CN117529314A - 包含kras g12c抑制剂的药物组合及其用于治疗癌症的用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及药物组合，其包含KRAS G12C抑制剂和一种或多种选自以下的治疗剂：靶向MARK通路的药剂或靶向并行通路的药剂；以及包含该药物组合的药物组合物。本发明还涉及单独KRAS G12C抑制剂或所述组合用于在治疗癌症或肿瘤的方法中使用，特别地其中该癌症或肿瘤是KRAS G12C突变型。

Description

包含KRAS G12C抑制剂的药物组合及其用于治疗癌症的用途

序列表

本申请包含以ASCII格式电子提交的序列表。所述ASCII副本创建于2022年6月22日，命名为PAT059141-WO-PCT SQL_ST25，大小为2,471字节，与本申请一同提交并通过引用并入本文。

技术领域

本发明涉及KRAS G12C抑制剂及其与一种或两种另外的治疗活性剂组合用于治疗癌症，特别地KRAS G12C突变型癌症(例如，肺癌、非小细胞肺癌、结直肠癌、胰腺癌或实体瘤)的用途。本发明涉及药物组合，其包含(i)KRAS G12C抑制剂，如化合物A或其药学上可接受的盐，以及第二治疗剂，该第二治疗剂选自靶向MAPK通路或并行通路(如PI3K/AKT通路)的药剂。第二治疗剂可以选自EGFR抑制剂、SOS抑制剂、SHP2抑制剂(如TNO155或其药学上可接受的盐)、Raf抑制剂、ERK抑制剂、MEK抑制剂、AKT抑制剂、PI3K抑制剂、mTOR抑制剂、CDK4/6抑制剂、FGFR抑制剂及其组合。本发明还涉及三重组合，该三重组合包含：KRAS G12C抑制剂，如化合物A或其药学上可接受的盐；和为SHP2抑制剂的第二治疗剂(如TNO155或其药学上可接受的盐)；以及第三治疗剂，任选地其中该第三治疗剂可以选自EGFR抑制剂、SOS抑制剂、Raf抑制剂、ERK抑制剂、MEK抑制剂、AKT抑制剂、PI3K抑制剂、mTOR抑制剂、CDK4/6抑制剂和FGFR抑制剂。

本发明还涉及包含该组合的药物组合物；以及使用此类组合和组合物治疗或预防癌症或实体瘤，特别地KRAS G12C突变型癌症或KRAS G12C实体瘤的方法。

背景技术

癌症的生长是由多种多样复杂的机制驱动的。一些癌症不可避免地会对给定疗法产生抗性。抑制MAPK通路诱导了反馈机制和通路重新布线，导致其在随后重新激活。例如，一种常见机制是激活受体酪氨酸激酶(RTK)。

另外，尽管靶向疗法和免疫疗法最近取得了成功，但一些癌症，特别是转移性癌症，在很大程度上仍然无法治愈。

KRAS癌蛋白是具有作为细胞内信号传导通路(如MAPK、PI3K和Ral通路)调节剂的至关重要角色的GTP酶，这些信号传导通路涉及增殖、细胞生存和肿瘤发生。KRAS的致癌基因激活主要通过密码子12的错义突变发生。在大约30％的所有人类癌症中均发现了KRAS功能获得性突变。KRAS G12C突变是特异的亚突变，盛行于大约13％的肺腺癌、4％(3％-5％)的结肠腺癌和更小部分的其他癌症类型。

在正常细胞中，KRAS在无活性GDP束缚态与活性GTP束缚态之间交替。密码子12处KRAS的突变(如G12C)损害GTP酶活化蛋白(GAP)刺激的GTP水解。因此在这种情况下，KRASG12C从GTP到GDP形式的转化会非常缓慢。结果KRAS G12C转变成活性GTP束缚态，因此驱动致癌基因信号传导。

CDKN2A，也称为细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂2A，是编码INK4家族成员p16(或p16INK4a)和p14arf的基因，这些成员通过调节细胞周期充当肿瘤抑制因子。p16抑制细胞周期蛋白依赖性激酶4和6(CDK4和CDK6)，从而激活视网膜母细胞瘤(Rb)蛋白家族，这些蛋白阻断从G1期到S期的传递。p14ARF(在小鼠中称为p19ARF)激活p53肿瘤抑制因子。CDKN2A被认为是继p53之后在癌症中第二常见的失活基因。

CDKN2A突变已在以下癌症中均有描述，如黑色素瘤、胃淋巴瘤、伯基特氏淋巴瘤、头颈部鳞状细胞癌、口腔癌、胰腺癌、非小细胞肺癌、食道鳞状细胞癌、胃癌、结直肠癌、上皮性卵巢癌和前列腺癌。

PIK3CA基因(磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸3-激酶催化亚基α)是编码p110的基因，p110参与细胞的增殖、生长、分化、运动和生存。PIK3CA基因突变以更高的速率产生异常p110蛋白。在乳腺癌、卵巢癌、肺癌、胃部癌症、胃癌和脑癌中均已发现PIK3CA基因突变。

肺癌仍然是全世界最常见的癌症类型并且是包括美国在内的许多国家癌症死亡的主要原因。NSCLC占所有肺癌诊断的约85％。在大约25％的肺腺癌患者中检测到KRAS突变(Sequist等人2011)。它们最常见于密码子12处，其中KRAS G12C突变在腺癌和鳞状NSCLC中都是最常见的(总体上占40％)(Liu等人2020)。KRAS突变的存在预示着较差的生存期并且与对EGFR TKI治疗的反应性降低有关。

KRAS G12C突变型NSCLC患者的标准护理治疗由基于铂的化学疗法和免疫检查点抑制剂组成。索托拉西布(Sotorasib，一种KRAS G12C抑制剂)最近获得了FDA加速批准，用于治疗此适应证和接受过至少一次先前全身性疗法的成人患者，目前正在进行进一步的验证性试验。索托拉西布于2021年5月获得美国FDA(食品和药物管理局)的加速批准，并于2022年1月获得欧盟委员会(EC)的有条件标记授权，用于KRAS G12C突变型局部晚期或转移性非小细胞肺癌(NSCLC)患者。在该患者群体中，在一项126名患者的第2期单臂研究中，索托拉西布的ORR为37％(95％CI 28.6-46.2)，中位DOR为11.1个月，中位PFS为6.8个月，并且中位OS为12.5个月(Skoulidis等人,N Engl J Med[新英格兰医学杂志]；384:2371-81)。另一种KRAS G12C抑制剂阿达格拉西布(adagrasib)也在KRAS G12C突变型恶性肿瘤的临床开发中，在患有NSCLC的患者中初步ORR为45％(Janne等人,2019,于2019年10月28日在AACR-NCI-EORTC国际分子靶标会议(AACR-NCI-EORTC International Conference onMolecular Targets)上发表)。

使用免疫检查点抑制剂的用于NSCLC的免疫疗法已经表明是有前景的，其中一些NSCLC患者经历了持续数年的持久疾病控制。然而，此类长期非进展是不常见的，并且迫切需要可以增加对疗法反应并实现疗法持久缓解的患者比例的治疗策略。

结直肠癌(CRC)是美国第四大最常被诊断的癌症，也是癌症相关死亡的第二大原因。2019年美国新发CRC病例大约为15万例，而2020年欧盟预计有超过30万名患者被诊断为CRC(欧洲癌症信息系统2020)。尽管观察到CRC的总发病率有所改善，但近年来50岁以下患者的发病率增加(Bailey等人2015)，作者估计，到2030年，20-34岁患者中结肠和直肠癌的发病率可能分别增加90％和约124％。转移性CRC的全身性疗法包括单独使用或组合使用的各种药剂，包括化学疗法，如5-氟尿嘧啶/亚叶酸、卡培他滨(capecitabine)、奥沙利铂(oxaliplatin)和伊立替康(irinotecan)；抗血管生成剂，如贝伐单抗(bevacizumab)和雷莫芦单抗(ramucirumab)；抗EGFR剂，包括针对野生型KRAS/NRAS癌症的西妥昔单抗(cetuximab)和帕尼妥木单抗(panitumumab)；以及免疫疗法，包括纳武单抗(nivolumab)和派姆单抗(pembrolizumab)。尽管有多种积极疗法，转移性CRC仍然无法治愈。尽管错配修复(MSI高)缺陷型CRC对免疫检查点抑制剂疗法表现出高反应率，但错配修复熟练型CRC却没有表现出高反应率。KRAS突变型CRC典型地是错配修复熟练型，并且不是抗EGFR疗法的候选者，因此这种CRC亚型尤其需要改善的疗法。

肿瘤特征数据显示，除NSCLC和CRC外，还有一部分实体瘤具有KRAS G12C突变。KRAS G12C存在于大约1％-2％的恶性实体瘤中，包括大约1％的所有胰腺癌(Biernacka等人2016,Zehir等人2017)。在阑尾癌、小肠癌、肝胆癌、膀胱癌、卵巢癌和原发部位不明的癌症中也发现了KRAS G12C突变(Hassar等人,N Engl Med[新英格兰医学杂志]2021 384；2185-187)。

目前有几种靶向疗法正在进行临床测试，旨在通过抑制RAS通路来治疗KRAS突变患者。然而，目前这些疗法对具有KRAS G12C突变的肿瘤的益处仍不确定，因为并非所有患者都有反应，并且在一些情况下，所报告的反应持续时间很短，这可能是由于出现了抗性，该抗性至少部分是由破坏抑制剂结合和下游通路的重新激活的RAS基因突变介导的。

用KRAS G12C抑制剂治疗的大多数患者最终都会对单一药剂疗法产生获得性抗性。例如，在阿达格拉西布研究中纳入的38名患者：27名非小细胞肺癌患者、10名结直肠癌患者和1名阑尾癌患者，在17名患者(占群组的45％)中检测到对阿达格拉西布的推定抗性机制，其中7名(占群组的18％)有多种重合机制。获得性KRAS改变包括G12D/R/V/W、G13D、Q61H、R68S、H95D/Q/R、Y96C和KRASG12C等位基因的高水平扩增。获得性旁路抗性机制包括MET扩增；NRAS、BRAF、MAP2K1、和RET中的激活突变；涉及ALK、RET、BRAF、RAF1、和FGFR3的致癌性融合；以及NF1和PTEN中的功能丧失性突变(Awad等人,Acquired Resistance toKRASG12C Inhibition in Cancer[癌症中对KRASG12C抑制的获得性抗性],N Engl J Med[新英格兰医学杂志]2021；384:2382-93)。Tanaka等人(Cancer Discov[癌症发现]2021；11:1913-22)描述了影响开关-II袋的新型KRAS Y96D突变，阿达格拉西布和其他非活性KRAS G12C抑制剂与该突变结合，干扰了关键的蛋白质-药物相互作用，并在工程化和患者源性KRASG12C癌症模型中赋予这些抑制剂抗性。

因此，需要另外的治疗选择来克服在使用KRAS抑制剂(如阿达格拉西布或索托拉西布)治疗期间出现的抗性机制。

因此，对于患有以下癌症的患者(包括晚期和/或转移性癌症，包括肺癌(包括NSCLC)、结直肠癌、胰腺癌和实体瘤)，尤其是当癌症或实体瘤具有KRAS G12C突变时，新治疗选择的医疗需求仍然是迫切的。还重要的是提供用于不治之症，特别是用于患有KRASG12C突变型肿瘤的患者的潜在有益的新颖疗法，这些患者已接受了针对其适应证的标准护理疗法但失败了，或者对于批准的疗法不耐受或不具有资格，并且因此具有有限的治疗选择。

附图说明

图1至图5是瀑布图，表示KRAS G12C抑制剂单独和与其他药剂组合在CRC和肺癌患者源性异种移植模型中的功效。每个图示出了各单个小鼠模型对特定治疗的反应，表示为(竖直)y轴上的％最佳平均反应(简写为Best Avg.Resp.)。最佳平均反应是最小平均反应(第0天到第X天之间所有时间点的平均体积变化-这类似于曲线下的累积总和或面积。它将反应的速度、强度和持久性合并为单个值)。

图1A和图1B：瀑布图示出了KRAS G12C抑制剂和与靶向MAPK通路的药剂组合在CRC患者源性异种移植模型中的功效，显示为最佳平均反应结果。

图2：瀑布图示出了KRAS G12C抑制剂和与靶向并行通路的药剂组合在CRC患者源性异种移植模型中的功效，显示为最佳平均反应结果。

图3A和图3B：瀑布图示出了包含KRAS G12C抑制剂的三重组合在NSCLC患者源性异种移植模型中的功效，显示为最佳平均反应结果。

图4A和图4B：瀑布图示出了KRAS G12C抑制剂和与靶向MAPK通路的药剂组合在NSCLC患者源性异种移植模型中的功效，显示为最佳平均反应结果。

图5：瀑布图示出了KRAS G12C抑制剂和与靶向并行通路的药剂组合在NSCLC患者源性异种移植模型中的功效，显示为最佳平均反应结果。

图6：蜘蛛图示出了随时间的％肿瘤体积变化。将CRC或肺癌的片段植入小鼠体内，并且当肿瘤达到所需体积时(T＝0，在蜘蛛图的x轴上)，将对照小鼠模型分配到多个组中，并监测肿瘤体积。

蜘蛛图示出了未治疗对照组入组后每个肿瘤模型的随时间的％肿瘤体积变化。将CRC或肺癌的片段植入小鼠体内，并且当肿瘤达到所需体积时(T＝0，在蜘蛛图的x轴上)，将对照小鼠分配作为对照，并监测肿瘤体积。

图7：患者源性NSCLC和CRC异种移植物的卡普兰-梅尔(Kaplan-Meier)肿瘤体积倍增时间图。针对肿瘤体积倍增的时间观察到组合治疗的益处。

图8：化合物A以突变选择性方式强效抑制KRAS G12C细胞信号传导和增殖，并且显示出剂量依赖性抗肿瘤活性，其中功效由每日AUC驱动。

A.六种KRASG12C肿瘤模型中的综合最佳肿瘤生长抑制。在小鼠中的六种人类KRASG12C突变型CDX模型中，口服给药10、30和100mg/kg/天后，评估JDQ443的功效。NSCLC细胞系模型以深灰色描绘，同时PDAC(MIA Paca-2)和食道癌(KYSE-410)细胞系模型以浅灰色示出。数据为来自2-11项独立体内研究的平均值。B-G.以指定剂量和方案口服JDQ443治疗具有KRAS G12C突变型(C-G)和非KRAS G12C突变型(NCI-441，KRASG12V；B)肿瘤的CDX荷瘤小鼠。G.通过使用微型泵进行连续静脉内输注，用JDQ443治疗LU99荷瘤小鼠。H-I.小鼠血液中JDQ443的模拟pop-PKPD指标每日AUC(H)和稳态肿瘤中的平均游离KRASG12C水平(I)与观察到的LU99中的功效相关(T/C或％回归)。基于100次模拟和观察到的功效指标，点对应于模拟PK/PD指标的平均值和误差条±1S.D。

通过单因素ANOVA，与媒介物相比，*p<0.05；与彼此相比，#p<0.05。

图9：化合物A(JDQ443)、索托拉西布(AMG510)和阿达格拉西布(MRTX-849)对KRASG12C/H95双突变体增殖的影响。用指定的化合物浓度处理表达指定FLAG-KRAS^G12C单突变体或双突变体的Ba/F3细胞3天，并通过Cell titer glo活力测定评估增殖抑制。y轴示出经处理细胞相对于第3天处理的％生长，x轴示出KRASG12C抑制剂的对数浓度(μM)。

图10：ERK磷酸化的蛋白质印迹分析，以评估化合物A(JDQ443)、索托拉西布(AMG510)和阿达格拉西布(MRTX-849)对KRAS G12C/H95双突变体信号传导的影响。用指定的化合物浓度处理表达指定FLAG-KRAS^G12C单突变体或双突变体的Ba/F3细胞30min，并通过蛋白质印迹探测细胞裂解物的pERK减少来评估MAPK通路的抑制。图11A和图11B：NCI H23细胞中3天细胞活力测定中获得的协同作用得分(SS)。在KRAS G12C突变型H23细胞系中，在以下项存在的情况下：上游受体激酶抑制剂BGJ398(FGFR抑制剂(图11中标记为“FGFRi”))和厄洛替尼(EGFR抑制剂(图11中标记为“EGFRi”))或曲美替尼(MEK抑制剂(图11中标记为“MEKi”))或PI3K效应子臂抑制剂阿培利司(图11中标记为“PI3Kαi”)和GDC0941(泛PI3K抑制剂(图11中标记为“panPI3Ki”))，以KRAS^G12C抑制剂(图11中标记为“KRAS^G12Ci”)作为单一药剂或与10μM SHP099(SHP2抑制剂(图11中标记为“SHP2i”))组合进行矩阵组合增殖测定(治疗时间3天，细胞滴度发光测定)。协同作用得分(SS)在每个网格顶部表示为“SS”值。网格中的值是生长抑制(％)值：高于100％的值表示细胞死亡。每个网格x轴上的值表示所用KRASG12c抑制剂的浓度(μM)。每个网格y轴上的值示出第二药剂(即分别是FGFR抑制剂、EGFR抑制剂、MEK抑制剂、PI3αK抑制剂和泛PI3K抑制剂)的浓度(μM)。

图12：PI3K+/-CDK4抑制改善了KRASG12C+SHP2组合治疗。化合物A(JDQ443)的双阶和高阶组合改善了LU99肺异种移植物(KRAS G12C、PIK3CAmut、CDKN2Adel)中的单一药剂活性。与用化合物A单一药剂治疗相比，化合物A与SHP2抑制剂、PI3K抑制剂或CDK4/6抑制剂组合使用延迟了进展时间(TTP)。从单一药剂到四重组合，进展时间增加(TTP：单一药剂<双重组合<三重组合<四重组合)。

图13：化合物A(JDQ443)与EGFR抑制剂组合用于NSCLC细胞系和CRC细胞系的剂量反应。

图14：在用KRASG12C抑制剂化合物A(图14中的“NVP-JDQ443”)与SOS1抑制剂BI-3406组合治疗7天后，使用CellTiterGlo评估结直肠癌细胞系和肺癌的体外活力。生长抑制％：0-99＝增殖延迟，100＝生长骤停/停滞，101-200＝细胞数量减少/细胞死亡。

图15：JDQ443 RD 200mg BID的PK和目标占有率曲线。顶部小图示出了稳态下的PK曲线。误差条表示每个时间点的PK曲线的标准偏差。底部小图示出了预测的目标占有率曲线，其中线示出模拟的中位数，并且阴影区域示出5％-95％的预测区间。

图16：顶部小图示出了JDQ443单一疗法在各剂量水平和适应证方面的最佳总体反应。瀑布图：相较于基线肿瘤评估，37名(94.9％)患者具有可得变化；绘制了N＝39名JDQ443单一药剂患者的数据。根据RECIST v1.1，研究者对最佳总体反应进行评估。三名(7.7％)患者有uPR，这有助于ORR(确认和未确认的)。uPR＝未确认的PR待确认，正在进行治疗，无PD。根据方案，四名患者中发生从200mg QD到200mg BID的患者内剂量递增。

底部小图示出了所有患有NSCLC的患者在不同剂量下的最佳总体反应。瀑布图：相较于基线肿瘤评估，19名(95.0％)NSCLC患者具有可得变化；绘制了JDQ443单一药剂群组中N＝20名NSCLC患者的数据。

图17：PET扫描显示，向患有NSCLC的患者施用200mg BID的化合物A治疗四个周期后，肿瘤肿块的2-[氟-18]-氟-2-脱氧-d-葡萄糖(18-F-FDG)亲合力大幅下降。CT：计算机断层扫描；PET，正电子发射断层扫描。箭头指示肿瘤部位。

图18：用化合物A进行组合疗法的连续轴向CT/PET图像和稳态(第1周期第14天)JDQ443 PK暴露。化合物A和SHP2抑制剂的组合是有效的。化合物A和TNO155在患有十二指肠乳头癌的患者中的功效。箭头指示肿瘤部位。

发明内容

本发明为患有癌症(包括晚期和/或转移性癌症)的患者提供了新的治疗选择，并且特别寻求改善患有KRAS G12C驱动的癌症的患者的结果。

本文提供了化合物和化合物的组合，及其在治疗癌症(尤其是当癌症或实体瘤具有KRAS G12C突变时)的方法中的用途，该癌症包括肺癌(包括NSCLC)、结直肠癌、胰腺癌和实体瘤。本发明还提供了用于不治之症，特别是用于患有KRAS G12C突变型肿瘤的患者的潜在有益的新颖疗法，这些患者已接受了针对其适应证的标准护理疗法但失败了，或者对于批准的疗法不耐受或不具有资格，并且因此具有有限的治疗选择。

另外，本发明还提供了单独的或与一种或多种另外的治疗剂组合的化合物A，其用于在治疗对其他疗法产生抗性的癌症患者的方法中使用，这些其他疗法如先前用其他KRAS抑制剂(如阿达格拉西布和索托拉西布)治疗；更优选地先前用索托拉西布治疗。

化合物A是KRAS G12C的选择性共价不可逆抑制剂，利用与KRASG12C的独特相互作用表现出新颖的结合模式。值得注意的是，化合物A将KRAS G12C捕获在GDP结合的非活性状态，同时避免了与H95(公认的抗性途径)直接相互作用(Awad-MM等人,New Engl J Med[新英格兰医学杂志]2021；384:2382-2392)。化合物A强效抑制KRAS G12C H95Q(在临床试验中介导对阿达格拉西布抗性的双突变体)。

化合物A在临床前模型中显示出强效的抗肿瘤活性和有利的药代动力学特性。化合物A是口服生物可利用的，在预测以赋予抗肿瘤活性的范围内实现了暴露，并且耐受性良好。

KontRASt-01研究(NCT04699188)的初步数据(Ib期)表明，化合物A是一种选择性的共价和口服生物可利用的KRASG12C抑制剂，基于患有KRAS G12C突变型实体瘤的患者的初步临床数据，在其推荐剂量下显示出抗肿瘤活性、高全身暴露以及良好的安全性。

