TW202128203A - 預防癌症復發的組成物及方法 - Google Patents

Abstract

本揭示係關於用於在哺乳動物中預防癌症複發並增強癌症免疫療法功效的方法和組成物，該方法中所使用的組成物包括草藥提取物YIV-906，其包含黃芩（Scutellaria baicalensis ）（S）、甘草（Glycyrrhiza uralensis ）（G）、芍藥（Paeonia lactiflora ）（P）及棗（Ziziphus jujuba ）（Z）之草藥萃取物或經β-葡萄醣醛酸苷酶處理的YIV-906（YIV-906GU）。

Description

預防癌症復發的組成物及方法

本申請案主張美國臨時申請案第62/945,464號發明名稱為「預防癌症復發的組成物及方法」（2019年12月9日申請）之優先權利益，本揭示藉由引用將其等整體併入。

本案係關於一種預防癌症復發的組成物及方法。

免疫檢查點阻斷療法被認為是癌症治療的突破。目前，美國FDA已批准伊匹單抗（ipilumumab）（抗CTLA4）、派姆單抗（pembrolizumab）（抗PD1）、納武單抗（nivolumab）（抗PD1）及阿特朱單抗（Atezolizumab）（抗PDL1）用於治療多種類型的癌症。這些抗體的基本作用機制是藉由中斷CTLA4-CD80/CD86、PD1-PDL1/PDL2之間的相互作用來抑制共抑制途徑，從而恢復細胞毒性T細胞功能。然而，並非所有病患都對這些免疫療法有反應。這些免疫療法亦取決於腫瘤類型，例如，在胰臟癌、結腸癌及肝癌病患中已發現沒有或低的反應率。因此，為了提高免疫治療反應率，正研發用於免疫抑制或激動劑以刺激免疫反應的特異性標靶導向抑制劑。然而，許多這些單一標靶導向免疫增強劑在臨床試驗中失敗。這可能是由於腫瘤環境的複雜性所致，其中癌細胞高度異質，免疫細胞由處於不同發育階段的許多細胞類型組成。

考慮到上述情況，本領域需要研發用於癌症免疫療法的多標靶導向的免疫增強劑，本發明滿足了此一需求。

本揭示提供在哺乳動物中預防癌症復發的方法，該方法包括向該哺乳動物受試者投予草藥萃取物，其包含黃芩（Scutellaria baicalensis ）（S ）、甘草（ Glycyrrhiza uralensis ）（ G ）、芍藥（ Paeonia lactiflora ）（ P ）及棗（ Ziziphus jujuba ）（ Z ） 之草藥萃取物、其等之濾分或存在於草藥萃取物或其濾分中之任何活性化學物質，及/或（b）β-葡萄醣醛酸酶處理的YIV-906（YIV-906GU）或其之濾分，或存在於YIV-906或其之濾分中之任何活性化學物質。進一步投予哺乳動物有效量的至少一種免疫治療劑，適當的免疫治療劑包括免疫檢查點抑制劑及抗體。

現在將詳細參考所揭示的標的之某些實施方式。儘管將結合所列舉的申請專利範圍來序述所揭示的標的，但應理解的是，所例示的標的並非意圖將申請專利範圍限制為所揭示的標的。定義

如本文所使用，以下各術語在本章節中具有與其相關的含義。

除另有定義外，否則所有本文使用的技術和科學術語具有與本揭示所屬技術領域中具有通常知識者所能理解的涵義相同。儘管與本文描述者類似或等同的任何方法和材料都可以用於本揭示的實施或測試中，但仍描述例示的方法和材料。

一般而言，本文使用的命名法與藥理學、天然產物化學及有機化學中的實驗室程序是本領域公知且常用的。

如本文所使用，術語「約」可以允許數值或範圍內的可變程度，例如，在指定值或指定之範圍極限的10%以內、5%以內或1%以內，並包括該確切的指定值或範圍。

如本文所使用，術語「實質上」係指至少約50%、60%、70%、80%、90%、95%、96%、97%、98%、99%、99.5%、99.9%、99.99%或至少約99.999%或更高或100%的主要部分或大部分。如本文所使用，術語「實質上無」可表示不具有或具有少量，使得存在物質的量不影響包括該物質之組成物的物質特性，從而該組成物為約0 wt%至約5 wt%的該物質，或約0 wt%至約1 wt%、或約5 wt%或更少，或小於、等於或大於約4.5 wt%、4、3.5、3、2.5、2、1.5、1、0.9、0.8、0.7、0.6、0.5、0.4、0.3、0.2、0.1、0.01或約0.001 wt%或更少。術語「實質上無」可意指具有少量的，使得組成物為約0 wt%至約5 wt%的該物質，或約0 wt%至約1 wt%，或約5 wt%或更少，或小於、等於或大於約4.5 wt%、4、3.5、3、2.5、2、1.5、1、0.9、0.8、0.7、0.6、0.5、0.4、0.3、0.2、0.1、0.01或約0.001 wt%或更少、或約0 wt%。

如本文所使用，術語「癌症」定義為特徵在於異常細胞的快速且不受控制地生長的疾病，癌細胞可局部擴散或通過血流和淋巴系統擴散到身體的其他部位。各種癌症的實例包括但不限於骨癌、乳腺癌、前列腺癌、卵巢癌、宮頸癌、皮膚癌、胰腺癌、結腸直腸癌、腎癌、肝癌、腦癌、淋巴瘤、白血病、肺癌等等。

在一方面，與受試者有關的術語「共同投予的（co-administered）」和「共同投予（co-administration）」係指對受試者投予本揭示的化合物和/或組成物以及亦可治療或預防本文考慮的疾病或病症的化合物和/或組成物。在某些實施方式中，共同給予的化合物和/或組合物分別投予，或作為單一治療方法的一部分以任何種類的組合投予。共同投予的化合物及/或組成物在各種固體、凝膠及液體調配物下可以各種組合調配成固體及液體的混合物，及調配成溶液。

如本文所使用，術語「治愈」係指減輕受試者的特定疾病或病症，例如特定類型的癌症。

如本文所使用，術語「萃取物」係指源自例如草藥或其他植物材料的天然存在來源的化合物或藥物的濃縮製劑或溶液。萃取物可藉由許多方法製備，包括將草藥浸泡在溶液中，或將草藥乾燥和研磨成粉末並將粉末溶解在溶液中。在將一定量所需之化合物溶解於溶液後，藉由除去一部分溶劑可進一步濃縮萃取物。亦可對萃取物進行過濾或離心以從溶液中除去任何固體物質。

如本文所使用，短語「抑制」意指以可測量之量減少或完全防止分子、反應、相互作用、基因及/或蛋白質的表現、穩定性、功能或活性。抑制劑是例如部分結合或完全阻斷刺激、減少、防止、延遲活化、去活化、脫敏或下調蛋白質或基因穩定性、表現、功能及活性的化合物，例如激動劑。

如本文所使用，術語「醫藥組成物」或「組成物」係指至少一種可用於本揭示中的化合物與醫藥上可接受的載劑的混合物，該醫藥組成物有助於將化合物投予受試者。

如本文所使用，術語「醫藥上可接受」係指一種物質，例如載劑或稀釋劑，其不會消除本揭示中有用之化合物的生物活性或性質，且相對是無毒的，即該物質可投予個體而不引起非所欲的生物學效果，或以有害的方式與包含其之組成物中的任何組分相互作用。

如本文所使用，術語「醫藥上可接受的載劑」意指醫藥上可接受物質、組成物或載劑，例如液體或固體填充劑、穩定劑、分散劑、懸浮劑、稀釋劑、賦形劑、增稠劑、溶劑或包封材料，涉及在病患體內攜帶或運輸本揭示中有用的化合物，或將其攜帶或運輸至受試者，使其可進行其預期的功能。通常，這種構造體從一個器官或身體的一部分被攜帶或輸送到另一器官或身體的一部分，在與調配物的其他成分相容的意義上，每種載劑必須是「可接受的」，包括在本揭示中有用的化合物，且對受試者無害。可作為醫藥上可接受的載劑的物質的一些實例包括：糖類，例如乳糖、葡萄糖和蔗糖；澱粉類，例如玉米澱粉和馬鈴薯澱粉；纖維素及其衍生物，例如羧甲基纖維素鈉、乙基纖維素和纖維素乙酸酯；粉末黃蓍膠；麥芽；明膠；滑石粉；賦形劑，例如可可脂和栓劑蠟；油類，例如花生油、棉籽油、紅花油、芝麻油、橄欖油、玉米油和大豆油；二醇類，例如丙二醇；多元醇，例如甘油、山梨糖醇、甘露醇和聚乙二醇；酯類，例如油酸乙酯和月桂酸乙酯；瓊脂；緩沖劑，例如氫氧化鎂和氫氧化鋁；界面活性劑；褐藻糖酸；無熱原水；等滲鹽水；林格氏（Ringer）液；乙醇；磷酸鹽緩衝液溶液；和醫藥調配物中所使用的其他無毒相容物質。如本文所使用的，術語「醫藥上可接受載劑」亦包含任何及所有的塗層、抗細菌及抗真菌劑以及吸收延遲劑等，其與本揭示中可用的化合物的活性相容，並對於受試者是生理上可接受的。補充活性化合物亦可以納入組成物中。「醫藥上可接受載劑」可進一步包括可用於本揭示之化合物的醫藥上可接受的鹽類。可以包含於用於實施本發明醫藥組成物的其它額外成分在本領域中是已知的，例如在Remington’s Pharmaceutical Sciences（Genaro, Ed., Mack Publishing Co., 1985, Easton, PA）中所述，其藉由引用併入本文所揭露之一部分。

如本文所使用，術語「醫藥上可接受的鹽類」係指所施用的化合物的鹽類，其由醫藥上可接受的無毒酸及鹼所製備，包括無機酸、無機鹼、有機酸、有機鹼、溶劑合物、水合物及其籠合物（clathrate）。適當的醫藥上可接受的酸加成鹽類可由無機酸或有機酸製備。無機酸的實例包括硫酸鹽、硫酸氫鹽、鹽酸、氫溴酸、氫碘酸、硝酸、碳酸、硫酸和磷酸（包括磷酸氫鹽和磷酸二氫鹽）。適當的有機酸可選自脂肪族、脂環族、芳香族、芳脂族、雜環、羧酸及磺酸類有機酸，其實例包括甲酸、乙酸、丙酸、琥珀酸、乙醇酸、葡萄糖酸、乳酸、蘋果酸、酒石酸、檸檬酸、抗壞血酸、葡萄醣醛酸、馬來酸、富馬酸、丙酮酸、天冬胺酸、麩胺酸、苯甲酸、鄰胺苯甲酸、4-羥基苯甲酸、苯乙酸、杏仁酸、撲酸（embonic）（或撲酸（pamoic））、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、泛酸、三氟甲磺酸、2-羥基乙磺酸、對甲苯磺酸、對胺基苯磺酸、環己基胺基磺酸、硬脂酸、藻酸、β-羥基丁酸、水楊酸、半乳糖二酸及半乳醣醛酸。本揭示化合物適當的醫藥上可接受的鹼加成鹽包括例如金屬鹽類，包括鹼金屬鹽、鹼土金屬鹽及過渡金屬鹽等金屬鹽，例如鈣鹽、鎂鹽、鉀鹽、鈉鹽及鋅鹽。醫藥上可接受的鹼加成鹽亦包括由鹼性胺製成的有機鹽類，例如N,N’-二芐基乙烯基-二胺基、氯普魯卡因（chloroprocine）、膽鹼、二乙醇胺、乙二胺、葡胺（meglumine）（N‑甲基葡糖胺）及普魯卡因。所有這些鹽類可由對應的化合物藉由例如使適當的酸或鹼與化合物反應來製備。

術語「藥學有效量」和「有效量」係指提供所需生物學結果的藥劑之無毒但足夠的量。該結果可能是減輕及/或緩和體徵、徵狀或疾病或病症的病因，或生物系統的任何其他所需改變。在任何個體的情況中，本技術領域中具有通常知識者可使用常規實驗確定適當的有效量。「醫藥調配物」進一步意指載劑、溶劑、賦形劑及/或鹽必須與調配物（例如本揭示的化合物）的活性成分相容。本技術領域中具有通常知識者應理解，術語「醫藥調配物」和「醫藥組成物」通常是可互換的，且它們被用於本案的目的。

如本文所使用，術語「YIV-906」係指包含甘草（Glycyrrhiza uralensis Fisch ）（G）、芍藥（Paeonia lactiflora Pall ）（P）、黃芩（Scutellaria baicalensis Georgi ）（S）及棗（Ziziphus jujuba Mill ）（Z）的草藥組成物。YIV-906可指，例如，包含在標準操作程序下製備的3：2：2：2比例的S、G、P和Z的特定組成物，在一些實施方式中，包括S、P、G和Z的熱水萃取。

