TW202026272A

TW202026272A - 促進心肌再生之化合物、其製法、醫藥品及其用途

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Publication number: TW202026272A
Application number: TW107147884A
Authority: TW
Inventors: 李連滋; 蔡蕙冰; 黃淑芬; 藺以文; 黃必燦; 吳盈瑩; 陳美惠; 許理絜
Original assignee: 健裕生技股份有限公司
Priority date: 2018-12-28
Filing date: 2018-12-28
Publication date: 2020-07-16
Also published as: TWI692467B

Abstract

本發明提供一種新穎3-芳香基-2-丙烯-1-酮系列衍生物以及其合成工藝。此外，本發明另提供含有前述衍生物之醫藥組成物及其用於製備促進心肌再生之醫藥品的用途。

Description

促進心肌再生之化合物、其製法、醫藥品及其用途

本發明係關於一種新穎化合物、其製法及用途，尤指一種新穎3-芳香基-2-丙烯-1-酮系列衍生物、其製法以及其用於促進心肌再生之用途。

心肌梗塞(myocardial infarction，MI)是一種臨床上常見的急性心臟疾病，其成因是部分心肌的血液循環突然中斷，心肌因無法得到足夠氧氣而導致的損傷。一般認為，患者一旦發生心肌梗塞，壞死的心肌細胞便不能再生，而心肌受損的區域只能形成纖維斑痕進行修補，修補後形成之纖維斑痕為僵硬的疤痕組織並且不具有收縮的功能，雖然能幫助心臟維持結構的完整性，但是會進一步影響心臟重構以及造成功能障礙，甚至導致心臟衰竭、心律不整、心因性休克等症狀。

目前對於心肌梗塞的治療方法主要包括介入性治療與藥物投予二種方式；其中介入性治療例如氣球擴張術、支架放置術及冠狀動脈繞道手術等，而治療藥物主要是血栓溶解藥、鈣離子阻斷劑、硝酸鹽、血管收縮素轉化酶抑制劑、乙型交感神經阻斷劑及麻醉性鎮痛藥等。

然而，不論是臨床治療或是基礎醫學研究領域，目前已發展的介入性治療或是藥物治療皆無法促使受損的心肌組織復原，更有可能衍生其他的副作用，對於已損傷的心肌組織除了靜待其自行恢復外並無其他有效的方法。

因此，目前仍有待發展一種促進心肌再生的相關技術，以提供在臨床治療或是基礎醫學研究上能有效治癒心肌梗塞的藥物。

有鑑於現有技術之缺陷，本發明之目的在於提供一種新穎的化合物，能促進心肌細胞的再生及修復，進而提供心肌梗塞的治療上一種非創傷性、治療性的治療策略。

為達成前述目的，本發明提供一種如化學式(I)所示之新穎化合物：

(I)；其中， X₁ 為氫或未經取代之C₁ -C₆ 之烷基； X₂ 為氧(-O-)或胺基(-NH-或-NX₄ -)； X₃ 為氫(-H)、羥基(-OH)或前述以-X₂ (CO)-(Y)_p -Z所示之取代基； Y為C₁ -C₆ 之伸烷基(C₁ -C₆ alkylene group)、C₂ -C₁₂ 之伸烯基(C₂ -C₁₂ alkenylene group)、C₇ -C₁₈ 之伸烷基芳基(C₇ -C₁₈ arylenealkylene group)或C₆ -C₁₈ 之伸芳基(C₆ -C₁₈ arylene group)； Z為-COOH、-COOCH₃ 、-OCOCH₃ 、-NHCOOC(CH₃ )₃ 、-F、-Cl、-Br或-I；且 p為0或1。

較佳的，於化學式(I)中，所述Z為-COOH、-COOCH₃ 、-OCOCH₃ 、-NHCOOC(CH₃ )₃ 或-Cl。

於本說明書中，所述「C₁ -C₆ 之烷基」可為直鏈或支鏈的烷基，其意指以X₁ 表示之整體取代基具有1至6個總碳數。較佳的，以X₁ 表示之C₁ -C₆ 之烷基可為甲基、乙基、丙基或異丙基等，但並非僅限於此。

較佳的，於化學式(I)中，所述X₂ 為-NX₄ -，X₄ 可以為前述以-X₂ -(CO)-(Y)_p -Z所示之取代基；更佳的，X₄ 可以為取代基

。

於本說明書中，所述「C₁ -C₆ 之伸烷基」可為直鏈或支鏈的伸烷基，其意指以Y表示之整體取代基具有1至6個總碳數；同理，於本說明書中，所述「C₂ -C₁₂ 之伸烯基」可為直鏈或支鏈的伸烯基，其意指以Y表示之整體取代基具有2至12個總碳數。於本說明書中，所述「C₇ -C₁₈ 之伸烷基芳基」為伸芳基鍵結有伸烷基之基團，其意指以Y表示之整體取代基具有7至18個總碳數，即，所述伸芳基和伸烷基之總碳數為7至18個。於本說明書中，所述「C₆ -C₁₈ 之伸芳基」可為單芳香環或多個芳香環相互鍵結合或稠合而成之多芳香環，其意指以Y表示之整體取代基具有6至18個總碳數。

較佳的，於化學式(I)中，以Y表示之C₁ -C₆ 之伸烷基可為亞甲基(methylene group，-CH₂ -)、伸乙基(ethylene group，-CH₂ CH₂ -)、亞乙基(ethylidene group，-CH(CH₃ )-)、伸丙基(propylene group，-CH₂ CH₂ CH₂ -)、亞異丙基(isopropylidene group，-C(CH₃ )₂ -)、伸丁基(butylene group，-CH₂ CH₂ CH₂ CH₂ -)等，但並非僅限於此；以Y表示之C₂ -C₁₂ 之伸烯基可為伸乙烯基(vinylene group，-CH=CH-)、伸丙烯基(propenylene group，-CH₂ CH=CH-或-CH=CHCH₂ -)、伸丁烯基(butylene group，-CH₂ CH₂ -CH=CH-、-CH₂ CH=CHCH₂ -或-CH=CHCH₂ CH₂ -)等，但並非僅限於此；以Y表示之C₇ -C₁₈ 之伸烷基芳基可為伸苄基(cresylene group，-CH₂ C₆ H₄ -)、甲伸苯基(tolylene group，-C₆ H₃ (CH₃ )-)或伸苯二甲基(phenylenedimethylene group，-CH₂ C₆ H₄ CH₂ -)等，但並非僅限於此；以Y表示之C₆ -C₁₈ 之伸芳基可為伸苯基(phenylene group，-C₆ H₄ -)、伸聯苯基(biphenylene group，-C₆ H₄ -C₆ H₄ -)或伸萘基(naphthylene group，-C₁₀ H₆ -)，但並非僅限於此。

