TW202308603A

TW202308603A - 肝衰竭的治療

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Publication number: TW202308603A
Application number: TW111117653A
Authority: TW
Inventors: 凡妮莎勒格利; 雷米漢福; 西蒙德貝克爾; 菲利普普蘭; 貝努瓦諾埃爾
Original assignee: 法商Ｇｅｎｆｉｔ公司
Priority date: 2021-05-11
Filing date: 2022-05-11
Publication date: 2023-03-01
Also published as: WO2022238445A1; JP2024518521A; CA3214214A1; EP4337184A1; AU2022274304A1; WO2022238450A1; TW202332424A

Abstract

本發明係關於用於治療肝衰竭之化合物。

Description

肝衰竭的治療

本發明係關於用於治療肝衰竭之化合物。

肝衰竭係肝嚴重不能執行其正常功能。本文中之肝衰竭的表現包括急性肝衰竭（acute liver failure，ALF）、代償不全之肝硬化、急性肝硬化代償不全（acute cirrhosis decompensation，AD）及慢性肝衰竭急性發作（acute on chronic liver failure，ACLF）。

急性肝衰竭（ALF）

術語「ALF」描述了一種特徵在於在沒有預先存在之慢性肝病之情況下之急性肝功能喪失的病症。ALF亦稱為猛爆性肝衰竭、急性肝壞死、猛爆性肝壞死及猛爆性肝炎。ALF係突發性肝細胞損傷之罕見且嚴重的結果，且可能經數天或數週演化為致死性結果。對肝細胞的各種損傷導致了一致的模式，亦即快速發生之胺基轉移酶升高、精神活動改變及凝血紊亂。沒有現存的肝病將ALF與由末期慢性肝病導致的肝衰竭（代償不全之肝硬化、急性代償不全及慢性肝衰竭急性發作）區分開來。在ALF中，導致肝細胞損傷之物質會造成直接中毒性壞死，或細胞凋亡及免疫損傷，此為較慢的過程。自症狀發作至肝性腦病發作之時間區分了急性肝衰竭之不同形式：直接的極快速損傷（在數小時內），其稱為超急性肝衰竭；及較慢的基於免疫之損傷（數天至數週），其視為急性或亞急性的。如本文所使用之術語「肝性腦病」或HE係指因肝衰竭而發生錯亂、意識程度改變及昏迷。在晚期，其稱為肝性昏迷（hepatic coma）或肝昏迷（coma hepaticum）。在已開發國家，導致ALF之五個最普遍的原因為對乙酼胺基酚（乙醯胺酚）毒性、局部缺血、藥物誘發之肝損傷、B型肝炎及自體免疫，以上原因幾乎占病例之80%。在開發中國家，A型、B型及E型肝炎為導致ALF之主要原因。其餘導致ALF之原因占總體的不到15%，且包括中暑、妊娠相關損傷（例如妊娠急性脂肪肝及HELLP [溶血、肝酶升高及低血小板]症候群）、布加症候群（Budd-Chiari syndrome）、諸如單純疱疹之非趨肝性病毒感染及彌漫性浸潤性惡性腫瘤。若不加以治療，則預後很差，因此及時辨識及管控急性肝衰竭患者係關鍵的。只要有可能，就應在肝移植中心之加護病房管控急性肝衰竭患者。

代償不全之肝硬化及急性代償不全（AD）

如本文所使用之術語「肝硬化」係指特徵在於肝組織被纖維化及再生結節取代，從而導致肝功能喪失直至代償不全之病況。腹水（腹腔內體液滯留）為與肝硬化代償不全相關之最常見併發症。其與生活品質差、感染風險增加及長期結果差相關。其他可能危及生命之併發症為肝性腦病及食道靜脈曲張引起之出血。肝硬化代償不全具有許多可能的臨床表現。此等徵象及症狀可能係肝細胞衰竭之直接結果或繼發於所導致之門脈高血壓。門脈高血壓之影響包括脾腫大、胃食道靜脈曲張及門脈側支循環，此係由於因門脈高血壓而在門脈系統與肚臍周圍靜脈之間形成靜脈側支脈。

肝硬化在臨床上分為兩類：代償性肝硬化及代償不全之肝硬化。

如本文所使用之術語「代償性肝硬化」意謂肝重度瘢痕化但仍可執行許多重要身體功能。患有代償性肝硬化之患者所經歷的症狀極少或沒有症狀，且可能在沒有嚴重臨床併發症的情況下生活。代償性肝硬化早期患者之特徵在於門脈高血壓程度低，且沒有食道靜脈曲張。代償性肝硬化晚期患者之特徵在於門脈高血壓程度較高，且存在食道靜脈曲張，但沒有腹水且沒有出血。

如本文所使用之術語「代償不全之肝硬化」意謂肝廣泛地瘢痕化且不能正常運作。患有代償不全之肝硬化之患者會出現各種症狀，諸如疲勞、食慾不振、黃疸、體重減輕、腹水及/或水腫、肝性腦病及/或出血。代償不全之肝硬化早期患者之特徵在於在從未出血之患者中存在腹水，且伴有或不伴有食道靜脈曲張。代償不全之肝硬化晚期患者之特徵在於更嚴重的腹水單獨出現或與出血、細菌感染及/或肝性腦病組合出現。可能會出現與代償不全之肝硬化相關的併發症，諸如腹水、水腫、出血問題、骨質及骨密度損失、肝腫大、女性的月經不規律及男性的男子女乳症、精神狀態減損、搔癢、腎功能衰竭及肌肉萎縮。

術語「急性代償不全」係指患有晚期慢性肝病、代償性肝硬化或穩定的代償不全之肝硬化之患者的肝功能突然惡化，需要立即住院。入院時，患有AD之患者具有多種症狀，包括嚴重腹水、肝性腦病、與敗血症相關或不相關之靜脈曲張出血及/或腎功能受損及/或凝血病及/或心血管功能受損及/或呼吸功能受損。AD為危及生命之病況，28天總死亡率為11%。

慢性肝衰竭急性發作（ACLF）

ACLF為在患有已知慢性肝病之患者中觀測到之最嚴重肝病況，該等患者患有急性肝功能代償不全。

ACLF為患有晚期肝硬化或患有由慢性肝病所致之肝硬化之患者的臨床狀況突然惡化且危及生命。此症候群之特徵在於三大特徵：其一般在強烈全身性發炎之情形下出現，產生通常與促炎性誘發事件（例如感染或酒精性肝炎）時間關係緊密，且與影響生命器官：肝、腎、腦之最小功能，凝血及/或心血管功能及/或呼吸系統的單器官或多器官衰竭相關。至於敗血症，器官衰竭係藉由使用改良型連續器官衰竭評估評分（DOFA評分）或EASL-CLIF聯盟器官衰竭評分系統來加以鑑別的，該評分考慮了肝、腎及腦的功能以及凝血、循環及呼吸，從而允許將患者分層為具有不同死亡風險之亞組。已提出若干分類以對ACLF進行定級（APASL、EASL/CLIF、NASCELD）。使用EASL/CLIF，根據診斷時器官衰竭之數目，將患者分層為四個預後級別（無慢性肝衰竭急性發作以及1級、2級及3級慢性肝衰竭急性發作）。ACLF易感性與基礎慢性肝病之嚴重程度（亦即纖維化進展至肝硬化）相關。無關於基礎慢性肝病（膽汁鬱積性、代謝性肝病，慢性病毒性肝炎及非酒精性脂肪變性肝炎（NASH），酒精性肝炎），代償性肝硬化及穩定的代償不全之肝硬化為與ACLF發展相關之主要病況。在西方國家，酒精性肝硬化占ACLF所有基礎肝病之50%-70%，而病毒性肝炎相關肝硬化占所有病例之約10%-30%。