如本文所使用，術語「預防（prevent）」、「預防（prevention）」或「預防（preventing）」係指部分或完全預防、延遲或減緩疾病、病症和/或狀況（例如，癌症）的一種或多種症狀或特徵之發作的任何方法。預防導致疾病狀態的臨床症狀在可能暴露於或易患疾病狀態但尚未經歷或顯示疾病狀態症狀的受試者中不發展，即，抑制疾病發作。可對沒有表現出疾病、病症及/或症狀跡象的受試者進行預防給藥。在一些實施方式中，減緩一種或多種疾病或病證的症狀或特徵的發作意指如果發生該疾病或病症的複發，或疾病或病症的一種或多種症狀的複發，則該疾病或病症的複發，或疾病或病症的一種或多種症狀的復發至少比在不使用YIV-906或YIV-906GU的情況下會復發該疾病或病症，或疾病或病症的一種或多種症狀還慢約5%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%或99%。

如本文所用，預期被投予的術語「受試者」、「病患」或「個體」包括但不限於人（即，任何年齡組別的男性或女性，例如兒科受試者（例如，嬰兒、兒童、青少年）或成人受試者（例如，青年、中年或老年人））及/或其他靈長類動物（例如，食蟹猴、恒河猴）；哺乳動物，包括商業上相關的哺乳動物如牛、豬、馬、綿羊、山羊、貓和/或狗；和/或鳥類，包括商業上相關的鳥類如雞、鴨、鵝、鵪鶉和/或火雞。

如本文所使用，術語「治療有效量」為本揭示之的化合物的量，當向患者給予時，其治療、最小化及/或減輕疾病或病症的症狀。構成「治療有效量」的本揭示之化合物的量將根據化合物、疾病狀態及其嚴重性、待治療病患的年齡等而變化。治療有效量可由本技術領域中具有通常知識者根據其自身的知識和本揭示常規地確定。

如本文所用，術語「治療」或「處理」定義為治療劑（即，本揭示中有用的化合物（單獨或與另一種藥劑組合））對受試者的施用或投予，或治療劑對來自受試者的分離組織或細胞系的施用或投予（例如，用於診斷或離體應用），該受試者具有癌症、癌症的症狀或發展成癌症的可能性，目的是治療、治癒、減輕、緩解、改變、補救、減輕、改善或影響癌症、癌症的症狀或發展成癌症的可能性。基於從藥物基因組學領域獲得的知識，此類治療可特定地定製或修改。

範圍：貫穿本揭示內容，本揭示的各個態樣可以範圍的形式呈現。應理解的是，範圍形式的描述僅是為了方便及簡潔，且不應被解釋為對本揭示範圍的不靈活限制。因此，範圍的描述應被視為已具體揭示所有可能的子範圍以及該範圍內的單一數值。例如，從1至6的範圍描述應被認為已特定揭示子範圍，例如從1至3、1至4、1至5、2至4、2至6、3至6等，以及在該範圍內的個別及部分數字，例如1、2、2.7、3、4、5、5.3及6。無論範圍的寬度如何皆適用。

此外，在整個文件中，應以靈活的方式來解釋以範圍方式表示的值，不僅包括明確列舉為範圍限制的數值，還包括範圍內包含的所有個別數值或子範圍，如同每個數值和子範圍都被明確敘述一樣。例如，「約0.1%至約5%」或「約0.1%至5%」的範圍應解釋為不僅包括約0.1%至約5%，而且包括各個值（例如1%、2%、3%及4%）以及在指定範圍內的子範圍（例如0.1%至0.5%、1.1%至2.2%、3.3%至4.4%）。除非另有說明，否則「約X至Y」的含義與「約X至約Y」的含義相同。同樣地，除非另有說明，否則「約X，Y或約Z」與「約X，約Y或約Z」具有相同的含義。

在本文中，除非上下文另外明確指出，否則術語「一」，「一種」或「該」用於包括一個或多個。除非另有說明，否則術語「或」用於表示非排他性的「或」。表達方式「A及B中至少一者」或「A或B中至少一者」具有與「A、B或A及B」相同之含義。此外，應理解，本文中採用的，沒有另外定義的措詞或術語僅是出於描述的目的而非限制。任何章節標題的使用均意在幫助閱讀文件，而不應理解為限制性的；與章節標題相關的信息可能出現在該特定章節內部或外部。此文件中引用的所有出版物、專利及專利文件皆藉由引用整體併入本文，如同藉由引用將其個別併入一樣。

在本文描述的方法中，可以任何順序進行動作，除非明確陳述時間或操作序列。此外，特定的動作可同時進行，除非明確的申請專利範圍語句陳述它們是分開執行的。例如，可在單一操作中同時進行所主張的X行為及所主張的Y行為，並且所產生的過程將落入所主張方法的文義範圍內。

在本文中使用以下縮寫： BMDM = 骨髓來源的單核球； GU = β-葡萄醣醛酸酶； IFNγ = γ干擾素； IL4= 介白素4； MDSC = 骨髓來源的抑制細胞； STING = 干擾素基因的刺激劑；及 YIV-906GU = 經β-葡萄醣醛酸酶處理的YIV-906或不含葡糖苷酸的YIV-906。

在一方面，本揭示係關於不可預期的發現包含草藥萃取物YIV-906或葡萄醣醛酸共軛的YIV-906或YIV-906GU（經β-葡萄醣醛酸酶處理的YIV-906或不含葡萄醣醛酸的YIV-906）的組成物可預防癌症的複發。在某些實施方式中，可將其中的草藥萃取物或其分離的濾分或活性化學物質與免疫檢查點抑制劑或用於治療癌症的任何其他治療劑共投予至療罹患癌症的哺乳動物，以預防癌症的複發。

當前許多針對癌症的免疫療法試圖將「冷腫瘤」轉化為「熱腫瘤」，從而恢復免疫細胞能夠攻擊腫瘤細胞。免疫檢查點抗體（抑制劑），例如抗PD1、抗PDL1、抗CTLA4，在治療許多類型的腫瘤方面取得了突破。然而，例如HCC（肝細胞癌）、胰腺癌和結腸癌等腫瘤類型對這些抗體的反應率相對較低。這些治療藥物中有許多被設計為針對免疫週期的特定目標（相對於多個目標）。本揭示敍述YIV-906或YIV-906GU，一種具有全身生物學效應的植物來源免疫調節劑，其可藉由促進適應性及先天性免疫來增強針對Hepa 1-6腫瘤生長的抗PD1作用。

關於適應性免疫，不可預期地發現YIV-906與抗PD1劑組合可顯著減少PD1腫瘤蛋白質並抑制經抗PD1誘導的PDL-1表現。此外，YIV-906可調節IDO活性並導致Hepa 1-6腫瘤的MDSC降低。

另外，據報導，IDO抑制劑可增強抗PD1、抗PD-L1、抗CTLA4對不同類型之動物腫瘤的作用。在臨床試驗中，已經進行許多嘗試將IDO抑制劑與免疫檢查點抑制劑聯合使用，包括艾卡哚司他（epacadostat）（IDO抑制劑）和派姆單抗（ECHO-301/KN-252）。然而，這種組合在晚期實體腫瘤的第三期臨床試驗中未顯示出足夠的療效，且還具有嚴重的不良反應，這種挫折並未阻止使用IDO抑制劑治療癌症的臨床試驗。例如，BMS-986205仍與納武單抗組合作為肝癌的第一線或第二線療法而正在接受測試[NCT03695250]。

不受理論的束縛，單一目標定向抑制劑，例如作為單獨的IDO抑制劑，可能不足以增強針對免疫檢查點抗體的抗腫瘤活性。相反地，YIV-906不僅增強了適應性免疫反應，還增強先天性免疫反應。關於先天免疫，不可預期地發現YIV-906加上抗PD1藥物可吸引更多的M1巨噬細胞浸潤，這可能部分是由於在腫瘤中誘導MCP1。有趣的是，當與伊立替康（irinotecan）（CPT-11）或索拉非尼（sorafenib）聯合使用時，YIV-906亦增加M1巨噬細胞的腫瘤浸潤。

最近，在了解巨噬細胞在免疫檢查點阻斷療法中的重要作用方面取得了進展。越來越多的證據支持腫瘤中M1巨噬細胞的存在可增強化學療法和標靶療法的療效。

M1巨噬細胞可藉由產生NO（一氧化氮）直接殺死腫瘤細胞，或藉由活化T細胞間接殺死腫瘤細胞。另一方面，具有高PD1表現和低吞噬活性的M2巨噬細胞促進腫瘤生長並且不利於免疫療法。低的PD1表現有利於具有高吞噬活性的M1巨噬細胞，並可能增加免疫檢查點阻斷療法的作用。最近的報告證實，抗PD1藥物可幫助肺癌中巨噬細胞之極性狀態從M2切換成M1表型。單獨使用抗PD1藥物可使腫瘤微環境中M1巨噬細胞的機率增加約40%。在一些實施方式中，令人驚訝的是，YIV-906與抗PD1試劑組合可進一步增強M1巨噬細胞和腫瘤微環境中的先天性免疫反應。

在各種實施方式中，YIV-906與抗PD1試劑組合甚至可進一步減少腫瘤組織中的PD1蛋白質，此可隨既為具有高吞噬能力的M1巨噬細胞增殖提供有利的條件。如本文他處所詳述，YIV-906加上抗PD1的組別中，PD1蛋白質水平的降低亦可解釋，在不受理論束縛的情況下，如此低之劑量（相較於單獨的抗PD1，至少約1/3）的抗PD1與YIV-906組合可達到與單獨使用更高劑量的抗PD1藥劑的相同抗腫瘤活性。

藉由投予YIV-906來增加M1巨噬細胞以增強先天性和適應性免疫力，並藉由組合抗PD1藥劑來重新活化適應性免疫力，可在活體內對Hepa 1-6腫瘤生長產生不可預期的強大協同效應。這種組合不僅消除每隻小鼠的Hepa 1-6腫瘤，而且還模仿腫瘤特異性的疫苗樣行為，如藉由再植入之Hepa 1-6腫瘤的選擇性排斥以及植入的CMT167或Pan02腫瘤的生長所證實。

IFNγ在巨噬細胞M1極化中扮演重要角色。不受理論的束縛，YIV-906可增強IFNγ的活性，以增強傳訊轉導反應至更高的水平；因為單獨的抗PD1可活化腫瘤中釋放IFNγ的T細胞，添加YIV-906可進一步放大 IFNγ信號並增強M1巨噬細胞極化。這些M1巨噬細胞具有高水平的iNOS蛋白質，用於代謝L-精胺酸成為瓜胺酸及NO，從而殺死癌細胞。

YIV-906的另一個令人驚訝的特性是通過下調IFR4對M2誘導物IL4表現出抑制活性。當以YIV-906和抗PD1的組合治療時，促進M1極性同時抑制M2狀態的雙重作用確保腫瘤組織中M1巨噬細胞的優勢。

在一些實施方式中，黃芩（S）可促進M1巨噬細胞極化。在一些實施方式中，一種或多種類黃酮是S中促進M1巨噬細胞極化的醫藥活性化合物。在Hepa 1-6腫瘤中檢測到貝加因、黃芩素和木蝴蝶素A的存在，且這些類黃酮可增強腫瘤中的IFNγ，使巨噬細胞極化為M1。應注意的是，類黃酮並非簡單地穿過腸道進入腫瘤部位。口服後，YIV-906的大多數類黃酮將被來自腸道微生物體組（例如大腸桿菌）的β-葡萄醣醛酸酶進行去葡醣醛酸化，例如，貝加靈（含葡萄醣醛酸）將被轉化為貝加因（無葡萄醣醛酸）。糖苷配基類黃酮在通過腸道時，將被不同的UDP-葡醣醛酸糖基轉移酶（UGT）同工酶進行葡醣醛酸化，以形成不同的葡醣醛酸化類黃酮代謝產物。腫瘤β-葡萄醣醛酸酶亦可將葡醣醛酸化的類黃酮代謝產物轉化為糖苷配基類黃酮，例如黃芩素。UGT與β-葡萄醣醛酸酶的比例可能會影響葡萄醣醛酸化類黃酮的存在，並在腫瘤或其他組織中將其轉化成糖苷配基類黃酮。YIV-906加上抗PD1的組別中的腫瘤比YIV-906組別具有更多的黃芩素和木蝴蝶素A，但不具有貝加因。方法

在一實施方式中，本揭示包括在哺乳動物中預防癌症復發的方法，其中該方法包含向所需的哺乳動物投予治療有效量的至少一種選自下列所組成群組的草藥組成物：a）草藥萃取物YIV-906或其濾分或存在於該草藥萃取物或其濾分中的任何活性化學物質，（b）葡萄醣醛酸共軛的YIV-906或其濾分，或葡萄醣醛酸共軛的YIV-906或其濾分中所存在的任何活性化學物質，（c）YIV-906GU（經β-葡萄醣醛酸酶處理的YIV-906或不含葡萄醣醛酸的YIV-906）或其濾分，或YIV-906GU或其濾分中所存在的任何活性化學物質。在某些實施方式中，草藥萃取物YIV-906包含黃芩（S）、甘草（G）、芍藥（P）及棗（Z）之草藥萃取物。在某些實施方式中，進一步投予哺乳動物至少一種免疫治療劑。

