TW202328194A

TW202328194A - Ｌｉｌｒｂ２特異性單株抗體及其使用方法

Info

Publication number: TW202328194A
Application number: TW111134582A
Authority: TW
Inventors: 寧燕張; 志強安; 趙鵬
Original assignee: 德州大學系統董事會
Priority date: 2021-09-13
Filing date: 2022-09-13
Publication date: 2023-07-16
Also published as: CA3231706A1; WO2023039613A2; WO2023039613A3

Abstract

提供分離的或重組的抗LILRB2單株抗體。在一些實施方案中，此處的抗體可用於諸如阿滋海默病等人疾病的檢測、診斷和/或治療性治療。

Description

ＬＩＬＲＢ２特異性單株抗體及其使用方法

通過電子申請提交的序列表的引用大小為164 KB的名稱為"UTH-013PCT0_sequence_ listing_ST26_FILED.XML"的序列表的XML文件內容創建於2022年9月11日，並隨同本申請以電子方式提交給美國專利商標局專利中心(USPTO’s Patent Center)，其通過引用整體並入。 在先申請的交叉引用本申請要求2021年9月13日提交的美國臨時申請號63/243,472的權益。以上述申請的內容為依托，並且其通過引用整體並入本文。本揭露係關於分離的或重組的抗LILRB2單株抗體及其使用方法。

如Zhao等人("TREM2 Is a Receptor for β-Amyloid that Mediates Microglial Function"; 2018; Neuron 97:1023-1031; 其通過引用整體並入本文)論述的，阿滋海默病(AD)是年齡依賴性神經退行性病症，其特徵在於富含β-澱粉樣(Aβ)肽的老年斑和包含過度磷酸化的tau的神經原纖維纏結。寡聚形式的Aβ (oAβ)被認為會觸發導致AD的病理級聯反應。最近的全基因組關聯研究已鑒定了許多在AD中改變了的遺傳基因座，其可能不直接影響Aβ生成或tau聚集。有趣的是，這些基因的子集，包括TREM2 (髓樣細胞表現觸發受體2 (Triggering Receptor Expressed on Myeloid cells 2))在內，在諸如小膠質細胞等髓樣細胞類型中表現，這提示免疫細胞功能障礙可能在AD發病機制中起關鍵作用。除了與早發性AD有聯繫的家族性β澱粉樣前體蛋白(APP)、早老蛋白(PS) 1/2等位基因之外，ApoE (ε4)和TREM2胞外結構域(R47H)中的變異目前與最高的AD風險有關。TREM2胞外結構域另外的變體(例如R62H)也與增加的AD風險有聯繫。已經證明TREM2介導雕亡細胞碎片的吞噬清除並調節炎症反應。TREM2與其銜接子(小膠質細胞表面上的12 kDa的DNAX活化蛋白(DAP12))結合，以發生固有免疫應答和下游細胞應答或信號傳導通路。儘管最近鑒定出脂質和ApoE為TREM2配體，但TREM2的生物配體及其對AD發病機制中小膠質細胞功能的相應影響仍不清楚。仍然需要診斷和治療組合物以及方法來檢測、預防和治療在AD以及尤其是另外形式的痴呆發展期間發生的病理過程。

本文現在提供單株抗體組合物，其可用於診斷和/或治療神經系統或神經退行性疾病和病症，所述疾病和病症包括但不限於阿滋海默病(AD)、帕金森病(PD)、痴呆、路易體痴呆(DLB)等，包括神經炎症過程和涉及小膠質細胞的過程。有利的是，該發現為其使用者提供了治療對其他常規治療沒有充分反應的某些類型的神經退行性疾病和痴呆的方法。本文中描述的是與LILRB2結合的單株抗體。在另外的方面，所提供的結合LILRB2的抗體可以影響細胞信號傳導並且可用於調節小膠質細胞功能，所述細胞信號傳導至少通過oAβ和PS介導的TREM2和白細胞免疫球蛋白樣受體亞家族B成員2 ("LILRB2")共連接信號傳導通路所介導。因此，在一個方面，提供與LILRB2特異性結合的分離的或重組的單株抗體。在某些方面，提供與NeuB2-8、NeuB2-9、NeuB2-13、NeuB2-19、NeuB2-29、NeuB2-37、NeuB2-40、NeuB2-55、NeuB2-60、NeuB2-80、NeuB2-93、NeuB2-110或NeuB2-128單株抗體競爭LILRB2的結合的抗體。在某些方面，抗體可以包含NeuB2-8、NeuB2-9、NeuB2-13、NeuB2-19、NeuB2-29、NeuB2-37、NeuB2-40、NeuB2-55、NeuB2-60、NeuB2-80、NeuB2-93、NeuB2-110或NeuB2-128單株抗體的全部或部分的重鏈可變區和/或輕鏈可變區。在另一方面，抗體可以包含胺基酸序列，所述胺基酸序列對應於來自本實施方案的NeuB2-8、NeuB2-9、NeuB2-13、NeuB2-19、NeuB2-29、NeuB2-37、NeuB2-40、NeuB2-55、NeuB2-60、NeuB2-80、NeuB2-93、NeuB2-110或NeuB2-128單株抗體的輕可變鏈和/或重可變鏈的第一、第二和/或第三互補決定區(CDR)。在某些實施方案中，分離的抗體包含CDR序列，所述CDR序列與NeuB2-8、NeuB2-9、NeuB2-13、NeuB2-19、NeuB2-29、NeuB2-37、NeuB2-40、NeuB2-55、NeuB2-60、NeuB2-80、NeuB2-93、NeuB2-110或NeuB2-128的重鏈和輕鏈胺基酸序列的CDR區具有至少80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%的同一性。在另外的方面，抗體包含除了在一個或多個CDR處的一個或兩個胺基酸取代、缺失或插入之外，與NeuB2-8、NeuB2-9、NeuB2-13、NeuB2-19、NeuB2-29、NeuB2-37、NeuB2-40、NeuB2-55、NeuB2-60、NeuB2-80、NeuB2-93、NeuB2-110或NeuB2-128 CDR區相同的CDR區。在又一方面，本公開提供一種組合物，其包含上述實施方案中任一個的抗體或重組多肽。在又一方面，本公開提供一種宿主細胞，其包含一種或多種編碼上述實施方案中任一個的抗體或重組多肽的多核苷酸分子。數字E5、E6和E7等在本文中分別與10 ⁵、10 ⁶和10 ⁷等互換使用。術語"包含(comprising)"及其變體(例如包含(comprises)、包括等)，當這些術語出現在描述和請求項中時，不具有限制性含義。如本文使用的，除非上下文另有明確規定，"一個"、"一種"、"該"、"至少一個"和"一個或多個"可互換使用。同樣在本文中，通過端點列舉的數值範圍包括歸入該範圍內的所有數字(例如500至7000 nm包括500、530、551、575、583、592、600、620、650、700等)。詞語"優選的"和"優選地"是指在某些情況下可以提供某些益處的本發明的實施方案。然而，在相同或其他情況下，其他實施方案也可以是優選的。此外，一個或多個優選實施方案的列舉並不含有其他實施方案是無用的意思，並且不旨在將其他實施方案從本發明的範圍中排除。 "激動劑"抗體或"活化"抗體是在抗體結合抗原後誘導(例如增加)抗原的一種或多種活性或功能的抗體。 "拮抗劑"抗體或"阻斷"抗體是在抗體結合抗原後減少或消除(例如降低)抗原與一個或多個配體的結合的抗體，和/或在抗體結合抗原後減少或消除(例如降低)抗原的一種或多種活性或功能的抗體。在一些實施方案中，拮抗劑抗體或阻斷抗體基本上或完全抑制抗原與一種或多種配體的結合和/或抗原的一種或多種活性或功能。如本文使用的，關於肽、多肽或抗體序列的"百分比(%)胺基酸序列同一性"和"同源性"是指在比對序列並引入缺口(如果需要，以實現最大百分比序列同一性)，並且不考慮將任何保守取代作為序列同一性的一部分後，候選序列中與特定肽或多肽序列中的胺基酸殘基相同的胺基酸殘基百分比。為了確定百分比胺基酸序列同一性，可以以本領域的技術範圍內的各種方法實現比對，例如使用公開可用的計算機軟件，諸如BLAST、BLAST-2、ALIGN或MEGALIGN™ (DNASTAR)軟件。本領域技術人員可以確定用於測量比對的適當參數，包括在被比較序列的全長上實現最大比對所需的本領域已知的任何算法。 "宿主細胞"包括單獨的細胞或細胞培養物，其可以是或已經是用於摻入多核苷酸插入物的載體的受體。宿主細胞包括單一宿主細胞的子代，並且由於自然、偶然或故意的突變，子代可以不一定與原始親本細胞完全相同(在形態或基因組DNA互補方面)。宿主細胞包括用本發明的多核苷酸在體內轉染的細胞。術語"分離的分子"(其中分子為例如多肽、多核苷酸或抗體)是由於其起源或衍生來源，(1)不與在其天然狀態下伴隨其的天然締合組分締合的、(2)基本上不含來自相同物種的其他分子的、(3)由來自不同物種的細胞表現或(4)在自然界中不存在的分子。因此，本公開的抗LILRB2抗體是經鑒定並與至少一種通常在其產生的環境中與其締合的污染核酸分子分離的核酸分子。優選地，分離的核酸不與產生環境相關聯的所有組分締合。編碼本文中的多肽和抗體的分離的核酸分子的形式不同於其在自然界中發現的形式或環境，因此，分離的核酸分子區別於天然存在於細胞中的編碼本文中的多肽和抗體的核酸。此外，化學合成的或在細胞系統中表現的分子將與其天然締合組分"分離"，所述細胞系統與該分子天然起源於的細胞不同。也可以使用本領域衆所周知的純化技術，通過分離使分子基本上不含天然締合組分。分子純度或同質性可以通過本領域衆所周知的許多手段來測定。例如，多肽樣品的純度可以使用聚丙烯醯胺凝膠電泳以及凝膠染色以使用本領域衆所周知的技術使多肽可視化來測定。為了某些目的，可以通過使用HPLC或本領域衆所周知的用於純化的其他手段來提供更高的分辨率。術語"表位"是指能夠在一個或多個抗體分子的抗原結合區處，被抗體分子或其抗原結合部分識別並被其結合的分子的那部分。表位可由一級、二級或三級蛋白結構的確定的區域組成，並且包括被抗體或其抗原結合部分的抗原結合區識別的靶標的二級結構單元或結構域的組合。表位同樣可以由分子的確定的化學活性表面定群(諸如胺基酸或糖側鏈)組成，並且具有特定的三維結構特徵以及特定的電荷特徵。如本文使用的，術語"抗原表位"定義為抗體分子可以特異性地與之結合的多肽的一部分，如通過本領域衆所周知的任何方法，例如通過常規的免疫測定、抗體競爭性結合測定或通過X射線晶體學或相關結構確定方法(例如NMR)確定的。術語"結合親和力"或"K _D"是指特定抗原-抗體相互作用的解離速率。K _D是解離速率(也稱為"解離速率(off-rate)(k _off)")與締合速率或"締合速率(on-rate)(k _on)"的比率。因此，K _D等於k _off/k _on並表示為莫耳濃度(M)。由此可見，K _D越小，結合的親和力越强。因此，與1 nM的K _D相比，1 µM的K _D指示弱結合親和力。抗體的K _D值可以使用本領域公認的方法來確定。一種確定抗體K _D的方法是通過使用表面等離子體共振(SPR)，典型地使用生物傳感器系統，諸如Biacore.RTM.系統。如本文使用的，短語"有效量"或"治療有效量"是指(在一定劑量中和一段時間內以及對於施用方式而言)實現所期望的治療結果所必需的量。有效量是賦予受試者治療益處所必需的活性劑的至少最小量(但小於中毒量)。