TW201821086A - 微小ｒｎａ－１９５局部用製劑及其用途 - Google Patents

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Abstract

本發明提供一種微小RNA-195局部用製劑及其用途。所述微小RNA-195局部用製劑包含微小RNA-195和載體，所述微小RNA-195局部用製劑具有改善眼部血管滲漏之功效。藉此，所述微小RNA-195局部用製劑可用於製備治療因血管滲漏所引起的眼部病症的藥物。

Description

微小RNA-195局部用製劑及其用途
本發明是有關於一種微小RNA-195製劑及其用途，特別是微小RNA-195局部用製劑及其用於製備因血管滲漏所引起的眼部病症之藥物的用途。
視網膜為眼球內一層薄而纖細的感覺組織，由高度分化的神經細胞所構成，功能如同照相機的底片一樣，使我們能感受到光影與色彩。然而視網膜易受各種病理因子的損害而產生多種的視網膜疾病。
視網膜病變包含高度近視引起的視網膜格子化變性、視網膜破洞及視網膜剝離；糖尿病引起的新生血管、玻璃體出血；老化或糖尿病引起的黃斑部水腫；以及眼球外傷引起的眼內出血、異物等。其中全世界罹患糖尿病的人口有不斷增加的趨勢，糖尿病是體內醣類代謝失調的疾病易發生於血糖控制不穩定，而且罹患糖尿病的時間愈久，產生視網膜病變的危險就愈高。
部分糖尿病的併發症或許可藉由藥物的治療而延緩發生，但因糖尿病而併發的視網膜病變甚至是失明，卻 是最常見且最難預防的併發症，失明不僅造成個人生活極度不便，也增加國家醫療保健支出與造成國家社會福利沉重的負擔。因此，糖尿病所造成的視網膜病變不容小覷，如何及早預防及延緩糖尿病視網膜病變之發生相形重要。
本發明之一態樣是在提供一種微小RNA-195局部用製劑，其包含微小RNA-195和載體。所述載體係選自脂質體(liposome)、聚乙烯亞胺(polyethyleneimine,PEI)、聚乙烯亞胺偶聯物(PEI-conjugate)、聚乙二胺樹枝狀聚合物(polyamidoamine dendrimer,PAMAM)、聚乳酸與聚甘醇酸共聚物(poly(lactide-co-glycolide),PLGA)、去端肽膠原(atelocollagen)、胞外泌體(exosome)和二氧化矽奈米顆粒所組成之群組。
依據前述之微小RNA-195局部用製劑，其中所述聚乙烯亞胺偶聯物可為線性聚乙烯亞胺與雙氰胺(dicyandiamide)接合所形成的聚二甲雙胍(polymetformin)。
依據前述之微小RNA-195局部用製劑，其中所述微小RNA-195的濃度可為0.1μM至1000μM。較佳地，所述微小RNA-195的濃度可為1μM至100μM。
依據前述之微小RNA-195局部用製劑，其可呈凝膠、軟膏、懸浮液或溶液的形式。
依據前述之微小RNA-195局部用製劑，其可呈聚合物固體或半固體的形式。所述聚合物固體或半固體的形式可為薄膜(membrane)、鏡片(lens)、粉片(wafer)或微球(microsphere)。較佳地，所述聚合物固體或半固體的形式可為水凝膠鏡片。
依據前述之微小RNA-195局部用製劑，其可為單位劑量形式，例如搭載在隱形眼鏡上，或在眼藥水、長效藥物、眼用乳劑中。
依據前述之微小RNA-195局部用製劑，其可被包裝於眼藥水分裝器中。
依據前述之微小RNA-195局部用製劑，其可更包含可直接施用於眼部的賦形劑，所述賦形劑係選自一pH緩衝液、一調整滲透壓的物質、一調整黏稠度的物質、一維持穩定度的物質和一保持無菌的物質所組成之群組。
依據前述之微小RNA-195局部用製劑，其可更包含另一治療視網膜病變的藥物或另一抗VEGF藥物。
本發明之另一態樣是在提供一種微小RNA-195局部用製劑之用途，其係用於製備治療因血管滲漏所引起的眼部病症之藥物。
