TW202309040A

TW202309040A - 作為cGAS抑制劑之具有C-連接環狀取代基之吡啶衍生物

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Publication number: TW202309040A
Application number: TW111117564A
Authority: TW
Inventors: 安妮卡翠夏綠蒂希曼; 珊卓盧思漢斯屈; 克里斯多夫霍恩柯; 克里斯汀格納姆; 西德克斯格波特; 派翠克葛洛斯; 喬格克雷; 克莉絲汀安德里亞斯庫拉夫; 德克瑞納特; 拉斐爾史杜伯
Original assignee: 德商百靈佳殷格翰國際股份有限公司
Priority date: 2021-05-12
Filing date: 2022-05-11
Publication date: 2023-03-01
Also published as: WO2022238335A1; KR20240006613A; EP4337327A1; CA3216507A1; BR112023020381A2; JP2024517934A; IL307790A; US20230002401A1; AU2022273980A1

Abstract

本發明係關於作為cGAS抑制劑之新型式 ( I )之脯胺酸衍生物

，其中 R ¹ 係選自甲基、乙基、鹵甲基及鹵素， G係選自SO ₂、S、O、N、N R ⁸ ， R ² 係選自H、鹵素、環丙基、C ₁ _- ₃烷基、C ₂ _- ₅炔基及CN，或其中 R ² 為選自由以下組成之群的環狀基團：苯基或具有1、2、3或4個各自獨立地選自N、S及O之雜原子的五至六員雜芳基，其中此環狀基團係經一或兩個相同或不同取代基 R ¹⁰ 取代，其中 R ³ 及 R ⁴ 均彼此獨立地選自H、甲基及-CF ₃，且其中 R ⁵ 、 R ⁶ 、 R ⁷ 、 R ⁸ 及 R ¹⁰ 係如技術方案1中所定義，以及此等化合物之前藥或醫藥學上可接受之鹽其用於治療諸如以下之疾病：全身性紅斑狼瘡、全身性硬化症(SSc)、非酒精性脂肪變性肝炎(NASH)、間質性肺病(ILD)或特發性肺纖維化(IPF)。

Description

作為cGAS抑制劑之具有C-連接環狀取代基之吡啶衍生物

1.1 cGAS 抑制劑先天性免疫被視為第一線細胞應激反應，其保護宿主細胞免受病原體入侵且啟動對適應性免疫系統之信號傳導。此等過程係由保守的病原體相關分子模式(PAMP)經由不同模式識別受體(PRR)感測以及隨後活化細胞介素及第I型干擾素基因表現而觸發的。諸如單核球、巨噬細胞及樹突狀細胞之主要抗原呈遞細胞產生第I型干擾素且對於引發適應性T細胞及B細胞免疫系統反應為至關重要的。主要的PRR偵測細胞表面上、溶酶體膜內部或其他細胞區室中的異常核酸，亦即錯誤定位、未成熟或未修飾之核酸(Barbalat等人, Annu. Rev. Immunol. 29, 185-214 (2011))。

「環狀 GMP- AMP合成酶」( Cyclic GMP- AMP Synthase； cGAS，UniProtKB-Q8N884))為源自病原體或核或粒線體細胞dsDNA之錯誤定位或錯誤加工的異常雙股DNA (dsDNA)的主要感測物(Sun等人, Science 339, 786-791 (2013)；Wu等人, Science 339, 826-830 (2013)；Ablasser等人, Nature 498, 380-384 (2013))。dsDNA與cGAS之結合活化GTP與ATP之反應以形成環二核苷酸GMP-AMP (稱為cGAMP)。隨後cGAMP行進抵達且活化內質網膜錨定轉接蛋白，「干擾素基因刺激因子」( Stimulator of Interferon Genes；STING)。經活化之STING募集且活化 TANK結合激酶 1( TANK- binding kinase 1； TBK1)，其轉而使干擾素調節因子( IRF)之轉錄因子家族磷酸化，誘導細胞介素及第I型干擾素mRNA表現。

cGAS在dsDNA感測中之關鍵作用已經在不同病原菌(Hansen等人, EMBOJ. 33, 1654 (2014))、病毒(Ma等人, PNAS 112, E4306 (2015))及逆轉錄病毒(Gao等人, Science 341, 903-906 (2013))中得到證實。另外，cGAS在各種其他生物過程中必不可少，諸如細胞衰老(Yang等人, PNAS 114, E4612 (2017)；Glück等人, Nat. Cell Biol. 19, 1061-1070 (2017))及潛在癌細胞之監測中破裂微核之識別(Mackenzie等人, Nature 548, 461-465 (2017)；Harding等人, Nature 548, 466-470 (2017))。

雖然cGAS路徑對於宿主防禦病原體入侵至關重要，但細胞應激及遺傳因子亦可例如藉由核或粒線體洩漏引起產生異常細胞dsDNA，且由此觸發自體發炎反應。艾卡迪-古特雷斯症候群(Aicardi-Goutieres syndrome，AGS；Crow等人, Nat. Genet. 38, 917-920 (2006)) (一種狼瘡樣重度自體發炎性免疫介導之病症)係由TREX1中之功能損失型突變引起，該TREX1為一種負責降解胞溶質中之異常DNA的主要DNA外切核酸酶。在TREX1缺陷型小鼠中對cGAS進行基因剔除另外防止致死性自體免疫反應，支持cGAS作為干擾素病變之驅動因子(Gray等人, J. Immunol. 195, 1939-1943 (2015)；Gao等人, PNAS 112, E5699-E5705 (2015))。同樣，由DNAse2 (一種負責在內飲過程中降解溶酶體中之過量DNA的核酸內切酶)之缺乏所引起的胚胎致死性被額外基因剔除cGAS (Gao等人, PNAS 112, E5699-E5705 (2015))或STING (Ahn等人, PNAS 109, 19386-19391 (2012))完全補救。此等觀測結果支持cGAS作為藥物標靶，且抑制cGAS可為預防自體發炎及治療諸如全身性紅斑狼瘡(SLE)的涉及抗dsDNA抗體之疾病提供治療策略(Pisetsky等人, Nat. Rev. Rheumatol. 12, 102-110 (2016))。

1.2 現有技術歸因於觀測到抑制cGAS路徑可為預防自體發炎及治療例如自體免疫疾病提供治療策略，已進行多項努力來研發cGAS抑制劑。在WO 2019/241787中，例如4-胺基-6-(苯胺基)-1,3,5-三𠯤-2-甲酸甲酯(諸如CU-32及CU-76)已被揭示為cGAS抑制劑，其中活體外hcGAS IC50值略低於1 µM (IC50(CU-32) = 0.66 µM且IC50(CU-76)=0.27 µM)。

在Hall等人, PLoS ONE 12(9); e0184843 (2017)中，化合物PF-06928215已被公開為cGAS抑制劑，其中如藉由新穎螢光偏振分析所量測，活體外hcGAS IC50值為0.049 µM。然而，化合物PF-06928215作為cGAS抑制劑未顯示出可接受之細胞活性。

在WO 2020/142729中，(苯并呋喃并[3,2-d]嘧啶-4-基)吡咯啶-2-甲酸衍生物已被揭示為用於自體免疫病症，諸如艾卡迪-古特雷斯症候群(AGS)、紅斑狼瘡、硬皮病、發炎性腸病及非酒精性脂肪變性肝炎(NASH)之療法的cGAS抑制劑。然而，本發明化合物不同於WO 2020/142729之(苯并呋喃并[3,2-d]嘧啶-4-基)吡咯啶-2-甲酸衍生物，其在吡咯啶環之4位處的取代模式方面完全不同。

最近提供之cGAS抑制劑，諸如WO 2020/142729中之cGAS抑制劑，通常顯示不足的細胞cGAS抑制效能(其中在細胞分析中所量測，關於抑制cGAS/STING路徑之IC50值通常大於1 µM，往往大於5 µM)。然而，提供治療性cGAS抑制劑至關重要，其不僅顯示出令人滿意之生物化學(活體外)抑制效能(「hcGAS IC50」)，亦顯示出令人滿意之細胞抑制效能(例如藉由顯示抑制病毒刺激之THP-1細胞中的IFN誘導(THP1 ₍ _vir ₎IC50)，以確保化合物能夠在患者中顯示治療作用。對成功研發作為治療劑的cGAS抑制劑可具有預測性的其他重要特性為令人滿意之cGAS選擇性(對比脫靶活性)及在人類全血中之可接受之抑制效能。

出人意料地，現已發現式 (I)、 (I ' )、 (I '' )、 (II ' )及 (II '' )化合物同時顯示出以下三種特性： • 令人滿意之「關於cGAS抑制之生物化學(活體外) IC50值」(其中hcGAS IC50 ≤ 100 nM，較佳≤ 50 nM，尤其≤ 10 nM)， • 令人滿意之「抑制病毒刺激之THP-1細胞中的IFN誘導」(其中THP1 IC50 ₍ _vir ₎≤ 1 µM，較佳≤ 500 nM，更佳≤ 100 nM，尤其≤ 50 nM) 及 • 令人滿意之對cGAS抑制之選擇性 (其中THP1 IC50 _(cGAMP)/ THP1 IC50 _(vir)之比率為≥10，更佳≥50，更佳≥500，尤其≥1000)。

另外，式 (I)、 (I ' )、 (I '' )、 (II ' )及 (II '' )化合物亦在dsDNA刺激之人類全血分析中顯示可接受之關於抑制IFN誘導之IC50值，較佳關於cGAS抑制之人類全血IC50值(hWB IC50) ≤5000 nM，更佳≤ 1000 nM，尤其≤ 100 nM。

具有此特定藥理學概況的本發明之cGAS抑制劑，結合極佳活體外抑制效能及極佳細胞抑制效能以及對cGAS抑制之高選擇性，很有可能在患者中亦展現出良好治療作用。歸因於其高細胞抑制效能，具有此特定藥理學概況之化合物應能夠通過細胞膜屏障，且因此達至其細胞內目標位置，且歸因於其專門抑制cGAS活性之選擇性，此等化合物不應顯示不合需要之脫靶作用，例如在cGAS之信號傳導路徑下游的某處產生副作用或細胞毒性作用。

本發明係關於式 ( I )化合物，

，其中 R ¹ 係選自甲基、乙基、鹵甲基及鹵素，其中 G係選自SO ₂、S、O、N、N R ⁸ ；其中 R ² 係選自H、鹵素、環丙基、C ₁ _- ₃烷基、C ₂ _- ₅炔基及CN，或其中 R ² 為選自由以下組成之群的環狀基團：苯基或具有1、2、3或4個各自獨立地選自N、S及O之雜原子的五至六員雜芳基，其中此環狀基團係經一或兩個相同或不同取代基 R ¹⁰ 取代，其中 R ³ 係選自H、甲基及-CF ₃， R ⁴ 係選自H、甲基及-CF ₃， R ⁵ 係選自H、甲基、-CN、-亞甲基-OH及-CF ₃，或 R ⁵ 可不存在， R ⁶ 係選自H、甲基、-CN、-亞甲基-OH及-CF ₃， R ⁷ 係選自氫、鹵素、甲基、-O-甲基及-OH； R ⁸ 係選自CN、H、甲基、-CO-NH ₂、-CO-(C ₁ _- ₃烷基)、環烷基及氧雜環丁烷，其中各 R ¹⁰ 獨立地選自由以下組成之群：氫、鹵素、鹵烷基、-甲基、-乙基、-NH-CO-甲基、-N(CH ₃) ₂、-CH ₂-OH、-NH(CH ₃)、-O-CH ₃及-CN，或其中 R ⁵ 及 R ⁶ 一起形成選自氧雜環丁烷、四氫呋喃、環丙烷及環丁烷之環，或在 G為N R ⁸ 之情況下，則當 R ⁵ 不存在時， R ⁸ 及 R ⁶ 與其間之C原子形成包含兩個各自獨立地選自N及O之雜原子的環化五員芳族或非芳族雜環，其中此五員環化雜環可視情況經側氧基取代，或 R ⁷ 及 R ³ 與其間之C原子一起形成環化環丙烷環，或其前藥或醫藥學上可接受之鹽。

本發明之一較佳實施例係關於屬於以下範疇內的上述化合物：式 (I ' )

，或式 (I '' )

，其中 R ¹ 、 R ² 、 R ³ 、 R ⁵ 、 R ⁶ 、 R ⁷ 、 R ⁸ 、 R ⁹ 、 R ¹⁰ 及 G係如上文所提及而定義，及其前藥或醫藥學上可接受之鹽。

本發明之另一較佳實施例涉及屬於以下範疇內的上述化合物：式 ( II ')

，或式 (II '' )

其中 R ¹ 、 R ² 、 R ³ 、 R ⁵ 、 R ⁶ 、 R ⁷ 、 R ⁸ 、 R ⁹ 、 R ¹⁰ 及 G係如上文所提及而定義，及其前藥或醫藥學上可接受之鹽。

在另一較佳實施例中，本發明係關於前述式 ( I )、 ( I ' )、 ( I '' )、 ( II ' )或 ( II '' )中之一或多者的化合物，其中 G係選自SO ₂、O及N R ⁸ ；且其中 R ⁸ 係選自CN、H、甲基、-CO-NH ₂、-CO-甲基及氧雜環丁烷，且其中 R ² 係選自H、鹵素、1-丙炔基及乙炔基，或其中 R ² 為選自由具有1或2個選自N、S及O之雜原子的五至六員雜芳基組成之群的環狀基團，該雜芳基選自由吡啶基及吡唑基組成之群，其中此環狀基團係經一或兩個相同或不同取代基 R ¹⁰ 取代，該 R ¹⁰ 選自由鹵素、甲基及-NH(CH ₃)組成之群，或其前藥或醫藥學上可接受之鹽。

在另一較佳實施例中，本發明涉及上文提及的式 ( I )、 ( I ' )、 ( I '' )、 ( II ' )或 ( II '' )中之至少一者的化合物，其中 R ¹ 為鹵甲基，或其前藥或醫藥學上可接受之鹽。

在另一較佳實施例中，本發明係關於上文提及的式 ( I )、 ( I ' )、 ( I '' )、 ( II ' )或 ( II '' )中之至少一者的化合物，其中 R ¹ 為選自由-CF ₃、-CHF ₂及-CH ₂F組成之群的氟甲基，或其前藥或醫藥學上可接受之鹽。

在另一較佳實施例中，本發明涉及上文提及的式 ( I )、 ( I ' )、 ( I '' )、 ( II ' )或 ( II '' )中之至少一者的化合物，其中 R ³ 為甲基且 R ⁴ 為氫，或其前藥或醫藥學上可接受之鹽。

在另一較佳實施例中，本發明係關於上文提及的式 ( I )、 ( I ' )、 ( I '' )、 ( II ' )或 ( II '' )中之至少一者的化合物，其中 R ⁷ 為鹵素，或其前藥或醫藥學上可接受之鹽。

在另一較佳實施例中，本發明涉及上文提及的式 ( I )、 ( I ' )、 ( I '' )、 ( II ' )或 ( II '' )中之至少一者的化合物，其中 R ⁷ 為F，或其前藥或醫藥學上可接受之鹽。

在另一較佳實施例中，本發明係關於上文提及的式 ( I )、 ( I ' )、 ( I '' )、 ( II ' )或 ( II '' )中之至少一者的化合物，其中 G選自由O及SO ₂組成之群，且其中 R ⁷ 為F，或其前藥或醫藥學上可接受之鹽。

在另一較佳實施例中，本發明涉及上文提及的式 ( I )、 ( I ' )、 ( I '' )、 ( II ' )或 ( II '' )中之至少一者的化合物，其中 G選自由O及SO ₂組成之群，其中 R ⁷ 為F，且其中 R ² 係選自乙炔基及鹵素，或其前藥或醫藥學上可接受之鹽。

在另一較佳實施例中，本發明係關於上文提及的式 ( I )、 ( I ' )、 ( I '' )、 ( II ' )或 ( II '' )中之至少一者的化合物，其中 G選自由O及SO ₂組成之群，其中 R ⁷ 為F，其中 R ² 係選自乙炔基、1-丙炔基及鹵素，且其中 R ³ 為甲基且 R ⁴ 為氫，或其前藥或醫藥學上可接受之鹽。

在另一較佳實施例中，本發明涉及上文提及的式 ( I )、 ( I ' )、 ( I '' )、 ( II ' )或 ( II '' )中之至少一者的化合物，其中 R ¹ 為氟甲基； G為SO ₂； R ⁷ 為F；且其中 R ⁵ 及 R ⁶ 均為甲基或均為氫或其中 R ⁵ 及 R ⁶ 一起形成選自由氧雜環丁烷、環丙烷及環丁烷組成之群的環，或其前藥或醫藥學上可接受之鹽。

在另一較佳實施例中，本發明係關於上文提及的式 ( I )、 ( I ' )、 ( I '' )、 ( II ' )或 ( II '' )中之至少一者的化合物，其中 R ¹ 為氟甲基； G為SO ₂； R ⁷ 為F；其中 R ⁵ 及 R ⁶ 均為甲基或均為氫或其中 R ⁵ 及 R ⁶ 一起形成選自由氧雜環丁烷、環丙烷及環丁烷組成之群的環，且其中 R ³ 為甲基且 R ⁴ 為氫，或其前藥或醫藥學上可接受之鹽。

在另一較佳實施例中，本發明涉及上文提及的式 ( I )、 ( I ' )、 ( I '' )、 ( II ' )或 ( II '' )中之至少一者的化合物，其中 R ¹ 為氟甲基； G為SO ₂； R ⁷ 為F；且其中 R ⁵ 及 R ⁶ 均為甲基，或其中 R ⁵ 及 R ⁶ 一起形成選自氧雜環丁烷、環丙烷及環丁烷之環，或其前藥或醫藥學上可接受之鹽。

在另一較佳實施例中，本發明係關於上文提及的式 ( I )、 ( I ' )、 ( I '' )、 ( II ' )或 ( II '' )中之至少一者的化合物，其中 G為O R ¹ 為氟甲基， R ⁷ 係選自F、-O-甲基及-OH R ⁵ 及 R ⁶ 均為氫，或其前藥或醫藥學上可接受之鹽。

在另一較佳實施例中，本發明涉及上文提及的式 ( I )、 ( I ' )、 ( I '' )、 ( II ' )或 ( II '' )中之至少一者的化合物，其中 G為O R ¹ 為氟甲基， R ⁷ 係選自F、-O-甲基及-OH R ⁵ 及 R ⁶ 均為氫，且其中 R ³ 為甲基且 R ⁴ 為氫，或其前藥或醫藥學上可接受之鹽。

在另一較佳實施例中，本發明係關於上文提及的式 ( I )、 ( I ' )、 ( I '' )、 ( II ' )或 ( II '' )中之至少一者的化合物，其中 R ² 係選自由組成之群：H、乙炔基、1-丙炔基及鹵素，或其前藥或醫藥學上可接受之鹽。

在另一較佳實施例中，本發明涉及上文提及的式 ( I )、 ( I ' )、 ( I '' )、 ( II ' )或 ( II '' )中之至少一者的化合物，其中 R ³ 為甲基且 R ⁴ 為氫，其中 R ⁷ 為F；其中 R ⁵ 及 R ⁶ 均為氫且其中 R ² 為選自由具有1或2個選自N、S及O之雜原子的五至六員雜芳基組成之群的環狀基團，該雜芳基選自由吡啶及吡唑組成之群，其中此環狀基團係經一或兩個相同或不同取代基 R ¹⁰ 取代，該 R ¹⁰ 選自由鹵素、甲基及-NH(CH ₃)組成之群，或其前藥或醫藥學上可接受之鹽。

在另一較佳實施例中，本發明係關於上文提及的式 ( I )、 ( I ' )、 ( I '' )、 ( II ' )或 ( II '' )中之至少一者的化合物，其選自由以下組成之群：

，及其前藥或醫藥學上可接受之鹽。

本發明之另一較佳實施例涉及一種式 ( IV )中間物

如流程1中所定義，或式 (V)

如流程1中所定義，其中 R ¹ 、 R ² 、 R ³ 、 R ⁴ 、 R ⁵ 、 R ⁶ 、 R ⁷ 及 G係如上述所定義。

本發明之另一較佳實施例係關於一種屬於式 ( A )之範疇內的前述化合物中之任一者之前藥，

，其中 R ¹² 為C ₁ _- ₄烷基、芳基、-CH ₂-芳基或NH-SO ₂-C ₁ _- ₃烷基。

尤佳為上文提及的式 ( A )之前藥，其中 R ¹² 為甲基。

本發明之另一較佳實施例涉及式 ( I )、 ( I ' )、 ( I '' )、 ( II ' )或 ( II '' )中之至少一者的前述化合物，其供用於治療可藉由抑制cGAS治療之疾病。

在另一較佳實施例中，本發明係關於式 ( I )、 ( I ' )、 ( I '' )、 ( II ' )或 ( II '' )中之至少一者的前述化合物，其供用於治療選自由以下組成之群的疾病：全身性紅斑狼瘡(SLE)、干擾素病變、艾卡迪-古特雷斯症候群、年齡相關之黃斑變性(AMD)、肌肉萎縮性側索硬化(ALS)、發炎性腸病(IBD)、慢性阻塞性肺病(COPD)、布盧姆症候群(Bloom's syndrome)、休格倫氏症候群(Sjogren's syndrome)、帕金森氏病(Parkinsons disease)、心臟衰竭及癌症、全身性硬化症(SSc)、非酒精性脂肪變性肝炎(NASH)、間質性肺病(ILD)，較佳進行性纖維化間質性肺病(PF-ILD)，尤其特發性肺纖維化(IPF)。

在另一較佳實施例中，本發明係關於式 ( I )、 ( I ' )、 ( I '' )、 ( II ' )或 ( II '' )中之至少一者的前述化合物，其供用於治療選自由以下組成之群的疾病：全身性紅斑狼瘡(SLE)、干擾素病變、艾卡迪-古特雷斯症候群、年齡相關之黃斑變性(AMD)、肌肉萎縮性側索硬化(ALS)、發炎性腸病(IBD)、慢性阻塞性肺病(COPD)、布盧姆症候群、休格倫氏症候群及帕金森氏病。

在另一較佳實施例中，本發明涉及式 ( I )、 ( I ' )、 ( I '' )、 ( II ' )或 ( II '' )中之至少一者的前述化合物，其供用於治療選自由以下組成之群的纖維化疾病：全身性硬化症(SSc)、干擾素病變、非酒精性脂肪變性肝炎(NASH)、間質性肺病(ILD)，較佳進行性纖維化間質性肺病(PF-ILD)，尤其特發性肺纖維化(IPF)。

在另一較佳實施例中，本發明係關於式 ( I )、 ( I ' )、 ( I '' )、 ( II ' )或 ( II '' )中之至少一者的前述化合物，其供用於治療選自由以下組成之群的疾病：年齡相關之黃斑變性(AMD)、心臟衰竭、COVID-19/SARS-CoV-2感染、腎臟發炎、腎纖維化、代謝障礙、血管疾病、心血管疾病及癌症。

在另一較佳實施例中，本發明係關於一種醫藥組合物，其包含上述式 ( I )、 ( I ' )、 ( I '' )、 ( II ' )或 ( II '' )中之至少一者的化合物及視情況選用之一或多種醫藥學上可接受之載劑及/或賦形劑。

在另一較佳實施例中，本發明涉及一種醫藥組合物，其包含前述式 ( I )、 ( I ' )、 ( I '' )、 ( II ' )或 ( II '' )中之至少一者的化合物以及一或多種選自由組成之群的活性劑：消炎劑、抗纖維變性劑、抗過敏劑/抗組織胺、支氣管擴張劑、β2促效劑/β模擬劑、腎上腺素促效劑、抗膽鹼激導性劑、甲胺喋呤、黴酚酸嗎啉乙酯、白三烯調節劑、JAK抑制劑、抗介白素抗體、非特異性免疫治療劑(諸如干擾素或其他細胞介素/趨化細胞素)、細胞介素/趨化激素受體調節劑、鐸樣受體促效劑、免疫檢查點調節劑、抗TNF抗體(諸如Humira™)、抗BAFF抗體(諸如貝利單抗(Belimumab))及依那西普(Etanercept)。在另一較佳實施例中，本發明係關於一種醫藥組合物，其中上述式 ( I )、 ( I ' )、 ( I '' )、 ( II ' )或 ( II '' )中之至少一者的化合物係與一或多種選自由吡非尼酮(Pirfenidon)及尼達尼布(Nintedanib)組成之群的抗纖維變性劑組合。

在另一較佳實施例中，本發明係關於一種醫藥組合物，其中上述式 ( I )、 ( I ' )、 ( I '' )、 ( II ' )或 ( II '' )中之至少一者的化合物係與一或多種選自由NSAID及皮質類固醇組成之群的消炎劑組合。

在另一較佳實施例中，本發明涉及一種醫藥組合物，其中上述式 ( I )、 ( I ' )、 ( I '' )、 ( II ' )或 ( II '' )中之至少一者的化合物係與一或多種選自支氣管擴張劑、β2促效劑/β模擬劑、腎上腺素促效劑及抗膽鹼激導性劑之群的活性劑組合。

在另一較佳實施例中，本發明涉及一種醫藥組合物，其中前述式 ( I )、 ( I ' )、 ( I '' )、 ( II ' )或 ( II '' )中之至少一者的化合物係與一或多種選自由以下組成之群的抗介白素抗體組合：抗IL-23抗體(諸如里森基單抗(Risankizumab))、抗IL-17抗體、抗IL-1抗體、抗IL-4抗體、抗IL-13抗體、抗IL-5抗體、抗IL-6抗體(諸如Actemra™)、抗IL-12抗體及抗IL-15抗體。

在另一較佳實施例中，本發明涉及一種醫藥組合物，其包含式 ( I )、 ( I ' )、 ( I '' )、 ( II ' )或 ( II '' )中之至少一者的化合物以及上述活性劑中之任一者。

