TW201817438A - 含有大豆黃葉萃取物的用於防止脫髮或改善生髮的組合物及其用途 - Google Patents

Abstract

本發明涉及用於防止脫髮或改善生髮的組合物，其含有大豆黃葉萃取物，更具體而言，涉及具有防止脫髮或改善生髮效果的組合物，其含有由大豆的生長過程中大豆葉的顏色變為黃色的大豆葉中萃取的萃取物。使用本發明的含有大豆黃葉萃取物的組合物時，藉由促進諸如毛乳頭細胞等與脫髮相關的組織中的Wnt/β-連環蛋白訊號傳遞系統的活性，從而具有防止脫髮或改善生髮的效果。

Description

含有大豆黃葉萃取物的用於防止脫髮或改善生髮的組合物及其用途

本發明涉及用於防止脫髮或改善生髮的組合物，其含有大豆黃葉萃取物，更具體而言，涉及具有防止脫髮或改善生髮效果的組合物，其含有由大豆的生長過程中大豆葉的顏色變為黃色的大豆葉中萃取的萃取物。

頭皮由表皮（epidermis）、真皮（dermis）及皮下組織（subcutaneous tissue）組成，作為最外層組織的表皮起到保護身體的敏感組織免受損傷的功能。然而，因對頭皮產生影響的環境因素，例如，溫度變化、濕度變化、暴露在污染物質等外部刺激所帶來的壓力及營養缺乏等，會引起頭皮功能的喪失，也會對脫髮現象產生影響。

與脫髮相關的組織有皮脂腺（sebaceous gland）、表皮和毛囊的角化細胞（keratinocytes）、毛乳頭細胞（真皮乳頭細胞，dermal papilla cell）、汗腺（sweat gland）、根鞘（root sheath of the scalp hair follicle）等。

已知男性的基因表達中睾固酮（testosterone）參與骨骼肌的增加、精子的形成等，二氫睾固酮（dihydrotestosterone，DHT）在相應的組織中參與痤瘡、皮脂的增加、脫髮及前列腺肥大症等（Thiboutotet al., J. Invest. Dermatol., 105(2):209-14, 1995）。

男性型脫髮症是因稱為睾固酮的雄激素而出現的現象，該睾固酮藉由稱為5-α還原酶（5 alpha-reductase）的酶變為更加強的激素，即，變為二氫睾固酮時，該激素作用於毛囊，將毛囊從生長期階段誘導至退化期階段，從而引起脫髮。因此，為了治療男性型脫髮症，主要使用抑制5-α還原酶引起的DHT的生成的方法。

另外，已知作為5-α還原酶的抑制劑的非那斯特萊（finasteride）藉由減少脫髮患者的脫髮激素DHT來改善脫髮（Van Neste et al., 2000），藉由其5-α還原酶作為用於治療脫髮的重要的目標利用在脫髮治療劑的開發中，並且進行很多尋找治療脫髮症的藥理活性物質的研究，其中所述藥理活性物質是藉由阻礙參與從睾固酮轉變為二氫睾固酮的反應的活體酶，即阻礙5-α還原酶的活性來治療脫髮症。

女性型脫髮症主要是在閉經以後因雌激素的減少而產生。用於女性型脫髮症的治療劑主要使用米諾地爾（minoxidil）或雌激素。斑禿症是因自身免疫性疾病或精神壓力、遺傳因素而產生。這種斑禿症的原因根本上不同於雄激素性脫髮症，並且治療法也不同，使用利用腎上腺皮質激素劑來處理的方法，或者使用將米諾地爾塗於患處或人為地對患處誘發刺激的方法。

對於如上所述的複合性的脫髮原因，市面上正在以產品的形式銷售將促進血液循環、抑制雄激素作用、強化髮根功能等作為目的的成分等，但是目前處於還沒有具有顯著效果的狀態，並且還被提出副作用的問題。例如，就米諾地爾而言，報導有黏膩的使用感和對皮膚誘發刺激的副作用，就非那雄胺而言，目前作為口服給藥用製劑來使用，但是據報導隨著攝取該藥物，不僅具有性功能障礙等副作用，而且只能經由口服來期待效果，從而在使用方面有諸多不便。

為了預防及治療這種脫髮，使用激素代替療法作為最有效的方法。然而，長期施用諸如雌激素的激素時，具有乳房癌、子宮癌等的致癌危險性，並且具有發生諸如頭痛、體重增加的副作用等的問題。

另外，由植物萃取的作為雌激素類似物（植物雌激素（phytoestrogen））的大豆的異黃酮（isoflavone）普遍以改善脫髮為目的來使用，但是持續被提出對於效果及安全性的話題。因此，迫切要求開發更加安全的同時利用有效的源自天然的脫髮治療劑。

選擇性雌激素受體調節劑（SERM，Selective estrogen receptor modulators）為選擇性雌激素受體調節因子，是指結合於雌激素受體，從而能夠在某些組織中起到雌激素促效劑（agonist）的作用，在其他組織中起到雌激素拮抗劑（antagonist）的作用的物質。利用SERM的這種特徵，正在開發含有SERM的藥物，其在致癌可能性高的子宮、乳房等組織中安全，並且對更年期綜合症的改善有效。

已知芹菜素（apigenin）是植物性多酚，廣泛分佈在水果及蔬菜中，尤其富含於荷蘭芹、芹菜、蒜及白菜中，具有抗炎症反應、抗癌、消除自由基等特性（Kimet al., Prostag. Leukotr. Ess., 58:17-24, 1998）。

已知香豆雌酚（Coumestrol）在大豆或豆科植物原物中以極微量存在或者不存在。與異黃酮（isoflavone）相比，香豆雌酚的雌激素活性高出30~100倍以上，從而在緩解子宮癌、骨髓癌、乳房癌或腦癌、更年期症狀等方面非常有用。

對於咖啡因發表過以下研究結果：咖啡因藉由刺激毛乳頭細胞的新陳代謝作用，從而促進毛囊的生長（Krenet al, Zygote , 12（1）:31-38, 2004; Tsianakas Aet al., Arch. Dermatol. Res. , 296:450, 2005），並且抑制用於萎縮毛囊的活性雄激素的作用，即，抑制二氫睾固酮的作用（Fischeret al., Int J Dermatol. , 46（1）:27-35, 2007）。此外還有如下的研究結果：如果咖啡因的含量過多，則會對毛乳頭細胞產生影響，從而能夠使細胞壞死（Hashimotoet al., Cancer Res. , 64（9）:3344-3349, 2004），因此反而會成為脫髮的原因。即，如果想使咖啡因以能夠顯示防止脫髮及毛髮生長的效果的量到達毛囊，則需要每天喝60杯含有咖啡因的咖啡或茶，或者可塗抹於頭皮的咖啡因溶液為高濃度時，反而會誘發脫髮，因此目前的情況為對功效優異且安全的脫髮防止劑的開發不足。

已知人參（Panax ginseng C.A. Mey. 1909）是屬五加科的多年生草本植物，根用作藥，其保護五臟並補充元氣，自古以來被稱為長生不老的名藥。對於人參的藥效成分的功效，藉由Brekhman（1957）對於人參皂苷（ginsenoside）或皂素（saponin）的研究開始被公開。就人參皂苷而言，已知抑制癌細胞增殖的效果、改善高血壓、抗氧化效果、抗壓力等諸多功效。

綠茶是屬山茶科的多年生常綠植物（例如，茶樹（Camellia sinensis ）），從三國時代就開始飲用，到近來，隨著綠茶中所含有的多種成分的功能性漸漸被公開，其價值再次被認知。已知綠茶中含有大量的多酚（例如，兒茶素）、咖啡因、氨基酸、維生素C等有效成分，從而宿醉及尼古丁解毒作用、恢復疲勞、強心作用、皮膚美容方面的效果優異，尤其對於綠茶中含量最高的多酚的抗氧化作用、抗膽固醇作用、降低血糖作用、抗腫瘤作用、阻礙血小板凝集作用等效果得到證實，其功能性備受矚目。

