TW201718010A

TW201718010A - 治療原發性局部節段性腎小球硬化症之方法

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Publication number: TW201718010A
Application number: TW105118870A
Authority: TW
Inventors: 史蒂芬萊德貝特; 莎拉恩斯特蘭德; 派翠克芬恩; 茱麗葉林; 羅伯特蓬波尼奧
Original assignee: 健臻公司
Priority date: 2015-06-19
Filing date: 2016-06-16
Publication date: 2017-06-01
Also published as: AU2016280832A1; CN108290054A; CA2989629A1; EP3310438A4; US20190062416A1; ZA201708305B; IL256321A; MX2017016533A; RU2018101865A; JP2018517721A; KR20180019125A; WO2016205581A1; EP3310438A1

Abstract

一種治療具有APOL1變體的患者中的原發性局部節段性腎小球硬症的方法，包括對所述患者靜脈內投予TGFβ拮抗劑。

Description

治療原發性局部節段性腎小球硬化症之方法

【相關申請的交叉引用】

本申請案主張申請日為2015年6月19日的美國臨時申請No.62/182,102的優先權。上述相關申請在此通過提述以其整體併入。

美國專利No.7,723,486、美國專利No.8,383,780、及美國專利No.8,591,901同樣在此通過提述各自以其整體併入。

本發明係關於治療原發性局部節段性腎小球硬化症(原發性FSGS)和/或改善一個或多個原發性FSGS相關症狀的方法，包括將TGFβ拮抗劑投予於對其有需要的患者。具體而言，所述方法涉及將包含治療有效量的夫蘇木單株抗體(fresolimumab)的醫藥配製物投予于原發性FSGS患者(例如具有基因變體的患者，所述基因變體與患有或患上原發性FSGS的風險升高相關，例如APOL1基因變體)，以使患者可以從中獲益。

部節段性腎小球硬化症(FSGS)是一種臨床實體，其通過腎小球的逐步纖維化影響腎功能。FSGS不是單一疾病，而是在腎組織活檢中鑑別出的異質性(heterogeneous)臨床病理學過程，所述腎組織活檢通常在蛋白尿或腎病徵候群患者中進行。原發性(或特發性)部節段性腎小球硬化症(下文稱“原發性FSGS”)是一種基於臨床病理學發現而診斷的腎臟疾病。原發性FSGS具有獨特的組織病理學表現，其特徵是部分腎小球叢的透明變性和硬化，免疫複合體的最小沉積、以及內臟上皮細胞(足細胞)足突過程(foot processes)的消失(effacement)。大部分的FSGS病例特徵為逐漸的腎纖維化和腎功能穩定退化。

部節段性腎小球硬化症通常表現為腎病徵候群：蛋白尿3.0g/24小時，伴有指征/症狀包括低白蛋白血症、水腫和高脂血症。腎病徵候群的具體致病原因有很多，包括腎臟疾病如微小病變型腎病、局灶腎小球硬化、和膜性腎病。腎病徵候群還能由系統性疾病引起，所述系統性疾病除腎臟外還影響其他器官，如糖尿病、澱粉樣變性、和紅斑狼瘡。值得注意的是，腎病徵候群可以影響成人和兒童，影響兩種性別及任何種族。

腎病徵候群可以是原發性的，特定針對腎臟的疾病，或可以是繼發性的，系統性一般疾病的腎臟發病表現。在所有情況下，腎小球損傷是基本特徵。腎病徵候群的原發性病因包括如下(大體按發病率順序)：微小病變型腎病、局部腎小球硬化症、膜性腎病、和遺傳性腎病。繼發性病因包括如下(大體按發病率順序)：糖尿病、紅斑狼瘡、澱粉樣變性和病變蛋白血(paraproteinemias)、病毒感染(例如乙型肝炎、丙型肝炎、人類免疫缺陷病毒[HIV])、和先兆子癇(preeclampsia)。

原發性FSGS是一種進展性疾病，其對於生活質量、發病率和死亡率有重大影響。原發性FSGS通過腎臟活檢確證，所述腎臟活檢顯示局部(涉及一些但非全部腎小球)和節段性(涉及任何單個腎小球的部分)模式的腎小球瘢痕形成。患者可能具有深度水腫，其可能導致數公升流體的滯留，影響運動力和日常活動。如果放任不治療的話，原發性FSGS僅在少數患者(<5%)中自發緩解，而其通常導致腎功能的相對快速下降，引起終末期腎臟疾病(End Stage Renal Disease，下文稱“ESRD”)並需要進行透析或移植。腎臟疾病進展隨之引起副發病變(co-morbidities)，如高血壓和心血管風險，其被腎病徵候群患者中所見的高脂血症進一步放大。

快速進展至ESRD的最重要的預後因子之一是蛋白尿程度。蛋白尿能以多種形式及不同的嚴重程度發生。例如，可以基於分泌的蛋白量(腎病的或非腎病的)、分泌的蛋白類型(白蛋白尿或低分子量蛋白尿)、或基礎的病理學損害(腎小球的或非腎小球的)對蛋白尿進行分類。

在非腎病蛋白尿中，蛋白尿的量為<3.0g/24h並且是持久的。這些患者需要密切的隨訪，並且如果其具有異常的尿顯微鏡檢查結果和/或或腎功能損壞的話，可能需要進行腎臟活檢。腎病範圍的蛋白尿定義為3.0g/24h的蛋白尿排泄率或3.0g/gm肌酐現測尿蛋白對肌酐比率(on a spot urine protein-to-creatinine ratio)。這個發現指示了顯著的腎小球疾病且需要腎臟活檢以供診斷和管控。相比而言，正常的尿蛋白排泄通常認為是大約<150mg/24小時。例如，關於白蛋白這種蛋白，正常人中的每日白蛋白排泄通常認為是大約<30mg/24小時。

腎病範圍的蛋白尿的存在與不良的結局是相關的，並且大約50%的患者在6至8年達到ESRD，而20%的具有非腎病性蛋白尿的患者在約10年達到ESRD。更嚴重的蛋白尿(>10g/24小時)與更加惡性的進程是相關的，以致大多數患者3年進展至ESRD(Korbet S.,“Clinical picture and outcome of primary focal segmental glomerulosclerosis”,Nephrol Dial Transplant.,1999；14：68-73)。此外，進展至ESRD並接受腎臟移植的患者在所移植的移植體中有患上復發的FSGS的高風險，其後果是大量蛋白尿和移植失敗。

從治療角度來看，腎病徵候群可以分為類固醇敏感的、類固醇抗性的、類固醇依賴的、或頻繁復發的。蛋白尿的緩解常用作預測向ESRD進展延遲的因子(Korbet S.,Nephrol Dial Transplant.,1999)。目前，尚未有類固醇抗性患者的療法獲得批准。在沒有獲批療法的情況下，可以嘗試多種療法。例如，免疫抑制療法(例如環磷醯胺和環孢黴素A)已用於嘗試誘導緩解，其目的是減輕腎病和腎機能不全相關的腎功能下降及死亡率，儘管尚未有療法顯示出有利的益處-危險比。雖然不是標記的適應症，但高劑量皮質類固醇(例如強的松)已經同樣經常用於此種目的，但是通常僅在相對低百分比率的部分患者中有效(Korbet SM.,“Angiotensin antagonists and steroids in the treatment of focal segmental glomerulosclerosis,”Semin Nephrol.,2003；23：219-28)。例如，雖然用高劑量糖皮質類固醇進行持久治療與較高的緩解率有聯繫，但其也罹患了更多的併發症，包括高血壓、高血糖、感染風險、腫脹和/或增重。經常投予利尿劑來降低相關的水腫。為了降低腎病範圍的蛋白尿和非腎病性的蛋白尿患者二者中的蛋白尿含量，投予了血管緊張素轉化酶(ACE)抑制劑和血管緊張素II受體阻斷劑(ARBs)，並使患者處於低鹽飲食。

這些療法的許多都已經在FSGS患者中嘗試過，所述患者具有腎病範圍的蛋白尿，且對類固醇療法有抗性或是不耐受類固醇療法。在腎病徵候群患者(包括患有抗類固醇的FSGS的患者)中，已經嘗試了免疫抑制療法，如用環孢黴素A治療(Brandis,M等，“Cyclosporine A for treatment of nephrotic syndromes”,Transplantation Proc.1988；20(S4)：275-9；Capodicasa,G.，等，“Cyclosporin A in nephrotic syndrome of childhood-a 14 month experience”,Int J Pediatr Nephrol.,1986；7：69-72；Cattran,D.，等，“A controlled trial of cyclosporine in patients with progressive membranous nephropathy,”Kidney Int.1995；47：1130-5；Cattran,DC.，等，“A randomized trial of cyclosporine in patients with steroid-resistant focal segmental glomerulosclerosis,”Kidney Int.,1999；56：2220-6；Chishti,AS.，等，“Long-term treatment of focal segmental glomerulosclerosis in children with cyclosporine given as a single daily dose,”Am J Kidney Dis.,2001；38：754-60；Gregory,MJ.，等，“Long-term cyclosporine therapy for pediatric nephrotic syndrome：a clinical and histologic analysis,”J Am Soc Nephrol., 1996；7：543-9；Hino,S.，等，“Follow-up study of children with nephrotic syndrome treated with a long-term moderate dose of cyclosporine,”Am J Kidney Dis.,1998；31(6)：932-9；Meyrier,A.，等，“Remission of idiopathic nephrotic syndrome after treatment with cyclosporin A,”Br Med J.,1986；292：789-92；Niaudet,P.，等，“Cyclosporin in the treatment of idiopathic nephrotic syndrome in children,”Pediatr Nephrol.,1987；1：566-73；Niaudet,P.,“The French Club of Pediatric Nephrology.Steroid-resistant idiopathic nephrotic syndrome and ciclosporin,”Nephron.,1991；57：481；Ponticelli,C等，“A randomized trial of cyclosporine in steroid-resistant idiopathic nephrotic syndrome,”Kidney Int.,1993；43：1377-84；Tejani,A.，等，“Cyclosporine A induced remission of relapsing nephrotic syndrome in children,”Kidney Int.,1988；33：729-34；Lieberman,KV.，等，“New York-New Jersey Pediatric Nephrology Study Group.A randomized double-blind placebo-controlled trial of cyclosporine in steroid-resistant idiopathic focal segmental glomerulosclerosis in children,”J Am Soc Nephrol.,1996；7：56-63；Walker,RG.，等，“The effect of treatment of corticosteroid-resistant idiopathic(primary)focal and segment hyalinosis and sclerosis(focal glomerulosclerosis)with ciclosporin,”Nephron.,1990；54：117-21)。然而，終止治療後復發頻繁，並且其毒性值得關注。當用於預防器官排斥時，嚴重副作用包括增加的感染易感性、瘤形成(特別是淋巴瘤以及皮膚癌)的發生/進展、腎毒性和高血壓。過往或進行中的研究的其他治療幹預包括黴酚酸酯(mycophenolate mofetil)(Briggs,WA.，等，“Successful mycophenolate mofetil treatment of glomerular disease,”Am J Kidney Dis.,1998；31：213-7；Choi,MJ.，等，“Mycophenolate mofetil treatment for primary glomerular diseases,”Kidney Int.,2002；61：1098-114；Cattran,DC.，等，“Mycophenolate mofetil in the treatment of focal segmental glomerulosclerosis,”Clin Nephrol.,2004；62(6)：405-11)、利妥昔單株抗體(Fernandez-Fernedo,G.，等，“Rituximab treatment of adult patients with steroid-resistant focal segmental glomerulosclerosis,”Clin J Am Soc Nephrol.,2009；4(8)：1317-23)、羅格列酮(Joy,MS.，等，“Phase I trial of rosiglitazone in FSGS：I.Report of the FONT Study Group,”Clin J Am Soc Nephrol.,2009；4：39-47)、西羅莫司(雷帕黴素)(Cho,ME.，等，“Sirolimus therapy of focal segmental glomerulosclerosis is associated with nephrotoxicity,”Am J Kidney Dis.,2007；49(2)：310-17)和環磷醯胺(Ponticelli,C.，等，“Can prolonged treatment improve the prognosis in adults with focal segmental glomerulosclerosis？”Am J Kidney Dis.,1999；34(4)：618-25)。這些製劑均未被批准用於原發性FSGS的治療。

