TW202227129A - 包括雙特異性ｅｇｆｒ／ｃ－ｍｅｔ抗體之穩定調配物 - Google Patents
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Abstract
本文提供包含雙特異性表皮生長因子受體(EGFR)/肝細胞生長因子受體(c-Met)抗體之調配物的穩定水性醫藥組成物及其製備方法。本文亦提供治療有需要之對象之癌症的方法，其係藉由向對象投予如本文所揭示之穩定水性醫藥組成物。本文進一步提供套組及製品，其包含如本文所揭示之穩定水性醫藥組成物。
Description
電子提交序列表之參照
本申請案含有序列表，該序列表已以ASCII格式序列表經由EFS-Web電子提交，檔案名稱為「JBI6337WOPCT1SEQLIST.txt」，創建日期2021年7月26日，且檔案大小為19 KB。經由EFS-Web提交之序列表係本說明書之一部分，其全文以引用方式併入本文中。
揭示用於調配包含雙特異性EGFR/c-Met抗體之穩定醫藥組成物的組成物及方法。
表皮生長因子受體（EGFR、ErbB1、或HER1）及肝細胞生長因子受體(c-Met)兩者在癌症中之作用經充分確立，使得此等目標對組合療法具有吸引力。兩種受體透過相同存活及抗細胞凋亡路徑（ERK及AKT）傳導信號。已在各種臨床試驗中測試靶向EGFR及c-Met之組合療法或雙特異性抗EGFR/c-Met分子。儘管雙特異性抗EGFR/c-Met抗體已顯示出具有前景的結果，但所屬技術領域仍需要包含此類抗體之醫藥組成物，其在冷藏（2至8℃）及環境溫度下長時間穩定。
本文揭示包含雙特異性抗體之特定調配物的穩定水性醫藥組成物。
在一態樣中，本文提供穩定水性醫藥組成物，其包含：
a) 約44 mg/mL至約56 mg/mL的雙特異性表皮生長因子受體(EGFR)/肝細胞生長因子受體(c-Met)抗體，該雙特異性抗體包含：
第一重鏈(HC1)，其包含HC1可變區1 (VH1)；
第一輕鏈(LC1)，其包含輕鏈可變區1 (VL1)；
第二重鏈(HC2)，其包含HC2可變區2 (VH2)；及
第二輕鏈(LC2)，其包含輕鏈可變區2 (VL2)，
其中該VH1包含分別為SEQ ID NO: 1、2、及3之重鏈互補決定區1 (HCDR1)、HCDR2、及HCDR3胺基酸序列；該VL1包含分別為SEQ ID NO: 4、5、及6之輕鏈互補決定區1 (LCDR1)、LCDR2、及LCDR3胺基酸序列，該VH2包含分別為SEQ ID NO: 7、8、及9之HCDR1、HCDR2、及HCDR3胺基酸序列；且該VL2包含分別為SEQ ID NO: 10、11、及12之LCDR1、LCDR2、及LCDR3胺基酸序列；
b) 約8 mM至約12 mM的組胺酸及/或醫藥上可接受之組胺酸鹽、
c) 約6.8% (w/v)至約10.2% (w/v)的蔗糖、
d) 約0.036% (w/v)至約0.084% (w/v)的聚山梨醇酯80 (PS80)、
e) 約0.8 mg/mL至約1.2 mg/mL的甲硫胺酸、
f) 約16 µg/mL至約24 µg/mL的乙二胺四乙酸(EDTA)；及
g) 約5.2至約6.2之pH。
本文亦提供治療有需要之對象之癌症的方法。該等方法包含向對象投予如本文所揭示之穩定水性醫藥組成物。
本文亦提供用於製備靶向EGFR及cMet之雙特異性抗體之穩定水性醫藥組成物的方法，該雙特異性抗體包含：第一重鏈(HC1)，其包含HC1可變區1 (VH1)；第一輕鏈(LC1)，其包含輕鏈可變區1 (VL1)；第二重鏈(HC2)，其包含HC2可變區2 (VH2)；及第二輕鏈(LC2)，其包含輕鏈可變區2 (VL2)；其中該VH1包含分別包含SEQ ID NO: 1、2、及3之胺基酸序列的重鏈互補決定區1 (HCDR1)、HCDR2、及HCDR3；該VL1包含分別包含SEQ ID NO: 4、5、及6之胺基酸序列的輕鏈互補決定區1 (LCDR1)、LCDR2、及LCDR3；該VH2包含分別為SEQ ID NO: 7、8、及9之HCDR1、HCDR2、及HCDR3胺基酸序列；且該VL2包含分別為SEQ ID NO: 10、11、及12之LCDR1、LCDR2、及LCDR3胺基酸序列。該等方法包含將包含約50 mg/mL的雙特異性抗體、約10 mM組胺酸及/或醫藥上可接受之組胺酸鹽、約8.5%蔗糖、及約1 mg/mL L-甲硫胺酸之組成物與聚山梨醇酯80組合至約0.06% (w/v)之最終濃度並與EDTA組合至約20 µg/mL之最終濃度，其中穩定水性醫藥組成物具有約pH 5.7。
本文亦提供套組，其包含如本文所揭示之穩定醫藥水性調配物及其使用說明。
本文進一步提供包含容納如本文所揭示之穩定水性醫藥調配物的容器之製品。
所揭示之組成物及方法藉由參考以下實施方式結合附圖（其形成本揭露之一部分）可更容易地理解。應理解的是，所揭示之組成物及方法不限於本文中描述及/或顯示之特定組成物及方法，且本文中使用之用語僅出於以舉實例之方式描述具體實施例之目的且不意欲限制所要求保護之組成物及方法。
除非另外特別說明，否則任何關於可能的機制或作用模式或改善原因之描述僅用以說明，且所揭示之組成物及方法不受限於任何此類建議的機制或作用模式或改善原因之正確性或不正確性。
在本文中記載或建立數值範圍之情況下，該範圍包括其端點及該範圍內之所有個別整數及分數，且亦包括由該等端點及內部整數及分數之所有各種可能組合形成之較窄範圍之各者，以在所述範圍內形成較大值組之子組，其程度如同明確記載該等較窄範圍之各者。在數值範圍在本文中陳述為大於所述值之情況下，該範圍仍係有限的，且在其上端受限於可在如本文所述之本發明之上下文內操作之值。在數值範圍在本文中陳述為小於所述值之情況下，該範圍在其下端仍受限於非零值。本發明之範疇並不意欲限於在定義範圍時所記載之特定值。所有範圍均被包括在內且為可組合的。
當數值係以近似值表示時，藉由使用先行詞「約(about)」，將可明瞭特定數值形成另一實施例。提及一具體數值時包括至少該具體值，除非上下文另有明確說明。
應理解的是，為了清楚起見，本文在不同實施例之上下文中描述的所揭示之組成物及方法的某些特徵亦可在單一實施例中組合提供。相反地，為了簡潔起見，在單一實施例之上下文中描述的所揭示之組成物及方法的各種特徵亦可單獨地或以任何次組合提供。
當用於本文時，單數形式「一(a/an)」及「該(the)」包括複數。
各種關於實施方式之態樣的用語係用於說明書與申請專利範圍的各個部分中。這些用語係以其在該項技術領域中之原始意義來使用，除非另有指示。其他經特別定義之用語的解讀係與本說明書中所提供之定義一致。
如本文中所使用，當用於指稱數值範圍、截止值、或特定值時，「約」係用以指示所記載之值可與所列舉之值相差高達10%。由於本文中使用之許多數值係由實驗判定，所屬技術領域中具有通常知識者應理解，此類判定可能且經常會在不同實驗之間有所變化。本文中所使用之值不應被視為由於此固有變化而受到過度限制。因此，用語「約」係用以涵蓋自指定值± 10%或更少之變化、± 5%或更少之變化、± 1%或更少之變化、± 0.5%或更少之變化、或± 0.1%或更少之變化。
用語「包含(comprising)」意欲包括用語「基本上由…所組成(consisting essentially of)」及「由…所組成(consisting of)」所涵蓋的實例；同樣地，用語「基本上由…所組成」意欲包括用語「由…所組成」所涵蓋的實例。
用語「抗體(antibody)」及類似用語係以廣義的方式意指並包括免疫球蛋白分子或其片段，其包括單株抗體（諸如鼠類、人類、人類調適(human-adapted)、人源化、及嵌合單株抗體）、抗體片段、雙特異性或多特異性抗體、二聚體、四聚體、或多聚體抗體、及單鏈抗體。
免疫球蛋白可分為五大類，即IgA、IgD、IgE、IgG、及IgM，此取決於重鏈恆定域胺基酸序列。IgA及IgG係進一步細分為同型IgA1、IgA2、IgG1、IgG2、IgG3、及IgG4。任何脊椎動物物種的抗體輕鏈可分派為兩種截然不同類型（即kappa (κ)及lambda (λ)）之一者，視其等恆定域的胺基酸序列而定。
「抗體片段(antibody fragment)」係指免疫球蛋白分子之保留親本全長抗體之抗原結合性質的部分。例示性抗體片段係重鏈互補決定區(HCDR) 1、2、及3、輕鏈互補決定區(LCDR) 1、2、及3、重鏈可變區(VH)、或輕鏈可變區(VL)。抗體片段包括：Fab片段，即由VL、VH、恆定輕(CL)、及（恆定重1）CH1域所組成之單價片段；F(ab)
2片段，即包含在鉸鏈區藉由雙硫鍵連接之兩個Fab片段的二價片段；Fd片段，由VH及CHI域所組成；Fv片段，由抗體單臂的VL及VH域所組成；及域抗體(dAb)片段(Ward
et al., Nature 341:544- 546, 1989)，其係由VH域所組成。VH及VL域可經工程改造並經由合成連接子連接在一起以形成各種類型的單鏈抗體設計，其中VH/VL域會進行分子內配對，或者在VH及VL域係由分開之單鏈抗體建構體所表現之情況下則會進行分子間配對，以形成單價抗原結合部位，諸如單鏈Fv (scFv)或雙價抗體(diabody)；例如描述於國際專利公開號WO1998/44001、WO1988/01649、WO1994/13804、及WO1992/01047中。此等抗體片段係使用所屬技術領域中具有通常知識者熟知的技術獲得，且以與全長抗體相同之方式針對實用性篩選該等片段。
抗體可變區係由被三個「抗原結合部位(antigen binding site)」中斷的「架構(framework)」區所組成。抗原結合部位係使用各種用語定義：(i)互補決定區(CDR)（三個在VH（HCDR1、HCDR2、HCDR3），且三個在VL（LCDR1、LCDR2、LCDR3））係基於序列變異性(Wu and Kabat J Exp Med 132:211-50, 1970; Kabat et al. Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md., 1991)；且(ii)「高度變異區(hypervariable region)」（「HVR」或「HV」）（三個在VH（H1、H2、H3），且三個在VL（L1、L2、L3））係指如Chothia及Lesk所定義般在結構上係高度變異之抗體可變域中的區域(Chothia and Lesk Mol Biol 196:901-17, 1987)。其他用語包括「IMGT-CDR」(Lefranc
et al.,Dev Comparat Immunol 27:55-77, 2003)及「特異性決定殘基用途(specificity determining residue usage, SDRU)」(Almagro Mol Recognit 17:132-43, 2004)。國際免疫遺傳學(International ImMunoGeneTics, IMGT)資料庫(www_imgt_org)提供標準化編號及抗原結合部位的定義。CDR、HV及IMGT描繪之間的對應性係描述於Lefranc等人，Dev Comparat Immunol 27:55-77, 2003。
「單株抗體(monoclonal antibody)」係指單一分子組成之抗體分子的製劑。單株抗體組成物對特定表位展示出單一結合特異性及親和力，或者在雙特異性單株抗體的情況下，對兩個不同的表位有雙結合特異性。單株抗體因此係指在各重鏈及各輕鏈中具有單一胺基酸組成之抗體群，除了可能熟知的改變，諸如自抗體重鏈移除C端離胺酸。單株抗體在抗體群內可具有異源醣基化。單株抗體可係單特異性或多特異性，或單價、二價、或多價。雙特異性抗體係包括在用語單株抗體中。
「表位(epitope)」係指與抗體特異性結合的抗原部分。表位通常係由分子部份（諸如胺基酸或多醣側鏈）之化學活性（諸如極性、非極性、或疏水性）表面分群(grouping)所組成，且可具有特定三維結構特性以及特定電荷特性。表位可包含形成構形空間單元之鄰接(contiguous)及/或不鄰接(discontiguous)胺基酸。關於不鄰接表位，來自抗原線性序列之相異部分的胺基酸會透過蛋白質分子的摺疊而在3維空間中緊密靠近。
「變體(variant)」係指因一或多個修飾（例如取代、插入、或缺失）而不同於參考多肽或參考多核苷酸的多肽或多核苷酸。
「與…組合(in combination with)」意指二或更多種治療劑可一起以混合物形式投予至對象、可以單劑並行投予至對象、或以任何順序以單劑依序投予至對象。
「治療(treat/treatment)」及類似用語係指治療性治療及疾病預防性(prophylactic)或預防性措施兩者，且包括降低症狀之嚴重性及/或頻率、消除症狀及/或症狀之根本原因、降低症狀及/或其根本原因之頻率或可能性、改善或補救由惡性疾病直接或間接造成之損傷。治療亦包括相較於未接受治療之對象的預期存活期，延長存活期。待治療之對象包括患有病況或病症者、以及易患有病況或病症者、或需要預防病況或病症者。
「治療有效量(therapeutically effective amount)」係指所揭示之組合療法之有效達到所欲治療所需之劑量及時間段的量。治療有效量可依各因素而異，諸如對象之疾病狀態、年齡、性別、及體重、及組合療法在對象中誘發所欲反應之能力。治療有效量之例示性指標包括例如患者幸福感的提高、腫瘤負荷的減少、腫瘤生長的停止或減緩、及/或癌細胞未轉移至身體的其他位置。
如本文中所使用，用語「癌症(cancer)」係定義為特徵在於異常細胞快速且不受控生長的疾病。癌細胞可局部地或透過血流及淋巴系統擴散至身體的其他部分。各種癌症之實例包括但不限於乳癌、前列腺癌、卵巢癌、子宮頸癌、皮膚癌、胰臟癌、結腸直腸癌、腎癌、肝癌、腦癌、淋巴瘤、白血病、肺癌（例如非小細胞肺癌(NSCLC)）、及類似者。
「對象(subject)」包括任何人類或非人類動物。「非人類動物(nonhuman animal)」包括所有脊椎動物，例如哺乳動物及非哺乳動物，諸如非人類靈長類、綿羊、狗、貓、馬、牛、雞、兩棲動物、爬蟲動物等。用語「對象」與「患者(patient)」在本文中可互換使用。
說明
本文揭示穩定水性醫藥組成物，其包含雙特異性EGFR/ c-Met抗體。
在一些態樣中，穩定水性醫藥組成物包含雙特異性EGFR/c-Met抗體，雙特異性EGFR/c-Met抗體包含：第一重鏈(HC1)，其包含HC1可變區1 (VH1)；第一輕鏈(LC1)，其包含輕鏈可變區1 (VL1)；第二重鏈(HC2)，其包含HC2可變區2 (VH2)；及第二輕鏈(LC2)，其包含輕鏈可變區2 (VL2)；其中VH1包含分別為SEQ ID NO: 1、2、及3之重鏈互補決定區1 (HCDR1)、HCDR2、及HCDR3胺基酸序列；VL1包含分別為SEQ ID NO: 4、5、及6之輕鏈互補決定區1 (LCDR1)、LCDR2、及LCDR3胺基酸序列；VH2包含分別為SEQ ID NO: 7、8、及9之HCDR1、HCDR2、及HCDR3胺基酸序列；且VL2包含分別為SEQ ID NO: 10、11、及12之LCDR1、LCDR2、及LCDR3胺基酸序列（參見表14）。穩定水性醫藥組成物亦包含組胺酸及/或醫藥上可接受之組胺酸鹽、蔗糖、聚山梨醇酯80 (PS80)、甲硫胺酸、及乙二胺四乙酸(EDTA)，且pH為約5.2至約6.2。本文提供之穩定水性醫藥組成物進一步包含約44 mg/mL至約56 mg/mL的雙特異性EGFR-cMet抗體、約8 mM至約12 mM的組胺酸及/或醫藥上可接受之組胺酸鹽、約6.8% (w/v)至約10.2% (w/v)的蔗糖、約0.036% (w/v)至約0.084% (w/v)的聚山梨醇酯80 (PS80)、約0.8 mg/mL至約1.2 mg/mL的甲硫胺酸、約16 µg/mL至約24 µg/mL的EDTA；且pH為約5.2至約6.2。
在一些實施例中，雙特異性EGFR-cMet抗體之第一重鏈(HC1)包含HC1恆定域3 (HC1 CH3)及HC1可變區1 (VH1)。在一些實施例中，雙特異性EGFR-cMet抗體之第二重鏈(HC2)包含HC2恆定域3 (HC2 CH3)及HC2可變區2 (VH2)。在一些實施例中，雙特異性EGFR-cMet抗體之第一重鏈(HC1)包含HC1恆定域3 (HC1 CH3)及HC1可變區1 (VH1)，且雙特異性EGFR-cMet抗體之第二重鏈(HC2)包含HC2恆定域3 (HC2 CH3)及HC2可變區2 (VH2)。在一些實施例中，雙特異性EGFR-cMet抗體之第一重鏈(HC1)包含HC1恆定域2及恆定域3 (HC1 CH2-CH3)及HC1可變區1 (VH1)。在一些實施例中，雙特異性EGFR-cMet抗體之第二重鏈(HC2)包含HC2恆定域2及恆定域3 (HC2 CH2- CH3)及HC2可變區2 (VH2)。在一些實施例中，雙特異性EGFR-cMet抗體之第一重鏈(HC1)包含HC1恆定域2及恆定域3 (HC1 CH2-CH3)及HC1可變區1 (VH1)，且雙特異性EGFR-cMet抗體之第二重鏈(HC2)包含HC2恆定域2及恆定域3 (HC2 CH2- CH3)及HC2可變區2 (VH2)。
在一些實施例中，雙特異性抗體包含在HC1 CH2-CH3區、HC2 CH2-CH3區、或兩者中之不對稱穩定突變。「不對稱穩定突變(asymmetric stabilizing mutations)」係指在第一CH2-CH3區及第二CH2-CH3區中之突變，其在第一及第二CH2-CH3區中之不同位置，且相對於第一CH2-CH3區或第二CH2-CH3區之間之同二聚體形成，有利於（例如穩定）第一CH2-CH3區與第二CH2-CH3區之間之異二聚體形成。在HC1 CH2-CH3區及HC2 CH2-CH3區、或HC2 CH2-CH3區及HC1 CH2-CH3區中之例示性不對稱穩定突變係（其中殘基編號係根據EU索引）：
分別為F405L及K409R；
分別為野生型及F405L/R409K；
分別為T366W及T366S/L368A/Y407V；
分別為T366Y/F405A及T394W/Y407T；
分別為T366W/F405W及T394S/Y407A；
分別為F405W/Y407A及T366W/T394S；
分別為L351Y/F405A/Y407V及T394W；
分別為T366I/K392M/T394W及F405A/Y407V；
分別為T366L/K392M/T394W及F405A/Y407V；
分別為L351Y/Y407A及T366A/K409F；
分別為L351Y/Y407A及T366V/K409F；
分別為Y407A及T366A/K409F；
分別為D399K/E356K及K409D/K392D；或
分別為D399K/E356K/E357K及K409D/K392D/K370。
在一些實施例中，雙特異性EGFR-cMet抗體包含包括SEQ ID NO:13之胺基酸序列的HC1可變區及包括SEQ ID NO:14之胺基酸序列的LC1可變區（參見表14）。在一些實施例中，雙特異性抗體包含在HC1 CH2-CH3區、HC2 CH2-CH3區、或兩者中之不對稱穩定突變。在一些實施例中，雙特異性抗體包含在c-Met結合臂中之K409R及在EGFR結合臂中之F405L。
在一些態樣中，雙特異性EGFR-cMet抗體包含包括SEQ ID NO:15之胺基酸序列的HC2可變區及包括SEQ ID NO:16之胺基酸序列的LC2可變區（參見表14）。
在一些實施例中，重鏈1 (HC1)包含SEQ ID NO:17之胺基酸序列，且HC2包含SEQ ID NO:19之胺基酸序列（參見表14）。
