TW202229348A - 使用sea-cd40治療葡萄膜黑色素瘤 - Google Patents

Abstract

本發明係關於使用非岩藻醣基化之抗CD40抗體治療葡萄膜黑色素瘤的方法。

Description

使用SEA-CD40治療葡萄膜黑色素瘤

本發明係關於使用非岩藻醣基化之抗CD40抗體治療包括葡萄膜黑色素瘤之免疫性冷腫瘤的方法。

葡萄膜黑色素瘤為眼部黑色素細胞之惡性腫瘤。葡萄膜黑色素瘤在生物學上與皮膚黑色素瘤不同。葡萄膜黑色素瘤為最常見的眼內惡性腫瘤。此腫瘤之發病率隨年齡增長而增加，且在患者六十多歲或七十多歲時達到最大值。大約50%之患者由於腫瘤轉移而死亡；且在上個世紀期間，治療未得到改良。在確診腫瘤轉移後之平均預期壽命為7個月。不存在針對葡萄膜黑色素瘤之照護標準。因此，存在大量的未得到滿足之治療需求。

CD40為腫瘤壞死因子(TNF)受體超家族之成員。其為具有50 kDa之表觀MW的單鏈I型跨膜蛋白。CD40由某些癌細胞，例如淋巴瘤細胞及若干類型之實體腫瘤細胞表現。CD40亦起作用以藉由促進抗原呈現細胞與T細胞之間的接觸依賴性互逆相互作用來活化免疫系統。儘管已在臨床試驗中測試許多抗CD40抗體，但迄今為止均未獲得FDA之認可。

SEA-CD40，一種非岩藻醣基化或最低限度岩藻醣基化(「非岩藻醣基化」及「最低限度岩藻醣基化」在本申請案中可互換使用)抗CD40抗體，可有效活化先天性免疫系統，且因此有可能治療其中先前存在的針對腫瘤之免疫反應(immune reaction)有限或不存在之「免疫性冷」腫瘤，包括葡萄膜黑色素瘤。此外，SEA-CD40與抑制適應性免疫檢查點之藥物(例如PD1/PDL1靶向治療劑，諸如帕博利珠單抗(pembrolizumab)、阿特珠單抗(atezolizumab)等)之組合可為有協同作用的，因為SEA-CD40可刺激初始先天性免疫反應，且阻斷PD1/PDL1軸可實現持續的適應性免疫反應。

葡萄膜黑色素瘤為「免疫性冷」腫瘤，其在基因體研究(Danaher P等人, J Immunother Cancer. 2018年6月22日;6(1):63)中報導為具有癌症基因體圖譜(Cancer Genome Atlas)中之所有腫瘤中之最少的免疫浸潤。因此，由於葡萄膜黑色素瘤特有之最小的先前存在之免疫反應，尤其適合在存在或不存在PD1/PDL1阻斷之情況下，用SEA-CD40來治療葡萄膜黑色素瘤。在一些實施例中，免疫性冷腫瘤包括葡萄膜黑色素瘤。

本發明係關於治療對抗PD1或抗PDL1治療不起反應之葡萄膜黑色素瘤的方法。在一個態樣中，本發明係關於一種治療葡萄膜黑色素瘤之方法，其包括向患有葡萄膜黑色素瘤之患者投與包含抗CD40抗體之組合物。抗CD40抗體具有：1)重鏈可變區，其包含SEQ ID NO: 1之胺基酸序列；2)輕鏈可變區，其包含SEQ ID NO: 2之胺基酸序列；及3)人類恆定區。抗40抗體之人類恆定區具有殘基N297 (EU編號)處之N-醣苷連接之糖鏈，其中組合物中殘基N297 (EU編號)處小於5%的N-醣苷連接之糖鏈具有岩藻醣殘基。因此，抗CD40抗體具有最低限度之岩藻醣基化。此最低限度岩藻醣基化之抗CD40抗體亦稱為SEA-CD40。最低限度岩藻醣基化之抗CD40抗體係以每公斤患者體重約3 μg、約10 μg、約30 μg、約45 μg或約60 μg之劑量投與。

在一些實施例中，最低限度岩藻醣基化之抗CD40抗體的劑量為每公斤患者體重約30 μg。在一些實施例中，每三週一次或每六週一次投與最低限度岩藻醣基化之抗CD40抗體。在一些實施例中，方法進一步包括投與化學治療劑。在一些實施例中，化學治療劑為吉西他濱(gemcitabine)、達卡巴仁(dacarbazine)、替莫唑胺(temozolomide)、紫杉醇、白蛋白結合型紫杉醇或卡鉑(carboplatin)。在一些實施例中，化學治療劑為吉西他濱。在一些實施例中，化學治療劑為紫杉醇。在一些實施例中，化學治療劑包括吉西他濱及紫杉醇兩者。

在另一態樣中，本發明係關於一種治療葡萄膜黑色素瘤之方法，其包括向患有葡萄膜黑色素瘤之患者投與：1)包含抗CD40抗體之組合物；及2)抗PD1抗體或抗PDL1抗體。抗CD40抗體具有：1)重鏈可變區，其包含SEQ ID NO: 1之胺基酸序列；2)輕鏈可變區，其包含SEQ ID NO: 2之胺基酸序列；及3)人類恆定區。抗CD40抗體之人類恆定區具有殘基N297 (EU編號)處之N-醣苷連接之糖鏈，其中組合物中殘基N297 (EU編號)處小於5%的N-醣苷連接之糖鏈具有岩藻醣殘基。因此，抗CD40抗體具有最低限度之岩藻醣基化。此最低限度岩藻醣基化之抗CD40抗體亦稱為SEA-CD40。最低限度岩藻醣基化之抗CD40抗體係以每公斤患者體重約3 μg、約10 μg、約30 μg、約45 μg或約60 μg之劑量投與。

在一些實施例中，抗PD1抗體係選自由以下組成之群：帕博利珠單抗、納武單抗(Nivolumab)、西米普利單抗-rwlc (Cemiplimab-rwlc)、斯巴達珠單抗(Spartalizumab)、AK105、替雷利珠單抗(Tislelizumab)、多斯塔利馬單抗(Dostarlimab)、MEDI0680、匹地利珠單抗(Pidilizumab)、AMP-224及SHR-1210。在一些實施例中，抗PD1抗體為帕博利珠單抗、納武單抗或西米普利單抗-rwlc。在一些實施例中，抗PDL1抗體係選自由以下組成之群：阿特珠單抗、德瓦魯單抗(Durvalumab)、阿維魯單抗(Avelumab)、SHR-1316、MEDI4736、BMS-936559/MDX-1105、MSB0010718C、MPDL3280A或恩沃利單抗(Envafolimab)。在一些實施例中，抗PDL1抗體為阿特珠單抗、德瓦魯單抗或阿維魯單抗。

在一些實施例中，最低限度岩藻醣基化之抗CD40抗體的劑量為每公斤患者體重約30 μg。在一些實施例中，每三週一次或每六週一次投與抗CD40抗體。在一些實施例中，方法進一步包括投與化學治療劑。在一些實施例中，化學治療劑為吉西他濱、達卡巴仁、替莫唑胺、紫杉醇、白蛋白結合型紫杉醇、卡鉑或紫杉醇。在一些實施例中，化學治療劑為吉西他濱。在一些實施例中，化學治療劑為紫杉醇。在一些實施例中，化學治療劑包括吉西他濱及紫杉醇兩者。

在一些實施例中，治療葡萄膜黑色素瘤之方法包括投與：1)抗CD40抗體，及2)抗PD1抗體。在一些實施例中，抗PD1抗體為帕博利珠單抗。在一些實施例中，以約200 mg/kg投與抗PD1抗體。

