TW202116349A - 一種基於干擾素的疾病治療方法 - Google Patents

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Abstract

本發明涉及生物醫藥領域。具體而言，本發明涉及一種基於干擾素的疾病治療方法，包括給個體間歇性施用基於干擾素的治療劑，該疾病例如是病毒感染或癌症。

Description

一種基於干擾素的疾病治療方法
本發明涉及生物醫藥領域。具體而言，本發明涉及一種基於干擾素的疾病治療方法，包括給個體間歇性施用基於干擾素的治療劑，該疾病例如是病毒感染或癌症。
干擾素(IFN)是一類具有多種功能的活性蛋白質，是由單核細胞及淋巴細胞產生的細胞因子。它們具有廣譜的抗病毒、影響細胞生長，以及分化、調節免疫功能等多種生物活性，是目前最主要的抗病毒感染及抗腫瘤生物製品。干擾素作為廣譜抗病毒物質，並不直接殺傷或抑制病毒，主要是透過細胞表面受體作用使細胞產生抗病毒蛋白，從而抑制病毒的複製，同時還可增強自然殺手細胞(NK細胞)、巨噬細胞及T淋巴細胞的活力，從而引起免疫調節作用，並增強抗病毒能力。
目前，干擾素被分成I、II、III型干擾素。I型干擾素包括IFN-α與IFN-β等。IFN-α主要由單核-巨噬細胞產生，此外B細胞及成纖維細胞也能合成IFN-α；IFN-β主要由成纖維細胞產生。IFN-α/β二者結合相同受體，分佈廣泛，包括單核-巨噬細胞、多形核白細胞、B細胞、T細胞、血小板、上皮細胞、內皮細胞及腫瘤細胞等。已知IFNα有23個以上的亞型。IFNβ僅有一種亞型。II型干擾素即γ干擾素，主要由活化的T細胞(包括Th0、Th1細胞及幾乎所有的CD8+T細胞)及NK細胞產生，是所謂的淋巴因子的一種。IFN-γ可以以細胞外基質相連的形式存在，故透過旁鄰方式控制細胞生長，其可以分佈在除成熟紅細胞以外的幾乎所有細胞表面，IFNγ僅有1個亞型。III型干擾素主要指干擾素λ。
干擾素、干擾素突變體及干擾素衍生物已經被廣泛核准用於各類的治療。目前已核准用於人體臨床治療的干擾素類及突變體包括干擾素α 2a，干擾素α 2b、干擾素α 1b、複合干擾素(干複津)、干擾素突變體(如樂複能)、干擾素β、干擾素γ(1b)等。干擾素衍生物包括聚乙二醇干擾素α 2a，聚乙二醇干擾素α 2b，集成干擾素等。
此外，近年來隨著TLRs、RLRs、STING等信號路徑的發現及闡明，一系列作用於上述信號路徑以產生干擾素的激動劑被發現及闡明，利用該類激動劑也成為未來以干擾素類物質為治療基礎的新方向，目前該類激動劑已被用於HBV及相關腫瘤治療研究。
然而，儘管干擾素類物質及其激動劑取得了一定的治療效果，但其應用效果不盡如人意。以治療慢性B型肝炎為例，有資料表明(參見派格賓說明書)，e抗原陽性的慢性B型肝炎患者e抗原血清學轉換僅30%左右，S抗原清除率僅1-3%，臨床使用效果不佳。多個臨床研究顯示持續使用干擾素類產品，前期治療過程表面抗原、e抗原指標下降較後期更快，而後期變化較為緩慢。多種基因型的HBV研究結果相似，多項研究指出其作用機制可能及特異性T細胞耗竭及免疫抑制有關。如何改善治療效果進展緩慢。
I型IFN是FDA核准臨床用於癌症的首批免疫治療藥物。其中，療效最好的為血液系統腫瘤，淋巴系統腫瘤次之，實體瘤最差，例如惡性黑色素瘤、卵巢瘤、結腸直腸癌等療效最高不超過20%。此外，干擾素與化療，放療及免疫治療等聯合應用是目前干擾素抗腫瘤的常用治療方法，例如干擾素聯用5-氟尿嘧啶治療肝癌、結直腸癌，干擾素聯合順鉑、卡鉑等治療肺癌，這些研究雖然取得一些成效，但是總體效果一般，預後較差。此外，干擾素在臨床上一般採用大劑量、連續的施用方式，不可避免帶來藥物相關的毒性大、患者的依從性及耐受性差等問題。
綜上，干擾素或干擾素聯合抗癌劑或放療等治療手段，在臨床應用上取得了一些進展，但總體上看，療效並不理想，預後差，毒性副作用大。
因此，本領域仍然需要對基於干擾素的療法進行改進，以獲得更佳的治療效果。
本案發明人意外地發現，相比於在一個固定療程中連續施用干擾素，透過多個療程間歇性地施用干擾素可以取得顯著更優的治療效果，例如在施用基本上相同的劑量，施用基本上相同的次數，或在基本上相同的治療時間內取得顯著更優的治療效果。
不受任何理論約束，認為長時間地連續施用干擾素，將會造成免疫細胞的消耗且難以恢復。干擾素的療效依賴於免疫系統，因此基於干擾素的治療在免疫細胞仍然充足的治療前期能夠取得很好的治療效果例如很高的病毒清除或腫瘤抑制，然而，在治療後期由於長期施用干擾素導致的免疫細胞消耗，治療效果將大幅下降，並且即使繼續施用干擾素也可能無法提高治療效力。而透過間歇性施用干擾素，可以避免這一問題。例如，施用一段時間的干擾素取得一定療效後，在免疫部分抑制及免疫細胞耗竭前停止干擾素的施用一段時間，使得免疫細胞能夠儘快恢復，之後再次重新施用干擾素，仍然能夠取得較好的治療效力。
因此，在一方面，本發明提供一種在個體中治療疾病的方法，其包括給該個體間隔地施用多個連續療程的基於干擾素的治療劑。
「干擾素」可以是人干擾素，例如可以是I、II或III型干擾素，例如干擾素α、干擾素β、干擾素γ或干擾素λ，較佳干擾素α。
如本文所用，「基於干擾素的治療劑」指的是能夠產生天然干擾素的至少部分效果的治療劑。
例如，「基於干擾素的治療劑」可以包括天然分離的或重組產生的干擾素，例如I型干擾素，較佳干擾素α。合適的干擾素α包括但不限於干擾素α 2a、干擾素α 2b或干擾素α 1b。
「基於干擾素的治療劑」還可以包括干擾素突變體，例如干複津(重組集成干擾素，Infergen)。
「基於干擾素的治療劑」還可以包括干擾素衍生物，例如PEG化修飾的干擾素或其突變體、白蛋白化的干擾素或其突變體、以及其它蛋白及有機物修飾的干擾素及其突變體等。PEG化修飾的干擾素或其突變體的實例包括但不限於聚乙二醇干擾素α 2a (例如派羅欣，40Kd雙分支UPEG-NHS修飾)、聚乙二醇干擾素α 2b (例如佩樂能，12Kd線型PEG-SC修飾)、聚乙二醇干擾素α 2b (例如派格賓，Y型40Kd PEG修飾)、培集成干擾素α-2 (例如派益生)、聚乙二醇干擾素λ、P1101等。
在一些實施方案中，該「基於干擾素的治療劑」包含長效干擾素，例如PEG化修飾的干擾素或其突變體。在一些實施方案中，該「基於干擾素的治療劑」包含短效干擾素。
在一些實施方案中，該「基於干擾素的治療劑」包含多種不同類型的干擾素或其突變體或衍生物。
術語「基於干擾素的治療劑」涵蓋了已經獲准上市的各種包含干擾素或其突變體或衍生物的治療劑。在一些實施方案中，該「基於干擾素的治療劑」是派格賓(Y型40Kd PEG修飾，聚乙二醇干擾素α 2b，特寶生物)。在一些實施方案中，該「基於干擾素的治療劑」是派羅欣 (聚乙二醇干擾素α 2a，Roche)。在一些實施方案中，該「基於干擾素的治療劑」是佩樂能 (聚乙二醇干擾素α 2b注射劑，Schering-Plough)。在一些實施方案中，該「基於干擾素的治療劑」是干複津(Infergen，重組集成干擾素，美國安進)。在一些實施方案中，該「基於干擾素的治療劑」是甘樂能 (重組人干擾素α 2b，Schering-Plough)。在一些實施方案中，該「基於干擾素的治療劑」是羅飛龍 (干擾素α 2a，Roche)。在一些實施方案中，該「基於干擾素的治療劑」是運德素 (重組人干擾素α 1b，北京三元基因工程有限公司)。在一些實施方案中，該「基於干擾素的治療劑」是派益生 (培集成干擾素α-2注射液，北京凱因科技股份有限公司)。在一些實施方案中，該「基於干擾素的治療劑」是聚乙二醇干擾素λ(Nanogen Pharmaceutical Biotechbology)。
在一些較佳實施方案中，該基於干擾素的治療劑包含干擾素α 2b。在一些較佳實施方案中，該基於干擾素的治療劑包含聚乙二醇修飾的干擾素α 2b。在一些較佳實施方案中，該基於干擾素的治療劑是派格賓。
在一些實施方案中，該「基於干擾素的治療劑」包含干擾素或其突變體或衍生物，該干擾素或其突變體或衍生物包含SEQ ID NO:1-5中任一項的胺基酸序列，或者該干擾素或其突變體或衍生物包含與SEQ ID NO:1-5中任一項具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%序列相同性的胺基酸序列。
在一些實施方案中，該「基於干擾素的治療劑」也包括編碼干擾素或其突變體或衍生物的核酸分子例如重組核酸表現載體。合適的表現載體特別是適於治療應用的表現載體是本發明所屬技術領域中具有通常知識者能容易確定的。
「基於干擾素的治療劑」還可以包括能夠促進內源干擾素產生的物質，例如TLRs、RLRs及STINGs信號路徑的激動劑。促進內源干擾素產生的物質的實例包括但不限於GS-9620、GS-9688、RO7020531、RO6864018、TQ-A3334、JNJ-4964、SB9200、MIW815、DMXAA、MK-1454、diABZI等[1]-[34] 。