基礎疾病之嚴重程度可藉由末期肝病模型（MELD）評分來評估。

ACLF需要在肝硬化及/或慢性肝病環境中發生誘發事件，且快速惡化成多器官衰竭，死亡率較高。誘發事件可為再活動的B型肝炎或疊加型病毒性肝炎、酒精、藥物、缺血、手術、敗血症或特發性的。然而，約40% ACLF患者沒有誘發事件。

肝衰竭發病時，細菌產物移位伴隨或不伴隨活細菌自腸腔移位經由強烈全身性發炎反應症候群在多器官功能障礙及衰竭發展方面起關鍵作用。

宿主反應決定了損傷的嚴重程度。發炎及嗜中性球功能障礙在ACLF發病機制中非常重要，且突出的促炎性細胞介素概況造成自穩定的代償不全之肝硬化向AD及最終ACLF過渡。在此等患者中，發炎反應可能會導致免疫失調，免疫失調可能會使人容易感染，隨後將進一步加重促炎性反應，從而產生惡性循環。咸信細胞介素在ACLF中起重要作用。在ACLF患者中已描述了若干種細胞介素之血清含量升高，包括腫瘤壞死因子（TNF）-α、sTNF-αR1、sTNF-αR2、介白素（IL）-2、IL-2R、IL-4、IL-6、IL-8、IL-10及干擾素-α。

高膽紅素血症幾乎總是存在，且黃疸視為AD及ACLF之基本標準。不同的作者使用了不同的黃疸截止位準，在6-20 mg/dL血清膽紅素範圍內變化。除黃疸以外，肝功能障礙之另一標誌為凝血病。肝硬化患者中之凝血測試通常為異常的，此係歸因於凝血因子之合成受損而消耗增加。持續的肝損傷最終會導致不可阻擋之螺旋式下降及死亡。

除肝以外最常見的衰竭器官為腎。腎衰竭可分類為四種類型：肝腎症候群、實質性疾病、低血容量症誘發之腎衰竭及藥物誘發之腎衰竭。細菌感染（諸如自發性細菌腹膜炎）為肝硬化中腎衰竭之最常見的誘發原因，其次為低血容量症（繼發於胃腸出血、過度利尿劑治療）。

HE為AD及ACLF之常見表現之一。HE可為AD及ACLF之誘發因素或結果。氨係HE發病機制之中樞。實際上，多項研究已強調，高氨血症在患有肝硬化及其他肝病之患者之HE發展中起關鍵作用。由於肝衰竭，因此大量血清氨逃脫肝代謝且可到達腦，在腦中該等高氨濃度與高腦水腫及疝氣發生率密切相關。

另外，腦腫脹為AD及ACLF之重要特徵，此類似於ALF情形。

AD及ACLF標誌之一為類似於ALF患者中之心血管性虛脫的心血管性虛脫。此心血管異常與死亡風險增加相關，尤其在彼等呈現腎功能障礙之患者中。

AD及ACLF之呼吸併發症可分類為急性呼吸衰竭（例如肺炎）及由於肝硬化而出現之呼吸併發症（例如門肺高血壓及肝肺症候群）。肝硬化患者處於經增加之肺炎風險下。

患有AD及ACLF之患者在相同MELD評分下具有比非ACLF患者統計學上高之死亡率。無論誘發事件如何，導致肝功能急性惡化及多器官衰竭之最終共同路徑似乎為全身性發炎之擴大活化，接著為免疫系統麻痹期。初始細胞介素風暴造成大循環、微循環之巨大改變及正常器官功能破壞，從而導致多器官衰竭。

用於減輕或矯正損傷之早期干預係關鍵的。對於超過3個器官衰竭之患者，ACLF之管控目前基於器官衰竭之支持治療，主要在加護環境中。然而，一定比例之先前急性代償不全事件（出現腹水、腦病、胃腸出血、細菌感染）病例在ACLF患者中極為常見。實際上，肝硬化患者出現肝衰竭表示就醫學管控而言之決定性時間點，因為此病況通常與快速演變之多器官功能障礙相關。缺乏肝解毒、代謝及調節功能以及免疫反應改變會導致諸如腎衰竭、對感染之易感性增加、肝性昏迷及全身性血液動力學功能障礙之危及生命之併發症。此外，僅20%晚期肝硬化患者可經肝移植治療。

需要對肝衰竭，尤其AD、ACLF、ALF及代償不全之肝硬化之適當治療。

本發明係關於一種PPAR促效劑，其選自：艾拉菲諾（elafibranor）或其醫藥學上可接受之鹽；及2-[2,6-二甲基-4-[3-[4-(甲硫基)苯基]-3-側氧基-丙基]苯氧基]-2-甲基丙酸或其醫藥學上可接受之鹽；其用於治療有需要個體之肝衰竭的方法中。

在一特定實施例中，PPAR促效劑係用於治療選自以下之肝衰竭：急性代償不全（AD）、慢性肝衰竭急性發作（ACLF）、急性肝衰竭（ALF）及代償不全之肝硬化。

在一特定實施例中，PPAR促效劑係用於治療AD。

在另一特定實施例中，PPAR促效劑係用於治療代償不全之肝硬化。

更特定言之，PPAR促效劑係用於治療ACLF。

在另一實施例中，PPAR促效劑向患有AD、代償不全之肝硬化且伴有或不伴有ACLF，或具有AD及ACLF之風險的個體投與。

在另一實施例中，PPAR促效劑向患有代償不全之肝硬化或具有代償不全之肝硬化或急性代償不全之風險的個體投與。

在一特定實施例中，PPAR促效劑係用於預防代償不全之肝硬化。

在又一實施例中，PPAR促效劑係用於將代償不全之肝硬化逆轉為代償性肝硬化之方法中。

根據另一實施例，PPAR促效劑係用於預防患有ACLF之個體之肝代償不全之方法中。

在另一實施例中，PPAR促效劑係用於治療ALF。

在另一實施例中，PPAR促效劑係用於預防腎衰竭或預防肝性腦病。

根據一特定實施例，PPAR促效劑向患有ACLF而無腎衰竭之個體投與，或向患有ACLF且伴有非腎器官衰竭以及腎功能障礙之個體投與。

根據另一實施例，PPAR促效劑係用於治療敗血症相關ACLF。

本發明係關於一種PPAR促效劑，其選自：艾拉菲諾或其醫藥學上可接受之鹽；及2-[2,6-二甲基-4-[3-[4-(甲硫基)苯基]-3-側氧基-丙基]苯氧基]-2-甲基丙酸或其醫藥學上可接受之鹽；其用於治療肝衰竭之方法中。

定義

在本發明之上下文中，以下術語具有以下含義：

術語「醫藥學上可接受之鹽」包括無機酸鹽以及有機酸鹽。適合無機酸之代表性實例包括鹽酸、氫溴酸、氫碘酸、磷酸及其類似物。適合有機酸之代表性實例包括甲酸、乙酸、三氯乙酸、三氟乙酸、丙酸、苯甲酸、肉桂酸、檸檬酸、反丁烯二酸、順丁烯二酸、甲磺酸及其類似物。醫藥學上可接受之無機酸或有機酸加成鹽之其他實例包括以下中列出之醫藥學上可接受之鹽：J. Pharm. Sci. 1977, 66, 2，及Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use，P. Heinrich Stahl及Camille G. Wermuth, 2002。「醫藥學上可接受之鹽」亦包括無機鹼鹽以及有機鹼鹽。適合無機鹼之代表性實例包括鈉鹽或鉀鹽、鹼土金屬鹽（諸如鈣鹽或鎂鹽）或銨鹽。與有機鹼之適合鹽的代表性實例包括例如與甲胺、二甲胺、三甲胺、哌啶、嗎啉或三-(2-羥乙基)胺之鹽。

如本文所使用，術語「治療（treatment/treat/treating）」係指意欲改善患者之健康狀況的任何行為，諸如疾病之療法、預防、防治及延遲。在某些實施例中，此類術語係指疾病或與其相關之症狀的改善或根除。在其他實施例中，此術語係指使疾病之擴散或惡化減至最小，由向患有此種疾病之個體投與一或多種治療劑而引起。

