TW202307211A - Hpv感染症疫苗 - Google Patents
Hpv感染症疫苗 Download PDFInfo
- Publication number
- TW202307211A TW202307211A TW111118509A TW111118509A TW202307211A TW 202307211 A TW202307211 A TW 202307211A TW 111118509 A TW111118509 A TW 111118509A TW 111118509 A TW111118509 A TW 111118509A TW 202307211 A TW202307211 A TW 202307211A
- Authority
- TW
- Taiwan
- Prior art keywords
- antigen
- sequence
- type
- particle
- human papillomavirus
- Prior art date
Links
- 208000009608 Papillomavirus Infections Diseases 0.000 title claims description 16
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title abstract description 14
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims abstract description 219
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 claims abstract description 204
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims abstract description 93
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims abstract description 93
- -1 cationic lipid Chemical class 0.000 claims abstract description 88
- 241000701806 Human papillomavirus Species 0.000 claims abstract description 76
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims abstract description 67
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims abstract description 19
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims abstract description 4
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 210
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 210
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 210
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 87
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 77
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 claims description 63
- 229920001223 polyethylene glycol Chemical class 0.000 claims description 63
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 claims description 57
- 230000007017 scission Effects 0.000 claims description 57
- 229930182558 Sterol Chemical class 0.000 claims description 54
- 150000003432 sterols Chemical class 0.000 claims description 54
- 235000003702 sterols Nutrition 0.000 claims description 54
- 125000002091 cationic group Chemical class 0.000 claims description 45
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 38
- 238000013519 translation Methods 0.000 claims description 37
- 125000003342 alkenyl group Chemical group 0.000 claims description 35
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 33
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 claims description 29
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 claims description 29
- 239000004365 Protease Substances 0.000 claims description 29
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 claims description 29
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 claims description 29
- 108091036066 Three prime untranslated region Proteins 0.000 claims description 27
- 102000004961 Furin Human genes 0.000 claims description 26
- 108090001126 Furin Proteins 0.000 claims description 26
- 108091026898 Leader sequence (mRNA) Proteins 0.000 claims description 25
- 108020003589 5' Untranslated Regions Proteins 0.000 claims description 24
- 108020005345 3' Untranslated Regions Proteins 0.000 claims description 23
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 23
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 23
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 22
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims description 21
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 20
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 claims description 20
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims description 20
- 125000003668 acetyloxy group Chemical group [H]C([H])([H])C(=O)O[*] 0.000 claims description 19
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 17
- 125000003545 alkoxy group Chemical group 0.000 claims description 15
- NRJAVPSFFCBXDT-HUESYALOSA-N 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC NRJAVPSFFCBXDT-HUESYALOSA-N 0.000 claims description 13
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 claims description 12
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 12
- 208000021145 human papilloma virus infection Diseases 0.000 claims description 11
- 208000001307 recurrent respiratory papillomatosis Diseases 0.000 claims description 11
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 claims description 10
- WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N hydroxyacetaldehyde Natural products OCC=O WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 claims description 10
- 230000028993 immune response Effects 0.000 claims description 9
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 claims description 9
- ZAYHVCMSTBRABG-UHFFFAOYSA-N 5-Methylcytidine Natural products O=C1N=C(N)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 ZAYHVCMSTBRABG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- ZAYHVCMSTBRABG-JXOAFFINSA-N 5-methylcytidine Chemical compound O=C1N=C(N)C(C)=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 ZAYHVCMSTBRABG-JXOAFFINSA-N 0.000 claims description 8
- 206010059313 Anogenital warts Diseases 0.000 claims description 8
- 229930185560 Pseudouridine Natural products 0.000 claims description 8
- JFBCSFJKETUREV-LJAQVGFWSA-N 1,2-ditetradecanoyl-sn-glycerol Chemical compound CCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](CO)OC(=O)CCCCCCCCCCCCC JFBCSFJKETUREV-LJAQVGFWSA-N 0.000 claims description 7
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- DWRXFEITVBNRMK-JXOAFFINSA-N ribothymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-JXOAFFINSA-N 0.000 claims description 7
- PTJWIQPHWPFNBW-UHFFFAOYSA-N Pseudouridine C Natural products OC1C(O)C(CO)OC1C1=CNC(=O)NC1=O PTJWIQPHWPFNBW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 125000004423 acyloxy group Chemical group 0.000 claims description 6
- WGDUUQDYDIIBKT-UHFFFAOYSA-N beta-Pseudouridine Natural products OC1OC(CN2C=CC(=O)NC2=O)C(O)C1O WGDUUQDYDIIBKT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 125000003917 carbamoyl group Chemical group [H]N([H])C(*)=O 0.000 claims description 6
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims description 6
- 229920001427 mPEG Polymers 0.000 claims description 6
- PTJWIQPHWPFNBW-GBNDHIKLSA-N pseudouridine Chemical class O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1C1=CNC(=O)NC1=O PTJWIQPHWPFNBW-GBNDHIKLSA-N 0.000 claims description 6
- 125000006273 (C1-C3) alkyl group Chemical group 0.000 claims description 5
- UVBYMVOUBXYSFV-XUTVFYLZSA-N 1-methylpseudouridine Chemical compound O=C1NC(=O)N(C)C=C1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 UVBYMVOUBXYSFV-XUTVFYLZSA-N 0.000 claims description 5
- UVBYMVOUBXYSFV-UHFFFAOYSA-N 1-methylpseudouridine Natural products O=C1NC(=O)N(C)C=C1C1C(O)C(O)C(CO)O1 UVBYMVOUBXYSFV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 5
- SNRUBQQJIBEYMU-UHFFFAOYSA-N Dodecane Natural products CCCCCCCCCCCC SNRUBQQJIBEYMU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 125000002704 decyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 claims description 4
- 125000003438 dodecyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 claims description 4
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 claims description 4
- ZXIATBNUWJBBGT-JXOAFFINSA-N 5-methoxyuridine Chemical compound O=C1NC(=O)C(OC)=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 ZXIATBNUWJBBGT-JXOAFFINSA-N 0.000 claims description 3
- 125000002777 acetyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)=O 0.000 claims description 3
- 239000002719 pyrimidine nucleotide Substances 0.000 claims description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 2
- 125000001820 oxy group Chemical group [*:1]O[*:2] 0.000 claims 2
- UDMBCSSLTHHNCD-KQYNXXCUSA-N adenosine 5'-monophosphate Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(O)=O)[C@@H](O)[C@H]1O UDMBCSSLTHHNCD-KQYNXXCUSA-N 0.000 claims 1
- 239000002777 nucleoside Substances 0.000 claims 1
- 125000003835 nucleoside group Chemical group 0.000 claims 1
- 241001428582 Human papillomavirus type 6 Species 0.000 abstract description 27
- 241000701828 Human papillomavirus type 11 Species 0.000 abstract description 25
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 43
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 35
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 30
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 19
- 235000019419 proteases Nutrition 0.000 description 19
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 18
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 16
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 16
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 16
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 15
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 14
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 14
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 13
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 11
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 11
- 210000002706 plastid Anatomy 0.000 description 10
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 10
- 238000011740 C57BL/6 mouse Methods 0.000 description 9
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 9
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 9
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 9
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 9
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 8
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 8
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 8
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 8
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 8
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 8
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 8
- 102000006734 Beta-Globulins Human genes 0.000 description 7
- 108010087504 Beta-Globulins Proteins 0.000 description 7
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 7
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 7
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 7
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 7
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 7
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 7
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 7
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 6
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 6
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 6
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 6
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 6
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 6
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 description 6
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 6
- KWGKDLIKAYFUFQ-UHFFFAOYSA-M lithium chloride Chemical compound [Li+].[Cl-] KWGKDLIKAYFUFQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 238000007069 methylation reaction Methods 0.000 description 6
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 6
- 239000000047 product Substances 0.000 description 6
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 6
- ZKHQWZAMYRWXGA-KQYNXXCUSA-N Adenosine triphosphate Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)[C@@H](O)[C@H]1O ZKHQWZAMYRWXGA-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 5
- ZKHQWZAMYRWXGA-UHFFFAOYSA-N Adenosine triphosphate Natural products C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C1OC(COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)C(O)C1O ZKHQWZAMYRWXGA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 101150077194 CAP1 gene Proteins 0.000 description 5
- XKMLYUALXHKNFT-UUOKFMHZSA-N Guanosine-5'-triphosphate Chemical compound C1=2NC(N)=NC(=O)C=2N=CN1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)[C@@H](O)[C@H]1O XKMLYUALXHKNFT-UUOKFMHZSA-N 0.000 description 5
- WDJHALXBUFZDSR-UHFFFAOYSA-N acetoacetic acid Chemical compound CC(=O)CC(O)=O WDJHALXBUFZDSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 5
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 5
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 5
- XKMLYUALXHKNFT-UHFFFAOYSA-N rGTP Natural products C1=2NC(N)=NC(=O)C=2N=CN1C1OC(COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)C(O)C1O XKMLYUALXHKNFT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 5
- HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 2-Aminoethan-1-ol Chemical compound NCCO HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 4
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 4
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 4
- 108091023045 Untranslated Region Proteins 0.000 description 4
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 4
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 4
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 4
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 4
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N glycerol Substances OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 4
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 4
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 4
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 4
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 4
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 4
- YEPAFLHOTODYGA-UHFFFAOYSA-N 3-(dimethylamino)propyl hydrogen carbonate Chemical compound CN(C)CCCOC(O)=O YEPAFLHOTODYGA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 3
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 3
- 102100025064 Cellular tumor antigen p53 Human genes 0.000 description 3
- 102000016911 Deoxyribonucleases Human genes 0.000 description 3
- 108010053770 Deoxyribonucleases Proteins 0.000 description 3
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 3
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 3
- 101100438378 Neurospora crassa (strain ATCC 24698 / 74-OR23-1A / CBS 708.71 / DSM 1257 / FGSC 987) fac-1 gene Proteins 0.000 description 3
- 108091034057 RNA (poly(A)) Proteins 0.000 description 3
- 230000024932 T cell mediated immunity Effects 0.000 description 3
- 101710137500 T7 RNA polymerase Proteins 0.000 description 3
- RZCIEJXAILMSQK-JXOAFFINSA-N TTP Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)O1 RZCIEJXAILMSQK-JXOAFFINSA-N 0.000 description 3
- 108010067390 Viral Proteins Proteins 0.000 description 3
- YIJVOACVHQZMKI-JXOAFFINSA-N [[(2r,3s,4r,5r)-5-(4-amino-5-methyl-2-oxopyrimidin-1-yl)-3,4-dihydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl] phosphono hydrogen phosphate Chemical compound O=C1N=C(N)C(C)=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)O1 YIJVOACVHQZMKI-JXOAFFINSA-N 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 238000005538 encapsulation Methods 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 3
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 3
- 210000002027 skeletal muscle Anatomy 0.000 description 3
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 3
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 3
- 239000001226 triphosphate Substances 0.000 description 3
- 101800001779 2'-O-methyltransferase Proteins 0.000 description 2
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010008342 Cervix carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 2
- PCDQPRRSZKQHHS-UHFFFAOYSA-N Cytidine 5'-triphosphate Natural products O=C1N=C(N)C=CN1C1C(O)C(O)C(COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)O1 PCDQPRRSZKQHHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 101000899111 Homo sapiens Hemoglobin subunit beta Proteins 0.000 description 2
- 206010064912 Malignant transformation Diseases 0.000 description 2
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 2
- 101100245221 Mus musculus Prss8 gene Proteins 0.000 description 2
- 102100038042 Retinoblastoma-associated protein Human genes 0.000 description 2
- 108091081024 Start codon Proteins 0.000 description 2
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 2
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 2
- PGAVKCOVUIYSFO-XVFCMESISA-N UTP Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C=C1 PGAVKCOVUIYSFO-XVFCMESISA-N 0.000 description 2
- ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N Uracil Chemical compound O=C1C=CNC(=O)N1 ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000006105 Uterine Cervical Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 206010046865 Vaccinia virus infection Diseases 0.000 description 2