如本文所用，「連續療程」指的是在該療程中，該治療劑的施用使得持續維持患者體內干擾素(外源或內源)的起效濃度(例如起效血液濃度)或者維持干擾素類物質的主要藥效學標誌物新喋呤(NPT)的體內濃度(例如血液濃度)高於未使用該治療劑時的濃度(初始濃度或基線濃度)。由於干擾素類物質的主要藥效學標誌物新喋呤與干擾素類物質施用具有良好的相關性，因此特別較佳地採用新喋呤的體內濃度(如血液濃度)變化作為「連續療程」的指標。例如，「連續療程」可以定義為，在該療程中，施用一或多次基於干擾素的治療劑，使得基本上在整個療程期間，個體體內新喋呤的濃度高於首次施用前的新喋呤濃度(基線濃度)，例如是首次施用前新喋呤濃度的大約110%、大約120%、大約130%、大約140%、大約150%、大約200%、大約250%或更高。體內新喋呤濃度的濃度可以透過本領域公知的方法測定。
在該連續療程中，基於干擾素的治療劑的施用方案通常取決於所選治療劑本身的特性，例如其體內半衰期。例如，對於長效干擾素(體內半衰期通常為30-120小時)，在該連續療程中可以約每週、約每兩週施用一次，或者在提高劑量情況下可每月甚至更長時間施用一次；而對於短效干擾素(體內半衰期通常為2-5小時)，則可以每天或每兩天施用一次或每週施用三次，或者在提高劑量(例如9-36 MIU或更高劑量)的情況下，可每週施用一次，或者在降低劑量的情況下，可每天施用多次。在該連續療程中，基於干擾素的治療劑的施用次數並沒有特別限制，只要其能滿足上述連續療程的定義。本發明所屬技術領域中具有通常知識者能夠根據基於干擾素的治療劑的藥效學標誌物例如新喋呤的體內濃度(如血液濃度)確定該連續療程。
在一些實施方案中，在該「連續療程」中，「基於干擾素的治療劑」可以以其常規方案施用。例如，干複津(重組集成干擾素，Infergen)、干擾素α 2b(如甘樂能)、干擾素α 2a(如羅蕘素)、干擾素α 1b(如運德素)在3-18 MIU的劑量區間內可以每日或每兩日施用一次或每週施用三次；聚乙二醇干擾素α 2a(如派羅欣)、聚乙二醇干擾素α 2b (如佩樂能或派格賓)、培集成干擾素α -2 (如派益生)或聚乙二醇干擾素λ可以在45-270 μg的劑量區間內每週施用一次。P1101每兩週約400 μg施用一次。白蛋白化干擾素α 2b可以每兩週施用約900-約1800 μg或每4週施用約1200 μg。
該多個連續療程各自的時間長度應當允許治療劑實現一定治療效果，但是應當避免使免疫細胞過度消耗。療程中免疫細胞的消耗通常能夠透過相關治療指標的變化來鑒別。例如，當相關治療指標顯示該治療劑的療效變差，則表示免疫細胞可能已經過度消耗。例如，在用干擾素治療慢性B型肝炎的標準方案中，干擾素類製劑連續治療12個月)，在治療的前期(例如前3個月或前6個月)表面抗原下降幅度顯著大於治療後期(例如後9個月或後6個月)的表面抗原下降幅度，這種表面抗原下降幅度的變小顯示免疫細胞可能(例如在連續治療3個月或6個月後)出現了免疫部分抑制及免疫細胞耗竭(參考實施例1)。
在一些實施方案中，該多個連續療程各自的長度為至少大約1週。
在一些實施方案中，該多個連續療程各自的長度為至多大約24週。
在一些實施方案中，該多個連續療程各自的長度為大約1週-大約24週，例如大約1週、大約2週、大約3週、大約4週、大約5週、大約6週、大約7週、大約8週、大約9週、大約10週、大約11週、大約12週、大約13週、大約14週、大約15週、大約16週、大約17週、大約18週、大約19週、大約20週、大約21週、大約22週、大約23週、大約24週。
在一些較佳實施方案中，該多個連續療程各自的長度為大約1週-大約12週。在一些更較佳的實施方案中，該多個連續療程各自的長度為大約1週-大約8週。在一些進一步較佳的實施方案中，該多個連續療程各自的長度為大約2週-大約6週。在一些進一步較佳的實施方案中，該多個連續療程各自的長度為大約2週。
在一些實施方案中，各個連續療程的終點(也即連續療程之間的間隔時間的起點)可以是該連續療程中最後一次施用基於干擾素的治療劑再加上該治療劑的大約5個體內半衰期的時刻。也就是說，該連續療程的長度為第一次施用至最後一次施用的時間，再加上該治療劑的大約5個體內半衰期。據認為，在治療劑施用5個半衰期後，將不再產生實質性的治療效果。
在本發明的方法中，該多個連續療程之間的間隔時間可取決於免疫細胞的再生週期。該間隔時間長度應當允許患者體內由於治療而降低的免疫細胞恢復至能夠有效實現治療的水準。通常認為，免疫細胞增殖需要大約1-2週，因此，該多個連續療程之間的間隔時間最短可以為大約1週。
在一些實施方案中，其中各連續療程之間至少間隔大約1週。
在一些實施方案中，該各連續療程之間至多間隔大約24週。
在一些實施方案中，各連續療程之間間隔大約1週-大約24週，例如大約1週、大約2週、大約3週、大約4週、大約5週、大約6週、大約7週、大約8週、大約9週、大約10週、大約11週、大約12週、大約13週、大約14週、大約15週、大約16週、大約17週、大約18週、大約19週、大約20週、大約21週、大約22週、大約23週、大約24週。
在一些較佳實施方案中，各連續療程之間間隔大約1週-大約12週。在一些更較佳的實施方案中，各連續療程之間間隔大約1週-大約8週。在一些進一步較佳的實施方案中，各連續療程之間間隔大約2週-大約6週。
在一些實施方案中，其中每個連續療程的長度為大約1週-大約24週，且其中各療程之間間隔大約1週-大約24週。
在一些實施方案中，其中每個連續療程的長度為大約1週-大約12週，且其中各療程之間間隔大約1週-大約12週。
在一些實施方案中，其中每個連續療程的長度為大約1週-大約8週，且其中各療程之間間隔大約1週-大約8週。
在一些實施方案中，其中每個連續療程的長度為大約2週-大約6週，且其中各療程之間間隔大約2週-大約6週。
在一些實施方案中，其中每個連續療程的長度為大約2週，且其中各療程之間間隔大約2週。
在一些實施方案中，該「基於干擾素的治療劑」施用至少2個、至少3個、至少4個、至少5個、至少6個、至少7個、至少8個、至少9個、至少10個、至少11個、至少12個、至少13個、至少14個、至少15個、至少20個、至少25個或更多個連續療程。
在一些實施方案中，其中該多個連續療程的長度基本上相同。
在一些實施方案中，該各療程之間具有基本上相同的時間間隔。
在一些具體實施方案中，該基於干擾素的治療劑是派格賓，每個連續療程的長度為大約5週-大約24週，各療程之間間隔大約2週-8週。
在一些實施方案中，該疾病是病毒感染。該病毒感染包括但不限於B型肝炎病毒感染、C型肝炎病毒感染、D型肝炎病毒感染、HIV感染，EBV感染、HPV感染、CMV感染、皰疹病毒感染等，較佳是B型肝炎病毒感染。
在一些實施方案中，該疾病是癌症。該癌症包括但不限於白血病(如急性淋巴細胞白血病(ALL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性骨髓性白血病(CML)、慢性淋巴細胞白血病、多毛細血管白血病)、肝癌、肺癌、結直腸癌、皮膚癌、胃癌、乳腺癌、前列腺癌、非霍奇金淋巴瘤、黑色素瘤、多發性骨髓瘤、喉乳頭狀瘤、濾泡性淋巴瘤、愛滋病相關卡波氏肉瘤、腎細胞癌等。在一些實施方案中，該疾病是骨髓增殖性腫瘤(MPN)。在一些較佳實施方案中，該疾病是肝癌、肺癌、乳腺癌、結直腸癌或黑色素瘤。
在一些實施方案中，該「基於干擾素的治療劑」與額外的藥劑(agent)聯合施用。該額外藥劑包括但不限於抗病毒劑、抗癌劑等。
在一些實施方案中，該抗病毒劑是穿入及脫殼抑制劑：包括但不限於金剛烷胺、金剛乙胺、恩夫韋地、馬拉韋羅；DNA聚合酶抑制劑：包括但不限於阿昔洛韋、更昔洛韋、伐昔洛韋、泛昔洛韋、膦甲酸鈉；逆轉錄酶抑制劑：核苷類：包括但不限於拉米夫定、齊多夫定、恩曲他濱、替諾福韋、阿德福韋酯、TAF、恩替卡韋，非核苷類：包括但不限於依法韋侖、奈韋拉平；蛋白質抑制劑：沙奎那韋；神經氨酸酶抑制劑：包括但不限於奧司他韋、紮那米韋；廣譜抗病毒藥：包括但不限於利巴韋林等。在一些較佳實施方案中，該抗病毒劑是恩替卡韋，替諾福韋，TAF等。
在一些實施方案中，在HIV抗病毒疾病治療中，該額外的藥劑包括但不限於恩曲他濱、替諾福韋、拉米夫定、沙奎那韋、茚地那韋、利托那韋、奈非那韋、安普那韋、洛匹那韋、阿紮那韋、Kaletra、奈韋拉平、地拉韋啶、依非韋倫等。
在一些實施方案中，該基於干擾素的治療劑是派格賓，該抗病毒劑是恩替卡韋。
在一些具體實施方案中，該方法用於治療B型肝炎病毒感染，該基於干擾素的治療劑是派格賓，每個連續療程的長度為大約5週-大約24週，各療程之間間隔大約2週-8週；該抗病毒劑是恩替卡韋，該恩替卡韋每日施用。
在一些實施方案中，該抗癌劑是化療劑包括但不限於，如烷化劑：尼莫司汀、卡莫司汀、洛莫司汀、環磷醯胺、異環磷醯胺、甘磷醯芥、司莫司汀；如化療藥物抗代謝藥：去氧氟鳥苷、多西氟鳥啶、5-氟尿嘧啶、巰嘌呤、硫鳥嘌呤、阿糖胞苷、氟鳥苷、替加氟、吉西他濱、卡莫氟、羥基脲、甲氨蝶呤、優福定、安西他濱、卡培他濱；如化療藥物抗腫瘤抗生素：放線菌素D、多柔比星、柔紅黴素、表柔比星、絲裂黴素、培洛黴素、平陽黴素、吡柔比星；如化療藥物抗腫瘤動植物成分藥：伊立替康、三尖杉酯堿、羥基喜樹堿、長春瑞賓、紫杉醇、白蛋白紫杉醇、泰索帝、拓撲替康、長春新堿、長春地辛、長春醯胺、長春堿、替尼泊苷、依託泊苷、欖香烯；如化療藥物抗腫瘤激素類：阿他美坦、阿那曲唑、氨魯米特、來曲唑、福美坦、甲他孕酮、他莫昔芬；如化療藥物雜類：門冬醯胺酶、卡鉑、順鉑、達卡巴嗪、奧沙利鉑、樂沙定、可鉑奧沙、米托蒽醌、丙卡巴肼。