在一些實施例中，輕鏈1 (LC1)包含SEQ ID NO:18之胺基酸序列，且LC2包含SEQ ID NO:20之胺基酸序列（參見表14）。
在一些實施例中，雙特異性EGFR-cMet抗體係阿米維單抗(amivantamab)。
根據一些態樣，穩定水性醫藥組成物包含約以下濃度的雙特異性EGFR-cMet抗體：35 mg/mL、36 mg/mL、37 mg/mL、38 mg/mL、39 mg/mL、40 mg/mL、41 mg/mL、42 mg/mL、43 mg/mL、44 mg/mL、45 mg/mL、46 mg/mL、47 mg/mL、48 mg/mL、49 mg/mL、50 mg/mL、51 mg/mL、52 mg/mL、53 mg/mL、54 mg/mL、55 mg/mL、56 mg/mL、57 mg/mL、58 mg/mL、59 mg/mL、60 mg/mL、61 mg/mL、62 mg/mL、63 mg/mL、64 mg/mL、或65 mg/mL。在一些實施例中，雙特異性EGFR-cMet抗體具有約50 mg/mL之濃度。
根據一些態樣，穩定水性醫藥組成物包含約以下濃度的組胺酸及/或醫藥上可接受之組胺酸鹽：8 mM、9 mM、10 mM、11 mM、12 mM、13 mM、14 mM、或15 mM。在一些實施例中，組胺酸及/或醫藥上可接受之組胺酸鹽具有約10 mM之濃度。在一進一步實施例中，組胺酸及/或醫藥上可接受之組胺酸鹽包含L-組胺酸及L-組胺酸鹽酸鹽單水合物。
根據一些態樣，穩定水性醫藥組成物包含約以下濃度（重量對體積百分比(% w/v)）的蔗糖：6.0%、6.1%、6.2%、6.3%、6.4%、6.5%、6.6%、6.7% 6.8%、6.9%、7.0%、7.1%、7.2%、7.3%、7.4%、7.5%、7.6%、7.7%、7.8%、7.9%、8.0%、8.1%、8.2%、8.3%、8.4%、8.5%、8.6%、8.7%、8.8%、9.9%、10.0%、10.1%、10.2%、10.3%、10.4%、10.5%、10.6%、10.7%、10.8%、10.9%、或11.0%。在一些實施例中，穩定水性醫藥組成物包含約8.5% (w/v)蔗糖。
根據一些態樣，穩定水性醫藥組成物包含約以下濃度(% w/v)的聚山梨醇酯80 (PS80)：0.036%、0.037%、0.038%、0.039%、0.040%、0.041%、0.042%、0.043%、0.044%、0.045%、0.046%、0.047%、0.048%、0.049%、0.050%、0.051%、0.052%、0.053%、0.054%、0.055%、0.056%、0.057%、0.058%、0.059%、0.060%、0.061%、0.062%、0.063%、0.064%、0.065%、0.066%、0.067%、0.068%、0.069%、0.070%、0.071%、0.072%、0.073%、0.074%、0.075%、0.080%、0.081%、0.082%、0.083%、0.084%、0.085%、0.086%、0.087%、0.088%、0.089%、0.090%、0.091%、0.092%、0.093%、0.094%、或0.095%。在一些實施例中，穩定水性醫藥組成物包含約0.06% (w/v) PS80。
根據一些態樣，穩定水性醫藥組成物包含約以下濃度的甲硫胺酸：0.1 mg/mL、0.2 mg/mL、0.3 mg/mL、0.4 mg/mL、0.5 mg/mL、0.6 mg/mL、0.7 mg/mL、0.8 mg/mL、0.9 mg/mL、1.0 mg/mL、1.1 mg/mL、1.2 mg/mL、1.3 mg/mL、1.4 mg/mL、1.5 mg/mL、1.6 mg/mL、1.7 mg/mL、1.8 mg/mL、1.9 mg/mL、或2.0 mg/mL。在一個實施例中，甲硫胺酸具有約1.0 mg/mL之濃度。
根據一些態樣，穩定水性醫藥組成物包含約以下濃度的EDTA：10 µg /mL、11 µg/mL、12 µg/mL、13 µg/mL、14 µg/mL、15 µg/mL、16 µg/mL、17 µg/mL、18 µg/mL、19 µg/mL、20 µg/mL、21 µg/mL、22 µg/mL、23 µg/mL、24 µg/mL、25 µg/mL、26 µg/mL、27 µg/mL、28 µg/mL、29 µg/mL、或30 µg/mL。在一個實施例中，EDTA具有約20 µg/mL之濃度。
儲存時間
在一些實施例中，在儲存指定時間段後判定DP穩定性。在一些實施例中，將DP儲存約3個月或更久、約6個月或更久、約12個月或更久、約1.5年或更久、約2年或更久、約2.5年或更久、約3年或更久、約3.5年或更久、約4年或更久、約4.5年或更久、約5年或更久、約6年或更久、約7年或更久、約8年或更久、約9年或更久、或約10年或更久。在一些實施例中，將DP儲存約12個月或更久、約1.5年或更久、約2年或更久、約2.5年或更久、或約3年或更久。在一些實施例中，將DP儲存約2年或更久。
溫度
在一些實施例中，DP在特定溫度下儲存指定時間段後係穩定的。在一些實施例中，溫度範圍在約以下之間：-10至50℃、0至25℃、1至20℃、1至15℃、2至10℃、或2至5℃。在一些實施例中，溫度範圍在約以下之間：2至8℃。在一些實施例中，溫度係約：-10℃、-9℃、-8℃、-7℃、-6℃、-5℃、-4℃、-3℃、-2℃、-1℃、0℃、1℃、2℃、3℃、4℃、5℃、6℃、7℃、8℃、9℃、10℃、11℃、12℃、13℃、14℃、15℃、16℃、17℃、18℃、19℃、20℃、21℃、22℃、23℃、24℃、25℃、26℃、27℃、28℃、29℃、30℃、31℃、32℃、33℃、34℃、35℃、36℃、37℃、38℃、39℃、40℃、41℃、42℃、43℃、44℃、45℃、46℃、47℃、48℃、49℃、或50℃。
在一些實施例中，DP在約2℃至約8℃之範圍內之溫度下儲存約12個月或更久、或約2年或更久後係穩定的。在一些實施例中，DP在約5℃之溫度下儲存約12個月或更久或約2年或更久後係穩定的。在一些實施例中，DP在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久後係穩定的。
本文所揭示之水性醫藥組成物（亦稱為藥品(drug product, DP)）之穩定性係基於雙特異性EGFR-cMet抗體及如本文提供之DP之其他成分（諸如但不限於組胺酸及/或醫藥上可接受之組胺酸鹽、蔗糖、PS80、甲硫胺酸、及EDTA）之具體量或比例、以及各種因素之評估來判定。此等因素包括但不限於溶液之顏色、pH、濁度、微可見(subvisible)粒子之數目、無醣基化重鏈(aglycosylated heavy chain, AGHC)之百分比、一或多個新峰之百分比、高分子量物種(HMWS)之百分比、低分子量物種(LMWS)之百分比、酸性峰總和之百分比、鹼性峰總和之百分比、蛋白質濃度、EGFR結合活性之百分比、cMet結合活性之百分比、及/或PS80之百分比。
如本文所揭示之穩定DP不應被解讀為需要本文所列之所有因素，而是需要該等因素中之至少一個、至少兩個、或至少三個或更多。在一些實施例中，針對本文以下詳細列出之至少一個、至少兩個、至少三個或更多個因素，所揭示之穩定DP展現出以下結果。在一些實施例中，針對本文以下詳細列出之所有因素，穩定DP展現出以下結果。
溶液之顏色
監測DP溶液之顏色，並可對其進行評估，以驗證溶液之外觀在釋出時及在儲放期限內與先前批次一致。DP溶液之顏色可反映穩定性。在一個實施例中，當溶液之顏色橫跨無色至約BY2或更低、至約BY4或更低、至約B2或更低、至約B4或更低、至約Y2或更低、或至約Y4或更低時，界定DP之穩定性，如描述於歐洲藥典(European Pharmacopoeia) 2.2.2液體變色程度(Degree of Coloration of Liquids)，歐洲藥典(Ph. Eur.)第10版專著編號20202，2019年7月。
在一個實施例中，穩定性係界定為在約5℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，具有無色至約BY2或更低、約B2或更低、約Y2或更低之溶液顏色。在一較佳實施例中，穩定性係界定為在約5℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，具有無色至約BY5或更低、至約B5或更低、至約Y5或更低之溶液顏色。
pH
測量DP溶液之pH允許確認其在釋出時及在儲放期限內與先前DP批次一致。在一個實施例中，當DP之pH約為以下時，界定DP之穩定性：4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、或7.0。在一個實施例中，在約5℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，DP之pH係約5.7。在一個實施例中，在約5℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，pH係在約5.0至約6.4之範圍內。在一較佳實施例中，當在約5℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，DP之pH係在約5.2至約6.2之範圍內時，界定DP之穩定性。在一最佳實施例中，當在約5℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，DP之pH係在約5.4至約6.0之範圍內時，界定DP之穩定性。在一最佳實施例中，當在約5℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，DP之pH係在約5.3至約6.1之範圍內時，界定DP之穩定性。
濁度
濁度允許測量DP溶液中粒子之存在，以確保在釋出時及在儲放期限內與先前DP批次及適用的藥典指南之一致性。在一個實施例中，當在約5℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，DP之濁度值約為以下時，界定DP之穩定性：0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、或20個比濁法濁度單位(nephelometric turbidity unit, NTU)。在一個實施例中，當在約5℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，DP之濁度值係約或小於18 NTU時，界定DP之穩定性。在一較佳實施例中，當在約5℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，DP之濁度值係約或小於13 NTU時，界定DP之穩定性。在最佳實施例中，當在約5℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，DP之濁度值係約或小於8 NTU時，界定DP之穩定性。在一最佳實施例中，當在約5℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，DP之濁度值係約或小於6 NTU時，界定DP之穩定性。
粒子分析
基於微可見粒子之平均數量，將DP之穩定性設定為粒子污染之特定臨限。在一個實施例中，針對等於10 µm或更大之粒徑，測試之DP單位中存在的粒子之平均數目不應超過每個容器100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000、2000、3000、4000、5000、或6000個。在一個實施例中，針對等於10 µm或更大之粒徑，測試之DP單位中存在的粒子之平均數目不應超過每個容器6000個。在一個實施例中，針對等於25 µm或更大之粒徑，測試之DP單位中存在的粒子之平均數目不應超過每個容器100、200、300、400、500、或600個。在一個實施例中，針對等於25 µm或更大之粒徑，測試之DP單位中存在的粒子之平均數目不應超過每個容器600個。
cSDS 條件
如同基於凝膠之SDS-PAGE，還原之毛細管SDS-PAGE (cSDS)係一種用於基於分子量分離變性蛋白質之方法。此程序允許定量DP純度並監測其在釋出時及在儲放期限內之穩定性。
在一個實施例中，DP穩定性係在約5℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，基於cSDS變量（例如純度百分比、無醣基化重鏈(AGHC)、或新峰之存在）之各種結果界定，其中cSDS係在還原或非還原條件下執行。
在一個實施例中，DP穩定性係界定為具有約為以下之純度百分比：80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或約或等於100%或其間之任何範圍。
在一個實施例中，DP穩定性係界定為具有約為以下之AGHC：0.1%、0.5%、1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%或其間之任何範圍。
在一個實施例中，DP穩定性係界定為當相較於未經處理之參考材料時，在cSDS結果中未顯示多於0.5%、0.8%、0.9%、1.0%、1.2%、1.3%、1.4%、1.5%、1.6%、1.7%、1.8%、1.9%、或多於2%之新峰。
在一個實施例中，DP穩定性係界定為純度百分比為約88%或更高，AGHC為約11%或更多，且相較於參考材料，新峰不多於1.5%。在一較佳實施例中，DP穩定性係界定為純度百分比為約91%或更高，AGHC為約8%或更多，且相較於參考材料，新峰不多於1.0%。在一最佳實施例中，DP穩定性係界定為純度百分比為約94%或更高，AGHC為約5%或更少，且相較於參考材料，新峰不多於1.0%。在一最佳實施例中，DP穩定性係界定為純度百分比為約93%或更高，AGHC為約6%或更少，且相較於參考材料，新峰不多於1.0%。
如同基於凝膠之SDS-PAGE，非還原之毛細管SDS-PAGE (cSDS)係一種用於基於分子量分離蛋白質之方法。此程序允許定量DP純度並監測其在釋出時及在儲放期限內之穩定性。
在一個實施例中，DP穩定性係在約5℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，基於cSDS變量（例如純度百分比或新峰之存在）之各種結果界定，其中cSDS係在非還原條件下執行。
在一個實施例中，DP穩定性係界定為具有約為以下之純度百分比：80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或約或等於100%或其間之任何範圍。
在一個實施例中，DP穩定性係界定為當相較於未經處理之參考材料時，在cSDS結果中未顯示多於0.5%、0.8%、0.9%、1.0%、1.2%、1.3%、1.4%、1.5%、1.6%、1.7%、1.8%、1.9%、或多於2%之新峰。
在一個實施例中，DP穩定性係界定為純度百分比為約90%或更高，且相較於參考材料，新峰不多於1.5%。在一較佳實施例中，DP穩定性係界定為純度百分比為約94%或更高，且相較於參考材料，新峰不多於1.2%。在一最佳實施例中，DP穩定性係界定為純度百分比為約97%或更高，且相較於參考材料，新峰不多於1.0%。
與穩定性一致之粒徑篩析HPLC (SE-HPLC) 結果
SE-HPLC程序允許評估DP之純度，並監測其在非變性條件下在釋出時及在儲放期限內之穩定性。
在一個實施例中，DP穩定性係在將DP在約5℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，基於SE-HPLC變量（諸如主要組分(MC)、高分子量物種(HMWS)、或低分子量物種(LMWS)）之各種結果界定。
在一個實施例中，DP穩定性係界定為具有約以下的MC：80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或等於約100%或其間之任何範圍。在一個實施例中，DP穩定性係界定為具有約90%或更多的MC。在一個實施例中，DP穩定性係界定為具有約92%或更多的MC。在一較佳實施例中，DP穩定性係界定為具有約95%或更多的MC。在最佳實施例中，DP穩定性係界定為具有約97%或更多的MC。在一最佳實施例中，DP穩定性係界定為具有約98%或更多的MC。
在一個實施例中，DP穩定性係界定為具有約以下的HMWS：0.1%、0.5%、1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%或其間之任何範圍。在一個實施例中，DP穩定性係界定為具有約10%或更少的HMWS。在一個實施例中，DP穩定性係界定為具有約8%或更少的HMWS。在一較佳實施例中，DP穩定性係界定為具有約5%或更少的HMWS。在最佳實施例中，DP穩定性係界定為具有約3%或更少的HMWS。在一較佳實施例中，DP穩定性係界定為具有約2%或更少的HMWS。
在一個實施例中，DP穩定性係界定為具有約以下的LMWS：0.1%、0.5%、0.6%、0.7%、0.8%、0.9%、1%、1.5%、2%、2.5%、3%、3.5%、4%、4.5%、5%、5.5%、6%、6.5%、7%、7.5%、8%、8.5%、9%、9.5%、或10%。在一個實施例中，DP穩定性係界定為具有約5%或更少的LMWS。在一較佳實施例中，DP穩定性係界定為具有約2%或更少的LMWS。在一最佳實施例中，DP穩定性係界定為具有約1%或更少的LMWS。
毛細管等電聚焦(cIEF)
如同等電凝膠電泳(IEF)法，cIEF基於總電荷或等電點(pI)分離蛋白質。此程序允許監測藥品在釋出時及在儲放期限內之基於電荷之異構體的分布。在一個實施例中，DP穩定性係在將DP在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，基於cIEF變量（諸如主峰(MP)、酸性峰總和、或鹼性峰總和）之各種結果界定。
在一個實施例中，DP穩定性係界定為在將DP在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，具有MP約為以下的cIEF：20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、或100%或其間之任何範圍。在一個實施例中，DP穩定性係界定為在將DP在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，具有MP在約30%至約90%之範圍內的cIEF。在一個實施例中，DP穩定性係界定為在將DP在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，具有MP在約37%至約87%之範圍內的cIEF。在一較佳實施例中，DP穩定性係界定為在將DP在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，具有MP在約47%至約87%之範圍內的cIEF。在一較佳實施例中，DP穩定性係界定為在將DP在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，具有MP在約46%至約87%之範圍內的cIEF。在最佳實施例中，DP穩定性係界定為在將DP在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，具有MP在約57%至約87%之範圍內的cIEF。在一最佳實施例中，DP穩定性係界定為在將DP在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，具有MP在約66%至約83%之範圍內的cIEF。