作為綠茶的主要生理活性物質的兒茶素為多酚的一種，一杯綠茶中含有100mg左右，主要由表沒食子兒茶素沒食子酸酯（epigallocatechin gallate，以下稱為「EGCG」）及表兒茶素沒食子酸酯（epicatechin gallate，以下稱為「ECG」）等沒食子兒茶素（gallated catechin，以下稱為「GC」）和其他表兒茶素（epicatechin，以下稱為「EC」）及表沒食子兒茶素（epigallocatechin，以下稱為「EGC」）等多種兒茶素組成，這些成分作為具有抗齲齒、抗菌、抗氧化、除臭作用、抑制血糖值及血中膽固醇的上升、抗腫瘤、抑制過氧化脂質生成作用等多種活體調節功能的食品材料實用化，並廣泛利用在加工食品領域中。已知這種兒茶素具有維生素C和維生素E的3~4倍的抗氧化效果。

此外，已知兒茶素類為水溶性，但是茶葉中還含有維生素E或β-胡蘿蔔素等脂溶性成分，從而這些成分參與在活體內去除對免疫反應或癌的發生產生壞影響的活性氧或源自活性氧的產物的過程，並且已知如果同時攝取具有抗氧化作用的兒茶素，則能夠期待協同效果。

已有報導稱，Wnt/β-連環蛋白訊號傳遞系統對促進毛囊的形成（Andl T,et al., Dev Cell, 2（5）:643-653, 2002），在維持並活化毛髮週期的生長期期間表達的基因方面起到重要的作用（Kishimoto J,et al., Genes & Dev , 14:1181-1185, 2000），並且促進從幹細胞至角化細胞的分化（Huelsken J,et al., Cell 105（4）:533-545, 2001）。

已知，Wnt/β-連環蛋白訊號傳遞系統的活性對皮膚的生成及毛囊的發生起到作用，並且在減量（Knock-down）Wnt基因的小鼠中毛髮的生長受到阻礙。因此，促進毛囊幹細胞中存在的Wnt/β-連環蛋白訊號傳遞系統的活化的物質能夠促進毛髮的生長。

米諾地爾為得到美國食品與藥物管理局（Food and Drug Administration，FDA）的認可的促進毛髮生長的藥物中的一種，剛開始開發為用於治療高血壓的血管擴張劑，但是被報導有多毛症的副作用，因此目前利用為生髮劑。關於米諾地爾的生髮效果的具體作用機制還沒有明確地公開，但是可以理解為藉由K_ATP -通道的開放、血管的擴張來增加營養供給，以及人毛乳頭細胞（dermal papilla cell）中的β-連環蛋白（catenin）路徑的活化等誘導了毛髮的生長。有報導稱，人毛乳頭細胞是源自中胚層的成纖維細胞，藉由分泌諸如類胰島素生長因子-1（IGF-1）、肝細胞生長因子（HGF）及成纖維細胞生長因子-7（FGF-7）的蛋白質來對毛髮週期產生影響，已知米諾地爾具有藉由降低毛乳頭細胞的細胞凋亡（apoptosis）來增殖人毛乳頭細胞的生長的效果。

因此，對於某些物質的5-α還原酶活性抑制效果、NIH3T3成纖維細胞增殖效果及人毛乳頭細胞（dermal papilla cell）的生長增殖效果的測量能夠成為評估該物質如何有效地治療脫髮，並改善生髮的有效的指標。

另外，根據現有技術，下述專利文獻1中公開了包含大豆葉萃取物的組合物的改善皮膚炎症、過敏症（allergy）及特應性皮炎（atopy）的效果和皮膚保濕效果，下述專利文獻2中公開了含有人參萃取物及綠茶萃取物的組合物的抑制白髮、脫髮及頭皮屑的功效，但沒有公開關於含有由大豆的生長過程中大豆葉的顏色變為黃色的大豆葉（即，大豆黃葉）中萃取的萃取物作為有效成分的用於促進毛髮生長及改善脫髮症狀的組合物的內容。

在這種技術背景下，本發明人開發了顯示出促進毛髮生長並改善脫髮症狀的效果的組合物，該組合物含有大豆黃葉萃取物作為有效成分，即，含有由大豆生長過程中大豆葉的顏色變為黃色的大豆葉中萃取的萃取物作為有效成分。

[先前技術文獻]

[專利文獻]

（專利文獻1）韓國公開專利第10-2014-0034964號（2014.03.21.）

（專利文獻2）韓國公開專利第10-2015-0030095號（2015.03.19.）

要解決的技術問題

對此，本發明人為了開發對防止脫髮或改善生髮有效的含有源自植物的SERM（phytoSERM）的組合物而進行努力的結果，確認了由大豆的生長過程中大豆葉的顏色變為黃色的大豆葉（即，大豆黃葉）中萃取的萃取物促進毛乳頭細胞（dermal papilla cell）的Wnt/β-連環蛋白訊號傳遞系統的活性，從而顯示出促進毛髮生長及改善脫髮症狀的功效，並完成了本發明。

因此，本發明的主要目的在於，提供促進毛髮生長及防止脫髮功效優異的含有大豆黃葉萃取物作為有效成分的組合物。

本發明的另一個目的在於，提供促進毛髮生長及防止脫髮功效優異的組合物，其含有混合選自芹菜素、香豆雌酚、咖啡因、人參萃取物及綠茶萃取物中的一種以上的物質和大豆黃葉萃取物的混合物作為有效成分。

技術方案

為了實現上述目的，本發明提供含有大豆黃葉萃取物作為有效成分的用於防止脫髮或改善生髮的組合物，較佳地，提供含有大豆黃葉萃取物作為有效成分的用於防止脫髮或改善生髮的藥學組合物、健康功能食品組合物及化妝料組合物。

此外，本發明提供含有混合選自芹菜素、香豆雌酚、咖啡因、人參萃取物及綠茶萃取物中的一種以上的物質和大豆黃葉萃取物的混合物作為有效成分的用於防止脫髮或改善生髮的組合物，較佳地，提供含有所述混合物作為有效成分的用於防止脫髮或改善生髮的藥學組合物、健康功能食品組合物及化妝料組合物。

此外，本發明提供在用於防止脫髮或改善生髮的藥學組合物或醫藥的製備中，大豆黃葉萃取物作為脫髮防止劑或生髮改善劑的用途。

此外，本發明提供在用於防止脫髮或改善生髮的藥學組合物或醫藥的製備中，混合選自芹菜素、香豆雌酚、咖啡因、人參萃取物及綠茶萃取物中的一種以上的物質和大豆黃葉萃取物的混合物作為脫髮防止劑或生髮改善劑的用途。

此外，本發明提供在用於防止脫髮或改善生髮的健康功能食品組合物的製備中大豆黃葉萃取物作為脫髮防止劑或生髮改善劑的的用途。

此外，本發明提供在用於防止脫髮或改善生髮的健康功能食品組合物的製備中，混合選自芹菜素、香豆雌酚、咖啡因、人參萃取物及綠茶萃取物中的一種以上的物質和大豆黃葉萃取物的混合物作為脫髮防止劑或生髮改善劑的用途。

此外，本發明提供在用於防止脫髮或改善生髮的化妝料組合物的製備中，大豆黃葉萃取物作為脫髮防止劑或生髮改善劑的用途。

此外，本發明提供在用於防止脫髮或改善生髮的化妝料組合物的製備中，混合選自芹菜素、香豆雌酚、咖啡因、人參萃取物綠茶萃取物中的一種以上的物質和大豆黃葉萃取物的混合物作為脫髮防止劑或生髮改善劑的用途。

有益效果

使用本發明的含有大豆黃葉萃取物的組合物時，在諸如毛乳頭細胞的與脫髮相關的組織中促進Wnt/β-連環蛋白訊號傳遞系統的活性，因此具有防止脫髮或改善生髮的效果。

除非另有定義，本說明書中所使用的所有技術術語及科學術語的意思與本發明所屬技術領域具有通常知識者一般所理解的意思相同。一般而言，本說明書中所使用的命名法是本技術領域所熟知並通常使用的命名法。

