TW202342019A - 取代的稠環化合物及其藥物組合物、製備方法和用途 - Google Patents

Abstract

本發明屬於LRRK2激酶藥物領域，具體地涉及取代的稠環化合物及其藥物組合物、製備方法和用途。本發明提供的化合物具有良好的LRRK2激酶調節/抑制作用，可用於治療與LRRK2激酶活性相關的病症和疾病，以及製備用於此類病徵和疾病的藥物。本發明化合物的製備方法簡單，具有良好的用途前景。

Description

取代的稠環化合物及其藥物組合物、製備方法和用途

本申請要求享有申請人於2022年2月25日向中國國家知識產權局提交的申請號為202210178818.7、發明名稱為「取代的稠環化合物及其藥物組合物、製備方法和用途」和2022年4月28日向中國國家知識產權局提交的申請號為202210470959.6、發明名稱為「取代的稠環化合物及其藥物組合物、製備方法和用途」的兩項中國發明專利先申請案的優先權權益。上述兩項先申請案的全文均以引用的方式結合至本文中。

本發明屬於LRRK2激酶藥物領域，具體地涉及取代的稠環化合物及其藥物組合物、製備方法和用途。

帕金森病(Parkinson’s disease，PD)是一種常見的神經退化性疾病，影響1-2%的老年人群。全基因組關聯研究(Genome-wide association studies，GWAS)在非家族性PD的24個位點上關聯到28種相關的遺傳風險變異。其中，LRRK2 (Park8)的突變也在遺傳形式中發現，確定了家族性和非家族性PD的共同分子途徑驅動發病機制，是引起相關疾病的最常見原因(Simon-Sanchez J, Schulte C, Bras JM, Sharma M, Gibbs JR, et al. Genome-wide association study reveals genetic risk underlying Parkinson's disease. Nat Genet, 2009, 41, 1308-1312.)。PD致病性LRRK2突變圖譜主要與激酶(G2019S，I2020T)和ROC-COR結構域(R1441C/G/H，Y1699C)有關，這意味著這些酶活性對病情至關重要。致病突變的頻率很罕見，約占總體的2%左右，然而，在某些種族人群中，最常見的突變G2019S在高達40%的患者中發現，將該激酶啟動二至三倍(West AB, Moore DJ, Biskup S, Bugayenko A, Smith WW, et al. From The Cover: Parkinson's disease-associated mutations in leucine-rich repeat kinase 2 augment kinase activity. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2005, 102, 16842-16847.)。除了致病突變外，LRRK2的普通遺傳變異是散發性PD的危險因素(Tan, E. K. Identification of a common genetic risk variant (LRRK2 Gly2385Arg) in Parkinson's disease. Ann Acad Med Singapore. 2006, 35, 840-842.)。

在2004年，LRRK2被確定為與負責PD遺傳的基因，其與PARK8位點相關，並發現其由51個外顯子組成，從而產生了一個大的(268kDa)蛋白。隨後，鑒定了很多LRRK2一級結構變異體，包括還出現在散發性PD中的與家族性PD分離的顯性突變，以及LRRK2基因座處的多態性，所述多態性增加了散發性PD發展的終生風險。

LRRK2是一種核心具有兩種酶功能的多域蛋白。GTP酶結構域包含複合蛋白的RAS (Ras of complex protein，ROC)，所述ROC終止於一個Roc結構域C端(COR)的間隔結構域，緊接著是屬於絲胺酸/蘇胺酸激酶的激酶結構域。該酶促核心被蛋白質-蛋白質相互作用結構域所包圍，包括Armadillo、錨蛋白和LRRK2的N端富含亮胺酸重複序列(leucine-rich repeat，LRR)結構域。LRRK2的C末端含有WD40結構域，是蛋白質折疊所必需的區域，可控制LRRK2的功能和激酶活性(Rudenko IN, Kaganovich A, Hauser DN, Beylina A, Chia R, et al. The G2385R variant of leucine-rich repeat kinase 2 associated with Parkinson's disease is a partial loss-of-function mutation. Biochemical Journal, 2012, 446, 99-111.)。有趣的是，最新描述的顯性致病突變發生在LRRK2的酶促核內，表明LRRK2活性的修飾極大地影響PD的發生和進展。

到目前為止，LRRK2突變中近40個單胺基酸替代突變與常染色體顯性PD有關。歐洲最普遍的LRRK2突變形式約占家族性PD的6%和散發性PD病例的3%，包括Gly2019的胺基酸替換為Ser殘基。Gly2019位於保守DYG-Mg ²⁺結合基序內，在激酶結構域的亞結構域-VII中。最近的報導表明，這種突變增強了LRRK2的自磷酸化，並且將它磷酸化髓鞘磷脂鹼性蛋白的能力提高了2-3倍。在無論是否存在氧化應激的情況下，當細胞系和原代神經元培養中過度表達G2019S-LRRK2時，均觀察到細胞毒性和包涵體的形成。這些結果以及LRRK2激酶活性的基因性失活顯示出對這種毒性表型的保護作用表明，LRRK2激酶活性的改變可能與LRRK2-PD的神經毒性和致病機制有關。

研究已發現，從LRRK2 G2019S帕金森病患者中誘導的多能乾細胞(Induced pluripotent stem cells，iPSC)表現出突神經突增生缺陷和對魚藤酮的敏感性增加，這可以通過G2019S突變的基因修正或用LRRK2激酶活性的小分子抑制劑處理細胞來改善(Reinhardt P, Schmid B, Burbulla Lena F, Schöndorf David C, Wagner L, et al. Genetic Correction of a LRRK2 Mutation in Human iPSCs Links Parkinsonian Neurodegeneration to ERK-Dependent Changes in Gene Expression. Cell Stem Cell, 2013, 12, 354-367.)。在iSPC中與LRRK2 G2019S突變相關的增加的粒線體損傷也被G2019S突變的遺傳校正所阻斷。

為改善上述技術問題，本發明提供一種式(I)所示的化合物、其消旋物、立體異構物、互變異構物、同位素標記物、N-氧化物、水合物、溶劑化物、多晶型物、代謝物，藥學上可接受的鹽、藥學上可接受的酯或其前藥化合物： (I) 其中： W選自N或O； R ¹選自無取代或被一個、兩個或更多個R ^a取代的下列基團：C _1-10烷基、C _3-10環烷基、3-10員雜環基； 每一個R ^a相同或不同，彼此獨立地選自鹵素、羥基、C _{1- 10}烷基、C _{1- 10}烷基氧基、C _{3- 10}環烷基、C _{3- 10}環烷基氧基、3-10員雜環基、3-10員雜環基氧基； 或者作為選擇，兩個R ^a與其連接的原子一起形成無取代或任選被一個、兩個或更多個R ^c取代的下列基團：C _{1- 10}烷基、C _{1- 10}烷基氧基、C _{3- 10}環烷基、C _{3- 10}環烷基氧基、3-10員雜環基、3-10員雜環基氧基； R ²不存在或選自H或C _1-10烷基；其中，當W選自O時，R ²不存在；當W選自N時，R ²選自H或C _1-10烷基； 或者作為選擇，R ¹、R ²與W一起形成無取代或任選被一個、兩個或更多個R ^b取代的3-10員雜環基； 每一個R ^b相同或不同，彼此獨立地選自鹵素、羥基、C _{1- 10}烷基、C _{1 -10}烷基氧基、C _{3- 10}環烷基、C _{3- 10}環烷基氧基、3-10員雜環基、3-10員雜環基氧基； 或者作為選擇，兩個R ^b與其連接的原子一起形成無取代或任選被一個、兩個或更多個R ^c取代的下列基團：C _{1- 10}烷基、C _{1- 10}烷基氧基、C _{3- 10}環烷基、C _{3- 10}環烷基氧基、3-10員雜環基、3-10員雜環基氧基； 每一個R ^c相同或不同，彼此獨立地選自鹵素、羥基、C _{1- 10}烷基、C _{1 -10}烷基氧基、C _{3- 10}環烷基、C _{3- 10}環烷基氧基、3-10員雜環基、3-10員雜環基氧基； X選自被一個、兩個或更多個R ³取代的5-10員雜芳基； 每一個R ³相同或不同，彼此獨立地選自無取代或被一個、兩個或更多個R ⁴取代的下列基團：C _1-10烷基、C _3-10環烷基、3-10員雜環基、5-10員雜芳基； 或者作為選擇，兩個R ³與其連接的原子一起形成無取代或任選被一個、兩個或更多個R ⁴取代的下列基團：C _3-10環烷基、3-10員雜環基； 每一個R ⁴相同或不同，彼此獨立地選自鹵素、羥基、腈基，無取代或被一個、兩個或更多個R ^d取代的下列基團：C _{1- 10}烷基、C _{1- 10}亞烷基、C _{3- 10}環烷基、3-10員雜環基、5-10員雜芳基；其中，當R ⁴選自C _1-6亞烷基時，意指R ⁴中的碳原子與R ³所連接的碳原子形成雙鍵； 每一個R ^d相同或不同，彼此獨立地選自鹵素、羥基、腈基、C _1-6烷基、C _1-6烷基氧基、C _{3- 10}環烷基、C _{3- 10}環烷基氧基、3-10員雜環基、3-10員雜環氧基、5-10員雜芳基、5-10員雜芳基氧基。

根據本發明的實施方案，R ¹選自無取代或被一個、兩個或更多個R ^a取代的下列基團：C _{1- 8}烷基、C _{3- 8}環烷基、3-8員雜環基； 例如，R ¹選自無取代或被一個、兩個或更多個R ^a取代的下列基團：C _{1- 6}烷基、C _{3- 7}環烷基、3-7員雜環基； 根據本發明的實施方案，每一個R ^a相同或不同，彼此獨立地選自F、Cl、Br、C _1-6烷基； 作為實例，R ¹選自 、 、 、 、-CH ₂CF ₃、-CH(CH ₃)CF ₃。

根據本發明的實施方案，R ¹、R ²與W一起形成無取代或任選被一個、兩個或更多個R ^b取代的下列基團： 、 、 、 、 。

根據本發明的實施方案，X選自被一個、兩個或更多個R ³取代的5-6員雜芳基； 例如，X選自被一個、兩個或更多個R ³取代的 、 ； 作為實例，X選自 、 。

根據本發明的實施方案，R ³選自無取代或被一個、兩個或更多個R ⁴取代的下列基團：C _{1- 6}烷基、C _{3- 8}環烷基、3-8員雜環基、5-6員雜芳基； 例如，R ³選自無取代或被一個、兩個或更多個R ⁴取代的下列基團：甲基、乙基、丙基、異丙基、環丙烷基、環丁烷基、 、 、 、 、 、 、 、 ； 每一個R ⁴相同或不同，彼此獨立地選自氟、氯、溴、羥基、腈基，無取代或被一個、兩個或更多個R ^d取代的下列基團：C _1-6烷基、C _1-6亞烷基、C _{3- 8}環烷基、3-8員雜環基； 作為實例，R ³選自異丙基、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 。

根據本發明較佳的實施方案，式(I)所示化合物較佳如下式(II)所示的化合物： (II) 其中，R ⁵選自被一個、兩個或更多個鹵素取代的C _1-6烷基，較佳為被1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個鹵素取代的C _1-6烷基，例如被1、2、3、4或5個氟或氯原子取代的甲基或乙基，例如三氟甲基； R ⁶選自C _1-6烷基，例如甲基、乙基、丙基或異丙基； R ⁷、R ⁸、R ⁹、R ¹⁰相同或不同，彼此獨立地選自H或C _1-6烷基，例如H、甲基、乙基、丙基或異丙基； R ¹¹、R ¹²相同或不同，彼此獨立地選自H或C _1-6烷基，例如H、甲基、乙基、丙基或異丙基。

根據本發明較佳的實施方案，式(I)所示化合物較佳如下式(III)所示的化合物： (III) 其中，R ⁵、R ⁶、R ⁷、R ⁸、R ⁹、R ¹⁰、R ¹¹、R ¹²具有上文所述的定義。

根據本發明示例性的實施方案，式(I)所示化合物可選自下列化合物： 。

本發明還提供式(I)所示化合物、其消旋物、立體異構物、互變異構物、同位素標記物、N-氧化物、水合物、溶劑化物、多晶型物、代謝物，藥學上可接受的鹽、藥學上可接受的酯或其前藥化合物的製備方法，包括如下反應： 其中，R ¹、R ²、W和X具有上文所述的定義；P ¹選自胺基保護基。

較佳地，式(M2)化合物在脫去保護基團P ¹的條件下進行反應，以得到式(I)所示的化合物。

根據本發明製備方法的實施方案，所述P ¹選自所屬技術領域中具有通常知識者已知的胺基保護基。例如，適宜的胺基保護基可以選自如烷基氧基羰基(如叔丁氧基羰基等)、環烷基烷氧基羰基(如環己基甲氧基羰基)、取代的烷基氧基羰基(如三氯乙氧基羰基等)、取代的芳基烷基氧基羰基(如對-硝基苄氧基羰基)、芳基烷基(如三苯甲基或二苯甲基)、雜芳基烷基(如吡啶基烷基，例如2-吡啶基甲基、4-吡啶基甲基)、烷氧基芳基烷基(如烷氧基苯基烷基，例如對甲氧基苄基，其可縮寫為「PMB」)。

根據本發明製備方法的實施方案，還提供式(M2)化合物的製備方法，包括如下反應： 其中，R ¹、R ²、W、X和P ¹具有上文所述的定義； L ¹和L ²相同或不同，彼此獨立地選自能夠發生偶聯反應的離去基團。

根據本發明的實施方案，式(M2)化合物的製備方法可以通過本領域已知的偶聯反應進行，例如通過Stille偶聯反應或Suzuki偶聯反應進行。

作為所屬技術領域中具有通常知識者已知的Stille偶聯反應或Suzuki偶聯反應，符合其反應需要的L ¹和L ²是所屬技術領域中具有通常知識者已知的。例如，L ¹可以選自鹵素，如碘；L ²可以選自烷基錫基團或硼酸酯基團。

本發明還提供一種藥物組合物，其包含式(I)所示的化合物、其消旋物、立體異構物、互變異構物、同位素標記物、N-氧化物、水合物、溶劑化物、多晶型物、代謝物，藥學上可接受的鹽、藥學上可接受的酯或其前藥化合物中的至少一種。

本發明還提供一種藥物組合物，其包含治療有效量的式(I)所示的化合物、其消旋物、立體異構物、互變異構物、同位素標記物、N-氧化物、水合物、溶劑化物、多晶型物、代謝物，藥學上可接受的鹽、藥學上可接受的酯或其前藥化合物中的至少一種。

根據本發明的實施方案，所述藥物組合物還包括一種或多種藥學上可接受的輔料。

根據本發明的實施方案，所述藥物組合物還可以進一步含有一種或多種額外的治療劑。

根據本發明的實施方案，式(I)所示的化合物、其消旋物、立體異構物、互變異構物、同位素標記物、N-氧化物、水合物、溶劑化物、多晶型物、代謝物，藥學上可接受的鹽、藥學上可接受的酯或其前藥化合物，或者所述藥物組合物可以用於調節LRRK激酶，尤其是LRRK2激酶的活性。

根據本發明的實施方案，式(I)所示的化合物、其消旋物、立體異構物、互變異構物、同位素標記物、N-氧化物、水合物、溶劑化物、多晶型物、代謝物，藥學上可接受的鹽、藥學上可接受的酯或其前藥化合物，或者所述藥物組合物可以用於預防和/或治療疾病或病症，所述疾病或病症可以包括選自下列的一種、兩種或更多種：神經退化性疾病、增殖性疾病、與蛋白激酶相關的疾病、溶酶體疾病、Tau病和多巴胺水準降低引起的疾病，例如癌症、與GBA突變相關的帕金森氏病(PD)、其他α-突觸核蛋白病、tau蛋白病、阿爾茨海默病、戈謝病、C型尼曼氏病(NPC)、嗜銀顆粒病、皮克病、皮質基底核退化症、進行性核上性癱瘓、與17號染色體相關的遺傳性額顳葉癡呆和帕金森病(FTDP-17)、藥物成癮相關的戒斷症狀/復發等。

