TW202304982A - 一種能與人內皮素受體特異性結合的抗體及其在糖尿病腎病及慢性腎病治療中的應用 - Google Patents

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Abstract

本文提供ET AR抗體及其醫藥組合物，本文亦提供了其用於治療、預防或改善糖尿病腎病之一或多種症狀以及慢性腎病之一或多種症狀的方法。

Description

一種能與人內皮素受體特異性結合的抗體及其在糖尿病腎病及慢性腎病治療中的應用
本文提供了ET AR抗體及其醫藥組合物。本文亦提供了其用於治療、預防或改善糖尿病腎病之一或多種症狀以及慢性腎病之一或多種症狀的方法。
內皮素係由21個胺基酸組成之多肽，分子量為2,400 Da，N端為兩個二硫鍵將1-15、3-11位置之半胱胺酸連接起來，C端為一些疏水性胺基酸之殘基。N端結構決定其與受體之親和力，C端結構決定其與受體之結合位置。內皮素(endothelin，ET)有三個亞型，亦即ET-1、ET-2及ET-3。內皮素受體(endothelin receptor，ETR)有ET AR及ET BR兩種，屬G蛋白偶聯受體(G-protein coupled receptor，GPCR)。ET及其受體廣泛分佈於人體組織及器官，包括心血管系統、肺、腎臟系統、腦、神經組織等。腎髓質擁有機體最高之ET-1水平(Kitamura等，1989， BiochemBiophys Res Commun161: 348–352)。相對於其他器官，腎臟對ET-1具有更高的敏感性(Speed及Pollock，2013， Hypertension61: 1142–1145)。ET及其受體可能參與肥胖、高血壓及糖尿病等引起之腎損傷，且通常由ET AR介導。
隨著全球經濟之發展及生活水平之提高，糖尿病發病率及流行率逐步增加，以致糖尿病已成為一個重大的公共衛生問題。糖尿病腎病係糖尿病最重要之併發症之一，影響15-25%之I型糖尿病病人及30-40%之II型糖尿病病人(Schernthaner及Schernthaner，2013, J Nephrol26:975–985)。
本文提供了ET AR抗體及其醫藥組合物。本文亦提供了其用於治療、預防或改善糖尿病腎病之一或多種症狀以及慢性腎病之一或多種症狀的方法。
本文提供了ET AR抗體，其抗體包含一個、兩個、三個、四個、五個、或六個胺基酸序列，其中各胺基酸序列獨立地選自於以下所列之胺基酸序列： a. 輕鏈CDR1胺基酸序列：SEQ ID NO: 8、SEQ ID NO: 10、SEQ ID NO: 12、SEQ ID NO: 14、SEQ ID NO: 16、SEQ ID NO: 18、SEQ ID NO: 20、SEQ ID NO: 22、SEQ ID NO: 24、SEQ ID NO: 26、SEQ ID NO: 28、及SEQ ID NO: 30； b. 輕鏈CDR2胺基酸序列：SEQ ID NO: 32、SEQ ID NO: 34、SEQ ID NO: 36、SEQ ID NO: 38、SEQ ID NO: 40、SEQ ID NO: 42、SEQ ID NO: 44、SEQ ID NO: 46、及SEQ ID NO: 48； c. 輕鏈CDR3胺基酸序列：SEQ ID NO: 50、SEQ ID NO: 52、SEQ ID NO: 54、SEQ ID NO: 56、SEQ ID NO: 58、SEQ ID NO: 60、SEQ ID NO: 62、SEQ ID NO: 64、SEQ ID NO: 66、及SEQ ID NO: 68； d. 重鏈CDR1胺基酸序列：SEQ ID NO: 70、SEQ ID NO: 72、SEQ ID NO: 74、SEQ ID NO: 76、SEQ ID NO: 78、SEQ ID NO: 80、SEQ ID NO: 82、SEQ ID NO: 84、SEQ ID NO: 86、SEQ ID NO: 88、及SEQ ID NO: 90； e. 重鏈CDR2胺基酸序列：SEQ ID NO: 92、SEQ ID NO: 94、SEQ ID NO: 96、SEQ ID NO: 98、SEQ ID NO: 100、SEQ ID NO: 102、SEQ ID NO: 104、SEQ ID NO: 106、SEQ ID NO: 108、SEQ ID NO: 110、SEQ ID NO: 112、及SEQ ID NO: 114；及 f. 重鏈CDR3胺基酸序列：SEQ ID NO: 116、SEQ ID NO: 118、SEQ ID NO: 120、SEQ ID NO: 122、SEQ ID NO: 124、SEQ ID NO: 126、SEQ ID NO: 128、SEQ ID NO: 130、SEQ ID NO: 132、SEQ ID NO: 134、及SEQ ID NO: 136。
在一個實施方案中，本文提供之ET AR抗體包含： a. 輕鏈CDR1胺基酸序列：SEQ ID NO: 8 b. 輕鏈CDR2胺基酸序列：SEQ ID NO: 32 c. 輕鏈CDR3胺基酸序列：SEQ ID NO: 50 d. 重鏈CDR1胺基酸序列：SEQ ID NO: 70 e. 重鏈CDR2胺基酸序列：SEQ ID NO: 92 f. 重鏈CDR3胺基酸序列：SEQ ID NO: 116
在一個實施方案中，本文提供之ET AR抗體包含： a. 輕鏈CDR1胺基酸序列：SEQ ID NO: 10 b. 輕鏈CDR2胺基酸序列：SEQ ID NO: 34 c. 輕鏈CDR3胺基酸序列：SEQ ID NO: 52 d. 重鏈CDR1胺基酸序列：SEQ ID NO: 72 e. 重鏈CDR2胺基酸序列：SEQ ID NO: 94 f. 重鏈CDR3胺基酸序列：SEQ ID NO: 118
在一個實施方案中，本文提供之ET AR抗體包含： a. 輕鏈CDR1胺基酸序列：SEQ ID NO: 12 b. 輕鏈CDR2胺基酸序列：SEQ ID NO: 36 c. 輕鏈CDR3胺基酸序列：SEQ ID NO: 54 d. 重鏈CDR1胺基酸序列：SEQ ID NO: 74 e. 重鏈CDR2胺基酸序列：SEQ ID NO: 96 f. 重鏈CDR3胺基酸序列：SEQ ID NO: 120
在一個實施方案中，本文提供之ET AR抗體包含： a. 輕鏈CDR1胺基酸序列：SEQ ID NO: 14 b. 輕鏈CDR2胺基酸序列：SEQ ID NO: 38 c. 輕鏈CDR3胺基酸序列：SEQ ID NO: 56 d. 重鏈CDR1胺基酸序列：SEQ ID NO: 76 e. 重鏈CDR2胺基酸序列：SEQ ID NO: 98 f. 重鏈CDR3胺基酸序列：SEQ ID NO: 122
在一個實施方案中，本文提供之ET AR抗體包含： a. 輕鏈CDR1胺基酸序列：SEQ ID NO: 16 b. 輕鏈CDR2胺基酸序列：SEQ ID NO: 40 c. 輕鏈CDR3胺基酸序列：SEQ ID NO: 58 d. 重鏈CDR1胺基酸序列：SEQ ID NO: 78 e. 重鏈CDR2胺基酸序列：SEQ ID NO: 100 f. 重鏈CDR3胺基酸序列：SEQ ID NO: 124
在一個實施方案中，本文提供之ET AR抗體包含： a. 輕鏈CDR1胺基酸序列：SEQ ID NO: 18 b. 輕鏈CDR2胺基酸序列：SEQ ID NO: 42 c. 輕鏈CDR3胺基酸序列：SEQ ID NO: 60 d. 重鏈CDR1胺基酸序列：SEQ ID NO: 80 e. 重鏈CDR2胺基酸序列：SEQ ID NO: 102 f. 重鏈CDR3胺基酸序列：SEQ ID NO: 126
在一個實施方案中，本文提供之ET AR抗體包含： a. 輕鏈CDR1胺基酸序列：SEQ ID NO: 20 b. 輕鏈CDR2胺基酸序列：SEQ ID NO: 44 c. 輕鏈CDR3胺基酸序列：SEQ ID NO: 62 d. 重鏈CDR1胺基酸序列：SEQ ID NO: 82 e. 重鏈CDR2胺基酸序列：SEQ ID NO: 104 f. 重鏈CDR3胺基酸序列：SEQ ID NO: 128
在一個實施方案中，本文提供之ET AR抗體包含： a. 輕鏈CDR1胺基酸序列：SEQ ID NO: 22 b. 輕鏈CDR2胺基酸序列：SEQ ID NO: 44 c. 輕鏈CDR3胺基酸序列：SEQ ID NO: 62 d. 重鏈CDR1胺基酸序列：SEQ ID NO: 82 e. 重鏈CDR2胺基酸序列：SEQ ID NO: 106 f. 重鏈CDR3胺基酸序列：SEQ ID NO: 128
在一個實施方案中，本文提供之ET AR抗體包含： a. 輕鏈CDR1胺基酸序列：SEQ ID NO: 24 b. 輕鏈CDR2胺基酸序列：SEQ ID NO: 44 c. 輕鏈CDR3胺基酸序列：SEQ ID NO: 62 d. 重鏈CDR1胺基酸序列：SEQ ID NO: 84 e. 重鏈CDR2胺基酸序列：SEQ ID NO: 108 f. 重鏈CDR3胺基酸序列：SEQ ID NO: 130
在一個實施方案中，本文提供之ET AR抗體包含： a. 輕鏈CDR1胺基酸序列：SEQ ID NO: 26 b. 輕鏈CDR2胺基酸序列：SEQ ID NO: 46 c. 輕鏈CDR3胺基酸序列：SEQ ID NO: 64 d. 重鏈CDR1胺基酸序列：SEQ ID NO: 86 e. 重鏈CDR2胺基酸序列：SEQ ID NO: 110 f. 重鏈CDR3胺基酸序列：SEQ ID NO: 132
在一個實施方案中，本文提供之ET AR抗體包含： a. 輕鏈CDR1胺基酸序列：SEQ ID NO: 28 b. 輕鏈CDR2胺基酸序列：SEQ ID NO: 46 c. 輕鏈CDR3胺基酸序列：SEQ ID NO: 66 d. 重鏈CDR1胺基酸序列：SEQ ID NO: 88 e. 重鏈CDR2胺基酸序列：SEQ ID NO: 112 f. 重鏈CDR3胺基酸序列：SEQ ID NO: 134
在另一個實施方案中，本文提供之ET AR抗體包含： a. 輕鏈CDR1胺基酸序列：SEQ ID NO: 30 b. 輕鏈CDR2胺基酸序列：SEQ ID NO: 48 c. 輕鏈CDR3胺基酸序列：SEQ ID NO: 68 d. 重鏈CDR1胺基酸序列：SEQ ID NO: 90 e. 重鏈CDR2胺基酸序列：SEQ ID NO: 114 f. 重鏈CDR3胺基酸序列：SEQ ID NO: 136
本文亦提供了醫藥組合物，其包含本文提供之ET AR抗體，與一或多種可藥用載劑之組合。
本文提供了治療、預防或改善糖尿病腎病之一或多種症狀的方法，其包括投與受試者治療有效量的本文提供之醫藥組合物。
本文提供了治療、預防或改善慢性腎病之一或多種症狀的方法，其包括投與受試者治療有效量的本文提供之醫藥組合物。
本文提供了治療、預防或改善伴隨有蛋白尿之疾病之一或多種症狀的方法，其包括投與受試者治療有效量的本文提供之醫藥組合物。
本文提供了治療、預防或改善伴隨有腎小球濾過率降低之疾病之一或多種症狀的方法，其包括投與受試者治療有效量的本文提供之醫藥組合物。
本文提供了用於治療糖尿病腎病、慢性腎病、伴隨有蛋白尿或腎小球濾過率降低之疾病的套組，其包含本文提供之醫藥組合物。
本文提供了醫藥組合物在製備用於治療糖尿病腎病、慢性腎病、伴隨有蛋白尿或腎小球濾過率降低之疾病之藥物中的用途。本文提供了分離之核酸，其包含本文提供之ET AR抗體之多聚核苷酸編碼序列。
本文提供了重組表現載體，其包含本文提供之核酸。
本文提供了宿主細胞，其包含本文提供之載體。
本文提供了生產ET AR抗體之方法，其包括在允許表現本文提供之抗體的條件下培養本文提供之宿主細胞。
定義 除非本文另外定義，與本文相關之科學及技術術語應具有此項技術普通技術人員所理解之含義。通常，與本文所述藥物學、生物學、生物化學、細胞及組織培養學、生物學、分子生物學、免疫學、微生物學、遺傳學及蛋白質核酸化學以及雜交相關之命名法及技術為此項技術熟知及經常使用的。
本文使用標準的單字母或三字母縮寫表明多聚核苷酸及多肽序列。除非另外指明，多肽序列之胺基端在左而他們的羧基端在右，單鏈核酸序列及雙鏈核酸序列之上游鏈的5'端在左而他們的3'端在右。多肽之具體部分可由胺基酸殘基編號表示，例如胺基酸80至130，或由該位點之實際殘基表示例如Lys80至Lys130。亦可藉由解釋其與參比序列之差異描述具體之多肽或多聚核苷酸序列。
術語「肽」、「多肽」、及「蛋白」均指包含兩個或多個藉由肽鍵相互連接之胺基酸的分子。此等術語涵蓋例如天然及人工蛋白、蛋白片段及蛋白序列之多肽類似物(例如突變蛋白、變異體及融合蛋白)以及轉錄後或否則為共價或非共價修飾之蛋白。肽、多肽或蛋白可為單體或多聚體。
術語「多肽片段」指與對應的全長蛋白相比具有胺基端及/或羧基端缺失之多肽。片段長度可為例如至少5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、20、50、70、80、90、100、150或200個胺基酸。片段長度可為例如最多1000、750、500、250、200、175、150、125、100、90、80、70、60、50、40、30、20、15、14、13、12、11或10個胺基酸。片段可在其一端或兩端進一步包含一或多個附加胺基酸，例如，來自不同天然蛋白質之胺基酸序列(例如，Fc或白胺酸拉鏈域)或人工胺基酸序列(例如，人工接頭序列)。
本文之多肽包括以任何原因及經任何方法修飾之多肽，例如，以：(1)降低蛋白水解敏感性，(2)降低氧化敏感性，(3)改變形成蛋白複合物之親和性，(4)改變結合親和性，以及(4)賦予或修飾其他物理化學或功能性質。類似物包含多肽之突變蛋白。例如，可在天然序列(例如在形成分子內接觸之域之外的多肽部分)中進行單個或多個胺基酸替換(例如，保守胺基酸替換)。「保守胺基酸替換」為不顯著改變母體序列結構特性者(例如，替換胺基酸不應破壞母體序列中出現的螺旋或干擾其他賦予母體序列特性或對其功能為必須之二級結構類型)。
多肽之「變異體」包含相對於另一多肽序列在胺基酸序列中插入、缺失及/或替換了一或多個胺基酸殘基之胺基酸序列。本文之變異體包括融合蛋白。
多肽之「衍生物」為經化學修飾之多肽，例如藉由與其他化學部分例如聚乙二醇、白蛋白(例如人血清白蛋白)結合、磷酸化及糖基化。
除非另外說明，術語「抗體」包括除包含兩個全長重鏈及兩個全長輕鏈之抗體外的其衍生物，變異體、片段及突變蛋白，其實例見下文。
術語「抗體」為包含與抗原結合部分並視情況為允許抗原結合部分採取促進該抗體與該抗原結合之構象之支架或構架部分的蛋白。抗體之實例包括完整抗體、抗體片段(例如抗體之抗原結合部分)、抗體衍生物、及抗體類似物。該抗體可包含例如可選擇之蛋白支架或具有移植CDR或CDR衍生物之人工支架。該支架包括但不限於包含被引入之例如以穩定化該抗體之三維結構的抗體衍生支架以及包含例如生物相容性多聚體之全合成支架。參見，例如，Korndorfer等，2003， Proteins: Structure ， Function and Bioinformatics53:121-129；Roque等，2004, Biotechnol. Prog.20:639-654。此外，可使用類比肽抗體(「PAM」)以及基於類比抗體之支架，其如支架一樣利用纖維蛋白連接素。
抗體可具有例如天然免疫球蛋白之結構。「免疫球蛋白」為四聚體分子。在天然的免疫球蛋白中，各四聚體由兩個相同的多肽鏈對組成，各對具有一個「輕」(約25 kDa)及一個「重」鏈(約50-70 kDa)。各鏈之胺基端包括約100至110或更多胺基酸之可變域，主要與抗原識別相關。各鏈之羧基端部分確定了主要與效應器作用相關之恆定區。人之輕鏈分為κ及λ輕鏈。重鏈分為μ、δ、α或ε，並確定了抗原之同種型，例如分別為IgM、IgD、IgG、IgA及IgE。在輕鏈及重鏈中，可變及恆定區由約12或更多個胺基酸之「J」區連接，重鏈亦包括約10多個胺基酸之「D」區。參見，Fundamental Immunology Ch.7 (Paul編輯，第2版，Raven Press，1989) (其完整內容以參考形式併於本文用於任何目的)。各輕/重鏈對之可變區形成抗體結合位點，這樣一個完整的免疫球蛋白具有兩個結合位點。
天然免疫球蛋白鏈顯示出由三個高度可變區連接之相對保守骨架區(FR)之相同基本結構，亦被稱作互補決定區或CDR。自N端至C端，輕及重鏈均包含域FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3及FR4。各域胺基酸之分配與Kabat等在Sequences of Proteins of Immunological Interest，第5版，US Dept. of Health and Human Services, PHS，NIH，NIH公開案第91-3242號，1991中之定義一致。
除非另外指明，「抗體」指完整的免疫球蛋白或其可與完整抗體競爭特異性結合之抗原結合部分。可由重組DNA技術或藉由酶或化學裂解完整抗體生產抗原結合部分。抗原結合部分包括，尤其是，Fab、Fab'、F(ab') 2、Fv、域抗體(dAb)，包括互補決定區(CDR)之片段、單鏈抗體(scFv)、嵌合抗體、雙鏈抗體(diabody)、三鏈抗體(triabody)、四鏈抗體(tetrabody)及至少包含足以賦予多肽特異抗原結合之免疫球蛋白之一部分的多肽。
Fab片段為具有V L、V H、C L及C H1域之單價片段；F(ab') 2片段為具有兩個在鉸鏈區由二硫鍵連接之Fab片段的二價片段；Fd片段具有V H或V L域；dAb片段具有V H域、V L域，或V H或V L域之抗原結合片段(美國專利號6846634、6696245，美國專利申請公開號05/0202512、04/0202995、04/0038291、04/0009507、03/0039958；Ward等，1989，Nature 341:544-546)。
單鏈抗體(scFv)為其中的V L及V H區由接頭(例如，合成的胺基酸殘基序列)連接以形成連續蛋白質之抗體，其中該接頭足夠長以允許該蛋白鏈摺疊回自身並形成單價抗原結合位點(參見，例如，Bird等，1988， Science242:423-26及Huston等，1988, Proc. Natl. Acad. Sci. USA85:5879-83)。雙鏈抗體為包含兩個多肽鏈之二價抗體，其中各多肽鏈包含由接頭連接之V H及V L域，該接頭很短以致於不允許兩個域在相同鏈上之配對，因此允許各域與另一多肽鏈上之互補域配對(參見，例如，Holliger等，1993， Proc. Natl. Acad. Sci. USA90:6444-48，及Poljak等，1994， Structure2:1121-23)。若雙鏈抗體之兩個多肽鏈為相同的，則由他們配對得到的雙鏈抗體將具有相同的抗原結合位點。具有不同序列之多肽鏈可用於製備具有不同抗原結合位點之雙鏈抗體。相似地，三鏈抗體及四鏈抗體分別為包含三個及四個多肽鏈之抗體並分別形成三個及四個抗原結合位點，其可相同或不同。
可使用Kabat等在Sequences of Proteins of Immunological Interest，第5版, US Dept. of Health and Human Services, PHS, NIH, NIH公開案第91-3242號，1991中描述之方法鑑定給定抗體之互補決定區(CDR)及構架區(FR)。可向分子中共價或非共價併入一或多個CDR使其成為抗體。抗體可以較大多肽鏈併入CDR。可將CDR共價連接至另一鄉肽鏈，或非共價併入CDR。CDR允許抗體與具體的相關抗原特異性結合。
抗體可有一或多個結合位點。若多於一個結合位點，該結合位點可與另一個相同或不同。例如，天然人免疫球蛋白通常具有兩個相同的結合位點，而「雙特異性」或「雙功能」抗體具有兩個不同的結合位點。
術語「鼠源抗體」包括具有一或多個來源於小鼠免疫球蛋白序列之可變區及恆定區的所有抗體。
術語「人源化抗體」係將小鼠抗體分子之互補決定區序列移植至人抗體可變區構架中而製成之抗體。
術語「抗原結合域」、「抗原結合區」或「抗原結合位點」為包含與抗原相互作用之胺基酸殘基(或其他部分)並有助於抗體對抗原之特異性及親和力的抗體之部分。對與其抗原特異性結合之抗體而言，此將包括至少部分的至少一個其CDR域。
術語「表位」為與抗體(例如，藉由抗體)結合之分子部分。表位可包含分子之非連續部分(例如，在多肽中，在多肽之一級序列中不連續的胺基酸殘基在該多肽之三級及四級結構中相互足夠接近以致於被一個抗體結合)。
兩個多聚核苷酸或兩個多肽序列之「相同百分比」由使用GAP電腦程式(GCG Wisconsin Package；version 10.3 (Accelrys，San Diego，CA)之一部分)使用其預設參數比較序列測定。
術語「多聚核苷酸」、「寡聚核苷酸」及「核酸」可在全文中交替使用並包括DNA分子(例如，cDNA或基因組DNA)、RNA分子(例如mRNA)、使用核苷酸類似物(例如，肽核酸及非天然核苷酸類似物)生成的DNA或RNA類似物及其雜交體。核酸分子可為單鏈或雙鏈。在一個實施方案中，本文之核酸分子包含編碼本文提供抗體或其片段、衍生物、突變蛋白或變異體連續之開放閱讀框。
若他們的序列可反向平行排列，則兩個單鏈多聚核苷酸係相互「互補的」，這樣一個多聚核苷酸中之各核苷酸與另一多聚核苷酸中之互補核苷酸相反，不會引入空隙並且各序列之5'或3'端沒有未配對的核苷酸。若兩個多聚核苷酸可在中等嚴格條件下相互雜交，則一個多聚核苷酸與另一多聚核苷酸「互補」。因此，一個多聚核苷酸可與另一多聚核苷酸互補，但並非他的互補序列。
術語「載體」為可用於將與其相連之另一核酸引入細胞之核酸。載體之一種類型為「質體」，其指可連接附加核酸區段之線性或環狀雙鏈DNA分子。載體之另一類型為病毒載體(例如，複製缺陷反轉錄病毒、腺病毒及腺病毒伴隨病毒)，其中可將附加DNA區段引入病毒基因組。某些載體可在他們被引入之宿主細胞中自主複製(例如，包含細菌複製起點之細菌載體以及游離型哺乳動物載體)。其他載體(例如，非游離型哺乳動物載體)在引入宿主細胞時整合入宿主細胞之基因組中並因此與宿主基因組一起複製。「表現載體」為可引導所選多聚核苷酸表現之載體類型。
若調控序列影響核苷酸序列之表現(例如，表現量、時間或位點)，則核苷酸序列與調控序列「可操作地相連」。「調控序列」為可影響與其可操作相連之核酸之表現(例如，表現量、時間或位點)的核酸。調控基因，例如，直接對受調控核酸發揮作用或藉由一或多個其他分子(例如，與調控序列及/或核酸結合之多聚核苷酸)之作用。調控序列之實例包括啟動子、增強子及其他表現控制元件(例如，多腺苷酸化信號)。調控序列之進一步實例描述於例如Goeddel，1990, Gene Expression Technology: Methods in Enzymology, 第185卷, Academic Press, San Diego, CA及Baron等, 1995, Nucleic Acids Res.23:3605-06。
術語「宿主細胞」為用於表現核酸例如本文提供核酸之細胞。宿主細胞可為原核生物，例如大腸桿菌，或者其可為真核生物，例如單細胞真核生物(例如，酵母或其他真菌)、植物細胞(例如菸草或番茄植物細胞)、動物細胞(例如，人細胞、猴細胞、倉鼠細胞、大鼠細胞、小鼠細胞或昆蟲細胞)或雜交瘤。通常，宿主細胞為可用多肽編碼核酸轉化或轉染之培養細胞，其可接著在宿主細胞中表現。短語「重組宿主細胞」可用於表述用預期表現之核酸轉化或轉染之宿主細胞。宿主細胞亦可為包含該核酸但不以期望水準表現之細胞，除非向該宿主細胞引入了調控序列這樣其與核酸可操作地相連。應理解的係術語宿主細胞不僅指具體之受試者細胞，亦指該細胞之子代或可能的子代。由於例如突變或環境影響後續世代會出現某些修飾，該子代事實上可能與母體細胞不同但仍然屬於本文使用之術語範圍。
內皮素及內皮素受體 內皮素係由21個胺基酸組成之多肽，分子量為2,400 Da，N端為兩個二硫鍵將1-15、3-11位置之半胱胺酸連接起來，C端為一些疏水性胺基酸之殘基。N端結構決定其與受體之親和力，C端結構決定其與受體之結合位置。內皮素(ET)有三個亞型，亦即ET-1、ET-2及ET-3，其差別在於個別胺基酸之殘基。內皮素受體(ET AR)屬於7-跨膜受體家族之A亞家族，其藉由異源三聚體鳥嘌呤核苷酸結合蛋白(G蛋白)與一或多個胞內信號傳導途徑偶聯(Jelinek等，1993, Science259:1614-1616；Segre等, 1993, Trends Endocrinol. Metab. 4:309-314)。如本文所使用「內皮素受體」及「ET AR」可交替使用。
在一個實施方案中，可選擇本文提供之抗體結合表現於細胞上之膜結合內皮素受體並藉由內皮素受體抑制或阻斷內皮素信號傳導。在一個實施方案中，本文提供之抗體與人內皮素受體特異性結合。在進一步之實施方案中，與人內皮素受體結合之抗體亦可與其他物種之內皮素受體結合，例如大鼠。下文中之實施例提供生成與人膜結合內皮素受體結合之鼠源抗體，在進一步之實施方案中與其他物種之內皮素受體結合。
已知數個物種之內皮素受體之多聚核苷酸及多肽序列。SEQ ID NO：1-SEQ ID NO：6顯示了人、猴子及大鼠之序列。序列資料來源於美國國立生物技術資訊中心之GeneBank資料庫。
內皮素受體A (ET AR)如下： 人(Homo sapiens)多聚核苷酸(SEQ ID NO：1)；登錄號：S63938。 人(Homo sapiens)胺基酸(SEQ ID NO：2)；登錄號：AAB20278。 猴子(Rhesus macaque)多聚核苷酸(SEQ ID NO：3)；登錄號：JV635771。 猴子(Rhesus macaque)胺基酸(SEQ ID NO：4)；登錄號：AFJ71111。 大鼠(Rattus norvegicus)多聚核苷酸(SEQ ID NO: 5)；登錄號：M60786。 大鼠(Rattus norvegicus)胺基酸(SEQ ID NO: 6)；登錄號：AAA41114。
內皮素受體A (ET AR)抗體 在一個實施方案中，本文提供了ET AR抗體(例如，完整抗體、抗體片段、抗體衍生物、抗體突變蛋白、及抗體變異體)。
在一個實施方式中，本文提供之ET AR抗體包含一個、兩個、三個、四個、五個、或六個胺基酸序列，其中各胺基酸序列獨立地選自於以下所列胺基酸序列： a. 輕鏈CDR1胺基酸序列：SEQ ID NO: 8、SEQ ID NO: 10、SEQ ID NO: 12、SEQ ID NO: 14、SEQ ID NO: 16、SEQ ID NO: 18、SEQ ID NO: 20、SEQ ID NO: 22、SEQ ID NO: 24、SEQ ID NO: 26、SEQ ID NO: 28、及SEQ ID NO: 30； b. 輕鏈CDR2胺基酸序列：SEQ ID NO: 32、SEQ ID NO: 34、SEQ ID NO: 36、SEQ ID NO: 38、SEQ ID NO: 40、SEQ ID NO: 42、SEQ ID NO: 44、SEQ ID NO: 46、及SEQ ID NO: 48； c. 輕鏈CDR3胺基酸序列：SEQ ID NO: 50、SEQ ID NO: 52、SEQ ID NO: 54、SEQ ID NO: 56、SEQ ID NO: 58、SEQ ID NO: 60、SEQ ID NO: 62、SEQ ID NO: 64、SEQ ID NO: 66、及SEQ ID NO: 68； d. 重鏈CDR1胺基酸序列：SEQ ID NO: 70、SEQ ID NO: 72、SEQ ID NO: 74、SEQ ID NO: 76、SEQ ID NO: 78、SEQ ID NO: 80、SEQ ID NO: 82、SEQ ID NO: 84、SEQ ID NO: 86、SEQ ID NO: 88、及SEQ ID NO: 90； e. 重鏈CDR2胺基酸序列：SEQ ID NO: 92、SEQ ID NO: 94、SEQ ID NO: 96、SEQ ID NO: 98、SEQ ID NO: 100、SEQ ID NO: 102、SEQ ID NO: 104、SEQ ID NO: 106、SEQ ID NO: 108、SEQ ID NO: 110、SEQ ID NO: 112、及SEQ ID NO: 114；及 f. 重鏈CDR3胺基酸序列：SEQ ID NO: 116、SEQ ID NO: 118、SEQ ID NO: 120、SEQ ID NO: 122、SEQ ID NO: 124、SEQ ID NO: 126、SEQ ID NO: 128、SEQ ID NO: 130、SEQ ID NO: 132、SEQ ID NO: 134、及SEQ ID NO: 136。
表1列出本文提供之ET AR抗體之輕鏈CDR的胺基酸序列，以及其相應的多聚核苷酸編碼序列。表2列出本文提供之ET AR抗體之重鏈CDR的胺基酸序列，以及其相應的多聚核苷酸編碼序列。 表1：輕鏈CDR之胺基酸序列及其多聚核苷酸編碼序列
CDR1 CDR2 CDR3
A-1 核苷酸 agggccagtcagaacattggcacaagcatacac (SEQ ID NO: 7) tatgcttctaagtctatatct (SEQ ID NO: 31) caacatagttatagctggccgtggacg (SEQ ID NO: 49)
A-1 胺基酸 RASQNIGTSIH (SEQ ID NO: 8) YASKSIS (SEQ ID NO: 32) QHSYSWPWT (SEQ ID NO: 50)
A-2 核苷酸 cgagcaagtgaaaatatttacagttatttagca (SEQ ID NO: 9) aatgcaaaaaccttagcagaa (SEQ ID NO: 33) cagcatcattatggtattccgttcacg (SEQ ID NO: 51)
A-2 胺基酸 RASENIYSYLA (SEQ ID NO: 10) NAKTLAE (SEQ ID NO: 34) QHHYGIPFT (SEQ ID NO: 52)
A-3 核苷酸 cagagcctctttgatattgatggaaagacatatttgaat (SEQ ID NO: 11) ctggtgtctgaattggactct (SEQ ID NO:35) tggcaaggtacacattttccgctcacg (SEQ ID NO: 53)
A-3 胺基酸 QSLFDIDGKTYLN (SEQ ID NO: 12) LVSELDS (SEQ ID NO: 36) WQGTHFPLT (SEQ ID NO: 54)
A-4 核苷酸 cgggcaagtcaggacattggtggtagcttaaac (SEQ ID NO: 13) gccacatccagcttagattct (SEQ ID NO: 37) ctacaatatgctagttctccgtatacg (SEQ ID NO: 55)
A-4 胺基酸 RASQDIGGSLN (SEQ ID NO: 14) ATSSLDS (SEQ ID NO: 38) LQYASSPYT (SEQ ID NO: 56)
A-5 核苷酸 agggccagccagactattagcgacttcttacac (SEQ ID NO: 15) tatgcttcccaatccatctct (SEQ ID NO: 39) caaagtggtaacacctttccgtggacg (SEQ ID NO: 57)
A-5 胺基酸 RASQTISDFLH (SEQ ID NO: 16) YASQSIS (SEQ ID NO: 40) QSGNTFPWT (SEQ ID NO:58)
A-6 核苷酸 agggcaagtgaggacatacacactcaattagcc (SEQ ID NO: 17) ggtgcagccagtttgaaaagt (SEQ ID NO: 41) caacagtataggagtattccgtggacg (SEQ ID NO: 59)
A-6 胺基酸 RASEDIHTQLA (SEQ ID NO: 18) GAASLKS (SEQ ID NO: 42) QQYRSIPWT (SEQ ID NO: 60)
A-7 核苷酸 agatctagtcagtacattgttcatagtactggaaccacctatttagaa (SEQ ID NO: 19) aaagtttccaaccgattttct (SEQ ID NO: 43) tttcaaggttcacattttccattcacg (SEQ ID NO: 61)
A-7 胺基酸 RSSQYIVHSTGTTYLE (SEQ ID NO: 20) KVSNRFS (SEQ ID NO: 44) FQGSHFPFT (SEQ ID NO: 62)
A-8 核苷酸 agatctagtcattaccttgttcatgataacggaaacacctatgttgaa (SEQ ID NO: 21) aaggtttccaaccgattttct (SEQ ID NO: 43) tttcaaggttcacatttcccattcacg (SEQ ID NO: 63)
A-8 胺基酸 RSSHYLVHDNGNTYVE (SEQ ID NO: 22) KVSNRFS (SEQ ID NO: 44) FQGSHFPFT (SEQ ID NO: 62)
A-9 核苷酸 agatctagtcagaacattgtccatagtactggaaacacctatttagaa (SEQ ID NO: 23) aaagtttccaaccgattttct (SEQ ID NO: 43) tttcaaggttcacattttccattcacg (SEQ ID NO: 61)
A-9 胺基酸 RSSQNIVHSTGNTYLE (SEQ ID NO: 24) KVSNRFS (SEQ ID NO: 44) FQGSHFPFT (SEQ ID NO: 62)
A-10 核苷酸 agtgtcagctcaagtgtaagttacatacac (SEQ ID NO: 25) gacacatccaaactggcttct (SEQ ID NO: 45) caccagtggagtactaacccacccacg (SEQ ID NO: 63)
A-10 胺基酸 SVSSSVSYIH (SEQ ID NO: 26) DTSKLAS (SEQ ID NO: 46) HQWSTNPPT (SEQ ID NO: 64)
A-11 核苷酸 agtgccagctcaagtgtaagttacatgtgc (SEQ ID NO: 27) gacacatccaaactggcttct (SEQ ID NO: 45) cagcagtggagtagtaacccacccacg (SEQ ID NO: 65)
A-11 胺基酸 SASSSVSYMC (SEQ ID NO: 28) DTSKLAS (SEQ ID NO: 46) QQWSSNPPT (SEQ ID NO: 66)
A-12 核苷酸 cagggcattaacaattat (SEQ ID NO: 29) tatacatcaactttacagtca (SEQ ID NO: 47) cagcagtttagtaaacttcggaca (SEQ ID NO: 67)
A-12 胺基酸 QGINNY (SEQ ID NO: 30) YTSTLQS (SEQ ID NO: 48) QQFSKLRT (SEQ ID NO: 68)
表2：重鏈CDR之胺基酸序列及其多聚核苷酸編碼序列
CDR1 CDR2 CDR3
A-1 核苷酸 gggttctcactgaccacttctggcttgggtgttgcc (SEQ ID NO: 69) cacatttggtcggatggtgacacgcgctattacccagccctgaagaac (SEQ ID NO: 91) atgaaggatgatagtctttactttgacaac (SEQ ID NO:115)
A-1 胺基酸 GFSLTTSGLGVA (SEQ ID NO: 70) HIWSDGDTRYYPALKN (SEQ ID NO: 92) MKDDSLYFDN (SEQ ID NO: 116)
A-2 核苷酸 ggctacacctttactagctactggatacac (SEQ ID NO: 71) tacattaatcctgacactgattatagtgagtacaat (SEQ ID NO:93) gcaagtgctggttattatttttttgacttc (SEQ ID NO: 117)
A-2 胺基酸 GYTFTSYWIH (SEQ ID NO:72) YINPDTDYSEYN (SEQ ID NO: 94) ASAGYYFFDF (SEQ ID NO: 118
A-3 核苷酸 ggcctcaacattaaagacatctatattcac (SEQ ID NO: 73) aggattgatcctgcgaacggtaagactgcatatgac (SEQ ID NO: 95) ggtaggggggcccac (SEQ ID NO:119)
A-3 胺基酸 GLNIKDIYIH (SEQ ID NO:74) RIDPANGKTAYD (SEQ ID NO: 96) GRGAH (SEQ ID NO:120)
A-4 核苷酸 ggttactcattcaccaactactggatacac (SEQ ID NO: 75) atgattgatccttccgatgctgaaactgggttaaat (SEQ ID NO:97) gcaagaattggcgattactataatatggactac (SEQ ID NO:121)
A-4 胺基酸 GYSFTNYWIH (SEQ ID NO: 76) MIDPSDAETGLN (SEQ ID NO: 98) ARIGDYYNMDY (SEQ ID NO:122)
A-5 核苷酸 ggattcactttcagtgactatcccatgtct (SEQ ID NO: 77) gttagtgatggtggtggttccacc (SEQ ID NO: 99) acaagacatgcttcctactatagctacgaccattctatggactac (SEQ ID NO:123)
A-5 胺基酸 GFTFSDYPMS (SEQ ID NO: 78) VSDGGGST (SEQ ID NO: 100) TRHASYYSYDHSMDY (SEQ ID NO:124)
A-6 核苷酸 ggattcactttcagtagctttggcatgtct (SEQ ID NO: 79) attagtagtgctggtagtttcacc (SEQ ID NO: 101) gcaagacgggggtacgacgttgggtgctttgaccac (SEQ ID NO:125)
A-6 胺基酸 GFTFSSFGMS (SEQ ID NO: 80) ISSAGSFT (SEQ ID NO: 102) ARRGYDVGCFDH (SEQ ID NO:126)
A-7 核苷酸 ggattcactttcagtacctatggcatgtct (SEQ ID NO: 81) accattaatactaatggtggtaccacctattatcgagacagtgtgaagggc (SEQ ID NO: 103) gcaagagactacggggctatggactac (SEQ ID NO: 127)
A-7 胺基酸 GFTFSTYGMS (SEQ ID NO: 82) TINTNGGTTYYRDSVKG (SEQ ID NO: 104) ARDYGAMDY (SEQ ID NO: 128)
A-8 核苷酸 ggattcactttcagtacctatggcatgtct (SEQ ID NO: 81) accataaatactaatggtggtaacacctattattcagacaatgtgaagggc (SEQ ID NO: 105) gcaagagactacggggctatggactac (SEQ ID NO: 127)
A-8 胺基酸 GFTFSTYGMS (SEQ ID NO:82) TINTNGGNTYYSDNVKG (SEQ ID NO: 106) ARDYGAMDY (SEQ ID NO: 128)
A-9 核苷酸 ggattcactttcagtagttatggcatgtct (SEQ ID NO: 83) accattagtactaatggtgccaccgccaattatccagacagtgtgaagggc (SEQ ID NO:107) gcaactgaaaagggagctatgggctac (SEQ ID NO:129)
A-9 胺基酸 GFTFSSYGMS (SEQ ID NO: 84) TISTNGATANYPDSVKG (SEQ ID NO: 108) ATEKGAMGY (SEQ ID NO: 130)
A-10 核苷酸 gggttttcactgaccacttctggtatgggtgtaggc (SEQ ID NO: 85) cacatttggtgggatgatgataagtactataatccatccctgaagagc (SEQ ID NO: 109) gctcgaagaactgagactatgattacgacagtgctatattactatgctatggactac (SEQ ID NO:131)
A-10 胺基酸 GFSLTTSGMGVG (SEQ ID NO: 86) HIWWDDDKYYNPSLKS (SEQ ID NO: 110) ARRTETMITTVLYYYAMDY (SEQ ID NO: 132)
A-11 核苷酸 ggattttcactgagcacttctggtttgggtgtaggc (SEQ ID NO:87) cacatttggtgggatgatgataagtactataatccatcccttaagaga (SEQ ID NO: 111) gctcgaaggagggaagttaacttcggtattaactattactattctatggactac (SEQ ID NO: 133)
A-11 胺基酸 GFSLSTSGLGVG (SEQ ID NO: 88) HIWWDDDKYYNPSLKR (SEQ ID NO: 112) ARRREVNFGINYYYSMDY (SEQ ID NO: 134)
A-12 核苷酸 ggattcaccttcagtgattattac (SEQ ID NO: 89) attagaaatcgggctaatggttacacaaca (SEQ ID NO: 113) gtaagagattcctatcactacgggtacttcgatgtc (SEQ ID NO: 135)
A-12 胺基酸 GFTFSDYY (SEQ ID NO:90) IRNRANGYTT (SEQ ID NO:114) VRDSYHYGYFDV (SEQ ID NO: 136)
在一個實施方案中，本文提供之抗體包含與表1及表2中之CDR胺基酸序列各相差5、4、3、2、或1個單胺基酸添加、替換及/或缺失之序列。在另一個實施方案中，本文提供之抗體包含與表1及表2中之CDR胺基酸序列各相差4、3、2、或1個單胺基酸添加、替換及/或缺失之序列。在另一個實施方案中，本文提供之抗體包含與表1及表2中之CDR胺基酸序列各相差3、2、或1個單胺基酸添加、替換及/或缺失之序列。在另一個實施方案中，本文提供之抗體包含與表1及表2中之CDR胺基酸序列各相差2或1個單胺基酸添加、替換及/或缺失之序列。在另一個實施方案中，本文提供之抗體包含與表1及表2中之CDR胺基酸序列各相差1個單胺基酸添加、替換及/或缺失之序列。
在另一個實施方式中，本文提供之ET AR抗體(ET AR-1抗體)，其包含一個或兩個胺基酸序列，其中各胺基酸序列獨立地選自於以下所列胺基酸序列： a. 輕鏈CDR1胺基酸序列：SEQ ID NO: 8、SEQ ID NO: 10、SEQ ID NO: 12、SEQ ID NO: 14、SEQ ID NO: 16、SEQ ID NO: 18、SEQ ID NO: 20、SEQ ID NO: 22、SEQ ID NO: 24、SEQ ID NO: 26、SEQ ID NO: 28、及SEQ ID NO: 30；及 b. 重鏈CDR1胺基酸序列：SEQ ID NO: 70、SEQ ID NO: 72、SEQ ID NO: 74、SEQ ID NO: 76、SEQ ID NO: 78、SEQ ID NO: 80、SEQ ID NO: 82、SEQ ID NO: 84、SEQ ID NO: 86、SEQ ID NO: 88、及SEQ ID NO: 90。
一方面，ET AR-1抗體亦包含一個或兩個胺基酸序列，其中各胺基酸序列獨立地選自於以下所列胺基酸序列： a. 輕鏈CDR2胺基酸序列：SEQ ID NO: 32、SEQ ID NO: 34、SEQ ID NO: 36、SEQ ID NO: 38、SEQ ID NO: 40、SEQ ID NO: 42、SEQ ID NO: 44、SEQ ID NO: 46、及SEQ ID NO: 48；及 b. 重鏈CDR2胺基酸序列：SEQ ID NO: 92、SEQ ID NO: 94、SEQ ID NO: 96、SEQ ID NO: 98、SEQ ID NO: 100、SEQ ID NO: 102、SEQ ID NO: 104、SEQ ID NO: 106、SEQ ID NO: 108、SEQ ID NO: 110、SEQ ID NO: 112、及SEQ ID NO: 114。
另一方面，ET AR-1抗體亦包含一個或兩個胺基酸序列，其中各胺基酸序列獨立地選自於以下所列胺基酸序列： a. 輕鏈CDR3胺基酸序列：SEQ ID NO: 50、SEQ ID NO: 52、SEQ ID NO: 54、SEQ ID NO: 56、SEQ ID NO: 58、SEQ ID NO: 60、SEQ ID NO: 62、SEQ ID NO: 64、SEQ ID NO: 66、及SEQ ID NO: 68；及 b. 重鏈CDR3胺基酸序列：SEQ ID NO: 116、SEQ ID NO: 118、SEQ ID NO: 120、SEQ ID NO: 122、SEQ ID NO: 124、SEQ ID NO: 126、SEQ ID NO: 128、SEQ ID NO: 130、SEQ ID NO: 132、SEQ ID NO: 134、及SEQ ID NO: 136。
在另一個實施方式中，本文提供之ET AR抗體(ET AR-2抗體)，其包含一個或兩個胺基酸序列，其中各胺基酸序列獨立地選自於以下所列胺基酸序列： a. 輕鏈CDR2胺基酸序列：SEQ ID NO: 32、SEQ ID NO: 34、SEQ ID NO: 36、SEQ ID NO: 38、SEQ ID NO: 40、SEQ ID NO: 42、SEQ ID NO: 44、SEQ ID NO: 46、及SEQ ID NO: 48；及 b. 重鏈CDR2胺基酸序列：SEQ ID NO: 92、SEQ ID NO: 94、SEQ ID NO: 96、SEQ ID NO: 98、SEQ ID NO: 100、SEQ ID NO: 102、SEQ ID NO: 104、SEQ ID NO: 106、SEQ ID NO: 108、SEQ ID NO: 110、SEQ ID NO: 112、及SEQ ID NO: 114。
一方面，ET AR-2抗體亦包含一個或兩個胺基酸序列，其中各胺基酸序列獨立地選自於以下所列胺基酸序列： a. 輕鏈CDR1胺基酸序列：SEQ ID NO: 8、SEQ ID NO: 10、SEQ ID NO: 12、SEQ ID NO: 14、SEQ ID NO: 16、SEQ ID NO: 18、SEQ ID NO: 20、SEQ ID NO: 22、SEQ ID NO: 24、SEQ ID NO: 26、SEQ ID NO: 28、及SEQ ID NO: 30；及 b. 重鏈CDR1胺基酸序列：SEQ ID NO: 70、SEQ ID NO: 72、SEQ ID NO: 74、SEQ ID NO: 76、SEQ ID NO: 78、SEQ ID NO: 80、SEQ ID NO: 82、SEQ ID NO: 84、SEQ ID NO: 86、SEQ ID NO: 88、及SEQ ID NO: 90。
另一方面，ET AR-2抗體亦包含一個或兩個胺基酸序列，其中各胺基酸序列獨立地選自於以下所列胺基酸序列： a. 輕鏈CDR3胺基酸序列：SEQ ID NO: 50、SEQ ID NO: 52、SEQ ID NO: 54、SEQ ID NO: 56、SEQ ID NO: 58、SEQ ID NO: 60、SEQ ID NO: 62、SEQ ID NO: 64、SEQ ID NO: 66、及SEQ ID NO: 68；及 b. 重鏈CDR3胺基酸序列：SEQ ID NO: 116、SEQ ID NO: 118、SEQ ID NO: 120、SEQ ID NO: 122、SEQ ID NO: 124、SEQ ID NO: 126、SEQ ID NO: 128、SEQ ID NO: 130、SEQ ID NO: 132、SEQ ID NO: 134、及SEQ ID NO: 136。