本說明書中，在表示體積、時間（期間）、濃度、含量、面積等時所使用的術語「約」表示在該數值或數值範圍存在最大10%的允許誤差。

本說明書中，「大豆黃葉」是指在大豆的生長過程中大豆葉的顏色變為黃色的大豆葉，這種大豆葉是指在大豆的生長階段中處於1）豆莢和大豆逐漸變成黃色的狀態（下述R7時期）；至2）落葉，並且豆莢和大豆完全變成黃色的狀態（下述R8時期）的大豆葉。具體而言，「大豆黃葉」是指綠色或鮮綠的大豆葉逐漸變成黃色的狀態的大豆葉（即，一部分變成黃色的狀態的大豆葉）或完全變成黃色的狀態的大豆葉。該大豆葉逐漸變成黃色的狀態的大豆葉相當於包括以下狀態的最廣泛的概念：以大豆葉的總面積作為基準，約1/10以上變成黃色，較佳為約1/5以上變成黃色，更佳為約1/3以上變成黃色，再更佳為約1/2以上變成黃色，最佳為約4/5變成黃色。

根據本發明的一個方面，大豆黃葉萃取物可以由下述大豆的生長階段中的R7~R8階段的大豆葉中萃取。本說明書中的大豆的生長階段如下所示： VE階段：播種後1~2周後的狀態，子葉從土壤露出； VC階段：子葉盛開，其上面長出一個節並生成外葉； V1階段：從第一個外葉生成一個節，從而生成3個葉子； V2階段：在V1階段的基礎上再生成一個節，從而生成3個葉子； V3階段：在V2階段的基礎上再生成一個節，從而生成3個葉子； V4階段：在V3階段的基礎上再生成一個節，從而生成3個葉子； V5階段：在V4階段的基礎上再生成一個節，從而生成3個葉子； R2階段：大豆花盛開的狀態； R4階段：豆莢的生成結束的狀態； R5階段：豆莢裡生成大豆的狀態； R6階段：豆莢裡的綠色大豆的生成結束的狀態； R7階段：豆莢和大豆逐漸變成黃色的狀態； R8階段：落葉，並且豆莢和大豆完全變成黃色的狀態。

本發明的一個實施例中，測量了使用大豆黃葉萃取物處理的毛囊幹細胞的Wnt/β-連環蛋白訊號傳遞系統的活性變化。其結果如第3圖所示，當使用10ppm以上的濃度的大豆黃葉萃取物（實施例4）處理時，顯示出150%以上的Wnt/β-連環蛋白螢光素酶反應程度（即，Wnt/β-連環蛋白訊號傳遞系統的活性度），反應程度依賴於大豆黃葉萃取物（實施例4）的濃度而增加。因此，可以知道大豆黃葉萃取物藉由促進作為毛囊幹細胞的毛髮生長促進訊號的Wnt/β-連環蛋白訊號傳遞系統的活性，從而具有促進毛髮生長的效果（參照試驗例2）。

本發明的另一個實施例中，確認了使用大豆黃葉萃取物處理的人毛囊器官的毛髮生長效果。其結果如第4圖所示，大豆黃葉萃取物（實施例4）在1、10及50ppm的濃度範圍內顯示出與陽性對照組同等水平或其以上的毛髮生長效果，尤其在10ppm的濃度下毛髮的長度生長顯示為最優異。因此，確認了大豆黃葉萃取物對人毛囊器官的毛髮生長有效（參照試驗例3）。

本發明的另一個實施例中，確認了使用大豆黃葉萃取物或使用下述混合物處理的人毛乳頭細胞的增殖效果，該混合物包含選自芹菜素、香豆雌酚、咖啡因、人參萃取物及綠茶萃取物中的任一種物質和大豆黃葉萃取物。其結果如表2所示，與使用二甲基亞碸（DMSO）處理的人毛乳頭細胞（陰性對照組）相比，使用1、10或50ppm的大豆黃葉萃取物（實施例4）處理的人毛乳頭細胞的細胞增殖率得到增加，尤其使用10ppm濃度的大豆黃葉萃取物（實施例4）來處理的人毛乳頭細胞的細胞增殖率顯示為最高值，可以確認其具有與使用米諾地爾處理的人毛乳頭細胞（陽性對照組）同等程度的細胞增殖效果。此外，使用混合選自芹菜素、香豆雌酚、咖啡因、人參萃取物（比較例1）及綠茶萃取物（比較例2）中的任一種物質和10ppm的大豆黃葉萃取物（實施例4）的混合物對人毛乳頭細胞進行處理的結果，人毛乳頭細胞的細胞增殖率顯著增加。因此，確認了混合大豆黃葉萃取物和所述物質對人毛乳頭細胞進行處理時，具有使毛髮生長效果進一步得到促進的協同效果（參照試驗例4）。

藉由調節Wnt/β-連環蛋白訊號傳遞系統的活性來促進毛髮生長的物質並不是藉由調節雄激素及/或血液循環來參與毛髮生長的促進，因此能夠改善藉由抑制雄激素或促進血液循環的方法所不能解決的嚴重的脫髮及女性型脫髮。

因此，本發明的一個觀點涉及含有大豆黃葉萃取物作為有效成分的用於防止脫髮或改善生髮的藥學組合物、健康功能食品組合物或化妝料組合物，其中中該大豆黃葉萃取物較佳可以由大豆葉的一部分或全部變成黃色時的大豆葉中萃取，更佳可以由該大豆的生長階段中的R7~R8階段的大豆葉中萃取。

在另一個方面，本發明涉及包含以特定的混合比混合選自芹菜素（apigenin）、香豆雌酚（Coumestrol）、咖啡因、人參萃取物及綠茶萃取物中的一種以上的物質和大豆黃葉萃取物的用於防止脫髮或改善生髮的組合物。

本發明中，「大豆」的種類不受限制，例如可以為選自Seoritae（Glycin max MERR）、Seomoktae（Rhynchosia Nolubilis ）、黑大豆（Black soybean，Glycine max （L.） Merr.）、藍豆（blue bean，Glycime max MERR ）、黃豆（yellow bean，Glycime max MERR）、蠶豆（field bean，Vicia faba ）、菜豆（kidney bean，Phaseolus vulgaris ）、花豆（pinto bean，Phaseolus vulgaris L.）、赤小豆（small red bean，Vigna angularis ）、黑小豆（small black bean，Phaseolus angularis W.F. WIGHT.）、發芽豆（sprouting bean，Glycine max （L.） Merr.）及大豆（soybean，Glycine max ）中的任一種以上，但並不限定於此。

根據本發明的一個方面，「大豆黃葉萃取物」為廣泛的概念，其包含藉由抽取大豆黃葉的成分而獲得的所有物質，不論萃取方法、萃取溶劑、萃取的成分或萃取物的形態如何；包含以下物質，即，在抽取大豆黃葉的成分的過程中，藉由包括用熱、酸（acid）、鹼（base）、酶等進行處理的製程的萃取方法來獲得的物質；並且包含以下物質，即，對藉由抽取大豆黃葉的成分而獲得的物質進行萃取後，藉由其他方法進行加工或處理來獲得的所有物質。具體而言，該加工或處理可以是對大豆黃葉萃取物進一步進行發酵或酶處理等。因此，根據本發明的一個方面，大豆黃葉萃取物可以是發酵物。

根據本發明的一個方面，「大豆黃葉」可以為萃取物的形態或生大豆黃葉、生藥自身的粉碎物、生藥的乾燥物、生藥的乾燥粉碎物、大豆黃葉的發酵物，但並不限定於此。此外，就本說明書中所使用的大豆黃葉而言，其獲得方法沒有限制，可以栽培並使用，或者購買市面上銷售的並使用，並且可以使用草本的地上部分或根部的一部分或全部。更具體而言，可以使用選自大豆黃葉草本的葉子、莖、根及花中的一種以上，更具體而言，可以使用花、葉子及莖。根據本發明的一個方面，大豆黃葉並不是必須得藉由乾燥來製備，只要是適合萃取大豆黃葉的有效成分的形態的原料，則不受限制。