本發明還提供一種調節LRRK激酶，尤其是LRRK2激酶的活性的方法，包括給予患者預防或治療有效量的式(I)所示的化合物、其消旋物、立體異構物、互變異構物、同位素標記物、N-氧化物、水合物、溶劑化物、多晶型物、代謝物，藥學上可接受的鹽、藥學上可接受的酯或其前藥化合物中的至少一種。

根據本發明的實施方案，所述LRRK激酶較佳為LRRK2激酶或其突變體或同等型，或它們的組合。

本發明還提供用於與LRRK激酶，尤其是LRRK2激酶活性相關的疾病或病症的式(I)所示的化合物、其消旋物、立體異構物、互變異構物、同位素標記物、N-氧化物、水合物、溶劑化物、多晶型物、代謝物，藥學上可接受的鹽、藥學上可接受的酯或其前藥化合物，或所述藥物組合物中的至少一種。

根據本發明的實施方案，所述LRRK激酶較佳為LRRK2激酶或其突變體或同等型，或它們的組合。

所述與LRRK激酶，尤其是LRRK2激酶活性相關的疾病或病症包括選自下列的一種、兩種或更多種：神經退化性疾病、增殖性疾病、與蛋白激酶相關的疾病、溶酶體疾病、Tau病和多巴胺水準降低引起的疾病，例如癌症、與GBA突變相關的帕金森氏病(PD)、其他α-突觸核蛋白病、tau蛋白病、阿爾茨海默病、戈謝病、C型尼曼氏病(NPC)、嗜銀顆粒病、皮克病、皮質基底核退化症、進行性核上性癱瘓、與17號染色體相關的遺傳性額顳葉癡呆和帕金森病(FTDP-17)、藥物成癮相關的戒斷症狀/復發等。

本發明還提供一種預防和/或治療疾病或病症的方法，包括給予患者式(I)所示的化合物、其消旋物、立體異構物、互變異構物、同位素標記物、N-氧化物、水合物、溶劑化物、多晶型物、代謝物，藥學上可接受的鹽、藥學上可接受的酯或其前藥化合物中的至少一種；其中所述疾病或病症可以包括選自下列的一種、兩種或更多種：神經退化性疾病、增殖性疾病、與蛋白激酶相關的疾病、溶酶體疾病、Tau病和多巴胺水準降低引起的疾病，例如癌症、與GBA突變相關的帕金森氏病(PD)、其他α-突觸核蛋白病、tau蛋白病、阿爾茨海默病、戈謝病、C型尼曼氏病(NPC)、嗜銀顆粒病、皮克病、皮質基底核退化症、進行性核上性癱瘓、與17號染色體相關的遺傳性額顳葉癡呆和帕金森病(FTDP-17)、藥物成癮相關的戒斷症狀/復發等。

在一些實施方案中，所述疾病或病症的患者是人。

本發明還提供治療或預防與LRRK激酶，尤其是LRRK2激酶活性相關的疾病或病症的方法，包括給予患者式(I)所示的化合物、其消旋物、立體異構物、互變異構物、同位素標記物、N-氧化物、水合物、溶劑化物、多晶型物、代謝物，藥學上可接受的鹽、藥學上可接受的酯或其前藥化合物中的至少一種。

本發明還提供式(I)所示的化合物、其消旋物、立體異構物、互變異構物、同位素標記物、N-氧化物、水合物、溶劑化物、多晶型物、代謝物，藥學上可接受的鹽、藥學上可接受的酯或其前藥化合物中的至少一種在製備藥物中的用途。

所述藥物可以用於預防和/或治療與LRRK激酶，尤其是LRRK2激酶活性相關的疾病或病症。

或者，所述藥物可以用於預防和/或治療疾病或病症，其中所述疾病或病症可以包括選自下列的一種、兩種或更多種：神經退化性疾病、增殖性疾病、與蛋白激酶相關的疾病、溶酶體疾病、Tau病和多巴胺水準降低引起的疾病，例如癌症、與GBA突變相關的帕金森氏病(PD)、其他α-突觸核蛋白病、tau蛋白病、阿爾茨海默病、戈謝病、C型尼曼氏病(NPC)、嗜銀顆粒病、皮克病、皮質基底核退化症、進行性核上性癱瘓、與17號染色體相關的遺傳性額顳葉癡呆和帕金森病(FTDP-17)、藥物成癮相關的戒斷症狀/復發等。

作為藥物時，可按藥物組合物的形式給予本發明化合物。可按藥劑領域中熟知的方式製備這些組合物，可通過多種途徑給予它們，這取決於是否需要局部或全身治療和所治療的區域。可局部(例如，透皮、皮膚、眼和黏膜包括鼻內、陰道和直腸遞藥)、肺(例如，通過吸入或吹入粉末或氣霧劑，包括通過噴霧器；氣管內、鼻內)、口服或腸胃外給藥。腸胃外給藥包括靜脈內、動脈內、皮下、腹膜內或肌內注射或輸注；或顱內例如鞘內或腦室內給藥。可按單次大劑量形式腸胃外給藥，或可通過例如連續灌注泵給藥。局部給予的藥用組合物和製劑可包括透皮貼劑、軟膏、洗劑、霜劑、凝膠劑、滴劑、栓劑、噴霧劑、液體劑、粉末製劑和散劑。常規藥物載體、水、粉末或油性基質、增稠劑等可能是必須的或需要的。

在製備本發明的組合物時，通常將活性成分與賦形劑混合，通過賦形劑稀釋或裝入例如膠囊、小藥囊、紙或其它容器形式的這種載體內。當賦形劑用作稀釋劑時，它可以是固體、半固體或液體物質，用作溶劑、載體或活性成分的介質。因此，組合物可以是以下形式：片劑、丸劑、散劑、錠劑、小藥囊、扁囊劑、酏劑、混懸劑、乳劑、溶液劑、糖漿劑、氣霧劑(固體或溶於液體溶劑)；含例如高達10%重量活性化合物的軟膏劑、軟和硬明膠膠囊、栓劑、無菌注射溶液和無菌包裝粉末。

適宜的賦形劑的某些實例包括乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨醇、甘露醇、澱粉、阿拉伯膠、磷酸鈣、藻酸鹽、黃蓍膠、明膠、矽酸鈣、微晶纖維素、聚乙烯吡咯烷酮、纖維素、水、糖漿和甲基纖維素。製劑還可含有：潤滑劑例如滑石粉、硬脂酸鈉、硬脂酸鎂、油酸鈉、苯甲酸鈉、乙酸鈉、氯化鈉和礦物油；濕潤劑；乳化劑和懸浮劑；防腐劑例如苯甲酸甲酯和苯甲酸羥基丙酯；甜味劑和矯味劑。可通過使用所屬技術領域中已知的方法配製本發明組合物，以便在給予患者後提供速釋、緩釋或延遲釋放活性成分的作用。

可按單位劑型配製所述藥物組合物，每一單位劑型可以包含約1~1000 mg，例如約5~1000 mg，更通常約5~500 mg，如5~100 mg、100~500 mg活性成分或50~200 mg活性成分。作為實例，每一劑量可以包含1 mg、5 mg、10 mg、15 mg、20 mg、25 mg、30 mg、35 mg、40 mg、45 mg、50 mg、55 mg、60 mg、65 mg、70 mg、75 mg、80 mg、85 mg、90 mg、95 mg、100 mg、105 mg、110 mg、115 mg、120 mg、125 mg、130 mg、135 mg、140 mg、145 mg、150 mg、155 mg、160 mg、165 mg、170 mg、175 mg、180 mg、185 mg、190 mg、200 mg、210 mg、220 mg、230 mg、240 mg、250 mg、260 mg、270 mg、280 mg、290 mg或300 mg活性成分。術語「單位劑型」是指物理上分離的適宜作為用於人患者和其它哺乳動物的單一劑量單位，各單位含有與適宜的藥物賦形劑混合的經計算可產生所需療效的預定量的活性物質。

活性化合物的有效劑量的範圍可很大，通常按藥用有效量給藥。但是，可以理解實際給予的化合物的量通常由醫師根據相關情況決定，它們包括所治療的病症、所選擇的給藥途徑、所給予的實際化合物；患者個體的年齡、重量和反應；患者症狀的嚴重程度等。

本發明化合物的治療劑量可根據例如以下而定：治療的具體用途、給予化合物的方式、患者的健康和狀態，以及簽處方醫師的判斷。本發明化合物在藥用組合物中的比例或濃度可不固定，取決於多種因素，它們包括劑量、化學特性(例如疏水性)和給藥途徑。例如可通過含約0.1~10%(w/v)該化合物的生理緩衝水溶液提供本發明化合物、其消旋物、立體異構物、互變異構物、同位素標記物、N-氧化物、水合物、溶劑化物、多晶型物、代謝物，藥學上可接受的鹽、藥學上可接受的酯或其前藥化合物中的至少一種，用於腸胃外給藥。某些典型劑量範圍為約1 μg/kg~約1 g/kg體重/日。在某些實施方案中，劑量範圍為約0.01 mg/kg~約100 mg/kg體重/日，例如0.1 mg/kg體重/日、0.2 mg/kg體重/日、0.3 mg/kg體重/日、0.4 mg/kg體重/日、0.5 mg/kg體重/日、0.6 mg/kg體重/日、0.7 mg/kg體重/日、0.8 mg/kg體重/日、0.9 mg/kg體重/日、1 mg/kg體重/日、5 mg/kg體重/日、10 mg/kg體重/日、15 mg/kg體重/日、20 mg/kg體重/日、25 mg/kg體重/日、30 mg/kg體重/日、35 mg/kg體重/日、40 mg/kg體重/日、45 mg/kg體重/日、50 mg/kg體重/日。作為實例，當給藥物件為人時，給予患者的劑量可以是57 mg/70kg至171 mg/70kg。劑量很可能取決於此類變數，如疾病或病症的種類和發展程度、具體患者的一般健康狀態、所選擇的化合物的相對生物學效力、賦形劑製劑及其給藥途徑。可通過由體外或動物模型試驗系統匯出的劑量-反應曲線外推，得到有效劑量。

對於製備固體組合物例如片劑，將主要的活性成分與藥物賦形劑混合，形成含本發明化合物的均勻混合物的固體預製劑組合物。當稱這些預製劑組合物為均勻時，是指活性成分通常均勻地分佈在整個組合物中，致使該組合物可容易地劃分為同等有效的單位劑型例如片劑、丸劑和膠囊劑。然後將該固體預製劑劃分為上述類型的含例如約0.1~1000 mg本發明活性成分的單位劑型，每一單位劑型可以包含約1~1000 mg，例如約5~1000 mg，更通常約5~500 mg，如5~100 mg、100~500 mg活性成分或50~200 mg活性成分。作為實例，每一劑量可以包含1 mg、5 mg、10 mg、15 mg、20 mg、25 mg、30 mg、35 mg、40 mg、45 mg、50 mg、55 mg、60 mg、65 mg、70 mg、75 mg、80 mg、85 mg、90 mg、95 mg、100 mg、105 mg、110 mg、115 mg、120 mg、125 mg、130 mg、135 mg、140 mg、145 mg、150 mg、155 mg、160 mg、165 mg、170 mg、175 mg、180 mg、185 mg、190 mg、200 mg、210 mg、220 mg、230 mg、240 mg、250 mg、260 mg、270 mg、280 mg、290 mg或300 mg活性成分。

可將本發明片劑或丸劑包衣或複合，得到提供長效作用優點的劑型。例如，片劑或丸劑含內劑量和外劑量組分，後者是前者的被膜形式。可通過腸溶層將兩種組分隔離，腸溶層用於在胃中阻止崩解，以使內組分完整通過十二指腸或延遲釋放。多種物質可用於此類腸溶層或包衣劑，此類物質包括多種高分子酸和高分子酸與此類物質如蟲膠、鯨蠟醇和醋酸纖維素的混合物。

其中可摻入本發明化合物和組合物，用於口服或注射給藥的液體形式包括水溶液、適當矯味的糖漿劑、水或油混懸液；和用食用油例如棉子油、芝麻油、椰子油或花生油矯味的乳劑；以及酏劑和類似的藥用溶劑。

用於吸入或吹入的組合物包括溶於藥學上可接受的水或有機溶劑或其混合物的溶液劑和混懸液、散劑。液體或固體組合物可含有如上所述適宜的藥學上可接受的賦形劑。在某些實施方案中，通過口服或鼻呼吸途徑給予組合物，實現局部或全身作用。可通過使用呈惰性的氣體，使組合物呈霧化。可直接由霧化裝置吸入霧化溶液，或霧化裝置可與面罩帷或間歇正壓呼吸機連接。可通過口服或由按適當方式遞送製劑的裝置通過鼻給予溶液、混懸液或粉末組合物。

給予患者的化合物、其消旋物、立體異構物、互變異構物、同位素標記物、N-氧化物、水合物、溶劑化物、多晶型物、代謝物，藥學上可接受的鹽、藥學上可接受的酯或其前藥化合物或藥物組合物的量不固定，取決於給予的藥物、給藥的目的例如預防或治療；患者的狀態、給藥的方式等。在治療用途時，可給予已患疾病的患者足夠治癒或至少部分抑制疾病及其併發症症狀的量的組合物。有效劑量應取決於所治療的疾病狀態和主治臨床醫師的判斷，該判斷取決於例如疾病的嚴重程度、患者的年齡、體重和一般狀況等因素。某些典型劑量範圍為約1 μg/kg~約1 g/kg體重/日。在某些實施方案中，劑量範圍為約0.01 mg/kg~約100 mg/kg體重/日，例如0.1 mg/kg體重/日、0.2 mg/kg體重/日、0.3 mg/kg體重/日、0.4 mg/kg體重/日、0.5 mg/kg體重/日、0.6 mg/kg體重/日、0.7 mg/kg體重/日、0.8 mg/kg體重/日、0.9 mg/kg體重/日、1 mg/kg體重/日、5 mg/kg體重/日、10 mg/kg體重/日、15 mg/kg體重/日、20 mg/kg體重/日、25 mg/kg體重/日、30 mg/kg體重/日、35 mg/kg體重/日、40 mg/kg體重/日、45 mg/kg體重/日、50 mg/kg體重/日。作為實例，當給藥物件為人時，給予患者的劑量可以是57 mg/70kg至171 mg/70kg。

給予患者的組合物可以是上述藥用組合物形式。可通過常規滅菌技術或可過濾滅菌，將這些組合物滅菌。可將水溶液包裝原樣使用，或凍乾，給藥前，將凍乾製劑與無菌水性載體混合。化合物製劑的pH通常為3~11，更佳為5~9，最佳為7~8。可以理解，使用某些前述賦形劑、載體或穩定劑會導致形成藥物鹽。

本發明提供式(I)所述的化合物、其消旋物、立體異構物、互變異構物、同位素標記物、N-氧化物、水合物、溶劑化物、多晶型物、代謝物，藥學上可接受的鹽、藥學上可接受的酯或其前藥化合物中的至少一種在分析測試中的用途，所述分析試驗用於鑒定能夠抑制一種或多種激酶的化合物，所述激酶較佳為LRRK，更佳為LRRK2。

較佳地，所述分析測試是競爭性結合活性測試。

更佳地，競爭性結合試驗包括將本發明化合物與激酶接觸，並檢測根據本發明的化合物與激酶之間的相互作用的任何變化。

本發明的另一方面提供了檢測本發明化合物與激酶結合的方法，所述方法包括以下步驟： (i)在激酶和已知受質存在下，將本發明化合物、其消旋物、立體異構物、互變異構物、同位素標記物、N-氧化物、水合物、溶劑化物、多晶型物、代謝物，藥學上可接受的鹽、藥學上可接受的酯或其前藥化合物中的至少一種與所述激酶接觸； (ii)檢測所述激酶和所述已知受質之間的相互作用的任何變化。