在一些實施方案中，該額外的藥物是小分子靶向藥物，包括但不限於伊馬替尼、吉非替尼、硼替佐米、厄洛替尼、索拉非尼、來那度胺、舒尼替尼、達沙替尼、尼洛替尼、拉帕替尼、帕唑帕尼、依維莫司、凡德他尼、克唑替尼、威羅菲尼、魯索替尼(ruxolitinib)、阿西替尼、維莫德吉(vismodegib)、卡非佐米、瑞戈非尼、博舒替尼、托法替尼、卡博替尼、帕納替尼、泊馬度胺、曲美替尼、達拉菲尼、阿法替尼、埃克替尼、依魯替尼、色瑞替尼、艾代拉裡斯、阿帕替尼、帕布昔利布、樂伐替尼、阿西替尼、埃克替尼、阿帕替尼、索尼得吉(sonidegib)、考比替尼(cobimetinib)、塔格瑞斯(osimertinib)、艾樂替尼(alectinib)、依沙柔咪(ixazomib)。
在一些實施方案中，該額外的藥劑是腫瘤相關抗原特異性抗體類如美羅華、赫賽丁等。
該額外的藥劑還可以是免疫檢查點抑制劑，例如PD1、PDL1、CTLA4等的抑制劑如特異性抗體。免疫檢查點抑制劑的實例包括但不限於納武利尤單抗(Nivolumab)、帕博利珠單抗(Pembrolizumab)、阿特珠單抗(Atezolizumab)、度伐魯單抗(Durvalumab)、阿維魯單抗(Avelumab)等。
在一些具體實施方案中，該化療劑是奧沙利鉑。在一些具體實施方案中，該化療劑是表柔比星。在一些具體實施方案中，該化療劑是紫杉醇。
在一些較佳實施方案中，該化療劑是抗代謝類化療藥，如吉西他濱、卡培他濱、安西他濱。在一些最較佳實施方案中，該化療劑是吉西他濱。在一些實施方案中，該「基於干擾素的治療劑」的施用與該額外的藥劑的施用不重疊。
在一些實施方案中，在該多個連續療程之間施用該額外的藥劑。例如，該額外的藥劑可以在「基於干擾素的治療劑」施用間隔期內施用一段時間，該一段時間短於或等於該間隔期。
在一些實施方案中，該「基於干擾素的治療劑」的施用與該額外的藥劑的施用重疊。
在一些實施方案中，在該多個連續療程期間及該多個連續療程之間施用該額外的藥劑，即在整個治療期間施用該額外的藥劑(全部重疊)。
在整個治療期間或在「基於干擾素的治療劑」的治療間隔施用額外的藥劑例如抗病毒劑，對於治療病毒感染例如B型肝炎病毒感染是特別較佳的，因為可以控制或避免「基於干擾素的治療劑」停藥期間病毒的再感染。在一些實施方案中，該額外的藥劑按照常規方案施用，例如，其針對所治療的疾病的常規施用方案。
在一些實施方案中，本發明的方法導致個體中病毒載荷的降低，例如降低至少10%、至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、或至少99%。較佳地，本發明的方法導致個體中病毒基本上被清除，例如無法透過常規方法檢測出。較佳地，本發明的方法導致緩解或消除與病毒感染相關的一種或多種症狀。
在一些實施方案中，本發明的方法導致個體中腫瘤消退或腫瘤體積減小或延長生存期。特別地，本發明的方法導致：減少癌細胞的數目、減少腫瘤體積、抑制 (即減緩或停止) 癌細胞浸潤到周邊器官中、抑制(即減緩或停止)腫瘤轉移、抑制腫瘤生長、及/或緩解與癌症相關的一種或多種症狀。
在一方面，本發明提供一種藥物組合物，其包含基於干擾素的治療劑，該藥物組合物用於透過本發明的方法在個體中治療疾病。在一些實施方案中，該藥物組合物還包括額外的藥劑。該基於干擾素的治療劑及化療劑如上所定義。
在一方面，本發明提供基於干擾素的治療劑在製備藥物組合物中的用途，該藥物組合物用於透過本發明的方法在個體中治療疾病。在一些實施方案中，該藥物組合物還包括額外的藥劑。該基於干擾素的治療劑及化療劑如上所定義。
在一方面，本發明提供基於干擾素的治療劑在製備藥物組合物中的用途，該藥物組合物用於與額外的藥劑組合在個體中治療疾病。該基於干擾素的治療劑及化療劑如上所定義。該基於干擾素的治療劑及/或額外的藥劑可以根據本發明所述的方法施用。
在一方面，本發明提供基於干擾素的治療劑在製備用於增強額外藥劑之療效的藥物組合物中的用途。該基於干擾素的治療劑及化療劑如上所定義。該基於干擾素的治療劑及/或額外的藥劑可以根據本發明所述的方法施用。
在一方面，本發明提供一種藥盒，其包含基於干擾素的治療劑以及使用說明，該使用說明提供關於該基於干擾素的治療劑可以根據本發明的方法或根據本發明的方法施用以在個體中治療疾病的描述。在一些實施方案中，該藥盒還包含額外的藥劑。該基於干擾素的治療劑及化療劑如上所定義。
實施例 下文實施例僅僅是為了更好地闡釋本發明，而不意在以任何方式限制本發明。
實施例1、常規的基於干擾素的B型肝炎療法
本發明人收集了使用聚乙二醇干擾素α 2a(派羅欣)、聚乙二醇干擾素α 2b (Y型40kD 派格賓)進行常規治療的B型肝炎患者的B型肝炎表面e抗原資料，這些患者均根據藥品說明書記載的治療方案進行連續治療。派羅欣的治療方案為：派羅欣單藥治療180微克每週，連續治療48週。派格賓的治療方案為：派格賓單藥治療180微克每週，連續治療48週。
結果如圖1所示。聚乙二醇干擾素α 2a(派羅欣)、聚乙二醇干擾素α 2b (Y型40kD 派格賓)在治療慢性B型肝炎過程中表面抗原下降的趨勢都符合前期較快後期較慢的特徵。在派格賓及派羅欣對照治療e抗原陽性慢性B型肝炎表面抗原下降資料平均值圖中顯顯示，前24週較後24週治療效果更佳，進一步的前12週較後36週治療效果更佳。干擾素連續使用12週以上或者24週以上，可能造成免疫部分抑制及免疫細胞耗竭，從而導致後續治療效果的不佳。
實施例2、改進的基於干擾素的療法
如實施例1所示，干擾素連續治療效果不佳。本發明人令人驚奇地發現，透過間歇性地施用干擾素，可以獲得顯著更優的治療效果。
在一例慢性B型肝炎患者中，使用派格賓48週後，停用派格賓並常規施用核苷酸類似物恩替卡韋(ETV)抑制病毒複製；停用派格賓5週後，再使用派格賓8週，再停用6週。下一階段繼續重複。
派格賓的施用方式為：180微克每週。核苷酸類似物ETV的施用方式為每天口服0.5毫克。
具體如圖2所示，該患者在0-48週使用派格賓，49週起使用核苷酸類似物ETV，49至52週停用派格賓，53週起至61週使用派格賓8週，62週停用派格賓4週以上。從圖中可以看出，53至65週期間用藥8週停藥4週，表面抗原下降較36-48週顯著加快。顯示停藥5週可能取得了免疫清除能力恢復的效果。
在另一例慢性B型肝炎感染者的治療中，派格賓聯合ETV治療8週，停用派格賓5週同時繼續使用ETV，之後再使用派格賓5週，停用2週。
派格賓的施用方式為：90微克每週。核苷酸類似物ETV的施用方式為：每日0.5毫克。
如圖3所示，在干擾素使用過程中第一個週期的4週後觀察到隨著轉胺酶的升高可看到表面抗原升高的過程，表明干擾素可能啟動了相關細胞清除機制，停藥5週後用藥兩週同樣觀察到轉胺酶升高伴隨表面抗原升高的過程。提示使用干擾素治療後，停藥一定週期後重新使用可反復啟動免疫清除過程。透過停藥可以解除相關免疫抑制。推測其中轉胺酶升高代表受感染的細胞被免疫清除，在破壞的肝細胞釋放相關代謝酶的同時，伴隨表面抗原從被破壞的細胞的釋放，表面抗原暫時性升高。
在另一例慢性B型肝炎感染者治療中，派格賓施用方式為180微克每週，核苷酸類似物ETV施用方式為0.5毫克每天，第4週起使用派格賓聯合ETV 24週，第28-40週停用派格賓單用ETV，第44-68週使用派格賓聯合ETV，第68-76週停用派格賓單用ETV，第76-80週使用派格賓聯合ETV。
如圖4所示，在干擾素使用過程中第一個週期24週中觀察到隨著轉胺酶的升高可看到表面抗原升高後下降的過程，表明干擾素啟動了相關細胞清除機制。76-80週治療表面抗原小於0.05，使B型肝炎表面抗原低於檢測線，實現表面抗原清除。提示使用干擾素治療後，停藥一定週期後重新使用可反復啟動免疫清除過程。
上述結果提示，透過階段性的用藥及停藥的用藥方案，使用干擾素階段可以反復重複免疫清除、免疫細胞消耗，停用干擾素階段在聯合核苷酸類似物防止病毒再感染同時使免疫部分恢復同時免疫抑制消除，最終逐步清除感染B型肝炎病毒的肝臟細胞，使慢性B型肝炎患者血清中的表面抗原轉陰，實現臨床治癒。
實施例3、重組小鼠干擾素α4(mIFN-α4)的製備
干擾素同樣廣泛用於癌症治療，但是效果有待改進。為了研究干擾素是否的確由於連續施用導致免疫部分抑制及免疫細胞耗竭，進而導致後續治療效果的不佳，在小鼠上進行了干擾素間隙施用及連續施用的效力比較。
大量抗腫瘤效應的研究是以裸鼠(缺乏正常胸腺)為宿主進行實施研究的，而裸鼠的免疫狀態弱於正常鼠，難以體現正常狀態的免疫反應。而基於正常鼠在抗腫瘤模型中，可部分實現干擾素對免疫系統的效應，體現施用該干擾素的抗腫瘤療法的效果。從功能的實現途徑上，干擾素應依託宿主的免疫系統才能更完整發揮抗病毒、抗腫瘤作用。由於干擾素具有較強的種屬特異性，因此實施例中以正常小鼠為研究對象時，使用鼠干擾素或其衍生物更能反映出其生理學效應及實施效果。在本發明使用小鼠作為研究模型中，採用了聚乙二醇化重組小鼠干擾素α4(PEG-mIFNα4)作為干擾素類治療藥物及其衍生物的代表。