在一個實施例中，DP穩定性係界定為在將DP在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，具有酸性峰總和總計約為以下的cIEF：1%、5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、或80%或其間之任何範圍。在一個實施例中，DP穩定性係界定為在將DP在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，具有酸性峰總和總計為約5%至約65%的cIEF。在一個實施例中，DP穩定性係界定為在將DP在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，具有酸性峰總和總計為約10%至約60%的cIEF。在一個實施例中，DP穩定性係界定為在將DP在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，具有酸性峰總和總計為約10%至約50%的cIEF。在一較佳實施例中，DP穩定性係界定為在將DP在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，具有酸性峰總和總計為約10至約50%的cIEF。在一較佳實施例中，DP穩定性係界定為在將DP在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，具有酸性峰總和總計為約10至約40%的cIEF。在一最佳實施例中，DP穩定性係界定為在將DP在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，具有酸性峰總和總計為約10%至約40%的cIEF。在一最佳實施例中，DP穩定性係界定為在將DP在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，具有酸性峰總和總計為約15%至約31%的cIEF。
在一個實施例中，DP穩定性係界定為在將DP在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，具有鹼性峰總和總計約為以下的cIEF：1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、或20%或其間之任何範圍。在一個實施例中，DP穩定性係界定為在將DP在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，具有鹼性峰總和總計為約12%或更少的cIEF。在一個實施例中，DP穩定性係界定為在將DP在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，具有鹼性峰總和總計為約10%或更少的cIEF。在一較佳實施例中，DP穩定性係界定為在將DP在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，具有鹼性峰總和總計小於或為約10%的cIEF。在一較佳實施例中，DP穩定性係界定為在將DP在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，具有鹼性峰總和總計小於或為約8%的cIEF。在一最佳實施例中，DP穩定性係界定為在將DP在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，具有鹼性峰總和總計小於或為約8%的cIEF。在一最佳實施例中，DP穩定性係界定為在將DP在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，具有鹼性峰總和總計小於或為約5%的cIEF。
蛋白質濃度
DP之蛋白質濃度可允許驗證其在釋出時及在儲放期限內與先前DP批次一致。可藉由測量藥品溶液在280 nm下之UV光吸光度(A280)來達成蛋白質濃度之定量。
在一個實施例中，DP穩定性係界定為在將DP在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，具有約為以下之蛋白質濃度：10 mg/mL、20 mg/mL、30 mg/mL、35 mg/mL、36 mg/mL、37 mg/mL、38 mg/mL、39 mg/mL、40 mg/mL、41 mg/mL、42 mg/mL、43 mg/mL、44 mg/mL、45 mg/mL、46 mg/mL、47 mg/mL、48 mg/mL、49 mg/mL、50 mg/mL、51 mg/mL、52 mg/mL、53 mg/mL、54 mg/mL、55 mg/mL、56 mg/mL、57 mg/mL、58 mg/mL、59 mg/mL、60 mg/mL、61 mg/mL、62 mg/mL、63 mg/mL、64 mg/mL、或65 mg/mL。在一個實施例中，DP穩定性係界定為在將DP在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，具有約40 mg/mL至約60 mg/mL之蛋白質濃度。在一較佳實施例中，DP穩定性係界定為在將DP在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，具有約45 mg/mL至約55 mg/mL之蛋白質濃度。在一較佳實施例中，DP穩定性係界定為在將DP在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，具有約43 mg/mL至約57 mg/mL之蛋白質濃度。在一最佳實施例中，DP穩定性係界定為在將DP在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，具有約47 mg/mL至54 mg/mL之蛋白質濃度。在一最佳實施例中，DP穩定性係界定為在將DP在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，具有約45 mg/mL至55 mg/mL之蛋白質濃度。
肽圖譜(peptide mapping)
轉譯後修飾(PTM)（諸如氧化、脫醯胺化、及異構化）係可在抗體結構中偵測到之酶修飾。在一些實施例中，基於抗體中PTM之水平評估PD穩定性。酶消化測試物品以產出肽區段。接著藉由例如質譜法(MS)、串聯質譜法(MS-MS)、或超高效液相層析質譜法(UPLC-MS)評估此等肽。各經分析之肽序列係相對於其在整體抗體結構中之已知位置識別。轉譯後修飾係藉由比較經識別肽序列之測量質量與其預期質量來判定。
藥品效力
DP與EGFR及/或c-Met之體外結合允許評估DP穩定性之水平。此結合可藉由使用（但不限於）均相競爭性時差性螢光共振能量轉移(TR-FRET)檢定來評估。
EGFR 結合活性
在一個實施例中，DP穩定性係界定為在將DP在約5℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，相對於參考具有約為以下之EGFR結合活性：20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、100%、110%、120%、130%、140%、150%、160%、170%、180%、190%、或200%或其間之任何範圍。在一個實施例中，DP穩定性係界定為在將DP在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，相對於參考具有在約50%至約150%之範圍內之EGFR結合活性。在一個實施例中，DP穩定性係界定為在將DP在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，相對於參考具有在約60%至約140%之範圍內之EGFR結合活性。在一較佳實施例中，DP穩定性係界定為在將DP在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，相對於參考具有在約60%至約140%之範圍內之EGFR結合活性。在一較佳實施例中，DP穩定性係界定為在將DP在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，相對於參考具有在約65%至約130%之範圍內之EGFR結合活性。在一最佳實施例中，DP穩定性係界定為在將DP在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，相對於參考具有在約80%至約120%之範圍內之EGFR結合活性。在一最佳實施例中，DP穩定性係界定為在將DP在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，相對於參考具有在約70%至約130%之範圍內之EGFR結合活性。
與穩定性一致之
cMet 結合活性結果
在一個實施例中，DP穩定性係界定為在將DP在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，相對於參考具有約為以下之cMet結合活性：20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、100%、110%、120%、130%、140%、150%、160%、170%、180%、190%、或200%或其間之任何範圍。在一個實施例中，DP穩定性係界定為在將DP在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，相對於參考具有在約50%至約150%之範圍內之cMet結合活性。在一個實施例中，DP穩定性係界定為在將DP在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，相對於參考具有在約60%至約140%之範圍內之cMet結合活性。在一較佳實施例中，DP穩定性係界定為在將DP在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，相對於參考具有在約60%至約140%之範圍內之cMet結合活性。在一較佳實施例中，DP穩定性係界定為在將DP在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，相對於參考具有在約65%至約125%之範圍內之cMet結合活性。在一最佳實施例中，DP穩定性係界定為在將DP在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，相對於參考具有在約80%至約120%之範圍內之cMet結合活性。在一最佳實施例中，DP穩定性係界定為在將DP在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，相對於參考具有在約76%至約125%之範圍內之cMet結合活性。
聚山梨醇酯80 (PS80)
在一個實施例中，DP穩定性係由在將DP在約5℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，約為以下之PS80濃度（以重量對體積百分比為單位）界定：0.005%、0.01%、0.02%、0.03%、0.04%、0.05%、0.06%、0.08%、0.09%、0.1%、0.11%、0.12%、0.13%、0.14%、或0.15%或其間之任何範圍。在一個實施例中，DP穩定性係由在將DP在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，約0.02%至約0.1%之PS80濃度界定。在一個實施例中，DP穩定性係由約0.03%至約0.09%之PS80濃度界定。在一較佳實施例中，DP穩定性係由在將DP在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，約0.04%至約0.08%之PS80濃度界定。在一個實施例中，DP穩定性係由約0.02%至約0.09%之PS80濃度界定。在一較佳實施例中，DP穩定性係由在將DP在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，約0.03%至約0.08%之PS80濃度界定。在一最佳實施例中，DP穩定性係由在將DP在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，約0.05%至約0.08%之PS80濃度界定。在一最佳實施例中，DP穩定性係由在將DP在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，約0.04%至約0.08%之PS80濃度界定。
在一個實施例中，穩定水性醫藥組成物（或DP）之總體積係在約5 mL至約10 mL之範圍內。在一個實施例中，穩定水性醫藥組成物（或DP）之總體積係在約0.5 mL至約20 mL、約1 mL至約15 mL、約5 mL至約10 mL、或約6 mL至約8 mL之範圍內。在一個實施例中，穩定水性醫藥組成物之總體積係約：0.5 mL、0.6 mL、0.7 mL、0.8 mL、0.9 mL、1 mL、2 mL、3 mL、4 mL、5 mL、6 mL、8 mL、9 mL、10 mL、11 mL、12 mL、13 mL、14 mL、15 mL、16 mL、18 mL、19 mL、20 mL、25 mL、或30 mL或其間之任何範圍。
方法
本文提供一種治療有需要之對象之癌症的方法。在一些實施例中，癌症係肺癌。在一些實施例中，肺癌係非小細胞肺癌(NSCLC)。該方法包含向對象投予如本文所揭示之穩定水性醫藥組成物。在一個實施例中，投予係靜脈內的。
本文亦提供一種用於製備靶向EGFR及cMet之雙特異性抗體之穩定水性醫藥組成物的方法。用於此方法中之靶向EGFR及cMet之雙特異性抗體包含：第一重鏈(HC1)，其包含HC1可變區1 (VH1)；第一輕鏈(LC1)，其包含輕鏈可變區1 (VL1)；第二重鏈(HC2)，其包含HC2可變區2 (VH2)；及第二輕鏈(LC2)，其包含輕鏈可變區2 (VL2)；其中該VH1包含分別包含SEQ ID NO: 1、2、及3之胺基酸序列的重鏈互補決定區1 (HCDR1)、HCDR2、及HCDR3；該VL1包含分別包含SEQ ID NO: 4、5、及6之胺基酸序列的輕鏈互補決定區1 (LCDR1)、LCDR2、及LCDR3；該VH2包含分別為SEQ ID NO: 7、8、及9之HCDR1、HCDR2、及HCDR3胺基酸序列；且該VL2包含分別為SEQ ID NO: 10、11、及12之LCDR1、LCDR2、及LCDR3胺基酸序列（參見表14）。該方法亦包含將包含約50 mg/mL的雙特異性抗體、約10 mM組胺酸及/或醫藥上可接受之組胺酸鹽、約8.5%蔗糖、及約1 mg/mL L-甲硫胺酸之組成物與聚山梨醇酯80組合至約0.06% (w/v)之最終濃度並與EDTA組合至約20 µg/mL之最終濃度，其中穩定水性醫藥組成物具有約pH 5.7。
在一個實施例中，雙特異性EGFR-cMet抗體之第一重鏈(HC1)包含HC1恆定域3 (HC1 CH3)及HC1可變區1 (VH1)。在另一實施例中，雙特異性EGFR-cMet抗體之第二重鏈(HC2)包含HC2恆定域3 (HC2 CH3)及HC2可變區2 (VH2)。
在一個實施例中，雙特異性EGFR-cMet抗體包含包括SEQ ID NO:13之胺基酸序列的HC1可變區及包括SEQ ID NO:14之胺基酸序列的LC1可變區（參見表14）。
在一個實施例中，雙特異性EGFR-cMet抗體包含包括SEQ ID NO:15之胺基酸序列的HC2可變區及包括SEQ ID NO:16之胺基酸序列的LC2可變區（參見表14）。
在一個實施例中，HC1包含SEQ ID NO:17之胺基酸序列，且HC2包含SEQ ID NO:19之胺基酸序列（參見表14）。
在另一實施例中，LC1包含SEQ ID NO:18之胺基酸序列，且LC2包含SEQ ID NO:20之胺基酸序列（參見表14）。
在一個實施例中，該方法進一步包含過濾穩定水性醫藥組成物。在另一實施例中，過濾係用一或多個0.22 µm滅菌過濾器執行。在一個實施例中，滅菌過濾器具有約為以下之孔徑：0.10 µm、0.15 µm、0.20 µm、0.25 µm、0.30 µm、0.35 µm、0.40 µm、0.45 µm、0.50 µm、0.55 µm、0.60 µm、0.65 µm、0.70 µm、或0.75 µm。
可將本文所揭示之穩定水性醫藥組成物包裝至套組、容器、藥包(pack)、分配器、或小瓶中。
本文提供一種套組，其包含所揭示之穩定水性藥物及其使用說明。
本文亦提供一種製品，包含容納所揭示之穩定水性醫藥組成物的容器。在一些實施例中，容器係具有可被注射器刺穿之塞子的小瓶。
說明性實施例
此處提供所揭示技術之說明性實施例。這些實施例僅係說明性的，並且不會限制本揭露或本文中所隨附之申請專利範圍的範疇。
實施例1.一種穩定水性醫藥組成物，其包含：
a) 約44 mg/mL至約56 mg/mL的雙特異性表皮生長因子受體(EGFR)/肝細胞生長因子受體(c-Met)抗體，該雙特異性抗體包含：
第一重鏈(HC1)，其包含HC1可變區1 (VH1)；
第一輕鏈(LC1)，其包含輕鏈可變區1 (VL1)；
第二重鏈(HC2)，其包含HC2可變區2 (VH2)；及
第二輕鏈(LC2)，其包含輕鏈可變區2 (VL2)，
其中該VH1包含分別為SEQ ID NO: 1、2、及3之重鏈互補決定區1 (HCDR1)、HCDR2、及HCDR3胺基酸序列；該VL1包含分別為SEQ ID NO: 4、5、及6之輕鏈互補決定區1 (LCDR1)、LCDR2、及LCDR3胺基酸序列，該VH2包含分別為SEQ ID NO: 7、8、及9之HCDR1、HCDR2、及HCDR3胺基酸序列；且該VL2包含分別為SEQ ID NO: 10、11、及12之LCDR1、LCDR2、及LCDR3胺基酸序列；
b) 約8 mM至約12 mM的組胺酸及/或醫藥上可接受之組胺酸鹽、
c) 約6.8% (w/v)至約10.2% (w/v)的蔗糖、
d) 約0.036% (w/v)至約0.084% (w/v)的聚山梨醇酯80 (PS80)、
e) 約0.8 mg/mL至約1.2 mg/mL的甲硫胺酸、
f) 約16 µg/mL至約24 µg/mL的乙二胺四乙酸(EDTA)；及
g) 約5.2至約6.2之pH。
實施例2.如實施例1之穩定水性醫藥組成物，其中該雙特異性EGFR-cMet抗體包含包括SEQ ID NO:13之胺基酸序列的HC1可變區及包括SEQ ID NO:14之胺基酸序列的LC1可變區。
實施例3.如實施例1或實施例2之穩定水性醫藥組成物，其中該雙特異性EGFR-cMet抗體包含包括SEQ ID NO:15之胺基酸序列的HC2可變區及包括SEQ ID NO:16之胺基酸序列的LC2可變區。
