TW202340152A

TW202340152A - 用於靶向療法之複合體

Info

Publication number: TW202340152A
Application number: TW111113108A
Authority: TW
Inventors: 梁碧惠; 張竣凱; 邱沛芳
Original assignee: 國立臺灣大學臺北市大安區羅斯福路4 段1 號
Priority date: 2022-04-06
Filing date: 2022-04-06
Publication date: 2023-10-16

Abstract

本發明提供一種新穎複合體或其醫藥學上可接受之鹽，其中該複合體具活性的醫藥部分或其前驅藥、靶向模組及於其間之連接基團。該複合體或其醫藥學上可接受之鹽適用於治療個體之疾病、復發或進展或經診斷患有疾病之個體在相關時段內，增加其存活之可能性。

Description

用於靶向療法之複合體

本發明係關於一種新穎複合體，更特定言之，係關於用於靶向療法之複合體。

將藥物選擇性遞送至確定的疾病部位係臨床療法之最關鍵目標之一。例如，在治療某些腫瘤之情況下，仍需要能夠將抗癌藥物靶向至腫瘤部位，同時最大限度地減少脫靶效應之遞送系統。儘管化學療法已取得巨大進步，但當前療法仍不能令人滿意，且大多數患者之預後仍不佳。一個主要挑戰在於非所需副作用的發生。

通常，將藥物調配成用於局部、經口、靜脈內或肌肉內投予之藥劑。沿此等途徑投予之藥物通常需要比原位使用之藥物之實際量高得多的劑量。此外，毒性藥物係以可能會隨時間推移或累積應用而限制其使用的量投予。

例如，大腸直腸癌(CRC)，其為世界上第四常見及第二致命的癌症，四十多年來，一直用5-氟尿嘧啶(5-FU)作為轉移性大腸直腸癌(mCRC)之基本治療，通常與甲醯四氫葉酸(leucovorin)並於伴隨或不伴隨奧沙利鉑(oxaliplatin)下的組合使用作為標準第一線療法(Cunningham等人, Ann Oncol 2009,20, 244-50)。然而，已有報導指出接受5-FU之化學療法之患者的平均反應率僅為約23% (Sotos等人, Cancer Treat Rev 1994,20, 11-49)。伊立替康(Irinotecan)為7-乙基-10羥基喜樹鹼(SN-38)之前驅藥，其係對於氟尿嘧啶難治性(fluorouracil-refractory)IV期CRC患者而言作為二線療法，為一重要化療試劑，但一項II期研究表明，單藥劑伊立替康對氟尿嘧啶耐藥患者之反應率僅為約27% (Shimada等人, J Clin Oncol 1993,11, 909-13)。另外，基於5-FU之方案及伊立替康的選擇性不佳，會在mCRC療法中引起諸如嗜中性球減少症、腹瀉、噁心、嘔吐及口腔炎等不良反應(Falcone等人, J Clin Oncol 2001,19, 3456-62)。

因此，需要一些改進方法將藥物轉運靶向至特定器官、組織、細胞及/或亞細胞細胞器。

本發明提供一種新穎複合體或其醫藥學上可接受之鹽，其中複合體具活性的醫藥部分或其前驅藥、靶向模組及其間之連接基團。複合體或其醫藥學上可接受之鹽適用於治療個體之疾病、復發或進展或經診斷患有疾病之個體在相關時段內，增加其存活之可能性。

在本發明之第一態樣之一個實施例中，複合體由式I表示， A- L- B(I) 或其醫藥學上可接受之鹽，其中 A為具活性的醫藥部分或其前驅藥； B為靶向模組； L為由式II表示之連接基團 (II)；其中 R ₁為-SR ₂或； R ₂為R ₃、-SR ₃或； R ₃為-(CH ₂) _n-R ₄； R ₄為R ₅、-OC(O)-R ₅、-C(O)-R ₅、-C(O)NH-R ₅、-C(O)-、-NHC(O)-R ₅、-OC(O)O-R ₅或-C(O)-Z-NH-伸苯基-R ₅； R ₅為-(CH ₂) _m-； Z為-Val-Cit-、-Phe-Lys-、-Val-Ala-或-Gly-Phe-Leu-Gly-； p為2至9之整數； n為2至9之整數； m為0或1；且該虛線為共價鍵；其限制條件為該複合體不為選自由以下組成之群的化合物：。

在複合體或其醫藥學上可接受之鹽之一個實施例中， A為具抗癌治療的部分。在一些實施例中，A係選自5-氟尿嘧啶(5-FU)、7-乙基-10-羥基喜鹼(SN-38)、伊立替康(irinotecan)、氯尼達明(lonidamine)、博萊黴素(bleomycin)、絲裂黴素(mitomycin)、順鉑(cisplatinum)、阿黴素(doxorubicin)、美登素(DM-1)、紫杉醇(taxol)、卡巴他賽(cabazitaxel)、氟尿苷(floxuridine)或氟脫氧尿苷(FdUMP)。

在複合體或其醫藥學上可接受之鹽之一個實施例中， B為具葡萄糖轉運體特異性的結合劑。在一些實施例中， B可選自視情況經葡萄糖、甘露糖或2-氟-葡萄糖取代之根皮素。

在複合體或其醫藥學上可接受之鹽之一個實施例中，R ₁為-SR ₂；R ₂為；R ₃為-(CH ₂) _n-R ₄；R ₄為-C(O)-R ₅；R ₅為-(CH ₂) _m-；p為2；n為5；且m為0。

在複合體或其醫藥學上可接受之鹽之一個實施例中，R ₁為-SR ₂；R ₂為-SR ₃；R ₃為-(CH ₂) _n-R ₄；R ₄為-OC(O)-R ₅或-OC(O)O-R ₅；R ₅為-(CH ₂) _m-；p為2；n為2；且m為0。

在複合體或其醫藥學上可接受之鹽之一個實施例中，R ₁為SR ₂；R ₂為；R ₃為-(CH ₂) _n-R ₄；R ₄為-C(O)-Z-NH-伸苯基-R ₅；R ₅為-(CH ₂) _m-；Z為-Val-Cit-；p為2；n為4；且m為1。

在複合體或其醫藥學上可接受之鹽之一個實施例中，R ₁為；R ₃為-(CH ₂) _n-R ₄；R ₄為-C(O)O-R ₅；R ₅為-(CH ₂) _m-；p為2；n為3；且m為1。

在複合體或其醫藥學上可接受之鹽之一個實施例中，R ₁為-SR ₂；R ₂為；R ₃為-(CH ₂) _n-R ₄；R ₄為-C(O)O-R ₅；R ₅為-(CH ₂) _m-；p為2；n為4；且m為1。

在複合體或其醫藥學上可接受之鹽之一個實施例中，R ₁為-SR ₂；R ₂為-SR ₃；R ₃為(CH ₂) _n-R ₄；R ₄為-C(O)O-R ₅；R ₅為-(CH ₂) _m-；p為2；n為3；且m為1。

在複合體或其醫藥學上可接受之鹽之一個實施例中，複合體由式III表示， (III)，其中 R為OH或。

在複合體或其醫藥學上可接受之鹽之一個實施例中，複合體選自由以下組成之群：其中R為OH或。

本發明之第二態樣之一個實施例為一種治療個體之疾病、復發或進展或經診斷患有疾病之個體在相關時段內，增加其存活之可能性的方法，其包含向個體投予如本文所述之複合體或其醫藥學上可接受之鹽。

在該方法之一個實施例中，疾病為選自實體癌或液體癌或其轉移之癌症。癌症之實例包括但不限於鱗狀細胞癌；肺癌，包括小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺腺癌及肺鱗狀癌；腹膜癌；肝細胞癌；胃癌或胃臟癌，包括胃腸癌；胰臟癌；神經膠母細胞瘤；子宮頸癌；卵巢癌；肝癌；膀胱癌；肝腫瘤；乳癌；大腸癌；直腸癌；大腸直腸癌；子宮內膜癌或子宮癌；唾液腺癌；腎臟癌或腎癌；前列腺癌；外陰癌；甲狀腺癌；肝癌；肛門癌；陰莖癌；頭頸癌；淋巴瘤；白血病；骨髓瘤；及骨髓增生性贅瘤。

在方法之一個實施例中，個體難以用藥物治療或對藥物具有耐藥性。

在方法之一個實施例中， A為具活性的醫藥部分或其前驅藥，其中該具活性的醫藥部分為具抗癌治療的部分。在一些實施例中， A選自5-氟尿嘧啶(5-FU)、7-乙基-10-羥基喜鹼(SN-38)、伊立替康(irinotecan)、氯尼達明(lonidamine)、博萊黴素(bleomycin)、絲裂黴素(mitomycin)、順鉑(cisplatinum)、阿黴素(doxorubicin)、美登素(DM-1)、紫杉醇(taxol)、卡巴他賽(cabazitaxel)、氟尿苷(floxuridine) 或氟脫氧尿苷(FdUMP)。

在方法之一個實施例中， B為具葡萄糖轉運體特異性的結合劑。在一些實施例中， B為視情況經葡萄糖、甘露糖或2-氟-葡萄糖取代之根皮素。

在方法之一個實施例中，複合體由式III表示 (III)，其中 R為OH或。

在方法之一個實施例中，複合體選自由以下組成之群：其中R為OH或。

本發明之第三態樣之一個實施例為一種組合物，其包含治療有效量之如前述之複合體或其醫藥學上可接受之鹽及醫藥學上可接受之載劑、賦形劑或媒劑。

此等及其他態樣由以下較佳實施例之描述結合以下附圖而將變得顯而易見，但其中可進行變化及潤飾而不悖離本發明之新穎構思的精神及範疇。

定義

除非另外定義，否則本文中所用之所有技術及科學術語具有與本發明所屬領域之一般熟習此項技術者通常所理解相同的含義。在發生衝突之情況下，以本文獻(包括定義)為準。除非內容另外明確規定，否則如本說明書及隨附申請專利範圍中所使用，單數形式「一(a/an)」及「該(the)」包括複數個參考物。

在本說明書通篇中，除非本文另有規定，否則字語「包含(comprise)」或諸如「包含(comprises)」或「包含(comprising)」之變化形式應理解為暗示包括所陳述之要素或整數或要素或整數之群，但不排除任何其他要素或整數或要素或整數之群。

如本文所用，術語「複合體」係指兩個或兩個以上的分子以共價連接為更大的化合物。在一些實施例中，複合體包括與一或多種治療分子共價連接之一或多種特異性結合分子。

如本文所使用，術語「式I」及「式III」在下文中可稱為「本發明之複合體」。此類術語亦經定義以包括式I或III之複合體之所有形式，包括其水合物、溶劑合物、異構體、結晶及非結晶形式、同晶型物、多晶型物及代謝物。舉例而言，本發明之複合體或其醫藥學上可接受之鹽可以非溶劑化及溶劑化形式存在。當複合體緊密地結合溶劑或水時，其具有明確的化學計量，並不受濕度影響。然而複合體與溶劑或水產生弱結合時(如在通道溶劑型合物及吸濕化合物)，水/溶劑含量將取決於濕度及乾燥條件。在此等情況下，通常形成非化學計量的複合體。

式I或III之立體異構體包括順式及反式異構體、光學異構體(諸如R及S對映異構體、非對映異構體)、幾何異構體、旋轉異構體、構形異構體及互變異構體，包括呈現一種以上類型之異構現象的化合物；及其混合物(諸如外消旋體及非對映異構對)。亦包括酸加成鹽或鹼加成鹽，其中相對離子為光學活性的(例如D-乳酸鹽或L-離胺酸)或外消旋的(例如DL-酒石酸鹽或DL-精胺酸)。

當任一種外消旋體結晶時，可能有兩種不同類型之晶體。第一種類型為上文所提及之外消旋化合物(真實外消旋體)，其中產生含有等莫耳量之兩種對映異構體的一種均質形式晶體。第二種類型為外消旋混合物或聚結物，其中等莫耳量產生各包含單一對映異構體的兩種晶體形式。

式I或III之複合體可呈現互變異構現象；此類互變異構體亦視為本發明化合物。式I或III之複合體之範疇內包括所有此類互變異構形式及其混合物。互變異構體係以溶液中互變異構集合之混合物形式存在。在固體形式中，通常，一種互變異構體佔主導。儘管可描述一種互變異構體，但本發明亦包括式I或III之複合體之所有互變異構體及其鹽。

如本文所用，「醫藥學上可接受之鹽」包括本文所述之化合物中可能存在的酸性或鹼性基團之鹽，另有定義者除外。本質上呈鹼性的本發明化合物能夠與各種無機及有機酸形成多種鹽。可用於製備此類鹼性化合物的醫藥學上可接受之酸加成鹽的酸為形成無毒酸加成鹽(亦即含有藥理學上可接受的陰離子之鹽)的彼等酸，該等鹽諸如乙酸酯鹽、苯磺酸鹽、苯甲酸鹽、碳酸氫鹽、硫酸氫鹽、酒石酸氫鹽、硼酸鹽、溴化物、乙二胺四乙酸鈣、樟腦磺酸鹽、碳酸鹽、氯化物、棒酸鹽、檸檬酸鹽、二鹽酸鹽、乙二胺四乙酸鹽、乙二磺酸鹽(edislyate)、依託酸鹽(estolate)、乙磺酸鹽、乙基丁二酸鹽、反丁烯二酸鹽、葡庚糖酸鹽、葡糖酸鹽、麩胺酸鹽、乙內醯胺苯胂酸鹽、己基間苯二酚酸鹽、海卓胺(hydrabamine)、氫溴酸鹽、鹽酸鹽、碘化物、羥乙磺酸鹽、乳酸鹽、乳糖酸鹽、月桂酸鹽、蘋果酸鹽、順丁烯二酸鹽、杏仁酸鹽、甲磺酸鹽、甲基硫酸鹽、半乳糖二酸鹽、萘磺酸鹽、硝酸鹽、油酸鹽、草酸鹽、雙羥萘酸鹽(恩波酸鹽(embonate))、棕櫚酸鹽、泛酸鹽、磷酸鹽/二磷酸酯、聚半乳糖醛酸鹽、水楊酸鹽、硬脂酸鹽、次乙酸鹽、丁二酸鹽、丹寧酸鹽(tannate)、酒石酸鹽、茶氯酸鹽、甲苯磺酸鹽、三乙碘化物及戊酸鹽。

如本文所用，「具活性的醫藥部分」係指具有生理學、醫藥、藥理學或治療作用之活性醫藥成分(API)之部分。該術語意欲包括呈任何適合形式之API，諸如其醫藥學上可接受之鹽、複合物、溶劑合物或前驅藥，或若相關，呈任何立體異構體形式，包括任何對映異構或外消旋形式或以上任一者之組合。API之實例包括但不限於激素、肽、小分子或其前驅藥。在另一態樣中，具活性的醫藥部分可為包含通常在活有機體中合成之一或多個化學基團的生物分子，包括但不限於胺基酸、核苷酸、多醣、單糖、脂質或其組合。

如本文所用，術語「前驅藥」係指呈基於該物質、分子或實體之形式以在化學或物理變化之後充當治療劑的任何物質、分子或實體。前驅藥可在向哺乳動物個體投予之前、期間或之後以某種方式共價連接或螯合且釋放或轉化為具活性的醫藥部分。前驅藥可藉由以一定方式修飾化合物中所存在之官能基以使得該修飾可在常規操作中或在活體內裂解得到母化合物來製備。前驅藥包括羥基、胺基、巰基或羧基連接至任何基團之化合物，當向哺乳動物個體投予時，該任何基團裂解以分別形成羥基、胺基、巰基或游離羧基。

如本文所用，術語「靶向模組」係指能夠直接或間接結合至特定目標(例如細胞表面上之受體或組織中之蛋白質)，因此能夠促進本發明之分子構築體遞送至特定目標。在某些實例中，靶向模組可將分子構築體引至鄰近於目標細胞之位置。在其他情況下，靶向模組可特異性結合至目標細胞表面上之分子；或靶向模組可特異性結合至能夠特異性結合至目標細胞表面上之分子的第二分子。在某些情況下，一旦靶向模組與所特定目標接合，則靶向模組可內化本發明之分子構築體，允許其移動至目標細胞之細胞質中。靶向模組可為針對細胞表面受體之抗體或配位體；或結合至上述抗體或配位體之分子，藉此使本發明之分子構築體間接靶向目標位點(例如所選細胞之表面)。

如本文所用，術語「葡萄糖轉運體」係指鈉依賴型性葡萄糖轉運體(SGLT)或易化型葡萄糖轉運體(GLUT)。SGLT 藉由將糖跨細胞膜之向上運輸與鈉之向下運輸而將葡萄糖逆濃度梯度地運入細胞中。上皮細胞頂端面之向內鈉梯度之維持係由ATP驅動的鈉跨細胞抗腔表面上之底側面的主動擠出。根皮苷特異性且競爭性地抑制SGLT-1及SGLT-2兩者，且不影響GLUT 1到12。

在GLUT 1至12中，胰島素非依賴型葡萄糖轉運體GLUT-1在人類癌症中廣泛過度表現，且此等蛋白質在腫瘤活檢樣品中之高表現量與不良癌症預後相關，使其成為有吸引力的治療靶標。根皮素為熟知且天然豐富的GLUT-1抑制劑。此外，目前已鑑定出許多葡萄糖轉運體1-4抑制劑，例如Cytochalasin B、WZB117、GLUT-1、GLUT-2、BAY-876、Chromopynone-1、Glutor、Glupin、NV-5440，如ChemBioChem 2020, 21, 45-52中所揭示。

如本文所用，「具抗癌治療的部分」係指包括用於治療癌症之所有化學或物理干預之抗癌藥物的部分。抗癌藥物包括化學治療劑，諸如細胞毒性劑或免疫毒性劑，但亦包括放射性標記之抗體、肽及化學物質，其可能發射α、β和γ射線以及電子。放射治療進一步包括足夠高能量的光子、帶電粒子，例如電子、正電子、μ子、質子、α粒子及來自加速器之重原子核，但亦包括中子及γ射線。在一些實施例中，抗癌藥物可選自5-氟尿嘧啶(5-FU)、7-乙基-10-羥基喜鹼、伊立替康、氯尼達明、博萊黴素、絲裂黴素、順鉑、阿黴素、美登素、紫杉醇、卡巴他賽、氟尿苷或氟脫氧尿苷。

如本文所用，「經取代」意謂指定原子上之一或多個氫經所選擇的指定基團置換，其限制條件為不超過指定原子在現有情況下之正常原子價，且該取代能產生穩定化合物。

如本文所用，「視情況經取代」係指未經取代或經一或多個取代基取代之基團。

如本文所用，「治療(treatment)」及「治療(treating)」涵蓋預防性(亦即，防治性)或治療性(亦即，洽愈性及/或姑息劑)治療兩者。因此，術語「治療(treatment)」及「治療(treating)」包含已產生該病狀，尤其呈明顯形式之患者的治療性治療。治療性治療可為症狀治療以減輕具體適應症之症狀，或可為病因治療以逆轉或部分逆轉適應症之病況或阻止或減緩疾病之進展因此，本發明之複合體、組合物及方法可例如用作一段時間內之治療性治療以及慢性療法。另外，術語「治療(treatment)」及「治療(treating)」包含防治性治療，亦即處於產生上文提及之病狀之風險下之患者的治療，由此降低該風險。

如本文所用，「治療有效量」意謂(i)治療或預防特定疾病或病狀，(ii)減輕、改善或消除特定疾病或病狀之一或多個症狀，或(iii)預防或延緩本文所述之特定體疾病或病狀之一或多種症狀之發病的本發明複合體之量。

「癌症」、「腫瘤」及類似術語包括癌變前、贅生性、轉型及癌細胞，且可指實體固態腫瘤，或非實體固態癌(參見例如Edge等人 AJCC Cancer Staging Manual (第7版 2009)；Cibas and Ducatman Cytology: Diagnostic principles and clinical correlates (第3版 2009))。癌症包括良性贅瘤及惡性贅瘤(異常生長)兩者。「轉型」係指自發的或誘發的表現型變化，例如，細胞之永生化、形態變化、異常細胞生長、減少的接觸抑制、固著及/或惡性病(參見Freshney, Culture of Animal Cells a Manual of Basic Technique (第3版 1994))。儘管轉型可由經轉型病毒之感染及新基因組DNA之併入或外源DNA之攝入引起，其亦可以自發方式或在暴露於誘癌物之後產生。

複合體及其通用製備程序

在本發明之第一態樣之一個實施例中，複合體由式I表示， A- L- B(I) 或其醫藥學上可接受之鹽。

A為具活性的醫藥部分或其前驅藥；特定言之，具抗癌治療的部分，且在本發明之一些實施例中，5-氟尿嘧啶(5-FU)、7-乙基-10-羥基喜鹼、伊立替康、氯尼達明、博萊黴素、絲裂黴素、順鉑、阿黴素、美登素、紫杉醇、卡巴他賽、氧氟苷或氟脫氧尿苷。

B為靶向模組。在本發明之一些實施例中， B為靶向腫瘤細胞之靶向模組，諸如具葡萄糖轉運體特異性的結合劑。在一些實施例中，葡萄糖轉運體為鈉依賴性葡萄糖轉運體(SGLT)或易化葡萄糖轉運體(GLUT)。在一些另外的實施例中， B可選自視情況經葡萄糖、甘露糖或2-氟-葡萄糖取代之根皮素。

與非癌細胞相比，癌細胞比粒線體氧化磷酸化更依賴於厭氧糖酵解途徑，亦即所謂的瓦爾堡效應(Warburg effect)。有兩類葡萄糖轉運體能使癌細胞攝取葡萄糖：(i)易化型葡萄糖轉運體GLUT (1至4)，及(ii)次級活性鈉-葡萄糖共轉運體(SGLT-1至2)。雖然不希望受理論限制，但咸信腫瘤細胞過度表現糖酵解酶及葡萄糖轉運體，兩者均與癌症之侵襲性及轉移潛能相關。發現來自用5-FU治療之CRC患者之標本在難以用療法治療之患者中具有較高的葡萄糖轉運體轉錄水準，且已知葡萄糖轉運體之過度表現經由丙酮酸清除自由基而與大腸癌細胞中之5-FU抗性相關。

