TW201545754A - 用於抑制骨髓衍生抑制細胞之組成物 - Google Patents
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Abstract
本發明係關於一種包含序列編號1之胺基酸序列的胜肽、具有與胺基酸序列80%或以上之序列同源性的胜肽或係上述之片段的胜肽之新穎用途。更特定而言,本發明係關於抑制骨髓衍生抑制細胞(MDSC)的胜肽之用途。藉由抑制MDSC,可解決MDSC抑制免疫反應。藉由使用與抗癌藥物及佐劑組合之胜肽有效抑制MDSC,使得可預防、緩解或治療由MDSC引發的疾病及症狀。此外,可提供無MDSC相關副作用的一種疫苗(特定而言為癌症疫苗)、一種抗癌套組或一種抗癌方法。
Description
本發明係關於一種含有端粒酶衍生胜肽的用於抑制骨髓衍生抑制細胞的組成物、套組及方法,及一種使用對抑制骨髓衍生抑制細胞有效的端粒酶衍生胜肽來抗癌的組成物、方法及用途。
骨髓衍生抑制細胞(Myeloid-derived suppressor cells;MDSC)係由各種腫瘤分泌因子在分化過程中所遏止的未成熟骨髓細胞之異質族。MDSC以各種方式抑制細胞毒素T淋巴細胞之活性。
MDSC在保護宿主身體免遭由急性及慢性感染產生的極度免疫反應之不良影響及在抑制由創傷釋放的抗原之自體免疫反應中起重要作用。同樣地,用於抑制自體免疫反應的MDSC功能可幫助患有自體免疫疾病的患者,但MDSC增殖涉及病理途徑。藉由各種轉錄因子調節活化,因此活化免疫抑制子諸如ARG1及NOS2之向上調控及表現,及增加NO、ROS、RNS及細胞素之產生。特定而言,MDSC之累積
維持免疫抑制之狀況,因此使得身體連續曝露於過敏原及/或病毒感染中,及引發慢性炎症。當身體不能適應免疫反應時,可發生由慢性炎症產生的組織損傷。
在臨床前試驗模型中,作為已論證直接減少MDSC之數目的化學療法藥物,僅存在兩種藥物:吉西他濱(gemcitabine)及5-氟脲嘧啶(5-fluorouracil;5-FU)。已報告吉西他濱減少了腫瘤誘發小鼠之脾的MDSC之顯著數目[Suzuki E,Kapoor V,Jassar AS,Kaiser LR,Albelda SM(2005)Gemcitabine selectively eliminates splenic Gr-1+/CD11b+ myeloid suppressor cells in tumor-bearing animals and enhances anti-tumor immune activity.Clin Cancer Res 11:6713-6721]。亦已論證5-FU可實質上減少MDSC之數目且5-FU之MDSC減少程度比吉西他濱之MDSC減少程度更高。
在抑制MDSC的方法中,對MDSC施用miR-142及/或miR-223核糖核苷酸(WO2013/082591)。miR-142及/或miR-223核糖核苷酸使得MDSC分化成巨噬細胞或樹突狀細胞,使得MDSC之數目減少。
在抑制MDSC的另一方法中,已論證使用雙膦酸鹽或CCR2抑制劑作為佐劑(WO2011/116299)。雙膦酸鹽包括氯屈膦酸鹽(clodronate)、唑來膦酸鹽(zoledronate)、帕米膦酸鹽(pamidronate)、依替膦酸鹽(etidronate)及其他雙膦酸鹽藥物。CCR2抑制劑之實例為RS 1028595、PF-04178903等。
同時,在臨床前試驗中,已論證顆粒性細胞-巨噬細
