TW202241414A

TW202241414A - 包含ｋｒａｓｇ１２ｃ抑制劑的藥物組合以及ｋｒａｓｇ１２ｃ抑制劑用於治療癌症之用途

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Publication number: TW202241414A
Application number: TW110147765A
Authority: TW
Inventors: 瓦西里奧斯阿斯克齊雷奇斯; 賽斯吉婭瑪麗亞布拉克曼; 席蒙娜扣泰斯塔; 曉鳴崔; 杰弗瑞英格曼; 安娜法拉戈; 馬克吉史帕奇; 波塔黛安娜葛羅斯; 凱薩琳萊柏蘭克; 艾德維莉莉安珍洛提維斯; 劉波; 雷奈馬曲爾; 羅伯馬; 克里斯托夫穆拉; 巴斯可萊戈利爾; 納丁施耐德; 史戴芬史吐滋; 安卓維波; 尼克拉斯華林; 安德烈亞斯維斯
Original assignee: 瑞士商諾華公司
Priority date: 2020-12-22
Filing date: 2021-12-20
Publication date: 2022-11-01
Also published as: BR112023012301A2; EP4267134A1; US20240082218A1; CN116710094A; CA3205008A1; JP2023554471A; KR20230127256A; IL303917A; WO2022135346A1; MX2023007399A; AU2021408129A1

Abstract

本發明關於藥物組合，該藥物組合包含KRAS G12C抑制劑和選自SHP2抑制劑（例如TNO155）和PD-1抑制劑的一或多種治療活性劑；包含該藥物組合的藥物組成物；以及使用此類組合和組成物在治療或預防癌症或腫瘤中之方法，特別地其中該癌症或腫瘤係KRAS G12C突變型。

Description

包含KRAS　G12C抑制劑的藥物組合以及KRAS　G12C抑制劑用於治療癌症之用途

本發明關於KRAS G12C抑制劑及其單獨和與一種或兩種另外的治療活性劑的組合在治療癌症，特別地KRAS G12C突變型癌症（例如，肺癌、非小細胞肺癌、大腸直腸癌、胰臟癌或實性瘤）中之用途。本發明關於藥物組合，該藥物組合包含 (i) KRAS G12C抑制劑，如化合物A或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物或水合物，以及第二治療劑，即SHP2抑制劑（如TNO155或其藥學上可接受的鹽），或PD-1抑制劑。本發明還關於三重組合，該三重組合包含KRAS G12C抑制劑，如化合物A或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物或水合物，和第二治療劑，即SHP2抑制劑（如TNO155或其藥學上可接受的鹽），以及PD-1抑制劑。本發明還關於包含該組合的藥物組成物；以及使用此類組合和組成物在治療或預防癌症或實性瘤，特別地KRAS G12C突變型癌症或KRAS G12C突變型癌症中之方法。

儘管靶向療法和免疫療法最近取得了成功，但一些癌症，特別是轉移性癌症，在很大程度上仍然無法治癒。

KRAS癌蛋白係具有作為細胞內傳訊途徑（如MAPK、PI3K和Ral途徑）的調節劑之至關重要角色的GTP酶，該等傳訊途徑涉及增殖、細胞存活和腫瘤形成。KRAS的致癌基因活化主要通過密碼子12的誤義突變發生。在大約30%的所有人類癌症中均發現了 KRAS功能獲得性突變。 KRASG12C（密碼子12處的 KRAS甘胺酸至半胱胺酸胺基酸取代）突變係特異的亞突變，盛行於大約13%的肺腺癌、4%（3%-5%）的結腸腺癌和更小部分的其他癌症類型。

在正常細胞中，KRAS在無活性GDP束縛態與活性GTP束縛態之間交替。密碼子12處 KRAS的突變（如G12C）損害GTP酶活化蛋白（GAP）刺激的GTP水解。在這種情況下，因此，KRAS G12C從GTP到GDP形式的轉化會非常緩慢。結果KRAS G12C轉變成活性GTP束縛態，因此驅動致癌基因傳訊。

肺癌仍然是全世界最常見的癌症類型並且是包括美國在內的許多國家癌症死亡的主要原因。NSCLC占所有肺癌診斷的約85%。在大約25%的肺腺癌患者中檢測到 KRAS突變（Sequist等人2011）。它們最常見於密碼子12處，其中 KRAS G12C突變在腺癌和鱗狀NSCLC中均為最常見的（總體上占40%）（Liu等人2020）。 KRAS突變的存在預示著較差的生存期並且與對EGFR TKI治療的響應性降低有關。

KRAS G12C突變型NSCLC患者的標準護理治療由基於鉑的化學療法和免疫檢查點抑制劑組成。索托拉西布（Sotorasib）最近獲得了FDA針對此適應症和接受過至少一次先前全身性療法的成人患者的加速批准，目前正在進行進一步的驗證性試驗。使用免疫檢查點抑制劑的用於NSCLC的免疫療法已經表明是有前景的，其中一些NSCLC患者經歷了持續數年的持久疾病控制。然而，此類長期非進展係不常見的，並且迫切需要可以增加對療法響應並實現療法持久緩解的患者比例的治療策略。

大腸直腸癌（CRC）係美國第四大最常被診斷的癌症，亦為癌症相關死亡的第二大原因。2019年美國新發CRC病例大約為15萬例，而2020年歐盟預計有超過30萬名患者被診斷為CRC（歐洲癌症資訊系統2020）。儘管觀察到CRC的總發病率有所改善，但近年來50歲以下患者的發病率增加（Bailey等人2015），作者估計，到2030年，20-34歲患者結腸和直腸癌的發病率可能分別增加90%和約124%。轉移性CRC的全身性療法包括單獨使用或組合使用的各種藥劑，包括化學療法，如5-氟尿嘧啶/亞葉酸、卡培他濱、奧沙利鉑和伊立替康；抗血管生成劑，如貝伐單抗和雷莫蘆單抗；抗EGFR劑，包括針對野生型KRAS/NRAS癌症的西妥昔單抗和帕尼單抗；以及免疫療法，包括納武單抗和派姆單抗。目前播散性轉移性大腸直腸癌的護理標準主要是基於化學療法方案，包括5-FU/LV或基於卡培他濱、奧沙利鉑和/或伊立替康的方案（NCCN Clinical Practice Guidelines www.nccn.org），而免疫檢查點抑制劑在具有高水平微衛星不穩定性（MSI-H）或錯配修復缺陷（dMMR）的腫瘤亞組中顯示出療效（Overman等人2018，Overman等人2017）。野生型RAS（KRAS/NRAS）患者的治療包括EGFR抑制劑西妥昔單抗和帕尼單抗（NCCN Clinical Practice Guidelines www.nccn.org）。

儘管有多種積極療法，轉移性CRC仍然無法治癒。儘管錯配修復（MSI高）缺陷型CRC對免疫檢查點抑制劑療法表現出高響應率，但錯配修復熟練型CRC卻沒有表現出高響應率。在大約4%的所有結腸腺癌中普遍存在 KRAS G12C突變。KRAS突變型CRC典型地是錯配修復熟練型，並且不是抗EGFR療法的候選者，因此這種CRC亞型尤其需要改善的療法。

腫瘤特徵數據顯示，除NSCLC和CRC外，還有一部分實性瘤帶有 KRAS G12C突變。 KRAS G12C存在於大約1%-2%的惡性實性瘤中，包括大約1%的所有胰臟癌（Biernacka等人2016, Zehir等人2017）。在闌尾癌、小腸癌、肝膽癌、膀胱癌、卵巢癌和原發部位不明的癌症中也發現了 KRAS G12C突變（Hassar等人, N Engl Med [新英格蘭醫學] 2021 384; 2 185-187）。

目前有幾種靶向療法正在進行臨床測試，旨在藉由抑制RAS途徑來治療 KRAS突變患者。然而，目前該等療法對帶有 KRAS G12C突變的腫瘤的益處仍不確定，因為並非所有患者都有響應，並且在一些情況下，報告的響應持續時間很短，這可能是由於出現了抗性，該抗性至少部分是由破壞抑制劑結合和下游途徑的重新激活的RAS基因突變介導的。

用KRAS G12C抑制劑治療的大多數患者最終都會對單一藥劑療法產生獲得性抗性。例如，在阿達格拉西布（adagrasib）研究中納入的38名患者：27名非小細胞肺癌患者、10名大腸直腸癌患者和1名闌尾癌患者，在17名患者（占群組的45%）中檢測到對阿達格拉西布的推定抗性機制，其中7名（占群組的18%）有多種重合機制。獲得性KRAS改變包括G12D/R/V/W、G13D、Q61H、R68S、H95D/Q/R、Y96C和KRASG12C等位基因的高水平擴增。獲得性旁路抗性機制包括MET擴增；NRAS、BRAF、MAP2K1、和RET中的激活突變；涉及ALK、RET、BRAF、RAF1、和FGFR3的致癌性融合；以及NF1和PTEN中的功能喪失性突變（Awad等人, Acquired Resistance to KRASG12C Inhibition in Cancer [癌症中對KRASG12C抑制的獲得性抗性], N Engl J Med [新英格蘭醫學雜誌] 2021; 384: 2382-93）。Tanaka等人（Cancer Discov [癌症發現] 2021; 11: 1913-22）描述了影響開關-II袋的新型KRAS Y96D突變，阿達格拉西布和其他非活性KRAS G12C抑制劑與該突變結合，干擾了關鍵的蛋白質-藥物相互作用，並在工程化和患者來源的KRASG12C癌症模型中賦予該等抑制劑抗性。

因此，需要提供具有替代性結合模式和有效治療的另外的KRAS抑制劑，以克服在用KRAS抑制劑（如阿達格拉西布或索托拉西布）治療期間出現的抗性機制。

本發明為患有癌症（包括晚期和/或轉移性癌症）的患者提供了新的治療選擇。本文提供了化合物和化合物之組合，及其在治療癌症（尤其是當癌症或實性瘤帶有KRAS G12C突變時）的方法中之用途，該癌症包括肺癌（包括NSCLC）、大腸直腸癌、胰臟癌和實性瘤。本發明還提供了用於不治之症，特別是患有 KRAS G12C突變型腫瘤的患者的潛在有益的新穎研究性療法，該等患者已經針對其適應症接受了標準護理療法但失敗了，或者對於批准的療法不能耐受或不適合，並且因此具有有限的治療選擇。另外，本發明還提供了單獨的化合物A或與一或多種另外的治療劑的組合，其用於在治療對其他療法產生抗性的癌症患者之方法中使用，該等其他療法如先前用其他KRAS抑制劑（如阿達格拉西布和索托拉西布）治療；更較佳的是先前用索托拉西布治療。

化合物A係KRAS G12C的選擇性共價不可逆抑制劑，利用與KRASG12C的獨特相互作用表現出新穎的結合模式。化合物A在臨床前模型中顯示出有效的抗腫瘤活性和有利的藥物動力學特性。化合物A係口服生物可利用的，在預測以賦予抗腫瘤活性的範圍內實現了暴露，並且耐受性良好。還發現化合物A有效抑制KRAS G12C H95Q（在臨床試驗中介導對阿達格拉西布抗性的雙突變體）。

本文的數據和實例表明，單獨的化合物A以及與另一種治療活性劑（選自SHP2抑制劑（如TNO155或其藥學上可接受的鹽）、PD-1抑制劑及其組合）的組合可用於治療癌症，例如，由KRAS G12C突變驅動的癌症。藉由化合物A對KRAS G12C靶向抑制可能會導致強大的抗腫瘤響應。另外，化合物A可藉由重新激活繞過KRAS G12C以通過野生型（WT）KRAS發出訊息的RTK-MAPK通路，來為例如對KRAS G12C抑制劑具有獲得性抗性的患者提供組合益處。化合物A與SHP2抑制劑的組合進一步增加了體內KRAS G12C目標佔有率，增強了臨床前的抗腫瘤活性，並延遲了異種移植中抗性的出現。

在KRAS G12C NSCLC細胞系中，化合物A與SHP2抑制劑TNO155的組合導致比單獨使用化合物A更持續的RAS途徑抑制。另外，該組合導致幾種細胞系中改善的腫瘤細胞生長抑制。本文還顯示，化合物A與TNO155的組合顯著改善了化合物A作為單一藥劑和TNO155作為單一藥劑所見的響應可持續性和復發時間。

在食道癌的KRAS G12C異種移植模型中，化合物A與SHP2抑制劑TNO155的組合足以使幾乎沒有響應的模型轉化為良好的響應者。

化合物A可誘導促炎性微環境，其增強了抗PD-1療法（如斯巴達珠單抗（spartalizumab）或替雷利珠單抗（tislelizumab））的療效。因此，化合物A與抗PD-1抑制劑（例如斯巴達珠單抗或替雷利珠單抗）的組合與任一單一藥劑相比，可能導致改善的抗腫瘤活性。改善的抗腫瘤活性可為例如增加的療效和/或更持久的響應。

將SHP2抑制劑（如TNO155）添加至化合物A加斯巴達珠單抗或至化合物A加替雷利珠單抗中，與單一藥劑治療或雙重組合相比，可進一步降低細胞內PD-1傳訊並導致抑制性減弱的腫瘤微環境，該腫瘤微環境允許改善的免疫響應和更好的抗腫瘤活性。改善的抗腫瘤活性可為例如增加的療效和/或更持久的響應

因此，本發明提供了KRAS G12C抑制劑，即1-{6-[(4 M)-4-(5-氯-6-甲基-1 H-吲唑-4-基)-5-甲基-3-(1-甲基-1 H-吲唑-5-基)-1 H-吡唑-1-基]-2-氮雜螺[3.3]庚-2-基}丙-2-烯-1-酮（化合物A）或其藥學上可接受的鹽，其用於在治療如本文所述之癌症中使用。

因此，本發明還提供了藥物組合，該藥物組合包含KRAS G12C抑制劑，如化合物A或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物或水合物，和選自SHP2抑制劑（如TNO155，或其藥學上可接受的鹽）的第二治療活性劑，以及PD-1抑制劑。除了該等組合，本發明還提供了三重組合，該三重組合由以下組成：化合物A或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物或水合物，SHP2抑制劑（如TNO155或其藥學上可接受的鹽），以及PD-1抑制劑。

本發明還提供了藥物組合，該藥物組合包含 (i) 1-{6-[(4 M)-4-(5-氯-6-甲基-1 H-吲唑-4-基)-5-甲基-3-(1-甲基-1 H-吲唑-5-基)-1 H-吡唑-1-基]-2-氮雜螺[3.3]庚-2-基}丙-2-烯-1-酮，其具有結構

（化合物A），或其藥學上可接受的鹽，以及 (ii) (3S,4S)-8-(6-胺基-5-((2-胺基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡𠯤-2-基)-3-甲基-2-氧雜-8-氮雜螺[4.5]癸-4-胺（TNO155），其具有結構：

，或其藥學上可接受的鹽。

本發明還提供了藥物組合，該藥物組合包含： 1-{6-[(4 M)-4-(5-氯-6-甲基-1 H-吲唑-4-基)-5-甲基-3-(1-甲基-1 H-吲唑-5-基)- 1 H-吡唑-1-基]-2-氮雜螺[3.3]庚-2-基}丙-2-烯-1-酮（化合物A）或其藥學上可接受的鹽以及 (ii) PD-1抑制劑。

本發明還提供了藥物組合，該藥物組合包含： 1-{6-[(4 M)-4-(5-氯-6-甲基-1 H-吲唑-4-基)-5-甲基-3-(1-甲基-1 H-吲唑-5-基)- 1 H-吡唑-1-基]-2-氮雜螺[3.3]庚-2-基}丙-2-烯-1-酮（化合物A）或其藥學上可接受的鹽以及 (ii) 斯巴達珠單抗替雷利珠單抗。

本發明還提供了藥物組合，該藥物組合包含： 1-{6-[(4 M)-4-(5-氯-6-甲基-1 H-吲唑-4-基)-5-甲基-3-(1-甲基-1 H-吲唑-5-基)- 1 H-吡唑-1-基]-2-氮雜螺[3.3]庚-2-基}丙-2-烯-1-酮（化合物A）或其藥學上可接受的鹽以及 (ii) 替雷利珠單抗。

本發明還提供了藥物組合，該藥物組合包含 (i) 1-{6-[(4 M)-4-(5-氯-6-甲基-1 H-吲唑-4-基)-5-甲基-3-(1-甲基-1 H-吲唑-5-基)- 1 H-吡唑-1-基]-2-氮雜螺[3.3]庚-2-基}丙-2-烯-1-酮（化合物A）或其藥學上可接受的鹽， (ii) TNO155或其藥學上可接受的鹽，以及 (iii) PD-1抑制劑。

本發明還提供了藥物組合，該藥物組合包含 (i) 1-{6-[(4 M)-4-(5-氯-6-甲基-1 H-吲唑-4-基)-5-甲基-3-(1-甲基-1 H-吲唑-5-基)-1 H-吡唑-1-基]-2-氮雜螺[3.3]庚-2-基}丙-2-烯-1-酮（化合物A）或其藥學上可接受的鹽， (ii) TNO155或其藥學上可接受的鹽，以及 (iii) 斯巴達珠單抗。

本發明還提供了藥物組合，該藥物組合包含 (i) 1-{6-[(4 M)-4-(5-氯-6-甲基-1 H-吲唑-4-基)-5-甲基-3-(1-甲基-1 H-吲唑-5-基)- 1 H-吡唑-1-基]-2-氮雜螺[3.3]庚-2-基}丙-2-烯-1-酮（化合物A）或其藥學上可接受的鹽， (ii) TNO155或其藥學上可接受的鹽，以及 (iii) 替雷利珠單抗。

應當理解，本文提到的「本發明之組合」或「本發明之一或多種組合」旨在單獨地包括該等藥物組合中的每一種還旨在包括該等組合中的所有作為一組。

本發明提供了本發明之組合，其用於在治療如本文所述之癌症中使用。

本發明提供了該等藥物組合，其用於在治療如本文所述之癌症中使用。

在本發明之實施方式中，PD-1抑制劑選自PDR001（斯巴達珠單抗；諾華股份有限公司（Novartis））、納武單抗（百時美施貴寶公司（Bristol-Myers Squibb））、派姆單抗（默克公司（Merck & Co））、匹地利珠單抗（醫好科技公司（CureTech））、MEDI0680（英商梅迪繆思公司（Medimmune））、REGN2810（再生元公司（Regeneron））、TSR-042（泰薩羅公司（Tesaro））、PF-06801591（輝瑞公司（Pfizer））、替雷利珠單抗（BGB-A317；百濟神州公司（Beigene））、BGB-108（百濟神州公司）、INCSHR1210（因賽特公司（Incyte））、或AMP-224（安普利公司（Amplimmune））。

在本發明之實施方式中，PD-1抑制劑係PDR001（斯巴達珠單抗）。

在本發明之實施方式中，以約300-400 mg的劑量投與PD-1抑制劑（例如，斯巴達珠單抗）。

在本發明之實施方式中，每3週一次或每4週一次投與PD-1抑制劑（例如，斯巴達珠單抗）。

在本發明之實施方式中，以約300 mg的劑量每3週一次投與PD-1抑制劑（例如，斯巴達珠單抗）。

在本發明之實施方式中，以約400 mg的劑量每4週一次投與PD-1抑制劑（例如，斯巴達珠單抗）。

在本發明之實施方式中，PD-1抑制劑係替雷利珠單抗。

在本發明之實施方式中，以約100-300 mg、或約200-300 mg的劑量投與PD-1抑制劑（例如，替雷利珠單抗）。

在本發明之實施方式中，每3週一次或每4週一次投與PD-1抑制劑（例如，替雷利珠單抗）。

在本發明之實施方式中，以約100-300 mg的劑量每3週一次投與PD-1抑制劑（例如，替雷利珠單抗）。

在本發明之實施方式中，以約100-300 mg的劑量每4週一次投與PD-1抑制劑（例如，替雷利珠單抗）。

在本發明之實施方式中，以約200-300 mg的劑量每3週一次投與PD-1抑制劑（例如，替雷利珠單抗）。

在本發明之實施方式中，以約200-300 mg的劑量每4週一次投與PD-1抑制劑（例如，替雷利珠單抗）。在本發明之實施方式中，以約200 mg的劑量每3週一次投與PD-1抑制劑（例如，替雷利珠單抗）。

在本發明之實施方式中，以約300 mg的劑量每4週一次投與PD-1抑制劑（例如，替雷利珠單抗）。

在本發明之組合的另一個實施方式中，化合物A或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物或水合物，SHP2抑制劑（例如TNO155）或其藥學上可接受的鹽和PD-1抑制劑（例如，斯巴達珠單抗或替雷利珠單抗）在分開的配製物中。

在另一個實施方式中，本發明之組合用於同時或依序（以任何順序）投與。

在另一個實施方式中係用於治療或預防有需要的受試者的癌症之方法，該方法包括向該受試者投與治療有效量的本發明之組合。

在本發明之實施方式中，待治療的癌症或腫瘤選自由以下組成之群組：肺癌（包括肺腺癌、非小細胞肺癌和鱗狀細胞肺癌）、大腸直腸癌（包括結腸直腸腺癌）、胰臟癌（包括胰臟腺癌）、子宮癌（包括子宮內膜癌（uterine endometrial cancer））、直腸癌（包括直腸腺癌）、闌尾癌、小腸癌、食道癌、肝膽癌（包括肝癌和膽管癌）、膀胱癌、卵巢癌和實性瘤，特別地當該癌症或腫瘤帶有KRAS G12C突變時。原發部位不明但示出KRAS G12C突變的癌症也可以得益於用本發明之方法的治療。

適當地，待治療的癌症係肺癌、大腸直腸癌或食道癌。

在本發明之方法的實施方式中，癌症選自非小細胞肺癌、大腸直腸癌、胰臟癌和實性瘤。

在方法之另外的實施方式中，癌症係非小細胞肺癌。

在方法之另外的實施方式中，癌症係小細胞肺癌。

在方法之另外的實施方式中，癌症係大腸直腸癌（包括結腸直腸腺癌）。

在方法之另外的實施方式中，癌症係胰臟癌（包括胰臟腺癌）。

在方法之另外的實施方式中，癌症係子宮癌（包括子宮內膜癌）。

在方法之另外的實施方式中，癌症係直腸癌（包括直腸腺癌）。

在方法之另外的實施方式中，癌症係闌尾癌。

在方法之另外的實施方式中，癌症係小腸癌。

在方法之另外的實施方式中，癌症係食道癌。

在方法之另外的實施方式中，癌症係肝膽癌（包括肝癌和膽管癌）。

在方法之另外的實施方式中，癌症係膀胱癌。

在方法之另外的實施方式中，癌症係卵巢癌。

在方法之另外的實施方式中，癌症係實性瘤

在方法之另外的實施方式中，癌症係胃癌。

在方法之另外的實施方式中，癌症係鼻咽癌。

在方法之另外的實施方式中，癌症係肝細胞癌。

在方法之另外的實施方式中，癌症係尿路上皮膀胱癌。

在方法之另外的實施方式中，癌症係何杰金氏淋巴瘤。

在另外的實施方式中，本發明提供了用於在製造用於治療選自以下的癌症的藥物中使用的本發明之組合：非小細胞肺癌、大腸直腸癌、胰臟癌和實性瘤，視需要其中該癌症或實性瘤係KRAS G12C突變型。在另一個實施方式中係藥物組成物，該藥物組成物包含本發明之組合。

在另外的實施方式中，藥物組成物進一步包含如本文所述的一或多種藥學上可接受的賦形劑。

序列表

本申請含有已經以ASCII格式電子遞交的序列表，並且將該序列表藉由引用以其全文特此併入。創建於2021年12月7日的所述ASCII副本名稱為PAT059013-WO-PCT04_ST25並且大小為49,644位元組。 KRAS G12C抑制劑化合物A

化合物A係1-{6-[(4 M)-4-(5-氯-6-甲基-1 H-吲唑-4-基)-5-甲基-3-(1-甲基-1 H-吲唑-5-基)-1 H-吡唑-1-基]-2-氮雜螺[3.3]庚-2-基}丙-2-烯-1-酮。化合物A還被稱作「a( R)-1-(6-(4-(5-氯-6-甲基-1H-吲唑-4-基)-5-甲基-3-(1-甲基-1H-吲唑-5-基)-1H-吡唑-1-基)-2-氮雜螺[3.3]庚-2-基)丙-2-烯-1-酮」。

化合物A及其結晶形式的合成如以下實例中所述。化合物A的結晶形式（例如，如實例中所述）也特別地可用於本發明之方法和用途中。

化合物A的結構如下：

。

可替代地，化合物A的結構可如下繪製：

。

化合物A也稱為「JDQ443」或「NVP-JDQ443」並且描述於2021年6月24日公開的PCT申請WO 2021/124222之實例1中。WO 2021/124222（將其藉由引用以其全文併入）還描述了可用於本發明之組合、用途和方法中的結晶形式（例如，變型HA）。

與索托拉西布和阿達格拉西布相比，化合物A利用與KRASG12C蛋白的獨特相互作用以新穎的結合模式在KRAS的開關II環下結合。化合物A藉由在位置12處與半胱胺酸形成共價鍵從而不可逆地誘捕KRASG12C的GDP束縛態，來以突變的選擇性方式有效抑制KRASG12C細胞傳訊和增殖。

化合物A顯示持續的體內目標佔有率（TO）（在MiaPaCa2模型中KRASG12C TO t1/2為約66 h）（儘管血液半衰期為約2小時），並表現出線性PK/PD（藥物動力學/藥效學建模）關係。化合物A在攜帶KRAS G12C突變型腫瘤異種移植的小鼠中具有與索托拉西布和阿達格拉西布相當的劑量依賴性抗腫瘤活性（圖5）。在小鼠、大鼠、和狗中，化合物A係口服生物可利用的，在預測以賦予抗腫瘤活性的範圍內實現了暴露，並且耐受性良好。使用微型泵投與的化合物A的連續遞送表明，曲線下面積（AUC）而非最大濃度（Cmax）係療效的驅動因子。

可用於本發明之組合和方法的其他KRAS G12C抑制劑包括選自以下的化合物：1-(4-(6-氯-8-氟-7-(3-羥基-5-乙烯基苯基)喹唑啉-4-基)哌𠯤-1-基)丙-2-烯-1-酮-,-甲烷（1/2）；(S)-1-(4-(6-氯-8-氟-7-(2-氟-6-羥基苯基)喹唑啉-4-基)哌𠯤-1-基)丙-2-烯-1-酮；和2-((S)-1-丙烯醯基-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌𠯤-2-基)乙腈以及以下文獻中詳述的化合物：WO 2013/155223、WO 2014/143659、WO 2014/152588、WO 2014/160200、WO 2015/054572、WO 2016/044772、WO 2016/049524、WO 2016164675、WO 2016168540、WO 2017/058805、WO 2017015562、WO 2017058728、WO 2017058768、WO 2017058792、WO 2017058805、WO 2017058807、WO 2017058902、WO 2017058915、WO 2017087528、WO 2017100546、WO 2017/201161、WO 2018/064510、WO 2018/068017、WO 2018/119183、WO 2018/217651、WO 2018/140512、WO 2018/140513、WO 2018/140514、WO 2018/140598、WO 2018/140599、WO 2018/140600、WO 2018/143315、WO 2018/206539、WO 2018/218069、WO 2018/218070、WO 2018/218071、WO 2019/051291、WO 2019/099524、WO 2019/110751、WO 2019/141250、WO 2019/150305、WO 2019/155399、WO 2019/213516、WO 2019/213526、WO 2019/215203、WO 2019/217307和WO 2019/217691、WO 2019/232419、WO 2020/028706、WO 2020/047192、EP 3628664、WO 2020081282、WO 2020085504、WO 2020/085493、WO 2020/097537、WO 2020/106640、WO 2020/113071、WO 2020/146613、WO 2020/156285、WO 2020/181110、WO 2020/178282、WO 2020/216190、WO 2020/236940、WO 2020/233592、WO 2020/238791、WO 2020/239077、WO 2020/239123、WO 2020/259513、WO 2020/259573、WO 2020/259432、WO 2021/000885、WO 2021/023154、WO 2021/027943、WO 2021/027911、CN 112390796、WO 2021/037018、CN 112430234、CN 112442029、WO 2021/043322、WO 2021/055728。 SHP2抑制劑

可用於本發明之組合和方法的SHP2抑制劑之實例包括TNO155、JAB3068（加科思公司（Jacobio））、JAB3312（加科思公司）、RLY1971（羅氏公司（Roche））、SAR442720（賽諾菲公司（Sanofi））、RMC4450（革命藥物公司（Revolution Medicines））、BBP398（Navire公司）、BR790（上海藍光公司（Shanghai Blueray））、SH3809（南京聖和公司（Nanjing Sanhome））、PF0724982（輝瑞公司）、ERAS601（Erasca公司）、RX-SHP2（Redx製藥公司）、ICP189（諾誠健華（InnoCare））、HBI2376（滬亞生物（HUYA Bioscience））、ETS001（上海ETERN生物製藥公司（Shanghai ETERN Biopharma））、TAS-ASTX（大鵬製藥腫瘤學公司（Taiho Oncology））和X-37-SHP2（X-37）。

根據本發明所使用的特別較佳的SHP2抑制劑係 (3S,4S)-8-(6-胺基-5-((2-胺基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡𠯤-2-基)-3-甲基-2-氧雜-8-氮雜螺[4.5]癸-4-胺（TNO155）或其藥學上可接受的鹽。根據WO 2015/107495之實例69合成TNO155，將該文獻藉由引用以其全文併入。TNO155的較佳的鹽係琥珀酸鹽。

另外，SHP2抑制劑包括以下中描述的化合物：WO 2015/107493、WO 2015/107494、WO 2015/107495、WO 2016/203406、WO 2016/203404、WO 2016/203405、WO 2017/216706、WO 2017/156397、WO 2020/063760、WO 2018/172984、WO 2017/211303、WO 21/061706、WO 2019/183367、WO 2019/183364、WO 2019/165073、WO 2019/067843、WO 2018/218133、WO 2018/081091、WO 2018/057884、WO 2020/247643、WO 2020/076723、WO 2019/199792、WO 2019/118909、WO 2019/075265、WO 2019/051084、WO 2018/136265、WO 2018/136264、WO 2018/013597、WO 2020/033828、WO 2019/213318、WO 2019/158019、WO 2021/088945、WO 2020/081848、WO 21/018287、WO 2020/094018、WO 2021/033153、WO 2020/022323、WO 2020/177653、WO 2021/073439、WO 2020/156243、WO 2020/156242、WO 2020/249079、WO 2020/033286、WO 2021/061515、WO 2019/182960、WO 2020/094104、WO 2020/210384、WO 2020/181283、WO 2021/043077、WO 2021/028362、WO 2020/259679、WO 2020/108590以及WO 2019/051469。

