TW202228765A - 重組ACE2-Fc融合分子以及製造與使用其的方法 - Google Patents

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Abstract

一種預防病毒感染、降低病毒感染風險或治療病毒感染，或預防或治療受試者中由病毒引起的症狀的方法，該方法包括向該受試者投與有效量的融合蛋白，其中該融合蛋白包含與Fc結構域共價融合的變異血管收縮素轉化酶2 (ACE2)結構域。相對於具有SEQ ID NO. 1的全長野生型ACE2，變異ACE2結構域包含N末端缺失、C末端缺失或兩者，並且變異ACE2結構域具有ACE2活性。該病毒可為SARS-CoV、SARS-CoV-2、或MERS-CoV。症狀包括嚴重急性呼吸道症候群(SARS)、中東呼吸道症候群(MERS)、急性呼吸道窘迫症候群(ARDS)、肺動脈高壓(PAH)或冠狀病毒疾病2019 (COVID-19)。

Description

重組ACE2-Fc融合分子以及製造與使用其的方法
本申請案根據專利法主張2020年10月1日申請的美國臨時申請案序列號第63/086,593號之申請日權益，該案之整體內容以引用方式併入本文。
本申請案係關於涉及血管收縮素轉化酶2(ACE2)的疾病、症狀或病況(例如冠狀病毒疾病2019(COVID-19)與相關病況)之預防或治療。
除本文另有指明，此節所述之材料對於此申請案之申請專利範圍並非先前技術，且亦不因內含於此節而認作先前技術。
COVID-19為嚴重急性呼吸道症候群(severe acute respiratory syndrome; SARS)冠狀病毒2(SARS-CoV-2)所引起的感染性疾病。COVID-19的併發症可包括長期肺損傷、肺炎、急性呼吸道窘迫症候群(acute respiratory distress syndrome; ARDS)、周邊及嗅覺神經損傷、多重器官衰竭、敗血性休克及死亡。發表於2020年一月號《柳葉刀》中的頭41起COVID-19確診病例之研究報導了2019年12月1日為最早的症狀發端日。2020年3月11日之時，世界衛生組織(World  Health  Organization; WHO)宣告COVID-19爆發大流行。截至2020年9月26日為止，遍及188個國家及地區已報導超過3260萬起病例且超過99萬人死亡，其中美國就報導了超過750萬起病例且超過20.5萬人死亡。
在2020年12月2日，英國藥品與醫療產品監控署(Medicines and Healthcare products Regulatory Agency; MHRA)給予了輝瑞-德國BNT (Phizer-BioNTech) mRNA疫苗臨時監管批准，成為首個批准該疫苗的國家並且亦是西方世界首個批准使用任何COVID-19疫苗的國家。自此以後，更多類型的疫苗已被至少一個國家監管機構授權供公眾使用：來自輝瑞-德國BNT (Phizer-BioNTech)以及莫德納(Moderna)的兩種RNA疫苗；來自國藥集團(Sinopharm)、巴拉特生物科技公司 (Bharat Biotech)以及莫德納的三種習知不活化疫苗；來自衛星V (Sputnik V)、牛津-阿斯特捷利康(Oxford-AstraZeneca)以及楊森(Janssen)的三種病毒載體疫苗；以及一種肽疫苗(EpiVacCorona)。
截至2021年8月16日，CDC的疫苗有效性研究提供了越來越多的證據，證明可用的RNA COVID-19疫苗在現實條件下的保護作用與它們在臨床試驗環境中的保護作用一樣好。該等疫苗降低了完全接種疫苗的人患COVID-19，尤其是重症的風險。與完全接種疫苗的人相比，華盛頓州的一項研究發現，與已接種疫苗的人相比，未接種疫苗的人測試出COVID-19陽性的可能性高6倍，住院的可能性高37倍，並且死亡的可能性高67倍。CDC的資料顯示，未接種疫苗的人感染的可能性是5倍，住院的可能性是10倍，並且死亡的可能性是11倍。
血管收縮素轉化酶2(ACE2)是一種位於下列細胞的細胞膜上的含鋅金屬酶：主要為肺的肺泡細胞、小腸的腸上皮細胞、動脈與靜脈的內皮細胞、動脈的平滑肌細胞以及肺、動脈、心臟、腎、小腸與其他組織裡的其他細胞譜系。ACE2藉由抗衡心血管、腎及呼吸系統中血管收縮素轉化酶的活性來調節腎素血管收縮素系統(renin angiotensin system)，此指出其在血壓控制中的重要角色。ACE2在高血壓、心臟相關功能(cardiac function)、心臟功能(heart function)及糖尿病的生理學中扮演保護性角色。在急性呼吸道窘迫症候群(ARDS)中，ACE、AngII與AT1R促進致病機轉，然而ACE2與AT2R卻保護免於ARDS。另外，ACE2已被鑑別為嚴重急性呼吸道症候群(severe acute respiratory syndrome; SARS)冠狀病毒的受體，且扮演嚴重急性呼吸道症候群(SARS)致病機制中的重要角色。冠狀病毒家族中的至少三種病毒SARS-CoV、MERS CoV以及SARS-CoV-2，使用其病毒蛋白中的一種，又稱為棘蛋白(Spike)，結合至人類宿主細胞表面上的ACE2蛋白，以使病毒入侵人細胞中。
SARS-CoV-2為七種已知之感染人類的冠狀病毒中的一種，已知之感染人類的冠狀病毒包括2003年在亞洲引起SARS大爆發的SARS-CoV-1病毒以及2012年在中東引起SARS大爆發的MERS CoV病毒。對SARS-CoV-2病毒的免疫反應涉及細胞介導的免疫(cell-mediated immunity)以及抗體生成的組合。儘管超過了1億人自COVID-19中恢復，但在個體中對SARS-CoV-2病毒的天然免疫是否持久仍屬未知。顧慮之一係關於病毒持續累積的突變，這會改變病毒抗原性範圍且引起病毒突變株的再感染。截至2021年1月，在歐洲與南非鑑別出的SARS-CoV-2病毒變異株(variant strain)似乎正迅速擴散。這些變異株可能窩藏終將增進病毒識別並感染至宿主細胞的突變，從而增加感染性和/或致病性。
其他顧慮與抗體依賴性增強反應(antibody-dependent enhancement; ADE)的現象有關。ADE在次佳抗體的結合增進病毒入侵宿主細胞中時發生。在冠狀病毒中，靶向病毒棘蛋白(S) (spike (S))醣蛋白的抗體促進ADE (Wan等人，J. Virol. 2020)。在SARS-CoV-1病毒的案例中，發現了中和多數變體的抗體能增進變體病毒入侵免疫細胞，繼而針對其設計疫苗來進行防範的疾病遭惡化。因此，ADE會阻礙疫苗開發，因為疫苗可能導致次佳抗體產生。在此情況下，應考慮不同於疫苗的任何預防性策略作為在暴露至SARS-CoV-2病毒前或後防止ADE發生的可行選項。
在流行病早期，由於受感染的人數很少，很少有『突變』變異病毒，因此出現逃逸突變株的機會更少。隨著時間的推移，SARS-CoV-2開始進化成許多變體，並且變得更容易傳播。幾種SARS-CoV-2變體由於其增強的傳播性、增加的毒性或降低的疫苗對其有效性而特別重要(Planas等人，Nature, 2020；Kim等人，bioRxiv, 2021)。為了對SARS-CoV-2變體進行分類，祖先類型係「A」型，並且衍生類型係「B」型。B型突變成更多的類型，包括B.1，其係所關注的全球變體的祖先。WHO已經命名了α (B.1.1.7，2020年12月)、β (B.1.351，2021年1月)、γ (P.1，2021年1月)、κ (B.1.617.1)、δ (B.1.617.2，2021年5月)、λ (C.37)和其他變體。與2020年初鑑別出的原始病毒相比，α變體和δ變體兩者的傳播性明顯更強。
δ變體的感染性比α變體的感染性大約40%，並且在2021年春季成為優勢毒株。截至2021年8月下旬，δ變體佔美國病例的99%，並且發現尚未接種疫苗的人患重症及住院的風險加倍，且甚至RNA疫苗的疫苗保護率亦從91%下降至66%。CDC研究表明，COVID-19疫苗提供了55%的抗感染保護，80%的抗症狀感染保護，以及至少90%的抗住院保護。最近的研究已表明，疫苗效力降低了53.1%、42-76%或64.6%，此種降低可能係由於免疫力下降與對高感染性δ毒株的保護不力的組合(Nanduri等人，MMWR. 2021；Puranik等人，medRxiv, 2021；Seppala等人，Eurosurveillance, 2021)。CDC亦報告了5814例突破性感染(亦即接種過疫苗的個體因疫苗意欲預防的同一種疾病而患病)，以及美國大於7500萬完全接種疫苗的人中的74例死亡。突破性感染和相關死亡的比率可能非常低，從而證明了疫苗的有效性。另一方面，新病毒毒株諸如δ的突破性感染可能會更頻繁地發生，如在以色列所證明的，在以色列2021年8月超過一半的病例和住院發生在完全接種疫苗的個體中(Wadman, M. Science 2021)。對於彼等有突破性感染的個體患者，特別是彼等虛弱的老年人，發生嚴重疾病、譫妄、住院和死亡的風險非常高(Antonelli等人，Lancet, 2021)。
減輕SARS-CoV-2致病性的兩種主要醫療干預包括主動免疫及被動免疫；亦即疫苗接種、單株抗體療法和用來自先前感染的患者的恢復期血漿治療(Taylor等人，Nat Rev Immunol., 2021；Yan等人，Pharmaceuticals. 2021)。該等策略中的每一種策略都依賴於抗體結合及病毒抗原的中和，特別是棘蛋白的受體結合結構域，其介導病毒入侵帶有ACE2受體的宿主細胞。任何影響棘蛋白結構的病毒突變都可能影響抗體結合並中和棘蛋白的能力，從而降低大多數現有疫苗及療法的效力。
因此，仍迫切需要涉及血管收縮素轉化酶2(ACE2)諸如SARS-CoV2，尤其是其更強的突變毒株之疾病或病況的有效治療方式或預防措施。
下列發明內容僅供說明，並不意指任何方式的限定。除上述說明性態樣、實施例及特徵外，藉由參考附圖和下列的詳細說明，進一步的態樣、實施例及特徵將變得顯而易見。
本申請案尤其提供了用於預防病毒感染、降低病毒感染風險或治療病毒感染，或預防或治療受試者的由病毒引起的症狀的方法。
在一個實施例中，病毒可係冠狀病毒。在一個實施例中，病毒可係SARS-CoV、SARS-CoV-2、MERS-CoV或其組合。
在一個實施例中，症狀可係由冠狀病毒引起的任何症狀。在一個實施例中，症狀可係嚴重急性呼吸道症候群(SARS)、中東呼吸道症候群(MERS)、急性呼吸道窘迫症候群(ARDS)、冠狀病毒疾病2019 (COVID-19)或其組合。在一個實施例中，症狀(疾病或病況)涉及血管收縮素轉化酶2 (ACE2)。在一個實施例中，症狀可係病毒感染，諸如SARS-CoV-2、SARS-CoV、SARS棘蛋白、冠狀病毒、SARS病毒或其片段或組合的感染。
在一個實施例中，SARS-CoV-2病毒實質上包含δ毒株。在一個實施例中，SARS-CoV-2病毒包含棘蛋白突變。在一個實施例中，突變被配置為增加病毒對ACE2結構域的結合親和力。
在一個實施例中，該方法包括向受試者投與有效量的融合蛋白或融合蛋白複合體的步驟。在一個實施例中，融合蛋白包含與Fc結構域共價融合的變異血管收縮素轉化酶2 (ACE2)結構域。相對於具有SEQ ID NO. 1的全長野生型ACE2，變異ACE2結構域可包含N末端缺失、C末端缺失或兩者，並且變異ACE2結構域具有ACE2活性。
在一個實施例中，融合蛋白包含與Fc結構域共價融合的變異血管收縮素轉化酶2 (ACE2)結構域。在一個實施例中，相對於全長野生型ACE2，變異ACE2結構域包含N末端缺失、C末端缺失或兩者。在一個實施例中，全長野生型ACE2結構域與SEQ ID NO. 1具有至少70%、80%、90%、95%、97%或98%序列一致性的胺基酸序列。在一個實施例中，變異ACE2結構域具有ACE2活性。
在一個實施例中，變異ACE2結構域包含與來自全長野生型ACE2的胺基酸序列的區段具有至少75%、80%、85%、90%、95%、97%、98%或99%序列一致性的胺基酸序列。在一個實施例中，該區段可以從選自全長野生型ACE2的殘基1-17的胺基酸殘基開始。在一個實施例中，該區段可以選自全長野生型ACE2的殘基615740的胺基酸殘基結束。例如，變異ACE2結構域可以具有與來自全長野生型ACE2的從殘基1至殘基615、從殘基2至殘基618、從殘基2至殘基740、從殘基4至殘基615、從殘基17至殘基615、從殘基18至殘基615、從殘基17至殘基740、或起始殘基和結束殘基的任何其他組合的胺基酸序列區段具有至少98%或99%序列一致性的胺基酸序列。
在一個實施例中，變異ACE2結構域包含與SEQ ID NO. 3具有至少75%、80%、85%、90%、95%、97%、98%或99%序列一致性的胺基酸序列 。
在一個實施例中，與全長野生型ACE2相比，變異ACE2結構域對SARS-CoV或SARS棘蛋白具有更高的結合親和力。例如，變異ACE2結構域可對SARS-CoV或SARS棘蛋白具有KD為0.1 nM 至100 nM的結合親和力。
在一個實施例中，與全長野生型ACE2相比，變異ACE2結構域對SARS-CoV或SARS棘蛋白具有更高的結合親合力。例如，變異ACE2結構域可對SARS-CoV或SARS棘蛋白具有KD為小於10 nM的結合親合力。
在一個實施例中，融合蛋白對κ變體的親合力小於1.0E-12。在一個實施例中，融合蛋白對δ SARS-CoV-2毒株的結合親和力高於對Wuhan-Hu-1毒株的結合親和力。在一個實施例中，對δ SARS-CoV-2毒株的結合親和力是對Wuhan-Hu-1毒株的結合親和力的至少3倍。
在一個實施例中，Fc結構域來源於免疫球蛋白的Fc結構域。免疫球蛋白可以是IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1 (d-IgA1、S-IgA1)、IgA2、IgD、IgE或IgM。在一個實施例中，Fc結構域可以具有Fc鉸鏈區。在一個實施例中，Fc鉸鏈區可工程化為C220S。在一個實施例中，當與野生型Fc結構域相比時，Fc結構域可包含選自K322A、L234A和L235A的無效突變。在一個實施例中，野生型Fc結構域具有與SEQ ID NO. 5具有至少98%或99%的序列一致性的胺基酸序列。
在一個實施例中，Fc結構域可缺乏效應子功能。在一個實施例中，Fc結構域可缺乏抗體依賴性細胞性細胞毒性(antibody-dependent cellular cytotoxicity；ADCC)、抗體依賴性細胞性吞噬作用(antibody-dependent cellular phagocytosis；ADCP)以及補體依賴性細胞毒性(complement-dependent cytotoxicity；CDC)。在一個實施例中，Fc結構域包含IgG1 Fc結構域。
在一個實施例中，Fc結構域包含與SEQ ID NO. 6具有至少75%、80%、85%、90%、95%、97%、98%或99%序列一致性的胺基酸序列。
在一個實施例中，融合蛋白可具有與SEQ ID NO. 7、SEQ ID NO. 9、SEQ ID NO. 11、SEQ ID NO. 13、SEQ ID NO. 15、SEQ ID NO. 16、SEQ ID NO. 17、SEQ ID NO. 18、SEQ ID NO. 19、及SEQ ID NO. 21具有至少75%、80%、85%、90%、95%、97%、98%或99%序列一致性的胺基酸序列。
在一個實施例中，融合蛋白可具有約50 kDa至250 kDa的分子量。在一個實施例中，融合蛋白可具有50 kDa、60 kDa、70 kDa、80 kDa、90 kDa、100 kDa、120 kDa、150 kDa、180 kDa、200 kDa、250 kDa或之間任何數字的分子量。
在一個實施例中，融合蛋白複合體可為本文所揭示的融合蛋白的同質二聚體。在一個實施例中，融合蛋白複合體包括兩個變異ACE2結構域。在一個實施例中，融合蛋白複合體包含至少兩個融合蛋白。在一個實施例中，兩個融合蛋白藉由一個或兩個雙硫鍵成對。在一個實施例中，雙硫鍵位於Fc結構域的鉸鏈上。
在一個實施例中，融合蛋白或融合蛋白複合體具有對SARS-CoV-2、SARS-CoV或SARS棘蛋白或其片段的結合親和力。在一個實施例中，結合親和力具有不大於0.1nM、0.5nM、1nM、2nM、3nM、5nM、10nM、20nM、25nM、30nM、40nM、50nM、60nM、80nM或於之間任何數字的平衡解離常數(KD)。
在一個實施例中，融合蛋白或融合蛋白複合體具有對SARS-CoV-2、SARS-CoV或SARS棘蛋白或其片段的結合親合力。在一個實施例中，結合親合力具有不大於1.0E-12、0.001nM、0.01nM、0.05nM、1nM、2nM、3nM、5nM、10nM或於之間任何數字的平衡解離常數(KD)。
在一個實施例中，融合蛋白或融合蛋白複合體具有約50 pmol/min/μg至約5000 pmol/min/μg的酵素比活性(specific enzymatic activity)。在一個實施例中，融合蛋白具有約568 pmol/min/μg的酵素比活性。
融合蛋白以用於治療和預防本文揭示的感染或疾病的有效劑量投與。在一個實施例中，每次治療投與的融合蛋白的劑量為約1mg/Kg體重至約200mg/Kg體重、約5mg/Kg體重至約100mg/Kg體重、約3mg/Kg體重至約70mg/Kg體重、或約10mg/Kg體重至約150mg/Kg體重。