胞群落刺激因子(granulocyte-macrophage colony-stimulating factor;GM-CSF)作為疫苗佐劑在腫瘤微環境下增加MDSC[Curran MA,Allison JP(2009)Tumor vaccines expressing flt3 ligand synergize with ctla-4 blockade to reject preimplanted tumors.Cancer Res 69:7747-7755]。又,在臨床試驗中,已論證使用低劑量GM-CSF作為疫苗佐劑以增加血液中的MDSC之數目[Filipazzi P,Valenti R,Huber,V,Pilla L,Canese P,Iero MC,Mariani L,Parmiani G,Rivoltini L等人(2007)Identification of a new subset of myeloid suppressor cells in peripheral blood of melanoma patients with modulation by a granulocyte-macrophage colony-stimulation factor-based antitumor vaccine.J Clin Oncol 25:2546-2553]。
【先前技術文獻】
[專利文獻]
(1)WO 2013/082591
(2)WO 2011/116299
[非專利文獻]
(1) Suzuki E, Kapoor V, Jassar AS, Kaiser LR, Albelda SM (2005) Gemcitabine selectively eliminates splenic Gr-1+/CD11b+ myeloid suppressor cells in tumor-bearing animals and enhances anti-tumor immune activity. Clin Cancer Res 11:6713-6721
(2) Curran MA, Allison JP (2009) Tumor vaccines expressing flt3 ligand synergies with ctla-4 blockade to reject
preimplanted tumors. Cancer Res 69:7747-7755
(3) Filipazzi P, Valenti R, Huber, V, Pilla L, Canese P, Iero MC, Mariani L, Parmiani G, Rivoltini L等人(2007) Identification of a new subset of myeloid suppressor cells in peripheral blood of melanoma patients with modulation by a granulocyte-macrophage colony-stimulation factor-based antitumor vaccine. J Clin Oncol 25:2546-2553
在一態樣中,本發明之目的在於抑制MDSC。
在另一態樣中,本發明之目的在於活化免疫反應。
在另一態樣中,本發明之目的在於活化由MDSC抑制之免疫反應。
在另一態樣中,本發明之目的在於解決由MDSC所引發的疫苗免疫反應抑制問題。
在另一態樣中,本發明之目的在於解決由MDSC所引發的癌症疫苗免疫反應抑制問題。
在另一態樣中,本發明之目的在於預防、緩解或治療與MDSC相關的疾病或症狀。
在另一態樣中,本發明之目的在於提供一種未減少與MDSC相關的免疫反應之抗癌組成物、抗癌套組或抗癌方法。
在另一態樣中,本發明之目的在於提供一種未減少與MDSC相關的免疫反應之癌症疫苗。
在本發明之示例性實施例中,本發明係關於一種抑制骨髓衍生抑制細胞(MDSC)之組成物,該組成物含有包含序列編號1之胺基酸序列的胜肽、具有與胺基酸序列80%或以上之序列同源性的胜肽或係上述之片段的胜肽,該組成物以有效量之胜肽抑制MDSC。
在本發明之示例性實施例中,本發明係關於一種抑制MDSC之組成物,該組成物包含:包含序列編號1之胺基酸序列的胜肽、具有與胺基酸序列80%或以上之序列同源性的胜肽或係上述之片段的胜肽;抗癌藥物;及佐劑。