如本文使用的，關於本發明的抗體分子生物活性的術語"抑制"或"中和"，意為抗體基本上拮抗、阻止、防止、限制、減緩、中斷、消除、停止、減少或逆轉例如正要被抑制的那些(包括但不限於抗體分子與LILRB2的生物活性或結合相互作用)的進展或嚴重程度的能力。如本文使用的，"載體"意為能夠在宿主細胞中遞送，並且優選地表現感興趣的一個或多個基因或序列的構建體。載體的實例包括但不限於病毒載體、裸DNA或RNA表現載體、質體、黏質體或噬菌體載體、與陽離子縮合劑締合的DNA或RNA表現載體、包封在脂質體中的DNA或RNA表現載體以及某些真核細胞，諸如產生細胞。如本文使用的，除非另有指示，術語"治療(treating)"意為該術語所適用的病症或狀況，或此類病症或狀況的一個或多個症狀的逆轉、緩解、抑制其進展、延遲其進展、延遲其發作或預防。如本文使用的，除非另有指示，術語"治療(treatment)"是指如上所定義的治療行為。術語"治療(treating)"還包括受試者的輔助治療和新輔助治療。為避免疑義，本文提及"治療(treatment)"包括提及治愈性、姑息性和預防性治療。為避免疑義，本文提及"治療(treatment)"還包括提及治愈性、姑息性和預防性治療。術語"包含(comprising)"及其變體(例如包含(comprises)、包括等)，當這些術語出現在描述和請求項中時，不具有限制性含義。除非另有規定，本文使用的所有科學和技術術語都具有本領域常用的含義。本文提供的定義是為了促進對本申請中頻繁使用的某些術語的理解，並且不意味著在本公開的上下文中排除這些術語的合理解釋。應理解，本文所描述的本公開的方面和實施方案包括"包含"、"由…組成"和"基本上由…組成"的方面和實施方案。除非另有指示，說明書和申請專利範圍中使用的表示特徵大小、量和物理性質的說明和申請專利範圍中的所有數字在所有情況下均應理解為被術語"約"修飾。因此，除非指示相反的情況，在前述說明書和所附申請專利範圍中闡述的數值參數是近似值，其可以根據由本領域技術人員利用本文公開的教式所尋求獲得的期望性質而變化。至少，而不是試圖將等同原則的應用限制在申請專利範圍的範圍內，每個數值參數至少應根據所報告的有效數字的數量以及通過應用普通的四捨五入技術來解釋。儘管闡述本發明廣泛範圍的數值範圍和參數是近似值，但具體實例中闡述的數值是盡可能準確地報告的。然而，任何數值本質上都含有一定的誤差，這些誤差必然是由於其各自的測試測量中發現的標準偏差造成的。本發明的上述概述並不旨在描述本發明的每個公開的實施方案或每個實施。下面的描述更具體地例示了說明性實施方案。

本公開描述了具有與LILRB2的結合親和力的一組單株抗體及其片段。抗體特異性地與LILRB2結合，並阻斷LILRB2與配體oAβ和PS之間的相互作用，而無對LILRB和LILRA家族中的受體的交叉反應性(Zhao等人, Molecular Neurodegeneration, 17:44 2022)。本公開的抗體可用於治療腦疾病，諸如神經退行性疾病和病症，其包括但不限於阿滋海默病(AD)、帕金森病(PD)、痴呆、路易體痴呆(DLB)等，包括例如神經炎症過程和涉及小膠質細胞的過程。實施方案的抗體在某些實施方案中，設想了與LILRB2蛋白的至少一部分結合並抑制LILRB2信號傳導的抗體或其片段。如本文使用的，術語"抗體"旨在泛指任何免疫結合劑，諸如IgG、IgM、IgA、IgD、IgE和遺傳修飾IgG以及包含保留抗原結合活性的抗體CDR結構域的多肽。抗體可以選自：嵌合抗體、親和力成熟抗體、多株抗體、單株抗體、人源化抗體、人抗體或結合抗原的抗體片段或天然或合成的配體。優選地，抗LILRB2抗體是單株抗體或人源化抗體。 "抗體分子"包括任何類別的抗體，諸如IgG、IgA或IgM (或其亞類)，並且抗體不需要是任何特定類別的。取決於其重鏈恆定區的抗體胺基酸序列，免疫球蛋白可以分為不同的類別。免疫球蛋白有五個主要類別：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，並且其中幾個可以進一步分為亞類(同種型)，例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2。對應於不同類別的免疫球蛋白的重鏈恆定區分別稱為α、δ、ε、γ和μ。不同類別的免疫球蛋白的亞基結構和三維構型是衆所周知的。如本文使用的，術語抗體分子的"抗原結合部分"是指保留與LILRB2特異性結合能力的完整抗體的一個或多個片段。抗體分子的抗原結合功能可以通過完整抗體的片段來完成。包括在術語抗體分子的"抗原結合部分"內的結合片段的實例包括Fab、Fab'、F(ab')2、由V _H和CH1結構域組成的Fd片段、由抗體單臂的V _L和V _H結構域組成的Fv片段、單結構域抗體(dAb)片段和分離的互補決定區(CDR)。術語"Fc區"用於定義免疫球蛋白重鏈的C末端區。"Fc區"可以是天然序列Fc區或變體Fc區。儘管免疫球蛋白重鏈的Fc區的邊界可以變化，但人IgG重鏈Fc區通常定義為從位置Cys226處的胺基酸殘基或從Pro230延伸至其羧基末端。Fc區中殘基的編號是與Kabat中的一樣的EU索引的編號。免疫球蛋白的Fc區一般包含兩個恆定結構域，CH2和CH3。如本領域已知的，Fc區可以以二聚體或單體形式存在。抗體的"可變區"是指單獨或組合的抗體輕鏈的可變區或抗體重鏈的可變區。如本領域已知的，重鏈和輕鏈的可變區各自由通過三個互補決定區(CDR)(也稱為超變區)連接的四個框架區(FR)組成，其有助於抗體的抗原結合位點的形成。當選擇在CDR側翼的FR時，例如當人源化或優化抗體時，來自含有在相同典範類別中的CDR序列的抗體的FR是優選的。如本文使用的，術語"保守取代"是指一種胺基酸用不會顯著有害地改變功能活性的另一種胺基酸置換。"保守取代"的優選實例是一種胺基酸用在BLOSUM 62取代矩陣中具有大於0的值的另一種胺基酸置換(參見Henikoff & Henikoff, 1992, PNAS 89: 10915-10919)。因此，通過已知手段以及如本文所述，可以產生對LILRB2蛋白、其各個表位中的一個或多個或前述的任一種的綴合物(無論此類抗原或表位是從天然來源分離的還是天然化合物的合成衍生物或變體)特異的多株或單株抗體、抗體片段以及結合結構域和CDR (包括前述的任一種的工程化形式)。適合用於本實施方案的抗體片段的實例包括但不限於：(i)由V _L、V _H、CL和CHI結構域組成的Fab片段；(ii)由V _H和CHI結構域組成的"Fd"片段；(iii)由單個抗體的V _L和V _H結構域組成的"Fv"片段；(iv)由V _H結構域組成的"dAb"片段；(v)分離的CDR區；(vi) F(ab')2片段，其為包含兩個相連的Fab片段的二價片段；(vii)單鏈Fv分子("scFv")，其中V _H結構域和V _L結構域通過肽連接子連接，所述肽連接子允許兩個結構域締合以形成結合結構域；(viii)雙特異性單鏈Fv二聚體(例如參見美國專利號5,091,513)；和(ix)通過基因融合構建的雙抗體(diabody)、多價或多特異性片段(例如參見美國專利申請公開號20050214860)。Fv、scFv或雙抗體分子可以通過摻入連接V _H和V _L結構域的二硫橋來穩定。也可以製造包含與CH3結構域連接的scFv的微抗體(例如參見Hu等人, 1996, "Minibody: A Novel Engineered Anti-Carcinoembryonic Antigen Antibody Fragment (Single-Chain Fv-CH3) Which Exhibits Rapid, High-Level Targeting of Xenografts", Cancer Res. 56:3055-3061)。在實施方案中還設想了抗體樣結合肽模擬物。Liu等人(Murali, R.; Liu, Q.; Cheng, X.; Berezov, A.; Richter, M.; Furuchi, K.; Greene, M.I.; Zhang, H. Antibody like peptidomimetics as large scale immunodetection probes. Cell. Mol. Biol. (Noisy-le-grand) 2003, 49:209–216, 其通過引用整體並入本文)描述了"抗體樣結合肽模擬物"(ABiP)，其為充當精簡抗體，並具有較長的血清半衰期以及不太繁瑣的合成方法的某些優點的肽。單株抗體(或"MAb")是單一種類的抗體，其中每個抗體分子識別相同的表位，因為所有產生抗體的細胞都來源於單一B淋巴細胞系。產生單株抗體(MAb)的方法一般以與製備多株抗體的方法相同的方式開始。在一些實施方案中，嚙齒動物(諸如小鼠和大鼠)用於產生單株抗體。在一些實施方案中，兔、綿羊或蛙細胞用於產生單株抗體。使用大鼠是衆所周知的，並且其可以提供某些優點。常規使用的是小鼠(例如BALB/c小鼠)，並且其一般給出高百分比的穩定融合。融合瘤技術涉及來自先前免疫的(例如使用LILRB2抗原)小鼠的單一B淋巴細胞與永生骨髓瘤細胞(通常是小鼠骨髓瘤)的融合。該技術提供使產生單一抗體的細胞增殖無限代數的方法，使得可以產生無限量的具有相同抗原或表位特異性的結構相同的抗體(單株抗體)。漿B細胞(CD45+CD5-CD19+)可以從免疫兔的新鮮製備的兔外周血單核細胞中分離，並進一步選擇結合LILRB2的細胞。在富集產生抗體的B細胞後，可以分離總RNA並合成cDNA。可以擴增來自重鏈和輕鏈兩者的抗體可變區的DNA序列，將其構建到噬菌體展示Fab表現載體中，並轉化到大腸杆菌( E. coli)中。特異性結合LILRB2的Fab可以通過多輪富集淘選選擇出來並測序。所選擇的結合LILRB2的命中可以使用人胚胎腎(HEK293)細胞(Invitrogen)中的哺乳動物表現載體系統以兔和兔/人嵌合形式表現為全長IgG，並使用蛋白G樹脂用快速蛋白液相層析(FPLC)分離單元純化。在一個實施方案中，抗體是嵌合抗體，例如包含接枝到異源非人、人或人源化序列(例如框架和/或恆定結構域序列)上的來自非人供體的抗原結合序列的抗體。已經開發出用人類起源的類似結構域置換單株抗體的輕鏈和重鏈恆定結構域，而使外來抗體的可變區保持完整的方法。備選地，"完全人"單株抗體是在人免疫球蛋白基因的轉基因小鼠中產生的。還開發了通過重組構建具有嚙齒動物(例如小鼠)和人胺基酸序列兩者的抗體可變結構域，來將單株抗體的可變結構域轉換為更具人形式的方法。在"人源化"單株抗體中，只有高變CDR來源於小鼠單株抗體，而框架區和恆定區來源於人胺基酸序列(例如參見美國專利號5,091,513和6,881,557，其通過引用整體並入本文)。認為抗體中具有嚙齒類動物特徵的胺基酸序列用在人抗體的相應位置中發現的胺基酸序列置換，將減少治療使用期間不良免疫反應的可能性。產生抗體的融合瘤或其他細胞也可能發生遺傳突變或其他變化，這可能會或可能不會改變由融合瘤產生的抗體的結合特異性。用於在不同動物物種中產生多株抗體，以及用於產生不同類型(包括人源化、嵌合和完全人)單株抗體的方法是本領域衆所周知並且高度可預測的。