TW202142860A - 細胞分析方法 - Google Patents

細胞分析方法 Download PDF

Info

Publication number
TW202142860A
TW202142860A TW110102656A TW110102656A TW202142860A TW 202142860 A TW202142860 A TW 202142860A TW 110102656 A TW110102656 A TW 110102656A TW 110102656 A TW110102656 A TW 110102656A TW 202142860 A TW202142860 A TW 202142860A
Authority
TW
Taiwan
Prior art keywords
metal
cell
sers
analysis method
cells
Prior art date
Application number
TW110102656A
Other languages
English (en)
Inventor
藤原一彦
風見紗弥香
丸山芳弘
Original Assignee
日商濱松赫德尼古斯股份有限公司
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 日商濱松赫德尼古斯股份有限公司 filed Critical 日商濱松赫德尼古斯股份有限公司
Publication of TW202142860A publication Critical patent/TW202142860A/zh

Links

Images

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/62—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light
    • G01N21/63—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light optically excited
    • G01N21/65—Raman scattering
    • G01N21/658—Raman scattering enhancement Raman, e.g. surface plasmons

Abstract

本發明之細胞分析方法具備：混合步驟S11，將作為受檢體之細胞、金屬離子之溶液及還原劑加以混合而製作混合液；金屬微結構生成步驟S12，藉由混合液中之還原劑之還原作用，將混合液中之金屬離子還原而於支持體上生成金屬微結構，並且使細胞或源自細胞之物質附著於金屬微結構；乾燥步驟S13，於金屬微結構生成步驟後，對支持體進行乾燥；測定步驟S15，於乾燥步驟後，向支持體上之金屬微結構照射激發光，測定藉由該激發光之照射而產生之拉曼散射光之光譜；及分析步驟S16，基於拉曼散射光之光譜對細胞進行分析。藉此，就作為受檢體之細胞，能夠實現可容易地進行利用高效率之SERS分光予以分析之方法。

