TW202216136A - 預防及治療病毒感染之化合物及方法 - Google Patents

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Abstract

本發明涉及抗病毒化合物。本發明包括透過抑制一病毒內的半胱胺酸蛋白酶及/或一細胞內的牛磺膽酸鈉協同轉運多胜肽，具體而言是SARS-COV-2以及B型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）來預防及/或治療病毒感染之方法。還提供包含該用於預防及/或治療病毒感染之組合物/醫藥組合物，包括任何該化合物、醫藥上可接受之鹽類，或其混合物，以及該化合物之用途。

Description

預防及治療病毒感染之化合物及方法
本發明申請主張於2020年8月28日提出申請之美國臨時申請案第63/071,564號之優先權。
本發明提供一些抗病毒化合物以及預防及治療病毒感染之方法及組合物/醫藥組合物，具體而言是預防及治療由冠狀病毒或肝炎病毒所造成之疾病。
由外殼蛋白內的遺傳物質構成的病毒會侵入活的、正常的細胞，並利用這些細胞繁殖而產生與其自身相似的其他病毒，這些病毒可能會導致常見的傳染病，例如流感及疣，或可能導致嚴重的疾病，例如天花及後天性免疫缺乏症候群（acquired immune deficiency syndrome，AIDS）。
例如，有5種不同類型的肝炎病毒，即A、B、C、D及E，以及X與G。A型及E型肝炎病毒是由食用受病毒污染的水及食物所引起的。然而，B型、C型及D型肝炎病毒是由腸胃外引起的，與受感染的體液相鄰。此外，C型肝炎與D型肝炎病毒感染也在增加，需要有效的治療。
B型肝炎病毒（Hepatitis B virus，HBV）在人類中引起急性及慢性病毒性肝炎。HBV感染通常與嚴重的肝臟疾病有關，包括肝硬化及肝細胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC）[1]。全球HBV感染率非常高。 儘管已有可用的有效疫苗長達25 年以上，但仍有約3.5億的人口被慢性感染。相較於非帶原者，HBV帶原者罹患HCC的相對風險增加約100倍[2]。
由於副作用及抗藥性的出現，越來越多的HBV 感染患者不能使用目前核准的抗HBV藥物，包括干擾素α或抑制病毒反轉錄酶的核苷（酸）類似物 [3]。
因此，需要尋找有效、安全且可負擔的抗HBV藥物，以干擾病毒生命週期中的其他步驟，以改善治療結果。
HBV為一種小DNA病毒，由保護3.2 kb病毒基因組的核鞘所組成 [4]。HBV核鞘被包膜包圍，包膜由B型肝炎表面抗原（hepatitis B surface antigens，HBsAgs）所組成。HBsAgs在一個開放閱讀框中編碼，具有三個同相起始密碼子。MHBsAg自S結構域具有一個55個胺基酸（amino acid，aa）的延伸部分，稱為前S2結構域。LHBsAgs還有一個108-aa的區域，從前S2結構域延伸到前S1結構域。最近，牛磺膽酸鈉協同轉運多胜肽（sodium taurocholate cotransporting polypeptide，NTCP）被鑑定為HBV受體 [5, 6]。長期以來，一直有建議將HBV進入未感染的肝細胞作為抗病毒干預的潛在目標 [7]。另一方面，HepG2.2.15細胞包含HBV全基因組，廣泛用於研究HBV複製、組裝及分泌。
長期以來，HBV在感染期間對肝細胞的附著一直被認為是抗病毒干預的潛在目標。人們認為與HBV顆粒特異性結合的分子可能會干擾病毒附著，進而減少或阻止隨後的感染 [8]。
由於缺乏支持完整複製週期的細胞培養系統，對人類HBV早期感染事件的了解有限。迄今為止，已顯示兩種細胞類型對HBV感染敏感。一種是人類肝癌細胞株HepaRG，在二甲基亞碸（dimethyl sulfoxide，DMSO）誘導分化後變得可感染[7, 9]，而另一種細胞類型，正常人類原代肝細胞，很容易被HBV感染[10, 11]，但體外細胞的有限壽命以及缺乏一致來源嚴重限制其進一步應用。
此外，單純疱疹病毒（Herpes simplex virus，HSV）還由包裹在蛋白質包被中的DNA基因組所組成。單純疱疹病毒第1型及第2型（HSV-1以及HSV-2）為人類疾病的病原體，包括齦口炎、咽炎、唇疱疹、腦炎、眼睛及生殖器感染 [12]。疱疹病毒感染通常涉及輕度或無症狀的初步階段，隨後病毒以非複製潛伏狀態或臨床上檢測不到的複製程度持續存在 [13]。HSV-1的原發感染最常涉及口腔及/或喉嚨，導致齦口炎及咽炎。從原發性口咽部感染中恢復後，個體終生在三叉神經節中保留HSV DNA，並可能遭受唇疱疹的反覆發作。研究還揭示疱疹病毒家族的一些成員與牙周病之間可能存在關聯 [14]。人類疱疹病毒可能發生在牙周炎病變中，發病率相對較高[15]。就臨床附著喪失而言，HSV與牙周病的嚴重程度有關 [16]。病毒性牙齦感染可能會損害宿主防禦機制，進而創造使口腔致病菌過度生長的條件[15, 17]。
HSV通常攻擊黏膜、皮膚、眼睛及神經系統，並且能夠感染多種細胞 [18]。人類牙齦黏膜器官培養可被HSV-1與HSV-2感染[19]。此外，體外培養的人類牙齦角化細胞與牙齦纖維母細胞支持HSV的繁殖 [20, 21]。HSV-1編碼病毒胸苷激酶，其間接將阿昔洛韋（acyclovir）代謝為三磷酸阿昔洛韋，這是HSV DNA聚合酶的鏈終止受質，並停止病毒DNA複製 [22]。然而，據報導，在5-30%的病例中，HSV對阿昔洛韋產生抗藥性[23]。抗阿昔洛韋的HSV-1病毒株經常發生在免疫功能低下的患者體內，這可能導致嚴重的併發症[24]。由於缺乏疫苗，局部使用殺微生物劑可能是預防HSV傳播的重要策略。
根據世界衛生組織（World Health Organization，WHO）[25]，2002年11月1日至2003年6月18日爆發的嚴重急性呼吸道症候群（Severe acute respiratory syndrome，SARS）導致超過29個國家801人死亡以及全球8465個可能的病例。SARS為一種包含正向單股RNA的包膜β冠狀病毒，其基因組大小約為30 kb，其中開放閱讀框（open reading frame，ORF）1a及1b分別編碼兩種多蛋白（polyproteins，pps），pp1a與pp1ab [26, 27]。為了完成其生命週期，成功的複製及蛋白水解處理是必要的 [28]。事實上，在所有冠狀病毒中都發現這些病毒編碼的蛋白水解蛋白的共同功能，特別是類乳頭蛋白蛋白酶（papline-like protease，PLpro）以及胰凝乳蛋白酶樣蛋白酶（chymotrypsin-like protease，3CLpro）[28]。在pp1a與pp1ab的蛋白水解過程中，PLpro與3CLpro分別切割前三個位點以及其餘的11個位置，產生共16個非結構蛋白（nonstructural proteins，nsp1–16）[26, 27]。因此，抑制3CLpro被視為抗SARS藥物發現及開發中的分子方法 [25, 29]。