然而，在大多數原發性FSGS患者中，用類固醇治療和其他治療幹預僅導致蛋白尿的瞬時改善而不改變疾病進程。在具有導致FSGS的基因突變的患者中尤其是這樣。近來已經發現，載脂蛋白L1基因的基因座(下文稱“APOL1”)中的變異與患上FSGS及其他相關形式的進展性非糖尿病腎病的風險增加是相關的，其包含在近期的非洲血統人群中，相對於歐洲血統人而言(Freedman,Barry I.,等“Gene-Gene and Gene Environment Interactions in Apolipoprotein L1 Gene-Associated Nephropathy,”Clin.J.Am.Soc.Nephrol.,2014,doi：10.2215/CJN.01330214)。因為FSGS(例如抗類固醇FSGS)患者或具有FSGS相關基因突變的患者的不良腎臟預後且缺少得到證明的治療，對於新的治療的未滿足的醫學需求是很高的，所述新的治療能降低蛋白尿或誘導蛋白尿緩解，並降低或終止這個人群中的腎損傷的進展以及進展至ESRD。

一些具體例針對治療具有APOL1變體的患者中的原發性局部節段性腎小球硬症(原發性FSGS)的方法，其包括對患者投予TGFβ拮抗劑，或包含治療有效量的TGFβ拮抗劑的醫藥配製物。

一些具體例針對治療具有APOL1變體的患者中的原發性FSGS的方法，其包括對患者靜脈內投予TGFβ拮抗劑，或包含治療有效量的TGFβ拮抗劑的醫藥配製物。

一些具體例針對治療具有APOL1變體的患者中的原發性FSGS的方法，其包括對患者靜脈內投予TGFβ拮抗劑，或包含治療有效量的TGFβ拮抗劑的醫藥配製物，其中所述方法穩定患者的腎小球濾過率。

一些具體例針對治療具有APOL1變體的患者中的原發性FSGS的方法，其包括對患者投予夫蘇木單株抗體或包含治療有效量的夫蘇木單株抗體的醫藥配製物。

一些具體例針對治療具有APOL1變體的患者中的原發性FSGS的方法，其包括對患者靜脈內投予夫蘇木單株抗體或包含治療有效量的夫蘇木單株抗體的醫藥配製物。

一些具體例針對治療具有APOL1變體的患者中的原發性FSGS的方法，其包括對患者靜脈內投予夫蘇木單株抗體或包含治療有效量的夫蘇木單株抗體的醫藥配製物，其中所述方法還包括穩定患者的腎小球濾過率。

一些具體例針對治療具有APOL1變體的患者中的原發性FSGS的方法，其包括基於每月、每28天、每21天、或每14天對所述患者投予1-4mg/kg的夫蘇木單株抗體，或包含1-4mg/kg的夫蘇木單株抗體的醫藥配製物。

一些具體例針對治療具有APOL1變體的患者中的原發性FSGS的方法，其包括基於每月、每28天、每21天、或每14天以單次輸注或在療程期間的一段時間以系列輸注的方式對所述患者靜脈內投予1-4mg/kg的夫蘇木單株抗體，或包含1-4mg/kg的夫蘇木單株抗體的醫藥配製物。

一些具體例針對治療具有APOL1變體的患者中的原發性FSGS 的方法，其包括基於每月、每28天、每21天、或每14天，在1-50個療程(例如1-10個療程或1-4個療程)對所述患者靜脈內投予1-4mg/kg的夫蘇木單株抗體，或包含1-4mg/kg的夫蘇木單株抗體的醫藥配製物。

一些具體例針對治療具有APOL1變體的患者中的原發性FSGS的方法，其包括基於每月、每28天、每21天、或每14天對所述患者靜脈內投予1-4mg/kg的夫蘇木單株抗體，或包含1-4mg/kg的夫蘇木單株抗體的醫藥配製物，其中治療的患者具有自基線下降50%或更多的Up/C比率(毫克蛋白/毫克肌酐)。

一些具體例針對治療具有APOL1變體的患者中的原發性FSGS的方法，其包括基於每月、每28天、每21天、或每14天對所述患者靜脈內投予1-4mg/kg的夫蘇木單株抗體，或包含1-4mg/kg的夫蘇木單株抗體的醫藥配製物，其中治療的患者具有自基線下降50%或更多，降至範圍為0.3至3.0毫克蛋白/毫克肌酐的含量的Up/C比率。

一些具體例針對治療具有APOL1變體的患者中的原發性FSGS的方法，其包括基於每月、每28天、每21天、或每14天對所述患者靜脈內投予1-4mg/kg的夫蘇木單株抗體，或包含1-4mg/kg的夫蘇木單株抗體的醫藥配製物，其中治療的患者具有自基線下降50%或更多，降至<0.3毫克蛋白/毫克肌酐含量的Up/C比率。

一些具體例針對治療具有APOL1變體的患者中的原發性FSGS的方法，其包括基於每月、每28天、每21天、或每14天以單次輸注或在療程期間的一段時間以系列輸注的方式對所述患者靜脈內投予1-4mg/kg的夫蘇木單株抗體，或包含1-4mg/kg的夫蘇木單株抗體的醫藥配製物，其中所述APOL1變體包括APOL1 G1單倍型(如G1/-或G1/G1)，APOL-1 G2單倍型(如G2/-或G2/G2)，或雙倍型，如G1/G2。

一些具體例針對治療具有APOL1變體的患者中的原發性FSGS的方法，其包括基於每月、每28天、每21天、或每14天以單次輸注或在療程期間的一段時間以系列輸注的方式對所述患者靜脈內投予1-4mg/kg的夫蘇木單株抗體，或包含1-4mg/kg的夫蘇木單株抗體的醫藥配製物，其中所述APOL1變體是APOL1 G1單倍型純合陽性的(即G1/G1)，或是APOL1 G1單倍型的雜合攜帶體(例如G1/-或雙倍型G1/G2)。

一些具體例針對治療具有APOL1變體的患者中的原發性FSGS的方法，其包括基於每月、每28天、每21天、或每14天以單次輸注或在療程期間的一段時間以系列輸注的方式對所述患者靜脈內投予1-4mg/kg的夫蘇木單株抗體，或包含1-4mg/kg的夫蘇木單株抗體的醫藥配製物，其中所述APOL1變體是APOL1 G1單倍型純合陽性的(即G1/G1)，或是APOL1 G1單倍型的雜合攜帶體(例如G1/-或雙倍型G1/G2)，且其中所述方法還包括通過鑑別分離自患者的血液樣品中APOL1 G1單倍型(例如G1/G1、G1/-、或G1/G2)的存在而對所述患者進行基因分型，其中所述基因分型在治療之前、期間、或之後進行。

一些具體例針對治療具有APOL1變體的患者中的原發性FSGS的方法，其包括基於每月、每28天、每21天、或每14天對所述患者投予1-4mg/kg的夫蘇木單株抗體，或包含1-4mg/kg的夫蘇木單株抗體的醫藥配製物，其中所述原發性FSGS是抗類固醇的原發性FSGS。

一些具體例針對治療具有APOL1變體的患者中的原發性FSGS的方法，其包括對患者投予1-4mg/kg的夫蘇木單株抗體，或包含1-4mg/kg的夫蘇木單株抗體的醫藥配製物，其中所述原發性FSGS是抗類固醇的原發性FSGS，並且其中所述APOL1變體是APOL1風險變體，包括G1/G1、G1/-、G1/G2、G2/-、或G2/G2。

一些具體例針對治療具有APOL1變體的患者中的原發性FSGS的方法，其包括對患者投予1-4mg/kg的夫蘇木單株抗體，或包含1-4mg/kg的夫蘇木單株抗體的醫藥配製物，其中所述原發性FSGS是抗類固醇的原發性FSGS，並且其中治療的患者是非洲血統或西班牙血統。

圖1：通過治療分配的均值eGFR(mL/min每1.73m²)隨時間的百分比變化。

轉化生長因子β(TGFβ)是一種多效細胞因子，屬配體超家族，包括骨形成蛋白和激活素，所述TGFβ在細胞增殖和分化、胞外基質(ECM)產生、血管生成、傷口癒合、免疫調節、以及胚胎發育過程中起著重要的生理作用。由於TGFβ在腎纖維化中起著重要的生理作用，且FSGS臨床前模型已經證明瞭通過抑制TGFβ來預防蛋白尿和腎小球病理學以及減少已有的蛋白尿，因此有理由相信夫蘇木單株抗體可能是對於抗類固醇的原發性FSGS患者的有效療法。

在人類中，TGFβ存在3個同種型：TGFβ1、β2和β3。各同種型由不同的、高度保守的基因編碼，並且是25千道爾頓的同型二聚體、結合有二硫化物的蛋白。TGFβ以生物學上非活性的“潛伏形式(latent form)”被細胞所分泌，這是由於其與潛伏相關蛋白相連。TGFβ/潛伏相關蛋白“前藥”的許多貯存於胞外基質(ECM)中；其他值得注意的位點包括血小板顆粒和T-調節細胞的表面。活性TGFβ的釋放機制可以在酸性條件下(例如在腫瘤內)發生或通過蛋白酶作用而發生，所述蛋白酶如血栓反應素-1(thrombospondin-1)、纖溶酶、或前列腺特異性抗原(Dallas SL，等，“Preferential production of latent transforming growth factor β-2 by primary prostatic epithelial cells and its activation by prostate-specific antigen,”J Cell Physiol.,2005；202：361-70)。

活性TGFβ首先是通過2個主要受體，TGFβRII和TGFβRIII，結合至細胞，其可以導致Smad途徑激活、基因轉錄的誘導和對細胞分化和生長的作用。雖然TGFβ/TGFβR/Smad是主要的信號傳輸途徑，但TGFβ還結合至其他受體如內皮糖蛋白(endoglin)，而且還可涉及其他信號傳輸途徑，如ERK、JNK、MAPK、PI3K、Rho-激酶、Akt以及GTP酶(GTPases)。這些途徑的下游效應器導致生理學和病理學TGF-介導的過程，如下文所述(Blobe GC.，等，“Role of transforming growth factor β in human disease,”N Engl J Med.,2000；342：1350-8)。

在正常條件下，TGFβ家族成員維持許多器官系統的內穩態。在正常和非癌性細胞中，TGFβ通過抗增殖和凋亡響應來限制上皮細胞、內皮細胞、神經細胞、和造血細胞系的生長。此外，TGFβ發揮強力作用，其影響免疫功能、細胞增殖/功能性分化、細胞粘附、胞外基質(ECM)產生、細胞運動性、血管生成、和細胞因子產生(Blobe GC.,N Engl J Med.,2000)。

儘管在生理學上是重要的，但TGFβ的過表達可能是病態的且促進纖維化的，例如腎纖維化。例如，持續的TGFβ過度活性可能是病態的且導致過度ECM積累，這是纖維化疾病的特徵。TGFβ也被認為是晚期癌症的生長、進展、和轉移潛能中的重要因子，以及免疫功能的重要調節因子。對TGFβ的抑制、中和、及阻斷可以改善病理狀態中的疾病進展，所述病理狀態的特徵為過渡纖維化和異常細胞增殖，例如FSGS，如原發性FSGS，以及腫瘤學。具體而言，用TGFβ拮抗劑(如針對TGFβ的抗體)中和或阻斷TGFβ，可以改變病理進程(所述病理進程的特徵為不當的纖維化，例如FSGS，如原發性FSGS)，並且可以為治療腎纖維化提供新的治療機會。