有益效果

本發明提供的化合物具有良好的LRRK2激酶調節/抑制作用，可用於治療與LRRK2激酶活性相關的病症和疾病，以及製備用於此類病徵和疾病的藥物。本發明化合物的製備方法簡單，具有良好的用途前景。

術語定義與說明

除非另有說明，本申請說明書和申請專利範圍中記載的基團和術語定義，包括其作為實例的定義、示例性的定義、較佳的定義、表格中記載的定義、實施例中具體化合物的定義等，可以彼此之間任意組合和結合。這樣的組合和結合後的基團定義及化合物結構，應當被理解為本申請說明書和/或申請專利範圍記載的範圍內。

除非另有說明，本說明書和申請專利範圍記載的數值範圍相當於至少記載了其中每一個具體的整數數值。例如，數值範圍「1-10」相當於記載了數值範圍「1-10」中的每一個整數數值即1、2、3、4、5、6、7、8、9、10。此外，當某些數值範圍被定義為「數」時，應當理解為記載了該範圍的兩個端點、該範圍內的每一個整數以及該範圍內的每一個小數。例如，「0~10的數」應當理解為不僅記載了0、1、2、3、4、5、6、7、8、9和10的每一個整數，還至少記載了其中每一個整數分別與0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9的和。

應當理解，本文在描述一個、兩個或更多個中，「更多個」應當是指大於2，例如大於等於3的整數，例如3、4、5、6、7、8、9或10。

術語「鹵素」表示氟、氯、溴和碘。

術語「C _1-40烷基」應理解為表示具有1~40個碳原子的直鏈或支鏈飽和一價烴基。例如，「C _1-10烷基」表示具有1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個碳原子的直鏈和支鏈烷基，「C _1-6烷基」表示具有1、2、3、4、5或6個碳原子的直鏈和支鏈烷基。所述烷基是例如甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、異丙基、異丁基、仲丁基、叔丁基、異戊基、2-甲基丁基、1-甲基丁基、1-乙基丙基、1,2-二甲基丙基、新戊基、1,1-二甲基丙基、4-甲基戊基、3-甲基戊基、2-甲基戊基、1-甲基戊基、2-乙基丁基、1-乙基丁基、3,3-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,1-二甲基丁基、2,3-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基或1,2-二甲基丁基等或它們的異構物。

術語「C _3-10環烷基」應理解為表示飽和的一價單環、雙環(如橋環、螺環)烴環或三環烷烴，其具有3、4、5、6、7、8、9或10個碳原子。所述C _3-10環烷基可以是單環烴基，如環丙基、環丁基、環戊基、環己基、環庚基、環辛基、環壬基或環癸基，或者是雙環烴基如龍腦基、吲哚基、六氫吲哚基、四氫萘基、十氫萘基、二環[2.1.1]己基、二環[2.2.1]庚基、二環[2.2.1]庚烯基、6,6-二甲基二環[3.1.1]庚基、2,6,6-三甲基二環 [3.1.1]庚基、二環[2.2.2]辛基、2,7-二氮雜螺[3,5]壬烷基、2,6-二氮雜螺[3,4]辛烷基，或者是三環烴基如金剛烷基。

除非另有定義，術語「3-10員雜環基」是指飽和的或不飽和的非芳族的環或環系，例如，其是4-、5-、6-或7-員的單環、7-、8-、9-或員的二環(如稠環、橋環、螺環)或者10-員的三環環系，並且含有至少一個，例如1、2、3、4、5個或更多個選自O、S和N的雜原子，其中N和S還可以任選被氧化成各種氧化狀態，以形成氮氧化物、-S(O)-或-S(O) ₂-的狀態。較佳地，所述雜環基可以選自「3-10員雜環基」。所述雜環基可以通過所述碳原子中的任一個或氮原子(如果存在的話)與分子的其餘部分連接。所述雜環基可以包括稠合的或橋連的環以及螺環的環。特別地，所述雜環基可以包括但不限於：4員環，如氮雜環丁烷基、氧雜環丁烷基；5員環，如四氫呋喃基、二氧雜環戊烯基、吡咯烷基、咪唑烷基、吡唑烷基、吡咯啉基；或6員環，如四氫吡喃基、哌啶基、嗎啉基、二噻烷基、硫代嗎啉基、哌嗪基或三噻烷基；或7員環，如二氮雜環庚烷基。任選地，所述雜環基可以是苯並稠合的。所述雜環基可以是雙環的，例如但不限於5,5員環，如六氫環戊並[c]吡咯-2(1H)-基環，或者5,6員雙環，如六氫吡咯並[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基環。雜環基可以是部分不飽和的，即它可以包含一個或多個雙鍵，例如但不限於二氫呋喃基、二氫吡喃基、2,5-二氫-1H-吡咯基、4H-[1,3,4]噻二嗪基、4,5-二氫噁唑基或4H-[1,4]噻嗪基，或者，它可以是苯並稠合的，例如但不限於二氫異喹啉基。所述3-10員雜環基與其它基團相連構成本發明的化合物時，可以為3-10員雜環基上的碳原子與其它基團相連，也可以為3-10員雜環基環上雜環原子與其它基團相連。例如當3-10員雜環基選自哌嗪基時，可以為哌嗪基上的氮原子與其它基團相連。或當3-10員雜環基選自哌啶基時，可以為哌啶基環上的氮原子和其對位上的碳原子與其它基團相連。

術語「C _6-10芳基」應理解為較佳表示具有6~10個碳原子的一價芳香性或部分芳香性的單環或二環(如稠環、橋環、螺環)烴環，其可以是單芳族環或稠合在一起的多芳族環，特別是具有6個碳原子的環(「C ₆芳基」)，例如苯基；或聯苯基，或者是具有9個碳原子的環(「C ₉芳基」)，例如茚滿基或茚基，或者是具有10個碳原子的環(「C ₁₀芳基」)，例如萘基。當所述C _6-10芳基被取代時，其可以為單取代或者多取代。並且，對其取代位點沒有限制，例如可以為鄰位、對位或間位取代。

術語「5-10員雜芳基」應理解為包括這樣的一價單環、二環(如稠環、橋環、螺環)或三環芳族環系：其具有5~10個環原子且包含1-5個獨立選自N、O和S的雜原子，較佳為1-3各獨立選自N、O和S的雜原子並且，另外在每一種情況下可為苯並稠合的。「雜芳基」還指其中雜芳族環與一個或多個芳基、脂環族或雜環基環稠合的基團，其中所述連接的根基或點在雜芳族環上。非限制性實例包括1-、2-、3-、5-、6-、7-或8-吲嗪基、1-、3-、4-、5-、6-或7-異吲哚基、2-、3-、4-、5-、6-或7-吲哚基、2-、3-、4-、5-、6-或7-吲唑基、2-、4-、5-、6-、7-或8-嘌呤基、1-、2-、3-、4-、6-、7-、8-或9-喹嗪基、2-、3-、4-、5-、6-、7-或8-喹啉基、1-、3-、4-、5-、6-、7-或8-異喹啉基、1-、4-、5-、6-、7-或8-酞嗪基(phthalazinyl)、2-、3-、4-、5-或6-萘啶基、2-、3-、5-、6-、7-或8-喹唑啉基、3-、4-、5-、6-、7-或8-噌啉基、2-、4-、6-或7-蝶啶基、1-、2-、3-、4-、5-、6-、7-或8-4aH哢唑基、1-、2-、3-、4-、5-、6-、7-或8-哢唑基哢唑基、1-、3-、4-、5-、6-、7-、8-或9-哢啉基、1-、2-、3-、4-、6-、7-、8-、9-或10-菲啶基、1-、2-、3-、4-、5-、6-、7-、8-或9-吖啶基、1-、2-、4-、5-、6-、7-、8-或9-啶基、2-、3-、4-、5-、6-、8-、9-或10-菲咯啉基、1-、2-、3-、4-、6-、7-、8-或9-吩嗪基、1-、2-、3-、4-、6-、7-、8-、9-或10-吩噻嗪基、1-、2-、3-、4-、6-、7-、8-、9-或10-吩嗪基、2-、3-、4-、5-、6-或1-、3-、4-、5-、6-、7-、8-、9-或10-苯並異喹啉基、2-、3-、4-或噻吩並[2,3-b]呋喃基、2-、3-、5-、6-、7-、8-、9-、10-或11-7H-吡嗪並[2,3-c]哢唑基、2-、3-、5-、6-或7-2H-呋喃並[3,2-b]-吡喃基、2-、3-、4-、5-、7-或8-5H-吡啶並[2,3-d]-鄰-嗪基、1-、3-或5-1H-吡唑並[4,3-d]-唑基、2-、4-或54H-咪唑並[4,5-d]噻唑基、3-、5-或8-吡嗪並[2,3-d]噠嗪基、2-、3-、5-或6-咪唑並[2,1-b]噻唑基、1-、3-、6-、7-、8-或9-呋喃並[3,4-c]噌啉基、1-、2-、3-、4-、5-、6-、8-、9-、10或11-4H-吡啶並[2,3-c]哢唑基、2-、3-、6-或7-咪唑並[1,2-b][1,2,4]三嗪基、7-苯並[b]噻吩基、2-、4-、5-、6-或7-苯並唑基、2-、4-、5-、6-或7-苯並咪唑基、2-、4-、4-、5-、6-或7-苯並噻唑基、1-、2-、4-、5-、6-、7-、8-或9-苯並氧雜基(benzoxapinyl)、2-、4-、5-、6-、7-或8-苯並嗪基、1-、2-、3-、5-、6-、7-、8-、9-、10-或11-1H-吡咯並[1,2-b][2]苯並氮雜基(benzazapinyl)。典型的稠合雜芳基包括但不限於2-、3-、4-、5-、6-、7-或8-喹啉基、1-、3-、4-、5-、6-、7-或8-異喹啉基、2-、3-、4-、5-、6-或7-吲哚基、2-、3-、4-、5-、6-或7-苯並[b]噻吩基、2-、4-、5-、6-或7-苯並唑基、2-、4-、5-、6-或7-苯並咪唑基和2-、4-、5-、6-或7-苯並噻唑基。當所述5-10員雜芳基與其它基團相連構成本發明的化合物時，可以為5-10員雜芳基環上的碳原子與其它基團相連，也可以為5-10員雜芳基環上的雜原子與其它基團相連。當所述5-10員雜芳基被取代時，其可以為單取代或者多取代。並且，對其取代位點沒有限制，例如可以為雜芳基環上與碳原子相連的氫被取代，或者雜芳基環上與雜原子相連的氫被取代。

術語「螺環」是指兩個環共用1個成環原子的環系。

術語「稠環」是指兩個環共用2個成環原子的環系。

術語「橋環」是指兩個環共用3個以上成環原子的環系。

除非另有說明，雜環基、雜芳基或亞雜芳基包括其所有可能的異構形式，例如其位置異構物。因此，對於一些說明性的非限制性實例，可以包括在其1-、2-、3-、4-、5-、6-、7-、8-、9-、10-位等(如果存在)中的一個、兩個或更多個位置上取代或與其他基團鍵合的形式，包括吡啶-2-基、亞吡啶-2-基、吡啶-3-基、亞吡啶-3-基、吡啶-4-基和亞吡啶-4-基；噻吩基或亞噻吩基包括噻吩-2-基、亞噻吩-2-基、噻吩-3-基和亞噻吩-3-基；吡唑-1-基、吡唑-3-基、吡唑-4-基、吡唑-5-基。

術語「側氧基」是指取代基中的碳原子、氮原子或硫原子被氧化後形成的氧基取代(=O)。

除非另有說明，本文中術語的定義同樣適用於包含該術語的基團，例如C _1-10烷基的定義也適用於C _1-10烷基氧基、C _3-10環烷基氧基等。

所屬技術領域中具有通常知識者可以理解，式(I)所示化合物可以以各種藥學上可接受的鹽的形式存在。如果這些化合物具有鹼性中心，則其可以形成酸加成鹽；如果這些化合物具有酸性中心，則其可以形成鹼加成鹽；如果這些化合物既包含酸性中心(例如羧基)又包含鹼性中心(例如胺基)，則其還可以形成內鹽。

本發明的化合物可以溶劑合物(如水合物)的形式存在，其中本發明的化合物包含作為所述化合物晶格的結構要素的極性溶劑，特別是例如水、甲醇或乙醇。極性溶劑特別是水的量可以化學計量比或非化學計量比存在。

根據其分子結構，本發明的化合物可以是掌性的，因此可能存在各種鏡像異構物形式。因而這些化合物可以以消旋物形式或光學活性形式存在。本發明的化合物涵蓋了各掌性碳為R或S構型的異構物或其混合物、消旋物。本發明的化合物或其中間體可以通過所屬技術領域中具有通常知識者公知的化學或物理方法分離為鏡像異構物化合物，或者以此形式用於合成。在外消旋的胺的情況中，通過與光學活性的拆分試劑反應，從混合物製得非鏡像異構物。適當的拆分試劑的示例是光學活性的酸，例如R和S形式的酒石酸、二乙醯酒石酸、二苯甲醯酒石酸、扁桃酸、蘋果酸、乳酸、適當的N-保護的胺基酸(例如N-苯甲醯脯胺酸或N-苯磺醯基脯胺酸)或各種光學活性的樟腦磺酸。借助光學活性的拆分試劑(例如固定在矽膠上的二硝基苯甲醯基苯基甘胺酸、三乙酸纖維素或其它碳水化合物的衍生物或掌性衍生化的異丁烯酸酯聚合物)，也可有利地進行管柱層析鏡像異構物拆分。用於此目的的適當的洗脫劑是含水或含醇的溶劑混合物，例如，己烷/異丙醇/乙腈。

可以根據已知的方法，例如通過萃取、過濾或管柱層析來分離相應的穩定異構物。

術語「患者」是指包括哺乳動物在內的任何動物，較佳為小鼠、大鼠、其它齧齒類動物、兔、狗、貓、豬、牛、羊、馬或靈長類動物，最佳為人。

術語「治療有效量」是指研究人員、獸醫、醫師或其它臨床醫師正在組織、系統、動物、個體或人中尋找的引起生物學或醫學反應的活性化合物或藥物的量，它包括以下一項或多項：(1)預防疾病：例如在易感染疾病、紊亂或病症但尚未經歷或出現疾病病理或症狀的個體中預防疾病、紊亂或病症。(2)抑制疾病：例如在正經歷或出現疾病、紊亂或病症的病理或症狀的個體中抑制疾病、紊亂或病症(即阻止病理和/或症狀的進一步發展)。(3)緩解疾病：例如在正經歷或出現疾病、紊亂或病症的病理或症狀的個體中緩解疾病、紊亂或病症(即逆轉病理和/或症狀)。治療有效量最初可以由細胞培養測定來進行估計,也可以從體內資料估計初始劑量。使用這些初步指導，本發明所屬技術領域中具有通常知識者可以確定人類的有效劑量。此外，也可以通過細胞培養物或實驗動物中的標準藥物程式來確定本文所述化合物的毒性和治療功效，例如通過測定LD ₅₀和ED ₅₀。

術語「與LRRK激酶或LRRK2激酶活性相關的疾病或病症」是指以本文定義的不適當所述激酶活性或激酶的過度活性為特徵的疾病或病症。不適當活性是指(i)通常不表達所述激酶的細胞中的激酶表達；(ii)增加的激酶表達，導致不希望的細胞增殖、分化和/或生長；或(iii)降低的激酶表達，導致細胞增殖、分化和/或生長不期望的減少。激酶的過度活性是指編碼特定激酶的基因的擴增或一定激酶活性水準的產生，其可以與細胞增殖、分化和/或生長紊亂相關(即，隨著激酶水準增加，一個或多個的細胞紊亂的症狀的嚴重程度增加)。過度活性也可以是由於突變而導致的與配體無關或組成型啟動的結果，所述突變如負責配體結合的激酶的片段缺失。