在另一態樣中，本發明係關於一種治療葡萄膜黑色素瘤之方法，其包括向有需要之患者投與包含抗CD40抗體之組合物。抗CD40抗體具有：1)重鏈可變區，其包含SEQ ID NO: 1之胺基酸序列；2)輕鏈可變區，其包含SEQ ID NO: 2之胺基酸序列；及3)人類恆定區。抗CD40抗體之人類恆定區具有殘基N297 (EU編號)處之N-醣苷連接之糖鏈，其中組合物中殘基N297 (EU編號)處小於5%的N-醣苷連接之糖鏈具有岩藻醣殘基。因此，抗CD40抗體具有最低限度之岩藻醣基化。此最低限度岩藻醣基化之抗CD40抗體亦稱為SEA-CD40。最低限度岩藻醣基化之抗CD40抗體係以每公斤患者體重約3 μg、約10 μg、約30 μg、約45 μg或約60 μg之劑量投與。所治療之免疫性冷腫瘤包括葡萄膜黑色素瘤。

在一些實施例中，最低限度岩藻醣基化之抗CD40抗體的劑量為每公斤患者體重約30 μg。在一些實施例中，每三週一次或每六週一次投與最低限度岩藻醣基化之抗CD40抗體。在一些實施例中，治療葡萄膜黑色素瘤之方法進一步包括投與化學治療劑。在一些實施例中，化學治療劑為吉西他濱、達卡巴仁、替莫唑胺、紫杉醇、白蛋白結合型紫杉醇或卡鉑。在一些實施例中，化學治療劑為吉西他濱。在一些實施例中，化學治療劑為紫杉醇。在一些實施例中，化學治療劑包括吉西他濱及紫杉醇兩者。

除非另外定義，否則本文所用之所有技術及科學術語具有與一般熟悉本發明所屬之技術者通常理解相同的含義。本文中描述用於本發明之方法及材料；亦可使用此項技術中已知之其他適合的方法及材料。該等材料、方法及實例僅為說明性的且不意欲為限制性的。本文中所提及之所有公開案、專利申請案、專利、序列、資料庫條目及其他參考文獻均以全文引用之方式併入。在存在衝突之情況下，將以本說明書(包括定義)為凖。

本發明之其他特徵及優點將自以下實施方式及圖式及自申請專利範圍顯而易見。

優先權之主張本申請案主張於2020年9月30日提交之美國臨時申請案第63/085,765號之權利。以上申請案之全部內容以引用之方式併入本文中。

序列表之引用本申請案包括2021年9月28日創建的名為0040-00912PC_ST25且含有75KB之檔案中之電子序列表，其在此以引用之方式併入。 定義

「多肽」或「多肽鏈」係天然或以合成方式產生的藉由肽鍵接合之胺基酸殘基之聚合物。具有小於約10個胺基酸殘基之多肽通常稱為「肽」。

「蛋白質」係包含一或多個多肽鏈之大分子。蛋白質亦可包含非肽組分，諸如碳水化合物基團。碳水化合物及其他非肽取代基可藉由產生蛋白質之細胞添加至蛋白質中，且將隨細胞類型而變化。蛋白質在本文中係根據其胺基酸主鏈結構來定義；通常不指定取代基，諸如碳水化合物基團，但仍然可能存在。

術語「胺基端」及「羧基端」在本文中用於指示多肽內之位置。在上下文允許之情況下，此等術語係參考多肽之特定序列或部分用於指示鄰近或相對位置。舉例而言，定位於多肽內之參考序列之羧基端的某一序列位於參考序列之羧基端附近，但未必位於整個多肽之羧基端。

術語「抗體」在本文中用於指示由身體回應於抗原之存在而產生且與抗原結合之免疫球蛋白，以及其抗原結合片段及經工程改造之變異體。因此，術語「抗體」包括例如完整單株抗體，其包含全長免疫球蛋白重鏈及輕鏈(例如使用融合瘤技術產生之抗體)及抗原結合抗體片段，諸如F(ab')2及Fab片段。亦包括經基因工程改造之完整抗體及片段，諸如嵌合抗體、人類化抗體、單鏈Fv片段、單鏈抗體、雙功能抗體、微型抗體、線抗體、多價或多特異性(例如雙特異性)混合抗體及其類似物。因此，術語「抗體」係廣泛地使用，以包括包含抗體之抗原結合位點且能夠特異性結合於其抗原的任何蛋白質。

「抗體之抗原結合位點」係抗體中足以與其抗原結合之部分。最小的此類區域通常係可變域或其經基因工程改造之變異體。單域結合位點可由駱駝抗體(參見Muyldermans及Lauwereys, J . Mol . Recog .12:131-140, 1999；Nguyen等人, EMBO J .19:921-930, 2000)或其他物種之VH域產生，以產生單域抗體(「dAb」；參見Ward等人, Nature341:544-546, 1989；Winter等人之美國專利第6,248,516號)。在某些變化中，抗原結合位點係僅具有天然或非天然(例如經突發誘變)存在之重鏈可變域或輕鏈可變域或其組合之2個互補決定區(CDR)之多肽區(參見例如Pessi等人, Nature362:367-369, 1993；Qiu等人, Nature Biotechnol. 25:921-929, 2007)。更常見的是，抗體之抗原結合位點包含與共同抗原決定基結合之重鏈可變(VH)域及輕鏈可變(VL)域。在本發明之上下文中，抗體可包括一或多種除抗原結合位點以外之組分，諸如抗體之第二抗原結合位點(其可與相同或不同的抗原決定基或與相同或不同的抗原結合)、肽連接子、免疫球蛋白恆定區、免疫球蛋白鉸鏈、兩親性螺旋(參見Pack及Pluckthun, Biochem .31:1579-1584, 1992)、非肽連接子、寡核苷酸(參見Chaudri等人, FEBS Letters450:23-26, 1999)、細胞生長抑制或細胞毒性藥物及其類似物，且可為單體或多聚體蛋白。包含抗體之抗原結合位點之分子的實例為此項技術中已知的且包括例如Fv、單鏈Fv (scFv)、Fab、Fab'、F(ab') ₂、F(ab) _c、雙功能抗體、dAb、微型抗體、奈米抗體、Fab-scFv融合體、雙特異性(scFv) ₄-IgG及雙特異性(scFv) ₂-Fab。(參見例如Hu等人, Cancer Res .56:3055-3061, 1996；Atwell等人, Molecular Immunology33:1301-1312, 1996；Carter及Merchant, Curr . Opin . Biotechnol .8:449-454, 1997；Zuo等人, Protein Engineering13:361-367, 2000；及Lu等人, J . Immunol . Methods267:213-226, 2002。)

如本文中所使用，術語「免疫球蛋白」係指由一或多個大體上由免疫球蛋白基因編碼之多肽組成的蛋白。一種形式之免疫球蛋白構成脊椎動物中之原生(亦即天然)抗體之基本結構單元。此形式為四聚體且由相同的兩對免疫球蛋白鏈組成，各對具有一個輕鏈及一個重鏈。在各對中，輕鏈可變區及重鏈可變區(VL及VH)共同主要負責與抗原結合，且恆定區主要負責抗體效應功能。已在高等脊椎動物中發現五種類別之免疫球蛋白(IgG、IgA、IgM、IgD及IgE)。IgG構成主要類別；其通常作為血漿中之含量第二高的蛋白存在。在人類中，IgG由命名為IgG1、IgG2、IgG3及IgG4之四個子類組成。IgG類別之重鏈恆定區由希臘語符號γ標識。舉例而言，IgG1子類之免疫球蛋白含有γ1重鏈恆定區。各免疫球蛋白重鏈具有由恆定區蛋白域(CH1、鉸鏈、CH2及CH3；IgG3亦含有CH4域)組成之恆定區，該等恆定區蛋白域對於物種之既定子類而言係基本不變的。編碼人類及非人類免疫球蛋白鏈之DNA序列為此項技術中已知的。(參見例如Ellison等人, DNA1:11-18, 1981；Ellison等人, Nucleic Acids Res. 10:4071-4079, 1982；Kenten等人, Proc . Natl . Acad . Sci . USA79:6661-6665, 1982；Seno等人, Nuc . Acids Res. 11:719-726, 1983；Riechmann等人, Nature332:323-327, 1988；Amster等人, Nuc . Acids Res. 8:2055-2065, 1980；Rusconi及Kohler, Nature314:330-334, 1985；Boss等人, Nuc . Acids Res. 12:3791-3806, 1984；Bothwell等人, Nature298:380-382, 1982；van der Loo等人, Immunogenetics42:333-341, 1995；Karlin等人, J . Mol . Evol .22:195-208, 1985；Kindsvogel等人, DNA1:335-343, 1982；Breiner等人, Gene18:165-174, 1982；Kondo等人, Eur . J . Immunol. 23:245-249, 1993；及GenBank寄存編號J00228。)關於免疫球蛋白結構及功能之綜述，參見Putnam, The Plasma Proteins, 第V卷, Academic Press, Inc., 49-140, 1987；及Padlan, Mol . Immunol. 31:169-217, 1994。術語「免疫球蛋白」在本文中係以其一般含義使用，視上下文而定，指示完整抗體、其組分鏈或鏈之片段。

