TW202233660A - 過表現胰島素樣生長因子受體突變體以調節ｉｇｆ補充 - Google Patents

過表現胰島素樣生長因子受體突變體以調節ｉｇｆ補充 Download PDF

Info

Publication number
TW202233660A
TW202233660A TW110139979A TW110139979A TW202233660A TW 202233660 A TW202233660 A TW 202233660A TW 110139979 A TW110139979 A TW 110139979A TW 110139979 A TW110139979 A TW 110139979A TW 202233660 A TW202233660 A TW 202233660A
Authority
TW
Taiwan
Prior art keywords
glu
leu
ser
val
gly
Prior art date
Application number
TW110139979A
Other languages
English (en)
Inventor
克麗斯汀 瑪莉 達瑞斯
菲迪斯 德維納 雷
Original Assignee
美商安進公司
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 美商安進公司 filed Critical 美商安進公司
Publication of TW202233660A publication Critical patent/TW202233660A/zh

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0603—Embryonic cells ; Embryoid bodies
    • C12N5/0604—Whole embryos; Culture medium therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/72—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants for hormones
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/575—Hormones
    • C07K14/65—Insulin-like growth factors (Somatomedins), e.g. IGF-1, IGF-2
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M29/00—Means for introduction, extraction or recirculation of materials, e.g. pumps
    • C12M29/10—Perfusion
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
    • C12N2501/10—Growth factors
    • C12N2501/105—Insulin-like growth factors [IGF]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2510/00—Genetically modified cells
    • C12N2510/02—Cells for production

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Gynecology & Obstetrics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Sustainable Development (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