依據前述之微小RNA-195局部用製劑之用途，其中所述因血管滲漏所引起的眼部病症可為視網膜病變(retinopathy)。進一步地，所述視網膜病變(retinopathy)可為糖尿病視網膜病變(diabetic retinopathy)、老年性黃 斑部病變(age-related macular degeneration,AMD)或早產兒視網膜病變(retinopathy of prematurity,ROP)。
依據前述之微小RNA-195局部用製劑之用途，所述微小RNA-195局部用製劑可局部投與眼部。
藉此，本發明之微小RNA-195局部用製劑藉由抑制高血糖所誘發之滲透性傷害，可達到治療因血管滲漏所引起的眼部病症之功效，且本發明之微小RNA-195局部用製劑可經由眼睛局部施用即可達到良好的效果，具有運用於生醫保健市場之潛能。
上述發明內容旨在提供本揭示內容的簡化摘要，以使閱讀者對本揭示內容具備基本的理解。此發明內容並非本揭示內容的完整概述，且其用意並非在指出本發明實施例的重要/關鍵元件或界定本發明的範圍。
為讓本發明之上述和其他目的、特徵、優點與實施例能更明顯易懂，所附圖式之說明如下：第1圖為對照組大鼠和糖尿病大鼠眼睛中微小RNA-195表現量的結果圖；第2A圖和第2B圖為眼球內注射本發明之實施例的步驟流程圖；第3A圖至第3F圖為眼球內注射本發明之實施例對糖尿病大鼠影響的結果圖； 第4A圖和第4B圖為眼睛局部施用本發明之實施例的步驟流程圖；第5A圖至第5F圖為眼睛局部施用本發明之實施例對糖尿病大鼠影響的結果圖；以及第6A圖和第6B圖為施用比較例對糖尿病大鼠影響的結果圖。
本說明書揭露內容提出一種新穎的微小RNA-195局部用製劑及其新穎的用途。以糖尿病大鼠體內試驗評估本發明之微小RNA-195局部用製劑治療因血管滲漏所引起的眼部疾病的功效，而所述的因血管滲漏所引起的眼部疾病可為視網膜病變(retinopathy)，所述的視網膜病變可為糖尿病視網膜病變(diabetic retinopathy)、老年性黃斑部病變(age-related macular degeneration,AMD)或早產兒視網膜病變(retinopathy of prematurity,ROP)。並進一步驗證本發明之微小RNA-195局部用製劑的治療因血管滲漏所引起的眼部疾病的功效，係為藉由降低血管新生因子、血管新生因子受體和SEMA3A表現，並提升細胞結合蛋白表現以改善糖尿病大鼠眼內血管滲漏的狀況。
除非另有說明，本文中所使用之所有專門術語、符號或其他科學名詞或術語具有本發明所屬領域中熟諳此技藝者習知之含意。在某些情況下，具有習知含意之術語係在本文中界定以達到明確及/或即時參考之目的，且本文 中所納入的這些定義應被解釋為不一定與該領域中習知之意義有實質差異。本文中所敘述或引用之許多技術與程序均為大眾所習知且時常為該領域中之技術人員以常規方法使用。在適當情況下，除非另有說明，市售套組和試劑的使用程序一般均根據製造商界定的使用說明及/或參數來進行。
本說明書所述之「一」及「一個」意指文章中的文法對象為一或多個(即至少一個)。本說明書所述之「或」意指「及/或」，除非有明確表示要僅僅意指另一個選擇，或除非其他的選擇互相排斥。而本說明書所述之「多核酸序列」包含了正股之序列和反股之序列。
本說明書所述之「微小RNA(microRNA)」係指來自內源基因具有21-23個核苷酸的非編碼RNA，而「微小RNA-195」係指人類的微小RNA-195，其核苷酸序列為UAGCAGCACAGAAAUAUUGGC。
本發明之微小RNA-195局部用製劑係提供一種可局部給藥的製劑，其可為凝膠、軟膏、懸浮液或溶液的形式，亦可為聚合物固體或半固體的形式，所述聚合物固體或半固體的形式可為薄膜(membrane)、鏡片(lens)、粉片(wafer)或微球(microsphere)。較佳地，所述聚合物固體或半固體的形式可為水凝膠鏡片。