所用術語及定義除非另外說明，否則所有取代基彼此間為獨立的。舉例而言，若多個C ₁ _- ₆烷基為基團上之可能取代基，則在例如三個取代基之情況下，C ₁ _- ₆烷基可彼此獨立地表示甲基、正丙基及三級丁基。

術語「C ₁ _- ₆烷基」(包括作為其他基團之一部分的彼等烷基)意謂具有1至6個碳原子的分支鏈及非分支鏈烷基，且術語「C ₁ _- ₃烷基」意謂具有1至3個碳原子的分支鏈及非分支鏈烷基。「C ₁ _- ₄烷基」因此表示具有1至4個碳原子的分支鏈及非分支鏈烷基。較佳為具有1至4個碳原子之烷基。此等烷基之實例包括甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、二級丁基、三級丁基、正戊基、異戊基、新戊基或己基。上述基團視情況亦可使用縮寫Me、Et、n-Pr、i-Pr、n-Bu、i-Bu、t-Bu等。除非另外說明，否則定義丙基、丁基、戊基及己基包括所述基團之所有可能異構體形式。因此，舉例而言，丙基包括正丙基及異丙基，丁基包括異丁基、二級丁基及三級丁基等。

術語「C ₁ _- ₆伸烷基」(包括作為其他基團之一部分的彼等伸烷基)意謂具有1至6個碳原子的分支鏈及非分支鏈伸烷基，且術語「C ₁ _- ₄伸烷基」意謂具有1至4個碳原子的分支鏈及非分支鏈伸烷基。較佳為具有1至4個碳原子之伸烷基。此等伸烷基之實例包括亞甲基、伸乙基、伸丙基、1-甲基伸乙基、伸丁基、1-甲基伸丙基、1,1-二甲基伸乙基、1,2-二甲基伸乙基、伸戊基、1,1-二甲基伸丙基、2,2-二甲基伸丙基、1,2-二甲基伸丙基、1,3-二甲基伸丙基或伸己基。除非另外說明，定義伸丙基、伸丁基、伸戊基及伸己基包括具有相同碳數目之所述基團的所有可能異構體形式。因此，舉例而言，丙基亦包括1-甲基伸乙基且伸丁基包括1-甲基伸丙基、1,1-二甲基伸乙基、1,2-二甲基伸乙基。

若碳鏈係經與伸烷基鏈之一或兩個碳原子一起形成具有3、5或6個碳原子之碳環的基團取代，則其尤其包括以下環實例：

。

術語「C ₂ _- ₆烯基」(包括作為其他基團之一部分的彼等烯基)意謂具有2至6個碳原子的分支鏈及非分支鏈烯基，且術語「C ₂ _- ₄烯基」意謂具有2至4個碳原子的分支鏈及非分支鏈烯基，限制條件為其具有至少一個雙鍵。較佳為具有2至4個碳原子之烯基。實例包括：乙烯基(ethenyl或vinyl)、丙烯基、丁烯基、戊烯基或己烯基。除非另外說明，否則定義丙烯基、丁烯基、戊烯基及己烯基包括所述基團之所有可能異構體形式。因此，舉例而言，丙烯基包括1-丙烯基及2-丙烯基，丁烯基包括1-丁烯基、2-丁烯基及3-丁烯基、1-甲基-1-丙烯基、1-甲基-2-丙烯基等。

術語「C ₂ _- ₅炔基」(包含作為其他基團之一部分的炔基)意指具有2至5個碳原子之分支鏈及非分支鏈炔基，且術語「C ₂ _- ₄炔基」意指具有2至4個碳原子之分支鏈及非分支鏈炔基，限制條件為其具有至少一個參鍵。較佳為具有2至4個碳原子之炔基。

術語「C ₂ _- ₆伸烯基」(包括作為其他基團之一部分的彼等伸烯基)意謂具有2至6個碳原子的分支鏈及非分支鏈伸烯基，且術語「C ₂ _- ₄伸烯基」意謂具有2至4個碳原子的分支鏈及非分支鏈伸烷基。較佳為具有2至4個碳原子之伸烯基。此等伸烯基之實例包括：伸乙烯基、伸丙烯基、1-甲基伸乙烯基、伸丁烯基、1-甲基伸丙烯基、1,1-二甲基伸乙烯基、1,2-二甲基伸乙烯基、伸戊烯基、1,1-二甲基伸丙烯基、2,2-二甲基伸丙烯基、1,2-二甲基伸丙烯基、1,3-二甲基伸丙烯基或伸己烯基。除非另外說明，定義伸丙烯基、伸丁烯基、伸戊烯基及伸己烯基包括具有相同碳數目之所述基團的所有可能異構體形式。因此，舉例而言，丙烯基亦包括1-甲基伸乙烯基且伸丁烯基包括1-甲基伸丙烯基、1,1-二甲基伸乙烯基、1,2-二甲基伸乙烯基。

術語「芳基」(包括作為其他基團之一部分的彼等基團)意謂具有6或10個碳原子的芳環系統。實例包括苯基或萘基，較佳芳基為苯基。除非另有說明，否則芳族基可經一或多種選自以下的基團取代：甲基、乙基、異丙基、三級丁基、羥基、氟、氯、溴及碘。

術語「芳基-C ₁ _- ₆伸烷基」(包括作為其他基團之一部分的彼等基團)意謂具有1至6個碳原子的分支鏈及非分支鏈伸烷基，其經具有6或10個碳原子的芳族環系統取代。實例包括苯甲基、1-苯基乙基或2-苯基乙基，或1-萘基乙基或2-萘基乙基。除非另有說明，否則芳族基可經一或多種選自以下的基團取代：甲基、乙基、異丙基、三級丁基、羥基、氟、氯、溴及碘。

術語「雜芳基-C ₁ _- ₆伸烷基」(包括作為其他基團之一部分的彼等基團)即使其已包括在「芳基-C ₁ _- ₆伸烷基」下，亦意謂具有1至6個碳原子的分支鏈及非分支鏈伸烷基經雜芳基取代。

若未另外特別定義，則此類雜芳基包括五或六員雜環芳族基或5至10員雙環雜芳基環，其可含有一個、兩個、三個或四個選自氧、硫及氮之雜原子，且含有形成芳族系統之許多共軛雙鍵。以下為五或六員雜環芳族基或雙環雜芳基環之實例：

，除非另外說明，否則此等雜芳基可經一或多個選自以下中之基團取代：甲基、乙基、異丙基、三級丁基、羥基、胺基、硝基、烷氧基、氟、氯、溴及碘。

以下為雜芳基-C ₁ _- ₆伸烷基之實例：

、

、

、

、

術語「C ₁ _- ₆鹵烷基」(包括作為其他基團之一部分的彼等基團)意謂具有1至6個碳原子的分支鏈及非分支鏈烷基經一或多個鹵素原子取代。術語「C ₁ _- ₄鹵烷基」意謂具有1至4個碳原子之分支鏈及非分支鏈烷基經一或多個鹵素原子取代。較佳為具有1至4個碳原子之烷基。實例包括：CF ₃、CHF ₂、CH ₂F、CH ₂CF ₃。

若未另外特別定義，則術語「C ₃ _- ₇環烷基」(包括作為其他基團之一部分的基團)意謂具有3至7個碳原子的環烷基。實例包括：環丙基、環丁基、環戊基、環己基或環庚基。除非另有說明，否則環烷基可經一或多種選自以下的基團取代：甲基、乙基、異丙基、三級丁基、羥基、氟、氯、溴及碘。

若未另外特別定義，則術語「C ₃ _- ₁₀環烷基」亦意謂具有3至7個碳原子的單環烷基且亦意謂具有7至10個碳原子的雙環烷基，或經至少一個C ₁ _- ₃碳橋橋接的單環烷基。

除非另外說明，否則術語「雜環(heterocyclic ring/heterocycle)」意謂五、六或七員飽和、部分飽和或不飽和雜環，其可含有一個、兩個或三個選自氧、硫及氮之雜原子，而若存在一個，則環可經由碳原子或經由氮原子鍵聯至分子。儘管被術語「雜環」包括在內，但術語「飽和雜環」係指五、六或七員飽和環。實例包括：

。

儘管被術語「雜環」或「雜環基」包括在內，但術語「部分飽和雜環基」係指五、六或七員部分飽和環，其含有一或兩個雙鍵，但未產生多的以致形成芳族系統的雙鍵，除非另外特別定義。實例包括：

。

儘管被術語「雜環」包括在內，但除非另外特別定義，否則術語「雜環芳環」、「不飽和雜環基」或「雜芳基」係指五或六員雜環芳族基或5至10員雙環雜芳基環，其可含有一個、兩個、三個或四個選自氧、硫及氮之雜原子，且含有形成芳族系統之許多共軛雙鍵。五或六員雜環芳族基之實例包括：

。

除非另外提及，否則雜環可具有酮基團。實例包括：

。

儘管被術語「環烷基」涵蓋，但術語「雙環環烷基」通常表示八員、九員或十員雙環碳環。實例包括：

。

儘管已由術語「雜環」包括在內，但除非另外特別定義，否則術語「雙環雜環」通常表示可含有一或多個雜原子，較佳1至4個，更佳1至3個，甚至更佳1至2個，尤其一個選自氧、硫及氮之雜原子的八、九或十員雙環。環可經由環中之碳原子或經由環中之氮原子(若存在一者)鍵聯至分子。實例包括：

。

儘管已被術語「芳基」包括在內，但術語「雙環芳基」表示含有足以形成芳族系統之共軛雙鍵的5至10員雙環芳基環。雙環芳基之一個實例為萘基。

儘管已包括在「雜芳基」下，但除非另外特定定義，否則術語「雙環雜芳基」表示5員至10員雙環雜芳基環，其可含有一個、兩個、三個或四個選自氧、硫及氮中之雜原子，且含有足以形成芳族系統之共軛雙鍵。

儘管被術語「雙環環烷基」或「雙環芳基」包括在內，但術語「稠合環烷基」或「稠合芳基」表示雙環，其中分隔環之橋表示直接的單鍵。以下為稠合之雙環環烷基之實例：

。

術語「稠合的雙環雜環」或「稠合的雙環雜芳基」儘管包括在術語「雙環雜環」或「雙環雜芳基」內，但係表示含有一個、兩個、三個或四個選自氧、硫及氮之雜原子的5員至10員雙環雜環，且其中分隔環的橋表示直接的單鍵。「稠合的雙環雜芳基」再含有足以形成芳族系統的共軛雙鍵。實例包括吡

、吲哚、吲哚𠯤、異吲哚、吲唑、嘌呤、喹啉、異喹啉、苯并咪唑、苯并呋喃、苯并哌喃、苯并噻唑、苯并噻唑、苯并異噻唑、吡啶并嘧啶、喋啶、嘧啶并嘧啶、

。

本發明範疇內之「鹵素」表示氟、氯、溴或碘。除非有相反說明，否則氟、氯及溴視為較佳鹵素。

如先前所提及，式 (I)、 (I ' )、 (I '' )、 (II ' )及 (II '' )化合物可轉化為其鹽，尤其出於醫藥用途，而轉化為其生理學及藥理學上可接受之鹽。片語「醫藥學上可接受」在本文中用於指在合理醫學判斷之範疇內適用於與人類及動物之組織接觸而無過度毒性、刺激、過敏反應或其他問題或併發症，且符合合理益處/風險比的彼等化合物、材料、組合物及/或劑型。此等鹽一方面可以與無機或有機酸一起成為式 (I)、 (I ' )、 (I '' )、 (II ' )及 (II '' )化合物之生理學及藥理學上可接受之酸加成鹽形式存在。另一方面，式 (I)、 (I ' )、 (I '' )、 (II ' )及 (II '' )化合物可藉由與無機鹼反應轉化為生理學及藥理學上可接受之鹽，其中以鹼金屬或鹼土金屬陽離子作為相對離子。酸加成鹽可例如使用鹽酸、氫溴酸、硫酸、磷酸、甲磺酸、對甲苯磺酸、乙酸、反丁烯二酸、丁二酸、乳酸、檸檬酸、酒石酸或順丁烯二酸製備。亦可使用上述酸之混合物。為製備式 (I)、 (I ' )、 (I '' )、 (II ' )及 (II '' )化合物之鹼金屬及鹼土金屬鹽，較佳使用鹼金屬及鹼土金屬之氫氧化物及氫化物，其中鹼金屬之氫氧化物及氫化物，尤其鈉、鉀、鎂、鈣、鋅之氫氧化物及氫化物及二乙醇胺較佳，而氫氧化鈉及氫氧化鉀尤佳。

本發明係關於所述化合物，其視情況呈個別光學異構體、非鏡像異構體、非鏡像異構體混合物、個別鏡像異構體或外消旋體之混合物形式；呈互變異構體形式；以及呈游離鹼或與藥理學上可接受之酸所形成之相應酸加成鹽形式，諸如與氫鹵酸(例如鹽酸或氫溴酸)或有機酸(諸如乙二酸、反丁烯二酸、二乙醇酸或甲烷酸)形成的酸加成鹽。

根據本發明之式 (I)、 (I ' )、 (I '' )、 (II ' )及 (II '' )化合物可視情況以非鏡像異構體之混合物形式存在，但亦可以純非鏡像異構體形式獲得。較佳為具有式 (I)、 (I ' )、 (I '' )、 (II ' )及 (II '' )之特定立體化學的化合物。

合成方法根據本發明之化合物及其中間物可使用以下實例中所述之方法獲得，該等方法亦可出於此目的與熟習此項技術者已知且自文獻已知之方法組合。

特定言之，本發明提供用於製造式 (I)、 (I ' )、 (I '' )、 (II ' )及 (II '' )中之任一者之化合物的方法。

最佳反應條件及反應時間可視所用特定反應物而變化。除非另外指定，否則一般熟習此項技術者可易於選擇溶劑、溫度、壓力及其他反應條件。合成實例部分中提供特定程序。通常，必要時，反應進程可藉由薄層層析(TLC)或液相層析質譜(LC-MS)來監測，且中間物及產物可藉由矽膠層析、HPLC及/或再結晶來純化。以下實例為說明性的且如熟習此項技術者將識別，可在無過度實驗之情況下針對個別化合物按需要修改特定試劑或條件。以下方法中所用之起始物質及中間物為市售的或易於由熟習此項技術者自市售材料製備。

式 (I)、 (I ' )、 (I '' )、 (II ' )及 (II '' )中之任一者之化合物可藉由流程1-3中所概述之方法製備，其中 R ¹ 、 R ² 、 R ³ 、 R ⁴ 、 R ⁵ 、 R ⁶ 、 R ⁷ 及 G係如技術方案1中所定義：流程1：

如流程1中所說明，在適合鹼(諸如DIPEA、K ₂CO ₃或NaH)存在下，使氯-嘧啶(III)與(2S,4S) -4-羥基吡咯啶-2-甲酸於適合溶劑(諸如DMSO或DMF)中反應，得到式(IV)之羥脯胺酸衍生物。羥脯胺酸衍生物(IV)與式(V)吡啶衍生物在適合鹼(諸如NaH)存在下，在適合溶劑(諸如DMA、DMF或NMP)中反應得到式(I)化合物。

流程2：

如流程2中所說明，使3-溴-2-氟吡啶衍生物(VI)與異丙基氯化鎂氯化鋰錯合物在適合溶劑(諸如THF)中反應，得到有機鎂衍生物(VII)。使有機鎂衍生物(VII)在式(VIII)之酮衍生物存在下在溶劑(諸如THF)中反應，得到式(V)之衍生物，其中R ⁷=OH。替代地，使2-氟吡啶衍生物(IX)與鹼(諸如二異丙胺基鋰)在溶劑(諸如THF)中反應，得到有機鋰衍生物(X)。使有機鋰衍生物(X)在式(VIII)之酮衍生物存在下在溶劑(諸如THF)中反應，得到式(V)化合物，其中R ⁷= OH。

在氟化劑(諸如三氟化雙(2-甲氧基乙基)胺基硫(Deoxo-Fluor®)或三氟化二乙基胺基硫(DAST))存在下在溶劑(諸如二氯甲烷)中進行式(V)化合物之醇官能基(R ⁷= OH)之取代，得到式(V)化合物，其中R ⁷= F。

在烷基化試劑(諸如碘代甲烷)存在下用鹼(諸如NaH)在溶劑(諸如DMF)中對式(V)化合物之醇官能基(R ⁷= OH)進行烷基化，得到相應式(V)化合物，其中R ⁷= OMe。式(III)化合物可如流程3中所說明製備。

流程3：

使3-胺基-1-苯并呋喃-2-甲腈(XII)與式(XIII)之酐(或相應酸)在適合溶劑(諸如吡啶)中反應，得到醯胺(XIV)。在與適合氯化試劑(諸如五氯化磷)在適合溶劑(諸如環丁碸)中反應後，醯胺(XIV)環化形成式(III)化合物。

在替代合成工序中，使2-羥基苯甲腈(XV)與2-溴乙醯胺(XVI)在適合鹼(諸如K ₂CO ₃或KOH)存在下在適合溶劑(諸如乙醇)中反應，得到3-胺基-1-苯并呋喃-2-甲醯胺(XVII)。使化合物(XVII)與式(XVIII)之二甲基醯胺在適合氯化試劑(諸如氧氯化磷)存在下反應且形成式(III)化合物。

在另一替代合成工序中，使2-羥基苯甲腈(XV)在適合鹼(諸如K ₂CO ₃)存在下在適合溶劑(諸如DMF)中與溴乙腈反應，得到2-(氰基甲氧基)苯甲腈(XIX)。使此化合物在適合鹼(諸如三級丁醇鹽)存在下在適合溶劑(諸如THF)中環化，形成3-胺基-1-苯并呋喃-2-甲腈(XII)，且可轉化成式(XIV)化合物且隨後轉化成如上文所述之式(III)化合物。

中間物之合成 中間物 1中間物 1.1(通用程序) N -( 2 - 氰基 - 1 - 苯并呋喃 - 3 - 基 )- 2 , 2 , 2 - 三氟乙醯胺

在RT下將TFAA (5.31 g，25.3 mmol)添加至3-胺基-1-苯并呋喃-2-甲腈(4.00 g，25.3 mmol)於吡啶(40.0 mL)中之混合物。將混合物在25℃下攪拌12h，隨後減壓濃縮，用20 mL水稀釋且用EtOAc萃取。用鹽水洗滌合併之有機層，經Na ₂SO ₄乾燥，過濾且減壓濃縮。藉由管柱層析(矽膠；PE/EtOAc=20/1至5/1)純化殘餘物。 ESI-MS： 254.9 [M+H] ⁺R _t(HPLC)： 0.56 min (方法A)

根據上文所述之通用程序(中間物 1 . 1)製備以下中間物：

Int.	起始物質	結構	ESI-MS	R _t(HPLC或R _f(TLC)：
1.2				237 [M+H] ⁺	R _f(TLC)：0.6 (PE/EtOAc = 2/1)

中間物 2中間物 2.1(通用程序) 6- 氯 -4- ( 三氟甲基 )- 8 - 氧雜 - 3 , 5 - 二氮雜三環 [ 7 . 4 . 0 . 0 ² ^, ⁷ ] 十三 - 1 ( 9 ), 2 ( 7 ), 3 , 5 , 10 , 12 - 六烯

向N-(2-氰基-1-苯并呋喃-3-基)-2,2,2-三氟乙醯胺(中間物 1 . 1，4.00 g，15.7 mmol)於環丁碸(10.0 mL)中之溶液中添加五氯化磷(13.1 g，63.0 mmol)。在110℃下攪拌混合物16h。在冷卻至RT之後，將反應混合物倒入冰水中且用EtOAc萃取。用鹽水洗滌合併之有機層，經Na ₂SO ₄乾燥，過濾且減壓濃縮。藉由管柱層析(矽膠；PE/EtOAc=20/1至10/1)純化殘餘物。 ESI-MS： 273 [M+H] ⁺R _t(HPLC)： 0.71 min (方法A)

根據上文所述之通用程序(中間物 2 . 1)製備以下中間物：

Int.	起始物質	結構	ESI-MS	R _t(HPLC)或 R _f(TLC)：
2.2			255 / 257 [M+H] ⁺	R _f(TLC)：0.6 (PE/EtOAc = 5/1)

中間物 3中間物 3.1 ( 通用程序 ) (2S,4S)-4- 羥基 -1-[4- ( 三氟甲基 )- 8 - 氧雜 - 3 , 5 - 二氮雜三環 [ 7 . 4 . 0 . 0 ² ^, ⁷ ]- 十三 - 1 ( 9 ), 2 ( 7 ), 3 , 5 , 10 , 12 - 六烯 - 6 - 基 ] 吡咯啶 - 2 - 甲酸

在110℃下向(2S,4S)-4-羥基吡咯啶-2-甲酸(1.44 g，11.0 mmol)於DMSO (25.0 mL)中之預加熱混合物中添加DIPEA (3.90 g，30.0 mmol)及6-氯-4-(三氟甲基)-8-氧雜-3,5-二氮雜三環[7.4.0.0 ² ^, ⁷]十三-1(9),2(7),3,5,10,12-六烯(中間物 2 . 1，2.73 g，10.0 mmol)。在110℃下繼續攪拌10 min。移除加熱，將反應混合物逐滴添加至水中且用4 M HCl酸化。過濾且乾燥沈澱。 ESI-MS： 368 [M+H] ⁺R _t(HPLC)： 0.50 min (方法A)

根據上文所述之通用程序(中間物 3 . 1)製備以下中間物：

Int.	起始物質	結構	ESI-MS	R _t(HPLC) [min] (方法)	反應條件
3.2			350 [M+H] ⁺	0.26 (F)	溶劑：DMSO，110℃，10 min

酮前驅體之製備中間物 4 3 -[( 3 - 甲氧基 - 3 - 側氧基丙基 ) 硫基 ]- 3 - 甲基丁酸甲酯

在0℃下攪拌3-甲基-丁-2-烯酸甲酯(14.2 g，124 mmol)、含苯甲基三甲基銨氫氧化物之MeOH溶液(40%於MeOH中，1.0 g，6.2 mmol)及哌啶(8.5 g，99.8 mmol)於MeOH(50 mL)中之冷卻混合物15 min。其後在0℃下逐滴添加3-巰基丙酸甲酯(15.0 g，125 mmol)。將反應混合物加熱至60℃且攪拌24h。在冷卻至RT之後，添加乙醚(50 mL)且將混合物倒入10% H ₂SO ₄水溶液中且用二乙醚萃取三次。合併之有機層用NaHCO ₃飽和水溶液及鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮，得到所需中間物，其按原樣用於下一步驟中。 R _f(TLC)： 0.5 (PE/EtOAc = 1/0) ¹H NMR (300 MHz，氯仿-d) (以ppm計): 3.63 (s, 3H), 3.61 (s, 3H), 2.79 - 2.71 (m, 2H), 2.55 - 2.46 (m, 4H), 1.37 (s, 6H)。

中間物 5 6 , 6 - 二甲基 - 4 - 側氧基 噻𠮿 - 3 - 甲酸甲酯

向-78℃下之LDA (82.3 g，768 mmol)之溶液中緩慢添加3-[(3-甲氧基-3-側氧基丙基)硫基]-3-甲基丁酸甲酯(中間物 4，60.0 g，256 mmol)於THF (300 mL)中之溶液。在15℃下攪拌混合物12 h。反應混合物用10% H ₂SO ₄水溶液稀釋，隨後用石油醚萃取。有機相用鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且減壓濃縮。粗產物在120℃下減壓蒸餾。 R _f(TLC)： 0.7 (PE/EtOAc = 5/1) ESI-MS： 203 [M+H] ⁺R _t(LC-MS)： 1.014 min (方法X)

中間物 6 2 , 2 - 二甲基噻 𠮿 - 4 - 酮

在110℃下攪拌6,6-二甲基-4-側氧基噻𠮿-3-甲酸甲酯(中間物 5，40.0 g，98.9 mmol)於10% H ₂SO ₄水溶液(900 mL)中之混合物12 h。用石油醚萃取反應混合物，合併之有機層用NaHCO ₃飽和水溶液及鹽水洗滌，經Na ₂SO ₄乾燥，過濾且減壓濃縮。藉由矽膠管柱層析(石油醚/EtOAc，100:0至85:15)純化殘餘物，得到相應中間物。 ESI-MS： 144 [M] ⁺R _f(TLC)：0.4 (PE/EtOAc = 5/1)

中間物 7 2 , 2 - 二甲基 - 1 - l - 6 - 噻𠮿 - 1 , 1 , 4 - 三酮

向2,2-二甲基噻𠮿-4-酮(中間物 6，9.00 g，62.4 mmol)於EtOH (90 mL)中之混合物中添加mCPBA (16.2 g，93.9 mmol)。將混合物在RT下攪拌2h，隨後過濾且減壓濃縮濾液。藉由矽膠管柱層析(石油醚/EtOAc，85:15至65:35)純化混合物，得到相應中間物。 R _f(TLC)：0.3 (PE/EtOAc = 1/1) ¹H NMR (300 MHz，氯仿-d) (以ppm計): 3.33-3.40 (m, 2H), 2.84-2.97 (m, 2H), 2.81 (s, 2H), 1.45 (s, 6H)。