如本文所使用，術語「個體」、「個人」或「患者」可互換且係指動物，較佳哺乳動物，甚至更佳人類，包括成人、兒童、新生兒及產前期人類。然而，術語「個體」亦可指非人類動物，尤其哺乳動物，諸如狗、貓、馬、牛、豬、羊及非人類靈長類動物，以及其他。

在本發明之上下文中，應用於數值之術語「約」意謂值±10%。為清楚起見，此意謂「約100」係指包含於90-110範圍內之值。另外，在本發明之上下文中，其中X為數值之術語「約X」亦特定地揭示X值，且亦揭示如此定義之範圍之較低值及較高值，更特定言之X值。

用於本發明之化合物

本發明提供一種PPAR促效劑，其選自：艾拉菲諾或其醫藥學上可接受之鹽；及2-[2,6-二甲基-4-[3-[4-(甲硫基)苯基]-3-側氧基-丙基]苯氧基]-2-甲基丙酸或其醫藥學上可接受之鹽；其用於治療肝衰竭之方法中。

根據本發明使用之PPAR促效劑可呈醫藥學上可接受之鹽，尤其與醫藥用途相容之酸鹽或鹼鹽的形式。根據本發明之PPAR促效劑的鹽包括醫藥學上可接受之酸加成鹽、醫藥學上可接受之鹼加成鹽、醫藥學上可接受之金屬鹽、銨及烷基化銨鹽。此等鹽可在PPAR促效劑之最終純化步驟期間或藉由將鹽併入至先前純化之PPAR促效劑中來獲得。

肝衰竭

在一特定實施例中，個體為患有選自由以下組成之群的肝衰竭之患者：AD、ACLF、ALF及肝硬化，諸如代償性肝硬化或代償不全之肝硬化。在一特定實施例中，個體為患有選自由以下組成之群的肝衰竭之患者：ACLF、ALF及代償不全之肝硬化。

或者，需要治療之個體為具有選自AD、ACLF、ALF及肝硬化之肝衰竭風險的個體。在一特定實施例中，個體具有選自由以下組成之群的肝衰竭之風險：AD、ACLF、ALF及代償不全之肝硬化。特定言之，個體可為具有AD、ACLF之風險或具有因慢性肝病所致之代償不全之肝硬化之風險的患者。

在一特定實施例中，個體患有ALF。在另一實施例中，個體患有由以下引起之ALF：藥物誘發之肝損傷、對乙酼胺基酚毒性、局部缺血、A型、B型或E型肝炎、自體免疫、中暑、妊娠相關損傷（例如妊娠急性脂肪肝及HELLP [溶血、肝酶升高及低血小板]症候群）、布加症候群、諸如單純疱疹之非趨肝性病毒感染及彌漫性浸潤性惡性腫瘤。在又一實施例中，個體患有由以下引起之ALF：藥物誘發之肝損傷、對乙酼胺基酚毒性、局部缺血、A型、B型或E型肝炎、自體免疫。在又一實施例中，個體患有由對乙酼胺基酚毒性引起之ALF。

在另一特定實施例中，個體具有ALF之風險。在另一實施例中，個體具有由以下引起之ALF之風險：藥物誘發之肝損傷、對乙酼胺基酚毒性、局部缺血、A型、B型或E型肝炎、自體免疫、中暑、妊娠相關損傷（例如妊娠急性脂肪肝及HELLP [溶血、肝酶升高及低血小板]症候群）、布加症候群、諸如單純疱疹之非趨肝性病毒感染及彌漫性浸潤性惡性腫瘤。在又一實施例中，個體具有由以下引起之ALF之風險：藥物誘發之肝損傷、對乙酼胺基酚毒性、局部缺血、A型、B型或E型肝炎、自體免疫。在又一實施例中，個體具有由對乙酼胺基酚毒性引起之ALF之風險。

在一特定實施例中，個體患有代償性肝硬化或代償不全之肝硬化，尤其代償不全之肝硬化。在一特定實施例中，個體患有酒精性肝硬化，諸如酒精性代償性肝硬化或酒精性代償不全之肝硬化，更尤其酒精性代償不全之肝硬化。在另一特定實施例中，個體患有續接非酒精性脂肪肝病（NAFLD）之代償性肝硬化或代償不全之肝硬化。在另一特定實施例中，個體患有續接非酒精性脂肪肝病（NAFLD）之代償不全之肝硬化。在另一特定實施例中，個體患有續接非酒精性脂肪變性肝炎（NASH）之代償性肝硬化或代償不全之肝硬化。在另一特定實施例中，個體患有續接非酒精性脂肪變性肝炎（NASH）之代償不全之肝硬化。

在一特定實施例中，個體具有代償性肝硬化或代償不全之肝硬化，尤其代償不全之肝硬化之風險。在一特定實施例中，個體具有酒精性肝硬化，諸如酒精性代償性肝硬化或酒精性代償不全之肝硬化，更尤其酒精性代償不全之肝硬化之風險。在另一特定實施例中，個體具有續接非酒精性脂肪肝病（NAFLD）之代償性肝硬化或代償不全之肝硬化之風險。在另一特定實施例中，個體具有續接非酒精性脂肪肝病（NAFLD）之代償不全之肝硬化之風險。在另一特定實施例中，個體具有續接非酒精性脂肪變性肝炎（NASH）之代償性肝硬化或代償不全之肝硬化之風險。在另一特定實施例中，個體具有續接非酒精性脂肪變性肝炎（NASH）之代償不全之肝硬化之風險。

在另一特定實施例中，個體患有代償性肝硬化或代償不全之肝硬化且具有AD及ACLF之風險。在另一實施例中，個體患有代償不全之肝硬化且具有AD及ACLF之風險。

在另一特定實施例中，個體患有ACLF或具有ACLF之風險。

如上文所提及，ACLF為多器官症候群，其一般發生於患有肝硬化之個體中，尤其患有代償不全之肝硬化之個體中，具有至少一個器官衰竭且具有高短期死亡率。ACLF可在患有慢性肝病之患者中回應於疊加誘發因素而發生。

在一特定實施例中，個體罹患慢性肝病且伴有肝硬化且具有罹患ACLF之風險。

術語「慢性肝病」在本文中用於指與慢性肝損傷相關之肝病，而不考慮其根本原因。慢性肝病可例如由以下造成：酒精濫用（酒精性肝炎）、病毒感染性過程（例如A型、B型、C型、E型病毒性肝炎）、自體免疫過程（自體免疫性肝炎）、非酒精性脂肪變性肝炎（NASH）、癌症或長期暴露於肝之機械或化學損傷。肝之化學損傷可由諸如毒素、酒精、四氯化碳、三氯乙烯、鐵或藥物之多種物質造成。

在一特定實施例中，個體患有慢性肝病，且伴有肝硬化。在一特定實施例中，個體患有續接以下之肝硬化：酒精濫用，病毒性肝炎（諸如由A型、B型、C型、D型、E型或G型肝炎病毒感染造成之病毒性肝炎），藥物之使用，代謝疾病，膽道疾病，原發性膽汁性膽管炎，原發性硬化性膽管炎，或NASH。

本發明尤其適合於預防AD及ACLF復發或管控AD及ACLF。

在一特定實施例中，患有代償不全之肝硬化、AD或ACLF之個體顯示高MELD評分。如本文所使用之術語「MELD評分」或「末期肝病模型」係指用於評估肝功能障礙之嚴重程度之評分系統。MELD使用患者之血清膽紅素、血清肌酸酐及凝血酶原時間國際比率（INR）值來預測存活率。其係根據以下公式計算：MELD= 3.78 [Ln血清膽紅素(mg/dL)] + 11.2 [Ln INR] + 9.57 [Ln血清肌酸酐(mg/dL)] + 6.43，其中Ln意謂訥氏對數（Napierian logarithm）。