TNO155係含有蛋白酪胺酸磷酸酶-2（SHP2，由 PTPN11基因編碼）的口服生物可利用的Src同源-2結構域別構抑制物，該蛋白酪胺酸磷酸酶-2將來自激活的受體酪胺酸激酶（RTK）的訊息轉導到下游途徑（包括絲裂原激活蛋白激酶（MAPK）途徑）。SHP2還涉及免疫檢查點和細胞介素受體傳訊。TNO155已在多種RTK依賴性人癌細胞系和體內腫瘤異種移植物中顯示出療效。 PD1-抑制劑

計畫性死亡1（PD-1）蛋白係T細胞調節子的擴展的CD28/CTLA-4家族的抑制性成員。已經鑒定出PD-1的兩種配體PD-L1（B7-H1）和PD-L2（B7-DC），已經證實兩者在結合PD-1時下調T細胞活化。PD-L1在多種人癌症中大量存在。

PD-1被認為是負調節TCR訊息的免疫抑制性蛋白。PD-1和PD-L1之間的相互作用可以充當免疫檢查點，該相互作用可以導致例如腫瘤浸潤性淋巴球的減少、T細胞受體介導的增殖的減少和/或癌細胞的免疫逃避。藉由抑制PD-1與PD-L1或PD-L2的局部相互作用可以逆轉免疫抑制；當PD-1與PD-L2的相互作用被阻斷時，效果亦為累加的。

本發明之包含PD1-抑制劑（例如，斯巴達珠單抗或替雷利珠單抗）的藥物組合特別地可用於本發明之方法中，因為 KRAS G12C與更高的PD-L1表現率相關。

在某些實施方式中，化合物A或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物或水合物進一步與PD-1抑制劑組合投與。在某些實施方式中，化合物A或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物或水合物，和SHP2抑制劑（例如TNO155或其藥學上可接受的鹽）進一步與PD-1抑制劑組合投與。在一些實施方式中，PD-1抑制劑選自斯巴達珠單抗（PDR001，諾華股份有限公司）、納武單抗（百時美施貴寶公司）、派姆單抗（默克公司）、匹地利珠單抗（醫好科技公司）、MEDI0680（英商梅迪繆思公司）、塞米普利單抗（REGN2810）（再生元公司）、TSR-042（泰薩羅公司）、PF-06801591（輝瑞公司）、替雷利珠單抗（BGD-A317，百濟神州公司）、BGB-108（百濟神州公司）、INCSHR1210（因賽特公司）、或AMP-224（安普利公司）。根據本發明所使用的特別較佳的PD-1抑制劑係斯巴達珠單抗。根據本發明所使用的另一種特別較佳的PD-1抑制劑係替雷利珠單抗。

PDR001也稱為斯巴達珠單抗（抗PD-1抗體分子），如題為「Antibody Molecules to PD-1 and Uses Thereof [PD-1的抗體分子及其用途]」的2015年7月30日公佈的US 2015/0210769（將其藉由引用以其全文併入）中所述的。

替雷利珠單抗也稱為BGB-A317，一種抗PD-1抗體，描述於2015年3月19日公佈的WO 2015035606中，將該文獻藉由引用以其全文併入。

另外的抗PD-1抗體分子包括以下：納武單抗（百時美施貴寶公司），也稱為MDX-1106、MDX-1106-04、ONO-4538、BMS-936558或OPDIVO®。納武單抗（殖株5C4）和其他抗PD-1抗體揭露於US 8,008,449和WO 2006/121168（將其藉由引用以其全文併入）中；派姆單抗（默克公司），也稱為帕博利珠單抗（Lambrolizumab）、MK-3475、MK03475、SCH-900475或KEYTRUDA®。派姆單抗和其他抗PD-1抗體揭露於Hamid, O. 等人 (2013) New England Journal of Medicine[新英格蘭醫學期刊] 369 (2): 134-44，US 8,354,509和WO 2009/114335（將其藉由引用以其全文併入）中；匹地利珠單抗（醫好科技公司），也稱為CT-011。匹地利珠單抗和其他抗PD-1抗體揭露於Rosenblatt, J. 等人, (2011) J Immunotherapy[免疫療法雜誌] 34 (5): 409-18，US 7,695,715，US 7,332,582和US 8,686,119（將其藉由引用以其全文併入）中； MEDI0680（英商梅迪繆思公司），也稱為AMP-514。MEDI0680和其他抗PD-1抗體揭露於US 9,205,148和WO 2012/145493（將其藉由引用以其全文併入）中； AMP-224（B7-DCIg（安普利穆尼公司）），例如，揭露於WO 2010/027827和WO 2011/066342（將其藉由引用以其全文併入）中； REGN2810（再生元公司）；PF-06801591（輝瑞公司）；BGB-A317或BGB-108（百濟神州公司）；INCSHR1210（因賽特公司）也稱為INCSHR01210或SHR-1210；TSR-042（泰薩羅公司），也稱為ANB011；以及其他已知的抗PD-1抗體，包括描述於例如以下中的那些：WO 2015/112800、WO 2016/092419、WO 2015/085847、WO 2014/179664、WO 2014/194302、WO 2014/209804、WO 2015/200119、US 8,735,553、US 7,488,802、US 8,927,697、US 8,993,731、和US 9,102,727（將其藉由引用以其全文併入）。示例性PD-1抑制劑

在一個實施方式中，PD-1抑制劑係抗PD-1抗體分子。在一個實施方式中，PD-1抑制劑係抗PD-1抗體分子，如題為「PD-1的抗體分子及其用途」的2015年7月30日公佈的US 2015/0210769（將其藉由引用以其全文併入）中所述的。在一個實施方式中，抗PD-1抑制劑係斯巴達珠單抗，也稱為PDR001。在一些實施方式中，抗PD-1抗體分子係BAP049-殖株E或BAP049-殖株B。在其他實施方式中，抗PD1抗體分子係替雷利珠單抗，也稱為BGB-A317。

在本發明之實施方式中，抗PD-1抗體分子包含來自重鏈和輕鏈可變區的至少一個、兩個、三個、四個、五個或六個互補決定區（CDR）（或總體上全部CDR），該重鏈和輕鏈可變區包含表 1（例如，來自表 1中揭露的BAP049-殖株-E或BAP049-殖株-B的重鏈和輕鏈可變區序列）中所示的胺基酸序列，或由表 1中所示的核苷酸序列編碼的胺基酸序列。在一些實施方式中，CDR根據卡巴特（Kabat）定義（例如，如表 1中所列出的）。在一些實施方式中，CDR根據喬西亞（Chothia）定義（例如，如表 1中所列出的）。在一些實施方式中，CDR根據卡巴特和喬西亞二者的組合CDR定義（例如，如表 1中所列出的）。在一個實施方式中，VH CDR1的卡巴特和喬西亞CDR的組合包含胺基酸序列GYTFTTYWMH（SEQ ID NO: 541）。在一個實施方式中，相對於表 1中所示的胺基酸序列，或由表 1中所示的核苷酸序列編碼的胺基酸序列，CDR中的一或多個（或總體上全部CDR）具有一個、兩個、三個、四個、五個、六個或更多個變化，例如胺基酸取代（例如，保守胺基酸取代）或缺失。

在本發明之實施方式中，抗PD-1抗體分子包含：含有SEQ ID NO: 501的VHCDR1胺基酸序列、SEQ ID NO: 502的VHCDR2胺基酸序列、和SEQ ID NO: 503的VHCDR3胺基酸序列的重鏈可變區（VH）；以及含有SEQ ID NO: 510的VLCDR1胺基酸序列、SEQ ID NO: 511的VLCDR2胺基酸序列、和SEQ ID NO: 512的VLCDR3胺基酸序列的輕鏈可變區（VL），各自揭露於表 1中。

在本發明之實施方式中，抗體分子包含：含有由SEQ ID NO: 524的核苷酸序列編碼的VHCDR1、由SEQ ID NO: 525的核苷酸序列編碼的VHCDR2、和由SEQ ID NO: 526的核苷酸序列編碼的VHCDR3的VH；以及含有由SEQ ID NO: 529的核苷酸序列編碼的VLCDR1、由SEQ ID NO: 530的核苷酸序列編碼的VLCDR2、和由SEQ ID NO: 531的核苷酸序列編碼的VLCDR3的VL，各自揭露於表 1中。

在本發明之實施方式中，抗PD-1抗體分子包含：含有SEQ ID NO: 547的VHCDR1胺基酸序列、SEQ ID NO: 548的VHCDR2胺基酸序列、和SEQ ID NO: 549的VHCDR3胺基酸序列的重鏈可變區（VH）；以及含有SEQ ID NO: 542的VLCDR1胺基酸序列、SEQ ID NO: 543的VLCDR2胺基酸序列、和SEQ ID NO: 544的VLCDR3胺基酸序列的輕鏈可變區（VL），各自揭露於表1中。在本發明之實施方式中，抗PD-1抗體分子包含：含有SEQ ID NO: 550的胺基酸序列，或與SEQ ID NO: 550具有至少85%、90%、95%、或99%、或更高同一性的胺基酸序列的VH。在一個實施方式中，抗PD-1抗體分子包含：含有SEQ ID NO: 545的胺基酸序列，或與SEQ ID NO: 545具有至少85%、90%、95%、或99%、或更高同一性的胺基酸序列的VL。在本發明之實施方式中，抗PD-1抗體分子包含：含有SEQ ID NO: 551的胺基酸序列，或與SEQ ID NO: 551具有至少85%、90%、95%、或99%、或更高同一性的胺基酸序列的重鏈。在一個實施方式中，抗PD-1抗體分子包含：含有SEQ ID NO: 546的胺基酸序列，或與SEQ ID NO: 546具有至少85%、90%、95%、或99%、或更高同一性的胺基酸序列的輕鏈。

在本發明之實施方式中，抗PD-1抗體分子包含：含有SEQ ID NO: 506的胺基酸序列，或與SEQ ID NO: 506具有至少85%、90%、95%、或99%、或更高同一性的胺基酸序列的VH。在一個實施方式中，抗PD-1抗體分子包含：含有SEQ ID NO: 520的胺基酸序列，或與SEQ ID NO: 520具有至少85%、90%、95%、或99%、或更高同一性的胺基酸序列的VL。在一個實施方式中，抗PD-1抗體分子包含：含有SEQ ID NO: 516的胺基酸序列，或與SEQ ID NO: 516具有至少85%、90%、95%、或99%、或更高同一性的胺基酸序列的VL。在一個實施方式中，抗PD-1抗體分子包含：含有SEQ ID NO: 506的胺基酸序列的VH和含有SEQ ID NO: 520的胺基酸序列的VL。

在本發明之實施方式中，抗PD-1抗體分子包含：含有SEQ ID NO: 506的胺基酸序列的VH和含有SEQ ID NO: 516的胺基酸序列的VL。

在本發明之實施方式中，抗體分子包含：由SEQ ID NO: 507的核苷酸序列，或與SEQ ID NO: 507具有至少85%、90%、95%、或99%、或更高同一性的核苷酸序列編碼的VH。在一個實施方式中，抗體分子包含：由SEQ ID NO: 521或517的核苷酸序列，或與SEQ ID NO: 521或517具有至少85%、90%、95%、或99%或更高同一性的核苷酸序列編碼的VL。在一個實施方式中，抗體分子包含由SEQ ID NO: 507的核苷酸序列編碼的VH和由SEQ ID NO: 521或517的核苷酸序列編碼的VL。

在本發明之實施方式中，抗PD-1抗體分子包含：含有SEQ ID NO: 508的胺基酸序列，或與SEQ ID NO: 508具有至少85%、90%、95%、或99%、或更高同一性的胺基酸序列的重鏈。在一個實施方式中，抗PD-1抗體分子包含：含有SEQ ID NO: 522的胺基酸序列，或與SEQ ID NO: 522具有至少85%、90%、95%、或99%、或更高同一性的胺基酸序列的輕鏈。在一個實施方式中，抗PD-1抗體分子包含：含有SEQ ID NO: 518的胺基酸序列、或與SEQ ID NO: 518具有至少85%、90%、95%、或99%、或更高同一性的胺基酸序列的輕鏈。在一個實施方式中，抗PD-1抗體分子包含：含有SEQ ID NO: 508的胺基酸序列的重鏈和含有SEQ ID NO: 522的胺基酸序列的輕鏈。在一個實施方式中，抗PD-1抗體分子包含：含有SEQ ID NO: 508的胺基酸序列的重鏈和含有SEQ ID NO: 518的胺基酸序列的輕鏈。

在本發明之實施方式中，抗體分子包含：由SEQ ID NO: 509的核苷酸序列，或與SEQ ID NO: 509具有至少85%、90%、95%、或99%、或更高同一性的核苷酸序列編碼的重鏈。在一個實施方式中，抗體分子包含：由SEQ ID NO: 523或519的核苷酸序列，或與SEQ ID NO: 523或519具有至少85%、90%、95%、或99%或更高同一性的核苷酸序列編碼的輕鏈。在一個實施方式中，抗體分子包含由SEQ ID NO: 509的核苷酸序列編碼的重鏈和由SEQ ID NO: 523或519的核苷酸序列編碼的輕鏈。

本文所述之抗體分子可以藉由運載體、宿主細胞、和在US 2015/0210769（將其藉由引用以其全文併入）中描述的方法制得。

本文所述之抗體分子可如WO 2015035606中描述的製得，該文獻公佈於2015年3月19日，將其藉由引用以其全文併入。

在某些實施方式中，將檢查點抑制劑（例如，本文描述的TIM-3的抑制劑）與TGF-β抑制劑的組合抑制進一步與PD-1抑制劑組合，並用於治療癌症（例如，骨髓纖維化）。

在一些實施方式中，以介於以下的劑量投與PD-1抑制劑（例如，斯巴達珠單抗）：約100 mg至約600 mg，例如，約100 mg至約500 mg、約100 mg至約400 mg、約100 mg至約300 mg、約100 mg至約200 mg、約200 mg至約600 mg、約200 mg至約500 mg、約200 mg至約400 mg、約200 mg至約300 mg、約300 mg至約600 mg、約300 mg至約500 mg、約300 mg至約400 mg、約400 mg至約600 mg、約400 mg至約500 mg、或約500 mg至約600 mg。在一些實施方式中，以約100 mg、約200 mg、約300 mg、約400 mg、約500 mg、或約600 mg的劑量投與PD-1抑制劑（例如，斯巴達珠單抗）。在一些實施方式中，每四週一次投與PD-1抑制劑（例如，斯巴達珠單抗）。在一些實施方式中，每三週一次投與（例如，斯巴達珠單抗）。在一些實施方式中，靜脈內投與（例如，斯巴達珠單抗）。在一些實施方式中，經約20分鐘至40分鐘（例如，約30分鐘）的時間段投與（例如，斯巴達珠單抗）。

在一些實施方式中，以介於約300 mg至約500 mg（例如，約400 mg）的劑量，經約20分鐘至約40分鐘（例如，約30分鐘）的時間段，每兩週一次，靜脈內投與PD-1抑制劑（例如，斯巴達珠單抗）。在一些實施方式中，以介於約200 mg至約400 mg（例如，約300 mg）的劑量，經約20分鐘至約40分鐘（例如，約30分鐘）的時間段，每三週一次，靜脈內投與PD-1抑制劑（例如，斯巴達珠單抗）。

在一些實施方式中，將PD-1抑制劑（例如，斯巴達珠單抗）與TIM-3抑制劑（例如，抗TIM3抗體）和TGF-β抑制劑（例如，NIS793）組合投與。

在本發明之實施方式中，以約200-300 mg的劑量每4週一次投與PD-1抑制劑（例如，替雷利珠單抗）。

在本發明之實施方式中，以約200 mg的劑量每3週一次投與PD-1抑制劑（例如，替雷利珠單抗）。

[ 表 1] .示例性抗PD-1抗體分子的胺基酸和核苷酸序列

BAP049- 殖株 -B HC
SEQ ID NO: 501（卡巴特）	HCDR1	TYWMH
SEQ ID NO: 502（卡巴特）	HCDR2	NIYPGTGGSNFDEKFKN
SEQ ID NO: 503（卡巴特）	HCDR3	WTTGTGAY
SEQ ID NO: 504（喬西亞）	HCDR1	GYTFTTY
SEQ ID NO: 505（喬西亞）	HCDR2	YPGTGG
SEQ ID NO: 503（喬西亞）	HCDR3	WTTGTGAY
SEQ ID NO: 506	VH	EVQLVQSGAEVKKPGESLRISCKGSGYTFTTYWMHWVRQATGQGLEWMGNIYPGTGGSNFDEKFKNRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCTRWTTGTGAYWGQGTTVTVSS
SEQ ID NO: 507	DNA VH	GAGGTGCAGCTGGTGCAGTCAGGCGCCGAAGTGAAGAAGCCCGGCGAGTCACTGAGAATTAGCTGTAAAGGTTCAGGCTACACCTTCACTACCTACTGGATGCACTGGGTCCGCCAGGCTACCGGTCAAGGCCTCGAGTGGATGGGTAATATCTACCCCGGCACCGGCGGCTCTAACTTCGACGAGAAGTTTAAGAATAGAGTGACTATCACCGCCGATAAGTCTACTAGCACCGCCTATATGGAACTGTCTAGCCTGAGATCAGAGGACACCGCCGTCTACTACTGCACTAGGTGGACTACCGGCACAGGCGCCTACTGGGGTCAAGGCACTACCGTGACCGTGTCTAGC
SEQ ID NO: 508	重鏈	EVQLVQSGAEVKKPGESLRISCKGSGYTFTTYWMHWVRQATGQGLEWMGNIYPGTGGSNFDEKFKNRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCTRWTTGTGAYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG
SEQ ID NO: 509	DNA重鏈	GAGGTGCAGCTGGTGCAGTCAGGCGCCGAAGTGAAGAAGCCCGGCGAGTCACTGAGAATTAGCTGTAAAGGTTCAGGCTACACCTTCACTACCTACTGGATGCACTGGGTCCGCCAGGCTACCGGTCAAGGCCTCGAGTGGATGGGTAATATCTACCCCGGCACCGGCGGCTCTAACTTCGACGAGAAGTTTAAGAATAGAGTGACTATCACCGCCGATAAGTCTACTAGCACCGCCTATATGGAACTGTCTAGCCTGAGATCAGAGGACACCGCCGTCTACTACTGCACTAGGTGGACTACCGGCACAGGCGCCTACTGGGGTCAAGGCACTACCGTGACCGTGTCTAGCGCTAGCACTAAGGGCCCGTCCGTGTTCCCCCTGGCACCTTGTAGCCGGAGCACTAGCGAATCCACCGCTGCCCTCGGCTGCCTGGTCAAGGATTACTTCCCGGAGCCCGTGACCGTGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCTCCGGAGTGCACACCTTCCCCGCTGTGCTGCAGAGCTCCGGGCTGTACTCGCTGTCGTCGGTGGTCACGGTGCCTTCATCTAGCCTGGGTACCAAGACCTACACTTGCAACGTGGACCACAAGCCTTCCAACACTAAGGTGGACAAGCGCGTCGAATCGAAGTACGGCCCACCGTGCCCGCCTTGTCCCGCGCCGGAGTTCCTCGGCGGTCCCTCGGTCTTTCTGTTCCCACCGAAGCCCAAGGACACTTTGATGATTTCCCGCACCCCTGAAGTGACATGCGTGGTCGTGGACGTGTCACAGGAAGATCCGGAGGTGCAGTTCAATTGGTACGTGGATGGCGTCGAGGTGCACAACGCCAAAACCAAGCCGAGGGAGGAGCAGTTCAACTCCACTTACCGCGTCGTGTCCGTGCTGACGGTGCTGCATCAGGACTGGCTGAACGGGAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGGACTTCCTAGCTCAATCGAAAAGACCATCTCGAAAGCCAAGGGACAGCCCCGGGAACCCCAAGTGTATACCCTGCCACCGAGCCAGGAAGAAATGACTAAGAACCAAGTCTCATTGACTTGCCTTGTGAAGGGCTTCTACCCATCGGATATCGCCGTGGAATGGGAGTCCAACGGCCAGCCGGAAAACAACTACAAGACCACCCCTCCGGTGCTGGACTCAGACGGATCCTTCTTCCTCTACTCGCGGCTGACCGTGGATAAGAGCAGATGGCAGGAGGGAAATGTGTTCAGCTGTTCTGTGATGCATGAAGCCCTGCACAACCACTACACTCAGAAGTCCCTGTCCCTCTCCCTGGGA
BAP049- 殖株 -B LC
SEQ ID NO: 510（卡巴特）	LCDR1	KSSQSLLDSGNQKNFLT
SEQ ID NO: 511（卡巴特）	LCDR2	WASTRES
SEQ ID NO: 512（卡巴特）	LCDR3	QNDYSYPYT
SEQ ID NO: 513（喬西亞）	LCDR1	SQSLLDSGNQKNF
SEQ ID NO: 514（喬西亞）	LCDR2	WAS
SEQ ID NO: 515（喬西亞）	LCDR3	DYSYPY
SEQ ID NO: 516	VL	EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCKSSQSLLDSGNQKNFLTWYQQKPGKAPKLLIYWASTRESGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQNDYSYPYTFGQGTKVEIK
SEQ ID NO: 517	DNA VL	GAGATCGTCCTGACTCAGTCACCCGCTACCCTGAGCCTGAGCCCTGGCGAGCGGGCTACACTGAGCTGTAAATCTAGTCAGTCACTGCTGGATAGCGGTAATCAGAAGAACTTCCTGACCTGGTATCAGCAGAAGCCCGGTAAAGCCCCTAAGCTGCTGATCTACTGGGCCTCTACTAGAGAATCAGGCGTGCCCTCTAGGTTTAGCGGTAGCGGTAGTGGCACCGACTTCACCTTCACTATCTCTAGCCTGCAGCCCGAGGATATCGCTACCTACTACTGTCAGAACGACTATAGCTACCCCTACACCTTCGGTCAAGGCACTAAGGTCGAGATTAAG
SEQ ID NO: 518	輕鏈	EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCKSSQSLLDSGNQKNFLTWYQQKPGKAPKLLIYWASTRESGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQNDYSYPYTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
SEQ ID NO: 519	DNA輕鏈	GAGATCGTCCTGACTCAGTCACCCGCTACCCTGAGCCTGAGCCCTGGCGAGCGGGCTACACTGAGCTGTAAATCTAGTCAGTCACTGCTGGATAGCGGTAATCAGAAGAACTTCCTGACCTGGTATCAGCAGAAGCCCGGTAAAGCCCCTAAGCTGCTGATCTACTGGGCCTCTACTAGAGAATCAGGCGTGCCCTCTAGGTTTAGCGGTAGCGGTAGTGGCACCGACTTCACCTTCACTATCTCTAGCCTGCAGCCCGAGGATATCGCTACCTACTACTGTCAGAACGACTATAGCTACCCCTACACCTTCGGTCAAGGCACTAAGGTCGAGATTAAGCGTACGGTGGCCGCTCCCAGCGTGTTCATCTTCCCCCCCAGCGACGAGCAGCTGAAGAGCGGCACCGCCAGCGTGGTGTGCCTGCTGAACAACTTCTACCCCCGGGAGGCCAAGGTGCAGTGGAAGGTGGACAACGCCCTGCAGAGCGGCAACAGCCAGGAGAGCGTCACCGAGCAGGACAGCAAGGACTCCACCTACAGCCTGAGCAGCACCCTGACCCTGAGCAAGGCCGACTACGAGAAGCATAAGGTGTACGCCTGCGAGGTGACCCACCAGGGCCTGTCCAGCCCCGTGACCAAGAGCTTCAACAGGGGCGAGTGC
BAP049- 殖株 -E HC
SEQ ID NO: 501（卡巴特）	HCDR1	TYWMH
SEQ ID NO: 502（卡巴特）	HCDR2	NIYPGTGGSNFDEKFKN
SEQ ID NO: 503（卡巴特）	HCDR3	WTTGTGAY
SEQ ID NO: 504（喬西亞）	HCDR1	GYTFTTY
SEQ ID NO: 505（喬西亞）	HCDR2	YPGTGG
SEQ ID NO: 503（喬西亞）	HCDR3	WTTGTGAY
SEQ ID NO: 506	VH	EVQLVQSGAEVKKPGESLRISCKGSGYTFTTYWMHWVRQATGQGLEWMGNIYPGTGGSNFDEKFKNRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCTRWTTGTGAYWGQGTTVTVSS
SEQ ID NO: 507	DNA VH	GAGGTGCAGCTGGTGCAGTCAGGCGCCGAAGTGAAGAAGCCCGGCGAGTCACTGAGAATTAGCTGTAAAGGTTCAGGCTACACCTTCACTACCTACTGGATGCACTGGGTCCGCCAGGCTACCGGTCAAGGCCTCGAGTGGATGGGTAATATCTACCCCGGCACCGGCGGCTCTAACTTCGACGAGAAGTTTAAGAATAGAGTGACTATCACCGCCGATAAGTCTACTAGCACCGCCTATATGGAACTGTCTAGCCTGAGATCAGAGGACACCGCCGTCTACTACTGCACTAGGTGGACTACCGGCACAGGCGCCTACTGGGGTCAAGGCACTACCGTGACCGTGTCTAGC
SEQ ID NO: 508	重鏈	EVQLVQSGAEVKKPGESLRISCKGSGYTFTTYWMHWVRQATGQGLEWMGNIYPGTGGSNFDEKFKNRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCTRWTTGTGAYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG
SEQ ID NO: 509	DNA重鏈	GAGGTGCAGCTGGTGCAGTCAGGCGCCGAAGTGAAGAAGCCCGGCGAGTCACTGAGAATTAGCTGTAAAGGTTCAGGCTACACCTTCACTACCTACTGGATGCACTGGGTCCGCCAGGCTACCGGTCAAGGCCTCGAGTGGATGGGTAATATCTACCCCGGCACCGGCGGCTCTAACTTCGACGAGAAGTTTAAGAATAGAGTGACTATCACCGCCGATAAGTCTACTAGCACCGCCTATATGGAACTGTCTAGCCTGAGATCAGAGGACACCGCCGTCTACTACTGCACTAGGTGGACTACCGGCACAGGCGCCTACTGGGGTCAAGGCACTACCGTGACCGTGTCTAGCGCTAGCACTAAGGGCCCGTCCGTGTTCCCCCTGGCACCTTGTAGCCGGAGCACTAGCGAATCCACCGCTGCCCTCGGCTGCCTGGTCAAGGATTACTTCCCGGAGCCCGTGACCGTGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCTCCGGAGTGCACACCTTCCCCGCTGTGCTGCAGAGCTCCGGGCTGTACTCGCTGTCGTCGGTGGTCACGGTGCCTTCATCTAGCCTGGGTACCAAGACCTACACTTGCAACGTGGACCACAAGCCTTCCAACACTAAGGTGGACAAGCGCGTCGAATCGAAGTACGGCCCACCGTGCCCGCCTTGTCCCGCGCCGGAGTTCCTCGGCGGTCCCTCGGTCTTTCTGTTCCCACCGAAGCCCAAGGACACTTTGATGATTTCCCGCACCCCTGAAGTGACATGCGTGGTCGTGGACGTGTCACAGGAAGATCCGGAGGTGCAGTTCAATTGGTACGTGGATGGCGTCGAGGTGCACAACGCCAAAACCAAGCCGAGGGAGGAGCAGTTCAACTCCACTTACCGCGTCGTGTCCGTGCTGACGGTGCTGCATCAGGACTGGCTGAACGGGAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGGACTTCCTAGCTCAATCGAAAAGACCATCTCGAAAGCCAAGGGACAGCCCCGGGAACCCCAAGTGTATACCCTGCCACCGAGCCAGGAAGAAATGACTAAGAACCAAGTCTCATTGACTTGCCTTGTGAAGGGCTTCTACCCATCGGATATCGCCGTGGAATGGGAGTCCAACGGCCAGCCGGAAAACAACTACAAGACCACCCCTCCGGTGCTGGACTCAGACGGATCCTTCTTCCTCTACTCGCGGCTGACCGTGGATAAGAGCAGATGGCAGGAGGGAAATGTGTTCAGCTGTTCTGTGATGCATGAAGCCCTGCACAACCACTACACTCAGAAGTCCCTGTCCCTCTCCCTGGGA
BAP049- 殖株 -E LC
SEQ ID NO: 510（卡巴特）	LCDR1	KSSQSLLDSGNQKNFLT
SEQ ID NO: 511（卡巴特）	LCDR2	WASTRES
SEQ ID NO: 512（卡巴特）	LCDR3	QNDYSYPYT
SEQ ID NO: 513（喬西亞）	LCDR1	SQSLLDSGNQKNF
SEQ ID NO: 514（喬西亞）	LCDR2	WAS
SEQ ID NO: 515（喬西亞）	LCDR3	DYSYPY
SEQ ID NO: 520	VL	EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCKSSQSLLDSGNQKNFLTWYQQKPGQAPRLLIYWASTRESGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLEAEDAATYYCQNDYSYPYTFGQGTKVEIK
SEQ ID NO: 521	DNA VL	GAGATCGTCCTGACTCAGTCACCCGCTACCCTGAGCCTGAGCCCTGGCGAGCGGGCTACACTGAGCTGTAAATCTAGTCAGTCACTGCTGGATAGCGGTAATCAGAAGAACTTCCTGACCTGGTATCAGCAGAAGCCCGGTCAAGCCCCTAGACTGCTGATCTACTGGGCCTCTACTAGAGAATCAGGCGTGCCCTCTAGGTTTAGCGGTAGCGGTAGTGGCACCGACTTCACCTTCACTATCTCTAGCCTGGAAGCCGAGGACGCCGCTACCTACTACTGTCAGAACGACTATAGCTACCCCTACACCTTCGGTCAAGGCACTAAGGTCGAGATTAAG
SEQ ID NO: 522	輕鏈	EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCKSSQSLLDSGNQKNFLTWYQQKPGQAPRLLIYWASTRESGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLEAEDAATYYCQNDYSYPYTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
SEQ ID NO: 523	DNA輕鏈	GAGATCGTCCTGACTCAGTCACCCGCTACCCTGAGCCTGAGCCCTGGCGAGCGGGCTACACTGAGCTGTAAATCTAGTCAGTCACTGCTGGATAGCGGTAATCAGAAGAACTTCCTGACCTGGTATCAGCAGAAGCCCGGTCAAGCCCCTAGACTGCTGATCTACTGGGCCTCTACTAGAGAATCAGGCGTGCCCTCTAGGTTTAGCGGTAGCGGTAGTGGCACCGACTTCACCTTCACTATCTCTAGCCTGGAAGCCGAGGACGCCGCTACCTACTACTGTCAGAACGACTATAGCTACCCCTACACCTTCGGTCAAGGCACTAAGGTCGAGATTAAGCGTACGGTGGCCGCTCCCAGCGTGTTCATCTTCCCCCCCAGCGACGAGCAGCTGAAGAGCGGCACCGCCAGCGTGGTGTGCCTGCTGAACAACTTCTACCCCCGGGAGGCCAAGGTGCAGTGGAAGGTGGACAACGCCCTGCAGAGCGGCAACAGCCAGGAGAGCGTCACCGAGCAGGACAGCAAGGACTCCACCTACAGCCTGAGCAGCACCCTGACCCTGAGCAAGGCCGACTACGAGAAGCATAAGGTGTACGCCTGCGAGGTGACCCACCAGGGCCTGTCCAGCCCCGTGACCAAGAGCTTCAACAGGGGCGAGTGC
BAP049- 殖株 -B HC
SEQ ID NO: 524（卡巴特）	HCDR1	ACCTACTGGATGCAC
SEQ ID NO: 525（卡巴特）	HCDR2	AATATCTACCCCGGCACCGGCGGCTCTAACTTCGACGAGAAGTTTAAGAAT
SEQ ID NO: 526（卡巴特）	HCDR3	TGGACTACCGGCACAGGCGCCTAC
SEQ ID NO: 527（喬西亞）	HCDR1	GGCTACACCTTCACTACCTAC
SEQ ID NO: 528（喬西亞）	HCDR2	TACCCCGGCACCGGCGGC
SEQ ID NO: 526（喬西亞）	HCDR3	TGGACTACCGGCACAGGCGCCTAC
BAP049- 殖株 -B LC
SEQ ID NO: 529（卡巴特）	LCDR1	AAATCTAGTCAGTCACTGCTGGATAGCGGTAATCAGAAGAACTTCCTGACC
SEQ ID NO: 530（卡巴特）	LCDR2	TGGGCCTCTACTAGAGAATCA
SEQ ID NO: 531（卡巴特）	LCDR3	CAGAACGACTATAGCTACCCCTACACC
SEQ ID NO: 532（喬西亞）	LCDR1	AGTCAGTCACTGCTGGATAGCGGTAATCAGAAGAACTTC
SEQ ID NO: 533（喬西亞）	LCDR2	TGGGCCTCT
SEQ ID NO: 534（喬西亞）	LCDR3	GACTATAGCTACCCCTAC
BAP049- 殖株 -E HC
SEQ ID NO: 524（卡巴特）	HCDR1	ACCTACTGGATGCAC
SEQ ID NO: 525（卡巴特）	HCDR2	AATATCTACCCCGGCACCGGCGGCTCTAACTTCGACGAGAAGTTTAAGAAT
SEQ ID NO: 526（卡巴特）	HCDR3	TGGACTACCGGCACAGGCGCCTAC
SEQ ID NO: 527（喬西亞）	HCDR1	GGCTACACCTTCACTACCTAC
SEQ ID NO: 528（喬西亞）	HCDR2	TACCCCGGCACCGGCGGC
SEQ ID NO: 526（喬西亞）	HCDR3	TGGACTACCGGCACAGGCGCCTAC
BAP049- 殖株 -E LC
SEQ ID NO: 529（卡巴特）	LCDR1	AAATCTAGTCAGTCACTGCTGGATAGCGGTAATCAGAAGAACTTCCTGACC
SEQ ID NO: 530（卡巴特）	LCDR2	TGGGCCTCTACTAGAGAATCA
SEQ ID NO: 531（卡巴特）	LCDR3	CAGAACGACTATAGCTACCCCTACACC
SEQ ID NO: 532（喬西亞）	LCDR1	AGTCAGTCACTGCTGGATAGCGGTAATCAGAAGAACTTC
SEQ ID NO: 533（喬西亞）	LCDR2	TGGGCCTCT
SEQ ID NO: 534（喬西亞）	LCDR3	GACTATAGCTACCCCTAC
BGB-A317
SEQ ID NO: 542	LCDR1	KSSESVSNDVA
SEQ ID NO: 543	LCDR2	YAFHRFT
SEQ ID NO: 544	LCDR3	HQAYSSPYT
SEQ ID NO: 545	VL	DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSESVSNDVAWYQQKPGQPPKLLINYAFHRFTGVPDRFSGSGYGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCHQAYSSPYTFGQGTKLEIK
SEQ ID NO: 546	輕鏈	DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSESVSNDVAWYQQKPGQPPKLLINYAFHRFTGVPDRFSGSGYGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCHQAYSSPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
SEQ ID NO: 547	HCDR1	GFSLTSYGVH
SEQ ID NO: 548	HCDR2	VIYADGSTNYNPSLKS
SEQ ID NO: 549	HCDR3	ARAYGNYWYIDV
SEQ ID NO: 550	VH	QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGFSLTSYGVHWIRQPPGKGLEWIGVIYADGSTNYNPSLKSRVTISKDTSKNQVSLKLSSVTAADTAVYYCARAYGNYWYIDVWGQGTTVTVSS
SEQ ID NO: 551	重鏈	QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGFSLTSYGVHWIRQPPGKGLEWIGVIYADGSTNYNPSLKSRVTISKDTSKNQVSLKLSSVTAADTAVYYCARAYGNYWYIDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPPVAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVAVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK

