TW201922773A - 雙特異性抗cd307e及抗bcma嵌合抗原受體之製造方法及用途 - Google Patents

雙特異性抗cd307e及抗bcma嵌合抗原受體之製造方法及用途 Download PDF

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TW201922773A
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彼得 伊瑪泰吉
史蒂芬 桑圖羅
史蒂芬妮 西克里斯特
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美商細胞設計實驗公司
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Abstract

本文提供特異性結合至B細胞成熟抗原(BCMA)及CD307e之嵌合抗原受體、編碼該等嵌合抗原受體之核酸，以及製造及使用該等嵌合抗原受體之方法。

Description

雙特異性抗CD307E及抗BCMA嵌合抗原受體之製造方法及用途
本發明係關於生物技術領域，且更特定地係關於嵌合抗原受體。
全世界有數百萬人患有癌症。免疫療法提供藉由動員患者之免疫系統來選擇性殺死癌細胞之靶向方法。
本發明係基於發現：可特異性結合至BCMA及CD307e二者之雙特異性嵌合抗原受體可用於選擇性靶向表面上表現BCMA及CD307e二者之癌細胞。治療癌症之此雙特異性方法藉由損失一種或其他抗原來降低腫瘤逃逸療法之可能性。由於更具活性之嵌合抗原受體靶向兩種抗原相對於一種抗原之更深反應因此產生抗腫瘤反應之耐久性比靶向單一抗原更長。
本文提供嵌合抗原受體(CAR)，其包括：特異性結合至B細胞成熟抗原(BCMA)之第一抗原結合結構域；特異性結合至CD307e之第二抗原結合結構域；跨膜結構域；共刺激結構域；及細胞內信號傳導結構域。本文所述CAR中任一者之一些實施例進一步包括位於第一抗原結合結構域與第二抗原結合結構域之間之連接體。在本文所述CAR中任一者之一些實施例中，連接體係GS連接子。本文所述CAR中任一者之一些實施例進一步包括位於第二抗原結合結構域與跨膜結構域之間之鉸鏈序列。本文所述CAR中任一者之一些實施例進一步包括位於第一抗原結合結構域與跨膜結構域之間之鉸鏈序列。在本文所述CAR中任一者之一些實施例中，鉸鏈序列係CD8a鉸鏈序列或CD28鉸鏈序列。
在本文所述CAR中任一者之一些實施例中，CAR自N端至C端方向上包括：第一抗原結合結構域、連接體、第二抗原結合結構域、跨膜結構域、共刺激結構域及細胞內信號傳導結構域。本文所述CAR中任一者之一些實施例進一步包括位於第二抗原結合結構域與跨膜結構域之間之鉸鏈序列。
在本文所述CAR中任一者之一些實施例中，CAR自N端至C端方向上包括：第二抗原結合結構域、連接體、第一抗原結合結構域、跨膜結構域、共刺激結構域及細胞內信號傳導結構域。本文所述CAR中任一者之一些實施例進一步包括位於第一抗原結合結構域與跨膜結構域之間之鉸鏈序列。
在本文所述CAR中任一者之一些實施例中，第一抗原結合結構域及第二抗原結合結構域中之一者或二者係單鏈可變片段(scFv)。在本文所述CAR中任一者之一些實施例中，第一抗原結合結構域及第二抗原結合結構域二者皆係scFv。在本文所述CAR中任一者之一些實施例中，第一抗原結合結構域自N端至C端方向上包括由第一scFv連接體分開之VL 結構域及VH 結構域。在本文所述CAR中任一者之一些實施例中，第一抗原結合結構域自N端至C端方向上包括由第一scFv連接體分開之VH 結構域及VL 結構域。在本文所述CAR中任一者之一些實施例中，第二抗原結合結構域自N端至C端方向上包含由第二scFv連接體分開之VL 結構域及VH 結構域。在本文所述CAR中任一者之一些實施例中，第二抗原結合結構域自N端至C端方向上包含由第二scFv連接體分開之VH 結構域及VL 結構域。在本文所述CAR中任一者之一些實施例中，第一scFv連接體及第二scFv連接體中之一者或二者係Whitlow連接體。在本文所述CAR中任一者之一些實施例中，第一scFv連接體及第二scFv連接體二者皆係Whitlow連接體。
在本文所述CAR中之任一者之一些實施例中，跨膜結構域係CD28、CD3 ε、CD4、CD5、CD6、CD8a、CD9、CD16、CD22、CD33、CD37、CD 45、CD64、CD80、CD86、CD134、4-1BB或CD154之跨膜結構域。在本文所述CAR中之任一者之一些實施例中，共刺激結構域係4-1BB、CD28、CD2、CD4、CD8、GITR糖皮質激素誘導之TNFR家族相關基因(GITR)、神經生長因子受體(NGFR、CD271)或CD154之共刺激結構域。在本文所述CAR中之任一者之一些實施例中，細胞內信號傳導結構域係CD3ζ、CD5、CD22、CD79、造血細胞信號轉換器(DAP-10、KAP10)或TYRO蛋白酪胺酸激酶結合蛋白(DAP-12、KARAP)之細胞內信號傳導結構域(例如，參見Wilson等人 (2000) Immunol Res.22(1):21-42)。在本文所述CAR中之任一者之一些實施例中，細胞內信號傳導結構域係CD3ζ之細胞內信號傳導結構域且共刺激結構域係4-1BB之共刺激結構域。
本文亦提供編碼本文所述CAR中之任一者之核酸。本文亦提供包括編碼本文所述CAR中之任一者之核酸中的任一者之載體。在本文所述載體之一些實施例中，編碼本文所述CAR中之任一者之核酸可操作連接至啟動子及增強子中之一者或二者。在本文所述載體之一些實施例中，啟動子係可誘導啟動子。
本文亦提供包括編碼本文所述CAR中之任一者之任何核酸或本文所述任何載體的細胞。在本文所述細胞中之任一者之一些實施例中，細胞係真核細胞。在本文所述細胞中之任一者之一些實施例中，真核細胞係哺乳動物細胞。在本文所述細胞中之任一者之一些實施例中，哺乳動物細胞係人類細胞。在本文所述細胞中之任一者之一些實施例中，哺乳動物細胞係選自以下之群之細胞：T細胞、天然殺手(NK)細胞、單核球/巨噬細胞及B細胞。在本文所述細胞中之任一者之一些實施例中，哺乳動物細胞係自個體獲得之哺乳動物細胞。在本文所述細胞中之任一者之一些實施例中，個體經診斷或鑑別為患有癌症。在本文所述細胞中之任一者之一些實施例中，癌症之特徵在於癌細胞表現BCMA及CD307e中之一者或二者。
本文亦提供包括本文所述細胞中之任一者及醫藥上可接受之載劑的醫藥組合物。本文亦提供包括本文所述醫藥組合物中之任一者之套組。
本文亦提供包括編碼本文所述CAR中之任一者之任何核酸以及醫藥上可接受之載劑的醫藥組合物。本文亦提供包括本文所述醫藥組合物中之任一者之套組。
本文亦提供生成表現嵌合抗原受體(CAR)之細胞之方法，其包括向細胞中引入編碼本文所述CAR中之任一者之核酸中的任一者或本文所述載體中的任一者。在本文所述方法中之任一者之一些實施例中，細胞真核細胞。在本文所述方法中之任一者之一些實施例中，真核細胞係哺乳動物細胞。在本文所述方法中之任一者之一些實施例中，哺乳動物細胞係人類細胞。在本文所述方法中之任一者之一些實施例中，哺乳動物細胞係選自由以下組成之群之細胞：T細胞、NK細胞、巨噬細胞/單核球及B細胞。在本文所述方法中之任一者之一些實施例中，哺乳動物細胞係自個體獲得之哺乳動物細胞。在本文所述方法中之任一者之一些實施例中，個體經診斷或鑑別為患有癌症。在本文所述方法中之任一者之一些實施例中，癌症之特徵在於癌細胞表現BCMA及CD307e中之一者或二者。本文所述方法中之任一者之一些實施例進一步包括在引入步驟後在液體培養基中培養細胞。本文所述方法中之任一者之一些實施例可進一步包括在引入步驟之前自個體獲得細胞。
本文亦提供治療個體之癌症之方法，其包括：向個體投與治療有效量之本文所述細胞中之任一者。在本文所述方法中之任一者之一些實施例中，癌症之特徵在於癌細胞表現BCMA及CD307e中之一者或二者。在本文所述方法中之任一者之一些實施例中，癌症係癌瘤、肉瘤、骨髓瘤、白血病或淋巴瘤。在本文所述方法中之任一者之一些實施例中，個體經診斷或鑑別為患有癌症。本文所述方法中之任一者之一些實施例進一步包括在投與步驟之前：自個體獲得初始細胞；及向初始細胞中引入編碼本文所述CAR中之任一者之任何核酸或本文所述任何載體，以產生投與個體之細胞。本文所述方法中之任一者之一些實施例進一步包括在引入步驟與投與步驟之間在液體培養基中培養投與個體之細胞的步驟。在本文所述方法中之任一者之一些實施例中，個體係人類。
本文亦提供治療個體之多發性骨髓瘤之方法，其包括向個體投與治療有效量之本文所述細胞中之任一者。在本文所述方法中之任一者之一些實施例中，個體經診斷或鑑別為患有多發性骨髓瘤。本文所述方法中之任一者之一些實施例進一步包括在投與步驟之前：自個體獲得初始細胞；及向初始細胞中引入編碼本文所述CAR中之任一者之任何核酸或本文所述任何載體，以產生投與個體之細胞。本文所述方法中之任一者之一些實施例進一步包括在引入步驟與投與步驟之間在液體培養基中培養投與個體之細胞的步驟。在本文所述方法中之任一者之一些實施例中，個體係人類。
本文所述方法中之任一者之一些實施例進一步包括向個體投與一或多種額外抗癌症療法。在本文所述方法中之任一者之一些實施例中，一或多種額外抗癌症療法係選自由以下組成之群：化學療法、免疫療法、手術切除及放射療法。
在名稱之前使用術語「一」意指特定名稱之「一或多者」。舉例而言，片語「一哺乳動物細胞」意指「一或多個哺乳動物細胞。」
術語「嵌合抗原受體」及「CAR」在本文中可互換使用，且係指能觸發或抑制免疫細胞活化之人工多模組分子，其通常但不排他地包含細胞外結構域(例如，配體/抗原結合結構域)、跨膜結構域及一或多個細胞內信號傳導結構域。實例性CAR、CAR內之實例性結構域及其衍生物(例如，CAR變體)闡述於以下中，例如，PCT申請案第US2014/016527號；Fedorov等人 Sci Transl Med (2013) ；5(215):215ra172；Glienke等人 Front Pharmacol (2015) 6:21；Kakarla & Gottschalk 52 Cancer J (2014) 20(2):151-5；Riddell等人 Cancer J (2014) 20(2):141-4；Pegram等人 Cancer J (2014) 20(2):127-33；Cheadle等人 Immunol Rev (2014) 257(1):91-106；Barrett等人 Annu Rev Med (2014) 65:333-47；Sadelain等人 Cancer Discov (2013) 3(4):388-98；Cartellieri等人，J Biomed Biotechnol (2010) 956304；其揭示內容以全文引用之方式併入本文中。
術語「跨膜結構域」意指包括至少一個鄰接胺基酸序列之多肽之結構域，當存在於在哺乳動物細胞中表現時之相應內源多肽中時，該鄰接胺基酸序列橫貫脂質雙層。舉例而言，跨膜結構域可包括1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個或10個鄰接胺基酸序列，當存在於在哺乳動物細胞中表現時之相應內源多肽中時，該等鄰接胺基酸序列各自橫貫脂質雙層。如業內已知，跨膜結構域可(例如)包括至少一個(例如2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個或10個)在脂質雙層中具有α-螺旋二級結構的鄰接胺基酸序列(當存在於在哺乳動物細胞中表現時之相應內源多肽中時，其橫貫脂質雙層)。在一些實施例中，跨膜結構域可包括兩個或更多個在脂質雙層中形成β-桶狀二級結構之鄰接胺基酸序列(當存在於在哺乳動物細胞中表現時之相應內源多肽中時，其各自橫貫脂質雙層)。本文闡述跨膜結構域之非限制性實例。業內已知跨膜結構域之額外實例。
術語「共刺激結構域」意指來自T淋巴球中表現之內源共刺激跨膜多肽之信號傳導結構域，其促進下游T細胞受體信號傳導及/或T細胞活化。本文闡述共刺激結構域之非限制性實例。業內已知共刺激結構域之額外實例。參見(例如) Chen等人，Nature Reviews Immunol. 13:227-242, 2013。
「細胞內信號傳導結構域」係跨膜蛋白中使細胞(例如，本文所述哺乳動物細胞中之任一者，例如本文所述任何T細胞、任何B細胞、單核球、巨噬細胞、嗜酸性球、NK細胞及嗜中性球)活化及/或增殖所需之細胞內結構域。本文闡述細胞內信號傳導結構域之非限制性實例。業內已知細胞內信號傳導結構域之額外實例。
術語「抗原結合結構域」意指特異性結合至靶抗原之結構域。在一些實例中，抗原結合結構域可自單鏈多肽內存在之胺基酸形成。在其他實例中，抗原結合結構域可自第一單鏈多肽內存在之胺基酸及一或多個額外單鏈多肽(例如，第二單鏈多肽)中存在之胺基酸形成。本文闡述抗原結合結構域之非限制性實例。業內已知抗原結合結構域之額外實例。
片語「癌症之治療」或「治療癌症」意指患有癌症之個體中一或多種(例如，兩種、三種、四種或五種)癌症症狀之數目、頻率或嚴重程度減少。本文闡述非限制性癌症症狀。業內已知額外癌症症狀。
除非另有定義，否則本文所用之所有技術及科學術語皆具有與熟習本發明所屬領域技術者通常所理解之含義相同的含義。本文闡述用於本發明中之方法及材料；亦可使用此項技術中已知之其他適宜方法及材料。該等材料、方法及實例僅係說明性的且並非意欲加以限制。本文提及之所有出版物、專利申請案、專利、順序、資料庫及其他參考文獻皆以全文引用方式併入。倘若出現衝突，則以本說明書(包括定義)為準。
本發明之其他特徵及優點自下列實施方式及附圖以及申請專利範圍將顯而易見。
因此，本發明提供嵌合抗原受體(CAR)，其包括特異性結合至B細胞成熟抗原(BCMA)之第一抗原結合結構域；特異性結合至CD307e之第二抗原結合結構域；跨膜結構域；共刺激結構域；及細胞內信號傳導結構域。亦提供編碼該等CAR中之任一者之核酸、包括編碼該等CAR中之任一者之核酸的載體以及表現該等CAR中之任一者之細胞。亦提供包括表現該等CAR中之任一者之細胞中之任一者的組合物。亦提供組合物，其包括編碼本文所述CAR中之任一者之任何核酸或包括編碼本文所述CAR中之任一者之任何核酸之任何載體。亦提供包括本文所述組合物中之任一者之套組。本文亦提供製造表現本文所述CAR中之任一者之細胞的方法及治療患有癌症之個體之方法，其包括投與表現本文所述CAR中之任一者之任何細胞。
該等CAR及方法之各個實例性態樣闡述於下文中且可以任何組合用於本文提供之組合物及方法中而不加以限制。所提供方法之實例性態樣闡述於下文中；然而，熟習此項技術者應瞭解，可在本文所述方法中增加額外步驟且可使用其他材料以實施本文所述方法之任何步驟。
嵌合抗原受體 (CAR)
嵌合抗原受體(CAR)係人工構築之雜合蛋白或包括至少一個抗原結合結構域(例如，單鏈可變片段(scFv))、跨膜結構域及至少一個細胞信號傳導結構域(例如，至少一個共刺激結構域及至少一個細胞內信號傳導結構域)。CAR具有以非MHC限制方式將T細胞特異性及反應性重定向至所需靶標的能力(例如，BCMA抗原或CD307e抗原)。CAR已闡述於以下中，例如Kershaw等人，Nature Reviews Immunol . 5(12):928-940, 2005；Eshhar等人，Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 90(2):720-724, 1993；Sadelain等人，Curr. Opin. Immunol. 21(2): 215-223, 2009；WO 2015/142675；WO 2015/150526；及WO 2014/134165，其揭示內容各自以全文引用之方式併入本文中。
本文提供嵌合抗原受體(CAR)，其包括：特異性結合至B細胞成熟抗原(BCMA)之第一抗原結合結構域；特異性結合至CD307e之第二抗原結合結構域；跨膜結構域；共刺激結構域；及細胞內信號傳導結構域。本文闡述第一抗原結合結構域、第二抗原結合結構域、跨膜結構域、共刺激結構域及細胞內信號傳導結構域之非限制性態樣及實例。業內已知第一抗原結合結構域、第二抗原結合結構域、跨膜結構域、共刺激結構域及細胞內信號傳導結構域之額外態樣及實例。
在本文所述CAR中之任一者之一些實例中，CAR之細胞內部分在自N端至C端方向上包括共刺激結構域及細胞內信號傳導結構域。在本文所述CAR中之任一者之一些實例中，CAR之細胞內部分在自N端至C端方向上包括細胞內信號傳導結構域及共刺激結構域。
在本文所述CAR中之任一者之一些實例中，CAR之細胞內部分在自C端至N端方向上包括共刺激結構域及細胞內信號傳導結構域。在本文所述CAR中之任一者之一些實例中，CAR之細胞內部分在自C端至N端方向上包括細胞內信號傳導結構域及共刺激結構域。
本文所述CAR中之任一者之一些實施例進一步包括位於第一抗原結合結構域與第二抗原結合結構域之間之連接體。本文闡述連接體之非限制性實例。在一些實施例中，連接體係GS連接子。
本文所述CAR中之任一者之一些實施例進一步包括位於第二抗原結合結構域與跨膜結構域之間之鉸鏈序列。本文所述CAR中之任一者之一些實施例進一步包括位於第一抗原結合結構域與跨膜結構域之間之鉸鏈序列。在一些實施例中，鉸鏈序列係或包括CD8a鉸鏈序列。在一些實施例中，鉸鏈序列係或包括CD28鉸鏈序列。
在本文所述CAR中之任一者之一些實施例中，CAR在自N端至C端方向上包括：第一抗原結合結構域、連接體、第二抗原結合結構域、跨膜結構域、共刺激結構域及細胞內信號傳導結構域。在本文所述CAR中之任一者之一些實施例中，CAR在自C端至N端方向上包括：第一抗原結合結構域、連接體、第二抗原結合結構域、跨膜結構域、共刺激結構域及細胞內信號傳導結構域。本文所述CAR中之任一者之一些實施例包括位於第二抗原結合結構域與跨膜結構域之間之鉸鏈序列。
在本文所述CAR中之任一者之一些實施例中，CAR在自N端至C端方向上包括：第二抗原結合結構域、連接體、第一抗原結合結構域、跨膜結構域、共刺激結構域及細胞內信號傳導結構域。在本文所述CAR中之任一者之一些實施例中，CAR在自C端至N端方向上包括：第二抗原結合結構域、連接體、第一抗原結合結構域、跨膜結構域、共刺激結構域及細胞內信號傳導結構域。本文所述CAR中之任一者之一些實施例進一步包括位於第一抗原結合結構域與跨膜結構域之間之鉸鏈序列。
在本文所述CAR中之任一者之一些實例中，第一抗原結合結構域及第二抗原結合結構域中之一者或二者係單一結構域可變片段(scFv)。在本文所述CAR中之任一者之一些實例中，第一抗原結合結構域及第二抗原結合結構域二者皆係單一結構域可變片段(scFv)。
在本文所述CAR中之任一者之一些實施例中，第一抗原結合結構域在自N端至C端方向上包括由第一scFv連接體分開之VL結構域及VH結構域。在本文所述CAR中之任一者之一些實施例中，第一抗原結合結構域在自N端至C端方向上包括由第一scFv連接體分開之VH結構域及VL結構域。
在本文所述CAR中之任一者之一些實施例中，第二抗原結合結構域在自N端至C端方向上包括由第二scFv連接體分開之VL結構域及VH結構域。在本文所述CAR中之任一者之一些實施例中，第二抗原結合結構域在自N端至C端方向上包括由第二scFv連接體分開之VH結構域及VL結構域。
本文闡述第一scFv連接體及第二scFv連接體之非限制性態樣及實例。在本文所述CAR中之任一者之一些實施例中，第一scFv連接體及第二scFv連接體中之一者或二者係Whitlow連接體。在本文所述CAR中之任一者之一些實施例中，第一scFv連接體及第二scFv連接體二者皆係Whitlow連接體。
在本文所述CAR中之任一者之一些實施例中，跨膜係或包括CD28、CD3 ε、CD4、CD5、CD6、CD8a、CD9、CD16、CD22、CD33、CD37、CD45、CD64、CD80、CD86、CD134、4-1BB或CD154之跨膜結構域。本文闡述跨膜結構域之額外實例及態樣。
在本文所述CAR中之任一者之一些實施例中，共刺激結構域係或包括4-1BB、CD28、CD2、CD4或CD8之共刺激結構域。本文闡述共刺激結構域之額外實例及態樣。
在本文所述CAR中之任一者之一些實施例中，細胞內信號傳導結構域係或包括CD3 ζ、CD5、CD22、DAP-10、DAP-12、CD5、CD22或CD79之細胞內信號傳導結構域。本文闡述細胞內信號傳導結構域之額外實例及態樣。
在本文所述CAR中之任一者之一些實施例中，細胞內信號傳導結構域係CD3 ζ且共刺激結構域係4-1BB或CD28之共刺激結構域。
業內已知可用於測定本文所述CAR中之任一者之KD 值的各種方法(例如，電泳遷移位移分析、過濾器結合分析、表面電漿共振及生物分子結合動力學分析等)。
抗原結合結構域
在一些實施例中，第一抗原結合結構域及第二抗原結合結構域各自獨立地選自由以下組成之群：VHH結構域、VNAR結構域及scFv。業內已知可使用之抗原結合結構域之額外實例。
VH H結構域係可在駱駝科動物中發現之單一單體可變抗體結構域。VNAR 結構域係可在軟骨魚類中發現之單一單體可變抗體結構域。VH H結構域及VNAR 結構域之非限制性態樣闡述於以下中：例如，Cromie等人，Curr. Top. Med. Chem. 15:2543-2557, 2016；De Genst等人，Dev. Comp. Immunol. 30:187-198, 2006；De Meyer等人，Trends Biotechnol. 32:263-270, 2014；Kijanka等人，Nanomedicine 10:161-174, 2015；Kovaleva等人，Expert. Opin. Biol. Ther. 14:1527-1539, 2014；Krah等人，Immunopharmacol. Immunotoxicol. 38:21-28, 2016；Mujic-Delic等人，Trends Pharmacol. Sci. 35:247-255, 2014；Muyldermans,J. Biotechnol. 74:277-302, 2001；Muyldermans等人，Trends Biochem. Sci. 26:230-235, 2001；Muyldermans,Ann. Rev. Biochem. 82:775-797, 2013；Rahbarizadeh等人，Immunol. Invest. 40:299-338, 2011；Van Audenhove等人，EBioMedicine 8:40-48, 2016；Van Bockstaele等人，Curr. Opin. Investig. Drugs 10:1212-1224, 2009；Vincke等人，Methods Mol. Biol. 911:15-26, 2012；及Wesolowski等人，Med. Microbiol. Immunol. 198:157-174, 2009。
在本文所述CAR中之任一者之一些實施例中，第一抗原結合結構域及第二抗原結合結構域二者皆係VHH結構域，或至少一個抗原結合結構域係VHH結構域。在本文所述CAR中之任一者之一些實施例中，第一抗原結合結構域及第二抗原結合結構域二者皆係VNAR結構域，或至少一個抗原結合結構域係VNAR結構域。在本文所述CAR中之任一者之一些實施例中，第一抗原結合結構域及第二抗原結合結構域二者皆係scFv結構域，或至少一個抗原結合結構域係scFv結構域。
在一些實例中，第一抗原結合結構域及/或第二抗原結合結構域係人類。在一些實例中，第一抗原結合結構域及/或第二抗原結合結構域經人類化。
在一些實例中，第一抗原結合結構域係scFv，例如源自J6M0之scFv。
下文提供J6M0之輕鏈可變結構域及重鏈可變結構域。輕鏈可變結構域中存在之三個CDR及重鏈可變結構域中存在之三個CDR係以粗體顯示。
J6M0 之輕鏈可變結構域 (SEQ ID NO: 1) ( 各 CDR 係以粗體顯示。 )
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC SASQDISNYLN WYQQKPGKAPKLLIY YTSNLHS GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC QQYRKLPWT FGQGTKLEIKR
J6M0 之重鏈可變結構域 (SEQ ID NO: 2) ( 各 CDR 係以粗體顯示。 )
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFS NYWMH WVRQAPGQGLEWMG ATYRGHSDTYYNQKFK G RVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAR GAIYDGYDVLDN WGQGTLVTVSS
編碼J6M0之輕鏈可變結構域之核酸序列及編碼J6M0之重鏈可變結構域之核酸序列.