根據mIFN-α4的胺基酸序列(GenBank NP_034634)，按畢赤酵母偏好密碼子進行編碼並優化設計出mIFN-α4 的cDNA序列，委託金斯瑞生物科技有限公司合成該cDNA。將編碼mIFN-α4的cDNA同源重組插入pPIC9K質體，轉化TOP10感受態細胞，塗布LB固體培養基，37℃培養過夜。挑取單克隆接種LB液體培養基，37℃培養過夜；提取質體，XhoI、NotI雙酶切，核酸電泳鑒定出陽性克隆，並進一步經核酸測序確認。陽性克隆質體SalI酶切線性化，電轉化轉入畢赤酵母GS115，塗布RD平板，28-30℃培養3天。挑取陽性轉化子接種YPD液體培養基，28-30℃培養過夜；按OD600nm終濃度為約1轉接BMMY培養基，28-30℃培養約24小時；補加甲醇至甲醇終濃度為約1%，28-30℃繼續培養約24小時。取培養液離心收集上清液，SDS-PAGE電泳檢測mIFN-α4表現量。根據SDS-PAGE電泳結果，篩選出表現量較高且表現穩定的工程菌株進行後續上罐發酵。
發酵罐規模為30L，參照「Pichia Fermentation Process Guidelines」進行發酵培養及甲醇誘導，誘導時長約30h；離心收集發酵上清液，5kD中空纖維膜管超濾濃縮3~5倍，並替換緩衝體系為20mM磷酸鹽緩衝液-20mM精胺酸鹽酸鹽-50mM氯化鈉緩衝溶液(pH6.5)；然後上樣SP Sepharose Fast Flow層析柱(GE Healthcare，柱床Φ38mm×160mm)，20mM磷酸鹽緩衝液-20mM精胺酸鹽酸鹽（pH6.5）（溶液A）清洗約3個柱床體積；用溶液A及20mM磷酸鹽緩衝液-20mM精胺酸鹽酸鹽–1M氯化鈉溶液(pH6.5)(溶液B)進行梯度溶析，收集mIFN-α4目的樣品，取樣進行非還原型SDS-PAGE(分離膠濃度為14%，銀染顯色)檢測。溶析光譜見圖5，電泳結果見圖6。
mIFN-α4 SP Sepharose Fast Flow純化目的樣用5K超濾膜包超濾濃縮並替換緩衝液為20mM磷酸鹽緩衝液-50mM精胺酸鹽酸鹽-10mM甲硫胺酸-20mM氯化鈉(pH7.0)，調整濃度為約1.0mg/ml；按mIFN-α4蛋白與酶質量比為約20：1加入糖苷酶，25℃酶切約20h去除糖基。酶切樣品用5mM硼酸緩衝液-10mM精胺酸鹽酸鹽(pH9.0)稀釋約6倍，上樣Q Sepharose Fast Flow層析柱(GE Healthcare，柱床Φ50mm×154mm)，20mM硼酸緩衝液-20mM精胺酸鹽酸鹽-10mM甲硫胺酸（pH9.0）(溶液C)清洗約3個柱床體積；用溶液C及20mM硼酸緩衝液-20mM精胺酸鹽酸鹽-10mM甲硫胺酸-0.3M氯化鈉(pH9.0)(溶液D)進行梯度溶析，收集去除糖基mIFN-α4目的樣品，並用10%乙酸調pH至約pH5.0；用5K超濾膜包超濾濃縮並替換緩衝液為5mM乙酸/乙酸鈉緩衝液-50mM精胺酸鹽酸鹽-100mM氯化鈉(pH5.0)，所得樣品即為去糖基化mIFN-α4原液。取樣送檢，餘樣-70℃凍存備用。溶析光譜見圖7，SDS-PAGE電泳結果見圖8。
去糖基化mIFN-α4原液鱟試劑法測定細菌內毒素含量為＜60EU/mg；以商品化mIFN-α4(R&D，貨號12115-1)為標準品，小鼠成纖維細胞/腦心肌炎病毒(L929/EMCV)細胞病變抑制法測定比活性為5.4×108 U/mg。
實施例4、PEG化重組鼠干擾素(PEG-mIFN-α4)的製備
去糖基化mIFN-α4原液用5kD超濾膜包超濾替換緩衝液為5mM乙酸/乙酸鈉緩衝液-50mM氯化鈉(pH5.0)；取約333ml樣品(去糖基化mIFNα4含量為約500mg)，加入約22ml 0.8M硼酸/氫氧化鈉緩衝液(pH9.4)，攪拌均勻；按蛋白與40kD Y型聚乙二醇琥珀醯亞胺酯(YPEG-NHS)質量比為約1:8加入YPEG-NHS，快速攪拌，室溫反應10分鐘；加入0.2M甲硫胺酸約20ml終止反應，10%乙酸調pH至5.0。加入550ml純水，再加入600ml 20mM乙酸/乙酸鈉緩衝液-20mM精胺酸鹽酸鹽-10mM甲硫胺酸(pH5.1)(溶液E)，混勻；上樣SP Sepharose Fast Flow 層析柱(GE Healthcare，柱床Φ50mm×194mm)，溶液E清洗約5個柱床體積；然後用溶液E及20mM乙酸/乙酸鈉緩衝液-20mM精胺酸鹽酸鹽-10mM甲硫胺酸-600mM氯化鈉(pH5.1)(溶液F)進行梯度溶析，收集PEG-mIFN-α4目的樣品；5kD超濾膜包超濾替換緩衝液為：20mM磷酸鹽緩衝液-123mM氯化鈉(pH6.5)並適當濃縮，添加0.5% Tween80至Tween80終濃度為約0.005%，所得樣品即為聚乙二醇化鼠干擾素α4原液(PEG-mIFN-α4)；取樣送檢，餘樣-70℃凍存備用。溶析光譜見圖9，SDS-PAGE電泳結果見圖10。
PEG-mIFN-α4原液鱟試劑法測定細菌內毒素含量為＜15EU/mg；以商品化mIFN-α4(R&D，貨號12115-1)為標準品，小鼠成纖維細胞/腦心肌炎病毒(L929/EMCV)細胞病變抑制法測定比活性為6.1×106 U/mg。
實施例5、健康BALB/c小鼠皮下注射PEG-mIFN-α4的藥代動力學研究
本實施例中，BALB/c小鼠購自北京維通利華實驗動物技術有限公司。PEG-mIFN-α4血漿濃度採用雙抗體夾心ELISA法檢測。檢測試劑盒採用Mouse IFN alpha Platinum ELISA kit(貨號BMS6027/ BMS6027TEN，Thermo)，但將其報告抗體替換成抗PEG抗體3.3biotin(中央研究院生物醫學科學研究所，臺灣)，以避免內源性mIFN-α對測定結果的干擾。
6-8週齡、SPF級BALB/c小鼠(N=60，雌雄各半)於頸背部皮下單次注射1μg/隻PEG-mIFN-α4，分別採集投藥前(0h)及投藥後6h、15h、24h、36h、48h、72h、96h、120h、168h、216h、264h、312h的血漿樣本，測定血漿濃度。採用Phoenix WinNonlin 6.4軟體計算藥代動力學參數。
血漿濃度測定結果見表1，血漿濃度-給藥時間曲線見圖11，藥代動力學參數結果見表2。BALB/c小鼠頸背部皮下單次注射1μg/隻PEG-mIFN-α4，血漿藥物濃度達峰時間(Tmax )為24h，達峰濃度(Cmax )為268 ng/ml，消除半衰期(T1/2 )為28.3h。
表1、BALB/c小鼠單次皮下注射1μg/隻PEG-mIFN-α4血漿濃度檢測結果( N=5，ng/ml)
採集時間 個體血漿濃度 (ng/ml) Mean (ng/ml) SD
1 2 3 4 5
0h 0 0 0 0 0 0.0 0.0
6h 218.1 165.9 167.8 220.8 200.6 194.6 26.5
15h 282.7 326.1 194.3 203.8 183.2 238.0 62.9
24h 341.5 290.8 362.8 185.3 159.7 268.0 91.5
36h 204.8 263.1 145.4 60.6 61.4 147.1 88.9
48h 205.8 128.1 133.3 79 91.4 127.5 49.5
72h 95.5 73.6 40.4 52.9 54.6 63.4 21.5
96h 41.2 52.6 87.5 20.6 22.2 44.8 27.4
120h 22.6 26.1 19.1 11.5 10.6 18.0 6.8
168h BLQ BLQ BLQ BLQ BLQ BLQ /
216h BLQ BLQ BLQ BLQ BLQ BLQ /
264h BLQ BLQ BLQ BLQ BLQ BLQ /
312h BLQ BLQ BLQ BLQ BLQ BLQ /
註：在藥代動力學分析時，血漿濃度低於定量下限的樣品，血漿濃度達峰前樣品按0計，達峰後樣品以BLQ表示。
表2、BALB/c小鼠單次皮下注射1μg/隻PEG-mIFN-α4的藥代動力學參數匯總
參數 單位 PEG-mIFNα4
T1/2 hr 28.3
Tmax hr 24.0
Cmax ng/ml 268.0
Tlast hr 120.0
AUClast hr*ng/ml 13289.3
AUCINF_obs hr*ng/ml 14023.2
Vz_F_obs ml 2.91
Cl_F_obs ml/hr 0.07
實施例6、PEG-mIFN-α4間歇(每48小時給藥一次、連續給予3次，停藥144小時；連續4輪)、連續給藥(每48小時給藥一次，連續給予21次)對小鼠移殖性肝癌H22 的療效比較研究。
本實施例中，BALB/c小鼠購自北京維通利華實驗動物技術有限公司，小鼠肝癌H22 細胞株購自中國典型培養物保藏中心(CCTCC)。
6-8週齡、18-22g SPF級BALB/c小鼠右前肢腋下皮下接種H22 細胞(0.5×106 個/mL，0.2ml/隻)。接瘤當天隨機分組，實驗分組包括PEG-mIFN-α4連續給藥組(N=15，雌7雄8)、PEG-mIFN-α4間歇給藥組(N=15，雌7雄8)及生理鹽水對照組(N=10，雌5雄5)等。