Description

細胞分析方法
本發明係關於一種細胞分析方法。
作為對受檢體進行分析之方法，已知基於向該受檢體照射激發光時所產生之拉曼散射光之光譜之方法。拉曼散射光譜係反映受檢體之分子振動者，故而可基於拉曼散射光譜之形狀對受檢體進行分析。但該分析方法通常拉曼散射之效率非常小，於受檢體為微量之情形時難以分析。由此，先前，實際應用該分析方法之受檢體限於礦物或高密度塑膠等物質。
另一方面，表面增強拉曼散射(Surface Enhanced Raman Scattering：SERS)分光因大幅度提高拉曼散射效率，故而可進行高感度之測定，且可進行低濃度試樣之分析，從而受到關注。於SERS分光中，藉由滿足如下2個主要條件，可自受檢體產生高強度之拉曼散射光：於照射了激發光之金屬微結構中產生增強之電場(光子場)(第1條件)；及在該增強之電場所到達之金屬微結構之附近恆定存在受檢體(第2條件)。
提出：為了高效率地達成第1條件，設計奈米級尺寸之各種形狀之金屬微結構排列體，利用表面具備該金屬微結構排列體之基板(SERS基板)，向該SERS基板滴加受檢體等，從而藉由SERS分光對受檢體進行分析。又，提出：利用分散有金屬膠體(例如銀膠體粒子、金膠體粒子)之分散液，向該金屬膠體分散液中添加受檢體，藉此利用SERS分光對受檢體進行分析。
於利用SERS基板之情形及利用金屬膠體分散液之情形時，藉由SERS分光對受檢體進行分析均需滿足上述第2條件。即，可獲得增強之電場之區域取決於金屬微結構在空間上有限制，於多數情況下，位於金屬微結構之間隙。因此，為了亦滿足第2條件且高效率地產生SERS光，受檢體需存在於該經限制之間隙。
為了滿足第2條件，受檢體需對構成金屬微結構之金屬親和性較高且容易吸附。但即便藉由可高效率地產生增強之電場之SERS基板可滿足第1條件，對構成金屬微結構之金屬之親和性較低而不易吸附之受檢體亦無法進入金屬微結構之狹窄之間隙，無法滿足第2條件，故而難以藉由SERS分光對受檢體進行分析。
藉由利用SERS基板或金屬膠體分散液所進行之SERS分光對受檢體進行分析需要預先準備SERS基板或金屬膠體分散液。特別是於使用銀(Ag)之情形時，雖高效率地產生SERS光，但銀容易氧化。若分光測定時，在SERS基板上之銀之微結構或銀膠體之表面形成有氧化膜，則無法進行利用高效率之SERS分光對受檢體之分析。又，至分光測定時之前需防止SERS基板或金屬膠體被污染，該等處理不容易。
於專利文獻1中揭示有一種發明，其意圖消除如上所述之先前技術所具有之問題。該文獻所揭示之發明可容易地進行利用高效率之SERS分光之分析。
又，據非專利文獻1所載，使作為受檢體之菌附著於金屬膠體粒子而進行SERS分光，藉此可獲得源自菌之拉曼散射光譜。 先前技術文獻 專利文獻
專利文獻1：日本專利特開2018-25431號公報 非專利文獻
非專利文獻1：Pamela A. Mosier-Boss, "Review on SERS of Bacteria", Biosensors 2017, 7, 51
[發明所欲解決之問題]
專利文獻1所揭示之發明可容易進行利用高效率之SERS分光對受檢體之分析，但作為分析對象之受檢體受限，無法以包含菌等之細胞作為受檢體進行分析。
非專利文獻1所記載之技術使用金屬膠體分散液，故而無法高效率且容易地利用SERS分光對受檢體(包含菌等之細胞)進行分析。
本發明之目的在於提供一種可容易地進行利用高效率之SERS分光對受檢體之分析的方法。 [解決問題之技術手段]
本發明之實施方式係一種細胞分析方法。細胞分析方法具備：(1)混合步驟，將作為受檢體之細胞、金屬離子之溶液及還原劑加以混合而製作混合液；(2)金屬微結構生成步驟，藉由混合液中之還原劑之還原作用，將混合液中之金屬離子還原而於支持體上生成金屬微結構，並且使細胞或源自細胞之物質附著於金屬微結構；(3)乾燥步驟，於金屬微結構生成步驟後，對支持體進行乾燥；及(4)測定步驟，於乾燥步驟後，向支持體上之金屬微結構照射激發光，測定藉由該激發光之照射而產生之拉曼散射光之光譜。又，可進一步具備洗淨步驟，該洗淨步驟設置於乾燥步驟與測定步驟之間，對支持體進行洗淨。 [發明之效果]
根據本發明之實施方式，就作為受檢體之細胞，可容易地進行利用高效率之SERS分光之分析。
以下，參照隨附圖式，對細胞分析方法之實施方式進行詳細說明。再者，於圖式之說明中，對相同元件標註相同元件符號，省略重複說明。本發明並不限定於該等例示。
實施方式之細胞分析方法係將金屬離子之溶液及還原劑加以混合而製作混合液，藉由該混合液中之還原劑之還原作用將混合液中之金屬離子還原而於支持體上生成金屬微結構，並且使細胞或源自細胞之物質附著於該金屬微結構。繼而，向支持體上之金屬微結構照射激發光，測定藉由該激發光之照射而產生之拉曼散射光之光譜，基於該拉曼散射光之光譜對細胞進行分析。以下，對第1及第2實施方式之細胞分析方法進行說明。