編碼 J6M0 之輕鏈可變結構域之 cDNA (SEQ ID NO: 3)
gatatacaaatgacccaaagcccaagctctctgagtgcgtccgtcggggacagagtgacaataacatgtagtgcgtctcaggacatcagtaactacctgaactggtaccagcaaaaaccaggtaaggctcccaagctgcttatttattatacctcaaatctgcacagcggcgttccatcacgcttttctggctctggcagtgggacggacttcaccctcacaatttctagccttcaaccagaagatttcgccacttactactgtcaacagtaccggaagctgccctggacgttcgggcagggaacaaaacttgaaatcaagcgg
編碼 J6M0 之重鏈可變結構域之 cDNA (SEQ ID NO: 4)
caagtccagctggttcaatccggagctgaggtgaaaaaaccaggctcaagcgttaaggtttcttgcaaggccagtggggggactttctccaactactggatgcactgggtacggcaggcccccggtcaagggcttgaatggatgggtgccacgtacagaggacactcagacacatactataaccaaaaattcaaggggcgagttactattactgcagacaagtcaacttctacagcctacatggaattgtcctcccttaggtctgaagacacagcagtgtactattgcgcgcggggggccatatacgacggatacgacgtgcttgataactggggccagggcaccctcgtgactgttagctcc
在本文所述CAR之一些實施例中，第一抗原結合結構域包括係或包括與J6M0之VL結構域具有至少80%一致性(例如，至少82%、至少84%、至少86%、至少88%、至少90%、至少92%、至少94%、至少96%、至少98%或至少99%一致性)之序列的VL結構域，及/或包括係或包括與J6M0之VH結構域具有至少80%一致性(例如，至少82%、至少84%、至少86%、至少88%、至少90%、至少92%、至少94%、至少96%、至少98%或至少99%一致性)之序列的VH結構域。在本文所述CAR之一些實施例中，第一抗原結合結構域包括係或包括J6M0之VL結構域的VL結構域，及/或係或包括J6M0之VH結構域的VH結構域。在本文所述CAR中之任一者之一些實施例中，第一抗原結合結構域包括係或包括J6M0之VL序列的VL結構域，只是其包括1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、10個、11個、12個、13個、14個或15個胺基酸取代，及/或包括係或包括J6M0之VH序列的VH結構域，只是其包括1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、10個、11個、12個、13個、14個或15個胺基酸取代。在一些實施例中，第一抗原結合結構域包括J6M0之輕鏈可變結構域中之三個CDR及/或J6M0之重鏈可變結構域中之三個CDR。
在本文所述CAR中之任一者之一些實例中，CAR可以如下解離平衡常數(KD )結合至BCMA抗原(例如，BCMA之細胞外結構域中存在之表位)：小於1 × 10-5 M、小於0.5 × 10-5 M、小於1 × 10-6 M、小於0.5 × 10-6 M、小於1 × 10-7 M、小於0.5 × 10-7 M、小於1 × 10-8 M、小於0.5 × 10-8 M、小於1 × 10-9 M、小於0.5 × 10-9 、小於1 × 10-10 M、小於0.5 × 10-10 M或小於1 × 10-11 M (例如，如使用表面電漿共振所量測)。
在本文所述CAR中之任一者之一些實例中，CAR可以如下KD 結合至BCMA抗原(例如，BCMA之細胞外結構域中存在之表位)：約1 × 10-11 M至約1 × 10-5 M、約1 × 10-11 M至約0.5 × 10-5 M、約1 × 10-11 M至約1 × 10-6 M、約1 × 10-11 M至約0.5 × 10-6 M、約1 × 10-11 M至約1 × 10-7 M、約1 × 10-11 M至約0.5 × 10-7 M、約1 × 10-11 M至約1 × 10-8 M、約1 × 10-11 M至約0.5 × 10-8 M、約1 × 10-11 M至約1 × 10-9 M、約1 × 10-11 M至約0.5 × 10-9 M、約1 × 10-11 M至約1 × 10-10 M、約1 × 10-11 M至約0.5 × 10-10 M；約0.5 × 10-10 M至約1 × 10-5 M、約0.5 × 10-10 M至約0.5 × 10-5 M、約0.5 × 10-10 M至約1 × 10-6 M、約0.5 × 10-10 M至約0.5 × 10-6 M、約0.5 × 10-10 M至約1 × 10-7 M、約0.5 × 10-10 M至約0.5 × 10-7 M、約0.5 × 10-10 M至約1 × 10-8 M、約0.5 × 10-10 M至約0.5 × 10-8 M、約0.5 × 10-10 M至約1 × 10-9 M、約0.5 × 10-10 M至約0.5 × 10-9 M、約0.5 × 10-10 M至約1 × 10-10 M、約1 × 10-10 M至約1 × 10-5 M、約1 × 10-10 M至約0.5 × 10-5 M、約1 × 10-10 M至約1 × 10-6 M、約1 × 10-10 M至約0.5 × 10-6 M、約1 × 10-10 M至約1 × 10-7 M、約1 × 10-10 M至約0.5 × 10-7 M、約1 × 10-10 M至約1 × 10-8 M、約1 × 10-10 M至約0.5 × 10-8 M、約1 × 10-10 M至約1 × 10-9 M、約1 × 10-10 M至約0.5 × 10-9 M、約0.5 × 10-9 M至約1 × 10-5 M、約0.5 × 10-9 M至約0.5 × 10-5 M、約0.5 × 10-9 M至約1 × 10-6 M、約0.5 × 10-9 M至約0.5 × 10-6 M、約0.5 × 10-9 M至約1 × 10-7 M、約0.5 × 10-9 M至約0.5 × 10-7 M、約0.5 × 10-9 M至約1 × 10-8 M、約0.5 × 10-9 M至約0.5 × 10-8 M、約0.5 × 10-9 M至約1 × 10-9 M、約1 × 10-9 M至約1 × 10-5 M、約1 × 10-9 M至約0.5 × 10-5 M、約1 × 10-9 M至約1 × 10-6 M、約1 × 10-9 M至約0.5 × 10-6 M、約1 × 10-9 M至約1 × 10-7 M、約1 × 10-9 M至約0.5 × 10-7 M、約1 × 10-9 M至約1 × 10-8 M、約1 × 10-9 M至約0.5 × 10-8 M、約0.5 × 10-8 M至約1 × 10-5 M、約0.5 × 10-8 M至約0.5 × 10-5 M、約0.5 × 10-8 M至約1 × 10-6 M、約0.5 × 10-8 M至約0.5 × 10-6 M、約0.5 × 10-8 M至約1 × 10-7 M、約0.5 × 10-8 M至約0.5 × 10-7 M、約0.5 × 10-8 M至約1 × 10-8 M、約1 × 10-8 M至約1 × 10-5 M、約1 × 10-8 M至約0.5 × 10-5 M、約1 × 10-8 M至約1 × 10-6 M、約1 × 10-8 M至約0.5 × 10-6 M、約1 × 10-8 M至約1 × 10-7 M、約1 × 10-8 M至約0.5 × 10-7 M、約0.5 × 10-7 M至約1 × 10-5 M、約0.5 × 10-7 M至約0.5 × 10-5 M、約0.5 × 10-7 M至約1 × 10-6 M、約0.5 × 10-7 M至約0.5 × 10-6 M、約0.5 × 10-7 M至約1 × 10-7 M、約1 × 10-7 M至約1 × 10-5 M、約1 × 10-7 M至約0.5 × 10-5 M、約1 × 10-7 M至約1 × 10-6 M、約1 × 10-7 M至約0.5 × 10-6 M、約0.5 × 10-6 M至約1 × 10-5 M、約0.5 × 10-6 M至約0.5 × 10-5 M、約0.5 × 10-6 M至約1 × 10-6 M、約1 × 10-6 M至約1 × 10-5 M、約1 × 10-6 M至約0.5 × 10-5 M或約0.5 × 10-5 M至約1 × 10-5 M (例如，如使用表面電漿共振所量測)。
在一些實例中，第二抗原結合結構域係scFv，例如源自10A8之scFv。
下文提供10A8之輕鏈可變結構域及重鏈可變結構域。輕鏈可變結構域中存在之三個CDR及重鏈可變結構域中存在之三個CDR係以粗體顯示。
10A8 之人類輕鏈可變結構域 (SEQ ID NO: 5) (各CDR係以粗體顯示。)
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC KASQDVSTAVA WYQQKPGKAPKLLIY SASYRYT GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC QQHFSSPRT FGQGTKVEIKR
10A8 之人類重鏈可變結構域 (SEQ ID NO: 6) (各CDR係以粗體顯示。)
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAAS GFTFSSYAVS WVRQAPGKGLEWV ATISSGGSLTFYLDSVR GRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR PIPDYYALDY WGQGTLVTVSS
編碼 10A8 之人類輕鏈可變結構域之 cDNA (SEQ ID NO: 7)
gatatccagatgacccagtctcctagttccttgtccgcatcagtaggagacagggtcaccatcacctgcaaggccagtcaggatgtgagtactgctgtagcctggtatcaacagaaaccaggaaaagctcctaaactactgatttattcggcatcctaccggtacactggagtcccttctcgcttctctggcagtggatctgggacggatttcactctcaccatcagcagtctgcagcctgaagactttgcaacttattactgtcagcaacattttagtagtcctcggacgttcggtcaaggtaccaaggtggagatcaaacga
編碼 10A8 之人類重鏈可變結構域之 cDNA (SEQ ID NO: 8)
gaagtgcagttggtggagtctgggggaggcttagtgcagcctggagggtccctgcgactctcctgtgcagcctctggattcactttcagtagctatgccgtgtcttgggttcgccaggctccggggaagggactggagtgggtcgctaccattagcagtggtggtagtttgaccttctatttagacagtgtgaggggtcgattcaccatctccagagacaatagcaagaacaccctgtacctgcaaatgaatagtctgagggctgaagacacggccgtgtattactgtgcaaggcccattccggattactatgctttggactactggggtcaaggaaccttagtcaccgtctcctca
10A8 之小鼠輕鏈可變結構域 (SEQ ID NO: 9) (各CDR係以粗體顯示。)
DIVMTQSHKFMSTSVRDRVSITCKASQDVSTAVA WYQQKPGQSPKLLIYSASYRYT GVPDRFTGSGSGTDFTFTISSVQAEDLAVYYCQQHFSSPRT FGGGTKVEIKR
10A8 之小鼠重鏈可變結構域 (SEQ ID NO: 10) (各CDR係以粗體顯示。)
EVQLVESGGGLVKPGGSLKISCAASGFTFSSYAVS WVRQTPEKRLEWVATISSGGSLTFYLDSVR GRFTISRDNAKNTLYLQMSSLRSEDTAMYYCARPIPDYYALDY WGQGTSVTVSS
編碼 10A8 之小鼠輕鏈可變結構域之 cDNA (SEQ ID NO: 11)
gatatcgtgatgacccagtctcataaattcatgtccacatcagtaagagacagggtcagcatcacctgcaaggccagtcaggatgtgagtactgctgtagcctggtatcaacagaaaccaggacaatctcctaaactactgatttattcggcatcctaccggtacactggagtccctgatcgcttcactggcagtggatctgggacggatttcactttcaccatcagcagtgtgcaggctgaagacctggcagtttattactgtcagcaacattttagtagtcctcggacgttcggtggaggtaccaaggtggagatcaaacga
編碼 10A8 之小鼠重鏈可變結構域之 cDNA (SEQ ID NO: 12)
gaagtgcagttggtggagtctgggggaggcttagtgaagcctggagggtccctgaaaatctcctgtgcagcctctggattcactttcagtagctatgccgtgtcttgggttcgccagactccggagaagaggctggagtgggtcgctaccattagcagtggtggtagtttgaccttctatttagacagtgtgaggggtcgattcaccatctccagagacaatgccaagaacaccctgtacctgcaaatgagcagtctgaggtctgaagacacggccatgtattactgtgcaaggcccattccggattactatgctttggactactggggtcaaggaacctcagtcaccgtctcctca
下文提供人類1G7.v85之輕鏈可變結構域及重鏈可變結構域。輕鏈可變結構域中存在之三個CDR及重鏈可變結構域中存在之三個CDR係以粗體顯示。
1G7.v85 之人類輕鏈可變結構域 (SEQ ID NO: 13) (各CDR係以粗體顯示。)
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC KASQDVRNLVV WFQQKPGKAPKLLIY SGSYRYS GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC QQHYSPPYT FGQGTKVEIK
1G7.v85 之人類重鏈可變結構域 (SEQ ID NO: 14) (各CDR係以粗體顯示。)
EVQLVESGPGLVKPSETLSLTCTVSGFSLT RFGVH WVRQPPGKGLEWLG VIWRGGSTDYNAAFVS RLTISKDNSKNQVSLKLSSVTAADTAVYYCSN HYYGSSDYALDN WGQGTLVTVSS
編碼 1G7.v85 之人類輕鏈可變結構域之 cDNA (SEQ ID NO: 15)
gatattcagatgacccagagcccgagcagcctgagcgcgagcgtgggcgatcgcgtgaccattacctgcaaagcgagccaggatgtgcgcaacctggtggtgtggtttcagcagaaaccgggcaaagcgccgaaactgctgatttatagcggcagctatcgctatagcggcgtgccgagccgctttagcggcagcggcagcggcaccgattttaccctgaccattagcagcctgcagccggaagattttgcgacctattattgccagcagcattatagcccgccgtatacctttggccagggcaccaaagtggaaattaaa
編碼 1G7.v85 之人類重鏈可變結構域之 cDNA (SEQ ID NO: 16)
gaagtgcagctggtggaaagcggcccaggcctggtgaaaccgagcgaaaccctgagcctgacctgcaccgtgagcggctttagcctgacccgctttggcgtgcattgggtgcgccagccgccgggcaaaggcctggaatggctgggcgtgatttggcgcggcggcagcaccgattataacgcggcgtttgtgagccgcctgaccattagcaaagataacagcaaaaaccaggtgagcctgaaactgagcagcgtgaccgcggcggataccgcggtgtattattgcagcaaccattattatggcagcagcgattatgcgctggataactggggccagggcaccctggtgaccgtgagcagc
下文提供人類1G7.v93之輕鏈可變結構域及重鏈可變結構域。輕鏈可變結構域中存在之三個CDR及重鏈可變結構域中存在之三個CDR係以粗體顯示。
1G7.v93 之人類輕鏈可變結構域 (SEQ ID NO: 17) (各CDR係以粗體顯示。)
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC KASQDVSNLVV WFQQKPGKAPKLLIY SGSYRYS GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC QQHYSPPYT FGQGTKVEIK
1G7.v93 之人類重鏈可變結構域 (SEQ ID NO: 18) (各CDR係以粗體顯示。)
EVQLVESGPGLVKPSETLSLTCTVSGFSTT RFGVH WVRQPPGKGLEWLG VIWRGGSTDYNAAFVS RLTISKDNSKNQVSLKLSSVTAADTAVYYCSN HYYGSPDYALDN WGQGTLVTVSS
編碼 1G7.v93 之人類輕鏈可變結構域之 cDNA (SEQ ID NO: 19)
gatattcagatgacccagagcccgagcagcctgagcgcgagcgtgggcgatcgcgtgaccattacctgcaaagcgagccaggatgtgagcaacctggtggtgtggtttcagcagaaaccgggcaaagcgccgaaactgctgatttatagcggcagctatcgctatagcggcgtgccgagccgctttagcggcagcggcagcggcaccgattttaccctgaccattagcagcctgcagccggaagattttgcgacctattattgccagcagcattatagcccgccgtatacctttggccagggcaccaaagtggaaattaaa
編碼 1G7.v93 之人類重鏈可變結構域之 cDNA (SEQ ID NO: 20)
gaagtgcagctggtggaaagcggcccgggcctggtgaaaccgagcgaaaccctgagcctgacctgcaccgtgagcggctttagcacgacccgctttggcgtgcattgggtgcgccagccgccgggcaaaggcctggaatggctgggcgtgatttggcgcggcggcagcaccgattataacgcggcgtttgtgagccgcctgaccattagcaaagataacagcaaaaaccaggtgagcctgaaactgagcagcgtgaccgcggcggataccgcggtgtattattgcagcaaccattattatggcagccccgattatgcgctggataactggggccagggcaccctggtgaccgtgagcagc
在本文所述CAR之一些實施例中，第一抗原結合結構域包括係或包括與10A8之VL結構域具有至少80%一致性(例如，至少82%、至少84%、至少86%、至少88%、至少90%、至少92%、至少94%、至少96%、至少98%、或至少99%一致性)之序列的VL結構域，及/或包括係或包括與10A8之VH結構域具有至少80%一致性(例如，至少82%、至少84%、至少86%、至少88%、至少90%、至少92%、至少94%、至少96%、至少98%、或至少99%一致性)之序列的VH結構域。在本文所述CAR之一些實施例中，第一抗原結合結構域包括係或包括10A8之VL結構域的VL結構域，及/或係或包括10A8之VH結構域的VH結構域。在本文所述CAR中之任一者之一些實施例中，第一抗原結合結構域包括係或包括10A8之VL序列的VL結構域，只是其包括1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、10個、11個、12個、13個、14個或15個胺基酸取代，及/或包括係或包括10A8之VH序列的VH結構域，只是其包括1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、10個、11個、12個、13個、14個或15個胺基酸取代。在一些實施例中，第二抗原結合結構域包括10A8之輕鏈可變結構域中之三個CDR及/或10A8之重鏈可變結構域中之三個CDR。
在本文所述CAR中之任一者之一些實例中，CAR可以如下解離平衡常數(KD )結合至CD307e抗原(例如，CD307e之細胞外結構域中存在之表位)：小於1 × 10-5 M、小於0.5 × 10-5 M、小於1 × 10-6 M、小於0.5 × 10-6 M、小於1 × 10-7 M、小於0.5 × 10-7 M、小於1 × 10-8 M、小於0.5 × 10-8 M、小於1 × 10-9 M、小於0.5 × 10-9 、小於1 × 10-10 M、小於0.5 × 10-10 M或小於1 × 10-11 M (例如，如使用表面電漿共振所量測)。
在本文所述CAR中之任一者之一些實例中，CAR可以如下KD 結合至CD307e抗原(例如，CD307e之細胞外結構域中存在之表位)：約1 × 10-11 M至約1 × 10-5 M、約1 × 10-11 M至約0.5 × 10-5 M、約1 × 10-11 M至約1 × 10-6 M、約1 × 10-11 M至約0.5 × 10-6 M、約1 × 10-11 M至約1 × 10-7 M、約1 × 10-11 M至約0.5 × 10-7 M、約1 × 10-11 M至約1 × 10-8 M、約1 × 10-11 M至約0.5 × 10-8 M、約1 × 10-11 M至約1 × 10-9 M、約1 × 10-11 M至約0.5 × 10-9 M、約1 × 10-11 M至約1 × 10-10 M、約1 × 10-11 M至約0.5 × 10-10 M；約0.5 × 10-10 M至約1 × 10-5 M、約0.5 × 10-10 M至約0.5 × 10-5 M、約0.5 × 10-10 M至約1 × 10-6 M、約0.5 × 10-10 M至約0.5 × 10-6 M、約0.5 × 10-10 M至約1 × 10-7 M、約0.5 × 10-10 M至約0.5 × 10-7 M、約0.5 × 10-10 M至約1 × 10-8 M、約0.5 × 10-10 M至約0.5 × 10-8 M、約0.5 × 10-10 M至約1 × 10-9 M、約0.5 × 10-10 M至約0.5 × 10-9 M、約0.5 × 10-10 M至約1 × 10-10 M、約1 × 10-10 M至約1 × 10-5 M、約1 × 10-10 M至約0.5 × 10-5 M、約1 × 10-10 M至約1 × 10-6 M、約1 × 10-10 M至約0.5 × 10-6 M、約1 × 10-10 M至約1 × 10-7 M、約1 × 10-10 M至約0.5 × 10-7 M、約1 × 10-10 M至約1 × 10-8 M、約1 × 10-10 M至約0.5 × 10-8 M、約1 × 10-10 M至約1 × 10-9 M、約1 × 10-10 M至約0.5 × 10-9 M、約0.5 × 10-9 M至約1 × 10-5 M、約0.5 × 10-9 M至約0.5 × 10-5 M、約0.5 × 10-9 M至約1 × 10-6 M、約0.5 × 10-9 M至約0.5 × 10-6 M、約0.5 × 10-9 M至約1 × 10-7 M、約0.5 × 10-9 M至約0.5 × 10-7 M、約0.5 × 10-9 M至約1 × 10-8 M、約0.5 × 10-9 M至約0.5 × 10-8 M、約0.5 × 10-9 M至約1 × 10-9 M、約1 × 10-9 M至約1 × 10-5 M、約1 × 10-9 M至約0.5 × 10-5 M、約1 × 10-9 M至約1 × 10-6 M、約1 × 10-9 M至約0.5 × 10-6 M、約1 × 10-9 M至約1 × 10-7 M、約1 × 10-9 M至約0.5 × 10-7 M、約1 × 10-9 M至約1 × 10-8 M、約1 × 10-9 M至約0.5 × 10-8 M、約0.5 × 10-8 M至約1 × 10-5 M、約0.5 × 10-8 M至約0.5 × 10-5 M、約0.5 × 10-8 M至約1 × 10-6 M、約0.5 × 10-8 M至約0.5 × 10-6 M、約0.5 × 10-8 M至約1 × 10-7 M、約0.5 × 10-8 M至約0.5 × 10-7 M、約0.5 × 10-8 M至約1 × 10-8 M、約1 × 10-8 M至約1 × 10-5 M、約1 × 10-8 M至約0.5 × 10-5 M、約1 × 10-8 M至約1 × 10-6 M、約1 × 10-8 M至約0.5 × 10-6 M、約1 × 10-8 M至約1 × 10-7 M、約1 × 10-8 M至約0.5 × 10-7 M、約0.5 × 10-7 M至約1 × 10-5 M、約0.5 × 10-7 M至約0.5 × 10-5 M、約0.5 × 10-7 M至約1 × 10-6 M、約0.5 × 10-7 M至約0.5 × 10-6 M、約0.5 × 10-7 M至約1 × 10-7 M、約1 × 10-7 M至約1 × 10-5 M、約1 × 10-7 M至約0.5 × 10-5 M、約1 × 10-7 M至約1 × 10-6 M、約1 × 10-7 M至約0.5 × 10-6 M、約0.5 × 10-6 M至約1 × 10-5 M、約0.5 × 10-6 M至約0.5 × 10-5 M、約0.5 × 10-6 M至約1 × 10-6 M、約1 × 10-6 M至約1 × 10-5 M、約1 × 10-6 M至約0.5 × 10-5 M、或約0.5 × 10-5 M至約1 × 10-5 M (例如，如使用表面電漿共振所量測)。