KRAS G12C抑制剂被专门设计用于抑制KRAS G12C。然而，许多肿瘤具有KRAS WT、HRAS和NRAS蛋白，这些蛋白不受KRAS G12C抑制剂的抑制。例如，在KRAS G12C抑制剂治疗后，重新激活的RTK可以经由这些蛋白进入MAPK通路，从而抵消抗肿瘤活性。同样，许多RTK和RAS蛋白直接激活并行通路，例如PI3K/AKT通路。

本文中的数据和实例表明，在组合疗法中向KRAS G12C抑制剂添加靶向MAPK通路或并行通路(例如PI3K/AKT通路)的另一种治疗活性剂有潜力增加抗肿瘤反应的深度和持久性。

例如，SHP2抑制剂有潜力与KRAS G12C抑制剂(如化合物A)发挥协同作用。对SHP2的抑制会将KRAS突变型癌症细胞系的生长抑制，这是部分地通过将KRAS库转移到非活性加载GDP的状态。由于化合物A仅与GDP结合的KRASG12C结合，所以鉴于不可逆化合物A结合的靶库增加，预测组合的SHP2和KRASG12C的抑制作用是协同的。

如实例中所见，在细胞活力测定中，在与单独的KRAS G12C抑制剂组合的PI3K抑制剂存在下，或在SHP2抑制剂存在下，获得了最高的协同作用得分。因此，本发明还提供了如本文所述的三重或四重组合。

如实例中所见，化合物A(KRAS G12C抑制剂)在异种移植模型中显示出深部肿瘤，特别是在具有选自KRAS G12C、PIK3CA和CDKN2A的一个或多个突变的癌症异种移植模型中。KRAS G12C抑制剂作为单一药剂的抗肿瘤反应在具有每个所测试的组合配偶体的情况下都得到了改善，其中一些肿瘤甚至在组合治疗的情况下消退。三重组合和四重组合似乎进一步改善了反应。

总之，可以看出，具有其独特的特性、耐受性和安全性的化合物A单独时或与本文所述的一种或多种(例如，一种、两种或三种)治疗剂组合时，可以特别适用于治疗癌症，特别是本文所述的癌症。

特别地，KRAS G12C抑制剂(如化合物A)与MAPK通路的其他抑制剂或PI3K/AKT通路的抑制剂的组合具有进一步增强抗肿瘤反应和克服潜在抗性的潜力。此类组合疗法可用于治疗癌症，特别是由KRAS G12C突变驱动的癌症。第二治疗剂可以选自EGFR抑制剂、SOS抑制剂、SHP2抑制剂(如TNO155或其药学上可接受的盐)、Raf抑制剂、ERK抑制剂、MEK抑制剂、AKT抑制剂、PI3K抑制剂、mTOR抑制剂、CDK4/6抑制剂及其组合。

因此，本发明的组合和方法还可以通过重新激活绕过KRAS G12C以通过WT KRAS、NRAS和/或HRAS发出信号的RTK-MAPK通路，为例如对KRAS G12C抑制剂具有获得性抗性的患者提供临床益处。另外，EGFR的抑制靶向KRAS上游的KRAS信号传导通路，并且可能增强KRASG12C抑制剂(如化合物A)在KRAS G12C突变型癌症中的抗肿瘤活性。待通过本发明的组合和方法治疗的癌症包括具有选自KRAS G12C、PIK3CA和CDKN2A及其组合中的一个、两个或三个突变的癌症或实体瘤；例如，具有KRAS G12C和CDKN2A突变的癌症；以及具有KRAS G12C、PIK3CA和CDKN2A突变的癌症。

因此，本发明还提供了药物组合，其包含KRAS G12C抑制剂(如化合物A或其药学上可接受的盐)，以及至少一种另外的治疗活性剂。另外的治疗活性剂可以是靶向MAPK通路的药剂或靶向并行通路的药剂。

因此，本发明还提供了药物组合，其包含KRAS G12C抑制剂(如化合物A或其药学上可接受的盐)、以及选自由以下组成的组的治疗活性剂：EGFR抑制剂、SOS抑制剂、SHP2抑制剂(如TNO155或其药学上可接受的盐)、Raf抑制剂、ERK抑制剂、MEK抑制剂、AKT抑制剂、PI3K抑制剂、mTOR抑制剂、CDK4/6抑制剂及其组合。

因此，本发明还提供了药物组合，其包含KRAS G12C抑制剂(例如化合物A或其药学上可接受的盐)、SHP2抑制剂(如TNO155或其药学上可接受的盐)以及选自由以下组成的组的另一种治疗活性剂：EGFR抑制剂(如西妥昔单抗、帕尼单抗(panitumab)、阿法替尼(afatinib)、拉帕替尼(lapatinib)、厄洛替尼(erlotinib)、吉非替尼(gefitinib)、奥西美替尼(osimertinib)或纳扎替尼(nazartinib))、SOS抑制剂(如BAY-293、BI-3406或BI-1701963)、Raf抑制剂(如贝伐非尼(belvarafenib)或LXH254(萘普拉非尼(naporafenib)))、ERK抑制剂(如LTT462(里内特基布(rineterkib))、GDC-0994、KO-947、Vtx-11e、SCH-772984、MK2853、LY3214996或乌利替尼(ulixertinib))、MEK抑制剂(如匹玛舍替(pimasertib)、PD-0325901、塞洛美替尼(selumetinib)、曲美替尼(trametinib)、比尼替尼(binimetinib)或钴美替尼(cobimetinib))、AKT抑制剂(如卡帕沙替尼(capivasertib)(AZD5363)或依帕替尼(ipatasertib))、PI3K抑制剂(如AMG 511、布帕昔布(buparlisib)、阿培利司(alpelisib))、mTOR抑制剂(如依维莫司(everolimus)或坦罗莫司(temsirolimus))和CDK4/6抑制剂(如瑞博西尼(ribociclib)、帕博西尼(palbociclib)或阿贝西利(alemaciclib))。

本发明还提供了药物组合，其包含1-{6-[(4M)-4-(5-氯-6-甲基-1H-吲唑-4-基)-5-甲基-3-(1-甲基-1H-吲唑-5-基)-1H-吡唑-1-基]-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-基}丙-2-烯-1-酮，其具有结构

或其药学上可接受的盐，

以及选自以下的第二治疗活性剂：EGFR抑制剂(如西妥昔单抗、帕尼单抗、厄洛替尼、吉非替尼、奥西美替尼或纳扎替尼)、SOS抑制剂(如BAY-293、BI-3406或BI-1701963)、Raf抑制剂(如贝伐非尼或LXH254(萘普拉非尼))、ERK抑制剂(如LTT462(里内特基布)、GDC-0994、KO-947、Vtx-11e、SCH-772984、MK2853、LY3214996或乌利替尼)、MEK抑制剂(如匹玛舍替、PD-0325901、塞洛美替尼、曲美替尼、比尼替尼或钴美替尼)、AKT抑制剂(如卡帕沙替尼(AZD5363)或依帕替尼)、PI3K抑制剂(如AMG 511、布帕昔布、阿培利司)、mTOR抑制剂(如依维莫司或坦罗莫司)和CDK4/6抑制剂(如瑞博西尼、帕博西尼或阿贝西利)。

本发明还提供了药物组合，其包含化合物A或其药学上可接受的盐、以及选自以下的第二治疗活性剂：Raf抑制剂(如贝伐非尼或LXH254(萘普拉非尼))、ERK抑制剂(如LTT462(里内特基布)、GDC-0994、KO-947、Vtx-11e、SCH-772984、MK2853、LY3214996或乌利替尼)、MEK抑制剂(如匹玛舍替、PD-0325901、塞洛美替尼、曲美替尼、比尼替尼或钴美替尼)、PI3K抑制剂(如AMG 511、布帕昔布、阿培利司)、mTOR抑制剂(如依维莫司或坦罗莫司)和CDK4/6抑制剂(如瑞博西尼、帕博西尼或阿贝西利)。

在本发明的实施例中，第二治疗活性剂可以选自FGFR抑制剂，如英非替尼(infigratinib)(BGJ398)、培美加替尼(pemigatinib)、耶尔替尼(erdafitinib)、德拉赞蒂尼(derazantinib)；以及福提巴替尼。本发明还提供了药物组合，其包含(a)化合物A或其药学上可接受的盐，(b)SHP2抑制剂(如TNO 155或其药学上可接受的盐)，以及(c)选自以下的第三治疗活性剂：Raf抑制剂(如贝伐非尼或LXH254(萘普拉非尼))、ERK抑制剂(如LTT462(里内特基布)、GDC-0994、KO-947、Vtx-11e、SCH-772984、MK2853、LY3214996或乌利替尼)、MEK抑制剂(如匹玛舍替、PD-0325901、塞洛美替尼、曲美替尼、比尼替尼或钴美替尼)、PI3K抑制剂(如AMG 511、布帕昔布、阿培利司)、mTOR抑制剂(如依维莫司或坦罗莫司)和CDK4/6抑制剂(如瑞博西尼、帕博西尼或阿贝西利)。

在本发明的实施例中，第三治疗活性剂可以选自FGFR抑制剂，如英非替尼(BGJ398)、培美加替尼、耶尔替尼、德拉赞蒂尼；以及福提巴替尼。

本发明还提供了药物组合，其包含(a)化合物A或其药学上可接受的盐，(b)TNO155或其药学上可接受的盐，以及(c)选自以下的第三治疗活性剂：Raf抑制剂(如贝伐非尼或LXH254(萘普拉非尼))、ERK抑制剂(如LTT462(里内特基布)、GDC-0994、KO-947、Vtx-11e、SCH-772984、MK2853、LY3214996或乌利替尼)、MEK抑制剂(如匹玛舍替、PD-0325901、塞洛美替尼、曲美替尼、比尼替尼或钴美替尼)、PI3K抑制剂(如AMG 511、布帕昔布、阿培利司)、mTOR抑制剂(如依维莫司或坦罗莫司)和CDK4/6抑制剂(如瑞博西尼、帕博西尼或阿贝西利)。

本发明还提供了本发明的组合，其包含化合物A或其药学上可接受的盐，以及选自以下的第二药剂：

(i)LXH254(萘普拉非尼)或其药学上可接受的盐；

(ii)曲美替尼、其药学上可接受的盐或溶剂化物，例如其DMSO溶剂化物；

(iii)LTT462(里内特基布)或其药学上可接受的盐，例如其HCl盐；

(iv)BYL719(阿培利司)或其药学上可接受的盐；

(v)LEE011或其药学上可接受的盐，例如其琥珀酸盐；和

(vi)依维莫司(RAD001)、

或其药学上可接受的盐。

本发明还提供了本发明的组合，其包含(a)化合物A或其药学上可接受的盐，(b)TNO 155或其药学上可接受的盐，以及选自以下的第三药剂：

(i)萘普拉非尼(LXH254)或其药学上可接受的盐；

(ii)曲美替尼、其药学上可接受的盐或溶剂化物，例如其DMSO溶剂化物；

(iii)里内特基布(LTT462)或其药学上可接受的盐，例如其HCl盐；

(iv)阿培利司(BYL719)或其药学上可接受的盐；

(v)瑞博西尼(LEE011)或其药学上可接受的盐，例如其琥珀酸盐；和

(vi)依维莫司(RAD001)、

或其药学上可接受的盐。

应当理解，本文提到的“本发明的组合”或“本发明的一种或多种组合”旨在单独地包括这些药物组合中的每一种并且还旨在包括这些组合中的所有作为一组。

特别地，提到“本发明的组合”旨在包括KRASG12C抑制剂和SHP2抑制剂的组合(例如化合物A和TNO155)；KRASG12C抑制剂和PI3K抑制剂的组合(例如化合物A和阿培利司(BYL719))；KRASG12C抑制剂和CDK4/6抑制剂(例如化合物A和瑞博西尼)。

三重组合也包括在“本发明的组合”的定义中。优选的实施例包括(i)化合物A、TNO155和阿培利司的组合，以及(ii)化合物A、TNO155和瑞博西尼的组合。

本发明提供了这些药物组合，其用于在治疗如本文所述的癌症中使用。

本发明的治疗方法的功效可通过本领域所熟知的方法确定，例如根据RECISTv.1.1确定最佳总体反应(BOR)、总体反应率(ORR)、反应持续时间(DOR)、疾病控制率(DCR)、无进展生存期(PFS)和总生存期(OS)。因此，本发明提供了本发明的药物组合，其改善了KRAS G12C抑制剂疗法，例如，如通过根据RECIST v.1.1得出的最佳总体反应(BOR)、总体反应率(ORR)、反应持续时间(DOR)、疾病控制率(DCR)、无进展生存期(PFS)和总生存期(OS)中一项或多项的增加所衡量的。

在本发明的组合的另一个实施例中，化合物A或其药学上可接受的盐、第二治疗活性剂和第三治疗活性剂(如果存在)是在分开的配制品中。

在另一个实施例中，本发明的组合用于同时或依序(以任何顺序)施用。

在另一个实施例中是用于治疗或预防有需要的受试者的癌症的方法，该方法包括向该受试者施用治疗有效量的本发明的组合。

在本发明的实施例中，待治疗的癌症或肿瘤选自由以下组成的组：肺癌(包括肺腺癌、非小细胞肺癌和鳞状细胞肺癌)、结直肠癌(包括结直肠腺癌)、胰腺癌(包括胰腺腺癌)、子宫癌(包括子宫内膜癌)、直肠癌(包括直肠腺癌)、阑尾癌、小肠癌、食道癌、肝胆癌(包括肝癌和胆管癌)、膀胱癌、卵巢癌和实体瘤，特别地当该癌症或肿瘤具有KRAS G12C突变时。

在本发明的实施例中，待治疗的癌症或肿瘤选自由以下组成的组：肺癌(包括肺腺癌、非小细胞肺癌和鳞状细胞肺癌)、结直肠癌(包括结直肠腺癌)、胰腺癌(包括胰腺腺癌)、子宫癌(包括子宫内膜癌)、直肠癌(包括直肠腺癌)、阑尾癌、小肠癌、食道癌、肝胆癌(包括肝癌、胆管癌症和胆管癌)、膀胱癌、卵巢癌、十二指肠乳头癌和实体瘤，特别地当该癌症或肿瘤具有KRAS G12C突变时。

在本发明的实施例中，待治疗的癌症或肿瘤选自非小细胞肺癌、结直肠癌、胆管癌症、卵巢癌、十二指肠乳头癌和胰腺癌。

原发部位不明但示出KRAS G12C突变的癌症也可以得益于用本发明的方法进行治疗。

在本发明的方法的实施例中，癌症选自非小细胞肺癌、结直肠癌、胰腺癌和实体瘤。

在方法的另外的实施例中，癌症是实体瘤。

在方法的另外的实施例中，癌症是结直肠癌。

在方法的另外的实施例中，癌症是非小细胞肺癌。

在方法的另外的实施例中，癌症是胰腺癌。

在方法的另外的实施例中，癌症是实体瘤。

在方法的另外的实施例中，癌症是阑尾癌。

在方法的另外的实施例中，癌症是小肠癌。

在方法的另外的实施例中，癌症是食道癌。

在方法的另外的实施例中，癌症是肝胆癌。

在方法的另外的实施例中，癌症是膀胱癌。

在方法的另外的实施例中，癌症是卵巢癌。

在方法的另外的实施例中，癌症是胆管癌症。

在方法的另外的实施例中，癌症是十二指肠乳头癌。

在另外的实施例中，本发明提供了用于在制造用于治疗选自以下的癌症的药物中使用的本发明的组合：非小细胞肺癌、结直肠癌、胰腺癌和实体瘤，任选地其中该癌症或实体瘤是KRAS G12C突变型。在另一个实施例中是药物组合物，该药物组合物包含本发明的组合。

在另外的实施例中，药物组合物进一步包含如本文所述的一种或多种药学上可接受的赋形剂。

KRAS G12C抑制剂

可用于本发明的组合和方法的KRAS G12C抑制剂的实例包括化合物A、索托拉西布(美商安进公司(Amgen))、阿达格拉西布(Mirati公司)、D-1553(益方生物(InventisBio))、BI1701963(勃林格公司(Boehringer))、GDC6036(罗氏公司(Roche))、JNJ74699157(J&J公司)、X-Chem KRAS(X-Chem公司)、LY3537982(礼来公司(Lilly))、BI1823911(勃林格公司)、AS KRAS G12C(亚盛药业公司(Ascentage Pharma))、SF KRAS G12C(赛诺菲公司(Sanofi))、RMC032(革命药物公司(Revolution Medicine))、JAB-21822(加科思制药公司(Jacobio Pharmaceuticals))、AST-KRAS G12C(艾力斯制药公司(AllistPharmaceuticals))、AZ KRAS G12C(阿斯利康公司(Astra Zeneca))、NYU-12VC1(纽约大学(New York University))、和RMC6291(革命药物公司)或其药学上可接受的盐。

KRAS G12C抑制剂还包括以下详述的化合物：“KRASG12C抑制剂”是选自详述于以下中的化合物的化合物：WO 2013/155223、WO 2014/143659、WO 2014/152588、WO 2014/160200、WO 2015/054572、WO 2016/044772、WO 2016/049524、WO 2016164675、WO2016168540、WO 2017/058805、WO 2017015562、WO 2017058728、WO 2017058768、WO2017058792、WO 2017058805、WO 2017058807、WO 2017058902、WO 2017058915、WO2017087528、WO 2017100546、WO 2017/201161、WO 2018/064510、WO 2018/068017、WO2018/119183、WO 2018/217651、WO 2018/140512、WO 2018/140513、WO 2018/140514、WO2018/140598、WO 2018/140599、WO 2018/140600、WO 2018/143315、WO 2018/206539、WO2018/218070、WO 2018/218071、WO 2019/051291、WO 2019/099524、WO 2019/110751、WO2019/141250、WO 2019/150305、WO 2019/155399、WO 2019/213516、WO 2019/213526、WO2019/217307和WO 2019/217691。实例为：1-(4-(6-氯-8-氟-7-(3-羟基-5-乙烯基苯基)喹唑啉-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮-甲烷(1/2)(化合物1)；(S)-1-(4-(6-氯-8-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)喹唑啉-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮(化合物2)；和2-((S)-1-丙烯酰基-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(化合物3)。

KRAS G12C抑制剂化合物A

本发明的优选KRAS G12C抑制剂是化合物A，是1-{6-[(4M)-4-(5-氯-6-甲基-1H-吲唑-4-基)-5-甲基-3-(1-甲基-1H-吲唑-5-基)-1H-吡唑-1-基]-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-基}丙-2-烯-1-酮或其药学上可接受的盐。化合物A还被称作“a(R)-1-(6-(4-(5-氯-6-甲基-1H-吲唑-4-基)-5-甲基-3-(1-甲基-1H-吲唑-5-基)-1H-吡唑-1-基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)丙-2-烯-1-酮”。

化合物A的合成在以下实例中或在2021年6月24日公开的PCT申请WO 2021/124222的实例1中描述。2021年12月20日提交的PCT/CN2021/139694中描述了单独的或与另外的治疗剂组合的化合物A的用途。化合物A也称为“JDQ443”或“NVP-JDQ443”。

化合物A的结构如下：

可替代地，化合物A的结构可如下绘制：

化合物A是强效的且选择性的KRAS G12C小分子抑制剂，其可与突变Cys12共价结合，将KRAS G12C捕获在非活性GDP结合状态。与索托拉西布或阿达格拉西布相比，化合物A在结构上是独特的；它的结合模式是一种到达残基C12的新方式，并且与残基H95没有直接相互作用。

临床前数据表明，化合物A与KRAS G12C结合，其中与RAS SWII袋的可逆结合亲和力低，从而抑制下游细胞信号传导和增殖，特别是在KRAS G12C驱动的细胞系中，而不是在KRAS野生型(WT)或MEK Q56P突变细胞系中。化合物A在不同KRAS G12C突变型异种移植模型中表现出深度和持续的目标占有率，从而产生抗肿瘤活性。

SHP2抑制剂

可用于本发明的组合和方法的SHP2抑制剂的实例包括TNO155、JAB3068(加科思公司(Jacobio))、JAB3312(加科思公司)、RLY1971(罗氏公司)、SAR442720(赛诺菲公司)、RMC4450(革命药物公司)、BBP398(Navire公司)、BR790(上海蓝光公司(ShanghaiBlueray))、SH3809(南京圣和公司(Nanjing Sanhome))、PF0724982(辉瑞公司(Pfizer))、ERAS601(Erasca公司)、RX-SHP2(Redx制药公司(Redx Pharma))、ICP189(诺诚健华(InnoCare))、HBI2376(沪亚生物(HUYA Bioscience))、ETS001(上海ETERN生物制药公司(Shanghai ETERN Biopharma))、TAS-ASTX(大鹏制药肿瘤学公司(Taiho Oncology))和X-37-SHP2(X-37)或其药学上可接受的盐。

可用于本发明的组合和方法中，特别是在如本文所述，使用双重组合来治疗癌症的双重组合和方法中的SHP2抑制剂的实例包括JAB3068(加科思公司)、JAB3312(加科思公司)、RLY1971(罗氏公司)、SAR442720(赛诺菲公司)、RMC4450(革命药物公司)、BBP398(Navire公司)、BR790(上海蓝光公司)、SH3809(南京圣和公司)、PF0724982(辉瑞公司)、ERAS601(Erasca公司)、RX-SHP2(Redx制药公司)、ICP189(诺诚健华)、HBI2376(沪亚生物)、ETS001(上海ETERN生物制药公司)、TAS-ASTX(大鹏制药肿瘤学公司)和X-37-SHP2(X-37)。

用于根据本发明使用的、并且尤其是在本发明的三重组合中、以及使用三重组合的方法中使用的特别优选的SHP2抑制剂可以选自：

用于根据本发明使用的、并且尤其是在本发明的三重组合中、以及使用三重组合的方法中使用的特别优选的SHP2抑制剂是(3S,4S)-8-(6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡嗪-2-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-4-胺(TNO155)或其药学上可接受的盐。根据WO 2015/107495的实例69合成TNO155，将该文献通过引用以其全文并入。TNO155的优选的盐是琥珀酸盐。