在另一個實施方式中，本文提供之ET AR抗體(ET AR-3抗體)，其包含一個或兩個胺基酸序列，其中各胺基酸序列獨立地選自於以下所列胺基酸序列： a. 輕鏈CDR3胺基酸序列：SEQ ID NO: 50、SEQ ID NO: 52、SEQ ID NO: 54、SEQ ID NO: 56、SEQ ID NO: 58、SEQ ID NO: 60、SEQ ID NO: 62、SEQ ID NO: 64、SEQ ID NO: 66、及SEQ ID NO: 68；及 b. 重鏈CDR3胺基酸序列：SEQ ID NO: 116、SEQ ID NO: 118、SEQ ID NO: 120、SEQ ID NO: 122、SEQ ID NO: 124、SEQ ID NO: 126、SEQ ID NO: 128、SEQ ID NO: 130、SEQ ID NO: 132、SEQ ID NO: 134、及SEQ ID NO: 136。
一方面，ET AR-3抗體亦包含一個或兩個胺基酸序列，其中各胺基酸序列獨立地選自於以下所列胺基酸序列： a. 輕鏈CDR1胺基酸序列：SEQ ID NO: 8、SEQ ID NO: 10、SEQ ID NO: 12、SEQ ID NO: 14、SEQ ID NO: 16、SEQ ID NO: 18、SEQ ID NO: 20、SEQ ID NO: 22、SEQ ID NO: 24、SEQ ID NO: 26、SEQ ID NO: 28、及SEQ ID NO: 30；及 b. 重鏈CDR1胺基酸序列：SEQ ID NO: 70、SEQ ID NO: 72、SEQ ID NO: 74、SEQ ID NO: 76、SEQ ID NO: 78、SEQ ID NO: 80、SEQ ID NO: 82、SEQ ID NO: 84、SEQ ID NO: 86、SEQ ID NO: 88、及SEQ ID NO: 90。
另一方面，ET AR-3抗體亦包含一個或兩個胺基酸序列，其中各胺基酸序列獨立地選自於以下所列胺基酸序列： a. 輕鏈CDR2胺基酸序列：SEQ ID NO: 32、SEQ ID NO: 34、SEQ ID NO: 36、SEQ ID NO: 38、SEQ ID NO: 40、SEQ ID NO: 42、SEQ ID NO: 44、SEQ ID NO: 46、及SEQ ID NO: 48；及 b. 重鏈CDR2胺基酸序列：SEQ ID NO: 92、SEQ ID NO: 94、SEQ ID NO: 96、SEQ ID NO: 98、SEQ ID NO: 100、SEQ ID NO: 102、SEQ ID NO: 104、SEQ ID NO: 106、SEQ ID NO: 108、SEQ ID NO: 110、SEQ ID NO: 112、及SEQ ID NO: 114。
在一個實施方式中，本文提供之ET AR抗體包含： a. 一個獨立地選自於以下所列之輕鏈CDR1胺基酸序列：SEQ ID NO: 8、SEQ ID NO: 10、SEQ ID NO: 12、SEQ ID NO: 14、SEQ ID NO: 16、SEQ ID NO: 18、SEQ ID NO: 20、SEQ ID NO: 22、SEQ ID NO: 24、SEQ ID NO: 26、SEQ ID NO: 28、及SEQ ID NO: 30； b. 一個獨立地選自於以下所列之輕鏈CDR2胺基酸序列：SEQ ID NO: 32、SEQ ID NO: 34、SEQ ID NO: 36、SEQ ID NO: 38、SEQ ID NO: 40、SEQ ID NO: 42、SEQ ID NO: 44、SEQ ID NO: 46、及SEQ ID NO: 48； c. 一個獨立地選自於以下所列之輕鏈CDR3胺基酸序列：SEQ ID NO: 50、SEQ ID NO: 52、SEQ ID NO: 54、SEQ ID NO: 56、SEQ ID NO: 58、SEQ ID NO: 60、SEQ ID NO: 62、SEQ ID NO: 64、SEQ ID NO: 66、及SEQ ID NO: 68； d. 一個獨立地選自於以下所列之重鏈CDR1胺基酸序列：SEQ ID NO: 70、SEQ ID NO: 72、SEQ ID NO: 74、SEQ ID NO: 76、SEQ ID NO: 78、SEQ ID NO: 80、SEQ ID NO: 82、SEQ ID NO: 84、SEQ ID NO: 86、SEQ ID NO: 88、及SEQ ID NO: 90； e. 一個獨立地選自於以下所列之重鏈CDR2胺基酸序列：SEQ ID NO: 92、SEQ ID NO: 94、SEQ ID NO: 96、SEQ ID NO: 98、SEQ ID NO: 100、SEQ ID NO: 102、SEQ ID NO: 104、SEQ ID NO: 106、SEQ ID NO: 108、SEQ ID NO: 110、SEQ ID NO: 112、及SEQ ID NO: 114；及 f. 一個獨立地選自於以下所列之重鏈CDR3胺基酸序列：SEQ ID NO: 116、SEQ ID NO: 118、SEQ ID NO: 120、SEQ ID NO: 122、SEQ ID NO: 124、SEQ ID NO: 126、SEQ ID NO: 128、SEQ ID NO: 130、SEQ ID NO: 132、SEQ ID NO: 134、及SEQ ID NO: 136。
在一個實施方式中，本文提供之ET AR抗體包含一個獨立地選自於以下所列之輕鏈CDR3胺基酸序列：SEQ ID NO: 50、SEQ ID NO: 52、SEQ ID NO: 54、SEQ ID NO: 56、SEQ ID NO: 58、SEQ ID NO: 60、SEQ ID NO: 62、SEQ ID NO: 64、SEQ ID NO: 66、及SEQ ID NO: 68。在另一個實施方式中，本文提供之ET AR抗體包含一個獨立地選自於以下所列之重鏈CDR3胺基酸序列：SEQ ID NO: 116、SEQ ID NO: 118、SEQ ID NO: 120、SEQ ID NO: 122、SEQ ID NO: 124、SEQ ID NO: 126、SEQ ID NO: 128、SEQ ID NO: 130、SEQ ID NO: 132、SEQ ID NO: 134、及SEQ ID NO: 136。在另一個實施方式中，本文提供之ET AR抗體包含一個獨立地選自於以下所列之輕鏈與重鏈CDR3胺基酸序列之組合：SEQ ID NO: 50與SEQ ID NO: 116、SEQ ID NO: 62與SEQ ID NO: 128、SEQ ID NO: 62與SEQ ID NO: 130、SEQ ID NO: 64與SEQ ID NO: 132、SEQ ID NO: 66與SEQ ID NO: 134、及SEQ ID NO: 68與SEQ ID NO: 136。
在另一個實施方式中，本文提供之ET AR抗體，其包含一個或兩個胺基酸序列，其中各胺基酸序列獨立地選自於以下所列胺基酸序列： a. 輕鏈可變域胺基酸序列：SEQ ID NO: 138 (L1)、SEQ ID NO: 140 (L2)、SEQ ID NO: 142 (L3)、SEQ ID NO: 144 (L4)、SEQ ID NO: 146 (L5)、SEQ ID NO: 148 (L6)、SEQ ID NO: 150 (L7)、SEQ ID NO: 152 (L8)、SEQ ID NO: 154 (L9)、SEQ ID NO: 156 (L10)、SEQ ID NO: 158 (L11)、SEQ ID NO: 160 (L12)、SEQ ID NO: 162 (L13)、及SEQ ID NO: 164 (L14)、及與其有至少80%、至少85%、至少90%、或至少95%相同之胺基酸序列；及 b. 重鏈可變域胺基酸序列：SEQ ID NO: 166 (H1)、SEQ ID NO: 168 (H2)、SEQ ID NO: 170 (H3)、SEQ ID NO: 172 (H4)、SEQ ID NO: 174 (H5)、SEQ ID NO: 176 (H6)、SEQ ID NO: 178 (H7)、SEQ ID NO: 180 (H8)、SEQ ID NO: 182 (H9)、SEQ ID NO: 184 (H10)、SEQ ID NO: 186 (H11)、SEQ ID NO: 188 (H12)、SEQ ID NO: 190 (H13)、及SEQ ID NO: 192 (H14)、及與其有至少80%、至少85%、至少90%、或至少95%相同之胺基酸序列。
在另一個實施方式中，本文提供之ET AR抗體之多聚核苷酸編碼序列包含一個或兩個多聚核苷酸序列，其中各多聚核苷酸序列獨立地選自於以下所列多聚核苷酸序列： a. 輕鏈可變域之多聚核苷酸編碼序列：SEQ ID NO: 137、SEQ ID NO: 139、SEQ ID NO: 141、SEQ ID NO: 143、SEQ ID NO: 145、SEQ ID NO: 147、SEQ ID NO: 149、SEQ ID NO: 151、SEQ ID NO: 153、SEQ ID NO: 155、SEQ ID NO: 157、SEQ ID NO: 159、SEQ ID NO: 161、及SEQ ID NO: 163、及與其有至少80%、至少85%、至少90%、或至少95%相同之多聚核苷酸序列；及 b. 重鏈可變域之多聚核苷酸編碼序列：SEQ ID NO: 165、SEQ ID NO: 167、SEQ ID NO: 169、SEQ ID NO: 171、SEQ ID NO: 173、SEQ ID NO: 175、SEQ ID NO: 177、SEQ ID NO: 179、SEQ ID NO: 181、SEQ ID NO: 183、SEQ ID NO: 185、SEQ ID NO: 187、SEQ ID NO: 189、及SEQ ID NO: 191、及與其有至少80%、至少85%、至少90%、或至少95%相同之多聚核苷酸序列。
在另一個實施方式中，本文提供之ET AR抗體，其包含： a. 一個獨立地選自於以下所列之輕鏈可變域胺基酸序列：SEQ ID NO: 138 (L1)、SEQ ID NO: 140 (L2)、SEQ ID NO: 142 (L3)、SEQ ID NO: 144 (L4)、SEQ ID NO: 146 (L5)、SEQ ID NO: 148 (L6)、SEQ ID NO: 150 (L7)、SEQ ID NO: 152 (L8)、SEQ ID NO: 154 (L9)、SEQ ID NO: 156 (L10)、SEQ ID NO: 158 (L11)、SEQ ID NO: 160 (L12)、SEQ ID NO: 162 (L13)、及SEQ ID NO: 164 (L14)、及與其有至少80%、至少85%、至少90%、或至少95%相同之胺基酸序列；及 b. 一個獨立地選自於以下所列之重鏈可變域胺基酸序列：SEQ ID NO: 166 (H1)、SEQ ID NO: 168 (H2)、SEQ ID NO: 170 (H3)、SEQ ID NO: 172 (H4)、SEQ ID NO: 174 (H5)、SEQ ID NO: 176 (H6)、SEQ ID NO: 178 (H7)、SEQ ID NO: 180 (H8)、SEQ ID NO: 182 (H9)、SEQ ID NO: 184 (H10)、SEQ ID NO: 186 (H11)、SEQ ID NO: 188 (H12)、SEQ ID NO: 190 (H13)、及SEQ ID NO: 192 (H14)、及與其有至少80%、至少85%、至少90%、或至少95%相同之胺基酸序列。
在另一個實施方式中，本文提供之ET AR抗體，其包含： a. 一個獨立地選自於以下所列之輕鏈可變域胺基酸序列：SEQ ID NO: 138 (L1)、SEQ ID NO: 140 (L2)、SEQ ID NO: 142 (L3)、SEQ ID NO: 144 (L4)、SEQ ID NO: 146 (L5)、SEQ ID NO: 148 (L6)、SEQ ID NO: 150 (L7)、SEQ ID NO: 152 (L8)、SEQ ID NO: 154 (L9)、SEQ ID NO: 156 (L10)、SEQ ID NO: 158 (L11)、SEQ ID NO: 160 (L12)、SEQ ID NO: 162 (L13)、及SEQ ID NO: 164 (L14)；及 b. 一個獨立地選自於以下所列之重鏈可變域胺基酸序列：SEQ ID NO: 166 (H1)、SEQ ID NO: 168 (H2)、SEQ ID NO: 170 (H3)、SEQ ID NO: 172 (H4)、SEQ ID NO: 174 (H5)、SEQ ID NO: 176 (H6)、SEQ ID NO: 178 (H7)、SEQ ID NO: 180 (H8)、SEQ ID NO: 182 (H9)、SEQ ID NO: 184 (H10)、SEQ ID NO: 186 (H11)、SEQ ID NO: 188 (H12)、SEQ ID NO: 190 (H13)、及SEQ ID NO: 192 (H14)。
在另一個實施方式中，本文提供之ET AR抗體包含一個獨立地選自於以下所列之輕鏈與重鏈可變域胺基酸序列之組合：SEQ ID NO: 138及SEQ ID NO: 166 (L1H1)、SEQ ID NO: 140及SEQ ID NO: 168 (L2H2)、SEQ ID NO: 142及SEQ ID NO: 170 (L3H3)、SEQ ID NO: 144及SEQ ID NO: 172 (L4H4)、SEQ ID NO: 146及SEQ ID NO: 174 (L5H5)、SEQ ID NO: 148及SEQ ID NO: 176 (L6H6)、SEQ ID NO: 150及SEQ ID NO: 178 (L7H7)、SEQ ID NO: 152及SEQ ID NO: 180 (L8H8)、SEQ ID NO: 154及SEQ ID NO: 182 (L9H9)、SEQ ID NO: 156及SEQ ID NO: 184 (L10H10)、SEQ ID NO: 158及SEQ ID NO: 186 (L11H11)、SEQ ID NO: 160及SEQ ID NO: 188 (L12H12)、SEQ ID NO: 162及SEQ ID NO: 190 (L13H13)、及SEQ ID NO: 164及SEQ ID NO: 192 (L14H14)。
本文亦可用「LxHy」符號來表示本文提供之ET AR抗體，其中「x」對應於輕鏈可變區並且「y」對應於重鏈可變區。例如，L2H1指具有包含SEQ ID NO: 140 (L2)胺基酸序列之輕鏈可變區及包含SEQ ID NO: 166 (H1)胺基酸序列之重鏈可變區的抗體。
在另一個實施方式中，本文提供之ET AR抗體包含選自L1-L14之輕鏈可變區或選自H1-H14之重鏈可變區及其片段、衍生物、突變蛋白、或變異體之抗體。
在另一個實施方式中，本文提供之ET AR抗體包含一個獨立地選自於以下所列之輕鏈與重鏈CDR3胺基酸序列之組合：SEQ ID NO: 138與SEQ ID NO: 166、SEQ ID NO: 150與SEQ ID NO: 178、SEQ ID NO: 152與SEQ ID NO: 180、SEQ ID NO: 154與SEQ ID NO: 182、SEQ ID NO: 156與SEQ ID NO: 184、SEQ ID NO: 158與SEQ ID NO: 186、SEQ ID NO: 160與SEQ ID NO: 188、SEQ ID NO: 162與SEQ ID NO: 190、及SEQ ID NO: 164與SEQ ID NO: 192。
在一個實施方式中，本文提供之ET AR抗體包含SEQ ID NO: 138輕鏈可變域胺基酸序列或SEQ ID NO: 166重鏈可變域胺基酸序列。在另一個實施方式中，本文提供之ET AR抗體包含SEQ ID NO: 138輕鏈可變域胺基酸序列及SEQ ID NO: 166之重鏈可變域胺基酸序列之組合。
在另一個實施方式中，本文提供之ET AR抗體亦包含恆定區胺基酸序列，其中各恆定區胺基酸序列獨立地選自於以下所列之胺基酸序列： a. 輕鏈恆定區胺基酸序列：SEQ ID NO: 194及SEQ ID NO: 196；及 b. 重鏈恆定區胺基酸序列：SEQ ID NO: 198。
在另一個實施方式中，本文提供之ET AR抗體亦包含恆定區胺基酸序列，其中各恆定區胺基酸序列獨立地選自於以下所列之輕鏈及重鏈恆定區胺基酸序列之組合： a. 輕鏈恆定區胺基酸序列SEQ ID NO: 194及重鏈恆定區胺基酸序列SEQ ID NO: 198之組合； b. 輕鏈恆定區胺基酸序列SEQ ID NO: 196及重鏈恆定區胺基酸序列SEQ ID NO: 198之組合。
在一個實施方案中，本文提供之抗體包含本文所列輕鏈及重鏈CDR及FR (構架)之胺基酸序列。在一個實施方案中，該抗體包含本文所列之輕鏈CDR1序列。在另一個實施方案中，該抗體包含本文所列之輕鏈CDR2序列。在另一個實施方案中，該抗體包含本文所列之輕鏈CDR3序列。在另一個實施方案中，該抗體包含本文所列之重鏈CDR1序列。在另一個實施方案中，該抗體包含本文所列之重鏈CDR2序列。在另一個實施方案中，該抗體包含本文所列之重鏈CDR3序列。在另一個實施方案中，該抗體包含本文所列之輕鏈FR1序列。在另一個實施方案中，該抗體包含本文所列之輕鏈FR2序列。在另一個實施方案中，該抗體包含本文所列輕鏈之FR3序列。在另一個實施方案中，該抗體包含本文所列之輕鏈FR4序列。在另一個實施方案中，該抗體包含本文所列之重鏈FR1序列。在另一個實施方案中，該抗體包含本文所列重鏈之FR2序列。在另一個實施方案中，該抗體包含本文所列之重鏈FR3序列。在另一個實施方案中，該抗體包含本文所列之重鏈FR4序列。
在一個實施方案中，該抗體之CDR3序列與本文所列輕重鏈CDR3胺基酸序列SEQ ID NO: 50與SEQ ID NO: 116之組合相差最多不超過6、5、4、3、2、或1個單胺基酸添加、替換及/或缺失。在另一個實施方案中，該抗體之輕鏈CDR3序列與本文所列輕鏈CDR3胺基酸序列SEQ ID NO: 50相差不得超過6、5、4、3、2、或1個單胺基酸添加、替換及/或缺失。在另一個實施方案中，該抗體之輕鏈CDR3序列與本文所列輕鏈CDR3胺基酸序列SEQ ID NO: 50相差不得超過6、5、4、3、2、或1個單胺基酸添加、替換及/或缺失，並且該抗體之重鏈CDR3序列與本文所列重鏈CDR3胺基酸序列SEQ ID NO: 116或SEQ ID NO: 118相差最多不超過6、5、4、3、2、或1個單胺基酸添加、替換及/或缺失。在另一個實施方案中，該抗體進一步包含1、2、3、4、5、或6個本文所列輕重鏈CDR輕重鏈序列組合。在另一個實施方案中，該抗體進一步包含1、2、3、4、5、或6個CDR輕重鏈序列組合，各序列獨自與本文所列輕重鏈CDR3胺基酸序列SEQ ID NO: 50與SEQ ID NO: 116之組合相差最多不超過6、5、4、3、2、或1個單胺基酸。在另一個實施方案中，該抗體包含本文所列輕鏈可變區之CDR及重鏈可變區之CDR。在另一實施方案中，該抗體包含本文所列之1、2、3、4、5、及/或6個CDR輕重鏈序列組合。
在一個實施方案中，該抗體(例如抗體或抗體片段)包含本文所列L1輕鏈可變域序列。在一個實施方案中，該輕鏈可變域包含與L1之輕鏈可變域序列存在15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、或1個胺基酸差異之胺基酸序列，其中各該序列之差異獨立為一個胺基酸殘基之缺失、插入或替換。在另一個實施方案中，該輕鏈可變域包含與L1之輕鏈可變域序列有至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少97%、或至少99%相同之胺基酸序列。在另一個實施方案中，該輕鏈可變域多聚核苷酸編碼序列包含與L1多聚核苷酸編碼序列有至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少97%、或至少99%相同之核苷酸編碼序列。在另一個實施方案中，該輕鏈可變域多聚核苷酸編碼序列包含在中等條件下與L1之輕鏈可變域之多聚核苷酸編碼序列互補序列雜交的多聚核苷酸序列。在另一個實施方棠中，該輕鏈可變域多聚核苷酸編碼序列包含在嚴格條件下與L1之輕鏈可變域之多聚核苷酸編碼序列互補序列雜交的多聚核苷酸序列。
在一個實施方案中，該抗體(例如抗體或抗體片段)包含本文所列H1重鏈可變域序列。在另一個實施方案中，該可變域包含與H1之重鏈可變域序列存在15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、或1個胺基酸差異之胺基酸序列，其中各該序列之差異獨立為一個胺基酸殘基之缺失、插入或替換。在另一個實施方案中，該重鏈可變域包含與H1之重鏈可變域序列有至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少97%、或至少99%相同之胺基酸序列。在另一個實施方案中，該重鏈可變域多聚核苷酸編碼序列包含與H1多聚核苷酸編碼序列有至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少97%、或至少99%相同之核苷酸編碼序列。在另一個實施方案中，該重鏈可變域多聚核苷酸編碼序列包含在中等嚴格條件下與H1之重鏈可變域之多聚核苷酸編碼序列互補序列雜交的多聚核苷酸序列。在一個實施方案中，該重鏈可變域多聚核苷酸編碼序列包含在嚴格條件下與H1之重鏈可變域之多聚核苷酸編碼序列互補序列雜交的多聚核苷酸序列。
在一個實施方案中，本文提供之抗體包括包含組合L1H1、L2H2、L3H3、L4H4、L5H5、L6H6、L7H7、L8H8、L9H9、L10H10、L11H11、L12H12、L13H13、或L14H14之抗體，或其期望表型(例如，IgA、IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3、IgM、IgE及IgD)，或其Fab或F(ab') 2片段。
在一個實施方案中，本文提供之抗體包括包含組合L1H1之抗體，或其類轉換的抗體(例如，IgA、IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3、IgM、IgE及IgD)，或其Fab或F(ab') 2片段。
本文提供之抗體(例如，抗體、抗體片段、及抗體衍生物)可包含此項技術已知之恆定區中任何一個。輕鏈恆定區可為例如κ或λ型輕鏈恆定區，例如小鼠κ或λ型輕鏈恆定區。重鏈恆定區可為例如α、δ、ε、γ、或μ型重鏈恆定區，例如小鼠α、δ、ε、γ、或μ型重鏈恆定區。在一個實施方案中，該輕鏈或重鏈恆定區為天然恆定區之片段、衍生物、變異體、或突變蛋白。
在一個實施方案中，本文提供之抗體進一步包含恆定輕鏈κ或λ域或此等之片段。輕鏈恆定區序列及他們的多聚核苷酸編碼序列提供如下： 多聚核苷酸(κ)，(SEQ ID NO: 193)；胺基酸(κ)，(SEQ ID NO: 194)； 多聚核苷酸(λ)，(SEQ ID NO: 195)；胺基酸(λ)，(SEQ ID NO: 196)。
在另一個實施方案中，本文提供之抗體進一步包含重鏈恆定域或其片段。重鏈恆定區序列及他的多聚核苷酸編碼序列提供如下： 多聚核苷酸(IgG1)，(SEQ ID NO: 197)；胺基酸(IgG1)，(SEQ ID NO: 198)。
在一個實施方式中，本文所提供之ET AR抗體選自鼠源抗體、人源化抗體、嵌合抗體、單株抗體、多株抗體、重組抗體、抗原結合抗體片段、單鏈抗體、雙鏈抗體、三鏈抗體、四鏈抗體、Fab片段、F(ab') x片段、域抗體、IgD抗體、IgE抗體、IgM抗體、IgGl抗體、IgG2抗體、IgG3抗體、及IgG4抗體。在另一個實施方式中，本文提供之ET AR抗體為ET AR單株抗體。在另一個實施方式中，本文提供之ET AR抗體為鼠源ET AR抗體。本文提供之ET AR抗體為人源化ET AR抗體。
在一個實施方式中，本文提供之ET AR抗體為單株抗體A-1 (其包含SEQ ID NO: 138與SEQ ID NO: 166)、A-7 (其包含SEQ ID NO: 150與SEQ ID NO: 178)、A-8 (其包含SEQ ID NO: 152與SEQ ID NO: 180)、A-9 (其包含SEQ ID NO: 154與SEQ ID NO: 182)、A-10 (其包含SEQ ID NO: 156與SEQ ID NO: 184)、A-11 (其包含SEQ ID NO: 158與SEQ ID NO: 186)、A-12 (其包含SEQ ID NO: 160與SEQ ID NO: 188)、A-13 (其包含SEQ ID NO: 162與SEQ ID NO: 190)、或A-14 (其包含SEQ ID NO: 164與SEQ ID NO: 192)。
抗體及抗體片段 在一個實施方案中，本文提供之抗體為完整抗體(包括具有全長重及/或輕鏈之多株、單株、嵌合、人源化或人類抗體)。在另一個實施方案中，本文提供之抗體為抗體片段，例如F(ab')2、Fab、Fab'、Fv、Fc、或Fd片段，並可整合入單域抗體、單鏈抗體、最大抗體(maxibody)、微抗體(minibody)、內抗體(intrabody)、二鏈抗體、三鏈抗體、四鏈抗體、v-NAR及bis-scFv (參見，例如Hollinger及Hudson，2005，Nature Biotechnology 23:1126-1136)。在另一個實施方案中，本文提供之抗體亦包括抗體多肽例如美國專利號6703199中所揭示之彼等，包括纖維結合素多肽單抗體。在另一個實施方案中，本文提供之抗體亦包括其他抗體多肽揭示於美國專利出版物2005/0238646，其為單鏈多肽。
在一個實施方案中，使用核苷酸引物擴增在雜交瘤中表現相關單株抗體之基因之可變區。此等引物可由一般熟習此項技術者合成或自商業來源購買(參見，例如Stratagene，La Jolla，California)，此等廠商銷售鼠及人可變區引物包括V Ha、V Hb、V Hc、V Hd、C H1、V L及C L區之引物。此等引物可用於擴增重鏈或輕鏈可變區，然後將其分別插入載體例如IMMUNOZAP TMH或ILLLFFLUNOZAP TML (Stratagene)中。然後將此等載體引入大腸桿菌、酵母或哺乳動物為基礎之表現系統。可使用此等方法生產大量包含V H及V L域融合之單鏈蛋白(參見Bird等，1988， Science242:423-426)。
一旦使用上述任何免疫及其他技術獲得了根據本文生產抗體之細胞，可根據本文所述標準方法藉由分離並自其擴增DNA或mRNA將特異抗體基因選殖。定序自其生產之抗體並鑑定CDR，可如之前所述對編碼CDR之DNA進行操作以生成根據本文提供之其他抗體。
本文提供之抗體較佳在本文描述之基於細胞之測定法中及/或本文描述之體內測定法中調節內皮素信號傳導及/或交叉阻斷本申請所述抗體之一的結合及/或經本申請所述抗體之一被結合ET AR交叉阻斷。因此可使用本文所述測定法鑑定該類結合劑。
在一些實施方案中，藉由首先鑑定在本文描述之基於細胞的及/或體內測定法中與過表現ET AR之細胞結合及/或中和及/或交叉阻斷本申請描述之抗體及/或經本申請描述之抗體之一被結合ET AR交叉阻斷的抗體以生成抗體。
熟習此項技術者應理解的係一些蛋白質，例如抗體，可能進行可多種轉錄後修飾。此等修飾之類型及程度取決於用於表現該蛋白之宿主細胞株以及培養條件。該類修飾包括糖基化作用、甲硫胺酸氧化、二酮哌𠯤形成、天冬胺酸異構化及天冬醯胺脫醯胺作用之變化。由於羧肽酶之作用頻繁修飾導致羧端鹼性殘基(例如離胺酸或精胺酸)之丟失(如Harris，1995， Journal of Chromatography705:129-134中所述)。
生產鼠單株抗體之可選擇方法為將雜交瘤細胞注入同系基因小鼠之腹膜腔，例如經處理(例如姥鮫烷初次免疫)促進形成包含單株抗體之腹水之小鼠。可藉由多種已確立之技術分離及純化單株抗體。該類分離技術包括使用蛋白A-瓊脂糖之親和層析法、分子排阻層析法及離子交換層析法，參見，例如，Coligan第2.7.1-2.7.12頁及第2.9.1-2.9.3頁；Baines等，「Purification of Immunoglobulin G (IgG)」, Methods in Molecular Biology，第10卷，第79-104頁(The Humana Press，Inc.，1992)。可使用基於抗體之特殊性質(例如，重鏈或輕鏈同種型、結合特異性等)篩選的適當配基藉由親和層析法純化單株抗體。固定化於固體載體之適當配基之實例包括蛋白A、蛋白G、抗恆定區(輕鏈或重鏈)抗體、抗獨特型抗體以及TGF-p結合蛋白或其片段或變異體。
可使用抗體結合位點中央的互補決定區(CDR)之分子進化分離親和性增加之抗體，例如對c-erbB-2親和性增加之抗體，如Schier等，1996，J. Mol. Biol. 263:551-567所述。因此，該類技術可用於製備人內皮素受體之抗體。
例如可在偵測是否存在內皮素受體之體外或體內測定法中使用針對人內皮素受體之抗體。
亦可藉由任何傳統技術製備抗體。例如，可自天然表現此等抗體之細胞將其純化(例如，可自生產抗體之雜交瘤將其純化)或使用此項技術任何已知之技術在重組表現系統中生產。參見，例如，Monoclonal Antibodies, Hybridomas: A New Dimension in Biological Analyses, Kennet等編輯，Plenum Press (1980)；及Antibodies: A Laboratory Manual, Harlow及Land編輯, Cold Spring Harbor Laboratory Press (1988)。此在下文之核酸部分討論。
可藉由任何已知技術製備抗體並篩選期望性質。一些技術係關於分離編碼相關抗體(例如，抗內皮素受體抗體)之多肽鏈(或其部分)的核酸，並藉由重組DNA技術操作核酸。該核酸可與另一相關核酸融合或經修飾(例如藉由誘變或其他傳統技術)以添加、缺失或替換一或多個胺基酸殘基。
當需要提高根據本文包含一或多個上述CDR之抗體的親和性時，可藉由多種親和成熟方案包括維持CDR (Yang等，1995， J. Mol. Biol.254:392-403)、鏈替換(Marks等，1992， Bio/Technology10:779-783)、使用大腸桿菌之突變株(Low等，1996， J. Mol. Biol.250:350-368) DNA重排(Patten等，1997， Curr. Opin. Biotechnol.8:724-733)、噬菌體展示(Thompson等，1996， J. Mol. Biol.256:7-88)以及其他PCR技術(Crameri等，1998， Nature391：288-291)。所有此等親和力成熟方法討論於Vaughan等，1998， Nature Biotechnology16:535-539中。
在一個實施方案中，本文提供之抗體為抗內皮素受體片段。該片段可完全由抗體衍生序列組成或可包含附加序列。抗原結合片段之實例包括Fab、F(ab')2、單鏈抗體、雙鏈抗體、三鏈抗體、四鏈抗體及域抗體，其他實例提供於Lunde等，2002， Biochem. Soc. Trans.30:500-06。
可經胺基酸橋(短肽接頭)連接重鏈及輕鏈可變域(Fv區)形成單鏈抗體，從而得到單多肽鏈。已藉由將編碼肽接頭之DNA融合在編碼兩個可變域多肽(V L及V H)的DNA之間製備該單鏈FV (scFv)。所得多肽可摺疊回自身形成抗原結合單體，或他們可形成多聚體(例如，二聚體、三聚體或四聚體)，取決於兩個可變域之間的可撓性接頭之長度(Kortt等，1997， Prot. Eng.10:423；Kortt等2001， Biomol. Eng.18:95-108)。藉由組合包含多肽之不同V L及V H，可形成與不同表型結合之多體scFv (Kriangkum等，2001， Biomol. Eng.18:31-40)。已研發的用於生產單鏈抗體之技術包括美國專利號4946778；Bird，1988， Science242:423；Huston等，1988, Proc. Natl. Acad. Sci. USA85:5879-5883；Ward等，1989， Nature334:544-546；de Graaf等，2002， Methods Mol Biol.178:379-87中描述之彼等。來源於本文提供之抗體之單鏈抗體包括但不限於包含可變域組合L1H1之scFv，均涵蓋於本文。
亦可藉由抗體之蛋白水解作用例如根據傳統方法用胃蛋白酶或木瓜蛋白酶消化完整的抗體獲得來源於抗體之抗原結合片段。舉例而言，可用胃蛋白酶酶裂解抗體提供稱作F(ab')2之SS片段生產抗體片段。可使用巰基還原劑進一步裂解這一片段產生3.5S Fab'單價片段。可選擇的方案有，使用巰基保護基團進行該裂解反應得到二硫鍵之裂解；另外亦可以使用木瓜蛋白酶之酶裂解直接產生兩個單價Fab片段及一個Fc片段。此等方法描述於例如Goldenberg，美國專利號4,331,647，Nisonoff等，1960，Arch. Biochem. Biophys. 89:230；Porter，1959，Biochem. J. 73:119；Edelman等，Methods in Enzymology l:422 (Academic Press，1967)；以及Andrews及Titus, J.A. Current Protocols in Immunology (Coligan等編輯，John Wiley&Sons, 2003)，第2.8,1-2.8.10頁及第2.10A.1-2.10A.5頁。其他裂解抗體之方法，例如製備重鏈以形成單價重、輕鏈片段(Fd)，進一步裂解片段或亦可使用其他酶、化學或基因技術，只要片段與可被該完整抗體識別之抗原結合。
另一種形式的抗體片段為包含一或多個抗體互補決定區(CDR)之肽。可藉由構築編碼相關CDR之多肽獲得CDR。例如可藉由使用聚合酶鏈式反應用抗體生成細胞之mRNA作為模板合成可變區製備該類多肽，參見，例如，Larrick等，1991，Methods: A Companion to Methods in Enzymology 2:106；Courtenay-Luck，「Genetic Manipulation of Monoclonal Antibodies」, Monoclonal Antibodies:Production, Engineering and Clinical Application，Ritter等編輯，166頁(Cambridge University Press，1995)；及Ward等，「Genetic Manipulation and Expression of Antibodies」, Monoclonal Antibodies: Principles and Applications，Birch等編輯，137頁(Wiley-Liss，Inc.，1995)。該抗體片段可進一步包含本文所述抗體之至少一個可變域。因此，例如，V區域可為單體並且為V H或V L域，其可以如下文所述之至少等於1 × 10 -7M或更低的親和度獨立與內皮素受體結合。
該可變區域可為任何天然可變域或其基因工程形式。基因工程形式指使用重組DNA工程技術生產之可變區域。該基因工程形式包括例如藉由向特異抗體之胺基酸序列插入、缺失或改變自特異抗體可變區產生的。具體實例包括包含只含一個CDR以及視情況來自一個抗體之一或多個構架胺基酸及來自另一抗體之可變區域剩餘部分，並由基因工程組裝成的可變區域。
可變區域可與至少一個其他抗體域或其片段在C端胺基酸共價連接。因此，舉例而言，存在於可變區域之V H域可與免疫球蛋白CH1域或其片段相連。相似地，V L域可與C K域或其片段相連。以此種方式，例如，該抗體可為Fab片段，其中抗原結合域包含他們的C端分別與CH1及C K域共價連接之聯合V H及V L域。可用其他胺基酸延長CH1域，例如以提供鉸鏈區或如Fab'片段中之部分鉸鏈域或提供其他域，例如抗體CH2及CH3域。
抗體之衍生物及變異體 例如可藉由隨機誘變或藉由定點誘變(例如寡聚核苷酸誘導之定點誘變)改變編碼對應於胺基酸序列A-1之核苷酸序列L1及H1以產生與未突變多聚核苷酸相比包含一或多個具體核苷酸替換、缺失或插入的經改變之多聚核苷酸。用於產生該類改變之技術實例描述於Walder等，1986， Gene42:133；Bauer等，1985， Gene37:73；Craik, 1985, BioTechniques, 3:12-19；Smith等，1981, Genetic Engineering: Principles and Methods，Plenum Press；以及美國專利號4518584及4737462。此等及其他方法可用於產生例如與未衍生化抗體相比具有期望性質例如親和性、親和力或對內皮素受體之特異性增強、體內或體外活性或穩定性增強或體內副作用降低的抗內皮素受體抗體之衍生物。
本文領域之其他抗內皮素受體抗體衍生物包括抗內皮素受體抗體或其片段與其他蛋白或多肽之共價或聚集結合物，例如藉由表現包含與抗內皮素受體抗體多肽之N端或C端融合的異源多肽之重組融合蛋白。例如，該結合肽可為異源信號(或引導)多肽，例如酵母α因子前導肽或例如表位標籤之肽。包含融合蛋白之抗體可包含被添加以輔助抗體之純化或鑑定的肽(例如多聚組胺酸)。抗體亦可與FLAG肽連接，如Hopp等，1988, Bio/Technology6:1204及美國專利5011912所述。FLAG肽具有高抗原性並提供被特異單株抗體(mAb)可逆結合之表位，允許已表現重組蛋白之快速偵測及方便純化。可商業購買(Sigma-Aldrich，St. Louis，MO)用於製備其中FLAG肽與給定多肽融合之融合蛋白的試劑，在另一個實施方案中，包含一或多個抗體之寡聚體可用作內皮素受體拮抗劑或用更高級的寡聚體。寡聚體可為共價連接的或非共價連接的二聚體、三聚體或更高之寡聚體形式。可使用包含兩個或更多個抗體之寡聚體，其中一個實例為同型二聚體。其他寡聚體包括異二聚體、同型三聚體、異三聚體、同型四聚體、雜四聚體等。
一個實施方案係針對包含多個抗體之寡聚體，他們藉由與抗體融合的肽部分之間的共價或非共價相互作用連接。該類肽可為肽接頭(spacer)或具有促進寡聚化作用性質之肽。白胺酸拉鏈及某些來源於抗體之多肽為可促進抗體寡聚化之肽，如下文詳細描述。
在具體的實施方案中，寡聚體包含兩個至四個抗體。寡聚體之抗體可為任何形式，如上文所述任何形式，例如變異體或片段。較佳地，該寡聚體包含具有內皮素受體結合活性之抗體。
在一個實施方案中，使用來源於免疫球蛋白之多肽製備寡聚體。製備包含一些與抗體衍生多肽(包括Fc域)之不同部位融合的異源多肽已描述於例如Ashkenazi等，1991， PNAS USA88:10535；Byrn等，1990, Nature344:677；及Hollenbaugh等， Construction of Immunoglobulin Fusion Proteins, Current Protocols in Immunology, Suppl. 4，第10.19.1-10.19.11頁。本文之一個實施方案係針對包含兩個由融合抗內皮素受體抗體之內皮素結合片段與抗體之Fc區產生的融合蛋白之二聚體。可藉由以下方式製備二聚體：例如在適當之表現載體中插入編碼融合蛋白之基因融合，在用重組表現載體轉化之宿主細胞中表現該融合基因並允許已表現融合蛋白像抗體分子一樣組裝，其中Fc部分之間的鏈間二硫鍵形成二聚體。
如本文所使用術語「Fc多肽」包括來源於抗體Fc區之天然及突變蛋白形式之多肽。亦包括包含促進二聚體化之鉸鏈區之該類多肽的截短形式。包含Fc部分(以及由其形成之寡聚體)之融合蛋白提供了在蛋白A或蛋白G管柱上進行親和層析法方便純化之優勢。
PCT申請W0 93/10151 (以參考形式併於本文)中一種適當的Fc多肽為自N端鉸鏈區延伸至人IgG1抗體之Fc區之天然C端的單鏈多肽。另一種可用的Fc多肽為美國專利5457035及Baum等，1994, EMBO J. 13:3992-4001中描述之Fc突變蛋白。該突變蛋白之胺基酸序列與W0 93/10151中所示天然Fc序列之胺基酸序列相同，除了胺基酸19自白胺酸變為丙胺酸，胺基酸20自白胺酸變為麩醯胺酸以及胺基酸22自甘胺酸變為丙胺酸。該突變蛋白表現出對Fc受體之親和力降低。在其他實施方案中，抗內皮素受體抗體之重鏈及/或輕鏈可經取代為抗體重鏈及/或輕鏈之可變部分。或者，該寡聚體為包含多個抗體之融合蛋白，包含或不包含接頭肽(spacer peptide)。此等適當的接頭肽描述於美國專利4751180及4935233。
製備寡聚抗體之另一種方法係關於使用白胺酸拉鏈。白胺酸拉鏈域為促進他們所存在之蛋白寡聚化作用的肽。最初發現白胺酸拉鏈存在於數種DNA結合蛋白中(Landschulz等，1988， Science240:1759)，此後發現存在於各種不同蛋白中。在已知的白胺酸拉鏈中為可二聚體化或三聚體化之天然肽或其衍生物。適用於生產可溶寡聚蛋白之白胺酸拉鏈域之實例描述於PCT申請W0 94/10308，來源於肺表面活性蛋白D (SPD)之白胺酸拉鏈描述於Hoppe等，1994， FEBS Letters344:191，以參考形式併於本文。允許與其融合的異源蛋白穩定三聚體化之經修飾之白胺酸拉鏈的使用描述於Fanslow等，1994， Semin. Immunol.6:267-78。在一種方法中，在適當的宿主細胞中表現包含與白胺酸拉鏈肽融合的抗內皮素受體抗體片段或衍生物之重組融合蛋白，自培養物上清中收集可溶寡聚抗內皮素受體抗體片段或其衍生物。
在另一個實施方案中，該抗體衍生物可包含至少本文揭示之CDR之一。舉例而言，可將一或多個CDR整合入已知的抗體骨架區(IgG1，IgG2等)或與適當的載體結合以增強其半衰期。適當載體包括但不限於Fc、白蛋白、轉鐵蛋白及類似物質。此等及其他適當的載體為此項技術已知。該結合CDR肽可為單體、二聚體、四聚體或其他形式。在一個實施方案中，一或多個水溶性多聚體在結合劑之一或多個特異位點結合，例如在胺基端。在一個實例中，抗體衍生物包含一或多個水溶性多聚體附著物包括但不限於聚乙二醇、聚氧乙烯二醇或聚丙二醇。參見，例如，美國專利號4640835、4496689、4301144、4670417、4791192及4179337，在一些實施方案中，衍生物包含一或多個一甲氧基.聚乙二醇、葡聚糖、纖維素或其他基於碳水化合物之聚合物，聚(N-乙烯基吡咯酮).聚乙二醇、聚氧乙烯多元醇(例如甘油)及聚乙烯醇，以及該類聚合物之混合物。在一些實施方案中，一或多個水溶性聚合物與一或多個側鏈隨機結合。在一些實施方案中。PEG可提高結合劑例如抗體之治療作用。一些該類方法描述於例如美國專利號6133426，其以參考形式以任何目的併於本文。
應當理解的是本文提供之抗體可具有至少一個胺基酸替換，只要該抗體保留了結合特異性。因此，抗體結構之修飾包含於本文範疇。此等可包括不破壞抗體內皮素受體結合能力之胺基酸替換，其可為保守或非保守的。保守胺基酸替換可包括非天然胺基酸殘基，其通常經化學肽合成整合而非生物系統合成。此等包括擬肽及其他反向或倒轉形式之胺基酸部分。保守胺基酸替換亦可涉及採用非天然殘基替換天然胺基酸殘基這樣對該位點胺基酸殘基之極性或電荷作用很小或沒有作用。非保守替換可涉及一類胺基酸或胺基酸類似物之一個成員與具有不同物理性質(例如，體積、極性、疏水性、電荷)之另一類胺基酸之成員交換。
而且，熟習此項技術者可生成在各期望胺基酸殘基上包含胺基酸替換之待測變異體。可使用熟習此項技術者已知之活性測定法篩選該類變異體。該類變異體可用於收集關於適當變異體之資訊。舉例而言，若發現某一胺基酸殘基會引起活性破壞、非期望之降低或不當之活性，可避免具有該類變化之變異體。換言之，基於自此等習知試驗收集之資訊，熟習此項技術者可輕鬆確定應避免進一步替換(單獨或與其他突變組合)之胺基酸。
技術人員可使用已知技術確定如本文所列之多肽之適當變異體。在一些實施方案中，熟習此項技術者可藉由靶向對於活性不重要的區域鑑定經改變後不會破壞活性之分子適當區域。在一些實施方案中，可鑑定在相似多肽中保守的殘基或分子部分。在一些實施方案中，甚至可保守替換對於生物活性或結構重要的區域而不破壞生物活性或不會有不利作用於多肽結構。此外，熟習此項技術者可考察結構-功能研究來鑑定對活性或結構重要的相似多肽中之殘基。鑒於這一對比，可預測對應於在相似蛋白中對活性或結構重要的胺基酸殘基之蛋白質中胺基酸殘基之重要性。熟習此項技術者可為此等經預測重要的胺基酸殘基選擇化學相似胺基酸替換。
熟習此項技術者亦可分析與相似多肽之結構相關的三維結構及胺基酸序列。鑒於該類資訊，熟習此項技術者可預測就三維結構而言抗體之胺基酸殘基比對。在一些實施方案中，熟習此項技術者可選擇不對經預測在蛋白質表面之胺基酸殘基進行顯著改變，因為該類殘基可能參與與其他分子之重要相互作用。許多科學出版物致力於二級結構之預測。參見，Moult，1996， Curr. Op. Biotech.7:422-427，Chou等，1974， Biochemistry13:222-245；Chou等，1974， Biochemistry113:211-222；Chou等，1978， Adv. Enzymol. Relat. Areas Mol. Biol.47:45-148；Chou等，1979， Ann. Rev. Biochem.47:251-276；及Chou等， Biophys. J.26:367-384。此外，目前可使用電腦程式輔助預測二級結構。舉例而言，序列同一性大於30%或相似性大於40%的兩個多肽或蛋白質通常具有相似的高級結構。近期蛋白結構資料庫(PDB)之增長增強了二級結構之可預測性，包括多肽或蛋白結構中潛在的摺疊數目。參見，Holm等，1999， Nucl. Acid. Res.27:244-247。已表明(Brenner等，1997， Curr. Op. Struct. Biol.7:369-376)在給定多肽或蛋白質中存在有限數目之摺疊並且一旦確定了臨界數目之結構，結構預測將變得顯著更加精確。
預測二級結構之其他方法包括「穿接(threading)」(Jones，1997， Curr. Opin. Struct. Biol., 7:377-87；Sippl等，1996， Structure4:15-19；「圖譜分析(profile analysis)」(Bowie等，1991， Science253:164-170；Gribskov等，1990， Meth. Enzym.183:146-159；Gribskov等，1987， Proc. Nat. Acad. Sci. USA84:4355-4358及「進化聯繫(evolutionary linkage)」(參見Holm, 見上文(1999)及Brenner, 見上文(1997))。在一些實施方案中，抗體變異體包括糖基化變異體，其中與母體多肽之胺基酸序列相比改變了糖基化位點之數目及/或類型。在一些實施方案中，變異體與天然蛋白質相比具有更多或更少數目之N連接糖基化位點。或者，移除該序列之替換可移除現有的N連接糖鏈。亦提供了N連接糖鏈之重排，其中移除了一或多個N連接糖鏈位點(通常為天然存在之彼等)並創造了一或多個新的N連接位點。其他較佳抗體變異體包括半胱胺酸變異體，與母體胺基酸序列相比其中缺失或由另一胺基酸(例如絲胺酸)替換一或多個半胱胺酸殘基。當抗體必須摺疊成生物活性構象時(例如在分離可溶包涵體之後)可用半胱胺酸變異體。半胱胺酸變異體通常比天然蛋白質具有較少的半胱胺酸殘基，並通常具有偶數個半胱胺酸以最小化未配對半胱胺酸引起的相互作用。
熟習此項技術者可在需要該類替換時確定期望的胺基酸替換(保守或非保守)。在一些實施方案中，胺基酸替換可用於鑑定人內皮素受體抗體之重要殘基或者增加或降低本文所述人內皮素受體抗體之親和力。
根據一些實施方案，較佳的胺基酸替換為以下：(1)降低蛋白質水解敏感性，(2)降低氧化敏感性，(3)改變形成蛋白質複合物之結合親和力，(4)改變結合親和力及/或(4)賦予或修飾該類多肽上之其他物理化學或功能性質。根據一些實施方案，可在天然存在序列中(在一些實施方案中，在形成分子間接觸之域之外的多肽部分)進行單個或多個胺基酸替換(在一些實施方案中為保守胺基酸替換)。在一些實施方案中，保守胺基酸替換通常不會本質上改變母體序列之結構特性(例如，替換胺基酸不應破解存在於母體序列中之螺旋或干擾特徵化母體序列之其他類型二級結構)。此項技術認可之多肽二級及三級結構之實例描述於Proteins，Structures and Molecular Principles，Creighton編輯，W.H. Freeman and Company (1984)；Introduction to Protein Structure，Branden及Tooze編輯, Garland Publishing (1991)；以及Thornton等，1991, Nature354:105，其以參考形式併於本文。
在一些實施方案中，本文提供之抗體可與多聚體、脂類或其他部分(moiety)化學鍵合。
抗原結合試劑可包含至少一個本文描述之CDR，其摻入生物相容性骨架結構中。在一個實例中，該生物相容性骨架結構包含足以形成構象穩定結構支持或骨架或支架之多肽或其部分，其可在侷限的表面區域展示可與抗原結合之一或多個胺基酸序列(例如，CDR、可變區等)。該類結構可為天然存在多肽或多肽「摺疊」(結構基序)，或相對與天然多肽或摺疊可具有一或多個修飾，例如胺基酸添加、缺失或替換。此等支架可來源於任何物種(或多於一個物種)之多肽，例如，人類、其他哺乳動物、其他脊椎動物、無脊椎動物、細菌或病毒。