PEG-mIFN-α4施用方式為頸背部皮下注射給藥，劑量為1微克每隻。PEG-mIFN-α4間歇給藥組每48小時給藥一次、連續給予3次，停藥144小時；連續4輪。PEG-mIFN-α連續給藥組每48小時給藥一次、連續給予21次。生理鹽水對照組給予等體積的生理鹽水。
所有組均進行生存分析，比較組間差異。統計分析採用SAS 9.4、office2010軟體，統計檢驗均為雙側檢驗。
生存曲線如圖12所示，統計比較結果如表3所示。至接瘤40天，生理鹽水對照組的中位生存期為19.5天，PEG-mIFN-α4連續給藥組為38天；PEG-mIFN-α4間歇給藥組的生存率為93.3%，尚無法計算中位生存期。PEG-mIFN-α4連續給藥組、間歇給藥組的生存曲線與生理鹽水對照組的差異均顯著；PEG-mIFN-α4連續給藥組與間歇給藥組的差異也顯著(P=0.0035)，PEG-mIFN-α4間歇給藥組的生存期相對連續給藥組顯著延長。針對小鼠移殖性肝癌H22 的治療，PEG-mIFN-α4間歇性施用相對連續施用方式表現顯著更優的療效。
表3、PEG-mIFN-α4連續、間歇給藥治療小鼠移殖性肝癌H22 療效比較實驗生存分析結果
組別 例數 ( 雌 + 雄 ) 中位生存期 ( 接瘤後時間，天 ) 生存曲線比較
P 值 1 P 值 2
生理鹽水對照組 5+5 19.5 / /
PEG-mIFN-α4間歇給藥組 7+8 觀察期內生存率93.3% ＜0.0001* /
PEG-mIFN-α4連續給藥組 7+8 38.0 0.0137* 0.0035*
注：1、與「生理鹽水對照組」比較。2、與「PEG-mIFN-α4間歇給藥組」比較。3、*：統計學差異顯著。
實施例7、間歇式施用干擾素聯合吉西他濱治療小鼠肝癌H22的研究
本案發明人研究了間歇式施用PEG化重組小鼠干擾素α（PEG-mIFN-α4）聯合吉西他濱對小鼠肝癌H22的抑瘤作用，探索干擾素與吉西他濱的聯合療效。本發明人驚奇地發現，透過間歇性地施用PEG-mIFN-α4並同時施用吉西他濱，相比於單獨施用吉西他濱或單獨間歇式施用PEG-mIFN-α4，在H22腫瘤治療中可以獲得顯著更優的治療效果。
本實施例中，BALB/c小鼠購自北京維通利華實驗動物技術有限公司；H22小鼠肝癌細胞株購自中國典型培養物保藏中心(CCTCC)，抗癌劑吉西他濱廠家為江蘇豪森藥業。
120隻6-8週齡、18-22g SPF級BALB/c小鼠右前肢腋下皮下接種肝癌H22瘤細胞（1×106 個/mL，0.2ml/隻），接瘤3天後，隨機分成包括生理鹽水對照組、PEG-mIFN-α4單用組、吉西他濱單用組、以及PEG-mIFN-α4聯用吉西他濱組在內的多個研究組。分組後當天開始給藥，每週給藥一次；PEG-mIFN-α4為頸背部皮下注射，吉西他濱為腹腔注射。所有組別使用測量瘤徑的方法，按公式V=1/2ab2 測量計算（a、b分別表示長和寬（mm））計算平均瘤體積，動態觀察抗腫瘤效應。
採用SAS 9.4、office2010軟體進行統計分析。統計檢驗均為雙側檢驗。
各組瘤體積變化情況如圖13所示。接瘤8天以後，生理鹽水對照組全部小鼠的瘤體肉眼可見。至接瘤18天，用藥組的平均瘤體積均低於生理鹽水組，提示吉西他濱、PEG-mIFN-α4、PEG-mIFN-α4聯用吉西他濱均具有一定的抗腫瘤作用。PEG-mIFN-α4聯用吉西他濱組的平均瘤體積顯著低於單用PEG-mIFN-α4組（P＜0.0001）及單用吉西他濱組（P＜0.0001）。
結果顯示，間歇式施用聚乙二醇化鼠干擾素α聯合吉西他濱的抗癌活性，顯著優於單獨間歇式施用聚乙二醇化鼠干擾素α4或單獨施用吉西他濱。
表4. 實施例7各組投藥後平均腫瘤體積匯總比較
組別 例數 （雌 + 雄） 平均瘤體積 ( 標準差 )/mm^3 組間比較
P 值 1 P 值 2
PEG-mIFN-α4（1.0μg/w） 13+13 846.2(592.0) ＜0.0001* ＜0.0001*
生理鹽水（0.2mL/w） 13+13 2722.0(1023.2)   
吉西他濱（60mg/kg/w） 13+13 1619.3(911.2) 0.0001* ＜0.0001*
吉西他濱+PEG-mIFN-α4 13+13 148.6(164.2)
註：P值1 為與「生理鹽水(0.2ml/w)」比較，P值2 為與「吉西他濱+PEG-mIFN-α4」比較，*具有統計學差異。
實施例8、間歇式施用干擾素聯合吉西他濱治療小鼠肺癌LLC的研究
本案發明人研究了間歇式施用PEG-mIFN-α4聯合吉西他濱對小鼠肺癌LLC的抑瘤作用，探索干擾素與吉西他濱的聯合療效。透過實驗發現，間歇性地施用PEG-mIFN-α4並同時施用吉西他濱，相比於單獨施用吉西他濱或單獨間歇式施用PEG-mIFN-α4，在肺癌LLC治療中同樣也可以獲得顯著更優的治療效果。
本實施例中，C57BL/6N小鼠購自北京維通利華實驗動物技術有限公司，LLC小鼠肺癌細胞株購自北京協和細胞資源中心。抗癌劑為吉西他濱（江蘇豪森藥業）。
120隻6-8週齡、18-22g SPF級C57BL6/N小鼠右前肢腋下皮下接種肺癌LLC瘤細胞（1×107 個/mL，0.2ml/隻）；接瘤3天後，隨機分成包括生理鹽水對照組、吉西他濱單用組、PEG-mIFN-α4聯用吉西他濱組。分組後當天開始給藥，每週給藥一次；PEG-mIFN-α4為頸背部皮下注射，吉西他濱為腹腔注射。所有組使用測量瘤徑的方法，按公式V=1/2ab2 測量計算（a、b分別表示長和寬（mm））計算平均瘤體積，動態觀察抗腫瘤效應。
採用SAS 9.4、office2010軟體進行統計分析。統計檢驗均為雙側檢驗。
各組瘤體積變化情況如圖14所示。接瘤8天以後，生理鹽水對照組全部小鼠的瘤體肉眼可見。接瘤24天，用藥組平均荷瘤體積均低於生理鹽水組，提示吉西他濱、PEG-mIFN-α4及PEG-mIFN-α4聯用吉西他濱組均具有一定的抗腫瘤作用。PEG-mIFN-α4聯用吉西他濱組的平均瘤體積顯著低於單用PEG-mIFN-α4組（P＜0.0001）及單用吉西他濱組（P＜0.0001）。
結果顯示，間歇式施用聚乙二醇化鼠干擾素α聯合吉西他濱的抗肺癌活性，顯著優於單獨間歇式施用聚乙二醇化鼠干擾素α4或單獨施用吉西他濱。
表5. 實施例8各組投藥後平均腫瘤體積匯總比較
組別 例數 （雌 + 雄） 平均瘤體積 ( 標準差 )/mm^3 組間比較
P 值 1 P 值 2
PEG-mIFN-α4（1.0μg/w） 14+14 4000.8 (2513.7) 0.0388 ＜0.0001*
生理鹽水（0.2mL/w） 14+14 5511.6 (2817.1)   
吉西他濱（60mg/kg/w） 14+14 1466.6 (791.5) ＜0.0001* ＜0.0001*
吉西他濱+PEG-mIFN-α4 14+14 364.1 (387.8)
注：P值1 為與「生理鹽水(0.2ml/w)」比較，P值2 為與「吉西他濱+PEG-mIFN-α4」比較，*具有統計學差異。
實施例9、間歇式施用干擾素聯合吉西他濱治療結直腸癌CT26的研究
本發明人研究了間歇式施用PEG-mIFN-α4聯合吉西他濱對小鼠結直腸癌CT26的抑瘤作用，探索干擾素與吉西他濱的聯合療效。透過實驗發現，間歇性地施用PEG-mIFN-α4並同時施用吉西他濱，相比于單獨施用吉西他濱或單獨間歇式施用PEG-mIFN-α4，在結直腸癌CT26治療中同樣也可以獲得顯著更優的治療效果。
本實施例中，BALB/c小鼠購自北京維通利華實驗動物技術有限公司，CT26小鼠結直腸癌細胞株購自中國科學院上海生科院細胞資源中心。抗癌劑為吉西他濱（江蘇豪森藥業）。
120隻6-8週齡、18-22g SPF級BALB/c小鼠右前肢腋下皮下接種結直腸癌CT26瘤細胞（1×106 個/mL，0.2ml/隻）；接瘤3天後，隨機分成包括生理鹽水對照組、PEG-mIFN-α4單用組、吉西他濱單用組、以及PEG-mIFN-α4聯用吉西他濱組在內的多個研究組。分組後當天開始給藥，每週給藥一次；PEG-mIFNα為頸背部皮下注射，吉西他濱為腹腔注射。所有組別使用測量瘤徑的方法，按公式V=1/2ab2 測量計算（a、b分別表示長和寬（mm））計算平均瘤體積，動態觀察抗腫瘤效應。
採用SAS 9.4、office2010軟體進行統計分析。統計檢驗均為雙側檢驗。
各組瘤體積變化情況如圖15所示。接瘤8天以後，生理鹽水對照組全部小鼠的瘤體肉眼可見。至接瘤43天，用藥組平均荷瘤體積顯著低於生理鹽水組（P＜0.05），用藥組平均荷瘤體積均低於生理鹽水組，提示吉西他濱、PEG-mIFN-α4、PEG-mIFN-α4聯用吉西他濱均具有一定的抗腫瘤作用。PEG-mIFN-α4聯用吉西他濱組的平均瘤體積顯著低於單用PEG-mIFN-α4組（P＜0.0001）及單用吉西他濱組（P=0.0054）。
結果顯示，間歇式施用聚乙二醇化鼠干擾素α聯合吉西他濱的抗結直腸癌活性，顯著優於單獨間歇式施用聚乙二醇化鼠干擾素α4或單獨施用吉西他濱。
表6. 實施例9各組藥後平均腫瘤體積匯總比較
組別 例數 （雌 + 雄） 平均瘤體積 ( 標準差 )/mm^3 組間比較
P 值 1 P 值 2
PEG-mIFN-α4（1.0μg/w） 14+12 5283.7(5030.5) 0.0004* ＜0.0001*