另外，SHP2抑制剂包括以下中描述的化合物：WO 2015/107493、WO 2015/107494、WO 2015/107495、WO 2016/203406、WO 2016/203404、WO 2016/203405、WO 2017/216706、WO2017/156397、WO 2020/063760、WO 2018/172984、WO 2017/211303、WO 21/061706、WO2019/183367、WO 2019/183364、WO 2019/165073、WO 2019/067843、WO 2018/218133、WO2018/081091、WO 2018/057884、WO 2020/247643、WO 2020/076723、WO 2019/199792、WO2019/118909、WO 2019/075265、WO 2019/051084、WO 2018/136265、WO 2018/136264、WO2018/013597、WO 2020/033828、WO 2019/213318、WO 2019/158019、WO 2021/088945、WO2020/081848、WO 21/018287、WO 2020/094018、WO 2021/033153、WO 2020/022323、WO2020/177653、WO 2021/073439、WO 2020/156243、WO 2020/156242、WO 2020/249079、WO2020/033286、WO 2021/061515、WO 2019/182960、WO 2020/094104、WO 2020/210384、WO2020/181283、WO 2021/043077、WO 2021/028362、WO 2020/259679、WO 2020/108590以及WO2019/051469。

TNO155是含有蛋白酪氨酸磷酸酶-2(SHP2，由PTPN11基因编码)的口服生物可利用的Src同源-2结构域变构抑制剂，该蛋白酪氨酸磷酸酶-2将来自激活的受体酪氨酸激酶(RTK)的信号传导到下游通路(包括丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)通路)。SHP2还涉及免疫检查点和细胞因子受体信号传导。TNO155已在多种RTK依赖性人癌细胞系和体内肿瘤异种移植物中显示出功效。

PI3K抑制剂

可用于本发明的组合和方法的PI3K抑制剂的实例包括达托利斯布(dactolisib)、阿匹托利斯布(apitolisib)、加多利西(gedatolisib)、布帕昔布(buparlisib)、杜韦利斯布(duvelisib)、库潘尼西(copanlisib)、艾代拉里斯(idelalisib)、阿培利司、塔塞利西卜(taselisib)和匹替西布(pictilisib)。本发明的优选PI3K抑制剂包括AMG 511、布帕昔布和阿培利司。在本发明的优选实施例中，阿培利司是PI3K抑制剂。

在本发明的组合中，每种治疗活性剂可以分开地、同时地或依序地(以任何顺序)施用。

在本发明的组合中，能以口服剂型施用化合物A和/或TNO155。

在另一个实施例中，提供了药物组合物，其包含本发明的药物组合和至少一种药学上可接受的载体。

待通过本发明的组合和方法治疗的癌症

因此，本发明的组合可用于治疗癌症和KRAS G12C突变型癌症或肿瘤。本发明的组合可用于治疗选自由以下组成的组的癌症或肿瘤：肺癌(包括肺腺癌、非小细胞肺癌和鳞状细胞肺癌)、结直肠癌(包括结直肠腺癌)、胰腺癌(包括胰腺腺癌)、子宫癌(包括子宫内膜癌)、直肠癌(包括直肠腺癌)、阑尾癌、小肠癌、食道癌、肝胆癌(包括肝癌和胆管癌)、膀胱癌、卵巢癌和实体瘤，特别地当该癌症或肿瘤具有KRAS G12C突变时。原发部位不明但示出KRAS G12C突变的癌症也可以得益于用本发明的方法进行治疗。

待治疗的癌症或肿瘤可以选自由以下组成的组：肺癌(包括肺腺癌、非小细胞肺癌和鳞状细胞肺癌)、结直肠癌(包括结直肠腺癌)、胰腺癌(包括胰腺腺癌)、子宫癌(包括子宫内膜癌)、直肠癌(包括直肠腺癌)、阑尾癌、小肠癌、食道癌、肝胆癌(包括肝癌、胆管癌症和胆管癌)、膀胱癌、卵巢癌、十二指肠乳头癌和实体瘤，特别地当癌症或肿瘤具有KRAS G12C突变时。

待治疗的癌症或肿瘤可以选自非小细胞肺癌、结直肠癌、胆管癌症、卵巢癌、十二指肠乳头癌和胰腺癌，特别地当该癌症或肿瘤具有KRAS G12C突变时。

待通过本发明的化合物、组合和方法治疗的其他癌症包括胃癌、鼻咽癌、肝细胞癌、和霍奇金淋巴瘤，特别地当该癌症具有KRAS G12C突变时。

特别地，本发明提供了治疗方法和用于在治疗选自由以下组成的组的癌症中使用的组合：肺癌(如肺腺癌和非小细胞肺癌)、结直肠癌(包括结直肠腺癌)、胰腺癌(包括胰腺腺癌)、子宫癌(包括子宫内膜癌)、直肠癌(包括直肠腺癌)和实体瘤，特别地当该癌症或肿瘤具有KRAS G12C突变时。

如实例所示，本发明的化合物A和组合在具有选自KRAS G12C、PIK3CA和CDKN2A的一个、两个或三个突变的异种移植模型中已经显示出抗肿瘤活性。因此，待通过本发明的组合和方法治疗的癌症包括具有选自KRAS G12C、PIK3CA和CDKN2A及其组合中的一个、两个或三个突变的癌症或实体瘤；如具有KRAS G12C和CDKN2A突变的癌症；以及具有KRAS G12C、PIK3CA和CDKN2A突变的癌症。例如，待治疗的癌症可以是肺癌(例如非小细胞肺癌)，具有KRAS G12C和CDKN2A突变；或肺癌(例如非小细胞肺癌)，具有KRAS G12C、PIK3CA和CDKN2A突变。

具有选自KRAS G12C、PIK3CA和CDKN2A的一个、两个或三个突变的癌症还可以选自由以下组成的组：肺癌(包括肺腺癌、非小细胞肺癌和鳞状细胞肺癌)、结直肠癌(包括结直肠腺癌)、胰腺癌(包括胰腺腺癌)、子宫癌(包括子宫内膜癌)、直肠癌(包括直肠腺癌)、阑尾癌、小肠癌、食道癌、肝胆癌(包括肝癌、胆管癌症和胆管癌)、膀胱癌、卵巢癌、十二指肠乳头癌和实体瘤，特别地当该癌症或肿瘤具有KRAS G12C突变时。

在本发明的实施例中，待通过化合物A或通过本发明的组合或方法治疗的癌症选自由以下组成的组：黑色素瘤、胃淋巴瘤、伯基特氏淋巴瘤、头颈部鳞状细胞癌、口腔癌、胰腺腺癌、非小细胞肺癌、食道鳞状细胞癌、胃癌、结直肠癌、上皮性卵巢癌和前列腺癌；任选地，其中癌症具有KRAS G12C突变和/或CDKN2A突变；或其中癌症具有KRAS G12C、PIK3CA和CDKN2A突变。

在本发明的实施例中，待通过化合物A或通过本发明的组合或方法治疗的癌症选自由以下组成的组：乳腺癌、卵巢癌、肺癌、胃部癌症、胃癌和脑癌；任选地，其中癌症具有KRAS G12C突变和/或PIK3CA突变；或其中癌症具有KRAS G12C、PIK3CA和CDKN2A突变。

癌症可以处于早期、中期、晚期或可以是转移性癌症。在一些实施例中，癌症是晚期癌症。在一些实施例中，癌症是转移性癌症。在一些实施例中，癌症是复发性癌症。在一些实施例中，癌症是难治性癌症。在一些实施例中，癌症是反复性癌症。在一些实施例中，癌症是不可切除性癌症。

癌症可以处于早期、中期、晚期或是转移性癌症。

本发明的化合物A和组合还可用于治疗以RAS突变为特征的实体恶性肿瘤。

本发明的化合物A和组合还可用于治疗以KRAS的一种或多种突变，特别是KRAS中的G12C突变为特征的实体恶性肿瘤。

本发明提供了本发明的化合物A和组合，其用于在治疗以获得性KRAS改变(选自G12D/R/V/W、G13D、Q61H、R68S、H95D/Q/R、Y96C、Y96 D和KRASG12C等位基因的高水平扩增)为特征或以获得性旁路抗性机制为特征的癌症或实体瘤中使用，这些旁路抗性机制包括MET扩增；NRAS、BRAF、MAP2K1、和RET中的激活突变；涉及ALK、RET、BRAF、RAF1、和FGFR3的致癌性融合；以及NF1和PTEN中的功能丧失性突变。

因此，作为另外的实施例，本发明提供了本发明的组合，其用于在疗法中使用。本发明还提供了由以下组成的三重组合：化合物A或其药学上可接受的盐，SHP2抑制剂(如TNO155或其药学上可接受的盐)，以及第三治疗活性剂。作为另外的实施例，本发明提供了本发明的组合，其用于在疗法中使用。在优选的实施例中，该疗法或药物有用的疗法对于选自可以通过抑制RAS突变蛋白，特别是KRAS、HRAS或NRAS G12C突变蛋白来治疗的疾病是有用的。在另一个实施例中，本发明提供了治疗有需要的受试者的疾病的方法，该疾病通过抑制RAS突变型蛋白，特别地KRAS、HRAS或NRAS蛋白的G12C突变型进行治疗，其中该方法包括向受试者施用治疗有效量的本发明的组合。

在更优选的实施例中，该疾病选自上述列表，适当地是非小细胞肺癌、结直肠癌和胰腺癌。在优选的实施例中，该疗法用于疾病，该疾病可以通过抑制RAS突变蛋白，特别是抑制KRAS、HRAS或NRAS蛋白的G12C突变体来治疗。在更优选的实施例中，该疾病选自上述列表，适当地是非小细胞肺癌、结直肠癌和胰腺癌，其特征在于KRAS、HRAS或NRAS中的G12C突变。

在另一个实施例中是治疗(例如，减轻、抑制或延迟进展中的一项或多项)受试者的癌症或肿瘤的方法，该方法包括向有需要的受试者施用包含化合物A或其药学上可接受的盐、与如本文所述的第二治疗剂组合、任选地与第三组合组合的药物组合物。

因此，本发明提供了治疗(例如，减轻、抑制或延迟进展中的一项或多项)有需要的患者的癌症或肿瘤的方法，其中该方法包括向该有需要的患者施用治疗活性量的本发明的组合，其中该癌症是肺癌(包括肺腺癌和非小细胞肺癌)、结直肠癌(包括结直肠腺癌)、胰腺癌(包括胰腺腺癌)、子宫癌(包括子宫内膜癌)、直肠癌(包括直肠腺癌)和实体瘤，任选地其中该癌症是KRAS-、NRAS-或HRAS-G12C突变型。

对KRAS G12C抑制剂而言是难治的癌症或肿瘤

本发明的方法和组合可以特别地用于治疗对用KRAS G12C抑制剂的先前治疗而言是难治的或具有抗性的癌症或肿瘤。此类KRAS G12C抑制剂的实例包括化合物A、索托拉西布(美商安进公司)、阿达格拉西布(Mirati公司)、D-1553(益方生物)、BI1701963(勃林格公司)、GDC6036(罗氏公司)、JNJ74699157(J&J公司)、X-Chem KRAS(X-Chem公司)、LY3537982(礼来公司)、BI1823911(勃林格公司)、AS KRAS G12C(亚盛药业公司)、SF KRAS G12C(赛诺菲公司)、RMC032(革命药物公司)、JAB-21822(加科思制药公司)、AST-KRAS G12C(艾力斯制药公司)、AZ KRAS G12C(阿斯利康公司)、NYU-12VC1(纽约大学)、和RMC6291(革命药物公司)或其药学上可接受的盐。在一个实施例中，癌症(例如NSCLC)先前已经用KRAS G12C抑制剂(例如索托拉西布、阿达格拉西布、D-1553、和GDC6036)治疗。

预期涉及KRAS G12 C抑制剂(例如化合物A或其药物活性盐)，以及第二治疗活性剂，任选地第三治疗剂的组合疗法将在克服此抗性方面特别有用。

本发明的方法和组合可用作一线疗法(或用作二线或更晚线疗法)。例如，患者可能是治疗不可知的患者或在先前疗法中有进展和/或复发的患者。

例如，待通过本发明的方法和组合治疗的患者或受试者包括患有癌症(例如KRASG12C突变型NSCLC(包括晚期(转移性或不可切除性)KRAS G12C突变型NSCLC))的患者，任选地其中该患者已经接受了先前疗法并且有进展。

在本发明的实施例中，待使用化合物A单一疗法或使用如本文所述的组合疗法的组合疗法进行治疗并且可能从治疗中获益的受试者或患者选自：

-患有KRAS G12C突变型实体瘤(例如晚期(转移性或不可切除性)KRAS G12C突变型实体瘤)的患者，任选地其中该患者已经接受了标准护理疗法但失败了，或者对先前的研究性疗法和/或批准的疗法不耐受或不具有资格；

-患有KRAS G12C突变型NSCLC(例如，晚期(转移性或不可切除性)KRAS G12C突变型NSCLC)的患者，任选地其中所述患者已经接受了组合或顺序进行的基于铂的化学疗法方案和免疫检查点抑制剂疗法但失败了；

-患有KRAS G12C突变型CRC(例如，晚期(转移性或不可切除性)KRAS G12C突变型CRC)的患者，任选地其中所述患者已经接受了标准护理疗法但失败了，该标准护理疗法包括基于氟嘧啶、奥沙利铂、和/或伊立替康的化学疗法；和

-患有KRAS G12C突变型NSCLC(例如，晚期(转移性或不可切除性)KRAS G12C突变型NSCLC)的患者，任选地其中所述患者先前已经用KRAS G12C抑制剂(例如索托拉西布、阿达格拉西布、GDC6036或D-1553)治疗。

如本文所述，单独的或与另一种治疗剂组合的化合物A可以用于治疗选自以下的患者：

患有NSCLC的患者，其肿瘤具有KRAS G12C肿瘤突变，并且该患者先前已经接受了组合或顺序进行的基于铂的化学疗法方案和免疫检查点抑制剂疗法(G12Ci初治)；

患有NSCLC的患者，其肿瘤具有KRAS G12C肿瘤突变，并且该患者先前已经接受了组合或顺序进行的基于铂的化学疗法方案和免疫检查点抑制剂疗法，紧随其后是KRASG12C抑制剂(除化合物A以外)的一个治疗线，例如索托拉西布或阿达格拉西布，作为单一药剂给予，并且在此试验中研究治疗的第一天开始的6个月内停止(G12Ci治疗)；

患有CRC的患者，其肿瘤具有KRAS G12C肿瘤突变，并且该患者接受了基于氟嘧啶、奥沙利铂或伊立替康的化学疗法。

在另外的实施例中，以有效治疗癌症的量向有需要的受试者施用化合物A或其药学上可接受的盐。

在本发明的实施例中，向有需要的受试者施用一定量的化合物A或其药学上可接受的盐、以及第二治疗剂和第三治疗剂(如果存在)，并且该量在为有效治疗癌症的量时是有效的。

剂量和给药方案

当化合物A用作单一疗法时，化合物A的每日推荐总剂量为400mg，每日给予一次或每日两次，连续给予(即无药物假期)。基于观察到的安全性、PK和功效数据，化合物A单一疗法的推荐剂量是100mg BID连续给予。

当化合物A用作单一疗法或组合疗法时，优选与食物一起服用，例如饭后立即(30分钟内)服用。

根据本发明的组合疗法中的KRAS G12 C抑制剂和第二治疗活性剂以及第三治疗活性剂的剂量被设计为具有药理活性并且产生抗肿瘤反应。

当KRAS G12 C抑制剂是本发明的组合中的化合物A时，化合物A或其药学上可接受的盐以范围从50至1600mg/天(例如范围从200至1600mg/天，或400至1600mg/天或50至400mg/天)的治疗有效剂量施用。化合物A的总日剂量可选自50、100、150、200、250、300、350、400、450、500、600、800、1000、1200和1600mg。例如，化合物A的总日剂量可以选自100、200、300、400、600、800、1000、1200和1600mg。

化合物A的总日剂量可以按QD(每日一次)或BID(每日两次)方案连续施用。例如，能以200mg BID(总日剂量为400mg)、400mg QD(总日剂量为400mg)的剂量施用化合物A。能以100mg BID(总日剂量为200mg)的剂量或以200mg QD(总日剂量为200mg)的剂量施用化合物A。PK/PD建模预测在推荐剂量200mg BID时，持续的高水平目标占有率。还预测100mg BID的化合物A与选择的疗法组合时，允许足够的治疗窗口。

当存在SHP2抑制剂并且TNO155为SHP2抑制剂时，在本发明的组合中，本发明的组合中的TNO 155的剂量被设计为具有药理活性，并具有协同抗肿瘤作用的潜力，同时最小化由于两种药剂对MAPK通路信号传导的抑制活性而产生的不可接受的毒性的可能性。因此，能以范围从10至80mg、或从10至60mg的总日剂量施用TNO155。例如，TNO155的总日剂量可选自10、15、20、30、40、60和80mg。TNO155的总日剂量可以按QD(每日一次)或BID(每日两次)，2周施用/1周停用方案QD或BID连续施用。TNO155的总日剂量可以按QD(每日一次)或BID(每日两次)，连续(即无药物假期)QD或BID连续施用。

在本发明的组合中，以范围从50至1600mg/天(例如，50、100、150、200、250、300、350、400、450、500、600、800、1000、1200或1600mg)或从200至1600mg/天(例如，200、300、400、600、800、1000、1200或1600mg)的剂量施用化合物A，并且以范围从10至80mg/天(0、15、20、30、40、60或80mg)的剂量施用TNO155，其中化合物A按连续方案施用，并且TNO按两周施用/一周停用方案或连续方案施用。

在本发明的组合中，按连续方案以范围从50至1600mg/天(例如，50、100、150、200、250、300、350、400、450、500、600、800、1000、1200或1600mg)或从200至1600mg/天(例如，200、300、400、600、800、1000、1200或1600mg)的剂量施用化合物A，按两周施用/一周停用方案或连续方案以从10至80mg(0、15、20、30、40、60或80mg)的范围的剂量施用TNO155。

EGFR抑制剂(如西妥昔单抗)可以用于本发明的组合疗法，特别是当待治疗的癌症是结直肠癌时。西妥昔单抗(当存在时)用作浓溶液，用于输注和静脉内施用(IV)。西妥昔单抗可以每周施用，其中初始剂量是400mg/m² IV(典型地按120分钟静脉内输注施用)，并且后续剂量是250mg/m²/周(按每周60分钟输注施用)。可替代地，西妥昔单抗可以每两周施用一次，初始和后续剂量是500mg/m²，每两周施用一次。典型地，本发明组合中化合物A的总日剂量可以选自100mg至400mg，例如选自200mg至400mg。总日剂量可以每日一次或每日两次(BID)连续施用。

化合物A和西妥昔单抗的组合的给药方案的实例是化合物A QD或BID与西妥昔单抗每周给药组合连续施用(初始剂量400mg/m2，按120分钟静脉内输注施用，后续剂量250mg/m2，按每周60分钟输注施用)。典型地，西妥昔单抗的总暴露量可以不超过每2周500mg/m2或400mg/m2初始剂量，然后每周250mg/m2。

化合物A与西妥昔单抗组合的典型剂量水平可以如下：

给药方案	化合物A	西妥昔单抗两周一次方案
			1	每日一次100mg	300、400或500mg/m2 Q2W
2	每日两次100mg	300、400或500 mg/m2 Q2W
			3	每日两次200mg	300、400或500 mg/m2 Q2W

MEK抑制剂(如曲美替尼)可以用于本发明的组合疗法。曲美替尼可以按每日一次(QD)0.5mg、1mg或2mg的剂量连续施用(即无药物假期)。基于临床PK和PD数据，1mg QD剂量的曲美替尼被认为具有潜在的药理活性。化合物A和/或曲美替尼可以与食物一起施用。典型地，本发明组合中化合物A的总日剂量可以选自100mg至400mg，例如选自200mg至400mg。总日剂量可以每日一次或每日两次(BID)连续施用。

化合物A与曲美替尼组合的典型剂量水平可以如下：

给药方案	化合物A	曲美替尼
			1	每日一次100mg	每日一次0.5mg
2	每日两次100mg	每日一次0.5mg
			3	每日两次100mg	每日一次1mg
4	每日两次200mg	每日一次1mg
			5	每日两次200mg	每日一次2mg

CDK4/6抑制剂(如帕博西尼或瑞博西尼)可以用于本发明的组合疗法。当瑞博西尼用作组合配偶体时，可以按100mg至600mg QD的总日剂量、3周停用/1周停用进行施用。例如，可以每日一次，按100mg、200mg、300mg、400mg或600mg的剂量施用瑞博西尼。典型地，本发明组合中化合物A的总日剂量可以选自100mg至400mg，例如选自200mg至400mg。总日剂量可以每日一次或每日两次(BID)连续施用。

化合物A与瑞博西尼组合的典型剂量水平可如下：

药物组合物

KRAS G12 C抑制剂(例如化合物A或其药学上可接受的盐)可以与一种或多种(例如一种或两种)其他治疗活性剂同时施用，或在其之前或之后施用。化合物A或其药学上可接受的盐可以通过相同或不同的施用途径分开施用，或与另一种治疗活性剂一起在相同的药物组合物中施用。

在另一个方面，本发明提供了药学上可接受的组合物，这些药学上可接受的组合物包含治疗有效量的选自KRAS G12C抑制剂(例如化合物A)、SHP2抑制剂(例如TNO155)和任选地如本文所述的第三药剂的一种或多种(例如，一种或两种)治疗剂，这些治疗剂与一种或多种药学上可接受的载体(添加剂)和/或稀释剂配制在一起。

在另一个方面，本发明提供了药物组合物，其包含一种、两种或三种本发明的组合中存在的化合物或其药学上可接受的盐以及药学上可接受的载体。在另一个方面，本发明提供了药物组合物，其包含KRAS G12C抑制剂(如化合物A)或其药学上可接受的盐，和一种或多种(例如，一种或两种)治疗活性剂，这些治疗活性剂选自SHP2抑制剂(如TNO155，或其药学上可接受的盐)和第三治疗活性剂。在另外的实施例中，组合物包含至少两种药学上可接受的载体，例如本文所述的那些。优选地，药学上可接受的载体是无菌的。可以将药物组合物配制成用于特定的施用途径，如口服施用、肠胃外施用和直肠施用等。另外，本发明的药物组合物能以固体形式(包括但不限于胶囊、片剂、丸剂、颗粒、粉末或栓剂)、或以液体形式(包括但不限于溶液、悬浮液或乳液)制成。可以对药物组合物进行常规的制药操作，如灭菌，和/或可以使其含有常规的惰性稀释剂、润滑剂或缓冲剂，以及辅助剂(如防腐剂、稳定剂、润湿剂、乳化剂和缓冲剂等)。