SARS-COV-2為一種新型冠狀病毒，自發現在中國武漢的重症肺炎患者（命名為COVID-19）以來，傳播迅速，已有25個國家報導出現該病毒，實驗室確診病例近72000例，截至2020年2月17日，全球死亡人數達1775例[30]。令人震驚的是，目前還沒有任何藥物或疫苗被核准用於治療人類冠狀病毒 [31]。關於目前SARS-CoV-2的爆發以及SARS及MERS（另一種β冠狀病毒）的治療經驗，許多研究廣泛檢視使用現有用於治療HIV、B型肝炎病毒、C型肝炎病毒以及流感感染的抗病毒藥物用於治療或干預SARS-COV-2的可能性[31, 32]。與此同時，SARS-CoV-2已被確定特徵為一種包膜、正向、單股RNA β冠狀病毒，類似於SARS及MERS [31]。與冠狀病毒的特徵一致，SARS-CoV-2基因組編碼結構蛋白（例如棘糖蛋白）、非結構蛋白（例如，3CLpro、PLpro、解旋酶、RNA依賴性RNA聚合酶）以及輔助蛋白。關於SARS-COV-2、SARS及MERS的可用基因組序列，發現蛋白水解位點以及蛋白水解酶高度保守，因此重新利用SARS及MERS蛋白酶抑制劑治療 SARS-COV-2是值得考慮的[33]。由於3CLpro在SARS 中具有關鍵作用，因此透過以SARS-COV-2的3CLpro而非其PLpro為目標來阻止其生命週期以實現蛋白酶抑制是合理的[25, 29, 33]。
目前，二硫龍（disulfiram）是一種已獲核准的治療酒精依賴的藥物，據報導可抑制細胞培養物中MERS及SARS的PLpro，但尚未進行臨床評估 [31]。此外，針對SARS-CoV-2患者的HIV蛋白酶抑制劑（洛匹那韋（lopinavir）與利托那韋（ritonavir））的臨床試驗也已經開始，但尚未確定它們能否有效抑制SARS-CoV-2，因為HIV以及β冠狀病毒蛋白酶分別屬於天門冬胺酸蛋白酶家族以及半胱胺酸蛋白酶家族 [31, 34]。另一方面，瑞德西韋（remdesivir，RDV）是一種被核准用於HIV治療的RNA依賴性RNA聚合酶抑制劑的核苷酸類似物，目前正在SARS-CoV-2患者中進行臨床試驗，預計完成日期為2020年4月； galidesivir是治療HCV早期臨床研究中RNA依賴性RNA聚合酶抑制劑的另一種核苷酸類似物，在臨床前研究中顯示出針對嚴重急性呼吸道症候群（SARS）、中東呼吸道症候群（MERS）的廣效抗病毒活性[34, 35]。然而，核苷類似物可能會被認為會引起我們不知道的毒性[36]。
目前還沒有找到抗病毒藥物來預防或治療人類冠狀病毒感染。迫切需要探索並開發安全的抗冠狀病毒療法，特別是針對SARS-COV-2。
仍需開發一種新穎之抗病毒療法或藥物。
本發明意外地發現，一些三萜類化合物能有效抑制病毒感染，尤其是對B型肝炎病毒（Hepatitis B virus，HBV）感染及/或單純疱疹病毒（Herpes simplex virus，HSV）及/或冠狀病毒感染，特別是SARS-COV-2病毒感染。
於一目的中，本發明提供一種預防及/或治療一病毒感染之方法，包括對一有此需要的個體施用一化合物或其一醫藥上可接受之鹽類，其中該化合物選自由下列所組成之群組： 具有式I結構之烏戈寧J及其衍生物：
Figure 02_image001
I， 具有式II結構之烏戈寧N及其衍生物：
Figure 02_image002
II， 具有式III結構之6-（3,4-二羥基苯基）-4-羥基六-3,5-二烯-2-酮及其衍生物：
Figure 02_image003
III， 具有IV結構之2-[（E）-2-（3,4-二羥基苯基）乙烯基]-6-羥基吡喃-4-酮及其衍生物：
Figure 02_image005
IV， 具有式V結構之去氫齒孔酸（dehydroeburicoic acid）及其衍生物：
Figure 02_image007
V， 具有式VI結構之3-O-甲基山奈酚及其衍生物：
Figure 02_image009
VI， 具有式VII結構之山奈酚-3-O-（3, 4-二乙醯-α-L-吡喃鼠李糖苷）及其衍生物：
Figure 02_image011
VII， 具有式VIII結構之山奈酚-3-O-（2, 4-二乙醯-α-L-吡喃鼠李糖苷）及其衍生物：
Figure 02_image013
VIII， 具有式IX結構之去氫硫色多孔菌酸（dehydrosulphurenic acid）及其衍生物：
Figure 02_image015
IX， 具有式X結構之硫色多孔菌酸（sulphurenic acid）及其衍生物：
Figure 02_image017
X， 具有式XI結構之變孔㶷孔菌酸D（versisponic acid D）及其衍生物：
Figure 02_image019
XI， 具有式XII結構之反式-對-薄荷-6-烯-2,8-二醇及其衍生物：
Figure 02_image021
XII，以及 具有式XIII結構之樟芝酸K（antcin K）及其衍生物：
Figure 02_image023
XIII。
於一目的中，本發明提供一種預防及/或治療一病毒感染之方法，包括對一有此需要的個體施用一化合物或其一醫藥上可接受之鹽類，其中該化合物為選自由下列所組成之群組的化合物之組合： 具有式I結構之烏戈寧J及其衍生物：
Figure 02_image001
I， 具有式II結構之烏戈寧N及其衍生物：
Figure 02_image002
II， 具有式III結構之6-（3,4-二羥基苯基）-4-羥基六-3,5-二烯-2-酮及其衍生物：
Figure 02_image025
III， 具有IV結構之2-[（E）-2-（3,4-二羥基苯基）乙烯基]-6-羥基吡喃-4-酮及其衍生物：
Figure 02_image005
IV， 具有式V結構之去氫齒孔酸及其衍生物：
Figure 02_image007
V， 具有式VI結構之3-O-甲基山奈酚及其衍生物：
Figure 02_image009
VI， 具有式VII結構之山奈酚-3-O-（3, 4-二乙醯-α-L-吡喃鼠李糖苷）及其衍生物：
Figure 02_image011
VII， 具有式VIII結構之山奈酚-3-O-（2, 4-二乙醯-α-L-吡喃鼠李糖苷）及其衍生物：
Figure 02_image013
VIII， 具有式IX結構之魚針草內酯（ovatodiolide）及其衍生物：
Figure 02_image032
IX， 具有式X結構之去氫硫色多孔菌酸及其衍生物：
Figure 02_image015
X， 具有式XI結構之硫色多孔菌酸及其衍生物：
Figure 02_image034
XI， 具有式XII結構之變孔㶷孔菌酸D（versisponic acid D）及其衍生物：
Figure 02_image019
XII， 具有式 XIII 結構之反式-對-薄荷-6-烯-2,8-二醇及其衍生物：
Figure 02_image021
XIII，以及 具有式XIV結構之樟芝酸K及其衍生物：
Figure 02_image023
XIV。
於本發明之某些特定實施例中，該化合物為選自由下列所組成之群組之一：烏戈寧J、烏戈寧N、6-（3,4-二羥基苯基）-4-羥基六-3,5-二烯-2-酮、2-[（E）-2-（3,4-二羥基苯基）乙烯基]-6-羥基吡喃-4-酮、去氫齒孔酸、3-O-甲基山奈酚、山奈酚-3-O-（3, 4-二乙醯-α-L-吡喃鼠李糖苷）、山奈酚-3-O-（2, 4-二乙醯-α-L-吡喃鼠李糖苷）、去氫硫色多孔菌酸、硫色多孔菌酸、變孔㶷孔菌酸D、反式-對-薄荷-6-烯-2,8-二醇，以及樟芝酸K。