根據本發明的一個方面，大豆黃葉萃取物可以是選自水、有機溶劑及它們的混合物中的一種以上的萃取物。

根據本發明的一個方面，水包含蒸餾水或精製水，有機溶劑包含選自C1~C6的低級醇、丙酮、乙醚、乙酸乙酯、二乙醚、甲基乙基酮及氯仿中的一種以上，但並不限定於此。具體而言，該醇可以為甲醇或乙醇。

本說明書中所使用的術語「改善（improve）」或「緩解（alleviate）」是指減少或去除異常（abnormality）或症狀、包括綜合症的條件、疾病、障礙或表現型。其中，脫髮的改善或緩解是指藉由促進Wnt/β-連環蛋白訊號傳遞系統的活性來預防、改善或緩解脫髮疾病。

本說明書中所使用的「治療」是指脫髮疾病的症狀得到好轉或痊癒的所有行為，更詳細而言，是指對使用該術語的疾患或疾病，或者該疾患或疾病中的一種以上症狀進行逆轉或緩解，或者對其的發展進行抑制或預防。

本發明的大豆黃葉萃取物的特徵在於，可以含有植物-選擇性雌激素受體調節因子（phyto-SERM，phyto-selective estrogen receptor modulator）。phyto-SERM是將表示源自植物的「植物（phyto）」和「選擇性雌激素受體調節因子（SERM，selective estrogen receptor modulator）」組合而成的詞語。選擇性雌激素受體調節因子是指結合於雌激素受體，從而能夠在某些組織中起到雌激促進劑（agonist）的作用，並且在其他組織中起到雌激素拮抗劑（antagonist）作用的物質。可以預測本發明的含有大豆葉萃取物的組合物中含有phyto-SERM，該phyto-SERM對致癌可能性高的子宮、乳房等組織中的雌激素受體起到拮抗劑的作用，從而降低子宮癌、乳房癌等致癌危險性，同時對皮膚，較佳為頭皮，更佳為毛囊人毛乳頭細胞起到促進劑的作用，從而對促進毛髮生長及防止脫髮有效。

本發明的特徵為，以組合物的總重量為基準，含有1~60重量%的該大豆黃葉萃取物，較佳為含有5~50重量%，更佳為含有10~30重量%。當大豆黃葉萃取物的含量少於1重量%時，難以期待促進毛髮生長及防止脫髮的效果，當大豆黃葉萃取物的含量超過60重量%時，劑型的穩定性降低，從而對萃取物的成分穩定性也產生影響，因此預測會降低效果。

本發明的特徵在於，該組合物可以進一步包含選自芹菜素（apigenin）、香豆雌酚（Coumestrol）、咖啡因、人參萃取物及綠茶萃取物中的一種以上。

當該組合物含有大豆黃葉萃取物及芹菜素的混合物時，其中，該混合物以ppm濃度為基準含有1~10：1~10的混合比的大豆黃葉萃取物及芹菜素，較佳為含有1~2：1~2的混合比的大豆黃葉萃取物及芹菜素，更佳為含有2：1的混合比的大豆黃葉萃取物及芹菜素。

當該組合物含有大豆黃葉萃取物及香豆雌酚的混合物時，其中，該混合物以ppm濃度為基準含有1~10：1~10的混合比的大豆黃葉萃取物及香豆雌酚，較佳為含有1~2：1~2的混合比的大豆黃葉萃取物及香豆雌酚，更佳為含有2：1的混合比的大豆黃葉萃取物及香豆雌酚。

當所述組合物含有大豆黃葉萃取物及咖啡因的混合物時，其中，所述混合物以ppm濃度為基準含有1~10：1~10的混合比的大豆黃葉萃取物及咖啡因，較佳為含有1~2：1~2的混合比的大豆黃葉萃取物及咖啡因，更佳為含有2：1的混合比的大豆黃葉萃取物及咖啡因。

當該組合物含有大豆黃葉萃取物及人參萃取物的混合物時，其中，該混合物以ppm濃度為基準含有1~10：1~10的混合比的大豆黃葉萃取物及人參萃取物，較佳為含有1~2：1~2的混合比的大豆黃葉萃取物及人參萃取物，更佳為含有2：1的混合比的大豆黃葉萃取物及人參萃取物。

當該組合物含有大豆黃葉萃取物及綠茶萃取物的混合物時，其中，該混合物以ppm濃度為基準含有1~10：1~10的混合比的大豆黃葉萃取物及綠茶萃取物，較佳為含有1~2：1~2的混合比的大豆黃葉萃取物及綠茶萃取物，更佳為含有2：1的混合比的大豆黃葉萃取物及綠茶萃取物。

該大豆黃葉萃取物及芹菜素的混合物、大豆黃葉萃取物及香豆雌酚的混合物、大豆黃葉萃取物及咖啡因的混合物、大豆黃葉萃取物及人參萃取物的混合物、或大豆黃葉萃取物及綠茶萃取物的混合物可以為以對應於該ppm濃度的混合比的重量比（重量%）混合選自芹菜素、香豆雌酚、咖啡因、人參萃取物及綠茶萃取物中的一種與大豆黃葉萃取物的。

本發明中，該大豆葉萃取物能夠促進Wnt/β-連環蛋白訊號傳遞系統的活性，較佳為能夠促進毛乳頭細胞（dermal papilla cell）的Wnt/β-連環蛋白訊號傳遞系統的活性，更佳為能夠促進人毛乳頭細胞（Human dermal papilla cell）的Wnt/β-連環蛋白訊號傳遞系統的活性。

本發明的特徵在於，該大豆葉萃取物能夠使毛囊器官的毛髮生長。

本發明的特徵在於，該大豆葉萃取物藉由促進毛乳頭細胞的Wnt/β-連環蛋白訊號傳遞系統的活性，從而具有促進毛髮生長及/或改善脫髮症狀的功效。

本發明的含有大豆黃葉萃取物的藥學組合物可以進一步含有防腐劑、穩定化劑、可溶性粉劑或乳化促進劑、用於調節滲透壓的鹽及/或緩衝劑等藥劑學助劑及其他治療上有效的物質（載體、賦形劑、稀釋劑等），並且可以根據常規的方法劑型化為多種口服給藥劑或非口服給藥劑。

術語「載體（carrier）」被定義為使化合物容易負載於細胞或組織內的化合物。例如，二甲基亞碸（DMSO）是使很多有機化合物容易施用於生物體的細胞或組織中的常規的載體。

術語「賦形劑（excipient）」是在片劑或丸劑等的製劑過程中，在主藥的量少的情況下，為了使服藥容易或具備某種顏色及形態而進一步添加的物質，主要使用乳糖或澱粉。

術語「稀釋劑（diluent）」被定義為不僅使對象化合物的生物學活性形態進行穩定化，而且在溶解化合物的水中被稀釋的化合物。溶解在緩衝溶液中的鹽在本領域中用作稀釋劑。通常所使用的緩衝溶液為磷酸鹽緩衝食鹽水，這是因為在模仿人溶液的鹽狀態。由於緩衝鹽在低的濃度下能夠控制溶液的pH，因此緩衝稀釋劑使化合物的生物學活性發生變化的情況很罕見。

本說明書中使用的含有大豆黃葉萃取物的組合物可以以該組合物自身，或者如同結合療法，以與其他活性成分一起或與適當的載體或賦形劑一起混合的藥學組合物來施用於人類患者。

該藥學組合物中可包含的載體、賦形劑及稀釋劑可以例舉如乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露醇、木糖醇、赤蘚糖醇、麥芽糖醇、澱粉、阿拉伯膠(Acaciarubber)、藻酸鹽、明膠、磷酸鈣、矽酸鈣、纖維素、甲基纖維素、微晶纖維素、聚乙烯吡咯烷酮、水、羥基苯甲酸甲酯、羥基苯甲酸丙酯、滑石、硬脂酸鎂及礦物油。