有關前述製作劑型的材料和方法已揭露於先前技術中，例如水凝膠在眼科的應用可參考Kirchhof等人在2015年的發表(Kirchhof,Eur J Pharm Biopharm.2015 Sep；95(Pt B)：227-38)，而如何製備眼藥的傳輸系統可參 考Chen等人在2015的發表(Chen,J Drug Target.2015；23(7-8)：597-604)。另關於在膠質材料(例如隱形眼鏡和粉片)中製造、裝載和傳輸藥物亦已為眾所皆知，可參考Hsu等人在2014的發表(J Drug Deliv Sci Tech 24(2),123-35,Review of ophthalmic drug delivery by contact lenses)。
使用聚合體做控制性釋放的微球，為利用生物可降解性聚合體，例如聚乳酸(Polylactic Acid,PLA)、聚乙醇酸(polyglycolic acid,PGA)和聚乳酸與聚甘醇酸共聚物(poly(lactide-co-glycolide),PLGA)為已知的。前述奈米顆粒和奈米材質可參考以下文獻：(Kim et al.,Ther Deliv.2015 Dec；6(12)：1365-1376；Ciolino et al.,Opthalmology 2016,123(10),2085-92；Nanoparticles J Biomater Sci Polym Ed.2014；25(1)：18-31；Bian et al.Invest Ophthalmol Vis Sci.2016 Jun；57(7)：3222-3230)。
此外，本發明之微小RNA-195局部用製劑可為單位劑量形式，例如搭載在隱形眼鏡上，或在眼藥水、長效藥物、眼用乳劑中。而所述微小RNA-195局部用製劑可被包裝於眼藥水分裝器中。
而含有微小RNA-195的眼藥水可以包含一個生理相容的載體，例如可包含但不僅限於以下幾種鹽水溶液、聚乙二醇等水性聚醚、聚乙烯醇、聚維酮等聚乙烯醇、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素等纖維素衍生物、礦物油、 白凡士林等石油衍生物、羊毛脂等動物性脂肪、羧基聚亞甲基花生油等植物脂肪、葡聚醣等多醣類、透明質酸鈉等葡糖胺聚醣、氯化鈉、氯化鉀等鹽類。
本發明之微小RNA-195局部用製劑，其可更包含可直接施用於眼部的賦形劑，所述賦形劑係選自pH緩衝液、調整滲透壓的物質、調整黏稠度的物質、維持穩定度的物質和保持無菌的物質所組成之群組。
保持無菌的物質包含防腐劑，例如苯扎氯銨和其他如EDTA不具活性的成分。然而如果需要長期使用(例如超過兩個禮拜)，因為擔心長期使用防腐劑，可能對角膜上皮細胞會有傷害，因此本發明之微小RNA-195局部用製劑會傾向不添加防腐劑。而不含防腐劑的微小RNA-195局部用以單位劑量製備並儲存在一次性容器中。
另可藉由生理學上和眼科學上可接受的pH調節劑和pH緩衝液來調整本發明之微小RNA-195局部用製劑的pH值為約5至7.5，更佳地，可將本發明之微小RNA-195局部用製劑的pH值調整為6至7。例如可利用醋酸、硼酸、檸檬酸、乳酸、磷酸或鹽酸等調低微小RNA-195局部用製劑的pH值，可利用氫氧化鈉、磷酸鈉、硼酸鈉、檸檬酸鈉、乙酸鈉、乳酸鈉、氨丁三醇、三羥甲基氨基甲烷等調高pH值。而鹽和緩沖液可包含檸檬酸鹽/右旋糖、碳酸氫鈉、氯化銨和上述酸和鹼的混合物。