第一 scFv 連接體及第二 scFv 連接體
在一些實施例中，第一scFv連接體及第二scFv連接體各自獨立地係1個胺基酸至約50個胺基酸、1個胺基酸至約48個胺基酸、1個胺基酸至約46個胺基酸、1個胺基酸至約44個胺基酸、1個胺基酸至約42個胺基酸、1個胺基酸至約40個胺基酸、1個胺基酸至約38個胺基酸、1個胺基酸至約36個胺基酸、1個胺基酸至約34個胺基酸、1個胺基酸至約32個胺基酸、1個胺基酸至約30個胺基酸、1個胺基酸至約28個胺基酸、1個胺基酸至約26個胺基酸、1個胺基酸至約24個胺基酸、1個胺基酸至約22個胺基酸、1個胺基酸至約20個胺基酸、1個胺基酸至約18個胺基酸、1個胺基酸至約16個胺基酸、1個胺基酸至約14個胺基酸、1個胺基酸至約12個胺基酸、1個胺基酸至約10個胺基酸、1個胺基酸至約8個胺基酸、1個胺基酸至約6個胺基酸、1個胺基酸至約4個胺基酸、1個胺基酸至約3個胺基酸、約2個胺基酸至約50個胺基酸、約2個胺基酸至約48個胺基酸、約2個胺基酸至約46個胺基酸、約2個胺基酸至約44個胺基酸、約2個胺基酸至約42個胺基酸、約2個胺基酸至約40個胺基酸、約2個胺基酸至約38個胺基酸、約2個胺基酸至約36個胺基酸、約2個胺基酸至約34個胺基酸、約2個胺基酸至約32個胺基酸、約2個胺基酸至約30個胺基酸、約2個胺基酸至約28個胺基酸、約2個胺基酸至約26個胺基酸、約2個胺基酸至約24個胺基酸、約2個胺基酸至約22個胺基酸、約2個胺基酸至約20個胺基酸、約2個胺基酸至約18個胺基酸、約2個胺基酸至約16個胺基酸、約2個胺基酸至約14個胺基酸、約2個胺基酸至約12個胺基酸、約2個胺基酸至約10個胺基酸、約2個胺基酸至約8個胺基酸、約2個胺基酸至約6個胺基酸、約2個胺基酸至約4個胺基酸、約4個胺基酸至約50個胺基酸、約4個胺基酸至約48個胺基酸、約4個胺基酸至約46個胺基酸、約4個胺基酸至約44個胺基酸、約4個胺基酸至約42個胺基酸、約4個胺基酸至約40個胺基酸、約4個胺基酸至約38個胺基酸、約4個胺基酸至約36個胺基酸、約4個胺基酸至約34個胺基酸、約4個胺基酸至約32個胺基酸、約4個胺基酸至約30個胺基酸、約4個胺基酸至約28個胺基酸、約4個胺基酸至約26個胺基酸、約4個胺基酸至約24個胺基酸、約4個胺基酸至約22個胺基酸、約4個胺基酸至約20個胺基酸、約4個胺基酸至約18個胺基酸、約4個胺基酸至約16個胺基酸、約4個胺基酸至約14個胺基酸、約4個胺基酸至約12個胺基酸、約4個胺基酸至約10個胺基酸、約4個胺基酸至約8個胺基酸、約4個胺基酸至約6個胺基酸、約6個胺基酸至約50個胺基酸、約6個胺基酸至約48個胺基酸、約6個胺基酸至約46個胺基酸、約6個胺基酸至約44個胺基酸、約6個胺基酸至約42個胺基酸、約6個胺基酸至約40個胺基酸、約6個胺基酸至約38個胺基酸、約6個胺基酸至約36個胺基酸、約6個胺基酸至約34個胺基酸、約6個胺基酸至約32個胺基酸、約6個胺基酸至約30個胺基酸、約6個胺基酸至約28個胺基酸、約6個胺基酸至約26個胺基酸、約6個胺基酸至約24個胺基酸、約6個胺基酸至約22個胺基酸、約6個胺基酸至約20個胺基酸、約6個胺基酸至約18個胺基酸、約6個胺基酸至約16個胺基酸、約6個胺基酸至約14個胺基酸、約6個胺基酸至約12個胺基酸、約6個胺基酸至約10個胺基酸、約6個胺基酸至約8個胺基酸、約8個胺基酸至約50個胺基酸、約8個胺基酸至約48個胺基酸、約8個胺基酸至約46個胺基酸、約8個胺基酸至約44個胺基酸、約8個胺基酸至約42個胺基酸、約8個胺基酸至約40個胺基酸、約8個胺基酸至約38個胺基酸、約8個胺基酸至約36個胺基酸、約8個胺基酸至約34個胺基酸、約8個胺基酸至約32個胺基酸、約8個胺基酸至約30個胺基酸、約8個胺基酸至約28個胺基酸、約8個胺基酸至約26個胺基酸、約8個胺基酸至約24個胺基酸、約8個胺基酸至約22個胺基酸、約8個胺基酸至約20個胺基酸、約8個胺基酸至約18個胺基酸、約8個胺基酸至約16個胺基酸、約8個胺基酸至約14個胺基酸、約8個胺基酸至約12個胺基酸、約8個胺基酸至約10個胺基酸、約10個胺基酸至約50個胺基酸、約10個胺基酸至約48個胺基酸、約10個胺基酸至約46個胺基酸、約10個胺基酸至約44個胺基酸、約10個胺基酸至約42個胺基酸、約10個胺基酸至約40個胺基酸、約10個胺基酸至約38個胺基酸、約10個胺基酸至約36個胺基酸、約10個胺基酸至約34個胺基酸、約10個胺基酸至約32個胺基酸、約10個胺基酸至約30個胺基酸、約10個胺基酸至約28個胺基酸、約10個胺基酸至約26個胺基酸、約10個胺基酸至約24個胺基酸、約10個胺基酸至約22個胺基酸、約10個胺基酸至約20個胺基酸、約10個胺基酸至約18個胺基酸、約10個胺基酸至約16個胺基酸、約10個胺基酸至約14個胺基酸、約10個胺基酸至約12個胺基酸、約12個胺基酸至約50個胺基酸、約12個胺基酸至約48個胺基酸、約12個胺基酸至約46個胺基酸、約12個胺基酸至約44個胺基酸、約12個胺基酸至約42個胺基酸、約12個胺基酸至約40個胺基酸、約12個胺基酸至約38個胺基酸、約12個胺基酸至約36個胺基酸、約12個胺基酸至約34個胺基酸、約12個胺基酸至約32個胺基酸、約12個胺基酸至約30個胺基酸、約12個胺基酸至約28個胺基酸、約12個胺基酸至約26個胺基酸、約12個胺基酸至約24個胺基酸、約12個胺基酸至約22個胺基酸、約12個胺基酸至約20個胺基酸、約12個胺基酸至約18個胺基酸、約12個胺基酸至約16個胺基酸、約12個胺基酸至約14個胺基酸、約14個胺基酸至約50個胺基酸、約14個胺基酸至約48個胺基酸、約14個胺基酸至約46個胺基酸、約14個胺基酸至約44個胺基酸、約14個胺基酸至約42個胺基酸、約14個胺基酸至約40個胺基酸、約14個胺基酸至約38個胺基酸、約14個胺基酸至約36個胺基酸、約14個胺基酸至約34個胺基酸、約14個胺基酸至約32個胺基酸、約14個胺基酸至約30個胺基酸、約14個胺基酸至約28個胺基酸、約14個胺基酸至約26個胺基酸、約14個胺基酸至約24個胺基酸、約14個胺基酸至約22個胺基酸、約14個胺基酸至約20個胺基酸、約14個胺基酸至約18個胺基酸、約14個胺基酸至約16個胺基酸、約16個胺基酸至約50個胺基酸、約16個胺基酸至約48個胺基酸、約16個胺基酸至約46個胺基酸、約16個胺基酸至約44個胺基酸、約16個胺基酸至約42個胺基酸、約16個胺基酸至約40個胺基酸、約16個胺基酸至約38個胺基酸、約16個胺基酸至約36個胺基酸、約16個胺基酸至約34個胺基酸、約16個胺基酸至約32個胺基酸、約16個胺基酸至約30個胺基酸、約16個胺基酸至約28個胺基酸、約16個胺基酸至約26個胺基酸、約16個胺基酸至約24個胺基酸、約16個胺基酸至約22個胺基酸、約16個胺基酸至約20個胺基酸、約16個胺基酸至約18個胺基酸、約18個胺基酸至約50個胺基酸、約18個胺基酸至約48個胺基酸、約18個胺基酸至約46個胺基酸、約18個胺基酸至約44個胺基酸、約18個胺基酸至約42個胺基酸、約18個胺基酸至約40個胺基酸、約18個胺基酸至約38個胺基酸、約18個胺基酸至約36個胺基酸、約18個胺基酸至約34個胺基酸、約18個胺基酸至約32個胺基酸、約18個胺基酸至約30個胺基酸、約18個胺基酸至約28個胺基酸、約18個胺基酸至約26個胺基酸、約18個胺基酸至約24個胺基酸、約18個胺基酸至約22個胺基酸、約18個胺基酸至約20個胺基酸、約20個胺基酸至約50個胺基酸、約20個胺基酸至約48個胺基酸、約20個胺基酸至約46個胺基酸、約20個胺基酸至約44個胺基酸、約20個胺基酸至約42個胺基酸、約20個胺基酸至約40個胺基酸、約20個胺基酸至約38個胺基酸、約20個胺基酸至約36個胺基酸、約20個胺基酸至約34個胺基酸、約20個胺基酸至約32個胺基酸、約20個胺基酸至約30個胺基酸、約20個胺基酸至約28個胺基酸、約20個胺基酸至約26個胺基酸、約20個胺基酸至約24個胺基酸、約20個胺基酸至約22個胺基酸、約22個胺基酸至約50個胺基酸、約22個胺基酸至約48個胺基酸、約22個胺基酸至約46個胺基酸、約22個胺基酸至約44個胺基酸、約22個胺基酸至約42個胺基酸、約22個胺基酸至約40個胺基酸、約22個胺基酸至約38個胺基酸、約22個胺基酸至約36個胺基酸、約22個胺基酸至約34個胺基酸、約22個胺基酸至約32個胺基酸、約22個胺基酸至約30個胺基酸、約22個胺基酸至約28個胺基酸、約22個胺基酸至約26個胺基酸、約22個胺基酸至約24個胺基酸、約24個胺基酸至約50個胺基酸、約24個胺基酸至約48個胺基酸、約24個胺基酸至約46個胺基酸、約24個胺基酸至約44個胺基酸、約24個胺基酸至約42個胺基酸、約24個胺基酸至約40個胺基酸、約24個胺基酸至約38個胺基酸、約24個胺基酸至約36個胺基酸、約24個胺基酸至約34個胺基酸、約24個胺基酸至約32個胺基酸、約24個胺基酸至約30個胺基酸、約24個胺基酸至約28個胺基酸、約24個胺基酸至約26個胺基酸、約26個胺基酸至約50個胺基酸、約26個胺基酸至約48個胺基酸、約26個胺基酸至約46個胺基酸、約26個胺基酸至約44個胺基酸、約26個胺基酸至約42個胺基酸、約26個胺基酸至約40個胺基酸、約26個胺基酸至約38個胺基酸、約26個胺基酸至約36個胺基酸、約26個胺基酸至約34個胺基酸、約26個胺基酸至約32個胺基酸、約26個胺基酸至約30個胺基酸、約26個胺基酸至約28個胺基酸、約28個胺基酸至約50個胺基酸、約28個胺基酸至約48個胺基酸、約28個胺基酸至約46個胺基酸、約28個胺基酸至約44個胺基酸、約28個胺基酸至約42個胺基酸、約28個胺基酸至約40個胺基酸、約28個胺基酸至約38個胺基酸、約28個胺基酸至約36個胺基酸、約28個胺基酸至約34個胺基酸、約28個胺基酸至約32個胺基酸、約28個胺基酸至約30個胺基酸、約30個胺基酸至約50個胺基酸、約30個胺基酸至約48個胺基酸、約30個胺基酸至約46個胺基酸、約30個胺基酸至約44個胺基酸、約30個胺基酸至約42個胺基酸、約30個胺基酸至約40個胺基酸、約30個胺基酸至約38個胺基酸、約30個胺基酸至約36個胺基酸、約30個胺基酸至約34個胺基酸、約30個胺基酸至約32個胺基酸、約32個胺基酸至約50個胺基酸、約32個胺基酸至約48個胺基酸、約32個胺基酸至約46個胺基酸、約32個胺基酸至約44個胺基酸、約32個胺基酸至約42個胺基酸、約32個胺基酸至約40個胺基酸、約32個胺基酸至約38個胺基酸、約32個胺基酸至約36個胺基酸、約32個胺基酸至約34個胺基酸、約34個胺基酸至約50個胺基酸、約34個胺基酸至約48個胺基酸、約34個胺基酸至約46個胺基酸、約34個胺基酸至約44個胺基酸、約34個胺基酸至約42個胺基酸、約34個胺基酸至約40個胺基酸、約34個胺基酸至約38個胺基酸、約34個胺基酸至約36個胺基酸、約36個胺基酸至約50個胺基酸、約36個胺基酸至約48個胺基酸、約36個胺基酸至約46個胺基酸、約36個胺基酸至約44個胺基酸、約36個胺基酸至約42個胺基酸、約36個胺基酸至約40個胺基酸、約36個胺基酸至約38個胺基酸、約38個胺基酸至約50個胺基酸、約38個胺基酸至約48個胺基酸、約38個胺基酸至約46個胺基酸、約38個胺基酸至約44個胺基酸、約38個胺基酸至約42個胺基酸、約38個胺基酸至約40個胺基酸、約40個胺基酸至約50個胺基酸、約40個胺基酸至約48個胺基酸、約40個胺基酸至約46個胺基酸、約40個胺基酸至約44個胺基酸、約40個胺基酸至約42個胺基酸、約42個胺基酸至約50個胺基酸、約42個胺基酸至約48個胺基酸、約42個胺基酸至約46個胺基酸、約42個胺基酸至約44個胺基酸、約44個胺基酸至約50個胺基酸、約44個胺基酸至約48個胺基酸、約44個胺基酸至約46個胺基酸、約46個胺基酸至約50個胺基酸、約46個胺基酸至約48個胺基酸或約48個胺基酸至約50個胺基酸。
在一些實施例中，第一scFv連接體及第二scFv連接體可各自獨立地為或包含(SG)n 之序列，其中n可為1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25。在一些實施例中，第一scFv連接體及第二scFv連接體可各自獨立地為或包含(GS)n 之序列，其中n可為1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25。
在一些實施例中，第一scFv連接體及第二scFv連接體可各自獨立地為或包含(SGGS)n 之序列，其中n可為1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12或13。在一些實施例中，第一scFv連接體及第二scFv連接體可各自獨立地為或包含(SGGGS)n 之序列，其中n可為1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一些實施例中，第一scFv連接體及第二scFv連接體可各自獨立地為或包含(SGGGGS)n之序列，其中n可為1、2、3、4、5、6、7、8或9。
在一些實施例中，第一scFv連接體及/或第二scFv連接體可為或包括SGGGGSGGGGSGGGG(SEQ ID NO: 21)之序列。
在一些實施例中，第一scFv連接體及/或第二scFv連接體可為或包括ASTKGPSVFPLAPSSSGSG (SEQ ID NO: 22)之序列。
在一些實施例中，第一scFv連接體及/或第二scFv連接體可為或包括GGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 23)之序列。
在一些實施例中，第一scFv連接體及/或第二scFv連接體可為Whitlow連接體。在一些實施例中，Whitlow連接體具有GSTSGSGKPGSGEGSTKG (SEQ ID NO: 12)之胺基酸序列或編碼ggcagcaccagcggcagcggcaaaccgggcagcggcgaaggcagcaccaaaggc (SEQ ID NO: 24)之Whitlow連接體序列之核苷酸序列。
在一些實施例中，第一scFv連接體及/或第二scFv連接體可為(G4 S)5連接體。在一些實施例中，(G4 S)5連接體具有GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 25)之胺基酸序列或編碼ggcggtggtggttctggaggcggtggcagcggtggaggtggctcaggaggaggaggta gcggcggcggagggagt (SEQ ID NO: 26)之(G4 S)5連接體序列之核苷酸序列。
在一些實施例中，第一scFv連接體及第二scFv連接體可為或包括相同序列。在一些實施例中，第一scFv連接體及第二scFv連接體可為或包括不同序列。
業內已知第一scFv連接體及第二scFv連接體之額外態樣及實例。
連接體
在一些實施例中，第一抗原結合結構域與第二抗原結合結構域之間之連接體可為1個胺基酸至約250個胺基酸、1個胺基酸至約240個胺基酸、1個胺基酸至約230個胺基酸、1個胺基酸至約220個胺基酸、1個胺基酸至約210個胺基酸、1個胺基酸至約200個胺基酸、1個胺基酸至約190個胺基酸、1個胺基酸至約180個胺基酸、1個胺基酸至約170個胺基酸、1個胺基酸至約160個胺基酸、1個胺基酸至約150個胺基酸、1個胺基酸至約140個胺基酸、1個胺基酸至約130個胺基酸、1個胺基酸至約120個胺基酸、1個胺基酸至約110個胺基酸、1個胺基酸至約100個胺基酸、1個胺基酸至約95個胺基酸、1個胺基酸至約90個胺基酸、1個胺基酸至約85個胺基酸、1個胺基酸至約80個胺基酸、1個胺基酸至約75個胺基酸、1個胺基酸至約70個胺基酸、1個胺基酸至約65個胺基酸、1個胺基酸至約60個胺基酸、1個胺基酸至約55個胺基酸、1個胺基酸至約50個胺基酸、1個胺基酸至約45個胺基酸、1個胺基酸至約40個胺基酸、1個胺基酸至約35個胺基酸、1個胺基酸至約30個胺基酸、1個胺基酸至約25個胺基酸、1個胺基酸至約20個胺基酸、1個胺基酸至約15個胺基酸、1個胺基酸至約10個胺基酸、1個胺基酸至約5個胺基酸、約5個胺基酸至約250個胺基酸、約5個胺基酸至約240個胺基酸、約5個胺基酸至約230個胺基酸、約5個胺基酸至約220個胺基酸、約5個胺基酸至約210個胺基酸、約5個胺基酸至約200個胺基酸、約5個胺基酸至約190個胺基酸、約5個胺基酸至約180個胺基酸、約5個胺基酸至約170個胺基酸、約5個胺基酸至約160個胺基酸、約5個胺基酸至約150個胺基酸、約5個胺基酸至約140個胺基酸、約5個胺基酸至約130個胺基酸、約5個胺基酸至約120個胺基酸、約5個胺基酸至約110個胺基酸、約5個胺基酸至約100個胺基酸、約5個胺基酸至約95個胺基酸、約5個胺基酸至約90個胺基酸、約5個胺基酸至約85個胺基酸、約5個胺基酸至約80個胺基酸、約5個胺基酸至約75個胺基酸、約5個胺基酸至約70個胺基酸、約5個胺基酸至約65個胺基酸、約5個胺基酸至約60個胺基酸、約5個胺基酸至約55個胺基酸、約5個胺基酸至約50個胺基酸、約5個胺基酸至約45個胺基酸、約5個胺基酸至約40個胺基酸、約5個胺基酸至約35個胺基酸、約5個胺基酸至約30個胺基酸、約5個胺基酸至約25個胺基酸、約5個胺基酸至約20個胺基酸、約5個胺基酸至約15個胺基酸、約5個胺基酸至約10個胺基酸、約10個胺基酸至約250個胺基酸、約10個胺基酸至約240個胺基酸、約10個胺基酸至約230個胺基酸、約10個胺基酸至約220個胺基酸、約10個胺基酸至約210個胺基酸、約10個胺基酸至約200個胺基酸、約10個胺基酸至約190個胺基酸、約10個胺基酸至約180個胺基酸、約10個胺基酸至約170個胺基酸、約10個胺基酸至約160個胺基酸、約10個胺基酸至約150個胺基酸、約10個胺基酸至約140個胺基酸、約10個胺基酸至約130個胺基酸、約10個胺基酸至約120個胺基酸、約10個胺基酸至約110個胺基酸、約10個胺基酸至約100個胺基酸、約10個胺基酸至約95個胺基酸、約10個胺基酸至約90個胺基酸、約10個胺基酸至約85個胺基酸、約10個胺基酸至約80個胺基酸、約10個胺基酸至約75個胺基酸、約10個胺基酸至約70個胺基酸、約10個胺基酸至約65個胺基酸、約10個胺基酸至約60個胺基酸、約10個胺基酸至約55個胺基酸、約10個胺基酸至約50個胺基酸、約10個胺基酸至約45個胺基酸、約10個胺基酸至約40個胺基酸、約10個胺基酸至約35個胺基酸、約10個胺基酸至約30個胺基酸、約10個胺基酸至約25個胺基酸、約10個胺基酸至約20個胺基酸、約10個胺基酸至約15個胺基酸、約15個胺基酸至約250個胺基酸、約15個胺基酸至約240個胺基酸、約15個胺基酸至約230個胺基酸、約15個胺基酸至約220個胺基酸、約15個胺基酸至約210個胺基酸、約15個胺基酸至約200個胺基酸、約15個胺基酸至約190個胺基酸、約15個胺基酸至約180個胺基酸、約15個胺基酸至約170個胺基酸、約15個胺基酸至約160個胺基酸、約15個胺基酸至約150個胺基酸、約15個胺基酸至約140個胺基酸、約15個胺基酸至約130個胺基酸、約15個胺基酸至約120個胺基酸、約15個胺基酸至約110個胺基酸、約15個胺基酸至約100個胺基酸、約15個胺基酸至約95個胺基酸、約15個胺基酸至約90個胺基酸、約15個胺基酸至約85個胺基酸、約15個胺基酸至約80個胺基酸、約15個胺基酸至約75個胺基酸、約15個胺基酸至約70個胺基酸、約15個胺基酸至約65個胺基酸、約15個胺基酸至約60個胺基酸、約15個胺基酸至約55個胺基酸、約15個胺基酸至約50個胺基酸、約15個胺基酸至約45個胺基酸、約15個胺基酸至約40個胺基酸、約15個胺基酸至約35個胺基酸、約15個胺基酸至約30個胺基酸、約15個胺基酸至約25個胺基酸、約15個胺基酸至約20個胺基酸、約20個胺基酸至約250個胺基酸、約20個胺基酸至約240個胺基酸、約20個胺基酸至約230個胺基酸、約20個胺基酸至220個胺基酸、約20個胺基酸至約210個胺基酸、約20個胺基酸至約200個胺基酸、約20個胺基酸至約190個胺基酸、約20個胺基酸至約180個胺基酸、約20個胺基酸至約170個胺基酸、約20個胺基酸至約160個胺基酸、約20個胺基酸至約150個胺基酸、約20個胺基酸至約140個胺基酸、約20個胺基酸至約130個胺基酸、約20個胺基酸至約120個胺基酸、約20個胺基酸至約110個胺基酸、約20個胺基酸至約100個胺基酸、約20個胺基酸至約95個胺基酸、約20個胺基酸至約90個胺基酸、約20個胺基酸至約85個胺基酸、約20個胺基酸至約80個胺基酸、約20個胺基酸至約75個胺基酸、約20個胺基酸至約70個胺基酸、約20個胺基酸至約65個胺基酸、約20個胺基酸至約60個胺基酸、約20個胺基酸至約55個胺基酸、約20個胺基酸至約50個胺基酸、約20個胺基酸至約45個胺基酸、約20個胺基酸至約40個胺基酸、約20個胺基酸至約35個胺基酸、約20個胺基酸至約30個胺基酸、約20個胺基酸至約25個胺基酸、約25個胺基酸至約250個胺基酸、約25個胺基酸至約240個胺基酸、約25個胺基酸至約230個胺基酸、約25個胺基酸至約220個胺基酸、約25個胺基酸至約210個胺基酸、約25個胺基酸至約200個胺基酸、約25個胺基酸至約190個胺基酸、約25個胺基酸至約180個胺基酸、約25個胺基酸至約170個胺基酸、約25個胺基酸至約160個胺基酸、約25個胺基酸至約150個胺基酸、約25個胺基酸至約140個胺基酸、約25個胺基酸至約130個胺基酸、約25個胺基酸至約120個胺基酸、約25個胺基酸至約110個胺基酸、約25個胺基酸至約100個胺基酸、約25個胺基酸至約95個胺基酸、約25個胺基酸至約90個胺基酸、約25個胺基酸至約85個胺基酸、約25個胺基酸至約80個胺基酸、約25個胺基酸至約75個胺基酸、約25個胺基酸至約70個胺基酸、約25個胺基酸至約65個胺基酸、約25個胺基酸至約60個胺基酸、約25個胺基酸至約55個胺基酸、約25個胺基酸至約50個胺基酸、約25個胺基酸至約45個胺基酸、約25個胺基酸至約40個胺基酸、約25個胺基酸至約35個胺基酸、約25個胺基酸至約30個胺基酸、約30個胺基酸至約250個胺基酸、約30個胺基酸至約240個胺基酸、約30個胺基酸至約230個胺基酸、約30個胺基酸至約220個胺基酸、約30個胺基酸至約210個胺基酸、約30個胺基酸至約200個胺基酸、約30個胺基酸至約190個胺基酸、約30個胺基酸至約180個胺基酸、約30個胺基酸至約170個胺基酸、約30個胺基酸至約160個胺基酸、約30個胺基酸至約150個胺基酸、約30個胺基酸至約140個胺基酸、約30個胺基酸至約130個胺基酸、約30個胺基酸至約120個胺