TW202323275A - 預防及治療突觸核蛋白病的方法 - Google Patents

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Abstract

本揭露提供用於預防及治療突觸核蛋白病之方法及組合物。

Description

預防及治療突觸核蛋白病的方法
本揭露係關於用於預防及治療突觸核蛋白病的方法。
突觸核蛋白病為慢性進行性神經退化性疾病，其特徵在於大腦中α-突觸核蛋白(α-syn)之累積。突觸核蛋白病包括帕金森病(PD)、帕金森病癡呆(PDD)、路易體癡呆(DLB)及多系統萎縮(MSA) (Outeiro等人, Mol. Neurodegener. 14(1):5, 2019)。此等疾病有若干種治療選擇，但它們僅提供症狀緩解，並不直接針對潛在病理。隨著當前人口老齡化，PD及DLB病例不斷增加，由此凸顯了開發能夠預防或延緩神經退化進展之療法的迫切需要。
α-Syn主要為一種胞內蛋白。然而，許多研究表明，胞外α-syn亦在疾病中發揮作用，並且參與神經元之間α-syn的傳播。α-Syn可在腦脊液(CSF)以及腦實質之間隙液(ISF)中偵測到(Emmanouilidou等人, PLoS One 6(7):e22225, 2011)。α-Syn主要藉由胞吐作用自細胞中分泌(Lee等人, J. Neurosci. 25(25):6016-6024, 2005)或由於細胞溶解及死亡而直接釋放至胞外空間。鄰近細胞對蛋白質之內化造成蛋白質聚集體之形成，這可能導致疾病傳播至解剖上連接之大腦區域(Danzer等人, Mol. Neurodegener. 7:42, 2012；Lee等人, J. Biol. Chem. 285:9262-9272, 2010)。此機制已在細胞培養研究中得到證實，其中將α-syn預成形原纖維以與CSF中所見之彼等濃度相當(0.1 ng/ml)的濃度添加至原代神經元培養物中，誘導內源性α-syn形成LB樣內涵物。單體α-syn不會發生此種情況，這與寡聚及纖維狀α-syn物質一致，寡聚及纖維狀α-syn物質係PD中之有毒物質(Volpicelli-Daley等人, Neuron 72:57-71, 2011)。
PD之診斷包括觀察運動功能之特徵性變化，包括運動遲緩、僵硬及震顫之症狀。在PD中，運動症狀通常先於非運動或自主神經功能障礙長達20年(Yu等人, Scientific Reports 8(1):567, 2018；Postuma等人, Nat. Rev. Neurol. 12(11) 622-634, 2016；Durcan等人, Eur. J. Neurol. 26(7):979-985, 2019)。PD最普遍的非運動特徵之一係胃腸道(GI)功能障礙(Fasano等人, The Lancet Neurology 14(6):625-639, 2015；Noyce等人, Annals of Neurology 72(6):893-901, 2012)。一些對於會發展為PD疾病的患者之獨立縱向人群研究顯示，超過50%的PD個體罹患GI功能障礙(Mukhtar等人, BMJ Open 8(5):e019172, 2018)。出現運動症狀之前PD的額外特徵包括，例如，嗅覺減退、REM睡眠行為障礙、白天過度嗜眠、抑鬱、認知症狀及自主神經系統功能障礙(Crosiers等人, Front. Neurol. Doi.org/10.3389/fneur.2020634490, 2021)，以及嗅覺喪失、色覺下降、定量運動測試減慢及黑質神經影像學檢查結果異常。
需要治療諸如PD之突觸核蛋白病的早期運動前症狀的方法，目的是緩解運動前症狀，以及延遲、減輕或預防運動症狀之發作。
在一態樣中，本發明提供在有此需要之個體中預防、減輕、抑制或減緩突觸核蛋白病之一或多種運動症狀發展的方法，該等方法包括向個體投與有效量的靶向α-突觸核蛋白(α-syn)之免疫療法。
在一些實施例中，突觸核蛋白病之一或多種運動症狀選自由以下組成之群：肌肉僵硬、運動遲緩、靜止性震顫及姿勢不穩。
在另一態樣中，本發明提供在有此需要之個體中治療、預防、減輕或抑制突觸核蛋白病之一或多種胃腸道症狀的方法，該方法包括向個體投與有效量的靶向α-syn之免疫療法。
在一些實施例中，該一或多種胃腸道症狀選自由以下組成之群：流口水、流涎、吞嚥困難、噁心、嘔吐、消化不良、便秘、腹痛、胃輕癱及大便失禁。
在一些實施例中，胃腸道症狀發生在個體之結腸中。
在另一態樣中，本發明提供在有此需要之個體中降低胃腸道(例如結腸)中α-syn水準之方法，該方法包括向個體投與有效量的靶向α-syn之免疫療法。
在一些實施例中，個體不具有突觸核蛋白病之一或多種運動症狀或僅表現出最少的突觸核蛋白病運動症狀。
在一些實施例中，個體不具有突觸核蛋白病之一或多種選自由以下組成之群的運動症狀：肌肉僵硬、運動遲緩、靜止性震顫及姿勢不穩。
在一些實施例中，個體患有早期、前驅期之突觸核蛋白病。
在另一態樣中，本發明提供在個體中誘導對α-syn之免疫反應、在個體中抑制α-syn聚集或在個體中減少α-syn聚集體之量的方法，該方法包括向個體投與 有效量的靶向α-syn之免疫療法，其中個體患有早期、前驅期之突觸核蛋白病。
在一些實施例中，突觸核蛋白病選自由以下組成之群：帕金森病(PD)、帕金森病癡呆(PDD)、路易體癡呆(DLB)、多系統萎縮(MSA)、神經軸索營養不良及純自主神經衰竭(PAF)。
在一些實施例中，免疫療法包含肽、蛋白質(例如，抗體)、肽或蛋白質(例如，抗體)之片段或融合物、或編碼分子中之一者的核酸分子(例如，載體中之mRNA或核酸)。
在一些實施例中，免疫療法包含肽免疫原構築體。
在一些實施例中，肽免疫原構築體包含B細胞表位、異源T細胞表位及視情況選用之連接子。
在一些實施例中，B細胞表位誘導針對α-syn之免疫反應，例如當存在於肽免疫原構築體中時。
在一些實施例中，B細胞表位包含α-syn蛋白之C端區域的肽，其中該肽之長度視情況為約10至約25個胺基酸。
在一些實施例中，α-syn蛋白包含SEQ ID NO: 1之序列。
在一些實施例中，B細胞表位包含選自表1之序列的肽(例如，SEQ ID NO: 3、4、5、6、7、8, 9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68或69中任一者之肽)。
在一些實施例中，異源T細胞表位衍生自致病蛋白。
在一些實施例中，異源T細胞表位包含選自表2之序列的序列(例如，SEQ ID NO: 70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97及98中任一者之序列)。
在一些實施例中，肽在B細胞表位與T細胞表位之間包含異源間隔物或連接子。
在一些實施例中，異源間隔物或連接子選自由以下組成之群：Lys-、Gly-、Lys-Lys-Lys-、(α, Ɛ-N)Lys及Ɛ-N-Lys-Lys-Lys-Lys。
在一些實施例中，B細胞表位位於T細胞表位之N端。
在一些實施例中，T細胞表位位於B細胞表位之N端。
在一些實施例中，肽免疫原構築體選自表3之序列(例如，SEQ ID NO: 99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146及147中任一者之構築體)。
在一些實施例中，肽免疫原構築體包含： (a) B細胞表位，其包含來自α-Syn之C端片段的約10至約25個胺基酸殘基，對應於SEQ ID NO: 1之大約胺基酸G111至大約胺基酸D135；(b) T輔助表位，其包含選自由SEQ ID NO: 70-98組成之群的胺基酸序列；及(c)選自由胺基酸Lys-、Gly-、Lys-Lys-Lys-、(α, ε-N)Lys及ε-N-Lys-Lys-Lys-Lys (SEQ ID NO: 148)組成之群的視情況選用之異源間隔物，其中B細胞表位直接或經由視情況選用之異源間隔物與T輔助表位共價連接。
在一些實施例中，B細胞表位選自由以下組成之群：SEQ ID NO: 12-15、17及49-63。
在一些實施例中，T輔助表位選自由以下組成之群：SEQ ID NO: 70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97及98，例如，選自由SEQ ID NO: 81、83及84組成之群。
在一些實施例中，視情況選用之異源間隔物為(α, ε-N)Lys或ε-N-Lys-Lys-Lys-Lys (SEQ ID NO: 148)。
在一些實施例中，T輔助表位與B細胞表位之胺基端共價連接。
在一些實施例中，T輔助表位經由視情況選用之異源間隔物與B細胞表位之胺基端共價連接。
在一些實施例中，肽免疫原構築體包含下式： (Th) m-(A) n-(α-Syn C端片段)-X或(α-Syn C端片段)-(A) n-(Th) m-X，其中：Th為T輔助表位；A為異源間隔物；(α-Syn C端片段)為B細胞表位；X為胺基酸之α-COOH或α-CONH2；m為1至約4；且n為1至約10。
在一些實施例中，肽免疫原構築體包含選自由SEQ ID NO: 107、108、111-113及115-147組成之群的胺基酸序列。
在一些實施例中，肽免疫原構築體呈與CpG寡去氧核苷酸(ODN)之穩定的免疫刺激複合物形式。
在一些實施例中，免疫療法包含在組合物中，該組合物視情況包含多於一種免疫療法，例如多於一種肽免疫原構築體。
在一些實施例中，該組合物包含肽免疫原構築體，該等構築體包含SEQ ID NO: 112及113之胺基酸序列。
在一些實施例中，該組合物為包含該一或多種免疫療法及醫藥學上可接受之遞送媒劑及/或佐劑的醫藥組合物。
在一些實施例中，該組合物包含佐劑，該佐劑包含鋁之礦物鹽，其視情況選自由Al(OH) 3及AlPO 4組成之群。
在一些實施例中，(a)肽免疫原構築體選自由以下組成之群：SEQ ID NO: 99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146及147，例如選自由SEQ ID NO: 107、108、111-113及115-147組成之群；且(b)該組合物包含佐劑，該佐劑為選自由Al(OH) 3及AlPO 4組成之群的鋁之礦物鹽。
在一些實施例中， (a)肽免疫原構築體選自由以下組成之群：SEQ ID NO: 99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146及147，例如選自由SEQ ID NO: 107、108、111-113及115-147組成之群；且(b)肽免疫原構築體呈與CpG ODN之穩定的免疫刺激複合物形式。
在一些實施例中，免疫療法包含特異性結合至以下各物的抗體或其表位結合片段：本文所述之肽免疫原構築體之B細胞表位(參見，例如SEQ ID NO: 99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146及147)、SEQ ID NO: 1之B細胞表位 (例如，SEQ ID NO: 1之C端區域)、或表1之肽 (例如，SEQ ID NO: 3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68及69中之任一者)。
在一些實施例中，該等方法包括使用兩種或更多種、三種或更多種、四種或更多種、或五種或更多種免疫療法。
在一些實施例中，個體係診斷為患有快速眼動(REM)睡眠行為障礙(RBD)。
在一些實施例中，個體具有以下中之一或多者： ：嗅覺減退、REM睡眠行為障礙、白天過度嗜眠、抑鬱、認知症狀、自主神經系統功能障礙、嗅覺喪失、色覺下降、定量運動測試減慢、黑質神經影像學檢查結果異常或其他前驅症狀，例如，如本文所述。
在一些實施例中，個體不具有任何或任何顯著的運動遲緩、僵硬、及/或震顫或其他非前驅性的突觸核蛋白病之症狀。
在一些實施例中，免疫療法包含肽免疫原構築體或由其組成，該構築體包含SEQ ID NO: 112或由其組成。
在另一態樣中，本發明提供用於實施本文所述之任一種方法的組合物或套組。
在其他態樣中，本發明提供本文所述之組合物，其係用於治療、抑制、預防、改善、減少、抑制或減緩本文所述之一或多種疾病或病症或其一或多種症狀之發展。
在其他態樣中，本發明提供使用一或多種本文所述之組合物來產生藥劑，該藥劑係用於治療、抑制、減輕、預防、改善、減少、抑制或減緩本文所述之一或多種疾病或病症或其一或多種症狀之發展。
在其他態樣中，本發明提供本文所述之組合物或套組，其係用於製備用於實施本文所述之任何方法的藥劑。
在其他態樣中，本發明提供用於產生本文所述之組合物及套組的方法，該等組合物及套組係用於治療、抑制、減輕、預防、改善、減少、抑制或減緩本文所述之一或多種疾病或病症之發展，該等方法包括例如混合其組分。
本揭露部分基於以下發現：針對α-突觸核蛋白(α-syn)之免疫療法可用於預防或減少突觸核蛋白病特徵性運動症狀的發作或早期發展，以及降低胃腸道中的α-syn水準。
因此，本揭露係關於藉由使用靶向α-syn之免疫療法在有此需要之個體中預防或減少突觸核蛋白病之一或多種運動症狀之發展的方法。本揭露亦係關於使用此類手段治療、預防、減少或抑制突觸核蛋白病之一或多種胃腸道症狀或無症狀性胃腸道病理的方法。此外，本揭露係關於使用此類手段降低有此需要之個體的胃腸道中α-syn之水準的方法。有利地，在一些實施例中，本揭露之方法可用於治療其中突觸核蛋白病之發展處於早期階段的個體，這可為抑制或減緩疾病之發展提供實質性益處，從而使得生活品質提高及健康壽命延長。
本揭露之方法，包括其中使用的分子及組合物，在下文中以示範性方式描述。
本文所用之章節標題僅用於組織目的，且不應解釋為限制所描述之主題。本申請案中引用的所有參考文獻或參考文獻之一部分出於任何目的明確地以引用方式全部併入本文。
