TW202340459A - 包含α—Ｌ—艾杜糖醛酸酶之融合蛋白及其方法 - Google Patents

包含α—Ｌ—艾杜糖醛酸酶之融合蛋白及其方法 Download PDF

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高利蘇達 阿杜蘇米利
奧利弗 布雷耶 戴維斯
米漢利斯 Ｓ 卡里歐立斯
凱瑟 Ｓ 馬翁
施瑞施蒂 蒂亞吉
山ノ口繭輔
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美商戴納立製藥公司
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Abstract

本文提供蛋白質，其能夠運輸穿過血腦障壁(BBB)且包含α-L-艾杜糖醛酸酶(IDUA)-Fc融合多肽。某些實施例亦提供使用該等蛋白質治療MPS I之方法。

Description

包含α-L-艾杜糖醛酸酶之融合蛋白及其方法
黏多糖貯積病I (MPS I) (或赫爾勒症候群(Hurler syndrome))係由 IDUA基因之遺傳突變引起之溶酶體儲積症。該等突變降低或消除α-L-艾杜糖醛酸酶(IDUA)蛋白功能，此導致糖胺聚糖硫酸皮膚素及硫酸乙醯肝素累積以及多個器官及組織之變化，包括骨骼、心臟、呼吸系統及腦。對MPS I之治療在很大程度上仍為支持性的；儘管該缺陷酶可靜脈內投與，但由於難以將重組酶遞送穿過血腦障壁(BBB)，因此對腦之效應極小。因此，業內需要更有效之療法來治療CNS及外周中之MPS I症狀及IDUA缺乏。
因此，本文提供特異性酶替代療法，其具有穿過BBB以及治療MPS I之外周及CNS表現之能力。具體而言，某些實施例提供蛋白質，該蛋白質包含(a)第一Fc多肽，該第一Fc多肽連接至α-L-艾杜糖醛酸酶(IDUA)胺基酸序列、IDUA變異體胺基酸序列或其催化活性片段；及(b)第二Fc多肽；其中第一及/或第二Fc多肽係能夠結合(例如，特異性結合)至血腦障壁(BBB)受體(例如運鐵蛋白受體(TfR))之經修飾Fc。在某些實施例中，第二Fc多肽與第一Fc多肽形成Fc二聚體。
在某些實施例中，第一Fc多肽係能夠結合(例如特異性結合)至TfR之經修飾Fc。在某些實施例中，第一Fc多肽係包含與SEQ ID NO:28或98 (例如SEQ ID NO:28)具有至少90%一致性之序列的經修飾Fc且能夠特異性結合至TfR。
在某些實施例中，第一Fc多肽，1)包含與SEQ ID NO:28或98 (例如SEQ ID NO:28)具有至少90%一致性之序列；2)能夠特異性結合至TfR；及3)根據EU編號，在位置389處具有Ala。在某些實施例中，根據EU編號，第一Fc多肽進一步包含位置380處之Glu；及位置390處之Asn。在某些實施例中，根據EU編號，第一Fc多肽在以下位置進一步包含：位置384處之Tyr；位置386處之Thr；位置387處之Glu；位置388處之Trp；位置413處之Thr；位置415處之Glu；位置416處之Glu；及位置421處之Phe。
在某些實施例中，第二Fc多肽係能夠結合(例如特異性結合)至TfR之經修飾Fc。在某些實施例中，第二Fc多肽係包含與SEQ ID NO: 28或98 (例如SEQ ID NO:28)具有至少90%一致性之序列的經修飾Fc且能夠特異性結合至TfR。
在某些實施例中，第二Fc多肽，1)包含與SEQ ID NO:28或98 (例如SEQ ID NO:28)具有至少90%一致性之序列；2)能夠特異性結合至TfR；及3)根據EU編號，在位置389處具有Ala。在某些實施例中，根據EU編號，第二Fc多肽進一步包含位置380處之Glu；及位置390處之Asn。在某些實施例中，根據EU編號，第二Fc多肽在以下位置進一步包含：位置384處之Tyr；位置386處之Thr；位置387處之Glu；位置388處之Trp；位置413處之Thr；位置415處之Glu；位置416處之Glu；及位置421處之Phe。
某些實施例提供蛋白質，其包含： a.    第一Fc多肽，該第一Fc多肽連接至α-L-艾杜糖醛酸酶(IDUA)胺基酸序列、IDUA變異體胺基酸序列或其催化活性片段；及 b.    第二Fc多肽，其包含與SEQ ID NO:28具有至少90%一致性之序列且能夠特異性結合至運鐵蛋白受體(TfR)。
在某些實施例中，根據EU編號，第二Fc多肽在位置389處具有Ala。
在某些實施例中，根據EU編號，第二Fc多肽進一步包含位置380處之Glu；及位置390處之Asn。
在某些實施例中，根據EU編號，第二Fc多肽在以下位置進一步包含：位置384處之Tyr；位置386處之Thr；位置387處之Glu；位置388處之Trp；位置413處之Thr；位置415處之Glu；位置416處之Glu；及位置421處之Phe。
在某些實施例中，該蛋白質能夠運輸穿過個體之血腦障壁。
在某些實施例中，該蛋白質以約100 nM至約500 nM之親和力結合至TfR。
在某些實施例中，該蛋白質以約200 nM至約400 nM之親和力結合至TfR。
在某些實施例中，第二Fc多肽結合至TfR之頂端結構域。
在某些實施例中，該蛋白質與TfR之結合實質上不會抑制運鐵蛋白與TfR之結合。
在某些實施例中，IDUA胺基酸序列包含與SEQ ID NO:39、40、45、78及99中之任一者具有至少80%、85%、90%或95%一致性之胺基酸序列。
在某些實施例中，IDUA胺基酸序列包含SEQ ID NO:39、40、45、78及99中之任一者之胺基酸序列。
在某些實施例中，IDUA胺基酸序列包含與SEQ ID NO:41-44中之任一者具有至少80%、85%、90%或95%一致性之胺基酸序列。
在某些實施例中，IDUA胺基酸序列包含SEQ ID NO:41-44中之任一者之胺基酸序列。
在某些實施例中，IDUA胺基酸序列包含與SEQ ID NO:46-49中之任一者具有至少80%、85%、90%或95%一致性之胺基酸序列。
在某些實施例中，IDUA胺基酸序列包含SEQ ID NO:46-49中之任一者之胺基酸序列。
在某些實施例中，IDUA胺基酸序列包含與SEQ ID NO:79-82中之任一者具有至少80%、85%、90%或95%一致性之胺基酸序列。
在某些實施例中，IDUA胺基酸序列包含SEQ ID NO:79-82中之任一者之胺基酸序列。
在某些實施例中，第一Fc多肽藉由肽鍵或藉由多肽連接體連接至IDUA胺基酸序列、IDUA變異體胺基酸序列或其催化活性片段。在某些實施例中，第一Fc多肽藉由肽鍵連接至IDUA胺基酸序列、IDUA變異體胺基酸序列或其催化活性片段。在某些實施例中，第一Fc多肽藉由多肽連接體連接至IDUA胺基酸序列、IDUA變異體胺基酸序列或其催化活性片段。
在某些實施例中，多肽連接體係撓性多肽連接體。
在某些實施例中，撓性多肽連接體係富含甘胺酸之連接體。
在某些實施例中，多肽連接體係GS (SEQ ID NO:71)、G 4S (SEQ ID NO:72)或(G 4S) 2(SEQ ID NO:73)。
在某些實施例中，第一Fc多肽之N末端連接至IDUA胺基酸序列、IDUA變異體胺基酸序列或其催化活性片段。
在某些實施例中，第一Fc多肽之C末端連接至IDUA胺基酸序列、IDUA變異體胺基酸序列或其催化活性片段。
在某些實施例中，如本文所述之融合蛋白包含單一IDUA胺基酸序列、IDUA變異體胺基酸序列或其催化活性片段。
在某些實施例中，第二Fc多肽與第一Fc多肽形成Fc二聚體。
在某些實施例中，第一Fc多肽及第二Fc多肽各自含有促進異二聚化之修飾。
在某些實施例中，根據EU編號，一種Fc多肽具有T366W取代且另一Fc多肽具有T366S、L368A及Y407V取代。
在某些實施例中，第一Fc多肽含有T366S、L368A及Y407V取代且第二Fc多肽含有T366W取代。
在某些實施例中，第一Fc多肽包含與SEQ ID NO:9-16及19-22中之任一者具有至少95%或100%一致性之胺基酸序列；且第二Fc多肽包含與SEQ ID NO:25-32及35-38中之任一者具有至少95%或100%一致性之胺基酸序列。
在某些實施例中，第一Fc多肽含有T366W取代且第二Fc多肽含有T366S、L368A及Y407V取代。
在某些實施例中，第一Fc多肽包含與SEQ ID NO:17-18及74-75中之任一者具有至少95%或100%一致性之胺基酸序列；且第二Fc多肽包含與SEQ ID NO:33-34及97-98中之任一者具有至少95%或100%一致性之胺基酸序列。
在某些實施例中，第一Fc多肽及/或第二Fc多肽包含天然FcRn結合位點。
在某些實施例中，第一Fc多肽及第二Fc多肽不具效應功能。
在某些實施例中，第一Fc多肽及/或第二Fc多肽包括降低效應功能之修飾。
在某些實施例中，根據EU編號，降低效應功能之修飾係位置234處之Ala及位置235處之Ala；位置234處之Ala、位置235處之Ala及位置329處之Gly；或位置234處之Ala、位置235處之Ala及位置329處之Ser的取代。
在某些實施例中，第一Fc多肽包含與SEQ ID NO:11-16及19-22中之任一者具有至少95%或100%一致性之胺基酸序列。
在某些實施例中，第一Fc多肽包含與SEQ ID NO:11、12、19及20中之任一者具有至少95%或100%一致性之胺基酸序列。
在某些實施例中，第一Fc多肽包含與SEQ ID NO:15、16、21及22中之任一者具有至少95%或100%一致性之胺基酸序列。
在某些實施例中，連接至IDUA胺基酸序列之第一Fc多肽包含與SEQ ID NO:50-69及83-92中之任一者具有至少95%或100%一致性之胺基酸序列。
在某些實施例中，連接至IDUA胺基酸序列之第一Fc多肽包含與SEQ ID NO:50-53中之任一者具有至少95%或100%一致性之胺基酸序列。
在某些實施例中，連接至IDUA胺基酸序列之第一Fc多肽包含與SEQ ID NO:54-57中之任一者具有至少95%或100%一致性之胺基酸序列。
在某些實施例中，連接至IDUA胺基酸序列之第一Fc多肽包含與SEQ ID NO:83-86中之任一者具有至少95%或100%一致性之胺基酸序列。
在某些實施例中，連接至IDUA胺基酸序列之第一Fc多肽包含與SEQ ID NO:58-61及91-92中之任一者具有至少95%或100%一致性之胺基酸序列。
在某些實施例中，連接至IDUA胺基酸序列之第一Fc多肽包含與SEQ ID NO:62-65中之任一者具有至少95%或100%一致性之胺基酸序列。
在某些實施例中，連接至IDUA胺基酸序列之第一Fc多肽包含與SEQ ID NO:87-90中之任一者具有至少95%或100%一致性之胺基酸序列。
在某些實施例中，連接至IDUA胺基酸序列之第一Fc多肽包含與SEQ ID NO:66-67中之任一者具有至少95%或100%一致性之胺基酸序列。
在某些實施例中，連接至IDUA胺基酸序列之第一Fc多肽包含與SEQ ID NO:68-69中之任一者具有至少95%或100%一致性之胺基酸序列。
在某些實施例中，第二Fc多肽包含與SEQ ID NO:27-32及35-38中之任一者具有至少95%或100%一致性之胺基酸序列。
在某些實施例中，第二Fc多肽包含與SEQ ID NO:27、28、35及36中之任一者具有至少95%或100%一致性之胺基酸序列。
在某些實施例中，第二Fc多肽包含與SEQ ID NO:31、32、37及38中之任一者具有至少95%或100%一致性之胺基酸序列。
在某些實施例中，連接至IDUA胺基酸序列之第一Fc多肽包含SEQ ID NO:50-65及83-92中之任一者之胺基酸序列；且第二Fc多肽包含SEQ ID NO:35-38中之任一者之胺基酸序列。
在某些實施例中，連接至IDUA胺基酸序列之第一Fc多肽包含SEQ ID NO:50-57及83-86中之任一者之胺基酸序列；且第二Fc多肽包含SEQ ID NO:35-36中之任一者之胺基酸序列。
在某些實施例中，連接至IDUA胺基酸序列之第一Fc多肽包含SEQ ID NO:58-65及87-92中之任一者之胺基酸序列；且第二Fc多肽包含SEQ ID NO:37-38中之任一者之胺基酸序列。
在某些實施例中，連接至IDUA胺基酸序列之第一Fc多肽包含SEQ ID NO:66-69中之任一者之胺基酸序列；且第二Fc多肽包含SEQ ID NO:35-38中之任一者之胺基酸序列。
在某些實施例中，連接至IDUA胺基酸序列之第一Fc多肽包含SEQ ID NO:66-67中之任一者之胺基酸序列；且第二Fc多肽包含SEQ ID NO:35-36中之任一者之胺基酸序列。
在某些實施例中，連接至IDUA胺基酸序列之第一Fc多肽包含SEQ ID NO:68-69中之任一者之胺基酸序列；且第二Fc多肽包含SEQ ID NO:37-38中之任一者之胺基酸序列。
在某些實施例中，與在第一Fc多肽及第二Fc多肽不存在下IDUA胺基酸序列之攝取相比或與第二Fc多肽不具導致TfR結合之修飾下IDUA酶之攝取相比，IDUA胺基酸序列至腦中之攝取為至少5倍大。
在某些實施例中，第一Fc多肽未經修飾以結合至血腦障壁(BBB)受體且第二Fc多肽經修飾以特異性結合至TfR。
在某些實施例中，蛋白質不包括免疫球蛋白重鏈及/或輕鏈可變區序列或其抗原結合部分。
某些實施例亦提供多肽，該多肽包含連接至α-L-艾杜糖醛酸酶(IDUA)胺基酸序列、IDUA變異體胺基酸序列或其催化活性片段之Fc多肽，其中Fc多肽包含與SEQ ID NO:12具有至少90%一致性之序列且含有促進其與另一Fc多肽異二聚化之一或多種修飾。
在某些實施例中，Fc多肽藉由肽鍵或藉由多肽連接體連接至IDUA酶、IDUA變異體胺基酸序列或其催化活性片段。
在某些實施例中，多肽自N末端至C末端包含：IDUA酶、IDUA變異體胺基酸序列或其催化活性片段；多肽連接體；及Fc多肽。
在某些實施例中，多肽自N末端至C末端包含：Fc多肽；多肽連接體；及IDUA酶、IDUA變異體胺基酸序列或其催化活性片段。
在某些實施例中，根據EU編號，Fc多肽包含T366S、L368A及Y407V取代。
在某些實施例中，根據EU編號，Fc多肽包含位置234處之Ala及位置235處之Ala；位置234處之Ala、位置235處之Ala及位置329處之Gly；或位置234處之Ala、位置235處之Ala及位置329處之Ser的取代。
在某些實施例中，該多肽包含與SEQ ID NO:50-69及83-92中之任一者具有至少95%或100%一致性之胺基酸序列。
某些實施例提供蛋白質，該蛋白質包含1)多肽，該多肽包含連接至α-L-艾杜糖醛酸酶(IDUA)胺基酸序列、IDUA變異體胺基酸序列或其催化活性片段之Fc多肽，其中Fc多肽包含與SEQ ID NO:12具有至少90%一致性之序列且含有促進其與另一Fc多肽異二聚化之一或多種修飾；及2)另一Fc多肽。
某些實施例提供醫藥組合物，其包含如本文所述之融合蛋白或如本文所述之多肽及醫藥學上可接受之載劑及/或賦形劑。
某些實施例提供多核苷酸，其包含編碼如本文所述之多肽(例如，如本文所述之IDUA-Fc融合多肽)之核酸序列。
某些實施例提供載體，其包含如本文所述之多核苷酸。
某些實施例提供宿主細胞，其包含如本文所述之多核苷酸或如本文所述之載體。在某些實施例中，宿主細胞進一步包含多核苷酸，該多核苷酸包含編碼本文所述之另一多肽(例如另一Fc多肽，例如TfR結合經修飾Fc多肽)之核酸序列。
某些實施例提供產生包含連接至IDUA胺基酸序列、IDUA變異體胺基酸序列或其催化活性片段之Fc多肽之多肽的方法，該方法包括在表現如本文所述之多核苷酸編碼之多肽之條件下培養宿主細胞。
某些實施例提供多核苷酸對，其包含第一核酸序列，該第一核酸序列編碼連接至IDUA胺基酸序列、IDUA變異體胺基酸序列或其催化活性片段之第一Fc多肽；及第二核酸序列，該第二核酸序列編碼如本文所述之第二Fc多肽。
某些實施例提供一或多種載體，其包含如本文所述之多核苷酸對。舉例而言，某些實施例提供包含多核苷酸對之單一載體。其他實施例提供兩種載體，其中第一種載體包含來自該對之第一多核苷酸且第二種載體包含來自該對之第二多核苷酸。
某些實施例提供宿主細胞，其包含如本文所述之多核苷酸對、或如本文所述之一或多種載體。
某些實施例提供產生包含連接至IDUA胺基酸序列、IDUA變異體胺基酸序列或其催化活性片段之第一Fc多肽以及第二Fc多肽之蛋白質的方法，該方法包括在表現如本文所述之多核苷酸對之條件下培養宿主細胞。
某些實施例提供治療MPS I之方法，該方法包括向有需要之患者投與如本文所述之蛋白質或如本文所述之多肽。在某些實施例中，投與治療有效量之該蛋白質或多肽。
某些實施例提供如本文所述之蛋白質或如本文所述之多肽，其用於治療有需要之患者之MPS I。
某些實施例提供如本文所述之蛋白質或如本文所述之多肽的用途，其用於製備用來治療有需要之患者之MPS I的藥物。
某些實施例提供減少毒性代謝產物在患有MPS I之患者中累積之方法，該方法包括向患者投與如本文所述之蛋白質或如本文所述之多肽。在某些實施例中，投與有效量(例如治療有效量)之該蛋白質或多肽。
某些實施例提供如本文所述之蛋白質或如本文所述之多肽，其用於減少毒性代謝產物在患有MPS I之患者中累積。
某些實施例提供如本文所述之蛋白質或如本文所述之多肽的用途，其用於製備用來減少毒性代謝產物在患有MPS I之患者中累積的藥物。
在某些實施例中，毒性代謝產物包括硫酸乙醯肝素源性寡糖或硫酸皮膚素源性寡糖。
相關申請案之交叉引用
本申請案主張於2021年12月17日提出申請之美國臨時申請案第63/291,283號之優先權。上文所引用申請案之全部內容皆以引用方式併入本文中。
目前業內需要用於治療MPS I之新治療劑，特定而言治療具有神經認知表型之重度MPS I之治療劑。本文闡述特異性酶替代療法，稱為ETV:IDUA，其具有穿過BBB以及治療MPS I之外周及CNS表現之能力。如本文所用之術語「ETV:IDUA」係指以下蛋白質(例如二聚體蛋白質)：能夠運輸穿過BBB，且包含連接(例如融合)至IDUA酶、IDUA酶變異體或其催化活性片段之第一Fc多肽；及第二Fc多肽。 包含 IDUA 酶 -Fc 融合多肽之蛋白質分子
如本文所述，某些實施例提供包含IDUA酶-Fc融合多肽之蛋白質分子。納入蛋白質中之IDUA酶係催化活性的，即其保留酶活性。在一些態樣中，本文所述之蛋白質包含：(a)第一Fc多肽，其可含有修飾(例如促進異二聚化之一或多種修飾)或可為野生型Fc多肽；及IDUA酶；及(b)第二Fc多肽，其可含有修飾(例如促進異二聚化之一或多種修飾)或可為野生型Fc多肽；及視情況地IDUA酶，其中第一及/或第二Fc多肽包含使得結合至血腦障壁(BBB)受體(例如運鐵蛋白受體(TfR))之修飾。
在一些實施例中，如本文所述之蛋白質包含全長IDUA野生型序列。在一些實施例中，如本文所述之蛋白質包含成熟IDUA野生型序列。如本文所述，在野生型IDUA蛋白序列中已報導多種多型性。舉例而言，根據EU編號，IDUA酶可包含位置33處之H或Q；及/或可包含位置622處之A或T。在一些實施例中，如本文所述之蛋白質包含野生型IDUA序列之催化活性片段或變異體。舉例而言，根據EU編號，IDUA酶可包含位置27處之E，或該胺基酸可不存在。本文亦闡述其他IDUA酶截短。因此，在一些實施例中，IDUA胺基酸序列包含與SEQ ID NO:39-49、78-82及99中之任一者之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%一致性、至少96%一致性、至少97%一致性、至少98%一致性或至少99%一致性之胺基酸序列，或包含SEQ ID NO:39-49、78-82及99之胺基酸序列。在一些實施例中，IDUA胺基酸序列包含與SEQ ID NO:39、40、45、78及99中之任一者之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%一致性、至少96%一致性、至少97%一致性、至少98%一致性或至少99%一致性之胺基酸序列，或包含SEQ ID NO:39、40、45、78及99中之任一者之胺基酸序列。在某些實施例中，在該等序列內，X 1係H。在某些實施例中，在該等序列內，X 1係Q。在某些實施例中，在該等序列內，X 2係A。在某些實施例中，在該等序列內，X 2係T。在某些實施例中，在該等序列內，X 3係E。在某些實施例中，在該等序列內，X 3係不存在。在一些實施例中，IDUA胺基酸序列包含與SEQ ID NO:41-44中之任一者之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%一致性、至少96%一致性、至少97%一致性、至少98%一致性或至少99%一致性之胺基酸序列，或包含SEQ ID NO:41-44中之任一者之胺基酸序列。在一些實施例中，IDUA胺基酸序列包含與SEQ ID NO:46-49中之任一者之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%一致性、至少96%一致性、至少97%一致性、至少98%一致性或至少99%一致性之胺基酸序列，或包含SEQ ID NO:46-49中之任一者之胺基酸序列。在一些實施例中，IDUA胺基酸序列包含與SEQ ID NO:79-82中之任一者之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%一致性、至少96%一致性、至少97%一致性、至少98%一致性或至少99%一致性之胺基酸序列，或包含SEQ ID NO:79-82中之任一者之胺基酸序列。
如本文所論述，在一些實施例中，IDUA酶係IDUA蛋白之變異體或催化活性片段(例如包含本文所述之IDUA胺基酸序列)。在一些實施例中，IDUA酶之催化活性變異體或片段之活性係野生型IDUA酶活性之至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或更大。
在一些實施例中，存在於本文所述蛋白質中之IDUA酶或其催化活性變異體或片段與其不連結至Fc多肽或TfR結合Fc多肽時之活性相比，保留其活性之至少25%。在一些實施例中，IDUA酶或其催化活性變異體或片段與其不連結至Fc多肽或TfR結合Fc多肽時之活性相比，保留其活性之至少10%、或至少15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%或95%。在一些實施例中，IDUA酶或其催化活性變異體或片段與其不連結至Fc多肽或TfR結合Fc多肽時之活性相比，保留其活性之至少80%、85%、90%或95%。在一些實施例中，與Fc多肽融合不會降低IDUA酶或其催化活性變異體或片段之活性。在一些實施例中，與TfR結合Fc多肽融合不會降低IDUA酶之活性。 Fc 多肽修飾
納入本文所述融合蛋白中之Fc多肽可包含某些修飾。舉例而言，Fc多肽可包含使得結合至血腦障壁(BBB)受體(例如運鐵蛋白受體(TfR))之修飾。另外，Fc多肽可包含其他修飾，例如促進異二聚化、增加血清穩定性或血清半衰期、調節效應功能、影響糖基化及/或降低人類中之免疫原性之修飾。因此，在某些實施例中，本文所述之融合蛋白包含兩種Fc多肽，其中一種Fc係野生型Fc多肽，例如人類IgG1 Fc多肽；且另一Fc經修飾以結合至血腦障壁(BBB)受體，例如運鐵蛋白受體(TfR)，且視情況地進一步包含一或多種其他修飾。在某些其他實施例中，兩種Fc多肽各自包含經獨立選擇之修飾(例如本文所述之修飾)。舉例而言，在某些實施例中，本文所述之融合蛋白包含兩種Fc多肽，其中一種Fc未經修飾以結合至BBB受體，但包含本文所述之一或多種其他修飾；且另一Fc經修飾以結合至血腦障壁(BBB)受體，例如運鐵蛋白受體(TfR)，且視情況地進一步包含一或多種其他修飾。在某些其他實施例中，本文所述之融合蛋白包含兩種Fc多肽，其中兩種Fc多肽經修飾以結合至血腦障壁(BBB)受體，例如運鐵蛋白受體(TfR)，且視情況地進一步包含一或多種其他修飾。
在各種Fc修飾(包括在結合至BBB受體(例如TfR)之經修飾Fc多肽中引入之彼等修飾)中指定之胺基酸殘基在本文中係使用EU索引編號來編號。任一Fc多肽(例如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4 Fc多肽)可在如本文所述之一或多個位置具有修飾，例如胺基酸取代。
存在於本文所述融合蛋白中之經修飾(例如增強異二聚化及/或BBB受體結合) Fc多肽可與天然Fc區序列或其片段(例如長度為至少50個胺基酸或至少100個胺基酸或更長之片段)具有至少70%一致性、至少75%一致性、至少80%一致性、至少85%一致性、至少90%一致性、至少95%一致性、至少96%一致性、至少97%一致性、至少98%一致性或至少99%一致性。在一些實施例中，天然Fc胺基酸序列係SEQ ID NO:1之Fc區序列。在一些實施例中，經修飾Fc多肽與SEQ ID NO:1之胺基酸1-110或與SEQ ID NO:1之胺基酸111-217或其片段(例如長度為至少50個胺基酸或至少100個胺基酸或更長之片段)具有至少70%一致性、至少75%一致性、至少80%一致性、至少85%一致性、至少90%一致性、至少95%一致性、至少96%一致性、至少97%一致性、至少98%一致性或至少99%一致性。
在一些實施例中，經修飾(例如增強異二聚化及/或BBB受體結合) Fc多肽包含對應於天然Fc區胺基酸序列之至少50個胺基酸、或至少60個、65個、70個、75個、80個、85個、90個或95個或更多個、或至少100個或更多個胺基酸。在一些實施例中，經修飾Fc多肽包含對應於天然Fc區胺基酸序列(例如SEQ ID NO:1)之至少25個連續胺基酸、或至少30個、35個、40個或45個連續胺基酸、或50個連續胺基酸、或至少60個、65個、70個、75個、80 85個、90個或95個或更多個連續胺基酸、或100個或更多個連續胺基酸。 用於血腦障壁 (BBB) 受體結合之修飾
在一些態樣中，本文提供能夠運輸穿過血腦障壁(BBB)之融合蛋白。該蛋白質包含結合至BBB受體之經修飾Fc多肽。BBB受體在BBB內皮以及其他細胞及組織類型上表現。在一些實施例中，BBB受體係運鐵蛋白受體(TfR)。
在一些實施例中，本文所述之融合蛋白特異性結合至TfR。在一些實施例中，本文所述之融合蛋白以約50 nM至約500 nM之親和力特異性結合至TfR。在一些實施例中，該蛋白質以約50 nM、60 nM、70 nM、80 nM、90 nM、100 nM、110 nM、120 nM、130 nM、140 nM、150 nM、160 nM、170 nM、180 nM、190 nM、200 nM、210 nM、220 nM、230 nM、240 nM、250 nM、260 nM、270 nM、280 nM、290 nM、300 nM、310 nM、320 nM、330 nM、340 nM、350 nM、360 nM、370 nM、380 nM、390 nM、400 nM、410 nM、420 nM、430 nM、440 nM、450 nM、460 nM、470 nM、480 nM、490 nM或500 nM之親和力結合(例如特異性結合)至TfR。在一些實施例中，該蛋白質以約100 nM至約500 nM之親和力結合至TfR。在一些實施例中，該蛋白質以約100 nM至約300 nM、或約200 nM至約450 nM之親和力結合至TfR。在一些實施例中，該蛋白質以約250 nM之親和力結合至TfR。在一些實施例中，該蛋白質以約150 nM至約400 nM、或約200 nM至約400 nM、或約250 nM至約350 nM、或約300 nM至約350 nM之親和力結合至TfR。
在一些實施例中，特異性結合至TfR之經修飾Fc多肽包含CH3結構域中之取代。在一些實施例中，經修飾Fc多肽包含針對TfR結合活性經修飾之人類Ig CH3結構域，例如IgG CH3結構域。CH3結構域可具有任一IgG亞型，即來自IgG1、IgG2、IgG3或IgG4。在IgG抗體之背景下，CH3結構域係指如根據EU編號方案編號之約位置341至約位置447之胺基酸之區段。
在一些實施例中，特異性結合至TfR之經修飾Fc多肽結合至TfR之頂端結構域且可結合至TfR而不阻斷或以其他方式抑制運鐵蛋白與TfR之結合。在一些實施例中，運鐵蛋白與TfR之結合實質上未被抑制。在一些實施例中，運鐵蛋白與TfR之結合被抑制小於約50% (例如小於約45%、40%、35%、30%、25%、20%、15%、10%或5%)。在一些實施例中，運鐵蛋白與TfR之結合被抑制小於約20% (例如小於約15%、10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%或1%)。
在一些實施例中，根據EU編號方案，存在於本文所述融合蛋白中之經修飾(例如BBB受體結合) Fc多肽包含胺基酸位置384、386、387、388、389、413、415、416及421處之取代。
在一些實施例中，根據EU編號，特異性結合至TfR之經修飾Fc多肽包含位置389處之Ala。在一些實施例中，根據EU編號，特異性結合至TfR之經修飾Fc多肽在以下位置包含：位置380處之Glu；位置389處之Ala；及位置390處之Asn。在一些實施例中，根據EU編號，特異性結合至TfR之經修飾Fc多肽在以下位置包含：位置380處之Glu；位置384處之Tyr；位置386處之Thr；位置387處之Glu；位置388處之Trp；位置389處之Ala；位置390處之Asn；位置413處之Thr；位置415處之Glu；位置416處之Glu；及位置421處之Phe。
在其他實施例中，根據EU編號方案，經修飾Fc多肽在包含414、424及426之位置進一步包含一個、兩個或三個取代。在一些實施例中，位置414係Lys、Arg、Gly或Pro；位置424係Ser、Thr、Glu或Lys；及/或位置426係Ser、Trp或Gly。
在一些實施例中，經修飾Fc多肽與SEQ ID NO:23之胺基酸111-217具有至少70%一致性、至少75%一致性、至少80%一致性、至少85%一致性、至少90%一致性、至少95%一致性、至少96%一致性、至少97%一致性、至少98%一致性或至少99%一致性；且包含SEQ ID NO:23之EU索引位置380、384-390及/或413-421處之胺基酸。在一些實施例中，經修飾Fc多肽與SEQ ID NO:24之胺基酸111-216具有至少70%一致性、至少75%一致性、至少80%一致性、至少85%一致性、至少90%一致性、至少95%一致性、至少96%一致性、至少97%一致性、至少98%一致性或至少99%一致性；且包含SEQ ID NO:23或24之EU索引位置380、384-390及/或413-421處之胺基酸。在一些實施例中，經修飾Fc多肽與SEQ ID NO:23或24具有至少70%一致性、至少75%一致性、至少80%一致性、至少85%一致性、至少90%一致性、至少95%一致性、至少96%一致性、至少97%一致性、至少98%一致性或至少99%一致性；且包含SEQ ID NO:23或24之EU索引位置380、384-390及/或413-421處之胺基酸。
在一些實施例中，經修飾Fc多肽與SEQ ID NO:23或24具有至少75%一致性、至少80%一致性、至少85%一致性、至少90%一致性、至少95%一致性、至少96%一致性、至少97%一致性、至少98%一致性或至少99%一致性，且根據EU編號，具有位置389處之Ala。在一些實施例中，經修飾Fc多肽與SEQ ID NO:23或24具有至少75%一致性、至少80%一致性、至少85%一致性、至少90%一致性、至少95%一致性、至少96%一致性、至少97%一致性、至少98%一致性或至少99%一致性，且根據EU編號在以下位置包含：位置380處之Glu；位置389處之Ala；及位置390處之Asn。在一些實施例中，經修飾Fc多肽與SEQ ID NO:23或24具有至少75%一致性、至少80%一致性、至少85%一致性、至少90%一致性、至少95%一致性、至少96%一致性、至少97%一致性、至少98%一致性或至少99%一致性，且根據EU編號在以下位置包含：位置380處之Glu；位置384處之Tyr；位置386處之Thr；位置387處之Glu；位置388處之Trp；位置389處之Ala；位置390處之Asn；位置413處之Thr；位置415處之Glu；位置416處之Glu；及位置421處之Phe。
在一些實施例中，經修飾Fc多肽包含SEQ ID NO:23或24之胺基酸序列。 其他 Fc 多肽突變
在一些態樣中，本文所述之融合蛋白包含兩種Fc多肽，其中一或兩種Fc多肽各自包含經獨立選擇之修飾(例如本文所述之修飾)。可引入一或兩種Fc多肽中之其他突變之非限制性實例包括例如增加血清穩定性或血清半衰期之突變、調節效應功能之突變、影響糖基化之突變、降低人類中之免疫原性之突變、及/或提供Fc多肽之旋鈕及孔洞異二聚化之突變。可納入Fc多肽中之各種修飾之實例闡述於WO2019/070577中，該專利之全文出於所有目的皆以引用方式併入本文中。
在一些實施例中，存在於融合蛋白中之Fc多肽與相應野生型Fc多肽(例如人類IgG1、IgG2、IgG3或IgG4 Fc多肽)各自獨立地具有至少約75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%之胺基酸序列一致性。
在一些實施例中，存在於融合蛋白中之Fc多肽包括旋鈕及孔洞突變以促進異二聚體形成且阻礙同二聚體形成。通常，該等修飾在一種多肽之界面處引入隆凸(「旋鈕」)且在另一多肽之界面中引入相應空腔(「孔洞」)，使得隆凸可定位於空腔中以促進異二聚體形成且因此阻礙同二聚體形成。隆凸係藉由用較大側鏈(例如酪胺酸或色胺酸)替代第一多肽界面之小胺基酸側鏈來構築。藉由用較小胺基酸側鏈(例如丙胺酸或蘇胺酸)替代大胺基酸側鏈在第二多肽之界面中產生大小與隆凸相同或相似之補償性空腔。在一些實施例中，該等其他突變處於Fc多肽中對多肽與BBB受體(例如TfR)之結合不具負面效應之位置。
在用於二聚化之旋鈕及孔洞方法之一個說明性實施例中，存在於融合蛋白中之一種Fc多肽之位置366 (根據EU編號方案編號)包含色胺酸來替代天然蘇胺酸。二聚體中之另一Fc多肽在位置407 (根據EU編號方案編號)處具有纈胺酸來替代天然酪胺酸。另一Fc多肽可進一步包含位置366 (根據EU編號方案編號)處之天然蘇胺酸經絲胺酸取代且位置368 (根據EU編號方案編號)處之天然白胺酸經丙胺酸取代之取代。因此，本文所述融合蛋白之一種Fc多肽具有T366W旋鈕突變且另一Fc多肽具有Y407V突變，其通常伴隨有T366S及L368A孔洞突變。在某些實施例中，第一Fc多肽含有T366S、L368A及Y407V取代且第二Fc多肽含有T366W取代。在某些其他實施例中，第一Fc多肽含有T366W取代且第二Fc多肽含有T366S、L368A及Y407V取代。
在一些實施例中，可引入增強血清半衰期之修飾。舉例而言，在一些實施例中，存在於本文所述融合蛋白中之一或兩種Fc多肽可包含如根據EU編號方案編號之位置252處之酪胺酸、位置254處之蘇胺酸及位置256處之麩胺酸。因此，一或兩種Fc多肽可具有M252Y、S254T及T256E取代。替代地，一或兩種Fc多肽可具有如根據EU編號方案編號之M428L及N434S取代。替代地，一或兩種Fc多肽可具有N434S或N434A取代。
在一些實施例中，存在於本文所述融合蛋白中之一或兩種Fc多肽可包含降低效應功能、即在結合至在調介效應功能之效應細胞上表現之Fc受體時具有降低的誘導某些生物功能之能力之修飾。抗體效應功能之實例包括(但不限於) C1q結合及補體依賴性細胞毒性(CDC)、Fc受體結合、抗體依賴性細胞介導之細胞毒性(ADCC)、抗體依賴性細胞介導之吞噬作用(ADCP)、細胞表面受體(例如B細胞受體)下調及B細胞活化。效應功能可隨著抗體類別而變化。舉例而言，天然人類IgG1及IgG3抗體可在結合至存在於免疫系統細胞上之適當Fc受體時引發ADCC及CDC活性；且天然人類IgG1、IgG2、IgG3及IgG4可在結合至存在於免疫細胞上之適當Fc受體時引發ADCP功能。
在一些實施例中，存在於本文所述融合蛋白中之一或兩種Fc多肽亦可經改造以含有其他針對異二聚化之修飾，例如對CH3-CH3界面內之天然帶電的接觸殘基(contact residue)之靜電改造，或疏水補丁修飾。
在一些實施例中，存在於本文所述融合蛋白中之一或兩種Fc多肽可包括調節效應功能之其他修飾。
在一些實施例中，存在於本文所述融合蛋白中之一或兩種Fc多肽可包含降低或消除效應功能之修飾。降低效應功能之說明性Fc多肽突變包括(但不限於) CH2結構域(例如根據EU編號方案之位置234及235)之取代。舉例而言，在一些實施例中，一或兩種Fc多肽可在位置234及235處包含丙胺酸殘基。因此，一或兩種Fc多肽可具有L234A及L235A (LALA)取代。