全長免疫球蛋白「輕鏈」(約25 Kd或214個胺基酸)由胺基端之可變區基因(編碼約110個胺基酸)及羧基端之κ或λ恆定區基因編碼。全長免疫球蛋白「重鏈」(約50 Kd或446個胺基酸)由可變區基因(編碼約116個胺基酸)及γ、μ、α、δ或ε恆定區基因(編碼約330個胺基酸)編碼，後者將抗體之同型分別定義為IgG、IgM、IgA、IgD或IgE。在輕鏈及重鏈內，可變區及恆定區由具有約12個或更多個胺基酸之「J」區連接，其中重鏈亦包括具有約10個或更多個胺基酸之「D」區。(通常參見 Fundamental Immunology(Paul編, Raven Press, N.Y., 第2版1989), 第7章)。

免疫球蛋白輕鏈可變區或重鏈可變區(在本文中亦分別稱為「輕鏈可變域」(「VL域」)或「重鏈可變域」(「VH域」))由間雜有三個高變區(亦稱為「互補決定區」或「CDR」)的「框架」區組成。框架區用於針對與抗原之抗原決定基之特異性結合來比對CDR。由此，術語「高變區」或「CDR」係指主要負責抗原結合的抗體之胺基酸殘基。自胺基端至羧基端，VL及VH域均包含以下框架(FR)及CDR區：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。將胺基酸分配至各域係根據Kabat, Sequences of Proteins of Immunological Interest(National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1987及1991)或Chothia及Lesk, J . Mol . Biol .196:901-917, 1987；Chothia等人， Nature342:878-883, 1989之定義進行。Kabat亦提供一種廣泛使用的編號規約(Kabat編號)，其中對不同重鏈之間或不同輕鏈之間的相應殘基指定相同編號。VL域之CDR 1、CDR 2及CDR 3在本文中亦分別稱為CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3；VH域之CDR 1、CDR 2及CDR 3在本文中亦分別稱為CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3。

除非上下文另外指示，否則如本文中所使用之術語「單株抗體」不限於經由融合瘤技術產生之抗體。術語「單株抗體」係指衍生自包括任何真核、原核或噬菌體純系之單一純系的抗體，且非產生抗體的方法。

術語「嵌合抗體」係指具有衍生自第一物種之可變域及衍生自第二物種之恆定區之抗體。可自屬於不同物種之免疫球蛋白基因區段來構築嵌合免疫球蛋白或抗體，例如藉由基因工程改造。如下文中所定義，術語「人類化抗體」不意欲涵蓋嵌合抗體。如本文中所定義，儘管人類化抗體之構造係嵌合的(亦即，包含來自超過一種蛋白質的區域)，但其包括未在嵌合免疫球蛋白或抗體中發現之額外特徵(亦即，包含供體CDR殘基及受體框架殘基之可變區)。

術語「人類化VH域」或「人類化VL域」係指滿足以下條件之免疫球蛋白VH或VL域：其包含一些或所有完全或大體上來自非人類供體免疫球蛋白(例如小鼠或大鼠)之CDR，及完全或大體上來自人類免疫球蛋白序列之可變區框架序列。提供CDR之非人類免疫球蛋白稱為「供體」，且提供框架之人類免疫球蛋白稱為「受體」。在一些情況下，人類化抗體可在人類可變域框架區內保留非人類殘基以增強適當的結合特徵(例如當抗體係人類化抗體時，需要在框架中存在突變以保持結合親和力)。

「人類化抗體」係包含人類化VH域及人類化VL域中之一或兩者的抗體。無需存在免疫球蛋白恆定區，但其若存在，則其完全或大體上來自人類免疫球蛋白恆定區。

抗體與其靶抗原之特異性結合意謂親和力為至少10 ⁶、10 ⁷、10 ⁸、10 ⁹或10 ¹⁰M ^{- 1}。可偵測到特異性結合之量值之較高且可將其與對至少一種不相關標靶進行之非特異性結合相區分。特異性結合可為形成特定官能基之間的鍵或特定空間擬合(例如鎖鑰類型(lock and key type))之結果，而非特異性結合通常為凡得瓦爾力(van der Waals force)之結果。然而，特異性結合未必暗示單株抗體結合一個且僅一個標靶。

關於如本文中所描述之蛋白質，對與由SEQ ID NO指定之胺基酸殘基對應的胺基酸殘基之參考包括此類殘基之轉譯後修飾。

如本文中所使用之術語「稀釋劑」係指如本文中所描述之適用於改變或達成例示性或適當濃度的溶液。

術語「容器」係指可安置或容納物件或液體(例如，以用於儲存)的物體(例如固持器、收容器、器皿或其類似物)。

術語「投藥途徑」包括此項技術中認可的用於傳遞治療蛋白之投藥途徑，諸如腸胃外、靜脈內、肌肉內或皮下。對於用於治療癌症之抗體之投藥，可能需要藉由靜脈內或皮下投藥來向全身循環投與。對於治療特徵在於實體腫瘤之癌症，若需要，亦可直接局部投與至腫瘤中。

術語「治療」係指出於治癒、治療、減輕、延緩、緩解、改變、補救、改善、改良或影響疾病之目的，向患有疾病之患者投與治療劑。

術語「患者」包括接受預防性或治療性治療之人類及其他哺乳動物個體。

術語「有效量」、「有效劑量(effective dose)」或「有效的劑量(effective dosage)」係指足以達成或至少部分達成所需效果，例如足以抑制疾病或病症之一或多種症狀之出現或改善疾病或病症之一或多種症狀的量。在「有效方案」中投與有效量之醫藥組合物。術語「有效方案」係指足夠實現疾病或病症之預防性或治療性治療的所投與之組合物的量與給藥頻率的組合。

如本文中所使用，術語「約」指示指定值加或減10%之近似範圍。舉例而言，術語「約20 μg/kg」涵蓋18-22 μg/kg之範圍。如本文中所使用，約亦包括精確量。因此，「約20 μg/kg」意謂「約20 μg/kg」且亦意謂「20 μg/kg」。 葡萄膜黑色素瘤係免疫性冷腫瘤

已報導，葡萄膜黑色素瘤在癌症基因組圖譜中所分析之全部腫瘤中展現出最小免疫活性(Danaher P等人, J Immunother Cancer. 2018年6月22日;6(1):63)，且因此可視為「免疫性冷」腫瘤。葡萄膜黑色素瘤為最常見的原發性成人眼部惡性腫瘤，在美國每年有超過兩千個新病例及超過兩百例死亡。葡萄膜黑色素瘤之治療方案有限。當前NCCN治療指南推薦考慮將臨床試驗作為患有轉移性葡萄膜黑色素瘤之患者的一線治療，因為一般而言，在此情況下不存在能夠穩定改良整體存活率之全身性療法(J Natl Compr Canc Netw. 2018年5月;16(5S):646-650. doi: 10.6004/jnccn.2018.0042)。