除非另有說明，否則本文使用之所有技術及科學術語與熟習本發明所屬領域之普通技術者通常理解的含義相同。除非上下文另有說明，否則單數術語「一」、「一個」及「該」包括各自的複數術語。類似地，除非上下文另有明確說明，否則「或」一詞旨在包括「及」。因此，「包含A或B」意謂包括A或B、或A及B。應進一步理解，所有胺基酸大小，以及針對多肽給出的所有分子量或分子質量值皆為近似值。儘管與本文所述之彼等方法及材料相似或等效的方法及材料可用於實施或測試所揭示之方法，但下面描述了合適的方法及材料。
本文所提及之所有公開案、專利申請案、專利及其他參考文獻皆以引用方式全部併入。倘若出現衝突，則以本說明書(包括術語解釋)為準。另外，材料、方法及實例僅具有說明性且不欲具有限制性。 免疫治療劑及組合物
本揭露之方法可包括使用例如一或多種肽、蛋白質(例如抗體)、肽或蛋白質(例如抗體)之片段或融合物、或編碼該等分子中之一者的核酸分子(例如，病毒載體中之mRNA或核酸)，其中該分子係針對α-syn。 肽
在一些實施例中，本揭露之方法採用肽免疫原構築體，該構築體包括來自α-syn之B細胞表位，該B細胞表位直接或經由視情況選用之異源間隔物連接至異源T輔助細胞(Th)表位。諸如此等之構築體在例如WO 2018/232369中有所描述，其內容以引用方式併入本文。
肽免疫原構築體之B細胞表位部分可視情況包括來自α-syn之C端末端的約10至約25個胺基酸殘基，對應於例如在全長α-syn (SEQ ID NO: 1)之大約胺基酸位置111處之甘胺酸(G111)至大約胺基酸位置135處之天冬醯胺(D135)的序列。肽免疫原構築體之異源Th表位部分可視情況衍生自致病蛋白。肽免疫原構築體之B細胞表位及Th表位部分在向個體投與時共同作用以刺激特異性識別並結合至構築體之α-syn B細胞表位部分的抗體之產生。
因此，如本文所用，片語「α-syn肽免疫原構築體」係指含有以下各物之肽：(a) B細胞表位，該B細胞表位具有來自α-syn之C端的約10至約25個胺基酸殘基，對應於在全長α-syn (SEQ ID NO: 1)之大約胺基酸位置111處之甘胺酸(G111)至大約胺基酸位置135處之天冬醯胺(D135)的序列； (b)異源Th表位；及(c)視情況選用之異源間隔物。
在某些實施例中，肽免疫原構築體可由下式表示：(Th) m-(A) n-(α-Syn C端片段)-X或(α-Syn C端片段)-(A) n-(Th) m-X，其中Th為異源T輔助表位；A為異源間隔物；(α-Syn C端片段)為具有來自α-Syn之C端的約10至約25個胺基酸殘基的B細胞表位；X為胺基酸之α-COOH或α-CONH 2；m為1至約4之整數；且n為0至約10之整數。在一些實施例中，A為胺基酸並且n表示胺基酸之數目，其中各A可彼此相同，或者一或多個A可為不同的胺基酸。下文描述了所揭示之α-syn肽免疫原構築體的各種組分。 α-Syn 及 α-Syn C 端片段
如本文所用，術語「α-syn」、「α-突觸核蛋白」、「α-突觸核蛋白」及其類似術語係指(a)全長α-syn蛋白及/或(b)來自任何表現α-syn之生物體的片段。在一些實施例中，α-syn蛋白係人類的。在某些實施例中，全長人類α-syn蛋白具有140個胺基酸 (登錄號NP_000336) (SEQ ID NO: 1)。
如本文所用，短語α-syn之「C端區域」或「C端末端」係指來自α-syn之羧基端部分的任何胺基酸序列。在某些實施例中，α-syn之C端區域或C端末端係指α-syn之殘基96-140或其片段之間的胺基酸序列。
如本文所用，片語「α-syn C端片段」或「來自α-syn C端末端之B細胞表位」係指全長α-syn序列之一部分，其包括來自α-syn之C端末端的約10至約25個胺基酸殘基，對應於在全長α-syn之大約胺基酸位置111處之甘胺酸(G111)至大約胺基酸位置135處之天冬醯胺(D135)的序列。α-syn C端片段在本文中亦稱為α-syn G111-D135肽及其片段。本文所述的各種α-syn C端片段係由它們相對於由SEQ ID NO: 1表示的α-syn全長序列之胺基酸位置來指代。
在一些實施例中，α-syn C端片段係由SEQ ID NO: 12表示的25個胺基酸之α-syn G111-D135肽。在其他實施例中，α-syn C端片段含有由SEQ ID NO: 12表示的α-syn G111-D135肽之約10個連續胺基酸。在某些實施例中，α-syn C端片段包括10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25個由SEQ ID NO: 12表示之α-syn G111-D135肽的連續胺基酸。在一些實施例中，α-syn C端片段具有選自SEQ ID NO: 3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68及69中之任一者的序列。在具體實施例中，α-syn C端片段具有由SEQ ID NO: 12-15、17或49-64之一表示的胺基酸序列，如表1所示。
在一些實施例中，肽免疫原構築體之B細胞表位包含SEQ ID NO: 3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68或69中之任一者的肽或由其組成。
本揭露之α-syn C端片段亦包括α-syn G111-D135肽或其片段之免疫功能類似物或同源物。α-syn G111-D135肽或其片段之功能性免疫類似物或同源物包括保留與原始肽實質相同之免疫原性的變異體。免疫功能類似物可在胺基酸位置處具有一或多個保守取代；總電荷之變化；與另一部分之共價連接；或胺基酸添加、插入或缺失；及/或其任何組合。
保守取代係其中一個胺基酸殘基由另一具有相似化學性質之胺基酸殘基取代。例如，非極性(疏水性)胺基酸包括丙胺酸、白胺酸、異白胺酸、纈胺酸、脯胺酸、苯丙胺酸、色胺酸及甲硫胺酸；極性中性胺基酸包括甘胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、半胱胺酸、酪胺酸、天冬醯胺及麩醯胺酸；帶正電荷之(鹼性)胺基酸包括精胺酸、離胺酸及組胺酸；帶負電荷之(酸性)胺基酸包括天冬胺酸及麩胺酸。
免疫功能類似物包括胺基酸序列，其包含一至約四個胺基酸殘基之保守取代、添加、缺失或插入，由此引發與α-syn G111-D135肽有交叉反應性的免疫反應。可用天然或非天然胺基酸完成保守取代、添加及插入。非天然存在之胺基酸包括但不限於ε-N離胺酸、β-丙胺酸、鳥胺酸、正白胺酸、正纈胺酸、羥脯胺酸、甲狀腺素、γ-胺基丁酸、高絲胺酸、瓜胺酸、胺基苯甲酸、6-胺基己酸(Aca；6-胺基己酸)、羥脯胺酸、巰基丙酸(MPA)、3-硝基-酪胺酸、焦麩胺酸及其類似物。天然存在之胺基酸包括丙胺酸、精胺酸、天冬醯胺、天冬胺酸、半胱胺酸、麩胺酸、麩醯胺酸、甘胺酸、組胺酸、異白胺酸、白胺酸、離胺酸、甲硫胺酸、苯丙胺酸、脯胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、色胺酸、酪胺酸及纈胺酸。
在一實施例中，特定肽之免疫功能類似物包括與原始肽相同之胺基酸序列，並且進一步包括添加至α-syn G111-D135肽(或其片段)B細胞表位肽之胺基端中的三個離胺酸殘基(Lys-Lys-Lys)。在此實施例中，向原始肽序列中添加三個離胺酸殘基改變了原始肽之總電荷，但不改變原始肽之功能。
本文所述之其他肽的功能類似物或同源物(參見以上列表及表 1；例如，SEQ ID NO: 3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68及69中之任一者)亦包括在內。
在某些實施例中，α-syn C端片段之功能類似物與原始胺基酸序列具有至少50%的序列一致性。在其他實施例中，功能類似物與原始胺基酸序列具有至少80%的一致性。在又其他實施例中，功能類似物與原始胺基酸序列具有至少85%的一致性。在仍其他實施例中，功能類似物與原始胺基酸序列具有至少90%或至少95%的一致性。兩個序列之間的一致性百分比可藉由檢查兩個最佳比對序列或藉由使用軟體程式或算法(例如，BLAST、ALIGN、CLUSTAL)，使用如此項技術已知的標準參數手動確定。 異源 T 輔助細胞表位 (Th 表位 )
在本揭露之方法中使用的肽免疫原構築體包括來自α-syn之B細胞表位，該B細胞表位直接或經由視情況選用之異源間隔物與異源T輔助細胞(Th)表位共價連接。α-syn肽免疫原構築體中的異源Th表位提高α-syn C端片段之免疫原性，由此有助於經由合理的設計產生針對經優化之靶B細胞表位(亦即α-syn C端片段)的特異性高效價抗體。
如本文所用，術語「異源」係指衍生自並非α-syn之野生型序列的一部分或與其同源之胺基酸序列的胺基酸序列。因此，異源Th表位為衍生自並非天然見於α-syn中之胺基酸序列的Th表位(亦即，Th表位並非α-syn自體的)。由於Th表位與α-syn異源，因此當異源Th表位與α-syn C端片段共價連接時，α-syn之天然胺基酸序列不會在N端或C端方向上延伸。
本揭露之異源Th表位可為不具有天然見於α-syn中之胺基酸序列的任何Th表位。Th表位可具有衍生自任何物種(例如，人類、豬、牛、狗、大鼠、小鼠、豚鼠等)或衍生自病原體(例如，麻疹病毒或肝炎病毒(例如，肝炎病毒表面蛋白；參見下文)之胺基酸序列。Th表位亦可具有與多種物種之II類MHC分子的混雜結合模體。在某些實施例中，Th表位包含多個混雜的II類MHC結合模體以允許T輔助細胞之最大活化，從而導致免疫反應之起始及調節。Th表位較佳自身為免疫沉默的，亦即，由α-syn肽免疫原構築體產生的抗體幾乎沒有(若有的話)將針對Th表位的，因此允許針對α-syn C端片段之所靶向的B細胞表位之極其集中的免疫反應。
表位包括但不限於衍生自外來病原體之胺基酸序列，如表2中所例示(SEQ ID NO: 70-98)。此外，Th表位包括理想化的人工Th表位及組合理想化的人工Th表位(例如，SEQ ID NO: 71及78-84)。作為組合序列(例如，SEQ ID NO: 79-82)呈現的異源Th表位肽含有基於該特定肽之同源物的可變殘基在肽框架內的特定位置處表示的胺基酸殘基之混合物。藉由在合成過程中於特定位置處添加指定的受保護胺基酸之混合物而非一種特定的胺基酸，可一個過程中合成組合肽之組裝體。此類組合的異源Th表位肽組裝體可允許具有不同遺傳背景之動物的廣泛Th表位覆蓋。異源Th表位肽之代表性組合序列包括SEQ ID NO: 79-82，其示於表2中。本發明之Th表位肽對來自遺傳多樣性群體之動物及患者提供廣泛的反應性及免疫原性。
因此，肽免疫原構築體之Th表位可選自SEQ ID NO: 70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97及98中之任一者，及其免疫功能類似物(參見下文)。
包含Th表位之α-Syn肽免疫原構築體可以與α-syn C端片段串聯之形式在單個固相肽合成中同時產生。Th表位亦包括Th表位之免疫類似物。免疫Th類似物包括足以增強或刺激對α-syn C端片段之免疫反應的任何此等Th表位之免疫增強類似物、交叉反應類似物及片段。
Th表位肽之免疫功能類似物亦為有效的並且可用於本揭露之方法中。免疫功能Th類似物可包括Th表位中1至約5個胺基酸殘基之保守取代、添加、缺失及插入，它們基本上不改變Th表位之Th刺激功能。保守取代、添加及插入可用天然或非天然胺基酸完成，如上文針對α-syn C端片段所述。表2鑑定Th表位肽之功能類似物的另一變型。具體而言，MvF1及MvF2 Th之SEQ ID NO: 71及78為MvF4及MvF5之SEQ ID NO: 81及83的功能類似物，因為它們在胺基酸框架上因在N及C端處各有兩個胺基酸之缺失(SEQ ID NO: 71及78)或包含(SEQ ID NO: 81及83)而不同。這兩個系列之類似序列之間的差異不會影響此等序列中所含的Th表位之功能。因此，功能性免疫Th類似物可包括例如衍生自麻疹病毒融合蛋白MvF1-4 Th (SEQ ID NO: 71、78、79、81及83)及肝炎表面蛋白HBsAg 1-3 Th (SEQ ID NO: 80、82及84)的幾個型式之Th表位。
α-syn肽免疫原構築體中的Th表位可在α-syn C端肽之N或C端末端處共價連接。在一些實施例中，Th表位與α-syn C端肽之N端末端共價連接。在其他實施例中，Th表位與α-syn C端肽之C端末端共價連接。在某些實施例中，多於一個Th表位與α-syn C端片段共價連接。當多於一個Th表位與α-syn C端片段連接時，各Th表位可具有相同的胺基酸序列或不同的胺基酸序列。此外，當多於一個Th表位與α-syn C端片段連接時，Th表位可以任意順序排列。舉例而言，Th表位可與α-syn C端片段之N端末端連續連接，或與α-syn C端片段之C端末端連續連接，或者Th表位可與α-syn C端片段之N端末端共價連接，而單獨的Th表位與α-syn C端片段之C端末端共價連接。對Th表位相對於α-syn C端片段之排列沒有限制。
在一些實施例中，Th表位直接與α-syn C端片段共價連接。在其他實施例中，Th表位經由下文進一步詳細描述之異源間隔物與α-syn C端片段共價連接。 異源間隔物
α-syn肽免疫原構築體視情況包括異源間隔物，其將來自α-syn之B細胞表位與異源T輔助細胞(Th)表位共價連接。
如上所討論，術語「異源的」係指衍生自並非α-syn之野生型序列之一部分或與其同源之胺基酸序列的胺基酸序列。因此，當異源間隔物與來自α-syn之B細胞表位共價連接時，α-syn之天然胺基酸序列不會在N端或C端方向上延伸，因為間隔物係α-syn序列異源的。
間隔物為能夠將兩個胺基酸及/或肽連接在一起之任何分子或化學結構。間隔物之長度或極性可視應用而變化。間隔物連接可經由醯胺鍵聯或羧基鍵聯，但其他官能亦係可能的。間隔物可包括化合物、天然存在之胺基酸或非天然存在之胺基酸。