調節效應功能之其他Fc多肽突變包括(但不限於)以下：位置329可具有突變，其中脯胺酸經甘胺酸、絲胺酸或精胺酸或大至足以破壞在Fc之脯胺酸329與FcγRIII之色胺酸殘基Trp 87及Trp 110之間形成的Fc/Fcγ受體界面之胺基酸殘基取代。根據EU編號方案，其他說明性取代包括S228P、E233P、L235E、N297A、N297D及P331S。亦可存在多種取代，例如根據EU編號方案，人類IgG1 Fc區之L234A及L235A；人類IgG1 Fc區之L234A、L235A及P329G；人類IgG1 Fc區之L234A、L235A及P329S；人類IgG4 Fc區之S228P及L235E；人類IgG1 Fc區之L234A及G237A；人類IgG1 Fc區之L234A、L235A及G237A；人類IgG2 Fc區之V234A及G237A；人類IgG4 Fc區之L235A、G237A及E318A；及人類IgG4 Fc區之S228P及L236E。在一些實施例中，一或兩種Fc多肽可具有調節ADCC之一或多種胺基酸取代，例如根據EU編號方案位置298、333及/或334處之取代。
在一些實施例中，C末端Lys殘基在本文所述之Fc多肽中被去除(即 ，根據EU編號方案位置447處之Lys殘基)。 包含其他突變之說明性 Fc 多肽
如本文所述且藉助非限制性實例，存在於本文所述融合蛋白中之一或兩種Fc多肽可包含其他突變，包括旋鈕突變(例如，如根據EU編號方案編號之T366W)、孔洞突變(例如，如根據EU編號方案編號之T366S、L368A及Y407V)、調節效應功能之突變(例如，如根據EU編號方案編號之L234A、L235A及/或P329G或P329S (例如L234A及L235A；L234A、L235A及P329G；或L234A、L235A及P329S))及/或增加血清穩定性或血清半衰期之突變(例如，(i)如參考EU編號進行編號之M252Y、S254T及T256E，或(ii)如根據EU編號方案編號之N434S，具或不具M428L)。藉助說明，SEQ ID NO:9-22、25-38、74-77及97-98提供包含該等其他突變中之一或多者之經修飾Fc多肽之非限制性實例。
在一些實施例中，Fc多肽或經修飾Fc多肽可具有旋鈕突變(例如，如根據EU編號方案編號之T366W)，及與SEQ ID NO:1、2、23及24中之任一者之序列至少85%一致性、至少90%一致性、至少95%一致性、至少96%一致性、至少97%一致性、至少98%一致性或至少99%一致性。在一些實施例中，具有SEQ ID NO:1、2、23及24中之任一者之序列的Fc多肽或經修飾Fc多肽可經修飾以具有旋鈕突變。
在一些實施例中，經修飾Fc多肽包含旋鈕突變(例如，如參考EU編號進行編號之T366W)，且與SEQ ID NO:17及18中之任一者之序列具有至少85%一致性、至少90%一致性、至少95%一致性、至少96%一致性、至少97%一致性、至少98%一致性或至少99%一致性。在一些實施例中，經修飾Fc多肽包含SEQ ID NO:17及18中之任一者之序列。
在一些實施例中，經修飾Fc多肽包含旋鈕突變(例如，如參考EU編號進行編號之T366W)，且與SEQ ID NO:25及26中之任一者之序列具有至少85%一致性、至少90%一致性、至少95%一致性、至少96%一致性、至少97%一致性、至少98%一致性或至少99%一致性。在一些實施例中，經修飾Fc多肽包含旋鈕突變(例如，如參考EU編號進行編號之T366W)，與SEQ ID NO:25及26中之任一者之序列具有至少85%一致性、至少90%一致性、至少95%一致性、至少96%一致性、至少97%一致性、至少98%一致性或至少99%一致性，且根據EU編號包含位置389處之Ala。在一些實施例中，經修飾Fc多肽包含旋鈕突變(例如，如參考EU編號進行編號之T366W)，與SEQ ID NO:25或26具有至少85%一致性、至少90%一致性、至少95%一致性、至少96%一致性、至少97%一致性、至少98%一致性或至少99%一致性，且根據EU編號在以下位置包含：位置380處之Glu；位置389處之Ala；及位置390處之Asn。在一些實施例中，經修飾Fc多肽包含旋鈕突變(例如，如參考EU編號進行編號之T366W)，與SEQ ID NO:25或26具有至少85%一致性、至少90%一致性、至少95%一致性、至少96%一致性、至少97%一致性、至少98%一致性或至少99%一致性，且根據EU編號在以下位置包含：位置380處之Glu；位置384處之Tyr；位置386處之Thr；位置387處之Glu；位置388處之Trp；位置389處之Ala；位置390處之Asn；位置413處之Thr；位置415處之Glu；位置416處之Glu；及位置421處之Phe。在一些實施例中，經修飾Fc多肽包含SEQ ID NO:25及26中之任一者之序列。
在一些實施例中，Fc多肽或經修飾Fc多肽可具有旋鈕突變(例如，如根據EU編號方案編號之T366W)、調節效應功能之突變(例如，如根據EU編號方案編號之L234A、L235A及/或P329G或P329S (例如L234A及L235A；L234A、L235A及P329G；或L234A、L235A及P329S))，及與SEQ ID NO:1、2、23及24中之任一者之序列至少85%一致性、至少90%一致性、至少95%一致性、至少96%一致性、至少97%一致性、至少98%一致性或至少99%一致性。在一些實施例中，具有SEQ ID NO:1、2、23及24中之任一者之序列之Fc多肽或經修飾Fc多肽可經修飾以具有旋鈕突變及調節效應功能之突變。
在一些實施例中，經修飾Fc多肽包含旋鈕突變(例如，如參考EU編號進行編號之T366W)及調節效應功能之突變(例如，如參考EU編號進行編號之L234A、L235A及/或P329G或P329S (例如L234A及L235A；L234A、L235A及P329G；或L234A、L235A及P329S))，且與SEQ ID NO:74-75及76-77中之任一者之序列具有至少85%一致性、至少90%一致性、至少95%一致性、至少96%一致性、至少97%一致性、至少98%一致性或至少99%一致性。在一些實施例中，經修飾Fc多肽包含SEQ ID NO:74-75及76-77中之任一者之序列。
在一些實施例中，經修飾Fc多肽包含旋鈕突變(例如，如參考EU編號進行編號之T366W)及調節效應功能之突變(例如，如參考EU編號進行編號之L234A、L235A及/或P329G或P329S (例如L234A及L235A；L234A、L235A及P329G；或L234A、L235A及P329S))，與SEQ ID NO:27-32及35-38中之任一者之序列具有至少85%一致性、至少90%一致性、至少95%一致性、至少96%一致性、至少97%一致性、至少98%一致性或至少99%一致性。在一些實施例中，經修飾Fc多肽包含旋鈕突變(例如，如參考EU編號進行編號之T366W)及調節效應功能之突變(例如，如參考EU編號進行編號之L234A、L235A及/或P329G或P329S (例如L234A及L235A；L234A、L235A及P329G；或L234A、L235A及P329S))，與SEQ ID NO:27-32及35-38中之任一者之序列具有至少85%一致性、至少90%一致性、至少95%一致性、至少96%一致性、至少97%一致性、至少98%一致性或至少99%一致性，且根據EU編號包含位置389處之Ala。在一些實施例中，經修飾Fc多肽包含旋鈕突變(例如，如參考EU編號進行編號之T366W)及調節效應功能之突變(例如，如參考EU編號進行編號之L234A、L235A及/或P329G或P329S (例如L234A及L235A；L234A、L235A及P329G；或L234A、L235A及P329S))，與SEQ ID NO:27-32及35-38中之任一者之序列具有至少85%一致性、至少90%一致性、至少95%一致性、至少96%一致性、至少97%一致性、至少98%一致性或至少99%一致性，且根據EU編號在以下位置包含：位置380處之Glu；位置389處之Ala；及位置390處之Asn。在一些實施例中，經修飾Fc多肽包含旋鈕突變(例如，如參考EU編號進行編號之T366W)及調節效應功能之突變(例如，如參考EU編號進行編號之L234A、L235A及/或P329G或P329S (例如L234A及L235A；L234A、L235A及P329G；或L234A、L235A及P329S))，與SEQ ID NO:27-32及35-38中之任一者之序列具有至少85%一致性、至少90%一致性、至少95%一致性、至少96%一致性、至少97%一致性、至少98%一致性或至少99%一致性，且根據EU編號在以下位置包含：位置380處之Glu；位置384處之Tyr；位置386處之Thr；位置387處之Glu；位置388處之Trp；位置389處之Ala；位置390處之Asn；位置413處之Thr；位置415處之Glu；位置416處之Glu；及位置421處之Phe。在一些實施例中，經修飾Fc多肽包含SEQ ID NO:27-32及35-38中之任一者之序列。
在一些實施例中，Fc多肽或經修飾Fc多肽可具有孔洞突變(例如，如根據EU編號方案編號之T366S、L368A及Y407V)，及與SEQ ID NO:1、2、23及24中之任一者至少85%一致性、至少90%一致性、至少95%一致性、至少96%一致性、至少97%一致性、至少98%一致性或至少99%一致性。在一些實施例中，具有SEQ ID NO:1、2、23及24中之任一者之序列之Fc多肽或經修飾Fc多肽可經修飾以具有孔洞突變。
在一些實施例中，經修飾Fc多肽包含孔洞突變(例如，如參考EU編號進行編號之T366S、L368A及Y407V)，且與SEQ ID NO:9及10中之任一者之序列具有至少85%一致性、至少90%一致性、至少95%一致性、至少96%一致性、至少97%一致性、至少98%一致性或至少99%一致性。在一些實施例中，經修飾Fc多肽包含SEQ ID NO:9及10中之任一者之序列。
在一些實施例中，經修飾Fc多肽包含孔洞突變(例如，如參考EU編號進行編號之T366S、L368A及Y407V)，與SEQ ID NO:33及34中之任一者之序列具有至少85%一致性、至少90%一致性、至少95%一致性、至少96%一致性、至少97%一致性、至少98%一致性或至少99%一致性。在一些實施例中，經修飾Fc多肽包含孔洞突變(例如，如參考EU編號進行編號之T366S、L368A及Y407V)，與SEQ ID NO:33及34中之任一者之序列具有至少85%一致性、至少90%一致性、至少95%一致性、至少96%一致性、至少97%一致性、至少98%一致性或至少99%一致性，且根據EU編號包含位置389處之Ala。在一些實施例中，經修飾Fc多肽包含孔洞突變(例如，如參考EU編號進行編號之T366S、L368A及Y407V)，與SEQ ID NO:33及34中之任一者之序列具有至少85%一致性、至少90%一致性、至少95%一致性、至少96%一致性、至少97%一致性、至少98%一致性或至少99%一致性，且根據EU編號在以下位置包含：位置380處之Glu；位置389處之Ala；及位置390處之Asn。在一些實施例中，經修飾Fc多肽包含孔洞突變(例如，如參考EU編號進行編號之T366S、L368A及Y407V)，與SEQ ID NO:33及34中之任一者之序列具有至少85%一致性、至少90%一致性、至少95%一致性、至少96%一致性、至少97%一致性、至少98%一致性或至少99%一致性，且根據EU編號在以下位置包含：位置380處之Glu；位置384處之Tyr；位置386處之Thr；位置387處之Glu；位置388處之Trp；位置389處之Ala；位置390處之Asn；位置413處之Thr；位置415處之Glu；位置416處之Glu；及位置421處之Phe。在一些實施例中，經修飾Fc多肽包含SEQ ID NO:33及34中之任一者之序列。
在一些實施例中，Fc多肽或經修飾Fc多肽可具有孔洞突變(例如，如根據EU編號方案編號之T366S、L368A及Y407V)、調節效應功能之突變(例如，如根據EU編號方案編號之L234A、L235A及/或P329G或P329S (例如L234A及L235A；L234A、L235A及P329G；或L234A、L235A及P329S))，及與SEQ ID NO:1、2、23及24中之任一者之序列至少85%一致性、至少90%一致性、至少95%一致性、至少96%一致性、至少97%一致性、至少98%一致性或至少99%一致性。在一些實施例中，具有SEQ ID NO:1、2、23及24中之任一者之序列之Fc多肽或經修飾Fc多肽可經修飾以具有孔洞突變及調節效應功能之突變。
在一些實施例中，經修飾Fc多肽包含孔洞突變(例如，如參考EU編號進行編號之T366S、L368A及Y407V)及調節效應功能之突變(例如，如參考EU編號進行編號之L234A、L235A及/或P329G或P329S (例如L234A及L235A；L234A、L235A及P329G；或L234A、L235A及P329S))，且與SEQ ID NO:11-16及19-22中之任一者之序列具有至少85%一致性、至少90%一致性、至少95%一致性、至少96%一致性、至少97%一致性、至少98%一致性或至少99%一致性。在一些實施例中，經修飾Fc多肽包含SEQ ID NO:11-16及19-22中之任一者之序列。
在一些實施例中，經修飾Fc多肽包含孔洞突變(例如，如參考EU編號進行編號之T366S、L368A及Y407V)及調節效應功能之突變(例如，如參考EU編號進行編號之L234A、L235A及/或P329G或P329S (例如L234A及L235A；L234A、L235A及P329G；或L234A、L235A及P329S))，與SEQ ID NO:97-98中之任一者之序列具有至少85%一致性、至少90%一致性、至少95%一致性、至少96%一致性、至少97%一致性、至少98%一致性或至少99%一致性。在一些實施例中，經修飾Fc多肽包含孔洞突變(例如，如參考EU編號進行編號之T366S、L368A及Y407V)及調節效應功能之突變(例如，如參考EU編號進行編號之L234A、L235A及/或P329G或P329S (例如L234A及L235A；L234A、L235A及P329G；或L234A、L235A及P329S))，與SEQ ID NO:97-98中之任一者之序列具有至少85%一致性、至少90%一致性、至少95%一致性、至少96%一致性、至少97%一致性、至少98%一致性或至少99%一致性，且根據EU編號包含位置389處之Ala。在一些實施例中，經修飾Fc多肽包含孔洞突變(例如，如參考EU編號進行編號之T366S、L368A及Y407V)及調節效應功能之突變(例如，如參考EU編號進行編號之L234A、L235A及/或P329G或P329S (例如L234A及L235A；L234A、L235A及P329G；或L234A、L235A及P329S))，與SEQ ID NO:97-98中之任一者之序列具有至少85%一致性、至少90%一致性、至少95%一致性、至少96%一致性、至少97%一致性、至少98%一致性或至少99%一致性，且根據EU編號在以下位置包含：位置380處之Glu；位置389處之Ala；及位置390處之Asn。在一些實施例中，經修飾Fc多肽包含孔洞突變(例如，如參考EU編號進行編號之T366S、L368A及Y407V)及調節效應功能之突變(例如，如參考EU編號進行編號之L234A、L235A及/或P329G或P329S (例如L234A及L235A；L234A、L235A及P329G；或L234A、L235A及P329S))，與SEQ ID NO:97-98中之任一者之序列具有至少85%一致性、至少90%一致性、至少95%一致性、至少96%一致性、至少97%一致性、至少98%一致性或至少99%一致性，且根據EU編號在以下位置包含：位置380處之Glu；位置384處之Tyr；位置386處之Thr；位置387處之Glu；位置388處之Trp；位置389處之Ala；位置390處之Asn；位置413處之Thr；位置415處之Glu；位置416處之Glu；及位置421處之Phe。在一些實施例中，經修飾Fc多肽包含SEQ ID NO:97-98中之任一者之序列。 FcRn 結合位點
在某些態樣中，經修飾(例如BBB受體結合) Fc多肽或存在於本文所述融合蛋白中之不會特異性結合至BBB受體之Fc多肽可包含FcRn結合位點。在一些實施例中，FcRn結合位點處於Fc多肽或其片段內。
在一些實施例中，FcRn結合位點包含天然FcRn結合位點。在一些實施例中，相對於天然FcRn結合位點之胺基酸序列，FcRn結合位點不包含胺基酸變化。在一些實施例中，天然FcRn結合位點係IgG結合位點，例如人類IgG結合位點。在一些實施例中，FcRn結合位點包含改變FcRn結合之修飾。
在一些實施例中，FcRn結合位點具有一或多個突變(例如經取代)胺基酸殘基，其中突變會增加血清半衰期或實質上不會縮短血清半衰期(即在相同條件下分析時，與在突變位置具有野生型殘基之對應經修飾Fc多肽相比，使血清半衰期縮短不超過25%)。在一些實施例中，根據EU編號方案，FcRn結合位點具有在位置250-256、307、380、428及433-436經取代之一或多個胺基酸殘基。
在一些實施例中，相對於天然人類IgG序列，FcRn結合位點處或附近之一或多個殘基經突變以延長經修飾多肽之血清半衰期。在一些實施例中，將突變引入位置252、254及256中之一者、兩者或三者中。在一些實施例中，突變係M252Y、S254T及T256E。在一些實施例中，經修飾Fc多肽進一步包含突變M252Y、S254T及T256E。在一些實施例中，根據EU編號方案，經修飾Fc多肽包含位置T307、E380及N434中之一者、兩者或所有三者處之取代。在一些實施例中，突變係T307Q及N434A。在一些實施例中，經修飾Fc多肽包含突變T307A、E380A及N434A。在一些實施例中，根據EU編號方案，經修飾Fc多肽包含位置T250及M428處之取代。在一些實施例中，經修飾Fc多肽包含突變T250Q及/或M428L。在一些實施例中，根據EU編號方案，經修飾Fc多肽包含位置M428及N434處之取代。在一些實施例中，經修飾Fc多肽包含突變M428L及N434S。在一些實施例中，經修飾Fc多肽包含N434S或N434A突變。 連接至 Fc 多肽之 IDUA 酶
在一些實施例中，本文所述之融合蛋白包含如本文所述之兩種Fc多肽，且Fc多肽中之一者或兩者可進一步包含部分或完整鉸鏈區。鉸鏈區可來自任一免疫球蛋白子類或同型。說明性免疫球蛋白鉸鏈係IgG鉸鏈區，例如IgG1鉸鏈區，例如人類IgG1鉸鏈胺基酸序列EPKSCDKTHTCPPCP (SEQ ID NO:5)或其部分(例如DKTHTCPPCP；SEQ ID NO:6)。在一些實施例中，鉸鏈區處於Fc多肽之N末端區域。
在某些實施例中，第一Fc多肽之N末端連接至IDUA胺基酸序列、IDUA變異體胺基酸序列或其催化活性片段。在某些實施例中，第一Fc多肽之C末端連接至IDUA胺基酸序列、IDUA變異體胺基酸序列或其催化活性片段。
在某些實施例中，本文所述之融合蛋白包含單一IDUA胺基酸序列、IDUA變異體胺基酸序列或其催化活性片段。
在某些其他實施例中，如本文所述之融合蛋白包含第二IDUA胺基酸序列、IDUA變異體胺基酸序列或其催化活性片段。舉例而言，在某些實施例中，第二Fc多肽連接至IDUA胺基酸序列、IDUA變異體胺基酸序列或其催化活性片段。在某些實施例中，第二Fc多肽之N末端連接至第二IDUA胺基酸序列、IDUA變異體胺基酸序列或其催化活性片段。在某些實施例中，第二Fc多肽之C末端連接至第二IDUA胺基酸序列、IDUA變異體胺基酸序列或其催化活性片段。
在某些實施例中，第一Fc多肽之N末端連接至第一IDUA胺基酸序列、IDUA變異體胺基酸序列或其催化活性片段；且第二Fc多肽之N末端連接至第二IDUA胺基酸序列、IDUA變異體胺基酸序列或其催化活性片段。
在某些實施例中，第一Fc多肽之C末端連接至第一IDUA胺基酸序列、IDUA變異體胺基酸序列或其催化活性片段；且第二Fc多肽之C末端連接至第二IDUA胺基酸序列、IDUA變異體胺基酸序列或其催化活性片段。
在某些實施例中，第一Fc多肽之N末端連接至第一IDUA胺基酸序列、IDUA變異體胺基酸序列或其催化活性片段；且第二Fc多肽之C末端連接至第二IDUA胺基酸序列、IDUA變異體胺基酸序列或其催化活性片段。
在某些實施例中，第一Fc多肽之C末端連接至第一IDUA胺基酸序列、IDUA變異體胺基酸序列或其催化活性片段；且第二Fc多肽之N末端連接至第二IDUA胺基酸序列、IDUA變異體胺基酸序列或其催化活性片段。
在一些實施例中，Fc多肽藉由連接體(例如肽連接體)連結至IDUA酶。在一些實施例中，Fc多肽藉由肽鍵或藉由肽連接體連結至IDUA酶，例如係融合多肽。肽連接體可經構形，使得其允許IDUA酶相對於其所連結之Fc多肽旋轉；及/或抵抗蛋白酶之消化。肽連接體可含有天然胺基酸、非天然胺基酸或其組合。在一些實施例中，肽連接體可為撓性連接體，例如含有諸如Gly、Asn、Ser、Thr、Ala及諸如此類之胺基酸之連接體(例如富含甘胺酸之連接體)。該等連接體係使用已知參數設計且可具有任一長度並含有任一數量之任一長度之重複單元(例如Gly及Ser殘基之重複單元)。舉例而言，連接體可具有重複，例如兩個、三個、四個、五個或更多個Gly 4-Ser (SEQ ID NO:72)重複或單一Gly 4-Ser (SEQ ID NO:72)。在其他態樣中，連接體可為Gly-Ser (SEQ ID NO:71)。在一些實施例中，肽連接體可包括蛋白酶裂解位點，例如可由存在於中樞神經系統中之酶裂解之位點。
在一些實施例中，IDUA酶連結至Fc多肽之N末端，例如藉由Gly-Ser連接體(SEQ ID NO:71)、Gly 4-Ser連接體(SEQ ID NO:72)或(Gly 4-Ser) 2連接體(SEQ ID NO:73)。在一些實施例中，Fc多肽可包含在N末端連結至連接體或直接連結至IDUA酶之鉸鏈序列或部分鉸鏈序列。
在一些實施例中，IDUA酶連結至Fc多肽之C末端，例如藉由Gly-Ser連接體(SEQ ID NO:71)、Gly 4-Ser連接體(SEQ ID NO:72)或(Gly 4-Ser) 2連接體(SEQ ID NO:73)。在一些實施例中，Fc多肽之C末端直接連結至IDUA酶。
在一些實施例中，IDUA酶藉由化學交聯劑連結至Fc多肽。該等結合物可使用熟知之化學交聯試劑及方案來生成。舉例而言，存在熟習此項技術者已知且可用於交聯多肽與所關注劑之大量化學交聯劑。舉例而言，交聯劑係異雙官能交聯劑，其可用於以逐步方式連接分子。異雙官能交聯劑提供設計用於結合蛋白質之更特異性偶聯方法之能力，由此減少不期望副反應(例如同蛋白質聚合物)之發生率。此項技術中已知眾多種異雙官能交聯劑，包括N-羥基琥珀醯亞胺(NHS)或其水溶性類似物N-羥基磺基琥珀醯亞胺(磺基-NHS)、4-(N-馬來醯亞胺基甲基)環己烷-1-甲酸琥珀醯亞胺基酯(SMCC)、間-馬來醯亞胺基苯甲醯基-N-羥基琥珀醯亞胺酯(MBS)；(4-碘乙醯基)胺基苯甲酸N-琥珀醯亞胺基酯(SIAB)、4-(對-馬來醯亞胺基苯基)丁酸琥珀醯亞胺基酯(SMPB)、1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽(EDC)；4-琥珀醯亞胺基氧基羰基-a-甲基-a-(2-吡啶基二硫基)-甲苯(SMPT)、3-(2-吡啶基二硫基)丙酸N-琥珀醯亞胺基酯(SPDP)及6-[3-(2-吡啶基二硫基)丙酸酯]己酸琥珀醯亞胺基酯(LC-SPDP)。具有N-羥基琥珀醯亞胺部分之彼等交聯劑可作為通常具有較大水溶解度之N-羥基磺基琥珀醯亞胺類似物獲得。另外，在連接鏈內具有二硫橋之彼等交聯劑可合成為烷基衍生物，以減少活體內連接體裂解之量。除異雙官能交聯劑外，存在多種其他交聯劑，包括同雙官能及光反應性交聯劑。二琥珀醯亞胺基辛二酸酯(DSS)、雙馬來醯亞胺基己烷(BMH)及庚二醯亞胺酸二甲酯. 2HCl (DMP)係有用同雙官能交聯劑之實例，且雙-[B-(4-疊氮基柳基醯胺基)乙基]二硫化物(BASED)及N-琥珀醯亞胺基-6-(4'-疊氮基-2'-硝基苯基胺基)己酸酯(SANPAH)係有用光反應性交聯劑之實例。 包含 IDUA 酶 -Fc 融合多肽之說明性蛋白質分子
在一些態樣中，本文所述之融合蛋白包含第一Fc多肽，該第一Fc多肽連接至IDUA酶、IDUA酶變異體或其催化活性片段；及第二Fc多肽；其中第一及/或第二Fc多肽係能夠結合(例如特異性結合)至血腦障壁(BBB)受體(例如運鐵蛋白受體(TfR))之經修飾Fc。在某些實施例中，第二Fc多肽與第一Fc多肽形成Fc二聚體。在一些實施例中，第一Fc多肽及/或第二Fc多肽不包括免疫球蛋白重鏈及/或輕鏈可變區序列或其抗原結合部分。在一些態樣中，融合蛋白進一步包含第二IDUA酶、IDUA酶變異體或其催化活性片段(例如，其可連接至第二Fc多肽)。
在一些實施例中，第一Fc多肽係經修飾Fc多肽及/或第二Fc多肽係經修飾Fc多肽(例如，包含本文所述之一或多種修飾)。舉例而言，在一些實施例中，經修飾Fc多肽含有促進其與另一Fc多肽異二聚化之一或多種修飾。在一些實施例中，經修飾Fc多肽含有降低效應功能之一或多種修飾。在一些實施例中，經修飾Fc多肽含有延長血清半衰期之一或多種修飾。在一些實施例中，經修飾Fc多肽包含賦予結合BBB受體(例如運鐵蛋白受體(TfR))之一或多種修飾。舉例而言，在某些實施例中，根據EU編號，能夠結合至TfR之Fc多肽包含位置389處之Ala。在一些實施例中，根據EU編號，能夠結合至TfR受體之Fc多肽在以下位置包含：位置380處之Glu；位置389處之Ala；及位置390處之Asn。在一些實施例中，根據EU編號，能夠結合至TfR受體之Fc多肽在以下位置包含：位置380處之Glu；位置384處之Tyr；位置386處之Thr；位置387處之Glu；位置388處之Trp；位置389處之Ala；位置390處之Asn；位置413處之Thr；位置415處之Glu；位置416處之Glu；及位置421處之Phe。在一些實施例中，該Fc多肽特異性結合至TfR。
在一些實施例中，第一Fc多肽係經修飾Fc多肽。在一些實施例中，第二Fc多肽係經修飾Fc多肽。在一些實施例中，第一及第二Fc多肽各自係經修飾Fc多肽。在一些實施例中，第一Fc多肽係經修飾多肽，但不特異性結合至TfR；且第二Fc多肽係能夠特異性結合至TfR之經修飾多肽，且視情況地進一步包含本文所述之一或多種其他修飾。在其他實施例中，第一Fc多肽係能夠特異性結合至TfR之經修飾多肽，且視情況地進一步包含本文所述之一或多種其他修飾；且第二Fc多肽係經修飾多肽，但不特異性結合至TfR。在一些實施例中，第一Fc多肽係能夠特異性結合至TfR之經修飾多肽，且視情況地進一步包含本文所述之一或多種其他修飾；且第二Fc多肽係能夠特異性結合至TfR之經修飾多肽，且視情況地進一步包含本文所述之一或多種其他修飾。
在一些實施例中，本文所述之融合蛋白包含第一多肽鏈，該第一多肽鏈包含連接至IDUA酶、IDUA酶變異體或其催化活性片段之第一Fc多肽，該第一Fc多肽包含T366S、L368A及Y407V (孔洞)取代；及第二多肽鏈，該第二多肽鏈包含含有T366W (旋鈕)取代之第二Fc多肽，其中第一及/或第二Fc多肽係能夠結合至TfR之經修飾多肽。在一些實施例中，第一Fc多肽及/或第二Fc多肽進一步包含L234A及L235A (LALA)取代。在一些實施例中，第一Fc多肽及/或第二Fc多肽進一步包含L234A、L235A及P329G (LALAPG)取代或進一步包含L234A、L235A及P329S (LALAPS)取代。在一些實施例中，第一Fc多肽及/或第二Fc多肽進一步包含M252Y、S254T及T256E (YTE)取代。在一些實施例中，第一Fc多肽及/或第二Fc多肽進一步包含：1) L234A及L235A (LALA)取代；L234A、L235A及P329G (LALAPG)取代；或L234A、L235A及P329S (LALAPS)取代；及2) M252Y、S254T及T256E (YTE)取代。在一些實施例中，第一Fc多肽及/或第二Fc多肽包含位置234、235、252、254、256及366處之人類IgG1野生型殘基。
在一些實施例中，第二Fc多肽係能夠結合至TfR之經修飾多肽。在一些實施例中，連接至IDUA酶、IDUA酶變異體或其催化活性片段之第一Fc多肽未經修飾以結合至TfR。在一些實施例中，第二Fc多肽包含旋鈕、LALA/LALAPG/LALAPS及/或YTE突變，與SEQ ID NO:25-32中之任一者具有至少85%一致性、至少90%一致性、至少95%一致性、至少96%一致性、至少97%一致性、至少98%一致性或至少99%一致性。在一些實施例中，第二Fc多肽包含旋鈕、LALA/LALAPG/LALAPS及/或YTE突變，與SEQ ID NO:25-32中之任一者具有至少85%一致性、至少90%一致性、至少95%一致性、至少96%一致性、至少97%一致性、至少98%一致性或至少99%一致性，且根據EU編號包含位置389處之Ala。在一些實施例中，第二Fc多肽與SEQ ID NO:25-32中之任一者之序列具有至少85%一致性、至少90%一致性、至少95%一致性、至少96%一致性、至少97%一致性、至少98%一致性或至少99%一致性，且根據EU編號在以下位置包含：位置380處之Glu；位置389處之Ala；及位置390處之Asn。在一些實施例中，第二Fc多肽與SEQ ID NO:25-32中之任一者之序列具有至少85%一致性、至少90%一致性、至少95%一致性、至少96%一致性、至少97%一致性、至少98%一致性或至少99%一致性，且根據EU編號在以下位置包含：位置380處之Glu；位置384處之Tyr；位置386處之Thr；位置387處之Glu；位置388處之Trp；位置389處之Ala；位置390處之Asn；位置413處之Thr；位置415處之Glu；位置416處之Glu；及位置421處之Phe；或包含SEQ ID NO:25-32中之任一者之序列。在一些實施例中，第一Fc多肽包含孔洞、LALA/LALAPG/LALAPS及/或YTE突變，且與SEQ ID NO:9-16中之任一者具有至少85%一致性、至少90%一致性、至少95%一致性、至少96%一致性、至少97%一致性、至少98%一致性或至少99%一致性；或包含SEQ ID NO:9-16中之任一者之序列。在一些實施例中，第二Fc多肽包含SEQ ID NO:25-32中之任一者，且第一Fc多肽包含SEQ ID NO:9-16中之任一者。在一些實施例中，第一Fc多肽及/或第二Fc多肽之N末端包括IgG1鉸鏈區之一部分(例如DKTHTCPPCP；SEQ ID NO:6)。在一些實施例中，第二Fc多肽與SEQ ID NO:35-38中之任一者具有至少85%、至少90%、至少95%一致性、至少96%一致性、至少97%一致性、至少98%一致性或至少99%一致性。在一些實施例中，第二Fc多肽與SEQ ID NO:35-38中之任一者具有至少85%、至少90%、至少95%一致性、至少96%一致性、至少97%一致性、至少98%一致性或至少99%一致性，且根據EU編號包含位置389處之Ala。在一些實施例中，第二Fc多肽與SEQ ID NO:35-38中之任一者之序列具有至少85%一致性、至少90%一致性、至少95%一致性、至少96%一致性、至少97%一致性、至少98%一致性或至少99%一致性，且根據EU編號在以下位置包含：位置380處之Glu；位置389處之Ala；及位置390處之Asn。在一些實施例中，第二Fc多肽與SEQ ID NO:35-38中之任一者之序列具有至少85%一致性、至少90%一致性、至少95%一致性、至少96%一致性、至少97%一致性、至少98%一致性或至少99%一致性，且根據EU編號在以下位置包含：位置380處之Glu；位置384處之Tyr；位置386處之Thr；位置387處之Glu；位置388處之Trp；位置389處之Ala；位置390處之Asn；位置413處之Thr；位置415處之Glu；位置416處之Glu；及位置421處之Phe，或包含SEQ ID NO:35-38中之任一者之序列。在一些實施例中，第一Fc多肽與SEQ ID NO:19-22中之任一者具有至少85%、至少90%、至少95%一致性、至少96%一致性、至少97%一致性、至少98%一致性或至少99%一致性，或包含SEQ ID NO:19-22中之任一者之序列。
在一些實施例中，第二Fc多肽未經修飾以結合至TfR。在一些實施例中，連接至IDUA酶、IDUA酶變異體或其催化活性片段之第一Fc多肽係能夠結合至TfR之經修飾多肽。在一些實施例中，第二Fc多肽包含旋鈕、LALA/LALAPG/LALAPS及/或YTE突變，與SEQ ID No:17-18及74-75中之任一者具有至少85%一致性、至少90%一致性、至少95%一致性、至少96%一致性、至少97%一致性、至少98%一致性或至少99%一致性；或包含SEQ ID NO:17-18及74-75中之任一者之序列。在一些實施例中，第一Fc多肽包含孔洞、LALA/LALAPG/LALAPS及/或YTE突變，且與SEQ ID NO:33-34及97-98中之任一者具有至少85%一致性、至少90%一致性、至少95%一致性、至少96%一致性、至少97%一致性、至少98%一致性或至少99%一致性。在一些實施例中，第一Fc多肽包含孔洞、LALA/LALAPG/LALAPS及/或YTE突變，與SEQ ID NO:33-34及97-98中之任一者具有至少85%一致性、至少90%一致性、至少95%一致性、至少96%一致性、至少97%一致性、至少98%一致性或至少99%一致性，且根據EU編號包含位置389處之Ala。在一些實施例中，第一Fc多肽包含孔洞、LALA/LALAPG/LALAPS及/或YTE突變，與SEQ ID NO:33-34及97-98中之任一者具有至少85%一致性、至少90%一致性、至少95%一致性、至少96%一致性、至少97%一致性、至少98%一致性或至少99%一致性，且根據EU編號在以下位置包含：位置380處之Glu；位置389處之Ala；及位置390處之Asn。在一些實施例中，第一Fc多肽包含孔洞、LALA/LALAPG/LALAPS及/或YTE突變，與SEQ ID NO:33-34及97-98中之任一者具有至少85%一致性、至少90%一致性、至少95%一致性、至少96%一致性、至少97%一致性、至少98%一致性或至少99%一致性，且根據EU編號在以下位置包含：位置380處之Glu；位置384處之Tyr；位置386處之Thr；位置387處之Glu；位置388處之Trp；位置389處之Ala；位置390處之Asn；位置413處之Thr；位置415處之Glu；位置416處之Glu；及位置421處之Phe，或包含SEQ ID NO:33-34及97-98中之任一者之序列。在一些實施例中，第二Fc多肽包含SEQ ID NO:17-18及74-75中之任一者，且第一Fc多肽包含SEQ ID NO:33-34及97-98中之任一者。在一些實施例中，第一Fc多肽及/或第二Fc多肽之N末端包括IgG1鉸鏈區之一部分(例如DKTHTCPPCP；SEQ ID NO:6)。在一些實施例中，第二Fc多肽與SEQ ID NO:76-77中之任一者具有至少85%、至少90%、至少95%一致性、至少96%一致性、至少97%一致性、至少98%一致性或至少99%一致性；或包含SEQ ID NO:76-77中之任一者之序列。
在一些實施例中，本文所述之融合蛋白包含第一多肽鏈，該第一多肽鏈包含連接至IDUA酶、IDUA酶變異體或其催化活性片段之包含T366W (旋鈕)取代之第一Fc多肽；及第二多肽鏈，該第二多肽鏈包含含有T366S、L368A及Y407V (孔洞)取代之第二Fc多肽，其中第一及/或第二Fc多肽係能夠結合至TfR之經修飾多肽。在一些實施例中，第一Fc多肽及/或第二Fc多肽進一步包含L234A及L235A (LALA)取代。在一些實施例中，第一Fc多肽及/或第二Fc多肽進一步包含L234A、L235A及P329G (LALAPG)取代或進一步包含L234A、L235A及P329S (LALAPS)取代。在一些實施例中，第一Fc多肽及/或第二Fc多肽進一步包含M252Y、S254T及T256E (YTE)取代。在一些實施例中，第一Fc多肽及/或第二Fc多肽進一步包含：1) L234A及L235A (LALA)取代；L234A、L235A及P329G (LALAPG)取代；或L234A、L235A及P329S (LALAPS)取代；及2) M252Y、S254T及T256E (YTE)取代。在一些實施例中，第一Fc多肽及/或第二Fc多肽包含位置234、235、252、254、256及366處之人類IgG1野生型殘基。