生理鹽水（0.2mL/w） 14+12 10510.8(4910.8)   
吉西他濱（60mg/kg/w） 14+13 1558.2(2225.2) ＜0.0001* 0.0054*
吉西他濱+PEG-mIFN-α4 14+13 238.9(460.0)
注：P值1 為與「生理鹽水(0.2ml/w)」比較，P值2 為與「吉西他濱+PEG-mIFN-α4」比較，*具有統計學差異。
實施例10、間歇式施用干擾素聯合吉西他濱治療黑色素瘤B16的研究
本發明人研究了間歇式施用PEG-mIFN-α4聯合吉西他濱對小鼠黑色素瘤B16的抑瘤作用，探索干擾素與吉西他濱的聯合療效。透過實驗發現，間歇性地施用PEG-mIFN-α4並同時施用吉西他濱，相比於單獨施用吉西他濱或單獨間歇式施用PEG-mIFN-α4，在黑色素瘤B16治療中同樣也可以獲得顯著更優的治療效果。
本實施例中，C57BL/6N小鼠購自北京維通利華實驗動物技術有限公司，B16小鼠黑色素瘤細胞株源自ATCC。抗癌劑為吉西他濱（江蘇豪森藥業）。
120隻6-8週齡、18-22g SPF級C57BL/6N小鼠右前肢腋下皮下接種B16瘤細胞（1×107 個/mL，0.2 ml/隻），接瘤3天後，隨機分成包括生理鹽水對照組、PEG-mIFN-α4單用組、吉西他濱單用組、以及PEG-mIFN-α4聯用吉西他濱組在內的多個研究組。分組後當天開始給藥，每週給藥一次；PEG-mIFN-α4為頸背部皮下注射，吉西他濱為腹腔注射。所有組別使用測量瘤徑的方法，按公式V=1/2ab2 測量計算（a、b分別表示長和寬（mm））計算平均瘤體積，動態觀察抗腫瘤效應。
採用SAS 9.4、office2010軟體進行統計分析。統計檢驗均為雙側檢驗。
各組瘤體積變化情況如圖16所示。接瘤8天以後，生理鹽水對照組全部小鼠的瘤體肉眼可見。至接瘤14天，用藥組平均荷瘤體積均低於生理鹽水組，提示吉西他濱、PEG-mIFN-α4、PEG-mIFN-α4聯用吉西他濱組均具有一定的抗黑色素瘤的作用。PEG-mIFN-α4聯用吉西他濱組的平均瘤體積顯著低於單用PEG-mIFN-α4組（P=0.0002）及單用吉西他濱組（P＜0.0001）。
結果顯示，間歇式施用聚乙二醇化鼠干擾素α同時聯合吉西他濱的抗黑色瘤活性，顯著優於單獨間歇式施用聚乙二醇化鼠干擾素α4或單獨施用吉西他濱。
表7. 實施例10各組藥後平均腫瘤體積匯總比較
組別 例數 （雌 + 雄） 平均瘤體積 ( 標準差 )/mm^3 組間比較
P 值 1 P 值 2
PEG-mIFN-α4（1.0μg/w） 14+14 1639.7 (979.5) ＜0.0001* 0.0002*
生理鹽水（0.2mL/w） 14+14 4330.9 (2028.6)      
吉西他濱（60mg/kg/w） 14+14 2279.9 (807.6) ＜0.0001* ＜0.0001*
吉西他濱+PEG-mIFN-α4 14+14 804.1 (467.6)      
註：P值1 為與「生理鹽水(0.2ml/w)」比較，P值2 為與「吉西他濱+PEG-mIFN-α4」比較，*具有統計學差異。
實施例 11 、 PEG-mIFN-α4 間歇給藥（每 48 小時給藥一次、連續給予 3 次，停藥 144 小時）聯合抗癌劑吉西他濱、單用吉西他濱對小鼠移殖性肝癌 H22 的療效比較研究。
本實施例中，BALB/c小鼠購自北京維通利華實驗動物技術有限公司，H22 小鼠肝癌細胞株購自中國典型培養物保藏中心（CCTCC），抗癌劑吉西他濱廠家為江蘇豪森藥業集團有限公司。
6-8週齡、18-22g SPF級BALB/c小鼠右前肢腋下皮下接種肝癌H22 瘤細胞（1×106 個/mL，0.2ml/隻）；接瘤3天後，隨機分組，每組26隻，雌雄各半；實驗分組包括生理鹽水對照組、吉西他濱組、PEG-mIFN-α4間歇給藥聯用吉西他濱組等。分好組後即給予相應藥物或生理鹽水。PEG-mIFN-α4給藥方式為頸背部皮下注射，給藥劑量為1微克每隻；間歇給藥為每48小時給藥一次、連續給3次，停藥144小時。吉西他濱為腹腔注射給藥，劑量為每次60毫克每千克體重，每週給藥一次。生理鹽水對照組給予等體積的生理鹽水。PEG-mIFN-α4間歇給藥聯用吉西他濱組在給予第1針PEG-mIFN-α4的同時給予吉西他濱，此後保持吉西他濱每週給藥一次。
所有組均進行生存分析，比較組間差異。統計分析採用SAS 9.4、office2010軟體，統計檢驗均為雙側檢驗。
至接瘤41天，生理鹽水對照組的死亡率為100%（26/26），吉西他濱組為73.1%（19/26），PEG-mIFN-α4間歇給藥聯用吉西他濱組為3.8%（1/26）；生理鹽水對照組的中位生存期為15.5天，吉西他濱組為21.5天，PEG-mIFN-α4間歇給藥併用吉西他濱組的生存率為96.2%。
生存曲線如圖17所示，統計比較結果如表8所示。PEG-mIFN-α4間歇給藥聯用吉西他濱組的生存曲線與生理鹽水對照組的差異顯著（P＜0.0001），與吉西他濱組的差異也顯著(P＜0.0001)。針對小鼠移殖性肝癌H22 的治療，PEG-mIFN-α4間歇性施用聯用陽性藥物吉西他濱相對陽性對照藥吉西他濱表現出更優的療效。
結果顯示，間歇施用PEG-mIFN-α4聯用吉西他濱的抗癌活性顯著優於單獨施用吉西他濱。
表8、PEG-mIFN-α4間歇給藥聯用吉西他濱治療小鼠移殖性肝癌H22 療效比較實驗生存分析結果
組別 例數 ( 雌 + 雄 ) 中位生存期 （接瘤後時間，天） 生存曲線比較
P 值 1 P 值 2
生理鹽水對照組 13+13 15.5 / /
吉西他濱組 13+13 21.5 0.0279 /
PEG-mIFN-α4間歇給藥 聯用吉西他濱組 13+13 觀察期內生存率為96.2% ＜0.0001* ＜0.0001*
註：1、P值為與「生理鹽水對照組」比較；2、P值為與「吉西他濱組」比較；3、*指統計學差異顯著。
實施例12、間歇施用干擾素聯合抗癌劑表柔比星治療小鼠移殖性肝癌H22 的研究
本實施例中採用的抗癌劑為化療藥物中抗腫瘤抗生素類藥物表柔比星，考察間歇施用干擾素聯合抗癌劑表柔比星治療小鼠移殖性肝癌H22 的實施效果。
本實施例中，BALB/c小鼠購自北京維通利華實驗動物技術有限公司，小鼠肝癌H22 細胞株購自中國典型培養物保藏中心(CCTCC)，表柔比星廠家為北京協和藥廠。
6-8週齡、18-22g SPF級BALB/c小鼠右前肢腋下皮下接種肝癌H22 瘤細胞（1×106 個/mL，0.2ml/隻）；接瘤3天後，隨機分組，每組28隻，雌雄各半；實驗分組包括生理鹽水對照組、表柔比星單用組、PEG-mIFN-α4聯用表柔比星組。
分組後當天開始給藥，每週給藥一次；PEG-mIFN-α4為頸背部皮下注射，每次施用劑量為1微克每隻；表柔比星為腹腔注射，劑量為每次3.5毫克每千克；生理鹽水對照組給予等體積的生理鹽水。
所有組別均進行生存曲線分析，並比較中位生存期；採用SAS 9.4、office2010軟體進行統計分析。統計檢驗均為雙側檢驗。
各組小鼠的生存曲線如圖18所示，中位生存期如表9所示。生理鹽水組的中位生存期為13.5天，表柔比星組的中位生存期為15天，PEG-mIFN-α4聯用表柔比星組在觀察期內的生存率為57.1%。PEG-mIFN-α4聯用表柔比星組的生存曲線與生理鹽水組的差異具有顯著性（P＜0.0001）；間歇性施用PEG-mIFN-α4同時聯用表柔比星，相比於單獨單獨施用表柔比星可以顯著延長荷瘤小鼠的生存期（P＜0.0001）。
該實施例提示，在小鼠移殖性肝癌H22 的治療中，間歇性地施用PEG-mIFN-α4同時聯合表柔比星的療效顯著優於單獨施用表柔比星。
表9.實施例12生存分析結果
組別 例數 ( 雌 + 雄 ) 中位生存期 （接瘤後時間，天） 生存曲線比較
P 值 1 P 值 2
生理鹽水（0.2mL/w） 14+14 13.5 /   
表柔比星（3.5mg/kg/w） 14+14 15.0 0.4598
表柔比星+PEG-mIFN-α4 14+14 觀察期內生存率57.1% ＜0.0001* ＜0.0001*
註：P值1 為與「生理鹽水(0.2ml/w)」比較，P值2 為與「表柔比星（3.5mg/kg/w）」比較，*具有統計學差異。
實施例13、間歇施用干擾素聯合抗癌劑奧沙利鉑治療小鼠移殖性肝癌H22 的研究
本實施例中採用的抗癌劑為化療藥物奧沙利鉑，考察間歇施用干擾素聯合抗癌劑奧沙利鉑治療小鼠移殖性肝癌H22 的實施效果。
本實施例中， BALB/c小鼠購自北京維通利華實驗動物技術有限公司，H22 小鼠肝癌細胞株購自中國典型培養物保藏中心(CCTCC)；奧沙利鉑廠家為齊魯製藥（海南）有限公司。
6-8週齡、18-22g SPF級BALB/c小鼠右前肢腋下皮下接種肝癌H22 瘤細胞（1×106 個/mL，0.2 ml/隻）；接瘤3天後，隨機分組，每組28隻，雌雄各半；實驗分組包括生理鹽水對照組、奧沙利鉑單用組、PEG-mIFN-α4聯用奧沙利鉑組等。
分組後當天開始給藥，每週給藥一次；PEG-mIFN-α4為頸背部皮下注射，每次施用劑量為1微克每隻；奧沙利鉑為腹腔注射，每次10毫克每千克；生理鹽水對照組給予等體積的生理鹽水。