通常，药物组合物是包含活性成分及以下中的一种或多种的片剂或明胶胶囊：

a)稀释剂，例如，乳糖、右旋糖、蔗糖、甘露醇、山梨醇、纤维素和/或甘氨酸；

b)润滑剂，例如，二氧化硅、滑石、硬酯酸、其镁盐或钙盐和/或聚乙二醇；

c)黏合剂，例如，硅酸铝镁、淀粉糊、明胶、黄蓍胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和/或聚乙烯吡咯烷酮；

d)崩解剂，例如，淀粉、琼脂、海藻酸或其钠盐或泡腾混合物；和

e)吸附剂、着色剂、风味剂和甜味剂。

在一个实施例中，药物组合物是仅包含活性成分的胶囊。

片剂可根据本领域已知的方法进行薄膜包衣或肠溶包衣。

用于口服施用的合适的组合物包括有效量的呈片剂、锭剂、水性或油性悬浮液、可分散的粉末或颗粒、乳液、硬或软胶囊、或糖浆或酏剂、溶液或固体分散体形式的本发明的组合中的化合物。将旨在用于口服使用的组合物根据本领域已知的用于制造药物组合物的任何方法来制备，并且为了提供药学上精致的并且适口的制剂，此类组合物可以包含一种或多种选自由以下组成的组的试剂：甜味剂、调味剂、着色剂以及防腐剂。片剂可含有活性成分，其与无毒的药学上可接受的赋形剂混合，这些赋形剂适合生产片剂。这些赋形剂是，例如，惰性稀释剂，如碳酸钙、碳酸钠、乳糖、磷酸钙或磷酸钠；造粒剂及崩解剂，例如，玉米淀粉或海藻酸；粘合剂，例如，淀粉、明胶或阿拉伯胶；以及润滑剂，例如硬脂酸镁、硬脂酸或滑石。片剂是未包衣的，或者根据已知技术进行包衣以延缓在胃肠道中的崩解和吸收，从而在较长的时间段内提供持久的作用。例如，可采用时间延迟材料，如单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。用于口服使用的配制品可呈现为硬质明胶胶囊，其中活性成分与惰性固体稀释剂(例如，碳酸钙、磷酸钙或高岭土)混合，或呈现为软质明胶胶囊，其中活性成分与水或油介质(例如，花生油、液体石蜡或橄榄油)混合。

某些可注射的组合物是水性等渗溶液或悬浮液，并且栓剂有利地由脂肪乳液或悬浮液制备。所述组合物可以是灭菌的和/或含有辅助剂，例如防腐剂、稳定剂、润湿剂或乳化剂、溶液促进剂、用于调节渗透压的盐和/或缓冲剂。此外，所述组合物还可含有其他有治疗价值的物质。所述组合物分别根据常规的混合、造粒或包衣方法制备，并含有约0.1％-75％或约1％-50％的活性成分。

适用于透皮应用的适合的组合物包括有效量的本发明的化合物和适合的载体。适于透皮递送的载体包括可吸收的药理学上可接受的溶剂，以帮助通过宿主的皮肤。例如，透皮设备呈绷带的形式，该绷带包含背衬构件、含有化合物以及任选地载体的贮存器、任选地控制速率的屏障以在长时间段内以受控和预定的速率将化合物递送至宿主皮肤、以及将该设备固定在皮肤上的装置。

适用于局部施用(例如，施用至皮肤及眼睛)的组合物包括水溶液、悬浮液、软膏剂、霜剂、凝胶或可喷雾配制品，例如，用于借由气溶胶或类似物递送。这些局部递送系统将具体地适用于真皮施用，例如，用于治疗皮肤癌，例如，用于防晒霜、洗剂、喷雾及类似物中的预防用途。因此它尤其适用于局部中的用途，包括本领域中熟知的化妆品、配制品。此类系统可含有增溶剂、稳定剂、张力增强剂、缓冲剂和防腐剂。

如本文所用，局部施用也可以涉及吸入或鼻内施用。它们可以在使用或不使用合适推进剂的情况下，自干粉吸入器以干粉形式(单独的作为混合物，例如与乳糖的干掺混物，或经混合的组分颗粒，例如与磷脂混合的组分颗粒)或自加压容器、泵、喷雾、喷雾器或雾化器以气溶胶喷雾形式便利地递送。

在一个实施例中，本发明提供了产品，其包含化合物A或其药学上可接受的盐，和至少一种其他治疗剂，该产品作为组合制剂用于在疗法中同时、分开或顺序使用。在一个实施例中，该疗法是治疗由KRAS、HRAS或NRAS G12C突变表征的疾病或病症。提供的作为组合制剂的产品包括以单独的形式(例如以试剂盒的形式)的组合物，该组合物包含本发明的化合物和一种或多种(例如，一种或两种)治疗活性剂(选自SHP2抑制剂(如TNO155或其药学上可接受的盐)、KRAS抑制剂(如化合物A或其药学上可接受的盐))，以及一种或多种其他治疗剂。

在一个实施例中，本发明提供了药物组合物，该药物组合物包含本发明的化合物和另一种或多种治疗剂。任选地，该药物组合物可以包含如上所述的药学上可接受的载体。

在一个实施例中，本发明提供了试剂盒，该试剂盒包含两种或更多种分开的药物组合物，其中至少一种含有化合物A或其药学上可接受的盐；TNO155或其药学上可接受的盐，以及如本文所述的第三治疗活性剂。在一个实施例中，试剂盒包含用于分开保留所述组合物的装置(例如容器、分隔瓶或分隔箔包)。这种试剂盒的实例是泡罩包装，如通常用于包装片剂、胶囊及类似物的泡罩包装。

本发明的试剂盒可用于施用不同剂型(例如，口服及肠胃外)，用于以不同剂量间隔施用单独组合物或用于相对彼此滴定单独组合物。为有助在依从性，本发明的试剂盒通常包含用于施用的用法说明书。

在本发明的组合疗法中，本发明的化合物和其他治疗剂可以由相同或不同的制造商生产和/或配制。此外，可以将本发明化合物和另一种治疗剂一起形成组合疗法：(i)在将组合产品发布给医师之前(例如，在包含本发明的化合物和其他治疗剂的试剂盒的情况下)；(ii)在施用之前不久，由医师自身(或在医师的指导下)进行；(iii)在患者自身中，例如在顺序施用本发明的化合物和其他治疗剂期间。本发明化合物可以与一种或多种其他的治疗剂同时施用、或在其之前或之后施用。本发明化合物可以通过与其他药剂相同或不同的施用途径分开施用，或在相同的药物组合物中一起施用。

通常，本发明的组合的合适日剂量将是每种化合物有效产生治疗效果的最低剂量的量。

在另一个方面，本发明提供了药学上可接受的组合物，其包含治疗有效量的一种或多种如上所述主题化合物，主题化合物与一种或多种药学上可接受的载剂(添加剂)和/或稀释剂配制在一起。

定义

除非另外指示，否则上文和下文中使用的通用术语优选在本披露的上下文中具有以下含义，其中无论在什么情况下使用的更通用的术语可以彼此独立地由更具体的定义代替或保留，从而定义本发明的更详细实施例：特别地，在提及剂量(dose或dosage)的情况下，其旨在包括指定值±10％或±5％附近的范围。

按照本领域的惯例，剂量是指游离形式的治疗剂的量。例如，当提及20mg的TNO155的剂量，并且TNO155以其琥珀酸盐使用时，所用治疗剂的量相当于20mg游离形式的TNO155。

如本文所用，术语“受试者”或“患者”旨在包括易于患有癌症或任何障碍(直接或间接涉及癌症)或受其折磨的动物。受试者的实例包括哺乳动物，例如人、猿、猴、狗、乳牛、马、猪、绵羊、山羊、猫、小鼠、兔、大鼠和转基因非人动物。在一个实施例中，受试者是人，例如患有癌症、具有患癌症的风险或可能易于患有癌症的人。

如本文所用，术语“治疗(treating或treatment)”包括解除、减轻或缓解受试者的至少一种症状或者实现疾病进展延迟的治疗。例如，治疗可以是减少一种或几种障碍的症状，或者部分或完全根除障碍(如癌症)。在本披露的含义范围内，术语“治疗”还表示阻止、延迟发作(即在疾病的临床表现之前的时间段)和/或降低疾病发展或疾病恶化的风险。

“治疗”也可以通过功效和/或药效学终点来确定，并且可定义为安全性、功效和耐受性中的一个或多个的改善。可以通过根据RECIST v.1.1确定以下项来确定单一疗法或组合疗法的功效：最佳总体反应(BOR)、总体反应率(ORR)、反应持续时间(DOR)、疾病控制率(DCR)、无进展生存期(PFS)和总生存期(OS)。

“最佳总体反应”(BOR)率被定义为从治疗开始直至疾病进展/复发，并且根据RECIST 1.1记录的最佳反应。

“总体反应率”(ORR)被定义为根据RECIST 1.1，BOR为CR或PR的患者的比例。

根据RECIST 1.1，“反应持续时间”(DOR)是第一次记录的反应(CR或PR)与进展或任何原因导致的死亡日期之间的时间。这里，任何原因导致的死亡被视为保守事件，并且符合PFS事件定义。

根据RECIST 1.1，“疾病控制率”(DCR)被定义为根据RECIST 1.1，BOR为CR、PR或SD的患者的比例。

根据RECIST 1.1，“无进展生存期”(PFS)被定义为从开始治疗的日期到根据RECIST 1.1第一次记录的进展或任何原因导致的死亡的日期之间的时间。如果患者不具有事件，PFS将在最后的充分的肿瘤评估日期进行审查。

“总生存期”(OS)被定义为从开始研究治疗的日期到任何原因导致的死亡的日期之间的天数。如果在研究终止或分析截止之前未报告死亡，则将在截止日期之前/当日最后一个已知患者生存日期对生存期进行审查。没有基线后生存信息的患者的生存时间将在开始治疗的日期进行审查。

“治疗”也可以定义为在减少化合物A单一疗法或如本文所述的组合疗法的不利影响方面的改善。

除非另外指明，否则术语“包含”和“包括”在本文中以其开放式和非限制性的含义使用。

除非本文另外指示或与上下文明显矛盾，否则在描述本发明的上下文中(尤其是下文权利要求的上下文中)，术语“一个/种(a和an)”和“该/所述(the)”以及相似的指示语应解释为包括单数和复数两者。当将复数形式用于化合物、盐等时，这也意指单一化合物、盐等。

术语“组合疗法”或“与……组合”是指施用两种或更多种治疗剂以治疗在本披露中描述的病症或障碍(例如癌症)。这种施用涵盖以基本上同时的方式共同施用这些治疗剂，如以具有固定比率的活性成分的单个胶囊施用。可替代地，这种施用涵盖在多个容器中或在每种活性成分的独立容器(例如，胶囊、粉末和液体)中共同施用。可以在施用之前将粉末和/或液体重构或稀释至所期望的剂量。另外，这种施用也涵盖在大致相同的时间或在不同的时间以依序方式使用每种类型的治疗剂。在任何一种情况下，治疗方案将在治疗本文所述的病症或障碍方面提供药物组合的有益效果。

组合疗法可以提供“协同”并且证明是“协同的”，即，当活性成分一起使用时所实现的效应大于由分别使用这些化合物所产生的效应的总和。当将活性成分为下述情形时可以获得协同效应：(1)共同配制并以组合的单位剂量配制品的形式同时施用或递送；(2)以分开的配制品的形式交替或平行递送；或(3)通过一些其他方案进行。当以交替疗法递送时，可以在依序(例如通过在单独注射器中不同的注射)施用或递送化合物时获得协同效应。通常，在交替疗法期间，将有效剂量的每种活性成分依序地即顺次地施用，而在组合疗法中，将有效剂量的两种或更多种活性成分一起施用。如本文所用，协同效应是指两种治疗剂(如，例如作为SHP2抑制剂的化合物TNO155和化合物A)的作用，该作用产生例如减缓增殖性疾病(特别是癌症)或其症状的症状进展的效果，这比单独施用每种药物的效果的简单加和要大。可以例如使用合适的方法计算协同效应，这些合适的方法如Sigmoid-Emax方程(Holford,N.H.G.和Scheiner,L.B.,Clin.Pharmacokinet.[临床药代动力学]6:429-453(1981))、Loewe可加性方程(Loewe,S.和Muischnek,H.,Arch.Exp.Pathol Pharmacol.[实验病理学与药理学档案]114:313-326(1926))以及中效方程(Chou,T.C.和Talalay,P.,Adv.Enzyme Regul.[酶调控研究进展]22:27-55(1984))。上面所指的每个方程都可以应用于实验数据以生成相应的图以帮助评估药物组合的效果。与上文提到的方程相关的相应的图分别是浓度-效果曲线、等效线图曲线和组合指数曲线。

如本文所用，术语“药物组合”是指在一个剂量单位形式中的固定组合、或用于组合施用的非固定组合或套装盒，其中两种或更多种治疗剂可以在同一时间独立地施用或在时间间隔内分别施用，特别地其中这些时间间隔允许组合配偶体显示合作性例如协同效应。

如本文所用，短语“治疗有效量”意指包含本发明化合物的化合物、材料或组合物的量，其对于在动物中的至少一个细胞亚群中以适用于任何医学治疗的合理的受益/风险比产生一些所期望的治疗效果是有效的。

本文使用的短语“药学上可接受的”是指在合理的医学判断的范围内，适合用于与人和动物的组织接触而不产生过度毒性、刺激、过敏反应、或其他问题或并发症，同时具有相称的合理受益/风险比的那些化合物、材料、组合物、和/或剂型。

如上文所述，本发明化合物的某些实施例可含有碱性官能团，例如氨基或烷基氨基，并且由此能够与药学上可接受的酸形成药学上可接受的盐。在这方面，术语“药学上可接受的盐”是指本发明的化合物的相对无毒的无机和有机酸加成盐。这些盐可以在施用媒介物或剂型制造过程中原位制备，或者通过使纯化的游离碱形式的本发明化合物与合适的有机或无机酸分别反应，并在随后的纯化期间分离由此形成的盐来制备。代表性盐包括氢溴酸盐、盐酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、硝酸盐、乙酸盐、戊酸盐、油酸盐、棕榈酸盐、硬脂酸盐、月桂酸盐、苯甲酸盐、乳酸盐、磷酸盐、甲苯磺酸盐、柠檬酸盐、马来酸盐、富马酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、萘酸盐(napthylate)、甲磺酸盐、葡庚糖酸盐、乳糖醛酸盐和月桂基磺酸盐等。(参见例如Berge等人(1977)“Pharmaceutical Salts[药用盐]”,J.Pharm.Sci.[药物科学杂志]66:1-19)。

主题化合物的药学上可接受的盐包括化合物的常规的无毒盐或季铵盐，例如来自无毒的有机酸或无机酸。例如，此类常规无毒盐包括衍生自无机酸的那些，该无机酸如盐酸、氢溴酸、硫酸、胺磺酸、磷酸、硝酸等；以及从有机酸制备的盐，该有机酸如乙酸、丙酸、琥珀酸、乙醇酸、硬脂酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、抗坏血酸、棕榈酸、马来酸、羟基马来酸、苯乙酸、谷氨酸、苯甲酸、水杨酸、磺胺酸、2-乙酰氧基苯甲酸、富马酸、甲苯磺酸、甲磺酸、乙二磺酸、草酸、异硫磺酸等。例如，TNO155的药学上可接受的盐是琥珀酸盐。

在本发明的组合中，化合物A、TNO155和第三治疗活性剂还旨在表示化合物的未经标记的形式以及同位素标记形式。同位素标记的化合物的一个或多个原子被具有选定原子质量或质量数的原子代替。可掺入TNO155和第三治疗活性剂的同位素的实例包括氢、碳、氮、氧和氯的同位素(在可能的情况下)，例如²H、³H、¹¹C、¹³C、¹⁴C、¹⁵N、³⁵S、³⁶Cl。本发明包括同位素标记的TNO155和PD-1抑制剂，例如其中存在放射性同位素(如³H和¹⁴C)或非放射性同位素(如²H和¹³C)。同位素标记的TNO155和第三治疗活性剂可用于代谢研究(用¹⁴C)、反应动力学研究(例如用²H或³H)、检测或成像技术，例如正电子发射断层扫描(PET)或单光子发射计算机断层扫描(SPECT)，包括药物或底物组织分布测定，或用于患者的放射治疗。本发明的同位素标记的化合物通常可通过本领域技术人员已知的常规技术或与在使用适当的同位素标记的试剂的所附实例中所述的那些类似的方法来制备。

此外，用较重的同位素，特别是氘(即，²H或D)取代可以提供来源于更大的代谢稳定性(例如，体内半衰期延长或剂量需求减少或治疗指数改进)的某些治疗优点。应当理解，在此上下文中，氘可以被认为是化合物A、TNO155或第三治疗活性剂抑制剂的取代基。这种较重的同位素(特别是氘)的浓度可以由同位素富集因子来定义。如本文所用的术语“同位素富集因子”是指同位素丰度与指定同位素的天然丰度之间的比率。如果本发明的化合物中的取代基指定为氘，则此类化合物具有针对每个指定的氘原子的同位素富集因子为至少3500(在每个指定的氘原子上52.5％氘掺入)、至少4000(60％氘掺入)、至少4500(67.5％氘掺入)、至少5000(75％氘掺入)、至少5500(82.5％氘掺入)、至少6000(90％氘掺入)、至少6333.3(95％氘掺入)、至少6466.7(97％氘掺入)、至少6600(99％氘掺入)或至少6633.3(99.5％氘掺入)。

在化合物A中，例如吲唑基环上的甲基基团，可以是氘化或全氘化的。

实例

实例1：1-{6-[(4M)-4-(5-氯-6-甲基-1H-吲唑-4-基)-5-甲基-3-(1-甲基-1H-吲 唑-5-基)-1H-吡唑-1-基]-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-基}丙-2-烯-1-酮(化合物A)的制备

1-{6-[(4M)-4-(5-氯-6-甲基-1H-吲唑-4-基)-5-甲基-3-(1-甲基-1H-吲唑-5-基)-1H-吡唑-1-基]-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-基}丙-2-烯-1-酮(化合物A)的合成如下所述。

化合物A还被称作“a(R)-1-(6-(4-(5-氯-6-甲基-1H-吲唑-4-基)-5-甲基-3-(1-甲基-1H-吲唑-5-基)-1H-吡唑-1-基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)丙-2-烯-1-酮”。

一般方法和条件：

温度以摄氏度给出。如果没有另外提及，则所有蒸发都在减压下进行，通常在约15mm Hg和100mm Hg(＝20-133mbar)之间。

使用的缩写为本领域中常规缩写。

使用电喷雾方法、化学方法和电子轰击离子化方法在LC-MS、SFC-MS或GC-MS系统上使用一系列以下配置的仪器中获取质谱：使用ESI方法在LCMS系统上使用一系列以下配置的仪器获取具有Waters SQ检测器的Waters Acquity UPLC或质谱：具有PDA检测器的Waters Acquity LCMS。[M+H]⁺是指化学物种的质子化分子离子。

NMR谱使用Bruker Ultrashield^TM400(400MHz)、Bruker Ultrashield^TM600(600MHz)和Bruker Ascend^TM400(400MHz)光谱仪运行，均以或不以四甲基硅烷作为内标。将化学位移(δ值)以四甲基硅烷的低场ppm报告，谱分裂模式被指定为，单信号(s)、双信号(d)、三重信号(t)、四重信号(q)、多重信号、未解析的或更多重叠信号(m)、宽信号(br)。溶剂在括号中给出。仅报告观察到且与溶剂峰不重叠的质子信号。

Celite：Celite^R(Celite公司)＝基于硅藻土的助滤剂

相分离器：Biotage-溶质相分离器-(部件号：120-1908-F，70mL，以及部件号：120-1909-J，150mL)

Thiol：SiliCYCLE硫醇金属净化剂-(R51030B，粒径：40-63μm)。

仪器

微波：除非另有说明，否则所有微波反应均在Biotage引发器中进行，以0-400W从磁控管在2.45GHz在Robot Eight/Robot Sixty的处理能力情况下进行辐照。

UPLC-MS和MS分析方法：使用带Waters SQ检测器的Waters Acquity UPLC。

UPLC-MS-1：Acquity HSS T3；粒径：1.8μm；柱尺寸：2.1x50mm；洗脱液A：H₂O+0.05％HCOOH+3.75mM乙酸铵；洗脱液B：CH₃CN+0.04％HCOOH；梯度：在1.40min内5％至98％B，然后98％B持续0.40min；流速：1mL/min；柱温：60℃。

UPLC-MS-3：Acquity BEH C18；粒径：1.7μm；柱尺寸：2.1x50mm；洗脱液A：H₂O+4.76％异丙醇+0.05％HCOOH+3.75mM乙酸铵；洗脱液B：异丙醇+0.05％HCOOH；梯度：在1.7min内1％至98％B，然后98％B持续0.1min min；流速：0.6mL/min；柱温：80℃。

UPLC-MS-4：Acquity BEH C18；粒径：1.7μm；柱尺寸：2.1x100mm；洗脱液A：H₂O+4.76％异丙醇+0.05％HCOOH+3.75mM乙酸铵；洗脱液B：异丙醇+0.05％HCOOH；梯度：在8.4min内1％至60％B，然后在1min内60％至98％B；流速：0.4mL/min；柱温：80℃。

UPLC-MS-6：Acquity BEH C18；粒径：1.7μm；柱尺寸：2.1x50mm；洗脱液A：H₂O+0.05％HCOOH+3.75mM乙酸铵；洗脱液B：异丙醇+0.05％HCOOH；梯度：在1.7min内5％至98％B，然后98％B持续0.1min；流速：0.6mL/min；柱温：80℃。