生物可溶性骨架結構通常係基於蛋白質支架或骨架而非免疫球蛋白域。舉例而言，可使用基於纖維結合素、錨蛋白、脂質運載蛋白(lipocalin)、新抑癌蛋白、細胞色素b、CP1鋅指蛋白、PST1、捲曲螺旋、LACI-D1、Z域及澱粉酶抑肽域(參見，例如，Nygren及Uhlen, 1997, Current Opinion in Structural Biology7:463-469)。
此外，熟習此項技術者可認識到適當的結合劑包括此等抗體之部分，例如一或多個重鏈CDR1、CDR2、CDR3，輕鏈CDR1、CDR2及CDR3，如本文所具體揭示。至少一個重鏈CDR1、CDR2、CDR3、CDR1，CDR2及CDR3區具有至少一個胺基酸替換，只要該抗體保留了非替換CDR之結合特異性。該抗體之非CDR部分可為非蛋白分子，其中該結合劑交叉阻斷本文揭示之抗體與人ET AR之結合及/或抑制經該受體之內皮素信號傳導。該抗體之非CDR部分可為非蛋白質分子，其中該抗體在競爭結合測定法中顯示出與至少抗體A-1/A-2之一所顯示相似的與人ET AR肽之結合類型，及/或中和內皮素之活性。抗體之非CDR部分可由胺基酸組成，其中該抗體為重組結合蛋白或合成肽，並且該重組結合蛋白交叉阻斷本文揭示之抗體與人ET AR之結合及/或中和體內或體外內皮素活性。抗體之非CDR部分可由胺基酸組成，其中該抗體為重組抗體，並且該重組抗體在競爭結合測定法中顯示出與至少抗體A-1/A-2之一所顯示相似的與人ET AR肽之結合類型，及/或中和內皮素信號傳導。
核酸 一方面，本文提供分離之核酸分子。該核酸分子包含例如編碼全部或部分抗體之多聚核苷酸，例如本文抗體之一條鏈或兩條鏈，或其片段、衍生物、突變蛋白或變異體；足以用作雜交探針之多聚核苷酸；PCR引物或用於鑑定、分析、突變或擴增編碼多肽之多聚核苷酸的定序引物；用於抑制多聚核苷酸表現之反義核酸以及其互補序列。該核酸可為任何長度。例如他們的長度可為5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、75、100、125、150、175、200、250、300、350、400、450、500、750、1000、1500、3000、5000或更多個核苷酸，及/或包含一或多個附加序列，例如調控序列，及/或為較大核酸例如載體之一部分。該核酸可為單鏈或雙鏈並包含RNA及/或DNA核苷酸以及其人工變異體(例如，肽核酸)。
可自經ET AR抗原免疫之小鼠B細胞中分離編碼抗體多肽(例如，重鏈或輕鏈、僅可變域或全長)之核酸。可藉由習知方法例如聚合酶鏈式反應(PCR)分離該核酸。
編碼重鏈及輕鏈可變區之核酸序列如上文所示。熟練之技術人員可理解由於遺傳密碼之簡併性，本文揭示之各多肽序列可由更多數目之其他核酸序列編碼。本文提供編碼本文提供之抗體的各簡併核苷酸序列。
本文進一步提供在具體雜交條件下與其他核酸(例如，包含任何A-1/A-2之核苷酸序列之核酸)雜交的核酸。雜交核酸之方法為此項技術熟知的。參見，例如，Current Protocols in Molecular Biology，John Wiley & Son (1989)，6.3.1-6.3.6。如本文定義，例如，中等嚴格條件使用包含5X氯化鈉/檸檬酸鈉(SSC)之預洗溶液、0.5% SDS、1.0 mM EDTA (pH 8.0)、約50%甲醯胺之雜交緩衝液、6X SSC及55℃之雜交溫度(或其他相似之雜交溶液，例如包含絢50%甲醯胺的，以42℃雜交)，並且溶離條件為60℃，使用0.5X SSC、0.1% SDS。嚴格雜交條件在6X SSC中於45℃雜交，然後於68℃在0.1X SSC、0.2% SDS中洗滌一次或多次。此外，熟習此項技術者可操作雜交及/或洗滌條件以增加或降低雜交嚴格度這樣包含相互之間至少65、70、75、80、85、90、95、98或99%同源之核苷酸序列的核酸通常仍可以相互雜交。影響雜交條件選擇之基本參數及設計適當條件之指導列於例如Sambrook，Fritsch及Maniatis，1989， Molecular Cloning:A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press，第9及11章；Current Protocols in Molecular Biology，1995，Ausubel等編輯，John Wiley&Sons，Inc.，第2.10及6.3-6.4節)並可由一般熟習此項技術者基於例如DNA之長度及/或鹼基組成輕鬆確定。可藉由突變在核酸中引入變化，藉此導致其編碼之多肽(例如，抗原結舍蛋白)胺基酸序列之變化。可使用此項技術已知之任何技術引入突變。在一個實施方案中，使用例如定點誘變方案改變一或多個具體胺基酸殘基。在另一個實施方案中，使用例如隨機誘變方案改變一或多個隨機選擇之殘基。無論其如何生成，可表現突變多肽並篩選期望性質。
可將突變引入核酸而不顯著改變其編碼多肽之生物學活性。例如，可進行引起非必需胺基酸殘基處胺基酸替換之核苷酸替換。在一個實施方案中，突變本文為L-1至L-2及H-1至H-2提供之核苷酸序列或其片段、變異體或衍生物這樣其編碼包含本文所示L-1至L-2及H-1至H-2之胺基酸殘基的一或多個缺失或替換，成為兩個或多個序列相異之殘基。在另一個實施方案中，誘變作用在本文所示L-1至L-2及H-1至H-2之一或多個胺基酸殘基附近插入一個胺基酸成為兩個或多個序列相異之殘基。或者，可將一或多個突變引入核酸以選擇性改變其編碼多肽之生物學活性(例如，與ET AR結合)。例如，該突變可在數目上或性質上改變生物學活性。量變之實例包括增加、降低或消除該活性。質變之實例包括改變抗體之抗原特異性。
在另一方面，本文提供適於用作引物或偵測本文核酸序列之雜交探針的核酸分子。本文之核酸分子可僅包含編碼本文全長多肽之核酸序列之一部分，例如，可用作探針或引物或編碼本文多肽活性部分之片段(例如，ET AR結合部分)的片段。
基於本文核酸序列之探針可用於偵測該核酸或相似核酸，例如編碼本文多肽之轉錄物。該探針可包含標記基團，例如放射性同位素、螢光化合物、酶或酶輔因子。該類探針可用於鑑定表現該多肽之細胞。
在另一方面本文提供包含編碼本文多肽或其部分之核酸的載體。載體之實例包括但不限於質體、病毒載體、非游離基因哺乳動物載體及表現載體，例如重組表現載體。
本文之重組表現載體可包含適於該核酸在宿主細胞中表現之形式的本文核酸。該重組表現載體包括一或多個調控序列，基於用於表現之宿主細胞進行篩選，其與該預表現之核酸序列可操作性相連。調控序列包括引導核苷酸序列在多個種類宿主細胞中組成型表現的(例如，SV40早期基因增強劑、勞斯氏肉瘤病毒啟動子及細胞巨化病毒啟動子)，引導僅在某些宿主細胞中核苷酸序列之表現的(例如，組織特異調控序列，參見Voss等，1986， Trends Biochem. Sci.11:287，Maniatis等，1987， Science236:1237，其完整內容以參考形式併於本文)以及引導核苷酸序列響應具體處理或條件之誘導型表現的(例如，哺乳動物細胞中之金屬硫堇啟動子及原核及真核系統二者中之四環黴素反應(tet-sesponsive)啟動子及/或鏈黴素反應啟動子(同前))。熟習此項技術者應理解表現載體之設計取決於例如用於轉化之宿主細胞的選擇、所需蛋白表現量等因素。本文之表現載體可引入宿主細胞，藉此生產由本文所述核酸編碼之蛋白或肽，包括融合蛋白或肽。
另一方面，本文提供可引入本文表現載體之宿主細胞。宿主細胞可為任何原核或真核細胞。原核宿主細胞包括革蘭氏陰性或革蘭氏陽性生物體，例如大腸桿菌或桿菌。更高級的真核細胞包括昆蟲細胞、酵母細胞以及哺乳動物源之確立細胞株。適當哺乳動物宿主細胞株之實例包括中國倉鼠卵巢(CHO)細胞或他們的衍生物例如Veggie CHO及在無血清培養基中生長之相關細胞株(參見Rasmussen等，1998，Cytotechnology 28:31)或CHO株DXB-11，其缺失DHFR (參見Urlaub等，1980， Proc. Natl. Acad, Sci. USA77:4216-20)。其他CHO細胞株包括CHO-K1 (ATCC #CCL-61)、EM9 (ATCC #CRL-1861)，及UV20 (ATCC# CRL-1862)，其他宿主細胞包括猴腎細胞之COS-7株(ATCC #CRL-1651) (參見Gluzman等，1981，Cell 23:175)、L細胞、C127細胞、3T3細胞(ATCC CCL-163)，AM-1/D細胞(描述於美國專利序列號6210924)、HeLa細胞、BHK (ATCC CRL-10)細胞株、來源於非洲綠猴腎細胞株CV1之CV1/EBNA細胞株(ATCC CCL-70) (參見McMahan等，1991，EMBO J. 10:2821)、人胚腎細胞例如293，293 EBNA或MSR 293、人上皮A431細胞、人C010205細胞、其他經轉化靈長動物細胞株、正常二倍體細胞、來源於初生組織體外培養物之細胞株、初移植體、HL-60、U937、HaK或Jurkat細胞。用於細菌、真菌、酵母及哺乳細胞宿主之適當純系及表現載體描述於Pouwels等(Cloning Vectors: A Laboratory Manual, Elsevier, 1985)。
可藉由傳統轉化或轉染技術將載體DNA引入原核或真核細胞中。對於穩定的哺乳動物轉染而言，取決於使用之表現載體及轉染技術，已知只有一小部分細胞可將外源DNA鏊合入他們的基因組中。為了鑑定及篩選此等整合子，通常將編碼篩選標記(例如抗生素抗性)之基因與所關注基因一起引入宿主細胞。較佳的篩選標記包括可賦予藥物(如G418、潮黴素及甲胺喋呤)抗性之彼等。在其他方法中可藉由藥物篩選鑑別包含被引入核酸之穩定轉染細胞(例如，整合了篩選基因之細胞可存活，而其他細胞則死亡)。
可在提高多肽表現之條件下培養已轉化細胞，可藉由習知蛋白純化方法回收多肽。一種該純化方法描述於下文實施例。預用於本文之多肽包括基本同源的重組哺乳動物抗內皮素受體抗體多肽，其基本不含污染性內源材料。
抗體之活性 在一個實施方案中，本文提供之抗體與內皮素受體特異性結合，抑制信號傳導。在另一個實施方案中，本文提供了能與人內皮素受體特異性結合之鼠源抗體或人源化抗體。該類抗體包括可減少或中和內皮素信號傳導之拮抗或中和抗體。
在一個實施方案中，本文提供之抗體與人內皮素受體ET AR結合時的K d大約為0.01 nM至1000 nM、0.1 nM至500 nM、0.5 nM至200 nM、1 nM至200 nM、或10 nM至100 nM。在另一個實施方案中，本文提供之抗體與人內皮素受體ET AR結合時的K d大約為1 nM至200 nM。在另一個實施方案中，本文提供之抗體與人內皮素受體ET AR結合時的K d大約為10 nM至100 nM。在另一個實施方案中，本文提供之抗體與人內皮素受體ET AR結合時的K d大約為1 nM、2 nM、5 nM、10 nM、20 nM、30 nM、40 nM、50 nM、60 nM、70 nM、80 nM、90 nM、或100 nM。
在一個實施方案中，本文提供之抗體在降低人內皮素信號傳導之IC 50值大約為0.01 nM至500 nM、0.1 nM至200 nM、0.5 nM至200 nM、1 nM至200 nM、或10 nM至100 nM。在另一個實施方案中，本文提供之抗體在降低人內皮素信號傳導之IC 50值大約為1 nM至200 nM。在另一個實施方案中，本文提供之抗體在降低人內皮素信號傳導之IC 50值大約為10 nM至100 nM。在另一個實施方案中，本文提供之抗體在降低人內皮素信號傳導之IC 50值大約為1 nM、2 nM、5 nM、10 nM、20 nM、30 nM、40 nM、50 nM、60 nM、70 nM、80 nM、90 nM、或100 nM。
在一個實施方式中，本文提供之ET AR抗體與人內皮素受體ET AR結合時，具有一或多個以下所列之性質： a. 以與該參比抗體相同之K d當與人內皮素受體ET AR結合時； b. 以與該參比抗體相同之IC 50當抑制人內皮素受體ET AR之內皮素活化；及 c. 在人內皮素受體ET AR上與上述參比抗體交叉競爭結合。
在一方面，該參比抗體包含輕鏈可變域胺基酸序列SEQ ID NO: 138及重鏈可變域胺基酸序列SEQ ID NO: 166之組合。在另一方面，上述參比抗體為單株抗體A-1、A-2、A-7、A-9、或A-12。
在本文中，術語「基本相似」意為與參比抗體之IC 50或K d可比或大約為參比抗體之IC 50或K b值之200%、180%、160%、150%、140%、120%、110%、100%、99%、98%、97%、95%、90%、85%、80%、75%、70%、65%、或50%。在一個實施方案中，參比抗體包括，例如，具有重鏈及輕鏈組合L1H1或L2H2之抗體。在另一個實施方案中，參比抗體包括ET AR抗體A-1。
適應症 在一個實施方案中，ET AR抗體之生物學活性變化為用鈣流偵測之方法來偵測ET AR抗體在體外抑制ET AR之功能。
在一個實施方案中，ET AR抗體之體內生物學活性為用急性腎損傷模型及糖尿病腎病動物模型來偵測ET AR抗體對腎臟疾病之治療效果。
本發明提供可與人內皮素受體特異性結合，阻斷ET-1及ET AR之信號轉傳導，從而達到治療糖尿病腎病、慢性腎病以及伴隨蛋白尿或腎小球濾過率降低之疾病的作用。
治療方法 本文中，術語「受試者」指哺乳動物，包括人類，可與術語「患者」交替使用。術語「治療」包括減輕或預防至少一種症狀或病症之其他態樣，或者減輕疾病嚴重性，等等。本文提供之抗體不需要產生完全治癒之效果，或根除疾病之所有症狀或表現，亦即可構成有效治療劑。如相關領域所公認，作為治療劑之藥物可減少給定疾病狀態之嚴重程度，但不需消除疾病之所有表現亦即可被認為是有效的治療劑。相似地，預防投與治療不需在預防症狀出現上完全有效亦即可構成有效預防劑。只減少疾病之影響(例如，藉由減少其症狀之數目或嚴重度，或藉由提高另一治療效果，或藉由產生另一有效作用)，或者減少受試者中疾病發生或加重之可能性就已經足夠。本文之一個實施方案係關於包含以足以誘導反應具體病症嚴重性之指示劑高於基線水準之持續改善的量及時間投與患者抗體的方法。
醫藥組合物可採用任意適當技術包括但不限於腸道外、局部或吸入投與。若為注射，可藉由例如關節內、靜脈內、肌肉內、損傷區內、腹膜內或皮下途徑，以快速注射或連續輸注投與醫藥組合物。可考慮例如在疾病或損傷部位局部投與，如透皮投與及埋植劑持續釋放投與。吸入投與包括例如鼻腔或口腔吸入、採用噴霧劑、以氣霧劑形式吸入抗體等等。其他選擇包括口腔製劑包括片劑、糖漿劑或錠劑。
以包含一個或更多其他組分例如生理學可接受載劑、輔料或稀釋劑之組合物形式投與本文提供之抗體係有利的。組合物可視情況額外包含一個或更多如下所述之生理學活性劑。在多個具體實施方案中，組合物包含除一個或更多本文提供之抗體(例如鼠源抗體或人源化抗體)之外的一個、兩個、三個、四個、五個或六個生理學活性劑。
投與劑量及頻率可根據以下因素而改變：投與途徑、所用具體抗體、所治疾病之性質及嚴重度、症狀為急性抑或慢性以及患者之體積及總體症狀。可藉由此項技術熟知之方法確定適當劑量，例如在臨床試驗中包括劑量放大研究。
本文提供之抗體可在例如一段時間內按規律間隔投與一次或多次。在具體實施方案中，在至少一個月或更長時間投與一次投與鼠源抗體或人源化抗體，例如一個、兩個或三個月或者甚至不確定。對於治療慢性症狀，長期治療通常最有效。但是，對於治療急性症狀，短期投與例如自一週至六週就已足夠。通常，投與人類抗體直至患者表現出所選體徵或指示劑高於基線水準之醫學相關改善度為止。
可在使用抗體例如人類抗體治療之前、進行中及/或之後監測病人症狀之任何變化。對於某些病症，蛋白尿、腎小球濾過率之變化可隨例如疾病進程等因素而變化。
本文之方法及組合物之具體實施方案涉及使用例如抗體及一或多個內皮素拮抗劑、兩個或更多本文提供之抗體，或者本發明抗體及一個或更多其他內皮素拮抗劑。在進一步之實施方案中，單獨或與其他用於治療使患者痛苦之症狀之藥劑組合投與抗體。此等藥劑之實例包括蛋白質以及非蛋白質藥物。當聯合投與多種藥物時，如此項技術所熟知其劑量應相應調整。「聯合投與」組合療法不限於同時投與，亦包括在涉及投與患者至少一種其他治療劑之療程中至少投與一次抗原及蛋白之治療方案。
本文提供可特異性結合至人內皮素受體之抗體相關的組合物、套組及方法。亦提供了核酸分子及其衍生物及片段，其包含編碼與內皮素受體結合之多肽之全部或部分的多聚核苷酸，例如編碼全部或部分抗內皮素受體抗體、抗體片段或抗體衍生物的核酸。本文進一步提供包含該類核酸之載體及質體以及包含該類核酸及/或載體及質體之細胞及細胞株。所提供方法包括，例如，製備、鑑定或分離與人ET AR結合之抗體例如抗ET AR抗體之方法，測定該抗體是否與ET AR結合之方法。
下面藉由具體實施例，對本文之技術方案作進一步的具體說明。
具體實施例：本文中，若非特指，所採用的原料及設備等均可自市場購得或為此項技術常用的。下述實施例中之方法，如無特別說明，均為此項技術之習知方法。
1、免疫用抗原細胞穩定株之構築 接種CHO-DHFR-細胞至6孔盤中，培養24小時後轉染選殖有hET AR基因(核苷酸序列見SEQ ID NO: 1，胺基酸序列見SEQ ID NO: 2)之pIRES質體(Clontech)入6孔盤中之細胞。轉染按照Invitrogen公司推薦Lipofectamine 2000之轉染條件進行。48小時後，將培養液換為含有10 nM MTX (甲胺碟呤)之完全培養基，每隔3天換液。培養兩週左右，穩定生長的純系出現。消化分散細胞集落，將細胞傳代，繼續培養細胞。待傳代細胞長至50%癒合度時，逐漸提高MTX之濃度進行分別加壓篩選，直至MTX之濃度為10 µM。利用多株ET AR抗體(Abcam)對構築的穩定細胞株分別進行FACS偵測，根據FACS偵測結果鑑定加壓後之細胞群體。篩選後的CHO-DHFR-hET AR細胞膜上有大量hET AR表現。最後經過次選殖及進一步鑑定，6株ET AR細胞為高表現穩定細胞株。
2、抗體之製備 將在弗氏佐劑中乳化之CHO-DHFR-hET AR全細胞，以2×10 6細胞/隻的劑量皮下注射BALB/c小鼠(6-8週齡)。2週後，使用不完全弗氏佐劑乳化免疫原，加強免疫小鼠，此後每週加強一次。經過總共6次免疫後，藉由剪尾之方式採血。離心分離血清，用FACS偵測血清效價。達到適合抗體滴度時，斷頸處死小鼠，無菌狀態下獲取脾臟細胞。另外收集生長狀態處於對數生長期之SP2/0細胞，以2000 rpm，3 min離心細胞，將沈澱細胞用無血清培養至重懸，再次離心-重懸，計數。混合脾臟細胞及SP2/0細胞，保證SP2/0:脾臟細胞≥1:1，混合以後再「洗滌-離心」3次。彈散最後一次離心後之細胞沈澱，逐滴加入1 mL預溫的PEG-1350 (30s內滴完)，上下吹吸1分鐘，緩慢加入30 mL預熱的無血清培養基以終止PEG之融合作用。再用1500 rpm，5 min離心，彈散細胞沈澱，加入融合培養基，按每孔20000個脾細胞及5000個飼養層細胞鋪於96孔盤中，每孔100 µL培養基。融合後之雜交瘤細胞及飼養層細胞一起在96孔盤中進行培養，並進行HAT (次黃嘌呤、胺甲喋呤及胸苷)篩選，以除去非融合的細胞。10天後收取培養盤中之雜交瘤細胞上清進行ELISA偵測。
3、全細胞ELISA篩選 將CHO-DHFR-hET AR過表現hET AR細胞及不表現hET AR之CHO-DHFR-細胞分別接種至96孔盤。待細胞長至90%癒合度，除去細胞培養上清，PBS洗兩遍，加入100 µL 100%甲醇4℃固定10 min。再加入100 µL新鮮配製的0.6% H 2O 2-PBS，室溫處理20 min，PBS洗滌2遍。經過PBS-1%BSA封閉後，加入雜交瘤細胞上清4℃孵育90 min。多次洗滌後，每孔加入100 µL稀釋的GxM-HRP-Fc二抗(Sigma-Aldrich)，37℃孵育0.5 hr。洗滌5次後，每孔加入100 µL TMB顯色基質，37℃反應15 min，加入2M H 2SO 4終止顯色，讀取OD 450值。陽性對照為免疫小鼠之血清；陰性對照為細胞培養基上清。經過ELISA之初步偵測，篩選到了數個分泌抗hET AR抗體之陽性雜交瘤細胞株。選取此等分泌抗hET AR抗體之雜交瘤株，進行選殖以獲得能穩定分泌抗hET AR抗體之細胞株。最後選取雜交瘤細胞分泌之抗體上清進行FACS驗證。
4、抗體基因之選殖及次選殖 收集分泌抗體之雜交瘤細胞，按照QIAGEN之mRNA抽提套組操作規程，提取雜交瘤細胞之mRNA。然後將提取後的mRNA反轉錄成cDNA，反轉錄引物為小鼠輕、重鏈恆定區之特異性引物，重鏈反轉錄引物為(5'-TTTGGRGGGAAGATGAAGAC -3') (SEQ ID NO: 199)，輕鏈反轉錄引物為(5'- TTAACACTCTCCCCTGTTGAA-3') (SEQ ID NO: 200)及(5'- TTAACACTCATTCCTGTTGAA-3') (SEQ ID NO: 201)。RT-PCR之反應條件為：25℃ 5 min；50℃ 60 min；70℃ 15 min。將反轉錄的cDNA用0.1 mM的TE稀釋至500 µL，加入至超濾離心管(Amicon Ultra-0.5)中，2000 g離心10 min；棄濾液，再加500 µL之0.1 mM的TE，2000 g離心10 min；棄濾液，將製備管倒置到新的離心管中，2000 g離心10 min，得到純化後的cDNA；取10 µL純化後的cDNA作為模板，加入4 µL之5 ×尾添加緩衝液(tailing buffer) (Promega)，4 µL之dATP (1 mM)及10U之末端轉移酶(Promega，市售)後混勻，37℃孵育5 min後再65℃孵育5 min；然後以加上PolyA尾之cDNA為模板，PCR擴增抗體之輕、重鏈可變區基因。上游引物均為OligodT，重鏈下游引物為(5'-TGGACAGGGATCCAGAGTTCC-3') (SEQ ID NO: 202)及(5'- TGGACAGGGCTCCATAGTTCC-3') (SEQ ID NO: 203)，輕鏈下游引物為(5'- ACTCGTCCTTGGTCAACGTG-3') (SEQ ID NO: 204)。PCR反應條件：95℃ 5 min；95℃ 30 s，56℃ 30 s，72℃ 1 min 40次循環；72℃ 7 min；PCR產物連接至PMD 18-T載體(Takara Bio)後進行定序。選殖之抗體序列見表2。
基於已定序得到的抗體之DNA序列設計PCR引物，從而將完整輕鏈、重鏈信號肽及可變域以及小鼠IgG1恆定區與表現載體pTM5相連。
5.  抗體之人源化及最佳化 首先，得到篩選的鼠源抗體輕、重鏈可變區序列，並使用NCBI之在線抗體可變區序列比對工具Ig Blast，搜尋與輸入之抗體可變區序列同源的人源抗體生殖細胞株基因序列(Ig Germline Gene sequence)，並將除CDR序列外，同源性最高的人源基因序列作為模板序列進行CDR嫁接，得到人源化抗體可變區序列。藉由外包合成人源化抗體輕、重鏈之基因。根據序列設計PCR引物，在合成序列之5'端及3'端引入合適的限制性內切酶位點，並藉由PCR擴增後將其與人IgG2或者IgG4恆定區序列拼接後得到完整的重組人源化抗體序列。重組之抗體根據步驟7進行表現，並按照步驟9中之FACS技術驗證其針對ET AR之親和力。在保留了針對ET AR親和力之人源化抗體群中，遴選出親和力表現最優秀的抗體，並藉由定點突變，對其可變區序列進行進一步的改造，更進一步提高其針對ET AR之親和力。
6.  ET AR人源化抗體之基因選殖與次選殖 最佳化後之人源化抗體重鏈及輕鏈可變區序列由金斯瑞生物科技有限公司合成，合成時重鏈可變區5'端帶入Nhe1酶切位點，3'端帶入Sal1酶切位點，從而將完整的重鏈可變區序列與已裝入重鏈恆定區之表現載體pTM5相連；同樣，合成時輕鏈可變區5'端帶入Nhe1酶切位點，3'端帶入Bsiw1酶切位點，從而將完整的輕鏈可變區序列與已裝入輕鏈恆定區之表現載體pTM5相連。
7.  抗體之短暫表現 接種5×10 5/mL之懸浮HEK293或者CHO表現細胞株至轉瓶中，經過24小時37℃，5% CO 2旋轉培養後，密度達到1×10 6/mL後被用於轉染。轉染過程中使用聚乙烯亞胺(PEI)作為轉染介質，將其與DNA (DNA用量為每1×10 6個細胞0.5 µg，其中抗體輕鏈及重鏈之比重為3:2)混合，PEI及DNA之質量混合較佳配比為3:1。兩者混合物在靜置孵育15分鐘後被加入至細胞培養中。細胞在接受PEI與DNA混合物後繼續37℃，5% CO 2旋轉培24小時後，向細胞培養液中加入0.5%之胰蛋白腖作為表現需要的添加物，最後在表現完成後(96小時以上)收集細胞上清用於抗體之純化分離。
8、抗體之純化分離 收集的細胞上清經過高速(8000 rpm，15分鐘)離心移除細胞以及細胞碎片後，再用0.45 um濾膜過濾澄清。澄清後的上清被用於純化。純化過程由層析儀完成。上清首先流過蛋白G親和層析管柱，上清中包含之抗體在此期間與蛋白G親和層析管柱之配基相結合後滯留於管柱內，然後用低pH值(小於等於3.0)之溶離緩衝液灌洗層析管柱解離與層析管柱結合之抗體。收集到的抗體溶離液之低pH值用1M之Tris-HCl迅速中和以保護抗體不變性失活。得到的抗體溶離液經過16小時之透析後置換成PBS緩衝體系。
9、流式細胞儀分析驗證功能性抗體(FACS) 用含10 mM EDTA之PBS消化、收集10 5個CHO-DHFR-hET AR細胞，分別加入1.5 mL EP管，離心後棄上清，陰性對照樣本用流式上樣緩衝液(PBS，2% FBS)重懸。陽性處理組細胞每管加200 µL抗體上清，室溫孵育；孵育完成後1500 rpm離心，棄上清，用流式上樣緩衝液洗一次細胞沈澱，再離心，將細胞重懸；向細胞重懸液加入1:50稀釋的FITC標記之羊抗鼠螢光二抗(BD Pharmingen)，200 µL/孔，室溫避光孵育30 min；離心，棄上清，再用流式上樣緩衝液洗一次，離心，最後用流式上樣緩衝液將細胞沈澱重懸，上機偵測。表現有重組抗ET AR功能性抗體之上清及表現有ET AR之CHO-DHFR-ET AR細胞有特異性結合。灰色峰及虛線峰為陰性對照，雜交瘤細胞上清對應的實線峰有明顯右移。
10、鈣流實驗驗證功能性抗體 以每孔25000個接種共表現hET AR-Aequorin之CHO-DHFR-細胞至黑色96孔細胞培養盤，37℃培養過夜。第二天除去細胞上清，加入50 µL基質coelenterazine h (Promega)避光孵育2 hr，再加入50 µL雜交瘤細胞上清或純化後的抗體繼續孵育30分鐘。在Molecular Devices之SpectraMax L酶標儀上採用自動進樣器灌注Endothelin-1，在灌注後之40s內偵測瞬間鈣流變化，記錄出峰時間及峰值。不同雜交瘤上清顯示出不同的抑制細胞內人ET AR介導之Ca 2+變化之結果，A-1抗體顯著地抑制ET AR介導之Ca 2+變化。隨著重組抗ET AR功能性抗體濃度之提高，抗體對細胞內人ET AR介導之Ca 2+變化之抑制性效果在顯著增強。
11、鈣流實驗偵測抗體A-1在體外拮抗不同種屬ET AR之生物學活性 用含2 mM EDTA之PBS消化、收集共表現水母發光蛋白Aequorin及兔ET AR、金黃地鼠ET AR或大鼠ET AR之CHO-A1細胞，按計數結果，每種細胞分別按照3.5×10 4個細胞/孔或4×10 4個細胞/孔接種至無菌96孔細胞培養盤，100μL/孔，周邊孔用PBS以100μL/孔補足。37℃培養箱隔夜培養。-20℃取出一管Coelenterazine-h待其完全融化後離心使液體聚集於EP管底部，在5mL離心管內加入3.2mL之無酚紅DMEM/F12，將100μL Colenterazine-h加入其中，顛倒混勻後320μL每孔分於加樣盤內備用。取出細胞培養盤，吸去原有培養基，用排槍加入50 μL/孔之Coelenterazine-h (避光操作)，將96孔細胞培養盤置於避光條件下，室溫孵育2-2.5小時。梯度稀釋抗體A-1，避光加藥，50μL/孔藥物加至50μL/孔之腔腸素裏，每個濃度做兩個複孔。不加抗體A-1之無酚紅DMEM/F12作為空白對照。加藥完畢，將96孔細胞培養盤置於避光條件下，室溫孵育30分鐘。孵育結束後，在酶標儀上讀取各孔螢光強度，每孔灌100μL 10nM ET-1。採用prism軟體進行作圖，由軟體自動計算藥物之IC50值及曲線擬合相關係數R 2。如圖5所示，抗體A-1可有效拮抗ET-1誘導的兔ET AR、金黃地鼠ET AR之活化，不能拮抗ET-1誘導的大鼠ET AR之活化。
12、抗體A-1在食蟹獼猴中之藥物動力學研究 18隻食蟹獼猴(9雌：9雄)隨機分入3個組，每組3隻雌性及3隻雄性食蟹獼猴。各組動物分別單次靜脈注射5mg/kg、15mg/kg或50mg/kg抗體A-1，並在投與前、投與後即刻(±1min)、投與後0.5h、2h、4h、8h、1天、2天、3天、4天、7天、14天、21天及28天採血，離心提取血清，用ELISA方法偵測血清中藥物濃度，並藉由軟體分析確定A-1在食蟹獼猴中之半衰期。如表1所示，食蟹獼猴中單次靜脈注射5mg/kg、15mg/kg或50mg/kg抗體A-1之半衰期分別為244.74h、173.15h及173.41h。 表1、食蟹獼猴中抗體A-1單次投與之藥物動力學
抗體A-1 (mg/kg) t 1/2(h) C max(μg/mL)
5 244.74±30.29 98.22±16.81
15 173.15±63.14 317.57±38.19
50 173.41±24.65 1,014.96±73.63
13、建立順鉑誘導之兔子急性腎損傷模型以評價抗體A-1之體內藥效 按5mg/kg之劑量單次耳緣靜脈注射順鉑誘導建立兔子急性腎損傷模型，並在該模型中評價抗體A-1每週兩次靜脈注射之藥效。隨機挑選24隻動物，順鉑注射前或投與抗體A-1前，稱量兔子體重，並收集兔子之24小時尿液及血清以偵測尿總蛋白(U-TP)、尿白蛋白(U-Alb)、尿素氮(BUN)及血肌酐(sCr)含量。24隻動物按照體重進行隨機分組，每組8隻，共3組，第2組動物首次投與時間為順鉑注射後24h (D1)，第2次投與時間為順鉑注射後第4天(D4)。第3組動物首次投與時間為順鉑注射前2h (-2h)，第2次投與時間為順鉑注射後第3天(D3)。在順鉑注射後第1、2、3及5天再次收集血清以偵測BUN及sCr。在實驗終點收集24小時尿液以偵測U-TP及U-Alb。如圖6、圖7、表2及表3所示，於-2h及D3投與抗體A-1治療顯著降低或阻斷了順鉑誘導之BUN及sCr升高。如圖8及表4所示，於-2h及D3投與抗體A-1治療顯著降低或阻斷了順鉑誘導之U-TP及U-Alb升高。以上資料表明，抗體A-1 (-2h及D3)在順鉑誘導之兔子急性腎損傷模型中具有優越的腎臟保護作用。 表2、各組兔子在不同時間點之BUN (平均值±SD)
組別 D0 D1 D2 D3 D5
第1組, 溶媒 IV, D1, 4 5.76±0.86 10.94±2.64 18.54±6.68 31.53±12.27 39.27±27.82
第2組, 抗體A-1 15mg/kg, IV, D1, 4 5.57±0.64 11.97±1.77## 22.46±5.40## 38.16±10.87## 49.56±36.44#
第3組, 抗體A-1 15mg/kg, -2h, D3 5.80±0.91 7.07±0.94** 7.50±0.86** 7.64±0.83** 8.13±1.21*
備註：第2組與第1組相比，自D1至D5，P＞0.05；第3組與第1組相比，*表示P＜0.05，**表示P＜0.01；第2組與第3組相比，#表示P＜0.05，##表示P＜0.01。 表3、各組兔子在不同時間點之sCr (平均值±SD)
組別 D0 D1 D2 D3 D5
第1組, 溶媒 IV, D1, 4 99.14±8.09 104.24±15.76 242.65±128.94 429.04±248.30 537.39±445.35
第2組, 抗體A-1 15mg/kg, IV, D1, 4 93.10±9.56 111.50±12.13## 283.55±78.84## 498.80±204.91## 605.28±481.84#
第3組, 抗體A-1 15mg/kg, -2h, D3 100.88±9.37 76.71±10.03** 75.65±9.53* 78.66±10.99* 74.69±11.85
備註：第2組與第1組相比，自D1至D5，P＞0.05；第3組與第1組相比，*表示P＜0.05，**表示P＜0.01；第2組與第3組相比，#表示P＜0.05，##表示P＜0.01。 表4、各組兔子在不同時間點之U-TP及U-Alb (平均值±SD)
組別 U-TP(mg/24h) U-Alb(mg/24h)
基線 投與後第一週 基線 投與後第一週
第1組 溶媒, IV, D1, 4 12.78±2.26 94.42±81.96 0.00±0.00 11.95±14.89
第2組 抗體A-1, 15mg/kg, IV, D1, 4 11.18±3.12 62.68±50.74 0.00±0.00 9.02±10.44
第3組 抗體A-1, 15mg/kg, -2h, D3 12.25±3.41 20.06±3.39* 0.00±0.00 0.00±0.00
備註：第2組與第1組相比，自D1至D5，P＞0.05；第3組與第1組相比，*表示P＜0.05，**表示P＜0.01；第2組與第3組相比，#表示P＜0.05，##表示P＜0.01。 表5、各組金黃地鼠在不同時間點之U-TP、U-Alb及尿液體積(平均值±SD)
組別 U-TP(mg/24h) U-Alb(mg/24h) 尿液體積(mL/24h)
基線 投與後2週 基線 投與後2週 基線 投與後2週
第1組，空白組 7.6±3.1 5.9±2.4 0.06±0.04 0.18±0.13 5.8±4.5 6±4.6
第2組，模型組 9.4±9 21.1±5.3 ### 0.12±0.1 1.93±0.77 ### 7±2.7 29.1±9.1 ###
第3組，抗體A-1，6mg/kg, i.p., BIW*2 8.2±7.6 17.8±7.6 ## 0.07±0.04 1.35±1.14 5.8±2.7 20.2±9.8 ##*
第4組，抗體A-1，18mg/kg, i.p., BIW*2 11.3±6.9 13±6 * 0.07±0.09 1.34±0.84 # 8.7±2.9 16.8±15.1 #**
第5組，抗體A-1，54mg/kg, i.p., BIW*2 6.4±4.9 13.5±4.6 #* 0.03±0.02 1.37±0.58 ## 5.3±3.2 11.5±6.1 ***
備註：與第1組相比，#表示P＜0.05，##表示P＜0.01，###表示P＜0.001；與第2組相比，*表示P＜0.05，**表示P＜0.01，***表示P＜0.001。
14、建立金黃地鼠之糖尿病腎病模型以評價抗體A-1之體內藥效 按30mg/kg之劑量連續3天腹腔注射鏈脲菌素(STZ)聯合高脂高膽固醇飼料誘導建立金黃地鼠之糖尿病腎病模型，並在該模型中評價抗體A-1每週兩次腹腔注射之藥效。隨機挑選50隻金黃地鼠，收集尿液偵測尿肌酐(U-Cr)、U-TP及U-Alb，收集血清偵測空腹血糖、BUN及sCr；按照體重進行隨機分組，空白組10隻，剩餘動物按照30mg/kg之劑量腹腔注射STZ，連續注射三天後，第四天進行分組，每組10隻。分組後分別投與溶媒(空白組及模型組)、6mg/kg、18mg/kg或54mg/kg抗體A-1，投與當天定義為D0，以普通飼料飼養10天，第11天將飼料更換成高脂高膽固醇飼料飼養至實驗結束。投與兩週後收集尿液偵測U-Cr、U-TP及U-Alb。如圖9至圖11、表5所示，與空白組相比，STZ注射後模型組動物24小時尿量、尿總蛋白及尿白蛋白升高，提示早期糖尿病腎病模型建模成功；與模型組相比，抗體A-1顯著降低了糖尿病腎病動物之24小時尿量及尿總蛋白，同時，抗體A-1治療後糖尿病腎病動物之24小時尿白蛋白亦降低了約30%，表現出了良好的腎臟保護作用。
提供以上實施例用於向一般熟習此項技術者充分揭示及說明如何製造及使用所主張之實施方式，而不意謂限制本文揭示之範疇。對熟習此項技術者而言顯而易見之修飾皆在本文申請專利範圍之範疇內。將本說明書中引用之所有出版物、專利及專利申請都藉由參考併入本文，就如同每個出版物、專利或專利申請均具體及單獨地藉由參考併入本文一樣。
圖1：顯示了ELISA實驗篩選不同雜交瘤細胞上清與CHO-DHFR-ET AR (圖中標為CHO-ET AR)細胞結合之結果。其中，自15F3雜交瘤細胞選殖至了ET AR抗體A-1 (其包含SEQ ID NO: 138與SEQ ID NO: 166)。 圖2：顯示了流式細胞術(FACS)偵測重組表現之ET AR抗體(A-1、A-2 (其包含SEQ ID NO: 140及SEQ ID NO: 168)、A-7 (其包含SEQ ID NO: 150與SEQ ID NO: 178)、及A-12 (其包含SEQ ID NO: 160與SEQ ID NO: 188))與人ET AR之特異性結合結果。其中灰色峰及虛線峰為陰性對照，虛線峰表示ET AR抗體與CHO-DHFR-之結合曲線，實線峰表示ET AR抗體與CHO-DHFR-ET AR之結合曲線。 圖3：顯示了鈣流實驗篩選不同雜交瘤細胞上清抑制細胞內人ET AR介導之Ca 2+變化結果。 圖4：顯示了鈣流實驗偵測重組表現之ET AR抗體與人ET AR之濃度梯度抑制曲線(IC 50= 38 nM，R 2= 0.97) (A-1)、(IC 50= 88 nM，R 2= 0.97) (A-9 (其包含SEQ ID NO: 154與SEQ ID NO: 182))。 圖5：顯示了鈣流實驗偵測抗體A-1與兔ET AR、金黃地鼠ET AR及大鼠ET AR之濃度梯度抑制曲線。 圖6：顯示了抗體A-1之兔子急性腎損傷模型藥效實驗中動物之尿素氮(BUN)變化曲線。 圖7：顯示了抗體A-1之兔子急性腎損傷模型藥效實驗中動物之血肌酐(sCr)變化曲線。 圖8：顯示了抗體A-1之兔子急性腎損傷模型藥效實驗中動物之24小時尿白蛋白(U-Alb)排泄量。 圖9：顯示了抗體A-1之金黃地鼠糖尿病腎病模型藥效實驗中動物之24小時尿總蛋白(U-TP)排泄量。 圖10：顯示了抗體A-1之金黃地鼠糖尿病腎病模型藥效實驗中動物之24小時尿白蛋白(U-Alb)排泄量。 圖11：顯示了抗體A-1之金黃地鼠糖尿病腎病模型藥效實驗中動物之24小時尿量。 

          <![CDATA[<110>  中國大陸商鴻運華寧（杭州）生物醫藥有限公司(GMAX BIOPHARM LLC)]]>
          　　 
          <![CDATA[<120>  一種能與人內皮素受體特異性結合的抗體及其在糖尿病腎病及慢性腎病治療中的應用]]>
          <![CDATA[<140>  111112218]]>
          <![CDATA[<141>  2022-03-30]]>
          <![CDATA[<150>  CN 202110353110.6]]>
          <![CDATA[<151>  2021-03-31]]>
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          <![CDATA[<170>  PatentIn version 3.5]]>
          <![CDATA[<210>  1]]>
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          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人]]>
          <![CDATA[<400>  1]]>
          gaattcggga aaaagtgaag gtgtaaaagc agcacaagtg caataagaga tatttcctca       60
          aatttgcctc aagatggaaa ccctttgcct cagggcatcc ttttggctgg cactggttgg      120
          atgtgtaatc agtgataatc ctgagagata cagcacaaat ctaagcaatc atgtggatga      180
          tttcaccact tttcgtggca cagagctcag cttcctggtt accactcatc aacccactaa      240
          tttggtccta cccagcaatg gctcaatgca caactattgc ccacagcaga ctaaaattac      300
          ttcagctttc aaatacatta acactgtgat atcttgtact attttcatcg tgggaatggt      360
          ggggaatgca actctgctca ggatcattta ccagaacaaa tgtatgagga atggccccaa      420
          cgcgctgata gccagtcttg cccttggaga ccttatctat gtggtcattg atctccctat      480
          caatgtattt aagctgctgg ctgggcgctg gccttttgat cacaatgact ttggcgtatt      540
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          ctgcgctctt agtgttgaca ggtacagagc agttgcctcc tggagtcgtg ttcagggaat      660
          tgggattcct ttggtaactg ccattgaaat tgtctccatc tggatcctgt cctttatcct      720
          ggccattcct gaagcgattg gcttcgtcat ggtacccttt gaatataggg gtgaacagca      780
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          Met Glu Thr Leu Cys Leu Arg Ala Ser Phe Trp Leu Ala Leu Val Gly 
          1               5                   10                  15      
          Cys Val Ile Ser Asp Asn Pro Glu Arg Tyr Ser Thr Asn Leu Ser Asn 
                      20                  25                  30          
          His Val Asp Asp Phe Thr Thr Phe Arg Gly Thr Glu Leu Ser Phe Leu 
                  35                  40                  45              
          Val Thr Thr His Gln Pro Thr Asn Leu Val Leu Pro Ser Asn Gly Ser 
              50                  55                  60                  
          Met His Asn Tyr Cys Pro Gln Gln Thr Lys Ile Thr Ser Ala Phe Lys 
          65                  70                  75                  80  
          Tyr Ile Asn Thr Val Ile Ser Cys Thr Ile Phe Ile Val Gly Met Val 
                          85                  90                  95      
          Gly Asn Ala Thr Leu Leu Arg Ile Ile Tyr Gln Asn Lys Cys Met Arg 
                      100                 105                 110         
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                  115                 120                 125             
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          Arg Trp Pro Phe Asp His Asn Asp Phe Gly Val Phe Leu Cys Lys Leu 
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                          165                 170                 175     
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          Val Gln Gly Ile Gly Ile Pro Leu Val Thr Ala Ile Glu Ile Val Ser 
                  195                 200                 205             
          Ile Trp Ile Leu Ser Phe Ile Leu Ala Ile Pro Glu Ala Ile Gly Phe 
              210                 215                 220                 
          Val Met Val Pro Phe Glu Tyr Arg Gly Glu Gln His Lys Thr Cys Met 
          225                 230                 235                 240 
          Leu Asn Ala Thr Ser Lys Phe Met Glu Phe Tyr Gln Asp Val Lys Asp 
                          245                 250                 255     
          Trp Trp Leu Phe Gly Phe Tyr Phe Cys Met Pro Leu Val Cys Thr Ala 
                      260                 265                 270         
          Ile Phe Tyr Thr Leu Met Thr Cys Glu Met Leu Asn Arg Arg Asn Gly 
                  275                 280                 285             
          Ser Leu Arg Ile Ala Leu Ser Glu His Leu Lys Gln Arg Arg Glu Val 
              290                 295                 300                 
          Ala Lys Thr Val Phe Cys Leu Val Val Ile Phe Ala Leu Cys Trp Phe 
          305                 310                 315                 320 
          Pro Leu His Leu Ser Arg Ile Leu Lys Lys Thr Val Tyr Asn Glu Met 
                          325                 330                 335     