根皮素係一種熟知且天然豐富的GLUT-1抑制劑，已對其抗癌活性進行了研究，且在臨床前研究中證明當與抗癌劑組合投予時能夠克服抗癌劑之治療抗性。根皮苷係一種SGLT-1抑制劑，其與根皮素之不同之處在於其在苯基部分之鄰羥基處帶有額外的葡萄糖複合體。由於此等葡萄糖轉運體在多種細胞及組織中生理表現，因此根皮素或根皮苷具有選擇性靶向癌細胞上之SGLT-1或GLUT-1的能力。

L為由式II表示之連接基團 (II)；其中 R ₁為-SR ₂或； R ₂為R ₃、-SR ₃或； R ₃為-(CH ₂) _n-R ₄； R ₄為R ₅、-OC(O)-R ₅、-C(O)-R ₅、-C(O)NH-R ₅、-C(O)-、-NHC(O)-R ₅、-OC(O)O-R ₅或-C(O)-Z-NH-伸苯基-R ₅； R ₅為-(CH ₂) _m-； Z為-Val-Cit-、-Phe-Lys-、-Val-Ala-或-Gly-Phe-Leu-Gly-； p為2至9之整數； n為2至9之整數； m為0或1；且該虛線為共價鍵。

L在腫瘤環境中為氧化還原敏感的及/或生物可裂解的。當複合體存在於正常環境中時， L為完整的且連接 A與 B。當複合體存在於富含GSH或組織蛋白酶B之環境中時， L經裂解，且釋放 A以展現醫藥活性。

L之實施例包括但不限於氧化還原敏感性及/或生物可裂解連接基團、丁二醯亞胺基硫醚、二硫鍵連接基團、三唑、纈胺酸-瓜胺酸二肽、對胺基苯甲基間隔基及醚鍵。

在一個實施例中， R ₁為-SR ₂；R ₂為；R ₃為-(CH ₂) _n-R ₄；R ₄為-C(O)-R ₅；R ₅為-(CH ₂) _m-；p為2；n為5；且m為0。

在一個實施例中，R ₁為-SR ₂；R ₂為-SR ₃；R ₃為-(CH ₂) _n-R ₄；R ₄為-OC(O)-R ₅或-OC(O)O-R ₅；R ₅為-(CH ₂) _m-；p為2；n為2；且m為0。

在一個實施例中，R ₁為SR ₂；R ₂為；R ₃為-(CH ₂) _n-R ₄；R ₄為-C(O)-Z-NH-伸苯基-R ₅；R ₅為-(CH ₂) _m-；Z為-Val-Cit-；p為2；n為4；且m為1。

在一個實施例中，R ₁為；R ₃為-(CH ₂) _n-R ₄；R ₄為-C(O)O-R ₅；R ₅為-(CH ₂) _m-；p為2；n為3；且m為1。

在一個實施例中，R ₁為-SR ₂；R ₂為；R ₃為-(CH ₂) _n-R ₄；R ₄為-C(O)O-R ₅；R ₅為-(CH ₂) _m-；p為2；n為4；且m為1。

在一個實施例中，R ₁為-SR ₂；R ₂為-SR ₃；R ₃為(CH ₂) _n-R ₄；R ₄為-C(O)O-R ₅；R ₅為-(CH ₂) _m-；p為2；n為3；且m為1。

在本發明之一些實施例中，複合體不為選自由以下組成之群的化合物：。

在複合體或其醫藥學上可接受之鹽之一個實施例中，複合體由式III表示 (III)，其中 R為OH或。

在本發明之一些實施例中，化合物 4-7、 30-31及 44-45，其中根皮素 3(或根皮苷 2)經由氧化還原敏感性連接基團連接至5-FU、SN-38或伊立替康。在化合物 4-5中，使用丁二醯亞胺基硫醚(中等敏感性連接基團)，而化合物 6-7及 30-31替代地引入二硫鍵連接基團(高靈敏度性連接基團)。化合物 8-9及 42-43，乃引入穩定的三唑連接基團以構成複合體亦被提供。由於組織蛋白酶B於腫瘤微環境中之過度表現，由纈胺酸-瓜胺酸二肽、對-胺基苯甲基間隔基及醚鍵組成之化合物 37及 38藉由組織蛋白酶B活化及1,6-脫去反應而釋放SN-38。

本發明之式I化合物係根據通用化學合成程序製備。本發明化合物之實施例的製備說明如下。

本發明之醫藥組合物及治療方法

在本發明之一些實施例中，已設計、合成及進行生物學評估此一系列藥物複合體，其包含與丁二醯亞胺基硫醚、二硫鍵、三唑或組織蛋白酶B敏感性連接基團接合之5-FU、SN-38、伊立替康及根皮苷或根皮素。在5-FU系列前驅藥中，大多數對CRC細胞株之效力低於5-FU；然而，含有5-FU、根皮素及二硫鍵之化合物 7在人類血漿中展示良好穩定性(t _1/2=13 h)，且在5 mM GSH存在下展示不穩定性(t _1/2=10.3 h)，且其對HCT-116及HT-29細胞株之細胞毒性與5-FU相似。在原位小鼠CRC模型中，化合物 7展現極佳抗腫瘤功效及低毒性，可在不減輕小鼠體重之情況下將腫瘤體積減小67% (5-FU僅可見減小33%)。高組織穿透及GLUT-1靶向功效所造成的大腸靶向效果，與5-FU相比，化合物 7展現相當大的腫瘤抑制的功效。在SN-38系列的前驅藥中，儘管化合物 31在細胞分析中展示與SN-38相似的細胞毒性，但藉由經由腹膜注射，可將腫瘤體積減小70% (伊立替康僅減小27%)，其中，化合物31中SN38含量僅為伊立替康中SN38含量的65%，其展現比伊立替康更好的抗腫瘤功效。當僅給與43%或22% SN-38時(劑量依存性)，化合物 38(40或20 mg/kg)經由靜脈內注射後，會以劑量依賴性方式展現比伊立替康(40 mg/kg)更好的治療功效。此外，化合物 31及 38在治療期間均不減輕小鼠體重。因此，提出用與麩胱甘肽敏感性及/或組織蛋白酶B連接基團結合具細胞毒性小分子藥物與具GLUT靶向之複合體可作為治療CRC之新穎策略。

在一個實施例中，本發明提供一種治療個體之癌症的方法，其包含向個體投予有效量之本發明複合體。此類方法包括以足以治療病況之量向個體投予本發明複合體。舉例而言，癌症但不限於由以下各者組成之群：鱗狀細胞癌；肺癌，包括小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺腺癌及肺鱗狀癌；腹膜癌；肝細胞癌；胃癌或胃臟癌，包括胃腸癌；胰臟癌；神經膠母細胞瘤；子宮頸癌；卵巢癌；肝癌；膀胱癌；肝腫瘤；乳癌；大腸癌；直腸癌；大腸直腸癌；子宮內膜癌或子宮癌；唾液腺癌；腎臟癌或腎癌；前列腺癌；外陰癌；甲狀腺癌；肝癌；肛門癌；陰莖癌；頭頸癌；淋巴瘤；白血病；骨髓瘤；及骨髓增生性贅瘤。

可將複合體調配成可經口、非經腸、藉由吸入噴霧、局部、經直腸、經鼻、頰內、經陰道或經由植入式貯器(implanted reservoir)投予的醫藥組合物。如本文所使用之術語「非經腸」包括皮下、靜脈內、肌肉內、關節內、滑膜內、胸骨內、鞘內、肝內、病灶內及顱內注射或輸注技術。熟習此項技術者熟悉醫藥學上可接受之載劑及稀釋劑。對於調配為液體溶液之組合物，可接受之載劑及/或稀釋劑包括生理鹽水及無菌水，且可視情況包括抗氧化劑、緩衝劑、抑菌劑及其他常見添加劑。亦可將組合物調配為丸劑、膠囊、顆粒劑或錠劑，其除了本發明化合物之外，亦含有稀釋劑、分散劑及界面活性劑、黏合劑及潤滑劑。

在本發明的範疇內之醫藥組合物包括本發明之化合物與藥學上可接受之載劑組合之所有組合物。在一個實施例中，化合物以可有效地實現其預期療法目的之量存在於組合物中。儘管個別需要可變化，但各化合物之有效量之最佳範圍之判定在此項技術之技藝內。

本發明之複合體可適用於與一或多種第二治療劑組合，尤其是適用於治療及/或預防先前所呈現之病況及疾病的治療劑。

在一個實施例中，複合體以可有效實現其預期治療目的之量存在於組合物中。儘管個別需要可變化，但各化合物之有效量之最佳範圍之判定在此項技術之技藝內。

本發明之複合體可適用於與一或多種第二治療劑組合，尤其是適用於治療及/或預防本文中所呈現之病況及疾病的治療劑。

對於經口投藥，本發明之醫藥組合物適合的方式包括粉劑、顆粒、丸劑、錠劑、口含錠、咀嚼片、凝膠及膠囊以及液體、糖漿劑、懸浮液、酏劑及乳化液。此等組合物亦可包括抗氧化劑、調味劑、防腐劑、懸浮劑、增稠劑及乳化劑、著色劑、調味劑及其他醫藥學上可接受之添加劑。用於經口投予之調配物可調配為速釋或緩釋，其中緩釋包括經延遲、維持、經脈衝、經控制、靶向及程控釋放。

對於非經腸投予，本發明之複合體係經由靜脈內、動脈內、腹膜內、肌肉內、皮下或其他注射或輸注直接投予至血流中、肌肉中或內部器官中。可在水性注射溶液中製備非經腸調配物，其可含有除本發明之化合物以外之緩衝劑、抗氧化劑、抑菌劑、鹽、碳水化合物及通常在此等溶液中所採用之其他添加劑。非經腸投予可為速釋或緩釋(諸如注射或植入儲存物)。

本發明之複合體亦可經體表、經真皮(真皮內)或經皮投予至皮膚或黏膜。典型的調配物包括凝膠、水凝膠、洗劑、溶液、乳膏、軟膏、敷料、泡沫劑、皮膚貼片、粉片、植入劑及微乳劑。本發明化合物亦可經由吸入或鼻內投予，諸如用乾粉、氣溶膠噴霧或滴劑來投予。本發明化合物之額外投予途徑包括陰道內及經直腸(藉助於栓劑、子宮托或灌腸劑)及經眼及經耳。實例

化學方法

合成途徑

化合物 4-9 、 30-31 、 37-38及 42-45係從中心連接基團依序建構而成(流程1)。將三乙二醇及甲苯磺醯氯(TsCl)添加至四氫呋喃(THF)/H ₂O中以生成甲苯磺醯化中間物，接著添加含硫代乙酸鉀(potassium thioacetate)/丙酮於其中。在回流下加熱此混合物1小時之後，獲得化合物 11(產率85%)。接者，利用碳酸鉀(0.05 M)使化合物 11進行水解，得到化合物 12(產率80%)，再藉由2-甲基-2-丙硫醇(2-methyl-2-propanethiol)保護其硫醇，得到化合物 13(產率71%)。在甲磺酸化及溴取代反應之後，獲得溴化化合物 14(產率57%)。使用碳酸鉀作為鹼，用化合物 14使根皮苷 3進行烷基化，得到主產物 15(產率54%)。此烷基化之區域選擇性可能係由於苯甲基對位處之羰基的拉電子效應；以及此位置具有較小的立體障礙。接著，利用4.0 N NaOH及三(羧乙基)膦((Tris(2-chloroethyl) phosphate，TCEP)使三級丁基硫醇基脫除保護基，得到化合物 16(產率86%)，其在90℃下用1.0 N HCl回流3小時，用碳酸氫鈉(NaHCO ₃)水溶液淬滅，得到化合物 17(產率73%)。

含疊氮化物之根皮苷衍生物 20及及根皮素衍生物 21也是用類似的前述方法所製得。在0℃下，將甲磺醯氯化物(MsCl)緩慢添加至攪拌中之含三乙二醇及三乙胺的二氯甲烷溶液。20分鐘後，濃縮反應混合物且將殘餘物溶解於乙醇中，並添加疊氮化鈉(NaN ₃)於其中。經回流24小時之後，獲得具疊氮化物連接基團之化合物 18。將此甲磺酸化，且接著使用溴化鋰使甲磺醯基與溴交換，得到化合物 19，其再與根皮苷反應，得到所需中間物 20。水解後，獲得根皮素衍生物 21。流程 1.根皮苷及根皮素複合體之合成途徑

有鑒於 N-1烷基取代之5-FU衍生物之細胞毒性不佳，且在活體內不轉化為5-FU之問題，，因此將酯官能基設計至連接基團中，預期此酯官能基將可在腫瘤微環境中經內源性酯酶裂解。將5-FU與甲醛先進行反應，接著再分別與6-順丁烯二醯亞胺己酸、4-(吡啶-2-基二硫基)-丁酸或4-戊炔酸於偶合劑二環己基碳二亞胺(DCC)及4-二甲胺基吡啶(DMAP)的反應條件下，得到化合物 22-24(流程2)。化合物 16及化合物 17分別與含順丁烯二醯亞胺之5FU ( 22)結合，以得到化合物 4及 5；且與含羧酸的化合物 22結合，分別得到化合物 6及 7。化合物 20及 21在點擊條件下(Cu(I)催化之疊氮-炔環加成反應)分別與含炔之化合物 24結合，得到化合物 8及 9。流程 2.複合體 4-9之合成途徑

化合物 30及 31使用巰基乙醇(mercaptoethanola，化合物 25)作為起始物質經由四個步驟所合成(流程3)。首先，化合物 25與2,2'-二硫化聯吡啶(aldrithiol-2)在乙酸條件下進行偶合反應，得到化合物 26。接著其次，使化合物 26之羥基與4-硝基氯甲酸苯酯(p-nitrophenyl chloroformate)反應，得到化合物 27。化合物 27與化合物 28(SN-38)反應，得到化合物 29，在氮氣條件下，分別添加含化合物 16或化合物 17之四氫呋喃，以得到化合物 30或 31。

流程4為化合物 37及 38之合成路徑。化合物 32(Fmoc-val-osu)與L-瓜胺酸(L-citrulline)在四氫呋喃/水/二甲氧甲烷(DMM)中反應，利用碳酸氫鈉作為鹼，得到化合物 33(Fmoc-val-cit)。接著在N-乙氧羰基-2-乙氧基-1,2-二氫喹啉(N-ethoxycarbonyl-2-ethoxy-1,2-dihydroquinoline ，EEDQ)存在下使化合物 33與對胺基苯甲醇( p-aminobenzyl) alcohol反應，得到化合物 34(Fmoc-val-cit-pab-OH)。為合成含有醚鍵之化合物 36，利用添加含濃度33% HBr之冰乙酸，將化合物34上之苯甲醇置換成溴離去基，得到中間物 35。將中間物 35添加至含化合物 28及碳酸銫之二甲基甲醯胺(DMF)中之混合物中。攪拌20分鐘後，將哌啶添加至反應混合物中以去除Fmoc保護基，以在一鍋化反應中得到val-cit-pab- O-SN-38。接著使Val-cit-pab- O-SN-38與三乙胺(TEA)及5-順丁烯二醯亞胺基戊酸-NHS在DMF中反應，得到化合物 36。最後，化合物 36分別與化合物 16或 17在甲醇中進行偶合反應，得到化合物 37或 38。

流程5揭示化合物 42-45之合成步驟。伊立替康分別與4-戊炔酸或6-順丁烯二醯亞胺基己酸在DCC及DMAP的條件下進行偶合反應，得到化合物 40或 41。接著在點擊條件下使含炔之化合物 40分別與化合物 20或 21結合，得到化合物 42及 43。另一方面，含順丁烯二醯亞胺之化合物 41分別與化合物 16或化合物 17結合，分別得到化合物 44及 45。流程 3.複合體 30及 31之合成途徑流程 4.複合體 37及 38之合成途徑流程 5.複合體 42-45之合成途徑

通用化學品。

合成所使用的試劑及溶劑均為試劑級且不需進一步純化即可使用。HPLC分析係使用具BDS HYPERSIL C18 (5 μm，4.6×250 mm)管柱之HITACHID-2000 Elite系統。移動相為乙腈及雙蒸水(dd H ₂O)或磷酸二氫鈉(NaH ₂PO ₄)緩衝液之混合物，其再在使用之前先利用0.45 µm膜過濾器過濾。管柱移動相以1.0 mL/min之流動速率進行沖提。藉由在25℃下量測254nm或265 nm處之吸收來監測析出液。所有最終產物之純度均藉由HPLC量測，其需大於95%才能於其活體外及活體內使用。薄層層析(0.25 mm，E. Merck矽膠60 F ₂₅₄)用於監測反應過程；藉由UV (狀態波長)或藉由用鈰或茚三酮染色且加熱使層析板可視化。在Bruker-AV-400 (400 MHz)及Bruker-AV-600 (600 MHz)上進行 ¹H及 ¹³C核磁共振(NMR)光譜的採集(參見補充資訊)。化學位移(δ)係以百萬分一為單位，以殘留溶劑的訊號峰作為標準： d ₆-DMSO的 ¹H δ = 2.50， ¹³C δ = 39.52；CD ₃OD的 ¹H δ = 3.31， ¹³C δ = 49.00； d ₆-丙酮的 ¹H δ = 2.05， ¹³C δ = 29.84, 206.26；CDCl ₃的 ¹H δ = 7.26， ¹³C δ = 77.16。耦合常數( J)的單位為赫茲(Hz)。峰的分裂模式分為s (單峰)、d (二重峰)、dd (雙二重峰)、t (三重峰)、q (四重峰)及m (多重峰)。質譜係使用Burker bioTOF III測定且以荷值比(m/z)表示。

6-(3-((2-(2-(2-(3- 羥基 -4-(3-(4- 羥苯基 ) 丙醯基 )-5-((( 2S,3R,5S,6R)-3,4,5- 三羥基 -6-( 羥甲基 ) 四氫 - 2H- 哌喃 -2- 基 ) 氧基 ) 苯氧基 ) 乙氧基 ) 乙氧基 ) 乙基 ) 硫基 )-2,5- 二側氧基吡咯啶 -1- 基 ) 己酸 (5- 氟 -2,4- 二側氧基 -3,4- 二氫嘧啶 -1( 2H)- 基 ) 甲酯 (4)向含有化合物 16(35 mg，0.06 mmol)之無水甲醇(2 mL)溶液中添加化合物 22(21 mg，0.06 mmol)。將反應混合物攪拌10分鐘，且接著透過真空中濃縮以得到粗產物，再利用管柱層析(矽膠；二氯甲烷/甲醇=12/1)純化粗產物，得到呈泡沫狀之化合物 4(53 mg，0.06 mmol，產率大於99%)。 ¹H NMR(600 MHz, CD ₃OD) δ 7.88 (d, J= 6Hz, 1H, H-29), 7.07 (d, J= 8.2Hz, 2H, H-2, H-6), 6.67 (d, J= 8.2Hz, 2H, H-3, H-5), 6.31-6.29 (m, 1H, H-3'), 6.11-6.09 (m, 1H, H-5'), 5.61 (s, 2H, H-23), 5.11 (d, J= 7.2Hz, 1H, H-1''), 4.15 (t, J= 4.8 Hz, 2H), 4.03-4.00 (m, 1H), 3.90 (d, J= 4.2Hz, 1H), 3.81 (t, J= 4.2Hz, 2H), 3.77-3.70 (m, 3H), 3.67 (t, J= 4.2Hz, 2H), 3.63 (t, J= 5.4Hz, 2H), 3.50-3.45 (m, 5H), 3.42-3.30 (m, 3H), 3.17-3.11 (m, 1H), 3.09-3.05 (m,1H), 2.89-2.81 (m,3H), 2.50 (dd, J ₁= 15.6, 3Hz, 1H), 2.33 (t, J= 7.2Hz, 2H, H-21), 1.60-1.58 (m,2H, H-20), 1.52-1.50 (m, 2H, H-18), 1.28-1.26 (m, 2H, H-19) ppm; ¹³C NMR (150 MHz, CD ₃OD) 206.8, 178.9, 177.2, 174.6, 167.2, 166.2, 161.9, 159.6 (d, J _CCF= 26.1 Hz), 156.3, 151.0, 141.4 (d, J _CF= 232.5 Hz), 133.7, 130.5 (d, J _CCF= 33.1 Hz), 130.4 (2C), 116.0 (2C), 107.6, 102.1, 97.1, 95.2, 78.4, 74.7, 72.1, 71.7, 71.6, 71.2, 71.1, 70.4, 69.0, 62.5, 49.8, 47.0, 40.8, 39.4, 37.3, 34.3, 32.0, 30.6, 28.0, 26.9, 25.0 ppm；HRMS (ESI TOF-MS) C ₄₂H ₅₂FN ₃O ₁₈SNa ⁺[M+Na] ⁺: 計算值960.2843，實驗值：960.2847。

