TW202317172A - Tnfsf-l融合蛋白及其用途 - Google Patents

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史蒂芬 哈華德 索爾
張明睿
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Abstract

本揭示內容提供組合物，其包含編碼融合至寡聚化結構域之腫瘤壞死因子超家族配體之融合蛋白的核酸。進一步提供用於遞送該等組合物之病毒及非病毒載體。本揭示內容亦提供組合物，其包含融合至寡聚化結構域之腫瘤壞死因子超家族配體之融合蛋白。

Description

TNFSF-L融合蛋白及其用途
TNF超家族(TNFSF)係由對許多哺乳動物系統(包括免疫、血液及骨骼系統)之發育及功能重要之蛋白質組成。TNFS蛋白質係用於TNF受體超家族(TNFS)之一組相應受體之配體。TNFSF成員通常表現為II型膜蛋白，惟作為分泌蛋白產生之淋巴毒素-α除外。
通常，為產生可溶形式之TNFSF蛋白質，膜蛋白通常表現於具有能夠將TNFSF細胞外結構域與跨膜結構域分離之蛋白酶之細胞系中，或產生具有細胞外結構域加信號序列之TNFSF蛋白質之截短形式。在任一情形中，某些可溶形式之TNFSF配體(TNFSF-L)蛋白質作為僅由細胞外結構域組成之同三聚體在溶液中通常係不穩定的。因此，業內需要該等重要信號傳導蛋白質之更穩定形式。
本文提供組合物，其中該組合物包含核酸，其中該核酸編碼融合蛋白，其中該融合蛋白包含：TNF超家族配體(TNFSF-L)或其功能變體；及複數個來自膠原凝集素家族蛋白之結構域，其中該複數個來自膠原凝集素家族蛋白之結構域包含：寡聚化結構域或其功能變體；及頸部結構域或其功能變體，其中該寡聚化結構域或其功能變體及該頸部結構域或其功能變體與其在膠原凝集素家族蛋白中之位置相比在序列鄰近性上更接近。進一步提供組合物，其中該融合蛋白以N-末端至C-末端順序包含：寡聚化結構域或其功能變體；頸部結構域或其功能變體；視情況，連接體序列；及TNFSF-L或其功能變體。進一步提供組合物，其中TNFSF-L包含淋巴毒素α、OX40配體、CD40配體、Fas配體、CD27配體、CD30配體、4-1BBL、TNF相關之細胞凋亡誘導配體(TRAIL)、核因子κ-Β配體之受體活化劑(RANKL)、TNF相關之細胞凋亡弱誘導劑、A增殖誘導配體(APRIL)、B細胞活化因子(BAFF)、LIGHT、血管內皮生長抑制劑(VEGI)、TNF超家族成員18配體(GITRL)、外異蛋白A或其任一組合。進一步提供組合物，其中TNFSF-L係CD40配體。進一步提供組合物，其中CD40配體包含有包含與SEQ ID NO: 1之至少85%序列一致性之序列。進一步提供組合物，其中TNFSF-L係OX40配體。進一步提供組合物，其中OX40配體包含有包含與SEQ ID NO: 2或SEQ ID NO: 3之至少85%序列一致性之序列。進一步提供組合物，其中TNFSF-L係4-1BBL。進一步提供組合物，其中4-1BBL包含有包含與SEQ ID NO: 4或SEQ ID NO: 5之至少85%序列一致性之序列。進一步提供組合物，其中TNFSF-L係LIGHT。進一步提供組合物，其中LIGHT包含有包含與SEQ ID NO: 6之至少85%序列一致性之序列。進一步提供組合物，其中TNFSF-L係TNF超家族成員18配體(GITRL)。進一步提供組合物，其中GITRL包含有包含與SEQ ID NO: 7或SEQ ID NO: 8之至少85%序列一致性之序列。進一步提供組合物，其中該膠原凝集素家族蛋白係SP-A、SP-D、甘露糖結合凝集素(MBL)、共凝集素、CL-43、CL-L1、CL-K1、CL-P1或CL-46。進一步提供組合物，其中該膠原凝集素家族蛋白係SP-D。進一步提供組合物，其中該寡聚化結構域包含有包含與SEQ ID NO: 9之至少85%序列一致性之序列。進一步提供組合物，其中該寡聚化結構域及該頸部結構域共同包含有包含與SEQ ID NO: 10之至少85%序列一致性之序列。進一步提供組合物，其中該寡聚化結構域及該頸部結構域共同包含SEQ ID NO: 10。進一步提供組合物，其中該融合蛋白包含連接體序列，且其中該連接體序列包含GSG (甘胺酸-絲胺酸-甘胺酸) (SEQ ID NO: 12)。進一步提供組合物，其中該核酸包含RNA。進一步提供組合物，其中該核酸包含DNA。
本文提供組合物，其中該組合物包含：核酸，其中該核酸包含有包含與SEQ ID NO: 21、22、23、24、25、26或27之至少85%序列一致性之序列。
本文提供組合物，其中該組合物包含：融合蛋白，其中該融合蛋白包含有包含與SEQ ID NO: 14、15、16、17、18、19或20之至少85%序列一致性之序列。
本文提供組合物，其中該組合物包含：載體；及編碼TNF超家族配體(TNFSF-L)或其功能變體之核酸，其中該TNFSF-L或其功能變體融合至寡聚化結構域。本文進一步提供組合物，其中該核酸編碼融合蛋白，其中該融合蛋白包含：TNF超家族配體(TNFSF-L)或其功能變體；及複數個來自膠原凝集素家族蛋白之結構域，其中該複數個來自膠原凝集素家族蛋白之結構域包含：寡聚化結構域或其功能變體；及頸部結構域或其功能變體，其中該寡聚化結構域或其功能變體及該頸部結構域或其功能變體與其在膠原凝集素家族蛋白中之位置相比在序列鄰近性上更接近。本文進一步提供組合物，其中該載體係病毒載體或非病毒載體。本文進一步提供組合物，其中該非病毒載體包含奈米粒子載劑。本文進一步提供組合物，其中該非病毒載體包含脂質奈米粒子載劑。本文進一步提供組合物，其中該奈米粒子載劑包含金、二氧化矽、碳奈米管、水溶性富勒烯(water soluble fullerene)、矽奈米線、量子點或其任一組合。本文進一步提供組合物，其中該載體包含噬菌體、類病毒顆粒(VLP)、紅血球外殼(erythrocyte ghost)、細菌轉染(bactofection)、外泌體或其任一組合。本文進一步提供組合物，其中該融合蛋白以N-末端至C-末端順序包含：寡聚化結構域或其功能變體；頸部結構域或其功能變體；視情況，連接體序列；及TNFSF-L或其功能變體。本文進一步提供組合物，其中該TNFSF-L包含淋巴毒素α、OX40配體、CD40配體、Fas配體、CD27配體、CD30配體、4-1BBL、TNF相關之細胞凋亡誘導配體(TRAIL)、核因子κ-Β配體之受體活化劑(RANKL)、TNF相關之細胞凋亡弱誘導劑、A增殖誘導配體(APRIL)、B細胞活化因子(BAFF)、LIGHT、血管內皮生長抑制劑(VEGI)、TNF超家族成員18配體(GITRL)、外異蛋白A或其任一組合。本文進一步提供組合物，其中該TNFSF-L係CD40配體。本文進一步提供組合物，其中該CD40配體包含有包含與SEQ ID NO: 1之至少85%序列一致性之序列。本文進一步提供組合物，其中該TNFSF-L係OX40配體。本文進一步提供組合物，其中該OX40配體包含有包含與SEQ ID NO: 2或SEQ ID NO: 3之至少85%序列一致性之序列。本文進一步提供組合物，其中該TNFSF-L係4-1BBL。本文進一步提供組合物，其中該4-1BBL包含有包含與SEQ ID NO: 4或SEQ ID NO: 5之至少85%序列一致性之序列。本文進一步提供組合物，其中該TNFSF-L係LIGHT。本文進一步提供組合物，其中該LIGHT包含有包含與SEQ ID NO: 6之至少85%序列一致性之序列。進一步提供組合物，其中該TNFSF-L係TNF超家族成員18配體(GITRL)。進一步提供組合物，其中該GITRL包含有包含與SEQ ID NO: 7或SEQ ID NO: 8之至少85%序列一致性之序列。本文進一步提供組合物，其中該膠原凝集素家族蛋白包含SP-A、SP-D、甘露糖結合凝集素(MBL)、共凝集素、CL-43、CL-L1、CL-K1、CL-P1或CL-46。本文進一步提供組合物，其中該膠原凝集素家族蛋白係SP-D。本文進一步提供組合物，其中該寡聚化結構域包含有包含與SEQ ID NO: 9之至少85%序列一致性之序列。本文進一步提供組合物，其中該寡聚化結構域及該頸部結構域共同包含有包含與SEQ ID NO: 10之至少85%序列一致性之序列。本文進一步提供組合物，其中該寡聚化結構域及該頸部結構域共同包含SEQ ID NO: 10。本文進一步提供組合物，其中該融合蛋白包含連接體序列，且其中該連接體序列包含GSG (甘胺酸-絲胺酸-甘胺酸) (SEQ ID NO: 12)。本文進一步提供組合物，其中該核酸包含RNA。本文進一步提供組合物，其中該核酸包含DNA。
本文提供組合物，其中該組合物包含：載體；及核酸，其中該核酸包含有包含與SEQ ID NO: 21、22、23、24、25、26或27之至少85%序列一致性之序列。
本文提供組合物，其中該組合物包含：載體；及核酸，其中該核酸編碼包含有包含與SEQ ID NO: 14、15、16、17、18、19或20之至少85%序列一致性之序列之蛋白質。
本文提供細胞，其中該細胞包含本文所述之組合物。本文進一步提供細胞，其中該細胞係免疫細胞。本文進一步提供細胞，其中該免疫細胞係淋巴樣細胞。
本文提供融合蛋白，其中該融合蛋白包含：TNF超家族配體(TNFSF-L)或其功能變體；及複數個來自膠原凝集素家族蛋白之結構域，其中該複數個來自膠原凝集素家族蛋白之結構域包含：寡聚化結構域或其功能變體；及頸部結構域或其功能變體，其中該寡聚化結構域或其功能變體及該頸部結構域或其功能變體與其在膠原凝集素家族蛋白中之位置相比在序列鄰近性上更接近。本文進一步提供融合蛋白，其中該融合蛋白在N-末端至C-末端順序上包含以下：寡聚化結構域或其功能變體；頸部結構域或其功能變體；視情況，連接體序列；及TNFSF-L或其功能變體。本文進一步提供融合蛋白，其中該TNFSF-L包含淋巴毒素α、OX40配體、CD40配體、Fas配體、CD27配體、CD30配體、4-1BBL、TNF相關之細胞凋亡誘導配體(TRAIL)、核因子κ-Β配體之受體活化劑(RANKL)、TNF相關之細胞凋亡弱誘導劑、A增殖誘導配體(APRIL)、B細胞活化因子(BAFF)、LIGHT、血管內皮生長抑制劑(VEGI)、TNF超家族成員18配體(GITRL)、外異蛋白A或其任一組合。本文進一步提供融合蛋白，其中該TNFSF-L係CD40配體。本文進一步提供融合蛋白，其中該CD40配體包含與SEQ ID NO: 1之至少85%序列一致性。本文進一步提供融合蛋白，其中該TNFSF-L係OX40配體。本文進一步提供融合蛋白，其中該OX40配體包含與SEQ ID NO: 2或SEQ ID NO: 3之至少85%序列一致性。本文進一步提供融合蛋白，其中該TNFSF-L係4-1BBL。本文進一步提供融合蛋白，其中該4-1BBL包含與SEQ ID NO: 4或SEQ ID NO: 5之至少85%序列一致性。本文進一步提供融合蛋白，其中該TNFSF-L係LIGHT。本文進一步提供融合蛋白，其中該LIGHT包含與SEQ ID NO: 6之至少85%序列一致性。進一步提供組合物，其中該TNFSF-L係TNF超家族成員18配體(GITRL)。進一步提供組合物，其中該GITRL包含有包含與SEQ ID NO: 7或SEQ ID NO: 8之至少85%序列一致性之序列。本文進一步提供融合蛋白，其中該膠原凝集素家族蛋白包含SP-A、SP-D、甘露糖結合凝集素(MBL)、共凝集素、CL-43、CL-L1、CL-K1、CL-P1、CL-46或其任一組合。本文進一步提供融合蛋白，其中該膠原凝集素家族蛋白係SP-D。本文進一步提供融合蛋白，其中該寡聚化結構域包含與SEQ ID NO: 9之至少85%序列一致性。本文進一步提供融合蛋白，其中該寡聚化結構域與頸部結構域共同包含與SEQ ID NO: 10之至少85%序列一致性。本文進一步提供融合蛋白，其中該寡聚化結構域及頸部結構域共同包含SEQ ID NO: 10。本文進一步提供融合蛋白，其中該融合蛋白包含連接體序列，且其中該連接體序列包含GSG (甘胺酸-絲胺酸-甘胺酸) (SEQ ID NO: 12)。
本文提供溶瘤病毒，其中該溶瘤病毒包含：編碼TNF超家族配體(TNFSF-L)或其功能變體之外源核酸，其中該TNFSF-L或其功能變體融合至寡聚化結構域。本文進一步提供溶瘤病毒，其中該溶瘤病毒係新城雞瘟病毒(Newcastle disease virus, NDV)、里奧病毒(Reovirus, RV)、黏液瘤病毒(MYXV)、麻疹病毒(MV)、單純疱疹病毒(HSV)、牛痘病毒(VV)、水疱性口炎病毒(VSV)、脊髓灰白質炎病毒(PV)、仙台病毒(Sendai virus)、黃病毒、慢病毒屬、痘病毒、反轉錄病毒、腺相關病毒或腺病毒。本文進一步提供溶瘤病毒，其中編碼TNFSF-L或其功能變體之核酸插入至病毒基因體中。本文進一步提供溶瘤病毒，其中編碼TNFSF-L或其功能變體之核酸插入胸苷激酶基因中。本文進一步提供溶瘤病毒，其中該TNFSF-L包含淋巴毒素α、OX40配體、CD40配體、Fas配體、CD27配體、CD30配體、4-1BBL、TNF相關之細胞凋亡誘導配體(TRAIL)、核因子κ-Β配體之受體活化劑(RANKL)、TNF相關之細胞凋亡弱誘導劑、A增殖誘導配體(APRIL)、B細胞活化因子(BAFF)、LIGHT、血管內皮生長抑制劑(VEGI)、TNF超家族成員18配體(GITRL)、外異蛋白A或其任一組合。本文進一步提供溶瘤病毒，其中該TNFSF-L係CD40配體。本文進一步提供溶瘤病毒，其中該CD40配體包含有包含與SEQ ID NO: 1之至少85%序列一致性之序列。本文進一步提供溶瘤病毒，其中該TNFSF-L係OX40配體。本文進一步提供溶瘤病毒，其中該OX40配體包含有包含與SEQ ID NO: 2或SEQ ID NO: 3之至少85%序列一致性之序列。本文進一步提供溶瘤病毒，其中該TNFSF-L係4-1BBL。本文進一步提供溶瘤病毒，其中該4-1BBL包含有包含與SEQ ID NO: 4或SEQ ID NO: 5之至少85%序列一致性之序列。本文進一步提供溶瘤病毒，其中該TNFSF-L係LIGHT。本文進一步提供溶瘤病毒，其中該LIGHT包含有包含與SEQ ID NO: 6之至少85%序列一致性之序列。進一步提供組合物，其中該TNFSF-L係TNF超家族成員18配體(GITRL)。進一步提供組合物，其中該GITRL包含有包含與SEQ ID NO: 7或SEQ ID NO: 8之至少85%序列一致性之序列。本文進一步提供溶瘤病毒，其中該寡聚化結構域包含有包含與SEQ ID NO: 9之至少85%序列一致性之序列。本文進一步提供溶瘤病毒，其中該核酸包含RNA。本文進一步提供溶瘤病毒，其中該核酸包含DNA。
本文提供牛痘病毒，其中該牛痘病毒包含：編碼TNF超家族配體(TNFSF-L)或其功能變體之外源核酸，其中該TNFSF-L或其功能變體融合至寡聚化結構域。本文進一步提供牛痘病毒，其中該牛痘病毒係以下各項之經修飾菌株：Western Reserve牛痘病毒(ATCC VR-1354)、哥本哈根菌株(Copenhagen strain)、牛痘病毒安卡拉株(Ankara)(ATCC VR-1508)、牛痘病毒安卡拉株(ATCC VR-1566)、重組牛痘病毒安卡拉株(MVA)、NYVAC株、牛痘病毒Wyeth株(ATCC VR-1536)、牛痘病毒Wyeth株(ATCC VR-325)、Wyeth (NYCBOH)菌株、天壇株(Tian Tan strain)、Lister株、USSR株及Evans株。本文進一步提供牛痘病毒，其中編碼TNFSF-L或其功能變體之外源核酸插入至病毒基因體中。本文進一步提供牛痘病毒，其中編碼TNFSF-L或其功能變體之外源核酸插入胸苷激酶基因中。本文進一步提供牛痘病毒，其中該TNFSF-L包含淋巴毒素α、OX40配體、CD40配體、Fas配體、CD27配體、CD30配體、4-1BBL、TNF相關之細胞凋亡誘導配體(TRAIL)、核因子κ-Β配體之受體活化劑(RANKL)、TNF相關之細胞凋亡弱誘導劑、A增殖誘導配體(APRIL)、B細胞活化因子(BAFF)、LIGHT、血管內皮生長抑制劑(VEGI)、TNF超家族成員18配體(GITRL)、外異蛋白A或其任一組合。本文進一步提供牛痘病毒，其中該TNFSF-L係CD40配體。本文進一步提供牛痘病毒，其中該CD40配體包含有包含與SEQ ID NO: 1之至少85%序列一致性之序列。本文進一步提供牛痘病毒，其中該TNFSF-L係OX40配體。本文進一步提供牛痘病毒，其中該OX40配體包含有包含與SEQ ID NO: 2或SEQ ID NO: 3之至少85%序列一致性之序列。本文進一步提供牛痘病毒，其中該TNFSF-L係4-1BBL。本文進一步提供牛痘病毒，其中該4-1BBL包含有包含與SEQ ID NO: 4或SEQ ID NO: 5之至少85%序列一致性之序列。本文進一步提供牛痘病毒，其中該TNFSF-L係LIGHT。本文進一步提供牛痘病毒，其中該LIGHT包含有包含與SEQ ID NO: 6之至少85%序列一致性之序列。進一步提供組合物，其中該TNFSF-L係TNF超家族成員18配體(GITRL)。進一步提供組合物，其中該GITRL包含有包含與SEQ ID NO: 7或SEQ ID NO: 8之至少85%序列一致性之序列。本文進一步提供牛痘病毒，其中該寡聚化結構域包含有包含與SEQ ID NO: 9之至少85%序列一致性之序列。本文進一步提供牛痘病毒，其中該核酸包含RNA。本文進一步提供牛痘病毒，其中該核酸包含DNA。
本文提供治療癌症之方法，其包含：將醫藥組合物以足以治療癌症之量投與給受試者，其中該醫藥組合物包含：如本文所述之組合物、細胞、融合蛋白、溶瘤病毒或牛痘病毒。本文進一步提供治療癌症之方法，其中該癌症包含血癌或實體癌。本文進一步提供治療癌症之方法，其中該癌症包含黑色素瘤、肝細胞癌、乳癌、肺癌、腹膜癌、前列腺癌、膀胱癌、卵巢癌、白血病、淋巴瘤、腎癌、胰臟癌、上皮癌、胃癌、結腸癌、十二指腸癌、胰臟腺癌、間皮瘤、多形性神經膠母細胞瘤、星細胞瘤、多發性骨髓瘤、前列腺癌、肝細胞癌、膽管肉瘤、胰臟腺癌、頭頸部鱗狀細胞癌、結腸直腸癌、腸型胃腺癌、子宮頸鱗狀上皮細胞瘤、骨肉瘤、上皮卵巢癌、急性淋巴母細胞性淋巴瘤、骨髓增生性腫瘤或肉瘤。本文進一步提供治療癌症之方法，其中該癌症包含膀胱、血液、骨、骨髓、腦、乳房、結腸、食道、胃腸道、牙齦、頭、腎、肝、肺、鼻咽、頸、卵巢、前列腺、皮膚、胃、睪丸、舌或子宮之癌症。本文進一步提供治療癌症之方法，其中該投與包含全身投與或局部投與。本文進一步提供治療癌症之方法，其中該投與包含腫瘤內投與、靜脈內投與、區域投與、腹膜內投與、非經腸投與、肌內投與、皮下投與、動脈內投與或其任一組合。本文進一步提供治療癌症之方法，其中該投與包含腫瘤內投與。本文進一步提供治療癌症之方法，其中該醫藥組合物進一步包含醫藥上可接受之載劑。本文進一步提供治療癌症之方法，其中該醫藥上可接受之載劑包含緩衝劑、乳液、生物可吸收聚合物、凝膠或其任一組合。本文進一步提供治療癌症之方法，其中該組合物、細胞或融合蛋白係以約0.01 μg/劑至約1 g/劑之劑量投與。本文進一步提供治療癌症之方法，其中該溶瘤病毒或該牛痘病毒係以約10 3至約10 12PFU/劑之劑量投與。本文進一步提供治療癌症之方法，其中該醫藥組合物係以包含1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多個劑量之治療週期投與。本文進一步提供治療癌症之方法，其中每一劑量中所投與之醫藥組合物係經約1分鐘、約1小時、約2小時、約3小時、約4小時、約1天或更長時間投與。本文進一步提供治療癌症之方法，其中每一劑量與任何其他劑量無關。本文進一步提供治療癌症之方法，其中該治療週期中之兩個或更多個劑量係由其中不投與劑量之劑量間隔隔開。本文進一步提供治療癌症之方法，其中該劑量間隔係約1分鐘、約1小時、約2小時、約3小時、約4小時、約1天、約2天、約3天、約4天、約5天、約6天、約1週、約2週、約3週、約4週、約1個月、約2個月、約3個月、約4個月、約5個月、約6個月、約7個月、約8個月、約9個月、約10個月、約11個月、約1年或更長時間。本文進一步提供治療癌症之方法，其中每一劑量間隔與任何其他劑量間隔無關。
本文提供減少腫瘤細胞生長之方法，其包含：向腫瘤細胞以足以減少腫瘤細胞生長之量投與本文所述之組合物、細胞、融合蛋白、溶瘤病毒或牛痘病毒。本文進一步提供減少腫瘤細胞生長之方法，其中該腫瘤包含液體腫瘤或實體腫瘤。本文進一步提供減少腫瘤細胞生長之方法，其中該腫瘤包含黑色素瘤、肝細胞癌、乳房腫瘤、肺腫瘤、腹膜腫瘤、前列腺腫瘤、膀胱腫瘤、卵巢腫瘤、白血病、淋巴瘤、腎癌、胰臟腫瘤、上皮癌、胃腫瘤、結腸癌、十二指腸腫瘤、胰臟腺癌、間皮瘤、多形性神經膠母細胞瘤、星細胞瘤、多發性骨髓瘤、前列腺癌、肝細胞癌、膽管肉瘤、胰臟腺癌、頭頸部鱗狀細胞癌、結腸直腸腫瘤、腸型胃腺癌、子宮頸鱗狀上皮細胞瘤、骨肉瘤、上皮卵巢癌、急性淋巴母細胞性淋巴瘤、骨髓增生性腫瘤或肉瘤。本文進一步提供減少腫瘤細胞生長之方法，其中該腫瘤包含膀胱、血液、骨、骨髓、腦、乳房、結腸、食道、胃腸道、牙齦、頭、腎、肝、肺、鼻咽、頸、卵巢、前列腺、皮膚、胃、睪丸、舌或子宮之腫瘤。本文進一步提供減少腫瘤細胞生長之方法，其中該投與包含全身投與或局部投與。本文進一步提供減少腫瘤細胞生長之方法，其中該投與包含腫瘤內投與、靜脈內投與、區域投與、腹膜內投與、非經腸投與、肌內投與、皮下投與、動脈內投與或其任一組合。本文進一步提供減少腫瘤細胞生長之方法，其中該投與包含腫瘤內投與。本文進一步提供減少腫瘤細胞生長之方法，其中該組合物進一步包含醫藥上可接受之載劑。本文進一步提供減少腫瘤細胞生長之方法，其中該醫藥上可接受之載劑包含緩衝劑、乳液、生物可吸收聚合物、凝膠或其任一組合。本文進一步提供減少腫瘤細胞生長之方法，其中該組合物、細胞或融合蛋白係以約0.01 μg/劑至約1 g/劑之劑量投與。本文進一步提供減少腫瘤細胞生長之方法，其中該溶瘤病毒或該牛痘病毒係以約10 3至約10 12PFU/劑之劑量投與。本文進一步提供減少腫瘤細胞生長之方法，其中該投與係在包含1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多個劑量之治療週期中。本文進一步提供減少腫瘤細胞生長之方法，其中每一劑量係經約1分鐘、約1小時、約2小時、約3小時、約4小時、約1天或更長時間投與。本文進一步提供減少腫瘤細胞生長之方法，其中兩個或更多個劑量係由其中不投與劑量之劑量間隔隔開。本文進一步提供減少腫瘤細胞生長之方法，其中該劑量間隔係約1分鐘、約1小時、約2小時、約3小時、約4小時、約1天、約2天、約3天、約4天、約5天、約6天、約1週、約2週、約3週、約4週、約1個月、約2個月、約3個月、約4個月、約5個月、約6個月、約7個月、約8個月、約9個月、約10個月、約11個月、約1年或更長時間。本文進一步提供減少腫瘤細胞生長之方法，其中每一劑量間隔與任何其他劑量間隔無關。
交叉參考
本申請案主張2021年6月17日提出申請之美國臨時申請案第63/211,766號之權益，該臨時申請案以整體引用的方式併入本文中。 序列表
本申請案含有序列表，其已以ASCII格式以電子形式提交，且其整體以引用的方式併入本文中。於2022年6月14日創建之該ASCII複本命名為199249-715851_SL.txt且大小為45,505個位元組。
儘管本文已顯示及闡述本揭示內容之較佳實施例，但熟習此項技術者將顯而易見，該等實施例僅作為實例提供。熟習此項技術者現將想到多種變化、改變及取代，而不背離本揭示內容。應理解，可在實踐本揭示內容中採用對本文所述本揭示內容實施例之多種替代。以下申請專利範圍意欲定義本揭示內容之範圍且意欲由此涵蓋該等申請專利範圍及其等效形式之範圍內之方法及結構。
本文提供組合物及其用於治療癌症之方法，其包含編碼融合至聚合結構域之TNF超家族配體(TNFSF-L)或其功能變體之融合蛋白的核酸。在一個實例性配置中，參考 圖 1，TNFSF-L融合(視情況經由連接體)至N-末端寡聚化結構域，且視情況頸部結構域C-末端融合至寡聚化結構域。在 圖 1之圖解說明中，寡聚化結構域及頸部結構域係來自膠原凝集素家族蛋白SP-D之功能結構域。額外寡聚化結構域及可選頸部結構域及/或連接體結構域允許融合蛋白聚合，以提供在觸發免疫反應中具有增加之活性之結構或其標記。本文更詳細地闡述TNFSF-L、與TNFSF-L融合之結構域、用於遞送編碼融合蛋白之核酸之病毒及非病毒載體、使用組合物之條件及投與方法。本文進一步提供用於治療癌症之組合物及方法，其通常包括包含編碼TNFSF-L融合蛋白之核酸的溶瘤病毒。本文另外提供包含表現本文所述融合蛋白之核酸的細胞。 定義
本文中所使用之術語僅用於闡述特定情形之目的且並非意欲為限制性的。如本文所用，除非上下文另外清楚地指示，否則單數形式「一(a, an)」、及「該(the)」亦可包含複數形式。此外，就在詳細說明及/或申請專利範圍中使用術語「含有(contains, containing)」、「包括(including, includes)」、「具有(having, has, with)」或其變化形式來說，該等術語意欲以類似於術語「包含(comprising)」之方式為包含性的。
如本文所用，術語「約」或「大約」可意指在熟習此項技術者所測定之特定值之可接受誤差範圍內，其將部分地取決於如何量測或測定該值，亦即量測系統之侷限性。在申請案及申請專利範圍中闡述特定值之情況中，除非另有說明，否則應假定術語「約」意指特定值之可接受誤差範圍，例如由術語「約」修飾之值的±10%。
如本文所用，與特定病毒相關之術語「異源核酸序列」或「外源核酸序列」或「轉基因」可係指來源於除該特定病毒以外之源之核酸序列。
如本文所用，術語「突變」可係指缺失、異源核酸之插入、反轉或取代，包括此項技術中通常理解之開放閱讀框消融突變。
如本文所用，術語「基因」可係指可以指編碼個別蛋白質或RNA之核酸片段(亦稱為「編碼序列」或「編碼區域」)，其視情況與可位於編碼序列之上游或下游之相關調節區域(例如啟動子、操縱子、終止子及諸如此類)一起。
如本文所用，「啟動子」可係控制序列，其係核酸序列之區域，在該區域控制轉錄之起始及速率。在一些實施例中，啟動子可包含調節蛋白及分子可結合之遺傳元件，例如RNA聚合酶及其他轉錄因子。術語「可操作地定位」、「可操作地連接」、「在控制下」及「在轉錄控制下」可意指啟動子處於與核酸序列相關之正確功能位置及/或方向處，以控制該序列之轉錄起始及/或表現。在一些實施例中，啟動子可以或可以不與「增強子」一起使用，「增強子」係指參與核酸序列之轉錄激活之順式作用調節序列。
如本文所用，術語「同源性」可係兩個或以上核苷酸或胺基酸序列之間之「同源性」或「同源性百分比」之計算，其可藉由比對序列來確定用於最佳比較目的(例如，可在第一序列之序列中引入空位)。然後可比較相應位置處之核苷酸，且兩個序列之間之一致性百分比可係該等序列共享之一致位置之數量的函數(即，同源性% = 相同位置之數量/位置之總數量 × 100)。舉例而言，第一序列中之位置可由與第二序列中相應位置相同之核苷酸佔據，則分子在該位置係一致的。兩個序列之間之同源性百分比可係由該等序列共用之一致位置之數量的函數，其中考慮到為兩個序列之最佳比對而需要引入之空位數量及每一空位之長度。在一些實施例中，出於比較目的，所比對序列之長度可為參照序列長度之至少約：30%、40%、50%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或95%。BLAST®搜尋可確定兩個序列之間之同源性。同源性可在兩個序列之整個長度之間或在兩個序列之整個長度之分數之間。兩個序列可為基因、核苷酸序列、蛋白質序列、肽序列、胺基酸序列或其片段。兩個序列之實際比較可藉由熟知方法(例如，使用數學演算法)完成。當利用BLAST及Gapped BLAST程式時，可使用各別程式(例如，NBLAST)之任何相關參數。舉例而言，用於序列比較之參數可設定為評分= 100，字長度= 12，或可有所變化(例如，W=5或W=20)。其他實例包括Myers及Miller、CABIOS (1989)、ADVANCE、ADAM、BLAT及FASTA之演算法。
術語「受試者」可係指動物，包括(但不限於)靈長類動物(例如人類)、牛、綿羊、山羊、馬、狗、貓、兔、大鼠或小鼠。術語「受試者」及「患者」在本文中提及(例如)哺乳動物受試者(例如人類受試者)時可互換使用。
術語「治療(treat, treating, treatment)」可意欲包括緩和或消除病症、疾病或病況；或與病症、疾病或病況相關之一或多種症狀；或緩和或根除病症、疾病或病況本身之原因。
術語「有效量」或「治療有效量」可係指在投與時可足以防止所治療病症、疾病或病況之一或多種症狀之發展或在一定程度上緩和之化合物之量。
如本文所用，術語「溶瘤」可係指藉由諸如溶瘤痘病毒(例如溶瘤牛痘病毒)之藥劑殺死癌症或腫瘤細胞，例如，藉助該等細胞之直接溶解、藉由刺激針對該等細胞之免疫反應、細胞凋亡、毒性蛋白之表現、自體吞噬及蛋白質合成之關閉、抗腫瘤免疫性之誘導或其任何組合。由該藥劑(例如溶瘤牛痘病毒)感染之癌症或腫瘤細胞之直接溶解可係病毒在該等細胞內複製之結果。在某些實例中，術語「溶瘤」可係指殺死癌症或腫瘤細胞而不使該等細胞溶解。
如本文所用，術語「溶瘤病毒」可係指優先感染並殺死腫瘤細胞之病毒。
如本文所用，術語「經修飾溶瘤病毒」可係指包含對其成分之修飾的溶瘤病毒，例如(但不限於)病毒之天然基因體(「主鏈」)中之修飾，例如病毒基因之突變或缺失、外源核酸之引入、病毒核酸或病毒蛋白之化學修飾及將外源蛋白或經修飾病毒蛋白引入病毒衣殼。一般而言，溶瘤病毒可經修飾(亦稱為「工程化」)，以獲得針對腫瘤細胞之經改良治療效應。 融合構築體
本文提供編碼融合蛋白之核酸構築體。在一些實施例中，本文所述之融合蛋白包含TNFSF-L區域及視情況來自膠原凝集素蛋白質之寡聚區域。該等融合蛋白可藉由核酸編碼並插入溶瘤病毒中。所得經表現融合蛋白可進一步包含在TNFSF-L區域與寡聚區域之間之連接體區域。用於納入TNFSF-L區域中之TNF超家族成員的實例包括(但不限於)：淋巴毒素α、OX40配體、CD40配體、Fas配體、CD27配體、CD30配體、CD137配體、TNF相關之細胞凋亡誘導配體(TRAIL)、核因子κ-Β配體之受體活化劑(RANKL)、TNF相關之細胞凋亡弱誘導劑、A增殖誘導配體(APRIL)、B細胞活化因子(BAFF)、LIGHT、血管內皮生長抑制劑(VEGI)、TNF超家族成員18配體(GITRL)、外異蛋白A或其任一組合。在其他實施例中，TNFSF-L區域可在N端處連接至連接體肽。在一些情形中，連接體肽之長度包含最多10個胺基酸，且視情況富含甘胺酸及/或絲胺酸。
在一些實施例中，本文提供融合蛋白本身。在一些實施例中，融合蛋白包含TNFSF-L區域及視情況來自膠原凝集素蛋白質之寡聚區域。該等融合蛋白可藉由核酸編碼並插入溶瘤病毒中。所得經表現融合蛋白可進一步包含在TNFSF-L區域與寡聚區域之間之連接體區域。用於納入TNFSF-L區域中之TNF超家族成員的實例包括(但不限於)：淋巴毒素α、OX40配體、CD40配體、Fas配體、CD27配體、CD30配體、CD137配體、TNF相關之細胞凋亡誘導配體(TRAIL)、核因子κ-Β配體之受體活化劑(RANKL)、TNF相關之細胞凋亡弱誘導劑、A增殖誘導配體(APRIL)、B細胞活化因子(BAFF)、LIGHT、血管內皮生長抑制劑(VEGI)、TNF超家族成員18配體(GITRL)、外異蛋白A或其任一組合。在其他實施例中，TNFSF-L區域可在N端處連接至連接體肽。在一些情形中，連接體肽之長度包含最多10個胺基酸，且視情況富含甘胺酸及/或絲胺酸。
用於全部或部分地納入本文所述之融合構築體之實例性腫瘤壞死超家族配體的胺基酸序列指示於 表 1中。該等實例性TNFSF-L蛋白質包含來自鼠類CD40L、人類OX40L、鼠類OX40L、鼠類4-1BBL、人類4-1BBL、人類GITRL、鼠類GITRL、鼠類3sCD40L、鼠類3sOX40L、鼠類3s4-1BBL、鼠類3sGITRL、人類3sOX40L、人類3s4-1BBL及鼠類3sGITRL之胞外結構域。 表 1.