具體而言，於化學式(I)中，所述伸苯基可為鄰-伸苯基(ortho- phenylene group)、間-伸苯基(meta- phenylene group)或對-伸苯基(para- phenylene group)，較佳為鄰-伸苯基。具體而言，所述伸苄基可為鄰-伸苄基(ortho- cresylene group)、間-伸苄基(meta- cresylenegroup)或對-伸苄基(para- cresylene group)，較佳為間-伸苄基。

依據本發明，所述新穎化合物可為下列化合物1至化合物15中任一者，但並非僅限於此：

本發明之另一目的在於提供上述新穎化合物之製備方法，其係由反應物A以及反應物B在0℃至25℃的溫度下進行反應，其中，反應物A為香豆酸衍生物、咖啡酸衍生物或肉桂酸衍生物；反應物B為酸類化合物、酸酐類化合物、醯氯類化合物或酯類化合物。

較佳的，反應物A以及反應物B係在0℃至25℃的溫度、鹼性環境下進行反應，所述反應中的酸鹼值可控制在pH 9至pH 12之間。

較佳的，反應物A為對香豆酸(para-Coumaric acid)、咖啡酸(Caffeic acid)、咖啡酸甲酯(Methyl caffeoate)或4-氨基肉桂酸(4-Aminocinnamic acid)。

較佳的，反應物B為乙醯水楊酸(Acetylsalicylic acid)、3-氯苯乙酸(3-Chlorophenylacetic acid)、叔丁氧羰基-γ-氨基丁酸(n-tert-Butoxycarbonyl-gamma-aminobutyric acid)、戊二酸酐(Glutaric anhydride)、己二酸酐(Adipic anhydride)、甲基己二酸醯氯(Methyl adipoyl chloride)或富馬酸單甲酯(Fumaric acid monomethyl ester)。

本發明之另一目的在於提供3-芳香基-2-丙烯-1-酮系列衍生物用於製備促進心肌再生之醫藥品之用途。

為達成前述目的，本發明提供一種如化學式(II)所示之化合物用於製備促進心肌再生之醫藥品之用途；

(II)；其中， R₁ 為羥基、未經取代之C₁ -C₆ 之烷基、未經取代之C₁ -C₆ 之烷氧基、經取代之C₁ -C₆ 之烷酸基、經取代之C₇ -C₁₂ 之環烷酸基、經取代或未經取代之C₆ -C₁₈ 之芳胺基、經取代或未經取代之C₆ -C₁₈ 之酚基、經取代或未經取代之C₆ -C₁₈ 之芳基、經取代或未經取代之噻吩基、經取代或未經取代之吡咯基、經取代或未經取代之吡啶基或經取代或未經取代之噻唑基； R₂ 為氫、羥基、未經取代之C₁ -C₆ 之烷基、胺基(-NH₂ )、乙醯氧基(-OCOCH₃ )、

或-X₂ (CO)-(Y)_p -Z，R₃ 為氫、羥基、未經取代之C₁ -C₆ 之烷基、未經取代之C₁ -C₆ 之烷氧基或-O-CO-(Y)_p -Z，或者，R₂ 以及R₃ 相互連接形成

； R₄ 為氫、未經取代之C₁ -C₆ 之烷氧基或

；以A表示之環狀結構為苯環、噻吩環或吡啶環； X₂ 為氧(-O-)或胺基(-NH-或-NX₄ -)； Y為C₁ -C₆ 之伸烷基(C₁ -C₆ alkylene group)、C₂ -C₁₂ 之伸烯基(C₂ -C₁₂ alkenylene group)、C₇ -C₁₈ 之伸烷基芳基(C₇ -C₁₈ arylenealkylene group)或C₆ -C₁₈ 之伸芳基(C₆ -C₁₈ arylene group)； Z為吡啶基(-C₅ H₄ N)、乙醯基(-COCH₃ )、-COOH、-COOCH₃ 、-OCOCH₃ 、-NHCOOC(CH₃ )₃ 、-F、-Cl、-Br或-I； p為0或1。

簡言之，所述3-芳香基-2-丙烯-1-酮系列衍生物除了包含如上方化學式(I)所示之新穎化合物之外，更包含其他市面上可取得的桂皮酸衍生物(cinnamic acid derivatives)。

較佳的，於化學式(II)中，所述Z為-COCH₃ 、-COOH、-COOCH₃ 、-OCOCH₃ 、-NHCOOC(CH₃ )₃ 或-Cl。

較佳的，於化學式(II)中，所述X₂ 為

、

或-NX₄ ，X₄ 可以為前述以-X₂ -(CO)-(Y)_p -Z所示之取代基；更佳的，X₄ 可以為取代基

。

較佳的，於化學式(II)中，所述R₃ 為-CH₃ 、

、-NH₂ 或-O-CO-(Y)_p -Z。

較佳的，於化學式(II)中，當R₂ 為-X₂ (CO)-(Y)_p -Z時，R₁ 為羥基。

較佳的，於化學式(II)中，當Y為伸烯基時，Z為-COOCH₃ 。

較佳的，於化學式(II)中，其X₂ 、Y、P及Z如前述化學式(I)中所述。此外，於化學式(II)中，所述Z也可以是吡啶基(-C₅ H₄ N)、乙醯基(-COCH₃ )。

較佳的，於化學式(II)中，所述R₁ 為-OH、-OCH₃ 、-OCH₂ C₆ H₄ OH、-OCH(COOH)CH(OH)COOH、-O(C₆ H₇ )(OH)₃ (COOH)、-NHC₆ H₄ OH、-C₄ H₃ S(CH₃ )、-C₆ H₄ OH、-(N )- C₄ H₄ N、-C₅ H₄ N或-C₃ SN(NH₂ )(CH₃ )。