          Asp Lys Asn Arg Cys Glu Leu Leu Ser Phe Leu Leu Leu Met Asp Tyr 
                      340                 345                 350         
          Ile Gly Ile Asn Leu Ala Thr Met Asn Ser Cys Ile Asn Pro Ile Ala 
                  355                 360                 365             
          Leu Tyr Phe Val Ser Lys Lys Phe Lys Asn Cys Phe Gln Ser Cys Leu 
              370                 375                 380                 
          Cys Cys Cys Cys Tyr Gln Ser Lys Ser Leu Met Thr Ser Val Pro Met 
          385                 390                 395                 400 
          Asn Gly Thr Ser Ile Gln Trp Lys Asn His Asp Gln Asn Asn His Asn 
                          405                 410                 415     
          Thr Asp Arg Ser Ser His Lys Asp Ser Met Asn 
                      420                 425         
          <![CDATA[<210>  3]]>
          <![CDATA[<211>  2696]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  3]]>
          gtctaggagc ctgtggagtc taaggaagat cgcgggaggc gtgttcctcc ggagtttgct       60
          tttccttggg agcctcgcgc gcacacccat cccttctagt ctggcaactg tgtctaggag      120
          gtggggagcc tctctctgat ccaccggacc atcgctggag cttgcaggct gagcaagatc      180
          tccccctaga gaagcctggc tgtccgggga agtttccccg agctgagact gtgctgcagc      240
          cctggtcacc cgccaccctg cgcgccaccc tcgttctcca gctcaggctc cggctggccc      300
          gtgcgcggac ctggagctgt ctgcttccga ggagctctaa ggtgaaaaaa agaaaggcgt      360
          gagaccaaca taagaagact taaaatccag gttaagatga gtatcttttg ccttgcggca      420
          tacttttggc tgaccatggt gggaggcgta atggctgaca atccggagag atacagcgct      480
          aatctaagca gccacatgga agacttcacc ccttttccgg ggacggagat caactttctg      540
          ggcaccaccc atcgaccccc taatttggcc ctgcctagca atggctcaat gcacggctat      600
          tgcccacagc agactaaaat cacgacagct ttcaaatata ttaacactgt gatatcctgc      660
          accattttca tcgtgggaat ggtggggaac gcaactctac tacgaatcat ttaccaaaac      720
          aagtgtatga ggaacggccc caatgcgctc atagccagcc tggcccttgg agaccttatc      780
          tacgtggtca ttgacctccc catcaacgtg tttaagctct tggcaggacg ctggcctttc      840
          gaccacaatg attttggagt gtttctctgc aagctgttcc ccttcctgca gaagtcctcc      900
          gtgggcatca ccgtcttgaa cctctgtgct ctcagtgtgg acaggtacag agcagtggct      960
          tcctggagcc gagttcaagg aatcgggatc cccttgatta ccgccattga aatcgtctcc     1020
          atctggattc tttccttcat cttggccatc ccggaagcaa tcggcttcgt catggtaccc     1080
          ttcgaataca agggcgagct gcataggacc tgcatgctca acgccacgtc caagttcatg     1140
          gagttttacc aagatgtgaa ggactggtgg ctctttgggt tctacttctg catgcccttg     1200
          gtgtgcacag caatcttcta caccctcatg acctgtgaga tgctcaacag gaggaacggc     1260
          agcttgcgga tcgcccttag tgagcacctc aaacagcgtc gagaagtggc aaagactgtc     1320
          ttctgcttgg ttgtcatctt cgccctgtgc tggttccctc ttcacttaag ccgcattttg     1380
          aagaaaactg tatatgatga gatggataag aaccggtgtg aactgctcag cttcttgctg     1440
          ctaatggatt acatcggcat taacctggca accatgaatt cttgcataaa cccaatagct     1500
          ctatattttg tgagcaagaa attcaaaaat tgttttcagt cctgcctctg ttgctgttgt     1560
          caccagtcca aaagcctcat gacctcggtc cccatgaatg gaacgagtat ccagtggaag     1620
          aaccaagagc agaacaacca caacacggaa cggagcagcc acaaggacag catgaactaa     1680
          ccctccgcag aaacaccgag acgtgtgcct tcaagtccta ggatggaaac aaccattacg     1740
          ccacagatgc gctcccaaaa cctcccaagt ctctcccatg ctccttttct aagtccatcc     1800
          taggaaaagc tctcctgccc tcccaacagc acgtggtgga ccggtcccag ctatagccaa     1860
          tgggtctttc ctgagtactg tatatgattt gcataccgcg catgtcattt ccaacacttg     1920
          aaaattagag ctgggagaaa ggagatgatg gttcaaagaa gccacctagc tgccgccttt     1980
          gcatgaacac agagtttgca agttcatgac cagcttccgt gcagttctat ggaccagctg     2040
          gtgggaactg tccatcctaa gattctagag cagtgggtct caaccttccc aatgctgcag     2100
          ccccttaata cagttcttca ttttccagtg acccccccca accacaatat tattttttgt     2160
          tgctacttca attattttga attgttataa ttgtctgata tttctgatag tcttagcctg     2220
          cccctgttaa agggtcatta gcaacccaca agttgagaac cactgcccta gaaattctgt     2280
          tgcgtttcat ggcccatgac tacaatccta aaattggaga ggtgagggaa gatggtcagg     2340
          tgttcaaggt tagcctcatc aacatagttc ggaaaagcca gggctacctg ttctcacaag     2400
          acacaaacag acaaaaagtg tttcaaagtt atggcagatt cattattatt aattattatt     2460
          atcttatagc caaacacatt gtgaggttaa agtactcttt tggaaatgtc accgagtgtt     2520
          ggtactttat aactgcatgg taccctagaa atgatcgttt catcttcttt caatgtactc     2580
          tgaagaaaag aaataggaga gttccagaag ggagatctgg aaaggagata atgtttgaaa     2640
          tgtaaagaag gaaaatatcc aataaaaaaa ttcaaagtct aaaaaaaaaa aaaaaa         2696
          <![CDATA[<210>  4]]>
          <![CDATA[<211>  427]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  4]]>
          Met Ser Ile Phe Cys Leu Ala Ala Tyr Phe Trp Leu Thr Met Val Gly 
          1               5                   10                  15      
          Gly Val Met Ala Asp Asn Pro Glu Arg Tyr Ser Ala Asn Leu Ser Ser 
                      20                  25                  30          
          His Met Glu Asp Phe Thr Pro Phe Pro Gly Thr Glu Ile Asn Phe Leu 
                  35                  40                  45              
          Gly Thr Thr His Arg Pro Pro Asn Leu Ala Leu Pro Ser Asn Gly Ser 
              50                  55                  60                  
          Met His Gly Tyr Cys Pro Gln Gln Thr Lys Ile Thr Thr Ala Phe Lys 
          65                  70                  75                  80  
          Tyr Ile Asn Thr Val Ile Ser Cys Thr Ile Phe Ile Val Gly Met Val 
                          85                  90                  95      
          Gly Asn Ala Thr Leu Leu Arg Ile Ile Tyr Gln Asn Lys Cys Met Arg 
                      100                 105                 110         
          Asn Gly Pro Asn Ala Leu Ile Ala Ser Leu Ala Leu Gly Asp Leu Ile 
                  115                 120                 125             
          Tyr Val Val Ile Asp Leu Pro Ile Asn Val Phe Lys Leu Leu Ala Gly 
              130                 135                 140                 
          Arg Trp Pro Phe Asp His Asn Asp Phe Gly Val Phe Leu Cys Lys Leu 
          145                 150                 155                 160 
          Phe Pro Phe Leu Gln Lys Ser Ser Val Gly Ile Thr Val Leu Asn Leu 
                          165                 170                 175     
          Cys Ala Leu Ser Val Asp Arg Tyr Arg Ala Val Ala Ser Trp Ser Arg 
                      180                 185                 190         
          Val Gln Gly Ile Gly Ile Pro Leu Ile Thr Ala Ile Glu Ile Val Ser 
                  195                 200                 205             
          Ile Trp Ile Leu Ser Phe Ile Leu Ala Ile Pro Glu Ala Ile Gly Phe 
              210                 215                 220                 
          Val Met Val Pro Phe Glu Tyr Lys Gly Glu Leu His Arg Thr Cys Met 
          225                 230                 235                 240 
          Leu Asn Ala Thr Ser Lys Phe Met Glu Phe Tyr Gln Asp Val Lys Asp 
                          245                 250                 255     
          Trp Trp Leu Phe Gly Phe Tyr Phe Cys Met Pro Leu Val Cys Thr Ala 
                      260                 265                 270         
          Ile Phe Tyr Thr Leu Met Thr Cys Glu Met Leu Asn Arg Arg Asn Gly 
                  275                 280                 285             
          Ser Leu Arg Ile Ala Leu Ser Glu His Leu Lys Gln Arg Arg Glu Val 
              290                 295                 300                 
          Ala Lys Thr Val Phe Cys Leu Val Val Ile Phe Ala Leu Cys Trp Phe 
          305                 310                 315                 320 
          Pro Leu His Leu Ser Arg Ile Leu Lys Lys Thr Val Tyr Asp Glu Met 
                          325                 330                 335     
          Asp Lys Asn Arg Cys Glu Leu Leu Ser Phe Leu Leu Leu Met Asp Tyr 
                      340                 345                 350         
          Ile Gly Ile Asn Leu Ala Thr Met Asn Ser Cys Ile Asn Pro Ile Ala 
                  355                 360                 365             
          Leu Tyr Phe Val Ser Lys Lys Phe Lys Asn Cys Phe Gln Ser Cys Leu 
              370                 375                 380                 
          Cys Cys Cys Cys His Gln Ser Lys Ser Leu Met Thr Ser Val Pro Met 
          385                 390                 395                 400 
          Asn Gly Thr Ser Ile Gln Trp Lys Asn Gln Glu Gln Asn Asn His Asn 
                          405                 410                 415     
          Thr Glu Arg Ser Ser His Lys Asp Ser Met Asn 
                      420                 425         
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          gtgagaccaa cataacagga cgtttcttca gatccacatt aagatgggtg tcctttgctt       60
          tctggcgtcc ttttggctgg ccctggtggg aggcgcaatc gctgacaatg ctgagagata      120
          cagtgctaat ctaagcagcc acgtggagga cttcacccct tttccaggga cagagttcga      180
          ctttctgggc accacccttc gaccccctaa tttggccctg cctagcaatg gctcaatgca      240
          tggctattgc ccacagcaga caaaaatcac gacggctttc aaatatatca acactgtgat      300
          atcctgtacc attttcatcg tgggaatggt ggggaacgcc actctcctaa gaatcattta      360
          ccaaaacaag tgtatgagga acggccccaa tgcgctcata gccagcctgg cccttggaga      420
          ccttatctac gtggtcattg atctccccat caatgtgttt aagctgttgg cggggcgctg      480
          gccttttgac cacaatgatt ttggagtgtt tctctgcaag ctgttcccct ttttgcagaa      540
          gtcgtccgtg ggcatcactg tcctgaatct ctgcgctctc agtgtggaca ggtacagagc      600
          agtggcttcc tggagccggg ttcaaggaat cgggatcccc ttgattaccg ccattgaaat      660
          tgtctccatc tggatccttt cctttatctt ggccatccca gaagcaatcg gcttcgtcat      720
          ggtacccttc gaatacaagg gcgagcagca caggacctgc atgctcaacg ccacgaccaa      780
          gttcatggag ttttaccaag acgtgaagga ctggtggctc tttggattct acttctgcat      840
          gcccttggtg tgcacagcaa tcttctatac cctcatgacc tgtgagatgc tcaacagaag      900
          gaatgggagc ttgcggattg ccctcagcga acacctcaag cagcgtcgag aggtggcaaa      960
          gaccgtcttc tgcttggttg tcatcttcgc cctgtgctgg ttccctcttc acttaagccg     1020
          aattttgaag aaaaccgtct atgatgagat ggataagaac cggtgtgaac tgctcagctt     1080
          cttgctgctc atggattaca ttggcattaa cctggcaacc atgaactctt gcataaaccc     1140
          aatagctctg tattttgtga gcaagaaatt caaaaattgt tttcagtcat gcctctgttg     1200
          ctgttgtcac cagtccaaaa gcctcatgac ctcggtcccc atgaatggaa cgagtatcca     1260
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          cagcagctgc gctcccaaaa cctcccaggt ctctcccctg ctttttgtct aagctt         1436
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          Met Gly Val Leu Cys Phe Leu Ala Ser Phe Trp Leu Ala Leu Val Gly 
          1               5                   10                  15      
          Gly Ala Ile Ala Asp Asn Ala Glu Arg Tyr Ser Ala Asn Leu Ser Ser 
                      20                  25                  30          
          His Val Glu Asp Phe Thr Pro Phe Pro Gly Thr Glu Phe Asp Phe Leu 
                  35                  40                  45              
          Gly Thr Thr Leu Arg Pro Pro Asn Leu Ala Leu Pro Ser Asn Gly Ser 
              50                  55                  60                  
          Met His Gly Tyr Cys Pro Gln Gln Thr Lys Ile Thr Thr Ala Phe Lys 
          65                  70                  75                  80  
          Tyr Ile Asn Thr Val Ile Ser Cys Thr Ile Phe Ile Val Gly Met Val 
                          85                  90                  95      
          Gly Asn Ala Thr Leu Leu Arg Ile Ile Tyr Gln Asn Lys Cys Met Arg 
                      100                 105                 110         
          Asn Gly Pro Asn Ala Leu Ile Ala Ser Leu Ala Leu Gly Asp Leu Ile 
                  115                 120                 125             
          Tyr Val Val Ile Asp Leu Pro Ile Asn Val Phe Lys Leu Leu Ala Gly 
              130                 135                 140                 
          Arg Trp Pro Phe Asp His Asn Asp Phe Gly Val Phe Leu Cys Lys Leu 
          145                 150                 155                 160 
          Phe Pro Phe Leu Gln Lys Ser Ser Val Gly Ile Thr Val Leu Asn Leu 
                          165                 170                 175     
          Cys Ala Leu Ser Val Asp Arg Tyr Arg Ala Val Ala Ser Trp Ser Arg 
                      180                 185                 190         
          Val Gln Gly Ile Gly Ile Pro Leu Ile Thr Ala Ile Glu Ile Val Ser 
                  195                 200                 205             
          Ile Trp Ile Leu Ser Phe Ile Leu Ala Ile Pro Glu Ala Ile Gly Phe 
              210                 215                 220                 
          Val Met Val Pro Phe Glu Tyr Lys Gly Glu Gln His Arg Thr Cys Met 
          225                 230                 235                 240 
          Leu Asn Ala Thr Thr Lys Phe Met Glu Phe Tyr Gln Asp Val Lys Asp 
                          245                 250                 255     
          Trp Trp Leu Phe Gly Phe Tyr Phe Cys Met Pro Leu Val Cys Thr Ala 
                      260                 265                 270         
          Ile Phe Tyr Thr Leu Met Thr Cys Glu Met Leu Asn Arg Arg Asn Gly 
                  275                 280                 285             
          Ser Leu Arg Ile Ala Leu Ser Glu His Leu Lys Gln Arg Arg Glu Val 
              290                 295                 300                 
          Ala Lys Thr Val Phe Cys Leu Val Val Ile Phe Ala Leu Cys Trp Phe 
          305                 310                 315                 320 
          Pro Leu His Leu Ser Arg Ile Leu Lys Lys Thr Val Tyr Asp Glu Met 
                          325                 330                 335     
          Asp Lys Asn Arg Cys Glu Leu Leu Ser Phe Leu Leu Leu Met Asp Tyr 
                      340                 345                 350         
          Ile Gly Ile Asn Leu Ala Thr Met Asn Ser Cys Ile Asn Pro Ile Ala 
                  355                 360                 365             
          Leu Tyr Phe Val Ser Lys Lys Phe Lys Asn Cys Phe Gln Ser Cys Leu 
              370                 375                 380                 
          Cys Cys Cys Cys His Gln Ser Lys Ser Leu Met Thr Ser Val Pro Met 
          385                 390                 395                 400 
          Asn Gly Thr Ser Ile Gln Trp Lys Asn Gln Glu Gln Asn His Asn Thr 
                          405                 410                 415     
          Glu Arg Ser Ser His Lys Asp Ser Met Asn 
                      420                 425     
          <![CDATA[<210>  7]]>
          <![CDATA[<211>  33]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  7]]>
          agggccagtc agaacattgg cacaagcata cac                                    33
          <![CDATA[<210>  8]]>
          <![CDATA[<211>  11]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  8]]>
          Arg Ala Ser Gln Asn Ile Gly Thr Ser Ile His 
          1               5                   10      
          <![CDATA[<210>  9]]>
          <![CDATA[<211>  33]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  9]]>
          cgagcaagtg aaaatattta cagttattta gca                                    33
          <![CDATA[<210>  10]]>
          <![CDATA[<211>  11]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  10]]>
          Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Tyr Leu Ala 
          1               5                   10      
          <![CDATA[<210>  11]]>
          <![CDATA[<211>  39]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  11]]>
          cagagcctct ttgatattga tggaaagaca tatttgaat                              39
          <![CDATA[<210>  12]]>
          <![CDATA[<211>  13]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  12]]>
          Gln Ser Leu Phe Asp Ile Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn 
          1               5                   10              
          <![CDATA[<210>  13]]>
          <![CDATA[<211>  33]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  13]]>
          cgggcaagtc aggacattgg tggtagctta aac                                    33
          <![CDATA[<210>  14]]>
          <![CDATA[<211>  11]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  14]]>
          Arg Ala Ser Gln Asp Ile Gly Gly Ser Leu Asn 
          1               5                   10      
          <![CDATA[<210>  15]]>
          <![CDATA[<211>  33]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  15]]>
          agggccagcc agactattag cgacttctta cac                                    33
          <![CDATA[<210>  16]]>
          <![CDATA[<211>  11]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  16]]>
          Arg Ala Ser Gln Thr Ile Ser Asp Phe Leu His 
          1               5                   10      
          <![CDATA[<210>  17]]>
          <![CDATA[<211>  33]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  17]]>
          agggcaagtg aggacataca cactcaatta gcc                                    33
          <![CDATA[<210>  18]]>
          <![CDATA[<211>  11]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  18]]>
          Arg Ala Ser Glu Asp Ile His Thr Gln Leu Ala 
          1               5                   10      
          <![CDATA[<210>  19]]>
          <![CDATA[<211>  48]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  19]]>
          agatctagtc agtacattgt tcatagtact ggaaccacct atttagaa                    48
          <![CDATA[<210>  20]]>
          <![CDATA[<211>  16]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  20]]>
          Arg Ser Ser Gln Tyr Ile Val His Ser Thr Gly Thr Thr Tyr Leu Glu 
          1               5                   10                  15      
          <![CDATA[<210>  21]]>
          <![CDATA[<211>  48]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  21]]>
          agatctagtc attaccttgt tcatgataac ggaaacacct atgttgaa                    48
          <![CDATA[<210>  22]]>
          <![CDATA[<211>  16]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  22]]>
          Arg Ser Ser His Tyr Leu Val His Asp Asn Gly Asn Thr Tyr Val Glu 
          1               5                   10                  15      
          <![CDATA[<210>  23]]>
          <![CDATA[<211>  48]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  23]]>
          agatctagtc agaacattgt ccatagtact ggaaacacct atttagaa                    48
          <![CDATA[<210>  24]]>
          <![CDATA[<211>  16]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  24]]>
          Arg Ser Ser Gln Asn Ile Val His Ser Thr Gly Asn Thr Tyr Leu Glu 
          1               5                   10                  15      
          <![CDATA[<210>  25]]>
          <![CDATA[<211>  30]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  25]]>
          agtgtcagct caagtgtaag ttacatacac                                        30
          <![CDATA[<210>  26]]>
          <![CDATA[<211>  10]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  26]]>
          Ser Val Ser Ser Ser Val Ser Tyr Ile His 
          1               5                   10  
          <![CDATA[<210>  27]]>
          <![CDATA[<211>  3]]>0
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  27]]>
          agtgccagct caagtgtaag ttacatgtgc                                        30
          <![CDATA[<210>  28]]>
          <![CDATA[<211>  10]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  28]]>
          Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met Cys 
          1               5                   10  
          <![CDATA[<210>  29]]>
          <![CDATA[<211>  18]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  29]]>
          cagggcatta acaattat                                                     18
          <![CDATA[<210>  30]]>
          <![CDATA[<211>  6]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  30]]>
          Gln Gly Ile Asn Asn Tyr 
          1               5       
          <![CDATA[<210>  31]]>
          <![CDATA[<211>  21]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  31]]>
          tatgcttcta agtctatatc t                                                 21
          <![CDATA[<210>  32]]>
          <![CDATA[<211>  7]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  32]]>
          Tyr Ala Ser Lys Ser Ile Ser 
          1               5           
          <![CDATA[<210>  33]]>
          <![CDATA[<211>  21]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  33]]>
          aatgcaaaaa ccttagcaga a                                                 21
          <![CDATA[<210>  34]]>
          <![CDATA[<211>  7]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  34]]>
          Asn Ala Lys Thr Leu Ala Glu 
          1               5           
          <![CDATA[<210>  35]]>
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          ctggtgtctg aattggactc t                                                 21