此外，水性眼藥組合物的滲透壓通常為約200至約400mOsM，更佳地可為260至340mOsM。滲透壓可 以通過使用適量的生理和眼科學上可接受的離子或非離子試劑來調節。其中氯化鈉是優選的離子試劑，氯化鈉的量為約0.01%至約1%(w/v)，優選約0.05%至約0.45%(w/v)。等當量的一種或多種由陽離子如鉀、銨等和陰離子如氯化物、檸檬酸鹽、抗壞血酸鹽、硼酸鹽、磷酸鹽、碳酸氫鹽、硫酸鹽、硫代硫酸鹽、硫酸氫鹽、硫酸氫鈉、硫酸銨等組成的鹽可以用作氯化鈉的補充或替代，以實現在上述範圍內的滲透壓。此外，還可以使用非離子試劑如甘露醇、右旋糖、山梨糖醇、葡萄糖等來調節滲透壓。
本發明之微小RNA-195局部用製劑，其可更包含另一治療視網膜病變的藥物或另一抗VEGF藥物。
茲以下列具體試驗例進一步示範說明本發明，用以有利於本發明所屬技術領域通常知識者，可在不需過度解讀的情形下完整利用並實踐本發明，而不應將這些試驗例視為對本發明範圍的限制，但用於說明如何實施本發明的材料及方法。
<試驗例> 1. 動物實驗模式
本試驗選用7周齡之Sprague-Dawley(SD)雄性大鼠(購買於樂斯科生物科技股份有限公司)，體重為200-250克，飼養於溫度25±2℃、濕度55-60%、明暗週期為12小時(8：00-20：00)的動物房內，給予一般粒狀飼料採自由攝食使其適應新環境。當大鼠飼養至八周齡時，將其禁食1天後進行糖尿病誘發。SD大鼠以腹腔注射65mg/kg BW的鏈脲佐菌素(streptozotocin,STZ)誘發糖尿病，並於誘發後3天，禁食6小時後，以尾巴採血的方式收集血液樣本測血糖，若血糖值≧250mg/dL，則視為糖尿病誘發成功之糖尿病大鼠，而對照組大鼠為未經處理的SD大鼠。
請參照第1圖，為對照組大鼠和糖尿病大鼠眼睛中微小RNA-195表現量的結果圖。試驗上以即時聚合酶鏈式反應(real-time PCR)分別偵測對照組大鼠和糖尿病大鼠眼睛中微小RNA-195的相對表現量，數據結果以mean±SD值表示。結果顯示，相較於對照組大鼠，糖尿病大鼠眼睛中微小RNA-195的表現量降低了50%以上。
2.本發明之微小RNA-195局部用製劑對糖尿病大鼠之影響
於前述試驗結果，已知糖尿病大鼠眼睛中的微小RNA-195表現量與對照組大鼠相較會顯著地降低，本試驗例進一步探討給予本發明之微小RNA-195局部用製劑對於糖尿病大鼠的影響。於下述試驗例中，本發明之微小RNA-195局部用製劑為利用線性聚乙烯亞胺與雙氰胺接合所形成的聚二甲雙胍來包覆微小RNA-195所形成的奈米顆粒，以下以「實施例」稱之。
2.1.眼球內注射
請參照第2A圖和第2B圖，為眼球內注射本發明之實施例的步驟流程圖，糖尿病大鼠的動物實驗模式依試驗例1所述之流程進行誘發。如第2A圖所示，試驗上將同1隻糖尿病大鼠右邊的眼睛施用實施例作為試驗組，而同一支糖尿病大鼠左邊的眼睛施用安慰劑作為安慰劑組，其中試驗 組每次的施用為5μL濃度為50nM的本發明之實施例，而安慰劑組每次的施用為5μL濃度為50nM的安慰劑。所述安慰劑為利用線性聚乙烯亞胺與雙氰胺接合所形成的聚二甲雙胍來包覆控制組微小RNA(micrON® miRNA mimic Negative Control #22,miR01101,GuangZhou Ribobio Co.,Guangzhou,China)所形成的奈米顆粒。另如第2B圖所示，試驗組的眼睛在STZ誘發後第4天開始每周於玻璃體內注射一次本發明之實施例，而安慰劑組的眼睛在STZ誘發後第4天開始每周於玻璃體內注射一次安慰劑，試驗時間持續4周。在STZ誘發後第30天於靜脈注射伊凡氏藍(Evans blue)以檢測糖尿病大鼠眼內的滲出。以視基底攝影術(fundus photography)掃描糖尿病大鼠眼睛的深處，檢查是否有視網膜病變的徵兆。並於STZ誘發後第30天犧牲糖尿病大鼠，採集眼睛分析與緊密連接和新血管生成相關的標記，所偵測的標記包含血管新生因子(vascular endothelial growth factor A,VEGF-A)、血管新生因子受體(VEGF receptor 2,VEGFR-2)、SEMA3A(semaphorin 3A)和Caludin-5，其中視網膜神經細胞產生的SEMA3A是早期誘發糖尿病視網膜病變的重要因子，其會增加血管的通透性導致視網膜水腫，而視網膜水腫是糖尿病視網膜病變的重要特徵。