在本發明之組合和方法中，每種治療活性劑可以分開地、同時地或依序地（以任何順序）投與。

在本發明之組合和方法中，以口服劑型投與化合物A和/或TNO155。

在本發明之組合和方法中，靜脈內投與替雷利珠單抗。

在另一個實施方式中，提供了藥物組成物，該藥物組成物包含本發明之藥物組合和至少一種藥學上可接受的載體。 KRAS G12C抑制劑

本發明之方法和組合可以特別地用於治療對用另一種KRAS G12C抑制劑的先前治療具有抗性的癌症或腫瘤。

此類KRAS G12C抑制劑之實例包括索托拉西布（美商安進公司（Amgen））、阿達格拉西布（Mirati公司）、D-1553（益方生物（InventisBio））、BI1701963（勃林格公司（Boehringer））、GDC6036（羅氏公司）、JNJ74699157（J & J公司）、X-Chem KRAS（X-Chem公司）、LY3537982（禮來公司（Lilly））、BI1823911（勃林格公司）、AS KRAS G12C（亞盛藥業公司（Ascentage Pharma））、SF KRAS G12C（賽諾菲公司）、RMC032（革命藥物公司）、JAB-21822（加科思製藥公司（Jacobio Pharmaceuticals））、AST-KRAS G12C（艾力斯製藥公司（Allist Pharmaceuticals））、AZ KRAS G12C（阿斯利康公司（Astra Zeneca））、NYU-12VC1（紐約大學（New York University））、和RMC6291（革命藥物公司）。

在一個實施方式中，待治療的癌症或腫瘤對用索托拉西布或阿達格拉西布的先前治療具有抗性或有進展。

在一個實施方式中，癌症（例如NSCLC）先前已經用KRAS G12C抑制劑（例如索托拉西布、阿達格拉西布、D-1553、和GDC6036）治療。

預期涉及化合物A與 (i) SHP2抑制劑或 (ii) PD-1抑制劑，或涉及化合物A與SHP2抑制劑和PD-1抑制劑兩者的組合療法將特別地可用於克服這種抗性。待治療的癌症

化合物A係KRAS G12C的強有力且選擇性的共價抑制劑，化合物A與KRAS G12C結合並且將其誘捕至無活性的鳥苷二磷酸（GDP）束縛態。藉由抑制腫瘤細胞中的KRAS G12C並阻止下游傳訊，化合物A有可能降低患有KRAS G12C突變型癌症或腫瘤的患者的腫瘤生長。

由於化合物A以替代性結合模式與KRAS G12結合並對雙突變體（其在臨床試驗中被確定為介導對阿達格拉西布的抗性（參見Tanaka 2021））顯示出活性，因此化合物A可以單獨以及與選自SHP2抑制劑（例如，TNO 155）和PD-1抑制劑（例如，斯巴達珠單抗或替雷利珠單抗）的一種或兩種藥劑組合提供有效的治療，以克服在用KRAS抑制劑（如阿達格拉西布或索托拉西布）治療期間出現的抗性機制。

因此，化合物A和包含化合物A的組合可用於治療癌症和KRAS G12C突變的癌症或腫瘤。本發明之化合物A和組合可用於治療選自由以下組成之群組的癌症或腫瘤：肺癌（包括肺腺癌、非小細胞肺癌和鱗狀細胞肺癌）、大腸直腸癌（包括結腸直腸腺癌）、胰臟癌（包括胰臟腺癌）、子宮癌（包括子宮內膜癌）、直腸癌（包括直腸腺癌）、闌尾癌、小腸癌、食道癌、肝膽癌（包括肝癌和膽管癌）、膀胱癌、卵巢癌和實性瘤，特別地當該癌症或腫瘤帶有KRAS G12C突變時。原發部位不明但示出KRAS G12C突變的癌症也可以得益於用本發明之方法的治療。

待藉由本發明之化合物、組合和方法治療的其他癌症包括胃癌、鼻咽癌、肝細胞癌、和何杰金氏淋巴瘤，特別地當該癌症帶有KRAS G12C突變時。

特別地，本發明提供了治療方法和用於在治療選自由以下組成之群組的癌症中使用的組合：肺癌（如肺腺癌和非小細胞肺癌）、大腸直腸癌（包括結腸直腸腺癌）、胰臟癌（包括胰臟腺癌）、子宮癌（包括子宮內膜癌）、直腸癌（包括直腸腺癌）和實性瘤，特別地當該癌症或腫瘤帶有KRAS G12C突變時。

癌症可以處於早期、中期、晚期或可為轉移性癌症。

在一些實施方式中，癌症係晚期癌症。在一些實施方式中，癌症係轉移性癌症。在一些實施方式中，癌症係復發性癌症。在一些實施方式中，癌症係難治性癌症。在一些實施方式中，癌症係反復發作性癌症。在一些實施方式中，癌症係不可切除性癌症。

癌症可以處於早期、中期、晚期或係轉移性癌症。

本發明之化合物A和組合還可用於治療以RAS突變為特徵的實體惡性腫瘤。

本發明之化合物A和組合還可用於治療以KRAS的一或多種突變，特別是KRAS中的G12C突變為特徵的實體惡性腫瘤。

本發明提供了本發明之化合物A和組合，其用於在治療以獲得性KRAS改變（選自G12D/R/V/W、G13D、Q61H、R68S、H95D/Q/R、Y96C、Y96 D和KRASG12C等位基因的高水平擴增）為特徵或以獲得性旁路抗性機制為特徵的癌症或實性瘤中使用，該等旁路抗性機制包括MET擴增；NRAS、BRAF、MAP2K1、和RET中的激活突變；涉及ALK、RET、BRAF、RAF1、和FGFR3的致癌性融合；以及NF1和PTEN中的功能喪失性突變。

因此，作為另外的實施方式，本發明提供了化合物A或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物或水合物，其單獨或與第二治療劑組合用於在療法中使用，該第二治療劑選自SHP2抑制劑（如TNO155或其藥學上可接受的鹽）、和PD-1抑制劑。本發明還提供了由以下組成的三重組合：化合物A或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物或水合物，SHP2抑制劑（如TNO155或其藥學上可接受的鹽），以及PD-1抑制劑。作為另外的實施方式，本發明提供了本發明之組合，其用於在療法中使用。在較佳的實施方式中，療法或藥物有用的療法對選自可以藉由抑制RAS突變型蛋白，特別地KRAS、HRAS或NRAS G12C突變型蛋白來治療的疾病係有用的。在另一個實施方式中，本發明提供了治療有需要的受試者的疾病之方法，該疾病藉由抑制RAS突變型蛋白，特別地KRAS、HRAS或NRAS蛋白的G12C突變型進行治療，其中該方法包括向該受試者投與治療有效量的本發明之化合物、或本發明之組合。

在更較佳的實施方式中，疾病選自上述列表，適當地是非小細胞肺癌、大腸直腸癌和胰臟癌。

在較佳的實施方式中，療法用於疾病，該疾病可以藉由抑制RAS突變型蛋白，特別地KRAS、HRAS或NRAS蛋白的G12C突變型來治療。在更較佳的實施方式中，疾病選自上述列表，適當地是非小細胞肺癌、大腸直腸癌和胰臟癌，其特徵在於KRAS、HRAS或NRAS中的G12C突變。

在另一個實施方式中係治療（例如，減輕、抑制或延遲進展中的一或多項）受試者的癌症或腫瘤之方法，該方法包括向有需要的受試者投與包含化合物A或其藥學上可接受的鹽與如本文所述之第二治療劑的組合的藥物組成物。

因此，本發明提供了治療（例如，減輕、抑制或延遲進展中的一或多項）有需要的患者的癌症或腫瘤之方法，其中該方法包括向該有需要的患者投與作為單一藥劑或作為與治療活性量的一種或兩種治療活性劑的組合療法的治療活性量的化合物A或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物或水合物，該等治療活性劑選自SHP2抑制劑（例如，TNO155或其藥學上可接受的鹽）、和PD-1抑制劑（例如，斯巴達珠單抗或替雷利珠單抗），其中該癌症係肺癌（包括肺腺癌和非小細胞肺癌）、大腸直腸癌（包括結腸直腸腺癌）、胰臟癌（包括胰臟腺癌）、子宮癌（包括子宮內膜癌）、直腸癌（包括直腸腺癌）和實性瘤，視需要其中該癌症係KRAS-、NRAS-或HRAS-G12C突變型。

在本發明之實施方式中，待治療的癌症或腫瘤選自由以下組成之群組：肺癌（包括肺腺癌、非小細胞肺癌和鱗狀細胞肺癌）、大腸直腸癌（包括結腸直腸腺癌）、胰臟癌（包括胰臟腺癌）、子宮癌（包括子宮內膜癌）、直腸癌（包括直腸腺癌）、闌尾癌、小腸癌、食道癌、肝膽癌（包括肝癌和膽管癌）、膀胱癌、卵巢癌和實性瘤，特別地當該癌症或腫瘤帶有KRAS G12C突變時。原發部位不明但示出KRAS G12C突變的癌症也可以得益於用本發明之方法的治療。

在方法之另外的實施方式中，癌症係大腸直腸癌。

在方法之另外的實施方式中，癌症係胃癌。

在方法之另外的實施方式中，癌症係鼻咽癌。

在方法之另外的實施方式中，癌症係非小細胞肺癌。

在方法之另外的實施方式中，癌症係小細胞肺癌。

在方法之另外的實施方式中，癌症係胰臟癌。

在方法之另外的實施方式中，癌症係實性瘤。

在方法之另外的實施方式中，癌症係闌尾癌。

在方法之另外的實施方式中，癌症係小腸癌。

在方法之另外的實施方式中，癌症係食道癌。

在方法之另外的實施方式中，癌症係肝膽癌。

在方法之另外的實施方式中，癌症係肝細胞癌。

在方法之另外的實施方式中，癌症係膀胱癌。

在方法之另外的實施方式中，癌症係尿路上皮膀胱癌。

在方法之另外的實施方式中，癌症係卵巢癌。

在方法之另外的實施方式中，癌症係何杰金氏淋巴瘤。

本發明之化合物A和方法以及組合可用作一線療法。

本發明之化合物A和方法以及組合還可用作一線療法。

本發明之方法和組合可用作二線療法或更晚線療法。在此方面，例如與其他KRASG12C抑制劑（如索托拉西布或阿達格拉西布）相比，化合物A與突變型KRAS G12C的獨特相互作用將可用於靶向抗性突變，該等抗性突變可能在用其他KRAS G12C抑制劑（如索托拉西布或阿達格拉西布）治療後產生。

單獨的化合物A或與如本文所述之一或多種治療劑的組合，可用於治療如本文所述之癌症或腫瘤，其中患者可能是治療不可知的患者或在先前療法中有進展和/或復發的患者。

先前療法包括：放射療法；手術；標準護理療法，如基於氟嘧啶、奧沙利鉑、和/或伊立替康的化學療法；化學療法，如培美曲塞、或基於鉑的化學療法；免疫檢查點抑制劑療法，如抗PD-1免疫療法（例如，派姆單抗、斯巴達珠單抗、替雷利珠單抗或納武單抗）或抗PD-L1免疫療法（例如阿特利珠單抗或德瓦魯單抗）；用KRAS G12C抑制劑（例如索托拉西布、阿達格拉西布、GDC6036、或D-1553，適當地索托拉西布或阿達格拉西布；更特別地索托拉西布）的療法。

先前療法還包括單獨的派姆單抗或與化學療法的組合。

例如，待藉由本發明之方法和組合治療的患者或受試者包括患有癌症（例如KRAS G12C突變型NSCLC（包括晚期（轉移性或不可切除性）KRAS G12C突變型NSCLC））的患者，視需要其中該患者已經接受了先前療法並且有進展。

在本發明之實施方式中，包括用作為單一療法和在如本文所述之組合中的化合物A治療的方法，待治療的受試者或患者選自： - 患有 KRAS G12C突變型實性瘤（例如晚期（轉移性或不可切除性） KRAS G12C突變型實性瘤）的患者，視需要其中該患者已經接受了標準護理療法但失敗了，或者對先前的研究性療法和/或批准的療法不耐受或不適合或具有難治性； - 患有 KRAS G12C突變型NSCLC（例如，晚期（轉移性或不可切除性） KRAS G12C突變型NSCLC）的患者，視需要其中該患者已經接受了組合或順序進行的基於鉑的化學療法方案和免疫檢查點抑制劑療法但失敗了； - 患有 KRAS G12C突變型CRC（例如，晚期（轉移性或不可切除性） KRAS G12C突變型CRC）的患者，視需要其中該患者已經接受了標準護理療法但失敗了，該標準護理療法包括基於氟嘧啶、奧沙利鉑、和/或伊立替康的化學療法；以及 - 患有 KRAS G12C突變型NSCLC（例如，晚期（轉移性或不可切除性） KRAS G12C突變型NSCLC）的患者，視需要其中該患者先前已經用KRAS G12C抑制劑（例如索托拉西布、阿達格拉西布、GDC6036或D-1553）治療； - 患有 KRAS G12C突變型癌症的患者，視需要其中該患者先前已經用另一種KRAS G12C抑制劑（例如索托拉西布、阿達格拉西布、GDC6036或D-1553）治療； - 患有 KRAS G12C突變型癌症的患者，視需要其中該患者先前已經用另一種KRAS G12C抑制劑（例如索托拉西布、阿達格拉西布、GDC6036或D-1553）治療，並且該患者患有選自由以下組成之群組的 KRAS G12C突變型癌症：肺癌（包括肺腺癌、非小細胞肺癌和鱗狀細胞肺癌）、大腸直腸癌（包括結腸直腸腺癌）、胰臟癌（包括胰臟腺癌）、子宮癌（包括子宮內膜癌）、直腸癌（包括直腸腺癌）、闌尾癌、小腸癌、食道癌、肝膽癌（包括肝癌和膽管癌）、膀胱癌、卵巢癌和實性瘤，視需要其中該患者先前已經用KRAS G12C抑制劑（例如索托拉西布、阿達格拉西布、GDC6036或D-1553）治療； - 患有以下的患者：肺癌（包括肺腺癌、非小細胞肺癌和鱗狀細胞肺癌）、大腸直腸癌（包括結腸直腸腺癌）、胰臟癌（包括胰臟腺癌）、子宮癌（包括子宮內膜癌）、直腸癌（包括直腸腺癌）、闌尾癌、小腸癌、食道癌、肝膽癌（包括肝癌和膽管癌）、膀胱癌、卵巢癌和實性瘤； - 患有選自由以下組成之群組的 KRAS G12C突變型癌症的患者：肺癌（包括肺腺癌、非小細胞肺癌和鱗狀細胞肺癌）、大腸直腸癌（包括結腸直腸腺癌）、胰臟癌（包括胰臟腺癌）、子宮癌（包括子宮內膜癌）、直腸癌（包括直腸腺癌）、闌尾癌、小腸癌、食道癌、肝膽癌（包括肝癌和膽管癌）、膀胱癌、卵巢癌和實性瘤，視需要其中該患者先前已經用KRAS G12C抑制劑（例如索托拉西布、阿達格拉西布、GDC6036或D-1553）治療； - 患有以下的患者：肺癌（包括肺腺癌、非小細胞肺癌和鱗狀細胞肺癌）、大腸直腸癌（包括結腸直腸腺癌）、胰臟癌（包括胰臟腺癌）、子宮癌（包括子宮內膜癌）、直腸癌（包括直腸腺癌）、闌尾癌、小腸癌、食道癌、肝膽癌（包括肝癌和膽管癌）、膀胱癌、卵巢癌和實性瘤； - 患有帶有KRASG12C突變的局部晚期或轉移性NSCLC的未進行治療的患者。

在一個實施方式中，提供了化合物A或其藥學上可接受的鹽，其用於在治療患者的KRAS G12C突變型NSCLC中使用，該患者先前已經用KRAS G12C抑制劑（如索托拉西布或阿達格拉西布）治療。

在一個實施方式中，提供了包含化合物A或其藥學上可接受的鹽、和TNO或其藥學上可接受的鹽的藥物組合，其用於在治療患者的KRAS G12C突變型NSCLC中使用，該患者先前已用KRAS G12C抑制劑（如索托拉西布或阿達格拉西布）治療。

在一個實施方式中，提供了化合物A或其藥學上可接受的鹽，其用於在治療患者的KRAS G12C突變型NSCLC中使用，該患者先前已接受了化學療法和/或免疫療法，隨後接受了KRAS G12C抑制劑（如索托拉西布或阿達格拉西布）。

在一個實施方式中，提供了包含化合物A或其藥學上可接受的鹽、和TNO或其藥學上可接受的鹽的藥物組合，其用於在治療患者的KRAS G12C突變型NSCLC中使用，該患者先前已接受了化學療法和/或免疫療法，隨後接受了KRAS G12C抑制劑（如索托拉西布或阿達格拉西布）。

在另外的實施方式中，以有效治療癌症的量向有需要的受試者投與化合物A或其藥學上可接受的鹽。

在本發明之實施方式中，以有效治療癌症的量向有需要的受試者投與化合物A或其藥學上可接受的鹽、以及第二治療劑和第三治療劑（如果存在）的量。

在另外的實施方式中，第二治療劑或第三治療劑係TNO155或其藥學上可接受的鹽。

在另外的實施方式中，第二治療劑或第三治療劑係免疫調節劑，如PD-1抑制劑。

在另外的實施方式中，PD-1抑制劑選自PDR001、納武單抗、派姆單抗、匹地利珠單抗、MEDI0680、REGN2810、TSR-042、PF-06801591、BGB-A317、BGB-108、INCSHR1210或AMP-224。

在另外的實施方式中，PD-1抑制劑係PDR001（斯巴達珠單抗）。

在另外的實施方式中，PD-1抑制劑係BGB-A317（替雷利珠單抗）。劑量和給藥方案

利用臨床前模型預測化合物A的有效暴露。當根據本發明單獨或以組合療法使用時，化合物A的劑量被設計為具有藥理活性並產生抗腫瘤響應。

SHP2抑制劑和/或PD-1抑制劑的劑量選擇同樣受藥物動力學（PK）、藥效學、安全性、和療效數據的混合的指導。

在本發明之實施方式中，以範圍從50至1600 mg/天，例如從200至1600 mg/天，或從400至1600 mg/天的治療有效劑量投與化合物A或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物或水合物。化合物A的每日總劑量可選自50、100、150、200、250、300、350、400、450、500、600、800、1000、1200和1600 mg。例如，化合物A的每日總劑量可選自200、300、400、600、800、1000、1200和1600 mg。

在本發明之較佳的實施方式中，以範圍從100至400 mg/天，例如從200至400 mg/天的治療有效劑量投與化合物A或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物或水合物。例如，化合物A的每日總劑量可選自100 mg、200 mg、400 mg和600 mg；更較佳的是選自100 mg、200 mg、和400 mg。

化合物A的每日總劑量可以按QD（每日一次）或BID（每日兩次）方案連續投與。

例如，可以以200 mg BID（每日總劑量為400 mg）、400 mg QD（每日總劑量為400 mg）的劑量投與化合物A。可以以100 mg BID（每日總劑量為200 mg）、200 mg QD（每日總劑量為200 mg）的劑量投與化合物A。還可以以每日600 mg的每日總劑量，較佳的是每日兩次（即300 mg BID）投與化合物A。

結合PK患者數據的臨床前目標佔有率模型預測BID計畫可能會導致更多數量的患者的響應增加。適當地，可以以100 mg BID的劑量或200 mg BID的劑量或300 mg BID的劑量投與化合物A。典型地，可以以100 mg的劑量每日兩次投與（每日總劑量為200 mg）或以200 mg的劑量每日兩次投與（每日總劑量為400 mg）投與化合物A。

本發明之組合中的TNO 155的劑量被設計為具有藥理活性，並具有協同抗腫瘤作用的潛力，同時最小化由於兩種藥劑對MAPK途徑傳訊的抑制活性而產生的不可接受的毒性的可能性。可以連續或間歇投與TNO（例如2週投與/1週停用時間表）以維持臨床療效並最小化臨床不良反應。

因此，可以以範圍從10至80 mg、或從10至60 mg的每日總劑量投與TNO155。例如，TNO155的每日總劑量可選自10、15、20、30、40、60和80 mg。TNO155的每日總劑量可以按QD（每日一次）或BID（每日兩次），2週投與/1週停用時間表QD或BID連續投與。TNO155的每日總劑量可以按QD（每日一次）或BID（每日兩次），連續（即無藥物假期）QD或BID連續投與。

在本發明之組合中，以範圍從50至1600 mg/天（例如，50、100、150、200、250、300、350、400、450、500、600、800、1000、1200或1600 mg）或從200至1600 mg/天（例如，200、300、400、600、800、1000、1200或1600 mg）的劑量投與化合物A，並且以範圍從10至80 mg/天（0、15、20、30、40、60或80 mg）的劑量投與TNO155，其中化合物A按連續時間表投與，並且TNO按兩週投與/一週停用時間表或連續時間表投與。

在本發明之組合中，以約300 mg的劑量每3週一次、或約400 mg的劑量每4週一次投與斯巴達珠單抗。更較佳的是，藉由注射（例如，皮下或靜脈內），以約300 mg的劑量每3週一次（Q3W）投與斯巴達珠單抗。

在本發明之組合中，按連續時間表以範圍從50至1600 mg/天（例如，50、100、150、200、250、300、350、400、450、500、600、800、1000、1200或1600 mg）或從200至1600 mg/天（例如，200、300、400、600、800、1000、1200或1600 mg）的劑量投與化合物A，並且以約300 mg的劑量每3週一次、或約400 mg的劑量每4週一次投與斯巴達珠單抗。

在本發明之組合中，按連續時間表以範圍從50至1600 mg/天（例如，50、100、150、200、250、300、350、400、450、500、600、800、1000、1200或1600 mg）或從200至1600 mg/天（例如，200、300、400、600、800、1000、1200或1600 mg）的劑量投與化合物A，按兩週投與/一週停用時間表或連續時間表以從10至80 mg（0、15、20、30、40、60或80 mg）的範圍的劑量投與TNO155，並且以約300 mg的劑量每3週一次、或約400 mg的劑量每4週一次投與斯巴達珠單抗。

在本發明之組合中，以約200 mg的劑量每3週一次、或約300 mg的劑量每4週一次投與替雷利珠單抗。可以藉由注射（例如，皮下或靜脈內）投與替雷利珠單抗。

在本發明之組合中，按連續時間表以範圍從50至1600 mg/天（例如，50、100、150、200、250、300、350、400、450、500、600、800、1000、1200或1600 mg）的劑量投與化合物A，並且以約200 mg的劑量每3週一次、或約300 mg的劑量每4週一次投與替雷利珠單抗。

在本發明之組合中，按連續時間表以範圍從50至1600 mg/天（例如，50、100、150、200、250、300、350、400、450、500、600、800、1000、1200或1600 mg）的劑量投與化合物A，按兩週投與/一週停用時間表或連續時間表以範圍從10至80 mg（0、15、20、30、40、60或80 mg）的劑量投與TNO155，並且以約200 mg的劑量每3週一次、或約300 mg的劑量每4週一次投與替雷利珠單抗。

組合的示例性劑量和給藥如下。

[表]：

化合物A-連續時間表*	TNO155給藥，2週投與/1週停用
50 mg BID	10 mg或20 mg
100 mg QD	10 mg或20 mg
100 mg BID	10 mg或20 mg
200 mg QD	10 mg或20 mg
200 mg BID	10 mg或20 mg
400 mg QD	10 mg或20 mg
300 mg BID	10 mg或20 mg

*：當替雷利珠單抗與化合物A組合使用，或與化合物A和TNO155組合使用時，較佳的是以約200 mg的劑量每3週一次投與替雷利珠單抗。

或如下：

化合物A-連續時間表*	TNO155給藥，連續時間表
50 mg BID	10 mg或20 mg
100 mg QD	10 mg或20 mg
100 mg BID	10 mg或20 mg
200 mg QD	10 mg或20 mg
200 mg BID	10 mg或20 mg
400 mg QD	10 mg或20 mg
300 mg BID	10 mg或20 mg

在本發明之組合中，以約200 mg的劑量每3週一次投與替雷利珠單抗，並且以10 mg至60 mg的每日總劑量，每日一次或每日兩次投與（較佳的是按兩週投與/一週停用時間表）來投與TNO。適當地，可以以100 mg-300 mg BID，較佳的是100-200 mg BID，例如100 mg BID的劑量，或以200 mg BID的劑量或300 mg BID的劑量投與化合物A。藥物組成物

化合物A或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物或水合物可以與一或多種（例如，一種或兩種）其他治療劑同時投與、或在其之前或之後投與。化合物A或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物或水合物可以藉由與其他藥劑相同或不同的投與途徑分開投與，或與其他藥劑在相同的藥物組成物中一起投與。

在另一個方面，本發明提供了藥學上可接受的組成物，該等藥學上可接受的組成物包含治療有效量的選自化合物A、TNO155和PD-1抑制劑的一或多種（例如，一種或兩種）治療劑，其與一或多種藥學上可接受的載體（添加劑）和/或稀釋劑配製在一起。

在另一個方面，本發明提供了一種藥物組成物，該藥物組成物包含本發明化合物或其藥學上可接受的鹽以及藥學上可接受的載體。在另一個方面，本發明提供了藥物組成物，該藥物組成物包含KRAS G12C抑制劑（如化合物A）或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物或水合物，和一或多種（例如，一種或兩種）治療活性劑，該等治療活性劑選自SHP2抑制劑（如TNO155，或其藥學上可接受的鹽）和PD-1抑制劑。在另外的實施方式中，組成物包含至少兩種藥學上可接受的載體，如本文所述的那些。出於本發明之目的，除非另有指定，否則溶劑化物和水合物通常被認為是組成物。較佳的是，藥學上可接受的載體係無菌的。可以將藥物組成物配製成用於特定的投與途徑，如口服投與、腸胃外投與和直腸投與等。另外，本發明之藥物組成物可以固體形式（包括但不限於膠囊、片劑、丸劑、顆粒、粉末或栓劑）、或以液體形式（包括但不限於溶液、懸浮液或乳液）製成。可以對藥物組成物進行常規的製藥操作，如滅菌和/或可以使其含有常規的惰性稀釋劑、潤滑劑或緩衝劑，以及輔助劑（如防腐劑、穩定劑、潤濕劑、乳化劑和緩衝液等）。