中間物 8 2 , 2 , 5 - 三甲基 - 1 - l - 6 - 噻𠮿 - 1 , 1 , 4 - 三酮

向在-78℃下冷卻之LDA (1M於THF/己烷中，14.8 mL，14.8 mmol)於10.0 mL THF中之溶液中緩慢添加2,2-二甲基-1-l-6-噻𠮿-1,1,4-三酮(中間物 7，2.0 g，11.4 mmol)及HMPA (2.6 mL，14.8 mmol)於THF (15 mL)中之混合物，使反應混合物之溫度保持低於-60℃。完成添加後，將混合物在-78℃下攪拌20 min，其後緩慢添加碘代甲烷(1.4 mL，22.7 mmol)於THF(10 mL)中之溶液。反應混合物在-78℃下進一步攪拌2 h，隨後使其達至RT且在RT下攪拌30 min。藉由添加NH ₄Cl水溶液(20 mL)，之後添加4 M HCl水溶液(10 mL)，將反應混合物在0℃下中和。在相分離之後，有機層用鹽水洗滌，有機相經Na ₂SO ₄乾燥，過濾且減壓濃縮。藉由矽膠管柱層析(CH/EtOAc，90:10至0:100)純化粗產物。 ESI-MS： 191 [M+H] ⁺GC-MS: 3.57 min (方法GC01)

中間物 9 3 - 二甲基噻 𠮿 - 4 - 酮

在-78℃下向噻𠮿-4-酮(20.0 g，172 mmol)及HMPA (39 mL，224 mmol)於THF(100 mL)中之混合物中添加LDA溶液(2 M於THF/庚烷中，100 mL，200 mmol)且所得混合物在-60℃下攪拌1 h。隨後逐滴添加碘代甲烷(16.1 mL，258 mmol)且使混合物達至RT，同時攪拌超過4 h。藉由添加半飽和NH ₄Cl水溶液(150 mL)中和反應混合物，且藉由添加4N HCl水溶液將其酸化至約pH 5。在用EtOAc萃取之後，合併之有機相用鹽水洗滌且經Na ₂SO ₄乾燥，過濾且減壓濃縮。藉由矽膠管柱層析(CH/EtOAc，6%-22%梯度)純化混合物。 ESI-MS： 130 [M] ⁺R _f(TLC)： 0.65 (環己烷/EtOAc = 3/1)

中間物 10 3 - 甲基 - 1 - l - 6 - 噻𠮿 - 1 , 1 , 4 - 三酮

向3-甲基噻𠮿-4-酮(中間物 9，1.3 g，8.64 mmol)於11.0 mL ACN中之混合物中添加0.00057M Na ₂.EDTA水溶液(7.5 mL，0.00428 mmol)。歷經20 min向此混合物中逐份添加過硫酸氫鉀(15.9 g，51.9 mmol)及NaHCO ₃(6.9 g，82.1 mmol)於去離子水(7.5 mL)中之混合物。將反應混合物在RT下攪拌2天。添加DCM (80 mL)且過濾混合物且用DCM沖洗。濾液經MgSO ₄乾燥且減壓濃縮。產物不經進一步純化即用於下一步驟。 ESI-MS： 161 [M-H] ^-R _f(TLC)： 0.4 (PE/EtOAc = 1/1)

中間物 11 ( 7R )- 1 , 4 - 二氧雜 - 8 - 氮雜螺 [ 4 . 5 ] 癸烷 - 7 , 8 - 二甲酸 8 - 三級丁基 7 - 甲酯

向配備有迪安-斯塔克分離器(Dean-Stark trap)之圓底燒瓶裝入1-三級丁基-2-甲基-(2R)-4-側氧基哌啶-1,2-二甲酸酯(3.00 g，11.7 mmol)、30.0 mL甲苯、乙二醇(2.30 mL，41.1 mmol)及p-TOSOH*H ₂O (220 mg，1.16 mmol)，且使混合物回流3 h。使反應混合物冷卻至RT且用飽和NaHCO ₃溶液洗滌。用EtOAc萃取水相且用鹽水洗滌有機相，經硫酸鈉乾燥，過濾且蒸發。產物不經進一步純化即用於下一步驟。 ESI-MS： 302 [M+H] ⁺R _t(HPLC)： 0.54 min (方法A)

中間物 12 ( 7R )- 8 -[ ( 三級丁氧基 ) 羰基 ] - 1 , 4 - 二氧雜 - 8 - 氮雜螺 [ 4 . 5 ] 癸烷 - 7 - 甲酸

將LiAlH ₄(1M於THF中，8.30 mL，8.30 mmol)置放於氬氣氛圍下之圓底燒瓶中。添加(7R)-1,4-二氧雜-8-氮雜螺[4.5]-癸烷-7,8-二甲酸8-三級丁基7-甲酯(中間物 11，1.00 g，3.32 mmol)於20.0 mL THF中之混合物，且將所得反應混合物在RT下攪拌15 min。小心地添加水(0.35 mL)，之後添加4M氫化鈉水溶液(1.05 mL)，且再次添加水(1.35 mL)。在RT下攪拌反應混合物30 min，隨後經矽藻土過濾，用THF洗滌且濃縮。藉由管柱層析(矽膠；CH/EtOAc=60/40至40/60)純化殘餘物。 ESI-MS： 274 [M+H] ⁺R _t(HPLC)： 0.43 min (方法A)

中間物 13 ( 7R )- 1 , 4 - 二氧雜 - 8 - 氮雜螺 [ 4 . 5 ] 癸烷 - 7 - 甲酸

向(7R)-8-[(三級丁氧基)羰基]-1,4-二氧雜-8-氮雜螺[4.5]癸烷-7-甲酸(中間物 12，270 mg，0.990 mmol)添加HCl (4M於二㗁烷中，5.00 mL，20.0 mmol)，且在RT下將混合物攪拌1 h。濃縮反應混合物，溶解於二乙醚中且再濃縮。殘餘物不經進一步純化即用於下一步驟中。 ESI-MS： 174 [M+H] ⁺R _t(HPLC)： 0.15 min (方法A)

中間物 14 ( 8aR )- 六氫螺 [[ 1 , 3 ] 㗁唑并 [ 3 , 4 - a ] 吡啶 - 7 , 2 '-[ 1 , 3 ] 二氧戊環 ]- 3 - 酮

向(7R)-1,4-二氧雜-8-氮雜螺[4.5]癸烷-7-甲酸(中間物 13，200 mg，0.95 mmol)之3.00 mL THF溶液添加DIPEA (332 µL，1.91 mmol)及1,1'-羰基二咪唑(160 mg，0.99 mmol)，且將混合物在RT下攪拌隔夜。用二乙醚稀釋反應混合物且用稀HCl水溶液洗滌。有機相用鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且蒸發。 ESI-MS： 200 [M+H] ⁺R _t(HPLC)： 0.26 min (方法A)

中間物 15( 8aR )- 六氫 - 1H -[ 1 , 3 ] 㗁唑并 [ 3 , 4 - a ] 吡啶 - 3 , 7 - 二酮

將濃硫酸(750 mL，14.0 mmol)逐滴添加至(8aR)-六氫螺[[1,3]㗁唑并[3,4-a]吡啶-7,2'-[1,3]二氧戊環]-3-酮(中間物 14，600 mg，3.01 mmol)於7.00 mL丙酮及7.00 mL水中之混合物中，且將混合物在70℃下攪拌隔夜。真空移除丙酮且使殘餘物分配於EtOAc與水之間。分離有機相，且用EtOAc萃取水相兩次。合併之有機相用鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮。使殘餘物與正庚烷共沸。 ESI-MS： 156 [M+H] ⁺R _t(HPLC)： 0.14 min (方法A)

中間物 16 2 - 亞環丙基乙酸甲酯

如WO 2007/107243, 第78頁中所述製備此中間物。將[(1-乙氧基環丙基)氧基]三甲基矽烷(2.00 g，11.5 mmol)於甲苯(4.0 mL)中之混合物緩慢添加至(三苯基亞膦基)乙酸甲酯(5.00 g，15.0 mmol)及苯甲酸(0.200 g，1.49 mmol)於甲苯(28.0 mL)中之混合物中。在80℃下攪拌反應混合物16 h。小心蒸發溶劑之後，藉由矽膠管柱層析(PE/DCM，100:0至0:100)純化混合物。 ESI-MS： 112 [M] ⁺R _f(TLC)： 0.66 (CH/EtOAc = 70/30)

中間物 17 3 -{[ 1 -( 2 - 甲氧基 - 2 - 側氧基乙基 ) 環丙基 ] 硫基 } 丙酸甲酯

將3-巰基丙酸甲酯(1.31 g，10.9 mmol)逐滴添加至2-亞環丙基乙酸甲酯(中間物 16，1.55 g，11.5 mmol)及三乙胺(112 mg，1.09 mmol)之混合物中。在60℃下攪拌所得混合物16 h。如藉由GC/MS監測反應完成後，將混合物用DCM及環己烷稀釋且藉由矽膠管柱層析(CH/EtOAC，93:7至40:60)純化。 ESI-MS： 233 [M+H] ⁺R _t(GC/MS)： 3.80 min (方法GC01) R _f(TLC)： 0.53 (CH/EtOAc = 70/30)

中間物 18 7 - 側氧基 - 4 - 硫雜螺 [ 2 . 5 ] 辛烷 - 6 - 甲酸甲酯

在氬氣氛圍下，將三氯化鋁(2.15 g，15.3 mmol)及19.0 mL DCM之混合物冷卻至0℃。歷經5 min緩慢添加三乙胺(2.15 mL，15.3 mmol)。將反應混合物用丙酮/冰浴冷卻至-5℃，且歷經5 min緩慢添加3-{[1-(2-甲氧基-2-側氧基乙基)環丙基]-硫基}丙酸甲酯(中間物 17，1.25 g，5.11 mmol)於6.00 mL DCM中之溶液，同時保持反應溫度在-5℃與0℃之間。在完成添加試劑後，反應混合物在0℃下攪拌 1 h，隨後在RT下再攪拌1.5 h。如藉由GC/MS監測反應完成後，將混合物倒入水中，隨後用1 N H ₂SO ₄水溶液酸化。分離各層且用DCM萃取水相。合併之有機相用水及鹽水洗滌且經Na ₂SO ₄乾燥，過濾且減壓濃縮。藉由管柱層析(矽膠，CH/EtOAC，93:7至40:60)純化殘餘物，得到標題化合物。 ESI-MS： 201 [M+H] ⁺R _t(GC/MS)： 3.65 min (方法GC01) R _f(TLC)： 0.59 (CH/EtOAc = 70/30)

中間物 19 4 - 硫雜螺 [ 2 . 5 ] 辛 - 7 - 酮

將7-側氧基-4-硫雜螺[2.5]辛烷-6-甲酸甲酯(中間物 18，600 mg，2.85 mmol)於1M H ₂SO ₄水溶液(25.0 mL)中之混合物在110℃下攪拌5.5 h。將反應混合物冷卻至RT，藉由添加飽和NaHCO ₃水溶液中和且用DCM萃取三次。合併之有機層經硫酸鈉乾燥，過濾且減壓濃縮，得到相應中間物。 ESI-MS： 143 [M-H] ^-R _f(TLC)： 0.50 (CH/EtOAc = 70/30)

中間物 20 2 -( 氧雜環丁 - 3 - 亞基 ) 乙酸甲酯

在0℃下將氧雜環丁-3-酮(10.2 g，142 mmol)於20.0 mL DCM中之溶液逐滴添加至(三苯基亞膦基)乙酸甲酯(49.7 g，149 mmol)於180 mL DCM中之預冷卻溶液中。在RT下攪拌90 min之後，減壓濃縮混合物，添加乙醚(400 mL)且混合物在回流溫度下聲波處理數分鐘。隨後，將混合物在0℃下攪拌15 min，冷卻至-15℃且攪拌15 min。隨後，過濾懸浮液，且用冰冷乙醚充分洗滌固體。減壓濃縮合併之濾液且藉由矽膠管柱層析(CH/EtOAc，75:25)純化。 ESI-MS： 129 [M+H] ⁺R _t(HPLC)： 0.26 min (方法A) R _f(TLC)： 0.42 (CH/EtOAc = 70/30)

中間物 21 3 -{[ 3 -( 2 - 甲氧基 - 2 - 側氧基乙基 ) 氧雜環丁 - 3 - 基 ] 硫基 } 丙酸甲酯

將3-巰基丙酸甲酯(3.74 g，29.6 mmol)逐滴添加至2-(氧雜環丁-3-亞基)乙酸甲酯(中間物 20，4.19 g，31.1 mmol)及三乙胺(302 mg，2.96 mmol)之混合物中。在60℃下攪拌所得混合物16 h。如藉由GC/MS監測反應完成後，用DCM及環己烷稀釋混合物且藉由矽膠管柱層析(CH/EtOAc，93:7至40:60)直接純化。 ESI-MS： 249 [M+H] ⁺R _t(GC/MS)： 4.21 min (方法GC01) R _f(TLC)： 0.15 (CH/EtOAc = 70/30)

中間物 22 8 - 側氧基 - 2 - 氧雜 - 5 - 硫雜螺 [ 3 . 5 ] 壬烷 - 7 - 甲酸甲酯

在氬氣氛圍下，將三氯化鋁(17.7 g，132 mmol)及173 mL脫氣DCM之混合物冷卻至0℃。歷經20 min緩慢添加三乙胺(18.6 mL，132 mmol)。將反應混合物用丙酮/冰浴冷卻至-5℃，且歷經20分鐘緩慢添加3-{[3-(2-甲氧基-2-側氧基乙基)氧雜環丁-3-基]硫基}-丙酸甲酯(中間物 21，11.5 g，44.1 mmol)於58.0 mL DCM中之溶液，同時保持反應溫度在-5℃與0℃之間。在完成添加試劑後，反應混合物在0℃下攪拌1 h，隨後在RT下再攪拌2 h。在如藉由GC/MS監測反應完成之後，將混合物倒入水中，隨後用1 N H ₂SO ₄水溶液酸化且攪拌30 min。分離各層且用DCM萃取水相。合併之有機相用水及鹽水洗滌且經Na ₂SO ₄乾燥，過濾且減壓濃縮。藉由矽膠管柱層析(CH/EtOAc，93:7至40:60)純化殘餘物，得到標題化合物。 ESI-MS： 217 [M+H] ⁺R _t(GC/MS)： 3.33 min (方法GC01) R _f(TLC)： 0.66 (CH/EtOAc = 50/50)

中間物 23 2 - 氧雜 - 5 - 硫雜螺 [ 3 . 5 ] 壬 - 8 - 酮

向8-側氧基-2-氧雜-5-硫雜螺[3.5]壬烷-7-甲酸甲酯(中間物 22，1.00 g，4.39 mmol)於10.0 mL DMSO中之溶液中添加氯化鈉(282 mg，4.83 mmol)及去離子水(0.28 mL，13.2 mmol)，且所得混合物立即在130℃下加熱4 h。在冷卻至RT之後，添加乙醚(100 mL)及5% LiCl水溶液(100 mL)且在RT下攪拌混合物10 min。在相分離之後，用乙醚萃取水層，合併之有機物用鹽水洗滌，經Na ₂SO ₄乾燥，過濾且減壓濃縮。藉由矽膠管柱層析(CH/EtOAC，90:10:12至0:100)純化混合物。 ESI-MS： 157 [M-H] ^-R _f(TLC)： 0.47 (CH/EtOAc = 50/50)

中間物 24 2 - 亞環丁基乙酸甲酯

如EP2192109，第52頁中所述來製備此中間物。將含有亞膦醯基乙酸甲酯(7.3 g，40.0 mmol)及氫化鈉(1.7 g，38.0 mmol)於THF (120 mL)中之混合物在0℃下攪拌1 h，隨後逐滴添加環丁酮(2.1 g，28.6 mmol)於THF (20 mL)中之溶液。完成添加之後，將混合物在RT下攪拌1.5 h。藉由添加NH ₄Cl飽和水溶液(100 mL)中和反應物且用己烷萃取混合物。合併之有機層用鹽水洗滌，經Na ₂SO ₄乾燥，過濾，小心地減壓濃縮(200毫巴，45℃下水浴)，且藉由矽膠管柱層析(CH/DCM，75:25至0:100)純化。 ESI-MS： 127 [M+H] ⁺R _f(TLC)： 0.20 (CH/DCM = 50/50)

中間物 25 3 -{[ 1 -( 2 - 甲氧基 - 2 - 側氧基乙基 ) 環丁基 ] 硫基 } 丙酸甲酯

在0℃下向含有2-亞環丁基乙酸甲酯(中間物 24，3.23 g，24.3 mmol)、哌啶(0.32 mL，3.23 mmol)、甲醇(0.322 mL，7.98 mmol)及苯甲基-三甲基銨氫氧化物(40%於MeOH中，0.32 mL，0.70 mmol)之混合物中添加3-巰基丙酸甲酯(2.85 mL，24.3 mmol)。使反應混合物在60℃下升溫16 h。如藉由GC/MS監測反應完成後，藉由矽膠管柱層析(CH/EtOAC，93:7至40:60)純化混合物。 ESI-MS： 247 [M+H] ⁺R _t(GC/MS)： 4.12 min (方法GC01) R _f(TLC)： 0.49 (CH/EtOAc = 70/30)

中間物 26 8 - 側氧基 - 5 - 硫雜螺 [ 3 . 5 ] 壬烷 - 7 - 甲酸甲酯

在氬氣氛圍下，將三氯化鋁(7.50 g，53.5 mmol)及70.0 mL DCM之混合物冷卻至0℃。歷經10 min緩慢添加三乙胺(7.51 mL，53.5 mmol)。將反應混合物用丙酮/冰浴冷卻至-5℃，且歷經10分鐘緩慢添加3-{[1-(2-甲氧基-2-側氧基乙基)環丁基]硫基}丙酸甲酯(中間物 25，4.6 g，17.8 mmol)於DCM (22.0 mL)中之溶液，同時保持反應溫度在-5℃與0℃之間。在完成添加試劑後，反應混合物在0℃下攪拌1.5 h，隨後在RT下攪拌1 h。將混合物倒入水中且用1 N H ₂SO ₄水溶液酸化。分離各層且用DCM萃取水相。合併之有機相用水及鹽水洗滌且經Na ₂SO ₄乾燥，過濾且減壓濃縮。藉由矽膠管柱層析(CH/EtOAC，95:5至50:50)純化殘餘物，得到標題化合物。 ESI-MS： 215 [M+H] ⁺R _t(GC/MS)： 3.15 min (方法GC01) R _f(TLC)： 0.65 (CH/EtOAc = 70/30)

中間物 27 5 - 硫雜螺 [ 3 . 5 ] 壬 - 8 - 酮

在110℃下攪拌8-側氧基-5-硫雜螺[3.5]壬烷-7-甲酸甲酯(中間物 26，3.0 g，13.4 mmol)於1 N H ₂SO ₄水溶液(121 mL，121 mmol)中之溶液8 h。冷卻反應混合物，用飽和NaHCO ₃水溶液中和且用DCM萃取。合併之有機相用鹽水洗滌，經Na ₂SO ₄乾燥，過濾且減壓濃縮。 ESI-MS： 155 [M] ⁺R _f(TLC)： 0.56 (CH/EtOAc = 70/30)

中間物 28中間物 28.01(通用程序) 4-(5- 氯 -2- 氟吡啶 - 3 - 基 )- 3 - 甲基㗁烷 - 4 - 醇

1)格林納(Grignard)中間物形成：在氬氣下，將3-溴-5-氯-2-氟吡啶(950 mg，4.29 mmol)於9.00 mL THF中之脫氣溶液冷卻至-15℃。逐滴添加異丙基氯化鎂氯化鋰錯合物(4.51 mL，4.50 mmol)且在-15℃下攪拌混合物10 min。 2)酮添加：隨後逐滴添加3-甲基四氫哌喃酮(0.68 mL，6.00 mmol)於3.0 mL THF中之溶液且添加完成之後，繼續在-15℃下攪拌30 min。用7.0 mL 1.0 M鹽酸水溶液在-15℃下小心地處理反應混合物。隨後，移除冷卻物且在RT下將混合物攪拌10 min。在相分離之後，減壓移除THF。用EtOAc萃取水相兩次。合併之有機相用水及鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且蒸發。藉由HPLC (Sunfire，ACN/H ₂O/TFA)純化殘餘物，得到順式/反式非鏡像異構體之混合物。 ESI-MS： 246 /248 [M+H] ⁺R _t(HPLC)： 0.42 / 0.46 min (方法A)

根據上文所述之通用程序(中間物 28.01)，以適當芳基鹵化物(3-溴-5-氯-2-氟吡啶或3,5-二溴-2-氟吡啶)為起始物質製備以下化合物：

Int.	立體化學	起始物質	結構	ESI-MS	R _t(HPLC或R _f(TLC)	反應條件*
28.02	ds-mix			290/292 [M+H] ⁺	R _t(HPLC)：0.43/0.48 min 方法A	溶劑：THF 1) 10 min，-15℃ 2) 30 min，-15℃
28.03				276/278 [M+H] ⁺	R _t(HPLC)：0.39 min 方法A	溶劑：THF 1) 30 min，-78℃ 2) 30 min，-78℃
28.04	ds-mix			-	R _f(TLC)：0.4 (PE/EtOAc = 3/1)	溶劑：THF 1) 10 min，-15℃ 2) 24 h，-30℃至RT
28.05				280/282 [M+H] ⁺	R _t(HPLC)：0.75 min 方法C	溶劑：THF 1) 10 min，-15℃ 2) 15 min，-15℃
28.06				324/326 [M+H] ⁺	R _t(HPLC)：0.36 min 方法A	溶劑：THF 1) 10 min，-15℃ 2) 30 min，-15℃
28.07	rac			308 [M+H] ⁺	R _t(HPLC)：0.82 min 方法C	溶劑：THF 1) 10 min，-50℃ 2) 10 min，-50℃
28.08	ds-mix			293/295 [M+H] ⁺	R _t(HPLC)：0.80 min 方法C	溶劑：THF 1) 10 min，-50℃ 2) -50℃至RT
28.09				274/276 [M+H-tBu] ⁺	R _t(HPLC)：1.01 min 方法C	溶劑：THF 1) 10 min，-50℃ 2) -50℃至RT
28.10	ds-mix			289/291 [M+H-tBu] ⁺	R _t(HPLC)：0.64/0.68 min (A)	溶劑：THF 1) 55 min，-78℃ 2) 0.1 eq LaCl ₃*LiCl錯合物，-65℃至RT
28.11	ds-rac			287/289 [M+H] ⁺	R _t(HPLC)：0.33/0.37 min 方法A	溶劑：THF 1) 15 min，-10℃ 2) 30 min，-10℃
28.12	rac			274/276 [M+H] ⁺	R _t(HPLC)：0.61 min 方法A	溶劑：THF 1) -78℃至-15℃，10 min 2) -15℃至RT
28.13	rac			290/292 [M+H] ⁺	R _t(HPLC)：0.48 min 方法A	溶劑：THF 1) 10 min，-78℃ 2) 15 min，-78℃及15 min，-15℃
28.14	rac			288/290 [M+H] ⁺	R _t(HPLC)：0.64 min (A)	溶劑：THF 1) 1 h，-78℃及10 min，RT 2) 30 min，-78℃至RT

* 1)格林納中間物形成；2)酮添加

中間物 29中間物 29.01及中間物 29.02(通用程序) 外消旋反式 5 - 溴 - 2 - 氟 - 3 -[ 4 - 氟 - 3 - 甲基㗁烷 - 4 - 基 ] 吡啶及 外消旋順式 5 - 溴 - 2 - 氟 - 3 -[ 4 - 氟 - 3 - 甲基氧雜環己 - 4 - 基 ] 吡啶

在0℃下向4-(5-溴-2-氟吡啶-3-基)-3-甲基㗁烷-4-醇(中間物 28 . 02，455 mg，1.57 mmol)於DCM (8.00 mL)中之溶液中逐滴添加三氟化雙(2-甲氧基乙基)胺基硫(DeoxoFluor) (50%於甲苯中，867 µL，2.35 mmol)。反應混合物在0℃下攪拌1h且隨後倒入NaHCO ₃水溶液中。在相分離之後，用DCM萃取水相，合併之有機物經硫酸鈉乾燥，過濾且蒸發。藉由製備型HPLC (Xbridge，ACN/H ₂O/TFA)純化殘餘物，得到兩種非鏡像異構體Int. 29 . 01及Int. 29 . 02。 Int. 29.01ESI-MS： 292/294 [M+H] ⁺R _t(HPLC)： 0.57 min (方法A) Int. 29.02ESI-MS： 292/294 [M+H] ⁺R _t(HPLC)： 0.62 min (方法A)

根據上文所述之通用程序(中間物 29.02)製備以下化合物：

Int.	立體化學	起始物質	結構	ESI-MS	R _t(HPLC或R _f(TLC)	反應條件
29.03	rac-cis			248/ 250 [M+H] ⁺	R _t(HPLC)： 0.90 min 方法Z	試劑：DeoxoFluor 溶劑：DCM 1 h, 0℃
29.04				278/ 280 [M+H] ⁺	R _t(HPLC)： 0.55 min 方法A	試劑：DeoxoFluor 溶劑：DCM 1 h, 0℃
29.05	ds-mix			302/ 304 [M+H] ⁺	R _f(TLC)：0.7 (PE/EtOAc = 3/1)	試劑：DAST 溶劑：DCM 12 h, RT
29.06				282/ 284 [M+H] ⁺	R _t(HPLC)： 0.43 min 方法A	試劑：DeoxoFluor 溶劑：DCM 1 h, 0℃
29.07				326/328 [M+H] ⁺	R _t(HPLC)： 0.44 min 方法A	試劑：DeoxoFluor 溶劑：DCM 1 h, 0℃
29.08				277 [M+H-tBu] ⁺	R _t(HPLC)： 1.18 min 方法C	試劑：DeoxoFluor 溶劑：DCM 1 h, 0℃
29.09	rac-trans			291/293 [M+H-tBu] ⁺	R _t(HPLC)： 0.75 min 方法A	試劑：DAST 溶劑：DCM 1 h, 0℃
29.10	rac-cis			291/293 [M+H-tBu] ⁺	R _t(HPLC)： 0.80 mn 方法A	試劑：DAST 溶劑：DCM 1 h, 0℃
29.11	rac			310/312 [M+H] ⁺	R _t(HPLC)： 0.93 min 方法C	試劑：DeoxoFluor 溶劑：DCM 1 h, 0℃
29.12	ds-mix			296/298 [M+H] ⁺	R _t(HPLC)： 0.80 min 方法C	試劑：DeoxoFluor 溶劑：DCM 1 h, 0℃
29.13	ds-mix			289/291 [M+H] ⁺	R _t(HPLC)： 0.44/0.47 min 方法A	試劑：DeoxoFluor 溶劑：DCM 3 h, RT
29.14	rac			276/278 [M+H] ⁺	R _t(HPLC)： 0.74 mn 方法A	試劑：DAST 溶劑：DCM 40 min, 0℃
29.15	rac			292/294 [M+H] ⁺	R _t(HPLC)： 0.58 min 方法A	試劑：DAST 溶劑：DCM 1.5 h, 0℃
29.16	rac			290/292 [M+H] ⁺	R _t(HPLC)： 0.78 min 方法A	試劑：DAST 溶劑：DCM 2 h, 0℃