在一個實施例中，每天投與的融合蛋白的劑量係小於或等於約100mg/Kg體重、120mg/Kg體重、140mg/Kg體重、150mg/Kg體重、180mg/Kg體重、200mg/Kg體重。在一個實施例中，融合蛋白以小於或等於約25mg/Kg體重、50mg/Kg體重、70mg/Kg體重、90mg/Kg體重、100mg/Kg體重、150mg/Kg體重、200mg/Kg體重的劑量每天投與兩次。
在一個實施例中，融合蛋白係作為液體製劑投與。在一個實施例中，融合蛋白係作為溶液中的液體懸浮液投與。在一個實施例中，溶液可包含鹽、碳水化合物、表面活性劑或其組合。在一個實施例中，鹽可以是氯化鈉、組胺酸鹽酸鹽或其組合。在一個實施例中，碳水化合物可係蔗糖、葡萄糖或其組合。在一個實施例中，表面活性劑可係聚山梨醇酯80。
在一個實施例中，液體製劑可包含濃度為約2mg/ml至約20mg/ml、約5mg/ml至約10mg/ml、或約5mg/ml至約20mg/ml的融合蛋白。
本申請案中揭示的方法可用於治療或預防受試者的病毒感染、急性呼吸道窘迫症候群、肺動脈高壓或急性肺損傷。在一個實施例中，投與融合蛋白可預防受試者感染SARS-CoV-2病毒感染。在一個實施例中，投與融合蛋白可降低受試者感染SARS-CoV-2病毒感染的風險。在一個實施例中，投與融合蛋白可防止患有SARS-CoV-2病毒感染的受試者住院。在一個實施例中，投與融合蛋白可降低患有SARS-CoV-2病毒感染的受試者住院的風險。在一個實施例中，投與融合蛋白可縮短患有SARS-CoV-2病毒感染的受試者的住院時長。在一個實施例中，投與融合蛋白可阻止患有SARS-CoV-2病毒感染的受試者的氧合和換氣。在一個實施例中，融合蛋白的投與可以減少患有SARS-CoV-2病毒感染的受試者對氧合和換氣的需求。在一個實施例中，投與融合蛋白可防止患有SARS-CoV-2病毒感染的受試者死亡。在一個實施例中，投與融合蛋白可降低患有SARS-CoV-2病毒感染的受試者死亡的風險。在一個實施例中，投與融合蛋白可降低患有SARS-Co2-2病毒感染的受試者的COVID症狀的嚴重程度。
在一個實施例中，該方法可包括靜脈內、皮下、經由鼻通道(諸如鼻噴霧劑)或經由肺部通道投與融合蛋白或融合蛋白複合體。在一個實施例中，融合蛋白可以經由每日輸注投與。在一個實施例中，融合蛋白可以經由每日肌內注射投與。
在一個實施例中，融合蛋白可以與抗病毒劑、免疫調節試劑或其組合共同投與。在一個實施例中，抗病毒劑可為法維拉韋(favipiravir)、雷巴威林(ribavirin)、戈利德西韋(galidesivir)、瑞德西韋(remdesvir)或其組合。
在一個實施例中，受試者係人。本申請案中揭示的方法可用於具有選自由以下項組成的群組的至少一個風險因素的受試者：年齡大於或等於65歲、免疫系統中度或嚴重受損、代謝症候群、對COVID疫苗過敏以及接受COVID疫苗後免疫反應低或無免疫反應。在一個實施例中，受試者可患有癌症、慢性腎病、慢性肺病、糖尿病或心臟病。
在進一步的態樣中，本申請案提供用於治療涉及血管收縮素轉化酶2(ACE2)之疾病或病況的醫藥組成物。在一個實施例中，醫藥組成物包括如本文所揭示之融合蛋白或融合複合體以及醫藥學可接受之載劑。在一個實施例中，醫藥組成物進一步包括抗病毒劑。在一個實施例中，醫藥組成物包括如其所揭示之蛋白接合物以及醫藥學可接受之載劑。
在一個實施例中，本申請案提供了一種包含本文所揭示的融合蛋白的液體組成物。在一個實施例中，液體組成物包含每劑約100 mg至約20,000 mg、約200 mg至約10,000 mg、約100 mg至約10,000 mg、或約500 mg至約10,000 mg的融合蛋白含量。
在一個實施例中，液體組成物包含濃度為約0.1重量%至約10重量%、約0.5重量%至約5重量%、約0.5重量%至約1重量%、或約0.5重量%至約2重量%的融合蛋白。
以下的詳細說明中，參考構成其一部分的附圖。在圖式中，除非上下文另有指明，相似的符號通常標識相似的元件。在詳細說明、圖式和申請專利範圍中所描述的說明性實施例並不被視為限制。在不背離本文所呈現之標的之精神或範圍的情形下，可利用其他實施例，且可進行其他改變。將容易理解，能夠以本文中明確考量之所有各式各樣不同的配置，來佈置、取代、組合、分離及設計在本文中概述且在圖式中闡明之本案揭示內容的態樣。
本申請案係關於融合蛋白(例如重組人類ACE2-Fc融合蛋白)的產生和特性分析等。在一些實施例中，這些融合蛋白能保護人類宿主細胞的膜ACE2免於病毒顆粒或病毒的侵害。在一個實施例中，病毒顆粒或病毒可運用病毒棘蛋白，在感染後使病毒入侵宿主細胞。在一個實施例中，病毒顆粒包括但不限定於SARS-CoV-2病毒、COVID-19病毒、SARS-CoV-2變體及其他冠狀病毒。在一個實施例中，病毒可引起嚴重急性呼吸道症候群(SARS)。在一個實施例中，SARS可包括冠狀病毒疾病2019或COVID-19。
在一個實施例中，重組人類ACE2-Fc融合蛋白可為ACE2鋅金屬肽酶結構域(又稱ACE2胞外結構域，ACE2-ECD)及IgG1 Fc片段的融合蛋白。在一個實施例中，融合蛋白為SI-F019，為ACE2-ECD及IgG1 Fc片段之融合蛋白且具有依據EU編號系統的C220S、L234A、L235A及K322A突變(表1及圖1)。活性ACE2-ECD保留宿主受體-病毒交互作用的結構性構形。IgG1 Fc片段中的每個突變可耗損某些免疫反應。突變C220S可移除配對輕鏈與重鏈用的未配對半胱胺酸，且因此提供避免蛋白質形成聚集、改善蛋白質穩定度及促進製造效率與擴充性等等的技術優勢。導入L234A及L235A兩者可減少Fc的效應子功能，例如抗體依賴性細胞性細胞毒性(ADCC)、抗體依賴性細胞性吞噬作用(ADCP)。K322A突變可減少C1q結合所觸發的補體依賴性細胞毒性作用(CDC)。SI-F019經設計以中和SARS-CoV-病毒，同時觸發較少的效應子反應。
除非上下文不適用，本文中使用的用語「一(a/an)」及「該」經定義為「一或更多」且包括複數。
用語「重組融合蛋白」係指透過編碼兩個或更多個基因之融合基因的基因生物工程所產生的蛋白質，該兩個或更多個基因原本編碼不同的蛋白質。
用語「ACE2-Fc」係指人類ACE2蛋白片段及人類免疫球蛋白之片段可結晶區(Fc區)的工程改造片段的重組融合蛋白，其中人類免疫球蛋白包括但不限定於IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1 (d-IgA1、S-IgA1)、IgA2、IgD、IgE或IgM。
用語「棘蛋白(spike/Spike)」、「S蛋白」或變體係指負責讓病毒能附接至宿主細胞之膜(「S1次單元」或「S1蛋白」)並與宿主細胞之膜融合(「S2次單元」或「S2蛋白」)的蛋白質。在COVID-19的案例中，SARS-CoV-2 對人類細胞上的ACE2受體具有充分親和力，以使用其作為入侵細胞的機制，且比起原始SARS病毒，SARS-CoV-2對人類ACE2具有較高親和力。
用語「Fc結構域」、「Fc片段」及「Fc區」係指IgG、IgA及IgD抗體同型中Fc區的相同結構域或片段(各自為「Fc結構域」或「Fc片段」)，其衍生自鉸鏈以及抗體兩個重鏈的第二與第三恆定結構域(CH2-CH3)。
用語「親和力」係指兩種多肽之間吸引力的度量單位(measure)，兩種多肽例如受體/配體、ACE2/棘蛋白或例如其變體。兩種多肽之間的內在吸引力(intrinsic attractiveness)能被表現為特定交互作用的結合親和力平衡常數(KD)。可藉由例如生物層干涉技術(Bio-Layer Interferometry)來量測KD結合親和力常數。
用語「親合力」係指例如蛋白質受體與其配體之間的個別非共價結合交互作用的多重親和力累加強度，且一般稱功能性親和力。因而親合力與親和力不同，親和力是描述單一交互作用的強度。
用語「抗原性漂移(antigenic drift)」係指感染性病毒的隨機基因突變，其產生在抗原性上具微小改變的新病毒株，防止先前株感染的抗體對新病毒株可能並不有效。
用語「細胞激素釋放症候群(CRS)」係指SARS-CoV-2感染後血液中與發炎介質增加程度相關聯的COVID-19重度案例中的CRS，發炎介質包括細胞激素與趨化激素，例如介白素(IL)-2、IL-6、IL-7、IL-10、腫瘤壞死因子(tumor necrosis factor; TNF)、顆粒球群落刺激因子(granulocyte colony-stimulating factor; G-CSF)、單核球趨化蛋白-1(MCP1；又稱CCL2)、巨噬細胞發炎蛋白1α (MIP1α；又稱CCL3)、CXC-趨化激素配體10 (CXCL10)、C-反應蛋白、鐵蛋白及D二聚體。
用語「中和抗體」係指藉由中和病原體或感染性粒子所具有的生物學上的任何效應來保護細胞免受病原體或感染性粒子侵害的抗體。中和使粒子不再是感染性或致病性的。中和抗體是過繼免疫系統針對病毒、細胞內細菌和微生物毒素的體液反應的一部分。藉由與感染性粒子上的表面結構(抗原)特異性結合，中和抗體阻止粒子與其可能感染和破壞的宿主細胞相互作用。由於中和抗體引起的免疫亦稱為消除性免疫(sterilizing immunity)，因為免疫系統在任何感染發生之前消除感染性粒子。
用語「疫苗」係指提供對特定感染性疾病的主動獲得性免疫的生物製劑。疫苗可為預防性的(預防或改善未來自然或「野生」病原體感染的影響)，或者治療性的(對抗已經發生的疾病)。
用語「突破性感染」係指接種過疫苗的個體因疫苗意欲預防的同一疾病而患病的病例。突破性感染的特徵取決於病毒本身。與若感染自然發生相比，接種過疫苗的個體的感染往往會導致較輕的症狀及較短的持續時間。突破性感染的原因包括年齡、病毒和中和抗體突變、疫苗投與或儲存不當。
用語「消除性免疫」係指由於中和抗體能夠藉由結合病原體(例如所有SARS-CoV-2變體)並阻斷細胞入侵所需的分子(亦即由變體編碼的棘蛋白)來抑制感染性，以此完全防止感染而產生的免疫性。由於突破性感染，COVID-19疫苗和中和抗體都未提供完全的消除性免疫。根據該等定義，SI-F019可用作治療性疫苗以實現對SARS-CoV-2病毒變體，以及使用ACE2作為入侵人類細胞的病毒性入侵的任何其他SARS病毒的治療性消除性免疫。 實例 實例 1.重組ACE2-Fc融合蛋白的選殖、表現及純化
人類膜性ACE2是介導SARS-CoV病毒入侵人類宿主細胞中的關鍵性受體。人類ACE2蛋白具有至少三個功能性結構域：信號肽(殘基1-17)；鋅金屬肽酶結構域(殘基18-615)；以及TMPRSS2蛋白酶切割位點(殘基697-716) (SEQ ID NO. 1為來自Genbank登錄號NP_001358344.1的全長人類ACE2蛋白序列)，SARS-CoV病毒蛋白(亦即棘蛋白)與全長人類ACE2蛋白的鋅金屬肽酶結構域(SEQ ID NO. 3為殘基1至615的經截斷ACE2蛋白序列)交互作用。另一方面，人類抗體Fc區(SEQ ID NO. 5)能與許多免疫細胞上的Fc受體(FcR)以及補體系統的一些蛋白質交互作用。IgG1 Fc區的每個Fc片段在C220處(依據EU編號系統)含有半胱胺酸，其本身可與κ或λ輕鏈形成雙硫鍵。為減少具有可將蛋白質去穩定化及/或去活化的游離半胱胺酸的風險，C220可被絲胺酸取代(C220S)或被其他胺基酸取代。為減少Fc結合至FcγR以及C1q，可將其他點突變(例如K322A、L234A以及L235A)工程改造至野生型IgG1 Fc片段中。總的來說，藏有四個突變的IgG1 Fc片段稱為IgG1 Fc無效段(Fc null) (SEQ ID NO. 6)。
將重組人類ACE2-Fc融合蛋白(如表1中列舉)工程改造以製造可溶性融合蛋白，其中的SI-69R2 (SEQ ID NO. 7)為不含TMPRSS2蛋白酶切割位點的經截斷ACE2片段及IgG1 Fc無效片段之重組融合蛋白。製作其他重組融合蛋白以提供Ig同型的Fc片段，例如SI-69R2-G4 (IgG4 Fc，SEQ ID NO. 9)、SI-69R2-A1 (IgA1 Fc，SEQ ID NO. 11)、SI-69R2-A2(IgA2 Fc，SEQ ID NO. 13)或野生型IgG1 Fc片段(IgG1 Fc，SEQ ID NO. 19)。亦製作具有所有三種結構域的經截斷ACE2及野生型IgG1 Fc片段之重組融合蛋白(SI-69R4，1-740，SEQ ID NO. 21)。所有重組ACE2-Fc融合蛋白中，可以不同長度的其他信號肽取代信號肽(ACE2殘基1-17)而不影響人類ACE蛋白或ACE2-Fc融合蛋白中其他結構域的功能。
將表1中編碼融合蛋白的重組融合基因選殖入pCGS3.0 (例如SI-69R2)或pTT5表現載體(例如SI-69R4及SI-69R10)並在ExpiCHO細胞中表現。遵照標準蛋白質表現步驟準則純化所有的融合蛋白，使用0.22 um過濾器滅菌，並在4℃儲存於冷凍保存緩衝液中。在表現及純化期間，每個重組融合蛋白可經歷轉譯後修飾，包括N醣基化及N端信號肽(17個胺基酸)切割。在SI-69R2的案例中，將經純化之融合蛋白新命名為SI-F019。
如圖1A及圖1B中所示，SI-F019保留包含人類ACE2的鋅金屬肽酶結構域(殘基19-611)的經截斷之ACE2片段(殘基18-615)，但不含TMPRSS2蛋白酶切割位點。此外，SI-F019保留IgG1 Fc無效片段，該IgG1 Fc無效片段並不結合至Fcγ受體。如此一來，並不預期在其可溶形態下的SI-F019結合周邊血液中的任何靶標細胞。
SI-F019融合蛋白很可能經歷轉譯後修飾，例如N-醣基化及藉由Fc區的兩個雙硫鍵連接的同質二聚化。為估定SI-F019二聚體的實際分子量，如圖1C所示，使用分析式尺寸排阻層析法(size exclusion chromatography; SEC)與多角度光散射(multi-angle light scattering; MALS)、吸光度(UV)及/或折射率(RI)濃度偵測器技術的組合。方法組合藉由分子尺寸的層析分離及藉由光散射(LS)的絕對莫耳質量測定，而不受分子量標準校正限制。SI-F019呈現209.6 kDa(主峰)的平均總分子量，其中SI-F019二聚體及其修飾物(亦即多醣)的分子量經量測分別為189.3 kDa及20.3 kDa。在其胺基酸的理論計算中，SI-F019單體的分子量為95.1 kDa。因此，經純化的SI-F019融合蛋白複合體為同質二聚體，而SI-F019蛋白複合體係指如單體或二聚體的SI-F019與例如棘蛋白與效應子蛋白的其他蛋白質之間的蛋白質-蛋白質交互作用。SI-F019-棘蛋白複合體(如圖1D之圖示說明)的形成構成一機制的基礎，藉由該機制，SI-F019為用於預防SARS-CoV-2病毒停駐在供病毒入侵人類宿主細胞中之膜ACE2上的候選抑制劑。 實例 2 ：SI-F019與棘蛋白、Fc受體及Clq的結合
SI-F019經設計以藉由防止棘蛋白結合至人類宿主細胞上的膜ACE2蛋白來阻斷SARS-CoV病毒入侵人體。棘蛋白為冠狀病毒最具識別性的特徵，其為造就冠狀或光環狀表面的旋鈕結構。棘蛋白大致上由醣蛋白構成，且每個棘蛋白由S蛋白的三聚體構成，且S蛋白依次由S1及S2次單元構成。同質三聚體S蛋白介導病毒與宿主細胞之間的受體結合與膜融合。S1次單元形成棘蛋白的頭部並具有受體結合結構域(receptor-binding domain; RBD)。S2次單元形成將棘蛋白固定在病毒套膜中的桿，並蛋白酶上的活化作用賦予融合能力。在功能活性狀態中，當在蛋白酶(例如組織蛋白酶家族以及跨膜絲胺酸蛋白酶2(TMPRSS2))作用下，病毒與宿主細胞結合並融合時，S1及S2次單元複合體分裂成個別的次單元。棘蛋白在冠狀病毒感染過程中的病毒入侵扮演重要角色。在COVID-19的案例中，SARS-CoV-2病毒停駐至宿主細胞表面上之膜結合ACE2受體上，且棘蛋白與ACE2功能性結構域之間的交互作用係藉由觸發病毒套膜與宿主細胞膜之間的融合，致使病毒的核殼蛋白釋放至宿主細胞的細胞質中。
針對ACE-Fc融合蛋白與病毒棘蛋白的結合親和力及親合力來評估SI-F019。在生物層干涉技術分析中，棘蛋白樣品包括SARS-CoV-2棘蛋白三聚體、SARS-CoV-2 S1蛋白、SARS-CoV-2 S1蛋白RBD結構域及SARS-CoV-1 RBD結構域(表2)。這些試劑是從ACROBiosystems購買的。結合親和力測定量測固定在抗人類IgG Fc捕獲生物感測器(anti-human IgG Fc Capture Biosensor)尖端(AHC)表面上的SI-F019與溶液中棘蛋白或其亞單元的結合。親合力測定量測固定在卵白素生物感測器尖端(SA)表面上的生物素化棘蛋白與溶液中SI-F019的結合。將該等試劑藉由NHS-酯活化反應進行化學生物素化，生物素/蛋白質的化學計量比為2:1。資料分析運用1:1擬合模型來計算結合親和力及親合力兩者。結果指出SI-F019與該等棘蛋白、片段或結構域的結合親和力及親合力似乎在其各自以奈莫耳(nM)計的KD尺度內(表2)。此特徵性及情報性資料對量測具有病毒棘蛋白變體的SI-F019蛋白複合體而言可為有用的參考，該等病毒棘蛋白變體表明為SARS-CoV-2變體中的潛在抗原性漂移。事實上，此種類型的病毒突變已經在某些SARS-CoV-2毒株中被鑑別出，諸如棘蛋白中的D614G(Zhang等人，2020)，該等突變更改病毒對膜ACE2的親和力然後病毒入侵宿主細胞。