本發明所述「輔料」的實例見「Handbook of Pharmaceutical Excipients，第2版，1994，由A Wade和PJ Weller編輯」。

本發明所述「載體」或「稀釋劑」在製藥領域是熟知的，並且在例如Remington's Pharmaceutical Sciences，Mack Publishing Co.(A.R. Gennaro編輯1985)中進行了描述。

藥物載體、輔料或稀釋劑的選擇可以根據預期給藥途徑和標準藥學實踐來進行選擇。藥物組合物可以包含或額外包含作為載體、輔料或稀釋劑的任何合適的黏合劑、潤滑劑、懸浮劑、包衣劑、增溶劑、緩衝劑、調味劑、表面活性劑、增稠劑、防腐劑(包括抗氧化劑)等，以及為了使得製劑與接受者的血液等滲所包含的物質。

其中載體是固體的適用於口服給藥的藥物製劑最佳地是單位劑量製劑形式，如各自含有預定量的活性化合物的丸劑、膠囊或片劑。可以通過壓製或模製，任選地與一種以上的輔助成分一起製備片劑。可以通過在合適的機器中壓製處於自由流動形式(諸如粉末或顆粒)的活性化合物，任選地與黏合劑、潤滑劑、惰性稀釋劑、潤滑物質、表面活性劑或分散劑混合來製備壓製片劑。可以通過模製活性化合物和惰性液體稀釋劑來製備模製的片劑。可以任選地將片劑包衣，如果不進行包衣的話，可以任選地列印符號。可以通過將活性化合物單獨地或與一種以上的輔助成分混合填充到膠囊殼中，然後以常規方式進行密封來製備膠囊。扁囊劑類似於膠囊，其中將活性化合物與任何輔助成分一起密封在米紙膜中。也可以將活性化合物配製成可分散的顆粒，例如可以在給藥前將其懸浮於水中，或灑在食物上。可以將顆粒包裝在例如小袋中。其中載體可以是液體的適合於口服給藥的製劑，可以作為以水性或非水性液體方式的溶液或懸浮液，或作為水包油液體乳劑呈現。

術語「藥學上可接受的鹽」包括其合適的酸加成鹽或鹼鹽。關於合適的藥物鹽見J Pharm Sci，66，199，1977，Berge等。例如用強無機酸，如礦物酸，例如氫鹵酸(如鹽酸、氫溴酸和氫碘酸)、硫酸、磷酸硫酸鹽、硫酸氫鹽、半硫酸鹽、硫氰酸鹽、過硫酸鹽和磺酸；用強有機羧酸，如未取代或取代的(例如，通過鹵素)1至4個碳原子的鏈烷羧酸，如乙酸；用飽和或不飽和二羧酸，例如草酸、丙二酸、琥珀酸、馬來酸、富馬酸、鄰苯二甲酸或四鄰苯二甲酸；用羥基羧酸，例如抗壞血酸、乙醇酸、乳酸、蘋果酸、酒石酸或檸檬酸；用胺基酸，例如天冬胺酸或谷胺酸；用苯甲酸；或用有機磺酸，如未取代或取代的(例如，通過鹵素)(C ₁-C ₄)-烷基-或芳基-磺酸，如甲烷-或對甲苯磺酸，來形成鹽。

較佳的鹽包括，例如乙酸鹽、三氟乙酸鹽、乳酸鹽、葡萄糖酸鹽、檸檬酸鹽、酒石酸鹽、馬來酸鹽、蘋果酸鹽、泛酸鹽、己二酸鹽、藻酸鹽、天冬胺酸鹽、苯甲酸鹽、丁酸鹽、二葡糖酸鹽、環戊酸鹽、葡庚糖酸鹽、甘油磷酸鹽、草酸鹽、庚酸鹽、己酸鹽、富馬酸鹽、煙酸鹽、棕櫚酸酯、果膠酸鹽、3-苯基丙酸鹽、苦味酸鹽、新戊酸鹽、丙酸鹽、酒石酸鹽、乳糖酸鹽、pivolate、樟腦酸鹽、十一酸鹽和琥珀酸鹽，有機磺酸如甲磺酸鹽、乙磺酸鹽、2-羥基乙烷磺酸鹽、樟腦磺酸鹽、2-萘磺酸鹽、苯磺酸鹽、對氯苯磺酸鹽和對甲苯磺酸鹽；和無機酸如鹽酸、氫溴酸、氫碘酸、硫酸、硫酸氫、半硫酸、硫氰酸、過硫酸、磷酸和磺酸。

術語「藥學上可接受的酯」是指使用有機酸或醇/氫氧化物，與本發明化合物結構中可被酯化的官能團形成酯。有機酸包括羧酸，如未取代或取代的(例如，通過鹵素)1至12個碳原子的鏈烷羧酸，如乙酸；用飽和或不飽和二羧酸，例如草酸、丙二酸、琥珀酸、馬來酸、富馬酸、鄰苯二甲酸或四鄰苯二甲酸；用羥基羧酸，例如抗壞血酸、乙醇酸、乳酸、蘋果酸、酒石酸或檸檬酸；用胺基酸，例如天冬胺酸或谷胺酸；用苯甲酸；或用有機磺酸，如未取代或取代的(例如，通過鹵素)(C ₁-C ₄)-烷基-或芳基-磺酸，如甲烷-或對甲苯磺酸。合適的氫氧化物包括無機氫氧化物，如氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化鈣、氫氧化鋁。醇包括可以是未取代或取代的(例如，通過鹵素)1-12個碳原子的烷醇。

術語「同位素標記物」，表示本發明化合物中至少一個原子被同位素代替。所述同位素的實例包括氫、碳、氮、氧、磷、硫、氟和氯的同位素，如相應的 ²H、 ³H、 ¹³C、 ¹⁴C、 ¹⁵N、 ¹⁷O、 ¹⁸O、 ³¹P、 ³²P、 ³⁵S、 ¹⁸F和 ³⁶Cl。用同位素如氘(即 ²H)取代可以提供由更大的代謝穩定性，例如增加的體內半衰期或降低的劑量需求產生的某些治療優勢，因此在某些情況下可能是較佳的。例如，本發明包括其中任一氫原子被氘原子代替的通式(I)的化合物。

術語「前藥化合物」，表示在體內釋放根據通式(I)的活性母體藥物的共價鍵合的化合物。這樣的前藥通常是其中一個以上的適當基團已被修飾，使得在給藥至人或哺乳動物受試者後該修飾可能被逆轉的本發明化合物。通常通過這類受試者中天然存在的酶來進行逆轉，儘管可能將第二藥劑與這種前藥一起給藥以便在體內進行逆轉。這類修飾的實例包括上文所述的藥學上可接受的酯，其中可以由酯酶等進行這種逆轉。

術語「多晶型物」，表示各種結晶形式、多晶形式和水合形式的本發明化合物。在製藥工業中已明確，可以通過在這類化合物的合成製備中使用的溶劑的純化和/或分離的方法而以任何這些形式分離化學化合物。

術語「給藥」，表示本發明的藥物組合物可適用於直腸、鼻內、支氣管內、局部(包括口腔和舌下)、陰道或腸胃外(包括皮下、肌內、靜脈內、動脈內和皮內)、腹膜內或鞘內給藥。較佳地，所述製劑是口服給藥的製劑。製劑可以方便地以單位劑型，即以包含單位劑量或者單位劑量的多個單位或子單位的離散部分的形式呈現。作為實例，製劑可以是以片劑和緩釋膠囊的形式，並且可以通過藥學領域熟知的任何方法進行製備。

本發明的用於口服給藥的製劑可以呈現為：離散單位，如各自含有預定量的活性劑的膠囊、凝膠劑、滴劑、扁囊劑、丸劑或片劑；作為粉末或顆粒；作為水性液體或非水性液體中的活性劑的溶液、乳液或懸浮液；或作為水包油液體乳劑或油包水液體乳劑；或作為團注製劑等。較佳地，每劑量的這些組合物含有1至250 mg且更佳為10-100 mg的活性成分。

對於用於口服給藥的組合物(例如，片劑和膠囊)，還包括溶劑和/或常用輔料，例如黏合劑，例如糖漿、阿拉伯膠、明膠、山梨糖醇、黃芪膠、聚乙烯吡咯烷酮(聚維酮)、甲基纖維素、乙基纖維素、羧甲基纖維素鈉、羥丙基甲基纖維素、蔗糖和澱粉；填料和載體，例如玉米澱粉、明膠、乳糖、蔗糖、微晶纖維素、高嶺土、甘露醇、磷酸二鈣、氯化鈉和海藻酸；和潤滑劑，如硬脂酸鎂、硬脂酸鈉和其它金屬硬脂酸酯、甘油硬脂酸、硬脂酸、矽酮流體、滑石蠟、油和膠體二氧化矽。調味劑如薄荷、冬青油、櫻桃香料等也可以使用。可能需要添加著色劑以使劑型容易被識別。片劑也可以通過本領域熟知的方法進行包衣。

適用於口服給藥的其它製劑包括包含調味基質，通常為蔗糖和阿拉伯膠或黃芪膠中的活性劑的錠劑；包含惰性基質如明膠和甘油、或蔗糖和阿拉伯膠中的活性劑的軟錠劑；和包含合適液體載體中的活性劑的漱口劑。

其它給藥形式包括進行靜脈內、動脈內、鞘內、皮下、皮內、腹膜內或肌肉內注射並由無菌或可滅菌溶液製備的溶液或乳劑。可注射形式通常每劑含有10-1000 mg，較佳為10-250 mg之間的活性成分。

所述給藥的形式還可以為聯合給藥，即將一種以上的本發明化合物與一種以上的其它活性劑聯合給藥。在這種情況下，可以將本發明化合物與一種以上的其它活性劑連續、同時或序貫給藥。

分析試驗

本發明的另一方面涉及如上所述的化合物在分析試驗中的用途，這種分析試驗用於鑒定能夠抑制一種或多種激酶、更佳為LRRK、甚至更佳為LRRK2的其它候選化合物。

較佳地，該分析試驗是競爭性結合試驗。

更佳地，競爭性結合試驗包括讓本發明化合物與激酶，較佳為LRRK、更佳為LRRK2和候選化合物接觸，並檢測根據本發明化合物與激酶之間的相互作用的任何變化。

較佳地，通過本發明化合物的SAR修飾產生候選化合物。

如本文所使用的，術語「SAR修飾」是指通過化學衍生化來改變給定化合物的標準方法。

因此，在一個方面，所鑒定的化合物可以作為模型(例如，範本)，用於開發其它化合物。在這種測試中使用的化合物可以游離於溶液中、固定在固體載體上、承載在細胞表面或位於細胞內。可以測量化合物和待測試藥劑之間的活性消除或結合複合物的形成。

本發明的分析試驗可以是篩選，因而測試了大量藥劑。在一方面，本發明的分析測定方法是高通量篩選。

本發明還考慮了使用競爭性藥物篩選試驗，其中能夠結合化合物的中和抗體與用於結合化合物的測試化合物特異性競爭。

提供了用於篩選的另一技術，用於對物質具有合適結合親和力的試劑進行高通量篩選(HTS)，並且該技術基於WO 84/03564中詳細描述的方法。

預期本發明的分析試驗方法，將適合於對測試化合物進行小規模篩選和大規模篩選以及適合於定量試驗。

較佳地，競爭性結合試驗包括在激酶的已知受質存在下，讓本發明化合物與所述激酶接觸，並檢測所述激酶和所述已知受質之間相互作用的任何變化。

本發明的另一方面提供了檢測配體與激酶結合的方法，所述方法包括以下步驟： (i)在激酶的已知受質存在下，讓配體與所述激酶接觸； (ii)檢測所述激酶和所述已知受質之間的相互作用的任何變化； 並且其中所述配體是本發明化合物。

本發明的一個方面涉及一種方法，包括以下步驟： (a)進行上述測定方法； (b)鑒定能夠與配體結合結構域結合的一種或多種配體； (c)修飾能夠與配體結合結構域結合的所述一種或多種配體； (d)進行這種上述測定方法； (e)任選地製備包含所述一種或多種配體的藥物組合物。

本發明還涉及通過上述方法鑒定的配體。

本發明的另一方面涉及包含通過上述方法鑒定的配體的藥物組合物。

本發明的另一方面涉及通過上述方法鑒定的配體在製備藥物組合物中的用途，該藥物組合物用於治療一種或多種病症。

上述方法可用於篩選可用作一種或多種激酶的抑制劑的配體。

下文將結合具體實施例對本發明的技術方案做更進一步的詳細說明。應當理解，下列實施例僅為示例性地說明和解釋本發明，而不應被解釋為對本發明保護範圍的限制。凡基於本發明上述內容所實現的技術均涵蓋在本發明旨在保護的範圍內。

除非另有說明，以下實施例中使用的原料和試劑均為市售商品，或者可以通過已知方法製備。

在本發明上下文中的縮寫具有以下含義： DBU             1,8-二氮雜雙環[5.4.0]十一碳-7-烯 DCM             二氯甲烷 DEA            二乙胺 DIEA           二異丙基乙基胺 DMA N,N-二甲基乙醯胺 DMF N,N-二甲基甲醯胺 DMSO          二甲基亞碸 EA, EtOAc    乙酸乙酯 IPA               異丙醇 MTBE           叔丁基甲基醚 NIS               N-碘代丁二醯亞胺 NMR             核磁共振 PE                石油醚 PMBCl          對甲氧基苄基氯 RT，t _R 保留時間 SFC              超臨界流體管柱層析 Tf                 三氟甲磺醯基 TfOH            三氟甲磺酸 TFA              三氟乙酸 THF             四氫呋喃 UV               紫外線

管柱層 析法

使用高壓液相管柱層析法，並通過多波長UV檢測器進行監測。用於分離過程的典型流動相是PE/EA、DCM/MeOH或水/MeCN。

分析方法

在室溫下在所述溶劑中，使用Bruker AV 400光譜儀進行 ¹H核磁共振(NMR)光譜，除非另有說明。在所有情況下，NMR資料與所提出的結構一致。使用用於指定主峰的常規縮寫，以份每百萬計給出特有的化學位移(δ)：例如，s，單峰；d，二重峰；t，三重峰；q，四重峰；dd，雙二重峰；br，寬峰。使用Agilent 1290 Infinity/6460 triple Quad LCMS記錄質譜。當使用薄層管柱層析(TLC)時，它是指矽膠TLC。

化合物製備

在沒有描述製備起始原料的情況下，這些起始原料是可以是通過商業管道購買的，文獻中已知的，或者由本發明所屬技術領域中具有通常知識者使用標準程式易於可獲得的。在說明通過類似於先前的實施例或中間體而製備化合物的情況下，本發明所屬技術領域中具有通常知識者將理解，可以改變每個特定反應的反應時間、試劑的當量數和溫度，並且採用不同的後處理或純化技術可能是必須的或期望的。

實施例 1 ：化合物 390 的製備

步驟 1 ： ( 2 S,6 R)-4-(6-氯嘧啶-4- 基 )-2,6- 二甲基嗎啉 (1-1) 的合成

室溫下，將DIEA(87.7 g，0.680 mol)和(2 R,6 S)-2,6-二甲基嗎啉(40.5 g，0.350 mol)添加到4,6-二氯嘧啶(50.0 g，0.340 mol)的IPA(1000 mL)溶液中。將混合物在室溫下攪拌1小時。濃縮以去除溶劑，殘餘物在EtOAc(500 mL)中稀釋。有機層用鹽水清洗，無水Na ₂SO ₄乾燥，過濾並濃縮，得到殘餘物。殘餘物通過矽膠管柱層析(PE/EA=1:1)純化，得到白色固體(2S,6R)-4-(6-氯嘧啶-4-基)-2,6-二甲基嗎啉(1-1，76.0 g，98.4%)。m/z (ESI) ⁺: 228.0 [M+H] ⁺.