制备型方法：

手性SFC方法：

C-SFC-1：柱：直链淀粉-C NEO 5μm；250x30mm；流动相；流速：80mL/min；柱温：40℃；背压：120巴。

C-SFC-3：柱：Chiralpak AD-H 5μm；100x4.6mm；流动相；流速：3mL/min；柱温：40℃；背压：1800psi。

缩写：

用于制备本发明化合物的所有起始材料、结构单元、试剂、酸、碱、脱水剂、溶剂和催化剂是可商购获得的或可通过本领域普通技术人员已知的有机合成方法生产。此外，本发明的化合物可以通过本领域普通技术人员已知的有机合成方法生产，如以下实例所示。

所有终产物、中间体和起始材料的结构通过标准分析光谱特征(例如，MS、IR、NMR)来确认。优选的(最具活性的)阻转异构体的代表性实例的绝对立体化学已经通过复合物的X射线晶体结构的分析确定，在这些复合物中，各个化合物与KRAS G12C突变型结合。在X射线结构不可得到的所有其他情况下，都以类似方式指定了立体化学，假设对于每一对，在共价竞争测定中表现出最高活性的阻转异构体具有与X射线晶体学观察到上述代表性实例的相同构型。绝对立体化学是根据卡恩-英格尔-普雷洛格(Cahn-lngold-Prelog)规则来指定的。

中间体C1的合成：叔丁基6-(3-溴-4-(5-氯-6-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H- 吲唑-4-基)-5-甲基-1H-吡唑-1-基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸酯

步骤C.1：叔丁基6-(甲苯磺酰基氧基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸酯(中间体C2)

在20℃-25℃下，向叔丁基6-羟基-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸酯[1147557-97-8](2.92kg，12.94mmol)在DCM(16.5L)中的溶液中添加DMAP(316.12g，2.59mol)和TsCl(2.96kg，15.52mol)。在10℃-20℃下，向反应混合物中逐滴添加Et₃N(2.62kg，25.88mol)。将反应混合物在5℃-15℃下搅拌0.5h，并且然后在18℃-28℃下搅拌1.5h。反应完成后，将反应混合物在真空下浓缩。向残余物添加NaCl(在水中5％，23L)随后用EtOAc(23L)萃取。将合并的水层用EtOAc(10L x 2)萃取。将合并的有机层用NaHCO₃(在水中3％，10L x 2)洗涤并在真空下浓缩以给出标题化合物。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ7.81-7.70(m,2H),7.53-7.36(m,2H),4.79-4.62(m,1H),3.84-3.68(m,4H),2.46-2.38(m,5H),2.26-2.16(m,2H),1.33(s,9H)。UPLC-MS-1:Rt＝1.18min；MS m/z[M+H]⁺；368.2。

步骤C.2：3,5-二溴-1H-吡唑

在-78℃下，经20min向3,4,5-三溴-1H-吡唑[17635-44-8](55.0g，182.2mmol)在无水THF(550mL)中的溶液中逐滴添加n-BuLi(145.8mL，364.5mmol)，保持内部温度在-78℃/-60℃。将RM在该温度下搅拌45min。然后将反应混合物用MeOH(109mL)在-78℃下小心淬灭并在该温度下搅拌30min。允许混合物达到0℃并搅拌1h。然后，将混合物用EtOAc(750mL)稀释并添加HCl(0.5N，300mL)。在真空下浓缩各层。将粗残余物溶解于DCM(100mL)中，冷却至-50℃并添加石油醚(400mL)。过滤沉淀的固体并用正己烷(250mL x2)洗涤并在真空下干燥以给出标题化合物。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ13.5(br s,1H),6.58(s,1H)。

步骤C.3：叔丁基6-(3,5-二溴-1H-吡唑-1-基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸酯

在15℃下，向叔丁基6-(甲苯磺酰基氧基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸酯(中间体C2)(步骤C.1，900g，2.40mol)在DMF(10.8L)中的溶液中添加Cs₂CO₃(1988g，6.10mol)和3,5-二溴-1H-吡唑(步骤C.2，606g，2.68mol)。将反应混合物在90℃下搅拌16h。将反应混合物倒入冰-水/盐水(80L)中并用EtOAc(20L)萃取。将水层用EtOAc(10L x 2)再萃取。将合并的有机层用盐水(10L)洗涤，干燥(Na₂SO₄)，过滤，并在真空下浓缩。将残余物与二噁烷(1.8L)一起研磨，并在60℃下溶解。向浅黄色溶液中缓慢添加水(2.2L)，并在添加900mL水后开始重结晶。将所得的悬浮液冷却至0℃，过滤，并用冷水洗涤。将滤饼与正庚烷一起研磨，过滤，然后在真空下在40℃下干燥以给出标题化合物。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ6.66(s,1H),4.86-4.82(m,1H),3.96-3.85(m,4H),2.69-2.62(m,4H),1.37(s,9H)；UPLC-MS-3:Rt＝1.19min；MS m/z[M+H]⁺；420.0/422.0/424.0。

步骤C.4：叔丁基6-(3-溴-5-甲基-1H-吡唑-1-基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸酯 (中间体C3)

在惰性气氛下，在-80℃下，向叔丁基6-(3,5-二溴-1H-吡唑-1-基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸酯(步骤C.3，960g，2.3mol)在THF(9.6L)中的溶液中逐滴添加n-BuLi(1.2L，2.5mol)。将反应混合物在-80℃下搅拌10min。然后在-80℃下，向反应混合物中逐滴添加碘甲烷(1633g，11.5mol)。在-80℃下搅拌5min后，允许反应混合物温热至18℃。将反应混合物倒入饱和NH₄Cl水溶液(4L)中并用DCM(10L)萃取。将分离的水层用DCM(5L)再萃取，并将合并的有机层在真空下浓缩。将粗产物在60℃下溶解于1,4-二噁烷(4.8L)中，然后逐滴缓慢添加水(8.00L)。将所得悬浮液冷却至17℃并搅拌30min。将固体过滤，用水洗涤，并在真空下干燥以给出标题化合物。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ6.14(s,1H),4.74-4.66(m,1H),3.95-3.84(m,4H),2.61-2.58(m,4H),2.20(s,3H),1.37(s,9H)；UPLC-MS-1:Rt＝1.18min；MS m/z[M+H]⁺；356.1/358.1。

步骤C.5：叔丁基6-(3-溴-4-碘-5-甲基-1H-吡唑-1-基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2- 甲酸酯(中间体C4)

在15℃下，向叔丁基6-(3-溴-5-甲基-1H-吡唑-1-基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸酯(中间体C3)(步骤C.4，350g，0.980mol)在乙腈(3.5L)中的溶液中添加NIS(332g，1.47mol)。将反应混合物在40℃下搅拌6h。反应完成后，将反应混合物用EtOAc(3L)稀释并用水(5L x 2)洗涤。将有机层用Na₂SO₃(在水中10％，2L)，用盐水(2L)洗涤，干燥(Na₂SO₄)，过滤，并在真空下浓缩以给出标题化合物。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ4.81-4.77(m,1H),3.94-3.83(m,4H),2.61-5.59(m,4H),2.26(s,3H),1.37(s,9H)；UPLC-MS-1:Rt＝1.31min；MS m/z[M+H]⁺；482.0/484.0。

步骤C.6：叔丁基6-(3-溴-4-(5-氯-6-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-4- 基)-5-甲基-1H-吡唑-1-基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸酯(中间体C1)

向叔丁基6-(3-溴-4-碘-5-甲基-1H-吡唑-1-基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸酯(中间体C4)(步骤C.5，136g，282mmol)和5-氯-6-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-1H-吲唑(中间体D1，116g，310mmol)在1,4-二噁烷(680mL)中的搅拌悬浮液中添加水性K₃PO₄(2M，467mL，934mmol)随后添加RuPhos(13.1g，28.2mmol)和RuPhos-Pd-G3(14.1g，16.9mmol)。在惰性气氛下，将反应混合物在80℃下搅拌1h。反应完成后，将反应混合物倒入1M NaHCO₃水溶液(1L)中并用EtOAc(1L x 3)萃取。将合并的有机层用盐水(1L x3)洗涤，干燥(Na₂SO₄)，过滤，并在真空下浓缩。将粗残余物通过正相色谱法(洗脱液：石油醚/EtOAc从1/0至0/1)纯化以给出黄色油状物。将该油状物溶解于石油醚(1L)和MTBE(500mL)中，然后在真空中浓缩，以给出标题化合物。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ7.81(s,1H),7.66(s,1H),5.94-5.81(m,1H),4.90-4.78(m,1H),3.99(br s,2H),3.93-3.84(m,3H),3.81-3.70(m,1H),2.81-2.64(m,4H),2.52(s,3H),2.46-2.31(m,1H),2.11-1.92(m,5H),1.82-1.67(m,1H),1.64-1.52(m,2H),1.38(s,9H)；UPLC-MS-3:Rt＝1.30min；MS m/z[M+H]⁺；604.1/606.1。

合成中间体D1：5-氯-6-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3, 2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-1H-吲唑

步骤D.1：1-氯-2,5-二甲基-4-硝基苯

向2-氯-1,4-二甲基苯(3.40kg，24.2mol)在AcOH(20.0L)中的冰冷的溶液中添加H₂SO₄(4.74kg，48.4.mol，2.58L)随后逐滴添加(滴液漏斗)HNO₃(3.41kg，36.3mol，2.44L，67.0％纯度)在H₂SO₄(19.0kg，193.mol，10.3L)中的冷溶液。然后允许反应混合物在0℃-5℃下搅拌0.5h。将反应混合物缓慢倒入碎冰(35.0L)中并沉淀出黄色固体。将悬浮液过滤并将滤饼用水(5.00L x 5)洗涤以给出黄色固体，其悬浮于MTBE(2.00L)中持续1h，过滤，干燥以给出呈黄色固体的标题化合物。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.90(s,1H),7.34(s,1H),2.57(s,3H),2.42(s,3H)。

步骤D.2：3-溴-2-氯-1,4-二甲基-5-硝基苯

向1-氯-2,5-二甲基-4-硝基苯(步骤D.1，2.00kg，10.8mol)在TFA(10.5L)中的冷却溶液中缓慢添加浓H₂SO₄(4.23kg，43.1mol，2.30L)并将反应混合物在20℃下搅拌。少量分批添加NBS(1.92kg，10.8mol)并将反应混合物在55℃下加热2h。将反应混合物冷却至25℃，然后倒入碎冰溶液以获得浅白色沉淀，其经真空过滤，用冷水洗涤并在真空下干燥以给出呈黄色固体的标题化合物，将其不经进一步纯化用于下一步骤。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.65(s,1H),2.60(s,3H),2.49(s,3H)。

步骤D.3：3-溴-4-氯-2,5-二甲基苯胺

向3-溴-2-氯-1,4-二甲基-5-硝基苯(步骤D.2，2.75kg，10.4mol)在THF(27.5L)中冰冷的溶液中添加HCl(4M，15.6L)然后少量分批添加Zn(2.72kg，41.6mol)。允许反应混合物在25℃下搅拌2h。通过添加饱和NaHCO₃水溶液碱化反应混合物(直至pH＝8)。将混合物用EtOAc(2.50L)稀释并剧烈搅拌10min并且然后通过硅藻土垫过滤。分离有机层并将水层用EtOAc(3.00L x 4)再萃取。将合并的有机层用盐水(10.0L)洗涤，干燥(Na₂SO₄)，过滤并在真空下浓缩以给出呈黄色固体的标题化合物，将其不经进一步纯化用于下一步骤。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ6.59(s,1H),5.23(s,2H),2.22(s,3H),2.18(s,3H)。

步骤D.4：3-溴-4-氯-2,5-二甲基苯重氮四氟硼酸盐

将BF₃.Et₂O(2.00kg，14.1mol，1.74L)溶解于DCM(20.0L)中并在氮气氛下冷却至-5℃至-10℃。将3-溴-4-氯-2,5-二甲基苯胺(步骤D.3，2.20kg，9.38mol)在DCM(5.00L)中的溶液添加至上述反应混合物中并搅拌0.5h。逐滴添加亚硝酸叔丁酯(1.16kg，11.3mol，1.34L)并将反应混合物在相同温度下搅拌1.5h。TLC(石油醚:EtOAc＝5:1)显示起始材料(R_f＝0.45)被完全消耗。将MTBE(3.00L)添加至反应混合物以给出黄色沉淀，其通过真空过滤并用冷MTBE(1.50L x 2)洗涤以给出呈黄色固体的标题化合物，将其不经进一步纯化用于下一步骤。

步骤D.5：4-溴-5-氯-6-甲基-1H-吲唑

向在氯仿(20.0L)中的18-冠-6醚(744g，2.82mol)添加KOAc(1.29kg，13.2mol)并将反应混合物冷却至20℃。然后缓慢添加3-溴-4-氯-2,5-二甲基苯重氮四氟硼酸盐(步骤D.4，3.13kg，9.39mol)。然后允许反应混合物在25℃下搅拌5h。反应完成后，将反应混合物倒入冰冷的水(10.0L)中，并将水层用DCM(5.00L x 3)萃取。将合并的有机层用饱和NaHCO₃水溶液(5.00L)、盐水(5.00L)洗涤，干燥(Na₂SO₄)，过滤并在真空下浓缩以给出呈黄色固体的标题化合物。¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ10.42(br s,1H),8.04(s,1H),7.35(s,1H),2.58(s,3H)。UPLC-MS-1:Rt＝1.02min；MS m/z[M+H]⁺；243/245/247。

步骤D.6：4-溴-5-氯-6-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑

25℃下，向PTSA(89.8g，521mmol)和4-溴-5-氯-6-甲基-1H-吲唑(步骤D.5，1.28kg，5.21mol)在DCM(12.0L)中的溶液中逐滴添加DHP(658g，7.82mol，715mL)。将混合物在25℃下搅拌1h。反应完成后，将反应混合物用水(5.00L)稀释并分离有机层。将水层用DCM(2.00L)再萃取。将合并的有机层用饱和NaHCO₃水溶液(1.50L)、盐水(1.50L)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并在真空下浓缩。将粗残余物通过正相色谱法(洗脱液：石油醚/EtOAc从100/1至10/1)纯化以给出呈黄色固体的标题化合物。¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ8.04(s,1H),7.81(s,1H),5.88-5.79(m,1H),3.92-3.83(m,1H),3.80-3.68(m,1H),2.53(s,3H),2.40-2.32(m,1H),2.06-1.99(m,1H),1.99-1.93(m,1H),1.77-1.69(m,1H),1.60-1.56(m,2H)。UPLC-MS-6:Rt＝1.32min；MS m/z[M+H]⁺；329.0/331.0/333.0

步骤D.7：5-氯-6-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二 氧杂环戊硼烷-2-基)-1H-吲唑(中间体D.1)

将4-溴-5-氯-6-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑(步骤D.6，450g，1.37mol)、KOAc(401g，4.10mol)和B₂Pin₂(520g，2.05mol)在1,4-二噁烷(3.60L)中的悬浮液用氮气脱气0.5h。添加Pd(dppf)Cl₂.CH₂Cl₂(55.7g，68.3mmol)并将反应混合物在90℃下搅拌6h。将反应混合物通过硅藻土过滤并将滤饼用EtOAc(1.50L x 3)洗涤。将混合物在真空下浓缩以给出黑色油状物，其通过正相色谱法(洗脱液：石油醚/EtOAc从100/1至10/1)纯化以给出呈棕色油状物的所希望的产物。将残余物悬浮于石油醚(250mL)中1h以获得白色沉淀。将悬浮液过滤，在真空下干燥以给出呈白色固体的标题化合物。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.17(d,1H),7.52(s,1H),5.69-5.66(m,1H),3.99-3.96(m,1H),3.75-3.70(m,1H),2.51(d,4H),2.21-2.10(m,1H),2.09-1.99(m,1H),1.84-1.61(m,3H),1.44(s,12H)；UPLC-MS-6:Rt＝1.29min；MS m/z[M+H]⁺；377.1/379。

化合物A的合成

步骤1：叔丁基6-(4-(5-氯-6-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-4-基)-5- 甲基-3-(1-甲基-1H-吲唑-5-基)-1H-吡唑-1-基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸酯

在500mL烧瓶中，在氩气下，将叔丁基6-(3-溴-4-(5-氯-6-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-4-基)-5-甲基-1H-吡唑-1-基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸酯(中间体C1，10g，16.5mmol)、(1-甲基-1H-吲唑-5-基)硼酸(6.12g，33.1mmol)、RuPhos(1.16g，2.48mmol)和RuPhos-Pd-G3(1.66g，1.98mmol)悬浮于甲苯(165mL)中。添加K₃PO₄(2M，24.8mL，49.6mmol)并将反应混合物置于预热油浴(95℃)中并搅拌45min。将反应混合物倒入饱和NH₄Cl水溶液并用EtOAc(x3)萃取。将合并的有机层用饱和NaHCO₃水溶液洗涤，干燥(相分离器)并在减压下浓缩。将粗残余物用THF(50mL)中稀释，添加硫醇(15.9mmol)并将混合物在40℃下涡旋1h。过滤混合物，将滤液浓缩并将粗残余物通过正相色谱法(洗脱液：在CH₂Cl₂中的MeOH从0％至2％)纯化，将纯化的级分再次通过正相色谱法(洗脱液：在CH₂Cl₂中的MeOH从0％至2％)纯化以给出呈米黄色泡沫的标题化合物。UPLC-MS-3:Rt＝1.23min；MS m/z[M+H]⁺；656.3/658.3。

步骤2：5-氯-6-甲基-4-(5-甲基-3-(1-甲基-1H-吲唑-5-基)-1-(2-氮杂螺[3.3] 庚烷-6-基)-1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑

将TFA(19.4mL，251mmol)添加至叔丁基6-(4-(5-氯-6-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-4-基)-5-甲基-3-(1-甲基-1H-吲唑-5-基)-1H-吡唑-1-基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸酯(步骤1，7.17g，10.0mmol)在CH₂Cl₂(33mL)中的溶液中。将反应混合物在RT下在氮气下搅拌1.5h。将RM在减压下浓缩以给出呈三氟乙酸盐的标题化合物，将其不经纯化用于下一步骤。UPLC-MS-3:Rt＝0.74min；MS m/z[M+H]⁺；472.3/474.3。

步骤3：1-(6-(4-(5-氯-6-甲基-1H-吲唑-4-基)-5-甲基-3-(1-甲基-1H-吲唑-5- 基)-1H-吡唑-1-基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)丙-2-烯-1-酮

将丙烯酸(0.69mL，10.1mmol)、丙基膦酸酐(在EtOAc中50％，5.94mL，7.53mmol)和DIPEA(21.6mL，126mmol)在CH₂Cl₂(80mL)中的混合物在RT下搅拌20min，然后添加(滴液漏斗)至5-氯-6-甲基-4-(5-甲基-3-(1-甲基-1H-吲唑-5-基)-1-(2-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)-1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑三氟乙酸酯(步骤2，6.30mmol)在CH₂Cl₂(40mL)中的冰冷的溶液中。将反应混合物在RT下在氮气下搅拌15min。将RM倒入饱和NaHCO₃水溶液并用CH₂Cl₂(x3)萃取。将合并的有机层干燥(相分离器)并浓缩。将粗残余物用THF(60mL)稀释并添加LiOH(2N，15.7mL，31.5mmol)。将混合物在RT下搅拌30min直到由丙烯酰氯与吲唑的游离NH基团反应产生的副产物消失(UPLC)，然后倒入饱和NaHCO₃水溶液中并用CH₂Cl₂(3x)萃取。将合并的有机层干燥(相分离器)并浓缩。将粗残余物通过正相色谱法(洗脱液：在CH₂Cl₂中的MeOH从0％至5％)纯化以给出标题化合物。将异构体通过手性SFC(C-SFC-1；流动相：CO₂/[IPA+0.1％Et₃N]:69/31)分离，以给出作为第二洗脱峰的化合物A，即a(R)-1-(6-(4-(5-氯-6-甲基-1H-吲唑-4-基)-5-甲基-3-(1-甲基-1H-吲唑-5-基)-1H-吡唑-1-基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)丙-2-烯-1-酮(白色粉末)：¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ13.1(s,1H),7.89(s,1H),7.59(s,1H),7.55(s,1H),7.42(m,2H),7.30(d,1H),6.33(m,1H),6.12(m,1H),5.68(m,1H),4.91(m,1H),4.40(s,1H),4.33(s,1H),4.11(s,1H),4.04(s,1H),3.95(s,3H),2.96-2.86(m,2H),2.83-2.78(m,2H),2.49(s,3H),2.04(s,3H)；UPLC-MS-4:Rt＝4.22min；MS m/z[M+H]⁺526.3/528.3；C-SFC-3(流动相：CO₂/[IPA+0.1％Et₃N]:67/33)：Rt＝2.23min。实例1的化合物又称为“化合物A”。

获得作为第一洗脱峰的化合物A的阻转异构体，a(S)-1-(6-(4-(5-氯-6-甲基-1H-吲唑-4-基)-5-甲基-3-(1-甲基-1H-吲唑-5-基)-1H-吡唑-1-基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)丙-2-烯-1-酮：C-SFC-3(流动相：CO₂/[IPA+0.1％Et₃N]:67/33)：Rt＝1.55min。

实例2：化合物A(JDQ443)在KRAS G12C突变型CDX模型中显示出抗肿瘤活性，这是 由目标占有率驱动的

在一组不同适应证的KRAS G12C突变型CDX模型中，每日口服剂量为10mg/kg、30mg/kg和100mg/kg时JDQ443的单一药剂抗肿瘤活性。异种移植细胞系为：MIA PaCa-2(PDAC)；NCI-H2122，LU99，HCC-44，NCI-H2030(NSCLC)；和KYSE410(食道癌)。JDQ443以剂量依赖性方式抑制所有模型的生长(图8A)，其中剂量反应动力学和最大反应模式的模型特异性差异从消退(MIA PaCa-2，LU99)，到停滞(HCC44，NCI-H2122)，到中度肿瘤抑制(NCI-H2030，KYSE410)不等。LU99中观察到最大动态范围。相比之下，JDQ443在KRASG12V突变型异种移植模型(NCI-H441；图8B)中未显示生长抑制，这证实了KRASG12C的特异性，并且与体外数据一致。每日一次(QD)或每日两次(BID)施用相同的日剂量，功效得以维持：在MIA PaCa-2中，30mg/kg QD对比15mg/kg BID(图8C)，或在NCI-H2122和LU99中，100mg/kg QD对比50mg/kg BID(图8D-E)。QD对比BID给药的功效与血液中浓度-时间曲线下的可比日面积(AUC)密切相关。