來自數個動物模型的臨床前數據顯示，TGFβ的中和能抑制組織纖維化的進展。在腎纖維化的大鼠單側輸尿管結紮(UUO)模型中，投予1D11(一種人泛特異性抗體的小鼠類似物(起初命名為GC-1008)，其針對轉化生長因子β的3個主要同種型(TGFβ；β1、2、和3))導致TGFβ表達和膠原沉積的顯著降低(Miyajima A，等，“Antibody to transforming growth factor-β ameliorates tubular apoptosis in unilateral ureteral obstruction,”Kidney Int.,2000；58：2301-13)。在氨基核苷嘌呤黴素(puromycin aminonucleoside,PAN)誘導的FSGS的單側腎切除大鼠模型中，1D11和GC-1008都有效預防蛋白尿和腎小球病理進展；1D11還有效降低先前存在的蛋白尿。這些結果證明，TGFβ拮抗作用可有效預防和降低FSGS動物模型中先前存在的蛋白尿。

夫蘇木單株抗體(GC-1008)(下文稱“夫蘇木單株抗體”，並且如美國專利No.7,723,486和美國專利No.8,383,780及美國專利No.8,591,901中所述，其各自在此通過提述以其整體併入)是一種工程改造的免疫球蛋白亞類γ4(IgG4)人單株抗體，其針對轉化生長因子β的3個主要同種型(TGFβ；β1、2、和3)。投予夫蘇木單株抗體導致TGFβ的中和及TGFβ活性的抑制。TGFβ抑制可以減輕病理狀態的疾病進展，所述病理狀態特徵為過渡纖維化和異常細胞增殖，例如PSGS，如原發性FSGS。

APOL1基因的某些單倍型和雙倍型(本文稱為APOL1變體或APOL1風險變體)與增加的發病率或增加的患上腎病的風險是相關的，所述腎病如非糖尿病腎病，例如原發性FSGS，其中所述APOL1變體(或APOL1風險變體)包括APOL1 G1單倍型(例如G1/G1和G1/-)、APOL1 G2單倍型(例如G2/G2和G2/-)、或APOL1雙倍型(即G1/G2)，相對於缺少G1和G2單倍型二者的(即-/-，或有時稱為“野生型”；其與增加的發病率或增加的患上腎病、非糖尿病腎病、或原發性FSGS的風險無關)。(Freedman,Barry I.，等“Gene-Gene and Gene Environment Interactions in Apolipoprotein L1 Gene-Associated Nephropathy,”Clin.J.Am.Soc.Nephrol.,2014,doi：10.2215/CJN.01330214)。

如下表1所示的APOL1 G1單倍型，理解為意指在APOL1基因中存在兩種特定的基因變體(即編碼變體)。鑑別為具有APOL1 G1單倍型的人，例如非洲血統(或人種或種族)的人與增加的FSGS疾病(如原發性FSGS)風險強烈相關。純合性中各個位置處“G”核苷酸的存在可以將個體(例如非洲血統的個體)鑑別為“APOL1 G1單倍型純合陽性的(即G1/G1)”，並且該個體可具有增加的患上原發性FSGS的風險。如果在雜合性中發現變體位置的任一者或二者(即A/G和G/G；或G/G和T/G)，個體(例如非洲血統的個體)可以鑑別為“APOL1 G1單倍型的雜合攜帶體”(例如G1/-、或雙倍型G1/G2)，或是(A/G和T/G)，該個體可以鑑別為“APOL1 G1單倍型的潛在雜合攜帶體”(例如G1/-、或雙倍型G1/G2)，並且該個體具有患上原發性FSGS的潛在風險。雖然已知這兩個編碼變體之間有近乎完美的連鎖不平衡，但存在變體互相不為順式的可能。純合性中各位置處缺乏“G”核苷酸，可以將個體(例如非洲血統的個體)鑑別為“APOL1 G1單倍型純合陰性的(即-/-)”，並且可認為該個體沒有增加的患上原發性FSGS的風險。

如下表2所示的APOL1 G2單倍型，理解為意指在APOL1基因中存在特定的基因變體(即編碼變體)。鑑別為具有APOL1 G2單倍型的人，例如非洲血統(或人種或種族)的人與增加的FSGS疾病(如原發性FSGS)風險強烈相關。在純合性中的變體位置處6個鹼基的刪除，可以將個體(例如非洲血統的個體)鑑別為“APOL1 G2單倍型純合陽性的(即G2/G2)”，並且該個體可具有增加的患上原發性FSGS的風險。如果在純合性中發現變體位置，該個體可以鑑別為“APOL1 G2單倍型的潛在雜合攜帶體”(例如G2/-、或雙倍型G1/G2)，並且該個體具有患上原發性FSGS的潛在風險。純合性中變體位置處所述6個鹼基的存在，可以將個體(例如非洲血統的個體)鑑別為“APOL1 G2單倍型純合陰性的(即-/-)”，並且可以認為該個體沒有增加的患上原發性FSGS的風險。

還存在與單倍型不相關的APOL1的SNP變體(如表3所示)。例如，被鑑別為APOL1基因的SNP變體rs2239785的雜合攜帶體的患者，被認為具有患有或患上FSGS疾病的增加的潛在風險，並且鑑別為APOL1基因的SNP變體rs2239785的純合攜帶體的患者，被認為具有患有或患上FSGS疾病的增加的風險。

在一些具體例，所述治療方法包括對患者投予TGFβ拮抗劑(如夫蘇木單株抗體)，所述患者已診斷為患有非糖尿病腎病、腎病徵候群、腎病蛋白尿、腎病範圍的蛋白尿、FSGS、或原發性FSGS，例如所述患者已診斷為患有原發性FSGS。

在一些具體例中，治療患者(例如非洲血統(或人種或種族)的患者，如來自非裔美國人群體的患者)中的原發性FSGS的方法可以包括對所述患者投予TGFβ拮抗劑(如夫蘇木單株抗體)，其中所述患者在治療之前具有30mL/min/1.73m²或更多的eGFR，在至少一個收集的尿樣品中3毫克蛋白/毫克肌酐或更多的Up/C比率，在至少兩個收集的尿樣品中2毫克蛋白/毫克肌酐或更多的Up/C比率，或其組合。

在一些具體例中，本發明涉及改善一個或多個原發性FSGS相關症狀的方法，包括對患者(例如非洲血統(或人種或種族)的患者，如來自非裔美國人群體的患者)投予泛特異性TGFβ拮抗劑(例如夫蘇木單株抗體)，其中所述一個或多個症狀的改善包括降低蛋白尿含量、降低Up/C比率、穩定eGFR、降低低白蛋白血症或高脂血症的嚴重程度、緩和水腫症狀，或其組合。

在一些具體例中，本發明涉及治療患者(例如非洲血統(或人種或種族)的患者，如來自非裔美國人群體的患者)中的原發性FSGS的方法，包括對患者投予TGFβ拮抗劑(例如夫蘇木單株抗體)，其中所述患者在治療前患有抗類固醇的原發性FSGS(患者不響應於類固醇治療)或是在治療前不耐受類固醇療法，例如所述抗類固醇的原發性FSGS患者在治療前不耐受至少2周(如3周、4周或5周)的高劑量類固醇療法。在一些具體例中，要用TGFβ拮抗劑治療的患者在用TGFβ拮抗劑治療前已按穩定劑量用ACEi、ARB、或二者治療至少2周、如3周、4周或5周。在一些具體例中，要用TGFβ拮抗劑治療的患者在用TGFβ拮抗劑治療之前、期間、或之後用免疫抑制療法治療。在一些具體例中，要用TGFβ拮抗劑治療的患者在用TGFβ拮抗劑治療之前、期間、或之後用另一療法治療(例如鈣調磷酸酶療法、環孢素、他克莫司(tacrolimus)、環孢黴素A、黴酚酸酯、利妥昔單株抗體、羅格列酮、西羅莫司(雷帕黴素)、或環磷醯胺，或其組合)。在一些具體例中，要用TGFβ拮抗劑治療的患者在用TGFβ拮抗劑治療之後用另一療法治療(如鈣調磷酸酶療法、環孢素、他克莫司、環孢黴素A、黴酚酸酯、利妥昔單株抗體、羅格列酮、西羅莫司(雷帕黴素)、或環磷醯胺，或其組合)。在一些具體例中，要用TGFβ拮抗劑治療的患者在用TGFβ拮抗劑治療之前或期間用另一療法治療(如鈣調磷酸酶療法、環孢素、他克莫司、環孢黴素A、黴酚酸酯、利妥昔單株抗體、羅格列酮、西羅莫司(雷帕黴素)、或環磷醯胺，或其組合)。

在一些具體例中，治療患者(例如非洲血統(或人種或種族)的患者，如來自非裔美國人群體的患者，或歐洲裔美國血統(或人種或種族)的患者，如高加索人/白人)中的原發性FSGS的方法可以包括對患者投予TGFβ拮抗劑(例如夫蘇木單株抗體)，其中所述患者具有增加所述患者患上原發性FSGS的風險的基因變體或APOL1的基因變體。在一些具體例中，所述APOL1的基因變體可以是APOL1 G1單倍型純合陽性的(即G1/G1)、APOL1 G1單倍型的雜合攜帶體(即G1/-或雙倍型G1/G2)、或APOL1 G1單倍型純合陰性的(即-/-)。在一些具體例中，APOL1的基因變體可以是APOL1 G2單倍型純合陽性的(即G2/G2)、APOL1 G2單倍型的潛在雜合攜帶體(即G2/-或雙倍型G1/G2)、或APOL1 G2單倍型純合陰性的(即-/-)。

在一些具體例中，治療患者(例如非洲血統(或人種或種族)的患者，如來自非裔美國人群體的患者)中的原發性FSGS的方法，可以包括對患者投予TGFβ拮抗劑(例如夫蘇木單株抗體)，其中所述患者具有增加患者患上原發性FSGS的風險的APOL1基因變體。例如，所述增加患者患上原發性FSGS的風險的APOL1基因變體可以是APOL1 G1單倍型(例如G1/G1或G1/-)、APOL1 G2單倍型(例如G2/G2或G2/-)、或兩種單倍型二者(即雙倍型(G1/G2))。在一些具體例中，所述增加患者患上原發性FSGS的風險的APOL1基因變體可以是APOL1 G1單倍型純合陽性的(G1/G1)或APOL1 G1單倍型的雜合攜帶體(G1/-或雙倍型G1/G2)，例如所述APOL1基因變體可以是APOL1 G1單倍型純合陽性的(G1/G1)。在一些具體例中，治療患者(例如非洲血統(或人種或種族)的患者，如來自非裔美國人群體的患者)中的原發性FSGS的方法，可以包括對患者投予TGFβ拮抗劑(例如夫蘇木單株抗體)，其中所述患者具有APOL1 G1單倍型變體，其包括SNP ID rs73885319或rs60910145。在一些具體例中，增加患者患上原發性FSGS風險的APOL1基因變體可以是APOL1 G2單倍型純合陽性的(G2/G2)或APOL1 G2單倍型的潛在雜合攜帶體(G2/-或雙倍型G1/G2)，例如所述APOL1基因變體可以是APOL1 G2單倍型純合陽性的(G2/G2)。在一些具體例中，治療患者(例如非洲血統(或人種或種族)的患者，如來自非裔美國人群體的患者)中的原發性FSGS的方法，可以包括對患者投予TGFβ拮抗劑(例如夫蘇木單株抗體)，其中所述患者具有APOL1 G2單倍型變體為SNP ID rs71785313。在一些具體例中，治療患者(例如非洲血統(或人種或種族)的患者，如來自非裔美國人群體的患者)中的原發性FSGS的方法，可以包括對患者投予TGFβ拮抗劑(例如夫蘇木單株抗體)，其中所述患者具有與APOL1單倍型無關的基因變體，例如具有SNP ID rs2239785的APOL1基因變體。在一些具體例中，所述患者具有基因變體，所述基因變體具有選自下組的SNP ID：rs73885319、rs60910145、rs71785313、或rs2239785。