步驟 2 ： ( 2 S , 6 R ) -2,6- 二甲基 -4- ( 6- ( 三甲基錫基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 嗎啉 (1-2) 的合成

在N ₂氣氛下，將裝有二甲苯(100 mL)的乾燥三頸燒瓶加熱至150℃，然後滴加化合物1-1(10.0 g，44.1 mmol)在二甲苯(50 mL)中的溶液、1,1,1,2,2,2-六甲基二苯乙烯(18.8 g，57.3 mmol)、Pd(PPh ₃) ₂Cl ₂(3.00 g，4.40 mmol)和PPh ₃(2.30 g，8.80 mmol)的脫氣混合物。將所得混合物在150℃下攪拌2小時。將反應混合物冷卻至室溫並用PE稀釋，然後通過矽藻土過濾。濾液在真空中濃縮，得到黃色固體的粗產物(1-2，16.0 g，純度約60%)，用於下一步，無需進一步純化。m/z (ESI) ⁺: 358.1 [M+H] ⁺.

步驟 3 ： 4-氯-3- 碘 -1H- 吡唑並 [4,3- c] 吡啶 (1-3) 的合成

在室溫下，向4-氯-1H-吡唑並[4,3-c]吡啶(50.0 g，0.326 mol)的DMF(500 mL)溶液中加入NIS(88.0 g，0.390 mol)，滴畢，將混合物加熱至80℃並攪拌2小時。然後，將混合物濃縮得到殘餘物，該殘餘物用飽和NaHSO ₃水溶液(500 mL)處理並攪拌30分鐘。過濾收集形成的固體，並用水(2 L)洗滌，然後真空乾燥，得到棕色固體狀產物(1-3，83.0 g，91.2%)。m/z (ESI) ⁺: 279.8 [M+H] ⁺.

步驟 4 ： 4-氯-3- 碘 -1- ( 4- 甲氧基苄基 ) -1 H- 吡唑並 [4,3- c] 吡啶 (1-4) 的合成

在冰水浴下，向化合物1-3(80.0 g，0.290 mol)的DMF(800 mL)溶液中加入PMBCl(49.6 g，0.320 mol)和NaOH(23.2 g，0.580 mol)。將混合物在室溫下攪拌20小時，濃縮以去除溶劑，將殘餘物溶於EtOAc(500 mL)中，鹽水洗滌，無水Na ₂SO ₄乾燥，過濾後濃縮溶液得殘餘物，用PE和EA(PE/EA=1:1)打漿，攪拌過夜。過濾，乾燥固體，得到呈灰白色固體的化合物1-4(104 g，89.7%)。m/z (ESI) ⁺: 399.7 [M+H] ⁺.

步驟 5 ： N - 環丙基 -3- 碘 -1- ( 4- 甲氧基苄基 ) -1 H- 吡唑 [4,3- c] 吡啶 -4- 胺 (1-5) 的合成

將DIEA(50 ml)中化合物1-4(7.00 g，17.5 mmol)和環丙烷胺(10.0 g，175 mmol)的混合物加熱至140℃並攪拌2天。在真空中濃縮以去除溶劑，然後在EA和鹽水中稀釋。將分離的有機層用無水Na ₂SO ₄乾燥，過濾並濃縮以得到殘餘物。通過矽膠管柱層析(100%EA)純化殘餘物，得到棕色固體形式的化合物1-5(5.00 g，68.0%)。m/z (ESI) ⁺: 421.1 [M+H] ⁺.

步驟 6 ： N - 環丙基 -3- ( 6- (( 2 S , 6 R ) -2,6- 二甲基嗎啉基 ) 嘧啶 -4- 基 ) -1- ( 4- 甲氧基苄基 ) -1 H- 吡唑 [4,3-c] 吡啶 -4- 胺 (1-6) 的合成

在N ₂氣氛下，向化合物1-5(200 mg，0.476 mmol)和粗品化合物1-2(純度約60%，425 mg，0.714 mmol)在DMF(10 mL)中的混合物中，加入Pd(PPh ₃) ₂Cl ₂(34 mg，0.048 mmol)、PPh ₃(25 mg，0.095 mmol)和CuI(9 mg，0.043 mmol)。將混合物脫氣並用氮氣吹掃3次，然後在120℃下攪拌1小時。冷卻至室溫並在EA中稀釋，有機物用飽和KF水溶液和鹽水清洗，分離有機層，無水Na ₂SO ₄乾燥，過濾並濃縮以得到殘餘物。通過矽膠柱管柱層析(DCM/MeOH=19:1)純化殘餘物，得到淺棕色固體形式的化合物1-6(50.0 mg，21.6%)。m/z (ESI) ⁺: 486.1 [M+H] ⁺.

步驟 7 ： N - ( 3,3- 二氟環丁基 ) -3- ( 6- ( 2 S , 6 R ) -2,6- 二甲基嗎啉基 ) 嘧啶 -4- 基 ) -1 H- 吡唑 [4,3- c] 吡啶 -4- 胺 (390) 的合成

向化合物1-6(50.0 mg，0.103 mmol)的TFA(5 mL)溶液中添加TfOH(0.5 mL)。所得混合物在室溫下攪拌1小時。濃縮以去除溶劑，並在DCM中稀釋。然後用1 M NaOH水溶液和鹽水洗滌，分離有機層，以無水Na ₂SO ₄乾燥，過濾並濃縮以得到殘餘物。通過製備TLC(DCM/MeOH=10:1)純化殘餘物，得到化合物390(6 mg)灰白色固體。 ¹HNMR (400 MHz, CD ₃OD) δ8.68 (d, J= 1.0 Hz, 1H), 7.72-7.65 (m, 2H), 7.10 (d, J= 7.2 Hz, 1H), 4.26-4.72 (m, 2H), 3.76-3.64 (m, 2H), 2.94-2.86 (m, 1H), 2.78-2.65 (m, 2H), 1.28 (d, J= 6.2 Hz, 6H), 1.20-1.13 (m, 2H), 0.95-0.88 (m, 2H).  m/z (ESI) ⁺: 366.0 [M+H] ⁺.

參照實施例1，在步驟5中的使用相應的起始原料，製備得到表1所示的化合物。

表 1

化合物	結構	m/z (ESI) +[M+H] +
391		379.9
446		416.2
447		407.8

實施例 2 ：化合物 397 的製備

步驟 1 ： ( 順 ) -2,6- 二甲基四氫 -2 H- 吡喃 -4- 醇 (2-1) 的合成

向2,6-二甲基-4 H-吡喃-4-酮(5.00 g，40.3 mmol)的乙醇(50 mL)溶液中加入Pd/C(10%，0.500 g)，35℃下在H ₂(4 atm)下攪拌反應混合物20 h。反應混合物通過矽藻土過濾，濾液減壓濃縮得到淺黃色晶體形式的化合物2-1(5.00 g，95.4%)。m/z (ESI) ⁺: 131.1 [M+H] ⁺.

步驟 2 ： 1- 異丙基 -4- ( 4,4,5,5- 四甲基 -1,3,2- 二氧苯 甲醛 -2- 基 ) -1 H- 吡唑 (2-2) 的合成

室溫下，向4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧苯並呋喃-2-基)-1 H吡唑(5.00 g，25.8 mmol)和Cs ₂CO ₃(12.6 g，38.6 mmol)在乙腈(100 mL)中的懸浮液中添加2-碘丙烷(6.57 g，38.6 mmol)。將混合物加熱至60℃並攪拌20小時。反應混合物通過矽藻土過濾，濾液減壓濃縮。殘餘物通過矽膠柱管柱層析法(PE/EA=4:1)純化，得到無色油狀化合物2-2(5.80 g，95.2%)。 ¹HNMR (300 MHz, CDCl ₃) δ7.78 (s, 1H), 7.73 (s, 1H), 4.51 (hept, J= 6.7 Hz, 1H), 1.49 (d, J= 6.7 Hz, 6H), 1.31 (s, 12H).

步驟 3 ： 4- (( 2 R , 4 R , 6 S ) -2,6- 二甲基四氫 -2 H- 吡喃 -4- 基 ) 氧基 ) -3- 碘 -1- ( 4- 甲氧基苄基 ) -1 H- 吡唑 [4,3- c] 吡啶 (2-3) 的合成：

室溫下，向化合物2-1(510 mg，3.90 mmol)的DMA(10 mL)溶液中加入NaH(60%)(187 mg，4.68 mmol)。攪拌10分鐘後，添加化合物1-4(1.57 g，3.9 mmol)。將所得混合物加熱至120℃並攪拌20小時。冷卻至室溫後，加入水(100 mL)，用EtOAc(100 mL*2)萃取所得混合物。合併的有機層用鹽水清洗，無水Na ₂SO ₄乾燥，過濾並濃縮以得到殘餘物。通過矽膠管柱層析(PE/EA=3:2)純化殘餘物，得到化合物2-3(680 mg，35.3%)，為淡黃色油狀物。m/z (ESI) ⁺: 493.7 [M+H] ⁺.

步驟 4 ： 4- (( 2 R , 4 R , 6 S ) -2,6- 二甲基四氫 -2 H- 吡喃 -4- 基 ) 氧基 ) -3- ( 1- 異丙基 -1 H- 吡唑 -4- 基 ) -1- ( 4- 甲氧基苄基 ) -1 H- 吡唑 [4,3-c] 吡啶 (2-4) 的合成：

向化合物2-3(176 mg，0.357 mmol)、化合物2-2(90 mg，0.38 mmol)和Na ₂CO ₃(121 mg，1.14 mmol)在DMSO/H ₂O(5 mL/0.5 mL)中的混合物中添加Pd(dppf)Cl ₂(27 mg，0.038 mmol)。將混合物脫氣並用氮氣吹掃3次，然後在80℃的氮氣氣氛下攪拌20小時。冷卻至室溫後，加入EA和水。分離有機層，用鹽水洗滌，無水Na ₂SO ₄乾燥，過濾並濃縮，得到殘餘物。殘餘物通過矽膠柱管柱層析(PE/EA = 32:3)純化，得到淺棕色固體形式的化合物2-4(100 mg，59.0%)。m/z (ESI) ⁺: 475.8 [M+H] ⁺.

步驟 5 ： 4- (( 2 R , 4 R , 6 S ) -2,6- 二甲基四氫 -2 H- 吡喃 -4- 基 ) 氧基 ) -3- ( 1- 異丙基 -1 H- 吡唑 -4- 基 ) -1 H- 吡唑 [4,3- c] 吡啶 (397) 的合成：

類似於實施例1步驟7，由化合物2-4合成4-((2 R,4 R,6 S)-2,6-二甲基四氫-2 H-吡喃-4-基)氧基)-3-(1-異丙基-1 H-吡唑-4-基)-1 H-吡唑[4,3- c]吡啶(397)，得到白色固體。 ¹HNMR (400 MHz, CD ₃OD) δ8.31 (s, 1H), 8.14 (s, 1H), 7.86 (d, J= 6.1 Hz, 1H), 7.07 (d, J= 6.1 Hz, 1H), 5.54-5.45 (m, 1H), 4.67-4.59 (m, 1H), 3.76-3.68 (m, 2H), 2.39-2.34 (m, 2H), 1.60 (d, J= 6.7 Hz, 6H), 1.47-1.38 (m, 2H), 1.28 (d, J= 6.2 Hz, 6H).  m/z (ESI) ⁺: 355.8 [M+H] ⁺.

參照實施例2，使用適當相應的起始原料，製備得到表2所示化合物。

表 2

化合物	結構	m/z(ESI) +[M+H] +	RT (min) a
395		354.9	2.9
404		354.9	4.35
396		368.8	2.57
405		368.8	2.87

^a : SFC(掌性管柱層析柱chiralpak-IC, 4.6 mm x 250 mm, 5 µm, 洗脫劑CO ₂-IPA (0.2% DEA)).

實施例 3 ：化合物 407 和 421 的製備

步驟 1 ： (2 R,6 S)-2,6- 二甲基四氫 -4 H- 吡喃 -4- 酮 (3-1) 的合成

向2,6-二甲基-4 H-吡喃-4-酮(100 g，0.810 mol)的乙醇(800 mL)溶液中加入Pd/C(10%，10 g)，30℃在H ₂(2 atm)下攪拌該混合物8h。該混合物通過矽藻土過濾，濾液在真空中濃縮。殘餘物通過矽膠柱管柱層析(PE/EA=3:1)純化，得到無色油狀化合物3-1粗品(53.0 g，51.1%)。m/z (ESI)+: 129.1 [m+H] ⁺。

步驟 2 ： (2 R,6 S)-2,6- 二甲基四氫 -4 H- 吡喃 -4- 酮肟 (3-2) 的合成

將化合物3-1(15 g，0.12 mol)、鹽酸羥胺(8.1 g，0.12 mol)和NaOAc(19.7 g，0.24 mol)在乙醇(150 mL)中的懸浮液加熱至60℃並攪拌3h。冷卻至室溫後，過濾混合物，並在真空中濃縮濾液以得到殘餘物。殘餘物在EtOAc中稀釋並用鹽水清洗。將分離的有機層以無水Na ₂SO ₄乾燥，過濾並濃縮以得到殘餘物。殘餘物通過矽膠柱管柱層析(PE/EA=3:7)純化，得到化合物3-2，白色固體(16.0 g，95.6%)。m/z (ESI)+: 144.2 [m+H] ⁺。

步驟 3 ： (2 R,6 S)-2,6- 二甲基四氫 -2 H- 吡喃 -4- 胺 (3-3) 的合成

向LiAlH4(5.7 g，0.15 mol)在THF(200 mL)的懸浮液中， 0℃下逐滴添加化合物3-2(7.2 g，0.050 mol)溶液。然後將混合物加熱至60℃並攪拌6小時。用冰水浴冷卻至0℃後，依次添加水(5.7 mL)、15% NaOH水溶液(5.7 mL)和水(17.1 mL)以使反應淬滅。然後添加Mg ₂SO ₄，並在室溫下攪拌1小時。過濾混合物，並減壓濃縮濾液，得到無色油狀物化合物3-3(6.10 g，94.5%)。m/z (ESI)+: 130.1[m+H] ⁺。

步驟 4 ： 4- (( 2 R , 4 R , 6 S ) -2,6- 二甲基四氫 -2 H- 吡喃 -4- 基 ) 氧基 ) -3- ( 1- 異丙基 -1 H- 吡唑 -4- 基 ) -1- ( 4- 甲氧基苄基 ) -1 H- 吡唑 [4,3- c] 吡啶 (3-4) 的合成

將化合物1-4(18.6 g，46.5 mmol)和化合物3-3(6.00 g，46.5 mmol)在DIEA(100 mL)中的混合物在140℃下攪拌36 h。將混合物減壓濃縮得到殘餘物。通過矽膠管柱層析(DCM/MeOH=97:3)純化殘餘物，得到化合物3-4，棕色固體(10.0 g，43.7%)。m/z (ESI)+: 492.8[m+H] ⁺。

步驟 5 ： 3- ( 6- (( 2 S , 6 R ) -2,6- 二甲基嗎啉基 ) 嘧啶 -4- 基 ) -N- ( (2 R,6 S)-2,6- 二甲基四氫 -2 H- 吡喃 -4- 基 ) -1- ( 4- 甲氧基苄基 ) -1 H- 吡唑 [4,3- c] 吡啶 -4- 胺 (3-5) 的合成

氮氣保護，向DMF(20 mL)中的中間體3-4(1.00 g，2.00 mmol)和中間體1-2粗品(純度約60%，1.4 g，2.35 mmol)的混合物中添加Pd(PPh ₃) ₂Cl ₂(280 mg，0.400 mmol)和CuI(76 mg，0.400 mmol)。將混合物脫氣並用氮氣吹掃3次，然後在120℃下攪拌2小時。冷卻至室溫並用EtOAc和水稀釋後，用鹽水清洗分離的有機層，以無水Na ₂SO ₄乾燥，過濾並濃縮以得到殘餘物。通過矽膠管柱層析(PE/EA=1:9)純化殘餘物，得到呈淺棕色固體的中間體3-5(300 mg，26.9%)。m/z (ESI)+: 557.7 [m+H] ⁺。

步驟 6 ： 3- ( 6-((2 S,6 R)-2,6- 二甲基嗎啉基 ) 嘧啶 -4- 基 )- N-((2 R,4 R,6 S)-2,6- 二甲基四氫 -2 H- 吡喃 -4- 基 )-1 H- 吡唑 [4,3- c] 吡啶 -4- 胺 (407) 和 3-(6-((2 S,6 R)-2,6- 二甲基嗎啉基 ) 嘧啶 -4- 基 )- N-((2 R,4 S,6 S)-2,6- 二甲基四氫 -2H- 吡喃 -4- 基 )-1 H- 吡唑 [4,3- c ] 吡啶 -4- 胺 ( 421 ) 的合成

向中間體3-5(300 mg，0.54 mol)的TFA(20 mL)溶液中加入TfOH(2 mL)。混合物室溫下攪拌1小時。濃縮並在EtOAc中稀釋，用1 mol/L NaOH水溶液以及鹽水洗滌，以無水Na ₂SO ₄乾燥，過濾並濃縮以得到殘餘物。殘餘物通過矽膠柱管柱層析法(PE/EA=1:9)純化，然後通過製備HPLC(水，Gemini 5 µm，C18 150 x 21.2 mm，20 mL/min，ACN/H ₂O(0.1%TFA)=33%：67%，保持10 min)分離，得到化合物407(16.5 mg)RT=6.55 min和化合物421(8.3 mg)RT=8.07 min的白色固體。

化合物 407 ： ¹HNMR (400 MHz, CD ₃OD) δ8.65 (s, 1H), 7.68 (s, 1H), 7.56 (d, J= 7.2 Hz, 1H), 7.03 (d, J= 7.2 Hz, 1H), 4.50-4.30 (m, 2H), 4.08-3.96 (m, 1H), 3.74-3.64 (m, 4H), 2.70 (t, J= 11.8 Hz, 2H), 2.23-2.16 (m, 2H), 1.46-1.35 (m, 2H), 1.31-1.24 (m, 12H); m/z (ESI) ⁺: 437.9 [M+H] ⁺.