提供了用於表現目的重組蛋白的哺乳動物細胞培養之方法。在各種實施方式中，該等方法涉及表現具有組成型活性的IGF1R突變體的哺乳動物細胞。

Description

過表現胰島素樣生長因子受體突變體以調節IGF補充
本發明總體上關於哺乳動物細胞系及其在細胞培養中用於生產重組蛋白之用途。 序列表
本申請包含電腦可讀形式的序列表（檔案名：A-2711-US-PSP Seq List_ST25.txt，創建於2020年10月30日，其大小為127 KB），作為本揭露內容的一個單獨部分，並且藉由援引以其全文併入本文。
生物配製物由於其廣泛的應用而在世界範圍內被用於多種應用中，諸如治療和診斷。哺乳動物細胞系係該等生物配製物的主要表現系統，而中國倉鼠卵巢（CHO）細胞係主要的細胞工廠。參見Lalonde等人, 2017, J Biotechnol [生物技術雜誌] 251:128-140。特別是隨著生物仿製藥的出現，上市速度和成本效益現在比以往任何時候都更重要。
製造生物配製物的成本由於它們利用多步製程的生產的複雜性而非常高昂，該多步製程涉及選擇最佳的細胞系、大量培養生產細胞、以及從細胞收穫物中純化所需的生物配製物。雖然由於對生產的各方面的改進，該等成本正在下降，但作為一線療法而廣泛採用時，其成本仍可能令人望而卻步。與任何製造步驟相關的成本的降低均可導致最終成本的降低。
與生物配製物製造相關的商品成本的一個主要促成原因係所需的細胞培養基和各種補充物。一種這樣的補充物係胰島素樣生長因子1（IGF-1）。
胰島素樣生長因子係通過它們與胰島素樣生長因子受體結合而啟動細胞內傳訊以調控細胞生長、增殖和分化的生長因子。由於IGF-1在細胞生長中的作用，常常在細胞培養基中補充IGF-1，但在重組蛋白的大規模商業製造時，它係昂貴的組分。
因此，需要降低與從宿主細胞生產重組蛋白相關的成本。實現這一目的的一種方式係藉由減少或消除對某些細胞培養基補充物諸如IGF-1的需要來降低商品成本。已經通過為細胞培養基補充血小板源性生長因子BB，在間充質幹細胞中觀察到增強的胰島素樣生長因子1受體（IGF1R）表現。參見美國專利申請公開案號US20200245388。但是這尚未應用於生物配製物的大規模生產，並且仍然會需要補充另一種生長因子。
仍然存在對培養基中的IGF-1補充需求減少或沒有需求並且在對生長和生產力的影響極低的情況下產生重組蛋白的宿主細胞系的需要。此類細胞系將有益於生物配製物的製程開發。
本揭露提供了一種用於從哺乳動物細胞培養過程表現目的蛋白之方法，該方法包括在細胞培養基中培養哺乳動物細胞，其中該哺乳動物細胞包含編碼具有組成型活性的胰島素樣生長因子受體1（IGF1R）突變體的核酸，並且進一步包含編碼該目的蛋白的異源核酸。
在某些實施方式中，該細胞培養基包含少於0.03 mg/L的胰島素樣生長因子（IGF-1）。在某些實施方式中，該細胞培養基不含IGF-1。
在某些實施方式中，該IGF1R突變體由穩定地整合到哺乳動物細胞基因組中的核酸編碼。在某些實施方式中，該IGF1R突變體係經過編輯的內源性IGF1R序列。
在某些實施方式中，在含有0.1 mg/L IGF-1的細胞培養基中，該哺乳動物細胞具有與不含IGF1R突變體的相同譜系的哺乳動物細胞相當的生長速率。
在某些實施方式中，該IGF1R突變體包含SEQ ID NO: 2、4、6、8、10、14或16中任一個的胺基酸序列。在某些實施方式中，該IGF1R突變體包含SEQ ID NO: 2或SEQ ID NO: 4的胺基酸序列。在某些實施方式中，該IGF1R突變體由SEQ ID NO: 2、4、6、8、10、14或16中任一個的胺基酸序列組成。在某些實施方式中，該IGF1R突變體由SEQ ID NO: 2或SEQ ID NO: 4的胺基酸序列組成。在某些實施方式中，該IGF1R由包含SEQ ID NO: 1、3、5、7、9、11、13或15中任一個的核苷酸序列的核酸序列編碼。在某些實施方式中，該IGF1R由包含SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO: 3的核苷酸序列的核酸序列編碼。
在某些實施方式中，採用本文所述之方法，在培養的第10天，所表現的目的蛋白的滴度為至少50 mg/L。
在某些實施方式中，該目的蛋白係抗原結合蛋白。在某些實施方式中，該目的蛋白選自由單株抗體、雙特異性T細胞接合子、免疫球蛋白、Fc融合蛋白和肽體組成之群組。
在某些實施方式中，該哺乳動物細胞培養過程利用補料分批培養過程、灌注培養過程及其組合。
在某些實施方式中，藉由在含有0.03 mg/L或更少IGF-1的無血清培養基中，為至少100 L的生物反應器接種至少0.5×10 6至3.0×10 6個細胞/mL來建立哺乳動物細胞培養。
在某些實施方式中，該等哺乳動物細胞係中國倉鼠卵巢（CHO）細胞。在某些實施方式中，該等CHO細胞缺乏二氫葉酸還原酶（DHFR -）或係麩醯胺酸合成酶敲除（GSKO）型。
在某些實施方式中，該方法進一步包括該目的蛋白的收穫步驟。在某些實施方式中，將收穫的目的蛋白純化並配製成藥學上可接受的配製物。
本揭露還提供了使用本文所述之方法製備的純化的、配製的目的蛋白。
本揭露還提供了一種經基因修飾的哺乳動物細胞，該哺乳動物細胞包含：1) 第一異源核酸，該第一異源核酸包含編碼表現組成型活性IGF1R分子的IGF1R突變體的核苷酸序列；和2) 第二異源核酸，該第二異源核酸包含編碼目的蛋白的核苷酸序列。
在某些實施方式中，該編碼IGF1R突變體的核苷酸序列包含SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO: 3的核苷酸序列。
在某些實施方式中，該第一異源核酸穩定地整合到宿主基因組中。在某些實施方式中，該第一異源核酸係經過編輯的內源性IGF1R序列。
在某些實施方式中，該等哺乳動物細胞係中國倉鼠卵巢（CHO）細胞。在某些實施方式中，該等CHO細胞缺乏二氫葉酸還原酶（DHFR -）或係麩醯胺酸合成酶敲除（GSKO）型。
在某些實施方式中，細胞系能夠在含有0.03 mg/L或更少IGF-1的細胞培養基中生長。
本發明部分地基於這樣的發現，即，IGF1R中維持該受體處於組成型活性狀態的突變避免了對培養基中高水平IGF-1補充的需要。IGF-1係通過IGF1R途徑的傳訊支持細胞生長的蛋白補充物。在不補充IGF-1的情況下可以存活和生長的工程化CHO細胞可以降低大規模重組蛋白生產中補充IGF-1的高成本。命名為delL1和H905C的兩種組成型活性IGF1R突變體（參見Kavran等人, 2014, eLife [生命科學線上], 3:e03772）在CHO細胞系中過表現，並且發現對IGF-1補充的需求降低或沒有需求。
本發明特別適用於在缺乏IGF-1的細胞培養基中商業生產目的蛋白。本發明中使用的細胞系（也稱為「宿主細胞」）經基因工程改造以穩定地表現IGF1R突變體。在某些實施方式中，細胞系還表現具有商業或科學意義的蛋白。細胞系通常源自來自原代培養物的譜系，其可在培養中維持無限時間。基因工程改造細胞系涉及用重組多核苷酸分子轉染、轉化或轉導細胞，和/或以其他方式改變（例如，藉由同源重組和基因活化或重組細胞與非重組細胞的融合）以引起宿主細胞表現IGF1R突變體。用於基因工程改造細胞和/或細胞系以表現例如IGF1R突變體的方法和載體係本領域技術者熟知的；例如，各種技術在Current Protocols in Molecular Biology [分子生物學現代方法]，Ausubel等人編輯（Wiley & Sons [約翰威立父子公司], 紐約, 1988, 和季度更新）；Sambrook等人, Molecular Cloning: A Laboratory Manual [分子選殖：實驗室手冊]（Cold Spring Laboratory Press [冷泉港實驗室出版社], 1989）；Kaufman, R.J., Large Scale Mammalian Cell Culture [大規模哺乳動物細胞培養], 1990, 第15-69頁中說明。 定義
儘管在本申請中使用的術語係本領域中的標準術語，但是本文提供了某些術語的定義以確保請求項的含義的清楚性和確定性。單位、首碼和符號可能會用它們的國際單位制（SI）接受形式表示。本文列舉的數字範圍包括定義範圍的數字，並且包括並支持所定義範圍內的每個整數。除非另外指示，否則本文所述之方法及技術可根據本領域中熟知的常規方法且如貫穿本說明書所引用及論述的各種通用及更特定參考文獻中所描述來進行。參見例如Sambrook等人, Molecular Cloning: A Laboratory Manual [分子選殖：實驗室手冊], 第3版, Cold Spring Harbor Laboratory Press [冷泉港實驗室出版社], 冷泉港, 紐約(2001)和Ausubel等人, Current Protocols in Molecular Biology [分子生物學現代方法], Greene Publishing Associates [格林出版聯合公司] (1992)；以及Harlow和Lane Antibodies: A Laboratory Manual [抗體：實驗室手冊] Cold Spring Harbor Laboratory Press [冷泉港實驗室出版社], 冷泉港, 紐約(1990)。
如本文所用，除非另外明確說明，否則術語「一」和「一個（種）」意指一或多個。此外，除非上下文另有要求，否則單數術語將包括複數且複數術語將包括單數。通常，結合本文中所描述的細胞及組織培養、分子生物學、免疫學、微生物學、遺傳學以及蛋白及核酸化學及雜交而使用的命名法及其技術係本領域中熟知且通常使用的那些命名法及技術。
在本申請中所引用的所有檔或檔的部分，包括但不限於專利、專利申請、論文、書籍、和專著，都藉由援引清楚地併入本文。在本發明之一個實施方式中描述的內容可以與本發明的其他實施方式組合。
本揭露提供了表現「目的蛋白」之方法；「目的蛋白」包括天然存在的蛋白、重組蛋白和工程化蛋白（例如，在自然界中不存在並且已經由人類設計和/或產生的蛋白）。目的蛋白可為，但不必是，已知或懷疑具有治療相關性的蛋白。目的蛋白的特定實例包括抗原結合蛋白（如本文所描述和定義的）、肽體（即，包含直接或間接與其他分子諸如抗體的Fc結構域融合的肽的分子，其中肽部分與所需靶標特異性結合；肽可與Fc區融合或插入到Fc環或經修飾的Fc分子中，例如如藉由援引以其全文併入本文的美國專利申請公開案號US 2006/0140934中所描述）、融合蛋白（例如，Fc融合蛋白，其中Fc片段與蛋白或肽融合，包括肽體）、細胞介素、生長因子、激素和其他天然存在的分泌蛋白，以及天然存在的蛋白的突變體形式。
如本文所用，術語「多肽」和「蛋白」（例如，如在目的蛋白或目的多肽的上下文中所用）在本文中可互換用於指胺基酸殘基的聚合物。該等術語還適用於其中一或多個胺基酸殘基係相應天然存在胺基酸的類似物或模擬物的胺基酸聚合物，以及天然存在的胺基酸聚合物。該等術語還可涵蓋已例如藉由添加碳水化合物殘基以形成糖蛋白而經修飾或經磷酸化的胺基酸聚合物。多肽和蛋白可由天然存在的和非重組的細胞產生，或者多肽和蛋白可由基因工程改造的或重組的細胞產生。多肽和蛋白可包含具有天然蛋白的胺基酸序列的分子，或具有天然序列的一或多個胺基酸的缺失、添加和/或取代的分子。
術語「多肽」和「蛋白」涵蓋僅包含天然存在的胺基酸的分子，以及包含非天然存在的胺基酸的分子。非天然存在的胺基酸（其可以根據需要取代在本文揭露的任何序列中發現的任何天然存在的胺基酸）的實例包括：4-羥基脯胺酸、γ-羧基麩胺酸、ε-N,N,N-三甲基離胺酸、e-N-乙醯基離胺酸、O-磷酸絲胺酸、N-乙醯絲胺酸、N-甲醯基甲硫胺酸、3-甲基組胺酸、5-羥基離胺酸、σ-N-甲基精胺酸、和其他類似的胺基酸和亞胺基酸（例如，4-羥基脯胺酸）。本文使用的多肽標記法中，按照標準用法和慣例，左手方向係胺基末端方向，右手方向係羧基末端方向。
可插入蛋白或多肽序列中或取代蛋白或多肽序列中的野生型殘基的非天然存在的胺基酸的實例的非限制性清單包括β-胺基酸、高胺基酸、環狀胺基酸及具有衍生化側鏈的胺基酸。實例包括（呈L形式或D形式；縮寫如括弧中所示）：瓜胺酸（Cit）、高瓜胺酸（hCit）、Nα-甲基瓜胺酸（NMeCit）、Nα-甲基高瓜胺酸（Nα-MeHoCit）、鳥胺酸（Orn）、Nα-甲基鳥胺酸（Nα-MeOrn或NMeOrn）、肌胺酸（Sar）、高離胺酸（hLys或hK）、高精胺酸（hArg或hR）、高麩醯胺酸（hQ）、Nα-甲基精胺酸（NMeR）、Nα-甲基白胺酸（Nα-MeL或NMeL）、N-甲基高離胺酸（NMeHoK）、Nα-甲基麩醯胺酸（NMeQ）、正白胺酸（Nle）、正纈胺酸（Nva）、1,2,3,4-四氫異喹啉（Tic）、八氫吲哚-2-甲酸（Oic）、3-(1-萘基)丙胺酸（1-Nal）、3-(2-萘基)丙胺酸（2-Nal）、1,2,3,4-四氫異喹啉（Tic）、2-二氫茚基甘胺酸（IgI）、對碘苯丙胺酸（pI-Phe）、對胺基苯丙胺酸（4AmP或4-胺基-Phe）、4-胍基苯丙胺酸（Guf）、甘胺醯基離胺酸（縮寫「K（Nε-甘胺醯基）」或「K（甘胺醯基）」或「K（gly）」）、硝基苯丙胺酸（硝基phe）、胺基苯丙胺酸（胺基phe或胺基-Phe）、苯甲基苯丙胺酸（苯甲基phe）、γ-羧基麩胺酸（γ-羧基glu）、羥基脯胺酸（羥基pro）、對羧基苯丙胺酸（Cpa）、α-胺基己二酸（Aad）、Nα-甲基纈胺酸（NMeVal）、N-α-甲基白胺酸（NMeLeu）、Nα-甲基正白胺酸（NMeNle）、環戊基甘胺酸（Cpg）、環己基甘胺酸（Chg）、乙醯基精胺酸（乙醯基arg）、α,β-二胺基丙酸（Dpr）、α,γ-二胺基丁酸（Dab）、二胺基丙酸（Dap）、環己基丙胺酸（Cha）、4-甲基-苯丙胺酸（MePhe）、β,β-二苯基丙胺酸（BiPhA）、胺基丁酸（Abu）、4-苯基-苯丙胺酸（或聯苯丙胺酸；4Bip）、α-胺基-異丁酸（Aib）、β-丙胺酸、β-胺基丙酸、哌啶甲酸、胺基己酸、胺基庚酸、胺基庚二酸、鎖鏈素、二胺基庚二酸、N-乙基甘胺酸、N-乙基精胺酸、羥基離胺酸、別羥基離胺酸、異鎖鏈素、別異白胺酸、N-甲基甘胺酸、N-甲基異白胺酸、N-甲基纈胺酸、4-羥基脯胺酸（Hyp）、γ-羧基麩胺酸、ε-N,N,N-三甲基離胺酸、ε-N-乙醯基離胺酸、O-磷酸絲胺酸、N-乙醯基絲胺酸、N-甲醯基甲硫胺酸、3-甲基組胺酸、5-羥基離胺酸、ω-甲基精胺酸、4-胺基-O-鄰苯二甲酸（4APA）及其他類似胺基酸，以及具體列出的那些胺基酸中的任一者的衍生化形式。
如本文所用，與核酸結合使用的術語「異源」意指具有宿主細胞內非天然存在的核酸。這可以包括突變的序列，例如不同於天然存在的序列的序列。這可以包括來自其他物種的序列。這還可以包括在基因組中與宿主細胞中天然存在的不同的位置具有序列。這通常不包括可能在宿主細胞中發生的天然突變。例如藉由表現盒的穩定整合，已經含有編碼目的蛋白的異源核酸的細胞將被認為含有異源核酸序列。為清楚起見，具有編碼抗原結合蛋白的核酸的CHO細胞或其衍生物（例如dhfr-或GS敲除型）將被認為具有異源核酸。本揭露考慮了以下兩者：(1) 首先進行修飾以併入編碼如本文所述之突變體IGF1R的核酸序列從而產生例如主細胞庫或工作細胞庫，然後進一步修飾以併入編碼例如抗體的核酸序列的宿主細胞（例如，CHO細胞）；以及 (2) 已經具有編碼目的異源蛋白（例如抗體）的核酸，然後進一步修飾以併入編碼如本文所述之突變體IGF1R的核酸序列的細胞，例如主細胞庫或工作細胞庫。
如本文所用，術語「抗原結合蛋白」以其最廣泛的含義使用，並且意指包含與抗原或靶標結合的部分，視需要包含允許抗原結合部分採用促進抗原結合蛋白與抗原結合的構象的支架或框架部分的蛋白。抗原結合蛋白的實例包括人抗體、人源化抗體；嵌合抗體；重組抗體；單鏈抗體；雙抗體；三抗體；四抗體；Fab片段；F(ab’) 2片段；IgD抗體；IgE抗體；IgM抗體；IgG1抗體；IgG2抗體；IgG3抗體；或IgG4抗體，及其片段。抗原結合蛋白可包含例如替代性蛋白支架或具有接枝的CDR或CDR衍生物的人工支架。此類支架包括但不限於抗體衍生的支架，其包含被引入以例如穩定抗原結合蛋白的三維結構的突變；以及全合成支架，其包含例如生物相容性聚合物。參見例如Korndorfer等人, 2003， Proteins: Structure, Function, and Bioinformatics[蛋白：結構、功能和生物資訊學], 53(1):121-129；Roque等人, 2004, Biotechnol. Prog.[生物技術進展] 20:639-654。另外，可以使用肽抗體模擬物（「PAM」），以及基於利用纖連蛋白組分作為支架的抗體模擬物的支架。
抗原結合蛋白可以具有例如天然存在的免疫球蛋白的結構。「免疫球蛋白」係四聚體分子。在天然存在的免疫球蛋白中，每個四聚體由兩對相同的多肽鏈組成，每對具有一條「輕鏈」（約25 kDa）和一條「重鏈」（約50-70 kDa）。每條鏈的胺基末端部分包括約100至110個或更多個胺基酸的可變區，該可變區主要負責抗原識別。每條鏈的羧基末端部分限定恒定區，主要負責效應子功能。人類輕鏈分成κ和λ輕鏈。重鏈分類為μ、δ、γ、α或ε，並且將抗體的同種型分別定義為IgM、IgD、IgG、IgA和IgE。
天然存在的免疫球蛋白鏈展現出由三個高變區（還稱作互補決定區或CDR）連接的相對保守的框架區（FR）的相同的一般結構。從N-末端到C-末端，輕鏈和重鏈二者包含結構域FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4。可以根據Kabat等人在Sequences of Proteins of Immunological Interest [具有免疫學意義的蛋白序列 ]，第5版，US Dept. of Health and Human Services [美國衛生與公眾服務部], PHS, NIH, NIH公開案號91-3242, (1991)中的定義對每個結構域進行胺基酸分配。根據需要，CDR也可以根據替代性命名方案，諸如Chothia的命名方案重新定義（參見Chothia和Lesk, 1987, J. Mol. Biol.[分子生物學雜誌] 196:901-917；Chothia等人, 1989, Nature[自然] 342:878-883或Honegger和Pluckthun, 2001, J . Mol. Biol.[分子生物學雜誌] 309:657-670）。
在本揭露的上下文中，當解離常數（K D）≤10 -8M時，稱抗原結合蛋白「特異性結合」或「選擇性結合」其靶抗原。當K D≤5×10 -9M時，抗體以「高親和力」特異性結合抗原，當K D≤5×10 -10M時，抗體以「極高的親和力」特異性結合抗原。
除非另有說明，否則術語「抗體」包括任何同種型或亞類的糖基化免疫球蛋白和非糖基化免疫球蛋白，或者其與完整抗體競爭特異性結合的抗原結合區。另外，除非另有說明，否則術語「抗體」係指完整的免疫球蛋白或其與完整抗體競爭特異性結合的抗原結合部分。抗原結合部分可藉由重組DNA技術或藉由完整抗體的酶促裂解或化學裂解產生，並且可形成目的蛋白的元件。抗原結合部分尤其包括Fab、Fab’、F(ab’) 2、Fv、結構域抗體（dAb）、包括互補決定區（CDR）的片段、單鏈抗體（scFv）、嵌合抗體、雙抗體、三抗體、四抗體，以及至少含有足以賦予抗原與多肽特異性結合的免疫球蛋白的一部分的多肽。
Fab片段係具有V L、V H、C L和C H1結構域的單價片段；F(ab’) 2片段係具有由二硫橋在鉸鏈區連接的兩個Fab片段的二價片段；Fd片段具有V H和C H1結構域；Fv片段具有抗體單臂的V L和V H結構域；並且dAb片段具有V H結構域、V L結構域、或V H或V L結構域的抗原結合片段（美國專利案號6,846,634、6,696,245，美國專利申請公開案號2005/0202512、2004/0202995、2004/0038291、2004/0009507、2003/0039958，Ward等人, 1989, Nature[自然] 341:544-546）。
單鏈抗體（scFv）係以下抗體，其中V L和V H區經由連接子（例如，胺基酸殘基的合成序列）連接以形成連續的蛋白鏈，其中該連接子足夠長以允許蛋白鏈自身折回並形成單價抗原結合位點（參見例如Bird等人, 1988, Science[科學]242:423-26和Huston等人, 1988, Proc. Natl. Acad. Sci. USA[美國科學院院刊] 85:5879-83）。雙抗體係包含兩條多肽鏈的二價抗體，其中每條多肽鏈包含藉由連接子連接的V H和V L結構域，該連接子太短而不允許在同一鏈上的兩個結構域之間配對，因此允許每個結構域與另一條多肽鏈上的互補結構域配對（參見例如，Holliger等人, 1993, Proc. Natl. Acad. Sci. USA[美國國家科學院院刊] 90:6444-48；和Poljak等人, 1994, Structure[結構] 2:1121-23）。如果雙抗體的兩條多肽鏈相同，則由它們配對產生的雙抗體將具有兩個相同的抗原結合位點。具有不同序列的多肽鏈可用於製備具有兩個不同抗原結合位點的雙抗體。類似地，三抗體和四抗體係分別包含三條和四條多肽鏈並分別形成三個和四個可以相同或不同的抗原結合位點的抗體。
可以將一或多個CDR共價或非共價併入分子中以使其成為抗原結合蛋白。抗原結合蛋白可併入CDR作為較大多肽鏈的一部分，可共價連接CDR與另一多肽鏈，或者可以非共價併入CDR。CDR容許抗原結合蛋白與特定目的抗原特異性結合。
抗原結合蛋白可具有一或多個結合位點。如果存在多於一個結合位點，則該等結合位點可以彼此相同或者可以不同。例如，天然存在的人免疫球蛋白典型地具有兩個相同的結合位點，而「雙特異性」或「雙功能」抗體具有兩個不同的結合位點。
為了清楚起見，並且如本文所述，注意抗原結合蛋白可以但不必是人來源的（例如，人抗體），並且在一些情況下將包含非人蛋白，例如大鼠或鼠類蛋白，並且在其他情況下抗原結合蛋白可以包含人蛋白和非人蛋白的雜交體（例如，人源化抗體）。
目的蛋白可以包括人抗體。術語「人抗體」包括具有一或多個源自人免疫球蛋白序列的可變區和恒定區的所有抗體。在一個實施方式中，所有可變區和恒定區都源自人免疫球蛋白序列（全人抗體）。此類抗體可以以多種方式製備，包括通過用目的抗原免疫接種經基因修飾以表現源自人重鏈和/或輕鏈編碼基因的抗體的小鼠，諸如源自Xenomouse ®、UltiMab™或Velocimmune ®系統的小鼠。也可以採用基於噬菌體的方法。
替代性地，目的蛋白可包括人源化抗體。「人源化抗體」的序列與源自非人物種的抗體的序列不同之處在於一或多個胺基酸取代、缺失和/或添加，使得與非人物種抗體相比，當向人類受試者投與時，人源化抗體不太可能誘導免疫反應和/或誘導不太嚴重的免疫反應。在一個實施方式中，使非人物種抗體的重鏈和/或輕鏈的框架和恒定結構域中的某些胺基酸突變以產生人源化抗體。在另一個實施方式中，來自人抗體的一或多個恒定結構域融合至非人物種的一或多個可變結構域。如何製備人源化抗體的實例可以在美國專利案號6,054,297、5,886,152和5,877,293中找到。
「Fc」區，當該術語在本文所用時，包含含有抗體的C H2和C H3結構域的兩個重鏈片段。這兩個重鏈片段由兩個或更多個二硫鍵以及由C H3結構域的疏水性相互作用維持在一起。包含Fc區的目的蛋白（包括抗原結合蛋白和Fc融合蛋白）形成本揭露的另一方面。
「半抗體」係包含完整重鏈、完整輕鏈和與完整重鏈的Fc區配對的第二重鏈Fc區的免疫功能性免疫球蛋白構建體。可以但不必採用連接子連接重鏈Fc區和第二重鏈Fc區。在特定的實施方式中，半抗體係本文揭露的抗原結合蛋白的單價形式。在其他實施方式中，可以採用成對的帶電殘基將一個Fc區與第二個Fc區締合。在本揭露的上下文中，半抗體可為目的蛋白。
如本文所用，術語「生物反應器」意指可用於細胞培養物生長的任何容器。本揭露的細胞培養物可以在生物反應器中生長，可以基於在生物反應器中生長的細胞產生的目的蛋白的應用來選擇生物反應器。生物反應器可以具有任何尺寸，只要其可用於細胞培養；典型地，生物反應器的大小適合在其內部生長的細胞培養物的體積。典型地，生物反應器將為至少1升並且可為2、5、10、50、100、200、250、500、1,000、1500、2000、2,500、5,000、8,000、10,000、12,000升或更大，或介於之間的任何體積。在培養期間可以控制生物反應器的內部條件，包括但不限於pH和溫度。本領域的普通技術者將意識到並且將能夠基於相關考慮因素來選擇用於實踐本文揭露的方法的合適的生物反應器。
如本文所用，「細胞培養」或「培養」意指細胞在多細胞生物體或組織外部的生長和繁殖。哺乳動物細胞的合適培養條件係本領域已知的。參見例如Animal cell culture: A Practical Approach [動物細胞培養：一種實用方法], D. Rickwood編輯, Oxford University Press [牛津大學出版社], 紐約(1992)。哺乳動物細胞可以懸浮培養或附著在固體底物上培養。可使用帶有或不帶有微載體的流化床生物反應器、中空纖維生物反應器、滾瓶、搖瓶或攪拌釜式生物反應器。在一個實施方式中，使用500 L至2000 L的生物反應器。在一個實施方式中，使用1000 L至2000 L的生物反應器。
術語「細胞培養基（cell culturing medium）」（也稱為「培養基（culture medium）」、「細胞培養基（cell culture media）」、「組織培養基」）係指用於生長細胞（例如動物或哺乳動物細胞）的任何營養液，並且其通常提供以下至少一或多種組分：能源（通常為碳水化合物，例如葡萄糖的形式）；所有必需胺基酸中的一或多種，通常是二十種鹼性胺基酸，再加上半胱胺酸；典型地以低濃度需要的維生素和/或其他有機化合物；脂質或游離脂肪酸；和微量元素，例如無機化合物或天然存在的元素，其典型地以極低濃度（通常在微莫耳範圍內）需要。
營養溶液可視需要補充另外的視需要的組分以優化細胞生長，諸如激素和其他生長因子，例如胰島素、轉鐵蛋白、表皮生長因子、血清等；鹽，例如鈣鹽、鎂鹽和磷酸鹽，和緩衝液，例如HEPES；核苷和鹼基，例如腺苷、胸苷、次黃嘌呤；以及蛋白和組織水解產物，例如水解的動物或植物蛋白（蛋白腖或蛋白腖混合物，其可以從動物副產品、純化的明膠或植物材料獲得）；抗生素，例如僅大黴素（gentamycin）；細胞保護劑或界面活性劑，諸如Pluronic ®F68（也稱為Lutrol ®F68和Kolliphor ®P188；非離子三嵌段共聚物，其由聚氧丙烯（聚(環氧丙烷)）中心疏水鏈與側翼的兩條聚氧乙烯（聚(環氧乙烷)）親水鏈組成；聚胺，例如腐胺、亞精胺和精胺（參見例如，國際專利申請公開案號WO 2008/154014）和丙酮酸鹽（參見例如美國專利案號8,053,238），這取決於待培養的細胞的需求和/或所需的細胞培養參數。
細胞培養基包括那些典型地用於和/或已知可用於任何細胞培養方法的培養基，例如但不限於分批、延長分批、補料分批和/或灌注或連續培養細胞。
「基礎」（或分批）細胞培養基係指典型地用於引發細胞培養並且足夠完全以支持細胞培養的細胞培養基。
「補料分批培養」係指懸浮培養的形式，並且意指其中在培養過程開始後的一或多個時間向培養物中提供附加組分的培養細胞之方法。所提供的組分通常包含對細胞而言在培養過程中已經耗盡的營養補充物。另外或替代性地，附加組分可以包括補充組分（例如，細胞週期抑制化合物）。補料分批培養通常在某一時刻停止，並且收集培養基中的細胞和/或組分並視需要純化。
「生長」細胞培養基係指典型地在指數生長時期（「生長階段」）用於細胞培養，並且在該階段期間足夠完全以支持細胞培養的細胞培養基。生長細胞培養基還可以含有賦予摻入到宿主細胞系中的選擇性標記抗性或存活性的選擇劑。這樣的選擇劑包括但不限於遺傳黴素（G418）、新黴素、潮黴素B、嘌呤黴素、博來黴素、甲硫胺酸亞碸亞胺、胺甲喋呤、無麩醯胺酸的細胞培養基、缺少甘胺酸的細胞培養基、次黃嘌呤和胸苷、或單獨的胸苷。
「灌注」細胞培養基係典型地用於藉由灌注或連續培養方法來維持的細胞培養，並且足夠完全以在該過程中支持細胞培養的細胞培養基。灌注細胞培養基配製物可以比基礎細胞培養基配製物更豐富或更濃，以適應用於去除用過的培養基的方法。灌注細胞培養基可在生長階段和生產階段期間使用。
「生產」細胞培養基係指這樣的細胞培養基，其典型地在指數生長結束和開始產生蛋白的過渡期，「過渡」和/或「產物」階段期間用於細胞培養，並且足夠完全以在該階段期間維持期望的細胞密度、活力和/或產物滴度。
濃縮細胞培養基可以含有維持細胞培養所必需的一些或全部營養物；具體而言，濃縮培養基可以含有鑒定為或已知在細胞培養的生產階段過程中被消耗的營養物。濃縮培養基可基於幾乎任何細胞培養基配製物。這樣的濃縮補料培養基可以含有細胞培養基的一些或所有組分，例如它們正常量的約2X、3X、4X、5X、6X、7X、8X、9X、10X、12X、14X、16X、20X、30X、50X、100x、200X、400X、600X、800X或甚至約1000X。
用於製備細胞培養基的組分可完全研磨成粉末培養基配製物；根據需要與要添加到細胞培養基中的液體補充物一起部分研磨；或以完全液體形式添加到細胞培養物中。
細胞培養物還可以補充有特定營養物的獨立濃縮補料，該等營養物可能難以配製在細胞培養物中或在細胞培養物中快速耗盡。此類營養物可為胺基酸諸如酪胺酸、半胱胺酸和/或胱胺酸（參見例如國際專利申請公開案號WO 2012/145682）。例如，可以將酪胺酸濃溶液獨立地補料到在含有酪胺酸的細胞培養基中生長的細胞培養物中，使得細胞培養物中酪胺酸的濃度不超過8 mM。在另一個實例中，將酪胺酸和胱胺酸濃溶液獨立地補料到在缺乏酪胺酸、胱胺酸或半胱胺酸的細胞培養基中生長的細胞培養物中。獨立的補料可以在生產階段開始之前或在生產階段時開始。獨立的補料可以藉由在與濃縮補料培養基的同一天或不同天分批補料至細胞培養基來完成。也可以在與灌注介質的同一天或不同天灌注獨立的補料。
「無血清」適用於不含動物血清諸如胎牛血清的細胞培養基。各種組織培養基，包括限定的培養基，係可商購的，例如，可以使用以下細胞培養基中的任一種或組合：RPMI-1640培養基、RPMI-1641培養基、杜爾貝科改良伊格爾培養基（DMEM）、伊格爾最小必需培養基、F-12K培養基、Ham F12培養基、伊斯科夫改良杜爾貝科培養基、McCoy 5A培養基、Leibovitz L-15培養基和無血清培養基諸如EX-CELL TM300系列（堪薩斯州萊內克薩的JRH生物科學公司（JRH Biosciences, Lenexa, Kansas））、MCDB 302（密蘇里州聖路易斯的西格瑪奧德里奇公司（Sigma Aldrich Corp., St. Louis, MO））等。此類培養基的無血清形式也是可用的。根據待培養細胞的需求和/或所需的細胞培養參數，細胞培養基可以補充附加的或增加濃度的組分，諸如胺基酸、鹽、糖、維生素、激素、生長因子、緩衝液、抗生素、脂質、微量元素等。也可以使用定制的細胞培養基。
「細胞密度」係指給定體積的培養基中的細胞數目。「活細胞密度」係指給定體積的培養基中的活細胞數目，如藉由標準活力測定法（諸如台盼藍染料排除法）所測定。
「細胞活力」意指培養物中的細胞在給定的一組培養條件或實驗變化下存活的能力。該術語還指在特定時間，相對於當時培養物中的細胞總數（活的和死的）而言，活的那部分細胞。
「生長停滯」，也可稱為「細胞生長停滯」，係細胞數目停止增加或細胞週期不再進展的點。可藉由測定細胞培養物的活細胞密度來監測生長停滯。處於生長停滯狀態的一些細胞的大小可增加但數目不增加，因此生長停滯的培養物的細胞壓積可增加。如果細胞健康不衰退，藉由逆轉導致生長停滯的條件，可以在一定程度上逆轉生長停滯。
「細胞壓積」（PCV），也稱為「細胞壓積百分比」（%PCV），係以百分比表示的由細胞佔據的體積與細胞培養物的總體積的比率（參見Stettler等人, 2006, Biotechnol Bioeng. [生物技術與生物工程] 12月20日:95(6):1228-33）。細胞壓積係細胞密度和細胞直徑的函數；細胞壓積的增加可由細胞密度或細胞直徑或兩者的增加引起。細胞壓積係細胞培養物中固體含量的量度。在收穫和下游純化期間去除固體。礦石固體意味著在收穫和下游純化步驟期間從所需產物中分離固體材料的更多努力。此外，所需產物可被捕集在固體中並在收穫過程中損失，導致產物收率降低。由於宿主細胞大小不同並且細胞培養物還含有死細胞和垂死細胞以及其他細胞碎片，與細胞密度或活細胞密度相比，細胞壓積係描述細胞培養物內固體含量的更準確的方式。例如，細胞密度為50×10 6個細胞/ml的2000 L培養物根據細胞的大小將具有截然不同的細胞壓積。另外，當處於生長停滯狀態時，一些細胞的大小將增加，因此生長停滯之前和生長停滯之後的細胞壓積將可能不同，這係由於細胞大小增加導致的生物量增加。
「滴度」意指在給定量的培養基體積中由細胞培養物產生的目的多肽或蛋白（其可為天然存在的或重組的目的蛋白）的總量。滴度可以以每毫升培養基（或其他體積量度）中多肽或蛋白的毫克數或微克數為單位表示。「累積滴度」係在培養過程中由細胞產生的滴度，並且可以例如藉由測量每日滴度並使用那些值來計算累積滴度來確定。
如本文所用，術語「宿主細胞」應理解為包括經基因工程改造以表現目的多肽的細胞。基因工程改造細胞系涉及用編碼重組多肽分子的核酸（「目的基因」）轉染、轉化或轉導細胞，和/或以其他方式改變（例如，藉由同源重組和基因活化或重組細胞與非重組細胞的融合）以引起宿主細胞表現所需的重組多肽。用於遺傳工程細胞和/或細胞系以表現目的多肽的方法和載體係本領域技術者熟知的；例如，各種技術在Current Protocols in Molecular Biology[分子生物學現代方法]，Ausubel等人編輯（Wiley & Sons [約翰威立父子公司], 紐約, 1988, 和季度更新）；Sambrook等人, Molecular Cloning: A Laboratory Manual [分子選殖：實驗室手冊]（冷泉實驗室出版社, 1989）；Kaufman, R.J., Large Scale Mammalian Cell Culture [大規模哺乳動物細胞培養], 1990, 第15-69頁中說明。該術語包括親本細胞的後代，無論後代是否與原始親本細胞在形態上或遺傳構成方面相同，只要存在目的基因即可。細胞培養物可包含一或多種宿主細胞。
如本文所用，與IGF1R有關，「組成型活性」係指處於一種構象，其中細胞膜中的受體區域緊密接近，由此在沒有IGF-1結合的情況下受體處於活化狀態。 組成型活性 IGF1R 突變體
IGF1R（胰島素樣生長因子1受體）係在哺乳動物細胞表面發現的蛋白，並且IGF1R係被稱為胰島素樣生長因子1（IGF-1）的激素活化的跨膜受體。IGF1R屬於一大類酪胺酸激酶受體。IGF-1係分子結構類似於胰島素的多肽蛋白激素。另外，IGF-1在成年哺乳動物的生長和合成代謝中起重要作用。
兩個α亞基和兩個β亞基構成IGF1R。α和β亞基兩者均由單一mRNA先質合成。然後先質糖基化，蛋白水解裂解，並藉由半胱胺酸鍵交聯以形成功能性跨膜αβ鏈。參見Gregory等人, 2001, Recent Research Developments in Cancer [最新癌症研究進展]: 437-462。α鏈位於細胞外，而β亞基則跨過膜並負責配位基刺激時的細胞內訊息轉導。α鏈分為五個細胞外結構域（L1、CR、L2、Fn1、Fn2），其後是插入結構域（ID），而β鏈包含細胞外Fn2和Fn3結構域，其後是跨膜（TM）區和酪胺酸激酶結構域。參見Kavran等人, 2014, eLife [生命科學線上] 3:e03772。
IGR1R具有ATP結合位點，該位點用於提供用於自磷酸化的磷酸酯。已經在IGF1R激酶結構域的晶體內鑒定了酪胺酸殘基1165和1166的自磷酸化複合物的結構。參見Xu等人, 2015, Science Signaling [科學訊息] 8(405):rs13。
回應於配位基結合，α鏈誘導β鏈的酪胺酸自磷酸化。該事件觸發細胞內傳訊級聯，細胞內傳訊級聯雖然係細胞類型特異性的，但常常促進細胞存活和細胞增殖。參見Jones等人, 1995, Endocrine Reviews [內分泌綜述] 16(1):3-34和LeRoith等人, 1995, Endocrine Reviews [內分泌綜述] 16(2):143-63。
正是對細胞增殖的這種影響使得為細胞培養基補充IGF-1在重組蛋白的大規模生產中係常見現象。藉由本揭露，已經發現藉由迫使IGF1R進入組成型活性狀態，可以在大規模重組蛋白製造中減少或省略IGF-1，同時保持相似的生長速率和生產率。
在本文揭露的方法和細胞系中，可以使用具有組成型活性的任何IGF1R突變體。這樣的突變體在不存在IGF-1的情況下將具有以下特徵中的一或多個：(1) 每個β亞基的跨膜結構域彼此締合；(2) 受體被磷酸化；以及 (3) 引發傳訊。產生組成型活性IGF1R的策略包括去除整個細胞外結構域，去除細胞外結構域的較小片段，諸如L1結構域，增加細胞外結構域與跨膜結構域之間連接子的長度，以及通過半胱胺酸殘基的插入/缺失在α鏈內產生/去除二硫鍵。
已經描述了兩種示例性突變。參見Kavran等人, 2014, eLife [生命科學線上] 3:e03772。第一種係α鏈的整個L1區域的缺失，該缺失消除了將TM區域間隔開的L1:FN2’-3’之間的亞基間相互作用。第二種係位於ECD與TM之間的細胞外近膜區內的H905C突變（在人序列中）。
這兩種突變體的胺基酸序列和核苷酸序列分別呈現於表1和表2。 [表1]：示例性鼠類IGF1R突變體的序列
SEQ ID NO: ID 序列
1 Del1 ATGAAGTCTGGCTCCGGAGGAGGGTCCCCGACCTCGCTGTGGGGGCTCGTGTTTCTCTCCGCCGCGCTCTCTCTCTGGCCGACGAGTGGATGCCACCCGGAGTGCCTGGGCAGCTGCCACACACCGGACGACAACACAACCTGCGTGGCCTGCAGACACTACTACTACAAAGGCGTGTGTGTGCCTGCCTGCCCGCCTGGCACCTACAGGTTCGAGGGCTGGCGCTGTGTGGATCGCGATTTCTGCGCCAACATCCCCAACGCTGAGAGCAGTGACTCGGATGGCTTCGTTATCCACGACGATGAGTGCATGCAGGAGTGTCCCTCAGGCTTCATCCGCAACAGCACCCAGAGCATGTACTGTATCCCCTGCGAAGGCCCCTGCCCCAAAGTCTGCGGCGATGAAGAGAAGAAAACGAAAACCATCGATTCGGTGACTTCTGCTCAAATGCTCCAAGGATGCACCATCCTGAAGGGCAATCTGCTTATTAACATCCGGAGAGGCAATAACATTGCCTCGGAGTTGGAGAACTTCATGGGGCTCATCGAGGTGGTGACCGGCTACGTGAAGATCCGCCATTCTCATGCCTTGGTCTCCTTGTCCTTCCTGAAGAACCTTCGTCTCATCTTAGGAGAGGAGCAGCTGGAAGGGAACTACTCCTTCTATGTCCTAGACAACCAGAACTTGCAGCAGCTGTGGGACTGGAACCACCGGAACCTGACCGTCAGGTCCGGAAAGATGTACTTTGCTTTCAATCCCAAGCTGTGTGTCTCCGAAATTTACCGCATGGAGGAAGTGACCGGAACCAAGGGACGCCAGAGCAAAGGGGACATAAACACCAGGAACAACGGAGAGCGAGCTTCCTGTGAAAGTGATGTTCTCCGTTTCACCTCCACCACGACCTGGAAGAACCGAATCATCATAACGTGGCACCGGTACCGGCCGCCGGACTACCGGGATCTCATCAGCTTCACAGTTTACTACAAGGAGGCACCATTTAAAAACGTTACGGAATATGACGGGCAGGATGCCTGTGGCTCCAACAGCTGGAACATGGTGGATGTAGACCTGCCTCCGAACAAGGAGGGCGAGCCTGGCATTTTACTGCATGGGCTGAAGCCCTGGACCCAGTATGCTGTCTATGTCAAGGCTGTGACCCTCACCATGGTGGAAAACGACCATATCCGTGGGGCCAAAAGTGAAATCTTGTACATTCGCACCAATGCTTCAGTCCCTTCCATTCCCCTAGATGTCCTCTCAGCATCAAACTCTTCCTCTCAGCTGATTGTGAAGTGGAATCCTCCAACTCTGCCCAATGGTAACTTGAGTTACTACATTGTGAGGTGGCAGCGGCAGCCCCAGGATGGTTACCTGTACCGGCACAACTACTGCTCCAAAGACAAAATACCCATCAGAAAGTACGCCGATGGTACCATCGACGTGGAGGAGGTGACGGAAAATCCCAAGACAGAAGTGTGTGGTGGTGATAAAGGGCCATGCTGCGCTTGCCCTAAAACTGAAGCTGAGAAGCAGGCTGAGAAAGAGGAGGCTGAGTACCGTAAAGTCTTTGAGAATTTCCTTCACAATTCCATCTTTGTGCCCAGGCCCGAAAGGAGGCGGAGAGACGTCATGCAAGTGGCCAACACGACCATGTCCAGCCGAAGCAGGAACACCACGGTAGCTGACACCTACAATATCACAGACCCGGAGGAGTTCGAGACAGAGTACCCTTTCTTTGAGAGCAGAGTGGATAACAAGGAGAGGACTGTCATCTCCAACCTCCGGCCTTTCACTCTGTACCGCATCGATATCCACAGCTGCAACCACGAGGCTGAGAAGCTGGGCTGCAGCGCCTCCAACTTCGTCTTTGCGAGAACCATGCCAGCAGAAGGAGCAGATGATATCCCTGGTCCGGTGACCTGGGAGCCAAGACCCGAAAACTCCATCTTTTTAAAGTGGCCAGAACCCGAGAACCCCAACGGATTGATCCTAATGTATGAAATTAAATACGGGTCGCAAGTCGAGGATCAGCGGGAATGTGTGTCCAGACAGGAGTACAGGAAGTACGGAGGGGCCAAACTCAACCGTCTAAACCCAGGGAACTATACAGCCCGGATTCAGGCTACCTCCCTCTCTGGGAATGGGTCATGGACAGATCCTGTGTTCTTCTATGTCCCCGCCAAAACGACGTATGAGAACTTCATGCATCTGATCATTGCTCTGCCGGTTGCCATCCTGCTGATCGTTGGGGGGCTGGTTATCATGCTGTATGTCTTCCATAGAAAGAGAAATAACAGCAGGTTGGGCAATGGAGTGCTGTATGCTTCTGTGAACCCCGAGTATTTCAGCGCAGCTGATGTGTACGTGCCTGATGAATGGGAGGTAGCTCGAGAGAAGATCACCATGAACCGGGAGCTCGGACAAGGGTCCTTTGGGATGGTCTATGAAGGAGTGGCCAAGGGTGTGGTCAAGGATGAACCCGAAACCAGAGTGGCCATCAAGACGGTAAACGAGGCTGCAAGTATGCGTGAAAGAATCGAGTTTCTCAACGAGGCCTCGGTGATGAAGGAGTTCAATTGTCACCATGTGGTCCGGTTGCTGGGTGTGGTATCCCAAGGCCAGCCCACCCTGGTCATCATGGAACTAATGACACGCGGTGATCTCAAAAGTTATCTCCGGTCTCTGAGGCCAGAAGTGGAGCAGAATAATCTAGTCCTCATTCCTCCGAGCTTAAGCAAGATGATCCAGATGGCTGGAGAGATTGCAGATGGCATGGCCTACCTCAATGCCAACAAGTTCGTCCACAGAGACCTTGCTGCTAGGAACTGCATGGTAGCCGAAGATTTCACAGTCAAAATTGGAGATTTCGGTATGACACGAGACATCTACGAGACGGACTACTACCGGAAAGGCGGGAAGGGGTTGCTGCCTGTGCGCTGGATGTCTCCCGAGTCCCTCAAGGATGGTGTCTTCACTACTCATTCTGATGTCTGGTCCTTCGGGGTCGTCCTCTGGGAGATCGCCACGCTGGCTGAGCAGCCCTACCAGGGCTTGTCCAACGAGCAAGTTCTTCGTTTCGTCATGGAGGGTGGCCTTCTGGACAAGCCGGACAACTGCCCTGATATGCTGTTTGAACTTATGCGCATGTGCTGGCAGTATAACCCCAAGATGCGGCCCTCCTTCCTGGAGATCATCGGCAGCATCAAGGATGAGATGGAGCCCAGCTTCCAGGAGGTCTCCTTCTACTACAGCGAGGAGAACAAGCCTCCCGAGCCAGAGGAGCTGGAGATGGAGCCTGAGAACATGGAGAGCGTCCCACTGGACCCTTCGGCCTCCTCAGCCTCCCTGCCTCTGCCTGAAAGACACTCAGGACACAAGGCTGAGAATGGCCCGGGCCCTGGCGTGCTCGTTCTCCGCGCCAGTTTTGATGAGAGACAGCCTTACGCTCACATGAACGGGGGACGCGCCAACGAGAGGGCCTTGCCTCTGCCCCAGTCCTCGACCTGCTGA
2 Del1    MKSGSGGGSPTSLWGLVFLSAALSLWPTSGCHPECLGSCHTPDDNTTCVACRHYYYKGVCVPACPPGTYRFEGWRCVDRDFCANIPNAESSDSDGFVIHDDECMQECPSGFIRNSTQSMYCIPCEGPCPKVCGDEEKKTKTIDSVTSAQMLQGCTILKGNLLINIRRGNNIASELENFMGLIEVVTGYVKIRHSHALVSLSFLKNLRLILGEEQLEGNYSFYVLDNQNLQQLWDWNHRNLTVRSGKMYFAFNPKLCVSEIYRMEEVTGTKGRQSKGDINTRNNGERASCESDVLRFTSTTTWKNRIIITWHRYRPPDYRDLISFTVYYKEAPFKNVTEYDGQDACGSNSWNMVDVDLPPNKEGEPGILLHGLKPWTQYAVYVKAVTLTMVENDHIRGAKSEILYIRTNASVPSIPLDVLSASNSSSQLIVKWNPPTLPNGNLSYYIVRWQRQPQDGYLYRHNYCSKDKIPIRKYADGTIDVEEVTENPKTEVCGGDKGPCCACPKTEAEKQAEKEEAEYRKVFENFLHNSIFVPRPERRRRDVMQVANTTMSSRSRNTTVADTYNITDPEEFETEYPFFESRVDNKERTVISNLRPFTLYRIDIHSCNHEAEKLGCSASNFVFARTMPAEGADDIPGPVTWEPRPENSIFLKWPEPENPNGLILMYEIKYGSQVEDQRECVSRQEYRKYGGAKLNRLNPGNYTARIQATSLSGNGSWTDPVFFYVPAKTTYENFMHLIIALPVAILLIVGGLVIMLYVFHRKRNNSRLGNGVLYASVNPEYFSAADVYVPDEWEVAREKITMNRELGQGSFGMVYEGVAKGVVKDEPETRVAIKTVNEAASMRERIEFLNEASVMKEFNCHHVVRLLGVVSQGQPTLVIMELMTRGDLKSYLRSLRPEVEQNNLVLIPPSLSKMIQMAGEIADGMAYLNANKFVHRDLAARNCMVAEDFTVKIGDFGMTRDIYETDYYRKGGKGLLPVRWMSPESLKDGVFTTHSDVWSFGVVLWEIATLAEQPYQGLSNEQVLRFVMEGGLLDKPDNCPDMLFELMRMCWQYNPKMRPSFLEIIGSIKDEMEPSFQEVSFYYSEENKPPEPEELEMEPENMESVPLDPSASSASLPLPERHSGHKAENGPGPGVLVLRASFDERQPYAHMNGGRANERALPLPQSSTC
3 H906C ATGAAGTCTGGCTCCGGAGGAGGGTCCCCGACCTCGCTGTGGGGGCTCGTGTTTCTCTCCGCCGCGCTCTCTCTCTGGCCGACGAGTGGAGAAATCTGTGGGCCCGGCATTGACATCCGCAACGACTATCAGCAGCTGAAGCGCCTGGAAAACTGCACGGTGATCGAGGGCTTCCTCCACATCCTGCTCATCTCCAAGGCCGAGGACTACCGAAGCTACCGCTTCCCCAAGCTCACCGTCATCACTGAGTACTTGCTGCTCTTCCGAGTCGCTGGCCTCGAGAGCCTGGGAGACCTCTTCCCCAACCTCACAGTCATCCGTGGCTGGAAACTCTTCTACAACTACGCACTGGTCATCTTCGAGATGACCAATCTCAAGGATATTGGGCTTTATAATCTGAGGAACATTACTCGGGGGGCCATCAGGATTGAGAAGAACGCCGACCTCTGTTACCTCTCCACCATAGACTGGTCTCTCATCTTGGATGCGGTGTCCAATAACTACATTGTGGGGAACAAGCCCCCGAAGGAATGTGGGGACCTGTGTCCAGGGACATTGGAGGAGAAGCCCATGTGTGAGAAGACCACCATCAACAATGAGTACAACTACCGCTGCTGGACCACAAATCGCTGCCAGAAAATGTGCCCAAGTGTGTGCGGGAAGCGAGCCTGCACCGAGAACAACGAGTGCTGCCACCCGGAGTGCCTGGGCAGCTGCCACACACCGGACGACAACACAACCTGCGTGGCCTGCAGACACTACTACTACAAAGGCGTGTGTGTGCCTGCCTGCCCGCCTGGCACCTACAGGTTCGAGGGCTGGCGCTGTGTGGATCGCGATTTCTGCGCCAACATCCCCAACGCTGAGAGCAGTGACTCGGATGGCTTCGTTATCCACGACGATGAGTGCATGCAGGAGTGTCCCTCAGGCTTCATCCGCAACAGCACCCAGAGCATGTACTGTATCCCCTGCGAAGGCCCCTGCCCCAAAGTCTGCGGCGATGAAGAGAAGAAAACGAAAACCATCGATTCGGTGACTTCTGCTCAAATGCTCCAAGGATGCACCATCCTGAAGGGCAATCTGCTTATTAACATCCGGAGAGGCAATAACATTGCCTCGGAGTTGGAGAACTTCATGGGGCTCATCGAGGTGGTGACCGGCTACGTGAAGATCCGCCATTCTCATGCCTTGGTCTCCTTGTCCTTCCTGAAGAACCTTCGTCTCATCTTAGGAGAGGAGCAGCTGGAAGGGAACTACTCCTTCTATGTCCTAGACAACCAGAACTTGCAGCAGCTGTGGGACTGGAACCACCGGAACCTGACCGTCAGGTCCGGAAAGATGTACTTTGCTTTCAATCCCAAGCTGTGTGTCTCCGAAATTTACCGCATGGAGGAAGTGACCGGAACCAAGGGACGCCAGAGCAAAGGGGACATAAACACCAGGAACAACGGAGAGCGAGCTTCCTGTGAAAGTGATGTTCTCCGTTTCACCTCCACCACGACCTGGAAGAACCGAATCATCATAACGTGGCACCGGTACCGGCCGCCGGACTACCGGGATCTCATCAGCTTCACAGTTTACTACAAGGAGGCACCATTTAAAAACGTTACGGAATATGACGGGCAGGATGCCTGTGGCTCCAACAGCTGGAACATGGTGGATGTAGACCTGCCTCCGAACAAGGAGGGCGAGCCTGGCATTTTACTGCATGGGCTGAAGCCCTGGACCCAGTATGCTGTCTATGTCAAGGCTGTGACCCTCACCATGGTGGAAAACGACCATATCCGTGGGGCCAAAAGTGAAATCTTGTACATTCGCACCAATGCTTCAGTCCCTTCCATTCCCCTAGATGTCCTCTCAGCATCAAACTCTTCCTCTCAGCTGATTGTGAAGTGGAATCCTCCAACTCTGCCCAATGGTAACTTGAGTTACTACATTGTGAGGTGGCAGCGGCAGCCCCAGGATGGTTACCTGTACCGGCACAACTACTGCTCCAAAGACAAAATACCCATCAGAAAGTACGCCGATGGTACCATCGACGTGGAGGAGGTGACGGAAAATCCCAAGACAGAAGTGTGTGGTGGTGATAAAGGGCCATGCTGCGCTTGCCCTAAAACTGAAGCTGAGAAGCAGGCTGAGAAGGAGGAGGCTGAGTACCGTAAAGTCTTTGAGAATTTCCTTCACAATTCCATCTTTGTGCCCAGGCCCGAAAGGAGGCGGAGAGACGTCATGCAAGTGGCCAACACGACCATGTCCAGCCGAAGCAGGAACACCACGGTAGCTGACACCTACAATATCACAGACCCGGAGGAGTTCGAGACAGAGTACCCTTTCTTTGAGAGCAGAGTGGATAACAAGGAGAGGACTGTCATCTCCAACCTCCGGCCTTTCACTCTGTACCGCATCGATATCCACAGCTGCAACCACGAGGCTGAGAAGCTGGGCTGCAGCGCCTCCAACTTCGTCTTTGCGAGAACCATGCCAGCAGAAGGAGCAGATGATATCCCTGGTCCGGTGACCTGGGAGCCAAGACCCGAAAACTCCATCTTTTTAAAGTGGCCAGAACCCGAGAACCCCAACGGATTGATCCTAATGTATGAAATTAAATACGGGTCGCAAGTCGAGGATCAGCGGGAATGTGTGTCCAGACAGGAGTACAGGAAGTACGGAGGGGCCAAACTCAACCGTCTAAACCCAGGGAACTATACAGCCCGGATTCAGGCTACCTCCCTCTCTGGGAATGGGTCATGGACAGATCCTGTGTTCTTCTATGTCCCCGCCAAAACGACGTATGAGAACTTCATGTGTCTGATCATTGCTCTGCCGGTTGCCATCCTGCTGATCGTTGGGGGGCTGGTTATCATGCTGTATGTCTTCCATAGAAAGAGAAATAACAGCAGGTTGGGCAATGGAGTGCTGTATGCTTCTGTGAACCCCGAGTATTTCAGCGCAGCTGATGTGTACGTGCCTGATGAATGGGAGGTAGCTCGAGAGAAGATCACCATGAACCGGGAGCTCGGACAAGGGTCCTTTGGGATGGTCTATGAAGGAGTGGCCAAGGGTGTGGTCAAGGATGAACCCGAAACCAGAGTGGCCATCAAGACGGTAAACGAGGCTGCAAGTATGCGTGAAAGAATCGAGTTTCTCAACGAGGCCTCGGTGATGAAGGAGTTCAATTGTCACCATGTGGTCCGGTTGCTGGGTGTGGTATCCCAAGGCCAGCCCACCCTGGTCATCATGGAACTAATGACACGCGGTGATCTCAAAAGTTATCTCCGGTCTCTGAGGCCAGAAGTGGAGCAGAATAATCTAGTCCTCATTCCTCCGAGCTTAAGCAAGATGATCCAGATGGCTGGAGAGATTGCAGATGGCATGGCCTACCTCAATGCCAACAAGTTCGTCCACAGAGACCTTGCTGCTAGGAACTGCATGGTAGCCGAAGATTTCACAGTCAAAATTGGAGATTTCGGTATGACACGAGACATCTACGAGACGGACTACTACCGGAAAGGCGGGAAGGGGTTGCTGCCTGTGCGCTGGATGTCTCCCGAGTCCCTCAAGGATGGTGTCTTCACTACTCATTCTGATGTCTGGTCCTTCGGGGTCGTCCTCTGGGAGATCGCCACGCTGGCTGAGCAGCCCTACCAGGGCTTGTCCAACGAGCAAGTTCTTCGTTTCGTCATGGAGGGTGGCCTTCTGGACAAGCCGGACAACTGCCCTGATATGCTGTTTGAACTTATGCGCATGTGCTGGCAGTATAACCCCAAGATGCGGCCCTCCTTCCTGGAGATCATCGGCAGCATCAAGGATGAGATGGAGCCCAGCTTCCAGGAGGTCTCCTTCTACTACAGCGAGGAGAACAAGCCTCCCGAGCCAGAGGAGCTGGAGATGGAGCCTGAGAACATGGAGAGCGTCCCACTGGACCCTTCGGCCTCCTCAGCCTCCCTGCCTCTGCCTGAAAGACACTCAGGACACAAGGCTGAGAATGGCCCGGGCCCTGGCGTGCTCGTTCTCCGCGCCAGTTTTGATGAGAGACAGCCTTACGCTCACATGAACGGGGGACGCGCCAACGAGAGGGCCTTGCCTCTGCCCCAGTCCTCGACCTGCTGA
4 H906C MKSGSGGGSPTSLWGLVFLSAALSLWPTSGEICGPGIDIRNDYQQLKRLENCTVIEGFLHILLISKAEDYRSYRFPKLTVITEYLLLFRVAGLESLGDLFPNLTVIRGWKLFYNYALVIFEMTNLKDIGLYNLRNITRGAIRIEKNADLCYLSTIDWSLILDAVSNNYIVGNKPPKECGDLCPGTLEEKPMCEKTTINNEYNYRCWTTNRCQKMCPSVCGKRACTENNECCHPECLGSCHTPDDNTTCVACRHYYYKGVCVPACPPGTYRFEGWRCVDRDFCANIPNAESSDSDGFVIHDDECMQECPSGFIRNSTQSMYCIPCEGPCPKVCGDEEKKTKTIDSVTSAQMLQGCTILKGNLLINIRRGNNIASELENFMGLIEVVTGYVKIRHSHALVSLSFLKNLRLILGEEQLEGNYSFYVLDNQNLQQLWDWNHRNLTVRSGKMYFAFNPKLCVSEIYRMEEVTGTKGRQSKGDINTRNNGERASCESDVLRFTSTTTWKNRIIITWHRYRPPDYRDLISFTVYYKEAPFKNVTEYDGQDACGSNSWNMVDVDLPPNKEGEPGILLHGLKPWTQYAVYVKAVTLTMVENDHIRGAKSEILYIRTNASVPSIPLDVLSASNSSSQLIVKWNPPTLPNGNLSYYIVRWQRQPQDGYLYRHNYCSKDKIPIRKYADGTIDVEEVTENPKTEVCGGDKGPCCACPKTEAEKQAEKEEAEYRKVFENFLHNSIFVPRPERRRRDVMQVANTTMSSRSRNTTVADTYNITDPEEFETEYPFFESRVDNKERTVISNLRPFTLYRIDIHSCNHEAEKLGCSASNFVFARTMPAEGADDIPGPVTWEPRPENSIFLKWPEPENPNGLILMYEIKYGSQVEDQRECVSRQEYRKYGGAKLNRLNPGNYTARIQATSLSGNGSWTDPVFFYVPAKTTYENFMHLIIALPVAILLIVGGLVIMLYVFHRKRNNSRLGNGVLYASVNPEYFSAADVYVPDEWEVAREKITMNRELGQGSFGMVYEGVAKGVVKDEPETRVAIKTVNEAASMRERIEFLNEASVMKEFNCHHVVRLLGVVSQGQPTLVIMELMTRGDLKSYLRSLRPEVEQNNLVLIPPSLSKMIQMAGEIADGMAYLNANKFVHRDLAARNCMVAEDFTVKIGDFGMTRDIYETDYYRKGGKGLLPVRWMSPESLKDGVFTTHSDVWSFGVVLWEIATLAEQPYQGLSNEQVLRFVMEGGLLDKPDNCPDMLFELMRMCWQYNPKMRPSFLEIIGSIKDEMEPSFQEVSFYYSEENKPPEPEELEMEPENMESVPLDPSASSASLPLPERHSGHKAENGPGPGVLVLRASFDERQPYAHMNGGRANERALPLPQSSTC
[表2]：示例性人IGF1R突變體的序列
SEQ ID NO: ID 序列
5 Del1 ATGAAGTCTGGCTCCGGAGGAGGGTCCCCGACCTCGCTGTGGGGGCTCCTGTTTCTCTCCGCCGCGCTCTCGCTCTGGCCGACGAGTGGATGCCACCCCGAGTGCCTGGGCAGCTGCAGCGCGCCTGACAACGACACGGCCTGTGTAGCTTGCCGCCACTACTACTATGCCGGTGTCTGTGTGCCTGCCTGCCCGCCCAACACCTACAGGTTTGAGGGCTGGCGCTGTGTGGACCGTGACTTCTGCGCCAACATCCTCAGCGCCGAGAGCAGCGACTCCGAGGGGTTTGTGATCCACGACGGCGAGTGCATGCAGGAGTGCCCCTCGGGCTTCATCCGCAACGGCAGCCAGAGCATGTACTGCATCCCTTGTGAAGGTCCTTGCCCGAAGGTCTGTGAGGAAGAAAAGAAAACAAAGACCATTGATTCTGTTACTTCTGCTCAGATGCTCCAAGGATGCACCATCTTCAAGGGCAATTTGCTCATTAACATCCGACGGGGGAATAACATTGCTTCAGAGCTGGAGAACTTCATGGGGCTCATCGAGGTGGTGACGGGCTACGTGAAGATCCGCCATTCTCATGCCTTGGTCTCCTTGTCCTTCCTAAAAAACCTTCGCCTCATCCTAGGAGAGGAGCAGCTAGAAGGGAATTACTCCTTCTACGTCCTCGACAACCAGAACTTGCAGCAACTGTGGGACTGGGACCACCGCAACCTGACCATCAAAGCAGGGAAAATGTACTTTGCTTTCAATCCCAAATTATGTGTTTCCGAAATTTACCGCATGGAGGAAGTGACGGGGACTAAAGGGCGCCAAAGCAAAGGGGACATAAACACCAGGAACAACGGGGAGAGAGCCTCCTGTGAAAGTGACGTCCTGCATTTCACCTCCACCACCACGTCGAAGAATCGCATCATCATAACCTGGCACCGGTACCGGCCCCCTGACTACAGGGATCTCATCAGCTTCACCGTTTACTACAAGGAAGCACCCTTTAAGAATGTCACAGAGTATGATGGGCAGGATGCCTGCGGCTCCAACAGCTGGAACATGGTGGACGTGGACCTCCCGCCCAACAAGGACGTGGAGCCCGGCATCTTACTACATGGGCTGAAGCCCTGGACTCAGTACGCCGTTTACGTCAAGGCTGTGACCCTCACCATGGTGGAGAACGACCATATCCGTGGGGCCAAGAGTGAGATCTTGTACATTCGCACCAATGCTTCAGTTCCTTCCATTCCCTTGGACGTTCTTTCAGCATCGAACTCCTCTTCTCAGTTAATCGTGAAGTGGAACCCTCCCTCTCTGCCCAACGGCAACCTGAGTTACTACATTGTGCGCTGGCAGCGGCAGCCTCAGGACGGCTACCTTTACCGGCACAATTACTGCTCCAAAGACAAAATCCCCATCAGGAAGTATGCCGACGGCACCATCGACATTGAGGAGGTCACAGAGAACCCCAAGACTGAGGTGTGTGGTGGGGAGAAAGGGCCTTGCTGCGCCTGCCCCAAAACTGAAGCCGAGAAGCAGGCCGAGAAGGAGGAGGCTGAATACCGCAAAGTCTTTGAGAATTTCCTGCACAACTCCATCTTCGTGCCCAGACCTGAAAGGAAGCGGAGAGATGTCATGCAAGTGGCCAACACCACCATGTCCAGCCGAAGCAGGAACACCACGGCCGCAGACACCTACAACATCACCGACCCGGAAGAGCTGGAGACAGAGTACCCTTTCTTTGAGAGCAGAGTGGATAACAAGGAGAGAACTGTCATTTCTAACCTTCGGCCTTTCACATTGTACCGCATCGATATCCACAGCTGCAACCACGAGGCTGAGAAGCTGGGCTGCAGCGCCTCCAACTTCGTCTTTGCAAGGACTATGCCCGCAGAAGGAGCAGATGACATTCCTGGGCCAGTGACCTGGGAGCCAAGGCCTGAAAACTCCATCTTTTTAAAGTGGCCGGAACCTGAGAATCCCAATGGATTGATTCTAATGTATGAAATAAAATACGGATCACAAGTTGAGGATCAGCGAGAATGTGTGTCCAGACAGGAATACAGGAAGTATGGAGGGGCCAAGCTAAACCGGCTAAACCCGGGGAACTACACAGCCCGGATTCAGGCCACATCTCTCTCTGGGAATGGGTCGTGGACAGATCCTGTGTTCTTCTATGTCCAGGCCAAAACAGGATATGAAAACTTCATCCATCTGATCATCGCTCTGCCCGTCGCTGTCCTGTTGATCGTGGGAGGGTTGGTGATTATGCTGTACGTCTTCCATAGAAAGAGAAATAACAGCAGGCTGGGGAATGGAGTGCTGTATGCCTCTGTGAACCCGGAGTACTTCAGCGCTGCTGATGTGTACGTTCCTGATGAGTGGGAGGTGGCTCGGGAGAAGATCACCATGAGCCGGGAACTTGGGCAGGGGTCGTTTGGGATGGTCTATGAAGGAGTTGCCAAGGGTGTGGTGAAAGATGAACCTGAAACCAGAGTGGCCATTAAAACAGTGAACGAGGCCGCAAGCATGCGTGAGAGGATTGAGTTTCTCAACGAAGCTTCTGTGATGAAGGAGTTCAATTGTCACCATGTGGTGCGATTGCTGGGTGTGGTGTCCCAAGGCCAGCCAACACTGGTCATCATGGAACTGATGACACGGGGCGATCTCAAAAGTTATCTCCGGTCTCTGAGGCCAGAAATGGAGAATAATCCAGTCCTAGCACCTCCAAGCCTGAGCAAGATGATTCAGATGGCCGGAGAGATTGCAGACGGCATGGCATACCTCAACGCCAATAAGTTCGTCCACAGAGACCTTGCTGCCCGGAATTGCATGGTAGCCGAAGATTTCACAGTCAAAATCGGAGATTTTGGTATGACGCGAGATATCTATGAGACAGACTATTACCGGAAAGGAGGGAAAGGGCTGCTGCCCGTGCGCTGGATGTCTCCTGAGTCCCTCAAGGATGGAGTCTTCACCACTTACTCGGACGTCTGGTCCTTCGGGGTCGTCCTCTGGGAGATCGCCACACTGGCCGAGCAGCCCTACCAGGGCTTGTCCAACGAGCAAGTCCTTCGCTTCGTCATGGAGGGCGGCCTTCTGGACAAGCCAGACAACTGTCCTGACATGCTGTTTGAACTGATGCGCATGTGCTGGCAGTATAACCCCAAGATGAGGCCTTCCTTCCTGGAGATCATCAGCAGCATCAAAGAGGAGATGGAGCCTGGCTTCCGGGAGGTCTCCTTCTACTACAGCGAGGAGAACAAGCTGCCCGAGCCGGAGGAGCTGGACCTGGAGCCAGAGAACATGGAGAGCGTCCCCCTGGACCCCTCGGCCTCCTCGTCCTCCCTGCCACTGCCCGACAGACACTCAGGACACAAGGCCGAGAACGGCCCCGGCCCTGGGGTGCTGGTCCTCCGCGCCAGCTTCGACGAGAGACAGCCTTACGCCCACATGAACGGGGGCCGCAAGAACGAGCGGGCCTTGCCGCTGCCCCAGTCTTCGACCTGCTGA