在一些實施例中，第二Fc多肽係能夠結合至TfR之經修飾多肽。在一些實施例中，連接至IDUA酶、IDUA酶變異體或其催化活性片段之第一Fc多肽未經修飾以結合至TfR。在一些實施例中，第二Fc多肽包含孔洞、LALA/LALAPG/LALAPS及/或YTE突變，與SEQ ID NO:33-34及97-98中之任一者具有至少85%一致性、至少90%一致性、至少95%一致性、至少96%一致性、至少97%一致性、至少98%一致性或至少99%一致性。在一些實施例中，第二Fc多肽包含孔洞、LALA/LALAPG/LALAPS及/或YTE突變，與SEQ ID NO:33-34及97-98中之任一者具有至少85%一致性、至少90%一致性、至少95%一致性、至少96%一致性、至少97%一致性、至少98%一致性或至少99%一致性，且根據EU編號包含位置389處之Ala。在一些前述實施例中，根據EU編號，第二Fc多肽在以下位置進一步包含：位置380處之Glu及位置390處之Asn。在一些前述實施例中，根據EU編號，第二Fc多肽在以下位置包含：位置380處之Glu；位置384處之Tyr；位置386處之Thr；位置387處之Glu；位置388處之Trp；位置389處之Ala；位置390處之Asn；位置413處之Thr；位置415處之Glu；位置416處之Glu；及位置421處之Phe。在一些實施例中，第二Fc多肽包含SEQ ID NO:33-34及97-98中之任一者之序列。在一些實施例中，第一Fc多肽包含旋鈕、LALA/LALAPG/LALAPS及/或YTE突變，且與SEQ ID NO:17-18及74-75中之任一者具有至少85%一致性、至少90%一致性、至少95%一致性、至少96%一致性、至少97%一致性、至少98%一致性或至少99%一致性；或包含SEQ ID NO:17-18及74-75中之任一者之序列。在一些實施例中，第二Fc多肽包含SEQ ID NO:33-34及97-98中之任一者，且第一Fc多肽包含SEQ ID NO:17-18及74-75中之任一者。在一些實施例中，第一Fc多肽及/或第二Fc多肽之N末端包括IgG1鉸鏈區之一部分(例如DKTHTCPPCP；SEQ ID NO:6)。在一些實施例中，第一Fc多肽與SEQ ID NO:76-77中之任一者具有至少85%、至少90%、至少95%一致性、至少96%一致性、至少97%一致性、至少98%一致性或至少99%一致性，或包含SEQ ID NO:76-77中之任一者之序列。
在一些實施例中，第二Fc多肽未經修飾以結合至TfR。在一些實施例中，連接至IDUA酶、IDUA酶變異體或其催化活性片段之第一Fc多肽係能夠結合至TfR之經修飾多肽。在一些實施例中，第二Fc多肽包含孔洞、LALA/LALAPG/LALAPS及/或YTE突變，與SEQ ID NO:9-16中之任一者具有至少85%一致性、至少90%一致性、至少95%一致性、至少96%一致性、至少97%一致性、至少98%一致性或至少99%一致性；或包含SEQ ID NO:9-16中之任一者之序列。在一些實施例中，第一Fc多肽包含旋鈕、LALA/LALAPG/LALAPS及/或YTE突變，且與SEQ ID NO:25-32中之任一者具有至少85%一致性、至少90%一致性、至少95%一致性、至少96%一致性、至少97%一致性、至少98%一致性或至少99%一致性。在一些實施例中，第一Fc多肽包含旋鈕、LALA/LALAPG/LALAPS及/或YTE突變，與SEQ ID NO:25-32中之任一者具有至少85%一致性、至少90%一致性、至少95%一致性、至少96%一致性、至少97%一致性、至少98%一致性或至少99%一致性，且根據EU編號包含位置389處之Ala。在一些前述實施例中，根據EU編號，第一Fc多肽在以下位置進一步包含：位置380處之Glu及位置390處之Asn。在一些前述實施例中，根據EU編號，第一Fc多肽在以下位置包含：位置380處之Glu；位置384處之Tyr；位置386處之Thr；位置387處之Glu；位置388處之Trp；位置389處之Ala；位置390處之Asn；位置413處之Thr；位置415處之Glu；位置416處之Glu；及位置421處之Phe。在一些實施例中，第一Fc多肽包含SEQ ID NO:25-32中之任一者之序列。在一些實施例中，第二Fc多肽包含SEQ ID NO:9-16中之任一者，且第一Fc多肽包含SEQ ID NO:25-32中之任一者。在一些實施例中，第一Fc多肽及/或第二Fc多肽之N末端包括IgG1鉸鏈區之一部分(例如DKTHTCPPCP；SEQ ID NO:6)。在一些實施例中，第二Fc多肽與SEQ ID NO:19-22中之任一者具有至少85%、至少90%、至少95%一致性、至少96%一致性、至少97%一致性、至少98%一致性或至少99%一致性；或包含SEQ ID NO:19-22中之任一者之序列。在一些實施例中，第一Fc多肽與SEQ ID NO:35-38中之任一者具有至少85%、至少90%、至少95%一致性、至少96%一致性、至少97%一致性、至少98%一致性或至少99%一致性；或包含SEQ ID NO:35-38中之任一者之序列。
在一些實施例中，存在於本文所述融合蛋白中之IDUA酶連接至第一多肽鏈，該第一多肽鏈包含第一Fc多肽，該第一Fc多肽與SEQ ID NO:9-16中之任一者具有至少85%、至少90%、至少95%一致性、至少96%一致性、至少97%一致性、至少98%一致性或至少99%一致性，或包含SEQ ID NO:9-16中之任一者之序列(例如作為融合多肽)。在一些實施例中，IDUA酶藉由連接體(例如撓性連接體)及/或鉸鏈區或其一部分(例如DKTHTCPPCP；SEQ ID NO:6)連接至第一Fc多肽。在一些實施例中，第一Fc多肽之N末端包括IgG1鉸鏈區之一部分(例如DKTHTCPPCP；SEQ ID NO:6)。在一些實施例中，第一Fc多肽與SEQ ID NO:19-22中之任一者具有至少85%、至少90%、至少95%一致性、至少96%一致性、至少97%一致性、至少98%一致性或至少99%一致性，或包含SEQ ID NO:19-22中之任一者之序列。在一些實施例中，IDUA酶包含與SEQ ID NO:39-49、78-82及99中之任一者具有至少85%、至少90%、至少95%一致性、至少96%一致性、至少97%一致性、至少98%一致性或至少99%一致性之IDUA序列，或包含SEQ ID NO:39-49、78-82及99中之任一者之序列。在一些實施例中，連接至第一Fc多肽之IDUA序列與SEQ ID NO:50-69及83-92中之任一者具有至少85%、至少90%、至少95%一致性、至少96%一致性、至少97%一致性、至少98%一致性或至少99%一致性，或包含SEQ ID NO:50-69及83-92中之任一者之序列。在一些實施例中，融合蛋白包含第二Fc多肽，該第二Fc多肽與SEQ ID NO:25-32中之任一者具有至少85%、至少90%、至少95%一致性、至少96%一致性、至少97%一致性、至少98%一致性或至少99%一致性。在一些實施例中，融合蛋白包含第二Fc多肽，該第二Fc多肽與SEQ ID NO:25-32中之任一者具有至少85%、至少90%、至少95%一致性、至少96%一致性、至少97%一致性、至少98%一致性或至少99%一致性，且根據EU編號包含位置389處之Ala。在一些實施例中，第二Fc多肽與SEQ ID NO:25-32中之任一者之序列具有至少85%一致性、至少90%一致性、至少95%一致性、至少96%一致性、至少97%一致性、至少98%一致性或至少99%一致性，且根據EU編號在以下位置包含：位置380處之Glu；位置389處之Ala；及位置390處之Asn。在一些實施例中，第二多肽與SEQ ID NO:25-32中之任一者之序列具有至少85%一致性、至少90%一致性、至少95%一致性、至少96%一致性、至少97%一致性、至少98%一致性或至少99%一致性，且根據EU編號在以下位置包含：位置380處之Glu；位置384處之Tyr；位置386處之Thr；位置387處之Glu；位置388處之Trp；位置389處之Ala；位置390處之Asn；位置413處之Thr；位置415處之Glu；位置416處之Glu；及位置421處之Phe，或包含SEQ ID NO:25-32中之任一者之序列。在一些實施例中，第二Fc多肽之N末端包括IgG1鉸鏈區之一部分(例如DKTHTCPPCP；SEQ ID NO:6)。在一些實施例中，第二Fc多肽與SEQ ID NO:35-38中之任一者具有至少85%、至少90%、至少95%一致性、至少96%一致性、至少97%一致性、至少98%一致性或至少99%一致性。在一些實施例中，第二Fc多肽與SEQ ID NO:35-38中之任一者具有至少85%、至少90%、至少95%一致性、至少96%一致性、至少97%一致性、至少98%一致性或至少99%一致性，且根據EU編號包含位置389處之Ala。在一些實施例中，第二Fc多肽與SEQ ID NO:35-38中之任一者之序列具有至少85%一致性、至少90%一致性、至少95%一致性、至少96%一致性、至少97%一致性、至少98%一致性或至少99%一致性，且根據EU編號在以下位置包含：位置380處之Glu；位置389處之Ala；及位置390處之Asn。在一些實施例中，第二Fc多肽與SEQ ID NO:35-38中之任一者之序列具有至少85%一致性、至少90%一致性、至少95%一致性、至少96%一致性、至少97%一致性、至少98%一致性或至少99%一致性，且根據EU編號在以下位置包含：位置380處之Glu；位置384處之Tyr；位置386處之Thr；位置387處之Glu；位置388處之Trp；位置389處之Ala；位置390處之Asn；位置413處之Thr；位置415處之Glu；位置416處之Glu；及位置421處之Phe，或包含SEQ ID NO:35-38中之任一者之序列。在一些實施例中，第二IDUA酶藉由連接體(例如撓性連接體)及/或鉸鏈區或其一部分(例如DKTHTCPPCP；SEQ ID NO:6)連接至第二Fc多肽。在一些實施例中，第二IDUA酶包含與SEQ ID NO:39-49、78-82及99中之任一者具有至少85%、至少90%、至少95%一致性、至少96%一致性、至少97%一致性、至少98%一致性或至少99%一致性之IDUA序列，或包含SEQ ID NO:39-49、78-82及99中之任一者之序列。在一些實施例中，連接至第二Fc多肽之第二IDUA序列與SEQ ID NO:101-103中之任一者具有至少85%、至少90%、至少95%一致性、至少96%一致性、至少97%一致性、至少98%一致性或至少99%一致性，或包含SEQ ID NO:101-103中之任一者之序列。
在一些實施例中，融合蛋白包含連接至IDUA胺基酸序列之第一Fc多肽，該第一Fc多肽包含SEQ ID NO:50-65及83-92中之任一者之胺基酸序列；及第二Fc多肽，該第二Fc多肽包含SEQ ID NO:35-38中之任一者之胺基酸序列。
在一些實施例中，融合蛋白包含連接至IDUA胺基酸序列之第一Fc多肽，該第一Fc多肽包含SEQ ID NO:50-57及83-86中之任一者之胺基酸序列；及第二Fc多肽，該第二Fc多肽包含SEQ ID NO:35-36中之任一者之胺基酸序列。
在一些實施例中，融合蛋白包含連接至IDUA胺基酸序列之第一Fc多肽，該第一Fc多肽包含SEQ ID NO:50-53中之任一者之胺基酸序列；及第二Fc多肽，該第二Fc多肽包含SEQ ID NO:35-36中之任一者之胺基酸序列。
在一些實施例中，融合蛋白包含連接至IDUA胺基酸序列之第一Fc多肽，該第一Fc多肽包含SEQ ID NO:50-51中之任一者之胺基酸序列；及第二Fc多肽，該第二Fc多肽包含SEQ ID NO:35-36中之任一者之胺基酸序列。
在一些實施例中，融合蛋白包含連接至IDUA胺基酸序列之第一Fc多肽，該第一Fc多肽包含SEQ ID NO:51之胺基酸序列；及第二Fc多肽，該第二Fc多肽包含SEQ ID NO:36之胺基酸序列。
在一些實施例中，融合蛋白包含連接至IDUA胺基酸序列之第一Fc多肽，該第一Fc多肽包含SEQ ID NO:54-57中之任一者之胺基酸序列；及第二Fc多肽，該第二Fc多肽包含SEQ ID NO:35-36中之任一者之胺基酸序列。
在一些實施例中，融合蛋白包含連接至IDUA胺基酸序列之第一Fc多肽，該第一Fc多肽包含SEQ ID NO:83-86中之任一者之胺基酸序列；及第二Fc多肽，該第二Fc多肽包含SEQ ID NO:35-36中之任一者之胺基酸序列。
在一些實施例中，融合蛋白包含連接至IDUA胺基酸序列之第一Fc多肽，該第一Fc多肽包含SEQ ID NO:83-84中之任一者之胺基酸序列；及第二Fc多肽，該第二Fc多肽包含SEQ ID NO:35-36中之任一者之胺基酸序列。
在一些實施例中，融合蛋白包含連接至IDUA胺基酸序列之第一Fc多肽，該第一Fc多肽包含SEQ ID NO:84之胺基酸序列；及第二Fc多肽，該第二Fc多肽包含SEQ ID NO:36之胺基酸序列。
在一些實施例中，融合蛋白包含連接至IDUA胺基酸序列之第一Fc多肽，該第一Fc多肽包含SEQ ID NO:58-65及87-92中之任一者之胺基酸序列；及第二Fc多肽，該第二Fc多肽包含SEQ ID NO:37-38中之任一者之胺基酸序列。
在一些實施例中，融合蛋白包含連接至IDUA胺基酸序列之第一Fc多肽，該第一Fc多肽包含SEQ ID NOS: 58-61中之任一者之胺基酸序列；及第二Fc多肽，該第二Fc多肽包含SEQ ID NO:37-38中之任一者之胺基酸序列。
在一些實施例中，融合蛋白包含連接至IDUA胺基酸序列之第一Fc多肽，該第一Fc多肽包含SEQ ID NOS: 58-59中之任一者之胺基酸序列；及第二Fc多肽，該第二Fc多肽包含SEQ ID NO:37-38中之任一者之胺基酸序列。
在一些實施例中，融合蛋白包含連接至IDUA胺基酸序列之第一Fc多肽，該第一Fc多肽包含SEQ ID NO:59之胺基酸序列；及第二Fc多肽，該第二Fc多肽包含SEQ ID NO:38之胺基酸序列。
在一些實施例中，融合蛋白包含連接至IDUA胺基酸序列之第一Fc多肽，該第一Fc多肽包含SEQ ID NOS: 60-61中之任一者之胺基酸序列；及第二Fc多肽，該第二Fc多肽包含SEQ ID NO:37-38中之任一者之胺基酸序列。
在一些實施例中，融合蛋白包含連接至IDUA胺基酸序列之第一Fc多肽，該第一Fc多肽包含SEQ ID NO:61之胺基酸序列；及第二Fc多肽，該第二Fc多肽包含SEQ ID NO:38之胺基酸序列。
在一些實施例中，融合蛋白包含連接至IDUA胺基酸序列之第一Fc多肽，該第一Fc多肽包含SEQ ID NO:62-65中之任一者之胺基酸序列；及第二Fc多肽，該第二Fc多肽包含SEQ ID NO:37-38中之任一者之胺基酸序列。
在一些實施例中，融合蛋白包含連接至IDUA胺基酸序列之第一Fc多肽，該第一Fc多肽包含SEQ ID NO:64-65中之任一者之胺基酸序列；及第二Fc多肽，該第二Fc多肽包含SEQ ID NO:37-38中之任一者之胺基酸序列。
在一些實施例中，融合蛋白包含連接至IDUA胺基酸序列之第一Fc多肽，該第一Fc多肽包含SEQ ID NO:65之胺基酸序列；及第二Fc多肽，該第二Fc多肽包含SEQ ID NO:38之胺基酸序列。
在一些實施例中，融合蛋白包含連接至IDUA胺基酸序列之第一Fc多肽，該第一Fc多肽包含SEQ ID NO:87-90中之任一者之胺基酸序列；及第二Fc多肽，該第二Fc多肽包含SEQ ID NO:37-38中之任一者之胺基酸序列。
在一些實施例中，融合蛋白包含連接至IDUA胺基酸序列之第一Fc多肽，該第一Fc多肽包含SEQ ID NO:89-90中之任一者之胺基酸序列；及第二Fc多肽，該第二Fc多肽包含SEQ ID NO:37-38中之任一者之胺基酸序列。
在一些實施例中，融合蛋白包含連接至IDUA胺基酸序列之第一Fc多肽，該第一Fc多肽包含SEQ ID NO:90之胺基酸序列；及第二Fc多肽，該第二Fc多肽包含SEQ ID NO:38之胺基酸序列。
在一些實施例中，融合蛋白包含連接至IDUA胺基酸序列之第一Fc多肽，該第一Fc多肽包含SEQ ID NO:91-92中之任一者之胺基酸序列；及第二Fc多肽，該第二Fc多肽包含SEQ ID NO:37-38中之任一者之胺基酸序列。
在一些實施例中，融合蛋白包含連接至IDUA胺基酸序列之第一Fc多肽，該第一Fc多肽包含SEQ ID NO:92之胺基酸序列；及第二Fc多肽，該第二Fc多肽包含SEQ ID NO:38之胺基酸序列。
在一些實施例中，融合蛋白包含連接至第一IDUA胺基酸序列之第一Fc多肽，該第一Fc多肽包含SEQ ID NO:50-51中之任一者之胺基酸序列；連接至第二IDUA胺基酸序列之第二Fc多肽，該第二Fc多肽包含SEQ ID NO:101或102中之任一者之胺基酸序列。
在一些實施例中，融合蛋白包含連接至第一IDUA胺基酸序列之第一Fc多肽，該第一Fc多肽包含SEQ ID NO:51之胺基酸序列；連接至第二IDUA胺基酸序列之第二Fc多肽，該第二Fc多肽包含SEQ ID NO:102中之任一者之胺基酸序列。
在一些實施例中，融合蛋白包含連接至IDUA胺基酸序列之第一Fc多肽，該第一Fc多肽包含SEQ ID NO:66-69中之任一者之胺基酸序列；及第二Fc多肽，該第二Fc多肽包含SEQ ID NO:35-38中之任一者之胺基酸序列。
在一些實施例中，融合蛋白包含連接至IDUA胺基酸序列之第一Fc多肽，該第一Fc多肽包含SEQ ID NO:66-67中之任一者之胺基酸序列；及第二Fc多肽，該第二Fc多肽包含SEQ ID NO:35-36中之任一者之胺基酸序列。
在一些實施例中，融合蛋白包含連接至IDUA胺基酸序列之第一Fc多肽，該第一Fc多肽包含SEQ ID NO:67之胺基酸序列；及第二Fc多肽，該第二Fc多肽包含SEQ ID NO:35-36之胺基酸序列。
在一些實施例中，融合蛋白包含連接至IDUA胺基酸序列之第一Fc多肽，該第一Fc多肽包含SEQ ID NO:67之胺基酸序列；及第二Fc多肽，該第二Fc多肽包含SEQ ID NO:36之胺基酸序列。
在一些實施例中，融合蛋白包含連接至IDUA胺基酸序列之第一Fc多肽，該第一Fc多肽包含SEQ ID NO:68-69中之任一者之胺基酸序列；及第二Fc多肽，該第二Fc多肽包含SEQ ID NO:37-38中之任一者之胺基酸序列。
在一些實施例中，融合蛋白包含連接至IDUA胺基酸序列之第一Fc多肽，該第一Fc多肽包含SEQ ID NO:68之胺基酸序列；及第二Fc多肽，該第二Fc多肽包含SEQ ID NO:37-38之胺基酸序列。
在一些實施例中，融合蛋白包含連接至IDUA胺基酸序列之第一Fc多肽，該第一Fc多肽包含SEQ ID NO:68之胺基酸序列；及第二Fc多肽，該第二Fc多肽包含SEQ ID NO:38之胺基酸序列。
在一些實施例中，融合蛋白包含連接至第一IDUA胺基酸序列之第一Fc多肽，該第一Fc多肽包含SEQ ID NO:67之胺基酸序列；及連接至第二IDUA胺基酸序列之第二Fc多肽，該第二Fc多肽包含SEQ ID NO:103之胺基酸序列。
在一些實施例中，存在於本文所述融合蛋白中之IDUA酶連接至第一多肽鏈，該第一多肽鏈包含第一Fc多肽，該第一Fc多肽與SEQ ID NO:17-18及74-75中之任一者具有至少85%、至少90%、至少95%一致性、至少96%一致性、至少97%一致性、至少98%一致性或至少99%一致性，或包含SEQ ID NO:17-18及74-75中之任一者之序列(例如作為融合多肽)。在一些實施例中，第一IDUA酶藉由連接體(例如撓性連接體)及/或鉸鏈區或其一部分(例如DKTHTCPPCP；SEQ ID NO:6)連接至第一Fc多肽。在一些實施例中，第一Fc多肽之N末端包括IgG1鉸鏈區之一部分(例如DKTHTCPPCP；SEQ ID NO:6)。在一些實施例中，第一Fc多肽與SEQ ID NO:76-77中之任一者具有至少85%、至少90%、至少95%一致性、至少96%一致性、至少97%一致性、至少98%一致性或至少99%一致性，或包含SEQ ID NO:76-77中之任一者之序列。在一些實施例中，IDUA酶包含與SEQ ID NO:39-49、78-82及99中之任一者具有至少85%、至少90%、至少95%一致性、至少96%一致性、至少97%一致性、至少98%一致性或至少99%一致性之IDUA序列，或包含SEQ ID NO:39-49、78-82及99中之任一者之序列。在一些實施例中，連接至第一Fc多肽之IDUA序列與SEQ ID NO:100及104中之任一者具有至少85%、至少90%、至少95%一致性、至少96%一致性、至少97%一致性、至少98%一致性或至少99%一致性，或包含SEQ ID NO:100及104中之任一者之序列。在一些實施例中，融合蛋白包含第二Fc多肽，該第二Fc多肽與SEQ ID NO:33-34及97-98中之任一者具有至少85%、至少90%、至少95%一致性、至少96%一致性、至少97%一致性、至少98%一致性或至少99%一致性。在一些實施例中，融合蛋白包含第二Fc多肽，該第二Fc多肽與SEQ ID NO:33-34及97-98中之任一者具有至少85%、至少90%、至少95%一致性、至少96%一致性、至少97%一致性、至少98%一致性或至少99%一致性，且根據EU編號包含位置389處之Ala。在一些前述實施例中，根據EU編號，第二多肽在以下位置進一步包含：位置380處之Glu及位置390處之Asn。在一些前述實施例中，根據EU編號，第二Fc多肽在以下位置包含：位置380處之Glu；位置384處之Tyr；位置386處之Thr；位置387處之Glu；位置388處之Trp；位置389處之Ala；位置390處之Asn；位置413處之Thr；位置415處之Glu；位置416處之Glu；及位置421處之Phe。在一些前述實施例中，第二Fc多肽包含SEQ ID NO:33-34及97-98中之任一者之序列。在一些實施例中，第二Fc多肽之N末端包括IgG1鉸鏈區之一部分(例如DKTHTCPPCP；SEQ ID NO:6)。在一些實施例中，第二IDUA酶藉由連接體(例如撓性連接體)及/或鉸鏈區或其一部分(例如DKTHTCPPCP；SEQ ID NO:6)連接至第二Fc多肽。
在一些實施例中，存在於本文所述融合蛋白中之IDUA酶連接至第一多肽鏈，該第一多肽鏈包含第一Fc多肽，該第一Fc多肽與SEQ ID NO:25-32中之任一者具有至少85%、至少90%、至少95%一致性、至少96%一致性、至少97%一致性、至少98%一致性或至少99%一致性(例如作為融合多肽)。在一些實施例中，第一Fc多肽與SEQ ID NO:25-32中之任一者具有至少85%、至少90%、至少95%一致性、至少96%一致性、至少97%一致性、至少98%一致性或至少99%一致性，且根據EU編號包含位置389處之Ala。在一些前述實施例中，根據EU編號，第一多肽在以下位置進一步包含：位置380處之Glu及位置390處之Asn。在一些前述實施例中，根據EU編號，第一Fc多肽在以下位置包含：位置380處之Glu；位置384處之Tyr；位置386處之Thr；位置387處之Glu；位置388處之Trp；位置389處之Ala；位置390處之Asn；位置413處之Thr；位置415處之Glu；位置416處之Glu；及位置421處之Phe。在一些前述實施例中，第一Fc多肽包含SEQ ID NO:25-32中之任一者之序列。在一些實施例中，IDUA酶藉由連接體(例如撓性連接體)及/或鉸鏈區或其一部分(例如DKTHTCPPCP；SEQ ID NO:6)連接至第一Fc多肽。在一些實施例中，第一Fc多肽之N末端包括IgG1鉸鏈區之一部分(例如DKTHTCPPCP；SEQ ID NO:6)。在一些實施例中，第一Fc多肽與SEQ ID NO:35-38中之任一者具有至少85%、至少90%、至少95%一致性、至少96%一致性、至少97%一致性、至少98%一致性或至少99%一致性。在一些實施例中，第一Fc多肽與SEQ ID NO:35-38中之任一者具有至少85%、至少90%、至少95%一致性、至少96%一致性、至少97%一致性、至少98%一致性或至少99%一致性，且根據EU編號包含位置389處之Ala。在一些前述實施例中，根據EU編號，第一多肽在以下位置進一步包含：位置380處之Glu及位置390處之Asn。在一些前述實施例中，根據EU編號，第一Fc多肽在以下位置包含：位置380處之Glu；位置384處之Tyr；位置386處之Thr；位置387處之Glu；位置388處之Trp；位置389處之Ala；位置390處之Asn；位置413處之Thr；位置415處之Glu；位置416處之Glu；及位置421處之Phe。在一些前述實施例中，第一Fc多肽包含SEQ ID NO:35-38中之任一者之序列。在一些實施例中，IDUA酶包含與SEQ ID NO:39-49、78-82及99中之任一者具有至少85%、至少90%、至少95%一致性、至少96%一致性、至少97%一致性、至少98%一致性或至少99%一致性之IDUA序列，或包含SEQ ID NO:39-49、78-82及99中之任一者之序列。在一些實施例中，連接至第一Fc多肽之IDUA序列與SEQ ID NO:101-103中之任一者具有至少85%、至少90%、至少95%一致性、至少96%一致性、至少97%一致性、至少98%一致性或至少99%一致性，或包含SEQ ID NO:101-103中之任一者之序列。在一些實施例中，融合蛋白包含第二Fc多肽，該第二Fc多肽與SEQ ID NO:9-16中之任一者具有至少85%、至少90%、至少95%一致性、至少96%一致性、至少97%一致性、至少98%一致性或至少99%一致性，或包含SEQ ID NO:9-16中之任一者之序列。在一些實施例中，第二Fc多肽之N末端包括IgG1鉸鏈區之一部分(例如DKTHTCPPCP；SEQ ID NO:6)。在一些實施例中，第二Fc多肽與SEQ ID NO:19-22中之任一者具有至少85%、至少90%、至少95%一致性、至少96%一致性、至少97%一致性、至少98%一致性或至少99%一致性，或包含SEQ ID NO:19-22中之任一者之序列。在一些實施例中，第二IDUA酶藉由連接體(例如撓性連接體)及/或鉸鏈區或其一部分(例如DKTHTCPPCP；SEQ ID NO:6)連接至第二Fc多肽。在一些實施例中，第二IDUA酶包含與SEQ ID NO:39-49、78-82及99中之任一者具有至少85%、至少90%、至少95%一致性、至少96%一致性、至少97%一致性、至少98%一致性或至少99%一致性之IDUA序列，或包含SEQ ID NO:39-49、78-82及99中之任一者之序列。在一些實施例中，連接至第二Fc多肽之第二IDUA序列與SEQ ID NO:50-69及83-92中之任一者具有至少85%、至少90%、至少95%一致性、至少96%一致性、至少97%一致性、至少98%一致性或至少99%一致性，或包含SEQ ID NO:50-69及83-92中之任一者之序列。
在一些實施例中，存在於本文所述融合蛋白中之IDUA酶連接至第一多肽鏈，該第一多肽鏈包含第一Fc多肽，該第一Fc多肽與SEQ ID NO:33-34及97-98中之任一者具有至少85%、至少90%、至少95%一致性、至少96%一致性、至少97%一致性、至少98%一致性或至少99%一致性(例如作為融合多肽)。在一些實施例中，第一Fc多肽與SEQ ID NO:33-34及97-98中之任一者具有至少85%、至少90%、至少95%一致性、至少96%一致性、至少97%一致性、至少98%一致性或至少99%一致性，且根據EU編號包含位置389處之Ala。在一些前述實施例中，根據EU編號，第一多肽在以下位置進一步包含：位置380處之Glu及位置390處之Asn。在一些前述實施例中，根據EU編號，第一Fc多肽在以下位置包含：位置380處之Glu；位置384處之Tyr；位置386處之Thr；位置387處之Glu；位置388處之Trp；位置389處之Ala；位置390處之Asn；位置413處之Thr；位置415處之Glu；位置416處之Glu；及位置421處之Phe。在一些前述實施例中，第一Fc多肽包含SEQ ID NO:33-34及97-98中之任一者之序列。在一些實施例中，IDUA酶藉由連接體(例如撓性連接體)及/或鉸鏈區或其一部分(例如DKTHTCPPCP；SEQ ID NO:6)連接至第一Fc多肽。在一些實施例中，第一Fc多肽之N末端包括IgG1鉸鏈區之一部分(例如DKTHTCPPCP；SEQ ID NO:6)。在一些實施例中，IDUA酶包含與SEQ ID NO:39-49、78-82及99中之任一者具有至少85%、至少90%、至少95%一致性、至少96%一致性、至少97%一致性、至少98%一致性或至少99%一致性之IDUA序列，或包含SEQ ID NO:39-49、78-82及99中之任一者之序列。在一些實施例中，融合蛋白包含第二Fc多肽，該第二Fc多肽與SEQ ID NO:17-18及74-75中之任一者具有至少85%、至少90%、至少95%一致性、至少96%一致性、至少97%一致性、至少98%一致性或至少99%一致性，或包含SEQ ID NO:17-18及74-75中之任一者之序列。在一些實施例中，第二Fc多肽之N末端包括IgG1鉸鏈區之一部分(例如DKTHTCPPCP；SEQ ID NO:6)。在一些實施例中，第二Fc多肽與SEQ ID NO:76-77中之任一者具有至少85%、至少90%、至少95%一致性、至少96%一致性、至少97%一致性、至少98%一致性或至少99%一致性，或包含SEQ ID NO:76-77中之任一者之序列。在一些實施例中，第二IDUA酶藉由連接體(例如撓性連接體)及/或鉸鏈區或其一部分(例如DKTHTCPPCP；SEQ ID NO:6)連接至第二Fc多肽。在一些實施例中，第二IDUA酶包含與SEQ ID NO:39-49、78-82及99中之任一者具有至少85%、至少90%、至少95%一致性、至少96%一致性、至少97%一致性、至少98%一致性或至少99%一致性之IDUA序列，或包含SEQ ID NO:39-49、78-82及99中之任一者之序列。在一些實施例中，連接至第二Fc多肽之第二IDUA序列與SEQ ID NO:100-104中之任一者具有至少85%、至少90%、至少95%一致性、至少96%一致性、至少97%一致性、至少98%一致性或至少99%一致性，或包含SEQ ID NO:100及104中之任一者之序列。
在一些實施例中，本文所述之融合蛋白包含：1)連接至IDUA胺基酸序列之第一Fc多肽；及2)第二Fc多肽；其中每一多肽係由如前述實施例中列舉之胺基酸序列組成。
在一些實施例中，本文所述之融合蛋白包含：1)連接至第一IDUA胺基酸序列之第一Fc多肽；及2)連接至第二IDUA胺基酸序列之第二Fc多肽；其中每一多肽係由如前述實施例中列舉之胺基酸序列組成。
本文所述之融合蛋白及其他組合物可具有一系列結合親和力。舉例而言，在一些實施例中，該蛋白質對運鐵蛋白受體(TfR)之親和力介於約50 mM至約500 nM、或約100 nM至約500 nM範圍內之任一處。在一些實施例中，對TfR之親和力介於約50 nM至約300 nM範圍內。在一些實施例中，對TfR之親和力介於約100 nM至約350 nM範圍內。在一些實施例中，對TfR之親和力介於約150 nM至約400 nM範圍內。在一些實施例中，對TfR之親和力介於約200 nM至約400 nM範圍內。在一些實施例中，對TfR之親和力介於約200 nM至約450 nM範圍內。在一些實施例中，對TfR之親和力係單價親和力。 蛋白質活性之評估
可使用多種分析(包括使用人工受質量測活體外活性之分析，例如實例部分中所述之彼等分析)來評價包含IDUA酶之本文所述融合蛋白之活性。
在一些實施例中，評估組織樣品。組織樣品可使用如上文所述之分析評估，只是通常在音波處理步驟前包括多個冷凍-解凍週期(例如2個、3個、4個、5個或更多個)以確保微泡破裂開。
可藉由本文所述之分析評估之樣品包括腦、肝臟、腎臟、肺、脾、血漿、血清、腦脊液(CSF)及尿。在一些實施例中，可評估接受本文所述之酶-Fc融合蛋白(例如IDUA-Fc融合蛋白)之患者之CSF樣品。 核酸、載體及宿主細胞
通常使用重組方法製備含於如本文所述之融合蛋白中之多肽鏈。因此，在一些態樣中，本揭示案提供經分離核酸，其包含編碼包含如本文所述之Fc多肽之任一多肽鏈的核酸序列；及其中引入核酸之宿主細胞，其用於複製編碼多肽之核酸及/或表現多肽。在一些實施例中，宿主細胞係真核細胞，例如人類細胞。
在另一態樣中，提供多核苷酸，其包含編碼本文所述之一或多條多肽鏈之核苷酸序列。在一些實施例中，多核苷酸編碼本文所述之一條多肽序列。在一些實施例中，多核苷酸編碼本文所述之兩條多肽序列。多核苷酸可為單股或雙股。在一些實施例中，多核苷酸係DNA。在具體實施例中，多核苷酸係cDNA。在一些實施例中，多核苷酸係RNA。
一些實施例亦提供核酸序列對，其中每條核酸序列編碼本文所述之多肽。舉例而言，某些實施例提供核酸序列對，其中該對中之第一核酸序列編碼連接至第一IDUA胺基酸序列、IDUA變異體胺基酸序列或其催化活性片段之第一Fc多肽；且該對中之第二核酸序列編碼第二Fc多肽，其中第一及/或第二Fc多肽係能夠結合(例如特異性結合)至血腦障壁(BBB)受體(例如運鐵蛋白受體(TfR))之經修飾Fc。
在一些實施例中，多核苷酸包括在核酸構築體內，或多核苷酸對包括在一或多種核酸構築體內。在一些實施例中，構築體係可複製載體。在一些實施例中，載體選自質體、病毒載體、噬菌粒、酵母染色體載體及非游離型哺乳動物載體。
在一些實施例中，多核苷酸可操作連接至表現構築體中之一或多條調控核苷酸序列。在一個系列之實施例中，核酸表現構築體適於用作表面表現文庫。在一些實施例中，文庫適於在酵母中進行表面表現。在一些實施例中，文庫適於在噬菌體中進行表面表現。在另一系列之實施例中，核酸表現構築體適於在容許以毫克或克量分離多肽之系統中表現多肽。在一些實施例中，系統係哺乳動物細胞表現系統。在一些實施例中，系統係酵母細胞表現系統。
用於產生重組多肽之表現媒劑包括質體及其他載體。例如，適宜載體包括以下類型之質體：pBR322源性質體、pEMBL源性質體、pEX源性質體、pBTac源性質體及pUC源性質體，用於在原核細胞(例如大腸桿菌( E. coli))中表現。pcDNAI/amp、pcDNAI/neo、pRc/CMV、pSV2gpt、pSV2neo、pSV2-dhfr、pTk2、pRSVneo、pMSG、pSVT7、pko-neo及pHyg源性載體係適於轉染真核細胞之哺乳動物表現載體之實例。替代地，可使用諸如牛乳頭瘤病毒(BPV-1)或艾司坦-巴爾病毒(Epstein-Barr virus，pHEBo、pREP源性及p205)之病毒的衍生物在真核細胞中瞬時表現多肽。在一些實施例中，可能期望藉由使用桿狀病毒(baculovirus)表現系統來表現重組多肽。該等桿狀病毒表現系統之實例包括pVL源性載體(例如pVL1392、pVL1393及pVL941)、pAcUW源性載體(例如pAcUW1)及pBlueBac源性載體。其他表現系統包括腺病毒、腺相關病毒及其他病毒表現系統。
載體可轉型至任一適宜宿主細胞中。在一些實施例中，宿主細胞(例如細菌或酵母細胞)可適於用作表面表現文庫。在一些細胞中，載體在宿主細胞中表現以表現相對較大量之多肽。該等宿主細胞包括哺乳動物細胞、酵母細胞、昆蟲細胞及原核細胞。在一些實施例中，細胞係哺乳動物細胞，例如中國倉鼠卵巢(CHO)細胞、幼小倉鼠腎臟(BHK)細胞、NS0細胞、Y0細胞、HEK293細胞、COS細胞、Vero細胞或HeLa細胞。
可在適當條件下培養經編碼如本文所述之一或多條Fc多肽鏈之表現載體轉染之宿主細胞以允許表現一或多種多肽。可自含有多肽之細胞及培養基之混合物分泌及分離多肽。替代地，多肽可保留在細胞質或膜部分中，且將細胞收穫，溶解，並使用期望方法分離多肽。 治療方法
如本文所述之融合蛋白可在治療上用於治療MPS I。
因此，某些實施例提供減少毒性代謝產物(例如硫酸乙醯肝素源性寡糖或硫酸皮膚素源性寡糖)在患有MPS I之個體中累積之方法，該方法包括向個體投與如本文所述之蛋白質。
某些實施例提供如本文所述之蛋白質，其用於減少毒性代謝產物(例如硫酸乙醯肝素源性寡糖或硫酸皮膚素源性寡糖)在患有MPS I之個體中累積。
某些實施例提供如本文所述之蛋白質之用途，其用於製備用來減少毒性代謝產物(例如硫酸乙醯肝素源性寡糖或硫酸皮膚素源性寡糖)在患有MPS I之個體中累積之藥物。
某些實施例亦提供治療MPS I之方法，其包括向有需要之個體投與如本文所述之蛋白質。
某些實施例提供如本文所述之蛋白質，其用於治療有需要之個體之MPS I。
某些實施例提供如本文所述之蛋白質之用途，其用於製備用來治療有需要之個體之MPS I的藥物。
在一些實施例中，與不連接至本文所述融合蛋白之IDUA之攝取相比或與連接至參考蛋白(例如如本文所述之融合蛋白，其不具引起TfR結合之第二Fc多肽之修飾)之IDUA之攝取相比，投與蛋白質(例如連接至IDUA酶)會改良(例如增加)腦中IDUA之C max。
在一些實施例中，與不連接至本文所述融合蛋白之IDUA之攝取相比或與連接至參考蛋白(例如如本文所述之融合蛋白，其不具引起TfR結合之第二Fc多肽之修飾)之IDUA之攝取相比，腦中IDUA之C max改良(例如增加)至少約1.1倍、1.2倍、1.3倍、1.4倍、1.5倍、1.6倍、1.7倍、1.8倍、1.9倍、2倍、2.2倍、2.4倍、2.6倍、2.8倍、3倍、4倍、5倍、6倍或更大。