間隔物可為α-syn肽免疫原構築體提供結構特徵。在結構上，間隔物提供Th表位與α-syn C端片段之B細胞表位的物理分離。間隔物之物理分離可破壞藉由將Th表位與B 細胞表位接合而產生的任何人工二級結構。另外，間隔物對表位之物理分離可消除Th細胞之間的干擾及/或B細胞反應。此外，間隔物可經設計以產生或修飾肽免疫原構築體之二級結構。例如，間隔物可經設計以充當柔性鉸鏈，從而增強Th表位與B細胞表位之分離。柔性鉸鏈間隔物亦可允許所呈遞的肽免疫原與適當的Th細胞及B細胞之間更有效的相互作用，從而增強對Th表位及B細胞表位之免疫反應。柔性鉸鏈序列之實例見於免疫球蛋白重鏈鉸鏈區中，該鉸鏈區通常富含脯胺酸。序列Pro-Pro-Xaa-Pro-Xaa-Pro (SEQ ID NO: 149)提供一種可用作間隔物之特別有用的柔性鉸鏈，其中Xaa為任何胺基酸，例如天冬胺酸。
間隔物亦可為α-syn肽免疫原構築體提供功能特徵。例如，間隔物可經設計以改變α-syn肽免疫原構築體之總電荷，這會影響肽免疫原構築體之溶解度。此外，改變α-syn肽免疫原構築體之總電荷會影響肽免疫原構築體與其他化合物及試劑締合的能力。如下文進一步詳細討論，α-syn肽免疫原構築體可藉由靜電締合與高度帶電之寡核苷酸諸如CpG寡聚物形成穩定的免疫刺激複合物。α-syn肽免疫原構築體之總電荷對於此等穩定的免疫刺激複合物之形成很重要。
可用作間隔物之化合物包括但不限於(2-胺基乙氧基)乙酸(AEA)、5-胺基戊酸(AVA)、6-胺基己酸(Ahx)、8-胺基-3,6-二氧雜辛酸(AEEA，mini-PEG1)、12-胺基-4,7,10-三氧雜十二酸(mini-PEG2)、15-胺基-4,7,10,13-四氧雜戊-癸酸(mini-PEG3)、三氧雜十三烷-琥珀醯胺酸(Ttds)、12-胺基-十二酸、Fmoc-5-胺基-3-氧雜戊酸(O1Pen)及其類似物。
天然存在之胺基酸包括丙胺酸、精胺酸、天冬醯胺、天冬胺酸、半胱胺酸、麩胺酸、麩醯胺酸、甘胺酸、組胺酸、異白胺酸、白胺酸、離胺酸、甲硫胺酸、苯丙胺酸、脯胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、色胺酸、酪胺酸及纈胺酸。
非天然存在之胺基酸包括但不限於ε-N離胺酸、β-丙胺酸、鳥胺酸、正白胺酸、正纈胺酸、羥脯胺酸、甲狀腺素、γ-胺基丁酸、高絲胺酸、瓜胺酸、胺基苯甲酸、6-胺基己酸(Aca；6-胺基己酸)、羥脯胺酸、巰基丙酸(MPA)、3-硝基-酪胺酸、焦麩胺酸及其類似物。
α-syn肽免疫原構築體中的間隔物可在Th表位及α-syn C端肽之N或C端末端處共價連接。在一些實施例中，間隔物與Th表位之C端末端及α-syn C端肽之N端末端共價連接。在其他實施例中，間隔物與α-syn C端肽之C端末端及Th表位之N端末端共價連接。在某些實施例中，可使用多於一個間隔物，例如，當多於一個Th表位存在於肽免疫原構築體中時。當使用多於一個間隔物時，各間隔物可彼此相同或不同。另外，當肽免疫原構築體中存在一個以上Th表位時，Th表位可用間隔物分隔開，該間隔物可與用於將Th表位與B細胞表位分隔開的間隔物相同或不同。對間隔物相對於α-syn C端片段之Th表位的排列沒有限制。
在某些實施例中，異源間隔物為天然存在之胺基酸或非天然存在之胺基酸。在其他實施例中，間隔物含有多於一個天然存在或非天然存在之胺基酸(例如，間隔物為肽)。間隔物可包含一或多個Lys (例如，1、2、3、4、5或6個)及/或一或多個Gly (例如，1、2、3、4、5或6個)。在具體實施例中，間隔物為Lys-、Gly-、Lys-Lys-Lys-、(α, ε-N)Lys或ε-N-Lys-Lys-Lys-Lys (SEQ ID NO: 148)。 α-Syn 肽免疫原構築體之具體實施例
α-syn肽免疫原構築體可由下式表示：(Th) m–(A) n–(α-syn C端片段)–X或(α-syn C端片段)–(A) n–(Th) m–X，其中Th為異源T輔助表位；A為異源間隔物；(α-Syn C端片段)為具有來自α-Syn之C端末端的約10至約25個胺基酸之B細胞表位；X為胺基酸之α-COOH或α-CONH 2；m為1至約4之整數；且n為0至約10之整數。在一些實施例中，A為胺基酸並且n表示胺基酸之數目，其中各A可彼此相同，或者一或多個A可為不同的胺基酸。
在某些實施例中，α-syn肽免疫原構築體中的異源Th表位具有選自表2中所示的SEQ ID NO: 70-98中之任一者或其組合的胺基酸序列。在具體實施例中，Th表位具有選自SEQ ID NO: 78-84中之任一者的胺基酸序列。在某些實施例中，α-syn肽免疫原構築體含有多於一個Th表位。
在某些實施例中，視情況選用之異源間隔物選自Lys-、Gly-、Lys-Lys-Lys-、(α, ε-N)Lys、ε-N-Lys-Lys-Lys-Lys (SEQ ID NO: 148)中之任一者及其組合。在具體實施例中，異源間隔物為ε-N-Lys-Lys-Lys-Lys (SEQ ID NO: 148)。
在某些實施例中，α-Syn C端片段具有來自α-syn C端末端之約10至約25個胺基酸殘基，對應於在全長α-syn之大約胺基酸位置111處之甘胺酸(G111)至大約胺基酸位置135處之天冬醯胺(D135)的序列。在一些實施例中，α-Syn C端片段具有SEQ ID NO: 3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68及69中之任一者的胺基酸序列。在具體實施例中，α-Syn C端片段具有由如表1中所示之SEQ ID NO: 12-15、17或49-64表示的胺基酸序列。
在某些實施例中，α-syn肽免疫原構築體具有來自表3之胺基酸序列，例如選自如表3中所示之SEQ ID NO: 107-108、111-113及115-147中之任一者的序列。在具體實施例中，α-Syn肽免疫原構築體具有選自SEQ ID NO: 107-108及111-113中之任一者的胺基酸序列。
在一些實施例中，α-syn肽免疫原構築體可包含SEQ ID NO: 99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146及147中之任一者以及其同源物、類似物、片段及/或組合或由它們組成。 組合物
肽免疫原構築體可包含在組合物(包括醫藥組合物)中，其能夠在個體(例如，人類患者)中引發免疫反應及產生針對肽免疫原構築體之抗體。所揭示之組合物可包括一種或多於一種肽免疫原構築體之混合物。此外，在一些實施例中，組合物包括肽免疫原構築體以及一或多種額外組分，例如載劑、佐劑、緩衝劑及其他合適的試劑。在一些實施例中，組合物包括呈與CpG寡聚物之穩定的免疫刺激複合物形式的肽免疫原構築體，該寡聚物視情況補充有佐劑。
含有所揭示之α-syn肽免疫原構築體的組合物可呈液體或固體形式。液體組合物可包括水、緩沖劑、溶劑、鹽及/或不改變α-syn肽免疫原構築體之結構或功能特性的任何其他可接受之試劑。肽組合物可含有所揭示之α-syn肽免疫原構築體中之一或多者。 醫藥組合物
本揭露之方法可利用含有所揭示之α-syn肽免疫原構築體之醫藥組合物。
醫藥組合物可在醫藥學上可接受之遞送系統中含有載劑及/或其他添加劑。因此，醫藥組合物可含有醫藥有效量之α-syn肽免疫原構築體以及醫藥學上可接受之載劑、佐劑及/或其他賦形劑諸如稀釋劑、添加劑、穩定劑、防腐劑、增溶劑、緩沖劑及其類似物。
醫藥組合物可含有一或多種佐劑，其係用於加速、延長或增強對α-syn肽免疫原構築體之免疫反應，而本身不具有任何特異性抗原效應。醫藥組合物中使用之佐劑可包括油、鋁鹽、病毒體、磷酸鋁(例如，ADJU-PHOS®)、氫氧化鋁(例如，ALHYDROGEL®)、脂質體、皂苷、角鯊烯、L121、Emulsigen®、單磷醯脂質A (MPL)、QS21、ISA 35、ISA 206、ISA50V、ISA51、ISA 720以及其他佐劑及乳化劑。
在一些實施例中，醫藥組合物含有Montanide™ ISA 51(油佐劑組合物，由植物油及甘露醇油酸酯構成，用於生成油包水乳液)、Tween® 80(亦稱為聚山梨醇酯80或聚氧乙烯(20)山梨糖醇酐單油酸酯)、CpG寡核苷酸及/或其任何組合。在其他實施例中，醫藥組合物為水包油包水(亦即，w/o/w)乳液，以Emulsigen或Emulsigen D作為佐劑。
醫藥組合物可經調配以用於立即釋放或持續釋放。此外，醫藥組合物可經調配以藉由免疫原包埋及與微粒共同投與來誘導全身或局部黏膜免疫。此類遞送系統易於由普通熟習此項技術者確定。
醫藥組合物可經製備成可注射劑，呈液體溶液或懸浮液形式。亦可在註射前製備含有α-syn肽免疫原構築體之液體媒劑。醫藥組合物可藉由任何合適的應用方式投與，例如，肌內、皮下、皮內、靜脈內、腹膜內、鼻內、經口等，並藉由使用任何合適的調配物或遞送裝置。
醫藥組合物亦可經調配呈合適的劑量單位形式。在一些實施例中，醫藥組合物含有每公斤體重約0.5 μg至約1 mg的α-syn肽免疫原構築體。在一些實施例中，醫藥組合物含有10-1000 μg，例如20-500 μg、50-400 μg或100-300 μg如本文所述之免疫療法(例如，肽免疫原構築體)。醫藥組合物之有效劑量視許多不同因素而變化，包括投藥方式、靶部位、患者之生理狀態、患者為人類抑或動物、所投與的其他藥劑以及治療為預防性的抑或治療性的。通常，患者為人類，但亦可治療非人類哺乳動物，包括基因轉殖的哺乳動物。當以多劑量遞送時，醫藥組合物可宜分成合適的量/劑量單位形式，如由熟習此項技術者確定為合適的。所投與之劑量將視個體之年齡、體重及一般健康狀況而定，如治療領域中所熟知的。
在一些實施例中，醫藥組合物含有多於一種α-syn肽免疫原構築體及/或抗體。一種醫藥組合物，其含有多於一種α-syn肽免疫原構築體 (及/或抗體)之混合物以允許協同增強構築體之免疫功效。由於II類MHC覆蓋範圍廣泛，含有多於一種α-syn肽免疫原構築體之醫藥組合物可在更大的遺傳群體中更有效，因此提供對α-syn肽免疫原構築體之改進的免疫反應。
在一些實施例中，醫藥組合物含有選自SEQ ID NO: 107、108、111-113及115-147之α-syn肽免疫原構築體，以及其同源物、類似物、片段及/或組合。在具體實施例中，醫藥組合物含有選自SEQ ID NO: 107、108、111-113之α-syn肽免疫原構築體及其任何組合。
在一些實施例中，α-syn肽免疫原構築體可包含SEQ ID NO: 99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146及147中之任一者以及其同源物、類似物、片段及/或組合或由它們組成。
含有α-syn肽免疫原構築體之醫藥組合物可用於在投與後在個體體內引發免疫反應並產生抗體。在一些實施例中，如熟習此項技術者確定為合適的，將本文所述之醫藥組合物向個體投與1、2、3、4、5次或更多次。可例如以初始劑量投與組合物，繼之投與1或多個(例如，2、3、4、5個或更多個)加強劑量。在一些實施例中，在第1週投與初始劑量，接著在第5週投與一個劑量，並在第13週投與額外的劑量。在一些實施例中，各劑量之量為相同的(例如，100 μg或300 μg；亦參見上文)。在一些實施例中，各劑量之量係不同的，如可由熟習此項技術者確定為合適的。例如，初始劑量可為40 μg，繼之在後續投藥中(例如，在第5週及第13週)給予100 μg、300 μg或1000 μg。 免疫刺激複合物
本揭露之方法亦可利用醫藥組合物，該等醫藥組合物含有呈與CpG寡核苷酸之免疫刺激複合物形式的α-syn肽免疫原構築體。此類免疫刺激複合物特別適於用作佐劑及肽免疫原穩定劑。免疫刺激複合物呈微粒狀，能有效地將α-syn肽免疫原呈遞給免疫系統之細胞，從而產生免疫反應。免疫刺激複合物可經調配成懸浮液以供非經口投與。免疫刺激複合物亦可經調配呈油包水乳液之形式，作為與礦物鹽或原位膠凝聚合物組合之懸浮液，用於在非經口投與後將α-syn肽免疫原有效遞送至個體免疫系統之細胞。
穩定的免疫刺激複合物可藉由將α-syn肽免疫原構築體與陰離子分子、寡核苷酸、多核苷酸或其組合經由靜電締合複合來形成。穩定的免疫刺激複合物可作為免疫原遞送系統併入醫藥組合物中。
在某些實施例中，α-syn肽免疫原構築體經設計以含有在5.0至8.0範圍內的pH下帶正電荷之陽離子部分。α-syn肽免疫原構築體或構築體混合物的陽離子部分之淨電荷藉由為離胺酸(K)、精胺酸(R)或組胺酸(H)各自指定+1電荷；為天冬胺酸(D)或麩胺酸(E)各自指定-1電荷；且為序列中之其他胺基酸指定0電荷來計算 。電荷在α-syn肽免疫原構築體之陽離子部分內相加，並表示為淨平均電荷。合適的肽免疫原具有陽離子部分，其淨平均正電荷為+1。在一些實施例中，肽免疫原之淨正電荷範圍大於+2。在一些實施例中，α-syn肽免疫原構築體之陽離子部分為異源間隔物。在某些實施例中，當間隔物序列為(α, ε-N)Lys、ε-N-Lys-Lys-Lys-Lys (SEQ ID NO: 148)時，α-syn肽免疫原構築體之陽離子部分具有+4之電荷。
如本文所述之「陰離子分子」係指在5.0-8.0範圍內的pH下帶負電荷之任何分子。在某些實施例中，陰離子分子為寡聚物或聚合物。寡聚物或聚合物上的淨負電荷藉由為寡聚物中的各磷酸二酯或硫代磷酸酯基團指定-1電荷來計算。合適的陰離子寡核苷酸為具有8至64個核苷酸鹼基之單鏈DNA分子，其中CpG模體之重複數目在1至10之範圍內。在一些實施例中，CpG免疫刺激性單鏈DNA分子含有18-48個核苷酸鹼基，其中CpG模體之重複數目在3至8之範圍內。
在一些實施例中，陰離子寡核苷酸由下式表示：5' X 1CGX 23'，其中C及G未甲基化；且X 1選自由A(腺嘌呤)、G(鳥嘌呤)及T(胸腺嘧啶)組成之群；且X 2為C(胞嘧啶)或T(胸腺嘧啶)。在其他實施例中，陰離子寡核苷酸由下式表示：5' (X 3)2CG(X 4)23'，其中C及G未甲基化；且X 3選自由A、T或 G組成之群；且X 4為C或T。
所得免疫刺激複合物呈顆粒狀，其尺寸通常在1-50微米範圍內，且為許多因素之函數，該等因素包括相互作用物質之相對電荷化學計量及分子量。微粒化免疫刺激複合物具有提供佐劑化及體內特異性免疫反應上調之優點。此外，穩定的免疫刺激複合物適用於藉由各種製程製備醫藥組合物，包括油包水乳液、礦物鹽懸浮液及聚合物凝膠。