在另一種實施方式中，本發明包括減緩哺乳動物中癌症復發的方法，其中該方法包含對所需的哺乳動物投予治療有效量的本文所述之至少一種草藥組成物，及在某些實施方式中，至少一種免疫治療劑。

在某些實施方式中，癌症包括實性瘤。在某些實施方式中，該癌症係選自黑素瘤、非小細胞肺癌、腎細胞癌、肝癌、結腸癌、尿路上皮膀胱癌及胰臟癌中的至少一種。

在某些實施方式中，至少一種免疫治療劑係選自抗PD1、抗PD-L1及抗CTLA4所組成之群組的免疫檢查點抑制劑。在某些實施方式中，至少一種免疫檢查點抑制劑選自依伊匹木單抗（Ipilimumab）、派姆單抗、納武單抗、度伐利尤單抗（Durvalumab）及阿特朱單抗（Atezolizumab）所組成之群組。

在某些實施方式中，至少一種免疫治療劑是選自下列所組成群組之抗體：Siglec 15抗體、抗磷脂絲胺酸、抗OX40、抗CD73、抗TIM3、抗CD24、抗CD47、抗PD1、抗PDL1、抗CTLA4、抗GITR、抗CD27、抗CD28、抗CD122、抗TIGIT、抗VISTA、抗ICOS及抗LAG3。

在某些實施方式中，投予草藥組成物可增強至少一種免疫治療劑的反應。

在某些實施方式中，將草藥組成物口服投予哺乳動物。在某些實施方式中，將草藥組成物以選自藥丸、錠劑、膠囊、湯劑、茶劑、濃縮物、糖衣錠、液體、滴劑和明膠衣錠（gelcap）所組成群組之形式投予哺乳動物。

在某些實施方式中，草藥組成物的治療有效量約為20毫克/天至約2000毫克/天。在某些實施方式中，治療有效量的草藥組成物（YIV-906或YIV-906GU）約為20、50、100、150、200、250、300、350、400、450、500、550、600、650、700、750、800、850、900、950、1000、1050、1100、1150、1200、1250、1300、1350、1400、1450、1500、1550、1600、1650、1700、1750、1800、1850、1900、1950或約2000 mg/天。

在一特定的實施方式中，草藥組成物的治療有效量為例如約1600 mg/天。

在某些實施方式中，草藥組成物每天投予兩次。在某些實施方式中，將該草藥組成物投予約一兩週，然後暫停治療至少一週。

在某些實施方式中，其中在施用化學療法或放射療法之前投予草藥組成物每天兩次，約30分鐘。在某些實施方式中，給藥持續約4天。

在某些實施方式中，在選自投予一種或多種免疫治療劑之前、同時和之後的時間，投予該草藥組合物至該哺乳動物。

在某些實施方式中，投予組成物可增強IFNγ作用在極化巨噬細胞成為M1（或腫瘤排斥）表現。在某些實施方式中，投予該組成物抑制IL4作用於極化巨噬細胞成為M2（或腫瘤促進）表現型。在某些實施方式中，投予組成物促進STING激動劑作用。在某些實施方式中，投予組成物降低或抑制CD73活性。在某些實施方式中，投予組成物對吲哚胺2,3-二氧酶（IDO）活性具有抑制作用。

在某些實施方式中，該哺乳動物是人類。給藥 / 劑量 / 調配物

治療方案可影響有效量的組成。治療調配物可在本揭示所考量之疾病或失調發作之前或之後投予受試者。此外，可以每日或依序投予若干分開的劑量以及交錯的劑量，或該劑量可被連續輸注，或可為快速推注（bolus injection）。此外，可視治療或預防情況的緊急程度，按比例增加或減少治療調配物的劑量。

可使用已知的程序、劑量及時間期間投予本揭示之組成物於病患，較佳為哺乳動物，更佳為人類，以有效治療本揭示所考量之疾病或病症。達到治療效果所必需的治療化合物有效量可根據許多因素而變化，例如被治療之病患的疾病或病症的狀態、年齡、性別及體重；以及治療化合物治療本揭示所考量的疾病或病症的能力。可調整劑量方案以提供優化的治療反應。例如，可每日投予若干分開的劑量，或劑量可該視如治療情況的緊急程度而按比例減少。本發明治療化合物的有效劑量範圍的非限制性實例為約為每日1至1,000 mg/kg體重。可用於實施本揭示之藥物組成物可投予以遞送1 ng/kg/天至100 mg/kg/天之劑量。本領域中具有通常知識者將能研究相關因素，並在不進行過度實驗的情況下確定治療化合物的有效量。

特別是，所選擇的劑量水平取決於多種因素，包括所使用特定化合物的活性、給藥時間、化合物的排泄速率、治療持續時間、與化合物組合使用的其他藥物、化合物或物質、年齡、性別、體重，症狀、所治療病患的一般健康狀況和既往病史，以及醫學領域中所熟知的類似因素。

本技術領域中具有通常知識的醫師，例如，內科醫師或獸醫師可容易地確定及囑咐所需醫藥組成物的有效量。例如，內科醫師或獸醫師可從低於欲達到治療效果所需之劑量水平的用於醫藥物組成物的本揭示之化合物劑量開始，並逐漸增加劑量，直到達到所需的效果。

在特定實施方式中，為了便於投予及劑量的一致性，以單位劑型配製化合物是有利的。如本文所使用的單位劑型是指適合作為欲治療病患的統一劑量的物理上獨立的單位；含有預定量的治療化合物的每個單位經計算與所需的藥物媒劑聯合產生所需的治療效果。本揭示的單位劑型取決於（a）治療化合物的獨特特徵和欲達到的特定治療效 果，及（b）混合/調配此類治療化合物用於治療本揭示中所考慮的疾病或病症的治療性化合物領域中固有的限制。

在某些實施方式中，使用一或多種醫藥上可接受的賦形劑或載劑來調配本揭示之組成物。在其他實施方式中，本揭示之醫藥組成物包含治療有效量的本揭示化合物及醫藥上可接受的載劑。在另外其他實施方式中，本揭示的化合物為組成物中唯一的生物活性劑（即，能夠治療癌症）。在另外其他實施方式中，本揭示的化合物為治療有效量之組成物中唯一的生物活性劑（即，能夠治療癌症）。

載劑可為溶劑或是含有例如水、乙醇、多元醇（例如甘油、丙二醇及液體聚乙二醇等）、其適合的混合物及植物油等之分散介質。可例如藉由使用如卵磷脂的包覆、藉由在分散的情況下維持所需的粒徑及藉由使用界面活性劑來維持適當的流動性。可藉由各種抗菌劑及抗真菌劑，例如對羥苯甲酸酯類（parabens）、氯丁醇、苯酚、抗壞血酸、乙汞硫柳酸鈉等來防止微生物的作用。在許多情況下，在組成物中較佳可包括等滲劑，例如糖類、氯化鈉或多元醇（如甘露醇及山梨醇）。藉由在組成物中包括延遲吸收的藥劑，例如，單硬脂酸鋁或明膠，可實現可注射組成物的延長吸收。

在某些實施方式中，以每天投予病患1至5次或更多次之劑量的本揭示之組成物。在其他實施方式中，本揭示之組成物以一劑量範圍投予病患，包括，但不限於每天一次、每兩天、每三天至每週一次及每兩週一次。對於本領域技術人員而言顯而易見的是，本揭示組成物的各種組合的給藥頻率因個體而異，取決於許多因素，包括但不限於年齡、疾病或待治療的疾病、性別、整體健康狀況和其他因素。因此，本揭示不應被解釋為限於任何特定的劑量方案，且要投予任何病患的精確劑量和組成物是由主治醫師在考慮病患所有其他因素的情況下確定的。

本揭示之化合物可在下列範圍內投予：約1 mg至約10,000 mg、約20 mg至約9,500 mg、約40 mg至約9,000 mg、約75 mg至約8,500 mg、約150 mg至約7,500 mg、約200 mg至約7,000 mg、約400 mg至約6,000 mg、約500 mg至約5,000 mg、約750 mg至約4,000 mg、約1,000 mg至約3,000 mg、約1,000 mg至約2,500 mg、約20 mg至約2,000 mg，及其等之間的所有或部分或全部增加量。在某些實施方式中，本揭示之化合物及/或組成物的劑量約800 mg。

在某些實施方式中，本揭示涉及經包裝的醫藥組成物，其包含容納治療有效量的本揭示化合物的容器，該化合物單獨或與第二藥劑組合；及使用該化合物治療、預防或減輕本揭示所考量之疾病或病症的一或多種徵狀的說明書。

調配物可與習知賦形劑混合使用，賦形劑即為適用於本領域已知的口服、經腸胃外、經鼻、靜脈內、皮下、腸內或其他任何適當給藥模式的醫藥上可接受之有機或無機載劑物質。醫藥製劑可經滅菌，且如果需要可與輔助劑混合，例如潤滑劑、防腐劑、穩定劑、濕潤劑、乳化劑、用於影響滲透壓緩衝液的鹽類、著色劑、調味劑及/或芳香物質等。如果需要，其等亦可與其它活性劑組合。

任何本揭示之組成物的給藥途徑包括口服、經鼻、經直腸、陰道內、經腸胃外、經頰、舌下或局部給藥。可調配用於本揭示的化合物以用於經任何合適途徑投予，例如用於經口或非經腸胃道，例如，經皮或經黏膜（例如，舌下、舌側、（經）口頰、（經）尿道、陰道（例如，經陰道及經陰道周圍）、鼻腔（內）及（經）直腸）、膀胱內、肺內、十二指腸內、胃內、鞘內、皮下、肌肉內、皮內、腹膜內、動脈內、靜脈內、支氣管內、吸入及局部投予。

適合的組成物及劑型包括例如錠劑、膠囊、膠囊型錠劑、丸劑、軟膠囊（gel caps）、口含劑、分散劑、懸浮劑、溶液、糖漿、顆粒、珠劑、經皮貼劑、凝膠、粉末、粒劑、乳漿劑、菱形錠、乳霜、膏劑、硬膏劑（plasters）、洗劑、盤劑（discs）、栓劑、用於鼻或口服投予之液體噴霧劑、用於吸入的乾粉或霧化調配物、用於膀胱內投予的組成物及調配物等。應理解，可用於本揭示之調配物及組成物不限於本文所述的特定調配物及組成物。 口服投予

關於口服投予，特別適合的為湯劑、茶劑、濃縮物、錠劑、糖衣錠、液體、滴劑、栓劑、或膠囊、膠囊型錠劑及軟膠囊。用於口服的組成物可根據本技術領域已知的任何方法製備，且該組成物可包含一或多種選自由惰性、無毒的醫藥賦形劑所組成群組的藥劑，其適於製造錠劑。此類賦形劑包括例如惰性稀釋劑，如乳糖；粒化劑及崩解劑，如玉米澱粉；黏合劑，如澱粉；及潤滑劑，如硬脂酸鎂。錠劑可為未經塗覆的，或其可藉由已知技術塗覆，以以提高美觀度或延緩活性成分的釋放。口服用途的調配物亦可以硬明膠膠囊形式存在，其中活性成分與惰性稀釋劑混合。

關於口服投予，本揭示之化合物可為錠劑或膠囊形式，其與醫藥上可接受的賦形劑藉由習知方法製備，該賦形劑例如為黏合劑（例如，聚乙烯吡咯啶酮、羥丙基纖維素或羥丙基甲基纖維素）；填充劑（例如，玉米澱粉、乳糖、微晶纖維素或磷酸鈣）；潤滑劑（例如，硬脂酸鎂、滑石或二氧化矽）；崩解劑（例如，澱粉乙醇酸鈉）；或濕潤劑（例如，月桂基硫酸鈉）。如果需要，可使用適合的方法和塗布材料塗布錠劑，例如OPADRY™薄膜塗布系統（可從Colorcon, West Point, Pa.取得）（例如OPADRY™ OY Type、OYC Type、Organic Enteric OY-P Type、Aqueous Enteric OY-A Type、OY-PM Type及OPADRY™ White、32K18400）。用於口服投予的液體製劑可為溶液、糖漿或懸浮液形式。液體製劑可與醫藥上可接受的添加劑藉由習知方法製備，該添加劑可例如為懸浮劑（例如，山梨糖醇糖漿、甲基纖維素或氫化食用脂肪）；乳化劑（例如，卵磷脂或阿拉伯膠）；非水性媒劑（例如，杏仁油、油性酯類或乙醇）；及防腐劑（例如，對羥基苯甲酸甲酯或對羥基苯甲酸丙酯或山梨酸）。

造粒技術在製藥技術中熟知的，用於修改活性成分的起始粉末或其他顆粒材料。粉末通常與黏合劑材料混合成較大的永久自由流動的黏聚物或顆粒，稱為「造粒」。例如，使用溶劑的「濕」造粒方法的一般特徵在於將粉末與黏合劑材料混合並在一定條件下用水或有機溶劑潤濕，從而形成濕的顆粒狀物質，然後溶劑必須由此形成蒸發。