免疫檢查點抑制劑，諸如PD1及PDL1抗體，很少能使轉移性葡萄膜黑色素瘤患者得到持久緩解(Algazi等人, Cancer. 2016年11月15日; 122(21): 3344-335)。經獲批准之靶向免疫細胞檢查點(諸如PD1/PDL1軸)的療法旨在恢復預先存在之免疫反應。然而，在許多情況下，免疫系統未能對腫瘤產生有意義的反應。因此，靶向適應性免疫檢查點之療法通常為無效的。舉例而言，即使在通常歸類為「免疫性熱」之癌症(諸如皮膚黑色素瘤)中，在大部分患者中PD1/PDL1靶向療法可為無效的，其中在未接受過療法之皮膚黑色素瘤患者中，帕博利珠單抗之客觀反應率為42% (Long GV等人, J Clin Oncol 2018;36S:ASCO #9503)。在其他「免疫性冷」腫瘤，諸如葡萄膜黑色素瘤中，PD1/PDL1靶向療法幾乎沒有或沒有活性，其中在轉移性葡萄膜黑色素瘤中，此類藥劑之客觀反應率小於4% (Algazi等人, Cancer. 2016年11月15日; 122(21): 3344-3353)。在一些實施例中，免疫性冷腫瘤包括葡萄膜黑色素瘤。因此，迫切需要能引發與PD1/PDL1阻斷無關之免疫反應的療法。

本發明表明，單獨或與其他治療劑組合之CD40靶向抗體可有效治療葡萄膜黑色素瘤。以CD40靶向抗體進行之CD40之活化可引發針對腫瘤之先天性免疫反應。此外，經由SEA技術進行之CD40抗體去岩藻醣基化可引起與習知CD40抗體相比顯著增強之效力，因此引起進一步的先天性免疫刺激。首次證實CD40促效作用(尤其在非岩藻醣基化抗體情況下)可重新觸發患者中之針對葡萄膜黑色素瘤的免疫反應。

經由CD40結合所引起之先天性免疫活化及PD1/PDL1阻斷所引起之適應性免疫系統之持續活化，CD40抗體與引起PD1/PDL1阻斷之藥物(例如帕博利珠單抗)之組合亦可引起持續免疫反應。此類經由CD40促效作用來「啟動(pressing the gas)」免疫系統，同時經由PD1/PDL1阻斷來「解除限制(releasing the brake)」的方法可在「免疫性冷」腫瘤，包括葡萄膜黑色素瘤中尤其有效。

本發明提供對非岩藻醣基化抗CD40抗體(SEA-CD40)在治療葡萄膜黑色素瘤(「免疫性冷」腫瘤)中之活性的說明。SEA-CD40為促效性抗體且具有增強之與Fcγ受體III之結合，且展現增強之CD40信號傳導路徑之活化。因為其CD40路徑之活化增強，所以SEA-CD40為免疫系統之強效活化劑。免疫系統之活化增強使得SEA-CD40能夠以比岩藻醣基化親本抗體低之劑量給藥。 CD40

CD40為腫瘤壞死因子(TNF)受體超家族之成員。其為具有50 kDa之表觀MW的單鏈I型跨膜蛋白。其成熟多肽核心由237個胺基酸組成，其中173個胺基酸構成胞外域(ECD)，該胞外域形成TNF受體家族成員所特有之4個富含半胱胺酸之重複序列。ECD之近膜區中存在兩個潛在的N連接之醣基化位點，且不存在潛在的O連接之醣基化位點。具有22個胺基酸之跨膜域使ECD與CD40之具有42個胺基酸之細胞質尾區連接。已在CD40細胞質尾區中發現與CD40介導之信號轉導有關之序列模體。此等模體與稱為TNF-R相關因子(TRAF)之細胞質因子相互作用，以觸發包括MAP激酶及NFκB之活化的多個下游事件，繼而調節多種炎症相關、存活相關及生長相關基因之轉錄活性。參見例如van Kooten及Banchereau, J. Leukoc. Biol. 67:2-17 (2000)；Elgueta等人, Immunol. Rev. 229:152-172 (2009)。

在造血系統內，可在B細胞(處於多個分化階段)、單核球、巨噬細胞、血小板、濾泡性樹突狀細胞、樹突狀細胞(DC)、嗜酸性白血球及經活化之T細胞上發現CD40。在正常非造血組織中，已在腎上皮細胞、角質細胞、滑膜及真皮來源之成纖維細胞以及經活化之內皮細胞上偵測到CD40。CD40之可溶版本係由表現CD40之細胞釋放，可能經由初級轉錄物之差異剪接或金屬蛋白酶TNFα轉化酶之有限蛋白水解。所排出的CD40可藉由干擾CD40/CD40L相互作用而潛在地調節免疫反應。參見例如van Kooten及Banchereau, J. Leukoc. Biol. 67:2-17 (2000)；Elgueta等人, Immunol. Rev. 229:152-172 (2009)。

CD40之內源配位體(CD40L)為39 kDa之II型膜醣蛋白，亦稱為CD154。CD40L為TNF超家族之成員且在細胞表面上以三聚體形式表現。CD40L在經活化之CD4+、CD8+及γδ T細胞上短暫表現。亦在經純化之單核球、經活化之B細胞、上皮細胞及血管內皮細胞、平滑肌細胞及DC上偵測到不同水準之CD40L，但尚未明確定義此等細胞類型上之CD40L表現之功能相關性(van Kooten 2000；Elgueta 2009)。然而，CD40L在經活化之血小板上之表現與血栓性疾病之發病機制有關。參見例如Ferroni等人, Curr. Med. Chem. 14:2170-2180 (2007)。

CD40/CD40L相互作用之最佳特徵化功能為其在抗原呈現細胞與T細胞之間的接觸依賴性互逆相互作用中之作用。參見例如van Kooten及Banchereau, J. Leukoc. Biol. 67:2-17 (2000)；Elgueta等人, Immunol. Rev. 229:152-172 (2009)。經活化之T細胞上之CD40L與抗原活化B細胞上之CD40的結合不僅驅動B細胞快速擴增，且亦提供B細胞分化為記憶B細胞或漿細胞所必需之信號。CD40信號傳導負責形成生發中心，其中B細胞經歷親和力成熟及同型轉換以獲得產生IgG、IgA及IgE同型之高親和力抗體的能力。參見例如Kehry, J. Immunol. 156:2345-2348 (1996)。因此，在CD40L基因座中具有阻止功能性CD40/CD40L相互作用之突變的個體罹患原發性免疫缺乏X性聯高IgM症候群，其特徵在於循環IgM之過度呈現以及無法產生IgG、IgA及IgE。此等患者展現次級體液免疫反應受到抑制、對復發性化膿性感染之易感性增加以及較高的癌瘤及淋巴瘤發生率。在小鼠中進行之使CD40或CD40L基因座失活之基因敲除實驗重現了在X性聯高IgM患者中發現之主要缺陷。此等KO小鼠亦展示減弱之抗原特異性T細胞激活，表明CD40L/CD40相互作用亦為引發細胞介導之免疫反應的關鍵因素。參見例如Elgueta等人, Immunol. Rev. 229:152-172 (2009)。

活體內由CD40L或抗CD40進行之CD40接合的免疫刺激作用與針對同基因型腫瘤之免疫反應相關。參見例如French等人, Nat. Med. 5:548-553 (1999)。針對腫瘤細胞之缺陷型免疫反應可由諸如以下之因素之組合引起：免疫檢查點分子(諸如PD1或CTLA-4)之表現、減少之MHC抗原之表現、腫瘤相關抗原之不良表現、適當的黏著或共刺激分子，及由腫瘤細胞產生諸如TGFβ之免疫抑制蛋白。經轉型之抗原呈現細胞上之CD40接合引起黏著蛋白(例如CD54)、共刺激分子(例如CD86)及MHC抗原之上調，以及發炎性細胞介素分泌，從而潛在地誘導及/或增強抗腫瘤免疫反應，以及腫瘤細胞之免疫原性。參見例如Gajewski等人, Nat. Immunol. 14:1014-1022 (2013)。