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          tatgcttccc aatccatctc t                                                 21
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          ggtgcagcca gtttgaaaag t                                                 21
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          <![CDATA[<400>  43]]>
          aaagtttcca accgattttc t                                                 21
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          gacacatcca aactggcttc t                                                 21
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          tatacatcaa ctttacagtc a                                                 21
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          cagcatcatt atggtattcc gttcacg                                           27
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          <![CDATA[<400>  52]]>
          Gln His His Tyr Gly Ile Pro Phe Thr 
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          <![CDATA[<400>  53]]>
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          <![CDATA[<211>  9]]>
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          <![CDATA[<210>  55]]>
          <![CDATA[<211>  27]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
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          ctacaatatg ctagttctcc gtatacg                                           27
          <![CDATA[<210>  56]]>
          <![CDATA[<211>  9]]>
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          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  56]]>
          Leu Gln Tyr Ala Ser Ser Pro Tyr Thr 
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          <![CDATA[<210>  57]]>
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          caaagtggta acacctttcc gtggacg                                           27
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          <![CDATA[<211>  9]]>
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          <![CDATA[<400>  58]]>
          Gln Ser Gly Asn Thr Phe Pro Trp Thr 
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          <![CDATA[<210>  59]]>
          <![CDATA[<211>  27]]>
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          <![CDATA[<400>  59]]>
          caacagtata ggagtattcc gtggacg                                           27
          <![CDATA[<210>  60]]>
          <![CDATA[<211>  9]]>
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          Gln Gln Tyr Arg Ser Ile Pro Trp Thr 
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          <![CDATA[<210>  61]]>
          <![CDATA[<211>  27]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
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          <![CDATA[<400>  61]]>
          tttcaaggtt cacattttcc attcacg                                           27
          <![CDATA[<210>  6]]>2
          <![CDATA[<211>  9]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  62]]>
          Phe Gln Gly Ser His Phe Pro Phe Thr 
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          <![CDATA[<210>  63]]>
          <![CDATA[<211>  27]]>
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          <![CDATA[<400>  63]]>
          tttcaaggtt cacatttccc attcacg                                           27
          <![CDATA[<210>  64]]>
          <![CDATA[<211>  9]]>
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          <![CDATA[<400>  64]]>
          His Gln Trp Ser Thr Asn Pro Pro Thr 
          1               5                   
          <![CDATA[<210>  65]]>
          <![CDATA[<211>  27]]>
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          cagcagtgga gtagtaaccc acccacg                                           27
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          <![CDATA[<211>  9]]>
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          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  66]]>
          Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Pro Thr 
          1               5                   
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          cagcagttta gtaaacttcg gaca                                              24
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          ggctacacct ttactagcta ctggatacac                                        30
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          <![CDATA[<400>  72]]>
          Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Trp Ile His 
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          ggcctcaaca ttaaagacat ctatattcac                                        30
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          Gly Leu Asn Ile Lys Asp Ile Tyr Ile His 
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          ggttactcat tcaccaacta ctggatacac                                        30
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          <![CDATA[<400>  76]]>
          Gly Tyr Ser Phe Thr Asn Tyr Trp Ile His 
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          ggattcactt tcagtgacta tcccatgtct                                        30
          <![CDATA[<210>  78]]>
          <![CDATA[<211>  10]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  78]]>
          Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr Pro Met Ser 
          1               5                   10  
          <![CDATA[<210> ]]> 79
          <![CDATA[<211>  30]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  79]]>
          ggattcactt tcagtagctt tggcatgtct                                        30
          <![CDATA[<210>  80]]>
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          <![CDATA[<400>  80]]>
          Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe Gly Met Ser 
          1               5                   10  
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          <![CDATA[<400>  81]]>
          ggattcactt tcagtaccta tggcatgtct                                        30
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          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  82]]>
          Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr Gly Met Ser 
          1               5                   10  
          <![CDATA[<210>  83]]>
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          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  83]]>
          ggattcactt tcagtagtta tggcatgtct                                        30
          <![CDATA[<210>  84]]>
          <![CDATA[<211>  10]]>
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          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  84]]>
          Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Gly Met Ser 
          1               5                   10  
          <![CDATA[<210>  85]]>
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          <![CDATA[<400>  85]]>
          gggttttcac tgaccacttc tggtatgggt gtaggc                                 36
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          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  86]]>
          Gly Phe Ser Leu Thr Thr Ser Gly Met Gly Val Gly 
          1               5                   10          
          <![CDATA[<210>  87]]>
          <![CDATA[<211>  36]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  87]]>
          ggattttcac tgagcacttc tggtttgggt gtaggc                                 36
          <![CDATA[<210>  88]]>
          <![CDATA[<211>  12]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  88]]>
          Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ser Gly Leu Gly Val Gly 
          1               5                   10          
          <![CDATA[<210>  89]]>
          <![CDATA[<211>  24]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  89]]>
          ggattcacct tcagtgatta ttac                                              24
          <![CDATA[<210>  90]]>
          <![CDATA[<211>  8]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  90]]>
          Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr Tyr 
          1               5               
          <![CDATA[<210>  91]]>
          <![CDATA[<211>  48]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  91]]>
          cacatttggt cggatggtga cacgcgctat tacccagccc tgaagaac                    48
          <![CDATA[<210>  92]]>
          <![CDATA[<211>  16]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  92]]>
          His Ile Trp Ser Asp Gly Asp Thr Arg Tyr Tyr Pro Ala Leu Lys Asn 
          1               5                   10                  15      
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          <![CDATA[<211>  36]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  93]]>
          tacattaatc ctgacactga ttatagtgag tacaat                                 36
          <![CDATA[<210>  94]]>
          <![CDATA[<211>  12]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  94]]>
          Tyr Ile Asn Pro Asp Thr Asp Tyr Ser Glu Tyr Asn 
          1               5                   10          
          <![CDATA[<210>  95]]>
          <![CDATA[<211>  36]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  95]]>
          aggattgatc ctgcgaacgg taagactgca tatgac                                 36
          <![CDATA[<210>  96]]>
          <![CDATA[<211>  12]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  96]]>
          Arg Ile Asp Pro Ala Asn Gly Lys Thr Ala Tyr Asp 
          1               5                   10          
          <![CDATA[<210>  97]]>
          <![CDATA[<211>  36]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  97]]>
          atgattgatc cttccgatgc tgaaactggg ttaaat                                 36
          <![CDATA[<210>  98]]>
          <![CDATA[<211>  12]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  98]]>
          Met Ile Asp Pro Ser Asp Ala Glu Thr Gly Leu Asn 
          1               5                   10          
          <![CDATA[<210>  99]]>
          <![CDATA[<211>  24]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  99]]>
          gttagtgatg gtggtggttc cacc                                              24
          <![CDATA[<210>  100]]>
          <![CDATA[<211>  8]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  100]]>
          Val Ser Asp Gly Gly Gly Ser Thr 
          1               5               
          <![CDATA[<210>  101]]>
          <![CDATA[<211>  24]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  101]]>
          attagtagtg ctggtagttt cacc                                              24
          <![CDATA[<210>  102]]>
          <![CDATA[<211>  8]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  102]]>
          Ile Ser Ser Ala Gly Ser Phe Thr 
          1               5               
          <![CDATA[<210>  103]]>
          <![CDATA[<211>  51]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  103]]>
          accattaata ctaatggtgg taccacctat tatcgagaca gtgtgaaggg c                51
          <![CDATA[<210>  104]]>
          <![CDATA[<211>  17]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  104]]>
          Thr Ile Asn Thr Asn Gly Gly Thr Thr Tyr Tyr Arg Asp Ser Val Lys 
          1               5                   10                  15      
          Gly 
          <![CDATA[<210>  105]]>
          <![CDATA[<211>  51]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  105]]>
          accataaata ctaatggtgg taacacctat tattcagaca atgtgaaggg c                51
          <![CDATA[<210>  106]]>
          <![CDATA[<211>  17]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>]]>  小鼠
          <![CDATA[<400>  106]]>
          Thr Ile Asn Thr Asn Gly Gly Asn Thr Tyr Tyr Ser Asp Asn Val Lys 
          1               5                   10                  15      
          Gly 
          <![CDATA[<210>  107]]>
          <![CDATA[<211>  51]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  107]]>
          accattagta ctaatggtgc caccgccaat tatccagaca gtgtgaaggg c                51
          <![CDATA[<210>  108]]>
          <![CDATA[<211>  17]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  108]]>
          Thr Ile Ser Thr Asn Gly Ala Thr Ala Asn Tyr Pro Asp Ser Val Lys 
          1               5                   10                  15      
          Gly 
          <![CDATA[<210>  109]]>
          <![CDATA[<211>  48]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  109]]>
          cacatttggt gggatgatga taagtactat aatccatccc tgaagagc                    48
          <![CDATA[<210>  110]]>
          <![CDATA[<211>  16]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  110]]>
          His Ile Trp Trp Asp Asp Asp Lys Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser 
          1               5                   10                  15      
          <![CDATA[<210>  111]]>
          <![CDATA[<211>  48]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  111]]>
          cacatttggt gggatgatga taagtactat aatccatccc ttaagaga                    48
          <![CDATA[<210>  112]]>
          <![CDATA[<211>  16]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  112]]>
          His Ile Trp Trp Asp Asp Asp Lys Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Arg 
          1               5                   10                  15      
          <![CDATA[<210>  113]]>
          <![CDATA[<211>  30]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  113]]>
          attagaaatc gggctaatgg ttacacaaca                                        30
          <![CDATA[<210>  114]]>
          <![CDATA[<211>  10]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  114]]>
          Ile Arg Asn Arg Ala Asn Gly Tyr Thr Thr 
          1               5                   10  
          <![CDATA[<210>  115]]>
          <![CDATA[<211>  30]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  115]]>
          atgaaggatg atagtcttta ctttgacaac                                        30
          <![CDATA[<210>  116]]>
          <![CDATA[<211>  10]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  116]]>
          Met Lys Asp Asp Ser Leu Tyr Phe Asp Asn 
          1               5                   10  
          <![CDATA[<210>  117]]>
          <![CDATA[<211>  30]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  117]]>
          gcaagtgctg gttattattt ttttgacttc                                        30
          <![CDATA[<210>  118]]>
          <![CDATA[<211>  10]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  118]]>
          Ala Ser Ala Gly Tyr Tyr Phe Phe Asp Phe 
          1               5                   10  
          <![CDATA[<210>  119]]>
          <![CDATA[<211>  15]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  119]]>
          ggtagggggg cccac                                                        15
          <![CDATA[<210>  120]]>
          <![CDATA[<211>  5]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  120]]>
          Gly Arg Gly Ala His 
          1               5   
          <![CDATA[<210>  121]]>
          <![CDATA[<211>  33]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  121]]>
          gcaagaattg gcgattacta taatatggac tac                                    33
          <![CDATA[<210>  122]]>
          <![CDATA[<211>  11]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  122]]>
          Ala Arg Ile Gly Asp Tyr Tyr Asn Met Asp Tyr 
          1               5                   10      
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          <![CDATA[<400>  123]]>
          acaagacatg cttcctacta tagctacgac cattctatgg actac                       45
          <![CDATA[<210>  124]]>
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          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  124]]>
          Thr Arg His Ala Ser Tyr Tyr Ser Tyr Asp His Ser Met Asp Tyr 
          1               5                   10                  15  
          <![CDATA[<210>  125]]>
          <![CDATA[<211>  36]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
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          <![CDATA[<400>  125]]>
          gcaagacggg ggtacgacgt tgggtgcttt gaccac                                 36
          <![CDATA[<210>  126]]>
          <![CDATA[<211>  12]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  126]]>
          Ala Arg Arg Gly Tyr Asp Val Gly Cys Phe Asp His 
          1               5                   10          
          <![CDATA[<210>  127]]>
          <![CDATA[<211>  27]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  127]]>
          gcaagagact acggggctat ggactac                                           27
          <![CDATA[<210>  128]]>
          <![CDATA[<211>  9]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  128]]>
          Ala Arg Asp Tyr Gly Ala Met Asp Tyr 
          1               5                   
          <![CDATA[<210>  129]]>
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          <![CDATA[<400>  129]]>
          gcaactgaaa agggagctat gggctac                                           27
          <![CDATA[<210>  130]]>
          <![CDATA[<211>  9]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  130]]>
          Ala Thr Glu Lys Gly Ala Met Gly Tyr 
          1               5                   
          <![CDATA[<210>  131]]>
          <![CDATA[<211>  57]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  131]]>
          gctcgaagaa ctgagactat gattacgaca gtgctatatt actatgctat ggactac          57
          <![CDATA[<210>  132]]>
          <![CDATA[<211>  19]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  132]]>
          Ala Arg Arg Thr Glu Thr Met Ile Thr Thr Val Leu Tyr Tyr Tyr Ala 
          1               5                   10                  15      
          Met Asp Tyr 
          <![CDATA[<210>  133]]>
          <![CDATA[<211>  54]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  133]]>
          gctcgaagga gggaagttaa cttcggtatt aactattact attctatgga ctac             54
          <![CDATA[<210>  134]]>
          <![CDATA[<211>  18]]>
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          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  134]]>
          Ala Arg Arg Arg Glu Val Asn Phe Gly Ile Asn Tyr Tyr Tyr Ser Met 
          1               5                   10                  15      
          Asp Tyr 
          <![CDATA[<210>  135]]>
          <![CDATA[<211>  36]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  135]]>
          gtaagagatt cctatcacta cgggtacttc gatgtc                                 36
          <![CDATA[<210>  136]]>
          <![CDATA[<211>  12]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  136]]>
          Val Arg Asp Ser Tyr His Tyr Gly Tyr Phe Asp Val 
          1               5                   10          
          <![CDATA[<210>  137]]>
          <![CDATA[<211>  324]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  137]]>
          gacatcttgc tgactcagtc tccagccatc ctgtctgtga gtccaggaaa aagagtcagt       60
          ttctcctgca gggccagtca gaacattggc acaagcatac actggtatca gcaaagaaca      120
          aatggttctc caaggcttct cataaagtat gcttctaagt ctatatctgg gatttcttcc      180
          aggtttagtg gcagtggctc agggacagat tttactctta gtatcaacag tgtggagtct      240
          gaagatattg cagcttatta ctgtcaacat agttatagct tcccgtggac gttcggtgga      300
          ggcaccaagc tggaaatcaa acgg                                             324
          <![CDATA[<210>  138]]>
          <![CDATA[<211>  108]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  138]]>
          Asp Ile Leu Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Leu Ser Val Ser Pro Gly 
          1               5                   10                  15      
          Lys Arg Val Ser Phe Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asn Ile Gly Thr Ser 
                      20                  25                  30          
          Ile His Trp Tyr Gln Gln Arg Thr Asn Gly Ser Pro Arg Leu Leu Ile 
                  35                  40                  45              
          Lys Tyr Ala Ser Lys Ser Ile Ser Gly Ile Ser Ser Arg Phe Ser Gly 
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Ser Ile Asn Ser Val Glu Ser 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Asp Ile Ala Ala Tyr Tyr Cys Gln His Ser Tyr Ser Phe Pro Trp 
                          85                  90                  95      
          Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg 
                      100                 105             
          <![CDATA[<210>  139]]>
          <![CDATA[<211>  324]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  139]]>
          gacatccaga tgactcagtc tccagcctcc ctatctacat ctgtgggaga aactgtcacc       60
          atcacatgtc gagcaagtga aaatatttac agttatttag catggtatca gcagagacag      120
          ggaaaatctc ctcacctcct ggtcaataat gcaaaaacct tagcagaagg tgtgccatca      180
          aggttcagtg gcagtggatc aggcacacat ttttctctga ggatcagcgg cctgcagcct      240