實施例4.如實施例1至3中任一者之穩定水性醫藥組成物，其中該HC1包含SEQ ID NO:17之胺基酸序列，且該LC1包含SEQ ID NO:18之胺基酸序列。
實施例5.如實施例1至4中任一者之穩定水性醫藥組成物，其中該HC2包含SEQ ID NO:19之胺基酸序列，且該LC2包含SEQ ID NO:20之胺基酸序列。
實施例6.如實施例1至5中任一者之穩定水性醫藥組成物，其中該雙特異性EGFR-cMet抗體係阿米維單抗。
實施例7.如實施例1至6中任一者之穩定水性醫藥組成物，其中該雙特異性EGFR-cMet抗體具有約50 mg/mL之濃度。
實施例8.如實施例1至7中任一者之穩定水性醫藥組成物，其中該組胺酸及/或醫藥上可接受之組胺酸鹽具有約10 mM之濃度。
實施例9.如實施例1至8中任一者之穩定水性醫藥組成物，其中該組胺酸及/或醫藥上可接受之組胺酸鹽包含L-組胺酸及L-組胺酸鹽酸鹽單水合物。
實施例10.如實施例1至9中任一者之穩定水性醫藥組成物，其包含約8.5% (w/v)蔗糖。
實施例11.如實施例1至10中任一者之穩定水性醫藥組成物，其包含約0.06% (w/v) PS80。
實施例12.如實施例1至11中任一者之穩定水性醫藥組成物，其中該甲硫胺酸具有約1 mg/mL之濃度。
實施例13.如實施例1至12中任一者之穩定水性醫藥組成物，其中該EDTA具有約20 µg/mL之濃度。
實施例14.如實施例1至13中任一者之穩定水性醫藥組成物，其中該pH係約5.7。
實施例15.如實施例1至14中任一者之穩定水性醫藥組成物，其中穩定性係基於以下界定：溶液之顏色、pH、濁度、微可見粒子之數目、無醣基化重鏈(AGHC)之百分比、一或多個新峰之百分比、高分子量物種(HMWS)之百分比、低分子量物種(LMWS)之百分比、酸性峰總和之百分比、鹼性峰總和之百分比、蛋白質濃度、EGFR結合活性之百分比、cMet結合活性之百分比、PS80之百分比、或其任何組合。
實施例15a.如請求項1至14中任一項所述之穩定水性醫藥組成物，其中穩定性係基於以下界定：溶液之顏色、pH、濁度、微可見粒子之數目、純度之百分比、無醣基化重鏈(AGHC)之百分比、如藉由還原之cSDS測量的一或多個新峰之百分比、如藉由非還原之cSDS測量的純度及一或多個新峰之百分比、高分子量物種(HMWS)之百分比、低分子量物種(LMWS)之百分比、酸性峰總和之百分比、鹼性峰總和之百分比、蛋白質濃度、EGFR結合活性之百分比、cMet結合活性之百分比、PS80之百分比、或其任何組合。
實施例15b.如請求項1至15中任一項所述之穩定水性醫藥組成物，其中該穩定水性醫藥組成物在約2至8℃之溫度下至少兩年係穩定的。
實施例16.如實施例1至15中任一者之穩定水性醫藥組成物，其中該組成物之總體積係在約5 mL至約10 mL之範圍內。
實施例16a.如實施例1至14中任一者之穩定水性醫藥組成物，其包含50 mg/mL的該雙特異性EGFR-cMet抗體、10 mM的該組胺酸及/或醫藥上可接受之組胺酸鹽、8.5% (w/v)蔗糖、0.06% (w/v) PS80、1 mg/mL的該甲硫胺酸、及20 µg/mL的該EDTA。
實施例17.一種治療有需要之對象之癌症的方法，該方法包含向該對象投予如實施例1至16a中任一者之醫藥組成物。
實施例18.如實施例17之方法，其中該投予係靜脈內的。
實施例19.一種用於製備靶向EGFR及cMet之雙特異性抗體之穩定水性醫藥組成物的方法，靶向EGFR及cMet之該雙特異性抗體包含：第一重鏈(HC1)，其包含HC1可變區1 (VH1)；第一輕鏈(LC1)，其包含輕鏈可變區1 (VL1)；第二重鏈(HC2)，其包含HC2可變區2 (VH2)；及第二輕鏈(LC2)，其包含輕鏈可變區2 (VL2)；其中該VH1包含分別包含SEQ ID NO: 1、2、及3之胺基酸序列的重鏈互補決定區1 (HCDR1)、HCDR2、及HCDR3；該VL1包含分別包含SEQ ID NO: 4、5、及6之胺基酸序列的輕鏈互補決定區1 (LCDR1)、LCDR2、及LCDR3；該VH2包含分別為SEQ ID NO: 7、8、及9之HCDR1、HCDR2、及HCDR3胺基酸序列；且該VL2包含分別為SEQ ID NO: 10、11、及12之LCDR1、LCDR2、及LCDR3胺基酸序列；該方法包含：
將包含約50 mg/mL的該雙特異性抗體、約10 mM組胺酸及/或醫藥上可接受之組胺酸鹽、約8.5%蔗糖、及約1 mg/mL L-甲硫胺酸之組成物與聚山梨醇酯80組合至約0.06% (w/v)之最終濃度並與EDTA組合至約20 µg/mL之最終濃度，其中該穩定水性醫藥組成物具有約pH 5.7。
實施例20.如實施例19之方法，其中該雙特異性EGFR-cMet抗體包含包括SEQ ID NO:13之胺基酸序列的HC1可變區及包括SEQ ID NO:14之胺基酸序列的LC1可變區。
實施例21.如實施例19至21中任一者之方法，其中該雙特異性EGFR-cMet抗體包含包括SEQ ID NO:15之胺基酸序列的HC2可變區及包括SEQ ID NO:16之胺基酸序列的LC2可變區。
實施例22.如實施例19至21中任一者之方法，其中該抗體包含包括SEQ ID NO:17之胺基酸序列的重鏈1 (HC1)及包括SEQ ID NO:18之胺基酸序列的輕鏈1 (LC1)。
實施例23.如實施例19至22中任一者之方法，其中該抗體包含包括SEQ ID NO:19之胺基酸序列的HC2及包括SEQ ID NO:20之胺基酸序列的LC2。
實施例24.如實施例19至23中任一者之方法，其中該抗體係阿米維單抗。
實施例25.一種套組，其包含如實施例1至16中任一者之穩定水性醫藥組成物及其使用說明。
實施例26.一種包含容納如實施例1至16中任一者之穩定水性醫藥組成物的容器之製品。
實施例27.如實施例26之製品，其中該容器係具有可被注射器刺穿之塞子的小瓶。
實施例28.一種用於治療癌症的如實施例1至16中任一者之醫藥組成物。
實施例29.一種用於製備藥物的如實施例1至16中任一者之醫藥組成物。
實施例30.一種醫藥組成物於治療有需要之對象之癌症中的用途，其係藉由投予如實施例1至16中任一者之醫藥組成物。
實施例31.如實施例30之醫藥組成物的用途，其中該投予係靜脈內的。
實例
提供下列實例以進一步描述一些本文所揭示之實施例。實例意欲說明而非限制所揭示之實施例。
本文中所使用之分析測試之說明 分析測試- 一般表徵 溶液之顏色
監測藥品之溶液顏色，以評估外觀並確保其在釋出時及在儲放期限內與先前批次一致。溶液之顏色可係產品穩定性之指標。為了判定溶液之顏色，目視比較測試樣本與一組經界定之參考溶液。
將規定體積之液體內容物轉移至尺寸與參考溶液相同之預刻痕安瓿中。接著目視比較安瓿之內容物與歐洲藥典顏色參考溶液。在漫射日光中判定顏色之程度，對照白色背景檢視。
溶液之顏色材料及方法
材料及方法係如描述於歐洲藥典2.2.2液體變色程度，歐洲藥典(Ph.Eur.)第10版專著編號20202，2019年7月。簡言之，將測試物品與B（棕色）、BY（棕黃色）、及Y（黃色）顏色參考溶液組進行比較。
與穩定性一致之溶液之顏色結果。在一個實施例中，穩定性係界定為在約5℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，具有無色至約BY2或更低、約B2或更低、約Y2或更低之溶液顏色。在一較佳實施例中，穩定性係界定為在約5℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，具有無色至約BY4或更低、至約B4或更低、至約Y4或更低之溶液顏色。在最佳實施例中，穩定性係界定為在約5℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，具有無色至約BY5或更低、至約B5或更低、至約Y5或更低之溶液顏色。
pH
pH材料及方法-使用具有標準化pH電極之每日校正電子pH計以測量測試物品之pH。在測試之前及期間，所有校正溶液、參考緩衝劑、及測試物品皆經平衡並維持在25℃下。
與穩定性一致之pH結果。在一個實施例中，穩定性係界定為在約5℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，具有5.0至6.4之pH範圍。在一較佳實施例中，穩定性係界定為在約5℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，pH範圍為5.2至6.2。在最佳實施例中，穩定性係界定為在約5℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，具有5.4至6.0之pH範圍。在一最佳實施例中，穩定性係界定為在約5℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，具有5.3至6.1之pH範圍。
濁度
濁度材料及方法-材料及方法係基於歐洲藥典2.2.1液體之澄清度及乳光度(Clarity and Degree of Opalescence of Liquids)。
與穩定性一致之濁度結果。測試結果係以比濁法濁度單位(NTU)記述。在一個實施例中，穩定性係界定為在約5℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，具有約18 NTU或更低之濁度值。在一較佳實施例中，穩定性係界定為在約5℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，濁度值為約13 NTU或更低。在最佳實施例中，穩定性係界定為在約5℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，具有約8 NTU或更低之濁度值。在一最佳實施例中，穩定性係界定為在約5℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，具有約6 NTU或更低之濁度值。
分析測試- 顆粒物質
顆粒物質（微可見）材料及方法-所有材料及方法皆符合美國藥典(United States Pharmacopeia) ＜788＞顆粒物質(Particulate Matter)。使用配備有藥典容量取樣器設置的符合藥典之液體粒子計數器儀器。在測試之前，將測試物品平衡至室溫至少60分鐘，但不超過10小時。以符合美國藥典＜788＞顆粒物質之方式匯集測試物品小瓶。如由美國藥典＜788＞顆粒物質所指示，取出四份匯集之測試物品（各體積適當），並對每份等於或大於10 µm及25 µm之粒子數目進行計數。不考慮第一份獲得之結果，並將其餘三個結果用於計算所檢驗之製劑之平均粒子數目。
粒子分析（微可見）符合藥典之結果-測試結果應符合美國藥典＜788＞顆粒物質、歐洲藥典2.9.19、及日本藥典XVII / 6.07顆粒污染：微可見粒子(Particulate Contamination: Sub-visible particles)。因此，針對等於10 µm或更大之粒徑，所測試之單位中存在的粒子之平均數目不應超過每容器6000個粒子，且針對等於25 µm或更大之粒徑，不應超過每容器600個粒子。
分析測試- 純度 還原之毛細管電泳十二烷基硫酸鈉(cSDS)
還原之cSDS材料及方法-分析採用商用毛細管電泳系統，在溫控卡匣中具有50 µm i.d. x 30.2 cm長的裸熔融矽石毛細管；毛細管配備有對紫外光透明之偵測窗。每次注射前，對毛細管進行電動潤洗。每次樣本分析前，將毛細管裝載由纏結聚合物溶液所組成之篩分基質。該方法利用SDS-MW凝膠遷移緩衝劑及橫跨大約10至148 kDa之範圍的經認證之蛋白質分子量標準品。將儀器之紫外吸收分光光度計偵測器設定於220 nm之波長下，且將毛細管溫度設定為25℃。針對還原樣本處理條件，將測試物品（二重複）與SDS及2-巰基乙醇混合，且接著在規定溫度下加熱規定時間，以使蛋白質完全變性及還原。藉由跨越毛細管施加5kV之電壓大約20秒，以電動方式注射還原之樣本，且接著藉由施加更大之電場大約35分鐘以進行分析。藉由光譜之遠紫外區(220 nm)中之吸光度完成偵測。收集輕鏈、重鏈、及無醣基化重鏈(AG HC)之總信號數據之百分比。
與穩定性一致之還原之cSDS結果。在一個實施例中，穩定性係界定為在約5℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，純度百分比≥88.0%，AG HC ≤11.0%，且相較於阿米維單抗參考材料之驗證儲備液，新峰不＞1.5%。在一較佳實施例中，穩定性係界定為在約5℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，純度百分比約為或大於91.0%，AG HC小於或約為8.0%，且相較於參考材料，新峰不多於1.0%。在一較佳實施例中，穩定性係界定為在約5℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，純度百分比約為或大於91.0%，AG HC小於或約為8.0%，且相較於參考材料，新峰不多於1.2%。在最佳實施例中，穩定性係界定為在約5℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，純度百分比約為或大於94.0%，AG HC小於或約為5.0%，且相較於參考材料，新峰不多於1.0%。在一最佳實施例中，穩定性係界定為在約5℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，純度百分比約為或大於93.0%，AG HC小於或約為6.0%，且相較於參考材料，新峰不多於1.0%。
非還原之毛細管電泳十二烷基硫酸鈉(cSDS)
非還原之cSDS材料及方法-分析採用商用毛細管電泳系統，在溫控卡匣中具有50 µm i.d. x 30.2 cm長的裸熔融矽石毛細管；毛細管配備有對紫外光透明之偵測窗。每次注射前，對毛細管進行電動潤洗。每次樣本分析前，將毛細管裝載由纏結聚合物溶液所組成之篩分基質。該方法利用SDS-MW凝膠遷移緩衝劑、橫跨大約10至148 kDa之範圍的經認證之蛋白質分子量標準品、及經驗證之阿米維單抗參考材料樣本。將儀器之紫外吸收分光光度計偵測器設定於220 nm之波長下，且將毛細管溫度設定為25℃。針對非還原樣本處理條件，將測試物品（二重複）與SDS及烷化試劑（N-乙基順丁烯二醯亞胺，以防止雙硫鍵改組(shuffling)或重新形成）混合。接著將其在規定溫度下加熱規定時間，以使蛋白質完全變性，並最小化片段及假影帶之形成。藉由跨越毛細管施加5kV之電壓大約20秒，以電動方式注射非還原之樣本，且接著藉由施加更大之電場大約35分鐘以進行分析。藉由光譜之遠紫外區(220 nm)中之吸光度完成偵測。收集總信號數據之百分比。亦分析數據以檢查相對於阿米維單抗參考材料新峰之存在。純度百分比係定義為重鏈百分比+輕鏈百分比。
與穩定性一致之非還原之cSDS結果。在一個實施例中，穩定性係界定為在約5℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，純度百分比為約88.0%或更大，且相較於參考材料，新峰不多於1.5%。在一個實施例中，穩定性係界定為在約5℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，純度百分比為約90.0%或更大，且相較於參考材料，新峰不多於1.5%。在一較佳實施例中，穩定性係界定為在約5℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，純度百分比為約90.0%或更大，且相較於參考材料，新峰不多於1.0%。在一較佳實施例中，穩定性係界定為在約5℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，純度百分比為約94.0%或更大，且相較於參考材料，新峰不多於1.2%。在最佳實施例中，穩定性係界定為在約5℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，純度百分比為約94.0%或更大，且相較於參考材料，新峰不多於1.0%。在一最佳實施例中，穩定性係界定為在約5℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，純度百分比為約97.0%或更大，且相較於參考材料，新峰不多於1.0%。
粒徑篩析高效液相層析(SE-HPLC)
SE-HPLC材料及方法-將參考材料及測試物品稀釋至目標蛋白質濃度。將20 µl體積的分析物注射至7.8 mm x 30 cm粒徑篩析管柱上，粒徑篩析管柱具有5 µm粒徑之二氧化矽基質，分級範圍為10至500 kDa。使用水性磷酸鹽緩衝劑作為流動相，流速為0.7 mL/分鐘，且在280 nm下連續監測洗出液之吸光度。在管柱上分離單體（主要組分或主峰）、聚集物（高分子量物種、或HMWS）、及片段（低分子量物種、或LMWS），並以不同滯留時間洗提。藉由監測280 nm下之峰值吸光度來測量此等物種之量。
與穩定性一致之SE-HPLC結果
主要組分-在一個實施例中，穩定性係界定為在約5℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，具有約90.0%或更多的主要組分。在一個實施例中，穩定性係界定為在約5℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，具有約92.0%或更多的主要組分。在一較佳實施例中，穩定性係界定為在約5℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，具有約95.0%或更多的主要組分。在最佳實施例中，穩定性係界定為在約5℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，具有約97.0%的主要組分。在一最佳實施例中，穩定性係界定為在約5℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，具有約98.0%的主要組分。高分子量物種(HMWS)-在一個實施例中，穩定性係界定為在約5℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，具有約10.0%或更少的HMWS。在一個實施例中，穩定性係界定為在約5℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，具有約8.0%或更少的HMWS。在一較佳實施例中，穩定性係界定為在約5℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，具有約5.0%或更少的HMWS。在最佳實施例中，穩定性係界定為在約5℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，具有約3.0%或更少的HMWS。在一最佳實施例中，穩定性係界定為在約5℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，具有約2.0%或更少的HMWS。低分子量物種(LMWS)-在一個實施例中，穩定性係界定為在約5℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，具有約5.0%或更少的LMWS。在一較佳實施例中，穩定性係界定為在約5℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，具有約2.0%或更少的LMWS。在最佳實施例中，穩定性係界定為在約5℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，具有約1.0%或更少的LMWS。