熔體造粒通常在於使用在室溫下為固體或半固體的材料（即，具有相對低的軟化或熔點範圍）以促進粉末或其他材料的造粒，基本上在沒有添加水或其他液體溶劑的情況下。當加熱至熔點範圍內的溫度時，低熔化固體液化以充當黏合劑或造粒介質。液化的固體在與其接觸的粉末材料的表面之上擴散液化的固體自身，並且在冷卻時形成固體顆粒狀物質，其中初始材料結合在一起。然後可將所產生的熔體造粒提供給壓錠機或包封以製備口服劑型。熔體造粒通過形成固體分散體或固體溶液來改善活性物質（即，藥物）的溶解速率和生物利用度。

美國專利號5,169,645揭示具有改進的流動性能的可直接壓縮之含蠟顆粒。當蠟在熔體中與某些流動改進添加劑摻合，然後冷卻和造粒摻合物時，得到顆粒。在某些實施方式中，只有蠟本身在蠟和添加劑的熔體組合中熔化，並且在其他情況下，蠟和添加劑都熔化。

本揭示亦包括多層錠劑，其包含提供用於一種或多種本揭示的化合物的延遲釋放的層，和提供用於治療本揭示所考慮的疾病或病症的藥物的立即釋放的另一層。使用蠟/pH敏感性聚合物混合物，可以獲得胃不溶性組成物，其中捕獲活性成分，確保其延遲釋放。 非經腸胃道投予

如本文所使用，醫藥組成物的「非腸胃道投予」包括任何投予途徑，其特徵在於對受試者組織的物理破壞及透過組織中的裂口投予醫藥組成物。因此，非腸胃道投予包括，但不限於經由注射組成物、透過手術切口施用組成物、透過穿透組織的非手術傷口施用組成物來投予醫藥組成物等。具體而言，非腸胃道投予包括，但不限於皮下、靜脈內、腹膜內、肌內、胸骨內注射及腎臟透析輸注技術。

適於非腸胃道投予的醫藥組成物的調配物包含與醫藥上可接受的載劑（例如無菌水或無菌等滲鹽水）組合的活性成分，此類調配物可以適於推注投予或連續投予的形式製備、包裝或銷售。可注射調配物可以單位劑型製備、包裝或銷售，例如以含有防腐劑的安瓿或多‑劑量容器形式。用於非腸胃道投予的調配物包括，但不限於懸浮液、溶液、在油性或水性媒劑中的乳劑、膏劑及可植入性緩釋或生物可降解調配物。此類調配物可進一步包含一或多種額外成分，包括，但不限於懸浮劑、穩定劑或分散劑。‑在用於非腸胃道投予之調配物的一實施方式中，活性成分以乾燥形式（即粉末或顆粒）提供，並在非腸胃道投予之前以適當媒劑（例如無菌無熱原水）回溶組成物。

藥物組成物可以無菌可注射水性或油性懸浮液或溶液的形式製備、包裝或銷售。此懸浮液或溶液可根據已知技術調配，且除活性成分外，亦可包含另外成分如本文所述的分散劑、潤濕劑或懸浮劑。此類無菌可注射製劑可使用無毒的腸胃道外可接受的稀釋劑或溶劑製備，舉例而言，如水或1,3-丁二醇。其他可接受的稀釋劑和溶劑包括但不限於林格氏（Ringer）溶液、等滲氯化鈉溶液和固定油如合成的甘油單酯或甘油二酯。其它可用於腸胃外給予的製劑包括含有微晶形式、在脂質體製劑中或作為可生物降解的聚合物系統的組分的活性成分的那些製劑。用於緩釋或植入的組成物可包含藥學上可接受的聚合或疏水材料如乳液、離子交換樹脂、微溶聚合物或微溶鹽。 控制釋放調配物及藥物遞送系統

在某些實施方式中，本揭示的調配物可為短期、快速補充及受控制的，例如緩釋、延遲釋放及脈衝釋放（pulsatile release）調配物，但不以此為限。

術語持續釋放以其習知含義使用，係指在延長的時間區段內提供藥物的逐漸釋放的藥物調配物，且雖非必要，但可在延長的時間區段期間造成藥物在血中濃度基本上恆定。這段期可長達一個月或更長，且其應為一種比以推注形式投予相同量之藥劑更長的釋放。

為了持續釋放，該化合物可與提供持續釋放性質於化合物的適當聚合物或疏水性材料配製。因此，用於本揭示之方法的化合物可以微粒的形式投予，例如藉由注射或藉由植入晶片（wafers）或盤劑（discs）的形式投予。

在本揭示之一實施方式中，本揭示之化合物單獨或與另一種藥劑組合，使用緩釋調配物投予至病患。

術語延遲釋放在本文中以其習知含義使用，係指在藥物投予後延遲一段時間後才提供藥物的初始釋放的藥物調配物，且雖非必要，但包括約10分鐘至最多約12個小時的延遲。

術語脈衝釋放在本文中以其習知含義使用，係指一種提供藥物釋放以便在藥物投予後產生藥物的脈衝式血漿輪廓的藥物調配物。

術語立即釋放以其習知含義使用，係指在藥物投予後立即提供藥物釋放的藥物調配物。

如本文所使用，短期係指在藥物施用後直至包括約8小時、約7小時、約6小時、約5小時、約4小時、約3小時、約2小時、約1小時、約40分鐘、約20分鐘、約10分鐘或約1分鐘，以及其任何、全部或部分時間增加量的任何期間。

如本文所使用，快速補充係指在藥物施用後直至包括約8小時、約7小時、約6小時、約5小時、約4小時、約3小時、約2小時、約1小時、約40分鐘、約20分鐘、約10分鐘或約1分鐘，以及其任何、全部或部分時間增加量的任何期間。 給藥

本揭示之化合物的治療有效量或劑量取決於病患的年齡和體重，病患的當前醫療狀況及本揭示中所考量之疾病或病症的進展。技術人員能夠依據這些及其他因素決定合適的劑量。

本發明之化合物、組成物或萃取物的適當劑量可在每日約0.01 mg至約5,000 mg的範圍內，例如每日約0.1 mg至約1,000 mg，例如約1 mg至約500 mg，例如約5 mg至約250 mg。劑量可單劑量或多劑量投予，例如每日1至5次或更多次。當使用多劑量時，每種劑量的量可相同或不同，例如，每天1 mg的劑量可作為兩個0.5 mg劑量以約12小時之間隔投予。

在各種實施方式中，投予的YIV-906或YIV-906GU草藥萃取物的量或劑量可約為0.5 mg/kg至約5000 mg/kg、約1 mg/kg至約2500 mg/kg、約5 mg/kg至約1000 mg/kg或約10 mg/kg至約1000 mg/kg。在各種實施方式中，投予的YIV-906或YIV-906GU草藥萃取物的量或劑量可約為0.01、0.5、1、2、3、4、5,6、7、8、9、10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、120、140、160、180、200、200、220、240、260、280、300、320、340、360、380、400、420、440、460、480、500、520、540、560、580、600、620、640、660、680、700、720、740、760、780、800、820、840、860、880、900、920、940、960、980、1000、1020、1040、1060、1080、1100、1120、1140、1160、1180、1200、1220、1240、1260、1280、1300、1320、1340、1360、1380、1400、1420、1440、1460、1480、1500、1520、1540、1560、1580、1600、1620、1640、1660、1680、1700、1720、1740、1760、1780、1800、1820、1840、1860、1880、1900、1920、1940、1960、1980、2000、2500、3000、3500、4000、4500或約5000 mg/kg。YIV-906或YIV-906GU草藥萃取物的這些量可使用本文所述的任何給藥方案投予。

在各種實施方式中，本文所述之任何免疫檢查點抑制劑或免疫治療劑的量或劑量可約為0.01 mg/kg至約50 mg/kg、約0.05 mg/kg至約30 mg/kg或約1 mg/kg至約20 mg/kg。在各種實施方式中，本文所述之任何免疫檢查點抑制劑或免疫治療劑的量或劑量可為0.01、0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、1.2、1.4、1.6、1.8、2、2.2、2.4、2.6、2.8、3、3.2、3.4、3.6、3.8、4、4.2、4.4、4.6、4.8、5、5.2、5.4、5.6、5.8、6、6.2、6.4、6.6、6.8、7、7.2、7.4、7.6、7.8、8、8.2、8.4、8.6、8.8、9、9.2、9.4、9.6、9.8、10、10.2、10.4、10.6、10.8、11、11.2、11.4、11.6、11.8、12、12.2、12.4、12.6、12.8、13、13.2、13.4、13.6、13.8、14、14.2、14.4、14.6、14.8、15、15.2、15.4、15.6、15.8、16、16.2、16.4、16.6、16.8、17、17.2、17.4、17.6、17.8、18、18.2、18.4、18.6、18.8、19、19.2、19.4、19.6、19.8或約20 mg/kg。在一些實施方式中，本文所述之任何免疫檢查點抑制劑或免疫治療劑的每日最大投予量或劑量可約為10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、100、120、140、160、180、200、220、240、260、280、300、320、340、360、380、400、420、440、460、480、500、520、540、560、580、600、620、640、660、680、700、720、740、760、780、800、820、840、860、880、900、920、940、960、980、1000、1020、1040、1060、1080、1100、1120、1140、1160、1180、1200、1220、1240、1260、1280、1300、1320、1340、1360、1380、1400、1420、1440、1460、1480、1500、1520、1540、1560、1580、1600、1620、1640、1660、1680、1700、1720、1740、1760、1780、1800、1820、1840、1860、1880、1900、1920、1940、1960、1980或約2000 mg。

在一些實施方式中，YIV-906和單一免疫治療劑是醫藥組成物中唯一的治療活性劑。在一些實施方式中，YIV-906GU和單一免疫治療劑是醫藥組成物中唯一的治療活性劑。在一些實施方式中，YIV-906或YIV-906GU與抗PD1檢查點抑制劑是投予受試者的醫藥組成物中唯一的治療活性劑。在一些實施方式中，YIV-906或YIV-906GU與抗PD-L1檢查點抑制劑是投予受試者的醫藥組成物中唯一的治療活性劑。在一些實施方式中，YIV-906或YIV-906GU與抗CTLA4檢查點抑制劑是投予受試者的醫藥組成物中唯一的治療活性劑。YIV-906或YIV-906GU可與本文所述的任何免疫治療劑同時或依次投予。在一些實施方式中，相較於單獨投予抗PD1、抗PDL1及/或抗CTLA4藥劑相比，當與YIV-906或YIV-906GU一起給藥時，只需更少量的抗PD1、抗PDL1及/或抗CTLA4藥劑來產生治療效果。抗PD1、相較於單獨投予抗PD1、抗PDL1及/或抗CTLA4藥劑相比，當與YVI-906或YIV-906GU投予時，抗PDL1及/或抗CTLA4藥劑的較少量可為ㄧ劑量，約為1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、25、30、33、35、40、45、50、55、60、65或約70%的較少量。

可理解的是，可以每日投予化合物的量來給藥，在非限制性實例中可為每天、每隔一日、每2日、每3日、每4日或每5日給藥。例如，每隔一日投予一次，可在星期一開始施用一日5毫克的劑量，在星期三再施用一日5毫克的劑量，然後再於星期五繼續施用一日5毫克的劑量，依此類推。

在病患狀態確實有所改善的情形中，根據醫生的判斷，本揭示的抑制劑可選擇地持續給予；或者，被投予的藥物之劑量暫時減少或暫時停止一段時間（即「停藥期」）。停藥期的長度可選擇地在2天到1年之間變化，僅以舉例之方式包括2日、3日、4日、5日、6日、7日、10日、12日、15日、20日、28日、35日、50日、70日、100日、120日、150日、180日、200日、250日、280日、300日、320日、350日或365日。停藥期期間的劑量減少包括10%-100%，僅以舉例之方式包括10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%。

一旦病患病情得到改善，必要時投予維持劑量。隨後，劑量或給藥頻率或兩者皆以疾病或病症的函數降低至保持改善疾病的水平。在某些實施方式中，病患在任何徵候及/或感染復發時需要長期間歇性治療。

用於本揭示之方法的化合物可調配成單位劑型。術語「單位劑型」係指物理上離散的單位，適合作為接受治療之病患的統一劑量，每個單位均包含經計算可產生所欲之治療效果的預定量活性物質，可選擇地與適當醫藥載劑結合使用。單位劑型可用於單次日劑量或多次日劑量（例如每日約1至5次或更多次）中的一劑。當使用多次日劑量時，單位劑型對於每一劑量可為相同或不同。