          gaagattttg ggagttatta ctgtcagcat cattatggta ttccgttcac gttcggaggg      300
          gggaccaagt tgtcaataaa acgg                                             324
          <![CDATA[<210>  140]]>
          <![CDATA[<211>  108]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  140]]>
          Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Thr Ser Val Gly 
          1               5                   10                  15      
          Glu Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Tyr 
                      20                  25                  30          
          Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Arg Gln Gly Lys Ser Pro His Leu Leu Val 
                  35                  40                  45              
          Asn Asn Ala Lys Thr Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Ser Gly Thr His Phe Ser Leu Arg Ile Ser Gly Leu Gln Pro 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Asp Phe Gly Ser Tyr Tyr Cys Gln His His Tyr Gly Ile Pro Phe 
                          85                  90                  95      
          Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Ser Ile Lys Arg 
                      100                 105             
          <![CDATA[<210>  141]]>
          <![CDATA[<211>  339]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  141]]>
          gatgttgtga tgacccagat tccactcact ttgtcggtta ccattggaca accagcctcc       60
          atctcttgca agtcaagtca gagcctcttt gatattgatg gaaagacata tttgaattgg      120
          ttgttacaga ggccaggcca gtctccaaag cgcctaatct atctggtgtc tgaattggac      180
          tctggagtcc ctgacaggtt cactggcagt ggatcaggga cagatttcac actgaaaatc      240
          agcagagtgg aggctgagga tttgggagtt tactattgtt ggcaaggtac acattttccg      300
          ctcacgttcg gtgctgggac caagctggag ctgaaacgg                             339
          <![CDATA[<210>  142]]>
          <![CDATA[<211>  113]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  142]]>
          Asp Val Val Met Thr Gln Ile Pro Leu Thr Leu Ser Val Thr Ile Gly 
          1               5                   10                  15      
          Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Phe Asp Ile 
                      20                  25                  30          
          Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Leu Leu Gln Arg Pro Gly Gln Ser 
                  35                  40                  45              
          Pro Lys Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Glu Leu Asp Ser Gly Val Pro 
              50                  55                  60                  
          Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 
          65                  70                  75                  80  
          Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly 
                          85                  90                  95      
          Thr His Phe Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys 
                      100                 105                 110         
          Arg 
          <![CDATA[<210>  143]]>
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          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  143]]>
          gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ttatctgcct ctctgggaga aagagtcagt       60
          ctcacttgtc gggcaagtca ggacattggt ggtagcttaa actggcttca gcagaaacca      120
          gatggaacta ttaaacgcct gatctacgcc acatccagct tagattctgg tgtccccaaa      180
          aggttcagtg gcagtaggtc tgggtcagtt ttttctctca ccatcaccag ccttgagtct      240
          gaagattttg tagactattt ctgtctacaa tatgctagtt ctccgtatac gttcggaggg      300
          gggaccaagc tggaaataaa acgg                                             324
          <![CDATA[<210>  144]]>
          <![CDATA[<211>  108]]>
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          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  144]]>
          Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly 
          1               5                   10                  15      
          Glu Arg Val Ser Leu Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Gly Gly Ser 
                      20                  25                  30          
          Leu Asn Trp Leu Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Ile Lys Arg Leu Ile 
                  35                  40                  45              
          Tyr Ala Thr Ser Ser Leu Asp Ser Gly Val Pro Lys Arg Phe Ser Gly 
              50                  55                  60                  
          Ser Arg Ser Gly Ser Val Phe Ser Leu Thr Ile Thr Ser Leu Glu Ser 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Asp Phe Val Asp Tyr Phe Cys Leu Gln Tyr Ala Ser Ser Pro Tyr 
                          85                  90                  95      
          Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg 
                      100                 105             
          <![CDATA[<210>  145]]>
          <![CDATA[<211>  324]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  145]]>
          gacattgtga tgactcagtc tccagccacc ctgtctgtga ctccaggaga tagagtctct       60
          ctttcctgca gggccagcca gactattagc gacttcttac actggtatca acaaaaatca      120
          catgagtctc caaggcttct catcaaatat gcttcccaat ccatctctgg gatcccctcc      180
          aggttcagtg gcactggatc agggtcagat ttcactctca ctatcaacag tgtggaacct      240
          gaagatgttg gagtgtatta ctgtcaaagt ggtaacacct ttccgtggac gttcggtgga      300
          ggcaccaagc tggaaatcaa acgg                                             324
          <![CDATA[<210>  146]]>
          <![CDATA[<211>  108]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  146]]>
          Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Thr Pro Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Arg Val Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Thr Ile Ser Asp Phe 
                      20                  25                  30          
          Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser His Glu Ser Pro Arg Leu Leu Ile 
                  35                  40                  45              
          Lys Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly 
              50                  55                  60                  
          Thr Gly Ser Gly Ser Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Val Glu Pro 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Ser Gly Asn Thr Phe Pro Trp 
                          85                  90                  95      
          Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg 
                      100                 105             
          <![CDATA[<210>  147]]>
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          <![CDATA[<400>  147]]>
          gacatccaga tgacacaatc ttcatcctcc ttttctggat ttctaggaga cagagtcacc       60
          attacttgca gggcaagtga ggacatacac actcaattag cctggtatca gcagaaacca      120
          ggaaatgctc ctaggctctt aatatctggt gcagccagtt tgaaaagtgg ggttccttca      180
          agattcagtg gcactggatc tggaaaggat tacactctca gcattaccag tcttcagact      240
          gaagatgttg ctacatatta ctgtcaacag tataggagta ttccgtggac gttcggtgga      300
          ggcaccaagc tggaaatcaa acgg                                             324
          <![CDATA[<210>  148]]>
          <![CDATA[<211>  108]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  148]]>
          Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Ser Ser Ser Phe Ser Gly Phe Leu Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asp Ile His Thr Gln 
                      20                  25                  30          
          Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Asn Ala Pro Arg Leu Leu Ile 
                  35                  40                  45              
          Ser Gly Ala Ala Ser Leu Lys Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 
              50                  55                  60                  
          Thr Gly Ser Gly Lys Asp Tyr Thr Leu Ser Ile Thr Ser Leu Gln Thr 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Arg Ser Ile Pro Trp 
                          85                  90                  95      
          Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg 
                      100                 105             
          <![CDATA[<210>  149]]>
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          <![CDATA[<400>  149]]>
          gatgttttga tgacccaaac tccgctctcc ctgcctgtca gtcttggaga tcacgcctcc       60
          atctcttgca gatctagtca gtacattgtt catagtactg gaaccaccta tttagaatgg      120
          tacctacaga aaccaggcca gtctccacag ctcctgatct acaaagtttc caaccgattt      180
          tctggggtcc cagacaggtt cactggcagt ggatcaggga cagatttcac actcaggatc      240
          agcagagtgg aggctgagga tctgggagtt tatttctgct ttcaaggttc acattttcca      300
          ttcacgttcg gctcggggac aaagttggaa ataaaacgg                             339
          <![CDATA[<210>  150]]>
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          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  150]]>
          Asp Val Leu Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp His Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Tyr Ile Val His Ser 
                      20                  25                  30          
          Thr Gly Thr Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 
                  35                  40                  45              
          Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 
              50                  55                  60                  
          Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Arg Ile 
          65                  70                  75                  80  
          Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Phe Gln Gly 
                          85                  90                  95      
          Ser His Phe Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 
                      100                 105                 110         
          Arg 
          <![CDATA[<210>  151]]>
          <![CDATA[<211>  339]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  151]]>
          gaagttgtga tgacccaaac tccactctcc ttgcctgtca gtcttggaga tcaagcctcc       60
          atctcttgca gatctagtca ttaccttgtt catgataacg gaaacaccta tgttgaatgg      120
          tacctgcaga agccaggcca gtctccaaag ctcctgatct acaaggtttc caaccgattt      180
          tctggagtcc cagacaggtt tactggcagt ggttcaggga cagatttcac actcaagatc      240
          agcagagtgg agtctgagga tctgggaatt tattactgct ttcaaggttc acatttccca      300
          ttcacgttcg gctcggggac agagttggaa ataaaacgg                             339
          <![CDATA[<210>  152]]>
          <![CDATA[<211>  113]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  152]]>
          Glu Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser His Tyr Leu Val His Asp 
                      20                  25                  30          
          Asn Gly Asn Thr Tyr Val Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 
                  35                  40                  45              
          Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 
              50                  55                  60                  
          Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 
          65                  70                  75                  80  
          Ser Arg Val Glu Ser Glu Asp Leu Gly Ile Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly 
                          85                  90                  95      
          Ser His Phe Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Glu Leu Glu Ile Lys 
                      100                 105                 110         
          Arg 
          <![CDATA[<210>  153]]>
          <![CDATA[<211>  339]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  153]]>
          gatgttttga tgacccaaac tccactctcc ctgcctgtca gtcttggaga tcaagcctcc       60
          atctcttgca gatctagtca gaacattgtc catagtactg gaaacaccta tttagaatgg      120
          tacctgcaga aaccaggcca gtctccaaag ctcctgattt ataaagtttc caaccgattt      180
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          accagagtgg aggctgagga tctgggaatt tattactgct ttcaaggttc acattttcca      300
          ttcacgttcg gctcggggac aaagttggaa ataaaacgg                             339
          <![CDATA[<210>  154]]>
          <![CDATA[<211>  113]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  154]]>
          Asp Val Leu Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Asn Ile Val His Ser 
                      20                  25                  30          
          Thr Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 
                  35                  40                  45              
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              50                  55                  60                  
          Asn Arg Phe Arg Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 
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          Thr Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Ile Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly 
                          85                  90                  95      
          Ser His Phe Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 
                      100                 105                 110         
          Arg 
          <![CDATA[<210>  155]]>
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          <![CDATA[<400>  155]]>
          caaattgttc tcacccagtc tccagcaatc atgtctgcat ctccagggga gaaggtcacc       60
          atgacctgca gtgtcagctc aagtgtaagt tacatacact ggtaccaaca gaagtcaggc      120
          acctccccca aaagatggat ttatgacaca tccaaactgg cttctggagt ccctgctcgc      180
          ttcagtggca gtgggtctgg gacctcttac tctctcacaa tcagcagcat ggaggctgaa      240
          gatgctgcca cttattactg ccaccagtgg agtactaacc cacccacgtt cggagggggg      300
          accaagctgg aaataagacg g                                                321
          <![CDATA[<210>  156]]>
          <![CDATA[<211>  107]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  156]]>
          Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly 
          1               5                   10                  15      
          Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Ser Val Ser Ser Ser Val Ser Tyr Ile 
                      20                  25                  30          
          His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Thr Ser Pro Lys Arg Trp Ile Tyr 
                  35                  40                  45              
          Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser 
              50                  55                  60                  
          Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Met Glu Ala Glu 
          65                  70                  75                  80  
          Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys His Gln Trp Ser Thr Asn Pro Pro Thr 
                          85                  90                  95      
          Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Arg Arg 
                      100                 105         
          <![CDATA[<210>  157]]>
          <![CDATA[<211>  321]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  157]]>
          caaattgttc tcacccagtc tccagcactc atgtctgcat ctccagggga gaaggtcacc       60
          atgacctgca gtgccagctc aagtgtaagt tacatgtgct ggtaccagca gaagccaaga      120
          tcctccccca aaccctggat ttatctcaca tccaacctgg cttctggagt ccctgctcgc      180
          ttcagtggca gtgggtctgg gacctcttac tctctcacaa tcagtagcat ggaggctgaa      240
          gatgctgcca cttattactg ccagcagtgg agtagtaacc cacccacgtt cggtgctggg      300
          accaagctgg agctgaaacg g                                                321
          <![CDATA[<210>  158]]>
          <![CDATA[<211>  107]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  158]]>
          Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Leu Met Ser Ala Ser Pro Gly 
          1               5                   10                  15      
          Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met 
                      20                  25                  30          
          Cys Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Arg Ser Ser Pro Lys Pro Trp Ile Tyr 
                  35                  40                  45              
          Leu Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser 
              50                  55                  60                  
          Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Met Glu Ala Glu 
          65                  70                  75                  80  
          Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Pro Thr 
                          85                  90                  95      
          Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg 
                      100                 105         
          <![CDATA[<210>  159]]>
          <![CDATA[<211>  321]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  159]]>
          gaaatccaga tgacacagac tccatcctcc ctgtctgcct ctctgggaga cagagtcacc       60
          atcacttgca gtgcaagtca gggcattaac aattatttga actggtatca gcagaaacca      120
          ggtggaaaga ctagactcct catctattat acatcaactt tacagtcagg agtcccatca      180
          aggttcagtg gcagtgggtc tgggacacat tattctctca ccatcagcaa tctggaacct      240
          gaagatattg ccacttacta ttgtcagcag tttagtaaac ttcggacatt cggtggaggc      300
          accaggctgg aaatcaaacg g                                                321
          <![CDATA[<210>  160]]>
          <![CDATA[<211>  107]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  160]]>
          Glu Ile Gln Met Thr Gln Thr Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Gln Gly Ile Asn Asn Tyr 
                      20                  25                  30          
          Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gly Lys Thr Arg Leu Leu Ile 
                  35                  40                  45              
          Tyr Tyr Thr Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Ser Gly Thr His Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Pro 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Ser Lys Leu Arg Thr 
                          85                  90                  95      
          Phe Gly Gly Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys Arg 
                      100                 105         
          <![CDATA[<210>  161]]>
          <![CDATA[<211>  324]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  可突變位置]]>
          <![CDATA[<222>  (128)..(128)]]>
          <![CDATA[<223>  第128位之X可為c或a ]]>
          <![CDATA[<400>  161]]>
          gagattgtgc tgactcagag tccagacttc cagtcagtga cccccaagga gaaagtcacc       60
          atcacatgcc gggcaagcca gaacatcggc acaagcattc actggtacca gcagaagccc      120
          gatcagtxcc ctaagctgct gatcaaatat gcctctaaga gtatttcagg ggtgccctct      180
          agattcagcg gctccgggtc tggaacagac tttactctga ccattaactc cctggaggct      240
          gaagatgccg ctacttacta ttgtcagcat agctactcat tcccttggac attcgggcag      300
          gggaccaaag tggaaatcaa acgt                                             324
          <![CDATA[<210>  162]]>
          <![CDATA[<211]]>>  108]]&gt;
          <br/>&lt;![CDATA[&lt;212&gt;  PRT]]&gt;
          <br/>&lt;![CDATA[&lt;213&gt;  人]]&gt;
          <br/>
          <br/>&lt;![CDATA[&lt;220&gt;]]&gt;
          <br/>&lt;![CDATA[&lt;221&gt;  可突變位置]]&gt;
          <br/>&lt;![CDATA[&lt;222&gt;  (43)..(43)]]&gt;
          <br/>&lt;![CDATA[&lt;223&gt;  第43位之Xaa可為Ser或Tyr ]]&gt;
          <br/>
          <br/>&lt;![CDATA[&lt;400&gt;  162]]&gt;
          <br/>
          <br/><![CDATA[Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Phe Gln Ser Val Thr Pro Lys 
          1               5                   10                  15      
          Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asn Ile Gly Thr Ser 
                      20                  25                  30          
          Ile His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gln Xaa Pro Lys Leu Leu Ile 
                  35                  40                  45              
          Lys Tyr Ala Ser Lys Ser Ile Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Glu Ala 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Ser Tyr Ser Phe Pro Trp 
                          85                  90                  95      
          Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg 
                      100                 105             
          <![CDATA[<210>  163]]>
          <![CDATA[<211>  339]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人]]>
          <![CDATA[<400>  163]]>
          gatattgtga tgacccaaac tccgctctcc ctgtccgtca cccctggaca gccggcctcc       60
          atctcttgca gatctagtca gaacattgtt catagtactg gaaacaccta tttagaatgg      120