在一些具體例中，所述患者可以基於具有APOL1的至少一個指示性SNP而選出，例如APOL1 SNP變體rs2239785、rs73885319、rs60910145、或rs71785313。例如，在一些具體例中，所述患者可以基於具有至少一個指示性的APOL1 SNP而選出，所述指示性的APOL1 SNP限定了APOL1 G1單倍型，如APOL1 SNP變體rs73885319、或APOL1 SNP變體rs60910145。在一些具體例中，所述患者可以基於具有至少一個指示性的APOL1 SNP而選出，所述指示性的APOL1 SNP限定APOL1 G2單倍型，如APOL1 SNP變體rs71785313。在一些具體例中，所述患者可以基於具有至少一個指示性的APOL1 SNP而選出，所述指示性的APOL1 SNP能通過等位基因識別進行評估，如APOL1 SNP變體rs2239785。

在一些具體例中，治療患者(例如非洲血統(或人種或種族)的患者，如來自非裔美國人群體的患者)中的原發性FSGS的方法，可以包括對患者投予TGFβ拮抗劑(例如夫蘇木單株抗體)，其中所述方法還包括在治療之前或期間對患者進行基因分型。例如，所述方法還包括對患者進行基因分型，包括：從所述患者獲取生物樣品，其中所述樣品選自下組：血液、血液來源的產物(如血沉棕黃層(buffy coat)、血清和血漿)、淋巴、尿液、淚液、唾液、腦脊液、口腔拭子、痰、毛根、白細胞樣品或組織樣品或其任何組合，以及鑑別原發性FSGS相關基因變體(如增加患有或患上原發性FSGS風險的基因變體)的存在或不存在。在一些具體例中，鑑別原發性FSGS相關基因變體的存在或不存在包括使生物樣品與能夠檢測所述原發性FSGS相關基因變體的試劑接觸，所述檢測是通過特異性直接核苷酸定序、通過特異性等位基因識別SNP基因分型(denotyping)測定，或其組合來進行的。在一些具體例中，所述方法還包括在治療之前或期間對患者進行基因分型，包括從所述患者獲取生物樣品，以及從獲取自所述患者的生物樣品鑑別原發性FSGS相關基因變體的存在或不存在，如APOL1基因變體的存在或不存在，例如鑑別APOL1 G1單倍型或APOL1 G2單倍型的存在或不存在。例如，所述方法還可以包括通過在獲取自所述患者的生物樣品(如分離自所述患者的血液樣品)中鑑別APOL1 G1純合子(G1/G1)的存在、APOL1 G1雜合子(例如G1/-或雙倍型G1/G2)的存在、或APOL1 G2雜合子(例如G2/-或雙倍型G1/G2)的存在，來對患者進行基因分型。在一些具體例中，所述基因分型在治療之前進行。在一些具體例中，所述基因分型在治療期間進行。

在一些具體例中，所述治療方法可以包括鑑別APOL1基因的指示性SNP，所述鑑別包括：a)選擇一組蛋白尿含量3.0毫克蛋白/毫克肌酐的患者；b)獲得所述患者在APOL1基因的基因座處的基因型；c)對所述患者投予治療有效量的TGFβ拮抗劑，如泛特異性TGFβ拮抗劑，例如夫蘇木單株抗體；d)測量治療的患者的蛋白尿含量、eGFR含量，或二者；e)通過鑑別顯示出統計學相關提高的蛋白尿含量、eGFR含量、或二者的患者，將步驟d)的患者細分為響應者亞組和未響應者亞組；及f)分析步驟e)中鑑別出的響應者和未響應者亞組人群的基因座的DNA序列，並選擇或查找僅存在於響應者的APOL1基因的基因座處的SNP；及g)通過將選出或查出的SNP與步驟d)的蛋白尿、eGFR或二者的含量結果相關聯而鑑別雜合或純合指示性SNP變體。

在一些具體例中，所述治療方法可以包括在治療期之前、期間或之後對患者進行基因分型。進行基因分型(如SNP的基因分型)的方法可以包括但不限於DNA定序、雜交技術、基於PCR的測定、螢光染料和基於淬滅劑的PCR測定(Taqman PCR檢測系統)、基於RFLP的技術、單鏈構象多態性(SSCP)、變性梯度凝膠電泳(DGGE)、溫度梯度凝膠電泳(TGGE)、化學錯配切割(CMC)、基於異源雙鏈核酸分子分析的系統、基於質譜法的技術、侵入性切割(invasive cleavage)測定、多態性比率定序(PRS)、微陣列、滾動循環延伸測定(rolling circle extension assay)、基於HPLC的技術、基於DHPLC的技術、寡核苷酸延伸測定(OLA)、基於延伸的測定(難擴增型突變系統(ARMS,Amplification Refractory Mutation System)，難擴增型突變線性延伸(ALEX,Amplification Refractory Mutation Linear Extension)、單鹼基鏈延伸(SBCE,Single base chain extension))、分子信標測定、侵入物(invader)(第三波技術(Third wave technologies))、連接酶鏈式反應測定、基於5’-核酸酶測定的技術、雜交毛細管陣列電泳(CAE)、焦磷酸定序、蛋白截短測定(PTT)、免疫測定、單倍型分析、以及固相雜交(斑點印記、反向斑點印記、染色質免疫沉澱/芯片(chips))。

在一些具體例中，所述治療方法可以包括投予TGFβ拮抗劑，如泛特異性TGFβ拮抗劑，如夫蘇木單株抗體，作為靜脈內輸注。例如，所述靜脈內輸注可以單次輸注或以療程期間一段時間的系列輸注方式進行。在一些具體例中，所述治療方法可以包括50-200mL(例如50-100mL、100-150mL、75-125mL、或150-200mL)的包含夫蘇木單株抗體(例如基於患者的總體重1-4mg/kg的夫蘇木單株抗體)的醫藥配製物的單次輸注或療程期間一段時間的系列輸注，所述醫藥配製物在注射用無菌水(sWFI)中重建。在一些具體例中，所述治療方法可以包括單次輸注100mL的基於患者總體重包含1-4mg/kg夫蘇木單株抗體的醫藥配製物，其在sWFI中重建。在一些具體例中，所述靜脈內輸注可以花費約10分鐘至1小時，例如約20分鐘、約30分鐘、約45分鐘、或約1小時。例如，靜脈內輸注可以單次輸注或以療程期間一段時間的系列輸注方式進行，其中療程期間的系列輸注的各次輸注可以花費約10分鐘至1小時，例如約20分鐘、約30分鐘、約45分鐘、或約1小時。

在一些具體例中，所述治療方法可以包括在一個或多個療程處(例如在第一療程處，或在各個療程處)測量患者的總體重，以確定sWFI中重建的凍乾夫蘇木單株抗體的量以基於所述患者的總體重達到給藥1-4mg/kg的夫蘇木單株抗體。

在一些具體例中，所述治療方法可以包括投予TGFβ拮抗劑，如泛特異性TGFβ拮抗劑，例如夫蘇木單株抗體，作為基於每月、每兩周、或定期的靜脈內輸注。例如，在一些具體例中，可以將夫蘇木單株抗體每月靜脈內輸注于患者，例如每28天、每21天、或每14天以基於患者總體重的1-4mg/kg的劑量靜脈內投予于所述患者。

在一些具體例中，所述治療方法可以包括將治療有效量的夫蘇木單株抗體作為靜脈內輸注基於每月、每兩周、或定期(如每28天、每21天、或每14天)投予。在一些具體例中，所述基於每月、每兩周、或定期(如每28天、每21天、或每14天)靜脈內投予的夫蘇木單株抗體的治療有效量，是基於所述患者總體重的1-4mg/kg的夫蘇木單株抗體的劑量，例如所述治療有效量是基於所述患者總體重的1mg/kg的夫蘇木單株抗體的劑量，如2mg/kg、3mg/kg、或4mg/kg的夫蘇木單株抗體的劑量。在一些具體例中，將所述治療有效量的夫蘇木單株抗體作為醫藥配製物靜脈內投予。

在一些具體例中，包含1-4mg/kg患者總體重的夫蘇木單株抗體的醫藥配製物可以單次輸注或療程期間一段時間的系列輸注的方式每月靜脈內投予于患者，例如每28天、每21天、或每14天以單次輸注或療程期間一段時間的系列輸注的方式靜脈內輸注于患者。在一些具體例中，所述治療方法包括在數月或數年時間期以單個療程或以一系列療程靜脈內投予TGFβ拮抗劑，如泛特異性TGFβ拮抗劑，例如夫蘇木單株抗體。在一些具體例中，所述治療方法可以包括在治療期間將夫蘇木單株抗體靜脈內投予于患者，隨後是隨訪期，在隨訪期間不對所述患者投予夫蘇木單株抗體並監測疾病相關症狀緩和的進展，如降低蛋白尿含量、穩定eGFR，或降低水腫症狀，或其組合。例如，在一些具體例中，所述治療方法可以包括在治療期間基於每月、基於每28天、基於每21天、或基於每14天將夫蘇木單株抗體靜脈內投予于患者，所述治療期包括時間進程為1個月至5年的一系列療程，例如基於每月、基於每28天、基於每21天、或基於每14天在時間進程為1個月至4年、1個月至3年、1個月至2年、1個月至1年、1個月至12個月、1個月至11個月、1個月至10個月、1個月至9個月、1個月至8個月、1個月至7個月、1個月至6個月、1個月至5個月、1個月至4個月、1個月至3個月、1個月至2個月、2個月至3個月、2個月至4個月、2個月至5個月、2個月至6個月、2個月至7個月、2個月至8個月、3個月至4個月、3個月至5個月、3個月至6個月、4個月至7個月、4個月至9個月、或5個月至10個月的一系列療程投予。例如，在一些具體例中，所述治療方法可以包括基於每月、基於每28天、基於每21天、或基於每14天在12個月的進程以一系列療程將夫蘇木單株抗體靜脈內投予于患者，例如基於每月、基於每28天、基於每21天、或基於每14天在11個月，10個月，9個月，8個月，7個月，6個月，5個月，4個月，3個月，2個月，或1個月的進程以一系列療程來投予。

在一些具體例中，所述治療方法可以包括基於每月、基於每28天、基於每21天、或基於每14天在一系列療程將夫蘇木單株抗體靜脈內投予于患者，然後是治療休息期，然後是進一步的一系列療程，其基於每月、基於每28天、基於每21天、或基於每14天。在一些具體例中，所述治療方法可以包括重複交替順序的一系列療程，然後是治療休息期，時間進程為1-10年，例如1-7年，如1-5年或1-3年。例如，在一些具體例中，所述治療方法可以包括基於每月、基於每28天、基於每21天、或基於每14天在12個月的進程以一系列療程將夫蘇木單株抗體靜脈內投予于患者，然後是3個月至5年的治療休息期，隨後是進一步的一系列療程，其在12個月的進程基於每月、基於每28天、基於每21天、或基於每14天進行。例如，第一系列治療和進一步的一系列治療之間的治療休息期可以是3個月至5年，例如3個月至4年，如3個月至3年、3個月至2年、3個月至1年、3個月至9個月、或3個月至6個月。