典型地，藥物組成物係包含活性成分及以下中的一或多種的片劑或明膠膠囊： a) 稀釋劑，例如，乳糖、右旋糖、蔗糖、甘露醇、山梨醇、纖維素和/或甘胺酸； b) 潤滑劑，例如，二氧化矽、滑石、硬酯酸、其鎂鹽或鈣鹽和/或聚乙二醇； c) 黏合劑，例如，矽酸鎂鋁、澱粉糊、明膠、黃蓍膠、甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉和/或聚乙烯吡咯啶酮； d) 崩散劑，例如，澱粉、瓊脂、海藻酸或其鈉鹽或泡騰混合物；以及 e) 吸附劑、著色劑、風味劑和甜味劑。

在實施方式中，藥物組成物係僅包含活性成分的膠囊。

片劑可以根據本領域已知的方法進行薄膜包衣或腸溶包衣。

用於口服投與的合適的組成物包括有效量的呈片劑、錠劑、水性或油性懸浮液、可分散的粉末或顆粒、乳液、硬或軟膠囊、或糖漿或酏劑、溶液或固體分散體形式的本發明之化合物。將旨在用於口服使用的組成物根據本領域已知的用於製造藥物組成物的任何方法來製備，並且為了提供藥學上精緻的並且適口的製劑，此類組成物可以包含一或多種選自由以下組成之群組的藥劑：甜味劑、調味劑、著色劑以及防腐劑。片劑可含有與適用於製造片劑的非毒性藥學上可接受的賦形劑混合的活性成分。該等賦形劑係，例如，惰性稀釋劑，如碳酸鈣、碳酸鈉、乳糖、磷酸鈣或磷酸鈉；製粒劑及崩散劑，例如，玉米澱粉或海藻酸；黏合劑，例如，澱粉、明膠或阿拉伯膠；以及潤滑劑，例如硬脂酸鎂、硬脂酸或滑石粉。片劑係未包衣的，或者藉由已知技術進行包衣以延遲在胃腸道中的崩散和吸收，從而在較長的時間段內提供持久的作用。例如，可以採用時間延遲材料，如甘油單硬脂酸酯或甘油二硬脂酸酯。用於口服用途的配製物可以呈現為硬明膠膠囊，其中活性成分係與惰性固體稀釋劑（例如，碳酸鈣、磷酸鈣或高嶺土）混合，或呈現為軟明膠膠囊，其中活性成分係與水或油介質（例如，花生油、液體石蠟或橄欖油）混合。

某些可注射組成物係水性等滲溶液或懸浮液，並且栓劑有利地由脂肪乳液或懸浮液製備。所述組成物可為滅菌的和/或含有輔助劑（例如，防腐劑、穩定劑、潤濕劑或乳化劑、溶液促進劑、用於調節滲透壓的鹽和/或緩衝液）。另外，它們還可以含有其他有治療價值的物質。所述組成物分別根據常規的混合、製粒或包衣方法製備，並含有約0.1%-75%，或含有約1%-50%的活性成分。

適用於透皮應用的適合的組成物包括有效量的本發明之化合物和適合的載體。適於透皮遞送的載體包括幫助通過宿主皮膚的可吸收的藥理學上可接受的溶劑。例如，透皮裝置呈繃帶的形式，該繃帶包含襯件、含有化合物並視需要含有載體的貯庫、視需要在延長的一段時間內以受控且預定的速率將化合物遞送至宿主皮膚的控速屏障、以及將該裝置固定至皮膚的器具。

適用於局部投與（例如，投與至皮膚及眼睛）的組成物包括水溶液、懸浮液、軟膏劑、霜劑、凝膠或可噴霧配製物，例如，用於借由氣溶膠或類似物遞送。該等局部遞送系統將具體地適用於真皮投與，例如，用於治療皮膚癌，例如，用於防曬霜、洗劑、噴霧及類似物中的預防用途。因此它尤其適用於局部中之用途，包括本領域中熟知的化妝品、配製物。此類系統可含有增溶劑、穩定劑、張力增強劑、緩衝液和防腐劑。

如本文所用，局部投與也可以涉及吸入或鼻內投與。它們可以在使用或不使用合適的推進劑的情況下自乾燥粉末吸入器以乾燥粉末的形式（單獨的作為混合物，例如與乳糖的乾燥摻混物，或經混合的組分顆粒，例如與磷脂混合的組分顆粒）或自加壓容器、泵、噴霧、霧化器或噴霧器以氣溶膠噴霧形式便利地遞送。

在一個實施方式中，本發明提供了產品，該產品包含化合物A或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物或水合物，和至少一種其他治療劑，該產品作為組合製劑用於在療法中同時、分開或順序使用。在一個實施方式中，療法係治療特徵在於KRAS、HRAS或NRAS G12C突變的疾病或病症。提供的作為組合製劑的產品包括組成物，該組成物在同一藥物組成物中共同包含本發明之化合物和一或多種（例如，一種或兩種）治療活性劑（選自SHP2抑制劑（如TNO155或其藥學上可接受的鹽）和PD-1抑制劑），或以單獨的形式（例如以套組（kit）的形式）包含化合物A或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物或水合物，和一或多種其他治療劑。

在一個實施方式中，本發明提供了藥物組成物，該藥物組成物包含本發明之化合物和另一或多種治療劑。視需要，藥物組成物可以包含如上所述之藥學上可接受的載體。

在一個實施方式中，本發明提供了套組，該套組包括兩種或更多種分開的藥物組成物，其中至少一種含有化合物A或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物或水合物；TNO155或其藥學上可接受的鹽，和PD-1抑制劑（例如，斯巴達珠單抗或替雷利珠單抗）。在一個實施方式中，套組包含用於單獨地保留所述組成物的裝置，如容器、分開的瓶、或分開的箔袋。此類套組之實例係泡罩包裝，如典型地用於包裝片劑、膠囊等。

本發明之套組可以用於投與不同劑型（例如，口服和腸胃外），用於以不同劑量間隔投與單獨的組成物，或用於相對彼此滴定單獨的組成物。為了有助於依從性，本發明之套組典型地包括投與指導。

在本發明之組合療法中，本發明之化合物和其他治療劑可以由相同或不同的製造商生產和/或配製。此外，可以將本發明之化合物和其他治療劑一起形成組合療法：(i) 在將組合產品發佈給醫師之前（例如，在包含本發明之化合物和其他治療劑的套組的情況下）；(ii) 在投與前不久，由醫師自己（或在醫師的指導下）進行；(iii) 在患者自身中，例如在順序投與本發明之化合物和其他治療劑期間。本發明化合物可以與一或多種其他的治療劑同時投與、或在其之前或之後投與。本發明之化合物可以藉由與其他藥劑相同或不同的投與途徑分開投與，或在相同的藥物組成物中一起投與。

通常，本發明之組合的合適日劑量將是每種化合物有效產生治療效果的最低劑量的量。

在另一個方面，本發明提供了藥學上可接受的組成物，該等藥學上可接受的組成物包含治療有效量的一或多種上述主題化合物，其與一或多種藥學上可接受的載體（添加劑）和/或稀釋劑配製在一起。定義

除非另外說明，否則上文和下文中使用的通用術語較佳的是在本揭露之上下文中具有以下含義，其中無論在什麼情況下使用的更通用的術語可以彼此獨立地由更具體的定義代替或保留，從而定義本發明之更詳細實施方式。

術語「KRAS G12C突變型（mutated）癌症」應理解為等同於術語「KRAS G12C突變型（mutant）癌症」。術語「KRAS G12C突變型NSCLC」等應相應地進行解釋。癌症是否為KRAS G12C突變型可以藉由本領域已知的測試來確定，例如藉由FDA批准的測試。

當劑量被提及為「約」特定值，或被提及為特定值（即該特定值前無術語「約」）時，其旨在包括在指定值 ± 10%或 ± 5%附近的範圍。按照本領域的慣例，劑量係指游離形式的治療劑之量。例如，當提及20 mg的TNO155的劑量，並且TNO155以其琥珀酸鹽使用時，所用治療劑的量相當於20 mg游離形式的TNO155。

如本文所用，術語「受試者」或「患者」旨在包括易於患有癌症或任何障礙（直接或間接涉及癌症）或受其折磨的動物。受試者之實例包括哺乳動物，例如人、猿、猴、狗、乳牛、馬、豬、綿羊、山羊、貓、小鼠、兔、大鼠和轉基因非人動物。在實施方式中，受試者係人，例如患有癌症、具有患癌症的風險或可能易於患有癌症的人。

如本文所用，術語「治療（treating或treatment）」包括解除、減輕或緩解受試者的至少一種症狀或者實現疾病進展延遲的治療。例如，治療可為減少一種或幾種障礙的症狀，或者部分或完全根除障礙（如癌症）。在本揭露之含義範圍內，術語「治療」還表示阻止、延遲發作（即在疾病的臨床表現之前的時間段）和/或降低疾病發展或疾病惡化的風險。

除非另外指明，否則術語「包含」和「包括」在本文中以其開放式和非限制性的含義使用。

除非本文另外指明或明顯與上下文矛盾，否則在描述本發明之上下文中（尤其是在以下請求項之上下文中），術語「一個/一種（a）」和「一個/一種（an）」和「所述（the）」以及類似的指示詞應當被解釋為涵蓋單數和複數這兩者。當將複數形式用於化合物、鹽等時，這也意指單一化合物、鹽等。

術語「組合療法」或「與……組合」係指投與兩種或更多種治療劑以治療在本揭露中描述的病症或障礙（例如癌症）。這種投與涵蓋以基本上同時的方式共同投與該等治療劑，如以具有固定比率的活性成分的單個膠囊投與。可替代地，這種投與涵蓋在多個容器中或在每種活性成分的獨立容器（例如，膠囊、粉末和液體）中共同投與。可以在投與之前將粉末和/或液體重構或稀釋至所需劑量。另外，這種投與也涵蓋在大致相同的時間或在不同的時間以依序方式使用每種類型的治療劑。在任何一種情況下，治療方案將在治療本文所述之病症或障礙方面提供藥物組合的有益效果。

組合療法可以提供「協同」並且證明係「協同的」，即，當活性成分一起使用時所實現的效應大於由分別使用該等化合物所產生的效應的總和。當將活性成分為下述情形時可以獲得協同效應：(1) 共同配製並以組合的單位劑量配製物的形式同時投與或遞送；(2) 以分開的配製物的形式交替或平行遞送；或 (3) 藉由一些其他方案進行。當以交替療法遞送時，可以在依序（例如藉由在單獨注射器中不同的注射）投與或遞送化合物時獲得協同效應。通常，在交替療法期間，將有效劑量的每種活性成分依序地即順次地投與，而在組合療法中，將有效劑量的兩種或更多種活性成分一起投與。如本文所用，協同效應係指兩種治療劑（如，例如作為SHP2抑制劑的化合物TNO155和化合物A）的作用，該作用產生例如減緩增殖性疾病（特別是癌症）或其症狀的症狀進展的效果，這比單獨投與每種藥物的效果的簡單加和要大。可以例如使用合適的方法計算協同效應，該等合適的方法如Sigmoid-Emax方程（Holford, N. H. G. 和Scheiner, L. B., Clin. Pharmacokinet. [臨床藥物動力學] 6: 429-453 (1981)）、Loewe可加性方程（Loewe, S. 和Muischnek, H., Arch. Exp. Pathol Pharmacol. [實驗病理學與藥理學文件案]114: 313-326 (1926)）以及中效方程（Chou, T. C. 和Talalay, P., Adv. Enzyme Regul. [酶調控研究進展] 22: 27-55 (1984)）。上面所指的每個方程式都可以應用於實驗數據以生成相應的圖以説明評估藥物組合的效果。與上文提到的方程相關的相應的圖分別是濃度-效果曲線、等效線圖曲線和組合指數曲線。

如本文所用，術語「藥物組合」係指在一個劑量單位形式中的固定組合、或用於組合投與的非固定組合或套裝盒，其中兩種或更多種治療劑可以在同一時間獨立地投與或在時間間隔內分別投與，特別地其中該等時間間隔允許組合配偶體顯示合作性例如協同效應。

如本文所用，短語「治療有效量」係指包含本發明化合物的化合物、材料或組成物的量，其對於在動物中的至少一個細胞亞群中以適用於任何醫學治療的合理的受益/風險比產生一些所期望的治療效果係有效的。

本文使用的短語「藥學上可接受的」係指在合理的醫學判斷的範圍，適合用於與人和動物的組織接觸而不產生過度毒性、刺激、過敏反應、或其他問題或併發症，同時具有相稱的合理受益/風險比的那些化合物、材料、組成物、和/或劑型。

如上文所述，本發明化合物之某些實施方式可含有鹼性官能基，例如胺基或烷基胺基，並且由此能夠與藥學上可接受的酸形成藥學上可接受的鹽。在這方面，術語「藥學上可接受的鹽」係指本發明之化合物的相對無毒的無機和有機酸加成鹽。該等鹽可以在投與媒介物或劑型製造過程中原位製備，或者藉由使純化的游離鹼形式的本發明化合物與合適的有機或無機酸分別反應，並在隨後的純化期間分離由此形成的鹽來製備。代表性鹽包括氫溴酸鹽、鹽酸鹽、硫酸鹽、硫酸氫鹽、磷酸鹽、硝酸鹽、乙酸鹽、戊酸鹽、油酸鹽、棕櫚酸鹽、硬脂酸鹽、月桂酸鹽、苯甲酸鹽、乳酸鹽、磷酸鹽、甲苯磺酸鹽、檸檬酸鹽、馬來酸鹽、富馬酸鹽、琥珀酸鹽、酒石酸鹽、萘酸鹽（napthylate）、甲磺酸鹽、葡庚糖酸鹽、乳糖醛酸鹽和月桂基磺酸鹽等。（參見例如Berge等人 (1977) 「Pharmaceutical Salts [藥用鹽]」, J. Pharm. Sci.[藥物科學雜誌] 66: 1-19）。

主題化合物的藥學上可接受的鹽包括化合物的常規的無毒鹽或四級銨鹽，例如來自無毒的有機酸或無機酸。例如，此類常規無毒鹽包括衍生自無機酸的那些，該無機酸如鹽酸、氫溴酸、硫酸、胺磺酸、磷酸、硝酸等；以及從有機酸製備的鹽，該有機酸如乙酸、丙酸、琥珀酸、乙醇酸、硬脂酸、乳酸、蘋果酸、酒石酸、檸檬酸、抗壞血酸、棕櫚酸、馬來酸、羥基馬來酸、苯乙酸、麩胺酸、苯甲酸、水楊酸、磺胺酸、2-乙醯氧基苯甲酸、富馬酸、甲苯磺酸、甲磺酸、乙二磺酸、草酸、異硫磺酸等。例如，TNO155的藥學上可接受的鹽係琥珀酸鹽。

在本發明之組合中，化合物A、TNO155和PD-1抑制劑還旨在表示未經標記的形式以及化合物的同位素標記形式。同位素標記的化合物的一或多個原子被具有選定原子質量或質量數的原子取代。可摻入TNO155和PD-1抑制劑的同位素之實例包括氫、碳、氮、氧和氯的同位素（在可能的情況下），例如 ²H、 ³H、 ¹¹C、 ¹³C、 ¹⁴C、 ¹⁵N、 ³⁵S、 ³⁶Cl。本發明包括同位素標記的TNO155和PD-1抑制劑，例如其中存在放射性同位素（如 ³H和 ¹⁴C）或非放射性同位素（如 ²H和 ¹³C）。同位素標記的TNO155和PD-1抑制劑可用於代謝研究（用 ¹⁴C）、反應動力學研究（例如用 ²H或 ³H）、檢測或成像技術，如正電子發射斷層掃描（PET）或單光子發射電腦斷層掃描（SPECT），包括藥物或底物組織分佈測定，或用於患者的放射治療。本發明之同位素標記的化合物通常可藉由熟悉該項技術者已知的常規技術或與在使用適當的同位素標記的試劑的所附實例中所述的那些類似的方法來製備。

此外，用較重的同位素，特別是氘（即， ²H或D）取代可以提供來源於更大的代謝穩定性（例如，體內半衰期延長或劑量需求減少或治療指數改進）的某些治療優點。應當理解，在此上下文中，氘可以被認為是化合物A、TNO155或PD-1抑制劑的取代基。這種較重的同位素（特別是氘）的濃度可以由同位素富集因子來定義。如本文所用，術語「同位素富集因子」意指指定同位素的同位素豐度與天然豐度之間的比率。如果TNO155或PD-1抑制劑中的取代基指示氘，這種化合物具有針對每個指定的氘原子的同位素富集因子為至少3500（在每個指定的氘原子上52.5%氘摻入）、至少4000（60%氘摻入）、至少4500（67.5%氘摻入）、至少5000（75%氘摻入）、至少5500（82.5%氘摻入）、至少6000（90%氘摻入）、至少6333.3（95%氘摻入）、至少6466.7（97%氘摻入）、至少6600（99%氘摻入）、或至少6633.3（99.5%氘摻入）。

在化合物A中，例如吲唑基環上的甲基基團，可為氘化或全氘化的。實例實例1：1-{6-[(4 M)-4-(5-氯-6-甲基-1 H-吲唑-4-基)-5-甲基-3-(1-甲基-1 H-吲唑-5-基)-1 H-吡唑-1-基]-2-氮雜螺[3.3]庚-2-基}丙-2-烯-1-酮（化合物A）的製備

1-{6-[(4 M)-4-(5-氯-6-甲基-1 H-吲唑-4-基)-5-甲基-3-(1-甲基-1 H-吲唑-5-基)-1 H-吡唑-1-基]-2-氮雜螺[3.3]庚-2-基}丙-2-烯-1-酮（化合物A）的合成如下所述。

化合物A還被稱作「a( R)-1-(6-(4-(5-氯-6-甲基-1H-吲唑-4-基)-5-甲基-3-(1-甲基-1H-吲唑-5-基)-1H-吡唑-1-基)-2-氮雜螺[3.3]庚-2-基)丙-2-烯-1-酮」。一般方法和條件：

溫度以攝氏度給出。如果沒有另外提及，則所有蒸發都在減壓下進行，典型地在約15 mm Hg與100 mm Hg（= 20-133毫巴）之間進行。

使用的縮寫係本領域常規的那些縮寫。

使用電灑方法、化學方法和電子衝擊電離方法在LC-MS、SFC-MS或GC-MS系統上使用一系列以下配置的儀器獲取質譜：使用ESI方法在LCMS系統上使用一系列以下配置的儀器獲取具有沃特世（Waters）SQ檢測器的沃特世Acquity UPLC或質譜：具有PDA檢測器的沃特世Acquity LCMS。[M+H] ⁺係指化學物種的質子化分子離子。

NMR光譜使用Bruker Ultrashield™400（400 MHz）、Bruker Ultrashield™600（600 MHz）和Ascend™400（400 MHz）光譜儀運行，均以或不以四甲基矽烷作為內標。將化學位移（δ值）以四甲基矽烷的低場ppm報告，光譜分裂模式被指定為單信號（s）、雙信號（d）、三重信號（t）、四重信號（q）、多重信號、未解析的或更多重疊信號（m）、寬信號（br）。溶劑在括弧中給出。僅報告觀察到且與溶劑峰不重疊的質子信號。

Celite：Celite ^R（Celite公司）= 基於矽藻土的助濾劑

相分離器：Biotage - 溶質相分離器 -（部件號：120-1908-F，70 mL，以及部件號：120-1909-J，150 mL）

SiliaMetS®Thiol：SiliCYCLE硫醇金屬淨化劑-（R51030B，粒徑：40-63 µm）。

使用在反射幾何中的Bruker Advance D8獲得本文所述之X-射線粉末繞射（XRPD）圖。使用零背景Si平板樣本架分析粉末樣本。輻射為Cu Kα（λ = 1.5418 Å）。在2°與40°2θ之間測量圖譜。

樣本量：5-10 mg

樣本架：零背景Si平板樣本架

XRPD參數：

儀器	Bruker D8 Advance
檢測器	LYNXEYE（1D模式），開角：2.948°，掃描模式：連續掃描
輻射	CuKα（0.15418 nm）
單色儀	鎳濾光片
X射線發生器功率	40 kV、40 mA
測角儀半徑	280 mm
步長	0.0164°（2θ值）
時間/步	0.3秒/步
掃描範圍	2°至40°（2θ值）
掃描時間	約768秒
狹縫	初級：固定的照明的樣本大小10 mm；二級：開角2.2°，軸向索拉（soller）：2.5°

儀器法

微波：除非另有說明，否則所有微波反應均在Biotage引發器中進行，以0-400 W從磁控管在2.45 GHz在Robot Eight/Robot Sixty的處理能力情況下進行輻照。

UPLC-MS和MS分析方法：使用帶沃特世SQ檢測器的沃特世Acquity UPLC。

UPLC-MS-1：Acquity HSS T3；粒徑：1.8 µm；柱尺寸：2.1 x 50 mm；洗脫液A：H ₂O + 0.05% HCOOH + 3.75 mM乙酸銨；洗脫液B：CH ₃CN + 0.04% HCOOH；梯度：在1.40 min內5%至98% B，然後98% B持續0.40 min；流速：1 mL/min；柱溫：60°C。

UPLC-MS-3：Acquity BEH C18；粒徑：1.7 µm；柱尺寸：2.1 x 50 mm；洗脫液A：H ₂O + 4.76%異丙醇+ 0.05% HCOOH + 3.75 mM乙酸銨；洗脫液B：異丙醇+ 0.05% HCOOH；梯度：在1.7 min內1%至98% B，然後98% B持續0.1 min；流速：0.6 mL/min；柱溫：80°C。

UPLC-MS-4：Acquity BEH C18；粒徑：1.7 µm；柱尺寸：2.1 x 100 mm；洗脫液A：H ₂O + 4.76%異丙醇+ 0.05% HCOOH + 3.75 mM乙酸銨；洗脫液B：異丙醇+ 0.05% HCOOH；梯度：在8.4 min內1%至60% B，然後在1 min內60%至98% B；流速：0.4 mL/min；柱溫：80°C。

UPLC-MS-6：Acquity BEH C18；粒徑：1.7 µm；柱尺寸：2.1 x 50 mm；洗脫液A：H ₂O + 0.05% HCOOH + 3.75 mM乙酸銨；洗脫液B：異丙醇+ 0.05% HCOOH；梯度：在1.7 min內5%至98% B，然後98% B持續0.1 min；流速：0.6 mL/min；柱溫：80°C。製備型方法：手性SFC方法：

C-SFC-1: 柱：直鏈澱粉-C NEO 5 µm；250 x 30 mm；流動相；流速：80 mL/min；柱溫：40°C；背壓：120巴。

C-SFC-3: 柱：Chiralpak AD-H 5 µm；100 x 4.6 mm；流動相；流速：3 mL/min；柱溫：40°C；背壓：1800 psi。

縮寫：

縮寫	說明
AcCN、ACN	乙腈
Ac ₂O	乙酸酐
AcOH	乙酸
AIBN	2,2′-偶氮雙(2-甲基丙腈)
aq.	水性
Ar	氬氣
B ₂Pin ₂	4,4,4′,4′,5,5,5′,5′-八甲基-2,2′-二(1,3,2-二氧雜環戊硼烷)
BPR	背壓
鹽水	飽和氯化鈉水溶液
n-BuLi	正丁基鋰
conc.	濃縮的
DAST	N,N-二乙基-1,1,1-三氟-λ ⁴-硫烷胺
DCE	二氯乙烷
DCM	二氯甲烷
DEA	二乙胺
DHP	3,4-二氫哌喃
DIPEA	N, N-二異丙基乙胺， N-乙基- N-異丙基丙烷-2-胺
DMA	N, N-二甲基乙醯胺
DMAP	N, N-二甲基吡啶-4-胺
DMF	N, N-二甲基甲醯胺
DMSO	二甲亞碸
DMSO-d ₆	六氘代二甲亞碸
dppf	1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵
ee	鏡像異構物過量
ESI	電灑離子化
ESI-MS	電灑離子化質譜法
EtOAc	乙酸乙酯
GBq	千兆貝克勒爾（gigabecquerel）
h	小時
HPLC	高效液相層析法
IPA	2-丙醇
KOAc	乙酸鉀
L/mL/μL	升/毫升/微升
LC-MS或LCMS	液相層析法和質譜法
M	莫耳
MeOH	甲醇
min	分鐘
MTBE	甲基三級丁基醚
MS	質譜
MW、mw	微波
m/z	質荷比
N	正態性
N ₂	氮氣
NaOtBu	三級丁醇鈉
NBS	N-溴代琥珀醯亞胺
NCS	N-氯代琥珀醯亞胺
NIS	N-碘代琥珀醯亞胺
NEt ₃、Et ₃N、TEA	三乙胺
PDA	光電二極體陣列檢測器
NMR	核磁共振
Pd(PPh ₃) ₄	四(三苯基膦)鈀(0)
iPrMgCl	異丙基氯化鎂
PTSA	對甲苯磺酸
RM	反應混合物
RP	逆相
Rt	滯留時間
RT	室溫
RuPhos	2-二環己基膦基-2′,6′-二異丙氧基二苯基
RuPhos-Pd-G3	(2-二環己基膦基-2′,6′-二異丙氧基-1,1′-二苯基)[2-(2′-胺基-1,1′-二苯基)]甲磺酸鈀(II)
Sat.	飽和的
SFC	超臨界液相層析法
SQ	單四極桿
TBAF	四丁基氟化銨
tBME、TBME、TBMe	三級丁基甲基醚
TBq	太貝克勒爾（terabecquerel）
t-BuOH	三級丁醇
tBuXPhos-Pd-G3	tBuXPhos-Pd-G3，[(2-二-三級丁基膦基-2′,4′,6′-三異丙基-1,1′-二苯基)-2-(2′-胺基-1,1′-二苯基)]甲磺酸鈀(II)
TFA	三氟乙酸
THF	四氫呋喃
TLC	薄層層析法
T ₃P	丙基膦酸酐
TsCl	甲苯磺醯氯，4-甲基苯-1-磺醯氯
UPLC	超高效液相層析法
XPhos	2-二環己基膦基-2′,4′,6′-三異丙基二苯基
XPhos-Pd-G3	(2-二環己基膦基-2′,4′,6′-三異丙基-1,1′-二苯基)[2-(2′-胺基-1,1′-二苯基)]甲磺酸鈀(II)

用於製備本發明化合物的所有起始材料、結構單元、試劑、酸、鹼、脫水劑、溶劑和催化劑係可商購獲得的或可藉由熟悉該項技術者已知的有機合成方法生產。此外，本發明之化合物可以藉由熟悉該項技術者已知的有機合成方法生產，如以下實例所示。

所有終產物、中間體和起始材料的結構藉由標準分析光譜特徵（例如，MS、IR、NMR）來確認。較佳的（最具活性的）阻轉異構物的代表性實例之絕對立體化學已經藉由複合物的X射線晶體結構的分析確定，在該等複合物中，各個化合物與KRAS G12C突變型結合。在X射線結構不可得到的所有其他情況下，都以類似方式指定了立體化學，假設對於每一對，在共價競爭測定中表現出最高活性的阻轉異構物具有與X射線晶體學觀察到上述代表性實例的相同組態。絕對立體化學係根據卡恩-英格爾-普雷洛格（Cahn-lngold-Prelog）規則來指定的。中間體C1的合成：三級丁基6-(3-溴-4-(5-氯-6-甲基-1-(四氫-2 H-哌喃-2-基)-1 H-吲唑-4-基)-5-甲基-1 H-吡唑-1-基)-2-氮雜螺[3.3]庚烷-2-甲酸酯

步驟C.1：三級丁基 6-(甲苯磺醯基氧基)-2-氮雜螺[3.3]庚烷-2-甲酸酯（中間體C2）

在20°C-25°C下，向三級丁基 6-羥基-2-氮雜螺[3.3]庚烷-2-甲酸酯[1147557-97-8]（2.92 kg，12.94 mmol）在DCM（16.5 L）中之溶液中添加DMAP（316.12 g，2.59 mol）和TsCl（2.96 kg，15.52 mol）。在10°C-20°C下，向反應混合物中逐滴添加Et ₃N（2.62 kg，25.88 mol）。將反應混合物在5°C-15°C下攪拌0.5 h，並且然後在18°C - 28°C下攪拌1.5 h。反應完成後，將反應混合物在真空下濃縮。向殘餘物中添加NaCl（在水中5%，23 L）隨後用EtOAc（23 L）萃取。將合併的水層用EtOAc（10 L x 2）萃取。將合併的有機層用NaHCO ₃（在水中3%，10 L x 2）洗滌並在真空下濃縮以給出標題化合物。 ¹H NMR (400 MHz, DMSO- d ₆) δ 7.81 - 7.70 (m, 2H), 7.53 - 7.36 (m, 2H), 4.79 - 4.62 (m, 1H), 3.84 - 3.68 (m, 4H), 2.46 - 2.38 (m, 5H), 2.26 - 2.16 (m, 2H), 1.33 (s, 9H)。UPLC-MS-1：Rt = 1.18 min；MS m/z [M+H] ⁺；368.2。步驟C.2：3,5-二溴-1 H-吡唑

在-78°C下，經20分鐘向3,4,5-三溴-1 H-吡唑[17635-44-8]（55.0 g，182.2 mmol）在無水THF（550 mL）中之溶液中逐滴添加n-BuLi（145.8 mL，364.5 mmol），保持內部溫度在-78°C/-60°C。將RM在該溫度下攪拌45 min。然後將反應混合物用MeOH（109 mL）在-78°C下小心淬滅並在該溫度下攪拌30 min。允許混合物達到0°C並攪拌1 h。然後，將混合物用EtOAc（750 mL）稀釋並添加HCl（0.5 N，300 mL）。在真空下濃縮各層。將粗殘餘物溶解於DCM（100 mL）中，冷卻至-50°C並添加石油醚（400 mL）。過濾沈澱的固體並用正己烷（250 mL x2）洗滌並在真空下乾燥以給出標題化合物。 ¹H NMR (400 MHz, DMSO- d ₆) δ 13.5 (br s, 1H), 6.58 (s, 1H)。步驟C.3：三級丁基 6-(3,5-二溴-1 H-吡唑-1-基)-2-氮雜螺[3.3]庚烷-2-甲酸酯

在15°C下，向三級丁基 6-(甲苯磺醯基氧基)-2-氮雜螺[3.3]庚烷-2-甲酸酯（中間體C2）（步驟C.1，900 g，2.40 mol）在DMF（10.8 L）中之溶液中添加Cs ₂CO ₃（1988 g，6.10 mol）和3,5-二溴-1 H-吡唑（步驟C.2，606 g，2.68 mol）。將反應混合物在90°C下攪拌16 h。將反應混合物倒入冰-水/鹽水（80 L）中並用EtOAc（20 L）萃取。將水層用EtOAc（10 L x 2）再萃取。將合併的有機層用鹽水（10 L）洗滌，乾燥（Na ₂SO ₄），過濾，並在真空下濃縮。將殘餘物與二㗁𠮿（1.8 L）一起研磨，並在60°C下溶解。向淺黃色溶液中緩慢添加水（2.2 L），並在添加900 mL水後開始重結晶。將所得懸浮液冷卻至0°C，過濾，並用冷水洗滌。將濾餅與正庚烷一起研磨，過濾，然後在真空下在40°C下乾燥以給出標題化合物。 ¹H NMR (400 MHz, DMSO- d ₆) δ 6.66 (s, 1H), 4.86 - 4.82 (m, 1H), 3.96 - 3.85 (m, 4H), 2.69 - 2.62 (m, 4H), 1.37 (s, 9H)；UPLC-MS-3：Rt = 1.19 min；MS m/z [M+H] ⁺；420.0/422.0/424.0。步驟C.4：三級丁基6-(3-溴-5-甲基-1 H-吡唑-1-基)-2-氮雜螺[3.3]庚烷-2-甲酸酯（中間體C3）