該口服給藥劑例如有片劑、丸劑、硬質及軟質膠囊劑、液劑、懸浮劑、乳化劑、糖漿劑、粉劑、散劑、細粒劑、顆粒劑、微丸劑(pellet)等，這些劑型中除了有效成分以外還可以含有表面活性劑、稀釋劑（例：乳糖、葡萄糖、蔗糖、甘露醇、山梨糖醇、纖維素及甘氨酸）、潤滑劑（例：二氧化矽、滑石、硬脂酸及其鎂鹽或鈣鹽、以及聚乙二醇）。此外，片劑可以含有諸如矽酸鎂鋁、澱粉糊、明膠、黃芪膠、甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉及聚乙烯吡咯烷的結合劑，可以根據情況含有諸如澱粉、瓊脂、褐藻酸或其鈉鹽的崩解劑、吸收劑、著色劑、香味劑及甜味劑等藥劑學添加劑。該片劑可以藉由常規的混合、顆粒化或塗布（coating）方法來製備。

此外，該非口服給藥劑例如可以為注射劑、點滴劑、軟膏、洗劑、凝膠、霜、噴霧、懸浮劑、乳劑、栓劑、貼劑等劑型，但並不限定於此。

本發明的一個實施例的所述藥學組合物可以經由口服、非口服、直腸、局部、經皮、靜脈內、肌肉內、腹腔內、皮下等方式施用。本發明的一個實施例的藥學組合物例如可以局部施用於頭皮。

此外，該活性成分的藥劑學上可接受的用量，即，給藥量會根據接受治療的對象的年齡、性別、體重和需要治療的特定疾病或病理狀態、疾病或病理狀態的嚴重程度、給藥途徑及處方者的判斷有所不同。基於這些因素的給藥量的決定在本領域具有通常知識者的水平內。給藥量可以為例如對每1kg的體重一天以0.01~5000mg的量給藥，較佳為以0.1~2000mg的量給藥，更佳為以0.5~500mg的量給藥，最佳為以1~100mg的量給藥，其可以一次性給藥，或者分成幾次給藥，但是該給藥量不會以任何方法限定本發明的範圍。

本發明的大豆葉萃取物或大豆黃葉萃取物為天然物質，從而完全沒有毒性，因此可以作為醫藥品持續地大量使用。

本發明中適合使用的藥學組合物包含以下組合物，即，以用於達到預期目的的有效的量含有包含大豆黃葉萃取物的活性成分的組合物。更具體而言，治療有效量是指延長需要治療的個體的生存，或者防止、減輕或緩解疾病的症狀所需的有效的化合物的量。尤其，從本說明書中所提供的詳細的公開內容方面考慮，治療有效量的決定在本領域具有通常知識者的能力範圍內。

本發明的方法中所使用的大豆黃葉萃取物及含有其作為有效成分的組合物（化合物）的治療有效量可以藉由細胞培養分析在初期進行測量。例如，就劑量（dose）而言，為了獲得在細胞培養中決定的包括IC50（半抑制濃度（half maximal inhibitory concentration））或EC50（半最大效應濃度（half maximal effective concentration））的循環濃度範圍，可以藉由動物模型進行計算。這種訊息可以用於更加正確地決定人的有效劑量時使用。

就記載於本說明書中的大豆黃葉萃取物或含有其作為有效成分的組合物（化合物）的毒性和治療效率性而言，例如，為了決定LD50（對於群集的50%的致死量）、ED50（對於群集的50%具有治療效果的劑量）、IC50（對於群集的50%具有抑制治療的效果的劑量），可以藉由細胞培養或實驗動物中的標準製藥過程來進行計算。毒性和治療效果之間的劑量比為治療指數，這可以由LD50和ED50（或IC50）之間的比率來表示。顯示出高的治療指數的化合物更佳。在這些細胞培養分析中所獲得的數據可以使用於計算對人所使用的劑量的範圍。這種化合物的施用量（dosage）或塗布量較佳在沒有毒性或幾乎沒有毒性的狀態下包含ED50（或IC50）的循環濃度範圍內。

本發明中的「功能食品」或「功能性食品」是指在普通的食品中添加本發明的大豆黃葉萃取物，從而提高普通食品的功能性的食品。

功能性可以大致分為物理性質及生理功能性，將本發明的萃取物添加到普通食品中時，普通食品的物理性質及生理功能性會得到提高，本發明中將這些功能得到提高的食品整體定義為「功能食品（健康功能食品）」或「功能性食品（健康功能性食品）」。

本發明中所稱的「健康功能食品」是指根據關於健康功能食品的法律第10219號的使用具有對人體有效的功能性的原料或成分來製備及加工的食品，表示對人體的結構及功能，以調節營養素或獲得諸如生理作用等對保健用途有效的效果作為目的來攝取。

就本發明的含有大豆黃葉萃取物的健康功能食品而言，在對本發明所希望的主要效果不會帶來破壞的範圍內，可以含有對主要效果帶來協同效果的其他成分等。例如，為了改善物理性質，可以進一步包含香料、色素、殺菌劑、抗氧化劑、防腐劑、保濕劑、增稠劑、無機鹽類、乳化劑及合成高分子物質等添加劑。除此之外，也可以進一步包含水溶性維生素、油溶性維生素、高分子肽、高分子多糖及海草萃取物等輔助成分。對於該成分，可以根據劑型或使用目的，本領域具有通常知識者可以容易地進行適當選定並進行調配，其添加量可以在不會破壞本發明的目的及效果的範圍內進行選擇。此外，本發明的組合物自身可以作為添加劑的形態用於其他食品中。

本發明的含有大豆黃葉萃取物的健康功能食品的劑型不受特別的限定，例如，可以劑型化為片劑、顆粒劑、保健飲料、飲料、溶液、乳化物、黏性混合物、錠劑(tablet)、粉末等多種形態。此外，施用該健康功能食品時，可以藉由單純的飲用、注射施用、噴霧（spray）的方式或擠壓（squeeze）方式等多種方法來施用。

本發明的一個實施例中，本發明的組合物可以製劑化為化妝學劑型，從而能夠以多種方式用於具有促進生髮效果的毛髮化妝品等中。

本發明的含有大豆黃葉萃取物的化妝料組合物的劑型不受特別的限定，可以根據目的適當地進行選擇。例如，可以製備成選自柔膚化妝水（潤膚乳液及牛奶乳液）、營養化妝水、精華液、營養霜、按摩霜、面膜、凝膠、眼霜、眼部精華液、潔面霜、潔面泡沫、潔面水、粉、身體乳液、身體霜、身體油、身體精華液、生髮水、護髮素、護髮精華素、頭髮乳液（hair lotion）、頭髮營養乳液、洗髮水、潤髮劑、焗油膏、髮乳、頭髮營養霜、頭髮保濕霜、頭髮按摩霜、髮蠟、髮膠、髮膜、頭髮營養膜、洗髮皂、洗髮泡沫、髮油、毛髮乾燥劑、毛髮保存處理劑、染髮劑、燙髮劑、毛髮脫色劑、頭髮凝膠、頭髮釉(hair glaze)、美髮劑、定型劑、頭髮濕潤劑、髮用慕斯及噴髮劑中的一種以上的劑型，但並不限定於此，較佳地可以劑型化為生髮水、護髮素、護髮精華素、頭髮乳液、頭髮營養乳液、洗髮水、潤髮劑、焗油膏、髮乳、頭髮營養霜、頭髮保濕霜、頭髮按摩霜、髮蠟、髮膠、髮膜、頭髮營養膜、洗髮皂、洗髮泡沫、髮油、毛髮乾燥劑、毛髮保存處理劑、染髮劑、燙髮劑、毛髮脫色劑、頭髮凝膠、頭髮釉、美髮劑、定型劑、頭髮濕潤劑、髮用慕斯或噴髮劑。

將本發明的組合物製劑化為化妝學劑型時，本發明的組合物中除了所述萃取物以外，還可以包含在化妝料中通常利用的所有成分，例如，可以包含選自水溶性維生素、油溶性維生素、高分子肽、高分子多糖、鞘脂類及海草萃取物中的成分。

就高分子肽而言，只要是能與化妝料進行混合均可以選擇，但是較佳地可以選擇膠原蛋白、水解膠原蛋白、明膠、彈性蛋白、水解彈性蛋白、角蛋白等。高分子肽可以藉由精製法、酶法或化學合成法等通常的方法從微生物的培養液進行精製來獲得，或者通常可以藉由對豬或牛等的真皮、蠶的絲蛋白等天然物進行精製來使用。