例如以下美國專利和專利申請(其通過引用整體並入本文)提供了可實施此類方法的描述：美國專利申請號2004/0126828和2002/0172677，以及美國專利號3,817,837、3,850,752、3,939,350、3,996,345、4,196,265、4,275,149、4,277,437、4,366,241、4,469,797、4,472,509、4,606,855、4,703,003、4,742,159、4,767,720、4,816,567、4,867,973、4,938,948、4,946,778、5,021,236、5,164,296、5,196,066、5,223,409、5,403,484、5,420,253、5,565,332、5,571,698、5,627,052、5,656,434、5,770,376、5,789,208、5,821,337、5,844,091、5,858,657、5,861,155、5,871,907、5,969,108、6,054,297、6,165,464、6,365,157、6,406,867、6,709,659、6,709,873、6,753,407、6,814,965、6,849,259、6,861,572、6,875,434和6,891,024。抗體可以從任何動物來源產生，包括鳥類和哺乳類。優選地，抗體為綿羊、鼠(例如小鼠和大鼠)、兔、山羊、豚鼠、駱駝、馬或鶏。此外，較新的技術允許從人組合抗體庫中開發和篩選人抗體。例如，如美國專利號6,946,546中所述(其通過引用並入本文)，噬菌體抗體表現技術允許在沒有動物免疫的情況下產生特異性抗體。完全可以預期，不論抗體的來源(例如動物物種、單株細胞系或其他來源)如何，通過與LILRB2結合，針對LILRB2的抗體都將具有調節人小膠質細胞活性的能力。某些動物物種可能不太優選用於產生治療性抗體，因為由於通過抗體的"Fc"部分活化補體系統，它們可能更容易引起過敏反應。然而，整個抗體可以被酶促消化成"Fc"(補體結合)片段，以及消化成具有結合結構域或CDR的抗體片段。Fc部分的去除減少了抗原抗體片段引發不良免疫應答的可能性，並且因此，沒有Fc的抗體可優先用於預防性或治療性治療。如上所述，抗體也可以被構建為嵌合的或部分或完全是人的，從而減少或消除由於向動物施用在其他物種中產生或具有來自其他物種的序列的抗體造成的不良免疫後果。取代變體典型地含有在單株抗體蛋白內的一個或多個位點處一個胺基酸與另一個的交換，並且可以設計用來調節多肽的一種或多種性質，而伴隨或不伴隨其他功能或性質的喪失。取代可以是保守的，即一個胺基酸用具有相似的形狀和電荷的胺基酸置換。保守取代在本領域是衆所周知的，並且包括例如以下的變化：丙胺酸到絲胺酸、精胺酸到離胺酸、天冬醯胺酸到麩醯胺酸或組胺酸、天冬胺酸到麩胺酸、半胱胺酸到絲胺酸、麩醯胺酸到天冬醯胺酸、麩胺酸到天冬胺酸、甘胺酸到脯胺酸、組胺酸到天冬醯胺酸或麩醯胺酸、異白胺酸到白胺酸或纈胺酸、白胺酸到纈胺酸或異白胺酸、賴胺酸到精胺酸、甲硫胺酸到白胺酸或異白胺酸、苯丙胺酸到酪胺酸、白胺酸或甲硫胺酸、絲胺酸到蘇胺酸、蘇胺酸到絲胺酸、色胺酸到酪胺酸、酪胺酸到色胺酸或苯丙胺酸以及纈胺酸到異白胺酸或白胺酸。備選地，取代可以是非保守的，使得多肽的功能或活性受到影響。非保守變化典型地涉及殘基用化學上不同的殘基取代，諸如用極性或帶電荷的胺基酸取代非極性或不帶電荷的胺基酸，並且反之亦然。本公開的蛋白(例如單株抗體)可以是分離的(例如富集和/或純化至一定程度)和/或可以是在體外重組或合成的。備選地，可以從細菌中分離出非重組或重組蛋白。還設想了含有這種變體的細菌可以在組合物和方法中實施。因此，不需要分離出蛋白。因此，本公開提供與LILRB2特異性結合的分離的或重組的單株抗體。在某些方面，提供與(NeuB2-8)、(NeuB2-9)、(NeuB2-13)、(NeuB2-19)、(NeuB2-29)、(NeuB2-37)、(NeuB2-40)、(NeuB2-55)、(NeuB2-60)或(NeuB2-80)、(NeuB2-8)、(NeuB2-93)、(NeuB2-110)或(NeuB2-128)單株抗體(每個都在本文中公開並描述)競爭LILRB2的結合的抗體。在某些方面，抗體可以包含(NeuB2-8)、(NeuB2-9)、(NeuB2-13)、(NeuB2-19)、(NeuB2-29)、(NeuB2-37)、(NeuB2-40)、(NeuB2-55)、(NeuB2-60)或(NeuB2-80)、(NeuB2-8)、(NeuB2-93)、(NeuB2-110)或(NeuB2-128)單株抗體的全部或部分的重鏈可變區和/或輕鏈可變區。設想在本公開的組合物中，每ml有在約0.001 mg和約10 mg之間的總多肽、肽和/或蛋白。因此，組合物中蛋白的濃度可以是約、至少約或至多約0.001、0.010、0.050、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5、5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0、8.5、9.0、9.5、10.0 mg/ml或更多(或其中可衍生出的任何範圍)。其中，約、至少約或至多約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、6 1、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、8 1、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100%可以是結合LILRB2的抗體。抗體或優選地，抗體的免疫部分，可以與其他蛋白化學綴合或表現為與其他蛋白的融合蛋白。出於本說明書和所附請求項的目的，所有此類融合的蛋白均包括在抗體或抗體的免疫部分的定義中。實施方案提供與至少一種藥劑連接以形成抗體綴合物或有效負載的針對LILRB2的抗體和抗體樣分子、多肽和肽。為了增加抗體分子作為診斷劑或治療劑的效力，常規的是連接或共價結合或複合至少一個期望的分子或部分。這種分子或部分可以是，但不限於，至少一個效應分子或報告分子。效應分子包含具有所期望的活性(例如細胞毒活性)的分子。已連接到抗體上的效應分子的非限制性實例包括毒素、治療酶、抗生素、放射性標記的核苷酸等。相比之下，報告分子定義為可使用測定檢測的任何部分。已綴合到抗體上的報告分子的非限制性實例包括酶、放射性標記、半抗原、螢光標記、磷光分子、化學發光分子、發色團、發光分子、光親和分子、帶色粒子或配體，諸如生物素。用於將抗體連接或綴合到其綴合部分上的幾種方法是本領域已知的。一些連接方法涉及金屬螯合複合物的使用，所述金屬螯合複合物採用例如連接到抗體上的有機螯合劑，諸如二乙撑三胺五乙酸酸酐(DTPA)、乙撑三胺四乙酸、N-氯對甲苯磺醯胺和/或四氯-3α-6α-二苯基甘脲。單株抗體也可以在偶聯劑(諸如戊二醛或高碘酸鹽)存在的情況下與酶反應。帶有螢光素標誌物的綴合物在這些偶聯劑存在的情況下或通過與異硫氰酸酯反應製備。在另一方面，本公開提供多核苷酸，其可以在合適的宿主中表現(例如轉錄和轉譯)以產生結合LILRB2的多肽或其部分。設想此類多核苷酸序列可以使用本領域已知的方法合成，並且多核苷酸可以通過本領域已知的手段在合適的表現載體中選殖，並且表現載體可以在體內或體外使用以表現由多核苷酸序列編碼的結合LILRB2的多肽。在某些實施方案中，本公開的多核苷酸包含與8H DNA (SEQ ID NO: 157)具有至少80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的部分。在某些實施方案中，本公開的多核苷酸包含與9H DNA (SEQ ID NO: 158)具有至少80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的部分。在某些實施方案中，本公開的多核苷酸包含與13H DNA (SEQ ID NO: 159)具有至少80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的部分。在某些實施方案中，本公開的多核苷酸包含與19H DNA (SEQ ID NO: 160)具有至少80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的部分。在某些實施方案中，本公開的多核苷酸包含與29H DNA (SEQ ID NO: 161)具有至少80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的部分。在某些實施方案中，本公開的多核苷酸包含與37H DNA (SEQ ID NO: 162)具有至少80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的部分。在某些實施方案中，本公開的多核苷酸包含與40H DNA (SEQ ID NO: 163)具有至少80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的部分。在某些實施方案中，本公開的多核苷酸包含與55H DNA (SEQ ID NO: 164)具有至少80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的部分。在某些實施方案中，本公開的多核苷酸包含與60H DNA (SEQ ID NO: 165)具有至少80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的部分。在某些實施方案中，本公開的多核苷酸包含與80H DNA (SEQ ID NO: 166)具有至少80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的部分。在某些實施方案中，本公開的多核苷酸包含與93H DNA (SEQ ID NO: 167)具有至少80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的部分。在某些實施方案中，本公開的多核苷酸包含與110H DNA (SEQ ID NO: 168)具有至少80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的部分。在某些實施方案中，本公開的多核苷酸包含與128H DNA (SEQ ID NO: 169)具有至少80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的部分。在某些實施方案中，本公開的多核苷酸包含與8L DNA (SEQ ID NO: 170)具有至少80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的部分。在某些實施方案中，本公開的多核苷酸包含與9L DNA (SEQ ID NO: 171)具有至少80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的部分。在某些實施方案中，本公開的多核苷酸包含與13L DNA (SEQ ID NO: 172)具有至少80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的部分。在某些實施方案中，本公開的多核苷酸包含與19L DNA (SEQ ID NO: 173)具有至少80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的部分。在某些實施方案中，本公開的多核苷酸包含與29L DNA (SEQ ID NO: 174)具有至少80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的部分。在某些實施方案中，本公開的多核苷酸包含與37L DNA (SEQ ID NO: 175)具有至少80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的部分。