作為受檢體之細胞包括原核細胞及真核細胞。原核細胞包括細菌及古細菌。真核細胞包括原生生物、植物、動物及真菌。可為單細胞，亦可為多細胞，又，亦可為培養細胞。源自細胞之物質為藉由細胞分解而生成者，例如，細胞中所包含之核酸或核酸鹼基等內容物或其代謝物。
圖1係第1實施方式之細胞分析方法之流程圖。第1實施方式之細胞分析方法係藉由依次進行混合步驟S11、金屬微結構生成步驟S12、乾燥步驟S13、測定步驟S15及分析步驟S16而進行細胞分析。
於混合步驟S11中，將包含細胞之被測定溶液、金屬離子之溶液及還原劑充分混合，製作混合液。進而，亦可混合pH調整劑而製作混合液。
作為被測定溶液、金屬離子溶液、還原劑及pH調整劑之混合方式或順序，可能有各種形態。可將被測定溶液、金屬離子溶液、還原劑及pH調整劑同時混合。又，亦可將被測定溶液、金屬離子溶液及還原劑加以混合而製作中間混合液，繼而，將該中間混合液及pH調整劑加以混合而製作最終混合液。又，亦可進一步混合鹽。添加pH調整劑後，可不待生成完全之金屬微結構而添加被測定溶液。
包含細胞之被測定溶液例如為使於液體培養基中培養後藉由離心分離所回收之細胞分散於水(較佳為純水)中而成者。金屬離子為可藉由還原劑之還原作用而被還原者即可，為任意，例如金離子或銀離子等。還原劑例如為葡萄糖水溶液、硫酸鐵(II)水溶液、硼氫化鈉水溶液、甲醛水溶液等。
pH調整劑係為了使混合液成為鹼性而混合者，例如為氫氧化鉀水溶液等。鹽係為了促進金屬微粒子之凝集而混合者，例如為氯化鈉等。作為最終混合液而混合之金屬離子溶液、還原劑及pH調整劑各者之量及濃度根據被測定溶液之量及被測定溶液中之細胞之濃度而適當地調製。
於金屬微結構生成步驟S12中，藉由混合液中之還原劑之還原作用，將混合液中之金屬離子還原而於支持體上生成金屬微結構，並且使細胞或源自細胞之物質附著於金屬微結構。支持體上之金屬微結構係金屬微粒子析出且其凝集體島狀地分佈於支持體上而成之結構。此時，為了防止混合液之蒸發，較佳為在加濕環境下將支持體靜置規定時間。
支持體可為製作中間混合液或混合液時所使用之容器，亦可為與容器別途準備之基板，作為基板，例如可為載玻片。又，可使用以規定圖案進行了撥水處理之載玻片，於該載玻片上未經撥水處理之區域製作混合液，生成金屬微結構。於使用與容器別途準備之基板作為支持體之情形時，分別將適量之中間混合液及pH調整劑滴加至基板上，使用微量吸管等於基板上將中間混合液與pH調整劑充分混合而製作最終混合液，於基板上生成金屬微結構。
於乾燥步驟S13中，對生成有金屬微結構之支持體進行乾燥。藉由該乾燥，附著有細胞或源自細胞之物質之金屬微結構凝集於支持體上之限定區域。
於測定步驟S15中，向支持體上之金屬微結構照射激發光，測定藉由該激發光之照射而產生之拉曼散射光之光譜。相對於激發光照射方向，拉曼散射光測定方向任意，可測定背向散射光及前向散射光之任一者，亦可測定朝向其他方向之散射光。又，較佳為在測定光學系統之中途，設置選擇性地使拉曼散射光透過之濾光器。
激發光較佳為雷射光。於照射了激發光之金屬微結構中產生增強之電場(第1條件)，於該增強之電場所到達之金屬微結構附著有細胞或源自細胞之物質(第2條件)。因此，被測定之拉曼散射光係由細胞或源自細胞之物質所產生之SERS光。
於在支持體上之狹窄區域生成金屬微結構之情形時，較佳為使用顯微分光裝置照射激發光，並且測定SERS光之光譜。於支持體上之生成了金屬微結構之區域乾燥之狀態下，照射激發光並測定SERS光之光譜。
於分析步驟S16中，基於拉曼散射光(SERS光)之光譜對細胞進行分析。具體而言，基於所獲得之SERS光之光譜中出現波峰之拉曼位移量之位置及該波峰之高度，對細胞進行分析。
圖2係第2實施方式之細胞分析方法之流程圖。第2實施方式之細胞分析方法係藉由依次進行混合步驟S11、金屬微結構生成步驟S12、乾燥步驟S13、洗淨步驟S14、測定步驟S15及分析步驟S16而進行細胞分析。
與第1實施方式之細胞分析方法相比，第2實施方式之細胞分析方法於在乾燥步驟S13與測定步驟S15之間進行洗淨步驟S14之方面不同。於洗淨步驟S14中，利用水(較佳為純水)洗淨乾燥步驟S13中乾燥之支持體，去除反應混合物中殘存之鹽，其後，再次對支持體進行乾燥。藉由該乾燥，附著有細胞或源自細胞之物質之金屬微結構凝集於支持體上之限定區域。
其次，對實施例1～5進行說明。圖3係表示於各實施例之測定步驟中測定SERS光之光譜時所使用之顯微分光裝置1之光學系統的圖。所有實施例均使用載玻片作為支持金屬微結構之支持體。於支持體(載玻片)21之表面形成金屬微粒子析出且其凝集體島狀地分佈之金屬微結構22。使細胞(或源自細胞之物質)23附著於該金屬微結構22。