6 Del1 MKSGSGGGSPTSLWGLLFLSAALSLWPTSGCHPECLGSCSAPDNDTACVACRHYYYAGVCVPACPPNTYRFEGWRCVDRDFCANILSAESSDSEGFVIHDGECMQECPSGFIRNGSQSMYCIPCEGPCPKVCEEEKKTKTIDSVTSAQMLQGCTIFKGNLLINIRRGNNIASELENFMGLIEVVTGYVKIRHSHALVSLSFLKNLRLILGEEQLEGNYSFYVLDNQNLQQLWDWDHRNLTIKAGKMYFAFNPKLCVSEIYRMEEVTGTKGRQSKGDINTRNNGERASCESDVLHFTSTTTSKNRIIITWHRYRPPDYRDLISFTVYYKEAPFKNVTEYDGQDACGSNSWNMVDVDLPPNKDVEPGILLHGLKPWTQYAVYVKAVTLTMVENDHIRGAKSEILYIRTNASVPSIPLDVLSASNSSSQLIVKWNPPSLPNGNLSYYIVRWQRQPQDGYLYRHNYCSKDKIPIRKYADGTIDIEEVTENPKTEVCGGEKGPCCACPKTEAEKQAEKEEAEYRKVFENFLHNSIFVPRPERKRRDVMQVANTTMSSRSRNTTAADTYNITDPEELETEYPFFESRVDNKERTVISNLRPFTLYRIDIHSCNHEAEKLGCSASNFVFARTMPAEGADDIPGPVTWEPRPENSIFLKWPEPENPNGLILMYEIKYGSQVEDQRECVSRQEYRKYGGAKLNRLNPGNYTARIQATSLSGNGSWTDPVFFYVQAKTGYENFIHLIIALPVAVLLIVGGLVIMLYVFHRKRNNSRLGNGVLYASVNPEYFSAADVYVPDEWEVAREKITMSRELGQGSFGMVYEGVAKGVVKDEPETRVAIKTVNEAASMRERIEFLNEASVMKEFNCHHVVRLLGVVSQGQPTLVIMELMTRGDLKSYLRSLRPEMENNPVLAPPSLSKMIQMAGEIADGMAYLNANKFVHRDLAARNCMVAEDFTVKIGDFGMTRDIYETDYYRKGGKGLLPVRWMSPESLKDGVFTTYSDVWSFGVVLWEIATLAEQPYQGLSNEQVLRFVMEGGLLDKPDNCPDMLFELMRMCWQYNPKMRPSFLEIISSIKEEMEPGFREVSFYYSEENKLPEPEELDLEPENMESVPLDPSASSSSLPLPDRHSGHKAENGPGPGVLVLRASFDERQPYAHMNGGRKNERALPLPQSSTC
7 H905C ATGAAGTCTGGCTCCGGAGGAGGGTCCCCGACCTCGCTGTGGGGGCTCCTGTTTCTCTCCGCCGCGCTCTCGCTCTGGCCGACGAGTGGAGAAATCTGCGGGCCAGGCATCGACATCCGCAACGACTATCAGCAGCTGAAGCGCCTGGAGAACTGCACGGTGATCGAGGGCTACCTCCACATCCTGCTCATCTCCAAGGCCGAGGACTACCGCAGCTACCGCTTCCCCAAGCTCACGGTCATTACCGAGTACTTGCTGCTGTTCCGAGTGGCTGGCCTCGAGAGCCTCGGAGACCTCTTCCCCAACCTCACGGTCATCCGCGGCTGGAAACTCTTCTACAACTACGCCCTGGTCATCTTCGAGATGACCAATCTCAAGGATATTGGGCTTTACAACCTGAGGAACATTACTCGGGGGGCCATCAGGATTGAGAAAAATGCTGACCTCTGTTACCTCTCCACTGTGGACTGGTCCCTGATCCTGGATGCGGTGTCCAATAACTACATTGTGGGGAATAAGCCCCCAAAGGAATGTGGGGACCTGTGTCCAGGGACCATGGAGGAGAAGCCGATGTGTGAGAAGACCACCATCAACAATGAGTACAACTACCGCTGCTGGACCACAAACCGCTGCCAGAAAATGTGCCCAAGCACGTGTGGGAAGCGGGCGTGCACCGAGAACAATGAGTGCTGCCACCCCGAGTGCCTGGGCAGCTGCAGCGCGCCTGACAACGACACGGCCTGTGTAGCTTGCCGCCACTACTACTATGCCGGTGTCTGTGTGCCTGCCTGCCCGCCCAACACCTACAGGTTTGAGGGCTGGCGCTGTGTGGACCGTGACTTCTGCGCCAACATCCTCAGCGCCGAGAGCAGCGACTCCGAGGGGTTTGTGATCCACGACGGCGAGTGCATGCAGGAGTGCCCCTCGGGCTTCATCCGCAACGGCAGCCAGAGCATGTACTGCATCCCTTGTGAAGGTCCTTGCCCGAAGGTCTGTGAGGAAGAAAAGAAAACAAAGACCATTGATTCTGTTACTTCTGCTCAGATGCTCCAAGGATGCACCATCTTCAAGGGCAATTTGCTCATTAACATCCGACGGGGGAATAACATTGCTTCAGAGCTGGAGAACTTCATGGGGCTCATCGAGGTGGTGACGGGCTACGTGAAGATCCGCCATTCTCATGCCTTGGTCTCCTTGTCCTTCCTAAAAAACCTTCGCCTCATCCTAGGAGAGGAGCAGCTAGAAGGGAATTACTCCTTCTACGTCCTCGACAACCAGAACTTGCAGCAACTGTGGGACTGGGACCACCGCAACCTGACCATCAAAGCAGGGAAAATGTACTTTGCTTTCAATCCCAAATTATGTGTTTCCGAAATTTACCGCATGGAGGAAGTGACGGGGACTAAAGGGCGCCAAAGCAAAGGGGACATAAACACCAGGAACAACGGGGAGAGAGCCTCCTGTGAAAGTGACGTCCTGCATTTCACCTCCACCACCACGTCGAAGAATCGCATCATCATAACCTGGCACCGGTACCGGCCCCCTGACTACAGGGATCTCATCAGCTTCACCGTTTACTACAAGGAAGCACCCTTTAAGAATGTCACAGAGTATGATGGGCAGGATGCCTGCGGCTCCAACAGCTGGAACATGGTGGACGTGGACCTCCCGCCCAACAAGGACGTGGAGCCCGGCATCTTACTACATGGGCTGAAGCCCTGGACTCAGTACGCCGTTTACGTCAAGGCTGTGACCCTCACCATGGTGGAGAACGACCATATCCGTGGGGCCAAGAGTGAGATCTTGTACATTCGCACCAATGCTTCAGTTCCTTCCATTCCCTTGGACGTTCTTTCAGCATCGAACTCCTCTTCTCAGTTAATCGTGAAGTGGAACCCTCCCTCTCTGCCCAACGGCAACCTGAGTTACTACATTGTGCGCTGGCAGCGGCAGCCTCAGGACGGCTACCTTTACCGGCACAATTACTGCTCCAAAGACAAAATCCCCATCAGGAAGTATGCCGACGGCACCATCGACATTGAGGAGGTCACAGAGAACCCCAAGACTGAGGTGTGTGGTGGGGAGAAAGGGCCTTGCTGCGCCTGCCCCAAAACTGAAGCCGAGAAGCAGGCCGAGAAGGAGGAGGCTGAATACCGCAAAGTCTTTGAGAATTTCCTGCACAACTCCATCTTCGTGCCCAGACCTGAAAGGAAGCGGAGAGATGTCATGCAAGTGGCCAACACCACCATGTCCAGCCGAAGCAGGAACACCACGGCCGCAGACACCTACAACATCACCGACCCGGAAGAGCTGGAGACAGAGTACCCTTTCTTTGAGAGCAGAGTGGATAACAAGGAGAGAACTGTCATTTCTAACCTTCGGCCTTTCACATTGTACCGCATCGATATCCACAGCTGCAACCACGAGGCTGAGAAGCTGGGCTGCAGCGCCTCCAACTTCGTCTTTGCAAGGACTATGCCCGCAGAAGGAGCAGATGACATTCCTGGGCCAGTGACCTGGGAGCCAAGGCCTGAAAACTCCATCTTTTTAAAGTGGCCGGAACCTGAGAATCCCAATGGATTGATTCTAATGTATGAAATAAAATACGGATCACAAGTTGAGGATCAGCGAGAATGTGTGTCCAGACAGGAATACAGGAAGTATGGAGGGGCCAAGCTAAACCGGCTAAACCCGGGGAACTACACAGCCCGGATTCAGGCCACATCTCTCTCTGGGAATGGGTCGTGGACAGATCCTGTGTTCTTCTATGTCCAGGCCAAAACAGGATATGAAAACTTCATCTGTCTGATCATCGCTCTGCCCGTCGCTGTCCTGTTGATCGTGGGAGGGTTGGTGATTATGCTGTACGTCTTCCATAGAAAGAGAAATAACAGCAGGCTGGGGAATGGAGTGCTGTATGCCTCTGTGAACCCGGAGTACTTCAGCGCTGCTGATGTGTACGTTCCTGATGAGTGGGAGGTGGCTCGGGAGAAGATCACCATGAGCCGGGAACTTGGGCAGGGGTCGTTTGGGATGGTCTATGAAGGAGTTGCCAAGGGTGTGGTGAAAGATGAACCTGAAACCAGAGTGGCCATTAAAACAGTGAACGAGGCCGCAAGCATGCGTGAGAGGATTGAGTTTCTCAACGAAGCTTCTGTGATGAAGGAGTTCAATTGTCACCATGTGGTGCGATTGCTGGGTGTGGTGTCCCAAGGCCAGCCAACACTGGTCATCATGGAACTGATGACACGGGGCGATCTCAAAAGTTATCTCCGGTCTCTGAGGCCAGAAATGGAGAATAATCCAGTCCTAGCACCTCCAAGCCTGAGCAAGATGATTCAGATGGCCGGAGAGATTGCAGACGGCATGGCATACCTCAACGCCAATAAGTTCGTCCACAGAGACCTTGCTGCCCGGAATTGCATGGTAGCCGAAGATTTCACAGTCAAAATCGGAGATTTTGGTATGACGCGAGATATCTATGAGACAGACTATTACCGGAAAGGAGGGAAAGGGCTGCTGCCCGTGCGCTGGATGTCTCCTGAGTCCCTCAAGGATGGAGTCTTCACCACTTACTCGGACGTCTGGTCCTTCGGGGTCGTCCTCTGGGAGATCGCCACACTGGCCGAGCAGCCCTACCAGGGCTTGTCCAACGAGCAAGTCCTTCGCTTCGTCATGGAGGGCGGCCTTCTGGACAAGCCAGACAACTGTCCTGACATGCTGTTTGAACTGATGCGCATGTGCTGGCAGTATAACCCCAAGATGAGGCCTTCCTTCCTGGAGATCATCAGCAGCATCAAAGAGGAGATGGAGCCTGGCTTCCGGGAGGTCTCCTTCTACTACAGCGAGGAGAACAAGCTGCCCGAGCCGGAGGAGCTGGACCTGGAGCCAGAGAACATGGAGAGCGTCCCCCTGGACCCCTCGGCCTCCTCGTCCTCCCTGCCACTGCCCGACAGACACTCAGGACACAAGGCCGAGAACGGCCCCGGCCCTGGGGTGCTGGTCCTCCGCGCCAGCTTCGACGAGAGACAGCCTTACGCCCACATGAACGGGGGCCGCAAGAACGAGCGGGCCTTGCCGCTGCCCCAGTCTTCGACCTGCTGA
8 H905C MKSGSGGGSPTSLWGLLFLSAALSLWPTSGEICGPGIDIRNDYQQLKRLENCTVIEGYLHILLISKAEDYRSYRFPKLTVITEYLLLFRVAGLESLGDLFPNLTVIRGWKLFYNYALVIFEMTNLKDIGLYNLRNITRGAIRIEKNADLCYLSTVDWSLILDAVSNNYIVGNKPPKECGDLCPGTMEEKPMCEKTTINNEYNYRCWTTNRCQKMCPSTCGKRACTENNECCHPECLGSCSAPDNDTACVACRHYYYAGVCVPACPPNTYRFEGWRCVDRDFCANILSAESSDSEGFVIHDGECMQECPSGFIRNGSQSMYCIPCEGPCPKVCEEEKKTKTIDSVTSAQMLQGCTIFKGNLLINIRRGNNIASELENFMGLIEVVTGYVKIRHSHALVSLSFLKNLRLILGEEQLEGNYSFYVLDNQNLQQLWDWDHRNLTIKAGKMYFAFNPKLCVSEIYRMEEVTGTKGRQSKGDINTRNNGERASCESDVLHFTSTTTSKNRIIITWHRYRPPDYRDLISFTVYYKEAPFKNVTEYDGQDACGSNSWNMVDVDLPPNKDVEPGILLHGLKPWTQYAVYVKAVTLTMVENDHIRGAKSEILYIRTNASVPSIPLDVLSASNSSSQLIVKWNPPSLPNGNLSYYIVRWQRQPQDGYLYRHNYCSKDKIPIRKYADGTIDIEEVTENPKTEVCGGEKGPCCACPKTEAEKQAEKEEAEYRKVFENFLHNSIFVPRPERKRRDVMQVANTTMSSRSRNTTAADTYNITDPEELETEYPFFESRVDNKERTVISNLRPFTLYRIDIHSCNHEAEKLGCSASNFVFARTMPAEGADDIPGPVTWEPRPENSIFLKWPEPENPNGLILMYEIKYGSQVEDQRECVSRQEYRKYGGAKLNRLNPGNYTARIQATSLSGNGSWTDPVFFYVQAKTGYENFIHLIIALPVAVLLIVGGLVIMLYVFHRKRNNSRLGNGVLYASVNPEYFSAADVYVPDEWEVAREKITMSRELGQGSFGMVYEGVAKGVVKDEPETRVAIKTVNEAASMRERIEFLNEASVMKEFNCHHVVRLLGVVSQGQPTLVIMELMTRGDLKSYLRSLRPEMENNPVLAPPSLSKMIQMAGEIADGMAYLNANKFVHRDLAARNCMVAEDFTVKIGDFGMTRDIYETDYYRKGGKGLLPVRWMSPESLKDGVFTTYSDVWSFGVVLWEIATLAEQPYQGLSNEQVLRFVMEGGLLDKPDNCPDMLFELMRMCWQYNPKMRPSFLEIISSIKEEMEPGFREVSFYYSEENKLPEPEELDLEPENMESVPLDPSASSSSLPLPDRHSGHKAENGPGPGVLVLRASFDERQPYAHMNGGRKNERALPLPQSSTC
[表3]：示例性大鼠IGF1R突變體的序列
SEQ ID NO: ID 序列
9 Del1 ATGAAGTCTGGCTCCGGAGGAGGGTCCCCGACCTCGCTGTGGGGGCTCGTGTTTCTCTCCGCCGCGCTCTCGCTCTGGCCGACGAGTGGATGCCACCCGGAGTGCCTAGGCAGCTGCCACACACCGGACGACAACACAACCTGCGTGGCCTGCCGACACTACTACTACAAAGGCGTGTGCGTGCCTGCCTGCCCGCCTGGCACCTACAGGTTCGAGGGCTGGCGCTGTGTGGACCGGGATTTCTGCGCCAACATCCCCAACGCCGAGAGCAGTGACTCAGATGGCTTCGTCATCCACGATGGCGAGTGCATGCAGGAGTGTCCATCAGGCTTCATCCGCAACAGCACCCAGAGCATGTACTGTATCCCCTGTGAAGGCCCCTGCCCCAAGGTCTGCGGCGATGAAGAAAAGAAAACGAAAACCATCGATTCTGTGACGTCTGCCCAGATGCTCCAAGGGTGCACCATTTTGAAGGGCAATCTGCTTATTAACATCCGGCGAGGCAATAACATTGCCTCGGAATTGGAGAACTTCATGGGGCTCATCGAGGTGGTGACTGGCTACGTGAAGATCCGCCATTCCCATGCCTTGGTCTCCTTGTCCTTCCTGAAGAACCTTCGTCTCATCTTAGGAGAGGAGCAGCTAGAAGGGAACTACTCCTTCTATGTCCTGGACAACCAGAACTTGCAGCAGCTGTGGGACTGGAACCACCGGAACCTGACCGTCAGGTCAGGGAAAATGTACTTCGCTTTCAATCCCAAGCTGTGTGTCTCTGAAATTTACCGGATGGAGGAGGTGACAGGAACAAAGGGACGGCAGAGCAAAGGAGACATAAACACCAGGAACAACGGAGAGCGAGCTTCCTGTGAAAGTGATGTTCTCCGTTTCACCTCCACCACCACCTGGAAGAACCGCATCATCATAACGTGGCACCGGTACCGGCCGCCGGACTACCGGGATCTCATCAGTTTCACAGTCTACTACAAGGAGGCACCCTTTAAAAACGTCACGGAATACGACGGGCAGGATGCCTGTGGCTCCAACAGCTGGAACATGGTGGACGTGGACCTGCCTCCGAACAAGGAGGGGGAGCCTGGCATTTTGCTGCATGGGCTGAAGCCCTGGACCCAGTATGCAGTCTATGTCAAGGCTGTGACCCTCACCATGGTGGAAAACGACCACATCCGTGGGGCCAAAAGTGAAATCTTGTACATTCGCACCAACGCTTCAGTTCCTTCCATTCCTCTAGATGTCCTCTCGGCATCAAACTCCTCCTCTCAGCTGATCGTGAAGTGGAACCCCCCAACTCTGCCCAATGGTAACTTGAGTTACTACATTGTGAGGTGGCAGCGGCAGCCGCAGGATGGCTATCTGTTCCGGCACAACTACTGCTCCAAAGACAAAATACCCATCAGAAAGTACGCCGATGGTACCATCGATGTGGAGGAGGTGACAGAAAATCCCAAGACAGAAGTGTGCGGTGGTGATAAAGGGCCGTGCTGTGCCTGTCCTAAAACCGAAGCTGAGAAGCAGGCTGAGAAGGAGGAGGCTGAGTACCGTAAAGTCTTTGAGAATTTCCTTCACAACTCCATCTTTGTGCCCAGACCTGAGAGGAGGCGGAGAGATGTCCTGCAGGTGGCTAACACCACCATGTCCAGCCGAAGCAGGAACACCACGGTAGCTGACACCTACAATATCACAGACCCGGAAGAGTTCGAGACAGAATACCCTTTCTTTGAGAGCAGAGTGGATAACAAGGAGAGGACTGTCATTTCCAACCTCCGGCCTTTCACTCTGTACCGTATCGATATCCACAGCTGCAACCACGAGGCTGAGAAGCTGGGCTGCAGCGCCTCCAACTTTGTCTTTGCAAGAACCATGCCAGCAGAAGGAGCAGATGACATTCCTGGCCCAGTGACCTGGGAGCCAAGACCTGAAAACTCCATCTTTTTAAAGTGGCCAGAACCCGAGAACCCCAACGGATTGATTCTAATGTATGAAATAAAATACGGATCGCAAGTCGAGGATCAGCGGGAATGTGTGTCCAGACAGGAGTACAGGAAGTATGGAGGGGCCAAACTTAACCGTCTAAACCCAGGGAACTATACGGCCCGGATTCAGGCTACCTCCCTCTCTGGGAATGGGTCGTGGACAGATCCTGTGTTCTTCTATGTCCCAGCCAAAACAACGTATGAGAATTTCATGCATCTGATCATTGCTCTGCCGGTTGCCATCCTGCTGATTGTGGGGGGCCTGGTAATCATGCTGTATGTCTTCCATAGAAAGAGGAATAACAGCAGATTGGGCAACGGGGTGCTGTACGCCTCTGTGAACCCCGAGTATTTCAGCGCAGCTGATGTGTACGTGCCTGATGAATGGGAGGTAGCTCGGGAGAAGATCACCATGAACCGGGAGCTCGGACAAGGGTCCTTCGGGATGGTCTATGAAGGAGTGGCCAAGGGCGTGGTCAAGGACGAGCCTGAAACCAGAGTGGCCATCAAGACAGTGAATGAGGCTGCAAGTATGCGTGAGAGAATTGAGTTTCTCAACGAGGCCTCAGTGATGAAGGAGTTCAACTGTCACCATGTGGTCCGGTTGCTGGGTGTAGTATCCCAAGGCCAGCCCACCCTGGTCATCATGGAACTAATGACACGTGGCGATCTCAAAAGTTATCTCCGGTCTCTAAGGCCAGAGGTGGAGAATAATCTAGTCCTGATTCCTCCGAGCTTAAGCAAGATGATCCAGATGGCTGGAGAGATTGCAGATGGCATGGCCTACCTCAATGCCAACAAGTTCGTCCACAGAGACCTGGCTGCTCGGAACTGCATGGTAGCTGAAGATTTCACAGTCAAAATTGGAGATTTTGGTATGACACGAGACATCTACGAGACGGACTACTACCGGAAAGGCGGGAAGGGCTTGCTGCCTGTGCGCTGGATGTCTCCCGAGTCCCTCAAGGATGGCGTCTTCACCACTCATTCCGATGTCTGGTCCTTTGGGGTCGTCCTCTGGGAGATCGCCACTCTGGCTGAGCAGCCGTACCAGGGCCTGTCCAACGAGCAAGTTCTTCGTTTCGTCATGGAGGGCGGCCTTCTGGACAAGCCGGATAACTGCCCCGATATGCTGTTTGAACTTATGCGCATGTGCTGGCAGTACAACCCCAAGATGCGGCCCTCCTTCCTGGAGATCATCGGAAGCATCAAGGATGAGATGGAGCCCAGTTTCCAGGAGGTCTCCTTCTACTACAGCGAGGAGAACAAGCCTCCAGAGCCGGAGGAGCTGGAGATGGAGCTGGAGCTGGAGCCCGAGAACATGGAGAGCGTCCCGCTGGACCCTTCGGCCTCCTCAGCCTCCCTGCCTCTGCCTGAAAGACACTCAGGACACAAGGCTGAGAACGGCCCTGGCGTGCTGGTTCTCCGTGCCAGTTTTGATGAGAGACAGCCTTACGCTCACATGAATGGGGGACGCGCCAACGAGAGGGCCTTGCCTCTGCCCCAGTCCTCAACCTGCTGA
10 Del1 MKSGSGGGSPTSLWGLVFLSAALSLWPTSGCHPECLGSCHTPDDNTTCVACRHYYYKGVCVPACPPGTYRFEGWRCVDRDFCANIPNAESSDSDGFVIHDGECMQECPSGFIRNSTQSMYCIPCEGPCPKVCGDEEKKTKTIDSVTSAQMLQGCTILKGNLLINIRRGNNIASELENFMGLIEVVTGYVKIRHSHALVSLSFLKNLRLILGEEQLEGNYSFYVLDNQNLQQLWDWNHRNLTVRSGKMYFAFNPKLCVSEIYRMEEVTGTKGRQSKGDINTRNNGERASCESDVLRFTSTTTWKNRIIITWHRYRPPDYRDLISFTVYYKEAPFKNVTEYDGQDACGSNSWNMVDVDLPPNKEGEPGILLHGLKPWTQYAVYVKAVTLTMVENDHIRGAKSEILYIRTNASVPSIPLDVLSASNSSSQLIVKWNPPTLPNGNLSYYIVRWQRQPQDGYLFRHNYCSKDKIPIRKYADGTIDVEEVTENPKTEVCGGDKGPCCACPKTEAEKQAEKEEAEYRKVFENFLHNSIFVPRPERRRRDVLQVANTTMSSRSRNTTVADTYNITDPEEFETEYPFFESRVDNKERTVISNLRPFTLYRIDIHSCNHEAEKLGCSASNFVFARTMPAEGADDIPGPVTWEPRPENSIFLKWPEPENPNGLILMYEIKYGSQVEDQRECVSRQEYRKYGGAKLNRLNPGNYTARIQATSLSGNGSWTDPVFFYVPAKTTYENFMHLIIALPVAILLIVGGLVIMLYVFHRKRNNSRLGNGVLYASVNPEYFSAADVYVPDEWEVAREKITMNRELGQGSFGMVYEGVAKGVVKDEPETRVAIKTVNEAASMRERIEFLNEASVMKEFNCHHVVRLLGVVSQGQPTLVIMELMTRGDLKSYLRSLRPEVENNLVLIPPSLSKMIQMAGEIADGMAYLNANKFVHRDLAARNCMVAEDFTVKIGDFGMTRDIYETDYYRKGGKGLLPVRWMSPESLKDGVFTTHSDVWSFGVVLWEIATLAEQPYQGLSNEQVLRFVMEGGLLDKPDNCPDMLFELMRMCWQYNPKMRPSFLEIIGSIKDEMEPSFQEVSFYYSEENKPPEPEELEMELELEPENMESVPLDPSASSASLPLPERHSGHKAENGPGVLVLRASFDERQPYAHMNGGRANERALPLPQSSTC
11 H906C ATGAAGTCTGGCTCCGGAGGAGGGTCCCCGACCTCGCTGTGGGGGCTCGTGTTTCTCTCCGCCGCGCTCTCGCTCTGGCCGACGAGTGGAGAAATTTGTGGGCCCGGCATTGACATCCGCAACGACTATCAGCAGCTGAAGCGCCTGGAAAACTGCACGGTGATCGAGGGCTTCCTCCACATCCTGCTCATCTCCAAGGCCGAGGACTACCGAAGCTACCGCTTCCCCAAGCTCACGGTCATCACCGAGTACTTGCTGCTGTTTCGAGTGGCCGGCCTCGAGAGCCTGGGAGACCTCTTCCCGAACCTCACAGTCATCCGTGGCTGGAAACTCTTCTACAATTACGCACTGGTCATCTTCGAGATGACCAATCTCAAGGATATTGGGCTTTATAATCTGAGGAACATTACTCGGGGGGCCATCAGGATTGAGAAAAACGCTGACCTCTGTTACCTCTCCACCATAGACTGGTCTCTCATCTTGGATGCGGTGTCCAATAACTACATTGTGGGGAACAAGCCCCCAAAGGAATGTGGGGACCTGTGTCCAGGGACCTTGGAGGAGAAGCCCATGTGTGAGAAGACCACCATCAACAATGAGTACAACTACCGCTGCTGGACCACAAATCGCTGCCAGAAAATGTGCCCAAGTGTGTGTGGGAAGCGAGCCTGCACCGAGAACAATGAGTGCTGCCACCCGGAGTGCCTAGGCAGCTGCCACACACCGGACGACAACACAACCTGCGTGGCCTGCCGACACTACTACTACAAAGGCGTGTGCGTGCCTGCCTGCCCGCCTGGCACCTACAGGTTCGAGGGCTGGCGCTGTGTGGACCGGGATTTCTGCGCCAACATCCCCAACGCCGAGAGCAGTGACTCAGATGGCTTCGTCATCCACGATGGCGAGTGCATGCAGGAGTGTCCATCAGGCTTCATCCGCAACAGCACCCAGAGCATGTACTGTATCCCCTGTGAAGGCCCCTGCCCCAAGGTCTGCGGCGATGAAGAAAAGAAAACGAAAACCATCGATTCTGTGACGTCTGCCCAGATGCTCCAAGGGTGCACCATTTTGAAGGGCAATCTGCTTATTAACATCCGGCGAGGCAATAACATTGCCTCGGAATTGGAGAACTTCATGGGGCTCATCGAGGTGGTGACTGGCTACGTGAAGATCCGCCATTCCCATGCCTTGGTCTCCTTGTCCTTCCTGAAGAACCTTCGTCTCATCTTAGGAGAGGAGCAGCTAGAAGGGAACTACTCCTTCTATGTCCTGGACAACCAGAACTTGCAGCAGCTGTGGGACTGGAACCACCGGAACCTGACCGTCAGGTCAGGGAAAATGTACTTCGCTTTCAATCCCAAGCTGTGTGTCTCTGAAATTTACCGGATGGAGGAGGTGACAGGAACAAAGGGACGGCAGAGCAAAGGAGACATAAACACCAGGAACAACGGAGAGCGAGCTTCCTGTGAAAGTGATGTTCTCCGTTTCACCTCCACCACCACCTGGAAGAACCGCATCATCATAACGTGGCACCGGTACCGGCCGCCGGACTACCGGGATCTCATCAGTTTCACAGTCTACTACAAGGAGGCACCCTTTAAAAACGTCACGGAATACGACGGGCAGGATGCCTGTGGCTCCAACAGCTGGAACATGGTGGACGTGGACCTGCCTCCGAACAAGGAGGGGGAGCCTGGCATTTTGCTGCATGGGCTGAAGCCCTGGACCCAGTATGCAGTCTATGTCAAGGCTGTGACCCTCACCATGGTGGAAAACGACCACATCCGTGGGGCCAAAAGTGAAATCTTGTACATTCGCACCAACGCTTCAGTTCCTTCCATTCCTCTAGATGTCCTCTCGGCATCAAACTCCTCCTCTCAGCTGATCGTGAAGTGGAACCCCCCAACTCTGCCCAATGGTAACTTGAGTTACTACATTGTGAGGTGGCAGCGGCAGCCGCAGGATGGCTATCTGTTCCGGCACAACTACTGCTCCAAAGACAAAATACCCATCAGAAAGTACGCCGATGGTACCATCGATGTGGAGGAGGTGACAGAAAATCCCAAGACAGAAGTGTGCGGTGGTGATAAAGGGCCGTGCTGTGCCTGTCCTAAAACCGAAGCTGAGAAGCAGGCTGAGAAGGAGGAGGCTGAGTACCGTAAAGTCTTTGAGAATTTCCTTCACAACTCCATCTTTGTGCCCAGACCTGAGAGGAGGCGGAGAGATGTCCTGCAGGTGGCTAACACCACCATGTCCAGCCGAAGCAGGAACACCACGGTAGCTGACACCTACAATATCACAGACCCGGAAGAGTTCGAGACAGAATACCCTTTCTTTGAGAGCAGAGTGGATAACAAGGAGAGGACTGTCATTTCCAACCTCCGGCCTTTCACTCTGTACCGTATCGATATCCACAGCTGCAACCACGAGGCTGAGAAGCTGGGCTGCAGCGCCTCCAACTTTGTCTTTGCAAGAACCATGCCAGCAGAAGGAGCAGATGACATTCCTGGCCCAGTGACCTGGGAGCCAAGACCTGAAAACTCCATCTTTTTAAAGTGGCCAGAACCCGAGAACCCCAACGGATTGATTCTAATGTATGAAATAAAATACGGATCGCAAGTCGAGGATCAGCGGGAATGTGTGTCCAGACAGGAGTACAGGAAGTATGGAGGGGCCAAACTTAACCGTCTAAACCCAGGGAACTATACGGCCCGGATTCAGGCTACCTCCCTCTCTGGGAATGGGTCGTGGACAGATCCTGTGTTCTTCTATGTCCCAGCCAAAACAACGTATGAGAATTTCATGTGTCTGATCATTGCTCTGCCGGTTGCCATCCTGCTGATTGTGGGGGGCCTGGTAATCATGCTGTATGTCTTCCATAGAAAGAGGAATAACAGCAGATTGGGCAACGGGGTGCTGTACGCCTCTGTGAACCCCGAGTATTTCAGCGCAGCTGATGTGTACGTGCCTGATGAATGGGAGGTAGCTCGGGAGAAGATCACCATGAACCGGGAGCTCGGACAAGGGTCCTTCGGGATGGTCTATGAAGGAGTGGCCAAGGGCGTGGTCAAGGACGAGCCTGAAACCAGAGTGGCCATCAAGACAGTGAATGAGGCTGCAAGTATGCGTGAGAGAATTGAGTTTCTCAACGAGGCCTCAGTGATGAAGGAGTTCAACTGTCACCATGTGGTCCGGTTGCTGGGTGTAGTATCCCAAGGCCAGCCCACCCTGGTCATCATGGAACTAATGACACGTGGCGATCTCAAAAGTTATCTCCGGTCTCTAAGGCCAGAGGTGGAGAATAATCTAGTCCTGATTCCTCCGAGCTTAAGCAAGATGATCCAGATGGCTGGAGAGATTGCAGATGGCATGGCCTACCTCAATGCCAACAAGTTCGTCCACAGAGACCTGGCTGCTCGGAACTGCATGGTAGCTGAAGATTTCACAGTCAAAATTGGAGATTTTGGTATGACACGAGACATCTACGAGACGGACTACTACCGGAAAGGCGGGAAGGGCTTGCTGCCTGTGCGCTGGATGTCTCCCGAGTCCCTCAAGGATGGCGTCTTCACCACTCATTCCGATGTCTGGTCCTTTGGGGTCGTCCTCTGGGAGATCGCCACTCTGGCTGAGCAGCCGTACCAGGGCCTGTCCAACGAGCAAGTTCTTCGTTTCGTCATGGAGGGCGGCCTTCTGGACAAGCCGGATAACTGCCCCGATATGCTGTTTGAACTTATGCGCATGTGCTGGCAGTACAACCCCAAGATGCGGCCCTCCTTCCTGGAGATCATCGGAAGCATCAAGGATGAGATGGAGCCCAGTTTCCAGGAGGTCTCCTTCTACTACAGCGAGGAGAACAAGCCTCCAGAGCCGGAGGAGCTGGAGATGGAGCTGGAGCTGGAGCCCGAGAACATGGAGAGCGTCCCGCTGGACCCTTCGGCCTCCTCAGCCTCCCTGCCTCTGCCTGAAAGACACTCAGGACACAAGGCTGAGAACGGCCCTGGCGTGCTGGTTCTCCGTGCCAGTTTTGATGAGAGACAGCCTTACGCTCACATGAATGGGGGACGCGCCAACGAGAGGGCCTTGCCTCTGCCCCAGTCCTCAACCTGCTGA
12 H906C MKSGSGGGSPTSLWGLVFLSAALSLWPTSGEICGPGIDIRNDYQQLKRLENCTVIEGFLHILLISKAEDYRSYRFPKLTVITEYLLLFRVAGLESLGDLFPNLTVIRGWKLFYNYALVIFEMTNLKDIGLYNLRNITRGAIRIEKNADLCYLSTIDWSLILDAVSNNYIVGNKPPKECGDLCPGTLEEKPMCEKTTINNEYNYRCWTTNRCQKMCPSVCGKRACTENNECCHPECLGSCHTPDDNTTCVACRHYYYKGVCVPACPPGTYRFEGWRCVDRDFCANIPNAESSDSDGFVIHDGECMQECPSGFIRNSTQSMYCIPCEGPCPKVCGDEEKKTKTIDSVTSAQMLQGCTILKGNLLINIRRGNNIASELENFMGLIEVVTGYVKIRHSHALVSLSFLKNLRLILGEEQLEGNYSFYVLDNQNLQQLWDWNHRNLTVRSGKMYFAFNPKLCVSEIYRMEEVTGTKGRQSKGDINTRNNGERASCESDVLRFTSTTTWKNRIIITWHRYRPPDYRDLISFTVYYKEAPFKNVTEYDGQDACGSNSWNMVDVDLPPNKEGEPGILLHGLKPWTQYAVYVKAVTLTMVENDHIRGAKSEILYIRTNASVPSIPLDVLSASNSSSQLIVKWNPPTLPNGNLSYYIVRWQRQPQDGYLFRHNYCSKDKIPIRKYADGTIDVEEVTENPKTEVCGGDKGPCCACPKTEAEKQAEKEEAEYRKVFENFLHNSIFVPRPERRRRDVLQVANTTMSSRSRNTTVADTYNITDPEEFETEYPFFESRVDNKERTVISNLRPFTLYRIDIHSCNHEAEKLGCSASNFVFARTMPAEGADDIPGPVTWEPRPENSIFLKWPEPENPNGLILMYEIKYGSQVEDQRECVSRQEYRKYGGAKLNRLNPGNYTARIQATSLSGNGSWTDPVFFYVPAKTTYENFMHLIIALPVAILLIVGGLVIMLYVFHRKRNNSRLGNGVLYASVNPEYFSAADVYVPDEWEVAREKITMNRELGQGSFGMVYEGVAKGVVKDEPETRVAIKTVNEAASMRERIEFLNEASVMKEFNCHHVVRLLGVVSQGQPTLVIMELMTRGDLKSYLRSLRPEVENNLVLIPPSLSKMIQMAGEIADGMAYLNANKFVHRDLAARNCMVAEDFTVKIGDFGMTRDIYETDYYRKGGKGLLPVRWMSPESLKDGVFTTHSDVWSFGVVLWEIATLAEQPYQGLSNEQVLRFVMEGGLLDKPDNCPDMLFELMRMCWQYNPKMRPSFLEIIGSIKDEMEPSFQEVSFYYSEENKPPEPEELEMELELEPENMESVPLDPSASSASLPLPERHSGHKAENGPGVLVLRASFDERQPYAHMNGGRANERALPLPQSSTC
[表4]：示例性中國倉鼠IGF1R突變體的序列
SEQ ID NO: ID 序列
13 Del1 ATGAAGTCTGGCTCCGGAGGAGGGTCCCCGACCTCACTGTGGGGGCTCGTGTTTCTCTCTGCCGCGCTCTCGCTGTGGCCGACGAGTGGATGCCACCCAGAGTGCCTAGGCAGCTGCCATACACCTGACGACAACACAACCTGTGTGGCCTGCCGACACTACTACTACAAAGGCGTGTGTGTGCCTGCCTGCCCACCTGGCACCTACAGGTTCGAGGGCTGGCGCTGTGTGGACCGCGATTTCTGCGCCAACATCCCCAACGCTGAGAGCAGTGACTCAGATGGCTTTGTCATCCACGATGGCGAGTGCATGCAAGAATGTCCCTCAGGCTTCATCCGCAACAGCACCCAGAGCATGTACTGTATCCCCTGTGAAGGCCCCTGCCCAAAAGTCTGTGGCGATGAAGAAAAGAAAACAAAAACCATCGACTCGGTTACGTCGGCTCAGATGCTCCAAGGATGCACCATCTTGAAGGGCAATTTACTTATTAATATCCGGCGGGGCAATAACATTGCCTCAGAACTTGAGAACTTCATGGGGCTCATCGAGGTAGTGACTGGCTATGTGAAGATCCGCCATTCCCATGCTTTGGTCTCCTTGTCCTTCCTGAAGAACCTTCGTCTAATCTTAGGAGAGGAGCAGCTGGAAGGGAACTACTCCTTCTATGTCCTGGACAACCAGAACTTGCAGCAGCTGTGGGACTGGAACCACCGGAACCTGACCGTCAGGTCGGGGAAGATGTACTTTGCTTTCAATCCCAAGCTGTGTGTCTCTGAAATTTACCGCATGGAGGAAGTAACAGGAACAAAGGGCCGCCAGAGCAAAGGGGACATAAACACCAGGAACAATGGAGAGCGAGCTTCCTGTGAAAGCGACGTTCTCCGTTTCACCTCCACCACCACCTCAAAGAACCGGATCATCATAACATGGCACCGGTACCGGCCCCCAGATTACAGGGATCTCATCAGCTTCACGGTTTACTACAAGGAGGCACCCTTTAAAAATGTTACGGAATATGATGGGCAGGATGCCTGTGGCTCCAACAGCTGGAACATGGTGGATGTGGACCTACCTCCCAACAAGGAGGGGGAGCCTGGCATTTTACTGCATGGGCTGAAGCCCTGGACCCAGTATGCCGTCTATGTCAAGGCTGTGACCCTCACCATGGTGGAAAACGACCATATCCGTGGGGCCAAAAGTGAAATCTTGTACATTCGCACCAATGCTTCAGTTCCTTCCATTCCCCTAGATGTACTTTCGGCCTCAAACTCTTCTTCTCAGCTGATTGTGAAGTGGAATCCTCCAACTCTGCCCAATGGTAACTTGAGTTACTACATTGTAAGGTGGCAGCGACAGCCACAGGATGGCTACCTGTACCGGCACAACTACTGCTCCAAAGACAAAATACCCATCAGAAAGTATGCGGATGGCACCATTGATGTGGAAGAGGTGACAGAGAATCCCAAGACAGAAGTGTGTGGTGGTGACAAAGGGCCTTGCTGTGCTTGTCCCAAAACTGAAGCCGAGAAGCAGGCCGAGAAGGAAGAGGCCGAGTACCGCAAAGTCTTTGAGAATTTCCTGCACAATTCCATCTTCGTGCCCAGACCCGAAAGGAGGCGGAGAGATGTCATGCAAGTAGCCAACACCACCATGTCTAGCCGAAGCAGGAACACCACAGTGGCTGACACCTACAATATCACAGATCCAGAAGAACTCGAGACAGAGTACCCTTTCTTTGAGAGCAGAGTAGATAACAAGGAGAGAACTGTCATCTCCAACCTTCGGCCTTTCACTTTGTACCGCATTGATATCCACAGCTGCAACCACGAAGCCGAGAAGCTGGGCTGCAGTGCCTCCAACTTTGTCTTTGCGAGAACCATGCCTGCAGAAGGAGCAGATGACATTCCTGGACCAGTGACCTGGGAGCCAAGACCTGAAAACTCCATCTTTTTAAAGTGGCCAGAACCTGAGAACCCCAACGGATTGATTCTAATGTATGAAATAAAGTATGGATCACAAGTTGAGGATCAGCGGGAATGTGTGTCCAGACAGGAATACAGGAAGTACGGAGGGGCCAAGCTTAACCGGCTAAACCCAGGGAACTATACAGCCCGGATTCAGGCCACGTCTCTCTCTGGCAATGGGTCTTGGACAGATCCTGTGTTCTTCTATGTCCCAGCCAAGACGACATATGAGAATTTCATGCACCTGATAATTGCTCTGCCGGTCGCCATCCTGCTGATTGTGGGGGGACTGGTCATCATGCTGTATGTCTTCCATAGGAAGAGAAATAACAGCAGGTTGGGCAATGGAGTGCTGTATGCCTCTGTGAACCCCGAGTATTTCAGTGCAGCGGATGTGTACGTGCCCGATGAATGGGAGGTAGCTCGAGAGAAGATCACCATGAACCGGGAGCTTGGACAAGGGTCCTTTGGGATGGTCTATGAAGGAGTGGCCAAGGGAGTGGTCAAGGATGAACCTGAAACCAGAGTAGCCATCAAGACAGTAAATGAGGCTGCAAGTATGCGTGAAAGAATCGAGTTTCTCAACGAGGCTTCAGTGATGAAGGAGTTCAACTGTCACCATGTGGTCCGGTTGCTGGGGGTGGTGTCCCAAGGCCAGCCTACCCTGGTCATCATGGAACTAATGACACGTGGGGATCTCAAAAGTTATCTCCGGTCTCTAAGGCCAGAAGTGGAGCAAAATAATCTAGTCCTAATTCCTCCGAGTTTAAGCAAGATGATCCAGATGGCTGGAGAGATTGCAGATGGCATGGCTTACCTCAACGCCAACAAGTTCGTCCACAGAGACCTTGCTGCTCGGAACTGCATGGTAGCTGAAGATTTCACAGTCAAAATTGGAGATTTTGGTATGACACGAGATATCTACGAGACAGACTACTACCGGAAAGGAGGGAAGGGGCTGCTGCCTGTGCGCTGGATGTCTCCTGAGTCCCTCAAGGACGGAGTCTTCACCACTCACTCAGATGTCTGGTCCTTTGGGGTCGTCCTCTGGGAGATTGCTACACTGGCTGAGCAGCCATACCAAGGCTTGTCCAATGAGCAAGTTCTTCGCTTCGTCATGGAGGGCGGCCTTCTGGACAAGCCGGACAATTGCCCTGACATGCTGTTTGAACTCATGCGCATGTGCTGGCAGTACAACCCTAAGATGAGGCCCTCCTTCCTGGAGATCATTGGCAGCATCAAGGATGAGATGGAGCCCAGCTTTCAGGAGGTCTCCTTCTACTACAGCGAGGAGAACAAGCCTCCTGAGCCAGAAGAGCTGGAGCTGGAACTGGAGCCCGAGAACATGGAGAGCGTACCGCTGGACCCCTCGGCCTCCTCAGTCTCCCTGCCTCTGCCAGAAAGACACTCAGGACACAAGGCCGAGAATGGCCCAGGCCCTGGAGTACTGGTTCTCCGTGCCAGTTTCGATGAGCGACAGCCTTACGCTCACATGAACGGGGGACGAGCCAACGAGAGGGCTTTGCCTCTGCCCCAGTCTTCAACCTGCTGA
14 Del1 MKSGSGGGSPTSLWGLVFLSAALSLWPTSGCHPECLGSCHTPDDNTTCVACRHYYYKGVCVPACPPGTYRFEGWRCVDRDFCANIPNAESSDSDGFVIHDGECMQECPSGFIRNSTQSMYCIPCEGPCPKVCGDEEKKTKTIDSVTSAQMLQGCTILKGNLLINIRRGNNIASELENFMGLIEVVTGYVKIRHSHALVSLSFLKNLRLILGEEQLEGNYSFYVLDNQNLQQLWDWNHRNLTVRSGKMYFAFNPKLCVSEIYRMEEVTGTKGRQSKGDINTRNNGERASCESDVLRFTSTTTSKNRIIITWHRYRPPDYRDLISFTVYYKEAPFKNVTEYDGQDACGSNSWNMVDVDLPPNKEGEPGILLHGLKPWTQYAVYVKAVTLTMVENDHIRGAKSEILYIRTNASVPSIPLDVLSASNSSSQLIVKWNPPTLPNGNLSYYIVRWQRQPQDGYLYRHNYCSKDKIPIRKYADGTIDVEEVTENPKTEVCGGDKGPCCACPKTEAEKQAEKEEAEYRKVFENFLHNSIFVPRPERRRRDVMQVANTTMSSRSRNTTVADTYNITDPEELETEYPFFESRVDNKERTVISNLRPFTLYRIDIHSCNHEAEKLGCSASNFVFARTMPAEGADDIPGPVTWEPRPENSIFLKWPEPENPNGLILMYEIKYGSQVEDQRECVSRQEYRKYGGAKLNRLNPGNYTARIQATSLSGNGSWTDPVFFYVPAKTTYENFMHLIIALPVAILLIVGGLVIMLYVFHRKRNNSRLGNGVLYASVNPEYFSAADVYVPDEWEVAREKITMNRELGQGSFGMVYEGVAKGVVKDEPETRVAIKTVNEAASMRERIEFLNEASVMKEFNCHHVVRLLGVVSQGQPTLVIMELMTRGDLKSYLRSLRPEVEQNNLVLIPPSLSKMIQMAGEIADGMAYLNANKFVHRDLAARNCMVAEDFTVKIGDFGMTRDIYETDYYRKGGKGLLPVRWMSPESLKDGVFTTHSDVWSFGVVLWEIATLAEQPYQGLSNEQVLRFVMEGGLLDKPDNCPDMLFELMRMCWQYNPKMRPSFLEIIGSIKDEMEPSFQEVSFYYSEENKPPEPEELELELEPENMESVPLDPSASSVSLPLPERHSGHKAENGPGPGVLVLRASFDERQPYAHMNGGRANERALPLPQSSTC
15 H906C ATGAAGTCTGGCTCCGGAGGAGGGTCCCCGACCTCACTGTGGGGGCTCGTGTTTCTCTCTGCCGCGCTCTCGCTGTGGCCGACGAGTGGAGAAATTTGTGGGCCCGGCATTGACATCCGCAATGACTACCAGCAGCTGAAGCGCCTGGAAAACTGCACAGTGATTGAGGGCTTCCTCCACATCCTGCTCATCTCCAAGGCCGAGGACTACCGAAGCTACCGCTTCCCCAAGCTCACGGTCATCACTGAGTACTTGCTGCTGTTTCGAGTGGCCGGCCTCGAGAGCCTGGGAGACCTCTTCCCCAACCTTACGGTTATCCGTGGCTGGAAACTCTTCTACAACTACGCACTGGTCATCTTTGAGATGACCAATCTCAAGGATATTGGACTTTATAATCTGAGAAACATTACACGGGGGGCCATCAGGATTGAGAAGAACGCAGACCTCTGTTACCTCTCCACCATAGACTGGTCTCTCATCTTGGATGCAGTGTCTAATAACTACATTGTGGGCAACAAGCCCCCAAAGGAATGTGGGGACCTGTGTCCAGGGACCTTGGAGGAGAAGCCCATGTGTGAGAAGACCACCATCAACAATGAGTACAACTACCGCTGCTGGACCACAAATCAATGCCAGAAAATGTGCCCAAGTGTGTGCGGAAAGCGAGCGTGCACCGAGAACAACGAATGCTGCCACCCAGAGTGCCTAGGCAGCTGCCATACACCTGACGACAACACAACCTGTGTGGCCTGCCGACACTACTACTACAAAGGCGTGTGTGTGCCTGCCTGCCCACCTGGCACCTACAGGTTCGAGGGCTGGCGCTGTGTGGACCGCGATTTCTGCGCCAACATCCCCAACGCTGAGAGCAGTGACTCAGATGGCTTTGTCATCCACGATGGCGAGTGCATGCAAGAATGTCCCTCAGGCTTCATCCGCAACAGCACCCAGAGCATGTACTGTATCCCCTGTGAAGGCCCCTGCCCAAAAGTCTGTGGCGATGAAGAAAAGAAAACAAAAACCATCGACTCGGTTACGTCGGCTCAGATGCTCCAAGGATGCACCATCTTGAAGGGCAATTTACTTATTAATATCCGGCGGGGCAATAACATTGCCTCAGAACTTGAGAACTTCATGGGGCTCATCGAGGTAGTGACTGGCTATGTGAAGATCCGCCATTCCCATGCTTTGGTCTCCTTGTCCTTCCTGAAGAACCTTCGTCTAATCTTAGGAGAGGAGCAGCTGGAAGGGAACTACTCCTTCTATGTCCTGGACAACCAGAACTTGCAGCAGCTGTGGGACTGGAACCACCGGAACCTGACCGTCAGGTCGGGGAAGATGTACTTTGCTTTCAATCCCAAGCTGTGTGTCTCTGAAATTTACCGCATGGAGGAAGTAACAGGAACAAAGGGCCGCCAGAGCAAAGGGGACATAAACACCAGGAACAATGGAGAGCGAGCTTCCTGTGAAAGCGACGTTCTCCGTTTCACCTCCACCACCACCTCAAAGAACCGGATCATCATAACATGGCACCGGTACCGGCCCCCAGATTACAGGGATCTCATCAGCTTCACGGTTTACTACAAGGAGGCACCCTTTAAAAATGTTACGGAATATGATGGGCAGGATGCCTGTGGCTCCAACAGCTGGAACATGGTGGATGTGGACCTACCTCCCAACAAGGAGGGGGAGCCTGGCATTTTACTGCATGGGCTGAAGCCCTGGACCCAGTATGCCGTCTATGTCAAGGCTGTGACCCTCACCATGGTGGAAAACGACCATATCCGTGGGGCCAAAAGTGAAATCTTGTACATTCGCACCAATGCTTCAGTTCCTTCCATTCCCCTAGATGTACTTTCGGCCTCAAACTCTTCTTCTCAGCTGATTGTGAAGTGGAATCCTCCAACTCTGCCCAATGGTAACTTGAGTTACTACATTGTAAGGTGGCAGCGACAGCCACAGGATGGCTACCTGTACCGGCACAACTACTGCTCCAAAGACAAAATACCCATCAGAAAGTATGCGGATGGCACCATTGATGTGGAAGAGGTGACAGAGAATCCCAAGACAGAAGTGTGTGGTGGTGACAAAGGGCCTTGCTGTGCTTGTCCCAAAACTGAAGCCGAGAAGCAGGCCGAGAAGGAAGAGGCCGAGTACCGCAAAGTCTTTGAGAATTTCCTGCACAATTCCATCTTCGTGCCCAGACCCGAAAGGAGGCGGAGAGATGTCATGCAAGTAGCCAACACCACCATGTCTAGCCGAAGCAGGAACACCACAGTGGCTGACACCTACAATATCACAGATCCAGAAGAACTCGAGACAGAGTACCCTTTCTTTGAGAGCAGAGTAGATAACAAGGAGAGAACTGTCATCTCCAACCTTCGGCCTTTCACTTTGTACCGCATTGATATCCACAGCTGCAACCACGAAGCCGAGAAGCTGGGCTGCAGTGCCTCCAACTTTGTCTTTGCGAGAACCATGCCTGCAGAAGGAGCAGATGACATTCCTGGACCAGTGACCTGGGAGCCAAGACCTGAAAACTCCATCTTTTTAAAGTGGCCAGAACCTGAGAACCCCAACGGATTGATTCTAATGTATGAAATAAAGTATGGATCACAAGTTGAGGATCAGCGGGAATGTGTGTCCAGACAGGAATACAGGAAGTACGGAGGGGCCAAGCTTAACCGGCTAAACCCAGGGAACTATACAGCCCGGATTCAGGCCACGTCTCTCTCTGGCAATGGGTCTTGGACAGATCCTGTGTTCTTCTATGTCCCAGCCAAGACGACATATGAGAATTTCATGTGTCTGATAATTGCTCTGCCGGTCGCCATCCTGCTGATTGTGGGGGGACTGGTCATCATGCTGTATGTCTTCCATAGGAAGAGAAATAACAGCAGGTTGGGCAATGGAGTGCTGTATGCCTCTGTGAACCCCGAGTATTTCAGTGCAGCGGATGTGTACGTGCCCGATGAATGGGAGGTAGCTCGAGAGAAGATCACCATGAACCGGGAGCTTGGACAAGGGTCCTTTGGGATGGTCTATGAAGGAGTGGCCAAGGGAGTGGTCAAGGATGAACCTGAAACCAGAGTAGCCATCAAGACAGTAAATGAGGCTGCAAGTATGCGTGAAAGAATCGAGTTTCTCAACGAGGCTTCAGTGATGAAGGAGTTCAACTGTCACCATGTGGTCCGGTTGCTGGGGGTGGTGTCCCAAGGCCAGCCTACCCTGGTCATCATGGAACTAATGACACGTGGGGATCTCAAAAGTTATCTCCGGTCTCTAAGGCCAGAAGTGGAGCAAAATAATCTAGTCCTAATTCCTCCGAGTTTAAGCAAGATGATCCAGATGGCTGGAGAGATTGCAGATGGCATGGCTTACCTCAACGCCAACAAGTTCGTCCACAGAGACCTTGCTGCTCGGAACTGCATGGTAGCTGAAGATTTCACAGTCAAAATTGGAGATTTTGGTATGACACGAGATATCTACGAGACAGACTACTACCGGAAAGGAGGGAAGGGGCTGCTGCCTGTGCGCTGGATGTCTCCTGAGTCCCTCAAGGACGGAGTCTTCACCACTCACTCAGATGTCTGGTCCTTTGGGGTCGTCCTCTGGGAGATTGCTACACTGGCTGAGCAGCCATACCAAGGCTTGTCCAATGAGCAAGTTCTTCGCTTCGTCATGGAGGGCGGCCTTCTGGACAAGCCGGACAATTGCCCTGACATGCTGTTTGAACTCATGCGCATGTGCTGGCAGTACAACCCTAAGATGAGGCCCTCCTTCCTGGAGATCATTGGCAGCATCAAGGATGAGATGGAGCCCAGCTTTCAGGAGGTCTCCTTCTACTACAGCGAGGAGAACAAGCCTCCTGAGCCAGAAGAGCTGGAGCTGGAACTGGAGCCCGAGAACATGGAGAGCGTACCGCTGGACCCCTCGGCCTCCTCAGTCTCCCTGCCTCTGCCAGAAAGACACTCAGGACACAAGGCCGAGAATGGCCCAGGCCCTGGAGTACTGGTTCTCCGTGCCAGTTTCGATGAGCGACAGCCTTACGCTCACATGAACGGGGGACGAGCCAACGAGAGGGCTTTGCCTCTGCCCCAGTCTTCAACCTGCTGA
16 H906C MKSGSGGGSPTSLWGLVFLSAALSLWPTSGEICGPGIDIRNDYQQLKRLENCTVIEGFLHILLISKAEDYRSYRFPKLTVITEYLLLFRVAGLESLGDLFPNLTVIRGWKLFYNYALVIFEMTNLKDIGLYNLRNITRGAIRIEKNADLCYLSTIDWSLILDAVSNNYIVGNKPPKECGDLCPGTLEEKPMCEKTTINNEYNYRCWTTNQCQKMCPSVCGKRACTENNECCHPECLGSCHTPDDNTTCVACRHYYYKGVCVPACPPGTYRFEGWRCVDRDFCANIPNAESSDSDGFVIHDGECMQECPSGFIRNSTQSMYCIPCEGPCPKVCGDEEKKTKTIDSVTSAQMLQGCTILKGNLLINIRRGNNIASELENFMGLIEVVTGYVKIRHSHALVSLSFLKNLRLILGEEQLEGNYSFYVLDNQNLQQLWDWNHRNLTVRSGKMYFAFNPKLCVSEIYRMEEVTGTKGRQSKGDINTRNNGERASCESDVLRFTSTTTSKNRIIITWHRYRPPDYRDLISFTVYYKEAPFKNVTEYDGQDACGSNSWNMVDVDLPPNKEGEPGILLHGLKPWTQYAVYVKAVTLTMVENDHIRGAKSEILYIRTNASVPSIPLDVLSASNSSSQLIVKWNPPTLPNGNLSYYIVRWQRQPQDGYLYRHNYCSKDKIPIRKYADGTIDVEEVTENPKTEVCGGDKGPCCACPKTEAEKQAEKEEAEYRKVFENFLHNSIFVPRPERRRRDVMQVANTTMSSRSRNTTVADTYNITDPEELETEYPFFESRVDNKERTVISNLRPFTLYRIDIHSCNHEAEKLGCSASNFVFARTMPAEGADDIPGPVTWEPRPENSIFLKWPEPENPNGLILMYEIKYGSQVEDQRECVSRQEYRKYGGAKLNRLNPGNYTARIQATSLSGNGSWTDPVFFYVPAKTTYENFMHLIIALPVAILLIVGGLVIMLYVFHRKRNNSRLGNGVLYASVNPEYFSAADVYVPDEWEVAREKITMNRELGQGSFGMVYEGVAKGVVKDEPETRVAIKTVNEAASMRERIEFLNEASVMKEFNCHHVVRLLGVVSQGQPTLVIMELMTRGDLKSYLRSLRPEVEQNNLVLIPPSLSKMIQMAGEIADGMAYLNANKFVHRDLAARNCMVAEDFTVKIGDFGMTRDIYETDYYRKGGKGLLPVRWMSPESLKDGVFTTHSDVWSFGVVLWEIATLAEQPYQGLSNEQVLRFVMEGGLLDKPDNCPDMLFELMRMCWQYNPKMRPSFLEIIGSIKDEMEPSFQEVSFYYSEENKPPEPEELELELEPENMESVPLDPSASSVSLPLPERHSGHKAENGPGPGVLVLRASFDERQPYAHMNGGRANERALPLPQSSTC
本揭露提供了相對於以上任何胺基酸序列具有一或多個胺基酸取代的另外的突變體IGF1R序列。例如，IGF1R突變體可包含至少一個突變，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10個或更多個突變，只要IGF1R突變體具有組成型活性。
本揭露還提供了與以上任何序列具有至少約70%、至少約80%、至少約85%、至少約90%或大於約90%（例如，約91%、約92%、約93%、約94%、約95%、約96%、約97%、約98%或約99%）序列同一性的另外的突變體IGF1R序列。
本揭露還提供了另外的IGF1R缺失突變體，其中L1亞基含有L1的至少1、2、3、4、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、70、75、80、85、90、95、100、105、110、115、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、170、175、180、185、190、195或全部200個胺基酸的缺失，其中突變體具有組成型活性。
在示例性實施方式中，IGF1R突變體包含相對於以上任何胺基酸序列包含至少一個胺基酸取代的胺基酸序列，且胺基酸取代為保守性胺基酸取代。如本文所用，術語「保守胺基酸取代」係指一個胺基酸經具有類似性質，例如尺寸、電荷、疏水性、親水性和/或芳香性的另一個胺基酸取代，且包括在以下五組中的一個內的交換： I. 小的脂肪族、非極性或微極性殘基：Ala、Ser、Thr、Pro、Gly； II. 極性、帶負電殘基及其醯胺和酯：Asp、Asn、Glu、Gln、磺基丙胺酸和高磺基丙胺酸； III. 極性帶正電殘基：His、Arg、Lys；鳥胺酸（Orn） IV. 大的脂肪族非極性殘基：Met、Leu、Ile、Val、Cys、正白胺酸（Nle）、高半胱胺酸； V. 大的芳族殘基：Phe、Tyr、Trp、乙醯基苯丙胺酸。
在示例性實施方式中，IGF1R突變體包含相對於以上任何胺基酸序列包含至少一個胺基酸取代的胺基酸序列，且胺基酸取代為非保守性胺基酸取代。如本文所用，術語「非保守胺基酸取代」在本文中定義為一個胺基酸經具有不同性質，例如尺寸、電荷、疏水性、親水性和/或芳香性的另一個胺基酸取代，且包括在以上五組外的交換。 含有 IGF1R 突變體的哺乳動物宿主細胞的生成
細胞中IGF1R突變體的過表現（即，細胞中至少一個拷貝的表現）可以藉由公知的方法瞬時地或藉由穩定表現實現（Davis等人, Basic Methods in Molecular Biology [分子生物學基本方法], 第2版, Appleton & Lange, Norwalk, Conn. [康涅狄格州諾沃克的阿爾普頓·蘭格出版公司], 1994；Sambrook等人, Molecular Cloning: A Laboratory Manual [分子選殖：實驗室手冊], 第3版, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. [冷泉港實驗室出版社，紐約冷泉港], 2001）。在一個實施方式中，IGF1R突變體編碼序列穩定地整合到基因組靶區域的一個或兩個等位基因中。
穩定整合的方法係本領域公知的。簡言之，通常藉由將異源多核苷酸或含有異源多核苷酸的載體瞬時引入宿主細胞中來實現穩定整合，這有利於所述異源多核苷酸穩定整合到細胞基因組中。典型地，異源多核苷酸側翼為同源臂，即與整合位點上游和下游區域同源的序列。在它們引入哺乳動物宿主細胞之前，可以將環狀載體線性化以利於整合到細胞基因組中。將載體引入細胞中的方法係本領域公知的，包括用生物學方法（諸如病毒遞送）轉染，用化學方法（諸如使用陽離子聚合物、磷酸鈣、陽離子脂質或陽離子胺基酸）轉染；用物理方法（諸如電穿孔或顯微注射）轉染；或用混合方法（諸如原生質體融合）轉染。
為了穩定轉染哺乳動物細胞，已知取決於所使用的表現載體及轉染技術，僅一小部分細胞可將外來DNA整合至其基因組中。為了鑒定及選擇該等整合體，通常將編碼選擇性標記（例如，針對抗生素抗性）的基因隨目的基因一起引入宿主細胞中。較佳的選擇性標記包括賦予對藥物（諸如G418、潮黴素及胺甲喋呤）的抗性的那些。除其他方法以外，可藉由藥物選擇（例如，已併入有選擇性標記基因的細胞將存活，而其他細胞則死亡）來鑒定經所引入的核酸穩定轉染的細胞。