較佳的，所述能促進心肌細胞的再生與修復的3-芳香基-2-丙烯-1-酮系列衍生物可為上述化合物1至15、下列化合物16至44中任一者，但並非僅限於此：

此外，本發明另提供一種用於促進心肌再生之醫藥品，其包含如上述3-芳香基-2-丙烯-1-酮系列衍生物(例如上述化合物1至化合物44)與醫藥上可接受之載劑。

綜合上述，本發明提供一種新穎3-芳香基-2-丙烯-1-酮系列衍生物及其製法，該新穎化合物可應用於促進受損的心肌細胞之修復與心肌細胞的再生；本發明另提供一種3-芳香基-2-丙烯-1-酮系列衍生物用於製備促進心肌再生之醫藥品之用途。

以下列舉數種實施例作為例示說明本發明的化合物及其用於製備促進心肌再生之醫藥品之用途的實施方式，熟習此技藝者可經由本明書之內容輕易地了解本發明所能達成的優點與功效，並且於不悖離本發明之精神下進行各種修飾與變更，以施行或應用本發明之內容。

實施例 1 ：化合物的製備

本發明的化合物係由反應物A及反應物B在反應溫度0°C至25℃的條件、鹼性環境下進行反應而製成，其中，反應物A為香豆酸衍生物、咖啡酸衍生物或肉桂酸衍生物；反應物B為酸類化合物、酸酐類化合物、醯氯類化合物或酯類化合物。

化合物 1

取1克對香豆酸溶於8毫升重量百分比為10%氫氧化鈉水溶液中，再將反應降溫至5°C至10°C，再取0.97克戊二酸酐溶於5毫升四氫呋喃後慢慢加入溶液中，經由攪拌反應30分鐘後，再加入40毫升水及40毫升乙酸乙酯並調整酸鹼值至5.2，取有機層濃縮至乾，再加入50毫升水調整酸鹼值至9.33，隨後加入1N鹽酸水溶液直至酸鹼值為5.0而析出固體，再攪拌1小時後過濾該固體，將其乾燥後得到0.5335克淺膚色粉末，其HPLC純度為100%。

化合物1之結構如下表1所示，其核磁共振氫譜為：¹ H NMR (500 MHz, DMSO-d ₆ ): δ12.255 (s, 2H), 7.723 (d, 2H), 7.577 (d, 1H), 7.166 (d, 2H), 6.494 (d, 1H), 2.618 (t, 2H), 2.330 (t, 2H), 1.841(tt, 2H)。質譜分析為：[M+H]⁺ ; C₁₄ H₁₅ O₆ ; 279.0859。

化合物 2

將0.3克咖啡酸加入6毫升乙腈中，混和均勻後加入0.46毫升三乙胺，攪拌5分鐘，隨後將反應置於冰浴，將溫度降為5°C至10°C，再取0.17克戊二酸酐溶於2毫升四氫呋喃後慢慢滴入，進行反應2小時後抽乾，再加入30毫升乙酸乙酯及30毫升10%氯化銨水溶液進行液相萃取，之後取水層再以30毫升乙酸乙酯萃取，將有機層濃縮至乾，得到一白色固體0.2685克，再以乙酸異丙酯及丙酮結晶，經過濾後得到0.1339克白色粉末，其HPLC純度為100%。

化合物2之結構如下表1所示，其核磁共振氫譜為：¹ H NMR (500MHz, CD₃ OD): δ7.576 (d, 1H), 7.347-6.913 (m, 3H), 6.392-6.287 (d+d, 1H), 2.705-2.669 (m, 2H), 2.483-2.447 (m, 2H), 2.152-1.986 (m, 2H)。質譜分析為：[M+H]⁺ ; C₁₄ H₁₅ O₇ ; 295.0812。

化合物 3

將0.25克咖啡酸溶解在5毫升四氫呋喃中，再加入0.76毫升三乙胺，攪拌7分鐘；將反應液濃縮至乾，並加入7毫升四氫呋喃，攪拌至溶解並冰浴將溫度降為5°C至10°C，再取0.4克戊二酸酐溶於3毫升四氫呋喃後慢慢滴入反應中，待反應1小時，將溶液濃縮至乾，隨後加入30毫升乙酸乙酯及30毫升水進行液相萃取，取有機層以30毫升飽和食鹽水洗一次，最後再用無水硫酸鈉除水，並濃縮至乾，再用乙酸異丙酯及丙酮結晶，過濾得到0.1629克白色粉體，HPLC純度為100%。

化合物3之結構如下表1所示，其核磁共振氫譜為：¹ H NMR (500MHz, CD₃ OD); δ7.645 (d, 1H), 7.537-7.513 (m, 2H), 7.278 (d, 1H), 6.482 (d, 1H), 2.703-2.663 (m, 4H), 2.463-2.425 (m, 4H), 2.009-1.969 (m, 4H)。質譜分析為：[M+NH₄ ]⁺ ；426.1402。

化合物 4

取1克對香豆酸溶於10毫升乙腈中，先加入2.5毫升三乙胺，再將反應降溫至0°C至10°C，隨後取0.93克己二酸酐溶於5毫升二氯甲烷後慢慢加入反應中，加完後再濃縮至乾得一褐色油狀物；加入30毫升水並用二氯甲烷每次30毫升洗三次，取水層再用乙酸乙酯每次30毫升洗二次，最後取水層調整酸鹼值為4.8，過濾析出固體，得到0.2542克白色固體，HPLC純度為99.2%。

化合物4之結構如下表1所示，其核磁共振氫譜為：¹ H NMR (500MHz, DMSO-d ₆ ): δ7.717 (d, 2H), 7.569 (d, 1H), 7.150 (d, 2H), 6.488 (d, 1H), 2.583 (t, 2H), 2.250 (t, 2H), 1.656-1.558 (m, 4H)。質譜分析為：[M+H]⁺ ; C₁₅ H₁₇ O₆ ; 293.1013。

化合物 5

取0.333克對香豆酸(2毫莫耳)置於氮封的反應瓶中，加入10毫升除水乾燥的四氫呋喃攪拌溶解。以針筒加入0.36克甲基己二酸醯氯(2毫莫耳,1倍當量)，再於冰浴下慢慢加入0.3克乙二胺(3毫莫耳,1.5倍當量)，並於室溫下攪拌反應2至3小時。真空濃縮除去溶劑，再以水/二氯甲烷萃取，取有機層。真空濃縮至乾再以逆向矽膠管柱分離，沖提液為50%甲醇水溶液，分離得產物17毫克，純度100%。