毛細管等電聚焦(cIEF)
cIEF材料及方法-分析程序係在配備有自動取樣器之市售成像cIEF分析儀上執行。分析採用具有外壁聚醯亞胺塗層之100-µm經內壁塗佈之二氧化矽毛細管。此外，使用稀磷酸及甲基纖維素之分析物溶液、氫氧化鈉及甲基纖維素之陰極電解質溶液、及經定義之類型及量的兩性電解質。用羧肽酶B (CPB)處理測試物品，以移除C端離胺酸，並消除因各帶電物種之多個C端變體之存在而引入之不明確(ambiguity)。將儀器之自動取樣器設定為4℃，以用於預聚焦及聚焦兩者。預聚焦電壓及時間分別係1500 V及1分鐘。聚焦電壓及時間分別係3000 V及7分鐘。
與穩定性一致之cIEF結果
主峰-在一個實施例中，穩定性係界定為在約5℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，具有37至87%的主峰。在一較佳實施例中，穩定性係界定為在約5℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，具有47至87%的主峰。在一較佳實施例中，穩定性係界定為在約5℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，具有46至87%的主峰。在最佳實施例中，穩定性係界定為在約5℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，具有57至87%的主峰。在最佳實施例中，穩定性係界定為在約5℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，具有66至83%的主峰。
酸性峰總和-在一個實施例中，穩定性係界定為在約5℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，具有總計10至60%之酸性峰總和。在一個實施例中，穩定性係界定為在約5℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，具有總計10至50%之酸性峰總和。在一較佳實施例中，穩定性係界定為在約5℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，具有總計10至50%之酸性峰總和。在一較佳實施例中，穩定性係界定為在約5℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，具有總計10至40%之酸性峰總和。在最佳實施例中，穩定性係界定為在約5℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，具有總計10至40%之酸性峰總和。在一最佳實施例中，穩定性係界定為在約5℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，具有總計15至31%之酸性峰總和。
鹼性峰總和-在一個實施例中，穩定性係界定為在約5℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，具有總計約12.0%或更少之鹼性峰總和。在一個實施例中，穩定性係界定為在約5℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，具有總計約10.0%或更少之鹼性峰總和。在一較佳實施例中，穩定性係界定為在約5℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，具有總計約10.0%或更少之鹼性峰總和。在一較佳實施例中，穩定性係界定為在約5℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，具有總計約8.0%或更少之鹼性峰總和。在最佳實施例中，穩定性係界定為在約5℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，具有總計約8.0%或更少之鹼性峰總和。在一最佳實施例中，穩定性係界定為在約5℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，具有總計約5.0%或更少之鹼性峰總和。
分析測試- 數量 根據A280 之蛋白質濃度
藉由定量在280 nm下之吸光度(A280)判定藥品之蛋白質濃度。
根據A280之蛋白質濃度材料及方法
使用合格且經校正之雙光束UV-Vis分光光度計執行蛋白質濃度之測量。使用0.9% (w/v) NaCl以1:125稀釋測試物品。使用路徑長度為1 cm且側面為黑色或磨砂之石英半微量比色管(1.4 ml)測量樣本。將分光光度計設定為280 nm之波長、1 nm之狹縫寬度、及一(1)秒之反應。使用0.9% (w/v) NaCl作為空白對照。藉由將測試物品吸光度與稀釋因數之乘積除以抗體吸收常數與儀器路徑長度之乘積（例如（但不限於），阿米維單抗之吸收常數為1.40 (mg/mL)ˉ1 cmˉ1，且儀器路徑長度為1 cm）計算蛋白質濃度(mg/mL)。
與穩定性一致之蛋白質濃度結果
在一個實施例中，穩定性係界定為在約5℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，具有4060 mg/mL之蛋白質濃度。在一較佳實施例中，穩定性係界定為在約5℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，具有45至55 mg/mL之蛋白質濃度。在一較佳實施例中，穩定性係界定為在約5℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，具有43至57 mg/mL之蛋白質濃度。在最佳實施例中，穩定性係界定為在約5℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，具有47 mg/mL至54 mg/mL之蛋白質濃度。在最佳實施例中，穩定性係界定為在約5℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，具有45 mg/mL至55 mg/mL之蛋白質濃度。
分析測試- 效力 效力（表皮生長因子受體(EGFR) 結合）
使用均相競爭性時差性螢光共振能量轉移(TR-FRET)檢定格式證明藥品與EGFR之體外結合。在此程序中，不同濃度的未經標示之雙特異性EGFR-cMet抗體樣本與經供體螢光團（銪(Eu)螯合物）標示之雙特異性EGFR-cMet抗體競爭結合至經受體螢光團(Cy5)標示之EGFR抗原。激發供體螢光團導致能量轉移至結合之受體螢光團（FRET程序）。使用能夠測量時差性螢光之微量盤讀取儀，藉由在665 nm下之光發射偵測所得FRET。將樣本劑量反應曲線與RM進行比較。
EGFR結合材料及方法。使經認證之商用EGFR（一種具有C端His標籤之重組人類EGFR/ErbB1/HER1）與經認證之商用Cy5 Mono NHS酯反應，以產生經Cy5標示之EGFR。使經驗證之雙特異性EGFR-cMet抗體與經認證之商用銪(Eu)螯合物反應，以產生經Eu標示之雙特異性EGFR-cMet抗體。在相同檢定盤上平行測試雙特異性EGFR-cMet抗體參考材料(RM)之連續稀釋液、檢定對照、及測試物品。將經Eu標示之雙特異性EGFR-cMet抗體添加至各RM、檢定對照、及測試物品中，接著將檢定盤溫和振盪。接著類似地添加Cy5-EGFR，將檢定盤再次溫和振盪，並於黑暗中培養4±1小時。接著藉由在665 nm下之分光光度法測量螢光，將其對抗體濃度作圖，並藉由四參數邏輯模型分析。判定RM、檢定對照、及樣本獲得半最大螢光反應(EC50)所需之抗體濃度。基於樣本（或對照）與RM EC50值之比計算檢定對照及樣本之效力，並以相對於RM之活性百分比記述。
與穩定性一致之EGFR結合活性結果。在一個實施例中，穩定性係界定為在約5℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，相對於參考材料，結合活性為50%至150%。在一個實施例中，穩定性係界定為在約5℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，相對於參考材料，結合活性為60%至140%。在一較佳實施例中，穩定性係界定為在約5℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，相對於參考材料，結合活性為60%至140%。在一較佳實施例中，穩定性係界定為在約5℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，相對於參考材料，結合活性為65%至130%。在最佳實施例中，穩定性係界定為在約5℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，相對於參考材料，結合活性之範圍在約80%至120%之間。在最佳實施例中，穩定性係界定為在約5℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，相對於參考材料，結合活性之範圍在約70%至130%之間。
效力（cMet 結合）
使用均相競爭性時差性螢光共振能量轉移(TR-FRET)檢定格式證明雙特異性EGFR-cMet抗體與c-MET之體外結合。在此程序中，不同濃度的未經標示之雙特異性EGFR-cMet抗體樣本與經供體螢光團（銪(Eu)螯合物）標示之雙特異性EGFR-cMet抗體競爭結合至經受體螢光團(Cy5)標示之c-MET抗原。激發供體螢光團導致能量轉移至結合之受體螢光團（FRET程序）。使用能夠測量時差性螢光之微量盤讀取儀，藉由在665 nm下之光發射偵測所得FRET。將樣本劑量反應曲線與參考材料(RM)進行比較。
c-MET結合材料及方法。使經認證之商用cMet（一種具有c端HIS-tag標籤標籤之重組cMet/HGFR）與經認證之商用Cy5 Mono NHS酯反應，以產生經Cy5標示之c-MET。使經驗證之雙特異性EGFR-cMet抗體與經認證之商用銪(Eu)螯合物反應，以產生經Eu標示之雙特異性EGFR-cMet抗體。在相同檢定盤上平行測試雙特異性EGFR-cMet抗體RM之連續稀釋液、檢定對照、及測試物品。將經Eu標示之雙特異性EGFR-cMet抗體添加至各RM、檢定對照、及測試物品中，接著將檢定盤溫和振盪。接著類似地添加Cy5-c-MET，將檢定盤再次溫和振盪，並於黑暗中培養4±1小時。接著藉由在665 nm下之分光光度法測量螢光，將其對抗體濃度作圖，並藉由四參數邏輯模型分析。判定RM、檢定對照、及樣本獲得半最大螢光反應(EC50)所需之抗體濃度。基於樣本（或對照）與RM EC50值之比計算檢定對照及樣本之效力，並以相對於RM之活性百分比記述。
與穩定性一致之cMet結合活性結果。在一個實施例中，穩定性係界定為在約5℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，相對於參考材料，結合活性之範圍在約50%至約150%之間。在一個實施例中，穩定性係界定為在約5℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，相對於參考材料，結合活性之範圍在約60%至約140%之間。在一較佳實施例中，穩定性係界定為在約5℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，相對於參考材料，結合活性之範圍在約60%至140%之間。在一較佳實施例中，穩定性係界定為在約5℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，相對於參考材料，結合活性之範圍在約65%至125%之間。在最佳實施例中，穩定性係界定為在約5℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，相對於參考材料，結合活性之範圍在約80%至約120%。在最佳實施例中，穩定性係界定為在約5℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，相對於參考材料，結合活性之範圍在約75%至約125%。
分析測試- 界面活性劑 聚山梨醇酯-80 定量
藉由混合模式離子交換/疏水性HPLC定量判定聚山梨醇酯80。
PS 80材料及方法。用配備有2.1 × 20 mm在線(on-line)管柱、ELSD、及在30℃下之溫控管柱腔之梯度HPLC進行分析，管柱含有30 µm可水潤濕之混合模式聚合球形吸附劑粒子。將流速設定為1 mL/分鐘，並將ELSD蒸發器溫度設定為50℃。流動相A係於水中之2% v/v甲酸，且流動相B係於異丙醇中之2% v/v甲酸。使用純聚山梨醇酯80以產生校正及檢查標準品。純注射測試物品樣本。
與穩定性一致之聚山梨醇酯80結果。在一個實施例中，穩定性係界定為在約5℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，PS80濃度為0.03至0.08%。在一個實施例中，穩定性係界定為在約5℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，PS80濃度為0.02至0.09%。在一較佳實施例中，穩定性係界定為在約5℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，PS 80濃度為0.04至0.08%。在一較佳實施例中，穩定性係界定為在約5℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，PS 80濃度為0.03至0.08%。在最佳實施例中，穩定性係界定為在約5℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，PS 80濃度為0.05至0.08%。在一最佳實施例中，穩定性係界定為在約5℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後，PS 80濃度為0.04至0.08%。
分析測試- 常規表徵 肽圖譜
此測試之目的係測量抗體結構中可能存在之轉譯後修飾（諸如氧化、脫醯胺化、及異構化）之水平。酶消化測試物品以產出肽區段。接著藉由超高效液相層析質譜法(UPLC-MS)評估此等肽。各經分析之肽序列係相對於其在整體抗體結構中之已知位置識別。轉譯後修飾係藉由比較經識別肽序列之測量質量與其預期質量來判定。
肽圖譜材料及方法。用6 M胍、50 mM Tris pH 8.0、5 mM EDTA使樣本變性，並使用30 kDa離心過濾裝置過濾（丟棄流過物）。用1 M二硫蘇糖醇(DTT)還原變性樣本，接著用1 M碘乙酸鈉烷化，並進一步用DTT處理以淬熄反應。經由Sephadex G-25管柱將反應混合物交換至消化緩衝劑（50 mM Tris pH 7.0，具有1 mM CaCl
2）中，管柱具有用於空白、參考材料、及測試物品之不同管柱。向消化緩衝劑中之樣本中添加1 mg/mL胰蛋白酶儲備溶液之等分試樣，產生20 µL/mL胰蛋白酶濃度。將溶液在37℃下培養2小時± 30分鐘。使經胰蛋白酶處理(trypsinized)之溶液冷卻至室溫，並用三氟乙酸使酶去活化。藉由配備有Waters Acquity BEH（伸乙基架橋雜化(ethylene bridged hybrid)）C18, 2.1 x 100 mm, 1.7 µm, 130 Å管柱及附接之自動取樣器的超高效液相層析質譜法(UPLC-MS)評估經處理之樣本。流動相A係於水中之0.1%甲酸，流動相B係於乙腈中之0.1% FA（流動相B）。將自動取樣器設定為2至8℃，將管柱設定為40℃，並將流速設定為500 µL/分鐘。使洗出肽經受電灑游離，並使用經校正之在線質譜法進行偵測。
實例1 ：高通量(HTP) 多因子篩選研究
進行高通量(HTP)多因子篩選研究，以選擇調配物緩衝劑、賦形劑、聚山梨醇酯、及pH之組合。此係藉由產生由緩衝劑、賦形劑、聚山梨醇酯、及pH值之各種組合所組成之多種測試調配物來達成。接著對測試調配物進行人工應激，並分析蛋白質去穩定化之替代標記。
在此等研究中，將大約200 µL的各測試調配物保持在65℃下24小時，且接著使其被動地回復至環境室溫。接著對經溫度平衡之樣本進行分光光度分析，以判定測試調配物在350 nm下之吸光度。在350 nm下之吸光度增加係蛋白質去穩定化及聚集之廣泛接受的替代相關屬性。因此，具有相對低的吸光值之經熱應激測試調配物被視為「穩定」調配物，其中所測量之吸光值增加與穩定性相對降低相關。測試調配物之組成及其在350 nm下測得之吸光度係示於下表1中。所有測試調配物之緩衝劑濃度皆係20 mM。針對上下文，在350 nm下之空孔（空白）之典型吸光值係0.104個吸收單位(AU)。
表1：測試調配物之組成及其在350 nm下測得之吸光度
| 緩衝劑 | pH | 界面活性劑 | 賦形劑 | 350 nm下之吸光度單位 |
| 磷酸鹽 | 7.0 | 0.04% (w/v)聚山梨醇酯20 | 8%蔗糖 | 1.286 |
| 5%山梨醇 | 1.331 | |||
| 8%海藻糖 | 1.324 | |||
| 0.04% (w/v)聚山梨醇酯80 | 8%蔗糖 | 1.352 | ||
| 5%山梨醇 | 1.383 | |||
| 8%海藻糖 | 1.357 | |||
| 組胺酸 | 6.5 | 0.04% (w/v)聚山梨醇酯20 | 8%蔗糖 | 0.222 |
| 5%山梨醇 | 0.260 | |||
| 8%海藻糖 | 0.245 | |||
| 0.04% (w/v)聚山梨醇酯80 | 8%蔗糖 | 0.234 | ||
| 5%山梨醇 | 0.278 | |||
| 8%海藻糖 | 0.280 | |||
| 6 | 0.04% (w/v)聚山梨醇酯20 | 8%蔗糖 | 0.165 | |
| 5%山梨醇 | 0.180 | |||
| 8%海藻糖 | 0.181 | |||
| 0.04% (w/v)聚山梨醇酯80 | 8%蔗糖 | 0.168 | ||
| 5%山梨醇 | 0.195 | |||
| 8%海藻糖 | 0.178 | |||
| 5.5 | 0.04% (w/v)聚山梨醇酯20 | 8%蔗糖 | 0.135 | |
| 5%山梨醇 | 0.138 | |||
| 8%海藻糖 | 0.137 | |||
| 0.04% (w/v)聚山梨醇酯80 | 8%蔗糖 | 0.131 | ||
| 5%山梨醇 | 0.131 | |||
| 8%海藻糖 | 0.131 | |||
| 乙酸鹽 | 5.5 | 0.04% (w/v)聚山梨醇酯20 | 8%蔗糖 | 0.179 |
| 5%山梨醇 | 0.188 | |||
| 8%海藻糖 | 0.201 | |||
| 0.04% (w/v)聚山梨醇酯80 | 8%蔗糖 | 0.195 | ||
| 5%山梨醇 | 0.207 | |||
| 8%海藻糖 | 0.208 | |||