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 210000000234 capsid Anatomy 0.000 description 2
- 201000010881 cervical cancer Diseases 0.000 description 2
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 2
- PCDQPRRSZKQHHS-ZAKLUEHWSA-N cytidine-5'-triphosphate Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO[P@](O)(=O)O[P@@](O)(=O)OP(O)(O)=O)O1 PCDQPRRSZKQHHS-ZAKLUEHWSA-N 0.000 description 2
- 230000016396 cytokine production Effects 0.000 description 2
- OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N cytosine Chemical compound NC=1C=CNC(=O)N=1 OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000007123 defense Effects 0.000 description 2
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 2
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 230000000857 drug effect Effects 0.000 description 2
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 description 2
- 230000006870 function Effects 0.000 description 2
- UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N guanine Chemical compound O=C1NC(N)=NC2=C1N=CN2 UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 2
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 2
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 2
- 230000036212 malign transformation Effects 0.000 description 2
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 2
- 125000005064 octadecenyl group Chemical group C(=CCCCCCCCCCCCCCCCC)* 0.000 description 2
- 230000002246 oncogenic effect Effects 0.000 description 2
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 2
- 150000003230 pyrimidines Chemical group 0.000 description 2
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 2
- 238000004366 reverse phase liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 230000001568 sexual effect Effects 0.000 description 2
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 2
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 2
- 229940021747 therapeutic vaccine Drugs 0.000 description 2
- RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N thymine Chemical compound CC1=CNC(=O)NC1=O RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PGAVKCOVUIYSFO-UHFFFAOYSA-N uridine-triphosphate Natural products OC1C(O)C(COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)OC1N1C(=O)NC(=O)C=C1 PGAVKCOVUIYSFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000007089 vaccinia Diseases 0.000 description 2
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 1
- HNSDLXPSAYFUHK-UHFFFAOYSA-N 1,4-bis(2-ethylhexyl) sulfosuccinate Chemical compound CCCCC(CC)COC(=O)CC(S(O)(=O)=O)C(=O)OCC(CC)CCCC HNSDLXPSAYFUHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HVVJCLFLKMGEIY-UHFFFAOYSA-N 2,3-dioctadecoxypropyl 2-(trimethylazaniumyl)ethyl phosphate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCCOCC(COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OCCCCCCCCCCCCCCCCCC HVVJCLFLKMGEIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AMMRPAYSYYGRKP-BGZDPUMWSA-N 5-[(2s,3r,4s,5r)-3,4-dihydroxy-5-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]-1-ethylpyrimidine-2,4-dione Chemical compound O=C1NC(=O)N(CC)C=C1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 AMMRPAYSYYGRKP-BGZDPUMWSA-N 0.000 description 1
- OGHAROSJZRTIOK-KQYNXXCUSA-O 7-methylguanosine Chemical group C1=2N=C(N)NC(=O)C=2[N+](C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O OGHAROSJZRTIOK-KQYNXXCUSA-O 0.000 description 1
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 description 1
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 1
- 229930024421 Adenine Natural products 0.000 description 1
- GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N Adenine Chemical compound NC1=NC=NC2=C1N=CN2 GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 238000011746 C57BL/6J (JAX™ mouse strain) Methods 0.000 description 1
- 101150014715 CAP2 gene Proteins 0.000 description 1
- 108091016585 CD44 antigen Proteins 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- 206010008263 Cervical dysplasia Diseases 0.000 description 1
- 241000725101 Clea Species 0.000 description 1
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 1
- HMFHBZSHGGEWLO-SOOFDHNKSA-N D-ribofuranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H]1O HMFHBZSHGGEWLO-SOOFDHNKSA-N 0.000 description 1
- 206010013710 Drug interaction Diseases 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- 101710116650 FAD-dependent monooxygenase Proteins 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 102100031181 Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Human genes 0.000 description 1
- 102100027685 Hemoglobin subunit alpha Human genes 0.000 description 1
- 108091005902 Hemoglobin subunit alpha Proteins 0.000 description 1
- 108091005904 Hemoglobin subunit beta Proteins 0.000 description 1
- 102100021519 Hemoglobin subunit beta Human genes 0.000 description 1
- 102000008055 Heparan Sulfate Proteoglycans Human genes 0.000 description 1
- 229920002971 Heparan sulfate Polymers 0.000 description 1
- PIWKPBJCKXDKJR-UHFFFAOYSA-N Isoflurane Chemical compound FC(F)OC(Cl)C(F)(F)F PIWKPBJCKXDKJR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004166 Lanolin Substances 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101100326803 Neurospora crassa (strain ATCC 24698 / 74-OR23-1A / CBS 708.71 / DSM 1257 / FGSC 987) fac-2 gene Proteins 0.000 description 1
- 101710128228 O-methyltransferase Proteins 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 101710132632 Protein C4 Proteins 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 108020004682 Single-Stranded DNA Proteins 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 101710172711 Structural protein Proteins 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 108090000054 Syndecan-2 Proteins 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 description 1
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 1
- 229960000643 adenine Drugs 0.000 description 1
- 229960001456 adenosine triphosphate Drugs 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 1
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000637 arginyl group Chemical group N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)* 0.000 description 1
- 210000000270 basal cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 125000004063 butyryl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 125000002915 carbonyl group Chemical group [*:2]C([*:1])=O 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 230000009713 cell cycle regulatory function Effects 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000004590 computer program Methods 0.000 description 1
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 1
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 1
- 229940104302 cytosine Drugs 0.000 description 1
- 125000003493 decenyl group Chemical group [H]C([*])=C([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000011033 desalting Methods 0.000 description 1
- 230000006866 deterioration Effects 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 125000002897 diene group Chemical group 0.000 description 1
- 125000005066 dodecenyl group Chemical group C(=CCCCCCCCCCC)* 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 238000002296 dynamic light scattering Methods 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 1
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 239000003925 fat Substances 0.000 description 1
- 239000010685 fatty oil Substances 0.000 description 1
- 238000003682 fluorination reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 210000004392 genitalia Anatomy 0.000 description 1
- 108020004445 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- 150000002334 glycols Chemical class 0.000 description 1
- 210000002443 helper t lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 230000036571 hydration Effects 0.000 description 1
- 238000006703 hydration reaction Methods 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 206010020718 hyperplasia Diseases 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 description 1
- 230000006882 induction of apoptosis Effects 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 1
- 229960002725 isoflurane Drugs 0.000 description 1
- 125000001449 isopropyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 229940039717 lanolin Drugs 0.000 description 1
- 235000019388 lanolin Nutrition 0.000 description 1
- 239000006210 lotion Substances 0.000 description 1
- 125000002960 margaryl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 238000013178 mathematical model Methods 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 230000001114 myogenic effect Effects 0.000 description 1
- 125000001421 myristyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 244000309711 non-enveloped viruses Species 0.000 description 1
- 239000012454 non-polar solvent Substances 0.000 description 1
- 125000001196 nonadecyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 1
- 125000004430 oxygen atom Chemical group O* 0.000 description 1
- 125000000913 palmityl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 208000003154 papilloma Diseases 0.000 description 1
- 229940056211 paraffin Drugs 0.000 description 1
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 239000006072 paste Substances 0.000 description 1
- 125000002958 pentadecyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 150000004713 phosphodiesters Chemical class 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 239000002798 polar solvent Substances 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 230000000770 proinflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 125000001501 propionyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 125000002572 propoxy group Chemical group [*]OC([H])([H])C(C([H])([H])[H])([H])[H] 0.000 description 1
- 125000001436 propyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- ROSDSFDQCJNGOL-UHFFFAOYSA-N protonated dimethyl amine Natural products CNC ROSDSFDQCJNGOL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 238000007670 refining Methods 0.000 description 1
- 230000022983 regulation of cell cycle Effects 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- 210000002345 respiratory system Anatomy 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 238000004513 sizing Methods 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 125000004079 stearyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 239000000375 suspending agent Substances 0.000 description 1
- 125000005063 tetradecenyl group Chemical group C(=CCCCCCCCCCCCC)* 0.000 description 1
- 239000010409 thin film Substances 0.000 description 1
- 229940113082 thymine Drugs 0.000 description 1
- 230000000472 traumatic effect Effects 0.000 description 1
- 125000005040 tridecenyl group Chemical group C(=CCCCCCCCCCCC)* 0.000 description 1
- 125000002889 tridecyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- AVBGNFCMKJOFIN-UHFFFAOYSA-N triethylammonium acetate Chemical compound CC(O)=O.CCN(CC)CC AVBGNFCMKJOFIN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 125000005065 undecenyl group Chemical group C(=CCCCCCCCCC)* 0.000 description 1
- 125000002948 undecyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 210000000689 upper leg Anatomy 0.000 description 1
- 229940035893 uracil Drugs 0.000 description 1
- 229940099259 vaseline Drugs 0.000 description 1
- 230000029812 viral genome replication Effects 0.000 description 1
- 210000002845 virion Anatomy 0.000 description 1
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 1
- 239000001993 wax Substances 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
- A61K31/7115—Nucleic acids or oligonucleotides having modified bases, i.e. other than adenine, guanine, cytosine, uracil or thymine
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
- A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
- A61K9/50—Microcapsules having a gas, liquid or semi-solid filling; Solid microparticles or pellets surrounded by a distinct coating layer, e.g. coated microspheres, coated drug crystals
- A61K9/51—Nanocapsules; Nanoparticles
- A61K9/5107—Excipients; Inactive ingredients
- A61K9/5123—Organic compounds, e.g. fats, sugars
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
- A61K9/50—Microcapsules having a gas, liquid or semi-solid filling; Solid microparticles or pellets surrounded by a distinct coating layer, e.g. coated microspheres, coated drug crystals
- A61K9/51—Nanocapsules; Nanoparticles
- A61K9/5107—Excipients; Inactive ingredients
- A61K9/513—Organic macromolecular compounds; Dendrimers
- A61K9/5146—Organic macromolecular compounds; Dendrimers obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyethylene glycol, polyamines, polyanhydrides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/87—Introduction of foreign genetic material using processes not otherwise provided for, e.g. co-transformation
- C12N15/88—Introduction of foreign genetic material using processes not otherwise provided for, e.g. co-transformation using microencapsulation, e.g. using amphiphile liposome vesicle
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/53—DNA (RNA) vaccination
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55555—Liposomes; Vesicles, e.g. nanoparticles; Spheres, e.g. nanospheres; Polymers
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/57—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2
- A61K2039/572—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2 cytotoxic response
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/70—Multivalent vaccine
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/20011—Papillomaviridae
- C12N2710/20022—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/20011—Papillomaviridae
- C12N2710/20034—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Virology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Zoology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Optics & Photonics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Nanotechnology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- Reproductive Health (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
Abstract
Description
本發明係關於一種封入有編碼HPV(人類乳突病毒(human papillomavirus))6型及/或11型之抗原的mRNA的核酸脂質粒子疫苗。
人類乳突病毒(human papillomavirus;HPV)係不具套膜之具有環狀雙股DNA作為基因體的病毒,存在有200種前後之基因型(非專利文獻1)。於其中有將感染細胞癌化之基因型,尤其是已證明與以子宮頸癌為代表之癌發病之關聯的基因型16及18被分類為高風險型(非專利文獻2)。另一方面,基因型6或11等其他大多數的基因型雖會引起上皮的過度增生,但為良性,鮮少會引起惡性腫瘤,因此被分類為低風險型(非專利文獻3)。
於HPV的基因體係編碼8個病毒蛋白質,因應病毒之生命週期中的表現時期,而被分類為早期基因(early gene)(E1、E2、E4、E5、E6、E7)與晚期基因(late gene)(L1、L2)。早期基因控制病毒複製及感染細胞的癌化,L1及L2則係成為病毒粒子外殼(殼體)之結構蛋白質(非專利文獻4)。
高風險型HPV病毒蛋白質的E6及E7係使感染細胞的細胞增殖發生異常。這是因為負責細胞凋亡(apoptotic cell death)誘導的p53或為具有細胞週期調節機能的Rb家族蛋白質之一的pRb之機能因E6及E7而被抑制(非專利文獻5、6)。又,關於低風險型HPV,亦被暗示E6所導致的p53之抑制、或E7所導致的為Rb家族蛋白質之一且主要負責在上皮側之細胞週期調節機能的p130之抑制(非專利文獻3)。再者,已明白對E6及E7的癌化活性而言重要的區域,於使用E6及E7作為疫苗抗原之際,能夠插入不活化變異而提高安全性(非專利文獻7-9)。
HPV基因型6或11係由呼吸道及生殖器等之黏膜上皮的創傷部位感染基底細胞,但通常會被宿主免疫系統排除。然而,在易感染性狀態之情形下,藉由病毒蛋白質之E6及E7的作用,而誘導黏膜上皮細胞的增殖,因此形成乳突瘤。藉此而會引起復發性呼吸道乳突瘤病(Recurrent respiratory papillomatosis)或尖頭濕疣。又,在極少數情況下會有惡性轉化(malignant transformation)之情形(非專利文獻3)。
HPV感染係藉由構成殼體之L1蛋白質吸附於在宿主細胞膜表面上存在的硫酸乙醯肝素蛋白多糖(heparan sulfate proteoglycan)而開始(非專利文獻10)。負責HPV感染防禦的中和抗體係以L1蛋白質作為標的,因此現在上市中的預防疫苗包含L1蛋白質的VLP(類病毒顆粒(virus-like particle))抗原作為藥效成分。又,現存的預防疫苗中亦包含基因型6與11的L1 VLP抗原,使復發性呼吸道乳突瘤病治療中之外科手術的頻度降低(非專利文獻11)。
對HPV感染之宿主防禦免疫,為中和抗體的誘導與細胞毒性T細胞(cytotoxic T cell;CTL)或輔助T細胞的誘導。尤其是E6或E7的非結構蛋白質係CTL誘導的標的抗原,作為起因於HPV感染之子宮頸癌、及子宮頸上皮分化不良(cervical dysplasia)的治療疫苗抗原而受到注目(非專利文獻12)。同樣地,亦於復發性呼吸道乳突瘤病治療中,作為其治療疫苗抗原而受到注目(非專利文獻13)。
專利文獻1中記載HPV基因型6、11、16、18、31、33、39、45、52及58的E6與E7融合抗原基因序列。此文獻所記載的基因序列中,在E6的N末端附加IgE前導序列,於E6與E7之轉譯區序列之間則插入弗林(furin)肽酶的切割位點。又,對E6的p53結合區域與E7的pRb結合區域插入變異,使E6及E7的癌化活性不活化。將此基因序列導入哺乳類表現質體,作為對HPV之DNA基因疫苗,而實施小鼠模式中的藥效評價。免疫係使用電穿孔法之對小鼠大腿部的肌肉內投予。
[先前技術文獻]
[非專利文獻]
[非專利文獻1]Virology 2013;445:2e10.
[非專利文獻2]J Natl Cancer Inst 1995;87:796-802.
[非專利文獻3]Virus Res. 2017, 231: 119-127.
[非專利文獻4]J Clin Virol 2005;32(Suppl.1):S7e15.
[非專利文獻5]Cell 1990;63:1129e36.
[非專利文獻6]Cancer Res 1996;56:4620e4.
[非專利文獻7]J Virol, 1989, p.2650-2656
[非專利文獻8]J Virol, 1992, p.1329-1335
[非專利文獻9]J Virol, 1994, p.5698-5705
[非專利文獻10]Proc Natl Acad Sci U. S. A 2009; 106: 20458e63.
[非專利文獻11]J Infect Dis. 2019, 219(7): 1016-1025.
[非專利文獻12]Nat Rev Cancer. 2006, 6(10): 753-763.
[非專利文獻13]Hum Vaccin Immunother. 2012, 8(4): 470-478.