作為激發光源11，使用輸出波長640 nm之雷射光作為激發光LP 之半導體雷射光源。自激發光源11輸出之激發光LP 被雙色鏡12反射後，經由物鏡13被照射至金屬微結構22及細胞23。作為物鏡13，使用倍率為100倍且數值孔徑為0.9者或倍率為50倍且數值孔徑為0.5者。經由物鏡13照射至試樣面之雷射光之功率為60 μW。
藉由照射激發光LP 而產生且被物鏡13捕獲之拉曼散射光(SERS光)LS 透過雙色鏡12及濾光器14，入射至分光器15。分光器15係具備冷卻CCD(Charge Coupled Device，電荷耦合元件)檢測器者，藉由該分光器15測定SERS光之光譜。
圖4係彙總各實施例所使用之試樣之表。於各實施例中，作為受檢體細胞，使用大腸桿菌(DH5α勝任細胞)，使該細胞分散於超純水中而製作被測定溶液。
於實施例1中，作為金屬離子溶液，使用硝酸銀水溶液(濃度為0.2 mM)，作為還原劑，使用羥胺鹽酸鹽水溶液(濃度為20 mM)，作為pH調整劑，使用氫氧化鉀水溶液(濃度為25 mM)。實施例1之程序係按照第1實施方式之細胞分析方法(圖1)，如下所示。
於混合步驟S11中，將被測定溶液、金屬離子溶液及pH調整劑各者調整為規定濃度。向作為支持體之載玻片上滴加2 μL金屬離子溶液，進一步對該滴加點滴加2 μL被測定溶液，於載玻片上將該等混合。進一步對該滴加點滴加2 μL還原劑，於載玻片上將該等混合。繼而，進一步對該滴加點滴加2 μL之pH調整劑，於載玻片上將該等混合，從而製作混合液。
於金屬微結構生成步驟S12中，在加濕環境下將載玻片上之液滴靜置1小時，於混合液中藉由還原劑之還原作用將金屬離子還原而於載玻片上生成金屬微結構，並且使細胞或源自細胞之物質附著於金屬微結構。金屬微結構生成步驟S12中靜置1小時後，於乾燥步驟S13中對載玻片進行乾燥。
於測定步驟S15中，向載玻片上之金屬微結構照射激發光，測定藉由該激發光之照射而產生之拉曼散射光(SERS光)之光譜。此時，使用顯微分光裝置，經由物鏡向金屬微結構照射激發光，並且經由該物鏡測定SERS光之光譜。
實施例2～4與實施例1之測定條件相比，在金屬離子溶液及pH調整劑各者之濃度之方面不同。實施例2～4中之金屬離子溶液(硝酸銀水溶液)之濃度為1.0 mM。實施例2～4中之還原劑(羥胺鹽酸鹽水溶液)之濃度與實施例1同樣為20 mM。實施例2中之pH調整劑(氫氧化鉀水溶液)之濃度為10 mM，實施例3中之pH調整劑之濃度為15 mM，實施例4中之pH調整劑之濃度為20 mM。
又，實施例2～4與實施例1之測定條件相比，於採用第2實施方式之細胞分析方法(圖2)之程序之方面(即，進行洗淨步驟S14之方面)不同。實施例2～4中之混合步驟S11、金屬微結構生成步驟S12、乾燥步驟S13及測定步驟S15之程序與實施例1相同。
實施例5與實施例4之測定條件相比，在使用葡萄糖水溶液(濃度為2 mM)作為還原劑之方面不同。作為金屬離子溶液，使用硝酸銀水溶液(濃度為1.0 mM)，作為還原劑，使用葡萄糖水溶液(濃度為2 mM)，作為pH調整劑，使用氫氧化鉀水溶液(濃度為20 mM)。實施例5之程序與實施例2～4相同。
圖5係表示實施例1所獲得之SERS光之光譜之圖。圖6係表示實施例2所獲得之SERS光之光譜之圖。圖7係表示實施例3所獲得之SERS光之光譜之圖。圖8係表示實施例4所獲得之SERS光之光譜之圖。圖9係表示實施例5所獲得之SERS光之光譜之圖。於該等圖中，橫軸表示拉曼位移量(單位cm-1 )，縱軸表示拉曼散射強度(任意單位)。
據非專利文獻1所載，藉由利用金屬膠體粒子亦可獲得源自細胞之物質之SERS光之光譜。所測定之SERS光係由細胞中所包含之核酸或核酸鹼基等內容物或代謝物所產生者，所獲取之SERS光之光譜具有該等之資訊。
圖10係比較例之明視野像之照片。於該比較例中，不生成金屬微結構而對滴加有被測定溶液之載玻片進行乾燥，洗淨該載玻片，拍攝該洗淨後之試樣。圖11係實施例2中測定步驟時之明視野像之照片。圖12係實施例3中測定步驟時之明視野像之照片。圖13係實施例4中測定步驟時之明視野像之照片。
於比較例之照片(圖10)中，可確認附著於載玻片之細胞之形狀。相對於此，於實施例之照片(圖11～圖13)中，無法確認作為受檢體之細胞之形狀，認為細胞分解。又，於實施例之照片(圖11～圖13)中，存在由已分解之細胞之一部分與銀微粒子所導致之亮點。
實施例2～5之SERS光之光譜(圖6～圖9)之波峰數較多。認為其原因為：於實施例2～5中，藉由利用pH調整劑使混合液成為鹼性，從而如明視野像之照片(圖11～圖13)所示，促進細胞溶解，觀測到較多該內容物。