中間物 29.18 外消旋反式三級丁基 - 4 -( 5 - 溴 - 2 - 氟吡啶 - 3 - 基 )- 4 - 氟 - 3 - 甲基哌啶 - 1 - 甲酸酯

根據Int. 29.09/29.10之製備，以3,5-二溴-2-氟吡啶及N-Boc-3-甲基-4-哌啶酮為起始物質以兩個合成步驟，之後HPLC分離，製備此等兩種中間物。 Int. 29.17ESI-MS： 335/337 [M+H] ⁺R _t(HPLC)： 0.75 min (方法A) Int. 29.18ESI-MS： 335/337 [M+H] ⁺R _t(HPLC)： 0.62 min (方法A)

中間物 30中間物 30.1(通用程序) 2 - 氟 - 3 -[ 4 - 氟 - 3 - 甲基㗁烷 - 4 - 基 ]- 5 -[ 2 -( 三甲基矽烷基 ) 乙炔基 ]- 吡啶

在氬氣下，向5-溴-2-氟-3-[4-氟-3-甲基㗁烷-4-基]吡啶(中間物 29 . 02，175 mg，0.60 mmol)於THF(3.0 mL)中之溶液中添加DIPEA (813 µL，4.49 mmol)、乙炔基三甲基矽烷(356 µL，2.40 mmol)、PdCl ₂(PPh ₃) ₂(42.0 mg，0.06 mmol)及碘化銅(I) (34.2 mg，0.18 mmol)。在80℃下攪拌混合物4 h。反應混合物用TFA酸化，用ACN/H ₂O稀釋，過濾且藉由HPLC (Xbridge，ACN/H ₂O/TFA)純化。 ESI-MS： 310 [M+H] ⁺R _t(HPLC)： 0.81 min (方法A)

根據上文所述之通用程序(中間物 30.1)製備以下化合物：

Int.	立體化學	起始物質	結構	ESI-MS	R _t(HPLC) [min] (方法)	反應條件
30.2	rac-trans			310 [M+H] ⁺	0.78 (A)	THF，4 h，80℃
30.3				344 [M+H] ⁺	0.67 (A)	THF，2.5 h，80℃

中間物 31 4-(5- 氯 -2- 氟吡啶 - 3 - 基 )- 4 - 羥基 - 2 , 2 , 5 - 三甲基 - 1 - l - 6 - 噻𠮿 - 1 , 1 - 二酮

向在氮氣氛圍下在-78℃下預冷卻之5-氯-2-氟吡啶(210 mg，1.60 mmol)於THF (20 mL)中之溶液中添加LDA溶液(2 M於THF/庚烷中，878 µL，1.76 mmol)且在-78℃下攪拌混合物20 min。其後添加2,2,5-三甲基-1-l-6-噻𠮿-1,1,4-三酮(中間物 8，305 mg，0.83 mmol)於10.0 mL THF中之溶液，且混合物在-78℃下攪拌45 min。使反應混合物達至RT，隨後再攪拌45 min。反應混合物用1 M HCl水溶液(20 mL)淬滅，隨後依次添加飽和NaCl溶液(40 mL)及EtOAc (50 mL)。在相分離之後，水相用EtOAc萃取。乾燥合併之有機相，過濾且蒸發。藉由矽膠管柱層析(CH/EtOAc = 90/10至0/100)純化殘餘物，得到順式/反式非鏡像異構體之混合物。 ESI-MS： 322/324 [M+H] ⁺R _t(HPLC)： 0.77 min (方法B)

中間物 32 4-(5- 氯 -2- 氟吡啶 - 3 - 基 )- 4 - 甲氧基 - 2 , 2 , 5 - 三甲基 - 1 - l - 6 - 噻𠮿 - 1 , 1 - 二酮

在氬氣下向4-(5-氯-2-氟吡啶-3-基)-4-羥基-2,2,5-三甲基-1- l -6-噻𠮿-1,1-二酮(中間物 31，107 mg，0.33 mmol)之2.5 mL DMF溶液添加NaH (50.8 mg，1.16 mmol)。在RT下攪拌反應混合物5 min，隨後添加碘甲烷(51.8 µL，0.830 mmol)且在RT下將混合物攪拌30 min。添加另一份碘甲烷(51.8 µL，0.830 mmol)且在RT下將混合物再攪拌1 h。混合物用10 mL半飽和NaHCO ₃溶液稀釋且用EtOAc萃取。合併之有機物用鹽水洗滌，乾燥，過濾且濃縮。藉由矽膠管柱層析(CH/EtOAc = 90/10至0/100)純化殘餘物，得到順式/反式非鏡像異構體之混合物。 ESI-MS： 336 / 338 [M+H] ⁺R _t(HPLC)： 0.84 min (方法C)

中間物 33 4-(5- 氯 -2 - 氟吡啶 - 3 - 基 )- 4 - 氟 - 2 , 2 , 5 - 三甲基 - 1 - l - 6 - 噻𠮿 - 1 , 1 - 二酮

將4-(5-氯-2-氟吡啶-3-基)-4-羥基-2,2,5-三甲基-1-l-6-噻𠮿-1,1-二酮(中間物 31，1.25 g，3.88 mmol)於20.0 mL二氯甲烷中之混合物用三氫氟化三乙胺(633 µL，3.88 mmol)處理且隨後冷卻至-78℃。逐滴添加DAST (2.05 mL，15.5 mmol)於10.0 mL DCM中之溶液。完成添加之後，使反應混合物在劇烈攪拌下經1 h達至RT。添加另一份DAST (2.05 mL，15.5 mmol)，隨後混合物在室溫下再攪拌1.5 h。藉由緩慢添加NaHCO ₃飽和水溶液(150 mL)使反應混合物在0℃下中和。將混合物在RT下攪拌20 min，添加DCM且分離各相。經硫酸鈉乾燥有機相，加以過濾且濃縮。藉由矽膠管柱層析(CH/EtOAc = 95/5至50/50)純化殘餘物，得到順式/反式非鏡像異構體之混合物。 ESI-MS： 324 / 326 [M+H] ⁺R _t(HPLC)： 0.87 min (方法B)

中間物 34中間物 34.1(通用程序) 4 - 氟 - 4 -( 2 - 氟 - 5 -{ 2 -[ 參 ( 丙 - 2 - 基 ) 矽烷基 ] 乙炔基 } 吡啶 - 3 - 基 )- 2 , 2 , 5 - 三甲基 - 1 - l - 6 - 噻𠮿 - 1 , 1 - 二酮

在氬氣下向4-(5-氯-2-氟吡啶-3-基)-4-氟-2,2,5-三甲基-1l6-噻𠮿-1,1-二酮(中間物 33，150 mg，0.44 mmol)之ACN (2.0 mL)溶液添加碳酸銫(172 mg，0.53 mmol)、乙炔基參(丙-2-基)矽烷(296 µl，1.32 mmol)、Brettphos (20.9 mg，0.04 mmol)及雙(乙腈)二氯化鈀(II) (5.71 mg，0.02 mmol)。反應混合物在90℃下攪拌2.5 h，隨後將其在RT下冷卻，用10.0 mL ACN稀釋，過濾且蒸發。藉由矽膠管柱層析(CH/EtOAc = 95/5至0/100)純化殘餘物，得到順式/反式非鏡像異構體之混合物。 ESI-MS： 470 [M+H] ⁺R _t(HPLC)： 1.27 min (方法B)

根據上文所述之通用程序(中間物 34.1)製備以下化合物：

Int.	立體化學	起始物質	結構	ESI-MS	R _t(HPLC) [min] (方法)	反應條件
34.2	rac			456 [M+H] ⁺	1.25 (B)	溶劑：ACN，2 h 90℃
34.3	ent			442 [M+H] ⁺	0.95 (A)	溶劑：ACN，1 h 20 min 90℃
34.4	ent			442 [M+H] ⁺	0.95 (A)	溶劑：ACN，1 h 20 min 90℃
34.5	ent			435 [M+H] ⁺	0.98 (A)	溶劑：ACN，1 h，90℃

中間物 35中間物 35.01及中間物 35.02(通用程序) (2S,4S)-4-({5 - 氯 - 3 -[( 3R , 4S )- 4 - 氟 - 3 - 甲基㗁烷 - 4 - 基 ] 吡啶 - 2 - 基 } 氧基 )- 1 -[ 4 -( 二氟甲基 )- 8 - 氧雜 - 3 , 5 - 二氮雜三環 [ 7 . 4 . 0 . 0 ² ^, ⁷ ] 十三 - 1 ( 13 ), 2 , 4 , 6 , 9 , 11 - 六烯 - 6 - 基 ] 吡咯啶 - 2 - 甲酸及 (2S,4S)-4-({5 - 氯 - 3 -[( 3S , 4R )- 4 - 氟 - 3 - 甲基㗁烷 -- 4 - 基 ] 吡啶 - 2 - 基 } 氧基 )- 1 -[ 4 -( 二氟甲基 )- 8 - 氧雜 - 3 , 5 - 二氮雜三環 [ 7 . 4 . 0 . 0 ² ^, ⁷ ] 十三 - 1 ( 13 ), 2 , 4 , 6 , 9 , 11 - 六烯 - 6 - 基 ] 吡咯啶 - 2 - 甲酸

向(2S,4S)-1-[4-(二氟甲基)-8-氧雜-3,5-二氮雜三環[7.4.0.02,7]-十三-1(9),2(7),3,5,10,12-六烯-6-基]-4-羥基吡咯啶-2-甲酸(中間物 3 . 2，404 mg，1.10 mmol)於中6.0 mL NMP之混合物中添加NaH (132 mg，3.30 mmol)及5-氯-2-氟-3-[4-氟-3-甲基㗁烷-4-基]吡啶(中間物 29 . 03，272 mg，1.10 mmol)。在RT下攪拌反應混合物16 h，隨後用ACN/水稀釋，用TFA酸化，過濾且藉由製備型HPLC(ACN/H ₂O/TFA)純化，得到兩種非鏡像異構體Int. 35 . 01及Int. 35 . 02。已藉由實例 3 . 01之X射線共結晶回顧性地評定絕對立體化學。 Int. 35.01ESI-MS： 577/579 [M+H]+ R _t(HPLC)： 0.77 min (方法A) Int. 35.02ESI-MS： 577/579 [M+H] ⁺R _t(HPLC)： 0.78 min (方法A)

根據上文所述之通用程序(中間物 35)製備以下化合物：

Int.	起始物質	結構	ESI-MS	R _t(HPLC) [min] (方法)	反應條件
35.03			607 / 609 [M+H] ⁺	0.75 (A)	溶劑：DMF，1 h RT
35.04			662 [M+H] ⁺	0.76 (A)	溶劑：DMF，2 h RT

中間物 36中間物 36.01 5- 氯 -2- 氟 - 3 -( 4 - 氟哌啶 - 4 - 基 ) 吡啶

向4-(5-氯-2-氟吡啶-3-基)-4-氟哌啶-1-甲酸三級丁酯(中間物 29 . 08，100 mg，0.30 mmol)之DCM (10 mL)溶液添加TFA (1.0 mL)。在RT下攪拌反應混合物隔夜，隨後將其濃縮且不經進一步純化即用於下一步驟。 ESI-MS： 233/235 [M+H] ⁺R _t(HPLC)： 0.64 min (方法C)

根據上文所述之通用程序(中間物 36.01)製備以下化合物：

Int.	立體化學	起始物質	結構	ESI-MS	R _t(HPLC) [min] (方法)	反應條件
36.02	rac-cis	Int. 29.10		247/249 [M+H] ⁺	0.36 (A)	溶劑：4N HCl/二㗁烷，45 min RT
36.03		Int. 29.18		291 / 293 [M+H] ⁺	0.36 (A)	溶劑：4N HCl/二㗁烷，RT

中間物 37中間物 37.01(通用程序) 4-(5- 氯 -2 - 氟吡啶 - 3 - 基 )- 4 - 氟哌啶 - 1 - 甲腈

向5-氯-2-氟-3-(4-氟哌啶-4-基)吡啶(中間物 36 . 01，100 mg，0.29 mmol)於DCM (5.0 mL)中之溶液中添加DIPEA (0.40 mL，2.31 mmol)，之後逐滴添加溴化氰(3M於DCM中，0.144 mL，0.43 mmol)。在RT下攪拌反應混合物隔夜，隨後用DCM稀釋且用水萃取。用DCM萃取合併之水相。蒸發合併之有機物且藉由製備型HPLC (ACN/H ₂O/TFA)純化殘餘物。 ESI-MS： 258 / 260 [M+H] ⁺R _t(HPLC)： 0.92 min (方法C)

根據上文所述之通用程序(中間物 37 . 01)製備以下化合物：

Int.	立體化學	起始物質	結構	ESI-MS	R _t(HPLC) [min] (方法)	反應條件
37.02	rac-cis			272/ 274 [M+H] ⁺	0.59 (A)	溶劑：DCM，DIPEA，1.5 h RT

中間物 38 外消旋順 - 1 - [ 4 -( 5 - 氯 - 2 - 氟吡啶 - 3 - 基 )- 4 - 氟 - 3 - 甲基哌啶 - 1 - 基 ] 乙 - 1 - 酮

向5-氯-2-氟-3-[4-氟-3-甲基哌啶-4-基]吡啶鹽酸鹽(中間物 36 . 02，110 mg，0.37 mmol)於DCM (4.0 mL)中之溶液中添加乙酸酐(88.0 µL，0.89 mmol)及三乙胺(155 µL，1.11 mmol)。在RT下攪拌反應混合物1 h，隨後用水中和且用DCM萃取。合併之有機物經Na ₂SO ₄乾燥，過濾且蒸發。 ESI-MS： 289 / 291 [M+H] ⁺R _t(HPLC)： 0.55 min (方法A)

中間物 38.01 外消旋順 - 1 -[ 4 -( 5 - 溴 - 2 - 氟吡啶 - 3 - 基 )- 4 - 氟 - 3 - 甲基哌啶 - 1 - 基 ] 乙 - 1 - 酮

向中間物 36 . 03(800 mg，2.44 mmol)及DIPEA (1.28 ml，7.33 mmol)於DCM (10 ml)中之溶液中添加乙醯氯(192 µl，2.69 mmol)。將混合物攪拌1 h，隨後用DCM稀釋且用碳酸氫鈉溶液萃取。分離有機層，真空濃縮且不經進一步純化即用於下一步驟中。 ESI-MS： 333 / 335 [M+H] ⁺R _t(HPLC)： 0.53 min (方法A)

中間物 39 外消旋順 - 5- 氯 -2 - 氟 - 3 -[ 4 - 氟 - 3 - 甲基 - 1 -( 氧雜環丁烷 - 3 - 基 ) 哌啶 - 4 - 基 ] 吡啶

向5-氯-2-氟-3-[4-氟-3-甲基哌啶-4-基]吡啶鹽酸鹽(中間物 36 . 02，110 mg，0.37 mmol)於THF (4.0 mL)中之溶液中添加氧雜環丁-3-酮(49.7 µL，0.85 mmol)及三乙醯氧基硼氫化鈉(234 mg，1.11 mmol)。在RT下攪拌反應混合物1h，隨後用1 N HCl水溶液(2.0 mL)酸化，用水及DCM稀釋，且劇烈攪拌10分鐘。在相分離之後，水相用NaHCO ₃水溶液中和且用DCM萃取。合併之有機物經Na ₂SO ₄乾燥，過濾且蒸發。 ESI-MS： 303 [M+H] ⁺R _t(HPLC)： 0.35 min (方法A)

中間物 40中間物 40.01及中間物 40.02 外消旋反式 4-(5- 氯 -2 - 氟吡啶 - 3 - 基 )- 4 - 甲氧基 - 3 - 甲基 - 1 - l - 6 - 噻𠮿 - 1 , 1 - 二酮及 外消旋順式 4-(5- 氯 -2 - 氟吡啶 - 3 - 基 )- 4 - 甲氧基 - 3 - 甲基 - 1 - l - 6 - 噻𠮿 - 1 , 1 - 二酮

向4-(5-氯-2-氟吡啶-3-基)-4-羥基-3-甲基-1-l-6-噻𠮿-1,1-二酮(中間物 28 . 08，100 mg，0.34 mmol)及碘甲烷(52.9 µL，0.85 mmol)於DMF (2.5 mL)中之溶液中添加氫化鈉(52 mg，1.19 mmol)，且將所得混合物在RT下攪拌10 min。添加乙酸乙酯且用半飽和NaHCO ₃水溶液及鹽水萃取有機相。合併之有機物經Na ₂SO ₄乾燥，過濾且濃縮。藉由製備型HPLC (ACN/H ₂O/NH ₃)純化殘餘物，得到呈外消旋混合物形式之順式-及反式-非鏡像異構體。 Int.40.01 (rac-trans) ：ESI-MS： 308/310 [M+H] ⁺R _t(HPLC)： 0.85 min (方法C) Int. 40.02 (rac-cis) ：ESI-MS： 308/310 [M+H] ⁺R _t(HPLC)： 0.88 min (方法C)

中間物 41 2 - 甲基 ( 2S , 4S )- 4 -[( 3 - 溴 - 5 - 氯吡啶 - 2 - 基 ) 氧基 ] 吡咯啶 - 1 , 2 - 二甲酸 1 - 三級丁 酯

將含有3-溴-5-氯吡啶-2-醇(500 mg，2.40 mmol)、1-三級丁基-2-甲基-(2S,4R)-4-羥基吡咯啶-1,2-二甲酸酯(706 mg，2.88 mmol)及三苯膦(755 mg，2.88 mmol)於THF (14 mL)中的混合物在0℃下冷卻。其後逐滴添加DIAD (565 µL，2.88 mmol)且將反應混合物在RT下攪拌隔夜。真空移除揮發物，將殘餘物溶解於DMF/ACN中且藉由製備型HPLC (ACN/H ₂O/TFA)純化，得到相應中間物。 ESI-MS： 435/437 [M+H] ⁺R _t(HPLC)： 1.18 min (方法C)

中間物 42 4,4,5,5- 四甲基 - 2 -{ 3 - 氧雜雙環 [ 4 . 1 . 0 ] 庚 - 6 - 基 }- 1 , 3 , 2 - 二氧硼㖦

根據由J. Med. Chem. 2019, 62, pp 6972-6984調整之程序製備此中間物。向冷卻至-5℃的2-(3,6-二氫-2H-哌喃-4-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼㖦(10.0 g，47.6 mmol)於DCM (100 mL)中之溶液中逐滴添加二乙基鋅於甲苯(119 mL，238 mmol)中的2M溶液。混合物在-5℃進一步攪拌5 min，隨後逐滴添加氯碘甲烷(84.0 g，476 mmol)於DCM(100 mL)中之溶液。將此混合物在-5℃下攪拌10 min，隨後在15℃下攪拌16 h。反應混合物用水稀釋且用EtOAc萃取，合併之有機層用鹽水洗滌且經Na ₂SO ₄乾燥，過濾且減壓濃縮。藉由矽膠管柱層析(PE/EtOAc：100:0至95:5)純化粗殘餘物。 ESI-MS： 224 [M+H] ⁺R _t(HPLC)： 1.02 min (方法W)

中間物 43 三氟 { 3 - 氧雜雙環 [ 4 . 4 .0] 庚 - 6 - 基 } 硼酸鉀

根據由J. Med. Chem. 2019, 62, pp 6972-6984調整之程序製備此中間物。在氬氣氛圍下製備中間物18.1 (0.8 g，3.66 mmol)於9.3 mL MeOH及9.3 mL ACN中之溶液，隨後添加氟化鉀(0.9 g，14.6 mmol)於去離子水(3.4 mL)中之水溶液。在RT下攪拌此懸浮液10分鐘。其後添加L-(+)-酒石酸(1.1 g，7.32 mmol)，之後加THF (0.4 mL)，且將混合物在RT下攪拌75 min，隨後靜置隔夜。過濾沈澱且用ACN洗滌。將濾液濃縮至乾燥，隨後使其與甲苯共沸三次且用乙醚濕磨三次，得到所需中間物，其不經進一步純化即直接用於下一步驟中。 ESI-MS： 165 [M-H] ⁺R _t(HPLC)： 1.03 min (方法W)

中間物 44 ( 2S , 4S )- 4 -[( 5 - 氯 - 3 -{ 3 - 氧雜雙環 [ 4 . 1 . 0 ] 庚 - 6 - 基 } 吡啶 - 2 - 基 ) 氧基 ]- 吡咯啶 - 1 , 2 - 二甲酸 1 - 三級丁基 2 - 甲酯

向(2S,4S)-4-[(3-溴-5-氯吡啶-2-基)氧基]吡咯啶-1,2-二甲酸1-三級丁基-2-甲酯(中間物 41，300 mg，0.69 mmol)於二㗁烷(10 mL)中之溶液中依次添加三氟({3-氧雜雙環[4.1.0]-庚-6-基})硼酸鉀(中間物 43，140 mg，0.69 mmol)、Pd(dppf)Cl ₂(56.2 mg，0.07 mmol)、K ₂CO ₃(190 mg，1.38 mmol)及水(500 µL)。在100℃攪拌混合物隔夜。藉由製備型HPLC (ACN/H ₂O/TFA)純化反應混合物，得到相應純中間物。 ESI-MS： 453/455 [M+H] ⁺R _t(HPLC)： 1.04 min (方法C)

中間物 45 ( 2S , 4S )- 4 -[( 3 -{ 3 - 氧雜雙環 [ 4 . 1 . 0 ] 庚 - 6 - 基 }- 5 -{ 2 -[ 參 ( 丙 - 2 - 基 ) 矽烷基 ]- 乙炔基 } 吡啶 - 2 - 基 ) 氧基 ] 吡咯啶 - 1 , 2 - 二甲酸 1 - 三級丁基 - 2 - 甲酯

在氬氣下向(2S,4S)-4-[(5-氯-3-{3-氧雜雙環[4.1.0]庚-6-基}吡啶-2-基)氧基]吡咯啶-1,2-二甲酸1-三級丁基2-甲酯(中間物 44，200 mg，0.44 mmol)之4.00 mL ACN溶液添加乙炔基參(丙-2-基)矽烷(396 µL，1.77 mmol)、Xphos (21.0 mg，0.04 mmol)、雙(乙腈)二氯化鈀(II) (5.73 mg，0.02 mmol)及碳酸銫(172 mg，0.53 mmol)。將混合物在90℃下攪拌5 h，隨後用ACN稀釋且藉由管柱層析(矽膠；CH/EtOAc = 88/12至45/55)純化。 ESI-MS： 599 [M+H] ⁺R _t(HPLC)： 1.31 min (方法C)

中間物 46 ( 2S , 4S )- 4 -[( 3 -{ 3 - 氧雜雙環 [ 4 . 1 . 0 ] 庚 - 6 - 基 }- 5 -{ 2 -[ 參 ( 丙 - 2 - 基 ) 矽烷基 ] 乙炔基 } 吡啶 - 2 - 基 ) 氧基 ] 吡咯啶 - 2 - 甲酸甲酯

向(2S,4S)-4-[(3-{3-氧雜雙環[4.1.0]庚-6-基}-5-{2-[參(丙-2-基)矽烷基]乙炔基}吡啶-2-基)氧基]吡咯啶-1,2-二甲酸1-三級丁基-2-甲酯(中間物 45，200 mg，0.33 mmol)於DCM (2.0 mL)中之溶液中添加TFA (130 µL，1.69 mmol)。將混合物在RT下攪拌隔夜。濃縮反應混合物且不經進一步純化即用於下一步驟。 ESI-MS： 499 [M+H] ⁺R _t(HPLC)： 1.00 min (方法C)

中間物 47 ( 2S , 4S )- 4 -[( 3 -{ 3 - 氧雜雙環 [ 4 . 1 . 0 ] 庚 - 6 - 基 }- 5 -{ 2 -[ 參 ( 丙 - 2 - 基 ) 矽烷基 ] 乙炔基 } 吡啶 - 2 - 基 ) 氧基 ]- 1 -[ 4 -( 三氟甲基 )- 8 - 氧雜 - 3 , 5 - 二氮雜三環 -[ 7 . 4 . 0 . 02 , 7 ] 十三 - 1 ( 13 ), 2 ( 7 ), 3 , 5 , 9 , 11 - 六烯 - 6 - 基 ] 吡咯啶 - 2 - 甲酸甲酯

向6-氯-4-(三氟甲基)-8-氧雜-3,5-二氮雜三環[7.4.0.02,7]十三-1(9),2,4,6,10,12-六烯(中間物 2 . 1，60.0 mg，0.22 mmol)於DMF (2.0 mL)中之溶液中添加(2S,4S)-4-[(3-{3-氧雜雙環[4.1.0]庚-6-基}-5-{2-[參(丙-2-基)矽烷基]乙炔基}吡啶-2-基)氧基]-吡咯啶-2-甲酸甲酯(中間物 46，110 mg，0.22 mmol)及K ₂CO ₃(121 mg，0.88 mmol)。將混合物在RT下攪拌隔夜。反應混合物用冰水淬滅且用TFA酸化。將混合物在RT下攪拌1h。將EtOAc添加至混合物中且分離各相。乾燥有機相，真空濃縮且不經進一步純化即使用。 ESI-MS： 735 [M+H] ⁺R _t(HPLC)： 1.33 min (方法W)