[專利文獻1]日本JP 2016-512553
[發明欲解決之課題]
本發明之目的為:提供用以預防及/或治療人類乳突病毒6型及/或11型所導致的感染之疫苗。
[用以解決課題之手段]
本發明人等發現對小鼠投予封入有編碼人類乳突病毒6型及/或11型的E6-E7抗原之mRNA的脂質粒子,結果可觀察到對該抗原特異性的免疫反應,以致完成本發明。
本發明之要旨係如以下所述。
(1)一種粒子,其係封入有可使人類乳突病毒的E6抗原及E7抗原表現之核酸的脂質粒子,其中脂質包含通式(Ia)所表示的陽離子性脂質、或其藥學上所容許之鹽,
式中,
R
1及R
2獨立地表示C1-C3烷基;
L
1表示可具有1或複數個C2-C4烷醯氧基(alkanoyloxy)之C17-C19烯基;
L
2表示可具有1或複數個C2-C4烷醯氧基之C10-C19烷基、或者可具有1或複數個C2-C4烷醯氧基之C10-C19烯基;
p為3或4。
(2)如(1)中記載之粒子,其中通式(Ia)中的R
1及R
2皆為甲基。
(3)如(1)或(2)中記載之粒子,其中通式(Ia)中的p為3。
(4)如(1)~(3)之任一者中記載之粒子,其中通式(Ia)中的L
1為可具有1或複數個乙醯氧基之C17-C19烯基。
(5)如(1)~(4)之任一者中記載之粒子,其中通式(Ia)中的L
2為可具有1或複數個乙醯氧基之C10-C12烷基、或者可具有1或複數個乙醯氧基之C10-C19烯基。
(6)如(1)~(4)之任一者中記載之粒子,其中通式(Ia)中的L
2為可具有1或複數個乙醯氧基之C10-C12烷基、或者可具有1或複數個乙醯氧基之C17-C19烯基。
(7)如(1)~(6)之任一者中記載之粒子,其中通式(Ia)中的L
1為(R)-11-乙醯氧基-順式-8-十七碳烯基、順式-8-十七碳烯基、或(8Z,11Z)-十七碳二烯基。
(8)如(1)~(7)之任一者中記載之粒子,其中通式(Ia)中的L
2為癸基、順式-7-癸烯基、十二烷基、或(R)-11-乙醯氧基-順式-8-十七碳烯基。
(9)如(1)中記載之粒子,其中陽離子性脂質係藉由下述結構式表示:
。
(10)如(1)中記載之粒子,其中陽離子性脂質係藉由下述結構式表示:
。
(11)如(1)中記載之粒子,其中陽離子性脂質係藉由下述結構式表示:
。
(12)如(9)或(10)中記載之粒子,其中脂質進一步包含兩親媒性脂質、固醇類及PEG脂質。
(13)如(11)中記載之粒子,其中脂質進一步包含兩親媒性脂質、固醇類及PEG脂質。
(14)如(12)中記載之粒子,其中兩親媒性脂質為由包含二硬脂醯基磷脂醯膽鹼、二油醯基磷脂醯膽鹼及二油醯基磷酯醯乙醇胺之群組所選出的至少1者。
(15)如(13)記載之粒子,其中兩親媒性脂質為由包含二硬脂醯基磷脂醯膽鹼、二油醯基磷脂醯膽鹼及二油醯基磷酯醯乙醇胺之群組所選出的至少1者。
(16)如(12)或(14)中記載之粒子,其中固醇類為膽固醇。
(17)如(13)或(15)中記載之粒子,其中固醇類為膽固醇。
(18)如(12)、(14)或(16)之任一者中記載之粒子,其中PEG脂質為1,2-二肉豆蔻醯基-sn-甘油甲氧基聚乙二醇及/或N-[甲氧基聚(乙二醇)2000]胺甲醯基]-1,2-二肉豆蔻基氧基丙基-3-胺。
(19)如(13)、(15)或(17)之任一者中記載之粒子,其中PEG脂質為1,2-二肉豆蔻醯基-sn-甘油甲氧基聚乙二醇及/或N-[甲氧基聚(乙二醇)2000]胺甲醯基]-1,2-二肉豆蔻基氧基丙基-3-胺。
(20)如(12)~(19)之任一者中記載之粒子,其中兩親媒性脂質、固醇類、陽離子性脂質、及PEG脂質之脂質組成以莫耳量計,兩親媒性脂質為5~25%、固醇類為10~55%、陽離子性脂質為40~65%、PEG脂質為1~5%。
(21)如(20)中記載之粒子,其中兩親媒性脂質為10~25%。
(22)如(12)、(14)、(16)或(18)之任一者中記載之粒子,其中兩親媒性脂質、固醇類、陽離子性脂質、及PEG脂質之脂質組成以莫耳量計,兩親媒性脂質為5~15%、固醇類為35~50%、陽離子性脂質為40~55%、PEG脂質為1~3%。
(23)如(22)中記載之粒子,其中兩親媒性脂質為10~15%、固醇類為35~45%、陽離子性脂質為40~50%、PEG脂質為1~2.5%。
(24)如(23)中記載之粒子,其中PEG脂質為1~2%。
(25)如(13)、(15)、(17)或(19)之任一者中記載之粒子,其中兩親媒性脂質、固醇類、陽離子性脂質、及PEG脂質之脂質組成以莫耳量計,兩親媒性脂質為10~25%、固醇類為10~50%、陽離子性脂質為40~65%、PEG脂質為1~3%。
(26)如(25)中記載之粒子,其中固醇類為10~45%、陽離子性脂質為42.5~65%、PEG脂質為1~2.5%。
(27)如(26)中記載之粒子,其中PEG脂質為1~2%。
(28)如(20)~(27)之任一者中記載之粒子,其中總脂質重量對核酸重量之比率為15~30。
(29)如(28)中記載之粒子,其中總脂質重量對核酸重量之比率為15~25。
(30)如(29)中記載之粒子,其中總脂質重量對核酸重量之比率為17.5~22.5。
(31)如(1)~(30)之任一者中記載之粒子,其中人類乳突病毒為HPV6型。
(32)如(31)中記載之粒子,其中人類乳突病毒為HPV6型,且HPV6型的E6抗原包含與序列識別號12的胺基酸序列具有至少95%之同一性的胺基酸序列。
(33)如(31)或(32)中記載之粒子,其中人類乳突病毒為HPV6型,且HPV6型的E7抗原包含與序列識別號13的胺基酸序列具有至少95%之同一性的胺基酸序列。
(34)如(31)~(33)之任一者中記載之粒子,其中人類乳突病毒為HPV6型,可使人類乳突病毒的E6抗原及E7抗原表現之核酸編碼HPV6型的E6抗原及E7抗原之融合蛋白,該融合蛋白包含與序列識別號17的胺基酸序列具有至少95%之同一性的胺基酸序列。
(35)如(31)~(34)之任一者中記載之粒子,其中人類乳突病毒為HPV6型,可使HPV6型的E6抗原及E7抗原表現之核酸為包含帽結構(Cap)、5’非轉譯區(5’-UTR)、前導序列(leader sequence)、E6之轉譯區、蛋白酶切割序列(弗林蛋白酶(Furin)切割位點)、E7之轉譯區、3’非轉譯區(3’-UTR)及多腺苷酸尾部(polyA)的mRNA。
(36)如(35)中記載之粒子,其中可使HPV6型的E6抗原及E7抗原表現之核酸之序列包含與序列識別號5之序列具有至少90%之同一性的核苷酸序列。
(37)如(31)~(34)之任一者中記載之粒子,其中人類乳突病毒為HPV6型,可使HPV6型的E6抗原及E7抗原表現之核酸為包含下述構成的mRNA,該構成包含帽結構(Cap)、5’非轉譯區(5’-UTR)、前導序列(leader sequence)、E6之轉譯區、蛋白酶切割序列(弗林蛋白酶切割位點)、E7之轉譯區及3’非轉譯區(3’-UTR)。
(38)如(37)中記載之粒子,其中包含帽結構(Cap)、5’非轉譯區(5’-UTR)、前導序列(leader sequence)、E6之轉譯區、蛋白酶切割序列(弗林蛋白酶切割位點)、E7之轉譯區及3’非轉譯區(3’-UTR)之構成係包含下述核苷酸序列:與序列識別號5的第1個至第1018個之序列具有至少90%之同一性的核苷酸序列。
(39)如(1)~(30)之任一者中記載之粒子,其中人類乳突病毒為HPV11型。
(40)如(39)中記載之粒子,其中人類乳突病毒為HPV11型,且HPV11型的E6抗原包含與序列識別號14的胺基酸序列具有至少95%之同一性的胺基酸序列。
(41)如(39)或(40)中記載之粒子,其中人類乳突病毒為HPV11型,且HPV11型的E7抗原包含與序列識別號15的胺基酸序列具有至少95%之同一性的胺基酸序列。
(42)如(39)~(41)之任一者中記載之粒子,其中人類乳突病毒為HPV11型,可使人類乳突病毒的E6抗原及E7抗原表現之核酸編碼HPV11型的E6抗原及E7抗原之融合蛋白,該融合蛋白包含與序列識別號18的胺基酸序列具有至少95%之同一性的胺基酸序列。
(43)如(39)~(42)之任一者中記載之粒子,其中人類乳突病毒為HPV11型,可使HPV11型的E6抗原及E7抗原表現之核酸為包含帽結構(Cap)、5’非轉譯區(5’-UTR)、前導序列(leader sequence)、E6之轉譯區、蛋白酶切割序列(弗林蛋白酶切割位點)、E7之轉譯區、3’非轉譯區(3’-UTR)及多腺苷酸尾部(polyA)的mRNA。
(44)如(43)中記載之粒子,其中可使HPV11型的E6抗原及E7抗原表現之核酸之序列包含與序列識別號8之序列具有至少90%之同一性的核苷酸序列。
(45)如(39)~(42)之任一者中記載之粒子,其中人類乳突病毒為HPV11型,可使HPV11型的E6抗原及E7抗原表現之核酸為包含下述構成的mRNA,該構成包含帽結構(Cap)、5’非轉譯區(5’-UTR)、前導序列(leader sequence)、E6之轉譯區、蛋白酶切割序列(弗林蛋白酶切割位點)、E7之轉譯區及3’非轉譯區(3’-UTR)。
(46)如(45)中記載之粒子,其中包含帽結構(Cap)、5’非轉譯區(5’-UTR)、前導序列(leader sequence)、E6之轉譯區、蛋白酶切割序列(弗林蛋白酶切割位點)、E7之轉譯區及3’非轉譯區(3’-UTR)之構成係包含下述核苷酸序列:與序列識別號8的第1個至第1018個之序列具有至少90%之同一性的核苷酸序列。
(47)如(1)~(30)之任一者中記載之粒子,其中人類乳突病毒為HPV6型及11型。
(48)如(47)中記載之粒子,其中人類乳突病毒為HPV6型及11型,可使人類乳突病毒的E6抗原及E7抗原表現之核酸編碼HPV6型的E6抗原及E7抗原與HPV11型的E6抗原及E7抗原之融合蛋白,該融合蛋白包含與序列識別號19的胺基酸序列具有至少95%之同一性的胺基酸序列。
(49)如(47)或(48)中記載之粒子,其中人類乳突病毒為HPV6型及11型,可使HPV6型的E6抗原及E7抗原與HPV11型的E6抗原及E7抗原表現之核酸為包含帽結構(Cap)、5’非轉譯區(5’-UTR)、前導序列(leader sequence)、HPV6型的E6之轉譯區、HPV6型的E7之轉譯區、蛋白酶切割序列(弗林蛋白酶切割位點)、HPV11型的E6之轉譯區、HPV11型的E7之轉譯區、3’非轉譯區(3’-UTR)及多腺苷酸尾部(polyA)的mRNA。
(50)如(49)中記載之粒子,其中可使HPV6型的E6抗原及E7抗原與HPV11型的E6抗原及E7抗原表現之核酸之序列包含與序列識別號11之序列具有至少90%之同一性的核苷酸序列。
(51)如(47)或(48)中記載之粒子,其中人類乳突病毒為HPV6型及11型,可使HPV6型的E6抗原及E7抗原與HPV11型的E6抗原及E7抗原表現之核酸為包含下述構成的mRNA,該構成包含帽結構(Cap)、5’非轉譯區(5’-UTR)、前導序列(leader sequence)、HPV6型的E6之轉譯區、HPV6型的E7之轉譯區、蛋白酶切割序列(弗林蛋白酶切割位點)、HPV11型的E6之轉譯區、HPV11型的E7之轉譯區及3’非轉譯區(3’-UTR)。
(52)如(51)中記載之粒子,其中包含帽結構(Cap)、5’非轉譯區(5’-UTR)、前導序列(leader sequence)、HPV6型的E6之轉譯區、HPV6型的E7之轉譯區、蛋白酶切割序列(弗林蛋白酶切割位點)、HPV11型的E6之轉譯區、HPV11型的E7之轉譯區及3’非轉譯區(3’-UTR)之構成係包含下述核苷酸序列:與序列識別號11的第1個至第1798個之序列具有至少90%之同一性的核苷酸序列。
(53)如(1)~(52)之任一者中記載之粒子,其中核酸包含至少1個修飾核苷酸。
(54)如(53)中記載之粒子,其中修飾核苷酸包含5位經取代之嘧啶核苷酸及/或1位可取代之假尿苷的至少1個。
(55)如(53)中記載之粒子,其中修飾核苷酸包含選自包含5-甲基胞苷、5-甲氧基尿苷、5-甲基尿苷、假尿苷、及1-烷基假尿苷之群組的至少1個。
(56)如(53)中記載之粒子,其中修飾核苷酸包含選自包含5-甲基胞苷、5-甲基尿苷、及1-甲基假尿苷之群組的至少1個。
(57)如(1)~(56)之任一者中記載之粒子,其平均粒徑為30~300nm。
(58)一種如(1)~(57)之任一者中記載之粒子之用途,其係用以製造用以預防及/或治療人類乳突病毒所導致的感染之組成物。
(59)一種如(1)~(57)之任一者中記載之粒子之用途,其係用以製造用以預防及/或治療人類乳突病毒之感染所導致的疾病之組成物。
(60)如(59)中記載之粒子之用途,其中人類乳突病毒之感染所導致的疾病為復發性呼吸道乳突瘤病或尖頭濕疣。
(61)如(58)~(60)之任一者中記載之粒子之用途,其中感染為HPV6型或HPV11型之人類乳突病毒所導致的感染。
(62)一種組成物,其含有如(1)~(57)之任一者中記載之粒子。
(63)如(62)中記載之組成物,其係用以使人類乳突病毒的E6抗原及E7抗原在體內或體外表現。
(64)如(62)或(63)中記載之組成物,其係作為醫藥使用。
(65)如(64)中記載之組成物,其係用以誘導對人類乳突病毒的免疫反應。
(66)如(64)或(65)中記載之組成物,其係用以預防及/或治療人類乳突病毒感染。
(67)如(64)或(65)中記載之組成物,其係用以預防及/或治療人類乳突病毒感染所導致的疾病。
(68)如(67)中記載之組成物,其中人類乳突病毒感染所導致的疾病為復發性呼吸道乳突瘤病或尖頭濕疣。
(69)如(66)~(68)之任一者中記載之組成物,其中感染為HPV6型或HPV11型之人類乳突病毒所導致的感染。
(70)一種使人類乳突病毒的E6抗原及E7抗原在體外表現之方法,其包含將如(62)或(63)中記載之組成物導入細胞。
(71)一種使人類乳突病毒的E6抗原及E7抗原在體內表現之方法,其包含對哺乳動物投予如(62)~(66)之任一者中記載之組成物。
(72)一種誘導對人類乳突病毒的免疫反應之方法,其包含對哺乳動物投予如(64)或(65)中記載之組成物。
(73)一種預防及/或治療人類乳突病毒感染之方法,其包含對哺乳動物投予如(64)~(69)之任一者中記載之組成物。
[發明之效果]
藉由本發明,而能夠預防及/或治療人類乳突病毒6型及/或11型所導致的感染。又,藉由本發明,而能夠預防及/或治療起因於人類乳突病毒6型及/或11型所導致的感染之疾病(復發性呼吸道乳突瘤病及尖頭濕疣等)。又,本發明之粒子,於代謝安定性、體外活性、體內活性、藥效表現之速度、藥效之持續性、物理安定性、藥物相互作用、安全性等之點具有優異之性質,作為用以治療或預防上述疾病之醫藥係有用的。
[用以實施發明的形態]
於以下針對本發明詳細地進行說明。
本說明書中使用以下所說明之用語。
「脂質粒子」:於本說明書中,所謂脂質粒子係表示包含兩親媒性脂質、固醇類、陽離子性脂質及PEG脂質作為脂質成分之粒子。
「可使…表現」:於本說明書中,所謂可使…表現係表示可於體外或體內使細胞產生目的之蛋白質。
「C1-C3烷基」:表示碳數1至3的直鏈或支鏈烷基。可舉出例如甲基、乙基、丙基、異丙基。