化合物5之結構如下表1所示，其核磁共振氫譜為：¹ H NMR (500MHz, CD₃ OD): δ7.675-7.629 (m, 3H), 7.150(d, 2H), 6.463(d, 1H), 3.667(s, 3H), 2.620(t, 2H), 2.401(t, 2H), 1.751-1.736 (m, 4H)。質譜分析為：[M+H]⁺ ; C₁₆ H₁₉ O₆ ; 307.1181; [M+Na]⁺ ; 329.1000。

化合物 6

稱取0.369克咖啡酸(2毫莫耳)置於氮封的反應瓶中，加入10毫升除水乾燥的四氫呋喃攪拌溶解。以針筒加入0.5146克甲基己二酸醯氯(3毫莫耳,1.5倍當量)，再於冰浴下慢慢加入0.5129克乙二胺(5毫莫耳,2.5倍當量)，並於室溫下攪拌反應2至3小時。真空濃縮除去溶劑，再以水/二氯甲烷萃取，取有機層。真空濃縮至乾再以逆向矽膠管柱分離，沖提液為50%至60%甲醇水溶液，分離得到13.8毫克，純度100%。

化合物6之結構如下表1所示，其核磁共振氫譜為：¹ H NMR (500MHz, CD₃ OD): δ7.635(d, 1H), 7.523(dd, 1H), 7.498(d, 1H), 7.264(d, 1H); 6.481(d, 1H), 3.670(s, 6H), 2.638-2.599 (m, 4H), 2.418-2.384 (m, 4H), 1.747-1.723 (m, 8H)。質譜分析為：[M+NH4]⁺ ; 482.2059。

化合物 7

將1克對香豆酸溶於10毫升重量百分比為10%氫氧化鈉水溶液中，攪拌至溶解，再降溫5°C至10°C，取2.45克乙醯水楊酸酐溶於3毫升四氫呋喃後慢慢加入反應中，攪拌30分鐘，濃縮至乾，再加入30毫升水及40毫升乙酸乙酯，取有機層加入20毫升水，調整至酸鹼值4至5，再取有機層用重量百分比為5%氯化銨水溶液清洗3次，取有機層加入40毫升水，再用碳酸氫鈉調整酸鹼值至6.01，取有機層以無水硫酸鈉除水，濃縮至乾得到1.9克白色固體。再加入30毫升二氯甲烷，並用水洗兩次並調整至酸鹼值為7.37，取有機層以無水硫酸鈉除水，濃縮至乾得到49.6毫克白色固體，HPLC純度為89.9%。

化合物7之結構如下表1所示，其核磁共振氫譜為：¹ H NMR (500MHz, CD₃ OD): δ8.200 (dd, 1H), 7.741-7.682 (m, 4H), 7.459 (t, 1H), 7.259-7.241 (m, 3H), 6.500 (d, 1H), 2.264 (s, 3H)。質譜分析為：[M+H]⁺ ; C₁₈ H₁₅ O₆ ; 327.0860; [M+Na]⁺ ; 349.0677。

化合物 8

於250毫升單頸瓶中，加入1.8克乙醯水楊酸、20毫升甲苯及二甲基甲醯胺3滴，在40°C下攪拌3分鐘。加入氯化亞碸1.8毫升，升溫至60°C反應2小時後，待反應降溫至25°C，以迴旋濃縮機除去多餘的氯化亞碸及全部溶劑。加入20毫升甲苯混合後，再以迴旋濃縮機除去溶劑，得淡黃色液體。將上述液體加入咖啡酸1.81克、四氫呋喃20毫升與三乙胺1.5毫升，於室溫下攪拌反應3小時後，加入飽和氯化銨水溶液20毫升，分出有機層。以迴旋濃縮機除去溶劑後，得灰白色固體，濕重為4.82克。以管柱層析法純化(矽膠63.4克，管柱直徑4.5公分；長13.5公分，洗脫液為二氯甲烷：甲醇 = 1：0至50：1)，收集主要產物。上述收集物將溶劑移除後，再以管柱層析法純化(矽膠43.2克，管柱直徑4公分；長8公分，洗脫液為二氯甲烷：甲醇 = 50：1)，收集主要產物，得到56毫克，HPLC純度為94.6%。

化合物8之結構如下表1所示，其核磁共振氫譜為：¹ H NMR (500MHz, CD₃ OD): δ8.242-8.207 (m, 1H), 7.708(t, 1H), 7.602 (d, 1H), 7.451 (t, 1H), 7.407-6.968(m, 4H), 6.425-6.312(d+d, 1H), 2.266(s, 3H)。質譜分析為：[M+H]⁺ ; C₁₈ H₁₅ O₇ ; 343.0822; [M+NH₄ ]⁺ ; 360.1091。

化合物 9

將5.0克3-氯苯基乙酸和10.0毫升氯化亞碸混合，升溫至79.8°C，反應1.5小時後，降至室溫，濃縮得到5.1克黃色液體。於冰浴下，再將0.304克對香豆酸混合2.9毫升三乙胺以及4.0毫升乙腈加入反應中，室溫反應1小時。再加入水和1,2-二氯乙烷進行液相萃取，取有機層以1N鹽酸水溶液調整酸鹼值到6.1，攪拌0.5小時，過濾得到2.8克黃色固形物。經矽膠管柱，以乙酸乙酯和二氯甲烷體積比為1：1.5進行沖堤，收集得到約0.026克白色固形物，HPLC純度為87.8%。

化合物9之結構如下表1所示，其核磁共振氫譜為：¹ H NMR (500MHz, CD₃ OD): δ7.661(d, 1H), 7.635 (d, 2H), 7.423 (s, 1H), 7.342(d, 1H), 7.324-7.312 (m, 2H), 7.146 (d, 2H), 6.457 (d, 1H), 3.939 (s, 2H)。質譜分析為：[M+H]⁺ ; C₁₇ H₁₄ ClO₄ ; 317.0580。