所有組別均進行生存曲線分析，並比較中位生存期；採用SAS 9.4、office2010軟體進行統計分析。統計檢驗均為雙側檢驗。
各組小鼠的生存曲線如圖19所示，中位生存期如表10所示。生理鹽水組的中位生存期為11天，奧沙利鉑組的中位生存期為12.5天，PEG-mIFN-α4聯用奧沙利鉑組的中位生存期為31天。PEG-mIFN-α4聯用奧沙利鉑組的生存曲線與生理鹽水組的差異顯著（P=0.0001），與單獨施用奧沙利鉑組的差異也顯著（P=0.0014）；間歇性施用PEG-mIFN-α4同時聯用奧沙利鉑可以顯著延長荷瘤小鼠的生存期。
該實施例提示，在小鼠移殖性肝癌H22 的治療中，間歇性地施用PEG-mIFN-α4並同時聯合施用奧沙利鉑，相比於單獨施用奧沙利鉑，可以獲得顯著更優的治療效果。
表10.實施例13生存分析結果
組別 例數 ( 雌 + 雄 ) 中位生存期 （接瘤後時間，天） 生存曲線比較
P 值 1 P 值 2
生理鹽水（0.2mL/w） 14+14    11.0 / /
奧沙利鉑（10mg/kg/w） 14+14    12.5 0.5112 /
奧沙利鉑+PEG-mIFN-α4 14+14    31.0 0.0001* 0.0014*
註：P值1 為與「生理鹽水(0.2ml/w)」比較，P值2 為與「奧沙利鉑（10mg/kg/w）」比較，*具有統計學差異。
實施例14、間歇施用干擾素聯合抗癌劑紫杉醇治療小鼠移殖性肝癌H22 研究
本實施例中採用的抗癌劑為化療藥物紫杉醇，考察間歇施用干擾素聯合抗癌劑紫杉醇治療小鼠移殖性肝癌H22 的實施效果。
本實施例中，BALB/c小鼠購自北京維通利華實驗動物技術有限公司，H22 小鼠肝癌細胞株購自中國典型培養物保藏中心(CCTCC)，紫杉醇廠家為江蘇奧賽康藥業股份有限公司。
6-8週齡、18-22g SPF級BALB/c小鼠右前肢腋下皮下接種肝癌H22 瘤細胞（1×106 個/mL，0.2ml/隻）；接瘤3天後，隨機分組，每組28隻，雌雄各半；實驗分組包括生理鹽水對照組、紫杉醇單用組、PEG-mIFN-α4聯用紫杉醇組。
分組後當天開始給藥，每週給藥一次；PEG-mIFN-α4為頸背部皮下注射，每次施用劑量為1微克每隻；紫杉醇為腹腔注射，每次10毫克每千克。
所有組別均進行生存曲線分析，並比較中位生存期；採用SAS 9.4、office2010軟體進行統計分析。統計檢驗均為雙側檢驗。
各組小鼠的生存曲線如圖20所示，中位生存期如表11所示。生理鹽水組的中位生存期為15天，紫杉醇組為17天；在觀察期內，PEG-mIFN-α4聯用紫杉醇組的生存率為82.1%。PEG-mIFN-α4聯用紫杉醇組的生存曲線與生理鹽水組的差異顯著（P=0.0001），與單獨施用紫杉醇組的差異也顯著（P＜0.0001）；間歇性施用PEG-mIFN-α4同時聯用紫杉醇可以顯著延長荷瘤小鼠的生存期。
該實施例提示，在小鼠移殖性肝癌H22 的治療中，間歇性地施用PEG-mIFN-α4並同時聯合施用紫杉醇，相比於單獨施用紫杉醇，可以獲得顯著更優的治療效果。
表11.實施例14生存分析結果
組別 例數 ( 雌 + 雄 ) 中位生存期 （接瘤後時間，天） 生存曲線比較
P 值 1 P 值 2
生理鹽水（0.2mL/w） 14+14 15.0 / /
紫衫醇（10mg/kg/w） 14+14 17.0 0.3147 /
紫衫醇+PEG-mIFN-α4 14+14 觀察期內生存率82.1% ＜0.0001* ＜0.0001*
註：P值1 為與「生理鹽水(0.2ml/w)」比較，P值2 為與「紫衫醇（10mg/kg/w）」比較，*具有統計學差異。
本發明上述結果提示，透過間歇性地施用PEG-mIFN-α4並同時聯合化療劑例如施用吉西他濱、紫杉醇、奧沙利鉑、表柔比星等，相比於單獨施用化療劑，可以獲得顯著更優的癌症治療效果。
在B型肝炎及癌症治療上類似的結果提示，長時間地連續施用干擾素，將會造成免疫抑制及免疫細胞消耗且難以恢復。干擾素的療效依賴於免疫系統，因此基於干擾素的治療在免疫細胞仍然充足的治療前期能夠取得很好的治療效果例如很高的病毒清除或腫瘤抑制，然而，在治療後期由於長期施用干擾素導致的免疫細胞消耗或免疫抑制，治療效果將大幅下降，並且即使繼續施用干擾素也可能無法持續保持較高的治療效力。而透過間歇性施用干擾素，可以避免這一問題。例如，施用一段時間的干擾素取得一定療效後，在免疫部分抑制及免疫細胞耗竭前停止干擾素的施用一段時間，使得免疫細胞能夠儘快恢復，之後再次重新施用干擾素，仍然能夠取得較好的治療效力。透過間歇性施用干擾素的治療劑合理聯合其他藥物，可取得更好的治療效果。
序列及說明 ＞SEQ ID NO:1是干擾素α 2a的胺基酸序列 (例如羅飛龍或派羅欣) CDLPQ THSLG SRRTL MLLAQ MRKIS LFSCL KDRHD FGFPQ EEFGN QFQKA ETIPV LHEMI QQIFN LFSTK DSSAA WDETL LDKFY TELYQ QLNDL EACVI QGVGV TEPLM KEDSI LAVRK YFQRI TLYLK EKKYS PCAWE VVRAE IMRSF SLSTN LQESL RSKE ＞SEQ ID NO:2是干擾素α 2b胺基酸序列 (例如甘樂能或佩樂能或派格賓) CDLPQ THSLG SRRTL MLLAQ MRRIS LFSCL KDRHD FGFPQ EEFGN QFQKA ETIPV LHEMI QQIFN LFSTK DSSAA WDETL LDKFY TELYQ QLNDL EACVI QGVGV TETPL MKEDS ILAVR KYFQR ITLYL KEKKY SPCAW EVVRA EIMRS FSLST NLQES LRSKE。 ＞SEQ ID NO:3是重組集成干擾素胺基酸序列 (例如干複津) MCDLPQTHSL GNRRALILLA QMRRISPFSC LKDRHDFGFP QEEFDGNQFQ KAQAISVLHE MIQQTFNLFS TKDSSAAWDE SLLEKFYTEL YQQLNDLEAC VIQEVGVEET PLMNVDSILA VKKYFQRITL YLTEKKYSPC AWEVVRAEIM RSFSLSTNLQ ERLRRKE。 ＞SEQ ID NO:4：是培集成干擾素α-2胺基酸序列 (例如派益生) GSGGGCDLPQTHSLGNRRALILLAQMRRISPFSCLKDRHDFGFPQEEFDGNQFQKAQAISVLHEMIQQTFNLFSTKDSSAAWDESLLEKFYTELYQQLNDLEACVIQEVGVEETPLMNVDSILAVRKYFQRITLYLTEKKYSPCAWEVVRAEIMR SFSLSTNLQERLRRKD ＞SEQ ID NO:5：是干擾素λ胺基酸序列 MGPVP TSKPT TTGKG CHIGR FKSLS PQELA SFKKA RDALE ESLKL KNWSC SSPVF PGNWD LRLLQ VRERP VALEA ELALT LKVLE AAAGP ALEDV LDQPL HTLHH ILSQL QACIQ PQPTA GPRPR GRLHH WLHRL QEAPK KESAG CLEAS VTFNL FRLLT RDLKY VADGN LCLRT STHPE ST ＞SEQ ID NO:6：是鼠干擾素α4胺基酸序列 CDLPHTYNLGNKRALTVLEEMRRLPPLSCLKDRKDFGFPLEKVDNQQIQKAQAILVLRDLTQQILNLFTSKDLSATWNATLLDSFCNDLHQQLNDLKACVMQEPPLTQEDSLLAVRTYFHRITVYLRKKKHSLCAWEVIRAEVWRALSSSTNLLARLSEEKE參考文獻 [1]Gisslinger H,et.al.Ropeginterferon alfa-2b, a novel IFNα-2b, induces high response rates with low toxicity in patients with polycythemia vera.Blood. 2015 Oct 8;126(15):1762-9. doi: 10.1182/blood-2015-04-637280. 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圖1.   顯示施用常規方案施用派羅欣或派格賓治療慢性B型肝炎的效果(表面抗原-時間曲線)。 圖2.   顯示間隔施用干擾素可以提高治療後期的干擾素效力。 圖3.   顯示間隔施用干擾素可能反復啟動免疫清除。 圖4.   顯示透過干擾素間隔施用可使患者血清中B型肝炎表面抗原轉陰。 圖5.   mIFN-α4發酵上清液SP Sepharose Fast Flow溶析光譜。 圖6.   mIFN-α4 SP Sepharose Fast Flow純化目的樣非還原型SDS-PAGE(分離膠濃度14%，銀染顯色)電泳結果。 圖7.   去除糖基mIFN-α4 Q Sepharose Fast Flow純化溶析光譜。 