在惰性氣氛下，在-80°C下，向三級丁基 6-(3,5-二溴-1 H-吡唑-1-基)-2-氮雜螺[3.3]庚烷-2-甲酸酯（步驟C.3，960 g，2.3 mol）在THF（9.6 L）中之溶液中逐滴添加 n-BuLi（1.2 L，2.5 mol）。將反應混合物在-80°C下攪拌10 min。然後在-80°C下，向反應混合物中逐滴添加碘甲烷（1633 g，11.5 mol）。在-80°C下攪拌5 min後，允許反應混合物溫熱至18°C。將反應混合物倒入飽和NH ₄Cl水溶液（4 L）中並用DCM（10 L）萃取。將分離的水層用DCM（5 L）再萃取，並將合併的有機層在真空下濃縮。將粗產物在60°C下溶解於1,4-二㗁𠮿（4.8 L）中，然後逐滴緩慢添加水（8.00 L）。將所得懸浮液冷卻至17°C並攪拌30 min。將固體過濾，用水洗滌，並在真空下乾燥以給出標題化合物。 ¹H NMR (400 MHz, DMSO- d ₆) δ 6.14 (s, 1H), 4.74 - 4.66 (m, 1H), 3.95 - 3.84 (m, 4H), 2.61 - 2.58 (m, 4H), 2.20 (s, 3H), 1.37 (s, 9H)；UPLC-MS-1：Rt = 1.18 min；MS m/z [M+H] ⁺；356.1/358.1。步驟C.5：三級丁基 6-(3-溴-4-碘-5-甲基-1 H-吡唑-1-基)-2-氮雜螺[3.3]庚烷-2-甲酸酯（中間體C4）

在15°C下，向三級丁基6-(3-溴-5-甲基-1 H-吡唑-1-基)-2-氮雜螺[3.3]庚烷-2-甲酸酯（中間體C3）（步驟C.4，350 g，0.980 mol）在乙腈（3.5 L）中之溶液中添加NIS（332 g，1.47 mol）。將反應混合物在40°C下攪拌6 h。反應完成後，將反應混合物用EtOAc（3 L）稀釋並用水（5 L x 2）洗滌。將有機層用Na ₂SO ₃（在水中10%，2 L）、用鹽水（2 L）洗滌，乾燥（Na ₂SO ₄），過濾，並在真空下濃縮以給出標題化合物。 ¹H NMR (400 MHz, DMSO- d ₆) δ 4.81 - 4.77 (m, 1H), 3.94 - 3.83 (m, 4H), 2.61 - 5.59 (m, 4H), 2.26 (s, 3H), 1.37 (s, 9H)；UPLC-MS-1：Rt = 1.31 min；MS m/z [M+H] ⁺；482.0/484.0。步驟C.6：三級丁基6-(3-溴-4-(5-氯-6-甲基-1-(四氫-2 H-哌喃-2-基)-1 H-吲唑-4-基)-5-甲基-1 H-吡唑-1-基)-2-氮雜螺[3.3]庚烷-2-甲酸酯（中間體C1）

向三級丁基6-(3-溴-4-碘-5-甲基-1 H-吡唑-1-基)-2-氮雜螺[3.3]庚烷-2-甲酸酯（中間體C4）（步驟C.5，136 g，282 mmol）和5-氯-6-甲基-1-(四氫-2 H-哌喃-2-基)-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜環戊硼烷-2-基)-1 H-吲唑（中間體D1，116 g，310 mmol）在1,4-二㗁𠮿（680 mL）中之攪拌懸浮液中添加水性K ₃PO ₄（2 M，467 mL，934 mmol）隨後添加RuPhos（13.1 g，28.2 mmol）和RuPhos-Pd-G3（14.1 g，16.9 mmol）。在惰性氣氛下，將反應混合物在80°C下攪拌1 h。反應完成後，將反應混合物倒入1 M NaHCO ₃水溶液（1 L）中並用EtOAc（1 L x 3）萃取。將合併的有機層用鹽水（1 L x 3）洗滌，乾燥（Na ₂SO ₄），過濾，並在真空下濃縮。將粗殘餘物藉由正相層析法（洗脫液：石油醚/EtOAc從1/0至0/1）純化以給出黃色油狀物。將該油狀物溶解於石油醚（1 L）和MTBE（500 mL）中，然後在真空中濃縮，以給出標題化合物。 ¹H NMR (400 MHz, DMSO- d ₆) δ 7.81 (s, 1H), 7.66 (s, 1H), 5.94 - 5.81 (m, 1H), 4.90 - 4.78 (m, 1H), 3.99 (br s, 2H), 3.93 - 3.84 (m, 3H), 3.81 - 3.70 (m, 1H), 2.81 - 2.64 (m, 4H), 2.52 (s, 3H), 2.46 - 2.31 (m, 1H), 2.11 - 1.92 (m, 5H), 1.82 - 1.67 (m, 1H), 1.64 - 1.52 (m, 2H), 1.38 (s, 9H)；UPLC-MS-3：Rt = 1.30 min；MS m/z [M+H] ⁺；604.1/606.1。合成中間體D1：5-氯-6-甲基-1-(四氫-2 H-哌喃-2-基)-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜環戊硼烷-2-基)-1 H-吲唑

步驟D.1：1-氯-2,5-二甲基-4-硝基苯

向2-氯-1,4-二甲基苯（3.40 kg，24.2 mol）在AcOH（20.0 L）中之冰冷的溶液中添加H ₂SO ₄（4.74 kg，48.4.mol，2.58 L）隨後逐滴添加（滴液漏斗）HNO ₃（3.41 kg，36.3 mol，2.44 L，67.0%純度）在H ₂SO ₄（19.0 kg，193. mol，10.3 L）中之冷溶液。然後允許反應混合物在0°C - 5°C下攪拌0.5 h。將反應混合物緩慢倒入碎冰（35.0 L）中並沈澱出黃色固體。將懸浮液過濾並將濾餅用水（5.00 L x 5）洗滌以給出黃色固體，將該黃色固體懸浮於MTBE（2.00 L）中持續1 h，過濾，並乾燥以給出呈黃色固體的標題化合物。 ¹H NMR (400 MHz, CDCl ₃) δ 7.90 (s, 1H), 7.34 (s, 1H), 2.57 (s, 3H), 2.42 (s, 3H)。步驟D.2：3-溴-2-氯-1,4-二甲基-5-硝基苯

向1-氯-2,5-二甲基-4-硝基苯（步驟D.1，2.00 kg，10.8 mol）在TFA（10.5 L）中之冷卻溶液中緩慢添加濃H ₂SO ₄（4.23 kg，43.1 mol，2.30 L）並將反應混合物在20°C下攪拌。少量分批添加NBS（1.92 kg，10.8 mol）並將反應混合物在55°C下加熱2 h。將反應混合物冷卻至25°C，然後倒入碎冰溶液以獲得淺白色沈澱，將該白色沈澱經真空過濾，用冷水洗滌並在真空下乾燥以給出呈黃色固體的標題化合物，將該標題化合物不經進一步純化用於下一步驟。 ¹H NMR (400 MHz, CDCl ₃) δ 7.65 (s, 1H), 2.60 (s, 3H), 2.49 (s, 3H)。步驟D.3：3-溴-4-氯-2,5-二甲基苯胺

向3-溴-2-氯-1,4-二甲基-5-硝基苯（步驟D.2，2.75 kg，10.4 mol）在THF（27.5 L）中冰冷的溶液中添加HCl（4 M，15.6 L）然後少量分批添加Zn（2.72 kg，41.6 mol）。允許反應混合物在25°C下攪拌2 h。藉由添加飽和NaHCO ₃水溶液將反應混合物鹼化（直至pH = 8）。將混合物用EtOAc（2.50 L）稀釋並劇烈攪拌10 min並且然後通過矽藻土墊過濾。分離有機層並將水層用EtOAc（3.00 L x 4）再萃取。將合併的有機層用鹽水（10.0 L）洗滌，乾燥（Na ₂SO ₄），過濾並在真空下濃縮以給出呈黃色固體的標題化合物，將該標題化合物不經進一步純化用於下一步驟。 ¹H NMR (400 MHz, DMSO- d ₆) δ 6.59 (s, 1H), 5.23 (s, 2H), 2.22 (s, 3H), 2.18 (s, 3H)。步驟D.4：3-溴-4-氯-2,5-二甲基苯重氮四氟硼酸鹽

將BF ₃.Et ₂O（2.00 kg，14.1 mol，1.74 L）溶解於DCM（20.0 L）中並在氮氣氛下冷卻至-5°C至-10°C。將3-溴-4-氯-2,5-二甲基苯胺（步驟D.3，2.20 kg，9.38 mol）在DCM（5.00 L）中之溶液添加至上述反應混合物中並攪拌0.5 h。逐滴添加亞硝酸三級丁酯（1.16 kg，11.3 mol，1.34 L）並將反應混合物在相同溫度下攪拌1.5 h。TLC（石油醚 : EtOAc = 5 : 1）顯示起始材料（R _f= 0.45）被完全消耗。將MTBE（3.00 L）添加至反應混合物中以給出黃色沈澱，將該黃色沈澱通過真空過濾並用冷MTBE（1.50 L x 2）洗滌以給出呈黃色固體的標題化合物，將該標題化合物不經進一步純化用於下一步驟。步驟D.5：4-溴-5-氯-6-甲基-1 H-吲唑

向在氯仿（20.0 L）中的18-冠-6 醚（744 g，2.82 mol）中添加KOAc（1.29 kg，13.2 mol）並將反應混合物冷卻至20°C。然後緩慢添加3-溴-4-氯-2,5-二甲基苯重氮四氟硼酸鹽（步驟D.4，3.13 kg，9.39 mol）。然後允許反應混合物在25°C下攪拌5 h。反應完成後，將反應混合物倒入冰冷的水（10.0 L）中，並將水層用DCM（5.00 L x 3）萃取。將合併的有機層用飽和NaHCO ₃水溶液（5.00 L）、鹽水（5.00 L）洗滌，乾燥（Na ₂SO ₄），過濾並在真空下濃縮以給出呈黃色固體的標題化合物。 ¹H NMR (600 MHz, CDCl ₃) δ 10.42 (br s, 1H), 8.04 (s, 1H), 7.35 (s, 1H), 2.58 (s, 3H)。UPLC-MS-1：Rt = 1.02 min；MS m/z [M+H] ⁺；243/245/247。步驟D.6：4-溴-5-氯-6-甲基-1-(四氫-2 H-哌喃-2-基)-1 H-吲唑

25°C下，向PTSA（89.8 g，521 mmol）和4-溴-5-氯-6-甲基-1 H-吲唑（步驟D.5，1.28 kg，5.21 mol）在DCM（12.0 L）中之溶液中逐滴添加DHP（658 g，7.82 mol，715 mL）。將混合物在25°C下攪拌1 h。反應完成後，將反應混合物用水（5.00 L）稀釋並分離有機層。將水層用DCM（2.00 L）再萃取。將合併的有機層用飽和NaHCO ₃水溶液（1.50 L）、鹽水（1.50 L）洗滌，經Na ₂SO ₄乾燥，過濾並在真空下濃縮。將粗殘餘物藉由正相層析法（洗脫液：石油醚/EtOAc從100/1至10/1）純化以給出呈黃色固體的標題化合物。 ¹H NMR (600 MHz, DMSO- d ₆) δ 8.04 (s, 1H), 7.81 (s, 1H), 5.88 - 5.79 (m, 1H), 3.92 - 3.83 (m, 1H), 3.80 - 3.68 (m, 1H), 2.53 (s, 3H), 2.40 - 2.32 (m, 1H), 2.06 - 1.99 (m, 1H), 1.99 - 1.93 (m, 1H), 1.77 - 1.69 (m, 1H), 1.60 - 1.56 (m, 2H)。UPLC-MS-6：Rt = 1.32 min；MS m/z [M+H] ⁺；329.0/331.0 /333.0 步驟D.7：5-氯-6-甲基-1-(四氫-2 H-哌喃-2-基)-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜環戊硼烷-2-基)-1 H-吲唑（中間體D.1）

將4-溴-5-氯-6-甲基-1-(四氫-2 H-哌喃-2-基)-1 H-吲唑（步驟D.6，450 g，1.37 mol）、KOAc（401 g，4.10 mol）和B ₂Pin ₂（520 g，2.05 mol）在1,4-二㗁𠮿（3.60 L）中的懸浮液用氮氣脫氣0.5 h。添加Pd(dppf)Cl ₂.CH ₂Cl ₂（55.7 g，68.3 mmol）並將反應混合物在90°C下攪拌6 h。將反應混合物通過矽藻土過濾並將濾餅用EtOAc（1.50 L x 3）洗滌。將混合物在真空下濃縮以給出黑色油狀物，將該黑色油狀物藉由正相層析法（洗脫液：石油醚/EtOAc 從100/1至10/1）純化以給出呈棕色油狀物的所希望的產物。將殘餘物懸浮於石油醚（250 mL）中1 h以獲得白色沈澱。將懸浮液過濾，在真空下乾燥以給出呈白色固體的標題化合物。 ¹H NMR (400 MHz, CDCl ₃) δ 8.17 (d, 1H), 7.52 (s, 1H), 5.69 - 5.66 (m, 1H), 3.99 - 3.96 (m, 1H), 3.75 - 3.70 (m, 1H), 2.51 (d, 4H), 2.21 - 2.10 (m, 1H), 2.09 - 1.99 (m, 1H), 1.84 - 1.61 (m, 3H), 1.44 (s, 12H)；UPLC-MS-6：Rt = 1.29 min；MS m/z [M+H] ⁺；377.1/379。化合物A的合成

步驟1：三級丁基 6-(4-(5-氯-6-甲基-1-(四氫-2H-哌喃-2-基)-1H-吲唑-4-基)-5-甲基-3-(1-甲基-1H-吲唑-5-基)-1H-吡唑-1-基)-2-氮雜螺[3.3]庚烷-2-甲酸酯

在500 mL燒瓶中，在氬氣下，將三級丁基 6-(3-溴-4-(5-氯-6-甲基-1-(四氫-2H-哌喃-2-基)-1H-吲唑-4-基)-5-甲基-1H-吡唑-1-基)-2-氮雜螺[3.3]庚烷-2-甲酸酯（中間體C1，10 g，16.5 mmol）、(1-甲基-1H-吲唑-5-基)硼酸（6.12 g，33.1 mmol）、RuPhos（1.16 g，2.48 mmol）和RuPhos-Pd-G3（1.66 g，1.98 mmol）懸浮於甲苯（165 mL）中。添加K ₃PO ₄（2 M，24.8 mL，49.6 mmol）並將反應混合物置於預熱油浴（95°C）中並攪拌45 min。將反應混合物倒入飽和NH ₄Cl水溶液並用EtOAc萃取（x3）。將合併的有機層用飽和NaHCO ₃水溶液洗滌，乾燥（相分離器）並在減壓下濃縮。將粗殘餘物用THF（50 mL）稀釋，添加SiliaMetS®硫醇（15.9 mmol）並將混合物在40°C下渦旋1 h。將混合物過濾，將濾液濃縮並將粗殘餘物藉由正相層析法（洗脫液：在CH ₂Cl ₂中的MeOH從0%至2%）純化，將純化的級分再次藉由正相層析法（洗脫液：在CH ₂Cl ₂中的MeOH從0%至2%）純化以給出呈米黃色泡沫的標題化合物。UPLC-MS-3：Rt = 1.23 min；MS m/z [M+H] ⁺；656.3/658.3。步驟2：5-氯-6-甲基-4-(5-甲基-3-(1-甲基-1H-吲唑-5-基)-1-(2-氮雜螺[3.3]庚-6-基)-1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑

將TFA（19.4 mL，251 mmol）添加至三級丁基 6-(4-(5-氯-6-甲基-1-(四氫-2H-哌喃-2-基)-1H-吲唑-4-基)-5-甲基-3-(1-甲基-1H-吲唑-5-基)-1H-吡唑-1-基)-2-氮雜螺[3.3]庚烷-2-甲酸酯（步驟1，7.17 g，10.0 mmol）在CH ₂Cl ₂（33 mL）中的溶液中。將反應混合物在RT下在氮氣下攪拌1.5 h。將RM在減壓下濃縮以給出呈三氟乙酸鹽的標題化合物，將該標題化合物不經純化用於下一步驟。UPLC-MS-3：Rt = 0.74 min；MS m/z [M+H] ⁺；472.3/474.3。步驟3：1-(6-(4-(5-氯-6-甲基-1H-吲唑-4-基)-5-甲基-3-(1-甲基-1H-吲唑-5-基)-1H-吡唑-1-基)-2-氮雜螺[3.3]庚-2-基)丙-2-烯-1-酮

將丙烯酸（0.69 mL，10.1 mmol）、丙基膦酸酐（在EtOAc中50%，5.94 mL，7.53 mmol）和DIPEA（21.6 mL，126 mmol）在CH ₂Cl ₂（80 mL）中之混合物在RT下攪拌20 min，然後添加（滴液漏斗）至5-氯-6-甲基-4-(5-甲基-3-(1-甲基-1H-吲唑-5-基)-1-(2-氮雜螺[3.3]庚-6-基)-1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑三氟乙酸酯（步驟2，6.30 mmol）在CH ₂Cl ₂（40 mL）中之冰冷的溶液中。將反應混合物在RT下在氮氣下攪拌15 min。將RM倒入飽和NaHCO ₃水溶液中並用CH ₂Cl ₂（x3）萃取。將合併的有機層乾燥（相分離器）並濃縮。將粗殘餘物用THF（60 mL）稀釋並添加LiOH（2 N，15.7 mL，31.5 mmol）。將混合物在RT下攪拌30 min直到由丙烯醯氯與吲唑的游離NH基團反應產生的副產物消失（UPLC），然後倒入飽和NaHCO ₃水溶液中並用CH ₂Cl ₂（3x）萃取。將合併的有機層乾燥（相分離器）並濃縮。將粗殘餘物藉由正相層析法（洗脫液：在CH ₂Cl ₂中的MeOH從0%至5%）純化以給出標題化合物。將異構物藉由手性SFC（C-SFC-1；流動相：CO ₂/[IPA + 0.1% Et ₃N]: 69/31）分離，以給出作為第二洗脫峰的化合物A，即a( R)-1-(6-(4-(5-氯-6-甲基-1H-吲唑-4-基)-5-甲基-3-(1-甲基-1H-吲唑-5-基)-1H-吡唑-1-基)-2-氮雜螺[3.3]庚-2-基)丙-2-烯-1-酮（白色粉末）： ¹H NMR (600 MHz, DMSO- d ₆) δ 13.1 (s, 1H), 7.89 (s, 1H), 7.59 (s, 1H), 7.55 (s, 1H), 7.42 (m, 2H), 7.30 (d, 1H), 6.33 (m, 1H), 6.12 (m, 1H), 5.68 (m, 1H), 4.91 (m, 1H), 4.40 (s, 1H), 4.33 (s, 1H), 4.11 (s, 1H), 4.04 (s, 1H), 3.95 (s, 3H), 2.96-2.86 (m, 2H), 2.83-2.78 (m, 2H), 2.49 (s, 3H), 2.04 (s, 3H)；UPLC-MS-4：Rt = 4.22 min；MS m/z [M+H] ⁺526.3/528.3；C-SFC-3（流動相：CO ₂/[IPA + 0.1% Et ₃N]: 67/33）：Rt = 2.23 min。實例1的化合物又稱為「化合物A」。

獲得作為第一洗脫峰的化合物A的阻轉異構物，a( S)-1-(6-(4-(5-氯-6-甲基-1H-吲唑-4-基)-5-甲基-3-(1-甲基-1H-吲唑-5-基)-1H-吡唑-1-基)-2-氮雜螺[3.3]庚-2-基)丙-2-烯-1-酮：C-SFC-3（流動相：CO ₂/[IPA + 0.1% Et ₃N]: 67/33）：Rt = 1.55 min。實例2：化合物A結晶形式的合成。

化合物A之結晶形式（如以下中所述的那些）也特別地適用於本發明之方法和用途中。實例2a：化合物A之結晶異丙醇（IPA）溶劑化物和化合物A之結晶水合物（變型HA）形式。

將25 mg的化合物A（從以上實例1中獲得）添加至0.1 mL的2-丙醇中。將所得的澄清溶液在25°C下攪拌3天，然後沈澱出結晶固體。藉由離心過濾收集固體，並在環境條件下乾燥過夜。濕餅表徵為化合物A之結晶異丙基（IPA）溶劑化物。將濕餅在環境條件下乾燥過夜，提供了結晶水合物（變型HA）形式。

藉由XRPD分析化合物A之結晶水合物（變型HA）形式，並且下表中示出了最具特徵的峰。

特別地，結晶水合物（變型HA）形式的XRPD圖之最具特徵的峰可以選自以下：具有選自以下群組的折射2θ值（CuKα λ = 1.5418 Å）的角的一個、兩個、三個或四個峰，該群組由以下組成：8.2°、11.6°、12.9°和18.8°。

指數	2θ	d值	相對強度	強度
1	8.2°	10.72Å	100%	強
2	11.6°	7.60Å	11%	弱
3	12.1°	7.30Å	10%	弱
4	12.9°	6.87Å	14%	中
5	14.6°	6.05Å	21%	中
6	16.2°	5.47Å	15%	中
7	18.8°	4.73Å	28%	中
8	20.4°	4.34Å	18%	中
9	24.1°	3.69Å	29%	中

藉由XRPD分析化合物A之結晶IPA溶劑化物形式，並且下表中示出了最具特徵的峰。

特別地，結晶IPA溶劑化物形式的XRPD圖之最具特徵的峰可以選自以下：具有選自以下群組的折射2θ值（CuKα λ = 1.5418 Å）的角的一個、兩個、或三個峰，該群組由以下組成：7.5°、12.5°和17.6°。

指數	2θ	d 值	相對強度	強度
1	7.5°	11.77	100%	強
2	12.5°	7.08Å	20%	中
3	15.5°	5.73Å	14%	低
4	16.4°	5.42 Å	8%	低
5	17.6°	5.04Å	28%	中
6	21.4°	4.15Å	11%	低
7	24.4°	3.64Å	8%	低

實例2b：化合物A之結晶乙醇（EtOH）溶劑化物和化合物A之結晶水合物（變型HA）形式

將25 mg的化合物A（從以上實例1中獲得）添加至0.1 mL的乙醇中。將所得澄清溶液在25°C下攪拌3天。將實例1中獲得的化合物A之結晶水合物（變型HA）形式作為種子添加到所得的溶液中。將所得懸浮液再平衡1天，然後沈澱出固體。藉由離心過濾收集固體，並在環境條件下乾燥過夜。濕餅表徵為結晶乙醇溶劑化物，其在環境條件下乾燥過夜後，產生結晶水合物（變型HA）。

替代性地，將3.1 g的化合物A添加至20 mL的乙醇中，將所得澄清溶液在25°C下攪拌20 min。添加約50 mg結晶水合物（變型HA）（以上獲得）作為種子，並將所得的混合物在25°C下平衡6小時。將所得懸浮液過濾，並將濕餅表徵為結晶乙醇溶劑化物。然後將固體在環境條件（25°C，60%-70%相對濕度）下乾燥3天，獲得2.8 g的化合物A水合物變型HA，產率為90%。

藉由XRPD分析化合物A之結晶乙醇溶劑化物形式，並且下表中示出了最具特徵的峰。

特別地，結晶乙醇溶劑化物形式的XRPD圖之最具特徵的峰可以選自以下：具有選自以下群組的折射2θ值（CuKα λ = 1.5418 Å）的角的一個、兩個、或三個或四個峰，該群組由以下組成：7.9°、12.7°、18.2°和23.1°。

指數	2θ	d值	相對強度	強度
1	7.9°	11.20Å	100%	強
2	12.7°	6.99Å	24%	中
3	13.1°	6.76Å	12%	弱
4	15.5°	5.70Å	18%	弱
5	15.9°	5.58Å	11%	弱
6	16.9°	5.24Å	11%	弱
7	18.2°	4.88Å	32%	中
8	18.6°	4.77Å	17%	弱
9	23.1°	3.85Å	26%	中

實例2c：結晶水合物（變型HA）製劑的替代性製備

將25 mg的化合物A（從以上實例1中獲得）添加至0.1 mL的甲醇中。將所得澄清溶液在25°C下攪拌3天。將實例1中獲得的結晶水合物（變型HA）作為種子添加到所得的溶液中。將所得懸浮液再平衡1天，然後沈澱出固體。藉由離心過濾收集固體，並在環境條件下乾燥過夜。在環境條件下乾燥過夜後，濕餅產生結晶水合物（變型HA）。實例2d：結晶丙二醇溶劑化物製劑和水合物（變型HA）製劑

將25 mg的化合物A（從以上實例1中獲得）添加至0.1 mL的丙二醇中。將所得懸浮液在50°C下攪拌1週。藉由離心過濾收集固體。過濾後獲得的濕餅表徵為結晶丙二醇溶劑化物。在環境條件下將濾餅乾燥1週後，獲得結晶水合物（變型HA）。

藉由XRPD分析化合物A的結晶丙二醇溶劑化物形式，並且下表中示出了最具特徵的峰。

特別地，結晶丙二醇溶劑化物形式的XRPD圖之最具特徵的峰可以選自以下：具有選自以下群組的折射2θ值（CuKα λ = 1.5418 Å）的角的一個、兩個、或三個或四個峰，該群組由以下組成：7.3°、13.2°、18.0°和25.5°。

指數	2θ	d 值	相對強度	強度
1	7.3°	12.15Å	34%	弱
2	13.2°	6.70Å	87%	強
3	15.6°	5.69Å	37%	弱
4	16.2°	5.48Å	56%	中
5	18.0°	4.92Å	64%	中
6	22.5°	3.96Å	100%	強
7	22.8°	3.90Å	35%	弱
8	23.2°	3.83Å	33%	弱
9	25.1°	3.55Å	37%	弱

實例3：化合物A利用與KRAS G12C獨特相互作用在KRAS G12C的開關II環下結合，並且有效和選擇性地抑制KRASG12C細胞傳訊和增殖

與其他KRAS G12C抑制劑（如索托拉西布和阿達格拉西布）相比，化合物A利用與KRAS G12C獨特相互作用在KRAS G12C的開關II環下結合。例如，化合物A的甲基吲唑基部分與Tyr64和Glu63主鏈形成堆積相互作用，並與Gln99的側鏈相互作用。因此，甲基吲唑基部分夾在開關II和Gln99主鏈之間，穩定了該開關II構象。向C12部分生長的44螺連接子連接到吡唑環上；這導致以不同方式佔據結合點，並優化丙烯醯胺位置以與Lys16和C12部分相互作用。另外，開關II構象與針對其他KRAS G12C抑制劑（例如索托拉西布和阿達格拉西布）的公開的結合模式揭露的開關II構象不同。（圖12）

因此，化合物A可用於治療患有癌症（特別是如本文所述之癌症）的患者，該癌症已對另一種KRAS G12C抑制劑（例如索托拉西布或阿達格拉西布）的治療產生抗性或難治性。

在細胞測定中，化合物A顯示出有效和選擇性的目標佔有率。化合物A選擇性地抑制下游效應蛋白對KRAS G12C（而不是對任何其他RAS野生型同種型）的募集。化合物A特別地在 KRAS G12C突變型細胞系中抑制了KRAS驅動的致癌傳訊和增殖，但在 KRASWT或 MEK Q56P突變型細胞系中沒有抑制。

[表]：化合物A有效和選擇性地抑制KRASG12C細胞傳訊和增殖

生物化學測定	值
共價競爭（SWII袋）k _反應/k _B KRAS ^G12CGDP	140 mM ^-1s ^-1
細胞測定	值 [µM]
目標佔有率6 h EC ₅₀ KRAS ^G12C	0.03
cRAF募集6 h EC ₅₀K RAS ^G12C 相對於 KRAS/NRAS/HRAS WT	0.02/ ＞ 10/ ＞ 6/ ＞ 10
pERK 6 h EC ₅₀K RAS ^G12C 相對於 MEK ^Q56P	0.02/ ＞ 10
增殖GI ₅₀K RAS ^G12C 相對於 MEK ^Q56P	0.03/4

在臨床前研究中，化合物A在KRAS G12C突變型異種移植模型中表現出深度和持續的目標佔有率，從而導致高效性。在小鼠的 KRASG12C突變型異種移植模型中，藥效學（PD）響應與血液中化合物A暴露相關。經化合物A治療後，游離腫瘤KRAS G12C水平以劑量依賴性方式有力地降低，並與MAPK途徑靶基因DUSP-6的腫瘤表現的抑制相關。

此外，每日口服化合物A治療導致對小鼠KRASG12C異種移植模型（MIA PaCa（KRASG12C胰腺）和NCI-H2122（KRASG12C肺））異種移植模型產生劑量依賴性抗腫瘤活性。在MIA PaCa-2中，化合物A在3 mg/kg下產生腫瘤停滯，在10 mg/kg、30 mg/kg和100 mg/kg下產生腫瘤消退。在NCI-H2122中，化合物A在10 mg/kg下產生微弱的腫瘤生長抑制，在30 mg/kg下產生中等的腫瘤生長抑制，並且在100 mg/kg下產生近似的腫瘤停滯。同樣，每日兩次用50 mg/kg的化合物A口服治療也在NCI-H2122中實現了近似的腫瘤停滯，表明AUC係療效的驅動力。

總體而言，在為期4週的大鼠和狗毒性研究中，化合物A的耐受性良好。實例4：• 在KRAS G12C突變型異種移植中，化合物A的QD或BID時間表在相同的每日劑量下顯示出相同的抗腫瘤活性

在具有不同適應症的一組KRAS G12C突變型異種移植模型中，對化合物A作為單一藥劑的抗腫瘤活性進行了研究：MIA PaCa-2（PDAC）；NCI-H2122，LU99，HCC-44，NCI-H2030（NSCLC）；KYSE410（食道）。基於PK曲線和PK/PD關係，選擇每日口服時間表中10 mg/kg、30 mg/kg和100 mg/kg的化合物A的劑量。化合物A以劑量依賴性方式抑制所有異種移植模型的生長。因此，在不同的異種移植模型中觀察到劑量響應的動態範圍與最大響應模式（範圍從消退（MIA-PaCa-2，LU99）經停滯樣（HCC44，NCI-H2122）到中度腫瘤生長抑制（NCI-H2030，KYSE410））的差異，反映各模型對KRASG12C抑制的敏感性差異。