請參照第3A圖至第3F圖，為眼球內注射本發明之實施例對糖尿病大鼠影響的結果圖，其中第3A圖為視基底攝影術的照片圖，第3B圖為以伊凡氏藍偵測視網膜血管 通透性的結果圖，第3C圖為VEGF-A相對表現量的結果圖，第3D圖為VEGFR-2相對表現量的結果圖，第3E圖為SEMA3A相對表現量的結果圖，第3F圖為Caludin-5相對表現量的結果圖，數據結果以mean±SD值表示，其中*表示不同組別之間存在統計上之顯著差異(p<0.05)，ns表示不同組別之間不存在統計上之顯著差異。
第3A圖為同一隻糖尿病大鼠眼底影像的結果顯示，和安慰劑組的眼睛相比，眼內注射本發明之實施例的眼睛可以大幅降低糖尿病大鼠眼睛內的新血管生成的狀況。而由第3B圖的結果顯示，眼內注射本發明之實施例可以完全抑制糖尿病大鼠眼內血管滲漏的狀況，使糖尿病大鼠的視網膜血管通透性與對照組大鼠的視網膜血管通透性相同。而由第3C圖和第3D圖的結果顯示，眼內注射本發明之實施例可以減少糖尿病大鼠眼內的VEGF-A和VEGFR-2的相對表現量。第3E圖的結果顯示，眼內注射本發明之實施例亦可以減少糖尿病大鼠眼內的SEMA3A的濃度。另由第3F圖的結果顯示，眼內注射本發明之實施例可以增加糖尿病大鼠眼內的Caludin-5的濃度。
2.2.以眼藥水形式對眼睛局部施用
請參照第4A圖和第4B圖，為眼睛局部施用本發明之實施例的步驟流程圖。糖尿病大鼠的動物實驗模式依試驗例1所述之流程進行誘發，而於本試驗例中，本發明之實施例係以眼藥水的形式對糖尿病大鼠進行眼睛局部施用。如第4A圖所示，試驗上將糖尿病大鼠的右邊眼睛滴入 實施例作為試驗組，而同1隻糖尿病大鼠的左邊眼睛滴入安慰劑作為安慰劑組，其中試驗組每次的施用為15μL濃度為10μM的本發明之實施例，而安慰劑組每次的施用為15μL濃度為10μM的安慰劑。所述安慰劑與試驗例2.1所述相同，其形式亦為眼藥水。另如第4B圖所示，試驗組的眼睛在STZ誘發後第4天開始每天施用含實施例的眼藥水2次，而安慰劑組的眼睛在STZ誘發後第4天開始每天施用含安慰劑的眼藥水2次，試驗時間持續30天。在STZ誘發後第33天於靜脈注射伊凡氏藍以檢測糖尿病大鼠眼內的滲出，並於STZ誘發後第33天犧牲糖尿病大鼠，採集眼睛分析與緊密連接和新血管生成相關的標記，所偵測的標記包含VEGFR-2、SEMA3A、Caludin-5和ZO-1。
請參照第5A圖至第5F圖，為眼睛局部施用本發明之實施例對糖尿病大鼠影響的結果圖，其中第5A圖為糖尿病大鼠眼睛的照片圖，第5B圖為以伊凡氏藍偵測視網膜血管通透性的量化結果圖，第5C圖為VEGFR-2相對表現量的結果圖，第5D圖為SEMA3A相對表現量的結果圖，第5E圖為Caludin-5相對表現量的結果圖，第5F圖為ZO-1相對表現量的結果圖，數據結果以mean±SD值表示，其中*表示不同組別之間存在統計上之顯著差異(p<0.05)。
第5A圖為同一隻糖尿病大鼠的一組眼睛，當眼睛的藍色越深，表示血管滲漏的狀況越嚴重，眼睛的藍色越淺代表越接近正常的狀況。第5A圖的結果顯示，糖尿病大鼠局部施用本發明之實施例的眼睛，可以大幅改善其血管滲 漏的狀況。而由第5B圖的量化結果顯示，眼睛局部施用本發明之實施例可以大幅減少糖尿病大鼠眼內血管滲漏的狀況，其與第3B圖的結果一致，顯示不論是眼內注射或使用眼藥水局部施用本發明之實施例，皆可降低糖尿病大鼠眼內的血管滲漏程度。而由第5C圖的結果顯示，眼睛局部施用本發明之實施例可以減少糖尿病大鼠眼內的VEGFR-2的相對表現量。第5D圖的結果顯示，眼睛局部施用本發明之實施例亦可以減少糖尿病大鼠眼內的SEMA3A的濃度。另由第5E圖和第5F圖的結果顯示，眼睛局部施用本發明之實施例可以增加糖尿病大鼠眼內的Caludin-5和ZO-1的濃度。