膽紅素為正常血基質代謝之黃色分解產物。膽紅素係在膽汁及尿液中排出。大部分膽紅素（70%-90%）來源於血紅素降解，且在較小程度上來源於其他血紅素蛋白。在血清中，膽紅素通常作為直接膽紅素及總膽紅素兩者量測。直接膽紅素與結合型膽紅素相關且其包括結合型膽紅素及與白蛋白共價結合之膽紅素兩者。間接膽紅素與未結合型膽紅素相關。血清膽紅素含量可藉由此項技術中已知之任何適合方法量測。用於測定血清膽紅素之方法之說明性非限制性實例包括使用重氮試劑之方法、利用DPD之方法、利用膽紅素氧化酶之方法或藉助於膽紅素之直接分光光度法測定之方法。簡言之，用重氮試劑測定血清中膽紅素含量之方法係基於藉助於添加對胺基苯磺酸及亞硝酸鈉之混合物進行之偶氮膽紅素形成，偶氮膽紅素充當指示劑。基於用DPD測定血清膽紅素之方法係基於以下事實：膽紅素與含2,5-二氯苯重氮鹽（DPD）之0.1 mol/HCl反應，從而形成在540-560 nm下具有最大吸光度之偶氮膽紅素。染色強度與膽紅素濃度成比例。在存在清潔劑（例如Triton TX-100）之情況下反應之未結合型膽紅素係作為總膽紅素測定，而僅結合型膽紅素在不存在清潔劑之情況下反應。用膽紅素氧化酶測定膽紅素血清含量之方法係基於將膽紅素氧化成膽綠素之酶膽紅素氧化酶所催化的反應，膽綠素在405-460 nm下具有最大吸光度。膽紅素濃度與所量測之吸光度成比例。總膽紅素濃度係藉由添加十二烷基硫酸鈉（SDS）或膽酸鈉，從而引起未結合型膽紅素與白蛋白分離及沈澱反應來測定。血清膽紅素含量亦可藉由在454 nm及540 nm下之直接分光光度法來測定。在此兩種波長下之量測係用於減少血紅素干擾。

如本文所使用之術語「凝血酶原時間國際比率」或「INR」係指用於測定血液凝結傾向之參數。INR為患者之凝血酶原時間與正常（對照）樣品之比率，自乘所用分析系統之ISI值之冪。凝血酶原時間（PT）量測因子I（纖維蛋白原）、II（凝血酶原）、V、VII及X且其與經活化部分凝血酶時間結合使用。凝血酶原時間為在添加組織因子之後血漿凝結所花費之時間。此量測凝血之外源性路徑。INR標準化凝血酶原時間之結果且藉由以下公式計算：INR= (PT測試/PT正常)＜ISI＞。

公式之ISI值為任何組織因子之國際敏感性指數且其指示如何將特定批次之組織因子與國際參考組織因子進行比較。ISI通常在1.0與2.0之間。

MELD評分值與短期死亡率強烈相關，MELD評分值愈低，死亡率愈低，且MELD評分值愈高，死亡率愈高。因此，具有低MELD評分，例如低於9之MELD之患者具有約1.9%之3個月死亡率，而具有高MELD評分，例如40或更高之MELD評分之患者具有約71.3%之3個月死亡率。

如本文所使用之術語「高MELD評分」係指具有高於9，例如至少10、至少15、至少19、至少20、至少25、至少29、至少30、至少35、至少39、至少40、至少45或更高之MELD評分之患者。在一特定實施例中，將本發明應用於具有高於20之MELD評分之個體。

在另一特定實施例中，待治療之患者顯示腎功能受損。如本文所使用之術語「腎功能受損（impairment of kidney function）」亦稱為「腎功能受損（impairment of renal function）」、「腎受損（病症）」、「腎功能衰竭」、「腎受損」及「腎衰竭」係指其中腎無法自血液中充分過濾廢物之醫學病況。腎衰竭主要藉由腎小球濾過率，亦即在腎之腎小球中過濾血液之速率的降低來測定。在腎衰竭中，可能存在體內體液增加（導致腫脹）、酸含量增加、鉀含量升高、鈣含量降低、磷酸鹽含量增加及後期中之貧血的問題。

根據本發明使用之PPAR促效劑可在ACLF之任何階段使用。在一特定實施例中，個體患有2級或3級ACLF。

在另一實施例中，個體患有ACLF而無腎衰竭。在一特定實施例中，個體患有ACLF且伴有腎衰竭。在另一特定實施例中，個體患有AD或ACLF且伴有非腎器官衰竭及腎功能障礙。

在另一實施例中，個體具有ACLF之風險。在又一實施例中，個體具有至少一次ACLF誘發事件。在另一實施例中，誘發事件係選自酒精性肝炎；細菌、真菌或病毒感染；敗血症、中毒；內臟出血及藥物誘發之肝機能不全。在另一實施例中，誘發事件為細菌感染。在又一特定實施例中，PPAR促效劑係用於治療敗血症相關AD或ACLF之方法中。

在另一實施例中，PPAR促效劑係用於治療或預防肝性腦病之方法中。在一特定實施例中，PPAR促效劑係用於治療或預防患有代償性肝硬化或代償不全之肝硬化，尤其代償不全之肝硬化之個體的肝性腦病之方法中。在另一實施例中，PPAR促效劑係用於治療患有AD或ACLF之個體的肝性腦病之方法中。

在本發明之上下文中，PPAR促效劑以治療有效量向個體投與。「治療有效量」係指有效達成所需治療結果之藥物之量。藥物之治療有效量可根據諸如個人之疾病狀態、年齡、性別及體重以及藥物在個人中引起所需反應之能力的因素而變化。治療有效量亦為其中治療有益作用超過藥劑之任何毒性或有害作用的量。藥物之有效劑量及劑量方案視待治療之疾病或病況而定且可由熟習此項技術者確定。一般熟習此項技術之醫師可易於確定及開具所需醫藥組合物之有效量。舉例而言，醫師可以低於為達成所需治療作用所需之位準的位準開始醫藥組合物中所採用之藥物劑量，且逐漸增加劑量直至達成所需作用。一般而言，本發明組合物之適合劑量將為作為根據特定劑量方案有效產生治療作用之最低劑量的化合物的量。此有效劑量一般視上文所描述之因素而定。

PPAR促效劑可以醫藥組合物形式調配，醫藥組合物進一步包含一種或若干種醫藥學上可接受之賦形劑或媒劑（例如生理食鹽水溶液、生理溶液、等張溶液等），其與醫藥用途相容且為一般熟習此項技術者熟知。此等組合物亦可進一步包含一種或若干種選自分散劑、增溶劑、穩定劑、防腐劑等之試劑或媒劑。適用於此等調配物之試劑或媒劑（液體及/或可注射劑及/或固體）尤其為甲基纖維素、羥甲基纖維素、羧甲基纖維素、聚山梨醇酯80、甘露糖醇、明膠、乳糖、植物油、阿拉伯膠、脂質體等。此等組合物可最終藉助於草本製劑形式或確保延長及/或緩慢釋放之裝置以可注射懸浮液、糖漿、凝膠、油、軟膏、丸劑、錠劑、栓劑、散劑、膠囊錠（gel cap）、膠囊、氣霧劑等形式調配。對於此類調配物，可有利地使用諸如纖維素、碳酸鹽或澱粉之試劑。

PPAR促效劑可藉由不同途徑且以不同形式投與。舉例而言，其可經由全身性方式、經口、非經腸、藉由吸入、藉由鼻噴霧、藉由鼻滴注或藉由注射，諸如靜脈內，藉由肌內途徑、藉由皮下途徑、藉由經皮途徑、藉由局部途徑、藉由動脈內途徑等來投與。當然，投與途徑將根據熟習此項技術者熟知之程序適應於藥物形式。