在本發明之示例性實施例中,本發明係關於一種抗癌之組成物,該組成物包含:包含序列編號1之胺基酸序列的胜肽、具有與胺基酸序列80%或以上之序列同源性的胜肽或係上述之片段的胜肽;抗癌藥物;及佐劑。
在本發明之示例性實施例中,本發明係關於一種癌症疫苗之組成物,該組成物包含:包含序列編號1之胺基酸序列的胜肽、具有與胺基酸序列80%或以上之序列同源性的胜肽或係上述之片段的胜肽;抗癌藥物;及佐劑。
在本發明之示例性實施例中,本發明係關於一種抑制MDSC之套組。套組含有一種組成物,該組成物包含:包含序列編號1之胺基酸序列的胜肽、具有與胺基酸序列80%或以上之序列同源性的胜肽或係上述之片段的胜肽,其中胜肽為活性成份,及其中胜肽具有抑制MDSC的有效量;抗癌藥物;及說明書。在另一態樣中,套組進一步包含佐劑。
在本發明之示例性實施例中,本發明係關於抑制MDSC之套組,該套組藉由抑制MDSC來預防、緩解或治療與MDSC相關的疾病或症狀。
在本發明之示例性實施例中,本發明係關於抑制MDSC之套組,該套組藉由抑制MDSC預防、緩解或治療癌症。
在本發明之示例性實施例中,本發明係關於一種抗癌之套組,該套組含有一種組成物,該組成物包含:包含序列編號1之胺基酸序列的胜肽、具有與胺基酸序列80%或以上之序列同源性的胜肽或係上述之片段的胜肽;抗癌藥物;及說明書。套組進一步包含佐劑組成物。
在本發明之示例性實施例中,本發明係關於一種抑制骨髓衍生抑制細胞(MDSC)之方法,該方法含有以下步驟:向需要抑制MDSC的受試者施用對抑制MDSC有效量之包含序列編號1之胺基酸序列的胜肽、具有與胺基酸序列80%或以上之序列同源性的胜肽或係上述之片段的胜肽。在另一態樣中,該方法可進一步含有施用與胜肽組合之抗癌藥物之步驟。在另一態樣中,該方法可進一步含有施用與胜肽組合之佐劑之步驟。
在本發明之示例性實施例中,本發明係關於一種預防、緩解或治療癌症之方法,該方法包含以下步驟:向需要預防、緩解或治療癌症的受試者施用與抗癌藥物及/或佐劑組合的有效量之包含序列編號1之胺基酸序列的胜肽、具有與胺基酸序列80%或以上之序列同源性的胜肽或係上述之片段
的胜肽。
在本發明之示例性實施例中,本發明係關於一種用於製造抑制骨髓衍生抑制細胞(MDSC)之組成物的胜肽之用途,該組成物包含:包含序列編號1之胺基酸序列的胜肽、具有與胺基酸序列80%或以上之序列同源性的胜肽或係上述之片段的胜肽。
在本發明之示例性實施例中,本發明可抑制MDSC。
在本發明之示例性實施例中,本發明可活化免疫反應。
在本發明之示例性實施例中,本發明可解決由MDSC抑制免疫反應的問題。
在本發明之示例性實施例中,本發明可預防、緩解或治療與MDSC相關的疾病及症狀。
在本發明之示例性實施例中,本發明可提供一種抗癌組成物、一種抗癌套組或一種抗癌方法,上述者無MDSC相關副作用。
在本發明之示例性實施例中,本發明可提供一種抗癌疫苗,該疫苗無MDSC相關副作用。
第1圖係圖示MDSC與促炎性細胞素(pre-inflammatory cytokine)水平之間關係之曲線圖。比較高MDSC患者與低MDSC患者之間的促炎性細胞素水平,結果展示MDSC與促炎性細胞素並無關係。
第2圖係藉由比較及分析用吉西他濱及卡西他濱(capecitabine)治療的患者群組(測試實例2,隊組2)與用GemCap及pep1治療的患者群組(實例2,隊組3)之MDSC變化而產生的對數標度曲線圖。
本發明中所描述之先前技術文獻與本發明整合。
在本文中,術語「抑制MDSC」意指不僅減少MDSC之數目,而且抑制MDSC之活性。減少MDSC之數目含有不僅抑制細胞增殖,而且破壞細胞及分化細胞為其他細胞。此外,鑒於生物學,該術語包括稱為「抑制」的所有機制。
在本文中,術語「與...組合」意指不僅實體上同時施用,而且類似於常見組合療法遵循藥物之各個療程組合施用。
本發明之發明人已辨識出癌症患者中的MDSC明顯增加。此意謂MDSC可抑制癌症疫苗之活性,該癌症疫苗施用於癌症患者及因此免除癌症治療。對於藉由癌症疫苗治療癌症,需要減少癌症患者中的MDSC。