此類治療方案的毒性和治療功效可選擇地在實驗動物中確定，包括，但不限於測定LD₅₀ （對50%的群體致死之劑量）及ED₅₀ （對50%的群體治療有效之劑量）。毒性和治療效果之間的劑量比是治療指數，其表示為LD₅₀ 和ED₅₀ 之間的比率。從動物研究所獲得的數據可選擇地用於調配用於人類的劑量範圍。此類化合物的劑量較佳位於循環濃度範圍內，包括具有最小毒性的ED₅₀ 。劑量可選擇地在此範圍內變化，這取決於所用的劑型和所用的給藥途徑。

除非另有說明，否則本揭示的實施採用分子生物學（包括重組技術）、微生物學、細胞生物學、生物化學和免疫學的習知技術，其等皆在技術人員的能力範圍內。此類技術已在文獻中得到充分說明，例如，“Molecular Cloning：A Laboratory Manual”, second edition（Sambrook, 1989）；“Oligonucleotide Synthesis”（Gait, 1984）；“Animal Cell Culture”（Freshney, 1987）；“Methods in Enzymology” “Handbook of Experimental Immunology”（Weir, 1996）；“Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells”（Miller and Calos, 1987）；“Current Protocols in Molecular Biology”（Ausubel, 1987）；“PCR： The Polymerase Chain Reaction”,（Mullis, 1994）；“Current Protocols in Immunology”（Coligan, 1991）。這些技術適用於本揭示的多核苷酸和多肽的製造，且因此可在進行及實施本揭示時考慮。在以下章節中將討論用於特定實施方式的特別有用的技術。

本領域熟悉技術者將認識到或能使用不超過常規實驗來判明本文所述的具體程序、實施方式、申請專利範圍和實施例的許多等效物，這些等效物被認為在本揭示之範圍內，且由後附之申請專利範圍所涵蓋。舉例而言，應當理解，以本領域公認的替代方案並且僅使用常規實驗修改反應條件，包括但不限於反應時間、反應尺寸/體積和實驗試劑都在本案的範圍內。

應理解的是，無論在本文何處提供的值和範圍，範圍形式的描述僅是為了方便及簡潔，且不應被解釋為對本揭示範圍的不靈活限制。因此，這些數值及範圍所涵蓋的所有數值及範圍皆包括在本揭示的範圍內。此外，落入這些範圍內的所有數值以及數值範圍的上限或下限亦被本申請案所預期。範圍的描述應被視為已具體揭示所有可能的子範圍以及該範圍內的單一數值，在適當的情況下，數值的部分整數應在範圍內。例如，從1至6的範圍描述應被認為已特定揭示子範圍，例如從1至3、1至4、1至5、2至4、2至6、3至6等，以及在該範圍內的個別數字，例如1、2、2.7、3、4、5、5.3及6。無論範圍的寬度如何皆適用。 實施例

參照以下實驗實施例進一步詳細描述本揭示。提供這些實施例僅為說明之目的，除非另有說明，否則並不意圖構成限制。因此，本揭示決不應被解釋為受限於以下實施例，而是應解釋為涵蓋由本文所提供之教示而變得顯而易見的任何及所有變化態樣。

無需進一步敘述，相信本領域具有普通知識的技術人員可使用先前的描述及以下的說明性實施例來製造和利用本揭示的化合物並實施所請之方法。因此，以下實施例具體指出本發明的較佳實施方式，且不應被解釋為以任何方式限制本揭示內容的其餘部分。材料及方法 動物研究

將Hepa 1-6細胞（在100μL磷酸鹽緩衝食鹽水中約2×10⁶ 個細胞）皮下移植到4至6週齡的雌性C57BL6小鼠（Charles River Laboratories, Wilmington, MA）中，每天監測體重、腫瘤大小和小鼠死亡率。10-14天後，選擇腫瘤大小為180 mm³ 的小鼠，使用公式長度×寬度² × π/6檢查腫瘤體積。每組由七隻小鼠組成，YIV-906口服投予4天（口服500 mg/kg，每天兩次），而抗PD1腹膜內給藥7天（200 μg/小鼠，每天一次）。在對照組中，小鼠口服投予水。在第0天，在投予抗PD1前30分鐘，投予YIV-906。

在各種實施方式中，在本文所述的實驗及圖式中使用的抗PD1藥劑是小鼠抗PD1單株抗體，殖株G4，倉鼠IgG。 免疫組織化學

治療4天後，小鼠在藥物治療開始2天或4天後藉由頸脫位而終結。去除腸和結腸組織，固定在福馬林中，包埋在石蠟中，並切成10μm。將切片安裝在Superfrost載玻片上，以二甲苯脫蠟，並逐漸水合。藉由在蒸汽下蒸30分鐘，以具有0.02% Tween-20的10 mM檸檬酸鈉pH 6.0達成抗原修復。使用含有1% BSA及0.5% Tween-20的Tris-HCl緩衝液稀釋初級抗體，並在室溫溫育1小時。作為陰性對照，進行一組不含初級抗體的載玻片，使用Super-picture免疫組織化學檢測套組（Invitrogen，Inc.）進行檢測，載玻片以蘇木精複染並固定。所使用的抗體為：經裂解的半胱天冬酶-3（#9664，Cell Signaling Technology, Inc.）、經裂解的半胱天冬酶-8（＃9496，Cell Signaling Technology, Inc. Danvers, MA）、經裂解的半胱天冬酶-9（＃ab52298，Abcam，Cambridge，England）、F4/80（＃ab16911，Abcam）。 流式細胞儀分析

將腫瘤組織（200 mg）在0.5 ml RPM1 640培養基中切成小塊，加入Liberase在室溫下分類連接的腫瘤細胞15分鐘，將經分類的細胞通過細胞濾器（70 µm）。在1000g離心10分鐘離下細胞後，將紅血球以1 mL BD Pharm Lyse於冰上裂解。在1000 g離心10分鐘收集細胞，每個染色樣品使用2x10⁶ 個細胞，將細胞再懸浮於具有3% FBS的RPM1 640中。使用抗小鼠CD16/CD32殖株2.4G2（BD Pharmingen，＃553142）阻斷細胞上的Fc受體。將總T細胞在冰上以抗CD3-PE（BD pharmingen，殖株145-2c11，＃553064）染色30分鐘。固定/透化（eBioscience）用於固定和透化細胞。活化的細胞毒性T細胞進一步以抗顆粒酶B-Pacific Blue（BioLegend，殖株GB11，＃515408）染色，並將T調節細胞以抗FOX3P-APC染色（eBioscience，殖株FJK16s，＃17-5773-83）。洗滌經染色的細胞，並藉由流式細胞儀LSR II（BD Canto II，New Jersey，USA）分析。 西方墨點法

將BMDM或RAW264.7細胞（American Type Culture Collection）在具有 5% CO₂ 的培養箱中，於37^o C培養在補充有5% FBS的RPMI中，將2x10⁶ 個細胞接種至12孔盤中。藥物處理後，將細胞溶解在0.3 ml蛋白質上樣緩衝液（loading buffer ）中（對於20 ml緩衝液，4 mL 10%SDS、0.75 mL Tris-HCl（pH 6.8）、5 mL 10%甘油、0.5 mLβ-巰基乙醇和溴酚藍），並以超音波處理30秒以破壞DNA。細胞萃取物通過Mini PROTEAN® TGX Precast凝膠（12%，15孔齒梳（comb），15 µL/孔Cat.  #456-1046）在電泳緩衝液（10×，Tris 30 g，甘胺酸144 g，SDS 10 g，與二次蒸餾H₂ O）中電泳，並在轉移緩衝液（Tris 30 g，甘胺酸144 g，SDS 0.5 g）中轉移到硝酸纖維素膜（Bio-Rad Laboratories，Inc）。將膜阻斷，並在含有1：5000脫脂牛奶（Blotting-Grade Blocker，Cat.  #170-0604 Nonfat dry milk）的TBS-T緩衝液（TBST + 1% Tween，AB14330-01000，American Bionanlytical）中以探針探測。

初級抗體（PD-1（D7D5W） XP® Rabbit mAb ＃84651S Mouse Specific lot：1 Ref：08/2017）以1：1000在TBS-T緩衝液（TBST + 1% Tween，AB14330-01000，American Bionanalytical）中與膜在4℃下震盪溫育隔夜，組蛋白H3用作標準化內部對照，並以1：1000稀釋的單株肌動蛋白抗體（H3（D1H2）XP® Rabbit mAb #4499S Ref：06/2017）檢測。以TBS-T洗滌3次後，每次5分鐘，然後將膜與山羊抗兔IgG-HRP SC-2004， lot #B1711 HRP 1：5000共軛進一步溫育，並在室溫下溫育1小時，然後將膜再次以TBS-T洗滌3次。使用1 mL穩定的過氧化物溶液（SuperSignalTM West Pico PLUS，Prod＃1863097）及1 mL發光胺/增強劑溶液（SuperSignal TM West Pico PLUS，Prod＃1863096）進行光密度計的可視化及掃描。抗體名單：PD-1（D7D5W）XP® Rabbit mAb #84651S Mouse Specific lot:1 Ref：08/2017（Cell Signaling）、抗PD-L1抗體[EPR20529]ab213480、Arginase-1（D4E3MTM）XP® Rabbit mAb#93668（Cell Signaling）、iNOS Antibody（Mouse Specific）#2982（Cell Signaling）、Jak1（6G4）Rabbit mAb#3344（Cell Signaling）、P-Jak1（Y1034/1035）（D7N4Z）Rabbit mAb#74129（Cell Signaling）、Jak2（D2E12）XP^® Rabbit mAb #3230（Cell Signaling）、P-Jak2（Y1008）（D4A8）Rabbit mAb #8082（Cell Signaling）、Stat1 Antibody#9172（Cell Signaling）、Phospho-Stat 1（Tyr701）（D4A7）Rabbit mAb#7649（Cell Signaling）、Stat2（D9J7L）Rabbit mAb#72604（Cell Signaling）、Phospho-Stat2（Tyr690）-R sc-21689 #K1609（SantaCruz）、Stat6（D3H4）Rabbit mAb#5397（Cell Signaling）、Phospho-Stat6（Tyr641）（D8S9Y）Rabbit mAb#56554（Cell Signaling）、IRF-1（D5E4）XP® Rabbit mAb #8478（Cell Signaling）、IRF-4（D9P5H）Rabbit mAb#15106（Cell Signaling）。 定量即時PCR（qRT-PCR）

以TRIzol試劑（Invitrogen, California, USA）萃取總RNA，收集水相，然後依據製造商的說明添加一體積的乙醇。離心之前，將此漿液添加至管柱（miRNeasy，Qiagen，Venlo，Limburg）中，以進一步萃取並同時進行DNA消化（RNase-Free DNAse set，Qiagen）。使用隨機引子和反轉錄酶MMLV（New England Biolabs，Ipswich，MA）合成cDNA。使用iTaq™ SYBR® Green Supermix和CFX96 Real-Time PCR Detection System（Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA）執行qPCR測定。針對β-肌動蛋白的目標基因的相對表現表示為2^-ΔCt ，並以經YIV-906及/或抗PD1處理之樣品相對於未處理之樣品的表現mRNA計算倍數差異。引子序列顯示於表1。表 1 ： qRT-PCR 中使用的引子序列：

基因	SEQ ID NO:	正向（ F ） 反向（ R ）	DNA 序列
mIFNg	1	F	ggcaaaaggatggtgacatgaaa
	2	R	tagtaatcaggtgtgattcaatg
mIFNb	3	F	tgtctttcttgtcttcagaaa
	4	R	tttctgaagacaagaaagaca
mgrB	5	F	cactctcgaccctacatggcctt
	6	R	gtgacatttattatacttccttcac
mperf	7	F	gtgtcgcatgtacagttttcgcctg
	8	R	ccgtgataaagtgcgtgccatag
mPDLl	9	F	cacttgctacgggcgtttactatca
	10	R	gaatcacttgctcatcttccttttc
mPDl	11	F	gccaggatggttcttagactccccag
	12	R	taccagtttagcacgaagctctccg
mIL17a	13	F	tcaccctggactctccaccgcaatg
	14	R	acagaattcatgtggtggtccagc
mCTLA4	15	F	tcactgctgtttctttgagca
	16	R	ggctgaaattgcttttcacat
TIMS	17	F	ctactacttgcaaggtcattgg
	18	R	ccaggtgtagatagagtgtaac
ICOS	19	F	tcagacttttaacaggagaaatc
	20	R	tctcagggtatttacaagaaatc
dectinl	21	F	agtgctgggtgccctagcattttg
	22	R	aggctgagaaaaacctcctgtagt
Oasla	23	F	gcctttgatgtcctgggtcatg
	24	R	ccagcttctccttacacagttg
Prkra	25	F	gaatcattcatggaaactggaaag
	26	R	atgtccaaccacgttcgttagag
illSra	27	F	ggagaggtatgtctgtaac
	28	R	gaggggtctctgatgcacttga