「C2-C4烷醯基」:表示碳數2至4個之烷醯基。可舉出例如乙醯基、丙醯基、丁醯基、異丁醯基。
「C2-C4烷醯氧基」:表示上述C2-C4烷醯基鍵結於氧原子而成之基。可舉出例如乙醯氧基、丙醯氧基、丁醯氧基、異丁醯氧基。
「C17-C19烯基」:表示碳數17至19的直鏈或支鏈烯基。本說明書中的C17-C19烯基亦包含C17-C19二烯烴基(alkadienyl)、C17-C19三烯烴基、及C17-C19四烯烴基之任一者。可舉出例如十七碳烯基、十八碳烯基、十九碳烯基、十七碳二烯基、十八碳二烯基、十九碳二烯基、十七碳三烯基、十八碳三烯基、十九碳三烯基。
「可具有1或複數個C2-C4烷醯氧基之C17-C19烯基」:表示上述C17-C19烯基之任意位置的氫原子取代為上述C2-C4烷醯氧基而成之基。可舉出例如11-乙醯氧基-8-十七碳烯基、11-丙醯氧基-8-十七碳烯基。
「C10-C19烷基」:表示碳數10至19的直鏈或支鏈烷基。可舉出例如癸基、十一烷基、十二烷基、十三烷基、十四烷基、十五烷基、十六烷基、十七烷基、十八烷基、十九烷基。
「可具有1或複數個C2-C4烷醯氧基之C10-C19烷基」:表示上述C10-C19烷基之任意位置的氫原子取代為上述C2-C4烷醯氧基而成之基。
「C10-C19烯基」:表示碳數10至19的直鏈或支鏈烯基。本說明書中的C10-C19烯基亦包含C10-C19二烯烴基、C10-C19三烯烴基、及C10-C19四烯烴基之任一者。可舉出例如癸烯基、十一碳烯基、十二碳烯基、十三碳烯基、十四碳烯基、十五碳烯基、十六碳烯基、十七碳烯基、十八碳烯基、十九碳烯基、癸二烯基、十一碳二烯基、十二碳二烯基、十三碳二烯基、十四碳二烯基、十五碳二烯基、十六碳二烯基、十七碳二烯基、十八碳二烯基、十九碳二烯基、癸三烯基、十一碳三烯基、十二碳三烯基、十三碳三烯基、十四碳三烯基、十五碳三烯基、十六碳三烯基、十七碳三烯基、十八碳三烯基、十九碳三烯基。
「可具有1或複數個C2-C4烷醯氧基之C10-C19烯基」:表示上述C10-C19烯基之任意位置的氫原子取代為上述C2-C4烷醯氧基而成之基。可舉出例如11-乙醯氧基-8-十七碳烯基、11-丙醯氧基-8-十七碳烯基。
「可具有1或複數個乙醯氧基之C17-C19烯基」:表示上述C17-C19烯基之任意位置的氫原子取代為乙醯氧基而成之基。可舉出例如11-乙醯氧基-8-十七碳烯基、11-丙醯氧基-8-十七碳烯基。
「可具有1或複數個乙醯氧基之C10-C12烷基」:表示上述C10-C12烷基之任意位置的氫原子取代為乙醯氧基而成之基。
「可具有1或複數個乙醯氧基之C10-C19烯基」:表示上述C10-C19烯基之任意位置的氫原子取代為乙醯氧基而成之基。可舉出例如11-乙醯氧基-8-十七碳烯基、11-丙醯氧基-8-十七碳烯基。
「治療」:於本說明書中,所謂治療係意指於病毒或細菌等所導致的感染症、或以該感染為原因的疾病(例如癌前病變或癌等)已發病之患者,此等疾病之臨床症狀的恢復、緩解、緩和及/或惡化的延遲。
「預防」:於本說明書中,所謂預防係意指減少病毒或細菌等所導致的感染症所致之疾病的發病率。預防包含病毒或細菌等所導致的感染症所致之疾病進行之風險的降低、或者彼等疾病之重症化的減少。本發明之粒子因誘導防禦免疫反應,而對上述疾病之預防及/或治療顯示效果。
「同一性」:於本說明書中,所謂同一性係指如在該領域所周知地,藉由序列之比較所決定的2個以上的核苷酸序列或胺基酸序列之序列間的關係。於該領域中,「同一性」還意指因應情形而藉由一列之2個以上的核苷酸序列間或2個以上的胺基酸序列間的一致來決定時的核酸分子間或多肽間的序列相關性之程度。同一性可藉由下述來評價:算出2個以上的序列之中較小者、與藉由特定數理模式或電腦程式(即「演算法」)所指定位址的間隙排比(gap alignment)(存在之情形)之間的相同一致之百分率。具體而言,可藉由使用歐洲分子生物學實驗室-歐洲生物資訊研究所(European Molecular Biology Laboratory-European Bioinformatics Institute;EMBL-EBI)所提供的ClustalW2等軟體來評價,但若為所屬技術領域中具通常知識者所使用者,則不被此所限定。
本發明提供一種粒子,其係封入有可使人類乳突病毒6型及/或11型的E6抗原及E7抗原表現之核酸的脂質粒子,其中脂質包含通式(Ia)所表示的陽離子性脂質、或其藥學上所容許之鹽。
式中,
R
1及R
2獨立地表示C1-C3烷基;
L
1表示可具有1或複數個C2-C4烷醯氧基之C17-C19烯基;
L
2表示可具有1或複數個C2-C4烷醯氧基之C10-C19烷基、或者可具有1或複數個C2-C4烷醯氧基之C10-C19烯基;
p為3或4。
通式(Ia)中的R
1及R
2獨立地表示C1-C3烷基,但較佳係皆為甲基。
通式(Ia)中的p為3或4,但較佳為3。
通式(Ia)中的L
1表示可具有1或複數個C2-C4烷醯氧基之C17-C19烯基,但較佳為可具有1或複數個乙醯氧基之C17-C19烯基。作為L
1,具體而言可例示(R)-11-乙醯氧基-順式-8-十七碳烯基、順式-8-十七碳烯基、或(8Z,11Z)-十七碳二烯基等。
通式(Ia)中的L
2表示可具有1或複數個C2-C4烷醯氧基之C10-C19烷基、或者可具有1或複數個C2-C4烷醯氧基之C10-C19烯基,但較佳為可具有1或複數個乙醯氧基之C10-C12烷基、或者可具有1或複數個乙醯氧基之C10-C19烯基。又或者,通式(Ia)中的L
2亦較佳為可具有1或複數個乙醯氧基之C10-C12烷基、或者可具有1或複數個乙醯氧基之C17-C19烯基。作為L
2,具體而言可例示癸基、順式-7-癸烯基、十二烷基、或(R)-11-乙醯氧基-順式-8-十七碳烯基等。
作為構成本發明之粒子之成分的陽離子性脂質,具體而言可例示以下述結構式所分別表示的二乙酸(7R,9Z,26Z,29R)-18-({[3-(二甲基胺基)丙氧基]羰基}氧基)三十五碳-9,26-二烯-7,29-二基酯、碳酸3-二甲基胺基丙酯(9Z,12Z)-二十八碳-19,22-二烯-11-基酯、乙酸(7R,9Z)-18-({[3-(二甲基胺基)丙基氧基]羰基}氧基)二十八碳-9-烯-7-基酯。
通式(Ia)所表示的陽離子性脂質可為1種類的化合物,亦可為2種類以上的化合物之組合。
製造通式(Ia)所表示的陽離子性脂質之方法,係記載於國際公報第2015/005253號小冊子中。
本發明之脂質亦可進一步包含兩親媒性脂質、固醇類及PEG脂質。
兩親媒性脂質係對極性、非極性之溶媒都具有親和性的脂質,具體而言可例示二硬脂醯基磷脂醯膽鹼、二油醯基磷脂醯膽鹼、二油醯基磷酯醯乙醇胺、彼等之組合等。作為用於本發明之粒子的兩親媒性脂質,較佳為二硬脂醯基磷脂醯膽鹼及/或二油醯基磷酯醯乙醇胺,更佳為二硬脂醯基磷脂醯膽鹼。
固醇類為具有羥基的固醇,具體而言可例示膽固醇等。
PEG脂質為經PEG修飾之脂質,具體而言可例示1,2-二肉豆蔻醯基-sn-甘油甲氧基聚乙二醇及/或N-[甲氧基聚(乙二醇)2000]胺甲醯基]-1,2-二肉豆蔻基氧基丙基-3-胺、彼等之組合等,但較佳為1,2-二肉豆蔻醯基-sn-甘油甲氧基聚乙二醇。PEG脂質之平均分子量並無特別限定,但例如為1000~5000,較佳為1500~3000,更佳為1800~2200。
兩親媒性脂質、固醇類、陽離子性脂質及PEG脂質之脂質組成雖未特別被限定,但例如以莫耳量計,兩親媒性脂質為5~25%、固醇類為10~55%、陽離子性脂質為40~65%、PEG脂質為1~5%;較佳係兩親媒性脂質、固醇類、陽離子性脂質、及PEG脂質之脂質組成以莫耳量計,兩親媒性脂質為10~25%、固醇類為10~55%、陽離子性脂質為40~65%、PEG脂質為1~5%;更佳係兩親媒性脂質、固醇類、陽離子性脂質、及PEG脂質之脂質組成以莫耳量計,兩親媒性脂質為10~22.5%、固醇類為15~55%、陽離子性脂質為40~65%、PEG脂質為1~5%。又,於上述脂質組成中PEG脂質之比例以莫耳量計,更佳為1~3%,進一步更佳為1~2%,進一步更佳為1.2~2%,進一步更佳為1.25~2%,進一步更佳為1.3~2%,進一步更佳為1.5~2%。又,於上述脂質組成中總脂質重量對核酸重量之比率並不特別被限定,但可為15~30,較佳為15~25,更佳為15~22.5,進一步更佳為17.5~22.5。
使用碳酸3-二甲基胺基丙酯(9Z,12Z)-二十八碳-19,22-二烯-11-基酯、或二乙酸(7R,9Z,26Z,29R)-18-({[3-(二甲基胺基)丙氧基]羰基}氧基)三十五碳-9,26-二烯-7,29-二基酯作為陽離子性脂質之情形,兩親媒性脂質、固醇類、陽離子性脂質、及PEG脂質之脂質組成雖未特別被限定,但例如以莫耳量計,兩親媒性脂質為5~25%、固醇類為10~55%、陽離子性脂質為40~65%、PEG脂質為1~5%;較佳係兩親媒性脂質為5~15%、固醇類為20~55%、陽離子性脂質為40~65%、PEG脂質為1~5%;更佳係兩親媒性脂質、固醇類、陽離子性脂質、及PEG脂質之脂質組成以莫耳量計,兩親媒性脂質為5~15%、固醇類為35~50%、陽離子性脂質為40~55%、PEG脂質為1~3%;進一步更佳係兩親媒性脂質、固醇類、陽離子性脂質、及PEG脂質之脂質組成以莫耳量計,兩親媒性脂質為10~15%、固醇類為35~45%、陽離子性脂質為40~50%、PEG脂質為1~2.5%;進一步更佳係兩親媒性脂質、固醇類、陽離子性脂質、及PEG脂質之脂質組成以莫耳量計,兩親媒性脂質為10~15%、固醇類為35~45%、陽離子性脂質為40~50%、PEG脂質為1~2%。於上述脂質組成中PEG脂質進一步更佳為1.2~2%,進一步更佳為1.25~2%,進一步更佳為1.3~2%,進一步更佳為1.5~2%。於上述脂質組成中總脂質重量對核酸重量之比率並不特別被限定,但可為15~30,較佳為15~25,更佳為15~22.5,進一步更佳為17.5~22.5。
使用乙酸(7R,9Z)-18-({[3-(二甲基胺基)丙基氧基]羰基}氧基)二十八碳-9-烯-7-基酯作為陽離子性脂質之情形,兩親媒性脂質、固醇類、陽離子性脂質、及PEG脂質之脂質組成雖未特別被限定,但例如以莫耳量計,兩親媒性脂質為5~25%、固醇類為10~55%、陽離子性脂質為40~65%、PEG脂質為1~5%;較佳係兩親媒性脂質為10~25%、固醇類為10~50%、陽離子性脂質為40~65%、PEG脂質為1~3%;更佳係兩親媒性脂質、固醇類、陽離子性脂質、及PEG脂質之脂質組成以莫耳量計,兩親媒性脂質為10~25%、固醇類為10~45%、陽離子性脂質為42.5~65%、PEG脂質為1~2.5%;進一步更佳係兩親媒性脂質、固醇類、陽離子性脂質、及PEG脂質之脂質組成以莫耳量計,兩親媒性脂質為15~22.5%、固醇類為15~40%、陽離子性脂質為45~65%、PEG脂質為1~2%;進一步更佳係兩親媒性脂質、固醇類、陽離子性脂質、及PEG脂質之脂質組成以莫耳量計,兩親媒性脂質為17.5~22.5%、固醇類為15~40%、陽離子性脂質為45~65%、PEG脂質為1~2%。於上述脂質組成中PEG脂質進一步更佳為1.2~2%,進一步更佳為1.25~2%,進一步更佳為1.3~2%,進一步更佳為1.5~2%。於上述脂質組成中總脂質重量對核酸重量之比率並不特別被限定,但可為15~30,較佳為15~25,進一步更佳為15~22.5,進一步更佳為17.5~22.5。
就本發明中之具體的脂質之組合而言,可組合作為兩親媒性脂質的二硬脂醯基磷脂醯膽鹼、二油醯基磷脂醯膽鹼、或二油醯基磷酯醯乙醇胺、作為固醇類的膽固醇、作為陽離子性脂質的二乙酸(7R,9Z,26Z,29R)-18-({[3-(二甲基胺基)丙氧基]羰基}氧基)三十五碳-9,26-二烯-7,29-二基酯、碳酸3-二甲基胺基丙酯(9Z,12Z)-二十八碳-19,22-二烯-11-基酯、或乙酸(7R,9Z)-18-({[3-(二甲基胺基)丙基氧基]羰基}氧基)二十八碳-9-烯-7-基酯、作為PEG脂質的1,2-二肉豆蔻醯基-sn-甘油甲氧基聚乙二醇或N-[甲氧基聚(乙二醇)2000]胺甲醯基]-1,2-二肉豆蔻基氧基丙基-3-胺而使用。又,較佳為使用作為兩親媒脂質的二硬脂醯基磷脂醯膽鹼、或二油醯基磷酯醯乙醇胺、作為固醇類的膽固醇、作為陽離子性脂質的二乙酸(7R,9Z,26Z,29R)-18-({[3-(二甲基胺基)丙氧基]羰基}氧基)三十五碳-9,26-二烯-7,29-二基酯、或乙酸(7R,9Z)-18-({[3-(二甲基胺基)丙基氧基]羰基}氧基)二十八碳-9-烯-7-基酯、作為PEG脂質的1,2-二肉豆蔻醯基-sn-甘油甲氧基聚乙二醇的脂質之組合。就本發明中之具體的脂質之組合而言,更佳係作為兩親媒脂質的二硬脂醯基磷脂醯膽鹼、作為固醇類的膽固醇、作為陽離子性脂質的二乙酸(7R,9Z,26Z,29R)-18-({[3-(二甲基胺基)丙氧基]羰基}氧基)三十五碳-9,26-二烯-7,29-二基酯、或乙酸(7R,9Z)-18-({[3-(二甲基胺基)丙基氧基]羰基}氧基)二十八碳-9-烯-7-基酯、作為PEG脂質的1,2-二肉豆蔻醯基-sn-甘油甲氧基聚乙二醇。
於本發明中,被封入脂質粒子的核酸為可使人類乳突病毒6型及/或11型的E6抗原及E7抗原表現者。被封入脂質粒子的核酸所表現之人類乳突病毒6型及/或11型的E6抗原與E7抗原,可為人類乳突病毒6型的E6抗原及E7抗原之融合蛋白、人類乳突病毒11型的E6抗原及E7抗原之融合蛋白、或人類乳突病毒6型的E6抗原及E7抗原與人類乳突病毒11型的E6抗原及E7抗原之融合蛋白質,於相鄰的抗原之間亦可包含蛋白酶切割序列。又,上述抗原可為與訊息肽之融合蛋白質,作為用以使上述抗原分泌於細胞外的訊息肽,可舉出IgE前導序列。訊息肽較佳係被融合在抗原的N末端側。例如,訊息肽與抗原之融合蛋白質為序列識別號17之胺基酸序列,序列識別號17之胺基酸序列的第1個~第18個之胺基酸序列為IgE前導序列之胺基酸序列。
將HPV6型的E6抗原的胺基酸序列示於序列識別號12。被封入脂質粒子的核酸,可為編碼包含與序列識別號12的胺基酸序列具有至少95%、較佳為至少96%、更佳為至少97%之同一性的胺基酸序列之HPV6型的E6抗原者。
將HPV6型的E7抗原的胺基酸序列示於序列識別號13。被封入脂質粒子的核酸,可為編碼包含與序列識別號13的胺基酸序列具有至少95%、較佳為至少96%、更佳為至少97%之同一性的胺基酸序列之HPV6型的E7抗原者。
將HPV11型的E6抗原的胺基酸序列示於序列識別號14。被封入脂質粒子的核酸,可為編碼包含與序列識別號14的胺基酸序列具有至少95%、較佳為至少96%、更佳為至少97%之同一性的胺基酸序列之HPV11型的E6抗原者。
將HPV11型的E7抗原的胺基酸序列示於序列識別號15。被封入脂質粒子的核酸,可為編碼包含與序列識別號15的胺基酸序列具有至少95%、較佳為至少96%、更佳為至少97%之同一性的胺基酸序列之HPV11型的E7抗原者。
將蛋白酶切割序列(弗林蛋白酶切割位點)的胺基酸序列示於序列識別號16。就蛋白酶切割序列而言,若為會藉由弗林蛋白酶蛋白而被切割之序列即可,可舉出例如R-X-K/R-R(R表示精胺酸,K表示離胺酸,X表示任意胺基酸)所表示的序列等(J. Biol. Chem. 1992, 267, 16396;J. Biol. Chem. 1991, 266, 12127)。