| 5 | 0.04% (w/v)聚山梨醇酯20 | 8%蔗糖 | 0.141 | |
| 5%山梨醇 | 0.146 | |||
| 8%海藻糖 | 0.138 | |||
| 0.04% (w/v)聚山梨醇酯80 | 8%蔗糖 | 0.145 | ||
| 5%山梨醇 | 0.149 | |||
| 8%海藻糖 | 0.133 | |||
| 4.5 | 0.04% (w/v)聚山梨醇酯20 | 8%蔗糖 | 0.143 | |
| 5%山梨醇 | 0.150 | |||
| 8%海藻糖 | 0.143 | |||
| 0.04% (w/v)聚山梨醇酯80 | 8%蔗糖 | 0.151 | ||
| 5%山梨醇 | 0.160 | |||
| 8%海藻糖 | 0.130 | |||
| 檸檬酸鹽 | 4.5 | 0.04% (w/v)聚山梨醇酯20 | 8%蔗糖 | 0.515 |
| 5%山梨醇 | 0.596 | |||
| 8%海藻糖 | 0.632 | |||
| 0.04% (w/v)聚山梨醇酯80 | 8%蔗糖 | 0.673 | ||
| 5%山梨醇 | 0.779 | |||
| 8%海藻糖 | 0.838 |
吸光度結果主要由pH以非線性方式驅動，其中在pH 5.5下看到最低吸光值，且在pH 4.5及7.0下看到最高值。然而，緩衝劑之化學性質似乎亦起作用。在5.5之相同pH下，組胺酸顯示低於乙酸鹽之值。考慮到乙酸鹽之pKa (4.76)及組胺酸之pKa (6.04)，組胺酸在pH 5.5下會具有較乙酸鹽強之緩衝容量。較強之容量解釋在相同pH值下，組胺酸之吸光值相對於乙酸鹽較低。此亦可解釋在pH 4.5下檸檬酸鹽(pKa 3.09)與乙酸鹽(4.76)之間的結果差異。相反地，磷酸鹽(pKa 6.82)在pH 7.0下應具有強的緩衝容量。然而，磷酸鹽吸光值較研究中看到之大多數值高五至十倍，且因此可明確地排除其作為潛在緩衝系統。以類似方式，檸檬酸鹽在pH 4.5下之吸光值較研究中看到之大多數值高二至五倍。用接近其pKa之檸檬酸鹽調配將需要對於醫藥應用而言不實際之pH值，且因此亦可明確地排除其作為潛在緩衝系統。
藉由檢驗研究看到賦形劑物種對吸光值之一致但溫和的效應，其中八個緩衝劑/pH值組合臂內之兩個聚山梨醇酯物種臂產出16個研究臂。自此觀點來看，在16個臂中之13個臂中，蔗糖相對於山梨醇及海藻糖顯示最低之吸光值。因此，儘管山梨醇及海藻糖可證明係可接受之賦形劑，但可將蔗糖視為較佳之賦形劑。
在整個研究中，聚山梨醇酯20通常顯示較對應聚山梨醇酯80值低之吸光值。針對上下文，界面活性劑（諸如聚山梨醇酯）在單株抗體調配物中之主要作用係保護抗體抵抗機械（振盪）應力、而非此HTP篩選研究中所使用之熱應力。自此觀點來看，兩個聚山梨醇酯物種之間看到之吸光值差異可視為可忽略的。然而，應注意的是，此研究中觀察到之最低吸光值含有聚山梨醇酯80。
實例2 ：聚山梨醇酯濃度範圍振盪及冷凍解凍研究
進行此研究以判定穩定阿米維單抗免受機械、界面、及冷凍/解凍應力影響的聚山梨醇酯80濃度之範圍。本研究亦評估聚山梨醇酯80在5℃下儲存12個月之後的保護性質。
產生六組相同之測試調配物小瓶。各組含有一小瓶之低(0.03%)、目標(0.06%)、及高(0.08%)聚山梨醇酯80濃度(% w/v)的測試調配物之各者。所有其他調配物組分保持恆定（50 mg/mL阿米維單抗、10 mM組胺酸、8.5%蔗糖、1 mg/mL甲硫胺酸、20 µg/mL乙二胺四乙酸(EDTA)，pH 5.7）。將調配物以7.5 mL之填充體積分配至8R小瓶中，加塞子，加蓋，並壓接(crimp)密封。
為了建立一般研究基線數據，在研究開始時測試一組小瓶，以用作未經處理之零時間對照(T=0)。
為了評估聚山梨醇酯80對機械及界面應力之穩定效應，將一組小瓶水平放置在迴轉式振盪器上，並在環境室溫及光照條件下以250 rpm振盪長達72小時（T72h振盪）。在相同之72小時時段期間，將第二組對應之未振盪對照小瓶在環境室溫及光照條件下垂直放置（T72h對照）。
為了評估老化之聚山梨醇酯80對機械及界面應力之穩定效應，將兩組小瓶保持在5℃下12個月。使用上述方法，將一組振盪72小時（T12 m T72h振盪），另一組保持作為對照（T12 m T72h對照）。
為了評估聚山梨醇酯80對冷凍/解凍應力之穩定效應，使一組小瓶經受五(5)個冷凍/解凍循環(5xFT)，其中一個循環係定義為冷凍至-70℃，接著在環境室溫下被動解凍。
如以下結果中所示，在振盪應力之後看到之屬性值相對於T=0及未振盪對照樣本兩者皆無實質差異。針對在振盪應力之前保持在5℃下12個月之樣本，看到類似之結果。此外，在冷凍/解凍應力之後看到之屬性值相對於T=0對照無實質差異。在振盪應力及冷凍/解凍應力兩者下，低、目標、及高聚山梨醇酯80樣本之間之屬性值無實質差異。此指示，與0.03% (w/v)至0.08% (w/v)之範圍內的聚山梨醇酯80一起調配之穩定阿米維單抗可抵抗機械、界面、及冷凍/解凍應力。
表2.振盪及冷凍/解凍研究之結果。
表3.振盪及冷凍/解凍研究之結果
實例3 ：金屬摻入(spiking) 研究
| 表2.振盪及冷凍/解凍研究之結果 | ||||||||||
| 測試條件 | 測試調配物(% (w/v) PS 80) | 顏色 | pH | 濁度 | 顆粒物質 （微可見） | A280 | SE-HPLC | |||
| NTU | ≥10 µm粒子/小瓶 | ≥25 µm粒子/小瓶 | mg/ mL | 主要組分% | HMWS % | LMWS % | ||||
| T=0 | 0.03 | ≤B9、≤BY7、≤Y7 | 5.8 | 4.2 | 88 | 30 | 50.0 | 98.8 | 1.1 | 0.0 |
| 0.06 | ≤B9、≤BY7、≤Y7 | 5.8 | 4.5 | 37 | 13 | 50.2 | 98.8 | 1.1 | 0.0 | |
| 0.08 | ≤B9、≤BY7、≤Y7 | 5.8 | 4.6 | 38 | 10 | 50.1 | 98.8 | 1.1 | 0.1 | |
| T72h振盪 | 0.03 | ≤B9、≤BY7、≤Y7 | 5.8 | 4.5 | 125 | 12 | 50.3 | 98.8 | 1.1 | 0.1 |
| 0.06 | ≤B9、≤BY7、≤Y7 | 5.8 | 4.8 | 70 | 8 | 50.9 | 98.9 | 1.1 | 0.1 | |
| 0.08 | ≤B9、≤BY7、≤Y7 | 5.7 | 4.6 | 87 | 23 | 50.4 | 98.8 | 1.1 | 0.1 | |
| T72h對照 | 0.03 | ≤B9、≤BY7、≤Y7 | 5.8 | 4.4 | 57 | 20 | 50.1 | 98.8 | 1.1 | 0.1 |
| 0.06 | ≤B9、≤BY7、≤Y7 | 5.8 | 4.3 | 42 | 3 | 50.0 | 98.8 | 1.1 | 0.1 | |
| 0.08 | ≤B9、≤BY7、≤Y7 | 5.8 | 4.5 | 55 | 17 | 50.0 | 98.8 | 1.1 | 0.1 | |
| T12 m T72h振盪 | 0.03 | ≤B9、≤BY7、≤Y7 | 5.9 | 4.7 | 167 | 23 | 49.9 | 98.6 | 1.2 | 0.2 |
| 0.06 | ≤B9、≤BY7、≤Y7 | 5.9 | 4.7 | 65 | 0 | 50.3 | 98.7 | 1.2 | 0.2 | |
| 0.08 | ≤B9、≤BY7、≤Y7 | 5.8 | 4.6 | 80 | 18 | 50.5 | 98.6 | 1.2 | 0.2 | |
| T12 m T72h對照 | 0.03 | ≤B9、≤BY7、≤Y7 | 5.8 | 4.5 | 95 | 12 | 50.3 | 98.7 | 1.2 | 0.2 |
| 0.06 | ≤B9、≤BY7、≤Y7 | 5.8 | 6.4 | 30 | 3 | 50.3 | 98.7 | 1.2 | 0.2 | |
| 0.08 | ≤B9、≤BY7、≤Y7 | 5.8 | 6.5 | 35 | 5 | 50.2 | 98.6 | 1.2 | 0.2 | |
| 5X F/T | 0.06 | ≤B9、≤BY7、≤Y7 | 5.8 | 4.7 | 112 | 7 | 50.4 | 98.8 | 1.1 | 0.0 |
| 測試 條件 | 測試調配物(% (w/v) PS 80) | cSDS （還原） | cSDS （非還原） | cIEF | PS80 | EGFR | cMET | |||||
| 純度% | AGHC % | 新峰不＞1.0% | 純度% | 新峰不＞1.0% | 主峰% | 酸性峰總和% | 鹼性峰總和% | (%) | 結合% | 結合% | ||
| T0 | 0.03 | 95.4 | 3.9 | NNP | 98.4 | NNP | 74.4 | 23.4 | 2.3 | 0.027 | 106 | 93 |
| 0.06 | 95.4 | 3.9 | NNP | 98.4 | NNP | 74.7 | 22.3 | 2.9 | 0.055 | 102 | 94 | |
| 0.08 | 95.4 | 3.9 | NNP | 98.3 | NNP | 75.3 | 22.3 | 2.4 | 0.076 | 109 | 100 | |
| T72h振盪 | 0.03 | 95.1 | 4.0 | NNP | 98.5 | NNP | 74.1 | 23.3 | 2.7 | 0.027 | 94 | 104 |
| 0.06 | 95.3 | 3.9 | NNP | 98.5 | NNP | 73.5 | 23.7 | 2.9 | 0.053 | 110 | 99 | |
| 0.08 | 95.3 | 3.9 | NNP | 98.5 | NNP | 73.6 | 23.4 | 2.9 | 0.074 | 104 | 98 | |
| T72h對照 | 0.03 | 95.3 | 3.9 | NNP | 98.5 | NNP | 73.9 | 23.3 | 2.9 | 0.027 | 93 | 99 |
| 0.06 | 95.3 | 3.9 | NNP | 98.5 | NNP | 73.3 | 23.8 | 2.9 | 0.052 | 104 | 100 | |
| 0.08 | 95.3 | 3.9 | NNP | 98.5 | NNP | 74.7 | 22.9 | 2.5 | 0.074 | 107 | 99 | |
| T12 m T72h振盪 | 0.03 | 95.2 | 4.0 | NNP | 98.0 | NNP | 74.2 | 23.0 | 2.9 | 0.031 | 92 | 102 |
| 0.06 | 95.2 | 4.0 | NNP | 97.9 | NNP | 74.5 | 22.6 | 3.0 | 0.051 | 98 | 96 | |
| 0.08 | 95.2 | 4.0 | NNP | 98.0 | NNP | 74.4 | 22.9 | 2.6 | 0.076 | 90 | 83 | |
| T12 m T72h對照 | 0.03 | 95.2 | 4.0 | NNP | 98.1 | NNP | 74.1 | 22.8 | 3.2 | 0.031 | 88 | 103 |
| 0.06 | 95.2 | 4.0 | NNP | 98.0 | NNP | 74.1 | 22.8 | 3.1 | 0.051 | 102 | 98 | |
| 0.08 | 95.2 | 4.0 | NNP | 98.1 | NNP | 74.5 | 22.7 | 2.9 | 0.078 | 103 | 81 | |
| 5xFT | 0.06 | 95.2 | 4.0 | NNP | 98.5 | NNP | 74.5 | 22.7 | 2.9 | 0.054 | 101 | 104 |
執行此研究以評估在雙特異性EGFR-cMet抗體製造程序期間可能存在或引入之金屬離子及過氧化物的影響。此經設計以評估在一組加劇應力條件下之調配物穩定性、及補充調配物賦形劑在減少或預防氧化路徑方面之效力。
測試調配物由以下所組成：50 mg/mL阿米維單抗、10 mM組胺酸、8.5% (w/v)蔗糖、0.06% (w/v) PS80，pH 5.7，補充有1 mg/mL L-甲硫胺酸及20 µg/mL EDTA或無補充。藉由向測試調配物中摻入氧化金屬（例如，氧化金屬包括但不限於鐵(Fe3+)、鉻(Cr3+)、銅(Cu2+)、鎳(Ni2+)、及鉬(Mo5+)）及/或溶解之過氧化氫來建立加劇應力條件。金屬之選擇係基於製造程序中可能存在之金屬合金組分之組成。選擇過氧化氫係由於在無菌製造空間之淨化中使用過氧化氫之後，可能會存在殘餘物質。所評估之金屬及過氧化氫之濃度係商用GMP藥品製造程序中會看到之最高值之兩倍。測試調配物之概述係列示於下表4中。
| 表4：測試調配物之組成及應力源 | ||||
| 調配物ID# | 說明 | 測試調配物之組成 | 金屬摻入 | 過氧化氫 摻入 |
| I | 無補充劑（陰性對照） | 10 mM組胺酸、8.5% 蔗糖、0.06% PS80 | 否 | 否 |
| II | 無補充劑+金屬 | 10 mM組胺酸、8.5% 蔗糖、0.06% PS80 | 是 | 否 |
| III | 無補充劑+過氧化物 | 10 mM組胺酸、8.5% 蔗糖、0.06% PS80 | 否 | 是 |
| IV | EDTA/+甲硫胺酸 （陽性對照） | 10 mM組胺酸、8.5% 蔗糖、0.06% PS80、 20 µg/mL EDTA、 1 mg/mL甲硫胺酸 | 否 | 否 |
| V | EDTA +甲硫胺酸+ 金屬+過氧化物 | 10 mM組胺酸、8.5% 蔗糖、0.06% PS80、 20 µg/mL EDTA、 1 mg/mL甲硫胺酸 | 是 | 是 |
將測試調配物以7.5 mL之填充體積等分至8R小瓶中。將小瓶加塞子，加蓋，並壓接密封。將小瓶在推薦(5℃)、加速(25℃)、及應激(40℃)儲存條件下置於穩定狀態。在指定時間點，取出樣本並藉由肽圖譜進行氧化檢定。
研究結果
在六個月之推薦(5℃)儲存條件下，暴露於金屬(II)或過氧化氫(III)之未補充調配物相對於未補充調配物(I)，顯示輕微至輕度氧化增加。此指示，在推薦儲存條件下，過高水平的金屬及過氧化物似乎會誘導未補充調配物(I)中之輕微至輕度氧化。然而，在相同之六個月5℃穩定性條件下，補充甲硫胺酸/EDTA之調配物(IV)與暴露於金屬及過氧化氫之相同經補充調配物(V)之間觀察到之氧化值沒有有意義之差異。此外，經補充調配物(IV)顯示較暴露於金屬(II)或過氧化氫(III)之未補充調配物低之氧化值。此指示，在推薦儲存條件下，補充有EDTA及甲硫胺酸之調配物能夠減輕由過高水平的金屬及過氧化物誘導之氧化。
在一個月之應激(40℃)及六個月之加速(25℃)儲存條件下看到相同趨勢，但水平更明顯。暴露於金屬(II)或過氧化氫(III)之未補充調配物相對於未補充調配物(I)，清楚顯示氧化增加。然而，補充甲硫胺酸/EDTA之調配物(IV)與暴露於金屬及過氧化氫之相同經補充調配物(V)之間觀察到之氧化值沒有有意義之差異。此外，經補充調配物(IV)清楚顯示較暴露於金屬(II)或過氧化氫(III)之未補充調配物低之氧化值。此證明補充EDTA及甲硫胺酸之調配物在加速及應激儲存條件下減輕由過高水平的金屬及過氧化物誘導之氧化的穩健性。
綜上所述，此數據顯示，補充有甲硫胺酸及EDTA之調配物成功地穩健減少金屬及過氧化物介導之氧化。
實例4 ：調配物穩健性發展 研究設計
執行本研究以檢驗保持在推薦(5℃)及加速(25℃)條件下之雙特異性EGFR-cMet抗體藥品之調配物組分濃度水平之多因子變化的效應。所評估之調配物組分係蛋白質濃度、組胺酸濃度、蔗糖濃度、聚山梨醇酯80濃度、EDTA/甲硫胺酸濃度、及pH。所測試之因子濃度之範圍係列示於表5中。
| 表5.所測試之因子濃度之範圍 | |||
| 測試因子 | 低 | 目標 | 高 |
| 雙特異性EGFR-cMet抗體 （阿米維單抗）蛋白質濃度 (mg/mL) | 44 | 50 | 56 |
| pH | 5.2 | 5.7 | 6.2 |
| 組胺酸濃度(mM) | 8 | 10 | 12 |
| 蔗糖濃度(% w/v) | 6.8 | 8.5 | 10.2 |
| EDTA濃度(µg/mL) | 16 | 20 | 24 |
| 甲硫胺酸濃度(mg/mL) | 0.8 | 1 | 1.2 |
| PS80濃度(% w/v) | 0.036 | 0.06 | 0.084 |
基於此標準，使用JMP®統計軟體建立具有中心點之部分因子設計（表6）。
| 表6.測試調配物之組成 | |||||||
| 測試調配物 | 蛋白質(mg/mL) | pH | 組胺酸(mM) | 蔗糖 (% w/v) | EDTA (µg/mL) | 甲硫胺酸 (mg/mL) | PS80 (% w/v) |
| 1 | 44 | 5.2 | 8 | 6.8 | 16 | 0.8 | 0.036 |
| 2 | 44 | 6.2 | 8 | 10.2 | 24 | 1.2 | 0.036 |
| 3 | 50 | 5.7 | 10 | 8.5 | 20 | 1 | 0.06 |
| 4 | 44 | 6.2 | 12 | 10.2 | 16 | 0.8 | 0.036 |
| 5 | 56 | 6.2 | 8 | 10.2 | 16 | 0.8 | 0.084 |
| 6 | 50 | 5.7 | 10 | 8.5 | 20 | 1 | 0.06 |
| 7 | 56 | 5.2 | 12 | 6.8 | 24 | 1.2 | 0.084 |
| 8 | 56 | 6.2 | 12 | 6.8 | 24 | 1.2 | 0.036 |
| 9 | 56 | 5.2 | 8 | 10.2 | 16 | 0.8 | 0.036 |
| 10 | 44 | 5.2 | 12 | 10.2 | 24 | 1.2 | 0.084 |
| 11 | 44 | 6.2 | 8 | 6.8 | 16 | 0.8 | 0.084 |
製備測試調配物，並以7.5 mL之填充體積等分至8R小瓶中。將小瓶加塞子，加蓋，並壓接密封。將小瓶在推薦(5℃)及加速(25℃)條件下置於穩定狀態。在指定時間點，取出樣本並進行檢定。
研究結果
十一種調配物在研究起始時（時間零）、在推薦儲存條件(5℃)下12個月之後、及在加速溫度(25℃)下6個月之後的各屬性之測試結果係呈現於表7中。數據係以針對各屬性之十一種調配物之範圍、平均值、及標準偏差記述。
保持在5℃下12個月之所有調配物之分析結果展示檢定測試值幾乎沒有變化，其指示穩定。賦形劑濃度具有多變量範圍之所有調配物產出窄範圍之檢定測試結果值之能力證明調配物在所測試之邊界及儲存條件內之穩健性。此外，此研究中每個檢定觀察到之全範圍之值與保持在2至8℃下時之穩定性之最佳實施例一致。
保持在加速(25℃)儲存條件下六個月之所有調配物之分析結果顯示的降解效應與暴露於長期加速儲存條件之雙特異性EGFR-cMet抗體之穩定性概況一致。然而，針對大多數結果，相較於在5℃下12個月看到之結果，效應之量值相對較小。類似地，結果值範圍增加之量值亦相對較小，僅不到一半之範圍等於或小於在5℃下12個月看到之結果。此證明即使在加速儲存條件下，賦形劑濃度之多變量範圍亦產生相對一致之結果。