中間物 48 ( 2S , 4S )- 4 -[( 5 - 乙炔基 - 3 -{ 3 - 氧雜雙環 [ 4 . 1 . 0 ] 庚 - 6 - 基 } 吡啶 - 2 - 基 ) 氧基 ]- 1 -[ 4 -( 三氟甲基 )- 8 - 氧雜 - 3 , 5 - 二氮雜三環 [ 7 . 4 . 0 . 02 , 7 ] 十三 - 1 ( 13 ), 2 ( 7 ), 3 , 5 , 9 , 11 - 六烯 - 6 - 基 ] 吡咯啶 - 2 - 甲酸甲酯

向(2S,4S)-4-[(3-{3-氧雜雙環[4.1.0]庚-6-基}-5-{2-[參(丙-2-基)矽烷基]乙炔基}吡啶-2-基)氧基]-1-[4-(三氟甲基)-8-氧雜-3,5-二氮雜-三環-[7.4.0.0 ² ^, ⁷]十三-1(13),2(7),3,5,9,11-六烯-6-基]吡咯啶-2-甲酸甲酯(中間物 47，90.0 mg，0.12 mmol)於2-甲基四氫呋喃(2.0 mL)中之溶液中添加TBAF (183 µL，0.18 mmol)。將混合物在RT下攪拌隔夜。濃縮反應混合物且藉由矽膠管柱層析(CH/EtOAc = 88/12至40/60)純化，得到相應中間物。 ESI-MS： 579 [M+H] ⁺R _t(HPLC)： 1.11 min (方法C)

中間物 49中間物 49.1及中間物 49.2 外消旋反 -4-(5- 氯 -2 - 氟吡啶 - 3 - 基 )- 4 - 氟 - 3 - 甲基 - 1 λ ⁶ - 噻𠮿 -1,1- 二酮及 外消旋順 - 4-(5- 氯 -2 - 氟吡啶 - 3 - 基 )- 4 - 氟 - 3 - 甲基 - 1 λ ⁶ - 噻𠮿 -1,1- 二酮

藉由製備型RP-HPLC (ACN/H2O/TFA)純化4-(5-氯-2-氟吡啶-3-基)-4-氟-3-甲基-1λ ⁶-噻𠮿-1,1-二酮(中間物 29 . 12，277 mg，0.94 mmol)。 Int. 49.1 (rac-trans)ESI-MS： 296/298 [M+H] ⁺R _t(HPLC)： 0.75 min (方法C) Int. 49.2 (rac-cis)ESI-MS： 296/298 [M+H] ⁺R _t(HPLC)： 0.77 min (方法C)

中間物 50中間物 50.1及中間物 50.2 (3S,4S)-4-(5- 氯 -2- 氟吡啶 -3- 基 )-4- 氟 -3- 甲基 -1 λ ⁶ - 噻𠮿 -1,1- 二酮及 (3R,4R)-4-(5- 氯 -2- 氟吡啶 -3- 基 )-4- 氟 -3- 甲基 -1 λ ⁶ - 噻𠮿 -1,1- 二酮

藉由對掌性SFC純化外消旋順式-4-(5-氯-2-氟吡啶-3-基)-4-氟-3-甲基-1λ ⁶-噻𠮿-1,1-二酮(中間物 49 . 2，830 mg，2.81 mmol)，分離兩種順式鏡像異構體。自實例 1 . 13之結合於人類cGAS之共晶體結構回顧性地評定絕對立體化學。 SFC製備型報告：管柱Chiralpak® IG_20×250 mm_5 µm，溶劑：scCO ₂(90 %)，MeOH+20mM NH ₃(10 %)，BPR：150巴，CT：40℃，流速：60 mL/min，裝置Sepiatec 1 Prep SFC 100。 Int. 50.1 ：R _t(SFC)：1.02 min (方法E) Int. 50.2 ：R _t(SFC)：1.34 min (方法E)

中間物 51中間物 51.1及中間物 51.2 (4S)-4-(5- 氯 -2- 氟吡啶 -3- 基 )-4- 氟 -2,2- 二甲基 -1 λ ⁶ - 噻𠮿 -1,1- 二酮及 (4R)-4-(5- 氯 -2- 氟吡啶 -3- 基 )-4- 氟 -2,2- 二甲基 -1 λ ⁶ - 噻𠮿 -1,1- 二酮

藉由對掌性SFC純化4-(5-氯-2-氟吡啶-3-基)-4-氟-2,2-二甲基-1λ ⁶-噻𠮿-1,1-二酮(中間物 29 . 11，100 mg，0.32 mmol)，得到純非鏡像異構體(管柱CHIRAL ART® Cellulose-SC_10×250 mm_5 µm，溶劑：scCO ₂(90 %)，MeOH+20mM NH ₃(10 %)，BPR：150巴，CT：40℃，流速：10 mL/min，裝置Mini Gram)。自實例 2 . 08之結合於人類cGAS之共晶體結構回顧性地評定絕對立體化學。 Int.51.1 ：R _t(HPLC)： 0.84 min (方法C) Int.51.2 ：R _t(HPLC)： 1.06 min (方法C)

中間物 52中間物 52.1(通用程序) 7-(5- 氯 -2- 氟吡啶 -3- 基 )-7- 氟 -4-l-6- 硫雜螺 [2.5] 辛烷 -4,4- 二酮

向5-氯-2-氟-3-{7-氟-4-硫雜螺[2.5]辛-7-基}吡啶(中間物 29 . 14，100 mg，0.34 mmol)之1.00 mL乙酸溶液添加過氧化氫(30%水溶液，173 µL，1.72 mmol)且在室溫下攪拌混合物16 h。再次添加過氧化氫(30%水溶液，173 µL，1.72 mmol)，且在RT下將混合物攪拌5 h。反應混合物用1.0 mL乙酸稀釋且在RT下攪拌17 h，隨後用NaHCO ₃飽和水溶液中和且用DCM萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機相，過濾且蒸發。 ESI-MS： 308 / 310 [M+H] ⁺R _t(HPLC)： 0.51 min (方法A)

根據上文所述之通用程序(中間物 52.1)製備以下化合物：

Int.	立體化學	起始物質	結構	ESI-MS	R _t(HPLC) [min] (方法)	反應條件
52.2	rac			324/326 [M+H] ⁺	0.45 (A)	溶劑：乙酸，RT 3.5 h，RT 18 h，RT 7 h
52.3	rac			322/324 [M+H] ⁺	0.17 (A)	溶劑：乙酸，RT 24 h，RT 3 h

中間物 53 (2S,4S)-1-[4- ( 二氟甲基 )- 8 - 氧雜 - 3 , 5 - 二氮雜三環 [ 7 . 4 . 0 . 0 ² ^, ⁷ ] 十三 - 1 ( 9 ), 2 ( 7 ), 3 , 5 , 10 , 12 - 六烯 - 6 - 基 ]- 4 -({ 3 -[( 3S , 4R )- 4 - 氟 - 3 - 甲基㗁烷 - 4 - 基 ]- 5 -( 4 , 4 , 5 , 5 - 四甲基 - 1 , 3 , 2 - 二氧硼㖦 - 2 - 基 )- 吡啶 - 2 - 基 } 氧基 ) 吡咯啶 - 2 - 甲酸

向中間物35.04 (1.50 g，2.29 mmol)、雙-(頻哪醇基)-二硼(675 mg，2.52 mmol)、乙酸鉀(475 mg，4.60 mmol)及二㗁烷(30 mL)之脫氣混合物添加(1,1'-雙-(二苯膦基)-二茂鐵)-二氯化鈀(II) (175 mg，0.228 mmol)。在90℃下攪拌混合物3 h。逐滴添加冰水，隨後用乙醚/THF萃取產物。分離有機層，用硫酸鈉乾燥，且減壓濃縮。經由矽膠(EtOAc/MeOH=10:1)過濾粗產物且蒸發。 ESI-MS： 669 [M+H] ⁺R _t(HPLC)： 0.81 min (方法A)

中間物 60 2 - 氟 - 3 -[( 3S , 4R )- 4 - 氟 - 3 - 甲基 - 1 -( 氧雜環丁烷 - 3 - 基 ) 哌啶 - 4 - 基 ]- 5 -( 丙 - 1 - 炔 - 1 - 基 ) 吡啶

在氬氣下將丙炔(1 mol/L於THF中，1.17 mL，3.00 eq.)、Xphos (18.6 mg，10 mol%)、雙(乙腈)二氯化鈀(II)(5.06 mg，5 mol%)及碳酸銫(152 mg，1.20 eq.)依次添加至外消旋順-5-氯-2-氟-3-[4-氟-3-甲基-1-(氧雜環丁烷-3-基)哌啶-4-基]吡啶(中間物 39，124 mg，0.39 mmol)於ACN中之脫氣溶液。將反應混合物在90℃下攪拌1.5 h，隨後濃縮且藉由矽膠管柱層析(CH/EtOAc = 80/20至0/100)純化。 ESI-MS： 307 [M+H] ⁺R _t(HPLC)： 0.38 min (方法A)

中間物 61 外消旋順式 1 -[ 4 - 氟 - 4 -[ 2 - 氟 - 5 -( 丙 - 1 - 炔 - 1 - 基 ) 吡啶 - 3 - 基 ] - 3 - 甲哌啶 - 1 - 基 ] 乙 - 1 - 酮

向外消旋順-1-[4-(5-氯-2-氟吡啶-3-基)-4-氟-3-甲基哌啶-1-基]乙-1-酮(中間物 38，166 mg，0.500 mmol)於無水ACN (3.0 mL)中之脫氣溶液依次添加丙炔(1 mol/L於THF中，1.50 mL，1.50 mmol)、Xphos (23.8 mg，0.050 mmol)、雙(乙腈)二氯化鈀(II)(6.5 mg，0.025 mmol)及碳酸銫(195 mg，0.600 mmol)。將混合物在90℃下攪拌1 h，隨後冷卻至RT，用ACN稀釋，過濾且蒸發至乾燥。藉由矽膠層析(CH/EtOAc 20% →100%)純化粗產物。 ESI-MS： 293 [M+H] ⁺R _t(HPLC)： 0.55 min (方法A)

最終化合物之製備 實例 1.01 ( 通用途徑 ) (2S,4S)-4-({5- 氯 -3-[(3S,4R)-4- 羥基 - 3 - 甲基㗁烷 - 4 - 基 ] 吡啶 - 2 - 基 } 氧基 )- 1 -[ 4 -( 二氟 - 甲基 )- 8 - 氧雜 - 3 , 5 - 二氮雜三環 [ 7 . 4 . 0 . 0 ² ^, ⁷ ] 十三 - 1 ( 13 ), 2 , 4 , 6 , 9 , 11 - 六烯 - 6 - 基 ] 吡咯啶 - 2 - 甲酸

向(2S,4S)-1-[4-(二氟甲基)-8-氧雜-3,5-二氮雜三環[7.4.0.02,7]十三-1(9),2(7),3,5,10,12-六烯-6-基]-4-羥基吡咯啶-2-甲酸(中間物 3 . 2，147mg，0.40mmol)之2.00 mL DMA溶液添加NaH (48.0 mg，1.20 mmol)，將混合物在RT下攪拌30 min。添加4-(5-氯-2-氟吡啶-3-基)-3-甲基㗁烷-4-醇(中間物 28 . 01，147 mg，0.60 mmol)於2.00 mL DMA中之混合物且將反應混合物在RT下攪拌1 h，隨後用ACN/水稀釋，用TFA酸化，過濾且藉由RP-HPLC(XBridge C-18，ACN/H2O/TFA)純化，得到呈所有四種非鏡像異構體混合物形式之粗產物。在SFC條件(管柱：BEH_2-EP，10×250 mm，5µm；MeOH/CO ₂= 10/90，CT：40℃，BPR：120巴，流速：10 mL/min)下純化之後，獲得呈純鏡像異構體之實例 1 . 01。自實例 1 . 01之結合於人類cGAS之共晶體評定絕對立體化學。 ESI-MS： 575 [M+H] ⁺R _t(HPLC)： 2.27 min (方法I)

根據上文所述之通用程序(實例 1.01)製備以下化合物：

Ex.	起始物質	結構	ESI-MS	R _t(HPLC) [min] (方法)	反應條件
1.02	Int. 3.2+ Int. 30.1		567 [M+H] ⁺	0.54 (D)	NMP，RT，1 h
RP-HPLC：XBridge C-18； SFC：MeOH(20 mM NH ₃)/CO ₂；管柱：Torus-2-PIC，10×250 mm，5µm；CT：40℃；BPR：120巴，流速：10 mL/min
1.03	Int. 3.2+ Int. 30.2		567 [M+H] ⁺	3.10 (G)	NMP，RT，1 h
RP-HPLC：XBridge C-18； SFC：IPA(20 mM NH ₃)/CO ₂= 25/75；管柱：Chiralpak® IG，10×250 mm，5µm；CT：40℃；BPR：140巴，流速：10 mL/min
1.04	Int. 3.1+ 30.2		585 [M+H] ⁺	1.17 (K)	NMP，RT，1 h
RP-HPLC：XBridge C-18； SFC：IPA(20 mM NH ₃)/CO ₂= 20/80；管柱：CHIRAL ART® Amylose-AC_N_10×250 mm，5µm；CT：40℃；BPR：150巴，流速：10 mL/min
1.05	Int. 3.2+ Int. 32		665 [M+H] ⁺	1.87 (M)	DMF，RT，2 h
RP-HPLC：Agilent Zorbax SB C-18； SFC：IPA(20 mM NH ₃)/CO ₂= 30/70；管柱：CHIRAL ART® Amylose-C_neo_20×250 mm，5µm；CT：40℃；BPR：150巴，流速：10 mL/min
1.06	Int. 3.1+ Int. 33		671 [M+H] ⁺	2.93 (N)	DMF，RT，2 h
RP-HPLC：Waters Sunfire C-18； SFC：MeOH(20 mM NH ₃)/CO ₂= 20/80；管柱：CHIRAL ART® Cellulose-SC 20×250 mm，5µm；CT：40℃；BPR：150巴，流速：10 mL/min
1.07	Int. 3.1+ Int. 33		671 [M+H] ⁺	3.41 (N)	DMF，RT，2 h
RP-HPLC：Waters Sunfire C-18； SFC：MeOH(20 mM NH ₃)/CO ₂= 20/80；管柱：CHIRAL ART® Cellulose-SC 20×250 mm，5µm；CT：40℃；BPR：150巴，流速：10 mL/min
1.08	Int. 3.1+ Int. 34.1		661 [M+H] ⁺	2.06 (M)	NMP，40℃，2 h
RP-HPLC：Agilent Zorbax SB C-18； SFC：IPA(20 mM NH ₃)/CO ₂= 30/70；管柱：CHIRAL ART® Amylose-C_neo_20×250 mm，5µm；CT：40℃；BPR：150巴，流速：10 mL/min
1.09	Int. 3.2+ Int. 34.1		643 [M+H] ⁺	3.07 (O)	NMP，40℃，2 h
RP-HPLC：Agilent Zorbax SB C-18； SFC：MeOH(20 mM NH ₃)/CO ₂= 25/75；管柱：CHIRAL ART® Cellulose-SC 10×250 mm，5µm；CT：40℃；BPR：150巴，流速：10 mL/min
1.10	Int. 3.2+ Int. 34.1		643 [M+H] ⁺	3.63 (O)	NMP，40℃，2 h
RP-HPLC：Agilent Zorbax SB C-18； SFC：MeOH(20 mM NH ₃)/CO ₂= 25/75；管柱：CHIRAL ART® Cellulose-SC 10×250 mm，5µm；CT：40℃；BPR：150巴，流速：10 mL/min
1.11	Int. 3.2+ Int. 49.1		625 [M+H] ⁺	3.56 (Q)	DMF，RT，30 min
SFC：MeOH(20 mM NH ₃) /CO ₂；管柱：Torus-2-PIC，10×250 mm，5µm；CT：40℃；BPR：120巴，流速：10 mL/min
1.12	Int. 3.2+ Int. 49.2		625 [M+H] ⁺	3.45 (P)	DMF，RT，1 h
SFC：MeOH(20 mM NH ₃)/CO ₂= 30/70；管柱：CHIRAL ART® Cellulose-SC 10×250 mm，5µm；CT：40℃；BPR：150巴，流速：10 mL/min
1.13	Int. 3.2+ Int. 49.2		625 [M+H] ⁺	3.17 (P)	DMF，RT，1 h
SFC：MeOH(20 mM NH ₃)/CO ₂= 30/70；管柱：CHIRAL ART® Cellulose-SC 10×250 mm，5µm；CT：40℃；B PR：150巴，流速：10 mL/min
1.14	Int. 3.1+ Int. 34.2		647 [M+H] ⁺	4.36 (Q)	NMP，RT，隔夜
SFC：MeOH(20 mM NH ₃)/CO ₂= 35/65；管柱：Chiralpak@ IG 10×250 mm，5µm；CT：40℃；BPR：150巴，流速：10 mL/min
1.15	Int. 3.2+ Int. 34.2		629 [M+H] ⁺	4.61 (R)	NMP，RT，隔夜
SFC：MeOH(20 mM NH ₃)/CO ₂= 40/60；管柱：Chiralpak@ IG 10×250 mm，5µm；CT：40℃；BPR：150巴，流速：10 mL/min
1.16	Int. 3.2+ Int. 33		653 [M+H] ⁺	2.62 (K)	DMF，RT，2 h
RP-HPLC：Agilent Zorbax SB C-18； SFC：MeOH(20 mM NH ₃)/CO ₂= 20/80；管柱：CHIRAL ART® Cellulose-SC 10×250 mm，5µm；CT：40℃；BPR：150巴，流速：10 mL/min
1.17	Int. 3.2+ Int. 52.1		637 [M+H] ⁺	4.09 (O)	NMP，RT 1h
RP-HPLC：XBridge C-18； SFC：MeOH(20 mM NH ₃)/CO ₂= 25/75；管柱：CHIRAL ART® Cellulose-SC 10×250 mm，5µm；CT：40℃；BPR：150巴，流速：10 mL/min
1.18	Int. 3.2+ Int. 52.1		637 [M+H] ⁺	4.47 (O)	NMP，RT 1h
RP-HPLC：XBridge C-18； SFC：MeOH(20 mM NH ₃)/CO ₂= 25/75；管柱：CHIRAL ART® Cellulose-SC 10×250 mm，5µm；CT：40℃；BPR：150巴，流速：15 mL/min
1.19	Int. 3.2+ Int. 52.2		653 [M+H] ⁺	1.49 (Y)	NMP，RT 1.5 h
RP-HPLC：XBridge C-18； SFC：EtOH (20 mM NH ₃)/CO ₂= 40/60；管柱：Chiralpak@ IG 10×250 mm，5µm；CT：40℃；BPR：150巴，流速：60 mL/min
1.20	Int. 3.2+ Int. 52.2		653 [M+H] ⁺	2.38 (Y)	NMP，RT，1.5 h
RP-HPLC：XBridge C-18； SFC：EtOH (20 mM NH ₃)/CO ₂= 40/60；管柱：Chiralpak@ IG 10×250 mm，5µm；CT：40℃；BPR：150巴，流速：60 mL/min
1.21	Int. 3.2+ Int. 52.3		651 [M+H] ⁺	2.23 (Y)	NMP，RT，1.5 h
RP-HPLC：XBridge C-18； SFC：EtOH (20 mM NH ₃)/CO ₂= 40/60；管柱：Chiralpak@ IG 10×250 mm，5µm；CT：40℃；BPR：150巴，流速：15 mL/min
1.22	Int. 3.2+ Int. 38		618 [M+H] ⁺	3.27 (U)	NMP，RT，2 h
RP-HPLC：XBridge C-18； SFC：MeOH(20 mM NH ₃)/CO ₂；管柱：Torus-DEA，CT：40℃；BPR：120巴
1.23	Int. 3.2+ Int. 39		632 [M+H] ⁺	2.36 (T)	溶劑：NMP，RT 2 h
RP-HPLC：XBridge C-18； SFC：MeOH(20 mM NH ₃)/CO ₂；管柱：BEH ；CT：40℃；BPR：120巴
1.24	Int. 3.2+ Int. 37.02		619 / 621 [M+H] ⁺	3.37 (L)	溶劑：NMP，RT 2 h
RP-HPLC：XBridge C-18； SFC：MeOH(20 mM NH ₃)/CO ₂；管柱：Torus-2-PIC ；CT：40℃；BPR：120巴
1.25	Int. 3.2+ Int. 29.05		631/633 [M+H] ⁺	2.27 (V)	溶劑：DMA，RT 1 h
RP-HPLC：Sunfire C-18； SFC：MeOH(20 mM NH ₃)/CO ₂；管柱：BEH_2-EP；CT：40℃；BPR：120巴

實例 2.01 ( 通用途徑 ) (2S,4S)-4-{[5- 氯 -3-(4- 氟 - 1 , 1 - 二側氧基 - 1 - l - 6 - 噻𠮿 - 4 - 基 ) 吡啶 - 2 - 基 ] 氧基 }- 1 -[ 4 -( 二氟甲基 )- 8 - 氧雜 - 3 , 5 - 二氮雜三環 [ 7 . 4 . 0 . 0 ² ^, ⁷ ] 十三 - 1 ( 13 ), 2 , 4 , 6 , 9 , 11 - 六烯 - 6 - 基 ] 吡咯啶 - 2 - 甲酸

向(2S,4S)-1-[4-(二氟甲基)-8-氧雜-3,5-二氮雜三環[7.4.0.0 ² ^, ⁷]十三-1(9),2(7),3,5,10,12-六烯-6-基]-4-羥基吡咯啶-2-甲酸(中間物 3 . 2，18.4 mg，0.05 mmol)之2.00 mL DMA溶液添加4-(5-氯-2-氟吡啶-3-基)-4-氟-1-l-6-噻𠮿-1,1-二酮(中間物 29 . 06，14.1 mg，0.05mmol)及NaH (6.00 mg，0.15 mmol)。在RT下攪拌反應混合物16 h，隨後用ACN/水稀釋，用TFA酸化，過濾且藉由HPLC (ACN/H2O/TFA)純化。 ESI-MS： 611 [M+H] ⁺R _t(HPLC)： 0.97 min (方法H)

根據上文所述之通用程序(實例 2.01)製備以下化合物：

Ex .	起始物質	結構	ESI-MS	R _t(HPLC) [min] (方法)	反應條件
2.02	Int 3.1+ Int. 29.06		629 [M+H] ⁺	1.04 (H)	DMA，RT，1 h
2.03	Int 3.2+ Int. 30.3		601 [M+H] ⁺	0.93 (J)	NMP，RT，2 h
2.04	Int. 3.2+ Int. 29.07		655 [M+H] ⁺	0.52 (D)	DMA，RT，1 h
2.05	Int . 3.2+ Int. 37.1		587 [M+H] ⁺	1.12 (C)	DMF，RT，1 h
2.06	Int. 3.2+ Int. 40.02		637 [M+H] ⁺	1.01 (W)	DMF，RT，1 h
2.07	Int 3.1+ Int. 30.3		619 [M+H] ⁺	1.02 (J)	NMP，RT，1 h
2.08	Int. 3.2+ Int. 51.1		639 [M+H] ⁺	1.00 (W)	DMF，RT，1 h
2.09	Int. 3.1+ Int. 51.1		657 [M+H] ⁺	1.04 (W)	DMF，RT，1 h
2.10	Int. 3.1+ Int. 49.2		643 [M+H] ⁺	0.56 (D)	NMP，RT，1 h
2.11	Int. 3.2+ Int. 34.3		615 [M+H] ⁺	0.66 (A)	DMF，60℃，15 min
2.12	Int. 3.1+ Int. 34.3		633 [M+H] ⁺	1.13 (W)	DMF，RT，45 min
2.13	Int. 3.2+ Int. 29.13		616/618 [M+H] ⁺	0.69 (A)	DMF，RT，1h
2.14	Int. 3.2+ Int. 34.4		615 [M+H] ⁺	0.68 (A)	DMF，60℃，15 min
2.15	Int. 3.1+ Int. 34.4		633 [M+H] ⁺	0.73 (A)	DMF，60℃，15 min
2.16	Int. 3.2. + Int. 29.02		621 [M+H] ⁺	1.16 (H)	NMP，RT，16 h
2.17	Int. 3.1 + Int. 60		654 [M+H] ⁺	0.88 (H)	NMP，50℃，10 min
2.18	Int. 3.2 + Int. 60		622 [M+H] ⁺	1.12 (Z)	NMP，50℃，10 min
2.19	Int. 3.1 + Int. 34.5		626 [M+H] ⁺	1.12 (H)	NMP，50℃，10 min
2.20	Int. 3.2 + Int. 34.5		608 [M+H] ⁺	1.04 (H)	NMP，50℃，10 min

實例 3.01 ( 通用途徑 ) (2S,4S)-1-[4-( 二氟甲基 )- 8 - 氧雜 - 3 , 5 - 二氮雜三環 [ 7 . 4 . 0 . 0 ² ^, ⁷ ] 十三 - 1 ( 13 ), 2 , 4 , 6 , 9 , 11 - 六烯 - 6 - 基 ]- 4 -({ 3 -[( 3S , 4R )- 4 - 氟 - 3 - 甲基㗁烷 - 4 - 基 ]- 5 -( 1 - 甲基 - 1H - 吡唑 - 4 - 基 ) 吡啶 - 2 - 基 } 氧基 ) 吡咯啶 - 2 - 甲酸