如上所述，本實施方式之細胞分析方法係藉由混合液中之還原劑之還原作用，將混合液中之金屬離子還原而於支持體上生成金屬微結構，使細胞或源自細胞之物質附著於該金屬微結構，測定藉由對此照射激發光而產生之拉曼散射光(SERS光)之光譜，基於該光譜對細胞進行分析。與先前之分析方法相比，本實施方式之細胞分析方法可簡便且迅速地進行分析。
於先前之分析方法中，可進行SERS分光之受檢體限於對構成金屬微結構之金屬親和性較高而容易吸附者。又，於專利文獻1所揭示之發明中，可進行SERS分光之受檢體限於具有還原作用者。相對於此，於本實施方式之細胞分析方法中，即便為對構成金屬微結構之金屬親和性較低而不易吸附之細胞或不具有還原作用之細胞，亦能夠製作金屬微結構，細胞或源自細胞之物質可進入該金屬微結構之狹窄之間隙，可滿足第2條件，故而可藉由SERS分光進行細胞分析。
於先前之分析方法中，測定SERS光之光譜時，需事先準備SERS基板或金屬膠體。相對於此，本實施方式之細胞分析方法可於即將測定SERS光之光譜前，生成金屬微結構及使細胞(或源自細胞之物質)附著於金屬微結構。因此，本實施方式之細胞分析方法即便於藉由容易氧化之銀生成金屬微結構之情形時，亦可抑制銀之氧化問題，可進行有效率之SERS分光。
本實施方式之細胞分析方法無需事先準備SERS基板或金屬膠體，故而該等之污染不成問題，可容易地進行細胞分析。又，本實施方式之細胞分析方法使用與SERS基板或金屬膠體相比可廉價獲得之金屬離子溶液，故而於該方面而言，亦能夠容易地進行細胞分析。
利用非專利文獻1所記載之金屬膠體分散液之分析方法，於細胞為微量之情形時，難以進行SERS分光。相對於此，本實施方式之細胞分析方法即便細胞為微量亦能夠進行SERS分光。
又，非專利文獻1所記載之分析方法係以金屬膠體覆蓋細胞而進行SERS光之光譜測定者，進行該測定時，需在顯微鏡下找出細胞，故而不易測定。相對於此，於本實施方式(特別是第2實施方式)之細胞分析方法中，使細胞溶解進而使其乾燥並進行洗淨，使源自細胞之內容物吸附於金屬微結構，進行SERS光之光譜測定，故而容易測定。
細胞分析方法並不限定於上述實施方式及構成例，可進行各種變化。
上述實施方式之細胞分析方法具備：(1)混合步驟，將作為受檢體之細胞、金屬離子之溶液及還原劑加以混合而製作混合液；(2)金屬微結構生成步驟，藉由混合液中之還原劑之還原作用，將混合液中之金屬離子還原而於支持體上生成金屬微結構，並且使細胞或源自細胞之物質附著於金屬微結構；(3)乾燥步驟，於金屬微結構生成步驟之後，對支持體進行乾燥；及(4)測定步驟，於乾燥步驟後，向支持體上之金屬微結構照射激發光，測定藉由該激發光之照射而產生之拉曼散射光之光譜。
於上述細胞分析方法中，可進一步具備洗淨步驟，該洗淨步驟設置於乾燥步驟與測定步驟之間，對支持體進行洗淨。於該情形時，細胞分析方法具備：(1)混合步驟，將作為受檢體之細胞、金屬離子之溶液及還原劑加以混合而製作混合液；(2)金屬微結構生成步驟，藉由混合液中之還原劑之還原作用，將混合液中之金屬離子還原而於支持體上生成金屬微結構，並且使細胞或源自細胞之物質附著於金屬微結構；(3)乾燥步驟，於金屬微結構生成步驟後，對支持體進行乾燥；(4)洗淨步驟，於乾燥步驟後，對支持體進行洗淨；及(5)測定步驟，於洗淨步驟後，向支持體上之金屬微結構照射激發光，測定藉由該激發光之照射而產生之拉曼散射光之光譜。
於上述細胞分析方法中，於混合步驟中，亦可混合pH調整劑而製作混合液。 [產業上之可利用性]
本發明可用作可容易地進行利用高效率之SERS分光對作為受檢體之細胞分析之方法。
1:顯微分光裝置 11:激發光源 12:雙色鏡 13:物鏡 14:濾光器 15:分光器 21:支持體 22:金屬微結構 23:細胞(或源自細胞之物質) Lp :激發光 Ls :拉曼散射光
圖1係第1實施方式之細胞分析方法之流程圖。 圖2係第2實施方式之細胞分析方法之流程圖。 圖3係表示於各實施例之測定步驟中測定SERS光之光譜時所使用之顯微分光裝置1之光學系統的圖。 圖4係彙總各實施例所使用之試樣之表。 圖5係表示實施例1所獲得之SERS光之光譜之圖。 圖6係表示實施例2所獲得之SERS光之光譜之圖。 圖7係表示實施例3所獲得之SERS光之光譜之圖。 圖8係表示實施例4所獲得之SERS光之光譜之圖。 圖9係表示實施例5所獲得之SERS光之光譜之圖。 圖10係比較例之明視野像之照片。 圖11係實施例2中測定步驟時之明視野像之照片。 圖12係實施例3中測定步驟時之明視野像之照片。 圖13係實施例4中測定步驟時之明視野像之照片。