在本揭露之方法中使用的α-syn肽免疫原構築體可使用此項技術中熟知之化學合成方法製得(參見，例如Fields等人, Synthetic Peptides中的第3章: A User’s Guide, 編者Grant, W. H. Freeman & Co., New York, NY, 1992, 第77頁)。例如，α-syn肽免疫原構築體可使用固相合成之自動Merrifield技術，使用側鏈保護之胺基酸在Applied Biosystems Peptide Synthesizer 型號430A或431上合成，其中α-NH 2受t-Boc或F-moc化學結構保護。包含Th表位之組合文庫肽的α-syn肽免疫原構築體之製備可藉由提供用於在給定可變位置處偶聯的替代胺基酸之混合物來完成。在完全組裝所需的α-syn肽免疫原構築體後，可根據標準程序處理樹脂以將肽自樹脂上切割下來，並且可去阻斷胺基酸側鏈上的官能基。遊離肽可藉由HPLC來純化並進行生化表徵，例如藉由胺基酸分析或定序。肽之純化及表徵方法為熟習此項技術者所熟知。
可控制及限定藉由此化學製程產生的肽之品質，並因此可確保α-syn肽免疫原構築體之可重複性、免疫原性及產率。藉由固相肽合成製造α-syn肽免疫原構築體之詳細描述在WO 2018/232369之實例1中有所描述。
已發現允許保留預期免疫活性的結構可變性範圍遠比允許保留小分子藥物之特定藥物活性或在與生物衍生藥物共同產生之大分子中所見的所需活性及不希望有的毒性之結構可變性範圍更適應。因此，肽類似物，無論是有意設計的抑或由於合成過程之錯誤作為具有與預期肽相似之色譜及免疫學特性的缺失序列副產物之混合物而不可避免地產生，通常皆與所需肽之純化製劑一樣有效。所設計的類似物及非預期類似物混合物為有效的，只要開發有辨別力之QC程序來監控製造過程及產物評估過程，由此保證使用此等肽的最終產物之可重複性及有效性。
α-syn肽免疫原構築體亦可使用重組DNA技術製得，包括使用核酸分子、載體及/或宿主細胞。因此，編碼α-syn肽免疫原構築體及其免疫功能類似物的核酸分子亦包括在本揭露內容中，作為本發明之一部分。類似地，包含核酸分子之載體(包括表現載體)以及含有該等載體之宿主細胞亦包括在本揭露內容中，作為本發明之一部分。
各種示範性實施例亦涵蓋產生α-syn肽免疫原構築體及α-syn G111-D135片段衍生之肽免疫原構築體的免疫功能類似物的方法。例如，方法可包括在表現肽及/或類似物之此類條件下培育含有表現載體之宿主細胞的步驟，該表現載體含有編碼α-syn肽免疫原構築體及/或其免疫功能類似物的核酸分子。較長的合成肽免疫原可藉由熟知的重組DNA技術合成。此類技術在帶有詳細方案之熟知標準手冊中提供。為了構築編碼本發明之肽的基因，將胺基酸序列反向翻譯以獲得編碼胺基酸序列之核酸序列，較佳使用對於要在其中表現基因之生物體最優的密碼子。接下來，若需要，則通常藉由合成編碼肽及任何調控元件之寡核苷酸製得合成基因。將合成基因插入合適的選殖載體並轉染至宿主細胞中。接著在適用於所選表現系統及宿主的合適條件下表現肽。藉由標準方法純化及表徵肽。 用於製造免疫刺激複合物之方法
如上所述，本揭露之方法可進一步使用包含α-syn肽免疫原構築體及CpG寡去氧核苷酸(ODN)分子的免疫刺激複合物。穩定的免疫刺激複合物(ISC)衍生自α-syn肽免疫原構築體之陽離子部分及多價陰離子CpG ODN分子。自組裝系統由電荷之靜電中和驅動。α-syn肽免疫原構築體之陽離子部分與陰離子寡聚物之莫耳電荷比的化學計量決定締合程度。α-syn肽免疫原構築體與 CpG ODN之非共價靜電締合為完全可重複的過程。肽/CpG ODN免疫刺激複合物聚集體有助於向免疫系統之「專業」抗原呈遞細胞(APC)進行呈遞，從而進一步增強複合物之免疫原性。此等複合物易於表徵以便在製造過程中進行品質控制。肽/CpG ISC在活體內具有良好的耐受性。包含CpG ODN及α-syn G111-D135片段衍生之肽免疫原構築體的此微粒系統旨在利用與CpG ODN使用相關的廣義B細胞有絲分裂性，同時促進平衡的Th-1/Th-2類型反應。
所揭示之醫藥組合物中的CpG ODN在由相反電荷之靜電中和介導的過程中與免疫原100%結合，導致形成微米級微粒。微粒形式可顯著降低與CpG佐劑之常規使用相比的CpG之劑量，降低不良先天免疫反應之可能性，並促進包括抗原呈遞細胞(APC)之替代免疫原加工途徑。因此，此類調配物在概念上係新穎的，並且藉由藉助於替代機制促進免疫反應之刺激而提供潛在優勢。 抗體
本揭露之方法可利用特異性識別並結合至α-syn (例如，α-syn之C端肽，例如本文所述之肽免疫原構築體的B細胞表位部分)之抗體(亦參見WO 2018/232369)。用於療法中之抗體可使用此項技術中之標準方法產生，包括例如單株抗體、多株抗體、多特異性抗體(例如雙特異性及三特異性抗體)及抗體片段，限制條件為保持所需抗原結合活性及特異性。抗體片段包括，例如，Fv、單鏈Fv (scFv)、Fab、Fab'、二-scFv、sdAb (單域抗體)及(Fab') 2(包括化學連接之F(ab') 2)。抗體亦包括例如嵌合抗體、人源化抗體及各種物種諸如小鼠、人類、食蟹猴等抗體。此外，亦包括具有來自其他生物體之序列的抗體變異體。抗體片段亦包括單鏈scFv、串聯二-scFv、雙抗體、串聯三-sdcFv、微型抗體等的任一方向。抗體片段進一步包括奈米抗體(sdAb，一種具有單個單體結構域之抗體，諸如一對重鏈可變結構域，沒有輕鏈)。在一些實施例中，抗體片段可稱為係特定物種(例如，人類scFv或小鼠scFv)。這表示至少部分非CDR區域之序列，而非構築體之來源。 治療方法
本揭露提供使用所揭示之免疫療法(例如，肽免疫原構築體及/或針對該等肽免疫原構築體之抗體)治療、延遲、減輕及/或預防突觸核蛋白病的方法。在一些實施例中，該等方法包括向個體投與含有所揭示之肽免疫原構築體及/或抗體的組合物。在某些實施例中，方法中使用的組合物含有所揭示之肽免疫原構築體，該構築體呈與帶負電荷之寡核苷酸(諸如CpG寡聚物)經由靜電締合形成的穩定免疫刺激複合物形式，該等複合物視情況進一步補充有礦物鹽或油作為佐劑，以供向患有突觸核蛋白病之受試者投與。所揭示之方法亦包括用於將肽免疫原構築體投與處於突觸核蛋白病之風險下或患有突觸核蛋白病之個體的給藥方案、劑型及途徑。
可根據本揭露之方法治療的個體包括患有突觸核蛋白病例如帕金森病(PD)、帕金森病癡呆(PDD)、路易體癡呆(DLB)、多系統萎縮(MSA)、神經軸索營養不良、純自主神經衰竭(PAF)或處於發生該等疾病之風險下的患者，諸如人類患者。
在一些實施例中，根據本揭露之方法治療的個體處於突觸核蛋白病發展之早期階段。例如，個體可處於此項技術已知之「前驅」期，此時可能出現疾病之早期體徵及症狀，但尚未出現疾病之主要症狀(例如，運動症狀)。前驅期的個體之鑑定通常涉及臨床、體液、組織、遺傳及成像特徵或標記之組合的考量。例如，可使用藉由例如正電子發射斷層攝影術(PET)、單光子發射電腦斷層攝影術(SPECT)或磁共振成像(MRI)的成像。在一些實施例中，PET或SPECT用於偵測多巴胺轉運蛋白(DAT)(DAT-PET或DAT-SPECT)。可使用的另一方法係藉由蛋白質錯誤折疊循環擴增(PMCA)偵測腦脊液或組織活檢中的病理性α-syn。在其他實例中，皮膚測試可用於偵測例如磷酸化α-syn(例如，使用Syn-One Test TM)或皮脂脂質(Sinclair等人, Nature 12:1592, 2021)。除了此等測試之外，亦可藉由偵測突觸核蛋白病之前驅症狀來識別個體，此等前驅症狀包括例如REM-睡眠行為障礙、嗅覺減退、便秘、情感疾患、白天過度嗜眠、整體認知缺陷、小手寫體、不寧腿症候群、體位性低血壓、性功能障礙、泌尿功能障礙、聲音及麵部運動不能或其組合。此外，家族史可為有用的考慮因素。另外，可確定閾下帕金森病之評分，諸如前驅PD之UPDRS評分(Goetz等人, Mov. Disord. 27:1239-1242, 2012)。亦可評估諸如α-syn、神經絲輕鏈(NfL)及血漿尿酸鹽水準之標記。可另外使用遺傳標記(例如，LRRK2、 GBA、SNCA及/或VPS35基因中之突變)。處於突觸核蛋白病早期(例如，前驅期)之個體可根據本揭露之方法來治療。在一些實施例中，個體經診斷患有REM-睡眠行為障礙，但沒有任何或任何顯著的運動症狀(例如，運動遲緩、僵硬及/或震顫)。在一些實施例中，受試者具有以下一或多者：嗅覺減退、REM睡眠行為障礙、白天過度嗜眠、抑鬱、認知症狀、自主神經系統功能障礙、嗅覺喪失、色覺下降、定量運動測試減慢、及黑質神經影像學檢查結果異常。在一些實施例中，個體沒有任何或任何顯著的運動症狀(例如，運動遲緩、僵硬及/或震顫)。
本揭露亦包括使用含有α-syn肽免疫原構築體之醫藥組合物的方法。在某些實施例中，含有α-syn肽免疫原構築體之醫藥組合物可用於：(a)抑制個體中的α-syn聚集；(b)誘導個體中預成形的α-syn聚集體之解集；(c)減少個體中小神經膠質細胞TNF-α及IL6之分泌；(d)減少個體中由外源性α-syn聚集體觸發之神經退化；(e)減少α-syn過表現細胞之神經退化；(f)降低個體之血清α-syn水準；(g)降低個體大腦中的寡聚α-syn水準；(h)減少個體之神經病理學及運動活動的恢復；及其類似情況，其中個體處於其突觸核蛋白病之早期、前驅期。
上述方法包含向有此需要之個體投與醫藥組合物，該醫藥組合物包含藥理學有效量的靶向α-syn之免疫療法(例如，一或多種肽免疫原構築體及/或抗體，例如如本文所述)。方法中使用之量及方案可與以上在關於組合物之部分中提供的資訊一致，或者由熟習此項技術者確定為合適的。
本發明亦提供本文所述之組合物及套組，其係用於預防、改善、抑制、減緩或治療本文所述之任何疾病或病症。
以下實例說明本揭露之某些特徵及態樣，並且不應被視為以任何方式限製本揭露之範疇。 實例
α-突觸核蛋白(α-syn)在帕金森病(PD)、路易體癡呆(LBD)及多系統萎縮(MSA)之發病機制中起關鍵作用。臨床上正在研究旨在中和有毒α-syn物質之免疫療法，作為PD及其他突觸核蛋白病之潛在疾病改善療法。在此項研究中，研究了在Thy1SNCA/15小鼠PD模型中用UB312疫苗對α-syn進行主動免疫的效果。年幼的基因轉殖及野生型小鼠在6週內接受免疫方案，接著再觀察9週。在免疫前及第一次給藥後15週進行行為評估。
UB312免疫預防線測試及挑戰性梁測試中運動損傷之發展，這與Thy1SNCA/15小鼠之大腦皮層、海馬體及紋狀體中α-syn寡聚物水準之降低有關 。UB312免疫療法導致結腸中α-syn負荷之顯著降低，伴隨有結腸神經節中腸神經膠細胞反應性的降低。
吾等結果表明，用UB312進行的免疫預防Thy1SNCA/15小鼠之功能缺陷以及中樞與周邊病理。 材料及方法 動物
Thy1SNCA/15小鼠(庫存號017682)係自Jackson Laboratory (Bar Harbour, Maine, USA)獲得，並在University of Southampton重新獲得以建立並維持品系。Thy1SNCA/15小鼠過表現由小鼠胸腺細胞抗原1 (Thy1) 啟動子驅動的編碼人類野生型α-syn之基因的1-2個拷貝(Choi等人, Nat. Commun. 11(1):1386, 2020)。Thy1SNCA/15小鼠呈現出廣泛的α-syn表現，看起來主要為突觸，其在10月齡前未報告有LB樣聚集體或磷酸化的α-syn (Rabl等人, BMC Neurosci. 18:22, 2017；Choi等人, Nat. Commun. 11(1):1386, 2020)。非基因轉殖(C57BL/6J背景)同窩小鼠用作對照。迄今為止，尚未在Thy1SNCA/15小鼠中進行過行為研究
所有小鼠以5-10只為一組圈養，在標準的12小時明/暗循環下飼養並餵以標準RM1飼料(SDS, UK)且 隨意飲水。所有程序均按照United Kingdom Animals (Scientific Procedures) Act 1986, Home Office license規定之動物護理指南進行。 用UB312對小鼠進行的預防接種及抗體效價
圖1總結了免疫方案。向10週齡Thy1SNCA/15肌肉內注射(相隔3週) UB312 (每次注射40 µg，n=29)或佐劑(Adju-Phos®及CpG1) (n=27) 3 次。10週齡非基因轉殖C57BL/6J小鼠亦接受同等的佐劑免疫(n=22)。每次注射前且在初次注射後第10週及第15週收集血清用於抗體效價分析。使用抗α-syn酶免疫檢定(EIA)套組(United Biomedical, Inc.)量測抗體效價，該套組使用針對α-syn之K97-D135區域的合成靶肽免疫吸附劑。UB312：UBITh1-ɛK-KKK-α-突觸核蛋白126-135 (SEQ ID NO: 112；UBITh1-εk-kkk-EMPSEEGYQD)。
初次注射後15週，用戊巴比妥(200 mg/kg)對小鼠進行終末麻醉並灌注以用於免疫組織化學(Tg-UB-312, n=12；Tg-Adj, n=11；WT-Adj, n=9)或生化分析(Tg-UB-312, n=17；Tg-Adj, n=16；WT-Adj, n=13)。對於免疫組織化學分析，向小鼠心內灌注PBS (0.01 M)，繼之4%多聚甲醛(PFA) (在0.01 M PBS, pH 7.4中)。解剖出大腦及腸(十二指腸及近端結腸)並再浸入4% PFA中4小時，隨後轉移至30%蔗糖中以進行冷凍保護。對於西方墨點分析，用冰冷的PBS (0.01 M)灌注小鼠，並立即在冰冷的PBS上解剖出皮層、海馬體及紋狀體，並在乾冰上快速冷凍以供進一步處理。 行為測試
在免疫前及第一次免疫後15週，小鼠經歷三種不同的行為測試，每種均在單獨之日進行，包括適應期，使得在任何一天均沒有重疊的行為測試。治療前與治療後的測試與適應期之順序保持一致(Tg-UB-312, n=29；Tg-Adj, n=27；WT-Adj, n=22)。評估者對動物的治療狀態不知情。 挑戰性梁穿越測試