在某些實施方案中，本公開的多核苷酸包含與40L DNA (SEQ ID NO: 176)具有至少80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的部分。在某些實施方案中，本公開的多核苷酸包含與55L DNA (SEQ ID NO: 177)具有至少80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的部分。在某些實施方案中，本公開的多核苷酸包含與60L DNA (SEQ ID NO: 178)具有至少80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的部分。在某些實施方案中，本公開的多核苷酸包含與80L DNA (SEQ ID NO: 179)具有至少80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的部分。在某些實施方案中，本公開的多核苷酸包含與93L DNA (SEQ ID NO: 180)具有至少80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的部分。在某些實施方案中，本公開的多核苷酸包含與110L DNA (SEQ ID NO: 181)具有至少80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的部分。在某些實施方案中，本公開的多核苷酸包含與128H DNA (SEQ ID NO: 182)具有至少80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的部分。 疾病的治療本實施方案的某些方面可用於預防或治療神經系統或神經退行性疾病和病症，其包括但不限於阿滋海默病(AD)、帕金森病(PD)、痴呆、路易體痴呆(DLB)等，包括神經炎症過程和涉及小膠質細胞的過程或與LILRB2調節蛋白有關的疾病或病症(例如腦的疾病或病症)。LILRB2活性可由任何結合LILRB2的抗體增加或減少。優選地，此類抗體將是抗LILRB2抗體。 "治療(treatment)"和"治療(treating)"是指為了獲得疾病或健康相關狀況的治療益處，向受試者施用或應用治療劑，或對受試者進行手術或物理療法。例如，治療可以包括施用藥學上有效量的調節LILRB2生物活性的抗體。治療可以通過灌注、直接皮下注射或注射到血液循環系統中來完成。 "受試者"和"患者"是指人或非人，諸如靈長類、哺乳類和脊椎動物。在特別的實施方案中，受試者是人。如在整個本申請中使用的，術語"治療益處"或"治療有效的"是指在該狀況的醫學治療方面促進或提高受試者的福祉的任何事物。這包括但不限於疾病體徵或症狀的頻率或嚴重程度的降低。 嵌合抗原受體如本文使用的，術語"嵌合抗原受體"或"CAR"是指人工構建的雜合蛋白或多肽，其含有與結構域或信號傳導(例如T細胞信號傳導或T細胞活化結構域)連接的抗體的抗原結合結構域(例如單鏈可變片段(scFv))，所述結構域或信號傳導活化免疫細胞，例如T細胞或NK細胞。CAR能夠以非MHC限制性方式，利用單株抗體的抗原結合性質，將免疫細胞特異性和反應性重新定向到所選擇的靶標。該非MHC限制性抗原識別賦予表現CAR的免疫細胞以獨立於加工的識別抗原的能力，從而繞過了腫瘤逃逸的機制。在另一方面，提供的是包含如本文提供的抗原結合片段的嵌合抗原受體(CAR)蛋白。在另一方面，提供的是編碼如本文提供的CAR蛋白的分離的核酸。在另一方面，工程化細胞包含如本文提供的分離的核酸。在某些實施方案中，工程化細胞是T細胞、NK細胞或髓樣細胞。在另一方面，本公開提供表現嵌合抗原受體(CAR)的免疫細胞。在一些實施方案中，CAR包含本文提供的抗原結合片段。在一些實施方案中，CAR蛋白從N末端到C末端包括：前導肽、抗LILRB2重鏈可變結構域、連接子結構域、抗LILRB2輕鏈可變結構域、人IgG1-CH2-CH3結構域、間隔區、CD28跨膜結構域、抗LILRB2細胞內共刺激信號傳導和CD3ζ細胞內T細胞信號傳導結構域。在某些實施方案中，嵌合抗原受體包含與本文公開的LILRB2特異性單株抗體中任何一種的抗原結合結構域具有至少80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或100%同一性的抗原結合結構域。在某些實施方案中，工程化細胞表現與本文公開的LILRB2特異性單株抗體中任何一種的抗原結合結構域具有至少80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%同一性的抗原結合結構域。在一些實施方案中，提供的是治療或改善受試者中神經退行性疾病和病症的影響的方法，所述神經退行性疾病和病症包括但不限於痴呆、阿滋海默病(AD)、帕金森病(PD)、路易體痴呆(DLB)等，包括神經炎症過程和涉及小膠質細胞的過程，該方法包含向受試者施用治療有效量的如本文定義的抗體或其抗原結合片段。在一些實施方案中，提供的是治療或改善受試者中阿滋海默病(AD)的影響的方法，該方法包含向受試者施用治療有效量的如本文定義的抗體或其抗原結合片段。 藥物製劑在進行含有抑制性抗體的治療組合物的臨床應用時，製備適合於預期應用的藥物組合物或治療組合物一般是有益的。在某些實施方案中，藥物組合物可以包含例如至少約0.1%的活性化合物。在其他實施方案中，活性化合物可以占在約2%至約75%之間的單位重量，或例如在約25%至約60%之間，以及其中可衍生出的任何範圍。本實施方案的治療組合物以可注射組合物形式作為液體溶液劑或混懸劑被有利地施用，還可以製備適合於在注射前溶解或混懸在液體中的固體形式。這些製劑也可以乳化。詞組"藥用或藥理學上可接受的"是指當在適當情況下施用給動物(例如人)時，不產生有害、過敏或其他不良反應的分子實體和組合物。根據本公開，包含抗體或另外的活性成分的藥物組合物的製備將是本領域技術人員已知的。此外，對於動物(例如人)的施用，應理解製劑應滿足如FDA生物標準辦公室(FDA Office Of Biological Standards)所要求的無菌性、產熱原性、一般安全性和純度標準。如本文使用的，"藥學上可接受的載體"包括如本領域普通技術人員已知的任何和所有水溶劑(例如水、酒精/水溶液、鹽水溶液、腸胃外溶媒，諸如氯化鈉、林格氏右旋糖等)、非水溶劑(例如丙二醇、聚乙二醇、植物油和可注射有機酯，諸如油酸乙酯)、分散介質、包衣、表面活性劑、抗氧化劑、防腐劑(例如抗細菌劑或抗真菌劑、抗氧化劑、螯合劑和惰性氣體)、等滲劑、吸收延遲劑、鹽類、藥物、藥物穩定劑、凝膠、黏合劑、賦形劑、崩解劑、潤滑劑、甜味劑、矯味劑、染料、流體和營養補充劑等材料及其組合。根據衆所周知的參數調整藥物組合物中各種組分的pH和精確濃度。活性化合物可以配製用於腸胃外施用，例如配製用於經由靜脉內、肌肉內、皮下、或甚至腹膜內途徑的注射。典型地，此類組合物可以製備為液體溶液劑或混懸劑，也可以製備適合用於在注射前加入液體後製備溶液劑或混懸劑的固體形式，並且製劑也可以乳化。適合於注射用途的藥物形式包括無菌水溶液劑或分散體(製劑包括芝麻油、花生油或丙二醇水溶液)，以及用於臨時製備無菌可注射溶液劑或分散體的無菌散劑。在所有情況下，形式必須是無菌的，並且必須是流動以至其可以容易地注射的程度的。它在製造和儲存的條件下還應是穩定的，並且其必須保持免受微生物(諸如細菌和真菌)的污染作用。蛋白組合物可以配製成中性形式或鹽形式。藥學上可接受的鹽包括酸加成鹽(與蛋白的游離胺基基團形成)並且其是與無機酸(諸如例如鹽酸或磷酸)，或諸如乙酸、草酸、酒石酸、扁桃酸等有機酸形成的。與游離羧基基團形成的鹽也可以衍生自無機鹼(諸如例如氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化銨、氫氧化鈣或氫氧化鐵)，以及諸如異丙胺、三甲胺、組胺酸、普魯卡因等有機鹼。藥物組合物可以包括含有例如水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇和液體聚乙二醇等)、其合適的混合物和植物油在內的溶劑或分散介質。例如，通過使用包衣(諸如卵磷脂)、通過在分散體的情況下維持所需的粒徑以及通過使用表面活性劑，可以維持適當的流動性。防止微生物作用可以通過各種抗細菌劑和抗真菌劑(例如對羥基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、山梨酸、硫柳汞等)來實現。在許多情況下，優選包括等滲劑，例如糖類或氯化鈉。可注射組合物的延長吸收可以通過在組合物中使用延遲吸收的試劑(例如單硬脂酸鋁和明膠)來實現。 套組和診斷在實施方案的不同方面，設想了含有治療劑和/或其他治療劑和遞送劑的套組。在一些實施方案中，本實施方案設想了用於製備和/或施用所述實施方案的療法的套組。該套組可以包含一個或多個密封的小瓶，該小瓶含有本實施方案的藥物組合物的任一種。該套組可以包括，例如至少一種抗LILRB2抗體以及試劑(以製備、配製和/或施用所述實施方案的組分或進行本發明方法的一個或多個步驟)。在一些實施方案中，套組還可以包含合適的容器，其為不與該套組的組分反應的容器，諸如Eppendorf管、測定板、注射器、瓶或管。容器可以由可滅菌的材料製成，諸如塑料或玻璃。套組可以進一步包括說明書，其概述了本文所述方法的程序性步驟，並且將遵循與本文所述或本領域普通技術人員已知的基本相同的程序。該說明信息可以在含有機器可讀指令(當使用計算機執行時，其導致遞送藥學上有效量的治療劑的真實或虛擬程序的展示)的計算機可讀媒介中。應理解，凡是本文中用語言"包含"描述的實施方案，也提供用"由…組成"和/或"基本上由…組成"來描述的另外的類似實施方案。在本發明的方面或實施方案用馬庫什組或其他替代方案的分組來描述時，本發明不僅包括作為整體列出的整個組，而且包括單獨的該組的每個成員和該主組的所有可能的子組，而且還包括缺少一個或多個組成員的主組。本發明還設想在所要求保護的發明中明確排除任何組成員中的一個或多個。除非另有定義，此處使用的所有技術和科學術語都具有與本發明所屬領域的普通技術人員通常所理解的相同的含義。在衝突的情況下，將以本說明書(包括定義)為準。在整個本說明書和請求項中，詞語"包含"或變體(諸如"包含(comprises)"或"包含(comprising)")將理解為表明包括所說明的整數或整數組，但不排除任何其他整數或整數組。除非上下文另有要求，單數術語應包括複數，並且複數術語應包括單數。術語"例如(e.g.)"或"例如(for example)"之後的任何實例並不意味著是窮盡的或限制性的。除非另有指示，本發明的實踐將採用分子生物學(包括重組技術)、微生物學、細胞生物學、生物化學和免疫學的常規技術，這些技術在本領域的技術範圍內。本發明通過以下實施例來說明。應理解，特定的實施例、材料、量和程序應根據如本文所述的本發明的範圍和精神廣義地解釋。 實施例包括以下實施例以說明本發明的某些實施方案。除非另有指示，從下面描述的實驗和實施例中產生的數據可以在Zhao等人Molecular Neurodegeneration (2022) 17:44中找到，其通過引用整體並入本文。 實驗程序和方法 實施例 1. 編碼結合 LILRB2 的單株抗體的多核苷酸的產生用重組表現的LILRB2-His淘選人源噬菌體抗體庫，選擇、富集並分離高親和力的結合LILRB2的噬菌體。確定每個噬菌體克隆的DNA序列，並使用GeneBank IgBLAST對序列進行分析，以鑒定種系V(D)J基因段。將單獨的V _H和V _L基因映射到主要IGL和IGH基因座的種系上。