CD40交聯之主要結果為骨髓細胞及B細胞處理腫瘤相關抗原且將其呈現至T細胞之能力之DC活化(通常稱為起始)及增強。除了具有直接活化先天性免疫反應之能力以外，CD40信號傳導之獨特結果係在稱為『交叉激活』之過程中對CD8+ 細胞毒性T細胞(CTL)前驅體進行腫瘤衍生之抗原之APC呈現。由成熟DC進行之CTL前驅體之此CD40依賴性活化及分化為腫瘤特異性效應CTL可增強針對腫瘤細胞的細胞介導之免疫反應。參見例如Kurts等人, Nat. Rev. Immunol. 10:403-414 (2010)。

包括達西珠單抗(dacetuzumab)之促效性CD40 mAb (SEA-CD40親本分子)已在單一藥劑及組合化學療法情況下展示令人鼓舞的臨床活性。達西珠單抗在NHL之1期研究及彌漫性大B細胞淋巴瘤(DLBCL)之2期研究中展現一些臨床活性。參見例如Advani等人, J. Clin. Oncol. 27:4371-4377 (2009)及De Vos等人, J. Hematol. Oncol. 7:1-9 (2014)。此外，當與紫杉醇或卡鉑或吉西他濱組合時，CP-870,893 (針對CD40之人類化IgG2促效劑抗體)在實體腫瘤適應症中展示令人鼓舞的活性。在此等研究中，發現抗原呈現細胞活化、細胞介素產生及抗原特異性T細胞產生。參見例如Beatty等人, Clin. Cancer Res. 19:6286-6295 (2013)及Vonderheide等人, Oncoimmunology 2:e23033 (2013)。 抗 CD40 抗體

抗CD40抗體，例如S2C6，已揭示於US20170333556A1中，其以引用之方式併入本文中。S2C6抗體為CD40信號傳導路徑之部分促效劑，且因此具有以下活性：與人類CD40蛋白結合、與食蟹獼猴CD40蛋白結合、活化CD40信號傳導路徑、增強CD40與其配位體CD40L之相互作用。參見例如美國專利第6,946,129號，其以引用之方式併入本文中。

人類化抗CD40抗體，例如人類化S2C6 (hS2C6)，已揭示於US8303955B2及US8492531B2中，其均以引用之方式併入本文中。

非岩藻醣基化抗CD40抗體，例如nf hS2C6或SEA-CD40，已揭示於US20170333556A1中。除增強與Fc受體之結合之外，SEA-CD40亦增強CD40路徑之活性，如與親本抗體達西珠單抗相比。因此，以較低劑量且使用不同投藥時程向患者投與SEA-CD40抗體。

如US20170333556A1中所描述，SEA-CD40展現增強的與FcγIII受體之結合及增強的活化免疫細胞中之CD40信號傳導路徑的能力。製造包括SEA-CD40之非岩藻醣基化抗體的方法亦揭示於US20170333556A1中。 用於治療葡萄膜黑色素瘤之 SEA - CD40 的劑量及投藥

用於腸胃外投藥之醫藥組合物較佳為無菌且實質上等張的，且在GMP條件下製造。醫藥組合物可以單位劑型(亦即，用於單次投藥之劑量)提供。可使用一或多種生理學上可接受之載劑、稀釋劑、賦形劑或助劑來調配醫藥組合物。調配物視所選擇之投藥途徑而定。對於注射，抗體可在水性溶液中，較佳在生理學上相容之緩衝液中調配以減少注射部位之不適。溶液可含有調配劑，諸如懸浮劑、穩定劑及/或分散劑。或者，抗體可呈冷凍乾燥形式，以用於在使用之前用適合的媒劑(例如無菌無熱原水)復原。

SEA-CD40係靜脈內投與。在其他實施例中，SEA-CD40係皮下投與。在另一實施例中，SEA-CD40係在腫瘤部位皮下投與。

舉例而言，可向葡萄膜黑色素瘤患者投與約0.1至約70 μg/kg (微克抗體/公斤患者體重)之水準的SEA-CD40。其他可能的劑量範圍包括約1 μg/kg至約60 μg/kg、約10 μg/kg至約50 μg/kg及約20 μg/kg至約40 μg/kg。其他可能的劑量範圍包括以下：約1 μg/kg至約5 μg/kg、約5 μg/kg至約10 μg/kg、約10 μg/kg至約15 μg/kg、約15 μg/kg至約20 μg/kg、約20 μg/kg至約25 μg/kg、約25 μg/kg至約30 μg/kg、約30 μg/kg至約35 μg/kg、約35 μg/kg至約40 μg/kg、約40 μg/kg至約45 μg/kg、約45 μg/kg至約50 μg/kg、約50 μg/kg至約55 μg/kg，及約55 μg/kg至約60 μg/kg。

在其他實施例中，向葡萄膜黑色素瘤患者投與以下劑量之SEA-CD40：約1 μg/kg、約2 μg/kg、約3 μg/kg、約4 μg/kg、約5 μg/kg、約6 μg/kg、約7 μg/kg、約8 μg/kg、約9 μg/kg、約10 μg/kg、約11 μg/kg、約12 μg/kg、約13 μg/kg、約14 μg/kg、約15 μg/kg、約16 μg/kg、約17 μg/kg、約18 μg/kg、約19 μg/kg、約20 μg/kg、約21 μg/kg、約22 μg/kg、約23 μg/kg、約24 μg/kg、約25 μg/kg、約26 μg/kg、約27 μg/kg、約28 μg/kg、約29 μg/kg、約30 μg/kg、約31 μg/kg、約32 μg/kg、約33 μg/kg、約34 μg/kg、約35 μg/kg、約36 μg/kg、約37 μg/kg、約38 μg/kg、約39 μg/kg、約40 μg/kg、約41 μg/kg、約42 μg/kg、約43 μg/kg、約44 μg/kg、約45 μg/kg、約46 μg/kg、約47 μg/kg、約48 μg/kg、約49 μg/kg、約50 μg/kg、約51 μg/kg、約52 μg/kg、約53 μg/kg、約54 μg/kg、約55 μg/kg、約56 μg/kg、約57 μg/kg、約58 μg/kg、約59 μg/kg、約60 μg/kg、約61 μg/kg、約62 μg/kg、約63 μg/kg、約64 μg/kg、約65 μg/kg、約66 μg/kg、約67 μg/kg、約68 μg/kg、約69 μg/kg或約70 μg/kg。在較佳實施例中，以約3 μg/kg、約10 μg/kg、約30 μg/kg、約45 μg/kg或約60 μg/kg之劑量向葡萄膜黑色素瘤患者投與SEA-CD40。在更佳實施例中，以約30 μg/kg之劑量向葡萄膜黑色素瘤患者投與SEA-CD40。

可以不同時間間隔投與SEA-CD40，包括間隔一週、間隔兩週、間隔三週、間隔四週、間隔五週、間隔六週、間隔七週、間隔八週、間隔九週、間隔十週、間隔十一週、間隔十二週、間隔十三週或間隔十四週。在一些實施例中，時間間隔為月度時程，例如間隔一個月、間隔兩個月或間隔三個月。在一些實施例中，時間間隔係基於週期，其中每個週期可包含SEA-CD40之一或多次投藥。每個週期之例示性長度包括一週、兩週、三週、四週、五週、六週、七週、八週、九週、十週、十一週及十二週。一個週期與下一個週期之週期長度可能不同。可在每個週期中之任一或多天投與SEA-CD40。在一些實施例中，在週期中之第一天投與SEA-CD40。在一些實施例中，在治療期中之三週週期中的第一天投與SEA-CD40，該治療期為一個週期、兩個週期、三個週期、四個週期、五個週期、六個週期、七個週期、八個週期、九個週期、十個週期、十一個週期、十二個週期、十三個週期、十四個週期、十五個週期或十六個週期。 用於治療葡萄膜黑色素瘤之 SEA - CD40 組合療法

SEA-CD40可與用於治療葡萄膜黑色素瘤之其他治療劑組合使用。

在一些實施例中，SEA-CD40可與抗PD1抗體組合投與以治療葡萄膜黑色素瘤。在一些實施例中，SEA-CD40與帕博利珠單抗、納武單抗、西米普利單抗-rwlc、斯巴達珠單抗、AK105、替雷利珠單抗、多斯塔利馬單抗、MEDI0680、匹地利珠單抗、AMP-224或SHR-1210組合投與。在一些實施例中，SEA-CD40與帕博利珠單抗、納武單抗及西米普利單抗-rwlc中之一或多者一起投與。在一些實施例中，SEA-CD40與帕博利珠單抗組合投與。在一些實施例中，SEA-CD40與納武單抗組合投與。在一些實施例中，SEA-CD40與西米普利單抗-rwlc組合投與。