藉由磁珠陣列術（cytometric bead array）進行細胞因子分析

處理後96小時，收集經YIV-906及/或抗PD-1處理的小鼠和對照小鼠的動物血漿和腫瘤組織。暴露24小時後，收集未處理及經YIV-906處理的BMDM的培養基。使用磁珠陣列術Flex Set套組以流式細胞術（BD Canto II，New Jersey，USA），根據製造商的說明（BD biosciences，UK）執行確定細胞因子的表現（IL-6、MIP-1a、IL-5, IL-17A, IL-12p70、TNFa、IL-1B、IL-10、MIG、IFNγ、MCP-1、G-CSF）。 骨髓衍生之單核球（BMDM）的單離和巨噬細胞分化

從10週齡C57Bl/6小鼠之脛骨和股骨收集骨髓細胞，並在鼠類M-CSF（10 ng/mL）存在下以完整的RPMI-1640培養基（補充5%胎牛血清及1% Penn/Strep）培養7天，以使單核球分化為巨噬細胞。將巨噬細胞在含IFNγ（10 ng/mL）的5% FBS RPMI-1640培養基中培養，以誘導對M1樣巨噬細胞的極化，而M2樣巨噬細胞以IL4 （20 ng/mL）誘導。 IDO活性分析

將2x10⁶ 個HEK293細胞以小鼠IDO （2 µg/10 cm平盤）轉染48小時，對於一平盤，使用1 mL PBS將細胞收集到2 ml管中。將細胞在3,500 rpm下離心1分鐘，然後在冰冷的PB緩衝液（1 mL，pH 6.5）中對細胞進行超音波處理。藉由在4°C以12,000 rpm離心5分鐘將細胞裂解澄清，將25 µL細胞裂解液與所需濃度的YIV906或YIV906GU （25 µL）混合。反應緩衝液包含50 µL PB緩衝液（100 mM，pH 6.5）、10 µL亞甲藍（2.5%）、100 µL過氧化氫酶（20 mg/mL）、250 µL L-色胺酸（500 mM），及每10 mL總溶液中含70 mg維生素C，然後將反應緩衝液添加至細胞裂解液中。使溶液在37℃下反應1.5小時，加入30% （25 µL）的三氯乙酸，並在50°C下溫育1小時。添加0.8%艾利希試劑[Ehrlich’s reagent，4-（二甲基胺基）苯甲醛，80 mg/10 mL於乙酸中，100 µL，得自Sigma Aldrich]。使用UV-vis光譜儀測量540 nm處的吸光度以確定犬尿胺酸濃度，發現540 nm （黃色）處的吸光度與樣品中犬尿胺酸的含量呈正相關。 CD73活性分析

藉由CD73隨著時間從AMP形成腺苷確定CD73核苷酸酶活性。反應在37°C的200μL緩衝液中進行3小時，該緩衝液包含50 mM Tris-HCl（pH 7）、100 mM NaCl、1 mM MgCl₂ 、1 mM CaCl₂ 、100 μg/mL BSA、10 mM AMP及200 ng人類重組CD73。反應以15%三氯乙酸萃取。以45/55比例的三辛胺及1,1,2-三氯三氟乙烷萃取含有核苷及其磷酸化形式的上清液。使用Partisil SAX管柱（Whatman，Clifton，NJ）及10 mM磷酸鹽緩衝液作為流動相，藉由高壓液相層析（Shimadzu，Braintree，MA）分析腺苷。 LC-MS檢測

將每個腫瘤樣品在200 μL乙腈/甲醇/水（2/2/1，v/v/v）及1 mm玻璃珠（BioSpec Products，Bartlesville，OK）中以3500 rpm勻質化30秒兩次。然後將勻質物在4℃下以12000 rpm離心15分鐘。將上清液在Speedvac中乾燥，將每個腫瘤樣品的殘於物重新溶解在100 µL乙腈中，並以3000 rpm渦旋3分鐘。然後將溶液在4℃以12000 rpm離心15分鐘，然後將2 μL上清液注入UPLC-QTOF系統進行分析。在ACQUITY超高效液相層析（ultra-performance liquid chromatography，UPLC）系統結合四極桿飛行時間（quadrupole-time of flight，Q-TOF）MS儀器（UPLC Xevo G2-XS QTOF MS，Waters Corp.，Milford，MA，USA）與電噴霧電離（ESI）源執行所有樣品的分析。在具有保護管柱的Waters ACQUITY BEH C18管柱（2.1 mm x 100 mm id，1.7 μm）（Waters ACQUITY BEH C18 column（2.1 mm x 5 mm id, 1.7 μm））上進行分離。

移動相由乙腈（A）和含0.1%甲酸的水（B）組成，使用0-2分鐘的5%的A，2-3分鐘5-10%的A，3–10分鐘10-17%的A，10–15分鐘17–30%的A，15–20分鐘30–40%的A，20–25分鐘40–80%的A，25–30分鐘80%的A，30–31分鐘80–5%的A及31–35分鐘5%的A的梯度洗提，流速為0.3 mL/分鐘。在Water Xevo G2-XS QTOF上執行質譜分析，掃描範圍是50至1000 Da。對於負電噴塗模式，毛細管電壓和錐電壓分別設置為2.5 kV和60 V。在500℃的溫度下將溶媒揮散氣體（desolvation gas）設置為800 L/小時，錐氣體（cone gas）在120ºC的溫度下設置為50 L/小時。使用MS^E 完成數據採集，且碰撞能量為15-60 V。 統計分析

藉由單因子或貳因子變異數分析（ANOVA）（GraphPad Prism 7）、相關性分析（GraphPad Prism 7）及司徒頓（Student）t檢驗（Microsoft Office Excel）分析數據。當P ＜ 0.05時，差異具有統計學上意義。

實施例 1 ： YIV-906 增強抗 PD1 在活體內抑制 Hepa1-6 腫瘤生長的作用，並證實腫瘤特異性疫苗樣作用。

為了研究YIV-906及抗PD1對於NCR裸鼠中Hepa 1-6腫瘤生長的影響，將Hepa 1-6細胞（10⁶ 個細胞）皮下植入NCR裸鼠中10天。當初始腫瘤大小達到約180 mm³ 時，從第0天到第7天每天兩次投予YIV-906（500 mg/kg，口服）並投予或不投予抗PD1（200 µg/小鼠ip qd）至攜帶Hepa1-6腫瘤的小鼠。Hepa1-6腫瘤的生長並不受YIV-906治療的影響（P＞ 0.05）（圖 1A 及 1B ）。治療4天後，抗PD1開始減慢Hepa 1-6的腫瘤生長（圖 1A 及 1B ）。在第8天觀察到一些腫瘤縮小，且到實驗結束時，約40%的腫瘤低於檢測極限（圖 1A 及 1B ）。

在YIV-906加上抗PD1免疫檢查點抑制劑組別中觀察到最強的抗腫瘤活性，在短短2天內，腫瘤對YIV-906與抗PD1的組合產生反應，所有腫瘤在治療7天後均消失（P ＜0.001）（圖 1A 及1B ）。在不經進一步治療的情況下，直到21天後，YIV-906加上抗PD1組合組別均未出現腫瘤，此表明在這些小鼠中已預防腫瘤的形成並得以治愈（圖 1A 及1B ）。當Hepa 1-6細胞被重新植入治癒的小鼠時，並未發現腫瘤的生長，而單純的小鼠卻有腫瘤的生長（數據未顯示）。當將CMT167細胞（小細胞肺癌）或Pan02細胞植入治癒的小鼠中後，再次以Hepa 1-6、CMT167或Pan02挑戰，觀察到腫瘤生長。這種行為表明，YIV-906結合抗PD1檢查點抑制劑，或與其他免疫檢查點抑制劑療法結合，在一些實施方式中可產生腫瘤特異性疫苗樣作用，以防止腫瘤復發。在各種實施方式中，以YIV 906與抗PD1的組合治療並不影響小鼠的體重。

實施例 2 ：在 Hepa 1-6 腫瘤中 YIV-906/ 抗 PD1 治療 誘導更多的巨噬細胞浸潤，並帶有更高的 M1 類巨噬細胞標記。

免疫組織化學研究顯示，在治療4天後，YIV-906與抗PD1檢查點抑制劑之組合（非單獨的YIV906或單獨的抗PD1）顯著誘導Hepa 1-6腫瘤中的巨噬細胞浸潤（圖 2A 及 2B ）。不受理論的束縛，此可歸因於在YIV-906加上抗PD1之治療組別的腫瘤中，單核球趨化蛋白MCP1（CCL2）的增加，其中MCP1高於僅抗PD1之組別（P ＜0.05）（圖 2C ）。

依據組織的微環境和呈現刺激之活化途徑，巨噬細胞可分為兩種不同的表現型：M1（腫瘤排斥）和M2（腫瘤促進），在YIV-906加上抗PD1處理後，對M1和M2樣巨噬細胞標籤基因的mRNA表現進行生物統計學分析，表明M1樣巨噬細胞是腫瘤中的顯性表現型（圖 2E 及 2F ）。西方墨點法分析進一步證實，在YIV-906加上抗PD1治療後，iNOS蛋白（一種M1標記）顯著增加（圖 2D ）。此結果亦表明經YIV-906加上抗PD1治療的腫瘤高度發炎。因此，不受理論的束縛，由YIV-906與抗PD1組合誘導的M1樣巨噬細胞的增強浸潤可協助對抗Hepa 1-6腫瘤生長的機制。

實施例 3 ： YIV-906 增強在極化巨噬細胞成為 M1 表現型中 IFNγ 的作用，同時抑制在極化巨噬細胞極化成為 M2 型中 IL4 的作用。

研究YIV-906對於在培養物中將BMDM極化成為M1型或M2型表現型的任何影響。β-葡萄醣醛酸酶（GU）處理可催化β-D-葡萄醣醛酸殘基從YIV-906的某些組分中水解，並影響YIV-906的巨噬細胞極化活性。結果表明，與單獨使用YIV-906相比，BMDM的YIV-906GU對IFNγ、IL1a、TFN　 mRNA表現具有更強的誘導作用（圖 3 ）。此外，YIV-906可增強IFN-γ以極化BMDM成為M1巨噬細胞，並增加iNOS、MCP-1、CXCL9、CXCL11、COXII、IL1a、TNF-α和CD86的表現信號（圖 3 ）。GU處理進一步增強YIV-906對於iNOS、IL1a、CXCL11的增強活性（圖 3 ）。

相反地，YIV906可藉由降低Arg1、CD206和IRF4的mRNA表現水平所呈現的抑制IL4對於M2巨噬細胞的極化作用。GU處理可在IL4存在下進一步提高YIV-906對於Arg、IL10及IRF4 mRNA表現的抑制活性（圖 3 ）。總體而言，YIV906可增強IFNγ誘導某些M1相關的標籤基因表現，同時抑制IL4誘導BMDM某些M2標籤基因表現。不受理論的束縛，以上活性的免疫調節作用可藉由YIV-906中存在的化學物質的糖基部分來解釋，特別是糖苷配基，其似乎是最具活性的。

實施例 4 ： YIV-906 誘導 IFNγ 分泌並活化 BMDM 的干擾素誘導級聯反應。

YIV-906及YIV-906GU（效力更高）可刺激BMDM分泌IFNγ蛋白質（圖 4A-4D ）。此結果顯示，YIV-906GU對於BMDM的IFNγ mRNA具有更強的誘導作用（圖 3 ）。培養基中IFNγ的增加觸發IFNγ誘導級聯反應的活化，如在YIV-906GU處理下檢測到較高的P-JAK1/2、P-stat1/2及IRF1水平，（圖 4A-4D 及圖 5A-5C ）。YIV-906GU對IFNβ的刺激提供促進M1巨噬細胞極化的其他機制。

在存在IFNγ時，YIV-906GU可在30分鐘之內進一步增強P-Jak1/2及P-Stat2蛋白質。在BMDM中存在IFNγ時，其可在24小時維持較高的P-Stat2。在第24小時，YIV-906或YIV-906GU增強IFNγ誘導iNOS蛋白質表現，但不增強BMDM的IFR1蛋白質表現（圖 4A-4d ）。不受理論的束縛，這可能是因為在給定的IFNγ濃度下IFR1可能已經達到其最大水平。此外，在BMDM中存在IFNγ時，YIV-906GU亦可上調IL15RA及ICAM mRNA。YIV-906或YIV-906GU增強的IFNγ作用並不限於BMDM，在經GM-CSF處理的Raw細胞264.7（巨噬細胞）中，其等亦可增強IFNγ誘導MCP1、TNFa、iNOS mRNA（圖 6 ）。

與IFNγ相反，YIV-906或YIV-906GU藉由抑制IRF4表現（IL4傳訊途徑的關鍵轉錄因子）來抑制IL4的作用（圖 4A-4D 及圖 5A-5C ）。在YIV-906或YIV-906GU處理24小時後，IL4的抑制亦導致BMDM中Arg蛋白質的下調（圖 4A-4D 及圖 5A-5C ） 。不受理論的束縛，IFR4和Arg蛋白質的減少可歸因於在IL4存在下YIV-906或YIV-906GU對其mRNA的下調（圖 3 ）。