2.3.比較例
此外，本試驗例中另施用一比較例探討其對於糖尿病大鼠的影響。糖尿病大鼠的動物實驗模式依試驗例1所述之流程進行誘發，試驗上另將糖尿病大鼠的右邊眼睛施用比較例做為比較例組，以及同一隻糖尿病大鼠的左邊眼睛施用安慰劑的控制組。所述比較例為利用jetPEI®(Polyplus transfection)來包覆微小RNA-195所形成的奈米顆粒，所述安慰劑為利用jetPEI®包覆控制組微小RNA所形成的奈米顆粒，所述控制組微小RNA與試驗例2.1所使用的相同，其餘的試驗流程亦與試驗例2.1相同，在此不再贅述。
請參照第6A圖和第6B圖，為施用比較例對糖尿病大鼠影響的結果圖，其中第6A圖為SEMA3A相對表現量的結果圖，第6B圖為VEGFR2相對表現量的結果圖。結 果顯示，糖尿病大鼠施用比較例的眼睛，其SEMA3A表現量和VEGFR2表現量相較於控制組不具有顯著地差異，顯示比較例並未如本發明之實施例可以大幅降低SEMA3A表現量和VEGFR2表現量。
2.4.以水凝膠鏡片形式對眼睛局部施用
於本試驗例中利用含有實施例的水凝膠鏡片測試其治療糖尿病視網膜病變的效果。糖尿病大鼠的動物實驗模式依試驗例1所述之流程進行誘發，在STZ誘發後的第4天給大鼠配備EW lotrafilcon A(CIBA Vision，Duluth，GA)水凝膠鏡片(Dk/t 175 barrers/cm)，試驗上將同1隻糖尿病大鼠的左眼配裝含有實施例的水凝膠鏡片作為試驗組，而右眼配裝含有安慰劑的水凝膠鏡片作為安慰劑組，試驗組的眼睛在STZ誘發後第5天開始每天施用10μL含實施例的眼藥水，而安慰劑組的眼睛在STZ誘發後第4天開始每天施用10μL含安慰劑的眼藥水，試驗時間持續30天。在STZ誘發後第33天於靜脈注射伊凡氏藍以檢測糖尿病大鼠眼內的滲出，並於STZ誘發後第33天犧牲糖尿病大鼠，採集眼睛分析與緊密連接和新血管生成相關的標記，所偵測的標記包含VEGFR-2、SEMA3A、Caludin-5和ZO-1。其結果與試驗例2.2以眼藥水形式對眼睛局部施用的結果一致。
2.5.利用體外眼模型測試微小RNA-195於水凝膠鏡片中的釋放
試驗上選擇4種常規水凝膠(conventional hydrogel,CH)，分別為CL(nelfilcon A[Alcon，Fort Worth，TX]，omafilcon A[CooperVision，Pleasanton，CA]，etafilcon A[Johnson & Johnson，New Brunswick，NJ]和ocufilcon B(CooperVision)，以及3個矽酮水凝膠(silicone hydrogel,SH)鏡片(somofilcon A[CooperVision]，narafilcon A[Johnson&Johnson]和delefilcon A[Alcon])。所有鏡片的屈光度為-3.00，基礎曲線為8.6mm。分別將每種類型的9個鏡片於在10μL的實施例中培育24小時，並參照Phan等人(Phan et al.,Transl Vis Sci Technol.2016 Nov；5(6)：3.)的實驗設計於體外眼模型中測試其藥物釋放動力學，結果顯示，每種類型的9個鏡片在24小時測試期間均顯示良好且一致的釋放動力學。
綜上所述，糖尿病引起的新生血管、玻璃體出血等會誘發視網膜病變，而本發明之微小RNA-195局部用製劑，可以降低糖尿病大鼠VEGF-A、VEGFR-2和SEMA3A的表現量，並提升糖尿病大鼠的Caludin-5和ZO-1的表現量，以及改善糖尿病大鼠眼內血管滲漏，進而改善視網膜病變的狀況，而所述的視網膜病變可為糖尿病視網膜病變、老年性黃斑部病變或早產兒視網膜病變，故本發明所揭露之微小RNA-195局部用製劑，可有效抑制高血糖所誘發之滲透性傷害，進而改善糖尿病大鼠眼內血管滲漏和視網膜病變的狀況，達到治療因血管滲漏所引起的眼部病症之功效，且其可以局部施用於眼睛即可達到良好的效果，具有運用於生醫保健市場之潛能。