在一些實施例中，SEA-CD40可與抗PDL1抗體組合投與以治療葡萄膜黑色素瘤。在一些實施例中，SEA-CD40與阿特珠單抗、德瓦魯單抗、阿維魯單抗、SHR-1316、MEDI4736、BMS-936559/MDX-1105、MSB0010718C、MPDL3280A或恩沃利單抗組合投與。在一些實施例中，SEA-CD40與阿特珠單抗、德瓦魯單抗、阿維魯單抗中之一或多者一起投與。在一些實施例中，SEA-CD40與阿特珠單抗組合投與。在一些實施例中，SEA-CD40與德瓦魯單抗組合投與。在一些實施例中，SEA-CD40與阿維魯單抗組合投與。

在一些實施例中，SEA-CD40可與抗CTLA-4抗體組合投與以治療葡萄膜黑色素瘤。在一些實施例中，SEA-CD40與伊派利單抗(ipilimumab)或曲美木單抗(tremelimumab)組合投與以治療葡萄膜黑色素瘤。

在一些實施例中，SEA-CD40可與阻斷免疫檢查點蛋白功能之其他抗體組合投與，包括針對例如LAG3、CD47及TIM3之抗體。在一些實施例中，SEA-CD40與REGN3767、瑞拉單抗(Relatlimab)、LAG-52、MK-4280或GSK2831781組合投與。

在一些實施例中，SEA-CD40可與針對41BB、CD27、ICOS或OX40之抗體組合投與。抗41BB抗體包括例如烏瑞魯單抗(Urelumab)及烏圖木單抗(Utomilumab)。抗OX40抗體包括例如INCAGN1949、MEDI6469及MEDI6383。

SEA-CD40可與化學治療劑或化學療法組合使用以治療葡萄膜黑色素瘤。在大多數人類中，數百萬細胞經由細胞凋亡而死亡且在不產生免疫反應之情況下移除。然而，在用一些化學治療劑處理之後，觀測到免疫細胞浸潤腫瘤。因此，由化學治療劑殺傷之一些腫瘤細胞充當疫苗且產生腫瘤特異性免疫反應。此現象稱為免疫原性細胞死亡(ICD)。參見例如Kroemer等人, Annu. Rev. Immunol., 31:51-72 (2013)。可以實驗方式測定化學治療劑誘導ICD之能力。必須滿足兩個準則。首先，在不存在佐劑之情況下，向免疫活性小鼠注射活體外經化學治療劑處理之癌細胞必須誘發對腫瘤抗原具有特異性之保護性免疫反應。其次，活體內發生之ICD (例如其中使用潛在的誘導ICD之化學治療劑進行處理之小鼠同基因型模型)必須驅動腫瘤中之依賴於免疫系統之免疫反應。

誘導ICD之化學治療劑包括例如蒽環黴素(anthracyclines)、抗EGFR抗體、硼替佐米(bortezomib)、環磷醯胺(cyclophosphamide)、吉西他濱、腫瘤照射及奧沙利鉑(oxaliplatin)。SEA-CD40可與此等藥劑中之任一者組合使用，以產生增強的免疫反應及治療患者中之葡萄膜黑色素瘤。在一些實施例中，SEA-CD40與吉西他濱、達卡巴仁、替莫唑胺、紫杉醇、白蛋白結合型紫杉醇或卡鉑組合使用。

在一些實施例中，SEA-CD40與兩種或更多種藥劑組合使用以治療葡萄膜黑色素瘤。在一些實施例中，SEA-CD40與化學治療劑及免疫檢查點抑制劑組合使用。在一些實施例中，SEA-CD40與化學治療劑及抗PD1抗體組合使用。在一些實施例中，SEA-CD40與化學治療劑及選自以下之抗PD1抗體組合使用：帕博利珠單抗、納武單抗、西米普利單抗-rwlc、斯巴達珠單抗、AK105、替雷利珠單抗、多斯塔利馬單抗、MEDI0680、匹地利珠單抗、AMP-224及SHR-1210。在一些實施例中，SEA-CD40與化學治療劑及以下中之一或多者組合使用：帕博利珠單抗、納武單抗及西米普利單抗-rwlc。在一些實施例中，SEA-CD40與化學治療劑及帕博利珠單抗組合使用。在一些實施例中，SEA-CD40與化學治療劑及納武單抗組合使用。在一些實施例中，SEA-CD40與化學治療劑及西米普利單抗-rwlc組合使用。在上述實施例中之任一項中，組合使用之化學治療劑可為吉西他濱、達卡巴仁、替莫唑胺、紫杉醇、白蛋白結合型紫杉醇、卡鉑或紫杉醇。在一些實施例中，上述組合中之任一者中所用之化學治療劑為吉西他濱。在一些實施例中，上述組合中之任一者中所用之化學治療劑為紫杉醇。在一些實施例中，上述組合中之任一者中所用之化學治療劑包括吉西他濱及紫杉醇兩者。

在一些其他實施例中，SEA-CD40與化學治療劑及抗PDL1抗體組合使用。在一些實施例中，SEA-CD40與化學治療劑及選自以下之抗PDL1抗體組合使用：阿特珠單抗、德瓦魯單抗、阿維魯單抗、SHR-1316、MEDI4736、BMS-936559/MDX-1105、MSB0010718C、MPDL3280A及恩沃利單抗。在一些實施例中，SEA-CD40與化學治療劑及以下中之一或多者組合使用：阿特珠單抗、德瓦魯單抗及阿維魯單抗。在一些實施例中，SEA-CD40與化學治療劑及阿特珠單抗組合使用。在一些實施例中，SEA-CD40與化學治療劑及德瓦魯單抗組合使用。在一些實施例中，SEA-CD40與化學治療劑及阿維魯單抗組合使用。在上述實施例中之任一項中，組合使用之化學治療劑可為吉西他濱、達卡巴仁、替莫唑胺、紫杉醇、白蛋白結合型紫杉醇、卡鉑或紫杉醇。在一些實施例中，上述組合中之任一者中所用之化學治療劑為吉西他濱。在一些實施例中，上述組合中之任一者中所用之化學治療劑為紫杉醇。在一些實施例中，上述組合中之任一者中所用之化學治療劑包括吉西他濱及紫杉醇兩者。

除非另外特別指示，否則本發明之任何特徵、步驟、元素、實施例或態樣可與任何其他特徵、步驟、元素、實施例或態樣組合使用。儘管已出於清楚及理解之目的而詳細地描述本發明以作為說明及實例，但顯而易見的是，可在所附申請專利範圍之範疇內實施某些改變及修改。 實例

提供以下實例以進行說明，而非限制所主張之本發明。 實例 1 ： 用 SEA - CD40 治療葡萄膜黑色素瘤

在I期臨床試驗中，用SEA-CD40與帕博利珠單抗治療兩名葡萄膜黑色素瘤患者(患者1及患者2)。

在出現進展前，患者已參與研究達4.6個月及6.3個月。此等結果被視為對葡萄膜黑色素瘤而言臨床上有意義之反應，因為帕博利珠單抗單藥療法僅在9%患者中引起6個月疾病控制(Algazi等人, Cancer. 2016年11月15日; 122(21): 3344-335)。此外，儘管兩種或更多種先前免疫療法之最佳反應為疾病繼續發展，但兩名患者在SEA-C40 + 帕博利珠單抗治療後均實現使疾病穩定之反應。另外，在任一名患者所接受之任何免疫療法中，SEA-CD40與帕博利珠單抗引起最長的疾病控制持續時間。