每日用30 mg/kg（qd）化合物A口服治療在MIA PaCa-2異種移植中誘導與每日兩次以15 mg/kg治療相同的腫瘤消退（圖9）。同樣，每日兩次以5 mg/kg治療取得了與每日以10 mg/kg口服治療相當的消退。在NCI-H2122和Lu99異種移植中也獲得了此結果（圖9中的「H2122」和「LU99」）。發現與每三天（q3d）給予相同劑量或90 mg/kg q3d的相同每日總劑量相比，以每日時間表給予30 mg/kg劑量導致更好的腫瘤生長抑制（圖9B）。療效與血液中的總藥物濃度密切相關。該等數據表明了AUC驅動的PD/療效關係。

在MIA PaCa-2和NCI-H2122異種移植中，與以評估的臨床相關劑量給予的索托拉西布和阿達格拉西布相比，每日口服投與化合物A引起非常相似的抗腫瘤活性。在MIA PaCa-2中，以10 mg/kg和30 mg/kg給予的化合物A和索托拉西布，都實現了腫瘤消退，其中治療組之間沒有統計上顯著的差異。在敏感性較低的NCI-H2122模型中，與媒介物組相比，每日給藥100 mg/kg的化合物A、索托拉西布和阿達格拉西布誘導腫瘤停滯，30 mg/kg的化合物A和索托拉西布導致略低的腫瘤停滯，並且30 mg/kg的阿達格拉西布對腫瘤生長沒有影響實例5：KRAS G12C突變型NSCLC細胞系中的化合物A與TNO155的體外組合

將試驗化合物的10 mM儲備溶液溶解於100% DMSO中，並將其以小等分試樣儲存於-20°C下。

十種KRAS G12C突變型非小細胞肺癌（NSCLC）細胞系：NCI-H2030、NCI-H358、NCI-H1792、HCC-44、NCI-H1373、Calu-1、NCI-H23、Lu99、NCI-H2122和HCC-1171來自商業來源，並將其在37°C 5% CO2下在供應商推薦的培養基條件下培養。

將指定的KRAS G12C突變型人NSCLC細胞系分配到384孔組織培養板中。用以下一式三份地處理細胞連續7天：DMSO、化合物A的劑量範圍（X軸；2 nM至1.6 µM）、TNO155的劑量範圍（Y軸；19 nM至4.5 µM）和兩種藥劑的成對組合。七十二小時後，藉由每孔補充相同體積的含有相應化合物或DMSO的培養基來更新培養基。在七天處理期後，使用CellTiter-Glo®（普洛麥格公司（Promega））確定細胞生長。在處理前（= 第1天）對一個板計數。圖1中的矩陣報告了與DMSO處理的細胞相比，每種處理的生長抑制（GI）百分比，其中顏色越深表示細胞生長抑制和/或細胞殺傷越大。使用經典的協同模型（Loewe、Bliss）對數據進行處理。化合物A/TNO155組合對於以下細胞系的協同作用得分如下。NCI-H2122：16.7；HCC-1171：9.7；NCI-H1373：6.9。協同作用得分超過2分表示有協同效應。

在NCI-H2122和HCC-1171中出現了協同細胞殺傷，而在NCI-1373和CALU-1中則實現了協同細胞生長抑制（參見圖1）。在NCI-H23和HCC-44細胞系中獲得了較低的協同作用得分。在本實驗中，Lu99細胞系（圖1中的LU99）沒有顯示出協同作用，可能是由於化合物A與TNO155的組合在體內Lu99模型中顯示出明顯的有益效果而產生的體外效應。實例6：單獨的化合物A以及與TNO155的組合在Lu99 KRAS G12C肺癌小鼠異種移植模型中的抗腫瘤療效

將名為Lu99的雜合性KRAS G12C肺癌異種移植模型用於小鼠的療效研究，以研究化合物A、TNO155作為單一藥劑以及組合的療效和耐受性。

Lu99人細胞系來源於一名63歲男性患者的肺巨細胞癌 [Yamada等人, 1985]。它攜帶等位基因NM_033360.4(KRAS):c.34G ＞ T，並且因此係雜合KRAS Gly12Cys突變。使Lu99細胞在具有5% CO2的37°C培育箱中在無菌條件下生長兩週。將細胞保持在補充有10% FCS、2 mM L-麩醯胺酸、1 mM丙酮酸鈉和10 mM HEPES的RPMI培養基中，並以1 : 6每3天分離。2012年細胞測試為支原體和鼠病毒檢測陰性（Radil案例號：8270-2012）。在注射當天，共傳代8次（包括來自供應商的傳代）後收穫細胞。將細胞以10.10 ⁶個細胞/ml的最終濃度重懸於50% HBSS和50%基質膠（Matrigel）中。

用雌性裸鼠（查理斯河實驗室（Charles River Laboratories），對照：NU(NCr)-Foxn1nu-純合）進行實驗。將動物安置在12 h光照/黑暗週期的設施中，並且可以自由地隨意取用Figure無菌食物和水。允許動物適應至少7天。

向小鼠皮下注射Lu99人NSCLC細胞以誘導異種移植腫瘤，並且當平均腫瘤體積達到約250 mm ³時，隨機分配至治療組。然後用媒介物、化合物A（100 mg/kg，每日一次）、TNO155（10 mg/kg，每日兩次）、或化合物A（100 mg/kg，每日一次）與TNO155（10 mg/kg，每日兩次）的組合對小鼠進行口服治療。

將化合物A和TNO155分別配製成在0.1% Tween 80（飛世爾科技公司（Fisher Scientific AG）#BP338-500）和0.5%甲基纖維素水溶液中的懸浮液。對照組接受0.1% Tween 80（飛世爾科技公司#BP338-500）和0.5%甲基纖維素在水中之溶液。

治療期為9至28天，具體取決於各組。當腫瘤體積（TV）達到授權限度時，在第9天終止用媒介物治療的動物，在第14天終止用TNO155治療的動物。將用化合物A或化合物A與TNO155的組合治療的動物治療28天，然後在不進行任何治療下再保持5天。

細胞接種後定期監測腫瘤生長並且當TV達到適當體積時，將動物隨機分配至治療組（n = 6）。在治療期間，每週用卡尺手動測量異種移植腫瘤大小約2-3次，並使用以下公式以mm ³為單位估算TV：長度 x 寬度 ²/2。結果如圖2所示。

雖然與媒介物組相比，單一藥劑TNO155的抗腫瘤響應中等，但在治療仍在進行的三週內，化合物A治療導致了Lu99腫瘤消退。在治療的前三週，這兩種藥劑的組合顯著改善了化合物A作為單一藥劑所見的響應的可持續性和復發時間，導致腫瘤響應與單獨使用化合物A相似。腫瘤在治療下沒有重新生長，這與單獨使用化合物A治療時觀察到的情況不同。儘管如此，當治療結束時，肺癌生長恢復。在整個治療期間，研究中的所有動物體重都增加了。所有的治療方案均為可以接受的，並且當單獨或組合投與時，兩種化合物的血液暴露在相似的範圍內。實例7：單獨的化合物A以及與不同時間表的TNO155的組合在Lu99 KRAS G12C肺癌小鼠異種移植模型中的抗腫瘤療效

在雌性裸鼠的KRAS G12C突變型Lu99異種移植模型中，進行了化合物A與不同時間表的TNO155的體內組合研究。向小鼠皮下注射Lu99人NSCLC細胞以誘導異種移植腫瘤，並且當平均腫瘤體積達到約200 mm ³時，隨機分配至治療組。按連續時間表或兩週投與、一週停用時間表用媒介物、化合物A（100 mg/kg，每日一次）、TNO155（10 mg/kg，每日兩次連續）或化合物A（100 mg/kg，每日一次）與TNO155（10 mg/kg，每日兩次）的組合對小鼠進行口服治療。治療期為14至35天，具體取決於各組。在第14天終止用媒介物治療的動物。在第21天終止TNO155和化合物A治療的動物。用化合物A和TNO155組合治療的動物治療35天。記錄腫瘤體積，並以每組的平均值 ± SEM（平均值的標準誤差）表示。治療組相對於媒介物組的抗腫瘤響應在第14天以%T/C或%消退計算。以100 mg/kg每日給藥化合物A誘導腫瘤消退大約兩週，隨後在治療仍在進行時，腫瘤復發。與媒介物組相比，以10 mg/kg每日兩次連續給予TNO155，導致了輕微的腫瘤生長延遲。如圖3顯示，化合物A與TNO155的組合顯著改善了化合物A作為單一藥劑所見的響應的可持續性和復發時間。因此，無論TNO155係按連續時間表給予還是按兩週投與、一週停用的時間表給予，其組合效果均為一樣的。這意味著TNO155可能只需要按間歇性時間表投與，以維持臨床療效，或者由於臨床不良反應而中斷劑量可能不會對臨床響應造成損害。實例8：化合物A顯示持續的體內目標佔有率，並且在攜帶KRAS G12C突變型腫瘤異種移植的小鼠中具有劑量依賴性的抗腫瘤活性。將TNO155添加至化合物A中，以化合物A單一藥劑的三分之一的量達到類似的目標佔有率

可以藉由測量游離的KRASG12C水平（目標佔有率）和MAPK傳訊途徑中的其他生物標誌物，如磷酸化ERK1/2（pERK）的水平下降和DUSP6 mRNA轉錄物的下調來評估KRASG12C抑制。在H358癌細胞中，抑制KRAS G12C（目標佔有率）和pERK的體外IC50分別為20 nM，並且抗增殖GI50為30 nM。在體內，口服投與化合物A（30 mg/kg QD）在MIA PaCa-2異種移植中實現了大約90%的KRASG12C抑制和 DUSP6mRNA轉錄物的75%下降，導致腫瘤消退。在敏感性較低的NCI-H2122異種移植中，口服投與JDQ443（100 mg/kg QD）實現了大約80%的KRASG12C抑制和 DUSP6mRNA轉錄物的90%下降，導致停滯，這是該模型中對MAPK途徑抑制的最大響應。

在相應的研究中，用單一藥劑化合物A（100 mg/kg qd）或化合物A（30 mg/kg）與TNO155（7.5 mg/kg bid）的組合治療LU99異種移植5天後，評估了KRASG12C目標佔有率。如圖11所示，兩種方案同等降低了腫瘤中的游離KRASG12C。因此，添加SHP2抑制劑可以增強化合物A的抗腫瘤響應，由此以單獨使用KRAS G12C抑制劑的三分之一的劑量達到相同的目標佔有率。

化合物A取得了與MIA PaCa2和NCI-H2122中的競爭化合物索托拉西布以及NCI-H2122中的阿達格拉西布相當的抗腫瘤效果。在劑量計畫研究中，以相同的每日劑量按BID或QD時間表給予的化合物A取得了相同的響應，這表明AUC驅動的PD/療效關係。除了在作為單一藥劑投與時取得明顯療效外，化合物A還有可能與TNO155（磷酸酶SHP2的抑制劑）協同作用。在體外，JDQ443與TNO155的組合在NCI-H2122、HCC-1171和NCI-H1373 NSCLC細胞系中具有協同作用，並且與單獨使用JDQ443相比，導致顯著更大的細胞生長抑制。在體內，JDQ443與TNO155的組合顯著改善了JDQ443作為單一藥劑在Lu99 NSCLC異種移植中所見的響應的可持續性和復發時間。實例9：單獨的化合物A以及與TNO155的組合在Lu99 KRAS G12C結直腸小鼠異種移植模型中的抗腫瘤療效

在一組KRAS G12C突變型人大腸直腸癌患者源性異種移植（PDX）模型中，進行了化合物A與TNO155的體內組合研究。向雌性裸鼠皮下植入來自每個PDX模型的腫瘤片段。一旦單個小鼠的腫瘤體積達到200-250 mm ³，就將其分配到治療組進行給藥。將每個PDX模型的一隻動物分配到每個治療組。將小鼠不作任何處理（對照），或用化合物A（每日100 mg/kg）或化合物A（每日100 mg/kg）與TNO155（10 mg/kg每日兩次）的組合口服治療。每個模型的研究結束被定義為最少28天的治療，或未經治療的腫瘤達到1500 mm ³的持續時間，或未經治療的腫瘤翻兩番的持續時間，以較慢者為準。記錄腫瘤體積，並以每組的腫瘤體積變化% ± SEM表示。每日給藥化合物A導致一個PDX模型的消退，並導致一些PDX模型中輕微到中等的腫瘤生長延遲。化合物A與TNO155的組合改善了在所有PDX模型中的響應，範圍從強烈的腫瘤生長抑制到腫瘤消退（參見圖4）。實例10：化合物A與TNO155的組合提高了化合物A的單一藥劑活性，並且在保持療效的同時可減少化合物A

使用不同劑量方案進一步研究了化合物A與SHP2抑制劑TNO155的組合所產生的改善的抗腫瘤效果。在體內三個 KRAS G12C突變型腫瘤模型（LU99、NCI-H2030和KYSE410）中進行了化合物A（100 mg/kg QD）與TNO155（7.5 mg/kg BID）的組合研究。在LU99模型中，該組合與單一藥劑相比延遲了腫瘤復發的時間（圖10「A」），並在H2030和KYSE410模型中顯示出更大的抗腫瘤療效（圖10「B」、「C」、「F」）。還測試了TNO155與化合物A的組合在這三種異種移植模型中減少暴露的效果。如圖10「A-C」所示，TNO155（7.5 mg/kg，每日兩次時間表）不需要與化合物A（100 mg/kg qd）組合，並且每日一次時間表足以維持在LU99和KYSE410異種移植中的療效。在LU99、HCC44和KYSE410異種移植中，劑量減少的化合物A與TNO155的組合的效果。在LU99異種移植模型中（圖10「D」），化合物A（每日30 mg/kg劑量）與TNO155（7.5 mg/kg bid）的組合取得了與化合物A單一藥劑（100 mg/kg）相同的響應。療效與目標佔有率密切相關。

在相應的研究（其中用單一藥劑化合物A（100 mg/kg qd）或與TNO155（7.5 mg/kg bid）的組合治療LU99異種移植5天後，評估了KRAS ^G12C目標佔有率）中，兩種方案同等降低了腫瘤中的游離KRAS ^G12C（圖10「G」）。作為單一藥劑，30 mg/kg的化合物A實現了比100 mg/kg更少的LU99腫瘤中的游離KRAS ^G12C的減少，這與劑量依賴性單一藥劑抗腫瘤療效相關（圖10「D」）。同樣，在HCC44異種移植模型中（圖10 E），化合物A（每日30 mg/kg劑量）與TNO155（7.5 mg/kg bid）的組合，取得了與化合物A單一藥劑（100 mg/kg）相同的響應。在KYSE410中（圖10「F」），化合物A（30 mg/kg）與TNO155（7.5 mg/kg bid）的組合，足以將幾乎沒有響應的模型轉化為良好的響應者，實現停滯。然而，化合物A（每日劑量為100 mg/kg）與TNO155（7.5 mg/kg bid）組合，進一步提高了療效並導致腫瘤消退。

該等結果共同表明，SHP2阻斷可以通過增強目標佔有率建立更全面的KRAS依賴性傳訊阻斷來增強KRAS ^G12C抑制劑的抗腫瘤活性，並且兩種藥物中的一種減少暴露可以維持療效。實例11：化合物A有效抑制KRAS G12C H95Q（在臨床試驗中介導對阿達格拉西布抗性的雙突變體）

GFP標記的KRASG12C H95Q、KRASG12C Y96D或KRASG12C R68S雙突變藉由定點誘變產生（QuikChange Lightning定點誘變套組（目錄號210518）模板：pcDNA3.1(+)EGFP-T2A-FLAG-KRAS G12C），並藉由穩定轉染在含有Ba/F3細胞的Cas9中表現。用從10 mM的DMSO原液中1/3稀釋的10 μM開始的劑量響應曲線處理細胞。用指定的化合物處理細胞系72小時，並且用CellTiter-Glo測量細胞的活力。結果：

與MRTX-849（阿達格拉西布）不同，JDQ443（化合物A）和AMG-510（索托拉西布）有效抑制KRASG12C H95Q雙突變體的細胞活力。MRTX-849、AMG-510或JDQ443在指定的濃度和所述環境下（Ba/F3系統，3天增殖測定）不能抑制KRASG12C Y96D或KRASG12C R68S雙突變體，並且該等雙突變體對所有三種測試的KRASG12C抑制劑產生抗性。（圖6；與DMSO對照（即沒有KRAS G12C化合物）相比，KRASG12C化合物在體外增殖測定中的y軸影響）。水平的紅色虛線代表GI50值。

KRAS G12C抑制劑	GI ₅₀[µM] +/- 標準差（STDEV）
KRAS G12C H95Q	KRAS G12C Y96D	KRAS G12C R68S
NVP-JDQ443（化合物A）	0.57 +/- 0.18	＞ 10	＞ 10
AMG-510（索托拉西布）	0.26 +/- 0.06	＞ 10	＞ 10
MRTX-849（阿達格拉西布）	＞ 10	＞ 10	＞ 10

在圖6中，最上面的曲線（綠色）代表用MRTX-849（阿達格拉西布）治療。中間的

曲線（紅色）代表用NVP-JDQ443（化合物A）治療。底部的曲線（藍色）代表用AMG-510（索托拉西布）治療。結論：

在KRASG12C H95Q情況下，化合物A可能克服對阿達格拉西布的抗性。另外，由於化合物A與突變型KRAS G12C有獨特的結合相互作用，當與索托拉西布和阿達格拉西布相比時，單獨的化合物A或與如本文所述之一或多種治療劑的組合，可用於治療先前用其他KRAS G12C抑制劑（如索托拉西布或阿達格拉西布）治療的患有癌症的患者，或在初始KRAS G12C抑制劑治療中出現獲得性KRAS抗性突變後靶向抗性。實例12：化合物A有效抑制KRAS G12C雙突變體

如下還研究了化合物A和其他KRASG12C抑制劑對所報導的賦予對阿達格拉西布抗性的第二位點突變的影響。 材料與方法： 細胞系和 KRAS ^G12C 抑制劑：

除非另外說明，否則Ba/F3細胞系係小鼠原B細胞系，並且在補充有10%的胎牛血清（FBS）（生物概念公司（BioConcept），#2-01F30-I）、2 mM丙酮酸鈉（生物概念公司，# 5-60F00-H）、2 mM穩定的麩醯胺酸（生物概念公司，# 5-10K50-H）、10 mM HEPES（生物概念公司，# 5-31F00-H）的RPMI 1640（生物概念公司，#1-41F01-I）中在37°C和5% CO ₂下培養。將親代Ba/F3細胞在5 ng/ml的重組鼠IL-3（生命技術公司（Life Technologies），#PMC0035）存在下培養。Ba/F3細胞通常依賴IL-3生存和增殖，然而，藉由表現致癌基因，它們能夠將其依賴性從IL-3轉向所表現的致癌基因（Curr Opin Oncology [腫瘤學當代視點], 2007年1月; 19 (1): 55-60. doi: 10.1097/CCO.0b013e328011a25f.） 單個質體誘變和 Ba/F3 穩定細胞系的產生：

使用QuikChange Lightning定點誘變套組（安捷倫公司（Agilent）；# 210519）以在pSG5_Flag-（密碼子優化）KRAS ^G12C_puro質體模板上產生抗性突變，並藉由桑格定序（sanger sequencing）確認序列。

引物	引物序列	SEQ ID NO
H95R_正向	5'-gtcatttgaagatatccaccgttatcgcgagcagattaaga-3'	552
H95R_反向	5'-tcttaatctgctcgcgataacggtggatatcttcaaatgac-3'	553
H95Q_正向	5'-tcatttgaagatatccaccagtatcgcgagcagattaagag-3'	554
H95Q_反向	5'-ctcttaatctgctcgcgatactggtggatatcttcaaatga-3'	555
H95D_正向	5'-agtcatttgaagatatccacgattatcgcgagcagattaag-3'	556
H95D_反向	5'-cttaatctgctcgcgataatcgtggatatcttcaaatgact-3'	557
MR68S_正向	5'-gaagagtactccgcaatgagcgatcaatacatgaggacg-3'	558
R68S_反向	5'-cgtcctcatgtattgatcgctcattgcggagtactcttc-3'	559
Y96C_正向	5'-cgaagtcatttgaagatatccaccattgtcgcgagcagatta-3'	560
Y96C_反向	5'-taatctgctcgcgacaatggtggatatcttcaaatgacttcg-3'	561
Y96D_正向	5'-cgaagtcatttgaagatatccaccatgatcgcgagcagatt-3	562
Y96D_反向	5'-aatctgctcgcgatcatggtggatatcttcaaatgacttcg-3'	563

將突變型質體用NEON轉染套組（英傑公司（Invitrogen），#MPK10025）藉由電穿孔轉染到Ba/F3 WT細胞中。因此，用NEON系統（英傑公司，#MPK5000）（使用以下條件：電壓（V）1635，寬度（ms）20，脈衝1）來用10 μg pf質體電穿孔二百萬個Ba/F3細胞。電穿孔72小時後，以1 μg/ml進行嘌呤黴素選擇，以產生穩定的細胞系。 IL-3 退出（ withdrawal ）

Ba/F3細胞通常依賴IL-3生存和增殖，然而，藉由表現致癌基因，它們能夠將其依賴性從IL-3轉向所表現的致癌基因。為了評估KRAS ^G12C單和雙突變體是否能夠維持Ba/F3細胞的增殖，在不存在IL-3的情況下培養表現突變構建體的工程化Ba/F3細胞。每三天測量一次細胞數量和活力，並且七天後完成IL-3退出。藉由西方墨點法（數據未顯示，觀察到KRAS ^G12C/R68S的上移）確認IL-3退出後突變體的表現。 KRASG12C 抑制劑的藥物響應曲線和抗性突變的驗證：

將1000個Ba/F3細胞/孔接種到96孔板（Greiner Bio-One公司，#655098）中。在同一天用Tecan D300e藥物分配器進行處理。在Tecan infinitiy M200 Pro讀數器（積分時間1000 ms）上，使用CellTiter-Glo發光細胞活力測定（普洛麥格公司，#G7573），在處理起始板（第0天）的同一天和處理後三天（第3天）檢測活力。

為了確定生長情況，將處理後三天（第3天）的讀數相對於起始板（第0天）歸一化。然後藉由將處理過的孔相對於DMSO處理過的對照樣本歸一化來計算活力百分比。使用XLfit來製作Sigmoidal劑量-響應模型的擬合曲線（四參數曲線）（圖7）。水平的紅色虛線代表GI50值。表格數據顯示如下。

[表]：化合物A（JDQ443）對KRAS G12C/H95雙突變體增殖的影響。（«STDEV»表示增長值%的標準差）

相對於第3天的處理，經處理的細胞生長%	濃度 [μM]
1	0.333333	0.111111	0.037037	0.012346	0.004115	0.001372	0.000457
G12C	4.279	20.252	44.204	72.785	89.361	93.832	97.516	95.501
G12C STDEV	0.961	0.345	3.567	3.058	1.072	0.770	3.921	3.639
H95R	0.321	5.323	23.425	52.178	66.971	83.996	92.517	103.118
H95R STDEV	0.943	0.276	0.779	1.034	0.897	3.344	3.811	7.044
H95Q	6.635	36.908	71.333	93.319	95.722	103.375	93.606	100.054
H95Q STDEV	2.025	0.910	11.656	4.209	0.919	6.685	3.996	2.621
H95D	28.569	68.199	88.358	102.308	97.783	90.379	91.567	96.429
H95D STDEV	1.055	4.247	2.997	6.409	3.644	0.087	2.074	7.212
R68S	69.159	93.111	103.721	108.276	104.608	100.329	103.390	100.931
R68S STDEV	7.892	4.607	9.627	6.839	0.781	4.288	2.838	0.996
Y96C	80.229	91.765	102.592	104.222	96.167	105.515	102.424	109.116
Y96C STDEV	1.667	0.222	2.981	1.230	0.896	4.837	5.863	4.380
Y96D	90.864	97.260	105.866	103.946	106.613	98.191	102.224	100.903
Y96D STDEV	0.852	0.105	4.943	6.090	3.050	1.435	5.305	3.229

[表]：索托拉西布（AMG510）對KRAS G12C/H95雙突變體增殖的影響（«STDEV»表示增長值%的標準差）

相對於第3天的處理，經處理的細胞生長%	濃度 [μM]
1	0.333333	0.111111	0.037037	0.012346	0.004115	0.001372	0.000457
G12C	24.244	46.199	71.315	77.193	92.241	95.211	94.786	100.303
G12C STDEV	5.785	4.703	0.727	0.776	2.500	1.603	2.016	5.046
H95R	3.485	8.354	23.503	53.471	71.098	83.029	90.450	93.527
H95R STDEV	1.825	1.731	0.971	4.408	1.615	6.613	10.693	5.561
H95Q	8.566	34.323	68.123	89.685	93.396	98.559	103.616	98.858
H95Q STDEV	2.203	1.572	6.416	5.515	0.970	1.603	4.610	1.842
H95D	-1.171	33.638	74.059	91.299	91.484	99.189	93.064	103.216
H95D STDEV	0.374	1.962	1.683	0.716	2.837	6.975	2.489	5.237
R68S	79.748	94.396	102.811	98.842	99.936	100.994	94.166	95.566
R68S STDEV	3.473	7.672	2.021	3.308	0.455	0.885	1.904	1.680
Y96C	111.964	105.031	103.341	97.712	104.892	109.010	106.167	103.355
Y96C STDEV	3.326	0.058	2.472	2.258	0.105	2.374	0.266	3.889
Y96D	106.099	101.660	101.868	97.311	102.190	106.308	101.134	105.511
Y96D STDEV	7.943	8.231	5.850	1.065	8.679	8.652	10.362	3.819

[表]：阿達格拉西布（MRTX-849）對KRAS G12C/H95雙突變體增殖的影響（«STDEV»表示增長值%的標準差）

相對於第3天的處理，經處理的細胞生長%	濃度 [μM]
1	0.333333	0.111111	0.037037	0.012346	0.004115	0.001372	0.000457
G12C	-0.266	16.329	51.013	72.820	87.908	90.538	97.358	99.591
G12C STDEV	0.026	0.281	1.081	5.419	4.200	3.922	1.669	7.272
H95R	64.097	87.126	83.910	90.693	96.751	85.570	95.027	89.422
H95R STDEV	6.732	10.191	5.867	1.326	1.261	8.143	11.049	7.126
H95Q	73.397	88.044	95.662	101.071	92.756	100.136	91.377	98.312
H95Q STDEV	6.148	0.323	0.148	0.289	1.657	1.053	5.052	1.475
H95D	82.356	91.214	103.587	100.461	103.684	89.514	98.169	92.404
H95D STDEV	6.938	2.123	4.434	4.185	5.798	3.766	1.029	2.848
R68S	26.823	84.668	94.008	101.452	105.903	100.837	99.142	97.443
R68S STDEV	2.129	0.233	1.666	0.085	7.640	1.368	3.217	1.746
Y96C	82.638	96.520	99.562	102.615	105.187	101.092	100.220	99.819
Y96C STDEV	9.540	4.002	2.065	3.987	4.264	2.673	6.930	10.013
Y96D	81.671	95.056	108.171	97.824	105.964	97.437	102.545	106.432
Y96D STDEV	3.884	2.842	0.058	4.085	8.415	7.575	0.349	6.625

西方墨點法

用不同化合物以指定濃度處理指定的時間後，將細胞收集，沈澱並在-80°C下速凍。向每個樣本中添加60 μL的裂解緩衝液（50 mM Tris HCl、120 mM NaCl、25 mM NaF、40 mM β-甘油磷酸二鈉五水合物、1% NP40、1 μM微囊藻毒素、0.1 mM Na3VO3、0.1 mM PMSF、1 mM DTT和1 mM苯甲脒，每10 mL緩衝液補充有1片蛋白酶抑制劑混合片劑（羅氏公司））。然後將樣本渦旋，在冰上孵育10 min，再渦旋並在4°C下以14000 rpm離心10 min。用BCA蛋白質測定套組（皮爾斯公司（Pierce），23225）確定蛋白質濃度。用裂解緩衝液歸一到相同的總體積後，添加NuPAGE™ LDS樣本緩衝液4 X（英傑公司，NP0007）和NuPAGE™樣本還原劑10 X（英傑公司，NP0009）。將樣本在70°C下加熱10 min，然後載入到NuPAGE™ Novex™ 4%-12% Bis-Tris Midi蛋白凝膠，26-孔（英傑公司，WG1403A）上。在NuPAGE MES SDS運行緩衝液（英傑公司，NP0002）中，在200 V下跑膠45 min（PowerPac HC，伯樂公司（Biorad））。使用Trans-Blot® Turbo™系統（伯樂公司），持續7 min將蛋白質以每凝膠135 mA轉移到Trans-Blot® Turbo™ Midi硝酸纖維素轉移包膜（伯樂公司，1704159）上，然後用Ponceau紅（西格瑪公司（Sigma），P7170）對膜染色。用含有5%乳的TBST在RT下阻斷膜。將抗RAS（艾博抗公司（Abcam），108602）抗體和抗磷酸化ERK 1/2 p44/42 MAPK（細胞傳訊公司（Cell Signaling），4370）抗體在4°C下孵育過夜，將抗黏著斑蛋白（anti-vinculin）（西格瑪公司，V9131）抗體在RT下孵育1 h。將膜用TBST洗滌3次持續5 min，並將抗兔（細胞傳訊公司，7074）和抗鼠（細胞傳訊公司，7076）二抗在RT下孵育1 h。將所有抗體在TBST中稀釋到1/1000，除抗黏著斑蛋白（1/3000）。在Fusion FX（Vilber Lourmat）上使用FusionCapt Advance FX7軟體，用針對Ras和黏著斑蛋白的WesternBright ECL（Advansta公司，K-12045-D20）和SuperSignal West Femto最高靈敏度底物（賽默飛世爾公司（Thermo Fischer），34096）進行確定。（圖8）。結果

[表]：化合物A（JDQ443）抑制KRAS G12C/H95雙突變體的增殖。用JDQ443（化合物A）、AMG-510（索托拉西布）和MRTX-849（阿達格拉西布）（從1 mM開始進行8點稀釋）處理表現指定FLAG-KRAS ^G12C單突變體或雙突變體的Ba/F3細胞3天，並藉由Cell titer glo活力測定評估增殖抑制。顯示了4個獨立實驗的GI ₅₀± 標準差（St DV）的平均值。

GI50 ± St DV [μM]	JDQ443	AMG-510	MRTX-849
G12C	0.115 ± 0.060	0.389 ± 0.235	0.136 ± 0.071
G12C/H95R	0.024 ± 0.006	0.033 ± 0.008	＞ 1
G12C/H95Q	0.284 ± 0.041	0.233 ± 0.022	＞ 1
G12C/H95D	0.612 ± 0.151	0.262 ± 0.088	＞ 1
G12C/R68S	＞ 1	＞ 1	0.707 ± 0.165
G12C/Y96C	＞ 1	＞ 1	＞ 1
G12C/Y96D	＞ 1	＞ 1	＞ 1