又,本發明之發明人已辨識出,使用已論證直接減少MDSC之數目的化學療法藥物,與5-氟脲嘧啶(5-FU)或卡西他濱組合的吉西他濱與單獨使用這些藥物之各者相比並未減少MDSC。確切而言,在眾多患者中,MDSC增加。此結果可限制施用與5-氟脲嘧啶(或卡西他濱)組合的吉西他濱。
本文所揭示胜肽可明顯減少MDSC。藉由減少MDSC,胜肽可解決與MDSC相關的系列病原性問題。
本文所揭示胜肽可為端粒酶之部分片段或其類似
物。端粒已知為染色體之末端處所發現的遺傳物質之重複序列,用於防止染色體遭受損壞或合併至其他染色體上。每次細胞分裂時端粒之長度縮短,且在若干次細胞分裂後,端粒長度極度縮短到細胞停止分裂及死亡的程度。另一方面,已知延長端粒以延伸細胞之壽命。舉例而言,癌細胞分泌一種稱為端粒酶的酶,端粒酶預防端粒縮短,從而導致癌細胞增殖。
本文所揭示之胜肽可包括包含胺基酸序列的胜肽,該等胜肽與序列編號1之胜肽或序列編號1之胜肽之片段具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%之序列同源性。
在本發明之示例性實施例中,胜肽包括與端粒酶相關的胜肽,特定而言人類(智人)端粒酶。
本發明所揭示之胜肽可包括與序列編號1之胜肽或其片段在至少一個胺基酸、至少2個胺基酸、至少3個胺基酸、至少4個胺基酸、至少5個轉化胺基酸、至少6個轉化胺基酸或至少7個胺基酸中具有差異的胜肽。
在本發明之示例性實施例中,胜肽由至多30個胺基酸組成。
序列編號1中所描述之胜肽與下表1中相同。下文表1中的「名稱」係用於區分胜肽。在一個態樣中,序列編號1之胜肽係人類端粒酶之整個胜肽。在本發明之不同特定實施例中,具有序列編號1之序列的胜肽、具有序列編號1
之序列的胜肽之片段的胜肽或具有與根據本揭示案之胜肽80%或以上之序列同源性的胜肽包括藉由選擇及合成對應於端粒酶內的相關位置的胜肽而合成之「合成胜肽」。序列編號2係整個端粒酶之胺基酸序列。
在本發明之一個實施例中,胺基酸中的改變包括胜肽物理及化學特性之修飾。舉例而言,可執行胺基酸修飾以便改良胜肽之熱穩定性、改變受質特異性及改變最佳pH。
本文中的術語「胺基酸」不僅包括天然整合至胜肽中的22種標準胺基酸,而且包括D-異構體及修飾胺基酸。因此,在本發明之特定實施例中,本文中的胜肽包括具有D-胺基酸的胜肽。另一方面,胜肽可包括非標準胺基酸,諸如已經轉譯後修飾之彼等胺基酸。轉譯後修飾之實例包括磷酸化、糖基化、醯基化(包括乙醯基化、肉豆蔻醯基化、棕櫚醯基化)、烷基化、羧基化、羥基化、糖化、生物素化、泛素化、化學特性的修改(例如,β-移除脫醯亞胺基化、脫醯胺基化)及結構修飾(例如,形成二硫鍵)。又,胺基酸之改變包括在與交聯劑形成胜肽共軛物的組合過程期間因化學反應而發生的胺基酸之改變,諸如胺基、羧基或側鏈的改變。
本文所揭示之胜肽可為已從天然源中辨識及分離的野生型胜肽。另一方面,當與序列編號1的胜肽或其片段相比時,本文所揭示之胜肽可為人工變異體,該等人工變異體包括一或更多個胺基酸經取代、刪除及/或插入。野生型多胜肽中的胺基酸變化(不僅在人工變異體中)包含蛋白質折疊及/或不明顯影響活性的胺基酸之保守取代。保守取代之實例可處於鹼性胺基酸(精胺酸、離胺酸及組胺酸)、酸性胺基酸(麩胺酸及天冬胺酸)、極性胺基酸(麩醯胺酸及天冬醯
胺酸)、疏水胺基酸(白胺酸、異白胺酸、纈胺酸及甲硫胺酸)、芳香族胺基酸(苯丙胺酸、色胺酸及酪胺酸)及小胺基酸(甘胺酸、丙胺酸、絲胺酸及蘇胺酸)之群組內。技術中已知大體不改變特定活性的胺基酸取代。最常發生的變化為Ala/Ser、Val/Ile、Asp/Glu、Thr/Ser、Ala/Gly、Ala/Thr、Ser/Asn、Ala/Val、Ser/Gly、Tyr/Phe、Ala/Pro、Lys/Arg、Asp/Asn、Leu/Ile、Leu/Val、Ala/Glu、Asp/Gly及上述之相反變化。下表2中展示保守取代之其他實例。