6-(3-((2-(2-(2-(3,5- 二羥基 -4-(3-(4- 羥苯基 ) 丙醯基 ) 苯氧基 ) 乙氧基 ) 乙氧基 ) 乙基 ) 硫基 )-2,5- 二側氧基吡咯啶 -1- 基 ) 己酸 (5- 氟 -2,4- 二側氧基 -3,4- 二氫嘧啶 -1( 2H)- 基 ) 甲酯 (5)向含有化合物 17(22 mg，0.05 mmol)之無水甲醇 (1 mL)溶液中添加化合物 22(19 mg，0.05 mmol)。將反應混合物攪拌10分鐘，接著再透過真空濃縮以得到粗產物，藉由管柱層析(矽膠；二氯甲烷/甲醇=12/1)純化粗產物，得到呈泡沫狀之化合物 5(39 mg，0.05 mmol，產率大於99%)。 ¹H NMR (400 MHz, CD ₃OD) δ 7.89 (d, J= 6 Hz, 1H, H-29), 7.05 (d, J= 8.4 Hz, 2H, H-2, H-6), 6.68 (d, J= 8.4 Hz, 2H, H-3, H-5), 5.92 (s, 2H, H-3', H-5'), 5.61 (s, 2H), 4.09 (t, J= 4.4 Hz, 2H), 4.09-3.99 (m, 1H), 3.81 (t, J =4.4 Hz, 2H), 3.76-3.72 (m, 2H), 3.69-3.64 (m, 4H), 3.42 (t, J= 7 Hz, 2H), 3.21-3.20 (m, 1H), 3.11-3.07 (m, 2H), 2.87-2.83 (m, 3H), 2.47 (dd, J= 14.8, 3.6 Hz, 1H), 2.34 (t, J= 7.3 Hz, 2H), 1.62-1.50 (m, 4H), 1.29-1.27 (m, 2H) ppm; ¹³C NMR(100 MHz, CD ₃OD) δ 206.7, 178.9, 177.1, 174.5, 166.5, 165.5 (2C), 159.7 (d, J _CCF= 27.4 Hz), 156.4, 151.3, 141.6 (d, J _CF= 227 Hz), 133.8, 130.5 (d, J _CCF= 32.2 Hz), 130.3(2C), 116.1 (2C), 106.1, 94.8 (2C), 72.1, 71.7, 71.6, 71.2, 70.4, 68.7, 47.4, 40.7, 39.4, 37.2, 34.3, 32.0, 31.2, 28.0, 26.9, 25.0 ppm；HRMS (ESI TOF-MS) C ₃₆H ₄₂FN ₃O ₁₃SNa ⁺[M+Na] ⁺: 計算值798.2315，實驗值：798.2319。

4-((2-(2-(2-(3- 羥基 -4-(3-(4- 羥苯基 ) 丙醯基 )-5-(((2S,3R,5S,6R)-3,4,5- 三羥基 -6-( 羥甲基 ) 四氫 -2H- 哌喃 -2- 基 ) 氧基 ) 苯氧基 ) 乙氧基 ) 乙氧基 ) 乙基 ) 二硫烷基 ) 丁酸 (5- 氟 -2,4- 二側氧基 -3,4- 二氫嘧啶 -1(2H)- 基 ) 甲酯 (6)向含有化合物 16(76 mg，0.13 mmol)之四氫呋喃溶液中添加化合物 23(50 mg，0.13 mmol)及磷酸鹽緩衝液(pH=8.0)。在室溫下攪拌混合物2小時。透過真空移除溶劑以得到粗產物，藉由管柱層析(矽膠；二氯甲烷/甲醇=15/1至10/1)純化粗產物，得到呈油狀之化合物 6(107 mg，0.13 mmol，產率大於99%)； ¹H NMR (400 MHz, CD ₃OD) δ 7.89 (t, J= 6.1 Hz, 1H), 7.07 (t, J= 8.4 Hz, 2H), 6.68 (t, J= 8.4 Hz, 2H), 6.32 (d, J= 2.2 Hz, 1H), 6.13 (d, J= 2.2 Hz, 1H), 5.62 (s, 2H), 5.10-5.03 (m, 1H), 4.64 (t, J= 7.2 Hz, 1H), 4.17-4.05 (m, 2H), 3.90 (dd, J= 12.4 Hz, 2.0 Hz, 1H), 3.83-3.95 (m, 2H), 3.59-3.73 (m, 7H),3.44-3.54 (m, 6H), 3.34-3.39 (m, 1H), 2.87 (m, 4H), 2.72 (t, J= 7.0 Hz, 2H), 2.49 (t, J= 7.1 Hz, 2H), 1.98 (t, J= 7.0 Hz, 2H); ¹³C NMR (100 MHz, CD ₃OD) δ 205.5, 172.9, 166.0, 165.0, 160.6, 159.8 (d, J _CCF= 27 Hz), 155.0, 149.8, 140.0 (d, J _CF= 233 Hz), 132.4, 129.3 (d, J _CCF= 35 Hz), 129.1(2C), 114.7 (2C), 106.3, 100.8, 95.8, 93.8, 77.1, 77.1, 73.4, 70.0(2C), 69.8, 69.5(2C), 67.6, 66.3, 61.1, 45.8, 38.0, 37.3, 31.7, 29.3, 23.6ppm；HRMS (ESI TOF-MS) C ₃₆H ₄₅FN ₂O ₁₆S ₂ ⁺[M+H] ⁺: 計算值845.2267，實驗值：845.2279。

4-((2-(2-(2-(3,5- 二羥基 -4-(3-(4- 羥苯基 ) 丙醯基 ) 苯氧基 ) 乙氧基 ) 乙氧基 ) 乙基 ) 二硫烷基 ) 丁酸 (5- 氟 -2,4- 二側氧基 -3,4- 二氫嘧啶 -1(2 H)- 基 ) 甲酯( 7)向含有化合物 17(55 mg，0.13 mmol)之四氫呋喃溶液中添加化合物 23(50 mg，0.13 mmol)及磷酸鹽緩衝液(pH 8.0)。在室溫下攪拌混合物2小時。透過真空移除溶劑以得到粗產物，藉由管柱層析(矽膠；二氯甲烷/甲醇=20/1)純化粗產物，得到呈固體狀之化合物 7(85 mg，0.12 mmol，產率92%)； ¹H NMR (600 MHz, d ₆-丙酮) δ 7.93 (d, J= 6.4 Hz, 1H), 7.09 (d, J= 8.4 Hz, 2H),6.75 (d, J= 9.4 Hz, 2H), 5.69 (s, 2H), 6.01 (s, 2H), 4.15 (t, J= 4.6 Hz, 2H), 3.81 (t, J= 4.3 Hz, 2H),3.70 (t, J= 6.5 Hz, 2H), 3.66-3.60 (m, 4H), 3.35 (t, J= 8.0 Hz, 2H), 2.89-2.77 (m, 4H), 2.78 (t, J= 7.2 Hz, 2H),2.52 (t, J= 7.2 Hz, 2H), 2 .07-2.04 (m, 2H)； ¹³C NMR (150 MHz, d ₆-丙酮) δ 205.8, 173.3, 166.1, 165.3, 157.9(d, J _CCF= 27 Hz), 156.4, 150.1, 140.9(d, J _CF= 231 Hz), 133.4, 130.2 (2C), 129.0(d, J _CCF= 34.5 Hz), 115.2 (2C), 105.7, 94.0 (2C), 71.4, 71.3, 71.0, 70.1, 70.0, 68.5, 47.0, 39.3, 38.1, 32.7, 30.5, 30.3, 24.7 ppm。HRMS (ESI TOF-MS) C ₃₀H ₃₅FN ₂O ₁₁S ₂ ⁺[M+H] ⁺: 計算值683.1739，實驗值：683.1763。

3-(1-(2-(2-(2-(3- 羥基 -4-(3-(4- 羥苯基 ) 丙醯基 )-5-((( 2S,3R,5S,6R)-3,4,5- 三羥基 -6-( 羥甲基 ) 四氫 - 2H- 哌喃 -2- 基 ) 氧基 ) 苯氧基 ) 乙氧基 ) 乙氧基 ) 乙基 )- 1H-1,2,3- 三唑 -4- 基 ) 丙酸 (5- 氟 -2,4- 二側氧基 -3,4- 二氫嘧啶 -1( 2H)- 基 ) 甲酯 (8)向含化合物 20(95 mg，0.16 mmol)之乙醇/水(3/1，2 mL)溶液中添加三[(1-苄基-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲基]胺(tris(benzyltriazolylmethyl)amine，TBTA，18 mg，0.03 mmol)、抗壞血酸鈉(NaASC，20.8 mg，0.10 mmol)、五水合硫酸銅(II) (3.3 mg，0.01 mmol)及化合物 24(38 mg，0.16 mmol)。將反應混合物攪拌12小時，接著在真空中濃縮。將混合物溶解於乙酸乙酯，且用水萃取。將有機層經真空濃縮且藉由管柱層析(矽膠；二氯甲烷/甲醇=10/1)純化，得到呈泡沫狀之化合物 8(117 mg，0.14 mmol，產率88%)。 ¹H-NMR (600 MHz, CD ₃OD) δ 7.81 (d, J= 6 Hz, 1 H, H-24), 7.77 (s, 1H, H-13), 7.06 (d, J= 8.4 Hz, 2H, H-2, H-6), 6.67 (d, J = 8.4 Hz, 2H, H-3, H-5), 6.30 (d, J = 2.4 Hz, 1H, H-3'), 6.12 (d, J= 2.4 Hz, 1H, H-5'), 5.59 (s, 2H, H-18), 5.07 (d, J= 7.2 Hz, 1H, H-1''), 4.50 (t, J= 4.8 Hz, 2H, H-12), 4.15 (t, J= 4.2 Hz, 2H, H-7), 3.88 (dd, J= 10, 2Hz, 1H), 3.80 (t, J= 4.8 Hz, 2H), 3.79-3.77 (m, 2H), 3.68 (q, J= 6Hz, 1H), 3.66-3.61 (m, 4H), 3.5-3.4 (m, 5H), 3.38-3.34 (m, 1H), 2.94 (t, J= 7.8 Hz,2H, H-16), 2.88 (t, J= 7.2 Hz, 2H, H-β), 2.72 (t, J = 7.2 Hz, 2H, H-17) ppm; ¹³C NMR (150 MHz, CD ₃OD) δ 206.8, 173.5, 167.2, 166.2, 161.8, 159.5 (d, J _CCF= 26 Hz), 156.4, 150.9, 146.9, 141.3 (d, J _CF= 232 Hz), 133.7, 130.5 (d, J _CCF= 34 Hz), 130.3 (2C), 124.4, 116.0 (2C), 107.6, 102.1, 97.1, 95.1, 78.5, 78.4, 74.7, 71.6, 71.5, 71.4, 71.1, 70.4, 70.3, 68.9, 62.4, 51.3, 47.0, 34.0, 30.6, 21.4 ppm；HRMS (ESI TOF-MS) C ₃₇H ₄₅FN ₅O ₁₆ ⁺[M+H] ⁺: 計算值834.2840，實驗值：834.2855。

3-(1-(2-(2-(2-(3- 羥基 -4-(3-(4- 羥苯基 ) 丙醯基 )-5-((( 2S,3R,5S,6R)-3,4,5- 三羥基 -6-( 羥甲基 ) 四氫 - 2H- 哌喃 -2- 基 ) 氧基 ) 苯氧基 ) 乙氧基 ) 乙氧基 ) 乙基 )- 1H-1,2,3- 三唑 -4- 基 ) 丙酸 (5- 氟 -2,4- 二側氧基 -3,4- 二氫嘧啶 -1( 2H)- 基 ) 甲酯 (9)向含化合物 21(62.3 mg，0.14 mmol)之乙醇/水(體積比=3:1，2 mL)溶液中添加TBTA(7.9 mg，0.01 mmol)、抗壞血酸鈉(NaASC，45 mg，0.22 mmol)、五水合硫酸銅(II) (5.6 mg，0.02 mmol)及化合物 24(35.7 mg，0.15 mmol)。將反應混合物攪拌12小時且接著在真空中濃縮。接著將混合物溶解於乙酸乙酯中且用水萃取。將有機層經真空濃縮且藉由管柱層析(矽膠:二氯甲烷/甲醇=14/1)純化，得到呈泡沫狀之化合物 9(62.9 mg，0.09 mmol，產率64%)； ¹H NMR (400 MHz, d ₆-DMSO) δ 8.11 (d, J= 6.4 Hz, 1H, H-24), 7.85 (s, 1H, H-13), 7.05 (d, J= 8.4 Hz, 2H, H-2, H-6), 6.69 (d, J= 8.4 Hz, 2H, H-3, H-5), 5.96-5.96 (m, 2H, H-3', H-5'), 5.59 (s, 2H, H-18), 4.48 (t, J= 5 Hz, 2H, H-12), 4.12-4.05 (m, 2H), 3.82 (t, J= 5 Hz, 2H), 3.75-3.65 (m, 2H), 3.59-3.51 (m, 4H), 3.27 (t, J= 7.6 Hz, 2H), 2.89 (t, J= 7.2 Hz, 2H, H-16), 2.80 (t, J= 7.4 Hz, 2H, H-β)), 2.7 (t, J= 7.2 Hz, 2 H, H-17) ppm; ¹³C NMR (100 MHz, CD ₃OD) δ 206.7, 173.6, 166.5, 165.6(2C), 159.7 (d, J _CCF= 26 Hz), 156.5, 151.1, 147.0, 141.3 (d, J _CF= 232 Hz), 133.9, 130.4 (d, J _CCF= 34 Hz), 130.3 (2C), 124.4, 116.1(2C), 106.1, 94.8(2C), 71.6, 71.6, 71.4, 70.5, 70.3, 68.7, 51.3, 47.4, 34.0, 31.2, 21.5 ppm；HRMS (ESI TOF-MS) C ₃₁H ₃₅FN ₅O ₁₁ ⁺[M+H] ⁺: 計算值672.2312，實驗值：672.2318。

硫乙酸 S -(2-(2-(2- 羥基乙酸酯 ) 乙氧基 ) 乙基 ) 酯 (11)將含三乙二醇(化合物 10，50.0 g，333 mmol)之四氫呋喃 (300 mL)在冰浴中冷卻至0℃。接著，添加含氫氧化鈉 (4.40 g，110 mmol)之水(200 mL)於其中，並攪拌10分鐘。逐滴添加含TsCl(6.34 g，33.3 mmol)之無水四氢呋喃 (50 mL) (滴加時間約30分鐘)。於室溫下再攪拌2小時之後，將反應物倒入水中且用乙醚萃取。用二氯甲烷再萃取水層。合併之有機層經硫酸鎂乾燥且透過真空濃縮，得到無色油狀物。接著，向含中間物之無水丙酮(200 mL)中添加硫代乙酸鉀(3.8 g，33.3 mmol)。在回流下加熱反應混合物1小時。過濾不溶性固體且在真空中濃縮濾液以得到粗產物，藉由管柱層析(矽膠；己烷/乙酸乙酯=1/1)純化粗產物，得到呈黃色油狀之化合物 11(5.89 g，28.3 mmol，產率85%)； ¹H NMR (400 MHz, CDCl ₃) δ 3.70-3.54 (m, 10H), 3.06 (t, J= 6.4 Hz, 2H), 2.30 (s, 3H) ppm; ¹³C NMR (100 MHz, CDCl ₃) δ 195.5, 72.4, 70.2, 69.6(2C), 61.6, 30.4, 28.6 ppm；HRMS (ESI TOF-MS) C ₈H ₁₇O ₄S+Na ⁺[M+Na] ⁺: 計算值231.0662，實驗值：231.0672。

2-(2-(2- 巰基乙氧基 ) 乙氧基 ) 乙醇 (12)向含化合物 11(5.7g，27.40 mmol)之無水甲醇(MeOH ，50 mL)的攪拌溶液中添加碳酸鉀 (345 mg，2.50 mmol)。用氯化銨溶液淬滅反應混合物且過濾以移除沈澱物。真空濃縮濾液以得到殘餘物。將殘餘物溶解於乙酸乙酯中且用水洗滌。有機層經合併且經硫酸鎂乾燥以得到粗產物。再經真空濃縮且藉由管柱層析(矽膠；己烷/乙酸乙酯=1/1)純化，得到呈黃色油狀之化合物 12(3.63 g，21.86 mmol，產率80%)； ¹H NMR (400 MHz, CDCl ₃) δ 3.74-3.71 (m, 4H), 3.67-3.65 (m, 4H), 3.60-3.57 (m, 2H), 2.90 (t, J= 6.4 Hz, 2H) ppm; ¹³C NMR (100 MHz, CDCl ₃) δ 72.5, 70.3, 70.2, 69.5, 61.6, 38.3 ppm；HRMS (ESI TOF-MS) C ₆H ₁₅O ₃S ⁺[M+H] ⁺: 計算值167.0736，實驗值：167.0735。

2-(2-(2-( 三級丁基二氫硫基 ) 乙氧基 ) 乙氧基 ) 乙醇 (13)向含有化合物 12(1.43 g，8.56 mmol)之乙醇 (5 mL)之攪拌溶液中添加2-甲基-2-丙硫醇(9.7 mL，7.76 g，86.04 mmol)。將反應混合物冷卻至0℃且逐滴添加含有碘(3.0 g)於乙醇 (20 mL)溶液直至反應物之顏色自無色變為深棕色。在12小時之後，添加飽和碳酸氫鈉溶液直至pH大於7為止。真空濃縮反應溶液。接著將殘餘物溶解於乙酸乙酯中且用飽和碳酸氫鈉溶液及鹽水萃取。合併之有機層經硫酸鎂乾燥，過濾及真空濃縮以得到粗產物。再藉由管柱層析(矽膠；己烷/乙酸乙酯(Hex/EtOAc)=2/1)純化，得到呈黃色油狀之化合物 13(1.54 g，6.06 mmol，產率71%)； ¹H NMR (400 MHz, CDCl ₃) δ 3.71-3.68 (m, 4H), 3.66-3.61 (m, 4H), 3.61-3.57 (m, 2H), 2.86 (t, J= 6.8 Hz, 2H), 1.30 (s, 9H) ppm; ¹³C NMR (100 MHz, CDCl ₃) δ 72.4, 70.2, 69.7(2C), 61.6, 47.7, 36.6, 29.7(3C) ppm。HRMS (ESI TOF-MS) C ₁₀H ₂₂O ₃S ₂ ⁺[M+H] ⁺: 計算值255.1083，實驗值：255.1089。

1-(2-(2-(2- 溴乙氧基 ) 乙氧基 ) 乙基 )-2-( 三級丁基 ) 二硫烷 (14)向含化合物 13(70.0 mg，0.28 mmol)之無水二氯甲烷 (2 mL)之攪拌溶液，於0℃下添加三乙胺(TEA，33.5 mg，0.33 mmol)，且將反應混合物攪拌10分鐘。將TsCl(32.0 mg，0.28 mmol)添加至反應混合物中(添加時間10分鐘)。接著，反應混合物用水萃取，接著經硫酸鎂乾燥，得到含甲磺酸化中間物之二氯甲烷。接著將含溴化鋰(60.2 mg，0.69 mmol)之四氫呋喃(1 mL)添加至前述溶液。在55℃下攪拌殘餘物18小時。反應混合物經濃縮，用乙酸乙酯及水萃取，且接著經硫酸鎂乾燥以得到產物。經濃縮且r藉由管柱層析(矽膠；Hex/EtOAc=8/1)純化，得到呈無色油狀之化合物 14(50 mg，0.16 mmol，兩步驟產率57%，)。 ¹H NMR (400 MHz, CDCl ₃) δ 3.77 (t, J= 6 Hz, 2H), 3.68-3.65 (m, 2H), 3.63-3.58 (m, 4H), 3.44 (t, J= 6.8 Hz, 2H), 2.83 (t, J= 6.8 Hz, 2H), 1.28 (s, 9H) ppm; ¹³C NMR (100 MHz, CDCl ₃) δ 71.1, 70.3, 70.2, 69.8, 47.7, 39.7, 29.7(3C) ppm；HRMS (ESI TOF-MS) C ₁₀H ₂₁BrO ₂S ₂Na ⁺[M+Na] ⁺: 計算值339.0059，實驗值：339.0066。

1-(4-(2-(2-(2-( 三級丁基二氫硫基 ) 乙氧基 ) 乙氧基 ) 乙氧基 )-2- 羥基 -6-(((2 S,3R,5S,6R)-3,4,5- 三羥基 -6-( 羥甲基 ) 四氫 - 2H- 哌喃 -2- 基 ) 氧基 ) 苯基 )-3-(4- 羥苯基 ) 丙 -1- 酮 (15)在室溫下，向含根皮苷( 3，1.0 g，2.29 mmol)之無水DMF (10 mL)中添加碳酸鉀 (436 mg，3.15 mmol)且攪拌10分鐘。添加化合物 14後(1.0 g，3.16 mmol)，將反應混合物在55℃下加熱12小時。將反應混合物真空濃縮。接著用水/EtOAc萃取三次。有機層經合併且在真空中濃縮以得到粗產物。再藉由管柱層析(矽膠；(二氯甲烷/甲醇(DCM/MeOH=10/1)純化，得到呈泡沫狀之化合物 15(837 mg，1.25 mmol，產率54%)； ¹H NMR (400 MHz, CD ₃OD) δ 7.06 (d, J= 8.4 Hz, 2H, H-2, H-6), 6.68 (d, J= 8.4 Hz, 2H, H-3, H-5), 6.33 (d, J= 2.4 Hz, 1H, H-3'), 6.14 (d, J= 2.4 Hz, 1H, H-5'), 5.08 (d, J= 7.6 Hz, 1H, H-1''), 4.15 (t, J= 4.4 Hz, 2H), 3.91-3.88 (m, 1H), 3.82 (t, J= 4.4 Hz, 2H), 3.71-3.62 (m, 5H), 3.61-3.60 (m, 2H), 3.50-3.44 (m, 5H), 3.34 (d, J= 9.2 Hz, 1H), 2.90-2.84 (m, 4H), 1.30 (s, 9H, H-14, H-15, H-16) ppm; ¹³C NMR(150 MHz, CD ₃OD) δ 206.8, 167.2, 166.2, 161.8, 156.3, 133.7, 130.3(2C), 116.0 (2C), 107.6, 102.1, 97.1, 95.1, 78.4, 74.7, 71.6, 71.3, 71.1, 70.7, 70.5, 68.9, 62.4, 48.4, 47.0, 40.9, 30.6, 30.2 (3C) ppm；HRMS (ESI TOF-MS) C ₃₁H ₄₄NaO ₁₂S ₂Na ⁺[M+Na] ⁺: 計算值695.2166，實驗值：695.2174。