在一特定實施例中，化合物經調配為錠劑。在另一特定實施例中，化合物係經口投與。

關於投與之頻率及/或劑量可由一般熟習此項技術者針對患者、病理學、投與形式等加以調適。通常，PPAR促效劑可以包含於0.01毫克/天至4000毫克/天，諸如50毫克/天至2000毫克/天，諸如100毫克/天至2000毫克/天，及尤其100毫克/天至1000毫克/天之間的劑量投與。必要時，可每天或甚至每天若干次執行投與。在一個實施例中，一天至少一次，諸如一天一次、一天兩次或一天三次投與化合物。在一特定實施例中，PPAR促效劑一天投與一次或兩次。特定言之，經口投與可一天進行一次，在用餐期間，例如在早餐、午餐或晚餐期間，藉由服用包含PPAR促效劑之錠劑進行。

適合地，PPAR促效劑之治療過程持續至少1週，尤其至少2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20或24週或更長時間。在一特定實施例中，治療過程持續至少1個月、至少2個月或至少3個月。在一特定實施例中，治療過程視所治療個體之病況而持續至少1年或更長時間。

在一特定實施例中，PPAR促效劑（「藥物」）用作本文所揭示之治療的唯一活性成分。

在又一實施例中，藥物用於組合療法中。

在一特定實施例中，藥物與針對誘發事件之療法組合使用。

在一特定實施例中，誘發事件為細菌、真菌或病毒感染。因此，藥物可與抗微生物劑或抗病毒劑組合。如此項技術中所熟知，最適合之藥劑將視引起感染之生物體或病毒而加以選擇。在一特定實施例中，誘發事件為B型肝炎病毒再活化。在彼情況下，藥物可與核苷或核苷類似物組合。說明性抗病毒藥物包括但不限於田諾弗（tenofovir）、田諾弗艾拉酚胺（tenofovir alafenamide）及因提弗（entecavir）。在另一特定實施例中，誘發事件為細菌感染，且藥物可與抗生素組合。適用於治療細菌感染之抗生素為此項技術中所熟知。說明性抗生素家族包括但不限於β-內醯胺抗生素（諸如青黴素）、四環素、頭孢菌素、喹啉酮、林可黴素、巨環內酯、磺醯胺、醣肽、胺基糖苷及碳青黴烯。在一特定實施例中，藥物可與碳青黴烯家族抗生素，諸如厄他培南（ertapenem）組合。

在另一特定實施例中，誘發事件為急性靜脈曲張出血。因此，藥物可與血管收縮劑，諸如特利加壓素（terlipressin）、生長抑制素或類似物，諸如奧曲肽（octreotide）或伐普肽（vapreotide），尤其奧曲肽組合。該治療可伴隨內窺鏡療法（較佳在入院之後少於12小時進行診斷性內窺鏡檢時進行之內窺鏡靜脈曲張結紮）。亦可實施諸如用頭孢克松（ceftriaxone）進行之短期抗生素防治。

在另一特定實施例中，誘發事件為酒精性肝炎。因此，藥物可與經指定用於患有嚴重酒精性肝炎之患者之普賴蘇穠（prednisolone）組合。

在另一特定實施例中，藥物與支持療法組合使用。

在一特定實施例中，支持療法為心血管支持。舉例而言，藥物可與諸如停藥利尿劑或體積膨脹（利用靜脈內白蛋白）之用於急性腎損傷之療法組合。藥物亦可與諸如特利加壓素或正腎上腺素之血管收縮劑組合，尤其在對體積膨脹不存在反應之情況下。在一特定實施例中，支持療法為腦病治療。舉例而言，藥物可與乳酮糖組合。視情況而言，可在投與灌腸劑以清潔腸道之情況下進一步完成乳酮糖療法。在個體患有難以用乳酮糖治療之嚴重肝性腦病之情況下，可使用白蛋白透析。在又一特定實施例中，藥物可與利福昔明（rifaximin）組合。在另一實施例中，藥物可與乳糖醇組合。在一特定實施例中，支持療法為體外肝支持。舉例而言，可使用併有肝細胞之體外肝輔助裝置。在另一實施例中，除了投與如本文所提供之藥物之外，亦可進行血漿交換。在又一實施例中，體外肝支持為白蛋白交換或內毒素移除。

以下實例係用以說明本發明且不得視為限制本發明之範疇。

實例

化學

化學名稱遵循IUPAC命名法。起始物質及溶劑係購自商業供應商（Acros Organic、Sigma Aldrich、Combi-Blocks、Fluorochem、Fluka、Alfa Aesar或Lancaster）且不經進一步純化按原樣使用。一些起始物質可由熟習此項技術者容易地合成。空氣及濕氣敏感反應在惰性氮氣氛圍下進行，且玻璃器皿經烘乾。未嘗試使反應產率最佳化。化學位移（δ）以百萬分率（parts per million，ppm）報告，參照作為內標之氘化溶劑的氫化殘餘物：DMSO-d6為2.50 ppm，CDCl3為7.26 ppm，且甲醇-d4為3.31及4.78。譜分裂圖案如下指定：s，單峰；d，二重峰；dd，雙二重峰；ddd，雙重雙二重峰；t，三重峰；dt，雙三重峰；q，四重峰；m，多重峰；br s，寬單峰。

根據本發明使用之PPAR促效劑可遵循WO2005005369及WO2007147879中所揭示之程序合成。

實驗中所用之化合物為以下化合物：化合物1：艾拉菲諾；及化合物2：2-[2,6-二甲基-4-[3-[4-(甲硫基)苯基]-3-側氧基-丙基]苯氧基]-2-甲基丙酸。

動物實驗

小心地對動物進行操縱以便將壓力降至最低。所有實驗均遵照法國農業部（French Ministry of Agriculture）關於實驗室動物實驗之指南（法則87-848）來執行。遵照動物健康法規（針對動物保護之2010年9月22日歐洲理事會指令（Council directive）第2010/63/EU號及2013年2月1日法國法令第2013-118號）進行研究。

實例1：根據本發明之化合物抑制單核球分化成巨噬細胞

為了測試化合物抑制免疫系統活化之功效，吾人使用人類單核球性細胞株THP-1（Sigma）。將THP1單核球在37℃下5% CO2培育箱中在補充有10%胎牛血清（FBS，#10270，Gibco）、1%青黴素/鏈黴素（#15140，Gibco）及25 mM Hepes（H0887，Sigma）之含L-麩醯胺酸RPMI 1640培養基（#10-040-CV，Corning）中培養。

為了評估化合物對單核球分化之影響，將2.5×10 ⁴個THP-1細胞在384孔盤中含有劑量範圍內之化合物1及化合物2，以及5或100 ng/mL佛波醇12-肉豆蔻酸酯13-乙酸酯（PMA，#P8139，Sigma）（如所指示）的FBS缺乏培養基中培養24小時，以誘導分化成巨噬細胞。

腫瘤壞死α（TNFα）及單核球趨化蛋白1（MCP1）在細胞上清液中藉由均相時差式螢光（HTRF，#62HTNFAPEG用於TNFα，及62HCCL2PEG用於MCP1，Cisbio）量測。用Infinite 500（#30019337，Tecan）量測螢光以確定細胞介素濃度。

結果

結果顯示於圖1A至圖1D中。雖然PMA誘導TNFα及MCP1（單核球分化為巨噬細胞之標記）分泌，但化合物1顯著減少上清液中之TNFα（圖1A）及MCP1（圖1B）含量，在10 µM劑量下達到大約80-85%抑制。同樣，化合物2減少回應於PMA之TNFα分泌（圖1C）且顯著減少MCP1分泌，在10 µM劑量下達到70%抑制（圖1D）。

綜合而言，此等結果顯示根據本發明之化合物降低免疫系統活化之功效。

實例2：根據本發明之化合物抑制巨噬細胞活化

為了測試化合物對巨噬細胞活化及促炎性細胞介素產生之功效，將2.5×10 ⁴個THP-1細胞在384孔盤中培養且用100 ng/mL PMA（#P8139，Sigma）處理24小時以誘導分化成巨噬細胞。