在一些具體例中，所述方法可以包括以單個療程或以一系列療程在1個月至5年的進程基於每月、基於每28天、基於每21天、或基於每14天靜脈內投予TGFβ拮抗劑，如泛特異性TGFβ拮抗劑，例如夫蘇木單株抗體，例如在1-50個療程的系列，如1-40個療程、1-30個療程、1-20個療程、1-15個療程、1-10個療程、1-9個療程、1-8個療程、1-7個療程、1-6個療程、1-5個療程、1-4個療程、1-3個療程、1-2個療程、2-10個療程、2-8個療程、2-6個療程、2-5個療程、2-4個療程、3-10個療程、3-8個療程、3-6個療程、3-5個療程、3-4個療程、4-10個療程、4-8個療程、4-7個療程、4-6個療程、4-5個療程、5-10個療程、7-15個療程、或15-20個療程在1個月至5年的進程中基於每月、基於每28天、基於每21天、或基於每14天進行投予。在一些具體例中，所述方法包括以單個療程或以一系列療程靜脈內投予夫蘇木單株抗體，，例如在10個療程、9個療程、8個療程、7個療程、6個療程、5個療程、4個療程、3個療程、或2個療程的系列在1個月至5年的進程中基於每月、基於每28天、基於每21天、或基於每14天投予。

在一些具體例中，所述方法包括以充足劑量靜脈內投予夫蘇木單株抗體，以在自投予之時21至84天的範圍內(例如自投予之時21至42天、28至49天、35至56天、或49至84天的範圍內)達到10至51,500ng/mL的穀(trough)血清血漿夫蘇木單株抗體含量，例如在自投予之時21至84天的範圍內(例如自投予之時21至42天、28至49天、35至56天、或49至84天的範圍內)達到200至51,500ng/mL、500至51,500ng/mL、1,000至51,500ng/mL、5,000至51,500ng/mL、10,000至51,500ng/mL、25,000至51,500ng/mL、100至30,000ng/mL、100至15,000ng/mL、103至51,209ng/mL、或10,000至40,000ng/mL。例如，在一些具體例中，在自投予之時21至84天的範圍內(例如自投予之時21至42天、28至49天、35至56天、或49至84天的範圍內)，治療的患者的谷血清血漿夫蘇木單株抗體含量是1,000至51,500ng/mL、1,000至45,000ng/mL、1,000至35,000ng/mL、1,000至25,000ng/mL、1,000至15,000ng/mL、5,000至40,000ng/mL、10,000至51,500ng/mL、15,000至51,500ng/mL、1,813至51,209ng/mL或2,000至51,500ng/mL。

在一些具體例中，所述治療方法可以導致治療的患者的蛋白尿含量自基線降低。在一些具體例中，所述治療方法可以導致治療的患者的尿總蛋白：肌酐比率(毫克蛋白/毫克肌酐)，也稱為“Up/C比率”自基線下降40%或更多，例如45%或更多，例如Up/C比率在2個療程後(例如在3、4、5、6、7、8、9或10個療程後)自基線下降50%或更多，55%或更多，60%或更多，65%或更多，或70%或更多。在一些具體例中，所述治療方法可以導致治療的患者在2個療程後(例如在3、4、5、6、7、8、9或10個療程後)Up/C比率自基線下降40%或更多，如Up/C比率自基線下降50%或更多，並且Up/C比率在2個療程後(例如在3、4、5、6、7、8、9或10個療程後)降至範圍為0.3至3.0毫克蛋白/毫克肌酐的含量，例如在2個療程後(例如在3、4、5、6、7、8、9或10個療程後)降至0.3至2.0、0.5至1.5、1.0至2.0、1.5至2.5、1.0至3.0、或2.0至3.0毫克蛋白/毫克肌酐。

在一些具體例中，所述治療方法可以導致治療的患者的Up/C比率自基線下降40%或更多，如Up/C比率自基線下降50%或更多，並且Up/C比率降至<0.3毫克蛋白/毫克肌酐的含量。在一些具體例中，所述治療方法可以導致治療的患者在2個療程後(例如在3、4、5、6、7、8、9或10個療程後)Up/C比率自基線下降40%或更多，如Up/C比率自基線下降50%或更多，降至範圍為0.3至3.0毫克蛋白/毫克肌酐的含量。在一些具體例中，所述治療方法可以導致治療的患者的Up/C比率自基線下降40%或更多，如Up/C比率自基線下降50%或更多，在隨訪期間(即發生在治療期之後)降至範圍為0.3至3.0毫克蛋白/毫克肌酐的含量。在一些具體例中，所述治療方法可以導致治療的患者在2個療程後(例如在3、4、5、6、7、8、9或10個療程後)Up/C比率自基線下降40%或更多，如Up/C比率自基線下降50%或更多，降至<0.3毫克蛋白/毫克肌酐的含量。在一些具體例中，所述治療方法可以導致治療的患者在隨訪期間(即發生在治療期之後)Up/C比率自基線下降40%或更多，如Up/C比率自基線下降50%或更多，降至<0.3毫克蛋白/毫克肌酐的含量。

在一些具體例中，所述治療方法可以導致治療的患者在治療期和隨訪期間具有至少一個如下項：i)至少兩次Up/C比率50%或更大的下降，自基線降至範圍為0.3至3.0毫克蛋白/毫克肌酐的含量；或ii)至少一次Up/C比率50%或更大的下降，自基線降至範圍為0.3至3.0毫克蛋白/毫克肌酐的含量且所述Up/C比率在至少一個月保持在基線含量的至少50%或更少。例如，在一些具體例中，所述治療方法可以導致治療的患者具有至少兩次Up/C比率50%或更大的下降，自基線降至範圍為0.3至3.0毫克蛋白/毫克肌酐的含量，例如所述Up/C比率自開始治療112-224天內(如開始治療112-196天、112-168天、或112-140天內)降至範圍為0.3至1.0毫克蛋白/毫克肌酐，如0.3至2.0、0.5至1.5、1.0至2.0、1.5至2.5、1.0至3.0、或2.0至3.0毫克蛋白/毫克肌酐的含量。

例如，在一些具體例中，所述治療方法可以導致治療的患者具有至少一次Up/C比率50%或更大的下降，自基線降至範圍為0.3至3.0毫克蛋白/毫克肌酐的含量，例如所述Up/C比率自開始治療112-224天內(如開始治療112-196天、112-168天、或112-140天內)降至範圍為0.3至1.0毫克蛋白/毫克肌酐，如0.3至2.0、0.5至1.5、1.0至2.0、1.5至2.5、1.0至3.0、或2.0至3.0毫克蛋白/毫克肌酐且所述Up/C比率在至少2周(例如至少3周，如至少1個月、至少5周、至少6周、至少8周、至少12周)保持在基線含量的至少50%或更少。

在一些具體例中，所述治療方法可以導致治療的患者腎功能得到穩定，例如評估的治療的患者的腎小球濾過率(稱為“eGFR”)得到穩定。在一些具體例中，當所述治療的患者的中值eGFR自基線含量下降15%或更少時，例如當所述治療的患者的中值eGFR自基線含量下降15%，如自基線含量下降少於12%、下降少於10%、下降少於9%、下降少於8%、下降少於7%、下降少於6%、下降少於5%、下降少於4%、或下降少於2%時，達到治療的患者的eGFR的穩定化。在一些具體例中，治療的患者的中值eGFR穩定在自基線含量15%或更低，如10%或更低，且所述eGFR穩定化發生在自開始治療112-224天內，如開始治療112-196天、112-168天、或112-140天內。

在一些具體例中，所述治療方法導致一個或多個腎病徵候群(原發性FSGS)相關症狀的嚴重程度減輕或減至最小，所述症狀包括低白蛋白血症、水腫、或高脂血症。例如，所述治療方法導致在具有腎病範圍的蛋白尿(例如3.0g/24h或3.0毫克蛋白/毫克肌酐)或更嚴重蛋白尿(例如10g/24h)的患者中一個或多個原發性FSGS相關症狀的嚴重程度減輕或減至最小。

在一些具體例中，治療的患者可以是非洲血統(或人種或種族)的患者如非裔美國人群體，歐洲裔美國血統(或人種或種族)的患者如高加索人/白人，或西班牙血統(或人種或種族)的患者。

醫藥配製物

在一些具體例中，所述治療方法可以包括將TGFβ拮抗劑，如泛特異性TGFβ拮抗劑，例如夫蘇木單株抗體，作為醫藥配製物投予。在一些具體例中，所述醫藥配製物可以包含凍乾的TGFβ拮抗劑產品，如在sWFI中重建的凍乾的TGFβ拮抗劑產品。在一些具體例中，所述醫藥配製物可以包含在sWFI中重建的(例如在3.0-10.0mL sWFI中重建的，如在4.0-8.0mL sWFI中重建的、在4.0-6.0mL sWFI中重建的、在4.5-5.5mL sWFI中重建的、在4.0mL sWFI中重建的、在5.0-5.5mL sWFI中重建的、在5.0-5.3mL sWFI中重建的、在5.0mL sWFI中重建的、在5.1mL sWFI中重建的、在5.2mL sWFI中重建的、在5.3mL sWFI中重建的、在5.4mL sWFI中重建的、在5.5mL sWFI中重建的、或在6.0mL sWFI中重建的)凍乾的夫蘇木單株抗體。在一些具體例中，凍乾的夫蘇木單株抗體可以儲存於小瓶中，例如50mg/小瓶中，並在3.0-10.0mL sWFI中重建，例如儲存於50mg/小瓶中並在5.0-5.3mL sWFI(如5.0mL sWFI、5.1mL sWFI、5.2mL sWFI、或5.3mL sWFI)中重建。在一些具體例中，凍乾的夫蘇木單株抗體可以在50mg/小瓶、5.1mL sWFI中重建。

實施例

測試產品指夫蘇木單株抗體，是一種工程改造的人IgG4 κ單株抗體，其能中和所有的哺乳動物TGFβ同種型(即β1、2、和3)。

測試醫藥配製物指凍乾的夫蘇木單株抗體粉末以5.1mL(50mg/小瓶)的注射用無菌水(sWFI)重建而成的靜脈內配製物，其中凍乾夫蘇木單株抗體粉末的1mg/kg或4mg/kg的劑量強度是基於每次拜訪時患者的總體重。凍乾的夫蘇木單株抗體的組合物列於表4中。

在投予前，用5.1mL(50mg小瓶)的sWFI重建凍乾的夫蘇木單株抗體，以得到50mM磷酸鈉緩衝液中約10mg/mL的濃度，所述磷酸鈉緩衝液pH為7.1，含有25mM氯化鈉、3%甘露糖、1%蔗糖、和0.01%聚山梨醇酯80。決不能使用針狀濾器(Filter needles)來從小瓶去除藥物產品。然而，由於蛋白質的性質及其沉澱能力，當投予這種產品(稀釋為溶液用於輸注)時需要使用0.22μm低蛋白結合內聯濾器(inline filter)。由重建的夫蘇木單株抗體製備的測試醫藥配製物的組合物列於表5中。

含有夫蘇木單株抗體的小瓶必須儲存在2至8℃(35.6至46.4℉)直至製備用於輸注。重建的夫蘇木單株抗體在用sWFI重建後是穩定的，例如，在用sWFI重建後於室溫或在冷卻下(2至8℃或35.6至46.4℉)穩定多達24小時。雖然在這些條件下穩定了多達24小時，sWFI中的夫蘇木單株抗體仍應立即使用。在sWFI中重建的夫蘇木單株抗體進一步在室溫以0.3mg/mL至7mg/mL的濃度稀釋於5%右旋糖的水溶液中，其在室溫穩定多達24小時。

安慰劑配製物意指用5.1mL(50mg/小瓶)的注射用無菌水(sWFI)重建的凍乾安慰劑產品(其看起來與測試產品相匹配)的靜脈內配製物。

投予途徑如下進行：以100mL靜脈內輸注在約30分鐘投予。

劑量方案包括通過在第1天、第28天、第56天、和第84天輸注，4次(4)每月投予測試配製物或安慰劑配製物，其中基於每次拜訪時患者的總體重來計算劑量強度。

實施例1

在抗類固醇的FSGS患者中進行了兩(2)劑測試醫藥配製物或安慰劑的雙盲、平行給藥、隨機研究，其中所述研究分為3個時期：1. 篩選(第1次拜訪，多至6周)；2. 治療期(第1天/第2次拜訪，第28天/第3次拜訪，第56天/第4次拜訪，第84天/第5次拜訪，和第112天/第6次拜訪)；及3. 隨訪期(第140天/第7次拜訪，第168天/第8次拜訪，和第252天/第9次拜訪)。