本文所述之融合蛋白係以治療有效量或劑量投與個體。
在多個實施例中，本文所述之融合蛋白係非經腸投與。在一些實施例中，蛋白質係靜脈內投與。
在一些非經腸實施例中，如本文所述之融合蛋白係腹膜內、真皮內或肌內投與。在一些實施例中，如本文所述之融合蛋白係經鞘內(例如藉由硬膜外投與)或腦室內投與。 醫藥組合物及套組
在其他態樣中，提供包含本文所述之融合蛋白之醫藥組合物及套組。 醫藥組合物
製備用於本揭示案中之調配物之指南可參見熟習此項技術者已知之任一數量之醫藥製備及調配手冊。
在一些實施例中，醫藥組合物包含如本文所述之融合蛋白且進一步包含一或多種醫藥學上可接受之載劑及/或賦形劑。醫藥學上可接受之載劑包括在生理上相容且不會干擾或以其他方式抑制活性劑之活性的任何溶劑、分散介質或包衣。
本文所述醫藥組合物之劑量及期望藥物濃度可端視所設想之特定用途而變化。 套組
在一些實施例中，提供用於治療MPS I之套組，其包含如本文所述之融合蛋白。
在一些實施例中，套組進一步包含一或多種其他治療劑。舉例而言，在一些實施例中，套組包含如本文所述之融合蛋白且進一步包含用於治療MPS I之神經症狀之一或多種其他治療劑。在一些實施例中，套組進一步包含含有用於實踐本文所述方法之指導(即方案)的說明材料(例如使用套組來投與包含IDUA酶之融合蛋白穿過血腦障壁之說明書)。儘管說明材料通常包含書面或印刷材料，但其並不限於該等材料。本揭示案預期能夠存儲該等說明書且將其傳達至最終使用者之任何媒體。該等媒體包括(但不限於)電子存儲媒體(例如磁碟、磁帶、盒式磁盤、晶片)、光學媒體(例如CD-ROM)及諸如此類。該等媒體可包括提供該等說明材料之網際網路網站之地址。 某些定義
除非內容另有明確說明，否則如本文所用之單數形式「一(a)」、「一(an)」及「該」包括複數個指示物。因此，例如，提及「一多肽」可包括兩種或更多種該等分子及諸如此類。
如本文所用之術語「約」及「大約」在用於修飾數值或範圍中指定之量時指示，該數值以及與熟習此項技術者已知之值的合理偏差(例如± 20%、± 10%或± 5%)在所列舉值之預期含義內。
如本文可互換使用之術語「個體(subject)」、「個體(individual)」及「患者」係指哺乳動物，包括(但不限於)人類、非人類靈長類動物、嚙齒類動物(例如大鼠、小鼠及豚鼠)、兔、奶牛、豬、馬及其他哺乳動物物種。在一個實施例中，患者係人類。在一些實施例中，人類係需要治療MPS I之患者。在一些實施例中，患者具有MPS I之一或多個徵象或症狀。
術語「醫藥學上可接受之賦形劑」係指在生物或藥理上適用於人類或動物中之非活性醫藥成分，例如(但不限於)緩衝劑、載劑或防腐劑。
術語「投與」係指將劑(例如MPS I治療劑，例如本文所述之ETV:IDUA療法)、化合物或組合物(例如醫藥組合物)遞送至期望生物作用位點之方法。該等方法包括(但不限於)非經腸遞送、靜脈內遞送、真皮內遞送、肌內遞送、鞘內遞送或腹膜內遞送。在一個實施例中，本文所述之多肽係靜脈內投與。
如本文所用之「治療(treatment)」(及其語法變化形式，例如「治療(treat)」或「治療(treating)」)係指改變所治療個體之自然病程之臨床干預，且可出於預防或在臨床病理學病程期間實施。期望治療效應包括(但不限於)防止疾病發生或復發、緩和症狀、減少疾病之任何直接或間接病理學後果、減小疾病進展速率、改善或緩和疾病狀態以及緩解或改良預後。
片語「有效量」意指本文所述之化合物(i)治療或預防特定疾病、疾患或病症，(ii)減弱、改善或消除特定疾病、疾患或病症之一或多個症狀，或(iii)預防或延遲本文所述之特定疾病、疾患或病症之一或多個症狀發作的量。
本文所揭示物質/分子之「治療有效量」可根據諸如以下之因素而變化：個體之疾病狀態、年齡、性別及體重，以及物質/分子在個體中引發期望反應之能力。治療有效量涵蓋其中治療有益效應超過物質/分子之任何毒性或有害效應之量。「預防有效量」係指在所需劑量及時間段下可有效地達成期望預防結果之量。通常但非必需，由於在個體中在疾病之前或早期使用預防劑量，故預防有效量將小於治療有效量。
如本文所用之「α-L-艾杜糖醛酸酶」、「艾杜糖醛酸酶α-L」、「L-艾杜糖醛酸酶」、「艾杜糖醛酸酶」或「IDUA」係指α-L-艾杜糖醛酸酶(EC 3.2.1.76)，其係參與糖胺聚糖(例如硫酸皮膚素及硫酸乙醯肝素)之溶酶體降解之酶。 IDUA基因之突變與由硫酸乙醯肝素及硫酸皮膚素之降解受損引起之MSP I相關。如本文所用之術語「IDUA」或「IDUA酶」(視情況地作為包含Fc多肽之蛋白質之組分)係催化活性的且涵蓋功能變異體，包括對偶基因及剪接變異體，及其催化活性片段。人類IDUA之序列可在UniProt條目P35475下獲得且由4p16.3處之人類 IDUA基因編碼。全長序列提供為SEQ ID NO:39，其可具有位置33處之H或Q及/或位置622處之A或T，其中位置係根據EU編號。如本文所用之「成熟」 IDUA序列係指缺少天然全長多肽鏈之信號序列之多肽鏈形式。成熟人類IDUA多肽之胺基酸序列之實施例提供為SEQ ID NO:40，其對應於全長人類序列之胺基酸27-653。如本文所用之「截短」 IDUA序列係指天然全長多肽鏈之催化活性片段(例如SEQ ID NO:45-49、78-82及99 (其中X 3係不存在))。人類IDUA之結構已經充分表徵。亦已闡述非人類靈長類動物IDUA序列，包括黑猩猩(例如侏儒黑猩猩(Pan paniscus、Pygmy chimpanzee) (矮黑猩猩(Bonobo))之UniProt條目A0A2R9ALZ1)。小鼠Idua序列可在Uniprot條目P48441下獲得。例如當在相同條件下分析時，IDUA變異體具有相應野生型IDUA或其片段之活性的至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%或至少95%。例如當在相同條件下分析時，催化活性IDUA片段具有相應全長IDUA或其變異體之活性的至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%或至少95%。IDUA之市售重組形式稱為Aldurazyme或拉羅尼酶，且兩個術語係指同一重組形式。
如本文所用之「運鐵蛋白受體」或「TfR」係指運鐵蛋白受體蛋白1。人類運鐵蛋白受體1多肽序列闡述於SEQ ID NO:7中。業內亦已知來自其他物種之運鐵蛋白受體蛋白1序列(例如黑猩猩，登錄號XP_003310238.1；恆河猴，NP_001244232.1；狗，NP_001003111.1；牛，NP_001193506.1；小鼠，NP_035768.1；大鼠，NP_073203.1；及雞，NP_990587.1)。術語「運鐵蛋白受體」亦涵蓋由運鐵蛋白受體蛋白1染色體基因座處之基因編碼之例示性參考序列(例如人類序列)之對偶基因變異體。全長運鐵蛋白受體蛋白包括短N末端細胞內區域、跨膜區域及大細胞外結構域。細胞外結構域之特徵在於三個結構域：蛋白酶樣結構域、螺旋結構域及頂端結構域。人類運鐵蛋白受體1之頂端結構域序列闡述於SEQ ID NO:8中。
如本文所用之「融合蛋白」或「[IDUA酶]-Fc融合蛋白」係指二聚體蛋白，該蛋白包含連接(例如融合)至IDUA酶、IDUA酶變異體或其催化活性片段之第一Fc多肽(即「[IDUA]-Fc融合多肽」)；及第二Fc多肽(例如與第一Fc多肽形成Fc二聚體之第二Fc多肽)。第二Fc多肽亦可連接(例如融合)至IDUA酶、IDUA酶變異體或其催化活性片段。第一Fc多肽及/或第二Fc多肽可藉由肽鍵或藉由多肽連接體連接至IDUA酶、IDUA酶變異體或其催化活性片段。第一Fc多肽及/或第二Fc多肽可為含有促進其與另一Fc多肽異二聚化之一或多種修飾之經修飾Fc多肽。第一Fc多肽及/或第二Fc多肽可為含有賦予運鐵蛋白受體結合之一或多種修飾之經修飾Fc多肽。第一Fc多肽及/或第二Fc多肽可為含有降低效應功能之一或多種修飾之經修飾Fc多肽。在某些實施例中，第一Fc多肽及第二Fc多肽不具效應功能。第一Fc多肽及/或第二Fc多肽可為含有延長血清半衰期之一或多種修飾之經修飾Fc多肽。在某些實施例中，第一Fc多肽及/或第二Fc多肽不包括免疫球蛋白重鏈及/或輕鏈可變區序列或其抗原結合部分。在某些實施例中，第一Fc多肽及第二Fc多肽不包括免疫球蛋白重鏈及/或輕鏈可變區序列或其抗原結合部分。
如本文所用之「融合多肽」或「[IDUA酶]-Fc融合多肽」係指連接(例如融合)至IDUA酶、IDUA酶變異體或其催化活性片段之Fc多肽。Fc多肽可藉由肽鍵或藉由多肽連接體連接至IDUA酶、IDUA酶變異體或其催化活性片段。Fc多肽可為含有促進其與另一Fc多肽異二聚化之一或多種修飾之經修飾Fc多肽。Fc多肽可為含有賦予運鐵蛋白受體結合之一或多種修飾之經修飾Fc多肽。Fc多肽可為含有降低效應功能之一或多種修飾之經修飾Fc多肽。Fc多肽可為含有延長血清半衰期之一或多種修飾之經修飾Fc多肽。
如本文所用之術語「Fc多肽」係指天然免疫球蛋白重鏈多肽之C末端區域，其特徵在於Ig折疊作為結構域。Fc多肽含有包括至少CH2結構域及/或CH3結構域之恆定區序列且可含有鉸鏈區之至少一部分。一般而言，Fc多肽不含可變區。
「經修飾Fc多肽」係指與野生型免疫球蛋白重鏈Fc多肽序列相比具有至少一個突變(例如取代、缺失或插入)、但保留天然Fc多肽之總體Ig折疊或結構的Fc多肽。
術語「FcRn」係指新生Fc受體。Fc多肽與FcRn結合會降低清除率且增加Fc多肽之血清半衰期。人類FcRn蛋白係異二聚體，其係由類似於I類主要組織相容性(MHC)蛋白之大小約50 kDa之蛋白質及大小約15 kDa之β2-微球蛋白構成。
如本文所用之「FcRn結合位點」係指結合至FcRn之Fc多肽區域。在人類IgG中，如使用EU索引編號之FcRn結合位點包括T250、L251、M252、I253、S254、R255、T256、T307、E380、M428、H433、N434、H435及Y436。該等位置對應於SEQ ID NO:1之位置20至26、77、150、198及203至206。
如本文所用之「天然FcRn結合位點」係指結合至FcRn且具有與結合至FcRn之天然Fc多肽區域相同之胺基酸序列的Fc多肽區域。
如本文所用之術語「CH3結構域」及「CH2結構域」係指免疫球蛋白恆定區結構域多肽。出於本申請案之目的，CH3結構域多肽係指如根據EU編號之約位置341至約位置447之胺基酸區段，且CH2結構域多肽係指如根據EU編號方案編號之約位置231至約位置340之胺基酸區段且不包括鉸鏈區序列。CH2及CH3結構域多肽亦可藉由IMGT (ImMunoGeneTics)編號方案來編號，其中根據IMGT科學圖表編號(IMGT網站)，CH2結構域編號係1-110且CH3結構域編號係1-107。CH2及CH3結構域係免疫球蛋白之Fc區之一部分。Fc區係指如根據EU編號方案編號之約位置231至約位置447之胺基酸區段，但如本文所用可包括抗體鉸鏈區之至少一部分。說明性鉸鏈區序列係人類IgG1鉸鏈序列EPKSCDKTHTCPPCP (SEQ ID NO:5)。
「天然(naturally occurring)」、「天然(native)」或「野生型」用於闡述可在自然界中發現為不同於人工製造之物體。舉例而言，存在於生物體(包括病毒)中之核苷酸序列係天然的，該核苷酸序列可自自然界中之來源分離且未在實驗室中經有意修飾。另外，「野生型」係指在自然界中發現之不具任何已知突變之正常基因或生物體。
舉例而言，關於CH3或CH2結構域之術語「野生型」、「天然(native)」及「天然(naturally occurring)」在本文中用於指具有在自然界中出現之序列之結構域。
如本文所用關於突變多肽或突變多核苷酸之術語「突變體」可與「變異體」互換使用。相對於給定野生型CH3或CH2結構域參考序列之變異體可包括天然對偶基因變異體。「非天然」 CH3或CH2結構域係指不存在於自然界中之細胞中且藉由天然CH3結構域或CH2結構域多核苷酸或多肽之遺傳修飾、例如使用遺傳改造技術或誘變技術產生之變異體或突變結構域。「變異體」包括相對於野生型包含至少一個胺基酸突變之任一結構域。突變可包括取代、插入及缺失。
術語「胺基酸」係指天然及合成胺基酸以及以與天然胺基酸相似之方式起作用之胺基酸類似物及胺基酸模擬物。
天然胺基酸係由遺傳密碼編碼之彼等胺基酸以及隨後經修飾之彼等胺基酸，例如羥脯胺酸、γ-羧基麩胺酸鹽及O-磷酸絲胺酸。「胺基酸類似物」係指具有與天然胺基酸相同之基本化學結構(即結合至氫、羧基、胺基及R基團之α碳)之化合物，例如高絲胺酸、正白胺酸、甲硫胺酸亞碸、甲硫胺酸甲基鋶。該等類似物具有經修飾之R基團(例如正白胺酸)或經修飾之肽骨架，但保留與天然胺基酸相同之基本化學結構。「胺基酸模擬物」係指具有不同於胺基酸之一般化學結構之結構、但以與天然胺基酸相似之方式起作用之化學化合物。
天然α-胺基酸包括(但不限於)丙胺酸(Ala)、半胱胺酸(Cys)、天冬胺酸(Asp)、麩胺酸(Glu)、苯丙胺酸(Phe)、甘胺酸(Gly)、組胺酸(His)、異白胺酸(Ile)、精胺酸(Arg)、離胺酸(Lys)、白胺酸(Leu)、甲硫胺酸(Met)、天冬醯胺(Asn)、脯胺酸(Pro)、麩醯胺酸(Gln)、絲胺酸(Ser)、蘇胺酸(Thr)、纈胺酸(Val)、色胺酸(Trp)、酪胺酸(Tyr)及其組合。天然α-胺基酸之立體異構物包括(但不限於) D-丙胺酸(D-Ala)、D-半胱胺酸(D-Cys)、D-天冬胺酸(D-Asp)、D-麩胺酸(D-Glu)、D-苯丙胺酸(D-Phe)、D-組胺酸(D-His)、D-異白胺酸(D-Ile)、D-精胺酸(D-Arg)、D-離胺酸(D-Lys)、D-白胺酸(D-Leu)、D-甲硫胺酸(D-Met)、D-天冬醯胺(D-Asn)、D-脯胺酸(D-Pro)、D-麩醯胺酸(D-Gln)、D-絲胺酸(D-Ser)、D-蘇胺酸(D-Thr)、D-纈胺酸(D-Val)、D-色胺酸(D-Trp)、D-酪胺酸(D-Tyr)及其組合。
胺基酸在本文中可由其通常已知之三字母符號或由IUPAC-IUB生物化學命名委員會推薦之單字母符號來提及。
術語「多肽」及「肽」在本文中可互換使用且係指單一鏈中胺基酸殘基之聚合物。該等術語適用於其中一或多個胺基酸殘基係相應天然胺基酸之人工化學模擬物之胺基酸聚合物以及適用於天然胺基酸聚合物及非天然胺基酸聚合物。胺基酸聚合物可完全包含L-胺基酸、完全包含D-胺基酸或包含L及D胺基酸之混合物。
如本文所用之術語「蛋白質」係指多肽或單鏈多肽之二聚體(即兩條)或多聚體(即三條或更多條)。蛋白質之單鏈多肽可藉由共價鍵(例如二硫鍵)或非共價相互作用連結。
術語「保守取代」、「保守突變」或「經保守修飾之變異體」係指導致胺基酸經可分類為具有相似特徵之另一胺基酸取代之變化。以此方式定義之保守胺基酸組之類別之實例可包括：「帶電/極性組」，包括Glu (麩胺酸或E)、Asp (天冬胺酸或D)、Asn (天冬醯胺或N)、Gln (麩醯胺酸或Q)、Lys (離胺酸或K)、Arg (精胺酸或R)及His (組胺酸或H)；「芳族組」，包括Phe (苯丙胺酸或F)、Tyr (酪胺酸或Y)、Trp (色胺酸或W)及(組胺酸或H)；及「脂族組」，包括Gly (甘胺酸或G)、Ala (丙胺酸或A)、Val (纈胺酸或V)、Leu (白胺酸或L)、Ile (異白胺酸或I)、Met (甲硫胺酸或M)、Ser (絲胺酸或S)、Thr (蘇胺酸或T)及Cys (半胱胺酸或C)。在每一組內，亦可鑑別出亞組。舉例而言，帶電或極性胺基酸之組可細分成亞組，包括：「帶正電之亞組」，包含Lys、Arg及His；「帶負電之亞組」，包含Glu及Asp；及「極性亞組」，包含Asn及Gln。在另一實例中，芳族或環狀組可細分成亞組，包括：「氮環亞組」，包含Pro、His及Trp；及「苯基亞組」，包含Phe及Tyr。在另一實例中，脂族組可細分成亞組，例如「脂族非極性亞組」，包含Val、Leu、Gly及Ala；及「脂族微極性亞組」，包含Met、Ser、Thr及Cys。保守突變之類別之實例包括上述亞組內胺基酸之胺基酸取代，例如(但不限於)：Lys取代Arg或反之亦然，使得可維持正電荷；Glu取代Asp或反之亦然，使得可維持負電荷；Ser取代Thr或反之亦然，使得可維持游離-OH；及Gln取代Asn或反之亦然，使得可維持游離-NH 2。在一些實施例中，用疏水性胺基酸取代天然疏水性胺基酸，例如在活性位點中，以保持疏水性。
術語「一致」或「一致性」%在兩條或更多條多肽序列之上下文中係指在比較及比對比較窗或特定區域內之最大對應性時，兩條或更多條序列或子序列相同或在指定區域內具有指定百分比之一致胺基酸殘基(例如至少60%一致性、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%或至少95%或更大)，如使用序列比較算法或藉由手動比對及目視檢查所量測。在一些實施例中，相對於參考序列具有指定一致性%之序列因一或多個保守取代而不同於參考序列。
為進行多肽之序列比較，通常一條胺基酸序列充當參考序列，候選序列與該參考序列進行比較。可使用熟習此項技術者可獲得之各種方法(例如視覺比對)或使用公開獲得之軟體使用已知算法來實施比對以達成最大比對。該等程式包括BLAST程式、ALIGN、ALIGN-2 (Genentech, South San Francisco, Calif.)或Megalign (DNASTAR)。用於比對以達成最大比對之參數可由熟習此項技術者確定。出於本申請案之目的，為進行多肽序列之序列比較，使用以預設參數比對兩條蛋白質序列之BLASTP算法標準蛋白質BLAST。
術語「對應於」、「參考……確定」或「參考……編號」在用於鑑別多肽序列中之給定胺基酸殘基之上下文中時係指，當給定胺基酸序列與參考序列進行最大比對及比較時，指定參考序列之殘基之位置。因此，例如，當經修飾Fc多肽中之胺基酸殘基與SEQ ID NO:1最佳比對時，當該等殘基與SEQ ID NO:1中之胺基酸對齊時，該等殘基「對應於」 SEQ ID NO:1中之胺基酸。與參考序列比對之多肽之長度無需與參考序列相同。
術語「多核苷酸」及「核酸」可互換地指任一長度之核苷酸鏈，且包括DNA及RNA。核苷酸可為去氧核糖核苷酸、核糖核苷酸、經修飾核苷酸或鹼基及/或其類似物或可藉由DNA或RNA聚合酶納入鏈中之任何受質。多核苷酸可包括經修飾核苷酸，例如甲基化核苷酸及其類似物。本文預期之多核苷酸之實例包括單股及雙股DNA、單股及雙股RNA以及具有單股及雙股DNA及RNA之混合物的雜合分子。
如本文所用之「結合親和力」係指兩個分子(例如多肽上之單一結合位點及與其結合之靶(例如運鐵蛋白受體))之間的非共價相互作用之強度。因此，例如，除非另有指示或上下文明確指出，否則該術語可指多肽及其靶之間的1:1相互作用。結合親和力可藉由量測平衡解離常數(K D)來量化，該平衡解離常數係指用解離速率常數(k d，時間 -1)除以締合速率常數(k a，時間 -1M -1)。K D可藉由量測複合物形成及解離之動力學(例如使用表面電漿子共振(SPR)方法，例如Biacore™系統；動力學排斥分析，例如KinExA ®；及生物層干涉術(例如使用ForteBio ®Octet ®平台))來確定。如本文所用之「結合親和力」不僅包括形式結合親和力，例如反映多肽及其靶之間的1:1相互作用之彼等結合親和力，且亦包括表觀親和力，對其計算可反映親合結合之K D。
如本文所用之術語「特異性結合」或「選擇性結合」至靶(例如TfR)在提及如本文所述之經改造TfR結合多肽、TfR結合肽或TfR結合融合蛋白時係指其中經改造TfR結合多肽、TfR結合肽或TfR結合融合蛋白以與其結合至結構不同之靶相比更大之親和力、更大之親合力及/或更長之持續時間結合至靶的結合反應。在典型實施例中，當在相同親和力分析條件下分析時，與不相關靶相比，經改造TfR結合多肽、TfR結合肽或TfR結合融合蛋白對特定靶(例如TfR)具有至少5倍、10倍、50倍、100倍、1,000倍、10,000倍或更大之親和力。如本文所用之術語「特異性結合」、「特異性結合至」或「特異性針對」特定靶(例如TfR)可展現為例如分子對其所結合之靶之平衡解離常數K D為例如10 -4M或更小、例如10 -5M、10 -6M、10 -7M、10 -8M、10 -9M、10 -10M、10 -11M或10 -12M。在一些實施例中，經改造TfR結合多肽、TfR結合肽或TfR結合融合蛋白特異性結合至TfR上在物種之間保守(例如在物種之間結構保守)、例如在非人類靈長類動物與人類物種之間保守(例如在非人類靈長類動物與人類物種之間結構保守)之抗原決定基。在一些實施例中，經改造TfR結合多肽、TfR結合肽或TfR結合融合蛋白可排他性地結合至人類TfR。
術語「可變區」或「可變結構域」係指抗體重鏈或輕鏈中衍生自生殖系可變(V)基因、多樣性(D)基因或連結(J)基因(且不衍生自恆定(Cμ及Cδ)基因區段)、並給予抗體與抗原結合之特異性的結構域。通常，抗體可變區包含四個保守「框架」區及三個超變「互補決定區」，二者間雜排列。
術語「抗原結合部分」及「抗原結合片段」在本文中可互換使用且係指保留經由其可變區特異性結合至抗原之能力之抗體之一或多個片段。抗原結合片段之實例包括(但不限於) Fab片段(單價片段，其係由VL、VH、CL及CH1結構域組成)、F(ab’) 2片段(二價片段，其包含在鉸鏈區藉由二硫橋連接之兩個Fab片段)、單鏈Fv (scFv)、二硫化物連接之Fv (dsFv)、互補決定區(CDR)、VL (輕鏈可變區)及VH (重鏈可變區)。
以下實例意欲係非限制性的。 實例1： 包含 α -L- 艾杜糖醛酸酶 (IDUA) 之融合蛋白之構築。 設計及選殖
設計IDUA-Fc融合蛋白，其含有(i)第一融合多肽，其中人類IDUA酶融合至包括Fc區之人類IgG1片段(「IDUA-Fc融合多肽」)，及(ii)經修飾人類IgG1片段，其在Fc區中含有賦予運鐵蛋白受體(TfR)結合之突變(「經修飾Fc多肽」)。亦設計融合蛋白，其含有(i)第一融合多肽，其中人類IDUA酶序列融合至包括Fc區之人類IgG1片段(「IDUA-Fc融合多肽」)，及(ii)第二融合多肽，其中人類IDUA酶序列融合至經修飾人類IgG1片段，其在Fc區中含有賦予TfR結合之突變(「結合TfR之IDUA-Fc融合多肽」)。產生IDUA-Fc融合多肽，其中IDUA序列融合至人類IgG1 Fc區之N末端及C末端。在所有構築體中，將信號肽MGWSCIILFLVATATGAYA (SEQ ID NO:70)插入融合物之上游以促進分泌。所用人類IgG1 Fc區之片段對應於UniProtKB ID P01857中序列之胺基酸D104-K330 (位置221-447，EU編號，其包括鉸鏈之10個胺基酸(位置221-230))。產生單獨編碼(i) IDUA-Fc融合多肽及(ii)經修飾Fc多肽之表現載體且將其共轉染至中國倉鼠卵巢(CHO)細胞中以產生含有IDUA酶(「單酶」)之異二聚體融合蛋白。亦產生單獨編碼(i) IDUA-Fc融合多肽及(ii)結合TfR之IDUA-Fc融合多肽之表現載體且將其共轉染至中國倉鼠卵巢(CHO)細胞中以產生含有兩種IDUA酶(「雙酶」)之異二聚體融合蛋白。在一些構築體中，IgG1片段含有其他突變以促進兩個Fc區之異二聚化。
包含融合至具有孔洞及LALA突變之IgG1 Fc多肽序列之N末端之成熟人類IDUA序列的IDUA-Fc融合多肽具有SEQ ID NO:50或51之序列。IDUA酶藉由GGGGS連接體(SEQ ID NO:72)連結至Fc多肽且Fc多肽之N末端包括IgG1鉸鏈區之一部分(DKTHTCPPCP；SEQ ID NO:6)。
包含融合至具有孔洞及LALAPS突變之IgG1 Fc多肽序列之N末端之成熟人類IDUA序列的IDUA-Fc融合多肽具有SEQ ID NO:58或59之序列。IDUA酶藉由GGGGS連接體(SEQ ID NO:72)連結至Fc多肽且Fc多肽之N末端包括IgG1鉸鏈區之一部分(DKTHTCPPCP；SEQ ID NO:6 )。
包含融合至具有孔洞及LALAPS突變之IgG1 Fc多肽序列之N末端之成熟人類IDUA序列的IDUA-Fc融合多肽具有SEQ ID NO:60或61之序列。IDUA酶藉由GGGGS連接體(SEQ ID NO:72)連結至Fc多肽且Fc多肽之N末端包括IgG1鉸鏈區之一部分(DKTHTCPPCP；SEQ ID NO:6)。
包含融合至具有孔洞及LALAPS突變之IgG1 Fc多肽序列之N末端之成熟截短人類IDUA序列的IDUA-Fc融合多肽具有SEQ ID NO:64或65之序列。IDUA酶藉由GGGGS連接體(SEQ ID NO:72)連結至Fc多肽且Fc多肽之N末端包括IgG1鉸鏈區之一部分(DKTHTCPPCP；SEQ ID NO:6)。
包含融合至具有孔洞及LALAPS突變之IgG1 Fc多肽序列之N末端之成熟人類IDUA序列的IDUA-Fc融合多肽具有SEQ ID NO:91或92之序列。IDUA酶藉由GGGGS連接體(SEQ ID NO:72)連結至Fc多肽且Fc多肽之N末端包括IgG1鉸鏈區之一部分(DKTHTCPPCP；SEQ ID NO:6)。
包含融合至具有旋鈕及LALA突變之IgG1 Fc多肽序列之N末端之成熟人類IDUA序列的IDUA-Fc融合多肽具有SEQ ID NO:104或100之序列。IDUA酶藉由GGGGS連接體(SEQ ID NO:72)連結至Fc多肽且Fc多肽之N末端包括IgG1鉸鏈區之一部分(DKTHTCPPCP；SEQ ID NO:6)。
包含融合至具有旋鈕及LALA突變之TfR結合經修飾IgG1 Fc多肽序列之N末端之成熟人類IDUA序列的IDUA-Fc融合多肽具有SEQ ID NO:101或102之序列。IDUA酶藉由GGGGS連接體(SEQ ID NO:72)連結至Fc多肽且Fc多肽之N末端包括IgG1鉸鏈區之一部分(DKTHTCPPCP；SEQ ID NO:6)。
包含融合至具有旋鈕及LALA突變之TfR結合經修飾IgG1 Fc多肽序列之C末端之成熟人類IDUA序列的Fc-IDUA融合多肽具有SEQ ID NO:103之序列。IDUA酶藉由GGGGS連接體(SEQ ID NO:72)連結至Fc多肽且Fc多肽之N末端包括IgG1鉸鏈區之一部分(DKTHTCPPCP；SEQ ID NO:6)。
包含融合至具有孔洞及LALAPS突變之IgG1 Fc多肽序列之C末端之成熟人類IDUA序列的Fc-IDUA融合多肽具有SEQ ID NO:68之序列。IDUA酶藉由GGGGS連接體(SEQ ID NO:72)連結至Fc多肽且Fc多肽之N末端包括IgG1鉸鏈區之一部分(DKTHTCPPCP；SEQ ID NO:6)。
包含融合至具有孔洞及LALAPS突變之IgG1 Fc多肽序列之C末端之成熟人類IDUA序列的Fc-IDUA融合多肽具有SEQ ID NO:69之序列。IDUA酶藉由GGGGS連接體(SEQ ID NO:72)連結至Fc多肽且Fc多肽之N末端包括IgG1鉸鏈區之一部分(DKTHTCPPCP；SEQ ID NO:6)。
具有旋鈕及LALA突變之TfR結合經修飾Fc多肽具有SEQ ID NO:35或36之序列。經修飾Fc多肽之N末端包括IgG1鉸鏈區之一部分(DKTHTCPPCP；SEQ ID NO:6)。
具有旋鈕及LALAPS突變之TfR結合經修飾Fc多肽具有SEQ ID NO:37或38之序列。經修飾Fc多肽之N末端包括IgG1鉸鏈區之一部分(DKTHTCPPCP；SEQ ID NO:6)。
產生第一「N末端單酶」 IDUA-Fc融合蛋白(「ETV:IDUA融合物1」)，其包含具有SEQ ID NO:35之序列之TfR結合經修飾Fc多肽及具有SEQ ID NO:50之序列之IDUA-Fc融合多肽。亦可在細胞培養物產生期間進一步處理IDUA-Fc融合蛋白，使得TfR結合經修飾Fc多肽具有SEQ ID NO:36之序列及/或IDUA-Fc融合多肽具有SEQ ID NO:51之序列。因此，如本文所用之術語ETV:IDUA融合物1可用於指具有未經處理序列(即SEQ ID NO:35及50)之蛋白質分子；包含一或多條經處理序列(即選自SEQ ID NO:36及51)之蛋白質分子；或指包含經處理及未經處理之蛋白質分子之混合物。
產生第二「N末端單酶」 IDUA-Fc融合蛋白(「ETV:IDUA融合物2」)，其包含具有SEQ ID NO:37之序列之TfR結合經修飾Fc多肽及具有SEQ ID NO:58之序列之IDUA-Fc融合多肽。亦可在細胞培養物產生期間進一步處理IDUA-Fc融合蛋白，使得TfR結合經修飾Fc多肽具有SEQ ID NO:38之序列及/或IDUA-Fc融合多肽具有SEQ ID NO:59之序列。因此，如本文所用之術語ETV:IDUA融合物2可用於指具有未經處理序列(即SEQ ID NO:37及58)之蛋白質分子；包含一或多條經處理序列(即選自SEQ ID NO:38及59)之蛋白質分子；或指包含經處理及未經處理之蛋白質分子之混合物。
產生第三「N末端單酶」 IDUA-Fc融合蛋白(「ETV:IDUA融合物3」)，其包含具有SEQ ID NO:37之序列之TfR結合經修飾Fc多肽及具有SEQ ID NO:60之序列之IDUA-Fc融合多肽。亦可在細胞培養物產生期間進一步處理IDUA-Fc融合蛋白，使得TfR結合經修飾Fc多肽具有SEQ ID NO:38之序列及/或IDUA-Fc融合多肽具有SEQ ID NO:61之序列。因此，如本文所用之術語ETV:IDUA融合物3可用於指具有未經處理序列(即SEQ ID NO:37及60)之蛋白質分子；包含一或多條經處理序列(即選自SEQ ID NO:38及61)之蛋白質分子；或指包含經處理及未經處理之蛋白質分子之混合物。
產生第四「N末端單酶」 IDUA-Fc融合蛋白(「ETV:IDUA融合物4」)，其包含具有SEQ ID NO:37之序列之TfR結合經修飾Fc多肽及具有SEQ ID NO:64之序列之IDUA-Fc融合多肽。亦可在細胞培養物產生期間進一步處理IDUA-Fc融合蛋白，使得TfR結合經修飾Fc多肽具有SEQ ID NO:38之序列及/或IDUA-Fc融合多肽具有SEQ ID NO:65之序列。因此，如本文所用之術語ETV:IDUA融合物4可用於指具有未經處理序列(即SEQ ID NO:37及64)之蛋白質分子；包含一或多條經處理序列(即選自SEQ ID NO:38及65)之蛋白質分子；或指包含經處理及未經處理之蛋白質分子之混合物。
產生第五「N末端單酶」 IDUA-Fc融合蛋白(「ETV:IDUA融合物5」)，其包含具有SEQ ID NO:37之序列之TfR結合經修飾Fc多肽及具有SEQ ID NO:91之序列之IDUA-Fc融合多肽。亦可在細胞培養物產生期間進一步處理IDUA-Fc融合蛋白，使得TfR結合經修飾Fc多肽具有SEQ ID NO:38之序列及/或IDUA-Fc融合多肽具有SEQ ID NO:92之序列。因此，如本文所用之術語ETV:IDUA融合物5可用於指具有未經處理序列(即SEQ ID NO:37及91)之蛋白質分子；包含一或多條經處理序列(即選自SEQ ID NO:38及92)之蛋白質分子；或指包含經處理及未經處理之蛋白質分子之混合物。
產生「C末端單酶」 IDUA-Fc融合蛋白(「ETV:IDUA融合物6」)，其包含具有SEQ ID NO:37之序列之TfR結合經修飾Fc多肽及具有SEQ ID NO:68之序列之IDUA-Fc融合多肽。亦可在細胞培養物產生期間進一步處理IDUA-Fc融合蛋白，使得TfR結合經修飾Fc多肽具有SEQ ID NO:38之序列。因此，如本文所用之術語ETV:IDUA融合物6可用於指包含SEQ ID NO:37及68之蛋白質分子；包含SEQ ID NO:38及68之蛋白質分子；或指具有包含SEQ ID NO:37及68之蛋白質分子及包含SEQ ID NO:38及68之蛋白質分子的混合物。
表1圖解說明其他例示性IDUA-Fc融合蛋白及重組蛋白之序列。 表 1. ETV:IDUA融合蛋白
融合蛋白 經修飾Fc 多肽( 視情況地連接至IDUA) IDUA-Fc 或Fc-IDUA 融合多肽
ETV:IDUA融合物1 SEQ ID NO:35或36 SEQ ID NO:50或51
ETV:IDUA融合物2 SEQ ID NO:37或38 SEQ ID NO:58或59
ETV:IDUA融合物3 SEQ ID NO:37或38 SEQ ID NO:60或61
ETV:IDUA融合物4 SEQ ID NO:37或38 SEQ ID NO:64或65
ETV:IDUA融合物5 SEQ ID NO:37或38 SEQ ID NO:91或92
ETV:IDUA融合物6 SEQ ID NO:37或38 SEQ ID NO:68
ETV:IDUA融合物7 SEQ ID NO:37或38 SEQ ID NO:89或90
ETV:IDUA融合物8 SEQ ID NO:35或36 SEQ ID NO:83或84
ETV:IDUA融合物9 SEQ ID NO:35或36 SEQ ID NO:67
ETV:IDUA融合物10 SEQ ID NO:101或102 SEQ ID NO:50或51
ETV:IDUA融合物11 SEQ ID NO:103 SEQ ID NO:67
包含ETV:IDUA之組合物(例如上文所述之任一融合蛋白)可用於指包含以下之組合物：具有未經處理序列之蛋白質分子；包含一或多條經處理序列之蛋白質分子；或包含經處理及未經處理之蛋白質分子之混合物。
以相似之方式設計及構築缺少賦予TfR結合之突變之IDUA-Fc融合蛋白。
產生第一非TfR結合「N末端單酶」 IDUA-Fc融合蛋白(「IDUA-Fc融合物12」，其包含具有SEQ ID NO:76之序列之Fc多肽及具有SEQ ID NO:83之序列之IDUA-Fc融合多肽。亦可在細胞培養物產生期間進一步處理IDUA-Fc融合蛋白，使得Fc多肽具有SEQ ID NO:77之序列及/或IDUA-Fc融合多肽具有SEQ ID NO:84之序列。因此，如本文所用之術語IDUA-Fc融合蛋白可用於指具有未經處理序列(即SEQ ID NO:76及83)之蛋白質分子；包含一或多條經處理序列(即選自SEQ ID NO:77及84)之蛋白質分子；或指包含經處理及未經處理之蛋白質分子之混合物。
產生第二非TfR結合「N末端單酶」 IDUA-Fc融合蛋白(「IDUA-Fc融合物13」，其包含具有SEQ ID NO:76之序列之Fc多肽及具有SEQ ID NO:50之序列之IDUA-Fc融合多肽。亦可在細胞培養物產生期間進一步處理IDUA-Fc融合蛋白，使得Fc多肽具有SEQ ID NO:77之序列及/或IDUA-Fc融合多肽具有SEQ ID NO:51之序列。因此，如本文所用之術語IDUA-Fc融合蛋白可用於指具有未經處理序列(即SEQ ID NO:76及50)之蛋白質分子；包含一或多條經處理序列(即選自SEQ ID NO:77及51)之蛋白質分子；或指包含經處理及未經處理之蛋白質分子之混合物。
產生非TfR結合「N末端雙酶」 IDUA-Fc融合蛋白(「IDUA-Fc融合物14」，其包含具有SEQ ID NO:104之序列之第一IDUA-Fc多肽及具有SEQ ID NO:50之序列之第二IDUA-Fc融合多肽。亦可在細胞培養物產生期間進一步處理IDUA-Fc融合蛋白，使得第一IDUA-Fc多肽具有SEQ ID NO:100之序列及/或第二IDUA-Fc融合多肽具有SEQ ID NO:51之序列。因此，如本文所用之術語IDUA-Fc融合物14可用於指具有未經處理序列(即SEQ ID NO:104及50)之蛋白質分子；包含一或多條經處理序列(即選自SEQ ID NO:100及51)之蛋白質分子；或指包含經處理及未經處理之蛋白質分子之混合物。表2圖解說明例示性非TfR結合IDUA-Fc融合蛋白及重組蛋白之序列。 表 2. IDUA-Fc融合蛋白及重組蛋白
融合蛋白 Fc 多肽( 視情況地連接至IDUA) IDUA-Fc 或Fc-IDUA 融合多肽 IDUA 多肽
IDUA-Fc融合物12 SEQ ID NO:76或77 SEQ ID NO:83或84 ---
IDUA-Fc融合物13 SEQ ID NO:76或77 SEQ ID NO:50或51 ---
IDUA-Fc融合物14 SEQ ID NO:104或100 SEQ ID NO:50或51 ---
IDUA重組蛋白15 --- --- SEQ ID NO:93
IDUA重組蛋白16 --- --- SEQ ID NO:94
IDUA重組蛋白17 --- --- SEQ ID NO:95
包含ETV:IDUA之組合物(例如上文所述之任一融合蛋白)可用於指包含以下之組合物：具有未經處理序列之蛋白質分子；包含一或多條經處理序列之蛋白質分子；或包含經處理及未經處理之蛋白質分子之混合物。 重組蛋白表現及純化
為表現重組IDUA-Fc融合蛋白，使用Expifectamine™ CHO轉染套組根據製造商之說明書(Thermo Fisher Scientific)用相關DNA構築體轉染ExpiCHO細胞(Thermo Fisher Scientific)。如製造商之方案所述，在37℃、5% CO 2及125 rpm下在軌道振蕩器(Infors HT Multitron)中，使細胞生長於補充有進料之ExpiCHO™表現培養基中。簡言之，用0.8 µg總DNA質體/mL培養物體積以6×10 6個細胞/ml密度轉染對數生長之ExpiCHO細胞。轉染後，使細胞返回至37℃。在轉染後18-22小時，向經轉染培養物補充營養素進料且將細胞培養溫度降低至32℃，保持生產運行之持續時間。在轉染後120小時藉由以4000 rpm離心15 min收穫經轉染細胞培養物上清液。將澄清上清液過濾(0.22 µM膜)且儲存在4℃下。