Claims (3)

  1. 一種細胞分析方法，其具備：混合步驟，將作為受檢體之細胞、金屬離子之溶液及還原劑加以混合而製作混合液； 金屬微結構生成步驟，藉由上述混合液中之上述還原劑之還原作用，將上述混合液中之上述金屬離子還原而於支持體上生成金屬微結構，並且使上述細胞或源自上述細胞之物質附著於上述金屬微結構； 乾燥步驟，於上述金屬微結構生成步驟後，對上述支持體進行乾燥；及 測定步驟，於上述乾燥步驟後，向上述支持體上之上述金屬微結構照射激發光，測定藉由該激發光之照射而產生之拉曼散射光之光譜。
  2. 如請求項1之細胞分析方法，其進而具備洗淨步驟，該洗淨步驟設置於上述乾燥步驟與上述測定步驟之間，對上述支持體進行洗淨。
  3. 如請求項1或2之細胞分析方法，其中於上述混合步驟中，亦混合pH調整劑而製作上述混合液。
TW110102656A 2020-01-27 2021-01-25 細胞分析方法 TW202142860A (zh)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2020-010708 2020-01-27
JP2020010708A JP7344140B2 (ja) 2020-01-27 2020-01-27 細胞分析方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
TW202142860A true TW202142860A (zh) 2021-11-16