基酸、約30個胺基酸至約110個胺基酸、約30個胺基酸至約100個胺基酸、約30個胺基酸至約95個胺基酸、約30個胺基酸至約90個胺基酸、約30個胺基酸至約85個胺基酸、約30個胺基酸至約80個胺基酸、約30個胺基酸至約75個胺基酸、約30個胺基酸至約70個胺基酸、約30個胺基酸至約65個胺基酸、約30個胺基酸至約60個胺基酸、約30個胺基酸至約55個胺基酸、約30個胺基酸至約50個胺基酸、約30個胺基酸至約45個胺基酸、約30個胺基酸至約40個胺基酸、約30個胺基酸至約35個胺基酸、約35個胺基酸至約250個胺基酸、約35個胺基酸至約240個胺基酸、約35個胺基酸至約230個胺基酸、約35個胺基酸至約220個胺基酸、約35個胺基酸至約210個胺基酸、約35個胺基酸至約200個胺基酸、約35個胺基酸至約190個胺基酸、約35個胺基酸至約180個胺基酸、約35個胺基酸至約170個胺基酸、約35個胺基酸至約160個胺基酸、約35個胺基酸至約150個胺基酸、約35個胺基酸至約140個胺基酸、約35個胺基酸至約130個胺基酸、約35個胺基酸至約120個胺基酸、約35個胺基酸至約110個胺基酸、約35個胺基酸至約100個胺基酸、約35個胺基酸至約95個胺基酸、約35個胺基酸至約90個胺基酸、約35個胺基酸至約85個胺基酸、約35個胺基酸至約80個胺基酸、約35個胺基酸至約75個胺基酸、約35個胺基酸至約70個胺基酸、約35個胺基酸至約65個胺基酸、約35個胺基酸至約60個胺基酸、約35個胺基酸至約55個胺基酸、約35個胺基酸至約50個胺基酸、約35個胺基酸至約45個胺基酸、約35個胺基酸至約40個胺基酸、約40個胺基酸至約250個胺基酸、約40個胺基酸至約240個胺基酸、約40個胺基酸至約230個胺基酸、約40個胺基酸至約220個胺基酸、約40個胺基酸至約210個胺基酸、約40個胺基酸至約200個胺基酸、約40個胺基酸至約190個胺基酸、約40個胺基酸至約180個胺基酸、約40個胺基酸至約170個胺基酸、約40個胺基酸至約160個胺基酸、約40個胺基酸至約150個胺基酸、約40個胺基酸至約140個胺基酸、約40個胺基酸至約130個胺基酸、約40個胺基酸至約120個胺基酸、約40個胺基酸至約110個胺基酸、約40個胺基酸至約100個胺基酸、約40個胺基酸至約95個胺基酸、約40個胺基酸至約90個胺基酸、約40個胺基酸至約85個胺基酸、約40個胺基酸至約80個胺基酸、約40個胺基酸至約75個胺基酸、約40個胺基酸至約70個胺基酸、約40個胺基酸至約65個胺基酸、約40個胺基酸至約60個胺基酸、約40個胺基酸至約55個胺基酸、約40個胺基酸至約50個胺基酸、約40個胺基酸至約45個胺基酸、約45個胺基酸至約250個胺基酸、約45個胺基酸至約240個胺基酸、約45個胺基酸至約230個胺基酸、約45個胺基酸至約220個胺基酸、約45個胺基酸至約210個胺基酸、約45個胺基酸至約200個胺基酸、約45個胺基酸至約190個胺基酸、約45個胺基酸至約180個胺基酸、約45個胺基酸至約170個胺基酸、約45個胺基酸至約160個胺基酸、約45個胺基酸至約150個胺基酸、約45個胺基酸至約140個胺基酸、約45個胺基酸至約130個胺基酸、約45個胺基酸至約120個胺基酸、約45個胺基酸至約110個胺基酸、約45個胺基酸至約100個胺基酸、約45個胺基酸至約95個胺基酸、約45個胺基酸至約90個胺基酸、約45個胺基酸至約85個胺基酸、約45個胺基酸至約80個胺基酸、約45個胺基酸至約75個胺基酸、約45個胺基酸至約70個胺基酸、約45個胺基酸至約65個胺基酸、約45個胺基酸至約60個胺基酸、約45個胺基酸至約55個胺基酸、約45個胺基酸至約50個胺基酸、約50個胺基酸至約250個胺基酸、約50個胺基酸至約240個胺基酸、約50個胺基酸至約230個胺基酸、約50個胺基酸至約220個胺基酸、約50個胺基酸至約210個胺基酸、約50個胺基酸至約200個胺基酸、約50個胺基酸至約190個胺基酸、約50個胺基酸至約180個胺基酸、約50個胺基酸至約170個胺基酸、約50個胺基酸至約160個胺基酸、約50個胺基酸至約150個胺基酸、約50個胺基酸至約140個胺基酸、約50個胺基酸至約130個胺基酸、約50個胺基酸至約120個胺基酸、約50個胺基酸至約110個胺基酸、約50個胺基酸至約100個胺基酸、約50個胺基酸至約95個胺基酸、約50個胺基酸至約90個胺基酸、約50個胺基酸至約85個胺基酸、約50個胺基酸至約80個胺基酸、約50個胺基酸至約75個胺基酸、約50個胺基酸至約70個胺基酸、約50個胺基酸至約65個胺基酸、約50個胺基酸至約60個胺基酸、約50個胺基酸至約55個胺基酸、約55個胺基酸至約250個胺基酸、約55個胺基酸至約240個胺基酸、約55個胺基酸至約230個胺基酸、約55個胺基酸至約220個胺基酸、約55個胺基酸至約210個胺基酸、約55個胺基酸至約200個胺基酸、約55個胺基酸至約190個胺基酸、約55個胺基酸至約180個胺基酸、約55個胺基酸至約170個胺基酸、約55個胺基酸至約160個胺基酸、約55個胺基酸至約150個胺基酸、約55個胺基酸至約140個胺基酸、約55個胺基酸至約130個胺基酸、約55個胺基酸至約120個胺基酸、約55個胺基酸至約110個胺基酸、約55個胺基酸至約100個胺基酸、約55個胺基酸至約95個胺基酸、約55個胺基酸至約90個胺基酸、約55個胺基酸至約85個胺基酸、約55個胺基酸至約80個胺基酸、約55個胺基酸至約75個胺基酸、約55個胺基酸至約70個胺基酸、約55個胺基酸至約65個胺基酸、約55個胺基酸至約60個胺基酸、約60個胺基酸至約250個胺基酸、約60個胺基酸至約240個胺基酸、約60個胺基酸至約230個胺基酸、約60個胺基酸至約220個胺基酸、約60個胺基酸至約210個胺基酸、約60個胺基酸至約200個胺基酸、約60個胺基酸至約190個胺基酸、約60個胺基酸至約180個胺基酸、約60個胺基酸至約170個胺基酸、約60個胺基酸至約160個胺基酸、約60個胺基酸至約150個胺基酸、約60個胺基酸至約140個胺基酸、約60個胺基酸至約130個胺基酸、約60個胺基酸至約120個胺基酸、約60個胺基酸至約110個胺基酸、約60個胺基酸至約100個胺基酸、約60個胺基酸至約95個胺基酸、約60個胺基酸至約90個胺基酸、約60個胺基酸至約85個胺基酸、約60個胺基酸至約80個胺基酸、約60個胺基酸至約75個胺基酸、約60個胺基酸至約70個胺基酸、約60個胺基酸至約65個胺基酸、約65個胺基酸至約250個胺基酸、約65個胺基酸至約240個胺基酸、約65個胺基酸至約230個胺基酸、約65個胺基酸至約220個胺基酸、約65個胺基酸至約210個胺基酸、約65個胺基酸至約200個胺基酸、約65個胺基酸至約190個胺基酸、約65個胺基酸至約180個胺基酸、約65個胺基酸至約170個胺基酸、約65個胺基酸至約160個胺基酸、約65個胺基酸至約150個胺基酸、約65個胺基酸至約140個胺基酸、約65個胺基酸至約130個胺基酸、約65個胺基酸至約120個胺基酸、約65個胺基酸至約110個胺基酸、約65個胺基酸至約100個胺基酸、約65個胺基酸至約95個胺基酸、約65個胺基酸至約90個胺基酸、約65個胺基酸至約85個胺基酸、約65個胺基酸至約80個胺基酸、約65個胺基酸至約75個胺基酸、約65個胺基酸至約70個胺基酸、約70個胺基酸至約250個胺基酸、約70個胺基酸至約240個胺基酸、約70個胺基酸至約230個胺基酸、約70個胺基酸至約220個胺基酸、約70個胺基酸至約210個胺基酸、約70個胺基酸至約200個胺基酸、約70個胺基酸至約190個胺基酸、約70個胺基酸至約180個胺基酸、約70個胺基酸至約170個胺基酸、約70個胺基酸至約160個胺基酸、約70個胺基酸至約150個胺基酸、約70個胺基酸至約140個胺基酸、約70個胺基酸至約130個胺基酸、約70個胺基酸至約120個胺基酸、約70個胺基酸至約110個胺基酸、約70個胺基酸至約100個胺基酸、約70個胺基酸至約95個胺基酸、約70個胺基酸至約90個胺基酸、約70個胺基酸至約85個胺基酸、約70個胺基酸至約80個胺基酸、約70個胺基酸至約75個胺基酸、約75個胺基酸至約250個胺基酸、約75個胺基酸至約240個胺基酸、約75個胺基酸至約230個胺基酸、約75個胺基酸至約220個胺基酸、約75個胺基酸至約210個胺基酸、約75個胺基酸至約200個胺基酸、約75個胺基酸至約190個胺基酸、約75個胺基酸至約180個胺基酸、約75個胺基酸至約170個胺基酸、約75個胺基酸至約160個胺基酸、約75個胺基酸至約150個胺基酸、約75個胺基酸至約140個胺基酸、約75個胺基酸至約130個胺基酸、約75個胺基酸至約120個胺基酸、約75個胺基酸至約110個胺基酸、約75個胺基酸至約100個胺基酸、約75個胺基酸至約95個胺基酸、約75個胺基酸至約90個胺基酸、約75個胺基酸至約85個胺基酸、約75個胺基酸至約80個胺基酸、約80個胺基酸至約250個胺基酸、約80個胺基酸至約240個胺基酸、約80個胺基酸至約230個胺基酸、約80個胺基酸至約220個胺基酸、約80個胺基酸至約210個胺基酸、約80個胺基酸至約200個胺基酸、約80個胺基酸至約190個胺基酸、約80個胺基酸至約180個胺基酸、約80個胺基酸至約170個胺基酸、約80個胺基酸至約160個胺基酸、約80個胺基酸至約150個胺基酸、約80個胺基酸至約140個胺基酸、約80個胺基酸至約130個胺基酸、約80個胺基酸至約120個胺基酸、約80個胺基酸至約110個胺基酸、約80個胺基酸至約100個胺基酸、約80個胺基酸至約95個胺基酸、約80個胺基酸至約90個胺基酸、約80個胺基酸至約85個胺基酸、約85個胺基酸至約250個胺基酸、約85個胺基酸至約240個胺基酸、約85個胺基酸至約230個胺基酸、約85個胺基酸至約220個胺基酸、約85個胺基酸至約210個胺基酸、約85個胺基酸至約200個胺基酸、約85個胺基酸至約190個胺基酸、約85個胺基酸至約180個胺基酸、約85個胺基酸至約170個胺基酸、約85個胺基酸至約160個胺基酸、約85個胺基酸至約150個胺基酸、約85個胺基酸至約140個胺基酸、約85個胺基酸至約130個胺基酸、約85個胺基酸至約120個胺基酸、約85個胺基酸至約110個胺基酸、約85個胺基酸至約100個胺基酸、約85個胺基酸至約95個胺基酸、約85個胺基酸至約90個胺基酸、約90個胺基酸至約250個胺基酸、約90個胺基酸至約240個胺基酸、約90個胺基酸至約230個胺基酸、約90個胺基酸至約220個胺基酸、約90個胺基酸至約210個胺基酸、約90個胺基酸至約200個胺基酸、約90個胺基酸至約190個胺基酸、約90個胺基酸至約180個胺基酸、約90個胺基酸至約170個胺基酸、約90個胺基酸至約160個胺基酸、約90個胺基酸至約150個胺基酸、約90個胺基酸至約140個胺基酸、約90個胺基酸至約130個胺基酸、約90個胺基酸至約120個胺基酸、約90個胺基酸至約110個胺基酸、約90個胺基酸至約100個胺基酸、約90個胺基酸至約95個胺基酸、約95個胺基酸至約250個胺基酸、約95個胺基酸至約240個胺基酸、約95個胺基酸至約230個胺基酸、約95個胺基酸至約220個胺基酸、約95個胺基酸至約210個胺基酸、約95個胺基酸至約200個胺基酸、約95個胺基酸至約190個胺基酸、約95個胺基酸至約180個胺基酸、約95個胺基酸至約170個胺基酸、約95個胺基酸至約160個胺基酸、約95個胺基酸至約150個胺基酸、約95個胺基酸至約140個胺基酸、約95個胺基酸至約130個胺基酸、約95個胺基酸至約120個胺基酸、約95個胺基酸至約110個胺基酸、約95個胺基酸至約100個胺基酸、約100個胺基酸至約250個胺基酸、約100個胺基酸至約240個胺基酸、約100個胺基酸至約230個胺基酸、約100個胺基酸至約220個胺基酸、約100個胺基酸至約210個胺基酸、約100個胺基酸至約200個胺基酸、約100個胺基酸至約190個胺基酸、約100個胺基酸至約180個胺基酸、約100個胺基酸至約170個胺基酸、約100個胺基酸至約160個胺基酸、約100個胺基酸至約150個胺基酸、約100個胺基酸至約140個胺基酸、約100個胺基酸至約130個胺基酸、約100個胺基酸至約120個胺基酸、約100個胺基酸至約110個胺基酸、約120個胺基酸至約250個胺基酸、約120個胺基酸至約240個胺基酸、約120個胺基酸至約230個胺基酸、約120個胺基酸至約220個胺基酸、約120個胺基酸至約210個胺基酸、約120個胺基酸至約200個胺基酸、約120個胺基酸至約190個胺基酸、約120個胺基酸至約180個胺基酸、約120個胺基酸至約170個胺基酸、約120個胺基酸至約160個胺基酸、約120個胺基酸至約150個胺基酸、約120個胺基酸至約140個胺基酸、約120個胺基酸至約130個胺基酸、約130個胺基酸至約250個胺基酸、約130個胺基酸至約240個胺基酸、約130個胺基酸至約230個胺基酸、約130個胺基酸至約220個胺基酸、約130個胺基酸至約210個胺基酸、約130個胺基酸至約200個胺基酸、約130個胺基酸至約190個胺基酸、約130個胺基酸至約180個胺基酸、約130個胺基酸至約170個胺基酸、約130個胺基酸至約160個胺基酸、約130個胺基酸至約150個胺基酸、約130個胺基酸至約140個胺基酸、約140個胺基酸至約250個胺基酸、約140個胺基酸至約240個胺基酸、約140個胺基酸至約230個胺基酸、約140個胺基酸至約220個胺基酸、約140個胺基酸至約210個胺基酸、約140個胺基酸至約200個胺基酸、約140個胺基酸至約190個胺基酸、約140個胺基酸至約180個胺基酸、約140個胺基酸至約170個胺基酸、約140個胺基酸至約160個胺基酸、約140個胺基酸至約150個胺基酸、約150個胺基酸至約250個胺基酸、約150個胺基酸至約240個胺基酸、約150個胺基酸至約230個胺基酸、約150個胺基酸至約220個胺基酸、約150個胺基酸至約210個胺基酸、約150個胺基酸至約200個胺基酸、約150個胺基酸至約190個胺基酸、約150個胺基酸至約180個胺基酸、約150個胺基酸至約170個胺基酸、約150個胺基酸至約160個胺基酸、約160個胺基酸至約250個胺基酸、約160個胺基酸至約240個胺基酸、約160個胺基酸至約230個胺基酸、約160個胺基酸至約220個胺基酸、約160個胺基酸至約210個胺基酸、約160個胺基酸至約200個胺基酸、約160個胺基酸至約190個胺基酸、約160個胺基酸至約180個胺基酸、約160個胺基酸至約170個胺基酸、約170個胺基酸至約250個胺基酸、約170個胺基酸至約240個胺基酸、約170個胺基酸至約230個胺基酸、約170個胺基酸至約220個胺基酸、約170個胺基酸至約210個胺基酸、約170個胺基酸至約200個胺基酸、約170個胺基酸至約190個胺基酸、約170個胺基酸至約180個胺基酸、約180個胺基酸至約250個胺基酸、約180個胺基酸至約240個胺基酸、約180個胺基酸至約230個胺基酸、約180個胺基酸至約220個胺基酸、約180個胺基酸至約210個胺基酸、約180個胺基酸至約200個胺基酸、約180個胺基酸至約190個胺基酸、約190個胺基酸至約250個胺基酸、約190個胺基酸至約240個胺基酸、約190個胺基酸至約230個胺基酸、約190個胺基酸至約220個胺基酸、約190個胺基酸至約210個胺基酸、約190個胺基酸至約200個胺基酸、約200個胺基酸至約250個胺基酸、約200個胺基酸至約240個胺基酸、約200個胺基酸至約230個胺基酸、約200個胺基酸至220個胺基酸、約200個胺基酸至約210個胺基酸、約210個胺基酸至約250個胺基酸、約210個胺基酸至約240個胺基酸、約210個胺基酸至約230個胺基酸、約210個胺基酸至約220個胺基酸、約220個胺基酸至約250個胺基酸、約220個胺基酸至約240個胺基酸、約220個胺基酸至約230個胺基酸、約230個胺基酸至約250個胺基酸、約230個胺基酸至約240個胺基酸或約240個胺基酸至約250個胺基酸。
在一些實施例中，連接體可為或可包括IgG1、IgG2、IgG3或IgG4 CH1、CH2及CH3結構域中之一或多者。在一些實施例中，連接體可為或可包括CH2-CH3人類IgG1結構域。在一些實施例中，CH2-CH3人類IgG1結構域具有以下序列：AEPKSPDKTHTCPPCPAPP VAGPSVFLFPPKPKDTLMIARTPEVTCWVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKKD (SEQ ID NO: 27)。
在一些實施例中，連接體可為或包括人類CD8細胞外序列中在人類CD8跨膜結構域近端之一部分。舉例而言，連接體可為或包括TTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDI (SEQ ID NO: 28)之人類CD8序列。
在一些實施例中，連接體可為或包括人類IgG1鉸鏈序列。在一些實施例中，人類IgG1鉸鏈序列係AEPKSPDKTHTCPPCPKDPK (SEQ ID NO: 29)。
在一些實施例中，連接體係或包括GS連接子。GS連接子之實例係(G4 S)5連接體。在一些實施例中，(G4 S)5連接體胺基酸序列係(SEQ ID NO: 25)，或編碼(G4S)5連接體(SEQ ID NO: 26)之核酸。
在一些實施例中，連接體具有α螺旋結構。在一些實施例中，連接體係捲曲螺旋結構域。業內已知連接體之額外態樣及實例。
BCMA
如本文所用「B細胞成熟蛋白(BCMA)」、「腫瘤壞死因子受體超家族成員17 (TNFRSF17)」及「CD269」可互換。BCMA基因編碼TNF超家族受體，一種在(例如)成熟B淋巴球及漿細胞中表現之蛋白質(例如，參見Laabi等人，Nucleic Acid Res. 22:1147-1154, 1994；及O’Connor等人，J. Exp. Med. 199: 91-97, 2004)。BCMA結合至B細胞活化因子(BAF)及增殖誘導配體(APRIL) (例如，參見Kalled,Immunol. Rev. 204: 43-54, 2005；Mackay等人，Ann. Rev. Immunol. 231-264, 2003)。BCMA在各種癌症中過表現，包括多發性骨髓瘤(Novak等人，Blood 103(2): 689-694, 2004)、神經膠母細胞瘤(Deshayes等人，Oncogene 23(17):3005-3012, 2004)、慢性淋巴球性白血病(Novak等人，Blood 100(8): 2973-2979, 2002)及霍奇金氏淋巴瘤(Hodgkin lymphoma) (Chiu等人，Blood 109(2): 729-739, 2007)。
下文提供BCMA之實例性序列及編碼BCMA之核酸之實例性序列。
人類 BCMA (SEQ ID NO: 30). 細胞外結構域以粗體顯示。
1mlqmagqcsq neyfdsllha cipcqlrcss ntppltcqry cnasvtnsvk gtna ilwtcl
61 glsliislav fvlmfllrki nseplkdefk ntgsgllgma nidleksrtg deiilprgle
121 ytveectced cikskpkvds dhcfplpame egatilvttk tndyckslpa alsateieks
181 isar
編碼人類 BCMA 之 cDNA (SEQ ID NO: 31). 編碼細胞外結構域之序列以粗體顯示。
1 aagactcaaa cttagaaact tgaattagat gtggtattca aatccttagc tgccgcgaag
61 acacagacag cccccgtaag aacccacgaa gcaggcgaag ttcattgttc tcaacattct
121 agctgctctt gctgcatttg ctctggaatt cttgtagaga tattacttgt ccttccaggc
181 tgttctttct gtagctccct tgttttcttt ttgtgatcat gttgcagatg gctgggcagt
241 gctcccaaaa tgaatatttt gacagtttgt tgcatgcttg cataccttgt caacttcgat
301 gttcttctaa tactcctcct ctaacatgtc agcgttattg taatgcaagt gtgaccaatt
361 cagtgaaagg aacgaatgcgattctctgga cctgtttggg actgagctta ataatttctt
421tggcagtttt cgtgctaatg tttttgctaa ggaagataaa ctctgaacca ttaaaggacg
481agtttaaaaa cacag gatca ggtctcctgg gcatggctaa cattgacctg gaaaagagca
541 ggactggtga tgaaattatt cttccgagag gcctcgagta cacggtggaa gaatgcacct
601 gtgaagactg catcaagagc aaaccgaagg tcgactctga ccattgcttt ccactcccag
661 ctatggagga aggcgcaacc attcttgtca ccacgaaaac gaatgactat tgcaagagcc
721 tgccagctgc tttgagtgct acggagatag agaaatcaat ttctgctagg taattaacca
781 tttcgactcg agcagtgcca ctttaaaaat cttttgtcag aatagatgat gtgtcagatc
841 tctttaggat gactgtattt ttcagttgcc gatacagctt tttgtcctct aactgtggaa
901 actctttatg ttagatatat ttctctaggt tactgttggg agcttaatgg tagaaacttc
961 cttggtttca tgattaaact cttttttttc ctga
人類 BCMA 轉錄物變體 4 (SEQ ID NO: 32)
1 mlqmagqcsq neyfdsllha cipcqlrcss ntppltcqry cnarsgllgm anidleksrt
61 gdeiilprgl eytveectce dcikskpkvd sdhcfplpam eegatilvtt ktndyckslp
121 aalsateiek sisar
編碼人類 BCMA 轉錄物變體 4 之 cDNA (SEQ ID NO: 33)
1 gttctcaaca ttctagctgc tcttgctgca tttgctctgg aattcttgta gagatattac
61 ttgtccttcc aggctgttct ttctgtagct cccttgtttt ctttttgtga tcatgttgca
121 gatggctggg cagtgctccc aaaatgaata ttttgacagt ttgttgcatg cttgcatacc
181 ttgtcaactt cgatgttctt ctaatactcc tcctctaaca tgtcagcgtt attgtaatgc
241 aagatcaggt ctcctgggca tggctaacat tgacctggaa aagagcagga ctggtgatga
301 aattattctt ccgagaggcc tcgagtacac ggtggaagaa tgcacctgtg aagactgcat
361 caagagcaaa ccgaaggtcg actctgacca ttgctttcca ctcccagcta tggaggaagg
421 cgcaaccatt cttgtcacca cgaaaacgaa tgactattgc aagagcctgc cagctgcttt
481 gagtgctacg gagatagaga aatcaatttc tgctaggtaa ttaaccattt cgactcgagc
541 agtgccactt taaaaatctt ttgtcagaat agatgatgtg tcagatctct ttaggatgac
601 tgtatttttc agttgccgat acagcttttt gtcctctaac tgtggaaact ctttatgtta
661 gatatatt
CD307e