使用蛋白質A親和層析自細胞培養物上清液純化具(或不具)賦予TfR結合之經改造Fc區之IDUA-Fc融合蛋白。將上清液加載至HiTrap MabSelect Prisma蛋白質A親和管柱(GE Healthcare Life Sciences，使用Akta Pure系統)上。然後用10管柱體積(CV)之PBS洗滌管柱。使用50 mM檸檬酸鈉緩衝液(pH 3.6)溶析所結合之蛋白質。在溶析後立即使用1 M Tris (pH 8) (以1:8稀釋度)中和流份。使用陽離子交換層析(CEX)使蛋白質A匯集物經受進一步精製。用乙酸鈉緩衝液(pH 5.5)將蛋白質A匯集物稀釋10倍以促進在HiTrap® SP高效管柱(Cytiva, SKU 17-1152-01)上結合。使用30CV之線性鹽梯度用20 mM乙酸鈉、0.5M NaCl (pH 5.5)溶析管柱。藉由HPLC-SEC進一步分析流份。將純度＞95%之流份匯集且在1×PBS (pH 7.4)中透析。藉由多種技術(包括還原及非還原Caliper (微毛細管電泳-SDS)及HPLC-SEC)來評價IDUA-Fc融合物半成品(final bulk)之均質性。
如上文所述在ExpiCHO細胞中表現具有C末端六組胺酸標籤之重組IDUA (SEQ ID NO:93-95)(「六組胺酸」揭示為SEQ ID NO: 96)。為純化帶有六組胺酸標籤之IDUA酶(「六組胺酸」揭示為SEQ ID NO: 96)，使經轉染上清液針對15 L之含有100 mM NaCl之20 mM HEPES (pH 7.4)透析過夜。經透析上清液結合至HisTrap管柱(GE Healthcare Life Sciences ，使用Akta Pure系統)。在結合後，用20 CV之PBS洗滌管柱。使用含有500 mM咪唑之PBS溶析所結合之蛋白質。將含有IDUA酶之匯集流份以1:10稀釋於50 mM Tris (pH 7.5)中且使用Q Sepharose高效(GE Healthcare)進一步純化。在結合後，用10 CV之50 mM Tris (pH 7.5)洗滌管柱。使用50 mM Tris (pH 7.5)及0.5 M NaCl之線性梯度溶析所結合之蛋白質且將其收集於1 CV流份中。藉由非還原SDS-PAGE來評價流份純度。 實例2： IDUA-Fc 融合蛋白之表徵
評估如實例1中所述構築及製備之ETV:IDUA融合蛋白之TfR結合、酶活性及細胞效力。 具有經改造 TfR 結合位點之 IDUA-Fc 融合蛋白結合至人類 TfR
為確定具有經改造TfR結合之IDUA-Fc融合蛋白是否影響經修飾Fc結構域與人類TfR相互作用之能力，使用Biacore 8K儀器(Cytiva)藉由表面電漿子共振(SPR)量測ETV:IDUA融合物3、4及6 (實例1)對人類TfR之親和力。將五(5) µg/mL之IDUA-Fc融合蛋白在蛋白質A包被之Biacore™系列S CM5感測器晶片上捕獲1分鐘，且以30 µL/min之流量注射人類頂端結構域TfR之連續3倍稀釋物。用人類TfR濃度遞增之連續五次60秒注射、然後在注射週期結束時進行60秒解離來分析每一樣品。在每次注射後，使用10 mM甘胺酸-HCl (pH 1.5)使晶片再生。藉由自以相似密度A捕獲不相關IgG之流動細胞減去RU來校正結合反應。使用Biacore ™Insight評估軟體使用k 締合及k 解離之同時擬合之1:1 Languir模型進行動力學分析。ETV:IDUA融合物3、4及6對人類TfR之單價結合親和力介於約200 nM至400 nM範圍內。 具有經改造 TfR 結合位點之 IDUA-Fc 融合蛋白在活體外有活性
評價經改造TfR結合IDUA-Fc融合蛋白之活體外活性以證實IDUA在融合至人類IgG片段時維持其酶活性。使用人工受質使用一步螢光酶分析來量測重組IDUA之活體外活性。將70.96 mM 4-甲基繖形基(umbelliferyl)-α-L-艾杜糖醛酸(游離酸)(Cayman Chemical #19543)之等份試樣在分析緩衝液(50 mM乙酸鈉、0.5 M NaCl、0.025% Triton X-100，pH 4.5)中稀釋至2.5 mM之最終濃度。IDUA-Fc融合蛋白係自50 mM之濃度開始連續稀釋。然後將五(5) µL受質與5 µL經連續稀釋之IDUA-Fc融合蛋白在384孔黑色平底微量板(NUNC #262260)中混合。將反應物在22℃下培育60分鐘且用10 µL終止緩衝液(0.5 M碳酸鈉緩衝液，pH 10.3)終止。然後量測反應溶液之螢光(在365 nm下激發且在450 nm下發射)。藉由非線性回歸擬合4-甲基繖形酮標準曲線以計算產物之量且驗證為小於總受質裂解之10%。藉由用產物之量除以反應時間及IDUA之莫耳量來計算比活性(pmol產物/min/pmol IDUA)。
該活體外酶活性分析證實，IDUA-Fc融合蛋白有活性且在ETV:IDUA融合物3、4及6之間係相似的(圖2)。所有ETV:IDUA融合蛋白皆具有介於Aldurazyme (拉羅尼酶)活性之約75%至約90%範圍內之比活性。 具有經改造 TfR 結合位點之 IDUA-Fc 融合蛋白校正活體外受質累積
亦在來自赫爾勒(MPS I)患者及健康對照之纖維母細胞中檢查IDUA-Fc融合蛋白之細胞活性，使用硫酸乙醯肝素及硫酸皮膚素之LCMS量化來評價受質校正。簡言之，將赫爾勒纖維母細胞及健康纖維母細胞以75,000個細胞/孔之密度平鋪於24孔培養板中之補充有10% FBS之DMEM培養基中。在此格式中培養細胞直至其達到鋪滿，大約96小時。然後將ETV:IDUA融合物1自62.5 nM之起始濃度以12點5倍連續稀釋劑量曲線添加至每孔中。在添加蛋白質後七十二(72)小時，藉由低滲休克溶解細胞。將溶解物轉移至96孔分析板，調節緩衝液組合物以含有111 mM乙酸銨及11 mM乙酸鈣，然後進行音波處理以完成溶解。經由BCA分析測定溶解物之蛋白質濃度，且將所有溶解物調節至相等之蛋白質濃度。向溶解物補充2 mM DTT且用含有肝素酶I (1.25 mIU/反應)、肝素酶II (1.25 mIU/反應)、肝素酶III (1.25 mIU/反應)及軟骨素酶B (6.25 mIU/反應)之酶混合物將GAG在30℃下消化3小時。用10 mM EDTA淬滅消化反應，且將20 ng 4UA-2S-GlcNCOEt-6S內部標準物添加至每一反應中，然後在95℃下變性10分鐘。藉由離心過濾自樣品去除不溶性材料，且將澄清樣品與乙腈以1:1在玻璃LC-MS瓶中混合。在配備有ACQUITY UPLC BEH Amide 1.7 mm, 2.1×150 mm管柱之Xevo TQ-S Micro儀器上藉由LC-MS/MS量化衍生自硫酸乙醯肝素及硫酸皮膚素GAG之二糖物質。
MPS I患者纖維母細胞缺少IDUA活性，從而導致兩種糖胺聚糖(GAG)物質硫酸乙醯肝素及硫酸皮膚素累積。ETV:IDUA融合物1在MPS I患者源性細胞中顯示與拉羅尼酶相似之效力，此展示用於減少硫酸乙醯肝素累積之低皮莫耳細胞EC 50(約7-10 pM) (圖3)。 具有經改造 TfR 結合位點之 IDUA-Fc 融合蛋白顯示 TfR KI 小鼠中增加的腦攝取。
評估TfR敲入(在本文中稱為「TfR mu/huKI」或「TfR mu/hu」)小鼠中IDUA-Fc融合蛋白之外周(血清)及腦PK。如國際專利公開案第WO 2018/152285號中所述使用CRISPR/Cas9技術產生TfR mu/huKI小鼠，以在鼠類 Tfrc基因內表現人類 Tfrc頂端結構域；在內源啟動子控制下活體內表現所得嵌合TfR。簡言之，向6-8週齡之雄性TfR mu/huKI小鼠(n = 12/隊列)投用40 mg/kg之ETV:IDUA融合蛋白，且在血清及腦組織中量測IDUA酶及ETV:IDUA完整分子之濃度。在t = 劑量後0.25小時、0.5小時、1小時、4小時、8小時、10小時、24小時及48小時(用於血清PK)以及在t=劑量後1小時、8小時、24小時、48小時(用於腦PK)，使用基於夾心ELISA之分析量測總IDUA酶水準。用於分析中之IDUA-Fc融合蛋白闡述於上文中且根據實例1製備。為量測總IDUA酶水準，將多株綿羊抗人類IDUA抗體(Bio-Techne AF4119)包被至MULTI-ARRAY® 96孔板(Meso Scale Diagnostics L15XA-3)上過夜。用PBS中之Blocker™酪蛋白(ThermoFisher 37528)封閉板且然後與經稀釋血清或腦溶解物一起培育。然後，添加釕結合之多株綿羊抗人類IDUA抗體(Bio-Techne AF4119)用於偵測。將含有表面活性劑之1×讀取緩衝液T (Meso Scale Diagnostics R92TC-1)添加至每孔中，且將板加載至MSD讀取器。標準曲線係基於個別構築體且使用四參數邏輯曲線來擬合。結果圖解說明於圖4A-圖4C及圖5A-圖5C以及表3中。
ETV:IDUA融合物3、4及6在循環中顯示良好的穩定性。觀察到所有分子之高腦Cmax值(約15 nM或更高)，且所有分子之腦攝取與外周暴露一致。 表 3. ETV:IDUA融合蛋白之藥物動力學參數(TfR mu/huKI小鼠)
分子 CL (mL/hr/kg) 血清半衰期(hr) 血清Cmax (nM) 腦Cmax (nM)
ETV:IDUA融合物3 37.0 5.8 4242 22.16
ETV:IDUA融合物4 45.3 6.0 3526 17.87
ETV:IDUA融合物6 30.1 5.3 4308 14.83
實例3： ETV:IDUA 融合物之產物品質屬性 .
評估各種ETV:IDUA融合蛋白之產物品質。對於此研究，評價ETV:IDUA融合物3、4及6 (實例1)。如實例1中所述製備所有結構。藉由多種技術(包括還原及非還原Caliper (微毛細管電泳-SDS)及HPLC-SEC)評價所溶析流份中ETV:IDUA融合蛋白之均質性。如實例2中所述量測對人類TfR之親和力。 結果
如實例2中所述，經量測人類TfR對ETV:IDUA融合物3及6之親和力係相當的(K D介於約200 nM至400 nM範圍內)。
ETV:IDUA融合物3、4及6之表現效價大於約100 mg/L。
在蛋白質A層析純化後，評估ETV:IDUA融合物3、4及6之回收率。所有結構之蛋白質A後匯集物之分析說明至少85%之純度(如藉由HPLC-SEC所量測)及至少約90%之完整ETV結構(維持包含旋鈕及孔洞對之經修飾Fc二聚體)。使所有結構之蛋白質A後匯集物經受陽離子交換層析(CEX)用於進一步精製。所有結構之CEX後匯集物達成＞ 99%之純度水準(如藉由HPLC-SEC所量測)及＞ 95%之完整ETV結構。
ETV:IDUA融合蛋白之產物品質屬性之彙總提供於表4中。 表 4. ETV:IDUA融合蛋白之產物品質屬性
屬性 ETV:IDUA 融合物 3 ETV:IDUA 融合物 4 ETV:IDUA 融合物 6
表現效價(mg/L) 182 160 105
產率% (蛋白質A後) 約45-50 約45-50 70
純度% (蛋白質A後) 93 93 85
純度% (CEX後) 99 99 99
比活性 (pmol產物/min/pmol IDUA) [相對於拉羅尼酶之%] 315 [89%] 293 [83%] 280 [79%]
TfR親和力K D 340 nM 355 nM 200 nM
實例4： 在 MPS I 疾病模型中 ETV:IDUA 融合蛋白與拉羅尼酶之比較研究。
在小鼠MPS I模型中，比較例示性ETV:IDUA融合蛋白(ETV:IDUA融合物3)與標準護理酶替代療法拉羅尼酶。 結果
在ETV:IDUA及拉羅尼酶在單一靜脈內(IV)劑量後降低IDUA KO;TfR mu/huKI小鼠之腦、CSF及肝臟中之總GAG水準的程度方面比較該ETV:IDUA及該拉羅尼酶。ETV:IDUA融合物3係以與拉羅尼酶等莫耳之劑量(0.85 mg/kg)、以比等莫耳劑量大約10倍之劑量(8.8 mg/kg)及以高劑量水準(40 mg/kg)投與小鼠，而拉羅尼酶係以與用於治療之臨床相關劑量(0.58 mg/kg)一致之劑量投與。總GAG測定為主要硫酸乙醯肝素(HS) (D0A0、D0S0)及硫酸皮膚素(DS) (D0a4)源性二糖之和。如圖6A-圖6D及表5中所圖解說明，在單劑量後7天時，ETV:IDUA蛋白能夠降低腦脊液(CSF)及腦組織中之總GAG水準，且此降低優於用拉羅尼酶達成之效應。在ETV:IDUA之所有三個投與劑量(包括與拉羅尼酶劑量等莫耳之劑量)下可見總GAG水準之降低(CSF：降低79%對降低36%；腦：降低38%對降低N/S)。在肝臟中，總GAG降低在拉羅尼酶與ETV:IDUA蛋白之間在所有投與劑量下係相似的。在尿中，ETV:IDUA在與拉羅尼酶等莫耳之劑量(0.85 mg/kg)下在降低總GAG水準方面係相當的。然而，在ETV:IDUA之更高劑量下(例如在8.8 mg/kg及40 mg/kg下)，尿中總GAG水準之降低優於拉羅尼酶。 表 5. 在單一IV劑量投與後，與媒劑治療之IDUA KO;TfR mu/huKI小鼠相比，總GAG水準之降低%。
治療 劑量[mg/kg] CSF總GAG降低 腦總GAG降低 肝臟總GAG降低 尿總GAG降低
拉羅尼酶 0.58 36% N/S 96% 63%
ETV:IDUA融合物3 0.85 79% 38% 95% 64%
ETV:IDUA融合物3 8.8 92% 79% 96% 86%
ETV:IDUA融合物3 40 95% 86% 95% 94%
圖6A-圖6D之數據表示近似平均量+/-平均值之標準誤差。結果證實，ETV:IDUA穩健地減少CSF、腦及尿中之受質累積且此降低表示相對於標準護理ERT治療之改良。 實驗方法
如實例1中所述表現及純化ETV:IDUA融合物3。拉羅尼酶係自商業來源獲得(NDC 58468-0070-1，批號0Y0432)。
此研究中所用之MPS I小鼠模型係其中剔除編碼IDUA之基因、同時亦具有敲入鼠類TfR中之人類TfR頂端結構域之小鼠模型(在本文中稱為「IDUA KO; TfR mu/huKI」小鼠或「IDUA KO; TfR mu/hu」小鼠)。IDUA KO小鼠係自Jackson Laboratories獲得(JAX儲備#004068)。簡言之，使TfR mu/huKI雄性小鼠(參見實例2；在本文中亦稱為「TfR mu/hu」)與IDUA突變雜合之雌性小鼠交配，以在TfR mu/huKI純合背景中產生純合IDUA KO小鼠。此研究中所用之小鼠為混合性別且圈養在12小時光照-黑暗週期下，且隨意獲取食物(#25502，照射過的；LabDiet)及水。
在該研究中，經由靜脈內注射向IDUA KO;TfR mu/huKI小鼠投與單劑量之ETV:IDUA融合物3或拉羅尼酶，且評價藥效學反應。具體而言，測定外周投與蛋白質對IDUA KO;TfR mu/huKI小鼠之腦、CSF、肝臟及尿總GAG水準之效應。向大約2月齡之IDUA KO;TfR mu/huKI小鼠靜脈內(i.v.)注射鹽水、ETV:IDUA融合蛋白(0.85 mg/kg體重、8.8 mg/kg體重或40 mg/kg體重)或拉羅尼酶(0.58 mg/kg體重) (n=4-5/組)。使用i.v.注射鹽水之大約2月齡之同胞仔TfR mu/huKI小鼠(非MPS I小鼠)作為對照。在單劑量後六(6)天時以及在單劑量後七(7)天時收集尿樣品且匯集用於分析。在單劑量後七(7)天時，將所有動物殺死，且收集腦、CSF及肝臟組織。將所有收集之組織及流體快速冷凍於乾冰上且儲存在-80℃下直至分析。
如下文所述使用基於LC-MS/MS之方法活體內量測硫酸乙醯肝素及硫酸皮膚素物質。使用Qiagen TissueLyzer II在30 Hz下在水(500-750 μL)中將組織等份試樣(50 mg)均質化兩次，每次3分鐘。將均質物轉移至96孔深板且使用96頭音波處理器(Q Sonica)音波處理20×1秒脈衝。將音波處理之均質物在4℃下以17,000× g旋轉20分鐘以沈澱細胞碎片。將所得溶解物轉移至清潔的96孔深板，且實施BCA以量化總蛋白質。在LC-MS/MS分析之前，將樣品中之硫酸乙醯肝素(HS)及硫酸皮膚素(DS)消化成其相應二糖。將蛋白質溶解物(來自腦及肝臟組織)及CSF及尿與肝素酶I、II及III以及內部標準物D4UA-2S-GlcNCOEt-6S (HD009, Iduron Ltd, Manchester, UK)在由乙酸銨、乙酸鈣及DTT組成之消化緩衝液中混合，在30℃下在PCR板中振蕩(700 rpm) 3小時。對於尿，亦將穩定標記之肌酸酐(內部標準物，N-METHYL-D3, 98%)添加至混合物中。培育3小時後，將0.0025 M之EDTA添加至每一樣品中以終止反應且將混合物在95℃下煮沸10分鐘以使酶失活。將腦、肝臟、CSF及尿之消化樣品離心，且將上清液轉移至乙酸纖維素過濾板(Millipore, MSUN03010)並再離心。對於腦、CSF及尿樣品，將所得溶析液與等份乙腈在96孔玻璃瓶板中混合且如下文所述藉由質譜進行分析。對於肝臟，將所得溶析液與2×體積之乙腈混合。
藉由偶聯至電噴霧質譜(Sciex Triple Quad 7500, Sciex, Framingham, MA, USA；Sciex Triple Quad 6500+, Sciex, Framingham, MA, USA)之液相層析(Exion LC, Sciex, Framingham, MA, USA；Agilent 1290 Infinity II HPLC, Agilent Technologies Inc., Santa Clara, CA, USA)實施流體及組織中HS及DS源性二糖之量化。對於兩種液相層析系統上之每一分析，使用0.6 mL/分鐘之流量及55℃之管柱溫度將樣品注射於ACQUITY UPLC BEH Amide 1.7 mm, 2.1×150 mm管柱(Waters Corporation, Milford, MA, USA)上。移動相A係由含有10 mM甲酸銨及0.1%甲酸之水組成，且移動相B係由含有0.1%甲酸之乙腈組成。使梯度如下程式化：0.0-6.0分鐘為80%B，6.0-6.01分鐘為80%B至20%B，6.01-8.0分鐘為20%B至20%B，8.0-8.1分鐘為20%B至80%B及8.1-10分鐘保持在80%B下。對於Sciex Triple Quad 7500，以負電離模式應用以下設定實施電噴霧電離：氣簾設定為40；離子噴霧電壓設定為-4500；溫度設定為450℃；離子源氣體1設定為50；且離子源氣體2設定為60。使用Sciex OS 2.1.6.59781以多反應監測模式(MRM)及以下設定來實施數據獲取：停留時間設定為100 msec；碰撞能量設定為-30；入口電位設定為-10；碰撞細胞出口電位設定為-10。對於Sciex Triple Quad 6500+，以負電離模式應用以下設定實施電噴霧電離：氣簾設定為20；離子噴霧電壓設定為-4500；溫度設定為450℃；離子源氣體1設定為50；且離子源氣體2設定為60。使用Analyst 1.7.1.以MRM及以下設定來實施數據獲取：停留時間設定為100 msec；碰撞能量設定為-30；去聚簇電位設定為-80；入口電位設定為-10；碰撞細胞出口電位設定為-10。個別二糖物質係基於其滯留時間及MRM轉換使用市售參考標準物(Iduron Ltd)來鑑別。監測Sciex Triple Quad 7500及Sciex Triple Quad 6500+之以下二糖轉換：D0A0 (HS), m/z 378 ＞ 87；D0S0 (HS), m/z 416 ＞ 138，及D0a4，m/z 458 ＞ 300；D4UA-2S-GlcNCOEt-6S (內部標準物) m/z 472 ＞ 97。將二糖量正規化至如藉由BCA分析量測之總蛋白質水準，或正規化至每個樣品所用體液之體積。 非正式序列表
SEQ ID NO: 序列 描述
1 APELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 野生型人類Fc序列 位置231-447 EU索引編號
2 APELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 野生型人類Fc序列 位置231-446 EU索引編號
3 APELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK CH2結構域序列 位置231-340 EU索引編號
4 GQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK CH3結構域序列 位置341-447 EU索引編號
5 EPKSCDKTHTCPPCP 人類IgG1鉸鏈胺基酸序列
6 DKTHTCPPCP 人類IgG1鉸鏈序列之一部分
7 MMDQARSAFSNLFGGEPLSYTRFSLARQVDGDNSHVEMKLAVDEEENADNNTKANVTKPKRCSGSICYGTIAVIVFFLIGFMIGYLGYCKGVEPKTECERLAGTESPVREEPGEDFPAARRLYWDDLKRKLSEKLDSTDFTGTIKLLNENSYVPREAGSQKDENLALYVENQFREFKLSKVWRDQHFVKIQVKDSAQNSVIIVDKNGRLVYLVENPGGYVAYSKAATVTGKLVHANFGTKKDFEDLYTPVNGSIVIVRAGKITFAEKVANAESLNAIGVLIYMDQTKFPIVNAELSFFGHAHLGTGDPYTPGFPSFNHTQFPPSRSSGLPNIPVQTISRAAAEKLFGNMEGDCPSDWKTDSTCRMVTSESKNVKLTVSNVLKEIKILNIFGVIKGFVEPDHYVVVGAQRDAWGPGAAKSGVGTALLLKLAQMFSDMVLKDGFQPSRSIIFASWSAGDFGSVGATEWLEGYLSSLHLKAFTYINLDKAVLGTSNFKVSASPLLYTLIEKTMQNVKHPVTGQFLYQDSNWASKVEKLTLDNAAFPFLAYSGIPAVSFCFCEDTDYPYLGTTMDTYKELIERIPELNKVARAAAEVAGQFVIKLTHDVELNLDYERYNSQLLSFVRDLNQYRADIKEMGLSLQWLYSARGDFFRATSRLTTDFGNAEKTDRFVMKKLNDRVMRVEYHFLSPYVSPKESPFRHVFWGSGSHTLPALLENLKLRKQNNGAFNETLFRNQLALATWTIQGAANALSGDVWDIDNEF 人類運鐵蛋白受體蛋白1 (TFR1)
8 NSVIIVDKNGRLVYLVENPGGYVAYSKAATVTGKLVHANFGTKKDFEDLYTPVNGSIVIVRAGKITFAEKVANAESLNAIGVLIYMDQTKFPIVNAELSFFGHAHLGTGDPYTPGFPSFNHTQFPPSRSSGLPNIPVQTISRAAAEKLFGNMEGDCPSDWKTDSTCRMVTSESKNVKLTVS 人類TfR頂端結構域
9 APELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 具有孔洞突變之Fc序列
10 APELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 具有孔洞突變之Fc序列   
11 APEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 具有孔洞及LALA突變之Fc序列
12 APEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 具有孔洞及LALA突變之Fc序列
13 APEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 具有孔洞及LALAPG突變之Fc序列   
14 APEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 具有孔洞及LALAPG突變之Fc序列   
15 APEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALSAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 具有孔洞及LALAPS突變之Fc序列
16 APEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALSAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 具有孔洞及LALAPS突變之Fc序列   
17 APELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 具有旋鈕突變之Fc序列   
18 APELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 具有旋鈕突變之Fc序列   
19 DKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 具有孔洞及LALA突變以及人類IgG1鉸鏈序列之一部分的Fc序列
20 DKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 具有孔洞及LALA突變以及人類IgG1鉸鏈序列之一部分的Fc序列
21 DKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALSAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 具有孔洞及LALAPS突變以及人類IgG1鉸鏈序列之一部分的Fc序列
22 DKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALSAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 具有孔洞及LALAPS突變以及人類IgG1鉸鏈序列之一部分的Fc序列
23 APELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESYGTEWANYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVTKEEWQQGFVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 純系CH3C.35.23.2
24 APELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESYGTEWANYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVTKEEWQQGFVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 純系CH3C.35.23.2
25 APELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESYGTEWANYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVTKEEWQQGFVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 具有旋鈕突變之純系CH3C.35.23.2   
26 APELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESYGTEWANYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVTKEEWQQGFVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 具有旋鈕突變之純系CH3C.35.23.2   
27 APEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESYGTEWANYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVTKEEWQQGFVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 具有旋鈕及LALA突變之純系CH3C.35.23.2
28 APEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESYGTEWANYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVTKEEWQQGFVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 具有旋鈕及LALA突變之純系CH3C.35.23.2
29 APEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESYGTEWANYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVTKEEWQQGFVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 具有旋鈕及LALAPG突變之純系CH3C.35.23.2   
30 APEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESYGTEWANYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVTKEEWQQGFVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 具有旋鈕及LALAPG突變之純系CH3C.35.23.2   
31 APEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALSAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESYGTEWANYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVTKEEWQQGFVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 具有旋鈕及LALAPS突變之純系CH3C.35.23.2
32 APEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALSAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESYGTEWANYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVTKEEWQQGFVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 具有旋鈕及LALAPS突變之純系CH3C.35.23.2   
33 APELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESYGTEWANYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVTKEEWQQGFVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 具有孔洞突變之純系CH3C.35.23.2   
34 APELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESYGTEWANYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVTKEEWQQGFVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 具有孔洞突變之純系CH3C.35.23.2   
35    DKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESYGTEWANYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVTKEEWQQGFVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 具有旋鈕及LALA突變以及人類IgG1鉸鏈序列之一部分的純系CH3C.35.23.2
36 DKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESYGTEWANYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVTKEEWQQGFVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 具有旋鈕及LALA突變以及人類IgG1鉸鏈序列之一部分的純系CH3C.35.23.2
37    DKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALSAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESYGTEWANYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVTKEEWQQGFVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 具有旋鈕及LALAPS突變以及人類IgG1鉸鏈序列之一部分的純系CH3C.35.23.2
38 DKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALSAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESYGTEWANYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVTKEEWQQGFVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 具有旋鈕及LALAPS突變以及人類IgG1鉸鏈序列之一部分的純系CH3C.35.23.2   
39 MRPLRPRAALLALLASLLAAPPVAPAEAPHLVX 1VDAARALWPLRRFWRSTGFCPPLPHSQADQYVLSWDQQLNLAYVGAVPHRGIKQVRTHWLLELVTTRGSTGRGLSYNFTHLDGYLDLLRENQLLPGFELMGSASGHFTDFEDKQQVFEWKDLVSSLARRYIGRYGLAHVSKWNFETWNEPDHHDFDNVSMTMQGFLNYYDACSEGLRAASPALRLGGPGDSFHTPPRSPLSWGLLRHCHDGTNFFTGEAGVRLDYISLHRKGARSSISILEQEKVVAQQIRQLFPKFADTPIYNDEADPLVGWSLPQPWRADVTYAAMVVKVIAQHQNLLLANTTSAFPYALLSNDNAFLSYHPHPFAQRTLTARFQVNNTRPPHVQLLRKPVLTAMGLLALLDEEQLWAEVSQAGTVLDSNHTVGVLASAHRPQGPADAWRAAVLIYASDDTRAHPNRSVAVTLRLRGVPPGPGLVYVTRYLDNGLCSPDGEWRRLGRPVFPTAEQFRRMRAAEDPVAAAPRPLPAGGRLTLRPALRLPSLLLVHVCARPEKPPGQVTRLRALPLTQGQLVLVWSDEHVGSKCLWTYEIQFSQDGKAYTPVSRKPSTFNLFVFSPDTGAVSGSYRVRX 2LDYWARPGPFSDPVPYLEVPVPRGPPSPGNP 全長人類α-L-艾杜糖醛酸酶多肽序列，其中X 1係H或Q；且X 2係A或T。