SEQ ID NO: 說明 胺基酸序列
1 CD40-L (鼠類) HRRLDKVEEEVNLHEDFVFIKKLKRCNKGEGSLSLLNCEEMRRQFEDLVKDITLNKEEKKENSFEMQRGDEDPQIAAHVVSEANSNAASVLQWAKKGYYTMKSNLVMLENGKQLTVKREGLYYVYTQVTFCSNREPSSQRPFIVGLWLKPSSGSERILLKAANTHSSSQLCEQQSVHLGGVFELQAGASVFVNVTEASQVIHRVGFSSFGLLKL
2 OX40-L (人類) RIQSIKVQFTEYKKEKGFILTSQKEDEIMKVQNNSVIINCDGFYLISLKGYFSQEVNISLHYQKDEEPLFQLKKVRSVNSLMVASLTYKDKVYLNVTTDNTSLDDFHVNGGELILIHQNPGEFCVL
3 OX40-L (鼠類) AKDPPIQRLRGAVTRCEDGQLFISSYKNEYQTMEVQNNSVVIKCDGLYIIYLKGSFFQEVKIDLHFREDHNPISIPMLNDGRRIVFTVVASLAFKDKVYLTVNAPDTLCEHLQINDGELIVVQLTPGYCAPEGSYHSTVNQVPL
4 4-1BBL (鼠類) SHIGCPNTTQQGSPVFAKLLAKNQASLCNTTLNWHSQDGAGSSYLSQGLRYEEDKKELVVDSPGLYYVFLELKLSPTFTNTGHKVQGWVSLVLQAKPQVDDFDNLALTVELFPCSMENKLVDRSWSQLLLLKAGHRLSVGLRAYLHGAQDAYRDWELSYPNTTSFGLFLVKPDNPWE
5 4-1BBL (人類) QGMFAQLVAQNVLLIDGPLSWYSDPGLAGVSLTGGLSYKEDTKELVVAKAGVYYVFFQLELRRVVAGEGSGSVSLALHLQPLRSAAGAAALALTVDLPPASSEARNSAFGFQGRLLHLSAGQRLGVHLHTEARARHAWQLTQGATVLGLFRVTPEIPAGLPSPRSE
6 LIGHT (人類) MEESVVRPSVFVVDGQTDIPFTRLGRSHRRQSCSVARVGLGLLLLLMGAGLAVQGWFLLQLHWRLGEMVTRLPDGPAGSWEQLIQERRSHEVNPAAHLTGANSSLTGSGGPLLWETQLGLAFLRGLSYHDGALVVTKAGYYYTYSKVQLGGVGCPLGLASTITHGLYKRTPRYPEELELLVSQQSPCGRATSSSRVWWDSSFLGGVVHLEAGEKVVVRVLDERLVRLRDGTRSYFGAFMV
7 GITRL (小鼠) TSLKPTAIESCMVKFELSSSKWHMTSPKPHCVNTTSDGKLKILQSGTYLIYGQVIPVDKKYIKDNAPFVVQIYKKNDVLQTLMNDFQILPIGGVYELHAGDNIYLKFNSKDHIQKTNTYWGIILMPDLPFIS
8 GITRL (人類) TSLKPTAIESCMVKFELSSSKWHMTSPKPHCVNTTSDGKLKILQSGTYLIYGQVIPVDKKYIKDNAPFVVQIYKKNDVLQTLMNDFQILPIGGVYELHAGDNIYLKFNSKDHIQKTNTYWGIILMPDLPFIS
許多TNF超家族受體遮蔽其作為同三聚體之同源配體。配體自然地在細胞表面上表現為跨膜錨定蛋白。本文提供融合構築體，其包含融合至例如來自人類膠原凝集素蛋白質之寡聚促進片段的TNFSF配體。在一些實施例中，寡聚區域包含視情況連接至TNFSF-L區域之N端或連接體肽之N端之膠原凝集素蛋白質多肽片段，其中連接體肽之C端連接至TNFSF-L區域之N端。通常，膠原凝集素包含C-末端碳水化合物區段、頸部區段、膠原區段及N-末端區段。膠原凝集素之C-末端碳水化合物區域(亦稱為凝集素結構域或CRD)通常包含胱胺酸殘基以幫助寡聚化。頸部區段起始三聚化並沿頸部區段之膠原尾部朝向N-末端區段形成拉鍊樣樣式。N-末端區段自身包括藉助二硫橋幫助寡聚之富含胱胺酸部分。 寡聚化結構域
本文提供包含寡聚區域之TNFSF-L融合構築體。該等區域允許經表現TNFSF-L之經增強穩定性及功能性，且因此用於宿主免疫系統活性之增加活化。在一些實施例中，寡聚區域包含至少一個來自膠原凝集素家族蛋白之結構域或其功能變體。已知膠原凝集素蛋白質形成穩定寡聚物。膠原凝集素係構建蛋白質凝集素超家族之18個群組成員中之一者，該超家族包含稱為C型凝集素結構域之結構蛋白摺疊。一些成員已顯示包含額外結構特徵；因此，其包含以下組分：i) N-末端膠原結構域，其連接至ii) α-螺旋段，其亦稱為頸部區域，及iii) 在C-末端之CRD。膠原凝集素之實例表面活性蛋白A (SP-A)、表面活性蛋白D (SP-D)、甘露糖結合凝集素(MBL)、共凝集素、CL-43、CL-L1、CL-K1、CL-P1及CL-46。SP-A及SP-D包含參與二硫化物介導之預形成三聚體的寡聚反應之N-末端半胱胺酸。在一些實施例中，亦涵蓋編碼上述肽序列之核酸。在一些實施例中，本文所述之融合構築體包含膠原凝集素寡聚化結構域或其功能變體。在一些實施例中，本文所述之融合構築體包含膠原凝集素寡聚化結構域或其功能變體及膠原凝集素頸部結構域或其功能變體。實例性序列提供於 表 2(胺基酸)及 表 3(核酸)中。 表 2
SEQ ID NO: 說明 胺基酸序列
9 來自SP-D之寡聚化結構域 MLLFLLSALVLLTQPLGYLEAEMKTYSHRTMPSACTLVMCSSVESGLPGRDG
10 來自SP-D之寡聚化結構域及頸部(粗體用於寡聚化且非粗體用於頸部) MLLFLLSALVLLTQPLGYLEAEMKTYSHRTMPSACTLVMCSSVESGLPGRDGSDVASLRQQVEALQGQVQHLQAAFSQYKKVE
表 3
SEQ ID NO: 說明 核酸序列
11 來自SP-D之寡聚化結構域及頸部 ATGCTGCTCTTCCTCCTCTCTGCACTGGTCCTGCTCACACAGCCCCTGGGCTACCTGGAAGCAGAAATGAAGACCTACTCCCACAGAACAATGCCCAGTGCTTGCACCCTGGTCATGTGTAGCTCAGTGGAGAGTGGCCTGCCTGGTCGCGATggatctgatGTTGCTTCTCTGAGGCAGCAGGTTGAGGCCTTACAGGGACAAGTACAGCACCTCCAGGCTGCTTTCTCTCAGTATAAGAAAgtGgaG
在一些實施例中，膠原凝集素多肽片段連接至融合蛋白之TNFSF-L區域之N端或連接體肽之N端，其中連接體肽之C端連接至融合蛋白之TNFSF-L區域之N端。 連接體
本文提供融合構築體，其包含位於寡聚化結構域與TNFSF-L結構域之間之撓性連接體元件。在一些實施例中，撓性連接體元件具有25個胺基酸或更少之長度。在一些實施例中，連接體元件具有3-30個胺基酸之長度，特定地3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28或30個胺基酸之長度。在一些實施例中，連接體之長度包含3-10或5-10個胺基酸。在一些實施例中，連接體元件由小且親水之不帶電胺基酸構建。在一些實施例中，本發明之連接體元件可包含選自G、S、A及T之胺基酸。連接體元件較佳係甘胺酸/絲胺酸連接體，即，包含胺基酸甘胺酸及絲胺酸之肽連接體。在一些實施例中，連接體包含胺基酸序列(GSG) (SEQ ID NO: 12)。在一些實施例中，連接體包含胺基酸序列(GSS)a(SSG)b(GSG)c (SEQ ID NO: 13)，其中a、b、c各自係0、1、2、3、4、5或6個重複。若TNFSF-L以絲胺酸或甘胺酸胺基酸結束或開始，則此一殘基亦可形成連接體之第一殘基。用於連接體元件之建構組元可由1、2、3、4、5或更多個胺基酸組成。通常，如本文所用，連接體元件可由建構組元組成或亦來自胺基酸之序列。 遞送載體
本文提供用於遞送編碼本文所述融合構築體之核酸之系統，其為核酸構築體進入靶細胞做準備，同時減少核酸之核酸酶降解。該等遞送系統可包含病毒或非病毒載體。 溶瘤病毒
本文提供呈病毒形式之載體。在一些實施例中，病毒遞送載體包含溶瘤病毒。本文提供包含溶瘤病毒之組合物，其中溶瘤病毒包含本文所述之TNFSF-L融合構築體。如本文所用，溶瘤病毒藉助諸如以下之機制殺死癌症或腫瘤細胞：該等細胞之直接溶解、藉由刺激針對該等細胞之免疫反應、細胞凋亡、毒性蛋白之表現、自體吞噬及蛋白質合成之關閉、抗腫瘤免疫性之誘導或其任何組合。用於納入本文所述組合物中之實例性溶瘤病毒包括(但不限於)痘病毒、新城雞瘟病毒(NDV)、里奧病毒(RV)、黏液瘤病毒(MYXV)、麻疹病毒(MV)、單純疱疹病毒(HSV)、牛痘病毒(VV)、水疱性口炎病毒(VSV)、脊髓灰白質炎病毒(PV)、仙台病毒、黃病毒、慢病毒屬、反轉錄病毒、腺相關病毒及腺病毒。在一些實施例中，溶瘤病毒係痘病毒。在一些實施例中，痘病毒包含β昆蟲痘病毒、亞塔痘病毒、鹿痘病毒、γ昆蟲痘病毒、野兔痘病毒、豬痘病毒、軟疣痘病毒、鱷魚痘病毒、α昆蟲痘病毒、山羊痘病毒、禽痘病毒、副痘病毒、金絲雀痘病毒或雞痘病毒。該等溶瘤病毒具有特異性靶向腫瘤細胞之傾向，且在病毒複製後可導致顯著細胞死亡及腫瘤消退。
在一些實施例中，溶瘤病毒係可具有一或多個修飾之經修飾溶瘤病毒，其與不包含該等修飾之其他相同病毒相比，可導致針對腫瘤細胞之較大治療效應。較大治療效應之一些非限制性實例可包括以下中之每一者或任何組合：增強之病毒免疫逃避、增強之病毒之腫瘤靶向全身遞送、增強之病毒腫瘤內及腫瘤間擴散、及增強之病毒腫瘤特異性複製或免疫調節劑及抗腫瘤劑至細胞外基質之釋放。在一些情形中，本揭示內容之經修飾溶瘤病毒可用作平臺載體用於全身遞送。
在本揭示內容之一些實施例中，提供包含可增強病毒之腫瘤靶向全身遞送之修飾的經修飾溶瘤病毒。通常，溶瘤病毒可經(a) 全身投與或(b) 局部接種於腫瘤上或在許多情形中直接注射於腫瘤中(「腫瘤內遞送」)。據信，溶瘤病毒之全身遞送可提供同時治療原發性腫瘤及任何明顯或未診斷出之轉移性沈積二者之機會。因此，此遞送方法對於治療具有晚期/轉移性疾病之患者或具有由於例如生理屏障(例如血腦障壁)而難以近接之不可及疾病之患者(例如具有胰臟癌或腦癌者)可係極有吸引力的選項。然而，許多溶瘤病毒之成功全身遞送可存在障礙。舉例而言，在一些情形中，如上文所述，宿主防禦限制大多數溶瘤病毒在全身投與後感染腫瘤之能力。血球、補體、抗體及抗病毒細胞介素以及被其他組織(例如肺、肝及脾)之非特異性攝取、組織駐留巨噬細胞及另外病毒自血管腔隙之差的逃逸能力係全身遞送溶瘤病毒之主要障礙之一。在本揭示內容之一些實施例中，所揭示溶瘤病毒可包含可至少藉助如上所述增強免疫逃避促進病毒在循環系統中之持續存在之修飾。另一方面，增強之病毒之腫瘤靶向全身遞送在某些情況下可係期望的，此乃因其不僅增加針對癌症之治療效能，而且亦緩和關於病毒介導之腫癌療法之安全性問題，此乃因可限制非腫瘤感染，避免病毒感染之不期望副作用。本文中之一些實施例係關於溶瘤病毒，其包含可促進病毒之腫瘤靶向遞送之修飾。
在本揭示內容之一些實施例中，提供經修飾溶瘤病毒，其包含可增強病毒之腫瘤內及腫瘤間擴散之修飾。溶瘤病毒在腫瘤內及腫瘤間之增強擴散可藉由增加被病毒感染之癌細胞數量提高治療效能。在一些實施例中，本文提供可包含外源核酸之經修飾溶瘤病毒。在一些實施例中，本文提供可包含病毒基因體中之修飾之經修飾溶瘤病毒。在一些實施例中，本文提供可包含外源核酸以及病毒基因體中之修飾之經修飾溶瘤病毒。
在一些實施例中，溶瘤病毒可包括(但不限於) (i) 通常由於對先天抗病毒信號之提高敏感性或對致癌信號傳導路徑信之依賴而優先在癌細胞中自然複製且在人類中係非致病性之病毒；及(ii) 經基因操縱以使用之病毒。在一些實施例中，溶瘤病毒可為麻疹病毒、脊髓灰白質炎病毒、痘病毒、牛痘病毒、腺病毒、腺相關病毒、單純疱疹病毒、水疱性口炎病毒、里奧病毒、新城雞瘟病毒、塞內卡病毒(senecavirus)、反轉錄病毒、門果病毒或黏液瘤病毒。在一些實施例中，溶瘤病毒可為痘病毒。在一些實施例中，痘病毒可為牛痘病毒。在一些情形中，經修飾痘病毒可為減弱金絲雀痘病毒。在一些情形中，經修飾痘病毒可為雞痘病毒。
在一些實施例中，採用經修飾溶瘤病毒。一般而言，此一病毒包含對其成分之修飾，例如但不限於病毒之天然基因體(「主鏈」)中之修飾，如病毒基因之突變或缺失、引入外源核酸、病毒核酸或病毒蛋白之化學修飾及外源蛋白或經修飾病毒蛋白至病毒衣殼之引入。
在一些實施例中，經修飾溶瘤病毒可包含可編碼LIGHT之外源核酸。在一些實施例中，經修飾溶瘤病毒可包含可編碼IL15之外源核酸。在一些實施例中，經修飾溶瘤病毒可包含可編碼IL15之外源核酸及可編碼CCL5之外源核酸。在一些實施例中，經修飾溶瘤病毒可包含可編碼IL15之外源核酸及可編碼IL15-Rα之外源核酸。在一些實施例中，經修飾溶瘤病毒可包含可編碼ITAC (CXCL11)之外源核酸及可編碼分形趨化因子(fractalkine, CX3CL1)之外源核酸。在一些實施例中，經修飾溶瘤病毒可包含可編碼ITAC (CXCL11)之外源核酸、可編碼分形趨化因子(CX3CL1)之外源核酸、可編碼IL15之外源核酸及可編碼IL15-Rα之外源核酸。
在一些實施例中，經修飾溶瘤病毒可包含K7R基因之突變或缺失且可進一步包含可編碼細胞介素(例如，IL15)之外源核酸。在一些實施例中，經修飾溶瘤病毒可包含K7R基因之突變或缺失，且可進一步包含可編碼細胞介素(例如，IL15)之外源核酸及可編碼趨化介素(例如CCL5)之外源核酸。在一些實施例中，經修飾溶瘤病毒可包含K7R基因之突變或缺失，且可進一步包含可編碼細胞介素(例如，IL15)之外源核酸及可編碼細胞介素之受體(例如，IL15Rα)之外源核酸。在一些實施例中，經修飾溶瘤病毒可包含K7R基因之突變或缺失且可進一步包含可編碼LIGHT之外源核酸。在一些實施例中，經修飾溶瘤病毒可包含K7R基因之突變或缺失且可進一步包含可編碼ITAC (CXCL11)之外源核酸。在一些實施例中，經修飾溶瘤病毒可包含K7R基因之突變或缺失且包含可編碼分形趨化因子(CX3CL1)之外源核酸。在一些實施例中，經修飾溶瘤病毒可包含K7R基因之突變或缺失且可進一步包含可編碼ITAC (CXCL11)之外源核酸及可編碼分形趨化因子(CX3CL1)之外源核酸。
在一些實施例中，經修飾溶瘤病毒可包含A52R基因之突變或缺失且可進一步包含可編碼細胞介素(例如，IL15)之外源核酸。在一些實施例中，經修飾溶瘤病毒可包含A52R基因之突變或缺失，且可進一步包含可編碼趨化介素(例如，IL15)之外源核酸及可編碼趨化介素(例如CCL5)之外源核酸。在一些實施例中，經修飾溶瘤病毒可包含A52R基因之突變或缺失，且可進一步包含可編碼細胞介素(例如，IL15)之外源核酸及可編碼細胞介素之受體(例如IL15Rα)之外源核酸。在一些實施例中，經修飾溶瘤病毒可包含A52R基因之突變或缺失且可進一步包含可編碼LIGHT之外源核酸。在一些實施例中，經修飾溶瘤病毒可包含A52R基因之突變或缺失且可進一步包含可編碼ITAC (CXCL11)之外源核酸。在一些實施例中，經修飾溶瘤病毒可包含A52R基因之突變或缺失且包含可編碼分形趨化因子(CX3CL1)之外源核酸。在一些實施例中，經修飾溶瘤病毒可包含A52R基因之突變或缺失且可進一步包含可編碼ITAC (CXCL11)之外源核酸及可編碼分形趨化因子(CX3CL1)之外源核酸。
在一些實例中，來自經修飾溶瘤病毒之細胞介素(例如，IL15)及其受體(例如，IL15-Rα)之共表現在一些情形中可例如由於由IL15及IL15-Rα所形成之複合物(IL15:IL15-R複合物)活化天然殺手細胞及促進T細胞反應之經改良能力導致溶瘤病毒之增強之免疫調節效應。不欲受任何特定理論約束，經考慮IL15:IL15-Rα複合物中之IL15可呈現給展現於T細胞及天然殺手(NK)細胞表面上之IL15-Rβγ (IL15-受體βγ複合物)，由此賦予對NK細胞及T細胞之有效免疫調節效應。
在一些實施例中，提供經修飾溶瘤病毒，其中A52R基因可經突變或缺失，且進一步其中該經修飾溶瘤病毒可包含可編碼經分泌玻尿酸酶(例如HysA)之外源核酸。在一些實施例中，提供經修飾溶瘤病毒，其中A52R基因可經突變或缺失，且進一步其中該經修飾溶瘤病毒可包含可編碼趨化介素受體(例如CXCR4)之外源核酸。
在一些實施例中，經修飾溶瘤病毒可包含完全或部分缺失之病毒胸苷激酶(TK)基因。在一些實施例中，在本文所揭示經修飾溶瘤病毒之基因體中，一或多個外源核酸插入缺失TK基因之基因座中。
在一些實施例中，在經修飾溶瘤病毒(例如在溶瘤牛痘病毒)中，病毒TK基因可由來自單純疱疹病毒之TK基因(HSV-TK)替代。HSV TK可作為缺失TK之替代且具有多方面優點。舉例而言，(i) HSV TK可作為額外治療前藥轉化酶，用於在腫瘤中將更昔洛韋(ganciclovir, GCV)轉化為其細胞毒性代謝物。除額外治療效應之外，此修飾亦可作為自殺基因，例如，表現牛痘之細胞可藉助添加GCV有效地殺死，由此在不良事件或不受控制複製之情況中關閉病毒。因此，在一些情形中，本揭示內容之經修飾溶瘤病毒可作為安全性開關。在額外實例中，可使用HSV TK之突變型式以允許經標記受質以極大增加之靈敏度PET成像。因此，在一些情形中，可用於PET成像之包含HSV TK之經修飾溶瘤病毒可用作活體內病毒複製之報導基因，以在治療後儘早確定治療活性。
在一些情形中，經修飾溶瘤病毒可包含上文所述之全長病毒主鏈基因或病毒主鏈蛋白質、或其截短型式、或其功能結構域、或其片段或其變體。在各個實例中，經修飾溶瘤病毒可包含上文所述病毒主鏈基因或病毒主鏈蛋白質中之一或多者之突變或缺失。病毒主鏈基因及病毒主鏈蛋白質之突變可包含核酸序列中之核苷酸及蛋白質序列中之胺基酸之插入、缺失、取代或修飾。在一些實例中，缺失可包含病毒主鏈基因或蛋白質之完全或部分缺失。 牛痘病毒
在一些實施例中，溶瘤病毒係牛痘病毒。實例性牛痘病毒包括(但不限於)野生型或藉由納入本文所述之融合構築體進行修飾之減弱牛痘病毒株，例如Western Reserve牛痘病毒(ATCC VR-1354)、哥本哈根菌株、牛痘病毒安卡拉株(ATCC VR-1508)、牛痘病毒安卡拉株(ATCC VR-1566)、重組牛痘病毒安卡拉株(MVA)、NYVAC株、牛痘病毒Wyeth株(ATCC VR-1536)、牛痘病毒Wyeth株(ATCC VR-325)、Wyeth (NYCBOH)菌株、天壇株、Lister株、USSR株及Evans株。如本文所述修飾之基礎牛痘病毒株本身可包含相對於其親本毒株之一或多種突變，例如但不限於以下之一或多者：TK中之缺失(在本文中亦稱為「TK-」)及A52R中之缺失(本文亦稱為「A52R-」)。牛痘病毒可經重組或選擇以具有低毒性並在靶標組織中累積。在一些實施例中，病毒主鏈/病毒基因體中之修飾係使牛痘病毒不能複製或包含差的複製能力之修飾。該等修飾之非限制性實例可包括以下病毒基因中之突變：A1、A2、VH1、A33及I7。在一些實施例中，病毒主鏈突變選自由以下組成之群：A52R基因之完全或部分缺失；TK基因之完全或部分缺失；B15R基因之完全或部分缺失；K7R基因之完全或部分缺失；B14R基因之完全或部分缺失；N1L基因之完全或部分缺失；K1L基因之完全或部分缺失；M2L基因之完全或部分缺失；A49R基因之完全或部分缺失；VH1基因之完全或部分缺失；A33基因之完全或部分缺失；A1之完全或部分缺失；A2基因之完全或部分缺失；I7基因之完全或部分缺失及A46R基因之完全或部分缺失。如本文所用，對病毒基因之提及可藉由對由該基因編碼之蛋白質的提及來進行(例如，A33基因可意指編碼A33蛋白之基因)。在一些實施例中，病毒主鏈突變(包括取代、插入及缺失之任何組合)可導致與病毒基因或該基因編碼之病毒蛋白之野生型序列具有小於100%、99%、98、%、97%、96%、95%、94%、93%、92%、91%、90%或以下序列同源性之序列。在一些實施例中，病毒基因或由其編碼之蛋白質選自由以下組成之群：B15R、K7R、B14R、N1L、K1L、M2L、A49R、VH1、A33、A1、A2、I7及A46R。在一些實施例中，病毒主鏈可在病毒蛋白(例如，病毒抗原)之胺基酸序列中包含1、2、3、4、5或更多突變。在一些實例中，病毒抗原選自由以下組成之群：B15R、K7R、B14R、N1L、K1L、M2L、A49R、VH1、A33、A1、A2、I7及A46R。在一些實施例中，本揭示內容提供在病毒之基因體(病毒主鏈)中包含一或多個突變之重組牛痘病毒，使得突變增加免疫反應之T細胞臂。突變可為病毒基因體(牛痘病毒之野生型或減弱天然毒株)中一或多個核酸之添加、缺失或取代。在非限制性實例中，突變可為已知抑制參與Th1免疫反應之細胞介素之基因的完全或部分缺失。作為非限制性實例，突變可為編碼B8R (幹擾素γ (IFN-g)結合蛋白)；C12L (介白素-18 (IL-18)結合蛋白)之核酸的缺失。在其他非限制性實例中，突變可為先天免疫信號傳導中基因之完全或部分缺失。作為非限制性實例，突變可為編碼以下各項之核酸的缺失：B18R (I型幹擾素(IFN)結合蛋白)；A52R (核因子κB (NF- κB)抑制劑蛋白)；E3L (蛋白激酶(PKR)抑制劑)；C4、C16 (STING路徑抑制劑)。在其他非限制性實例中，突變可為編碼用於抑制免疫反應之其他組份之蛋白質的基因之完全或部分缺失。作為非限制性實例，突變可為編碼B15、K7、B14、N1、K1、M2、A49、VH1、A46或其組合之核酸之完全或部分缺失。病毒主鏈突變亦可包括利用來自其他痘病毒之具有實質上等效功能之基因取代牛痘毒力基因。本文所提供之牛痘病毒包含病毒基因體中之額外插入、突變、缺失或取代。牛痘病毒可包含外源核酸之一或多個額外插入或部分插入，該等外源核酸編碼以下中之一或多者：趨化介素受體、TRIF蛋白或其功能結構域或瘦素、介白素-2 (IL2)、介白素-15/介白素-15Ra (IL15/IL15Ra)、介白素-7 (IL-7)、瘦素-介白素融合蛋白(例如，在實例1中顯示為L2之瘦素-IL2融合蛋白)中之一或多者。諸如插入趨化介素受體之修飾係插入野生型及/或突變型CXCR4、CCR2、CCL2。牛痘病毒可進一步包含一或多個基因之一或多個額外缺失或部分缺失，該等基因來自A52R、B15R、K7R、A46R、N1L、E3L、K1L、M2L、C16、N2R、B8R、B18R、VH1及其功能結構域或片段或變體或其任何組合。在一些情形中，本文提供之牛痘病毒可包含A52R基因之完全或部分缺失及趨化介素受體(例如CCR2)之插入。在一些情形中，本文提供之牛痘病毒可包含A52R或TK病毒基因中至少一者之完全或部分缺失及編碼融合蛋白(例如，融合至細胞介素之代謝調節蛋白，例如瘦素-IL2融合蛋白)之外源核酸之插入。 額外載體
遞送本文所述核酸構築體之載體可包含物理、化學或生物轉染手段。在一些實施例中，提供載體用於遞送本文所述之蛋白質。在一些實施例中，載體係脂質奈米粒子載體。
在一些實施例中，物理轉染包含電穿孔、熱輔助基因轉移、生物彈道技術(或基因槍)、顯微注射、雷射輔助轉染、超音波輔助基因轉移、流體動力學基因轉移、磁轉染或機械按摩或其任一組合。在一些實施例中，雷射輔助轉染包含光注射、雷射影響之應力波、光化學內化或經由光吸收粒子之選擇性細胞靶向。在一些實施例中，顯微注射包含單針或陣列。
在一些實施例中，化學轉染包含磷酸鈣介導之轉染；二乙基胺基乙基(DEAE)聚葡萄糖介導之轉染；陽離子脂質介導之轉染；脂質體；聚合物；其他奈米粒子，例如金、二氧化矽、碳奈米管、水溶性富勒烯、矽奈米線或量子點；或其任一組合。