載體可為適合用於將編碼資訊的蛋白轉移和/或轉運至宿主細胞和/或特定位置和/或宿主細胞內的區室的任何分子或實體（例如，核酸、質體、噬菌體、轉位子、黏接質體、染色體、病毒、病毒殼體、病毒體、裸DNA、複合DNA等）。載體可以包括病毒和非病毒載體、非附加型哺乳動物載體。載體通常被稱為表現載體，例如，重組表現載體和選殖載體。可以將載體引入宿主細胞以允許載體自身的複製，並從而擴增其中包含的多核苷酸的拷貝。選殖載體可含有序列組分，該等序列組分通常包括但不限於複製起點、啟動子序列、轉錄起始序列、強化子序列和選擇性標記。該等元件可以由熟悉該項技術者適當選擇。
載體可用於對宿主細胞進行轉化且含有指導和/或控制（連同宿主細胞一起）與其可操作地連接的一或多個異源編碼區的表現的核酸序列的載體。表現構建體可以包括但不限於影響或控制轉錄、翻譯且在存在內含子時影響與其可操作地連接的編碼區的RNA剪接的序列。「可操作地連接」意指該術語所適用的組分呈允許其執行其固有功能的關係。例如，在與蛋白編碼序列「可操作地連接」的載體中的控制序列（例如啟動子）的排列使得該控制序列的正常活性導致該蛋白編碼序列的轉錄，從而導致所編碼的蛋白的重組表現。
可選擇在所採用的特定宿主細胞中具有功能性的載體（即，該載體與宿主細胞機構相容，從而允許可發生基因的擴增和/或表現）。在一些實施方式中，所使用的載體採用使用諸如二氫葉酸還原酶的蛋白報導序列的蛋白片段互補測定（參見例如美國專利案號6,270,964）。合適的表現載體係本領域已知的，並且也是可商購的。
典型地，用於宿主細胞中的載體均將含有用於質體維持及用於選殖及表現外源核苷酸序列的序列。此類序列典型地將包含以下核苷酸序列中的一或多個：啟動子、一或多個強化子序列、複製起點、轉錄和翻譯控制序列、轉錄終止序列、包含供體和受體剪接位點的完整內含子序列、各種改善糖基化或產量的前序列（pre-sequence/pro-sequence）、用於多肽分泌的天然或異源訊息序列（前導序列或訊息肽）、核糖體結合位點、聚腺苷酸序列、內部核糖體進入位點（IRES）序列、表現增強序列元件（EASE）、來自腺病毒2的三聯體前導序列（TPA）和VA基因RNA、用於插入編碼待表現多肽的多核苷酸的多連接子區域以及選擇性標記元件。可以從起始載體（諸如市售的載體）構建載體，可以單獨獲得其他元件並將其連接到載體中。用於獲得各組分的方法係本領域技術者熟知的。
載體組分可為同源的（即，來自於與宿主細胞相同的物種和/或品系）、異源的（例如，來自於除宿主細胞物種或品系以外的物種）、雜合的（即，來自於多於一個來源的側接序列的組合）、合成的或天然的。可藉由本領域熟知的方法獲得該等載體中有用的組分的序列，諸如先前藉由作圖和/或藉由限制性核酸內切酶鑒定的那些。另外，它們可以藉由聚合酶鏈反應（PCR）和/或藉由用合適的探針篩選基因組文庫來獲得。
核糖體結合位點對於mRNA翻譯起始而言通常為必需的且以Shine-Dalgarno序列（原核生物）或Kozak序列（真核生物）為特徵。該元件典型地位於啟動子的3’且在待表現的多肽的編碼序列的5'。
複製的起點有助於宿主細胞中載體的擴增。它們可以作為市售原核載體的一部分包括在內，也可以基於已知序列化學合成並連接到載體中。各種病毒來源（例如，SV40、多瘤病毒、腺病毒、水泡性口炎病毒（VSV）或乳突狀瘤病毒（諸如HPV或BPV））可用於在哺乳動物細胞中選殖載體。
哺乳動物宿主細胞表現載體的轉錄和翻譯控制序列可以從病毒基因組中切除。常用的啟動子和強化子序列衍生自多瘤病毒、腺病毒2、猿猴病毒40（SV40）和人巨細胞病毒（CMV）。例如，可以使用即時早期基因1的人CMV啟動子/強化子。參見例如Patterson等人, 1994, Applied Microbiol. Biotechnol. [應用微生物學與生物技術] 40:691-98。衍生自SV40病毒基因組的DNA序列，例如，SV40來源、早期和晚期啟動子、強化子、剪接序列和聚腺苷酸位點可用於提供其他遺傳元件，用於在哺乳動物宿主細胞中表現結構基因序列。病毒早期和晚期啟動子係特別有用的，因為它們都容易從病毒基因組中作為片段獲得，也可以包含病毒複製起點（Fiers等人, 1978, Nature [自然] 273:113；Kaufman 1990, Meth. in Enzymol. [酶方法學] 185:487-511）。也可以使用更小或更大的SV40片段，前提係包括了從Hind III位點向位於SV40病毒複製起點的BglI位點延伸的約250 bp序列。
轉錄終止序列典型地位於多肽編碼區的3′端且用於終止轉錄。通常，原核細胞中的轉錄終止序列為富G-C片段，繼之以聚T序列。雖然序列可自文庫中容易地選殖或甚至作為載體的一部分而購自市面，但其還可使用本領域技術者已知的那些核酸合成方法容易地合成。
選擇性標記基因編碼在選擇性培養基中生長的宿主細胞的存活及生長所必需的蛋白。典型的選擇標記基因編碼如下蛋白：(a) 賦予針對抗生素或其他毒素（例如，對於原核宿主細胞，胺苄青黴素、四環素或康黴素）的抗性；(b) 補充細胞的營養缺陷；或 (c) 提供無法從複雜培養基或限定培養基中獲得的重要營養物。特定選擇性標記係康黴素抗性基因、胺苄青黴素抗性基因及四環素抗性基因。有利地，新黴素抗性基因還可用於在原核及真核宿主細胞中進行選擇。
其他選擇性基因可用於擴增將表現的基因。擴增為如下的過程：其中使產生對生長或細胞存活非常重要的蛋白所需的基因在重組細胞連續世代的染色體內串聯重複。哺乳動物細胞的合適的選擇性標記的實例包括麩醯胺酸合酶（GS）/甲硫胺酸亞碸亞胺（MSX）系統、二氫葉酸還原酶（DHFR）和無啟動子的胸苷激酶基因。將哺乳動物細胞轉化株置於選擇壓力下，其中只有轉化株由於載體中存在的選擇性基因而獨特地適應存活。藉由在連續增加培養基中選擇劑的濃度的條件下培養經轉化細胞，由此使選擇性基因和編碼目的蛋白的DNA擴增來施加選擇壓力。因此，由經擴增的DNA合成增加量的目的多肽。
在一些情況下，諸如在真核宿主細胞表現系統中需要糖基化時，可操縱各種前序列或前序列以改善糖基化或產率。舉例而言，可改變特定訊息肽的肽酶裂解位點，或添加還可影響糖基化的前序列。最終蛋白產物可以在-1位（相對於成熟蛋白的第一個胺基酸）具有一或多個易於表現的另外的胺基酸，該等胺基酸可能未完全移除。舉例而言，最終蛋白產物可具有一或兩個與胺基末端附接的在肽酶裂解位點發現的胺基酸殘基。替代性地，若酶在成熟多肽內的酶裂解位點區域進行切割，則一些酶裂解位點的使用可產生所要多肽的稍微截短形式。
表現和選殖典型地將含有被宿主生物體識別且可操作地連接至編碼目的蛋白的分子的啟動子。啟動子為位於控制結構基因轉錄的結構基因起始密碼子（一般在約100至1000 bp內）上游（即，5'）的非轉錄序列。啟動子通常分組為兩種類別：誘導型啟動子及組成型啟動子。誘導型啟動子起始處於其控制下的DNA回應於培養條件的某種變化（諸如營養素的存在或不存在，或者溫度變化）以提高的水平轉錄。另一方面，組成型啟動子一致地轉錄其可操作地連接的基因，即，對基因表現具有極小控制或無控制。許多由多種潛在宿主細胞識別的啟動子係熟知的。
用於哺乳動物宿主細胞的適合啟動子係熟知的，且包括但不限於獲自病毒基因組的那些啟動子，該等病毒為諸如多瘤病毒、傳染性上皮瘤病毒、腺病毒（諸如腺病毒2）、牛乳突狀瘤病毒、禽肉瘤病毒、巨細胞病毒、反轉錄病毒、B型肝炎病毒及猿猴病毒40（SV40）。其他適合哺乳動物啟動子包括異源哺乳動物啟動子，例如熱休克啟動子及肌動蛋白啟動子。
可能有意義的其他啟動子包括但不限於：SV40早期啟動子（Benoist和Chambon, 1981, Nature [自然] 290:304-310）；CMV啟動子（Thornsen等人, 1984, Proc.Natl.Acad.U.S.A. [美國國家科學院院刊] 81:659-663）；勞斯氏肉瘤病毒3'長末端重複序列中包含的啟動子（Yamamoto等人, 1980, Cell [細胞] 22:787-797）；皰疹病毒胸苷激酶啟動子（Wagner等人, 1981, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. [美國國家科學院院刊] 78:1444-1445）；甘油醛-3-磷酸脫氫酶（GAPDH）；來自金屬硫蛋白基因的啟動子和調控序列（Prinster等人, 1982, Nature [自然] 296:39-42）；以及原核啟動子，諸如β-內醯胺酶啟動子（Villa-Kamaroff等人, 1978, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. [美國國家科學院院刊] 75:3727-3731）；或tac啟動子（DeBoer等人, 1983, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. [美國國家科學院院刊] 80:21-25）。有意義的還有以下動物轉錄控制區，它們表現出組織特異性並已用於轉基因動物中：在胰臟腺泡細胞中有活性的彈性蛋白酶I基因控制區（Swift等人, 1984, Cell [細胞] 38:639-646；Ornitz等人, 1986，Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol. [冷泉港定量生物學研討會] 50:399-409；MacDonald, 1987, Hepatology [肝臟病學] 7:425-515）；在胰臟β細胞中具有活性的胰島素基因控制區（Hanahan, 1985, Nature [自然] 315:115-122）；在淋巴樣細胞中具有活性的免疫球蛋白基因控制區（Grosschedl等人, 1984, Cell [細胞] 38:647-658；Adames等人, 1985, Nature [自然] 318:533-538；Alexander等人, 1987, Mol. Cell. Biol. [分子細胞生物學] 7:1436-1444）；在睪丸、乳房、淋巴和肥大細胞中具有活性的小鼠乳房腫瘤病毒控制區（Leder等人, 1986, Cell [細胞] 45:485-495）；在肝中具有活性的白蛋白基因控制區（Pinkert等人, 1987, Genes and Devel. [基因與發育] 1:268-276）；在肝中具有活性的α-胎蛋白基因控制區（Krumlauf等人, 1985, Mol. Cell. Biol. [分子細胞生物學] 5:1639-1648；Hammer等人, 1987, Science [科學] 253:53-58）；在肝中具有活性的α1-抗胰蛋白酶基因控制區（Kelsey等人, 1987, Genes and Devel. [基因與發育] 1:161-171）；在骨髓細胞中具有活性的β-球蛋白基因控制區（Mogram等人, 1985, Nature [自然] 315:338-340；Kollias等人, 1986, Cell [細胞] 46:89-94）；在腦中的寡樹突細胞中具有活性的髓磷脂鹼性蛋白基因控制區（Readhead等人, 1987, Cell [細胞] 48:703-712）；在骨骼肌中具有活性的肌球蛋白輕鏈-2基因控制區（Sani, 1985, Nature [自然] 314:283-286）；和在下視丘中具有活性的促性腺激素釋放激素基因控制區（Mason等人, 1986, Science [科學] 234:1372-1378）。
可將強化子序列插入該載體中以增加高等真核生物的轉錄。強化子為DNA的順式作用元件，長度通常為約10-300 bp，作用於啟動子以增加轉錄。強化子在方向及位置方面為相對獨立的，已見於轉錄單元的5'及3'位置。已知可得自哺乳動物基因的若干強化子序列（例如，球蛋白、彈性蛋白酶、白蛋白、α-胎蛋白及胰島素）。然而，典型地使用來自於病毒的強化子。本領域中已知的SV40強化子、巨細胞病毒早期啟動子強化子、多瘤病毒強化子和腺病毒強化子係用於激活真核啟動子的例示性強化元件。儘管強化子可以定位於載體中編碼序列的5'或3'，但其典型地位於啟動子5'的位點處。
可將編碼適當天然或異源訊息序列（前導序列或訊息肽）的序列併入表現載體中，以促進目的蛋白的細胞外分泌。訊息肽或前導序列的選擇取決於待產生目的蛋白的宿主細胞的類型，且異源訊息序列可替換天然訊息序列。在哺乳動物宿主細胞中具有功能性的訊息肽的實例包括以下該等：美國專利案號4,965,195中所描述的介白素-7的訊息序列；Cosman等人,1984, Nature [自然] 312:768中所描述的白血球介素-2受體的訊息序列；歐洲專利案號0367 566中所描述的介白素-4受體訊息肽；美國專利案號4,968,607中所描述的I型介白素-1受體訊息肽；歐洲專利案號0 460 846中所描述的II型介白素-1受體訊息肽。
經證實會改善來自哺乳動物表現載體的異源基因表現的另外的控制序列包括諸如源自CHO細胞的表現增加序列元件（EASE）的元件（Morris等人, 在Animal Cell Technology [動物細胞技術]，第529-534頁(1997)中；美國專利案號6,312,951 B1、6,027,915和6,309,841 B1）和來自腺病毒2的三聯體前導序列（TPL）和VA基因RNA（Gingeras等人, 1982, J. Biol. Chem. [生物化學雜誌] 257:13475-13491）。病毒來源的內部核糖體進入位點（IRES）序列使雙順反子mRNA得以有效翻譯（Oh和Sarnow, 1993, Current Opinion in Genetics and Development [遺傳學與發育新見] 3:295-300；Ramesh等人, 1996, Nucleic Acids Research [核酸研究] 24:2697-2700）。
構建後，可將一或多種載體插入合適的細胞中以進行擴增和/或多肽表現。表現載體向所選細胞的轉化可以藉由熟知的方法完成，包括轉染、感染、磷酸鈣共沈澱、電穿孔、核轉染、顯微注射、DEAE-右旋糖酐介導的轉染、陽離子脂質介導的遞送、脂質體介導的轉染、微彈轟擊、受體介導的基因遞送，聚離胺酸、組蛋白、殼聚糖和肽介導的遞送。所選方法將部分隨待使用的宿主細胞類型而變化。該等方法及其他合適的方法係本領域技術者熟知的，並且在手冊和其他技術出版物中有闡述，例如在Sambrook等人，Molecular Cloning: A Laboratory Manual [分子選殖：實驗室手冊], 第3版, Cold Spring Harbor Laboratory Press [冷泉港實驗室出版社], 冷泉港, 紐約(2001)中。
術語「轉化」係指細胞遺傳特性的改變，當細胞被修飾以含有新的DNA或RNA時，則該細胞就被轉化了。例如，細胞經由轉染、轉導或其他技術引入新的遺傳材料，由其原始狀態進行基因修飾，則該細胞就被轉化了。轉染或轉導後，轉化DNA可以藉由物理整合進入細胞染色體與細胞的DNA重組，或者可以作為一個不被複製的游離元件被暫時維持，或者可以作為質體獨立複製。當轉化的DNA隨著細胞的分裂而複製時，細胞被認為已經「穩定地轉化」了。
術語「轉染」係指藉由細胞吸收外來或外源性DNA。許多轉染技術在本領域中係熟知的，並在本文中揭露。參見例如Graham等人, 1973, Virology [病毒學] 52:456；Sambrook等人, 2001, Molecular Cloning: A Laboratory Manual [分子選殖：實驗室手冊]，同上；Davis等人, 1986, Basic Methods in Molecular Biology [分子生物學基本方法], 愛思唯爾；Chu等人, 1981, Gene [基因] 13:197。
術語「轉導」係指外來DNA經由病毒載體被引入細胞的過程。參見Jones等人, (1998). Genetics: principles and analysis. [遺傳學：原理和分析] Boston: Jones & Bartlett Publ. [波士頓：鐘斯和巴特利特出版社]。
IGF1R突變體也可藉由基因組或基因編輯引入具有內源IGF1R的宿主細胞中。此類基因組編輯技術包括但不限於鋅指核酸酶（ZFN）、轉錄激活因子樣效應物核酸酶（TALEN）、規律間隔重複短迴文序列簇（CRISPR）相關蛋白9（Cas9）、整合酶（諸如PhiC3期整合酶）、轉錄激活因子樣效應物（TALES）、序列特異性重組酶和轉位子/轉位酶系統（諸如睡美人（Sleeping Beauty））。參見例如美國專利申請公開案號2015/0031132；國際專利申請公開案號WO 2018/098671；Ivies等人, 1997,Cell [細胞] 91(4):501-510；Boch等人, 2009, Science [科學] 326(5959):1509-1512；Christian等人, 2010, Genetics [遺傳學] 186(2):757-761；Wilber等人, 2011, Stem Cells Int [國際幹細胞研究]；卷號: 2011: 文章編號717069；Yusa等人, 2011, Nature [自然] 478:391-396；Silva等人, 2011, Curr Gene Ther [當前基因療法] 11(1):11-27；Cong等人, 2013, Science [科學] 339(6121):819-823；Mali等人, 2013, Science [科學] 339(6121):823-826，Li等人, 2017, Molecular Therapy: Nucleic Acids [分子療法：核酸] 9月第8卷, 64-76；和Ishida等人, 2018, Scientific Reports [科技報告] 8:310。
宿主細胞可為含有內源IGF1R的任何細胞。對於藉由基因編輯產生的點突變，應注意確保宿主細胞種類與IGF1R序列匹配。例如，上述人的H905C突變對應於相應小鼠序列中的H906C突變。然而，來自不同物種的IGF1R序列可用於不同物種的宿主細胞系。例如，在下面的實例中，在CHO細胞（灰倉鼠（ Cricetulus griseus））中使用鼠類（小家鼠（ Mus musculus））IGF1R突變體序列。
適用於在培養中生長的多種哺乳動物細胞系可從美國模式培養物集存庫（American Type Culture Collection）（維吉尼亞州馬納薩斯）和商業供應商處獲得。行業中通常使用的細胞系的實例包括由SV40（COS-7、ATCC CRL 1651）轉化的猴腎CVl系；人胚胎腎系（293細胞或亞選殖用於在懸浮培養中生長的293細胞（Graham等人, 1977, J. Gen Virol.[普通病毒學雜誌] 36:59）；幼倉鼠腎細胞(BHK，ATCC CCL 10)；小鼠塞托利細胞（TM4, Mather, 1980, Biol. Reprod. [生殖生物學] 23:243-251）；猴腎細胞(CVl ATCC CCL 70)；非洲綠猴腎細胞(VERO-76，ATCC CRL-1587)；人子宮頸癌細胞(HELA，ATCC CCL 2)；犬腎細胞(MDCK，ATCC CCL 34)；水牛鼠肝細胞(BRL 3A，ATCC CRL 1442)；人肺細胞(W138，ATCC CCL 75)；人肝癌細胞（Hep G2，HB 8065）；小鼠乳房瘤（MMT 060562，ATCC CCL51）；TRI細胞（Mather等人, 1982, Annals N.Y Acad. Sci. [紐約科學院年報] 383:44-68）；MRC 5細胞或FS4細胞；哺乳動物骨髓瘤細胞，以及許多其他細胞系和中國倉鼠卵巢（CHO）細胞。
用於商業應用的蛋白的大規模生產通常在懸浮培養中進行。因此，用於生成本文所述之重組哺乳動物細胞的哺乳動物宿主細胞可以但不必適於在懸浮培養中生長。已知多種適於在懸浮培養中生長的宿主細胞，包括來自CFIO-S、DG44和DXB11細胞系的小鼠骨髓瘤NS0細胞和CLIO細胞。其他合適的細胞系包括小鼠骨髓瘤SP2/0細胞、幼倉鼠BF1K-21細胞、人PER.C6 ®細胞、人胚腎F1EK-293細胞和源自或工程化自本文揭露的任何細胞系的細胞系。
CHO細胞廣泛用於生產複合重組蛋白，包括CHOK1細胞（ATCC CCL61）。二氫葉酸還原酶（DHFR）缺陷突變體細胞系（Urlaub等人, 1980, Proc Natl Acad Sci USA[美國國家科學院院刊] 77: 4216-4220）DXB11和DG-44係理想的CHO宿主細胞系，因為有效的DHFR可選擇和可擴增基因表現系統允許在該等細胞中高水平表現重組蛋白（Kaufman R. J., 1990, Meth Enzymol[酶方法學] 185:537-566）。還包括利用基於麩醯胺酸合成酶（GS）的甲硫胺酸亞碸亞胺（MSX）選擇的麩醯胺酸合成酶（GS）-敲除CHOK1SV細胞系。其他合適的CHO宿主細胞可包括但不限於以下（括弧中的係ECACC登錄號）：CHO（85050302）、CHO（無蛋白）（00102307）、CHO-K1（85051005）、CHO-K1/SF（93061607）、CHO/dhFr-（94060607）、CHO/dhFr-無AC（05011002）、RR-CHOKI（92052129）。 細胞培養過程的描述
本文所述之採用IGF1R突變體的方法和細胞系允許減少用於製造目的蛋白的細胞培養基中IGF-1的量。典型地，細胞培養基中IGF-1的濃度為0.1 mg/L。在本文揭露的方法中，細胞培養基中IGF-1的濃度可減至小於0.05、0.04、0.03、0.02或0.01 mg/L。在某些實施方式中，細胞培養基中不需要IGF-1，即細胞培養基中IGF-1的濃度為0 mg/L。
在本文所述之方法中，在含有0.1 mg/L IGF-1的細胞培養基中，細胞具有與不含IGF1R突變體的相同譜系的細胞相當的生長速率。在某些實施方式中，對於生產的前5天，生長速率為0.015-0.04 1/小時。在某些實施方式中，在種子培植中生長速率為0.022-0.025 1/小時。在某些實施方式中，細胞的倍增時間為23-35小時。
在本文所述之方法中，在含有0.1 mg/L IGF-1的細胞培養基中，細胞以與不含IGF1R突變體的相同譜系的細胞相當的滴度產生重組目的蛋白。在某些實施方式中，培養第10天後，目的蛋白的滴度為至少50 mg/L、100 mg/L、150 mg/L、200 mg/L、250 mg/L、300 mg/L、350 mg/L、400 mg/L、450 mg/L、500 mg/L、550 mg/L或600 mg/L。
在本文所述之方法中，使用減少量的IGF-1或不使用IGF-1可在生產運行的任何或所有階段進行。例如，IGF-1可在種子規模、生產規模（N）或其間任何規模（例如N-1、N-2等）減少至0.03 mg/L或更少。在生產規模上，IGF-1可在初始細胞培養基和/或灌注培養基或補料分批補料培養基中適當地減少。
所揭露的方法適用於在攪拌釜反應器中生長的貼壁培養或懸浮培養（包括傳統的分批和補料分批細胞培養，其可以但不必包括旋轉過濾器）、灌注系統（包括交替切向流（「ATF」）培養、聲學灌注系統、深度過濾器灌注系統和其他系統）、中空纖維生物反應器（HFB，其在一些情況下可以用於灌注過程）以及各種其他細胞培養方法（參見例如Tao等人, 2003, Biotechnol. Bioeng.[生物技術與生物工程] 82:751-65；Kuystermans和Al-Rubeai, (2011) 「Bioreactor Systems for Producing Antibody from Mammalian Cells [用於從哺乳動物細胞產生抗體的生物反應器系統]」在Antibody Expression and Production [抗體表現和生產]中, Cell Engineering [細胞工程] 7:25-52, Al-Rubeai（編輯）Springer [斯普林格]；Catapano等人, (2009) 「Bioreactor Design and Scale-Up [生物反應器設計與擴大]」在Cell and Tissue Reaction Engineering: Principles and Practice [細胞與組織反應工程：原理與實踐]中, Eibl等人（編輯）Springer-Verlag [斯普林格-維拉格]，其藉由援引以其全文併入本文）。
在重組蛋白生產階段間，期望有一種受控系統，細胞在其中生長至所需密度，然後細胞的生理狀態轉換為生長停滯的高生產率狀態，其中細胞使用能量和底物生產重組目的蛋白而不是產生更多的細胞。存在各種實現該目標的方法，包括溫度變換和胺基酸饑餓，以及使用細胞週期抑制劑或其他可以阻止細胞生長而不引起細胞死亡的分子。
重組蛋白的生產始於在培養板、燒瓶、管、生物反應器或其他合適的容器中建立表現該蛋白的細胞的哺乳動物細胞生產培養物。典型地使用較小的生產生物反應器，在一個實施方式中，生物反應器為500 L至2000 L。在另一個實施方式中，使用1000 L-2000 L的生物反應器。用於接種生物反應器的種子細胞密度可對生產的重組蛋白的水平具有積極影響。在一個實施方式中，生物反應器用在無血清培養基中至少0.5×10 6至超過3.0×10 6個活細胞/mL接種。在另一個實施方式中，接種量為1.0×10 6個活細胞/mL。
然後哺乳動物細胞經歷指數生長階段。可以在沒有補充補料的情況下維持細胞培養物，直至達到期望的細胞密度。在一個實施方式中，細胞培養物在有或無補充補料的情況下維持長達三天。在另一個實施方式中，可以以期望的細胞密度接種培養物以開始生產階段而沒有短暫的生長階段。在本文的任何實施方式中，從生長階段到生產階段的轉換也可以藉由任何前述方法引發。
在介於生長階段與生產階段之間的過渡階段，以及在生產階段期間，細胞壓積百分比（%PCV）等於或小於35%。在生產階段維持的所需的細胞壓積等於或小於35%。在一個實施方式中，細胞壓積等於或小於30%。在另一個實施方式中，細胞壓積等於或小於20%。在又一個實施方式中，細胞壓積等於或小於15%。在另一個實施方式中，細胞壓積等於或小於10%。
在介於生長階段與生產階段之間的過渡階段的以及在生產階段期間維持的所需活細胞密度可根據專案而不同。它可以基於來自歷史資料的等效細胞壓積而決定。在一個實施方式中，活細胞密度為至少約10×10 6個活細胞/mL至80×10 6個活細胞/mL。在一個實施方式中，活細胞密度為至少約10×10 6個活細胞/mL至70×10 6個活細胞/mL。在一個實施方式中，活細胞密度為至少約10×10 6個活細胞/mL至60×10 6個活細胞/mL。在一個實施方式中，活細胞密度為至少約10×10 6個活細胞/mL至50×10 6個活細胞/mL。在一個實施方式中，活細胞密度為至少約10×10 6個活細胞/mL至40×10 6個活細胞/mL。在另一個實施方式中，活細胞密度為至少約10×10 6個活細胞/mL至30×10 6個活細胞/mL。在另一個實施方式中，活細胞密度為至少約10×10 6個活細胞/mL至20×10 6個活細胞/mL。在另一個實施方式中，活細胞密度為至少約20×10 6個活細胞/mL至30×10 6個活細胞/mL。在另一個實施方式中，活細胞密度為至少約20×10 6個活細胞/mL至至少約25×10 6個活細胞/mL，或至少約20×10 6個活細胞/mL。
在生產階段期間較低的細胞壓積有助於減輕溶解氧噴射問題，溶解氧噴射問題可阻礙較高細胞密度的灌注培養。較低的細胞壓積還允許較小的培養基體積，這允許使用較小的培養基存儲容器並且可以與較慢的流速組合。與較高的細胞生物質培養相比，較低的細胞壓積對收穫和下游加工也具有較小的影響。所有該等都降低了與製造重組蛋白治療劑相關的成本。
在藉由哺乳動物細胞培養生產重組蛋白的商業方法中典型地使用三種方法：分批培養、補料分批培養和灌注培養。分批培養係一種不連續的方法，其中細胞在固定體積的培養基中生長很短的一段時間，接著完全收穫。使用分批方法生長的培養物經歷細胞密度的增加直至達到最大細胞密度，接著隨著培養基組分的消耗和代謝副產物（諸如乳酸鹽和胺）水平的積聚，活細胞密度下降。收穫通常發生在達到最大細胞密度時（例如，5×10 6個細胞/mL或更高，取決於培養基配方、細胞系等）。分批過程係最簡單的培養方法，然而活細胞密度受到營養物可用性的限制，並且一旦細胞處於最大密度，則培養物衰退並且產量降低。不能夠延長生產階段，這係因為廢棄產物的積聚和營養物的消耗迅速導致培養物衰退（通常約3-7天）。
補料分批培養藉由提供團式或連續培養基補料以補充已經消耗的那些培養基組分而改進了分批過程。由於補料分批培養在整個運行中接受額外的營養物，所以與分批方法相比，它們具有獲得更高的細胞密度（＞10至30×10 6個細胞/ml，取決於培養基配方、細胞系等）和增加的產物滴度的潛力。與分批過程不同，可以藉由操縱補料策略和培養基配製物來產生和維持雙相培養物，以區分實現所需細胞密度的細胞增殖期（生長階段）與懸浮或緩慢細胞生長階段（生產階段）。因此，與分批培養相比，補料分批培養具有獲得更高產物滴度的潛力。典型地，在生長階段使用分批方法，在生產階段使用補料分批方法，但是在整個過程中可以使用補料分批補料策略。然而，與分批過程不同，生物反應器體積係限制補料量的限制因素。此外，與分批方法一樣，代謝副產物的積聚將導致培養物衰退，這限制了生產階段的持續時間，約10至21天。補料分批培養係不連續的，收穫典型地發生在代謝副產物水平或培養物活力達到預定水平時。與不進行補料的分批培養相比，補料分批培養可以產生更大量的重組蛋白。參見例如美國專利案號5,672,502。
灌注方法藉由添加新鮮培養基並同時去除用過的培養基提供了對分批方法和補料分批方法的潛在改進。典型的大規模商業細胞培養策略致力於達到60 - 90(+)×10 6個細胞/mL的高細胞密度，其中反應器體積的幾乎三分之一到一半以上係生物質。利用灌注培養，已經實現了＞1×10 8個細胞/mL的極端細胞密度，並且預測了甚至更高的密度。典型的灌注培養開始於持續一天或兩天的分批培養啟動，接著向培養物中連續、分步和/或間歇性添加新鮮補料培養基，並在培養的整個生長階段和生產階段同時去除用過的培養基並保留細胞和另外的高分子量化合物諸如蛋白（基於過濾分子量截斷值）。可以使用各種方法，諸如沈降、離心或過濾來去除用過的培養基，同時維持細胞密度。已經報導了每天一工作容積的一個分數至每天多個工作容積的灌注流速。
灌注方法的優點係生產培養物可以比分批培養或補料分批培養方法維持更長的時間。然而，需要增加培養基的製備、使用、儲存和處置以支持長期灌注培養，特別是具有高細胞密度的那些，還需要甚至更多的營養物，並且與分批和補料分批方法相比，所有該等驅使生產成本甚至更高。另外，較高的細胞密度可在生產過程中引起問題，諸如維持溶解氧水平和增加氣體處理的問題，包括供給更多的氧氣和去除更多的二氧化碳，這將導致更多的起泡和對改變消泡策略的需要；以及在收穫和下游加工期間，其中去除過量細胞材料所需的努力可導致產物損失，從而否定了由於細胞質量增加而增加滴度的益處。
還提供了一種大規模細胞培養策略，該策略結合了生長階段的補料分批補料和其後生產階段的連續灌注。該方法以細胞培養物維持在小於或等於35%的細胞壓積的生產階段為目標。
在一個實施方式中，使用具有團式補料的補料分批培養在生長階段期間維持細胞培養物。然後可以在生產階段期間使用灌注補料。在一個實施方式中，當細胞達到生產階段時開始灌注。在另一個實施方式中，在細胞培養的第3天或約第3天至第9天或約第9天開始灌注。在另一個實施方式中，在細胞培養的第5天或約第5天至第7天或約第7天開始灌注。
在生長階段期間使用團式補料允許細胞過渡到生產階段，導致對作為引發和控制生產階段的手段的溫度變換的依賴性較小，然而在生長階段與生產階段之間可發生約36°C至約31°C的溫度變換。在一個實施方式中，該變換為36°C至32°C。
如本文所述，生物反應器可以用在無血清培養基中至少0.5×10 6至超過3.0×10 6個活細胞/mL接種，例如1.0×10 6個活細胞/mL。
灌注培養係其中細胞培養物接收新鮮灌注供給培養基同時除去耗過培養基的培養。灌注可為連續的、分步的、間歇的、或任何該等中的任何一種或全部的組合。灌注率可以每天低於一工作容積至多個工作容積。細胞保留在培養物中，並且去除的用過的培養基基本上不含細胞或具有比培養物顯著更少的細胞。細胞培養物表現的重組蛋白也可以保留在培養物中。灌注可以藉由許多方式完成，包括離心、沈降或過濾， 參見例如Voisard等人, 2003, Biotechnology and Bioengineering [生物技術和生物工程] 82:751-65。過濾方法的實例係交替切向流過濾。藉由中空纖維過濾器模組泵送培養基來維持交替切向流。參見例如美國專利案號6,544,424；Furey, 2002, Gen. Eng. News. [基因工程新聞] 22 (7):62-63。
「灌注流速」係在給定時間內從生物反應器通過（添加和去除）的培養基的量，通常表示為工作容積的某一分數或多個工作容積。「工作容積」係指用於細胞培養的生物反應器容積的量。在一個實施方式中，灌注流速為每天一個工作容積或更少。可以配製灌注補料培養基以使灌注營養物濃度最大化，從而使灌注速率最小化。
細胞培養物可以補充含有在細胞培養物生產階段過程中被消耗的組分（諸如營養物和胺基酸）的濃縮補料培養基。
濃縮補料培養基可基於幾乎任何細胞培養基配製物。這樣的濃縮補料培養基可以含有細胞培養基的大多數組分，例如它們正常量的約5X、6X、7X、8X、9X、10X、12X、14X、16X、20X、30X、50X、100x、200X、400X、600X、800X或甚至約1000X。濃縮補料培養基常常用於補料分批培養過程。
根據本發明的方法可用於改善多階段培養過程中重組蛋白的生產。在多級過程中，在兩個或更多個不同階段培養細胞。例如，細胞可以首先在一或多個生長階段，在使細胞增殖和活力最大化的環境條件下培養，然後轉移到生產階段，在使蛋白生產最大化的條件下培養。在藉由哺乳動物細胞生產蛋白的商業過程中，通常存在多個，例如至少約2、3、4、5、6、7、8、9或10個生長階段，該等生長階段在最終生產培養之前在不同培養容器中發生。
生長階段和生產階段可以在一或多個過渡階段之前，或由一或多個過渡階段隔開。在多階段過程中，根據本發明的方法可以至少在商業細胞培養的最終生產階段的生長和生產階段中採用，但是它也可以在先前的生長階段中採用。生產階段可以大規模進行。大規模過程可以在至少約100、500、1000、2000、3000、5000、7000、8000、10,000、15,000、20,000升的體積中進行。在一個實施方式中，生產在500 L、1000 L和/或2000 L生物反應器中進行。
生長期可以在比生產期更高的溫度下進行。例如，生長期可以在約35°C至約38°C的第一溫度下進行，並且生產期可以在約29°C至約37°C，視需要約30°C至約36°C或約30°C至約34°C的第二溫度下進行。此外，可以在溫度變化之前和/或之後的同時添加蛋白產生的化學誘導劑，如像咖啡因、丁酸酯和六亞甲基雙乙醯胺（HMBA）。如果在溫度變化後添加誘導劑，則可以在溫度變化後1小時至5天，視需要在溫度變化後1至2天添加誘導劑。細胞培養物可維持數天或甚至數週，同時細胞產生所需蛋白。
可以使用本領域已知的任何分析技術監測和評價來自細胞培養物的樣本。可以在培養持續期間監測包括重組蛋白及培養基品質和特徵在內的多種參數。可以間歇性地以期望的頻率，包括連續監測，即時或接近即時採集和監測樣本。
典型地，在最終生產培養物之前的細胞培養物（N-x至N-1）用於生成種子細胞，該等種子細胞將用於接種生產生物反應器，N-1培養物。種子細胞密度可對生產的重組蛋白的水平具有積極影響。產物水平傾向於隨著種子密度的增加而增加。滴度的提高不僅與更高的種子密度有關，而且可能受進入生產的細胞的代謝和細胞週期狀態的影響。
種子細胞可藉由任何培養方法產生。一種這樣的方法係使用交替切向流過濾的灌注培養。N-1生物反應器可以使用交替切向流過濾來運行以提供高密度的細胞來接種生產生物反應器。N-1時期可用於使細胞生長至密度＞90×10 6個細胞/mL。N-1生物反應器可用於生成團式種子培養物或者可用作滾動種子儲備培養物，其可維持在高種子細胞密度下接種多個生產生物反應器。生產的生長時期的持續時間範圍可為7至14天，並且可以設計成在接種生產生物反應器之前維持細胞處於指數生長。優化灌注速率、培養基配方和時間以使細胞生長並將它們以最有利於優化其生產的狀態遞送至生產生物反應器。對於接種生產生物反應器，可以實現＞15×10 6個細胞/mL的種子細胞密度。接種時更高的種子細胞密度可減少或甚至消除達到所需生產密度所需的時間。
在某些實施方式中，本揭露的哺乳動物宿主細胞和方法可用於生成高產率的目的蛋白。高產率或高體積生產率係細胞產生高水平目的蛋白的能力。使用適於哺乳動物宿主細胞並且含有胺基酸、維生素或微量元素，同時含有減少量的IGF-1或缺乏IGF-1的補料培養基，在補料分批或灌注條件下生長10天的培養物中，特定產率將取決於目的蛋白並且可為至少0.05 g/L、至少0.1 g/L、至少0.15 g/L、至少0.2 g/L、至少0.25 g/L、至少0.3 g/L、至少0.35 g/L、至少0.4 g/L、至少0.45 g/L、至少0.5 g/L、至少0.6 g/L、至少0.7 g/L、至少0.8 g/L、至少0.9 g/L、至少1 g/L、至少1.5 g/L、至少2 g/L或更高。在具體實施方式中，本揭露的宿主細胞和方法表現目的蛋白並且當在上述培養條件下生長時能夠產生至少0.5 g/L、至少0.6 g/L、至少0.7 g/L、至少0.8 g/L、至少0.9 g/L、至少1 g/L、至少1.5 g/L、至少2 g/L或更多，較佳的是高達約3 g/L、4 g/L、5 g/L或10 g/L。
還可以根據基於每天每個細胞產生的蛋白的量（表示為pg/細胞/天）測定的細胞系的單位生產率來測量產率。使用適於哺乳動物宿主細胞並且含有胺基酸、維生素或微量元素，同時含有減少量的IGF-1或缺乏IGF-1的補料培養基，在補料分批或灌注條件下生長10天的培養物中，本揭露的哺乳動物宿主細胞能夠產生至少1 pg/細胞/天、至少2 pg/細胞/天、至少3 pg/細胞/天、至少4 pg/細胞/天、至少5 pg/細胞/天、至少6 pg/細胞/天、至少7 pg/細胞/天、至少8 pg/細胞/天、至少9 pg/細胞/天、至少10 pg/細胞/天、至少11 pg/細胞/天、至少12 pg/細胞/天、至少13 pg/細胞/天、至少14 pg/細胞/天、至少15 pg/細胞/天、至少20 pg/細胞/天、至少25 pg/細胞/天或更多、較佳的是高達50 pg/細胞/天。在具體實施方式中，本揭露的哺乳動物宿主細胞表現目的蛋白並且在上述培養條件下具有至少10 pg/細胞/天、至少11 pg/細胞/天、至少12 pg/細胞/天、至少13 pg/細胞/天、至少14 pg/細胞/天、至少15 pg/細胞/天、至少20 pg/細胞/天、至少25 pg/細胞/天或更高、較佳的是高達50 pg/細胞/天的單位生產率。 目的蛋白
目的多肽和蛋白可能具有科學意義或商業意義，包括基於蛋白的治療法。目的蛋白尤其包括分泌型蛋白、非分泌型蛋白、胞內蛋白或膜結合蛋白。目的多肽和蛋白可以使用細胞培養方法藉由重組動物細胞系產生，並且可以被稱為「重組蛋白」。所表現的一或多種蛋白可以在細胞內產生或被分泌到培養基中，從培養基中可以回收和/或收集該等蛋白。術語「分離的蛋白」或「分離的重組蛋白」係指目的多肽或蛋白，該目的多肽或蛋白從會干擾其治療、診斷、預防、研究或其他用途的蛋白或多肽或其他污染物中純化出來。目的蛋白包括藉由結合靶、特別是下面列出的那些中的靶而發揮治療作用的蛋白，包括從其衍生的靶、與其相關的靶及其修飾。
目的蛋白包括「抗原結合蛋白」。「抗原結合蛋白」係指包括抗原結合區或抗原結合部分的蛋白或多肽，該抗原結合區或抗原結合部分對與其結合的另一分子（抗原）具有親和力。抗原結合蛋白涵蓋抗體、肽體、抗體片段、抗體衍生物、抗體類似物、融合蛋白（包括單鏈可變片段（scFv）、雙鏈（二價）scFv和IgGscFv（參見例如Orcutt等人, 2010, Protein Eng Des Sel [蛋白工程、設計與選擇] 23:221-228）、異源IgG（參見例如Liu等人, 2015, J Biol Chem [生物化學雜誌] 290:7535-7562）、突變蛋白和XmAb ®（加利福尼亞州蒙羅維亞的Xencor公司（Xencor, Inc., Monrovia, CA））。還包括雙特異性T細胞接合子（BiTE ®）、具有延長（諸如半衰期延長）的雙特異性T細胞接合子（例如HLE BiTE、HeteroIg BITE以及其他）、嵌合抗原受體（CAR、CAR T）和T細胞受體（TCR）。
scFv係單鏈抗體片段，它具有連接在一起的抗體重鏈和輕鏈的可變區。參見美國專利案號7,741,465和6,319,494以及Eshhar等人,1997，Cancer Immunol Immunotherapy [癌症免疫學免疫療法] 45:131-136。scFv保留了親本抗體與靶抗原特異性相互作用的能力。
術語「抗體」包括任何同種型或亞類的糖基化免疫球蛋白和非糖基化免疫球蛋白，或者其與完整抗體競爭特異性結合的抗原結合區。除非另外說明，否則抗體包括人的、人源化的、嵌合的、多特異性的、單株的、多株的、特異性IgG（heteroIgG）、雙特異性的抗體、及其寡聚物或抗原結合片段。抗體包括IgG1型、IgG2型、IgG3型或IgG4型。還包括具有抗原結合片段或抗原結合區的蛋白，如Fab、Fab'、F(ab')2、Fv、雙抗體、Fd、dAb、最大抗體（maxibody）、單鏈抗體分子、單結構域V HH、互補決定區（CDR）片段、scFv、雙抗體、三抗體、四抗體和至少包含足以使特異性抗原與靶多肽結合的免疫球蛋白的一部分的多肽。
還包括人的、人源化的和其他抗原結合蛋白，如人抗體和人源化抗體，該等抗原結合蛋白當投與於人時不會產生明顯有害的免疫反應。
還包括經修飾的蛋白，如經非共價鍵、共價鍵或者共價鍵和非共價鍵兩者化學修飾的蛋白。還包括進一步包含一或多種譯後修飾的蛋白，其可以藉由細胞修飾系統或由酶和/或化學方法離體引入或以其他方式引入的修飾制得。
目的蛋白還可以包括重組融合蛋白，該等重組融合蛋白包括例如多聚化結構域，如白胺酸拉鍊、捲曲螺旋、免疫球蛋白的Fc部分等。還包括包含分化抗原的全部或部分胺基酸序列的蛋白（稱為CD蛋白）或其配位基或與該等中的任一個基本上相似的蛋白。
在一些實施方式中，目的蛋白可以包括群落刺激因子，諸如顆粒性白血球群落刺激因子（G-CSF）。此類G-CSF劑包括但不限於Neupogen ®（非格司亭）和Neulasta ®（培非格司亭）。還包括紅血球生成刺激劑（ESA），如Epogen ®（依伯汀α）、Aranesp ®（達貝泊汀α）、Dynepo ®（依伯汀δ）、Mircera ®（甲氧基聚乙二醇-依伯汀β）、Hematide ®、MRK-2578，INS-22，Retacrit ®（依伯汀ζ）、Neorecormon ®（依伯汀β）、Silapo ®（依伯汀ζ）、Binocrit ®（依伯汀α）、依伯汀αHexal、Abseamed ®（依伯汀α）、Ratioepo ®（依伯汀θ）、Eporatio ®（依伯汀θ）、Biopoin ®（依伯汀θ）、依伯汀α、依伯汀β、依伯汀ζ、依伯汀θ和依伯汀δ、依伯汀ω、依伯汀ι、組織纖維蛋白溶酶原活化劑、GLP-1受體促效劑、以及任何前述物質的分子或其變體或類似物和生物仿製藥。
在一些實施方式中，目的蛋白可以包括與一或多種CD蛋白、HER受體家族蛋白、細胞黏附分子、生長因子、神經生長因子、成纖維細胞生長因子、轉化生長因子（TGF）、胰島素樣生長因子、骨誘導因子、胰島素和胰島素相關蛋白、凝血和凝血相關蛋白、群落刺激因子（CSF）、其他血液和血清蛋白血型抗原特異性結合的蛋白；受體、受體相關蛋白、生長激素、生長激素受體、T細胞受體；神經營養因子、神經營養蛋白、鬆弛素（relaxin）、干擾素、介白素、病毒抗原、脂蛋白、整聯蛋白、類風濕因子、免疫毒素、表面膜蛋白、轉運蛋白、歸巢受體、位址素、調節蛋白和免疫黏附素。
在一些實施方式中，目的蛋白單獨或以任何組合結合以下的一或多種蛋白：CD蛋白（包括但不限於CD3、CD4、CD5、CD7、CD8、CD19、CD20、CD22、CD25、CD30、CD33、CD34、CD38、CD40、CD70、CD123、CD133、CD138、CD171和CD174）、HER受體家族蛋白（包括例如HER2、HER3、HER4和EGF受體）、EGFRvIII、細胞黏附分子（例如LFA-1、Mol、p150,95、VLA-4、ICAM-1、VCAM和α v/β 3整聯蛋白）、生長因子（包括但不限於例如血管內皮生長因子（「VEGF」））；VEGFR2、生長激素、促甲狀腺激素、卵泡刺激素、黃體生成素、生長激素釋放因子、甲狀旁腺激素、米勒管抑制物質（mullerian-inhibiting substance）、人巨噬細胞炎性蛋白（MIP-1-α）、促紅血球生成素（EPO）、神經生長因子（如NGF-β）、血小板源性生長因子（PDGF）、成纖維細胞生長因子（包括例如aFGF和bFGF）、表皮生長因子（EGF）、Cripto、轉化生長因子（TGF）（尤其包括TGF-α和TGF-β（包括TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3、TGF-β4或TGF-β5））、胰島素樣生長因子-I和胰島素樣生長因子-II（IGF-I和IGF-II）、des(1-3)-IGF-I（腦IGF-I）和骨誘導因子、胰島素和胰島素相關蛋白（包括但不限於胰島素、胰島素A鏈、胰島素B鏈、胰島素原和胰島素樣生長因子結合蛋白）；（凝血蛋白和凝血相關蛋白，尤其如，VIII因子、組織因子、馮威里氏（von Willebrand）因子、蛋白C、α-1-抗胰蛋白酶、纖維蛋白溶酶原活化劑（如尿激酶和組織纖維蛋白溶酶原活化劑（「t-PA」））、邦巴辛（bombazine）、凝血酶、血小板生成素和血小板生成素受體、群落刺激因子（CSF）（尤其包括以下物質：M-CSF、GM-CSF和G-CSF）、其他血液和血清蛋白（包括但不限於白蛋白、IgE和血型抗原）、受體和受體相關蛋白（包括例如flk2/flt3受體、肥胖（OB）受體、生長激素受體和T細胞受體）；神經營養因子，包括但不限於骨源性神經營養因子（BDNF）和神經營養蛋白-3、神經營養蛋白-4、神經營養蛋白-5或神經營養蛋白-6（NT-3、NT-4、NT-5或NT-6）；鬆弛素A鏈、鬆弛素B鏈和鬆弛素原、干擾素（包括例如干擾素α、干擾素β和干擾素γ）、介白素（IL）（例如IL-1至IL-10、IL-12、IL-15、IL-17、IL-23、IL-12/IL-23、IL-2Ra、IL1-R1、IL-6受體、IL-4受體和/或IL-13受體、IL-13RA2或IL-17受體、IL-1RAP；病毒抗原，包括但不限於AIDS包膜病毒抗原、脂蛋白、降鈣素、升糖素、心房利尿鈉因子、肺界面活性劑、腫瘤壞死因子-α和腫瘤壞死因子-β、腦啡肽酶、BCMA、IgKappa、ROR-1、ERBB2、間皮素、RANTES（受激活調節的正常T細胞表現與分泌因子）、小鼠促性腺激素相關肽、DNA酶、FR-α、抑制素和活化素、整聯蛋白、蛋白A或D、類風濕因子、免疫毒素、骨成形性蛋白蛋白（BMP）、超氧化物歧化酶、表面膜蛋白、衰退加速因子（DAF）、AIDS包膜、轉運蛋白、歸巢受體、MIC（MIC-a、MIC-B）、ULBP 1-6、EPCAM、位址素、調節蛋白、免疫黏附素、抗原結合蛋白、生長激素、CTGF、CTLA4、嗜酸性粒細胞趨化因子（eotaxin）-1、MUC1、CEA、c-MET、密蛋白（Claudin）-18、GPC-3、EPHA2、FPA、LMP1、MG7、NY-ESO-1、PSCA、神經節苷脂GD2、神經節苷脂GM2、BAFF、OPGL（RANKL）、肌生成抑制素、Dickkopf-1（DKK-1）、Ang2、NGF、IGF-1受體、肝細胞生長因子（HGF）、TRAIL-R2、c-Kit、B7RP-1、PSMA、NKG2D-1、計畫性細胞死亡蛋白1和配位基、PD1和PDL1、甘露糖受體/hCGβ、C型肝炎病毒、間皮素dsFv[PE38]軛合物、退伍軍人症嗜肺桿菌（lly）、IFN γ、γ干擾素誘導蛋白10（IP10）、IFNAR、TALL-1、胸腺基質淋巴球生成素（TSLP）、前蛋白轉化酶枯草桿菌蛋白酶/Kexin 9型（PCSK9）、幹細胞因子、Flt-3、降鈣素基因相關肽（CGRP）、OX40L、α4β7、血小板特異性（血小板糖蛋白IIb/IIIb（PAC-1）、轉化生長因子β（TFGβ）、透明帶精子結合蛋白3（ZP-3）、TWEAK、血小板來源的生長因子受體α（PDGFRα）、硬化蛋白（sclerostin）以及任何前述物質的生物活性片段或變體。
在另一個實施方式中，目的蛋白包括阿昔單抗、阿達木單抗、阿德木單抗、阿柏西普、阿侖單抗、阿利庫單抗、阿那白滯素、阿塞西普、巴厘昔單抗、貝利木單抗、貝伐單抗、生物素單抗（biosozumab）、博納吐單抗、本妥昔單抗、布羅達單抗、莫坎妥珠單抗、康納單抗、西妥昔單抗、塞妥珠單抗、可那木單抗、達利珠單抗、迪諾舒單抗（denosumab）、依庫麗單抗、依決洛單抗、依法利珠單抗、依帕珠單抗、依那西普、依伏庫單抗、加利昔單抗、蓋尼塔單抗、吉妥珠單抗、戈利木單抗、替伊莫單抗、英夫利昔單抗、易普利姆瑪、樂地單抗、魯昔單抗、左旋單抗（lxdkizumab）、馬帕木單抗、磷酸莫特沙尼（motesanib diphosphate）、莫羅單抗-CD3、那他珠單抗、奈西立肽、尼妥珠單抗、納武單抗、奧瑞珠單抗、奧法木單抗、奧馬珠單抗、奧普瑞介白素、帕利珠單抗、帕尼單抗、派姆單抗、帕妥珠單抗、培克珠單抗、蘭尼單抗、利妥木單抗、利妥昔單抗、羅米司亭、洛莫索珠單抗、沙格司亭、托珠單抗、托西莫單抗、曲妥單抗、優特克單抗、維多珠單抗、維西珠單抗、伏洛昔單抗、紮木單抗、紮魯木單抗、以及任何前述物質的生物仿製藥。
根據本發明所述之目的蛋白涵蓋所有前述內容，並且進一步包括包含上述任何抗體的1、2、3、4、5或6個互補決定區（CDR）的抗體。還包括這樣的變體，其包括與目的蛋白的參考胺基酸序列具有70%或更高、特別是80%或更高、更特別是90%或更高、再更特別是95%或更高、具體是97%或更高、更具體是98%或更高、再更具體是99%或更高同一性的胺基酸序列的區。在這方面的同一性可以使用多種熟知的且容易獲得的胺基酸序列分析軟體來確定。較佳的軟體包括實施史密斯-沃特曼（Smith-Waterman）演算法的那些軟體，該等軟體被認為是搜索和比對序列問題的令人滿意的解決方案。還可以採用其他演算法，特別是在速度係重要考慮因素的情況下。可以用於此方面的用於DNA、RNA和多肽的比對和同源性匹配的常用程式包括FASTA、TFASTA、BLASTN、BLASTP、BLASTX、TBLASTN、PROSRCH、BLAZE和MPSRCH，後者係用於在MasPar製造的大規模並行處理器上執行的史密斯-沃特曼演算法的實施方式。
目的蛋白還可以包括基因工程化受體，諸如嵌合抗原受體（CAR或CAR-T）和T細胞受體（TCR），以及包含與該靶向抗原相互作用的抗原結合分子的其他蛋白。藉由摻入與靶抗原相互作用的抗原結合分子，CAR可以被工程化以結合抗原（諸如細胞表面抗原）。CAR典型地將抗原結合結構域（諸如scFv）與一或多個共刺激（「傳訊」）結構域和一或多個激活結構域串聯在一起。
較佳的是，抗原結合分子係其抗體片段，且更較佳的是一或多個單鏈抗體片段（「scFv」）。scFv較佳的是用於嵌合抗原受體中，因為它們可以工程改造以作為單鏈的一部分與其他CAR組分一起表現。參見Krause等人, 1988, J. Exp. Med. [實驗醫學雜誌], 188(4): 619-626；Finney等人, 1998, J Immunol [免疫學雜誌] 161: 2791-2797。
嵌合抗原受體包含一或多個共刺激（傳訊）結構域以增加其效力。參見美國專利案號7,741,465和6,319,494，以及Krause等人和Finney等人（同上），Song等人, 2012，Blood [血液] 119:696-706；Kalos等人, 2011, Sci Transl. Med. [科學轉化醫學] 3:95；Porter等人, 2011, N. Engl. J. Med. [新英格蘭醫學雜誌] 365:725-33，和Gross等人, 2016, Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol. [藥理學與毒理學年評] 56:59-83。合適的共刺激結構域可以源自（除其他來源外）CD28、CD28T、OX40、4-1BB/CD137、CD2、CD3（α、β、δ、ε、γ、ξ）、CD4、CD5、CD7、CD8、CD9、CD16、CD22、CD27、CD30、CD 33、CD37、CD40、CD 45、CD64、CD80、CD86、CD134、CD137、CD154、PD-1、ICOS、淋巴球功能相關抗原-1（LFA-1（CDl la/CD18）、CD247、CD276（B7-H3）、LIGHT（腫瘤壞死因子超家族成員14；TNFSF14）、NKG2C、Ig α（CD79a）、DAP-10、Fc γ受體、MHC I類分子、TNF、TNFr、整聯蛋白、傳訊淋巴球活化分子、BTLA、Toll配位基受體、ICAM-1、B7-H3、CDS、ICAM-1、GITR、BAFFR、LIGHT、HVEM（LIGHTR）、KIRDS2、SLAMF7、NKp80（KLRF1）、NKp44、NKp30、NKp46、CD19、CD4、CD8α、CD8β、IL-2R β、IL-2R γ、IL-7R α、ITGA4、VLA1、CD49a、ITGA4、IA4、CD49D、ITGA6、VLA-6、CD49f、ITGAD、CDl-ld、ITGAE、CD103、ITGAL、CDl-la、LFA-1、ITGAM、CDl-lb、ITGAX、CDl-lc、ITGBl、CD29、ITGB2、CD18、LFA-1、ITGB7、NKG2D、TNFR2、TRANCE/RANKL、DNAM1（CD226）、SLAMF4（CD244、2B4）、CD84、CD96（Tactile）、CEACAM1、CRT AM、Ly9（CD229）、CD160（BY55）、PSGL1、CD100（SEMA4D）、CD69、SLAMF6（NTB-A、Lyl08）、SLAM（SLAMF1、CD150、IPO-3）、BLAME（SLAMF8）、SELPLG（CD162）、LTBR、LAT、41-BB、GADS、SLP-76、PAG/Cbp、CD19a、CD83配位基、或其片段或組合。共刺激結構域可包含細胞外部分、跨膜部分和細胞內部分的一或多個。
CAR還包括一或多個激活結構域。CD3ζ係天然T細胞上T細胞受體的元件並且已顯示是CAR內重要的細胞內激活元件。
CAR係跨膜蛋白，包含細胞外結構域，典型地包含能夠識別並結合目的抗原的抗原結合蛋白，並且還包括「鉸鏈」區域。另外係跨膜結構域和細胞內（胞質）結構域。
細胞外結構域有益於淋巴球對來自本文所述之任何蛋白或其任何組合的抗原的傳訊和有效反應。細胞外結構域可以衍生自合成或天然來源，諸如本文所述之蛋白。細胞外結構域通常包含鉸鏈部分。這係細胞外結構域的一部分，有時稱為「間隔」區。鉸鏈可衍生自如本文所述之該等蛋白，特別是上述共刺激蛋白，以及免疫球蛋白（Ig）序列或其他合適的分子，以實現距靶細胞所需的特殊距離。
跨膜結構域可以與該CAR的細胞外結構域融合。它可以類似地融合到CAR的細胞內結構域。該跨膜結構域可以衍生自合成或天然來源，諸如本文所述之蛋白，特別是上述共刺激蛋白。
細胞內（胞質）結構域可以與跨膜結構域融合，並且可以提供免疫細胞的正常效應子功能中的至少一種的激活。T細胞的效應子功能例如可為包括細胞介素的分泌的細胞溶解活性或輔助活性。細胞內結構域可以衍生自本文所述之蛋白，特別是衍生自CD3。
可以使用多種已知技術製備根據本發明的多核苷酸、多肽、載體、宿主細胞、免疫細胞、組成物等。
本發明在範圍上不受本文所述之特定實施方式的限制，該等特定實施方式旨在作為本發明各個方面的單個說明，並且功能上等效的方法和組分也在本發明之範圍內。實際上，除了本文中顯示和描述的那些之外，根據前述描述和附圖，本發明之各種修改對於本領域技術者將變得顯而易見。這類修改旨在包含在所附請求項的範圍內。 實例實例1：IGF1R突變體細胞系的構建
在CHO CS9和CHO GSKO宿主細胞系背景下過表現IGFR突變體的細胞系續使用保持受體處於組成型活性狀態的IGR1R突變體構建的，消除了為細胞培養基補充IGF-1配位基的需要。將該等突變體中命名為delL1和H905C的兩種（參見Kavran等人, 2014，eLife [生命科學線上] 3: e03772）選殖到載體中並使其在CHO宿主細胞系中過表現。 IGF1R突變體H905C（H906C）和delL1質體構建
兩個IGF1R突變體序列基於從NCBI登錄號NM_010513獲得的野生型（wt）鼠類IGR1R核苷酸序列。從起始到終止的完整序列作為2個片段合成，即由核苷酸1-2028組成的IGF1R-1和由核苷酸2008-4110組成的IGF1R-2，片段之間具有20個重疊鹼基以利於不依賴於連接的選殖。delL1核苷酸序列以90個鹼基的IGF1R天然訊息肽開始，並跳至wt序列的鹼基691。這對應於成熟IGF1R蛋白的前200個胺基酸（鑒定為L1區）的缺失。鑒定的人IGF1R的H905C突變對應於小鼠序列中的H906C。H906C核苷酸序列將wt IGF1R中位置2806-2807的核苷酸C和A分別變為T和G，對應於成熟蛋白中的H906C胺基酸變化。對於所有實驗將它稱為H905C。從合成的片段擴增PCR片段，然後選殖到整合載體pPT1.34.7GG（參見例如美國專利案號10,202,616）的SalI與NotI位點之間。參見圖1A-B。 將IGF1R突變體轉染到CHO CS9和GSKO平臺宿主和細胞培養物中
使用電穿孔將delL1和H905C的線性化質體轉染到CHO CS9 dhfr-宿主（參見Fomina-Yadlin等人, 2014, Biotechnol Bioeng [生物技術與生物工程] 111:965-979）和CHO GSKO（麩醯胺酸合成酶敲除）宿主中。對於轉染，使用伯樂實驗室（Bio-Rad Laboratories）裝置（加利福尼亞州赫拉克勒斯（Hercules, CA））在3175 uF（電容）、200伏和700歐姆（電阻）下對電穿孔杯中混合的約2×10 7個細胞和約25 μg的DNA進行電穿孔。然後立即將細胞轉移到T型燒瓶中預熱的培養基中。使細胞在補充有9.5 mM甘胺酸、0.2 mM胸苷和2 mM次黃嘌呤（CHO dhfr-）或5 mM麩醯胺酸（CHO GSKO）和IGF-1的非選擇性生長培養基中在36°C和5% CO 2下恢復三天。使用ViCELL™ XR細胞活力分析儀（印弟安納波里斯的貝克曼庫爾特公司（Beckman Coulter, Indianapolis, IN））根據製造商的說明測量細胞活力。
對於常規培養，細胞在選擇性培養基中懸浮培育。將培養物維持在通氣的125 mL或250 mL錐型搖瓶（麻塞諸塞州洛厄爾的康寧生命科學公司（Corning Life Sciences, Lowell, MA））或50 mL通氣旋轉管（瑞士特拉薩丁根的TPP（TPP, Trasadingen, Switzerland））中在36˚C、5% CO 2和85%相對濕度下。在大容量自動CO 2培養箱（麻塞諸塞州沃爾瑟姆的賽默飛世爾科技公司（Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA）中以25 mm軌道直徑以120 rpm振盪錐型燒瓶，並在大容量ISF4-X培養箱（瑞士巴塞爾的科耐（Kuhner AG, Basel, Switzerland））中以225 rpm、50 mm軌道直徑振盪旋轉管。
對於選擇策略採用三種不同的方法：從培養基中單獨去除IGF-1，在培養基中添加10 μg/ml嘌呤黴素和0.1 mg/mL IGF-1，或去除IGF-1並添加10 μg/ml嘌呤黴素。使轉染的宿主細胞在非選擇性生長培養基中以三種選擇策略之一在36°C和5% CO 2下每3至4天傳代一次，直至它們恢復至＞ 90%活力。在包含嘌呤黴素的選擇組中，一旦細胞系恢復，就去除嘌呤黴素並且使細胞在不含IGF-1的培養基中生長，直到活力＞90%並且使細胞堆積。
對於CHO dhfr-背景下過表現IGF1R突變體的細胞系，所有三種選擇策略產生用於進一步表徵的庫。對於兩種突變體而言，細胞系在沒有IGF-1或嘌呤黴素和IGF-1的情況下恢復得比在添加嘌呤黴素而沒有IGF-1的最嚴格的條件下的細胞系更快。H905突變體比delL1突變體恢復得更快。參見圖2。
恢復的在CHO CS9背景下過表現IGF1R突變體的細胞系的倍增時間與CHO CS9平臺宿主相似，通常低於30小時。參見圖3。
對於在CHO GSKO背景下過表現IGF1R突變體的細胞系，僅進行IGF-1去除的選擇策略並進一步測試。所有宿主中的H905突變體比所有宿主中的delL1突變體恢復得更快。參見圖4。
恢復的在CHO GSKO背景下過表現IGF1R突變體的細胞系的倍增時間與CHO GSKO平臺宿主相似，並且對於H905C突變體而言通常低於30小時，而對於delL1突變體而言與對照相似或略高。參見圖5。 CHO CS9背景下IGF1R突變體過表現細胞系的靶向基因座擴增（TLA）
對於CHO CS9背景下IGF1R過表現的突變體細胞庫，使用靶向基因座擴增（TLA）來確認IGF1R突變體基因的整合並鑒定CHO宿主細胞中IGF1R突變體表現載體的整合位點。簡言之，用1%甲醛固定1×10 7個細胞，並裂解。溶解染色質並用NlaIII消化，接著進行DNA的鄰位連接和反向交聯。隨後使用針對質體骨架的不同區域設計的兩組引物藉由反向PCR富集目的區域。將PCR產物在MiSeq™定序平臺（加利福利亞州聖地牙哥的依諾米那公司（Illumina, Inc., San Diego, CA））上定序。使用BWA比對軟體（加利福利亞州聖地牙哥的依諾米那公司）、igvtools（麻塞諸塞州劍橋的博多研究所（Broad Institute, Cambridge, MA））和自訂腳本（以perl和R書寫）進行分析以確定整合位點。對於被稱為整合位點的區域，它必須藉由兩組富集引物獨立地檢測。在所有庫中都確認了IGF1R突變體構建體的整合。 實例2：抗體構建體在IGF1R突變體細胞系中的表現
在轉染和10D FB（10天分批補料）生產實驗中測試了該等IGF1R突變體在沒有補充IGF-1的情況下從不同模式生長和表現治療劑的能力。使用Berkeley Lights平臺（加利福利亞州埃默里維爾的伯克利之光生命科技公司（Berkeley Lights, Inc., Emeryville, CA））或c.sight™（生德奈（Cytena），麻塞諸塞州波士頓的塞林克公司（Cellink Company, Boston, MA））對來自CHO CS9和CHO GSKO宿主的IGF1R突變體過表現細胞庫進行單細胞選殖。 將試驗分子轉染到CHO CS9和CHO GSKO背景和細胞培養物中的IGF1R突變體細胞系中
對於CHO CS9背景下的IGF1R突變體細胞系，使用長持續時間電穿孔方案轉染代表性mAb和代表性BiTE分子的線性化分裂DHFR質體。對於轉染，使用伯樂實驗室裝置（加利福尼亞州赫拉克勒斯（Hercules, CA））在3175 uF（電容）、200伏和700歐姆（電阻）下對電穿孔杯中混合的約2×10 7個細胞和約25 μg的DNA進行電穿孔。然後立即將細胞轉移到T型燒瓶中預熱的培養基中。使經過轉染的細胞系在無IGF-1的非選擇性培養基中在36°C和5% CO 2下恢復3天。使經過轉染的宿主細胞在無IGF-1的選擇性生長培養基（-GHT）中在36°C和5% CO 2下每3至4天傳代一次，直至它們恢復到＞90%。恢復後，使細胞系在10D補料分批生產中運行以評估表現。使用專有化學限定培養基在24深孔板（加利福利亞州聯合市的愛思進（Axygen, Union City, CA））中培養細胞。對於所有條件，每孔使用3.5 mL工作容積，並在具有5% CO 2的加濕培養箱（瑞士巴塞爾的科耐（Kuhner AG, Basel, Switzerland））中培育培養物。將細胞以8×10 5個細胞/ml接種並在第3、6和8天補料。使用Vi-Cell™（加利福利亞州富勒頓的貝克曼庫爾特公司）測量細胞密度、活力和細胞直徑。分析用過的培養基樣本的滴度。使用Waters UPLC（麻塞諸塞州米爾福德（Milford, MA））藉由親和蛋白A POROS PA ID感測器盒測量滴度。細胞系不進行MTX擴增。
對於GSKO背景下的IGF1R突變體細胞系，除了含有專有ILT轉位酶的質體外，代表性mAb和代表性BiTE分子的環狀pGS1.1PB質體使用長持續時間電穿孔方案轉染。使經過轉染的細胞系在無IGF-1的非選擇性培養基中在36°C和5% CO 2下恢復3天。使經過轉染的宿主細胞在無IGF-1的選擇性生長培養基（-麩醯胺酸）中在36°C和5% CO 2下每3至4天傳代一次，直至它們恢復到＞90%。恢復後，使細胞系在10D補料分批生產中運行以評估表現。
圖6A-B中示出了恢復圖表。在CHO CS9背景下，對照通常在4-5週內恢復（未示出），突變體在相似的時間範圍內恢復，其中H905C突變體比delL1突變體恢復得更快。在CHO GSKO背景下，用BiTE、mAb和IgGscFv的試驗分子轉染的IGF1R突變體細胞的恢復曲線顯示IGF1R突變體細胞系通常恢復得比對照慢，H905C恢復得比delL1突變體更快。 補料分批生產細胞培養
進行10天的補料分批生產以評估在CHO CS9或CHO GSKO背景下過表現IGF1R突變體的細胞系中試驗分子的生長和單位生產率（Qp）。將培養物以8×10 5（基於CS9）或1×10 6（基於GSKO）個細胞/mL接種在不含IGF-1的基礎生產培養基中，並在第3、6和8天用另外的營養物補料。在第10天收穫培養物。在補料分批的第十天測定抗體滴度。如上所述，使用Waters UPLC藉由親和蛋白A POROS PA ID感測器盒測量滴度。
在補料分批生產研究中，將細胞以上述滴度接種到生產培養基中。在24深孔板（加利福利亞州聯合市的愛思進科學公司（Axygen Scientific, Union City, CA））中使用3 mL工作容積，或在125 mL通氣搖瓶中使用25 mL工作容積。在第3、6和8天，以初始培養物體積的7%的單次團注對培養物補料。在第3、6和8天將葡萄糖補料至10 g/L的目標。在生產運行的第10天收穫離心的條件培養基。還在第3、6、8天取樣。
在CHO CS9背景下，H905C突變體具有與對照細胞系相比相似的生長、相似或更高的滴度和更高的Qp。參見圖7A-C。在CHO GSKO背景下，H905C突變體具有與對照細胞系相似的生長。delL1和H905C突變體具有與對照細胞系相比相似或更高的滴度和Qp。參見圖8A-B。
無
[圖1A-B]係 (A) delL1和 (B) H905C的pPT1.34.7GG IGF1R構建體圖譜之示意圖。
[圖2]說明含有IGF1R突變體delL1（上圖）或H905C（下圖）的CS9 CHO細胞的恢復。無IGF-1（黑色）；含有IGF-1的嘌呤黴素（深灰色）；無IGF-1（淺灰色）。
[圖3]說明含有IGF1R突變體delL1（深灰色）或H905C（淺灰色）的CS9 CHO細胞與CS9平臺宿主（黑色）相比的倍增時間。倍增時間基於細胞系恢復後三次傳代的平均值。
[圖4]說明僅在IGF-1中含有IGF1R突變體delL1（上圖）或H905C（下圖）的CHO GSKO宿主的恢復。CHO GSKO宿主EG9、EG10和SR3-E1顏色較深，CHO GSKO宿主11S和15-3E宿主顏色較淺。
[圖5]說明含有IGF1R突變體delL1（深灰色）或H905C（淺灰色）的CHO GSKO細胞與CHO GSKO平臺宿主（黑色）相比的倍增時間。倍增時間基於細胞系恢復後兩次至三次傳代的平均值。
[圖6A-B]說明對於A) CS9背景下的BiTE和mAb以及B) GSKO背景下的BiTE和IgGscFv，用試驗分子轉染的含有IGF1R突變體的細胞的恢復曲線。對照（黑線）、H905C突變體（淺灰色）、delL1突變體（深灰色）。
[圖7A-C]：A) 在CS9背景下IGF1R突變體試驗分子轉染的細胞系的平均10D補料分批VCD和活力。B) IGF1R突變體試驗分子轉染的細胞系的滴度。C) IGF1R突變體試驗分子轉染的細胞系的qp。H905C突變體（淺灰色）；對照細胞系（黑色）。
[圖8A-B]：A) 在GSKO背景下IGF1R突變體試驗分子轉染的細胞系的平均10D補料分批VCD和活力。B) IGF1R突變體試驗分子轉染的細胞系的滴度和qp。H905C突變體（淺灰色）；delL1（深灰色）；對照細胞系（黑色）。
無
 