1-(2- 羥基 -4-(2-(2-(2- 巰基乙氧基 ) 乙氧基 ) 乙氧基 )-6-((( 2S,3R,5S,6R)-3,4,5- 三羥基 -6-( 羥甲基 ) 四氫 - 2H- 哌喃 -2- 基 ) 氧基 ) 苯基 )-3-(4- 羥苯基 ) 丙 -1- 酮 (16)向含化合物 15(156 mg，0.23 mmol)之無水四氫呋喃(5 mL)之攪拌溶液中添加TCEP(133 mg，0.46 mmol)及4.0 N 氫氧化鈉溶液(1 mL)。將反應混合物攪拌5小時且接著在真空中濃縮。將殘餘物溶解於乙酸乙酯中且過濾沈澱物。濾液經真空濃縮且藉由管柱(矽膠；二氯甲烷/甲醇=10/1)純化，得到呈泡沫狀之化合物 16(115 mg，0.20 mmol，產率86%)； ¹H NMR (400 MHz, CD ₃OD) δ 7.06 (d, J= 8.4 Hz, 2H, H-2, H-6), 6.68 (d, J= 8.4 Hz, 2H, H-3, H-5), 6.33 (d, J= 2.4 Hz, 1H, H-3'), 6.14 (d, J= 2.4 Hz, 1H, H-5'), 5.08 (d, J= 7.2 Hz, 1H, H-1''), 4.15 (t, J= 4.4 Hz, 1H, H-7), 3.91 (dd, J= 10, 2 Hz, 1H), 3.84-3.81 (m, 2H), 3.71-3.68 (m, 3H), 3.64-3.62 (m, 2H), 3.59 (t, J= 6.4Hz, 2H), 3.50-3.43 (m, 5H), 3.39-3.37 (m, 1H), 2.88 (t, J= 7.5Hz, 2H), 2.64 (t, J= 6.4Hz, 2H) ppm; ¹³C NMR(100 MHz, CD ₃OD) δ 206.8, 167.3, 166.3, 161.8, 156.3, 133.7, 130.3 (2C), 116.0 (2C), 107.6, 102.1 , 97.1, 95.1, 78.5, 78.4, 74.7, 74.1, 71.6, 71.1(2C), 70.5, 68.9, 62.4, 47.0, 30.7, 24.6 ppm；HRMS (ESI TOF-MS) C ₂₇H ₃₆O ₁₂SNa ⁺[M+Na] ⁺: 計算值607.1820，實驗值：607.1821。

1-(2,6- 二羥基 -4-(2-(2-(2- 巰基乙氧基 ) 乙氧基 ) 乙氧基 ) 苯基 )-3-(4- 羥苯基 ) 丙 -1- 酮 (17)向含化合物 16(210 mg，0.36 mmol)之乙醇(EtOH，2 mL)的溶液中添加1.0 N 氯化氫 (1 mL)。在回流下加熱混合物3小時。冷卻反應混合物且利用真空移除溶劑。殘餘物用水及乙酸乙酯萃取，經硫酸鎂乾燥。有機層經合併且在真空中濃縮以得到粗產物。再藉由管柱層析(矽膠；Hex/EtOAc=1/1)純化粗產物，得到呈泡沫狀之化合物 17(111 mg，0.26 mmol，產率73%)； ¹H NMR (400 MHz, CDCl ₃) δ 7.00 (d, J= 8.4 Hz, 2H, H-2, H-6), 6.70 (d, J= 8.4 Hz, 2H, H-3, H-5), 5.87 (s, 2H, H-3', H-5'), 4.00 (t, J = 3.2 Hz, 2H), 3.79-3.77 (m, 2H), 3.71-3.69 (m, 2H), 3.63-3.61(m, 2H), 3.54 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 3.27 (t, J= 7.6 Hz, 2H), 2.83 (t, J= 7.6 Hz, 2H),2.62-2.57 (m, 2H); ¹³C NMR(100 MHz, CDCl ₃) δ 205.2, 164.5(2C), 153.7, 133.4, 129.5 (2C), 115.3 (2C), 94.5(2C), 77.2, 72.8, 70.4, 70.4, 69.9, 69.4, 67.0, 45.8, 29.8, 23.9；HRMS (ESI TOF-MS) C ₂₁H ₂₆O ₇SNa ⁺[M+Na] ⁺: 計算值445.1291，實驗值：445.1328。

2-(2-(2- 疊氮基乙氧基 ) 乙氧基 ) 乙醇 (18)向含三乙二醇( 10，50.0 g，333 mmol)之無水DCM (250 mL)，於0℃下中添加三乙醇胺（TEA ，37.0 g，366 mmol)，且將反應混合物攪拌10分鐘。接著，將甲磺醯氯(30.5 g，266 mmol)添加至反應混合物中(添加時間20分鐘)。反應混合物用水萃取，經硫酸鎂乾燥且濃縮，得到甲磺酸2-(2-(2-羥基乙酸酯)乙氧基)乙酯。向含甲磺酸化中間物之乙醇 (250 ml)中添加疊氮化鈉(21.6 g，332 mmol)且在回流下加熱一夜。之後，添加水且用二氯甲烷萃取混合物。有機層經硫酸鎂乾燥，濃縮，且藉由快速管柱層析(矽膠；乙酸乙酯/己烷=3/1至1/5)純化，得到呈無色油狀之化合物 18(12.1 g，69.1 mmol，二步驟產率26%)。 ¹H-NMR (200 MHz, CDCl ₃) δ 3.68-3.64 (m, 2H), 3.63-360 (m, 6H), 3.57-3.53 (m, 2H), 3.34 (t, J = 5.2 Hz, 2H) ppm; ¹³C-NMR (50 MHz, CDCl ₃) δ 72.4, 70.5, 70.2, 69.8, 61.5, 50.5 ppm；HRMS (ESI TOF-MS) C ₆H ₁₄N ₃O ₃ ⁺[M+H] ⁺: 計算值176.1030，實驗值：176.1029.

1- 疊氮基 -2-(2-(2- 溴乙氧基 ) 乙氧基 ) 乙烷 (19)向含化合物18 (8.0 g，45.7 mmol)之無水二氯甲烷 (100 mL)的攪拌溶液，在0℃下添加三乙醇胺(TEA ，9.25 g，91.4 mmol)，且將反應混合物攪拌10分鐘。接著將甲磺醯氯(6.28 g，54.8 mmol)添加至反應混合物中(添加時間為20分鐘)。反應混合物用水萃取，且經硫酸鎂乾燥，得到含甲磺酸化中間物之二氯甲烷。將溴化鋰(11.9 g，137 mmol)溶解於四氫呋喃 (150 mL)中，添加至甲磺酸化中間物及反應混合物中。在45℃下攪拌殘餘物18小時。反應混合物經濃縮，用乙酸乙酯及水萃取，收集有機層，經硫酸鎂乾燥且接著過濾。濾液經濃縮且藉由快速管柱層析(矽膠；己烷/乙酸乙酯=4/1)純化，得到呈無色油狀之化合物 19(6.9 g，29.1 mmol，二步驟產率64%)。 ¹H NMR (200 MHz, CDCl ₃) δ 3.73 (t, J= 6 Hz, 2H), 3.6-3.5 (m, 6H), 3.4 (t, J= 6 Hz, 2H), 3.3 (t, J= 5 Hz) ppm; ¹³C NMR (50 MHz, CDCl ₃) δ 70.9, 70.3, 70.2, 69.7, 50.3, 30.1 ppm。

1-(4-(2-(2-(2- 疊氮基乙氧基 ) 乙氧基 ) 乙氧基 )-2- 羥基 -6-((( 2S,3R,5S,6R)-3,4,5- 三羥基 -6-( 羥甲基 ) 四氫 - 2H- 哌喃 -2- 基 ) 氧基 ) 苯基 )-3-(4- 羥苯基 ) 丙 -1- 酮 (20)向含根皮苷( 3，2.31 g，5.30 mmol)之無水二甲基甲醯胺 (15 mL)，於室溫下添加碳酸鉀 (1.11 g，8.03 mmol)且攪拌10分鐘。添加化合物 19(1.66 g，7.00 mmol)且將反應混合物在55℃下加熱12小時。將反應混合物真空濃縮。殘餘物用水/乙酸乙酯萃取三次。有機層經合併後且在真空中濃縮以得到粗產物，藉由管柱層析(矽膠；二氯甲烷/甲醇=10/1)純化粗產物，得到呈泡沫狀之化合物 20(2.13 g，3.59 mmol，產率68%)； ¹H NMR (600 MHz, CD ₃OD) δ 7.08 (d, J= 8.4 Hz, 2H, H-2, H-6), 6.70 (d, J= 8.4, 2H, H-3, H-5), 6.34 (d, J= 2.4 Hz, 1 H, H-3'), 6.15 (d, J= 2.4 Hz, 1H, H-5'), 5.10 (d, J = 7.2 Hz, 1H, C-1''), 4.16 (t, J= 4.4 Hz, 2H, H-9), 3.91 (d, J= 2 Hz, 1H), 3.83 (t, J= 4.4 Hz, 1H), 3.73 - 3.70 (m, 5H), 3.69-3.67 (m, 1H), 3,52-3.50 (m, 4H), 3.49-3,40 (m, 5H), 2.90 (t, J= 7.8Hz, 2H, H-12) ppm; ¹³C NMR (150 MHz, CD ₃OD) δ 206.8, 167.2, 166.2, 161.8, 156.3, 133.7, 130.3(2C), 116.0 (2C), 107.6, 102.1, 97.1, 95.1, 78.4, 74.7, 71.7, 71.3, 71.1, 70.7, 70.5, 68.9, 62.4, 51.7, 47.0, 30.6 ppm；HRMS (ESI TOF-MS) C ₂₇H ₃₅N ₃O ₁₂Na ⁺[M+Na] ⁺: 計算值616.2113，實驗值：616.2115。

1-(4-(2-(2-(2- 疊氮基乙氧基 ) 乙氧基 ) 乙氧基 )-2,6- 二羥基苯基 )-3-(4- 羥苯基 ) 丙 -1- 酮 (21)向含化合物 20(195 mg，0.33 mmol)之乙醇 (5 mL)的溶液中添加1.0 N氯化氫 (3 mL)。使混合物在90℃下回流3小時，接著冷卻反應混合物並利用真空移除溶劑。殘餘物用己烷/乙酸乙酯萃取，經硫酸鎂乾燥。有機層經合併後且在真空中濃縮以得到粗產物。藉由管柱層析(矽膠；Hex/EtOAc=1/1)純化粗產物，得到呈泡沫狀之化合物 21(110 mg，0.26 mmol，產率79%)； ¹H NMR (400 MHz, CDCl ₃) δ 7.04 (d, J= 8.4 Hz, 2H, C-2, C-6), 6.71 (d, J= 8.4 Hz, 2H, C-3, C-5), 5.95-5.85 (m, 2H, C-3', C-5'), 4.06-4.04 (m, 2H, C-7), 3.82 (t, J= 4.4 Hz, 2H), 3.73-3.70 (m, 2H), 3.67-3.65 (m, 2H), 3.60 (t, J= 5Hz, 2H), 3.33-3.28 (m, 4H, C-α, C-12), 2.89 (t, J= 7.7 Hz, 2Hz, C-β) ppm; ¹³C NMR (100 MHz, CDCl ₃) δ 204.9, 164.5(2C), 153.7, 133.7, 129.5(2C), 115.2 (2C), 105.0, 94.6(2C), 70.6, 70.4, 69.9, 69.8, 67.1, 50.5, 45.8, 29.7 ppm；HRMS (ESI TOF-MS) C ₂₁H ₂₅N ₃O ₇Na ⁺[M+Na] ⁺: 計算值454.1585，實驗值：454.1583。

1-(6- 順丁烯二醯亞胺基己醯氧基甲基 )-5- 氟尿嘧啶 (22)於55℃下，向含5-FU (100 mg，0.77 mmol)之水溶液(0.5 mL)中，添加甲醛水溶液(重量百分濃度為37%，0.5 mL)，且在固體完全消失之後再攪拌3小時。接著利用真空移除溶劑，反應燒瓶中得到無色且黏稠的油狀物。在另一燒瓶中，在0℃下於含6-順丁烯二醯亞胺己酸(195 mg，0.92 mmol)之無水乙腈(2 mL)中，添加 N,N'-二環己基碳二亞胺(DCC ，190 mg，0.92 mmol)及4-二甲氨基吡啶(DMAP ，9.5 mg，0.08 mmol)且攪拌10分鐘。接著將上述含油狀物之無水乙腈(0.5 mL)添加至反應燒瓶中。將反應混合物在0℃下攪拌30分鐘，且接著在室溫下攪拌12小時。過濾反應物中形成之沈澱物，且在真空中移除其溶劑。將含殘餘物溶於乙酸乙酯並用濃度1.0 N 氯化氫、飽合碳酸氫鈉及水萃取。有機層經硫酸鎂乾燥且真空濃縮以得到粗產物，藉由管柱層析(矽膠；己烷/乙酸乙酯=1/1)純化粗產物，得到呈泡沫狀之化合物 22(117 mg，0.33 mmol，產率43%)； ¹H NMR (600 MHz, CD ₃OD) δ 7.92 (d, J= 6 Hz, 1H, H-6), 6.79 (s, 2H, H-16, H-17), 5.63 (s, 2H, H-7), 3.48 (t, J= 6.9 Hz, 2H, H-13), 2.38 (t, J= 7.3 Hz, 2H, H-9), 1.68-1.63 (m, 2H, H-10), 1.59-1.54 (m, 2H, H-12), 1.32-1.27 (m, 2H, H-11); ¹³C NMR (150 MHz, CD ₃OD) δ 174.6, 172.5 (2C), 159.7 (d, J _CCF= 25 H), 151.1, 141.4 (d, J _CF= 233 Hz), 135.3 (2C), 130.5 (d, J _CCF= 34 Hz), 71.6, 38.2, 34.3, 29.1, 27.0, 25.1；HRMS (ESI TOF-MS) C ₁₅H ₁₆FN ₃O ₆C ₂₁Na ⁺[M+Na] ⁺: 計算值376.0915，實驗值：376.0915。

1-(4-( 吡啶 -2- 基二硫基 ) 丁醯氧基甲基 )-5- 氟尿嘧啶 (23)於60℃下，將含5-FU (100 mg，0.77 mmol)的甲醛溶液(重量百分比濃度37%，0.5 mL)攪拌直至固體完全消失，且於60℃下再攪拌3小時。在真空中移除溶劑，得到無色油狀物。在另一燒瓶中，於0℃下添加4-(2-吡啶基二硫基)丁酸(206 mg，0.90 mmol)、DCC(190 mg，0.92 mmol)及含4-二甲氨基吡啶(DMAP ，11 mg，0.09 mmol)之乙腈 (5 mL)，且攪拌反應物10分鐘。接著將溶液添加至上述無色油狀物中。將反應混合物在0℃下攪拌30分鐘，且接著在室溫下攪拌12小時。過濾反應物中形成之沈澱物，且在真空中移除其溶劑。將殘餘物溶於乙酸乙酯並用濃度1.0 N 氯化氫、飽合碳酸氫鈉及水萃取。有機層經硫酸鎂乾燥且真空濃縮以得到粗產物。藉由管柱層析(矽膠；氯仿/甲醇=25/1)純化粗產物，得到呈固體狀之化合物 23(95.5 mg，0.26 mmol，二步驟產率34%)； ¹H NMR (400 MHz, CDCl ₃) δ 8.41 (d, J= 4.8 Hz, 1H), 7.62 (t, J = 7.3 Hz, 2H), 7.58 (d, J= 5.4 Hz, 1H), 7.11-7.01 (m, 1H), 5.60 (s, 2H), 2.78 (t, J= 7 Hz, 2 H), 2.50 (t, J= 7.2 Hz, 2H), 1.21-1.91(m, 2H); ¹³C NMR (100 MHz, CDCl ₃) δ 173.1, 159.8 (d, J _CCF= 27 Hz), 156.9, 149.8, 149.3, 140.3 (d, J _CF= 238 Hz), 137.2, 128.5 (d, J _CCF= 24 Hz), 120.9, 120.0, 69.8, 37.6, 32.2, 23.5, ppm；HRMS (ESI TOF-MS) C ₁₄H ₁₅F ₁N ₃O ₄S ₂ ⁺[M+H] ⁺: 計算值372.0485，實驗值：372.0483。

1-( 戊 -4- 醯氧基甲基 )-5- 氟尿嘧啶 (24) 於60℃下，將含5-FU (100 mg，0.77 mmol)的甲醛溶液(重量百分比濃度37%，0.5 mL)攪拌直至固體完全消失，且於60℃下再攪拌3小時，且於60℃下再攪拌3小時。在真空中移除溶劑，得到無色油狀物。在另一燒瓶中，於0℃下添加戊-4-炔酸(105 mg，1.07 mmol)、DCC(190 mg，0.92 mmol)及含4-二甲氨基吡啶(DMAP ，11 mg，0.09 mmol)之乙腈 (5 mL)，且攪拌反應物10分鐘，得到預活化戊-4-炔酸。接著，向上述無色油狀物中添加含預活化戊-4-炔酸之乙腈。將反應混合物在0℃下攪拌30分鐘，且接著在室溫下攪拌12小時。過濾反應物中形成之沈澱物，且在真空中移除其溶劑。將殘餘物溶於乙酸乙酯並用濃度1.0 N 氯化氫、飽合碳酸氫鈉及水萃取。有機層經硫酸鎂乾燥且真空濃縮以得到粗產物。藉由管柱層析(矽膠；己烷/乙酸乙酯=2/1)純化粗產物，得到呈非晶形固體狀之化合物 24(118 mg，0.49 mmol，產率64%)； ¹H NMR (400 MHz, CDCl ₃) δ .7.59 (d, J= 5.4 Hz, 1H, H-6), 5.65 (s, 2H, H-7), 2.67-2.55 (m, 2H), 2.54-2.46 (m, 2H), 1.97 (t, J= 2.5 Hz, 1H, H-12) ppm; ¹³C NMR (150 MHz, CDCl ₃) δ 171.9, 156.4 (d, J _CCF= 28 Hz), 148.8, 140.1 (d, J _CF= 237 Hz), 128.3 (d, J _CCF= 33 Hz), 81.5, 69.7, 69.5, 32.9, 14.1 ppm；HRMS (ESI TOF-MS) C ₁₀H ₉FN ₂O ₄Na ⁺[M+Na] ⁺: 計算值263.0439，實驗值：263.0443。

2-( 吡啶 -2- 基二硫基 ) 乙醇 (26)向含2,2'-二硫化聯吡啶(aldrithiol-2，5 g，0.02 mol)及乙酸(0.33 mL)之無水MeOH (25 mL)的溶液中逐滴添加巰基乙醇(1.2 mL，0.02 mol)。反應混合物用氮氣除氣20分鐘，並在室溫下攪拌26小時。接著，在減壓下將溶劑蒸發至乾燥，且藉由管柱層析(矽膠；乙酸乙酯/己烷=15/85至30/70)純化粗產物，得到呈無色油狀之化合物 26(2.4 g，產率64%)。 ¹H NMR (400 MHz, CDCl ₃) δ 2.95 (t, J= 5.1 Hz, 2H), 3.78-3.82 (m, 2H), 5.76 (t, J= 6.7 Hz, 1H), 7.13-7.17 (m, 1H), 7.39 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.56-7.60 (m, 1H), 8.51-8.52 (m, 1H) ppm; ¹³C NMR (100 MHz, CDCl ₃) δ 42.7, 58.3, 121.6, 122.0, 136.9, 149.9, 159.2 ppm。HRMS (ESI-TOF) C ₇H ₁₀NOS ₂[M+H] ⁺計算值: 188.0198，實驗值：188.0191。

碳酸 (4- 硝基苯基 )2-( 吡啶 -2- 基二硫基 ) 乙酯 (27)在0℃下，向含化合物 26(1.05 g，5.60 mmol)之無水二氯甲烷 (10 mL)的溶液中添加三甲胺(0.79 mL，5.6 mmol)及含氯甲酸對硝基苯酯(1.70 g，8.40 mmol)之無水二氯甲烷 (5 mL)。使反應混合物在室溫下再攪拌1小時。接著過濾混合物以移除沈澱之白色固體，且在真空中移除部分溶劑。藉由管柱層析(矽膠；乙酸乙酯/己烷=1/8至1/4)純化粗產物，得到呈無色油狀之化合物 27(1.1 g，產率56%)。 ¹H NMR (400 MHz, CDCl ₃) δ 3.16 (t, J= 6.4 Hz, 2H), 4.56 (t, J= 6.4 Hz, 2H), 7.11-7.14 (m, 1H), 7.36-7.40 (m, 2H), 7.63-7.69 (m, 2H), 8.26-8.30 (m, 2H), 8.48-8.50 (m, 1H) ppm; ¹³C NMR (100 MHz, CDCl ₃) δ 36.9, 66.8, 120.3, 121.3, 121.9, 121.9, 125.5, 137.2, 145.6, 150.1, 152.4, 155.5, 159.2 ppm。HRMS (ESI) C ₁₄H ₁₃N ₂O ₅S ₂[M+H] ⁺計算值: 353.0260，實驗值：353.0268。

(2-( 吡啶 -2- 基二硫基 ) 乙基 ) 碳酸 ( S)-4,11- 二乙基 -4- 羥基 -3,14- 二側氧基 -3,4,12,14- 四氫 -1 H- 哌喃并 [3 ' ,4 ' :6,7] 吲并 [1,2- b] 喹啉 -9- 酯 (29)向含SN-38 (化合物 28，288 mg，0.73 mmol)之無水DMG (27 mL)的溶液中添加含三甲胺(103 μl，0.73 mmol)及含化合物 27(310 mg，0.88 mmol)之無水二氯甲烷(9 mL)。在氮氣環境及室溫下攪拌反應混合物24小時。接著，將混合物在真空中蒸發至乾燥且藉由管柱層析(矽膠；甲醇/二氯甲烷=1/99至1/50)純化，得到呈黃色粉末狀之化合物 29(273 mg，產率62%)。 ¹H NMR (600 MHz, CDCl ₃) δ 1.03 (t, J= 7.4 Hz, 3H), 1.39 (t, J= 7.7 Hz, 3H), 1.85-1.95 (m, 2H), 3.13-3.17 (m, 2H), 3.19 (t, J= 6.4 Hz, 2H), 3.93 (s, 1H), 4.59 (t, J= 6.4 Hz, 2H), 5.25 (s, 2H), 5.30 (d, J= 16.1 Hz, 1H), 5.74 (d, J= 16.2 Hz, 1H), 7.11-7.13 (m, 1H), 7.61-7.70 (m, 4H), 7.90 (d, J= 2.5 Hz, 1H), 8.23 (d, J= 9.2 Hz, 1H), 8.50 (d, J= 4.6 Hz, 1H) ppm; ¹³C NMR (150 MHz, CDCl ₃) δ 8.0, 14.1, 23.3, 31.7, 37.0, 49.5, 66.4, 66.6, 72.9, 98.3, 114.2, 118.8, 120.3, 121.2, 124.7, 127.5 (2C), 132.4, 137.2, 145.6, 146.9, 147.6, 149.9, 150.0, 150.3, 152.2, 153.2, 157.7, 159.3, 174.0 ppm。HRMS (ESI) C ₃₀H ₂₈N ₃O ₇S ₂[M+H] ⁺計算值: 606.1363，實驗值：606.1366。