在一些實施例中，轉染係由陽離子、可電離或其他類型之脂質介導。在一些實施例中，本文所述之脂質包含3,3′,3″,3‴-(((甲基氮烷二基)雙(丙烷-3,1二基))雙(氮烷三基))四丙酸四(8-甲基壬基)酯(306O i10)；(2-(二辛基銨基)乙基)磷酸癸酯(9A1P9)；5,5-二(( Z)-十七碳-8-烯-1-基)-1-(3-(吡咯啶-1-基)丙基)-2,5-二氫-1 H-咪唑-2-甲酸乙酯(A2-Iso5-2DC18)；雙(2-己基癸酸)((4-羥基丁基)氮烷二基)雙(己烷-6,1-二基)酯(ALC-0315)；2-[(聚乙二醇)-2000]- N, N-二(十四烷基乙醯胺)(ALC-0159)；(3 S,8 S,9 S,10 R,13 R,14 S,17 R)-17-((2 R,5 R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1 H-環戊并[a]菲-3-醇(β-榖甾醇)；3,3′-((3-甲基-9-側氧基-10-氧雜-13,14-二硫雜-3,6-二氮雜二十六烷基)氮烷二基)二丙酸雙(2-(十二烷基二硫基)乙基)酯(BAME-O16B)；溴化2-(((((3 S,8 S,9 S,10 R,13 R,14 S,17 R)-10,13-二甲基-17-(( R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1 H-環戊并[a]菲-3-基)氧基)羰基)胺基)- N, N-雙(2-羥基乙基)- N-甲基乙-1-胺鎓鹽(BHEM-膽固醇)；1,1′-((2-(4-(2-((2-(雙(2-羥基十二烷基)胺基)乙基)(2-羥基十二烷基)胺基)乙基)六氫吡嗪-1-基)乙基)氮烷二基)雙(十二烷-2-醇) (C12-200)；3,6-雙(4-(雙(2-羥基十二烷基)胺基)丁基)六氫吡嗪-2,5-二酮(cKK-E12)；3β-[ N-( N′, N′-二甲基胺基乙烷)-胺甲醯基]膽固醇(DC-膽固醇)；4-(二甲基胺基)丁酸(6 Z,9 Z,28 Z,31 Z)-三十七烷-6,9,28,31-四烯-19-基酯(DLin-MC3-DMA)；1,2-二油醯基- sn-甘油-3-膦醯-乙醇胺(DOPE)；三氟乙酸2,3-二油烯基氧基- N-[2-(精胺甲醯胺基)乙基]- N, N-二甲基-1-丙胺鎓鹽(DOSPA)；1,2-二油醯基-3-三甲基銨-丙烷(DOTAP)；1,2-二- O-十八烯基-3-三甲基銨-丙烷(DOTMA)；1,2-二硬脂醯基- sn-甘油-3-磷酸膽鹼；ePC，乙基磷酯醯膽鹼(DSPC)；9,9′,9″,9‴,9″″,9‴″-((((苯-1,3,5-三羰基)參(氮烷二基))參(丙烷-3,1-二基))參(氮烷三基))六壬酸六(辛-3-基)酯(FTT5)；8-((2-羥基乙基)(6-側氧基-6-(十一烷基氧基)己基)胺基)辛酸十七烷-9-基酯(脂質H (SM-102))；(9 Z,9′ Z,9″ Z,9‴ Z,12 Z,12′ Z,12″ Z,12‴ Z)-四(十八-9,12-二烯酸)(((3,6-六氫吡嗪二酮-2,5-二基)雙(丁烷-4,1-二基))雙(氮烷三基))四(乙烷-2,1-二基)酯(OF-Deg-Lin)；1,2-二肉豆蔻醯基-rac-甘油-3-甲氧基聚乙二醇-2000 (PEG2000-DMG)； N 1, N 3, N 5-參(3-(雙十二烷基胺基)丙基)苯-1,3,5-三甲醯胺(TT3)、二(十八烷基)-醯胺解-精胺或其任一組合。
在一些實施例中，本文所述之脂質體係帶電或中性的。在一些實施例中，脂質體係單層或多層囊泡。在一些實施例中，脂質體係倒置脂質體。
在一些實施例中，本文所述之聚合物包含陽離子肽及其衍生物，例如聚鳥胺酸或聚離胺酸。在一些實施例中，陽離子聚合物包含直鏈或具支鏈合成聚合物，包括聚乙亞胺或聚凝胺。在一些實施例中，陽離子聚合物包含基於多醣之遞送化合物，包括幾丁聚醣或環糊精。在一些實施例中，陽離子聚合物包含天然聚合物，包括膠原或組織蛋白。
在一些實施例中，本文所述之碳奈米管(CNT)包含單壁碳奈米管(SWNT)、多壁碳奈米管(MWNT)或更多。在一些實施例中，本文所述之CNT包含卷成圓柱體之同心薄板。
在一些實施例中，本文所述之量子點包含由半導體材料(例如，鎘、硒化物、矽、砷化銦、硫化鎘或其任一組合)製成之奈米粒子。
在一些實施例中，生物轉染包含噬菌體、類病毒顆粒(VLP)、紅血球外殼、細菌轉染、外泌體或其任一組合。 核酸
本文提供編碼本文所述融合構築體之核酸。在一些實施例中，核酸編碼融合蛋白。在一些實施例中，融合蛋白包含全長蛋白質、全長蛋白質之截短型式、全長蛋白質之功能結構域、全長蛋白質之片段、全長蛋白質之變體或其任一組合。在一些實例中，全長蛋白質之變體可包含胺基酸取代(保守或非保守)、缺失、添加、修飾或其任何組合。在一些實施例中，核酸編碼趨化介素受體。在一些實施例中，核酸編碼包含腫瘤壞死超家族成員配體(TNFSF-L)之三聚化融合蛋白。在一些實施例中，核酸編碼淋巴毒素α配體、OX40配體、CD40配體、Fas配體、CD27配體、CD30配體、CD137配體、TNF相關之細胞凋亡誘導配體(TRAIL)、核因子κ-Β配體之受體活化劑(RANKL)、TNF相關之細胞凋亡弱誘導劑、A增殖誘導配體(APRIL)、B細胞活化因子(BAFF)、LIGHT、血管內皮生長抑制劑(VEGI)、TNF超家族成員18配體(GITRL)、外異蛋白A、其片段或其任何組合。
本文提供編碼包含TNFSF-L及寡聚化結構域之融合構築體之核酸。用於納入之實例性TNFSF-L包括來自以下之功能結構域：淋巴毒素α、OX40配體、CD40配體、Fas配體、CD27配體、CD30配體、CD137配體、TNF相關之細胞凋亡誘導配體(TRAIL)、核因子κ-Β配體之受體活化劑(RANKL)、TNF相關之細胞凋亡弱誘導劑、A增殖誘導配體(APRIL)、B細胞活化因子(BAFF)、LIGHT、血管內皮生長抑制劑(VEGI)、TNF超家族成員18配體(GITRL)、外異蛋白A或其任一組合。實例性寡聚化結構域包括(但不限於)來自以下之膠原凝集素區域：表面活性蛋白A (SP-A)、表面活性蛋白D (SP-D)、甘露糖結合凝集素(MBL)、共凝集素、CL-43、CL-L1、CL-K1、CL-P1或CL-46。包括此一特徵組合之實例性融合構築體之序列提供於 表 4(胺基酸)及 表 5(核酸)中。 表 4.
SEQ ID NO: 說明 胺基酸序列
14 3sCD40L (鼠類) MLLFLLSALVLLTQPLGYLEAEMKTYSHRTMPSACTLVMCSSVESGLPGRDGSDVASLRQQVEALQGQVQHLQAAFSQYKKVEGSGHRRLDKVEEEVNLHEDFVFIKKLKRCNKGEGSLSLLNCEEMRRQFEDLVKDITLNKEEKKENSFEMQRGDEDPQIAAHVVSEANSNAASVLQWAKKGYYTMKSNLVMLENGKQLTVKREGLYYVYTQVTFCSNREPSSQRPFIVGLWLKPSSGSERILLKAANTHSSSQLCEQQSVHLGGVFELQAGASVFVNVTEASQVIHRVGFSSFGLLKL*
15 3sOX40L (鼠類) MLLFLLSALVLLTQPLGYLEAEMKTYSHRTMPSACTLVMCSSVESGLPGRDGSDVASLRQQVEALQGQVQHLQAAFSQYKKVESSSSPAKDPPIQRLRGAVTRCEDGQLFISSYKNEYQTMEVQNNSVVIKCDGLYIIYLKGSFFQEVKIDLHFREDHNPISIPMLNDGRRIVFTVVASLAFKDKVYLTVNAPDTLCEHLQINDGELIVVQLTPGYCAPEGSYHSTVNQVPL
16 3s41BBL (鼠類) MLLFLLSALVLLTQPLGYLEAEMKTYSHRTMPSACTLVMCSSVESGLPGRDGSDVASLRQQVEALQGQVQHLQAAFSQYKKVESSHIGCPNTTQQGSPVFAKLLAKNQASLCNTTLNWHSQDGAGSSYLSQGLRYEEDKKELVVDSPGLYYVFLELKLSPTFTNTGHKVQGWVSLVLQAKPQVDDFDNLALTVELFPCSMENKLVDRSWSQLLLLKAGHRLSVGLRAYLHGAQDAYRDWELSYPNTTSFGLFLVKPDNPWE*
17 3sGITRL (鼠類) MLLFLLSALVLLTQPLGYLEAEMKTYSHRTMPSACTLVMCSSVESGLPGRDGSDVASLRQQVEALQGQVQHLQAAFSQYKKVEGSGTSLKPTAIESCMVKFELSSSKWHMTSPKPHCVNTTSDGKLKILQSGTYLIYGQVIPVDKKYIKDNAPFVVQIYKKNDVLQTLMNDFQILPIGGVYELHAGDNIYLKFNSKDHIQKTNTYWGIILMPDLPFIS
18 3sOX40L (人類) MLLFLLSALVLLTQPLGYLEAEMKTYSHRTMPSACTLVMCSSVESGLPGRDGSDVASLRQQVEALQGQVQHLQAAFSQYKKVEGSGRIQSIKVQFTEYKKEKGFILTSQKEDEIMKVQNNSVIINCDGFYLISLKGYFSQEVNISLHYQKDEEPLFQLKKVRSVNSLMVASLTYKDKVYLNVTTDNTSLDDFHVNGGELILIHQNPGEFCVL
19 3s41BBL (人類) MLLFLLSALVLLTQPLGYLEAEMKTYSHRTMPSACTLVMCSSVESGLPGRDGSDVASLRQQVEALQGQVQHLQAAFSQYKKVEGSGQGMFAQLVAQNVLLIDGPLSWYSDPGLAGVSLTGGLSYKEDTKELVVAKAGVYYVFFQLELRRVVAGEGSGSVSLALHLQPLRSAAGAAALALTVDLPPASSEARNSAFGFQGRLLHLSAGQRLGVHLHTEARARHAWQLTQGATVLGLFRVTPEIPAGLPSPRSE*
20 3sGITRL (人類) MLLFLLSALVLLTQPLGYLEAEMKTYSHRTMPSACTLVMCSSVESGLPGRDGSDVASLRQQVEALQGQVQHLQAAFSQYKKVEGSGTAKEPCMAKFGPLPSKWQMASSEPPCVNKVSDWKLEILQNGLYLIYGQVAPNANYNDVAPFEVRLYKNKDMIQTLTNKSKIQNVGGTYELHVGDTIDLIFNSEHQVLKNNTYWGIILLANPQFIS
表 5.
SEQ ID NO: 說明 核酸序列
21 3sCD40L (鼠類) ATGCTGCTCTTCCTCCTCTCTGCACTGGTCCTGCTCACACAGCCCCTGGGCTACCTGGAAGCAGAAATGAAGACCTACTCCCACAGAACAATGCCCAGTGCTTGCACCCTGGTCATGTGTAGCTCAGTGGAGAGTGGCCTGCCTGGTCGCGATGGATCTGATGTTGCTTCTCTGAGGCAGCAGGTTGAGGCCTTACAGGGACAAGTACAGCACCTCCAGGCTGCTTTCTCTCAGTATAAGAAAGTGGAGGGATCCGGTCACAGGCGTCTGGACAAGGTCGAAGAGGAAGTAAACCTTCATGAAGATTTTGTATTCATAAAAAAGCTAAAGAGATGCAACAAAGGAGAAGGATCTTTATCCTTGCTGAACTGTGAGGAGATGAGAAGGCAATTTGAAGACCTTGTCAAGGATATAACGTTAAACAAAGAAGAGAAAAAAGAAAACAGCTTTGAAATGCAAAGAGGTGATGAGGATCCTCAAATTGCAGCACACGTTGTAAGCGAAGCCAACAGTAATGCAGCATCCGTTCTACAGTGGGCCAAGAAAGGATATTATACCATGAAAAGCAACTTGGTAATGCTTGAAAATGGGAAACAGCTGACGGTTAAAAGAGAAGGACTCTATTATGTCTACACTCAAGTCACCTTCTGCTCTAATCGGGAGCCTTCGAGTCAACGCCCATTCATCGTCGGCCTCTGGCTGAAGCCCAGCAGTGGATCTGAGAGAATCTTACTCAAGGCGGCAAATACCCACAGTTCCTCCCAGCTTTGCGAGCAGCAGTCTGTTCACTTGGGCGGAGTGTTTGAATTACAAGCTGGTGCTTCTGTGTTTGTCAACGTGACTGAAGCAAGCCAAGTGATCCACAGAGTTGGCTTCTCATCTTTTGGCTTACTCAAACTCTGA
22 3sOX40L (鼠類) ATGCTGCTCTTCCTCCTCTCTGCACTGGTCCTGCTCACACAGCCCCTGGGCTACCTGGAAGCAGAAATGAAGACCTACTCCCACAGAACAATGCCCAGTGCTTGCACCCTGGTCATGTGTAGCTCAGTGGAGAGcGGCCTGCCTGGTCGCGATGGATCTGATGTTGCTTCTCTGAGGCAGCAGGTTGAGGCCTTACAGGGACAAGTACAGCACCTCCAGGCTGCTTTCTCTCAGTATAAGAAAGTAGAATCATCTTCCTCTCCGGCAAAGGACCCTCCAATCCAAAGACTCAGAGGAGCAGTTACCAGATGTGAGGATGGGCAACTATTCATCAGCTCATACAAGAATGAGTATCAAACTATGGAGGTGCAGAACAATTCGGTTGTCATCAAGTGCGATGGGCTTTATATCATCTACCTGAAGGGCTCCTTTTTCCAGGAGGTCAAGATTGACCTTCATTTCCGGGAGGATCATAATCCCATCTCTATTCCAATGCTGAACGATGGTCGAAGGATTGTCTTCACTGTGGTGGCCTCTTTGGCTTTCAAAGATAAAGTTTACCTGACTGTAAATGCTCCTGATACTCTCTGCGAACACCTCCAGATAAATGATGGGGAGCTGATTGTTGTCCAGCTAACGCCTGGATACTGTGCTCCTGAAGGATCTTACCACAGCACTGTGAACCAAGTACCACTGTGA
23 3s41BBL (鼠類) ATGCTGCTCTTCCTCCTCTCTGCACTGGTCCTGCTCACACAGCCCCTGGGCTACCTGGAAGCAGAAATGAAGACCTACTCCCACAGAACAATGCCCAGTGCTTGCACCCTGGTCATGTGTAGCTCAGTGGAGAGTGGCCTGCCTGGTCGCGATGGATCTGATGTTGCTTCTCTGAGGCAGCAGGTTGAGGCCTTACAGGGACAAGTACAGCACCTCCAGGCTGCTTTCTCTCAGTATAAGAAAGTAGAATCATCCCACATTGGCTGCCCCAACACTACACAACAGGGCTCTCCTGTGTTCGCCAAGCTACTGGCTAAAAACCAAGCATCGTTGTGCAATACAACTCTGAACTGGCACAGCCAAGATGGAGCTGGGtctTCATACCTATCTCAAGGTCTGAGGTACGAAGAAGACAAAAAGGAGTTGGTGGTAGACAGTCCCGGGCTCTACTACGTATTTTTGGAACTGAAGCTCAGTCCAACATTCACAAACACAGGCCACAAGGTGCAGGGCTGGGTCTCTCTTGTTTTGCAAGCAAAGCCTCAGGTAGATGACTTTGACAACTTGGCCCTGACAGTGGAACTGTTCCCTTGCTCCATGGAGAACAAGTTAGTGGACCGTTCCTGGAGTCAACTGTTGCTCCTGAAGGCTGGCCACCGCCTCAGTGTGGGTCTGAGGGCTTATCTGCATGGAGCCCAGGATGCATACAGAGACTGGGAGCTGTCTTATCCCAACACCACCAGCTTTGGACTCTTTCTTGTGAAACCCGACAACCCATGGGAATGA
24 3xGITRL (鼠類) ATGCTGCTCTTCCTCCTCTCTGCACTGGTCCTGCTCACACAGCCCCTGGGCTACCTGGAAGCAGAAATGAAGACCTACTCCCACAGAACAATGCCCAGTGCTTGCACCCTGGTCATGTGTAGCTCAGTGGAGAGTGGCCTGCCTGGTCGCGATGGATCTGATGTTGCTTCTCTGAGGCAGCAGGTTGAGGCCTTACAGGGACAAGTACAGCACCTCCAGGCTGCTTTCTCTCAGTATAAGAAAGTGGAGGGATCCGGTACTTCACTCAAGCCAACTGCCATCGAGTCCTGCATGGTTAAGTTTGAACTATCATCCTCAAAATGGCACATGACATCTCCCAAACCTCACTGTGTGAATACGACATCTGATGGGAAGCTGAAGATACTGCAGAGTGGCACATATTTAATCTACGGCCAAGTGATTCCTGTGGATAAGAAATACATAAAAGACAATGCCCCCTTCGTAGTACAGATATATAAAAAGAATGATGTCCTACAAACTCTAATGAATGATTTTCAAATCTTGCCTATAGGAGGGGTTTATGAACTGCATGCTGGAGATAACATATATCTGAAGTTCAACTCTAAAGACCATATTCAGAAAACTAACACATACTGGGGGATCATCTTAATGCCTGATCTACCATTCATCTCTTAG
25 3sOX40L (人類) ATGCTGCTCTTCCTCCTCTCTGCACTGGTCCTGCTCACACAGCCCCTGGGCTACCTGGAAGCAGAAATGAAGACCTACTCCCACAGAACAATGCCCAGTGCTTGCACCCTGGTCATGTGTAGCTCAGTGGAGAGTGGCCTGCCTGGTCGCGATGGATCTGATGTTGCTTCTCTGAGGCAGCAGGTTGAGGCCTTACAGGGACAAGTACAGCACCTCCAGGCTGCTTTCTCTCAGTATAAGAAAGTGGAGGGATCCGGTCGAATTCAAAGTATCAAAGTACAATTTACCGAATATAAGAAGGAGAAAGGTTTCATCCTCACTTCCCAAAAGGAGGATGAAATCATGAAGGTGCAGAACAACTCAGTCATCATCAACTGTGATGGGTTTTATCTCATCTCCCTGAAGGGCTACTTCTCCCAGGAAGTCAACATTAGCCTTCATTACCAGAAGGATGAGGAGCCCCTCTTCCAACTGAAGAAGGTCAGGTCTGTCAACTCCTTGATGGTGGCCTCTCTGACTTACAAAGACAAAGTCTACTTGAATGTGACCACTGACAATACCTCCCTGGATGACTTCCATGTGAATGGCGGAGAACTGATTCTTATCCATCAAAATCCTGGTGAATTCTGTGTCCTTTGA
26 3s41BBL (人類) ATGCTGCTCTTCCTCCTCTCTGCACTGGTCCTGCTCACACAGCCCCTGGGCTACCTGGAAGCAGAAATGAAGACCTACTCCCACAGAACAATGCCCAGTGCTTGCACCCTGGTCATGTGTAGCTCAGTGGAGAGTGGCCTGCCTGGTCGCGATGGATCTGATGTTGCTTCTCTGAGGCAGCAGGTTGAGGCCTTACAGGGACAAGTACAGCACCTCCAGGCTGCTTTCTCTCAGTATAAGAAAGTGTGTTCTGCTGATCGATGGGCCCCTGAGCTGGTACAGTGACCCAGGCCTGGCAGGCGTGTCCCTGACGGGGGGCCTGAGCTACAAAGAGGACACGAAGGAGCTGGTGGTGGCCAAGGCTGGAGTCTACTATGTCTTCTTTCAACTAGAGCTGCGGCGCGTGGTGGCCGGCGAGGGCTCAGGCTCCGTTTCACTTGCGCTGCACCTGCAGCCACTGCGCTCTGCTGCTGGGGCCGCCGCCCTGGCTTTGACCGTGGACCTGCCACCCGCCTCCTCCGAGGCTCGGAACTCGGCCTTCGGTTTCCAGGGCCGCTTGCTGCACCTGAGTGCCGGCCAGCGCCTGGGCGTCCATCTTCACACTGAGGCCAGGGCACGCCATGCCTGGCAGCTTACCCAGGGCGCCACAGTCTTGGGACTCTTCCGGGTGACCCCCGAAATCCCAGCCGGACTCCCTTCACCGAGGTCGGAATAA
27 3sGITRL (人類) ATGCTGCTCTTCCTCCTCTCTGCACTGGTCCTGCTCACACAGCCCCTGGGCTACCTGGAAGCAGAAATGAAGACCTACTCCCACAGAACAATGCCCAGTGCTTGCACCCTGGTCATGTGTAGCTCAGTGGAGAGTGGCCTGCCTGGTCGCGATGGATCTGATGTTGCTTCTCTGAGGCAGCAGGTTGAGGCCTTACAGGGACAAGTACAGCACCTCCAGGCTGCTTTCTCTCAGTATAAGAAAGTGGAGGGATCCGGTACTGCTAAGGAGCCCTGTATGGCTAAGTTTGGACCATTACCCTCAAAATGGCAAATGGCATCTTCTGAACCTCCTTGCGTGAATAAGGTGTCTGACTGGAAGCTGGAGATACTTCAGAATGGCTTATATTTAATTTATGGCCAAGTGGCTCCCAATGCAAACTACAATGATGTAGCTCCTTTTGAGGTGCGGCTGTATAAAAACAAAGACATGATACAAACTCTAACAAACAAATCTAAAATCCAAAATGTAGGAGGGACTTATGAATTGCATGTTGGGGACACCATAGACTTGATATTCAACTCTGAGCATCAGGTTCTAAAAAATAATACATACTGGGGTATCATTTTACTAGCAAATCCCCAATTCATCTCCTAG
在一些實施例中，本文所述核酸與載體組合。在一些實施例中，核酸併入基因體中。在一些實施例中，基因體係病毒基因體、細菌基因體或細胞基因體。在一些實施例中，細胞係哺乳動物細胞。在一些實施例中，哺乳動物細胞係免疫細胞。在一些實施例中，免疫細胞係腫瘤細胞。
本文提供包含編碼融合蛋白之外源核酸中之一或多者之經修飾溶瘤病毒，其中融合蛋白包含全長蛋白質、全長蛋白質之截短型式、全長蛋白質之功能結構域、全長蛋白質之片段、全長蛋白質之變體或其任一組合。在一些實例中，全長蛋白質之變體可包含胺基酸取代(保守或非保守)、缺失、添加、修飾或其任何組合。在一些實施例中，本文提供經修飾溶瘤病毒，其包含可編碼趨化介素受體之外源核酸(在本文中亦稱為轉基因)。在一些情形中，外源核酸可為治療轉基因。在一些實施例中，本文提供經修飾溶瘤病毒，其包含可編碼包含腫瘤壞死超家族成員配體(TNFSF-L)之三聚化融合蛋白之外源核酸。