这些发现表明，JDQ443的功效与目标占有率(TO)有关，并且在QD和BID给药下都可以实现有效的AUC暴露。为了表征AUC是否可以充当TO的替代物，研究了LU99异种移植模型中连续输注对比口服给药的效果。每日一次口服给药30mg/kg诱导了约一周的停滞，随后是肿瘤进展，并且100mg/kg诱导了肿瘤消退(图8F)，其中稳态平均浓度(Cav)分别大致为0.3μM和约1μM。为了评估连续给药，经由可编程微量输注泵静脉内递送JDQ443，从而实现接近口服Cav的目标浓度。连续输注和口服给药产生相当的抗肿瘤反应(图8F、G)。PK/PD模型模拟表明，功效与JDQ443的TO和AUC相关性最好(图8H、I)，而不是其他PK指标。

实例3：化合物A强效抑制KRAS G12C H95Q(在临床试验中介导对阿达格拉西布抗 性的双突变体)

GFP标记的KRASG12C H95Q、KRASG12C Y96D或KRASG12C R68S双突变通过定点诱变产生(QuikChange Lightning定点诱变试剂盒(目录号210518)模板：pcDNA3.1(+)EGFP-T2A-FLAG-KRAS G12C)，并通过稳定转染在含有Ba/F3细胞的Cas9中表达。用从10mM的DMSO原液中1/3稀释的10μM开始的剂量反应曲线处理细胞。用指定的化合物处理细胞系72小时，并且用CellTiter-Glo测量细胞的活力。

结果：

与MRTX-849(阿达格拉西布)不同，JDQ443(化合物A)和AMG-510(索托拉西布)强效抑制KRASG12C H95Q双突变体的细胞活力。MRTX-849、AMG-510或JDQ443在指定的浓度和所述环境下(Ba/F3系统，3天增殖测定)不能抑制KRASG12C Y96D或KRASG12C R68S双突变体，并且这些双突变体对所有三种测试的KRASG12C抑制剂产生抗性。

结论：

在KRASG12C H95Q情况下，化合物A可能克服对阿达格拉西布的抗性。另外，由于化合物A与突变型KRAS G12C有独特的结合相互作用，当与索托拉西布和阿达格拉西布相比时，单独的或与如本文所述的一种或多种治疗剂组合的化合物A，可用于治疗先前用其他KRAS G12C抑制剂(如索托拉西布或阿达格拉西布)治疗的患有癌症的患者，或在初始KRASG12C抑制剂治疗中出现获得性KRAS抗性突变后靶向抗性。

实例4：化合物A强效抑制KRAS G12C双突变体

如下还研究了化合物A和其他KRASG12C抑制剂对所报道的赋予对阿达格拉西布抗性的第二位点突变的影响。

材料与方法：

细胞系和KRAS^G12C抑制剂：

除非另外指示，否则Ba/F3细胞系是小鼠原B细胞系，并且在补充有10％的胎牛血清(FBS)(生物概念公司(BioConcept)，#2-01F30-I)、2mM丙酮酸钠(生物概念公司，#5-60F00-H)、2mM稳定的谷氨酰胺(生物概念公司，#5-10K50-H)、10mM HEPES(生物概念公司，#5-31F00-H)的RPMI 1640(生物概念公司，#1-41F01-I)中在37℃和5％CO₂下培养。将亲代Ba/F3细胞在5ng/ml的重组鼠IL-3(生命技术公司(Life Technologies)，#PMC0035)存在下培养。Ba/F3细胞通常依赖IL-3生存和增殖，然而，通过表达致癌基因，它们能够将其依赖性从IL-3转向所表达的致癌基因(Curr Opin Oncology[肿瘤学当代视点],2007年1月；19(1):55-60.doi:10.1097/CCO.0b013e328011a25f.)

单个质粒诱变和Ba/F3稳定细胞系的产生：

使用QuikChange Lightning定点诱变试剂盒(安捷伦公司(Agilent)；#210519)以在pSG5_Flag-(密码子优化)KRAS^G12C_puro质粒模板上产生抗性突变，并通过桑格测序(sanger sequencing)确认序列。

引物	引物序列	SEQ ID NO
			H95R_正向	5'-gtcatttgaagatatccaccgttatcgcgagcagattaaga-3'	552
H95R_反向	5'-tcttaatctgctcgcgataacggtggatatcttcaaatgac-3'	553
			H95Q_正向	5'-tcatttgaagatatccaccagtatcgcgagcagattaagag-3'	554
H95Q_反向	5'-ctcttaatctgctcgcgatactggtggatatcttcaaatga-3'	555
			H95D_正向	5'-agtcatttgaagatatccacgattatcgcgagcagattaag-3'	556
H95D_反向	5'-cttaatctgctcgcgataatcgtggatatcttcaaatgact-3'	557
			MR68S_正向	5'-gaagagtactccgcaatgagcgatcaatacatgaggacg-3'	558
R68S_反向	5'-cgtcctcatgtattgatcgctcattgcggagtactcttc-3'	559
			Y96C_正向	5'-cgaagtcatttgaagatatccaccattgtcgcgagcagatta-3'	560
Y96C_反向	5'-taatctgctcgcgacaatggtggatatcttcaaatgacttcg-3'	561
			Y96D_正向	5'-cgaagtcatttgaagatatccaccatgatcgcgagcagatt-3	562
Y96D_反向	5'-aatctgctcgcgatcatggtggatatcttcaaatgacttcg-3'	563

将突变型质粒用NEON转染试剂盒(英杰公司(Invitrogen)，#MPK10025)通过电穿孔转染到Ba/F3 WT细胞中。因此，用NEON系统(英杰公司，#MPK5000)(使用以下条件：电压(V)1635，宽度(ms)20，脉冲1)来用10μg pf质粒电穿孔二百万个Ba/F3细胞。电穿孔72小时后，以1μg/ml进行嘌呤霉素选择，以产生稳定的细胞系。

IL-3退出(withdrawal)

Ba/F3细胞通常依赖IL-3生存和增殖，然而，通过表达致癌基因，它们能够将其依赖性从IL-3转向所表达的致癌基因。为了评估KRAS^G12C单和双突变体是否能够维持Ba/F3细胞的增殖，在不存在IL-3的情况下培养表达突变构建体的工程化Ba/F3细胞。每三天测量一次细胞数量和活力，并且七天后完成IL-3退出。通过蛋白质印迹(数据未显示，观察到KRAS^G12C/R68S的上移)确认IL-3退出后突变体的表达。

KRASG12C抑制剂的药物反应曲线和抗性突变的验证：

将1000个Ba/F3细胞/孔接种到96孔板(葛莱娜第一生化公司(Greiner Bio-One)，#655098)中。在同一天用Tecan D300e药物分配器进行处理。在Tecan infinitiyM200 Pro读数器(积分时间1000ms)上，使用CellTiter-Glo发光细胞活力测定(普洛麦格公司(Promega)，#G7573)，在处理起始板(第0天)的同一天和处理后三天(第3天)检测活力。

为了确定生长情况，将处理后三天(第3天)的读数相对于起始板(第0天)归一化。然后通过将处理过的孔相对于DMSO处理过的对照样品归一化来计算活力百分比。使用XLfit来制作Sigmoidal剂量-反应模型的拟合曲线(四参数曲线)(图9)。水平的红色虚线代表GI50值。表格数据显示如下。

表：化合物A(JDQ443)对KRAS G12C/H95双突变体增殖的影响。(《STDEV》表示％增 长值的标准偏差)

表：索托拉西布(AMG510)对KRAS G12C/H95双突变体增殖的影响(《STDEV》表示％ 增长值的标准偏差)

表：阿达格拉西布(MRTX-849)对KRAS G12C/H95双突变体增殖的影响(《STDEV》表 示％增长值的标准偏差)

蛋白质印迹

用不同化合物以指定浓度处理指定的时间后，将细胞收集，沉淀并在-80℃下速冻。向每个样品中添加60μL的裂解缓冲液(50mM Tris HCl、120mM NaCl、25mM NaF、40mMβ-甘油磷酸二钠五水合物、1％NP40、1μM微囊藻毒素、0.1mM Na3VO3、0.1mM PMSF、1mM DTT和1mM苯甲脒，每10mL缓冲液补充有1片蛋白酶抑制剂混合片剂(罗氏公司))。然后将样品涡旋，在冰上孵育10min，再涡旋并在4℃下以14000rpm离心10min。用BCA蛋白质测定试剂盒(皮尔斯公司(Pierce)，23225)确定蛋白质浓度。用裂解缓冲液归一到相同的总体积后，添加NuPAGE^TMLDS样品缓冲液4X(英杰公司，NP0007)和NuPAGE^TM样品还原剂10X(英杰公司，NP0009)。将样品在70℃下加热10min，然后加载到NuPAGE^TMNovex^TM4％-12％Bis-Tris Midi蛋白凝胶，26-孔(英杰公司，WG1403A)上。在NuPAGE MESSDS运行缓冲液(英杰公司，NP0002)中，在200V下跑胶45min(PowerPac HC，伯乐公司(Biorad))。使用Turbo^TM系统(伯乐公司)，持续7min将蛋白质以每凝胶135mA转移到Turbo^TMMidi硝酸纤维素转移包膜(伯乐公司，1704159)上，然后用Ponceau红(西格玛公司(Sigma)，P7170)对膜染色。用含有5％乳的TBST在RT下阻断膜。将抗RAS(艾博抗公司(Abcam)，108602)抗体和抗磷酸化ERK 1/2p44/42MAPK(细胞信号传导公司(Cell Signaling)，4370)抗体在4℃下孵育过夜，将抗黏着斑蛋白(西格玛公司，V9131)抗体在RT下孵育1h。将膜用TBST洗涤3次持续5min，并将抗兔(细胞信号传导公司，7074)和抗小鼠(细胞信号传导公司，7076)二抗在RT下孵育1h。将所有抗体在TBST中稀释到1/1000，除抗黏着斑蛋白(1/3000)。在Fusion FX(Vilber Lourmat)上使用FusionCapt Advance FX7软件，用针对Ras和黏着斑蛋白的WesternBright ECL(Advansta公司，K-12045-D20)和SuperSignal West Femto最高灵敏度底物(赛默飞世尔公司(Thermo Fischer)，34096)进行确定。(图10)。

结果

表：化合物A(JDQ443)抑制KRAS G12C/H95双突变体的增殖。用JDQ443(化合物A)、 AMG-510(索托拉西布)和MRTX-849(阿达格拉西布)(从1mM开始进行8点稀释)处理表达指定 FLAG-KRAS^G12C单突变体或双突变体的Ba/F3细胞3天，并通过Cell titer glo活力测定评估 增殖抑制。显示了4个独立实验的GI₅₀±标准偏差(St DV)的平均值。

GI50±St DV[μM]	JDQ443	AMG-510	MRTX-849
				G12C	0.115±0.060	0.389±0.235	0.136±0.071
G12C/H95R	0.024±0.006	0.033±0.008	>1
				G12C/H95Q	0.284±0.041	0.233±0.022	>1
G12C/H95D	0.612±0.151	0.262±0.088	>1
				G12C/R68S	>1	>1	0.707±0.165
G12C/Y96C	>1	>1	>1
				G12C/Y96D	>1	>1	>1

生物物理数据

材料与方法：

试剂的制备：

RAS蛋白构建体的克隆、表达和纯化

本研究中使用的大肠杆菌表达构建体基于pET系统，并使用标准的分子克隆技术产生。在可裂解的N-末端his亲和纯化标签后，编码KRAS、NRAS和HRAS的cDNA包含aa 1-169，并通过GeneArt(赛默飞世尔科技公司(Thermo Fisher Scientific))进行密码子优化和合成。用QuikChange Lightning定点诱变试剂盒(安捷伦公司)引入点突变。通过桑格测序对所有最终的表达构建体进行序列验证。

对两升培养基接种用表达质粒新鲜转化的大肠杆菌BL21(DE3)的预培养物，并用1mM异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(西格玛公司)在18℃下诱导蛋白表达16小时。将带有avi-标签的蛋白质转化到携带表达生物素连接酶BirA的兼容质粒的大肠杆菌中，并在培养基中补充135μM d-生物素(西格玛公司)。

将细胞沉淀重悬于补充有Turbonuclease(默克公司(Merck))和cOmplete蛋白酶抑制剂片剂(罗氏公司)的缓冲液A(20mM Tris、500mM NaCl、5mM咪唑、2mM TCEP、10％甘油，pH 8.0)中。将细胞通过匀浆器(Avestin公司)在800-1000巴下裂解三次，并通过在40000g下离心40min来澄清裂解物。将裂解物加载到安装在Pure 25色谱系统(思拓凡公司(Cytiva))上的HisTrap HP 5ml柱(思拓凡公司)上。将污染的蛋白质用缓冲液A洗去，并将结合的蛋白质用线性梯度洗脱到缓冲液B(补充有200mM咪唑的缓冲液A)中。在透析O/N期间，将无标签和avi-标签蛋白质上的N-末端His亲和纯化标签分别通过TEV或HRV3C蛋白酶裂解。将蛋白溶液重新加载到HisTrap柱上，并收集含有靶蛋白的流。

添加5'-二磷酸鸟苷钠盐(GDP，西格玛公司)或GppNHp-四锂盐(Jena生物科学公司)至超过蛋白质24-32倍的摩尔量。添加EDTA(pH调节至8)至最终浓度为25mM。室温下1小时后，在PD-10脱盐柱(思拓凡公司)上，将缓冲液与40mM Tris、200mM(NH4)2SO4、0.1mMZnCl2，pH 8.0进行交换。将GDP(用于KRAS G12C抗性突变体H95Q/D/R、Y96D/C和R68S)或GppNHp添加至洗脱蛋白质中至超过蛋白质24-32倍的摩尔量。将40U虾碱性磷酸酶(新英格兰生物实验室(New England Biolabs))添加到仅含有样品的GppNHp中。然后将样品在5℃下孵育1小时。最后，添加MgCl2至浓度为约30mM。

然后将蛋白质经HiLoad 16/600 Superdex 200pg柱(思拓凡公司)进一步纯化，该柱用20mM HEPES、150mM NaCl、5mM MgCl2、2mM TCEP预平衡，pH 7.5。

通过RP-HPLC确定蛋白质的纯度和浓度，通过LC-MS确认其身份。通过离子对色谱法确定目前的核苷酸[Eberth等人,2009]。

通过RapidFire MS确定共价速率常数

测定和曲线拟合

在384孔板中制备测试化合物的连续稀释液(50μM，¹/₂稀释液)，并在室温下与1μMKRAS G12C(有/无另外的突变体)在20mM Tris(pH 7.5)、150mM NaCl、100μM MgCl₂、1％DMMSO中孵育。在不同的时间点通过添加1％的甲酸停止反应。使用联接到AgilentRapidFire自动进样器RF360设备的Agilent 6530四极杆飞行时间(QToF)MS系统进行MS测量，得出每个孔的％修饰值。同时，通过比浊法评估化合物溶解度，导致可测浊度的化合物浓度被排除在曲线拟合之外。

绘制％修饰相对于时间的关系图，以提取不同化合物浓度的k_obs值。在第二步中，将获得的k_obs值相对于化合物浓度作图。从所得曲线的初始线性部分得出速率常数(即k_inact/K_I)。

MS测量

使用RapidFire自动进样器RF 360进行注射。将溶剂通过Agilent 1200泵递送。使用C18固相萃取(SPE)筒用于所有的实验。

从384孔板的每个孔中吸出30μL的体积。在1.5mL/min(H2O，0.1％甲酸)的流速下，样品加载/清洗时间为3000ms；洗脱时间为3000ms(乙腈，0.1％甲酸)；在1.25mL/min(H2O，0.1％甲酸)的流速下，再平衡时间为500ms。

在联接到双电喷雾(AJS)离子源(处于正模式)的Agilent 6530四极杆飞行时间(QToF)MS系统上获得质谱(MS)数据。仪器参数如下：气体温度350℃，干燥气体10L/min，雾化器45psi，保护气体350℃，保护气体流速11L/min，毛细管4000V，喷嘴1000V，碎裂电压250V，撇渣器65V，八极RF 750V。以6个谱/s的速度获取数据。质量校准在300-3200m/z范围内进行。

使用Agilent MassHunter定性分析、Agilent Rapid-Fire控制软件和Agilent DAReprocessor Offline Utilities的组合进行所有的数据处理。最大熵算法产生每个注射的单独文件中的零电荷谱。批量处理生成单个文件，将文本格式的所有质谱合并为x，y坐标。将该文件用于计算每个孔中蛋白质修饰的百分比。

结果

使用动力学MS实验对指定的构建体(所有加载GDP的)的修饰的二阶速率常数进行量化，在不同的时间点测量化合物浓度范围内的％修饰。K_inact/K_I是由k_obs相对于化合物浓度曲线的初始斜率推算出来的。将相对于KRAS G12D:GDP的活性设定为1，并给出了抗性突变体的相对活性。下表给出了KRAS G12C的n＝4次实验、G12C_Y96D的n＝3次、和其他突变体的n＝2次的平均值。

表：抗性突变体相对于KRAS G12C的二阶速率常数(K_inact/K_I)的倍数变化

使用动力学MS实验对指定的构建体(所有加载GDP的)的修饰的二阶速率常数进行量化，在不同的时间点测量化合物浓度范围内的％修饰。K_inact/KI是由K_obs相对于化合物浓度曲线的初始斜率推算出来的。给出了KRAS G12C的n＝4次实验、G12C_Y96D的n＝3次、和其他突变体的n＝2次的平均值。

表：化合物A(JDQ443)、索托拉西布和阿达格拉西布相对于抗性突变体的二阶速率 常数(K_inact/KI[mM-1*s-1])

结论

第一代KRAS G12C抑制剂已在临床试验中显示出功效。然而，破坏抑制剂结合和下游通路的重新激活的突变的出现，限制了反应持续时间。据报道，在临床试验中，第二位点突变体赋予了对阿达格拉西布的抗性(参考：N Engl J Med.[新英格兰医学杂志]2021年6月24日；384(25):2382-2393.doi:10.1056/NEJMoa2105281.、Cancer Discov.[癌症发现]2021年8月；11(8):1913-1922.doi:10.1158/2159-8290.CD-21-0365.2021年4月6日在线发表PMID:33824136.)，将这些第二位点突变体在Ba/F3细胞中表达，并分析了与KRAS G12C(GI₅₀＝0.115±0.060mM)相比它们对化合物A(JDQ443)的敏感性。如结合模式所预期的，化合物A抑制了KRAS G12C H95双突变体的增殖和信号传导。化合物A强效抑制G12C/H95R和G12C/H95Q的增殖(分别为GI₅₀＝0.024±0.006mM，GI₅₀＝0.284±0.041mM)，而G12C/R68S、G12C/Y96C和G12C/Y96D的表达赋予了对化合物A的抗性(所有的GI₅₀>1mM)。

令人惊讶的是，尽管化合物A不直接与组氨酸95相互作用，但与H95R或Q相比，G12C/H95D的表达导致对化合物A的敏感性降低(GI₅₀＝0.612±0.151mM)。化合物A处理后pERK的蛋白质印迹分析以及生物物理环境中化合物A朝着这些临床观察到的SWII袋突变的速率常数分析(生物物理数据，上文)都与细胞生长抑制数据一致(参见表)。

H95D与H95R或Q之间的差异可能是由于天冬氨酸的负电荷，其能进一步增加KRASG12C表面的负静电电位。这可能影响配体识别并且因此降低化合物A对该突变体的特异反应性和细胞活性。另一个可能的解释是，H95D突变可能影响KRAS的动力学，从而使得允许化合物A结合的构象变得更难获得。

总之，数据显示，在G12C/Q95R或G12C/H95Q情况下，化合物A应克服阿达格拉西布诱导的抗性。化合物A治疗(特别是在本发明的组合中)在其已显示出活性的G12C/H95Q情况下可能仍然有用。

实例5：与RAS上游和RAS下游信号传导的抑制剂组合增强了JDQ443体内抗肿瘤功 效

在人类KRAS G12C突变型NSCLC和CRC的PDX小组中，评估了RAS上游或RAS下游信号传导的JDQ443±抑制剂的抗肿瘤功效。

通过将患者NSCLC或CRC肿瘤组织直接皮下植入裸鼠，建立了人类NSCLC和CRC的患者源性异种移植(PDX)模型。通过体内连续传代维持PDX模型。

向小鼠群组皮下植入来自每个PDX模型(典型地第4-9次传代)的肿瘤片段。使用了10种NSCLC和9种CRC PDX模型。出于鉴定和跟踪的目的，每个模型都用编码命名，例如30580-HX、30581-HX等。一旦单个小鼠的肿瘤体积达到200-250mm³(T＝0，在蜘蛛图的x轴上)，将它们分配给治疗组或对照组进行给药。将每个PDX模型的一只动物分配到每个治疗组。一旦入组治疗组，每周用卡尺测量两次肿瘤体积，并且使用以下公式以mm³估计肿瘤体积：长度x宽度²/2。每个模型的研究结束被定义为最少28天的治疗，或未经治疗的肿瘤达到1500mm³的持续时间，或未经治疗的肿瘤翻两番的持续时间，以较慢者为准。

使用单独的或与组合配偶体组合的KRAS G12C抑制剂(按100mg/kg QD的化合物A)口服治疗小鼠，如下表所述。例如，化合物A以100mg/kg每日一次(QD)与LXH254(萘普拉非尼)以50mg/kg每日两次(BID)组合给药。