(2-((2-(2-(2-(4- 羥基 -3-(3-(4- 羥苯基 ) 丙醯基 )-2-(((2 S,3 R,4 S,5 S,6 R)-3,4,5- 三羥基 -6-( 羥甲基 ) 四氫 -2 H) 哌喃 -2- 基 ) 氧基 ) 苯氧基 ) 乙氧基 ) 乙氧基 ) 乙基 ) 二硫烷基 ) 乙基 ) 碳酸 ( S)-4,11- 二乙基 -4- 羥基 -3,14- 二側氧基 -3,4,12,14- 四氫 -1 H- 哌喃并 [3 ' ,4 ' :6,7] 吲并 [1,2- b] 喹啉 -9- 酯 (30)向含化合物 16(9 mg，15.4 μmol)之無水四氫呋喃 (800 μL)的溶液中，添加含化合物 29(9 mg，14.9 μmol)之無水四氫呋喃(300 μL)。在氮氣環境及室溫下攪拌反應混合物4.5小時。將混合物減壓蒸發至乾燥，且藉由管柱層析(矽膠；甲醇/二氯甲烷=1/15)純化粗產物，得到呈白色粉末狀之化合物 30(16 mg，產率99%)。 ¹H NMR (600 MHz, (CD ₃) ₂CO + D ₂O) δ 0.99 (t, J= 7.3 Hz, 3H), 1.39 (t, J= 7.7 Hz, 3H), 1.91-2.0 (m, 2H), 2.81 (t, J= 7.4 Hz, 2H), 2.99 (t, J= 6.4 Hz, 2H), 3.17 (t, J= 6.4 Hz, 2H), 3.25 (q, J= 7.7, 15.4 Hz, 2H), 3.34-3.60 (m, 6H), 3.65-3.67 (m, 4H), 3.69-3.72 (dd, J = 5.9, 12.0 Hz, 1H), 3.76 (t, J= 6.4 Hz, 2H), 3.78 (t, J= 4.5 Hz, 2H), 3.90 (dd, J = 2.5, 12.0 Hz, 1H), 4.11 (m, 2H), 4.58 (t, J= 6.3 Hz, 2H), 5.14 (d, J= 7.32 Hz, 1H), 5.27 (d, J = 1.0, 2H), 5.36 (d, J= 16.1 Hz, 1H), 5.53 (d, J= 16.4 Hz, 1H), 5.98 (d, J= 2.3 Hz, 1H), 6.27 (d, J= 2.3 Hz, 1H), 6.70 (d, J= 8.5 Hz, 2H), 7.06 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 7.50 (s, 1H), 7.73 (dd, J= 2.5, 9.2 Hz, 1H), 8.09 (d, J= 2.5 Hz, 1H), 8.21 (d, J= 9.2 Hz, 1H) ppm; ¹³C NMR (150 MHz, (CD ₃) ₂CO + D ₂O) δ 8.2, 14.3, 23.4, 31.8, 37.6, 39.7, 46.4, 50.2, 62.3, 66.3, 67.5, 68.6, 69.9, 70.9, 71.0, 71.3, 73.6, 74.3, 78.1, 94.6, 96.6, 97.9, 101.9, 106.9, 115.6, 115.8, 120.1, 125.6, 128.2, 129.3, 130.1, 132.6, 133.0, 146.6, 147.4, 148.0, 150.7, 151.2, 153.3, 154.1, 156.2, 158.2, 161.6, 165.8, 166.8, 173.5, 206.1 ppm。HRMS (ESI TOF-MS) C ₅₂H ₅₉N ₂O ₁₉S ₂[M+H] ⁺: 計算值1079.3148，實驗值：1079.3157。

(2-((2-(2-(2-(2,4- 二羥基 -3-(3-(4- 羥苯基 ) 丙醯基 ) 苯氧基 ) 乙氧基 ) 乙氧基 ) 乙基 ) 二硫烷基 ) 乙基 ) 碳酸 ( S)-4,11- 二乙基 -4- 羥基 -3,14- 二側氧基 -3,4,12,14- 四氫 -1 H- 哌喃并 [3 ' ,4 ' :6,7] 吲并 [1,2- b] 喹啉 -9- 酯 (31)將化合物 17(50 mg，0.12 mmol)溶解於無水THF(10 mL)中。接著將化合物 29(60 mg，0.10 mmol)添加至前述溶液中且在氮氣環境及室溫下攪拌1小時。在真空中濃縮反應混合物以移除溶劑。藉由管柱層析(矽膠；甲醇/二氯甲烷=1/25)純化粗產物，得到呈黃色固體狀之化合物 31(76.2 mg，產率84%)。 ¹H NMR (600 MHz, (CD ₃) ₂CO + D ₂O) δ 1.01 (t, J= 7.4 Hz, 3H), 1.41 (t, J= 7.6 Hz, 3H), 1.93-2.0 (m, 2H), 2.86 (m, 2H), 2.99 (t, J= 6.2 Hz, 2H), 3.17 (t, J= 6.3 Hz, 2H), 3.26-3.32 (m, 4H), 3.64-3.66 (m, 4H), 3.76 (t, J= 6.2 Hz, 2H), 3.78 (t, J= 4.7 Hz, 2H), 4.09 (t, J= 4.5 Hz, 2H), 4.58 (t, J= 6.4 Hz, 2H), 5.28 (s, 2H), 5.39 (d, J= 16.1 Hz, 1H), 5.54 (d, J= 16.1 Hz, 1H), 5.96 (s, 2H), 6.73 (d, J= 8.3 Hz, 2H), 7.06 (d, J= 8.3 Hz, 2H), 7.47 (s, 1H), 7.74 (dd, J= 2.5, 9.2 Hz, 1H), 8.11 (d, J= 2.5 Hz, 1H), 8.22 (d, J= 9.1 Hz, 1H), 11.82 (br, s, 1H) ppm; ¹³C NMR (150 MHz, (CD ₃) ₂CO + D ₂O) δ 8.2, 14.3, 23.4, 31.9, 37.6, 46.9, 50.2, 66.4, 67.5, 68.5, 70.0, 71.1, 71.4, 73.7, 94.8, 97.4, 105.7, 115.6, 116.0, 120.1, 125.6, 128.3, 129.4, 130.2, 132.7, 133.4, 146.4, 147.6, 148.2, 150.7, 150.9, 153.5, 154.1, 156.4, 158.0, 165.1, 166.0, 173.6, 205.8 ppm。HRMS (ESI TOF-MS) C ₄₆H ₄₈N ₂O ₁₄S ₂[M+H] ⁺: 計算值917.2620，實驗值：917.2621。

( S)-2(( S)-2((((9 H- 茀 -9- 基 ) 甲氧基 ) 羰基 ) 胺基 )-3- 甲基丁醯胺基 )-5- 脲基戊酸 (33)向含化合物 32(5 g，11.46 mmol)、含L-瓜胺酸(2.1 g，12 mmol)之二甲氧甲烷(50 mL)及THF (25 mL)的溶液中添加含碳酸氫鈉(1 g，12 mmol)之水溶液(50 mL)。將反應物在室溫下攪拌且置於暗處。5天後，向混合物中添加濃度20%的檸檬酸水溶液，且將pH調節至約5。溶液用等量體積之含10%異丙醇之乙酸乙酯萃取三次。將有機層合併且再用水洗滌三次。接著收集有機層，經硫酸鎂乾燥，且在真空中蒸發至乾燥，得到粗產物。最後，將粗產物分散在乙醚中且用超音波震盪處理，得到呈白色固體狀之化合物 33(5 g，產率88%)。 ¹H NMR (400 MHz, DMSO- d ₆) δ 0.85-0.9 (m, 6H), 1.39-1.41 (m, 2H), 1.51-1.61 (m, 1H), 1.69-1.70 (m, 1H), 1.95-2.00 (m, 1H), 2.94 (m, 2H), 3.92 (t, J= 8.24 Hz, 1H), 4.12-4.17 (m, 1H), 4.21-4.31 (m, 3H), 5.37 (s, 2H), 5.94 (t, J= 4.44 Hz, 1H), 7.30-7.34 (m, 1H), 7.38-7.43 (m, 3H), 7.75 (t, J= 7.12 Hz, 2H), 7.89 (d, J= 7.48 Hz, 2H), 8.17 (d, J= 7.16 Hz, 2H), 12.55 (br, s, 1H) ppm; ¹³C NMR (100 MHz, DMSO- d ₆) δ 18.2, 19.2, 26.6, 28.4, 30.6, 38.8, 46.7, 51.9, 59.8, 65.7, 120.1, 125.4, 127.1, 127.7, 140.7, 143.8, 143.9, 156.1, 158.7, 171.3, 173.4 ppm。HRMS (ESI TOF-MS) C ₂₆H ₃₂N ₄O ₆[M+H] ⁺: 計算值497.2395，實驗值：497.2404。

(9 H- 茀 -9- 基 ) 甲基 (( S)-1-((( S)-1-[[4-( 羥甲基 ) 苯基 ] 胺基 ]-1- 側氧基 -5- 脲基戊 -2- 基 ) 胺基 )-3- 甲基 -1- 側氧基丁 -2- 基 ) 胺基甲酸酯 (34)將化合物 33(6 g，12.1 mmol)、對胺基苯甲醇(3 g，24.2 mmol)及EEDQ (6 g，24.2 mmol)溶解於無水DCM (200 mL)及甲醇 (100 mL)中。將反應混合物在室溫下攪拌且置於暗處。24小時後，將混合物在真空中蒸發至乾燥。用乙醚/乙酸乙酯(體積比=1/1)洗滌殘餘物，得到呈淡棕色固體狀之化合物 34(5 g，產率69%)。 ¹H NMR (400 MHz, DMSO- d ₆) δ 0.84-0.89 (m, 6H), 1.38-1.44 (m, 2H), 1.58-1.70 (m, 2H), 1.97-2.01 (m, 1H), 2.91-3.04 (m, 2H), 3.93 (t, J= 7.34 Hz, 1H), 4.23-4.33 (m, 3H), 4.42-4.43 (m, 3H), 5.11 (t, J= 5.76 Hz, 1H), 5.43 (s, 2H), 5.99 (t, J= 4.72 Hz, 1H), 7.23 (d, J= 8.16 Hz, 2H), 7.30-7.34 (m, 2H), 7.39-7.46 (m, 3H), 7.54 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 7.74 (t, J= 7.84 H, 2H), 7.89 (d, J= 7.44 Hz, 1H), 8.11 (d, J= 7.64 Hz, 1H), 9.99 (s, 1H) ppm; ¹³C NMR (100 MHz, DMSO- d ₆) δ 18.3, 19.2, 26.8, 29.5, 30.4, 38.6, 46.7, 53.0, 60.1, 62.6, 65.7, 118.9, 120.1, 125.4, 126.9, 127.1, 127.6, 137.4, 137.5, 140.7, 143.8, 143.9, 156.1, 158.9, 170.3, 171.2 ppm。HRMS (ESI TOF-MS) C ₃₃H ₄₀N ₅O ₆[M+H] ⁺: 計算值602.2973，實驗值：602.2987。

( S)- N-(4-(((( S)-4,11- 二乙基 -4- 羥基 -3,14- 二側氧基 -3,4,12,14- 四氫 -1 H- 哌喃并 [3 ' ,4 ' :6,7] 吲并 [1,2- b] 喹啉 -9- 基 ) 氧基 ) 甲基 ) 苯基 )-2-(( S)-2-(5-(2,5- 二側氧基 -2,5- 二氫 -1 H- 吡咯 -1- 基 ) 戊醯胺基 )-3- 甲基丁醯胺基 )-5- 脲基戊醯胺 (36)在0℃下將化合物 34(1.71 g，2.84 mmol)添加至30毫升的HBr (於冰乙酸中的(重量百分比濃度為33%)中且攪拌10分鐘。將混合物回溫至室溫且再攪拌2小時。接著用500 mL水淬滅反應物且產生溴化中間物 35之沈澱物。中間物 35藉由過濾收集，用額外的水洗滌以移除殘餘酸，且在真空中乾燥，得到呈淡棕色固體狀之粗物質 35(1.52 g)。向含SN-38 (694 mg，1.77 mmol)及碳酸銫 (811.4 mg，2.3 mmol)之無水DMF (50 mL)的溶液中添加粗物質 35，且攪拌反應混合物20分鐘。接著，將哌啶(5 mL)添加至前述混合物中，且再攪拌10分鐘。接著將混合物真空蒸發至乾燥，且藉由管柱層析(矽膠；甲醇/二氯甲烷=50/1至5/1)純化，得到呈黃色固體狀之粗產物val-cit-pab- O-SN-38 (316 mg)。將粗產物val-cit-pab- O-SN- 38(316 mg)溶解於無水DMF(25 mL)中，且添加三乙醇胺 (58.6 μL，0.42 mmol)及5-順丁烯二醯亞胺基戊酸-NHS (161.8 mg，0.55 mmol)。經攪拌3.5小時之後，將混合物在真空中蒸發至乾燥，且藉由管柱層析(矽膠；甲醇/二氯甲烷=10/1)純化，得到呈黃色固體狀之化合物 36(164.4 mg，產率10%)。 ¹H NMR (600 MHz, DMSO- d ₆) δ 0.81-0.89 (m, 9H), 1.26 (t, J= 7.6 Hz, 3H), 1.32-1.49 (m, 6H), 1.56-1.61 (m, 1H), 1.67-1.73 (m, 1H), 1.81-1.91 (m, 2H), 1.94-1.99 (m, 1H), 2.12-2.17 (m, 1H), 2.18-2.23 (m, 1H), 2.92-2.97 (m, 1H), 3.00-3.05 (m, 1H), 3.14-3.15 (m, 2H), 4.18 (t, J= 7.8 Hz, 1H), 4.35-4.40 (m, 1H), 5.25 (s, 2H), 5.28 (s, 2H), 5.38-5.44 (m, 4H), 5.98 (t, J= 5.4 Hz, 1H), 6.50 (s, 1H), 6.99 (s, 2H), 7.25 (s, 1H), 7.49 (d, J= 8.52 Hz, 2H), 7.52 (d, J= 9.24 Hz, 1H), 7.55 (s, 1H), 7.65 (d, J= 8.46 Hz, 2H), 7.82 (d, J= 8.58 Hz, 1H), 8.05 (dd, J= 8.9, 2.2 Hz, 1H), 8.08 (d, J= 7.4 Hz, 1H), 10.01 (s, 1H) ppm; ¹³C NMR (150 MHz, DMSO- d ₆) δ 7.8, 13.5, 18.2, 19.2, 22.3, 22.7, 26.8, 27.7, 29.3, 30.3, 30.4, 34.6, 36.9, 38.6, 40.1, 49.5, 53.1, 57.6, 65.3, 69.6, 72.4, 96.0, 103.7, 118.3, 119.1, 122.7, 127.8, 128.3, 128.8, 131.3, 131.4, 134.5, 138.8, 143.9, 144.4, 146.3, 149.6, 150.1, 156.9, 157.2, 158.9, 170.7, 171.1, 171.3, 172.2, 172.6 ppm。HRMS (ESI TOF-MS) C ₄₉H ₅₇N ₈O ₁₁[M+H] ⁺: 計算值933.4141，實驗值：933.4188。

(2 S)- N-(4-(((( S)-4,11- 二乙基 -4- 羥基 -3,14- 二側氧基 -3,4,12,14- 四氫 -1 H- 哌喃并 [3 ' ,4 ' :6,7] 吲并 [1,2- b] 喹啉 -9- 基 ) 氧基 ) 甲基 ) 苯基 )-2-((2 S)-2-(5-(3-((2-(2-(2-(3- 羥基 -4-(3-(4- 羥苯基 ) 丙醯基 )-5-(((2 S,3 R,4 S,5 S,6 R)-3,4,5- 三羥基 -6-( 羥甲基 ) 四氫 -2 H- 哌喃 -2- 基 ) 氧基 ) 苯氧基 ) 乙氧基 ) 乙氧基 ) 乙基 ) 硫基 )-2,5- 二側氧基吡咯啶 -1- 基 ) 戊醯胺基 )-3- 甲基丁醯胺基 )-5- 脲基戊醯胺 (37)向含化合物 36(136 mg，0.15 mmol)之甲醇 (60 mL)溶液中添加化合物 16(108.6 mg，0.26 mmol)。在室溫下攪拌反應物。經1.5小時後，將混合物在真空中蒸發至乾燥，且藉由管柱層析(矽膠；二氯甲烷/甲醇=7/1至5/1)純化，得到呈黃色固體狀之化合物 37(113 mg，產率50%)。 ¹H NMR (600 MHz, DMSO- d ₆) δ 0.82-0.89 (m, 9H), 1.27 (t, J= 7.4 Hz, 3H), 1.36-1.45 (m, 6H), 1.59-1.69 (m, 2H), 1.81-1.91 (m, 2H), 1.94-1.98 (m, 1H), 2.08-2.22 (m, 2H), 2.50-2.22 (m, 1H), 2.77-2.84 (m, 3H), 2.92-3.04 (m, 3H), 3.14-3.18 (m, 4H), 3.26-3.30 (m, 3H), 3.35 (m, 2H), 3.39-3.47 (m, 3H), 3.54-3.57 (m, 4H), 3.60-3.63 (m, 2H), 3.70-3.72 (m, 3H), 4.02 (dd, J= 8.7, 3.3 Hz, 1H), 4.14 (m, 2H), 4.19 (t, J= 7.5 Hz, 1H), 4.35-4.40 (m, 1H), 4.63 (t, J= 5.3 Hz, 1H), 5.04 (d, J= 7.0 Hz, 1H), 5.08 (d, J= 5.2 Hz, 1H), 5.16 (d, J= 4.0 Hz, 1H), 5.28 (s, 4H), 5.33 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 5.42-5.45 (m, 4H), 5.99 (t, J= 5.5 Hz, 1H), 6.12 (s, 1H), 6.28 (s, 1H), 6.49 (s, 1H), 6.64 (d, J= 8.1 Hz, 2H), 7.03 (d, J= 8.1 Hz, 2H), 7.26 (s, 1H), 7.49 (d, J= 8.3 Hz, 2H), 7.54-7.56 (m, 1H), 7.59 (m, 1H), 7.66 (d, J= 8.2 Hz, 2H), 7.81 (d, J= 8.3 Hz, 1H), 8.07 (d, J= 9.2 Hz, 1H), 8.10 (d, J= 7.1 Hz, 1H), 9.11 (s, 1H), 10.02 (s, 1H), 13.33 (s, 1H) ppm; ¹³C NMR (150 MHz, DMSO- d ₆) δ 7.7, 13.4, 18.2, 19.2, 22.2, 22.6, 26.7, 26.8, 28.9, 29.3, 30.3, 30.4, 34.6, 35.9, 38.0, 38.5, 40.1, 45.1, 49.5, 53.1, 57.6, 60.7, 65.3, 67.6, 68.6, 69.5, 69.7, 69.8, 72.4, 73.2, 76.7, 77.3, 93.7, 95.7, 96.0, 100.7, 103.8, 106.3, 115.0, 118.3, 119.1, 122.7, 127.8, 128.4, 128.7, 129.1, 131.3, 131.4, 138.8, 143.9, 144.5, 146.3, 149.6, 150.1, 155.3, 156.8, 157.2, 158.9, 160.2, 164.3, 164.8, 170.6, 171.3, 172.1, 172.5, 175.1, 176.8, 205.1 ppm。HRMS (ESI TOF-MS) C ₇₆H ₉₃N ₈O ₂₃S [M+H] ⁺: 計算值1517.6069，實驗值：1517.6083。