在第1天/第2次拜訪，第28天/第3次拜訪，第56天/第4次拜訪，和第84天/第5次拜訪時，患者在診所接受單次靜脈內(IV)測試醫藥配製物或安慰劑輸注。輸注持續時間約30分鐘，然後將患者留在診所內觀察至少30分鐘的時段。安排患者在第112天/第6次拜訪直至第252天/第9次拜訪返回診所以供跟進隨訪。

在每次拜訪時收集：腎臟評估(蛋白尿、血清肌酐、和eGFR)、血清脂質、血清白蛋白、及重量。基於第1天/第2次拜訪，第56天/第4次拜訪，第112天/第6次拜訪/提前終止(ET)、和第252天/第9次拜訪時完成的問卷對患者報告的結果進行評估。在研究全程收集安全性數據，包括安全性實驗室評估、體檢、以及生命體征。在治療期過程中收集所有不良事件(AE)及伴隨使用的藥物。在隨訪期過程中安排收集僅藥物相關和方案相關的嚴重不良反應(SAE)及所有感興趣的醫療事件(MEOI)。在隨訪期過程中僅收集治療FSGS的藥物。

在每個治療期和隨訪期拜訪時收集用於確定測試產品血清濃度的血液樣品。

在第1天/第2次拜訪，第112天/第6次拜訪/ET，第140天/第7次拜訪，第168天/第8次拜訪，和第252天/第9次拜訪時評估抗-夫蘇木單株抗體抗體的潛在進展。

將總計36名治療抗性的FSGS患者隨機化至用1mg/kg測試醫藥配製物的治療(n=14)、用4mg/kg測試醫藥配製物的治療(n=12)、或用安慰劑配製物的治療(n=10)。大多數患者(92%)完成了全部4次研究輸注，且沒有患者在治療期間中止研究。測試醫藥配製物1mg/kg組中的一名患者完成了3次輸注，測試醫藥配製物4mg/kg組中的一名患者完成了3次輸注，以及測試醫藥配製物4mg/kg組中的一名患者完成了2次輸注。未完成全部研究治療的原因包括：對於測試醫藥配製物1mg/kg組中的患者而言是醫師決定(開始另一項治療)；對於測試醫藥配製物4mg/kg組中的2名患者而言是輕微肝酶異常及腎衰竭(經評估均與治療無關)的不良事件。所有36名患者都完成了治療期(直至經過第112天/第6次拜訪)。除一人外(其分配至4mg/kg測試醫藥配製物組且在第252天研究總結之前失去隨訪)，所有患者都在隨訪期間完成了研究拜訪。具有腎病蛋白尿的抗類固醇的原發性FSGS患者的診斷和關鍵標準包括如下：

i)患者願意並能夠提供簽署的知情同意書，並且在提供同意書之時為18歲或以上男性或女性。

ii)評估患者的腎臟活檢，並且其與包括所有組織學亞型的原發性FSGS的診斷是一致的。

iii)計算得出的患者在第一次拜訪時的eGFR30mL/min/1.73m²。

iv)患者在篩選期間收集的尿樣品中至少1個的Up/C比率3(毫克蛋白/毫克肌酐)，在篩選期間的至少2個樣品中Up/C比率2(毫克蛋白/毫克肌酐)。

v)在研究者看來，患者患有抗類固醇的FSGS。所述患者在此期間必須以高劑量類固醇療法的進程接受了針對FSGS的治療最少4周，或發現其在篩選拜訪之前不耐受類固醇。

vi)患者在第2次拜訪(治療開始)前已用ACEi和/或ARB以穩定劑量治療最少4周，不耐受或忌用除外。

患者人口統計特徵：患者人群的中值年齡為41歲(範圍為19至77歲)，並且由53%男性和47%女性組成。患者人群的人種是約83%高加索人/白人和約17%黑人，且種族劃分由約31%西班牙或拉丁美洲人及約69%非西班牙或拉丁美洲人組成。3個治療組之間的人口統計學和臨床特徵以及基線蛋白尿和通過eGFR反映的腎功能是大體平衡的。與4mg/kg測試醫藥配製物組(75%)或安慰劑組(90%)相比，1mg/kg測試醫藥配製物組(57.1%)有較少患者接受過既往的鈣調磷酸酶(CNI)治療。1mg/kg測試醫藥配製物組中有3名患者有血栓史(可能指征更嚴重的腎病徵候群相關疾病)，而另外兩組分配中沒有這樣的患者。

患者群體自初始腎活檢診斷的中值時間為3.0年(範圍是0.1至16.8年)，且約72%的患者針對其FSGS疾病既往接受過鈣調磷酸酶治療。大多數患者在高劑量皮質類固醇治療之外，還接受過多療程不同類型的免疫抑制藥物，並且三分之二的藥物報告為“無響應”，而剩下的則記錄為瞬時和/或部分響應。三個治療組之間的FSGS組織學亞型是合理地非常平衡的。

過往和當前的用於FSGS的藥物使用及響應：所有患者針對FSGS疾病接受高劑量皮質類固醇治療4周。36名隨機化的患者中，總計有123個皮質類固醇療程，66個(53.7%)報告為“無響應”，36個(29.3%)報告為“瞬時部分響應”，8個(6.5%)報告為“持續部分響應”，2個(1.6%)報告為瞬時完全響應，以及11個報告為“患者不耐受藥物”。3個治療組之中的既往響應類型沒有顯著變化。

其他非類固醇免疫抑制藥物由多種藥物組成(包括鈣調磷酸酶抑制劑、環孢素和他克莫司)，而一些具有數種不同的既往類型的患者的蛋白尿降低是總體不足的，而大多數療程(107個中的72個，或67.3%)被分類為在所有招入的患者中“無響應”。針對非類固醇免疫抑制藥物的既往響應類型在三個治療組之間變化不顯著。

本研究中包括的患者的表徵(其詳細描述了人口統計學特徵和基線疾病)示於表6中(結果以中值(min,max)或n(%)表示)。

1：一名患者由於發現了一些腎小球基底膜異常而起初被認為不是原發性FSGS，但與醫師和中心病理學家進一步討論得出其臨床表現與猝發腎病徵候群一致(基底膜發現無法解釋)且不能定義性地排除原發性FSGS，因此將患者招入了本研究；活檢中發現的FSGS病損的變體記為NOS。

2：如eCRF中記錄的既往CNI治療狀態已確定是準確的，並且與過往藥物(Past Medications)中列出的既往CNI藥物使用相對應。

基因分型數據：用如下所述的基因分型程序(A)或程序(B)，在36名隨機化患者的35名中進行了APOL1基因分型(未獲得患者4A的基因型)。

基因分型程序(A)-等位基因分型：

通過特定等位基因分型SNP基因分型測定(Applied Biosystems,Inc.)進行的8個(8)FSGS相關的APOL1基因變體的確定和評估(Bostrom,M.A.，等，“Genetic association and gene-gene interaction analyses in African American dialysis patients with nondiabetic nephropathy,”Am J Kidney Dis.,2012,59,210-221.；和Genovese,G.，等，“A risk allele for focal segmental glomerulosclerosis in African Americans is located within a region containing APOL1 and MYH9,”Kidney Int.,2010,78,698-704)列示於表7中：

表7中所示的用於確定8個(8)基因變體的附加試劑包括：將已知代表各個變體的三種潛在基因型的基因組DNA或質粒樣品用作PCR對照。適當測試的樣品可用多達兩年。

2X TaqMan®通用PCR主混合劑(Applied Biosystems,Inc，產品編號#4326708 Carlsbad,CA)。

無核酸酶水(Ambion，產品編號# AM9932或等同物Carlsbad,CA)。

40X TaqMan SNP基因分型測定試劑一次性等分試樣(12μL)。

2X TaqMan通用PCR主混合劑一次性等分試樣(650μL).

使用設備：帶有Applied Biosystems序列檢測軟件版本2.4或等同物(Applied Biosystems)的Applied Biosystems 7900實時PCR系統。

程序：通常，程序涉及將來自患者的基因組DNA稀釋至終濃度為5ng/mL，然後將其用作模板，根據下文詳述的製造商提供的使用說明，在單次SNP基因分型測定試劑和2X TaqMan通用PCR主混合劑的存在下進行40個循環定量PCR。基因型的確定是通過Quantstudio 12K Flex實時PCR儀運行軟件v1.2.2(LifeTechnologies)而得到的。所述程序還涉及如下步驟(一次基因分型運行耗時約1.5小時完成)：

1-從患者收集(取)全血樣品。

2-加工所述全血樣品用於分離DNA，如果可得到的話，產生兩個(2)DNA等分試樣。

3-等位基因識別測定部分(lots)的資格驗證。

4-將樣品和對照在無核酸酶水中稀釋至5ng/μL，然後進行分析。

5-3個表徵的DNA樣品充當各個感興趣的SNP的對照，如果可用的話。每一個代表特定的基因型：純合等位基因“1”，雜合子，和雜合等位基因“2”。對各個SNP運行一次陽性對照。

6-對於各個患者，將8個(8)SNP的每一個按照如下取樣計劃一式兩份進行基因分型：如果可獲得兩個DNA等分試樣，將各個等分試樣取樣並分析一次；如果僅能獲得一個DNA等分試樣，則將其取樣並分析兩次。

7-製備主混合劑，並用如下試劑體積(以單一反應體積提供)在預PCR 罩(hood)中短暫渦旋使其混合：40x ABI SNP基因分型測定試劑(0.63μL)；2X TaqMan通用PCR主混合劑(12.50μL)；和無核酸酶水(9.90μL)；從而最終體積為23.03μL。

8-將一瓶2X TaqMan®通用PCR主混合劑短暫渦旋使其柔和混合。

9-將40X基因分型測定試劑渦旋5-10秒並納米離心(nanofuged)5-10秒以使內容物回到管底。

10-將試劑合併至無核酸酶管中，並短暫渦旋使其混合。

11-製備並完成平板分佈圖(Plate Map)，指示樣品和對照的位置。

12-根據完成的平板分佈圖，將23μL合適的主混合劑的等分試樣置於各實驗孔中。

13-基於平板分佈圖，將2μL水空白樣品(NTC)添加至適當的孔。

14-將平板密封並於1,250±250g離心15-30秒。

15-樣品添加：對每個樣品使用新的移液槍尖，吸取2.0μL的DNA(稀釋至5ng/μL)，基於完成的平板分佈圖添加至適當的孔。上下抽吸使其混合。

16-基於平板分佈圖，添加2μL針對的各個SNP測定的各個對照(稀釋至5ng/μL)至適當的孔。上下抽吸使其混合。

17-用光學膠黏劑密封光學平板，然後在1,250±250g離心15-30秒。

18-數據收集：用壓縮空氣(Whoosh Duster)確保在將平板裝入QuantStudio^TM 12K Flex實時PCR儀中的平板承接架之前沒有灰塵或碎渣污染平板外部。

19-創建新的基因分型“實驗”文檔(.eds)並用按如下定義設置(用儀器的觸控面板或來自儀器的控制主機上的QuantStudio^TM 12K Flex軟件來設置)的參數運行：每孔反應體積(25μL)，預讀階段(60.0°，30秒)；保持階段(95.0℃，10分鐘)；PCR階段步驟1(95.0°，15秒)；PCR階段步驟2(60.0°，1分鐘)；讀取後階段(60.0°，30秒)；循環數(40)；自動△(Auto Delta)(不能進行)，以及起始循環(1)。

基因分型步驟(B)-定序：

通過特異性直接核苷酸定序對4個(4)FSGS相關APOL1基因變體進行確定和評估(Kopp,J.B.等，“APOL1 genetic variants in focal segmental glomerulosclerosis and HIV-associated nephropathy,”J Am Soc Nephrol.,2011,22,2129-2137(描述G1/G2等位基因的命名法))，所述直接核苷酸定序使用以表8中列出的基因特異性引子PCR擴增含有APOL1基因變體的基因組區的步驟：

表8中所示的用於確定所述4個(4)基因變體的附加試劑包括：如表9中記錄的寡核苷酸聚合酶鏈式反應(“PCR”)引子(序列以5’-3’方向提供)，製備為0.2μM Scale HPLC Purified(eurofins MWG Operon Huntsville,AL)：

已知擴增感興趣的APOL1區的基因組DNA用作PCR對照。

Platinum Taq聚合酶(Invitrogen，產品編號#10966-034 Carlsbad,CA)。

50mM氯化鎂(MgCl₂)(Invitrogen，產品編號#Y02016 Carlsbad,CA).