就高分子多糖而言，只要是能與化妝料進行混合均可以選擇，但是較佳地可以選擇羥乙基纖維素、黃原膠、透明質酸鈉、硫酸軟骨素或其鹽（鈉鹽等）等。例如，硫酸軟骨素或其鹽通常可以對哺乳動物或魚類進行精製來使用。

就鞘脂類而言，只要是能與化妝料進行混合均可以選擇，但是較佳地可以選擇神經醯胺、植物鞘氨醇、神經鞘糖脂類等。鞘脂類通常可以藉由常規的方法對哺乳類、魚類、貝類、酵母或植物等進行精製或藉由化學合成法來獲取。

本發明的化妝料中，與該必要成分一起，根據需要可以調配通常在化妝料中進行調配的其他成分。這時，作為調配成分可以使用油脂成分、保濕劑、潤滑劑、表面活性劑、有機及無機顏料、有機粉體、紫外線吸收劑、防腐劑、殺菌劑、抗氧化劑、植物萃取物、pH調節劑、乙醇、色素、香料、血行促進劑、冷感劑、止汗劑、精製水等。

此外，除此之外能添加的調配成分並不限定於此，並且，對本發明的目的及效果不會進行破壞的範圍內，均可調配所述任何成分，但以組合物的總重量為基準，以0.001~50重量%，較佳以0.01~5重量%，更佳以0.01~3重量%的量進行調配。

本發明的製劑化為化妝學劑型的組合物中所包含的成分，除了包含所述萃取物以外，進一步可以包含通常利用於化妝料中的成分作為有效成分，例如，包含諸如穩定化劑、增溶劑、維生素、顏料及香料的通常的助劑及載體。

具體實施方式

下面，將藉由實施例對本發明進行更詳細的說明。這些實施例僅用於例示本發明，本發明的範圍並不受限於這些實施例，這對於本領域具有通常知識來說是顯而易見的。因此，本發明的實質性範圍是由所附的權利要求及其等價物來定義。

[實施例1~4] 各個生長階段的大豆葉萃取物的製備

用精製水對播種神話（Shinhwa）豆（Glycine max （L.） Merrill，國立種子院品種登記編號：第01-0003-134號）後經過約45天的大豆葉（V5階段）、經過約78天的大豆葉（R2~3階段）、經過約107天的大豆葉（R6階段）、經過約139天的大豆葉（R8階段）進行洗滌並乾燥，然後進行了細末化。取100g的該細末化的各個大豆葉粉末，並分別放入1升的乙醇水溶液中，在常溫（25℃）下萃取約24小時，然後用300目的濾布進行了過濾。之後，對過濾物進行濃縮並進行粉末化。由此，分別獲得約10.3g的V5階段的大豆葉萃取物（實施例1）、R2~3階段的大豆葉萃取物（實施例2）、R6階段的大豆葉萃取物（實施例3）及R8階段的大豆葉萃取物（實施例4）的粉末。

[比較例1] 人參萃取物的製備

將生人參根進行日光乾燥或熱風乾燥，從而製備了人參根乾燥原料。在約1kg的所述人參根乾燥原料中加入約3L的水進行回流萃取，然後進行過濾後在40~45℃下進行減壓濃縮，從而獲得了約300g的人參根萃取物。

[比較例2] 綠茶萃取物的製備

在約300g的綠茶中添加約4.5L的加熱至85∼95℃的溫度的水，然後維持所述溫度的同時進行處理約2~3小時，然後進行過濾，並在65∼75℃下藉由減壓獲得約82.7g的綠茶萃取物。

[比較例3] 大豆萃取物的製備

將與製備實施例1~4時所使用的大豆相同品種的神話（Shinhwa）大豆用精製水進行洗滌並乾燥，然後進行了細末化。將約100g的經過細末化的大豆粉末放入1升的乙醇水溶液中，並在常溫（25℃）下萃取約24小時，然後用300目的濾布進行了過濾。之後，對過濾物進行濃縮並進行粉末化。由此，獲得了約10.3g的大豆萃取物的粉末。

與此同時，如實施例5~9，製備了混合選自芹菜素（Sigma，美國）、香豆雌酚（Sigma，美國）、咖啡因（Sigma，美國）、人參萃取物（比較例1）及綠茶萃取物（比較例2）中的任一種物質和大豆黃葉萃取物（實施例4）的混合物（參照下述表2）。

[實施例5]

製備了由約10ppm的大豆黃葉萃取物（實施例4）及約5ppm的芹菜素組成的混合物（以ppm濃度為基準為2：1）。

[實施例6]

製備了由約10ppm的大豆黃葉萃取物（實施例4）及約5ppm的香豆雌酚組成的混合物（以ppm濃度為基準為2：1）。

[實施例7]

製備了由約10ppm的大豆黃葉萃取物（實施例4）及約5ppm的咖啡因組成的混合物（以ppm濃度為基準為2：1）。

[實施例8]

製備了由約10ppm的大豆黃葉萃取物（實施例4）及約5ppm的人參萃取物組成的混合物（以ppm濃度為基準為2：1）。

[實施例9]

製備了由約10ppm的大豆黃葉萃取物（實施例4）及約5ppm的綠茶萃取物組成的混合物（以ppm濃度為基準為2：1）。

[試驗例1] 各個生長階段的大豆葉萃取物的成分比較分析

對製備的各個生長階段的大豆葉萃取物（實施例1~4）及大豆萃取物（比較例3）的成分進行分析。將所述萃取物分別溶解於70%的乙醇中，從而製備10,000ppm的溶液，然後利用高效液相層析儀（HPLC，Waters公司，2695型號）進行了成分分析（Waters公司，2996 PDA檢測器）。固定相是利用關東化學（Kanto Chemical）的Mightysil RP-18 GP 250-4.6（5μm）層析柱，流動相是使用了如下述表1的組成比。

[表1]

其結果如第1圖的HPLC分析結果所示，可以知道在播種後經過約139天的大豆葉（R8階段）萃取物（實施例4）中出現了在播種後經過約45天的大豆葉（V5階段）萃取物（實施例1）、播種後經過約78天的大豆葉（R2~3階段）萃取物（實施例2）及播種後經過約107天的大豆葉（R6階段）萃取物（實施例3）中沒有發現的新的峰值（peak）。因此，可以確認大豆葉萃取物的組成成分會根據大豆葉的生長階段不同而發生變化。

此外，如圖2的HPLC分析結果所示，與大豆種子萃取物（比較例3）相比，播種後經過約139天的大豆葉（R8階段）萃取物（實施例4）的異黃酮及其衍生物（大豆苷元（Daidzein）、染料木黃酮（Genistein）、大豆苷（Daidzin）、染料木苷（Genistin）、丙二醯基大豆苷（Malonyl-Daidzin）、丙二醯基染料木苷（Malonyl-Genistin））的含量水平各不相同，尤其，可以知道香豆雌酚及其他未知的成分含量高。

[試驗例2] 根據大豆黃葉萃取物的處理的毛囊幹細胞的Wnt/β-連環蛋白訊號傳遞系統的活性變化

將NIH3T3（Wnt）細胞以10000細胞/孔接種（seeding）於96孔板（Nunc公司，威斯巴登（Wiesbaden），德國）中，然後在5%的CO₂ 、37℃的條件下培養約24小時，其中該NIH3T3（Wnt）細胞是將表達能夠測定Wnt/β-連環蛋白訊號傳遞系統的活性變化的報告蛋白（Reporter protein）即螢光素酶的毛囊幹細胞。對按照如上所述的方法來培養的NIH3T3（Wnt）細胞，用1、10或50ppm的不同濃度的大豆黃葉萃取物（實施例4）進行處理，然後培養約24小時（陰性對照組：DMSO（二甲基亞碸（Dimethyl Sulfoxide））；陽性對照組：50mM的氯化鋰（LiCl）；比較例：普通大豆葉萃取物）。之後，向96孔板的各個孔中分別加入100μL的ONE-Glo試劑（普洛麥格（Promega）公司，麥迪遜（Madison），威斯康星州（WI），美國），並反應3分鐘，反應後利用Victor光度計（luminometer Victor）（珀金埃爾默（PerkinElmer）公司，沃爾瑟姆（Waltham），馬薩諸塞州（Massachusetts），美國）測量了NIH3T3（Wnt）細胞的Wnt/β-連環蛋白螢光素酶反應（Wnt/β-連環蛋白訊號傳遞系統的活性度）（Wnt/β-連環蛋白螢光素酶分析）。