化合物 421 ： ¹HNMR (400 MHz, CD ₃OD) δ8.55 (s, 1H), 7.74 (s, 1H), 7.59 (d, J= 7.2 Hz, 1H), 7.07 (d, J= 7.2 Hz, 1H), 4.63-4.36 (m, 2H), 4.32 (s, 1H), 4.01-3.93 (m, 2H), 3.73-3.64 (m, 2H), 2.70 (t, J= 11.8 Hz, 2H), 2.03-1.94 (m, 2H), 1.76-1.66 (m, 2H), 1.30-1.24 (m, 12H); m/z (ESI) ⁺: 437.9 [M+H] ⁺.

參照實施例1和實施例3，在實施例1步驟1使用合適的胺取代(2 R,6 S)-2,6-二甲基嗎啉，和/或在實施例3步驟4使用合適的胺取代 3-3，合成表 3中的化合物。其中，未註明保留時間RT的化合物527、528、561和562為選用掌性原料製備得到。

表 3

化合物	結構	m/z (ESI) +[M+H] +	RT(min) a
424		421.8	4.94 a
438		421.9	8.16 a
425		421.8	10.93 b
440		421.8	12.45 b
486		392.2
487		391.8
519		406.0
520		406.1
527		421.7
528		421.7
561		421.7
562		421.7

^a : SFC (掌性管柱層析柱chiralpak-IC column, 4.6 mm x 250 mm, 5 µm, 洗脫劑CO ₂-EtOH (0.2% NH ₄OH)). ^b : Prep-HPLC (Waters, Gemini 5 µm, C18 150 x 21.2 mm, 20 mL/min, ACN/H ₂O (0.1%TFA ) = 2%:98%, 保持6 min, 隨後23%:77%, 保持10 min).

實施例 4 ：化合物 422 和化合物 445 的製備

步驟 1 ： 4- 碘 -1- 異丙基 -1 H- 咪唑 (4-1) 的合成

向4-碘代-1 H-咪唑(20 g，0.1 mol)和2-碘代丙烷(21 g，0.12 mol)在CH ₃CN(50 mL)中的溶液中添加Cs ₂CO ₃(50 g，0.15 mol)。將所得混合物在60℃下攪拌過夜。冷卻至室溫並過濾，濾液濃縮。殘餘物溶解在EtOAc中，用鹽水洗滌，經無水Na ₂SO ₄乾燥，過濾並濃縮。殘餘物通過矽膠管柱層析(PE/EA=1:1)純化，得到無色油狀物化合物4-1(20 g，82%)。m/z (ESI)+: 236.8 [m+H] ⁺。

步驟 2 ： ( 1- 異丙基 -1 H- 咪唑 -4- 基 ) 硼酸 (4-2) 的合成

氮氣保護，-75℃向化合物4-1(3 g，13 mmol)和2-異丙氧基-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧苯甲醛(7.1 g，38 mmol)的THF(20 mL)溶液中，緩慢滴加正丁基鋰( n-BuLi)的正己烷(2.4 M，16 mL，38 mmol)溶液。滴畢在-75℃下攪拌2小時。向混合物中添加NH ₄Cl(飽和水溶液，50 mL)以使反應淬滅。用EtOAc萃取，有機層用鹽水清洗，無水Na ₂SO ₄乾燥，過濾並濃縮，得到殘餘物。通過矽膠管柱層析(DCM/MeOH=10:1)純化殘餘物，得到化合物4-2，為白色固體(1.7 g，87%)。m/z (ESI)+: 155.2 [m+H] ⁺。

步驟 3 ： N-((2 R,6 S)-2,6- 二甲基四氫 -2 H- 吡喃 -4- 基 )-3-(1- 異丙基 -1 H- 咪唑 -4- 基 )-1-(4- 甲氧基苄基 )-1 H- 吡唑 [4,3- c] 吡啶 -4- 胺 (4-3) 的合成

以類似於實施例2步驟4的方法，由化合物4-2和3-4合成 N-((2 R,6 S)-2,6-二甲基四氫-2 H-吡喃-4-基)-3-(1-異丙基-1 H-咪唑-4-基)-1-(4-甲氧基苄基)-1 H-吡唑[4,3- c]吡啶-4-胺(4-3)，為白色固體。m/z (ESI)+: 475.2 [m+H] ⁺。

步驟 4 ： N -((2 R,4 R,6 S)-2,6- 二甲基四氫 -2 H- 吡喃 -4- 基 )-3-(1- 異丙基 -1 H- 咪唑 -4- 基 )-1 H- 吡唑 [4,3- c] 吡啶 -4- 胺 (422) 和 N -((2 R,4 S,6 S)-2,6- 二甲基四氫 -2 H- 吡喃 -4- 基 )-3-(1- 異丙基 -1 H- 咪唑 -4- 基 )-1 H- 吡唑 [4,3- c] 吡啶 -4- 胺 (445) 的合成

向中間體4-3(200 mg，0.42 mol)的TFA(10 mL)溶液中添加TfOH(0.5 mL)。將混合物在室溫下攪拌1小時。將混合物濃縮並在EtOAc中稀釋，用1 M NaOH水溶液以及鹽水洗滌，以無水Na ₂SO ₄乾燥，過濾並濃縮以得到殘餘物。殘餘物通過矽膠管柱層析(PE/EA=1:9)純化，然後通過SFC(掌性管柱層析柱chiralpak IC column，4.6 mm x 250 mm，5 µm，用CO ₂-EtOH(0.2% NH ₄OH)洗脫)分離，得到化合物422(9 mg)RT=15.6 min和化合物445(3 mg)RT=10.09 min，為白色固體。

化合物 422: ¹HNMR (400 MHz, CD ₃OD) δ7.95 (s, 1H), 7.79 (s, 1H), 7.59 (d, J= 6.6 Hz, 1H), 6.76 (d, J= 6.6 Hz, 1H), 4.60-4.52 (m, 1H), 4.17-4.07 (m, 1H), 3.75-3.65 (m, 2H), 2.23-2.13 (m, 2H), 1.58 (d, J= 6.6 Hz, 6H), 1.38-1.31 (m, 2H), 1.27 (d, J= 6.1 Hz, 1H); m/z (ESI) ⁺: 355.2 [M+H] ⁺.

化合物 445: ¹HNMR (400 MHz, CD ₃OD) 7.88 (s, 1H), 7.84 (s, 1H), 7.61 (d, J= 6.6 Hz, 1H), 6.78 (d, J= 6.6 Hz, 1H), 4.65-4.55 (m, 1H), 4.45-4.37 (m, 1H), 4.15-4.05 (m, 2H), 1.98-1.88 (m, 2H), 1.73-1.63 (m, 2H), 1.59 (d, J= 6.6 Hz, 6H), 1.25 (d, J= 6.1 Hz, 1H); m/z (ESI) ⁺: 355.2 [M+H] ⁺.

參照實施例3和實施例4，在實施例3步驟4中使用合適的胺代替胺 3-3，可以製備表4所示化合物。

表 4

化合物	結構	m/z (ESI) +[M+H] +
426		283.1
516		324.8

實施例 5 ：化合物 423 和 439 的製備

步驟 1 ： 1- 異丙基 -3- ( 4,4,5,5- 四甲基 -1,3,2- 二氧苯 甲醛 -2- 基 ) -1H- 吡唑 (5-1) 的合成

向DMF(10 mL)中的NaH(60%，0.24 g，6 mmol)懸浮液中添加3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧苯並呋喃-2-基)-1H吡唑(1.04 g，5.36 mmol)，在0℃的氮氣氣氛下。將混合物在30℃下攪拌30分鐘。然後將其冷卻至0℃，並逐滴添加2-碘丙烷(0.8 mL，8 mmol)。將所得混合物在室溫下再攪拌30分鐘。向混合物中添加NH ₄Cl飽和水溶液以淬滅反應，然後用乙酸乙酯萃取。有機層用鹽水洗滌，以無水Na ₂SO ₄乾燥，過濾並濃縮，得到殘餘物。殘餘物通過矽膠管柱層析(PE/EA=4:1)純化，得到無色油狀物化合物5-1(550 mg，43%)。 ¹HNMR (300 MHz, CD ₃OD) δ7.67 (d, J= 2.3 Hz, 1H), 6.59 (d, J= 2.3 Hz, 1H), 4.66-4.52 (m, 1H), 1.48 (d, J= 6.7 Hz, 6H), 1.19(s, 12H).

步驟 2 ： N- (( 2R , 6S ) -2,6- 二甲基四氫 -2H- 吡喃 -4- 基 ) -3- ( 1- 異丙基 -1H- 吡唑 -3- 基 ) -1- ( 4- 甲氧基苄基 ) -1H- 吡唑 [4,3-c] 吡啶 -4- 胺 (5-2) 的合成：

以類似於實施例2步驟4的方法，由化合物5-1和3-4合成N-((2R,6S)-2,6-二甲基四氫-2H-吡喃-4-基)-3-(1-異丙基-1H-咪唑-4-基)-1-(4-甲氧基苄基)-1H-吡唑[4,3-c]吡啶-4-胺(5-2)，為白色固體。 m/z (ESI) ⁺: 475.2 [M+H] ⁺.

步驟 3 ： N- (( 2R , 4R , 6S ) -2,6- 二甲基四氫 -2H- 吡喃 -4- 基 ) -3- ( 1- 異丙基 -1H- 吡唑 -3- 基 ) -1H- 吡唑 [4,3-c] 吡啶 -4- 胺 (423) 和 N- (( 2R , 4S , 6S ) -2,6- 二甲基四氫 -2H- 吡喃 -4- 基 ) -3- ( 1- 異丙基 -1H- 吡唑 -3- 基 ) -1H- 吡唑 [4,3-c] 吡啶 -4- 胺 (439) 的合成

向TFA(10 mL)中的中間體5-2(200 mg，0.42 mmol)溶液中添加TfOH(0.5 mL)。將混合物在室溫下攪拌1小時。將混合物濃縮並在EtOAc中稀釋，用1 M NaOH水溶液以及鹽水洗滌，以無水Na ₂SO ₄乾燥，過濾並濃縮以得到殘餘物。殘留物通過矽膠柱管柱層析法(DCM/MeOH=10:1)純化，然後通過SFC(掌性管柱層析柱chiralpak IC column，4.6 mm x 250 mm，5 µm，用CO ₂-IPA(0.2% NH ₄OH)洗脫)分離，得到化合物423(50 mg)，RT=10.55 min，以及化合物439(17 mg)，RT=7.90 min，為白色固體。

化合物 423: ¹HNMR (400 MHz, CD ₃OD) δ7.86 (d, J= 2.4 Hz, 1H), 7.61 (d, J= 6.9 Hz, 1H), 6.95-6.90 (m, 2H), 4.76-4.66 (m, 1H), 4.21-4.13 (m, 1H), 3.77-3.68 (m, 2H), 2.28-2.21 (m, 2H), 1.64 (d, J= 6.7 Hz, 6H), 1.44-1.33 (m, 2H), 1.29 (d, J= 6.2 Hz, 6H); m/z (ESI) ⁺: 354.9 [M+H] ⁺.

化合物 439: ¹HNMR (400 MHz, CD ₃OD) δ7.87 (d, J= 2.5 Hz, 1H), 7.70 (d, J= 6.4 Hz, 1H), 6.96 (d, J= 2.5 Hz, 1H), 6.76 (d, J= 6.4 Hz, 1H), 4.67-4.57 (m, 1H), 4.54-4.49 (m, 1H), 4.06-3.97 (m, 2H), 2.04-1.97 (m, 2H), 1.67-1.62 (m, 2H), 1.60 (d, J= 6.8 Hz, 6H), 1.23 (d, J= 6.2 Hz, 6H); m/z (ESI) ⁺: 354.9 [M+H] ⁺.