於本發明之某些特定實施例中，該化合物為選自由下列所組成之群組的化合物之組合：烏戈寧 J、烏戈寧 N、6-（3,4-二羥基苯基）-4-羥基六-3,5-二烯-2-酮、2-[（E）-2-（3,4-二羥基苯基）乙烯基]-6-羥基吡喃-4-酮、去氫齒孔酸、3-O-甲基山奈酚、山奈酚-3-O-（3, 4-二乙醯-α-L-吡喃鼠李糖苷）、山奈酚-3-O-（2, 4-二乙醯-α-L-吡喃鼠李糖苷）、魚針草內酯、去氫硫色多孔菌酸、硫色多孔菌酸、變孔㶷孔菌酸D、反式-對-薄荷-6-烯-2,8-二醇，以及樟芝酸K。
於另一方面，本發明提供用於預防及/或治療冠狀病毒感染，特別是SARS-COV-2感染的組合物/醫藥組合物，其包含一治療有效量之本文所公開之任何化合物或其醫藥上可接受之鹽類，或其混合物，與一醫藥上可接受之載體的組合。
於另一方面，本發明提供一種用於預防及/或治療一肝炎病毒感染，特別是HBV感染的組合物/醫藥組合物，其包含一治療有效量之本文所公開之任何化合物或其醫藥上可接受之鹽類，或其混合物，與一醫藥上可接受之載體的組合。
可選擇地，根據本發明之組合物/醫藥組合物可包含至少一種額外的抗病毒治療劑。
於又一方面，本發明提供一種本文所公開之任何化合物或其醫藥上可接受之鹽類，或其混合物在製備用於預防及/或治療一冠狀病毒感染，特別是SARS-COV-2感染的藥物中之用途。
於又一方面，本發明提供一種本文所公開之任何化合物或其醫藥上可接受之鹽類，或其混合物在製備用於預防及/或治療一肝炎病毒感染，特別是HBV感染的藥物中之用途。
應當理解的是，以上的一般性描述以及以下的詳細描述僅為示例性及解釋性的，而非對本發明之限制。
以下結合實施例對本發明之上述內容作進一步說明。但是，不應理解為本發明之內容僅限於以下具體實施例，凡基於本發明上述內容之發明，都屬於本發明之保護範圍。
除非另有定義，本文使用之所有技術及科學術語與本發明所屬領域的技術人員通常理解的含義相同。
如本文所用，單數形式「一」、「一個」以及「該」包括複數所指對象，除非上下文另有明確規定。因此，例如，提及「一樣品」則包括本領域技術人員已知的多個這樣的樣品及其等價物。
於本發明中，為了評估待測藥物對高生產量蛋白水解加工抑制的影響，如同先前研究中所使用的，採用標記螢光共振能量轉移（fluorescence resonance energy transfer，FRET）對的合成胜肽，其中在FRET標記的胜肽切割後立即釋放淬滅的螢光團，產生可即時監測的螢光信號（Chen等人，2005年；Jean 等人，1995年；Jo 等人，2020年）。本發明證實，本文所公開之任何化合物或其混合物均能有效抑制半胱胺酸蛋白酶，特別是SARS-CoV-2的3CLpro。
本發明提供一種預防及/或治療一病毒感染之方法，包括對一有此需要的個體施用一化合物或其醫藥上可接受之鹽類，或其混合物，其中該化合物選自由下列所組成之群組之一： 具有式I結構之烏戈寧J及其衍生物：
Figure 02_image001
I， 具有式II結構之烏戈寧N及其衍生物：
Figure 02_image002
II， 具有式III結構之6-（3,4-二羥基苯基）-4-羥基六-3,5-二烯-2-酮及其衍生物：
Figure 02_image025
III， 具有IV結構之2-[（E）-2-（3,4-二羥基苯基）乙烯基]-6-羥基吡喃-4-酮及其衍生物：
Figure 02_image005
IV， 具有式V結構之去氫齒孔酸及其衍生物：
Figure 02_image007
V， 具有式VI結構之3-O-甲基山奈酚及其衍生物：
Figure 02_image009
VI， 具有式VII結構之山奈酚-3-O-（3, 4-二乙醯-α-L-吡喃鼠李糖苷）及其衍生物：
Figure 02_image011
VII， 具有式VIII結構之山奈酚-3-O-（2, 4-二乙醯-α-L-吡喃鼠李糖苷）及其衍生物：
Figure 02_image013
VIII， 具有式IX結構之去氫硫色多孔菌酸及其衍生物：
Figure 02_image015
IX， 具有式X結構之硫色多孔菌酸及其衍生物：
Figure 02_image034
X， 具有式XI結構之變孔㶷孔菌酸D及其衍生物：
Figure 02_image019
XI， 具有式XII結構之反式-對-薄荷-6-烯-2,8-二醇及其衍生物：
Figure 02_image021
XII，以及 具有式XIII結構之樟芝酸K及其衍生物：
Figure 02_image023
XIII。
本發明提供一種預防及/或治療一病毒感染之方法，包括對一有此需要的個體施用一化合物或其醫藥上可接受之鹽類，或其混合物，其中該化合物為選自由下列所組成之群組的化合物之組合： 具有式I結構之烏戈寧J及其衍生物：
Figure 02_image001
I， 具有式II結構之烏戈寧N及其衍生物：
Figure 02_image002
II， 具有式III結構之6-（3,4-二羥基苯基）-4-羥基六-3,5-二烯-2-酮及其衍生物：
Figure 02_image048
III， 具有IV結構之2-[（E）-2-（3,4-二羥基苯基）乙烯基]-6-羥基吡喃-4-酮及其衍生物：
Figure 02_image005
IV， 具有式V結構之去氫齒孔酸及其衍生物：
Figure 02_image007
V， 具有式VI結構之3-O-甲基山奈酚及其衍生物：
Figure 02_image009
VI， 具有式VII結構之山奈酚-3-O-（3, 4-二乙醯-α-L-吡喃鼠李糖苷）及其衍生物：
Figure 02_image011
VII， 具有式VIII結構之山奈酚-3-O-（2, 4-二乙醯-α-L-吡喃鼠李糖苷）及其衍生物：
Figure 02_image013
VIII， 具有式IX結構之魚針草內酯及其衍生物：
Figure 02_image032
IX， 具有式X結構之去氫硫色多孔菌酸及其衍生物：
Figure 02_image015
X， 具有式XI結構之硫色多孔菌酸及其衍生物：
Figure 02_image034
XI， 具有式XII結構之變孔㶷孔菌酸D及其衍生物：
Figure 02_image019
XII， 具有式XIII結構之反式-對-薄荷-6-烯-2,8-二醇及其衍生物：
Figure 02_image021
XIII，以及 具有式XIV結構之樟芝酸K及其衍生物：
Figure 02_image023
XIV。
本文所用之「病毒」乙詞係指任何病毒，其為一種僅在生物體的活細胞內複製的小型傳染因子，其可感染所有類型的生命形式，從動植物到微生物，包括細菌及古細菌。示例性病毒包括，但不限於，肝炎病毒、流感病毒、單純疱疹病毒（HSV）、腸病毒、輪狀病毒、登革熱病毒、痘病毒、人類免疫缺陷病毒、腺病毒、麻疹病毒、反轉錄病毒 ，冠狀病毒或諾羅病毒。
如本文所用，「肝炎病毒」乙詞係指引起肝炎的病毒，特別是B型肝炎病毒（HBV）、C型肝炎病毒（HCV）、D型肝炎病毒（HDV）。
本發明還提供一種用於預防及/或治療冠狀病毒感染，特別是SARS-COV-2感染之組合物/醫藥組合物，其包含一治療有效量之本文所公開之化合物或其混合物以及一醫藥上可接受之載體。
本發明還提供一種用於預防及/或治療肝炎病毒感染，特別是HBV感染之組合物/醫藥組合物，其包含一治療有效量之本文所公開之化合物或其混合物以及一醫藥上可接受之載體。
如本文所用，「冠狀病毒」乙詞係指正冠狀病毒亞科、冠狀病毒科、尼多病毒目，以及核糖病毒域中的冠狀病毒，其為具有正向單股RNA基因組以及螺旋對稱核鞘的包膜病毒。其具有從表面突出的特徵性的棒狀棘，在電子顯微照片中產生的影像讓人想起日冕，故其名稱來源於此。冠狀病毒會導致哺乳動物以及鳥類，包括人類的疾病。在人類中，冠狀病毒會引起呼吸道感染，包括普通感冒、嚴重急性呼吸道症候群（SARS）、中東呼吸道症候群（MERS），以及SARS-COV-2。