在本發明之示例性實施例中,本發明係關於一種抑制骨髓衍生抑制細胞(MDSC)之組成物,該組成物含有包含序列編號1之胺基酸序列的胜肽、具有與胺基酸序列80%或以上之序列同源性的胜肽或係上述之片段的胜肽,其中該胜肽為活性成份。
在本發明之示例性實施例中,本發明係關於一種抑制MDSC之組成物,該組成物包含:包含序列編號1之胺基酸序列的胜肽、具有與胺基酸序列80%或以上之序列同源性的胜肽或係上述之片段的胜肽;抗癌藥物及佐劑。
在本發明之示例性實施例中,本發明係關於一種抗癌之組成物,該組成物包含:包含序列編號1之胺基酸序列的胜肽、具有與胺基酸序列80%或以上之序列同源性的胜肽或係上述之片段的胜肽;抗癌藥物及佐劑。
在本發明之示例性實施例中,本發明係關於一種癌症疫苗之組成物,該組成物包含:包含序列編號1之胺基酸序列的胜肽、具有與胺基酸序列80%或以上之序列同源性的胜肽或係上述之片段的胜肽;抗癌藥物及佐劑。
在本發明之示例性實施例中,本發明係關於一種抑制MDSC之套組。套組含有用於MDSC之組成物、抗癌藥物及說明書。在另一態樣中,套組進一步包含佐劑。
在本發明之示例性實施例中,用於抑制MDSC之套組藉由抑制MDSC預防、緩解或治療與MDSC相關的疾病或症狀。
在本發明之示例性實施例中,用於抑制MDSC之套
組藉由抑制MDSC預防、緩解或治療癌症。
在本發明之示例性實施例中,本發明係關於一種抗癌之套組,該套組含有一種組成物,該組成物包含:包含序列編號1之胺基酸序列的胜肽、具有與胺基酸序列80%或以上之序列同源性的胜肽或係上述之片段的胜肽;抗癌藥物;及說明書。套組進一步包含佐劑組成物。
在套組中,說明書包括關於施用與抗癌藥物組合之抑制MDSC組成物的資訊。特定而言,說明書包括關於施用各種藥物之劑量、時間及方法的資訊。此外,說明書包括抑制MDSC之使用、抗癌之使用及癌症疫苗之使用。更特定而言,說明書包括需要抑制MDSC的所有疾病或症狀。又,說明書包括關於給藥相關副作用及警告的資訊。
在本發明之示例性實施例中,本發明係關於一種抑制骨髓衍生抑制細胞(MDSC)之方法,該方法含有以下步驟:向需要抑制MDSC的受試者施用對抑制MDSC有效量之包含序列編號1之胺基酸序列的胜肽、具有與胺基酸序列80%或以上之序列同源性的胜肽或係上述之片段的胜肽。在另一態樣中,該方法可進一步含有施用與胜肽組合之抗癌藥物之步驟。在另一態樣中,該方法可進一步含有施用與胜肽組合之佐劑之步驟。
在本發明之示例性實施例中,本發明係關於一種預防、緩解或治療癌症之方法,該方法包含以下步驟:向需要預防、緩解或治療癌症的受試者施用與抗癌藥物及/或佐劑組合的有效量之包含序列編號1之胺基酸序列的胜肽、具有與
胺基酸序列80%或以上之序列同源性的胜肽或係上述之片段的胜肽。
在本發明之示例性實施例中,癌症選自由腎細胞癌(renal cell carcinoma;RCC)、大腸直腸癌(colorectal cancer;CRC)、胃癌(gastric cancer;GC)、黑色素瘤、肺癌、血癌、前列腺癌、腺癌及胰臟癌所組成之群組。
在本發明之示例性實施例中,本發明係關於一種用於製造抑制骨髓衍生抑制細胞(MDSC)之組成物的胜肽之用途,該組成物包含:包含序列編號1之胺基酸序列的胜肽、具有與胺基酸序列80%或以上之序列同源性的胜肽或係上述之片段的胜肽。
在本發明之示例性實施例中,骨髓衍生抑制細胞(MDSC)可處於具有腫瘤的受試者體內。又,可將組成物施用於需要抑制MDSC的受試者。MDSC藉由抑制細胞毒素T淋巴細胞之活性抑制免疫反應。MDSC具有適當功能,該功能抑制急性免疫反應(諸如自體免疫疾病),但藉由抑制所需免疫反應而具有引發或惡化疾病或中斷適當治療的不良影響。舉例而言,MDSC在癌症或腫瘤患者中大量增加,使得MDSC藉由降低施用癌症疫苗之效果而使癌症疫苗失效。在此情形中,若有效減少MDSC之數目,則將輕易且有效地完成癌症治療。
在本文之本發明中,顯然疾病或症狀與MDSC相關。在本文中,本發明所描述之疾病及症狀包括與MDSC相關的所有常見疾病及症狀。舉例而言,骨骼疾病:溶骨性骨