如本文所用術語「Fc受體樣蛋白5 (FCRL5)」、「CD307」、「CD307e」、「10A8」、「1G7」、「FcRH5」及「免疫球蛋白超家族受體易位相關之2 (IRTA2)」可互換。FCRL5基因編碼免疫球蛋白受體超家族及Fc-受體樣家族之成員(一種在(例如) B細胞及漿細胞中表現之蛋白質)(參見例如Li等人，J. Immunol. 196(10): 4064-4074, 2016)。FCRL5與諸如以下等疾病相關：多發性骨髓瘤(Ise等人，Leukemia 21:169-174, 2007；及Elkins等人，Mol. Cancer Ther. 11:2222-2232, 2012)、毛細胞白血病(Janik,Leuk. Lymphoma 52:69-71, 2011)及柏基特淋巴瘤(Burkitt lymphoma) (Mohan等人，Blood 107(11):4433-4439, 2006)。
下文提供CD307e之實例性序列及編碼CD307e之核酸之實例性序列。
人類 CD307e 同種型 1 前體蛋白 (SEQ ID NO: 34). 信號序列加下劃線。成熟蛋白質中存在之細胞外結構域以粗體顯示。
1mllwvillvl apvsg qfart prpiiflqpp wttvfqgerv tltckgfrfy spqktkwyhr
61ylgkeilret pdnilevqes geyrcqaqgs plsspvhldf ssaslilqap lsvfegdsvv
121lrcrakaevt lnntiykndn vlaflnkrtd fhiphaclkd ngayrctgyk esccpvssnt
181vkiqvqepft rpvlrassfq pisgnpvtlt cetqlslers dvplrfrffr ddqtlglgws
241lspnfqitam wskdsgfywc kaatmpysvi sdsprswiqv qipashpvlt lspekalnfe
301gtkvtlhcet qedslrtlyr fyhegvplrh ksvrcergas isfslttens gnyyctadng
361lgakpskavs lsvtvpvshp vlnlsspedl ifegakvtlh ceaqrgslpi lyqfhhegaa
421lerrsansag gvaisfslta ehsgnyycta dngfgpqrsk avslsvtvpv shpvltlssa
481ealtfegatv tlhcevqrgs pqilyqfyhe dmplwssstp svgrvsfsfs lteghsgnyy
541ctadngfgpq rsevvslfvt vpvsrpiltl rvpraqavvg dllelhceap rgsppilywf
601yhedvtlgss sapsggeasf nlsltaehsg nysceanngl vaqhsdtisl svivpvsrpi
661ltfrapraqa vvgdllelhc ealrgsspil ywfyhedvtl gkisapsggg asfnlsltte
721hsgiyscead ngleaqrsem vtlkvavpvs rpvltlrapg thaavgdlle lhcealrgsp
781lilyrffhed vtlgnrssps ggaslnlslt aehsgnysce adnglgaqrs etvtlyitgl
841tanrsgpfat g vaggllsia glaagallly cwlsrkagrk pasdparsps dsdsqeptyh
901 nvpaweelqp vytnanprge nvvysevrii qekkkhavas dprhlrnkgs piiysevkva
961 stpvsgslfl assaphr
編碼人類 CD307e 同種型 1 前體蛋白之 cDNA (SEQ ID NO: 35). 編碼信號序列之序列加下劃線。編碼成熟蛋白質中存在之細胞外結構域之序列以粗體顯示。
1 aattcactaa tgcattctgc tctttttgag agcacagctt ctcagatgtg ctccttggag
61 ctggtgtgca gtgtcctgac tgtaagatca agtccaaacc tgttttggaa ttgaggaaac
121 ttctcttttg atctcagccc ttggtggtcc aggtcttcat gctgctgtgg gtgatattac
181tggtcctggc tcctgtcagt gga cagtttg caaggacacc caggcccatt attttcctcc
241agcctccatg gaccacagtc ttccaaggag agagagtgac cctcacttgc aagggatttc
301gcttctactc accacagaaa acaaaatggt accatcggta ccttgggaaa gaaatactaa
361gagaaacccc agacaatatc cttgaggttc aggaatctgg agagtacaga tgccaggccc
421agggctcccc tctcagtagc cctgtgcact tggatttttc ttcagcttcg ctgatcctgc
481aagctccact ttctgtgttt gaaggagact ctgtggttct gaggtgccgg gcaaaggcgg
541aagtaacact gaataatact atttacaaga atgataatgt cctggcattc cttaataaaa
601gaactgactt ccatattcct catgcatgtc tcaaggacaa tggtgcatat cgctgtactg
661gatataagga aagttgttgc cctgtttctt ccaatacagt caaaatccaa gtccaagagc
721catttacacg tccagtgctg agagccagct ccttccagcc catcagcggg aacccagtga
781ccctgacctg tgagacccag ctctctctag agaggtcaga tgtcccgctc cggttccgct
841tcttcagaga tgaccagacc ctgggattag gctggagtct ctccccgaat ttccagatta
901ctgccatgtg gagtaaagat tcagggttct actggtgtaa ggcagcaaca atgccttaca
961gcgtcatatc tgacagcccg agatcctgga tacaggtgca gatccctgca tctcatcctg
1021tcctcactct cagccctgaa aaggctctga attttgaggg aaccaaggtg acacttcact
1081gtgaaaccca ggaagattct ctgcgcactt tgtacaggtt ttatcatgag ggtgtccccc
1141tgaggcacaa gtcagtccgc tgtgaaaggg gagcatccat cagcttctca ctgactacag
1201agaattcagg gaactactac tgcacagctg acaatggcct tggcgccaag cccagtaagg
1261ctgtgagcct ctcagtcact gttcccgtgt ctcatcctgt cctcaacctc agctctcctg
1321aggacctgat ttttgaggga gccaaggtga cacttcactg tgaagcccag agaggttcac
1381tccccatcct gtaccagttt catcatgagg gtgctgccct ggagcgtagg tcggccaact
1441ctgcaggagg agtggccatc agcttctctc tgactgcaga gcattcaggg aactactact
1501gcacagctga caatggcttt ggcccccagc gcagtaaggc ggtgagcctc tccgtcactg
1561tccctgtgtc tcatcctgtc ctcaccctca gctctgctga ggccctgact tttgaaggag
1621ccactgtgac acttcactgt gaagtccaga gaggttcccc acaaatccta taccagtttt
1681atcatgagga catgcccctg tggagcagct caacaccctc tgtgggaaga gtgtccttca
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1861tcaccctcag ggttcccagg gcccaggctg tggtggggga cctgctggag cttcactgtg
1921aggccccgag aggctctccc ccaatcctgt actggtttta tcatgaggat gtcaccctgg
1981ggagcagctc agccccctct ggaggagaag cttctttcaa cctctctctg actgcagaac
2041attctggaaa ctactcatgt gaggccaaca atggcctagt ggcccagcac agtgacacaa
2101tatcactcag tgttatagtt ccagtatctc gtcccatcct caccttcagg gctcccaggg
2161cccaggctgt ggtgggggac ctgctggagc ttcactgtga ggccctgaga ggctcctccc
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2401cggtgtctcg cccggtcctc accctcaggg ctcccgggac ccatgctgcg gtgggggacc
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2881 tgcaaccagt gtacactaat gcaaatccta gaggagaaaa tgtggtttac tcagaagtac
2941 ggatcatcca agagaaaaag aaacatgcag tggcctctga ccccaggcat ctcaggaaca
3001 agggttcccc tatcatctac tctgaagtta aggtggcgtc aaccccggtt tccggatccc
3061 tgttcttggc ttcctcagct cctcacagat gagtccacac gtctctccaa ctgctgtttc
3121 agcctctgca ccccaaagtt ccccttgggg gagaagcagc attgaagtgg gaagatttag
3181 gctgccccag accatatcta ctggcctttg tttcacatgt cctcattctc agtctgacca
3241 gaatgcaggg ccctgctgga ctgtcacctg tttcccagtt aaagccctga ctggcaggtt
3301 ttttaatcca gtggcaaggt gctcccactc cagggcccag cacatctcct ggattcctta
3361 gtgggcttca gctgtggttg ctgttctgag tactgctctc atcacacccc cacagagggg
3421 gtcttaccac acaaagggag agtgggcctt caggagatgc cgggctggcc taacagctca
3481 ggtgctccta aactccgaca cagagttcct gctttgggtg gatgcatttc tcaattgtca
3541 tcagcctggt ggggctactg cagtgtgctg ccaaatggga cagcacacag cctgtgcaca
3601 tgggacatgt gatgggtctc cccacggggg ctgcatttca cactcctcca cctgtctcaa
3661 actctaaggt cggcacttga caccaaggta acttctctcc tgctcatgtg tcagtgtcta
3721 cctgcccaag taagtggctt tcatacacca agtcccaagt tcttcccatc ctaacagaag
3781 taacccagca agtcaaggcc aggaggacca ggggtgcaga cagaacacat actggaacac
3841 aggaggtgct caattactat ttgactgact gactgaatga atgaatgaat gaggaagaaa
3901 actgtgggta atcaaactgg cataaaatcc agtgcactcc ctaggaaatc cgggaggtat
3961 tctggcttcc ctaagaaaca atggaagaga aggagcttgg atgaggaaac tgttcagcaa
4021 gaggaagggc ttctcacact ttcatgtgct tgtggatcac ctgaggatcc tgtgaaaata
4081 cagatactga ttcagtgggt ctgcgtagag cctgagactg ccattctaac atgttcccag
4141 gggatgctga tgctgctggc cctgggactg cactgcatgc atgtgaagcc ctataggtct
4201 cagcagaggc ccatggagag ggaatgtgtg gctctggctg cccagggccc aactcggttc
4261 acacggatcg tgctgctccc tggccagcct ttggccacag caccaccagc tgctgttgct
4321 gagagagctt cttctctgtg acatgttggc tttcatcagc caccctggga agcggaaagt
4381 agctgccact atctttgttt ccccacctca ggcctcacac tttcccatga aaagggtgaa
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4501 ttctgttccg cttttatgat atccatcaca tcttatcttg atctttgctc ccagtggatt
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4621 agctcactcc acctgaacca tggcttttca tgcttccaag tgtcagggcc ttgcccagat
4681 agacagggct ggctctgctg ccccaacctt tcaaggagga aaccagacac ctgagacagg
4741 agcctgtatg cagcccagtg cagccttgca gaggacaagg ctggaggcat ttgtcatcac
4801 tacagatatg caactaaaat agacgtggag caagagaaat gcattcccac cgaggccgct
4861 tttttaggcc tagttgaaag tcaagaagga cagcagcaag cataggctca ggattaaaga
4921 aaaaaatctg ctcacagtct gttctggagg tcacatcacc aacaaagctc acgccctatg
4981 cagttctgag aaggtggagg caccaggctc aaaagaggaa atttagaatt tctcattggg
5041 agagtaaggt acccccatcc cagaatgata actgcacagt ggcagaacaa actccaccct
5101 aatgtgggtg gaccccgtcc agtctgttga aggcctgaat gtaacaaaag ggcttattct
5161 tcctcaagta agggggaact cctgctttgg gctgggacat aagtttttct gctttcagac
5221 gcaaactgaa aaatggctct tcttgggtct tgagcttgct ggcatatgga ctgaaagaaa
5281 ctatgctatt ggatctcctg gatctccagc ttgctgactg cagatcttga gatatgtcag
5341 cctctacagt cacaagagct aattcattct aataaaccaa tctttctgta aaaaa
人類 CD307e 同種型 2 前體蛋白 (SEQ ID NO: 36). 信號序列加下劃線。成熟蛋白質中存在之細胞外結構域以粗體顯示。
1mllwvillvl apvsg qfart prpiiflqpp wttvfqgerv tltckgfrfy spqktkwyhr
61ylgkeilret pdnilevqes geyrcqaqgs plsspvhldf ssaslilqap lsvfegdsvv
121lrcrakaevt lnntiykndn vlaflnkrtd fhiphaclkd ngayrctgyk esccpvssnt
181vkiqvqepft rpvlrassfq pisgnpvtlt cetqlslers dvplrfrffr ddqtlglgws
241lspnfqitam wskdsgfywc kaatmpysvi sdsprswiqv qipashpvlt lspekalnfe
301gtkvtlhcet qedslrtlyr fyhegvplrh ksvrcergas isfslttens gnyyctadng
361lgakpskavs lsvtvpvshp vlnlsspedl ifegakvtlh ceaqrgslpi lyqfhhegaa
421lerrsansag gvaisfslta ehsgnyycta dngfgpqrsk avslsvtvpv shpvltlssa
481ealtfegatv tlhcevqrgs pqilyqfyhe dmplwssstp svgrvsfsfs lteghsgnyy
541ctadngfgpq rsevvslfvt vpvsrpiltl rvpraqavvg dllelhceap rgsppilywf
601yhedvtlgss sapsggeasf nlsltaehsg nysceanngl vaqhsdtisl svivpvsrpi
661ltfrapraqa vvgdllelhc ealrgsspil ywfyhedvtl gkisapsggg asfnlsltte
721hsgiyscead ngleaqrsem vtlkvavpvs rpvltlrapg thaavgdlle lhcealrgsp
781lilyrffhed vtlgnrssps ggaslnlslt aehsgnysce adnglgaqrs etvtlyitgl
841tanrsgpfat g vaggllsia glaagallly cwlsrkagrk pasdparsps dsdsqeptyh
901 nvpaweelqp vytneekmwf tqkygsskrk rnmqwpltpg isgtrvplss tlklrwrqpr
961 fpdpcswlpq lltdestrls nccfslctpk fplgekqh
編碼人類 CD307e 同種型 2 前體蛋白之 cDNA (SEQ ID NO: 37). 編碼信號序列之序列加下劃線。編碼成熟蛋白質中存在之細胞外結構域之序列以粗體顯示。
1 aattcactaa tgcattctgc tctttttgag agcacagctt ctcagatgtg ctccttggag
61 ctggtgtgca gtgtcctgac tgtaagatca agtccaaacc tgttttggaa ttgaggaaac
121 ttctcttttg atctcagccc ttggtggtcc aggtcttcat gctgctgtgg gtgatattac
181tggtcctggc tcctgtcagt gga cagtttg caaggacacc caggcccatt attttcctcc
241agcctccatg gaccacagtc ttccaaggag agagagtgac cctcacttgc aagggatttc
301gcttctactc accacagaaa acaaaatggt accatcggta ccttgggaaa gaaatactaa
361gagaaacccc agacaatatc cttgaggttc aggaatctgg agagtacaga tgccaggccc
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661gatataagga aagttgttgc cctgtttctt ccaatacagt caaaatccaa gtccaagagc
721catttacacg tccagtgctg agagccagct ccttccagcc catcagcggg aacccagtga
781ccctgacctg tgagacccag ctctctctag agaggtcaga tgtcccgctc cggttccgct
841tcttcagaga tgaccagacc ctgggattag gctggagtct ctccccgaat ttccagatta
901ctgccatgtg gagtaaagat tcagggttct actggtgtaa ggcagcaaca atgccttaca
961gcgtcatatc tgacagcccg agatcctgga tacaggtgca gatccctgca tctcatcctg
1021tcctcactct cagccctgaa aaggctctga attttgaggg aaccaaggtg acacttcact
1081gtgaaaccca ggaagattct ctgcgcactt tgtacaggtt ttatcatgag ggtgtccccc
1141tgaggcacaa gtcagtccgc tgtgaaaggg gagcatccat cagcttctca ctgactacag
1201agaattcagg gaactactac tgcacagctg acaatggcct tggcgccaag cccagtaagg
1261ctgtgagcct ctcagtcact gttcccgtgt ctcatcctgt cctcaacctc agctctcctg
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1501gcacagctga caatggcttt ggcccccagc gcagtaaggc ggtgagcctc tccgtcactg
1561tccctgtgtc tcatcctgtc ctcaccctca gctctgctga ggccctgact tttgaaggag
1621ccactgtgac acttcactgt gaagtccaga gaggttcccc acaaatccta taccagtttt
1681atcatgagga catgcccctg tggagcagct caacaccctc tgtgggaaga gtgtccttca
1741gcttctctct gactgaagga cattcaggga attactactg cacagctgac aatggctttg
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1861tcaccctcag ggttcccagg gcccaggctg tggtggggga cctgctggag cttcactgtg
1921aggccccgag aggctctccc ccaatcctgt actggtttta tcatgaggat gtcaccctgg
1981ggagcagctc agccccctct ggaggagaag cttctttcaa cctctctctg actgcagaac
2041attctggaaa ctactcatgt gaggccaaca atggcctagt ggcccagcac agtgacacaa
2101tatcactcag tgttatagtt ccagtatctc gtcccatcct caccttcagg gctcccaggg
2161cccaggctgt ggtgggggac ctgctggagc ttcactgtga ggccctgaga ggctcctccc
2221caatcctgta ctggttttat catgaagatg tcaccctggg taagatctca gccccctctg