在SI-F019結合至棘蛋白的同時，藉由使用生物層干涉技術來評估SI-F019與人類FcγR、C1q及FcRn的結合。如表3所示，並沒有偵測到與包括FcγRI、FcγRIIa、FcγRIIb及FcγRIIIa之FcγR的結合，也沒有偵測到與C1q的結合。然而，SI-F019確實與FcRn結合，且判定結合親和力的KD在37.6 nM，其堪比人類IgG1 Fc區的結合親和力。 實例 3.SI-F019抗TMPRSS2蛋白酶活性
人類ACE2受到TMPRSS2的膜蛋白酶水解，單體胞外ACE2便從細胞脫落，其可容易在血清中測得。在重組ACE2-Fc融合蛋白中，將經截斷ACE2結構域與Fc片段融合，但仍保留與病毒棘蛋白的結合親和力。
將SI-F019工程改造使之在經截斷ACE2結構域中不具TMPRSS2切割位點。如圖1中所示，SI-F019含有18到615的殘基，而SI-69R4編碼包含TMPRSS2切割位點的所有三個ACE2結構域(殘基：1-740，SEQ ID NO. 21)。為證實SI-F019免遭TMPRSS2特異性蛋白水解作用，使用SI-69R4作為對照。為進行TMPRSS2特異性水解的測定，依據Genbank：NP_001358344.1來選殖、表現及純化TMPRSS2 (106-492)催化結構域。如圖2A所示，不存在TMPRSS2時，SI-F019及SI-69R4兩者皆穩定遷移至其各自的分子量(還原、變性情況下為單體)。當添加TMPRSS2時，SI-F019顯露出其TMPRSS2抗性，而SI-69R4經歷如預測指出其對TMPRSS2敏感性的蛋白水解作用。因此，SI-F019係為穩定且抗TMPRSS2介導蛋白酶活性。 實例 4.SI-F019發揮ACE2酵素活性
SI-F019為經截斷ACE2 (殘基18～625)及IgG1 Fc無效片段的融合蛋白。經截斷ACE2編碼鋅金屬肽酶，其酵素活性可藉由使用已確立的測定法再評估。使用具有MCA (7-甲氧基香豆素-4-乙酸)螢光標記物[MCA-YVADAPK Dnp)-OH螢光肽基質(MCA-YVADAPK (Dnp)-OH Fluorogenic Peptide Substrate)]的ACE2肽基質來量測SI-F019的ACE2酵素活性。製備MCA分子作為游離螢光團定量的標準曲線校正，以及將基質稀釋於DMSO中至0.97 mg/ml。將SI-F019稀釋成100 ng/ml、200 ng/ml及300 ng/ml，並用於試管內使螢光肽斷裂以釋出游離MCA。測定法在室溫下培養20分鐘，並以每間隔2分鐘的時間點收集螢光信號資料。
使用MCA標準曲線以莫耳計來定量斷裂的MCA。如圖2B (MCA量對時間)所示，依據線性曲線的斜率判定酵素活性。SI-F019在三個濃度中皆呈現出良好線性度(R2＞ 0.99)，這表明了肽的穩定斷裂具濃度依賴性。為計算酵素活性，斜率除以SI-F019的質量數(μg)。最終酵素比活性為568 pmol/min/μg。SI-F019保留膜ACE2酵素活性的事實表明了此ACE2的獨立結構域也保留了供宿主受體與病毒交互作用的結構構形。 實例 5.SI-F019抑制活SARS-CoV-2感染VeroE6細胞
在試管內測試SI-F019抑制活SARS-CoV-2感染及溶解VeroE6 (ATCC：CRL-1586)細胞的能力。將範圍自1.5 nM至1200 nM測試濃度的SI-F019與三種濃度的活SARS-CoV-2病毒(病毒株USA-WA1/2020，相當於100倍範圍的感染劑量，MOI)預培養1小時，且接著添加至90%匯合(90% confluent)的單層VeroE6細胞。1小時後，移除含病毒培養基並以匹配測試濃度之含SI-F019培養基取代，執行三重複的測試。藉由中性紅染劑攝入72小時之後量測細胞存活率，並藉由與其中不含SI-F019但添加各MOI之病毒的孔(well)比較來判定溶菌病毒感染的抑制百分比。使用GraphPad Prism軟體來計算各病毒濃度(1 MOI=40,000病毒顆粒)的50%抑制濃度(IC50)，並將其顯示餘各圖表中。SI-F019與活SARS-CoV-2的預培養在所有三個經測試之病毒MOI下皆達到100%的劑量依賴性感染阻斷。如圖3所示，SI-F019在MOI為1.0時中和40,000個之多的病毒顆粒，且IC50為97.62 nM。在MOI為0.1及0.01時，SI-F019能各自在79.95 nM及36.5 nM的IC50阻斷感染。 實例 6.SI-F019減少病毒複製及再感染
測試SI-F019抑制複製及再感染的能力，亦即從先前以低MOI之SARS-CoV-2或SARS-CoV-1病毒感染之細胞進一步將感染轉移至VeroE6細胞的能力。將90%匯合單層的VeroE6細胞(約20,000個細胞)在0.01的MOI下(經計算為400個病毒感染性顆粒)暴露至SARS-CoV-2 (毒株USA-WA1/2020)或SARS-CoV-1 (毒株Urbani 2003000592) 1小時。在清洗掉游離病毒顆粒後，重複三次將範圍在10 fM至100 nM的SI-F019添加至細胞，並將細胞培養物保持72小時。藉由中性紅染劑攝入判定細胞存活率並計算病毒細胞毒性抑制%。使用表示100%細胞存活率之無病毒或無藥物(no virus or no drug; NVND)條件的最大吸光以及使用方程式： %細胞生存=[(Well OD540-VND OD540)/(NVND OD540-VND OD540)]*100 確立最大細胞死亡數的病毒/無藥物(virus/no drug; VND)之平均吸光值，在各培養板上常態化吸光值。
如 圖 4所示，添加濃度為10 fM的SI-F019保護Vero E6細胞免於二次感染。以0.01之MOI感染SARS-CoV-2或SARS-CoV-1病毒1小時的培養物減少了至少20%的細胞溶解。然而，當SI-F019濃度增加10倍的增加量而高至100 nM時，在此測定中並無觀察到保護性顯著增加。該發現表明了對以低病毒效價感染的細胞而言，即便以低濃度添加SI-F019也可減少病毒傳播以及細胞毒性的程度。 實例 7.SI-F019抑制假病毒感染HEK293T-ACE2細胞
藉由人類ACE2蛋白的慢病毒轉導產生HEK293T (ATCC：CRL-3216)-3D4殖株細胞株。藉由酵素基質轉化測定及藉由FACS以特異性抗體結合來確認表現人類ACE2的功能。自國家藥品生物製品檢定所(National Institute for the Control of Pharmaceutical & Biological Products)獲得含有螢光酶報導基因的SARS-CoV-2 S蛋白包裝假病毒。依據製造商說明書執行測試。將S-假病毒原液稀釋於MRD為20的培養物培養基中以產出300 TCID50/孔的病毒載量。將濃度範圍在0.07 nM至1500 nM的SI-F019與稀釋的病毒溶液預培養1小時。將HEK293T-3D4細胞分散至96孔板中。1小時後，將混合物添加至細胞板中。藉由測試培養24小時後的螢光酶活性來量測感染細胞。使用GraphPad Prism軟體來計算定義之病毒載量的50%抑制濃度(IC50)。圖5圖示在以假病毒預培養後，SI-F019以劑量依賴方式抑制病毒感染並在較高濃度達到完全抑制(IC50=32.56 nM)。 實例 8.SI-F019減少ADE發生率
抗體依賴性增強反應(antibody-dependent enhancement; ADE)為一種現象，在該現象中病毒結合至次佳抗體而增進其入侵宿主細胞。在COVID-19案例中，SARS-CoV-2病毒對具有由初次感染而發展出抗SARS-CoV-2抗體的患者或已接種疫苗的個體的二次感染可能導致藉由單核球與B細胞的病毒攝入增強。與病毒接觸的抗病毒抗體可結合至表現在特定免疫細胞上的Fc受體或結合至一些補體蛋白。後者的結合取決於抗體的Fc區。典型地，病毒經歷稱為吞噬作用之過程的降解，宿主細胞藉由吞噬作用經由細胞膜(plasma membrane)將病毒顆粒吞噬。然而，若由於低親和力之結合或靶向非中和之抗原決定基而使病毒未被抗體中和，則抗體結合可能會產生病毒逃逸。於是，後果就是抗體增進感染。
經由天然免疫或接種疫苗過程，抗體發展出野生型Fc區。儘管SI-F019能與抗棘蛋白抗體競爭結合至SARS-CoV2病毒，但IgG1 Fc無效片段無法結合至Fc受體或C1q (請參閱表3)。為證實其在減少ADE效果上的比較性優勢，評估SI-F019在內化、複製及再感染中的作用。
在量測Fc介導內化的測定中，將SARS-CoV-2 S 蛋白包裝至GFP表現假病毒(PsV)中，以及使用表現Fc受體及補體受體2 (CR2)的THP1 (單核球)及Daudi (B細胞)兩種細胞株來測定FcRγ及CR2介導的ADE機制。使用SI-69R3作為SI-F019的對照，與具有IgG1 Fc無效修飾的SI-F019相比SI-69R3具有野生型的Fc (請參閱表1)。在暴露至PsV 48小時之後，定量來自細胞的綠螢光信號作為PsV感染的指標。在以PsV與SI-69C1 (抗S1抗體)處理或PsV與SI-69R3處理的條件中，於THP1 (pH 7.2) (6A)、THP1 (pH 6.0)(6B)及Daudi (6C)細胞中在48小時之時量測到低程度綠螢光。此結果表明一些PsV轉移可經由Fc受體發生。相反地，在指示濃度之SI-F019條件下，THP1或Daudi細胞不產生PsV攝入，其與包括測定培養基、配方緩衝液及SI-69C1的陰性對照條件下量測到的綠螢光信號相當(圖6)。當使用1 pM至高達100 nM範圍的劑量執行細胞處理時，Fc介導ADE的效果呈劑量依賴性。此表明了某些PsV攝入可透過FcγR或CR2機制發生。 實例 9.SI-F019減少PsV病毒載量
由於缺乏功能性Fc片段，SI-F019可不介導包裝S蛋白之GFP表現假病毒(PsV)的內化。為判定是否SI-F019能抑制假病毒攝入，在競爭模式中使用SI-F019作為與SI-69R3或天然抗SARS-CoV-2抗體的共處理。在感染同系列靶標細胞之前，將PsV與劑量範圍1 pM至100 nM的SI-F019共同與10 pM的抗SARS-CoV-2 (S1)抗體或10 pM的SI-69R3培養1小時。偵測PsV衍生之GFP信號作為感染的病毒載量。SI-F019能抑制在靶標細胞中始於10 fM的PsV病毒載量(圖7)。
儘管顯示出抗體(例如抗SARS-CoV-2 (S1)抗體)以及SI-69R3中經截斷ACE2野生型Fc片段之融合蛋白皆能介導SARS-CoV-2棘蛋白假性慢病毒的內化，但由於SI-F019缺乏功能性Fc片段，因此不能介導內化。本文中，在10 pM的抗SARS-CoV-2 (S1)抗體或10 pM的SI-69R3存在的情況下，即便是在10 fM的低濃度時，SI-F019幫助減少PsV病毒載量。整體而言，該等結果表明SI-F019可減少各自在THP1單核球及Daudi B細胞中藉由FcRγ及CR2依賴性機制所誘發的ADE發生率。 實例 10.表現SARS-CoV-2棘蛋白的HEK293-T細胞
藉由轉導包裝有編碼SARS-CoV-2棘蛋白之cDNA (登錄號：YP_009724390.1)的慢病毒以及基於嘌呤黴素抗性的IRES表現與選擇來確立穩定表現SARS-CoV-2棘蛋白的HEK293-T細胞(ATCC：CRL-3216)，該嘌呤黴素抗性藉由相同的表現建構體(LPP-CoV219-Lv105-050，GeneCopoeia)驅動。藉由人類IgG殖株AM001414的結合來確認SARS-CoV-2棘蛋白表現，AM001414對SARS-CoV-2棘蛋白的「抗棘蛋白(Anti-Spike)」(SKU938701，Biolegend)具特異性，以及使用人類IgG同型匹配殖株QA16A12作為對照「同型」(SKU403502, Biolegend)。如圖8所示，藉由與多株抗人類Fc AF647 Fab (SKU109-607-008，Jackson ImmunoResearch)二次培養以及FACS評估來定量結合的蛋白質。
以指示材料將表現SARS-CoV-2棘蛋白的HEK293-T細胞及親代HEK293細胞在37℃且存在內化抑制劑疊氮化鈉的情形下進行30分鐘的染色。在移除游離SI-F019之後，藉由使用抗人類Fc AF647 fab (SKU109-607-008，Jackson ImmunoResearch)以及流式細胞儀分析來偵測與定量SI-F109。如圖9所示，使用幾何平均信號強度來定量SI-F019與靶標細胞株的結合。表現任一SARS-CoV-2棘蛋白的HEK293-T細胞可以作為COVID-19感染細胞的模型。 實例 11.SI-F019對抗體依賴性細胞性細胞毒性(ADCC)之效果
抗體依賴性細胞性細胞毒性(ADCC)是針對病毒感染的重要免疫反應中的一種，該病毒感染例如在COVID-19案例中SARS-CoV-2病毒感染。在初始病毒感染後，抗病毒抗體直接結合至病毒顆粒以中和並凝集。病毒-抗體複合體與吞噬細胞上Fc受體的結合能觸發吞噬作用而摧毀病毒；結合至例如單核球、嗜中性球、嗜酸性白血球及NK細胞的免疫效應子細胞上的Fc受體能觸發細胞毒性因子(例如：抗病毒干擾素)釋出，而產生對病毒複製不友善的微環境。
為區別SI-F019及抗棘蛋白抗體的效果，以鈣黃綠素裝載表現SARS-CoV-2棘蛋白的HEK293-T細胞，並與純化的人類NK細胞以效應子比靶標為5:1的比例共培養。測試的處理包括SI-F019及S1特異性人類IgG殖株SI-69C3。SI-69C3為人類抗體殖株CC12.3，其分離自住院的COVID-19患者(10.1126/science.abc7520)。在共培養12小時之後，以碘化丙啶將細胞染色並評估存活率。如圖10所示，評估基於鈣黃綠素及碘化丙啶染色之表現的存活靶標細胞頻率(族群3)的減少作為胞解度量單位(a measure of cytolysis)。
NK細胞介導的ADCC可與暴露至S1特異性人類IgG殖株SI-69C3 (殖株CC12.3)時的表現SARS-CoV-2蛋白的HEK293-T細胞有關。SI-F019在100 nM至100 fM的處理範圍內相較於SI-69C3並不介導ADCC。如圖11及圖12所示，在該等測定條件下，具有wt Fc的SI-F019藥物變體(SI-69R3)能以劑量依賴方式介導ADCC，但相較於S1特異性人類IgG殖株CC12.3的活性程度較低。該等資料表明了與SARS-CoV-2 S1特異性人類IgG抗體不同的是，SI-F019不會介導NK細胞所介導的ADCC。 實例 12.SI-F019對補體依賴性細胞毒性(CDC)的效果
COVID-19患者中基於抗體的細胞及組織傷害介導的補體級聯(complement cascade)角色可見於天然免疫反應及基於中和性抗體的治療(Perico等人，2021)兩者中。由病毒及特異性IgG形成的免疫複合物介導補體誘發的血液凝固、血栓性栓塞及全身性微血管病變。該等在COVID-19患者中的普遍併發症能危及性命且取決於補體蛋白結合至IgG。經由C1q橋接紅血球細胞與具有FcγRIIA之血小板的病毒免疫複合物是COVID-19患者中血栓性栓塞的介導物(Nazy等人，2020)。免疫複合物固著至內皮血管壁以及補體介導的凝血是患有COVID-19之患者主要擔心的事，其中內皮細胞的活化是血栓性栓塞級聯的一部分。
如表3所示，不同於天然IgG抗體，SI-F019無法結合C1q。此特徵消除誘發可瞬間在其表面上表現SARS-CoV-2棘蛋白的經感染上皮與內皮之細胞死亡的風險。與抗棘蛋白人類IgG抗體相較證實了此SI-F019的保護性效果。
為證實SI-F019的保護性效果，將表現SARS-CoV-2棘蛋白的HEK293-T細胞培養於不含血清的培養基(Optimem)處理30分鐘，接著以1:10的血清比培養基之比例添加人類血清補體。測試的處理包括SI-F019及S1特異性人類IgG殖株AM001414 (BioLegend)。在每個孔中添加所計數的碘化丙啶染色以及正染色細胞之前，將細胞於37℃培養3小時。如圖12及圖13所示，將在第3小時之時以Incucyte Zoom Software計數的紅色細胞評估為CDC的度量單位(a measure of CDC)。如圖13展示的，在96小時之後評估總細胞匯合度作為CDC影響力的度量。
在人類血清補體攻毒後，藉由這些細胞進一步增殖的能力來進一步確認保護組織細胞免於補體損傷。以1:10之體積對體積比例的人類血清補體與不含血清培養基所介導的CDC可評估暴露至S1特異性人類IgG殖株(殖株AM4141)時表現SARS-CoV-2 S蛋白的HEK293-T細胞。結果表明人類可溶性單體ACE2及SI-F019兩者皆不介導CDC，而與人類IgG抗體相較，SI-69R3具有經限制的劑量依賴性增加CDC活性。CDC細胞溶解反映於基於處理後96小時之時的孔匯合度之減少的細胞生長。 實例 13.PBMC培養物中由可溶或板結合SI-F019所引起的細胞激素釋出。
SARS-CoV-2具有對呼吸道及小腸的表現ACE2的上皮細胞的趨向性。表明細胞激素釋放症候群(CRS)之升高的IL-2、IL-6、IL-7、顆粒球-巨噬細胞群落刺激因子(GM-CSF)、干擾素-γ可誘導蛋白10 (IP-10)、單核球趨化蛋白1(MCP-1)、巨噬細胞發炎蛋白1α(MIP-1α)以及腫瘤壞死因子-α(TNF-α)的臨床實驗室發現暗示隱含的免疫病理學。CRS為能限制生物製劑治療運用的主要不良副作用，以及使用試管內細胞激素釋出測定來測試CRS。