骼疾病;多發性骨髓瘤;神經膠母細胞瘤;感染:細菌或寄生蟲感染;急性或慢性炎症;創傷壓力症候群;敗血症;移植;眼內自體免疫性疾病;炎性腸道疾病;癌症惡病質;及肺結核(TB),但不限於該等。
在本文之本發明中,MDSC可包括所有MDSC而不涉及其表現型。技術領域中已知多種表現型。舉例而言,表現型選自由CD15、IL4Ra、CD14、CD11b、HLA-DR、CD33、Lin、FSC、DR及SSC所組成之群組;選擇性地為,CD18、CD80、CD83、CD86、HLA-I;及生存/死亡識別物。舉例而言,表現型包括基於標記物IL4RA+與CD14+的MDSC1;基於標記物IL4Ra+與CD15+的MDSC2;基於標記物IL4Ra+的MDSC2;基於Lin-、HLA-DR-與CD33+及選擇性基於CD18+與HLA-I+的MDSC3;基於CD14+、HLA-DR(-/Io)、FSCHi與SSCim的MDSC4;基於標記物CD11b+、CD14-與CD15+及選擇性基於FSChi、SSCim、CD80-、CD83-、CD86-與HLA-DR-的MDSC5。舉例而言,表現型可為Lin-DR-CD11b+。
在本文之本發明所描述之組成物中,可根據技術中已知的決定胜肽之濃度。舉例而言,根據本發明的組成物可含有10mg/L至1000mg/L,特定而言10mg/L至500mg/L,更特定而言30mg/L至200mg/L之包含序列編號1之胺基酸序列的胜肽、具有與胺基酸序列80%或以上之序列同源性的胜肽或係上述之片段的胜肽,但當根據濃度存在不同效果時,可修改濃度。當胜肽含有在上文所提及之範圍內時,可滿足組成物之安全性及穩定性兩者且該等範圍在成本效益方
面適宜。
在本文之本發明中,醫藥組成物中的活性成份之劑量可根據患者年齡、性別、體重、病理及狀態、給藥路徑或處方醫師之診斷而變化。可在熟習此項技術者之水平內決定基於該等因素的劑量,及每日劑量(例如)可為(但不限於)1μg/kg/日至10g/kg/日,特定而言10μg/kg/日至100mg/kg/日,更特定而言50μg/kg/日至10mg/kg/日。舉例而言,可經由經皮給藥施用胜肽。給藥時期可為每隔一日,每日一次,及可延長給藥間隔。舉例而言,在1週、2週、3週及4週之各者中進行給藥後,可在第6週或第10週進行給藥。給藥劑量可為成人每次0.1至3mg。給藥劑量可超過0.1mg、0.2mg、0.3mg、0.4mg、0.45mg或0.5mg。又,給藥劑量可小於3mg、2.5mg、2.0mg、1.5mg、1.0mg、0.9mg、0.8mg、0.7mg或0.6mg。
在示例性實施例中,可與抗癌藥物組合施用本發明所描述之胜肽。抗癌藥物包括(但不限於)化學療法藥物及生物療法藥物。化學療法藥物可包括(但不限於)DNA烷化劑、抗代謝物、天然材料及激素。化學療法藥物為抗代謝物。代謝物意指抑制合成DNA及RNA的分子之群組。代謝物之子類型可包括(但不限於)抗葉酸、氟基嘧啶、脫氧核苷類似物及硫代嘌呤。氟基嘧啶可包括(但不限於)氟脲嘧啶及卡西他濱。卡西他濱為5-氟脲嘧啶之前藥。脫氧核苷類似物可包括(但不限於)阿糖胞苷(cytarabine)、吉西他濱、地西他濱(decitabine)、委丹扎(Vidaza)、氟達拉濱(fludarabine)、
奈拉濱(nelarabine)、克拉屈濱(cladribine)、氯法拉濱(clofarabine)及噴司他丁(pentostatin)。化學療法藥物可施用兩種或更多種藥物。舉例而言,可與脫氧核苷類似物組合施用氟基嘧啶。在另一示例性實施例中,可與5-氟脲嘧啶(或前藥卡西他濱)組合施用吉西他濱。在另一示例性實施例中,可與卡西他濱組合施用吉西他濱。
在示例性實施例中,於熟習此項技術者之水平內決定本發明所描述之抗癌藥物之劑量,且每日劑量(例如)可為1μg/kg/日至10g/kg/日,更特定而言10μg/kg/日至100mg/kg/日,更特定而言50μg/kg/日至10mg/kg/日,但不限於該等數字及可根據年齡、健康狀態、併發症及其他各種因素而變化。