在用SEA-CD40與帕博利珠單抗之組合治療前，患者1患有3.6 cm主動脈淋巴結(LN)、2.1 cm肺右上葉(RUL)、4.0 cm肝、4.3 cm肝門LN、b/l肺門淋巴結、多個肺 + 肝結節及其他LN之基線疾病。圖1說明在用SEA-40與帕博利珠單抗治療時患者1之疾病穩定。

患者1接受為期140天(20週，7個週期)的SEA-CD40 (10 μg/kg)與帕博利珠單抗(200 mg/kg)之組合之治療方案，在此期間觀測到疾病穩定長達18週(6個週期)。對於每個週期(3週)，在第1天靜脈內投與SEA-CD40，且在第2天靜脈內投與帕博利珠單抗。

在用SEA-CD40與帕博利珠單抗之組合治療前，患者2患有2.0 cm RUL、1.8 cm LUL、3.7 cm肝、3.5 cm肝及腹膜癌病之基線疾病。先前向患者2投與若干其他治療方案。在任何先前治療方案期間均未觀測到疾病穩定。失敗的治療方案包括：1)帕博利珠單抗與吲哚莫德(indoximod)之組合；2)伊派利單抗與吲哚莫德之組合；及3) Y90化學藥物栓塞治療。各先前治療方案由於疾病繼續發展(未由於治療而穩定)而停止。圖1說明在用SEA-40與帕博利珠單抗治療時患者2之疾病穩定。

患者2接受為期191天的SEA-CD40 (3 μg/kg)與帕博利珠單抗(200 mg/kg)之組合之治療方案，在此期間觀測到疾病穩定長達27週(9個週期)。對於每個週期(3週)，在第1天靜脈內投與SEA-CD40，且在第2天靜脈內投與帕博利珠單抗。

更多的患者用約3 μg/kg之SEA-CD40歷時多個投藥週期來進行治療，每個週期為3週。在每個週期中之一天(例如每個週期中之第一天)或在每個週期中之兩天或更多天投與SEA-CD40。患者會展現出未繼續發展之穩定疾病達一段醫學上顯著的時段。醫學上顯著的時段為一般熟習此項技術者所瞭解的且可為例如四個週期或更長時間、三個月或更長時間。向一些或全部患者進一步投與化學療法，化學治療劑為吉西他濱、達卡巴仁、替莫唑胺、紫杉醇、白蛋白結合型紫杉醇或卡鉑。

患者亦用約3 μg/kg之SEA-CD40與約200 mg/kg之帕博利珠單抗之組合歷時多個投藥週期來進行治療，每個週期為3週。在每個週期中之一天(例如每個週期中之第一天)或在每個週期中之兩天或更多天投與SEA-CD40。在每個週期中之一天(例如每個週期中之第2天)或在每個週期中之兩天或更多天投與帕博利珠單抗。患者會展現出未繼續發展之穩定疾病達一段醫學上顯著的時段。醫學上顯著的時段為一般熟習此項技術者所瞭解的且可例如四個週期或更長時間、三個月或更長時間。向一些或全部患者進一步投與化學療法，化學治療劑為吉西他濱、達卡巴仁、替莫唑胺、紫杉醇、白蛋白結合型紫杉醇或卡鉑。

更多的患者用約10 μg/kg之SEA-CD40歷時多個投藥週期來進行治療，每個週期為3週。在每個週期中之一天(例如每個週期中之第一天)或在每個週期中之兩天或更多天投與SEA-CD40。患者會展現出未繼續發展之穩定疾病達一段醫學上顯著的時段。醫學上顯著的時段為一般熟習此項技術者所瞭解的且可為例如四個週期或更長時間、三個月或更長時間。向一些或全部患者進一步投與化學療法，化學治療劑為吉西他濱、達卡巴仁、替莫唑胺、紫杉醇、白蛋白結合型紫杉醇或卡鉑。

患者亦用約10 μg/kg之SEA-CD40與約200 mg/kg之帕博利珠單抗之組合歷時多個投藥週期來進行治療，每個週期為3週。在每個週期中之一天(例如每個週期中之第一天)或在每個週期中之兩天或更多天投與SEA-CD40。在每個週期中之一天(例如每個週期中之第2天)或在每個週期中之兩天或更多天投與帕博利珠單抗。患者會展現出未繼續發展之穩定疾病達一段醫學上顯著的時段。醫學上顯著的時段為一般熟習此項技術者所瞭解的且可為例如四個週期或更長時間、三個月或更長時間。向一些或全部患者進一步投與化學療法，化學治療劑為吉西他濱、達卡巴仁、替莫唑胺、紫杉醇、白蛋白結合型紫杉醇或卡鉑。

更多的患者係用約30 μg/kg之SEA-CD40歷時多個投藥週期來進行治療，每個週期為3週。在每個週期中之一天(例如每個週期中之第一天)或在每個週期中之兩天或更多天投與SEA-CD40。患者會展現出未繼續發展之穩定疾病達一段醫學上顯著的時段。醫學上顯著的時段為一般熟習此項技術者所瞭解的且可為例如四個週期或更長時間、三個月或更長時間。向一些或全部患者進一步投與化學療法，化學治療劑為吉西他濱、達卡巴仁、替莫唑胺、紫杉醇、白蛋白結合型紫杉醇或卡鉑。

患者亦用約30 μg/kg之SEA-CD40與約200 mg/kg之帕博利珠單抗之組合歷時多個投藥週期來進行治療，每個週期為3週。在每個週期中之一天(例如每個週期中之第一天)或在每個週期中之兩天或更多天投與SEA-CD40。在每個週期中之一天(例如每個週期中之第2天)或在每個週期中之兩天或更多天投與帕博利珠單抗。患者會展現出未繼續發展之穩定疾病達一段醫學上顯著的時段。醫學上顯著的時段為一般熟習此項技術者所瞭解的且可為例如四個週期或更長時間、三個月或更長時間。向一些或全部患者進一步投與化學療法，化學治療劑為吉西他濱、達卡巴仁、替莫唑胺、紫杉醇、白蛋白結合型紫杉醇或卡鉑。

更多的患者用約45 μg/kg之SEA-CD40歷時多個投藥週期來進行治療，每個週期為3週。在每個週期中之一天(例如每個週期中之第一天)或在每個週期中之兩天或更多天投與SEA-CD40。患者會展現出未繼續發展之穩定疾病達一段醫學上顯著的時段。醫學上顯著的時段為一般熟習此項技術者所瞭解的且可為例如四個週期或更長時間、三個月或更長時間。向一些或全部患者進一步投與化學療法，化學治療劑為吉西他濱、達卡巴仁、替莫唑胺、紫杉醇、白蛋白結合型紫杉醇或卡鉑。

患者亦用約45 μg/kg之SEA-CD40與約200 mg/kg之帕博利珠單抗之組合歷時多個投藥週期來進行治療，每個週期為3週。在每個週期中之一天(例如每個週期中之第一天)或在每個週期中之兩天或更多天投與SEA-CD40。在每個週期中之一天(例如每個週期中之第2天)或在每個週期中之兩天或更多天投與帕博利珠單抗。患者會展現出未繼續發展之穩定疾病達一段醫學上顯著的時段。醫學上顯著的時段為一般熟習此項技術者所瞭解的且可為例如四個週期或更長時間、三個月或更長時間。向一些或全部患者進一步投與化學療法，化學治療劑為吉西他濱、達卡巴仁、替莫唑胺、紫杉醇、白蛋白結合型紫杉醇或卡鉑。

更多的患者用約60 μg/kg之SEA-CD40歷時多個投藥週期來進行治療，每個週期為3週。在每個週期中之一天(例如每個週期中之第一天)或在每個週期中之兩天或更多天投與SEA-CD40。患者會展現出未繼續發展之穩定疾病達一段醫學上顯著的時段。醫學上顯著的時段為一般熟習此項技術者所瞭解的且可為例如四個週期或更長時間、三個月或更長時間。向一些或全部患者進一步投與化學療法，化學治療劑為吉西他濱、達卡巴仁、替莫唑胺、紫杉醇、白蛋白結合型紫杉醇或卡鉑。