向(2S,4S)-4-({5-氯-3-[(3S,4R)-4-氟-3-甲基㗁烷-4-基]吡啶-2-基}氧基)-1-[4-(二氟甲基)-8-氧雜-3,5-二氮雜三環[7.4.0.0 ² ^, ⁷]十三-1(13),2,4,6,9,11-六烯-6-基]吡咯啶-2-甲酸(中間物 35 . 01，50.0 mg，0.09 mmol)之2.00 mL二㗁烷溶液添加1-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼㖦-2-基)-1H-吡唑(63.0 mg，0.30 mmol)之碳酸鈉溶液(0.11 mL，0.22 mmol)、Xphos 3 ^rdgen (7.00 mg，0.01 mmol)及Tetrakis (10.0 mg，0.01 mmol)。在100℃下攪拌此混合物4 h。在冷卻至RT之後，反應混合物用水稀釋且用DCM萃取三次。有機相使用分離柱®相分離器乾燥且減壓濃縮。用ACN/DMSO/TFA溶解殘餘物，過濾且藉由HPLC (ACN/H2O/TFA)純化。 ESI-MS： 623 [M+H] ⁺R _t(HPLC)： 0.66 min (方法A)

根據上文所述之通用程序(實例 3 . 01)製備以下化合物：

Ex.	起始物質	結構	ESI-MS	R _t(HPLC) [min] (方法)	反應條件
3.02			649 [M+H] ⁺	0.43 (F)	溶劑：二㗁烷，100℃，2 h
3.03			709 [M+H] ⁺	1.13 (H)	溶劑：二㗁烷，100℃，2 h
3.04			703 [M+H] ⁺	0.82 (H)	溶劑：二㗁烷，100℃，2 h

實例 4.01 ( 通用途徑 ) (2S,4S)-4-[(5- 乙炔基 - 3 -{ 3 - 氧雜雙環 [ 4 . 1 . 0 ] 庚 - 6 - 基 } 吡啶 - 2 - 基 ) 氧基 ]- 1 -[ 4 -( 三氟甲基 )- 8 - 氧雜 - 3 , 5 - 二氮雜三環 o [ 7 . 4 . 0 . 0 ² ^, ⁷ ] 十三 - 1 ( 13 ), 2 , 4 , 6 , 9 , 11 - 六烯 - 6 - 基 ] 吡咯啶 - 2 - 甲酸

向(2S,4S)-4-[(5-乙炔基-3-{3-氧雜雙環[4.1.0]庚-6-基}吡啶-2-基)氧基]-1-[4-(三氟甲基)-8-氧雜-3,5-二氮雜三環[7.4.0.0 ² ^, ⁷]十三-1(13),2,4,6,9,11-六烯-6-基]吡咯啶-2-甲酸甲酯(中間物 48，40.0 mg，0.07 mmol)之1.50 mL甲醇溶液添加氫氧化鋰(2.0 mol/L，450 mL，0.90 mmol)，且將反應混合物在50℃下攪拌2 h。減壓濃縮反應混合物且藉由HPLC (ACN/H2O/TFA)純化殘餘物。 ESI-MS： 565 [M+H] ⁺R _t(HPLC)： 1.03 min (方法W)

實例 5.01 ( 通用途徑 ) (2S,4S)-4-{[5-(4- 氯 - 1H - 吡唑 - 1 - 基 )- 3 -( 4 - 氟㗁烷 - 4 - 基 ) 吡啶 - 2 - 基 ] 氧基 }- 1 -[ 4 -( 二氟甲基 )- 8 - 氧雜 - 3 , 5 - 二氮雜三環 [ 7 . 4 . 0 . 0 ² ^, ⁷ ] 十三 - 1 ( 13 ), 2 , 4 , 6 , 9 , 11 - 六烯 - 6 - 基 ] 吡咯啶 - 2 - 甲酸

在惰性氛圍下向4-氯-1H-吡唑(7.69 mg，0.08 mmol)添加(2S,4S)-4-{[5-溴-3-(4-氟㗁烷-4-基)吡啶-2-基]氧基}-1-[4-(二氟甲基)-8-氧雜-3,5-二氮雜三環[7.4.0.0 ² ^, ⁷]十三-1(13),2,4,6,9,11-六烯-6-基]吡咯啶-2-甲酸(中間物 35 . 03 ，30.4 mg，0.05 mmol)於1.00 mL二㗁烷中之溶液，之後加Li(HMDS) (1 mol/L於THF中，125 µL，0.13 mmol)及tBu-Brett-Phos (3.91 mg，0.01 mmol)。將此反應混合物在100℃下攪拌隔夜。在冷卻至RT之後，過濾混合物，用水及ACN稀釋且藉由HPLC (ACN/H2O/TFA)純化。 ESI-MS： 629 [M+H] ⁺R _t(HPLC)： 1.09 min (方法J)

實例 6.01 ( 通用途徑 ) ： (2S,4S)-4-({5-[1-( 二氟甲基 )- 1H - 吡唑 - 4 - 基 ]- 3 -[( 3S , 4R )- 4 - 氟 - 3 - 甲基㗁烷 - 4 - 基 ] 吡啶 - 2 - 基 } 氧基 )- 1 -[ 4 -( 二氟甲基 )- 8 - 氧雜 - 3 , 5 - 二氮雜三環 [ 7 . 4 . 0 . 0 ² ^, ⁷ ] 十三 - 1 ( 9 ), 2 ( 7 ), 3 , 5 , 10 , 12 - 六烯 - 6 - 基 ] 吡咯啶 - 2 - 甲酸

在氮氣氣氛下向(2S,4S)-1-[4-(二氟甲基)-8-氧雜-3,5-二氮雜三環[7.4.0.02,7]十三-1(9),2(7),3,5,10,12-六烯-6-基]-4-({3-[(3S,4R)-4-氟-3-甲基㗁烷-4-基]-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼㖦-2-基)-吡啶-2-基}氧基)吡咯啶-2-甲酸(中間物53，50 mg，0.075 mmol)於二㗁烷(3.0 ml)中之溶液中添加4-溴-1-(二氟甲基)-1H-吡唑(39 mg，0.20 mmol)、碳酸鉀(2.0 mol/L水溶液，0.20 mL，0.40 mmol)及Xphos 3rd gen (6.33 mg，0.00748 mmol)。在100℃下加熱混合物2 h。用DMF稀釋混合物，過濾且藉由製備型HPLC (C18管柱，ACN，H2O-TFA，60℃)純化粗產物。 ESI-MS： 709 [M+H]+ Rt (HPLC)： 1.02 (方法H)

根據上文所述之通用程序(實例 6 .01)製備以下化合物：

Ex .	起始物質	結構	ESI-MS	R _t(HPLC) [min] (方法)	反應條件
6.02	Int. 53 +		650 [M+H] ⁺	0.60 (A)	二㗁烷，90℃，3.5h
6.03			648 [M+H] ⁺	0.84 (H)	二㗁烷，80℃，2h
6.04			662 [M+H] ⁺	0.63 (D)	二㗁烷，80℃，2h

前藥 P01 ( 通用途徑 ) ( 2S , 4S )- 4 -({ 5 - 氰基 - 3 -[( 3R , 4R )- 4 - 氟 - 3 - 甲基 - 1 , 1 - 二側氧基 - 1 - l - 6 - 噻𠮿 - 4 - 基 ] 吡啶 - 2 - 基 } 氧基 )- 1 -[ 4 -( 三氟甲基 )- 8 - 氧雜 - 3 , 5 - 二氮雜三環 [ 7 . 4 . 0 . 0 ² ^, ⁷ ] 十三 - 1 ( 13 ), 2 , 4 , 6 , 9 , 11 - 六烯 - 6 - 基 ] 吡咯啶 - 2 - 甲酸甲酯

向(2S,4S)-4-({5-氰基-3-[(3R,4R)-4-氟-3-甲基-1,1-二側氧基-1-l-6-噻𠮿-4-基]吡啶-2-基}氧基)-1-[4-(三氟甲基)-8-氧雜-3,5-二氮雜三環[7.4.0.0 ² ^, ⁷]十三-1(13),2,4,6,9,11-六烯-6-基]吡咯啶-2-甲酸(實例 2 . 14，15.0 mg，0.02 mmol)之1.00 mL THF溶液添加I-N,N'-雙(丙-2-基)甲氧基-甲脒(43.1 µL，0.23 mmol)且在RT下攪拌62 h。反應混合物用水及I稀釋且藉由HPLC (I/H2O/TFA)純化。 ESI-MS： 647 [M+H] ⁺R _t(HPLC)： 0.99 min (方法H)

根據上文所述之通用程序(前藥 P01)製備以下化合物：

前藥編號	起始物質	結構	ESI-MS	R _t(HPLC) [min] (方法)	反應條件
P02	Ex. 1.14		639 [M+H] ⁺	1.09 (H)	溶劑：THF，RT 48 h
P03	Ex. 1.5		679 [M+H] ⁺	1.17 (H)	溶劑：THF，RT，62 h

一般技術註解術語「環境溫度」及「室溫」可互換使用且表示約20℃，例如，15℃至25℃之溫度。

一般而言，已獲得所製備之化合物的 ¹H NMR光譜及/或質譜。除非另外說明，否則所有層析操作均在室溫下進行。

縮寫清單

ACN	乙腈
aq.	水溶液
Brettphos	2-(二環已基膦基)-3,6-二甲氧基-2'-4'-6'-三異丙基-1,1'-聯苯
BPR	背壓調節器
℃	攝氏度
CH	環己烷
CT	柱溫
DA	二極體陣列
DAST	三氟化二乙基胺基硫
DBU	二氮雜雙環[5.4.0]十一-7-烯
DCM	二氯甲烷
Deoxo-Fluor®	三氟化雙-(2-甲氧基乙基)-胺基硫
DIAD	偶氮二甲酸二異丙酯
DIPEA	二異丙基乙胺
DMA	二甲基乙醯胺
DMAP	4-二甲胺基吡啶
DMF	N,N-二甲基甲醯胺
ds-mix	順式/反式之非鏡像異構混合物
ent	鏡像異構純
ESI-MS	吸電噴霧電離質譜分析
EtOAc	乙酸乙酯
eq	當量
Ex.	實例
FA	甲酸
GC/MS	氣相層析-質譜分析
h	小時
HCl	鹽酸
HATU	[二甲胺基-(1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶-3-基氧基)-亞甲基]-二甲基-銨六氟磷酸鹽
HMPA	六甲基磷醯胺
HPLC	高效液相層析
Int.	中間物
IPA	異丙醇
K ₂CO	碳酸鉀
KOH	氫氧化鉀
L	公升
LDA	二異丙胺基鋰
LiAlH ₄	氫化鋰鋁
LiHMDS	雙(三甲基矽烷)胺基鋰
mCPBA	間氯過苯甲酸
MeOH	甲醇
min	分鐘
mL	毫升
MS	質譜
NH ₃	氨
NH ₄OH	NH ₃之水溶液
NMP	N-甲基-2-吡咯啶酮
PE	石油醚
PdCl ₂(PPh ₃) ₂	雙(三苯膦)二氯化鈀(II)
Pd(dppf)Cl ₂	(1,1´-雙-(二苯膦基)-二茂鐵)-二氯化鈀(II)
Pd(PPh ₃) ₄	肆(三苯膦)鈀(0)
Pd(OH) ₂/C	氫氧化鈀/碳20%
psi pTsOH*H ₂O	磅/平方吋對甲苯磺酸單水合物
rac	外消旋混合物或外消旋體
rac-cis	順式非鏡像異構體之外消旋混合物
rac-trans	反式非鏡像異構體之外消旋混合物
RT	室溫(約20℃)
R _t	滯留時間(按分鐘計)
scCO ₂	超臨界二氧化碳
TBAF	氟化四丁銨
tBu-Brett-Phos	2-(二三級丁基膦基)-2',4',6'-三異丙基-3,6-二甲氧基-1,1'-聯苯
TEAF	甲酸三乙銨
Tetrakis	肆(三苯膦)-鈀-(0)
TFA	三氟乙酸
TFAA	三氟乙酸酐
THF	四氫呋喃
Xphos	2-二環己基膦基-2',4',6'-三異丙基聯苯
Xphos 3 ^rdgen	(2-二環已基膦基-2',4',6'-三異丙基-1,1'-聯苯)[2-(2'-胺基-1,1'-聯苯)]鈀(II)甲磺酸鹽
Ziram	二甲基二硫胺基甲酸鋅鹽

分析方法 (HPLC/SFC) ：方法 A

時間(min)	Vol%水 (包括0.1% TFA)	Vol% I	流速[mL/min]
0.00	99	1	1.6
0.02	99	1	1.6
1.00	0	100	1.6
1.10	0	100	1.6
管柱：Xbridge BEH C18_2.1×30 mm，1.7 μm；CT：60℃

方法 B

時間(min)	Vol%水 (包括0.1% TFA)	Vol% I	流速[mL/min]
0.00	97	3	2.2
0.20	97	3	2.2
1.20	0	100	2.2
1.25	0	100	3.0
1.40	0	100	3.0
管柱： Stable Bond (Agilent) 1.8 µm ； 3.0 × 30 mm ； CT ： 60 ℃

方法 C (SFC)

時間(min)	Vol.% scCO ₂	Vol% MeOH 20mM NH ₃	流速[mL/min]
0.00	90	10	2.0
4.00	90	10	2.0
管柱：CHIRAL ART Cellulose_SC (YMC) 3.0 µm；3.0×100 mm；CT：40℃，BP：2175 PSI，儀器：具有DAD之Agilent 1260 Infinity II SFC

方法 D

時間(min)	Vol.%水 (包括0.1 % NH ₄OH)	Vol. % I	流速[mL/min]
0.00	95	5	1.5
1.30	0	100	1.5
1.50	0	100	1.5
1.60	95	5	1.5
管柱：Xbridge C18_3.0×30 mm_2.5 µm (Waters)；CT：60℃

方法 E (SFC)

時間(min)	Vol.% scCO ₂	Vol. % MeOH 20mM NH ₃	流速[mL/min]
0.00	90	10	2.0
4.00	90	10	2.0
管柱：Chiralpak IG (Daicel) 3.0 µm；3.0×100 mm；CT：40℃

方法 F

時間(min)	Vol%水 (包括0.1% NH3)	Vol% I	流速[mL/min]
0.00	95	5	1.3
0.02	95	5	1.3
1.00	0	100	1.3
1.30	0	100	1.3
管柱：Xbridge BEH (Waters) C18_2.1×30 mm，2.5 μm；CT：60℃

方法 G (SFC)

時間(min)	Vol% scCO ₂	Vol% IPA 20 mM NH ₃	流速[mL/min]
0.00	75	25	4.0
10.0	75	25	4.0
管柱：Chiralpak IG (Daicel) 4.6×250 mm，5 μm；CT：40℃

方法 H

時間(min)	Vol.%水 (包括0.1 % TFA)	Vol. % I	流速[mL/min]
0.00	95	5	1.5
1.30	0	100	1.5
1.50	0	100	1.5
1.60	95	5	1.5
管柱：Sunfire C18 (Waters) 2.5 µm；3.0×30 mm；CT：60℃

方法 I (SFC)

時間(min)	Vol.% scCO ₂	Vol% MeOH	流速[mL/min]
0.00	97	3	1.3
2.50	55	45	1.3
3.50	55	45	1.3
3.51	97	3	1.3
4.00	97	3	1.3
管柱：Acquity UPC2 BEH 2-EP (Waters) 3.0×100 mm，1.7 μm；CT：30℃

方法 J

方法 K (SFC)

時間(min)	Vol.% scCO ₂	Vol. % IPA 20mM NH ₃	流速[mL/min]
0.00	80	20	2.0
4.00	80	20	2.0
管柱：Chiral Art Amylos-C Neo (YMC) 3.0 µm；3.0×100 mm；CT：40℃

方法 L (SFC)

時間(min)	Vol.% scCO ₂	Vol. % methanol	流速[mL/min]
0.00	97	3	1.3
2.50	55	45	1.3
3.50	55	45	1.3
3.51	97	3	1.3
4.00	97	3	1.3
管柱：Acquity UPC2 Torus 2-PIC (Waters) 1.7 µm；3.0×100 mm；CT：30℃

方法 M (SFC)

時間(min)	Vol.% scCO ₂	Vol. % IPA 20mM NH ₃	流速[mL/min]
0.00	70	30	2.0
4.00	70	30	2.0
管柱：Chiral Art Amylos-C Neo (YMC) 3.0 µm；3.0×100 mm；CT：40℃

方法 N (SFC)

時間(min)	Vol.% scCO ₂	Vol% MeOH 20mM NH ₃	流速[mL/min]
0.00	80	20	4.0
10.00	80	20	4.0
管柱：CHIRAL ART Cellulose_SC (YMC) 5.0 µm；4.6×250 mm；CT：40℃

方法 O (SFC)

時間(min)	Vol.% scCO ₂	Vol% MeOH 20mM NH ₃	流速[mL/min]
0.00	75	25	4.0
10.00	75	25	4.0
管柱：CHIRAL ART Cellulose_SC (YMC) 5.0 µm；4.6×250 mm；CT：40℃

方法 P (SFC)

時間(min)	Vol.% scCO ₂	Vol% MeOH 20mM NH ₃	流速[mL/min]
0.00	70	30	4.0
10.00	70	30	4.0
管柱：CHIRAL ART Cellulose_SC (YMC) 5.0 µm；4.6×250 mm；CT：40℃

方法 Q (SFC)

時間(min)	Vol% scCO ₂	Vol% MeOH 20 mM NH ₃	流速[mL/min]
0.00	65	35	4.0
10.0	65	35	4.0
管柱：Chiralpak IG (Daicel) 4.6×250 mm, 5 μm；CT：40℃

方法 R (SFC)

時間(min)	Vol% scCO ₂	Vol% MeOH 20 mM NH ₃	流速[mL/min]
0.00	60	40	4.0
10.0	60	40	4.0
管柱：Chiralpak IG (Daicel) 4.6×250 mm，5 μm；CT：40℃

方法 S (SFC)

時間(min)	Vol% scCO ₂	Vol% MeOH 20 mM NH ₃	流速[mL/min]
0.00	60	40	2.0
4.0	60	40	2.0
管柱：Chiralpak IG (Daicel) 3.0×100 mm，3 μm；CT：40℃

方法 T (SFC)

時間(min)	Vol% csCO2	Vol% MeOH	流速[mL/min]
0.00	97	3	1.3
2.50	55	45	1.3
3.50	55	45	1.3
3.51	97	3	1.3
4.00	97	3	1.3
管柱：Acquity UPC2 BEH (Waters) 3.0×100 mm，1.7 μm；CT：30℃

方法 U (SFC)

時間(min)	Vol% scCO2	Vol% MeOH	流速[mL/min]
0.00	97	3	1.3
2.50	55	45	1.3
3.50	55	45	1.3
3.51	97	3	1.3
4.00	97	3	1.3
管柱：Acquity UPC2 Torus DEA (Waters) 3.0×100 mm，1.7 μm；CT：30℃

方法 V (SFC)

時間(min)	Vol% scCO ₂	Vol% MeOH 20mM NH ₃	流速[mL/min]
0.00	95	5	2.0
3.60	40	60	2.0
4.00	40	60	2.0
管柱：Lux Cellulose-4 (Phenomenex) 3.0×100 mm，3 μm；CT：40℃

方法 W

時間(min)	Vol%水 (包括0.1% TFA)	Vol% I	流速[mL/min]
0.00	97	3	2.2
0.20	97	3	2.2
1.20	0	100	2.2
1.25	0	100	3.0
1.40	0	100	3.0
管柱：Sunfire C18_3.0×30 mm_2.5 µm (Waters)；CT：60℃

方法 X

時間(min)	Vol%水+0.04%(v/v)TFA	Vol% ACN +0.02%(v/v) TFA	流速[mL/min]
0.00	95	5	1.0
1.00	5	95	1.0
1.80	0	100	1.0
1.81	95	5	1.2
2.00	95	5	1.2
管柱：Kinetex C18 30×2.1 mm，5 µm；CT：40℃，儀器：Agilent 1200 & G6120B

方法 Z

時間(min)	Vol%水 (包括0.1% TFA)	Vol% I	流速[mL/min]
0.0	95	5	1.5
1.3	0	100	1.5
1.5	0	100	1.5
管柱：Sunfire C18_3.0×30 mm_2.5 µm (Waters Aquity)；CT：60℃

分析型 GC-MS ：方法 GC01

時間(min)	溶劑% [氦]	溫度[℃]	流速[mL/min]
0.00	100	50	2.1
1.00	100	50	2.1
2.80	100	170	2.1
6.00	100	320	2.1
8.50	100	320	2.1
裝置：具有FI偵測器及MS偵測器之Agilent GC 7890A，管柱：Optima 5HT，15m×0.25m×0.25µm 管柱製造商：Macherey-Nagel，注入器溫度：280℃ 離子源溫度：300℃ 四極溫度：150℃

實例 5.1 實例化合物已合成如彙總於表1中的以下式 ( I )、 ( I ' )、 ( I '' )、 ( II ' )及 ( II '' )之實例化合物且就關於其抑制cGAS活性之效能之藥理學特性進行測試。

特定言之，已根據如第6章所述之分析方法，以實驗方式測定關於cGAS抑制之「生物化學(活體外) IC50值」(hcGAS IC50)；「關於抑制病毒刺激之THP-1細胞中的IFN誘導的IC50值」(THP ₍ _vir ₎IC50)；「關於抑制cGAMP刺激之THP1細胞中的IFN誘導的IC50值」(THP ₍ _cGAMP ₎IC50)；及「關於抑制dsDNA刺激之人類全血中的IFN誘導的IC50值」(hWB IC50)。結果彙總於表1中。

如彙總於表1中的式 ( I )、 ( I ' )、 ( I '' )、 ( II ' )及 ( II '' )之實例化合物同時顯示以下三種特性： • 令人滿意之「關於cGAS抑制之生物化學(活體外) IC50值」(其中hcGAS IC50 ≤ 100 nM，較佳≤ 50 nM，尤其≤ 10 nM)， • 令人滿意之「關於cGAS抑制之細胞IC50值」(其中THP1 ₍ _vir ₎IC50 ≤ 1 µM，較佳≤ 500 nM，更佳≤ 100 nM，尤其≤ 50 nM) 及 • 令人滿意之對cGAS抑制之選擇性 (其中THP1 _(cGAMP)IC50 / THP1 _(vir)IC50之比率 ≥10，更佳≥50，更佳≥500，尤其≥1000)。

另外，式 ( I )、 ( I ' )、 ( I '' )、 ( II ' )及 ( II '' )之實例化合物亦顯示可接受的關於抑制dsDNA刺激之人類全血中的IFN誘導的IC50值(hWB IC50)。表 1 ：本發明之實例化合物之藥理學特性

實例編號	結構	hcGAS IC50 [nM]	THP1 _(vir) IC50 [nM]	THP1 _(cGAMP) IC50 [nM]	THP _(cGAMP)IC50 / THP _(vir)IC50 比率	hWB IC50 [nM]
1.01		5	530	＞16600	＞31
1.02		3	351	18922	54	103
1.03		2	283	＞16599	＞59	137
1.04		4	378	24920	66	648
1.05		2	44	13188	298	135
1.06		5	12	5822	479	24
1.07		69	216	3676	17	213
1.08		4	4	13932	3275	16
1.09		4	＜5	15822	＞2935	4
1.10		40	82	2245	28	70
1.11		2	731	＞16611	＞23	194
1.12		9	314	15335	49	270
1.13		2	6	22502	3491	6
1.14		9	42	5280	127	53
1.15		6	11	10200	963	22
1.16		5	8	8237	1055	6
1.17		3	54	22148	412	45
1.18		9	535	10870	20	287
1.19		5	566	13976	25	316
1.20		3	139	15484	111	55
1.21		5	126	9282	74	76
1.22		4	85	16070	189	114
1.23		15	185	8404	45	165
1.24		7	248	21832	88	479
1.25		10	712	13538	19	502
2.01		3	179	＞16612	＞93
2.02		4	540	＞16620	＞31	89
2.03		2	112	＞16611	＞148	40
2.04		5	638	＞16619	＞26	115
2.05		6	718	16748	23	945
2.06		8	314	14568	46	287
2.07		2	688	＞16624	＞24	97
2.08		5	25	11999	479	28
2.09		11	168	5494	33	90
2.10		3	4	18848	4605	15
2.11		2	4	＞16623	＞3829	3
2.12		3	8	21781	2619	8
2.13		7	818	＞16601	＞20	582
2.14		5	248	7756	31	124
2.15		6	207	10276	50	291
2.16		4	125	＞16628	133	325
2.17		96	382	3921	10	287
2.18		13	59	12633	215	97
2.19		5	23	9962	435	57
2.20		4	17	9888	583	25
3.01		2	81	＞16596	＞205	51
3.02		2	23	4710	201	53
3.03		12	18	10361	568	53
3.04		29	16	10467	650	46
4.01		8	784	＞16596	＞21	1499
5.01		12	1,001	＞16610	＞17	2886
6.01		5	35	＞9994	＞289	82
6.02		6	5	＞16619	＞3212	45
6.03		10	35	9508	276	38
6.04		17	21	7682	371	75

5.2 實例化合物與先前技術化合物之比較 5.2.1 WO 2020/142729 之化合物在WO 2020/142729中，已揭示具有部分相似結構之cGAS抑制劑。在WO 2020/142729之第44頁及第45頁，已揭示關於cGAS抑制之「生物化學(活體外) IC50值」(對應於「hcGAS IC50」)。在此，「生物化學(活體外) IC50值」小於100 nM之化合物被稱為「A組」；「生物化學(活體外) IC50值」超過100 nM且小於500 nM之化合物被稱為「B組」；「生物化學(活體外) IC50值」超過500 nM且小於1 µM之化合物被稱為「C組」；「生物化學(活體外) IC50值」超過1 µM且小於10 µM之化合物被稱為「D組」；且「生物化學(活體外) IC50值」超過10 µM之化合物被稱為「E組」(參見WO 2020/142729之之第44頁)。