訓練小鼠穿過由4個相等節段構成之1 m長的梁，該等節段越向末端變得越窄(3.5、2.5、1.5、0.5 cm寬)。將小鼠放在梁較寬的一端處，並鼓勵小鼠穿過梁到達另一側的乾淨籠子處。在3日內每日對小鼠進行5次試驗，繼之為測試日。在測試日，在梁段上放置1 cm 2之金屬線網，並讓小鼠自由穿過梁進行5次試驗。對每次試驗之視訊記錄進行分析，並記錄錯誤次數。若小鼠向前移動且它們的一隻腳從金屬線網滑落了一半，則認為係錯誤的。計算5個試驗之平均錯誤次數。 桿測試
桿測試由固定在乾淨籠中之立桿(直徑1.5 cm且高55 cm)組成。將小鼠頭部朝上放在桿之一側，並記錄將自己180º面朝下重新定向並沿桿下降之時間。每隻小鼠經歷3天適應，每節最多5次試驗，繼之為測試日。 懸線測試
在免疫療法之前及之後，小鼠僅接受一項線測試試驗。將小鼠倒掛在6 mm厚的金屬線環(直徑20 cm)上，該金屬線環可在一個樞軸上自由旋轉。不鼓勵不適當的行為，諸如在線上保持平衡或故意自線上跳下，且試驗被放棄或重複。以5分鐘為截止值記錄自線上跌落之總時間。 免疫組織化學
使用Leica Cryostat自大腦(距中線1800 µm)或腸切下20 µm厚之矢狀切片。使用免疫螢光偵測α-Syn。簡而言之，將組織切片在0.01 M PBS (Sigma, 1002795531)中再水化並在15%正常山羊血清(Fisher Scientific, 1002817944)中阻斷1小時。將切片在0.01 M PBS, 0.1% Triton X [1001466726, ThermoFisher]中之抗α-syn抗體MJFR1 (1:2000, Abcam, ab138501) 中在4℃下培育隔夜。接著將切片在室溫(RT)下在Alexa-Fluor 555結合之山羊抗兔二次抗體(Molecular Probes life technologies)中培育。將切片用DAPI複染並裝在Mowiol 及Citifluor (ThermoFisher)中。
為了分析大腦及腸道之炎性狀態，選擇星狀細胞(GFAP, 1:400, Dako)、小神經膠質細胞(Iba1, 1:400, Wako, 019-19741)、T細胞(CD3 (KT3), 1:200, BioRad, MCA500G)及內皮激活(ICAM1, 1:200, Bioledgend, 116101)之標記。將內源性過氧化酶活性用3% H 2O 2(H1009-500 ml, Sigma Aldrich)淬滅10分鐘。藉由使用Panasonic 800W微波爐在中火下在檸檬酸鹽緩衝液(15 mM Tris檸檬酸鈉[101578237, Sigma Aldrich]、0.1% tween, pH6 [P1379, Sigma Aldrich])中加熱組織25分鐘，對Iba1染色進行熱誘導之抗原修復。用15%正常山羊血清(Fisher Scientific)阻斷非特異性結合位點1小時。隨後將組織與一次抗體在0.01M PBS、0.1% triton X中在4℃下培育隔夜。然後將組織在經生物素化之二次抗體中在室溫下培育1小時。將組織在抗生物素蛋白生物素複合物(ABC)中在RT下培育1小時(PK-6100 Vectastain ABC套組)。使用鎳DAB進行色原體之顯色。在裝於聯苯乙烯塑化劑二甲苯(DPX, 12658646 Fisher Scientific)中之前，將組織在IMS 50%、70%、95%、100%中分別脫水2分鐘，用伊紅複染並在二甲苯中培育5分鐘。 西方墨點
使用Kontes顆粒杵均質器在10% W/V放射免疫沉澱檢定(RIPA)緩衝液(ThermoFisher, 89901)中將組織樣品在冰上與HALT蛋白酶及磷酸酶抑制劑混合物(ThermoScientific, 78442)一起均質化。勻漿在Eppendorf 5417 R台式離心機中在4℃下以14000 rpm離心。丟棄沉澱並保留上清液用於分析。使用Pierce牛血清白蛋白(BSA)檢定套組(ThermoFisher, 23227)，根據製造商說明書測定每份上清液之蛋白質濃度。
Mini-PROTEIN Tetra垂直電泳池(BioRad; 1568004)用於自腦勻漿中分離蛋白質。為變性條件或天然條件製備1 mm厚之聚丙烯醯胺凝膠。
對於天然聚丙烯醯胺凝膠電泳(PAGE)，將腦勻漿在4X Laemmli樣品緩衝液(BioRad, 1620112)中稀釋，並將20 µg蛋白質加載至10%或12%天然凝膠中。將純單體α-syn(圖10A)作為分子量標記與大腦勻漿一起跑膠。用於加載之蛋白質濃度由所用抗體之線性範圍確定(圖10A)。在Laemmli緩衝液(192 mM甘胺酸[Sigma Aldrich, G8898]、25 mM Tris Base [ThermoFisher, 10103203])中以100-150 V進行電泳持續2小時。使用Trans Blot turbo系統 (BioRad, 1704150)及Mini轉印套組(BioRad, 1704270) 進行半乾轉印。在2.5 V、2 A及15分鐘時將蛋白質乾轉至0.2 µm硝酸纖維素膜上。將膜用3%牛血清白蛋白(BSA) (Sigma Aldrich, 102052095)在RT下阻斷1小時。在Tris緩衝鹽水(TBS) (0.25 M Tris Base、1.5 M NaCl, pH 7.2)、0.1% tween20 (Sigma, P1379) 中洗滌膜3 x 5分鐘後，在MJFR1 (1:5000; ab138501, Abcam)中在4℃下培育其隔夜 。在BSA中阻斷之前應用Revert 700總蛋白質染劑(LiCor, 926-11015)以使蛋白質負載歸一化。 圖像分析與統計
免疫墨點在LiCor Odyssey Fc掃描儀上成像，並使用Image Studio Lite V5.2進行分析。免疫反應性α-syn條帶經歸一化為GAPDH以用於天然PAGE之SDS-PAGE及Revert。使用SP8共焦雷射掃描顯微鏡(Milton Keys, UK)以20倍對用於螢光顯微鏡檢查之免疫染色組織切片進行可視化並捕獲圖像。使用Olympus VS110高通量虛擬顯微鏡系統以x20掃描DAB免疫染色組織切片以供分析。使用Olympus VS軟體自所掃描之圖像中捕獲圖像(每個0.16 mm 2)。對於所研究之各標記，使用FIJI軟體計算每隻動物2個連續切片之免疫反應性面積百分比。計算每個大腦區域之平均面積百分比，並使用GraphPad Prism軟體進行統計分析。雙向變異數分析(ANOVA)用於行為分析，其中Bonferroni校正用於事後多重比較。除非另有說明，否則進行T檢驗以在西方墨點及免疫組織化學中分析α-syn之免疫反應性。單向ANOVA用於分析炎性標記。在適用的情況下，使用Bonferroni校正進行 事後分析，以進行多重比較分析。當p＜0.05時，差異被視為顯著的。數字(n)係指用於每個實驗之小鼠的數量。 結果 抗體效價
所有基因轉殖小鼠在第一次注射後均產生高水準之抗α-syn97-135抗體效價。效價水準在前6週迅速上升，在第6-10週間達到峰值，並在15週研究期間的剩餘時間內保持穩定(圖2)。出乎意料地，一些投與佐劑之Wt及基因轉殖小鼠亦產生背景抗體效價，但此等效價比UB312誘導之效價低2-3個數量級。 UB312免疫提高運動表現
使用旨在評估運動功能的三種行為測試對UB312免疫療法對Thy1SNCA/15小鼠中功能結果之影響進行了研究。其中包括用於量測握力之懸線測試、用於感覺運動表現之挑戰性梁測試以及用於自主運動控制之桿測試(Fleming等人, J. Neurosci. 24:9434-9440, 2004)。在10週齡時，在開始免疫療法之前，Thy1SNCA/15小鼠與Wt小鼠相比在任何測試中的運動表現沒有任何差異，如圖3所示。Thy1SNCA/15小鼠之運動表現在樑及線測試(26週齡)中隨著年齡的增長而惡化，並且此惡化經由15週之UB312免疫療法得到了預防。
在挑戰性梁穿越測試中，雙向ANOVA揭示年齡(F (1,83)=22.46, p ＜ 0.0001)及治療(F( 2,83)=5.72, p=0.0047) 對腳錯誤之次數的顯著影響。多重比較之 事後分析顯示，接受佐劑之Thy1SNCA/15小鼠對照組與10週相比(P＜0.0001)並與6月齡之Wt小鼠相比(Wt-Adj: 3.1，Tg-Adj: 5.1；p ＜ 0.0001)，在6月齡時每次試驗之錯誤明顯更多。每次試驗之錯誤次數在Wt小鼠與經UB312治療之Thy1SNCA/15小鼠之間沒有顯著差異(p=0.38)。
在懸線測試中，在接受佐劑之Thy1SNCA/15小鼠中觀察到治療對年齡相關性下降的顯著影響(F (2,80)=4.03, P=0.022)。 事後分析表明，與Wt小鼠相比，在經佐劑治療之Thy1SNCA/15小鼠對照組中下落時間之延遲有減少的趨勢 (Wt-Adj: 3.85, Tg-Adj: 2.98；p=0.102)。這明顯低於經UB312治療之Thy1SNCA/15小鼠(Tg-Adj: 2.98, Tg-UB312: 4.2；p=0.0095)。在治療期結束時，Wt小鼠與經UB312治療之Thy1SNCA/15小鼠之間沒有顯著差異(Wt-Adj: 3.85, Tg-UB312: 4.20；p＞0.99)。
對於桿測試，小鼠轉個彎並沿桿下降所花的時間在Thy1SNCA/15小鼠與Wt小鼠之間係相似的，其中年齡(F (1,64)=0.156, p=0.6941)或治療(F (2,64)=2.688, p=0.076)對運動表現沒有影響。 UB312免疫減少大腦中的α-syn寡聚物
在15週治療期結束時，將6月齡之小鼠麻醉並收集組織以評估UB312免疫療法對α-syn介導之病理的影響。使用MJFR1 (亦即抗α-syn抗體)，藉由免疫組織化學及西方墨點分析α-Syn病理，該抗體對由Thy1SNCA/15小鼠過表現之人類α-syn有特異性。如所預期的，Wt小鼠對人類α-syn沒有顯示出免疫反應性，並且不包括在定量分析中。在Thy1SNCA/15小鼠之大腦切片中的α-syn免疫組織化學染色顯示灰質中有廣泛的顆粒狀或點狀圖案，與突觸位置一致。在6月齡之Thy1SNCA/15小鼠的大腦中無法偵測到諸如路易體之α-Syn包涵體。對各感興趣區域(皮層、紋狀體、海馬體、黑質及小腦；圖4)中α-syn免疫反應性所覆蓋的面積百分比之定量分析未顯示UB312與佐劑治療之小鼠之間有任何差異。類似地，藉由西方墨點分析偵測到的α-syn總水準(圖5)在UB312與佐劑治療之小鼠之間沒有顯示任何差異。為了研究UB312是否特異性減少較高分子量的α-syn寡聚物，進行天然非變性西方墨點。純單體α-syn用作分子量標記，且對應於凝膠中的最低條帶。結果示於圖5中，且展示與投與佐劑之對照Thy1SNCA/15小鼠相比，UB312將Thy1SNCA/15小鼠之海馬體中的α-syn寡聚物而非單體顯著減少了27.8%(p=0.049)、紋狀體中27.9% (p=0.045)及皮層中49.8% (p=0.035)。 UB312不誘導廣泛的神經膠細胞反應
對相鄰組織切片進行神經膠標記小神經膠質細胞(Iba1)及星狀細胞(GFAP)之免疫組織化學。圖6展示Iba1之代表性圖像，且圖7展示各大腦區域(皮層、海馬體、紋狀體及黑質)中的GFAP免疫染色。Iba1及GFAP免疫反應性之單向ANOVA顯示各組之間沒有差異，例外為SN (F (2,25)= 4.989)，其顯示與對照佐劑治療之Thy1SNCA/15或Wt小鼠相比，在經UB312治療之Thy1SNCA/15小鼠中Iba1免疫染色的顯著增加(Wt-Adj: 0.29%, Tg-UB312: 0.65%；p=0.015)。在佐劑治療之Thy1SNCA/15小鼠與Wt小鼠之間，在所有大腦區域中的Iba1及GFAP 免疫反應性係相當的。 UB312不誘導T細胞浸潤
UB312治療對T細胞浸潤之影響藉由計數三個連續的20 µm厚大腦切片上的實質CD3陽性T細胞之數量來檢查。大多數大腦切片對CD3 T細胞呈陰性，並且在經UB312治療之Thy1SNCA/15小鼠中T細胞數量沒有增加(圖8)。為了評估內皮細胞之激活狀態，對腦內皮細胞上的ICAM1免疫反應性進行量化。ICAM1在內皮細胞上表現並在炎症期間上調以促進T細胞外滲。結果示於圖8中且展示在UB312與佐劑治療之Thy1SNCA/15或Wt小鼠之間的ICAM1免疫反應性沒有差異。 UB312減少結腸中的α-syn及腸神經膠細胞活化
胃腸道(GI)功能障礙為PD之常見前驅特徵，並且已在PD患者之結腸活檢中鑑定LB。Thy1SNCA/15小鼠在10週齡時在腸壁肌層之神經纖維及突觸中呈現出α-syn累積(圖9)。腸壁中α-syn免疫反應性百分比之雙尾t檢驗顯示，與佐劑對照相比，在經UB312治療之Thy1SNCA/15小鼠之結腸中的顯著降低(Tg-Adj: 2.65%, Tg-UB312: 0.98%；p=0.0093)，但不在十二指腸中(Tg-Adj: 1.12%, Tg-UB312: 1.18%；p=0.91)。
使用用於激活神經節腸神經膠細胞(GFAP)之標記研究腸道中神經膠細胞反應性之模式。圖9展示GFAP免疫染色之代表性圖像及對肌間神經節內GFAP免疫反應性之後續量化。單向ANOVA揭示對GFAP表現之顯著治療效果 (F (2,20)= 7.007；p=0.0049)。在Thy1SNCA/15小鼠中的UB312免疫療法與佐劑治療之Thy1SNCA/15小鼠相比，結腸肌間神經節中的GFAP表現水準顯著降低(Tg-Adj: 16.86%, Tg-UB312: 8.47%；P=0.014)。在Wt與Thy1SNCA/15佐劑治療之小鼠對照組之間沒有GFAP免疫反應性的差異(Wt-Adj: 16.73, Tg-Adj: 16.86；p＞0.99)，而經UB312治療之Thy1SNCA/15小鼠與Wt小鼠相比展示GFAP之顯著降低(Wt-Adj: 16.73%, Tg-Adj: 8.47%；p＞0.012)。治療組之間十二指腸中的GFAP表現沒有差異。 表 1 – α-syn 及其片段之胺基酸序列
胺基酸位置 SEQ ID NO: 序列