2281gaggaggggc ctccttcaac ctctctctga ctacagaaca ttctggaatc tactcctgtg
2341aggcagacaa tggtctggag gcccagcgca gtgagatggt gacactgaaa gttgcagttc
2401cggtgtctcg cccggtcctc accctcaggg ctcccgggac ccatgctgcg gtgggggacc
2461tgctggagct tcactgtgag gccctgagag gctctcccct gatcctgtac cggttttttc
2521atgaggatgt caccctagga aataggtcgt ccccctctgg aggagcgtcc ttaaacctct
2581ctctgactgc agagcactct ggaaactact cctgtgaggc cgacaatggc ctcggggccc
2641agcgcagtga gacagtgaca ctttatatca cagggctgac cgcgaacaga agtggccctt
2701ttgccacagg a gtcgccggg ggcctgctca gcatagcagg ccttgctgcg ggggcactgc
2761 tgctctactg ctggctctcg agaaaagcag ggagaaagcc tgcctctgac cccgccagga
2821 gcccttcaga ctcggactcc caagagccca cctatcacaa tgtaccagcc tgggaagagc
2881 tgcaaccagt gtacactaat gaggagaaaa tgtggtttac tcagaagtac ggatcatcca
2941 agagaaaaag aaacatgcag tggcctctga ccccaggcat ctcaggaaca agggttcccc
3001 tatcatctac tctgaagtta aggtggcgtc aaccccggtt tccggatccc tgttcttggc
3061 ttcctcagct cctcacagat gagtccacac gtctctccaa ctgctgtttc agcctctgca
3121 ccccaaagtt ccccttgggg gagaagcagc attgaagtgg gaagatttag gctgccccag
3181 accatatcta ctggcctttg tttcacatgt cctcattctc agtctgacca gaatgcaggg
3241 ccctgctgga ctgtcacctg tttcccagtt aaagccctga ctggcaggtt ttttaatcca
3301 gtggcaaggt gctcccactc cagggcccag cacatctcct ggattcctta gtgggcttca
3361 gctgtggttg ctgttctgag tactgctctc atcacacccc cacagagggg gtcttaccac
3421 acaaagggag agtgggcctt caggagatgc cgggctggcc taacagctca ggtgctccta
3481 aactccgaca cagagttcct gctttgggtg gatgcatttc tcaattgtca tcagcctggt
3541 ggggctactg cagtgtgctg ccaaatggga cagcacacag cctgtgcaca tgggacatgt
3601 gatgggtctc cccacggggg ctgcatttca cactcctcca cctgtctcaa actctaaggt
3661 cggcacttga caccaaggta acttctctcc tgctcatgtg tcagtgtcta cctgcccaag
3721 taagtggctt tcatacacca agtcccaagt tcttcccatc ctaacagaag taacccagca
3781 agtcaaggcc aggaggacca ggggtgcaga cagaacacat actggaacac aggaggtgct
3841 caattactat ttgactgact gactgaatga atgaatgaat gaggaagaaa actgtgggta
3901 atcaaactgg cataaaatcc agtgcactcc ctaggaaatc cgggaggtat tctggcttcc
3961 ctaagaaaca atggaagaga aggagcttgg atgaggaaac tgttcagcaa gaggaagggc
4021 ttctcacact ttcatgtgct tgtggatcac ctgaggatcc tgtgaaaata cagatactga
4081 ttcagtgggt ctgcgtagag cctgagactg ccattctaac atgttcccag gggatgctga
4141 tgctgctggc cctgggactg cactgcatgc atgtgaagcc ctataggtct cagcagaggc
4201 ccatggagag ggaatgtgtg gctctggctg cccagggccc aactcggttc acacggatcg
4261 tgctgctccc tggccagcct ttggccacag caccaccagc tgctgttgct gagagagctt
4321 cttctctgtg acatgttggc tttcatcagc caccctggga agcggaaagt agctgccact
4381 atctttgttt ccccacctca ggcctcacac tttcccatga aaagggtgaa tgtatataac
4441 ctgagccctc tccattcaga gttgttctcc catctctgag caatgggatg ttctgttccg
4501 cttttatgat atccatcaca tcttatcttg atctttgctc ccagtggatt gtacagtgat
4561 gacttttaag ccccacggcc ctgaaataaa atccttccaa gggcattgga agctcactcc
4621 acctgaacca tggcttttca tgcttccaag tgtcagggcc ttgcccagat agacagggct
4681 ggctctgctg ccccaacctt tcaaggagga aaccagacac ctgagacagg agcctgtatg
4741 cagcccagtg cagccttgca gaggacaagg ctggaggcat ttgtcatcac tacagatatg
4801 caactaaaat agacgtggag caagagaaat gcattcccac cgaggccgct tttttaggcc
4861 tagttgaaag tcaagaagga cagcagcaag cataggctca ggattaaaga aaaaaatctg
4921 ctcacagtct gttctggagg tcacatcacc aacaaagctc acgccctatg cagttctgag
4981 aaggtggagg caccaggctc aaaagaggaa atttagaatt tctcattggg agagtaaggt
5041 acccccatcc cagaatgata actgcacagt ggcagaacaa actccaccct aatgtgggtg
5101 gaccccgtcc agtctgttga aggcctgaat gtaacaaaag ggcttattct tcctcaagta
5161 agggggaact cctgctttgg gctgggacat aagtttttct gctttcagac gcaaactgaa
5221 aaatggctct tcttgggtct tgagcttgct ggcatatgga ctgaaagaaa ctatgctatt
5281 ggatctcctg gatctccagc ttgctgactg cagatcttga gatatgtcag cctctacagt
5341 cacaagagct aattcattct aataaaccaa tctttctgta
跨膜結構域
在本文所述CAR中之任一者之一些實施例中，跨膜結構域係或包含CD28、CD3 ε、CD4、CD5、CD6、CD8a、CD9、CD16、CD22、CD33、CD37、CD 45、CD64、CD80、CD86、CD134、CD137、GITR、NGFR或CD154之跨膜結構域。業內已知適宜跨膜結構域之額外實例。
在一些實施例中，跨膜結構域係單道跨膜結構域。在一些實施例中，跨膜結構域形成α-螺旋。在一些實施例中，跨膜結構域形成β桶。在一些實施例中，跨膜結構域係約15個胺基酸至約200個胺基酸、約15個胺基酸至約180個胺基酸、約15個胺基酸至約160個胺基酸、約15個胺基酸至約140個胺基酸、約15個胺基酸至約120個胺基酸、約15個胺基酸至約100個胺基酸、約15個胺基酸至約80個胺基酸、約15個胺基酸至約60個胺基酸、約15個胺基酸至約50個胺基酸、約15個胺基酸至約45個胺基酸、約15個胺基酸至約40個胺基酸、約15個胺基酸至約35個胺基酸、約15個胺基酸至約30個胺基酸、約15個胺基酸至約25個胺基酸、約15個胺基酸至約22個胺基酸、約15個胺基酸至約20個胺基酸、約15個胺基酸至約18個胺基酸、約18個胺基酸至約200個胺基酸、約18個胺基酸至約180個胺基酸、約18個胺基酸至約160個胺基酸、約18個胺基酸至約140個胺基酸、約18個胺基酸至約120個胺基酸、約18個胺基酸至約100個胺基酸、約18個胺基酸至約80個胺基酸、約18個胺基酸至約60個胺基酸、約18個胺基酸至約50個胺基酸、約18個胺基酸至約45個胺基酸、約18個胺基酸至約40個胺基酸、約18個胺基酸至約35個胺基酸、約18個胺基酸至約30個胺基酸、約18個胺基酸至約25個胺基酸、約18個胺基酸至約22個胺基酸、約18個胺基酸至約20個胺基酸、約20個胺基酸至約200個胺基酸、約20個胺基酸至約180個胺基酸、約20個胺基酸至約160個胺基酸、約20個胺基酸至約140個胺基酸、約20個胺基酸至約120個胺基酸、約20個胺基酸至約100個胺基酸、約20個胺基酸至約80個胺基酸、約20個胺基酸至約60個胺基酸、約20個胺基酸至約50個胺基酸、約20個胺基酸至約45個胺基酸、約20個胺基酸至約40個胺基酸、約20個胺基酸至約35個胺基酸、約20個胺基酸至約30個胺基酸、約20個胺基酸至約25個胺基酸、約20個胺基酸至約22個胺基酸、約22個胺基酸至約200個胺基酸、約22個胺基酸至約180個胺基酸、約22個胺基酸至約160個胺基酸、約22個胺基酸至約140個胺基酸、約22個胺基酸至約120個胺基酸、約22個胺基酸至約100個胺基酸、約22個胺基酸至約80個胺基酸、約22個胺基酸至約60個胺基酸、約22個胺基酸至約50個胺基酸、約22個胺基酸至約45個胺基酸、約22個胺基酸至約40個胺基酸、約22個胺基酸至約35個胺基酸、約22個胺基酸至約30個胺基酸、約22個胺基酸至約25個胺基酸、約25個胺基酸至約200個胺基酸、約25個胺基酸至約180個胺基酸、約25個胺基酸至約160個胺基酸、約25個胺基酸至約140個胺基酸、約25個胺基酸至約120個胺基酸、約25個胺基酸至約100個胺基酸、約25個胺基酸至約80個胺基酸、約25個胺基酸至約60個胺基酸、約25個胺基酸至約50個胺基酸、約25個胺基酸至約45個胺基酸、約25個胺基酸至約40個胺基酸、約25個胺基酸至約35個胺基酸、約25個胺基酸至約30個胺基酸、約30個胺基酸至約200個胺基酸、約30個胺基酸至約180個胺基酸、約30個胺基酸至約160個胺基酸、約30個胺基酸至約140個胺基酸、約30個胺基酸至約120個胺基酸、約30個胺基酸至約100個胺基酸、約30個胺基酸至約80個胺基酸、約30個胺基酸至約60個胺基酸、約30個胺基酸至約50個胺基酸、約30個胺基酸至約45個胺基酸、約30個胺基酸至約40個胺基酸、約30個胺基酸至約35個胺基酸、約35個胺基酸至約200個胺基酸、約35個胺基酸至約180個胺基酸、約35個胺基酸至約160個胺基酸、約35個胺基酸至約140個胺基酸、約35個胺基酸至約120個胺基酸、約35個胺基酸至約100個胺基酸、約35個胺基酸至約80個胺基酸、約35個胺基酸至約60個胺基酸、約35個胺基酸至約50個胺基酸、約35個胺基酸至約45個胺基酸、約35個胺基酸至約40個胺基酸、約40個胺基酸至約200個胺基酸、約40個胺基酸至約180個胺基酸、約40個胺基酸至約160個胺基酸、約40個胺基酸至約140個胺基酸、約40個胺基酸至約120個胺基酸、約40個胺基酸至約100個胺基酸、約40個胺基酸至約80個胺基酸、約40個胺基酸至約60個胺基酸、約40個胺基酸至約50個胺基酸、約40個胺基酸至約45個胺基酸、約45個胺基酸至約200個胺基酸、約45個胺基酸至約180個胺基酸、約45個胺基酸至約160個胺基酸、約45個胺基酸至約140個胺基酸、約45個胺基酸至約120個胺基酸、約45個胺基酸至約100個胺基酸、約45個胺基酸至約80個胺基酸、約45個胺基酸至約60個胺基酸、約45個胺基酸至約50個胺基酸、約50個胺基酸至約200個胺基酸、約50個胺基酸至約180個胺基酸、約50個胺基酸至約160個胺基酸、約50個胺基酸至約140個胺基酸、約50個胺基酸至約120個胺基酸、約50個胺基酸至約100個胺基酸、約50個胺基酸至約80個胺基酸、約50個胺基酸至約60個胺基酸、約60個胺基酸至約200個胺基酸、約60個胺基酸至約180個胺基酸、約60個胺基酸至約160個胺基酸、約60個胺基酸至約140個胺基酸、約60個胺基酸至約120個胺基酸、約60個胺基酸至約100個胺基酸、約60個胺基酸至約80個胺基酸、約80個胺基酸至約200個胺基酸、約80個胺基酸至約180個胺基酸、約80個胺基酸至約160個胺基酸、約80個胺基酸至約140個胺基酸、約80個胺基酸至約120個胺基酸、約80個胺基酸至約100個胺基酸、約100個胺基酸至約200個胺基酸、約100個胺基酸至約180個胺基酸、約100個胺基酸至約160個胺基酸、約100個胺基酸至約140個胺基酸、約100個胺基酸至約120個胺基酸、約120個胺基酸至約200個胺基酸、約120個胺基酸至約180個胺基酸、約120個胺基酸至約160個胺基酸、約120個胺基酸至約140個胺基酸、約140個胺基酸至約200個胺基酸、約140個胺基酸至約180個胺基酸、約140個胺基酸至約160個胺基酸、約160個胺基酸至約200個胺基酸、約160個胺基酸至約180個胺基酸或約180個胺基酸至約200個胺基酸。
在一些實施例中，跨膜結構域係或包含與CD28、CD3 ε、CD4、CD5、CD6、CD8a、CD9、CD16、CD22、CD33、CD37、CD 45、CD64、CD80、CD86、CD134、4-1BB或CD154之跨膜結構域具有至少80%一致性(例如，至少82%一致性、至少84%一致性、至少86%一致性、至少88%一致性、至少90%一致性、至少92%一致性、至少94%一致性、至少96%一致性、至少98%一致性或至少99%一致性)的序列。在一些實施例中，跨膜結構域係或包含與CD28、CD3 ε、CD4、CD5、CD6、CD8a、CD9、CD16、CD22、CD33、CD37、CD 45、CD64、CD80、CD86、CD134、4-1BB或CD154之跨膜結構域相同之序列，只是該序列包括1個、2個、3個、4個或5個取代。在一些實施例中，跨膜結構域係或包含與CD28、CD3 ε、CD4、CD5、CD6、CD8a、CD9、CD16、CD22、CD33、CD37、CD 45、CD64、CD80、CD86、CD134、4-1BB或CD154之跨膜結構域相同之序列，只是自其N端缺失1個、2個、3個、4個或5個胺基酸及/或自其C端缺失1個、2個、3個、4個或5個胺基酸。下文顯示CD28、CD3 ε、CD4、CD5、CD6、CD8a、CD9、CD16、CD22、CD33、CD37、CD 45、CD64、CD80、CD86、CD134、4-1BB及CD154之跨膜結構域之實例性序列。下文顯示編碼CD28、CD3 ε、CD4、CD5、CD6、CD8a、CD9、CD16、CD22、CD33、CD37、CD 45、CD64、CD80、CD86、CD134、4-1BB及CD154之跨膜結構域之實例性核酸序列。
人類 CD28 跨膜結構域 (SEQ ID NO: 38)
fwvlvvvggvlacysllvtvafiifwv
編碼人類 CD28 跨膜結構域之 cDNA (SEQ ID NO: 39)
ttttgggtgctggtggtggttggtggagtcctggcttgctatagcttgctagtaacagtggcctttattattttctgggtg
人類 CD3 e跨膜結構域 (SEQ ID NO: 40)
vmsvativivdicitggllllvyyws
編碼人類 CD3 e跨膜結構域之 cDNA (SEQ ID NO: 41)
gtgatgtcggtggccacaattgtcatagtggacatctgcatcactgggggcttgctgctgctggtttactactggagc
人類 CD4 跨膜結構域 (SEQ ID NO: 42)
malivlggvaglllfiglgiff
編碼人類 CD4 跨膜結構域之 cDNA (SEQ ID NO: 43)
atggccctgattgtgctggggggcgtcgccggcctcctgcttttcattgggctaggcatcttcttc
人類 CD5 跨膜結構域 (SEQ ID NO: 44)
aglaagtvasiilalvllvvllvvcgplay
編碼人類 CD5 跨膜結構域之 cDNA (SEQ ID NO: 45)
gcaggcctggccgcaggcacggtggcaagcatcatcctggccctggtgctcctggtggtgctgctggtcgtgtgcggcccccttgcctac
人類 CD6 跨膜結構域 (SEQ ID NO: 46)
ipsivlgilllgslifiafil
編碼人類 CD6 跨膜結構域之 cDNA (SEQ ID NO: 47)
atcccctccatcgttctgggaattctcctccttggctccctcatcttcatagccttcatcctc
人類 CD8a 跨膜結構域 (SEQ ID NO: 48)
iyiwaplagtcgvlllslvit
編碼人類 CD8a 跨膜結構域同種型 1 之 cDNA (SEQ ID NO: 49)
atctacatctgggcgcccttggccgggacttgtggggtccttctcctgtcactggttatcacc
人類 CD9 跨膜結構域同種型 1 (SEQ ID NO: 50)
LLFGFNFIFWLAGIAVLAIGL
編碼人類 CD9 跨膜結構域之 cDNA (SEQ ID NO: 51)
CTGCTGTTCGGATTTAACTTCATCTTCTGGCTTGCCGGGATTGCTGTCCTTGCCATTGGACTA
人類 CD9 跨膜結構域同種型 2 (SEQ ID NO: 52)
FYTGVYILIGAGALMMLVGFL
編碼人類 CD9 跨膜結構域同種型 2 之 cDNA (SEQ ID NO: 53)
TTCTACACAGGAGTCTATATTCTGATCGGAGCCGGCGCCCTCATGATGCTGGTGGGCTTCCTG
人類 CD9 跨膜結構域同種型 3 (SEQ ID NO: 54)
MLGLFFGFLLVIFAIEIAAAIWGY
編碼人類 CD9 跨膜結構域同種型 3 之 cDNA (SEQ ID NO: 55)
ATGCTGGGACTGTTCTTCGGCTTCCTCTTGGTGATATTCGCCATTGAAATAGCTGCGGCCATCTGGGGATAT
人類 CD9 跨膜結構域同種型 4 (SEQ ID NO: 56)
IGAVGIGIAVVMIFGMIFSMILCCAI
編碼人類 CD9 跨膜結構域同種型 4 之 cDNA (SEQ ID NO: 57)
ATCGGCGCAGTGGGCATCGGCATTGCCGTGGTCATGATATTTGGCATGATCTTCAGTATGATCTTGTGCTGTGCTATC
人類 CD16 跨膜結構域 (SEQ ID NO: 58)
VSFCLVMVLLFAVDTGLYFSV
人類 CD22 跨膜結構域 (SEQ ID NO: 59)
VAVGLGSCLAILILAICGL
人類 CD33 跨膜結構域 (SEQ ID NO: 60)
GAIGGAGVTALLALCLCLIFFIV
人類 CD37 跨膜結構域同種型 1 (SEQ ID NO: 61)
VLAISGIFTMGIALL
編碼人類 CD37 跨膜結構域同種型 1 之 cDNA (SEQ ID NO: 62)
GTCCTGGCCATCTCAGGAATCTTCACCATGGGCATCGCCCTCCTG
人類 CD37 跨膜結構域同種型 2 (SEQ ID NO: 63)
LLGLYFGMLLLLFATQITLGILISTQ
編碼人類 CD37 跨膜結構域同種型 2 之 cDNA (SEQ ID NO: 64)
CTCCTGGGCCTGTATTTTGGGATGCTGCTGCTCCTGTTTGCCACACAGATCACCCTGGGAATCCTCATCTCCACTCAG
人類 CD37 跨膜結構域同種型 3 (SEQ ID NO: 65)
LISIVGICLGVGLLELGFMTLSIFL
編碼人類 CD37 跨膜結構域同種型 3 之 cDNA (SEQ ID NO: 66)
CTTATTTCCATAGTGGGCATTTGCCTGGGCGTCGGCCTACTCGAGCTCGGGTTCATGACGCTCTCGATATTCCTG
人類 CD37 跨膜結構域同種型 4 (SEQ ID NO: 67)
FNLFFFVLGSLIFCFGIWILI
編碼人類 CD37 跨膜結構域同種型 4 之 cDNA (SEQ ID NO: 68)
TTCAACCTCTTCTTCTTCGTCCTCGGCAGCCTGATCTTCTGCTTCGGCATCTGGATCCTCATT
人類 CD64 跨膜結構域 (SEQ ID NO: 69)
VLFYLAVGIMFLVNTVLWVTI
編碼人類 CD64 跨膜結構域之 cDNA (SEQ ID NO: 70)
GTCCTTTTCTATCTGGCAGTGGGAATAATGTTTTTAGTGAACACTGTTCTCTGGGTGACAATA
人類 CD80 跨膜結構域 (SEQ ID NO: 71)
LLPSWAITLISVNGIFVICCL
編碼人類 CD80 跨膜結構域之 cDNA (SEQ ID NO: 72)
CTGCTCCCATCCTGGGCCATTACCTTAATCTCAGTAAATGGAATTTTTGTGATATGCTGCCTG
人類 CD86 跨膜結構域 (SEQ ID NO: 73)
WITAVLPTVIICVMVFCLILW
人類 CD134 跨膜結構域 (SEQ ID NO: 74)
VAAILGLGLVLGLLGPLAILL
編碼人類 CD134 跨膜結構域之 cDNA (SEQ ID NO: 75)
GTTGCCGCCATCCTGGGCCTGGGCCTGGTGCTGGGGCTGCTGGGCCCCCTGGCCATCCTGCTG
人類 4-1BB 跨膜結構域 (SEQ ID NO: 76)
IISFFLALTSTALLFLLFFLTLRFSVV
編碼人類 4-1BB 跨膜結構域之 cDNA (SEQ ID NO: 77)
ATCATCTCCTTCTTTCTTGCGCTGACGTCGACTGCGTTGCTCTTCCTGCTGTTCTTCCTCACGCTCCGTTTCTCTGTTGTT
人類 CD154 跨膜結構域 (SEQ ID NO: 78)
ifmylltvflitqmigsalfavyl
編碼人類 CD154 跨膜結構域之 cDNA (SEQ ID NO: 79)
atttttatgtatttacttactgtttttcttatcacccagatgattgggtcagcactttttgctgtgtatctt
在本文所述CAR中之任一者之一些實施例中，跨膜結構域係或包含CD28之跨膜結構域或CD8a之跨膜結構域。在本文所述CAR中之任一者之一些實施例中，跨膜結構域可包括具有跨膜結構域之任何蛋白之跨膜結構域。
鉸鏈序列