Claims (16)

  1. 一種微小RNA-195局部用製劑，包含：一微小RNA-195；以及一載體，用以包覆該微小RNA-195，其中該載體係選自脂質體(liposome)、聚乙烯亞胺(polyethyleneimine,PEI)、聚乙烯亞胺偶聯物(PEI-conjugate)、聚乙二胺樹枝狀聚合物(polyamidoamine dendrimer,PAMAM)、聚乳酸與聚甘醇酸共聚物(poly(lactide-co-glycolide),PLGA)、去端肽膠原(atelocollagen)、胞外泌體(exosome)和二氧化矽奈米顆粒所組成之群組。
  2. 如申請專利範圍第1項所述的微小RNA-195局部用製劑，其中該聚乙烯亞胺偶聯物為線性聚乙烯亞胺與雙氰胺(dicyandiamide)接合所形成的聚二甲雙胍(polymetformin)。
  3. 如申請專利範圍第1項所述的微小RNA-195局部用製劑，其中該微小RNA-195的濃度為0.1μM至1000μM。
  4. 如申請專利範圍第1項所述的微小RNA-195局部用製劑，其中該微小RNA-195的濃度為1μM至100μM。
  5. 如申請專利範圍第1項所述的微小RNA-195局部用製劑，其係呈一凝膠、一軟膏、一懸浮液或一溶液的形式。
  6. 如申請專利範圍第1項所述的微小RNA-195局部用製劑，其係呈一聚合物固體或一半固體的形式。
  7. 如申請專利範圍第6項所述的微小RNA-195局部用製劑，其中該聚合物固體或該半固體的形式為一薄膜(membrane)、一鏡片(lens)、一粉片(wafer)或一微球(microsphere)。
  8. 如申請專利範圍第6項所述的微小RNA-195局部用製劑，其中該聚合物固體或半固體的形式為一水凝膠鏡片。
  9. 如申請專利範圍第1項所述的微小RNA-195局部用製劑，其為單位劑量形式。
  10. 如申請專利範圍第1項所述的微小RNA-195局部用製劑，其係被包裝於眼藥水分裝器中。
  11. 如申請專利範圍第1項所述的微小RNA-195局部用製劑，更包含可直接施用於眼部的一賦形劑，其中該賦形劑係選自一pH緩衝液、一調整滲透壓的物質、一調整黏稠度的物質、一維持穩定度的物質和一保持無菌的物質所組成之群組。
  12. 如申請專利範圍第1項所述的微小RNA-195局部用製劑，更包含另一治療視網膜病變的藥物或另一抗VEGF藥物。
  13. 一種如申請專利範圍第1-12項任一項所述之微小RNA-195局部用製劑之用途，其係用於製備治療因血管滲漏所引起的眼部病症之藥物。
  14. 如申請專利範圍第13項所述的微小RNA-195局部用製劑之用途，其中該因血管滲漏所引起的眼部病症為視網膜病變(retinopathy)。
  15. 如申請專利範圍第14項所述的微小RNA-195局部用製劑之用途，其中該視網膜病變為糖尿病視網膜病變(diabetic retinopathy)、老年性黃斑部病變(age-related macular degeneration,AMD)或早產兒視網膜病變(retinopathy of prematurity,ROP)。
  16. 如申請專利範圍第13項所述的微小RNA-195局部用製劑之用途，其中該微小RNA-195局部用製劑係局部投與眼部。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108904875A (zh) * 2018-07-02 2018-11-30 西安交通大学 一种促进慢性创面愈合的抗菌自愈合水凝胶辅料及其制备方法和应用