          tacctacaga aaccaggcca gtctccacag ctcctgatct acaaagtttc caaccgattt      180
          tctggggtcc cagacaggtt cagtggcagt ggatcaggga cagatttcac actcaaaatc      240
          agcagagtgg aggctgagga tgttggagtt tattactgct ttcaaggttc acattttcca      300
          ttcacgttcg gccaagggac caaggtggaa atcaaacgt                             339
          <![CDATA[<210>  164]]>
          <![CDATA[<211>  113]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人]]>
          <![CDATA[<400>  164]]>
          Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 
          1               5                   10                  15      
          Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Asn Ile Val His Ser 
                      20                  25                  30          
          Thr Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 
                  35                  40                  45              
          Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 
              50                  55                  60                  
          Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 
          65                  70                  75                  80  
          Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly 
                          85                  90                  95      
          Ser His Phe Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 
                      100                 105                 110         
          Arg 
          <![CDATA[<210>  165]]>
          <![CDATA[<211>  360]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  165]]>
          caggttactc tgaaagagtc tggccctggg atattgcagc cctcccagac cctcagtctg       60
          acttgttctt tctctgggtt ctcactgacc acttctggct tgggtgttgc ctggattcgt      120
          cagccttcag ggaagggtct ggagtggctg gcacacattt ggtcggatgg tgacacgcgc      180
          tattacccag ccctgaagaa ccgactgaca atctccaagg attcctccag caaccaggtc      240
          ttcctcaaga tcgcccgtgt ggacactgca gatactgcca catactactg tgctcgaatg      300
          aaggatgata gtctttactt tgacaactgg ggccaaggca ctattttcac agtctcctca      360
          <![CDATA[<210>  166]]>
          <![CDATA[<211>  120]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  166]]>
          Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Ile Leu Gln Pro Ser Gln 
          1               5                   10                  15      
          Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Phe Ser Gly Phe Ser Leu Thr Thr Ser 
                      20                  25                  30          
          Gly Leu Gly Val Ala Trp Ile Arg Gln Pro Ser Gly Lys Gly Leu Glu 
                  35                  40                  45              
          Trp Leu Ala His Ile Trp Ser Asp Gly Asp Thr Arg Tyr Tyr Pro Ala 
              50                  55                  60                  
          Leu Lys Asn Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Ser Ser Ser Asn Gln Val 
          65                  70                  75                  80  
          Phe Leu Lys Ile Ala Arg Val Asp Thr Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr 
                          85                  90                  95      
          Cys Ala Arg Met Lys Asp Asp Ser Leu Tyr Phe Asp Asn Trp Gly Gln 
                      100                 105                 110         
          Gly Thr Ile Phe Thr Val Ser Ser 
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          <![CDATA[<210>  167]]>
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          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  167]]>
          cagatccagt tggtgcagtc tggggctgaa ctggcaaaac ctggggcctc agtgaggatg       60
          tcctgcgaga cttctggcta cacctttact agctactgga tacactggat aaaagagagg      120
          cctggacagg gtctggaatg gattggatac attaatcctg acactgatta tagtgagtac      180
          aatcagaaat tcaaggacaa ggccagattg actgcagaca aatcctccac cacagcctac      240
          atggagctga acagcctgac atttgatgat tctgcagtct attactgtgc aagtgctggt      300
          tattattttt ttgacttctg gggccaaggc accactctca cagtctcctc a               351
          <![CDATA[<210>  168]]>
          <![CDATA[<211>  117]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  168]]>
          Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Leu Ala Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Arg Met Ser Cys Glu Thr Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 
                      20                  25                  30          
          Trp Ile His Trp Ile Lys Glu Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 
                  35                  40                  45              
          Gly Tyr Ile Asn Pro Asp Thr Asp Tyr Ser Glu Tyr Asn Gln Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Lys Asp Lys Ala Arg Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Thr Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Asn Ser Leu Thr Phe Asp Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Ser Ala Gly Tyr Tyr Phe Phe Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Thr 
                      100                 105                 110         
          Leu Thr Val Ser Ser 
                  115         
          <![CDATA[<210>  169]]>
          <![CDATA[<211>  336]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  169]]>
          gaggttcagc tgcagcagtc tggggcagaa cttgtgaaac caggggcctc agtcaagttg       60
          tcctgtacaa cttctggcct caacattaaa gacatctata ttcactgggt gaagcagagg      120
          cctgaacagg gcctggagtg gattgggagg attgatcctg cgaacggtaa gactgcatat      180
          gacctgaagt tccaggccaa ggccactata acagcagaca catcttccaa aacagcctac      240
          ctgcacctca gcagcctgac atctgaggac actgccgtct attactgtgg taggggggcc      300
          cactggggcc aaggcaccac tctcacagtc tcctca                                336
          <![CDATA[<210>  170]]>
          <![CDATA[<211>  112]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  170]]>
          Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Leu Ser Cys Thr Thr Ser Gly Leu Asn Ile Lys Asp Ile 
                      20                  25                  30          
          Tyr Ile His Trp Val Lys Gln Arg Pro Glu Gln Gly Leu Glu Trp Ile 
                  35                  40                  45              
          Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Gly Lys Thr Ala Tyr Asp Leu Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Gln Ala Lys Ala Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Ser Lys Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu His Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Gly Arg Gly Ala His Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser 
                      100                 105                 110         
          <![CDATA[<210>  171]]>
          <![CDATA[<211>  354]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  171]]>
          cagatccagt tggtgcagtc tgggcctcag ctggttaggc ctggggcttc agtgaagata       60
          tcctgcgagg cttctggtta ctcattcacc aactactgga tacactgggt gaagcagagg      120
          cctggacagg gtcttgagtg gattggcatg attgatcctt ccgatgctga aactgggtta      180
          aatcagaagt tcaaggacaa ggccacattg actgtagaca aatcctccag cacagcctac      240
          atgcaactca gcagcccgac atctgaagac tctgcggtct attactgtgc aagaattggc      300
          gattactata atatggacta ctggggtcaa ggaacctcag tcaccgtctc ctca            354
          <![CDATA[<210>  172]]>
          <![CDATA[<211>  118]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  172]]>
          Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Gln Leu Val Arg Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Ile Ser Cys Glu Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asn Tyr 
                      20                  25                  30          
          Trp Ile His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 
                  35                  40                  45              
          Gly Met Ile Asp Pro Ser Asp Ala Glu Thr Gly Leu Asn Gln Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Gln Leu Ser Ser Pro Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Ile Gly Asp Tyr Tyr Asn Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 
                      100                 105                 110         
          Ser Val Thr Val Ser Ser 
                  115             
          <![CDATA[<210>  173]]>
          <![CDATA[<211>  366]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  173]]>
          gaagtgaagg tggtggagtc tgggggaggt ttagtgcagc ctggagggtc cctgaaactc       60
          tcctgtgcag cctctggatt cactttcagt gactatccca tgtcttgggt tcgccagact      120
          ccagagaaga gactggagtg ggtcgcatac gttagtgatg gtggtggttc cacctactat      180
          ccagacattg taaagggccg attcaccatc tcccgagaca atgccaagaa caccctgtac      240
          cttcaaatga gcagtctgaa gtctgaggac acggccatgt atttctgtac aagacatgct      300
          tcctactata gctacgacca ttctatggac tactggggtc agggaacctc agtcaccgtc      360
          tcatca                                                                 366
          <![CDATA[<210>  174]]>
          <![CDATA[<211>  122]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  174]]>
          Glu Val Lys Val Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr 
                      20                  25                  30          
          Pro Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ala Tyr Val Ser Asp Gly Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Ile Val 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Gln Met Ser Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Phe Cys 
                          85                  90                  95      
          Thr Arg His Ala Ser Tyr Tyr Ser Tyr Asp His Ser Met Asp Tyr Trp 
                      100                 105                 110         
          Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser 
                  115                 120         
          <![CDATA[<210>  175]]>
          <![CDATA[<211>  357]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  175]]>
          cagatccagt tggtgcagtc tgggggagac ttagtgaggc ctggagggtc cctgaaactc       60
          tcctgtgcag cctctggatt cactttcagt agctttggca tgtcttggat tcgccagact      120
          ccagacaaga ggctggagtg ggtcgcaacc attagtagtg ctggtagttt cacctactat      180
          ccagacagtg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca atgccaggaa caccctgtat      240
          ctacaaatga acagtctgaa gtctgaggac tcagccatgt attactgtgc aagacggggg      300
          tacgacgttg ggtgctttga ccactggggc cgaggcacca ctctcacagt ctcctca         357
          <![CDATA[<210>  176]]>
          <![CDATA[<211>  119]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  176]]>
          Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Asp Leu Val Arg Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe 
                      20                  25                  30          
          Gly Met Ser Trp Ile Arg Gln Thr Pro Asp Lys Arg Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ala Thr Ile Ser Ser Ala Gly Ser Phe Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Arg Asn Thr Leu Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Ser Glu Asp Ser Ala Met Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Arg Gly Tyr Asp Val Gly Cys Phe Asp His Trp Gly Arg Gly 
                      100                 105                 110         
          Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser 
                  115                 
          <![CDATA[<210>  177]]>
          <![CDATA[<211>  348]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  177]]>
          gaggtgcacc tggtggagtc tgggggaggc ttagtgcagc ctggagggtc cctgaaactc       60
          tcctgtgcag cctctggatt cactttcagt acctatggca tgtcttgggt tcgccagact      120
          ccagacaaga ggctggagtt ggtcgcgacc attaatacta atggtggtac cacctattat      180
          cgagacagtg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca atgccaagaa caccctgtac      240
          ctgcaaatga gcagtctgaa gtctgatgac acagccatgt attactgtgc aagagactac      300
          ggggctatgg actactgggg tcaaggaacc tcagtcaccg tctcctca                   348
          <![CDATA[<210>  178]]>
          <![CDATA[<211>  116]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  178]]>
          Glu Val His Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr 
                      20                  25                  30          
          Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Asp Lys Arg Leu Glu Leu Val 
                  35                  40                  45              
          Ala Thr Ile Asn Thr Asn Gly Gly Thr Thr Tyr Tyr Arg Asp Ser Val 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Gln Met Ser Ser Leu Lys Ser Asp Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Asp Tyr Gly Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val 
                      100                 105                 110         
          Thr Val Ser Ser 
                  115     
          <![CDATA[<210>  179]]>
          <![CDATA[<211>  345]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  179]]>
          gatgtgcacc tggtggagtc tgggggaggc ttagtgcagc ctggagggtc cctgacagtc       60
          tcctgcgcag cctctggatt cactttcagt acctatggca tgtcttgggt tcgccagact      120
          cgagacaaga ggctggagtt ggtcgcaacc ataaatacta atggtggtaa cacctattat      180
          tcagacaatg tgaagggccg attcaccatt tccagagaca atgccaagaa caccctgtat      240
          ttggaaatga gaggtctgag gtctggggac acagccatgt attactgtgc aagagactac      300
          ggggctatgg actactgggg tcaaggaacc tcagtcaccg tctct                      345
          <![CDATA[<210>  180]]>
          <![CDATA[<211>  115]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  180]]>
          Asp Val His Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Thr Val Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr 
                      20                  25                  30          
          Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Arg Asp Lys Arg Leu Glu Leu Val 
                  35                  40                  45              
          Ala Thr Ile Asn Thr Asn Gly Gly Asn Thr Tyr Tyr Ser Asp Asn Val 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Glu Met Arg Gly Leu Arg Ser Gly Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Asp Tyr Gly Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val 
                      100                 105                 110         
          Thr Val Ser 
                  115 
          <![CDATA[<210>  181]]>
          <![CDATA[<211>  348]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  181]]>
          gaggtgcagc tgcagcagcc tgggggaggc ttagtacagc ctggagggtc cctgacactc       60
          tcctgtgcaa cctctggatt cactttcagt agttatggca tgtcttgggt tcgccagact      120
          ccagccaaga ggctggagtt ggtcgcaacc attagtacta atggtgccac cgccaattat      180
          ccagacagtg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca atgccaagag caccctgtac      240
          ctacaaatgc gcagtctgaa gtctgaggac acagccatgt attactgtgc aactgaaaag      300
          ggagctatgg gctactgggg tcaaggaacc tcagtcaccg tctcctca                   348
          <![CDATA[<210>  182]]>
          <![CDATA[<211>  116]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  182]]>
          Glu Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Thr Leu Ser Cys Ala Thr Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 
                      20                  25                  30          
          Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Ala Lys Arg Leu Glu Leu Val 
                  35                  40                  45              
          Ala Thr Ile Ser Thr Asn Gly Ala Thr Ala Asn Tyr Pro Asp Ser Val 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Ser Thr Leu Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Gln Met Arg Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Thr Glu Lys Gly Ala Met Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val 
                      100                 105                 110         
          Thr Val Ser Ser 
                  115     
          <![CDATA[<210>  183]]>
          <![CDATA[<211>  381]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  183]]>
          caagttactc taaaagagtc tggccctggg atattgaagc cctcacagac cctcagtctg       60
          acttgttctt tctctgggtt ttcactgacc acttctggta tgggtgtagg ctggattcgt      120
          cagccttcag ggaagggtct ggagtggctg gcacacattt ggtgggatga tgataagtac      180
          tataatccat ccctgaagag ccaggtcaca atctccaagg acacctccag aaaccaggta      240
          ttcctcaaga tcaccagtgt ggacactgca gatactgcca cttactactg tgctcgaaga      300
          actgagacta tgattacgac agtgctatat tactatgcta tggactactg gggtcaagga      360
          acctcagtca ccgtctcctc a                                                381
          <![CDATA[<210>  184]]>
          <![CDATA[<211>  127]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  184]]>
          Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Ile Leu Lys Pro Ser Gln 
          1               5                   10                  15      
          Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Phe Ser Gly Phe Ser Leu Thr Thr Ser 
                      20                  25                  30          
          Gly Met Gly Val Gly Trp Ile Arg Gln Pro Ser Gly Lys Gly Leu Glu 
                  35                  40                  45              
          Trp Leu Ala His Ile Trp Trp Asp Asp Asp Lys Tyr Tyr Asn Pro Ser 
              50                  55                  60                  
          Leu Lys Ser Gln Val Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Arg Asn Gln Val 
          65                  70                  75                  80  
          Phe Leu Lys Ile Thr Ser Val Asp Thr Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr 
                          85                  90                  95      
          Cys Ala Arg Arg Thr Glu Thr Met Ile Thr Thr Val Leu Tyr Tyr Tyr 
                      100                 105                 110         
          Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser 
                  115                 120                 125         
          <![CDATA[<210>  185]]>
          <![CDATA[<211>  378]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  185]]>
          caagttactc taaaagagtc tggccctggg atattgaagc cctcacagac cctcagtctg       60
          acttgttctt tctctggatt ttcactgagc acttctggtt tgggtgtagg ctggattcgt      120
          cagccttcag ggaagggtct ggagtggctg gcacacattt ggtgggatga tgataagtac      180
          tataatccat cccttaagag acagatcaca atctccaagg attcctccag aaaccaggta      240
          ttcctcaaga tcaccaatgt ggacactgca gatactgcca cttactactg tgctcgaagg      300
          agggaagtta acttcggtat taactattac tattctatgg actactgggg tcaaggaacc      360
          tcagtcaccg tctcctca                                                    378
          <![CDATA[<210>  186]]>
          <![CDATA[<211>  126]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  186]]>
          Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Ile Leu Lys Pro Ser Gln 
          1               5                   10                  15      
          Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ser 
                      20                  25                  30          
          Gly Leu Gly Val Gly Trp Ile Arg Gln Pro Ser Gly Lys Gly Leu Glu 
                  35                  40                  45              
          Trp Leu Ala His Ile Trp Trp Asp Asp Asp Lys Tyr Tyr Asn Pro Ser 
              50                  55                  60                  
          Leu Lys Arg Gln Ile Thr Ile Ser Lys Asp Ser Ser Arg Asn Gln Val 
          65                  70                  75                  80  
          Phe Leu Lys Ile Thr Asn Val Asp Thr Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr 
                          85                  90                  95      
          Cys Ala Arg Arg Arg Glu Val Asn Phe Gly Ile Asn Tyr Tyr Tyr Ser 
                      100                 105                 110         
          Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser 
                  115                 120                 125     
          <![CDATA[<210>  187]]>
          <![CDATA[<211>  363]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  187]]>
          gaggtgaagc tggtggagtc tggaggacgc ttggtacagc ctgggaattc tctgagactc       60
          tcctgtgcaa cttctggatt caccttcagt gattattaca tgagttgggt ccgccagact      120
          ccaggaaggg cacttgagtg gttgagtttt attagaaatc gggctaatgg ttacacaaca      180
          gagtacagtg catctgtgaa gggtcgattc accatctcca gagataattc ccaaagcatc      240
          ctctatcttc acatgagcac cctgagacct gaggacagtg ccacttatta ctgtgtaaga      300
          gattcctatc actacgggta cttcgatgtc tggggcgcag ggaccacggt caccgtctcc      360
          tca                                                                    363
          <![CDATA[<210>  188]]>