這些結果證實，YIV-906或YIV-906GU本身可誘導IFNγ和IFNβ分泌。其兩者都可藉由刺激P-Jak1/2和P-Stat2磷酸化來增強IFNγ的作用，同時藉由下調BMDM的FR4蛋白質來抑制IL4的作用。這種方式可解釋YIV-906的多種機制如何能夠使巨噬細胞極化為M1表現型。

實施例 5 ： YIV-906 及抗 PD1 藥物的組合降低 PD1 ，並使 Hepa 1-6 腫瘤的 PDL1 蛋白質表現正常化。

當與抗PD1藥物組合使用時，檢測YIV-906對於Hepa 1-6腫瘤之PD1和PDL1的蛋白質表現的影響，抗PD1或YIV-906處理並未顯著改變PD1腫瘤蛋白質。相較於對照組，YIV-906加上抗PD1藥劑可在治療4天後顯著降低PD1腫瘤蛋白質（P = 0.02）或抗PD1組（P = 0.003）（圖 7 ）。不受理論的束縛，該結果至少可部分解釋為什麼與具有更高劑量的單獨抗PD1相比，只需較少量的抗PD1與YIV-906組合即具有相似的抗腫瘤活性。此外，抗PD1而非僅YIV-906的治療顯著增加了PDL-1腫瘤蛋白質（P = 0.01），但可藉由組合YIV-906與抗PD1來克服這種增加（P = 0.008）（圖 7 ）。總體而言，這些結果進一步表明，YIV-906可促進抗PD1作用，克服腫瘤對免疫監視的抗性。

實施例 6 ： YIV-906/ 抗 -PD1 處理誘導 Hepa 1-6 腫瘤中與 T 細胞活化相關之基因表現。

抗PD1的關鍵功能是藉由抑制T細胞的共抑制途徑來恢復細胞毒性T細胞功能。正如預期，抗PD1藥劑誘導Hepa 1-6腫瘤中活化的T細胞（GranyzmeB+/CD3+）數量（圖 8A ），抗PD1處理後活化的T細胞和Treg的數目不受YIV-906的共同處理的影響（圖 8A 及 8B ）。然而，組合治療確實在Hepa 1-6腫瘤中誘導更多的T細胞活化相關基因（圖 8C ），並暗示T細胞的功能可被增強。

目前的結果表明，抗PD1或YIV-906單一療法並不會顯著改變PD1腫瘤蛋白質（圖 7A ）。相較於對照組或單獨的抗PD1組，YIV-906加上抗PD1可在4天的治療後顯著降低PD1腫瘤蛋白質（分別為P = 0.02或0.003）（圖 7A ）。此結果部分地幫助解釋為什麼與具有更高劑量的單獨抗PD1相比，只需較少量的抗PD1與YIV-906組合即具有相似的抗腫瘤活性。此外，抗PD1而非僅YIV-906的治療確實顯著增加了PDL-1腫瘤蛋白質（P = 0.01），但藉由組合YIV-906與抗PD1可抵消這種增加（P = 0.008）（圖 7B ）。這些結果表明，YIV-906可促進抗PD1作用，克服腫瘤對免疫監視的抗性，並產生更強的抗腫瘤作用。

實施例 7 ： YIV-906 可調節在免疫檢查點抗體的活性上扮演重要角色的吲哚胺 2,3- 二氧酶（ IDO ）的活性。

IDO是一種負責將L-色胺酸代謝為犬尿胺酸的酶，其可為ㄧ種抗PD1、抗CTLA4治療的關鍵抗藥性因子。據報導，IDO抑制劑可增強抗PD1、抗PD-L1、抗CTLA4藥劑對不同類型之動物腫瘤的作用。IDO表現抑制效應T細胞（Teff）的活化和Foxp3+調節性T細胞（Tregs）的活化，其等有助於將CD11b + Gr1int骨髓來源之抑制細胞（MDSC）招募至腫瘤中以抑制T細胞增殖。此外，發現單核球IDO的高表現有利於M2樣巨噬細胞極化，而單核球中IDO的低表現則有利於M1樣巨噬細胞極化。

IDO測定結果顯示，YIV-906可調節細胞培養物中的IDO酶（圖 9A ）。在使用純化的大腸桿菌葡萄醣醛酸酶（GU）去除化學物質中的葡萄醣醛酸來模擬下消化道條件後，YIV-906GU比YIV-906具有更強的IDO抑制作用（圖 9A ）。貝加因在類黃酮化合物中顯示出是最有效的化合物（圖 9A ）。YIV-906或YIV-906/抗PD1具有降低Hepa 1-6腫瘤的犬尿胺酸/色胺酸比例的趨勢（圖 9B ），這表明YIV-906可在活體內調節IDO活性。此外，發現抗PD1加上YIV-906處理可降低Hepa 1-6腫瘤的單核球MDSC（圖 9C ），YIV-906對IDO的調節可能是降低免疫耐受和促進抗PD1作用的另一種機制。

實施例 8 ： YIV906 增加磷酸化的 IRF3 蛋白質水平及 IFNβ ，其為 STING 傳訊的關鍵介質。

STING的活化是癌症免疫治療的最新方法，STING（stimulator of interferon gene，干擾素基因的刺激物）為一種與內質網（ER）相關的傳訊分子，且對於控制多種宿主防禦基因的轉錄非常重要。STING傳訊可因與cGAS結合的細胞死亡雙股DNA（dsDNA）而被觸發，dsDNA/cGAS複合物會將ATP和GTP轉換成cGAMP，從而將STING活化為磷酸化TBK。最後，磷酸化的TBK將磷酸化IRF3以轉錄IFNβ，該IFNβ可活化樹突狀細胞以招募和活化對抗腫瘤的T細胞。STING傳訊亦可扮演腫瘤疫苗的重要角色。如圖 10A 及10B 所示，YIV-906或YIV-906GU（以重組大腸桿菌β-葡萄醣醛酸酶預處理以模擬腸道條件）可觸發BMDM（小鼠骨髓衍生的巨噬細胞）的IRF3磷酸化。YIV-906或YIV-906GU處理（48小時）亦可誘導BMDM分泌IFNβ（圖 10C ）。

實施例 9 ： YIV-906 調節 CD73 酶的活性。

CD73（5'-核苷酸酶（5'-NT）或ecto-5'-核苷酸酶）為一種膜核苷酸酶，負責將細胞外AMP轉化為與A2AR結合的腺苷。高水平的細胞外腺苷可藉由降低IL2/IFNγ表現來抑制T效應細胞的功能和增殖。腺苷亦可抑制樹突狀細胞和自然殺手細胞的活性。如圖 11 所示，在活體外測定中，YIV-906及YIV-906GU以各種劑量抑制曲線抑制CD73酶活性。YIV-906在200 μg/mL時對CD73的抑制作用比YIV-906GU強，YIV-906在400 μg/mL至800 μg/mL的範圍內可抑制CD73最多60%，而YIV-906GU具有更佳的效力，並以200 μg/mL至800 μg/mL的劑量依賴性抑制CD73。這些結果表明，YIV-906的葡萄醣醛酸共軛化合物可調節CD73活性，而YIV-906的糖苷配基化合物對CD73具有真正的抑制作用。

實施例 10 ： YIV-906 中的類黃酮在增強 IFNγ 作用以極化巨噬細胞成為 M1 樣表現型上扮演重要的角色。

在YIV-906GU中的四種草藥成分：G、P、S和Z中，結果表明，在IFNγ存在下，S在增加iNOS/Arg比例方面具有最高的生物活性（圖 12A ）。一致地，不含S （-S）的調配物失去IFNγ的增強特性（圖 12A ）。類黃酮貝加因、黃芩素，金黃酮、木蝴蝶素A和貝加靈為在以GU處理的S中主要的標記化合物，因此隨後比較其等對IFNγ的增強作用。結果指出，所有測試的類黃酮均可能對IFNγ作用於增加iNOS/Arg比例上產生積極的影響（圖 12B ）。在一些實施方式中，從YIV-906中刪除任何一種草藥都可以降低IFNγ的作用（圖 12A ）。這些結果指出，G、P、Z亦可在IFNγ增強或與S相互作用以增強IFNγ作用中起作用。

執行分析以確定在給藥後Hepa 1-6中存在哪些YIV-906的代謝產物。結果指出，貝加因、黃芩素和木蝴蝶素A，它們均能增強IFNγ作用（圖 12B ），其等在腫瘤塊中檢出（圖 12C ）。重要的是需注意，相較於單獨的YIV-906組別，YIV-906加上抗PD1組的腫瘤中的黃芩素和木蝴蝶素A的含量更高（圖 12C ）。因此，在一些實施方式中，在YIV-906與抗PD1組合中的組分S中所存在的這些類黃酮化合物可能是活性成分，與其他成分一起，有助於IFNγ的增強，使巨噬細胞在Hepa 1-6腫瘤中極化為M1表現型。列舉的實施方式

提供下列列舉的實施方式，其編號不應解釋為指定重要性程度：

實施方式1提供一種在哺乳動物中預防癌症復發的方法，該方法包含對所需之哺乳動物投予治療有效量的選自下列所組成群組之至少一種草藥組成物： （a）一種草藥萃取物YIV-906，其包含黃芩（S）、甘草（G）、芍藥（P）及棗（Z）之草藥萃取物、其等之濾分或存在於該草藥萃取物或其濾分中之任何活性化學物質，及 （b） β-葡萄醣醛酸酶處理的YIV-906（YIV-906GU）或其之濾分，或存在於該YIV-906GU或其之濾分中的任何活性化學物質； 其中進一步投予哺乳動物有效量的至少一種免疫治療劑，

實施方式2提供實施方式1的方法，其中該癌症包含實性瘤。

實施方式3提供任一實施方式1至2的方法，其中該癌症係選自黑素瘤、非小細胞肺癌、腎細胞癌、肝癌、結腸癌、尿路上皮膀胱癌及胰臟癌中的至少一種。

實施方式4提供任一實施方式1至3的方法，其中至少一種免疫治療劑係選自抗PD1、抗PD-L1及抗CTLA4抑制劑所組成群組的免疫檢查點抑制劑。

實施方式5提供任一實施方式1至4的方法，其中至少一種免疫檢查點抑制劑選自依伊匹木單抗、派姆單抗、納武單抗、度伐利尤單抗及阿特朱單抗所組成之群組。

實施方式6提供任一實施方式1至5的方法，其中至少一種免疫治療劑是選自下列所組成群組之抗體：Siglec 15抗體、抗磷脂絲胺酸、抗OX40、抗CD73、抗TIM3、抗CD24、抗CD47、抗PD1、抗PDL1、抗CTLA4、抗GITR、抗CD27、抗CD28、抗CD122、抗TIGIT、抗VISTA、抗ICOS及抗LAG3。

實施方式7提供任一實施方式1至6的方法，其中投予該草藥組成物增強至少一種免疫治療劑的反應。

實施方式8提供任一實施方式1至7的方法，其中口服投予該草藥組成物至該哺乳動物。

實施方式9提供任一實施方式1至8的方法，其中投予該草藥組成物促進刺激干擾素基因（STING）激動劑的作用。

實施方式10提供任一實施方式1至9的方法，其中將草藥組成物以選自藥丸、錠劑、膠囊、湯劑、茶劑、濃縮物、糖衣錠、液體、滴劑和明膠衣錠所組成群組之形式口服投予該哺乳動物。

實施方式11提供任一實施方式1至10的方法，其中該治療有效量的草藥組成物為約20 mg/天至約2000 mg/天。

實施方式12提供任一實施方式1至11的方法，其中該治療有效量的草藥組成物為約1600 mg/天。

實施方式13提供任一實施方式1至12的方法，其中每日投予二次該草藥組成物。

實施方式14提供任一實施方式1至12的方法，其中將該草藥組成物投予約一至二週，然後暫停治療至少一週。

實施方式15提供任一實施方式1至14的方法，其中在投予化學療法或放射線療法約30分鐘之前，投予該草藥組成物。

實施方式16提供任一實施方式1至14的方法，其中該給藥持續約4天。

實施方式17提供任一實施方式1至16的方法，其中在選自投予一種或多種免疫治療劑之前、同時和之後的時間，投予該草藥組合物至該哺乳動物。

實施方式18提供任ㄧ實施方式1至17的方法，其中該哺乳動物為人類。

在本文變量的任何定義中，成分列表的列舉包括將該變量定義為所列成分的任何單一成分或組合（或次組合）。本文實施方式的列舉包括以任何單一實施方式或與任何其他實施方式或其部分之組合的實施方式。

本文中所引用之每一個及各個專利案、專利申請案及公開文獻的揭示內容藉由引用其全文而併入本文中。本揭示雖已參照特定實施方式，但對於其他本發明所屬技術領域具有通常知識者而言，很明顯地在不背離本發明真實精神與範圍之下，可設計出其他實施方式與變形。後附之申請專利範圍意在被解釋為包括所有此類實施方式及等效的變形。

無

當結合後附圖式閱讀時，將更好地理解以下本發明的具體實施方式的詳細描述。為了說明本發明的目的，在圖式中顯示特定實施方式。然而，應當理解，本發明並不限於圖式中所顯示的實施方式的精確佈置和手段。