如本文所用，「半胱胺酸蛋白酶」乙詞係指硫醇蛋白酶，為降解蛋白質的酵素，具有共同的催化機制，涉及催化三聯體或二聯體中的親核半胱胺酸硫醇。病毒中半胱胺酸蛋白酶的一個實例為SARS-CoV-2中的3CLpro。
如本文所用，「治療（treat）」、「治療（treating）」或「治療（treatment）」等詞係指將包含一種或多種活性劑的組合物施用或給予一患有疾病、疾病症狀或病症或疾病進展的個體，目的為治療、治癒、緩解、減緩、改變、補救、改善、增進或影響疾病、疾病的症狀或病症、疾病引起的殘疾或疾病的進展。
如本文所用，「預防（prevent）」、「預防（prevention）」或「預防（preventing）」等詞係指預防病毒感染的復發、發作，或發展，預防病毒感染的一種或多種症狀，或與一個體感染冠狀病毒相關、由其增強或增強的呼吸病症。
本文使用之「個體」乙詞包括人類或非人類動物，例如伴侶動物（例如狗、貓等）、農場動物（例如牛、羊、豬、馬等）或實驗動物（例如大鼠、小鼠、天竺鼠等）。
如本文所用，「治療有效量」乙詞係指相較於未接受該量的相應個體，達到治療、治愈、預防，或改善疾病、障礙或副作用，或降低疾病或障礙進展速度的效果之藥劑的量。該術語在其範圍內還包括有效增強正常生理功能的量。
為了治療之用途，將該治療有效量的該化合物配製為用於給藥的醫藥組合物。因此，本發明進一步提供一種醫藥組合物，包含一治療有效量之任何本文所公開之這些化合物或其混合物，以及一種或多種醫藥上可接受的載體。
為了遞送及吸收的目的，一治療有效量之根據本發明之活性成分可與一醫藥上可接受之載體一起配製成合適形式的醫藥組合物。根據給藥途徑，本發明之醫藥組合物較佳包含該活性成分總重量的0.1重量%至100重量%。
本文使用之「醫藥上可接受的載體」乙詞係指可接受的載體、稀釋劑或賦形劑，在與製劑的其他成分相容且對個體無害的意義上與該醫藥組合物一起施用。根據藥物製劑的要求，本領域中通常已知或使用的任何載體、稀釋劑或賦形劑均可用於本發明。該載體可為該活性成分之稀釋劑、載劑、賦形劑，或基質。一些合適的賦形劑之實例包括乳糖、右旋糖、蔗糖、山梨糖、甘露糖、澱粉、阿拉伯膠、磷酸鈣、藻酸鹽、黃蓍膠、明膠、矽酸鈣、微晶纖維素、聚乙烯吡咯烷酮、纖維素、無菌水、糖漿，以及甲基纖維素。該組合物還可包含潤滑劑，例如滑石、硬脂酸鎂，以及礦物油；潤濕劑；乳化劑以及懸浮劑；防腐劑，例如羥基苯甲酸甲酯及丙酯；甜味劑；以及調味劑。
本發明之組合物可在施用於患者後提供該活性成分之快速、持續或延遲釋放的效果。根據本發明，該醫藥組合物可適於透過任何合適的途徑施用，包括但不限於口服、直腸、鼻、局部、陰道或腸胃外途徑（例如肌肉內、靜脈內、皮下，以及腹膜內）、透皮、栓劑，以及鼻內方法。
關於腸胃外給藥，較佳以無菌水溶液的形式使用，其可包含其他物質，例如足以使溶液與血液等滲的鹽類或葡萄糖。可根據需要將水溶液適當地緩衝（較佳之pH值為3至9）。可以本領域技術人員熟知的標準藥理學技術在無菌條件下完成製備合適的腸胃外組合物。
於本發明之一特定實施例中，該醫藥組合物被配製用於口服給藥。此類製劑可透過藥學領域已知的任何方法製備。根據本發明，該組合物的形式可為片劑、丸劑、散劑、口含錠、小包、錠劑、酏劑、混懸劑、洗劑、溶液、糖漿、軟硬膠囊、栓劑、無菌注射液以及包裝粉劑。
於本發明中，該方法及組合物/醫藥組合物透過抑制病毒，特別是RNA依賴性病毒中的半胱胺酸蛋白酶而有效治療病毒感染。因此，本發明還提供透過抑制病毒內的半胱胺酸蛋白酶來治療及/或預防病毒感染之方法及組合物/醫藥組合物，包括使用本文所公開之化合物或其醫藥上可接受之鹽類。
有反應的示例性病毒包括，但不限於，肝炎病毒、流感病毒、單純疱疹病毒、腸病毒、輪狀病毒、登革熱病毒、痘病毒、人類免疫缺陷病毒、腺病毒、冠狀病毒感染、沙狀病毒感染、麻疹病毒、冠狀病毒，或諾羅病毒。較佳地，該病毒為一肝炎病毒，包括B型肝炎病毒（HBV）、C型肝炎病毒（HCV）、D型肝炎病毒（HDV），或SARS-CoV-2。
於另一方面，本發明提供一種通過抑制病毒中的半胱胺酸蛋白酶來治療或預防一RNA依賴性病毒感染之方法。該病毒之一實例為一RNA依賴性病毒，例如 SARS、MERS，以及SARS-COV-2；特別是SARS-COV-2。
於另一方面，本發明提供一種透過抑制病毒內的半胱胺酸蛋白酶來治療及/或預防一病毒感染之組合物/醫藥組合物，其包含本文所公開之任何化合物、其醫藥上可接受之鹽類，或其混合物。可選擇地，該組合物/醫藥組合物可包含至少一種額外的抗病毒治療劑。
於另一方面，本發明提供一種用於透過抑制一細胞內牛磺膽酸鈉協同轉運多胜肽（NTCP）來治療及/或預防一病毒感染之組合物/醫藥組合物，其包含本文所公開之任何化合物、其醫藥上可接受之鹽類，或其混合物。可選擇地，該組合物/醫藥組合物可包含至少一種額外的抗病毒治療劑。
於另一方面，本發明提供一種本文所公開之任何化合物在製備透過抑制一病毒內的半胱胺酸蛋白酶來治療或預防病毒感染的藥物中之用途。
於另一方面，本發明提供一種本文所公開之任何化合物在製備透過抑制一細胞內的牛磺膽酸鈉協同轉運多胜肽（NTCP）來治療或預防病毒感染的藥物中之用途。
於另一方面，本發明提供透過抑制一細胞內的牛磺膽酸鈉協同轉運多胜肽（NTCP）來治療或預防一DNA依賴性病毒感染之方法。該病毒之一實例為一DNA依賴性病毒，例如B型肝炎病毒（HBV）、C型肝炎病毒（HCV），以及D型肝炎病毒（HDV）。
透過以下實施例進一步說明本發明，提供這些實施例是為了演示而非限制。
實施例
材料與方法
I. SARS-CoV-2 3CLpro 的 FRET 蛋白酶分析
ED-FRET平台的建立遵循Jo等人（2020年）提供的方法。簡言之，末端帶有DABCYL及EDANS的訂製蛋白水解螢光胜肽 DABCYL-TSAVLQSGFRKMG-EDANS（Genomics公司，台灣）包含可被SARS-CoV-2的3CLpro識別的共有nsp4/nsp5切割序列。將該胜肽溶解於蒸餾水中，並與SARS-CoV-2的3CLpro 一起作用。基於光譜的螢光測量由TECAN公司提供的SPARK®多模式酶標儀確定。蛋白水解活性於37℃下透過胜肽水解時EDANS的螢光強度確定為時間的函數，其中 λ 激發= 340 nm，λ 發射= 490 nm，帶寬分別為 9、15 nm。在測定前，測試藥物的發射波長為340 nm。 檢查激發以確保它不與EDANS的發射光譜重疊。
於黑色96孔微孔盤（Greiner公司）內，在含有0.25 µM SARS-CoV-2 3CLpro以及0.6 µM訂製的IQF基質胜肽的100 µL的檢測緩衝液（50 mM Tris pH 6.5）中進行三次檢測。
II. SARS-CoV-2 3CLpro 的即時 FRET 蛋白酶分析以及劑量反應曲線分析。
於添加 IQF胜肽基質前，於37℃下將0.25 µM SARS-CoV-2 3CLpro與指定濃度（0-100 µM）的目標化合物在分析緩衝液中（SC-HM100，晟青企業有限公司）作用1小時。之後，將6 µM IQF胜肽基質加入在一黑色96孔微量滴定盤中的該混合物，並立即以一TECAN SPARK®多模式微量盤檢測儀進行RFU檢測。與蛋白質活性分析中使用的參數不同，對測量參數進行微調。在運行期間，在增益值為80的情況下進行10個檢測循環，間隔為1.5分鐘。藉由從最終值中減去條件的初始值來計算螢光強度的變化。之後，以每個分析盤中陰性對照（只有載體）的變化對每個條件下螢光強度的變化進行標準化。對於每種藥物，將0–100 µM的劑量反應點擬合至GraphPad Prism 7.03（GraphPad Software公司）中給出的標準化劑量反應模型，其中