生物物理數據 材料與方法： 試劑的製備： RAS 蛋白構建體的選殖、表現和純化

本研究中使用的大腸桿菌表現構建體基於pET系統，並使用標準的分子選殖技術產生。在可裂解的N-末端his親和純化標籤後，編碼KRAS、NRAS和HRAS的cDNA包含aa 1-169，並藉由GeneArt（賽默飛世爾科技公司（Thermo Fisher Scientific））進行密碼子優化和合成。用QuikChange Lightning定點誘變套組（安捷倫公司）引入點突變。藉由桑格定序對所有最終的表現構建體進行序列驗證。

對兩升培養基接種用表現質體新鮮轉化的大腸桿菌BL21（DE3）的預培養物，並用1 mM異丙基-β-D-硫代半乳糖苷（西格瑪公司）在18°C下誘導蛋白表現16小時。將帶有avi-標籤的蛋白質轉化到攜帶表現生物素連接酶BirA的相容質體的大腸桿菌中，並在培養基中補充135 µM d-生物素（西格瑪公司）。

將細胞沈澱重懸於補充有Turbonuclease（默克公司（Merck））和cOmplete蛋白酶抑制劑片劑（羅氏公司）的緩衝液A（20 mM Tris、500 mM NaCl、5 mM咪唑、2 mM TCEP、10%甘油，pH 8.0）中。將細胞通過勻漿器（Avestin公司）在800-1000巴下裂解三次，並藉由在40000 g下離心40 min來澄清裂解物。

將裂解物載入到安裝在ÄKTA Pure 25層析系統（思拓凡公司（Cytiva））上的HisTrap HP 5 ml柱（思拓凡公司）上。將污染的蛋白質用緩衝液A洗去，並將結合的蛋白質用線性梯度洗脫到緩衝液B（補充有200 mM咪唑的緩衝液A）中。在透析O/N期間，將無標籤和avi-標籤蛋白質上的N-末端His親和純化標籤分別藉由TEV或HRV3C蛋白酶裂解。將蛋白溶液重新載入到HisTrap柱上，並收集含有靶蛋白的流。

添加5’-二磷酸鳥苷鈉鹽（GDP，西格瑪公司）或GppNHp-四鋰鹽（Jena生物科學公司）至超過蛋白質24-32倍的莫耳量。添加EDTA（pH調節至8）至最終濃度為25 mM。室溫下1小時後，在PD-10脫鹽柱（思拓凡公司）上，將緩衝液與40 mM Tris、200 mM (NH4)2SO4、0.1 mM ZnCl2，pH 8.0進行交換。將GDP（用於KRAS G12C抗性突變體H95Q/D/R、Y96D/C和R68S）或GppNHp添加至洗脫蛋白質中至超過蛋白質24-32倍的莫耳量。將40 U蝦鹼性磷酸酶（新英格蘭生物實驗室（New England Biolabs））添加到僅含有樣本的GppNHp中。然後將樣本在5°C下孵育1小時。最後，添加MgCl2至濃度為約30 mM。

然後將蛋白質經HiLoad 16/600 Superdex 200 pg柱（思拓凡公司）進一步純化，該柱用20 mM HEPES、150 mM NaCl、5 mM MgCl2、2 mM TCEP預平衡，pH 7.5。

藉由RP-HPLC確定蛋白質之純度和濃度，藉由LC-MS確認其身份。藉由離子對層析法確定目前的核苷酸[Eberth等人, 2009]。藉由 RapidFire MS 確定共價速率常數 測定和曲線擬合

在384孔板中製備測試化合物的連續稀釋液（50 µM，½稀釋液），並在室溫下與1 µM KRAS G12C（有/無另外的突變體）在20 mM Tris（pH7.5）、150 mM NaCl、100 µM MgCl ₂、1% DMSO中孵育。在不同的時間點藉由添加1%的甲酸停止反應。使用聯接到Agilent RapidFire自動進樣器RF360設備的Agilent 6530四極桿飛行時間（QToF）MS系統進行MS測量，得出每個孔的修飾值%。同時，藉由比濁法評估化合物溶解度，導致可測濁度的化合物濃度被排除在曲線擬合之外。

繪製修飾%相對於時間的關係圖，以提取不同化合物濃度的k _obs值。在第二步中，將獲得的k _obs值相對於化合物濃度作圖。從所得曲線的初始線性部分得出速率常數（即k _inact/K _I）。 MS 測量

使用RapidFire自動進樣器RF 360進行注射。將溶劑藉由Agilent 1200泵遞送。使用C18固相萃取（SPE）筒用於所有的實驗。

從384孔板的每個孔中吸出30 μL的體積。在1.5 mL/min（H2O，0.1%甲酸）的流速下，樣本載入/清洗時間為3000 ms；洗脫時間為3000 ms（乙腈，0.1%甲酸）；在1.25 mL/min（H2O，0.1%甲酸）的流速下，再平衡時間為500 ms。

在聯接到雙電灑（AJS）離子源（處於正模式）的Agilent 6530四極桿飛行時間（QToF）MS系統上獲得質譜（MS）數據。儀器參數如下：氣體溫度350°C，乾燥氣體10 L/min，霧化器45 psi，保護氣體350°C，保護氣體流速11 L/min，毛細管4000 V，噴嘴1000 V，碎裂電壓250 V，撇渣器65 V，八極RF 750 V。以6個光譜/s的速度獲取數據。質量校準在300-3200 m/z範圍內進行。

使用Agilent MassHunter定性分析、Agilent Rapid-Fire控制軟體和Agilent DA Reprocessor Offline Utilities的組合進行所有的數據處理。最大熵演算法產生每個注射的單獨文件中的零電荷光譜。批量處理生成單個文件，將文本格式的所有質譜合併為x，y座標。將該文件用於計算每個孔中蛋白質修飾的百分比。結果

使用動力學MS實驗對指定的構建體（所有裝載GDP的）的修飾的二階速率常數進行量化，在不同的時間點測量化合物濃度範圍內的修飾%。K _inact/K _I係由k _obs相對於化合物濃度曲線的初始斜率推算出來的。將相對於KRAS G12D : GDP的活性設定為1，並給出了抗性突變體的相對活性。下表給出了KRAS G12C的n = 4次實驗、G12C_Y96D的n = 3次、和其他突變體的n = 2次的平均值。

[表]：抗性突變體相對於KRAS G12C的二階速率常數（K _inact/K _I）的倍數變化

KRAS突變體（GDP）	G12C	G12C_H95R	G12C_H95Q	G12C_H95D	G12C_R68S	G12C_Y96C	G12C_Y96D
化合物A（JDQ443）	1	1.04	0.40	0.20	0.14	0.03	0.004
索托拉西布	1	2.39	1.67	1.45	0.31	＜ 0.002	＜ 0.001
阿達格拉西布	1	＜ 0.05	＜ 0.05	＜ 0.05	0.38	＜ 0.002	＜ 0.001

使用動力學MS實驗對指定的構建體（所有裝載GDP的）的修飾的二階速率常數進行量化，在不同的時間點測量化合物濃度範圍內的修飾%。K _inact/KI係由K _obs相對於化合物濃度曲線的初始斜率推算出來的。給出了KRAS G12C的n = 4次實驗、G12C_Y96D的n = 3次、和其他突變體的n = 2次的平均值。

[表]：化合物A（JDQ443）、索托拉西布和阿達格拉西布相對於抗性突變體的二階速率常數（K _inact/KI [mM-1*s-1]）

KRAS突變體（GDP）	G12C	G12C_H95R	G12C_H95Q	G12C_H95D	G12C_R68S	G12C_Y96C	G12C_Y96D
化合物A（JDQ443）	24.3	25	9.5	4.85	3.45	0.65	0.09
索托拉西布	9	21.5	15	13.05	2.75	＜ 0.02	＜ 0.01
阿達格拉西布	26	＜ 1	＜ 1	＜ 1	9.9	＜ 0.04	＜ 0.01

結論

第一代KRAS G12C抑制劑已在臨床試驗中顯示出療效。然而，破壞抑制劑結合和下游途徑的重新激活的突變的出現，限制了響應的持續時間。據報導，在臨床試驗中，第二位點突變體賦予了對阿達格拉西布的抗性（參考：N Engl J Med. [新英格蘭醫學雜誌] 2021年6月24日; 384 (25): 2382-2393. doi: 10.1056/NEJMoa2105281.、Cancer Discov. [癌症發現] 2021年8月; 11 (8): 1913-1922. doi: 10.1158/2159-8290.CD-21-0365. 2021年4月6日線上發表PMID: 33824136.），將該等第二位點突變體在Ba/F3細胞中表現，並分析了與KRAS G12C（GI ₅₀= 0.115 ± 0.060 mM）相比它們對化合物A（JDQ443）的敏感性。如結合模式所預期的，化合物A抑制了KRAS G12C H95雙突變體的增殖和傳訊。化合物A有效抑制G12C/H95R和G12C/H95Q的增殖（分別為GI ₅₀= 0.024 ± 0.006 mM，GI ₅₀= 0.284 ± 0.041 mM），而G12C/R68S、G12C/Y96C和G12C/Y96D的表現賦予了對化合物A的抗性（所有的GI ₅₀＞ 1 mM）。

令人驚訝的是，儘管化合物A不直接與組胺酸95相互作用，但與H95R或Q相比，G12C/H95D的表現導致對化合物A的敏感性降低（GI ₅₀= 0.612 ± 0.151 mM）。化合物A處理後pERK的西方墨點法分析以及生物物理環境中化合物A朝著該等臨床觀察到的SWII袋突變的速率常數分析（ 生物物理數據，上文）都與細胞生長抑制數據一致（參見表）。

H95D與H95R或Q之間的差異可能是由於天冬胺酸的負電荷，其能進一步增加KRAS G12C表面的負靜電電位。這可能影響配體識別並且因此降低化合物A對該突變體的特異反應性和細胞活性。另一個可能的解釋係，H95D突變可能影響KRAS的動力學，從而使得允許化合物A結合的構象變得更難獲得。

總之，數據顯示，在G12C/Q95R或G12C/H95Q情況下，化合物A應克服阿達格拉西布誘導的抗性。化合物A治療（特別是在本發明之組合中）在其已顯示出活性的G12C/H95Q情況下可能仍然有用。實例13：化合物A在帶有KRAS G12C突變的晚期實性瘤患者中的研究

進行了一項研究以評估化合物A單一藥劑、化合物A與TNO155的組合、化合物A與PD1抑制劑（如斯巴達珠單抗或替雷利珠單抗）的組合、以及化合物A與TNO155和PD1抑制劑（如斯巴達珠單抗或替雷利珠單抗）的組合之安全性和耐受性並確定未來研究的最大耐受劑量和/或推薦劑量和方案。進行該研究亦為為了評估研究治療的抗腫瘤活性，並評估斯巴達珠單抗或替雷利珠單抗當與化合物A和/或TNO155組合給藥時的免疫原性。

該研究在帶有KRAS G12C突變的晚期實性瘤成年患者中進行。在擴展階段，將招募帶有KRAS G12C突變且處於二線或三線治療環境的晚期（轉移性或不可切除性）非小細胞肺癌患者。其他具有KRAS G12C突變並且標準護理療法（即基於氟嘧啶、奧沙利鉑和/或伊立替康的化學療法）失敗的晚期大腸直腸癌患者群體也將被招募進化合物A單一藥劑和化合物A加TNO155擴展組中。

化合物A以21天週期，QD或BID連續口服（p.o）投與。在本發明之實施方式中，以範圍從200至1600 mg/天，例如從400至1600 m/天的治療有效劑量投與化合物A或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物或水合物，化合物A或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物或水合物。例如，化合物A的每日總劑量可選自200、300、400、600、800、1000、1200和1600 mg。化合物A的每日總劑量可以按QD（每日一次）或BID（每日兩次）方案連續投與。

可以以100 mg至400 mg，例如200至200 mg的每日總劑量投與化合物A。特別地，可以以400 mg的每日總劑量投與，每日投與一次或每日投與兩次。還可以以200 mg的每日總劑量投與，每日投與一次或每日投與兩次。

還可以以600 mg的每日總劑量投與，每日投與一次或每日投與兩次。

按2週投與/1週停用時間表或連續地，QD或BID，p.o.投與TNO155。

可以以範圍從10至80 mg、或從10至60 mg的每日總劑量投與TNO155。例如，TNO155的每日總劑量可選自10、15、20、30、40、60和80 mg。例如，TNO可以以10、15、20或30 mg的每日總劑量給藥。

TNO155的每日總劑量可以按QD（每日一次）或BID（每日兩次），2週投與/1週停用時間表QD或BID連續投與。TNO155的每日總劑量可以按QD（每日一次）或BID（每日兩次），連續（即無藥物假期）QD或BID連續投與。

例如，可以連續或按藥物假期時間表（如2週投與/1週停用時間表），以20 mg的每日總劑量投與TNO155，每日投與一次或每日投與兩次。

如果將斯巴達珠單抗用作PD1-抑制劑，則按21天週期，以約300 mg的劑量每3週一次、或約400 mg的劑量每4週一次靜脈內投與。

如果將替雷利珠單抗用作PD1-抑制劑，則按21天週期，以約200 mg的劑量每3週一次、或約300 mg的劑量每4週一次靜脈內投與。

也可以使用說明書中描述的其他劑量和給藥方案。

本發明之治療方法的療效可藉由本領域所熟知的方法確定，例如根據RECIST v.1.1確定最佳總體響應（BOR）、總體響應率（ORR）、響應持續時間（DOR）、疾病控制率（DCR）、無進展生存期（PFS）和總生存期（OS）。

關鍵納入標準	劑量遞增：• 患有晚期（轉移性或不可切除性） KRAS G12C突變型實性瘤的患者，該等患者已經接受了標準護理療法但失敗了或對於批准的療法不能耐受或不適合。劑量擴展：• 晚期（轉移性或不可切除性） KRAS G12C突變型非小細胞肺癌患者，該等患者處於二線或三線治療環境，已經接受了基於鉑的化學療法方案和免疫檢查點抑制劑療法但失敗了，除非患者拒絕或沒有資格接受此療法 • 晚期（轉移性或不可切除性） KRAS G12C突變型大腸直腸癌患者，該等患者已經接受了標準護理療法（包括基於氟嘧啶、奧沙利鉑、和/或伊立替康的化學療法）但失敗了，除非患者拒絕或沒有資格接受此療法。全部患者：• 0或1的ECOG體能狀態。 • 患者必須具有適合生檢的疾病部位，並且根據機構自己的準則和此類程序的要求係腫瘤生檢的候選者。
關鍵排除標準	• 具有批准療法的帶有驅動突變的腫瘤，或具有已知激活的 KRAS 、 NRAS 、 HRAS 、 BRAF 、或 PTPN11 （ SHP2 ）突變（除 KRAS G12C突變外）的腫瘤。 • 對於單一藥劑劑量遞增臂中的患者和所有劑量擴展的患者，將排除之前用KRAS G12C抑制劑治療的。 • 在化合物A單一藥劑和化合物 A加TNO155擴展組中，對於納入到劑量擴展部分的NSCLC患者，不允許之前用SHP2抑制劑治療。 • 活動性腦轉移，即有症狀的腦轉移或已知的軟腦膜疾病 • 篩查時臨床上顯著的心臟病或風險因子 • 在篩選時，不足的骨髓、肝或腎功能：
療效評估	根據RECIST v.1.1的最佳總體響應（BOR）、總體響應率（ORR）、響應持續時間（DOR）、疾病控制率（DCR）、無進展生存期（PFS）和總生存期（OS）

臨床試驗在進行中。基於初步數據，化合物A治療已顯示出可接受的安全性和耐受性特徵，並已顯示出臨床療效的早期跡象。實例14：化合物A作為單一療法在患有局部晚期或轉移性KRAS G12C突變型非小細胞肺癌的參與者中的臨床研究

進行了一項開放標籤研究，該研究被設計為在患有帶有KRAS G12C突變的晚期非小細胞肺癌（NSCLC）的參與者中比較作為單一療法的化合物A與多西他賽，該等參與者先前已用基於鉑的化學療法和免疫檢查點抑制劑療法順序或組合治療。

該研究由2個部分組成： - 隨機部分將評估與多西他賽相比化合物A作為單一療法之療效和安全性。 - 擴展部分將在最終無進展生存期（PFS）分析後開放（如果主要終點達到統計學意義），以允許隨機接受多西他賽治療的參與者交叉接受化合物A治療。

研究群體包括患有局部晚期或轉移性（IIIB/IIIC或IV期）KRAS G12C突變型非小細胞肺癌的成年參與者，該等參與者之前接受過順序或作為組合療法投與的基於鉑的化學療法和免疫檢查點抑制劑療法。

根據護理標準和產品標籤，按照當地準則用化合物A或多西他賽對參與者進行治療（多西他賽濃縮溶液用於輸注，靜脈內投與）主要結果量度包括：無進展生存期（PFS）

PFS係從隨機化/治療開始的日期到定義為首次記錄的進展或因任何原因死亡的事件的日期的時間。PFS基於中心評估並使用RECIST 1.1標準。次要結果量度包括： • 總生存期（OS） • OS被定義為從隨機化日期到因任何原因死亡的日期的時間 • 總體響應率（ORR） • ORR被定義為根據RECIST 1.1基於中心和當地研究者的評估，具有完全響應（CR）或部分響應（PR）的最佳總體響應的患者比例。 • 疾病控制率（DCR） • DCR被定義為具有完全響應（CR）、部分響應（PR）、穩定疾病（SD）或非CR/非PD的最佳總體響應（BOR）的參與者比例。 • 響應時間（TTR） • TTR被定義為從隨機化的日期到首次記錄的響應（CR或PR，必須隨後確認）日期的時間 • 響應持續時間（DOR） • DOR計算為從首次記錄的響應（完全響應（CR）或部分響應（PR））日期到首次記錄的進展或因潛在癌症死亡的日期的時間。 • 下一線療法後的無進展生存期（PFS2） • PFS2（基於當地研究者評估）被定義為從隨機化日期到下一線療法中首次記錄的進展或因任何原因死亡（以先發生者為準）的時間。 • 血漿中化合物A及其代謝物之濃度 • 表徵化合物A及其代謝物HZC320之藥物動力學 • 東部腫瘤協作組（Eastern Cooperative Group of Oncology Group，ECOG）體能狀態確定性惡化的時間 • 東部腫瘤協作組（ECOG）體能狀態（PS）的惡化 • 根據QLQ-LC13，胸痛、咳嗽和呼吸困難的確定性10分惡化症狀評分的時間 • EORTC QLQ LC13係一個13個項目的肺癌專用問卷模組，並且其包括對肺癌相關症狀（即咳嗽、咯血、呼吸困難和疼痛）以及常規化學療法和放射療法的副作用（即脫髮、神經病變、口瘡和吞咽困難）的多項目和單項目測量。確定性10分惡化的時間被定義為從隨機化日期到事件發生日期的時間，該事件定義為從基線增加至少10分的絕對值（惡化），以後沒有低於閾值的變化或任何原因導致的死亡 • 根據QLQ-C30，整體健康狀況/QoL確定性惡化、呼吸急促和疼痛的時間 • EORTC QLQ-C30係為評估癌症參與者的健康相關生活質量而開發的問卷。該問卷含有30個項目，並且由多項目量表和單項目測量（基於過去一週的參與者經歷）組成。其中包括五個領域（身體、角色、情緒、認知和社會功能），三個症狀量表（疲勞、噁心/嘔吐和疼痛），六個單項（呼吸困難、失眠、食欲不振、便秘、腹瀉和財務影響）和一個整體健康狀況/HRQoL量表。確定性10點惡化的時間被定義為從隨機化日期到事件發生日期的時間，該事件定義為從相應量表評分的基線增加至少10分絕對值（惡化），以後沒有低於閾值的變化或任何原因導致的死亡 • EORTC-QLQ-C30從基線的變化 • EORTC QLQ-C30係為評估癌症參與者的健康相關生活質量而開發的問卷。該問卷含有30個項目，並且由多項目量表和單項目測量（基於過去一週的參與者經歷）組成。其中包括五個領域（身體、角色、情緒、認知和社會功能），三個症狀量表（疲勞、噁心/嘔吐和疼痛），六個單項（呼吸困難、失眠、食欲不振、便秘、腹瀉和財務影響）和一個整體健康狀況/HRQoL量表。分數越高表示症狀存在程度越高。 • EORTC-QLQ-LC13從基線的變化 o EORTC QLQ LC13係一個13個項目的肺癌專用問卷模組，並且其包括對肺癌相關症狀（即咳嗽、咯血、呼吸困難和疼痛）以及常規化學療法和放射療法的副作用（即脫髮、神經病變、口瘡和吞咽困難）的多項目和單項目測量。分數越高表示症狀存在程度越高。 • EORTC-EQ-5D-5L從基線的變化 o EQ-5D-5L係用於描述和評價健康的通用工具。它基於描述系統，該系統從5個維度定義健康：行動能力、自我照顧能力、日常活動、疼痛/不適、和焦慮/抑鬱。 • NSCLC-SAQ從基線的變化 o 非小細胞肺癌症狀評估問卷（NSCLC-SAQ）係一個7個項目的患者報告的結果測量，其評估患者報告的與晚期NSCLC有關的症狀。它含有被確定為NSCLC症狀的五個領域和伴隨項目：咳嗽（1項）、疼痛（2項）、呼吸困難（1項）、疲勞（2項）和食欲（1項）。 • 基於血漿中KRAS G12C突變狀態的PFS • 基於血漿中KRAS G12C突變狀態，比較化合物A相對於多西他賽的臨床結果 • 基於血漿中KRAS G12C突變狀態的OS。 • 基於血漿中KRAS G12C突變狀態，比較化合物A相對於多西他賽的臨床結果 • 基於血漿中KRAS G12C突變狀態的ORR。 • 基於血漿中KRAS G12C突變狀態，比較化合物A相對於多西他賽的臨床結果排除標準： • 先前已接受多西他賽、KRAS G12C抑制劑或任何其他全身性療法（而不是一種基於鉑的化學療法和一種在先的免疫檢查點抑制劑）治療局部晚期或轉移性NSCLC的參與者 • 藉由當地實驗室測試發現具有EGFR致敏突變和/或ALK重排的參與者 • 參與者患有已知的活動性中樞神經系統（CNS）轉移和/或癌變性腦膜炎 • 參與者具有間質性肺病或肺炎＞ 1級的病史。

可以應用其他納入/排除標準。實例15：使用KRAS G12C抑制劑（如化合物A）的臨床試驗

也可以根據本文所述之方法和如上所述之臨床試驗對KRASG12C抑制劑（如化合物A）進行研究。

例如，可以用化合物A與PD1抑制劑（如替雷利珠單抗）的組合或用派姆單抗與標準化學療法的組合治療患有帶有KRASG12C突變的局部晚期或轉移性NSCLC的未進行治療的成人患者。

在另一個實例中，可以用化合物A與PD1抑制劑（如替雷利珠單抗）的組合或派姆單抗與標準化學療法的組合治療患有帶有KRASG12C突變的局部晚期或轉移性NSCLC的未進行治療的成人患者。

本發明之治療組合和方法的療效可藉由本領域所熟知的方法確定，例如根據RECIST v.1.1和如本文所述確定最佳總體響應（BOR）、總體響應率（ORR）、響應持續時間（DOR）、疾病控制率（DCR）、無進展生存期（PFS）和總生存期（OS）。

應理解，本文所述之實例和實施方式僅用於舉例說明目的，其各種修飾或改變對於熟悉該項技術者將是明瞭的，並包括在本申請的精神和範圍內和所附申請專利範圍的範圍內。

無

[圖1]：化合物A（JDQ443）和TNO155的組合在KRAS G12C突變型NSCLC細胞系中具有協同作用。用指定細胞系進行細胞活力測定，將該等細胞系用增加濃度的化合物A或TNO155作為單一藥劑及其組合處理7天。矩陣表示與DMSO處理的細胞相比，每個處理的生長抑制百分比。使用經典的協同模型（Loewe、Bliss）對數據進行處理，得出JDQ443/TNO155組合對每個細胞系的協同作用得分：NCI-H2122：16.7；HCC-1171：9.7；NCI-H1373：6.9。

[圖2]：單獨的化合物A以及與TNO155的組合在Lu99 KRAS G12C肺癌小鼠異種移植模型中顯示出抗腫瘤療效。將攜帶LU99腫瘤的裸鼠用TNO155（2週）、化合物A（4週）或其組合（4週）以指定劑量水平和時間表進行口服治療。將媒介物組治療9天。在第28天停止所有治療（圖2中的垂直虛線）。腫瘤和體重再監測5天。C.使用Mann-Whitney檢驗，在治療的第28天，**p ＜ 0.01，在第33天，即治療停止後5天，*p ＜ 0.05。

[圖3]：化合物A與TNO155的組合在連續投與TNO155（圖3中縮寫為「cont.」）時和投與兩週和停藥一週TNO時均有效。

[圖4]：化合物A與TNO155的組合在CRC異種移植模型中的療效。

[圖5]：連續化合物A治療在小鼠模型中的抗腫瘤活性。將攜帶MIA PaCa-2 （ A ）和NCI-H2122 （ B ）腫瘤的裸鼠用化合物A以指定劑量水平和時間表口服治療3週。使用單因素方差分析（Dunnett事後），相對於媒介物， *p ＜ 0.05。

[圖6]：化合物A對KRAS G12C H95Q（在臨床試驗中介導對阿達格拉西布抗性的雙突變體）的有效抑制。

[圖7]：化合物A（JDQ443）、索托拉西布（AMG510）和阿達格拉西布（MRTX-849）對KRAS G12C/H95雙突變體增殖的影響。用指定的化合物濃度處理表現指定FLAG-KRAS ^G12C單突變體或雙突變體的Ba/F3細胞3天，並藉由Cell titer glo活力測定評估增殖抑制。y軸顯示經處理細胞相對於處理3天的生長%，x軸顯示KRASG12C抑制劑的對數濃度（μM）。

[圖8]：ERK磷酸化的西方墨點法分析，以評估化合物A（JDQ443）、索托拉西布（AMG510）和阿達格拉西布（MRTX-849）對KRAS G12C/H95雙突變體傳訊的影響。用指定的化合物濃度處理表現指定的FLAG-KRAS ^G12C單突變體或雙突變體的Ba/F3細胞30 min，並藉由西方墨點法探測細胞裂解物的pERK減少來評估MAPK途徑的抑制。

[圖9A]：使用不同給藥時間表的攜帶MIA PaCa-2腫瘤的裸鼠的抗腫瘤活性。將攜帶MIA PaCa-2、NCI-H2122和LU99腫瘤的裸鼠用化合物A（JDQ443）以指定劑量水平和時間表進行口服治療。使用單因素方差分析（Dunnett事後），相對於媒介物， *p ＜ 0.05。

[圖9B]：將攜帶MIA PaCa-2腫瘤的裸鼠用化合物A（JDQ443）以指定劑量水平和時間表進行口服治療。使用單因素方差分析（Dunnett事後），相對於媒介物， *p ＜ 0.05。發現與每三天（q3d）給予相同劑量或90 mg/kg q3d的相同每日總劑量相比，以每日時間表給予30 mg/kg劑量導致更好的腫瘤生長抑制。

[圖10A-圖10F]：化合物A與TNO155的組合改善了化合物A之單一藥劑活性，而用較低劑量的任一藥物均可維持療效。

[圖11]：療效與目標佔有率相關。JDQ443顯示持續的體內目標佔有率，並且在攜帶KRAS G12C突變型腫瘤異種移植的小鼠中具有劑量依賴性的抗腫瘤活性。將TNO155添加至化合物A中，以化合物A單一藥劑之三分之一的量達到類似的目標佔有率。