隨後，移除培養基且添加含有該等化合物之FBS缺乏培養基24小時。最後，用100 ng/mL LPS（大腸桿菌（E.coli）O55:B5，#L4005，Sigma）刺激THP1巨噬細胞6小時。

結果

結果顯示於圖2中。化合物1以劑量依賴型方式減少PMA分化巨噬細胞中由LPS誘導之細胞介素分泌，在1 µM劑量之情況下達到86%的TNFα分泌抑制（圖2A）。

此等結果顯示化合物抵消巨噬細胞活化及限制細胞介素產生之效力，藉此防護對組織之損傷。

實例3：盲腸結紮穿孔模型中之活體內效應

對於存活率，藉由使用對數等級檢定來確定實驗組之間差異的統計評估。小於0.05之P值視為顯著的。

研究目標

ACLF為罕見臨床病況，但在住院期間或出院後不久仍與高短期死亡率相關。新出現一種共識範式，暗示由於如PAMP（主要來自革蘭氏陰性細菌之LPS）之細菌產物伴隨或不伴隨來自腸道之活細菌的移位，引起先天免疫系統過度活化。此類受損腸道障壁引起內毒素血症擴大，從而導致不可控之發炎風暴，其可危及硬化肝及其他生命器官如腎、腦，凝血系統、心血管系統及/或呼吸系統之最小功能。

由盲腸結紮穿孔（CLP）誘導之多微生物敗血症之特徵在於全身發炎反應失調，接著為免疫抑止。小鼠CLP模型模擬人類敗血症之進展及特徵，且鑒於代償不全之肝硬化向ACLF過渡及敗血症向敗血性休克過渡的共同病理生理學特徵，因此亦適用於判定藥物是否將適用於治療ACLF。

此研究旨在研究化合物1（艾拉菲諾（ELA））在C57BL6J（BL6）雄性小鼠之盲腸結紮穿孔（CLP）模型中的功效。基於研究時段內動物之存活率評估測試化合物之功效。

盲腸結紮穿孔手術

9週齡、到達時體重22-25 g之C57BL6J雄性小鼠（供應商Janvier -法國）以250 µL甲苯噻 /氯胺酮溶液（對於氯胺酮，6.75 mg/kg，且對於甲苯噻，2.5 mg/kg）藉由腹膜內途徑麻醉。製造1-1.5 cm腹部正中切口且定位盲腸，且在盲腸遠極與基部之間距離一半處用4-0絲質縫合線（輕度）緊密結紮。中結紮之後，用21號針自腸系膜朝向腸系膜對向方向貫穿盲腸一次。擠出少量糞便以確保傷口開放。隨後，將盲腸放回腹部內原始位置，腹部用縫合線及創緣夾封閉。追蹤小鼠體重演變及死亡率直至第6天。

處理方案

媒劑為CMC（羧甲基纖維素）。

化合物1在CMC中製備。ELA（10 mg/kg，經口）200 µL體積對應於10 mg/kg與不同劑量厄他培南（0.3；1；3及10 mg/kg，腹膜內）之組合在第0天CLP手術前1小時投與，且每天實行一次直至第6天。

厄他培南（ORB134782/PO8952，lnterchim/Biorbyt）在PBS 1×及NaCl中製備。厄他培南（0.3；1；3及10 mg/kg，腹膜內）用作藥理學參考化合物，且在第0天手術前1小時藉由腹膜內途徑投與200 µL，且在CLP手術之後每天實行。

實驗組

9週齡C57BL6J小鼠如上文所描述進行處理。

使用九組，每組10隻小鼠： 1. BL6小鼠CLP（21G針）+媒劑（10 mL/kg；經口）+媒劑（腹膜內） 2. BL6小鼠CLP（21G針）+媒劑（10 mL/kg；經口）+厄他培南（0.3 mg/kg，腹膜內） 3. BL6小鼠CLP（21G針）+媒劑（10 mL/kg；經口）+厄他培南（1 mg/kg，腹膜內） 4. BL6小鼠CLP（21G針）+媒劑（10 mL/kg；經口）+厄他培南（3 mg/kg，腹膜內） 5. BL6小鼠CLP（21G針）+媒劑（10 mL/kg；經口）+厄他培南（10 mg/kg，腹膜內） 6. BL6小鼠CLP（21G針）+化合物1（10 mg/kg；經口）+厄他培南（0.3 mg/kg，腹膜內） 7. BL6小鼠CLP（21G針）+化合物1（10 mg/kg；經口）+厄他培南（1 mg/kg，腹膜內） 8. BL6小鼠CLP（21G針）+化合物1（10 mg/kg；經口）+厄他培南（3 mg/kg，腹膜內） 9. BL6小鼠CLP（21G針）+化合物1（10 mg/kg；經口）+厄他培南（10 mg/kg，腹膜內）

臨床徵象

包括於第1組至第5組中之動物接受媒劑伴隨或不伴隨不同劑量之厄他培南，且包括於第6組至第9組中之動物接受化合物1處理，在第0天手術前1小時進行，且其在CLP手術之後每天實行直至第6天。每次投與之後均未記錄到化合物1之副作用。量測體重及存活率持續7天。

結果

存活率

「CLP+媒劑（經口）+媒劑（腹膜內）」組在第2天顯示40%，在第4天達到70%且在第7天達到90%。

與「CLP+媒劑（經口）+媒劑（腹膜內）」組相比，「CLP+媒劑（經口）+厄他培南（10 mg/kg，腹膜內）」組顯示存活率顯著提高，以第3天90%存活率開始，且在第7天達到70%。

與「CLP+媒劑（經口）+媒劑（腹膜內）」組相比，「CLP+媒劑（經口）+厄他培南（3 mg/kg，腹膜內）」組顯示存活率之一天延遲，以第2天70%存活率開始，在第4天達到30%，且保持穩定直至第7天。

與「CLP+媒劑（經口）+媒劑（腹膜內）」組相比，「CLP+媒劑（經口）+厄他培南（1 mg/kg，腹膜內）」組顯示存活率之一天延遲，以第2天70%存活率開始，在第4天達到50%，且保持穩定直至第6天，且第7天為30%。

與「CLP+媒劑（經口）+媒劑（腹膜內）」組相比，「CLP+媒劑（經口）+厄他培南（0.3 mg/kg，腹膜內）」組顯示相似存活率演變。

與「CLP+媒劑（經口）+媒劑（腹膜內）」組相比，「CLP+化合物1（10 mg/kg，經口）+厄他培南（10 mg/kg，腹膜內）」組顯示存活率顯著提高，以第3天90%存活率開始，且在第7天達到80%。此表示與「CLP+媒劑（經口）+厄他培南（3 mg/kg，腹膜內）」組相比，第7天存活率之10%提高。

與「CLP+媒劑（經口）+媒劑（腹膜內）」組相比，「CLP+化合物1（10 mg/kg，經口）+厄他培南（3 mg/kg，腹膜內）」組顯示存活率顯著提高，以第2天90%存活率開始，且自第4天達到70%直至第7天。與CLP+媒劑（經口）+厄他培南（3 mg/kg，腹膜內）組相比，「CLP+化合物1（10 mg/kg，經口）+厄他培南（3 mg/kg，腹膜內）」顯示存活率提高。

與「CLP+媒劑（經口）+媒劑（腹膜內）」組相比，「CLP+化合物1（10 mg/kg，經口）+厄他培南（1 mg/kg，腹膜內）」組顯示存活率顯著提高，以第2天90%存活率開始，且自第5天達到60%直至第7天。與「CLP+媒劑（經口）+厄他培南（3 mg/kg，腹膜內）組」相比，「CLP+化合物1（10 mg/kg，經口）+厄他培南（3 mg/kg，腹膜內）」顯示存活率提高。