患者亦用約60 μg/kg之SEA-CD40與約200 mg/kg之帕博利珠單抗之組合歷時多個投藥週期來進行治療，每個週期為3週。在每個週期中之一天(例如每個週期中之第一天)或在每個週期中之兩天或更多天投與SEA-CD40。在每個週期中之一天(例如每個週期中之第2天)或在每個週期中之兩天或更多天投與帕博利珠單抗。患者會展現出未繼續發展之穩定疾病達一段醫學上顯著的時段。醫學上顯著的時段為一般熟習此項技術者所瞭解的且可為例如四個週期或更長時間、三個月或更長時間。向一些或全部患者進一步投與化學療法，化學治療劑為吉西他濱、達卡巴仁、替莫唑胺、紫杉醇、白蛋白結合型紫杉醇或卡鉑。 實例 2 ： 用 SEA - CD40 治療之葡萄膜黑色素瘤患者中之 T 細胞活化

在用SEA-CD40與帕博利珠單抗之組合治療期間，在每個週期中在給藥之前自患者2採集樣品且分析T細胞活化。結果展示於圖2A及2B中。在治療期間且尤其在第4週期(C4)中觀測到高量值之T細胞活化，與影像學上之疾病消退相符。 序列表 SEQ ID NO : 1 ； SEA - CD40 重鏈

SEQ ID NO : 2 ， SEA - CD40 輕鏈

圖1提供向患有葡萄膜黑色素瘤之兩名患者投與SEA-CD40與帕博利珠單抗之結果。實線表示葡萄膜黑色素瘤患者1及葡萄膜黑色素瘤患者2。虛線表示其他腫瘤類型之患者。

圖2A及圖2B說明在投與SEA-CD40與帕博利珠單抗之後，葡萄膜黑色素瘤患者中之T細胞活化。在每個週期之給藥前採集樣品。x軸中之「C」意謂週期。


          <![CDATA[<110>  美商西健公司(Seagen Inc.)]]>
          <![CDATA[<120>  使用SEA-CD40治療葡萄膜黑色素瘤]]>
          <![CDATA[<130>  0040-00912PC]]>
          <![CDATA[<150>  63/085,765]]>
          <![CDATA[<151>  2020-09-30]]>
          <![CDATA[<160>  2     ]]>
          <![CDATA[<170>  PatentIn version 3.5]]>
          <![CDATA[<210>  1]]>
          <![CDATA[<211>  444]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  重鏈可變區]]>
          <![CDATA[<400>  1]]>
          Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr 
                      20                  25                  30          
          Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ala Arg Val Ile Pro Asn Ala Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Phe Thr Leu Ser Val Asp Asn Ser Lys Asn Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Glu Gly Ile Tyr Trp Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val 
                      100                 105                 110         
          Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser 
                  115                 120                 125             
          Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys 
              130                 135                 140                 
          Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu 
          145                 150                 155                 160 
          Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu 
                          165                 170                 175     
          Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr 
                      180                 185                 190         
          Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val 
                  195                 200                 205             
          Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro 
              210                 215                 220                 
          Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe 
          225                 230                 235                 240 
          Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val 
                          245                 250                 255     
          Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe 
                      260                 265                 270         
          Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro 
                  275                 280                 285             
          Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr 
              290                 295                 300                 
          Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val 
          305                 310                 315                 320 
          Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala 
                          325                 330                 335     
          Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg 
                      340                 345                 350         
          Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly 
                  355                 360                 365             
          Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro 
              370                 375                 380                 
          Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser 
          385                 390                 395                 400 
          Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln 
                          405                 410                 415     
          Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His 
                      420                 425                 430         
          Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 
                  435                 440                 
          <![CDATA[<210>  2]]>
          <![CDATA[<211>  219]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  輕鏈可變區]]>
          <![CDATA[<400>  2]]>
          Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser 
                      20                  25                  30          
          Asn Gly Asn Thr Phe Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala 
                  35                  40                  45              
          Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Thr Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 
              50                  55                  60                  
          Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile 
          65                  70                  75                  80  
          Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Ser Gln Thr 
                          85                  90                  95      
          Thr His Val Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 
                      100                 105                 110         
          Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 
                  115                 120                 125             
          Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 
              130                 135                 140                 
          Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 
          145                 150                 155                 160 
          Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 
                          165                 170                 175     
          Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 
                      180                 185                 190         
          Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 
                  195                 200                 205             
          Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 
              210                 215                 
          

Claims (15)

1. 一種治療葡萄膜黑色素瘤之方法，其包含向患有葡萄膜黑色素瘤之患者投與包含抗CD40抗體之組合物， 其中該抗CD40抗體包含：1)重鏈可變區，其包含SEQ ID NO: 1之胺基酸序列；2)輕鏈可變區，其包含SEQ ID NO: 2之胺基酸序列；及3)人類恆定區； 其中該人類恆定區包含殘基N297 (EU編號)處之N-醣苷連接之糖鏈，其中該組合物中殘基N297 (EU編號)處小於5%的N-醣苷連接之糖鏈包含岩藻醣殘基；及 其中該抗CD40抗體係以每公斤患者體重約3 μg、約10 μg、約30 μg、約45 μg或約60 μg之劑量投與。
2. 如請求項1之方法，其中該劑量為每公斤患者體重約30 μg。
3. 如請求項1或2之方法，其中每三週或每六週投與該抗CD40抗體。
4. 如請求項1至3中任一項之方法，其進一步包含投與化學治療劑。
5. 如請求項4之方法，其中該化學治療劑為吉西他濱(gemcitabine)、達卡巴仁(dacarbazine)、替莫唑胺(temozolomide)、紫杉醇、白蛋白結合型紫杉醇或卡鉑(carboplatin)。
6. 一種治療葡萄膜黑色素瘤之方法，其包含向患有葡萄膜黑色素瘤之患者投與1)包含抗CD40抗體之組合物；及2)抗PD1抗體或抗PDL1抗體， 其中該抗CD40抗體包含：1)重鏈可變區，其包含SEQ ID NO: 1之胺基酸序列；2)輕鏈可變區，其包含SEQ ID NO: 2之胺基酸序列；及3)人類恆定區； 其中該人類恆定區包含殘基N297 (EU編號)處之N-醣苷連接之糖鏈，其中該組合物中殘基N297 (EU編號)處小於5%的N-醣苷連接之糖鏈包含岩藻醣殘基；及 其中該抗CD40抗體係以每公斤患者體重約3 μg、約10 μg、約30 μg、約45 μg或約60 μg之劑量投與。
7. 如請求項6之方法，其中該抗PD1抗體係選自由以下組成之群：帕博利珠單抗(Pembrolizumab)、納武單抗(Nivolumab)、西米普利單抗-rwlc (Cemiplimab-rwlc)、斯巴達珠單抗(Spartalizumab)、AK105、替雷利珠單抗(Tislelizumab)、多斯塔利馬單抗(Dostarlimab)、MEDI0680、匹地利珠單抗(Pidilizumab)、AMP-224及SHR-1210。
8. 如請求項6或7之方法，其中該抗PDL1抗體係選自由以下組成之群：阿特珠單抗(Atezolizumab)、德瓦魯單抗(Durvalumab)、阿維魯單抗(Avelumab)、SHR-1316、MEDI4736、BMS-936559/MDX-1105、MSB0010718C、MPDL3280A或恩沃利單抗(Envafolimab)。
9. 如請求項6至8中任一項之方法，其中該劑量為每公斤患者體重約30 μg。
10. 如請求項6至9中任一項之方法，其中每三週或每六週投與該抗CD40抗體。
11. 如請求項6至10中任一項之方法，其進一步包含投與化學治療劑。
12. 如請求項11之方法，其中該化學治療劑為吉西他濱、達卡巴仁、替莫唑胺、紫杉醇、白蛋白結合型紫杉醇、卡鉑或紫杉醇。
13. 如請求項6至12中任一項之方法，其包含投與1)抗CD40抗體，及2)抗PD1抗體。
14. 如請求項13之方法，其中該抗PD1抗體為帕博利珠單抗。
15. 如請求項13或14之方法，其中以約200 mg/kg投與該抗PD1抗體。

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