圖8.   去除糖基mIFN-α4 Q Sepharose Fast Flow純化原液非還原型SDS-PAGE(分離膠濃度14%，銀染顯色)電泳結果。 圖9.   PEG-mIFN-α4 SP Sepharose Fast Flow純化溶析光譜。 圖10.  PEG-mIFN-α4原液非還原型SDS-PAGE(銀染顯色)電泳結果。 圖11.  BALB/c小鼠單次皮下注射1μg/隻PEG-mIFN-α4的血漿濃度-時間曲線。 圖12.  PEG-mIFN-α4連續、間歇給藥治療小鼠移殖性肝癌H22 療效比較實驗生存曲線。 圖13.  間歇式施用干擾素聯合吉西他濱治療小鼠肝癌H22 的腫瘤變化。 圖14.  間歇式施用干擾素聯合吉西他濱治療小鼠肺癌LLC的腫瘤變化。 圖15.  間歇式施用干擾素聯合吉西他濱治療結直腸癌CT26的腫瘤變化。 圖16.  間歇式施用干擾素聯合吉西他濱治療黑色素瘤B16的腫瘤變化。 圖17.  PEG-mIFN-α4間歇給藥聯用吉西他濱治療小鼠移殖性肝癌H22療效比較實驗生存曲線 圖18.  間歇施用干擾素聯合抗癌劑表柔比星治療小鼠移殖性肝癌H22的生存曲線。 圖19.  間歇施用干擾素聯合抗癌劑奧沙利鉑治療小鼠移殖性肝癌H22的生存曲線。 圖20.  間歇施用干擾素聯合抗癌劑紫杉醇治療小鼠移殖性肝癌H22的生存曲線。

Claims (32)

  1. 一種在個體中治療疾病的方法，其包括給該個體間隔地施用多個連續療程的基於干擾素的治療劑。
  2. 如請求項1之方法，其中該基於干擾素的治療劑包含干擾素或其突變體或衍生物，或包含編碼干擾素或其突變體或衍生物的核酸分子，或包含促進內源干擾素產生的物質。
  3. 如請求項1或2之方法，其中該干擾素是I型、II型或III型干擾素，例如干擾素α、干擾素β、干擾素γ或干擾素λ，較佳干擾素α。
  4. 如請求項1-3中任一項之方法，其中該基於干擾素的治療劑包含干擾素α 2a、干擾素α 2b、干擾素α 1b、干擾素λ，或其突變體或衍生物。
  5. 如請求項1-4中任一項之方法，其中該干擾素或其突變體或衍生物是PEG化修飾的。
  6. 如請求項1-5中任一項之方法，其中該基於干擾素的治療劑選自P1101、派格賓、派羅欣、佩樂能、干複津、樂複能、甘樂能、羅飛龍、運德素、派益生及聚乙二醇干擾素λ。
  7. 如請求項1-3中任一項之方法，其中該基於干擾素的治療劑包括TLRs、RLRs及STINGs信號路徑的激動劑。
  8. 如請求項7之方法，其中該基於干擾素的治療劑選自GS-9620、GS-9688、RO7020531、RO6864018、TQ-A3334、JNJ-4964、SB9200、MIW815、DMXAA、MK-1454及diABZI。
  9. 如請求項1-8中任一項之方法，其中在該連續療程中，該基於干擾素的治療劑的施用使得基本上在整個療程期間，個體體內新喋呤的濃度高於首次施用前的新喋呤濃度，例如是首次施用前新喋呤濃度的大約110%、大約120%、大約130%、大約140%、大約150%、大約200%、大約250%或更高。
  10. 如請求項1-9中任一項之方法，其中該連續療程的長度為第一次施用至最後一次施用的時間，再加上該治療劑的大約5個體內半衰期。
  11. 如請求項1-10中任一項之方法，該多個連續療程各自的長度為大約1週-大約24週，較佳大約1週-大約12週，更佳大約1週-大約8週，更佳大約2週-大約6週。
  12. 如請求項1-11中任一項之方法，其中每個連續療程的長度為大約1週-大約12週，且其中各療程之間間隔大約1週-大約12週。
  13. 如請求項1-12中任一項之方法，其中各連續療程之間間隔大約1週-大約24週，較佳大約1週-大約12週，更佳大約1週-大約8週，更佳大約2週-大約6週。
  14. 如請求項1-13中任一項之方法，其中每個連續療程的長度為大約1週-大約8週，且其中各療程之間間隔大約1週-大約8週。
  15. 如請求項1-14中任一項之方法，其中每個連續療程的長度為大約2週-大約6週，且其中各療程之間間隔大約2週-大約6週。
  16. 如請求項1-15中任一項之方法，該基於干擾素的治療劑施用2個-25個或以上的連續療程。
  17. 如請求項1-16中任一項之方法，其中該多個連續療程的長度基本上相同。
  18. 如請求項1-17中任一項之方法，該各療程之間具有基本上相同的時間間隔。
  19. 如請求項1-18中任一項之方法，其中該疾病是病毒感染，例如該病毒感染選自B型肝炎病毒感染、C型肝炎病毒感染、D型肝炎病毒感染、HIV感染，EBV感染、HPV感染、CMV感染及皰疹病毒感染，較佳是B型肝炎病毒感染。
  20. 如請求項1-18中任一項之方法，其中該疾病是癌症，例如該癌症選自白血病(如急性淋巴細胞白血病(ALL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性骨髓性白血病(CML)、慢性淋巴細胞白血病、多毛細血管白血病)、肝癌、肺癌、結直腸癌、皮膚癌、胃癌、乳腺癌、前列腺癌、非霍奇金淋巴瘤、黑色素瘤、多發性骨髓瘤、喉乳頭狀瘤、濾泡性淋巴瘤、愛滋病相關卡波氏肉瘤及腎細胞癌，較佳是肝癌、肺癌、乳腺癌、結直腸癌或黑色素瘤。
  21. 如請求項1-20中任一項之方法，還包括給該個體施用額外的藥劑。
  22. 如請求項21之方法，該基於干擾素的治療劑的施用與該額外的藥劑的施用不重疊。
  23. 如請求項22之方法，在該多個連續療程之間施用該額外的藥劑。
  24. 如請求項21之方法，該「基於干擾素的治療劑」的施用與該額外的藥劑的施用重疊。
  25. 如請求項24之方法，在該多個連續療程期間及該多個連續療程之間施用該額外的藥劑。
  26. 如請求項21-25中任一項之方法，其中該額外的藥劑按照其常規方案施用。
  27. 如請求項21-26中任一項之方法，其中該額外的藥劑是抗病毒劑。
  28. 如請求項27之方法，其中該抗病毒劑是穿入及脫殼抑制劑，例如金剛烷胺、金剛乙胺、恩夫韋地、馬拉韋羅；DNA聚合酶抑制劑，例如阿昔洛韋、更昔洛韋、伐昔洛韋、泛昔洛韋、膦甲酸鈉；核苷類逆轉錄酶抑制劑，例如拉米夫定、齊多夫定、恩曲他濱、替諾福韋、阿德福韋酯、TAF、恩替卡韋；非核苷類逆轉錄酶抑制劑，例如依法韋侖、奈韋拉平；蛋白質抑制劑，例如沙奎那韋；神經氨酸酶抑制劑，例如奧司他韋、紮那米韋；廣譜抗病毒藥，例如利巴韋林。
  29. 如請求項21-28中任一項之方法，該基於干擾素的治療劑是派格賓，該抗病毒劑是恩替卡韋。
  30. 如請求項21-29中任一項之方法，其用於治療B型肝炎病毒感染，該基於干擾素的治療劑是派格賓，每個連續療程的長度為大約5週-大約24週，該各連續療程之間間隔大約2週-8週；該抗病毒劑是恩替卡韋，該恩替卡韋每日施用。
  31. 如請求項21-26中任一項之方法，其中該額外的藥劑是抗癌劑。
  32. 如請求項31之方法，其中該抗癌劑是 i) 化療劑，例如烷化劑：尼莫司汀、卡莫司汀、洛莫司汀、環磷醯胺、異環磷醯胺、甘磷醯芥、司莫司汀；抗代謝藥：去氧氟鳥苷、多西氟鳥啶、5-氟尿嘧啶、巰嘌呤、硫鳥嘌呤、阿糖胞苷、氟鳥苷、替加氟、吉西他濱、卡莫氟、羥基脲、甲氨蝶呤、優福定、安西他濱、卡培他濱；抗腫瘤抗生素：放線菌素D、多柔比星、柔紅黴素、表柔比星、絲裂黴素、培洛黴素、平陽黴素、吡柔比星；抗腫瘤動植物成分藥：伊立替康、三尖杉酯堿、羥基喜樹堿、長春瑞賓、紫杉醇、白蛋白紫杉醇、泰索帝、拓撲替康、長春新堿、長春地辛、長春醯胺、長春堿、替尼泊苷、依託泊苷、欖香烯；抗腫瘤激素類化療藥物：阿他美坦、阿那曲唑、氨魯米特、來曲唑、福美坦、甲他孕酮、他莫昔芬；化療藥物雜類：門冬醯胺酶、卡鉑、順鉑、達卡巴嗪、奧沙利鉑、樂沙定、可鉑奧沙、米托蒽醌、丙卡巴肼；或 ii) 免疫檢查點抑制劑，例如PD-1、PD-L1、CTLA4的抑制劑，例如選自以下的抗體：納武利尤單抗(Nivolumab)、帕博利珠單抗(Pembrolizumab)、阿特珠單抗(Atezolizumab)、度伐魯單抗(Durvalumab)、阿維魯單抗(Avelumab)；或 iii) 小分子靶向藥物，例如伊馬替尼、吉非替尼、硼替佐米、厄洛替尼、索拉非尼、來那度胺、舒尼替尼、達沙替尼、尼洛替尼、拉帕替尼、帕唑帕尼、依維莫司、凡德他尼、克唑替尼、威羅菲尼、魯索替尼(ruxolitinib)、、阿西替尼、維莫德吉(vismodegib)、卡非佐米、瑞戈非尼、博舒替尼、托法替尼、卡博替尼、帕納替尼、泊馬度胺、曲美替尼、達拉菲尼、阿法替尼、埃克替尼、依魯替尼、色瑞替尼、艾代拉裡斯、阿帕替尼、帕布昔利布、樂伐替尼、阿西替尼、埃克替尼、阿帕替尼、索尼得吉(sonidegib)、考比替尼(cobimetinib)、塔格瑞斯(osimertinib)、艾樂替尼(alectinib)、依沙柔咪(ixazomib)；或 iv) 腫瘤相關抗原特異性抗體類，如美羅華、赫賽丁； 較佳地，該抗癌劑選自奧沙利鉑、表柔比星、紫杉醇及吉西他濱，更佳是吉西他濱。
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