化合物 10

於250毫升單頸瓶中，加入1.71克3-氯苯乙酸、20毫升甲苯及二甲基甲醯胺2滴，在室溫24°C下攪拌5分鐘後加入氯化亞碸1.5毫升，完畢後升溫至65°C反應1小時，待反應降溫至25°C，以迴旋濃縮機除去多餘的氯化亞碸及全部溶劑。加入四氫呋喃25毫升混合後，再以迴旋濃縮機除去溶劑，得淡黃色液體，濕重2.18克。加入咖啡酸1.81克、四氫呋喃20毫升與三乙胺1.4毫升，完畢後於室溫下攪拌反應4小時，加入飽和氯化銨水溶液20毫升後，分出有機層，以迴旋濃縮機除去溶劑後，得灰白色固體5.13克。以管柱層析法純化(矽膠67.4克，管柱直徑4公分；長14公分，洗脫液為乙酸乙酯：庚烷 = 1：3)，收集產物，HPLC純度為97.6%。

化合物10之結構如下表1所示，其核磁共振氫譜為：¹ H NMR (500MHz, CD₃ OD): δ7.613(d, 1H), 7.511-7.478 (m, 2H), 7.356-7.281 (m, 6H), 7.250-7.214 (m, 3H), 6.455(d, 1H), 3.726(s, 2H), 3.696(s, 2H)。質譜分析為：[M+H]⁺ ; C₂₅ H₁₉ Cl₂ O₆ ; 485.0569。

化合物 11

於100毫升單頸瓶中，加入1.8克3-氯苯乙酸、20毫升甲苯與二甲基甲醯胺2滴，在24°C下攪拌10分鐘。加入氯化亞碸(0.5毫升，一次加入)，完畢後升溫至65°C，反應1小時後，降溫至25°C，以迴旋濃縮機除去多餘的氯化亞碸及全部溶劑。加入甲苯10毫升混合後，再以迴旋濃縮機除去溶劑，得淡黃色液體。加入咖啡酸甲酯0.49克、四氫呋喃10毫升與三乙胺0.35毫升，室溫下攪拌反應3小時，加入飽和氯化銨水溶液10毫升後，分出有機層。以迴旋濃縮機除去溶劑後，與乙酸乙酯10毫升混合後，以10毫升飽和碳酸氫鈉水溶液清洗，保留有機層，以迴旋濃縮機除去溶劑後，得橘色液體1.03克。以管柱層析法純化(矽膠48.4克，管柱直徑3.81公分；長10公分，洗脫液為乙酸乙酯：庚烷 = 1：5)，收集產物，得27.3毫克，HPLC純度為98.6%。

化合物11之結構如下表1所示，其核磁共振氫譜為：¹ H NMR (500MHz, CD₃ OD): δ7.618(d, 1H), 7.503-7.476 (m, 2H), 7.344-7.266 (m, 6H), 7.242-7.205 (m, 3H), 6.490(d, 1H), 3.767(s, 3H), 3.713(s, 2H), 3.686(s, 2H)。質譜分析為：[M+H]⁺ ; C₂₆ H₂₁ Cl₂ O₆ ; 499.0719。

化合物 12

於250毫升單頸瓶中，加入1.59克叔丁氧羰基-γ-氨基丁酸，以乾燥氮氣保護反應系統。加入四氫呋喃8毫升與三乙胺2.2毫升，在-20°C下攪拌5分鐘。加入叔戊酸醯氯溶液(0.96毫升與5毫升四氫呋喃混合)，加入時間10分鐘。完畢後回溫到0°C，反應2小時後，加入咖啡酸溶液(0.7克與8毫升四氫呋喃混合)，加入時間2分鐘。完畢後回至室溫反應44.5小時後，加入飽和氯化銨水溶液30毫升，保留有機層以迴旋濃縮機去除溶劑後，剩餘物與乙酸乙酯30毫升混合後，以水洗(30毫升1次)，保留有機層，以迴旋濃縮機除去溶劑後，得白色固體，濕重為2.13克。以管柱層析法純化(矽膠65克，管柱直徑4公分；長15公分，洗脫液為二氯甲烷：甲醇 = 50：1至20：1)，收集產物，得到17.8毫克，HPLC純度為97.4%。

化合物12之結構如下表1所示，其核磁共振氫譜為：¹ H NMR (500MHz, CD₃ OD): δ7.644 (d, 1H), 7.535-7.507(m, 2H), 7.293 (d, 1H), 6.845(d, 1H), 3.173-3.134(m, 4H), 2.637-2.596(m, 4H), 1.885-1.846(m, 4H), 1.440(s, 18H)。質譜分析為：[M+H]⁺ ; C₂₇ H₃₉ N₂ O₁₀ ; 551.2591; [M+Na]⁺ ; 573.2414。

化合物 13

室溫下，先將0.201克4-氨基肉桂酸和2.0毫升四氫呋喃混合後，加入0.169克戊二酸酐反應1.5小時，加入少量乙腈、乙酸乙酯及正庚烷後過濾固體，得0.336克米白色粉體，HPLC純度為98.2%。

化合物13之結構如下表1所示，其核磁共振氫譜為：¹ H NMR (500MHz, CD₃ OD): δ7.643-7.611 (m, 3H), 7.551(d, 2H), 6.401(d, 1H), 2.454(t, 2H), 2.393(t, 2H), 1.978(tt,2H)。質譜分析為：[M+H]⁺ ; C₁₄ H₁₆ NO₅ ; 278.1067。

化合物 14

於100毫升單頸瓶中，加入0.72克富馬酸單甲酯、10毫升甲苯與二甲基甲醯胺2滴，於17°C下攪拌3分鐘。加入氯化亞碸0.9毫升，完畢後加熱至60°C反應3小時，待反應降溫至30°C，以迴旋濃縮機除去多餘的氯化亞碸及全部溶劑。加入4-氨基肉桂酸0.82克、四氫呋喃10毫升與三乙胺1.4毫升，於0°C下攪拌反應30分鐘後回到室溫。反應19小時後加入飽和氯化銨水溶液20毫升及水5毫升，分出並保留有機層，下層水溶液以二氯甲烷萃取(20毫升2次)，保留有機層。合併所有有機溶液後，以迴旋濃縮機除去溶劑後，得黃色固體。以管柱層析法純化(矽膠52.9克，管柱直徑4公分；長11公分，洗脫液為乙酸乙酯：庚烷 = 1：3至1：0)，收集產物，得22.5毫克，HPLC純度為94.0%。