CDR序列根據IMGT (http://www.imgt.org/)命名法進行注釋。使用基因特異性引子，通過PCR擴增編碼V _H和V _L鏈的DNA片段。將V _H和V _L基因片段的PCR產物進行凝膠提取和純化，以使用infusion選殖套組(In-Fusion® HD Cloning套組, Clontech)製造全長重鏈(HC)和輕鏈(LC) DNA構建體。 實施例 2. 抗 LILRB2 單株抗體的表現通過用含有配對的HC和LC的DNA構建體瞬時轉染HEK293細胞，在哺乳動物細胞(來自Thermo Fisher的Expi 293細胞)中產生人抗LILRB2抗體。使用蛋白A樹脂，按照基於製造商(Repligen)的說明書的方法純化(分離)培養基中的抗體。 mAb 表徵 - 使用生物膜層干涉法 (BLI) 的親和力測量和動力學結合性質使用Octet Red96儀器(ForteBio; Fremont, CA)確定動力學結合參數(KD、k _on和k _off)。結果顯示於表2中。 mAb 表徵 - 在 LILRB2 報告細胞系統中篩選阻斷配體活化的抗體在遞增濃度的純化的NeuB2-mAb的存在的情況下，將板塗布的OAβ與LILRB2嵌合報告細胞一起孵育，並使用流式細胞術(iQue3儀器)確定報告細胞中的GFP信號。使用GraphPad Prism8.0中的非線性曲線擬合函數log(抑制劑)對反應來計算IC ₅₀值。結果顯示於表3和表4中。 mAb 表徵 - 使用 ELISA 的親和力測量和 EC50 確定通過ELISA測量抗體與LILRB2的結合親和力。將遞增濃度的純化的LILRB2抗體與板塗布的LILRB2一起孵育。通過抗人F(ab)2 HRP檢測結合的抗體，並將信號量化為OD ₄₅₀值。使用GraphPad Prism中的非線性曲線擬合函數Sigmoidal劑量-反應(可變斜率)來計算EC ₅₀值( 表 5)。 實施方案列表1. 一種分離的單株抗體，其中抗體與LILRB2特異性結合，並且其中抗體與NeuB2-8、NeuB2-9、NeuB2-13、NeuB2-19、NeuB2-29、NeuB2-37、NeuB2-40、NeuB2-55、NeuB2-60、NeuB2-80、NeuB2-93、NeuB2-110或NeuB2-128單株抗體競爭LILRB2表位的結合。 2. 如實施方案1的抗體或其抗原結合片段，其中抗體包含： (a)第一V _HCDR，其與NeuB2-8的V _HCDR1 (SEQ ID NO: 1)具有至少80%同一性，與NeuB2-9的V _HCDR1 (SEQ ID NO: 4)具有至少80%同一性，與NeuB2-13的V _HCDR1 (SEQ ID NO: 7)具有至少80%同一性，與NeuB2-19的V _HCDR1 (SEQ ID NO: 10)具有至少80%同一性，與NeuB2-29的V _HCDR1 (SEQ ID NO: 13)具有至少80%同一性，與NeuB2-37的V _HCDR1 (SEQ ID NO: 16)具有至少80%同一性，與NeuB2-40的V _HCDR1 (SEQ ID NO: 19)具有至少80%同一性，與NeuB2-55的V _HCDR1 (SEQ ID NO: 22)具有至少80%同一性，與NeuB2-60的V _HCDR1 (SEQ ID NO: 25)具有至少80%同一性，與NeuB2-80的V _HCDR1 (SEQ ID NO: 28)具有至少80%同一性，與NeuB2-93的V _HCDR1 (SEQ ID NO: 31)具有至少80%同一性，與NeuB2-110的V _HCDR1 (SEQ ID NO: 34)具有至少80%同一性，或與NeuB2-128的V _HCDR1 (SEQ ID NO: 37)具有至少80%同一性； (b)第二V _HCDR，其與NeuB2-8的V _HCDR2 (SEQ ID NO: 2)具有至少80%同一性，與V _HCDR2 (SEQ ID NO: 5)具有至少80%同一性，與V _HCDR2 (SEQ ID NO: 8)具有至少80%同一性，與V _HCDR2 (SEQ ID NO: 11)具有至少80%同一性，與V _HCDR2 (SEQ ID NO: 14)具有至少80%同一性，與V _HCDR2 (SEQ ID NO: 17)具有至少80%同一性，與V _HCDR2 (SEQ ID NO: 20)具有至少80%同一性，與V _HCDR2 (SEQ ID NO: 23)具有至少80%同一性，與V _HCDR2 (SEQ ID NO: 26)具有至少80%同一性，與V _HCDR2 (SEQ ID NO: 29)具有至少80%同一性，與V _HCDR2 (SEQ ID NO: 32)具有至少80%同一性，與V _HCDR2 (SEQ ID NO: 35)具有至少80%同一性，或與V _HCDR2 (SEQ ID NO: 38)具有至少80%同一性； (c)第三V _HCDR，其與NeuB2-8的V _HCDR3 (SEQ ID NO: 3)具有至少80%同一性，與NeuB2-9的V _HCDR3 (SEQ ID NO: 6)具有至少80%同一性，與NeuB2-13的V _HCDR3 (SEQ ID NO: 9)具有至少80%同一性，與NeuB2-19的V _HCDR3 (SEQ ID NO: 12)具有至少80%同一性，與NeuB2-29的V _HCDR3 (SEQ ID NO: 15)具有至少80%同一性，與NeuB2-37的V _HCDR3 (SEQ ID NO: 18)具有至少80%同一性，與NeuB2-40的V _HCDR3 (SEQ ID NO: 21)具有至少80%同一性，與NeuB2-55的V _HCDR3 (SEQ ID NO: 24)具有至少80%同一性，與NeuB2-60的V _HCDR3 (SEQ ID NO: 27)具有至少80%同一性，與NeuB2-80的V _HCDR3 (SEQ ID NO: 30)具有至少80%同一性，與NeuB2-93的V _HCDR3 (SEQ ID NO: 33)具有至少80%同一性，與NeuB2-110的V _HCDR3 (SEQ ID NO: 36)具有至少80%同一性，或與NeuB2-128的V _HCDR3 (SEQ ID NO: 39)具有至少80%同一性； (d)第一V _LCDR，其與NeuB2-8的V _LCDR1 (SEQ ID NO: 40)具有至少80%同一性，與NeuB2-9的V _LCDR1 (SEQ ID NO: 42)具有至少80%同一性，與NeuB2-13的V _LCDR1 (SEQ ID NO: 44)具有至少80%同一性，與NeuB2-19的V _LCDR1 (SEQ ID NO: 46)具有至少80%同一性，與NeuB2-29的V _LCDR1 (SEQ ID NO: 48)具有至少80%同一性，與NeuB2-37的V _LCDR1 (SEQ ID NO: 50)具有至少80%同一性，與NeuB2-40的V _LCDR1 (SEQ ID NO: 52)具有至少80%同一性，與NeuB2-55的V _LCDR1 (SEQ ID NO: 54)具有至少80%同一性，與NeuB2-60的V _LCDR1 (SEQ ID NO: 56)具有至少80%同一性，與NeuB2-80的V _LCDR1 (SEQ ID NO: 58)具有至少80%同一性，與NeuB2-93的V _LCDR1 (SEQ ID NO: 60)具有至少80%同一性，與NeuB2-110的V _LCDR1 (SEQ ID NO: 62)具有至少80%同一性，或與NeuB2-128的V _LCDR1 (SEQ ID NO: 64)具有至少80%同一性； (e)第二V _LCDR，其與NeuB2-8的V _LCDR2 (三肽GVS)具有至少80%同一性，與NeuB2-9的V _LCDR2 (三肽SNN)具有至少80%同一性，與NeuB2-13的V _LCDR2 (三肽GAS)具有至少80%同一性，與NeuB2-19的V _LCDR2 (三肽DNN)具有至少80%同一性，與NeuB2-29的V _LCDR2 (三肽YDD)具有至少80%同一性，與NeuB2-37的V _LCDR2 (三肽SNN)具有至少80%同一性，與NeuB2-40的V _LCDR2 (三肽YDD)具有至少80%同一性，與NeuB2-55的V _LCDR2 (三肽DVS)具有至少80%同一性，與NeuB2-60的V _LCDR2 (三肽YDD)具有至少80%同一性，與NeuB2-80的V _LCDR2 (三肽NNS)具有至少80%同一性，與NeuB2-93的V _LCDR2 (三肽EVS)具有至少80%同一性，與NeuB2-110的V _LCDR2 (三肽EVS)具有至少80%同一性，或與NeuB2-128的V _LCDR2 (三肽DAS)具有至少80%同一性；和 (f)第三V _LCDR，其與NeuB2-8的V _LCDR3 (SEQ ID NO: 41)具有至少80%同一性，與NeuB2-9的V _LCDR3 (SEQ ID NO: 43)具有至少80%同一性，與NeuB2-13的V _LCDR3 (SEQ ID NO: 45)具有至少80%同一性，與NeuB2-19的V _LCDR3 (SEQ ID NO: 47)具有至少80%同一性，與NeuB2-29的V _LCDR3 (SEQ ID NO: 80)具有至少80%同一性，與NeuB2-37的V _LCDR3 (SEQ ID NO: 51)具有至少80%同一性，與NeuB2-40的V _LCDR3 (SEQ ID NO: 53)具有至少80%同一性，與NeuB2-55的V _LCDR3 (SEQ ID NO: 55)具有至少80%同一性，與NeuB2-60的V _LCDR3 (SEQ ID NO: 57)具有至少80%同一性，與NeuB2-80的V _LCDR3 (SEQ ID NO: 59)具有至少80%同一性，與NeuB2-93的V _LCDR3 (SEQ ID NO: 61)具有至少80%同一性，與NeuB2-110的V _LCDR3 (SEQ ID NO: 63)具有至少80%同一性，或與NeuB2-128的V _LCDR3 (SEQ ID NO: 65)具有至少80%同一性。 3. 如實施方案2的分離的抗體，其中抗體包含： (a)與SEQ ID NO: 1相同的第一V _HCDR； (b)與SEQ ID NO: 2相同的第二V _HCDR； (c)與SEQ ID NO: 3相同的第三V _HCDR； (d)與SEQ ID NO: 40相同的第一V _LCDR； (e)與三肽GVS相同的第二V _LCDR；和 (f)與SEQ ID NO: 41相同的第三V _LCDR。 4. 如實施方案2的分離的抗體，其中抗體包含： (a)與SEQ ID NO: 4相同的第一V _HCDR； (b)與SEQ ID NO: 5相同的第二V _HCDR； (c)與SEQ ID NO: 6相同的第三V _HCDR； (d)與SEQ ID NO: 42相同的第一V _LCDR； (e)與三肽SNN相同的第二V _LCDR；和 (f)與SEQ ID NO: 43相同的第三V _LCDR。 5. 如實施方案2的分離的抗體，其中抗體包含： (a)與SEQ ID NO: 7相同的第一V _HCDR； (b)與SEQ ID NO: 8相同的第二V _HCDR； (c)與SEQ ID NO: 9相同的第三V _HCDR； (d)與SEQ ID NO: 44相同的第一V _LCDR； (e)與三肽GAS相同的第二V _LCDR；和 (f)與SEQ ID NO: 45相同的第三V _LCDR。 