Figure 02_image055
。
III. 於 Arjil 藥物存在下進行抑制分析。
於37℃下，將待測的13種Arjil藥物與SARS-CoV-2 3CLpro預作用1小時。使用GraphPad Prism 7.03（GraphPad Software公司，聖地牙哥市，加州，美國），在不同濃度下進一步研究那些對SARS-CoV-2的3CLpro表現出抑制活性的物質，以對其IC50值進行特徵描述。下表所示為待測的13種Arjil藥物。
化合物編號 化合物名稱及結構
AR100-DS1
Figure 02_image032
魚針草內酯
AR101-DS1
Figure 02_image023
 樟芝酸K
AR101-DS2
Figure 02_image015
Figure 02_image059
去氫硫色多孔菌酸                  硫色多孔菌酸    
AR101-DS3
Figure 02_image061
變孔㶷孔菌酸D
AR101-DS4
Figure 02_image007
去氫齒孔酸
ARH 020-DS1
Figure 02_image063
烏戈寧J
ARH 020-DS2
Figure 02_image002
烏戈寧N
ARH 019-DS1
Figure 02_image065
6-(3,4-二羥基苯基)-4-羥基六-3,5-二烯-2-酮
ARH 019-DS2
Figure 02_image067
2-[(E)-2-(3,4-二羥基苯基)乙烯基]-6-羥基吡喃-4-酮
ARH 007-DS3
Figure 02_image009
3-O-甲基山奈酚
ARH 007-DS4
Figure 02_image011
山奈酚-3-O-(3, 4-二乙醯-α-L-吡喃鼠李糖苷)
ARH 007-DS5
Figure 02_image013
山奈酚-3-O-(2, 4-二乙醯-α-L-吡喃鼠李糖苷)
ARH013-DS1
Figure 02_image021
反式-對-薄荷-6-烯-2,8-二醇
預期結果
基於對SARS-CoV-2 3CLpro的知識及序列，對Arjil提供的3CLpro抑制藥物的功效進行體外評估，以確定它們對SARS-CoV-2治療的潛力。有鑑於尚無任何藥物或疫苗被核准用來治療人類SARS-CoV-2感染，開發一種廣效抗病毒藥物來對抗SARS-CoV-2是極為重要且緊迫的。ED-FRET技術及其工作流程的制定為實驗室提供一種強大、高產出量藥物發現的方法。同時，由Arjil提出且提供的13項測試中所鑑定出之SARS-CoV-2 3CLpro抑制劑可作為臨床評估中可能的治療劑量的基準，並提示未來的專利申請，有助於抗病毒庫的構建。 這13項測試包括： 1. AR100-DS1+AR101-DS2； 2. AR100-DS1+AR101-DS3； 3. ARH 020-DS1（即時）； 4. ARH 020-DS2（即時）； 5. ARH 019-DS1（即時）； 6. ARH 019-DS2（即時）； 7. ARH 007-DS3（即時）； 8. ARH 007-DS4（即時）； 9. ARH 007-DS5（即時）； 10. AR101-DS2+ARH013-DS1； 11. ARH007-DS3+ARH013-DS1； 12. AR100-DS1+ARH007-DS3；以及 13. ARH 013-DS1（即時）。
IV. HepG2.2.15 細胞
持續的HBV增殖可以HBV adw2亞型的基因組穩定轉染的HepG2.2.15細胞（RRID:CVCL_L855）來實現。使用HepG2.2.15細胞是因為無限量供應且品質穩定，並將細胞維持在Dulbecco氏改良的Eagle培養基（Dulbecco’s modified Eagle medium，DMEM；Invitrogen公司）中，並補充10%熱滅活胎牛血清（fetal bovine serum，FBS；Thermo公司）以及100單位的青黴素與100 X g 每毫升的鏈黴素（均來自 Invitrogen公司）。
V. HuS-E/2 細胞
使用即使在長時間培養後仍保留原代肝細胞特徵的HuS-E/2細胞進行HBV感染。針對HBV感染，HuS-E/2細胞以2% DMSO分化7天，收集病毒顆粒以感染HuS-E/2細胞並如本案發明人先前的研究進行複製[38]。這些細胞可用於檢測HBV病毒株的感染性及篩選抗HBV藥物。
VI. 收集 HBV 顆粒
藥物處理過的HepG2.2.15細胞的培養基於4℃下以1,000 X g離心10分鐘澄清，然後將上清液鋪在20%蔗糖墊（20% 蔗糖、20 mM HEPES， pH 7.4、0.1% 牛血清白蛋白[bovine serum albumin，BSA]）並於4℃下以197,000 X g離心3小時以沉澱HBV顆粒，然後將其濃縮100倍以檢測HBV的DNA。
VII. 分離 DNA 及 RNA 、反轉錄與即時 PCR
以基因組DNA分離套組（Nexttec Biotechnologie公司，德國）萃取總DNA。使用TRIzol®試劑（Invitrogen公司）從培養的細胞中分離總RNA。使用RNA模板、AMV反轉錄酶（Roche公司）及oligo-dT引子進行反轉錄。使用特定基因的引子組以及SYBR Green PCR Master Mix（Bio-Rad公司）對產物進行即時PCR。用於HBV核心、HBsAg、cccDNA以及GAPDH的引子組如參考文獻所述[3]。使用 iCycler iQ即時PCR檢測系統（Bio-Rad公司）分析結果。質體p1.3HBcl以10倍稀釋（2*10 4–2*10 9複製數/ml）製備，以在平行PCR反應中產生標準曲線。
VIII. 酶連結免疫吸附分析（ Enzyme-linked immunosorbent assay ， ELISA ）
使用HBsAg ELISA套組（General Biologicals公司）按照建議的方法檢測B型肝炎表面抗原（HBsAg）。
IX. PreS1-NTCP 拉下實驗
如先前所述進行重組融合蛋白的表現與純化以及GST拉下實驗[40]。簡言之，以0.5 mM異丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷誘導大腸桿菌BL21（DE3）中GST融合蛋白的表現，然後於4℃下在含有1% Triton X-100（PBST）的 PBS 中以超音波裂解細菌細胞，並透過於4℃下以13,800 g離心10分鐘將其分離為可溶性及不溶性部分。為了進行GST拉下實驗，將含有GST融合蛋白的細菌裂解物的可溶性部分與麩胱甘肽-瓊脂糖4B微珠（GE Healthcare Bio-Sciences公司）於4℃下作用3小時，然後以PBST洗滌微珠3次，然後於4℃下將該微珠與Huh7細胞裂解物以及過度表現的HA-NTCP一起作用整夜，該過度表現的HA-NTCP以在含有蛋白酶抑制劑混合物（1 mM PMSF、10 μg/ml 抑肽酶（aprotinin）、1 μg/ml胃酶抑素A、1 μg/ml亮抑酶肽）的PBST中裂解所製備而來。然後以PBST洗滌微珠，重新懸浮在樣品緩衝液（12.5 mM Tris-HCl，pH 6.8，2% SDS，20% 甘油，0.25% 溴酚藍，5% β-巰基乙醇）中，並進行SDS-聚丙烯醯胺凝膠電泳以及以西方墨點分析進行檢查。