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2022529506A (ja) * 2019-04-26 2022-06-22 ノースウェスタン ユニバーシティ 眼の治療のための高密度リポタンパク質ナノ粒子およびｒｎａテンプレート化リポタンパク質粒子
WO2022033529A1 (zh) * 2020-08-12 2022-02-17 洪明奇 Sema3d拮抗剂在预防或治疗神经退行性疾病以及延长寿命中的用途
KR102517172B1 (ko) * 2021-02-26 2023-04-04 주식회사 아이코디 컬러 콘택트렌즈용 코팅액 및 이를 포함하여 제조된 컬러 콘택트렌즈

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20120183593A1 (en) 2003-04-09 2012-07-19 Directcontact Llc Hydrogels used to deliver medicaments to the eye for the treatment of posterior segment diseases
US20120014970A1 (en) 2009-01-09 2012-01-19 Reza Dana Therapeutic Compositions for Treatment of Corneal Disorders
US9096850B2 (en) * 2009-08-24 2015-08-04 Sirna Therapeutics, Inc. Segmented micro RNA mimetics
JP5888572B2 (ja) 2011-11-03 2016-03-22 カオシウング メディカル ユニバーシティー 神経保護の提供におけるマイクロｒｎａ１９５の使用法
US9206423B2 (en) * 2012-12-30 2015-12-08 The Regents Of The University Of California Methods of modulating compliance of the trabecular meshwork
EP3250706A4 (en) 2015-01-30 2018-09-05 The Johns Hopkins University Extracellular vesicles for agent delivery
WO2016144766A1 (en) 2015-03-06 2016-09-15 The University Of North Carolina At Chapel Hill Polymeric metformin and its use as a therapeutic agent and as a delivery vehicle
GB201504772D0 (en) 2015-03-20 2015-05-06 Univ Aston Preeclampsia

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108904875A (zh) * 2018-07-02 2018-11-30 西安交通大学 一种促进慢性创面愈合的抗菌自愈合水凝胶辅料及其制备方法和应用
CN108904875B (zh) * 2018-07-02 2023-09-22 西安交通大学 一种促进慢性创面愈合的抗菌自愈合水凝胶辅料及其制备方法和应用

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