          <![CDATA[<110>  美商安進公司（AMGEN INC. ）]]>
          <![CDATA[<120>  過表現胰島素樣生長因子受體突變體以調節IGF補充]]>
          <![CDATA[<130>  A-2711-US-PSP]]>
          <![CDATA[<140> TW 110139979]]>
          <![CDATA[<141> 2021-10-28]]>
          <![CDATA[<150> US 63/108,084]]>
          <![CDATA[<151> 2020-10-30]]>
          <![CDATA[<160>  16    ]]>
          <![CDATA[<170>  PatentIn版本3.5]]>
          <![CDATA[<210>  1]]>
          <![CDATA[<211>  3510]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  小家鼠IGF1R Del1突變體]]>
          <![CDATA[<400>  1]]>
          atgaagtctg gctccggagg agggtccccg acctcgctgt gggggctcgt gtttctctcc       60
          gccgcgctct ctctctggcc gacgagtgga tgccacccgg agtgcctggg cagctgccac      120
          acaccggacg acaacacaac ctgcgtggcc tgcagacact actactacaa aggcgtgtgt      180
          gtgcctgcct gcccgcctgg cacctacagg ttcgagggct ggcgctgtgt ggatcgcgat      240
          ttctgcgcca acatccccaa cgctgagagc agtgactcgg atggcttcgt tatccacgac      300
          gatgagtgca tgcaggagtg tccctcaggc ttcatccgca acagcaccca gagcatgtac      360
          tgtatcccct gcgaaggccc ctgccccaaa gtctgcggcg atgaagagaa gaaaacgaaa      420
          accatcgatt cggtgacttc tgctcaaatg ctccaaggat gcaccatcct gaagggcaat      480
          ctgcttatta acatccggag aggcaataac attgcctcgg agttggagaa cttcatgggg      540
          ctcatcgagg tggtgaccgg ctacgtgaag atccgccatt ctcatgcctt ggtctccttg      600
          tccttcctga agaaccttcg tctcatctta ggagaggagc agctggaagg gaactactcc      660
          ttctatgtcc tagacaacca gaacttgcag cagctgtggg actggaacca ccggaacctg      720
          accgtcaggt ccggaaagat gtactttgct ttcaatccca agctgtgtgt ctccgaaatt      780
          taccgcatgg aggaagtgac cggaaccaag ggacgccaga gcaaagggga cataaacacc      840
          aggaacaacg gagagcgagc ttcctgtgaa agtgatgttc tccgtttcac ctccaccacg      900
          acctggaaga accgaatcat cataacgtgg caccggtacc ggccgccgga ctaccgggat      960
          ctcatcagct tcacagttta ctacaaggag gcaccattta aaaacgttac ggaatatgac     1020
          gggcaggatg cctgtggctc caacagctgg aacatggtgg atgtagacct gcctccgaac     1080
          aaggagggcg agcctggcat tttactgcat gggctgaagc cctggaccca gtatgctgtc     1140
          tatgtcaagg ctgtgaccct caccatggtg gaaaacgacc atatccgtgg ggccaaaagt     1200
          gaaatcttgt acattcgcac caatgcttca gtcccttcca ttcccctaga tgtcctctca     1260
          gcatcaaact cttcctctca gctgattgtg aagtggaatc ctccaactct gcccaatggt     1320
          aacttgagtt actacattgt gaggtggcag cggcagcccc aggatggtta cctgtaccgg     1380
          cacaactact gctccaaaga caaaataccc atcagaaagt acgccgatgg taccatcgac     1440
          gtggaggagg tgacggaaaa tcccaagaca gaagtgtgtg gtggtgataa agggccatgc     1500
          tgcgcttgcc ctaaaactga agctgagaag caggctgaga aagaggaggc tgagtaccgt     1560
          aaagtctttg agaatttcct tcacaattcc atctttgtgc ccaggcccga aaggaggcgg     1620
          agagacgtca tgcaagtggc caacacgacc atgtccagcc gaagcaggaa caccacggta     1680
          gctgacacct acaatatcac agacccggag gagttcgaga cagagtaccc tttctttgag     1740
          agcagagtgg ataacaagga gaggactgtc atctccaacc tccggccttt cactctgtac     1800
          cgcatcgata tccacagctg caaccacgag gctgagaagc tgggctgcag cgcctccaac     1860
          ttcgtctttg cgagaaccat gccagcagaa ggagcagatg atatccctgg tccggtgacc     1920
          tgggagccaa gacccgaaaa ctccatcttt ttaaagtggc cagaacccga gaaccccaac     1980
          ggattgatcc taatgtatga aattaaatac gggtcgcaag tcgaggatca gcgggaatgt     2040
          gtgtccagac aggagtacag gaagtacgga ggggccaaac tcaaccgtct aaacccaggg     2100
          aactatacag cccggattca ggctacctcc ctctctggga atgggtcatg gacagatcct     2160
          gtgttcttct atgtccccgc caaaacgacg tatgagaact tcatgcatct gatcattgct     2220
          ctgccggttg ccatcctgct gatcgttggg gggctggtta tcatgctgta tgtcttccat     2280
          agaaagagaa ataacagcag gttgggcaat ggagtgctgt atgcttctgt gaaccccgag     2340
          tatttcagcg cagctgatgt gtacgtgcct gatgaatggg aggtagctcg agagaagatc     2400
          accatgaacc gggagctcgg acaagggtcc tttgggatgg tctatgaagg agtggccaag     2460
          ggtgtggtca aggatgaacc cgaaaccaga gtggccatca agacggtaaa cgaggctgca     2520
          agtatgcgtg aaagaatcga gtttctcaac gaggcctcgg tgatgaagga gttcaattgt     2580
          caccatgtgg tccggttgct gggtgtggta tcccaaggcc agcccaccct ggtcatcatg     2640
          gaactaatga cacgcggtga tctcaaaagt tatctccggt ctctgaggcc agaagtggag     2700
          cagaataatc tagtcctcat tcctccgagc ttaagcaaga tgatccagat ggctggagag     2760
          attgcagatg gcatggccta cctcaatgcc aacaagttcg tccacagaga ccttgctgct     2820
          aggaactgca tggtagccga agatttcaca gtcaaaattg gagatttcgg tatgacacga     2880
          gacatctacg agacggacta ctaccggaaa ggcgggaagg ggttgctgcc tgtgcgctgg     2940
          atgtctcccg agtccctcaa ggatggtgtc ttcactactc attctgatgt ctggtccttc     3000
          ggggtcgtcc tctgggagat cgccacgctg gctgagcagc cctaccaggg cttgtccaac     3060
          gagcaagttc ttcgtttcgt catggagggt ggccttctgg acaagccgga caactgccct     3120
          gatatgctgt ttgaacttat gcgcatgtgc tggcagtata accccaagat gcggccctcc     3180
          ttcctggaga tcatcggcag catcaaggat gagatggagc ccagcttcca ggaggtctcc     3240
          ttctactaca gcgaggagaa caagcctccc gagccagagg agctggagat ggagcctgag     3300
          aacatggaga gcgtcccact ggacccttcg gcctcctcag cctccctgcc tctgcctgaa     3360
          agacactcag gacacaaggc tgagaatggc ccgggccctg gcgtgctcgt tctccgcgcc     3420
          agttttgatg agagacagcc ttacgctcac atgaacgggg gacgcgccaa cgagagggcc     3480
          ttgcctctgc cccagtcctc gacctgctga                                      3510
          <![CDATA[<210>  2]]>
          <![CDATA[<211>  1169]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  小家鼠IGF1R Del1突變體]]>
          <![CDATA[<400>  2]]>
          Met Lys Ser Gly Ser Gly Gly Gly Ser Pro Thr Ser Leu Trp Gly Leu 
          1               5                   10                  15      
          Val Phe Leu Ser Ala Ala Leu Ser Leu Trp Pro Thr Ser Gly Cys His 
                      20                  25                  30          
          Pro Glu Cys Leu Gly Ser Cys His Thr Pro Asp Asp Asn Thr Thr Cys 
                  35                  40                  45              
          Val Ala Cys Arg His Tyr Tyr Tyr Lys Gly Val Cys Val Pro Ala Cys 
              50                  55                  60                  
          Pro Pro Gly Thr Tyr Arg Phe Glu Gly Trp Arg Cys Val Asp Arg Asp 
          65                  70                  75                  80  
          Phe Cys Ala Asn Ile Pro Asn Ala Glu Ser Ser Asp Ser Asp Gly Phe 
                          85                  90                  95      
          Val Ile His Asp Asp Glu Cys Met Gln Glu Cys Pro Ser Gly Phe Ile 
                      100                 105                 110         
          Arg Asn Ser Thr Gln Ser Met Tyr Cys Ile Pro Cys Glu Gly Pro Cys 
                  115                 120                 125             
          Pro Lys Val Cys Gly Asp Glu Glu Lys Lys Thr Lys Thr Ile Asp Ser 
              130                 135                 140                 
          Val Thr Ser Ala Gln Met Leu Gln Gly Cys Thr Ile Leu Lys Gly Asn 
          145                 150                 155                 160 
          Leu Leu Ile Asn Ile Arg Arg Gly Asn Asn Ile Ala Ser Glu Leu Glu 
                          165                 170                 175     
          Asn Phe Met Gly Leu Ile Glu Val Val Thr Gly Tyr Val Lys Ile Arg 
                      180                 185                 190         
          His Ser His Ala Leu Val Ser Leu Ser Phe Leu Lys Asn Leu Arg Leu 
                  195                 200                 205             
          Ile Leu Gly Glu Glu Gln Leu Glu Gly Asn Tyr Ser Phe Tyr Val Leu 
              210                 215                 220                 
          Asp Asn Gln Asn Leu Gln Gln Leu Trp Asp Trp Asn His Arg Asn Leu 
          225                 230                 235                 240 
          Thr Val Arg Ser Gly Lys Met Tyr Phe Ala Phe Asn Pro Lys Leu Cys 
                          245                 250                 255     
          Val Ser Glu Ile Tyr Arg Met Glu Glu Val Thr Gly Thr Lys Gly Arg 
                      260                 265                 270         
          Gln Ser Lys Gly Asp Ile Asn Thr Arg Asn Asn Gly Glu Arg Ala Ser 
                  275                 280                 285             
          Cys Glu Ser Asp Val Leu Arg Phe Thr Ser Thr Thr Thr Trp Lys Asn 
              290                 295                 300                 
          Arg Ile Ile Ile Thr Trp His Arg Tyr Arg Pro Pro Asp Tyr Arg Asp 
          305                 310                 315                 320 
          Leu Ile Ser Phe Thr Val Tyr Tyr Lys Glu Ala Pro Phe Lys Asn Val 
                          325                 330                 335     
          Thr Glu Tyr Asp Gly Gln Asp Ala Cys Gly Ser Asn Ser Trp Asn Met 
                      340                 345                 350         
          Val Asp Val Asp Leu Pro Pro Asn Lys Glu Gly Glu Pro Gly Ile Leu 
                  355                 360                 365             
          Leu His Gly Leu Lys Pro Trp Thr Gln Tyr Ala Val Tyr Val Lys Ala 
              370                 375                 380                 
          Val Thr Leu Thr Met Val Glu Asn Asp His Ile Arg Gly Ala Lys Ser 
          385                 390                 395                 400 
          Glu Ile Leu Tyr Ile Arg Thr Asn Ala Ser Val Pro Ser Ile Pro Leu 
                          405                 410                 415     
          Asp Val Leu Ser Ala Ser Asn Ser Ser Ser Gln Leu Ile Val Lys Trp 
                      420                 425                 430         
          Asn Pro Pro Thr Leu Pro Asn Gly Asn Leu Ser Tyr Tyr Ile Val Arg 
                  435                 440                 445             
          Trp Gln Arg Gln Pro Gln Asp Gly Tyr Leu Tyr Arg His Asn Tyr Cys 
              450                 455                 460                 
          Ser Lys Asp Lys Ile Pro Ile Arg Lys Tyr Ala Asp Gly Thr Ile Asp 
          465                 470                 475                 480 
          Val Glu Glu Val Thr Glu Asn Pro Lys Thr Glu Val Cys Gly Gly Asp 
                          485                 490                 495     
          Lys Gly Pro Cys Cys Ala Cys Pro Lys Thr Glu Ala Glu Lys Gln Ala 
                      500                 505                 510         
          Glu Lys Glu Glu Ala Glu Tyr Arg Lys Val Phe Glu Asn Phe Leu His 
                  515                 520                 525             
          Asn Ser Ile Phe Val Pro Arg Pro Glu Arg Arg Arg Arg Asp Val Met 
              530                 535                 540                 
          Gln Val Ala Asn Thr Thr Met Ser Ser Arg Ser Arg Asn Thr Thr Val 
          545                 550                 555                 560 
          Ala Asp Thr Tyr Asn Ile Thr Asp Pro Glu Glu Phe Glu Thr Glu Tyr 
                          565                 570                 575     
          Pro Phe Phe Glu Ser Arg Val Asp Asn Lys Glu Arg Thr Val Ile Ser 
                      580                 585                 590         
          Asn Leu Arg Pro Phe Thr Leu Tyr Arg Ile Asp Ile His Ser Cys Asn 
                  595                 600                 605             
          His Glu Ala Glu Lys Leu Gly Cys Ser Ala Ser Asn Phe Val Phe Ala 
              610                 615                 620                 
          Arg Thr Met Pro Ala Glu Gly Ala Asp Asp Ile Pro Gly Pro Val Thr 
          625                 630                 635                 640 
          Trp Glu Pro Arg Pro Glu Asn Ser Ile Phe Leu Lys Trp Pro Glu Pro 
                          645                 650                 655     
          Glu Asn Pro Asn Gly Leu Ile Leu Met Tyr Glu Ile Lys Tyr Gly Ser 
                      660                 665                 670         
          Gln Val Glu Asp Gln Arg Glu Cys Val Ser Arg Gln Glu Tyr Arg Lys 
                  675                 680                 685             
          Tyr Gly Gly Ala Lys Leu Asn Arg Leu Asn Pro Gly Asn Tyr Thr Ala 
              690                 695                 700                 
          Arg Ile Gln Ala Thr Ser Leu Ser Gly Asn Gly Ser Trp Thr Asp Pro 
          705                 710                 715                 720 
          Val Phe Phe Tyr Val Pro Ala Lys Thr Thr Tyr Glu Asn Phe Met His 
                          725                 730                 735     
          Leu Ile Ile Ala Leu Pro Val Ala Ile Leu Leu Ile Val Gly Gly Leu 
                      740                 745                 750         
          Val Ile Met Leu Tyr Val Phe His Arg Lys Arg Asn Asn Ser Arg Leu 
                  755                 760                 765             
          Gly Asn Gly Val Leu Tyr Ala Ser Val Asn Pro Glu Tyr Phe Ser Ala 
              770                 775                 780                 
          Ala Asp Val Tyr Val Pro Asp Glu Trp Glu Val Ala Arg Glu Lys Ile 
          785                 790                 795                 800 
          Thr Met Asn Arg Glu Leu Gly Gln Gly Ser Phe Gly Met Val Tyr Glu 
                          805                 810                 815     
          Gly Val Ala Lys Gly Val Val Lys Asp Glu Pro Glu Thr Arg Val Ala 
                      820                 825                 830         
          Ile Lys Thr Val Asn Glu Ala Ala Ser Met Arg Glu Arg Ile Glu Phe 
                  835                 840                 845             
          Leu Asn Glu Ala Ser Val Met Lys Glu Phe Asn Cys His His Val Val 
              850                 855                 860                 
          Arg Leu Leu Gly Val Val Ser Gln Gly Gln Pro Thr Leu Val Ile Met 
          865                 870                 875                 880 
          Glu Leu Met Thr Arg Gly Asp Leu Lys Ser Tyr Leu Arg Ser Leu Arg 
                          885                 890                 895     
          Pro Glu Val Glu Gln Asn Asn Leu Val Leu Ile Pro Pro Ser Leu Ser 
                      900                 905                 910         
          Lys Met Ile Gln Met Ala Gly Glu Ile Ala Asp Gly Met Ala Tyr Leu 
                  915                 920                 925             
          Asn Ala Asn Lys Phe Val His Arg Asp Leu Ala Ala Arg Asn Cys Met 
              930                 935                 940                 
          Val Ala Glu Asp Phe Thr Val Lys Ile Gly Asp Phe Gly Met Thr Arg 
          945                 950                 955                 960 
          Asp Ile Tyr Glu Thr Asp Tyr Tyr Arg Lys Gly Gly Lys Gly Leu Leu 
                          965                 970                 975     
          Pro Val Arg Trp Met Ser Pro Glu Ser Leu Lys Asp Gly Val Phe Thr 
                      980                 985                 990         
          Thr His Ser Asp Val Trp Ser Phe  Gly Val Val Leu Trp  Glu Ile Ala 
                  995                 1000                 1005             
          Thr Leu  Ala Glu Gln Pro Tyr  Gln Gly Leu Ser Asn  Glu Gln Val 
              1010                 1015                 1020             
          Leu Arg  Phe Val Met Glu Gly  Gly Leu Leu Asp Lys  Pro Asp Asn 
              1025                 1030                 1035             
          Cys Pro  Asp Met Leu Phe Glu  Leu Met Arg Met Cys  Trp Gln Tyr 
              1040                 1045                 1050             
          Asn Pro  Lys Met Arg Pro Ser  Phe Leu Glu Ile Ile  Gly Ser Ile 
              1055                 1060                 1065             
          Lys Asp  Glu Met Glu Pro Ser  Phe Gln Glu Val Ser  Phe Tyr Tyr 
              1070                 1075                 1080             
          Ser Glu  Glu Asn Lys Pro Pro  Glu Pro Glu Glu Leu  Glu Met Glu 
              1085                 1090                 1095             
          Pro Glu  Asn Met Glu Ser Val  Pro Leu Asp Pro Ser  Ala Ser Ser 
              1100                 1105                 1110             
          Ala Ser  Leu Pro Leu Pro Glu  Arg His Ser Gly His  Lys Ala Glu 
              1115                 1120                 1125             
          Asn Gly  Pro Gly Pro Gly Val  Leu Val Leu Arg Ala  Ser Phe Asp 
              1130                 1135                 1140             
          Glu Arg  Gln Pro Tyr Ala His  Met Asn Gly Gly Arg  Ala Asn Glu 
              1145                 1150                 1155             
          Arg Ala  Leu Pro Leu Pro Gln  Ser Ser Thr Cys 
              1160                 1165                 
          <![CDATA[<210>  3]]>
          <![CDATA[<211>  4110]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  小家鼠IGF1R H906C突變體]]>
          <![CDATA[<400>  3]]>
          atgaagtctg gctccggagg agggtccccg acctcgctgt gggggctcgt gtttctctcc       60
          gccgcgctct ctctctggcc gacgagtgga gaaatctgtg ggcccggcat tgacatccgc      120
          aacgactatc agcagctgaa gcgcctggaa aactgcacgg tgatcgaggg cttcctccac      180
          atcctgctca tctccaaggc cgaggactac cgaagctacc gcttccccaa gctcaccgtc      240
          atcactgagt acttgctgct cttccgagtc gctggcctcg agagcctggg agacctcttc      300
          cccaacctca cagtcatccg tggctggaaa ctcttctaca actacgcact ggtcatcttc      360
          gagatgacca atctcaagga tattgggctt tataatctga ggaacattac tcggggggcc      420
          atcaggattg agaagaacgc cgacctctgt tacctctcca ccatagactg gtctctcatc      480
          ttggatgcgg tgtccaataa ctacattgtg gggaacaagc ccccgaagga atgtggggac      540
          ctgtgtccag ggacattgga ggagaagccc atgtgtgaga agaccaccat caacaatgag      600
          tacaactacc gctgctggac cacaaatcgc tgccagaaaa tgtgcccaag tgtgtgcggg      660
          aagcgagcct gcaccgagaa caacgagtgc tgccacccgg agtgcctggg cagctgccac      720
          acaccggacg acaacacaac ctgcgtggcc tgcagacact actactacaa aggcgtgtgt      780
          gtgcctgcct gcccgcctgg cacctacagg ttcgagggct ggcgctgtgt ggatcgcgat      840
          ttctgcgcca acatccccaa cgctgagagc agtgactcgg atggcttcgt tatccacgac      900
          gatgagtgca tgcaggagtg tccctcaggc ttcatccgca acagcaccca gagcatgtac      960
          tgtatcccct gcgaaggccc ctgccccaaa gtctgcggcg atgaagagaa gaaaacgaaa     1020
          accatcgatt cggtgacttc tgctcaaatg ctccaaggat gcaccatcct gaagggcaat     1080
          ctgcttatta acatccggag aggcaataac attgcctcgg agttggagaa cttcatgggg     1140
          ctcatcgagg tggtgaccgg ctacgtgaag atccgccatt ctcatgcctt ggtctccttg     1200
          tccttcctga agaaccttcg tctcatctta ggagaggagc agctggaagg gaactactcc     1260
          ttctatgtcc tagacaacca gaacttgcag cagctgtggg actggaacca ccggaacctg     1320
          accgtcaggt ccggaaagat gtactttgct ttcaatccca agctgtgtgt ctccgaaatt     1380
          taccgcatgg aggaagtgac cggaaccaag ggacgccaga gcaaagggga cataaacacc     1440
          aggaacaacg gagagcgagc ttcctgtgaa agtgatgttc tccgtttcac ctccaccacg     1500
          acctggaaga accgaatcat cataacgtgg caccggtacc ggccgccgga ctaccgggat     1560
          ctcatcagct tcacagttta ctacaaggag gcaccattta aaaacgttac ggaatatgac     1620
          gggcaggatg cctgtggctc caacagctgg aacatggtgg atgtagacct gcctccgaac     1680
          aaggagggcg agcctggcat tttactgcat gggctgaagc cctggaccca gtatgctgtc     1740
          tatgtcaagg ctgtgaccct caccatggtg gaaaacgacc atatccgtgg ggccaaaagt     1800
          gaaatcttgt acattcgcac caatgcttca gtcccttcca ttcccctaga tgtcctctca     1860
          gcatcaaact cttcctctca gctgattgtg aagtggaatc ctccaactct gcccaatggt     1920
          aacttgagtt actacattgt gaggtggcag cggcagcccc aggatggtta cctgtaccgg     1980
          cacaactact gctccaaaga caaaataccc atcagaaagt acgccgatgg taccatcgac     2040
          gtggaggagg tgacggaaaa tcccaagaca gaagtgtgtg gtggtgataa agggccatgc     2100
          tgcgcttgcc ctaaaactga agctgagaag caggctgaga aggaggaggc tgagtaccgt     2160
          aaagtctttg agaatttcct tcacaattcc atctttgtgc ccaggcccga aaggaggcgg     2220
          agagacgtca tgcaagtggc caacacgacc atgtccagcc gaagcaggaa caccacggta     2280
          gctgacacct acaatatcac agacccggag gagttcgaga cagagtaccc tttctttgag     2340
          agcagagtgg ataacaagga gaggactgtc atctccaacc tccggccttt cactctgtac     2400
          cgcatcgata tccacagctg caaccacgag gctgagaagc tgggctgcag cgcctccaac     2460
          ttcgtctttg cgagaaccat gccagcagaa ggagcagatg atatccctgg tccggtgacc     2520
          tgggagccaa gacccgaaaa ctccatcttt ttaaagtggc cagaacccga gaaccccaac     2580
          ggattgatcc taatgtatga aattaaatac gggtcgcaag tcgaggatca gcgggaatgt     2640
          gtgtccagac aggagtacag gaagtacgga ggggccaaac tcaaccgtct aaacccaggg     2700
          aactatacag cccggattca ggctacctcc ctctctggga atgggtcatg gacagatcct     2760
          gtgttcttct atgtccccgc caaaacgacg tatgagaact tcatgtgtct gatcattgct     2820
          ctgccggttg ccatcctgct gatcgttggg gggctggtta tcatgctgta tgtcttccat     2880
          agaaagagaa ataacagcag gttgggcaat ggagtgctgt atgcttctgt gaaccccgag     2940
          tatttcagcg cagctgatgt gtacgtgcct gatgaatggg aggtagctcg agagaagatc     3000
          accatgaacc gggagctcgg acaagggtcc tttgggatgg tctatgaagg agtggccaag     3060
          ggtgtggtca aggatgaacc cgaaaccaga gtggccatca agacggtaaa cgaggctgca     3120
          agtatgcgtg aaagaatcga gtttctcaac gaggcctcgg tgatgaagga gttcaattgt     3180
          caccatgtgg tccggttgct gggtgtggta tcccaaggcc agcccaccct ggtcatcatg     3240
          gaactaatga cacgcggtga tctcaaaagt tatctccggt ctctgaggcc agaagtggag     3300
          cagaataatc tagtcctcat tcctccgagc ttaagcaaga tgatccagat ggctggagag     3360
          attgcagatg gcatggccta cctcaatgcc aacaagttcg tccacagaga ccttgctgct     3420
          aggaactgca tggtagccga agatttcaca gtcaaaattg gagatttcgg tatgacacga     3480
          gacatctacg agacggacta ctaccggaaa ggcgggaagg ggttgctgcc tgtgcgctgg     3540
          atgtctcccg agtccctcaa ggatggtgtc ttcactactc attctgatgt ctggtccttc     3600
          ggggtcgtcc tctgggagat cgccacgctg gctgagcagc cctaccaggg cttgtccaac     3660
          gagcaagttc ttcgtttcgt catggagggt ggccttctgg acaagccgga caactgccct     3720
          gatatgctgt ttgaacttat gcgcatgtgc tggcagtata accccaagat gcggccctcc     3780
          ttcctggaga tcatcggcag catcaaggat gagatggagc ccagcttcca ggaggtctcc     3840
          ttctactaca gcgaggagaa caagcctccc gagccagagg agctggagat ggagcctgag     3900
          aacatggaga gcgtcccact ggacccttcg gcctcctcag cctccctgcc tctgcctgaa     3960
          agacactcag gacacaaggc tgagaatggc ccgggccctg gcgtgctcgt tctccgcgcc     4020
          agttttgatg agagacagcc ttacgctcac atgaacgggg gacgcgccaa cgagagggcc     4080
          ttgcctctgc cccagtcctc gacctgctga                                      4110
          <![CDATA[<210>  4]]>
          <![CDATA[<211>  1369]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  小家鼠IGF1R H906C突變體]]>
          <![CDATA[<400>  4]]>
          Met Lys Ser Gly Ser Gly Gly Gly Ser Pro Thr Ser Leu Trp Gly Leu 
          1               5                   10                  15      
          Val Phe Leu Ser Ala Ala Leu Ser Leu Trp Pro Thr Ser Gly Glu Ile 
                      20                  25                  30          
          Cys Gly Pro Gly Ile Asp Ile Arg Asn Asp Tyr Gln Gln Leu Lys Arg 
                  35                  40                  45              
          Leu Glu Asn Cys Thr Val Ile Glu Gly Phe Leu His Ile Leu Leu Ile 
              50                  55                  60                  
          Ser Lys Ala Glu Asp Tyr Arg Ser Tyr Arg Phe Pro Lys Leu Thr Val 
          65                  70                  75                  80  
          Ile Thr Glu Tyr Leu Leu Leu Phe Arg Val Ala Gly Leu Glu Ser Leu 
                          85                  90                  95      
          Gly Asp Leu Phe Pro Asn Leu Thr Val Ile Arg Gly Trp Lys Leu Phe 
                      100                 105                 110         
          Tyr Asn Tyr Ala Leu Val Ile Phe Glu Met Thr Asn Leu Lys Asp Ile 
                  115                 120                 125             
          Gly Leu Tyr Asn Leu Arg Asn Ile Thr Arg Gly Ala Ile Arg Ile Glu 
              130                 135                 140                 
          Lys Asn Ala Asp Leu Cys Tyr Leu Ser Thr Ile Asp Trp Ser Leu Ile 
          145                 150                 155                 160 
          Leu Asp Ala Val Ser Asn Asn Tyr Ile Val Gly Asn Lys Pro Pro Lys 
                          165                 170                 175     
          Glu Cys Gly Asp Leu Cys Pro Gly Thr Leu Glu Glu Lys Pro Met Cys 
                      180                 185                 190         
          Glu Lys Thr Thr Ile Asn Asn Glu Tyr Asn Tyr Arg Cys Trp Thr Thr 
                  195                 200                 205             
          Asn Arg Cys Gln Lys Met Cys Pro Ser Val Cys Gly Lys Arg Ala Cys 
              210                 215                 220                 
          Thr Glu Asn Asn Glu Cys Cys His Pro Glu Cys Leu Gly Ser Cys His 
          225                 230                 235                 240 
          Thr Pro Asp Asp Asn Thr Thr Cys Val Ala Cys Arg His Tyr Tyr Tyr 
                          245                 250                 255     
          Lys Gly Val Cys Val Pro Ala Cys Pro Pro Gly Thr Tyr Arg Phe Glu 
                      260                 265                 270         
          Gly Trp Arg Cys Val Asp Arg Asp Phe Cys Ala Asn Ile Pro Asn Ala 
                  275                 280                 285             
          Glu Ser Ser Asp Ser Asp Gly Phe Val Ile His Asp Asp Glu Cys Met 
              290                 295                 300                 
          Gln Glu Cys Pro Ser Gly Phe Ile Arg Asn Ser Thr Gln Ser Met Tyr 
          305                 310                 315                 320 
          Cys Ile Pro Cys Glu Gly Pro Cys Pro Lys Val Cys Gly Asp Glu Glu 
                          325                 330                 335     
          Lys Lys Thr Lys Thr Ile Asp Ser Val Thr Ser Ala Gln Met Leu Gln 
                      340                 345                 350         
          Gly Cys Thr Ile Leu Lys Gly Asn Leu Leu Ile Asn Ile Arg Arg Gly 
                  355                 360                 365             
          Asn Asn Ile Ala Ser Glu Leu Glu Asn Phe Met Gly Leu Ile Glu Val 
              370                 375                 380                 
          Val Thr Gly Tyr Val Lys Ile Arg His Ser His Ala Leu Val Ser Leu 
          385                 390                 395                 400 
          Ser Phe Leu Lys Asn Leu Arg Leu Ile Leu Gly Glu Glu Gln Leu Glu 
                          405                 410                 415     
          Gly Asn Tyr Ser Phe Tyr Val Leu Asp Asn Gln Asn Leu Gln Gln Leu 
                      420                 425                 430         
          Trp Asp Trp Asn His Arg Asn Leu Thr Val Arg Ser Gly Lys Met Tyr 
                  435                 440                 445             
          Phe Ala Phe Asn Pro Lys Leu Cys Val Ser Glu Ile Tyr Arg Met Glu 
              450                 455                 460                 
          Glu Val Thr Gly Thr Lys Gly Arg Gln Ser Lys Gly Asp Ile Asn Thr 
          465                 470                 475                 480 
          Arg Asn Asn Gly Glu Arg Ala Ser Cys Glu Ser Asp Val Leu Arg Phe 
                          485                 490                 495     
          Thr Ser Thr Thr Thr Trp Lys Asn Arg Ile Ile Ile Thr Trp His Arg 
                      500                 505                 510         
          Tyr Arg Pro Pro Asp Tyr Arg Asp Leu Ile Ser Phe Thr Val Tyr Tyr 
                  515                 520                 525             
          Lys Glu Ala Pro Phe Lys Asn Val Thr Glu Tyr Asp Gly Gln Asp Ala 
              530                 535                 540                 
          Cys Gly Ser Asn Ser Trp Asn Met Val Asp Val Asp Leu Pro Pro Asn 
          545                 550                 555                 560 
          Lys Glu Gly Glu Pro Gly Ile Leu Leu His Gly Leu Lys Pro Trp Thr 
                          565                 570                 575     
          Gln Tyr Ala Val Tyr Val Lys Ala Val Thr Leu Thr Met Val Glu Asn 
                      580                 585                 590         
          Asp His Ile Arg Gly Ala Lys Ser Glu Ile Leu Tyr Ile Arg Thr Asn 
                  595                 600                 605             
          Ala Ser Val Pro Ser Ile Pro Leu Asp Val Leu Ser Ala Ser Asn Ser 
              610                 615                 620                 
          Ser Ser Gln Leu Ile Val Lys Trp Asn Pro Pro Thr Leu Pro Asn Gly 
          625                 630                 635                 640 
          Asn Leu Ser Tyr Tyr Ile Val Arg Trp Gln Arg Gln Pro Gln Asp Gly 
                          645                 650                 655     
          Tyr Leu Tyr Arg His Asn Tyr Cys Ser Lys Asp Lys Ile Pro Ile Arg 
                      660                 665                 670         
          Lys Tyr Ala Asp Gly Thr Ile Asp Val Glu Glu Val Thr Glu Asn Pro 
                  675                 680                 685             
          Lys Thr Glu Val Cys Gly Gly Asp Lys Gly Pro Cys Cys Ala Cys Pro 
              690                 695                 700                 
          Lys Thr Glu Ala Glu Lys Gln Ala Glu Lys Glu Glu Ala Glu Tyr Arg 
          705                 710                 715                 720 
          Lys Val Phe Glu Asn Phe Leu His Asn Ser Ile Phe Val Pro Arg Pro 
                          725                 730                 735     
          Glu Arg Arg Arg Arg Asp Val Met Gln Val Ala Asn Thr Thr Met Ser 
                      740                 745                 750         
          Ser Arg Ser Arg Asn Thr Thr Val Ala Asp Thr Tyr Asn Ile Thr Asp 
                  755                 760                 765             
          Pro Glu Glu Phe Glu Thr Glu Tyr Pro Phe Phe Glu Ser Arg Val Asp 
              770                 775                 780                 
          Asn Lys Glu Arg Thr Val Ile Ser Asn Leu Arg Pro Phe Thr Leu Tyr 
          785                 790                 795                 800 
          Arg Ile Asp Ile His Ser Cys Asn His Glu Ala Glu Lys Leu Gly Cys 
                          805                 810                 815     
          Ser Ala Ser Asn Phe Val Phe Ala Arg Thr Met Pro Ala Glu Gly Ala 
                      820                 825                 830         
          Asp Asp Ile Pro Gly Pro Val Thr Trp Glu Pro Arg Pro Glu Asn Ser 
                  835                 840                 845             
          Ile Phe Leu Lys Trp Pro Glu Pro Glu Asn Pro Asn Gly Leu Ile Leu 
              850                 855                 860                 
          Met Tyr Glu Ile Lys Tyr Gly Ser Gln Val Glu Asp Gln Arg Glu Cys 
          865                 870                 875                 880 
          Val Ser Arg Gln Glu Tyr Arg Lys Tyr Gly Gly Ala Lys Leu Asn Arg 
                          885                 890                 895     
          Leu Asn Pro Gly Asn Tyr Thr Ala Arg Ile Gln Ala Thr Ser Leu Ser 
                      900                 905                 910         
          Gly Asn Gly Ser Trp Thr Asp Pro Val Phe Phe Tyr Val Pro Ala Lys 
                  915                 920                 925             
          Thr Thr Tyr Glu Asn Phe Met His Leu Ile Ile Ala Leu Pro Val Ala 
              930                 935                 940                 
          Ile Leu Leu Ile Val Gly Gly Leu Val Ile Met Leu Tyr Val Phe His 
          945                 950                 955                 960 
          Arg Lys Arg Asn Asn Ser Arg Leu Gly Asn Gly Val Leu Tyr Ala Ser 
                          965                 970                 975     
          Val Asn Pro Glu Tyr Phe Ser Ala Ala Asp Val Tyr Val Pro Asp Glu 
                      980                 985                 990         
          Trp Glu Val Ala Arg Glu Lys Ile  Thr Met Asn Arg Glu  Leu Gly Gln 
                  995                 1000                 1005             
          Gly Ser  Phe Gly Met Val Tyr  Glu Gly Val Ala Lys  Gly Val Val 
              1010                 1015                 1020             
          Lys Asp  Glu Pro Glu Thr Arg  Val Ala Ile Lys Thr  Val Asn Glu 
              1025                 1030                 1035             
          Ala Ala  Ser Met Arg Glu Arg  Ile Glu Phe Leu Asn  Glu Ala Ser 
              1040                 1045                 1050             
          Val Met  Lys Glu Phe Asn Cys  His His Val Val Arg  Leu Leu Gly 
              1055                 1060                 1065             
          Val Val  Ser Gln Gly Gln Pro  Thr Leu Val Ile Met  Glu Leu Met 
              1070                 1075                 1080             
          Thr Arg  Gly Asp Leu Lys Ser  Tyr Leu Arg Ser Leu  Arg Pro Glu 
              1085                 1090                 1095             
          Val Glu  Gln Asn Asn Leu Val  Leu Ile Pro Pro Ser  Leu Ser Lys 
              1100                 1105                 1110             
          Met Ile  Gln Met Ala Gly Glu  Ile Ala Asp Gly Met  Ala Tyr Leu 
              1115                 1120                 1125             
          Asn Ala  Asn Lys Phe Val His  Arg Asp Leu Ala Ala  Arg Asn Cys 
              1130                 1135                 1140             
          Met Val  Ala Glu Asp Phe Thr  Val Lys Ile Gly Asp  Phe Gly Met 
              1145                 1150                 1155             
          Thr Arg  Asp Ile Tyr Glu Thr  Asp Tyr Tyr Arg Lys  Gly Gly Lys 
              1160                 1165                 1170             
          Gly Leu  Leu Pro Val Arg Trp  Met Ser Pro Glu Ser  Leu Lys Asp 
              1175                 1180                 1185             
          Gly Val  Phe Thr Thr His Ser  Asp Val Trp Ser Phe  Gly Val Val 
              1190                 1195                 1200             
          Leu Trp  Glu Ile Ala Thr Leu  Ala Glu Gln Pro Tyr  Gln Gly Leu 
              1205                 1210                 1215             
          Ser Asn  Glu Gln Val Leu Arg  Phe Val Met Glu Gly  Gly Leu Leu 
              1220                 1225                 1230             
          Asp Lys  Pro Asp Asn Cys Pro  Asp Met Leu Phe Glu  Leu Met Arg 
              1235                 1240                 1245             
          Met Cys  Trp Gln Tyr Asn Pro  Lys Met Arg Pro Ser  Phe Leu Glu 
              1250                 1255                 1260             
          Ile Ile  Gly Ser Ile Lys Asp  Glu Met Glu Pro Ser  Phe Gln Glu 
              1265                 1270                 1275             
          Val Ser  Phe Tyr Tyr Ser Glu  Glu Asn Lys Pro Pro  Glu Pro Glu 
              1280                 1285                 1290             
          Glu Leu  Glu Met Glu Pro Glu  Asn Met Glu Ser Val  Pro Leu Asp 
              1295                 1300                 1305             
          Pro Ser  Ala Ser Ser Ala Ser  Leu Pro Leu Pro Glu  Arg His Ser 
              1310                 1315                 1320             
          Gly His  Lys Ala Glu Asn Gly  Pro Gly Pro Gly Val  Leu Val Leu 
              1325                 1330                 1335             
          Arg Ala  Ser Phe Asp Glu Arg  Gln Pro Tyr Ala His  Met Asn Gly 
              1340                 1345                 1350             
          Gly Arg  Ala Asn Glu Arg Ala  Leu Pro Leu Pro Gln  Ser Ser Thr 
              1355                 1360                 1365             
          Cys 
          <![CDATA[<210>  5]]>
          <![CDATA[<211>  3504]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  智人IGF1R Del1突變體]]>
          <![CDATA[<400>  5]]>
          atgaagtctg gctccggagg agggtccccg acctcgctgt gggggctcct gtttctctcc       60
          gccgcgctct cgctctggcc gacgagtgga tgccaccccg agtgcctggg cagctgcagc      120
          gcgcctgaca acgacacggc ctgtgtagct tgccgccact actactatgc cggtgtctgt      180
          gtgcctgcct gcccgcccaa cacctacagg tttgagggct ggcgctgtgt ggaccgtgac      240
          ttctgcgcca acatcctcag cgccgagagc agcgactccg aggggtttgt gatccacgac      300
          ggcgagtgca tgcaggagtg cccctcgggc ttcatccgca acggcagcca gagcatgtac      360
          tgcatccctt gtgaaggtcc ttgcccgaag gtctgtgagg aagaaaagaa aacaaagacc      420
          attgattctg ttacttctgc tcagatgctc caaggatgca ccatcttcaa gggcaatttg      480
          ctcattaaca tccgacgggg gaataacatt gcttcagagc tggagaactt catggggctc      540
          atcgaggtgg tgacgggcta cgtgaagatc cgccattctc atgccttggt ctccttgtcc      600
          ttcctaaaaa accttcgcct catcctagga gaggagcagc tagaagggaa ttactccttc      660
          tacgtcctcg acaaccagaa cttgcagcaa ctgtgggact gggaccaccg caacctgacc      720
          atcaaagcag ggaaaatgta ctttgctttc aatcccaaat tatgtgtttc cgaaatttac      780
          cgcatggagg aagtgacggg gactaaaggg cgccaaagca aaggggacat aaacaccagg      840
          aacaacgggg agagagcctc ctgtgaaagt gacgtcctgc atttcacctc caccaccacg      900
          tcgaagaatc gcatcatcat aacctggcac cggtaccggc cccctgacta cagggatctc      960
          atcagcttca ccgtttacta caaggaagca ccctttaaga atgtcacaga gtatgatggg     1020
          caggatgcct gcggctccaa cagctggaac atggtggacg tggacctccc gcccaacaag     1080
          gacgtggagc ccggcatctt actacatggg ctgaagccct ggactcagta cgccgtttac     1140
          gtcaaggctg tgaccctcac catggtggag aacgaccata tccgtggggc caagagtgag     1200
          atcttgtaca ttcgcaccaa tgcttcagtt ccttccattc ccttggacgt tctttcagca     1260
          tcgaactcct cttctcagtt aatcgtgaag tggaaccctc cctctctgcc caacggcaac     1320
          ctgagttact acattgtgcg ctggcagcgg cagcctcagg acggctacct ttaccggcac     1380
          aattactgct ccaaagacaa aatccccatc aggaagtatg ccgacggcac catcgacatt     1440
          gaggaggtca cagagaaccc caagactgag gtgtgtggtg gggagaaagg gccttgctgc     1500
          gcctgcccca aaactgaagc cgagaagcag gccgagaagg aggaggctga ataccgcaaa     1560
          gtctttgaga atttcctgca caactccatc ttcgtgccca gacctgaaag gaagcggaga     1620
          gatgtcatgc aagtggccaa caccaccatg tccagccgaa gcaggaacac cacggccgca     1680
          gacacctaca acatcaccga cccggaagag ctggagacag agtacccttt ctttgagagc     1740
          agagtggata acaaggagag aactgtcatt tctaaccttc ggcctttcac attgtaccgc     1800
          atcgatatcc acagctgcaa ccacgaggct gagaagctgg gctgcagcgc ctccaacttc     1860
          gtctttgcaa ggactatgcc cgcagaagga gcagatgaca ttcctgggcc agtgacctgg     1920
          gagccaaggc ctgaaaactc catcttttta aagtggccgg aacctgagaa tcccaatgga     1980
          ttgattctaa tgtatgaaat aaaatacgga tcacaagttg aggatcagcg agaatgtgtg     2040
          tccagacagg aatacaggaa gtatggaggg gccaagctaa accggctaaa cccggggaac     2100
          tacacagccc ggattcaggc cacatctctc tctgggaatg ggtcgtggac agatcctgtg     2160
          ttcttctatg tccaggccaa aacaggatat gaaaacttca tccatctgat catcgctctg     2220
          cccgtcgctg tcctgttgat cgtgggaggg ttggtgatta tgctgtacgt cttccataga     2280
          aagagaaata acagcaggct ggggaatgga gtgctgtatg cctctgtgaa cccggagtac     2340
          ttcagcgctg ctgatgtgta cgttcctgat gagtgggagg tggctcggga gaagatcacc     2400
          atgagccggg aacttgggca ggggtcgttt gggatggtct atgaaggagt tgccaagggt     2460
          gtggtgaaag atgaacctga aaccagagtg gccattaaaa cagtgaacga ggccgcaagc     2520
          atgcgtgaga ggattgagtt tctcaacgaa gcttctgtga tgaaggagtt caattgtcac     2580
          catgtggtgc gattgctggg tgtggtgtcc caaggccagc caacactggt catcatggaa     2640
          ctgatgacac ggggcgatct caaaagttat ctccggtctc tgaggccaga aatggagaat     2700
          aatccagtcc tagcacctcc aagcctgagc aagatgattc agatggccgg agagattgca     2760
          gacggcatgg catacctcaa cgccaataag ttcgtccaca gagaccttgc tgcccggaat     2820
          tgcatggtag ccgaagattt cacagtcaaa atcggagatt ttggtatgac gcgagatatc     2880
          tatgagacag actattaccg gaaaggaggg aaagggctgc tgcccgtgcg ctggatgtct     2940
          cctgagtccc tcaaggatgg agtcttcacc acttactcgg acgtctggtc cttcggggtc     3000
          gtcctctggg agatcgccac actggccgag cagccctacc agggcttgtc caacgagcaa     3060
          gtccttcgct tcgtcatgga gggcggcctt ctggacaagc cagacaactg tcctgacatg     3120
          ctgtttgaac tgatgcgcat gtgctggcag tataacccca agatgaggcc ttccttcctg     3180
          gagatcatca gcagcatcaa agaggagatg gagcctggct tccgggaggt ctccttctac     3240
          tacagcgagg agaacaagct gcccgagccg gaggagctgg acctggagcc agagaacatg     3300
          gagagcgtcc ccctggaccc ctcggcctcc tcgtcctccc tgccactgcc cgacagacac     3360
          tcaggacaca aggccgagaa cggccccggc cctggggtgc tggtcctccg cgccagcttc     3420
          gacgagagac agccttacgc ccacatgaac gggggccgca agaacgagcg ggccttgccg     3480
          ctgccccagt cttcgacctg ctga                                            3504
          <![CDATA[<210>  6]]>
          <![CDATA[<211>  1167]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  智人IGF1R Del1突變體]]>
          <![CDATA[<400>  6]]>
          Met Lys Ser Gly Ser Gly Gly Gly Ser Pro Thr Ser Leu Trp Gly Leu 
          1               5                   10                  15      
          Leu Phe Leu Ser Ala Ala Leu Ser Leu Trp Pro Thr Ser Gly Cys His 
                      20                  25                  30          
          Pro Glu Cys Leu Gly Ser Cys Ser Ala Pro Asp Asn Asp Thr Ala Cys 
                  35                  40                  45              
          Val Ala Cys Arg His Tyr Tyr Tyr Ala Gly Val Cys Val Pro Ala Cys 
              50                  55                  60                  
          Pro Pro Asn Thr Tyr Arg Phe Glu Gly Trp Arg Cys Val Asp Arg Asp 
          65                  70                  75                  80  
          Phe Cys Ala Asn Ile Leu Ser Ala Glu Ser Ser Asp Ser Glu Gly Phe 
                          85                  90                  95      
          Val Ile His Asp Gly Glu Cys Met Gln Glu Cys Pro Ser Gly Phe Ile 
                      100                 105                 110         
          Arg Asn Gly Ser Gln Ser Met Tyr Cys Ile Pro Cys Glu Gly Pro Cys 
                  115                 120                 125             
          Pro Lys Val Cys Glu Glu Glu Lys Lys Thr Lys Thr Ile Asp Ser Val 
              130                 135                 140                 
          Thr Ser Ala Gln Met Leu Gln Gly Cys Thr Ile Phe Lys Gly Asn Leu 
          145                 150                 155                 160 
          Leu Ile Asn Ile Arg Arg Gly Asn Asn Ile Ala Ser Glu Leu Glu Asn 
                          165                 170                 175     
          Phe Met Gly Leu Ile Glu Val Val Thr Gly Tyr Val Lys Ile Arg His 
                      180                 185                 190         
          Ser His Ala Leu Val Ser Leu Ser Phe Leu Lys Asn Leu Arg Leu Ile 
                  195                 200                 205             
          Leu Gly Glu Glu Gln Leu Glu Gly Asn Tyr Ser Phe Tyr Val Leu Asp 
              210                 215                 220                 
          Asn Gln Asn Leu Gln Gln Leu Trp Asp Trp Asp His Arg Asn Leu Thr 
          225                 230                 235                 240 
          Ile Lys Ala Gly Lys Met Tyr Phe Ala Phe Asn Pro Lys Leu Cys Val 
                          245                 250                 255     
          Ser Glu Ile Tyr Arg Met Glu Glu Val Thr Gly Thr Lys Gly Arg Gln 
                      260                 265                 270         
          Ser Lys Gly Asp Ile Asn Thr Arg Asn Asn Gly Glu Arg Ala Ser Cys 
                  275                 280                 285             
          Glu Ser Asp Val Leu His Phe Thr Ser Thr Thr Thr Ser Lys Asn Arg 
              290                 295                 300                 
          Ile Ile Ile Thr Trp His Arg Tyr Arg Pro Pro Asp Tyr Arg Asp Leu 
          305                 310                 315                 320 
          Ile Ser Phe Thr Val Tyr Tyr Lys Glu Ala Pro Phe Lys Asn Val Thr 
                          325                 330                 335     
          Glu Tyr Asp Gly Gln Asp Ala Cys Gly Ser Asn Ser Trp Asn Met Val 
                      340                 345                 350         
          Asp Val Asp Leu Pro Pro Asn Lys Asp Val Glu Pro Gly Ile Leu Leu 
                  355                 360                 365             
          His Gly Leu Lys Pro Trp Thr Gln Tyr Ala Val Tyr Val Lys Ala Val 
              370                 375                 380                 
          Thr Leu Thr Met Val Glu Asn Asp His Ile Arg Gly Ala Lys Ser Glu 
          385                 390                 395                 400 
          Ile Leu Tyr Ile Arg Thr Asn Ala Ser Val Pro Ser Ile Pro Leu Asp 
                          405                 410                 415     
          Val Leu Ser Ala Ser Asn Ser Ser Ser Gln Leu Ile Val Lys Trp Asn 
                      420                 425                 430         
          Pro Pro Ser Leu Pro Asn Gly Asn Leu Ser Tyr Tyr Ile Val Arg Trp 
                  435                 440                 445             
          Gln Arg Gln Pro Gln Asp Gly Tyr Leu Tyr Arg His Asn Tyr Cys Ser 
              450                 455                 460                 
          Lys Asp Lys Ile Pro Ile Arg Lys Tyr Ala Asp Gly Thr Ile Asp Ile 
          465                 470                 475                 480 
          Glu Glu Val Thr Glu Asn Pro Lys Thr Glu Val Cys Gly Gly Glu Lys 
                          485                 490                 495     
          Gly Pro Cys Cys Ala Cys Pro Lys Thr Glu Ala Glu Lys Gln Ala Glu 
                      500                 505                 510         
          Lys Glu Glu Ala Glu Tyr Arg Lys Val Phe Glu Asn Phe Leu His Asn 
                  515                 520                 525             
          Ser Ile Phe Val Pro Arg Pro Glu Arg Lys Arg Arg Asp Val Met Gln 
              530                 535                 540                 
          Val Ala Asn Thr Thr Met Ser Ser Arg Ser Arg Asn Thr Thr Ala Ala 
          545                 550                 555                 560 
          Asp Thr Tyr Asn Ile Thr Asp Pro Glu Glu Leu Glu Thr Glu Tyr Pro 
                          565                 570                 575     
          Phe Phe Glu Ser Arg Val Asp Asn Lys Glu Arg Thr Val Ile Ser Asn 
                      580                 585                 590         
          Leu Arg Pro Phe Thr Leu Tyr Arg Ile Asp Ile His Ser Cys Asn His 
                  595                 600                 605             
          Glu Ala Glu Lys Leu Gly Cys Ser Ala Ser Asn Phe Val Phe Ala Arg 
              610                 615                 620                 
          Thr Met Pro Ala Glu Gly Ala Asp Asp Ile Pro Gly Pro Val Thr Trp 
          625                 630                 635                 640 
          Glu Pro Arg Pro Glu Asn Ser Ile Phe Leu Lys Trp Pro Glu Pro Glu 
                          645                 650                 655     
          Asn Pro Asn Gly Leu Ile Leu Met Tyr Glu Ile Lys Tyr Gly Ser Gln 
                      660                 665                 670         
          Val Glu Asp Gln Arg Glu Cys Val Ser Arg Gln Glu Tyr Arg Lys Tyr 
                  675                 680                 685             
          Gly Gly Ala Lys Leu Asn Arg Leu Asn Pro Gly Asn Tyr Thr Ala Arg 
              690                 695                 700                 
          Ile Gln Ala Thr Ser Leu Ser Gly Asn Gly Ser Trp Thr Asp Pro Val 
          705                 710                 715                 720 
          Phe Phe Tyr Val Gln Ala Lys Thr Gly Tyr Glu Asn Phe Ile His Leu 
                          725                 730                 735     
          Ile Ile Ala Leu Pro Val Ala Val Leu Leu Ile Val Gly Gly Leu Val 
                      740                 745                 750         
          Ile Met Leu Tyr Val Phe His Arg Lys Arg Asn Asn Ser Arg Leu Gly 
                  755                 760                 765             
          Asn Gly Val Leu Tyr Ala Ser Val Asn Pro Glu Tyr Phe Ser Ala Ala 
              770                 775                 780                 
          Asp Val Tyr Val Pro Asp Glu Trp Glu Val Ala Arg Glu Lys Ile Thr 
          785                 790                 795                 800 
          Met Ser Arg Glu Leu Gly Gln Gly Ser Phe Gly Met Val Tyr Glu Gly 
                          805                 810                 815     
          Val Ala Lys Gly Val Val Lys Asp Glu Pro Glu Thr Arg Val Ala Ile 
                      820                 825                 830         
          Lys Thr Val Asn Glu Ala Ala Ser Met Arg Glu Arg Ile Glu Phe Leu 
                  835                 840                 845             
          Asn Glu Ala Ser Val Met Lys Glu Phe Asn Cys His His Val Val Arg 
              850                 855                 860                 
          Leu Leu Gly Val Val Ser Gln Gly Gln Pro Thr Leu Val Ile Met Glu 
          865                 870                 875                 880 
          Leu Met Thr Arg Gly Asp Leu Lys Ser Tyr Leu Arg Ser Leu Arg Pro 
                          885                 890                 895     
          Glu Met Glu Asn Asn Pro Val Leu Ala Pro Pro Ser Leu Ser Lys Met 
                      900                 905                 910         
          Ile Gln Met Ala Gly Glu Ile Ala Asp Gly Met Ala Tyr Leu Asn Ala 
                  915                 920                 925             
          Asn Lys Phe Val His Arg Asp Leu Ala Ala Arg Asn Cys Met Val Ala 
              930                 935                 940                 
          Glu Asp Phe Thr Val Lys Ile Gly Asp Phe Gly Met Thr Arg Asp Ile 
          945                 950                 955                 960 
          Tyr Glu Thr Asp Tyr Tyr Arg Lys Gly Gly Lys Gly Leu Leu Pro Val 
                          965                 970                 975     
          Arg Trp Met Ser Pro Glu Ser Leu Lys Asp Gly Val Phe Thr Thr Tyr 
                      980                 985                 990         
          Ser Asp Val Trp Ser Phe Gly Val  Val Leu Trp Glu Ile  Ala Thr Leu 
                  995                 1000                 1005             
          Ala Glu  Gln Pro Tyr Gln Gly  Leu Ser Asn Glu Gln  Val Leu Arg 
              1010                 1015                 1020             
          Phe Val  Met Glu Gly Gly Leu  Leu Asp Lys Pro Asp  Asn Cys Pro 
              1025                 1030                 1035             
          Asp Met  Leu Phe Glu Leu Met  Arg Met Cys Trp Gln  Tyr Asn Pro 
              1040                 1045                 1050             
          Lys Met  Arg Pro Ser Phe Leu  Glu Ile Ile Ser Ser  Ile Lys Glu 
              1055                 1060                 1065             
          Glu Met  Glu Pro Gly Phe Arg  Glu Val Ser Phe Tyr  Tyr Ser Glu 
              1070                 1075                 1080             
          Glu Asn  Lys Leu Pro Glu Pro  Glu Glu Leu Asp Leu  Glu Pro Glu 
              1085                 1090                 1095             
          Asn Met  Glu Ser Val Pro Leu  Asp Pro Ser Ala Ser  Ser Ser Ser 
              1100                 1105                 1110             
          Leu Pro  Leu Pro Asp Arg His  Ser Gly His Lys Ala  Glu Asn Gly 
              1115                 1120                 1125             
          Pro Gly  Pro Gly Val Leu Val  Leu Arg Ala Ser Phe  Asp Glu Arg 
              1130                 1135                 1140             
          Gln Pro  Tyr Ala His Met Asn  Gly Gly Arg Lys Asn  Glu Arg Ala 
              1145                 1150                 1155             
          Leu Pro  Leu Pro Gln Ser Ser  Thr Cys 
              1160                 1165         
          <![CDATA[<210>  7]]>
          <![CDATA[<211>  4104]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  智人IGF1R H905C突變體]]>
          <![CDATA[<400>  7]]>
          atgaagtctg gctccggagg agggtccccg acctcgctgt gggggctcct gtttctctcc       60
          gccgcgctct cgctctggcc gacgagtgga gaaatctgcg ggccaggcat cgacatccgc      120
          aacgactatc agcagctgaa gcgcctggag aactgcacgg tgatcgaggg ctacctccac      180
          atcctgctca tctccaaggc cgaggactac cgcagctacc gcttccccaa gctcacggtc      240
          attaccgagt acttgctgct gttccgagtg gctggcctcg agagcctcgg agacctcttc      300
          cccaacctca cggtcatccg cggctggaaa ctcttctaca actacgccct ggtcatcttc      360
          gagatgacca atctcaagga tattgggctt tacaacctga ggaacattac tcggggggcc      420
          atcaggattg agaaaaatgc tgacctctgt tacctctcca ctgtggactg gtccctgatc      480
          ctggatgcgg tgtccaataa ctacattgtg gggaataagc ccccaaagga atgtggggac      540
          ctgtgtccag ggaccatgga ggagaagccg atgtgtgaga agaccaccat caacaatgag      600
          tacaactacc gctgctggac cacaaaccgc tgccagaaaa tgtgcccaag cacgtgtggg      660
          aagcgggcgt gcaccgagaa caatgagtgc tgccaccccg agtgcctggg cagctgcagc      720
          gcgcctgaca acgacacggc ctgtgtagct tgccgccact actactatgc cggtgtctgt      780
          gtgcctgcct gcccgcccaa cacctacagg tttgagggct ggcgctgtgt ggaccgtgac      840
          ttctgcgcca acatcctcag cgccgagagc agcgactccg aggggtttgt gatccacgac      900
          ggcgagtgca tgcaggagtg cccctcgggc ttcatccgca acggcagcca gagcatgtac      960
          tgcatccctt gtgaaggtcc ttgcccgaag gtctgtgagg aagaaaagaa aacaaagacc     1020
          attgattctg ttacttctgc tcagatgctc caaggatgca ccatcttcaa gggcaatttg     1080
          ctcattaaca tccgacgggg gaataacatt gcttcagagc tggagaactt catggggctc     1140
          atcgaggtgg tgacgggcta cgtgaagatc cgccattctc atgccttggt ctccttgtcc     1200
          ttcctaaaaa accttcgcct catcctagga gaggagcagc tagaagggaa ttactccttc     1260
          tacgtcctcg acaaccagaa cttgcagcaa ctgtgggact gggaccaccg caacctgacc     1320
          atcaaagcag ggaaaatgta ctttgctttc aatcccaaat tatgtgtttc cgaaatttac     1380
          cgcatggagg aagtgacggg gactaaaggg cgccaaagca aaggggacat aaacaccagg     1440
          aacaacgggg agagagcctc ctgtgaaagt gacgtcctgc atttcacctc caccaccacg     1500
          tcgaagaatc gcatcatcat aacctggcac cggtaccggc cccctgacta cagggatctc     1560
          atcagcttca ccgtttacta caaggaagca ccctttaaga atgtcacaga gtatgatggg     1620
          caggatgcct gcggctccaa cagctggaac atggtggacg tggacctccc gcccaacaag     1680
          gacgtggagc ccggcatctt actacatggg ctgaagccct ggactcagta cgccgtttac     1740
          gtcaaggctg tgaccctcac catggtggag aacgaccata tccgtggggc caagagtgag     1800
          atcttgtaca ttcgcaccaa tgcttcagtt ccttccattc ccttggacgt tctttcagca     1860
          tcgaactcct cttctcagtt aatcgtgaag tggaaccctc cctctctgcc caacggcaac     1920
          ctgagttact acattgtgcg ctggcagcgg cagcctcagg acggctacct ttaccggcac     1980
          aattactgct ccaaagacaa aatccccatc aggaagtatg ccgacggcac catcgacatt     2040
          gaggaggtca cagagaaccc caagactgag gtgtgtggtg gggagaaagg gccttgctgc     2100
          gcctgcccca aaactgaagc cgagaagcag gccgagaagg aggaggctga ataccgcaaa     2160
          gtctttgaga atttcctgca caactccatc ttcgtgccca gacctgaaag gaagcggaga     2220
          gatgtcatgc aagtggccaa caccaccatg tccagccgaa gcaggaacac cacggccgca     2280
          gacacctaca acatcaccga cccggaagag ctggagacag agtacccttt ctttgagagc     2340
          agagtggata acaaggagag aactgtcatt tctaaccttc ggcctttcac attgtaccgc     2400
          atcgatatcc acagctgcaa ccacgaggct gagaagctgg gctgcagcgc ctccaacttc     2460
          gtctttgcaa ggactatgcc cgcagaagga gcagatgaca ttcctgggcc agtgacctgg     2520
          gagccaaggc ctgaaaactc catcttttta aagtggccgg aacctgagaa tcccaatgga     2580
          ttgattctaa tgtatgaaat aaaatacgga tcacaagttg aggatcagcg agaatgtgtg     2640
          tccagacagg aatacaggaa gtatggaggg gccaagctaa accggctaaa cccggggaac     2700
          tacacagccc ggattcaggc cacatctctc tctgggaatg ggtcgtggac agatcctgtg     2760
          ttcttctatg tccaggccaa aacaggatat gaaaacttca tctgtctgat catcgctctg     2820
          cccgtcgctg tcctgttgat cgtgggaggg ttggtgatta tgctgtacgt cttccataga     2880
          aagagaaata acagcaggct ggggaatgga gtgctgtatg cctctgtgaa cccggagtac     2940
          ttcagcgctg ctgatgtgta cgttcctgat gagtgggagg tggctcggga gaagatcacc     3000
          atgagccggg aacttgggca ggggtcgttt gggatggtct atgaaggagt tgccaagggt     3060
          gtggtgaaag atgaacctga aaccagagtg gccattaaaa cagtgaacga ggccgcaagc     3120
          atgcgtgaga ggattgagtt tctcaacgaa gcttctgtga tgaaggagtt caattgtcac     3180
          catgtggtgc gattgctggg tgtggtgtcc caaggccagc caacactggt catcatggaa     3240
          ctgatgacac ggggcgatct caaaagttat ctccggtctc tgaggccaga aatggagaat     3300
          aatccagtcc tagcacctcc aagcctgagc aagatgattc agatggccgg agagattgca     3360
          gacggcatgg catacctcaa cgccaataag ttcgtccaca gagaccttgc tgcccggaat     3420
          tgcatggtag ccgaagattt cacagtcaaa atcggagatt ttggtatgac gcgagatatc     3480
          tatgagacag actattaccg gaaaggaggg aaagggctgc tgcccgtgcg ctggatgtct     3540
          cctgagtccc tcaaggatgg agtcttcacc acttactcgg acgtctggtc cttcggggtc     3600
          gtcctctggg agatcgccac actggccgag cagccctacc agggcttgtc caacgagcaa     3660
          gtccttcgct tcgtcatgga gggcggcctt ctggacaagc cagacaactg tcctgacatg     3720
          ctgtttgaac tgatgcgcat gtgctggcag tataacccca agatgaggcc ttccttcctg     3780
          gagatcatca gcagcatcaa agaggagatg gagcctggct tccgggaggt ctccttctac     3840
          tacagcgagg agaacaagct gcccgagccg gaggagctgg acctggagcc agagaacatg     3900
          gagagcgtcc ccctggaccc ctcggcctcc tcgtcctccc tgccactgcc cgacagacac     3960
          tcaggacaca aggccgagaa cggccccggc cctggggtgc tggtcctccg cgccagcttc     4020
          gacgagagac agccttacgc ccacatgaac gggggccgca agaacgagcg ggccttgccg     4080
          ctgccccagt cttcgacctg ctga                                            4104
          <![CDATA[<210>  8]]>
          <![CDATA[<211>  1367]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  智人IGF1R H905C突變體]]>
          <![CDATA[<400>  8]]>
          Met Lys Ser Gly Ser Gly Gly Gly Ser Pro Thr Ser Leu Trp Gly Leu 
          1               5                   10                  15      
          Leu Phe Leu Ser Ala Ala Leu Ser Leu Trp Pro Thr Ser Gly Glu Ile 
                      20                  25                  30          
          Cys Gly Pro Gly Ile Asp Ile Arg Asn Asp Tyr Gln Gln Leu Lys Arg 
                  35                  40                  45              
          Leu Glu Asn Cys Thr Val Ile Glu Gly Tyr Leu His Ile Leu Leu Ile 
              50                  55                  60                  
          Ser Lys Ala Glu Asp Tyr Arg Ser Tyr Arg Phe Pro Lys Leu Thr Val 
          65                  70                  75                  80  
          Ile Thr Glu Tyr Leu Leu Leu Phe Arg Val Ala Gly Leu Glu Ser Leu 
                          85                  90                  95      
          Gly Asp Leu Phe Pro Asn Leu Thr Val Ile Arg Gly Trp Lys Leu Phe 
                      100                 105                 110         
          Tyr Asn Tyr Ala Leu Val Ile Phe Glu Met Thr Asn Leu Lys Asp Ile 
                  115                 120                 125             
          Gly Leu Tyr Asn Leu Arg Asn Ile Thr Arg Gly Ala Ile Arg Ile Glu 
              130                 135                 140                 
          Lys Asn Ala Asp Leu Cys Tyr Leu Ser Thr Val Asp Trp Ser Leu Ile 
          145                 150                 155                 160 
          Leu Asp Ala Val Ser Asn Asn Tyr Ile Val Gly Asn Lys Pro Pro Lys 
                          165                 170                 175     
          Glu Cys Gly Asp Leu Cys Pro Gly Thr Met Glu Glu Lys Pro Met Cys 
                      180                 185                 190         
          Glu Lys Thr Thr Ile Asn Asn Glu Tyr Asn Tyr Arg Cys Trp Thr Thr 
                  195                 200                 205             
          Asn Arg Cys Gln Lys Met Cys Pro Ser Thr Cys Gly Lys Arg Ala Cys 
              210                 215                 220                 
          Thr Glu Asn Asn Glu Cys Cys His Pro Glu Cys Leu Gly Ser Cys Ser 
          225                 230                 235                 240 
          Ala Pro Asp Asn Asp Thr Ala Cys Val Ala Cys Arg His Tyr Tyr Tyr 
                          245                 250                 255     
          Ala Gly Val Cys Val Pro Ala Cys Pro Pro Asn Thr Tyr Arg Phe Glu 
                      260                 265                 270         
          Gly Trp Arg Cys Val Asp Arg Asp Phe Cys Ala Asn Ile Leu Ser Ala 
                  275                 280                 285             
          Glu Ser Ser Asp Ser Glu Gly Phe Val Ile His Asp Gly Glu Cys Met 
              290                 295                 300                 
          Gln Glu Cys Pro Ser Gly Phe Ile Arg Asn Gly Ser Gln Ser Met Tyr 
          305                 310                 315                 320 
          Cys Ile Pro Cys Glu Gly Pro Cys Pro Lys Val Cys Glu Glu Glu Lys 
                          325                 330                 335     
          Lys Thr Lys Thr Ile Asp Ser Val Thr Ser Ala Gln Met Leu Gln Gly 
                      340                 345                 350         
          Cys Thr Ile Phe Lys Gly Asn Leu Leu Ile Asn Ile Arg Arg Gly Asn 
                  355                 360                 365             
          Asn Ile Ala Ser Glu Leu Glu Asn Phe Met Gly Leu Ile Glu Val Val 
              370                 375                 380                 
          Thr Gly Tyr Val Lys Ile Arg His Ser His Ala Leu Val Ser Leu Ser 
          385                 390                 395                 400 
          Phe Leu Lys Asn Leu Arg Leu Ile Leu Gly Glu Glu Gln Leu Glu Gly 
                          405                 410                 415     
          Asn Tyr Ser Phe Tyr Val Leu Asp Asn Gln Asn Leu Gln Gln Leu Trp 
                      420                 425                 430         
          Asp Trp Asp His Arg Asn Leu Thr Ile Lys Ala Gly Lys Met Tyr Phe 
                  435                 440                 445             
          Ala Phe Asn Pro Lys Leu Cys Val Ser Glu Ile Tyr Arg Met Glu Glu 
              450                 455                 460                 
          Val Thr Gly Thr Lys Gly Arg Gln Ser Lys Gly Asp Ile Asn Thr Arg 
          465                 470                 475                 480 
          Asn Asn Gly Glu Arg Ala Ser Cys Glu Ser Asp Val Leu His Phe Thr 
                          485                 490                 495     
          Ser Thr Thr Thr Ser Lys Asn Arg Ile Ile Ile Thr Trp His Arg Tyr 
                      500                 505                 510         
          Arg Pro Pro Asp Tyr Arg Asp Leu Ile Ser Phe Thr Val Tyr Tyr Lys 
                  515                 520                 525             
          Glu Ala Pro Phe Lys Asn Val Thr Glu Tyr Asp Gly Gln Asp Ala Cys 
              530                 535                 540                 
          Gly Ser Asn Ser Trp Asn Met Val Asp Val Asp Leu Pro Pro Asn Lys 
          545                 550                 555                 560 
          Asp Val Glu Pro Gly Ile Leu Leu His Gly Leu Lys Pro Trp Thr Gln 
                          565                 570                 575     
          Tyr Ala Val Tyr Val Lys Ala Val Thr Leu Thr Met Val Glu Asn Asp 
                      580                 585                 590         
          His Ile Arg Gly Ala Lys Ser Glu Ile Leu Tyr Ile Arg Thr Asn Ala 
                  595                 600                 605             
          Ser Val Pro Ser Ile Pro Leu Asp Val Leu Ser Ala Ser Asn Ser Ser 
              610                 615                 620                 
          Ser Gln Leu Ile Val Lys Trp Asn Pro Pro Ser Leu Pro Asn Gly Asn 
          625                 630                 635                 640 
          Leu Ser Tyr Tyr Ile Val Arg Trp Gln Arg Gln Pro Gln Asp Gly Tyr 
                          645                 650                 655     
          Leu Tyr Arg His Asn Tyr Cys Ser Lys Asp Lys Ile Pro Ile Arg Lys 
                      660                 665                 670         
          Tyr Ala Asp Gly Thr Ile Asp Ile Glu Glu Val Thr Glu Asn Pro Lys 
                  675                 680                 685             
          Thr Glu Val Cys Gly Gly Glu Lys Gly Pro Cys Cys Ala Cys Pro Lys 
              690                 695                 700                 
          Thr Glu Ala Glu Lys Gln Ala Glu Lys Glu Glu Ala Glu Tyr Arg Lys 
          705                 710                 715                 720 
          Val Phe Glu Asn Phe Leu His Asn Ser Ile Phe Val Pro Arg Pro Glu 
                          725                 730                 735     
          Arg Lys Arg Arg Asp Val Met Gln Val Ala Asn Thr Thr Met Ser Ser 
                      740                 745                 750         
          Arg Ser Arg Asn Thr Thr Ala Ala Asp Thr Tyr Asn Ile Thr Asp Pro 
                  755                 760                 765             
          Glu Glu Leu Glu Thr Glu Tyr Pro Phe Phe Glu Ser Arg Val Asp Asn 
              770                 775                 780                 
          Lys Glu Arg Thr Val Ile Ser Asn Leu Arg Pro Phe Thr Leu Tyr Arg 
          785                 790                 795                 800 
          Ile Asp Ile His Ser Cys Asn His Glu Ala Glu Lys Leu Gly Cys Ser 
                          805                 810                 815     
          Ala Ser Asn Phe Val Phe Ala Arg Thr Met Pro Ala Glu Gly Ala Asp 
                      820                 825                 830         
          Asp Ile Pro Gly Pro Val Thr Trp Glu Pro Arg Pro Glu Asn Ser Ile 
                  835                 840                 845             
          Phe Leu Lys Trp Pro Glu Pro Glu Asn Pro Asn Gly Leu Ile Leu Met 
              850                 855                 860                 
          Tyr Glu Ile Lys Tyr Gly Ser Gln Val Glu Asp Gln Arg Glu Cys Val 
          865                 870                 875                 880 
          Ser Arg Gln Glu Tyr Arg Lys Tyr Gly Gly Ala Lys Leu Asn Arg Leu 
                          885                 890                 895     
          Asn Pro Gly Asn Tyr Thr Ala Arg Ile Gln Ala Thr Ser Leu Ser Gly 
                      900                 905                 910         
          Asn Gly Ser Trp Thr Asp Pro Val Phe Phe Tyr Val Gln Ala Lys Thr 
                  915                 920                 925             
          Gly Tyr Glu Asn Phe Ile His Leu Ile Ile Ala Leu Pro Val Ala Val 
              930                 935                 940                 
          Leu Leu Ile Val Gly Gly Leu Val Ile Met Leu Tyr Val Phe His Arg 
          945                 950                 955                 960 
          Lys Arg Asn Asn Ser Arg Leu Gly Asn Gly Val Leu Tyr Ala Ser Val 
                          965                 970                 975     
          Asn Pro Glu Tyr Phe Ser Ala Ala Asp Val Tyr Val Pro Asp Glu Trp 
                      980                 985                 990         
          Glu Val Ala Arg Glu Lys Ile Thr  Met Ser Arg Glu Leu  Gly Gln Gly 
                  995                 1000                 1005             
          Ser Phe  Gly Met Val Tyr Glu  Gly Val Ala Lys Gly  Val Val Lys 
              1010                 1015                 1020             
          Asp Glu  Pro Glu Thr Arg Val  Ala Ile Lys Thr Val  Asn Glu Ala 
              1025                 1030                 1035             
          Ala Ser  Met Arg Glu Arg Ile  Glu Phe Leu Asn Glu  Ala Ser Val 
              1040                 1045                 1050             
          Met Lys  Glu Phe Asn Cys His  His Val Val Arg Leu  Leu Gly Val 
              1055                 1060                 1065             
          Val Ser  Gln Gly Gln Pro Thr  Leu Val Ile Met Glu  Leu Met Thr 
              1070                 1075                 1080             
          Arg Gly  Asp Leu Lys Ser Tyr  Leu Arg Ser Leu Arg  Pro Glu Met 
              1085                 1090                 1095             
          Glu Asn  Asn Pro Val Leu Ala  Pro Pro Ser Leu Ser  Lys Met Ile 
              1100                 1105                 1110             
          Gln Met  Ala Gly Glu Ile Ala  Asp Gly Met Ala Tyr  Leu Asn Ala 
              1115                 1120                 1125             
          Asn Lys  Phe Val His Arg Asp  Leu Ala Ala Arg Asn  Cys Met Val 
              1130                 1135                 1140             
          Ala Glu  Asp Phe Thr Val Lys  Ile Gly Asp Phe Gly  Met Thr Arg 
              1145                 1150                 1155             
          Asp Ile  Tyr Glu Thr Asp Tyr  Tyr Arg Lys Gly Gly  Lys Gly Leu 
              1160                 1165                 1170             
          Leu Pro  Val Arg Trp Met Ser  Pro Glu Ser Leu Lys  Asp Gly Val 
              1175                 1180                 1185             
          Phe Thr  Thr Tyr Ser Asp Val  Trp Ser Phe Gly Val  Val Leu Trp 
              1190                 1195                 1200             
          Glu Ile  Ala Thr Leu Ala Glu  Gln Pro Tyr Gln Gly  Leu Ser Asn 
              1205                 1210                 1215             
          Glu Gln  Val Leu Arg Phe Val  Met Glu Gly Gly Leu  Leu Asp Lys 
              1220                 1225                 1230             
          Pro Asp  Asn Cys Pro Asp Met  Leu Phe Glu Leu Met  Arg Met Cys 
              1235                 1240                 1245             
          Trp Gln  Tyr Asn Pro Lys Met  Arg Pro Ser Phe Leu  Glu Ile Ile 
              1250                 1255                 1260             
          Ser Ser  Ile Lys Glu Glu Met  Glu Pro Gly Phe Arg  Glu Val Ser 
              1265                 1270                 1275             
          Phe Tyr  Tyr Ser Glu Glu Asn  Lys Leu Pro Glu Pro  Glu Glu Leu 
              1280                 1285                 1290             
          Asp Leu  Glu Pro Glu Asn Met  Glu Ser Val Pro Leu  Asp Pro Ser 
              1295                 1300                 1305             
          Ala Ser  Ser Ser Ser Leu Pro  Leu Pro Asp Arg His  Ser Gly His 
              1310                 1315                 1320             
          Lys Ala  Glu Asn Gly Pro Gly  Pro Gly Val Leu Val  Leu Arg Ala 
              1325                 1330                 1335             
          Ser Phe  Asp Glu Arg Gln Pro  Tyr Ala His Met Asn  Gly Gly Arg 
              1340                 1345                 1350             
          Lys Asn  Glu Arg Ala Leu Pro  Leu Pro Gln Ser Ser  Thr Cys 
              1355                 1360                 1365         
          <![CDATA[<210>  9]]>
          <![CDATA[<211>  3513]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  褐鼠IGFR1 Del1突變體]]>
          <![CDATA[<400>  9]]>
          atgaagtctg gctccggagg agggtccccg acctcgctgt gggggctcgt gtttctctcc       60
          gccgcgctct cgctctggcc gacgagtgga tgccacccgg agtgcctagg cagctgccac      120
          acaccggacg acaacacaac ctgcgtggcc tgccgacact actactacaa aggcgtgtgc      180
          gtgcctgcct gcccgcctgg cacctacagg ttcgagggct ggcgctgtgt ggaccgggat      240
          ttctgcgcca acatccccaa cgccgagagc agtgactcag atggcttcgt catccacgat      300
          ggcgagtgca tgcaggagtg tccatcaggc ttcatccgca acagcaccca gagcatgtac      360
          tgtatcccct gtgaaggccc ctgccccaag gtctgcggcg atgaagaaaa gaaaacgaaa      420
          accatcgatt ctgtgacgtc tgcccagatg ctccaagggt gcaccatttt gaagggcaat      480