化合物14之結構如下表1所示，其核磁共振氫譜為：¹ H NMR (500MHz, DMSO-d ₆ ): δ12.283(br s,1H), 10.709(s,1H), 7.707 (d, 2H), 7.663(d, 2H), 7.523(d, 1H), 7.211(d, 1H), 6.726(d, 1H), 6.430(d, 1H), 3.746(s,3H)。質譜分析為：[M+H]⁺ ; C₁₄ H₁₄ NO₅ ; 276.0866。

化合物 15

於100毫升單頸瓶中，加入1.0克乙醯水楊酸、20毫升甲苯與二甲基甲醯胺3滴，於20°C下攪拌3分鐘。加入氯化亞碸0.9毫升，完畢後加熱至60°C反應1.5小時，待反應降溫至35°C後，以迴旋濃縮機除去多餘的氯化亞碸及全部溶劑。加入四氫呋喃10毫升混合後，再以迴旋濃縮機除去溶劑，得淡黃色液體1.00克。加入4-氨基肉桂酸0.81克、四氫呋喃10毫升與三乙胺1.4毫升，於0°C下攪拌反應1小時後回到室溫。反應22小時，加入飽和氯化銨水溶液25毫升及水5毫升後，分出有機層。以迴旋濃縮機除去溶劑後，得淡黃色固體0.91克。以管柱層析法純化(矽膠64.7克，管柱直徑4公分；長12.5公分，洗脫液為乙酸乙酯：庚烷 = 1：5至1：1)，收集產物，得10.7毫克，HPLC純度為92.7%。

化合物15之結構如下表1所示，其核磁共振氫譜為：¹ H NMR (500MHz, DMSO-d ₆ ): δ10.523(s, 1H), 7.948(dd,1H), 7.765 (td, 1H), 7.700(d, 2H), 7.666-7.627(m, 3H), 7.564(td, 1H), 7.508(d, 1H), 7.378(t, 1H), 7.321(t,1H), 7.236(d,2H), 6.369(d,1H), 2.230(s, 3H), 2.154(s, 3H)。質譜分析為：[M+H]⁺ ; C₂₇ H₂₂ NO₈ ; 488.1348; [M+Na]⁺ ; 510.1171。

表一：化合物1至15之結構

實施例 2 ：化合物用於促進心肌細胞再生之用途

具有下列化學式(II)之化合物可用於促進心肌細胞再生，修復已受創傷的心肌細胞：

(II)；在化學式(II)中，R₁ 為羥基、未經取代之C₁ -C₆ 之烷基、未經取代之C₁ -C₆ 之烷氧基、經取代之C₁ -C₆ 之烷酸基、經取代之C₇ -C₁₂ 之環烷酸基、經取代或未經取代之C₆ -C₁₈ 之芳胺基、經取代或未經取代之C₆ -C₁₈ 之酚基、經取代或未經取代之C₆ -C₁₈ 之芳基、經取代或未經取代之噻吩基、經取代或未經取代之吡咯基、經取代或未經取代之吡啶基或經取代或未經取代之噻唑基； R₂ 為氫、羥基、未經取代之C₁ -C₆ 之烷基、胺基(-NH₂ )、乙醯氧基(-OCOCH₃ )、

； R₄ 為氫、未經取代之C₁ -C₆ 之烷氧基或

除了上述化合物1至化合物15之外，具有上述化學式(II)之化合物還包括例如化合物16至化合物44，化合物16至化合物44之結構列於下表二中。

表二：化合物16至化合物44之結構

上述化合物1至化合物44作為活性成分，再與醫藥上可容許之載劑混合成可促進心肌細胞再生之醫藥組合物、可預防心肌梗塞之保健食品或心肌梗塞預後保養之保健食品。

上述可用於促進心肌細胞再生之化合物可為化學式(II)所示之各種化合物的鹽類或酯類之形式，例如化學式(II)所示之各種化合物與鹼金屬或鹼土金屬形成的鈉鹽、鉀鹽、鋰鹽、鎂鹽、鈣鹽、銨鹽、碳酸鹽、硝酸鹽、碳酸氫鹽、鹽酸鹽、硫酸鹽、磷酸鹽、或矽酸鹽等之鹽類；或者化學式(II)所示之各種化合物與醇類形成的酯類，例如甲酯、乙酯、丙酯、丁酯、戊酯、乙酸甲酯、乙酸乙酯、甲酸丁酯、乙酸丁酯、戊酸丁酯、丙酸丁酯、丁酸甲酯、丁酸乙酯等酯類。

上述之｢醫藥上可接受之載劑｣或｢可接受之載劑｣可包括醫藥或食品上可接受之賦形劑或添加劑，例如澱粉、玉米澱粉、明膠、阿拉伯膠、食用色素、香料、調味劑、防腐劑等。投予路徑可包括口服、經皮膚投予、腹腔內投予、靜脈內投予、經鼻投予、或眼部投予等，較佳為口服方式。

上述之醫藥組合物可根據患者年齡、體重、健康狀況、疾病種類、疾病的進展、患部等因素，由相關醫療人員依該技術領域中共通知識決定投予劑量。本案之醫藥組成物亦可單獨投予或與其他藥劑共同投予，投予療程應依據醫師或相關人士依藥學上例行方法實施。

上述之保健食品可針對設定的族群調整適當的活性成分含量，較佳調整為可每日服用的含量。外包裝可標示建議使用量、特定族群(如孕婦、腎病患者)的使用標準及條件、或與其他食品或醫藥共同服用的建議事項，以使購買者在無醫師、藥師或相關執事人員指導下可在家自行服用而無安全疑慮。

試驗例 1 ：化合物促進心肌細胞再生活性之測定

肌球蛋白是心肌結構和功能的重要組成，其為肌球蛋白重鏈（myosin heavy chain）組成，其中肌球蛋白重鏈α型(α-cardiac myosin heavy chain; α-MHC)是由MYH6基因編碼的蛋白質，是心臟發育中早期表現的心肌細胞專一性基因，其主要在心房中表達，在心肌細胞的收縮功能中起著至關重要的作用，該基因向心臟提供轉錄調控事件的識別線索，來參與心臟細胞譜系誘導和維護。由於α-MHC白是心肌早期形成的重要蛋白質，因此可以α-MHC在心肌母細胞H9C2細胞株中的表現量多寡，作為評估試驗物是否具有促進幹細胞分化及心肌梗塞癒後保養功效的指標。