在一些實施例中，經修飾溶瘤病毒可包含外源核酸，該外源核酸編碼淋巴毒素α配體、OX40配體、CD40配體、Fas配體、CD27配體、CD30配體、CD137配體、TNF相關之細胞凋亡誘導配體(TRAIL)、核因子κ-Β配體之受體活化劑(RANKL)、TNF相關之細胞凋亡弱誘導劑、A增殖誘導配體(APRIL)、B細胞活化因子(BAFF)、LIGHT、血管內皮生長抑制劑(VEGI)、TNF超家族成員18配體(GITRL)、外異蛋白A、其片段或其任何組合。該等蛋白質中之每一者或任何組合可促成主鏈溶瘤病毒之更大治療益處。
在一些實施例中，與不包含修飾之其他方面相同之溶瘤病毒相比，溶瘤病毒之修飾可導致病毒之腫瘤靶向全身遞送的效能至少約1.1、1.2、1.5、1.8、2、2.2、2.5、2.8、3、3.2、3.5、3.8、4、4.2、4.5、4.8、5、5.2、5.5、5.8、6、6.2、6.5、6.8、7、7.2、7.5、7.8、8、8.2、8.5、8.8、9、9.2、9.5、9.8、10、12、14、15、16、18、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、150、200、250、500、800、1000、2500、5000、1 × 10 4、2.5 × 10 4、5 × 10 4、7.5 × 10 4、1 × 10 5、2.5 × 10 5、5 × 10 5、7.5 × 10 5、1 × 10 6、2.5 × 10 6、5 × 10 6、7.5 × 10 6、1 × 10 7、2.5 × 10 7、5 × 10 7、7.5 × 10 7、1 × 10 8、2.5 × 10 8、5 × 10 8、7.5 × 10 8、1 × 10 9、2.5 × 10 9、5 × 10 9、7.5 × 10 9、1 × 10 10或甚至更多倍增加。在一些實施例中，病毒之腫瘤靶向全身遞送的效能可藉由量化感染腫瘤細胞之病毒且視情況與體內感染非腫瘤細胞之病毒相比來量測。在一些實施例中，在白血病、淋巴瘤或骨髓瘤之情形中，病毒之量化可藉由染色組織切片或血液塗片中之病毒顆粒來實施。在一些實施例中，量化可藉由經工程化以藉由病毒表現之報導基因分子(例如，螢光素酶及螢光蛋白)來實施。在一些情形中，該量化可藉由量化腫瘤中之病毒基因體來實施。不受限制地，病毒之腫瘤靶向全身遞送可藉由量化腫瘤細胞中病毒感染之某些下游效應來量測，例如，因應病毒感染或淋巴球累積之細胞介素。在一些實施例中，溶瘤病毒包含可編碼寡聚融合蛋白之外源核酸，該寡聚融合蛋白經設計用於細胞外釋放且包含腫瘤壞死超家族成員配體(TNFSF-L)區域，且與不包含外源核酸之其他方面相同之溶瘤病毒相比，外源核酸之存在可導致病毒之腫瘤靶向全身遞送的效能約5至10倍增加。
在一些實施例中，經修飾溶瘤病毒包含編碼三聚化融合蛋白之外源核酸，該三聚化融合蛋白經設計用於細胞外釋放且包含TNFSF-L區域及寡聚區域，且此融合蛋白由經修飾溶瘤病毒之釋放可導致對抗感染腫瘤之增強免疫反應。因此，與包含編碼上文所提及之融合蛋白之核酸的其他方面相同之病毒相比，腫瘤中之免疫抑制微環境可經改變，導致增強經修飾溶瘤病毒之免疫治療活性。在一些實施例中，免疫治療活性之增加可為至少約1.1、1.1、1.2、1.5、1.8、2、2.2、2.5、2.8、3、3.2、3.5、3.8、4、4.2、4.5、4.8、5、5.2、5.5、5.8、6、6.2、6.5、6.8、7、7.2、7.5、7.8、8、8.2、8.5、8.8、9、9.2、9.5、9.8、10、12、14、15、16、18、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、150、200、250、500、800、1000、2500、5000、1 × 10 4、2.5 × 10 4、5 × 10 4、7.5 × 10 4、2.5 × 10 5、5 × 10 5、1 × 10 6或甚至更高倍數。不受限制地，增加之免疫治療活性可由腫瘤中增加之B細胞累積、增加之T細胞對腫瘤相關免疫原之反應或二者反映。B細胞累積可藉由例如量化腫瘤中之B細胞來量測，且T細胞免疫活性可藉由例如ELISPOT分析中幹擾素-g (幹擾素-γ)分泌來量測。
本文提供包含外源核酸序列之溶瘤病毒，該外源核酸序列編碼包含TNFSF-L及寡聚化結構域之融合構築體。用於納入之實例性TNFSF-Ls包括來自以下之功能結構域：淋巴毒素α、OX40配體、CD40配體、Fas配體、CD27配體、CD30配體、CD137配體、TNF相關之細胞凋亡誘導配體(TRAIL)、核因子κ-Β配體之受體活化劑(RANKL)、TNF相關之細胞凋亡弱誘導劑、A增殖誘導配體(APRIL)、B細胞活化因子(BAFF)、LIGHT、血管內皮生長抑制劑(VEGI)、TNF超家族成員18配體(GITRL)、外異蛋白A、其任何組合。實例性寡聚化結構域包括(但不限於)來自以下之膠原凝集素區域：表面活性蛋白A (SP-A)、表面活性蛋白D (SP-D)、甘露糖結合凝集素(MBL)、共凝集素、CL-43、CL-L1、CL-K1、CL-P1或CL-46。包括此一特徵組合之實例性融合構築體提供於 表 4(胺基酸)及 表 5(核酸)中。 病況及投與
本文提供用於表現系統中用於治療癌症之融合構築體。在一些實施例中，融合構築體表現於癌細胞內。在一些實施例中，癌症係血癌(亦稱為造血系統癌)或實體癌。在一些實施例中，癌症包括(但不限於)黑色素瘤、肝細胞癌、乳癌、肺癌、腹膜癌、前列腺癌、膀胱癌、卵巢癌、白血病、淋巴瘤、腎癌、胰臟癌、上皮癌、胃癌、結腸癌、十二指腸癌、胰臟腺癌、間皮瘤、多形性神經膠母細胞瘤、星細胞瘤、多發性骨髓瘤、前列腺癌、肝細胞癌、膽管肉瘤、胰臟腺癌、頭頸部鱗狀細胞癌、結腸直腸癌、腸型胃腺癌、子宮頸鱗狀上皮細胞瘤、骨肉瘤、上皮卵巢癌、急性淋巴母細胞性淋巴瘤、骨髓增生性腫瘤及肉瘤。在一些實施例中，癌症係膀胱、血液、骨、骨髓、腦、乳房、結腸、食道、胃腸道、牙齦、頭、腎、肝、肺、鼻咽、頸、卵巢、前列腺、皮膚、胃、睪丸、舌或子宮之癌症。
在一些實施例中，融合構築體表現於免疫細胞中。在一些實施例中，細胞係淋巴樣或骨髓細胞。在一些實施例中，淋巴樣細胞係B細胞、天然殺手細胞或T細胞。在一個實施例中，T細胞係效應細胞。在一些實施例中，效應細胞係細胞毒性T細胞或CD8+細胞。在一些實施例中，效應細胞係輔助細胞或CD4+細胞。在一些實施例中，效應細胞係調節T細胞。在一些實施例中，T細胞係記憶T細胞。在一些實施例中，骨髓細胞係嗜中性球、嗜酸性球或單核球。
本文提供用於表現系統中用於減少腫瘤細胞生長之融合構築體。在一些實施例中，腫瘤係液體腫瘤或實體腫瘤。在一些實施例中，腫瘤包含黑色素瘤、肝細胞癌、乳房腫瘤、肺腫瘤、腹膜腫瘤、前列腺腫瘤、膀胱腫瘤、卵巢腫瘤、白血病、淋巴瘤、腎癌、胰臟腫瘤、上皮癌、胃腫瘤、結腸癌、十二指腸腫瘤、胰臟腺癌、間皮瘤、多形性神經膠母細胞瘤、星細胞瘤、多發性骨髓瘤、前列腺癌、肝細胞癌、膽管肉瘤、胰臟腺癌、頭頸部鱗狀細胞癌、結腸直腸腫瘤、腸型胃腺癌、子宮頸鱗狀上皮細胞瘤、骨肉瘤、上皮卵巢癌、急性淋巴母細胞性淋巴瘤、骨髓增生性腫瘤或肉瘤。在一些實施例中，腫瘤包含膀胱、血液、骨、骨髓、腦、乳房、結腸、食道、胃腸道、牙齦、頭、腎、肝、肺、鼻咽、頸、卵巢、前列腺、皮膚、胃、睪丸、舌或子宮之腫瘤。
在一些實施例中，此揭示內容提供藉由投與一或多種本文所揭示之經修飾溶瘤病毒治療受試者之方法。「個體」或「受試者」：如本文可互換使用，係指人類或非人類受試者。非人類受試者之非限制性實例包括非人類靈長類動物、狗、貓、大鼠、小鼠、天竺鼠、兔、豬、家禽、馬、牛、山羊、綿羊、鯨類等。在一些實施例中，受試者係人類。
在一些實施例中，本文提供在癌細胞中產生毒性效應之方法，其包含向該癌細胞投與治療有效量之如上所述經修飾病毒(例如溶瘤牛痘病毒)或包含其之醫藥組合物。此揭示內容進一步提供抑制第二癌細胞之生長及增殖中之至少一者之方法，其包含向第一癌細胞投與如上所述之經修飾溶瘤病毒，使得第一癌細胞經該病毒感染。因此，在本文所揭示方法之一些實施例中，經考慮，並非每一癌症或腫瘤細胞在投與治療有效劑量之如本文所述溶瘤牛痘病毒或含有其之醫藥組合物後均被感染，且可在沒有直接感染之情況下抑制未感染細胞之生長。
在一些實施例中，為使用本揭示內容之方法及組合物誘導溶瘤、殺死細胞、抑制生長、抑制轉移、減小腫瘤大小及以其他方式逆轉或減少腫瘤細胞之惡性表型，癌細胞或腫瘤可與治療有效劑量之如本文所述之實例性溶瘤牛痘病毒或包含其之醫藥組合物接觸。在一些實施例中，本揭示內容之經修飾溶瘤病毒(例如，本文所述之溶瘤牛痘病毒)或其醫藥組合物之有效量可包括足以誘導溶瘤、破壞或溶解癌細胞或抑制或減少癌細胞之生長或大小之量。例如，癌細胞生長之減少可藉由例如細胞死亡或包含該細胞之腫瘤的較慢複製速率或降低之生長速率或包含該癌細胞之受試者的延長存活來證明。
在一些實施例中，提供治療具有癌症或腫瘤之受試者之方法，其包含向該受試者投與有效量之如上所述之核酸、融合蛋白或經修飾病毒。該方法中之有效量可包括減小癌症之生長速度或擴散或延長受試者存活之量。此揭示內容提供減小腫瘤生長之方法，該方法可包含向該腫瘤投與有效量之如上所述核酸、融合蛋白或經修飾溶瘤病毒。在一些實施例中，核酸、融合蛋白、或經修飾病毒或其醫藥組合物之有效量可包括足以引起減慢、抑制或減小腫瘤生長或大小之量，且可包括根除腫瘤。減小腫瘤生長可由例如減小之生長速率或延長之包含該腫瘤之受試者的存在來證明。
在一些實施例中，本文所述之核酸係以約0.01 μg/劑至約1 g/劑或約0.5 μg/劑至約500 mg/劑之量投與給受試者。在一些實施例中，核酸係以約0.01 μg/劑、約0.05 μg/劑、約0.1 μg/劑、約0.5 μg/劑、約1 μg/劑、約5 μg/劑、約10 μg/劑、約50 μg/劑、約100 μg/劑、約500 μg/劑、約1 mg/劑、約5 mg/劑、約10 mg/劑、約50 mg/劑、約100 mg/劑、約500 mg/劑、約1 g/劑投與給受試者。
在一些實施例中，本文所述之細胞係以約0.01 μg/劑至約1 g/劑或約0.5 μg/劑至約500 mg/劑之量投與給受試者。在一些實施例中，細胞係以約0.01 μg/劑、約0.05 μg/劑、約0.1 μg/劑、約0.5 μg/劑、約1 μg/劑、約5 μg/劑、約10 μg/劑、約50 μg/劑、約100 μg/劑、約500 μg/劑、約1 mg/劑、約5 mg/劑、約10 mg/劑、約50 mg/劑、約100 mg/劑、約500 mg/劑、約1 g/劑投與給受試者。
在一些實施例中，本文所述之融合蛋白係以約0.01 μg/劑至約1 g/劑或約0.5 μg/劑至約500 mg/劑之量投與給受試者。在一些實施例中，融合蛋白係以約0.01 μg/劑、約0.05 μg/劑、約0.1 μg/劑、約0.5 μg/劑、約1 μg/劑、約5 μg/劑、約10 μg/劑、約50 μg/劑、約100 μg/劑、約500 μg/劑、約1 mg/劑、約5 mg/劑、約10 mg/劑、約50 mg/劑、約100 mg/劑、約500 mg/劑、約1 g/劑投與給受試者。
在一些實施例中，投與給受試者之本揭示內容之經修飾溶瘤病毒(例如，溶瘤病毒或牛痘病毒)之量係約10 3與10 12個感染性病毒顆粒或噬菌斑形成單位(PFU)之間、或約10 5與10 10PFU之間、或約10 5與10 8PFU之間、或約10 8與10 10PFU之間。在一些實施例中，投與給受試者之本揭示內容之經修飾溶瘤病毒(例如，溶瘤病毒或牛痘病毒)之量係約10 3與10 12個病毒顆粒或噬菌斑形成單位(PFU)之間、或約10 5與10 10PFU之間、或約10 5與10 8PFU之間、或約10 8與10 10PFU之間。在一些實施例中，本揭示內容之經修飾溶瘤病毒(例如，溶瘤牛痘病毒)係以包含以下之劑量投與：約10 3PFU/劑至約10 4PFU/劑、約1 4PFU/劑至約10 5PFU/劑、約10 5PFU/劑至約10 6PFU/劑、約10 7PFU/劑至約10 8PFU/劑、約10 9PFU/劑至約10 10PFU/劑、約10 10PFU/劑至約10 11PFU/劑、約10 11PFU/劑至約10 12PFU/劑、約10 12PFU/劑至約10 13PFU/劑、約10 13PFU/劑至約10 14PFU/劑或約10 14PFU/劑至約10 15PFU/劑。在一些實施例中，本揭示內容之經修飾溶瘤病毒(例如，溶瘤牛痘病毒)係以包含以下之劑量投與：約2 × 10 3PFU/劑、3 × 10 3PFU/劑、4 × 10 3PFU/劑、5 × 10 3PFU/劑、6 × 10 3PFU/劑、7 × 10 3PFU/劑、8 × 10 3PFU/劑、9 × 10 3PFU/劑、約10 4PFU/劑、約2 × 10 4PFU/劑、約3 × 10 4PFU/劑、約4 × 10 4PFU/劑、約5 × 10 4PFU/劑、約6 × 10 4PFU/劑、約7 × 10 4PFU/劑、約8 × 10 4PFU/劑、約9 × 10 4PFU/劑、約10 5PFU/劑、2 × 10 5PFU/劑、3 × 10 5PFU/劑、4 × 10 5PFU/劑、5 × 10 5PFU/劑、6 × 10 5PFU/劑、7 × 10 5PFU/劑、8 × 10 5PFU/劑、9 × 10 5PFU/劑、約10 6PFU/劑、約2 × 10 6PFU/劑、約3 × 10 6PFU/劑、約4 × 10 6PFU/劑、約5 × 10 6PFU/劑、約6 × 10 6PFU/劑、約7 × 10 6PFU/劑、約8 × 10 6PFU/劑、約9 × 10 6PFU/劑、約10 7PFU/劑、約2 × 10 7PFU/劑、約3 × 10 7PFU/劑、約4 × 10 7PFU/劑、約5 × 10 7PFU/劑、約6 × 10 7PFU/劑、約7 × 10 7PFU/劑、約8 × 10 7PFU/劑、約9 × 10 7PFU/劑、約10 8PFU/劑、約2 × 10 8PFU/劑、約3 × 10 8PFU/劑、約4 × 10 8PFU/劑、約5 × 10 8PFU/劑、約6 × 10 8PFU/劑、約7 × 10 8PFU/劑、約8 × 10 8PFU/劑、約9 × 10 8PFU/劑、約10 9PFU/劑、約2 × 10 9PFU/劑、約3 × 10 9PFU/劑、約4 × 10 9PFU/劑、約5 × 10 9PFU/劑、約6 × 10 9PFU/劑、約7 × 10 9PFU/劑、約8 × 10 9PFU/劑、約9 × 10 9PFU/劑、約10 10PFU/劑、約2 × 10 10PFU/劑、約3 × 10 10PFU/劑、約4 × 10 10PFU/劑、約5 × 10 10PFU/劑、約6 × 10 10PFU/劑、約7 × 10 10PFU/劑、約8 × 10 10PFU/劑、約9 × 10 10PFU/劑、約10 10PFU/劑、約2 × 10 10PFU/劑、約3 × 10 10PFU/劑、約4 × 10 10PFU/劑、約5 × 10 10PFU/劑、約6 × 10 10PFU/劑、約7 × 10 10PFU/劑、約8 × 10 10PFU/劑、約9 × 10 10PFU/劑、約10 11PFU/劑、約2 × 10 11PFU/劑、約3 × 10 11PFU/劑、約4 × 10 11PFU/劑、約5 × 10 11PFU/劑、約6 × 10 11PFU/劑、約7 × 10 11PFU/劑、約8 × 10 11PFU/劑、約9 × 10 11PFU/劑、或約10 12PFU/劑、約10 12PFU/劑至約10 13PFU/劑、約10 13PFU/劑至約10 14PFU/劑或約10 14PFU/劑至約10 15PFU/劑。在一些實施例中，本揭示內容之經修飾溶瘤病毒(例如，溶瘤牛痘病毒)可以包含5 × 10 9PFU/劑之劑量投與。在一些實施例中，本揭示內容之經修飾溶瘤病毒(例如，溶瘤牛痘病毒)可以包含最高5 × 10 9PFU/劑之劑量投與。
在一些實施例中，本揭示內容之經修飾溶瘤病毒(例如，溶瘤牛痘病毒)可以包含以下之劑量投與：約10 3個病毒顆粒/劑至約10 4個病毒顆粒/劑、約10 4個病毒顆粒/劑至約10 5個病毒顆粒/劑、約10 5個病毒顆粒/劑至約10 6個病毒顆粒/劑、約10 7個病毒顆粒/劑至約10 8個病毒顆粒/劑、約10 9個病毒顆粒/劑至約10 10個病毒顆粒/劑、約10 10個病毒顆粒/劑至約10 11個病毒顆粒/劑、約10 11個病毒顆粒/劑至約10 12個病毒顆粒/劑、約10 12個病毒顆粒/劑至約10 13個病毒顆粒/劑、約10 13個病毒顆粒/劑至約10 14個病毒顆粒/劑、或約10 14個病毒顆粒/劑至約10 15個病毒顆粒/劑。
在一些實施例中，本揭示內容之經修飾溶瘤病毒可以包含以下之劑量投與：約10 3PFU/kg至約10 4PFU/kg、約10 4PFU/kg至約10 5PFU/kg、約10 5PFU/kg至約10 6PFU/kg、約10 7PFU/kg至約10 8PFU/kg、約10 9PFU/kg至約10 10PFU/kg、約10 10PFU/kg至約10 11PFU/kg、約10 11PFU/kg至約10 12PFU/kg、約10 12PFU/kg至約10 13PFU/kg、約10 13PFU/kg至約10 14PFU/kg、或約10 14PFU/kg至約10 15PFU/kg。在一些實施例中，本揭示內容之經修飾溶瘤病毒(例如，溶瘤牛痘病毒)可以包含以下之劑量投與：約2 × 10 3PFU/kg、3 × 10 3PFU/kg、4 × 10 3PFU/kg、5 × 10 3PFU/kg、6 × 10 3PFU/kg、7 × 10 3PFU/kg、8 × 10 3PFU/kg、9 × 10 3PFU/kg、約10 4PFU/kg、約2 × 10 4PFU/kg、約3 × 10 4PFU/kg、約4 × 10 4PFU/kg、約5 × 10 4PFU/kg、約6 × 10 4PFU/kg、約7 × 10 4PFU/kg、約8 × 10 4PFU/kg、約9 × 10 4PFU/kg、約10 5PFU/kg、2 × 10 5PFU/kg、3 × 10 5PFU/kg、4 × 10 5PFU/kg、5 × 10 5PFU/kg、6 × 10 5PFU/kg、7 × 10 5PFU/kg、8 × 10 5PFU/kg、9 × 10 5PFU/kg、約10 6PFU/kg、約2 × 10 6PFU/kg、約3 × 10 6PFU/kg、約4 × 10 6PFU/kg、約5 × 10 6PFU/kg、約6 × 10 6PFU/kg、約7 × 10 6PFU/kg、約8 × 10 6PFU/kg、約9 × 10 6PFU/kg、約10 7PFU/kg、約2 × 10 7PFU/kg、約3 × 10 7PFU/kg、約4 × 10 7PFU/kg、約5 × 10 7PFU/kg、約6 × 10 7PFU/kg、約7 × 10 7PFU/kg、約8 × 10 7PFU/kg、約9 × 10 7PFU/kg、約10 8PFU/kg、約2 × 10 8PFU/kg、約3 × 10 8PFU/kg、約4 × 10 8PFU/kg、約5 × 10 8PFU/kg、約6 × 10 8PFU/kg、約7 × 10 8PFU/kg、約8 × 10 8PFU/kg、約9 × 10 8PFU/kg、約10 9PFU/kg、約2 × 10 9PFU/kg、約3 × 10 9PFU/kg、約4 × 10 9PFU/kg、約5 × 10 9PFU/kg、約6 × 10 9PFU/kg、約7 × 10 9PFU/kg、約8 × 10 9PFU/kg、約9 × 10 9PFU/kg、約10 10PFU/kg、約2 × 10 10PFU/kg、約3 × 10 10PFU/kg、約4 × 10 10PFU/kg、約5 × 10 10PFU/kg、約6 × 10 10PFU/kg、約7 × 10 10PFU/kg、約8 × 10 10PFU/kg、約9 × 10 10PFU/kg、約10 10PFU/kg、約2 × 10 10PFU/kg、約3 × 10 10PFU/kg、約4 × 10 10PFU/kg、約5 × 10 10PFU/kg、約6 × 10 10PFU/kg、約7 × 10 10PFU/kg、約8 × 10 10PFU/kg、約9 × 10 10PFU/kg、約10 11PFU/kg、約2 × 10 11PFU/kg、約3 × 10 11PFU/kg、約4 × 10 11PFU/kg、約5 × 10 11PFU/kg、約6 × 10 11PFU/kg、約7 × 10 11PFU/kg、約8 × 10 11PFU/kg、約9 × 10 11PFU/kg、或約10 12PFU/kg、約10 12PFU/kg至約10 13PFU/kg、約10 13PFU/kg至約10 14PFU/kg、或約10 14PFU/kg至約10 15PFU/kg。在一些實施例中，本揭示內容之經修飾溶瘤病毒(例如，溶瘤牛痘病毒)可以包含5 × 10 9PFU/kg之劑量投與。在一些實施例中，本揭示內容之經修飾溶瘤病毒(例如，溶瘤牛痘病毒)可以包含最高5 × 10 9PFU/kg之劑量投與。
在一些實施例中，本揭示內容之經修飾溶瘤病毒可以包含以下之劑量投與：約10 3個病毒顆粒/kg至約10 4個病毒顆粒/kg、約10 4個病毒顆粒/kg至約10 5個病毒顆粒/kg、約10 5個病毒顆粒/kg至約10 6個病毒顆粒/kg、約10 7個病毒顆粒/kg至約10 8個病毒顆粒/kg、約10 9個病毒顆粒/kg至約10 10個病毒顆粒/kg、約10 10個病毒顆粒/kg至約10 11個病毒顆粒/kg、約10 11個病毒顆粒/kg至約10 12個病毒顆粒/kg、約10 12個病毒顆粒/kg至約10 13個病毒顆粒/kg、約10 13個病毒顆粒/kg至約10 14個病毒顆粒/kg、或約10 14個病毒顆粒/kg至約10 15個病毒顆粒/kg。