双重组合

三重组合

将化合物A和TNO155配制成在0.1％Tween 80和0.5％甲基纤维素水溶液中的悬浮液。将Raf抑制剂(LXH254(萘普拉非尼))配制成悬浮液。将MEK抑制剂(曲美替尼)在0.2％Tween 80、0.5％羟丙基甲基纤维素(HPMC)中配制成悬浮液，pH调节至pH约8。在pH 7.4磷酸盐缓冲盐水(PBS)缓冲液(pH 4)中的0.5％羟丙基纤维素(HPC)/0.5％Pluronic中，将ERK抑制剂(LTT462(里内特基布))配制成悬浮液。将CDK4/6抑制剂(LEE011)在0.5％甲基纤维素中配制成悬浮液。将PI3K抑制剂(BYL719)配制成在0.5％Tween 80和1％羧甲基纤维素水溶液中的悬浮液。将mTOR抑制剂(RAD001)在5％葡萄糖中进行配制。

对照组未接受治疗。

结果：

在NSCLC和CRC模型中，所有组合治疗的肿瘤体积改善和客观抗肿瘤反应均大于JDQ443单一疗法(图1-6)。类似地，在两种模型中观察到组合治疗对肿瘤体积倍增时间的益处(图7)。

在CRC模型中，在少数模型中，单独的化合物A治疗引起中度抗肿瘤反应。化合物A与每个组合配偶体组合改善了抗肿瘤反应。三重组合似乎进一步改善了反应(图1和2)。

在NSCLC模型中，单独的化合物A治疗在一半的模型中从未引起抗肿瘤反应到引起中度抗肿瘤反应，而在另一半的模型中引起良好的抗肿瘤反应。化合物A与每个组合配偶体组合改善了抗肿瘤反应(图3、4和5)。

实例6：PI3K抑制剂与单独的KRAS G12C抑制剂组合使用或在SHP2抑制剂存在下使用，在3天的增殖测定中显示出最高的协同作用得分。

在KRAS G12C突变型H23细胞系中，在以下项存在的情况下：上游受体激酶抑制剂BGJ398(FGFR抑制剂(图11中标记为“FGFRi”))和厄洛替尼(EGFR抑制剂(图11中标记为“EGFRi”))或曲美替尼(MEK抑制剂(图11中标记为“MEKi”))或PI3K效应子臂抑制剂阿培利司(图11中标记为“PI3Kαi”)和GDC0941(泛PI3K抑制剂(图11中标记为“panPI3Ki”))，以KRAS^G12C抑制剂(图11中标记为“KRAS^G12Ci”)作为单一药剂或与10μM SHP099(SHP2抑制剂(图11中标记为“SHP2i”))组合进行矩阵组合增殖测定(治疗时间3天，细胞滴度发光测定)。

协同作用得分(SS)是通过罗威指数(Loewe index)计算的，并且在每个网格顶部表示为“SS”值。网格中的值是生长抑制(％)值：高于100％的值表示细胞死亡。生长抑制％：0-99＝增殖延迟，100＝生长骤停/停滞，101-200＝细胞数量减少/细胞死亡。

每个网格x轴上的值表示所用KRASG12c抑制剂的浓度(μM)。每个网格y轴上的值示出第二药剂(即分别是FGFR抑制剂、EGFR抑制剂、MEK抑制剂、PI3αK抑制剂和泛PI3K抑制剂)的浓度(μM)。

如图11A和图11B所示，向KRASG12C抑制剂和选自FGFR抑制剂、EGFR抑制剂、MEK抑制剂和PI3K抑制剂的第二药剂的双重组合中添加SHP2抑制剂增加了协同作用得分。例如，协同作用得分从KRASG12 C抑制剂和EGFR抑制剂的双重组合的1.522增加至KRASG12 C抑制剂、EGFR抑制剂和SHP2抑制剂的三重组合的3.533。

在与单独的KRAS G12C抑制剂组合的PI3K抑制剂存在下，或在SHP2抑制剂存在下，获得了最高的协同作用得分(图11A和图11B)。

实例7：在NSCLC细胞系中，与厄洛替尼或西妥昔单抗组合的JDQ443的剂量反应化 合物A和瑞博西尼的组合对NSCLC异种移植模型的有益作用。

在小鼠KRAS G12C和CDKN2A突变型LU99异种移植模型中进行了化合物A与瑞博西尼的组合研究。化合物A单一药剂诱导了肿瘤消退，持续大约两周半，随后在治疗仍在进行时肿瘤复发。瑞博西尼单一药剂对肿瘤生长没有任何影响。组合显著改善了化合物A作为单一药剂所见的反应的可持续性和复发时间。

实例8：在NSCLC异种移植模型中，与用化合物A单一药剂治疗相比，化合物A与SHP2 抑制剂、PI3K抑制剂或CDK4/6抑制剂组合使用延迟了进展时间(TPP)。

在小鼠KRAS G12C、PIK3CA和CDKN2A突变型LU99异种移植模型中，进行了化合物A(JDQ443)作为单一药剂或与TNO155(SHP2抑制剂)、BYL719(阿培利司，PI3K抑制剂)和LEE011(瑞博西尼，CDK4/6抑制剂)组合(双重、三重、四重)的体内功效研究。以100mg/kg每日给药JDQ443诱导了深度肿瘤消退，持续大约两周半，随后在治疗仍在进行时肿瘤复发。与媒介物组相比，每日给予7.5mg/kg TNO155对肿瘤生长没有任何影响。

JDQ443与TNO155、BYL719或LEE011的双重组合、JDQ443与TNO155与BYL719或LEE011的三重组合、以及JDQ443与TNO155、BYL719和LEE011的四重组合改善了JDQ443作为单一药剂所见的反应的可持续性和进展时间，顺序如下：单一药剂<双重组合<三重组合<四重组合(图12)。

实例9：化合物A(JDQ443)与EGFR抑制剂组合用于NSCLC细胞系和CRC细胞系的剂量 反应

在CRC细胞系(SW1463)中，西妥昔单抗和化合物A的组合给化合物A治疗和西妥昔单抗治疗带来了另外的益处(图13，顶部小图)。

在NSCLC(NCI-H358和NCI-H2122)细胞系中，厄洛替尼或西妥昔单抗与化合物A的组合也增加了％生长抑制(图13，中间和底部的小图)。

实例10：化合物A、SOS抑制剂BI-3406，以及化合物A、SOS抑制剂BI-3406的组合对 NSCLC和CRC细胞系的影响。

矩阵组合增殖测定是如下所示进行的。对于每个细胞系，将细胞分配到组织培养处理的384孔板(葛莱娜公司(Greiner)#781098)中，最终体积为25μL/孔。允许细胞粘附并开始生长二十四小时。在治疗前(＝第1天)对平板进行计数，并且另一个平板使用HP D300数字分配器用化合物或DMSO进行处理。七十二小时后，通过每孔补充25μl含有相应化合物或DMSO的培养基来更新培养基。一式三份进行所有处理。

在治疗开始七天后，使用(普洛麦格公司，#G7573)确定细胞生长，该试剂可测量孔中的ATP量。将板平衡至室温约三十分钟，并添加等于细胞培养基体积的一体积的试剂。在轨道振荡器上诱导细胞裂解两分钟，将板在室温下孵育十分钟，并记录发光。

用指定最终浓度的化合物处理细胞。使用XLfit剂量反应单位点模型205得出剂量反应曲线。报告的是减去第1天的读数后，生长抑制相对于DMSO的百分比(百分比GI)。

用SOS抑制剂BI-3406单一药剂处理观察到低生长抑制。添加KRAS G12C抑制剂后观察到组合益处(图14)。

实例11：化合物A作为单一疗法和组合疗法的临床功效

在患有具有KRAS G12C突变的晚期实体瘤(包括KRAS G12C突变型NSCLC和KRASG12C突变型结直肠癌(KontRASt-01(NCT04699188)))的患者中，进行了单独的化合物A(JDQ443)及其与特定药剂组合的Ib/II期开放标签、多中心、剂量递增研究。进行本研究，从而评估JDQ443作为单一药剂以及JDQ443与其他药剂组合的抗肿瘤功效、安全性和耐受性。JDQ443+TNO155和JDQ443+PD1抑制剂(如替雷利珠单抗(tislelizumab))可以用于治疗患有KRAS G12C突变型实体瘤的患者。

待治疗的患者包括：患有晚期KRAS G12C突变型实体瘤的患者，其已经接受过标准护理疗法，或对于批准的疗法不耐受或不具有资格；或者，东部肿瘤协作组体能状态(Eastern Cooperative Oncology Group Performance Status，ECOGPS 0-1)；或者之前没有使用过KRAS^G12C抑制剂进行治疗。JDQ443单一疗法组的主要排除标准是：活动性脑转移和/或之前的KRASG12C抑制剂治疗。

患有NSCLC的患者包括：先前使用基于铂的化学疗法方案和免疫检查点抑制剂组合或顺序治疗的患者，除非没有资格接受此类疗法。

患有CRC的患者包括先前接受标准护理疗法的患者，该疗法包括基于氟嘧啶、奥沙利铂和伊立替康的化学疗法，除非没有资格接受此类疗法。

来自单一疗法剂量递增组研究的初步数据如下。

截止日期2022年1月5日，使用200mg QD、400mg QD、200mg BID或300mg BID的化合物A治疗了39名患者。化合物A是与食物一起施用的。

患者具有的中位数是3个先前线的抗肿瘤疗法。单一疗法的推荐剂量是每日两次(BID)口服200mg化合物A的剂量。来自汇集的Ib期JDQ443单一药剂群组(n＝39)的功效数据(截止2022年1月05日)显示：

·在NSCLC中，在200mg BID时，57％(4/7)确认总体反应率(ORR)

·在NSCLC中，在各剂量下，45％(9/20)确认和未确认ORR

·在NSCLC中，在各剂量下，35％(7/20)确认ORR

·PD/PK建模预测在推荐剂量200mg BID时，持续的高水平目标占有率

化合物A治疗通常是良好耐受的。大多数治疗相关不良事件(TRAE)为1-2级(Gr)。不存在4-5级TRAE。在4个单独的患者中发生四次3级TRAE。最常见的TRAE是疲劳、恶心、水肿、腹泻和呕吐。各自在300mg BID治疗的单独患者中，存在一例DLT(3级疲劳)和一例治疗相关的严重AE(3级光敏反应)。

在推荐的200mg BID的剂量下，存在延长吸收，其中在与食物一起施用后，达到最大血浆浓度(Tmax)的中位时间为3-4hr。在稳定状态下未观察到显著累积，并且也不存在自诱导的证据。半衰期是约7小时，并且稳态曲线下面积(AUCss)比敏感度更低的KRAS G12C异种移植模型的最大功效所需暴露量高出大于三倍。图15示出了稳态下的PK曲线。

预测的目标占有率曲线如图15所示。对患者PK和临床前目标占有率模型进行整合，从而预测在>82％患者中的患者目标占有率>90％。这些模型假设小鼠和人类中的JDQ443结合和靶点(KRAS)转化率相同(KRAS的半衰期约为25hr)，并且仅游离药物可以结合靶点。

图16上半部分和下表中显示了各剂量水平和适应证时的最佳总体反应。

图16下半部分和下表显示了所有患有NSCLC的患者在各剂量水平下的最佳总体反应。所有具有部分反应或未确认的部分反应的患者均在数据截止时继续进行治疗。

NE，不可评估；NSCLC，非小细胞肺癌；ORR，总体反应率；PD，进展性疾病；PR，部分反应；QD，每日一次。

反应是由研究者根据RECIST v1.1评估的。两名(10.0％)患者有uPR，这有助于ORR(确认和未确认的)。uPR＝未确认的PR待确认，正在进行治疗，无PD。在数据截止后，两名具有uPR的患者中有一名具有确认的PR。

·图17显示，PET扫描显示，向患有NSCLC的患者施用200mg BID的化合物A治疗四个周期后，肿瘤肿块的2-[氟-18]-氟-2-脱氧-d-葡萄糖(18-F-FDG)亲合力大幅下降。患者已经接受培美曲塞/派姆单抗、多西他赛、替加氟/吉美嘧啶/奥替拉西和卡铂/紫杉醇/阿特珠单抗。第2周期后扫描显示，与基线相比，靶病灶的最长直径的总和减少了30.4％。PR在后续扫描中得到确认

化合物A和SHP2抑制剂(如TNO155)的组合也显示出临床功效。图18示出了来自患者的第2周期后扫描，该患者患有KRAS G12C突变型十二指肠乳头癌，并且先前已经接受顺铂/吉西他滨和替加氟治疗，每种药物具有进展性疾病的最佳反应。使用JDQ443 200mg QD连续和TNO155 20mg QD 2周施用/1周停用治疗患者。第2周期后扫描显示，与基线相比，靶病灶的最长直径的总和减少了44.2％。

本文提供了两例在首次人体临床试验中接受治疗的患者，从而说明单独的JDQ443或与TNO155组合的临床抗肿瘤活性(图17和图18)。

病例1：患有转移性KRAS G12C突变型NSCLC的57岁老年男性。使用下一代测序(NGS)进行的局部分子测试鉴定出TP53中没有突变。STK11、KEAP1和NRF2的突变状态未知。患者已经接受先前的卡铂/培美曲塞/派姆单抗、多西他赛、替加氟-吉美嘧啶-奥替拉西和卡铂/紫杉醇/阿特珠单抗。他被纳入研究的JDQ443单一疗法剂量递增部分，剂量为JDQ443200mg BID，以21天为周期连续给予。2个治疗周期后的疾病评估显示了RECIST 1.1部分反应，其中与基线相比，靶病灶的最长直径的总和改变了-30.4％。部分反应在随后的扫描中得到确认(图17)，并且患者继续治疗。基线处和4个治疗周期后的正电子发射断层扫描成像也显示肿瘤肿块的2-[氟-18]-氟-2-脱氧-d-葡萄糖亲合力大幅下降。

病例2：患有转移至肝脏的KRAS G12C突变型十二指肠乳头癌的58岁老年女性。通过NGS(Foundation One小组)观察到TP53中存在R175H突变。患者已经接受先前使用顺铂/吉西他滨和替加氟的治疗，这两种方案具有进展性疾病的最佳反应。她被纳入研究的JDQ443+TNO155组的剂量递增部分，并且接受连续的JDQ443 200mg QD，伴随TNO155 20mgQD，2周施用/2周停用。两个治疗周期后的疾病评估显示了RECIST 1.1部分反应，其中与基线相比，靶病灶的最长直径的总和改变了-44.2％(图18)。部分反应在随后的扫描中得到确认，并且患者继续治疗。

实例12：在患有先前治疗的、局部晚期或转移性KRAS G12C突变型NSCLC的患者中， 研究化合物A对比多西他赛的临床研究

进行了一项开放标签研究，该研究被设计为在患有带有KRAS G12C突变的晚期非小细胞肺癌(NSCLC)的参与者中比较作为单一疗法的化合物A与多西他赛，这些参与者先前已用基于铂的化学疗法和免疫检查点抑制剂疗法顺序或组合治疗。

该研究由2个部分组成：

-随机部分将评估与多西他赛相比化合物A作为单一疗法的功效和安全性。

-扩展部分将在最终无进展生存期(PFS)分析后开放(如果主要终点达到统计学意义)，以允许随机接受多西他赛治疗的参与者交叉接受化合物A治疗。

研究群体包括患有局部晚期或转移性(IIIB/IIIC或IV期)KRAS G12C突变型非小细胞肺癌的成年参与者，这些参与者之前接受过顺序或作为组合疗法施用的基于铂的化学疗法和免疫检查点抑制剂疗法。

根据护理标准和产品标签，按照当地准则用化合物A或多西他赛对参与者进行治疗(多西他赛浓缩溶液用于输注，静脉内施用)

主要结果量度包括：

无进展生存期(PFS)

PFS是从随机化/治疗开始的日期到定义为首次记录的进展或任何原因导致的死亡的事件的日期的时间。PFS基于中心评估并使用RECIST 1.1标准。

次要结果量度包括：

·总生存期(OS)

·OS被定义为从随机化日期到任何原因导致的死亡的日期的时间

·总体反应率(ORR)

·ORR被定义为根据RECIST 1.1基于中心和当地研究者的评估，具有完全反应(CR)或部分反应(PR)的最佳总体反应的患者比例。

·疾病控制率(DCR)

·DCR被定义为具有完全反应(CR)、部分反应(PR)、稳定疾病(SD)或非CR/非PD的最佳总体反应(BOR)的参与者比例。

·反应时间(TTR)

·TTR被定义为从随机化的日期到首次记录的反应(CR或PR，必须随后确认)日期的时间

·反应持续时间(DOR)

·DOR计算为从首次记录的反应(完全反应(CR)或部分反应(PR))日期到首次记录的进展或因潜在癌症死亡的日期的时间。

·下一线疗法后的无进展生存期(PFS2)

·PFS2(基于当地研究者评估)被定义为从随机化日期到下一线疗法中首次记录的进展或因任何原因死亡(以先发生者为准)的时间。

·血浆中化合物A及其代谢物的浓度

·表征化合物A及其代谢物HZC320的药代动力学

·东部肿瘤协作组(ECOG)体能状态的至明确恶化时间

·东部肿瘤协作组(ECOG)体能状态(PS)的恶化

·根据QLQ-LC13，胸痛、咳嗽和呼吸困难的明确10分恶化症状评分的时间

·EORTC QLQ LC13是一个13个项目的肺癌专用问卷模块，并且其包括对肺癌相关症状(即咳嗽、咯血、呼吸困难和疼痛)以及常规化学疗法和放射疗法的副作用(即脱发、神经病变、口疮和吞咽困难)的多项目和单项目测量。明确10分恶化的时间被定义为从随机化日期到事件发生日期的时间，该事件定义为相较于基线增加至少10分绝对值(恶化)，以后没有低于阈值的变化或任何原因导致的死亡

·根据QLQ-C30，整体健康状况/QoL明确恶化、呼吸急促和疼痛的时间

·EORTC QLQ-C30是为评估癌症参与者的健康相关生活质量而开发的问卷。该问卷含有30个项目，并且由多项目量表和单项目测量(基于过去一周的参与者经历)组成。其中包括五个领域(身体、角色、情绪、认知和社会功能)，三个症状量表(疲劳、恶心/呕吐和疼痛)，六个单项(呼吸困难、失眠、食欲不振、便秘、腹泻和财务影响)和一个整体健康状况/HRQoL量表。明确10分恶化的时间被定义为从随机化日期到事件发生日期的时间，该事件定义为相较于相应量表评分的基线增加至少10分绝对值(恶化)，以后没有低于阈值的变化或任何原因导致的死亡

·EORTC-QLQ-C30相较于基线的变化

·EORTC QLQ-C30是为评估癌症参与者的健康相关生活质量而开发的问卷。该问卷含有30个项目，并且由多项目量表和单项目测量(基于过去一周的参与者经历)组成。其中包括五个领域(身体、角色、情绪、认知和社会功能)，三个症状量表(疲劳、恶心/呕吐和疼痛)，六个单项(呼吸困难、失眠、食欲不振、便秘、腹泻和财务影响)和一个整体健康状况/HRQoL量表。分数越高表示症状存在程度越高。

·EORTC-QLQ-LC13相较于基线的变化

οEORTC QLQ LC13是一个13个项目的肺癌专用问卷模块，并且其包括对肺癌相关症状(即咳嗽、咯血、呼吸困难和疼痛)以及常规化学疗法和放射疗法的副作用(即脱发、神经病变、口疮和吞咽困难)的多项目和单项目测量。分数越高表示症状存在程度越高。

·EORTC-EQ-5D-5L相较于基线的变化

οEQ-5D-5L是用于描述和评价健康的通用工具。它基于描述系统，该系统从5个维度定义健康：行动能力、自我照顾能力、日常活动、疼痛/不适、和焦虑/抑郁。

·NSCLC-SAQ相较于基线的变化

ο非小细胞肺癌症状评估问卷(NSCLC-SAQ)是一个7个项目的患者报告的结果测量，其评估患者报告的与晚期NSCLC有关的症状。它含有被确定为NSCLC症状的五个领域和伴随项目：咳嗽(1项)、疼痛(2项)、呼吸困难(1项)、疲劳(2项)和食欲(1项)。

·基于血浆中KRAS G12C突变状态的PFS

·基于血浆中KRAS G12C突变状态，比较化合物A相对于多西他赛的临床结果

·基于血浆中KRAS G12C突变状态的OS。

·基于血浆中KRAS G12C突变状态，比较化合物A相对于多西他赛的临床结果

·基于血浆中KRAS G12C突变状态的ORR。

·基于血浆中KRAS G12C突变状态，比较化合物A相对于多西他赛的临床结果

实例13：在患有具有KRAS G12C突变的晚期实体瘤的患者中，JDQ443与选择的组合 的临床研究

可以在患有具有KRAS G12C突变的晚期实体瘤的患者中，进行JDQ443与选择的组合的Ib/II期、多中心、开放标签平台研究。本研究旨在：在患有具有KRAS G12C突变的实体瘤的成年患者中，对JDQ443与选择的疗法组合的安全性、耐受性、药代动力学、药效学和抗肿瘤活性进行表征。

此研究聚焦于如下患者的单个分子子集：这些患者肿瘤中具有KRAS G12C突变，并且基于历史数据，这些患者已经显示出或预测这些患者将对单一药剂KRAS G12C抑制仅有适度的反应性。JDQ443与选择的靶向疗法或其他抗肿瘤疗法的组合，可以预防或克服KRASG12C突变型肿瘤的这种抗性，并且可以实现比以往在类似患者群体中使用KRAS G12C抑制剂单一疗法所见的更深入和更持久的反应。

每个治疗组包括剂量递增部分(Ib期)和II期部分。将在KRAS G12C突变型实体瘤中进行剂量递增(可以在CRC中探索JDQ443+西妥昔单抗)，从而确定安全性/功效，并且确定最大耐受剂量(MTD)和/或推荐剂量(RD)。

研究的II期部分将进一步探索选择的适应证中的RD(例如，NSCLC和CRC，针对JDQ443与选择的疗法组合)。II期的目的是评估抗肿瘤功效，并且进一步探索JDQ443与RD下的选择的疗法组合的安全性和耐受性。