SI-F019是由人類ACE2及無法結合至Fcγ受體的突變形式人類IgG1 Fc所組成的融合蛋白。因此，並不期望SI-F019結合至周邊血液中任何的靶標細胞或引起細胞激素釋出。將分離自5名健康捐贈者的包括嗜中性球的白血球細胞(white blood cell; WBC)放置在含有濃度為2000 nM及200 nM之板結合或可溶SI-F019的培養孔中。
由於在此測定的板結合形式中，其證據充分之誘發細胞激素釋出的能力，以相同濃度及相同形式使用TGN1412抗體作為陽性對照。藉由與具有能結合Fcγ受體的野生型Fc片段的SI-69R3相較來評估IgG1 Fc無效片段減少細胞激素釋出的潛在貢獻，該等Fcγ受體由周邊血液中的數種細胞類型表現。使用相似稀釋度之SI-F019用的僅含配方緩衝液的WBC培養物作為陰性對照。收集在第24小時及第48小時之時點的培養物上清液，並使用Meso Scale Discovery (MSD)平台來偵測9種細胞激素的存在。
如圖14A至圖14E所示，細胞激素小組包括T細胞相關細胞激素IFNγ、TNFα、GM-CSF、IL-2以及IL-10。如圖14F至圖14I所示，亦測試下列物質的促炎性程度，非T細胞相關細胞激素IL-1β、IL-12p70及IL-6，以及單核球趨化蛋白MCP-1。平均來自每位血液捐贈者重複孔的結果，並使用JMP14軟體繪製來自每位血液捐贈者重複孔的箱型圖，該箱型圖顯示出95%可信區間及離群值。
結果表明在200 nM及2000 nM濃度下，不論在板結合形式或可溶形式中，SI-F019不會自暴露於WBC誘發任何所測試的細胞激素。SI-F019處理樣品中細胞激素的程度呈現類似於所有條件下緩衝液對照的濃度。在板結合形式而於可溶形式中，陽性對照TGN1412激烈誘發大部分細胞激素，此與先前發表的結果吻合。當使用板結合ACE2-Fc野生型刺激WBC時，可偵測到一些中間產生的IFNγ、GM-CSF及TNFα，此表明了SI-F019的Fc無效片段增強的安全性。
近來已提出在接受介入性IgG療法的患者中，抗SARS-CoV-2病毒體液反應的致病性作用(Weinreich 等人，2021；Chen等人，2021)。小血管過度發炎反應為包括血小板增多、搔癢、發熱及高血壓之不良事件的基礎。本申請案證實SI-F019可提供與IgG療法之益處相當的病毒中和的益處，同時保護組織與器官免於多重途徑的功能異常。因此，可將SI-F019用於治療、預防或緩和病毒感染，具體來說用於預防及管理COVID-19病程並減少臨床併發症，以及另外用於急性呼吸道窘迫症候群、肺動脈高壓或急性肺傷害。 實例 14.SI-F019與SARS-CoV-2 RBD變體的結合動力學(親和力)
隨著流行病的持續，突變和選擇驅動SARS-CoV-2病毒演進以獲得更高的與ACE2的結合親和力，從而獲得更高的病毒傳播率，此導致了突變株，包括新出現的高度感染性的δ變體。事實上，α變體和δ變體都比原始SARS-CoV-2病毒更容易傳播。SARS-CoV-2變體的流行是開發治療和預防的尚未解決的挑戰。儘管SI-F019是一種候選中和劑，但是FDA已經批准了幾種用於治療患者的中和抗體，包括b)巴尼韋單抗(禮來公司(Eli Lilly)的LY-CoV555；SI-69C4，SEQ ID No. 29及SEQ ID No. 30)；c)卡西瑞單抗(再生元製藥公司(Regeneron)的REGN10933；SI-69C5，SEQ ID NO. 31及SEQ ID NO. 32)；d)埃特司韋單抗(禮來公司的CB-6；SI-69C6，SEQ ID NO. 33及SEQ ID No. 34)；e)伊德單抗(再生元製藥公司的REGN10987；SI-69C7，SEQ ID NO. 35及SEQ ID No. 36)；f)西加維單抗(阿斯利康公司(AstraZeneca)的AZD1061；SI-69C8，SEQ ID NO. 37及SEQ ID No. 38)；以及g)替沙格韋單抗(阿斯利康公司的AZD8895；SI-69C9，SEQ ID NO.39及SEQ ID No. 40)。
為了確定帶有彼等中和抗體的重組ACE2-Fc融合蛋白SI-F019的相對優勢，使用生物層干涉技術，藉由使用Octet Red 384來量化它們與模仿COVID-19變體的SARS-CoV-2 RBD變體的結合相互作用的強度。該等變異蛋白購自亞旭生物科技公司(Sino Biological)。首先，將測定緩衝液(含有1% BSA和0.05% Tween 20的PBS)中的10 μg/ml的SI-F019蛋白加載到AHC感測器上180秒。在180秒的基線步驟後，使加載的蛋白質與RBD變體蛋白在測定緩衝液中的1:2連續稀釋(最高濃度從50 nM開始)締合180秒，之後在測定緩衝液中進行300秒的解離步驟。使用pH 1.5的10 mM甘胺酸執行再生。為了提取動力學參數KD、kon和kdis，使用完全締合階段和解離階段的前60秒將資料與1:1結合模型全局擬合。如表2和表4所示的相同變體和野生型RBD蛋白的結合親和力是可比的，因為不同的讀出可能來自不同的供應商(ACROBiosystem和亞旭生物科技公司)。
圖15 (a至g)圖示了在與RBD變體結合的同時SI-F019及中和抗體的感測圖，並且表4 (a至g)列出了所提取的結合動力學(親和力)參數。結果表明，與SI-F019 (15a)相比，巴尼韋單抗(SI-69C4)不能與κ變體、γ變體、β變體及λ變體結合(15b)；卡西瑞單抗(SI-69C5)表現出其對γ變體及β變體的結合親和力顯著降低(15c)；並且埃特司韋單抗(SI-69C6)亦表現出其對γ變體及β變體(15d)的結合親和力顯著降低。儘管其他單株抗體(諸如伊德單抗(SI-69C7)(4e)、西加維單抗(SI-69C8)(4f)及替沙格韋單抗(SI-69C9)(4g))可能沒有顯示出其結合親和力的任何顯著變化，但是感測圖揭示變體中的一些變體中的結合反應減少(圖15e、圖15f和圖15g)。與中和抗體不同，SI-F019表現出對新出現的變體(包括高感染性的δ變體)的結合親和力比對祖先野生型RBD的結合親和力有所提高(圖15a，表4a)。觀察結果支持以下觀點：SI-F019的ACE2部分保留了野生型全長ACE2的用於使病毒入侵人類細胞的構象，此係用於選擇高親和力變體的靶標。因此，SI-F019具有與彼等FDA批准的中和抗體可比的優勢，從而可以用作結合劑和阻斷劑。 實例 15.SI-F019及中和抗體與變體的結合動力學(親合力)
儘管上述結合親和力測定量測了固定在抗人類IgG Fc捕獲生物感測器尖端(AHC)表面上的SI-F019與溶液中的SARS-CoV-2 RBD蛋白變體的結合，但是親合力測定量測了固定在鏈黴親和素生物感測器尖端表面上的生物素化SARS-CoV-2 RBD蛋白變體與溶液中的SI-F019的結合。
使用生物層干涉技術，以使用Octet Red 384來量化SI-F019與SARS-CoV-2 S蛋白變體RBD結構域之間的結合相互作用強度。試劑購自亞旭生物科技公司及藉由NHS酯活化反應進行化學生物素化，其中生物素/蛋白質的化學計量比為2:1。首先，將測定緩衝液(含有1% BSA及0.05% Tween 20的PBS)中的2 μg/ml生物素化RBD或其變體蛋白加載到SA感測器上180秒。在180秒的基線步驟後，使加載的蛋白質與SI-F019蛋白質(GMP批次)在測定緩衝液中的1:2連續稀釋(最高濃度從50 nM開始)締合300秒，之後在測定緩衝液中進行600秒的解離步驟。使用pH 1.5的10 mM甘胺酸執行再生。為了計算動力學參數K D、k on和k dis，使用全締合相和全解離相將資料與1:1結合模型全局擬合。如表2和表5所示的相同變體和野生型RBD蛋白的結合親和力相當，因為不同的讀出可能來自不同的供應商(ACROBiosystem和亞旭生物科技公司)。
圖16 (a至g)圖示了與SI-F019結合的SARS-CoV-2 RBD蛋白變體的感測圖，並且表5 (a至g)列出了提取的結合動力學(親合力)參數。值得注意的是，相對於野生型RBD，SI-F019以更高的親合力結合RBD變體形式，其中親合力的增加主要是由更慢的解離速率驅動的。結果顯示，相對於野生型RBD，SI-F019對RBD變體的結合親和力增加並且解離速率降低；而在一些中和抗體中的有效性則降低或減弱。 實例 16.SI-F019與中和抗體的可比優勢
為了證明SI-F019與中和抗體的可比優勢，使用了結合反應或反應的值。如圖15、圖16所示，反應係以干涉圖中的nm位移來量測，並且與結合至生物感測器表面的分子數量成比例。反應是與最高濃度的分析物締合時達到的最大結合信號，並且是複雜的函數，該函數取決於動力學結合參數、蛋白質大小和測定條件，且只要相互作用的蛋白質具有相似的大小和形式，在給定的分析中就應該是相當的。反應的差異可指示蛋白質-蛋白質相互作用的有效強度的差異，其中高反應表明強相互作用，並且低反應表明較弱的相互作用。
表6列出了從圖15和圖16中的SI-F019及中和抗體的結合親和力和親合力提取的反應值(分析物的最高濃度)。為了評估每種中和劑及變體的結合動力學變化，以下情況應用該等定義：1)當反應＜WT的10%時，無結合；2)當反應＜WT的30%時，結合最小；3)當反應＜WT的75%時，低結合；以及4)對於複雜動力學，包括向上解離、非特異性結合。當將該等標準應用於每個反應時，每個中和抗體顯示出與至少一種變體的低結合至無結合。特別是對於親合力測定，巴尼韋單抗(SI-69C4)對δ、κ、γ、β和λ的結合反應降低；埃特司韋單抗(SI-69C6)對γ和β的結合反應降低；並且卡西瑞單抗(SI-69C5)、伊德單抗(SI-69C7)、西加維單抗(SI-69C8)及替沙格韋單抗(SI-69C9)都具有降低的對β的結合反應。相比之下，SI-F019保留了其對所有變體的結合親和力和親合力。 實例 17.SI-F019作為能夠抑制COVID-19 RBD變體的病毒感染性的阻斷劑
為了測試SI-F019預防病毒感染的能力，使用螢光素酶報告測定來表徵病毒感染性。將含有螢光素酶報告基因(NICPBP)的SARS-CoV-2 S蛋白包裝的假病毒(野生型或變異株，亞旭生物科技公司)與過表現ACE2的293T細胞(殖株3D4)和SI-F019的1:3連續稀釋(從30 μg/ml開始)共同培養。藉由酶促及FACS測定證實了ACE2在轉染細胞上的表現。假病毒可能經由S蛋白與ACE2的結合進入ACE2陽性細胞，此導致螢光素酶的表現。因此，發光被用作病毒感染性的讀出。
特別地，在培養基中製備10倍的S蛋白假病毒儲備溶液至最終病毒載量為227-394個TCID50/孔。將培養基中的SI-F019以最大濃度150 μg/ml連續稀釋3倍(最終30 μg/ml)。使用缺乏胰蛋白酶的解離緩衝液收穫3D4細胞。將假病毒(20 μl)和SI-F019 (30 μl)在96孔板的孔中組合，混合，並在室溫下培養1小時。隨後，將100個收穫的3D4細胞加入到每個孔中(20,000個/孔)，並在37℃、5% CO 2下培養18小時。培養後，移除上清液，加入50份螢光素酶受質溶液，混合，並在室溫下培養1分鐘。使用I3X讀板儀讀取發光，其中以RLU (相對發光單位)為單位的發光信號代表S蛋白假病毒的感染性。
可計算與沒有SI-F019的條件相比的發光降低，以判定感染性的抑制百分比。隨後將該資料與GraphPad Prism 6.0中的S形函數擬合，以提取SI-F019抑制假病毒感染性的IC50值，其中假病毒包含不同的S蛋白變體。圖17a繪製了病毒抑制資料，並且表7中列出了IC50值。結果表明，當與SI-F019對野生型菌株的效力相比時，SI-F019能夠以增加2倍至15倍的效力抑制所有變體的感染性，並且親和力或親合力的IC50值與KD值之間的線性關聯(圖17b、圖17c)表明了SI-F019的競爭性抑制作用。試管內實驗資料表明，ACE2蛋白，諸如SI-F019融合蛋白(與膜結合的ACE2蛋白)，不僅能夠緊密結合，而且亦能夠以增加的RBD-ACE2相互作用親和力抑制SARS-CoV-2病毒變體，該RBD-ACE2演進出了增加的感染性和傳播性。 實例 18.SI-F019在中國健康參與者中的一期臨床試驗(NCT04851444)
三種抗SARS-CoV-2單株抗體產品目前擁有來自食品藥品監督管理局(Food and Drug Administration, FDA)的用於治療患有實驗室確認的SARS-CoV-2感染的非住院患者中的輕度至中度COVID-19的緊急使用授權(Emergency Use Authorization, EUA)，該等患者處於進展為嚴重疾病和/或住院的高風險下。第一，巴尼韋單抗加埃特司韋單抗：該等係中和單株抗體，其與SARS-CoV-2的棘蛋白RBD中不同但重疊的表位結合；第二，卡西瑞單抗加伊德單抗：該等係重組人單株抗體，其結合SARS-CoV-2的棘蛋白RBD的非重疊表位；以及第三，索托維單抗(Sotrovimab)：此種單株抗體最初是在2003年從一名SARS-CoV倖存者身上鑑別出的。其靶向在SARS-CoV與SARS-CoV-2之間保守的棘蛋白的RBD中的表位。
與彼等結合單個表位的單株抗體不同，SI-F019具有與人類細胞上的ACE2蛋白競爭結合SARS-CoV-2棘蛋白RBD的所有對接位點的技術優勢，該等對接位點中的一些對接位點可能與彼等表位重疊。由於減少了將兩種或更多種單株抗體組合作為治療方案的負擔和技術困難，目前正在臨床試驗中使用的SI-F019具有作為單一有效治療劑來治療輕度至中度COVID-19並用於處於進展為嚴重COVID-19的高風險個體中的SARS-CoV-2感染的暴露後預防(PEP)的優勢。SI-F019能夠與亦靶向人類細胞上的膜結合ACE2蛋白的其他冠狀病毒(諸如SARS-CoV-1)競爭(圖4)。除COVID-19外，SI-F019亦可用於治療由SARS-CoV-1病毒引起的嚴重急性呼吸道症候群(SARS)、由MERS-CoV病毒引起的中東呼吸道症候群(MERS)，以及急性呼吸道窘迫症候群(ARDS)和其他肺部損傷。在彼等情況下，若需要，則SI-F019亦可以與其他治療劑聯合使用。
一期試驗的目的是測試單次靜脈注射SI-F019的安全性、耐受性和藥代動力學特性。該試驗以雙盲、安慰劑對照和隨機化的方式設計，起著劑量從3 mg/Kg增加到70 mg/Kg 的SI-F019 (表8a、表8b)。融合蛋白作為在組胺酸/組胺酸鹽酸鹽、氯化鈉、蔗糖和聚山梨醇酯80中的液體懸浮液投與。共有36名參與者在第1天接受了單劑量，並隨訪至第29天。治療緊急不良事件(treatment emergent adverse event, TEAE)、治療相關不良事件(treatment related adverse event, TRAE)、嚴重程度和實驗室異常由NCI-CTCAE v5.0捕獲並分級。截至2021年9月16日，電子資料采集(electronic data capture, EDC)資料庫尚未鎖定。基於盲法資料審查，36名參與者中有21名參與者經歷了44起不良事件(adverse event, AE)，其中16名參與者中發生了31起TRAE。所有AE均為1級，並且未發現與SI-F019劑量有顯著關聯(表9a、表9b)。SI-F019的良好總體耐受性及安全性支持其作為對抗COVID-19和其他相關疾病的預防和治療劑的進一步探索。 表格 表1.重組ACE2-Fc融合蛋白的選殖、表現及純化
重組融合蛋白 樣本ID 純化的融合蛋白
huACE2 (1-615)-6His標記的 SI-69R1 SI-69R3 SI-69R4 huACE2 (18-615)-6His-標記的
huACE2 (1-615)-IgG1 Fc (w2) huACE2 (18-615)-IgG1 Fc (w2)
huACE2 (1-740)-IgG1 Fc (w2) huACE2 (18-740)-IgG1 Fc (w2)
huACE2 (1-615)-IgG1 Fc無效 SI-69R2 SI-F019 huACE2 (18-615)-IgG1 Fc無效
huACE2 (1-615)-IgG4 Fc SI-69R2-G4 SI-69R2-A1 SI-69R2-A2 huACE2 (18-615)-IgG4 Fc
huACE2 (1-615)-IgA1 Fc huACE2 (18-615)-IgA1 Fc
huACE2 (1-615)-IgA2 Fc huACE2 (18-615)-IgA2 Fc
表2.SI-F019與病毒蛋白結合的親和力和親合力
  親和力KD (nM) Kon (1/ms) Kdis (1/s) 親合力KD (nM) Kon (1/ms) Kdis (1/s)
CoV2 S1 14.7 3.37E+05 4.93E-03 0.29 1.49E+05 4.72E-05
CoV2 RBD 13.8 3.45E+05 4.79E-03 0.89 3.09E+05 2.70E-04
CoV RBD 14.0 4.26E+05 5.97E-03 0.33 5.18E+05 1.71E-04
CoV2棘蛋白三聚體 不適用 不適用 不適用 0.18 4.20E+04 1.12E-05
表3.Fc無效突變對其與Fc受體結合的影響
Fc受體 KD (nM) Kon (1/Ms) Kdis (1/s)
FcyRI/CD64 不可偵測
FcyRIIa/CD32a 不可偵測
FcyRIIb/CD32b 不可偵測
FcyRIIIa/CD16a 不可偵測