在一些實施例中，本文所述溶瘤牛痘病毒之液體劑型可包含約10 3PFU/mL至約10 4PFU/mL、約10 4PFU/mL至約10 5PFU/mL、約10 5PFU/mL至約10 6PFU/mL、約10 7PFU/mL至約10 8PFU/mL、約10 9PFU/mL至約10 10PFU/mL、約10 10PFU/mL至約10 11PFU/mL、約10 11PFU/mL至約10 12PFU/mL、約10 12PFU/mL至約10 13PFU/mL、約10 13PFU/mL至約10 14PFU/mL、或約10 14PFU/mL至約10 15PFU/mL之病毒劑量。在一些實施例中，本揭示內容之經修飾溶瘤病毒(例如，溶瘤牛痘病毒)可以包含以下之劑量投與：約2 × 10 3PFU/mL、3 × 10 3PFU/mL、4 × 10 3PFU/mL、5 × 10 3PFU/mL、6 × 10 3PFU/mL、7 × 10 3PFU/mL、8 × 10 3PFU/mL、9 × 10 3PFU/mL、約10 4PFU/mL、約2 × 10 4PFU/mL、約3 × 10 4PFU/mL、約4 × 10 4PFU/mL、約5 × 10 4PFU/mL、約6 × 10 4PFU/mL、約7 × 10 4PFU/mL、約8 × 10 4PFU/mL、約9 × 10 4PFU/mL、約10 5PFU/mL、2 × 10 5PFU/mL、3 × 10 5PFU/mL、4 × 10 5PFU/mL、5 × 10 5PFU/mL、6 × 10 5PFU/mL、7 × 10 5PFU/mL、8 × 10 5PFU/mL、9 × 10 5PFU/mL、約10 6PFU/mL、約2 × 10 6PFU/mL、約3 × 10 6PFU/mL、約4 × 10 6PFU/mL、約5 × 10 6PFU/mL、約6 × 10 6PFU/mL、約7 × 10 6PFU/mL、約8 × 10 6PFU/mL、約9 × 10 6PFU/mL、約10 7PFU/mL、約2 × 10 7PFU/mL、約3 × 10 7PFU/mL、約4 × 10 7PFU/mL、約5 × 10 7PFU/mL、約6 × 10 7PFU/mL、約7 × 10 7PFU/mL、約8 × 10 7PFU/mL、約9 × 10 7PFU/mL、約10 8PFU/mL、約2 × 10 8PFU/mL、約3 × 10 8PFU/mL、約4 × 10 8PFU/mL、約5 × 10 8PFU/mL、約6 × 10 8PFU/mL、約7 × 10 8PFU/mL、約8 × 10 8PFU/mL、約9 × 10 8PFU/mL、約10 9PFU/mL、約2 × 10 9PFU/mL、約3 × 10 9PFU/mL、約4 × 10 9PFU/mL、約5 × 10 9PFU/mL、約6 × 10 9PFU/mL、約7 × 10 9PFU/mL、約8 × 10 9PFU/mL、約9 × 10 9PFU/mL、約10 10PFU/mL、約2 × 10 10PFU/mL、約3 × 10 10PFU/mL、約4 × 10 10PFU/mL、約5 × 10 10PFU/mL、約6 × 10 10PFU/mL、約7 × 10 10PFU/mL、約8 × 10 10PFU/mL、約9 × 10 10PFU/mL、約10 10PFU/mL、約2 × 10 10PFU/mL、約3 × 10 10PFU/mL、約4 × 10 10PFU/mL、約5 × 10 10PFU/mL、約6 × 10 10PFU/mL、約7 × 10 10PFU/mL、約8 × 10 10PFU/mL、約9 × 10 10PFU/mL、約10 11PFU/mL、約2 × 10 11PFU/mL、約3 × 10 11PFU/mL、約4 × 10 11PFU/mL、約5 × 10 11PFU/mL、約6 × 10 11PFU/mL、約7 × 10 11PFU/mL、約8 × 10 11PFU/mL、約9 × 10 11PFU/mL、或約10 12PFU/mL、約10 12PFU/mL至約10 13PFU/mL、約10 13PFU/mL至約10 14PFU/mL、或約10 14PFU/mL至約10 15PFU/mL。在一些實施例中，本揭示內容之經修飾溶瘤病毒(例如，溶瘤牛痘病毒)可以包含5 × 10 9PFU/mL之劑量投與。在一些實施例中，本揭示內容之經修飾溶瘤病毒(例如，溶瘤牛痘病毒)可以包含最高5 × 10 9PFU/mL之劑量投與。
在一些情形中，在藉由注射投與經修飾溶瘤病毒之情形中，劑量可包含約10 3個病毒顆粒/次注射、10 4個病毒顆粒/次注射、10 5個病毒顆粒/次注射、10 6個病毒顆粒/次注射、10 7個病毒顆粒/次注射、10 8個病毒顆粒/次注射、10 9個病毒顆粒/次注射、10 10個病毒顆粒/次注射、10 11個病毒顆粒/次注射、10 12個病毒顆粒/次注射、2 × 10 12個病毒顆粒/次注射、10 13個病毒顆粒/次注射、10 14個病毒顆粒/次注射或10 15個病毒顆粒/次注射。在其他情形中，在藉由注射投與經修飾溶瘤病毒之情形中，劑量可包含約10 3個感染性病毒顆粒/次注射、10 4個感染性病毒顆粒/次注射、10 5個感染性病毒顆粒/次注射、10 6個感染性病毒顆粒/次注射、10 7個感染性病毒顆粒/次注射、10 8個感染性病毒顆粒/次注射、10 9個感染性病毒顆粒/次注射、10 10個感染性病毒顆粒/次注射、10 11個感染性病毒顆粒/次注射、10 12個感染性病毒顆粒/次注射、2 × 10 12個感染性病毒顆粒/次注射、10 13個感染性病毒顆粒/次注射、10 14個感染性病毒顆粒/次注射或10 15個感染性病毒顆粒/次注射。在一些實施例中，病毒可以足以誘使腫瘤中至少約20%細胞、腫瘤中至少約30%細胞、腫瘤中至少約40%細胞、腫瘤中至少約50%細胞、腫瘤中至少約60%細胞、腫瘤中至少約70%細胞、腫瘤中至少約80%細胞或腫瘤中至少約90%細胞溶瘤之量投與。
在一些實施例中，本文所述醫藥組合物之單劑量可係指經1、2、5、10、15、20或24小時時期投與給受試者之量。在一些實施例中，劑量可隨時間或藉由單獨注射擴散。在一些實施例中，可將多個劑量(例如，2、3、4、5、6或更多個劑量)之本文所述醫藥組合物投與給受試者，例如在第二治療可在第一治療之1、2、3、4、5、6、7天或週內發生時。在一些實施例中，多個劑量之本文所述醫藥組合物可經1、2、3、4、5、6、7或以上天數或週數之時期投與給受試者。在一些實施例中，本文所述溶瘤牛痘病毒或本文所述醫藥組合物可經以下時期投與：約1週至約2週、約2週至約3週、約3週至約4週、約4週至約5週、約6週至約7週、約7週至約8週、約8週至約9週、約9週至約10週、約10週至約11週、約11週至約12週、約12週至約24週、約24週至約48週、約48週或約52週或更長時間。在某些情形中，本文所述溶瘤牛痘病毒或醫藥組合物之投與頻率可為每天一次、每天兩次、每週一次、每三週一次、每四週一次(或1個月一次)、每8週一次(或每2個月一次)、每12週一次(或每3個月一次)或每24週一次(或每6個月一次)。在本文所揭示方法之一些實施例中，溶瘤牛痘病毒或醫藥組合物可獨立地以初始劑量投與第一時間段、中間劑量投與第二時間段及高劑量投與第三時間段。在一些實施例中，初始劑量低於中間劑量且中間劑量低於高劑量。在一些實施例中，第一、第二及第三時間段獨立地為約1週至約2週、約2週至約3週、約3週至約4週、約4週至約5週、約6週至約7週、約7週至約8週、約8週至約9週、約9週至約10週、約10週至約11週、約11週至約12週、約12週至約24週、約24週至約48週、約48週或約52週或更長時間。
一或多個劑量之醫藥組合物構成一治療週期。治療週期中之兩個或更多個劑量可由劑量間隔分開，其中未投與醫藥組合物。一或多個治療週期構成一療程。療程中之兩個或更多個治療週期可由治療間隔分開，其中未提供治療。
在本文所述方法之一些實施例中，一或多個劑量之本文所述組合物、細胞、融合蛋白、溶瘤病毒或牛痘病毒構成一治療週期。在一些實施例中，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多個劑量之本文所述組合物、細胞、融合蛋白、溶瘤病毒或牛痘病毒構成一治療週期。在一些實施例中，劑量係經約1分鐘、約1小時、約2小時、約3小時、約4小時、約1天或更長時間投與。在一些實施例中，治療週期中之所有劑量在劑量及持續時間上大約相同。在一些實施例中，治療週期中之每一劑量獨立於任何其他劑量。在一些實施例中，治療週期中之兩個或更多個劑量由劑量間隔分開，其中不投與劑量。在一些實施例中，劑量間隔係約1分鐘、約1小時、約2小時、約3小時、約4小時、約1天、約2天、約3天、約4天、約5天、約6天、約1週、約2週、約3週、約4週、約1個月、約2個月、約3個月、約4個月、約5個月、約6個月、約7個月、約8個月、約9個月、約10個月、約11個月、約1年或更長時間。在一些實施例中，所有劑量間隔大約相同。在一些實施例中，每一劑量間隔與任何其他劑量間隔無關。
在本文所述方法之一些實施例中，一或多個治療週期構成一療程。在一些實施例中，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多個治療週期構成一療程。本文所述之治療週期之持續時間可為1至24小時、1至6天、1至4週、1至12個月或更長時間。在一些實施例中，治療週期為1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、10小時、15小時、20小時、1天、2天、3天、4天、5天、6天、1週、2週、3週、4週、1個月、2個月、3個月、4個月 5個月、6個月 7個月、8個月、9個月、10個月、11個月、12個月或更長時間。在一些實施例中，所有治療週期大約相同。在一些實施例中，每一治療週期獨立於任何其他治療週期。在一些實施例中，兩個或以上治療週期由治療間隔分開，在此期間不投與治療。在一些實施例中，治療間隔係1至6天、1至4週、1至12個月、1至5年或更長時間。在一些實施例中，治療間隔係約1天、約2天、約3天、約4天、約5天、約6天、約1週、約2週、約3週、約4週、約1個月、約2個月、約3個月、約4個月、約5個月、約6個月、約7個月、約8個月、約9個月、約10個月、約11個月、約1年、約2年、約3年、約4年、約5年或更長時間。在一些實施例中，所有治療間隔大約相同。在一些實施例中，每一治療間隔獨立於任何其他治療間隔。
在本文所述方法之一些實施例中，利用本文所述之組合物、細胞、融合蛋白、溶瘤病毒或牛痘病毒之一或多個療程構成本文所述之方法。在一些實施例中，1、2、3、4、5、6、7、8或更多個療程構成一方法。在一些實施例中，療程係1至6天、1至4週、1至12個月、1至5年或更長時間。在一些實施例中，療程係約1天、約2天、約3天、約4天、約5天、約6天、約1週、約2週、約3週、約4週、約1個月、約2個月、約3個月、約4個月、約5個月、約6個月、約7個月、約8個月、約9個月、約10個月、約11個月、約1年、約2年、約3年、約4年、約5年或更長時間。在一些實施例中，所有療程係相同的。在一些實施例中，每一療程獨立於任何其他療程。在一些實施例中，每一療程之後係療程間隔，其中不投與治療。在一些實施例中，療程間隔為1至6天、1至4週、1至12個月、1至5年或更長時間。在一些實施例中，療程間隔係約1天、約2天、約3天、約4天、約5天、約6天、約1週、約2週、約3週、約4週、約1個月、約2個月、約3個月、約4個月、約5個月、約6個月、約7個月、約8個月、約9個月、約10個月、約11個月、約1年、約2年、約3年、約4年、約5年或更長時間。在一些實施例中，療程間隔之持續時間依賴於疾病之發生或復發。在一些實施例中，所有療程間隔大約相同。在一些實施例中，每一療程間隔獨立於任何其他療程間隔。
在一些實例中，根據本文所述治療方法中之任一者，受試者可在投與經修飾溶瘤病毒(例如溶瘤牛痘病毒)或包含其之藥物組合物之前、同時及之後限制減少碳水化合物之飲食(例如產酮飲食)。在一些實施例中，受試者被限制飲食，其可包含消耗少於500克碳水化合物/天、少於450克碳水化合物/天、少於450克碳水化合物/天、少於400克碳水化合物/天、少於350克碳水化合物/天、少於300克碳水化合物/天、少於250克碳水化合物/天、少於200克碳水化合物/天、少於150克碳水化合物/天、少於100克碳水化合物/天、少於90克碳水化合物/天、少於80克碳水化合物/天、少於70克碳水化合物/天、少於60克碳水化合物/天、少於50克碳水化合物/天、少於40克碳水化合物/天、少於30克碳水化合物/天、少於20克碳水化合物/天或少於10克碳水化合物/天。
遞送本揭示內容之經修飾溶瘤病毒(例如，本文所述之溶瘤牛痘病毒)及包含其之醫藥組合物至癌症或腫瘤細胞之實例性方法可經由腫瘤內注射。然而，亦可使用替代投與方法。投與途徑可隨腫瘤之位置及性質而變。在一些實施例中，投與可為局部投與或全身投與。在一些實施例中，投與途徑係靜脈內、區域性(例如，在腫瘤附近、尤其腫瘤之血管系統或毗鄰血管系統)、腹膜內、非經腸、肌內、皮下、動脈內、經皮、鞘內、氣管內、膀胱內、經皮、真皮內、藉由吸入、灌注、鼻內、尿道內、陰道內、藉由灌洗、經口、牙內、經直腸或其任何組合。可注射劑量之溶瘤病毒可以濃注注射或緩慢輸注形式投與。在一些實施例中，經修飾溶瘤病毒可自植入患者中之源投與給患者。在一些實施例中，經修飾溶瘤病毒之投與可藉由連續輸注經所選時間段發生。在一些情形中，本文所述之溶瘤牛痘病毒或包含其之醫藥組合物可以治療有效劑量藉由輸注經約15 min、約30 min、約45 min、約50 min、約55 min、約60分鐘、約75 min、約90 min、約100 min、或約120 min或更長時間段投與。本揭示內容之醫藥組合物之溶瘤病毒可作為液體劑型投與，其中投與之總體積為約1 mL至約5 mL、約5 mL至10 mL、約15 mL至約20 mL、約25 mL至約30 mL、約30 mL至約50 mL、約50 mL至約100 mL、約100 mL至150 mL、約150 mL至約200 mL、約200 mL至約250 mL、約250 mL至約300 mL、約300 mL至約350 mL、約350 mL至約400 mL、約400 mL至約450 mL、約450 mL至500 mL、約500 mL至750 mL或約750 mL至1000 mL。 醫藥組合物
本文提供醫藥組合物，其包含融合構築體或編碼該構築體之核酸，及醫藥上可接受之載劑。如本文所用，「醫藥上可接受」包括不幹擾活性成分之生物活性的有效性及/或對被投與之患者無毒之任何載劑。醫藥上可接受之載劑之非限制性實例包括緩衝劑、水、乳液、各種類型之潤濕劑、無菌溶液、防腐劑、穩定劑、壓實劑、潤滑劑、螯合劑、分散增強劑、崩解劑及其任何組合。在一些實施例中，緩衝劑包含檸檬酸鹽緩衝劑、磷酸鹽緩衝劑、乙酸鹽緩衝劑或其任一組合。在一些實施例中，乳液係水包油(O/W)乳液、油包水乳液(W/O)或多重乳液。醫藥上可接受之載劑之額外非限制性實例可包括凝膠、生物可吸收聚合物、包含融合構築體或核酸之植入元件、或任何其他適宜媒劑、遞送或分配構件或材料。在一些實施例中，生物可吸收聚合物包含聚乳酸(PLA)、聚乙醇酸(PGA)、聚己內酯(PCL)、聚二噁酮(polydioxone, PDO)或其任一組合。在一些實施例中，凝膠包含蛋白質、多醣、纖維素衍生物、合成聚合物或其任一組合。在一些實施例中，蛋白質包含明膠、膠原或其任一組合。在一些實施例中，多醣包含果膠、結蘭膠、海藻酸、瓊脂、黃嘌呤、決明子、黃蓍膠、卡拉膠鈉或鉀、瓜爾豆膠或其任一組合。在一些實施例中，纖維素衍生物包含甲基纖維素、羥基乙基纖維素、羥基丙基纖維素、羥基丙基甲基纖維素或其任一組合。在一些實施例中，合成聚合物包含卡波姆(carbomer)、聚丙烯醯胺、泊洛沙姆(poloxamer)、聚乙烯醇、聚乙烯或其共聚物或其任一組合。該等載劑可藉由習用方法調配且可以有效量投與給受試者。
在一些實施例中，本文所述之醫藥組合物調配成水基溶液、油基溶液、甘油中之分散液、液體聚乙二醇、固體、可吸入形式、鼻內形式、脂質體、奈米粒子、微粒、聚合物或任一組合。在一些實施例中，本文所述之醫藥組合物可包含穩定劑及緩衝劑。在一些實施例中，本文所述之醫藥組合物可包含增溶劑，例如無菌水或緩衝劑。 生產方法
在一些實施例中，此揭示內容之經修飾溶瘤病毒包裝於細胞株中。在一些實施例中，經修飾溶瘤病毒可在適宜宿主細胞(例如，HeLa細胞、293細胞或Vero細胞)中繁殖，自宿主細胞分離並儲存在促進病毒穩定性及完整性之條件下，使得感染性隨時間之損失最小化。在某些實例性方法中，經修飾溶瘤病毒係使用細胞堆、滾瓶或灌注生物反應器在宿主細胞中繁殖。在一些實例中，用於純化經修飾溶瘤病毒之下游方法可包含過濾(例如，深度過濾、切向流過濾或其組合)、超速離心或層析捕獲。經修飾溶瘤病毒可例如藉由冷凍或乾燥(例如藉由凍乾)儲存。在一些實施例中，在投與前，經儲存之修飾溶瘤病毒可經重構(若乾燥儲存)並於醫藥上可接受之載劑中稀釋用於投與。在一些實施例中，與經修飾溶瘤病毒中不包含該等修飾之其他方面相同之病毒相比，本文所述之經修飾溶瘤病毒在HeLa細胞及293細胞中展現更高滴度。在某些情況下，在經修飾溶瘤病毒中觀察到HeLa細胞及293細胞中之更高滴度。 套組
在實施例中，本揭示內容提供用於投與本文所述經修飾溶瘤病毒之套組。在一些實施例中，本揭示內容之套組可包括如上所述經修飾溶瘤病毒或包含經修飾溶瘤病毒之醫藥組合物。在一些實施例中，本揭示內容之套組可進一步包括一或多個組件，例如使用說明書、裝置及額外試劑及諸如用於執行上文所揭示方法之管、容器及注射器之組件。在一些實施例中，本揭示內容之套組可進一步包括一或多種試劑，例如可與經修飾病毒組合投與之抗癌劑、免疫調節劑或其任何組合中之至少一者。
在一些實施例中，本揭示內容之套組可包含一或多個包含本文所揭示經修飾病毒之容器。舉例而言但不作為限制，本揭示內容之套組可包含一或多個包含本文所揭示經修飾溶瘤病毒之容器。
在一些實施例中，本揭示內容之套組可包括使用說明書、用於將經修飾溶瘤病毒投與給受試者之裝置或將額外試劑或化合物投與給受試者之裝置。舉例而言但不作為限制，說明書可包括經修飾溶瘤病毒及視情況套組中所包括其他組分之描述及投與方法，包括確定受試者之適宜狀態、適宜劑量量及投與經修飾病毒之適宜投與方法。說明書亦可包括包括在治療時間之持續期間監測受試者之指導。
在一些實施例中，本揭示內容之套組可包括將經修飾溶瘤病毒投與給受試者之裝置。此項技術中已知用於投與醫藥及醫藥組合物之各種裝置中之任一者均可包括在本文提供之套組中。舉例而言但不作為限制，該等裝置包括皮下注射針、靜脈注射針、導管、無針注射裝置、吸入器及液體分配器，例如滴眼管。在一些實施例中，欲藉由靜脈內注射、腫瘤內注射、腹膜內注射全身遞送之經修飾溶瘤病毒可包括在具有皮下注射針及注射器之套組中。 實例性實施例
本文提供融合蛋白，其中融合蛋白包含：TNF (腫瘤壞死因子)超家族配體(TNFSF-L)或其功能變體；及複數個來自膠原凝集素家族蛋白之結構域，其中該複數個來自膠原凝集素家族蛋白之結構域包含：寡聚化結構域或其功能變體；及頸部結構域或其功能變體，其中該寡聚化結構域或其功能變體及該頸部結構域或其功能變體與其在膠原凝集素家族蛋白中之位置相比在序列鄰近性上更接近。本文進一步提供融合蛋白，其中該融合蛋白在N-末端至C-末端順序上包含以下：寡聚化結構域或其功能變體；頸部結構域或其功能變體；視情況連接體序列；及TNFSF-L或其功能變體。本文進一步提供融合蛋白，其中該TNFSF-L係淋巴毒素α、OX40配體、CD40配體、Fas配體、CD27配體、CD30配體、4-1BBL、TNF相關之細胞凋亡誘導配體(TRAIL)、核因子κ-Β配體之受體活化劑(RANKL)、TNF相關之細胞凋亡弱誘導劑、A增殖誘導配體(APRIL)、B細胞活化因子(BAFF)、LIGHT、血管內皮生長抑制劑(VEGI)、TNF超家族成員18、外異蛋白A。本文進一步提供融合蛋白，其中該TNFSF-L肽係CD40配體。本文進一步提供融合蛋白，其中該CD40配體包含與SEQ ID NO: 1之至少85%序列一致性。本文進一步提供融合蛋白，其中該TNFSF-L肽係OX40配體。本文進一步提供融合蛋白，其中該OX40配體包含與SEQ ID NO: 2或SEQ ID NO: 3之至少85%序列一致性。本文進一步提供融合蛋白，其中該TNFSF-L肽係4-1BBL。本文進一步提供融合蛋白，其中該4-1BBL包含與SEQ ID NO: 4或SEQ ID NO: 5之至少85%序列一致性。本文進一步提供融合蛋白，其中該TNFSF-L肽係LIGHT。本文進一步提供融合蛋白，其中該LIGHT包含與SEQ ID NO: 6之至少85%序列一致性。本文進一步提供融合蛋白，其中該膠原凝集素家族蛋白係SP-A、SP-D、甘露糖結合凝集素(MBL)、共凝集素、CL-43、CL-L1、CL-K1、CL-P1或CL-46。本文進一步提供融合蛋白，其中該膠原凝集素家族蛋白係SP-D。本文進一步提供融合蛋白，其中該寡聚化結構域包含與SEQ ID NO: 9之至少85%序列一致性。本文進一步提供融合蛋白，其中該寡聚化結構域與頸部結構域共同包含與SEQ ID NO: 11之至少85%序列一致性。本文進一步提供融合蛋白，其中該寡聚化結構域及頸部結構域共同包含SEQ ID NO: 11。本文進一步提供融合蛋白，其中該融合蛋白包含連接體序列，且其中該連接體序列包含GSG (甘胺酸-絲胺酸-甘胺酸) (SEQ ID NO: 12)。
本文提供融合蛋白，其中該融合蛋白包含與SEQ ID NO: 14、15、16、18或19具有至少85%序列一致性之序列。
本文提供溶瘤病毒，其中溶瘤病毒包含：融合至寡聚化結構域之TNF (腫瘤壞死因子)超家族配體(TNFSF-L)或其功能變體。本文進一步提供溶瘤病毒，其中該溶瘤病毒係新城雞瘟病毒(NDV)、里奧病毒(RV)、黏液瘤病毒(MYXV)、麻疹病毒(MV)、單純疱疹病毒(HSV)、牛痘病毒(VV)、水疱性口炎病毒(VSV)或脊髓灰白質炎病毒(PV)。本文進一步提供溶瘤病毒，其中該TNFSF-L或其功能變體插入至病毒基因體中。本文進一步提供溶瘤病毒，其中該TNFSF-L或其功能變體插入胸苷激酶基因中。
本文提供牛痘病毒，其中該牛痘病毒包含：融合至寡聚化結構域之TNF (腫瘤壞死因子)超家族配體(TNFSF-L)或其功能變體。本文進一步提供牛痘病毒，其中該牛痘病毒係以下各項之經修飾菌株：Western Reserve牛痘病毒(ATCC VR-1354)、牛痘病毒安卡拉株(ATCC VR-1508)、牛痘病毒安卡拉株(ATCC VR-1566)、牛痘病毒Wyeth株(ATCC VR-1536)或牛痘病毒Wyeth株(ATCC VR-325)。本文進一步提供牛痘病毒，其中該TNFSF-L或其功能變體插入至病毒基因體中。本文進一步提供牛痘病毒，其中該TNFSF-L或其功能變體插入胸苷激酶基因中。
本文提供溶瘤病毒，其中該溶瘤病毒包含本文所述之融合蛋白。
本文提供牛痘病毒，其中該牛痘病毒包含本文所述之融合蛋白。
本文提供治療癌症之方法，其包含：將包含核酸之載體以足以治療癌症之量投與給受試者，其中該核酸編碼本文所述之融合蛋白。
本文提供治療癌症之方法，其包含：將本文所述之溶瘤病毒以足以治療癌症之量投與給受試者。
本文提供治療癌症之方法，其包含：將本文所述之牛痘病毒以足以治療癌症之量投與給受試者。
本文提供減少腫瘤細胞生長之方法，其包含：將包含核酸之載體以足以減少腫瘤細胞生長之量投與給腫瘤細胞，其中該核酸編碼本文所述之融合蛋白。
本文提供減少腫瘤細胞生長之方法，其包含：將本文所述之溶瘤病毒以足以減少腫瘤細胞生長之量投與給腫瘤細胞。
本文提供減少腫瘤細胞生長之方法，其包含：將本文所述之牛痘病毒以足以減少腫瘤細胞生長之量投與給腫瘤細胞。 實例
以下實例進一步說明所闡述實施例而不限制本揭示內容之範圍。 實例 1 ：天然及 TNFSF-L 融合构筑体 之表現
設計以下融合TNFSF-L構築體。3sCD40L (鼠類)；3sOX40L (鼠類)；3s41BBL (鼠類)；3sOX40L (人類)；及3s41BBL (人類)。該等構築體之序列闡述於 表 4及 表 5中。
另外，設計以下天然單體產生構築體mOX40L (鼠類，天然)及m41BBL (鼠類，天然)。該等構築體之序列提供於 表 6(胺基酸)及 表 7(核酸)中。 表 6.
SEQ ID NO: 說明 胺基酸序列
28 mOX40L (鼠類，天然) MEGEGVQPLDENLENGSRPRFKWKKTLRLVVSGIKGAGMLLCFIYVCLQLSSSPAKDPPIQRLRGAVTRCEDGQLFISSYKNEYQTMEVQNNSVVIKCDGLYIIYLKGSFFQEVKIDLHFREDHNPISIPMLNDGRRIVFTVVASLAFKDKVYLTVNAPDTLCEHLQINDGELIVVQLTPGYCAPEGSYHSTVNQVPL*
29 m4-1BBL (鼠類，天然) MDQHTLDVEDTADARHPAGTSCPSDAALLRDTGLLADAALLSDTVRPTNAALPTDAAYPAVNVRDREAAWPPALNFCSRHPKLYGLVALVLLLLIAACVPIFTRTEPRPALTITTSPNLGTRENNADQVTPVSHIGCPNTTQQGSPVFAKLLAKNQASLCNTTLNWHSQDGAGSSYLSQGLRYEEDKKELVVDSPGLYYVFLELKLSPTFTNTGHKVQGWVSLVLQAKPQVDDFDNLALTVELFPCSMENKLVDRSWSQLLLLKAGHRLSVGLRAYLHGAQDAYRDWELSYPNTTSFGLFLVKPDNPWE*
表 7.