10mM三磷酸脫氧核苷(“dNTPs”)，PCR級(Invitrogen，產品編號#18427-013或等同物Carlsbad,CA)。

10x PCR緩衝液(Invitrogen，產品編號#Y02028 Carlsbad,CA)。

無核酸酶水(Ambion，產品編號# AM9932或等同物Carlsbad,CA)。

Tris/EDTA(“TE”)緩衝液(10mM Tris-HCl,1.0mM EDTA)，pH 8.0(Ambion，產品編號#AM9849或等同物Carlsbad,CA)。

溴化乙錠溶液10mL(10mg/mL)(Invitrogen產品編號#15585-011，或等同物，Carlsbad,CA)。

100鹼基對(“bp”)DNA梯度條帶試樣(Invitrogen #15628-019 Carlsbad,CA)。

Latitude HT預製凝膠-2%瓊脂糖(Lonza #57246或等同物Hopkinton,MA)。

去離子水。

還採用了如下試劑：100μM寡核苷酸引子儲液，10μM寡核苷酸引子儲液，帶有50μg L^-1溴化乙錠的1X Tris硼酸EDTA運行緩衝液，1X溴酚藍瓊脂糖凝膠上樣染料儲液，1X瓊脂糖凝膠上樣染料，及0.1μg/μL 100鹼基對DNA梯度條帶試樣。

使用的設備：Eppendorf Mastercycler PCR儀(Eppendorf)。

程序：一般而言，對包含三個APOL1變體(其代表APOL1 G1/G2基因型(rs73885319、rs60910145、和rs71785313))的靶區域用表9中所示的基因特異性寡核苷酸引子對進行PCR擴增。如下文進一步詳述的，將所得產物進行純化並進行螢光雙脫氧核苷酸DNA定序。在ABI3730 48-毛細管陣列上運行所述產物以通過電泳圖檔案收集序列。每個個體的外顯子的電泳圖檔案用生物信息學套裝軟體定序儀(GeneCodes Corporation)版本4.10.1進行輸出和顯示。將來自各樣品的基因序列與共有序列進行比較，以確定APOL1變體位置rs73885319、rs60910145、和rs71785313處的基因型。APOL1的核苷酸編號分別基於NCBI參考序列NM_003661.3和NM_014625.2。所有蛋白結果基於核苷酸變化而推測得出，並未經實驗驗證。所述程序還涉及如下步驟：

1-從患者收集(取)全血樣品。

3-寡核苷酸引子部分的資格驗證。

5-將無模板對照(NTC)空白樣品包含在用於各變體測定的初級PCR中，其包含無核酸酶水以取代任何樣品或陽性對照。對各個初級PCR設置運行NTC一次。

6-對於患者樣品，將4個(4)變體的每一個按照如下取樣計劃一式兩份進行基因分型：如果可獲得兩個DNA等分試樣，將各個等分試樣取樣並分析一次；如果僅能獲得一個DNA等分試樣，則將其取樣並分析兩次。

7-製備並完成平板分佈圖，指示樣品和對照的位置。

8-將如下每一項在室溫解凍：10X PCR緩衝液、50mM MgCl₂、10mM dNTP、10μM正向和反向引子(針對感興趣的變體)。從冰箱取出Platinum Taq^TM DNA聚合酶並將其置於冰上。

9-製備主混合劑，並用如下試劑體積(以單一反應體積/終濃度提供)在預PCR罩中短暫渦旋使其混合：無核酸酶水(17.75μL/--)、10X PCR緩衝液2.5μL/1X)；50mM MgCl₂(0.75μL/1.5mM)、10mM dNTP混合劑(0.25μL/0.1mM)、10mM正向引子(0.5μL/0.1mM)、10mM反向引子(0.5μL/0.1mM)、Platinum Taq聚合酶(0.25μL/1.25單位)；以使最終體積為22.5μL。

10-將22.50μL等分試樣的主混合劑放入各實驗孔中，密封平板並將其移至指定的樣品添加罩(hood)，然後去除密封。

11-樣品添加：用新的對每個樣品使用新的移液槍尖，吸取2.50μL的DNA(稀釋至5ng/μL)，基於完成的平板分佈圖添加至適當的孔。吸取2.50μL的無核酸酶水添加至陰性對照孔。上下抽吸使其混合。

12-用PCR板粘合膜密封平板，然後在1,250±250g離心5-10秒。

13-將平板置於e Eppendorf Mastercycler PCR儀上，關閉蓋子，從具有如下設置的可用的循環程序名單選擇適當的“APOL1”實驗方案：步驟1，94℃，2min.；步驟2，(30個循環)：94℃，20sec.，58℃，30sec.，72℃，30sec.；步驟3，72℃，4min.；以及步驟4，保持在4℃。

14-在熱循環程序完成後，將平板從熱循環儀取出，並通過瓊脂糖凝膠電泳對所有樣品和對照的PCR產物進行分析。

15-初級PCR擴增的評估：

i)將預製凝膠(Lonza)和塑料託盤從密封袋取出，轉移至凝膠盒，用TruBand^TM錨(Anchor)覆蓋凝膠(用開口將孔調整對準)，添加足夠的帶有溴化乙錠溶液(~1L)的1X TBE以完全淹過凝膠和託盤但未淹過TruBand^TM錨。

ii)對於每個分析的樣品，吸取5μL 1X溴酚藍上樣染料加入Falcon 3911 U底部96孔板的每個孔，吸取10μL的各個PCR樣品與上樣染料共同加入所述孔，並輕柔上下抽吸混合2至3次；

iii)將3μL的製備的100bp DNA梯度條帶試樣(0.1μg/μL儲液)加載至凝膠上每一排的至少一個孔；

iv)將全部體積的每個樣品(或多至12μL，取較小的那個)加載至瓊脂糖凝膠上適當的孔；

v)滑動TruBand^TM錨以蓋住孔，以約180V將凝膠運行約20分鐘或直至溴酚藍染料前端遷移距離下一排孔或凝膠底部至少2/3的路程；

vi)從凝膠盒取出凝膠，用Alphainnotech凝膠成像系統(SCI-IM-195)拍照，產生兩個熱敏紙(thermal paper)圖像：(1)針對組合物(按需放大至填滿框)和曝光優化(按需調整焦距)的圖像，以及(2)初始圖像的3D圖像；將每個凝膠圖像文件保存至專用儀器電腦的C：\驅動器。

vii)根據表10中所述的接受標準對凝膠圖像上的對照和樣品進行分析，以確定PCR是否成功。陰性對照(NTC)中擴增產物的存在導致測定失敗且需要立即重新擴增所有樣品和對照，並且樣品的兩個重複都是需要的，以產生預期大小的條帶(任何擴增失敗的樣品重複都需要重新擴增(一式兩份))。

16-通過定序分析樣品的PCR產物：(1)用Exo-SAP-IT純化試劑純化各樣品的PCR產物；(2)針對樣品的PCR產物的定序反應按如下步驟進行：將各個“Exosapped”的產物用表11中記錄的體積(一個反應體積)在正向和反向反應中都擴增一次，以製備所需量的各個主混合劑，然後將純化的擴增子進行定序和解讀。

17-APOL1定序的數據分析：i)將來自ABI 3730運行文件夾的AB1定序文檔導出至Gene Codes定序儀軟體中；ii)將得到的各個對照樣品的正向和反向序列與參考序列文檔進行比對；iii)參閱各個樣品正向和反向反應的序列，並將各樣品重複的變體序列記錄為純合結果或雜合結果，如表8中所示(在一個反應(正向或反向)產生了質量不佳的序列的情況下，可以用另一個來讀取序列，前提是該序列是高質量的)。測試樣品的兩個重複都是需要的，以產出相同的序列結果。如果兩個重複之間的結果不一致，則重新評估樣品，如果任一重複由於無擴增或擴增不佳而失敗，則不記錄結果，直至獲得確定性的結果為止。

APOL1基因分型：

從每名患者收集一管全血並一式兩份進行提取，以產生兩個等分試樣的基因組DNA。如表12中所述，用基因分型程序(A)或基因分型程序(B)分析每個等分試樣以確定每名患者的APOL1基因型，具體如上文所述：

各個治療的患者的APOL1基因分型結果通過治療組總結於表13-15中，並按人種及在先鈣調磷酸酶抑制劑(CNI)治療進行分層：

APOL1 G1和G2單倍型與非洲血統人群中增加的FSGS風險有關，其在6名研究受試者中存在(5名黑人受試者和1名非黑人西班牙受試者)。雜合 APOL1 G1發現(G1/G1)被解釋為“在非裔美國人群體中與FSGS疾病強相關”，而APOL1 G1攜帶體(G1/-或G1/G2)和/或APOL1 G2攜帶體(G2/-或G1/G2)則解釋為“非裔美國人群體中的潛在風險”。1名來自美國的非黑人的西班牙患者(4016-0001)是APOL-1 G1攜帶體，尚未知曉患者是否具有非洲祖輩。

劑量和持續時間：36名隨機化的患者的每一個都接受了至少一次研究治療，並且所有患者均囊括在了安全性數據集中。在安慰劑配製物組中，10名患者(100%)完成了全部四次研究治療。在1mg/kg測試醫藥配製物組(n=14)中，13名患者(93%)完成了全部4次研究輸注，而1名(7.1%)完成了3次輸注。在4mg/kg測試醫藥配製物組(n=12)中，10名患者(83%)完成了全部四次研究治療，1名患者(8.3%)完成了3次研究治療，而1名患者(8.3%)完成了2次研究治療。

統計學方法：用全部分析(FA)套組進行效力分析(所有隨機化患者用至少1劑研究藥物治療的且具有至少1次基線後Up/c評估)。如果PPS低於FAS的80%的話，計劃採用使用限於主要效力的每次方案(Per Protocol,PP)套組(所有不具有顯著偏差的FAS可評估的患者被認為可能影響效力分析)的分析；未進行PPS分析，因為未達標準。

Up/C比率和eGFR的連續參數提供於下表16-51中，其通過治療組(表16-29：1mg/kg的測試醫藥配製物；表30-41：4mg/kg的測試醫藥配製物；和表42-51：安慰劑配製物)總結。研究輸注在第2-5次拜訪時進行(“V2-V5”)，並且隨訪期在第6-9次拜訪時進行(“V6-V9”)。隨訪期間允許使用免疫抑制藥物。對於每個患者，每次拜訪在分別的2天收集的2個首次早晨空測量值(first morning void measurements)的平均值用於所有Up/C比率的效力分析。對每個參數而言，用混合模型重複測量方法來進行自基線至第112天/ET的百分比變化的比較。所述混合模型重複測量模型包括在先CNI治療(是，否)、治療組、人種(黑人、非黑人)、和基線Up/C比率和基線eGFR作為協變量。用SAS PROC MIXED程序來調適所述模型，並從該模型評估和測試多個時間點處的治療差異。還用非參數ANCOVA，進行了針對到第112天的Up/C比率、eGFR、及尿蛋白排泄的百分比變化的非參數分析。