在一些實施例中，第一抗原結合結構域與第二抗原結合結構域之間之連接體可為1個胺基酸至約250個胺基酸(或本文所述此範圍之子範圍中之任一者)。舉例而言，鉸鏈序列可包括跨膜蛋白中在細胞外、但在跨膜結構域近端且不特異性結合至配體或可溶性蛋白的一部分。鉸鏈序列之非限制性實例包括人類CD8a之細胞外部分、人類IgG4之細胞外部分或CD28之細胞外部分。
在一些實施例中，鉸鏈序列係或包括人類CD28之鉸鏈。CD28之鉸鏈之實例性序列係IEVMYPPPYLDNEKSNGTII HVKGKHLCPS PLFPGPSKP (SEQ ID NO: 80)或其片段(例如，自其N端縮短1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15個胺基酸及/或自其C端縮短1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15個胺基酸)。在一些實施例中，鉸鏈序列可與人類CD28之鉸鏈之序列具有至少80% (例如，至少82%、至少84%、至少86%、至少88%、至少90%、至少92%、至少94%、至少96%、至少98%或至少99%)一致性。
在一些實施例中，鉸鏈序列係或包括人類CD8a之鉸鏈。人類CD8a之鉸鏈之實例性序列係：TTTPAPRPPTPAPTIASQPL SLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACD (SEQ ID NO: 81)或其片段(例如，自其N端縮短1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個胺基酸及/或自其C端縮短1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個胺基酸)。在一些實施例中，鉸鏈序列可與人類CD8a之鉸鏈之序列具有至少80% (例如，至少82%、至少84%、至少86%、至少88%、至少90%、至少92%、至少94%、至少96%、至少98%或至少99%)一致性。
在一些實施例中，人類CD8a之鉸鏈係由以下序列編碼：ACCACGACGCCAGCGCCGCGACCACCAACACCGGCGCCCACCATCGCGTCGCAGCCCCTGTCCCTGCGCCCAGAGGCGTGCCGGCCAGCGGCGGGGGGCGCAGTGCACACGAGGGGGCTGGACTTCGCCTGTGAT (SEQ ID NO: 82)。
在一些實施例中，鉸鏈序列係或包括人類IgG4之鉸鏈。人類IgG4之鉸鏈之實例性序列係：ESKYGPPCPPCPAPEFLGGPS VFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGKM (SEQ ID NO: 83)或其片段(例如，自其N端縮短1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100個胺基酸及/或自其C端縮短1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100個胺基酸)。在一些實施例中，鉸鏈序列可與人類IgG4之鉸鏈之序列具有至少80% (例如，至少82%、至少84%、至少86%、至少88%、至少90%、至少92%、至少94%、至少96%、至少98%或至少99%)一致性。
在一些實施例中，人類IgG4之鉸鏈係由以下序列編碼：
GAGAGCAAGTACGGCCCTCCCTGCCCCCCTTGCCCTGCCCCCGAGTTCCTGGGCGGACCCA GCGTGTTCCTGTTCCCCCCCAAGCCCAAGGACACCCTGATGATCAGCCGGACCCCCGAGGT GACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCAGGAGGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTG GACGGCGTGGAGGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCCCGGGAGGAGCAGTTCAATAGCACC TACCGGGTGGTGTCCGTGCTGACCGTGCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAATAC AAGTGTAAGGTGTCCAACAAGGGCCTGCCCAGCAGCATCGAGAAAACCATCAGCAAGGCC AAGGGCCAGCCTCGGGAGCCCCAGGTGTACACCCTGCCCCCTAGCCAAGAGGAGATGACC AAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGCCTGGTGAAGGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGG AGTGGGAGAGCAACGGCCAGCCCGAGAACAACTACAAGACCACCCCCCCTGTGCTGGACA GCGACGGCAGCTTCTTCCTGTACAGCCGGCTGACCGTGGACAAGAGCCGGTGGCAGGAGG GCAACGTCTTTAGCTGCTCCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAACCACTACACCCAGAAGAG CCTGAGCCTGTCCCTGGGCAAGATG (SEQ ID NO: 84)
細胞內信號傳導結構域
在一些實施例中，細胞內信號傳導結構域包括20個胺基酸至約250個胺基酸(或本文所述此範圍之任何子範圍)。在本文所述CAR中之任一者之一些實施例中，細胞內信號傳導結構域係人類4-1BB、人類CD28、人類CD3ζ、人類CD5、人類CD22、人類CD79、人類DAP-10或人類DAP-12之細胞內信號傳導結構域。
在一些實施例中，細胞內信號傳導序列係或包括人類CD3 ζ之細胞內信號傳導序列。人類CD3 ζ細胞內信號傳導序列之實例性序列係：RVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR (SEQ ID NO: 85)或其片段(例如，自其N端縮短1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30個胺基酸及/或自其C端縮短11、2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30個胺基酸)。在一些實施例中，細胞內信號傳導序列可與人類CD3 ζ之細胞內信號傳導序列之序列具有至少80% (例如，至少82%、至少84%、至少86%、至少88%、至少90%、至少92%、至少94%、至少96%、至少98%或至少99%)一致性。在一些實施例中，細胞內信號傳導序列係人類CD3 ζ之細胞內信號傳導序列之至少50個鄰接胺基酸、至少55個鄰接胺基酸、至少60個鄰接胺基酸、至少65個鄰接胺基酸、至少70個鄰接胺基酸、至少75個鄰接胺基酸、至少80個鄰接胺基酸、至少85個鄰接胺基酸、至少90個鄰接胺基酸、至少95個鄰接胺基酸或至少100個鄰接胺基酸。
在一些實施例中，細胞內信號傳導序列係或包括人類4-1BB之細胞內信號傳導序列。人類4-1BB細胞內信號傳導序列之實例性序列係：KRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCEL (SEQ ID NO: 86)或其片段(例如，自其N端縮短1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個胺基酸及/或自其C端縮短1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個胺基酸)。在一些實施例中，細胞內信號傳導序列可與人類4-1BB之細胞內信號傳導序列之序列具有至少80% (例如，至少82%、至少84%、至少86%、至少88%、至少90%、至少92%、至少94%、至少96%、至少98%或至少99%)一致性。在一些實施例中，細胞內信號傳導序列係人類4-1BB之細胞內信號傳導序列之至少10個鄰接胺基酸、至少15個鄰接胺基酸、至少20個鄰接胺基酸、至少25個鄰接胺基酸、至少35個鄰接胺基酸或至少40個鄰接胺基酸。在一些實施例中，人類4-1BB細胞內信號傳導序列係由以下編碼：
AAACGGGGCAGAAAGAAACTCCTGTATATATTCAAACAACCATTTATGAGACCAGTACAAACTACTCAAGAGGAAGATGGCTGTAGCTGCCGATTTCCAGAAGAAGAAGAAGGAGGATGT GAACTG (SEQ ID NO: 87)。
在一些實施例中，細胞內信號傳導序列係或包括人類CD28之細胞內信號傳導序列。人類CD28細胞內信號傳導序列之實例性序列係：RSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRS (SEQ ID NO: 88)或其片段(例如，自其N端縮短1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個胺基酸及/或自其C端縮短1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個胺基酸)。在一些實施例中，細胞內信號傳導序列可與人類CD28之細胞內信號傳導序列之序列具有至少80% (例如，至少82%、至少84%、至少86%、至少88%、至少90%、至少92%、至少94%、至少96%、至少98%或至少99%)一致性。在一些實施例中，細胞內信號傳導序列係人類CD28之細胞內信號傳導序列之至少10個鄰接胺基酸、至少15個鄰接胺基酸、至少20個鄰接胺基酸、至少25個鄰接胺基酸或至少35個鄰接胺基酸。
在一些實施例中，細胞內信號傳導序列係或包括人類CD5之細胞內信號傳導序列。人類CD5細胞內信號傳導序列之實例性序列係：KKLVKKFRQKKQRQWIGPTGMNQNMSFHRNHTATVRSHAENPTASHVDNEYSQPPRNSHLSAYPALEGALHRSSMQPDNSSDSDYDLHGAQRL (SEQ ID NO: 89)或其片段(例如，自其N端縮短1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34或35個胺基酸及/或自其C端縮短1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34或35個胺基酸)。在一些實施例中，細胞內信號傳導序列可與人類CD5之細胞內信號傳導序列之序列具有至少80% (例如，至少82%、至少84%、至少86%、至少88%、至少90%、至少92%、至少94%、至少96%、至少98%或至少99%)一致性。在一些實施例中，細胞內信號傳導序列係人類CD28之細胞內信號傳導序列之至少10個鄰接胺基酸、至少15個鄰接胺基酸、至少20個鄰接胺基酸、至少25個鄰接胺基酸或至少35個鄰接胺基酸、至少40個鄰接胺基酸、至少45個鄰接胺基酸、至少50個鄰接胺基酸、至少55個鄰接胺基酸、至少60個鄰接胺基酸、至少65個鄰接胺基酸、至少70個鄰接胺基酸、至少75個鄰接胺基酸、至少80個鄰接胺基酸、至少85個鄰接胺基酸或至少90個鄰接胺基酸。
在一些實施例中，細胞內信號傳導序列係或包括人類CD22之細胞內信號傳導序列。人類CD22細胞內信號傳導序列之實例性序列係：KLQRRWKRTQSQQGLQENSSGQSFFVRNKKVRRAPLSEGPHSLGCYNPMMEDGISYTTLRFPEMNIPRTGDAESSEMQRPPPDCDDTVTYSALHKRQVGDYENVIPDFPEDEGIHYSELIQFGVGERPQAQENVDYVILKH (SEQ ID NO: 90)或其片段(例如，自其N端縮短1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59或60個胺基酸及/或自其C端縮短1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59或60個胺基酸)。在一些實施例中，細胞內信號傳導序列可與人類CD22之細胞內信號傳導序列之序列具有至少80% (例如，至少82%、至少84%、至少86%、至少88%、至少90%、至少92%、至少94%、至少96%、至少98%或至少99%)一致性。在一些實施例中，細胞內信號傳導序列係人類CD22之細胞內信號傳導序列之至少10個鄰接胺基酸、至少15個鄰接胺基酸、至少20個鄰接胺基酸、至少25個鄰接胺基酸或至少35個鄰接胺基酸、至少40個鄰接胺基酸、至少45個鄰接胺基酸、至少50個鄰接胺基酸、至少55個鄰接胺基酸、至少60個鄰接胺基酸、至少65個鄰接胺基酸、至少70個鄰接胺基酸、至少75個鄰接胺基酸、至少80個鄰接胺基酸、至少85個鄰接胺基酸、至少90個鄰接胺基酸、至少95個鄰接胺基酸、至少100個鄰接胺基酸、至少105個鄰接胺基酸、至少110個鄰接胺基酸、至少115個鄰接胺基酸、至少120個鄰接胺基酸、至少125個鄰接胺基酸、至少130個鄰接胺基酸或至少135個鄰接胺基酸。
在一些實施例中，細胞內信號傳導序列係或包括人類CD79之細胞內信號傳導序列。人類CD79細胞內信號傳導序列之實例性序列係：RKRWQNEKLGLDAGDEYEDENLYEGLNLDDCSMYEDISRGLQGTYQDVGSLNIGDVQLEKP (SEQ ID NO: 91)或其片段(例如，自其N端縮短1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個胺基酸及/或自其C端縮短1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個胺基酸)。在一些實施例中，細胞內信號傳導序列可與人類CD79之細胞內信號傳導序列之序列具有至少80% (例如，至少82%、至少84%、至少86%、至少88%、至少90%、至少92%、至少94%、至少96%、至少98%或至少99%)一致性。在一些實施例中，細胞內信號傳導序列係人類CD79之細胞內信號傳導序列之至少10個鄰接胺基酸、至少15個鄰接胺基酸、至少20個鄰接胺基酸、至少25個鄰接胺基酸或至少35個鄰接胺基酸、至少40個鄰接胺基酸、至少45個鄰接胺基酸、至少50個鄰接胺基酸或至少55個鄰接胺基酸。
業內已知細胞內信號傳導序列之額外態樣及實例。
共刺激結構域
在一些實施例中，共刺激結構域可包括20個胺基酸至250個胺基酸(或本文所述此範圍內之任何子範圍)之序列。
在本文所述CAR中之任一者之一些實施例中，共刺激結構域係4-1BB、CD28、CD2、CD4、CD27、CD8或CD137之共刺激結構域。
在一些實施例中，共刺激結構域係或包括人類4-1BB之共刺激結構域。人類4-1BB共刺激結構域之實例性序列係：KRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCEL (SEQ ID NO: 92)或其片段(例如，自其N端縮短1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個胺基酸及/或自其C端縮短1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個胺基酸)。在一些實施例中，共刺激結構域可與人類4-1BB之共刺激結構域之序列具有至少80% (例如，至少82%、至少84%、至少86%、至少88%、至少90%、至少92%、至少94%、至少96%、至少98%或至少99%)一致性。在一些實施例中，共刺激結構域係人類4-1BB之共刺激結構域之至少10個鄰接胺基酸、至少15個鄰接胺基酸、至少20個鄰接胺基酸、至少25個鄰接胺基酸、至少30個鄰接胺基酸或至少35個鄰接胺基酸。
在一些實施例中，共刺激結構域係或包括人類CD28之共刺激結構域。人類4-1BB共刺激結構域之實例性序列係：RSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRS (SEQ ID NO: 93)或其片段(例如，自其N端縮短1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個胺基酸及/或自其C端縮短1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個胺基酸)。在一些實施例中，共刺激結構域可與人類CD28之共刺激結構域之序列具有至少80% (例如，至少82%、至少84%、至少86%、至少88%、至少90%、至少92%、至少94%、至少96%、至少98%或至少99%)一致性。在一些實施例中，共刺激結構域係人類CD28之共刺激結構域之至少10個鄰接胺基酸、至少15個鄰接胺基酸、至少20個鄰接胺基酸、至少25個鄰接胺基酸、至少30個鄰接胺基酸或至少35個鄰接胺基酸。
在一些實施例中，共刺激結構域係或包括人類CD4之共刺激結構域。人類CD4共刺激結構域之實例性序列係：CVRCRHRRRQAERMSQIKRLLSEKKTCQCPHRFQKTCSPI (SEQ ID NO: 94)或其片段(例如，自其N端縮短1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個胺基酸及/或自其C端縮短1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個胺基酸)。在一些實施例中，共刺激結構域可與人類CD4之共刺激結構域之序列具有至少80% (例如，至少82%、至少84%、至少86%、至少88%、至少90%、至少92%、至少94%、至少96%、至少98%或至少99%)一致性。在一些實施例中，共刺激結構域係人類CD4之共刺激結構域之至少10個鄰接胺基酸、至少15個鄰接胺基酸、至少20個鄰接胺基酸、至少25個鄰接胺基酸、至少30個鄰接胺基酸或至少35個鄰接胺基酸。
在一些實施例中，共刺激結構域係或包括人類CD27之共刺激結構域。人類CD27共刺激結構域之實例性序列係：QRRKYRSNKGESPVEPAEPCHYSCPREEEGSTIPIQEDYRKPEPACSP (SEQ ID NO: 95)或其片段(例如，自其N端縮短1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14個胺基酸及/或自其C端縮短1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14個胺基酸)。在一些實施例中，共刺激結構域可與人類CD27之共刺激結構域之序列具有至少80% (例如，至少82%、至少84%、至少86%、至少88%、至少90%、至少92%、至少94%、至少96%、至少98%或至少99%)一致性。在一些實施例中，共刺激結構域係人類CD27之共刺激結構域之至少10個鄰接胺基酸、至少15個鄰接胺基酸、至少20個鄰接胺基酸、至少25個鄰接胺基酸、至少30個鄰接胺基酸、至少35個鄰接胺基酸或至少40個鄰接胺基酸。
在一些實施例中，共刺激結構域係或包括人類CD8之共刺激結構域。人類CD8共刺激結構域之實例性序列係：LYCNHRNRRRVCKCPRPVVKSGDKPSLSARYV (SEQ ID NO: 96)或其片段(例如，自其N端縮短1、2、3、4或5個胺基酸及/或自其C端縮短1、2、3、4或5個胺基酸)。在一些實施例中，共刺激結構域可與人類CD8之共刺激結構域之序列具有至少80% (例如，至少82%、至少84%、至少86%、至少88%、至少90%、至少92%、至少94%、至少96%、至少98%或至少99%)一致性。在一些實施例中，共刺激結構域係人類CD8之共刺激結構域之至少10個鄰接胺基酸、至少15個鄰接胺基酸、至少20個鄰接胺基酸、至少25個鄰接胺基酸或至少30個鄰接胺基酸。
在一些實施例中，共刺激結構域係或包括人類CD2之共刺激結構域。人類CD2共刺激結構域之實例性序列係：KRKKQRSRRNDEELETRAHRVATEERGRKPHQIPASTPQNPATSQHPPPPPGHRSQAPSHRPPPPGHRVQHQPQKRPPAPSGTQVHQQKGPPLPRPRVQPKPPHGAAENSLSPSSN (SEQ ID NO: 97)或其片段(例如，自其N端縮短1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44或55個胺基酸及/或自其C端縮短1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44或55個胺基酸)。在一些實施例中，共刺激結構域可與人類CD2之共刺激結構域之序列具有至少80% (例如，至少82%、至少84%、至少86%、至少88%、至少90%、至少92%、至少94%、至少96%、至少98%或至少99%)一致性。在一些實施例中，共刺激結構域係人類CD2之共刺激結構域之至少10個鄰接胺基酸、至少15個鄰接胺基酸、至少20個鄰接胺基酸、至少25個鄰接胺基酸、至少30個鄰接胺基酸、至少35個鄰接胺基酸、至少40個鄰接胺基酸、至少45個鄰接胺基酸、至少50個鄰接胺基酸、至少55個鄰接胺基酸、至少60個鄰接胺基酸、至少65個鄰接胺基酸、至少70個鄰接胺基酸、至少75個鄰接胺基酸、至少80個鄰接胺基酸、至少85個鄰接胺基酸、至少90個鄰接胺基酸、至少95個鄰接胺基酸、至少100個鄰接胺基酸、至少105個鄰接胺基酸或至少110個鄰接胺基酸。
在一些實施例中，共刺激結構域係或包括人類CD137之共刺激結構域。人類CD137共刺激結構域之實例性序列係：KRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCEL (SEQ ID NO: 98)或其片段(例如，自其N端縮短1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個胺基酸及/或自其C端縮短1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個胺基酸)。在一些實施例中，共刺激結構域可與人類CD137之共刺激結構域之序列具有至少80% (例如，至少82%、至少84%、至少86%、至少88%、至少90%、至少92%、至少94%、至少96%、至少98%或至少99%)一致性。在一些實施例中，共刺激結構域係人類CD137之共刺激結構域之至少10個鄰接胺基酸、至少15個鄰接胺基酸、至少20個鄰接胺基酸、至少25個鄰接胺基酸、至少30個鄰接胺基酸或至少35個鄰接胺基酸。實例性CD137共刺激結構域係由以下核酸序列編碼：
AAACGGGGCAGAAAGAAACTCCTGTATATATTCAAACAACCATTTATGAGACCAGTACAAACTACTCAAGAGGAAGATGGCTGTAGCTGCCGATTTCCAG AAGAAGAAGAAGGAGGATGTGAACTG (SEQ ID NO: 99)。
業內已知共刺激結構域之額外態樣及實例。
生成表現嵌合抗原受體 (CAR) 之細胞之方法
本文亦提供生成表現嵌合抗原受體(CAR)之細胞之方法，其包括向細胞(例如，本文所述細胞中之任一者)中引入編碼本文所述CAR中之任一者之任何核酸或本文所述載體中之任一者。在一些實例中，細胞可為真核細胞。在一些實例中，真核細胞可為哺乳動物細胞(例如，人類細胞)。在本文所述方法中之任一者之一些實施例中，哺乳動物細胞可為(例如) T細胞(CD4+ T細胞、CD8+ T細胞、TH1細胞、TH2細胞或Treg細胞)、B細胞(例如，記憶B細胞)、NK細胞、嗜中性球、巨噬細胞或單核球。在本文所述方法中之任一者之一些實施例中，哺乳動物細胞係慢性骨髓性白血病(CML) K-562細胞(ATCC® CCL-243™)。
本文闡述向細胞中引入本文所述核酸或載體之非限制性方法。業內已知向細胞中引入核酸或載體之額外方法。
在本文所述方法中之任一者之一些實施例中，哺乳動物細胞可為自個體(例如，人類個體)獲得之細胞。在一些實例中，個體(例如，人類)經診斷或鑑別為患有癌症(例如，特徵在於癌細胞表現BCMA及CD307e中之一者或二者之癌症)。本文所述方法中之任一者之一些實施例可進一步包括在引入步驟之前自個體(例如，本文所述個體中之任一者)獲得細胞。
該等方法中之任一者之一些實施例可進一步包括在引入步驟之後，在液體培養基中(例如，在容許細胞增殖之條件下)培養細胞之步驟。業內已知可用於培養該等細胞之液體培養基。
真核細胞
本文所述方法及組合物可涉及使用或包含真核細胞。真核細胞之非限制性實例包括哺乳動物細胞(例如，小鼠細胞、大鼠細胞、倉鼠細胞、兔細胞、犬細胞、貓科動物細胞、猴細胞或人類細胞)。在本文所述方法中之任一者之一些實施例中，哺乳動物細胞可為(例如) T細胞(CD4+ T細胞、CD8+ T細胞、TH1細胞、TH2細胞或Treg細胞)、B細胞(例如，記憶B細胞)、NK細胞、嗜中性球、巨噬細胞或單核球。