舉例而言,在吉西他濱中,可每週經由靜脈注射給藥,且劑量及間隔可為每週100~10000mg/m2之劑量及每2至8週中給藥1至6次並接著休息1週。劑量可超過100mg/m2、200mg/m2、300mg/m2、400mg/m2、500mg/m2、600mg/m2、700mg/m2、800mg/m2或900mg/m2。或劑量可小於10000mg/m2、9000mg/m2、8000mg/m2、7000mg/m2、6000mg/m2、5000mg/m2、4000mg/m2、3000mg/m2、2000mg/m2、1500mg/m2、1400mg/m2、1300mg/m2、1200mg/m2、1100mg/m2、1050mg/m2、1030mg/m2、1020mg/m2或1010mg/m2。
在卡西他濱中,可經由口服療法給藥。給藥間隔可為每日2次。給藥之每日劑量可超過500mg/m2、600mg/m2、700mg/m2、800mg/m2、900mg/m2、1000mg/m2、1200mg/m2、
1300mg/m2、1400mg/m2、1500mg/m2或1600mg/m2。或劑量可小於10000mg/m2、9000mg/m2、8000mg/m2、7000mg/m2、6000mg/m2、5000mg/m2、4000mg/m2、3000mg/m2、2000mg/m2、1900mg/m2、1800mg/m2或1700mg/m2。給藥之每日劑量可分為兩次或更多次。
在示例性實施例中,可與佐劑組合施用本發明所描述之胜肽及/或抗癌物。佐劑可增加MDSC。鑒於免疫學,佐劑係用於刺激目標抗原之免疫反應,但本身並未提供免疫原性。每種疫苗引發炎症,因此一起調用骨髓細胞(淋巴細胞及嗜中性白細胞)。MDSC為已調用細胞的部分。除刺激免疫反應外,存在一種佐劑用於疫苗之著色穩定性。技術中熟知免疫佐劑[J Biomed Biotechnol.2012;2012:831486.2012年3月13日線上發表]。免疫佐劑包括:無機佐劑,諸如鋁鹽;油型;病毒體;及有機佐劑,諸如鯊烷(Squalane)。有機佐劑包括(但不限於)乳液、微生物衍生、合成佐劑及細胞素。舉例而言,將刺激成熟顆粒性細胞及巨噬細胞的顆粒性細胞-巨噬細胞群落刺激因子(GM-CSF)用作針對B型肝炎、HIV及癌症的疫苗[J Biomed Biotechnol.2012;2012:831486.2012年3月13日線上發表]。本發明所描述之佐劑可為增加MDSC的佐劑。由於使用增加MDSC的佐劑減少了免疫反應,無法實現疫苗效果。在此情況中,需要一種擋止MDSC增加的手段。
對於本發明所描述之佐劑的劑量決定處於熟習此項技術者之水平內,且每日劑量(例如)可為1μg/kg/日至10g/kg/日,更特定而言10μg/kg/日至100mg/kg/日,更特定而
言50μg/kg/日至10mg/kg/日,但不限於該等數字及可根據年齡、健康狀態、併發症及其他各種因素而變化。
舉例而言,可在施用本發明所描述之胜肽前(例如,1至150分鐘前、5至80分鐘前或10至15分鐘前)經由經皮給藥施用GM-CSF,對成人可以7至700mg之劑量皮內施用GM-CSF。又,給藥時間可為在胜肽給藥前超過1分鐘、3分鐘、5分鐘、7分鐘、8分鐘、9分鐘或10分鐘進行。又,可在小於150分鐘、130分鐘、110分鐘、100分鐘、90分鐘、80分鐘、70分鐘、60分鐘、50分鐘、40分鐘、30分鐘、20分鐘或15分鐘前給藥。給藥劑量可超過7mg、10mg、20mg、30mg、40mg、50mg、60mg或70mg。又,給藥劑量可小於700mg、600mg、500mg、400mg、300mg、200mg、100mg、90mg或80mg。