6. 如實施方案2的分離的抗體，其中抗體包含： (a)與SEQ ID NO: 10相同的第一V _HCDR； (b)與SEQ ID NO: 11相同的第二V _HCDR； (c)與SEQ ID NO: 12相同的第三V _HCDR； (d)與SEQ ID NO: 46相同的第一V _LCDR； (e)與三肽DNN相同的第二V _LCDR；和 (f)與SEQ ID NO: 47相同的第三V _LCDR。 7. 如實施方案2的分離的抗體，其中抗體包含： (a)與SEQ ID NO: 13相同的第一V _HCDR； (b)與SEQ ID NO: 14相同的第二V _HCDR； (c)與SEQ ID NO: 15相同的第三V _HCDR； (d)與SEQ ID NO: 48相同的第一V _LCDR； (e)與三肽YDD相同的第二V _LCDR；和 (f)與SEQ ID NO: 49相同的第三V _LCDR。 8. 如實施方案2的分離的抗體，其中抗體包含： (a)與SEQ ID NO: 16相同的第一V _HCDR； (b)與SEQ ID NO: 17相同的第二V _HCDR； (c)與SEQ ID NO: 18相同的第三V _HCDR； (d)與SEQ ID NO: 50相同的第一V _LCDR； (e)與三肽SNN相同的第二V _LCDR；和 (f)與SEQ ID NO: 51相同的第三V _LCDR。 9. 如實施方案2的分離的抗體，其中抗體包含： (a)與SEQ ID NO: 19相同的第一V _HCDR； (b)與SEQ ID NO: 20相同的第二V _HCDR； (c)與SEQ ID NO: 21相同的第三V _HCDR； (d)與SEQ ID NO: 52相同的第一V _LCDR； (e)與三肽YDD相同的第二V _LCDR；和 (f)與SEQ ID NO: 53相同的第三V _LCDR。 10. 如實施方案2的分離的抗體，其中抗體包含： (a)與SEQ ID NO: 22相同的第一V _HCDR； (b)與SEQ ID NO: 23相同的第二V _HCDR； (c)與SEQ ID NO: 24相同的第三V _HCDR； (d)與SEQ ID NO: 54相同的第一V _LCDR； (e)與三肽DVS相同的第二V _LCDR；和 (f)與SEQ ID NO: 55相同的第三V _LCDR。 11. 如實施方案2的分離的抗體，其中抗體包含： (a)與SEQ ID NO: 25相同的第一V _HCDR； (b)與SEQ ID NO: 26相同的第二V _HCDR； (c)與SEQ ID NO: 27相同的第三V _HCDR； (d)與SEQ ID NO: 56相同的第一V _LCDR； (e)與三肽YDD相同的第二V _LCDR；和 (f)與SEQ ID NO: 57相同的第三V _LCDR。 12. 如實施方案2的分離的抗體，其中抗體包含： (a)與SEQ ID NO: 28相同的第一V _HCDR； (b)與SEQ ID NO: 29相同的第二V _HCDR； (c)與SEQ ID NO: 30相同的第三V _HCDR； (d)與SEQ ID NO: 58相同的第一V _LCDR； (e)與三肽NNS相同的第二V _LCDR；和 (f)與SEQ ID NO: 59相同的第三V _LCDR。 13. 如實施方案2的分離的抗體，其中抗體包含： (a)與SEQ ID NO: 31相同的第一V _HCDR； (b)與SEQ ID NO: 32相同的第二V _HCDR； (c)與SEQ ID NO: 33相同的第三V _HCDR； (d)與SEQ ID NO: 60相同的第一V _LCDR； (e)與三肽EVS相同的第二V _LCDR；和 (f)與SEQ ID NO: 61相同的第三V _LCDR。 14. 如實施方案2的分離的抗體，其中抗體包含： (a)與SEQ ID NO: 34相同的第一V _HCDR； (b)與SEQ ID NO: 35相同的第二V _HCDR； (c)與SEQ ID NO: 36相同的第三V _HCDR； (d)與SEQ ID NO: 62相同的第一V _LCDR； (e)與三肽EVS相同的第二V _LCDR；和 (f)與SEQ ID NO: 63相同的第三V _LCDR。 15. 如實施方案2的分離的抗體，其中抗體包含： (a)與SEQ ID NO: 37相同的第一V _HCDR； (b)與SEQ ID NO: 38相同的第二V _HCDR； (c)與SEQ ID NO: 39相同的第三V _HCDR； (d)與SEQ ID NO: 64相同的第一V _LCDR； (e)與三肽DAS相同的第二V _LCDR；和 (f)與SEQ ID NO: 65相同的第三V _LCDR。 16. 如實施方案2的抗體，其中抗體包含： (i)與NeuB2-8的V _H結構域(SEQ ID NO: 66)或NeuB2-8 mAb的人源化V _H結構域具有至少約80%同一性的V _H結構域；以及與NeuB2-8的V _L結構域(SEQ ID NO: 79)或NeuB2-8 mAb的人源化V _L結構域具有至少約80%同一性的V _L結構域； (ii)與NeuB2-9的V _H結構域(SEQ ID NO: 67)或NeuB2-9 mAb的人源化V _H結構域具有至少約80%同一性的V _H結構域；以及與NeuB2-9的V _L結構域(SEQ ID NO: 80)或NeuB2-9 mAb的人源化V _L結構域具有至少約80%同一性的V _L結構域； (iii)與NeuB2-13的V _H結構域(SEQ ID NO: 68)或NeuB2-13 mAb的人源化V _H結構域具有至少約80%同一性的V _H結構域；以及與NeuB2-13的V _L結構域(SEQ ID NO: 81)或NeuB2-13 mAb的人源化V _L結構域具有至少約80%同一性的V _L結構域； (iv)與NeuB2-19的V _H結構域(SEQ ID NO: 69)或NeuB2-19 mAb的人源化V _H結構域具有至少約80%同一性的V _H結構域；以及與NeuB2-19的V _L結構域(SEQ ID NO: 82)或NeuB2-19 mAb的人源化V _L結構域具有至少約80%同一性的V _L結構域； (v)與NeuB2-29的V _H結構域(SEQ ID NO: 70)或NeuB2-29 mAb的人源化V _H結構域具有至少約80%同一性的V _H結構域；以及與NeuB2-29的V _L結構域(SEQ ID NO: 83)或NeuB2-29 mAb的人源化V _L結構域具有至少約80%同一性的V _L結構域； (vi)與NeuB2-37的V _H結構域(SEQ ID NO: 71)或NeuB2-37 mAb的人源化V _H結構域具有至少約80%同一性的V _H結構域；以及與NeuB2-37的V _L結構域(SEQ ID NO: 84NO: 84)或NeuB2-37 mAb的人源化V _L結構域具有至少約80%同一性的V _L結構域； (vii)與NeuB2-40的V _H結構域(SEQ ID NO: 72)或NeuB2-40 mAb的人源化V _H結構域具有至少約80%同一性的V _H結構域；以及與NeuB2-40的V _L結構域(SEQ ID NO: 85)或NeuB2-40 mAb的人源化V _L結構域具有至少約80%同一性的V _L結構域； (viii)與NeuB2-55的V _H結構域(SEQ ID NO: 73)或NeuB2-55 mAb的人源化V _H結構域具有至少約80%同一性的V _H結構域；以及與NeuB2-55的V _L結構域(SEQ ID NO: 86)或NeuB2-55 mAb的人源化V _L結構域具有至少約80%同一性的V _L結構域； (ix)與NeuB2-60的V _H結構域(SEQ ID NO: 74)或NeuB2-60 mAb的人源化V _H結構域具有至少約80%同一性的V _H結構域；以及與NeuB2-60的V _L結構域(SEQ ID NO: 87)或NeuB2-60 mAb的人源化V _L結構域具有至少約80%同一性的V _L結構域； (x)與NeuB2-80的V _H結構域(SEQ ID NO: 75)或NeuB2-80 mAb的人源化V _H結構域具有至少約80%同一性的V _H結構域；以及與NeuB2-80的V _L結構域(SEQ ID NO: 88)或NeuB2-80 mAb的人源化V _L結構域具有至少約80%同一性的V _L結構域； (xi)與NeuB2-93的V _H結構域(SEQ ID NO: 76)或NeuB2-93 mAb的人源化V _H結構域具有至少約80%同一性的V _H結構域；以及與NeuB2-93的V _L結構域(SEQ ID NO: 89)或NeuB2-93 mAb的人源化V _L結構域具有至少約80%同一性的V _L結構域； (xii)與NeuB2-110的V _H結構域(SEQ ID NO: 77)或NeuB2-110 mAb的人源化V _H結構域具有至少約80%同一性的V _H結構域；以及與NeuB2-110的V _L結構域(SEQ ID NO: 90)或NeuB2-110 mAb的人源化V _L結構域具有至少約80%同一性的V _L結構域，或 (xiii)與NeuB2-128的V _H結構域(SEQ ID NO: 78)或NeuB2-128 mAb的人源化V _H結構域具有至少約80%同一性的V _H結構域；以及與NeuB2-128的V _L結構域(SEQ ID NO: 91)或NeuB2-128 mAb的人源化V _L結構域具有至少約80%同一性的V _L結構域。 17. 如實施方案16的抗體，其中抗體包含與NeuB2-8的V _H結構域相同的V _H結構域(SEQ ID NO: 66)和與NeuB2-8的V _L結構域相同的V _L結構域(SEQ ID NO: 79)。 18. 如實施方案16的抗體，其中抗體包含與NeuB2-9的V _H結構域相同的V _H結構域(SEQ ID NO: 67)和與NeuB2-9的V _L結構域相同的V _L結構域(SEQ ID NO: 80)。 19. 如實施方案16的抗體，其中抗體包含與NeuB2-13的V _H結構域相同的V _H結構域(SEQ ID NO: 68)和與NeuB2-13的V _L結構域相同的V _L結構域(SEQ ID NO: 81)。 20. 如實施方案16的抗體，其中抗體包含與NeuB2-19的V _H結構域相同的V _H結構域(SEQ ID NO: 69)和與NeuB2-19的V _L結構域相同的V _L結構域(SEQ ID NO: 82)。 21. 如實施方案16的抗體，其中抗體包含與NeuB2-29的V _H結構域相同的V _H結構域(SEQ ID NO: 70)和與NeuB2-29的V _L結構域相同的V _L結構域(SEQ ID NO: 83)。 22. 如實施方案16的抗體，其中抗體包含與NeuB2-37的V _H結構域相同的V _H結構域(SEQ ID NO: 71)和與NeuB2-37的V _L結構域相同的V _L結構域(SEQ ID NO: 84NO: 84)。 23. 如實施方案16的抗體，其中抗體包含與NeuB2-40的V _H結構域相同的V _H結構域(SEQ ID NO: 72)和與NeuB2-40的V _L結構域相同的V _L結構域(SEQ ID NO: 85)。 24. 