將HPV6型的E6抗原及E7抗原之融合蛋白的胺基酸序列示於序列識別號17。被封入脂質粒子的核酸,可為編碼包含與序列識別號17的胺基酸序列具有至少95%、較佳為至少96%、更佳為至少97%之同一性的胺基酸序列之HPV6型的E6抗原及E7抗原之融合蛋白者。
將HPV11型的E6抗原及E7抗原之融合蛋白的胺基酸序列示於序列識別號18。被封入脂質粒子的核酸,可為編碼包含與序列識別號18的胺基酸序列具有至少95%、較佳為至少96%、更佳為至少97%之同一性的胺基酸序列之HPV11型的E6抗原及E7抗原之融合蛋白者。
將HPV6型的E6抗原及E7抗原與HPV11型的E6抗原及E7抗原之融合蛋白的胺基酸序列示於序列識別號19。被封入脂質粒子的核酸,可為編碼包含與序列識別號19的胺基酸序列具有至少95%、較佳為至少96%、更佳為至少97%之同一性的胺基酸序列之HPV6型的E6抗原及E7抗原與HPV11型的E6抗原及E7抗原之融合蛋白者。
所謂胺基酸序列的同一性(identity),係以對應之胺基酸完全一致的胺基酸為相同胺基酸,並將相對於全長序列而言之胺基酸的一致比例進行數值化而成者。本發明中之序列的同一性係使用序列解析軟體之GENETYX-SV/RC(GENETYX股份有限公司製)所算出者,此演算法為該技術領域中所通常使用者。被封入本發明之脂質粒子的核酸所編碼的胺基酸,只要保持與序列識別號12-20一定以上的同一性,則亦可發生胺基酸之變異(取代)、缺失、插入及/或附加。
被封入本發明之脂質粒子的核酸所編碼的胺基酸,係保持上述之序列同一性,且可在序列識別號12-20之胺基酸序列中,於數處(較佳為5處以下,更佳為3、2或1處)中,每1處有數個(較佳為10個以下,更佳為7個以下,進一步較佳為5、4、3、2或1個)胺基酸取代、缺失、插入及/或附加。
可使人類乳突病毒6型的E6抗原及E7抗原及/或11型的E6抗原及E7抗原表現之核酸,可為包含帽結構(Cap)、5’非轉譯區(5’-UTR)、前導序列(leader sequence)、E6之轉譯區、蛋白酶切割序列(弗林蛋白酶切割位點)、E7之轉譯區、3’非轉譯區(3’-UTR)及多腺苷酸尾部(polyA)的mRNA。帽結構(Cap)存在於許多真核生物之mRNA的5’末端,且係具有7-甲基鳥苷結構之部位。就帽結構而言,可舉出例如使用cap0、cap1、cap2、ARCA(抗反向帽類似物(Anti-Reverse Cap Analog))之情形的帽結構等,該帽結構係如下述結構式所示。
[式中,Base表示未修飾或經修飾之任意核酸鹼基,RNA表示任意聚核苷酸。]
[式中,Base表示未修飾或經修飾之任意核酸鹼基,RNA表示任意聚核苷酸。]
[式中,Base表示未修飾或經修飾之任意核酸鹼基,RNA表示任意聚核苷酸。]
[式中,Base表示未修飾或經修飾之任意核酸鹼基,RNA表示任意聚核苷酸。]
就本發明之mRNA的帽結構而言,較佳為cap0、或cap1,更佳為cap1。
5’非轉譯區及3’非轉譯區之序列並不特別被限定,但可使用α-球蛋白、β-球蛋白、肌動蛋白或GAPDH等之安定的mRNA之非轉譯區。就本發明之脂質粒子所封入之核酸所使用的非轉譯區而言,較佳為β-球蛋白之非轉譯區,例如就β-球蛋白之5’非轉譯區而言,可使用包含序列識別號2之序列中的鹼基編號15~64之序列,就β-球蛋白之3’非轉譯區而言,可使用包含序列識別號2之序列中的鹼基編號887~1018之序列。
5’非轉譯區(5’-UTR)之序列,係例如序列識別號5之序列中的鹼基編號1~70之序列、序列識別號8之序列中的鹼基編號1~70之序列、及序列識別號11之序列中的鹼基編號1~70之序列。
前導序列(leader sequence)之序列,係例如序列識別號5之序列中的鹼基編號71~124之序列、序列識別號8之序列中的鹼基編號71~124之序列、及序列識別號11之序列中的鹼基編號71~124之序列。
E6之轉譯區之序列,係可表現E6抗原的胺基酸序列全部或一部分之序列,亦可包含起始密碼子及/或終止密碼子,例如為序列識別號5之序列中的鹼基編號125~571之序列、序列識別號8之序列中的鹼基編號125~571之序列、及序列識別號11之序列中的鹼基編號125~571、及905~1351之序列。
蛋白酶切割序列(弗林蛋白酶切割位點)之序列,係例如序列識別號5之序列中的鹼基編號572~592之序列、序列識別號8之序列中的鹼基編號572~592之序列、及序列識別號11之序列中的鹼基編號572~592、884~904、及1352~1372之序列。
E7之轉譯區之序列,係可表現E7抗原的胺基酸序列全部或一部分之序列,亦可包含起始密碼子及/或終止密碼子,例如為序列識別號5之序列中的鹼基編號593~886之序列、序列識別號8之序列中的鹼基編號593~886之序列、及序列識別號11之序列中的鹼基編號593~883、及1373~1666之序列。
3’非轉譯區(3’-UTR)之序列,係例如序列識別號5之序列中的鹼基編號887~1018之序列、序列識別號8之序列中的鹼基編號887~1018之序列、及序列識別號11之序列中的鹼基編號1667~1798之序列。
多腺苷酸尾部(polyA)之序列,係例如序列識別號5之序列中的鹼基編號1019~1118之序列、序列識別號8之序列中的鹼基編號1019~1118之序列、及序列識別號11之序列中的鹼基編號1799~1898之序列。
於帽結構(Cap)、5’非轉譯區(5’-UTR)、前導序列(leader sequence)、E6之轉譯區、蛋白酶切割序列(弗林蛋白酶切割位點)、E7之轉譯區、3’非轉譯區(3’-UTR)及多腺苷酸尾部(polyA)之序列,亦可進行改變,可使HPV6型的E6抗原及E7抗原表現之核酸之序列,可包含與序列識別號5之序列具有至少90%、較佳為至少95%、更佳為至少97%之同一性的核苷酸序列。又,可使HPV11型的E6抗原及E7抗原表現之核酸之序列,可包含與序列識別號8之序列具有至少90%、較佳為至少95%、更佳為至少97%之同一性的核苷酸序列。再者,可使HPV6型及11型的E6抗原及E7抗原表現之核酸之序列,可包含與序列識別號11之序列具有至少90%、較佳為至少95%、更佳為至少97%之同一性的核苷酸序列。
多腺苷酸尾部之長度並不特別被限定,但例如為10~250鹼基長,較佳為15~120鹼基長,進一步較佳為15~115鹼基長,特佳為20~110鹼基長。
本發明之mRNA為包含帽結構(Cap)、5’非轉譯區(5’-UTR)、E6之轉譯區、蛋白酶切割序列(弗林蛋白酶切割位點)、E7之轉譯區及3’非轉譯區(3’-UTR)之序列,亦可為下述mRNA,該mRNA之包含帽結構(Cap)、5’非轉譯區(5’-UTR)、E6之轉譯區、蛋白酶切割序列(弗林蛋白酶切割位點)、E7之轉譯區及3’非轉譯區(3’-UTR)之部分係包含下述核苷酸序列:與序列識別號5的第1個至第1018個、序列識別號8的第1個至第1018個之序列或序列識別號11的第1個至第1798個之任一者中記載之序列具有至少90%、較佳為至少95%、更佳為至少97%之同一性的核苷酸序列。
被封入脂質粒子的核酸,若為可使人類乳突病毒6型及/或11型的E6抗原及E7抗原表現之核酸,則可為任何形態。可舉出例如單股DNA、單股RNA(例如mRNA)、混合有DNA與RNA之單股聚核苷酸、雙股DNA、雙股RNA、DNA-RNA之雜合聚核苷酸、包含混合有DNA與RNA之2種聚核苷酸的雙股聚核苷酸等,但較佳為mRNA。
構成被封入脂質粒子的核酸之核苷酸可為天然型者,亦可為修飾核苷酸,但可包含至少1個修飾核苷酸。
修飾核苷酸可為鹼基、糖及磷酸二酯鍵之任一部分經修飾者。修飾部位可為1處,亦可為2處以上。
就鹼基的修飾之例而言,可舉出胞嘧啶的5-甲基化、5-氟化、N4-甲基化、尿嘧啶的5-甲基化(胸腺嘧碇)、5-氟化、腺嘌呤的N6-甲基化、鳥糞嘌呤的N2-甲基化等。
就糖的修飾之例而言,可舉出D-核呋喃糖的2’-O-甲基化。
就磷酸二酯鍵的修飾之例而言,可舉出硫代磷酸酯(phosphorothioate)鍵。
修飾核苷酸較佳為鹼基部分經修飾者,可為例如5位經取代之嘧啶核苷酸、1位可取代之假尿苷,具體而言可例示5-甲基胞苷、5-甲氧基尿苷、5-甲基尿苷、假尿苷、1-烷基假尿苷。又,就1-烷基假尿苷而言,可為1-(C1-C6烷基)假尿苷,較佳為1-甲基假尿苷或1-乙基假尿苷。作為修飾核苷酸,更佳可舉出5-甲基胞苷、5-甲基尿苷、及1-甲基假尿苷。作為修飾核苷酸,特佳可舉出5-甲基胞苷及5-甲基尿苷之組合、或5-甲基胞苷及1-甲基假尿苷之組合。
本發明之可使人類乳突病毒(例如HPV6型、HPV11型)的E6抗原及E7抗原表現之核酸,可由具有所期望之鹼基序列的DNA藉由體外轉錄反應來製造。體外轉錄所需要的酵素、緩衝液、及核苷-5’-三磷酸混合物(腺苷-5’-三磷酸(ATP)、鳥苷-5’-三磷酸(GTP)、胞苷-5’-三磷酸(CTP)及尿苷-5’-三磷酸(UTP))已有市售(AmpliScribeT7高產率轉錄套組(Epicentre)、mMESSAGE mMACHINE T7 Ultra套組(Life thechnologies)等)。為了製造單股RNA而使用的DNA,可使用經選殖化之DNA,例如質體DNA或DNA片段。質體DNA或DNA片段可使用市售者,還可藉由該領域中一般所知悉的方法來製造(例如,Sambrook, J. et al., Molecular Cloning a Laboratory Manual second edition (1989);Rashtchian, A., Current Opinion in Biotechnology, 1995, 6(1), 30-36;Gibson D. G. et al., Science, 2008, 319(5867), 1215-1220中記載之方法等)。
為了得到安定性及/或安全性經提升的mRNA,亦可藉由在體外轉錄反應中,將一部分或全部的未修飾核苷-5’-三磷酸取代為修飾核苷-5’-三磷酸,而將mRNA之中一部分或全部的未修飾核苷酸取代為修飾核苷酸(Kormann, M., Nature Biotechnology, 2011, 29, 154-157.)。
為了得到安定性及/或安全性經提升的mRNA,可藉由在體外轉錄反應後使用戴帽酵素(capping enzyme)的方法,而對mRNA之5’末端導入帽結構(上述之Cap0結構)。又,可進一步藉由使2’-O-甲基轉移酶對具有Cap0之mRNA作用的方法,而將Cap0變換為Cap1。戴帽酵素及2’-O-甲基轉移酶可使用市售製品(例如,牛痘戴帽系統(Vaccinia Capping System),M2080;mRNA帽2’-O-甲基轉移酶(mRNA Cap 2’-O-Methyltransferase),M0366,皆為New England Biolab製)。使用市售製品之情形,可按照附屬於製品的步驟準則而製造具有帽結構之mRNA。
mRNA之5’末端的帽結構,亦可藉由與使用酵素者不同的方法來導入。例如,可藉由在體外轉錄反應中加入ARCA或CleanCap(註冊商標),而對mRNA導入ARCA所具有的帽類似物(Cap analog)之結構、或源自CleanCap(註冊商標)之Cap1結構。ARCA及CleanCap(註冊商標)可使用市售製品(ARCA,N-7003;CleanCap試劑AG,N-7113,皆為TriLink BioTechnologies製)。使用市售製品之情形,可按照附屬於製品的步驟準則而製造具有帽結構之mRNA。
於本發明中,被封入脂質粒子的核酸亦可藉由脫鹽、HPLC(逆相、凝膠過濾、離子交換、親和性)、PAGE、超過濾等方法進行精製。藉由精製處理而將雜質去除,因此可減少投予核酸之生物體中的促發炎細胞激素(proinflammatory cytokine)的產生。
本發明之封入核酸的脂質粒子可藉由薄膜法、逆相蒸發法、乙醇注入法、醚注入法、脫水-再水合法、界面活性劑透析法、水合法、凍融法等方法來製造。例如,可藉由國際公開公報第2015/005253號中記載之方法來製造封入核酸的脂質粒子。本發明之封入核酸的脂質粒子亦可藉由在微流道內混合核酸溶液與脂質溶液而製造。例如,可使用Precision Nanosystems公司的NanoAssemblr(註冊商標),且按照附屬的步驟準則中記載之方法製造。
本發明之粒子可為平均粒徑為30~300nm,較佳為30~200nm,更佳為30~100nm。平均粒徑可藉由使用仄他電位/粒度分析儀(Zeta Potential/ Particle Sizer) NICOMP(註冊商標) 380ZLS(PARTICLE SIZING SYSTEMS)等機器,基於動態光散射法等原理來測定體積平均粒徑而得到。
本發明之粒子可為了製造用以預防及/或治療人類乳突病毒6型及/或11型感染所導致的疾病(復發性呼吸道乳突瘤病、尖頭濕疣等)之組成物而使用。
可使用本發明之粒子而使人類乳突病毒6型及/或11型的E6抗原及E7抗原在體內或體外表現。因此,本發明提供一種使人類乳突病毒6型及/或11型的E6抗原及E7抗原在體外表現之方法,其包含將含有上述粒子之組成物導入細胞。又,本發明亦提供一種使人類乳突病毒6型及/或11型的E6抗原及E7抗原在體內表現之方法,其包含對哺乳動物投予含有上述粒子之組成物。可藉由使人類乳突病毒6型及/或11型的E6抗原及E7抗原在體內表現,而誘導對人類乳突病毒6型及/或11型的免疫反應。作為其結果,可預防及/或治療人類乳突病毒6型及/或11型的感染。因此,本發明提供一種誘導對人類乳突病毒6型及/或11型的免疫反應之方法,其包含對哺乳動物投予含有上述粒子之組成物。又,本發明提供一種預防及/或治療人類乳突病毒6型及/或11型的感染之方法,其包含對哺乳動物投予含有上述粒子之組成物。
本發明之粒子可利用來作為醫藥,還可利用來作為實驗用試藥。本發明之粒子通常被添加於水、緩衝液、生理食鹽水等載體,且將此摻合物(組成物)導入細胞(體外)、或可對哺乳動物投予(體內)。於對哺乳動物投予之情形,載體可為藥學上所容許之載體(例如生理食鹽水)。又,本發明之粒子亦可製劑化為以脂肪、脂肪油、羊毛脂、凡士林、石蠟、蠟、樹脂、塑膠、二醇類、高級醇、甘油、水、乳化劑、懸浮劑等作為基劑原料之乳霜、糊劑、軟膏、凝膠、乳液等劑型。
本發明之粒子可對人類、小鼠、大鼠、倉鼠、天竺鼠、兔、豬、猴、貓、犬、馬、山羊、綿羊、牛等哺乳動物經口投予、或者藉由肌肉內投予、靜脈內投予、直腸內投予、經皮投予、經黏膜投予、皮下投予、皮內投予等方法而進行非經口投予。
於將本發明之粒子對人類進行投予之情形,可為例如成人每1次,就mRAN之重量而言以約0.001~1mg、較佳為0.01~0.2mg的投予量進行1次或數次肌肉內注射、皮下注射、皮內注射、點滴靜脈注射、或靜脈注射,但其投予量及投予次數可依據疾病的種類、症狀、年齡、投予方法等而適宜變更。