C1q 不可偵測
FcRn 37.6 4.51E+05 3.52E-0.2
表4.SI-F019 (4a)和針對S蛋白RBD的不同變體的中和抗體(包括巴尼韋單抗(SI-69C4)(4b)；卡西瑞單抗(SI-69C5)(4c)；埃特司韋單抗(SI-69C6)(4d)；伊德單抗(SI-69C7)(4e)；西加維單抗(SI-69C8)(4f)；及替沙格韋單抗(SI-69C9)(4g))的結合動力學(親和力)，表明相對於野生型RBD，SI-F019以增加的結合親和力與RBD變體形式結合，此主要是由較慢的解離速率驅動的，與此同時至少三種中和抗體失去了與至少一種變體的結合(不可偵測)。
WHO 命名 RBD突變 4a.SI-F019
KD (M) Kon (1/Ms) Kdis (1/s)
原始 WT 2.18E-08 4.26E+05 9.26E-03
α N501Y 4.54E-09 3.96E+05 1.80E-03
δ L452R、T478K 7.26E-09 6.11E+05 4.44E-03
κ L452R、E484Q 9.07E-09 5.12E+05 4.65E-03
γ K417T、E484K、N501Y 4.03E-09 5.30E+05 2.13E-03
β K417N、E484K、N501Y 8.49E-09 4.24E+05 3.61E-03
λ L452Q、F490S 1.35E-08 4.59E+05 6.21E-03
表4(續-1)
WHO 命名 4b.巴尼韋單抗(SI-69C4) 4c.卡西瑞單抗(SI-69C5)
KD (M) Kon (1/Ms) Kdis (1/s) KD (M) Kon (1/Ms) Kdis (1/s)
原始 1.64E-09 5.86E+05 9.60E-04 2.02E-09 9.75E+05 1.96E-03
α 1.67E-09 4.03E+05 6.74E-04 2.65E-09 6.59E+05 1.75E-03
δ 3.61E-09 3.52E+05 1.27E-03 1.02E-09 1.14E+06 1.16E-03
κ 不可偵測 不可偵測 不可偵測 7.20E-09 7.90E+05 5.69E-03
γ 不可偵測 不可偵測 不可偵測 2.93E-08 1.92E+05 5.64E-03
β 不可偵測 不可偵測 不可偵測 不可偵測 不可偵測 不可偵測
λ 不可偵測 不可偵測 不可偵測 2.52E-09 6.50E+05 1.64E-03
表4(續-2)
WHO 命名 4d.埃特司韋單抗(SI-69C6) 4e.伊德單抗(SI-69C7)
KD (M) Kon (1/Ms) Kdis (1/s) KD (M) Kon (1/Ms) Kdis (1/s)
原始 1.67E-08 4.89E+05 8.16E-03 1.10E-08 4.51E+05 4.98E-03
α 9.59E-09 2.41E+05 2.31E-03 6.53E-09 3.81E+05 2.48E-03
δ 8.09E-09 4.93E+05 3.99E-03 4.77E-09 5.61E+05 2.68E-03
κ 1.48E-08 3.18E+05 4.72E-03 3.34E-09 4.83E+05 1.61E-03
γ 4.68E-08 2.44E+05 1.14E-02 7.72E-09 4.40E+05 3.40E-03
β 不可偵測 不可偵測 不可偵測 6.01E-09 4.90E+05 2.94E-03
λ 8.24E-09 5.61E+05 4.62E-03 1.10E-08 4.48E+05 4.91E-03
表4(續-3)
WHO 命名 4f.西加維單抗(SI-69C8) 4g.替沙格韋單抗(SI-69C9)
kd (M) Kon (1/Ms) Kdis (1/s) kd (M) Kon (1/Ms) Kdis (1/s)
原始 3.98E-09 4.34E+05 1.72E-03 3.63E-09 1.12E+06 4.06E-03
α 2.44E-09 4.01E+05 9.81E-04 3.17E-09 8.21E+05 2.60E-03
δ 7.34E-09 4.38E+05 3.21E-03 3.83E-09 1.12E+06 4.30E-03
κ 9.89E-09 3.68E+05 3.64E-03 5.21E-09 9.00E+05 4.69E-03
γ 2.82E-09 3.92E+05 1.10E-03 5.83E-09 8.30E+05 4.84E-03
β 1.43E-09 4.41E+05 6.31E-04 3.24E-09 9.81E+05 3.18E-03
λ 9.81E-09 3.54E+05 3.48E-03 4.31E-09 7.82E+05 3.37E-03
表5.使用生物層干涉法來量化SI-F019 (5a)和針對S蛋白RBD不同變體的中和抗體(包括巴尼韋單抗(SI-69C4)(5b)；卡西瑞單抗(SI-69C5)(5c)；埃特司韋單抗(SI-69C6)(5d)；伊德單抗(SI-69C7)(5e)；西加維單抗(SI-69C8)(5f)；及替沙格韋單抗(SI-69C9)(5g))的結合動力學(親合力)。
WHO命名 RBD突變 5a.SI-F019
kd (M) Kon (1/Ms) Kdis (1/s)
原始 WT 1.14E-10 8.63E+05 9.82E-05
α N501Y 1.90E-11 1.02E+06 1.94E-05
δ L452R、T478K 1.41E-11 8.58E+05 1.21E-05
κ L452R、E484Q ＜1.0E-12 1.01E+06 ＜1.0E-07
γ K417T、E484K、N501Y 6.23E-11 1.00E+06 6.26E-05
β K417N、E484K、N501Y 6.35E-11 8.93E+05 5.66E-05
λ L452Q、F490S 8.92E-11 9.13E+05 8.15E-05
表5(續-1)
WHO 命名 5b.巴尼韋單抗(SI-69C4) 5c.卡西瑞單抗(SI-69C5)
kd (M) Kon (1/Ms) Kdis (1/s) kd (M) Kon (1/Ms) Kdis (1/s)
原始 7.03E-11 5.60E+05 3.94E-05 1.37E-10 4.64E+05 6.34E-05
α 5.55E-11 4.10E+05 2.27E-05 7.83E-11 5.17E+05 4.05E-05
δ 2.37E-09 5.38E+05 1.27E-03 8.04E-11 5.54E+05 4.46E-05
κ 不可偵測 不可偵測 不可偵測 ＜1.0E-12 4.57E+05 ＜1.0E-07
γ 不可偵測 不可偵測 不可偵測 1.33E-09 5.64E+05 7.52E-04
β 不可偵測 不可偵測 不可偵測 9.20E-10 5.60E+05 5.16E-04
λ 4.83E-09 8.46E+05 4.09E-03 9.58E-11 4.24E+05 4.07E-05
表5(續-2)
WHO 命名 5d.埃特司韋單抗(SI-69C6) 5e.伊德單抗(SI-69C7)
KD (M) Kon (1/Ms) Kdis (1/s) KD (M) Kon (1/Ms) Kdis (1/s)
原始 4.92E-11 2.56E+05 1.26E-05 ＜1.0E-12 3.06E+05 ＜1.0E-07
α 2.43E-11 2.26E+05 5.50E-06 ＜1.0E-12 3.85E+05 ＜1.0E-07
δ ＜1.0E-12 2.56E+05 ＜1.0E-07 ＜1.0E-12 3.57E+05 ＜1.0E-07
κ 2.96E-11 2.70E+05 7.99E-06 ＜1.0E-12 3.44E+05 ＜1.0E-07
γ 4.15E-10 1.39E+06 5.78E-04 ＜1.0E-12 3.24E+05 ＜1.0E-07
β 不可偵測 不可偵測 不可偵測 ＜1.0E-12 3.40E+05 ＜1.0E-07
λ ＜1.0E-12 2.70E+05 ＜1.0E-07 ＜1.0E-12 2.73E+05 ＜1.0E-07
表5(續-3)
WHO 命名 5f.西加維單抗(SI-69C8) 5g.替沙格韋單抗(SI-69C9)
KD (M) Kon (1/Ms) Kdis (1/s) KD (M) Kon (1/Ms) Kdis (1/s)
原始 2.10E-10 3.12E+05 6.53E-05 2.21E-11 3.35E+05 7.40E-06
α 1.24E-10 3.44E+05 4.26E-05 ＜1.0E-12 4.47E+05 ＜1.0E-07
δ 4.81E-11 3.35E+05 1.61E-05 3.03E-11 4.22E+05 1.28E-05
κ 2.04E-10 2.98E+05 6.08E-05 ＜1.0E-12 4.16E+05 ＜1.0E-07
γ 1.93E-10 3.85E+05 7.42E-05 ＜1.0E-12 3.76E+05 ＜1.0E-07
β 2.73E-10 3.55E+05 9.67E-05 ＜1.0E-12 4.40E+05 ＜1.0E-07
λ 8.15E-11 2.91E+05 2.37E-05 ＜1.0E-12 3.62E+05 ＜1.0E-07
表6a.SI-F019和中和抗體對SARS-CoV-2病毒RBD的最大結合反應(親和力)的比較分析，表明該等抗體中的四種抗體對至少一種變體的反應範圍為低至無反應，而SI-F019顯示出增強的對所有變體的反應。
WHO命名 SI-F019 SI-69C4 SI-68C5 SI-69C6 SI-69C7 SI-69C8 SI-69C9
原始 0.255 0.6224 0.5842 0.3512 0.561 0.3973 0.4767
α 0.3801 0.6714 0.6233 0.3763 0.6723 0.4521 0.5523
δ 0.3115 0.326 0.5787 0.4078 0.6585 0.3566 0.5133
    低          
κ 0.2905 0.0516 0.509 0.3368 0.6459 0.3223 0.4717
    無          
γ 0.3336 0.0624 0.4199 0.0923 0.6419 0.4283 0.4742
    最小的 低 最小的      
β 0.3046 0.031 0.139 0.0246 0.658 0.4384 0.4602
    無 非特異性的 無      
λ 0.278 0.1124 0.4976 0.3516 0.429 0.236 0.4113
    最小的       低  
表6b.SI-F019或中和抗體對SARS-CoV-2病毒RBD的結合反應(親合力)的比較分析，表明抗體的反應範圍從低到無，而SI-F019無明顯變化。
WHO命名 SI-F019 SI-69C4 SI-68C5 SI-69C6 SI-69C7 SI-69C8 SI-69C9
WT 0.7116 1.089 1.5033 0.7459 1.4517 0.6397 1.6959
α 0.7596 1.237 1.2967 0.7718 1.1912 0.6967 1.3498
δ 0.6226 0.6171 1.1999 0.7103 1.145 0.5252 1.2973
    低          
κ 0.8529 0.0072 1.4715 0.9705 1.3218 0.6285 1.5444
    無          
γ 0.7085 0.0261 1.1662 0.1694 1.3319 0.6571 1.5804
    無   低      
β 0.5671 0.0212 0.9041 0.0398 1.068 0.4734 1.1393
    無 低 無 低 低 低
λ 0.9729 0.4863 1.6376 1.1007 1.4551 0.727 1.7596
    低          
表7.在使用S蛋白包裝假病毒(NICPBP)感染表現ACE2的293T細胞的螢光素酶報告測定中，抑制病毒感染性的IC50值。值得注意的是，基於較低的IC50值，SI-F019抑制含有S蛋白變異形式的假病毒比抑制含有野生型S蛋白的假病毒更有效。
WHO命名 SARS-CoV-2假病毒 IC50 (μg/ml)
原始 WT Wuhan-Hu-1 1.311
α B.1.1.7 0.235
δ B.1.617.2 0.087
κ B.1.617.1 0.163
γ P.1 0.089
β 501Y.V2 0.223
不適用 B.1.617.3 0.611
表8a.SI-F019一期臨床試驗的人口統計學概要(年齡、體重) (NCT04851444)
  3mg/kg 10mg/kg 30mg/kg 52mg/kg 70mg/kg 總計
(n=4) (n=8) (n=8) (n=8) (n=8) (n=36)
中間年齡 30.5 27.5 24.5 28 27 27
(最小值-最大值) (26.0-38.0) (21.0-37.0) (21.0-31.0) (23.0-39.0) (18.0-41.0) (18.0-41.0)
中間體重(kg) 58.2 59.4 55.3 53.7 61.9 57.6
(最小值-最大值) (56.5-59.5) (53.0-68.1) (47.7-65.4) (47.3-63.9) (50.8-70.8) (47.3-70.8)
表8b.SI-F019一期臨床試驗的劑量遞增和分配設計 (NCT04851444)
組別 1 2 3 4 5
劑量(mg/Kg) 3 10 30 52 70
劑量增量 / 233% 200% 73% 34%
參與者人數(治療+對照) 2+2 6+2 6+2 6+2 6+2
表9a.基於SI-F019 (NCT04851444)一期臨床試驗的系統器官分類/首選用語(SOC/PT)的所有不良事件(AE)匯總
不良事件 NCI-CTCAE 5.0 AE等級
3mg/kg (N*=3) 10mg/kg (N=4) 30mg/kg (N=4) 52mg/kg (N=5) 70mg/kg (N=5) 全部(N=21)
1級 1級 1級 1級 1級 1級
調查 3 (100%) 3 (75%) 4 (100%) 5 (100%) 5 (100%) 20 (95%)
白細胞計數增加 1 (33%)         1 (5%)
白細胞尿陽性   1 (25%) 2 (50%) 3 (60%) 2 (40%) 8 (38%)
存在尿酮體   1 (25%) 1 (25%)   1 (20%) 3 (14%)
腎小球濾過率降低     1 (25%) 1 (20%)   2 (10%)
細菌測試陽性 2 (67%) 2 (50%) 4 (100%) 3 (60%) 3 (60%) 14 (67%)
心電圖異常   2 (50%)   1 (20%)   3 (14%)
血膽紅素升高     1 (25%)     1 (5%)
血三酸甘油酯升高   1 (25%)   1 (20%) 1 (20%) 3 (14%)
血肌酐升高     1 (25%) 1 (20%)   2 (10%)
血尿酸升高         1 (20%) 1 (5%)
中性粒細胞計數增加 1 (33%)         1 (5%)
腎臟和泌尿系統病症   1 (25%)       1 (5%)
血尿   1 (25%)       1 (5%)
*N：經歷AE的患者數。 表9b：基於SI-F019 (NCT04851444)一期臨床試驗的系統器官分類/首選用語(SOC/PT)的所有治療相關不良事件(TRAE)匯總
不良事件 NCI-CTCAE 5.0 AE等級
3mg/kg (N=2) 10mg/kg (N=4) 30mg/kg (N=3) 52mg/kg (N=4) 70mg/kg (N=3) 全部(N=16)
1級 1級 1級 1級 1級 1級
調查 2 (100%) 3 (75%) 3 (100%) 4 (100%) 3 (100%) 15 (94%)
白細胞計數增加 1 (50%)         1 (6%)
白細胞尿陽性   1 (25%) 1 (33%) 1 (25%)   3 (19%)
存在尿酮體   1 (25%)     1 (33%) 2 (13%)
腎小球濾過率降低     1 (33%) 1 (25%)   2 (13%)
細菌測試陽性 1 (50%) 2 (50%) 2 (67%) 1 (25%) 1 (33%) 7 (44%)
心電圖異常   2 (50%)   1 (25%)   3 (19%)
血膽紅素升高     1 (33%)     1 (6%)
血三酸甘油酯升高   1 (25%)   1 (25%) 1 (33%) 3 (19%)
血肌酐升高     1 (33%) 1 (25%)   2 (13%)
血尿酸升高         1 (33%) 1 (6%)
中性粒細胞計數增加 1 (50%)         1 (6%)
腎臟和泌尿系統病症   1 (25%)       1 (6%)
血尿   1 (25%)       1 (6%)
*N：經歷TRAE的患者數。 序列表
樣本ID 註解 SEQ ID No.