1.1 H9C2 細胞株之培養

H9C2細胞株，是大鼠的一種心肌母細胞（cardiac myoblast），該細胞株購自於台灣食品工業研究所。此細胞株所使用的培養基為體積百分比為 90% Dulbecco’s modified Eagle’s medium(Gibco™，Cat.12800017)含有1.5g/L碳酸氫鈉(sodium bicarbonate；Sigma，Cat.S5761)以及體積百分比為10%胎牛血清(fetal bovine serum；Gibco™，Cat.10437028)。該細胞株培養於37℃，含有體積百分比為5%二氧化碳的細胞培養箱。

1.2 MTT 細胞存活率測試

為確立不具有細胞毒性之合適化合物濃度，將H9C2細胞培養至9成滿，隨後接種1.5*10⁴ cell/well至24 well細胞培養盤上，培養24小時後，各自加入濃度為0.2至30 μg/mL之上述化合物1至化合物44以及DMSO(Sigma，Cat.D4540)作用48小時(各組別皆為3重覆)，再使用PBS buffer(Phosphate buffered saline)清洗後加入0.5 mg/mL之MTT(Thiazoly Blue Tetrazolium Bromide；Sigma，Cat.M2128)，放置37℃含體積百分比為5%二氧化碳之細胞培養箱反應4小時，隨後可於顯微鏡下看見紫色結晶物。將上清液吸取去除後加入200 μL/well之DMSO使其結晶物溶解析出，放置室溫振盪10分鐘，最後使用ELISA Reader 讀取波長570 nm之吸光值(吸光值為三重覆之平均)。以DMSO組之吸光值作為100%，代表細胞存活率為100%。

在後續測定各化合物對促進心肌細胞再生與修復之影響時，即選用相對吸光值在80%至120%範圍內的化合物濃度進行測試，如圖1所示，如此可確保心肌細胞是在正常生長的情況下進行測試。

1.3 細胞破碎收集

將H9C2細胞培養至9成滿，隨後接種1.5*10⁴ cell/well至24 well細胞培養盤上，培養24小時後，各自加入上述化合物1至化合物44以及DMSO(各組別皆為3重覆)作用48小時(各組化合物選用之濃度列於下表3中)，再以PBS buffer清洗後加入體積百分比為0.05% trypsin 200 μL/well作用5分鐘，隨後加入細胞培養液終止trypsin反應，接著將含有懸浮細胞的溶液在4℃，1000rpm之轉速下進行離心3分鐘，再使用PBS buffer將沉澱回溶，重複同樣的清洗步驟3次，最後將細胞充分混合在PBS buffer內，移至-80℃冰箱靜置30分鐘，再移置37℃水浴槽中至解凍，反復凍融3次致使細胞破碎，最後於4℃，3000rpm之轉速下離心15分鐘，收集上清液後置於-20℃冰箱保存。

表3：化合物1至化合物44之濃度

1.4 α-MHC 表現之測定

使用Mouse Myosin Heavy Chain 6, Cardiac Muscle Alpha (MYH6) ELISA Kit(MyBioSource，Cat.MBS7583946)進行α-MHC之含量測定，最後使用ELISA Reader 讀取波長450 nm吸光值(吸光值為三重覆之平均)，以加入與化合物濃度相同DMSO組別的吸光值當作100%，算出化合物1至化合物44相對的α-MHC含量。

結果如圖1所示，在H9C2細胞成長安全的情況下(即細胞存活率介於80%至120%間)，細胞在加入化合物1至化合物44任一者培養後，其α-MHC的含量相對於加入DMSO培養的組別都有上升的現象，由此可知，化合物1至化合物44確實能促進H9C2細胞提升α-MHC的表現量，顯示上述化合物1至化合物44具有促進心肌細胞再生與修復之功效。

試驗例 2 ：化合物促進斑馬魚之心肌再生功效評估

斑馬魚心臟以冷凍方式進行區域(~30%)創傷可在21天內修復損傷，故實驗使用成體斑馬魚作為研究心臟受損之實驗動物。斑馬魚心臟受損後，再生過程可分為三階段，初期由心肌細胞增生，第二階段由心包膜細胞再生，最後階段由血管內皮細胞再生。

為方便觀察受測樣品是否具有促進心肌再生與修復的功效，利用轉殖基因斑馬魚(Tg-fli1-eGFP)進行實驗，將轉殖基因斑馬魚麻醉後進行心臟冷凍創傷手術。由於此轉殖基因斑馬魚可於血管內皮細胞表現綠色螢光蛋白，透過心臟冷凍創傷後，受損細胞將無法繼續表現螢光，藉以評估心臟損傷面積大小。

2.1 成年斑馬魚心室凍傷之誘導

如附件一所示之斑馬魚冷凍創傷實驗流程圖，圖A為冷凍探針的照片，其一端具有長約6毫米，寬約為0.8毫米之探針，用於對斑馬魚之心室進行創傷。在進行冷凍創傷之前，須將已麻醉之成年斑馬魚放在海綿的縫隙中，並使其腹側朝上，如圖B所示。再參照圖C，在斑馬魚之兩個胸鰭(紅線處)之間切開皮膚和肌肉，再將剪刀插入切口，並依照紅色箭頭所指之方向切開皮膚(圖D)，在皮膚下方，以鑷子輕輕打開細小的銀色皮下組織(藍色虛線包圍處)以進入心臟(圖E)，再用鑷子切開切口，使斑馬魚之心室顯露出來(圖F綠色箭頭處)以進行冷凍損傷，即如圖G將冷凍探針輕輕插入胸腔以觸及心臟。

在評估化合物是否促能進心肌再生與修復時，須將斑馬魚之心臟進行摘取以評估損傷的情況。心臟摘取的流程需先以通過胸部的鰓弓進行深而長的切口以進入心包腔，此時可見兩種心臟結構：動脈球(圖H之白色箭頭)和心室(圖H綠色箭頭)，隨後用動脈鉗握住動脈球莖並自體腔拔出(圖I)，進而將整個心臟從身體中切除，完成心臟摘除(圖J之綠色箭頭)。

2.2 斑馬魚之心肌再生的功效評估

將轉殖基因斑馬魚麻醉進行心臟冷凍創傷手術後，再餵食魚隻受測物7天，每天投予之劑量為12.5 μg/g，第8天犧牲魚隻並進行心臟摘取，觀察並計算心臟受損區域，進而評估測試物是否具有促進斑馬魚心肌再生與修復之功效。