參照實施例3和實施例5，在實施例3步驟4中使用合適的胺代替胺 3-3，可以製備表5所示化合物。

表 5

化合物	結構	m/z (ESI) +[M+H] +
427		282.9
515		324.9

實施例 6 ：化合物 523 的製備

步驟 1 ： 2-(6-氯嘧啶-4- 基 )-2- 腈基乙酸叔丁酯 (6-1) 的合成

在0℃氮氣下，向4,6-二氯嘧啶(10 g，0.067 mol)和2-腈基乙酸叔丁酯(23.7 g，0.168 mol)的THF(100 mL)溶液中添加氫化鈉(60%，6.71 g，0.168 mol)。室溫下攪拌反應混合物2小時。向混合物中添加NH ₄Cl飽和水溶液以淬滅反應，然後用1 M HCl水溶液將pH值調節到2~3。用EtOAc萃取兩次，合併的有機層用鹽水洗滌，以無水Na ₂SO ₄乾燥，過濾並濃縮，得到白色固體化合物6-1(16 g，94%)。m/z(ESI)+: 253.9[m+H] ⁺。

步驟 2 ： 2-(6-氯嘧啶-4- 基 ) 乙 腈 (6-2) 的合成

向中間體6-1(11 g，0.043 mol)的甲苯(100 mL)溶液中添加對甲苯磺酸一水合物(0.82 g，0.0043 mol)。將混合物在100℃下攪拌3小時。冷卻至室溫並用EtOAc稀釋，用NaHCO ₃飽和水溶液及鹽水洗滌混合物，無水Na ₂SO ₄乾燥，過濾並濃縮以得到殘餘物。通過矽膠管柱層析(PE/EA=7:3)純化殘餘物，得到黃色固體化合物6-2(5.5 g，84%)。m/z(ESI)+: 154.0[m+H] ⁺。

步驟 3 ： 1-(6-氯嘧啶-4- 基 ) 環丁烷 -1- 腈 (6-3) 的合成

在冰水浴中，向碳酸鉀(1.38 g，10 mmol)的DMF(10 mL)懸浮液中滴加中間體6-2(612 mg，4 mmol)和1,3-二溴丙烷(965 mg，4.8 mmol)的DMF(10 mL)溶液。反應混合物室溫下攪拌3h。用EtOAc稀釋混合物，然後用鹽水洗滌，以無水Na ₂SO ₄乾燥，過濾並濃縮，得到殘餘物。通過矽膠管柱層析(PE/EA=1:1)純化殘餘物，得到黃色固體化合物6-3(600 mg，78%)。m/z(ESI)+: 194.0 [m+H] ⁺。

步驟 4 ： 1-(6-( 三甲基錫基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 環丁烷 -1- 腈 (6-4) 的合成

以類似於實施例1步驟2的方法，由化合物6-3合成1-(6-(三甲基錫基)嘧啶-4-基)環丁烷-1-腈(6-4)，為黃色固體。m/z(ESI)+: 323.9 [m+H] ⁺。

步驟 5 ： 3- 碘 -1-(4- 甲氧基苄基 )-N-(2,2,2- 三氟乙基 )-1H- 吡唑 [4,3-c] 吡啶 -4- 胺 (6-5) 的合成

將中間體1-4(30 g，0.075 mol)、2,2,2-三氟乙胺鹽酸鹽(30.5 g，0.225 mol)和DBU(23 g，0.15 mmol)的二甲苯(250 mL)懸浮液密封並在油浴中加熱至190℃，攪拌3 h。冷卻至室溫並在EtOAc中稀釋，用鹽水洗滌，以無水Na ₂SO ₄乾燥，過濾，濃縮，得到殘餘物。室溫下，將殘餘物在MTBE中攪拌30分鐘，過濾，得到化合物6-5(24 g，69%)，為白色固體。m/z(ESI)+: 463.1 [m+H] ⁺。

步驟 6 ： 1-(6-(1-(4- 甲氧基苄基 )-4-(2,2,2- 三氟乙基 ) 胺基 )-1H- 吡唑 [4,3-c] 吡啶 -3- 基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 環丁烷 -1- 腈 (6-6) 的合成

以類似於實施例3步驟5的方法，由化合物6-4和6-5合成1-(6-(1-(4-甲氧基苄基)-4-(2,2,2-三氟乙基)胺基)-1H-吡唑[4,3-c]吡啶-3-基)嘧啶-4-基)環丁烷-1-腈(6-6)，為黃色固體。m/z(ESI)+:493.9[m+H]+。

步驟 7 ： 1-(6-(4-( ( 2,2,2- 三氟乙基 ) 胺基 )-1H- 吡唑 [4,3-c] 吡啶 -3- 基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 環丁烷 -1- 腈 (523) 的合成

以類似於實施例3步驟6的方法，由化合物6-6合成1-(6-(4-((2,2,2-三氟乙基)胺基)-1H-吡唑[4,3-c]吡啶-3-基)嘧啶-4-基)環丁烷-1-腈(523)，為黃色固體。 ¹HNMR (400 MHz, DMSO- d6) δ13.65 (s, 1H), 10.26 (s, 1H), 8.08 (s, 1H), 7.80 (d, J= 6.0 Hz, 1H), 7.32 (s, 1H), 6.80 (d, J= 6.0 Hz, 1H), 4.48-4.35 (m, 2H), 3.92-3.81 (m, 2H), 2.34-2.27 (m, 2H), 1.90-1.80 (m, 2H);  m/z (ESI) ⁺: 373.8 [M+H] ⁺.

參照實施例6，在步驟2中使用合適的鹵代烴代替1,3-二溴丙烷，或在步驟5使用合適的胺取代2,2,2-三氟乙胺，製備表6所示化合物。

表 6

化合物	結構	m/z (ESI) +[M+H] +
524		360.0
525		361.8
508		399.8
529		367.8

實施例 7 ：化合物 521 和 509 的製備

步驟 1 ： 2- ( 4,4,5,5- 四甲基 -1,3,2- 二氧苯 甲醛 -2- 基 ) -1H- 吡唑 -1- 基 ) 乙腈 (7-1) 的合成

0℃攪拌下，向4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧苯並呋喃-2-基)-1H吡唑(10 g，0.052 mol)的DMF(150 mL)溶液中添加氫化鈉(60%，4.12 g，0.103 mol)。攪拌30分鐘後，添加2-溴代乙腈(12.35 g，0.103 mol)。混合物在室溫下攪拌過夜。向混合物中添加NH ₄Cl飽和水溶液淬滅反應，並用乙酸乙酯萃取兩次。合併的有機層用鹽水洗滌，無水Na ₂SO ₄乾燥，過濾並濃縮以得到殘餘物。通過矽膠管柱層析(DCM/MeOH=97:3)純化殘餘物，得到化合物7-1(2.0 g，17%)灰白色固體。m/z (ESI)+: 234.0[m+H] ⁺。

步驟 2 ： 5-(4-(4,4,5,5- 四甲基 -1,3,2- 二氧苯 甲醛 -2- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ) 螺 [2.3] 己烷 -5- 腈 (7-2) 的合成

氮氣保護，-5 ℃~0 ℃下向LiHMDS(1M，43 mL，43 mmol)的THF(150 mL)溶液中，滴加中間體7-1(2.05 g，8.8 mmol)和1,1-二(溴甲基)環丙烷(2.0 g，8.8 mmol)的THF(50 mL)溶液。在該溫度下攪拌混合物10分鐘，然後用甲酸淬滅反應。將混合物濃縮，得到殘餘物。殘餘物通過矽膠管柱層析(DCM/MeOH=99:1)純化，得到無色油狀物化合物7-2(170 mg，26%)。m/z (ESI)+: 300.0 [m+H] ⁺。

步驟 3 ： 5-(4-(1-(4- 甲氧基苄基 )-4-(2,2,2- 三氟乙基 ) 胺基 )-1H- 吡唑 [4,3-c] 吡啶 -3- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ) 螺 [2.3] 己烷 -5- 腈 (7-3) 的合成

以類似於實施例2步驟4的方法，由化合物7-2和6-5合成5-(4-(1-(4-甲氧基苄基)-4-(2,2,2-三氟乙基)胺基)-1H-吡唑[4,3-c]吡啶-3-基)-1H-吡唑-1-基)螺[2.3]己烷-5-腈(7-3)，為黃色固體。 ¹HNMR (300 MHz, CDCl ₃) δ8.04 (s, 1H), 7.96 (s, 1H), 7.87 (d, J= 6.1 Hz, 1H), 7.20-7.15 (m, 2H), 6.86-6.79 (m, 2H), 6.68 (d, J= 6.1 Hz, 1H), 5.43 (s, 2H), 5.16 (t, J= 6.3 Hz, 1H), 4.37-4.24 (m, 2H), 3.76 (s, 3H), 3.34-3.26 (m, 2H), 3.03-2.95 (m, 2H), 0.85-0.77 (m, 2H), 0.67-0.59 (m, 2H); m/z (ESI) ⁺: 507.7 [M+H] ⁺.

步驟 4 ： 3- 亞乙基 -1-(4-(4-( ( 2,2,2- 三氟乙基 ) 胺基 )-1H- 吡唑 [4,3-c] 吡啶 -3- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ) 環丁烷 -1- 腈 (521) 和 5-(4-((2,2,2,2- 三氟乙基 ) 胺基 )-1H- 吡唑 [4,3-c] 吡啶 -3- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ) 螺 [2.3] 己烷 -5- 腈 (509) 的合成

以類似於實施例1步驟7的方法，由化合物7-3合成1-(6-(4-((2,2,2-三氟乙基)胺基)-1H-吡唑[4,3-c]吡啶-3-基)嘧啶-4-基)環丁烷-1-腈(521)和5-(4-(4-((2,2,2-三氟乙基)胺基)-1H-吡唑[4,3-c]吡啶-3-基)-1H-吡唑-1-基)螺[2.3]己烷-5-腈(509)，為白色固體。

化合物 521:RT = 8.3 min (製備HPLC (GILSON, Gemini 5 µm, C18 150 x 21.2 mm, 20 mL/min, ACN/H ₂O (0.05%NH ₄OH) = 35%:65%~60%:40%，10 min內)); ¹HNMR (400 MHz, CD ₃OD) δ8.26 (s, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.84 (d, J= 6.2 Hz, 1H), 6.89 (d, J= 6.2 Hz, 1H), 5.60-5.52 (m, 1H), 4.28 (q, J= 9.5 Hz, 2H), 3.79-3.64 (m, 4H), 1.66-1.60 (m, 3H); m/z (ESI) ⁺: 387.8 [M+H] ⁺.

化合物 509:RT = 7.7 min (製備HPLC (GILSON, Gemini 5 µm, C18 150 x 21.2 mm, 20 mL/min, ACN/H ₂O (0.05%NH ₄OH) = 35%:65%~60%:40%，10 min內)); ¹HNMR (400 MHz, CD ₃OD) δ8.30 (s, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.84 (d, J= 6.2 Hz, 1H), 6.89 (d, J= 6.2 Hz, 1H), 5.60-5.52 (m, 1H), 4.29 (q, J= 9.5 Hz, 2H), 3.30-3.26 (m, 2H), 3.04-2.98 (m, 2H), 0.83-0.77 (m, 2H), 0.66-0.59 (m, 2H);  m/z (ESI) ⁺: 387.9 [M+H] ⁺.

實施例 8 ：化合物 526 的製備

步驟 1 ： 3-(6-( ( 1R ， 5S)-6- 氧雜 -3- 氮雜雙環 [ 3.1.1] 庚烷 -3- 基 ) 嘧啶 -4- 基 )-1-(4- 甲氧基苄基 )-N-(2,2,2- 三氟乙基 )-1H- 吡唑 [4,3-c] 吡啶 -4- 胺 (8-1) 的合成

以類似於實施例1的方法，由4,6-二氯嘧啶，在適當步驟使用適當試劑合成3-(6-((1R，5S)-6-氧雜-3-氮雜雙環[3.1.1]庚烷-3-基)嘧啶-4-基)-1-(4-甲氧基苄基)-N-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吡唑[4,3-c]吡啶-4-胺(8-1)。

步驟 2 ： ( 3S , 5R)-1-(6-(4-( ( 2,2,2- 三氟乙基 ) 胺基 )-1H- 吡唑 [4,3-c] 吡啶 -3- 基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 哌啶 -3,5- 二醇 (526) 的合成

向化合物8-1(90 mg，0.176 mmol)的TFA(10 mL)溶液中添加TfOH(0.5 mL)。所得混合物在室溫下攪拌1h，然後濃縮，加入DCM稀釋，然後用1 M NaOH水溶液和鹽水洗滌。將分離的有機層以無水Na ₂SO ₄乾燥，過濾並濃縮以得到殘餘物。殘餘物通過製備TLC(DCM/MeOH=5:1)進行純化，並通過製備HPLC進行純化(Gilson, Gemini 5 µm, C18 150 x 21.2 mm, 20 mL/min, ACN/H ₂O (0.1%FA ) = 35%:65% ~ 50%:50% in 10 min)，得到化合物 526(20 mg)，為白色固體。 ¹HNMR (400 MHz, CD ₃OD) δ8.58 (d, J= 1.0 Hz, 1H), 7.77 (d, J= 6.3 Hz, 1H), 7.71 (d, J= 1.0 Hz, 1H), 6.87 (d, J= 6.3 Hz, 1H), 4.39 (q, J= 9.5 Hz, 2H), 4.16-4.08 (m, 2H), 4.05-3.90 (m, 2H), 3.68-3.58 (m, 2H), 1.95 (t, J= 5.4 Hz, 2H).  m/z (ESI) ⁺: 410.0 [M+H] ⁺.

實施例 9 ：化合物 522 的製備

步驟 1 ： ( 2R , 6S)-4-(2- 溴吡啶 -4- 基 )-2,6- 二甲基嗎啉 (9-1) 的合成

氮氣氣氛下，向2-溴-4-碘吡啶(1.0 g，3.52 mmol)，(2R,6S)-2,6-二甲基嗎啉(400 mg，3.52 mmol)和K ₂CO ₃(1.5 g，10.5 mmol)的DMSO(20 mL)懸浮液中添加碘化亞銅(70 mg，0.352 mmol)和L-脯胺酸(80 mg，0.704 mmol)。將所得混合物脫氣並用氮氣吹掃三次，然後在60℃下攪拌1h。反應混合物在EtOAc中稀釋並用鹽水洗滌。將分離的有機層以無水Na ₂SO ₄乾燥，過濾並濃縮以得到殘餘物。通過矽膠管柱層析(DCM/MeOH=99:1)純化殘餘物，得到白色固體化合物9-1(400 mg，42%)。m/z (ESI)+: 270.8, 272.8 [m+H] ⁺.

步驟 2 ： 3-(4-( ( 2S , 6R)-2,6- 二甲基嗎啉基 ) 吡啶 -2- 基 )-N-(2,2,2- 三氟乙基 )-1H- 吡唑 [4,3-c] 吡啶 -4- 胺 (522) 的合成

以類似於實施例1的方法，由化合物9-1，在適當步驟使用適當試劑，合成3-(4-((2S,6R)-2,6-二甲基嗎啉基)吡啶-2-基)-N-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吡唑並[4,3-c]吡啶-4-胺(522)。 ¹HNMR (400 MHz, CDCl ₃) δ8.25 (d, J= 6.1 Hz, 1H), 7.87 (d, J= 6.1 Hz, 1H), 7.76 (d, J= 2.6 Hz, 1H), 6.71 (dd, J= 6.1, 2.6 Hz, 2H), 4.50-4.36 (m, 2H), 3.81-3.71 (m, 4H), 2.66-2.58 (m, 2H), 1.30 (d, J= 6.2 Hz, 6H.  m/z (ESI) ⁺: 406.8 [M+H] ⁺.

製備例：對照化合物的合成 對照化合物

參照實施例1的方法合成上述對照化合物，不同之處在於：不進行步驟1，使用2-氯吡啶進行步驟2，將製備得到的2-(三甲基錫基)吡啶替換實施例1中的化合物1-2，並在步驟5中使用CF ₃CH ₂NH ₂替換環丙烷胺，得到對照化合物。

實施例 10 激酶抑制測定

材料

激酶LRRK2 G2019S蛋白源自Carna，LRRKtide源自Signalchem，ATP源自Promega，DMSO源自Sigma。

激酶試驗方法

在室溫下進行所有測定。將待測化合物溶解稀釋後加入到384孔板中，加入2.5 μL的2×激酶反應緩衝液，離心，加入2.5μL的2×受質和ATP混合物，離心，加入4 μL ADP-Glo試劑，在室溫孵育40min。加入8 μL LRRKtide，在室溫孵育40min，然後用Envision 2104 multi-label Reader讀取資料。

結果

本發明實施例化合物對LRRK2 G2019S抑制的IC ₅₀值如下表3所示。

表3

化合物	LRRK2 IC 50 (G2019S ，nM)
對照化合物	12.0
447	2.8
527	1.2
391	9.5
407	2.2
424	3.7
425	1.9
440	36.5
486	3.1
487	2.4
515	27.7
520	4.8
523	2.4
526	5.1
528	1.6
561	1.3
379	3.2
473	2.8

實施例 11 HEK293 細胞激酶抑制測定

培養HEK293細胞，加入胰酶收集細胞，加入培養基並調節細胞密度為2×10 ⁵/ml。構建脂質體-DNA複合物，並按照1：20與HEK293細胞混合，加入到384孔板中，在37℃孵育20~30小時。加入酶受質和待測化合物的混合溶液，室溫下孵育2-3分鐘，加入NanoBRET 試劑(Promega)，在10min內用酶標儀(Envision 2104)分別讀取供體螢光素酶蛋白(donor)在 450 nm和受體螢光基團(acceptor)在610 nm的生物發光，並按照以下公式計算受試品的BRET比率，包括了背景矯正選項。 Acceptor _sample：加入待測化合物的610 nm螢光； Donor _sample：加入待測化合物的450 nm螢光； Acceptor _{no-tracer control}：背景(不加待測化合物)的610 nm螢光； Donor _{no-tracer control}：背景(不加待測化合物)的450 nm螢光。

待測化合物對細胞LRRK2酶的抑制活性通過下式計算： 百分比抑制率=100-(受試品BRET 比率-全微板陽性對照平均BRET比率)/(全微板陰性對照平均BRET比率-全微板陽性對照平均BRET比率)×100.