蛋白質 DNA
huACE2野生型 huACE2全長(Genbank_編號：蛋白質：NP_001358344.1；DNA：NM_021804.3) 1 2
huACE2 (1-615) huACE2功能結構域(殘基：1-615) 3 4
  IgG1 Fc野生型 5 -
  IgG1 Fc無效 6 -
SI-69R2 huACE2 (1-615)與IgG1 Fc無效的融合蛋白 7 8
SI-69R2-G4 huACE2 (1-615)與IgG4 Fc的融合蛋白 9 10
SI-69R2-A1 huACE2 (1-615)與IgA1 Fc的融合蛋白 11 12
SI-69R2-A2 huACE2 (1-615)與IgA2 Fc的融合蛋白 13 14
SI-F019 huACE2 (18-615)與IgG1 Fc無效(從SI-69R2純化出的)的融合蛋白 15  
  huACE2 (18-615)與IgG4 Fc(從SI-69R2-G4純化出的)的融合蛋白 16  
  huACE2 (18-615)與IgA1 Fc(從SI-69R2-A1純化出的)的融合蛋白 17  
  huACE2 (18-615)與IgA2 Fc(從SI-69R2-A2純化出的)的融合蛋白 18  
SI-69R3 huACE2 (1-615)與IgG1 Fc (w2)的融合蛋白 19 20
SI-69R4 huACE2 (1-740)與IgG1 Fc (w2)的融合蛋白 21 22
SI-69R1 6His標記的huACE2 (1-615) 23 24
SI-69R10 6His標記的人TMPRSS2蛋白(殘基：106-492) 25 26
  IgJ鏈 27 -
  分泌組分 28 -
SI-69C4 巴尼韋單抗重鏈 29  
  巴尼韋單抗輕鏈 30  
SI-69C5 卡西瑞單抗重鏈 31  
  卡西瑞單抗輕鏈 32  
SI-69C6 埃特司韋單抗重鏈 33  
  埃特司韋單抗輕鏈 34  
SI-69C7 伊德單抗重鏈 35  
  伊德單抗輕鏈 36  
SI-69C8 西加維單抗重鏈 37  
  西加維單抗輕鏈 38  
SI-69C9 替沙格韋單抗重鏈 39  
  替沙格韋單抗輕鏈 40  
＞序列ID 1：huACE2全長蛋白序列(Genbank_編號：NP_001358344.1， TMPRSS2 蛋白酶切割位點) MSSSSWLLLSLVAVTAAQSTIEEQAKTFLDKFNHEAEDLFYQSSLASWNYNTNITEENVQNMNNAGDKWSAFLKEQSTLAQMYPLQEIQNLTVKLQLQALQQNGSSVLSEDKSKRLNTILNTMSTIYSTGKVCNPDNPQECLLLEPGLNEIMANSLDYNERLWAWESWRSEVGKQLRPLYEEYVVLKNEMARANHYEDYGDYWRGDYEVNGVDGYDYSRGQLIEDVEHTFEEIKPLYEHLHAYVRAKLMNAYPSYISPIGCLPAHLLGDMWGRFWTNLYSLTVPFGQKPNIDVTDAMVDQAWDAQRIFKEAEKFFVSVGLPNMTQGFWENSMLTDPGNVQKAVCHPTAWDLGKGDFRILMCTKVTMDDFLTAHHEMGHIQYDMAYAAQPFLLRNGANEGFHEAVGEIMSLSAATPKHLKSIGLLSPDFQEDNETEINFLLKQALTIVGTLPFTYMLEKWRWMVFKGEIPKDQWMKKWWEMKREIVGVVEPVPHDETYCDPASLFHVSNDYSFIRYYTRTLYQFQFQEALCQAAKHEGPLHKCDISNSTEAGQKLFNMLRLGKSEPWTLALENVVGAKNMNVRPLLNYFEPLFTWLKDQNKNSFVGWSTDWSPYADQSIKVRISLKSALGDKAYEWNDNEMYLFRSSVAYAMRQYFLKVKNQMILFGEEDVRVANLKPRISFNFFVTAPKNVSDIIP RTEVEKAIRMSRSRINDAFRLNDNSLEFLGIQPTLGPPNQPPVSIWLIVFGVVMGVIVVGIVILIFTGIRDRKKKNKARSGENPYASIDISKGENNPGFQNTDDVQTSF ＞序列ID 2：huACE2全長DNA序列(Genbank_編號：NM_021804.3) ATGTCAAGCTCTTCCTGGCTCCTTCTCAGCCTTGTTGCTGTAACTGCTGCTCAGTCCACCATTGAGGAACAGGCCAAGACATTTTTGGACAAGTTTAACCACGAAGCCGAAGACCTGTTCTATCAAAGTTCACTTGCTTCTTGGAATTATAACACCAATATTACTGAAGAGAATGTCCAAAACATGAATAATGCTGGGGACAAATGGTCTGCCTTTTTAAAGGAACAGTCCACACTTGCCCAAATGTATCCACTACAAGAAATTCAGAATCTCACAGTCAAGCTTCAGCTGCAGGCTCTTCAGCAAAATGGGTCTTCAGTGCTCTCAGAAGACAAGAGCAAACGGTTGAACACAATTCTAAATACAATGAGCACCATCTACAGTACTGGAAAAGTTTGTAACCCAGATAATCCACAAGAATGCTTATTACTTGAACCAGGTTTGAATGAAATAATGGCAAACAGTTTAGACTACAATGAGAGGCTCTGGGCTTGGGAAAGCTGGAGATCTGAGGTCGGCAAGCAGCTGAGGCCATTATATGAAGAGTATGTGGTCTTGAAAAATGAGATGGCAAGAGCAAATCATTATGAGGACTATGGGGATTATTGGAGAGGAGACTATGAAGTAAATGGGGTAGATGGCTATGACTACAGCCGCGGCCAGTTGATTGAAGATGTGGAACATACCTTTGAAGAGATTAAACCATTATATGAACATCTTCATGCCTATGTGAGGGCAAAGTTGATGAATGCCTATCCTTCCTATATCAGTCCAATTGGATGCCTCCCTGCTCATTTGCTTGGTGATATGTGGGGTAGATTTTGGACAAATCTGTACTCTTTGACAGTTCCCTTTGGACAGAAACCAAACATAGATGTTACTGATGCAATGGTGGACCAGGCCTGGGATGCACAGAGAATATTCAAGGAGGCCGAGAAGTTCTTTGTATCTGTTGGTCTTCCTAATATGACTCAAGGATTCTGGGAAAATTCCATGCTAACGGACCCAGGAAATGTTCAGAAAGCAGTCTGCCATCCCACAGCTTGGGACCTGGGGAAGGGCGACTTCAGGATCCTTATGTGCACAAAGGTGACAATGGACGACTTCCTGACAGCTCATCATGAGATGGGGCATATCCAGTATGATATGGCATATGCTGCACAACCTTTTCTGCTAAGAAATGGAGCTAATGAAGGATTCCATGAAGCTGTTGGGGAAATCATGTCACTTTCTGCAGCCACACCTAAGCATTTAAAATCCATTGGTCTTCTGTCACCCGATTTTCAAGAAGACAATGAAACAGAAATAAACTTCCTGCTCAAACAAGCACTCACGATTGTTGGGACTCTGCCATTTACTTACATGTTAGAGAAGTGGAGGTGGATGGTCTTTAAAGGGGAAATTCCCAAAGACCAGTGGATGAAAAAGTGGTGGGAGATGAAGCGAGAGATAGTTGGGGTGGTGGAACCTGTGCCCCATGATGAAACATACTGTGACCCCGCATCTCTGTTCCATGTTTCTAATGATTACTCATTCATTCGATATTACACAAGGACCCTTTACCAATTCCAGTTTCAAGAAGCACTTTGTCAAGCAGCTAAACATGAAGGCCCTCTGCACAAATGTGACATCTCAAACTCTACAGAAGCTGGACAGAAACTGTTCAATATGCTGAGGCTTGGAAAATCAGAACCCTGGACCCTAGCATTGGAAAATGTTGTAGGAGCAAAGAACATGAATGTAAGGCCACTGCTCAACTACTTTGAGCCCTTATTTACCTGGCTGAAAGACCAGAACAAGAATTCTTTTGTGGGATGGAGTACCGACTGGAGTCCATATGCAGACCAAAGCATCAAAGTGAGGATAAGCCTAAAATCAGCTCTTGGAGATAAAGCATATGAATGGAACGACAATGAAATGTACCTGTTCCGATCATCTGTTGCATATGCTATGAGGCAGTACTTTTTAAAAGTAAAAAATCAGATGATTCTTTTTGGGGAGGAGGATGTGCGAGTGGCTAATTTGAAACCAAGAATCTCCTTTAATTTCTTTGTCACTGCACCTAAAAATGTGTCTGATATCATTCCTAGAACTGAAGTTGAAAAGGCCATCAGGATGTCCCGGAGCCGTATCAATGATGCTTTCCGTCTGAATGACAACAGCCTAGAGTTTCTGGGGATACAGCCAACACTTGGACCTCCTAACCAGCCCCCTGTTTCCATATGGCTGATTGTTTTTGGAGTTGTGATGGGAGTGATAGTGGTTGGCATTGTCATCCTGATCTTCACTGGGATCAGAGATCGGAAGAAGAAAAATAAAGCAAGAAGTGGAGAAAATCCTTATGCCTCCATCGATATTAGCAAAGGAGAAAATAATCCAGGATTCCAAAACACTGATGATGTTCAGACCTCCTTTTAG ＞序列ID 3：huACE2功能結構域(殘基：1-615)蛋白序列 MSSSSWLLLSLVAVTAAQSTIEEQAKTFLDKFNHEAEDLFYQSSLASWNYNTNITEENVQNMNNAGDKWSAFLKEQSTLAQMYPLQEIQNLTVKLQLQALQQNGSSVLSEDKSKRLNTILNTMSTIYSTGKVCNPDNPQECLLLEPGLNEIMANSLDYNERLWAWESWRSEVGKQLRPLYEEYVVLKNEMARANHYEDYGDYWRGDYEVNGVDGYDYSRGQLIEDVEHTFEEIKPLYEHLHAYVRAKLMNAYPSYISPIGCLPAHLLGDMWGRFWTNLYSLTVPFGQKPNIDVTDAMVDQAWDAQRIFKEAEKFFVSVGLPNMTQGFWENSMLTDPGNVQKAVCHPTAWDLGKGDFRILMCTKVTMDDFLTAHHEMGHIQYDMAYAAQPFLLRNGANEGFHEAVGEIMSLSAATPKHLKSIGLLSPDFQEDNETEINFLLKQALTIVGTLPFTYMLEKWRWMVFKGEIPKDQWMKKWWEMKREIVGVVEPVPHDETYCDPASLFHVSNDYSFIRYYTRTLYQFQFQEALCQAAKHEGPLHKCDISNSTEAGQKLFNMLRLGKSEPWTLALENVVGAKNMNVRPLLNYFEPLFTWLKDQNKNSFVGWSTDWSPYAD ＞序列ID 4：huACE2功能結構域(殘基：1-615) DNA序列 ATGTCAAGCTCTTCCTGGCTCCTTCTCAGCCTTGTTGCTGTAACTGCTGCTCAGTCCACCATTGAGGAACAGGCCAAGACATTTTTGGACAAGTTTAACCACGAAGCCGAAGACCTGTTCTATCAAAGTTCACTTGCTTCTTGGAATTATAACACCAATATTACTGAAGAGAATGTCCAAAACATGAATAATGCTGGGGACAAATGGTCTGCCTTTTTAAAGGAACAGTCCACACTTGCCCAAATGTATCCACTACAAGAAATTCAGAATCTCACAGTCAAGCTTCAGCTGCAGGCTCTTCAGCAAAATGGGTCTTCAGTGCTCTCAGAAGACAAGAGCAAACGGTTGAACACAATTCTAAATACAATGAGCACCATCTACAGTACTGGAAAAGTTTGTAACCCAGATAATCCACAAGAATGCTTATTACTTGAACCAGGTTTGAATGAAATAATGGCAAACAGTTTAGACTACAATGAGAGGCTCTGGGCTTGGGAAAGCTGGAGATCTGAGGTCGGCAAGCAGCTGAGGCCATTATATGAAGAGTATGTGGTCTTGAAAAATGAGATGGCAAGAGCAAATCATTATGAGGACTATGGGGATTATTGGAGAGGAGACTATGAAGTAAATGGGGTAGATGGCTATGACTACAGCCGCGGCCAGTTGATTGAAGATGTGGAACATACCTTTGAAGAGATTAAACCATTATATGAACATCTTCATGCCTATGTGAGGGCAAAGTTGATGAATGCCTATCCTTCCTATATCAGTCCAATTGGATGCCTCCCTGCTCATTTGCTTGGTGATATGTGGGGTAGATTTTGGACAAATCTGTACTCTTTGACAGTTCCCTTTGGACAGAAACCAAACATAGATGTTACTGATGCAATGGTGGACCAGGCCTGGGATGCACAGAGAATATTCAAGGAGGCCGAGAAGTTCTTTGTATCTGTTGGTCTTCCTAATATGACTCAAGGATTCTGGGAAAATTCCATGCTAACGGACCCAGGAAATGTTCAGAAAGCAGTCTGCCATCCCACAGCTTGGGACCTGGGGAAGGGCGACTTCAGGATCCTTATGTGCACAAAGGTGACAATGGACGACTTCCTGACAGCTCATCATGAGATGGGGCATATCCAGTATGATATGGCATATGCTGCACAACCTTTTCTGCTAAGAAATGGAGCTAATGAAGGATTCCATGAAGCTGTTGGGGAAATCATGTCACTTTCTGCAGCCACACCTAAGCATTTAAAATCCATTGGTCTTCTGTCACCCGATTTTCAAGAAGACAATGAAACAGAAATAAACTTCCTGCTCAAACAAGCACTCACGATTGTTGGGACTCTGCCATTTACTTACATGTTAGAGAAGTGGAGGTGGATGGTCTTTAAAGGGGAAATTCCCAAAGACCAGTGGATGAAAAAGTGGTGGGAGATGAAGCGAGAGATAGTTGGGGTGGTGGAACCTGTGCCCCATGATGAAACATACTGTGACCCCGCATCTCTGTTCCATGTTTCTAATGATTACTCATTCATTCGATATTACACAAGGACCCTTTACCAATTCCAGTTTCAAGAAGCACTTTGTCAAGCAGCTAAACATGAAGGCCCTCTGCACAAATGTGACATCTCAAACTCTACAGAAGCTGGACAGAAACTGTTCAATATGCTGAGGCTTGGAAAATCAGAACCCTGGACCCTAGCATTGGAAAATGTTGTAGGAGCAAAGAACATGAATGTAAGGCCACTGCTCAACTACTTTGAGCCCTTATTTACCTGGCTGAAAGACCAGAACAAGAATTCTTTTGTGGGATGGAGTACCGACTGGAGTCCATATGCAGAC ＞序列ID 5：Fc野生型IgGl Fc(EU編號216-447) EPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK ＞序列ID 6：Fc無效版本(EU編號216-447，具有突變： C220S、 L234A、 L235A及 K322A) EPKS SDKTHTCPPCPAPE AAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKC AVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK ＞序列ID 7：SI-69R2_huACE2功能結構域(殘基：1-615)-IgG1 FC(無效段)蛋白序列(EU編號216-447，具有突變：C220S、L234A、L235A及K322A) MSSSSWLLLSLVAVTAAQSTIEEQAKTFLDKFNHEAEDLFYQSSLASWNYNTNITEENVQNMNNAGDKWSAFLKEQSTLAQMYPLQEIQNLTVKLQLQALQQNGSSVLSEDKSKRLNTILNTMSTIYSTGKVCNPDNPQECLLLEPGLNEIMANSLDYNERLWAWESWRSEVGKQLRPLYEEYVVLKNEMARANHYEDYGDYWRGDYEVNGVDGYDYSRGQLIEDVEHTFEEIKPLYEHLHAYVRAKLMNAYPSYISPIGCLPAHLLGDMWGRFWTNLYSLTVPFGQKPNIDVTDAMVDQAWDAQRIFKEAEKFFVSVGLPNMTQGFWENSMLTDPGNVQKAVCHPTAWDLGKGDFRILMCTKVTMDDFLTAHHEMGHIQYDMAYAAQPFLLRNGANEGFHEAVGEIMSLSAATPKHLKSIGLLSPDFQEDNETEINFLLKQALTIVGTLPFTYMLEKWRWMVFKGEIPKDQWMKKWWEMKREIVGVVEPVPHDETYCDPASLFHVSNDYSFIRYYTRTLYQFQFQEALCQAAKHEGPLHKCDISNSTEAGQKLFNMLRLGKSEPWTLALENVVGAKNMNVRPLLNYFEPLFTWLKDQNKNSFVGWSTDWSPYADEPKSSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCAVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK ＞序列ID 8：SI-69R2：huACE2功能結構域(殘基：1-615)-IgG1 FC(無效段)DNA序列 ATGTCAAGCTCTTCCTGGCTCCTTCTCAGCCTTGTTGCTGTAACTGCTGCTCAGTCCACCATTGAGGAACAGGCCAAGACATTTTTGGACAAGTTTAACCACGAAGCCGAAGACCTGTTCTATCAAAGTTCACTTGCTTCTTGGAATTATAACACCAATATTACTGAAGAGAATGTCCAAAACATGAATAATGCTGGGGACAAATGGTCTGCCTTTTTAAAGGAACAGTCCACACTTGCCCAAATGTATCCACTACAAGAAATTCAGAATCTCACAGTCAAGCTTCAGCTGCAGGCTCTTCAGCAAAATGGGTCTTCAGTGCTCTCAGAAGACAAGAGCAAACGGTTGAACACAATTCTAAATACAATGAGCACCATCTACAGTACTGGAAAAGTTTGTAACCCAGATAATCCACAAGAATGCTTATTACTTGAACCAGGTTTGAATGAAATAATGGCAAACAGTTTAGACTACAATGAGAGGCTCTGGGCTTGGGAAAGCTGGAGATCTGAGGTCGGCAAGCAGCTGAGGCCATTATATGAAGAGTATGTGGTCTTGAAAAATGAGATGGCAAGAGCAAATCATTATGAGGACTATGGGGATTATTGGAGAGGAGACTATGAAGTAAATGGGGTAGATGGCTATGACTACAGCCGCGGCCAGTTGATTGAAGATGTGGAACATACCTTTGAAGAGATTAAACCATTATATGAACATCTTCATGCCTATGTGAGGGCAAAGTTGATGAATGCCTATCCTTCCTATATCAGTCCAATTGGATGCCTCCCTGCTCATTTGCTTGGTGATATGTGGGGTAGATTTTGGACAAATCTGTACTCTTTGACAGTTCCCTTTGGACAGAAACCAAACATAGATGTTACTGATGCAATGGTGGACCAGGCCTGGGATGCACAGAGAATATTCAAGGAGGCCGAGAAGTTCTTTGTATCTGTTGGTCTTCCTAATATGACTCAAGGATTCTGGGAAAATTCCATGCTAACGGACCCAGGAAATGTTCAGAAAGCAGTCTGCCATCCCACAGCTTGGGACCTGGGGAAGGGCGACTTCAGGATCCTTATGTGCACAAAGGTGACAATGGACGACTTCCTGACAGCTCATCATGAGATGGGGCATATCCAGTATGATATGGCATATGCTGCACAACCTTTTCTGCTAAGAAATGGAGCTAATGAAGGATTCCATGAAGCTGTTGGGGAAATCATGTCACTTTCTGCAGCCACACCTAAGCATTTAAAATCCATTGGTCTTCTGTCACCCGATTTTCAAGAAGACAATGAAACAGAAATAAACTTCCTGCTCAAACAAGCACTCACGATTGTTGGGACTCTGCCATTTACTTACATGTTAGAGAAGTGGAGGTGGATGGTCTTTAAAGGGGAAATTCCCAAAGACCAGTGGATGAAAAAGTGGTGGGAGATGAAGCGAGAGATAGTTGGGGTGGTGGAACCTGTGCCCCATGATGAAACATACTGTGACCCCGCATCTCTGTTCCATGTTTCTAATGATTACTCATTCATTCGATATTACACAAGGACCCTTTACCAATTCCAGTTTCAAGAAGCACTTTGTCAAGCAGCTAAACATGAAGGCCCTCTGCACAAATGTGACATCTCAAACTCTACAGAAGCTGGACAGAAACTGTTCAATATGCTGAGGCTTGGAAAATCAGAACCCTGGACCCTAGCATTGGAAAATGTTGTAGGAGCAAAGAACATGAATGTAAGGCCACTGCTCAACTACTTTGAGCCCTTATTTACCTGGCTGAAAGACCAGAACAAGAATTCTTTTGTGGGATGGAGTACCGACTGGAGTCCATATGCAGACGAGCCCAAATCTTCCGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAAGCCGCGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCGCGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATAG ＞序列ID 9：huACE2功能結構域(殘基：1-615)-IgG4 Fc蛋白序列 