α-突觸核蛋白1-140 1 MDVFM KGLSK AKEGV VAAAE KTKQG VAEAA GKTKE GVLYV GSKTK EGVVH GVATV AEKTK EQVTN VGGAV VTGVT AVAQK TVEGA GSIAA ATGFV KKDQL GKNEE GAPQE GILED MPVDP DNEAY EMPSE EGYQD YEPEA
α-突觸核蛋白80-140 3 KTVEG AGSIA AATGF VKKDQ LGKNE EGAPQ EGILE DMPVD PDNEA YEMPS EEGYQ DYEPE A
α-突觸核蛋白85-140 4 AGSIA AATGF VKKDQ LGKNE EGAPQ EGILE DMPVD PDNEA YEMPS EEGYQ DYEPEA
α-突觸核蛋白91-140 5 ATGFV KKDQL GKNEE GAPQE GILED MPVDP DNEAY EMPSE EGYQD YEPEA
α-突觸核蛋白101-140 6 GKNEE GAPQE GILED MPVDP DNEAY EMPSE EGYQD YEPEA
α-突觸核蛋白111-140 7 GILED MPVDP DNEAY EMPSE EGYQD YEPEA
α-突觸核蛋白121-140 8 DNEAY EMPSE EGYQD YEPEA
α-突觸核蛋白126-140 9 EMPSE EGYQD YEPEA
α-突觸核蛋白97-135 10 KDQLG KNEEG APQEG ILEDM PVDPD NEAYE MPSEE GYQD
α-突觸核蛋白101-135 11 GKNEE GAPQE GILED MPVDP DNEAY EMPSE EGYQD
α-突觸核蛋白111-135 12 GILED MPVDP DNEAY EMPSE EGYQD
α-突觸核蛋白121-135 13 DNEAY EMPSE EGYQD
α-突觸核蛋白123-135 14 EAYEM PSEEG YQD
α-突觸核蛋白126-135 15 EMPSE EGYQD
α-突觸核蛋白101-132 16 GKNEE GAPQE GILED MPVDP DNEAY EMPSE EG
α-突觸核蛋白111-132 17 GILED MPVDP DNEAY EMPSE EG
α-突觸核蛋白80-89 18 KTVEG AGSIA
α-突觸核蛋白81-90 19 TVEGA GSIAA
α-突觸核蛋白82-91 20 VEGAG SIAAA
α-突觸核蛋白83-92 21 EGAGS IAAAT
α-突觸核蛋白84-93 22 GAGSI AAATG
α-突觸核蛋白85-94 23 AGSIA AATGF
α-突觸核蛋白86-95 24 GSIAA ATGFV
α-突觸核蛋白87-96 25 SIAAA TGFVK
α-突觸核蛋白88-97 26 IAAAT GFVKK
α-突觸核蛋白89-98 27 AAATG FVKKD
α-突觸核蛋白90-99 28 AATGF VKKDQ
α-突觸核蛋白91-100 29 ATGFV KKDQL
α-突觸核蛋白92-101 30 TGFVK KDQLG
α-突觸核蛋白93-102 31 GFVKK DQLGK
α-突觸核蛋白94-103 32 FVKKD QLGKN
α-突觸核蛋白95-104 33 VKKDQ LGKNE
α-突觸核蛋白96-105 34 KKDQL GKNEE
α-突觸核蛋白97-106 35 KDQLG KNEEG
α-突觸核蛋白98-107 36 DQLGK NEEGA
α-突觸核蛋白99-108 37 QLGKN EEGAP
表 1( 續 )
胺基酸位置 SEQ ID NO: 序列
α-突觸核蛋白100-109 38 LGKNE EGAPQ
α-突觸核蛋白101-110 39 GKNEE GAPQE
α-突觸核蛋白102-111 40 KNEEG APQEG
α-突觸核蛋白103-112 41 NEEGA PQEGI
α-突觸核蛋白104-113 42 EEGAP QEGIL
α-突觸核蛋白105-114 43 EGAPQ EGILE
α-突觸核蛋白106-115 44 GAPQE GILED
α-突觸核蛋白107-116 45 APQEG ILEDM
α-突觸核蛋白108-117 46 PQEGI LEDMP
α-突觸核蛋白109-118 47 QEGIL EDMPV
α-突觸核蛋白110-119 48 EGILE DMPVD
α-突觸核蛋白111-120 49 GILED MPVDP
α-突觸核蛋白112-121 50 ILEDM PVDPD
α-突觸核蛋白113-122 51 LEDMP VDPDN
α-突觸核蛋白114-123 52 EDMPV DPDNE
α-突觸核蛋白115-124 53 DMPVD PDNEA
α-突觸核蛋白116-125 54 MPVDP DNEAY
α-突觸核蛋白117-126 55 PVDPD NEAYE
α-突觸核蛋白118-127 56 VDPDN EAYEM
α-突觸核蛋白119-128 57 DPDNE AYEMP
α-突觸核蛋白120-129 58 PDNEA YEMPS
α-突觸核蛋白121-130 59 DNEAY EMPSE
α-突觸核蛋白122-131 60 NEAYE MPSEE
α-突觸核蛋白123-132 61 EAYEM PSEEG
α-突觸核蛋白124-133 62 AYEMP SEEGY
α-突觸核蛋白125-134 63 YEMPS EEGYQ
α-突觸核蛋白126-135 64 EMPSE EGYQD
α-突觸核蛋白127-136 65 MPSEE GYQDY
α-突觸核蛋白128-137 66 PSEEG YQDYE
α-突觸核蛋白129-138 67 SEEGY QDYEP
α-突觸核蛋白130-139 68 EEGYQ DYEPE
α-突觸核蛋白131-140 69 EGYQD YEPEA
表 2 病原體蛋白衍生之 Th 表位的胺基酸序列，包括用於設計 α-Syn 肽免疫原構築體的理想化人工 Th 表位
描述 SEQ ID NO: 序列
破傷風梭菌1 Th 70 KKQYIKANSKFIGITEL
MvF1 Th 71 LSEIKGVIVHRLEGV
百日咳博德氏桿菌Th 72 GAYARCPNGTRALTVAELRGNAEL
破傷風梭菌2 Th 73 WVRDIIDDFTNESSQKT
白喉Th 74 DSETADNLEKTVAALSILPGHGC
惡性瘧原蟲Th 75 DHEKKHAKMEKASSVFNVVNS
曼氏血吸蟲Th 76 KWFKTNAPNGVDEKHRH
霍亂毒素Th 77 ALNIWDRFDVFCTLGATTGYLKGNS
MvF2 Th 78 ISEIKGVIVHKIEGI
KKKMvF3 Th 79 KKKISISEIKGVIVHKIEGILF T    RT       TR     T
HBsAg1 Th 80 KKKLFLLTKLLTLPQSLD RRRIKII      RII     I    L  IR VRVV     VV V   I   V F   FF      FF   F  V   F F
MvF4 Th  (UBITh®3) 81 ISISEIKGVIVHKIETILF T    RT        TR
HBsAg2 Th 82 KKKIITITRIITIPQSLD FFLL    L  ITTI
MvF5 Th (UBITh®1) 83 ISITEIKGVIVHRIETILF
HBsAg3 Th (UBITh®2) 84 KKKIITITRIITIITTID
流感MP1_1 Th 85 FVFTLTVPSER
流感MP1_2 Th 86 SGPLKAEIAQRLEDV
流感NSP1 Th 87 DRLRRDQKS
EBV BHRF1 Th 88 AGLTLSLLVICSYLFISRG
破傷風梭菌TT1 Th 89 QYIKANSKFIGITEL
EBV EBNA-1 Th 90 PGPLRESIVCYFMVFLQTHI
破傷風梭菌 TT2 Th 91 FNNFTVSFWLRVPKVSASHLE
破傷風梭菌TT3 Th 92 KFIIKRYTPNNEIDSF
破傷風梭菌 TT4 Th 93 VSIDKFRIFCKALNPK
EBV CP Th 94 VPGLYSPCRAFFNKEELL
HCMV IE1 Th 95 DKREMWMACIKELH
EBV GP340 Th 96 TGHGARTSTEPTTDY
EBV BPLF1 Th 97 KELKRQYEKKLRQ
EBV EBNA-2 Th 98 TVFYNIPPMPL
表 3 α-Syn 肽免疫原構築體之胺基酸序列
肽描述 Seq ID NO: 序列
UBITh3-εK-KKK-α-突觸核蛋白126-140 99 UBITh3-εk-kkk-EMPSEEGYQDYEPEA
UBITh3-εK-KKK-α-突觸核蛋白121-140 100 UBITh3-εk-kkk-DNEAYEMPSEEGYQDYEPEA
UBITh3-εK-KKK-α-突觸核蛋白111-140 101 UBITh3-εk-kkk-GILEDMPVDPDNEAYEMPSEEGYQDYEPEA
UBITh3-εK-KKK-α-突觸核蛋白101-140 102 UBITh3-εk-kkk-GKNEEGAPQEGILEDMPVDPDNEAYEMPSEEGYQDYEPEA
UBITh1-εK-KKK-α-突觸核蛋白101-140 103 UBITh1-εk-kkk-GKNEEGAPQEGILEDMPVDPDNEAYEMPSEEGYQDYEPEA
UBITh2-εK-KKK-α-突觸核蛋白101-140 104 UBITh2-εk-kkk-GKNEEGAPQEGILEDMPVDPDNEAYEMPSEEGYQDYEPEA
UBITh3-εK-KKK-α-突觸核蛋白91-140 105 UBITh3-εk-kkk-ATGFVKKDQLGKNEEGAPQEGILEDMPVDPDNEAYEMPSEEGYQDYEPEA
UBITh3-εK-KKK-α-突觸核蛋白85-140 106 UBITh3-εk-kkk-AGSIAAATGFVKKDQLGKNEEGAPQEGILEDMPVDPDNEAYEMPSEEGYQDYEPEA
UBITh1-εK-KKK-α-突觸核蛋白121-135 107 UBITh1-εk-kkk-DNEAYEMPSEEGYQD
UBITh1-εK-KKK-α-突觸核蛋白111-135 108 UBITh1-εk-kkk-GILEDMPVDPDNEAYEMPSEEGYQD
UBITh1-εK-KKK-α-突觸核蛋白101-135 109 UBITh1-εk-kkk-GKNEEGAPQEGILEDMPVDPDNEAYEMPSEEGYQD
UBITh1-εK-KKK-α-突觸核蛋白97-135 110 UBITh1-εk-kkk-KDQLGKNEEGAPQEGILEDMPVDPDNEAYEMPSEEGYQD
UBITh1-εK-KKK-α-突觸核蛋白123-135 111 UBITh1-εk-kkk-EAYEMPSEEGYQD
UBITh1-εK-KKK-α-突觸核蛋白126-135 112 UBITh1-εk-kkk-EMPSEEGYQD
UBITh1-εK-KKK-α-突觸核蛋白111-132 113 UBITh1-εk-kkk-GILEDMPVDPDNEAYEMPSEEG
UBITh1-εK-KKK-α-突觸核蛋白101-132 114 UBITh1-εk-kkk-GKNEEGAPQEGILEDMPVDPDNEAYEMPSEEG
UBITh1-εK-KKK-小鼠對應體 α-突觸核蛋白111-132 115 UBITh1-εk-kkk-GILEDMPVDPGSEAYEMPSEEG
UBITh3-εK-KKK-α-突觸核蛋白126-135 116 UBITh3-εk-kkk-EMPSEEGYQD
UBITh3-εK-KKK-α-突觸核蛋白111-132 117 UBITh3-εk-kkk-GILEDMPVDPDNEAYEMPSEEG
UBITh1-εK-α-突觸核蛋白126-135 118 UBITh1-εk-EMPSEEGYQD
UBITh1-εK-α-突觸核蛋白111-132 119 UBITh1-εk-GILEDMPVDPDNEAYEMPSEEG
UBITh2-εK-α-突觸核蛋白126-135 120 UBITh2-εk-EMPSEEGYQD
UBITh2-εK-α-突觸核蛋白111-132 121 UBITh2-εk-GILEDMPVDPDNEAYEMPSEEG
破傷風梭菌1 Th-εK-α-Syn 111-132 122 KKQYIKANSKFIGITEL-εk-GILEDMPVDPDNEAYEMPSEEG
MvF1 Th-εK-α-突觸核蛋白111-132 123 LSEIKGVIVHRLEGV-εk-GILEDMPVDPDNEAYEMPSEEG
百日咳博德氏桿菌Th-εK-α-Syn 111-132 124 GAYARCPNGTRALTVAELRGNAEL-εk-GILEDMPVDPDNEAYEMPSEEG
破傷風梭菌2 Th-εK-α-Syn 111-132 125 WVRDIIDDFTNESSQKT-εk-GILEDMPVDPDNEAYEMPSEEG
白喉Th-εK-α-Syn 111-132 126 DSETADNLEKTVAALSILPGHGC-εk-GILEDMPVDPDNEAYEMPSEEG
惡性瘧原蟲Th-εK-α-Syn 111-132 127 DHEKKHAKMEKASSVFNVVNS-εk-GILEDMPVDPDNEAYEMPSEEG
曼氏血吸蟲Th-εK-α-Syn 111-132 128 KWFKTNAPNGVDEKHRH-εk-GILEDMPVDPDNEAYEMPSEEG
霍亂毒素Th-εK-α-Syn 111-132 129 ALNIWDRFDVFCTLGATTGYLKGNS-εk-GILEDMPVDPDNEAYEMPSEEG
MvF2 Th-εK-α-Syn 111-132 130 ISEIKGVIVHKIEGI-εk-GILEDMPVDPDNEAYEMPSEEG