40 EAPHLVX 1VDAARALWPLRRFWRSTGFCPPLPHSQADQYVLSWDQQLNLAYVGAVPHRGIKQVRTHWLLELVTTRGSTGRGLSYNFTHLDGYLDLLRENQLLPGFELMGSASGHFTDFEDKQQVFEWKDLVSSLARRYIGRYGLAHVSKWNFETWNEPDHHDFDNVSMTMQGFLNYYDACSEGLRAASPALRLGGPGDSFHTPPRSPLSWGLLRHCHDGTNFFTGEAGVRLDYISLHRKGARSSISILEQEKVVAQQIRQLFPKFADTPIYNDEADPLVGWSLPQPWRADVTYAAMVVKVIAQHQNLLLANTTSAFPYALLSNDNAFLSYHPHPFAQRTLTARFQVNNTRPPHVQLLRKPVLTAMGLLALLDEEQLWAEVSQAGTVLDSNHTVGVLASAHRPQGPADAWRAAVLIYASDDTRAHPNRSVAVTLRLRGVPPGPGLVYVTRYLDNGLCSPDGEWRRLGRPVFPTAEQFRRMRAAEDPVAAAPRPLPAGGRLTLRPALRLPSLLLVHVCARPEKPPGQVTRLRALPLTQGQLVLVWSDEHVGSKCLWTYEIQFSQDGKAYTPVSRKPSTFNLFVFSPDTGAVSGSYRVRX 2LDYWARPGPFSDPVPYLEVPVPRGPPSPGNP 成熟人類α-L-艾杜糖醛酸酶多肽，其中X 1係H或Q；且X 2係A或T。
41 EAPHLV Q VDAARALWPLRRFWRSTGFCPPLPHSQADQYVLSWDQQLNLAYVGAVPHRGIKQVRTHWLLELVTTRGSTGRGLSYNFTHLDGYLDLLRENQLLPGFELMGSASGHFTDFEDKQQVFEWKDLVSSLARRYIGRYGLAHVSKWNFETWNEPDHHDFDNVSMTMQGFLNYYDACSEGLRAASPALRLGGPGDSFHTPPRSPLSWGLLRHCHDGTNFFTGEAGVRLDYISLHRKGARSSISILEQEKVVAQQIRQLFPKFADTPIYNDEADPLVGWSLPQPWRADVTYAAMVVKVIAQHQNLLLANTTSAFPYALLSNDNAFLSYHPHPFAQRTLTARFQVNNTRPPHVQLLRKPVLTAMGLLALLDEEQLWAEVSQAGTVLDSNHTVGVLASAHRPQGPADAWRAAVLIYASDDTRAHPNRSVAVTLRLRGVPPGPGLVYVTRYLDNGLCSPDGEWRRLGRPVFPTAEQFRRMRAAEDPVAAAPRPLPAGGRLTLRPALRLPSLLLVHVCARPEKPPGQVTRLRALPLTQGQLVLVWSDEHVGSKCLWTYEIQFSQDGKAYTPVSRKPSTFNLFVFSPDTGAVSGSYRVR T LDYWARPGPFSDPVPYLEVPVPRGPPSPGNP 根據EU編號，具有Q33及T622 (加下劃線)之成熟人類α-L-艾杜糖醛酸酶多肽序列
42 EAPHLV Q VDAARALWPLRRFWRSTGFCPPLPHSQADQYVLSWDQQLNLAYVGAVPHRGIKQVRTHWLLELVTTRGSTGRGLSYNFTHLDGYLDLLRENQLLPGFELMGSASGHFTDFEDKQQVFEWKDLVSSLARRYIGRYGLAHVSKWNFETWNEPDHHDFDNVSMTMQGFLNYYDACSEGLRAASPALRLGGPGDSFHTPPRSPLSWGLLRHCHDGTNFFTGEAGVRLDYISLHRKGARSSISILEQEKVVAQQIRQLFPKFADTPIYNDEADPLVGWSLPQPWRADVTYAAMVVKVIAQHQNLLLANTTSAFPYALLSNDNAFLSYHPHPFAQRTLTARFQVNNTRPPHVQLLRKPVLTAMGLLALLDEEQLWAEVSQAGTVLDSNHTVGVLASAHRPQGPADAWRAAVLIYASDDTRAHPNRSVAVTLRLRGVPPGPGLVYVTRYLDNGLCSPDGEWRRLGRPVFPTAEQFRRMRAAEDPVAAAPRPLPAGGRLTLRPALRLPSLLLVHVCARPEKPPGQVTRLRALPLTQGQLVLVWSDEHVGSKCLWTYEIQFSQDGKAYTPVSRKPSTFNLFVFSPDTGAVSGSYRVR A LDYWARPGPFSDPVPYLEVPVPRGPPSPGNP 根據EU編號，具有Q33及A622 (加下劃線)之成熟人類α-L-艾杜糖醛酸酶多肽序列
43 EAPHLV H VDAARALWPLRRFWRSTGFCPPLPHSQADQYVLSWDQQLNLAYVGAVPHRGIKQVRTHWLLELVTTRGSTGRGLSYNFTHLDGYLDLLRENQLLPGFELMGSASGHFTDFEDKQQVFEWKDLVSSLARRYIGRYGLAHVSKWNFETWNEPDHHDFDNVSMTMQGFLNYYDACSEGLRAASPALRLGGPGDSFHTPPRSPLSWGLLRHCHDGTNFFTGEAGVRLDYISLHRKGARSSISILEQEKVVAQQIRQLFPKFADTPIYNDEADPLVGWSLPQPWRADVTYAAMVVKVIAQHQNLLLANTTSAFPYALLSNDNAFLSYHPHPFAQRTLTARFQVNNTRPPHVQLLRKPVLTAMGLLALLDEEQLWAEVSQAGTVLDSNHTVGVLASAHRPQGPADAWRAAVLIYASDDTRAHPNRSVAVTLRLRGVPPGPGLVYVTRYLDNGLCSPDGEWRRLGRPVFPTAEQFRRMRAAEDPVAAAPRPLPAGGRLTLRPALRLPSLLLVHVCARPEKPPGQVTRLRALPLTQGQLVLVWSDEHVGSKCLWTYEIQFSQDGKAYTPVSRKPSTFNLFVFSPDTGAVSGSYRVR T LDYWARPGPFSDPVPYLEVPVPRGPPSPGNP 根據EU編號，具有H33及T622 (加下劃線)之成熟人類α-L-艾杜糖醛酸酶多肽序列
44 EAPHLV H VDAARALWPLRRFWRSTGFCPPLPHSQADQYVLSWDQQLNLAYVGAVPHRGIKQVRTHWLLELVTTRGSTGRGLSYNFTHLDGYLDLLRENQLLPGFELMGSASGHFTDFEDKQQVFEWKDLVSSLARRYIGRYGLAHVSKWNFETWNEPDHHDFDNVSMTMQGFLNYYDACSEGLRAASPALRLGGPGDSFHTPPRSPLSWGLLRHCHDGTNFFTGEAGVRLDYISLHRKGARSSISILEQEKVVAQQIRQLFPKFADTPIYNDEADPLVGWSLPQPWRADVTYAAMVVKVIAQHQNLLLANTTSAFPYALLSNDNAFLSYHPHPFAQRTLTARFQVNNTRPPHVQLLRKPVLTAMGLLALLDEEQLWAEVSQAGTVLDSNHTVGVLASAHRPQGPADAWRAAVLIYASDDTRAHPNRSVAVTLRLRGVPPGPGLVYVTRYLDNGLCSPDGEWRRLGRPVFPTAEQFRRMRAAEDPVAAAPRPLPAGGRLTLRPALRLPSLLLVHVCARPEKPPGQVTRLRALPLTQGQLVLVWSDEHVGSKCLWTYEIQFSQDGKAYTPVSRKPSTFNLFVFSPDTGAVSGSYRVR A LDYWARPGPFSDPVPYLEVPVPRGPPSPGNP 根據EU編號，具有H33及A622 (加下劃線)之成熟人類α-L-艾杜糖醛酸酶多肽序列
45 EAPHLVX 1VDAARALWPLRRFWRSTGFCPPLPHSQADQYVLSWDQQLNLAYVGAVPHRGIKQVRTHWLLELVTTRGSTGRGLSYNFTHLDGYLDLLRENQLLPGFELMGSASGHFTDFEDKQQVFEWKDLVSSLARRYIGRYGLAHVSKWNFETWNEPDHHDFDNVSMTMQGFLNYYDACSEGLRAASPALRLGGPGDSFHTPPRSPLSWGLLRHCHDGTNFFTGEAGVRLDYISLHRKGARSSISILEQEKVVAQQIRQLFPKFADTPIYNDEADPLVGWSLPQPWRADVTYAAMVVKVIAQHQNLLLANTTSAFPYALLSNDNAFLSYHPHPFAQRTLTARFQVNNTRPPHVQLLRKPVLTAMGLLALLDEEQLWAEVSQAGTVLDSNHTVGVLASAHRPQGPADAWRAAVLIYASDDTRAHPNRSVAVTLRLRGVPPGPGLVYVTRYLDNGLCSPDGEWRRLGRPVFPTAEQFRRMRAAEDPVAAAPRPLPAGGRLTLRPALRLPSLLLVHVCARPEKPPGQVTRLRALPLTQGQLVLVWSDEHVGSKCLWTYEIQFSQDGKAYTPVSRKPSTFNLFVFSPDTGAVSGSYRVRX 2LDYWARPGPFSDPVPYLEVPV 截短人類α-L-艾杜糖醛酸酶多肽序列之實施例，其中X 1係H或Q；且X 2係A或T。
46 EAPHLV Q VDAARALWPLRRFWRSTGFCPPLPHSQADQYVLSWDQQLNLAYVGAVPHRGIKQVRTHWLLELVTTRGSTGRGLSYNFTHLDGYLDLLRENQLLPGFELMGSASGHFTDFEDKQQVFEWKDLVSSLARRYIGRYGLAHVSKWNFETWNEPDHHDFDNVSMTMQGFLNYYDACSEGLRAASPALRLGGPGDSFHTPPRSPLSWGLLRHCHDGTNFFTGEAGVRLDYISLHRKGARSSISILEQEKVVAQQIRQLFPKFADTPIYNDEADPLVGWSLPQPWRADVTYAAMVVKVIAQHQNLLLANTTSAFPYALLSNDNAFLSYHPHPFAQRTLTARFQVNNTRPPHVQLLRKPVLTAMGLLALLDEEQLWAEVSQAGTVLDSNHTVGVLASAHRPQGPADAWRAAVLIYASDDTRAHPNRSVAVTLRLRGVPPGPGLVYVTRYLDNGLCSPDGEWRRLGRPVFPTAEQFRRMRAAEDPVAAAPRPLPAGGRLTLRPALRLPSLLLVHVCARPEKPPGQVTRLRALPLTQGQLVLVWSDEHVGSKCLWTYEIQFSQDGKAYTPVSRKPSTFNLFVFSPDTGAVSGSYRVR T LDYWARPGPFSDPVPYLEVPV 根據EU編號，具有Q33及T622 (加下劃線)之截短人類α-L-艾杜糖醛酸酶多肽序列之實施例
47 EAPHLV Q VDAARALWPLRRFWRSTGFCPPLPHSQADQYVLSWDQQLNLAYVGAVPHRGIKQVRTHWLLELVTTRGSTGRGLSYNFTHLDGYLDLLRENQLLPGFELMGSASGHFTDFEDKQQVFEWKDLVSSLARRYIGRYGLAHVSKWNFETWNEPDHHDFDNVSMTMQGFLNYYDACSEGLRAASPALRLGGPGDSFHTPPRSPLSWGLLRHCHDGTNFFTGEAGVRLDYISLHRKGARSSISILEQEKVVAQQIRQLFPKFADTPIYNDEADPLVGWSLPQPWRADVTYAAMVVKVIAQHQNLLLANTTSAFPYALLSNDNAFLSYHPHPFAQRTLTARFQVNNTRPPHVQLLRKPVLTAMGLLALLDEEQLWAEVSQAGTVLDSNHTVGVLASAHRPQGPADAWRAAVLIYASDDTRAHPNRSVAVTLRLRGVPPGPGLVYVTRYLDNGLCSPDGEWRRLGRPVFPTAEQFRRMRAAEDPVAAAPRPLPAGGRLTLRPALRLPSLLLVHVCARPEKPPGQVTRLRALPLTQGQLVLVWSDEHVGSKCLWTYEIQFSQDGKAYTPVSRKPSTFNLFVFSPDTGAVSGSYRVR A LDYWARPGPFSDPVPYLEVPV 根據EU編號，具有Q33及A622 (加下劃線)之截短人類α-L-艾杜糖醛酸酶多肽序列之實施例
48 EAPHLV H VDAARALWPLRRFWRSTGFCPPLPHSQADQYVLSWDQQLNLAYVGAVPHRGIKQVRTHWLLELVTTRGSTGRGLSYNFTHLDGYLDLLRENQLLPGFELMGSASGHFTDFEDKQQVFEWKDLVSSLARRYIGRYGLAHVSKWNFETWNEPDHHDFDNVSMTMQGFLNYYDACSEGLRAASPALRLGGPGDSFHTPPRSPLSWGLLRHCHDGTNFFTGEAGVRLDYISLHRKGARSSISILEQEKVVAQQIRQLFPKFADTPIYNDEADPLVGWSLPQPWRADVTYAAMVVKVIAQHQNLLLANTTSAFPYALLSNDNAFLSYHPHPFAQRTLTARFQVNNTRPPHVQLLRKPVLTAMGLLALLDEEQLWAEVSQAGTVLDSNHTVGVLASAHRPQGPADAWRAAVLIYASDDTRAHPNRSVAVTLRLRGVPPGPGLVYVTRYLDNGLCSPDGEWRRLGRPVFPTAEQFRRMRAAEDPVAAAPRPLPAGGRLTLRPALRLPSLLLVHVCARPEKPPGQVTRLRALPLTQGQLVLVWSDEHVGSKCLWTYEIQFSQDGKAYTPVSRKPSTFNLFVFSPDTGAVSGSYRVR T LDYWARPGPFSDPVPYLEVPV 根據EU編號，具有H33及T622 (加下劃線)之截短人類α-L-艾杜糖醛酸酶多肽序列之實施例
49 EAPHLV H VDAARALWPLRRFWRSTGFCPPLPHSQADQYVLSWDQQLNLAYVGAVPHRGIKQVRTHWLLELVTTRGSTGRGLSYNFTHLDGYLDLLRENQLLPGFELMGSASGHFTDFEDKQQVFEWKDLVSSLARRYIGRYGLAHVSKWNFETWNEPDHHDFDNVSMTMQGFLNYYDACSEGLRAASPALRLGGPGDSFHTPPRSPLSWGLLRHCHDGTNFFTGEAGVRLDYISLHRKGARSSISILEQEKVVAQQIRQLFPKFADTPIYNDEADPLVGWSLPQPWRADVTYAAMVVKVIAQHQNLLLANTTSAFPYALLSNDNAFLSYHPHPFAQRTLTARFQVNNTRPPHVQLLRKPVLTAMGLLALLDEEQLWAEVSQAGTVLDSNHTVGVLASAHRPQGPADAWRAAVLIYASDDTRAHPNRSVAVTLRLRGVPPGPGLVYVTRYLDNGLCSPDGEWRRLGRPVFPTAEQFRRMRAAEDPVAAAPRPLPAGGRLTLRPALRLPSLLLVHVCARPEKPPGQVTRLRALPLTQGQLVLVWSDEHVGSKCLWTYEIQFSQDGKAYTPVSRKPSTFNLFVFSPDTGAVSGSYRVR A LDYWARPGPFSDPVPYLEVPV 根據EU編號，具有H33及A622 (加下劃線)之截短人類α-L-艾杜糖醛酸酶多肽序列之實施例
50    EAPHLVQVDAARALWPLRRFWRSTGFCPPLPHSQADQYVLSWDQQLNLAYVGAVPHRGIKQVRTHWLLELVTTRGSTGRGLSYNFTHLDGYLDLLRENQLLPGFELMGSASGHFTDFEDKQQVFEWKDLVSSLARRYIGRYGLAHVSKWNFETWNEPDHHDFDNVSMTMQGFLNYYDACSEGLRAASPALRLGGPGDSFHTPPRSPLSWGLLRHCHDGTNFFTGEAGVRLDYISLHRKGARSSISILEQEKVVAQQIRQLFPKFADTPIYNDEADPLVGWSLPQPWRADVTYAAMVVKVIAQHQNLLLANTTSAFPYALLSNDNAFLSYHPHPFAQRTLTARFQVNNTRPPHVQLLRKPVLTAMGLLALLDEEQLWAEVSQAGTVLDSNHTVGVLASAHRPQGPADAWRAAVLIYASDDTRAHPNRSVAVTLRLRGVPPGPGLVYVTRYLDNGLCSPDGEWRRLGRPVFPTAEQFRRMRAAEDPVAAAPRPLPAGGRLTLRPALRLPSLLLVHVCARPEKPPGQVTRLRALPLTQGQLVLVWSDEHVGSKCLWTYEIQFSQDGKAYTPVSRKPSTFNLFVFSPDTGAVSGSYRVRTLDYWARPGPFSDPVPYLEVPVPRGPPSPGNPGGGGSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK IDUA-Fc融合多肽，其中具有Q33及T622 (加下劃線)之成熟人類IDUA序列利用G 4S連接體(SEQ ID NO:72)融合至具有孔洞及LALA突變之Fc序列之N末端
51    EAPHLVQVDAARALWPLRRFWRSTGFCPPLPHSQADQYVLSWDQQLNLAYVGAVPHRGIKQVRTHWLLELVTTRGSTGRGLSYNFTHLDGYLDLLRENQLLPGFELMGSASGHFTDFEDKQQVFEWKDLVSSLARRYIGRYGLAHVSKWNFETWNEPDHHDFDNVSMTMQGFLNYYDACSEGLRAASPALRLGGPGDSFHTPPRSPLSWGLLRHCHDGTNFFTGEAGVRLDYISLHRKGARSSISILEQEKVVAQQIRQLFPKFADTPIYNDEADPLVGWSLPQPWRADVTYAAMVVKVIAQHQNLLLANTTSAFPYALLSNDNAFLSYHPHPFAQRTLTARFQVNNTRPPHVQLLRKPVLTAMGLLALLDEEQLWAEVSQAGTVLDSNHTVGVLASAHRPQGPADAWRAAVLIYASDDTRAHPNRSVAVTLRLRGVPPGPGLVYVTRYLDNGLCSPDGEWRRLGRPVFPTAEQFRRMRAAEDPVAAAPRPLPAGGRLTLRPALRLPSLLLVHVCARPEKPPGQVTRLRALPLTQGQLVLVWSDEHVGSKCLWTYEIQFSQDGKAYTPVSRKPSTFNLFVFSPDTGAVSGSYRVRTLDYWARPGPFSDPVPYLEVPVPRGPPSPGNPGGGGSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG IDUA-Fc融合多肽，其中具有Q33及T622  (加下劃線)之成熟人類IDUA序列利用G 4S連接體(SEQ ID NO:72)融合至具有孔洞及LALA突變之Fc序列之N末端
52 EAPHLVQVDAARALWPLRRFWRSTGFCPPLPHSQADQYVLSWDQQLNLAYVGAVPHRGIKQVRTHWLLELVTTRGSTGRGLSYNFTHLDGYLDLLRENQLLPGFELMGSASGHFTDFEDKQQVFEWKDLVSSLARRYIGRYGLAHVSKWNFETWNEPDHHDFDNVSMTMQGFLNYYDACSEGLRAASPALRLGGPGDSFHTPPRSPLSWGLLRHCHDGTNFFTGEAGVRLDYISLHRKGARSSISILEQEKVVAQQIRQLFPKFADTPIYNDEADPLVGWSLPQPWRADVTYAAMVVKVIAQHQNLLLANTTSAFPYALLSNDNAFLSYHPHPFAQRTLTARFQVNNTRPPHVQLLRKPVLTAMGLLALLDEEQLWAEVSQAGTVLDSNHTVGVLASAHRPQGPADAWRAAVLIYASDDTRAHPNRSVAVTLRLRGVPPGPGLVYVTRYLDNGLCSPDGEWRRLGRPVFPTAEQFRRMRAAEDPVAAAPRPLPAGGRLTLRPALRLPSLLLVHVCARPEKPPGQVTRLRALPLTQGQLVLVWSDEHVGSKCLWTYEIQFSQDGKAYTPVSRKPSTFNLFVFSPDTGAVSGSYRVRALDYWARPGPFSDPVPYLEVPVPRGPPSPGNPGGGGSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK IDUA-Fc融合多肽，其中具有Q33及A622 (加下劃線)之成熟人類IDUA序列利用G 4S連接體(SEQ ID NO:72)融合至具有孔洞及LALA突變之Fc序列之N末端
53 EAPHLVQVDAARALWPLRRFWRSTGFCPPLPHSQADQYVLSWDQQLNLAYVGAVPHRGIKQVRTHWLLELVTTRGSTGRGLSYNFTHLDGYLDLLRENQLLPGFELMGSASGHFTDFEDKQQVFEWKDLVSSLARRYIGRYGLAHVSKWNFETWNEPDHHDFDNVSMTMQGFLNYYDACSEGLRAASPALRLGGPGDSFHTPPRSPLSWGLLRHCHDGTNFFTGEAGVRLDYISLHRKGARSSISILEQEKVVAQQIRQLFPKFADTPIYNDEADPLVGWSLPQPWRADVTYAAMVVKVIAQHQNLLLANTTSAFPYALLSNDNAFLSYHPHPFAQRTLTARFQVNNTRPPHVQLLRKPVLTAMGLLALLDEEQLWAEVSQAGTVLDSNHTVGVLASAHRPQGPADAWRAAVLIYASDDTRAHPNRSVAVTLRLRGVPPGPGLVYVTRYLDNGLCSPDGEWRRLGRPVFPTAEQFRRMRAAEDPVAAAPRPLPAGGRLTLRPALRLPSLLLVHVCARPEKPPGQVTRLRALPLTQGQLVLVWSDEHVGSKCLWTYEIQFSQDGKAYTPVSRKPSTFNLFVFSPDTGAVSGSYRVRALDYWARPGPFSDPVPYLEVPVPRGPPSPGNPGGGGSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG IDUA-Fc融合多肽，其中具有Q33及A622 (加下劃線)之成熟人類IDUA序列利用G 4S連接體(SEQ ID NO:72)融合至具有孔洞及LALA突變之Fc序列之N末端
54 EAPHLVQVDAARALWPLRRFWRSTGFCPPLPHSQADQYVLSWDQQLNLAYVGAVPHRGIKQVRTHWLLELVTTRGSTGRGLSYNFTHLDGYLDLLRENQLLPGFELMGSASGHFTDFEDKQQVFEWKDLVSSLARRYIGRYGLAHVSKWNFETWNEPDHHDFDNVSMTMQGFLNYYDACSEGLRAASPALRLGGPGDSFHTPPRSPLSWGLLRHCHDGTNFFTGEAGVRLDYISLHRKGARSSISILEQEKVVAQQIRQLFPKFADTPIYNDEADPLVGWSLPQPWRADVTYAAMVVKVIAQHQNLLLANTTSAFPYALLSNDNAFLSYHPHPFAQRTLTARFQVNNTRPPHVQLLRKPVLTAMGLLALLDEEQLWAEVSQAGTVLDSNHTVGVLASAHRPQGPADAWRAAVLIYASDDTRAHPNRSVAVTLRLRGVPPGPGLVYVTRYLDNGLCSPDGEWRRLGRPVFPTAEQFRRMRAAEDPVAAAPRPLPAGGRLTLRPALRLPSLLLVHVCARPEKPPGQVTRLRALPLTQGQLVLVWSDEHVGSKCLWTYEIQFSQDGKAYTPVSRKPSTFNLFVFSPDTGAVSGSYRVRTLDYWARPGPFSDPVPYLEVPVGGGGSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK IDUA-Fc融合多肽，其中具有Q33及T622 (加下劃線)之截短人類IDUA序列利用G 4S連接體(SEQ ID NO:72)融合至具有孔洞及LALA突變之Fc序列之N末端
55 EAPHLVQVDAARALWPLRRFWRSTGFCPPLPHSQADQYVLSWDQQLNLAYVGAVPHRGIKQVRTHWLLELVTTRGSTGRGLSYNFTHLDGYLDLLRENQLLPGFELMGSASGHFTDFEDKQQVFEWKDLVSSLARRYIGRYGLAHVSKWNFETWNEPDHHDFDNVSMTMQGFLNYYDACSEGLRAASPALRLGGPGDSFHTPPRSPLSWGLLRHCHDGTNFFTGEAGVRLDYISLHRKGARSSISILEQEKVVAQQIRQLFPKFADTPIYNDEADPLVGWSLPQPWRADVTYAAMVVKVIAQHQNLLLANTTSAFPYALLSNDNAFLSYHPHPFAQRTLTARFQVNNTRPPHVQLLRKPVLTAMGLLALLDEEQLWAEVSQAGTVLDSNHTVGVLASAHRPQGPADAWRAAVLIYASDDTRAHPNRSVAVTLRLRGVPPGPGLVYVTRYLDNGLCSPDGEWRRLGRPVFPTAEQFRRMRAAEDPVAAAPRPLPAGGRLTLRPALRLPSLLLVHVCARPEKPPGQVTRLRALPLTQGQLVLVWSDEHVGSKCLWTYEIQFSQDGKAYTPVSRKPSTFNLFVFSPDTGAVSGSYRVRTLDYWARPGPFSDPVPYLEVPVGGGGSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG IDUA-Fc融合多肽，其中具有Q33及T622 (加下劃線)之截短人類IDUA序列利用G 4S連接體(SEQ ID NO:72)融合至具有孔洞及LALA突變之Fc序列之N末端
56 EAPHLVQVDAARALWPLRRFWRSTGFCPPLPHSQADQYVLSWDQQLNLAYVGAVPHRGIKQVRTHWLLELVTTRGSTGRGLSYNFTHLDGYLDLLRENQLLPGFELMGSASGHFTDFEDKQQVFEWKDLVSSLARRYIGRYGLAHVSKWNFETWNEPDHHDFDNVSMTMQGFLNYYDACSEGLRAASPALRLGGPGDSFHTPPRSPLSWGLLRHCHDGTNFFTGEAGVRLDYISLHRKGARSSISILEQEKVVAQQIRQLFPKFADTPIYNDEADPLVGWSLPQPWRADVTYAAMVVKVIAQHQNLLLANTTSAFPYALLSNDNAFLSYHPHPFAQRTLTARFQVNNTRPPHVQLLRKPVLTAMGLLALLDEEQLWAEVSQAGTVLDSNHTVGVLASAHRPQGPADAWRAAVLIYASDDTRAHPNRSVAVTLRLRGVPPGPGLVYVTRYLDNGLCSPDGEWRRLGRPVFPTAEQFRRMRAAEDPVAAAPRPLPAGGRLTLRPALRLPSLLLVHVCARPEKPPGQVTRLRALPLTQGQLVLVWSDEHVGSKCLWTYEIQFSQDGKAYTPVSRKPSTFNLFVFSPDTGAVSGSYRVRALDYWARPGPFSDPVPYLEVPVGGGGSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK IDUA-Fc融合多肽，其中具有Q33及A622 (加下劃線)之截短人類IDUA序列利用G 4S連接體(SEQ ID NO:72)融合至具有孔洞及LALA突變之Fc序列之N末端
57 EAPHLVQVDAARALWPLRRFWRSTGFCPPLPHSQADQYVLSWDQQLNLAYVGAVPHRGIKQVRTHWLLELVTTRGSTGRGLSYNFTHLDGYLDLLRENQLLPGFELMGSASGHFTDFEDKQQVFEWKDLVSSLARRYIGRYGLAHVSKWNFETWNEPDHHDFDNVSMTMQGFLNYYDACSEGLRAASPALRLGGPGDSFHTPPRSPLSWGLLRHCHDGTNFFTGEAGVRLDYISLHRKGARSSISILEQEKVVAQQIRQLFPKFADTPIYNDEADPLVGWSLPQPWRADVTYAAMVVKVIAQHQNLLLANTTSAFPYALLSNDNAFLSYHPHPFAQRTLTARFQVNNTRPPHVQLLRKPVLTAMGLLALLDEEQLWAEVSQAGTVLDSNHTVGVLASAHRPQGPADAWRAAVLIYASDDTRAHPNRSVAVTLRLRGVPPGPGLVYVTRYLDNGLCSPDGEWRRLGRPVFPTAEQFRRMRAAEDPVAAAPRPLPAGGRLTLRPALRLPSLLLVHVCARPEKPPGQVTRLRALPLTQGQLVLVWSDEHVGSKCLWTYEIQFSQDGKAYTPVSRKPSTFNLFVFSPDTGAVSGSYRVRALDYWARPGPFSDPVPYLEVPVGGGGSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG IDUA-Fc融合多肽，其中具有Q33及A622 (加下劃線)之截短人類IDUA序列利用G 4S連接體(SEQ ID NO:72)融合至具有孔洞及LALA突變之Fc序列之N末端
58    EAPHLVQVDAARALWPLRRFWRSTGFCPPLPHSQADQYVLSWDQQLNLAYVGAVPHRGIKQVRTHWLLELVTTRGSTGRGLSYNFTHLDGYLDLLRENQLLPGFELMGSASGHFTDFEDKQQVFEWKDLVSSLARRYIGRYGLAHVSKWNFETWNEPDHHDFDNVSMTMQGFLNYYDACSEGLRAASPALRLGGPGDSFHTPPRSPLSWGLLRHCHDGTNFFTGEAGVRLDYISLHRKGARSSISILEQEKVVAQQIRQLFPKFADTPIYNDEADPLVGWSLPQPWRADVTYAAMVVKVIAQHQNLLLANTTSAFPYALLSNDNAFLSYHPHPFAQRTLTARFQVNNTRPPHVQLLRKPVLTAMGLLALLDEEQLWAEVSQAGTVLDSNHTVGVLASAHRPQGPADAWRAAVLIYASDDTRAHPNRSVAVTLRLRGVPPGPGLVYVTRYLDNGLCSPDGEWRRLGRPVFPTAEQFRRMRAAEDPVAAAPRPLPAGGRLTLRPALRLPSLLLVHVCARPEKPPGQVTRLRALPLTQGQLVLVWSDEHVGSKCLWTYEIQFSQDGKAYTPVSRKPSTFNLFVFSPDTGAVSGSYRVRTLDYWARPGPFSDPVPYLEVPVPRGPPSPGNPGGGGSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALSAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK IDUA-Fc融合多肽，其中具有Q33及T622 (加下劃線)之成熟人類IDUA序列利用G 4S連接體(SEQ ID NO:72)融合至具有孔洞及LALAPS突變之Fc序列之N末端
59    EAPHLVQVDAARALWPLRRFWRSTGFCPPLPHSQADQYVLSWDQQLNLAYVGAVPHRGIKQVRTHWLLELVTTRGSTGRGLSYNFTHLDGYLDLLRENQLLPGFELMGSASGHFTDFEDKQQVFEWKDLVSSLARRYIGRYGLAHVSKWNFETWNEPDHHDFDNVSMTMQGFLNYYDACSEGLRAASPALRLGGPGDSFHTPPRSPLSWGLLRHCHDGTNFFTGEAGVRLDYISLHRKGARSSISILEQEKVVAQQIRQLFPKFADTPIYNDEADPLVGWSLPQPWRADVTYAAMVVKVIAQHQNLLLANTTSAFPYALLSNDNAFLSYHPHPFAQRTLTARFQVNNTRPPHVQLLRKPVLTAMGLLALLDEEQLWAEVSQAGTVLDSNHTVGVLASAHRPQGPADAWRAAVLIYASDDTRAHPNRSVAVTLRLRGVPPGPGLVYVTRYLDNGLCSPDGEWRRLGRPVFPTAEQFRRMRAAEDPVAAAPRPLPAGGRLTLRPALRLPSLLLVHVCARPEKPPGQVTRLRALPLTQGQLVLVWSDEHVGSKCLWTYEIQFSQDGKAYTPVSRKPSTFNLFVFSPDTGAVSGSYRVRTLDYWARPGPFSDPVPYLEVPVPRGPPSPGNPGGGGSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALSAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG IDUA-Fc融合多肽，其中具有Q33及T622 (加下劃線)之成熟人類IDUA序列利用G 4S連接體(SEQ ID NO:72)融合至具有孔洞及LALAPS突變之Fc序列之N末端
60    EAPHLVQVDAARALWPLRRFWRSTGFCPPLPHSQADQYVLSWDQQLNLAYVGAVPHRGIKQVRTHWLLELVTTRGSTGRGLSYNFTHLDGYLDLLRENQLLPGFELMGSASGHFTDFEDKQQVFEWKDLVSSLARRYIGRYGLAHVSKWNFETWNEPDHHDFDNVSMTMQGFLNYYDACSEGLRAASPALRLGGPGDSFHTPPRSPLSWGLLRHCHDGTNFFTGEAGVRLDYISLHRKGARSSISILEQEKVVAQQIRQLFPKFADTPIYNDEADPLVGWSLPQPWRADVTYAAMVVKVIAQHQNLLLANTTSAFPYALLSNDNAFLSYHPHPFAQRTLTARFQVNNTRPPHVQLLRKPVLTAMGLLALLDEEQLWAEVSQAGTVLDSNHTVGVLASAHRPQGPADAWRAAVLIYASDDTRAHPNRSVAVTLRLRGVPPGPGLVYVTRYLDNGLCSPDGEWRRLGRPVFPTAEQFRRMRAAEDPVAAAPRPLPAGGRLTLRPALRLPSLLLVHVCARPEKPPGQVTRLRALPLTQGQLVLVWSDEHVGSKCLWTYEIQFSQDGKAYTPVSRKPSTFNLFVFSPDTGAVSGSYRVRALDYWARPGPFSDPVPYLEVPVPRGPPSPGNPGGGGSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALSAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK IDUA-Fc融合多肽，其中具有Q33及A622 (加下劃線)之成熟人類IDUA序列利用G 4S連接體(SEQ ID NO:72)融合至具有孔洞及LALAPS突變之Fc序列之N末端
61    EAPHLVQVDAARALWPLRRFWRSTGFCPPLPHSQADQYVLSWDQQLNLAYVGAVPHRGIKQVRTHWLLELVTTRGSTGRGLSYNFTHLDGYLDLLRENQLLPGFELMGSASGHFTDFEDKQQVFEWKDLVSSLARRYIGRYGLAHVSKWNFETWNEPDHHDFDNVSMTMQGFLNYYDACSEGLRAASPALRLGGPGDSFHTPPRSPLSWGLLRHCHDGTNFFTGEAGVRLDYISLHRKGARSSISILEQEKVVAQQIRQLFPKFADTPIYNDEADPLVGWSLPQPWRADVTYAAMVVKVIAQHQNLLLANTTSAFPYALLSNDNAFLSYHPHPFAQRTLTARFQVNNTRPPHVQLLRKPVLTAMGLLALLDEEQLWAEVSQAGTVLDSNHTVGVLASAHRPQGPADAWRAAVLIYASDDTRAHPNRSVAVTLRLRGVPPGPGLVYVTRYLDNGLCSPDGEWRRLGRPVFPTAEQFRRMRAAEDPVAAAPRPLPAGGRLTLRPALRLPSLLLVHVCARPEKPPGQVTRLRALPLTQGQLVLVWSDEHVGSKCLWTYEIQFSQDGKAYTPVSRKPSTFNLFVFSPDTGAVSGSYRVRALDYWARPGPFSDPVPYLEVPVPRGPPSPGNPGGGGSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALSAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG IDUA-Fc融合多肽，其中具有Q33及A622 (加下劃線)之成熟人類IDUA序列利用G 4S連接體(SEQ ID NO:72)融合至具有孔洞及LALAPS突變之Fc序列之N末端