X. 統計分析
所有數值皆表示為平均值±SE。每個數值為每個藥物體外實驗中至少三個實驗的平均值。學生氏t檢驗用於統計比較。*表示數值與對照組顯著不同（*，p ＜ 0.05；**，P ＜ 0.01；***，P ＜ 0.001）。
III. 結果
1. 抑制劑的半數最大抑制濃度之特徵
對SARS-CoV-2 3CLpro的半數最大抑制濃度的特徵在於以0 µM至100 µM的指定濃度的Arjil藥物進行處理。Arjil藥物/測試對SARS-CoV-2的IC50值如表1所示。每種Arjil藥物/測試的IC50值如附圖所示。總之，AR100-DS1+AR101-DS2、AR101-DS2+ARH013-DS1、AR100-DS1+ARH007-DS3，以及AR100-DS1+AR101-DS3的組合對SARS-CoV-2 3CLpro的抑制作用突顯這些組合用於治療COVID-19的潛力。此外，ARH 020-DS2、ARH 019-DS2，以及ARH 007-DS3為最有希望抑制SARS-CoV-2 3CLpro的化合物。 表 1. Arjil 藥物對 SARS-CoV-2 3CLpro 的抑制作用
Arjil 藥物 IC 50 （µM ） 來源
1. AR100-DS1+AR101-DS2 3.065 組合
2. AR100-DS1+AR101-DS3 2.934 組合
3. ARH 020-DS1（ 即時） 14.93 紀錫蘭七指蕨 （ Helminthostachys zeylanica）
4. ARH 020-DS2（ 即時） 6.329 紀錫蘭七指蕨 （ Helminthostachys zeylanica）
5. ARH 019-DS1（ 即時） 19.21 桑黃 （ Sanghuangporus sanghuang）
6. ARH 019-DS2（ 即時） 2.487 桑黃 （ Sanghuangporus sanghuang）
7. ARH 007-DS3（ 即時） 11.61 紅球薑（ Zingiber zerumbet）
8. ARH 007-DS4（ 即時） 18.85 紅球薑（ Zingiber zerumbet）
9. ARH 007-DS5（ 即時） 48.22 紅球薑（ Zingiber zerumbet）
10. AR101-DS2+ARH013-DS1 2.409 組合
11. ARH007-DS3+ARH013-DS1 18.2 組合
12. AR100-DS1+ARH007-DS3 8.646 組合
13. ARH013-DS1（ 即時） 32.89 草豆蔻（ Alpinia katsumadai Hayata）
十種示例化合物/測試（AR100-DS1+AR101-DS2、AR100-DS1+AR101-DS3、ARH 020-DS1、ARH 020-DS2、ARH 019-DS1、ARH 019-DS2、ARH 007-DS3、ARH 007-DS4、ARH 007-DS5、ARH101-DS2+ARH013-DS1、ARH007-DS3+ARH013-DS1、AR100-DS1+ARH007-DS3、ARH013-DS1）的IC50值如圖1-13所示。
如圖1所示，在0.25 µM SARS-CoV-2 3CLpro以及0.6 µM IQF胜肽基質（FP）存在下，AR100-DS1+AR101-DS2的IC50值為3.065 µM。同時，測量0.25 µM AR100-DS1+AR101-DS3對SARS-CoV-2 3CLpro以及0.6 µM IQF胜肽基質的抑制作用（參閱圖 2），AR100-DS1+ AR101-DS3對SARS-CoV-2的IC50值為2.934 µM。
ARH 020-DS2、ARH 019-DS2，以及ARH 007-DS3的IC50值分別為6.329 μM、2.487 μM，以及11.61 μM。
綜上所述，AR100-DS1+AR101-DS2、AR101-DS2+ARH013-DS1、AR100-DS1+ARH007-DS3，以及AR100-DS1+AR101-DS3的組合對SARS-CoV-2 3CLpro的抑制作用突顯它們針對COVID-19的治療潛力。此外，ARH 020-DS2、ARH 019-DS2，以及ARH 007-DS3為最有希望抑制SARS-CoV-2 3CLpro的化合物。
以上引用之所有出版物、專利，以及專利文件皆透過引用方式併入本文，如同透過個別引用併入一般。
已參考各種特定且較佳具體實施例及技術來描述本發明。然而，本領域技術人員將理解，在保持在本發明之精神及範圍內的情況下，可進行許多變化及修改。
2. 抑制劑對 HepG2.2.15 細胞分泌 HBV 的影響
為測試上述化合物是否對HBV基因組的複製、組裝或分泌有任何影響，將HBV基因組穩定轉染的HepG2.2.15細胞與AR101-DS2作用48小時，然後自培養基中收集HBsAg以及HBV DNA，並分別以ELISA與即時PCR測量。結果如圖14及15所示。
AR101-DS2對HepG2.2.15細胞分泌HBsAg的影響如圖14所示（0、20以及40 μM的AR101-DS2）。以AR101-DS2處理顯著抑制了HBsAg的分泌。
AR101-DS2對培養基中HBV DNA含量的影響如圖15所示（0、20以及40 μM的AR101-DS2）。發現在以20 μM AR101-DS2或40 μM AR101-DS2處理後，DNA含量顯著降低。這些結果顯示AR101-DS2抑制了HepG2.2.15細胞分泌HBV。
3. 抑制劑對 HuS-E/2 細胞的 HBV 感染性的影響
為了評估AR101-DS2對HBV感染性與複製的影響，以源自HepG2.2.15細胞的任何亞型HBV感染HuS-E/2細胞。在HBV感染過程中將AR101-DS2加入培養基中作用18小時，然後洗滌感染的細胞並在新鮮培養基中培養48小時，以ELISA檢測培養基中HBsAg，以即時PCR檢測HBV mRNA，以作為HBV感染HuS-E/2細胞效率的指標。結果如圖16及17所示。
AR101-DS2對HBV進入HuS-E/2細胞的影響如圖16及17所示。發現培養基中HBsAg的分泌以及HBV mRNA表現量均未顯示出劑量依賴性降低。因此，AR101-DS2不能阻止HBV進入HuS-E/2 細胞。
4. 對細胞內牛磺膽酸鈉共轉運多胜肽（ NTCP ）之抑制作用。
為了評估抑制劑對抑制HBV感染的影響，從以AR101-DS3或AR101-DS4處理的細胞中萃取細胞裂解物。拉下實驗顯示，隨著AR101-DS3的含量增加（0、10、20以及100 μM，參見圖18），NTCP的量顯示出劑量依賴性增加。
類似地，如圖19所示，拉下實驗顯示，AR101-DS4也造成NTCP的含量顯著減少。這些結果顯示，抑制劑可透過抑制NTCP來抑制肝炎病毒的感染。
5. 抑制劑組合對 HuS-E/2 細胞中 HBV 感染能力的影響