本文提及的所有出版物、专利和登录号均通过引用以其全文特此并入，如同每个单独的出版物或专利被明确且单独地表明通过引用而并入。

本说明书中对“本发明”的提及旨在反映本说明书中披露的数项发明的实施例，并且不应被视为对所要求保护的主题的不必要限制。

应理解，本文所述的实例和实施例仅用于举例说明目的，其各种修饰或改变对于本领域技术人员将是明了的，并包括在本申请的精神和范围内和所附权利要求书的范围内。

虽然已经讨论了本发明的特定实施例，但上述说明是说明性而非限制性的。在综述本说明书和以下权利要求书之后，本发明的许多修改对于本领域的技术人员将是显而易见的。应当通过参考权利要求书及其等同形式的全范围以及说明书连同此类变化来确定本发明的全范围。

序列表

<110> 诺华股份有限公司（Novartis AG）

<120> 包含KRAS G12C抑制剂的药物组合及其用于治疗癌症的用途

<130> PAT059141-WO-PCT

<150> US 63/214001

<151> 2021-06-23

<150> US 63/328442

<151> 2022-04-07

<160> 12

<170> PatentIn3.5版

<210> 552

<211> 41

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多核苷酸

<400> 552

gtcatttgaa gatatccacc gttatcgcga gcagattaag a 41

<210> 553

<211> 41

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多核苷酸

<400> 553

tcttaatctg ctcgcgataa cggtggatat cttcaaatga c 41

<210> 554

<211> 41

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多核苷酸

<400> 554

tcatttgaag atatccacca gtatcgcgag cagattaaga g 41

<210> 555

<211> 41

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多核苷酸

<400> 555

ctcttaatct gctcgcgata ctggtggata tcttcaaatg a 41

<210> 556

<211> 41

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多核苷酸

<400> 556

agtcatttga agatatccac gattatcgcg agcagattaa g 41

<210> 557

<211> 41

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多核苷酸

<400> 557

cttaatctgc tcgcgataat cgtggatatc ttcaaatgac t 41

<210> 558

<211> 39

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多核苷酸

<400> 558

gaagagtact ccgcaatgag cgatcaatac atgaggacg 39

<210> 559

<211> 39

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多核苷酸

<400> 559

cgtcctcatg tattgatcgc tcattgcgga gtactcttc 39

<210> 560

<211> 42

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多核苷酸

<400> 560

cgaagtcatt tgaagatatc caccattgtc gcgagcagat ta 42

<210> 561

<211> 42

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多核苷酸

<400> 561

taatctgctc gcgacaatgg tggatatctt caaatgactt cg 42

<210> 562

<211> 41

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多核苷酸

<400> 562

cgaagtcatt tgaagatatc caccatgatc gcgagcagat t 41

<210> 563

<211> 41

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多核苷酸

<400> 563

aatctgctcg cgatcatggt ggatatcttc aaatgacttc g 41

Claims (39)

1.一种治疗有需要的受试者的癌症或肿瘤的方法，其中所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的单独的或与至少一种另外的治疗活性剂组合的KRAS G12C抑制剂或其药学上可接受的盐。

2.如权利要求1所述的方法，其中所述KRAS G12C抑制剂选自1-{6-[(4M)-4-(5-氯-6-甲基-1H-吲唑-4-基)-5-甲基-3-(1-甲基-1H-吲唑-5-基)-1H-吡唑-1-基]-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-基}丙-2-烯-1-酮(化合物A)、索托拉西布(美商安进公司)、阿达格拉西布(Mirati公司)、D-1553(益方生物)、BI1701963(勃林格公司)、GDC6036(罗氏公司)、JNJ74699157(J&J公司)、X-Chem KRAS(X-Chem公司)、LY3537982(礼来公司)、BI1823911(勃林格公司)、ASKRAS G12C(亚盛药业公司)、SF KRAS G12C(赛诺菲公司)、RMC032(革命药物公司)、JAB-21822(加科思制药公司)、AST-KRAS G12C(艾力斯制药公司)、AZ KRAS G12C(阿斯利康公司)、NYU-12VC1(纽约大学)、和RMC6291(革命药物公司)或其药学上可接受的盐。

3.如权利要求2所述的方法，其中所述KRAS G12C抑制剂选自1-{6-[(4M)-4-(5-氯-6-甲基-1H-吲唑-4-基)-5-甲基-3-(1-甲基-1H-吲唑-5-基)-1H-吡唑-1-基]-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-基}丙-2-烯-1-酮(化合物A)、索托拉西布、阿达格拉西布、D-1553、和GDC6036或其药学上可接受的盐。

4.如权利要求2所述的方法，其中所述KRAS G12C抑制剂是1-{6-[(4M)-4-(5-氯-6-甲基-1H-吲唑-4-基)-5-甲基-3-(1-甲基-1H-吲唑-5-基)-1H-吡唑-1-基]-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-基}丙-2-烯-1-酮(化合物A)或其药学上可接受的盐。

5.如权利要求2所述的方法，其中所述KRAS G12C抑制剂是1-{6-[(4M)-4-(5-氯-6-甲基-1H-吲唑-4-基)-5-甲基-3-(1-甲基-1H-吲唑-5-基)-1H-吡唑-1-基]-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-基}丙-2-烯-1-酮(化合物A)。

6.如权利要求1至5中任一项所述的方法，其中所述另外的治疗活性剂选自由以下组成的组：EGFR抑制剂、SHP2抑制剂、SOS1抑制剂、AKT抑制剂、EGFR抑制剂、SHP2抑制剂(如TNO155或其药学上可接受的盐)、Raf抑制剂、ERK抑制剂、MEK抑制剂、PI3K抑制剂、mTOR抑制剂、CDK4/6抑制剂、FGFR抑制剂及其组合。

7.如权利要求1至5中任一项所述的方法，其中所述至少一种另外的治疗活性剂选自由以下组成的组：EGFR抑制剂(如西妥昔单抗、帕尼单抗、厄洛替尼、吉非替尼、奥西美替尼或纳扎替尼或其药学上可接受的盐)、SOS抑制剂(如BAY-293、BI-3406或BI-1701963或其药学上可接受的盐)、SHP2抑制剂(如NO155(诺华股份有限公司)、JAB3068(加科思公司)、JAB3312(加科思公司)、RLY1971(罗氏公司)、SAR442720(赛诺菲公司)、RMC4450(革命药物公司)、BBP398(Navire公司)、BR790(上海蓝光公司)、SH3809(南京圣和公司)、PF0724982(辉瑞公司)、ERAS601(Erasca公司)、RX-SHP2(Redx制药公司)、ICP189(诺诚健华)、HBI2376(沪亚生物)、ETS001(上海ETERN生物制药公司)、TAS-ASTX(大鹏制药肿瘤学公司)和X-37-SHP2(X-37)或其药学上可接受的盐)、Raf抑制剂(如贝伐非尼或LXH254(萘普拉非尼)或其药学上可接受的盐)、ERK抑制剂(如LTT462(里内特基布)、GDC-0994、KO-947、Vtx-11e、SCH-772984、MK2853、LY3214996或乌利替尼或其药学上可接受的盐)、MEK抑制剂(如匹玛舍替、PD-0325901、塞洛美替尼、曲美替尼、比尼替尼或钴美替尼或其药学上可接受的盐或溶剂化物)、AKT抑制剂(如卡帕沙替尼(AZD5363)或依帕替尼或其药学上可接受的盐)、PI3K抑制剂(如AMG 511、布帕昔布、阿培利司或其药学上可接受的盐)、mTOR抑制剂(如依维莫司或坦罗莫司或其药学上可接受的盐)、和CDK4/6抑制剂(如瑞博西尼、帕博西尼或阿贝西利或其药学上可接受的盐)。

8.如权利要求7所述的方法，其中所述至少一种另外的治疗活性剂是EGFR抑制剂(如西妥昔单抗、帕尼单抗、厄洛替尼、吉非替尼、奥西美替尼或纳扎替尼或其药学上可接受的盐)。

9.如权利要求7所述的方法，其中所述至少一种另外的治疗活性剂是SOS抑制剂(如BAY-293、BI-3406或BI-1701963或其药学上可接受的盐)。

10.如权利要求7所述的方法，其中所述至少一种另外的治疗活性剂是SHP2抑制剂(如JAB3068(加科思公司)、JAB3312(加科思公司)、RLY1971(罗氏公司)、SAR442720(赛诺菲公司)、RMC4450(革命药物公司)、BBP398(Navire公司)、BR790(上海蓝光公司)、SH3809(南京圣和公司)、PF0724982(辉瑞公司)、ERAS601(Erasca公司)、RX-SHP2(Redx制药公司)、ICP189(诺诚健华)、HBI2376(沪亚生物)、ETS001(上海ETERN生物制药公司)、TAS-ASTX(大鹏制药肿瘤学公司)和X-37-SHP2(X-37)或其药学上可接受的盐)。

11.如权利要求7所述的方法，其中所述至少一种另外的治疗活性剂是Raf抑制剂(如贝伐非尼或LXH254(萘普拉非尼)或其药学上可接受的盐)。

12.如权利要求7所述的方法，其中所述至少一种另外的治疗活性剂是ERK抑制剂(如LTT462(里内特基布)、GDC-0994、KO-947、Vtx-11e、SCH-772984、MK2853、LY3214996或乌利替尼或其药学上可接受的盐)。

13.如权利要求7所述的方法，其中所述至少一种另外的治疗活性剂是MEK抑制剂(如匹玛舍替、PD-0325901、塞洛美替尼、曲美替尼、比尼替尼或钴美替尼或其药学上可接受的盐或溶剂化物)，或其中所述至少一种另外的治疗活性剂是AKT抑制剂(如卡帕沙替尼(AZD5363)或依帕替尼或其药学上可接受的盐)。

14.如权利要求7所述的方法，其中所述至少一种另外的治疗活性剂是PI3K抑制剂(如AMG 511、布帕昔布、阿培利司或其药学上可接受的盐)。

15.如权利要求7所述的方法，其中所述至少一种另外的治疗活性剂是mTOR抑制剂(如依维莫司或坦罗莫司或其药学上可接受的盐)。

16.如权利要求7所述的方法，其中所述至少一种另外的治疗活性剂是CDK4/6抑制剂(如瑞博西尼、帕博西尼或阿贝西利或其药学上可接受的盐)。

17.如权利要求1或7所述的方法，其中所述至少一种另外的治疗活性剂是SHP2抑制剂(如TNO155(诺华股份有限公司)、JAB3068(加科思公司)、JAB3312(加科思公司)、RLY1971(罗氏公司)、SAR442720(赛诺菲公司)、RMC4450(革命药物公司)、BBP398(Navire公司)、BR790(上海蓝光公司)、SH3809(南京圣和公司)、PF0724982(辉瑞公司)、ERAS601(Erasca公司)、RX-SHP2(Redx制药公司)、ICP189(诺诚健华(InnoCare))、HBI2376(沪亚生物)、ETS001(上海ETERN生物制药公司)、TAS-ASTX(大鹏制药肿瘤学公司)和X-37-SHP2(X-37)或其药学上可接受的盐)，并且其中所述方法进一步包括向所述受试者施用治疗有效量的选自以下的第三治疗活性剂：

Raf抑制剂(如贝伐非尼或LXH254(萘普拉非尼)或其药学上可接受的盐)、ERK抑制剂(如LTT462(里内特基布)、GDC-0994、KO-947、Vtx-11e、SCH-772984、MK2853、LY3214996或乌利替尼或其药学上可接受的盐)、MEK抑制剂(如匹玛舍替、PD-0325901、塞洛美替尼、曲美替尼、比尼替尼或钴美替尼或其药学上可接受的盐或溶剂化物)、AKT抑制剂(如卡帕沙替尼(AZD5363)或依帕替尼或其药学上可接受的盐)、PI3K抑制剂(如AMG 511、布帕昔布、阿培利司或其药学上可接受的盐)、mTOR抑制剂(如依维莫司或坦罗莫司或其药学上可接受的盐)、和CDK4/6抑制剂(如瑞博西尼、帕博西尼或阿贝西利或其药学上可接受的盐)。

18.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述癌症或肿瘤是选自由以下组成的组的癌症或肿瘤：肺癌(包括肺腺癌、非小细胞肺癌和鳞状细胞肺癌)、结直肠癌(包括结直肠腺癌)、胰腺癌(包括胰腺腺癌)、子宫癌(包括子宫内膜癌)、直肠癌(包括直肠腺癌)、阑尾癌、小肠癌、食道癌、肝胆癌(包括肝癌和胆管癌)、膀胱癌、卵巢癌和实体瘤；或其中所述待治疗的癌症或肿瘤可以选自由以下组成的组：肺癌(包括肺腺癌、非小细胞肺癌和鳞状细胞肺癌)、结直肠癌(包括结直肠腺癌)、胰腺癌(包括胰腺腺癌)、子宫癌(包括子宫内膜癌)、直肠癌(包括直肠腺癌)、阑尾癌、小肠癌、食道癌、肝胆癌(包括肝癌、胆管癌症和胆管癌)、膀胱癌、卵巢癌、十二指肠乳头癌和实体瘤，特别地当所述癌症或肿瘤具有KRAS G12C突变时。

19.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述癌症选自肺癌(如非小细胞肺癌)、结直肠癌、胰腺癌和实体瘤，或其中所述癌症选自非小细胞肺癌、结直肠癌、胆管癌症、卵巢癌、十二指肠乳头癌和胰腺癌，特别地当所述癌症或肿瘤具有KRAS G12C突变时。

20.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述癌症或肿瘤是KRAS G12C突变型癌症或肿瘤。

21.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中同时、分开或经一段时间施用组合疗法中的治疗剂。

22.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中向所述有需要的受试者施用的每种治疗剂的量对治疗所述癌症或肿瘤是有效的。

23.如权利要求3、4、8、9、10、13至17中任一项所述的方法，其中所述SHP2抑制剂是TNO155或其药学上可接受的盐，并且以范围从10至80mg或从10至60mg的总日剂量口服施用。

24.如权利要求18所述的方法，其中TNO155的每日剂量按2周用药、随后1周停药的21天周期施用。

25.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中以范围从50mg至1600mg/天，例如从200至1600mg/天，例如从400至1600mg/天的治疗有效剂量施用化合物A或其药学上可接受的盐。

26.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中以选自50、100、150、200、250、300、350、400、450、500、550和600mg/天的治疗有效剂量施用化合物A或其药学上可接受的盐。

27.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中化合物A的总日剂量每日一次或每日两次施用。

28.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述待治疗的受试者或患者选自：

-患有KRAS G12C突变型实体瘤(例如晚期(转移性或不可切除性)KRAS G12C突变型实体瘤)的患者，任选地其中所述患者已经接受了标准护理疗法但失败了，或者对批准的疗法不耐受或不具有资格；

-患有KRAS G12C突变型NSCLC(例如，晚期(转移性或不可切除性)KRAS G12C突变型NSCLC)的患者，任选地其中所述患者已经接受了组合或顺序进行的基于铂的化学疗法方案和免疫检查点抑制剂疗法但失败了；

-患有KRAS G12C突变型NSCLC(例如，晚期(转移性或不可切除性)KRAS G12C突变型NSCLC)的患者，任选地其中所述患者先前已经用KRAS G12C抑制剂(例如索托拉西布、阿达格拉西布、GDC6036或D-1553)治疗；和

-患有KRAS G12C突变型CRC(例如，晚期(转移性或不可切除性)KRAS G12C突变型CRC)的患者，任选地其中所述患者已经接受了标准护理疗法但失败了，所述标准护理疗法包括基于氟嘧啶、奥沙利铂、和/或伊立替康的化学疗法。

29.一种药物组合，其包含KRAS G12C抑制剂和至少一种另外的治疗活性剂，所述至少一种另外的治疗活性剂是靶向MAPK通路的药剂或靶向并行通路的药剂。

30.一种药物组合，其包含KRAS G12C抑制剂KRAS G12C抑制剂如化合物A或其药学上可接受的盐、以及选自由以下组成的组的治疗活性剂：EGFR抑制剂、SOS抑制剂、SHP2抑制剂(如TNO155或其药学上可接受的盐)、Raf抑制剂、ERK抑制剂、MEK抑制剂、AKT抑制剂、PI3K抑制剂、mTOR抑制剂、CDK4/6抑制剂及其组合。

31.如权利要求29或30所述的药物组合，其中所述另外的药剂选自EGFR抑制剂(如西妥昔单抗、帕尼单抗、阿法替尼、拉帕替尼、厄洛替尼、吉非替尼、奥西美替尼或纳扎替尼)、SOS抑制剂(如BAY-293、BI-3406或BI-1701963)、Raf抑制剂(如贝伐非尼或LXH254(萘普拉非尼))、ERK抑制剂(如LTT462(里内特基布)、GDC-0994、KO-947、Vtx-11e、SCH-772984、MK2853、LY3214996或乌利替尼)、MEK抑制剂(如匹玛舍替、PD-0325901、塞洛美替尼、曲美替尼、比尼替尼或钴美替尼)、AKT抑制剂(如卡帕沙替尼(AZD5363)或依帕替尼)、PI3K抑制剂(如AMG 511、布帕昔布、阿培利司)、mTOR抑制剂(如依维莫司或坦罗莫司)和CDK4/6抑制剂(如瑞博西尼、帕博西尼或阿贝西利)或其药学上可接受的盐。

32.一种药物组合，其包含化合物A或其药学上可接受的盐，以及选自以下的第二药剂：

(i)萘普拉非尼(LXH254)或其药学上可接受的盐；

(ii)曲美替尼、其药学上可接受的盐或溶剂化物，例如其DMSO溶剂化物；

(iii)里内特基布(LTT462)或其药学上可接受的盐，例如其HCl盐；

(iv)阿培利司(BYL719)或其药学上可接受的盐；

(v)瑞博西尼(LEE011)或其药学上可接受的盐，例如其琥珀酸盐；和

(vi)依维莫司(RAD001)、

或其药学上可接受的盐。

33.一种药物组合，其包含：(a)化合物A或其药学上可接受的盐，(b)TNO 155或其药学上可接受的盐，以及选自以下的第三药剂：

(i)萘普拉非尼(LXH254)或其药学上可接受的盐；

(ii)曲美替尼、其药学上可接受的盐或溶剂化物，例如其DMSO溶剂化物；

(iii)里内特基布(LTT462)或其药学上可接受的盐，例如其HCl盐；

(iv)阿培利司(BYL719)或其药学上可接受的盐；

(v)瑞博西尼(LEE011)或其药学上可接受的盐，例如其琥珀酸盐；和

(vi)依维莫司(RAD001)、

或其药学上可接受的盐。

34.如权利要求29至33中任一项所述的药物组合，用于在治疗癌症或实体瘤的方法中使用，其中所述方法是如权利要求1至28中任一项所述的。

35.一种化合物，所述化合物是1-{6-[(4M)-4-(5-氯-6-甲基-1H-吲唑-4-基)-5-甲基-3-(1-甲基-1H-吲唑-5-基)-1H-吡唑-1-基]-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-基}丙-2-烯-1-酮(化合物A)或其药学上可接受的盐，用于在如权利要求1至28中任一项所述的治疗癌症或实体瘤的方法中使用。

36.如权利要求35所述使用的化合物，其中所述癌症或肿瘤选自由以下组成的组：肺癌(包括肺腺癌、非小细胞肺癌和鳞状细胞肺癌)、结直肠癌(包括结直肠腺癌)、胰腺癌(包括胰腺腺癌)、子宫癌(包括子宫内膜癌)、直肠癌(包括直肠腺癌)、阑尾癌、小肠癌、食道癌、肝胆癌(包括肝癌和胆管癌)、膀胱癌、卵巢癌和实体瘤、原发部位不明的癌症，特别地当所述癌症或肿瘤具有KRAS G12C突变时。

37.如权利要求36所述使用的化合物，其中所述化合物与一种或两种另外的治疗活性剂组合施用。

38.如权利要求35至37中任一项所述使用的化合物，用于在治疗癌症或实体瘤的方法中使用，其中所述另外的治疗活性剂选自SHP2抑制剂(如TNO155(诺华股份有限公司)、JAB3068(加科思公司)、JAB3312(加科思公司)、RLY1971(罗氏公司)、SAR442720(赛诺菲公司)、RMC4450(革命药物公司)、BBP398(Navire公司)、BR790(上海蓝光公司)、SH3809(南京圣和公司)、PF0724982(辉瑞公司)、ERAS601(Erasca公司)、RX-SHP2(Redx制药公司)、ICP189(诺诚健华(InnoCare))、HBI2376(沪亚生物)、ETS001(上海ETERN生物制药公司)、TAS-ASTX(大鹏制药肿瘤学公司)和X-37-SHP2(X-37)或其药学上可接受的盐)，并且其中所述方法进一步包括向所述受试者施用治疗有效量的选自以下的第三治疗活性剂：

Raf抑制剂(如贝伐非尼或LXH254(萘普拉非尼)或其药学上可接受的盐)、ERK抑制剂(如LTT462(里内特基布)、GDC-0994、KO-947、Vtx-11e、SCH-772984、MK2853、LY3214996或乌利替尼或其药学上可接受的盐)、MEK抑制剂(如匹玛舍替、PD-0325901、塞洛美替尼、曲美替尼、比尼替尼或钴美替尼或其药学上可接受的盐或溶剂化物)、AKT抑制剂(如卡帕沙替尼(AZD5363)或依帕替尼或其药学上可接受的盐)、PI3K抑制剂(如AMG 511、布帕昔布、阿培利司或其药学上可接受的盐)、mTOR抑制剂(如依维莫司或坦罗莫司或其药学上可接受的盐)、和CDK4/6抑制剂(如瑞博西尼、帕博西尼或阿贝西利或其药学上可接受的盐)。

39.如权利要求中任一项所述的用于在治疗癌症或实体瘤的方法中使用的化合物、或用于在治疗癌症或实体瘤的方法中使用的组合、或治疗癌症或实体瘤的方法，其中所述癌症或实体瘤存在于先前已经接受KRAS G12C抑制剂治疗的患者或KRAS G12C抑制剂初治患者(即先前未接受KRAS G12C抑制剂治疗的患者)中。