62 EAPHLVQVDAARALWPLRRFWRSTGFCPPLPHSQADQYVLSWDQQLNLAYVGAVPHRGIKQVRTHWLLELVTTRGSTGRGLSYNFTHLDGYLDLLRENQLLPGFELMGSASGHFTDFEDKQQVFEWKDLVSSLARRYIGRYGLAHVSKWNFETWNEPDHHDFDNVSMTMQGFLNYYDACSEGLRAASPALRLGGPGDSFHTPPRSPLSWGLLRHCHDGTNFFTGEAGVRLDYISLHRKGARSSISILEQEKVVAQQIRQLFPKFADTPIYNDEADPLVGWSLPQPWRADVTYAAMVVKVIAQHQNLLLANTTSAFPYALLSNDNAFLSYHPHPFAQRTLTARFQVNNTRPPHVQLLRKPVLTAMGLLALLDEEQLWAEVSQAGTVLDSNHTVGVLASAHRPQGPADAWRAAVLIYASDDTRAHPNRSVAVTLRLRGVPPGPGLVYVTRYLDNGLCSPDGEWRRLGRPVFPTAEQFRRMRAAEDPVAAAPRPLPAGGRLTLRPALRLPSLLLVHVCARPEKPPGQVTRLRALPLTQGQLVLVWSDEHVGSKCLWTYEIQFSQDGKAYTPVSRKPSTFNLFVFSPDTGAVSGSYRVRTLDYWARPGPFSDPVPYLEVPVGGGGSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALSAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK IDUA-Fc融合多肽，其中具有Q33及T622 (加下劃線)之截短人類IDUA序列利用G 4S連接體(SEQ ID NO:72)融合至具有孔洞及LALAPS突變之Fc序列之N末端
63 EAPHLVQVDAARALWPLRRFWRSTGFCPPLPHSQADQYVLSWDQQLNLAYVGAVPHRGIKQVRTHWLLELVTTRGSTGRGLSYNFTHLDGYLDLLRENQLLPGFELMGSASGHFTDFEDKQQVFEWKDLVSSLARRYIGRYGLAHVSKWNFETWNEPDHHDFDNVSMTMQGFLNYYDACSEGLRAASPALRLGGPGDSFHTPPRSPLSWGLLRHCHDGTNFFTGEAGVRLDYISLHRKGARSSISILEQEKVVAQQIRQLFPKFADTPIYNDEADPLVGWSLPQPWRADVTYAAMVVKVIAQHQNLLLANTTSAFPYALLSNDNAFLSYHPHPFAQRTLTARFQVNNTRPPHVQLLRKPVLTAMGLLALLDEEQLWAEVSQAGTVLDSNHTVGVLASAHRPQGPADAWRAAVLIYASDDTRAHPNRSVAVTLRLRGVPPGPGLVYVTRYLDNGLCSPDGEWRRLGRPVFPTAEQFRRMRAAEDPVAAAPRPLPAGGRLTLRPALRLPSLLLVHVCARPEKPPGQVTRLRALPLTQGQLVLVWSDEHVGSKCLWTYEIQFSQDGKAYTPVSRKPSTFNLFVFSPDTGAVSGSYRVRTLDYWARPGPFSDPVPYLEVPVGGGGSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALSAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG IDUA-Fc融合多肽，其中具有Q33及T622 (加下劃線)之截短人類IDUA序列利用G 4S連接體(SEQ ID NO:72)融合至具有孔洞及LALAPS突變之Fc序列之N末端
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66 DKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGGGGS EAPHLVQVDAARALWPLRRFWRSTGFCPPLPHSQADQYVLSWDQQLNLAYVGAVPHRGIKQVRTHWLLELVTTRGSTGRGLSYNFTHLDGYLDLLRENQLLPGFELMGSASGHFTDFEDKQQVFEWKDLVSSLARRYIGRYGLAHVSKWNFETWNEPDHHDFDNVSMTMQGFLNYYDACSEGLRAASPALRLGGPGDSFHTPPRSPLSWGLLRHCHDGTNFFTGEAGVRLDYISLHRKGARSSISILEQEKVVAQQIRQLFPKFADTPIYNDEADPLVGWSLPQPWRADVTYAAMVVKVIAQHQNLLLANTTSAFPYALLSNDNAFLSYHPHPFAQRTLTARFQVNNTRPPHVQLLRKPVLTAMGLLALLDEEQLWAEVSQAGTVLDSNHTVGVLASAHRPQGPADAWRAAVLIYASDDTRAHPNRSVAVTLRLRGVPPGPGLVYVTRYLDNGLCSPDGEWRRLGRPVFPTAEQFRRMRAAEDPVAAAPRPLPAGGRLTLRPALRLPSLLLVHVCARPEKPPGQVTRLRALPLTQGQLVLVWSDEHVGSKCLWTYEIQFSQDGKAYTPVSRKPSTFNLFVFSPDTGAVSGSYRVRALDYWARPGPFSDPVPYLEVPVPRGPPSPGNP Fc-IDUA融合多肽，其中具有Q33及A622 (加下劃線)之成熟人類IDUA序列利用G 4S連接體(SEQ ID NO:72)融合至具有孔洞及LALA突變之Fc序列之C末端   
67    DKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGGGGS EAPHLVQVDAARALWPLRRFWRSTGFCPPLPHSQADQYVLSWDQQLNLAYVGAVPHRGIKQVRTHWLLELVTTRGSTGRGLSYNFTHLDGYLDLLRENQLLPGFELMGSASGHFTDFEDKQQVFEWKDLVSSLARRYIGRYGLAHVSKWNFETWNEPDHHDFDNVSMTMQGFLNYYDACSEGLRAASPALRLGGPGDSFHTPPRSPLSWGLLRHCHDGTNFFTGEAGVRLDYISLHRKGARSSISILEQEKVVAQQIRQLFPKFADTPIYNDEADPLVGWSLPQPWRADVTYAAMVVKVIAQHQNLLLANTTSAFPYALLSNDNAFLSYHPHPFAQRTLTARFQVNNTRPPHVQLLRKPVLTAMGLLALLDEEQLWAEVSQAGTVLDSNHTVGVLASAHRPQGPADAWRAAVLIYASDDTRAHPNRSVAVTLRLRGVPPGPGLVYVTRYLDNGLCSPDGEWRRLGRPVFPTAEQFRRMRAAEDPVAAAPRPLPAGGRLTLRPALRLPSLLLVHVCARPEKPPGQVTRLRALPLTQGQLVLVWSDEHVGSKCLWTYEIQFSQDGKAYTPVSRKPSTFNLFVFSPDTGAVSGSYRVRTLDYWARPGPFSDPVPYLEVPVPRGPPSPGNP Fc-IDUA融合多肽，其中具有Q33及T622 (加下劃線)之成熟人類IDUA序列利用G 4S連接體(SEQ ID NO:72)融合至具有孔洞及LALA突變之Fc序列之C末端   
68    DKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALSAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGGGGS EAPHLVQVDAARALWPLRRFWRSTGFCPPLPHSQADQYVLSWDQQLNLAYVGAVPHRGIKQVRTHWLLELVTTRGSTGRGLSYNFTHLDGYLDLLRENQLLPGFELMGSASGHFTDFEDKQQVFEWKDLVSSLARRYIGRYGLAHVSKWNFETWNEPDHHDFDNVSMTMQGFLNYYDACSEGLRAASPALRLGGPGDSFHTPPRSPLSWGLLRHCHDGTNFFTGEAGVRLDYISLHRKGARSSISILEQEKVVAQQIRQLFPKFADTPIYNDEADPLVGWSLPQPWRADVTYAAMVVKVIAQHQNLLLANTTSAFPYALLSNDNAFLSYHPHPFAQRTLTARFQVNNTRPPHVQLLRKPVLTAMGLLALLDEEQLWAEVSQAGTVLDSNHTVGVLASAHRPQGPADAWRAAVLIYASDDTRAHPNRSVAVTLRLRGVPPGPGLVYVTRYLDNGLCSPDGEWRRLGRPVFPTAEQFRRMRAAEDPVAAAPRPLPAGGRLTLRPALRLPSLLLVHVCARPEKPPGQVTRLRALPLTQGQLVLVWSDEHVGSKCLWTYEIQFSQDGKAYTPVSRKPSTFNLFVFSPDTGAVSGSYRVRALDYWARPGPFSDPVPYLEVPVPRGPPSPGNP Fc-IDUA融合多肽，其中具有Q33及A622 (加下劃線)之成熟人類IDUA序列利用G 4S連接體(SEQ ID NO:72)融合至具有孔洞及LALAPS突變之Fc序列之C末端   
69 DKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALSAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGGGGS EAPHLVQVDAARALWPLRRFWRSTGFCPPLPHSQADQYVLSWDQQLNLAYVGAVPHRGIKQVRTHWLLELVTTRGSTGRGLSYNFTHLDGYLDLLRENQLLPGFELMGSASGHFTDFEDKQQVFEWKDLVSSLARRYIGRYGLAHVSKWNFETWNEPDHHDFDNVSMTMQGFLNYYDACSEGLRAASPALRLGGPGDSFHTPPRSPLSWGLLRHCHDGTNFFTGEAGVRLDYISLHRKGARSSISILEQEKVVAQQIRQLFPKFADTPIYNDEADPLVGWSLPQPWRADVTYAAMVVKVIAQHQNLLLANTTSAFPYALLSNDNAFLSYHPHPFAQRTLTARFQVNNTRPPHVQLLRKPVLTAMGLLALLDEEQLWAEVSQAGTVLDSNHTVGVLASAHRPQGPADAWRAAVLIYASDDTRAHPNRSVAVTLRLRGVPPGPGLVYVTRYLDNGLCSPDGEWRRLGRPVFPTAEQFRRMRAAEDPVAAAPRPLPAGGRLTLRPALRLPSLLLVHVCARPEKPPGQVTRLRALPLTQGQLVLVWSDEHVGSKCLWTYEIQFSQDGKAYTPVSRKPSTFNLFVFSPDTGAVSGSYRVRTLDYWARPGPFSDPVPYLEVPVPRGPPSPGNP Fc-IDUA融合多肽，其中具有Q33及T622 (加下劃線)之成熟人類IDUA序列利用G 4S連接體(SEQ ID NO:72)融合至具有孔洞及LALAPS突變之Fc序列之C末端   
70 MGWSCIILFLVATATGAYA 分泌信號肽
71 GS GS連接體
72 GGGGS 富含甘胺酸之連接體
73 GGGGSGGGGS 富含甘胺酸之連接體
74    APEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 具有旋鈕及LALA突變之Fc序列   
75 APEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 具有旋鈕及LALA突變之Fc序列   
76    DKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK    具有旋鈕及LALA突變以及人類IgG1鉸鏈序列之一部分的Fc序列   
77 DKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG    具有旋鈕及LALA突變以及人類IgG1鉸鏈序列之一部分的Fc序列   
78 EAPHLVX 1VDAARALWPLRRFWRSTGFCPPLPHSQADQYVLSWDQQLNLAYVGAVPHRGIKQVRTHWLLELVTTRGSTGRGLSYNFTHLDGYLDLLRENQLLPGFELMGSASGHFTDFEDKQQVFEWKDLVSSLARRYIGRYGLAHVSKWNFETWNEPDHHDFDNVSMTMQGFLNYYDACSEGLRAASPALRLGGPGDSFHTPPRSPLSWGLLRHCHDGTNFFTGEAGVRLDYISLHRKGARSSISILEQEKVVAQQIRQLFPKFADTPIYNDEADPLVGWSLPQPWRADVTYAAMVVKVIAQHQNLLLANTTSAFPYALLSNDNAFLSYHPHPFAQRTLTARFQVNNTRPPHVQLLRKPVLTAMGLLALLDEEQLWAEVSQAGTVLDSNHTVGVLASAHRPQGPADAWRAAVLIYASDDTRAHPNRSVAVTLRLRGVPPGPGLVYVTRYLDNGLCSPDGEWRRLGRPVFPTAEQFRRMRAAEDPVAAAPRPLPAGGRLTLRPALRLPSLLLVHVCARPEKPPGQVTRLRALPLTQGQLVLVWSDEHVGSKCLWTYEIQFSQDGKAYTPVSRKPSTFNLFVFSPDTGAVSGSYRVRX 2LDYWARPGPFSDPVPYLEVPVPRG 截短人類α-L-艾杜糖醛酸酶多肽序列之實施例，其中X 1係H或Q；且X 2係A或T。
79 EAPHLV Q VDAARALWPLRRFWRSTGFCPPLPHSQADQYVLSWDQQLNLAYVGAVPHRGIKQVRTHWLLELVTTRGSTGRGLSYNFTHLDGYLDLLRENQLLPGFELMGSASGHFTDFEDKQQVFEWKDLVSSLARRYIGRYGLAHVSKWNFETWNEPDHHDFDNVSMTMQGFLNYYDACSEGLRAASPALRLGGPGDSFHTPPRSPLSWGLLRHCHDGTNFFTGEAGVRLDYISLHRKGARSSISILEQEKVVAQQIRQLFPKFADTPIYNDEADPLVGWSLPQPWRADVTYAAMVVKVIAQHQNLLLANTTSAFPYALLSNDNAFLSYHPHPFAQRTLTARFQVNNTRPPHVQLLRKPVLTAMGLLALLDEEQLWAEVSQAGTVLDSNHTVGVLASAHRPQGPADAWRAAVLIYASDDTRAHPNRSVAVTLRLRGVPPGPGLVYVTRYLDNGLCSPDGEWRRLGRPVFPTAEQFRRMRAAEDPVAAAPRPLPAGGRLTLRPALRLPSLLLVHVCARPEKPPGQVTRLRALPLTQGQLVLVWSDEHVGSKCLWTYEIQFSQDGKAYTPVSRKPSTFNLFVFSPDTGAVSGSYRVR T LDYWARPGPFSDPVPYLEVPVPRG 根據EU編號，具有Q33及T622 (加下劃線)之截短人類α-L-艾杜糖醛酸酶多肽序列之實施例
80 EAPHLV Q VDAARALWPLRRFWRSTGFCPPLPHSQADQYVLSWDQQLNLAYVGAVPHRGIKQVRTHWLLELVTTRGSTGRGLSYNFTHLDGYLDLLRENQLLPGFELMGSASGHFTDFEDKQQVFEWKDLVSSLARRYIGRYGLAHVSKWNFETWNEPDHHDFDNVSMTMQGFLNYYDACSEGLRAASPALRLGGPGDSFHTPPRSPLSWGLLRHCHDGTNFFTGEAGVRLDYISLHRKGARSSISILEQEKVVAQQIRQLFPKFADTPIYNDEADPLVGWSLPQPWRADVTYAAMVVKVIAQHQNLLLANTTSAFPYALLSNDNAFLSYHPHPFAQRTLTARFQVNNTRPPHVQLLRKPVLTAMGLLALLDEEQLWAEVSQAGTVLDSNHTVGVLASAHRPQGPADAWRAAVLIYASDDTRAHPNRSVAVTLRLRGVPPGPGLVYVTRYLDNGLCSPDGEWRRLGRPVFPTAEQFRRMRAAEDPVAAAPRPLPAGGRLTLRPALRLPSLLLVHVCARPEKPPGQVTRLRALPLTQGQLVLVWSDEHVGSKCLWTYEIQFSQDGKAYTPVSRKPSTFNLFVFSPDTGAVSGSYRVR A LDYWARPGPFSDPVPYLEVPVPRG 根據EU編號，具有Q33及A622 (加下劃線)之截短人類α-L-艾杜糖醛酸酶多肽序列之實施例
81 EAPHLV H VDAARALWPLRRFWRSTGFCPPLPHSQADQYVLSWDQQLNLAYVGAVPHRGIKQVRTHWLLELVTTRGSTGRGLSYNFTHLDGYLDLLRENQLLPGFELMGSASGHFTDFEDKQQVFEWKDLVSSLARRYIGRYGLAHVSKWNFETWNEPDHHDFDNVSMTMQGFLNYYDACSEGLRAASPALRLGGPGDSFHTPPRSPLSWGLLRHCHDGTNFFTGEAGVRLDYISLHRKGARSSISILEQEKVVAQQIRQLFPKFADTPIYNDEADPLVGWSLPQPWRADVTYAAMVVKVIAQHQNLLLANTTSAFPYALLSNDNAFLSYHPHPFAQRTLTARFQVNNTRPPHVQLLRKPVLTAMGLLALLDEEQLWAEVSQAGTVLDSNHTVGVLASAHRPQGPADAWRAAVLIYASDDTRAHPNRSVAVTLRLRGVPPGPGLVYVTRYLDNGLCSPDGEWRRLGRPVFPTAEQFRRMRAAEDPVAAAPRPLPAGGRLTLRPALRLPSLLLVHVCARPEKPPGQVTRLRALPLTQGQLVLVWSDEHVGSKCLWTYEIQFSQDGKAYTPVSRKPSTFNLFVFSPDTGAVSGSYRVR T LDYWARPGPFSDPVPYLEVPVPRG 根據EU編號，具有H33及T622 (加下劃線)之截短人類α-L-艾杜糖醛酸酶多肽序列之實施例
82 EAPHLV H VDAARALWPLRRFWRSTGFCPPLPHSQADQYVLSWDQQLNLAYVGAVPHRGIKQVRTHWLLELVTTRGSTGRGLSYNFTHLDGYLDLLRENQLLPGFELMGSASGHFTDFEDKQQVFEWKDLVSSLARRYIGRYGLAHVSKWNFETWNEPDHHDFDNVSMTMQGFLNYYDACSEGLRAASPALRLGGPGDSFHTPPRSPLSWGLLRHCHDGTNFFTGEAGVRLDYISLHRKGARSSISILEQEKVVAQQIRQLFPKFADTPIYNDEADPLVGWSLPQPWRADVTYAAMVVKVIAQHQNLLLANTTSAFPYALLSNDNAFLSYHPHPFAQRTLTARFQVNNTRPPHVQLLRKPVLTAMGLLALLDEEQLWAEVSQAGTVLDSNHTVGVLASAHRPQGPADAWRAAVLIYASDDTRAHPNRSVAVTLRLRGVPPGPGLVYVTRYLDNGLCSPDGEWRRLGRPVFPTAEQFRRMRAAEDPVAAAPRPLPAGGRLTLRPALRLPSLLLVHVCARPEKPPGQVTRLRALPLTQGQLVLVWSDEHVGSKCLWTYEIQFSQDGKAYTPVSRKPSTFNLFVFSPDTGAVSGSYRVR A LDYWARPGPFSDPVPYLEVPVPRG 根據EU編號，具有H33及A622 (加下劃線)之截短人類α-L-艾杜糖醛酸酶多肽序列之實施例
83    EAPHLVQVDAARALWPLRRFWRSTGFCPPLPHSQADQYVLSWDQQLNLAYVGAVPHRGIKQVRTHWLLELVTTRGSTGRGLSYNFTHLDGYLDLLRENQLLPGFELMGSASGHFTDFEDKQQVFEWKDLVSSLARRYIGRYGLAHVSKWNFETWNEPDHHDFDNVSMTMQGFLNYYDACSEGLRAASPALRLGGPGDSFHTPPRSPLSWGLLRHCHDGTNFFTGEAGVRLDYISLHRKGARSSISILEQEKVVAQQIRQLFPKFADTPIYNDEADPLVGWSLPQPWRADVTYAAMVVKVIAQHQNLLLANTTSAFPYALLSNDNAFLSYHPHPFAQRTLTARFQVNNTRPPHVQLLRKPVLTAMGLLALLDEEQLWAEVSQAGTVLDSNHTVGVLASAHRPQGPADAWRAAVLIYASDDTRAHPNRSVAVTLRLRGVPPGPGLVYVTRYLDNGLCSPDGEWRRLGRPVFPTAEQFRRMRAAEDPVAAAPRPLPAGGRLTLRPALRLPSLLLVHVCARPEKPPGQVTRLRALPLTQGQLVLVWSDEHVGSKCLWTYEIQFSQDGKAYTPVSRKPSTFNLFVFSPDTGAVSGSYRVRTLDYWARPGPFSDPVPYLEVPVPRGGGGGSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK IDUA-Fc融合多肽，其中具有Q33及T622 (加下劃線)之截短人類IDUA序列利用G 4S連接體(SEQ ID NO:72)融合至具有孔洞及LALA突變之Fc序列之N末端
84 EAPHLVQVDAARALWPLRRFWRSTGFCPPLPHSQADQYVLSWDQQLNLAYVGAVPHRGIKQVRTHWLLELVTTRGSTGRGLSYNFTHLDGYLDLLRENQLLPGFELMGSASGHFTDFEDKQQVFEWKDLVSSLARRYIGRYGLAHVSKWNFETWNEPDHHDFDNVSMTMQGFLNYYDACSEGLRAASPALRLGGPGDSFHTPPRSPLSWGLLRHCHDGTNFFTGEAGVRLDYISLHRKGARSSISILEQEKVVAQQIRQLFPKFADTPIYNDEADPLVGWSLPQPWRADVTYAAMVVKVIAQHQNLLLANTTSAFPYALLSNDNAFLSYHPHPFAQRTLTARFQVNNTRPPHVQLLRKPVLTAMGLLALLDEEQLWAEVSQAGTVLDSNHTVGVLASAHRPQGPADAWRAAVLIYASDDTRAHPNRSVAVTLRLRGVPPGPGLVYVTRYLDNGLCSPDGEWRRLGRPVFPTAEQFRRMRAAEDPVAAAPRPLPAGGRLTLRPALRLPSLLLVHVCARPEKPPGQVTRLRALPLTQGQLVLVWSDEHVGSKCLWTYEIQFSQDGKAYTPVSRKPSTFNLFVFSPDTGAVSGSYRVRTLDYWARPGPFSDPVPYLEVPVPRGGGGGSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG IDUA-Fc融合多肽，其中具有Q33及T622 (加下劃線)之截短人類IDUA序列利用G 4S連接體(SEQ ID NO:72)融合至具有孔洞及LALA突變之Fc序列之N末端
85 EAPHLVQVDAARALWPLRRFWRSTGFCPPLPHSQADQYVLSWDQQLNLAYVGAVPHRGIKQVRTHWLLELVTTRGSTGRGLSYNFTHLDGYLDLLRENQLLPGFELMGSASGHFTDFEDKQQVFEWKDLVSSLARRYIGRYGLAHVSKWNFETWNEPDHHDFDNVSMTMQGFLNYYDACSEGLRAASPALRLGGPGDSFHTPPRSPLSWGLLRHCHDGTNFFTGEAGVRLDYISLHRKGARSSISILEQEKVVAQQIRQLFPKFADTPIYNDEADPLVGWSLPQPWRADVTYAAMVVKVIAQHQNLLLANTTSAFPYALLSNDNAFLSYHPHPFAQRTLTARFQVNNTRPPHVQLLRKPVLTAMGLLALLDEEQLWAEVSQAGTVLDSNHTVGVLASAHRPQGPADAWRAAVLIYASDDTRAHPNRSVAVTLRLRGVPPGPGLVYVTRYLDNGLCSPDGEWRRLGRPVFPTAEQFRRMRAAEDPVAAAPRPLPAGGRLTLRPALRLPSLLLVHVCARPEKPPGQVTRLRALPLTQGQLVLVWSDEHVGSKCLWTYEIQFSQDGKAYTPVSRKPSTFNLFVFSPDTGAVSGSYRVRALDYWARPGPFSDPVPYLEVPVPRGGGGGSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK IDUA-Fc融合多肽，其中具有Q33及A622 (加下劃線)之截短人類IDUA序列利用G 4S連接體 (SEQ ID NO:72)融合至具有孔洞及LALA突變之Fc序列之N末端
86 EAPHLVQVDAARALWPLRRFWRSTGFCPPLPHSQADQYVLSWDQQLNLAYVGAVPHRGIKQVRTHWLLELVTTRGSTGRGLSYNFTHLDGYLDLLRENQLLPGFELMGSASGHFTDFEDKQQVFEWKDLVSSLARRYIGRYGLAHVSKWNFETWNEPDHHDFDNVSMTMQGFLNYYDACSEGLRAASPALRLGGPGDSFHTPPRSPLSWGLLRHCHDGTNFFTGEAGVRLDYISLHRKGARSSISILEQEKVVAQQIRQLFPKFADTPIYNDEADPLVGWSLPQPWRADVTYAAMVVKVIAQHQNLLLANTTSAFPYALLSNDNAFLSYHPHPFAQRTLTARFQVNNTRPPHVQLLRKPVLTAMGLLALLDEEQLWAEVSQAGTVLDSNHTVGVLASAHRPQGPADAWRAAVLIYASDDTRAHPNRSVAVTLRLRGVPPGPGLVYVTRYLDNGLCSPDGEWRRLGRPVFPTAEQFRRMRAAEDPVAAAPRPLPAGGRLTLRPALRLPSLLLVHVCARPEKPPGQVTRLRALPLTQGQLVLVWSDEHVGSKCLWTYEIQFSQDGKAYTPVSRKPSTFNLFVFSPDTGAVSGSYRVRALDYWARPGPFSDPVPYLEVPVPRGGGGGSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG IDUA-Fc融合多肽，其中具有Q33及A622 (加下劃線)之截短人類IDUA序列利用G 4S連接體 (SEQ ID NO:72)融合至具有孔洞及LALA突變之Fc序列之N末端
87 EAPHLVQVDAARALWPLRRFWRSTGFCPPLPHSQADQYVLSWDQQLNLAYVGAVPHRGIKQVRTHWLLELVTTRGSTGRGLSYNFTHLDGYLDLLRENQLLPGFELMGSASGHFTDFEDKQQVFEWKDLVSSLARRYIGRYGLAHVSKWNFETWNEPDHHDFDNVSMTMQGFLNYYDACSEGLRAASPALRLGGPGDSFHTPPRSPLSWGLLRHCHDGTNFFTGEAGVRLDYISLHRKGARSSISILEQEKVVAQQIRQLFPKFADTPIYNDEADPLVGWSLPQPWRADVTYAAMVVKVIAQHQNLLLANTTSAFPYALLSNDNAFLSYHPHPFAQRTLTARFQVNNTRPPHVQLLRKPVLTAMGLLALLDEEQLWAEVSQAGTVLDSNHTVGVLASAHRPQGPADAWRAAVLIYASDDTRAHPNRSVAVTLRLRGVPPGPGLVYVTRYLDNGLCSPDGEWRRLGRPVFPTAEQFRRMRAAEDPVAAAPRPLPAGGRLTLRPALRLPSLLLVHVCARPEKPPGQVTRLRALPLTQGQLVLVWSDEHVGSKCLWTYEIQFSQDGKAYTPVSRKPSTFNLFVFSPDTGAVSGSYRVRTLDYWARPGPFSDPVPYLEVPVPRGGGGGSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALSAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK IDUA-Fc融合多肽，其中具有Q33及T622 (加下劃線)之截短人類IDUA序列利用G 4S連接體 (SEQ ID NO:72)融合至具有孔洞及LALAPS突變之Fc序列之N末端
88 EAPHLVQVDAARALWPLRRFWRSTGFCPPLPHSQADQYVLSWDQQLNLAYVGAVPHRGIKQVRTHWLLELVTTRGSTGRGLSYNFTHLDGYLDLLRENQLLPGFELMGSASGHFTDFEDKQQVFEWKDLVSSLARRYIGRYGLAHVSKWNFETWNEPDHHDFDNVSMTMQGFLNYYDACSEGLRAASPALRLGGPGDSFHTPPRSPLSWGLLRHCHDGTNFFTGEAGVRLDYISLHRKGARSSISILEQEKVVAQQIRQLFPKFADTPIYNDEADPLVGWSLPQPWRADVTYAAMVVKVIAQHQNLLLANTTSAFPYALLSNDNAFLSYHPHPFAQRTLTARFQVNNTRPPHVQLLRKPVLTAMGLLALLDEEQLWAEVSQAGTVLDSNHTVGVLASAHRPQGPADAWRAAVLIYASDDTRAHPNRSVAVTLRLRGVPPGPGLVYVTRYLDNGLCSPDGEWRRLGRPVFPTAEQFRRMRAAEDPVAAAPRPLPAGGRLTLRPALRLPSLLLVHVCARPEKPPGQVTRLRALPLTQGQLVLVWSDEHVGSKCLWTYEIQFSQDGKAYTPVSRKPSTFNLFVFSPDTGAVSGSYRVRTLDYWARPGPFSDPVPYLEVPVPRGGGGGSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALSAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG IDUA-Fc融合多肽，其中具有Q33及T622 (加下劃線)之截短人類IDUA序列利用G 4S連接體 (SEQ ID NO:72)融合至具有孔洞及LALAPS突變之Fc序列之N末端
89    EAPHLVQVDAARALWPLRRFWRSTGFCPPLPHSQADQYVLSWDQQLNLAYVGAVPHRGIKQVRTHWLLELVTTRGSTGRGLSYNFTHLDGYLDLLRENQLLPGFELMGSASGHFTDFEDKQQVFEWKDLVSSLARRYIGRYGLAHVSKWNFETWNEPDHHDFDNVSMTMQGFLNYYDACSEGLRAASPALRLGGPGDSFHTPPRSPLSWGLLRHCHDGTNFFTGEAGVRLDYISLHRKGARSSISILEQEKVVAQQIRQLFPKFADTPIYNDEADPLVGWSLPQPWRADVTYAAMVVKVIAQHQNLLLANTTSAFPYALLSNDNAFLSYHPHPFAQRTLTARFQVNNTRPPHVQLLRKPVLTAMGLLALLDEEQLWAEVSQAGTVLDSNHTVGVLASAHRPQGPADAWRAAVLIYASDDTRAHPNRSVAVTLRLRGVPPGPGLVYVTRYLDNGLCSPDGEWRRLGRPVFPTAEQFRRMRAAEDPVAAAPRPLPAGGRLTLRPALRLPSLLLVHVCARPEKPPGQVTRLRALPLTQGQLVLVWSDEHVGSKCLWTYEIQFSQDGKAYTPVSRKPSTFNLFVFSPDTGAVSGSYRVRALDYWARPGPFSDPVPYLEVPVPRGGGGGSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALSAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK IDUA-Fc融合多肽，其中具有Q33及A622 (加下劃線)之截短人類IDUA序列利用G 4S連接體(SEQ ID NO:72)融合至具有孔洞及LALAPS突變之Fc序列之N末端
90 EAPHLVQVDAARALWPLRRFWRSTGFCPPLPHSQADQYVLSWDQQLNLAYVGAVPHRGIKQVRTHWLLELVTTRGSTGRGLSYNFTHLDGYLDLLRENQLLPGFELMGSASGHFTDFEDKQQVFEWKDLVSSLARRYIGRYGLAHVSKWNFETWNEPDHHDFDNVSMTMQGFLNYYDACSEGLRAASPALRLGGPGDSFHTPPRSPLSWGLLRHCHDGTNFFTGEAGVRLDYISLHRKGARSSISILEQEKVVAQQIRQLFPKFADTPIYNDEADPLVGWSLPQPWRADVTYAAMVVKVIAQHQNLLLANTTSAFPYALLSNDNAFLSYHPHPFAQRTLTARFQVNNTRPPHVQLLRKPVLTAMGLLALLDEEQLWAEVSQAGTVLDSNHTVGVLASAHRPQGPADAWRAAVLIYASDDTRAHPNRSVAVTLRLRGVPPGPGLVYVTRYLDNGLCSPDGEWRRLGRPVFPTAEQFRRMRAAEDPVAAAPRPLPAGGRLTLRPALRLPSLLLVHVCARPEKPPGQVTRLRALPLTQGQLVLVWSDEHVGSKCLWTYEIQFSQDGKAYTPVSRKPSTFNLFVFSPDTGAVSGSYRVRALDYWARPGPFSDPVPYLEVPVPRGGGGGSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALSAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG IDUA-Fc融合多肽，其中具有Q33及A622 (加下劃線)之截短人類IDUA序列利用G 4S連接體 (SEQ ID NO:72)融合至具有孔洞及LALAPS突變之Fc序列之N末端
91    EAPHLVHVDAARALWPLRRFWRSTGFCPPLPHSQADQYVLSWDQQLNLAYVGAVPHRGIKQVRTHWLLELVTTRGSTGRGLSYNFTHLDGYLDLLRENQLLPGFELMGSASGHFTDFEDKQQVFEWKDLVSSLARRYIGRYGLAHVSKWNFETWNEPDHHDFDNVSMTMQGFLNYYDACSEGLRAASPALRLGGPGDSFHTPPRSPLSWGLLRHCHDGTNFFTGEAGVRLDYISLHRKGARSSISILEQEKVVAQQIRQLFPKFADTPIYNDEADPLVGWSLPQPWRADVTYAAMVVKVIAQHQNLLLANTTSAFPYALLSNDNAFLSYHPHPFAQRTLTARFQVNNTRPPHVQLLRKPVLTAMGLLALLDEEQLWAEVSQAGTVLDSNHTVGVLASAHRPQGPADAWRAAVLIYASDDTRAHPNRSVAVTLRLRGVPPGPGLVYVTRYLDNGLCSPDGEWRRLGRPVFPTAEQFRRMRAAEDPVAAAPRPLPAGGRLTLRPALRLPSLLLVHVCARPEKPPGQVTRLRALPLTQGQLVLVWSDEHVGSKCLWTYEIQFSQDGKAYTPVSRKPSTFNLFVFSPDTGAVSGSYRVRALDYWARPGPFSDPVPYLEVPVPRGPPSPGNPGGGGSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALSAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK IDUA-Fc融合多肽，其中具有H33及A622 (加下劃線)之成熟人類IDUA序列利用G 4S連接體 (SEQ ID NO:72)融合至具有孔洞及LALAPS突變之Fc序列之N末端