          ctgcttatta acatccggcg aggcaataac attgcctcgg aattggagaa cttcatgggg      540
          ctcatcgagg tggtgactgg ctacgtgaag atccgccatt cccatgcctt ggtctccttg      600
          tccttcctga agaaccttcg tctcatctta ggagaggagc agctagaagg gaactactcc      660
          ttctatgtcc tggacaacca gaacttgcag cagctgtggg actggaacca ccggaacctg      720
          accgtcaggt cagggaaaat gtacttcgct ttcaatccca agctgtgtgt ctctgaaatt      780
          taccggatgg aggaggtgac aggaacaaag ggacggcaga gcaaaggaga cataaacacc      840
          aggaacaacg gagagcgagc ttcctgtgaa agtgatgttc tccgtttcac ctccaccacc      900
          acctggaaga accgcatcat cataacgtgg caccggtacc ggccgccgga ctaccgggat      960
          ctcatcagtt tcacagtcta ctacaaggag gcacccttta aaaacgtcac ggaatacgac     1020
          gggcaggatg cctgtggctc caacagctgg aacatggtgg acgtggacct gcctccgaac     1080
          aaggaggggg agcctggcat tttgctgcat gggctgaagc cctggaccca gtatgcagtc     1140
          tatgtcaagg ctgtgaccct caccatggtg gaaaacgacc acatccgtgg ggccaaaagt     1200
          gaaatcttgt acattcgcac caacgcttca gttccttcca ttcctctaga tgtcctctcg     1260
          gcatcaaact cctcctctca gctgatcgtg aagtggaacc ccccaactct gcccaatggt     1320
          aacttgagtt actacattgt gaggtggcag cggcagccgc aggatggcta tctgttccgg     1380
          cacaactact gctccaaaga caaaataccc atcagaaagt acgccgatgg taccatcgat     1440
          gtggaggagg tgacagaaaa tcccaagaca gaagtgtgcg gtggtgataa agggccgtgc     1500
          tgtgcctgtc ctaaaaccga agctgagaag caggctgaga aggaggaggc tgagtaccgt     1560
          aaagtctttg agaatttcct tcacaactcc atctttgtgc ccagacctga gaggaggcgg     1620
          agagatgtcc tgcaggtggc taacaccacc atgtccagcc gaagcaggaa caccacggta     1680
          gctgacacct acaatatcac agacccggaa gagttcgaga cagaataccc tttctttgag     1740
          agcagagtgg ataacaagga gaggactgtc atttccaacc tccggccttt cactctgtac     1800
          cgtatcgata tccacagctg caaccacgag gctgagaagc tgggctgcag cgcctccaac     1860
          tttgtctttg caagaaccat gccagcagaa ggagcagatg acattcctgg cccagtgacc     1920
          tgggagccaa gacctgaaaa ctccatcttt ttaaagtggc cagaacccga gaaccccaac     1980
          ggattgattc taatgtatga aataaaatac ggatcgcaag tcgaggatca gcgggaatgt     2040
          gtgtccagac aggagtacag gaagtatgga ggggccaaac ttaaccgtct aaacccaggg     2100
          aactatacgg cccggattca ggctacctcc ctctctggga atgggtcgtg gacagatcct     2160
          gtgttcttct atgtcccagc caaaacaacg tatgagaatt tcatgcatct gatcattgct     2220
          ctgccggttg ccatcctgct gattgtgggg ggcctggtaa tcatgctgta tgtcttccat     2280
          agaaagagga ataacagcag attgggcaac ggggtgctgt acgcctctgt gaaccccgag     2340
          tatttcagcg cagctgatgt gtacgtgcct gatgaatggg aggtagctcg ggagaagatc     2400
          accatgaacc gggagctcgg acaagggtcc ttcgggatgg tctatgaagg agtggccaag     2460
          ggcgtggtca aggacgagcc tgaaaccaga gtggccatca agacagtgaa tgaggctgca     2520
          agtatgcgtg agagaattga gtttctcaac gaggcctcag tgatgaagga gttcaactgt     2580
          caccatgtgg tccggttgct gggtgtagta tcccaaggcc agcccaccct ggtcatcatg     2640
          gaactaatga cacgtggcga tctcaaaagt tatctccggt ctctaaggcc agaggtggag     2700
          aataatctag tcctgattcc tccgagctta agcaagatga tccagatggc tggagagatt     2760
          gcagatggca tggcctacct caatgccaac aagttcgtcc acagagacct ggctgctcgg     2820
          aactgcatgg tagctgaaga tttcacagtc aaaattggag attttggtat gacacgagac     2880
          atctacgaga cggactacta ccggaaaggc gggaagggct tgctgcctgt gcgctggatg     2940
          tctcccgagt ccctcaagga tggcgtcttc accactcatt ccgatgtctg gtcctttggg     3000
          gtcgtcctct gggagatcgc cactctggct gagcagccgt accagggcct gtccaacgag     3060
          caagttcttc gtttcgtcat ggagggcggc cttctggaca agccggataa ctgccccgat     3120
          atgctgtttg aacttatgcg catgtgctgg cagtacaacc ccaagatgcg gccctccttc     3180
          ctggagatca tcggaagcat caaggatgag atggagccca gtttccagga ggtctccttc     3240
          tactacagcg aggagaacaa gcctccagag ccggaggagc tggagatgga gctggagctg     3300
          gagcccgaga acatggagag cgtcccgctg gacccttcgg cctcctcagc ctccctgcct     3360
          ctgcctgaaa gacactcagg acacaaggct gagaacggcc ctggcgtgct ggttctccgt     3420
          gccagttttg atgagagaca gccttacgct cacatgaatg ggggacgcgc caacgagagg     3480
          gccttgcctc tgccccagtc ctcaacctgc tga                                  3513
          <![CDATA[<210>  10]]>
          <![CDATA[<211>  1170]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  褐鼠IGFR1 Del1突變體]]>
          <![CDATA[<400>  10]]>
          Met Lys Ser Gly Ser Gly Gly Gly Ser Pro Thr Ser Leu Trp Gly Leu 
          1               5                   10                  15      
          Val Phe Leu Ser Ala Ala Leu Ser Leu Trp Pro Thr Ser Gly Cys His 
                      20                  25                  30          
          Pro Glu Cys Leu Gly Ser Cys His Thr Pro Asp Asp Asn Thr Thr Cys 
                  35                  40                  45              
          Val Ala Cys Arg His Tyr Tyr Tyr Lys Gly Val Cys Val Pro Ala Cys 
              50                  55                  60                  
          Pro Pro Gly Thr Tyr Arg Phe Glu Gly Trp Arg Cys Val Asp Arg Asp 
          65                  70                  75                  80  
          Phe Cys Ala Asn Ile Pro Asn Ala Glu Ser Ser Asp Ser Asp Gly Phe 
                          85                  90                  95      
          Val Ile His Asp Gly Glu Cys Met Gln Glu Cys Pro Ser Gly Phe Ile 
                      100                 105                 110         
          Arg Asn Ser Thr Gln Ser Met Tyr Cys Ile Pro Cys Glu Gly Pro Cys 
                  115                 120                 125             
          Pro Lys Val Cys Gly Asp Glu Glu Lys Lys Thr Lys Thr Ile Asp Ser 
              130                 135                 140                 
          Val Thr Ser Ala Gln Met Leu Gln Gly Cys Thr Ile Leu Lys Gly Asn 
          145                 150                 155                 160 
          Leu Leu Ile Asn Ile Arg Arg Gly Asn Asn Ile Ala Ser Glu Leu Glu 
                          165                 170                 175     
          Asn Phe Met Gly Leu Ile Glu Val Val Thr Gly Tyr Val Lys Ile Arg 
                      180                 185                 190         
          His Ser His Ala Leu Val Ser Leu Ser Phe Leu Lys Asn Leu Arg Leu 
                  195                 200                 205             
          Ile Leu Gly Glu Glu Gln Leu Glu Gly Asn Tyr Ser Phe Tyr Val Leu 
              210                 215                 220                 
          Asp Asn Gln Asn Leu Gln Gln Leu Trp Asp Trp Asn His Arg Asn Leu 
          225                 230                 235                 240 
          Thr Val Arg Ser Gly Lys Met Tyr Phe Ala Phe Asn Pro Lys Leu Cys 
                          245                 250                 255     
          Val Ser Glu Ile Tyr Arg Met Glu Glu Val Thr Gly Thr Lys Gly Arg 
                      260                 265                 270         
          Gln Ser Lys Gly Asp Ile Asn Thr Arg Asn Asn Gly Glu Arg Ala Ser 
                  275                 280                 285             
          Cys Glu Ser Asp Val Leu Arg Phe Thr Ser Thr Thr Thr Trp Lys Asn 
              290                 295                 300                 
          Arg Ile Ile Ile Thr Trp His Arg Tyr Arg Pro Pro Asp Tyr Arg Asp 
          305                 310                 315                 320 
          Leu Ile Ser Phe Thr Val Tyr Tyr Lys Glu Ala Pro Phe Lys Asn Val 
                          325                 330                 335     
          Thr Glu Tyr Asp Gly Gln Asp Ala Cys Gly Ser Asn Ser Trp Asn Met 
                      340                 345                 350         
          Val Asp Val Asp Leu Pro Pro Asn Lys Glu Gly Glu Pro Gly Ile Leu 
                  355                 360                 365             
          Leu His Gly Leu Lys Pro Trp Thr Gln Tyr Ala Val Tyr Val Lys Ala 
              370                 375                 380                 
          Val Thr Leu Thr Met Val Glu Asn Asp His Ile Arg Gly Ala Lys Ser 
          385                 390                 395                 400 
          Glu Ile Leu Tyr Ile Arg Thr Asn Ala Ser Val Pro Ser Ile Pro Leu 
                          405                 410                 415     
          Asp Val Leu Ser Ala Ser Asn Ser Ser Ser Gln Leu Ile Val Lys Trp 
                      420                 425                 430         
          Asn Pro Pro Thr Leu Pro Asn Gly Asn Leu Ser Tyr Tyr Ile Val Arg 
                  435                 440                 445             
          Trp Gln Arg Gln Pro Gln Asp Gly Tyr Leu Phe Arg His Asn Tyr Cys 
              450                 455                 460                 
          Ser Lys Asp Lys Ile Pro Ile Arg Lys Tyr Ala Asp Gly Thr Ile Asp 
          465                 470                 475                 480 
          Val Glu Glu Val Thr Glu Asn Pro Lys Thr Glu Val Cys Gly Gly Asp 
                          485                 490                 495     
          Lys Gly Pro Cys Cys Ala Cys Pro Lys Thr Glu Ala Glu Lys Gln Ala 
                      500                 505                 510         
          Glu Lys Glu Glu Ala Glu Tyr Arg Lys Val Phe Glu Asn Phe Leu His 
                  515                 520                 525             
          Asn Ser Ile Phe Val Pro Arg Pro Glu Arg Arg Arg Arg Asp Val Leu 
              530                 535                 540                 
          Gln Val Ala Asn Thr Thr Met Ser Ser Arg Ser Arg Asn Thr Thr Val 
          545                 550                 555                 560 
          Ala Asp Thr Tyr Asn Ile Thr Asp Pro Glu Glu Phe Glu Thr Glu Tyr 
                          565                 570                 575     
          Pro Phe Phe Glu Ser Arg Val Asp Asn Lys Glu Arg Thr Val Ile Ser 
                      580                 585                 590         
          Asn Leu Arg Pro Phe Thr Leu Tyr Arg Ile Asp Ile His Ser Cys Asn 
                  595                 600                 605             
          His Glu Ala Glu Lys Leu Gly Cys Ser Ala Ser Asn Phe Val Phe Ala 
              610                 615                 620                 
          Arg Thr Met Pro Ala Glu Gly Ala Asp Asp Ile Pro Gly Pro Val Thr 
          625                 630                 635                 640 
          Trp Glu Pro Arg Pro Glu Asn Ser Ile Phe Leu Lys Trp Pro Glu Pro 
                          645                 650                 655     
          Glu Asn Pro Asn Gly Leu Ile Leu Met Tyr Glu Ile Lys Tyr Gly Ser 
                      660                 665                 670         
          Gln Val Glu Asp Gln Arg Glu Cys Val Ser Arg Gln Glu Tyr Arg Lys 
                  675                 680                 685             
          Tyr Gly Gly Ala Lys Leu Asn Arg Leu Asn Pro Gly Asn Tyr Thr Ala 
              690                 695                 700                 
          Arg Ile Gln Ala Thr Ser Leu Ser Gly Asn Gly Ser Trp Thr Asp Pro 
          705                 710                 715                 720 
          Val Phe Phe Tyr Val Pro Ala Lys Thr Thr Tyr Glu Asn Phe Met His 
                          725                 730                 735     
          Leu Ile Ile Ala Leu Pro Val Ala Ile Leu Leu Ile Val Gly Gly Leu 
                      740                 745                 750         
          Val Ile Met Leu Tyr Val Phe His Arg Lys Arg Asn Asn Ser Arg Leu 
                  755                 760                 765             
          Gly Asn Gly Val Leu Tyr Ala Ser Val Asn Pro Glu Tyr Phe Ser Ala 
              770                 775                 780                 
          Ala Asp Val Tyr Val Pro Asp Glu Trp Glu Val Ala Arg Glu Lys Ile 
          785                 790                 795                 800 
          Thr Met Asn Arg Glu Leu Gly Gln Gly Ser Phe Gly Met Val Tyr Glu 
                          805                 810                 815     
          Gly Val Ala Lys Gly Val Val Lys Asp Glu Pro Glu Thr Arg Val Ala 
                      820                 825                 830         
          Ile Lys Thr Val Asn Glu Ala Ala Ser Met Arg Glu Arg Ile Glu Phe 
                  835                 840                 845             
          Leu Asn Glu Ala Ser Val Met Lys Glu Phe Asn Cys His His Val Val 
              850                 855                 860                 
          Arg Leu Leu Gly Val Val Ser Gln Gly Gln Pro Thr Leu Val Ile Met 
          865                 870                 875                 880 
          Glu Leu Met Thr Arg Gly Asp Leu Lys Ser Tyr Leu Arg Ser Leu Arg 
                          885                 890                 895     
          Pro Glu Val Glu Asn Asn Leu Val Leu Ile Pro Pro Ser Leu Ser Lys 
                      900                 905                 910         
          Met Ile Gln Met Ala Gly Glu Ile Ala Asp Gly Met Ala Tyr Leu Asn 
                  915                 920                 925             
          Ala Asn Lys Phe Val His Arg Asp Leu Ala Ala Arg Asn Cys Met Val 
              930                 935                 940                 
          Ala Glu Asp Phe Thr Val Lys Ile Gly Asp Phe Gly Met Thr Arg Asp 
          945                 950                 955                 960 
          Ile Tyr Glu Thr Asp Tyr Tyr Arg Lys Gly Gly Lys Gly Leu Leu Pro 
                          965                 970                 975     
          Val Arg Trp Met Ser Pro Glu Ser Leu Lys Asp Gly Val Phe Thr Thr 
                      980                 985                 990         
          His Ser Asp Val Trp Ser Phe Gly  Val Val Leu Trp Glu  Ile Ala Thr 
                  995                 1000                 1005             
          Leu Ala  Glu Gln Pro Tyr Gln  Gly Leu Ser Asn Glu  Gln Val Leu 
              1010                 1015                 1020             
          Arg Phe  Val Met Glu Gly Gly  Leu Leu Asp Lys Pro  Asp Asn Cys 
              1025                 1030                 1035             
          Pro Asp  Met Leu Phe Glu Leu  Met Arg Met Cys Trp  Gln Tyr Asn 
              1040                 1045                 1050             
          Pro Lys  Met Arg Pro Ser Phe  Leu Glu Ile Ile Gly  Ser Ile Lys 
              1055                 1060                 1065             
          Asp Glu  Met Glu Pro Ser Phe  Gln Glu Val Ser Phe  Tyr Tyr Ser 
              1070                 1075                 1080             
          Glu Glu  Asn Lys Pro Pro Glu  Pro Glu Glu Leu Glu  Met Glu Leu 
              1085                 1090                 1095             
          Glu Leu  Glu Pro Glu Asn Met  Glu Ser Val Pro Leu  Asp Pro Ser 
              1100                 1105                 1110             
          Ala Ser  Ser Ala Ser Leu Pro  Leu Pro Glu Arg His  Ser Gly His 
              1115                 1120                 1125             
          Lys Ala  Glu Asn Gly Pro Gly  Val Leu Val Leu Arg  Ala Ser Phe 
              1130                 1135                 1140             
          Asp Glu  Arg Gln Pro Tyr Ala  His Met Asn Gly Gly  Arg Ala Asn 
              1145                 1150                 1155             
          Glu Arg  Ala Leu Pro Leu Pro  Gln Ser Ser Thr Cys  
              1160                 1165                 1170 
          <![CDATA[<210>  11]]>
          <![CDATA[<211>  4113]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  褐鼠IGFR1 H906C突變體]]>
          <![CDATA[<400>  11]]>
          atgaagtctg gctccggagg agggtccccg acctcgctgt gggggctcgt gtttctctcc       60
          gccgcgctct cgctctggcc gacgagtgga gaaatttgtg ggcccggcat tgacatccgc      120
          aacgactatc agcagctgaa gcgcctggaa aactgcacgg tgatcgaggg cttcctccac      180
          atcctgctca tctccaaggc cgaggactac cgaagctacc gcttccccaa gctcacggtc      240
          atcaccgagt acttgctgct gtttcgagtg gccggcctcg agagcctggg agacctcttc      300
          ccgaacctca cagtcatccg tggctggaaa ctcttctaca attacgcact ggtcatcttc      360
          gagatgacca atctcaagga tattgggctt tataatctga ggaacattac tcggggggcc      420
          atcaggattg agaaaaacgc tgacctctgt tacctctcca ccatagactg gtctctcatc      480
          ttggatgcgg tgtccaataa ctacattgtg gggaacaagc ccccaaagga atgtggggac      540
          ctgtgtccag ggaccttgga ggagaagccc atgtgtgaga agaccaccat caacaatgag      600
          tacaactacc gctgctggac cacaaatcgc tgccagaaaa tgtgcccaag tgtgtgtggg      660
          aagcgagcct gcaccgagaa caatgagtgc tgccacccgg agtgcctagg cagctgccac      720
          acaccggacg acaacacaac ctgcgtggcc tgccgacact actactacaa aggcgtgtgc      780
          gtgcctgcct gcccgcctgg cacctacagg ttcgagggct ggcgctgtgt ggaccgggat      840
          ttctgcgcca acatccccaa cgccgagagc agtgactcag atggcttcgt catccacgat      900
          ggcgagtgca tgcaggagtg tccatcaggc ttcatccgca acagcaccca gagcatgtac      960
          tgtatcccct gtgaaggccc ctgccccaag gtctgcggcg atgaagaaaa gaaaacgaaa     1020
          accatcgatt ctgtgacgtc tgcccagatg ctccaagggt gcaccatttt gaagggcaat     1080
          ctgcttatta acatccggcg aggcaataac attgcctcgg aattggagaa cttcatgggg     1140
          ctcatcgagg tggtgactgg ctacgtgaag atccgccatt cccatgcctt ggtctccttg     1200
          tccttcctga agaaccttcg tctcatctta ggagaggagc agctagaagg gaactactcc     1260
          ttctatgtcc tggacaacca gaacttgcag cagctgtggg actggaacca ccggaacctg     1320
          accgtcaggt cagggaaaat gtacttcgct ttcaatccca agctgtgtgt ctctgaaatt     1380
          taccggatgg aggaggtgac aggaacaaag ggacggcaga gcaaaggaga cataaacacc     1440
          aggaacaacg gagagcgagc ttcctgtgaa agtgatgttc tccgtttcac ctccaccacc     1500
          acctggaaga accgcatcat cataacgtgg caccggtacc ggccgccgga ctaccgggat     1560
          ctcatcagtt tcacagtcta ctacaaggag gcacccttta aaaacgtcac ggaatacgac     1620
          gggcaggatg cctgtggctc caacagctgg aacatggtgg acgtggacct gcctccgaac     1680
          aaggaggggg agcctggcat tttgctgcat gggctgaagc cctggaccca gtatgcagtc     1740
          tatgtcaagg ctgtgaccct caccatggtg gaaaacgacc acatccgtgg ggccaaaagt     1800
          gaaatcttgt acattcgcac caacgcttca gttccttcca ttcctctaga tgtcctctcg     1860
          gcatcaaact cctcctctca gctgatcgtg aagtggaacc ccccaactct gcccaatggt     1920
          aacttgagtt actacattgt gaggtggcag cggcagccgc aggatggcta tctgttccgg     1980
          cacaactact gctccaaaga caaaataccc atcagaaagt acgccgatgg taccatcgat     2040
          gtggaggagg tgacagaaaa tcccaagaca gaagtgtgcg gtggtgataa agggccgtgc     2100
          tgtgcctgtc ctaaaaccga agctgagaag caggctgaga aggaggaggc tgagtaccgt     2160
          aaagtctttg agaatttcct tcacaactcc atctttgtgc ccagacctga gaggaggcgg     2220
          agagatgtcc tgcaggtggc taacaccacc atgtccagcc gaagcaggaa caccacggta     2280
          gctgacacct acaatatcac agacccggaa gagttcgaga cagaataccc tttctttgag     2340
          agcagagtgg ataacaagga gaggactgtc atttccaacc tccggccttt cactctgtac     2400
          cgtatcgata tccacagctg caaccacgag gctgagaagc tgggctgcag cgcctccaac     2460
          tttgtctttg caagaaccat gccagcagaa ggagcagatg acattcctgg cccagtgacc     2520
          tgggagccaa gacctgaaaa ctccatcttt ttaaagtggc cagaacccga gaaccccaac     2580
          ggattgattc taatgtatga aataaaatac ggatcgcaag tcgaggatca gcgggaatgt     2640
          gtgtccagac aggagtacag gaagtatgga ggggccaaac ttaaccgtct aaacccaggg     2700
          aactatacgg cccggattca ggctacctcc ctctctggga atgggtcgtg gacagatcct     2760
          gtgttcttct atgtcccagc caaaacaacg tatgagaatt tcatgtgtct gatcattgct     2820
          ctgccggttg ccatcctgct gattgtgggg ggcctggtaa tcatgctgta tgtcttccat     2880
          agaaagagga ataacagcag attgggcaac ggggtgctgt acgcctctgt gaaccccgag     2940
          tatttcagcg cagctgatgt gtacgtgcct gatgaatggg aggtagctcg ggagaagatc     3000
          accatgaacc gggagctcgg acaagggtcc ttcgggatgg tctatgaagg agtggccaag     3060
          ggcgtggtca aggacgagcc tgaaaccaga gtggccatca agacagtgaa tgaggctgca     3120
          agtatgcgtg agagaattga gtttctcaac gaggcctcag tgatgaagga gttcaactgt     3180
          caccatgtgg tccggttgct gggtgtagta tcccaaggcc agcccaccct ggtcatcatg     3240
          gaactaatga cacgtggcga tctcaaaagt tatctccggt ctctaaggcc agaggtggag     3300
          aataatctag tcctgattcc tccgagctta agcaagatga tccagatggc tggagagatt     3360
          gcagatggca tggcctacct caatgccaac aagttcgtcc acagagacct ggctgctcgg     3420
          aactgcatgg tagctgaaga tttcacagtc aaaattggag attttggtat gacacgagac     3480
          atctacgaga cggactacta ccggaaaggc gggaagggct tgctgcctgt gcgctggatg     3540
          tctcccgagt ccctcaagga tggcgtcttc accactcatt ccgatgtctg gtcctttggg     3600
          gtcgtcctct gggagatcgc cactctggct gagcagccgt accagggcct gtccaacgag     3660
          caagttcttc gtttcgtcat ggagggcggc cttctggaca agccggataa ctgccccgat     3720
          atgctgtttg aacttatgcg catgtgctgg cagtacaacc ccaagatgcg gccctccttc     3780
          ctggagatca tcggaagcat caaggatgag atggagccca gtttccagga ggtctccttc     3840
          tactacagcg aggagaacaa gcctccagag ccggaggagc tggagatgga gctggagctg     3900
          gagcccgaga acatggagag cgtcccgctg gacccttcgg cctcctcagc ctccctgcct     3960
          ctgcctgaaa gacactcagg acacaaggct gagaacggcc ctggcgtgct ggttctccgt     4020
          gccagttttg atgagagaca gccttacgct cacatgaatg ggggacgcgc caacgagagg     4080
          gccttgcctc tgccccagtc ctcaacctgc tga                                  4113
          <![CDATA[<210>  12]]>
          <![CDATA[<211>  1370]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  褐鼠IGFR1 H906C突變體]]>
          <![CDATA[<400>  12]]>
          Met Lys Ser Gly Ser Gly Gly Gly Ser Pro Thr Ser Leu Trp Gly Leu 
          1               5                   10                  15      
          Val Phe Leu Ser Ala Ala Leu Ser Leu Trp Pro Thr Ser Gly Glu Ile 
                      20                  25                  30          
          Cys Gly Pro Gly Ile Asp Ile Arg Asn Asp Tyr Gln Gln Leu Lys Arg 
                  35                  40                  45              
          Leu Glu Asn Cys Thr Val Ile Glu Gly Phe Leu His Ile Leu Leu Ile 
              50                  55                  60                  
          Ser Lys Ala Glu Asp Tyr Arg Ser Tyr Arg Phe Pro Lys Leu Thr Val 
          65                  70                  75                  80  
          Ile Thr Glu Tyr Leu Leu Leu Phe Arg Val Ala Gly Leu Glu Ser Leu 
                          85                  90                  95      
          Gly Asp Leu Phe Pro Asn Leu Thr Val Ile Arg Gly Trp Lys Leu Phe 
                      100                 105                 110         
          Tyr Asn Tyr Ala Leu Val Ile Phe Glu Met Thr Asn Leu Lys Asp Ile 
                  115                 120                 125             
          Gly Leu Tyr Asn Leu Arg Asn Ile Thr Arg Gly Ala Ile Arg Ile Glu 
              130                 135                 140                 
          Lys Asn Ala Asp Leu Cys Tyr Leu Ser Thr Ile Asp Trp Ser Leu Ile 
          145                 150                 155                 160 
          Leu Asp Ala Val Ser Asn Asn Tyr Ile Val Gly Asn Lys Pro Pro Lys 
                          165                 170                 175     
          Glu Cys Gly Asp Leu Cys Pro Gly Thr Leu Glu Glu Lys Pro Met Cys 
                      180                 185                 190         
          Glu Lys Thr Thr Ile Asn Asn Glu Tyr Asn Tyr Arg Cys Trp Thr Thr 
                  195                 200                 205             
          Asn Arg Cys Gln Lys Met Cys Pro Ser Val Cys Gly Lys Arg Ala Cys 
              210                 215                 220                 
          Thr Glu Asn Asn Glu Cys Cys His Pro Glu Cys Leu Gly Ser Cys His 
          225                 230                 235                 240 
          Thr Pro Asp Asp Asn Thr Thr Cys Val Ala Cys Arg His Tyr Tyr Tyr 
                          245                 250                 255     
          Lys Gly Val Cys Val Pro Ala Cys Pro Pro Gly Thr Tyr Arg Phe Glu 
                      260                 265                 270         
          Gly Trp Arg Cys Val Asp Arg Asp Phe Cys Ala Asn Ile Pro Asn Ala 
                  275                 280                 285             
          Glu Ser Ser Asp Ser Asp Gly Phe Val Ile His Asp Gly Glu Cys Met 
              290                 295                 300                 
          Gln Glu Cys Pro Ser Gly Phe Ile Arg Asn Ser Thr Gln Ser Met Tyr 
          305                 310                 315                 320 
          Cys Ile Pro Cys Glu Gly Pro Cys Pro Lys Val Cys Gly Asp Glu Glu 
                          325                 330                 335     
          Lys Lys Thr Lys Thr Ile Asp Ser Val Thr Ser Ala Gln Met Leu Gln 
                      340                 345                 350         
          Gly Cys Thr Ile Leu Lys Gly Asn Leu Leu Ile Asn Ile Arg Arg Gly 
                  355                 360                 365             
          Asn Asn Ile Ala Ser Glu Leu Glu Asn Phe Met Gly Leu Ile Glu Val 
              370                 375                 380                 
          Val Thr Gly Tyr Val Lys Ile Arg His Ser His Ala Leu Val Ser Leu 
          385                 390                 395                 400 
          Ser Phe Leu Lys Asn Leu Arg Leu Ile Leu Gly Glu Glu Gln Leu Glu 
                          405                 410                 415     
          Gly Asn Tyr Ser Phe Tyr Val Leu Asp Asn Gln Asn Leu Gln Gln Leu 
                      420                 425                 430         
          Trp Asp Trp Asn His Arg Asn Leu Thr Val Arg Ser Gly Lys Met Tyr 
                  435                 440                 445             
          Phe Ala Phe Asn Pro Lys Leu Cys Val Ser Glu Ile Tyr Arg Met Glu 
              450                 455                 460                 
          Glu Val Thr Gly Thr Lys Gly Arg Gln Ser Lys Gly Asp Ile Asn Thr 
          465                 470                 475                 480 
          Arg Asn Asn Gly Glu Arg Ala Ser Cys Glu Ser Asp Val Leu Arg Phe 
                          485                 490                 495     
          Thr Ser Thr Thr Thr Trp Lys Asn Arg Ile Ile Ile Thr Trp His Arg 
                      500                 505                 510         
          Tyr Arg Pro Pro Asp Tyr Arg Asp Leu Ile Ser Phe Thr Val Tyr Tyr 
                  515                 520                 525             
          Lys Glu Ala Pro Phe Lys Asn Val Thr Glu Tyr Asp Gly Gln Asp Ala 
              530                 535                 540                 
          Cys Gly Ser Asn Ser Trp Asn Met Val Asp Val Asp Leu Pro Pro Asn 
          545                 550                 555                 560 
          Lys Glu Gly Glu Pro Gly Ile Leu Leu His Gly Leu Lys Pro Trp Thr 
                          565                 570                 575     
          Gln Tyr Ala Val Tyr Val Lys Ala Val Thr Leu Thr Met Val Glu Asn 
                      580                 585                 590         
          Asp His Ile Arg Gly Ala Lys Ser Glu Ile Leu Tyr Ile Arg Thr Asn 
                  595                 600                 605             
          Ala Ser Val Pro Ser Ile Pro Leu Asp Val Leu Ser Ala Ser Asn Ser 
              610                 615                 620                 
          Ser Ser Gln Leu Ile Val Lys Trp Asn Pro Pro Thr Leu Pro Asn Gly 
          625                 630                 635                 640 
          Asn Leu Ser Tyr Tyr Ile Val Arg Trp Gln Arg Gln Pro Gln Asp Gly 
                          645                 650                 655     
          Tyr Leu Phe Arg His Asn Tyr Cys Ser Lys Asp Lys Ile Pro Ile Arg 
                      660                 665                 670         
          Lys Tyr Ala Asp Gly Thr Ile Asp Val Glu Glu Val Thr Glu Asn Pro 
                  675                 680                 685             
          Lys Thr Glu Val Cys Gly Gly Asp Lys Gly Pro Cys Cys Ala Cys Pro 
              690                 695                 700                 
          Lys Thr Glu Ala Glu Lys Gln Ala Glu Lys Glu Glu Ala Glu Tyr Arg 
          705                 710                 715                 720 
          Lys Val Phe Glu Asn Phe Leu His Asn Ser Ile Phe Val Pro Arg Pro 
                          725                 730                 735     
          Glu Arg Arg Arg Arg Asp Val Leu Gln Val Ala Asn Thr Thr Met Ser 
                      740                 745                 750         
          Ser Arg Ser Arg Asn Thr Thr Val Ala Asp Thr Tyr Asn Ile Thr Asp 
                  755                 760                 765             
          Pro Glu Glu Phe Glu Thr Glu Tyr Pro Phe Phe Glu Ser Arg Val Asp 
              770                 775                 780                 
          Asn Lys Glu Arg Thr Val Ile Ser Asn Leu Arg Pro Phe Thr Leu Tyr 
          785                 790                 795                 800 
          Arg Ile Asp Ile His Ser Cys Asn His Glu Ala Glu Lys Leu Gly Cys 
                          805                 810                 815     
          Ser Ala Ser Asn Phe Val Phe Ala Arg Thr Met Pro Ala Glu Gly Ala 
                      820                 825                 830         
          Asp Asp Ile Pro Gly Pro Val Thr Trp Glu Pro Arg Pro Glu Asn Ser 
                  835                 840                 845             
          Ile Phe Leu Lys Trp Pro Glu Pro Glu Asn Pro Asn Gly Leu Ile Leu 
              850                 855                 860                 
          Met Tyr Glu Ile Lys Tyr Gly Ser Gln Val Glu Asp Gln Arg Glu Cys 
          865                 870                 875                 880 
          Val Ser Arg Gln Glu Tyr Arg Lys Tyr Gly Gly Ala Lys Leu Asn Arg 
                          885                 890                 895     
          Leu Asn Pro Gly Asn Tyr Thr Ala Arg Ile Gln Ala Thr Ser Leu Ser 
                      900                 905                 910         
          Gly Asn Gly Ser Trp Thr Asp Pro Val Phe Phe Tyr Val Pro Ala Lys 
                  915                 920                 925             
          Thr Thr Tyr Glu Asn Phe Met His Leu Ile Ile Ala Leu Pro Val Ala 
              930                 935                 940                 
          Ile Leu Leu Ile Val Gly Gly Leu Val Ile Met Leu Tyr Val Phe His 
          945                 950                 955                 960 
          Arg Lys Arg Asn Asn Ser Arg Leu Gly Asn Gly Val Leu Tyr Ala Ser 
                          965                 970                 975     
          Val Asn Pro Glu Tyr Phe Ser Ala Ala Asp Val Tyr Val Pro Asp Glu 
                      980                 985                 990         
          Trp Glu Val Ala Arg Glu Lys Ile  Thr Met Asn Arg Glu  Leu Gly Gln 
                  995                 1000                 1005             
          Gly Ser  Phe Gly Met Val Tyr  Glu Gly Val Ala Lys  Gly Val Val 
              1010                 1015                 1020             
          Lys Asp  Glu Pro Glu Thr Arg  Val Ala Ile Lys Thr  Val Asn Glu 
              1025                 1030                 1035             
          Ala Ala  Ser Met Arg Glu Arg  Ile Glu Phe Leu Asn  Glu Ala Ser 
              1040                 1045                 1050             
          Val Met  Lys Glu Phe Asn Cys  His His Val Val Arg  Leu Leu Gly 
              1055                 1060                 1065             
          Val Val  Ser Gln Gly Gln Pro  Thr Leu Val Ile Met  Glu Leu Met 
              1070                 1075                 1080             
          Thr Arg  Gly Asp Leu Lys Ser  Tyr Leu Arg Ser Leu  Arg Pro Glu 
              1085                 1090                 1095             
          Val Glu  Asn Asn Leu Val Leu  Ile Pro Pro Ser Leu  Ser Lys Met 
              1100                 1105                 1110             
          Ile Gln  Met Ala Gly Glu Ile  Ala Asp Gly Met Ala  Tyr Leu Asn 
              1115                 1120                 1125             
          Ala Asn  Lys Phe Val His Arg  Asp Leu Ala Ala Arg  Asn Cys Met 
              1130                 1135                 1140             
          Val Ala  Glu Asp Phe Thr Val  Lys Ile Gly Asp Phe  Gly Met Thr 
              1145                 1150                 1155             
          Arg Asp  Ile Tyr Glu Thr Asp  Tyr Tyr Arg Lys Gly  Gly Lys Gly 
              1160                 1165                 1170             
          Leu Leu  Pro Val Arg Trp Met  Ser Pro Glu Ser Leu  Lys Asp Gly 
              1175                 1180                 1185             
          Val Phe  Thr Thr His Ser Asp  Val Trp Ser Phe Gly  Val Val Leu 
              1190                 1195                 1200             
          Trp Glu  Ile Ala Thr Leu Ala  Glu Gln Pro Tyr Gln  Gly Leu Ser 
              1205                 1210                 1215             
          Asn Glu  Gln Val Leu Arg Phe  Val Met Glu Gly Gly  Leu Leu Asp 
              1220                 1225                 1230             
          Lys Pro  Asp Asn Cys Pro Asp  Met Leu Phe Glu Leu  Met Arg Met 
              1235                 1240                 1245             
          Cys Trp  Gln Tyr Asn Pro Lys  Met Arg Pro Ser Phe  Leu Glu Ile 
              1250                 1255                 1260             
          Ile Gly  Ser Ile Lys Asp Glu  Met Glu Pro Ser Phe  Gln Glu Val 
              1265                 1270                 1275             
          Ser Phe  Tyr Tyr Ser Glu Glu  Asn Lys Pro Pro Glu  Pro Glu Glu 
              1280                 1285                 1290             
          Leu Glu  Met Glu Leu Glu Leu  Glu Pro Glu Asn Met  Glu Ser Val 
              1295                 1300                 1305             
          Pro Leu  Asp Pro Ser Ala Ser  Ser Ala Ser Leu Pro  Leu Pro Glu 
              1310                 1315                 1320             
          Arg His  Ser Gly His Lys Ala  Glu Asn Gly Pro Gly  Val Leu Val 
              1325                 1330                 1335             
          Leu Arg  Ala Ser Phe Asp Glu  Arg Gln Pro Tyr Ala  His Met Asn 
              1340                 1345                 1350             
          Gly Gly  Arg Ala Asn Glu Arg  Ala Leu Pro Leu Pro  Gln Ser Ser 
              1355                 1360                 1365             
          Thr Cys  
              1370 
          <![CDATA[<210>  13]]>
          <![CDATA[<211>  3516]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  灰倉鼠IGF1R Del1突變體]]>
          <![CDATA[<400>  13]]>
          atgaagtctg gctccggagg agggtccccg acctcactgt gggggctcgt gtttctctct       60
          gccgcgctct cgctgtggcc gacgagtgga tgccacccag agtgcctagg cagctgccat      120
          acacctgacg acaacacaac ctgtgtggcc tgccgacact actactacaa aggcgtgtgt      180
          gtgcctgcct gcccacctgg cacctacagg ttcgagggct ggcgctgtgt ggaccgcgat      240
          ttctgcgcca acatccccaa cgctgagagc agtgactcag atggctttgt catccacgat      300
          ggcgagtgca tgcaagaatg tccctcaggc ttcatccgca acagcaccca gagcatgtac      360
          tgtatcccct gtgaaggccc ctgcccaaaa gtctgtggcg atgaagaaaa gaaaacaaaa      420
          accatcgact cggttacgtc ggctcagatg ctccaaggat gcaccatctt gaagggcaat      480
          ttacttatta atatccggcg gggcaataac attgcctcag aacttgagaa cttcatgggg      540
          ctcatcgagg tagtgactgg ctatgtgaag atccgccatt cccatgcttt ggtctccttg      600
          tccttcctga agaaccttcg tctaatctta ggagaggagc agctggaagg gaactactcc      660
          ttctatgtcc tggacaacca gaacttgcag cagctgtggg actggaacca ccggaacctg      720
          accgtcaggt cggggaagat gtactttgct ttcaatccca agctgtgtgt ctctgaaatt      780
          taccgcatgg aggaagtaac aggaacaaag ggccgccaga gcaaagggga cataaacacc      840
          aggaacaatg gagagcgagc ttcctgtgaa agcgacgttc tccgtttcac ctccaccacc      900
          acctcaaaga accggatcat cataacatgg caccggtacc ggcccccaga ttacagggat      960
          ctcatcagct tcacggttta ctacaaggag gcacccttta aaaatgttac ggaatatgat     1020
          gggcaggatg cctgtggctc caacagctgg aacatggtgg atgtggacct acctcccaac     1080
          aaggaggggg agcctggcat tttactgcat gggctgaagc cctggaccca gtatgccgtc     1140
          tatgtcaagg ctgtgaccct caccatggtg gaaaacgacc atatccgtgg ggccaaaagt     1200
          gaaatcttgt acattcgcac caatgcttca gttccttcca ttcccctaga tgtactttcg     1260
          gcctcaaact cttcttctca gctgattgtg aagtggaatc ctccaactct gcccaatggt     1320
          aacttgagtt actacattgt aaggtggcag cgacagccac aggatggcta cctgtaccgg     1380
          cacaactact gctccaaaga caaaataccc atcagaaagt atgcggatgg caccattgat     1440
          gtggaagagg tgacagagaa tcccaagaca gaagtgtgtg gtggtgacaa agggccttgc     1500
          tgtgcttgtc ccaaaactga agccgagaag caggccgaga aggaagaggc cgagtaccgc     1560
          aaagtctttg agaatttcct gcacaattcc atcttcgtgc ccagacccga aaggaggcgg     1620
          agagatgtca tgcaagtagc caacaccacc atgtctagcc gaagcaggaa caccacagtg     1680
          gctgacacct acaatatcac agatccagaa gaactcgaga cagagtaccc tttctttgag     1740
          agcagagtag ataacaagga gagaactgtc atctccaacc ttcggccttt cactttgtac     1800
          cgcattgata tccacagctg caaccacgaa gccgagaagc tgggctgcag tgcctccaac     1860
          tttgtctttg cgagaaccat gcctgcagaa ggagcagatg acattcctgg accagtgacc     1920
          tgggagccaa gacctgaaaa ctccatcttt ttaaagtggc cagaacctga gaaccccaac     1980
          ggattgattc taatgtatga aataaagtat ggatcacaag ttgaggatca gcgggaatgt     2040
          gtgtccagac aggaatacag gaagtacgga ggggccaagc ttaaccggct aaacccaggg     2100
          aactatacag cccggattca ggccacgtct ctctctggca atgggtcttg gacagatcct     2160
          gtgttcttct atgtcccagc caagacgaca tatgagaatt tcatgcacct gataattgct     2220
          ctgccggtcg ccatcctgct gattgtgggg ggactggtca tcatgctgta tgtcttccat     2280
          aggaagagaa ataacagcag gttgggcaat ggagtgctgt atgcctctgt gaaccccgag     2340
          tatttcagtg cagcggatgt gtacgtgccc gatgaatggg aggtagctcg agagaagatc     2400
          accatgaacc gggagcttgg acaagggtcc tttgggatgg tctatgaagg agtggccaag     2460
          ggagtggtca aggatgaacc tgaaaccaga gtagccatca agacagtaaa tgaggctgca     2520
          agtatgcgtg aaagaatcga gtttctcaac gaggcttcag tgatgaagga gttcaactgt     2580
          caccatgtgg tccggttgct gggggtggtg tcccaaggcc agcctaccct ggtcatcatg     2640
          gaactaatga cacgtgggga tctcaaaagt tatctccggt ctctaaggcc agaagtggag     2700
          caaaataatc tagtcctaat tcctccgagt ttaagcaaga tgatccagat ggctggagag     2760
          attgcagatg gcatggctta cctcaacgcc aacaagttcg tccacagaga ccttgctgct     2820
          cggaactgca tggtagctga agatttcaca gtcaaaattg gagattttgg tatgacacga     2880
          gatatctacg agacagacta ctaccggaaa ggagggaagg ggctgctgcc tgtgcgctgg     2940
          atgtctcctg agtccctcaa ggacggagtc ttcaccactc actcagatgt ctggtccttt     3000
          ggggtcgtcc tctgggagat tgctacactg gctgagcagc cataccaagg cttgtccaat     3060
          gagcaagttc ttcgcttcgt catggagggc ggccttctgg acaagccgga caattgccct     3120
          gacatgctgt ttgaactcat gcgcatgtgc tggcagtaca accctaagat gaggccctcc     3180
          ttcctggaga tcattggcag catcaaggat gagatggagc ccagctttca ggaggtctcc     3240
          ttctactaca gcgaggagaa caagcctcct gagccagaag agctggagct ggaactggag     3300
          cccgagaaca tggagagcgt accgctggac ccctcggcct cctcagtctc cctgcctctg     3360
          ccagaaagac actcaggaca caaggccgag aatggcccag gccctggagt actggttctc     3420
          cgtgccagtt tcgatgagcg acagccttac gctcacatga acgggggacg agccaacgag     3480
          agggctttgc ctctgcccca gtcttcaacc tgctga                               3516
          <![CDATA[<210>  14]]>
          <![CDATA[<211>  1171]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  灰倉鼠IGF1R Del1突變體]]>
          <![CDATA[<400>  14]]>
          Met Lys Ser Gly Ser Gly Gly Gly Ser Pro Thr Ser Leu Trp Gly Leu 
          1               5                   10                  15      
          Val Phe Leu Ser Ala Ala Leu Ser Leu Trp Pro Thr Ser Gly Cys His 
                      20                  25                  30          
          Pro Glu Cys Leu Gly Ser Cys His Thr Pro Asp Asp Asn Thr Thr Cys 
                  35                  40                  45              
          Val Ala Cys Arg His Tyr Tyr Tyr Lys Gly Val Cys Val Pro Ala Cys 
              50                  55                  60                  
          Pro Pro Gly Thr Tyr Arg Phe Glu Gly Trp Arg Cys Val Asp Arg Asp 
          65                  70                  75                  80  
          Phe Cys Ala Asn Ile Pro Asn Ala Glu Ser Ser Asp Ser Asp Gly Phe 
                          85                  90                  95      
          Val Ile His Asp Gly Glu Cys Met Gln Glu Cys Pro Ser Gly Phe Ile 
                      100                 105                 110         
          Arg Asn Ser Thr Gln Ser Met Tyr Cys Ile Pro Cys Glu Gly Pro Cys 
                  115                 120                 125             
          Pro Lys Val Cys Gly Asp Glu Glu Lys Lys Thr Lys Thr Ile Asp Ser 
              130                 135                 140                 
          Val Thr Ser Ala Gln Met Leu Gln Gly Cys Thr Ile Leu Lys Gly Asn 
          145                 150                 155                 160 
          Leu Leu Ile Asn Ile Arg Arg Gly Asn Asn Ile Ala Ser Glu Leu Glu 
                          165                 170                 175     
          Asn Phe Met Gly Leu Ile Glu Val Val Thr Gly Tyr Val Lys Ile Arg 
                      180                 185                 190         
          His Ser His Ala Leu Val Ser Leu Ser Phe Leu Lys Asn Leu Arg Leu 
                  195                 200                 205             
          Ile Leu Gly Glu Glu Gln Leu Glu Gly Asn Tyr Ser Phe Tyr Val Leu 
              210                 215                 220                 
          Asp Asn Gln Asn Leu Gln Gln Leu Trp Asp Trp Asn His Arg Asn Leu 
          225                 230                 235                 240 
          Thr Val Arg Ser Gly Lys Met Tyr Phe Ala Phe Asn Pro Lys Leu Cys 
                          245                 250                 255     
          Val Ser Glu Ile Tyr Arg Met Glu Glu Val Thr Gly Thr Lys Gly Arg 
                      260                 265                 270         
          Gln Ser Lys Gly Asp Ile Asn Thr Arg Asn Asn Gly Glu Arg Ala Ser 
                  275                 280                 285             
          Cys Glu Ser Asp Val Leu Arg Phe Thr Ser Thr Thr Thr Ser Lys Asn 
              290                 295                 300                 
          Arg Ile Ile Ile Thr Trp His Arg Tyr Arg Pro Pro Asp Tyr Arg Asp 
          305                 310                 315                 320 
          Leu Ile Ser Phe Thr Val Tyr Tyr Lys Glu Ala Pro Phe Lys Asn Val 
                          325                 330                 335     
          Thr Glu Tyr Asp Gly Gln Asp Ala Cys Gly Ser Asn Ser Trp Asn Met 
                      340                 345                 350         
          Val Asp Val Asp Leu Pro Pro Asn Lys Glu Gly Glu Pro Gly Ile Leu 
                  355                 360                 365             
          Leu His Gly Leu Lys Pro Trp Thr Gln Tyr Ala Val Tyr Val Lys Ala 
              370                 375                 380                 
          Val Thr Leu Thr Met Val Glu Asn Asp His Ile Arg Gly Ala Lys Ser 
          385                 390                 395                 400 
          Glu Ile Leu Tyr Ile Arg Thr Asn Ala Ser Val Pro Ser Ile Pro Leu 
                          405                 410                 415     
          Asp Val Leu Ser Ala Ser Asn Ser Ser Ser Gln Leu Ile Val Lys Trp 
                      420                 425                 430         
          Asn Pro Pro Thr Leu Pro Asn Gly Asn Leu Ser Tyr Tyr Ile Val Arg 
                  435                 440                 445             
          Trp Gln Arg Gln Pro Gln Asp Gly Tyr Leu Tyr Arg His Asn Tyr Cys 
              450                 455                 460                 
          Ser Lys Asp Lys Ile Pro Ile Arg Lys Tyr Ala Asp Gly Thr Ile Asp 
          465                 470                 475                 480 
          Val Glu Glu Val Thr Glu Asn Pro Lys Thr Glu Val Cys Gly Gly Asp 
                          485                 490                 495     
          Lys Gly Pro Cys Cys Ala Cys Pro Lys Thr Glu Ala Glu Lys Gln Ala 
                      500                 505                 510         
          Glu Lys Glu Glu Ala Glu Tyr Arg Lys Val Phe Glu Asn Phe Leu His 
                  515                 520                 525             
          Asn Ser Ile Phe Val Pro Arg Pro Glu Arg Arg Arg Arg Asp Val Met 
              530                 535                 540                 
          Gln Val Ala Asn Thr Thr Met Ser Ser Arg Ser Arg Asn Thr Thr Val 
          545                 550                 555                 560 
          Ala Asp Thr Tyr Asn Ile Thr Asp Pro Glu Glu Leu Glu Thr Glu Tyr 
                          565                 570                 575     
          Pro Phe Phe Glu Ser Arg Val Asp Asn Lys Glu Arg Thr Val Ile Ser 
                      580                 585                 590         
          Asn Leu Arg Pro Phe Thr Leu Tyr Arg Ile Asp Ile His Ser Cys Asn 
                  595                 600                 605             
          His Glu Ala Glu Lys Leu Gly Cys Ser Ala Ser Asn Phe Val Phe Ala 
              610                 615                 620                 
          Arg Thr Met Pro Ala Glu Gly Ala Asp Asp Ile Pro Gly Pro Val Thr 
          625                 630                 635                 640 
          Trp Glu Pro Arg Pro Glu Asn Ser Ile Phe Leu Lys Trp Pro Glu Pro 
                          645                 650                 655     
          Glu Asn Pro Asn Gly Leu Ile Leu Met Tyr Glu Ile Lys Tyr Gly Ser 
                      660                 665                 670         
          Gln Val Glu Asp Gln Arg Glu Cys Val Ser Arg Gln Glu Tyr Arg Lys 
                  675                 680                 685             
          Tyr Gly Gly Ala Lys Leu Asn Arg Leu Asn Pro Gly Asn Tyr Thr Ala 
              690                 695                 700                 
          Arg Ile Gln Ala Thr Ser Leu Ser Gly Asn Gly Ser Trp Thr Asp Pro 
          705                 710                 715                 720 
          Val Phe Phe Tyr Val Pro Ala Lys Thr Thr Tyr Glu Asn Phe Met His 
                          725                 730                 735     
          Leu Ile Ile Ala Leu Pro Val Ala Ile Leu Leu Ile Val Gly Gly Leu 
                      740                 745                 750         
          Val Ile Met Leu Tyr Val Phe His Arg Lys Arg Asn Asn Ser Arg Leu 
                  755                 760                 765             
          Gly Asn Gly Val Leu Tyr Ala Ser Val Asn Pro Glu Tyr Phe Ser Ala 
              770                 775                 780                 
          Ala Asp Val Tyr Val Pro Asp Glu Trp Glu Val Ala Arg Glu Lys Ile 
          785                 790                 795                 800 
          Thr Met Asn Arg Glu Leu Gly Gln Gly Ser Phe Gly Met Val Tyr Glu 
                          805                 810                 815     
          Gly Val Ala Lys Gly Val Val Lys Asp Glu Pro Glu Thr Arg Val Ala 
                      820                 825                 830         
          Ile Lys Thr Val Asn Glu Ala Ala Ser Met Arg Glu Arg Ile Glu Phe 
                  835                 840                 845             
          Leu Asn Glu Ala Ser Val Met Lys Glu Phe Asn Cys His His Val Val 
              850                 855                 860                 
          Arg Leu Leu Gly Val Val Ser Gln Gly Gln Pro Thr Leu Val Ile Met 
          865                 870                 875                 880 
          Glu Leu Met Thr Arg Gly Asp Leu Lys Ser Tyr Leu Arg Ser Leu Arg 
                          885                 890                 895     
          Pro Glu Val Glu Gln Asn Asn Leu Val Leu Ile Pro Pro Ser Leu Ser 
                      900                 905                 910         
          Lys Met Ile Gln Met Ala Gly Glu Ile Ala Asp Gly Met Ala Tyr Leu 
                  915                 920                 925             
          Asn Ala Asn Lys Phe Val His Arg Asp Leu Ala Ala Arg Asn Cys Met 
              930                 935                 940                 
          Val Ala Glu Asp Phe Thr Val Lys Ile Gly Asp Phe Gly Met Thr Arg 
          945                 950                 955                 960 
          Asp Ile Tyr Glu Thr Asp Tyr Tyr Arg Lys Gly Gly Lys Gly Leu Leu 
                          965                 970                 975     
          Pro Val Arg Trp Met Ser Pro Glu Ser Leu Lys Asp Gly Val Phe Thr 
                      980                 985                 990         
          Thr His Ser Asp Val Trp Ser Phe  Gly Val Val Leu Trp  Glu Ile Ala 
                  995                 1000                 1005             
          Thr Leu  Ala Glu Gln Pro Tyr  Gln Gly Leu Ser Asn  Glu Gln Val 
              1010                 1015                 1020             
          Leu Arg  Phe Val Met Glu Gly  Gly Leu Leu Asp Lys  Pro Asp Asn 
              1025                 1030                 1035             
          Cys Pro  Asp Met Leu Phe Glu  Leu Met Arg Met Cys  Trp Gln Tyr 
              1040                 1045                 1050             
          Asn Pro  Lys Met Arg Pro Ser  Phe Leu Glu Ile Ile  Gly Ser Ile 
              1055                 1060                 1065             
          Lys Asp  Glu Met Glu Pro Ser  Phe Gln Glu Val Ser  Phe Tyr Tyr 
              1070                 1075                 1080             
          Ser Glu  Glu Asn Lys Pro Pro  Glu Pro Glu Glu Leu  Glu Leu Glu 
              1085                 1090                 1095             
          Leu Glu  Pro Glu Asn Met Glu  Ser Val Pro Leu Asp  Pro Ser Ala 
              1100                 1105                 1110             
          Ser Ser  Val Ser Leu Pro Leu  Pro Glu Arg His Ser  Gly His Lys 
              1115                 1120                 1125             
          Ala Glu  Asn Gly Pro Gly Pro  Gly Val Leu Val Leu  Arg Ala Ser 
              1130                 1135                 1140             
          Phe Asp  Glu Arg Gln Pro Tyr  Ala His Met Asn Gly  Gly Arg Ala 
              1145                 1150                 1155             
          Asn Glu  Arg Ala Leu Pro Leu  Pro Gln Ser Ser Thr  Cys 
              1160                 1165                 1170     
          <![CDATA[<210>  15]]>
          <![CDATA[<211>  4116]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  灰倉鼠IGF1R H906C突變體]]>
          <![CDATA[<400>  15]]>
          atgaagtctg gctccggagg agggtccccg acctcactgt gggggctcgt gtttctctct       60
          gccgcgctct cgctgtggcc gacgagtgga gaaatttgtg ggcccggcat tgacatccgc      120
          aatgactacc agcagctgaa gcgcctggaa aactgcacag tgattgaggg cttcctccac      180
          atcctgctca tctccaaggc cgaggactac cgaagctacc gcttccccaa gctcacggtc      240
          atcactgagt acttgctgct gtttcgagtg gccggcctcg agagcctggg agacctcttc      300
          cccaacctta cggttatccg tggctggaaa ctcttctaca actacgcact ggtcatcttt      360
          gagatgacca atctcaagga tattggactt tataatctga gaaacattac acggggggcc      420
          atcaggattg agaagaacgc agacctctgt tacctctcca ccatagactg gtctctcatc      480
          ttggatgcag tgtctaataa ctacattgtg ggcaacaagc ccccaaagga atgtggggac      540
          ctgtgtccag ggaccttgga ggagaagccc atgtgtgaga agaccaccat caacaatgag      600
          tacaactacc gctgctggac cacaaatcaa tgccagaaaa tgtgcccaag tgtgtgcgga      660
          aagcgagcgt gcaccgagaa caacgaatgc tgccacccag agtgcctagg cagctgccat      720
          acacctgacg acaacacaac ctgtgtggcc tgccgacact actactacaa aggcgtgtgt      780
          gtgcctgcct gcccacctgg cacctacagg ttcgagggct ggcgctgtgt ggaccgcgat      840
          ttctgcgcca acatccccaa cgctgagagc agtgactcag atggctttgt catccacgat      900
          ggcgagtgca tgcaagaatg tccctcaggc ttcatccgca acagcaccca gagcatgtac      960
          tgtatcccct gtgaaggccc ctgcccaaaa gtctgtggcg atgaagaaaa gaaaacaaaa     1020
          accatcgact cggttacgtc ggctcagatg ctccaaggat gcaccatctt gaagggcaat     1080
          ttacttatta atatccggcg gggcaataac attgcctcag aacttgagaa cttcatgggg     1140
          ctcatcgagg tagtgactgg ctatgtgaag atccgccatt cccatgcttt ggtctccttg     1200
          tccttcctga agaaccttcg tctaatctta ggagaggagc agctggaagg gaactactcc     1260
          ttctatgtcc tggacaacca gaacttgcag cagctgtggg actggaacca ccggaacctg     1320
          accgtcaggt cggggaagat gtactttgct ttcaatccca agctgtgtgt ctctgaaatt     1380
          taccgcatgg aggaagtaac aggaacaaag ggccgccaga gcaaagggga cataaacacc     1440
          aggaacaatg gagagcgagc ttcctgtgaa agcgacgttc tccgtttcac ctccaccacc     1500
          acctcaaaga accggatcat cataacatgg caccggtacc ggcccccaga ttacagggat     1560
          ctcatcagct tcacggttta ctacaaggag gcacccttta aaaatgttac ggaatatgat     1620
          gggcaggatg cctgtggctc caacagctgg aacatggtgg atgtggacct acctcccaac     1680
          aaggaggggg agcctggcat tttactgcat gggctgaagc cctggaccca gtatgccgtc     1740
          tatgtcaagg ctgtgaccct caccatggtg gaaaacgacc atatccgtgg ggccaaaagt     1800
          gaaatcttgt acattcgcac caatgcttca gttccttcca ttcccctaga tgtactttcg     1860
          gcctcaaact cttcttctca gctgattgtg aagtggaatc ctccaactct gcccaatggt     1920
          aacttgagtt actacattgt aaggtggcag cgacagccac aggatggcta cctgtaccgg     1980
          cacaactact gctccaaaga caaaataccc atcagaaagt atgcggatgg caccattgat     2040
          gtggaagagg tgacagagaa tcccaagaca gaagtgtgtg gtggtgacaa agggccttgc     2100
          tgtgcttgtc ccaaaactga agccgagaag caggccgaga aggaagaggc cgagtaccgc     2160
          aaagtctttg agaatttcct gcacaattcc atcttcgtgc ccagacccga aaggaggcgg     2220
          agagatgtca tgcaagtagc caacaccacc atgtctagcc gaagcaggaa caccacagtg     2280
          gctgacacct acaatatcac agatccagaa gaactcgaga cagagtaccc tttctttgag     2340
          agcagagtag ataacaagga gagaactgtc atctccaacc ttcggccttt cactttgtac     2400
          cgcattgata tccacagctg caaccacgaa gccgagaagc tgggctgcag tgcctccaac     2460
          tttgtctttg cgagaaccat gcctgcagaa ggagcagatg acattcctgg accagtgacc     2520
          tgggagccaa gacctgaaaa ctccatcttt ttaaagtggc cagaacctga gaaccccaac     2580
          ggattgattc taatgtatga aataaagtat ggatcacaag ttgaggatca gcgggaatgt     2640
          gtgtccagac aggaatacag gaagtacgga ggggccaagc ttaaccggct aaacccaggg     2700
          aactatacag cccggattca ggccacgtct ctctctggca atgggtcttg gacagatcct     2760
          gtgttcttct atgtcccagc caagacgaca tatgagaatt tcatgtgtct gataattgct     2820
          ctgccggtcg ccatcctgct gattgtgggg ggactggtca tcatgctgta tgtcttccat     2880
          aggaagagaa ataacagcag gttgggcaat ggagtgctgt atgcctctgt gaaccccgag     2940
          tatttcagtg cagcggatgt gtacgtgccc gatgaatggg aggtagctcg agagaagatc     3000
          accatgaacc gggagcttgg acaagggtcc tttgggatgg tctatgaagg agtggccaag     3060
          ggagtggtca aggatgaacc tgaaaccaga gtagccatca agacagtaaa tgaggctgca     3120
          agtatgcgtg aaagaatcga gtttctcaac gaggcttcag tgatgaagga gttcaactgt     3180
          caccatgtgg tccggttgct gggggtggtg tcccaaggcc agcctaccct ggtcatcatg     3240
          gaactaatga cacgtgggga tctcaaaagt tatctccggt ctctaaggcc agaagtggag     3300
          caaaataatc tagtcctaat tcctccgagt ttaagcaaga tgatccagat ggctggagag     3360
          attgcagatg gcatggctta cctcaacgcc aacaagttcg tccacagaga ccttgctgct     3420
          cggaactgca tggtagctga agatttcaca gtcaaaattg gagattttgg tatgacacga     3480
          gatatctacg agacagacta ctaccggaaa ggagggaagg ggctgctgcc tgtgcgctgg     3540
          atgtctcctg agtccctcaa ggacggagtc ttcaccactc actcagatgt ctggtccttt     3600
          ggggtcgtcc tctgggagat tgctacactg gctgagcagc cataccaagg cttgtccaat     3660
          gagcaagttc ttcgcttcgt catggagggc ggccttctgg acaagccgga caattgccct     3720
          gacatgctgt ttgaactcat gcgcatgtgc tggcagtaca accctaagat gaggccctcc     3780
          ttcctggaga tcattggcag catcaaggat gagatggagc ccagctttca ggaggtctcc     3840
          ttctactaca gcgaggagaa caagcctcct gagccagaag agctggagct ggaactggag     3900
          cccgagaaca tggagagcgt accgctggac ccctcggcct cctcagtctc cctgcctctg     3960
          ccagaaagac actcaggaca caaggccgag aatggcccag gccctggagt actggttctc     4020
          cgtgccagtt tcgatgagcg acagccttac gctcacatga acgggggacg agccaacgag     4080
          agggctttgc ctctgcccca gtcttcaacc tgctga                               4116
          <![CDATA[<210>  16]]>
          <![CDATA[<211>  1371]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  灰倉鼠IGF1R H906C突變體]]>
          <![CDATA[<400>  16]]>
          Met Lys Ser Gly Ser Gly Gly Gly Ser Pro Thr Ser Leu Trp Gly Leu 
          1               5                   10                  15      
          Val Phe Leu Ser Ala Ala Leu Ser Leu Trp Pro Thr Ser Gly Glu Ile 
                      20                  25                  30          
          Cys Gly Pro Gly Ile Asp Ile Arg Asn Asp Tyr Gln Gln Leu Lys Arg 
                  35                  40                  45              
          Leu Glu Asn Cys Thr Val Ile Glu Gly Phe Leu His Ile Leu Leu Ile 
              50                  55                  60                  
          Ser Lys Ala Glu Asp Tyr Arg Ser Tyr Arg Phe Pro Lys Leu Thr Val 
          65                  70                  75                  80  
          Ile Thr Glu Tyr Leu Leu Leu Phe Arg Val Ala Gly Leu Glu Ser Leu 
                          85                  90                  95      
          Gly Asp Leu Phe Pro Asn Leu Thr Val Ile Arg Gly Trp Lys Leu Phe 
                      100                 105                 110         
          Tyr Asn Tyr Ala Leu Val Ile Phe Glu Met Thr Asn Leu Lys Asp Ile 
                  115                 120                 125             
          Gly Leu Tyr Asn Leu Arg Asn Ile Thr Arg Gly Ala Ile Arg Ile Glu 
              130                 135                 140                 
          Lys Asn Ala Asp Leu Cys Tyr Leu Ser Thr Ile Asp Trp Ser Leu Ile 
          145                 150                 155                 160 
          Leu Asp Ala Val Ser Asn Asn Tyr Ile Val Gly Asn Lys Pro Pro Lys 
                          165                 170                 175     
          Glu Cys Gly Asp Leu Cys Pro Gly Thr Leu Glu Glu Lys Pro Met Cys 
                      180                 185                 190         
          Glu Lys Thr Thr Ile Asn Asn Glu Tyr Asn Tyr Arg Cys Trp Thr Thr 
                  195                 200                 205             
          Asn Gln Cys Gln Lys Met Cys Pro Ser Val Cys Gly Lys Arg Ala Cys 
              210                 215                 220                 
          Thr Glu Asn Asn Glu Cys Cys His Pro Glu Cys Leu Gly Ser Cys His 
          225                 230                 235                 240 
          Thr Pro Asp Asp Asn Thr Thr Cys Val Ala Cys Arg His Tyr Tyr Tyr 
                          245                 250                 255     
          Lys Gly Val Cys Val Pro Ala Cys Pro Pro Gly Thr Tyr Arg Phe Glu 
                      260                 265                 270         
          Gly Trp Arg Cys Val Asp Arg Asp Phe Cys Ala Asn Ile Pro Asn Ala 
                  275                 280                 285             
          Glu Ser Ser Asp Ser Asp Gly Phe Val Ile His Asp Gly Glu Cys Met 
              290                 295                 300                 
          Gln Glu Cys Pro Ser Gly Phe Ile Arg Asn Ser Thr Gln Ser Met Tyr 
          305                 310                 315                 320 
          Cys Ile Pro Cys Glu Gly Pro Cys Pro Lys Val Cys Gly Asp Glu Glu 
                          325                 330                 335     
          Lys Lys Thr Lys Thr Ile Asp Ser Val Thr Ser Ala Gln Met Leu Gln 
                      340                 345                 350         
          Gly Cys Thr Ile Leu Lys Gly Asn Leu Leu Ile Asn Ile Arg Arg Gly 
                  355                 360                 365             
          Asn Asn Ile Ala Ser Glu Leu Glu Asn Phe Met Gly Leu Ile Glu Val 
              370                 375                 380                 
          Val Thr Gly Tyr Val Lys Ile Arg His Ser His Ala Leu Val Ser Leu 
          385                 390                 395                 400 
          Ser Phe Leu Lys Asn Leu Arg Leu Ile Leu Gly Glu Glu Gln Leu Glu 
                          405                 410                 415     
          Gly Asn Tyr Ser Phe Tyr Val Leu Asp Asn Gln Asn Leu Gln Gln Leu 
                      420                 425                 430         
          Trp Asp Trp Asn His Arg Asn Leu Thr Val Arg Ser Gly Lys Met Tyr 
                  435                 440                 445             
          Phe Ala Phe Asn Pro Lys Leu Cys Val Ser Glu Ile Tyr Arg Met Glu 
              450                 455                 460                 
          Glu Val Thr Gly Thr Lys Gly Arg Gln Ser Lys Gly Asp Ile Asn Thr 
          465                 470                 475                 480 
          Arg Asn Asn Gly Glu Arg Ala Ser Cys Glu Ser Asp Val Leu Arg Phe 
                          485                 490                 495     
          Thr Ser Thr Thr Thr Ser Lys Asn Arg Ile Ile Ile Thr Trp His Arg 
                      500                 505                 510         
          Tyr Arg Pro Pro Asp Tyr Arg Asp Leu Ile Ser Phe Thr Val Tyr Tyr 
                  515                 520                 525             
          Lys Glu Ala Pro Phe Lys Asn Val Thr Glu Tyr Asp Gly Gln Asp Ala 
              530                 535                 540                 
          Cys Gly Ser Asn Ser Trp Asn Met Val Asp Val Asp Leu Pro Pro Asn 
          545                 550                 555                 560 
          Lys Glu Gly Glu Pro Gly Ile Leu Leu His Gly Leu Lys Pro Trp Thr 
                          565                 570                 575     
          Gln Tyr Ala Val Tyr Val Lys Ala Val Thr Leu Thr Met Val Glu Asn 
                      580                 585                 590         
          Asp His Ile Arg Gly Ala Lys Ser Glu Ile Leu Tyr Ile Arg Thr Asn 
                  595                 600                 605             
          Ala Ser Val Pro Ser Ile Pro Leu Asp Val Leu Ser Ala Ser Asn Ser 
              610                 615                 620                 
          Ser Ser Gln Leu Ile Val Lys Trp Asn Pro Pro Thr Leu Pro Asn Gly 
          625                 630                 635                 640 
          Asn Leu Ser Tyr Tyr Ile Val Arg Trp Gln Arg Gln Pro Gln Asp Gly 
                          645                 650                 655     
          Tyr Leu Tyr Arg His Asn Tyr Cys Ser Lys Asp Lys Ile Pro Ile Arg 
                      660                 665                 670         
          Lys Tyr Ala Asp Gly Thr Ile Asp Val Glu Glu Val Thr Glu Asn Pro 
                  675                 680                 685             
          Lys Thr Glu Val Cys Gly Gly Asp Lys Gly Pro Cys Cys Ala Cys Pro 
              690                 695                 700                 
          Lys Thr Glu Ala Glu Lys Gln Ala Glu Lys Glu Glu Ala Glu Tyr Arg 
          705                 710                 715                 720 
          Lys Val Phe Glu Asn Phe Leu His Asn Ser Ile Phe Val Pro Arg Pro 
                          725                 730                 735     
          Glu Arg Arg Arg Arg Asp Val Met Gln Val Ala Asn Thr Thr Met Ser 
                      740                 745                 750         
          Ser Arg Ser Arg Asn Thr Thr Val Ala Asp Thr Tyr Asn Ile Thr Asp 
                  755                 760                 765             
          Pro Glu Glu Leu Glu Thr Glu Tyr Pro Phe Phe Glu Ser Arg Val Asp 
              770                 775                 780                 
          Asn Lys Glu Arg Thr Val Ile Ser Asn Leu Arg Pro Phe Thr Leu Tyr 
          785                 790                 795                 800 
          Arg Ile Asp Ile His Ser Cys Asn His Glu Ala Glu Lys Leu Gly Cys 
                          805                 810                 815     
          Ser Ala Ser Asn Phe Val Phe Ala Arg Thr Met Pro Ala Glu Gly Ala 
                      820                 825                 830         
          Asp Asp Ile Pro Gly Pro Val Thr Trp Glu Pro Arg Pro Glu Asn Ser 
                  835                 840                 845             
          Ile Phe Leu Lys Trp Pro Glu Pro Glu Asn Pro Asn Gly Leu Ile Leu 
              850                 855                 860                 
          Met Tyr Glu Ile Lys Tyr Gly Ser Gln Val Glu Asp Gln Arg Glu Cys 
          865                 870                 875                 880 
          Val Ser Arg Gln Glu Tyr Arg Lys Tyr Gly Gly Ala Lys Leu Asn Arg 
                          885                 890                 895     
          Leu Asn Pro Gly Asn Tyr Thr Ala Arg Ile Gln Ala Thr Ser Leu Ser 
                      900                 905                 910         
          Gly Asn Gly Ser Trp Thr Asp Pro Val Phe Phe Tyr Val Pro Ala Lys 
                  915                 920                 925             
          Thr Thr Tyr Glu Asn Phe Met His Leu Ile Ile Ala Leu Pro Val Ala 
              930                 935                 940                 
          Ile Leu Leu Ile Val Gly Gly Leu Val Ile Met Leu Tyr Val Phe His 
          945                 950                 955                 960 
          Arg Lys Arg Asn Asn Ser Arg Leu Gly Asn Gly Val Leu Tyr Ala Ser 
                          965                 970                 975     
          Val Asn Pro Glu Tyr Phe Ser Ala Ala Asp Val Tyr Val Pro Asp Glu 
                      980                 985                 990         
          Trp Glu Val Ala Arg Glu Lys Ile  Thr Met Asn Arg Glu  Leu Gly Gln 
                  995                 1000                 1005             
          Gly Ser  Phe Gly Met Val Tyr  Glu Gly Val Ala Lys  Gly Val Val 
              1010                 1015                 1020             
          Lys Asp  Glu Pro Glu Thr Arg  Val Ala Ile Lys Thr  Val Asn Glu 
              1025                 1030                 1035             
          Ala Ala  Ser Met Arg Glu Arg  Ile Glu Phe Leu Asn  Glu Ala Ser 
              1040                 1045                 1050             
          Val Met  Lys Glu Phe Asn Cys  His His Val Val Arg  Leu Leu Gly 
              1055                 1060                 1065             
          Val Val  Ser Gln Gly Gln Pro  Thr Leu Val Ile Met  Glu Leu Met 
              1070                 1075                 1080             
          Thr Arg  Gly Asp Leu Lys Ser  Tyr Leu Arg Ser Leu  Arg Pro Glu 
              1085                 1090                 1095             
          Val Glu  Gln Asn Asn Leu Val  Leu Ile Pro Pro Ser  Leu Ser Lys 
              1100                 1105                 1110             
          Met Ile  Gln Met Ala Gly Glu  Ile Ala Asp Gly Met  Ala Tyr Leu 
              1115                 1120                 1125             
          Asn Ala  Asn Lys Phe Val His  Arg Asp Leu Ala Ala  Arg Asn Cys 
              1130                 1135                 1140             
          Met Val  Ala Glu Asp Phe Thr  Val Lys Ile Gly Asp  Phe Gly Met 
              1145                 1150                 1155             
          Thr Arg  Asp Ile Tyr Glu Thr  Asp Tyr Tyr Arg Lys  Gly Gly Lys 
              1160                 1165                 1170             
          Gly Leu  Leu Pro Val Arg Trp  Met Ser Pro Glu Ser  Leu Lys Asp 
              1175                 1180                 1185             
          Gly Val  Phe Thr Thr His Ser  Asp Val Trp Ser Phe  Gly Val Val 
              1190                 1195                 1200             
          Leu Trp  Glu Ile Ala Thr Leu  Ala Glu Gln Pro Tyr  Gln Gly Leu 
              1205                 1210                 1215             
          Ser Asn  Glu Gln Val Leu Arg  Phe Val Met Glu Gly  Gly Leu Leu 
              1220                 1225                 1230             
          Asp Lys  Pro Asp Asn Cys Pro  Asp Met Leu Phe Glu  Leu Met Arg 
              1235                 1240                 1245             
          Met Cys  Trp Gln Tyr Asn Pro  Lys Met Arg Pro Ser  Phe Leu Glu 
              1250                 1255                 1260             
          Ile Ile  Gly Ser Ile Lys Asp  Glu Met Glu Pro Ser  Phe Gln Glu 
              1265                 1270                 1275             
          Val Ser  Phe Tyr Tyr Ser Glu  Glu Asn Lys Pro Pro  Glu Pro Glu 
              1280                 1285                 1290             
          Glu Leu  Glu Leu Glu Leu Glu  Pro Glu Asn Met Glu  Ser Val Pro 
              1295                 1300                 1305             
          Leu Asp  Pro Ser Ala Ser Ser  Val Ser Leu Pro Leu  Pro Glu Arg 
              1310                 1315                 1320             
          His Ser  Gly His Lys Ala Glu  Asn Gly Pro Gly Pro  Gly Val Leu 
              1325                 1330                 1335             
          Val Leu  Arg Ala Ser Phe Asp  Glu Arg Gln Pro Tyr  Ala His Met 
              1340                 1345                 1350             
          Asn Gly  Gly Arg Ala Asn Glu  Arg Ala Leu Pro Leu  Pro Gln Ser 
              1355                 1360                 1365             
          Ser Thr  Cys 
              1370
Figure 12_A0101_SEQ_0001
Figure 12_A0101_SEQ_0002
Figure 12_A0101_SEQ_0003
Figure 12_A0101_SEQ_0004
Figure 12_A0101_SEQ_0005
Figure 12_A0101_SEQ_0006
Figure 12_A0101_SEQ_0007
Figure 12_A0101_SEQ_0008
Figure 12_A0101_SEQ_0009
Figure 12_A0101_SEQ_0010
Figure 12_A0101_SEQ_0011
Figure 12_A0101_SEQ_0012
Figure 12_A0101_SEQ_0013
Figure 12_A0101_SEQ_0014
Figure 12_A0101_SEQ_0015
Figure 12_A0101_SEQ_0016
Figure 12_A0101_SEQ_0017
Figure 12_A0101_SEQ_0018
Figure 12_A0101_SEQ_0019
Figure 12_A0101_SEQ_0020
Figure 12_A0101_SEQ_0021
Figure 12_A0101_SEQ_0022
Figure 12_A0101_SEQ_0023
Figure 12_A0101_SEQ_0024
Figure 12_A0101_SEQ_0025
Figure 12_A0101_SEQ_0026
Figure 12_A0101_SEQ_0027
Figure 12_A0101_SEQ_0028
Figure 12_A0101_SEQ_0029
Figure 12_A0101_SEQ_0030
Figure 12_A0101_SEQ_0031
Figure 12_A0101_SEQ_0032
Figure 12_A0101_SEQ_0033
Figure 12_A0101_SEQ_0034
Figure 12_A0101_SEQ_0035
Figure 12_A0101_SEQ_0036
Figure 12_A0101_SEQ_0037
Figure 12_A0101_SEQ_0038
Figure 12_A0101_SEQ_0039
Figure 12_A0101_SEQ_0040
Figure 12_A0101_SEQ_0041
Figure 12_A0101_SEQ_0042
Figure 12_A0101_SEQ_0043
Figure 12_A0101_SEQ_0044
Figure 12_A0101_SEQ_0045
Figure 12_A0101_SEQ_0046
Figure 12_A0101_SEQ_0047
Figure 12_A0101_SEQ_0048
Figure 12_A0101_SEQ_0049
Figure 12_A0101_SEQ_0050
Figure 12_A0101_SEQ_0051
Figure 12_A0101_SEQ_0052
Figure 12_A0101_SEQ_0053
Figure 12_A0101_SEQ_0054
Figure 12_A0101_SEQ_0055
Figure 12_A0101_SEQ_0056
Figure 12_A0101_SEQ_0057
Figure 12_A0101_SEQ_0058
Figure 12_A0101_SEQ_0059
Figure 12_A0101_SEQ_0060
Figure 12_A0101_SEQ_0061
Figure 12_A0101_SEQ_0062
Figure 12_A0101_SEQ_0063
Figure 12_A0101_SEQ_0064
Figure 12_A0101_SEQ_0065
Figure 12_A0101_SEQ_0066
Figure 12_A0101_SEQ_0067
Figure 12_A0101_SEQ_0068
Figure 12_A0101_SEQ_0069
Figure 12_A0101_SEQ_0070
Figure 12_A0101_SEQ_0071
Figure 12_A0101_SEQ_0072
Figure 12_A0101_SEQ_0073
Figure 12_A0101_SEQ_0074
Figure 12_A0101_SEQ_0075
Figure 12_A0101_SEQ_0076