與「CLP+媒劑（經口）+媒劑（腹膜內）」組相比，「CLP+化合物1（10 mg/kg，經口）+厄他培南（0.3 mg/kg，腹膜內）」組顯示存活率之略微延遲，以第2天80%存活率開始，且自第5天達到40%直至第7天。與CLP+媒劑（經口）+厄他培南（3 mg/kg，腹膜內）組相比，CLP+化合物1（10 mg/kg，經口）+厄他培南（3 mg/kg，腹膜內）顯示存活率提高。

結論

用作參考化合物之厄他培南提高存活率。

與CLP+媒劑對照組相比，在第0天手術前1小時給與及每天一次直至第7天給與之化合物1（10 mg/kg，經口）與厄他培南（3 mg/kg或10 mg/kg，腹膜內）之組合顯著提高存活率。

總之，化合物1與厄他培南之組合對小鼠中CLP誘導之多微生物敗血症中之存活率具有有益作用。

實例4：根據本發明之化合物改良內毒素血症模型中之循環白蛋白

內毒素（諸如脂多醣（LPS））增加與罹患ACLF之風險相關（Takaya等人, J Clin Med, 2020, 9(5), p1467）。在患有此類嚴重肝病之患者中，歸因於肝細胞質量減少，血清白蛋白含量低。此外，在ACLF中，白蛋白含量與死亡率負相關（Sun等人, J Viral Hepat., 2009, 16(7), p464）。因此，此指標為評估分子對ACLF後肝功能之影響的適用標記。

內毒素血症之臨床前模型

為了評估化合物對回應於LPS誘導之內毒素血症之肝標記濃度的功效，來自Janvier Labs之250-275 g雄性史泊格多利大鼠接受單次腹膜內注射1 mg/kg LPS（大腸桿菌O111:B4，#L2630，Sigma-Aldrich）。

化合物1（30毫克/公斤/天）或媒劑（羧甲基纖維素1%，0.1%吐溫（Tween）80）在LPS注射之前3天期間藉由經口管飼投與。在LPS處理後3小時藉由頸椎脫位術使大鼠安樂死。恰好在處死之前，對用異氟烷（異氟醚1000 mg/g，GTIN 03760087152678，Axience）使之略微昏睡的動物進行眶後竇穿刺獲得血液樣品。

使用Randox Daytona plus automate套組（#AB8301，Randox Laboratories）來量測白蛋白之血清濃度。簡言之，白蛋白量測係基於其與指示劑3,3',5,5'-四溴-間甲酚磺酞（溴甲酚綠）之定量結合。白蛋白-BCG複合物在578 nm下最大限度地吸收。

結果

雖然大鼠中之LPS注射引起血清白蛋白含量減少，但與經媒劑處理之對照大鼠相比，經化合物1處理之動物顯示白蛋白濃度提高88%（圖3）。

此等結果顯示，投與化合物1使得可恢復活體內回應於LPS之循環白蛋白含量，藉此保護免於組織損傷及器官衰竭。

實例5：根據本發明之化合物在急性肝衰竭模型中減少發炎反應

低劑量LPS與肝毒性劑D-半乳糖胺（GalN）之組合促進小鼠特異性肝損傷且誘導發炎性細胞介素產生，由此再現人類急性肝損傷之臨床表現（Pourcet等人, Gastroenterology, 2018, 154(5), p1449-1464.e20）。因此，由LPS/GalN誘導之肝損傷為用於理解藥理學試劑對猛爆性肝炎之影響的廣泛使用之小鼠模型。

急性肝衰竭之臨床前模型

為了評估化合物對急性肝衰竭時發生之發炎反應的功效，C57BL/6J雄性小鼠（8週齡，Janvier Labs）接受腹膜內注射0.025 mg/kg LPS（大腸桿菌O111:B4，#L2630，Sigma-Aldrich）補充700 mg/kg D-半乳糖胺（GalN，G0500，Sigma-Aldrich）。

化合物1（30毫克/公斤/天）或媒劑（羧甲基纖維素1%，0.1%吐溫80）在LPS/Gal-N注射之前三天期間藉由經口管飼投與。LPS/GalN注射後4小時處死小鼠且隨後收集肝組織。恰好在處死之前，對用異氟烷（異氟醚1000 mg/g，GTIN 03760087152678，Axience）使之略微昏睡的動物進行眶後竇穿刺獲得血液樣品。

肝基因表現分析

使用NucleoSpin 8 RNA核心套組（Macherey Nagel）遵循製造商說明書自小鼠肝分離總RNA。使用含莫洛尼鼠類白血病病毒反轉錄酶（Moloney Murine Leukemia Virus Reverse Transcriptase，M-MLV RT）（# 28025，Invitrogen）之1×RT緩衝液、0.5 mM DTT、0.18 mM dNTP、200 ng隨機引子及30U RNA酶抑制劑進行反轉錄。

隨後使用CFX96 Touch™即時PCR偵測系統（Biorad）進行定量PCR（RT-qPCR）。簡言之，在含有iQ SYBR綠色超混合液（BioRad）及0.25 mM各引子之10 µl反應物中進行PCR反應。以下描述各核苷酸序列：

基因名稱	NCBI參考	正向序列	反向序列
Rplp0（36B4）	NM_007475.5	CATGCTCAACATCTCCCCCTTCTCC	GGGAAGGTGTAATCCGTCTCCACAG
Adgre1（F4/80）	NM_010130	TGAGATTGTGGAAGCATCCGAG	ACAGCAGGAAGGTGGCTATG
Ccl2（Mcp1）	NM_011333	GCTACAAGAGGATCACCAGCAG	GTCTGGACCCATTCCTTCTTGG
IL1b	NM_008361	AGACTTCCATCCAGTTGCCTTCTTG	TTGTTGATGTGCTGCTGTGA
TNF（TNFα）	NM_013693	CGTGGAACTGGCAGAAGAGG	AGACAGAAGAGCGTGGTGGC
IL6	NM_031168	CAGAGTCCTTCAGAGAGATACAG	ATGGTCTTGGTCCTTAGCC
Cxcl10	NM_021274.2	AAGTGCTGCCGTCATTTTCT	GTGGCAATGATCTCAACACG
TLR4	NM_021297.2	GCTTTCACCTCTGCCTTCAC	GAAACTGCCATGTTTGAGCA

藉由記錄解離曲線檢查擴增之特異性，且驗證各引子對之效率高於95%。mRNA含量相對於Rplp0管家基因之表現標準化，且使用循環臨限（ΔΔCT）方法計算誘導倍數。

小鼠血清中之細胞介素分析

介白素-1β（IL1β）及腫瘤壞死α（TNF α）之濃度使用多重夾心ELISA系統（小鼠磁性Luminex #LSXAMSM-06，Biotechne）根據製造商說明書測定。簡言之，將血清樣品添加至預塗有細胞介素特異性抗體之磁性粒子上。洗滌後，經由添加經生物素標記之抗體來偵測細胞介素。最後，添加與藻紅素結合之鏈黴抗生物素蛋白且用Luminex 200分析儀進行分析。藻紅素之信號強度與特定細胞介素之濃度成比例。

結果

與未處理小鼠相比，注射LPS/GalN之小鼠顯示編碼介白素-6（IL6）、介白素-1 β（IL1 β）、腫瘤壞死因子（TNF）、CC-模體趨化介素配位體2（Ccl2，Mcp1）及C-X-C模體趨化介素配位體10（Cxcl10）之基因的肝表現強烈增加20至80倍（圖4A-B）。此等誘導之促炎性細胞介素表現驗證本發明之小鼠急性肝衰竭模型。引起關注地，化合物1之投與伴隨LPS/GalN誘導之細胞介素IL6、IL1 β、TNF、Ccl2及Cxcl10之肝表現分別減少50%、38%、35%、49%及43%（圖4A-B）。一致地，與媒劑條件相比，化合物1處理後IL1β及TNFα之循環細胞介素含量亦分別減少17%及35%（圖5）。最後，吾人顯示化合物1使巨噬細胞標記類鐸受體4（Tlr4）及黏附G蛋白偶聯受體E1（Adgre1）之mRNA表現量分別減少25%及28%，指示肝內免疫細胞募集量之修改。