(2 S)- N-(4-(((( S)-4,11- 二乙基 -4- 羥基 -3,14- 二側氧基 -3,4,12,14- 四氫 -1 H- 哌喃并 [3 ' ,4 ' :6,7] 吲并 [1,2- b] 喹啉 -9- 基 ) 氧基 ) 甲基 ) 苯基 )-2-((2 S)-2-(5-(3-((2-(2-(2-(3,5- 二羥基 -4-(3-(4- 羥苯基 ) 丙醯基 ) 苯氧基 ) 乙氧基 ) 乙氧基 ) 乙基 ) 硫基 )-2,5- 二側氧基吡咯啶 -1- 基 ) 戊醯胺基 )-3- 甲基丁醯胺基 )-5- 脲基戊醯胺 (38)向含化合物 36(36 mg，0.04 mmol)之甲醇(20 mL)溶液中添加化合物 17(21.5 mg，0.05 mmol)。將懸浮液在室溫下攪拌1小時。將混合物在碳酸銫中真空蒸發至乾燥，且添加乙醚/乙酸乙酯(體積比=1/1)以沈澱粗產物。接著藉由管柱層析(C18；乙腈/水=1/1)純化粗產物，得到呈黃色固體狀之化合物 38(17.5 mg，產率32%)。 ¹H NMR (600 MHz, DMSO- d ₆) δ 0.82-0.89 (m, 9H), 1.27 (t, J= 7.4 Hz, 3H), 1.36-1.45 (m, 6H), 1.58-1.60 (m, 1H), 1.70-1.72 (m, 1H), 1.82-1.91 (m, 2H), 1.94-1.99 (m, 1H), 2.13-2.22 (m, 2H), 2.48-2.52 (m, 1H), 2.76 (t, J= 7.5 Hz, 2H), 2.79-2.83 (m, 1H), 2.93-2.99 (m, 2H), 3.01-3.04 (m, 1H), 3.13-3.17 (m, 3H), 3.24 (t, J= 7.5 Hz, 2H), 3.35 (m, 2H), 3.53-3.56 (m, 4H), 3.59-3.64 (m, 2H), 3.70 (t, J= 3.7 Hz, 2H), 4.02 (dd, J= 8.9, 3.8 Hz, 1H), 4.05 (t, J= 3.7 Hz, 2H), 4.19 (t, J= 7.4 Hz, 1H), 4.38 (q, J= 13.1, 7.5 Hz, 1H), 5.27-5.28 (m, 4H), 5.39-5.45 (m, 4H), 5.92 (s, 2H), 5.98 (t, J= 5.4 Hz, 1H), 6.49 (br, s, 1H), 6.65 (d, J= 8.2 Hz, 2H), 7.01 (d, J= 8.2 Hz, 2H), 7.26 (s, 1H), 7.48 (d, J= 8.3 Hz, 2H), 7.55 (dd, J= 11.0, 1.9 Hz, 1H), 7.58 (d, J= 1.6 Hz, 1H), 7.65 (d, J= 8.3 Hz, 2H), 7.81 (d, J= 8.5 Hz, 1H), 8.07 (d, J= 9.1 Hz, 1H), 8.09 (d, J= 7.3 Hz, 1H), 9.14 (br, s, 1H), 10.01 (s, 1H), 12.39 (br, s, 2H) ppm; ¹³C NMR (150 MHz, DMSO- d ₆) δ 7.8, 13.4, 18.2, 19.2, 22.2, 22.6, 23.4, 26.7, 26.8, 29.3, 30.3, 30.4, 34.6, 35.9, 38.0, 38.6, 40.1, 45.6, 49.5, 53.1, 57.6, 65.3, 67.3, 68.6, 69.4, 69.5, 69.6, 69.8, 72.2, 72.4, 93.6, 96.0, 103.7, 104.6, 115.1, 118.3, 119.1, 122.7, 127.8, 128.4, 128.7, 129.1, 131.3, 131.4, 131.5, 138.8, 143.9, 144.5, 146.3, 149.6, 150.1, 155.4, 156.9, 157.2, 158.9, 164.1, 164.6, 170.6, 171.3, 172.1, 172.5, 175.1, 176.8, 204.7 ppm。HRMS (ESI TOF-MS) C ₇₀H ₈₃N ₈O ₁₈S [M+H] ⁺: 計算值1355.5541，實驗值：1355.5562。

[1,4'- 二哌啶 ]-1'- 甲酸 (S)-4,11- 二乙基 -3,14- 二側氧基 -4-( 戊 -4- 炔醯氧基 )-3,4,12,14- 四氫 - 1H- 哌喃并 [3',4':6,7] 吲并 [1,2-b] 喹啉 -9- 酯 (40)向含伊立替康(400 mg，0.64 mmol)之無水乙腈 (5 mL)溶液中添加戊-4-炔酸(94 mg，0.96 mmol)且冷卻至0℃。添加含DCC(198 mg，0.96 mmol)及DMAP (2 mg，0.02 mmol)之無水乙腈 (0.5 mL)且接著再攪拌4小時。在過濾沈澱物之後，在真空中蒸發濾其溶劑。將殘餘物溶於乙酸乙酯並用濃度1.0 N 氯化氫溶液、飽和NaHCO ₃溶液及水萃取。有機層經硫酸鎂乾燥且真空濃縮。藉由管柱層析(矽膠；DCM/MeOH=12/1)純化粗產物，得到呈非晶形固體狀之化合物 40(295 mg，產率69%)。mp：149℃。 ¹H NMR(600 MHz, CDCl ₃) δ 8.13 (d, J= 9 Hz, 1H), 7.81 (d, J= 3 Hz, 1H), 7.56 (dd, J =6.6, 2.4 Hz, 1 H), 7.26 (s, 1H), 5.67 (d, J= 17.4 Hz, 1H), 5.37 (d, J= 17.4 Hz, 1H), 5.21(dd, J= 4.2 Hz, 2 H), 4.40 (dd, J =40.2, 12.6 Hz, 2H), 3.16-3.11 (m, 2H), 3.06 (t, J= 12.6 Hz, 1H), 2.88 (t, J= 12.6 Hz, 1H), 2.77-2.69 (m, 6H), 2.51-2.49 (m, 2H), 2.29-2.23 (m, 1H), 2.20 (t, J= 2.4 Hz, 1H), 2.14-2.08 (m, 4H), 1.75-1.60 (m, 6H), 1.55-1.51 (m, 2H), 1.37 (t, J= 7.5 Hz, 3H), 0.98 (t, J= 7.5 Hz, 3H) ppm; ¹³C NMR(150 MHz, CDCl ₃) δ 170.7, 167.4, 157.3, 153.0, 151.6, 150.3 147.1, 146.6, 145.9, 145.3, 131.5, 127.5, 127.1, 125.8, 119.7, 114.6, 96.4, 82.2, 76.3, 70.2, 67.0 , 62.6, 50.2, 49.2, 44.1, 43.7, 33.1, 31.7, 27.7, 25.1, 23.9, 23.1, 14.2, 13.9, 7.5 ppm；HRMS (ESI) C ₃₈H ₄₃N ₄O ₇[M+H] ⁺計算值: 667.3126，實驗值667.3134。

[1,4'- 二哌啶 ]-1'- 甲酸 ( S)-4-((6-(2,5- 二側氧基 -2,5- 二氫 - 1H- 吡咯 -1- 基 ) 己醯基 ) 氧基 )-4,11- 二乙基 -3,14- 二側氧基 -3,4,12,14- 四氫 - 1H- 哌喃并 [3',4': 6,7] 吲并 [1,2-b] 喹啉 -9- 酯 (41)向含伊立替康(100 mg，0.16 mmol)之無水乙腈 (6 mL)的溶液中添加6-順丁烯二醯亞胺基己酸(195 mg，0.06 mmol)且冷卻至0℃。將含DCC(40 mg，0.19 mmol)及DMAP(2.5 mg，0.02 mmol)之無水乙腈(0.5 mL)添加至前述溶液中且接著再攪拌反應物4小時。過濾反應物中所形成之沈澱物，且透過真空移除其溶劑，並得到粗產物。將粗產物溶於乙酸乙酯並用濃度1.0 N氯化氫溶液、飽和NaHCO ₃溶液及水萃取。收集有機層，經硫酸鎂乾燥且在真空中濃縮。藉由管柱層析(矽膠；(DCM/MeOH)=12/1)純化粗產物，得到呈非晶形固體狀之化合物 41(52.5 mg，產率42%)，mp：149℃。 ¹H NMR (600 MHz, CDCl ₃) δ 8.26 (d, J= 9 Hz, 1H), 7.89 (s, 1H), 7.66 (d, J= 9 Hz, 1H), 7.34 (s, 1H, H-29), 6.70 (s, 1H, H-53), 5.75 (d, J= 16.8 Hz, 1H), 5.48 (d, J= 16.8 Hz, 1 H), 5.46-5.31 (m, 2H, H-28), 4.50 (dd, J= 42, 12 Hz, 2H), 3.60-3.47 (m, 2H), 3.24 (dd, J= 7.2, 7.8 Hz, 2H), 3.15 (t, J= 2.6 Hz, 1H), 2.99 (t, J= 2.6 Hz, 1H), 2.85-2.73 (m, 5H), 2.61-2.52 (m, 3H), 2.39-2.33 (m, 1H), 2.26-2.21 (m, 1H), 2.15-2.10 (m, 1H), 1.86-1.81 (m, 5H), 1.77-1.72 (m, 3H), 1.68-1.63 (m, 2H), 1.63-1.60 (m, 2H), 1.47 (t, J= 7.8 Hz, 3H), 1.43-1.40 (m, 2H), 1.03 (t, J= 7.8 Hz, 3H) ppm; ¹³C NMR(150 MHz, CDCl ₃) δ 172.3, 170.7, 167.5, 157.3, 153.0, 151.5, 150.3, 147.1, 146.8, 145.8, 145.3, 133.9, 131.6, 127.5, 127.1, 125.8, 120.2, 114.6, 95.8, 75.7, 67.1, 62.6, 50.2, 49.3, 44.2, 43.8, 37.5, 33.5, 31.8, 28.1, 27.8, 27.1, 25.9, 25.3, 24.1, 23.1, 14.0, 7.5 ppm；HRMS (ESI) C ₄₃H ₅₀N ₅O ₉[M+H] ⁺計算值: 780.3603，實驗值：780.3636。

[1,4'- 二哌啶 ]-1'- 甲酸 ( 4S)-4,11- 二乙基 -4-((3-(1-(2-(2-(2-(3- 羥基 -4-(3-(4- 羥苯基 ) 丙醯基 )-5-((( 2S,3R,5S,6R)-3,4,5- 三羥基 -6-( 羥甲基 ) 四氫 - 2H- 哌喃 -2- 基 ) 氧基 ) 苯氧基 ) 乙氧基 ) 乙氧基 ) 乙基 )- 1H-1,2,3- 三唑 -4- 基 ) 丙醯基 ) 氧基 )-3,14- 二側氧基 -3,4,12,14- 四氫 - 1H- 哌喃并 [3',4':6,7] 吲并 [1,2-b] 喹啉 -9- 酯 (42)向含化合物 20(27.2 mg，0.04 mmol)之乙醇/水(體積比=3/1，1 mL)溶液中添加TBTA(6.2 mg，0.01 mmol)、抗壞血酸鈉(9.1 mg，0.46 mmol)、五水合硫酸銅(II) (2 mg，0.01 mmol)及化合物 40(30 mg，0.04 mmol)。將反應混合物攪拌24小時且接著在真空中濃縮。將混合物溶解於乙酸乙酯中且用水萃取。收集有機層，在真空中濃縮且藉由管柱層析(矽膠；二氯甲烷/甲醇=10/1至3/1)純化，得到呈泡沫狀之 42(38 mg，產率67%)。 ¹H NMR(400 MHz, CDCl ₃/CD ₃OD = 10/1) δ 8.13 (d, J= 9.2Hz, 1H), 7.88 (s, 1H), 7.81 (s, 1H), 7.58 (d, J= 9 Hz, 1H), 7.31 (s, 1H), 6.98 (d, J= 8.3 Hz, 2H), 6.63 (d, J= 10.8Hz, 2H), 6.03 (s, 1H), 5.82 (d, J= 2.1Hz, 1H), 5.63 (d, J= 16.8Hz, 1H), 5.43 (d, J= 16.8Hz, 1H), 5.13 (dd, J= 15.4, 18.5Hz, 2H), 4.95 (d, J= 7.3 Hz,1 H), 4.42-4.25 (m, 4H), 3.94-3.87 (m, 3H), 3.73-3.66 (m, 6H), 3.56-3.36 (m, 9H), 3.2-2.9 (m, 9H), 2.74-2.72 (m, 6H), 2.28-2.10 (m, 2H), 2.02-1.99 (m, 2H), 1.70-1.54 (m, 8H),1.31 (t, J= 7.3Hz, 3H), 0.99 (t, J= 7.4Hz,3H) ppm; ¹³C NMR(400 MHz, CDCl ₃/CD ₃OD = 10/1) δ 205.2, 171.7, 167.8, 166.1, 164.4, 160.1, 157,4, 153.2, 151.0, 150.3, 146.68, 146.63, 145.7, 132.5, 131.3, 129.1, 127.6, 127.6, 127.1, 126.1, 123.3, 119.3, 115.1, 114.7, 100.4, 96.5 95.6, 94.0, 77.3, 76.3, 76.1, 73.0, 70.5, 69.9, 69.3, 69.1, 67.4, 66.8, 62.4, 61.7, 50.2, 50.1, 49.4, 45.4, 44.2, 43.8, 33.0, 31.5, 29.6, 29.1, 27.7, 27.0, 25.4, 24.1, 23.1, 20.4, 13.8, 7.5 ppm.HRMS (ESI) C ₆₅H ₇₇N ₇O ₁₉+H [M+H] ⁺計算值: 1260.5347，實驗值：1260.5372。

[1,4'- 二哌啶 ]-1'- 甲酸 ( S)-4-((3-(1-(2-(2-(2-(3,5- 二羥基 -4-(3-(4- 羥苯基 ) 丙醯基 ) 苯氧基 ) 乙氧基 ) 乙氧基 ) 乙基 )- 1H-1,2,3- 三唑 -4- 基 ) 丙醯基 ) 氧基 )-4,11- 二乙基 -3,14- 二側氧基 -3,4,12,14- 四氫 - 1H- 哌喃并 [3',4':6,7] 吲并 [1,2-b] 喹啉 -9- 酯 (43)向含有化合物 21(50 mg，0.12 mmol)之乙醇/水 (體積比=3/1，1 mL)中之溶液中添加TBTA(13mg，0.02 mmol)、抗壞血酸鈉(24 mg，0.12 mmol)、五水合硫酸銅(II) (3 mg，0.01 mmol)及化合物 40(80 mg，0.15 mmol)。將反應混合物攪拌12小時且接著在真空中濃縮。將混合物再溶解於乙酸乙酯中且用水萃取。有機層經真空濃縮且藉由管柱層析(矽膠：二氯甲烷/甲醇=10/1至5/1)純化，得到呈非晶形固體狀之 43(77 mg，產率59%)，mp：158℃。 ¹H NMR(600 MHz, CDCl ₃) δ 8.20 (d, J= 9.6Hz, 1H), 7.84 (s, 1H), 7.54 (d, J= 9.6 Hz,1H), 7.49 (s, 1H),7.27 (s,1H), 7.02 (d, J= 7.8 Hz, 2H), 6.76 (d, J=7.8 Hz, 2H), 6.01-5 .93 (m, 2H), 5.63 (d, J=16.8 Hz, 1H), 5.34 (d, J= 16.8 Hz, 1H), 5.22 (d, J= 3.6 Hz, 2H), 4.44-4.41 (m, 3H, H-9), 4.38-4.33 (m, 1H), 4.04 (m, 2H), 3.87-3.86 (m, 2H), 3.64 (t, J= 5.4 Hz, 2H), 3.54 (m, 4H), 3.38-3.29 (m, 2H), 3.16-3.11 (m, 2H), 3.04 (t, J= 6.6 Hz, 1H), 2.91-2.85 (m, 3H), 2.81 (t, J= 6.4Hz, 2H), 2.72 (br, 4H), 2.51-2.50 (m, 1H), 2.46-2.40 (m, 1H), 2.14-2.01 (m, 5H), 1.83-1.62 (m, 6H), 1.51-1.39 (m, 2 H), 1.37 (t, J= 7.2 Hz, 3H), 0.93 (t, J= 7.2 Hz, 3H) ppm; ¹³C NMR (150 MHz, CDCl ₃) δ205.2, 171.6, 167.6, 164.7, 157.2, 154.7, 152.9, 151.0, 150.5, 146.6, 146.2, 146.1, 145.4, 133.4, 130.6,129.3, 127.7, 127.3, 126.5, 123.2, 119.8, 115.2, 114.8, 105.3, 96.5, 94.5, 75.9, 71.1, 70.3, 69.2, 68.7, 66.9, 62.6, 50.7, 50.2, 49.3, 45.9 , 44.1, 43.7, 32.7, 31.5, 29.9, 27.7, 26.9, 25.0, 23.9, 23.2, 20.3, 13.9, 7.5 ppm；HRMS (ESI) C ₅₉H ₆₈N ₇O ₁₄[M+H] ⁺計算值: 1098.4819，實驗值：1098.482

[1,4'- 二哌啶 ]-1'- 甲酸二乙基 -4-((6-(3-((2-(2-(2-(3- 羥基 -4-(3-(4- 羥苯基 ) 丙醯基 )-5-((( 2S,3R,5S,6R)-3,4,5- 三羥基 -6-( 羥甲基 ) 四氫 - 2H- 哌喃 -2- 基 ) 氧基 ) 苯氧基 ) 乙氧基 ) 乙氧基 ) 乙基 ) 硫基 )-2,5- 二側氧基吡咯啶 -1- 基 ) 己醯基 ) 氧基 )-3,14- 二側氧基 -3,4,12,14- 四氫 - 1H- 哌喃并 [3',4':6,7] 吲并 [1,2-b] 喹啉 -9- 酯 (44)向含化合物 16(33.7 mg，0.05 mmol)之無水甲醇 (2 mL)溶液中添加化合物 41(45 mg，0.05 mmol)。將反應混合物攪拌10分鐘，且接著在真空中濃縮。藉由管柱層析(矽膠；二氯甲烷/甲醇=10/1至3/1)純化粗產物，得到呈非晶形固體狀之 44(47.2 mg，產率69%)，mp：146℃。 ¹H NMR (400 MHz, CDCl ₃/CD ₃OD = 10/1) δ 8.05 (d, J= 9.2Hz,1H), 7.72 (d, J= 2.4Hz, 1H), 7.46 (dd, J= 6.7, 2.6 Hz, 1H), 7.14 (d, J= 1Hz, 1H), 6.92 (dd, J= 6.4, 2Hz, 2H), 6.58 (d, J= 7.8Hz, 2H), 6.04 (s, 1H), 5.94 (s, 1H), 5.53 (d, J= 17Hz, 1H), 5.27 (d, J= 8.2Hz, 1H), 4.87 (d, J= 5.7Hz, 1H), 4.34 (dd, J= 30.7, 16.4Hz, 2H), 3.97 (br, 2H), 3.70-3.69 (m, 3H), 3.64-3.59(m, 3H), 3.55-3.53(m, 5H), 3.35-3.31(m, 6H), 3.29-3.27(m, 3H), 3.23(t, J= 1.5 Hz, 2H), 3.05-2.94 (m, 6H), 2.81-2.70 (m, 6H), 2.39-2.30 (m, 3H), 2.14-1.98 (m, 4H), 1.89-1.72 (br, 4H), 1.61-1.49(m, 2H), 1.54-1.40 (m, 6H), 1.26 (t, J= 7.5 Hz, 3H), 1.24-1.15 (m, 2H), 0.85 (t, J= 7.3Hz, 3H) ppm; ¹³C NMR (100 MHz, CDCl ₃/CD ₃OD = 10/1) δ 205.2, 177.1, 175.3, 172.6, 167.9, 164.6, 160.1, 157.5, 154.6, 153.1, 151.3, 146.8, 146.5, 146.4, 146.0, 132.6, 131.2, 129.4, 129.2, 127.6, 127.3, 125.9, 119.7, 115.1, 114.8, 106.3, 100.6, 95.8, 94.2, 76.4, 75.7, 73.1, 70.7, 70.6, 70.1, 69.6, 69.2, 67.6, 66.9, 63.1, 61.5, 50.0, 49.4, 45.5, 43.5, 43.1, 39.3 38.6, 36.1, 33.3, 31.5, 31.2, 29.2, 27.0, 25.8, 24.0, 23.7, 23.1, 22.8, 13.9, 7.5 ppm。HRMS (ESI) C ₇₀H ₈₅N ₅O ₂₁S+H [M+H] ⁺計算值: 1364.5531，實驗值：1364.5597。

( 4S)-4-((6-(3-((2-(2-(2-(3,5- 二羥基 -4-(3-(4- 羥苯基 ) 丙醯基 ) 苯氧基 ) 乙氧基 ) 乙氧基 ) 乙基 ) 硫基 )-2,5- 二側氧基吡咯啶 -1- 基 ) 己醯基 ) 氧基 )-4,11- 二乙基 -3,14- 二側氧基 -3,4,12,14- 四氫 - 1H- 哌喃并 [3',4':6,7] 吲并 [1,2-b] 喹啉 -9- 基 [1,4'- 二哌啶 ]-1'- 甲酸酯 (45)向含化合物 17(25.8 mg，0.06 mmol)於之無水甲醇(2 mL)溶液中添加化合物 41(47.8 mg，0.06 mmol)。將反應混合物攪拌10分鐘，且在真空中濃縮。藉由管柱層析(矽膠；二氯甲烷/甲醇=12/1至5/1)純化粗產物，得到呈非晶形固體狀之 45(41.7 mg，產率58%)，mp：135℃。 ¹H NMR (400 MHz, CDCl ₃) δ 8.14 (d, J= 9.2 Hz, 1H), 7.79 (s, 1H), 7.51 (d, J= 9.2 Hz, 1H), 7.18 (d, J= 2.6Hz, 1H), 6.98 (d, J= 8.1 Hz, 2H), 6.70 (dd, J= 4, 4.3Hz, 2H), 5.92 (s, 2H), 5.63 (d, J= 17Hz, 1H), 5.35 (d, J= 17 Hz, 1H), 5.20 (s, 2H), 4.38 (dd, J= 22.2, 13Hz, 2H), 4.02 (m, 2H), 3.91-3.84 (m, 1H), 3.74-3.70 (m, 4H), 3.62-3.60 (m, 4H), 3.44-3.32 (m, 2H), 3.27-3.23 (m, 2H), 3.10-2.98 (m, 5H), 2.93-2.70 (m, 9H), 2.48-2.41 (dt, J= 18.8, 4.2Hz, 1H), 2.37-2.22 (m, 2H), 2.19-2.13 (m, 2H), 2.04-2.00 (m, 2H), 1.925-1.65(m, 6H), 1.53-1.47 (m, 6H), 1.31 (t, J= 7Hz, 3H), 1.27-1.18 (m, 2H), 0.90 (td, J = 7.4, 1.9Hz, 3H) ppm; ¹³C NMR (100 MHz, CDCl ₃) δ 205.3, 177.4, 177.3, 175.2, 172.6, 167.8, 164.8, 157.4, 154.7, 153.1, 151.1, 150.2, 146.7, 146.4, 146.1, 133.1, 131.1, 129.4, 127.6, 127.3, 126.1, 119.9, 115.4, 114.8, 105.1, 96.5, 94.3, 77.2, 75.7, 70.9, 70.8, 69.3, 67.4, 67.0, 62.8, 50.0, 49.4, 47.6, 47.4, 46.2, 40.9, 39.5, 38.8, 36.3, 33.3, 31.6, 31.4, 29.8, 27.0, 25.8, 24.3, 24.1, 23.4, 23.2, 14.0, 7.6 ppm；HRMS (ESI) C ₆₄H ₇₆N ₅O ₁₆S [M+H] ⁺計算值: 1202.5002，實驗值：1202.5013。