表 3( 續 )
肽描述 Seq ID NO: 序列
KKKMvF3 Th-εK-α-Syn 111-132 131 KKKISISEIKGVIVHKIEGILF-εk-GILEDMPVDPDNEAYEMPSEEG T    RT       TR     T
HBsAg1 Th-εK-α-Syn 111-132 132 KKKLFLLTKLLTLPQSLD-εk-GILEDMPVDPDNEAYEMPSEEG RRRIKII      RII     I    L  IR VRVV     VV V   I   V F   FF       FF  F   V  F F
HBsAg2 Th-εK-α-Syn 111-132 133 KKKIITITRIITIPQSLD-εk-GILEDMPVDPDNEAYEMPSEEG FFLL    L  ITTI
流感MP1_1 Th-εK-α-Syn 111-132 134 FVFTLTVPSER-εk-GILEDMPVDPDNEAYEMPSEEG
流感MP1_2 Th-εK-α-Syn 111-132 135 SGPLKAEIAQRLEDV-εk-GILEDMPVDPDNEAYEMPSEEG
流感NSP1 Th-εK-α-Syn 111-132 136 DRLRRDQKS-εk-GILEDMPVDPDNEAYEMPSEEG
EBV BHRF1 Th-εK-α-Syn 111-132 137 AGLTLSLLVICSYLFISRG-εk-GILEDMPVDPDNEAYEMPSEEG
破傷風梭菌TT1 Th-εK-α-Syn 111-132 138 QYIKANSKFIGITEL-εk-GILEDMPVDPDNEAYEMPSEEG
EBV EBNA-1 Th-εK-α-Syn 111-132 139 PGPLRESIVCYFMVFLQTHI-εk-GILEDMPVDPDNEAYEMPSEEG
破傷風梭菌 TT2 Th-εK-α-Syn 111-132 140 FNNFTVSFWLRVPKVSASHLE-εk-GILEDMPVDPDNEAYEMPSEEG
破傷風梭菌TT3 Th-εK-α-Syn 111-132 141 KFIIKRYTPNNEIDSF-εk-GILEDMPVDPDNEAYEMPSEEG
破傷風梭菌 TT4 Th-εK-α-Syn 111-132 142 VSIDKFRIFCKALNPK-εk-GILEDMPVDPDNEAYEMPSEEG
EBV CP Th-εK-α-Syn 111-132 143 VPGLYSPCRAFFNKEELL-εk-GILEDMPVDPDNEAYEMPSEEG
HCMV IE1 Th-εK-α-Syn 111-132 144 DKREMWMACIKELH-εk-GILEDMPVDPDNEAYEMPSEEG
EBV GP340 Th-εK-α-Syn 111-132 145 TGHGARTSTEPTTDY-εk-GILEDMPVDPDNEAYEMPSEEG
EBV BPLF1 Th-εK-α-Syn 111-132 146 KELKRQYEKKLRQ-εk-GILEDMPVDPDNEAYEMPSEEG
EBV EBNA-2 Th-εK-α-Syn 111-132 147 TVFYNIPPMPL-εk-GILEDMPVDPDNEAYEMPSEEG
其他實施例
在不脫離本發明之範疇及精神之情況下，熟習此項技術者將明瞭所述發明之各種修改及變化。儘管已結合特定實施例闡述了本發明，但應理解，所主張之本發明不應不適當地限於該等特定實施例。實際上，對熟習此項技術者顯而易見之用於實施本發明之所述模式之各種修改意欲在本發明之範疇內。
一些實施例在以下編號段落之範疇內。
1. 一種在有此需要之個體中預防、減輕、抑制或減緩突觸核蛋白病之一或多種運動症狀發展的方法，該方法包含向該個體投與有效量的靶向α-突觸核蛋白(α-syn)之免疫療法。
2. 編號第1段之方法，其中該突觸核蛋白病之一或多種運動症狀選自由以下組成之群：肌肉僵硬、運動遲緩、靜止性震顫及姿勢不穩。
3. 一種在有此需要之個體中治療、預防、減輕或抑制突觸核蛋白病之一或多種胃腸道症狀的方法，該方法包含向該個體投與有效量的靶向α-syn之免疫療法。
4. 編號第3段之方法，其中該一或多種胃腸道症狀選自由以下組成之群：流口水、流涎、吞嚥困難、噁心、嘔吐、消化不良、便秘、腹痛、胃輕癱及大便失禁。
5. 編號第3段或第4段之方法，其中該胃腸道症狀出現在該個體之結腸中。
6. 一種降低有此需要之個體胃腸道(例如結腸)中的α-syn水準之方法，該方法包含向該個體投與有效量的靶向α-syn之免疫療法。
7. 編號第1段至第6段中任一項之方法，其中該個體不具有突觸核蛋白病之一或多種運動症狀或僅表現出最少的突觸核蛋白病之運動症狀。
8. 編號第7段之方法，其中該個體不具有突觸核蛋白病之一或多種選自由以下組成之群的運動症狀：肌肉僵硬、運動遲緩、靜止性震顫及姿勢不穩。
9. 編號第1段至第8段中任一項之方法，其中該個體患有早期、前驅期之突觸核蛋白病。
10. 一種在個體中誘導對α-syn之免疫反應、在個體中抑制α-syn聚集或在個體中減少α-syn聚集體之量的方法，該方法包含向該個體投與有效量的靶向α-syn之免疫療法，其中該個體患有早期、前驅期之突觸核蛋白病。
11. 編號第1段至第10段中任一項之方法，其中該突觸核蛋白病選自由以下組成之群：帕金森病(PD)、帕金森病癡呆(PDD)、路易體癡呆(DLB)、多系統萎縮(MSA)、神經軸索營養不良及純自主神經衰竭(PAF)。
12. 編號第1段至第11段中任一項之方法，其中該免疫療法包含肽、蛋白質(例如，抗體)、肽或蛋白質(例如，抗體)之片段或融合物、或編碼該等分子中之一者的核酸分子(例如，載體中之mRNA或核酸)。
13. 編號第1段至第12段中任一項之方法，其中該免疫療法包含肽免疫原構築體。
14. 編號第13段之方法，其中該肽免疫原構築體包含B細胞表位、異源T細胞表位及視情況選用之連接子。
15. 編號第14段之方法，其中該B細胞表位誘導針對α-syn之免疫反應。
16. 編號第15段之方法，其中該B細胞表位包含α-syn蛋白之C端區域的肽，其中該肽之長度視情況為約10至約25個胺基酸。
17. 編號第16段之方法，其中該α-syn蛋白包含SEQ ID NO: 1之序列。
18. 編號第14段至第17段中任一項之方法，其中該B細胞表位包含選自表1之序列(例如，SEQ ID NO: 3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68及69中之任一者)的肽。
19. 編號第14段至第18段中任一項之方法，其中該異源T細胞表位衍生自致病蛋白。
20. 編號第14段至第19段中任一項之方法，其中該異源T細胞表位包含選自表2之序列的序列。
21. 編號第14段至第20段中任一項之方法，其中該肽在B細胞表位與T細胞表位之間包含異源間隔物或連接子。
22. 編號第21段之方法，其中該異源間隔物或連接子選自由以下組成之群：Lys-、Gly-、Lys-Lys-Lys-、(α, Ɛ-N)Lys及Ɛ-N-Lys-Lys-Lys-Lys或其組合。
23. 編號第14段至第22段中任一項之方法，其中該B細胞表位位於該T細胞表位之N端。
24. 編號第14段至第22段中任一項之方法，其中該T細胞表位位於該B細胞表位之N端。
25. 編號第13段至第24段中任一項之方法，其中該肽免疫原構築體選自表3之序列。
26. 編號第13段至第25段中任一項之方法，其中該肽免疫原構築體包含： (a) B細胞表位，其包含來自α-Syn之C端片段的約10至約25個胺基酸殘基，對應於SEQ ID NO: 1之大約胺基酸G111至大約胺基酸D135； (b) T輔助表位，其包含選自由SEQ ID NO: 70-98組成之群的胺基酸序列；及 (c) 視情況選用之異源間隔物，選自由以下組成之群：胺基酸Lys-、Gly-、Lys-Lys-Lys-、(α, ε-N)Lys及ε-N-Lys-Lys-Lys-Lys (SEQ ID NO: 148)或其組合， 其中該B細胞表位直接或經由該視情況選用之異源間隔物與該T輔助表位共價連接。
27. 編號第26段之方法，其中該B細胞表位選自由SEQ ID NO: 12-15、17及49-63組成之群。
28. 編號第26段或第27段之方法，其中該T輔助表位選自由SEQ ID NO: 70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97及98組成之群，例如，來自以下中之任一者：SEQ ID NO: 81、83及84。
29. 編號第26段至第28段中任一項之方法，其中該視情況選用之異源間隔物為(α, ε-N)Lys或ε-N-Lys-Lys-Lys-Lys (SEQ ID NO: 148)。
30. 編號第26段至第29段中任一項之方法，其中該T輔助表位與該B細胞表位之胺基端共價連接。
31. 編號第26段至第30段中任一項之方法，其中該T輔助表位經由該視情況選用之異源間隔物與該B細胞表位之胺基端共價連接。
32. 編號第26段至第31段中任一項之方法，其中該肽免疫原構築體包含下式： (Th) m–(A) n–(α-Syn C端片段)–X 或 (α-Syn C端片段)–(A) n–(Th) m–X 其中 Th為該T輔助表位； A為該異源間隔物； (α-Syn C端片段)為該B細胞表位； X為胺基酸之α-COOH或α-CONH2； m為1至約4；且 n為1至約10。
33. 編號第26段至第32段中任一項之方法，其中該肽免疫原構築體包含選自由SEQ ID NO: 107、108、111-113及115-147組成之群的胺基酸序列。
34. 編號第13段至第33段中任一項之方法，其中該肽免疫原構築體呈與CpG寡去氧核苷酸(ODN)之穩定的免疫刺激複合物形式。
35. 編號第1段至第34段中任一項之方法，其中該免疫療法包含在組合物中，該組合物視情況包含多於一種免疫療法，例如多於一種肽免疫原構築體。
36. 編號第35段之方法，其中該組合物包含肽免疫原構築體，該等構築體包含SEQ ID NO: 112及113之胺基酸序列。
37. 編號第35段或第36段之方法，其中該組合物為包含該一或多種免疫療法及醫藥學上可接受之遞送媒劑及/或佐劑的醫藥組合物。
38. 編號第37段之方法，其中該組合物包含佐劑，該佐劑包含鋁之礦物鹽，其視情況選自由Al(OH) 3及AlPO 4組成之群。
39. 編號第37段或第38段之方法，其中： (a) 該肽免疫原構築體選自由SEQ ID NO: 99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146及147組成之群，例如，由SEQ ID NO: 107、108、111-113及115-147組成之群；且 (b) 該組合物包含佐劑，該佐劑為選自由Al(OH) 3及AlPO 4組成之群的鋁礦物鹽。
40. 編號第37段至第39段中任一項之方法，其中： (a) 該肽免疫原構築體選自由SEQ ID NO: 99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146及147組成之群，例如，由SEQ ID NO: 107、108、111-113及115-147組成之群；且 (b) 該肽免疫原構築體呈與CpG ODN之穩定的免疫刺激複合物形式。
41. 編號第1段至第12段中任一項之方法，其中該免疫療法包含特異性結合至以下各物的抗體或其表位結合片段：編號第13段至第40段中任一項的肽免疫原構築體之B細胞表位、SEQ ID NO: 1之B細胞表位(例如，SEQ ID NO: 1之C端區域)、或表1之肽(例如，SEQ ID NO: 3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67, 68及69中之任一者)。
42. 編號第1段至第41段中任一項之方法，包含使用兩種或更多種、三種或更多種、四種或更多種、或五種或更多種免疫療法。
43. 編號第1段至第42段中任一項之方法，其中該個體係診斷為患有快速眼動(REM)睡眠行為障礙(RBD)。
44. 編號第1段至第43段中任一項之方法，其中該個體具有以下中之一或多者：嗅覺減退、REM睡眠行為障礙、白天過度嗜眠、抑鬱、認知症狀、自主神經系統功能障礙、嗅覺喪失、色覺下降、定量運動測試減慢、黑質神經影像學檢查結果異常或其他前驅症狀，例如，如本文所述。
45. 編號第1段至第44段中任一項之方法，其中該個體不具有任何或任何顯著的運動遲緩、僵硬、及/或震顫或其他非前驅性的突觸核蛋白病之症狀。
46. 編號第1段至第45段中任一項之方法，其中該免疫療法包含肽免疫原構築體或由其組成，該構築體包含SEQ ID NO: 112或由其組成。
47. 一種組合物或套組，其係用於進行任一種編號第1段至第46段中任一項之方法。
其他實施例在申請專利範圍之範疇內。