SEQ ID NO: 說明 核酸序列
30 mOX40L (鼠類，天然) ATGGAAGGGGAAGGGGTTCAACCCCTGGATGAGAATCTGGAAAACGGATCAAGGCCAAGATTCAAGTGGAAGAAGACGCTAAGGCTGGTGGTCTCTGGGATCAAGGGAGCAGGGATGCTTCTGTGCTTCATCTATGTCTGCCTGCAACTCTCTTCCTCTCCGGCAAAGGACCCTCCAATCCAAAGACTCAGAGGAGCAGTTACCAGATGTGAGGATGGGCAACTATTCATCAGCTCATACAAGAATGAGTATCAAACTATGGAGGTGCAGAACAATTCGGTTGTCATCAAGTGCGATGGGCTTTATATCATCTACCTGAAGGGCTCCTTTTTCCAGGAGGTCAAGATTGACCTTCATTTCCGGGAGGATCATAATCCCATCTCTATTCCAATGCTGAACGATGGTCGAAGGATTGTCTTCACTGTGGTGGCCTCTTTGGCTTTCAAAGATAAAGTTTACCTGACTGTAAATGCTCCTGATACTCTCTGCGAACACCTCCAGATAAATGATGGGGAGCTGATTGTTGTCCAGCTAACGCCTGGATACTGTGCTCCTGAAGGATCTTACCACAGCACTGTGAACCAAGTACCACTGTGA
31 m4-1BBL (鼠類，天然) ATGGACCAGCACACACTTGATGTGGAGGATACCGCGGATGCCAGACATCCAGCAGGTACTTCGTGCCCCTCGGATGCGGCGCTCCTCAGAGATACCGGGCTCCTCGCGGACGCTGCGCTCCTCTCAGATACTGTGCGCCCCACAAATGCCGCGCTCCCCACGGATGCTGCCTACCCTGCGGTTAATGTTCGGGATCGCGAGGCCGCGTGGCCGCCTGCACTGAACTTCTGTTCCCGCCACCCAAAGCTCTATGGCCTAGTCGCTTTGGTTTTGCTGCTTCTGATCGCCGCCTGTGTTCCTATCTTCACCCGCACCGAGCCTCGGCCAGCGCTCACAATCACCACCTCGCCCAACCTGGGTACaCGAGAGAATAATGCAGACCAGGTCACCCCTGTTTCCCACATTGGCTGCCCCAACACTACACAACAGGGCTCTCCTGTGTTCGCCAAGCTACTGGCTAAAAACCAAGCATCGTTGTGCAATACAACTCTGAACTGGCACAGCCAAGATGGAGCTGGGtctTCATACCTATCTCAAGGTCTGAGGTACGAAGAAGACAAAAAGGAGTTGGTGGTAGACAGTCCCGGGCTCTACTACGTATTTTTGGAACTGAAGCTCAGTCCAACATTCACAAACACAGGCCACAAGGTGCAGGGCTGGGTCTCTCTTGTTTTGCAAGCAAAGCCTCAGGTAGATGACTTTGACAACTTGGCCCTGACAGTGGAACTGTTCCCTTGCTCCATGGAGAACAAGTTAGTGGACCGTTCCTGGAGTCAACTGTTGCTCCTGAAGGCTGGCCACCGCCTCAGTGTGGGTCTGAGGGCTTATCTGCATGGAGCCCAGGATGCATACAGAGACTGGGAGCTGTCTTATCCCAACACCACCAGCTTTGGACTCTTTCTTGTGAAACCCGACAACCCATGGGAATGA
實施TNFSF-L天然單體或變體融合構築體自溶瘤病毒之表現。簡言之，利用表現單體或骨架TNFSF-L融合體之病毒(對於OX40L或41BBL)或不表現TNFSF-L之對照病毒或表現骨架TNFSF-L融合體之病毒(對於CD40L)以5.0之MOI感染HeLa細胞。在24小時時收集培養基並根據製造商之說明在商業ELISA套組上運行(試樣未經稀釋或按指示稀釋)。將試樣1:100稀釋，記錄結合，且圖表中匯總之量說明稀釋因子。
參照 圖 2，未感染HeLa細胞未顯示可檢測含量之mCD40L。同樣地，經具有A52R及TK缺失之溶瘤牛痘病毒感染之HeLa細胞未顯示可檢測含量之mCD40L。經具有TK缺失及具有寡聚化結構域且插入TK基因中之融合構築體3sCD40L (鼠類)之溶瘤牛痘病毒感染之HeLa細胞顯示約400 ng/mL之較高位準之表現。
參照 圖 3，未感染HeLa細胞未顯示可檢測含量之mOX40L。同樣地，經具有A52R及TK缺失之溶瘤牛痘病毒感染之HeLa細胞未顯示可檢測含量之mOX40L。經具有TK缺失及插入TK基因中之天然mOX40L之溶瘤牛痘病毒感染之HeLa細胞顯示略增加之mOX40L表現，其中經檢測為約4500 pg/mL。經具有TK缺失及包含插入TK基因中之寡聚化結構域之融合構築體3sOX40L (鼠類)之溶瘤牛痘病毒感染之HeLa細胞具有較高含量之mOX40L表現，其中經檢測為約265,000 pg/mL mOX40L。
參照 圖 4，未感染HeLa細胞未顯示可檢測含量之m41BBL。經具有A52R及TK缺失之溶瘤牛痘病毒感染之HeLa細胞同樣未顯示可檢測含量之m41BBL。經具有TK缺失及插入TK基因中之天然m41BBL之溶瘤牛痘病毒感染之HeLa細胞顯示最小表現，其中經檢測為1.4 ng/mL。經具有TK缺失及包含插入TK基因中之寡聚化結構域之融合構築體3s41BBL (鼠類)之溶瘤牛痘病毒感染之HeLa細胞具有較高位準之41BBL表現，其中經檢測為約1500 ng/mL 41BBL。
實例 2 ：天然及骨架結構之表現
分析表現具有寡聚化結構域之TNFSF-L融合構築體的經修飾溶瘤牛痘病毒的功能效應。使用CD40L活性之SEAP報導基因分析，其中SEAP產生之量與CD40L功能活性相關。簡言之，HeLa細胞經溶瘤牛痘病毒(無CD40L)或表現包含[寡聚化結構域]-[頸部結構域]-[mCD40L]之融合構築體3sCD40L之溶瘤牛痘病毒以1之MOI進行感染。在24小時後收集經感染及未感染細胞之上清液。向96孔板中將20ul、10ul或1ul上清液一式三份添加至具有20ul培養基之孔。使用10ng/ml濃度之重組CD40L作為陽性對照。將180ul之報導基因細胞株添加至孔以達到約50,000個細胞/孔。將細胞在CO 2培育器中過夜培育。第二天，將1ml Quanti-Blue溶液添加至1ml QB緩衝液及98ml無菌水中，並將所製備試劑以180ul/孔分配至96孔板中。將20ul來自實驗板之上清液添加至具有Quanti blue溶液之板。在37℃下培育3小時後，藉由使用讀板儀/分光光度計在625 nm下量測光學密度(O.D.)測定SEAP之相對含量。結果提供於下 表 8中並可視化於 圖 5中。 表 8.
   模擬 不具有轉基因之牛痘病毒(A52R-、TK-) 具有融合至CD40L之寡聚化結構域之牛痘病毒(TK-)
20 μL 0.075 0.087 2.297
10 μL 0.088 0.039 1.617
1 μL 0.063 0.07 0.223
對照：重組CD40L (10ng/mL) 0.29765 (未顯示)
意外地，來自實例1及2之該等結果顯示，在細胞外環境中產生超過1000x功能活性TNFSF-L。特定地，單體序列即使在細胞培養中亦不產生具功能活性之三聚體，且與骨架結構域之融合導致產量顯著增加。 實例 3 ： s3CD40L 之活體內活性分析
量測如實例1中所述TNFSF-L融合構築體3sCD40L (鼠類)在小鼠中之活性。BALB/c小鼠皮下植入源自Balb/cCr小鼠(RENCA)中之腎皮質腺癌之細胞。使腫瘤生長至50-100 mm 3並利用1x10 7PFU之表現具有TK缺失(TK-)之3sCD40L融合構築體之病毒或緩衝劑對照治療。治療係經腫瘤內(IT)以單劑量遞送。追蹤腫瘤生長且一旦經量測腫瘤大於1000 mm 3，便使小鼠離開研究。腫瘤達到1000 mm 3之小鼠的總體存活率顯示於圖6中。數據指示，與利用TK-病毒或緩衝劑對照治療之彼等小鼠相比，利用TNFSF-L融合物治療之小鼠顯示更高存活機率。 實例 4 ： S3 OX40L 之功能活性
量測如實例1中所述TNFSF-L融合構築體3sOX40L (人類)之活體外活性。將HeLa細胞以1 × 10 6個細胞/孔平鋪於6孔板中。將細胞以5.0之MOI用作為陰性對照之如實例1所述表現3sOX40L融合構築體、表現m41BBL之病毒或緩衝劑對照接種。將細胞與病毒在37℃, 5% CO 2下培育3小時。自孔去除培養基並將細胞用DMEM洗滌。添加DMEM+10%FBS並將板在37℃, 5% CO 2下培育60小時。在培養基更換後60小時時收穫上清液。使用螢光素酶檢測來量測經感染細胞中之螢光素酶表現並以相對光單位(RLU)表示。 圖 7顯示在具有s3OX40L融合構築體之病毒中有較高表現。 實例 5 ： 3s41BBL 之功能活性
量測如實例1中所述TNFSF-L融合構築體3s41BBL (人類序列)之活體外活性。將HeLa細胞以4 × 10 5個細胞/孔平鋪於12孔板中。將細胞以5.0之MOI用表現3s41BBL融合構築體、表現41BBL單體、表現不相關TNFSF-L、三聚體GITRL之病毒或緩衝劑對照感染。將細胞與病毒在37℃, 5% CO 2下培育48小時。在感染後48小時時收穫上清液。使用螢光素酶檢測來量測經感染細胞中之螢光素酶表現並以相對光單位(RLU)表示。 圖 8顯示僅病毒表現之融合構築體3s41BBL係有活性的，病毒表現之41BBL單體沒有活性。 實例 6 ：利用小鼠序列 S3 OX40L 及 S3 41BBL 刺激後之 IL-2 分泌
量測經包含TNFSF-L融合構築體之病毒感染之細胞中IL-2分泌之變化。將來自小鼠脾髒之CD8 T細胞使用EasySep TM小鼠CD8+ T細胞分離套組(#19853, STEMCELL Technologies, Inc., Vancouver, Canada)進行純化。將細胞用羧基螢光黃琥珀醯亞胺基酯(CFSE)標記。然後細胞未經刺激，單獨用CD3刺激或利用以下各項刺激：CD3及CD28、重組41BBL三聚體、重組OX40L三聚體、表現3s41BBL之病毒融合構築體之病毒、表現3sOX40L之病毒融合構築體或病毒陰性對照。將細胞培育3天。使用小鼠IL-2 ELISA套組分析上清液中之IL-2分泌。所得檢測之IL-2含量顯示於 圖 9中。圖表顯示以病毒方式表現之TNFSF-L融合構築體3s41BBL及3sOX40L具有功能活性，此乃因其誘導IL-2表現。 實例 7 ：使用 3S41BBL 及 3S OX40L 骨架構築體在小鼠中之腫瘤生長抑制
為證實活體內腫瘤生長抑制(TGI)，將如實例3中預先經皮下RENCA腫瘤誘導之BALB/c小鼠利用單一IT劑量之緩衝劑對照、或1 × 10 7PFU之僅具有胸苷激酶缺失之對照牛痘病毒(HCCTKM)、表現3s41BBL之病毒或表現3sOX40L之病毒治療。初步結果指示，如圖10所示，至治療後12天，接受表現3s41BBL或3sOX40L之病毒之小鼠的平均腫瘤體積低於僅用緩衝劑或HCCTKM治療之腫瘤。 實例 8 ：使用 GITRL 骨架構築體在小鼠中之腫瘤生長抑制
為證實活體內腫瘤生長抑制(TGI)，將如實例3中預先經皮下LLC或RENCA腫瘤誘導之BALB/c小鼠利用單一IT劑量之緩衝劑對照(VFB)、1 × 10 7PFU之僅具有胸苷激酶缺失之對照牛痘病毒(HCCTKM)或表現3sGITRL之病毒治療。30天後量測LLC腫瘤，如 圖 11A中所示。17天後量測RENCA腫瘤，如 圖 11B中所示。結果指示，接受表現3sGITRL之病毒之小鼠的平均腫瘤體積低於僅用緩衝劑或對照HCCTKM治療之腫瘤。
前述描述及附圖闡釋當前之多個代表性實施例。當然，各種修改、添加及替代設計對於熟習此項技術者將變得顯而易見，而不背離本發明之範圍，本發明之範圍係由隨附申請專利範圍而非前述描述來指示。屬於申請專利範圍之等效內容之意義及範圍內之所有改變皆將涵蓋於申請專利範圍之範圍內。
本揭示內容之新穎特徵在隨附申請專利範圍中特別闡述。將藉由參考以下闡述說明性實施例之詳細說明獲得對本揭示內容之特徵及優點的更好理解，其中利用本揭示內容之原理以及附圖，其中：
圖 1圖解說明具有寡聚化結構域、頸部結構域、可選連接體及TNFSF-L結構域之實例性結構域結構之圖解。
圖 2顯示與經不表現轉基因之溶瘤牛痘病毒感染之細胞或未感染相比，CD40L支架蛋白在經表現CD40L支架蛋白之經修飾溶瘤牛痘病毒轉基因感染之細胞中之表現。Y軸說明mCD40L (以ng/mL計)且X軸說明試樣(未感染細胞、具有A52R缺失及胸苷激酶缺失之牛痘病毒及具有胸苷激酶缺失及變體CD40L插入之牛痘病毒)。
圖 3顯示mOX40L ELISA分析之結果，其中在考慮稀釋因子後將上清液稀釋100X並針對mOX40L表現進行篩選。Y軸說明mOX40L (以pg/mL計)且X軸說明試樣(未感染細胞、具有A52R缺失及胸苷激酶缺失之牛痘病毒、具有胸苷激酶缺失及天然OX40L之牛痘病毒及具有胸苷激酶缺失及變體OX40L插入之牛痘病毒)。
圖 4顯示41BBL ELISA分析之結果，其中將未經稀釋之上清液針對41BBL表現進行篩選。Y軸說明m41BBL (以ng/mL計)且X軸說明試樣(未感染細胞、具有A52R缺失及胸苷激酶缺失之牛痘病毒、具有胸苷激酶缺失及天然41BBL之牛痘病毒及具有胸苷激酶缺失及變體41BBL插入之牛痘病毒)。
圖 5顯示CD40L報導基因細胞分析結果。Y軸係OD且X軸係所用上清液之體積。試樣係未感染細胞、經具有A52R缺失及胸苷激酶缺失之牛痘病毒感染之細胞及經包含胸苷激酶缺失及變體CD40L之牛痘病毒感染之細胞。
圖 6顯示經具有TK缺失(TK-)之病毒、具有TNFSFL融合構築體(s3CD40L)之病毒或緩衝劑對照處理之小鼠中之存活機率。
圖 7顯示未感染對照細胞(緩衝劑)、經表現41BBL之病毒感染之細胞及經表現三聚體OX40L (3sOX40L)之病毒感染之細胞中之螢光素酶表現位準(RLU)。
圖 8顯示未感染對照細胞(緩衝劑)、經以下各項感染之細胞中之螢光素酶表現位準(RLU)：表現三聚體GITRL之病毒作為陰性對照、表現41BBL單體之病毒及表現三聚體41BBL (3s41BBL)之病毒。
圖 9顯示利用CD3單獨或CD3與以下各項一起刺激之CD8 T細胞中之IL-2表現位準：CD28、重組41BBL、重組OX40L、表現3s41BBL之病毒或表現3xOX40L之病毒。
圖 10顯示具有皮下RENCA腫瘤之BALB/c小鼠中之平均腫瘤體積，其中y軸上之體積(以mm 3計)係以x軸上之治療後天數量測。體積係在利用緩衝劑對照、具有胸苷激酶缺失之對照牛痘病毒(HCCTKM)、表現3s41BBL之病毒或表現3sOX40L之病毒治療後0、5、8及12天時量測。與陰性對照相比，在包含表現配體3s41BBL或3sOX40L之治療組中之腫瘤體積在5、8及12天後顯示較小腫瘤體積。
圖 11A顯示具有皮下Lewis肺癌(LLC)腫瘤之BALB/c小鼠在利用緩衝劑對照、具有胸苷激酶缺失之對照牛痘病毒(HCCTKM)或表現3sGITRL之病毒治療30天後之腫瘤體積(以mm 3計)之散佈圖。指示每一組在30天後之平均腫瘤體積，其顯示在緩衝劑對照組中為約1400 mm 3，HCCTKM組為約750 mm 3，且3sGITRL組＜100 mm 3。
圖 11B顯示具有皮下RENCA腫瘤之BALB/c小鼠在利用緩衝劑對照、具有胸苷激酶缺失之對照牛痘病毒(HCCTKM)或表現3sGITRL之病毒治療17天後之腫瘤體積(以mm 3計)之散佈圖。指示每一組在17天後之平均腫瘤體積，其顯示在緩衝劑對照組中為約800 mm 3，HCCTKM組為約350 mm 3，且3sGITRL組為約250 mm 3。 

          <![CDATA[<110> 美商凱立凡爾免疫治療股份有限公司(KALIVIR IMMUNOTHERAPEUTICS, INC.)]]>
          <![CDATA[<120> TNFSF-L融合蛋白及其用途]]>
          <![CDATA[<130> 199249-715851]]>
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                          85                  90                  95      
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          Gly Leu Trp Leu Lys Pro Ser Ser Gly Ser Glu Arg Ile Leu Leu Lys 
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                          165                 170                 175     
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                  195                 200                 205             
          Phe Gly Leu Leu Lys Leu 
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          1               5                   10                  15      
          Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu 
                      20                  25                  30          
          Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala 
                  35                  40                  45              
          Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val 
              50                  55                  60                  
          Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln 
          65                  70                  75                  80  
          Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp 
                          85                  90                  95      
          Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln 
                      100                 105                 110         
          Gly Arg Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu 
                  115                 120                 125             
          His Thr Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala 
              130                 135                 140                 
          Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu 
          145                 150                 155                 160 
          Pro Ser Pro Arg Ser Glu 
                          165     
          <![CDATA[<210> 6]]>
          <![CDATA[<211> 240]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 智人]]>
          <![CDATA[<400> 6]]>
          Met Glu Glu Ser Val Val Arg Pro Ser Val Phe Val Val Asp Gly Gln 
          1               5                   10                  15      
          Thr Asp Ile Pro Phe Thr Arg Leu Gly Arg Ser His Arg Arg Gln Ser 
                      20                  25                  30          
          Cys Ser Val Ala Arg Val Gly Leu Gly Leu Leu Leu Leu Leu Met Gly 
                  35                  40                  45              
          Ala Gly Leu Ala Val Gln Gly Trp Phe Leu Leu Gln Leu His Trp Arg 
              50                  55                  60                  
          Leu Gly Glu Met Val Thr Arg Leu Pro Asp Gly Pro Ala Gly Ser Trp 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Gln Leu Ile Gln Glu Arg Arg Ser His Glu Val Asn Pro Ala Ala 
                          85                  90                  95      
          His Leu Thr Gly Ala Asn Ser Ser Leu Thr Gly Ser Gly Gly Pro Leu 
                      100                 105                 110         
          Leu Trp Glu Thr Gln Leu Gly Leu Ala Phe Leu Arg Gly Leu Ser Tyr 
                  115                 120                 125             
          His Asp Gly Ala Leu Val Val Thr Lys Ala Gly Tyr Tyr Tyr Thr Tyr 
              130                 135                 140                 
          Ser Lys Val Gln Leu Gly Gly Val Gly Cys Pro Leu Gly Leu Ala Ser 
          145                 150                 155                 160 
          Thr Ile Thr His Gly Leu Tyr Lys Arg Thr Pro Arg Tyr Pro Glu Glu 
                          165                 170                 175     
          Leu Glu Leu Leu Val Ser Gln Gln Ser Pro Cys Gly Arg Ala Thr Ser 
                      180                 185                 190         
          Ser Ser Arg Val Trp Trp Asp Ser Ser Phe Leu Gly Gly Val Val His 
                  195                 200                 205             
          Leu Glu Ala Gly Glu Lys Val Val Val Arg Val Leu Asp Glu Arg Leu 
              210                 215                 220                 
          Val Arg Leu Arg Asp Gly Thr Arg Ser Tyr Phe Gly Ala Phe Met Val 
          225                 230                 235                 240 
          <![CDATA[<210> 7]]>
          <![CDATA[<211> 132]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 鼷鼠屬]]>
          <![CDATA[<400> 7]]>
          Thr Ser Leu Lys Pro Thr Ala Ile Glu Ser Cys Met Val Lys Phe Glu 
          1               5                   10                  15      
          Leu Ser Ser Ser Lys Trp His Met Thr Ser Pro Lys Pro His Cys Val 
                      20                  25                  30          
          Asn Thr Thr Ser Asp Gly Lys Leu Lys Ile Leu Gln Ser Gly Thr Tyr 
                  35                  40                  45              
          Leu Ile Tyr Gly Gln Val Ile Pro Val Asp Lys Lys Tyr Ile Lys Asp 
              50                  55                  60                  
          Asn Ala Pro Phe Val Val Gln Ile Tyr Lys Lys Asn Asp Val Leu Gln 
          65                  70                  75                  80  
          Thr Leu Met Asn Asp Phe Gln Ile Leu Pro Ile Gly Gly Val Tyr Glu 
                          85                  90                  95      
          Leu His Ala Gly Asp Asn Ile Tyr Leu Lys Phe Asn Ser Lys Asp His 
                      100                 105                 110         
          Ile Gln Lys Thr Asn Thr Tyr Trp Gly Ile Ile Leu Met Pro Asp Leu 
                  115                 120                 125             
          Pro Phe Ile Ser 
              130         
          <![CDATA[<210> 8]]>
          <![CDATA[<211> 132]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 智人]]>
          <![CDATA[<400> 8]]>
          Thr Ser Leu Lys Pro Thr Ala Ile Glu Ser Cys Met Val Lys Phe Glu 
          1               5                   10                  15      
          Leu Ser Ser Ser Lys Trp His Met Thr Ser Pro Lys Pro His Cys Val 
                      20                  25                  30          
          Asn Thr Thr Ser Asp Gly Lys Leu Lys Ile Leu Gln Ser Gly Thr Tyr 
                  35                  40                  45              
          Leu Ile Tyr Gly Gln Val Ile Pro Val Asp Lys Lys Tyr Ile Lys Asp 
              50                  55                  60                  
          Asn Ala Pro Phe Val Val Gln Ile Tyr Lys Lys Asn Asp Val Leu Gln 
          65                  70                  75                  80  
          Thr Leu Met Asn Asp Phe Gln Ile Leu Pro Ile Gly Gly Val Tyr Glu 
                          85                  90                  95      
          Leu His Ala Gly Asp Asn Ile Tyr Leu Lys Phe Asn Ser Lys Asp His 
                      100                 105                 110         
          Ile Gln Lys Thr Asn Thr Tyr Trp Gly Ile Ile Leu Met Pro Asp Leu 
                  115                 120                 125             
          Pro Phe Ile Ser 
              130         
          <![CDATA[<210> 9]]>
          <![CDATA[<211> 52]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成多肽      ]]>
          <![CDATA[<400> 9]]>
          Met Leu Leu Phe Leu Leu Ser Ala Leu Val Leu Leu Thr Gln Pro Leu 
          1               5                   10                  15      
          Gly Tyr Leu Glu Ala Glu Met Lys Thr Tyr Ser His Arg Thr Met Pro 
                      20                  25                  30          
          Ser Ala Cys Thr Leu Val Met Cys Ser Ser Val Glu Ser Gly Leu Pro 
                  35                  40                  45              
          Gly Arg Asp Gly 
              50          
          <![CDATA[<210> 10]]>
          <![CDATA[<211> 83]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成多肽      ]]>
          <![CDATA[<400> 10]]>
          Met Leu Leu Phe Leu Leu Ser Ala Leu Val Leu Leu Thr Gln Pro Leu 
          1               5                   10                  15      
          Gly Tyr Leu Glu Ala Glu Met Lys Thr Tyr Ser His Arg Thr Met Pro 
                      20                  25                  30          
          Ser Ala Cys Thr Leu Val Met Cys Ser Ser Val Glu Ser Gly Leu Pro 
                  35                  40                  45              
          Gly Arg Asp Gly Ser Asp Val Ala Ser Leu Arg Gln Gln Val Glu Ala 
              50                  55                  60                  
          Leu Gln Gly Gln Val Gln His Leu Gln Ala Ala Phe Ser Gln Tyr Lys 
          65                  70                  75                  80  
          Lys Val Glu 
          <![CDATA[<210> 11]]>
          <![CDATA[<211> 249]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成多核苷酸]]>
          <![CDATA[<400> 11]]>
          atgctgctct tcctcctctc tgcactggtc ctgctcacac agcccctggg ctacctggaa       60
          gcagaaatga agacctactc ccacagaaca atgcccagtg cttgcaccct ggtcatgtgt      120
          agctcagtgg agagtggcct gcctggtcgc gatggatctg atgttgcttc tctgaggcag      180
          caggttgagg ccttacaggg acaagtacag cacctccagg ctgctttctc tcagtataag      240
          aaagtggag                                                              249
          <![CDATA[<210> 12]]>
          <![CDATA[<211> 3]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成肽]]>
          <![CDATA[<400> 12]]>
          Gly Ser Gly 
          1           
          <![CDATA[<210> 13]]>
          <![CDATA[<211> 54]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成多肽]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221> SITE]]>
          <![CDATA[<222> (1)..(18) ]]>
          <![CDATA[<223> 此區域可涵蓋0-6個「Gly Ser Ser」重複單元]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221> SITE]]>
          <![CDATA[<222> (19)..(36) ]]>
          <![CDATA[<223> ]]>此區域可涵蓋0-6個「Ser Ser Gly」重複單元      
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221> SITE]]>
          <![CDATA[<222> (37)..(54) ]]>
          <![CDATA[<223> 此區域可涵蓋0-6個「Gly Ser Gly」重複單元]]>
          <![CDATA[<400> 13]]>
          Gly Ser Ser Gly Ser Ser Gly Ser Ser Gly Ser Ser Gly Ser Ser Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Ser Ser Ser Gly Ser Ser Gly Ser Ser Gly Ser Ser Gly Ser Ser 
                      20                  25                  30          
          Gly Ser Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly 
                  35                  40                  45              
          Gly Ser Gly Gly Ser Gly 
              50                  
          <![CDATA[<210> 14]]>
          <![CDATA[<211> 300]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 14]]>
          Met Leu Leu Phe Leu Leu Ser Ala Leu Val Leu Leu Thr Gln Pro Leu 
          1               5                   10                  15      
          Gly Tyr Leu Glu Ala Glu Met Lys Thr Tyr Ser His Arg Thr Met Pro 
                      20                  25                  30          
          Ser Ala Cys Thr Leu Val Met Cys Ser Ser Val Glu Ser Gly Leu Pro 
                  35                  40                  45              
          Gly Arg Asp Gly Ser Asp Val Ala Ser Leu Arg Gln Gln Val Glu Ala 
              50                  55                  60                  
          Leu Gln Gly Gln Val Gln His Leu Gln Ala Ala Phe Ser Gln Tyr Lys 
          65                  70                  75                  80  
          Lys Val Glu Gly Ser Gly His Arg Arg Leu Asp Lys Val Glu Glu Glu 
                          85                  90                  95      
          Val Asn Leu His Glu Asp Phe Val Phe Ile Lys Lys Leu Lys Arg Cys 
                      100                 105                 110         
          Asn Lys Gly Glu Gly Ser Leu Ser Leu Leu Asn Cys Glu Glu Met Arg 
                  115                 120                 125             
          Arg Gln Phe Glu Asp Leu Val Lys Asp Ile Thr Leu Asn Lys Glu Glu 
              130                 135                 140                 
          Lys Lys Glu Asn Ser Phe Glu Met Gln Arg Gly Asp Glu Asp Pro Gln 
          145                 150                 155                 160 
          Ile Ala Ala His Val Val Ser Glu Ala Asn Ser Asn Ala Ala Ser Val 
                          165                 170                 175     
          Leu Gln Trp Ala Lys Lys Gly Tyr Tyr Thr Met Lys Ser Asn Leu Val 
                      180                 185                 190         
          Met Leu Glu Asn Gly Lys Gln Leu Thr Val Lys Arg Glu Gly Leu Tyr 
                  195                 200                 205             
          Tyr Val Tyr Thr Gln Val Thr Phe Cys Ser Asn Arg Glu Pro Ser Ser 
              210                 215                 220                 
          Gln Arg Pro Phe Ile Val Gly Leu Trp Leu Lys Pro Ser Ser Gly Ser 
          225                 230                 235                 240 
          Glu Arg Ile Leu Leu Lys Ala Ala Asn Thr His Ser Ser Ser Gln Leu 
                          245                 250                 255     
          Cys Glu Gln Gln Ser Val His Leu Gly Gly Val Phe Glu Leu Gln Ala 
                      260                 265                 270         
          Gly Ala Ser Val Phe Val Asn Val Thr Glu Ala Ser Gln Val Ile His 
                  275                 280                 285             
          Arg Val Gly Phe Ser Ser Phe Gly Leu Leu Lys Leu 
              290                 295                 300 
          <![CDATA[<210> 15]]>
          <![CDATA[<211> 232]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 15]]>
          Met Leu Leu Phe Leu Leu Ser Ala Leu Val Leu Leu Thr Gln Pro Leu 