為了評估多種抑制劑組合是否會提高抑制HBV感染性及複製的能力，以源自HepG2.2.15細胞的任何亞型HBV感染HuS-E/2細胞。在HBV感染18小時後，將AR101-DS1+AR101-DS3或AR101-DS1+AR101-DS4加入培養基中，然後洗滌感染的細胞並在新鮮培養基中培養48小時，以ELISA檢測培養基中的HBsAg，以real-time PCR檢測HBV mRNA以作為HBV感染HuS-E/2細胞效率的指標。
AR101-DS1+AR101-DS3對HBV進入HuS-E/2細胞的影響如圖20及21所示。發現培養基中HBsAg的分泌以及HBV mRNA表現量皆呈現劑量依賴性降低。因此，AR101-DS1+AR101-DS3可預防HuS-E/2細胞感染HBV。
類似地，AR101-DS1+AR101-DS4對HBV進入HuS-E/2細胞的影響如圖22及23所示。發現培養基中HBsAg的分泌以及HBV mRNA表現量皆呈現劑量依賴性降低。因此，AR101-DS1+AR101-DS4可預防HuS-E/2細胞感染HBV。
雖然本文已經顯示並描述本發明之較佳具體實施例，但是對於本領域技術人員而言，顯而易見的是，這些具體實施例僅提供作為示例，並可組合實施。在不脫離本發明之情況下，本領域技術人員現在將想到許多改變、變化以及替換。應當理解的是，在實踐本發明時可以採用本發明具體實施例的各種替代方案。以下申請專利範圍目的在於限定本發明之範圍，且在這些申請專利範圍的範圍內之方法與結構及其等同物由此涵蓋。 參考文獻1.   Ganem, D. and A.M. Prince, Hepatitis B virus infection--natural history and clinical consequences. N Engl J Med, 2004. 350(11): p. 1118-29. 2.   Beasley, R.P., Hepatitis B virus. The major etiology of hepatocellular carcinoma. Cancer, 1988. 61(10): p. 1942-56. 3.   Zoulim, F. and S. Locarnini, Hepatitis B virus resistance to nucleos(t)ide analogues. Gastroenterology, 2009. 137(5): p. 1593-608 e1-2. 4.   Chen, W.N. and C.J. Oon, Human hepatitis B virus mutants: significance of molecular changes. FEBS Lett, 1999. 453(3): p. 237-42. 5.   Yan, H., et al., Sodium taurocholate cotransporting polypeptide is a functional receptor for human hepatitis B and D virus. Elife. 1: p. e00049. 6.   Watashi, K., et al., NTCP and beyond: opening the door to unveil hepatitis B virus entry. 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無
當結合附圖閱讀時，將更能理解本發明之前述概述以及以下詳細描述。為了說明本發明，於附圖中顯示出目前較佳之具體實施例。
於圖式中：
圖1所示為AR100-DS1+ARH 101-DS2（0.25p/0.6FP）的3CLpro相對活性（%），IC50 = 3.065 µM。
圖2所示為AR100-DS1+ARH 101-DS3（0.25p/0.6FP）的3CLpro相對活性（%），IC50=2.934 µM。
圖3所示為ARH 020-DS1—SARS-Cov-2的IC50 = 14.93 µM。
圖4所示為ARH 020-DS2—SARS-Cov-2的IC50 = 6.329 µM。
圖5所示為ARH 019-DS1—SARS-Cov-2的IC50 = 19.21 µM。
圖6所示為ARH 019-DS2—SARS-Cov-2的IC50 = 2.487 µM。
圖7所示為ARH 007-DS3—SARS-Cov-2的IC50 = 11.61 µM。
圖8所示為ARH 007-DS4—SARS-Cov-2的IC50 = 18.85 µM。
圖9所示為ARH 007-DS5—SARS-Cov-2的IC50 = 48.22 µM。
圖10所示為AR101-DS2+ARH013-DS1的3CLpro相對活性（%），IC50 = 2.409µM。
圖11所示為ARH007-DS3+ARH013-DS1的3CLpro相對活性（%），IC50 = 18.2µM。
圖12所示為AR100-DS1+ARH007-DS3的3CLpro相對活性（%），IC50 = 8.646µM。
圖13所示為ARH013-DS1—SARS-Cov-2= 32.89µM。
圖14所示為0、20以及40 μM的AR101-DS2對HepG2.2.15細胞分泌HBsAg的影響（*, P＜0.05; **, P＜0.01; ***, P＜0.001）。
圖15所示為0、20以及40 μM的AR101-DS2對HepG2.2.15細胞的培養基中HBV的DNA含量的影響（*, P＜0.05; **, P＜0.01; ***, P＜0.001）。
圖16所示為0、20以及40 μM的AR101-DS2對HuS-E/2細胞分泌HBsAg的影響（*, P＜0.05; **, P＜0.01; ***, P＜0.001）。
圖17所示為0、20以及40 μM的AR101-DS2對HuS-E/2細胞的HBV mRNA表現量的影響。
圖18所示為0、10、20以及100 μM的AR101-DS3對NTCP的抑制效果（*, P＜0.05; **, P＜0.01; ***, P＜0.001）。
圖19所示為0、10、20以及100 μM的AR101-DS4對NTCP的抑制效果（*, P＜0.05; **, P＜0.01; ***, P＜0.001）。
圖20所示為0、40以及80 μM的AR101-DS1+AR101-DS3對Hus-E/2細胞分泌HBsAg的影響（*, P＜0.05; **, P＜0.01; ***, P＜0.001）。
圖21所示為0、40以及80 μM的AR101-DS1+AR101-DS3對Hus-E/2細胞的HBV mRNA表現量的影響（*, P＜0.05; **, P＜0.01; ***, P＜0.001）。
圖22所示為0、40以及80 μM的AR101-DS1+AR101-DS4對Hus-E/2細胞分泌HBsAg的影響（*, P＜0.05; **, P＜0.01; ***, P＜0.001）。
圖23所示為0、40以及80 μM的AR101-DS1+AR101-DS4對Hus-E/2細胞的HBV mRNA表現量的影響（*, P＜0.05; **, P＜0.01; ***, P＜0.001）。
無

Claims (20)

  1. 一種一化合物在製備抑制病毒感染的藥物中之用途，其中該化合物選自由下列所組成之群組： 具有式I結構之烏戈寧J及其衍生物：
    Figure 03_image001