在本文所述細胞中之任一者之一些實例中，細胞可自個體獲得(例如，且視情況，在引入編碼本文所述CAR中之任一者之核酸或本文所述載體中之任一者後，投與回同一個體)。在該等實施例中，個體可為經診斷或鑑別為患有癌症(例如，特徵在於癌細胞表現BCMA及CD307e中之一者或二者之癌症)之個體。
培養哺乳動物細胞之方法為業內所熟知。可將哺乳動物細胞活體外維持在容許增殖、分化及/或生長之條件下。簡言之，哺乳動物細胞可藉由使細胞(例如，任何細胞)與細胞培養基接觸來培養，該細胞培養基包括必需生長因子及支持細胞存活及生長之補充物。
業內已知向細胞(例如，真核細胞)中引入核酸及載體之方法。可用於向細胞中引入核酸或載體之方法之非限制性實例包括脂轉染、轉染、電穿孔、顯微注射、磷酸鈣轉染、基於樹枝狀聚合物之轉染、陽離子聚合物轉染、細胞擠壓、聲致穿孔、光學轉染、穿刺轉染(impalefection)、流體動力學遞送、磁轉染、病毒轉導(例如，腺病毒及慢病毒轉導)及奈米粒子轉染。
治療方法
本文亦提供治療個體之癌症之方法，其包括：投與治療有效量之本文所述細胞中之任一者(例如，表現本文所述CAR中之任一者之任何細胞)。在本文所述方法中之任一者之一些實施例中，癌症之特徵在於癌細胞表現BCMA及CD307e中之一者或二者。在本文所述方法中之任一者之一些實施例中，癌症係癌瘤、肉瘤(例如，尤恩氏肉瘤(Ewing sarcoma)、卡波西肉瘤(Kaposi sarcoma)、骨肉瘤及軟組織肉瘤)、骨髓瘤(例如，多發性骨髓瘤)、白血病(例如，B細胞白血病、例如，慢性淋巴球性白血病(CLL)、急性淋巴母細胞性白血病、B細胞幼淋巴球性白血病、前體B淋巴母細胞性白血病及毛細胞白血病、急性骨髓性白血病(AML)、慢性骨髓性白血病(CML))或淋巴瘤(例如，B細胞淋巴瘤，例如，小淋巴球性淋巴瘤、柏基特淋巴瘤、皮膚T細胞淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、非霍奇金氏淋巴瘤、原發性中樞神經系統淋巴瘤或T細胞淋巴瘤)。在一些實施例中，癌症係癌瘤、肉瘤、骨髓瘤、白血病或淋巴瘤，其特徵在於癌細胞表現BCMA及CD307e中之一者或二者。檢測BCMA及CD307e之癌細胞表現之方法可使用業內已知之方法(例如，利用結合至BCMA之經標記抗體及特異性結合至CD307e之經標記抗體染色、分選或成像個體之癌細胞)來實施。
在本文所述方法中之任一者之一些實施例中，個體經診斷或鑑別為患有癌症。本文所述方法之一些實施例進一步包括將個體診斷或鑑別為患有癌症。本文所述方法之一些實施例可進一步包括選擇患有癌症之個體進行使用本文所述方法中之任一者之治療。
在本文所述方法中之任一者之一些實施例中，該方法進一步包括在投與步驟之前：自個體(例如，本文所述任何實例性類型之哺乳動物細胞)獲得初始細胞；及向初始細胞中引入核酸(例如，編碼本文所述CAR中之任一者之任何核酸)或載體(例如，本文所述載體中之任一者)，以產生投與個體之細胞。在本文所述方法中之任一者之一些實施例中，該方法進一步包括在引入步驟與投與步驟之間之如下步驟：在液體培養基中(例如，在容許增殖之條件下)培養投與個體之細胞。
本文亦提供治療個體之多發性骨髓瘤之方法，其包括：向個體投與治療有效量之本文所述細胞中之任一者(例如，表現本文所述CAR中之任一者之任何細胞)。在本文所述方法中之任一者之一些實施例中，個體經診斷或鑑別為患有多發性骨髓瘤。在一些實施例中，個體經鑑別為患有多發性骨髓瘤，其特徵在於癌細胞表現BCMA及CD307e中之一者或二者。
本文所述方法之一些實施例進一步包括將個體診斷或鑑別為患有多發性骨髓瘤。本文所述方法之一些實施例可進一步包括選擇患有多發性骨髓瘤之個體進行使用本文所述方法中之任一者之治療。
在本文所述方法中之任一者之一些實施例中，該方法進一步包括在投與步驟之前：自患有多發性骨髓瘤之個體(例如，本文所述任何實例性類型之哺乳動物細胞)獲得初始細胞；及向初始細胞中引入核酸(例如，編碼本文所述CAR中之任一者之任何核酸)或載體(例如，本文所述載體中之任一者)，以產生投與個體之細胞。在本文所述方法中之任一者之一些實施例中，該方法進一步包括在引入步驟與投與步驟之間之如下步驟：在液體培養基中(例如，在容許增殖之條件下)培養投與個體之細胞。在本文所述方法中之任一者中，如本文所述之初始細胞並非癌細胞。
在本文所述方法中之任一者之一些實施例中，個體係人類。術語「個體」係指任何哺乳動物，例如，狗、貓科動物(例如，貓)、馬科動物(例如，馬)、綿羊、牛、豬、山羊；靈長類動物，例如，猿猴(例如，猴(例如，狨猴、狒狒)或猿(例如，大猩猩、黑猩猩、猩猩或長臂猿)或人類；或齧齒類動物(例如，小鼠、天竺鼠、倉鼠或大鼠)。在一些實施例中，個體可為非人類哺乳動物，尤其可採用通常在人類(例如，鼠類、兔、豬、犬或靈長類動物動物)中展現治療效能之模型的哺乳動物。舉例而言，非人類哺乳動物可為動物癌症模型(例如，本文所述任何特定類型之癌症之動物癌症模型)。
在本文所述方法中之任一者之一些實施例中，癌症係實體癌。在本文所述方法中之任一者之一些實施例中，癌症係非轉移癌症。在本文所述方法中之任一者之一些實施例中，癌症係轉移癌症。
本文所述方法中之任一者之一些實施例進一步包括向個體投與一或多種額外抗癌症療法。在本文所述方法中之任一者之一些實施例中，一或多種額外抗癌症療法係選自由以下組成之群：化學療法、免疫療法、手術切除及放射療法。
在本文所述方法中之任一者之一些實施例中，個體先前已投與另一抗癌症療法，且該抗癌症療法不成功。
組合物及套組
本文亦提供包括至少一種本文所述細胞中之任一者(例如，表現本文所述CAR之本文所述細胞中之任一者)以及醫藥上可接受之載劑的組合物(例如，醫藥組合物)。醫藥上可接受之載劑之實例為業內已知且包括(例如)磷酸鹽緩衝鹽水、鹽水及林格氏溶液(Ringer’s solution)。
本文亦提供包括至少一種本文所述細胞中之任一者(例如，表現本文所述CAR之本文所述細胞中之任一者)及細胞冷凍或儲存介質的組合物。細胞冷凍介質之實例為業內已知，且可包括(例如)二甲亞碸(DMSO)、羧甲基纖維素鈉及甘油中之一或多者。儲存介質之非限制性實例可包括(例如)緩衝等滲溶液、緩衝溶液、培養基及血清(例如，人類血清)中之一或多者。在該等組合物之一些實施例中，本文所述組合物經冷凍或解凍。在該等組合物之一些實施例中，組合物未經冷凍。
在一些實施例中，組合物經調配用於靜脈內投與。組合物可以包括有效治療個體之疾病(例如癌症)之足夠量之細胞的劑型提供。
亦提供包括編碼本文所述CAR中之任一者之任何核酸或本文所述載體中之任一者以及視情況醫藥上可接受之載劑的組合物。
本文亦提供包括本文所述組合物(例如，醫藥組合物)中之任一者之套組。在一些實施例中，套組可進一步包括實施本文所述方法中之任一者之說明書。在一些實施例中，套組可包括至少一個劑量之本文所述組合物中之任一者。在一些實施例中，套組可進一步包括可用於繁殖細胞之細胞培養基。在一些實施例中，套組可進一步包括無菌容器，其中細胞置於無菌容器中。在一些實施例中，套組可包括一或多種可用於將核酸或載體引入哺乳動物細胞中之劑。
實例
在以下實例中進一步闡述本發明，該等實例並不限制申請專利範圍中所述之本發明範圍。
實例 1. 實例性 CAR
不期望受限於理論，本發明者產生特異性結合至BCMA及CD307e二者之雙特異性嵌合抗原受體(CAR)的各種實施例(圖1-2及表1)。串聯CAR之實例提供於圖1中。在一些實施例中，雙特異性CAR係單一多肽鏈，其中第一抗原結合結構域係結合至CD307 (10A8)之單鏈可變片段(scFv)且第二抗原結合結構域係結合至BCMA (J6M0)之scFV，共刺激結合結構域係4-1BB (CD137)，且細胞內信號傳導結構域係CD3 ζ。在本文所述CAR中之任一者之一些實施例中，第一及第二抗原結合結構域由GS連接子連接(圖2)。在一些實施例中，第一抗原結合結構域包括經由第一scFv連接體連接之輕鏈可變結構域(VL )及重鏈可變結構域(VH )。在一些實施例中，第二抗原結合結構域包括輕鏈可變結構域(VL)及重鏈可變結構域(VH)。在一些實施例中，第二抗原結合結構域之VL及VH結構域經由第二scFv連接體連接。在一些實施例中，第一或第二抗原結合結構域之可變結構域(VH或VL)連接至鉸鏈序列(例如，CD8a鉸鏈序列)。


表 1. 實例性 CAR 之概述
實例 2. 串聯 CAR
多發性骨髓瘤係不能治癒之漿細胞惡性病。儘管基於細胞之CAR療法產生顯著緩解，但已在一些復發之多發性骨髓瘤患者中檢測到抗原陰性逃逸變體。不期望受限於理論，本發明者已發現，靶向兩種疾病相關之抗原可降低抗原逃逸之風險。BCMA及FCRL5 (CD307e)係在多發性骨髓瘤中高度表現之譜系特異性標記。表2提供所產生串聯CAR之概述。


表 2. 實例性串聯 CAR 之概述
如圖3、7A-B及16中所示，BCMA及CD307由患者源多發性骨髓瘤腫瘤細胞遍在表現。圖6及8B顯示在與鼠類10A8 scFv CAR及人類化10A8 scFv CAR一起培育後，在CD307+ K562細胞中觀察到50%以上之細胞溶解。圖9A顯示在與人類10A8 scFv CAR一起培育後在CD307+ K562細胞中檢測到高IFNγ含量，而在抗原陰性K562細胞中未檢測到IFNγ。圖9B顯示在與人類10A8 scFv CAR及鼠類10A8 scFv CAR一起培育後在CD307+ K562細胞中檢測到高IL-2含量，而在抗原陰性K562細胞中未檢測到IL-2。圖13A-D顯示使用表現CD307、BCMA或二者之10A8 scFv/J6M0 scFv雙特異性CAR的細胞溶解。評價原代T細胞中習用(單特異性) CAR及雙特異性CAR針對BCMA及CD307之表現(圖11及12)。
實例 3. 最佳化研究
不期望受限於理論，研發最佳化策略以容許納入多種雙重靶向方法。圖17A、17B及18顯示1G7識別CD307之內源含量且生成高含量之IFNγ，然而，亦檢測到高背景細胞毒性(數據未顯示)。圖14顯示1G7串聯CAR在原代人類T細胞中之表現。接下來，在與1G7串聯CAR一起培育後在K562細胞中測定細胞溶解(圖15A-D及表2)。為了進一步測試1G7串聯CAR之敏感性，測試1G7串聯CAR在表現CD307e之內源含量之細胞中的效應。如圖16中所示，與REC-1細胞(其表現CD307e之內源含量)相比，CD307e+ K562細胞表現高得多的CD307e含量。顯示基於1G7之串聯CAR能夠殺死REC-1細胞(圖17 A-B)且因應此靶細胞系上呈遞之CD307產生細胞介素(圖18)。另外，當串聯CAR設計中包括1G7 scFv時，自習用CAR觀察之中等背景細胞毒性被消除(圖17A)。
以下材料及方法用於下述實驗中。
其他實施例
應瞭解，儘管已結合本發明之詳細說明闡述本發明，但上述說明意欲闡釋而非限制本發明之範圍，本發明之範圍係由隨附申請專利範圍之範圍所界定。其他態樣、優點及修改均在以下申請專利範圍之範圍內。
圖1係習用嵌合抗原受體(CAR)及串聯CAR之示意圖示。
圖2係雙特異性CAR之細胞外部分之兩個實施例的示意圖示。
圖3顯示源自患有多發性骨髓瘤(MM.1R、MM.1S、H929、OPM2、U266)之患者之永生化癌細胞系及陰性對照細胞(K562)、未染色細胞及同位素對照上BCMA染色的代表性FACS直方圖。
圖4係顯示與作為陰性對照之未轉導T細胞相比，基於J6M0 scFv之CAR (J6M0_BBz)殺死多種BCMA陽性細胞系(MM.1R、MM.1S、H929、OPM2、U266)之能力的代表圖。所用效應物對靶標(E:T)比率係1:1。
圖5係顯示經工程化以外源表現CD307之K562腫瘤細胞及不天然表現CD307之親代陰性對照K562細胞、未染色細胞及同位素對照上之CD307e表現的代表性FACS直方圖。
圖6係在與m7D11、1G7v85、1G7v93、13G9v1、13G9v3、m13G9、10A8或m10A8一起培育後K562CD307 細胞之靶向細胞溶解的代表性散佈圖。
圖7A係自CoMMpass™研究獲得之BCMA之每百萬映射讀取每千鹼基之轉錄之片段(fragments per kilobase of transcript per million mapped reads, FPKM)的代表性圖。
圖7B係自CoMMpass™研究獲得之FCRL5 (CD307e)之FPKM的代表性圖。
圖8A係使用人類化10A8 scFv、鼠類m10A8 scFv (m10A8)或未轉導(UNTR)對照T細胞以3:1、1:1及1:3之效應物對靶標比率(E:T)之CD307抗原陰性K562腫瘤細胞溶解的代表圖。
圖8B係使用人類化10A8 scFv、鼠類m10A8 scFv (m10A8)或未轉導(UNTR)對照T細胞以3:1、1:1及1:3之比率(E:T)之CD307+ K562腫瘤細胞溶解的代表圖。
圖9A係在使CD307抗原陰性K562腫瘤細胞及CD307+ K562腫瘤細胞與鼠類10A8 (m10A8)或人類化10A8 (10A8)一起培育後，IFNγ含量之代表圖。*表示不可檢測之含量。
圖9B係在使抗原陰性K562腫瘤細胞及CD307+ K562腫瘤細胞與鼠類10A8 (m10A8)或人類化10A8 (10A8)一起培育後，IL-2含量之代表圖。*表示不可檢測之含量。
圖10係一系列串聯CAR (包括J6M0/10A8 (TanCAR1)、J6M0/10A8 (TanCAR2)及10A8/J6M0 (TanCAR3))之細胞外部分之三個實施例的示意圖示。
圖11係表現習用CAR之原代人類T細胞中未轉導(UNTR)、抗CD307 (10A8)及抗BCMA (J6M0)表現的代表性FACS點圖。
圖12係在原代人類T細胞中表現之攜帶抗CD307 (10A8)及抗BCMA (J6M0) scFvs之串聯CAR的代表性FACS點圖。
圖13A係在TanCAR1、TanCAR2、TanCAR3、10A8、J6M0、陰性對照或未轉導(UNTR)對照T細胞一起培育後抗原陰性K562腫瘤細胞溶解的代表圖。
圖13B係在TanCAR1、TanCAR2、TanCAR3、10A8、J6M0、陰性對照或未轉導(UNTR)對照T細胞一起培育後K562CD307 腫瘤細胞溶解的代表圖。
圖13C係在TanCAR1、TanCAR2、TanCAR3、10A8、J6M0、陰性對照或未轉導(UNTR)對照T細胞一起培育後K562BCMA 腫瘤細胞溶解的代表圖。
圖13D係在TanCAR1、TanCAR2、TanCAR3、10A8、J6M0、陰性對照或未轉導(UNTR)對照T細胞一起培育後K562CD307/BCMA 腫瘤細胞溶解的代表圖。
圖14係針對CD307表現習用CAR (1G7.v85及1G7.v93)、針對BCMA及CD307表現串聯CAR (J6M0/1G7v.85及J6M0/1G7v.93)、針對BCMA表現習用CAR (J6M0)或針對CD19表現習用CAR (FMC63)之原代人類T細胞中抗CD307及抗BCMA CAR表現的代表性FACS點圖。
圖15A係在與1G7.v85、1G7.v93、J6M0_1G7v85 TanCAR、J6M0_1G7v93 TanCAR、J6M0、陰性對照或未轉導(UNTR)對照T細胞一起培育後抗原陰性K562腫瘤細胞溶解的代表圖。
圖15B係在與1G7.v85、1G7.v93、J6M0_1G7v85 TanCAR、J6M0_1G7v93 TanCAR、J6M0、陰性對照或未轉導(UNTR)對照T細胞一起培育後CD307+ K562腫瘤細胞溶解的代表圖。
圖15C係在與1G7.v85、1G7.v93、J6M0_1G7v85 TanCAR、J6M0_1G7v93 TanCAR、J6M0、陰性對照或未轉導(UNTR)對照T細胞一起培育後BCMA+ K562腫瘤細胞溶解的代表圖。
圖15D係在與1G7.v85、1G7.v93、J6M0_1G7v85 TanCAR、J6M0_1G7v93 TanCAR、J6M0、陰性對照或未轉導(UNTR)對照T細胞一起培育後CD307+ BCMA+ K562腫瘤細胞溶解的代表圖。
圖16係顯示抗原陰性K-562腫瘤細胞、K562CD307 腫瘤細胞、REC-1腫瘤細胞、未染色細胞及同位素對照中之CD307表現的代表性FACS直方圖。
圖17A係在與1G7.v85、1G7.v93、J6M0_1G7v85 TanCAR、J6M0_1G7v93 TanCAR、J6M0、FMC63對照或未轉導(UNTR) T細胞一起培育後抗原陰性K562腫瘤細胞溶解的代表圖。所用效應物對靶標(E:T)比率係1:1。
圖17B係在與1G7.v85、1G7.v93、J6M0_1G7v85 TanCAR、J6M0_1G7v93 TanCAR、J6M0、FMC63對照或未轉導(UNTR) T細胞一起培育後REC-1腫瘤細胞溶解的代表圖。所用效應物對靶標(E:T)比率係1:1。
圖18係在單獨培育T細胞、抗原陰性K562腫瘤細胞及REC-1腫瘤細胞與1G7.v85、1G7.v93、J6M0_1G7v85 TanCAR、J6M0_1G7v93 TanCAR、J6M0或FMC63對照T細胞一起培育後IFNγ含量的代表圖。

Claims (62)

  1. 一種嵌合抗原受體(CAR)，其包含： 特異性結合至B細胞成熟抗原(BCMA)之第一抗原結合結構域； 特異性結合至CD307e之第二抗原結合結構域； 跨膜結構域； 共刺激結構域；及 細胞內信號傳導結構域。
  2. 如請求項1之CAR，其中該CAR進一步包含位於該第一抗原結合結構域與該第二抗原結合結構域之間之連接體。
  3. 如請求項2之CAR，其中該連接體係GS連接子。
  4. 如請求項1至3中任一項之CAR，其中該CAR進一步包含位於該第二抗原結合結構域與該跨膜結構域之間之鉸鏈序列。
  5. 如請求項1至3中任一項之CAR，其中該CAR進一步包含位於該第一抗原結合結構域與該跨膜結構域之間之鉸鏈序列。
  6. 如請求項4或5之CAR，其中該鉸鏈序列係CD8a鉸鏈序列或CD28鉸鏈序列。
  7. 如請求項2之CAR，其中該CAR自N端至C端方向上包含：該第一抗原結合結構域、該連接體、該第二抗原結合結構域、該跨膜結構域、該共刺激結構域及該細胞內信號傳導結構域。
  8. 如請求項7之CAR，其中該CAR進一步包含位於該第二抗原結合結構域與該跨膜結構域之間之鉸鏈序列。
  9. 如請求項2或3之CAR，其中該CAR自N端至C端方向上包含：該第二抗原結合結構域、該連接體、該第一抗原結合結構域、該跨膜結構域、該共刺激結構域及該細胞內信號傳導結構域。
  10. 如請求項9之CAR，其中該CAR進一步包含鉸鏈序列，其中該鉸鏈序列位於該第一抗原結合結構域與該跨膜結構域之間。
  11. 如請求項1至10中任一項之CAR，其中該第一抗原結合結構域及該第二抗原結合結構域中之一者或二者係單鏈可變片段(scFv)。
  12. 如請求項11之CAR，其中該第一抗原結合結構域及該第二抗原結合結構域二者皆係scFv。
  13. 如請求項12之CAR，其中該第一抗原結合結構域自N端至C端方向上包含由第一scFv連接體分開之VL 結構域及VH 結構域。
  14. 如請求項12之CAR，其中該第一抗原結合結構域自N端至C端方向上包含由第一scFv連接體分開之VH 結構域及VL 結構域。
  15. 如請求項12至14中任一項之CAR，其中該第二抗原結合結構域自N端至C端方向上包含由第二scFv連接體分開之VL 結構域及VH 結構域。
  16. 如請求項12至14中任一項之CAR，其中該第二抗原結合結構域自N端至C端方向上包含由第二scFv連接體分開之VH 結構域及VL 結構域。
  17. 如請求項13至16中任一項之CAR，其中該第一scFv連接體及該第二scFv連接體中之一者或二者係Whitlow連接體。
  18. 如請求項17之CAR，其中該第一scFv連接體及該第二scFv連接體二者皆係Whitlow連接體。
  19. 如請求項1至18中任一項之CAR，其中該跨膜結構域係CD28、CD3ε、CD4、CD5、CD6、CD8a、CD9、CD16、CD22、CD33、CD37、CD 45、CD64、CD80、CD86、CD134、4-1BB、GITR、NGFR或CD154之跨膜結構域。
  20. 如請求項1至19中任一項之CAR，其中該共刺激結構域係4-1BB、CD28、CD2、CD4或CD8之共刺激結構域。
  21. 如請求項1至21中任一項之CAR，其中該細胞內信號傳導結構域係CD3ζ、DAP-10、DAP-12、CD5、CD22或CD79之細胞內信號傳導結構域。
  22. 如請求項1至21中任一項之CAR，其中該細胞內信號傳導結構域係CD3ζ之細胞內信號傳導結構域，且該共刺激結構域係4-1BB之共刺激結構域。
  23. 一種核酸，其編碼如請求項1至22中任一項之CAR。
  24. 一種載體，其包含如請求項23之核酸。
  25. 如請求項24之載體，其中該核酸可操作地連接至啟動子及增強子中之一者或二者。
  26. 如請求項25之載體，其中該啟動子係可誘導型啟動子。
  27. 一種細胞，其包含如請求項23之核酸或如請求項24至26中任一項之載體。
  28. 如請求項27之細胞，其中該細胞為真核細胞。
  29. 如請求項28之細胞，其中該真核細胞為哺乳動物細胞。
  30. 如請求項29之細胞，其中該哺乳動物細胞係人類細胞。
  31. 如請求項29或30之細胞，其中該哺乳動物細胞係選自由以下組成之群之細胞：T細胞、天然殺手(NK)細胞、單核球/巨噬細胞，及B細胞。
  32. 如請求項29至31之細胞，其中該哺乳動物細胞係自個體獲得之哺乳動物細胞。
  33. 如請求項32之細胞，其中該個體經診斷或鑑別為患有癌症。
  34. 如請求項33之細胞，其中該癌症之特徵在於癌細胞表現BCMA及CD307e中之一者或二者。
  35. 一種醫藥組合物，其包含如請求項27至34中任一項之細胞及醫藥上可接受之載劑。
  36. 一種套組，其包含如請求項35之醫藥組合物。
  37. 一種醫藥組合物，其包含如請求項23之核酸或如請求項24至26中任一項之載體及醫藥上可接受之載劑。
  38. 一種套組，其包含如請求項37之醫藥組合物。
  39. 一種產生表現嵌合抗原受體(CAR)之細胞之方法，該方法包含將如請求項23之核酸或如請求項24至26中任一項之載體引入細胞中。
  40. 如請求項39之方法，其中該細胞為真核細胞。
  41. 如請求項40之方法，其中該真核細胞為哺乳動物細胞。
  42. 如請求項41之方法，其中該哺乳動物細胞係人類細胞。
  43. 如請求項40或41之方法，其中該哺乳動物細胞係選自由以下組成之群之細胞：T細胞、NK細胞、巨噬細胞/單核球，及B細胞。
  44. 如請求項41至43中任一項之方法，其中該哺乳動物細胞係自個體獲得之哺乳動物細胞。
  45. 如請求項44之方法，其中該個體經診斷或鑑別為患有癌症。
  46. 如請求項45之方法，其中該癌症之特徵在於癌細胞表現BCMA及CD307e中之一者或二者。
  47. 如請求項39至46中任一項之方法，其中該方法進一步包含在該引入步驟後： 在液體培養基中培養該細胞。
  48. 如請求項44之方法，其中該方法進一步包含在該引入步驟之前： 自該個體獲得該細胞。
  49. 一種如請求項27至31中任一項之細胞之用途，其用於製造用以治療個體之癌症之藥劑。
  50. 如請求項49之用途，其中該癌症之特徵在於癌細胞表現BCMA及CD307e中之一者或二者。
  51. 如請求項50之用途，其中該癌症係癌瘤、肉瘤、骨髓瘤、白血病或淋巴瘤。
  52. 如請求項49至51中任一項之用途，其中該個體經診斷或鑑別為患有該癌症。
  53. 如請求項49至52中任一項之用途，其中該細胞係藉由如請求項23之核酸或如請求項24至26中任一項之載體引入獲自該個體之初始細胞中來生成。
  54. 如請求項53之用途，其中在投與該個體之前，在液體培養基中培養該細胞。
  55. 如請求項49至54中任一項之用途，其中該個體係人類。
  56. 一種如請求項27至31中任一項之細胞之用途，其用於製造用以治療個體之多發性骨髓瘤之藥劑。
  57. 如請求項56之用途，其中該個體經診斷或鑑別為患有多發性骨髓瘤。
  58. 如請求項56或57之用途，其中該細胞係藉由如請求項23之核酸或如請求項24至26中任一項之載體引入獲自該個體之初始細胞中來生成。
  59. 如請求項58之用途，其中在投與該個體之前，在液體培養基中培養該細胞。
  60. 如請求項56至59中任一項之用途，其中該個體係人類。
  61. 如請求項49至60中任一項之用途，其中該藥劑係與一或多種另外抗癌症療法組合使用。
  62. 如請求項61之用途，其中該一或多種另外抗癌症療法係選自由以下組成之群：化學療法、免疫療法、手術切除及放射療法。
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