Claims (26)

  1. 一種從哺乳動物細胞培養過程表現目的蛋白之方法，該方法包括在細胞培養基中培養哺乳動物細胞，其中該哺乳動物細胞包含編碼具有組成型活性的胰島素樣生長因子受體1（IGF1R）突變體的核酸，並且進一步包含編碼該目的蛋白的異源核酸。
  2. 如請求項1所述之方法，其中該細胞培養基包含少於0.03 mg/L的胰島素樣生長因子（IGF-1）。
  3. 如請求項2所述之方法，其中該細胞培養基不含IGF-1。
  4. 如請求項1至3中任一項所述之方法，其中該IGF1R突變體由穩定地整合到哺乳動物細胞基因組中的核酸編碼。
  5. 如請求項1至3中任一項所述之方法，其中該IGF1R突變體係經過編輯的內源性IGF1R序列。
  6. 如請求項1至5中任一項所述之方法，其中在含有0.1 mg/L IGF-1的細胞培養基中，該哺乳動物細胞具有與不含該IGF1R突變體的相同譜系的哺乳動物細胞相當的生長速率。
  7. 如請求項1至6中任一項所述之方法，其中該IGF1R突變體包含SEQ ID NO: 2、4、6、8、10、12、14或16中任一個的胺基酸序列。
  8. 如請求項7所述之方法，其中該IGF1R突變體包含SEQ ID NO: 2或SEQ ID NO: 4的胺基酸序列。
  9. 如請求項7或8所述之方法，其中該IGF1R由包含SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO: 3的核苷酸序列的核酸序列編碼。
  10. 如請求項1至9中任一項所述之方法，其中在培養的第10天，所表現的重組蛋白的滴度為至少50 mg/L。
  11. 如請求項1至10中任一項所述之方法，其中該目的蛋白係抗原結合蛋白。
  12. 如請求項11所述之方法，其中該目的蛋白選自由單株抗體、雙特異性T細胞接合子、免疫球蛋白、Fc融合蛋白和肽體組成之群組。
  13. 如請求項1至12中任一項所述之方法，其中該哺乳動物細胞培養過程利用補料分批培養過程、灌注培養過程及其組合。
  14. 如請求項1至13中任一項所述之方法，其中藉由在含有0.03 mg/L或更少IGF-1的無血清培養基中，為至少100 L的生物反應器接種至少0.5×10 6至3.0×10 6個細胞/mL來建立哺乳動物細胞培養。
  15. 如請求項1至14中任一項所述之方法，其中該等哺乳動物細胞係中國倉鼠卵巢（CHO）細胞。
  16. 如請求項15所述之方法，其中該等CHO細胞缺乏二氫葉酸還原酶（DHFR -）或係麩醯胺酸合成酶敲除（GSKO）型。
  17. 如請求項1至16中任一項所述之方法，其中該方法進一步包括該目的蛋白的收穫步驟。
  18. 如請求項17所述之方法，其中將收穫的目的蛋白純化並配製成藥學上可接受的配製物。
  19. 如請求項18所述之純化的、配製的目的蛋白。
  20. 一種經基因修飾的哺乳動物細胞，其包含：1) 第一異源核酸，該第一異源核酸包含編碼表現組成型活性IGF1R分子的IGF1R突變體的核苷酸序列；和2) 第二異源核酸，該第二異源核酸包含編碼目的蛋白的核苷酸序列。
  21. 如請求項20所述之哺乳動物細胞，其中該編碼IGF1R突變體的核苷酸序列包含SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO: 3的核苷酸序列。
  22. 如請求項20或21所述之哺乳動物細胞，其中該第一異源核酸穩定地整合到宿主基因組中。
  23. 如請求項20或21所述之哺乳動物細胞，其中該第一異源核酸係經過編輯的內源性IGF1R序列。
  24. 如請求項20至23中任一項所述之哺乳動物細胞，其中該等哺乳動物細胞係中國倉鼠卵巢（CHO）細胞。
  25. 如請求項24所述之哺乳動物細胞，其中該等CHO細胞缺乏二氫葉酸還原酶（DHFR -）或係麩醯胺酸合成酶敲除（GSKO）型。
  26. 如請求項20至25中任一項所述之哺乳動物細胞，其中細胞系能夠在含有0.03 mg/L或更少IGF-1的細胞培養基中生長。
TW110139979A 2020-10-30 2021-10-28 過表現胰島素樣生長因子受體突變體以調節ｉｇｆ補充 TW202233660A (zh)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US202063108084P 2020-10-30 2020-10-30
US63/108,084 2020-10-30