[圖12]：化合物A利用與KRAS ^G12C蛋白的獨特相互作用以新穎的結合模式在開關II環下結合。

無


          <![CDATA[<110>  瑞士商諾華公司（NOVARTIS AG）]]>
          <![CDATA[<120>  包含KRAS G12C抑制劑的藥物組合以及KRAS G12C抑制劑用於治療癌症之用途]]>
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          Asn 
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          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成多肽]]>
          <![CDATA[<400>  505]]>
          Tyr Pro Gly Thr Gly Gly 
          1               5       
          <![CDATA[<210>  506]]>
          <![CDATA[<211>  117]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成多肽]]>
          <![CDATA[<400>  506]]>
          Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Thr Tyr 
                      20                  25                  30          
          Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Thr Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Asn Ile Tyr Pro Gly Thr Gly Gly Ser Asn Phe Asp Glu Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Lys Asn Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Thr Arg Trp Thr Thr Gly Thr Gly Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr 
                      100                 105                 110         
          Val Thr Val Ser Ser 
                  115         
          <![CDATA[<210>  507]]>
          <![CDATA[<211>  351]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成多核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  507]]>
          gaggtgcagc tggtgcagtc aggcgccgaa gtgaagaagc ccggcgagtc actgagaatt       60
          agctgtaaag gttcaggcta caccttcact acctactgga tgcactgggt ccgccaggct      120
          accggtcaag gcctcgagtg gatgggtaat atctaccccg gcaccggcgg ctctaacttc      180
          gacgagaagt ttaagaatag agtgactatc accgccgata agtctactag caccgcctat      240
          atggaactgt ctagcctgag atcagaggac accgccgtct actactgcac taggtggact      300
          accggcacag gcgcctactg gggtcaaggc actaccgtga ccgtgtctag c               351
          <![CDATA[<210>  508]]>
          <![CDATA[<211>  443]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成多肽]]>
          <![CDATA[<400>  508]]>
          Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Thr Tyr 
                      20                  25                  30          
          Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Thr Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Asn Ile Tyr Pro Gly Thr Gly Gly Ser Asn Phe Asp Glu Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Lys Asn Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Thr Arg Trp Thr Thr Gly Thr Gly Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr 
                      100                 105                 110         
          Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu 
                  115                 120                 125             
          Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys 
              130                 135                 140                 
          Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser 
          145                 150                 155                 160 
          Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser 
                          165                 170                 175     
          Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser 
                      180                 185                 190         
          Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn 
                  195                 200                 205             
          Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro 
              210                 215                 220                 
          Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe 
          225                 230                 235                 240 
          Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val 
                          245                 250                 255     
          Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe 
                      260                 265                 270         
          Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro 
                  275                 280                 285             
          Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr 
              290                 295                 300                 
          Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val 
          305                 310                 315                 320 
          Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala 
                          325                 330                 335     
          Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln 
                      340                 345                 350         
          Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly 
                  355                 360                 365             
          Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro 
              370                 375                 380                 
          Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser 
          385                 390                 395                 400 
          Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu 
                          405                 410                 415     
          Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His 
                      420                 425                 430         
          Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly 
                  435                 440             
          <![CDATA[<210>  509]]>
          <![CDATA[<211>  1329]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成多核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  509]]>
          gaggtgcagc tggtgcagtc aggcgccgaa gtgaagaagc ccggcgagtc actgagaatt       60
          agctgtaaag gttcaggcta caccttcact acctactgga tgcactgggt ccgccaggct      120
          accggtcaag gcctcgagtg gatgggtaat atctaccccg gcaccggcgg ctctaacttc      180
          gacgagaagt ttaagaatag agtgactatc accgccgata agtctactag caccgcctat      240
          atggaactgt ctagcctgag atcagaggac accgccgtct actactgcac taggtggact      300
          accggcacag gcgcctactg gggtcaaggc actaccgtga ccgtgtctag cgctagcact      360
          aagggcccgt ccgtgttccc cctggcacct tgtagccgga gcactagcga atccaccgct      420
          gccctcggct gcctggtcaa ggattacttc ccggagcccg tgaccgtgtc ctggaacagc      480
          ggagccctga cctccggagt gcacaccttc cccgctgtgc tgcagagctc cgggctgtac      540
          tcgctgtcgt cggtggtcac ggtgccttca tctagcctgg gtaccaagac ctacacttgc      600
          aacgtggacc acaagccttc caacactaag gtggacaagc gcgtcgaatc gaagtacggc      660
          ccaccgtgcc cgccttgtcc cgcgccggag ttcctcggcg gtccctcggt ctttctgttc      720
          ccaccgaagc ccaaggacac tttgatgatt tcccgcaccc ctgaagtgac atgcgtggtc      780
          gtggacgtgt cacaggaaga tccggaggtg cagttcaatt ggtacgtgga tggcgtcgag      840
          gtgcacaacg ccaaaaccaa gccgagggag gagcagttca actccactta ccgcgtcgtg      900
          tccgtgctga cggtgctgca tcaggactgg ctgaacggga aggagtacaa gtgcaaagtg      960
          tccaacaagg gacttcctag ctcaatcgaa aagaccatct cgaaagccaa gggacagccc     1020
          cgggaacccc aagtgtatac cctgccaccg agccaggaag aaatgactaa gaaccaagtc     1080
          tcattgactt gccttgtgaa gggcttctac ccatcggata tcgccgtgga atgggagtcc     1140
          aacggccagc cggaaaacaa ctacaagacc acccctccgg tgctggactc agacggatcc     1200
          ttcttcctct actcgcggct gaccgtggat aagagcagat ggcaggaggg aaatgtgttc     1260
          agctgttctg tgatgcatga agccctgcac aaccactaca ctcagaagtc cctgtccctc     1320
          tccctggga                                                             1329
          <![CDATA[<210>  510]]>
          <![CDATA[<211>  17]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成多肽]]>
          <![CDATA[<400>  510]]>
          Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser Gly Asn Gln Lys Asn Phe Leu 
          1               5                   10                  15      
          Thr 
          <![CDATA[<210>  511]]>
          <![CDATA[<211>  7]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成多肽]]>
          <![CDATA[<400>  511]]>
          Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser 
          1               5           
          <![CDATA[<210>  512]]>
          <![CDATA[<211>  9]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成多肽]]>
          <![CDATA[<400>  512]]>
          Gln Asn Asp Tyr Ser Tyr Pro Tyr Thr 
          1               5                   
          <![CDATA[<210>  513]]>
          <![CDATA[<211>  13]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成多肽]]>
          <![CDATA[<400>  513]]>
          Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser Gly Asn Gln Lys Asn Phe 
          1               5                   10              
          <![CDATA[<210>  514]]>
          <![CDATA[<211>  3]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成多肽]]>
          <![CDATA[<400>  514]]>
          Trp Ala Ser 
          1           
          <![CDATA[<210>  515]]>
          <![CDATA[<211>  6]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成多肽]]>
          <![CDATA[<400>  515]]>
          Asp Tyr Ser Tyr Pro Tyr 
          1               5       
          <![CDATA[<210>  516]]>
          <![CDATA[<211>  113]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成多肽]]>
          <![CDATA[<400>  516]]>
          Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 
          1               5                   10                  15      
          Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser 
                      20                  25                  30          
          Gly Asn Gln Lys Asn Phe Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys 
                  35                  40                  45              
          Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 
              50                  55                  60                  
          Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr 
          65                  70                  75                  80  
          Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Asn 
                          85                  90                  95      
          Asp Tyr Ser Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile 
                      100                 105                 110         
          Lys 
          <![CDATA[<210>  517]]>
          <![CDATA[<211>  339]]>
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          Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 
          1               5                   10                  15      
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                      20                  25                  30          
          Gly Asn Gln Lys Asn Phe Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys 
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              50                  55                  60                  
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                          85                  90                  95      
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                      100                 105                 110         
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          Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr 
                      180                 185                 190         
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          Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 
              210                 215                 220 
          <![CDATA[<210>  519]]>
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          gagatcgtcc tgactcagtc acccgctacc ctgagcctga gccctggcga gcgggctaca       60
          ctgagctgta aatctagtca gtcactgctg gatagcggta atcagaagaa cttcctgacc      120
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          Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 
          1               5                   10                  15      
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                          85                  90                  95      
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                      100                 105                 110         
          Lys 
          <![CDATA[<210>  521]]>
          <![CDATA[<211>  339]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
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          gagatcgtcc tgactcagtc acccgctacc ctgagcctga gccctggcga gcgggctaca       60
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          Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 
          1               5                   10                  15      
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          Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 
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          <![CDATA[<212>  DNA]]>
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          <![CDATA[<400>  525]]>
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          <![CDATA[<212>  DNA]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<400>  526]]>
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          aaatctagtc agtcactgct ggatagcggt aatcagaaga acttcctgac c                51
          <![CDATA[<210>  530]]>
          <![CDATA[<211>  21]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成多核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  530]]>
          tgggcctcta ctagagaatc a                                                 21
          <![CDATA[<210>  531]]>
          <![CDATA[<211>  27]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成多核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  531]]>
          cagaacgact atagctaccc ctacacc                                           27
          <![CDATA[<210>  532]]>
          <![CDATA[<211>  39]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成多核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  532]]>
          agtcagtcac tgctggatag cggtaatcag aagaacttc                              39
          <![CDATA[<210>  533]]>
          <![CDATA[<211>  9]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成多核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  533]]>
          tgggcctct                                                                9
          <![CDATA[<210>  534]]>
          <![CDATA[<211>  18]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成多核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  534]]>
          gactatagct acccctac                                                     18
          <![CDATA[<210>  535]]>
          <![CDATA[<400>  535]]>
          000
          <![CDATA[<210>  536]]>
          <![CDATA[<400>  536]]>
          000
          <![CDATA[<210>  537]]>
          <![CDATA[<400>  537]]>
          000
          <![CDATA[<210>  538]]>
          <![CDATA[<400>  538]]>
          000
          <![CDATA[<210>  539]]>
          <![CDATA[<400>  539]]>
          000
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          <![CDATA[<400>  540]]>
          000
          <![CDATA[<210>  541]]>
          <![CDATA[<400>  541]]>
          000
          <![CDATA[<210>  542]]>
          <![CDATA[<211>  11]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成多肽]]>
          <![CDATA[<400>  542]]>
          Lys Ser Ser Glu Ser Val Ser Asn Asp Val Ala 
          1               5                   10      
          <![CDATA[<210>  543]]>
          <![CDATA[<211>  7]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成多肽]]>
          <![CDATA[<400>  543]]>
          Tyr Ala Phe His Arg Phe Thr 
          1               5           
          <![CDATA[<210>  544]]>
          <![CDATA[<211>  9]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成多肽]]>
          <![CDATA[<400>  544]]>
          His Gln Ala Tyr Ser Ser Pro Tyr Thr 
          1               5                   
          <![CDATA[<210>  545]]>
          <![CDATA[<211>  107]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成多肽]]>
          <![CDATA[<400>  545]]>
          Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 
          1               5                   10                  15      
          Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Glu Ser Val Ser Asn Asp 
                      20                  25                  30          
          Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile 
                  35                  40                  45              
          Asn Tyr Ala Phe His Arg Phe Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly 
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Tyr Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ala 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys His Gln Ala Tyr Ser Ser Pro Tyr 
                          85                  90                  95      
          Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 
                      100                 105         
          <![CDATA[<210>  546]]>
          <![CDATA[<211>  214]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成多肽]]>
          <![CDATA[<400>  546]]>
          Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 
          1               5                   10                  15      
          Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Glu Ser Val Ser Asn Asp 
                      20                  25                  30          
          Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile 
                  35                  40                  45              
          Asn Tyr Ala Phe His Arg Phe Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly 
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Tyr Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ala 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys His Gln Ala Tyr Ser Ser Pro Tyr 
                          85                  90                  95      
          Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 
                      100                 105                 110         
          Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 
                  115                 120                 125             
          Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 
              130                 135                 140                 
          Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 
          145                 150                 155                 160 
          Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 
                          165                 170                 175     
          Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 
                      180                 185                 190         
          Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 
                  195                 200                 205             
          Phe Asn Arg Gly Glu Cys 
              210                 
          <![CDATA[<210>  547]]>
          <![CDATA[<211>  10]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成多肽]]>
          <![CDATA[<400>  547]]>
          Gly Phe Ser Leu Thr Ser Tyr Gly Val His 
          1               5                   10  
          <![CDATA[<210>  548]]>
          <![CDATA[<211>  16]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成多肽]]>
          <![CDATA[<400>  548]]>
          Val Ile Tyr Ala Asp Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser 
          1               5                   10                  15      
          <![CDATA[<210>  549]]>
          <![CDATA[<211>  12]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成多肽]]>
          <![CDATA[<400>  549]]>
          Ala Arg Ala Tyr Gly Asn Tyr Trp Tyr Ile Asp Val 
          1               5                   10          
          <![CDATA[<210>  550]]>
          <![CDATA[<211>  118]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成多肽]]>
          <![CDATA[<400>  550]]>
          Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 
          1               5                   10                  15      
          Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Ser Tyr 
                      20                  25                  30          
          Gly Val His Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 
                  35                  40                  45              
          Gly Val Ile Tyr Ala Asp Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 
              50                  55                  60                  
          Ser Arg Val Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val Ser Leu 
          65                  70                  75                  80  
          Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 
                          85                  90                  95      
          Arg Ala Tyr Gly Asn Tyr Trp Tyr Ile Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr 
                      100                 105                 110         
          Thr Val Thr Val Ser Ser 
                  115             
          <![CDATA[<210>  551]]>
          <![CDATA[<211>  445]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成多肽]]>
          <![CDATA[<400>  551]]>
          Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 
          1               5                   10                  15      
          Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Ser Tyr 
                      20                  25                  30          
          Gly Val His Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 
                  35                  40                  45              
          Gly Val Ile Tyr Ala Asp Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 
              50                  55                  60                  
          Ser Arg Val Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val Ser Leu 
          65                  70                  75                  80  
          Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 
                          85                  90                  95      
          Arg Ala Tyr Gly Asn Tyr Trp Tyr Ile Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr 
                      100                 105                 110         
          Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro 
                  115                 120                 125             
          Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly 
              130                 135                 140                 
          Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn 
          145                 150                 155                 160 
          Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln 
                          165                 170                 175     
          Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser 
                      180                 185                 190         
          Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser 
                  195                 200                 205             
          Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys 
              210                 215                 220                 
          Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu 
          225                 230                 235                 240 
          Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu 
                          245                 250                 255     
          Val Thr Cys Val Val Val Ala Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln 
                      260                 265                 270         
          Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys 
                  275                 280                 285             
          Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu 
              290                 295                 300                 
          Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys 
          305                 310                 315                 320 
          Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys 
                          325                 330                 335     
          Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser 
                      340                 345                 350         
          Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys 
                  355                 360                 365             
          Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln 
              370                 375                 380                 
          Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly 
          385                 390                 395                 400 
          Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln 
                          405                 410                 415     
          Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn 
                      420                 425                 430         
          His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 
                  435                 440                 445 
          <![CDATA[<210>  552]]>
          <![CDATA[<211>  41]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成多核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  552]]>
          gtcatttgaa gatatccacc gttatcgcga gcagattaag a                           41
          <![CDATA[<210>  553]]>
          <![CDATA[<211>  41]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成多核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  553]]>
          tcttaatctg ctcgcgataa cggtggatat cttcaaatga c                           41
          <![CDATA[<210>  554]]>
          <![CDATA[<211>  41]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成多核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  554]]>
          tcatttgaag atatccacca gtatcgcgag cagattaaga g                           41
          <![CDATA[<210>  555]]>
          <![CDATA[<211>  41]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成多核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  555]]>
          ctcttaatct gctcgcgata ctggtggata tcttcaaatg a                           41
          <![CDATA[<210>  556]]>
          <![CDATA[<211>  41]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成多核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  556]]>
          agtcatttga agatatccac gattatcgcg agcagattaa g                           41
          <![CDATA[<210>  557]]>
          <![CDATA[<211>  41]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成多核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  557]]>
          cttaatctgc tcgcgataat cgtggatatc ttcaaatgac t                           41
          <![CDATA[<210>  558]]>
          <![CDATA[<211>  39]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成多核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  558]]>
          gaagagtact ccgcaatgag cgatcaatac atgaggacg                              39
          <![CDATA[<210>  559]]>
          <![CDATA[<211>  39]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成多核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  559]]>
          cgtcctcatg tattgatcgc tcattgcgga gtactcttc                              39
          <![CDATA[<210>  560]]>
          <![CDATA[<211>  42]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成多核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  560]]>
          cgaagtcatt tgaagatatc caccattgtc gcgagcagat ta                          42
          <![CDATA[<210>  561]]>
          <![CDATA[<211>  42]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成多核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  561]]>
          taatctgctc gcgacaatgg tggatatctt caaatgactt cg                          42
          <![CDATA[<210>  562]]>
          <![CDATA[<211>  41]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成多核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  562]]>
          cgaagtcatt tgaagatatc caccatgatc gcgagcagat t                           41
          <![CDATA[<210>  563]]>
          <![CDATA[<211>  41]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成多核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  563]]>
          aatctgctcg cgatcatggt ggatatcttc aaatgacttc g                           41

Claims

一種治療有需要的受試者的癌症或腫瘤之方法，其中該方法包括向該受試者投與單獨的治療有效量的1-{6-[(4 M)-4-(5-氯-6-甲基-1 H-吲唑-4-基)-5-甲基-3-(1-甲基-1 H-吲唑-5-基)-1 H-吡唑-1-基]-2-氮雜螺[3.3]庚-2-基}丙-2-烯-1-酮（化合物A）或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物或水合物或與至少一種另外的治療活性劑的組合。
如請求項1所述之方法，其中化合物A與一種另外的治療活性劑一起投與，該治療活性劑係SHP2抑制劑或PD-1抑制劑。
如請求項2所述之方法，其中該另外的治療活性劑係SHP2抑制劑，該SHP2抑制劑選自由以下組成之群組：TNO155、JAB3068、JAB3312、RLY1971、SAR442720、RMC4450、BBP398、BR790、SH3809、PF0724982、ERAS601、RX-SHP2、ICP189、HBI2376、ETS001、TAS-ASTX和X-37-SHP2，或其藥學上可接受的鹽。
如請求項1、2或3所述之方法，其中該另外的治療活性劑係TNO155或其藥學上可接受的鹽。
如請求項1或2所述之方法，其中該另外的治療活性劑係PD-1抑制劑，該PD-1抑制劑選自由以下組成之群組：斯巴達珠單抗、替雷利珠單抗、納武單抗、派姆單抗、匹地利珠單抗、MEDI0680、REGN2810、TSR-042、PF-06801591、BGB-108、INCSHR1210和AMP-224。
如請求項4或5所述之方法，其中該另外的治療活性劑係斯巴達珠單抗或替雷利珠單抗。
如請求項1所述之方法，其中該方法包括向有需要的受試者投與治療有效量的1-{6-[(4 M)-4-(5-氯-6-甲基-1 H-吲唑-4-基)-5-甲基-3-(1-甲基-1 H-吲唑-5-基)-1 H-吡唑-1-基]-2-氮雜螺[3.3]庚-2-基}丙-2-烯-1-酮（化合物A）或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物或水合物與SHP2抑制劑和PD-1抑制劑的組合。
如請求項7所述之方法，其中該SHP2抑制劑選自由以下組成之群組：TNO155、JAB3068、JAB3312、RLY1971、SAR442720、RMC4450、BBP398、BR790、SH3809、PF0724982、ERAS601、RX-SHP2、ICP189、HBI2376、ETS001、TAS-ASTX和X-37-SHP2，或其藥學上可接受的鹽。
如請求項8所述之方法，其中該SHP2抑制劑係TNO155或其藥學上可接受的鹽。
如請求項7或8或9所述之方法，其中該PD-1抑制劑選自由以下組成之群組：斯巴達珠單抗、替雷利珠單抗、納武單抗、派姆單抗、匹地利珠單抗、MEDI0680、REGN2810、TSR-042、PF-06801591、BGB-108、INCSHR1210和AMP-224。
如請求項10所述之方法，其中該PD1-抑制劑係斯巴達珠單抗。
如請求項10所述之方法，其中該PD1-抑制劑係替雷利珠單抗。
如前述請求項中任一項所述之方法，其中該癌症或腫瘤係選自由以下組成之群組的癌症或腫瘤：肺癌（包括肺腺癌、非小細胞肺癌和鱗狀細胞肺癌）、大腸直腸癌（包括結腸直腸腺癌）、胰臟癌（包括胰臟腺癌）、子宮癌（包括子宮內膜癌）、直腸癌（包括直腸腺癌）、闌尾癌、小腸癌、食道癌、肝膽癌（包括肝癌和膽管癌）、膀胱癌、卵巢癌和實性瘤。
如前述請求項中任一項所述之方法，其中該癌症選自肺癌（如非小細胞肺癌）、大腸直腸癌、胰臟癌和實性瘤。
如前述請求項中任一項所述之方法，其中該癌症或腫瘤係KRAS G12C突變型癌症或腫瘤。
如前述請求項中任一項所述之方法，其中同時、分開或經一段時間投與組合療法中的治療劑。
如前述請求項中任一項所述之方法，其中向該有需要的受試者投與的每種治療劑的量對治療該癌症或腫瘤係有效的。
如請求項3、4、8、9、10、13至17中任一項所述之方法，其中該SHP2抑制劑係TNO155或其藥學上可接受的鹽，並且以範圍從10至80 mg或從10至60 mg的每日總劑量口服投與。
如請求項18所述之方法，其中TNO155的每日劑量按2週用藥、隨後1週停藥的21天週期投與。
如請求項5、6、10、12、13至17中任一項所述之方法，其中該PD1抑制劑係PDR001，並且以約300 mg的劑量每3週一次投與。
如請求項5、6、10、11、13至17中任一項所述之方法，其中該PD1抑制劑係PDR001，並且以約400 mg的劑量每4週一次投與。
如請求項5、6、10、12、13至17中任一項所述之方法，其中該PD1抑制劑係替雷利珠單抗，並且以約200 mg的劑量每3週一次投與。
如請求項5、6、10、12、13至17中任一項所述之方法，其中該PD1抑制劑係替雷利珠單抗，並且以約300 mg的劑量每4週一次投與。
如前述請求項中任一項所述之方法，其中以範圍從50 mg至1600 mg/天，例如從200至1600 mg/天，例如從400至1600 mg/天的治療有效劑量投與化合物A或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物或水合物。
如前述請求項中任一項所述之方法，其中以選自50、100、150、200、250、300、350、400、450、500、550和600 mg/天的治療有效劑量投與化合物A或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物或水合物。
如前述請求項中任一項所述之方法，其中化合物A的每日總劑量每日一次或每日兩次投與。
如前述請求項中任一項所述之方法，其中待治療的該受試者或患者選自： - 患有 KRAS G12C突變型實性瘤（例如晚期（轉移性或不可切除性） KRAS G12C突變型實性瘤）的患者，視需要其中該患者已經接受了標準護理療法但失敗了，或者對先前的研究性療法和/或批准的療法不耐受或不適合或具有難治性； - 患有 KRAS G12C突變型NSCLC（例如，晚期（轉移性或不可切除性） KRAS G12C突變型NSCLC）的患者，視需要其中該患者已經接受了組合或順序進行的基於鉑的化學療法方案和免疫檢查點抑制劑療法但失敗了； - 患有 KRAS G12C突變型CRC（例如，晚期（轉移性或不可切除性） KRAS G12C突變型CRC）的患者，視需要其中該患者已經接受了標準護理療法但失敗了，該標準護理療法包括基於氟嘧啶、奧沙利鉑、和/或伊立替康的化學療法；以及 - 患有 KRAS G12C突變型NSCLC（例如，晚期（轉移性或不可切除性） KRAS G12C突變型NSCLC）的患者，視需要其中該患者先前已經用KRAS G12C抑制劑（例如索托拉西布、阿達格拉西布、GDC6036或D-1553）治療； - 患有 KRAS G12C突變型癌症的患者，視需要其中該患者先前已經用另一種KRAS G12C抑制劑（例如索托拉西布、阿達格拉西布、GDC6036或D-1553）治療； - 患有 KRAS G12C突變型癌症的患者，視需要其中該患者先前已經用另一種KRAS G12C抑制劑（例如索托拉西布、阿達格拉西布、GDC6036或D-1553）治療，並且該患者患有選自由以下組成之群組的 KRAS G12C突變型癌症：肺癌（包括肺腺癌、非小細胞肺癌和鱗狀細胞肺癌）、大腸直腸癌（包括結腸直腸腺癌）、胰臟癌（包括胰臟腺癌）、子宮癌（包括子宮內膜癌）、直腸癌（包括直腸腺癌）、闌尾癌、小腸癌、食道癌、肝膽癌（包括肝癌和膽管癌）、膀胱癌、卵巢癌和實性瘤，視需要其中該患者先前已經用KRAS G12C抑制劑（例如索托拉西布、阿達格拉西布、GDC6036或D-1553）治療； - 患有以下的患者：肺癌（包括肺腺癌、非小細胞肺癌和鱗狀細胞肺癌）、大腸直腸癌（包括結腸直腸腺癌）、胰臟癌（包括胰臟腺癌）、子宮癌（包括子宮內膜癌）、直腸癌（包括直腸腺癌）、闌尾癌、小腸癌、食道癌、肝膽癌（包括肝癌和膽管癌）、膀胱癌、卵巢癌和實性瘤； - 患有選自由以下組成之群組的 KRAS G12C突變型癌症的患者：肺癌（包括肺腺癌、非小細胞肺癌和鱗狀細胞肺癌）、大腸直腸癌（包括結腸直腸腺癌）、胰臟癌（包括胰臟腺癌）、子宮癌（包括子宮內膜癌）、直腸癌（包括直腸腺癌）、闌尾癌、小腸癌、食道癌、肝膽癌（包括肝癌和膽管癌）、膀胱癌、卵巢癌和實性瘤，視需要其中該患者先前已經用KRAS G12C抑制劑（例如索托拉西布、阿達格拉西布、GDC6036或D-1553）治療； - 患有以下的患者：肺癌（包括肺腺癌、非小細胞肺癌和鱗狀細胞肺癌）、大腸直腸癌（包括結腸直腸腺癌）、胰臟癌（包括胰臟腺癌）、子宮癌（包括子宮內膜癌）、直腸癌（包括直腸腺癌）、闌尾癌、小腸癌、食道癌、肝膽癌（包括肝癌和膽管癌）、膀胱癌、卵巢癌和實性瘤。
一種藥物組合，該藥物組合包含 (i) 1-{6-[(4 M)-4-(5-氯-6-甲基-1 H-吲唑-4-基)-5-甲基-3-(1-甲基-1 H-吲唑-5-基)-1 H-吡唑-1-基]-2-氮雜螺[3.3]庚-2-基}丙-2-烯-1-酮，其具有結構
（化合物A），或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物或水合物，和SHP2抑制劑，視需要其中該SHP2抑制劑選自TNO155、JAB3068、JAB3312、RLY1971、SAR442720、RMC4450、BBP398、BR790、SH3809、PF0724982、ERAS601、RX-SHP2、ICP189、HBI2376、ETS001、TAS-ASTX和X-37-SHP2，或其藥學上可接受的鹽。
如請求項28所述之藥物組合，其中該SHP2抑制劑係 (3S,4S)-8-(6-胺基-5-((2-胺基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡𠯤-2-基)-3-甲基-2-氧雜-8-氮雜螺[4.5]癸-4-胺（TNO155），其具有結構：
，或其藥學上可接受的鹽。
一種藥物組合，該藥物組合包含： 1-{6-[(4 M)-4-(5-氯-6-甲基-1 H-吲唑-4-基)-5-甲基-3-(1-甲基-1 H-吲唑-5-基)- 1 H-吡唑-1-基]-2-氮雜螺 [3.3] 庚-2-基}丙-2-烯-1-酮（化合物A）或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物或水合物，和 (ii) PD-1抑制劑。
如請求項30所述之藥物組合，其中該PD1-抑制劑係斯巴達珠單抗或替雷利珠單抗。
一種藥物組合，該藥物組合包含 (i) 1-{6-[(4 M)-4-(5-氯-6-甲基-1 H-吲唑-4-基)-5-甲基-3-(1-甲基-1 H-吲唑-5-基)-1 H-吡唑-1-基]-2-氮雜螺[3.3]庚-2-基}丙-2-烯-1-酮（化合物A）或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物或水合物， (ii) SHP2抑制劑以及 (iii) PD-1抑制劑。
如請求項32所述之藥物組合，其中該SHP2抑制劑選自TNO155、JAB3068、JAB3312、RLY1971、SAR442720、RMC4450、BBP398、BR790、SH3809、PF0724982、ERAS601、RX-SHP2、ICP189、HBI2376、ETS001、TAS-ASTX和X-37-SHP2，或其藥學上可接受的鹽。
如請求項32或33所述之藥物組合，其中該PD-1抑制劑選自斯巴達珠單抗、替雷利珠單抗、納武單抗、派姆單抗、匹地利珠單抗、MEDI0680、REGN2810、TSR-042、PF-06801591、BGB-108、INCSHR1210和AMP-224（較佳的是選自斯巴達珠單抗和替雷利珠單抗）。
如請求項28至34中任一項所述之藥物組合，用於在治療癌症或實性瘤之方法中使用，其中該方法係如請求項1至27中任一項所述的。
一種化合物，即1-{6-[(4 M)-4-(5-氯-6-甲基-1 H-吲唑-4-基)-5-甲基-3-(1-甲基-1 H-吲唑-5-基)- 1 H-吡唑-1-基]-2-氮雜螺[3.3]庚-2-基}丙-2-烯-1-酮（化合物A）或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物或水合物，其用於在治療癌症或腫瘤之方法中使用，視需要其中該癌症選自非小細胞肺癌、大腸直腸癌、胰臟癌和實性瘤。
如請求項36所述使用的化合物，其中該化合物與一種或兩種另外的治療活性劑組合投與。
如請求項37所述使用的化合物，其中該一種或兩種另外的治療活性劑選自TNO155或其藥學上可接受的鹽，以及 (iii) PD1-抑制劑，如斯巴達珠單抗或替雷利珠單抗。
如請求項36至38中任一項所述使用的化合物，用於在治療癌症或實性瘤之方法中使用，其中該方法係如請求項1至27中任一項所述的。
一種治療有需要的受試者的癌症或腫瘤之方法，其中該方法包括向該受試者投與單獨的治療有效量的KRASG12C抑制劑或與至少一種另外的治療活性劑的組合，其中該待治療的受試者或患者選自： - 患有 KRAS G12C突變型實性瘤（例如晚期（轉移性或不可切除性） KRAS G12C突變型實性瘤）的患者，視需要其中該患者已經接受了標準護理療法但失敗了，或者對先前的研究性療法和/或批准的療法不耐受或不適合或具有難治性； - 患有 KRAS G12C突變型NSCLC（例如，晚期（轉移性或不可切除性） KRAS G12C突變型NSCLC）的患者，視需要其中該患者已經接受了組合或順序進行的基於鉑的化學療法方案和免疫檢查點抑制劑療法但失敗了； - 患有 KRAS G12C突變型CRC（例如，晚期（轉移性或不可切除性） KRAS G12C突變型CRC）的患者，視需要其中該患者已經接受了標準護理療法但失敗了，該標準護理療法包括基於氟嘧啶、奧沙利鉑、和/或伊立替康的化學療法；以及 - 患有 KRAS G12C突變型NSCLC（例如，晚期（轉移性或不可切除性） KRAS G12C突變型NSCLC）的患者，視需要其中該患者先前已經用KRAS G12C抑制劑（例如索托拉西布、阿達格拉西布、GDC6036或D-1553）治療； - 患有 KRAS G12C突變型癌症的患者，視需要其中該患者先前已經用另一種KRAS G12C抑制劑（例如索托拉西布、阿達格拉西布、GDC6036或D-1553）治療； - 患有 KRAS G12C突變型癌症的患者，視需要其中該患者先前已經用另一種KRAS G12C抑制劑（例如索托拉西布、阿達格拉西布、GDC6036或D-1553）治療，並且該患者患有選自由以下組成之群組的 KRAS G12C突變型癌症：肺癌（包括肺腺癌、非小細胞肺癌和鱗狀細胞肺癌）、大腸直腸癌（包括結腸直腸腺癌）、胰臟癌（包括胰臟腺癌）、子宮癌（包括子宮內膜癌）、直腸癌（包括直腸腺癌）、闌尾癌、小腸癌、食道癌、肝膽癌（包括肝癌和膽管癌）、膀胱癌、卵巢癌和實性瘤，視需要其中該患者先前已經用KRAS G12C抑制劑（例如索托拉西布、阿達格拉西布、GDC6036或D-1553）治療； - 患有以下的患者：肺癌（包括肺腺癌、非小細胞肺癌和鱗狀細胞肺癌）、大腸直腸癌（包括結腸直腸腺癌）、胰臟癌（包括胰臟腺癌）、子宮癌（包括子宮內膜癌）、直腸癌（包括直腸腺癌）、闌尾癌、小腸癌、食道癌、肝膽癌（包括肝癌和膽管癌）、膀胱癌、卵巢癌和實性瘤； - 患有選自由以下組成之群組的 KRAS G12C突變型癌症的患者：肺癌（包括肺腺癌、非小細胞肺癌和鱗狀細胞肺癌）、大腸直腸癌（包括結腸直腸腺癌）、胰臟癌（包括胰臟腺癌）、子宮癌（包括子宮內膜癌）、直腸癌（包括直腸腺癌）、闌尾癌、小腸癌、食道癌、肝膽癌（包括肝癌和膽管癌）、膀胱癌、卵巢癌和實性瘤，視需要其中該患者先前已經用KRAS G12C抑制劑（例如索托拉西布、阿達格拉西布、GDC6036或D-1553）治療； - 患有以下的患者：肺癌（包括肺腺癌、非小細胞肺癌和鱗狀細胞肺癌）、大腸直腸癌（包括結腸直腸腺癌）、胰臟癌（包括胰臟腺癌）、子宮癌（包括子宮內膜癌）、直腸癌（包括直腸腺癌）、闌尾癌、小腸癌、食道癌、肝膽癌（包括肝癌和膽管癌）、膀胱癌、卵巢癌和實性瘤； - 患有帶有KRASG12C突變的局部晚期或轉移性NSCLC的未進行治療的患者。
如請求項40所述之方法，其中該至少另外的治療活性劑選自SHP2抑制劑（如TNO 155）和PD1-抑制劑（如替雷利珠單抗）。