由於轉殖基因斑馬魚可於血管內皮細胞表現綠色螢光蛋白，因此可藉由綠螢光表現的區域大小評估心肌細胞受損或是再生與修復的情況，並以無綠螢光表現的區域代表心肌受損的區域，計算該區域的面積占整個心臟面積的比例，即可得到創傷區域的百分比。

以受測物中僅含有溶劑作為空白組，餵食已接受心臟創傷之斑馬魚7天後，進行心臟損傷區域的計算，其受損區域之百分比為27%。在確立空白之損傷區域比例後，接著進行評估化合物對於心肌再生與修復之影響。將含有上述化合物1至化合物44(各化合物之濃度如表3所示)的受測物餵食已接受心臟創傷之斑馬魚7天後，進行各組別心臟損傷區域的計算，並與空白組之結果一同列於圖2中。圖2之實驗數據顯示，經過7天餵食含有上述化合物1至化合物44的受測物，斑馬魚之心臟創傷的比例與空白組相比皆有明顯的減少，表示上述化合物1至化合物44確實有促進斑馬魚之心肌再生以及修復的功效。

根據本發明可作之不同修正及變化對於熟悉該項技術者而言均顯然不會偏離本發明的範圍與精神。雖然本發明已敘述特定的較佳具體事實，必須瞭解的是本發明不應被不當地限制於該等特定具體事實上。事實上，在實施本發明之已述模式方面，對於熟習該項技術者而言顯而易知之不同修正亦被涵蓋於下列申請專利範圍之內。

無

圖1為測試不同化合物對心肌細胞表現α-MHC之影響。圖2為測試不同化合物對於斑馬魚心肌創傷後修復之影響。附件一為斑馬魚冷凍創傷實驗流程示意圖。

無

Claims

一種如化學式(I)所示之化合物：
(I)；其中X₁ 為氫或未經取代之C₁ -C₆ 之烷基； X₂ 為氧或胺基； X₃ 為氫、羥基或前述以-X₂ -(CO)-(Y)_p -Z所示之取代基； Y為C₁ -C₆ 之伸烷基、C₂ -C₁₂ 之伸烯基、C₇ -C₁₈ 之伸烷基芳基或C₆ -C₁₈ 之伸芳基； Z為-COCH₃ 、-COOH、-COOCH₃ 、-OCOCH₃ 、-NHCOOC(CH₃ )₃ 、-F、-Cl、-Br或-I； p為0或1。
如請求項1所述之化合物，其中，Z為-COOH、-COOCH₃ 、-OCOCH₃ 、-NHCOOC(CH₃ )₃ 或-Cl。
如請求項1所述之化合物，其中，X₂ 為
、
或-NX₄ -，X₄ 為取代基
。
如請求項1所述之化合物，其中，Y為伸丁基、伸乙烯基、伸苄基或伸苯基。
如請求項1所述之化合物，其中該化合物為下列化合物1至化合物15其中之一者所表示：
一種如請求項1所述之化合物之製法，其係包括令反應物A以及反應物B在0℃至25℃的溫度下進行反應，其中，反應物A為香豆酸衍生物、咖啡酸衍生物或肉桂酸衍生物；反應物B為酸類化合物、酸酐類化合物、醯氯類化合物或酯類化合物。
如請求項6所述之製法，其中，反應物A為對香豆酸、咖啡酸、咖啡酸甲酯或4-氨基肉桂酸。
如請求項6所述之製法，其中，反應物B為乙醯水楊酸、3-氯苯乙酸、叔丁氧羰基-γ-氨基丁酸、戊二酸酐、己二酸酐、甲基己二酸醯氯或富馬酸單甲酯。
如請求項6至8中任一項所述之製法，其中，反應物A以及反應物B係在0℃至25℃的溫度、鹼性環境下進行反應。
一種用於促進心肌再生之醫藥品，其包含如請求項1至5中任一項所述之化合物與醫藥上可接受之載劑。
一種如化學式(II)所示之化合物用於製備促進心肌再生之醫藥品之用途；
(II)；其中R₁ 為羥基、未經取代之C₁ -C₆ 之烷基、未經取代之C₁ -C₆ 之烷氧基、經取代之C₁ -C₆ 之烷酸基、經取代之C₇ -C₁₂ 之環烷酸基、經取代或未經取代之C₆ -C₁₈ 之芳胺基、經取代或未經取代之C₆ -C₁₈ 之酚基、經取代或未經取代之C₆ -C₁₈ 之芳基、經取代或未經取代之噻吩基、經取代或未經取代之吡咯基、經取代或未經取代之吡啶基或經取代或未經取代之噻唑基； R₂ 為氫、羥基、未經取代之C₁ -C₆ 之烷基、胺基、乙醯氧基、
或-X₂ (CO)-(Y)_p -Z，R₃ 為氫、羥基、未經取代之C₁ -C₆ 之烷基、未經取代之C₁ -C₆ 之烷氧基或-O-CO-(Y)_p -Z，或者，R₂ 以及R₃ 相互連接形成
； R₄ 為氫、未經取代之C₁ -C₆ 之烷氧基或
；以A表示之環狀結構為苯環、噻吩環或吡啶環； X₂ 為氧或胺基； Z為-C₅ H₄ N、-COCH₃ 、-COOH、-COOCH₃ 、-OCOCH₃ 、-NHCOOC(CH₃ )₃ 、-F、-Cl、-Br或-I； Y為C₁ -C₆ 之伸烷基、C₂ -C₁₂ 之伸烯基、C₇ -C₁₈ 之伸烷基芳基或C₆ -C₁₈ 之伸芳基； p為0或1。
如請求項11所述之用途，其中，X₂ 為
、
或-NX₄ ，X₄ 為取代基
。
如請求項11所述之用途，其中，R₃ 為-CH₃ 、
、-NH₂ 或-O-CO-(Y)_p -Z。
如請求項11所述之用途，其中，當R₂ 為-X₂ (CO)-(Y)_p -Z時，R₁ 為羥基。
如請求項11所述之用途，其中，當Y為伸烯基時，Z為-COOCH₃ 。
如請求項11所述之用途，其中，化學式(II)所示之化合物為下列化合物1至化合物44其中之一者所表示：