          1               5                   10                  15      
          Gly Tyr Leu Glu Ala Glu Met Lys Thr Tyr Ser His Arg Thr Met Pro 
                      20                  25                  30          
          Ser Ala Cys Thr Leu Val Met Cys Ser Ser Val Glu Ser Gly Leu Pro 
                  35                  40                  45              
          Gly Arg Asp Gly Ser Asp Val Ala Ser Leu Arg Gln Gln Val Glu Ala 
              50                  55                  60                  
          Leu Gln Gly Gln Val Gln His Leu Gln Ala Ala Phe Ser Gln Tyr Lys 
          65                  70                  75                  80  
          Lys Val Glu Ser Ser Ser Ser Pro Ala Lys Asp Pro Pro Ile Gln Arg 
                          85                  90                  95      
          Leu Arg Gly Ala Val Thr Arg Cys Glu Asp Gly Gln Leu Phe Ile Ser 
                      100                 105                 110         
          Ser Tyr Lys Asn Glu Tyr Gln Thr Met Glu Val Gln Asn Asn Ser Val 
                  115                 120                 125             
          Val Ile Lys Cys Asp Gly Leu Tyr Ile Ile Tyr Leu Lys Gly Ser Phe 
              130                 135                 140                 
          Phe Gln Glu Val Lys Ile Asp Leu His Phe Arg Glu Asp His Asn Pro 
          145                 150                 155                 160 
          Ile Ser Ile Pro Met Leu Asn Asp Gly Arg Arg Ile Val Phe Thr Val 
                          165                 170                 175     
          Val Ala Ser Leu Ala Phe Lys Asp Lys Val Tyr Leu Thr Val Asn Ala 
                      180                 185                 190         
          Pro Asp Thr Leu Cys Glu His Leu Gln Ile Asn Asp Gly Glu Leu Ile 
                  195                 200                 205             
          Val Val Gln Leu Thr Pro Gly Tyr Cys Ala Pro Glu Gly Ser Tyr His 
              210                 215                 220                 
          Ser Thr Val Asn Gln Val Pro Leu 
          225                 230         
          <![CDATA[<210> 16]]>
          <![CDATA[<211> 261]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 16]]>
          Met Leu Leu Phe Leu Leu Ser Ala Leu Val Leu Leu Thr Gln Pro Leu 
          1               5                   10                  15      
          Gly Tyr Leu Glu Ala Glu Met Lys Thr Tyr Ser His Arg Thr Met Pro 
                      20                  25                  30          
          Ser Ala Cys Thr Leu Val Met Cys Ser Ser Val Glu Ser Gly Leu Pro 
                  35                  40                  45              
          Gly Arg Asp Gly Ser Asp Val Ala Ser Leu Arg Gln Gln Val Glu Ala 
              50                  55                  60                  
          Leu Gln Gly Gln Val Gln His Leu Gln Ala Ala Phe Ser Gln Tyr Lys 
          65                  70                  75                  80  
          Lys Val Glu Ser Ser His Ile Gly Cys Pro Asn Thr Thr Gln Gln Gly 
                          85                  90                  95      
          Ser Pro Val Phe Ala Lys Leu Leu Ala Lys Asn Gln Ala Ser Leu Cys 
                      100                 105                 110         
          Asn Thr Thr Leu Asn Trp His Ser Gln Asp Gly Ala Gly Ser Ser Tyr 
                  115                 120                 125             
          Leu Ser Gln Gly Leu Arg Tyr Glu Glu Asp Lys Lys Glu Leu Val Val 
              130                 135                 140                 
          Asp Ser Pro Gly Leu Tyr Tyr Val Phe Leu Glu Leu Lys Leu Ser Pro 
          145                 150                 155                 160 
          Thr Phe Thr Asn Thr Gly His Lys Val Gln Gly Trp Val Ser Leu Val 
                          165                 170                 175     
          Leu Gln Ala Lys Pro Gln Val Asp Asp Phe Asp Asn Leu Ala Leu Thr 
                      180                 185                 190         
          Val Glu Leu Phe Pro Cys Ser Met Glu Asn Lys Leu Val Asp Arg Ser 
                  195                 200                 205             
          Trp Ser Gln Leu Leu Leu Leu Lys Ala Gly His Arg Leu Ser Val Gly 
              210                 215                 220                 
          Leu Arg Ala Tyr Leu His Gly Ala Gln Asp Ala Tyr Arg Asp Trp Glu 
          225                 230                 235                 240 
          Leu Ser Tyr Pro Asn Thr Thr Ser Phe Gly Leu Phe Leu Val Lys Pro 
                          245                 250                 255     
          Asp Asn Pro Trp Glu 
                      260     
          <![CDATA[<210> 17]]>
          <![CDATA[<211> 218]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 17]]>
          Met Leu Leu Phe Leu Leu Ser Ala Leu Val Leu Leu Thr Gln Pro Leu 
          1               5                   10                  15      
          Gly Tyr Leu Glu Ala Glu Met Lys Thr Tyr Ser His Arg Thr Met Pro 
                      20                  25                  30          
          Ser Ala Cys Thr Leu Val Met Cys Ser Ser Val Glu Ser Gly Leu Pro 
                  35                  40                  45              
          Gly Arg Asp Gly Ser Asp Val Ala Ser Leu Arg Gln Gln Val Glu Ala 
              50                  55                  60                  
          Leu Gln Gly Gln Val Gln His Leu Gln Ala Ala Phe Ser Gln Tyr Lys 
          65                  70                  75                  80  
          Lys Val Glu Gly Ser Gly Thr Ser Leu Lys Pro Thr Ala Ile Glu Ser 
                          85                  90                  95      
          Cys Met Val Lys Phe Glu Leu Ser Ser Ser Lys Trp His Met Thr Ser 
                      100                 105                 110         
          Pro Lys Pro His Cys Val Asn Thr Thr Ser Asp Gly Lys Leu Lys Ile 
                  115                 120                 125             
          Leu Gln Ser Gly Thr Tyr Leu Ile Tyr Gly Gln Val Ile Pro Val Asp 
              130                 135                 140                 
          Lys Lys Tyr Ile Lys Asp Asn Ala Pro Phe Val Val Gln Ile Tyr Lys 
          145                 150                 155                 160 
          Lys Asn Asp Val Leu Gln Thr Leu Met Asn Asp Phe Gln Ile Leu Pro 
                          165                 170                 175     
          Ile Gly Gly Val Tyr Glu Leu His Ala Gly Asp Asn Ile Tyr Leu Lys 
                      180                 185                 190         
          Phe Asn Ser Lys Asp His Ile Gln Lys Thr Asn Thr Tyr Trp Gly Ile 
                  195                 200                 205             
          Ile Leu Met Pro Asp Leu Pro Phe Ile Ser 
              210                 215             
          <![CDATA[<210> 18]]>
          <![CDATA[<211> 212]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 18]]>
          Met Leu Leu Phe Leu Leu Ser Ala Leu Val Leu Leu Thr Gln Pro Leu 
          1               5                   10                  15      
          Gly Tyr Leu Glu Ala Glu Met Lys Thr Tyr Ser His Arg Thr Met Pro 
                      20                  25                  30          
          Ser Ala Cys Thr Leu Val Met Cys Ser Ser Val Glu Ser Gly Leu Pro 
                  35                  40                  45              
          Gly Arg Asp Gly Ser Asp Val Ala Ser Leu Arg Gln Gln Val Glu Ala 
              50                  55                  60                  
          Leu Gln Gly Gln Val Gln His Leu Gln Ala Ala Phe Ser Gln Tyr Lys 
          65                  70                  75                  80  
          Lys Val Glu Gly Ser Gly Arg Ile Gln Ser Ile Lys Val Gln Phe Thr 
                          85                  90                  95      
          Glu Tyr Lys Lys Glu Lys Gly Phe Ile Leu Thr Ser Gln Lys Glu Asp 
                      100                 105                 110         
          Glu Ile Met Lys Val Gln Asn Asn Ser Val Ile Ile Asn Cys Asp Gly 
                  115                 120                 125             
          Phe Tyr Leu Ile Ser Leu Lys Gly Tyr Phe Ser Gln Glu Val Asn Ile 
              130                 135                 140                 
          Ser Leu His Tyr Gln Lys Asp Glu Glu Pro Leu Phe Gln Leu Lys Lys 
          145                 150                 155                 160 
          Val Arg Ser Val Asn Ser Leu Met Val Ala Ser Leu Thr Tyr Lys Asp 
                          165                 170                 175     
          Lys Val Tyr Leu Asn Val Thr Thr Asp Asn Thr Ser Leu Asp Asp Phe 
                      180                 185                 190         
          His Val Asn Gly Gly Glu Leu Ile Leu Ile His Gln Asn Pro Gly Glu 
                  195                 200                 205             
          Phe Cys Val Leu 
              210         
          <![CDATA[<210> 19]]>
          <![CDATA[<211> 252]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 19]]>
          Met Leu Leu Phe Leu Leu Ser Ala Leu Val Leu Leu Thr Gln Pro Leu 
          1               5                   10                  15      
          Gly Tyr Leu Glu Ala Glu Met Lys Thr Tyr Ser His Arg Thr Met Pro 
                      20                  25                  30          
          Ser Ala Cys Thr Leu Val Met Cys Ser Ser Val Glu Ser Gly Leu Pro 
                  35                  40                  45              
          Gly Arg Asp Gly Ser Asp Val Ala Ser Leu Arg Gln Gln Val Glu Ala 
              50                  55                  60                  
          Leu Gln Gly Gln Val Gln His Leu Gln Ala Ala Phe Ser Gln Tyr Lys 
          65                  70                  75                  80  
          Lys Val Glu Gly Ser Gly Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln 
                          85                  90                  95      
          Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly 
                      100                 105                 110         
          Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr 
                  115                 120                 125             
          Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln 
              130                 135                 140                 
          Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser 
          145                 150                 155                 160 
          Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala 
                          165                 170                 175     
          Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn 
                      180                 185                 190         
          Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln 
                  195                 200                 205             
          Arg Leu Gly Val His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp 
              210                 215                 220                 
          Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro 
          225                 230                 235                 240 
          Glu Ile Pro Ala Gly Leu Pro Ser Pro Arg Ser Glu 
                          245                 250         
          <![CDATA[<210> 20]]>
          <![CDATA[<211> 211]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<400> 20]]>
          Met Leu Leu Phe Leu Leu Ser Ala Leu Val Leu Leu Thr Gln Pro Leu 
          1               5                   10                  15      
          Gly Tyr Leu Glu Ala Glu Met Lys Thr Tyr Ser His Arg Thr Met Pro 
                      20                  25                  30          
          Ser Ala Cys Thr Leu Val Met Cys Ser Ser Val Glu Ser Gly Leu Pro 
                  35                  40                  45              
          Gly Arg Asp Gly Ser Asp Val Ala Ser Leu Arg Gln Gln Val Glu Ala 
              50                  55                  60                  
          Leu Gln Gly Gln Val Gln His Leu Gln Ala Ala Phe Ser Gln Tyr Lys 
          65                  70                  75                  80  
          Lys Val Glu Gly Ser Gly Thr Ala Lys Glu Pro Cys Met Ala Lys Phe 
                          85                  90                  95      
          Gly Pro Leu Pro Ser Lys Trp Gln Met Ala Ser Ser Glu Pro Pro Cys 
                      100                 105                 110         
          Val Asn Lys Val Ser Asp Trp Lys Leu Glu Ile Leu Gln Asn Gly Leu 
                  115                 120                 125             
          Tyr Leu Ile Tyr Gly Gln Val Ala Pro Asn Ala Asn Tyr Asn Asp Val 
              130                 135                 140                 
          Ala Pro Phe Glu Val Arg Leu Tyr Lys Asn Lys Asp Met Ile Gln Thr 
          145                 150                 155                 160 
          Leu Thr Asn Lys Ser Lys Ile Gln Asn Val Gly Gly Thr Tyr Glu Leu 
                          165                 170                 175     
          His Val Gly Asp Thr Ile Asp Leu Ile Phe Asn Ser Glu His Gln Val 
                      180                 185                 190         
          Leu Lys Asn Asn Thr Tyr Trp Gly Ile Ile Leu Leu Ala Asn Pro Gln 
                  195                 200                 205             
          Phe Ile Ser 
              210     
          <![CDATA[<210> 21]]>
          <![CDATA[<211> 903]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成多核苷酸]]>
          <![CDATA[<400> 21]]>
          atgctgctct tcctcctctc tgcactggtc ctgctcacac agcccctggg ctacctggaa       60
          gcagaaatga agacctactc ccacagaaca atgcccagtg cttgcaccct ggtcatgtgt      120
          agctcagtgg agagtggcct gcctggtcgc gatggatctg atgttgcttc tctgaggcag      180
          caggttgagg ccttacaggg acaagtacag cacctccagg ctgctttctc tcagtataag      240
          aaagtggagg gatccggtca caggcgtctg gacaaggtcg aagaggaagt aaaccttcat      300
          gaagattttg tattcataaa aaagctaaag agatgcaaca aaggagaagg atctttatcc      360
          ttgctgaact gtgaggagat gagaaggcaa tttgaagacc ttgtcaagga tataacgtta      420
          aacaaagaag agaaaaaaga aaacagcttt gaaatgcaaa gaggtgatga ggatcctcaa      480
          attgcagcac acgttgtaag cgaagccaac agtaatgcag catccgttct acagtgggcc      540
          aagaaaggat attataccat gaaaagcaac ttggtaatgc ttgaaaatgg gaaacagctg      600
          acggttaaaa gagaaggact ctattatgtc tacactcaag tcaccttctg ctctaatcgg      660
          gagccttcga gtcaacgccc attcatcgtc ggcctctggc tgaagcccag cagtggatct      720
          gagagaatct tactcaaggc ggcaaatacc cacagttcct cccagctttg cgagcagcag      780
          tctgttcact tgggcggagt gtttgaatta caagctggtg cttctgtgtt tgtcaacgtg      840
          actgaagcaa gccaagtgat ccacagagtt ggcttctcat cttttggctt actcaaactc      900
          tga                                                                    903
          <![CDATA[<210> 22]]>
          <![CDATA[<211> 699]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>]]> 人工序列之描述：合成多核苷酸
          <![CDATA[<400> 22]]>
          atgctgctct tcctcctctc tgcactggtc ctgctcacac agcccctggg ctacctggaa       60
          gcagaaatga agacctactc ccacagaaca atgcccagtg cttgcaccct ggtcatgtgt      120
          agctcagtgg agagcggcct gcctggtcgc gatggatctg atgttgcttc tctgaggcag      180
          caggttgagg ccttacaggg acaagtacag cacctccagg ctgctttctc tcagtataag      240
          aaagtagaat catcttcctc tccggcaaag gaccctccaa tccaaagact cagaggagca      300
          gttaccagat gtgaggatgg gcaactattc atcagctcat acaagaatga gtatcaaact      360
          atggaggtgc agaacaattc ggttgtcatc aagtgcgatg ggctttatat catctacctg      420
          aagggctcct ttttccagga ggtcaagatt gaccttcatt tccgggagga tcataatccc      480
          atctctattc caatgctgaa cgatggtcga aggattgtct tcactgtggt ggcctctttg      540
          gctttcaaag ataaagttta cctgactgta aatgctcctg atactctctg cgaacacctc      600
          cagataaatg atggggagct gattgttgtc cagctaacgc ctggatactg tgctcctgaa      660
          ggatcttacc acagcactgt gaaccaagta ccactgtga                             699
          <![CDATA[<210> 23]]>
          <![CDATA[<211> 786]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成多核苷酸]]>
          <![CDATA[<400> 23]]>
          atgctgctct tcctcctctc tgcactggtc ctgctcacac agcccctggg ctacctggaa       60
          gcagaaatga agacctactc ccacagaaca atgcccagtg cttgcaccct ggtcatgtgt      120
          agctcagtgg agagtggcct gcctggtcgc gatggatctg atgttgcttc tctgaggcag      180
          caggttgagg ccttacaggg acaagtacag cacctccagg ctgctttctc tcagtataag      240
          aaagtagaat catcccacat tggctgcccc aacactacac aacagggctc tcctgtgttc      300
          gccaagctac tggctaaaaa ccaagcatcg ttgtgcaata caactctgaa ctggcacagc      360
          caagatggag ctgggtcttc atacctatct caaggtctga ggtacgaaga agacaaaaag      420
          gagttggtgg tagacagtcc cgggctctac tacgtatttt tggaactgaa gctcagtcca      480
          acattcacaa acacaggcca caaggtgcag ggctgggtct ctcttgtttt gcaagcaaag      540
          cctcaggtag atgactttga caacttggcc ctgacagtgg aactgttccc ttgctccatg      600
          gagaacaagt tagtggaccg ttcctggagt caactgttgc tcctgaaggc tggccaccgc      660
          ctcagtgtgg gtctgagggc ttatctgcat ggagcccagg atgcatacag agactgggag      720
          ctgtcttatc ccaacaccac cagctttgga ctctttcttg tgaaacccga caacccatgg      780
          gaatga                                                                 786
          <![CDATA[<210> 24]]>
          <![CDATA[<211> 657]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          atgctgctct tcctcctctc tgcactggtc ctgctcacac agcccctggg ctacctggaa       60
          gcagaaatga agacctactc ccacagaaca atgcccagtg cttgcaccct ggtcatgtgt      120
          agctcagtgg agagtggcct gcctggtcgc gatggatctg atgttgcttc tctgaggcag      180
          caggttgagg ccttacaggg acaagtacag cacctccagg ctgctttctc tcagtataag      240
          aaagtggagg gatccggtac ttcactcaag ccaactgcca tcgagtcctg catggttaag      300
          tttgaactat catcctcaaa atggcacatg acatctccca aacctcactg tgtgaatacg      360
          acatctgatg ggaagctgaa gatactgcag agtggcacat atttaatcta cggccaagtg      420
          attcctgtgg ataagaaata cataaaagac aatgccccct tcgtagtaca gatatataaa      480
          aagaatgatg tcctacaaac tctaatgaat gattttcaaa tcttgcctat aggaggggtt      540
          tatgaactgc atgctggaga taacatatat ctgaagttca actctaaaga ccatattcag      600
          aaaactaaca catactgggg gatcatctta atgcctgatc taccattcat ctcttag         657
          <![CDATA[<210> 25]]>
          <![CDATA[<211> 639]]>
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          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成多核苷酸]]>
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          atgctgctct tcctcctctc tgcactggtc ctgctcacac agcccctggg ctacctggaa       60
          gcagaaatga agacctactc ccacagaaca atgcccagtg cttgcaccct ggtcatgtgt      120
          agctcagtgg agagtggcct gcctggtcgc gatggatctg atgttgcttc tctgaggcag      180
          caggttgagg ccttacaggg acaagtacag cacctccagg ctgctttctc tcagtataag      240
          aaagtggagg gatccggtcg aattcaaagt atcaaagtac aatttaccga atataagaag      300
          gagaaaggtt tcatcctcac ttcccaaaag gaggatgaaa tcatgaaggt gcagaacaac      360
          tcagtcatca tcaactgtga tgggttttat ctcatctccc tgaagggcta cttctcccag      420
          gaagtcaaca ttagccttca ttaccagaag gatgaggagc ccctcttcca actgaagaag      480
          gtcaggtctg tcaactcctt gatggtggcc tctctgactt acaaagacaa agtctacttg      540
          aatgtgacca ctgacaatac ctccctggat gacttccatg tgaatggcgg agaactgatt      600
          cttatccatc aaaatcctgg tgaattctgt gtcctttga                             639
          <![CDATA[<210> 26]]>
          <![CDATA[<211> 715]]>
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          <![CDATA[<400> 26]]>
          atgctgctct tcctcctctc tgcactggtc ctgctcacac agcccctggg ctacctggaa       60
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          caggttgagg ccttacaggg acaagtacag cacctccagg ctgctttctc tcagtataag      240
          aaagtgtgtt ctgctgatcg atgggcccct gagctggtac agtgacccag gcctggcagg      300
          cgtgtccctg acggggggcc tgagctacaa agaggacacg aaggagctgg tggtggccaa      360
          ggctggagtc tactatgtct tctttcaact agagctgcgg cgcgtggtgg ccggcgaggg      420
          ctcaggctcc gtttcacttg cgctgcacct gcagccactg cgctctgctg ctggggccgc      480
          cgccctggct ttgaccgtgg acctgccacc cgcctcctcc gaggctcgga actcggcctt      540
          cggtttccag ggccgcttgc tgcacctgag tgccggccag cgcctgggcg tccatcttca      600
          cactgaggcc agggcacgcc atgcctggca gcttacccag ggcgccacag tcttgggact      660