圖 1A-1B 說明對於C57BL6小鼠之Hepa 1-6腫瘤生長，YIV-906在抗PD1之抗腫瘤活性的影響（YIV-906，500 mg/kg p.o. bid x 7；抗-PD-1抗體，200μg/小鼠i.p. qd）。圖 1A 為一環班圖（spot plot），顯示各治療組在第0至14天期間個別的腫瘤生長。圖 1B 為顯示在第0至20天期間各治療組的平均（±SD）腫瘤生長的圖，最初的腫瘤大小約為180 mm³ 。

圖 2A-2F 說明YIV-906及/或抗PD1對於巨噬細胞和Hepa 1-6腫瘤之M1/M2標誌基因表現的影響。圖 2A 是顯示治療4天後巨噬細胞浸潤到Hepa 1-6腫瘤中的F4/80之免疫組織化學染色的影像。圖 2B 顯示治療4天後腫瘤切片的巨噬細胞的定量。圖 2C 及2D 顯示治療4天後Hepa 1-6腫瘤的MCP1及iNOS蛋白質表現。圖 2E 為一熱圖（顯著上調：紅色，顯著下調：綠色），用於指示第4天治療後藉由RT-qPCR測定的mRNA表現。圖 2F 為基於圖 2E 所示之特徵基因表現，顯示處於M1狀態的可能性的表，從T檢驗分析獲得P值。

圖 3 說明YIV-906對於IFNγ或IL4將骨髓源性巨噬細胞（bone marrow derived macrophage，BMDM）極化為M1或M2樣巨噬細胞之作用的影響。圖 3 顯示在使用或不使用YIV-906或YIV-906GU處理的IFNγ或IL14後，BMDM的mRNA表現水平的熱圖，對於每一行（基因），mRNA的上調均以（紅色）突顯，而下調則以（綠色）突顯。表格中的數字表示對各治療條件的相對倍數變化的基因表現（三個獨立實驗的平均值；所有基因表現均以肌動蛋白標準化）。骨髓細胞在鼠類M-CSF（10 ng/mL）存在下培養7天，然後在IFNγ 10 ng/mL存在下培養以誘導極化成M1樣巨噬細胞的，而M2樣巨噬細胞則以IL-4 20 ng/mL誘導24小時。將YIV-906或YIV-906GU與IFNγ或IL4同時添加。在第8天處理後，藉由qRT-PCR測定M1或M2相關基因的mRNA表現。

圖 4A-4D 說明YIV-906GU對於BMDMs的IFNγ傳訊途徑蛋白的影響。圖 4A 為顯示YIV-906GU對於BMDMs的IFNγ分泌之作用的直方圖。在鼠類M-CSF（10 ng / mL）存在下培養骨髓細胞7天，然後將YIV-906添加至細胞中24小時，藉由ELISA檢測培養基中的IFNγ。圖 4B 顯示單獨的YIV-906GU對於BMDMs的IFNγ傳訊之作用的西方墨點法分析。圖 4C 顯示CYIV-906GU對於BMDMs的IFNγ傳訊之作用的西方墨點法分析。圖 4D 顯示YIV-906GU在IL4對BMDMs的IL4傳訊之作用的影響的西方墨點法分析。骨髓細胞在鼠類M-CSF（10 ng/mL）存在下培養7天，然後添加IFNγ 10 ng/mL以誘導極化成M1樣巨噬細胞的，而M2樣巨噬細胞則以IL-4 20 ng/mL在具有或不具有YIV-906下誘導24小時。蛋白質表現或磷酸化以西方墨點檢測，組蛋白H3用於標準化蛋白質負載。

圖 5A-5C 說明YIV-906對於IFNγ傳訊途徑中蛋白質的影響。圖5A顯示單獨的YIV-906對於BMDMs的IFNγ傳訊之影響的西方墨點法分析。圖 5B 顯示YIV-906在IFNγ對於BMDMs的IFNγ傳訊之作用的影響的西方墨點法分析。圖 5C 顯示YIV-906在IL4對於BMDMs的IL4傳訊之作用的影響的西方墨點法分析。骨髓細胞在鼠類M-CSF（10 ng/mL）存在下培養7天，然後添加IFNγ 10 ng/mL以誘導極化成M1樣巨噬細胞的，而M2樣巨噬細胞則以IL-4 20 ng/mL在具有或不具有YIV-906下誘導24小時。蛋白質表現或磷酸化以西方墨點檢測，組蛋白H3用於標準化蛋白質負載。

圖 6 說明YIV-906或YIV-906GU對IFNγ使Raw細胞264.7極化為M1樣巨噬細胞的影響。YIV-906或YIV-906GU可增強IFNγ誘導MCP1、TNFa和iNOS（M1相關基因）。Raw細胞在鼠類M-CSF（10 ng/mL）存在下培養3天，然後在IFNγ 10 ng/mL存在下培養以誘導極化成M1樣巨噬細胞24小時。在第8天處理後，藉由RT-PCR測定mRNA表現。

圖 7A-7B 說明 說明YIV-906及/或抗PD1對於Hepa 1-6腫瘤之PD1（圖 7A ）及PDL1（圖 7B ）蛋白質表現的影響。為了進行Hepa 1-6腫瘤之PD1和PDL1蛋白質表現的西方墨點法分析，在抗PD1-/+ YIV-906處理4天後，將β-肌動蛋白用於標準化蛋白質負載，將各樣品標準化為主要混合物樣品（MIX），並為各凝膠重複一致上樣。圖中顯示T檢驗的P值。

圖 8A-8C 說明 YIV-906及/或抗PD1對BD1小鼠中之T細胞及裸鼠中Hepa 1-6腫瘤生長的影響。圖 8A 說明YIV-906及/或抗PD1對於Hepa 1-6腫瘤之活化T細胞的影響，如GranyzmeB和CD3染色所示。圖 8B 說明如CD3+/FOX3P+所示，YIV-906及/或抗PD1對於Hepa 1-6腫瘤之Treg細胞的影響。處理4天後，藉由分散酶（dispase）消化腫瘤組織，隨後以螢光標記的抗FOX3P或抗顆粒酶B（GranyzmeB）以及CD3（T細胞）和CD45（血球）染色。流式細胞儀分析用於確定總T細胞的Treg或顆粒酶B+ve細胞百分比。圖 8C 說明 使用qRT-PCR，YIV-906及/或抗PD1對於Hepa 1-6腫瘤之T細胞相關之mRNA表現的影響。

圖 9A-9C 說明YIV-906對於IDO活體外及in vivo 活性的影響。圖 9A 為說明YIV-906、經大腸桿菌葡萄醣醛酸酶處理的YIV906（YIV906GU）及其類黃酮對於培養物中經IDO轉染的HEK293細胞之IDO活性的影響的圖。HEK293細胞以小鼠IDO表達質體轉染，然後接種培養隔夜。將帶有或不帶有YIV906、YIV906GU或其類黃酮的L-色胺酸125 µM添加至孔中24小時。使用基於比色的測定法測量培養基的犬尿胺酸（kynurenine）濃度，將結果標準化為每個孔中的蛋白質濃度。圖 9B 顯示不同處理對Hepa 1-6腫瘤的犬尿胺酸/色胺酸的影響。圖 9C 顯示不同處理對Hepa 1-6腫瘤的單核球MDSC的影響。來自T-試驗的P值顯示於圖9B和9C。

圖10A-10B顯示在沒有向細胞中添加YIV-906（圖10A）或YIV-906GU（圖10B）（以重組大腸桿菌β-葡萄醣醛酸酶預處理以模擬腸道條件）的情況下BMDM（以20 ng/mL MCSF預處理7天）的IRF3-P蛋白質表現再進行24小時的西方墨點法分析。組蛋白3用於標準化蛋白質負載。

圖 10C 是顯示藉由ELISA測定法檢測培養基（48小時）中的IFNβ的圖。

圖 11 說明YIV-906或YIV-906GU（以大腸桿菌葡萄醣醛酸酶預處理）對CD73酶活性的影響。在AMP（100μM）存在做為基質下，具有或不具有YIV-906或YIV-906GU的條件下，使用重組人類CD73酶2小時，以HPLC檢測腺苷的形成。將YIV-906或YIV-906GU存在下的相對面積腺苷峰值與對照組進行比較。

圖 12A-12C 顯示各種YIV-906製劑對於M1/M2 mRNA表現的影響。圖 12A 顯示YIV906GU、單一草藥（G、P、S和Z：GU處理）或刪去一種草藥的調配物（-G、-P、-S和-Z：GU處理）對於巨噬細胞之iNOS/Arg的mRNA表現的影響。圖 12B 顯示貝加因（baicalein）、黃芩素（wogonin），金黃酮（chrysin），木蝴蝶素A（oroxylin A）和貝加靈（baicalin）對巨噬細胞之iNOS/Arg的mRNA表現的影響。Raw細胞在鼠類M-CSF（10 ng/mL）存在下培養3天，然後在IFNγ 10 ng/mL單獨或伴隨YIV-906GU/其之成分存在下培養以誘導極化成M1樣巨噬細胞24小時。在第8天處理後，藉由RT-PCR測定mRNA表現。圖 12C 說明使用如本文所述的LC-MS，在具有或不具有抗PD1的情況下，口服投予YIV-906後對於Hepa 1-6腫瘤的YIV-906化合物的檢測。

Claims (18)

1. 一種在哺乳動物中預防癌症復發的方法，該方法包含對該所需之哺乳動物投予治療有效量的選自下列所組成群組之至少一種草藥組成物： （a）一種草藥萃取物YIV-906，其包含黃芩（Scutellaria baicalensis ）（S）、甘草（Glycyrrhiza uralensis ）（G）、芍藥（Paeonia lactiflora ）（P）及棗（Ziziphus jujuba ）（Z）之草藥萃取物、其等之濾分或存在於該草藥萃取物或其濾分中之任何活性化學物質，及 （b）β-葡萄醣醛酸酶處理的YIV-906（YIV-906GU）或其之濾分，或存在於該YIV-906GU或其之濾分中的任何活性化學物質； 其中進一步投予哺乳動物有效量的至少一種免疫治療劑。
2. 如請求項1所述的方法，其中該癌症包含實性瘤。
3. 如請求項1至2中任一項所述的方法，其中該癌症係選自黑素瘤、非小細胞肺癌、腎細胞癌、肝癌、結腸癌、尿路上皮膀胱癌及胰臟癌中的至少一種。
4. 如請求項1至3中任一項所述的方法，其中該至少一種免疫治療劑係選自抗PD1、抗PD-L1及抗CTLA4抑制劑所組成群組的免疫檢查點抑制劑。
5. 如請求項1至4中任一項所述的方法，其中該至少一種免疫檢查點抑制劑選自依伊匹木單抗（Ipilimumab）、派姆單抗（Pembrolizumab）、納武單抗（Nivolumab）、度伐利尤單抗（Durvalumab）及阿特朱單抗（Atezolizumab）所組成之群組。
6. 如請求項1至5中任一項所述的方法，其中至少一種免疫治療劑是選自下列所組成群組之抗體：Siglec 15抗體、抗磷脂絲胺酸、抗OX40、抗CD73、抗TIM3、抗CD24、抗CD47、抗PD1、抗PDL1、抗CTLA4、抗GITR、抗CD27、抗CD28、抗CD122、抗TIGIT、抗VISTA、抗ICOS及抗LAG3。
7. 如請求項1至6中任一項所述的方法，其中投予該草藥組成物增強至少一種免疫治療劑的反應。
8. 如請求項1至7中任一項所述的方法，其中口服投予該草藥組成物至該哺乳動物。
9. 如請求項1至8中任一項所述的方法，其中投予該草藥組成物促進刺激干擾素基因（STING）激動劑的作用。
10. 如請求項1至9中任一項所述的方法，其中將草藥組成物以選自藥丸、錠劑、膠囊、湯劑、茶劑、濃縮物、糖衣錠、液體、滴劑和明膠衣錠所組成群組之形式口服投予該哺乳動物。
11. 如請求項1至10中任一項所述的方法，其中該治療有效量的草藥組成物為約20 mg/天至約2000 mg/天。
12. 如請求項1至11中任一項所述的方法，其中該治療有效量的草藥組成物為約1600 mg/天。
13. 如請求項1至12中任一項所述的方法，其中每日投予二次該草藥組成物。
14. 如請求項1至12中任一項所述的方法，其中將該草藥組成物投予約一至約二週，然後暫停治療至少一週。
15. 如請求項1至14中任一項所述的方法，其中在投予化學療法或放射線療法約30分鐘之前，投予該草藥組成物。
16. 如請求項1至15中任一項所述的方法，其中該給藥持續約4天。
17. 如請求項1至16中任一項所述的方法，其中在選自投予一種或多種免疫治療劑之前、同時和之後的時間，投予該草藥組合物至該哺乳動物。
18. 如請求項1至17中任一項所述的方法，其中該哺乳動物為人類。

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