細胞培養及細胞毒性分析

除另有說明外，本揭示的癌細胞株係獲自ATCC。HT-29及HCT-116細胞係在含有10%胎牛血清(FBS，Thermo Fisher Scientific)及1%抗生素-抗黴劑(Thermo Fisher Scientific)之達爾伯克氏改良伊格爾培養基(DMEM，Thermo Fisher Scientific)中培養。除另有說明外，正常細胞株-NHDF細胞係獲自PromoCell。NHDF細胞係在含有10% FBS，及1%抗生素-抗黴劑之達爾伯克氏改良伊格爾培養基(產品編號6429)中培養。這些細胞在37℃下且具有5% 二氧化碳及95%空氣之含濕氣培育箱中培育。

藉由磺醯羅丹明B(SRB)分析測定化合物HT-29、HCT-116及NHDF細胞之細胞毒性。簡言之，將CRC細胞以5×10 ³個細胞/孔之密度接種於96孔微量多孔滴定盤中(100微升/孔)，並分成有添加GSH(實驗組)或無添加GSH(對照組)之兩組。培育24小時後，將培養基更換為新鮮培養基(100微升)。對於無添加GSH之對照組，將一系列濃度之化合物(100 μL，在DMSO或DMA中製備，且用培養基稀釋)直接添加至細胞；對於有添加GSH的組別，細胞用30 mM GSH (20微升/孔，用培養基稀釋)預先處理1小時，且接著添加一系列濃度之化合物(40微升/孔，在DMSO或DMA中製備，且用培養基稀釋)及10 mM GSH (40微升/孔)，以使最終GSH濃度為5 mM，且培育48小時或72小時(DMSO或DMA之量不超過0.5%)。培育後，向各孔中緩緩地添加10%之預冷的三氯乙酸溶液，且在4℃下培育1小時。將96孔微量多孔盤中的液體移除，小心地用水洗滌，且在室溫下乾燥。隨後，將盤用100 微升的0.057% SRB染色30分鐘，用1%乙酸沖洗以移除未結合的染料，且在室溫下乾燥。用100 微升10mM Tris鹼(pH 10.5)溶解結合蛋白質的染料且搖動10分鐘。使用Multi-Mode Microplate Reader (SpectraMax Paradigm, Beckman Coulter, U.S.)在510 nm處理測光密度(O.D.)。細胞存活率計算如下。存活率 = (實驗組O.D. - 空白組O.D.) / (對照組O.D.-空白組O.D.)。使用非線性回歸曲線擬合模型(GraphPad Prism 7，U.S.)計算IC ₅₀值(產生50%細胞生長抑制之濃度)。各實驗重複三次。

2-NBDG 吸收度 分析

將COS-7細胞接種於96孔培養盤中且在補充有10% FBS及2 mM L-麩醯胺酸(L-glutamine)之低葡萄糖達爾伯克氏改良伊格爾培養基中生長24小時。再用Krebs Ringer碳酸氫鹽緩衝液(KRB) (10 mM羥乙基哌嗪乙硫磺酸(HEPES)、129 mM 氯化鈉、4.7 mM 氯化鉀、2 mM 氯化鈣及1.2 mM硫酸鎂、1.2 mM磷酸二氫鉀、5 mM碳酸氫鈉，pH 7.4)洗滌之後，於37℃下及5% CO ₂環境下，將細胞與待測試化合物置於含2-NBDG (200 μM)之KRB中培育90分鐘，且接著用KRB洗滌兩次且用裂解緩衝液((1%乙基苯基聚乙二醇(Nonidet P-40)、1%去氧膽酸鈉(sodium deoxycholate)、40mM氯化鉀及20mM三羥甲基胺基甲烷(Tris)，pH 7.4)裂解細胞。最後，將裂解物轉移至黑色96孔盤中，利用Multi-Mode Microplate Reader (SpectraMax Paradigm, Beckman Coulter, USA)於475 nm之激發波長及550 nm之發射波長偵測螢光強度。

CRC 及 NHDF 細胞株之西方墨點法分析

收集HCT116、HT29及NHDF細胞，用PBS洗滌，使用0.3 毫升之含有50 mM三羥甲基胺基甲烷(Tris-HCl，pH 7.4)、150 mM 氯化鈉水溶液、1 mM乙二胺四乙酸(EDTA)、1%聚乙二醇辛基苯基醚(Triton X-100)及蛋白酶抑制劑混合液(Roche Diagnostics, Indianapolis, IN)之裂解緩衝液下進行裂解。將含有20 μg蛋白質之細胞裂解物與樣品緩衝液混合，且在37℃下變性30分鐘。將蛋白質在10%之十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)中藉由電泳分離，轉移至聚偏二氟乙烯(PVDF)膜上，用含3%牛血清白蛋白(Bovine serum albumi，BSA)之含吐温20的磷酸鹽缓衝液(PBST)封閉空白區域，且將PVDF膜與抗GLUT-1抗體(1:2000，Abcam)一起於4℃下培育過夜。PVDF膜用PBST洗滌，且與接有辣根過氧化物酶(HRP)之二級抗體，包括山羊抗兔(1:3000，Abcam)一起培育。藉由具Ultrascence western受質(Bio-Helix, Taiwan)之抗原，用ChemiDoc XRS系統及Image Lab軟體(Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA)進行影像偵測。3-磷酸甘油醛脱氫酶 (GAPDH)(1:2500，Abcam，小鼠)用作內參考物。HT-29及HCT-116均展示顯著GLUT-1表現量，其中多個條帶反映不同的醣基化GLUT-1。在NHDF細胞株中則觀測到極低表現量的GLUT-1。

健康小鼠與 AOM-DSS( 氧化偶氮甲烷 - 葡聚糖硫酸鈉 ) 誘導大腸癌小鼠之組織蛋白酶 B 表現量的評估

藉由向BALB/c小鼠(6週，雄性)進行i.p.注射AOM(10mg/kg體重)且在其飲用水中補充2%的DSS來建立原位CRC小鼠模型。兩個月後，用CO ₂安樂死小鼠，收集其具有腫瘤區域的大腸，且用4%多聚甲醛固定，隨後製作石蠟切片。另外，亦利用健康balb/c小鼠(6週，雄性)作為對照。根據臺灣大學實驗室動物中心的常規程序製備小鼠大腸樣品之石蠟切片。首先，將石蠟切片在100%二甲苯中脫蠟，且接著在100%、95%、70%、50%及0%乙醇溶液中再水合(在各乙醇溶液中3分鐘)。利用檸檬酸鈉緩衝液(pH 6.0)進行熱介導之抗原修復。於室溫下，藉由在含有3% 過氧化氫之100%甲醇中培育10分鐘，來阻斷組織中之內源性過氧化酶活性。再用PBS沖洗且用PBST (PBS+0.5% Tween 20)洗滌兩次後，將樣品封閉15至30分鐘。接著將切片在4℃下與一級抗體(組織蛋白酶B (DIC7Y) XP Rabbit mAb，1:1000，CST 31718，Cell signaling)一起培育過夜。隨後，將切片與接有HRP之二級抗體(抗兔IgG (HRP)，1:2000，7074S，Cell signaling)於室溫下培育1小時。使用DAB)(Cell signaling)偵測蛋白質表現，且使用蘇木精(Cell signaling)進行複染。藉由正立光學顯微鏡(LEICA DM2500)分析所有切片，且使用MicroVisioneer Manual Whole Slide Imaging Software拍攝影像。

活體內研究

無特定病原體之BALB/c小鼠(6週齡，雄性)係購自國家實驗動物中心。將動物圈養於乾淨的塑膠微型隔離籠(5隻小鼠/籠)中，標準實驗室顆粒的飲食及飲水採任飼方式。動物房間保持恆定溫度、濕度及12小時暗/光循環。所有動物程序均參照臺灣大學醫學院實驗動物照護及使用委員會(Committee for the Laboratory Animal Care Committee in National Taiwan University College of Medicine)之規範[IACUC 20180076]。

將透過AOM誘導之小鼠CRC模型應用於模擬人類的CRC。每兩週向BALB/c小鼠(6週齡，雄性)進行i.p.注射一次AOM (10 mg/kg體重)或PBS溶劑。每次AOM注射之後的七天，持續四天在飲用水中給與2%的DSS，接著給予3天的普通水。重複此循環三次。在第一次AOM治療之後的第60天，將小鼠隨機分成八組(n=5)。每3天一次，持續3週，i.p.注射含5-FU (50 mg/kg體重)、化合物 7(50 mg/kg體重)及5-FU+化合物 17(5-FU 10 mg/kg及化合物 1730 mg/kg)之0.2 mL磷酸鹽緩衝生理鹽水。每隔一天一次(q.o.d)，持續兩周，對小鼠進行i.p.注射伊立替康(20 mg/kg)、化合物 31(20 mg/kg)及伊立替康+化合物 17(20 mg/kg伊立替康及14 mg/kg化合物 17)。每兩天一次，持續兩週，i.v.注射伊立替康(20 mg/kg)、化合物 37(40或20 mg/kg)、化合物 38(40或20 mg/kg)、SN-38+化合物 16(10 mg/kg SN-38及15 mg/kg化合物 16)、SN-38+化合物 17(12 mg/kg SN-38及13 mg/kg化合物 17)、化合物 16(15 mg/kg)及化合物 17(13 mg/kg)。每3天 (5-FU系列)或2天(SN-38系列)量測體重。在第86天(5-FU系列)或第79天(SN-38系列)使用Zoletil ^®50麻醉安樂死小鼠。在死亡後記錄腫瘤面積及體重。在解剖顯微鏡下對腫瘤進行計數，且藉由影像分析軟體(AxioVision LE 4.8.2.0)量測腫瘤覆蓋的面積。

在以下藥動學實驗中，將BALB/c小鼠(六週齡，雄性)隨機分成兩組(n=3)。兩組小鼠分別藉由腹膜內及靜脈內注射用5-FU溶液(9.5 mg/kg)及化合物 7(50 mg/kg，等量於5-FU)治療。在藥物投予之後0、1、3、5、10、15、30、45分鐘、1、2、4及24小時，用注射器經由股靜脈收集血液樣品。將50 μL血液樣品收集至100 μL提取溶劑(EtOAc/MeOH=1:1)中且震盪渦旋30秒。以10,000 rpm的速度離心10分鐘使上清液分離出來，接著在-30℃下冷凍，以用於UPLC-MS/MS分析。對於生物分佈實驗，稱重後將整個解剖器官置於圓底、兩毫升微量離心管中，其中含有1 mL提取溶劑(EtOAc/MeOH=1:1)及7 mm不鏽鋼珠，接著均質化30分鐘。在整個過程中，所有容器均保持在4℃下。藉由以10,000 rpm的速度離心10分鐘而自混合物中分離上清液，且在-30℃下冷凍。用乾燥器自粗器官懸浮液中移除200 μL溶劑，且接著溶解於50 μL提取溶劑中。所有樣品均儲存在-30℃下且在24小時內進行分析。將所有樣品經由0.22 μm聚四氟乙烯膜(PTFE)過濾至12×32 mm小瓶中，以使用5-FU- ¹⁵N ₂作為內標物進行液相層析串聯質譜儀(UPLC-MS/MS)分析。使用WinNonlin軟體(5.2版，Pharsight, MO, USA.)計算藥物動力學參數。

UPLC-MS/MS 分析。

此分析係利用臺灣大學公共衛生學院(College of Public Health, National Taiwan University)之ACQUITY UPLC I-Class/Xevo TQ-XS IVD系統(Waters, Milford, MA, USA)。反相BEH C18 (100 mm×2.1 mm，1.7 μm，Waters)及VanGuard BEH C18 (5 mm×2.1 mm，1.7 μm，Waters)預管柱用於分離分析物。所有資料均藉由MassLynx V4.2獲得。移動相由10 mM之乙酸銨水溶液(A)及乙腈(B)所組成，設定如下：0.00 min 98% A → 1.00 min 98% A → 3.00 min 10% A → 4.50 min 10% A → 4.60 min 98% A → 6.00 min 98% A；速率為0.5 mL/min，持續6.00 min，每次注射4 µL。將管柱烘箱維持在60℃下。利用多反應監測(MRM)方法進行定量。質譜儀參數如下：毛細管電壓，3.0 kV/3.0 kV，分別為正/負離子模式；離子源溫度，120℃；去溶劑化溫度，450℃；錐形氣流(N ₂)，50 L/h；去溶劑化氣體流量(N ₂)，700 L/h；倍增器，650 V；及碰撞氣體壓力(Ar)，3-4×10 ^-3毫巴。

血漿穩定性及藥物釋放分析

為獲得人類血漿穩定性，在95%人類血漿中製備合成的複合體。在37℃下培育指定時間後，藉由添加ACN(5-FU系列前驅藥組)或DMA使蛋白質變性，且接著用12.5 mM磷酸二氫鈉水溶液) (pH 3.2)酸化(化合物30及31)。將混合物以13,000 rpm的速度離心5分鐘。藉由高效能液相層析法(HPLC)分析上清液，且樣品經離心以收集澄清上清液，且保存於-30℃下直至分析；對於釋放分析，將合成之複合體(5-FU系列前驅藥)溶解於DMSO中，且藉由在750 μL PBS (pH 7.4，含有5 μM、1 mM或5 mM GSH)中稀釋50 μL儲備液至最終濃度為2.5 mM來製備分析溶液。對於化合物30及31，將其溶解於DMA中且添加GSH (11.2 mM或11.2 μM)溶液，該溶液在乙酸鈉緩衝液(10 mM，pH 5.0)中以50/40 (體積比)之比例製備，最終GSH在pH 7.0下分別為5 mM或5 μM。培育指定時間後，將樣品離心以收集澄清上清液且儲存於-30℃下直至分析。在指定條件下進行RP-HPLC注射，且對峰面積進行積分以供進一步計算。

統計分析

所有數據至少進行三重複（triplicate），且以平均值±標準差平均值(S.E.M.)呈現。使用SAS版本9.2 (SAS Institute, Cary, NC)，經由t檢驗、單因素變異數分析及雙因素變異數分析來分析各組數據的差異。統計學上顯著性差異分為：n.s.，非顯著差異；****P ＜ 0.0001；***P ＜ 0.001；**P ＜ 0.01；或*P ＜ 0.05。

不同 GSH 濃度下之血漿穩定性及釋放曲線

化合物 5、 7、 9、 30及 31之活體外人類血漿穩定性及釋放曲線描繪於圖2 a)至3 d)中。穩定性測試包含化合物 5、 7、 9、 30及 31於37℃下在人類血漿中以不同時間間隔培育。關於化合物7的樣品係藉由RP-HPLC進行分析(圖2 a)。化合物 5、 7及 9之半衰期分別為0.8小時、13小時及3.6小時(圖2 b))，且化合物 30及 31之半衰期分別為20及50分鐘(圖3 a))。與化合物 7相比，化合物 5及 9之血漿穩定性較差的原因尚不清楚，但可歸因於連接基團之高pKa (丁二醯亞胺及三唑之pKa均在8.5-9.5左右)增加連接基團之酯部分降解的敏感性。因此，對化合物 9進行pH穩定性分析，發現化合物 9在pH 4-5下穩定，但在pH≥7時易於完全降解。為了預測彼等複合體在體內的表現，吾人自血漿分析中收集化合物 7之代謝物，並鑑定出兩種主要代謝物M1 (其產生於化合物 7之酯鍵水解)及M2 (二硫鍵交換中間物) (圖2 a))。由於GSH在腫瘤細胞中之濃度約為5-10 mM，且在血漿中為1-10 µM，因此吾人接著使用GSH評估化合物 5、 7、 9、 30及 31中5-FU或SN-38的釋放。所用GSH之濃度設定為5 mM，模擬腫瘤微環境。48小時後化合物 5及 9釋放出少量5-FU；然而，發現化合物 7中5-FU的釋放取決於所用GSH之濃度。在暴露於5 mM GSH 4小時後，化合物7之降解百分比高達60%，但在1 mM GSH存在下僅為約10%，表明化合物7在1 mM GSH中之降解速度比在5 mM GSH中慢得多(圖2 d))。化合物 7在5 mM及1 mM GSH下之半衰期分別為4.0小時及10.3小時。在5 μM GSH存在下，48小時後僅觀測到30%之化合物 7降解(圖2 d))。亦評估三種含有根皮苷之衍生物 4、 6及 8之穩定性及釋放曲線，其結果分別與其對應同類物 5、 7及 9類似。化合物 6-7中之二硫鍵在高還原性環境中具有相對較短半衰期(＜5小時)，同時在循環中維持一定程度的穩定性。前驅藥 30及 31在0 μM、5 μM及5 mM 的GSH中之穩定性如圖3 b)中所示。前驅藥 31在0及5 μM GSH中相對穩定(48小時後降解10%)，但在5 mM的GSH條件下，48小時後超過90%降解為SN-38，表明前驅藥可藉由高濃度的GSH活化有效地變為SN-38。前驅藥 30與 31具有相同的趨勢，但其SN-38在5 mM GSH中之釋放率僅為約60%。為了弄清楚前驅藥 30及 31之SN-38及該等前驅藥之代謝產物 M3-M7在5 mM GSH中之差異釋放率的原因(圖3 c)及3 d))，吾人按質量分析此等代謝物之分數。結果表明， M3及 M4分別應為來自前驅藥 30中片段 16及-S-(CH ₂) ₂-碳酸酯-SN-38之二硫鍵交換產物； M5為化合物 16； M6應為與 M4相同的產物，但來自前驅藥 31； M7可為GSH與前驅藥 31中片段 17之結合產物。根據此等綜合結果，吾人可知GSH之濃度及其對前驅藥片段之反應性導致母藥之差異釋放率，因此前驅藥 31可能比 30具有更大的治療潛力。

GLUT-1 抑制活性

先前晶體學研究確定，根皮素之苯-1,3,5-三醇環藉形成三個氫鍵而在GLUT-1中穩定，但3位處之取代基(諸如化合物 17)對此干擾的程度係未知的。吾人使用在2-NBDG攝取分析中過度表現GLUT-1之COS-7細胞檢查化合物 16-17對GLUT-1之抑制活性。由於根皮苷無法抑制GLUT-1，因此化合物 16(一種根皮苷衍生物)在50 µM及100 µM下均無法抑制GLUT-1 (圖4)並不出人意料。相反，化合物 17 ，儘管在3-OH處具有取代，仍具有與根皮素類似的抑制活性。

人類 CRC 細胞之細胞毒性

使用SRB分析評估化合物 4-9、 16-17、 30-31、根皮苷、根皮素、5-FU、SN-38及伊立替康對於CRC細胞株HCT-116及HT-29 (兩者均過度表現GLUT-1)之細胞毒性(表1至3)。5-FU展現大約15 µM之IC ₅₀(條目1，表1)。為了模擬腫瘤微環境，首先嘗試將10 mM GSH添加至培養基中，然而，吾人發現10 mM GSH會干擾CRC細胞生長。因此，將5 mM GSH添加至CRC細胞株之培養基中。化合物 16不展現任何抑制活性。化合物 17展現一些抑制活性，IC ₅₀為15至30 μM。在添加或不添加GSH之情況下，化合物 4-5之細胞毒性均不佳。含二硫鍵之化合物 6-7之細胞毒性對GSH敏感，例如，化合物 6對HCT-116細胞之IC ₅₀在具有GSH時為23.8 μM且在不具有GSH時為54.9 μM。此等癌細胞中化合物 6-7對這些癌細胞所造成的細胞毒性，可能係由於細胞內之亞μM水準之GSH逐漸裂解化合物 6-7之二硫鍵以釋放5-FU。在GSH存在下，化合物 7對於HCT-116及HT-29之IC ₅₀為10.5 µM及3.8 µM，其與5-FU在兩種細胞株中之IC ₅₀值(分別為13.9 µM及5.2 µM)接近。化合物 8-9之細胞毒性不佳。化合物 16及 17之細胞毒性亦在5-FU之組合中進行了分析：5-FU與化合物 17之組合比單獨給與其他化合物時更有效地抑制細胞活力，反映了協同抑制作用。另外，亦檢查5-FU及化合物 7在低表現GLUT-1正常細胞株NHDF中之細胞毒性(GLUT-1之西方墨點分析)，發現5-FU及化合物 7均無明顯抑制作用(IC ₅₀分別為70.4±7.2 μM及90.0±2.6 μM)，表明化合物 7對正常細胞之毒性較小。SN-38及伊立替康在CRC細胞中分別展示大約2-430 nM及0.3-8.5 μM之IC ₅₀(條目3至4，表2及表3)。SN-38與化合物 16或 17之組合在HT-29細胞株中展現協同效應。然而，令吾人驚訝的是，當相比於SN-38及SN-38與化合物 16或 17之組合時，化合物 30及 31具有較低或類似的細胞毒性。一般而言，HT-29細胞對化合物變得更敏感，且HCT-116細胞展示為與無GSH條件下類似。由於化合物 30及 31在高GSH濃度下之細胞毒性均未明顯改善，且在無GSH之情況下的IC ₅₀均為奈米級，因此可能會擔心活體內不良反應。亦針對另一類具有組織蛋白酶B敏感性及醚鍵之化合物 37及 38評估細胞毒性，且發現在HCT-116細胞株中之水準約為3-7 µM，且對HT-29細胞之敏感性較低(條目7至8，表3)。此處，為了研究葡萄糖抑制劑與抗癌藥物結合之概念驗證，選擇化合物 7及 31用於進一步評估動物研究中之治療功效。表 1.與 16或 17組合之化合物 4-9、 16-17、 5-FU及 5-FU在HCT-116及HT-29細胞株中之細胞毒性 ^a。