          cttccgggtg acccccgaaa tcccagccgg actcccttca ccgaggtcgg aataa           715
          <![CDATA[<210> 27]]>
          <![CDATA[<211> 636]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成多核苷酸]]>
          <![CDATA[<400> 27]]>
          atgctgctct tcctcctctc tgcactggtc ctgctcacac agcccctggg ctacctggaa       60
          gcagaaatga agacctactc ccacagaaca atgcccagtg cttgcaccct ggtcatgtgt      120
          agctcagtgg agagtggcct gcctggtcgc gatggatctg atgttgcttc tctgaggcag      180
          caggttgagg ccttacaggg acaagtacag cacctccagg ctgctttctc tcagtataag      240
          aaagtggagg gatccggtac tgctaaggag ccctgtatgg ctaagtttgg accattaccc      300
          tcaaaatggc aaatggcatc ttctgaacct ccttgcgtga ataaggtgtc tgactggaag      360
          ctggagatac ttcagaatgg cttatattta atttatggcc aagtggctcc caatgcaaac      420
          tacaatgatg tagctccttt tgaggtgcgg ctgtataaaa acaaagacat gatacaaact      480
          ctaacaaaca aatctaaaat ccaaaatgta ggagggactt atgaattgca tgttggggac      540
          accatagact tgatattcaa ctctgagcat caggttctaa aaaataatac atactggggt      600
          atcattttac tagcaaatcc ccaattcatc tcctag                                636
          <![CDATA[<210> 28]]>
          <![CDATA[<211> 198]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 28]]>
          Met Glu Gly Glu Gly Val Gln Pro Leu Asp Glu Asn Leu Glu Asn Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Arg Pro Arg Phe Lys Trp Lys Lys Thr Leu Arg Leu Val Val Ser 
                      20                  25                  30          
          Gly Ile Lys Gly Ala Gly Met Leu Leu Cys Phe Ile Tyr Val Cys Leu 
                  35                  40                  45              
          Gln Leu Ser Ser Ser Pro Ala Lys Asp Pro Pro Ile Gln Arg Leu Arg 
              50                  55                  60                  
          Gly Ala Val Thr Arg Cys Glu Asp Gly Gln Leu Phe Ile Ser Ser Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Lys Asn Glu Tyr Gln Thr Met Glu Val Gln Asn Asn Ser Val Val Ile 
                          85                  90                  95      
          Lys Cys Asp Gly Leu Tyr Ile Ile Tyr Leu Lys Gly Ser Phe Phe Gln 
                      100                 105                 110         
          Glu Val Lys Ile Asp Leu His Phe Arg Glu Asp His Asn Pro Ile Ser 
                  115                 120                 125             
          Ile Pro Met Leu Asn Asp Gly Arg Arg Ile Val Phe Thr Val Val Ala 
              130                 135                 140                 
          Ser Leu Ala Phe Lys Asp Lys Val Tyr Leu Thr Val Asn Ala Pro Asp 
          145                 150                 155                 160 
          Thr Leu Cys Glu His Leu Gln Ile Asn Asp Gly Glu Leu Ile Val Val 
                          165                 170                 175     
          Gln Leu Thr Pro Gly Tyr Cys Ala Pro Glu Gly Ser Tyr His Ser Thr 
                      180                 185                 190         
          Val Asn Gln Val Pro Leu 
                  195             
          <![CDATA[<210> 29]]>
          <![CDATA[<211> 309]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 29]]>
          Met Asp Gln His Thr Leu Asp Val Glu Asp Thr Ala Asp Ala Arg His 
          1               5                   10                  15      
          Pro Ala Gly Thr Ser Cys Pro Ser Asp Ala Ala Leu Leu Arg Asp Thr 
                      20                  25                  30          
          Gly Leu Leu Ala Asp Ala Ala Leu Leu Ser Asp Thr Val Arg Pro Thr 
                  35                  40                  45              
          Asn Ala Ala Leu Pro Thr Asp Ala Ala Tyr Pro Ala Val Asn Val Arg 
              50                  55                  60                  
          Asp Arg Glu Ala Ala Trp Pro Pro Ala Leu Asn Phe Cys Ser Arg His 
          65                  70                  75                  80  
          Pro Lys Leu Tyr Gly Leu Val Ala Leu Val Leu Leu Leu Leu Ile Ala 
                          85                  90                  95      
          Ala Cys Val Pro Ile Phe Thr Arg Thr Glu Pro Arg Pro Ala Leu Thr 
                      100                 105                 110         
          Ile Thr Thr Ser Pro Asn Leu Gly Thr Arg Glu Asn Asn Ala Asp Gln 
                  115                 120                 125             
          Val Thr Pro Val Ser His Ile Gly Cys Pro Asn Thr Thr Gln Gln Gly 
              130                 135                 140                 
          Ser Pro Val Phe Ala Lys Leu Leu Ala Lys Asn Gln Ala Ser Leu Cys 
          145                 150                 155                 160 
          Asn Thr Thr Leu Asn Trp His Ser Gln Asp Gly Ala Gly Ser Ser Tyr 
                          165                 170                 175     
          Leu Ser Gln Gly Leu Arg Tyr Glu Glu Asp Lys Lys Glu Leu Val Val 
                      180                 185                 190         
          Asp Ser Pro Gly Leu Tyr Tyr Val Phe Leu Glu Leu Lys Leu Ser Pro 
                  195                 200                 205             
          Thr Phe Thr Asn Thr Gly His Lys Val Gln Gly Trp Val Ser Leu Val 
              210                 215                 220                 
          Leu Gln Ala Lys Pro Gln Val Asp Asp Phe Asp Asn Leu Ala Leu Thr 
          225                 230                 235                 240 
          Val Glu Leu Phe Pro Cys Ser Met Glu Asn Lys Leu Val Asp Arg Ser 
                          245                 250                 255     
          Trp Ser Gln Leu Leu Leu Leu Lys Ala Gly His Arg Leu Ser Val Gly 
                      260                 265                 270         
          Leu Arg Ala Tyr Leu His Gly Ala Gln Asp Ala Tyr Arg Asp Trp Glu 
                  275                 280                 285             
          Leu Ser Tyr Pro Asn Thr Thr Ser Phe Gly Leu Phe Leu Val Lys Pro 
              290                 295                 300                 
          Asp Asn Pro Trp Glu 
          305                 
          <![CDATA[<210> 30]]>
          <![CDATA[<211> 597]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成多核苷酸]]>
          <![CDATA[<400> 30]]>
          atggaagggg aaggggttca acccctggat gagaatctgg aaaacggatc aaggccaaga       60
          ttcaagtgga agaagacgct aaggctggtg gtctctggga tcaagggagc agggatgctt      120
          ctgtgcttca tctatgtctg cctgcaactc tcttcctctc cggcaaagga ccctccaatc      180
          caaagactca gaggagcagt taccagatgt gaggatgggc aactattcat cagctcatac      240
          aagaatgagt atcaaactat ggaggtgcag aacaattcgg ttgtcatcaa gtgcgatggg      300
          ctttatatca tctacctgaa gggctccttt ttccaggagg tcaagattga ccttcatttc      360
          cgggaggatc ataatcccat ctctattcca atgctgaacg atggtcgaag gattgtcttc      420
          actgtggtgg cctctttggc tttcaaagat aaagtttacc tgactgtaaa tgctcctgat      480
          actctctgcg aacacctcca gataaatgat ggggagctga ttgttgtcca gctaacgcct      540
          ggatactgtg ctcctgaagg atcttaccac agcactgtga accaagtacc actgtga         597
          <![CDATA[<210> 31]]>
          <![CDATA[<211> 930]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成多核苷酸]]>
          <![CDATA[<400> 31]]>
          atggaccagc acacacttga tgtggaggat accgcggatg ccagacatcc agcaggtact       60
          tcgtgcccct cggatgcggc gctcctcaga gataccgggc tcctcgcgga cgctgcgctc      120
          ctctcagata ctgtgcgccc cacaaatgcc gcgctcccca cggatgctgc ctaccctgcg      180
          gttaatgttc gggatcgcga ggccgcgtgg ccgcctgcac tgaacttctg ttcccgccac      240
          ccaaagctct atggcctagt cgctttggtt ttgctgcttc tgatcgccgc ctgtgttcct      300
          atcttcaccc gcaccgagcc tcggccagcg ctcacaatca ccacctcgcc caacctgggt      360
          acacgagaga ataatgcaga ccaggtcacc cctgtttccc acattggctg ccccaacact      420
          acacaacagg gctctcctgt gttcgccaag ctactggcta aaaaccaagc atcgttgtgc      480
          aatacaactc tgaactggca cagccaagat ggagctgggt cttcatacct atctcaaggt      540
          ctgaggtacg aagaagacaa aaaggagttg gtggtagaca gtcccgggct ctactacgta      600
          tttttggaac tgaagctcag tccaacattc acaaacacag gccacaaggt gcagggctgg      660
          gtctctcttg ttttgcaagc aaagcctcag gtagatgact ttgacaactt ggccctgaca      720
          gtggaactgt tcccttgctc catggagaac aagttagtgg accgttcctg gagtcaactg      780
          ttgctcctga aggctggcca ccgcctcagt gtgggtctga gggcttatct gcatggagcc      840
          caggatgcat acagagactg ggagctgtct tatcccaaca ccaccagctt tggactcttt      900
          cttgtgaaac ccgacaaccc atgggaatga                                       930
Figure 12_A0101_SEQ_0001
Figure 12_A0101_SEQ_0002
Figure 12_A0101_SEQ_0003
Figure 12_A0101_SEQ_0004
Figure 12_A0101_SEQ_0005
Figure 12_A0101_SEQ_0006
Figure 12_A0101_SEQ_0007
Figure 12_A0101_SEQ_0008
Figure 12_A0101_SEQ_0009
Figure 12_A0101_SEQ_0010
Figure 12_A0101_SEQ_0011
Figure 12_A0101_SEQ_0012
Figure 12_A0101_SEQ_0013
Figure 12_A0101_SEQ_0014
Figure 12_A0101_SEQ_0015
Figure 12_A0101_SEQ_0016
Figure 12_A0101_SEQ_0017
Figure 12_A0101_SEQ_0018
Figure 12_A0101_SEQ_0019
Figure 12_A0101_SEQ_0020
Figure 12_A0101_SEQ_0021
Figure 12_A0101_SEQ_0022
Figure 12_A0101_SEQ_0023
Figure 12_A0101_SEQ_0024
Figure 12_A0101_SEQ_0025
Figure 12_A0101_SEQ_0026
Figure 12_A0101_SEQ_0027
Figure 12_A0101_SEQ_0028
Figure 12_A0101_SEQ_0029
Figure 12_A0101_SEQ_0030
Figure 12_A0101_SEQ_0031

Claims (143)

  1. 一種組合物，其中該組合物包含： 核酸，其中該核酸編碼融合蛋白，其中該融合蛋白包含： TNF超家族配體(TNF-superfamily ligand；TNFSF-L)或其功能變體；及 複數個來自膠原凝集素家族蛋白之結構域，其中該複數個來自膠原凝集素家族蛋白之結構域包含： 寡聚化結構域或其功能變體；及 頸部結構域或其功能變體， 其中該寡聚化結構域或其功能變體及該頸部結構域或其功能變體與其在膠原凝集素家族蛋白中之位置相比在序列鄰近性上更接近。
  2. 如請求項1之組合物，其中該融合蛋白以N-末端至C-末端順序包含： 該寡聚化結構域或其功能變體； 該頸部結構域或其功能變體； 視情況，連接體序列；及 該TNFSF-L或其功能變體。
  3. 如請求項1之組合物，其中該TNFSF-L包含淋巴毒素α、OX40配體、CD40配體、Fas配體、CD27配體、CD30配體、4-1BBL、TNF相關之細胞凋亡誘導配體(TNF-related apoptosis-inducing ligand；TRAIL)、核因子κ-Β配體之受體活化劑(Receptor activator of nuclear factor kappa-Β ligand；RANKL)、TNF相關之細胞凋亡弱誘導劑、A增殖誘導配體(A proliferation-inducing ligand；APRIL)、B細胞活化因子(B-cell activating factor；BAFF)、LIGHT、血管內皮生長抑制劑(Vascular endothelial growth inhibitor；VEGI)、TNF超家族成員18配體(GITRL)、外異蛋白A，或其任一組合。
  4. 如請求項3之組合物，其中該TNFSF-L係CD40配體。
  5. 如請求項4之組合物，其中該CD40配體包含有包含與SEQ ID NO: 1之至少85%序列一致性之序列。
  6. 如請求項3之組合物，其中該TNFSF-L係OX40配體。
  7. 如請求項6之組合物，其中該OX40配體包含有包含與SEQ ID NO: 2或SEQ ID NO: 3之至少85%序列一致性之序列。
  8. 如請求項3之組合物，其中該TNFSF-L係4-1BBL。
  9. 如請求項8之組合物，其中該4-1BBL包含有包含與SEQ ID NO: 4或SEQ ID NO: 5之至少85%序列一致性之序列。
  10. 如請求項3之組合物，其中該TNFSF-L係LIGHT。
  11. 如請求項10之組合物，其中該LIGHT包含有包含與SEQ ID NO: 6之至少85%序列一致性之序列。
  12. 如請求項3之組合物，其中該TNFSF-L係TNF超家族成員18配體(GITRL)。
  13. 如請求項12之組合物，其中該GITRL包含有包含與SEQ ID NO: 7或SEQ ID NO: 8之至少85%序列一致性之序列。
  14. 如請求項1之組合物，其中該膠原凝集素家族蛋白係SP-A、SP-D、甘露糖結合凝集素(mannose binding lectin；MBL)、共凝集素、CL-43、CL-L1、CL-K1、CL-P1或CL-46。
  15. 如請求項1之組合物，其中該膠原凝集素家族蛋白係SP-D。
  16. 如請求項1之組合物，其中該寡聚化結構域包含有包含與SEQ ID NO: 9之至少85%序列一致性之序列。
  17. 如請求項1之組合物，其中該寡聚化結構域及該頸部結構域共同包含有包含與SEQ ID NO: 10之至少85%序列一致性之序列。
  18. 如請求項1之組合物，其中該寡聚化結構域及該頸部結構域共同包含SEQ ID NO: 10。
  19. 如請求項2之組合物，其中該融合蛋白包含該連接體序列，且其中該連接體序列包含GSG (甘胺酸-絲胺酸-甘胺酸) (SEQ ID NO: 12)。
  20. 如請求項1至19中任一項之組合物，其中該核酸包含RNA。
  21. 如請求項1至19中任一項之組合物，其中該核酸包含DNA。
  22. 一種組合物，其中該組合物包含： 核酸，其中該核酸包含有包含與SEQ ID NO: 21、22、23、24、25、26或27之至少85%序列一致性之序列。
  23. 一種組合物，其中該組合物包含： 融合蛋白，其中該融合蛋白包含有包含與SEQ ID NO: 14、15、16、17、18、19或20之至少85%序列一致性之序列。
  24. 一種組合物，其中該組合物包含： 載體；及 編碼TNF超家族配體(TNFSF-L)或其功能變體之核酸，其中該TNFSF-L或其功能變體融合至寡聚化結構域。
  25. 如請求項24之組合物，其中該核酸編碼融合蛋白，其中該融合蛋白包含： TNF超家族配體(TNFSF-L)或其功能變體；及 複數個來自膠原凝集素家族蛋白之結構域，其中該複數個來自膠原凝集素家族蛋白之結構域包含： 寡聚化結構域或其功能變體；及 頸部結構域或其功能變體， 其中該寡聚化結構域或其功能變體及該頸部結構域或其功能變體與其在膠原凝集素家族蛋白中之位置相比在序列鄰近性上更接近。
  26. 如請求項24之組合物，其中該載體係病毒載體或非病毒載體。
  27. 如請求項26之組合物，其中該非病毒載體包含奈米粒子載劑。
  28. 如請求項26之組合物，其中該非病毒載體包含脂質奈米粒子載劑。
  29. 如請求項27之組合物，其中該奈米粒子載劑包含金、二氧化矽、碳奈米管、水溶性富勒烯(water soluble fullerene)、矽奈米線、量子點，或其任一組合。
  30. 如請求項24之組合物，其中該載體包含噬菌體、類病毒顆粒(virus-like particles；VLP)、紅血球外殼(erythrocyte ghost)、細菌轉染(bactofection)、外泌體(exosomes)，或其任一組合。
  31. 如請求項25之組合物，其中該融合蛋白以N-末端至C-末端順序包含： 該寡聚化結構域或其功能變體； 該頸部結構域或其功能變體； 視情況，連接體序列；及 該TNFSF-L或其功能變體。
  32. 如請求項24之組合物，其中該TNFSF-L包含淋巴毒素α、OX40配體、CD40配體、Fas配體、CD27配體、CD30配體、4-1BBL、TNF相關之細胞凋亡誘導配體(TRAIL)、核因子κ-Β配體之受體活化劑(RANKL)、TNF相關之細胞凋亡弱誘導劑、A增殖誘導配體(APRIL)、B細胞活化因子(BAFF)、LIGHT、血管內皮生長抑制劑(VEGI)、TNF超家族成員18配體(GITRL)、外異蛋白A或其任一組合。
  33. 如請求項32之組合物，其中該TNFSF-L係CD40配體。
  34. 如請求項33之組合物，其中該CD40配體包含有包含與SEQ ID NO: 1之至少85%序列一致性之序列。
  35. 如請求項32之組合物，其中該TNFSF-L係OX40配體。
  36. 如請求項35之組合物，其中該OX40配體包含有包含與SEQ ID NO: 2或SEQ ID NO: 3之至少85%序列一致性之序列。
  37. 如請求項32之組合物，其中該TNFSF-L係4-1BBL。
  38. 如請求項37之組合物，其中該4-1BBL包含有包含與SEQ ID NO: 4或SEQ ID NO: 5之至少85%序列一致性之序列。
  39. 如請求項32之組合物，其中該TNFSF-L係LIGHT。
  40. 如請求項39之組合物，其中該LIGHT包含有包含與SEQ ID NO: 6之至少85%序列一致性之序列。
  41. 如請求項32之組合物，其中該TNFSF-L係TNF超家族成員18配體(GITRL)。
  42. 如請求項41之組合物，其中該GITRL包含有包含與SEQ ID NO: 7或SEQ ID NO: 8之至少85%序列一致性之序列。
  43. 如請求項25之組合物，其中該膠原凝集素家族蛋白包含SP-A、SP-D、甘露糖結合凝集素(MBL)、共凝集素、CL-43、CL-L1、CL-K1、CL-P1或CL-46。
  44. 如請求項43之組合物，其中該膠原凝集素家族蛋白係SP-D。
  45. 如請求項24之組合物，其中該寡聚化結構域包含有包含與SEQ ID NO: 9之至少85%序列一致性之序列。
  46. 如請求項25之組合物，其中該寡聚化結構域及該頸部結構域共同包含有包含與SEQ ID NO: 10之至少85%序列一致性之序列。
  47. 如請求項25之組合物，其中該寡聚化結構域及該頸部結構域共同包含SEQ ID NO: 10。
  48. 如請求項31之組合物，其中該融合蛋白包含該連接體序列，且其中該連接體序列包含GSG (甘胺酸-絲胺酸-甘胺酸) (SEQ ID NO: 12)。
  49. 如請求項24至48中任一項之組合物，其中該核酸包含RNA。
  50. 如請求項24至48中任一項之組合物，其中該核酸包含DNA。
  51. 一種組合物，其中該組合物包含： 載體；及 核酸，其中該核酸包含有包含與SEQ ID NO: 21、22、23、24、25、26或27之至少85%序列一致性之序列。
  52. 一種組合物，其中該組合物包含： 載體；及 核酸，其中該核酸編碼包含有包含與SEQ ID NO: 14、15、16、17、18、19或20之至少85%序列一致性之序列的蛋白質。
  53. 一種細胞，其中該細胞包含如請求項1至52中任一項之組合物。
  54. 如請求項53之細胞，其中該細胞係免疫細胞。
  55. 如請求項54之細胞，其中該免疫細胞係淋巴樣細胞。
  56. 一種融合蛋白，其中該融合蛋白包含： TNF超家族配體(TNFSF-L)或其功能變體；及 複數個來自膠原凝集素家族蛋白之結構域，其中該複數個來自膠原凝集素家族蛋白之結構域包含： 寡聚化結構域或其功能變體；及 頸部結構域或其功能變體， 其中該寡聚化結構域或其功能變體及該頸部結構域或其功能變體與其在膠原凝集素家族蛋白中之位置相比在序列鄰近性上更接近。
  57. 如請求項56之融合蛋白，其中該融合蛋白以N-末端至C-末端順序包含以下： 該寡聚化結構域或其功能變體； 該頸部結構域或其功能變體； 視情況，連接體序列；及 該TNFSF-L或其功能變體。
  58. 如請求項56之融合蛋白，其中該TNFSF-L包含淋巴毒素α、OX40配體、CD40配體、Fas配體、CD27配體、CD30配體、4-1BBL、TNF相關之細胞凋亡誘導配體(TRAIL)、核因子κ-Β配體之受體活化劑(RANKL)、TNF相關之細胞凋亡弱誘導劑、A增殖誘導配體(APRIL)、B細胞活化因子(BAFF)、LIGHT、血管內皮生長抑制劑(VEGI)、TNF超家族成員18配體(GITRL)、外異蛋白A，或其任一組合。
  59. 如請求項58之融合蛋白，其中該TNFSF-L係CD40配體。
  60. 如請求項59之融合蛋白，其中該CD40配體包含與SEQ ID NO: 1之至少85%序列一致性。
  61. 如請求項58之融合蛋白，其中該TNFSF-L係OX40配體。
  62. 如請求項61之融合蛋白，其中該OX40配體包含與SEQ ID NO: 2或SEQ ID NO: 3之至少85%序列一致性。
  63. 如請求項58之融合蛋白，其中該TNFSF-L係4-1BBL。
  64. 如請求項63之融合蛋白，其中該4-1BBL包含與SEQ ID NO: 4或SEQ ID NO: 5之至少85%序列一致性。
  65. 如請求項58之融合蛋白，其中該TNFSF-L係LIGHT。
  66. 如請求項65之融合蛋白，其中該LIGHT包含與SEQ ID NO: 6之至少85%序列一致性。
  67. 如請求項58之組合物，其中該TNFSF-L係TNF超家族成員18配體(GITRL)。
  68. 如請求項67之組合物，其中該GITRL包含有包含與SEQ ID NO: 7或SEQ ID NO: 8之至少85%序列一致性之序列。
  69. 如請求項56之融合蛋白，其中該膠原凝集素家族蛋白包含SP-A、SP-D、甘露糖結合凝集素(MBL)、共凝集素、CL-43、CL-L1、CL-K1、CL-P1、CL-46，或其任一組合。
  70. 如請求項56之融合蛋白，其中該膠原凝集素家族蛋白係SP-D。
  71. 如請求項56之融合蛋白，其中該寡聚化結構域包含與SEQ ID NO: 9之至少85%序列一致性。
  72. 如請求項56之融合蛋白，其中該寡聚化結構域與頸部結構域共同包含與SEQ ID NO: 10之至少85%序列一致性。
  73. 如請求項56之融合蛋白，其中該寡聚化結構域及頸部結構域共同包含SEQ ID NO: 10。
  74. 如請求項57之融合蛋白，其中該融合蛋白包含該連接體序列，且其中該連接體序列包含GSG (甘胺酸-絲胺酸-甘胺酸) (SEQ ID NO: 12)。
  75. 一種溶瘤病毒，其中該溶瘤病毒包含： 編碼TNF超家族配體(TNFSF-L)或其功能變體之外源核酸，其中該TNFSF-L或其功能變體融合至寡聚化結構域。
  76. 如請求項75之溶瘤病毒，其中該溶瘤病毒係新城雞瘟病毒(Newcastle disease virus；NDV)、里奧病毒(Reovirus；RV)、黏液瘤病毒(Myxoma virus；MYXV)、麻疹病毒(Measles virus；MV)、單純疱疹病毒(Herpes Simplex virus；HSV)、牛痘病毒(Vaccinia virus；VV)、水疱性口炎病毒(Vesicular Somatitis virus；VSV)、脊髓灰白質炎病毒(Polio virus；PV)、仙台病毒(Sendai virus)、黃病毒、慢病毒屬、痘病毒、反轉錄病毒、腺相關病毒或腺病毒。
  77. 如請求項75之溶瘤病毒，其中編碼該TNFSF-L或其功能變體之該核酸插入至病毒基因體中。
  78. 如請求項75之溶瘤病毒，其中編碼該TNFSF-L或其功能變體之該核酸插入至胸苷激酶基因中。
  79. 如請求項75之溶瘤病毒，其中該TNFSF-L包含淋巴毒素α、OX40配體、CD40配體、Fas配體、CD27配體、CD30配體、4-1BBL、TNF相關之細胞凋亡誘導配體(TRAIL)、核因子κ-Β配體之受體活化劑(RANKL)、TNF相關之細胞凋亡弱誘導劑、A增殖誘導配體(APRIL)、B細胞活化因子(BAFF)、LIGHT、血管內皮生長抑制劑(VEGI)、TNF超家族成員18配體(GITRL)、外異蛋白A或其任一組合。
  80. 如請求項79之溶瘤病毒，其中該TNFSF-L係CD40配體。
  81. 如請求項80之溶瘤病毒，其中該CD40配體包含有包含與SEQ ID NO: 1之至少85%序列一致性之序列。
  82. 如請求項79之溶瘤病毒，其中該TNFSF-L係OX40配體。
  83. 如請求項82之溶瘤病毒，其中該OX40配體包含有包含與SEQ ID NO: 2或SEQ ID NO: 3之至少85%序列一致性之序列。
  84. 如請求項79之溶瘤病毒，其中該TNFSF-L係4-1BBL。
  85. 如請求項84之溶瘤病毒，其中該4-1BBL包含有包含與SEQ ID NO: 4或SEQ ID NO: 5之至少85%序列一致性之序列。
  86. 如請求項79之溶瘤病毒，其中該TNFSF-L係LIGHT。
  87. 如請求項86之溶瘤病毒，其中該LIGHT包含有包含與SEQ ID NO: 6之至少85%序列一致性之序列。
  88. 如請求項79之組合物，其中該TNFSF-L係TNF超家族成員18配體(GITRL)。
  89. 如請求項88之組合物，其中該GITRL包含有包含與SEQ ID NO: 7或SEQ ID NO: 8之至少85%序列一致性之序列。
  90. 如請求項75之溶瘤病毒，其中該寡聚化結構域包含有包含與SEQ ID NO: 9之至少85%序列一致性之序列。
  91. 如請求項75至90中任一項之溶瘤病毒，其中該核酸包含RNA。
  92. 如請求項75至90中任一項之溶瘤病毒，其中該核酸包含DNA。
  93. 一種牛痘病毒，其中該牛痘病毒包含： 編碼TNF超家族配體(TNFSF-L)或其功能變體之外源核酸，其中該TNFSF-L或其功能變體融合至寡聚化結構域。
  94. 如請求項93之牛痘病毒，其中該牛痘病毒係以下各項之經修飾菌株：Western Reserve牛痘病毒(ATCC VR-1354)、哥本哈根菌株(Copenhagen strain)、牛痘病毒安卡拉株(Ankara) (ATCC VR-1508)、牛痘病毒安卡拉株(ATCC VR-1566)、重組牛痘病毒安卡拉株(MVA)、NYVAC株、牛痘病毒Wyeth株(ATCC VR-1536)、牛痘病毒Wyeth株(ATCC VR-325)、Wyeth (NYCBOH)菌株、天壇株(Tian Tan strain)、Lister株、USSR株及Evans株。
  95. 如請求項93之牛痘病毒，其中編碼該TNFSF-L或其功能變體之該外源核酸插入至病毒基因體中。
  96. 如請求項93之牛痘病毒，其中編碼該TNFSF-L或其功能變體之該外源核酸插入至胸苷激酶基因中。
  97. 如請求項93之牛痘病毒，其中該TNFSF-L包含淋巴毒素α、OX40配體、CD40配體、Fas配體、CD27配體、CD30配體、4-1BBL、TNF相關之細胞凋亡誘導配體(TRAIL)、核因子κ-Β配體之受體活化劑(RANKL)、TNF相關之細胞凋亡弱誘導劑、A增殖誘導配體(APRIL)、B細胞活化因子(BAFF)、LIGHT、血管內皮生長抑制劑(VEGI)、TNF超家族成員18配體(GITRL)、外異蛋白A，或其任一組合。
  98. 如請求項97之牛痘病毒，其中該TNFSF-L係CD40配體。
  99. 如請求項98之牛痘病毒，其中該CD40配體包含有包含與SEQ ID NO: 1之至少85%序列一致性之序列。
  100. 如請求項97之牛痘病毒，其中該TNFSF-L係OX40配體。
  101. 如請求項100之牛痘病毒，其中該OX40配體包含有包含與SEQ ID NO: 2或SEQ ID NO: 3之至少85%序列一致性之序列。
  102. 如請求項97之牛痘病毒，其中該TNFSF-L係4-1BBL。
  103. 如請求項102之牛痘病毒，其中該4-1BBL包含有包含與SEQ ID NO: 4或SEQ ID NO: 5之至少85%序列一致性之序列。
  104. 如請求項97之牛痘病毒，其中該TNFSF-L係LIGHT。
  105. 如請求項104之牛痘病毒，其中該LIGHT包含有包含與SEQ ID NO: 6之至少85%序列一致性之序列。
  106. 如請求項97之組合物，其中該TNFSF-L係TNF超家族成員18配體(GITRL)。
  107. 如請求項106之組合物，其中該GITRL包含有包含與SEQ ID NO: 7或SEQ ID NO: 8之至少85%序列一致性之序列。
  108. 如請求項之牛痘病毒，其中該寡聚化結構域包含有包含與SEQ ID NO: 9之至少85%序列一致性之序列。
  109. 如請求項93至108中任一項之牛痘病毒，其中該核酸包含RNA。
  110. 如請求項93至108中任一項之牛痘病毒，其中該核酸包含DNA。
  111. 一種治療癌症之方法，其包含： 將醫藥組合物以足以治療癌症之量投與給受試者，其中該醫藥組合物包含： 如請求項1至110中任一項之組合物、細胞、融合蛋白、溶瘤病毒或牛痘病毒。
  112. 如請求項111之方法，其中該癌症包含血癌或實體癌。
  113. 如請求項111之方法，其中該癌症包含黑色素瘤、肝細胞癌、乳癌、肺癌、腹膜癌、前列腺癌、膀胱癌、卵巢癌、白血病、淋巴瘤、腎癌、胰臟癌、上皮癌、胃癌、結腸癌、十二指腸癌、胰臟腺癌、間皮瘤、多形性神經膠母細胞瘤、星細胞瘤、多發性骨髓瘤、前列腺癌、肝細胞癌、膽管肉瘤、胰臟腺癌、頭頸部鱗狀細胞癌、結腸直腸癌、腸型胃腺癌、子宮頸鱗狀上皮細胞瘤、骨肉瘤、上皮卵巢癌、急性淋巴母細胞性淋巴瘤、骨髓增生性腫瘤或肉瘤。
  114. 如請求項111之方法，其中該癌症包含膀胱、血液、骨、骨髓、腦、乳房、結腸、食道、胃腸道、牙齦、頭、腎、肝、肺、鼻咽、頸、卵巢、前列腺、皮膚、胃、睪丸、舌或子宮之癌症。
  115. 如請求項111之方法，其中該投與包含全身投與或局部投與。
  116. 如請求項111之方法，其中該投與包含腫瘤內投與、靜脈內投與、區域投與、腹膜內投與、非經腸投與、肌內投與、皮下投與、動脈內投與或其任一組合。
  117. 如請求項111之方法，其中該投與包含腫瘤內投與。
  118. 如請求項111之方法，其中該醫藥組合物進一步包含醫藥上可接受之載劑。
  119. 如請求項118之方法，其中該醫藥上可接受之載劑包含緩衝劑、乳液、生物可吸收聚合物、凝膠或其任一組合。
  120. 如請求項111之方法，其中該組合物、細胞或融合蛋白係以約0.01 μg/劑至約1 g/劑之劑量投與。
  121. 如請求項111之方法，其中該溶瘤病毒或該牛痘病毒係以約10 3至約10 12PFU/劑之劑量投與。
  122. 如請求項111之方法，其中該醫藥組合物係以包含1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多個劑量之治療週期投與。
  123. 如請求項122之方法，其中每一劑量係經約1分鐘、約1小時、約2小時、約3小時、約4小時、約1天或更長時間投與。
  124. 如請求項123之方法，其中每一劑量與任何其他劑量無關。
  125. 如請求項122之方法，其中該治療週期中之兩個或更多個劑量係被其中未投與劑量之劑量間隔隔開。
  126. 如請求項125之方法，其中該劑量間隔係約1分鐘、約1小時、約2小時、約3小時、約4小時、約1天、約2天、約3天、約4天、約5天、約6天、約1週、約2週、約3週、約4週、約1個月、約2個月、約3個月、約4個月、約5個月、約6個月、約7個月、約8個月、約9個月、約10個月、約11個月、約1年或更長時間。
  127. 如請求項126之方法，其中每一劑量間隔與任何其他劑量間隔無關。
  128. 一種減少腫瘤細胞生長之方法，其包含： 向腫瘤細胞以足以減少腫瘤細胞生長之量投與如請求項1至110中任一項之組合物、細胞、融合蛋白、溶瘤病毒或牛痘病毒。
  129. 如請求項128之方法，其中該腫瘤包含液體腫瘤或實體腫瘤。
  130. 如請求項128之方法，其中該腫瘤包含黑色素瘤、肝細胞癌、乳房腫瘤、肺腫瘤、腹膜腫瘤、前列腺腫瘤、膀胱腫瘤、卵巢腫瘤、白血病、淋巴瘤、腎癌、胰臟腫瘤、上皮癌、胃腫瘤、結腸癌、十二指腸腫瘤、胰臟腺癌、間皮瘤、多形性神經膠母細胞瘤、星細胞瘤、多發性骨髓瘤、前列腺癌、肝細胞癌、膽管肉瘤、胰臟腺癌、頭頸部鱗狀細胞癌、結腸直腸腫瘤、腸型胃腺癌、子宮頸鱗狀上皮細胞瘤、骨肉瘤、上皮卵巢癌、急性淋巴母細胞性淋巴瘤、骨髓增生性腫瘤或肉瘤。
  131. 如請求項128之方法，其中該腫瘤包含膀胱、血液、骨、骨髓、腦、乳房、結腸、食道、胃腸道、牙齦、頭、腎、肝、肺、鼻咽、頸、卵巢、前列腺、皮膚、胃、睪丸、舌或子宮之腫瘤。
  132. 如請求項128之方法，其中該投與包含全身投與或局部投與。
  133. 如請求項128之方法，其中該投與包含腫瘤內投與、靜脈內投與、區域投與、腹膜內投與、非經腸投與、肌內投與、皮下投與、動脈內投與或其任一組合。
  134. 如請求項128之方法，其中該投與包含腫瘤內投與。
  135. 如請求項128之方法，其中該組合物進一步包含醫藥上可接受之載劑。
  136. 如請求項135之方法，其中該醫藥上可接受之載劑包含緩衝劑、乳液、生物可吸收聚合物、凝膠或其任一組合。
  137. 如請求項128之方法，其中該組合物、細胞或融合蛋白係以約0.01 μg/劑至約1 g/劑之劑量投與。
  138. 如請求項128之方法，其中該溶瘤病毒或該牛痘病毒係以約10 3至約10 12PFU/劑之劑量投與。
  139. 如請求項128之方法，其中該投與係在包含1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多個劑量之治療週期中。
  140. 如請求項139之方法，其中每一劑量係經約1分鐘、約1小時、約2小時、約3小時、約4小時、約1天或更長時間投與。
  141. 如請求項139之方法，其中兩個或更多個劑量係被其中未投與劑量之劑量間隔隔開。
  142. 如請求項141之方法，其中該劑量間隔係約1分鐘、約1小時、約2小時、約3小時、約4小時、約1天、約2天、約3天、約4天、約5天、約6天、約1週、約2週、約3週、約4週、約1個月、約2個月、約3個月、約4個月、約5個月、約6個月、約7個月、約8個月、約9個月、約10個月、約11個月、約1年或更長時間。
  143. 如請求項142之方法，其中每一劑量間隔與任何其他劑量間隔無關。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
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AU2002350409A1 (en) * 2001-10-26 2003-05-06 Uffe Holmskov Surfactant protein-d and atherosclerosis
EP2484691B1 (en) * 2007-07-10 2016-01-13 Apogenix GmbH TNF superfamily collectin fusion proteins
FI20115914L (fi) * 2011-09-16 2013-03-17 Oncos Therapeutics Ltd Muunnettu onkolyyttinen virus
US9862932B2 (en) * 2012-07-24 2018-01-09 The General Hospital Corporation Oncolytic virus therapy for resistant tumors
WO2015103438A2 (en) * 2014-01-02 2015-07-09 Genelux Corporation Oncolytic virus adjunct therapy with agents that increase virus infectivity

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