如實施方案16的抗體，其中抗體包含與NeuB2-55的V _H結構域相同的V _H結構域(SEQ ID NO: 73)和與NeuB2-55的V _L結構域相同的V _L結構域(SEQ ID NO: 86)。 25. 如實施方案16的抗體，其中抗體包含與NeuB2-60的V _H結構域相同的V _H結構域(SEQ ID NO: 74)和與NeuB2-60的V _L結構域相同的V _L結構域(SEQ ID NO: 87)。 26. 如實施方案16的抗體，其中抗體包含與NeuB2-80的V _H結構域相同的V _H結構域(SEQ ID NO: 75)和與NeuB2-80的V _L結構域相同的V _L結構域(SEQ ID NO: 88)。 27. 如實施方案16的抗體，其中抗體包含與NeuB2-93的V _H結構域相同的V _H結構域(SEQ ID NO: 76)和與NeuB2-93的V _L結構域相同的V _L結構域(SEQ ID NO: 89)。 28. 如實施方案16的抗體，其中抗體包含與NeuB2-110的V _H結構域相同的V _H結構域(SEQ ID NO: 77)和與NeuB2-110的V _L結構域相同的V _L結構域(SEQ ID NO: 90)。 29. 如實施方案16的抗體，其中抗體包含與NeuB2-128的V _H結構域相同的V _H結構域(SEQ ID NO: 78)和與NeuB2-128的V _L結構域相同的V _L結構域(SEQ ID NO: 91)。 30. 如實施方案16的抗體，其中抗體是NeuB2-8、NeuB2-9、NeuB2-13、NeuB2-19、NeuB2-29、NeuB2-37、NeuB2-40、NeuB2-55、NeuB2-60、NeuB2-80、NeuB2-93、NeuB2-110或NeuB2-128抗體。 31. 如實施方案1-30中任一項的抗體，其中抗體是重組的。 32. 如實施方案1-31中任一項的抗體，其中抗體是IgG、IgM、IgA或其抗原結合片段。 33. 如實施方案1-30中任一項的抗體，其中抗體是Fab'、F(ab')2、F(ab')3、單價scFv、二價scFv或單結構域抗體。 34. 如實施方案1-16中任一項的抗體，其中抗體是人抗體、人源化抗體或去免疫化抗體。 35. 如實施方案1-30中任一項的抗體，其中抗體與顯像劑綴合。 36. 如實施方案1-30中任一項的抗體，其中如使用Octet 96-Red儀器測量的或如使用LILRB2嵌合細胞報告測定測量的，抗體抑制或阻斷LILRB2與配體PS和OAβ的相互作用。 37. 如實施方案1-30中任一項的抗體，其中如使用報告細胞測定測量的，抗體挽救配體誘導的TREM2信號傳導。 38. 一種嵌合抗原受體，其包含與如前述實施方案中任一項的單株抗體的抗原結合結構域具有至少80%同一性的抗原結合結構域。 39. 一種組合物，其包含在藥學上可接受的載體中的如實施方案1-30中任一項的抗體。 40. 一種分離的多核苷酸分子，其包含編碼如實施方案1-30中任一項的抗體的核酸序列。 41. 一種包含抗體V _H結構域的重組多肽，所述抗體V _H結構域包含：NeuB2-8的V _H結構域的CDR1-3 (SEQ ID NO: 1、2和3)；NeuB2-9的V _H結構域的CDR1-3 (SEQ ID NO: 4、5和6)；NeuB2-13的V _H結構域的CDR1-3 (SEQ ID NO: 7、8和9)；NeuB2-19的V _H結構域的CDR1-3 (SEQ ID NO: 10、11和12)；NeuB2-29的V _H結構域的CDR1-3 (SEQ ID NO: 13、14和15)；NeuB2-37的V _H結構域的CDR1-3 (SEQ ID NO: 16、17和18)；NeuB2-40的V _H結構域的CDR1-3 (SEQ ID NO: 19、20和21)；NeuB2-55的V _H結構域的CDR1-3 (SEQ ID NO: 22、23和24)；NeuB2-60的V _H結構域的CDR1-3 (SEQ ID NO: 25、26和27)；NeuB2-80的V _H結構域的CDR1-3 (SEQ ID NO: 28、29和30)；NeuB2-93的V _H結構域的CDR1-3 (SEQ ID NO: 31、32和33)；NeuB2-110的V _H結構域的CDR1-3 (SEQ ID NO: 34、35和36)；或NeuB2-128的V _H結構域的CDR1-3 (SEQ ID NO: 37、38和39)。 42. 一種包含抗體V _L結構域的重組多肽，所述抗體V _L結構域包含：NeuB2-8的V _L結構域的CDR1-3 (SEQ ID NO: 40、三肽GVS和SEQ ID NO: 41)；NeuB2-9的V _L結構域的CDR1-3 (SEQ ID NO: 42、三肽SNN和SEQ ID NO: 43)；NeuB2-13的V _L結構域的CDR1-3 (SEQ ID NO: 44、三肽GAS和SEQ ID NO: 45)；NeuB2-19的V _L結構域的CDR1-3 (SEQ ID NO: 46、三肽DNN和SEQ ID NO: 41)；NeuB2-29的V _L結構域的CDR1-3 (SEQ ID NO: 40、三肽YDD和SEQ ID NO: 47)；NeuB2-37的V _L結構域的CDR1-3 (SEQ ID NO: 48、三肽SNN和SEQ ID NO: 49)；NeuB2-40的V _L結構域的CDR1-3 (SEQ ID NO: 50、三肽YDD和SEQ ID NO: 51)；NeuB2-55的V _L結構域的CDR1-3 (SEQ ID NO: 52、三肽DVS和SEQ ID NO: 53)；NeuB2-60的V _L結構域的CDR1-3 (SEQ ID NO: 54、三肽YDD和SEQ ID NO: 55)；NeuB2-80的V _L結構域的CDR1-3 (SEQ ID NO: 56、三肽NNS和SEQ ID NO: 57)；NeuB2-93的V _L結構域的CDR1-3 (SEQ ID NO: 58、三肽EVS和SEQ ID NO: 59)；NeuB2-110的V _L結構域的CDR1-3 (SEQ ID NO: 60、三肽EVT和SEQ ID NO: 61)；或NeuB2-128的V _L結構域的CDR1-3 (SEQ ID NO: 62、三肽DAS和SEQ ID NO: 63)。 43. 一種分離的多核苷酸分子，其包含編碼如實施方案41或42的多肽的核酸序列。 44. 一種宿主細胞，其包含一種或多種編碼如實施方案1-30中任一項的抗體或如實施方案39或40的重組多肽的多核苷酸分子。 45. 如實施方案44的宿主細胞，其中宿主細胞是哺乳動物細胞、酵母細胞、細菌細胞、纖毛蟲細胞或昆蟲細胞。 46. 一種製造抗體的方法，所述方法包含： (a)在細胞中表現一種或多種編碼如實施方案1-30中任一項的抗體的V _L和V _H鏈的多核苷酸分子；以及 (b)從細胞中純化抗體。以上描述的實施方案僅作為示例而呈現，而不打算作為對本公開的概念和原理的限制。因此，本領域普通技術人員將理解，在不背離本公開的精神和範圍的情況下，可以對要素及其配置和排列進行各種改變。在以下請求項中闡述了本公開的各種特徵和方面。

[圖1]是顯示ELISA測定中純化的NeuB2-mAb與重組產生的LILRB2細胞外結構域(ECD)蛋白結合的圖。EC ₅₀值是根據濃度滴定曲線確定的。 [圖2]是顯示NeuB2-mAb與其他LILRB和LILRA家族成員無交叉反應性的圖。 [圖3]是顯示使用基於BLI的Octet 96-Red儀器的NeuB2 mAb的結合動力學的圖。 [圖4]是顯示如流式細胞術測定中測量的，單株抗體NewuB2-29與在表面上表現LILRB2的HEK293T細胞結合的圖。 [圖5A]提供顯示如使用Octet 96-Red儀器測量的，純化的NeuB2-29 (Ab29)阻斷LILRB2與配體PS和oAβ的相互作用的圖。 [圖5B]提供顯示如使用LILRB2嵌合細胞報告測定測量的，純化的NeuB2-29 (Ab29)阻斷LILRB2與配體PS和oAβ的相互作用的圖。 [圖6]提供顯示如使用報告細胞測定測量的，NeuB2-29 mAb (Ab29)挽救配體誘導的TREM2信號傳導的圖。 [圖7]提供顯示NeuB2-9 (Ab29) mAb增加oAβ複合物的小膠質細胞吞噬作用，並且活性取決於TREM2與配體的連接的圖。 [圖8]是顯示NeuB2-29 (Ab29) mAb促進通過TREM2信號傳導介導的人小膠質細胞遷移的圖。 [圖9]提供顯示NeuB2-29(Ab29)增加通過TREM2信號傳導介導的hMGL細胞中一組炎症細胞因子/趨化因子的基因轉錄的圖。

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Claims

一種分離的單株抗體，其中該抗體與LILRB2特異性結合，並且其中該抗體與NeuB2-8、NeuB2-9、NeuB2-13、NeuB2-19、NeuB2-29、NeuB2-37、NeuB2-40、NeuB2-55、NeuB2-60、NeuB2-80、NeuB2-93、NeuB2-110或NeuB2-128單株抗體競爭LILRB2表位的結合。
如請求項1所述的抗體或其抗原結合片段，其中該抗體包含： (a)第一V _HCDR，其與NeuB2-8的V _HCDR1 (SEQ ID NO: 1)具有至少80%同一性，與NeuB2-9的V _HCDR1 (SEQ ID NO: 4)具有至少80%同一性，與NeuB2-13的V _HCDR1 (SEQ ID NO: 7)具有至少80%同一性，與NeuB2-19的V _HCDR1 (SEQ ID NO: 10)具有至少80%同一性，與NeuB2-29的V _HCDR1 (SEQ ID NO: 13)具有至少80%同一性，與NeuB2-37的V _HCDR1 (SEQ ID NO: 16)具有至少80%同一性，與NeuB2-40的V _HCDR1 (SEQ ID NO: 19)具有至少80%同一性，與NeuB2-55的V _HCDR1 (SEQ ID NO: 22)具有至少80%同一性，與NeuB2-60的V _HCDR1 (SEQ ID NO: 25)具有至少80%同一性，與NeuB2-80的V _HCDR1 (SEQ ID NO: 28)具有至少80%同一性，與NeuB2-93的V _HCDR1 (SEQ ID NO: 31)具有至少80%同一性，與NeuB2-110的V _HCDR1 (SEQ ID NO: 34)具有至少80%同一性，或與NeuB2-128的V _HCDR1 (SEQ ID NO: 37)具有至少80%同一性； (b)第二V _HCDR，其與NeuB2-8的V _HCDR2 (SEQ ID NO: 2)具有至少80%同一性，與V _HCDR2 (SEQ ID NO: 5)具有至少80%同一性，與V _HCDR2 (SEQ ID NO: 8)具有至少80%同一性，與V _HCDR2 (SEQ ID NO: 11)具有至少80%同一性，與V _HCDR2 (SEQ ID NO: 14)具有至少80%同一性，與V _HCDR2 (SEQ ID NO: 17)具有至少80%同一性，與V _HCDR2 (SEQ ID NO: 20)具有至少80%同一性，與V _HCDR2 (SEQ ID NO: 23)具有至少80%同一性，與V _HCDR2 (SEQ ID NO: 26)具有至少80%同一性，與V _HCDR2 (SEQ ID NO: 29)具有至少80%同一性，與V _HCDR2 (SEQ ID NO: 32)具有至少80%同一性，與V _HCDR2 (SEQ ID NO: 35)具有至少80%同一性，或與V _HCDR2 (SEQ ID NO: 38)具有至少80%同一性； (c)第三V _HCDR，其與NeuB2-8的V _HCDR3 (SEQ ID NO: 3)具有至少80%同一性，與NeuB2-9的V _HCDR3 (SEQ ID NO: 6)具有至少80%同一性，與NeuB2-13的V _HCDR3 (SEQ ID NO: 9)具有至少80%同一性，與NeuB2-19的V _HCDR3 (SEQ ID NO: 12)具有至少80%同一性，與NeuB2-29的V _HCDR3 (SEQ ID NO: 15)具有至少80%同一性，與NeuB2-37的V _HCDR3 (SEQ ID NO: 18)具有至少80%同一性，與NeuB2-40的V _HCDR3 (SEQ ID NO: 21)具有至少80%同一性，與NeuB2-55的V _HCDR3 (SEQ ID NO: 24)具有至少80%同一性，與NeuB2-60的V _HCDR3 (SEQ ID NO: 27)具有至少80%同一性，與NeuB2-80的V _HCDR3 (SEQ ID NO: 30)具有至少80%同一性，與NeuB2-93的V _HCDR3 (SEQ ID NO: 33)具有至少80%同一性，與NeuB2-110的V _HCDR3 (SEQ ID NO: 36)具有至少80%同一性，或與NeuB2-128的V _HCDR3 (SEQ ID NO: 39)具有至少80%同一性； (d)第一V _LCDR，其與NeuB2-8的V _LCDR1 (SEQ ID NO: 40)具有至少80%同一性，與NeuB2-9的V _LCDR1 (SEQ ID NO: 42)具有至少80%同一性，與NeuB2-13的V _LCDR1 (SEQ ID NO: 44)具有至少80%同一性，與NeuB2-19的V _LCDR1 (SEQ ID NO: 46)具有至少80%同一性，與NeuB2-29的V _LCDR1 (SEQ ID NO: 48)具有至少80%同一性，與NeuB2-37的V _LCDR1 (SEQ ID NO: 50)具有至少80%同一性，與NeuB2-40的V _LCDR1 (SEQ ID NO: 52)具有至少80%同一性，與NeuB2-55的V _LCDR1 (SEQ ID NO: 54)具有至少80%同一性，與NeuB2-60的V _LCDR1 (SEQ ID NO: 56)具有至少80%同一性，與NeuB2-80的V _LCDR1 (SEQ ID NO: 58)具有至少80%同一性，與NeuB2-93的V _LCDR1 (SEQ ID NO: 60)具有至少80%同一性，與NeuB2-110的V _LCDR1 (SEQ ID NO: 62)具有至少80%同一性，或與NeuB2-128的V _LCDR1 (SEQ ID NO: 64)具有至少80%同一性； (e)第二V _LCDR，其與NeuB2-8的V _LCDR2 (三肽GVS)具有至少80%同一性，與NeuB2-9的V _LCDR2 (三肽SNN)具有至少80%同一性，與NeuB2-13的V _LCDR2 (三肽GAS)具有至少80%同一性，與NeuB2-19的V _LCDR2 (三肽DNN)具有至少80%同一性，與NeuB2-29的V _LCDR2 (三肽YDD)具有至少80%同一性，與NeuB2-37的V _LCDR2 (三肽SNN)具有至少80%同一性，與NeuB2-40的V _LCDR2 (三肽YDD)具有至少80%同一性，與NeuB2-55的V _LCDR2 (三肽DVS)具有至少80%同一性，與NeuB2-60的V _LCDR2 (三肽YDD)具有至少80%同一性，與NeuB2-80的V _LCDR2 (三肽NNS)具有至少80%同一性，與NeuB2-93的V _LCDR2 (三肽EVS)具有至少80%同一性，與NeuB2-110的V _LCDR2 (三肽EVS)具有至少80%同一性，或與NeuB2-128的V _LCDR2 (三肽DAS)具有至少80%同一性；和 (f)第三V _LCDR，其與NeuB2-8的V _LCDR3 (SEQ ID NO: 41)具有至少80%同一性，與NeuB2-9的V _LCDR3 (SEQ ID NO: 43)具有至少80%同一性，與NeuB2-13的V _LCDR3 (SEQ ID NO: 45)具有至少80%同一性，與NeuB2-19的V _LCDR3 (SEQ ID NO: 47)具有至少80%同一性，與NeuB2-29的V _LCDR3 (SEQ ID NO: 80)具有至少80%同一性，與NeuB2-37的V _LCDR3 (SEQ ID NO: 51)具有至少80%同一性，與NeuB2-40的V _LCDR3 (SEQ ID NO: 53)具有至少80%同一性，與NeuB2-55的V _LCDR3 (SEQ ID NO: 55)具有至少80%同一性，與NeuB2-60的V _LCDR3 (SEQ ID NO: 57)具有至少80%同一性，與NeuB2-80的V _LCDR3 (SEQ ID NO: 59)具有至少80%同一性，與NeuB2-93的V _LCDR3 (SEQ ID NO: 61)具有至少80%同一性，與NeuB2-110的V _LCDR3 (SEQ ID NO: 63)具有至少80%同一性，或與NeuB2-128的V _LCDR3 (SEQ ID NO: 65)具有至少80%同一性。
如請求項2所述的抗體，其中該抗體包含： (i)與NeuB2-8的V _H結構域(SEQ ID NO: 66)或NeuB2-8 mAb的人源化V _H結構域具有至少約80%同一性的V _H結構域；以及與NeuB2-8的V _L結構域(SEQ ID NO: 79)或NeuB2-8 mAb的人源化V _L結構域具有至少約80%同一性的V _L結構域； (ii)與NeuB2-9的V _H結構域(SEQ ID NO: 67)或NeuB2-9 mAb的人源化V _H結構域具有至少約80%同一性的V _H結構域；以及與NeuB2-9的V _L結構域(SEQ ID NO: 80)或NeuB2-9 mAb的人源化V _L結構域具有至少約80%同一性的V _L結構域； (iii)與NeuB2-13的V _H結構域(SEQ ID NO: 68)或NeuB2-13 mAb的人源化V _H結構域具有至少約80%同一性的V _H結構域；以及與NeuB2-13的V _L結構域(SEQ ID NO: 81)或NeuB2-13 mAb的人源化V _L結構域具有至少約80%同一性的V _L結構域； (iv)與NeuB2-19的V _H結構域(SEQ ID NO: 69)或NeuB2-19 mAb的人源化V _H結構域具有至少約80%同一性的V _H結構域；以及與NeuB2-19的V _L結構域(SEQ ID NO: 82)或NeuB2-19 mAb的人源化V _L結構域具有至少約80%同一性的V _L結構域； (v)與NeuB2-29的V _H結構域(SEQ ID NO: 70)或NeuB2-29 mAb的人源化V _H結構域具有至少約80%同一性的V _H結構域；以及與NeuB2-29的V _L結構域(SEQ ID NO: 83)或NeuB2-29 mAb的人源化V _L結構域具有至少約80%同一性的V _L結構域； (vi)與NeuB2-37的V _H結構域(SEQ ID NO: 71)或NeuB2-37 mAb的人源化V _H結構域具有至少約80%同一性的V _H結構域；以及與NeuB2-37的V _L結構域(SEQ ID NO: 84NO: 84)或NeuB2-37 mAb的人源化V _L結構域具有至少約80%同一性的V _L結構域； (vii)與NeuB2-40的V _H結構域(SEQ ID NO: 72)或NeuB2-40 mAb的人源化V _H結構域具有至少約80%同一性的V _H結構域；以及與NeuB2-40的V _L結構域(SEQ ID NO: 85)或NeuB2-40 mAb的人源化V _L結構域具有至少約80%同一性的V _L結構域； (viii)與NeuB2-55的V _H結構域(SEQ ID NO: 73)或NeuB2-55 mAb的人源化V _H結構域具有至少約80%同一性的V _H結構域；以及與NeuB2-55的V _L結構域(SEQ ID NO: 86)或NeuB2-55 mAb的人源化V _L結構域具有至少約80%同一性的V _L結構域； (ix)與NeuB2-60的V _H結構域(SEQ ID NO: 74)或NeuB2-60 mAb的人源化V _H結構域具有至少約80%同一性的V _H結構域；以及與NeuB2-60的V _L結構域(SEQ ID NO: 87)或NeuB2-60 mAb的人源化V _L結構域具有至少約80%同一性的V _L結構域； (x)與NeuB2-80的V _H結構域(SEQ ID NO: 75)或NeuB2-80 mAb的人源化V _H結構域具有至少約80%同一性的V _H結構域；以及與NeuB2-80的V _L結構域(SEQ ID NO: 88)或NeuB2-80 mAb的人源化V _L結構域具有至少約80%同一性的V _L結構域； (xi)與NeuB2-93的V _H結構域(SEQ ID NO: 76)或NeuB2-93 mAb的人源化V _H結構域具有至少約80%同一性的V _H結構域；以及與NeuB2-93的V _L結構域(SEQ ID NO: 89)或NeuB2-93 mAb的人源化V _L結構域具有至少約80%同一性的V _L結構域； (xii)與NeuB2-110的V _H結構域(SEQ ID NO: 77)或NeuB2-110 mAb的人源化V _H結構域具有至少約80%同一性的V _H結構域；以及與NeuB2-110的V _L結構域(SEQ ID NO: 90)或NeuB2-110 mAb的人源化V _L結構域具有至少約80%同一性的V _L結構域，或 (xiii)與NeuB2-128的V _H結構域(SEQ ID NO: 78)或NeuB2-128 mAb的人源化V _H結構域具有至少約80%同一性的V _H結構域；以及與NeuB2-128的V _L結構域(SEQ ID NO: 91)或NeuB2-128 mAb的人源化V _L結構域具有至少約80%同一性的V _L結構域。
如請求項1至3中任一項所述的抗體，其中該抗體是重組的。
如請求項1至3中任一項所述的抗體，其中該抗體是人抗體、人源化抗體或去免疫化抗體。
如請求項1至3中任一項所述的抗體，其中該抗體與顯像劑綴合。
一種嵌合抗原受體，其包含與如請求項1至6中任一項所述的單株抗體的抗原結合結構域具有至少80%同一性的抗原結合結構域。
一種組合物，其包含在藥學上可接受的載體中的如請求項1至6中任一項所述的抗體。
一種分離的多核苷酸分子，其包含編碼如請求項1至6中任一項所述的抗體的核酸序列。
一種宿主細胞，其包含一種或多種編碼如請求項1至56中任一項所述的抗體或權利要求68或69所述的重組多肽的多核苷酸分子。
如請求項10所述的宿主細胞，其中該宿主細胞是哺乳動物細胞、酵母細胞、細菌細胞、纖毛蟲細胞或昆蟲細胞。
一種製造抗體的方法，該方法包含： (a)在細胞中表現一種或多種編碼如請求項1至6中任一項所述的抗體的V _L和V _H鏈的多核苷酸分子；以及 (b)從細胞中純化該抗體。