作為實驗試藥使用之情形,可將本發明之粒子導入欲使人類乳突病毒6型及/或11型的E6抗原及E7抗原表現之細胞(例如HEK293細胞及其衍生細胞(HEK293T細胞、FreeStyle 293細胞或Expi293細胞)、CHO細胞、C2C12小鼠肌原細胞、永生化小鼠樹突細胞(MutuDC1940)),使人類乳突病毒6型及/或11型的E6抗原及E7抗原在體外表現。人類乳突病毒6型及/或11型的E6抗原及E7抗原之表現,可藉由以西方印漬術檢測試樣中之人類乳突病毒6型及/或11型的E6抗原及E7抗原蛋白質、或以質譜分析法檢測對人類乳突病毒6型及/或11型的E6抗原及E7抗原為特異性之肽片段而進行解析。
於本發明中,所謂「治療」係意指於病毒或細菌等所導致的感染症、或者以該感染為原因的疾病(例如復發性呼吸道乳突瘤病、尖頭濕疣、癌前病變或癌等)已發病之患者,此等疾病之臨床症狀的恢復、緩解、緩和及/或惡化的延遲。
於本發明中,所謂「預防」係意指減少病毒或細菌等所導致的感染症所致之疾病的發病率。預防包含病毒或細菌等所導致的感染症所致之疾病進行之風險的降低、或者彼等疾病之重症化的減少。本發明之粒子因誘導防禦免疫反應,而對上述疾病之預防及/或治療顯示效果。
[實施例]
以下,藉由實施例而具體地說明本發明。此外,此等實施例係用以說明本發明,而非限定本發明之範圍。
[實施例1]HPV6 E6-E7融合mRNA-001之調製
(1)HPV6 E6-E7融合之體外轉錄(IVT)用的模板DNA之製作
為了製作用於體外轉錄(IVT)之模板DNA,而構築質體。製作導入有包含GCTAGC(NheI位點)、T7啟動子序列、人類β-球蛋白之5’-UTR序列、KOZAK序列、IgE前導序列-HPV6型E6-弗林蛋白酶切割位點-HPV6型E7之轉譯區、人類β-球蛋白之3’-UTR序列、多腺苷酸尾部及ACTAGT(SpeI位點)依序連結而成之序列的DNA片段(序列識別號1)之質體(pMA-HPV6)。對溶解有經限制酵素SpeI處理之該質體8 ng的無核酸酶水(566.4μL)加入KOD-Plus- Ver.2用10×緩衝液(80μL,東洋紡(股)型錄# KOD-211)、2mM dNTP mix(80μL,東洋紡(股)型錄# KOD-211)、25mM MgSO
4(48μL,東洋紡(股)型錄# KOD-211)、50μM正向引子(4.8μL,序列識別號2)、50μM反向引子(4.8μL,序列識別號3)、KOD Plus聚合酶(16μL,東洋紡(股)型錄# KOD-211),在98℃保溫1分鐘後,將98℃5秒鐘、55℃15秒鐘、68℃2分鐘實施20循環,進而在68℃保溫1分鐘,將HPV6 E6-E7融合DNA擴增。反應後以Wizard SV凝膠及PCR純化系統(Promega型錄# A9281)將模板DNA(序列識別號4)進行精製。
(2)利用體外轉錄之HPV6 E6-E7融合mRNA-001之調製
將實施例1-(1)中所得之479μg/mL模板DNA(57μL)、100mM CleanCap AG(55μL,TriLink型錄# T-7113)、100mM ATP(55μL,Hongene型錄# R1331)、100mM GTP(55μL,Hongene型錄# R2331)、100mM 5-甲基胞苷-5’-三磷酸(55μL,Hongene型錄# R3-029)、100mM 5-甲基尿苷-5’-三磷酸(55μL)、無核酸酶水(438μL,Qiagen型錄# 129114)、T7轉錄5×緩衝液(220μL,Promega型錄# P140X)、Enzyme mix,T7 RNA聚合酶(110μL,Promega型錄# P137X)混合,在37℃保溫4小時。混合RQ1無RNase之DNase(27.5μL,Promega型錄# M6101),在37℃保溫15分鐘。混合8M LiCl溶液(550μL,Sigma-Aldrich型錄# L7026),在-20℃靜置整夜。離心分離(4℃、4000×g、30分鐘)後,將上清液廢棄,加入70%乙醇,離心分離(4℃、4000×g、10分鐘)後,將上清液廢棄並風乾。將所得之殘渣溶解於無核酸酶水後,使用RNeasy Maxi套組(Qiagen型錄# 75162)而如附屬之手冊地進行精製。將所得之析出液(3mL,以UV換算為4809μg)與無核酸酶水(88μL)、rApid鹼性磷酸酶(Roche型錄# 04 898 141 001)之緩衝液(450μL)與酵素(962μL)混合,在37℃保溫30分鐘。使用RNeasy Maxi套組而如附屬之手冊地進行精製,藉以得到目的之mRNA(3mL,以UV換算為4.1mg)。
所得之mRNA具有序列識別號5之序列。藉由LabChip GX Touch Standard RNA試劑套組(PerkinElmer型錄#CLS960010)進行分析,確認為目的之長度。
[實施例2]HPV11 E6-E7融合mRNA-002之調製
(1)HPV11 E6-E7融合之IVT用的模板DNA之製作
為了製作用於IVT模板之模板DNA,而構築質體。製作導入有包含GCTAGC(NheI位點)、T7啟動子序列、人類β-球蛋白之5’-UTR序列、KOZAK序列、IgE前導序列-HPV11型E6-弗林蛋白酶切割位點-HPV11型E7之轉譯區、人類β-球蛋白之3’-UTR序列、多腺苷酸尾部及ACTAGT(SpeI位點)依序連結而成之序列的DNA片段(序列識別號6)之質體(pMA-HPV11)。對溶解有經限制酵素SpeI處理之該質體8 ng的無核酸酶水(566.4μL)加入KOD-Plus- Ver.2用10×緩衝液(80μL,東洋紡(股)型錄# KOD-211)、2mM dNTP mix(80μL,東洋紡(股)型錄# KOD-211)、25mM MgSO
4(48μL,東洋紡(股)型錄# KOD-211)、50μM正向引子(4.8μL,序列識別號2)、50μM反向引子(4.8μL,序列識別號3)、KOD Plus聚合酶(16μL,東洋紡(股)型錄# KOD-211),在98℃保溫1分鐘後,將98℃5秒鐘、55℃15秒鐘、68℃2分鐘實施20循環,進而在68℃保溫1分鐘,將HPV11 E6-E7 DNA擴增。反應後以Wizard SV凝膠及PCR純化系統(Promega型錄# A9281)將模板DNA(序列識別號7)進行精製。
(2)利用體外轉錄之HPV11 E6-E7融合mRNA-002之調製
將實施例2-(1)中所得之467μg/mL模板DNA(59μL)、100mM CleanCap AG(55μL,TriLink型錄# T-7113)、100mM ATP(55μL,Hongene型錄# R1331)、100mM GTP(55μL,Hongene型錄# R2331)、100mM 5-甲基胞苷-5’-三磷酸(55μL,Hongene型錄# R3-029)、100mM 5-甲基尿苷-5’-三磷酸(55μL)、無核酸酶水(436μL,Qiagen型錄# 129114)、T7轉錄5×緩衝液(220μL,Promega型錄# P140X)、Enzyme mix,T7 RNA聚合酶(110μL,Promega型錄# P137X)混合,在37℃保溫4小時。混合RQ1無RNase之DNase(27.5μL,Promega型錄# M6101),在37℃保溫15分鐘。混合8M LiCl溶液(550μL,Sigma-Aldrich型錄# L7026),在-20℃靜置整夜。離心分離(4℃、4000×g、30分鐘)後,將上清液廢棄,加入70%乙醇,離心分離(4℃、4000×g、10分鐘)後,將上清液廢棄並風乾。將所得之殘渣溶解於無核酸酶水後,使用RNeasy Maxi套組(Qiagen型錄# 75162)而如附屬之手冊地進行精製。將所得之析出液(3mL,以UV換算為4769μg)與無核酸酶水(96μL)、rApid鹼性磷酸酶(Roche型錄# 04 898 141 001)之緩衝液(450μL)與酵素(954μL)混合,在37℃保溫30分鐘。使用RNeasy Maxi套組而如附屬之手冊地進行精製,藉以得到目的之mRNA(3mL,以UV換算為3.9mg)。
所得之mRNA具有序列識別號8之序列。藉由LabChip GX Touch Standard RNA試劑套組(PerkinElmer型錄#CLS960010)進行分析,確認為目的之長度。
[實施例3]HPV6 E6-E7 HPV11 E6-E7融合mRNA-003之調製
(1)HPV6 E6-E7 HPV11 E6-E7融合之IVT用的模板DNA之製作
為了製作用於IVT模板之模板DNA,而構築質體。製作導入有包含GCTAGC(NheI位點)、T7啟動子序列、人類β-球蛋白之5’-UTR序列、KOZAK序列、IgE前導序列-HPV6型E6-弗林蛋白酶切割位點-HPV6型E7-弗林蛋白酶切割位點-HPV11型E6-弗林蛋白酶切割位點-HPV11型E7之轉譯區、β-球蛋白之3’-UTR序列、多腺苷酸尾部及ACTAGT(SpeI位點)依序連結而成之序列的DNA片段(序列識別號9)之質體(pMA-HPV6_HPV11)。對溶解有經限制酵素SpeI處理之該質體8 ng的無核酸酶水(566.4μL)加入KOD-Plus- Ver.2用10×緩衝液(80μL,東洋紡(股)型錄# KOD-211)、2mM dNTP mix(80μL,東洋紡(股)型錄# KOD-211)、25mM MgSO
4(48μL,東洋紡(股)型錄# KOD-211)、50μM正向引子(4.8μL,序列識別號2)、50μM反向引子(4.8μL,序列識別號3)、KOD Plus聚合酶(16μL,東洋紡(股)型錄# KOD-211),在98℃保溫1分鐘後,將98℃5秒鐘、55℃15秒鐘、68℃2分鐘實施20循環,進而在68℃保溫1分鐘,將HPV6 E6-E7 HPV11 E6-E7 DNA擴增。反應後以Wizard SV凝膠及PCR純化系統(Promega型錄# A9281)將模板DNA(序列識別號10)進行精製。
(2)利用體外轉錄之HPV6 E6-E7 HPV11 E6-E7融合mRNA-003之調製
將實施例3-(1)中所得之413μg/mL模板DNA(67μL)、100mM CleanCap AG(55μL,TriLink型錄# T-7113)、100mM ATP(55μL,Hongene型錄# R1331)、100mM GTP(55μL,Hongene型錄# R2331)、100mM 5-甲基胞苷-5’-三磷酸(55μL,Hongene型錄# R3-029)、100mM 5-甲基尿苷-5’-三磷酸(55μL)、無核酸酶水(428μL,Qiagen型錄# 129114)、T7轉錄5×緩衝液(220μL,Promega型錄# P140X)、Enzyme mix,T7 RNA聚合酶(110μL,Promega型錄# P137X)混合,在37℃保溫4小時。混合RQ1無RNase之DNase(27.5μL,Promega型錄# M6101),在37℃保溫15分鐘。混合8M LiCl溶液(550μL,Sigma-Aldrich型錄# L7026),在-20℃靜置整夜。離心分離(4℃、4000×g、30分鐘)後,將上清液廢棄,加入70%乙醇,離心分離(4℃、4000×g、10分鐘)後,將上清液廢棄並風乾。將所得之殘渣溶解於無核酸酶水後,使用RNeasy Maxi套組(Qiagen型錄# 75162)而如附屬之手冊地進行精製。將所得之析出液(3mL,以UV換算為4345μg)與無核酸酶水(181μL)、rApid鹼性磷酸酶(Roche型錄# 04 898 141 001)之緩衝液(450μL)與酵素(869μL)混合,在37℃保溫30分鐘。使用RNeasy Maxi套組而如附屬之手冊地進行精製,藉以得到目的之mRNA(3mL,以UV換算為3.8mg)。
所得之mRNA具有序列識別號11之序列。藉由LabChip GX Touch Standard RNA試劑套組(PerkinElmer型錄#CLS960010)進行分析,確認為目的之長度。
[實施例4~12]使用實施例1~3記載之mRNA的封入mRNA的核酸脂質粒子之調製
(1)封入mRNA的核酸脂質粒子之調製
將二硬脂醯基磷脂醯膽鹼(1,2-Distearoyl-sn-glycero-3-phosphocholine:以下標記為DSPC,NOF CORPORATION)、膽固醇(Cholesterol:以下標記為Chol,Sigma-Aldrich,Inc.)、乙酸(7R,9Z)-18-({[3-(二甲基胺基)丙基氧基]羰基}氧基)二十八碳-9-烯-7-基酯(WO2015/005253的實施例28中記載之化合物)(以下標記為LP)、及聚乙二醇分子量為約2000的1,2-二肉豆蔻醯基-sn-甘油甲氧基聚乙二醇(1,2-Dimyristoyl-sn-Glycero-3-Methoxypolyethylene Glycol,以下標記為PEG-DMG,NOF CORPORATION),以表1記載之莫耳比溶解於乙醇,使總脂質濃度為5mM。
另一方面,將實施例1~3中得到的mRNA,以檸檬酸緩衝液(20mM檸檬酸鹽緩衝液,pH4.0)進行稀釋調製。
使用NanoAssemblr BenchTop (Precision Nanosystems Inc.),將上述之脂質溶液與mRNA溶液,以相對於mRNA而言之總脂質重量比為表1中記載之值且其體積比為1:3之方式,在微流道內混合,得到核酸脂質粒子之粗分散液。藉由將核酸脂質粒子之分散液以約25~50倍量的緩衝液透析(Float-A-Lyzer G2,MWCO:1,000kD,Spectra/Por)12~18小時,而進行乙醇去除,得到經精製之封入mRNA的核酸脂質粒子之分散液。
此外,LP係按照WO2015/005253的實施例28中記載之方法合成。
(2)封入mRNA的核酸脂質粒子之特性評價
進行所調製的包含核酸脂質粒子之分散液之特性評價。針對各個特性評價的方法進行說明。
(2-1)mRNA的封入率
mRNA的封入率係使用Quant-iT RiboGreen RNA分析套組(Invitrogen),根據所附文件來測定。
亦即,於0.015% Triton X-100界面活性劑存在下及不存在下,定量核酸脂質粒子之分散液中的mRNA,藉由下式而算出封入率。
{([於界面活性劑存在下的mRNA量]-[於界面活性劑不存在下的mRNA量])/[於界面活性劑存在下的mRNA量]}×100(%)
(2-2)mRNA與脂質之比率
以下述之任一者之方法測定核酸脂質粒子之分散液中的mRNA量。
以1.0% Triton X-100稀釋調製核酸脂質粒子分散液,以逆相層析法測定(系統:Agilent 1260series,管柱:Bioshell A400 Protein C4(10cm×4.6mm,3.4μm)(SUPELCO),緩衝液A:0.1M乙酸三乙胺(pH7.0),緩衝液B:乙腈,(B%):5-50%(0-15分鐘),流速:1mL/分鐘,溫度:70℃,檢測:260nm)。
將核酸脂質粒子分散液稀釋溶解於90%甲醇,以紫外/可見光分光光度計(PerkinElmer公司製,LAMBDA™ 465)測定核酸脂質粒子中的mRNA量。藉由下式而算出mRNA濃度。
{[260nm下之吸光度]-[350nm下之吸光度]}×40×稀釋倍率(μg/mL)
以逆相層析法測定核酸脂質粒子之分散液中的各脂質量(系統:DIONEX UltiMate 3000,管柱:XSelect CSH C18(130Å,3.5μm,3.0mm×150mm)(Waters型錄# 186005263)、緩衝液A:0.2%甲酸、緩衝液B:0.2%甲酸、甲醇,(B%):75-100%(0-6分鐘)、100%(6-15分鐘),流速:0.45mL/分鐘,溫度:50℃,檢測:Corona CAD(帶電氣溶膠檢測器(Charged Aerosol Detector)))。
藉由下式而算出總脂質量對mRNA之比率。
[總脂質濃度]/[mRNA濃度](wt/wt)
(2-3)平均粒徑
核酸脂質粒子之粒徑係以仄他電位/粒度分析儀NICOMPTM 380ZLS(PARTICLE SIZING SYSTEMS)來測定。表中之平均粒徑表示體積平均粒徑,±以下表示偏差。
將特性評價的結果示於表2。
[表1]
mRNA | DSPC | Chol | LP | PEG-DMG | 脂質/mRNA (wt/wt) | |
實施例4 | 實施例1 | 17.5% | 26% | 55% | 1.5% | 20 |
實施例5 | 實施例2 | 17.5% | 26% | 55% | 1.5% | 20 |
實施例6 | 實施例3 | 17.5% | 26% | 55% | 1.5% | 20 |
實施例7 | 實施例1 | 17.5% | 21% | 60% | 1.5% | 20 |
實施例8 | 實施例2 | 17.5% | 21% | 60% | 1.5% | 20 |
實施例9 | 實施例3 | 17.5% | 21% | 60% | 1.5% | 20 |
實施例10 | 實施例1 | 22.5% | 16% | 60% | 1.5% | 20 |
實施例11 | 實施例2 | 22.5% | 16% | 60% | 1.5% | 20 |
實施例12 | 實施例3 | 22.5% | 16% | 60% | 1.5% | 20 |
[表2]
封入率 (%) | 粒徑 (nm) | |
實施例4 | 99 | 115±16 |
實施例5 | 99 | 111±32 |
實施例6 | 99 | 120±51 |
實施例7 | 99 | 119±36 |
實施例8 | 98 | 120±46 |
實施例9 | 98 | 128±51 |
實施例10 | 96 | 130±48 |
實施例11 | 96 | 128±35 |
實施例12 | 96 | 132±43 |
由以上結果明白:此等核酸脂質粒子係mRNA的95%以上被封入脂質粒子內,具有約110nm至約140nm之平均粒徑。
[試驗例1]
HPV基因型6E6E7疫苗抗原特異性T細胞細胞激素產生能力(圖1)
C57BL/6J小鼠係自CLEA Japan購入。動物的所有處置在異氟烷(isoflurane)的吸入麻醉下進行。
對6週齡之C57BL/6小鼠的腓腸肌內,每一匹以2週間隔投予以mRNA換算為5μg之封入mRNA的核酸脂質粒子2次。於最終投予起1週後採集脾臟,調製脾臟細胞。以HPV6E6池肽(JPT公司製,型錄# PM-HPV06-E6)或HPV11E6池肽(JPT公司製,型錄# PM-HPV11-E6)處理脾臟細胞,將培養48小時後的培養上清液進行2倍或30倍稀釋,以細胞激素ELISA法測定IFN-γ量。
[試驗例2]
HPV基因型11E6E7疫苗抗原特異性T細胞細胞激素產生能力(圖2)
對6週齡之C57BL/6小鼠的腓腸肌內,每一匹以2週間隔投予以mRNA換算為5μg之封入mRNA的核酸脂質粒子2次。於最終投予起1週後採集脾臟,調製脾臟細胞。以HPV6E6池肽(JPT公司製,型錄# PM-HPV06-E6)或HPV11E6池肽(JPT公司製,型錄# PM-HPV11-E6)處理脾臟細胞,將培養48小時後的培養上清液進行2倍或30倍稀釋,以細胞激素ELISA法測定IFN-γ量。使用30倍稀釋之培養上清液的IFN-γ量超過檢量線的檢測上限之情形,係將對上限值乘以稀釋倍率30倍而算出之值當作數據。
[試驗例3]
HPV基因型6E6E7-基因型11E6E7疫苗抗原特異性T細胞細胞激素產生能力(圖3)
對6週齡之C57BL/6小鼠的腓腸肌內,每一匹以2週間隔投予以mRNA換算為5μg之封入mRNA的核酸脂質粒子2次。於最終投予起1週後採集脾臟,調製脾臟細胞。以HPV6E6池肽(JPT公司製,型錄# PM-HPV06-E6)或HPV11E6池肽(JPT公司製,型錄# PM-HPV11-E6)處理脾臟細胞,將培養48小時後的培養上清液進行2倍或30倍稀釋,以細胞激素ELISA法測定IFN-γ量。使用30倍稀釋之培養上清液的IFN-γ量超過檢量線的檢測上限之情形,係將對上限值乘以稀釋倍率30倍而算出之值當作數據。
[試驗例1~3的結果]
(試驗例1的結果)
脂質構成比不同的封入mRNA的核酸脂質粒子實施例4、7、10之HPV6E6及HPV11E6特異性IFN-γ誘導水準
將實施例4、7、10的封入mRNA的核酸脂質粒子對C57BL/6小鼠進行肌肉內投予,於最終免疫起1週後,檢驗從脾臟細胞之HPV6E6及HPV11E6特異性T細胞細胞激素誘導水準。將結果示於圖1。相較於NC組,於任一封入mRNA的核酸脂質粒子投予組中都因HPV6E6池肽處理而IFN-γ產生被增強。又,對於HPV11E6池肽處理亦誘導出IFN-γ產生。
(試驗例2的結果)
脂質構成比不同的封入mRNA的核酸脂質粒子實施例5、8、11之HPV6E6及HPV11E6特異性IFN-γ誘導水準
將實施例5、8、11的封入mRNA的核酸脂質粒子對C57BL/6小鼠進行肌肉內投予,於最終免疫起1週後,檢驗從脾臟細胞之HPV6E6及HPV11E6特異性T細胞細胞激素誘導水準。將結果示於圖2。相較於NC組,於任一封入mRNA的核酸脂質粒子投予組中都因HPV11E6池肽處理而IFN-γ產生被增強。又,對於HPV6E6池肽處理亦誘導出IFN-γ產生。
(試驗例3的結果)
脂質構成比不同的封入mRNA的核酸脂質粒子實施例6、9、12之HPV6E6及HPV11E6特異性IFN-γ誘導水準
將實施例6、9、12的封入mRNA的核酸脂質粒子對C57BL/6小鼠進行肌肉內投予,於最終免疫起1週後,檢驗從脾臟細胞之HPV6E6及HPV11E6特異性T細胞細胞激素誘導水準。將結果示於圖3。相較於NC組,於任一封入mRNA的核酸脂質粒子投予組中都因HPV6E6池肽及HPV11E6池肽處理而誘導出IFN-γ產生,因此HPV基因型6E6E7-基因型11E6E7融合疫苗,係誘導出與單獨投予HPV基因型6E6E7疫苗之情形的HPV6E6特異性細胞性免疫反應、及單獨投予HPV基因型11E6E7疫苗之情形的HPV11E6特異性細胞性免疫反應同等的細胞性免疫反應。
[產業上利用之可能性]
本發明可利用於人類乳突病毒6型及/或11型所導致的感染之預防及/或治療。
[序列表非關鍵詞文字]
序列識別號1:HPV6 E6-E7融合之IVT用的模板質體DNA
序列識別號2:正向引子
序列識別號3:反向引子
序列識別號4:HPV6 E6-E7融合模板DNA
序列識別號5:HPV6 E6-E7融合mRNA
序列識別號6:HPV11 E6-E7融合之IVT用的模板質體DNA
序列識別號7:HPV11 E6-E7融合模板DNA
序列識別號8:HPV11 E6-E7融合mRNA
序列識別號9:HPV6 E6-E7 HPV11 E6-E7融合模板質體DNA
序列識別號10:HPV6 E6-E7 HPV11 E6-E7融合模板DNA
序列識別號11:HPV6 E6-E7 HPV11 E6-E7融合mRNA
序列識別號12:HPV6型的E6抗原的胺基酸序列
序列識別號13:HPV6型的E7抗原的胺基酸序列
序列識別號14:HPV11型的E6抗原的胺基酸序列
序列識別號15:HPV11型的E7抗原的胺基酸序列
序列識別號16:蛋白酶切割序列的胺基酸序列
序列識別號17:HPV6型的E6抗原及E7抗原融合蛋白的胺基酸序列
序列識別號18:HPV11型的E6抗原及E7抗原融合蛋白的胺基酸序列
序列識別號19:HPV6型的E6抗原及E7抗原與HPV11型的E6抗原及E7抗原融合蛋白的胺基酸序列
序列識別號20:IgE前導序列
無
[圖1]C57BL/6小鼠中的封入mRNA的核酸脂質粒子之HPV6E6及HPV11E6特異性IFN-γ產生水準。實施例4、7、10:封入mRNA的核酸脂質粒子投予組;NC:投予緩衝液之陰性對照組。無肽:未經肽處理的陰性對照組;HPV6E6肽:HPV6E6池肽(pool peptide)處理組;HPV11E6肽:HPV11E6池肽處理組。長條圖表示各組之平均值,誤差槓表示標準偏差。
[圖2]C57BL/6小鼠中的封入mRNA的核酸脂質粒子之HPV6E6及HPV11E6特異性IFN-γ產生水準。實施例5、8、11:封入mRNA的核酸脂質粒子投予組;NC:投予緩衝液之陰性對照組。無肽:未經肽處理的陰性對照組;HPV6E6肽:HPV6E6池肽處理組;HPV11E6肽:HPV11E6池肽處理組。長條圖表示各組之平均值,誤差槓表示標準偏差。
[圖3]C57BL/6小鼠中的封入mRNA的核酸脂質粒子之HPV6E6及HPV11E6特異性IFN-γ產生水準。實施例6、9、12:封入mRNA的核酸脂質粒子投予組;NC:投予緩衝液之陰性對照組。無肽:未經肽處理的陰性對照組;HPV6E6肽:HPV6E6池肽處理組;HPV11E6肽:HPV11E6池肽處理組。長條圖表示各組之平均值,誤差槓表示標準偏差。
[圖4]為顯示HPV6 E6-E7融合之IVT用的模板質體DNA的核苷酸序列(序列識別號1)之圖。
[圖5]為顯示正向引子(sense primer)(序列識別號2)及反向引子(antisense primer)(序列識別號3)的核苷酸序列之圖。
[圖6]為顯示HPV6 E6-E7融合模板DNA的核苷酸序列(序列識別號4)之圖。
[圖7]為顯示HPV6 E6-E7融合mRNA的核苷酸序列(序列識別號5)之圖。
[圖8]為顯示HPV11 E6-E7融合之IVT用的模板質體DNA的核苷酸序列(序列識別號6)之圖。
[圖9]為顯示HPV11 E6-E7融合模板DNA的核苷酸序列(序列識別號7)之圖。
[圖10]為顯示HPV11 E6-E7融合mRNA的核苷酸序列(序列識別號8)之圖。
[圖11]為顯示HPV6 E6-E7 HPV11 E6-E7融合模板質體DNA的核苷酸序列(序列識別號9)之圖。
[圖12]為顯示HPV6 E6-E7 HPV11 E6-E7融合模板DNA的核苷酸序列(序列識別號10)之圖。
[圖13]為顯示HPV6 E6-E7 HPV11 E6-E7融合mRNA的核苷酸序列(序列識別號11)之圖。
[圖14]為顯示HPV6型的E6抗原的胺基酸序列(序列識別號12)之圖。
[圖15]為顯示HPV6型的E7抗原的胺基酸序列(序列識別號13)之圖。
[圖16]為顯示HPV11型的E6抗原的胺基酸序列(序列識別號14)之圖。
[圖17]為顯示HPV11型的E7抗原的胺基酸序列(序列識別號15)之圖。
[圖18]為顯示蛋白酶切割序列的胺基酸序列(序列識別號16)之圖。
[圖19]為顯示HPV6型的E6抗原及E7抗原融合蛋白的胺基酸序列(序列識別號17)之圖。
[圖20]為顯示HPV11型的E6抗原及E7抗原融合蛋白的胺基酸序列(序列識別號18)之圖。
[圖21]為顯示HPV6型的E6抗原及E7抗原與HPV11型的E6抗原及E7抗原融合蛋白的胺基酸序列(序列識別號19)之圖。
[圖22]為顯示IgE前導序列(序列識別號20)之圖。
無。
Claims (73)
- 如請求項1之粒子,其中通式(Ia)中的R 1及R 2皆為甲基。
- 如請求項1或2之粒子,其中通式(Ia)中的p為3。
- 如請求項1至3中任一項之粒子,其中通式(Ia)中的L 1為可具有1或複數個乙醯氧基之C17-C19烯基。
- 如請求項1至4中任一項之粒子,其中通式(Ia)中的L 2為可具有1或複數個乙醯氧基之C10-C12烷基、或者可具有1或複數個乙醯氧基之C10-C19烯基。
- 如請求項1至4中任一項之粒子,其中通式(Ia)中的L 2為可具有1或複數個乙醯氧基之C10-C12烷基、或者可具有1或複數個乙醯氧基之C17-C19烯基。
- 如請求項1至6中任一項之粒子,其中通式(Ia)中的L 1為(R)-11-乙醯氧基-順式-8-十七碳烯基、順式-8-十七碳烯基、或(8Z,11Z)-十七碳二烯基。
- 如請求項1至7中任一項之粒子,其中通式(Ia)中的L 2為癸基、順式-7-癸烯基、十二烷基、或(R)-11-乙醯氧基-順式-8-十七碳烯基。
- 如請求項9或10之粒子,其中脂質進一步包含兩親媒性脂質、固醇類及PEG脂質。
- 如請求項11之粒子,其中脂質進一步包含兩親媒性脂質、固醇類及PEG脂質。
- 如請求項12之粒子,其中兩親媒性脂質為由包含二硬脂醯基磷脂醯膽鹼、二油醯基磷脂醯膽鹼及二油醯基磷酯醯乙醇胺之群組所選出的至少1者。
- 如請求項13之粒子,其中兩親媒性脂質為由包含二硬脂醯基磷脂醯膽鹼、二油醯基磷脂醯膽鹼及二油醯基磷酯醯乙醇胺之群組所選出的至少1者。
- 如請求項12或14之粒子,其中固醇類為膽固醇。
- 如請求項13或15之粒子,其中固醇類為膽固醇。
- 如請求項12、14或16中任一項之粒子,其中PEG脂質為1,2-二肉豆蔻醯基-sn-甘油甲氧基聚乙二醇及/或N-[甲氧基聚(乙二醇)2000]胺甲醯基]-1,2-二肉豆蔻基氧基丙基-3-胺。
- 如請求項13、15或17中任一項之粒子,其中PEG脂質為1,2-二肉豆蔻醯基-sn-甘油甲氧基聚乙二醇及/或N-[甲氧基聚(乙二醇)2000]胺甲醯基]-1,2-二肉豆蔻基氧基丙基-3-胺。
- 如請求項12至19中任一項之粒子,其中兩親媒性脂質、固醇類、陽離子性脂質、及PEG脂質之脂質組成以莫耳量計,兩親媒性脂質為5~25%、固醇類為10~55%、陽離子性脂質為40~65%、PEG脂質為1~5%。
- 如請求項20之粒子,其中兩親媒性脂質為10~25%。
- 如請求項12、14、16或18中任一項之粒子,其中兩親媒性脂質、固醇類、陽離子性脂質、及PEG脂質之脂質組成以莫耳量計,兩親媒性脂質為5~15%、固醇類為35~50%、陽離子性脂質為40~55%、PEG脂質為1~3%。
- 如請求項22之粒子,其中兩親媒性脂質為10~15%、固醇類為35~45%、陽離子性脂質為40~50%、PEG脂質為1~2.5%。
- 如請求項23之粒子,其中PEG脂質為1~2%。
- 如請求項13、15、17或19中任一項之粒子,其中兩親媒性脂質、固醇類、陽離子性脂質、及PEG脂質之脂質組成以莫耳量計,兩親媒性脂質為10~25%、固醇類為10~50%、陽離子性脂質為40~65%、PEG脂質為1~3%。
- 如請求項25之粒子,其中固醇類為10~45%、陽離子性脂質為42.5~65%、PEG脂質為1~2.5%。
- 如請求項26之粒子,其中PEG脂質為1~2%。
- 如請求項20至27中任一項之粒子,其中總脂質重量對核酸重量之比率為15~30。
- 如請求項28之粒子,其中總脂質重量對核酸重量之比率為15~25。
- 如請求項29之粒子,其中總脂質重量對核酸重量之比率為17.5~22.5。
- 如請求項1至30中任一項之粒子,其中人類乳突病毒為HPV6型。