實例5 ：調配之藥物量產 程序說明處理溶液
超濾/滲濾(UF/DF)
| 表7A： 雙特異性EGFR-cMet抗體調配物保持在25℃下6個月及在5℃下12個月之穩定性數據（範圍、平均值、及標準偏差） | ||||||||||
| 檢定 | 時間及儲存條件 | |||||||||
| T=0M | 6M 25℃ | 12M 5℃ | ||||||||
| 範圍 | 平均值 | SD | 範圍 | 平均值 | SD | 範圍 | 平均值 | SD | ||
| cIEF | 主峰面積% | 73.9至75.2 | 74.5 | 0.4 | 55.1至58.2 | 56.3 | 1.1 | 72.5至74.7 | 73.8 | 0.7 |
| 酸性峰總和% | 22至23.4 | 22.7 | 0.4 | 37.8至40.4 | 39.1 | 0.8 | 22.8至24.9 | 23.7 | 0.8 | |
| 鹼性峰總和% | 2.4至3.4 | 2.8 | 0.2 | 3.9至5.5 | 4.7 | 0.5 | 2.1至3.0 | 2.5 | 0.3 | |
| cSDS | 純度% （非還原） | 97.6至98.4 | 98.1 | 0.3 | 95.7至96.5 | 96.1 | 0.3 | 97.8至98.2 | 98.1 | 0.1 |
| 純度% （還原） | 95至95.1 | 95.1 | 0.1 | 93至98.3 | 93.2 | 0.1 | 94.8至95.1 | 95.0 | 0.1 | |
| SE-HPLC | 聚集物% | 0.8至1.0 | 0.9 | 0.1 | 0.8至1.4 | 1.1 | 0.2 | 0.81至1.4 | 1.1 | 0.2 |
| 單體% | 98.9至91.1 | 99.0 | 0.1 | 98至98.6 | 98.3 | 0.2 | 98.5至99 | 98.8 | 0.2 | |
| 片段% | 0.1至0.1 | 0.1 | 0.0 | 0.5至0.7 | 0.6 | 0.1 | 0.14至0.16 | 0.2 | 0.0 | |
| 顆粒物質 （微可見） a | 粒子/容器≥ 10 µm | 25至215 | 69.9 | 59.2 | 27至97 | 64.9 | 19.5 | 13至165 | 68.0 | 41.5 |
| 粒子/容器≥ 25 µm | 5至44 | 15.5 | 11.3 | 5至8 | 11.7 | 4.6 | 0至25 | 10.6 | 8.3 | |
| 濁度 | NTU | 3.5至5.1 | 4.1 | 0.5 | 3.6至5.1 | 4.4 | 0.5 | 3.5至4.9 | 4.1 | 0.5 |
| a高標準偏差最可能係由於在此等低水平的顆粒物質下之檢定變異性 |
| 表7B.處理溶液目標組成及範圍 | ||
| 溶液 | 組成及範圍 | |
| 滲濾緩衝劑 | 10 mM組胺酸、8.5%蔗糖、1 mg/mL L-甲硫胺酸， pH 5.6±0.3 | |
| 聚山梨醇酯80、EDTA 儲備溶液 | 10 mM組胺酸、8.5%蔗糖、1 mg/mL L-甲硫胺酸、6.0% (w/v)聚山梨醇酯80、2 mg/mL EDTA，pH 5.6±0.3 | |
執行超濾/滲濾(UF/DF)以將阿米維單抗病毒保留濾液中間物製造溶液重新調配成預調配原液(pre-formulated bulk, pFB)溶液，預調配原液溶液由50 mg/mL阿米維單抗、10 mM組胺酸、8.5%蔗糖、1 mg/mL L-甲硫胺酸所組成，pH 5.7。
阿米維單抗調配原液(FB)之製備
將聚山梨醇酯80 (6.0% w/v)及EDTA (2 mg/mL)儲備溶液以1:100之稀釋率添加至pFB中，以獲得最終濃度為0.06% (w/v)之聚山梨醇酯80及20 µg/mL之EDTA，從而產出由於10 mM組胺酸中之50 mg/mL的阿米維單抗、8.5% (w/v)蔗糖、1 mg/mL L-甲硫胺酸、0.06%聚山梨醇酯80、20 µg/mL EDTA所組成之調配原液(FB)，pH 5.7。接著將FB溶液均勻混合。使用無菌0.45/0.22 µm過濾器、接著立即使用後續線上(in-line) 0.22 µm過濾器，達成調配原液之最終過濾。
最終原液填充
最終過濾後，將FB填充至一或多個聚碳酸酯Biotainer中。填充體積係biotainer規定體積之20%至90%。
最終原液儲存及運送
藥品生產之前的調配原液之儲存及運送條件係若FB儲存約一週或更短，則5℃±3℃避光；若FB儲存多於一週，則-40℃±10℃避光。
實例6 ：藥物調配物：初級包裝之組成及組分
本文提供阿米維單抗藥品調配物之組成的表格概述（表8）。
| 表8.阿米維單抗藥品之組成 | ||
| 組分 | 組成 | 每mL之量 |
| 阿米維單抗 | 50 mg | 50 mg |
| L-組胺酸 | 10 mM | 0.413 mg |
| L-組胺酸鹽酸鹽單水合物 | 1.538 mg | |
| 蔗糖 | 8.5% (w/v) | 85 mg |
| 聚山梨醇酯80 | 0.06% | 0.60 mg |
| L-甲硫胺酸 | 1.0 mg/mL | 1.0 mg |
| EDTA二鈉鹽二水合物 | 20 µg/mL | 0.02 mg |
| 注射用水 | 量足以至1.0 mL | 量足以至1.0 mL |
阿米維單抗藥品(DP)初級包裝由玻璃小瓶、聚合物小瓶塞子、以鋁密封件所組成。表9列出初級包裝材料之具體組分。
實例7 ：穩定性研究之說明
| 表9.初級包裝材料組分 | |
| 組分 | 說明 |
| 玻璃小瓶 | 8 mL玻璃1類硼矽酸鹽 |
| 塞子 | 20 mm丁基橡膠，經FluroTec塗佈之塞子 |
| 密封件 | 具有Flip-Off鈕扣之20 mm鋁密封件 |
進行此研究以監測在各種環境條件及時間長度下對穩定性產生影響之阿米維單抗藥品屬性。藉由將調配原液以7.5 mL之填充體積等分至8R小瓶中製備研究測試物品。將小瓶加塞子，加蓋，並壓接密封。
所有研究皆用倒置定向之小瓶執行。
表10：研究參數
穩定性研究結果
| 穩定性分類 | 儲存條件 | 持續時間（月） |
| 即時 | 5 ±3℃ | 36 |
| 加速 | 25±2℃/60% RH | 12 |
| 應激 | 40±2℃/75% RH | 6 |
以下列出保持在推薦、加速、及應激條件下之阿米維單抗DP之穩定性結果。在保持在推薦儲存條件下之DP之所有時間點，每個檢定研究觀察到之所有測試參數結果值與符合當在約5℃之溫度下儲存約12個月或更久、或在約5℃之溫度下儲存約24或更久之後保持時之穩定性之最佳實施例的標準一致或超過該標準。保持在加速條件(25℃)下12個月之DP顯示與在約25℃之溫度下儲存約12個月或更久之後、及/或在約5℃之溫度下儲存約2年或更久之後之穩定性之最佳實施例或較佳實施例一致或超過該穩定性之最佳實施例或較佳實施例的結果。類似地，肽圖譜結果顯示轉譯後修飾之測量百分比隨時間之變化幾乎沒有或沒有相應之變化。
保持在加速及應激條件下之阿米維單抗DP之結果顯示暴露於長期加速及應激儲存條件下之藥品之預期降解速率。特別值得注意的是，保持在加速條件(25℃)下12個月之DP顯示與穩定性之最佳實施例或較佳實施例一致或超過穩定性之最佳實施例或較佳實施例的結果。
5 ℃ 數據
25 ℃ 數據
40 ℃ 數據
| 表11：儲存於5℃下之阿米維單抗藥品之穩定性結果 | |||||||||
| 月數 | 溶液之顏色 | pH | 濁度 | 顆粒物質 | cSDS（還原） | ||||
| 微可見 | |||||||||
| (NTU) | ≥10 µm：粒子/小瓶 | ≥25 µm：粒子/小瓶 | 純度： % | AG HC：% | 新峰，相較於參考材料 | ||||
| 0 | ≤BY6、≤B7、≤Y6 | 5.8 | 4.3 | 65 | 2 | 95.1 | 4.2 | 新峰不＞ 1.0% | |
| 3 | ≤BY7、≤B8、≤Y7 | 5.7 | 4.4 | 71 | 1 | 94.9 | 4.3 | 新峰不＞ 1.0% | |
| 6 | ≤BY7、≤B9、≤Y7 | 5.7 | 4.1 | 20 | 0 | 95.2 | 4.1 | 新峰不＞ 1.0% | |
| 9 | ≤BY7、≤B7、≤Y7 | 5.9 | 4.0 | 89 | 5 | 95.0 | 4.2 | 新峰不＞ 1.0% | |
| 12 | ≤BY7、≤B8、≤Y7 | 5.5 | 4.4 | 23 | 1 | 95.1 | 4.1 | 新峰不＞ 1.0% | |
| 18 | ≤BY7、≤B8、≤Y7 | 5.7 | 4.2 | 71 | 2 | 95.1 | 4.1 | 新峰不＞ 1.0% | |
| 24 | ≤BY7、≤B8、≤Y7 | 5.6 | 4.1 | 16 | 1 | 94.9 | 未測試 | 新峰不＞ 1.0% | |
| 36 | |||||||||
| 表11：儲存於5℃下之阿米維單抗藥品之穩定性結果（續） | ||||||
| 月數 | cSDS（非還原） | SE HPLC | 根據A 280之 蛋白質濃度 | |||
| 純度(%) | 新峰(%) | 主要組分(%) | HMWS (%) | LMWS (%) | (mg/mL) | |
| 0 | 98.3 | 相較於參考材料，新峰不＞ 1.0% | 99.2 | 0.8 | ＜0.1 | 53.5 |
| 3 | 98.2 | 相較於參考材料，新峰不＞ 1.0% | 99.1 | 0.8 | ＜0.1 | 53.4 |
| 6 | 98.1 | 相較於參考材料，新峰不＞ 1.0% | 99.1 | 0.8 | ＜0.1 | 53.1 |
| 9 | 98.2 | 相較於參考材料，新峰不＞ 1.0% | 99.1 | 0.8 | ＜0.1 | 53.3 |
| 12 | 98.1 | 相較於參考材料，新峰不＞ 1.0% | 99.1 | 0.8 | ＜0.1 | 53.9 |
| 18 | 98.0 | 相較於參考材料，新峰不＞ 1.0% | 99.0 | 0.9 | 0.1 | 53.7 |
| 24 | 98.1 | 相較於參考材料，新峰不＞ 1.0% | 98.9 | 1.0 | 未測試 | 52.8 |
| 36 | ||||||
| 表11：儲存於5℃下之阿米維單抗藥品之穩定性結果（續） | ||||||
| 月數 | cIEF | EGFR結合 | cMET結合 | 聚山梨醇酯80 | ||
| 主峰(%) | 酸性峰 總和(%) | 鹼性峰 總和(%) | 相對於參考 材料之活性(%) | 相對於參考 材料之活性(%) | (%) | |
| 0 | 76 | 22 | ＜3.0 | 108 | 103 | 0.0561 |
| 3 | 75 | 22 | ＜3.0 | 107 | 104 | 0.0563 |
| 6 | 75 | 22 | ＜3.0 | 127 | 104 | 0.0578 |
| 9 | 74 | 23 | ＜3.0 | 92 | 98 | 0.0560 |
| 12 | 74 | 24 | 2 | 95 | 96 | 0.0597 |
| 18 | 74 | 23 | 3 | 110 | 100 | 0.0577 |
| 24 | 73 | 24 | 3 | 101 | 93 | 0.0603 |
| 36 |
| 表11：儲存於5℃下之阿米維單抗藥品之穩定性結果（續） | ||||||
| 月數 | 轉譯後修飾-氧化部位 | |||||
| 抗EGFR HC Met 34*/ 抗c-Met n/a | 抗EGFR HC Met 103*/抗 c-Met n/a | 抗EGFR HC Met 108*/抗 c-Met n/a | 抗EGFR HC Met 260/抗 c-Met HC Met 254 | 抗EGFR HC Met 436/ 抗c-Met HC Met 430 | 抗EGFR n/a/ 抗c-Met LC Trp 32*, Trp 35 | |
| (%) | (%) | (%) | (%) | (%) | (%) | |
| 0 | 0.2 | 1.6 | 2.2 | 2.3 | 0.7 | 未轉發結果 |
| 3 | 0.2 | 1.2 | 2.4 | 2.1 | 0.7 | 1.5 |
| 6 | 0.2 | 1.5 | 1.7 | 2.2 | 0.7 | 1.7 |
| 9 | 0.2 | 1.2 | 3.2 | 2.4 | 0.8 | 2 |
| 12 | 0.4 | 1.8 | 1.1 | 2.8 | 1.1 | 1.1 |
| 18 | 0.3 | 1.7 | 1.8 | 2.5 | 1.0 | 1.2 |
| 24 | 1.0 | 2.4 | 2.5 | 3.3 | 1.5 | 1.5 |
| 36 |
| 表11：儲存於5℃下之阿米維單抗藥品之穩定性結果（續） | |||
| 月數 | 轉譯後修飾-脫醯胺化部位 | ||
| 抗EGFR HC Asn 333*/ 抗c-Met HC Asn 327 | 抗EGFR HC Asn 392/ 抗c-Met HC Asn 386, Asn 391 | 抗EGFR n/a/ 抗c-Met HC Asn 55*, 59* | |
| (%) | (%) | (%) | |
| 0 | 0.7 | 2.7 | 4.4 |
| 3 | 0.7 | 2.2 | 3.7 |
| 6 | 0.7 | 2.6 | 3.6 |
| 9 | 0.8 | 2 | 4.4 |
| 12 | 0.8 | 2.8 | 3.7 |
| 18 | 0.9 | 3.1 | 3.7 |
| 24 | 未測試 | 3.0 | 4.2 |
| 36 |
| 表11：儲存於5℃下之阿米維單抗藥品之穩定性結果（續） | ||
| 月數 | 轉譯後修飾-異構化部位 | |
| 抗EGFR HC Asp 53*, Asp 54*/抗c-Metn/a | 抗EGFR HC Asp 99*/抗c-Met n/a | |
| (%) | (%) | |
| 0 | nr | 1 |
| 3 | 0.4 | 1 |
| 6 | 0.5 | 1.2 |
| 9 | 0.5 | 1.3 |
| 12 | 0.8 | 1.2 |
| 18 | 0.3 | 1.6 |
| 24 | 0.5 | 1.6 |
| 36 |
| 表12：儲存於25℃下之阿米維單抗藥品之穩定性結果 | |||||||||
| 月數 | 溶液之顏色 | pH | 濁度 | 顆粒物質 | cSDS（還原） | ||||
| 微可見 | |||||||||
| (NTU) | ≥10 µm：粒子/小瓶 | ≥25 µm：粒子/小瓶 | 純度： % | AG HC：% | 新峰 | ||||
| 0 | ≤BY6、≤B7、≤Y6 | 5.8 | 4.3 | 65 | 2 | 95.1 | 4.2 | 相較於參考材料，新峰不＞ 1.0% | |
| 3 | ≤BY6、≤B7、≤Y6 | 5.7 | 4.3 | 32 | 0 | 94.6 | 4.1 | 相較於參考材料，新峰不＞ 1.0% | |
| 6 | ≤BY7、≤B7、≤Y7 | 5.8 | 4 | 13 | 0 | 93.9 | 4.1 | 相較於參考材料，新峰不＞ 1.0% | |
| 9 | ≤BY7、≤B8、≤Y7 | 5.7 | 4.1 | 51 | 1 | 92.7 | 4.2 | 相較於參考材料，新峰不＞ 1.0% | |
| 12 | ≤BY6、≤B6、≤Y6 | 5.7 | 5 | 40 | 3 | 91.7 | 4.1 | 相較於參考材料，新峰不＞ 1.0% | |
| 表12：儲存於25℃下之阿米維單抗藥品之穩定性結果（續） | ||||||
| 月數 | cSDS（非還原） | SE HPLC | 根據A 280之 蛋白質濃度 | |||
| 純度(%) | 新峰(%) | 主要組分(%) | HMWS (%) | LMWS (%) | (mg/mL) | |
| 0 | 98.3 | 相較於參考材料， 新峰不＞ 1.0% | 99.2 | 0.8 | ＜0.1 | 53.5 |
| 3 | 97.4 | 相較於參考材料， 新峰不＞ 1.0% | 98.9 | 0.9 | 0.2 | 52.1 |
| 6 | 96.2 | 相較於參考材料， 新峰不＞ 1.0% | 98.5 | 1.0 | 0.5 | 53.2 |
| 9 | 95.5 | 相較於參考材料， 新峰不＞ 1.0% | 98.3 | 1.0 | 0.7 | 53.1 |
| 12 | 94.5 | 相較於參考材料， 新峰不＞ 1.0% | 98.0 | 1.1 | 0.9 | 53.7 |
| 表12：儲存於25℃下之阿米維單抗藥品之穩定性結果（續） | ||||||
| 月數 | cIEF | EGFR結合 | cMET結合 | 聚山梨醇酯80 | ||
| 主峰(%) | 酸性峰 總和(%) | 鹼性峰 總和(%) | 相對於參考 材料之活性(%) | 相對於參考 材料之活性(%) | (%) | |
| 0 | 76 | 22 | 2 | 108 | 103 | 0.0561 |
| 3 | 64 | 32 | 4 | 93 | 101 | 0.0552 |
| 6 | 56 | 39 | 5 | 82 | 96 | 0.0550 |
| 9 | 52 | 43 | 5 | 86 | 96 | 0.0578 |
| 12 | 46 | 48 | 6 | 79 | 89 | 0.055 |
| 表12：儲存於25℃下之阿米維單抗藥品之穩定性結果（續） | ||||||
| 月數 | 轉譯後修飾-氧化部位 | |||||
| 抗EGFR HC Met 34*/ 抗c-Met n/a | 抗EGFR HC Met 103*/ 抗c-Met n/a | 抗EGFR HC Met 108*/ 抗c-Met n/a | 抗EGFR HC Met 260/ 抗c-Met HC Met 254 | 抗EGFR HC Met 436/ 抗c-Met HC Met 430 | 抗EGFR n/a/ 抗c-Met LC Trp 32*, Trp 35 | |
| (%) | (%) | (%) | (%) | (%) | (%) | |
| 0 | 0.2 | 1.6 | 2.2 | 2.3 | 0.7 | 未轉發結果 |
| 3 | 0.5 | 1.7 | 3.1 | 2.7 | 1.2 | 2.5 |
| 6 | 0.4 | 2.2 | 1.9 | 2.6 | 0.8 | 4.1 |
| 9 | 0.5 | 2.3 | 1.1 | 2.9 | 1.2 | 3.2 |
| 12 | 0.4 | 2.4 | 1.3 | 2.9 | 1.2 | 4.0 |
| 表12：儲存於25℃下之阿米維單抗藥品之穩定性結果（續） | |||
| 月數 | 轉譯後修飾-脫醯胺化部位 | ||
| 抗EGFR HC Asn 333*/ 抗c-Met HC Asn 327 | 抗EGFR HC Asn 392/ 抗c-Met HC Asn 386, Asn 391 | 抗EGFR n/a/ 抗c-Met HC Asn 55*, 59* | |
| (%) | (%) | (%) | |
| 0 | 0.7 | 2.7 | 4.4 |
| 3 | 2.8 | 3.6 | 4.8 |
| 6 | 6.3 | 3.6 | 5.4 |