MSSSSWLLLSLVAVTAAQSTIEEQAKTFLDKFNHEAEDLFYQSSLASWNYNTNITEENVQNMNNAGDKWSAFLKEQSTLAQMYPLQEIQNLTVKLQLQALQQNGSSVLSEDKSKRLNTILNTMSTIYSTGKVCNPDNPQECLLLEPGLNEIMANSLDYNERLWAWESWRSEVGKQLRPLYEEYVVLKNEMARANHYEDYGDYWRGDYEVNGVDGYDYSRGQLIEDVEHTFEEIKPLYEHLHAYVRAKLMNAYPSYISPIGCLPAHLLGDMWGRFWTNLYSLTVPFGQKPNIDVTDAMVDQAWDAQRIFKEAEKFFVSVGLPNMTQGFWENSMLTDPGNVQKAVCHPTAWDLGKGDFRILMCTKVTMDDFLTAHHEMGHIQYDMAYAAQPFLLRNGANEGFHEAVGEIMSLSAATPKHLKSIGLLSPDFQEDNETEINFLLKQALTIVGTLPFTYMLEKWRWMVFKGEIPKDQWMKKWWEMKREIVGVVEPVPHDETYCDPASLFHVSNDYSFIRYYTRTLYQFQFQEALCQAAKHEGPLHKCDISNSTEAGQKLFNMLRLGKSEPWTLALENVVGAKNMNVRPLLNYFEPLFTWLKDQNKNSFVGWSTDWSPYADESKYGPPCP PCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK ＞序列ID 10：huACE2功能結構域(殘基：1-615)-IgG4 Fc DNA序列 ATGTCAAGCTCTTCCTGGCTCCTTCTCAGCCTTGTTGCTGTAACTGCTGCTCAGTCCACCATTGAGGAACAGGCCAAGACATTTTTGGACAAGTTTAACCACGAAGCCGAAGACCTGTTCTATCAAAGTTCACTTGCTTCTTGGAATTATAACACCAATATTACTGAAGAGAATGTCCAAAACATGAATAATGCTGGGGACAAATGGTCTGCCTTTTTAAAGGAACAGTCCACACTTGCCCAAATGTATCCACTACAAGAAATTCAGAATCTCACAGTCAAGCTTCAGCTGCAGGCTCTTCAGCAAAATGGGTCTTCAGTGCTCTCAGAAGACAAGAGCAAACGGTTGAACACAATTCTAAATACAATGAGCACCATCTACAGTACTGGAAAAGTTTGTAACCCAGATAATCCACAAGAATGCTTATTACTTGAACCAGGTTTGAATGAAATAATGGCAAACAGTTTAGACTACAATGAGAGGCTCTGGGCTTGGGAAAGCTGGAGATCTGAGGTCGGCAAGCAGCTGAGGCCATTATATGAAGAGTATGTGGTCTTGAAAAATGAGATGGCAAGAGCAAATCATTATGAGGACTATGGGGATTATTGGAGAGGAGACTATGAAGTAAATGGGGTAGATGGCTATGACTACAGCCGCGGCCAGTTGATTGAAGATGTGGAACATACCTTTGAAGAGATTAAACCATTATATGAACATCTTCATGCCTATGTGAGGGCAAAGTTGATGAATGCCTATCCTTCCTATATCAGTCCAATTGGATGCCTCCCTGCTCATTTGCTTGGTGATATGTGGGGTAGATTTTGGACAAATCTGTACTCTTTGACAGTTCCCTTTGGACAGAAACCAAACATAGATGTTACTGATGCAATGGTGGACCAGGCCTGGGATGCACAGAGAATATTCAAGGAGGCCGAGAAGTTCTTTGTATCTGTTGGTCTTCCTAATATGACTCAAGGATTCTGGGAAAATTCCATGCTAACGGACCCAGGAAATGTTCAGAAAGCAGTCTGCCATCCCACAGCTTGGGACCTGGGGAAGGGCGACTTCAGGATCCTTATGTGCACAAAGGTGACAATGGACGACTTCCTGACAGCTCATCATGAGATGGGGCATATCCAGTATGATATGGCATATGCTGCACAACCTTTTCTGCTAAGAAATGGAGCTAATGAAGGATTCCATGAAGCTGTTGGGGAAATCATGTCACTTTCTGCAGCCACACCTAAGCATTTAAAATCCATTGGTCTTCTGTCACCCGATTTTCAAGAAGACAATGAAACAGAAATAAACTTCCTGCTCAAACAAGCACTCACGATTGTTGGGACTCTGCCATTTACTTACATGTTAGAGAAGTGGAGGTGGATGGTCTTTAAAGGGGAAATTCCCAAAGACCAGTGGATGAAAAAGTGGTGGGAGATGAAGCGAGAGATAGTTGGGGTGGTGGAACCTGTGCCCCATGATGAAACATACTGTGACCCCGCATCTCTGTTCCATGTTTCTAATGATTACTCATTCATTCGATATTACACAAGGACCCTTTACCAATTCCAGTTTCAAGAAGCACTTTGTCAAGCAGCTAAACATGAAGGCCCTCTGCACAAATGTGACATCTCAAACTCTACAGAAGCTGGACAGAAACTGTTCAATATGCTGAGGCTTGGAAAATCAGAACCCTGGACCCTAGCATTGGAAAATGTTGTAGGAGCAAAGAACATGAATGTAAGGCCACTGCTCAACTACTTTGAGCCCTTATTTACCTGGCTGAAAGACCAGAACAAGAATTCTTTTGTGGGATGGAGTACCGACTGGAGTCCATATGCAGACGAGTCCAAATATGGTCCCCCGTGCCCA CCATGCCCAGCACCTGAGTTCCTGGGGGGACCATCAGTCTTCCTGTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACTCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCAGGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTCCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGGCCTCCCGTCCTCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAGCCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCAGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAGGCTAACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGGAGGGGAATGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCTGGGTAAATGA ＞序列ID 11：huACE2功能結構域(殘基：1-615)-IgAl Fc蛋白序列 MSSSSWLLLSLVAVTAAQSTIEEQAKTFLDKFNHEAEDLFYQSSLASWNYNTNITEENVQNMNNAGDKWSAFLKEQSTLAQMYPLQEIQNLTVKLQLQALQQNGSSVLSEDKSKRLNTILNTMSTIYSTGKVCNPDNPQECLLLEPGLNEIMANSLDYNERLWAWESWRSEVGKQLRPLYEEYVVLKNEMARANHYEDYGDYWRGDYEVNGVDGYDYSRGQLIEDVEHTFEEIKPLYEHLHAYVRAKLMNAYPSYISPIGCLPAHLLGDMWGRFWTNLYSLTVPFGQKPNIDVTDAMVDQAWDAQRIFKEAEKFFVSVGLPNMTQGFWENSMLTDPGNVQKAVCHPTAWDLGKGDFRILMCTKVTMDDFLTAHHEMGHIQYDMAYAAQPFLLRNGANEGFHEAVGEIMSLSAATPKHLKSIGLLSPDFQEDNETEINFLLKQALTIVGTLPFTYMLEKWRWMVFKGEIPKDQWMKKWWEMKREIVGVVEPVPHDETYCDPASLFHVSNDYSFIRYYTRTLYQFQFQEALCQAAKHEGPLHKCDISNSTEAGQKLFNMLRLGKSEPWTLALENVVGAKNMNVRPLLNYFEPLFTWLKDQNKNSFVGWSTDWSPYADSQDVTVPCPVPSTPPTPSPSTPPTPSPSCCHPRLSLHRPALEDLLLGSEANLTCTLTGLRDASGVTFTWTPSSGKSAVQGPPERDLCGCYSVSSVLPGCAEPWNHGKTFTCTAAYPESKTPLTATLSKSGNTFRPEVHLLPPPSEELALNELVTLTCLARGFSPKDVLVRWLQGSQELPREKYLTWASRQEPSQGTTTFAVTSILRVAAEDWKKGDTFSCMVGHEALPLAFTQKTIDRLAGKPTHVNVSVVMAEVDGTCY ＞序列ID 12：huACE2功能結構域(殘基：1-615)-IgA1 Fc DNA序列 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＞序列ID 13：huACE2功能結構域(殘基：1-615)-IgA2 Fc蛋白序列 MSSSSWLLLSLVAVTAAQSTIEEQAKTFLDKFNHEAEDLFYQSSLASWNYNTNITEENVQNMNNAGDKWSAFLKEQSTLAQMYPLQEIQNLTVKLQLQALQQNGSSVLSEDKSKRLNTILNTMSTIYSTGKVCNPDNPQECLLLEPGLNEIMANSLDYNERLWAWESWRSEVGKQLRPLYEEYVVLKNEMARANHYEDYGDYWRGDYEVNGVDGYDYSRGQLIEDVEHTFEEIKPLYEHLHAYVRAKLMNAYPSYISPIGCLPAHLLGDMWGRFWTNLYSLTVPFGQKPNIDVTDAMVDQAWDAQRIFKEAEKFFVSVGLPNMTQGFWENSMLTDPGNVQKAVCHPTAWDLGKGDFRILMCTKVTMDDFLTAHHEMGHIQYDMAYAAQPFLLRNGANEGFHEAVGEIMSLSAATPKHLKSIGLLSPDFQEDNETEINFLLKQALTIVGTLPFTYMLEKWRWMVFKGEIPKDQWMKKWWEMKREIVGVVEPVPHDETYCDPASLFHVSNDYSFIRYYTRTLYQFQFQEALCQAAKHEGPLHKCDISNSTEAGQKLFNMLRLGKSEPWTLALENVVGAKNMNVRPLLNYFEPLFTWLKDQNKNSFVGWSTDWSPYADSQDVTVPCRVPPPPPCCHPRLSLHRPALEDLLLGSEANLTCTLTGLRDASGATFTWTPSSGKSAVQGPPERDLCGCYSVSSVLPGCAQPWNHGETFTCTAAHPELKTPLTANITKSGNTFRPEVHLLPPPSEELALNELVTLTCLARGFSPKDVLVRWLQGSQELPREKYLTWASRQEPSQGTTTYAVTSILRVAAEDWKKGETFSCMVGHEALPLAFTQKTIDRMAGKPTHINVSVVMAEADGTCY ＞序列ID 14：huACE2功能結構域(殘基：1-615)-IgA2 Fc DNA序列 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SDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK ＞序列ID 22：SI-69R4_人ACE2-ECD-1-740-Fc-w2-DNA序列 ATGTCAAGCTCTTCCTGGCTCCTTCTCAGCCTTGTTGCTGTAACTGCTGCTCAGTCCACCATTGAGGAACAGGCCAAGACATTTTTGGACAAGTTTAACCACGAAGCCGAAGACCTGTTCTATCAAAGTTCACTTGCTTCTTGGAATTATAACACCAATATTACTGAAGAGAATGTCCAAAACATGAATAATGCTGGGGACAAATGGTCTGCCTTTTTAAAGGAACAGTCCACACTTGCCCAAATGTATCCACTACAAGAAATTCAGAATCTCACAGTCAAGCTCCAGCTGCAGGCTCTTCAGCAAAATGGGTCTTCAGTGCTCTCAGAAGACAAGAGCAAACGGTTGAACACAATTCTAAATACAATGAGCACCATCTACAGTACTGGAAAAGTTTGTAACCCAGATAATCCACAAGAATGCTTATTACTTGAACCAGGTTTGAATGAAATAATGGCAAACAGTTTAGACTACAATGAGAGGCTCTGGGCTTGGGAAAGCTGGAGATCTGAGGTCGGCAAGCAGCTGAGGCCATTATATGAAGAGTATGTGGTCTTGAAAAATGAGATGGCAAGAGCAAATCATTATGAGGACTATGGGGATTATTGGAGAGGAGACTATGAAGTAAATGGGGTAGATGGCTATGACTACAGCCGCGGCCAGTTGATTGAAGATGTGGAACATACCTTTGAAGAGATTAAACCATTATATGAACATCTTCATGCCTATGTGAGGGCAAAGTTGATGAATGCCTATCCTTCCTATATCAGTCCAATTGGATGCCTCCCTGCTCATTTGCTTGGTGATATGTGGGGTAGATTTTGGACAAATCTGTACTCTTTGACAGTTCCCTTTGGACAGAAACCAAACATAGATGTTACTGATGCAATGGTGGACCAGGCCTGGGATGCACAGAGAATATTCAAGGAGGCCGAGAAGTTCTTTGTATCTGTTGGTCTTCCTAATATGACTCAAGGATTCTGGGAAAATTCCATGCTAACGGACCCAGGAAATGTTCAGAAAGCAGTCTGCCATCCCACAGCTTGGGACCTGGGGAAGGGCGACTTCAGGATCCTTATGTGCACAAAGGTGACAATGGACGACTTCCTGACAGCTCATCATGAGATGGGGCATATCCAGTATGATATGGCATATGCTGCACAACCTTTTCTGCTAAGAAATGGAGCTAATGAAGGATTCCATGAAGCTGTTGGGGAAATCATGTCACTTTCTGCAGCCACACCTAAGCATTTAAAATCCATTGGTCTTCTGTCACCCGATTTTCAAGAAGACAATGAAACAGAAATAAACTTCCTGCTCAAACAAGCACTCACGATTGTTGGGACTCTGCCATTTACTTACATGTTAGAGAAGTGGAGGTGGATGGTCTTTAAAGGGGAAATTCCCAAAGACCAGTGGATGAAAAAGTGGTGGGAGATGAAGCGAGAGATAGTTGGGGTGGTGGAACCTGTGCCCCATGATGAAACATACTGTGACCCCGCATCTCTGTTCCATGTTTCTAATGATTACTCATTCATTCGATATTACACAAGGACCCTTTACCAATTCCAGTTTCAAGAAGCACTTTGTCAAGCAGCTAAACATGAAGGCCCTCTGCACAAATGTGACATCTCAAACTCTACAGAAGCTGGACAGAAACTGTTCAATATGCTGAGGCTTGGAAAATCAGAACCCTGGACCCTAGCATTGGAAAATGTTGTAGGAGCAAAGAACATGAATGTAAGGCCACTGCTCAACTACTTTGAGCCCTTATTTACCTGGCTGAAAGACCAGAACAAGAATTCTTTTGTGGGATGGAGTACCGACTGGAGTCCATATGCAGACCAAAGCATCAAAGTGAGGATAAGCCTAAAATCAGCTCTTGGAGATAAAGCATATGAATGGAACGACAATGAAATGTACCTGTTCCGATCATCTGTTGCATATGCTATGAGGCAGTACTTTTTAAAAGTAAAAAATCAGATGATTCTTTTTGGGGAGGAGGATGTGCGAGTGGCTAATTTGAAACCAAGAATCTCCTTTAATTTCTTTGTCACTGCACCTAAAAATGTGTCTGATATCATTCCTAGAACTGAAGTTGAAAAGGCCATCAGGATGTCCCGGAGCCGTATCAATGATGCTTTCCGTCTGAATGACAACAGCCTAGAGTTTCTGGGGATACAGCCAACACTTGGACCTCCTAACCAGCCCCCTGTTTCCGAGCCCAAATCTTCCGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATAG ＞序列ID23：SI-69R1_huACE2功能結構域(殘基：1-615)-6XHis蛋白序列 MSSSSWLLLSLVAVTAAQSTIEEQAKTFLDKFNHEAEDLFYQSSLASWNYNTNITEENVQNMNNAGDKWSAFLKEQSTLAQMYPLQEIQNLTVKLQLQALQQNGSSVLSEDKSKRLNTILNTMSTIYSTGKVCNPDNPQECLLLEPGLNEIMANSLDYNERLWAWESWRSEVGKQLRPLYEEYVVLKNEMARANHYEDYGDYWRGDYEVNGVDGYDYSRGQLIEDVEHTFEEIKPLYEHLHAYVRAKLMNAYPSYISPIGCLPAHLLGDMWGRFWTNLYSLTVPFGQKPNIDVTDAMVDQAWDAQRIFKEAEKFFVSVGLPNMTQGFWENSMLTDPGNVQKAVCHPTAWDLGKGDFRILMCTKVTMDDFLTAHHEMGHIQYDMAYAAQPFLLRNGANEGFHEAVGEIMSLSAATPKHLKSIGLLSPDFQEDNETEINFLLKQALTIVGTLPFTYMLEKWRWMVFKGEIPKDQWMKKWWEMKREIVGVVEPVPHDETYCDPASLFHVSNDYSFIRYYTRTLYQFQFQEALCQAAKHEGPLHKCDISNSTEAGQKLFNMLRLGKSEPWTLALENVVGAKNMNVRPLLNYFEPLFTWLKDQNKNSFVGWSTDWSPYADHHHHHH ＞序列ID 24：SI-69R1_huACE2功能結構域(殘基：1-615)-6XHisDNA序列 ATGTCAAGCTCTTCCTGGCTCCTTCTCAGCCTTGTTGCTGTAACTGCTGCTCAGTCCACCATTGAGGAACAGGCCAAGACATTTTTGGACAAGTTTAACCACGAAGCCGAAGACCTGTTCTATCAAAGTTCACTTGCTTCTTGGAATTATAACACCAATATTACTGAAGAGAATGTCCAAAACATGAATAATGCTGGGGACAAATGGTCTGCCTTTTTAAAGGAACAGTCCACACTTGCCCAAATGTATCCACTACAAGAAATTCAGAATCTCACAGTCAAGCTTCAGCTGCAGGCTCTTCAGCAAAATGGGTCTTCAGTGCTCTCAGAAGACAAGAGCAAACGGTTGAACACAATTCTAAATACAATGAGCACCATCTACAGTACTGGAAAAGTTTGTAACCCAGATAATCCACAAGAATGCTTATTACTTGAACCAGGTTTGAATGAAATAATGGCAAACAGTTTAGACTACAATGAGAGGCTCTGGGCTTGGGAAAGCTGGAGATCTGAGGTCGGCAAGCAGCTGAGGCCATTATATGAAGAGTATGTGGTCTTGAAAAATGAGATGGCAAGAGCAAATCATTATGAGGACTATGGGGATTATTGGAGAGGAGACTATGAAGTAAATGGGGTAGATGGCTATGACTACAGCCGCGGCCAGTTGATTGAAGATGTGGAACATACCTTTGAAGAGATTAAACCATTATATGAACATCTTCATGCCTATGTGAGGGCAAAGTTGATGAATGCCTATCCTTCCTATATCAGTCCAATTGGATGCCTCCCTGCTCATTTGCTTGGTGATATGTGGGGTAGATTTTGGACAAATCTGTACTCTTTGACAGTTCCCTTTGGACAGAAACCAAACATAGATGTTACTGATGCAATGGTGGACCAGGCCTGGGATGCACAGAGAATATTCAAGGAGGCCGAGAAGTTCTTTGTATCTGTTGGTCTTCCTAATATGACTCAAGGATTCTGGGAAAATTCCATGCTAACGGACCCAGGAAATGTTCAGAAAGCAGTCTGCCATCCCACAGCTTGGGACCTGGGGAAGGGCGACTTCAGGATCCTTATGTGCACAAAGGTGACAATGGACGACTTCCTGACAGCTCATCATGAGATGGGGCATATCCAGTATGATATGGCATATGCTGCACAACCTTTTCTGCTAAGAAATGGAGCTAATGAAGGATTCCATGAAGCTGTTGGGGAAATCATGTCACTTTCTGCAGCCACACCTAAGCATTTAAAATCCATTGGTCTTCTGTCACCCGATTTTCAAGAAGACAATGAAACAGAAATAAACTTCCTGCTCAAACAAGCACTCACGATTGTTGGGACTCTGCCATTTACTTACATGTTAGAGAAGTGGAGGTGGATGGTCTTTAAAGGGGAAATTCCCAAAGACCAGTGGATGAAAAAGTGGTGGGAGATGAAGCGAGAGATAGTTGGGGTGGTGGAACCTGTGCCCCATGATGAAACATACTGTGACCCCGCATCTCTGTTCCATGTTTCTAATGATTACTCATTCATTCGATATTACACAAGGACCCTTTACCAATTCCAGTTTCAAGAAGCACTTTGTCAAGCAGCTAAACATGAAGGCCCTCTGCACAAATGTGACATCTCAAACTCTACAGAAGCTGGACAGAAACTGTTCAATATGCTGAGGCTTGGAAAATCAGAACCCTGGACCCTAGCATTGGAAAATGTTGTAGGAGCAAAGAACATGAATGTAAGGCCACTGCTCAACTACTTTGAGCCCTTATTTACCTGGCTGAAAGACCAGAACAAGAATTCTTTTGTGGGATGGAGTACCGACTGGAGTCCATATGCAGACCATCATCACCATCACCAC ＞序列ID 25：SI-69R10_人類TMPRSS2蛋白，His標記的(106-492)-蛋白序列 MYRMQLLSCIALSLALVTNSWKFMGSKCSNSGIECDSSGTCINPSNWCDGVSHCPGGEDENRCVRLYGPNFILQVYSSQRKSWHPVCQDDWNENYGRAACRDMGYKNNFYSSQGIVDDSGSTSFMKLNTSAGNVDIYKKLYHSDACSSKAVVSLRCIACGVNLNSSRQSRIVGGESALPGAWPWQVSLHVQNVHVCGGSIITPEWIVTAAHCVEKPLNNPWHWTAFAGILRQSFMFYGAGYQVEKVISHPNYDSKTKNNDIALMKLQKPLTFNDLVKPVCLPNPGMMLQPEQLCWISGWGATEEKGKTSEVLNAAKVLLIETQRCNSRYVYDNLITPAMICAGFLQGNVDSCQGDSGGPLVTSKNNIWWLIGDTSWGSGCAKAYRPGVYGNVMVFTDWIYRQMRADGHHHHHH ＞序列ID 26：SI-69R10_人類TMPRSS2蛋白，His標記的(106-492)-DNA序列 ATGTACAGGATGCAACTCCTGTCTTGCATTGCACTAAGTCTTGCACTTGTCACCAATTCGTGGAAGTTTATGGGTTCTAAATGCTCTAATAGCGGGATAGAATGTGACAGTAGTGGCACTTGCATTAACCCTTCAAACTGGTGTGATGGGGTAAGCCATTGCCCCGGGGGGGAAGATGAAAATAGATGTGTTAGGCTCTACGGTCCCAACTTTATACTCCAGGTATATTCAAGTCAACGCAAATCATGGCATCCAGTGTGTCAAGACGACTGGAACGAAAACTATGGACGCGCTGCATGTCGAGATATGGGATATAAGAATAACTTCTATAGTTCACAGGGAATCGTAGATGACTCTGGATCTACTAGTTTCATGAAACTGAACACCTCTGCCGGAAACGTAGATATATATAAAAAGCTTTACCACTCCGACGCTTGTAGCTCTAAGGCCGTAGTTAGCCTCAGATGCATCGCCTGCGGAGTAAACCTCAATTCATCTCGCCAGAGTAGGATCGTTGGCGGGGAAAGCGCCCTCCCAGGCGCTTGGCCTTGGCAAGTTTCCCTTCATGTCCAGAATGTTCATGTATGTGGCGGGTCTATAATCACCCCAGAATGGATCGTCACAGCTGCCCACTGCGTGGAGAAACCCCTCAACAATCCTTGGCATTGGACCGCATTTGCCGGAATACTGAGACAATCATTTATGTTCTATGGAGCCGGGTACCAAGTCGAAAAGGTCATTTCCCATCCCAATTATGATTCCAAAACCAAAAACAATGACATAGCCTTGATGAAACTCCAGAAGCCTTTGACATTTAATGACCTGGTCAAACCAGTGTGCCTCCCAAATCCTGGAATGATGTTGCAGCCTGAACAGTTGTGCTGGATCAGCGGTTGGGGTGCTACCGAGGAGAAGGGTAAGACAAGCGAGGTCCTTAACGCTGCAAAGGTTTTGCTGATAGAAACACAGAGATGTAACAGCCGCTATGTGTACGATAACCTGATCACCCCAGCTATGATTTGCGCCGGGTTTTTGCAAGGTAACGTCGATTCTTGCCAAGGTGACTCAGGCGGCCCTCTTGTTACATCAAAGAACAATATATGGTGGCTTATCGGCGATACATCATGGGGTTCTGGATGTGCTAAAGCCTATCGCCCAGGGGTGTATGGCAATGTAATGGTGTTTACAGACTGGATCTATAGGCAGATGCGGGCTGACGGTCACCATCATCACCATCACTGA ＞序列ID 27：IgJ鏈 MKNHLLFWGVLAVFIKAVHVKAQEDERIVLVDNKCKCARITSRIIRSSEDPNEDIVERNIRIIVPLNNRENISDPTSPLRTRFVYHLSDLCKKCDPTEVELDNQIVTATQSNICDEDSATETCYTYDRNKCYTAVVPLVYGGETKMVETALTPDACYPD ＞序列ID 28：分泌組分 KSPIFGPEEVNSVEGNSVSITCYYPPTSVNRHTRKYWCRQGARGGCITLISSEGYVSSKYAGRANLTNFPENGTFVVNIAQLSQDDSGRYKCGLGINSRGLSFDVSLEVSQGPGLLNDTKVYTVDLGRTVTINCPFKTENAQKRKSLYKQIGLYPVLVIDSSGYVNPNYTGRIRLDIQGTGQLLFSVVINQLRLSDAGQYLCQAGDDSNSNKKNADLQVLKPEPELVYEDLRGSVTFHCALGPEVANVAKFLCRQSSGENCDVVVNTLGKRAPAFEGRILLNPQDKDGSFSVVITGLRKEDAGRYLCGAHSDGQLQEGSPIQAWQLFVNEESTIPRSPTVVKGVAGGSVAVLCPYNRKESKSIKYWCLWEGAQNGRCPLLVDSEGWVKAQYEGRLSLLEEPGNGTFTVILNQLTSRDAGFYWCLTNGDTLWRTTVEIKIIEGEPNLKVPGNVTAVLGETLKVPCHFPCKFSSYEKYWCKWNNTGCQALPSQDEGPSKAFVNCDENSRLVSLTLNLVTRADEGWYWCGVKQGHFYGETAAVYVAVEERKAAGSRDVSLAKADAAPDEKVLDSGFREIENKAIQDPR ＞序列ID 29：巴尼韋單抗_重_鏈 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSNYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGYYEARHYYYYYAMDVWGQGTAVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK ＞序列ID 30：巴尼韋單抗_輕_鏈 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLSWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTITSLQPEDFATYYCQQSYSTPRTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC ＞序列ID 31：卡西瑞單抗_重_鏈 QVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSDYYMSWIRQAPGKGLEWVSYITYSGSTIYYADSVKGRFTISRDNAKSSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRGTTMVPFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK ＞序列 ID 32：卡西瑞單抗_輕_鏈 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQDITNYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASNLETGVPSRFSGSGSGTDFTFTISGLQPEDIATYYCQQYDNLPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC ＞序列ID 33：埃特司韋單抗_重_鏈 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTVSSNYMSWVRQAPGKGLEWVSVIYSGGSTFYADSVKGRFTISRDNSMNTLFLQMNSLRAEDTAVYYCARVLPMYGDYLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK ＞序列ID 34：埃特司韋單抗_輕_鏈 DIVMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISRYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSTPPEYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC ＞序列ID 35：伊德單抗_重_鏈 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSNYAMYWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRTEDTAVYYCASGSDYGDYLLVYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK ＞Sequence ID 36：伊德單抗_輕_鏈 QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVGGYNYVSWYQQHPGKAPKLMIYDVSKRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQSEDEADYYCNSLTSISTWVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS ＞序列ID 37：西加維單抗_重_鏈 EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFRDVWMSWVRQAPGKGLEWVGRIKSKIDGGTTDYAAPVKGRFTISRDDSKNTLYLQMNSLKTEDTAVYYCTTAGSYYYDTVGPGLPEGKFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEFEGGPSVFLFPPKPKDTLYITREPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPASIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK ＞序列ID 38：西加維單抗_輕_鏈 DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSNNKNYLAWYQQKPGQPPKLLMYWASTRESGVPDRFSGSGSGAEFTLTISSLQAEDVAIYYCQQYYSTLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC ＞序列ID 39：替沙格韋單抗_重_鏈 QMQLVQSGPEVKKPGTSVKVSCKASGFTFMSSAVQWVRQARGQRLEWIGWIVIGSGNTNYAQKFQERVTITRDMSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAAPYCSSISCNDGFDIWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEFEGGPSVFLFPPKPKDTLYITREPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPASIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK ＞序列ID 40：替沙格韋單抗_輕_鏈 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQHYGSSRGWTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
無
本案揭示內容之前述及其他的特徵經由以下的詳細說明及附加的申請專利範圍並結合附圖，將變得更加顯而易見。應理解這些附圖僅描繪出依據本揭示內容所配置的數種實施例，因此不應視作其範圍之限制，將透過使用附圖，並以附帶的具體內容與細節來說明本揭示內容，其中： 圖1圖示了(1A)由ACE2功能結構域與工程改造的Fc(無效段)片段之間的重組融合蛋白(SI-69R2以及SI-69R4)之圖解，(1B) SI-F019融合蛋白之序列，為缺乏N端17個胺基酸信號肽的轉譯後修飾SI-69R2，(1C)指出SI-F019融合蛋白複合體為同質二聚體的粒徑篩析層析圖，以及(1D) SI-F019棘蛋白複合體之圖解； 圖2圖示SI-F019而不是SI-69R4係抗TMPRSS2依賴性水解(2A)，以及可以試管內(in vitro)螢光測定法定量SI-F019的酵素活性(2B)； 圖3證實活SARS-CoV-2感染VeroE6細胞的SI-F019劑量依賴性阻斷在測試中的所有三個病毒MOI下已達到100%； 圖4圖示以0.01之MOI的SARS-CoV-2或SARS-CoV-1病毒進行病毒感染的一小時後，添加10 fM或10 fM以上的SI-F019保護了一部分Vero E6細胞免遭細胞溶解； 圖5圖示在用假病毒預培養之後，SI-F019以劑量依賴性方式抑制病毒感染並在較高濃度下達到完全抑制(IC50=32.56 nM)； 圖6圖示在THP1 (pH 7.2)(6A)、THP1 (pH 6.0)(6B)以及Daudi (6C)中48小時之時的內化/感染介導測定結果，當以測試濃度的SI-F019連同培養基、緩衝液及ACE2-his (SI-69C1)預處理時，未見表明為假病毒(PsV)之GFP信號的攝入，儘管SI-69C1 (抗S1抗體)及SI-69R3 (SARS-CoV-2 ACE-2 Fc WT)與低GFP信號相關聯； 圖7圖示SI-F019能與天然抗SARS-CoV-2抗體或ACE2-Fc(野生型)融合蛋白競爭，以阻斷如GFP信號所量測到的Fc介導式抗體依賴性增強反應(antibody-dependent enhancement; ADE)，該GFP信號表明為PsV感染； 圖8圖示藉由使用抗棘蛋白抗體及抗人類Fc抗體所偵測到的表現SARS-CoV-2棘蛋白之HEK293-T細胞的流式細胞儀分析； 圖9圖示藉由幾何平均螢光強度(geometric mean fluorescent intensity; gMFI)所量測到的SI-F019對表現SARS-CoV-2棘蛋白之HEK293-T細胞的劑量依賴性結合； 圖10圖示抗體依賴性細胞性細胞毒性(ADCC)測定之FACS分析，其顯示出如藉由鈣黃綠素(Calcein-AM)及碘化丙啶(Propidium Iodide)染色所量測到的，人類抗S1抗體(SI-69C3)將人類NK細胞導向表現SARS-CoV-2棘蛋白之靶標HEK293-T細胞； 圖11圖示當與人類抗S1抗體(SI-69C3)相較時，在ADCC測定中SI-F019和對照分子在HEK293-T細胞上的劑量結合反應(11A)，並且在100fM與100 nM之間的治療劑量下SI-F019並不會介導ADCC，然而其具有野生型Fc的變體(SI-69R3)卻以抗體依賴性方式介導ADCC，即使活性程度較低(11B)； 圖12圖示在試管內藉由表現SARS-CoV-2 S蛋白之HEK293-T細胞存活率所量測到的，Fc無效突變能使SI-F019減少血清介導的補體依賴性細胞毒性(CDC)； 圖13圖示在試管內藉由量測在各種處理之後表現SARS-CoV-2 S蛋白之HEK293-T細胞的存活率，SI-F019並不會誘發血清補體依賴性細胞毒性(CDC)(13A)；及在試管內處理後的第96小時，SI-F019的Fc無效突變不影響後續細胞生長(13B)； 圖14圖示在PBMC培養中以可溶或板結合形式，SI-F019並不引起細胞激素釋出：(14A) IFNγ；(14B) TNFα；(14C) GM-CSF；(14D) IL-2；(14E) IL-10；(14F) IL-6；(14G) IL-1β；(14H) IL-12p70；以及(14I) MCP-1。 圖15圖示SI-F019 (15a)及針對COVID-19 RBD變體的中和抗體的結合動力學(親和力)的生物層干涉技術，該等抗體包括巴尼韋單抗(Bamlanivimab) (SI-69C4)(15b)、卡西瑞單抗(Casirivimab) (SI-69C5)(15c)、埃特司韋單抗(Etesevimab) (SI-69C6)(15d)、伊德單抗(Imdevimab) (SI-69C7)(15e)、西加維單抗(Cilgavimab) (SI-69C8)(15f)和替沙格韋單抗(Tixagevimab)(SI-69C9)(15g)； 圖16圖示了SI-F019 (16a)和針對RBD變體的中和抗體的結合動力學(親合力)的生物層干涉技術，該等抗體包括巴尼韋單抗(SI-69C4)(16b)、卡西瑞單抗(SI-69C5)(16c)、埃特司韋單抗(SI-69C6)(16d)、伊德單抗(SI-69C7)(16e)、西加維單抗(SI-69C8)(16f)和替沙格韋單抗(SI-69C9)(16g)；並且 圖17圖示了SI-F019在螢光素酶報告測定(17a)中使用S蛋白包裝的假病毒變體(NICPBP)保護表現ACE2的293T細胞免受病毒抑制的效力，以及IC50與指示SI-F019競爭性抑制的結合親和力(17b)或親合力(17c)之間的線性相關性。
國內寄存資訊(請依寄存機構、日期、號碼順序註記) 無 國外寄存資訊(請依寄存國家、機構、日期、號碼順序註記) 無

Claims (31)

  1. 一種預防一病毒感染、降低一病毒感染風險或治療一病毒感染，或預防或治療一受試者中由該病毒引起的一症狀的方法，該方法包括以下步驟：向該受試者投與一有效量的一融合蛋白，其中該融合蛋白包含與一Fc結構域共價融合的一變異血管收縮素轉化酶2 (ACE2)結構域，其中該變異ACE2結構域包含相對於具有一SEQ ID NO. 1的一全長野生型ACE2的一N末端缺失、一C末端缺失或兩者，其中該變異ACE2結構域具有ACE2活性，其中該病毒包括一SARS-CoV、SARS-CoV-2或MERS-CoV，並且其中該症狀包括嚴重急性呼吸道症候群(SARS)、中東呼吸道症候群(MERS)、急性呼吸道窘迫症候群(ARDS)、肺動脈高壓(PAH)或冠狀病毒疾病2019 (COVID-19)。
  2. 如請求項1所述之方法，其中該融合蛋白包含與SEQ ID NO. 15、SEQ ID NO. 16、SEQ ID NO. 17、SEQ ID NO. 18具有至少98%序列一致性的一胺基酸。
  3. 如請求項1所述之方法，其中每次治療投與的該融合蛋白的該劑量係約3 mg/Kg體重至約70 mg/Kg體重。
  4. 如請求項1所述之方法，其中每天投與的該融合蛋白的該劑量係小於或等於約140 mg/Kg體重。
  5. 如請求項1所述之方法，其中該融合蛋白係以小於或等於約70 mg/Kg體重的一劑量每天投與兩次。
  6. 如請求項1所述之方法，其中該融合蛋白係經由每日輸注投與。
  7. 如請求項1所述之方法，其中該融合蛋白係經由每日肌內注射投與。
  8. 如請求項1所述之方法，其中該融合蛋白係作為一液體製劑投與。
  9. 如請求項1所述之方法，其中該融合蛋白係作為包含一鹽及一表面活性劑的一溶液中的一液體懸浮液投與。
  10. 如請求項8所述之方法，其中該液體製劑包含濃度為約5 mg/ml至約10 mg/ml的該融合蛋白。
  11. 如請求項1所述之方法，其中該融合蛋白的該投與預防該受試者感染該SARS-CoV-2病毒感染。
  12. 如請求項1所述之方法，其中該融合蛋白的該投與降低該受試者感染該SARS-CoV-2病毒感染的風險。
  13. 如請求項1所述之方法，其中該融合蛋白的該投與預防患有該SARS-CoV-2病毒感染的該受試者住院。
  14. 如請求項1所述之方法，其中該融合蛋白的該投與降低患有該SARS-CoV-2病毒感染的該受試者住院的風險。
  15. 如請求項1所述之方法，其中該融合蛋白的該投與縮短患有該SARS-CoV-2病毒感染的該受試者的住院時長。
  16. 如請求項1所述之方法，其中該融合蛋白的該投與阻止患有該SARS-CoV-2病毒感染的該受試者的氧合及換氣。
  17. 如請求項1所述之方法，其中該融合蛋白的該投與降低患有該SARS-CoV-2病毒感染的該受試者對氧合及換氣的需求。
  18. 如請求項1所述之方法，其中該融合蛋白的該投與預防患有該SARS-CoV-2病毒感染的該受試者死亡。
  19. 如請求項1所述之方法，其中該融合蛋白的該投與降低患有該SARS-CoV-2病毒感染的該受試者死亡的風險。
  20. 如請求項18所述之方法，其中該SARS-CoV-2病毒實質上包括δ毒株。
  21. 如請求項18所述之方法，其中該SARS-CoV-2病毒包括棘蛋白突變，其中該突變被配置為增加該病毒與該ACE2結構域的結合親和力。
  22. 如請求項1所述之方法，其中該融合蛋白的該投與降低患有該SARS-Co2-2病毒感染的該受試者的COVID症狀的嚴重程度。
  23. 如請求項1所述之方法，其中該受試者具有選自以下各項組成之群的至少一個風險因素： 大於或等於65歲的一年齡； 一免疫系統中度或嚴重受損； 一代謝症候群； 對一COVID疫苗過敏；以及 接受一COVID疫苗後免疫反應低或無免疫反應。
  24. 如請求項23所述之方法，其中該受試者患有癌症、慢性腎病、慢性肺病、糖尿病、或心臟病。
  25. 如請求項1所述之方法，其中該受試者係人類。
  26. 一種液體組成物，包含一融合蛋白，其中該融合蛋白包含共價融合至一Fc結構域的一變異血管收縮素轉化酶2 (ACE2)結構域，其中該變異ACE2結構域包含相對於具有一SEQ ID NO. 1的一全長野生型ACE2的一N末端缺失、一C末端缺失或兩者，其中該變異ACE2結構域具有ACE2活性。
  27. 如請求項26所述之液體組成物，其融合蛋白含量為每劑約100 mg至約10,000 mg。
  28. 如請求項26所述之液體組成物，其融合蛋白濃度為約0.5重量%至約1重量%。
  29. 如請求項26所述之液體組成物，其中該變異ACE2結構域包含與SEQ ID NO. 3具有至少98%序列一致性的一胺基酸序列。
  30. 如請求項26所述之液體組成物，其中該Fc結構域包含與SEQ ID NO. 6具有至少98%序列一致性的一胺基酸序列。
  31. 如請求項26所述之液體組成物，其中該融合蛋白包含與SEQ ID NO. 7、SEQ ID NO. 9、SEQ ID NO. 11、SEQ ID NO. 13、SEQ ID NO. 15、SEQ ID NO. 16、SEQ ID NO. 17、SEQ ID NO. 18、SEQ ID NO. 19、或SEQ ID NO. 21具至少98%序列一致性的一胺基酸序列。
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