化合物	HCT-116(µM)	HT-29(µM)
無GSH	5 mM GSH	w/o GSH	5 mM GSH
5-FU	14.9 ± 2.24	13.9 ± 0.60	14.9 ± 1.86	5.20 ± 0.12
16	＞100	＞100	＞100	＞100
17	15.5 ± 0.72	15.9 ± 0.89	29.1 ± 6.14	24.2 ± 0.40
4	97.4 ± 20.3	＞100	＞100	93.6 ± 9.4
5	75.0 ± 13.7	82.8 ± 4.18	43.7 ± 5.0	86.9 ± 2.9
6	54.9 ± 3.36	23.8 ± 1.15	59.8 ± 7.93	8.00 ± 0.52
7	21.2 ± 1.69	10.5 ± 1.15	19.6 ± 3.86	3.80 ± 0.65
8	＞100	ND ^b	＞ 100	ND ^b
9	＞100	ND ^b	85 ± 9.1	ND ^b
5-FU+16	21.9 ± 2.98	13.6 ± 0.73	21.0 ± 9.38	8.58 ± 0.09
5-FU+17	10.4 ± 1.25	8.73 ± 0.64	10.3 ± 4.33	3.03 ± 0.03

^a細胞株與化合物一起培育48小時。藉由SRB分析測定IC ₅₀值。 ^bND =未測定。表 2.與 16或 17(在DMA中製備)組合之化合物 30-31、 根皮苷、 根皮素、 SN-38、 伊立替康及 SN-38在HCT-116及HT-29細胞株中之細胞毒性 ^a。

化合物	HCT-116 ^b	HT-29 ^c
無GSH	5 mM GSH	w/o GSH	5 mM GSH
根皮苷 (2) (μM)	＞ 100	＞ 100	＞ 100	＞ 100
根皮素 (3) (μM)	＞ 100	77.57 ± 3.42	＞100	＞100
SN-38 (28) (nM)	2.37± 0.04	2.88 ± 0.08	13.38 ± 0.4	11.28 ± 0.73
伊立替康( 39) (μM)	0.36 ± 0.01	0.32 ± 0.02	5.61 ± 0.11	6.44 ± 0.3
16(μM)	＞ 100	＞ 100	＞ 100	＞ 100
17(μM)	15.5 ± 0.72	15.9 ± 0.89	29.1 ± 6.14	24.2 ± 0.40
30(nM)	2.44 ± 0.17	2.57 ± 0.13	39.64 ± 3.45	30.11 ± 2.6
31(nM)	2.87 ± 0.19	2.59 ± 0.12	16.32 ± 1.31	11.43 ± 1.03
SN-38 +16(nM)	3.91 ± 0.9	2.14 ± 0.04	6.15 ± 0.13	3.8 ± 0.81
SN-38 +17(nM)	2.44 ± 0.18	2.02 ± 0.09	8.73 ± 1.17	6.02 ± 0.05

^aIC ₅₀值係藉由SRB分析測定。 ^b細胞株與化合物一起培育72小時。 ^c細胞株與化合物一起培育48小時。表 3.與 16或 17(在DMA中製備)組合之化合物 16-17、 37-38、 根皮苷、 根皮素、 SN-38、 伊立替康及 SN-38在HCT-116及HT-29細胞株中之細胞毒性 ^{a, b}。

化合物	HCT-116	HT-29
根皮苷 (2) (μM)	＞ 100	＞ 100
根皮素 (3) (μM)	＞ 100	＞100
SN-38 (28) (nM)	54.93 ± 3.86	430 ± 0.01
伊立替康( 39) (μM)	3.69 ± 0.24	8.51 ± 1.86
16(μM)	＞ 100	＞ 100
17(μM)	15.5 ± 0.72	29.1 ± 6.14
37(μM)	3.25 ± 0.42	＞100
38(μM)	7.43 ± 0.78	＞100
SN-38 +16(nM)	45.44 ± 7.4	330 ± 0.03
SN-38 +17(nM)	56.46 ± 2.63	360 ± 0.02

^aIC ₅₀值係藉由SRB分析測定。 ^b細胞株與化合物一起培育48小時。

評估健康小鼠相對於 AOM-DSS 誘導大腸癌小鼠之組織蛋白酶 B 表現量

在評估藥物在大腸癌小鼠中之治療功效之前，吾人首先評估AOM-DSS誘導之balb/c小鼠大腸癌模型是否為組織蛋白酶B過度表現相關疾病之合適模型。另外，健康balb/c小鼠(6週，雄性)亦用於比較。免疫組織化學結果表明，與正常組相比，原位CRC小鼠模型確實具有更高的組織蛋白酶B表現量(圖5 a)-d))，故可合理作為評估組織蛋白酶B敏感性前驅藥之治療功效的模型。

在原位 CRC 小鼠模型中評估合成化合物之活體內活性

基於其釋放曲線及細胞毒性實驗之結果，選擇化合物 7及 31進行活體內評估。藉由向BALB/c小鼠(6週，雄性)腹i.p.注射AOM (10 mg/kg體重)且在其飲水中補充2%的DSS來建立原位CRC小鼠模型(圖6a)及7a))。兩個月後，5-FU (50 mg/kg)、化合物 7(50 mg/kg)及5-FU+化合物 17(10 mg/kg 5-FU及30 mg/kg化合物17，劑量係基於化合物 7)於0.2 mL PBS中之溶液每三天i.p.注射一次，持續三週；含伊立替康(20 mg/kg)、化合物 31(20 mg/kg)及伊立替康+化合物 17(20 mg/kg伊立替康及14 mg/kg化合物 17，劑量係基於化合物 31)之5% DMA+2% Tween 80+93% PBS係經由i.p.途徑每兩天注射一次，持續兩週；含伊立替康(40 mg/kg)、化合物 37(20或40 mg/kg)、化合物 38(20或40 mg/kg)、SN-38+化合物 16(10 mg/kg SN-38及15 mg/kg化合物 16)、SN-38+化合物 17(12 mg/kg SN-38及13 mg/kg化合物 17)、化合物 16(15 mg/kg)及化合物 17(13 mg/kg)之10% DMSO+20% cremophor+10% Na ₂CO ₃(5%於dd H ₂O中)+60% D5W係經由i.v.注射每兩天注射一次，持續兩週。基於腫瘤面積之計算，相當於給與19%的5-FU時，化合物 7展示比50 mg/kg劑量之5-FU (0.07 mmol/kg 5-FU)更好的腫瘤抑制(圖6 b)及6 c))；化合物 31(20 mg/kg，0.022 mmol/kg SN-38)展示比伊立替康(20 mg/kg，0.034 mmol/kg SN-38)更好的抗腫瘤功效，相當於給與65%的SN-38(圖7 b)及7 c))；化合物 38(40 mg/kg，0.03 mmol/kg)亦顯示比伊立替康(40 mg/kg，0.068 mmol/kg)更好的抗腫瘤功效，相當於給與44%的SN-38，(圖7 d))。由於GLUT-1/3/4通常在CRC患者中過度表現，且已知根皮素抑制GLUT3/4抑制，因此化合物 7、 31及 38可能對GLUT-1/3/4顯示靶向作用，從而引起顯著腫瘤抑制。另外，與伊立替康(40 mg/kg，0.068 mmol/kg)相比，具SGLT靶向之化合物 37亦在40 mg/kg (0.03 mmol/kg)之劑量下改善小鼠之腫瘤面積。用游離5-FU治療之小鼠在注射後迅速失去約10%之體重(圖6 d))，可能反映了5-FU之全身毒性；接受化合物 7、 31或 38之小鼠的體重無顯著變化(圖6 d)及7 e)-f))。併用5-FU (含19%的5-FU劑量)或伊立替康(含65%的SN-38劑量)及化合物 17亦減少小鼠模型中之腫瘤面積，展現亦在細胞分析中觀測到的協同效應。

評估藥物動力學及生物分佈曲線

在單次劑量注射化合物之BALB/c小鼠(n=3)中評估化合物 7之血漿濃度及器官分佈。為分析化合物 7之5-FU釋放曲線，進行i.v.注射(50 mg/kg)後1分鐘、3分鐘、5分鐘、10分鐘、15分鐘、30分鐘、45分鐘、1小時、2小時、4小時及8小時收集血液樣品，且藉由UPLC-MS/MS測定化合物 7之濃度。化合物 7之濃度在10分鐘內迅速下降(圖8 a))，可能與羧酸酯酶(carboxylesterase)、二氫嘧啶脫氫酶(dihydropyrimidine，DPD)之表現及 7在小鼠血液中之高組織滲透性有關。在2小時內偵測到自化合物 7釋放之5-FU，且比化合物 7在血液中之持續時間更長(圖8 a))。化合物 7展現不尋常的血漿藥物動力學(PK)曲線，因為其濃度在30分鐘後無法偵測(偵測下限=0.003 μg/mL)，但在45分鐘及4小時後再次可偵測，表明其被小鼠細胞及組織快速吸收且在消除過程中達到平衡。為研究化合物 7之分佈相關抗腫瘤功效，在對BALB/c小鼠(n=3)腹膜內注射(i.p.) (50 mg/kg)化合物 7及5-FU後收集血液樣品。由於親脂性導向的高組織滲透性，5分鐘後化合物 7之濃度低於偵測極限。與5-FU組相比，化合物 7之5-FU的T _max自10分鐘延遲至45分鐘，且2小時後在兩組中均無法偵測到5-FU濃度，表明抗腫瘤功效可能與高組織滲透性有關(圖8 b))。因此，在腹膜內注射後1小時評估化合物 7(50 mg/kg，5-FU等效劑量)及5-FU (9.5 mg/kg)在BALB/c小鼠器官中之分佈；發現化合物 7分佈於胃、大腸、心臟及肝臟中(圖8 c))。由於各器官中化合物 7之量較低，因此對自化合物 7釋放之5-FU進行進一步分析，表明5-FU主要在大腸中偵測到，在腎臟及胃中偵測到少量，而游離5-FU分佈於胃、脾及腎臟中(圖8 c))，與之前的報告類似。此等結果表明吾人之化合物 7結合係實現5-FU遞送至大腸中之適當策略。假定此遞送由主要表現於大腸中之GLUT-1介導。由於根皮素部分與葡萄糖轉運體結合，因此整個複合體可能被細胞吸收。由於癌細胞之細胞內GSH濃度可能比正常細胞高10倍，因此藉由經GSH裂解化合物7之二硫鍵而自複合體中釋放出5-FU。化合物 7之高組織滲透性導致5-FU延遲釋放，延長5-FU之暴露時間且增強其腫瘤根除作用。器官分佈分析揭露了5-FU之大腸靶向作用，產生具有低毒性之有前景的抗腫瘤功效。

本發明之例示性實施例之前述描述僅出於說明及描述之目的呈現，且不意欲為窮盡性的或將本發明限制於所揭示之精確形式。鑒於上述教示，許多修改及變化係可能的。

圖1展示5-FU ( 1)、根皮苷( 2)、根皮素( 3)、SN-38 ( 28)、伊立替康( 39)之結構，以及化合物 4-9、 30-31、 37-38及 42-45之設計。

圖2 a)至2 d)展示化合物 5、 7及 9在不同條件下之活體外血漿穩定性及釋放曲線：圖2 a)使用逆相高效能液相層析法(RP-HPLC)分析人類血漿中的化合物7；圖2 b)化合物5、7及9於37℃下在人類血漿中之穩定性；圖2 c)利用RP-HPLC分析5mM榖胱甘肽(GSH)下的化合物7；圖2 d)化合物7及來自化合物7的5-FU於不同GSH濃度(1 mM及5 mM)之活體外釋放曲線；實驗數據以平均值±平均值標準誤差(S.E.M.) (n=3)來表示。

圖3 a)至3 d)展示化合物 30及 31在不同條件下之活體外血漿穩定性及釋放曲線：圖3 a)化合物 30及 31於37℃下在人類血漿中之穩定性；圖3 b) 化合物 30、 31及來自化合物 30及 31的SN-38於不同GSH濃度(5 μM或5 mM )之活體外釋放曲線；圖3 c)使用RP-HPLC於5 mMGSH的條件下分析化合物 30；圖3 d)使用RP-HPLC於5 mMGSH的條件下分析化合物 31；實驗數據以平均值±平均值標準誤差(S.E.M.) (n=3)來表示。

圖4藉由2-NBDG吸收度的分析，顯示化合物 16及 17之對GLUT-1活性的抑制效果；實驗數據以平均值±平均值標準誤差(S.E.M.)(n=4)來表示。n.s.，非顯著差異，****P ＜ 0.0001 (雙因素變異數分析)。

圖5 a)至5 d)展示下列各者之石蠟包埋大腸切片中組織蛋白酶B之免疫組織化學染色照片：圖5 a)健康小鼠，比例尺=200 μ m，放大倍率為400倍；圖5 b)健康小鼠，比例尺=50 µm，放大倍率率為100倍；圖5 c) CRC小鼠，比例尺=200 µm，放大倍率為400倍及圖5 d) CRC小鼠，比例尺=50 µm，放大倍率率為100倍。使用3,3'-二氨基联苯胺 (3,3'-Diaminobenzidine, DAB)受質(棕色)作為偵測組織蛋白酶B之免疫組織化之化學標記。細胞核使用蘇木精(藍色/紫色)複染。

圖6 a) 5-FU系列化合物於CRC小鼠模型的投藥示意圖；圖6 b)以顯微鏡拍攝小鼠大腸腫瘤之照片；圖6 c)腫瘤面積及圖6 d)對照組(僅PBS(磷酸鹽緩衝生理鹽水))、5-FU (50 mg/kg)、化合物 7(50 mg/kg)及5-FU+化合物 17(10 mg/kg 5-FU及30 mg/kg化合物 17，劑量係基於化合物 7)治療小鼠時的體重變化圖；實驗數據以平均值±平均值標準誤差(S.E.M.) (n=5)來表示。****P ＜ 0.0001，或*P ＜ 0.05 (單因素變異數分析)。

圖7 a)SN-38系列化合物於CRC小鼠模型的投藥示意圖；圖7 b)以顯微鏡拍攝小鼠大腸腫瘤之照片；圖7 c)腹腔(Intraperitoneal, i.p.)注射組之腫瘤面積比較圖及圖7d)靜脈(Intravenous，i.v.)注射組之腫瘤面積比較圖。圖7 e)經由i.p.注射時，對照組(5%二甲基乙醯胺(Dimethylacetamide，DMA)+2% Tween 80+93% PBS)、伊立替康(20 mg/kg)、化合物 31(20 mg/kg)及伊立替康+化合物 17(20 mg/kg伊立替康及14 mg/kg化合物 17)治療之小鼠時的體重變化圖；圖7 f)經由i.v.注射時，對照組(10%二甲基亞碸(Dimethyl sulfoxide，DMSO)+20% Cremophor+10% Na ₂CO ₃(5%於雙蒸水(dd)中)+60% D5W)、伊立替康(40 mg/kg)、化合物 38(40 mg/kg)、化合物 38(20 mg/kg)、化合物 37(40 mg/kg)、化合物 37(20 mg/kg)、SN-38+化合物 17(12 mg/kg SN-38及13 mg/kg化合物 17，劑量係基於40 mg/kg化合物 38)、SN-38+化合物 16(10 mg/kg SN-38及15 mg/kg化合物 16，劑量係基於40 mg/kg化合物37)、化合物 17(13 mg/kg)及化合物 16(15 mg/kg)治療之小鼠時的體重變化圖。實驗數據以平均值±平均值標準誤差(S.E.M.) (n=3~5)來表示。****P ＜ 0.0001，***P ＜ 0.001，**P ＜ 0.01或*P ＜ 0.05 (單因素變異數分析)。

圖8 a)至8 c)展示i.v.及i.p.注射後，小鼠中化合物 7及5-FU之藥物動力學概況。圖8 a)展示在i.v.注射化合物 7(50 mg/kg)及i.v.注射化合物 7及5-FU (50 mg/kg)之後，血漿濃度隨時間變化圖；圖8 b)展示在i.p.注射化合物 7(50 mg/kg)、5-FU (50 mg/kg)及i.p.注射化合物 7及5-FU (50 mg/kg)之後，血漿濃度隨時間變化圖。如化合物濃度低於質譜分析(LC-MS/MS)的偵測極限濃度(0.003 µg/mL)，則將這些資料點任意標示為略低於0.003 µg/mL的濃度顯示；圖8c)展示在向BALB/c小鼠i.p.注射游離5-FU (9.5 mg/kg)及化合物 7(50 mg/kg，5-FU當量劑量)之後1小時的5-FU分佈。實驗數據以平均值±平均值標準誤差(S.E.M.) (n=3)來表示。*P ＜ 0.05。

Claims

一種由式I表示之複合體， A- L- B(I) 或其醫藥學上可接受之鹽，其中 A為具活性的醫藥部分或其前驅藥； B為靶向模組； L為由式II表示之連接基團 (II)；其中 R ₁為-SR ₂或； R ₂為R ₃、-SR ₃或； R ₃為-(CH ₂) _n-R ₄； R ₄為R ₅、-OC(O)-R ₅、-C(O)-R ₅、-C(O)NH-R ₅、-C(O)-、-NHC(O)-R ₅、-OC(O)O-R ₅或-C(O)-Z-NH-伸苯基-R ₅； R ₅為-(CH ₂) _m-； Z為-Val-Cit-、-Phe-Lys-、-Val-Ala-或-Gly-Phe-Leu-Gly-； p為2至9之整數； n為2至9之整數； m為0或1；且該虛線為共價鍵；其限制條件為該複合體不為選自由以下組成之群的化合物：。
如請求項1之複合體或其醫藥學上可接受之鹽，其中 A為具抗癌治療的部分。
如請求項2之複合體或其醫藥學上可接受之鹽，其中 A係選自5-氟尿嘧啶(5-FU)、7-乙基-10-羥基喜鹼(SN-38)、伊立替康(irinotecan)、氯尼達明(lonidamine)、博萊黴素(bleomycin)、絲裂黴素(mitomycin)、順鉑(cisplatinum)、阿黴素(doxorubicin)、美登素(DM-1)、紫杉醇(taxol)、卡巴他賽(cabazitaxel)、氟尿苷(floxuridine)或氟脫氧尿苷(FdUMP)。
如請求項1之複合體或其醫藥學上可接受之鹽，其中 B為具葡萄糖轉運體特異性的結合劑。
如請求項4之複合體或其醫藥學上可接受之鹽，其中 B為視情況經葡萄糖、甘露糖或2-氟-葡萄糖取代之根皮素(phloretin)。
如請求項1之複合體或其醫藥學上可接受之鹽，其中 R ₁為-SR ₂； R ₂為； R ₃為-(CH ₂) _n-R ₄； R ₄為-C(O)-R ₅； R ₅為-(CH ₂) _m-； p為2； n為5；且 m為0。
如請求項1之複合體或其醫藥學上可接受之鹽，其中 R ₁為-SR ₂； R ₂為-SR ₃； R ₃為-(CH ₂) _n-R ₄； R ₄為-OC(O)-R ₅或-OC(O)O-R ₅； R ₅為-(CH ₂) _m-； p為2； n為2；且 m為0。
如請求項1之複合體或其醫藥學上可接受之鹽，其中 R ₁為SR ₂； R ₂為； R ₃為-(CH ₂) _n-R ₄； R ₄為-C(O)-Z-NH-伸苯基-R ₅； R ₅為-(CH ₂) _m-； Z為-Val-Cit-； p為2； n為4；且 m為1。
如請求項1之複合體或其醫藥學上可接受之鹽，其中 R ₁為； R ₃為-(CH ₂) _n-R ₄； R ₄為-C(O)O-R ₅； R ₅為-(CH ₂) _m-； p為2； n為3；且 m為1。
如請求項1之複合體或其醫藥學上可接受之鹽，其中 R ₁為-SR ₂； R ₂為； R ₃為-(CH ₂) _n-R ₄； R ₄為-C(O)O-R ₅； R ₅為-(CH ₂) _m-； p為2； n為4；且 m為1。
如請求項1之複合體或其醫藥學上可接受之鹽，其中 R ₁為-SR ₂； R ₂為-SR ₃； R ₃為-(CH ₂) _n-R ₄； R ₄為-C(O)O-R ₅； R ₅為-(CH ₂) _m-； p為2； n為3；且 m為1。
如請求項1之複合體或其醫藥學上可接受之鹽，其由式III表示， (III)，其中 R為OH或。
如請求項1之複合體或其醫藥學上可接受之鹽，其選自由以下組成之群：其中R為OH或。
一種醫藥組合物，其包含如請求項1至13中任一項之複合體。
如請求項14之醫藥組合物，其進一步包含治療劑。
一種如請求項1至13中任一項之複合體或其醫藥學上可接受之鹽之用途，其用於製造一藥劑，該藥劑用以治療一個體之疾病、復發或進展或經診斷患有疾病之個體在相關時段內，增加其存活之可能性。
如請求項16之用途，其中該疾病為選自實體固態瘤或液體瘤或其轉移之癌症。
如請求項17之用途，其中該癌症選自由以下組成之群：鱗狀細胞癌；肺癌，包括小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺腺癌及肺鱗狀癌；腹膜癌；肝細胞癌；胃癌或胃臟癌，包括胃腸癌；胰臟癌；神經膠母細胞瘤；子宮頸癌；卵巢癌；肝癌；膀胱癌；肝腫瘤；乳癌；大腸癌；直腸癌；大腸直腸癌；子宮內膜癌或子宮癌；唾液腺癌；腎臟癌或腎癌；前列腺癌；外陰癌；甲狀腺癌；肝癌；肛門癌；陰莖癌；頭頸癌；淋巴瘤；白血病；骨髓瘤；及骨髓增生性贅瘤。
如請求項16之用途，其中該個體難以用藥物治療或對藥物具有耐藥性。
如請求項16之用途，其中該藥劑可與治療劑併用。