Family

ID=77078834

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TW110102656A TW202142860A (zh) 2020-01-27 2021-01-25 細胞分析方法

Country Status (6)

Country Link
US (1) US20230034756A1 (zh)
JP (1) JP7344140B2 (zh)
CN (1) CN115004014A (zh)
DE (1) DE112021000772T5 (zh)
TW (1) TW202142860A (zh)
WO (1) WO2021153253A1 (zh)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2023074685A (ja) * 2021-11-18 2023-05-30 浜松ホトニクス株式会社 被検体分析方法

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1606610A2 (en) 2003-03-12 2005-12-21 Intel Corporation Chemical enhancement in surface enhanced raman scattering using lithium chloride
WO2007060988A1 (ja) 2005-11-22 2007-05-31 Intellectual Property Bank Corp. 表面増強ラマン散乱(ｓｅｒｓ)による微量物質の検知方法ならびに装置
GB2559520B (en) 2015-11-18 2021-07-28 Hamamatsu Photonics Kk Concentration measurement method
JP6807680B2 (ja) * 2016-08-09 2021-01-06 浜松ホトニクス株式会社 被検体分析方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN115004014A (zh) 2022-09-02
WO2021153253A1 (ja) 2021-08-05
DE112021000772T5 (de) 2023-01-19
JP2021117106A (ja) 2021-08-10
US20230034756A1 (en) 2023-02-02
JP7344140B2 (ja) 2023-09-13

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Ma et al. Surface-enhanced Raman spectroscopy on liquid interfacial nanoparticle arrays for multiplex detecting drugs in urine
Halvorson et al. Surface-enhanced Raman spectroscopy (SERS) for environmental analyses
Banholzer et al. On-wire lithography: synthesis, encoding and biological applications
Liao et al. A novel strategy for rapid detection of bacteria in water by the combination of three-dimensional surface-enhanced Raman scattering (3D SERS) and laser induced breakdown spectroscopy (LIBS)
JP5466226B2 (ja) 表面増強ラマン散乱活性測定基板
US11060976B2 (en) Methods and systems for optical control of metal particles with thermophoresis
Cherukulappurath et al. Rapid and sensitive in situ SERS detection using dielectrophoresis
Kahraman et al. Hydrophobicity-driven self-assembly of protein and silver nanoparticles for protein detection using surface-enhanced Raman scattering
Moreno et al. Analytical nanometrological approach for screening and confirmation of titanium dioxide nano/micro-particles in sugary samples based on Raman spectroscopy–capillary electrophoresis
TW202142860A (zh) 細胞分析方法
Kanodarwala et al. Novel upconverting nanoparticles for fingermark detection
Schmidt et al. High-speed spectral characterization of single-molecule SERS fluctuations
Li et al. Plasmonic rare-earth nanosheets as surface enhanced Raman scattering substrates with high sensitivity and stability for multicomponent analysis
JP6807680B2 (ja) 被検体分析方法
CN112730323B (zh) 一种新型杂化金属纳米材料，其制备方法及其在基质辅助激光解吸离子化质谱中的应用
Jung et al. Quantitative determination of nicotine in a PDMS microfluidic channel using surface enhanced Raman spectroscopy
Bai et al. Ultraminiaturized Microfluidic Electrochemical Surface‐Enhanced Raman Scattering Chip for Analysis of Neurotransmitters Fabricated by Ship‐in‐a‐Bottle Integration
Li Surface‐enhanced Raman scattering at colloidal silver oxide surfaces
WO2023089922A1 (ja) 被検体分析方法
US20210181116A1 (en) Analyte analysis method
McRae et al. Plasmon-mediated drilling in thin metallic nanostructures
US20210308671A1 (en) Systems and methods of using anisotropic nanostructures in microfluidic devices for binding and optional release of molecules and cells
Vitol et al. Surface-enhanced raman spectroscopy-active substrates: adapting the shape of plasmonic nanoparticles for different biological applications
Levin et al. Nanofluidics as a tool for parallelized single nanoparticle characterization: Fluorescence single nanoparticle catalysis and size determination through 1D Brownian motion
Ferreira et al. Unveiling Step-by-Step the Bottom-Up Kinetics and Growth Mechanism of Laser-Induced Colloidal Gold Nanoparticles