92    EAPHLVHVDAARALWPLRRFWRSTGFCPPLPHSQADQYVLSWDQQLNLAYVGAVPHRGIKQVRTHWLLELVTTRGSTGRGLSYNFTHLDGYLDLLRENQLLPGFELMGSASGHFTDFEDKQQVFEWKDLVSSLARRYIGRYGLAHVSKWNFETWNEPDHHDFDNVSMTMQGFLNYYDACSEGLRAASPALRLGGPGDSFHTPPRSPLSWGLLRHCHDGTNFFTGEAGVRLDYISLHRKGARSSISILEQEKVVAQQIRQLFPKFADTPIYNDEADPLVGWSLPQPWRADVTYAAMVVKVIAQHQNLLLANTTSAFPYALLSNDNAFLSYHPHPFAQRTLTARFQVNNTRPPHVQLLRKPVLTAMGLLALLDEEQLWAEVSQAGTVLDSNHTVGVLASAHRPQGPADAWRAAVLIYASDDTRAHPNRSVAVTLRLRGVPPGPGLVYVTRYLDNGLCSPDGEWRRLGRPVFPTAEQFRRMRAAEDPVAAAPRPLPAGGRLTLRPALRLPSLLLVHVCARPEKPPGQVTRLRALPLTQGQLVLVWSDEHVGSKCLWTYEIQFSQDGKAYTPVSRKPSTFNLFVFSPDTGAVSGSYRVRALDYWARPGPFSDPVPYLEVPVPRGPPSPGNPGGGGSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALSAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG IDUA-Fc融合多肽，其中具有H33及A622 (加下劃線)之成熟人類IDUA序列利用G 4S連接體 (SEQ ID NO:72)融合至具有孔洞及LALAPS突變之Fc序列之N末端
93    EAPHLVQVDAARALWPLRRFWRSTGFCPPLPHSQADQYVLSWDQQLNLAYVGAVPHRGIKQVRTHWLLELVTTRGSTGRGLSYNFTHLDGYLDLLRENQLLPGFELMGSASGHFTDFEDKQQVFEWKDLVSSLARRYIGRYGLAHVSKWNFETWNEPDHHDFDNVSMTMQGFLNYYDACSEGLRAASPALRLGGPGDSFHTPPRSPLSWGLLRHCHDGTNFFTGEAGVRLDYISLHRKGARSSISILEQEKVVAQQIRQLFPKFADTPIYNDEADPLVGWSLPQPWRADVTYAAMVVKVIAQHQNLLLANTTSAFPYALLSNDNAFLSYHPHPFAQRTLTARFQVNNTRPPHVQLLRKPVLTAMGLLALLDEEQLWAEVSQAGTVLDSNHTVGVLASAHRPQGPADAWRAAVLIYASDDTRAHPNRSVAVTLRLRGVPPGPGLVYVTRYLDNGLCSPDGEWRRLGRPVFPTAEQFRRMRAAEDPVAAAPRPLPAGGRLTLRPALRLPSLLLVHVCARPEKPPGQVTRLRALPLTQGQLVLVWSDEHVGSKCLWTYEIQFSQDGKAYTPVSRKPSTFNLFVFSPDTGAVSGSYRVRALDYWARPGPFSDPVPYLEVPVPRGPPSPGNPGSHHHHHH    具有Q33及A622 (加下劃線)之成熟人類α-L-艾杜糖醛酸酶多肽序列，融合至6× His標籤 (SEQ ID NO: 96)
94    EAPHLVQVDAARALWPLRRFWRSTGFCPPLPHSQADQYVLSWDQQLNLAYVGAVPHRGIKQVRTHWLLELVTTRGSTGRGLSYNFTHLDGYLDLLRENQLLPGFELMGSASGHFTDFEDKQQVFEWKDLVSSLARRYIGRYGLAHVSKWNFETWNEPDHHDFDNVSMTMQGFLNYYDACSEGLRAASPALRLGGPGDSFHTPPRSPLSWGLLRHCHDGTNFFTGEAGVRLDYISLHRKGARSSISILEQEKVVAQQIRQLFPKFADTPIYNDEADPLVGWSLPQPWRADVTYAAMVVKVIAQHQNLLLANTTSAFPYALLSNDNAFLSYHPHPFAQRTLTARFQVNNTRPPHVQLLRKPVLTAMGLLALLDEEQLWAEVSQAGTVLDSNHTVGVLASAHRPQGPADAWRAAVLIYASDDTRAHPNRSVAVTLRLRGVPPGPGLVYVTRYLDNGLCSPDGEWRRLGRPVFPTAEQFRRMRAAEDPVAAAPRPLPAGGRLTLRPALRLPSLLLVHVCARPEKPPGQVTRLRALPLTQGQLVLVWSDEHVGSKCLWTYEIQFSQDGKAYTPVSRKPSTFNLFVFSPDTGAVSGSYRVRTLDYWARPGPFSDPVPYLEVPVPRGPPSPGNPGSHHHHHH    具有Q33及T622 (加下劃線)之成熟人類α-L-艾杜糖醛酸酶多肽序列，融合至6× His標籤 (SEQ ID NO: 96)
95    X 3APHLVHVDAARALWPLRRFWRSTGFCPPLPHSQADQYVLSWDQQLNLAYVGAVPHRGIKQVRTHWLLELVTTRGSTGRGLSYNFTHLDGYLDLLRENQLLPGFELMGSASGHFTDFEDKQQVFEWKDLVSSLARRYIGRYGLAHVSKWNFETWNEPDHHDFDNVSMTMQGFLNYYDACSEGLRAASPALRLGGPGDSFHTPPRSPLSWGLLRHCHDGTNFFTGEAGVRLDYISLHRKGARSSISILEQEKVVAQQIRQLFPKFADTPIYNDEADPLVGWSLPQPWRADVTYAAMVVKVIAQHQNLLLANTTSAFPYALLSNDNAFLSYHPHPFAQRTLTARFQVNNTRPPHVQLLRKPVLTAMGLLALLDEEQLWAEVSQAGTVLDSNHTVGVLASAHRPQGPADAWRAAVLIYASDDTRAHPNRSVAVTLRLRGVPPGPGLVYVTRYLDNGLCSPDGEWRRLGRPVFPTAEQFRRMRAAEDPVAAAPRPLPAGGRLTLRPALRLPSLLLVHVCARPEKPPGQVTRLRALPLTQGQLVLVWSDEHVGSKCLWTYEIQFSQDGKAYTPVSRKPSTFNLFVFSPDTGAVSGSYRVRALDYWARPGPFSDPVPYLEVPVPRGPPSPGNP GSHHHHHH    具有H33及A622之成熟人類α-L-艾杜糖醛酸酶多肽序列，其中X 3係E或不存在(加下劃線)，融合至6× His標籤 (SEQ ID NO: 96)
96 HHHHHH 6× His標籤
97 APEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESYGTEWANYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVTKEEWQQGFVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 具有孔洞及LALA突變之純系CH3C.35.23.2   
98 APEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESYGTEWANYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVTKEEWQQGFVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 具有孔洞及LALA突變之純系CH3C.35.23.2   
99 X 3APHLVX 1VDAARALWPLRRFWRSTGFCPPLPHSQADQYVLSWDQQLNLAYVGAVPHRGIKQVRTHWLLELVTTRGSTGRGLSYNFTHLDGYLDLLRENQLLPGFELMGSASGHFTDFEDKQQVFEWKDLVSSLARRYIGRYGLAHVSKWNFETWNEPDHHDFDNVSMTMQGFLNYYDACSEGLRAASPALRLGGPGDSFHTPPRSPLSWGLLRHCHDGTNFFTGEAGVRLDYISLHRKGARSSISILEQEKVVAQQIRQLFPKFADTPIYNDEADPLVGWSLPQPWRADVTYAAMVVKVIAQHQNLLLANTTSAFPYALLSNDNAFLSYHPHPFAQRTLTARFQVNNTRPPHVQLLRKPVLTAMGLLALLDEEQLWAEVSQAGTVLDSNHTVGVLASAHRPQGPADAWRAAVLIYASDDTRAHPNRSVAVTLRLRGVPPGPGLVYVTRYLDNGLCSPDGEWRRLGRPVFPTAEQFRRMRAAEDPVAAAPRPLPAGGRLTLRPALRLPSLLLVHVCARPEKPPGQVTRLRALPLTQGQLVLVWSDEHVGSKCLWTYEIQFSQDGKAYTPVSRKPSTFNLFVFSPDTGAVSGSYRVRX 2LDYWARPGPFSDPVPYLEVPVPRGPPSPGNP 成熟人類α-L-艾杜糖醛酸酶多肽，其中X 1係H或Q; X 2係A或T；且X 3係E或不存在。
100 EAPHLVQVDAARALWPLRRFWRSTGFCPPLPHSQADQYVLSWDQQLNLAYVGAVPHRGIKQVRTHWLLELVTTRGSTGRGLSYNFTHLDGYLDLLRENQLLPGFELMGSASGHFTDFEDKQQVFEWKDLVSSLARRYIGRYGLAHVSKWNFETWNEPDHHDFDNVSMTMQGFLNYYDACSEGLRAASPALRLGGPGDSFHTPPRSPLSWGLLRHCHDGTNFFTGEAGVRLDYISLHRKGARSSISILEQEKVVAQQIRQLFPKFADTPIYNDEADPLVGWSLPQPWRADVTYAAMVVKVIAQHQNLLLANTTSAFPYALLSNDNAFLSYHPHPFAQRTLTARFQVNNTRPPHVQLLRKPVLTAMGLLALLDEEQLWAEVSQAGTVLDSNHTVGVLASAHRPQGPADAWRAAVLIYASDDTRAHPNRSVAVTLRLRGVPPGPGLVYVTRYLDNGLCSPDGEWRRLGRPVFPTAEQFRRMRAAEDPVAAAPRPLPAGGRLTLRPALRLPSLLLVHVCARPEKPPGQVTRLRALPLTQGQLVLVWSDEHVGSKCLWTYEIQFSQDGKAYTPVSRKPSTFNLFVFSPDTGAVSGSYRVRTLDYWARPGPFSDPVPYLEVPVPRGPPSPGNPGGGGSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG IDUA-Fc融合多肽，其中具有Q33及T622 (加下劃線)之成熟人類IDUA序列利用G 4S連接體 (SEQ ID NO:72)融合至具有旋鈕及LALA突變之Fc序列之N末端
101 EAPHLVQVDAARALWPLRRFWRSTGFCPPLPHSQADQYVLSWDQQLNLAYVGAVPHRGIKQVRTHWLLELVTTRGSTGRGLSYNFTHLDGYLDLLRENQLLPGFELMGSASGHFTDFEDKQQVFEWKDLVSSLARRYIGRYGLAHVSKWNFETWNEPDHHDFDNVSMTMQGFLNYYDACSEGLRAASPALRLGGPGDSFHTPPRSPLSWGLLRHCHDGTNFFTGEAGVRLDYISLHRKGARSSISILEQEKVVAQQIRQLFPKFADTPIYNDEADPLVGWSLPQPWRADVTYAAMVVKVIAQHQNLLLANTTSAFPYALLSNDNAFLSYHPHPFAQRTLTARFQVNNTRPPHVQLLRKPVLTAMGLLALLDEEQLWAEVSQAGTVLDSNHTVGVLASAHRPQGPADAWRAAVLIYASDDTRAHPNRSVAVTLRLRGVPPGPGLVYVTRYLDNGLCSPDGEWRRLGRPVFPTAEQFRRMRAAEDPVAAAPRPLPAGGRLTLRPALRLPSLLLVHVCARPEKPPGQVTRLRALPLTQGQLVLVWSDEHVGSKCLWTYEIQFSQDGKAYTPVSRKPSTFNLFVFSPDTGAVSGSYRVRTLDYWARPGPFSDPVPYLEVPVPRGPPSPGNPGGGGSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESYGTEWANYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVTKEEWQQGFVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK IDUA-Fc融合多肽，其中具有Q33及T622 (加下劃線)之成熟人類IDUA序列利用G 4S連接體 (SEQ ID NO:72)融合至具有旋鈕及LALA突變之純系CH3C.35.23.2之N末端
102 EAPHLVQVDAARALWPLRRFWRSTGFCPPLPHSQADQYVLSWDQQLNLAYVGAVPHRGIKQVRTHWLLELVTTRGSTGRGLSYNFTHLDGYLDLLRENQLLPGFELMGSASGHFTDFEDKQQVFEWKDLVSSLARRYIGRYGLAHVSKWNFETWNEPDHHDFDNVSMTMQGFLNYYDACSEGLRAASPALRLGGPGDSFHTPPRSPLSWGLLRHCHDGTNFFTGEAGVRLDYISLHRKGARSSISILEQEKVVAQQIRQLFPKFADTPIYNDEADPLVGWSLPQPWRADVTYAAMVVKVIAQHQNLLLANTTSAFPYALLSNDNAFLSYHPHPFAQRTLTARFQVNNTRPPHVQLLRKPVLTAMGLLALLDEEQLWAEVSQAGTVLDSNHTVGVLASAHRPQGPADAWRAAVLIYASDDTRAHPNRSVAVTLRLRGVPPGPGLVYVTRYLDNGLCSPDGEWRRLGRPVFPTAEQFRRMRAAEDPVAAAPRPLPAGGRLTLRPALRLPSLLLVHVCARPEKPPGQVTRLRALPLTQGQLVLVWSDEHVGSKCLWTYEIQFSQDGKAYTPVSRKPSTFNLFVFSPDTGAVSGSYRVRTLDYWARPGPFSDPVPYLEVPVPRGPPSPGNPGGGGSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESYGTEWANYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVTKEEWQQGFVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG IDUA-Fc融合多肽，其中具有Q33及T622 (加下劃線)之成熟人類IDUA序列利用G 4S連接體 (SEQ ID NO:72)融合至具有旋鈕及LALA突變之純系CH3C.35.23.2之N末端
103 DKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESYGTEWANYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVTKEEWQQGFVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGGGGS EAPHLVQVDAARALWPLRRFWRSTGFCPPLPHSQADQYVLSWDQQLNLAYVGAVPHRGIKQVRTHWLLELVTTRGSTGRGLSYNFTHLDGYLDLLRENQLLPGFELMGSASGHFTDFEDKQQVFEWKDLVSSLARRYIGRYGLAHVSKWNFETWNEPDHHDFDNVSMTMQGFLNYYDACSEGLRAASPALRLGGPGDSFHTPPRSPLSWGLLRHCHDGTNFFTGEAGVRLDYISLHRKGARSSISILEQEKVVAQQIRQLFPKFADTPIYNDEADPLVGWSLPQPWRADVTYAAMVVKVIAQHQNLLLANTTSAFPYALLSNDNAFLSYHPHPFAQRTLTARFQVNNTRPPHVQLLRKPVLTAMGLLALLDEEQLWAEVSQAGTVLDSNHTVGVLASAHRPQGPADAWRAAVLIYASDDTRAHPNRSVAVTLRLRGVPPGPGLVYVTRYLDNGLCSPDGEWRRLGRPVFPTAEQFRRMRAAEDPVAAAPRPLPAGGRLTLRPALRLPSLLLVHVCARPEKPPGQVTRLRALPLTQGQLVLVWSDEHVGSKCLWTYEIQFSQDGKAYTPVSRKPSTFNLFVFSPDTGAVSGSYRVRTLDYWARPGPFSDPVPYLEVPVPRGPPSPGNP Fc-IDUA融合多肽，其中具有Q33及T622 (加下劃線)之成熟人類IDUA序列利用G 4S連接體(SEQ ID NO:72)融合至具有旋鈕及LALA突變之純系CH3C.35.23.2之C末端
104 EAPHLVQVDAARALWPLRRFWRSTGFCPPLPHSQADQYVLSWDQQLNLAYVGAVPHRGIKQVRTHWLLELVTTRGSTGRGLSYNFTHLDGYLDLLRENQLLPGFELMGSASGHFTDFEDKQQVFEWKDLVSSLARRYIGRYGLAHVSKWNFETWNEPDHHDFDNVSMTMQGFLNYYDACSEGLRAASPALRLGGPGDSFHTPPRSPLSWGLLRHCHDGTNFFTGEAGVRLDYISLHRKGARSSISILEQEKVVAQQIRQLFPKFADTPIYNDEADPLVGWSLPQPWRADVTYAAMVVKVIAQHQNLLLANTTSAFPYALLSNDNAFLSYHPHPFAQRTLTARFQVNNTRPPHVQLLRKPVLTAMGLLALLDEEQLWAEVSQAGTVLDSNHTVGVLASAHRPQGPADAWRAAVLIYASDDTRAHPNRSVAVTLRLRGVPPGPGLVYVTRYLDNGLCSPDGEWRRLGRPVFPTAEQFRRMRAAEDPVAAAPRPLPAGGRLTLRPALRLPSLLLVHVCARPEKPPGQVTRLRALPLTQGQLVLVWSDEHVGSKCLWTYEIQFSQDGKAYTPVSRKPSTFNLFVFSPDTGAVSGSYRVRTLDYWARPGPFSDPVPYLEVPVPRGPPSPGNPGGGGSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK IDUA-Fc融合多肽，其中具有Q33及T622 (加下劃線)之成熟人類IDUA序列利用G 4S連接體(SEQ ID NO:72)融合至具有旋鈕及LALA突變之Fc序列之N末端
所有公開案、專利及專利文件皆以引用方式併入本文中，如同個別地以引用方式併入一般。已參考多個具體及較佳實施例及技術來闡述本揭示案。然而應理解，可在保留於本發明之精神及範圍內的同時，進行許多變化及修改。
圖 1A- 圖 1B.例示性ETV:IDUA融合蛋白之圖解說明，其中IDUA酶融合至(圖1A) Fc多肽之N末端；或融合至(圖1B) Fc多肽之C末端。 圖 2.活體外評估IDUA-Fc融合蛋白及Aldurazyme (拉羅尼酶(laronidase))之酶活性。 圖 3.使用硫酸乙醯肝素及硫酸皮膚素之LCMS量化在赫爾勒(MPS I)患者及健康對照之纖維母細胞中評估與拉羅尼酶相比ETV:IDUA融合物1之細胞活性。 圖 4A- 圖 4C.評估TfR敲入小鼠(「TfR mu/huKI」)中之(圖4A) ETV:IDUA融合物3血清PK、(圖4B) ETV:IDUA融合物4血清PK及(圖4C) ETV:IDUA融合物6血清PK。 圖 5A- 圖 5C.評估TfR敲入小鼠(「TfR mu/huKI」)中之(圖4A) ETV:IDUA融合物3腦PK、(圖4B) ETV:IDUA融合物4腦PK及(圖4C) ETV:IDUA融合物6腦PK。 圖 6A- 圖 6D.在健康小鼠模型及MPS I疾病小鼠模型中實施之比較研究中評估CSF (圖6A)、腦(圖6B)、肝臟(圖6C)及尿(圖6D)中之藥效學反應(總GAG水準)。健康小鼠模型由TfR敲入小鼠(「TfR mu/hu」)表示且疾病小鼠模型由其中已剔除IDUA基因之TfR敲入小鼠(「IDUA KO; TfR mu/hu」)表示。各圖展示平均值± SEM及p值：單因子ANOVA鄧妮特多重比較測試(Dunnett’s multiple comparison test)；** p ≤ 0.01，*** p ≤ 0.001，及**** p ≤ 0.0001。
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Claims (82)

  1. 一種蛋白質，其包含： a.        第一Fc多肽，該第一Fc多肽連接至α-L-艾杜糖醛酸酶(IDUA)胺基酸序列、IDUA變異體胺基酸序列或其催化活性片段；及 b.       第二Fc多肽，其包含與SEQ ID NO:28具有至少90%一致性之序列且能夠特異性結合至運鐵蛋白受體(TfR)。
  2. 如請求項1之蛋白質，其中根據EU編號，該第二Fc多肽在位置389處具有Ala。
  3. 如請求項2之蛋白質，其中根據EU編號，該第二Fc多肽進一步包含位置380處之Glu；及位置390處之Asn。
  4. 如請求項3之蛋白質，其中根據EU編號，該第二Fc多肽在以下位置進一步包含： i.       位置384處之Tyr； ii.       位置386處之Thr； iii.      位置387處之Glu； iv.      位置388處之Trp； v.       位置413處之Thr； vi.      位置415處之Glu； vii.     位置416處之Glu；及 viii.    位置421處之Phe。
  5. 如請求項1至4中任一項之蛋白質，其中該蛋白質能夠運輸穿過個體之血腦障壁。
  6. 如請求項1至5中任一項之蛋白質，其中該蛋白質以約100 nM至約500 nM之親和力結合至TfR。
  7. 如請求項1至5中任一項之蛋白質，其中該蛋白質以約200 nM至約400 nM之親和力結合至TfR。
  8. 如請求項1至7中任一項之蛋白質，其中該第二Fc多肽結合至該TfR之頂端結構域。
  9. 如請求項1至8中任一項之蛋白質，其中該蛋白質與該TfR之該結合實質上不會抑制運鐵蛋白與該TfR結合。
  10. 如請求項1至9中任一項之蛋白質，其中該IDUA胺基酸序列包含與SEQ ID NO:39、40、45、78及99中之任一者具有至少80%、85%、90%或95%一致性之胺基酸序列。
  11. 如請求項10之蛋白質，其中該IDUA胺基酸序列包含SEQ ID NO:39、40、45、78及99中之任一者之胺基酸序列。
  12. 如請求項1至9中任一項之蛋白質，其中該IDUA胺基酸序列包含與SEQ ID NO:41-44中之任一者具有至少80%、85%、90%或95%一致性之胺基酸序列。
  13. 如請求項12之蛋白質，其中該IDUA胺基酸序列包含SEQ ID NO:41-44中之任一者之胺基酸序列。
  14. 如請求項1至9中任一項之蛋白質，其中該IDUA胺基酸序列包含與SEQ ID NO:46-49中之任一者具有至少80%、85%、90%或95%一致性之胺基酸序列。
  15. 如請求項14之蛋白質，其中該IDUA胺基酸序列包含SEQ ID NO:46-49中之任一者之胺基酸序列。
  16. 如請求項1至9中任一項之蛋白質，其中該IDUA胺基酸序列包含與SEQ ID NO:79-82中之任一者具有至少80%、85%、90%或95%一致性之胺基酸序列。
  17. 如請求項16之蛋白質，其中該IDUA胺基酸序列包含SEQ ID NO:79-82中之任一者之胺基酸序列。
  18. 如請求項1至17中任一項之蛋白質，其中該第一Fc多肽藉由肽鍵或藉由多肽連接體連接至該IDUA胺基酸序列、IDUA變異體胺基酸序列或其催化活性片段。
  19. 如請求項18之蛋白質，其中該多肽連接體係撓性多肽連接體。
  20. 如請求項18之蛋白質，其中該撓性多肽連接體係富含甘胺酸之連接體。
  21. 如請求項19或20之蛋白質，其中該多肽連接體係GS (SEQ ID NO:71)、G 4S (SEQ ID NO:72)或(G 4S) 2(SEQ ID NO:73)。
  22. 如請求項1至21中任一項之蛋白質，其中該第一Fc多肽之N末端連接至該IDUA胺基酸序列、IDUA變異體胺基酸序列或其催化活性片段。
  23. 如請求項1至21中任一項之蛋白質，其中該第一Fc多肽之C末端連接至該IDUA胺基酸序列、IDUA變異體胺基酸序列或其催化活性片段。
  24. 如請求項1至23中任一項之蛋白質，該蛋白質包含單一IDUA胺基酸序列、IDUA變異體胺基酸序列或其催化活性片段。
  25. 如請求項1至24中任一項之蛋白質，其中該第二Fc多肽與該第一Fc多肽形成Fc二聚體。
  26. 如請求項1至25中任一項之蛋白質，其中該第一Fc多肽及該第二Fc多肽各自含有促進異二聚化之修飾。
  27. 如請求項26之蛋白質，其中根據EU編號，該等Fc多肽中之一者具有T366W取代，且另一Fc多肽具有T366S、L368A及Y407V取代。
  28. 如請求項27之蛋白質，其中該第一Fc多肽含有該T366S取代、該L368A取代及該Y407V取代，且該第二Fc多肽含有該T366W取代。
  29. 如請求項28之蛋白質，其中該第一Fc多肽包含與SEQ ID NO:9-16及19-22中之任一者具有至少95%或100%一致性之胺基酸序列；且該第二Fc多肽包含與SEQ ID NO:25-32及35-38中之任一者具有至少95%或100%一致性之胺基酸序列。
  30. 如請求項1至29中任一項之蛋白質，其中該第一Fc多肽及/或該第二Fc多肽包含天然FcRn結合位點。
  31. 如請求項1至30中任一項之蛋白質，其中該第一Fc多肽及該第二Fc多肽不具效應功能。
  32. 如請求項1至30中任一項之蛋白質，其中該第一Fc多肽及/或該第二Fc多肽包括降低效應功能之修飾。
  33. 如請求項32之蛋白質，其中根據EU編號，降低效應功能之該修飾係位置234處之Ala及位置235處之Ala；位置234處之Ala、位置235處之Ala及位置329處之Gly；或位置234處之Ala、位置235處之Ala及位置329處之Ser的取代。
  34. 如請求項33之蛋白質，其中該第一Fc多肽包含與SEQ ID NO:11-16及19-22中之任一者具有至少95%或100%一致性之胺基酸序列。
  35. 如請求項34之蛋白質，其中該第一Fc多肽包含與SEQ ID NO:11、12、19及20中之任一者具有至少95%或100%一致性之胺基酸序列。
  36. 如請求項34之蛋白質，其中該第一Fc多肽包含與SEQ ID NO:15、16、21及22中之任一者具有至少95%或100%一致性之胺基酸序列。
  37. 如請求項33之蛋白質，其中連接至該IDUA胺基酸序列之該第一Fc多肽包含與SEQ ID NO:50-69及83-92中之任一者具有至少95%或100%一致性之胺基酸序列。
  38. 如請求項37之蛋白質，其中連接至該IDUA胺基酸序列之該第一Fc多肽包含與SEQ ID NO:50-53中之任一者具有至少95%或100%一致性之胺基酸序列。
  39. 如請求項37之蛋白質，其中連接至該IDUA胺基酸序列之該第一Fc多肽包含與SEQ ID NO:54-57中之任一者具有至少95%或100%一致性之胺基酸序列。
  40. 如請求項37之蛋白質，其中連接至該IDUA胺基酸序列之該第一Fc多肽包含與SEQ ID NO:83-86中之任一者具有至少95%或100%一致性之胺基酸序列。
  41. 如請求項37之蛋白質，其中連接至該IDUA胺基酸序列之該第一Fc多肽包含與SEQ ID NO:58-61及91-92中之任一者具有至少95%或100%一致性之胺基酸序列。
  42. 如請求項37之蛋白質，其中連接至該IDUA胺基酸序列之該第一Fc多肽包含與SEQ ID NO:62-65中之任一者具有至少95%或100%一致性之胺基酸序列。
  43. 如請求項37之蛋白質，其中連接至該IDUA胺基酸序列之該第一Fc多肽包含與SEQ ID NO:87-90中之任一者具有至少95%或100%一致性之胺基酸序列。
  44. 如請求項37之蛋白質，其中連接至該IDUA胺基酸序列之該第一Fc多肽包含與SEQ ID NO:66-67中之任一者具有至少95%或100%一致性之胺基酸序列。
  45. 如請求項37之蛋白質，其中連接至該IDUA胺基酸序列之該第一Fc多肽包含與SEQ ID NO:68-69中之任一者具有至少95%或100%一致性之胺基酸序列。
  46. 如請求項33至45中任一項之蛋白質，其中該第二Fc多肽包含與SEQ ID NO:27-32及35-38中之任一者具有至少95%或100%一致性之胺基酸序列。
  47. 如請求項46之蛋白質，其中該第二Fc多肽包含與SEQ ID NO:27、28、35及36中之任一者具有至少95%或100%一致性之胺基酸序列。
  48. 如請求項46之蛋白質，其中該第二Fc多肽包含與SEQ ID NO:31、32、37及38中之任一者具有至少95%或100%一致性之胺基酸序列。
  49. 如請求項26之蛋白質，其中連接至該IDUA胺基酸序列之該第一Fc多肽包含SEQ ID NO:50-65及83-92中之任一者之胺基酸序列；且其中該第二Fc多肽包含SEQ ID NO:35-38中之任一者之胺基酸序列。
  50. 如請求項49之蛋白質，其中連接至該IDUA胺基酸序列之該第一Fc多肽包含SEQ ID NO:50-57及83-86中之任一者之胺基酸序列；且其中該第二Fc多肽包含SEQ ID NO:35-36中之任一者之胺基酸序列。
  51. 如請求項49之蛋白質，其中連接至該IDUA胺基酸序列之該第一Fc多肽包含SEQ ID NO:58-65及87-92中之任一者之胺基酸序列；且其中該第二Fc多肽包含SEQ ID NO:37-38中之任一者之胺基酸序列。
  52. 如請求項26之蛋白質，其中連接至該IDUA胺基酸序列之該第一Fc多肽包含SEQ ID NO:66-69中之任一者之胺基酸序列；且其中該第二Fc多肽包含SEQ ID NO:35-38中之任一者之胺基酸序列。
  53. 如請求項52之蛋白質，其中連接至該IDUA胺基酸序列之該第一Fc多肽包含SEQ ID NO:66-67中之任一者之胺基酸序列；且其中該第二Fc多肽包含SEQ ID NO:35-36中之任一者之胺基酸序列。
  54. 如請求項52之蛋白質，其中連接至該IDUA胺基酸序列之該第一Fc多肽包含SEQ ID NO:68-69中之任一者之胺基酸序列；且其中該第二Fc多肽包含SEQ ID NO:37-38中之任一者之胺基酸序列。
  55. 如請求項1至54中任一項之蛋白質，其中與在該第一Fc多肽及該第二Fc多肽不存在下該IDUA胺基酸序列之攝取相比或與該第二Fc多肽不具導致TfR結合之該等修飾下該IDUA酶之攝取相比，該IDUA胺基酸序列至腦中之攝取為至少5倍大。
  56. 如請求項1至55中任一項之蛋白質，其中該第一Fc多肽未經修飾以結合至血腦障壁(BBB)受體，且該第二Fc多肽經修飾以特異性結合至TfR。
  57. 如請求項1至56中任一項之蛋白質，其中該蛋白質不包括免疫球蛋白重鏈及/或輕鏈可變區序列或其抗原結合部分。
  58. 一種多肽，其包含Fc多肽，該Fc多肽連接至α-L-艾杜糖醛酸酶(IDUA)胺基酸序列、IDUA變異體胺基酸序列或其催化活性片段，其中該Fc多肽包含與SEQ ID NO:12具有至少90%一致性之序列且含有促進其與另一Fc多肽異二聚化之一或多種修飾。
  59. 如請求項58之多肽，其中該Fc多肽藉由肽鍵或藉由多肽連接體連接至該IDUA酶、該IDUA變異體胺基酸序列或其催化活性片段。
  60. 如請求項59之多肽，該多肽自N末端至C末端包含：該IDUA酶、該IDUA變異體胺基酸序列或其催化活性片段；多肽連接體；及該Fc多肽。
  61. 如請求項59之多肽，該多肽自N末端至C末端包含：該Fc多肽；多肽連接體；及該IDUA酶、該IDUA變異體胺基酸序列或其催化活性片段。
  62. 如請求項58至61中任一項之多肽，其中根據EU編號，該Fc多肽包含T366S、L368A及Y407V取代。
  63. 如請求項58至62中任一項之多肽，其中根據EU編號，該Fc多肽包含位置234處之Ala及位置235處之Ala；位置234處之Ala、位置235處之Ala及位置329處之Gly；或位置234處之Ala、位置235處之Ala及位置329處之Ser的取代。
  64. 如請求項63之多肽，其中該多肽包含與SEQ ID NO:50-69及83-92中之任一者具有至少95%或100%一致性之胺基酸序列。
  65. 一種蛋白質，其包含如請求項58至64中任一項之多肽及如請求項58之另一Fc多肽。
  66. 一種醫藥組合物，其包含如請求項1至57及65中任一項之蛋白質或如請求項58至64中任一項之多肽及醫藥學上可接受之賦形劑。
  67. 一種多核苷酸，其包含編碼如請求項58至64中任一項之多肽之核酸序列。
  68. 一種載體，其包含如請求項67之多核苷酸。
  69. 一種宿主細胞，其包含如請求項67之多核苷酸或如請求項68之載體。
  70. 如請求項69之宿主細胞，其進一步包含多核苷酸，該多核苷酸包含編碼如請求項58之另一Fc多肽之核酸序列。
  71. 一種產生包含連接至IDUA胺基酸序列、IDUA變異體胺基酸序列或其催化活性片段之Fc多肽之多肽的方法，該方法包括在表現如請求項67之多核苷酸編碼之該多肽之條件下培養宿主細胞。
  72. 一種多核苷酸對，其包含第一核酸序列，該第一核酸序列編碼如請求項1至57中任一項所述之連接至IDUA胺基酸序列、IDUA變異體胺基酸序列或其催化活性片段之該第一Fc多肽；及第二核酸序列，該第二核酸序列編碼如請求項1至57中任一項所述之該第二Fc多肽。
  73. 一或多種載體，其包含如請求項72之多核苷酸對。
  74. 一種宿主細胞，其包含如請求項72之多核苷酸對或如請求項73之一或多種載體。
  75. 一種產生包含連接至IDUA胺基酸序列、IDUA變異體胺基酸序列或其催化活性片段之第一Fc多肽以及第二Fc多肽之蛋白質的方法，該方法包括在表現如請求項72之多核苷酸對之條件下培養宿主細胞。
  76. 一種治療MPS I之方法，該方法包括向有需要之患者投與如請求項1至57及65中任一項之蛋白質或如請求項58至64中任一項之多肽。
  77. 如請求項1至57及65中任一項之蛋白質或如請求項58至64中任一項之多肽，其用於治療有需要之患者之MPS I。
  78. 一種如請求項1至57及65中任一項之蛋白質或如請求項58至64中任一項之多肽的用途，其用於製備用來治療有需要之患者之MPS I的藥物。
  79. 一種減少毒性代謝產物在患有MPS I之患者中累積之方法，該方法包括向該患者投與如請求項1至57及65中任一項之蛋白質或如請求項58至64中任一項之多肽。
  80. 如請求項1至57及65中任一項之蛋白質或如請求項58至64中任一項之多肽，其用於減少毒性代謝產物在患有MPS I之患者中累積。
  81. 一種如請求項1至57及65中任一項之蛋白質或如請求項58至64中任一項之多肽的用途，其用於製備用來減少毒性代謝產物在患有MPS I之患者中累積之藥物。
  82. 如請求項79至81中任一項之方法、蛋白質或用途，其中該毒性代謝產物包含硫酸乙醯肝素源性寡糖或硫酸皮膚素源性寡糖。
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