Publications (1)

Publication Number Publication Date
TW202233660A true TW202233660A (zh) 2022-09-01

Family

ID=78844954

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TW110139979A TW202233660A (zh) 2020-10-30 2021-10-28 過表現胰島素樣生長因子受體突變體以調節ｉｇｆ補充

Country Status (8)

Country Link
US (1) US20230323287A1 (zh)
EP (1) EP4237432A1 (zh)
JP (1) JP2023548294A (zh)
AU (1) AU2021368788A1 (zh)
CA (1) CA3199083A1 (zh)
MX (1) MX2023004885A (zh)
TW (1) TW202233660A (zh)
WO (1) WO2022094418A1 (zh)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN117384275B (zh) * 2023-12-13 2024-03-15 北京科为博生物科技有限公司 胰岛素样生长因子突变体igf1m及其应用

Family Cites Families (27)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5672502A (en) 1985-06-28 1997-09-30 Celltech Therapeutics Limited Animal cell culture
US4965195A (en) 1987-10-26 1990-10-23 Immunex Corp. Interleukin-7
US4968607A (en) 1987-11-25 1990-11-06 Immunex Corporation Interleukin-1 receptors
WO1990005183A1 (en) 1988-10-31 1990-05-17 Immunex Corporation Interleukin-4 receptors
WO1991018982A1 (en) 1990-06-05 1991-12-12 Immunex Corporation Type ii interleukin-1 receptors
GB9014932D0 (en) 1990-07-05 1990-08-22 Celltech Ltd Recombinant dna product and method
US6319494B1 (en) 1990-12-14 2001-11-20 Cell Genesys, Inc. Chimeric chains for receptor-associated signal transduction pathways
WO1994004679A1 (en) 1991-06-14 1994-03-03 Genentech, Inc. Method for making humanized antibodies
JPH05244982A (ja) 1991-12-06 1993-09-24 Sumitomo Chem Co Ltd 擬人化ｂ−ｂ１０
US5262308A (en) * 1992-01-28 1993-11-16 Thomas Jefferson University Cell lines which constitutively express IGF-1 and IGF-1 R
IL104570A0 (en) 1992-03-18 1993-05-13 Yeda Res & Dev Chimeric genes and cells transformed therewith
JP3495375B2 (ja) 1996-01-11 2004-02-09 イミュネックス・コーポレーション 真核生物発現システムの発現増大配列エレメント（ｅａｓｅ）
CA2196496A1 (en) 1997-01-31 1998-07-31 Stephen William Watson Michnick Protein fragment complementation assay for the detection of protein-protein interactions
GB9722131D0 (en) 1997-10-20 1997-12-17 Medical Res Council Method
GB9928787D0 (en) 1999-12-03 2000-02-02 Medical Res Council Direct screening method
US6544424B1 (en) 1999-12-03 2003-04-08 Refined Technology Company Fluid filtration system
GB0025144D0 (en) 2000-10-13 2000-11-29 Medical Res Council Concatenated nucleic acid sequences
US20040202995A1 (en) 2003-04-09 2004-10-14 Domantis Nucleic acids, proteins, and screening methods
AU2005289685B2 (en) 2004-09-24 2009-07-16 Amgen Inc. Modified Fc molecules
US8053238B2 (en) 2005-10-31 2011-11-08 Unhwa Corporation Isolated population of plant single cells and method of preparing the same
US20100221823A1 (en) 2007-06-11 2010-09-02 Amgen Inc. Method for culturing mammalian cells to improve recombinant protein production
WO2012145682A1 (en) 2011-04-21 2012-10-26 Amgen Inc. A method for culturing mammalian cells to improve recombinant protein production
US10563225B2 (en) 2013-07-26 2020-02-18 President And Fellows Of Harvard College Genome engineering
EP3207146B1 (en) 2014-10-15 2021-09-29 Amgen Inc. Promoter and regulatory elements for improved expression of heterologous genes in host cells
CN110402305B (zh) 2016-11-30 2023-07-21 北京复昇生物科技有限公司 一种crispr文库筛选的方法
EP3666035B1 (en) 2017-08-07 2023-04-05 LG Electronics Inc. Method and apparatus for keeping dc configuration
EP3441471A1 (en) * 2017-08-08 2019-02-13 CEVEC Pharmaceuticals GmbH Use of constitutively active variants of growth factor receptors as selection makers for the generation of stable producer cell lines

Also Published As

Publication number Publication date
WO2022094418A1 (en) 2022-05-05
MX2023004885A (es) 2023-07-04
US20230323287A1 (en) 2023-10-12
CA3199083A1 (en) 2022-05-05
EP4237432A1 (en) 2023-09-06
JP2023548294A (ja) 2023-11-16
AU2021368788A1 (en) 2023-06-08

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP7034236B2 (ja) 組換えタンパク質のグリコシル化を調節するためのｎ－グリコシル化経路制御因子の過剰発現
JP7441840B2 (ja) 変異したｐｉｇｇｙｂａｃトランスポザーゼ
TW202233660A (zh) 過表現胰島素樣生長因子受體突變體以調節ｉｇｆ補充
US20220403398A1 (en) Methods of cell selection
US20230082811A1 (en) Adaptation of platform hosts to igf- media
KR20240054986A (ko) Igf- 배지에 대한 플랫폼 숙주의 적응
US20170166942A1 (en) Overexpression of n-glycosylation pathway regulators to modulate glycosylation of recombinant proteins
EA043386B1 (ru) Прямой отбор клеток, экспрессирующих высокие уровни гетеромерных белков, с использованием глутаминсинтетазных векторов внутригенной комплементации