待測化合物對細胞LRRK2酶的IC ₅₀計算：使用Graphpad軟體，對百分比抑制率與化合物對數濃度曲線進行非線性回歸擬合(量效-變斜率方法)。 Y=Bottom + (Top-Bottom)/(1+10^((LogIC50-X)*Hill Slope)) X: 對數抑制劑濃度；Y: 百分比抑制率；Bottom：最小值；Top：最大值；Hill Slope：希爾斜率

結果

本發明部分實施例化合物對HEK293細胞內LRRK2、LRRK2-2019S和LRRK2-R1441C抑制的IC ₅₀值匯總於下表：

化合物	LRRK2 IC 50 (nM)	LRRK2 IC 50 (G2019S ， nM)	LRRK2 IC 50 (R1441C ， nM)
379	137.1	64.4	188.2
447	246.5	97.5	296.6
527	24.7	16.3	45.9
473	503.9	182.0	＞3000

實施例 12 口服給藥對小鼠的體內藥效研究

1. 實驗目的：通過觀察化合物527口服給藥對敲入G2019S突變LRRK2基因小鼠的腦內LRRK2磷酸化水準抑制作用，測定化合物527的體內藥效。

2. 實驗方法： (1)動物：B6.Cg-Tg(Lrrk2*G2019S)2Yue/J 轉基因小鼠購自Jackson Laboratory，與C57BL/6J小鼠交配繁殖得帶有G2019S突變的LRRK2雜合子小鼠(LRRK2-G2019S小鼠)。雌雄各半，體重16-20 g，週齡15~17週。 (2)分組及給藥：小鼠入組根據體重隨機分為5個實驗組中，每組8隻動物，雌鼠和雄鼠各4隻。實驗分組具體給藥見下表1。其中，G1組為溶劑對照組，組G2~組G5 分別為給予527化合物的劑量為1 mg/kg、3 mg/kg、10 mg/kg和30 mg/kg的組：

表1：實驗分組及給藥方式

組別	受試藥物	動物數 ( 隻 )	劑量 (mg/kg)	給藥途徑	取組織時間 ( 給藥後 )	給藥頻次
G1	等體積溶劑	8	-	灌胃	1 h	1
G2	527 1 mg/kg	8	1	灌胃	1 h	1
G3	527 3 mg/kg	8	3	灌胃	1 h	1
G4	527 10 mg/kg	8	10	灌胃	1 h	1
G5	527 30 mg/kg	8	30	灌胃	1 h	1

(3)腦內LRRK2活性測定：給藥後1h動物用CO ₂安樂死，採集腦組織用液氮速凍後-80℃凍存至後繼實驗。腦組織在含有cOmplete™ 蛋白酶抑制劑混合物(Roche，04693124001)和磷酸酶酶抑制劑混合物2(sigma，R0278)RIPA緩衝液中勻漿，使用BCA法進行蛋白定量。Western blot方法檢測勻漿中pS935位磷酸化LRRK2水準(一抗Anti-LRRK2 (phospho S935) antibody，abcam，ab133450)和總LRRK2水準(一抗 Anti-LRRK2 antibody，Abcam，ab133518)，腦內LRRK2活性水準以LRRK2的S935位磷酸化水準表示，即pS935-LRRK2和總LRRK2比值(pS935-LRRK2/LRRK2)。 (4)結果及結論：腦組織Western Blot的典型結果見圖1，527化合物對腦組織LRRK2磷酸化的抑制作用見圖2。

結果表明，化合物527口服給藥抑制腦組織LRRK2磷酸化的起效劑量為10 mg/kg，最大藥效劑量(定義為抑制LRRK2磷酸化水準60%)為30 mg/kg，相應的人等效劑量（以體重為70 kg計算）分別為57 mg和171 mg。

以上對本發明示例性的實施方式進行了說明。但是，本發明的保護範圍不拘囿於上述實施方式。凡在本發明的精神和原則之內，本發明所屬技術領域中具有通常知識者所作出的任何修改、均等替換或改進等，均應涵蓋在本發明的保護範圍之內。

無

圖1為實施例12中LRRK2-G2019S小鼠腦組織LRRK2表達水準的western blot結果例圖； 圖2為實施例12中化合物527對LRRK2-G2019S小鼠腦組織LRRK2磷酸化水準的作用圖，其中：資料為平均值±樣本標準差(mean±SE)，n=8；*代表相對於溶劑對照組的p＜0.05，***代表相對於溶劑對照組的p＜0.001，採用單因素方差分析。

Claims (10)

1. 一種式(I)所示的化合物、其消旋物、立體異構物、互變異構物、同位素標記物、N-氧化物、水合物、溶劑化物、多晶型物、代謝物，藥學上可接受的鹽、藥學上可接受的酯或其前藥化合物： (I) 其中： W選自N或O； R ¹選自無取代或被一個、兩個或更多個R ^a取代的下列基團：C _1-10烷基、C _3-10環烷基、3-10員雜環基； 每一個R ^a相同或不同，彼此獨立地選自鹵素、羥基、C _{1- 10}烷基、C _{1- 10}烷基氧基、C _{3- 10}環烷基、C _{3- 10}環烷基氧基、3-10員雜環基、3-10員雜環基氧基； 或者作為選擇，兩個R ^a與其連接的原子一起形成無取代或任選被一個、兩個或更多個R ^c取代的下列基團：C _{1- 10}烷基、C _{1- 10}烷基氧基、C _{3- 10}環烷基、C _{3- 10}環烷基氧基、3-10員雜環基、3-10員雜環基氧基； R ²不存在或選自H或C _1-10烷基；其中，當W選自O時，R ²不存在；當W選自N時，R ²選自H或C _1-10烷基； 或者作為選擇，R ¹、R ²與W一起形成無取代或任選被一個、兩個或更多個R ^b取代的3-10員雜環基； 每一個R ^b相同或不同，彼此獨立地選自鹵素、羥基、C _{1- 10}烷基、C _{1 -10}烷基氧基、C _{3- 10}環烷基、C _{3- 10}環烷基氧基、3-10員雜環基、3-10員雜環基氧基； 或者作為選擇，兩個R ^b與其連接的原子一起形成無取代或任選被一個、兩個或更多個R ^c取代的下列基團：C _{1- 10}烷基、C _{1- 10}烷基氧基、C _{3- 10}環烷基、C _{3- 10}環烷基氧基、3-10員雜環基、3-10員雜環基氧基； 每一個R ^c相同或不同，彼此獨立地選自鹵素、羥基、C _{1- 10}烷基、C _{1 -10}烷基氧基、C _{3- 10}環烷基、C _{3- 10}環烷基氧基、3-10員雜環基、3-10員雜環基氧基； X選自被一個、兩個或更多個R ³取代的5-10員雜芳基； 每一個R ³相同或不同，彼此獨立地選自無取代或被一個、兩個或更多個R ⁴取代的下列基團：C _1-10烷基、C _3-10環烷基、3-10員雜環基、5-10員雜芳基； 或者作為選擇，兩個R ³與其連接的原子一起形成無取代或任選被一個、兩個或更多個R ⁴取代的下列基團：C _3-10環烷基、3-10員雜環基； 每一個R ⁴相同或不同，彼此獨立地選自鹵素、羥基、腈基，無取代或被一個、兩個或更多個R ^d取代的下列基團：C _{1- 10}烷基、C _{1- 10}亞烷基、C _{3- 10}環烷基、3-10員雜環基、5-10員雜芳基；其中，當R ⁴選自C _1-6亞烷基時，意指R ⁴中的碳原子與R ³所連接的碳原子形成雙鍵； 每一個R ^d相同或不同，彼此獨立地選自鹵素、羥基、腈基、C _1-6烷基、C _1-6烷基氧基、C _{3- 10}環烷基、C _{3- 10}環烷基氧基、3-10員雜環基、3-10員雜環氧基、5-10員雜芳基、5-10員雜芳基氧基。
2. 如請求項1所述的化合物、其消旋物、立體異構物、互變異構物、同位素標記物、N-氧化物、水合物、溶劑化物、多晶型物、代謝物，藥學上可接受的鹽、藥學上可接受的酯或其前藥化合物，其中： 每一個R ^a相同或不同，彼此獨立地選自F、Cl、Br、C _1-6烷基； R ¹選自無取代或被一個、兩個或更多個R ^a取代的下列基團：C _{1- 8}烷基、C _{3- 8}環烷基、3-8員雜環基；例如，R ¹選自無取代或被一個、兩個或更多個R ^a取代的下列基團：C _{1- 6}烷基、C _{3- 7}環烷基、3-7員雜環基；例如，R ¹選自 、 、 、 、-CH ₂CF ₃、-CH(CH ₃)CF ₃； 或者，R ¹、R ²與W一起形成無取代或任選被一個、兩個或更多個R ^b取代的下列基團： 、 、 、 、 ； X選自被一個、兩個或更多個R ³取代的5-6員雜芳基；例如，X選自被一個、兩個或更多個R ³取代的 、 ；例如，X選自 、 ； 每一個R ⁴相同或不同，彼此獨立地選自氟、氯、溴、羥基、腈基，無取代或被一個、兩個或更多個R ^d取代的下列基團：C _1-6烷基、C _1-6亞烷基、C _{3- 8}環烷基、3-8員雜環基； R ³選自無取代或被一個、兩個或更多個R ⁴取代的下列基團：C _{1- 6}烷基、C _{3- 8}環烷基、3-8員雜環基、5-6員雜芳基； 例如，R ³選自無取代或被一個、兩個或更多個R ⁴取代的下列基團：甲基、乙基、丙基、異丙基、環丙烷基、環丁烷基、 、 、 、 、 、 、 、 ；例如，R ³選自異丙基、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 。
3. 如請求項1或2所述的化合物、其消旋物、立體異構物、互變異構物、同位素標記物、N-氧化物、水合物、溶劑化物、多晶型物、代謝物，藥學上可接受的鹽、藥學上可接受的酯或其前藥化合物，其中，式(I)所示化合物具有如下式(II)所示的結構： (II) 其中，R ⁵選自被一個、兩個或更多個鹵素取代的C _1-6烷基，較佳為被1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個鹵素取代的C _1-6烷基，例如被1、2、3、4或5個氟或氯原子取代的甲基或乙基，例如三氟甲基； R ⁶選自C _1-6烷基，例如甲基、乙基、丙基或異丙基； R ⁷、R ⁸、R ⁹、R ¹⁰相同或不同，彼此獨立地選自H或C _1-6烷基，例如H、甲基、乙基、丙基或異丙基； R ¹¹、R ¹²相同或不同，彼此獨立地選自H或C _1-6烷基，例如H、甲基、乙基、丙基或異丙基。
4. 如請求項3所述的化合物、其消旋物、立體異構物、互變異構物、同位素標記物、N-氧化物、水合物、溶劑化物、多晶型物、代謝物，藥學上可接受的鹽、藥學上可接受的酯或其前藥化合物，其中，式(I)所示化合物具有如下式(III)所示的化合物： (III) 其中，R ⁵、R ⁶、R ⁷、R ⁸、R ⁹、R ¹⁰、R ¹¹、R ¹²具有如請求項3所述的定義。
5. 如請求項1所述的化合物、其消旋物、立體異構物、互變異構物、同位素標記物、N-氧化物、水合物、溶劑化物、多晶型物、代謝物，藥學上可接受的鹽、藥學上可接受的酯或其前藥化合物，其中，式(I)所示化合物選自下列化合物： 。
6. 一種如請求項1至5中任一項所述的化合物、其消旋物、立體異構物、互變異構物、同位素標記物、N-氧化物、水合物、溶劑化物、多晶型物、代謝物，藥學上可接受的鹽、藥學上可接受的酯或其前藥化合物的製備方法，其特徵在於，所述製備方法包括如下反應： 其中，R ¹、R ²、W和X具有上文所述的定義；P ¹選自胺基保護基； 較佳地，式(M2)化合物在脫去保護基團P ¹的條件下進行反應，以得到式(I)所示的化合物； 較佳地，所述P ¹選自烷基氧基羰基(如叔丁氧基羰基等)、環烷基烷氧基羰基(如環己基甲氧基羰基)、取代的烷基氧基羰基(如三氯乙氧基羰基等)、取代的芳基烷基氧基羰基(如對-硝基苄氧基羰基)、芳基烷基(如三苯甲基或二苯甲基)、雜芳基烷基(如吡啶基烷基，例如2-吡啶基甲基、4-吡啶基甲基)、烷氧基芳基烷基(如烷氧基苯基烷基，例如對甲氧基苄基)； 較佳地，所述製備方法還包括如下反應： 其中，R ¹、R ²、W、X和P ¹具有上文所述的定義； L ¹和L ²相同或不同，彼此獨立地選自能夠發生偶聯反應的離去基團； 較佳地，式(M2)化合物可以通過本領域已知的偶聯反應，例如通過Stille偶聯反應或Suzuki偶聯反應製備； 例如，L ¹可以選自鹵素，如碘；L ²可以選自烷基錫基團或硼酸酯基團。
7. 一種藥物組合物，其特徵在於，所述藥物組合物包含如請求項1至5中任一項所述的化合物、其消旋物、立體異構物、互變異構物、同位素標記物、N-氧化物、水合物、溶劑化物、多晶型物、代謝物，藥學上可接受的鹽、藥學上可接受的酯或其前藥化合物中的至少一種； 較佳地，所述藥物組合物還包括一種或多種藥學上可接受的輔料； 較佳地，所述藥物組合物為單位劑型，每一單位劑型可以包含約1~1000 mg，例如約5~1000 mg，更通常約5~500 mg，如5~100 mg、100~500 mg或50~200 mg活性成分； 較佳地，所述化合物、其消旋物、立體異構物、互變異構物、同位素標記物、N-氧化物、水合物、溶劑化物、多晶型物、代謝物，藥學上可接受的鹽、藥學上可接受的酯或其前藥化合物的給藥劑量範圍為約1 μg/kg~約1 g/kg體重/日，例如0.01 mg/kg~約100 mg/kg體重/日； 當給藥物件為人時，給予患者的劑量可以是57 mg/70kg至171 mg/70kg。
8. 一種如請求項1至5中任一項所述的化合物、其消旋物、立體異構物、互變異構物、同位素標記物、N-氧化物、水合物、溶劑化物、多晶型物、代謝物，藥學上可接受的鹽、藥學上可接受的酯或其前藥化合物中的至少一種在製備藥物中的用途，其中，所述藥物用於與LRRK激酶，尤其是LRRK2激酶活性相關的疾病或病症。
9. 一種如請求項1至5中任一項所述的化合物、其消旋物、立體異構物、互變異構物、同位素標記物、N-氧化物、水合物、溶劑化物、多晶型物、代謝物，藥學上可接受的鹽、藥學上可接受的酯或其前藥化合物中的至少一種在分析測試中的用途，所述分析測試用於鑒定能夠抑制一種或多種激酶的化合物，所述激酶較佳為LRRK，更佳為LRRK2； 較佳地，所述分析測試是競爭性結合活性測試。
10. 一種檢測化合物與激酶結合的方法，所述方法包括以下步驟： (i)在激酶和已知受質存在下，將如請求項1至5中任一項所述的化合物、其消旋物、立體異構物、互變異構物、同位素標記物、N-氧化物、水合物、溶劑化物、多晶型物、代謝物，藥學上可接受的鹽、藥學上可接受的酯或其前藥化合物中的至少一種與所述激酶接觸； (ii)檢測所述激酶和所述已知受質之間的相互作用的任何變化。