總而言之，此等結果證明化合物1減少經歷急性肝衰竭之小鼠的發炎。

實例6：根據本發明之化合物保護肝細胞免於星形孢菌素誘導之細胞凋亡

為了評估化合物對經歷由星形孢菌素誘導之細胞壓力之人類肝細胞的影響，將人類肝母細胞瘤衍生之HepG ₂細胞株（ECACC，#85011430，Sigma-Aldrich）在37℃下5% CO ₂培育箱中在補充有10%胎牛血清（FBS，#10270，Gibco）、1%青黴素/鏈黴素（#15140，Gibco）、1%丙酮酸鈉（#11360，Gibco）及1% MEM非必需胺基酸（#11140，Gibco）之高葡萄糖DMEM培養基（#41965，Gibco，法國）中培養。

為了評估凋亡蛋白酶3/7活性（細胞凋亡之替代標記），將1.5×10 ⁴個細胞接種於384孔盤（#781080，Greiner，法國）中。細胞黏附（8小時）之後，細胞在3 µM化合物1或化合物2或媒劑存在下血清饑餓16小時。其後，細胞經補充有3 µM化合物之10 µM星形孢菌素（#569397，Sigma-Aldrich，德國）再處理4小時，隨後進行細胞溶解及凋亡蛋白酶活性量測。

使用凋亡蛋白酶Glow ^TM3/7分析（#G8093，Promega，美國）來量測凋亡蛋白酶3/7活性。使用Spark微量盤式讀取器（#30086376，Tecan，美國）來量測發光。發光量（RLU）與凋亡蛋白酶3/7活性直接相關。

結果

將HepG2細胞與星形孢菌素一起培育誘導細胞凋亡，如凋亡蛋白酶3/7活性提高8倍所示（圖6）。添加3 µM化合物1或化合物2使由星形孢菌素誘導之凋亡蛋白酶活性分別降低38%及25%（圖6）。此等結果顯示化合物1及化合物2兩者藉由抑制凋亡蛋白酶活性直接保護肝細胞免於細胞死亡。

總之，此等結果顯示，用根據本發明之化合物處理降低內毒素血症及敗血症中免疫系統之明顯活化，一方面係經由對單核球及巨噬細胞之直接抗發炎作用，同時另一方面該等化合物亦直接減少細胞凋亡。因此，根據本發明之化合物保護免於ACLF中出現之組織損傷、器官衰竭及死亡。

無

圖1：根據本發明之化合物減少經PMA刺激之THP1單核球中之TNFα及MCP1分泌。圖1A及圖1B分別顯示化合物1對經PMA刺激之THP1中TNFα及MCP1分泌減少的影響；對於圖1A及圖1B：*、**、***關於使用變異數分析（ANOVA）以及霍爾姆-西達克氏校正（Holm-Sidak's correction）進行多重比較，p＜0.05、p＜0.01、p＜0.001；&、&&、&&&關於使用非參數克拉斯卡瓦立斯檢定（Kruskal Wallis test）以及鄧恩校正（Dunn's correction）進行多重比較，p＜0.05、p＜0.01、p＜0.001；PMA劑量：5 ng/mL。圖1C及圖1D分別顯示化合物2對經PMA刺激之THP1中TNFα及MCP1分泌減少的影響；對於圖1C及圖1D：*、**、***關於與媒劑（Veh）相比，使用變異數分析及費雪最低顯著差異檢定（Fisher's LSD test）進行多重比較，p＜0.05、p＜0.01、p＜0.001。NS，未經PMA刺激。圖2：根據本發明之化合物減少THP1分化巨噬細胞之細胞介素產生。圖2A及圖2B分別顯示化合物1對THP1分化巨噬細胞之TNFα及MCP1產生減少的影響；對於圖2A及圖2B：*、**、***關於使用變異數分析以及杜奈特校正（Dunnett's correction）進行多重比較，p＜0.05、p＜0.01、p＜0.001；&、&&、&&&關於使用非參數克拉斯卡瓦立斯檢定以及鄧恩校正進行多重比較，p＜0.05、p＜0.01、p＜0.001。圖3：化合物1對內毒素血症中血清白蛋白含量之影響。小鼠每天經30 mg/kg化合物1或媒劑（Veh.）處理，持續3天，隨後進行LPS注射。在LPS注射後3小時收集血液，以量測血清中之白蛋白濃度。使用單因子變異數分析以及杜奈特檢定進行多重檢定來評估統計顯著性。*** p＜0.001。圖4：化合物1對急性肝衰竭模型中發炎性基因之肝表現的影響。小鼠每天經30 mg/kg化合物1或媒劑（Veh.）處理，持續3天，隨後進行LPS/GalN注射。在LPS/GalN注射後4小時收集肝組織。RT-qPCR資料顯示編碼細胞介素（圖4A及圖4B）或免疫細胞標記（圖4C）之基因表現的變化。mRNA含量相對於Rplp0之表現標準化，且參考未處理條件下量測之表現。使用單因子變異數分析以及杜奈特檢定進行多重檢定來評估統計顯著性。*** p＜0.001，** p＜0.01，* p＜0.05。圖5：化合物1對急性肝衰竭模型中循環促炎性細胞介素之影響。小鼠每天經30 mg/kg化合物1或媒劑（Veh.）處理，持續3天，隨後進行LPS/GalN注射。在LPS/GalN注射後4小時收集血液樣品以量測血清細胞介素含量。值得注意的是，圖中未示未處理條件（無LPS/GalN）下之細胞介素濃度，因為其幾乎不可偵測。使用單尾學生t檢定來評估統計顯著性。* p＜0.05。圖6：化合物1及化合物2對HepG2細胞中星形孢菌素（staurosporin）誘導之細胞凋亡的影響。HepG2細胞經3 µM化合物1或化合物2預處理16小時，隨後10 µM星形孢菌素再培育4小時。經由凋亡蛋白酶3/7活性量測來評估細胞凋亡。使用單因子變異數分析以及杜奈特檢定進行多重檢定來評估統計顯著性。*** p＜0.001。

Claims

一種PPAR促效劑，其選自：艾拉菲諾（elafibranor）或其醫藥學上可接受之鹽；及 2-[2,6-二甲基-4-[3-[4-(甲硫基)苯基]-3-側氧基-丙基]苯氧基]-2-甲基丙酸或其醫藥學上可接受之鹽；其用於治療有需要個體之肝衰竭的方法中。
如請求項1之PPAR促效劑，其中該肝衰竭係選自急性代償不全（acute decompensation，AD）、慢性肝衰竭急性發作（acute on chronic liver failure，ACLF）、急性肝衰竭（acute liver failure，ALF）及代償不全之肝硬化。
如請求項1或2之PPAR促效劑，其中該個體患有AD、代償不全之肝硬化且伴有或不伴有ACLF，或具有AD及ACLF之風險。
如請求項1或2之PPAR促效劑，其中該個體患有代償不全之肝硬化，或具有代償不全之肝硬化或急性代償不全之風險。
如請求項1或2之PPAR促效劑，其用於預防代償不全之肝硬化。
如請求項1或2之PPAR促效劑，其用於將代償不全之肝硬化逆轉為代償性肝硬化之方法中。
如請求項1或2之PPAR促效劑，其用於預防患有ACLF之個體之肝代償不全之方法中。
如請求項1或2之PPAR促效劑，其中該肝衰竭為ALF。
如請求項1或2之PPAR促效劑，其用於預防腎衰竭或預防肝性腦病。
如請求項1或2之PPAR促效劑，其中該個體患有ACLF而無腎衰竭，或其中該個體患有ACLF且伴有非腎器官衰竭以及腎功能障礙。
如請求項1或2之PPAR促效劑，其用於治療敗血症相關ACLF。