在積極治療組(1mg/kg的測試醫藥配製物和4mg/kg的測試醫藥配製物)中觀察到，總體趨勢趨向均值eGFR(mL/min每1.73m²)隨時間的穩定化，直至研究第252天(或直至第9次拜訪)，然而安慰劑組(用安慰劑配製物治療)中的均值eGFR含量(mL/min每1.73m²)隨時間逐漸下降。這些總體趨勢圖示於圖1中，並且表52中提供了每個具體研究日的分組數據點中所含患者的數目。

本申請中提及的所有出版物和專利申請在此通過提述以其整體併入至本文，如同具體而單獨地指示各出版物或專利申請通過提述以其整體併入一樣。

雖然本文顯示並描述了本發明優選的具體例，但本領域技術人員明顯瞭解這些具體例僅作為示例提供。意欲如下的申請專利範圍限定本發明的範圍，而且該申請專利範圍內的方法和結構及其等同內容由此涵蓋在內。

Claims

一種治療具有APOL1變體的患者中的原發性局部節段性腎小球硬化症(原發性FSGS)的方法，包括對所述患者投予TGFβ拮抗劑。
如請求項1的方法，其中將所述TGFβ拮抗劑靜脈內投予于患者。
一種治療具有APOL1變體的患者中的原發性局部節段性腎小球硬化症(原發性FSGS)的方法，包括對所述患者投予醫藥配製物，所述醫藥配製物包含治療有效量的TGFβ拮抗劑。
如請求項3的方法，其中將所述醫藥配製物靜脈內投予于患者。
如請求項1-4中任一項的方法，其中所述方法穩定患者的腎小球濾過率。
如請求項1-5中任一項的方法，其中所述TGFβ拮抗劑中和TGFβ的活性同種型。
如請求項1-5中任一項的方法，其中所述TGFβ拮抗劑是泛特異性TGFβ拮抗劑。
如請求項7的方法，其中所述泛特異性TGFβ拮抗劑是夫蘇木單株抗體(fresolimumab)。
一種治療具有APOL1變體的患者中的原發性局部節段性腎小球硬化症(原發性FSGS)的方法，包括對所述患者投予夫蘇木單株抗體。
如請求項9的方法，其中將所述夫蘇木單株抗體靜脈內投予于患者。
如請求項9的方法，其中基於所述患者的總重量，將1-4mg/kg的夫蘇木單株抗體靜脈內投予于所述患者。
如請求項11的方法，其中每月將1-4mg/kg的夫蘇木單株抗體靜脈內投予于所述患者。
如請求項11的方法，其中每28天將1-4mg/kg的夫蘇木單株抗體靜脈內投予于所述患者。
如請求項11的方法，其中每21天將1-4mg/kg的夫蘇木單株抗體靜脈內投予于所述患者。
如請求項11的方法，其中每14天將1-4mg/kg的夫蘇木單株抗體靜脈內投予于所述患者。
一種治療具有APOL1變體的患者中的原發性局部節段性腎小球硬化症(原發性FSGS)的方法，包括對所述患者投予醫藥配製物，所述醫藥配製物包含治療有效量的夫蘇木單株抗體。
如請求項16的方法，其中所述治療有效量是1-4mg/kg的夫蘇木單株抗體，其基於所述患者的總重量。
如請求項16或17的方法，其中將所述醫藥配製物靜脈內投予于患者。
如請求項16或17的方法，其中每月將1-4mg/kg的夫蘇木單株抗體靜脈內投予于患者。
如請求項16或17的方法，其中每28天將1-4mg/kg的夫蘇木單株抗體靜脈內投予于患者。
如請求項16或17的方法，其中每21天將1-4mg/kg的夫蘇木單株抗體靜脈內投予于患者。
如請求項16或17的方法，其中每14天將1-4mg/kg的夫蘇木單株抗體靜脈內投予于患者。
如請求項16-22中任一項的方法，其中所述醫藥配製物包含凍乾的夫蘇木單株抗體，其在注射用無菌水(sWFI)中重建。
如請求項17-23中任一項的方法，其中所述醫藥配製物包含1-4mg/kg的夫蘇木單株抗體，其用5.1mL的注射用無菌水(sWFI)重建。
如請求項16-24中任一項的方法，其中將所述醫藥配製物作為單次100mL靜脈內輸注靜脈內投予。
如請求項25的方法，其中所述單次100mL靜脈內輸注在約10分鐘至1小時的時間段進行。
如請求項25的方法，其中所述單次100mL靜脈內輸注在約30分鐘的時間段進行。
如請求項16-24中任一項的方法，其中將所述醫藥配製物以系列輸注方式在療程期間的一個時間段靜脈內投予。
如請求項28的方法，其中將100mL的所述醫藥配製物以系列輸注方式在療程期間的一個時間段靜脈內投予。
如請求項29的方法，其中所述療程期間的系列輸注的每次輸注是在約10分鐘至1小時的時間段進行的。
如請求項29的方法，其中所述療程期間的系列輸注的每次輸注是在約30分的時間段進行的。
如請求項16-31中任一項的方法，其中所述輸注的系列是1-50個療程。
如請求項16-31中任一項的方法，其中所述輸注的系列是1-10個療程。
如請求項16-31中任一項的方法，其中所述輸注的系列是1-4個療程。
如請求項8-34中任一項的方法，其中所述夫蘇木單株抗體以充足劑量投予，以達到103至51,209ng/mL的穀(trough)血清血漿夫蘇木單株抗體含量。
如請求項35的方法，其中所述穀血清血漿夫蘇木單株抗體含量為1,813至51,209ng/mL。
如請求項1-36中任一項的方法，其中治療的患者具有自基線下降50%或更多的Up/C比率(毫克蛋白/毫克肌酐)。
如請求項37的方法，其中所述Up/C比率自基線的下降是降至範圍為0.3至3.0毫克蛋白/毫克肌酐的含量。
如請求項1-38中任一項的方法，其中治療的患者具有自基線下降至<0.3毫克蛋白/毫克肌酐的含量的Up/C比率。
如請求項1-39中任一項的方法，其中所述APOL1變體是APOL1 G1單倍型，APOL-1 G2單倍型、或具有G1和G2單倍型二者的雙倍型。
如請求項1-39中任一項的方法，其中所述APOL1變體對於APOL1 G1單倍型是純合陽性的(G1/G1)，或是APOL1 G1單倍型的雜合攜帶體，包括G1/-或雙倍型G1/G2。
如請求項1-39中任一項的方法，其中所述APOL1變體是APOL1 G2單倍型純合陽性的(G2/G2)，或是APOL1 G2單倍型的雜合攜帶體，包括G2/-或雙倍型G1/G2。
如請求項40或41的方法，其中所述方法還包括通過鑑別分離自患者的血液樣品中APOL1 G1單倍型的存在，對所述患者進行基因分型。
如請求項40或41的方法，其中所述方法還包括通過鑑別分離自患者的血液樣品中APOL1 G1純合子的存在，對所述患者進行基因分型。
如請求項40或41的方法，其中所述方法還包括通過鑑別分離自患者的血液樣品中APOL1 G1雜合子(G1/-)的存在、APOL1G2雜合子(G2/-)的存在、或雙倍型G1/G2雜合子(G1/G2)，對所述患者進行基因分型。
如請求項43-45中任一項的方法，其中所述基因分型包括從所述患者分離血液樣品。
如請求項43-46中任一項的方法，其中所述基因分型在治療之前進行。
如請求項43-46中任一項的方法，其中所述基因分型在治療期間進行。
如請求項1-48中任一項的方法，其中所述患者在治療之前被診斷為患有腎病徵候群。
如請求項1-49中任一項的方法，其中所述患者在治療之前被診斷為患有腎病性蛋白尿。
如請求項1-50中任一項的方法，其中所述患者在治療之前具有30mL/min/1.73m²或更多的eGFR。
如請求項1-51中任一項的方法，其中所述患者在治療之前在至少一個收集的尿樣品中具有3毫克蛋白/毫克肌酐或更多的Up/C比率。
如請求項1-52中任一項的方法，其中所述患者在治療之前在至少兩個收集的尿樣品中具有2毫克蛋白/毫克肌酐或更多的Up/C比率。
如請求項1-53中任一項的方法，其中所述原發性FSGS是抗類固醇的原發性FSGS。
如請求項1-53中任一項的方法，其中所述患者在治療之前患有抗類固醇的原發性FSGS。
如請求項55的方法，其中所述抗類固醇的原發性FSGS患者是在治療之前不耐受類固醇療法的原發性FSGS患者。
如請求項55或56的方法，其中所述抗類固醇的原發性FSGS患者是在治療前對高劑量類固醇療法不耐受至少4周的原發性FSGS患者。
如請求項1-57中任一項的方法，其中所述患者在治療前已用ACEi、ARB、或二者一起以穩定劑量治療至少4周。
如請求項1-58中任一項的方法，其中治療的患者的腎功能得到穩定。
如請求項1-59中任一項的方法，其中治療的患者的eGFR得到穩定。
如請求項1-60中任一項的方法，其中所述穩定的eGFR包括中值eGFR自基線含量下降10%或更少。
如請求項61的方法，其中治療的患者的中值eGFR為自基線含量10%或更少。
如請求項59-62中任一項的方法，其中治療的患者中的eGFR自開始治療112-140天內得到穩定。
如請求項1-63中任一項的方法，其中所述方法自基線降低所述治療的患者中的蛋白尿含量。
如請求項1-64中任一項的方法，其中兩個療程後治療的患者具有自基線下降50%或更多，降至範圍為0.3至3.0毫克蛋白/毫克肌酐的含量的Up/C比率。
如請求項1-64中任一項的方法，其中三個療程後治療的患者具有自基線下降50%或更多，降至範圍為0.3至3.0毫克蛋白/毫克肌酐的含量的Up/C比率。
如請求項1-64中任一項的方法，其中四個療程後治療的患者具有自基線下降50%或更多，降至範圍為0.3至3.0毫克蛋白/毫克肌酐的含量的Up/C比率。
如請求項1-64中任一項的方法，其中治療的患者具有自基線下降至<0.3毫克蛋白/毫克肌酐的含量的Up/C比率。
如請求項1-68中任一項的方法，其中所述方法包括治療期和隨訪期。
如請求項69的方法，其中所述患者在治療期或隨訪期過程中具有如下至少一項：i)Up/C比率至少兩次50%或更大的下降，自基線降至範圍為0.3至3.0毫克蛋白/毫克肌酐的含量；或ii)Up/C比率至少一次50%或更大的下降，自基線降至範圍為0.3至3.0毫克蛋白/毫克肌酐的含量且所述Up/C比率在至少一個月保持在基線含量的至少50%或更少。
如請求項70的方法，其中自開始治療112-140天內，所述患者的Up/C比率具有至少兩次50%或更大的下降，自基線降至範圍為0.3至3.0毫克蛋白/毫克肌酐的含量。
如請求項70的方法，其中自開始治療112-140天內，所述患者的Up/C比率具有至少一次50%或更大的下降，自基線降至範圍為0.3至3.0毫克蛋白/毫克肌酐的含量，且所述Up/C比率在至少一個月保持在基線含量的至少50%或更少。
如請求項1-72中任一項的方法，其中治療的患者是非洲血統。
如請求項1-72中任一項的方法，其中治療的患者是西班牙血統。
如請求項1-74中任一項的方法，其中治療的患者具有APOL1變體，包括G1/G1、G1/-、G1/G2、G2/-、或G2/G2。
如請求項75的方法，其中相對於缺乏G1和G2單倍型二者(-/-)的患者，所述APOL1變體增加治療的患者患上原發性FSGS的風險或患有原發性FSGS的發生率。