- 如請求項31之粒子,其中人類乳突病毒為HPV6型,且HPV6型的E6抗原包含與序列識別號12的胺基酸序列具有至少95%之同一性的胺基酸序列。
- 如請求項31或32之粒子,其中人類乳突病毒為HPV6型,且HPV6型的E7抗原包含與序列識別號13的胺基酸序列具有至少95%之同一性的胺基酸序列。
- 如請求項31至33中任一項之粒子,其中人類乳突病毒為HPV6型,可使人類乳突病毒的E6抗原及E7抗原表現之核酸編碼HPV6型的E6抗原及E7抗原之融合蛋白,該融合蛋白包含與序列識別號17的胺基酸序列具有至少95%之同一性的胺基酸序列。
- 如請求項31至34中任一項之粒子,其中人類乳突病毒為HPV6型,可使HPV6型的E6抗原及E7抗原表現之核酸為包含帽結構(Cap)、5’非轉譯區(5’-UTR)、前導序列(leader sequence)、E6之轉譯區、蛋白酶切割序列(弗林蛋白酶(Furin)切割位點)、E7之轉譯區、3’非轉譯區(3’-UTR)及多腺苷酸尾部(polyA)的mRNA。
- 如請求項35之粒子,其中可使HPV6型的E6抗原及E7抗原表現之核酸之序列包含與序列識別號5之序列具有至少90%之同一性的核苷酸序列。
- 如請求項31至34中任一項之粒子,其中人類乳突病毒為HPV6型,可使HPV6型的E6抗原及E7抗原表現之核酸為包含下述構成的mRNA,該構成包含帽結構(Cap)、5’非轉譯區(5’-UTR)、前導序列(leader sequence)、E6之轉譯區、蛋白酶切割序列(弗林蛋白酶切割位點)、E7之轉譯區及3’非轉譯區(3’-UTR)。
- 如請求項37之粒子,其中包含帽結構(Cap)、5’非轉譯區(5’-UTR)、前導序列(leader sequence)、E6之轉譯區、蛋白酶切割序列(弗林蛋白酶切割位點)、E7之轉譯區及3’非轉譯區(3’-UTR)之構成係包含下述核苷酸序列:與序列識別號5的第1個至第1018個之序列具有至少90%之同一性的核苷酸序列。
- 如請求項1至30中任一項之粒子,其中人類乳突病毒為HPV11型。
- 如請求項39之粒子,其中人類乳突病毒為HPV11型,且HPV11型的E6抗原包含與序列識別號14的胺基酸序列具有至少95%之同一性的胺基酸序列。
- 如請求項39或40之粒子,其中人類乳突病毒為HPV11型,且HPV11型的E7抗原包含與序列識別號15的胺基酸序列具有至少95%之同一性的胺基酸序列。
- 如請求項39至41中任一項之粒子,其中人類乳突病毒為HPV11型,可使人類乳突病毒的E6抗原及E7抗原表現之核酸編碼HPV11型的E6抗原及E7抗原之融合蛋白,該融合蛋白包含與序列識別號18的胺基酸序列具有至少95%之同一性的胺基酸序列。
- 如請求項39至42中任一項之粒子,其中人類乳突病毒為HPV11型,可使HPV11型的E6抗原及E7抗原表現之核酸為包含帽結構(Cap)、5’非轉譯區(5’-UTR)、前導序列(leader sequence)、E6之轉譯區、蛋白酶切割序列(弗林蛋白酶切割位點)、E7之轉譯區、3’非轉譯區(3’-UTR)及多腺苷酸尾部(polyA)的mRNA。
- 如請求項43之粒子,其中可使HPV11型的E6抗原及E7抗原表現之核酸之序列包含與序列識別號8之序列具有至少90%之同一性的核苷酸序列。
- 如請求項39至42中任一項之粒子,其中人類乳突病毒為HPV11型,可使HPV11型的E6抗原及E7抗原表現之核酸為包含下述構成的mRNA,該構成包含帽結構(Cap)、5’非轉譯區(5’-UTR)、前導序列(leader sequence)、E6之轉譯區、蛋白酶切割序列(弗林蛋白酶切割位點)、E7之轉譯區及3’非轉譯區(3’-UTR)。
- 如請求項45之粒子,其中包含帽結構(Cap)、5’非轉譯區(5’-UTR)、前導序列(leader sequence)、E6之轉譯區、蛋白酶切割序列(弗林蛋白酶切割位點)、E7之轉譯區及3’非轉譯區(3’-UTR)之構成係包含下述核苷酸序列:與序列識別號8的第1個至第1018個之序列具有至少90%之同一性的核苷酸序列。
- 如請求項1至30中任一項之粒子,其中人類乳突病毒為HPV6型及11型。
- 如請求項47之粒子,其中人類乳突病毒為HPV6型及11型,可使人類乳突病毒的E6抗原及E7抗原表現之核酸編碼HPV6型的E6抗原及E7抗原與HPV11型的E6抗原及E7抗原之融合蛋白,該融合蛋白包含與序列識別號19的胺基酸序列具有至少95%之同一性的胺基酸序列。
- 如請求項47或48之粒子,其中人類乳突病毒為HPV6型及11型,可使HPV6型的E6抗原及E7抗原與HPV11型的E6抗原及E7抗原表現之核酸為包含帽結構(Cap)、5’非轉譯區(5’-UTR)、前導序列(leader sequence)、HPV6型的E6之轉譯區、HPV6型的E7之轉譯區、蛋白酶切割序列(弗林蛋白酶切割位點)、HPV11型的E6之轉譯區、HPV11型的E7之轉譯區、3’非轉譯區(3’-UTR)及多腺苷酸尾部(polyA)的mRNA。
- 如請求項49之粒子,其中可使HPV6型的E6抗原及E7抗原與HPV11型的E6抗原及E7抗原表現之核酸之序列包含與序列識別號11之序列具有至少90%之同一性的核苷酸序列。
- 如請求項47或48之粒子,其中人類乳突病毒為HPV6型及11型,可使HPV6型的E6抗原及E7抗原與HPV11型的E6抗原及E7抗原表現之核酸為包含下述構成的mRNA,該構成包含帽結構(Cap)、5’非轉譯區(5’-UTR)、前導序列(leader sequence)、HPV6型的E6之轉譯區、HPV6型的E7之轉譯區、蛋白酶切割序列(弗林蛋白酶切割位點)、HPV11型的E6之轉譯區、HPV11型的E7之轉譯區及3’非轉譯區(3’-UTR)。
- 如請求項51之粒子,其中包含帽結構(Cap)、5’非轉譯區(5’-UTR)、前導序列(leader sequence)、HPV6型的E6之轉譯區、HPV6型的E7之轉譯區、蛋白酶切割序列(弗林蛋白酶切割位點)、HPV11型的E6之轉譯區、HPV11型的E7之轉譯區及3’非轉譯區(3’-UTR)之構成係包含下述核苷酸序列:與序列識別號11的第1個至第1798個之序列具有至少90%之同一性的核苷酸序列。
- 如請求項1至52中任一項之粒子,其中核酸包含至少1個修飾核苷酸。
- 如請求項53之粒子,其中修飾核苷酸包含5位經取代之嘧啶核苷酸及/或1位可取代之假尿苷的至少1個。
- 如請求項53之粒子,其中修飾核苷酸包含選自包含5-甲基胞苷、5-甲氧基尿苷、5-甲基尿苷、假尿苷、及1-烷基假尿苷之群組的至少1個。
- 如請求項53之粒子,其中修飾核苷酸包含選自包含5-甲基胞苷、5-甲基尿苷、及1-甲基假尿苷之群組的至少1個。
- 如請求項1至56中任一項之粒子,其平均粒徑為30~300nm。
- 一種如請求項1至57中任一項之粒子之用途,其係用以製造用以預防及/或治療人類乳突病毒所導致的感染之組成物。
- 一種如請求項1至57中任一項之粒子之用途,其係用以製造用以預防及/或治療人類乳突病毒之感染所導致的疾病之組成物。
- 如請求項59之粒子之用途,其中人類乳突病毒之感染所導致的疾病為復發性呼吸道乳突瘤病(Recurrent respiratory papillomatosis)或尖頭濕疣。
- 如請求項58至60中任一項之粒子之用途,其中感染為HPV6型或HPV11型之人類乳突病毒所導致的感染。
- 一種組成物,其含有如請求項1至57中任一項之粒子。
- 如請求項62之組成物,其係用以使人類乳突病毒的E6抗原及E7抗原在體內或體外表現。
- 如請求項62或63之組成物,其係作為醫藥使用。
- 如請求項64之組成物,其係用以誘導對人類乳突病毒的免疫反應。
- 如請求項64或65之組成物,其係用以預防及/或治療人類乳突病毒感染。
- 如請求項64或65之組成物,其係用以預防及/或治療人類乳突病毒感染所導致的疾病。
- 如請求項67之組成物,其中人類乳突病毒感染所導致的疾病為復發性呼吸道乳突瘤病或尖頭濕疣。
- 如請求項66至68中任一項之組成物,其中感染為HPV6型或HPV11型之人類乳突病毒所導致的感染。
- 一種使人類乳突病毒的E6抗原及E7抗原在體外表現之方法,其包含將如請求項62或63之組成物導入細胞。
- 一種使人類乳突病毒的E6抗原及E7抗原在體內表現之方法,其包含對哺乳動物投予如請求項62至66中任一項之組成物。
- 一種誘導對人類乳突病毒的免疫反應之方法,其包含對哺乳動物投予如請求項64或65之組成物。
- 一種預防及/或治療人類乳突病毒感染之方法,其包含對哺乳動物投予如請求項64至69中任一項之組成物。
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2021084441 | 2021-05-19 | ||
JP2021-084441 | 2021-05-19 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
TW202307211A true TW202307211A (zh) | 2023-02-16 |
Family
ID=84141666
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
TW111118509A TW202307211A (zh) | 2021-05-19 | 2022-05-18 | Hpv感染症疫苗 |
Country Status (4)
Country | Link |
---|---|
EP (1) | EP4342993A1 (zh) |
JP (1) | JPWO2022244815A1 (zh) |
TW (1) | TW202307211A (zh) |
WO (1) | WO2022244815A1 (zh) |
Family Cites Families (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR102344392B1 (ko) * | 2008-11-10 | 2021-12-28 | 알닐람 파마슈티칼스 인코포레이티드 | 치료제 운반용 신규 지질 및 조성물 |
EP3586870A1 (en) | 2013-03-12 | 2020-01-01 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Improved vaccines for human papilloma virus and methods for using the same |
TW201534578A (zh) | 2013-07-08 | 2015-09-16 | Daiichi Sankyo Co Ltd | 新穎脂質 |
US20180289792A1 (en) * | 2015-10-22 | 2018-10-11 | ModernaTX. Inc. | Sexually transmitted disease vaccines |
AU2017347837A1 (en) * | 2016-10-26 | 2019-06-06 | Modernatx, Inc. | Messenger ribonucleic acids for enhancing immune responses and methods of use thereof |
CA3070042A1 (en) * | 2017-07-17 | 2019-01-24 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Lyssavirus antigen constructs |
JP7075130B2 (ja) * | 2019-10-25 | 2022-05-25 | ザ トラスティーズ オブ ザ ユニバーシティ オブ ペンシルバニア | ヒトパピローマウイルスのワクチンおよびその使用方法 |
TW202131945A (zh) * | 2019-11-15 | 2021-09-01 | 日商第一三共股份有限公司 | 封入HPV mRNA之核酸脂質粒子疫苗 |
-
2022
- 2022-05-18 WO PCT/JP2022/020713 patent/WO2022244815A1/ja active Application Filing
- 2022-05-18 EP EP22804725.4A patent/EP4342993A1/en active Pending
- 2022-05-18 JP JP2023522701A patent/JPWO2022244815A1/ja active Pending
- 2022-05-18 TW TW111118509A patent/TW202307211A/zh unknown
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JPWO2022244815A1 (zh) | 2022-11-24 |
EP4342993A1 (en) | 2024-03-27 |
WO2022244815A1 (ja) | 2022-11-24 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US11845950B2 (en) | Circular RNA for translation in eukaryotic cells | |
US20240207392A1 (en) | Epstein-barr virus mrna vaccines | |
TW202305140A (zh) | 多價rna組合物中rna種類之鑑定及比率測定方法 | |
EP4059515A1 (en) | Nucleic acid lipid particle vaccine encapsulating hpv mrna | |
US20220088049A1 (en) | Compositions, methods, and kits for delivery of polyribonucleotides | |
TW202307211A (zh) | Hpv感染症疫苗 | |
US20240123034A1 (en) | Mrnas encoding granulocyte-macrophage colony stimulating factor for treating parkinson's disease | |
WO2022244825A1 (ja) | インフルエンザウイルス核酸脂質粒子ワクチン | |
US20240238404A1 (en) | Influenza virus nucleic acid lipid particle vaccine | |
US20240229109A1 (en) | Methods for identification and ratio determination of rna species in multivalent rna compositions | |
TW202313102A (zh) | Htlv-1核酸脂質粒子疫苗 | |
JPWO2022244801A5 (zh) |