    I， 具有式II結構之烏戈寧N及其衍生物：
    Figure 03_image002
    II， 具有式III結構之6-（3,4-二羥基苯基）-4-羥基六-3,5-二烯-2-酮及其衍生物：
    Figure 03_image070
    III， 具有IV結構之2-[（E）-2-（3,4-二羥基苯基）乙烯基]-6-羥基吡喃-4-酮及其衍生物：
    Figure 03_image005
    IV， 具有式V結構之去氫齒孔酸（dehydroeburicoic acid）及其衍生物：
    Figure 03_image007
    V， 具有式VI結構之3-O-甲基山奈酚及其衍生物：
    Figure 03_image009
    VI， 具有式VII結構之山奈酚-3-O-（3, 4-二乙醯-α-L-吡喃鼠李糖苷）及其衍生物：
    Figure 03_image011
    VII， 具有式VIII結構之山奈酚-3-O-（2, 4-二乙醯-α-L-吡喃鼠李糖苷）及其衍生物：
    Figure 03_image013
    VIII， 具有式IX結構之去氫硫色多孔菌酸（dehydrosulphurenic acid）及其衍生物：
    Figure 03_image077
    IX， 具有式X結構之硫色多孔菌酸（sulphurenic acid）及其衍生物：
    Figure 03_image079
    X， 具有式XI結構之變孔㶷孔菌酸D（versisponic acid D）及其衍生物：
    Figure 03_image019
    XI， 具有式XII結構之反式-對-薄荷-6-烯-2,8-二醇及其衍生物：
    Figure 03_image021
    XII，以及 具有式XIII結構之樟芝酸K（antcin K）及其衍生物：
    Figure 03_image023
    XIII， 及其組合。
  2. 一種用於抑制一病毒感染之組合，包含二種或更多種選自由下列所組成之群組的化合物： 具有式I結構之烏戈寧J及其衍生物：
    Figure 03_image001
    I， 具有式II結構之烏戈寧N及其衍生物：
    Figure 03_image002
    II， 具有式III結構之6-（3,4-二羥基苯基）-4-羥基六-3,5-二烯-2-酮及其衍生物：
    Figure 03_image084
    III， 具有IV結構之2-[（E）-2-（3,4-二羥基苯基）乙烯基]-6-羥基吡喃-4-酮及其衍生物：
    Figure 03_image005
    IV， 具有式V結構之去氫齒孔酸及其衍生物：
    Figure 03_image007
    V， 具有式VI結構之3-O-甲基山奈酚及其衍生物：
    Figure 03_image009
    VI， 具有式VII結構之山奈酚-3-O-（3, 4-二乙醯-α-L-吡喃鼠李糖苷）及其衍生物：
    Figure 03_image011
    VII， 具有式VIII結構之山奈酚-3-O-（2, 4-二乙醯-α-L-吡喃鼠李糖苷）及其衍生物：
    Figure 03_image013
    VIII， 具有式IX結構之魚針草內酯（ovatodiolide）及其衍生物：
    Figure 03_image032
    IX， 具有式X結構之去氫硫色多孔菌酸及其衍生物：
    Figure 03_image077
    X， 具有式XI結構之硫色多孔菌酸及其衍生物：
    Figure 03_image079
    XI， 具有式XII結構之變孔㶷孔菌酸D（versisponic acid D）及其衍生物：
    Figure 03_image019
    XII， 具有式 XIII 結構之反式-對-薄荷-6-烯-2,8-二醇及其衍生物：
    Figure 03_image021
    XIII，以及 具有式XIV結構之樟芝酸K及其衍生物：
    Figure 03_image023
    XIV。
  3. 如請求項1之用途，其中該化合物選自由下列所組成之群組：烏戈寧J、烏戈寧N、6-（3,4-二羥基苯基）-4-羥基六-3,5-二烯-2-酮、2-[（E）-2-（3,4-二羥基苯基）乙烯基]-6-羥基吡喃-4-酮、去氫齒孔酸、3-O-甲基山奈酚、山奈酚-3-O-（3, 4-二乙醯-α-L-吡喃鼠李糖苷）、山奈酚-3-O-（2, 4-二乙醯-α-L-吡喃鼠李糖苷）、去氫硫色多孔菌酸、硫色多孔菌酸、變孔㶷孔菌酸D、反式-對-薄荷-6-烯-2,8-二醇，以及樟芝酸K。
  4. 如請求項2之組合，其中該二種或更多種化合物選自由下列所組成之群組：烏戈寧J、烏戈寧N、6-（3,4-二羥基苯基）-4-羥基六-3,5-二烯-2-酮、2-[（E）-2-（3,4-二羥基苯基）乙烯基]-6-羥基吡喃-4-酮、去氫齒孔酸、3-O-甲基山奈酚、山奈酚-3-O-（3, 4-二乙醯-α-L-吡喃鼠李糖苷）、山奈酚-3-O-（2, 4-二乙醯-α-L-吡喃鼠李糖苷）、魚針草內酯、去氫硫色多孔菌酸、硫色多孔菌酸、變孔㶷孔菌酸D、反式-對-薄荷-6-烯-2,8-二醇，以及樟芝酸K。
  5. 如請求項1之用途，其中該病毒為一B型肝炎病毒、一C型肝炎病毒，或一D型肝炎病毒。
  6. 如請求項5之用途，其中該病毒為一B型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）。
  7. 如請求項1之用途，其中該病毒為一單純疱疹病毒（herpes simplex virus，HSV）。
  8. 如請求項1之用途，其中該病毒為一冠狀病毒。
  9. 如請求項8之用途，其中該冠狀病毒選自由下列所組成之群組：嚴重急性呼吸道症候群（severe acute respiratory syndrome，SARS）、中東呼吸道症候群（Middle East respiratory syndrome，MERS），以及SARS-COV-2。
  10. 如請求項9之用途，其中該冠狀病毒為SARS-COV-2。
  11. 如請求項1之用途，其中該化合物能有效抑制一病毒內的半胱胺酸蛋白酶。
  12. 如請求項1之用途，其中該化合物能有效抑制一細胞內的牛磺膽酸鈉協同轉運多胜肽（sodium taurocholate cotransporting polypeptide，NTCP）。
  13. 如請求項1之用途，其中該化合物所具有的治療或預防的效果為抑制一病毒內的半胱胺酸蛋白酶。
  14. 如請求項13之用途，其中該化合物能有效抑制一細胞內的牛磺膽酸鈉協同轉運多胜肽（NTCP）。
  15. 如請求項2之組合，其中該RNA依賴性病毒為一冠狀病毒。
  16. 如請求項15之組合，其中該冠狀病毒為SARS、MERS，或SARS-CoV-2。
  17. 如請求項15之組合，其中該冠狀病毒為SARS-CoV-2。
  18. 如請求項2之組合，其中該病毒為一B型肝炎病毒、一C型肝炎病毒，或一D型肝炎病毒。
  19. 如請求項2之組合，其中該病毒為一B型肝炎病毒（HBV）。
  20. 如請求項2之組合，其中該病毒為一單純疱疹病毒（HSV）。
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