在WO 2020/142729之第45頁，揭示僅第25號化合物可被稱為「生物化學(活體外) IC50值」小於100 nM之「A組」。WO 2020/142729之所有其他實例化合物均顯示超過100 nM之「生物化學(活體外) IC50值」。

5.2.2 本發明之實例與 WO 2020 / 142729 之實例之間的比較已合成WO 2020/142729之所選先前技術化合物，且隨後已就其關於抑制cGAS/STING路徑之效能之藥理學特性進行測試。特定言之，已根據如第6章所述之分析方法，以實驗方式測定WO 2020/142729之結構上最接近之實例的關於cGAS抑制之「生物化學(活體外) IC50值」(hcGAS IC50)；「關於抑制病毒刺激之THP-1細胞中的IFN誘導的IC50值」(THP ₍ _vir ₎IC50)；「關於抑制cGAMP刺激之THP1細胞中的IFN誘導的IC50值」(THP ₍ _cGAMP ₎IC50)；及「關於抑制人類全血中的IFN誘導的IC50值」(hWB) (參見表2)。表 2 ：一系列來自 WO 2020 / 142729 之 實例化合物之藥理學特性

實例編號 ( 如 WO 2020/142729 中所揭示 )	結構	hcGAS IC50 [nM]	THP1 _(vir) IC50 [nM]	THP1 _(cGAMP) IC50 [nM]	hWB IC50 [nM]
15		2700	＞17000	＞17000	-
25		55	＞17000	＞17000	＞9992
28		630	＞32000	＞17000	＞9990
38		3000	＞17000	＞17000	＞9990
58		320	21000	23000	＞9982

如表1中所彙總之本發明之實例化合物的藥理學特性及WO 2020/142729之化合物的各別藥理學特性可彼此比較，因為其係根據如第6章中所述的相同分析程序以實驗方式測定。

自如表2中所示之資料顯而易見，WO 2020/142729之所有實例化合物均顯示顯著大於100 nM之「生物化學(活體外) IC50值」(=hcGAS IC50)，唯一例外為WO 2020/142729之實例編號25 (在WO 2020/142729中，指定於「生物化學(活體外) IC50值」(=hcGAS IC50)小於100 nM之「A組」中)。與之形成對比，本發明之實例化合物的「生物化學(活體外) IC50值」(hcGAS IC50)全部小於100 nM。然而，「生物化學(活體外) IC50值」(hcGAS IC50)為55 nM的WO 2020/142729之實例編號25並不完全符合THP1 ₍ _vir ₎IC50低於1 µM所顯示之「令人滿意之細胞抑制效能」的選擇標準，因為WO 2020/142729之實例編號25的THP1 ₍ _vir ₎IC50為17 µM。

5.3 前藥先前技術中已知，具有羧酸基之活性劑之酯可表示可行的前藥，亦即相較於各別活性劑，其可顯示改良之口服吸收/生物可用性。通常使用之具有羧酸基之活性劑之前藥為例如甲酯、乙酯、異丙酯等。(參見Beaumont等人, Current Drug Metabolism, 2003, 第4卷, 第6期, 461 - 485)。

此外，Nakamura等人, Bioorganic & Medicinal Chem., 第15卷, 第24期, 第7720-7725頁(2007)描述了具有游離羧酸基之特定活性劑之N-醯基磺醯胺衍生物與N-醯基磺醯脲衍生物亦可能為可行的前藥。

另外，實驗提示已發現，式 ( I )、 ( I ' )、 ( I '' )、 ( II ' )及 ( II '' )之實例化合物之甲酯亦代表式 ( I )、 ( I ' )、 ( I '' )、 ( II ' )及 ( II '' )之cGAS抑制劑之可行的前藥。

化合物P01、P02及P03分別為實例化合物2.12、1.13及1.05之甲酯，且因此可代表各別實例化合物之可行的前藥。

P01、P02及P03已合成且針對其關於抑制cGAS/STING路徑之效能的藥理學特性進行測試。隨後，已將以實驗方式測定之前藥P01、P02及P03之藥理學特性與如表3中所彙總之各別實例化合物2.12、1.13及1.05之相應藥理學特性進行比較。

實例化合物與其相應前藥之間的此比較顯示，實例化合物之hcGAS IC50值始終為約10 nM或甚至小於10 nM，而相應前藥之hcGAS IC50值始終極其大，其意謂一般大於至少7000 nM。一方面實例化合物與另一方面其相應前藥之間的較大差異從未在實例化合物與其相應前藥之間的各別THP1 ₍ _vir ₎IC50值方面觀測到，該等THP1 ₍ _vir ₎IC50值始終保持在相同範圍內(參見表3，例如實例編號2.12及其各別前藥P01)。

彼觀測結果之一個可能的解釋為實例化合物(其代表「藥物」)均具有游離羧基，其似乎對於抑制cGAS活性至關重要，而在所有「前藥」中，羧基被羧基甲酯基遮蔽。因此，前藥在「活體外人類cGAS酶分析(參見第6.1章)」中喪失其抑制效能，因為在此分析中不存在裂解羧基-甲酯基之細胞內酶。因此，前藥在此「活體外人類cGAS酶分析」中顯示極大「生物化學(活體外) IC50值」(=hcGAS IC50)，而相應實例化合物(其代表藥物或活性劑)顯示較小「生物化學(活體外) IC50值」(=hcGAS IC50)。

在「人類cGAS細胞及反向細胞分析」(參見第6.2章)中，存在裂解羧基-甲酯基團之內源性細胞酶。因此，不僅實例化合物本身(意謂藥物或活性劑本身)顯示較小THP1 ₍ _vir ₎IC50值，且相應前藥亦顯示相對較小的「THP1 ₍ _vir ₎IC50值」，因為在此「人類cGAS細胞分析」中，前藥之甲酯可藉由內源性細胞內酶裂解成再次顯示抑制效能之相應藥物/活性劑。

此解釋連同如表3中所示之量測結果一起暗示式 ( I )、 ( I ' )、 ( I '' )、 ( II ' )及 ( II '' )化合物之甲酯衍生物的確似乎代表式 ( I )、 ( I ' )、 ( I '' )、 ( II ' )及 ( II '' )化合物之可行的前藥，其本身不具有關於活體外人類生物化學GAS抑制之抑制效能。然而，藉由內源性細胞內酶裂解甲酯後，形成再次展現關於cGAS/STING路徑之抑制效能的式 ( I )、 ( I ' )、 ( I '' )、 ( II ' )及 ( II '' )化合物(活性劑)。表 3 ： 所選本發明實例化合物 (= 活性劑 ) 與其各別甲酯前藥之間的比較 ：

實例編號 / 前藥編號	結構	hcGAS IC50 [nM]	THP1 _(vir) IC50 [nM]	THP1 _(cGAMP) IC50 [nM]	hWB IC50 [nM]
P01 (Ex. 2.12之前藥)		19147	11	＞16612	67
Ex. 2.12		3	8	21781	8
P02 (Ex. 1.13之前藥)		＞9954	29	＞16620	140
Ex. 1.13		2	6	22502	6
P03 (Ex. 1.05之前藥)		7253	202	20592	1994
Ex. 1.05		2	44	13188	135

生物學實驗可使用以下活體外cGAS酶及細胞分析證明本發明之化合物之活性：

6.1 方法： 人類 cGAS 酶分析 ( hcGAS IC50 ( 活體外 ))將人類cGAS酶在45個鹼基對的雙股DNA存在下培育以活化酶，且GTP及ATP作為受質。藉由量測化合物對酶反應產物cGAMP形成之影響來測定，其藉由質譜法量測。

酶製備：使具有N端6x-His標籤及SUMO-標籤之人類cGAS (胺基酸1-522)在大腸桿菌(E.coli) BL21(DE3) pLysS (Novagen)細胞中在18℃下表現。使細胞在含有25 mM Tris (pH 8)、300 mM NaCl、10 mM咪唑、10%甘油、蛋白酶抑制劑混合液(cOmplete™，無EDTA，Roche)及DNA酶(5 µg/mL)之緩衝液中裂解。在Ni-NTA瓊脂糖樹脂上藉由親和性層析分離cGAS蛋白且藉由尺寸排阻層析，使用在20 mM Tris (pH 7.5)、500 mM KCl及1 mM TCEP中平衡的Superdex 200管柱(GE Healthcare)進一步純化。將純化蛋白質濃縮至1.7 mg/mL且儲存在-80℃下。

分析方法將化合物遞送於10 mM DMSO溶液中，連續稀釋且使用Echo聲學施配器轉移至384孔分析盤(Greiner #781201)中。通常，使用8種濃度，其中最終分析體積中之最高濃度為10 µM，隨後進行約1:5稀釋步驟。DMSO濃度在最終分析體積中設定成1%。384孔分析盤含有22種測試化合物(第1至22行)且第23及24行中為DMSO。

在化合物轉移之後，經由MultiDrop Combi施配器將15 µL酶-DNA工作溶液(12 nM cGAS，0.32 µM 45個鹼基對之DNA之分析緩衝液，10 mM Tris pH 7.5/10 mM KCl/5 mM MgCl2/1 mM DTT)添加至第1-23行之各孔。在第24行，添加15 µl無酶/DNA之分析緩衝液作為低對照。

隨後將培養盤在室溫下預培育60 min。

此後，使用Multidrop Combi將10 µL GTP (ThermoFisher #R0461)-ATP (Promega #V915B)混合物之分析緩衝液添加至分析盤(管柱1-24，各30 µM最終濃度)。

在室溫下再次培育培養盤90 min。

在培育之後，藉由80 µL 0.1%甲酸之含5 nM環狀-二-GMP (Sigma #SML1228)用作質譜內標物之分析緩衝液停止反應。每孔總體積為105 µL。

Rapidfire MS 偵測以4000 rpm，4℃使各盤離心5 min。

將RapidFire自動取樣器耦接至二元泵(Agilent 1290)及Triple Quad 6500 (ABSciex, Toronto, Canada)。此系統配備有10 μL環路，C18 [12 µL床體積]濾筒(Agilent，部件號G9210A)，其含有10 mM NH4Ac (aq)水(pH7.4)作為溶離劑A (泵1呈1.5mL/min，泵2呈1.25 mL/min)及10 mM NH4Ac之v/v/v 47.5/47.5/5 ACN/MeOH/H2O (pH7.4)作為溶離劑B (泵3呈1.25 mL/min)。抽吸時間：250 ms；加載時間：3000 ms；溶離時間：3000 ms；洗滌液體積：500 µL。

伴隨HESI離子源以陽離子模式操作MS，其中源溫度為550℃，氣簾= 35，氣體1 = 65且氣體2 = 80。在SRM模式下得到單位質量解析度。測定cGAMP及DicGMP之以下躍遷及MS參數(DP：去簇電位及CE：碰撞能量)：分析物：675.1/524下之cGAMP，DP = 130，CE = 30及內標物：690.1/540下之環狀-二-GMP，DP = 130，CE = 30。監測cGAMP之形成且評估為與環狀-二-GMP之比率。

資料評估及計算：對於資料評估及計算而言，低對照之量測結果設定為0%對照且高對照之量測結果設定為100%對照。使用標準4參數邏輯回歸公式計算IC50值。計算：[y=(a-d)/(1+(x/c)^b)+d]，a =低值，d =高值；x = conc M；c=IC50 M；b =斜率

6.2 方法： 人類 cGAS 細胞分析及 cGAMP 刺激之反向細胞分析 ( THP1 ₍ _vir ₎ IC50 及 THP1 ₍ _cGAMP ₎ IC50 )使用表現IRF依賴性Lucia螢光素酶報導基因之THP1-Dual™細胞(InvivoGen #thpd-nfis)作為兩種分析之基礎。對於細胞cGAS活性之偵測，藉由遞送cGAS酶刺激雙股DNA之桿狀病毒(pFastbac-1，Invitrogen，無編碼插入物)感染來刺激細胞(量測THP1 ₍ _vir ₎IC50)。

對於反向分析，藉由cGAMP (SigmaAldrich #SML1232)刺激細胞以活化獨立於cGAS且直接位於cGAS下游的相同路徑(量測THP1 ₍ _cGAMP ₎IC50)。

藉由量測由DNA刺激之cGAS酶活性(量測THP1 ₍ _vir ₎IC50)或直接藉由cGAMP (量測THP1 ₍ _cGAMP ₎IC50，反向分析)誘導的Lucia螢光素酶活性來監測路徑活性。

分析方法將化合物遞送於10 mM DMSO溶液中，連續稀釋且使用Echo聲學施配器轉移至384孔分析盤(Greiner #781201)中。通常，使用8種濃度，其中最終分析體積中之最高濃度為10 µM，隨後進行約1:5稀釋步驟。DMSO濃度在最終分析體積中設定成1%。384孔分析盤含有21種測試化合物(第1至22行)且第23及24行中為DMSO。

藉由以300g/10min離心收集根據製造商條件培養之細胞，且隨後在新製細胞培養基(RPMI 1640 (Gibco #A10491-01)、10% FCS (Gibco #10500)、1× GlutaMax (Gibco #35050-061)、1× Pen/Strep 溶液(Gibco #15140-122)、100µg/ml諾黴素(Normocin)(InvivoGen #ant-nr)、100 µg/ml吉歐黴素(Zeocin) (InvivoGen #ant-zn)、10µg/ml殺稻瘟菌素S (Life Technologies #A11139-03))中再懸浮且稀釋至1.66E5個細胞/毫升。隨後以1:200 (可根據病毒批次而變化)向細胞中添加桿狀病毒溶液(量測THP1 ₍ _vir ₎IC50)。替代地，對於反向分析，以10 µM之最終濃度向細胞添加cGAMP (量測THP1 ₍ _cGAMP ₎IC50)。

經由MultiDrop Combi施配器將30 µL細胞/病毒混合物添加至化合物盤第1-23行之各孔(5000個細胞/孔)。在第24行，添加30 µl/5000個細胞/孔(不含病毒)作為低對照。

培養盤隨後在含濕氣培育箱中在37℃下培育18 h。

此後，使用MultiDrop Combi將15 µL QuantiLuc偵測試劑(InvivoGen #rep-qlcg5)添加至各孔。在添加之後立即使用EnVision讀取器(US-螢光讀數模式)進行量測。

6.3 方法：人類全血分析 ( 人類 WB IC50)對於偵測人類全血中之細胞cGAS活性，藉由用雙股DNA轉染來刺激。藉由量測IFNα2α產生來監測路徑活性。

分析方法將化合物以10 mM DMSO溶液形式遞送且連續稀釋，且使用Echo聲學施配器轉移至96孔細胞培養盤(Corning #3595)中，各孔預填充有20 µl OptiMEM (Gibco，#11058-021)。通常，使用8種濃度，其中最終分析體積中之最高濃度為10 µM，隨後進行約1:5稀釋步驟。DMSO濃度在最終分析體積中設定成0.1%。96孔分析盤含有10種測試化合物且對照孔中有DMSO。

同時以檸檬酸鈉血液(例如，3.8%於來自Sarstedt之Monovettes中)形式自3個或多於3個健康供體(男性或女性，無藥物治療7天，避孕藥及甲狀腺素除外)收集人類全血。在收集之後，使全血在室溫下保持最多3小時，直至用於分析中。

將160 µl全血樣本轉移至填充有化合物/OptiMEM之96孔分析盤的各孔。用來自不同供體之血液以一式兩份製備所有分析盤。將血液盤保持在室溫下60分鐘且以450 rpm連續震盪，用蓋子蓋住，但不密封。

在OptiMEM中製備DNA-Fugene混合物(Herring DNA，Sigma Aldrich #D6898-1G；Fugene (5× 1 mL)，Promega # E2312)且在RT下培育10min (125 ng DNA/20 µl且Fugene比率9.6:1)。將20 µl DNA Fugene混合物添加至各孔，產生125 ng DNA/孔/200 µl且Fugene比率9.6 :1。將20 µl OptiMEM及9.6:1 Fugene添加至所有低對照孔。

用aera密封件及蓋蓋住分析盤之後，將血液盤保持在室溫下30分鐘且以450 rpm連續震盪，繼之以在無振盪之情況下在培育箱中在37℃下隔夜培育22 h。

為了偵測人類血漿中之IFNα-2α，根據製造商，將經生物素標記之捕捉抗體(抗體組IFNA2，Meso Scale Diagnostics #B21VH-3，包括包衣及捕捉抗體)以1:17.5稀釋於稀釋劑100 (Meso Scale Diagnostics #R50AA -4)中。U-Plex MSD GOLD 96孔小斑點鏈黴親和素SECTOR盤(Meso Scale Diagnostics #L45SA -5)包覆有25 µl稀釋捕捉抗體。經包覆之盤在室溫下、在700 rpm連續震盪下培育60 min。用150 µl洗滌緩衝液(1× HBSS，0.05% Tween)洗滌MSD IFNα-2α盤三次。

在室溫下用100 µl封閉溶液/孔(1× HBSS，含0.2% Tween，2% BSA)封閉各盤60 min且以700 rpm持續震盪之後，藉由傾倒將盤儘可能地乾燥清空，之後再繼續使用人類血漿。

將全血分析盤以1600 rpm離心10分鐘。用吸液自動機將25 µl上清液自各全血盤轉移至相應IFNα-2α盤。用微量培養盤密封件密封各盤且在室溫下在700 rpm連續振盪下再次保持兩小時。

隨後,用150 µl洗滌緩衝液(1× HBSS,0.05% Tween)洗滌MSD IFNα-2α盤三次，之後將25µl MSD SULFO-TAG IFNα-2α抗體溶液(1:100稀釋於稀釋劑3 (Meso Scale Diagnostics # R50AP-2)中)添加至盤之各孔。

隨後，用微量培養盤密封件密封各盤且在室溫下在700 rpm連續振盪下再次保持兩小時。最後，用150 µl洗滌緩衝液(1× HBSS，0.05% Tween)洗滌MSD IFNα-2α盤三次。將150 µl 2×讀取緩衝液添加至各孔，且立即使用供應商條碼使用MSD Sector S600讀取器量測各盤。

資料評估及計算：對於資料評估及計算，藉由使用下式，各孔之對照計算%係基於高(DNA刺激對照)之平均值及低(未刺激對照)對照之平均值： [計數(樣本) - 計數(低))/(計數(高) - 計數(低))]*100

使用標準4參數邏輯回歸公式計算IC50值。計算：[y=(a-d)/(1+(x/c)^b)+d]，a =低值，d =高值；x = conc M；c=IC50 M；b =斜率

適應症如已發現，式 ( I )、 ( I ' )、 ( I '' )、 ( II ' )及 ( II '' )化合物由其在治療領域中之應用範圍表徵。尤其應提及根據本發明之式 ( I )、 ( I ' )、 ( I '' )、 ( II ' )及 ( II '' )化合物較佳基於其作為cGAS抑制劑之醫藥活性使用的彼等應用。雖然cGAS路徑對於宿主防禦病原體入侵，諸如病毒感染及一些細胞內細菌之侵襲至關重要，但細胞應激及遺傳因子亦可例如藉由核或粒線體洩漏引起產生異常細胞dsDNA，且由此觸發自體發炎反應。因此，cGAS抑制劑具有用於治療不同自體發炎疾病及自體免疫疾病之強治療潛力。

An等人, Arthritis Rheumatol. 2017年4月;69(4):800-807揭示與正常對照相比，患有自體免疫疾病，全身性紅斑狼瘡(SLE)之患者中外周血液單核細胞(PBMC)中之cGAS表現顯著更高。藉由聯合質譜分析靶向量測cGAMP，在15%所測試之SLE患者及正常或類風濕性關節炎對照中偵測到cGAMP。有cGAMP之SLE患者與不具有cGAMP之SLE患者對比，疾病活動度更高。然而較高cGAS表現可為暴露於第I型干擾素(IFN)之結果，但具有增加之疾病活動度的SLE患者中之cGAMP之偵測指示cGAS路徑可能參與疾病表現。

Park等人, Ann Rheum Dis. 2018年10月;77(10):1507-1515亦揭示cGAS途徑參與SLE發展。

Thim-Uam等人,iScience 2020年9月4日, 23(9), 101530 (doi: 10.1016/j.isci.2020.101530)揭示STING路徑經由習知樹突狀細胞成熟及漿細胞樣樹突狀細胞分化之活化介導狼瘡。

Gao等人, Proc. Natl. Acad. Sci. U S A. 2015年10月20日;112(42):E5699-705描述藉由自體DNA活化cGAS導致某些自體免疫疾病，諸如干擾素病變。

Tonduti等人, Expert Rev. Clin. Immunol. 2020年2月;16(2):189-198揭示cGAS抑制劑對艾卡迪-古特雷斯症候群具有特定治療潛力，該症候群為狼瘡樣重度自體發炎性免疫介導之病症。

Yu等人, Cell 2020 Oct 29;183(3):636-649描述了TDP-43觸發之粒線體DNA與肌肉萎縮性側索硬化(ALS)中之cGAS/STING路徑之活化之間的聯繫。

Ryu等人, Arthritis Rheumatol. 2020年11月;72(11):1905-1915亦顯示生物活性血漿粒線體DNA係與特定纖維化疾病，諸如全身性硬化症(SSc)或間質性肺病(ILD)，較佳進行性纖維化間質性肺病(PF-ILD)，尤其特發性肺纖維化(IPF)之疾病進展相關。 Schuliga等人, Clin. Sci. (Lond). 2020年11月17日;134(7):889-905描述自體DNA以cGAS依賴性方式延續IPF肺臟纖維母細胞衰老。

其他纖維化疾病(諸如非酒精性脂肪變性肝炎(NASH))之原因與cGAS/STING路徑之聯繫的額外科學提示已描述於Yu等人, J. Clin. Invest. 2019年2月1日;129(2):546-555及Cho等人, Hepatology. 2018年10月;68(4): 1331-1346中。

Nascimento等人, Sci. Rep. 2019年10月16日;9(1):14848揭示自體DNA釋放及STING依賴性感測驅使小鼠對香菸煙霧產生發炎，暗示cGAS-STING路徑與慢性阻塞性肺病(COPD)之間存在聯繫。

Ma等人, Sci. Adv. 2020年5月20日;6(21):eaaz6717揭示可藉由控制cGAS介導之發炎來限制潰瘍性結腸炎及發炎性腸病(IBD)。

Gratia等人, J. Exp. Med. 2019年5月6日;216(5):1199-1213顯示布盧姆症候群蛋白質藉由cGAS限制微核之先天性免疫感測。因此，cGAS抑制劑具有治療布盧姆症候群之治療潛力。

Kerur等人, Nat. Med. 2018年1月;24(1):50-61描述cGAS在年齡相關之黃斑變性(AMD)中在非典型炎性體活化中起重要作用。

此外，式 ( I )、 ( I ' )、 ( I '' )、 ( II ' )及 ( II '' )之cGAS抑制劑在癌症治療中亦具有治療潛力(Hoong等人, Oncotarget. 2020年7月28日;11(30):2930-2955 及Chen等人, Sci. Adv. 2020年10月14日;6(42):eabb8941)。

另外，式 ( I )、 ( I ' )、 ( I '' )、 ( II ' )及 ( II '' )之cGAS抑制劑在心臟衰竭治療中亦具有治療潛力(Hu等人, Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 2020年6月1日;318(6):H1525-H1537)。

存在帕金森氏病與cGAS/STING路徑之間(Sliter等人, Nature. 2018年9月;561(7722):258-262)及休格倫氏症候群與cGAS/STING路徑之間(Papinska等人, J. Dent. Res. 2018年7月;97(8):893-900)的相關性的其他科學提示。

此外，式 ( I )或式 ( I ' )之cGAS抑制劑在治療COVID-19/SARS-CoV-2感染中亦具有治療潛力，如以下中所示：Di Domizio J, Gulen MF, Saidoune F, Thacker VV, Yatim A, Sharma K, Nass T, Guenova E, Schaller M, Conrad C, Goepfert C, De Leval L, von Garnier C, Berezowska S, Dubois A, Gilliet M, Ablasser A. Nature. 2022年1月19日. doi: 10.1038/s41586-022-04421-w: 「The cGAS-STING pathway drives type I IFN immunopathology in COVID-19」及Neufeldt CJ, Cerikan B, Cortese M, Frankish J, Lee JY, Plociennikowska A, Heigwer F, Prasad V, Joecks S, Burkart SS, Zander DY, Subramanian B, Gimi R, Padmanabhan S, Iyer R, Gendarme M, El Debs B, Halama N, Merle U, Boutros M, Binder M, Bartenschlager R. Commun Biol. 2022年1月12日;5(1):45. doi: 10.1038/s42003-021-02983-5: 「SARS-CoV-2 infection induces a pro-inflammatory cytokine response through cGAS-STING and NF-kappaB」。此外，式 ( I )或式 ( I ' )之cGAS抑制劑在治療腎臟發炎及腎纖維化中具有治療潛力，如以下中所示：Chung KW, Dhillon P, Huang S, Sheng X, Shrestha R, Qiu C, Kaufman BA, Park J, Pei L, Baur J, Palmer M, Susztak K. Cell Metab. 2019 30:784-799: 「Mitochondrial Damage and Activation of the STING Pathway Lead to Renal Inflammation and Fibrosis」及Maekawa H, Inoue T, Ouchi H, Jao TM, Inoue R, Nishi H, Fujii R, Ishidate F, Tanaka T, Tanaka Y, Hirokawa N, Nangaku M, Inagi R. Cell Rep. 2019 29:1261-1273: 「Mitochondrial Damage Causes Inflammation via cGAS-STING Signaling in Acute Kidney Injury」。