圖 1免疫方案示意圖。向10週大的Thy1SNCA/15小鼠及Wt 對照肌肉內注射UB312或佐劑，間隔3週。在第10週及第15週(最終時間點)，每次注射前收集血液樣品以用於抗體效價分析。在開始免疫療法之前以及在15週研究期結束時進行行為測試。 圖 2抗體效價分析。向10週大的Thy1SNCA/15小鼠及野生型同窩仔分別肌肉內注射UB312或佐劑3次，間隔3週。在每次注射前、第9週及第15週(最終時間點)收集血液樣品，並且量測所收集的每份血清之抗體效價。數據點表示平均值 ± 95% CI。 圖 3運動行為分析。10週大的Thy1SNCA/15小鼠及野生型同窩仔鼠在免疫之前(免疫前)及首次注射後15週(免疫後)接受三種不同的運動表現測試。其中包括挑戰性梁穿越測試、桿測試及懸線測試。條形表示平均值 ± 95% CI。 圖 4α-syn之免疫組織化學。在接受UB312 (n=12)或佐劑(n=11)之Thy1SNCA/15小鼠的皮層、海馬體、紋狀體及黑質中量化α-Syn免疫反應性。雙尾T檢驗顯示治療組之間的α-syn免疫反應性之平均百分比面積沒有差異。DAPI用於細胞核之視覺化。比例尺 = 50 µm。 圖 5寡聚α-syn之西方墨點分析。來自已接受UB312 (n=14)或佐劑(n=16)之Thy1SNCA/15小鼠的皮層、紋狀體及海馬體之大腦勻漿中的α-Syn裝配體係藉由天然西方墨點分離。寡聚及單體免疫反應性條帶之定量顯示用UB312處理之α-syn寡聚物顯著減少，但單體沒有。條形表示平均值 ± 95% CI。 圖 6小神經膠質之免疫組織化學。在接受UB312 (n=11)或佐劑(n=9)之Thy1SNCA/15小鼠或接受佐劑(n=8)之Wt同窩仔的皮層、海馬體、紋狀體及黑質中量化Iba1免疫反應性。具有Bonferroni校正之單向ANOVA顯示黑質中Iba1之平均百分比面積的顯著增加。條形表示平均值 ± 95% CI。 圖 7星狀細胞之免疫組織化學。在接受UB312 (n=11)或佐劑(n=9)之Thy1SNCA/15小鼠或接受佐劑(n=8)之Wt同窩仔的皮層、海馬體、紋狀體及黑質中量化GFAP免疫反應性。單向ANOVA顯示每個大腦區域的治療組之間沒有差異。條形表示平均值 ± 95% CI。 圖 8內皮活化及T細胞浸潤之免疫組織化學。在接受UB312 (n=11)或佐劑(n=9)之Thy1SNCA/15小鼠或接受佐劑(n=8)之Wt同窩仔的皮層、海馬體、紋狀體及黑質中量化ICAM1免疫反應性。單向ANOVA顯示每個大腦區域的治療組之間沒有差異。對全腦切片中的CD3+ T細胞進行計數。條形表示平均值 ± 95% CI。 圖 9胃腸道中α-syn及腸神經膠細胞(EGC)活化之免疫組織化學。免疫螢光顯示用DAPI複染劑在十二指腸及結腸之肌層(箭頭)中的α-syn免疫反應性。雙尾t檢驗顯示與Thy1SNCA/15小鼠中之佐劑相比，在UB312免疫療法後結腸肌層中α-syn之平均百分比面積顯著減小。藉由量化腸肌神經節中的GFAP免疫反應性來量測EGC反應性。單向ANOVA顯示與佐劑或接受佐劑之Wt同窩仔相比，接受UB312的Thy1SNCA/15小鼠之結腸中GFAP之平均百分比面積顯著減小。十二指腸中的UB312免疫療法對α-syn或GFAP表現水準沒有影響。條形表示平均值 ± 95% CI。 圖 10西方墨點分析之抗體濃度優化。 A, 確定α-syn (MJFR1)及總蛋白(Revert, Licor)之線性範圍。將大腦勻漿自1-50 µg蛋白質以遞增濃度加載於12%天然凝膠中。α-syn免疫反應性條帶及總蛋白之量化示於右側。 B，內部合成之α-syn單體(右)與它們被允許形成原纖維後(左)相比之透射電子顯微照片(TEM)。單體α-syn用作西方墨點分析之分子量標記。
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Claims (47)

  1. 一種在有此需要之個體中預防、減輕、抑制或減緩突觸核蛋白病之一或多種運動症狀發展的方法，該方法包含向該個體投與有效量的靶向α-突觸核蛋白(α-syn)之免疫療法。
  2. 如請求項1之方法，其中該突觸核蛋白病之一或多種運動症狀選自由以下組成之群：肌肉僵硬、運動遲緩、靜止性震顫及姿勢不穩。
  3. 一種在有此需要之個體中治療、預防、減輕或抑制突觸核蛋白病之一或多種胃腸道症狀的方法，該方法包含向該個體投與有效量的靶向α-syn之免疫療法。
  4. 如請求項3之方法，其中該一或多種胃腸道症狀選自由以下組成之群：流口水、流涎、吞嚥困難、噁心、嘔吐、消化不良、便秘、腹痛、胃輕癱及大便失禁。
  5. 如請求項3之方法，其中該胃腸道症狀出現在該個體之結腸中。
  6. 一種降低有此需要之個體胃腸道(例如結腸)中的α-syn水準之方法，該方法包含向該個體投與有效量的靶向α-syn之免疫療法。
  7. 如請求項1至6中任一項之方法，其中該個體不具有突觸核蛋白病之一或多種運動症狀或僅表現出最少的突觸核蛋白病之運動症狀。
  8. 如請求項7之方法，其中該個體不具有突觸核蛋白病之一或多種選自由以下組成之群的運動症狀：肌肉僵硬、運動遲緩、靜止性震顫及姿勢不穩。
  9. 如請求項1至6中任一項之方法，其中該個體患有早期、前驅期之突觸核蛋白病。
  10. 一種在個體中誘導對α-syn之免疫反應、在個體中抑制α-syn聚集或在個體中減少α-syn聚集體之量的方法，該方法包含向該個體投與有效量的靶向α-syn之免疫療法，其中該個體患有早期、前驅期之突觸核蛋白病。
  11. 如請求項1至6或10中任一項之方法，其中該突觸核蛋白病選自由以下組成之群：帕金森病(PD)、帕金森病癡呆(PDD)、路易體癡呆(DLB)、多系統萎縮(MSA)、神經軸索營養不良及純自主神經衰竭(PAF)。
  12. 如請求項1至6或10中任一項之方法，其中該免疫療法包含肽、蛋白質(例如，抗體)、肽或蛋白質(例如，抗體)之片段或融合物、或編碼該等分子中之一者的核酸分子(例如，載體中之mRNA或核酸)。
  13. 如請求項1至6或10中任一項之方法，其中該免疫療法包含肽免疫原構築體。
  14. 如請求項13之方法，其中該肽免疫原構築體包含B細胞表位、異源T細胞表位及視情況選用之連接子。
  15. 如請求項14之方法，其中該B細胞表位誘導針對α-syn之免疫反應。
  16. 如請求項15之方法，其中該B細胞表位包含α-syn蛋白之C端區域的肽，其中該肽之長度視情況為約10至約25個胺基酸。
  17. 如請求項16之方法，其中該α-syn蛋白包含SEQ ID NO: 1之序列。
  18. 如請求項14之方法，其中該B細胞表位包含選自表1之序列(例如，SEQ ID NO: 3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68及69中之任一者)的肽。
  19. 如請求項14之方法，其中該異源T細胞表位衍生自致病蛋白。
  20. 如請求項14之方法，其中該異源T細胞表位包含選自表2之序列的序列。
  21. 如請求項14之方法，其中該肽在B細胞表位與T細胞表位之間包含異源間隔物或連接子。
  22. 如請求項21之方法，其中該異源間隔物或連接子選自由以下組成之群：Lys-、Gly-、Lys-Lys-Lys-、(α, Ɛ-N)Lys及Ɛ-N-Lys-Lys-Lys-Lys或其組合。
  23. 如請求項14之方法，其中該B細胞表位位於該T細胞表位之N端。
  24. 如請求項14之方法，其中該T細胞表位位於該B細胞表位之N端。
  25. 如請求項13之方法，其中該肽免疫原構築體選自表3之序列。
  26. 如請求項13之方法，其中該肽免疫原構築體包含： (a) B細胞表位，其包含來自α-Syn之C端片段的約10至約25個胺基酸殘基，對應於SEQ ID NO: 1之大約胺基酸G111至大約胺基酸D135； (b) T輔助表位，其包含選自由SEQ ID NO: 70-98組成之群的胺基酸序列；及 (c) 視情況選用之異源間隔物，選自由以下組成之群：胺基酸Lys-、Gly-、Lys-Lys-Lys-、(α, ε-N)Lys及ε-N-Lys-Lys-Lys-Lys (SEQ ID NO: 148)或其組合， 其中該B細胞表位直接或經由該視情況選用之異源間隔物與該T輔助表位共價連接。
  27. 如請求項26之方法，其中該B細胞表位選自由SEQ ID NO: 12-15、17及49-63組成之群。
  28. 如請求項26之方法，其中該T輔助表位選自由SEQ ID NO: 70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97及98組成之群，例如，來自以下中之任一者：SEQ ID NO: 81、83及84。
  29. 如請求項26之方法，其中該視情況選用之異源間隔物為(α, ε-N)Lys或ε-N-Lys-Lys-Lys-Lys (SEQ ID NO: 148)。
  30. 如請求項26之方法，其中該T輔助表位與該B細胞表位之胺基端共價連接。
  31. 如請求項26之方法，其中該T輔助表位經由該視情況選用之異源間隔物與該B細胞表位之胺基端共價連接。
  32. 如請求項26之方法，其中該肽免疫原構築體包含下式： (Th) m–(A) n–(α-Syn C端片段)–X 或 (α-Syn C端片段)–(A) n–(Th) m–X 其中 Th為該T輔助表位； A為該異源間隔物； (α-Syn C端片段)為該B細胞表位； X為胺基酸之α-COOH或α-CONH2； m為1至約4；且 n為1至約10。
  33. 如請求項26之方法，其中該肽免疫原構築體包含選自由SEQ ID NO: 107、108、111-113及115-147組成之群的胺基酸序列。
  34. 如請求項13之方法，其中該肽免疫原構築體呈與CpG寡去氧核苷酸(ODN)之穩定的免疫刺激複合物形式。
  35. 如請求項1至6或10之方法，其中該免疫療法包含在組合物中，該組合物視情況包含多於一種免疫療法，例如多於一種肽免疫原構築體。
  36. 如請求項35之方法，其中該組合物包含肽免疫原構築體，該等構築體包含SEQ ID NO: 112及113之胺基酸序列。
  37. 如請求項35之方法，其中該組合物為包含該一或多種免疫療法及醫藥學上可接受之遞送媒劑及/或佐劑的醫藥組合物。
  38. 如請求項37之方法，其中該組合物包含佐劑，該佐劑包含鋁之礦物鹽，其視情況選自由Al(OH) 3及AlPO 4組成之群。
  39. 如請求項37之方法，其中： (a) 該肽免疫原構築體選自由SEQ ID NO: 99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146及147組成之群，例如，由SEQ ID NO: 107、108、111-113及115-147組成之群；且 (b) 該組合物包含佐劑，該佐劑為選自由Al(OH) 3及AlPO 4組成之群的鋁礦物鹽。
  40. 如請求項37之方法，其中： (a) 該肽免疫原構築體選自由SEQ ID NO: 99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146及147組成之群，例如，由SEQ ID NO: 107、108、111-113及115-147組成之群；且 (b) 該肽免疫原構築體呈與CpG ODN之穩定的免疫刺激複合物形式。
  41. 如請求項1之方法，其中該免疫療法包含特異性結合至以下各物的抗體或其表位結合片段：如請求項13至40中任一項的肽免疫原構築體之B細胞表位、SEQ ID NO: 1之B細胞表位(例如，SEQ ID NO: 1之C端區域)、或表1之肽(例如，SEQ ID NO: 3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68及69中之任一者)。
  42. 如請求項1至6或10中任一項之方法，其包含使用兩種或更多種、三種或更多種、四種或更多種、或五種或更多種免疫療法。
  43. 如請求項1至6或10中任一項之方法，其中該個體係診斷為患有快速眼動(REM)睡眠行為障礙(RBD)。
  44. 如請求項1至6或10中任一項之方法，其中該受試者具有以下中之一或多者：嗅覺減退、REM睡眠行為障礙、白天過度嗜眠、抑鬱、認知症狀、自主神經系統功能障礙、嗅覺喪失、色覺下降、定量運動測試減慢、黑質神經影像學檢查結果異常或其他前驅症狀，例如，如本文所述。
  45. 如請求項1至6或10中任一項之方法，其中該個體不具有任何或任何顯著的運動遲緩、僵硬、及/或震顫或其他非前驅性的突觸核蛋白病之症狀。
  46. 如請求項1至6或10中任一項之方法，其中該免疫療法包含肽免疫原構築體或由其組成，該構築體包含SEQ ID NO: 112或由其組成。
  47. 一種組合物或套組，其係用於進行任一種如請求項1至6中任一項之方法。
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US6906169B2 (en) * 2001-05-25 2005-06-14 United Biomedical, Inc. Immunogenic peptide composition comprising measles virus Fprotein Thelper cell epitope (MUFThl-16) and N-terminus of β-amyloid peptide
EP1572894B1 (en) * 2001-11-21 2016-04-13 New York University Synthetic immunogenic but non-deposit-forming polypeptides and peptides homologous to amyloid beta, prion protein, amylin, alpha synuclein, or polyglutamine repeats for induction of an immune response thereto
US8697082B2 (en) * 2002-11-01 2014-04-15 Neotope Biosciences Limited Prevention and treatment of synucleinopathic and amyloidogenic disease
GB201512203D0 (en) * 2015-07-13 2015-08-19 Lundbeck & Co As H Agents,uses and methods
JP2021508672A (ja) * 2017-06-16 2021-03-11 ユナイテッド ニューロサイエンスＵｎｉｔｅｄ Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ シヌクレイノパチーの治療のためのアルファ−シヌクレインタンパク質のｃ末端からのペプチド免疫原及びその製剤

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