          <![CDATA[<211>  121]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  188]]>
          Glu Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Gln Pro Gly Asn 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Thr Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Gly Arg Ala Leu Glu Trp Leu 
                  35                  40                  45              
          Ser Phe Ile Arg Asn Arg Ala Asn Gly Tyr Thr Thr Glu Tyr Ser Ala 
              50                  55                  60                  
          Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Gln Ser Ile 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Tyr Leu His Met Ser Thr Leu Arg Pro Glu Asp Ser Ala Thr Tyr 
                          85                  90                  95      
          Tyr Cys Val Arg Asp Ser Tyr His Tyr Gly Tyr Phe Asp Val Trp Gly 
                      100                 105                 110         
          Ala Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 
                  115                 120     
          <![CDATA[<210>  189]]>
          <![CDATA[<211>  360]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人]]>
          <![CDATA[<400>  189]]>
          caggtgaccc tgaaggaatc cgggcctact ctggtgaaac ctacccagac tctgactctg       60
          acttgtactt ttagcggctt ctcactgacc acatctggac tgggagtggc ttggatcaga      120
          cagcctcctg gaaaggccct ggagtggctg gctcacattt ggagcgacgg cgatactcgg      180
          tactatccag ccctgaaaaa cagactgact atcaccaagg acacatccaa aaaccaggtg      240
          gtcctgacaa tgactaatat ggaccccgtc gataccgcaa catactattg cgcccatatg      300
          aaggatgact ctctgtactt tgataactgg gggcagggaa ctctggtgac cgtgagcagc      360
          <![CDATA[<210>  190]]>
          <![CDATA[<211>  120]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人]]>
          <![CDATA[<400>  190]]>
          Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Thr Leu Val Lys Pro Thr Gln 
          1               5                   10                  15      
          Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu Thr Thr Ser 
                      20                  25                  30          
          Gly Leu Gly Val Ala Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu 
                  35                  40                  45              
          Trp Leu Ala His Ile Trp Ser Asp Gly Asp Thr Arg Tyr Tyr Pro Ala 
              50                  55                  60                  
          Leu Lys Asn Arg Leu Thr Ile Thr Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val 
          65                  70                  75                  80  
          Val Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr 
                          85                  90                  95      
          Cys Ala His Met Lys Asp Asp Ser Leu Tyr Phe Asp Asn Trp Gly Gln 
                      100                 105                 110         
          Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 
                  115                 120 
          <![CDATA[<210>  191]]>
          <![CDATA[<211>  348]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人]]>
          <![CDATA[<400>  191]]>
          gaggtgcagc tgctggaatc tgggggggga ctggtgcagc ctggaggaag cctgagactg       60
          agttgtgccg caagtgggtt tacatttagc tcctacggaa tgagctgggt gaggcaggct      120
          ccaggcaagg gactggagtg ggtctctgca atcagtacca acggagccac agcttactat      180
          gccgactccg tgaagggccg gttcactatc tcaagagata acagcaagaa caccctgtat      240
          ctgcagatga attctctgcg ggcagaagac acagccgtct actattgcgc tactgagaaa      300
          ggggcaatga gccactgggg acagggcaca ctggtgaccg tgagttcc                   348
          <![CDATA[<210>  192]]>
          <![CDATA[<211>  116]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人]]>
          <![CDATA[<400>  192]]>
          Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 
                      20                  25                  30          
          Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ser Ala Ile Ser Thr Asn Gly Ala Thr Ala Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Thr Glu Lys Gly Ala Met Ser His Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 
                      100                 105                 110         
          Thr Val Ser Ser 
                  115     
          <![CDATA[<210>  193]]>
          <![CDATA[<211>  318]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  193]]>
          gctgatgctg caccaactgt atccatcttc ccaccatcca gtgagcagtt aacatctgga       60
          ggtgcctcag tcgtgtgctt cttgaacaac ttctacccca aagacatcaa tgtcaagtgg      120
          aagattgatg gcagtgaacg acaaaatggc gtcctgaaca gttggactga tcaggacagc      180
          aaagacagca cctacagcat gagcagcacc ctcacgttga ccaaggacga gtatgaacga      240
          cataacagct atacctgtga ggccactcac aagacatcaa cttcacccat tgtcaagagc      300
          ttcaacagga atgagtgt                                                    318
          <![CDATA[<210>  194]]>
          <![CDATA[<211>  106]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  194]]>
          Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser Ser Glu Gln 
          1               5                   10                  15      
          Leu Thr Ser Gly Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe Tyr 
                      20                  25                  30          
          Pro Lys Asp Ile Asn Val Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser Glu Arg Gln 
                  35                  40                  45              
          Asn Gly Val Leu Asn Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr 
              50                  55                  60                  
          Tyr Ser Met Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu Arg 
          65                  70                  75                  80  
          His Asn Ser Tyr Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser Pro 
                          85                  90                  95      
          Ile Val Lys Ser Phe Asn Arg Asn Glu Cys 
                      100                 105     
          <![CDATA[<210>  195]]>
          <![CDATA[<211>  315]]>
          <![CDATA[<212> ]]> DNA
          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  195]]>
          ggtcagccca agtccactcc cactctcacc gtgtttccac cttcctctga ggagctcaag       60
          gaaaacaaag ccacactggt gtgtctgatt tccaactttt ccccgagtgg tgtgacagtg      120
          gcctggaagg caaatggtac acctatcacc cagggtgtgg acacttcaaa tcccaccaaa      180
          gagggcaaca agttcatggc cagcagcttc ctacatttga catcggacca gtggagatct      240
          cacaacagtt ttacctgtca agttacacat gaaggggaca ctgtggagaa gagtctgtct      300
          cctgcagaat gtctc                                                       315
          <![CDATA[<210>  196]]>
          <![CDATA[<211>  105]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  196]]>
          Gly Gln Pro Lys Ser Thr Pro Thr Leu Thr Val Phe Pro Pro Ser Ser 
          1               5                   10                  15      
          Glu Glu Leu Lys Glu Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asn 
                      20                  25                  30          
          Phe Ser Pro Ser Gly Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asn Gly Thr Pro 
                  35                  40                  45              
          Ile Thr Gln Gly Val Asp Thr Ser Asn Pro Thr Lys Glu Gly Asn Lys 
              50                  55                  60                  
          Phe Met Ala Ser Ser Phe Leu His Leu Thr Ser Asp Gln Trp Arg Ser 
          65                  70                  75                  80  
          His Asn Ser Phe Thr Cys Gln Val Thr His Glu Gly Asp Thr Val Glu 
                          85                  90                  95      
          Lys Ser Leu Ser Pro Ala Glu Cys Leu 
                      100                 105 
          <![CDATA[<210>  197]]>
          <![CDATA[<211>  975]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  197]]>
          gccaaaacaa cagccccatc ggtctatcca ctggcccctg tgtgtggaga tacaactggc       60
          tcctcggtga ctctaggatg cctggtcaag ggttatttcc ctgagccagt gaccttgacc      120
          tggaactctg gatccctgtc cagcggtgtg cacaccttcc cagctgtcct gcagtctgac      180
          ctctacactc tgagcagctc agtgactgtc ccctccagca cctggcccag cgagaccgtc      240
          acctgcaacg ttgcccaccc ggccagcagc accaaggtgg acaagaaaat tgtgcccagg      300
          gattgtggtt gtaagccttg catatgtaca gtcccagaag tatcatctgt cttcatcttc      360
          cccccaaagc ccaaggatgt gctcaccatt actctgactc ctaaggtcac gtgtgttgtg      420
          gtagacatca gcaaggatga tcccgaggtc cagttcagct ggtttgtaga tgatgtggag      480
          gtgcacacag ctcagacgca accccgggag gagcagttca acagcacttt ccgctcagtc      540
          agtgaacttc ccatcatgca ccaggactgg ctcaatggca aggagttcaa atgcagggtc      600
          aacagtgcag ctttccctgc ccccatcgag aaaaccatct ccaaaaccaa aggcagaccg      660
          aaggctccac aggtgtacac cattccacct cccaaggagc agatggccaa ggataaagtc      720
          agtctgacct gcatgataac agacttcttc cctgaagaca ttactgtgga gtggcagtgg      780
          aatgggcagc cagcggagaa ctacaagaac actcagccca tcatggacac agatggctct      840
          tacttcgtct acagcaagct caatgtgcag aagagcaact gggaggcagg aaatactttc      900
          acctgctctg tgttacatga gggcctgcac aaccaccata ctgagaagag cctctcccac      960
          tctcctggta aaggc                                                       975
          <![CDATA[<210>  198]]>
          <![CDATA[<211>  325]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小鼠]]>
          <![CDATA[<400>  198]]>
          Ala Lys Thr Thr Ala Pro Ser Val Tyr Pro Leu Ala Pro Val Cys Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Thr Thr Gly Ser Ser Val Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr 
                      20                  25                  30          
          Phe Pro Glu Pro Val Thr Leu Thr Trp Asn Ser Gly Ser Leu Ser Ser 
                  35                  40                  45              
          Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Asp Leu Tyr Thr Leu 
              50                  55                  60                  
          Ser Ser Ser Val Thr Val Pro Ser Ser Thr Trp Pro Ser Glu Thr Val 
          65                  70                  75                  80  
          Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser Ser Thr Lys Val Asp Lys Lys 
                          85                  90                  95      
          Ile Val Pro Arg Asp Cys Gly Cys Lys Pro Cys Ile Cys Thr Val Pro 
                      100                 105                 110         
          Glu Val Ser Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Val Leu 
                  115                 120                 125             
          Thr Ile Thr Leu Thr Pro Lys Val Thr Cys Val Val Val Asp Ile Ser 
              130                 135                 140                 
          Lys Asp Asp Pro Glu Val Gln Phe Ser Trp Phe Val Asp Asp Val Glu 
          145                 150                 155                 160 
          Val His Thr Ala Gln Thr Gln Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr 
                          165                 170                 175     
          Phe Arg Ser Val Ser Glu Leu Pro Ile Met His Gln Asp Trp Leu Asn 
                      180                 185                 190         
          Gly Lys Glu Phe Lys Cys Arg Val Asn Ser Ala Ala Phe Pro Ala Pro 
                  195                 200                 205             
          Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Arg Pro Lys Ala Pro Gln 
              210                 215                 220                 
          Val Tyr Thr Ile Pro Pro Pro Lys Glu Gln Met Ala Lys Asp Lys Val 
          225                 230                 235                 240 
          Ser Leu Thr Cys Met Ile Thr Asp Phe Phe Pro Glu Asp Ile Thr Val 
                          245                 250                 255     
          Glu Trp Gln Trp Asn Gly Gln Pro Ala Glu Asn Tyr Lys Asn Thr Gln 
                      260                 265                 270         
          Pro Ile Met Asp Thr Asp Gly Ser Tyr Phe Val Tyr Ser Lys Leu Asn 
                  275                 280                 285             
          Val Gln Lys Ser Asn Trp Glu Ala Gly Asn Thr Phe Thr Cys Ser Val 
              290                 295                 300                 
          Leu His Glu Gly Leu His Asn His His Thr Glu Lys Ser Leu Ser His 
          305                 310                 315                 320 
          Ser Pro Gly Lys Gly 
                          325 
          <![CDATA[<210>  199]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  合成的序列]]>
          <![CDATA[<400>  199]]>
          tttggrggga agatgaagac                                                   20
          <![CDATA[<210>  200]]>
          <![CDATA[<211>  21]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  合成的序列]]>
          <![CDATA[<400>  200]]>
          ttaacactct cccctgttga a                                                 21
          <![CDATA[<210>  201]]>
          <![CDATA[<211>  21]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  合成的序列]]>
          <![CDATA[<400>  201]]>
          ttaacactca ttcctgttga a                                                 21
          <![CDATA[<210>  202]]>
          <![CDATA[<211>  21]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  合成的序列]]>
          <![CDATA[<400>  202]]>
          tggacaggga tccagagttc c                                                 21
          <![CDATA[<210>  203]]>
          <![CDATA[<211>  21]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  合成的序列]]>
          <![CDATA[<400>  203]]>
          tggacagggc tccatagttc c                                                 21
          <![CDATA[<210>  204]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  合成的序列]]>
          <![CDATA[<400>  204]]>
          actcgtcctt ggtcaacgtg                                                   20
          　　
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Claims (30)

  1. 一種能與ET AR特異性結合之抗體，其特徵在於：該抗體包含一個、兩個、三個、四個、五個、或六個胺基酸序列，其中各胺基酸序列獨立地選自於以下所列之胺基酸序列： a. 輕鏈CDR1胺基酸序列：SEQ ID NO: 8、SEQ ID NO: 10、SEQ ID NO: 12、SEQ ID NO: 14、SEQ ID NO: 16、SEQ ID NO: 18、SEQ ID NO: 20、SEQ ID NO: 22、SEQ ID NO: 24、SEQ ID NO: 26、SEQ ID NO: 28、及SEQ ID NO: 30； b. 輕鏈CDR2胺基酸序列：SEQ ID NO: 32、SEQ ID NO: 34、SEQ ID NO: 36、SEQ ID NO: 38、SEQ ID NO: 40、SEQ ID NO: 42、SEQ ID NO: 44、SEQ ID NO: 46、及SEQ ID NO: 48； c. 輕鏈CDR3胺基酸序列：SEQ ID NO: 50、SEQ ID NO: 52、SEQ ID NO: 54、SEQ ID NO: 56、SEQ ID NO: 58、SEQ ID NO: 60、SEQ ID NO: 62、SEQ ID NO: 64、SEQ ID NO: 66、及SEQ ID NO: 68； d. 重鏈CDR1胺基酸序列：SEQ ID NO: 70、SEQ ID NO: 72、SEQ ID NO: 74、SEQ ID NO: 76、SEQ ID NO: 78、SEQ ID NO: 80、SEQ ID NO: 82、SEQ ID NO: 84、SEQ ID NO: 86、SEQ ID NO: 88、及SEQ ID NO: 90； e. 重鏈CDR2胺基酸序列：SEQ ID NO: 92、SEQ ID NO: 94、SEQ ID NO: 96、SEQ ID NO: 98、SEQ ID NO: 100、SEQ ID NO: 102、SEQ ID NO: 104、SEQ ID NO: 106、SEQ ID NO: 108、SEQ ID NO: 110、SEQ ID NO: 112、及SEQ ID NO: 114；及 f. 重鏈CDR3胺基酸序列：SEQ ID NO: 116、SEQ ID NO: 118、SEQ ID NO: 120、SEQ ID NO: 122、SEQ ID NO: 124、SEQ ID NO: 126、SEQ ID NO: 128、SEQ ID NO: 130、SEQ ID NO: 132、SEQ ID NO: 134、及SEQ ID NO: 136。
  2. 如請求項1之能與ET AR特異性結合之抗體，其中：該抗體包含一或兩個胺基酸序列，其中各胺基酸序列獨立地選自於以下所列之胺基酸序列： a. 輕鏈CDR1胺基酸序列：SEQ ID NO: 8、SEQ ID NO: 10、SEQ ID NO: 12、SEQ ID NO: 14、SEQ ID NO: 16、SEQ ID NO: 18、SEQ ID NO: 20、SEQ ID NO: 22、SEQ ID NO: 24、SEQ ID NO: 26、SEQ ID NO: 28、及SEQ ID NO: 30；及 b. 重鏈CDR1胺基酸序列：SEQ ID NO: 70、SEQ ID NO: 72、SEQ ID NO: 74、SEQ ID NO: 76、SEQ ID NO: 78、SEQ ID NO: 80、SEQ ID NO: 82、SEQ ID NO: 84、SEQ ID NO: 86、SEQ ID NO: 88、及SEQ ID NO: 90。
  3. 如請求項1之能與ET AR特異性結合之抗體，其中：該抗體包含一或兩個胺基酸序列，其中各胺基酸序列獨立地選自於以下所列之胺基酸序列： a. 輕鏈CDR2胺基酸序列：SEQ ID NO: 32、SEQ ID NO: 34、SEQ ID NO: 36、SEQ ID NO: 38、SEQ ID NO: 40、SEQ ID NO: 42、SEQ ID NO: 44、SEQ ID NO: 46、及SEQ ID NO: 48；及 b. 重鏈CDR2胺基酸序列：SEQ ID NO: 92、SEQ ID NO: 94、SEQ ID NO: 96、SEQ ID NO: 98、SEQ ID NO: 100、SEQ ID NO: 102、SEQ ID NO: 104、SEQ ID NO: 106、SEQ ID NO: 108、SEQ ID NO: 110、SEQ ID NO: 112、及SEQ ID NO: 114。
  4. 如請求項1之能與ET AR特異性結合之抗體，其中：該抗體包含一或兩個胺基酸序列，其中各胺基酸序列獨立地選自於以下所列之胺基酸序列： a. 輕鏈CDR3胺基酸序列：SEQ ID NO: 50、SEQ ID NO: 52、SEQ ID NO: 54、SEQ ID NO: 56、SEQ ID NO: 58、SEQ ID NO: 60、SEQ ID NO: 62、SEQ ID NO: 64、SEQ ID NO: 66、及SEQ ID NO: 68；及 b. 重鏈CDR3胺基酸序列：SEQ ID NO: 116、SEQ ID NO: 118、SEQ ID NO: 120、SEQ ID NO: 122、SEQ ID NO: 124、SEQ ID NO: 126、SEQ ID NO: 128、SEQ ID NO: 130、SEQ ID NO: 132、SEQ ID NO: 134、及SEQ ID NO: 136。
  5. 如請求項1之能與ET AR特異性結合之抗體，其中：該抗體包含一或兩個胺基酸序列，其中各胺基酸序列獨立地選自於以下所列之胺基酸序列：SEQ ID NO: 8、SEQ ID NO: 20、SEQ ID NO: 22、SEQ ID NO: 24、SEQ ID NO: 26、SEQ ID NO: 28、SEQ ID NO: 30、SEQ ID NO: 32、SEQ ID NO: 44、SEQ ID NO: 46、SEQ ID NO: 48、SEQ ID NO: 50、SEQ ID NO: 62、SEQ ID NO: 64、SEQ ID NO: 66、及SEQ ID NO: 68。
  6. 如請求項1之能與ET AR特異性結合之抗體，其中：該抗體包含一或兩個胺基酸序列，其中各胺基酸序列獨立地選自於以下所列之胺基酸序列：SEQ ID NO: 70、SEQ ID NO: 82、SEQ ID NO: 84、SEQ ID NO: 86、SEQ ID NO: 88、SEQ ID NO: 90、SEQ ID NO: 92、SEQ ID NO: 104、SEQ ID NO: 106、SEQ ID NO:108、SEQ ID NO: 110、SEQ ID NO: 112、SEQ ID NO: 114、SEQ ID NO: 116、SEQ ID NO: 128、SEQ ID NO: 130、SEQ ID NO: 132、SEQ ID NO: 134、及SEQ ID NO: 136。
  7. 如請求項1之能與ET AR特異性結合之抗體，其中：該抗體包含一個獨立地選自於以下所列之輕鏈與重鏈CDR3胺基酸序列的組合：SEQ ID NO: 50與SEQ ID NO: 116、SEQ ID NO: 62與SEQ ID NO: 128、SEQ ID NO: 62與SEQ ID NO: 130、SEQ ID NO: 64與SEQ ID NO: 132、SEQ ID NO: 66與SEQ ID NO: 134、及SEQ ID NO: 68與SEQ ID NO: 136。
  8. 如請求項1之能與ET AR特異性結合之抗體，其中：該抗體包含一或兩個胺基酸序列，其中各胺基酸序列獨立地選自於以下所列之胺基酸序列： a. 輕鏈可變域胺基酸序列：SEQ ID NO: 138、SEQ ID NO: 140、SEQ ID NO: 142、SEQ ID NO: 144、SEQ ID NO: 146、SEQ ID NO: 148、SEQ ID NO: 150、SEQ ID NO: 152、SEQ ID NO: 154、SEQ ID NO: 156、SEQ ID NO: 158、SEQ ID NO: 160、SEQ ID NO: 162、及SEQ ID NO: 164；及 b. 重鏈可變域胺基酸序列：SEQ ID NO: 166、SEQ ID NO: 168、SEQ ID NO: 170、SEQ ID NO: 172、SEQ ID NO: 174、SEQ ID NO: 176、SEQ ID NO: 178、SEQ ID NO: 180、SEQ ID NO: 182、SEQ ID NO: 184、SEQ ID NO: 186、SEQ ID NO: 188、SEQ ID NO: 190、及SEQ ID NO: 192。
  9. 如請求項1之能與ET AR特異性結合之抗體，其中：該抗體之多聚核苷酸編碼序列包含一或兩個多聚核苷酸序列，其中各多聚核苷酸序列獨立地選自於以下所列多聚核苷酸序列： a. 輕鏈可變域多聚核苷酸編碼序列：SEQ ID NO: 137、SEQ ID NO: 139、SEQ ID NO: 141、SEQ ID NO: 143、SEQ ID NO: 145、SEQ ID NO: 147、SEQ ID NO: 149、SEQ ID NO: 151、SEQ ID NO: 153、SEQ ID NO: 155、SEQ ID NO: 157、SEQ ID NO: 159、SEQ ID NO: 161、及SEQ ID NO: 163；及 b. 重鏈可變域多聚核苷酸編碼序列：SEQ ID NO: 165、SEQ ID NO: 167、SEQ ID NO: 169、SEQ ID NO: 171、SEQ ID NO: 173、SEQ ID NO: 175、SEQ ID NO: 177、SEQ ID NO: 179、SEQ ID NO: 181、SEQ ID NO: 183、SEQ ID NO: 185、SEQ ID NO: 187、SEQ ID NO: 189、及SEQ ID NO: 191。
  10. 如請求項1之能與ET AR特異性結合之抗體，其中：該抗體包含一個獨立地選自於以下所列之胺基酸序列之組合：SEQ ID NO: 138及SEQ ID NO: 166、SEQ ID NO: 140及SEQ ID NO: 168、SEQ ID NO: 142及SEQ ID NO: 170、SEQ ID NO: 144及SEQ ID NO: 172、SEQ ID NO: 146及SEQ ID NO: 174、SEQ ID NO: 148及SEQ ID NO: 176、SEQ ID NO: 150及SEQ ID NO: 178、SEQ ID NO: 152及SEQ ID NO: 180、SEQ ID NO: 154及SEQ ID NO: 182、SEQ ID NO: 156及SEQ ID NO: 184、SEQ ID NO: 158及SEQ ID NO: 186、SEQ ID NO: 160及SEQ ID NO: 188、SEQ ID NO: 162及SEQ ID NO: 190、及SEQ ID NO: 164及SEQ ID NO: 192。
  11. 如請求項1之能與ET AR特異性結合之抗體，其中：該抗體包含一個獨立地選自於以下所列之胺基酸序列：SEQ ID NO: 138、SEQ ID NO: 150、SEQ ID NO: 152、SEQ ID NO: 154、SEQ ID NO: 156、SEQ ID NO: 158、SEQ ID NO: 160、SEQ ID NO: 162、及SEQ ID NO: 164。
  12. 如請求項1之能與ET AR特異性結合之抗體，其中：該抗體包含一個獨立地選自於以下所列之胺基酸序列：SEQ ID NO: 166、SEQ ID NO: 178、SEQ ID NO: 180、SEQ ID NO: 182、SEQ ID NO: 184、SEQ ID NO: 186、SEQ ID NO: 188、SEQ ID NO: 190、及SEQ ID NO: 192。
  13. 如請求項1之能與ET AR特異性結合之抗體，其中：該抗體包含一個獨立地選自於以下所列之輕鏈與重鏈可變區胺基酸序列之組合：SEQ ID NO: 138與SEQ ID NO: 166、SEQ ID NO: 150與SEQ ID NO: 178、SEQ ID NO: 152與SEQ ID NO: 180、SEQ ID NO: 154與SEQ ID NO: 182、SEQ ID NO: 156與SEQ ID NO: 184、SEQ ID NO: 158與SEQ ID NO: 186、SEQ ID NO: 160與SEQ ID NO: 188、SEQ ID NO: 162與SEQ ID NO: 190、及SEQ ID NO: 164與SEQ ID NO: 192。
  14. 如請求項1之能與ET AR特異性結合之抗體，其中：該抗體包含胺基酸序列SEQ ID NO: 138或SEQ ID NO: 166。
  15. 如請求項1之能與ET AR受體特異性結合之抗體，其中：該抗體包含SEQ ID NO: 138及SEQ ID NO: 166胺基酸序列之組合。
  16. 如請求項1之能與ET AR特異性結合之抗體，其中：該抗體包含一或兩個胺基酸序列，其中各胺基酸序列獨立地選自於以下所列之胺基酸序列： a. 輕鏈恆定區胺基酸序列：SEQ ID NO: 194及SEQ ID NO: 196；及 b. 重鏈恆定區胺基酸序列：SEQ ID NO: 198。
  17. 如請求項1之能與ET AR特異性結合之抗體，其中：該抗體包含鼠源抗體或人源化抗體。
  18. 如請求項1之能與ET AR特異性結合之抗體，其中：該抗體包含單株抗體。
  19. 如請求項1之能與ET AR特異性結合之抗體，其中：該抗體包含單株抗體，該單株抗體包含SEQ ID NO: 138與SEQ ID NO: 166、SEQ ID NO: 150與SEQ ID NO: 178、SEQ ID NO: 152與SEQ ID NO: 180、SEQ ID NO: 154與SEQ ID NO: 182、SEQ ID NO: 156與SEQ ID NO: 184、SEQ ID NO: 158與SEQ ID NO: 186、SEQ ID NO: 160與SEQ ID NO: 188、SEQ ID NO: 162與SEQ ID NO: 190、或SEQ ID NO: 164與SEQ ID NO: 192。
  20. 如請求項1之能與ET AR特異性結合之抗體，其中：該抗體之降低人內皮素信號傳導之IC 50值大約為1 nM至200 nM或10 nM至100 nM。
  21. 一種醫藥組合物，其包含與醫藥可接受載劑混合的如請求項1之能與ET AR特異性結合之抗體。
  22. 一種多核苷酸，其編碼如請求項1之能與ET AR特異性結合之抗體。
  23. 一種重組表現載體，其包含如請求項22之核酸。
  24. 一種宿主細胞，其包含如請求項23之載體。
  25. 一種生產能與ET AR特異性結合之抗體的方法，其特徵在於：包括在允許表現該抗體之條件下培養如請求項24之宿主細胞。
  26. 一種用於治療、預防或改善受試者中糖尿病腎病之一或多種症狀的方法，該方法包括投與受試者治療有效量的如請求項21之醫藥組合物。
  27. 一種用於治療、預防或改善受試者中慢性腎病之一或多種症狀的方法，該方法包括投與受試者治療有效量的如請求項21之醫藥組合物。
  28. 一種用於治療、預防或改善受試者中伴隨有蛋白尿之疾病之一或多種症狀的方法，該方法包括投與受試者治療有效量的如請求項21之醫藥組合物。
  29. 一種用於治療、預防或改善受試者中伴隨有腎小球濾過率下降之疾病之一或多種症狀的方法，該方法包括投與受試者治療有效量的如請求項21之醫藥組合物。
  30. 如請求項26至29中任一項之方法，其中所述的受試者為人。
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