| 9 | 未測試 | 3.9 | 6.8 |
| 12 | 未測試 | 4.5 | 7.8 |
| 表12：儲存於25℃下之阿米維單抗藥品之穩定性結果（續） | ||
| 月數 | 轉譯後修飾-異構化部位 | |
| 抗EGFR HC Asp 53*, Asp 54*/抗c-Met n/a | 抗EGFR HC Asp 99*/抗c-Met n/a | |
| (%) | (%) | |
| 0 | nr | 1 |
| 3 | 0.7 | 3.6 |
| 6 | 1.3 | 1.8 |
| 9 | 2.7 | 6.1 |
| 12 | 3.1 | 7.4 |
| 表13：儲存於40℃下之阿米維單抗藥品之穩定性結果 | ||||||||||
| 月數 | 溶液之顏色 | pH | 濁度 | 顆粒物質 | cSDS（還原） | |||||
| 微可見 | ||||||||||
| (NTU) | ≥10 µm：粒子/小瓶 | ≥25 µm：粒子/小瓶 | 純度： % | AG HC： % | 新峰 | |||||
| 0 | ≤BY6、≤B7、≤Y6 | 5.8 | 4.3 | 65 | 2 | 95.1 | 4.2 | 相較於參考材料，新峰不＞ 1.0% | ||
| 1 | ≤BY6、≤B6、≤Y6 | 5.8 | 5.2 | 167 | 6 | 92.2 | 4.3 | 相較於參考材料，新峰不＞ 1.0% | ||
| 3 | ≤BY6、≤B6、≤Y6 | 5.7 | 4.9 | 32 | 1 | 88.4 | 4.2 | 相較於參考材料，新峰不＞ 1.0% | ||
| 6 | ≤BY6、≤B6、≤Y6 | 5.7 | 5 | 28 | 1 | 82.7 | 4.4 | 峰2：1.032% PI 12.82 | ||
| 表13：儲存於40℃下之阿米維單抗藥品之穩定性結果（續） | ||||||
| 月數 | cSDS（非還原） | SE HPLC | 根據A 280之 蛋白質濃度 | |||
| 純度(%) | 新峰 | 主要組分(%) | HMWS (%) | LMWS (%) | (mg/mL) | |
| 0 | 98.3 | 相較於參考材料， 新峰不＞ 1.0% | 99.2 | 0.8 | ＜0.1 | 53.5 |
| 1 | 95.5 | 相較於參考材料， 新峰不＞ 1.0% | 98.4 | 1.0 | 0.4 | 52.7 |
| 3 | 90.7 | 相較於參考材料， 新峰不＞ 1.0% | 96.5 | 1.9 | 1.6 | 53.7 |
| 6 | 82.4 | 峰1：1.19% PI 12.89 | 91.5 | 3.9 | 4.6 | 53.3 |
| 表13：儲存於40℃下之阿米維單抗藥品之穩定性結果（續） | ||||||
| 月數 | cIEF | EGFR結合 | cMET結合 | 聚山梨醇酯 80 | ||
| 主峰(%) | 酸性峰 總和(%) | 鹼性峰 總和(%) | 相對於參考 材料之活性(%) | 相對於參考 材料之活性(%) | (%) | |
| 0 | 76 | 22 | ＜3.0 | 108 | 103 | 0.0561 |
| 1 | 46 | 47 | 6 | 99 | 97 | 0.0560 |
| 3 | 23 | 73 | 5 | 63 | 91 | 0.0541 |
| 6 | 6 | 93 | ＜3.0 | 33 | 74 | 0.0543 |
| 表13：儲存於40℃下之阿米維單抗藥品之穩定性結果（續） | ||||||
| 月數 | 轉譯後修飾-氧化部位 | |||||
| 抗EGFR HC Met 34*/ 抗c-Met n/a | 抗EGFR HC Met 103*/ 抗c-Met n/a | 抗EGFR HC Met 108*/ 抗c-Met n/a | 抗EGFR HC Met 260/ 抗c-Met HC Met 254 | 抗EGFR HC Met 436/ 抗c-Met HC Met 430 | 抗EGFR n/a/抗c-Met LC Trp 32*, Trp 35 | |
| (%) | (%) | (%) | (%) | (%) | (%) | |
| 0 | 0.2 | 1.6 | 2.2 | 2.3 | 0.7 | 未轉發結果 |
| 1 | 0.4 | 1.6 | 3.1 | 2.8 | 0.9 | 1.8 |
| 3 | 0.6 | 2.5 | 4.5 | 3.4 | 1.4 | 7.7 |
| 6 | 0.4 | 7 | 5.1 | 4 | 1.4 | 18.8 |
| 表13：儲存於40℃下之阿米維單抗藥品之穩定性結果（續） | |||
| 月數 | 轉譯後修飾-脫醯胺化部位 | ||
| 抗EGFR HC Asn 333*/ 抗c-Met HC Asn 327 | 抗EGFR HC Asn 392/ 抗c-Met HC Asn 386, Asn 391 | 抗EGFR n/a/ 抗c-Met HC Asn 55*, 59* | |
| (%) | (%) | (%) | |
| 0 | 0.7 | 2.7 | 4.4 |
| 1 | 10.8 | 4.3 | 5.8 |
| 3 | 27.9 | 6.2 | 10.2 |
| 6 | 51.5 | 9.5 | 15.9 |
| 表13：儲存於40℃下之阿米維單抗藥品之穩定性結果（續） | ||
| 月數 | 轉譯後修飾-異構化部位 | |
| 抗EGFR HC Asp 53*, Asp 54*/抗c-Met n/a | 抗EGFR HC Asp 99*/ 抗c-Met n/a | |
| (%) | (%) | |
| 0 | nr | 1 |
| 1 | 2.2 | 5.6 |
| 3 | 4.5 | 21 |
| 6 | 6.5 | 18.3 |
所屬技術領域中具有通常知識者將瞭解到可以對本發明的較佳實施例做出許多變化及修改且可在不背離本發明精神的情況下做出該等變化及修改。因此，文後所附申請專利範圍是要含括所有此類相等變異，其係屬於本發明的真實精神及範疇。
本文件中所引用或描述之各個專利、專利申請案、及公開案之揭露內容其全文皆以引用方式併入本文中。
表14：序列
| SEQ ID NO: | 序列 |
| SEQ ID NO: 1 HCDR1，EGFR結合臂（Kabat方法） | TYGMH |
| SEQ ID NO: 2 HCDR2，EGFR結合臂（Kabat方法） | VIWDDGSYKYYGDSVKG |
| SEQ ID NO: 3 HCDR3，EGFR結合臂（Kabat方法） | DGITMVRGVMKDYFDY |
| SEQ ID NO: 4 LCDR1，EGFR結合臂（Kabat方法） | RASQDISSALV |
| SEQ ID NO: 5 LCDR2，EGFR結合臂（Kabat方法） | DASSLES |
| SEQ ID NO: 6 LCDR3，EGFR結合臂（Kabat方法） | QQFNSYPLT |
| SEQ ID NO: 7 HCDR1，c-Met結合臂（Kabat方法） | SYGIS |
| SEQ ID NO: 8 HCDR2，c-Met結合臂（Kabat方法） | WISAYNGYTNYAQKLQG |
| SEQ ID NO: 9 HCDR3，c-Met結合臂（Kabat方法） | DLRGTNYFDY |
| SEQ ID NO: 10 LCDR1，c-Met結合臂（Kabat方法） | RASQGISNWLA |
| SEQ ID NO: 11 LCDR2，c-Met結合臂（Kabat方法） | AASSLLS |
| SEQ ID NO: 12 LCDR3，c-Met結合臂（Kabat方法） | QQANSFPIT |
| SEQ ID NO: 13 VH1，EGFR結合臂 | QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSTYGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWDDGSYKYYGDSVKGRFTISRDNSKNTLYL QMNSLRAEDTAVYYCARDGITMVRGVMKDYFDYWGQGTLVTVSS |
| SEQ ID NO: 14 VL1，EGFR結合臂 | AIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDISSALVWYQQKPGKAPKLLIYDASSLESGVPSRFSGSESGTDFTLTISSLQPEDFATYY CQQFNSYPLTFGGGTKVEIK |
| SEQ ID NO: 15 VH2，c-Met結合臂 | QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCETSGYTFTSYGISWVRQAPGHGLEWMGWISAYNGYTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYM ELRSLRSDDTAVYYCARDLRGTNYFDYWGQGTLVTVSS |
| SEQ ID NO: 16 VL2，c-Met結合臂 | DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGISNWLAWFQHKPGKAPKLLIYAASSLLSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYY CQQANSFPITFGQGTRLEIK |
| SEQ ID NO: 17 HC1 | QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSTYGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWDDGSYKYYGDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDGITMVRGVMKDYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFLLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK |
| SEQ ID NO: 18 LC1 | AIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDISSALVWYQQKPGKAPKLLIYDASSLESGVPSRFSGSESGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQFNSYPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC |
| SEQ ID NO: 19 HC2 | QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCETSGYTFTSYGISWVRQAPGHGLEWMGWISAYNGYTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDLRGTNYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK |
| SEQ ID NO: 20 LC2 | DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGISNWLAWFQHKPGKAPKLLIYAASSLLSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQANSFPITFGQGTRLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC |
無
Claims (31)
- 一種穩定水性醫藥組成物，其包含： a) 約44 mg/mL至約56 mg/mL的雙特異性表皮生長因子受體(EGFR)/肝細胞生長因子受體(c-Met)抗體，該雙特異性抗體包含： 第一重鏈(HC1)，其包含HC1可變區1 (VH1)； 第一輕鏈(LC1)，其包含輕鏈可變區1 (VL1)； 第二重鏈(HC2)，其包含HC2可變區2 (VH2)；及 第二輕鏈(LC2)，其包含輕鏈可變區2 (VL2)， 其中該VH1包含分別為SEQ ID NO: 1、2、及3之重鏈互補決定區1 (HCDR1)、HCDR2、及HCDR3胺基酸序列；該VL1包含分別為SEQ ID NO: 4、5、及6之輕鏈互補決定區1 (LCDR1)、LCDR2、及LCDR3胺基酸序列，該VH2包含分別為SEQ ID NO: 7、8、及9之HCDR1、HCDR2、及HCDR3胺基酸序列；且該VL2包含分別為SEQ ID NO: 10、11、及12之LCDR1、LCDR2、及LCDR3胺基酸序列； b) 約8 mM至約12 mM的組胺酸及/或醫藥上可接受之組胺酸鹽、 c) 約6.8% (w/v)至約10.2% (w/v)的蔗糖、 d) 約0.036% (w/v)至約0.084% (w/v)的聚山梨醇酯80 (PS80)、 e) 約0.8 mg/mL至約1.2 mg/mL的甲硫胺酸、 f) 約16 µg/mL至約24 µg/mL的乙二胺四乙酸(EDTA)；及 g) 約5.2至約6.2之pH。
- 如請求項1所述之穩定水性醫藥組成物，其中該雙特異性EGFR-cMet抗體包含包括SEQ ID NO:13之胺基酸序列的HC1可變區及包括SEQ ID NO:14之胺基酸序列的LC1可變區。
- 如請求項1或請求項2所述之穩定水性醫藥組成物，其中該雙特異性EGFR-cMet抗體包含包括SEQ ID NO:15之胺基酸序列的HC2可變區及包括SEQ ID NO:16之胺基酸序列的LC2可變區。
- 如請求項1至3中任一項所述之穩定水性醫藥組成物，其中該HC1包含SEQ ID NO:17之胺基酸序列，且該LC1包含SEQ ID NO:18之胺基酸序列。
- 如請求項1至4中任一項所述之穩定水性醫藥組成物，其中該HC2包含SEQ ID NO:19之胺基酸序列，且該LC2包含SEQ ID NO:20之胺基酸序列。
- 如請求項1至5中任一項所述之穩定水性醫藥組成物，其中該雙特異性EGFR-cMet抗體係阿米維單抗(amivantamab)。
- 如請求項1至6中任一項所述之穩定水性醫藥組成物，其中該雙特異性EGFR-cMet抗體具有約50 mg/mL之濃度。
- 如請求項1至7中任一項所述之穩定水性醫藥組成物，其中該組胺酸及/或醫藥上可接受之組胺酸鹽具有約10 mM之濃度。
- 如請求項1至8中任一項所述之穩定水性醫藥組成物，其中該組胺酸及/或醫藥上可接受之組胺酸鹽包含L-組胺酸及L-組胺酸鹽酸鹽單水合物。
- 如請求項1至9中任一項所述之穩定水性醫藥組成物，其包含約8.5% (w/v)蔗糖。
- 如請求項1至10中任一項所述之穩定水性醫藥組成物，其包含約0.06% (w/v) PS80。
- 如請求項1至11中任一項所述之穩定水性醫藥組成物，其中該甲硫胺酸具有約1 mg/mL之濃度。
- 如請求項1至12中任一項所述之穩定水性醫藥組成物，其中該EDTA具有約20 µg/mL之濃度。
- 如請求項1至13中任一項所述之穩定水性醫藥組成物，其中該pH係約5.7。
- 如請求項1至14中任一項所述之穩定水性醫藥組成物，其包含50 mg/mL的該雙特異性EGFR-cMet抗體、10 mM組胺酸及/或醫藥上可接受之組胺酸鹽、8.5% (w/v)蔗糖、0.06% (w/v) PS80、1 mg/mL甲硫胺酸、及20 µg/mL EDTA。
- 如請求項1至15中任一項所述之穩定水性醫藥組成物，其中該穩定水性醫藥組成物在約2至8℃之溫度下至少兩年係穩定的。
- 如請求項1至16中任一項所述之穩定水性醫藥組成物，其中穩定性係基於以下界定：溶液之顏色、pH、濁度、微可見(subvisible)粒子之數目、無醣基化重鏈(aglycosylated heavy chain, AGHC)之百分比、一或多個新峰之百分比、高分子量物種(HMWS)之百分比、低分子量物種(LMWS)之百分比、酸性峰總和之百分比、鹼性峰總和之百分比、蛋白質濃度、EGFR結合活性之百分比、cMet結合活性之百分比、PS80之百分比、或其任何組合。
- 如請求項1至17中任一項所述之穩定水性醫藥組成物，其中該組成物之總體積係在約5 mL至約10 mL之範圍內。
- 一種如請求項1至18中任一項所述之醫藥組成物用於製備治療癌症之藥物之用途。
- 如請求項19之用途，其中該藥物係用於靜脈內投予。
- 一種用於製備靶向EGFR及cMet之雙特異性抗體之穩定水性醫藥組成物的方法，該靶向EGFR及cMet之該雙特異性抗體包含：第一重鏈(HC1)，其包含HC1可變區1 (VH1)；第一輕鏈(LC1)，其包含輕鏈可變區1 (VL1)；第二重鏈(HC2)，其包含HC2可變區2 (VH2)；及第二輕鏈(LC2)，其包含輕鏈可變區2 (VL2)；其中該VH1包含分別包含SEQ ID NO: 1、2、及3之胺基酸序列的重鏈互補決定區1 (HCDR1)、HCDR2、及HCDR3；該VL1包含分別包含SEQ ID NO: 4、5、及6之胺基酸序列的輕鏈互補決定區1 (LCDR1)、LCDR2、及LCDR3；該VH2包含分別為SEQ ID NO: 7、8、及9之HCDR1、HCDR2、及HCDR3胺基酸序列；且該VL2包含分別為SEQ ID NO: 10、11、及12之LCDR1、LCDR2、及LCDR3胺基酸序列；該方法包含： 將包含約50 mg/mL的該雙特異性抗體、約10 mM組胺酸及/或醫藥上可接受之組胺酸鹽、約8.5%蔗糖、及約1 mg/mL L-甲硫胺酸之組成物與聚山梨醇酯80組合至約0.06% (w/v)之最終濃度並與EDTA組合至約20 µg/mL之最終濃度，其中該穩定水性醫藥組成物具有約pH 5.7。
- 如請求項21所述之方法，其中該雙特異性EGFR-cMet抗體包含包括SEQ ID NO:13之胺基酸序列的HC1可變區及包括SEQ ID NO:14之胺基酸序列的LC1可變區。
- 如請求項21至22中任一項所述之方法，其中該雙特異性EGFR-cMet抗體包含包括SEQ ID NO:15之胺基酸序列的HC2可變區及包括SEQ ID NO:16之胺基酸序列的LC2可變區。
- 如請求項21至23中任一項所述之方法，其中該抗體包含包括SEQ ID NO:17之胺基酸序列的重鏈1 (HC1)及包括SEQ ID NO:18之胺基酸序列的輕鏈1 (LC1)。
- 如請求項21至24中任一項所述之方法，其中該抗體包含包括SEQ ID NO:19之胺基酸序列的HC2及包括SEQ ID NO:20之胺基酸序列的LC2。
- 如請求項21至25中任一項所述之方法，其中該抗體係阿米維單抗。
- 一種套組，其包含如請求項1至18中任一項所述之穩定水性醫藥組成物及其使用說明。
- 一種包含容納如請求項1至18中任一項所述之穩定水性醫藥組成物的容器之製品。
- 如請求項28所述之製品，其中該容器係具有可被注射器刺穿之塞子的小瓶。
- 如請求項1至18中任一項所述之醫藥組成物，其用於治療癌症。
- 如請求項1至18中任一項所述之醫藥組成物，其用於製備藥物。
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