其結果如第3圖所示，以10ppm以上濃度的大豆黃葉萃取物（實施例4）進行處理時，顯示出150%以上的Wnt/β-連環蛋白螢光素酶反應程度（即，Wnt/β-連環蛋白訊號傳遞系統的活性度），反應程度依賴於大豆黃葉萃取物（實施例4）的濃度而增加。另一方面，就作為比較例的普通大豆葉萃取物而言，幾乎沒有顯示出Wnt/β-連環蛋白螢光素酶反應（一般而言，Wnt/β-連環蛋白螢光素酶反應程度超過150%時，判斷為具有促進生髮的效果）。

因此，可以知道，大豆黃葉萃取物促進作為毛囊幹細胞的毛髮生長促進訊號的Wnt/β-連環蛋白訊號傳遞系統的活性，從而具有促進毛髮生長的效果。

[試驗例3] 根據大豆黃葉萃取物的處理的人毛囊器官的毛髮生長效果

從毛髮移植手術後剩下的組織中各分離一個人毛囊器官，並在William' E培養基（含有L-穀氨醯胺（2mM）、胰島素（10μg/mL）、氫化可的松（40ng/mL）、抗生素（1% w/v）、抗真菌劑（1% w/v）的培養基）中進行培養。用1、10或50ppm的不同濃度的大豆黃葉萃取物（實施例4）進行處理（陰性對照組：DMSO；陽性對照組：50μM的米諾地爾），然後在培養後的第三天及第六天測量了從毛囊器官生長的毛髮的長度。

其結果如第4圖所示，大豆黃葉萃取物（實施例4）在1、10及50ppm的濃度範圍顯示出與陽性對照組同等或其以上的毛髮生長效果，尤其在10ppm的濃度下毛髮的長度生長顯示為最優異。

因此，確認了大豆黃葉萃取物對人毛囊器官的毛髮生長具有效果。

[試驗例4] 大豆黃葉萃取物及包含其的混合物的人毛乳頭細胞的增殖效果

以5000細胞/孔將人毛乳頭細胞（Human dermal papilla cell）接種于96孔板中，並在5%的CO₂ 、37℃的條件下培養約24小時，然後（i）用大豆黃葉萃取物（實施例4：1、10或50ppm）、0.1%的DMSO（陰性對照組）、50μM的米諾地爾（陽性對照組）分別處理人毛乳頭細胞；或（ii）將5ppm濃度的選自芹菜素、香豆雌酚、咖啡因、人參萃取物（比較例1）或綠茶萃取物（比較例2）中的一種試驗物質與大豆黃葉萃取物（實施例4：10ppm）進行混合來處理人毛乳頭細胞，然後培養約72小時後，藉由MTT試驗法（3-(4,5-二甲基-2-噻唑基)-2,5-二苯基-2H-四唑溴化物四唑鹽還原驗（3-(4,5-Dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2H-tetrazolium bromide tetrazolium reduction assay））來測量細胞增殖程度，從而確認了細胞增殖率。

[表2]

其結果如表2所示，確認了與用DMSO處理的人毛乳頭細胞（陰性對照組）相比，用1、10或50ppm的大豆黃葉萃取物（實施例4）來處理的人毛乳頭細胞的細胞增殖率得到增加，尤其，用10ppm濃度的大豆黃葉萃取物（實施例4）來處理的人毛乳頭細胞的細胞增殖率顯示為最高，其與用米諾地爾處理的人毛乳頭細胞（陽性對照組）具有同等水平的細胞增殖效果。

另外，分別用5ppm濃度的芹菜素、香豆雌酚、咖啡因、人參萃取物（比較例1）或綠茶萃取物（比較例2）來處理人毛乳頭細胞的結果，細胞增殖率得到增加。

分別將5ppm濃度的選自芹菜素、香豆雌酚、咖啡因、人參萃取物（比較例1）及綠茶萃取物（比較例2）中的任一種物質與10ppm的大豆黃葉萃取物（實施例4）進行混合並處理毛乳頭細胞的結果，人毛乳頭細胞的細胞增殖率得到顯著增加。

因此，確認了混合大豆黃葉萃取物和所述物質來處理人毛乳細胞時，具有更加促進毛髮生長效果的協同效果。

本發明的含有大豆黃葉萃取物作為有效成分的藥學、食品及化妝料組合物可以產品化為劑型例1~10的多種劑型（醫藥品、食品、化妝品），但並不限定於此，考慮到希望實現的產品的功能性、費用及其他條件，可應用為含有適當含量的大豆黃葉萃取物的多種製劑及劑型。此外，下述劑型還可以製備成含有以下混合物作為有效成分的藥學、食品及化妝料組合物的劑型，該混合物是混合選自芹菜素、香豆雌酚、咖啡因、人參萃取物及綠茶萃取物中的一種以上的物質和大豆黃葉萃取物的混合物。

[劑型例1] 軟質膠囊的製備

將80mg的大豆黃葉萃取物、9mg的維生素E、9mg的維生素C、2mg的棕櫚油、8mg的植物性硬化油、4mg的黃蠟及9mg的卵磷脂進行混合，並藉由常規的方法進行混合，從而製備了軟質膠囊填充液。每個膠囊填充400mg，從而製備了軟質膠囊。此外，另外以66重量份的明膠、24重量份的甘油及10重量份的山梨糖醇液的比例製備軟質膠囊片，並填充所述填充液，從而製備了含有400mg的本發明的組合物的軟質膠囊。

[劑型例2] 片劑的製備

將80mg的大豆黃葉萃取物、9mg的維生素E、9mg的維生素C、200mg的低聚半乳糖、60mg的乳糖及140mg的麥芽糖進行混合，並利用流化床乾燥器進行顆粒化，然後添加了6mg的糖酯（sugar ester）。將504mg的這些組合物藉由常規的方法進行壓片，從而製備了片劑。

[劑型例3] 保健飲料的製備

將80mg的大豆黃葉萃取物、9mg的維生素E、9mg的維生素C、10g的葡萄糖、0.6g的檸檬酸及25g的液體低聚糖進行混合，然後添加300ml的精製水，並以200ml的量填充到各個瓶中。填充到瓶中後，在130℃下進行殺菌4~5秒，從而製備了飲料。

[劑型例4] 顆粒的製備

將80mg的大豆黃葉萃取物、9mg的維生素E、9mg的維生素C、250mg的無水結晶葡萄糖及550mg的澱粉進行混合，並使用流化床顆粒器成型為顆粒，然後填充到袋的方式來製備。

[劑型例5] 營養化妝水（牛奶乳液）的製備

將包含油相成分和水相成分的表3的成分進行混合，從而製備了含有本發明的大豆黃葉萃取物的營養化妝水。

[表3]

[劑型例6] 按摩霜的製備

將包含油相成分和水相成分的表4的成分進行混合，從而製備了含有本發明的大豆黃葉萃取物的按摩霜。

[表4]

[劑型例7] 面膜的製備

將包含油相成分和水相成分的表5的成分進行混合，從而製備了含有本發明的大豆黃葉萃取物的面膜。

[表5]

[劑型例8] 生髮水的製備

將包含油相成分和水相成分的表6的成分進行混合，從而製備了含有本發明的大豆黃葉萃取物的生髮水（hair tonic）。

[表6]

[劑型例9] 洗髮水的製備

將包含油相成分和水相成分的表7的成分進行混合，從而製備了含有本發明的大豆黃葉萃取物的洗髮水。

[表7]

[劑型例10] 護髮素的製備

將包含油相成分和水相成分的表8的成分進行混合，從而製備了含有本發明的大豆黃葉萃取物的護髮素。

[表8]