此外，式 ( I )或式 ( I ' )之cGAS抑制劑在治療癌症中具有治療潛力，如以下中所示：Bakhoum SF, Ngo B, Laughney AM, Cavallo JA, Murphy CJ, Ly P, Shah P, Sriram RK, Watkins TBK, Taunk NK, Duran M, Pauli C, Shaw C, Chadalavada K, Rajasekhar VK, Genovese G, Venkatesan S, Birkbak NJ, McGranahan N, Lundquist M, LaPlant Q, Healey JH, Elemento O, Chung CH, Lee NY, Imielenski M, Nanjangud G, Pe'er D, Cleveland DW, Powell SN, Lammerding J, Swanton C, Cantley LC. Nature. 2018年1月25日;553(7689):467-472: 「Chromosomal instability drives metastasis through a cytosolic DNA response」及Liu H, Zhang H, Wu X, Ma D, Wu J, Wang L, Jiang Y, Fei Y, Zhu C, Tan R, Jungblut P, Pei G, Dorhoi A, Yan Q, Zhang F, Zheng R, Liu S, Liang H, Liu Z, Yang H, Chen J, Wang P, Tang T, Peng W, Hu Z, Xu Z, Huang X, Wang J, Li H, Zhou Y, Liu F, Yan D, Kaufmann SHE, Chen C, Mao Z, Ge B. Nature. 2018年11月;563(7729):131-136: 「Nuclear cGAS suppresses DNA repair and promotes tumorigenesis」。

另外，式 ( I )或式 ( I ' )之cGAS抑制劑在治療代謝障礙中具有治療潛力，因為STING ^gt動物在亞慢性高熱量攝入(HFD)後，脂肪組織中顯示巨噬細胞浸潤減少，且STING ^gt及IRF3缺乏症引起血糖、胰島素下降及體重減輕(Mao等人, Arterioscler Thromb Vasc Biol, 2017, 37 (5): 920-929)。

此外，式 ( I )或式 ( I ' )之cGAS抑制劑在治療血管疾病中具有治療潛力，且引起血管修復/再生，因為粒線體DNA釋放於內皮細胞之胞溶質中引起cGAS/STING路徑活化且抑制內皮增生。另外，cGAS基因之基因剔除在發炎性肺損傷之小鼠模型中恢復內皮修復/再生(Huang等人, Immunity, 2020, 2017年三月; 52 (3): 475-486.e5. doi: 10.1016/j.immuni.2020,02.002)。

另外，式 ( I )或式 ( I ' )之cGAS抑制劑在治療年齡相關及肥胖症相關之心血管疾病中具有治療潛力(Hamann等人, Immun Ageing, 2020年3月14日; 17: 7; doi: 10.1186/s12979-020-00176-y.eCollection 2020)。

因此，作為cGAS抑制劑之式 ( I )、 ( I ' )、 ( I '' )、 ( II ' )及 ( II '' )化合物可用於自體發炎疾病及自體免疫疾病之療法中，該等疾病諸如全身性紅斑狼瘡(SLE)、干擾素病變、艾卡迪-古特雷斯症候群、年齡相關之黃斑變性(AMD)、肌肉萎縮性側索硬化(ALS)、發炎性腸病(IBD)、慢性阻塞性肺病(COPD)、布盧姆症候群、休格倫氏症候群及帕金森氏病。

另外，作為cGAS抑制劑之式 ( I )、 ( I ' )、 ( I '' )、 ( II ' )及 ( II '' )化合物可用於纖維化疾病之療法中，該等疾病諸如全身性硬化症(SSc)、干擾素病變、非酒精性脂肪變性肝炎(NASH)、間質性肺病(ILD)，較佳進行性纖維化間質性肺病(PF-ILD)，尤其特發性肺纖維化(IPF)。

此外，作為cGAS抑制劑之式 ( I )、 ( I ' )、 ( I '' )、 ( II ' )及 ( II '' )化合物可用於年齡相關之黃斑變性(AMD)、心臟衰竭、COVID-19/SARS-CoV-2感染、腎臟發炎、腎纖維化、代謝障礙、血管疾病、心血管疾病及癌症中之療法中。

組合式 ( I )、 ( I ' )、 ( I '' )、 ( II ' )及 ( II '' )化合物可單獨或與一或多種其他藥理學活性劑組合向患者投與。

在本發明之一較佳實施例中，式 ( I )、 ( I ' )、 ( I '' )、 ( II ' )及 ( II '' )化合物可與一或多種選自以下之群的藥理學活性劑組合：消炎劑、抗纖維變性劑、抗過敏劑/抗組織胺、支氣管擴張劑、β2促效劑/β模擬劑、腎上腺素促效劑、抗膽鹼激導性劑、甲胺喋呤、黴酚酸嗎啉乙酯、白三烯調節劑、JAK抑制劑、抗介白素抗體、非特異性免疫治療劑(諸如干擾素或其他細胞介素/趨化細胞素)、細胞介素/趨化激素受體調節劑(亦即，細胞介素受體促效劑或拮抗劑)、鐸樣受體促效劑(=TLR促效劑)、免疫檢查點調節劑、抗TNF抗體(Humira™)、抗BAFF抗體(貝利單抗)及依那西普。

抗纖維變性劑較佳選自吡非尼酮或酪胺酸激酶抑制劑(諸如尼達尼布)，其中尼達尼布為尤佳的。

消炎劑之較佳實例為NSAID及皮質類固醇。

NSAID較佳選自布洛芬(ibuprofen)、萘普生(naproxen)、雙氯芬酸(diclofenac)、美洛昔康(meloxicam)、塞內昔布(celecoxib)、乙醯水楊酸(Aspirin™)、吲哚美辛(indomethacin)、甲芬那酸(mefenamic acid)及依他昔布(etoricoxib)。

皮質類固醇較佳選自氟尼縮松(Flunisolide)、倍氯米松(Beclomethasone)、曲安西龍(Triamcinolone)、布地奈德(Budesonide)、氟替卡松(Fluticasone)、莫美他松(Mometasone)、環索奈德(Ciclesonide)、羅氟奈德(Rofleponide)及地塞米松(Dexametasone)。

抗過敏劑/抗組織胺較佳選自依匹斯汀(Epinastine)、西替利嗪(Cetirizine)、氮拉斯汀(Azelastine)、非索非那定(Fexofenadine)、左卡巴司汀(Levocabastine)、洛拉他定(Loratadine)、依巴司汀(Ebastine)、地氯雷他定(Desloratidine)及咪唑司汀(Mizolastine)。

β2促效劑/β模擬劑可為長效β2促效劑(LABA)或短效β促效劑(SABA)。尤佳β2促效劑/β模擬劑係選自班布特羅(Bambuterol)、比托特羅(Bitolterol)、卡布特羅(Carbuterol)、克侖特羅(Clenbuterol)、非諾特羅(Fenoterol)、福莫特羅(Formoterol)、己烷雙異丙腎上腺素(Hexoprenalin)、異丁特羅(Ibuterol)、吡布特羅(Pirbuterol)、丙卡特羅(Procaterol)、茶丙特羅(Reproterol)、沙美特羅(Salmeterol)、磺醯特羅(Sulfonterol)、特布他林(Terbutalin)、妥布特洛(Tolubuterol)、奧達特羅(Olodaterol)、羥甲叔丁腎上腺素(Salbutamol)，尤其奧達特羅。

抗膽鹼激導性劑較佳選自異丙托銨(ipratropium)鹽、噻托銨(tiotropium)鹽、格隆銨(glycopyrronium)鹽及茶鹼，其中噻托溴銨為尤佳的。

白三烯調節劑較佳選自孟魯司特(Montelukast)、普魯司特(Pranlukast)、紮魯司特(Zafirlukast)、異丁司特(Ibudilast)及齊留通(Zileuton)。

JAK抑制劑較佳選自巴瑞替尼(Baricitinib)、賽度替尼(Cerdulatinib)、非達替尼(Fedratinib)、非戈替尼(Filgotinib)、甘多替尼(Gandotinib)、來他替尼(Lestaurtinib)、莫羅替尼(Momelotinib)、帕瑞替尼(Pacritinib)、皮非替尼(Peficitinib)、魯索替尼(Ruxolitinib)、托法替尼(Tofacitinib)、優帕替尼(Upadacitinib)。

抗介白素抗體較佳選自抗IL-23抗體(諸如里森基單抗)、抗IL-17抗體、抗IL-1抗體、抗IL-4抗體、抗IL-13抗體、抗IL-5抗體、抗IL-6抗體(諸如Actemra™)、抗IL-12抗體、抗IL-15抗體。

調配物本發明化合物可藉由任何適合投與途徑投與，包括全身性投與及局部投與兩者。全身性投與包括經口投與、非經腸投與、經皮投藥、直腸投藥及藉由吸入劑投與。非經腸投與係指除經腸、經皮或藉由吸入劑以外的投與途徑，且通常係藉由注射或輸注。非經腸投與包括靜脈內、肌肉內及皮下注射或輸注。吸入係指投與至患者之肺部，無論經由口腔抑或經由鼻腔吸入。局部投與包括施用至皮膚。本發明化合物可經由滴眼劑投與以治療休格連氏症候群。

適用於投藥的形式為例如錠劑、膠囊、溶液、糖漿、乳液或可吸入粉末或氣溶膠。在各情況下，醫藥學上有效化合物之含量應在總組合物之0.1至90重量%，較佳0.5至50重量%範圍內，亦即量足以達成下文中指定之劑量範圍。

製劑可以錠劑、粉末、膠囊(例如硬明膠膠囊)中之粉末、溶液或懸浮液形式經口投與。藉由吸入投與時，活性物質組合可以粉末、水溶液或乙醇水溶液形式或使用推進劑氣體調配物來給予。

因此，較佳地，醫藥調配物係藉由根據以上較佳實施例，一或多種式 ( I )、 ( I ' )、 ( I '' )、 ( II ' )及 ( II '' )化合物之含量表徵。

尤佳地，若式 ( I )、 ( I ' )、 ( I '' )、 ( II ' )及 ( II '' )合物係經口投與，且若其一天一次或兩次投與，則其亦尤佳。適合錠劑可例如藉由以下方式獲得：將活性物質與已知賦形劑(例如惰性稀釋劑，諸如碳酸鈣、磷酸鈣或乳糖；崩解劑，諸如玉米澱粉或海藻酸；黏合劑，諸如澱粉或明膠；潤滑劑，諸如硬脂酸鎂或滑石；及/或用於延遲釋放之藥劑，諸如羧甲基纖維素、鄰苯二甲酸乙酸纖維素或聚乙酸乙烯酯))混合。錠劑亦可包含若干層。

因此，包衣錠劑可藉由用通常用於錠劑包衣之物質(例如可力酮(kollidone)或蟲膠、阿拉伯膠、滑石、二氧化鈦或糖)包覆類似於錠劑所產生之芯來製備。為達成延遲釋放或預防不相容，芯亦可由多個層組成。類似地，可能使用上文關於錠劑所提及之賦形劑，錠劑包衣可由多個層組成以達成延遲釋放。

根據本發明，含有活性物質或其組合之糖漿可另外含有諸如糖精、賽克拉美(cyclamate)、丙三醇或糖之甜味劑及風味增強劑(例如，諸如香草精或橙子提取物之調味劑)。其亦可含有懸浮佐劑或增稠劑，諸如羧甲基纖維素鈉；濕潤劑，諸如脂肪醇與環氧乙烷之縮合產物；或防腐劑，諸如對羥基苯甲酸酯。

含有一或多種活性物質或活性物質組合之膠囊可例如藉由混合活性物質與諸如乳糖或山梨醇之惰性載劑且將其填充入明膠膠囊製備。適合栓劑可例如藉由混合出於此目的提供之載劑，諸如中性脂肪或聚乙二醇或其衍生物來製造。

可使用之賦形劑包括例如水；醫藥學上可接受之有機溶劑，諸如石蠟(例如石油餾分)、植物油(例如花生油或芝麻油)、單官能性或多官能性醇(例如乙醇或甘油)；載劑，諸如天然礦物粉末(例如高嶺土、黏土、滑石、白堊)、合成礦物粉末(例如高度分散性矽酸及矽酸鹽)、糖(例如甘蔗糖、乳糖及葡萄糖)、乳化劑(例如木質素、廢亞硫酸液體、甲基纖維素、澱粉及聚乙烯吡咯啶酮)及潤滑劑(例如硬脂酸鎂、滑石、硬脂酸及月桂基硫酸鈉)。

當然，對於經口投與，除上述載劑之外，錠劑亦可含有諸如檸檬酸鈉、碳酸鈣及磷酸二鈣之添加劑，以及諸如澱粉(較佳馬鈴薯澱粉)、明膠及其類似物之各種添加劑。此外，諸如硬脂酸鎂、月桂基硫酸鈉及滑石之潤滑劑可同時用於制錠製程。在水性懸浮液之情況下，活性物質可與除上文所提及之賦形劑以外的各種風味增強劑或著色劑組合。

Claims

一種式 (I)化合物，
，其中 R ¹ 係選自甲基、乙基、鹵甲基及鹵素，其中 G係選自SO ₂、S、O、N、N R ⁸ ，其中 R ² 係選自H、鹵素、環丙基、C ₁ _- ₃烷基、C ₂ _- ₅炔基及CN，或其中 R ² 為選自由以下組成之群的環狀基團：苯基或具有1、2、3或4個各自獨立地選自N、S及O之雜原子的五至六員雜芳基，其中此環狀基團係經一或兩個相同或不同取代基 R ¹⁰ 取代，其中 R ³ 係選自H、甲基及-CF ₃， R ⁴ 係選自H、甲基及-CF ₃， R ⁵ 係選自H、甲基、-CN、-亞甲基-OH及-CF ₃，或 R ⁵ 可不存在， R ⁶ 係選自H、甲基、-CN、-亞甲基-OH及-CF ₃， R ⁷係選自氫、鹵素、甲基、-O-甲基及-OH， R ⁸ 係選自CN、H、甲基、-CO-NH ₂、-CO-(C ₁ _- ₃烷基)、環烷基及氧雜環丁烷，其中各 R ¹⁰ 獨立地選自由以下組成之群：氫、鹵素、鹵烷基、-甲基、-乙基、-NH-CO-甲基、-N(CH ₃) ₂、-CH ₂-OH、-NH(CH ₃)、-O-CH ₃及-CN，或其中 R ⁵ 及 R ⁶ 一起形成選自氧雜環丁烷、四氫呋喃、環丙烷及環丁烷之環，或在 G為N R ⁸ 之情況下，則當 R ⁵ 不存在時， R ⁸ 及 R ⁶ 與其間之C原子形成包含兩個各自獨立地選自N及O之雜原子的環化五員芳族或非芳族雜環，其中此五員環化雜環可視情況經側氧基取代，或 R ⁷ 及 R ³ 與其間之C原子一起形成環化環丙烷環，或其前藥或醫藥學上可接受之鹽。
一種如請求項1之式 ( I ' )
，或式 (I '' )化合物
，其中 R ¹ 、 R ² 、 R ³ 、 R ⁵ 、 R ⁶ 、 R ⁷ 、 R ⁸ 、 R ⁹ 、 R ¹⁰ 及 G係如請求項1中所定義或其前藥或醫藥學上可接受之鹽。
一種如請求項1之式 ( II ')
，或式 (II '' )化合物
其中 R ¹ 、 R ² 、 R ³ 、 R ⁵ 、 R ⁶ 、 R ⁷ 、 R ⁸ 、 R ⁹ 、 R ¹⁰ 及 G係如請求項1中所定義，或其前藥或醫藥學上可接受之鹽。
如請求項1至3中任一項之式 ( I )、 ( I ' )、 ( I '' )、 ( II ' )或 ( II '' )化合物，其中 G係選自SO ₂、O及NR ⁸，且其中 R ⁸ 係選自CN、H、甲基、-CO-NH ₂、-CO-甲基及氧雜環丁烷，且其中 R ² 係選自H、鹵素、1-丙炔基及乙炔基，或其中 R ² 為選自由具有1或2個選自N、S及O之雜原子的五至六員雜芳基組成之群的環狀基團，該雜芳基選自由吡啶基及吡唑基組成之群，其中此環狀基團係經一或兩個相同或不同取代基 R ¹⁰ 取代，該 R ¹⁰ 選自由鹵素、甲基及-NH(CH ₃)組成之群，或其前藥或醫藥學上可接受之鹽。
如請求項1至3中任一項之式 ( I )、 ( I ' )、 ( I '' )、 ( II ' )或 ( II '' )化合物，其中 R ¹ 為鹵甲基或其前藥或醫藥學上可接受之鹽。
如請求項5之式 ( I )、 ( I ' )、 ( I '' )、 ( II ' )或 ( II '' )化合物，其中 R ¹ 為選自由-CF ₃、-CHF ₂及-CH ₂F組成之群的氟甲基或其前藥或醫藥學上可接受之鹽。
如請求項1至3中任一項之式 ( I )、 ( I ' )、 ( I '' )、 ( II ' )或 ( II '' )化合物，其中 R ³ 為甲基且 R ⁴ 為氫，或其前藥或醫藥學上可接受之鹽。
如請求項1至3中任一項之式 ( I )、 ( I ' )、 ( I '' )、 ( II ' )或 ( II '' )化合物，其中 R ⁷ 為鹵素或其前藥或醫藥學上可接受之鹽。
如請求項8之式 ( I )、 ( I ' )、 ( I '' )、 ( II ' )或 ( II '' )化合物，其中 R ⁷ 為F 或其前藥或醫藥學上可接受之鹽。
如請求項1至3中任一項之式 ( I )、 ( I ' )、 ( I '' )、 ( II ' )或 ( II '' )化合物，其中 G選自由O及SO ₂組成之群且其中 R ⁷ 為F 或其前藥或醫藥學上可接受之鹽。
如請求項10之式 ( I )、 ( I ' )、 ( I '' )、 ( II ' )或 ( II '' )化合物，其中 R ² 係選自乙炔基、1-丙炔基及鹵素，或其前藥或醫藥學上可接受之鹽。
如請求項11之式 ( I )、 ( I ' )、 ( I '' )、 ( II ' )或 ( II '' )化合物，其中 R ³ 為甲基且 R ⁴ 為氫，或其前藥或醫藥學上可接受之鹽。
如請求項1至3中任一項之式 ( I )、 ( I ' )、 ( I '' )、 ( II ' )或 ( II '' )化合物，其中 R ¹ 為氟甲基， G為SO ₂， R ⁷ 為F，且其中 R ⁵ 及 R ⁶ 均為甲基或均為氫或其中 R ⁵ 及 R ⁶ 一起形成選自氧雜環丁烷、環丙烷及環丁烷之環，或其前藥或醫藥學上可接受之鹽。
如請求項13之式 ( I )、 ( I ' )、 ( I '' )、 ( II ' )或 ( II '' )化合物，其中 R ³ 為甲基且 R ⁴ 為氫；或其前藥或醫藥學上可接受之鹽。
如請求項13之式 ( I )、 ( I ' )、 ( I '' )、 ( II ' )或 ( II '' )化合物，其中 R ⁵ 及 R ⁶ 均為甲基或其中 R ⁵ 及 R ⁶ 一起形成選自氧雜環丁烷、環丙烷及環丁烷之環，或其前藥或醫藥學上可接受之鹽。
如請求項1至3中任一項之式 ( I )、 ( I ' )、 ( I '' )、 ( II ' )或 ( II '' )化合物，其中 G為O R ¹ 為氟甲基， R ⁷ 係選自F、-O-甲基及-OH， R ⁵ 及 R ⁶ 均為氫，或其前藥或醫藥學上可接受之鹽。
如請求項16之式 ( I )、 ( I ' )、 ( I '' )、 ( II ' )或 ( II '' )化合物，其中 R ³ 為甲基且 R ⁴ 為氫，或其前藥或醫藥學上可接受之鹽。
如請求項1至3中任一項之式 ( I )、 ( I ' )、 ( I '' )、 ( II ' )或 ( II '' )化合物，其中 R ² 係選自由組成之群：H、乙炔基、1-丙炔基及鹵素，或其前藥或醫藥學上可接受之鹽。
如請求項1至3中任一項之式 ( I )、 ( I ' )、 ( I '' )、 ( II ' )或 ( II '' )化合物，其中 R ³ 為甲基且 R ⁴ 為氫，其中 R ⁷ 為F；其中 R ⁵ 及 R ⁶ 均為氫且其中 R ² 為選自由具有1或2個選自N、S及O之雜原子的五至六員雜芳基組成之群的環狀基團，該雜芳基選自由吡啶及吡唑組成之群，其中此環狀基團係經一或兩個相同或不同取代基 R ¹⁰ 取代，該 R ¹⁰ 選自由鹵素、甲基及-NH(CH ₃)組成之群，或其前藥或醫藥學上可接受之鹽。
如請求項1至3中任一項之式 ( I )、 ( I ' )、 ( I '' )、 ( II ' )或 ( II '' )化合物，其選自由以下組成之群：

，及其前藥或醫藥學上可接受之鹽。
一種式 ( IV )
，或式 (V)中間物
，其中 R ¹ 、 R ² 、 R ³ 、 R ⁴ 、 R ⁵ 、 R ⁶ 、 R ⁷ 及 G係如請求項1中所定義。
一種如請求項1至20中任一項中所定義之化合物中之任一者的前藥，其屬於式 ( A )範疇內，
其中 R ¹² 為C ₁ _- ₄烷基、芳基、-CH ₂芳基、NH-SO ₂-C ₁ _- ₃烷基。
如請求項22之式(A)之前藥，其中 R ¹² 為甲基。
一種如請求項1至20中任一項之式 ( I )、 ( I ' )、 ( I '' )、 ( II ' )或 ( II '' )化合物之用途，其用於製造供用於治療可藉由抑制cGAS而治療之疾病的藥劑。
如請求項24之用途，其中該疾病係選自由以下組成之群：全身性紅斑狼瘡(SLE)、干擾素病變、艾卡迪-古特雷斯症候群(Aicardi- Goutières syndrome)、年齡相關之黃斑變性(AMD)、肌肉萎縮性側索硬化(ALS)、發炎性腸病(IBD)、慢性阻塞性肺病(COPD)、布盧姆症候群(Bloom's syndrome)、休格倫氏症候群(Sjogren's syndrome)、帕金森氏病(Parkinsons disease)、心臟衰竭及癌症、全身性硬化症(SSc)、非酒精性脂肪變性肝炎(NASH)、間質性肺病(ILD)，較佳係進行性纖維化間質性肺病(PF-ILD)，尤指特發性肺纖維化(IPF)。
如請求項24之用途，其中該疾病係選自由以下組成之群：全身性紅斑狼瘡(SLE)、干擾素病變、艾卡迪-古特雷斯症候群、年齡相關之黃斑變性(AMD)、肌肉萎縮性側索硬化(ALS)、發炎性腸病(IBD)、慢性阻塞性肺病(COPD)、布盧姆症候群、休格倫氏症候群及帕金森氏病。
如請求項24之用途，其中該疾病為選自由以下組成之群的纖維化疾病：全身性硬化症(SSc)、非酒精性脂肪變性肝炎(NASH)、干擾素病變、間質性肺病(ILD)，較佳係進行性纖維化間質性肺病(PF-ILD)，尤指特發性肺纖維化(IPF)。
如請求項24之用途，其中該疾病係選自由以下組成之群：年齡相關之黃斑變性(AMD)、心臟衰竭、COVID-19/SARS-CoV-2感染、腎臟發炎、腎纖維化、代謝障礙、血管疾病、心血管疾病及癌症。
一種醫藥組合物，其包含如請求項1至20中任一項之式 ( I )、 ( I ' )、 ( I '' )、 ( II ' )或 ( II '' )化合物及視情況選用之一或多種醫藥學上可接受之載劑及/或賦形劑。
一種醫藥組合物，其包含如請求項1至20中任一項之式 ( I )、 ( I ' )、 ( I '' )、 ( II ' )或 ( II '' )化合物與一或多種選自由以下組成之群的活性劑之組合：消炎劑、抗纖維變性劑、抗過敏劑/抗組織胺、支氣管擴張劑、β2促效劑/β模擬劑、腎上腺素促效劑、抗膽鹼激導性劑、甲胺喋呤、黴酚酸嗎啉乙酯(mycophenolate mofetil)、白三烯調節劑、JAK抑制劑、抗介白素抗體、非特異性免疫治療劑(諸如干擾素或其他細胞介素/趨化細胞素)、細胞介素/趨化激素受體調節劑、鐸樣(toll-like)受體促效劑、免疫檢查點調節劑、抗TNF抗體(諸如Humira™)、抗BAFF抗體(諸如貝利單抗(Belimumab))及依那西普(Etanercept)。
如請求項30之醫藥組合物，其中該式 ( I )、 ( I ' )、 ( I '' )、 ( II ' )或 ( II '' )化合物係與一或多種選自由吡非尼酮(Pirfenidon)及尼達尼布(Nintedanib)組成之群的抗纖維變性劑組合。
如請求項30之醫藥組合物，其中該式 ( I )、 ( I ' )、 ( I '' )、 ( II ' )或 ( II '' )化合物係與一或多種選自由NSAID及皮質類固醇組成之群的消炎劑組合。
如請求項30之醫藥組合物，其中該式 ( I )、 ( I ' )、 ( I '' )、 ( II ' )或 ( II '' )化合物係與一或多種選自支氣管擴張劑、β2促效劑/β模擬劑、腎上腺素促效劑及抗膽鹼激導性劑之群的活性劑組合。
如請求項30之醫藥組合物，其中該式 ( I )、 ( I ' )、 ( I '' )、 ( II ' )或 ( II '' )化合物係與一或多種選自由以下組成之群的抗介白素抗體組合：抗IL-23抗體(諸如里森基單抗(Risankizumab))、抗IL-17抗體、抗IL-1抗體、抗IL-4抗體、抗IL-13抗體、抗IL-5抗體、抗IL-6抗體(諸如Actemra™)、抗IL-12抗體及抗IL-15抗體。