以上，對本發明內容的特定部分進行了詳細記述，這些具體的記述只是較佳的實施方案，本發明的範圍並不限定於此，這對於本領域具有通常知識者來說是明確的。因此，本發明的實質性範圍是由所附的申請專利範圍及其等價物來定義。

無

第1圖為示出大豆（大豆葉）的各生長階段的大豆葉萃取物的高效液相層析（HPLC）分析結果的圖表。

第2圖為示出本發明的大豆黃葉萃取物和大豆萃取物的HPLC分析結果的圖表。

第3圖為示出基於使用本發明的大豆黃葉萃取物或大豆萃取物來處理的人毛乳頭細胞的Wnt/β-連環蛋白訊號傳遞系統（Wnt/β-catenin signalling cascade）活性的反應程度的圖表。

第4圖為示出使用本發明的大豆黃葉萃取物或大豆萃取物來處理的人毛囊器官的毛髮生長長度的圖表。

Claims (14)

1. 一種用於防止脫髮或改善生髮的組合物，其含有大豆黃葉萃取物作為有效成分。
2. 如申請專利範圍第1項所述的組合物，其中該大豆黃葉萃取物是由大豆葉的一部分或全部變為黃色時的大豆葉中萃取的。
3. 如申請專利範圍第2項所述的組合物，其中該大豆黃葉萃取物是由下述大豆的生長階段中的R7~R8階段的大豆葉中萃取的： VE階段：播種後1~2周後的狀態，子葉從土壤露出； VC階段：子葉盛開，其上面長出一個節並生成外葉； V1階段：從第一個外葉生成一個節，從而生成3個葉子； V2階段：在V1階段的基礎上再生成一個節，從而生成3個葉子； V3階段：在V2階段的基礎上再生成一個節，從而生成3個葉子； V4階段：在V3階段的基礎上再生成一個節，從而生成3個葉子 V5階段：在V4階段的基礎上再生成一個節，從而生成3個葉子； R2階段：大豆花盛開的狀態； R4階段：豆莢的生成結束的狀態； R5階段：豆莢裡生成大豆的狀態； R6階段：豆莢裡的綠色大豆的生成結束的狀態； R7階段：豆莢和大豆逐漸變成黃色的狀態；以及 R8階段：落葉，並且豆莢和大豆完全變成黃色的狀態。
4. 如申請專利範圍第1項所述的組合物，其進一步包含選自芹菜素（apigenin）、香豆雌酚（Coumestrol）、咖啡因、人參萃取物及綠茶萃取物中的一種以上。
5. 如申請專利範圍第4項所述的組合物，其中， 該組合物含有大豆黃葉萃取物及芹菜素的混合物時，該混合物以ppm濃度為基準含有1~10：1~10的混合比的大豆黃葉萃取物及芹菜素； 該組合物含有大豆黃葉萃取物及香豆雌酚的混合物時，該混合物以ppm濃度為基準含有1~10：1~10的混合比的大豆黃葉萃取物及香豆雌酚； 該組合物含有大豆黃葉萃取物及咖啡因的混合物時，該混合物以ppm濃度為基準含有1~10：1~10的混合比的大豆黃葉萃取物及咖啡因； 該組合物含有大豆黃葉萃取物及人參萃取物的混合物時，該混合物以ppm濃度為基準含有1~10：1~10的混合比的大豆黃葉萃取物及人參萃取物； 該組合物含有大豆黃葉萃取物及綠茶萃取物的混合物時，該混合物以ppm濃度為基準含有1~10：1~10的混合比的大豆黃葉萃取物及綠茶萃取物。
6. 如申請專利範圍第1項所述的組合物，其中以該組合物的總重量為基準，該大豆黃葉萃取物的含量為1~60重量%。
7. 如申請專利範圍第1項所述的組合物，其中所述大豆黃葉萃取物促進Wnt/β-連環蛋白訊號傳遞系統的活性。
8. 如申請專利範圍第1至7項中任一項所述的組合物，其中該組合物為藥學組合物、健康功能食品組合物或化妝料組合物。
9. 一種用於防止脫髮或改善生髮的藥學組合物或醫藥的製備中，大豆黃葉萃取物作為脫髮防止劑或生髮改善劑的用途，其中該大豆黃葉萃取物是由下述大豆的生長階段中的R7~R8階段的大豆葉中萃取的： VE階段：播種後1~2周後的狀態，子葉從土壤露出； VC階段：子葉盛開，其上面長出一個節並生成外葉； V1階段：從第一個外葉生成一個節，從而生成3個葉子； V2階段：在V1階段的基礎上再生成一個節，從而生成3個葉子； V3階段：在V2階段的基礎上再生成一個節，從而生成3個葉子； V4階段：在V3階段的基礎上再生成一個節，從而生成3個葉子； V5階段：在V4階段的基礎上再生成一個節，從而生成3個葉子； R2階段：大豆花盛開的狀態； R4階段：豆莢的生成結束的狀態； R5階段：豆莢裡生成大豆的狀態； R6階段：豆莢裡的綠色大豆的生成結束的狀態； R7階段：豆莢和大豆逐漸變成黃色的狀態；以及 R8階段：落葉，並且豆莢和大豆完全變成黃色的狀態。
10. 如申請專利範圍第9項所述的用途，其中該藥學組合物或醫藥進一步包含選自芹菜素（apigenin）、香豆雌酚（Coumestrol）、咖啡因、人參萃取物及綠茶萃取物中的一種以上。
11. 一種用於防止脫髮或改善生髮的健康功能食品組合物的製備中，大豆黃葉萃取物作為脫髮防止劑或生髮改善劑的用途，其中該大豆黃葉萃取物是由下述大豆的生長階段中的R7~R8階段的大豆葉中萃取的： VE階段：播種後1~2周後的狀態，子葉從土壤露出； VC階段：子葉盛開，其上面長出一個節並生成外葉； V1階段：從第一個外葉生成一個節，從而生成3個葉子； V2階段：在V1階段的基礎上再生成一個節，從而生成3個葉子； V3階段：在V2階段的基礎上再生成一個節，從而生成3個葉子； V4階段：在V3階段的基礎上再生成一個節，從而生成3個葉子； V5階段：在V4階段的基礎上再生成一個節，從而生成3個葉子； R2階段：大豆花盛開的狀態； R4階段：豆莢的生成結束的狀態； R5階段：豆莢裡生成大豆的狀態； R6階段：豆莢裡的綠色大豆的生成結束的狀態； R7階段：豆莢和大豆逐漸變成黃色的狀態；以及 R8階段：落葉，並且豆莢和大豆完全變成黃色的狀態。
12. 如申請專利範圍第11項所述的用途，其中該健康功能食品組合物進一步包含選自芹菜素（apigenin）、香豆雌酚（Coumestrol）、咖啡因、人參萃取物及綠茶萃取物中的一種以上。
13. 一種用於防止脫髮或改善生髮的化妝料組合物的製備中，大豆黃葉萃取物作為脫髮防止劑或生髮改善劑的用途，其中該大豆黃葉萃取物是由下述大豆的生長階段中的R7~R8階段的大豆葉中萃取的： VE階段：播種後1~2周後的狀態，子葉從土壤露出； VC階段：子葉盛開，其上面長出一個節並生成外葉； V1階段：從第一個外葉生成一個節，從而生成3個葉子； V2階段：在V1階段的基礎上再生成一個節，從而生成3個葉子； V3階段：在V2階段的基礎上再生成一個節，從而生成3個葉子； V4階段：在V3階段的基礎上再生成一個節，從而生成3個葉子； V5階段：在V4階段的基礎上再生成一個節，從而生成3個葉子； R2階段：大豆花盛開的狀態； R4階段：豆莢的生成結束的狀態； R5階段：豆莢裡生成大豆的狀態； R6階段：豆莢裡的綠色大豆的生成結束的狀態； R7階段：豆莢和大豆逐漸變成黃色的狀態；以及 R8階段：落葉，並且豆莢和大豆完全變成黃色的狀態。
14. 如申請專利範圍第13項所述的用途，其中該化妝料組合物進一步包含選自芹菜素（apigenin）、香豆雌酚（Coumestrol）、咖啡因、人參萃取物及綠茶萃取物中的一種以上。