在臨床前試驗中,已論證GM-CSF作為疫苗佐劑增加了MDSC[Curran MA,Allison JP(2009)Tumor vaccines expressing flt3 ligand synergize with ctla-4 blockade to reject preimplanted tumors.Cancer Res 69:7747-7755]。又,在臨床試驗中,已論證低劑量之GM-CSF作為疫苗佐劑增加了血液中的MDSC之數目[Filipazzi P,Valenti R,Huber,V,Pilla L,Canese P,Iero MC,Mariani L,Parmiani G,Rivoltini L等人(2007)Identification of a new subset of myeloid suppressor cells in peripheral blood of melanoma patients with modulation by a granulocyte-macrophage colony-stimulation factor-based antitumor vaccine.J Clin Oncol 25:2546-2553]。添加佐劑將輔
助疫苗,但確切而言將因增加MDSC之數目而中斷疫苗。因此,難以將GM-CSF用作癌症疫苗之佐劑。
本發明之發明人已辨識出,該方法可解決腫瘤微條件中由GM-CSF引起的MDSC增加問題及施用與5-氟脲嘧啶(或卡西他濱)組合之吉西他濱產生的功能損失問題。本發明之發明人已辨識出,當低劑量GM-CSF用作pep1之佐劑時,施用GemCap及pep1的患者群組之Lin-DR-CD11b+MDSC未增加。
在施用疫苗前,並未因高MDSC百分比而排除腫瘤相關抗原引發之免疫反應。
在示例性實施例中,組成物可用於醫藥、化妝品或食品。
在本發明之一個實施例中,醫藥組成物中的活性成份之劑量可根據患者年齡、性別、體重、病理及狀態、給藥路徑或處方醫師之診斷而變化。可在熟習此項技術者之水平內決定基於該等因素的劑量,及每日劑量(例如)可為1μg/kg/日至10g/kg/日,特定而言10μg/kg/日至100mg/kg/日,更特定而言50μg/kg/日至10mg/kg/日,但不限於該等數字,及可根據年齡、健康狀態、併發症及其他各種因素而變化。
在本發明之一個實施例中,組成物可應用於包括人、犬、雞、豬、奶牛、羊、豚鼠及猴在內的所有動物。
在本發明之一個實施例中,可經由口服、直腸、經皮、靜脈內、肌內、腹膜內、骨髓內、硬膜外或皮下路徑施用醫藥組成物。
口服給藥之形式可為(但不限於)錠劑、丸劑、軟膠囊或硬膠囊、顆粒劑、粉末劑、溶液或乳液。非口服給藥之形式可為(但不限於)注射、點滴、洗液、軟膏劑、凝膠劑、乳膏劑、懸浮液、乳液、栓劑、貼片或噴霧。
在本發明之一個實施例中,若需要,醫藥組成物可含有添加劑,諸如稀釋劑、賦形劑、潤滑劑、黏合劑、崩解劑、緩衝劑、分散劑、介面活性劑、著色劑、芳香劑或甜味劑。在本發明之一個實施例中,醫藥組成物可由技術中的習知工業方法製造。
本文所使用之術語意欲用於描述實施例,但不欲限制本發明。前面沒有數字的術語並不限制數量,但展示可存在關於所使用術語之一個以上之事物。應開放式解讀術語「包含」、「具有」、「包括」及「含有」(亦即,「包括但不限於」)。
使用論及數值範圍,而不是陳述範圍內的單獨數字,因此除非明確陳述,該範圍應將視為本文單獨描述範圍內的所有數字。所有範圍之末端值包括於該範圍內且可獨立組合。
除非另作說明或在上下文中明顯矛盾,可以適當次序執行本文所論及之所有方法。除非包括於申請專利範圍內,否則任一實施例及所有實施例或示例性語言(例如,「諸如」、「類似」)之使用係用於更清楚地描述本發明,而非限制本發明之範疇。在本文中的申請專利範圍外的任何語言不應解讀為本發明之必需。除非另有定義,本文所使用之技
術及科學術語具有為本發明所屬技術領域中熟習此項技術者通常所理解之含義。
本發明之較佳實施例包括發明人已知的執行本發明之最佳模式。較佳實施例中的變化可在閱讀上文陳述後對熟習此項技術者變得清楚。本發明人希望熟習此項技術者可充分使用變化及可以與本文中所列出方式不同的其他方式實施本發明。因此,如專利法所允許,本發明包括隨附申請專利範圍中所陳述之本發明之關鍵點之等效物、修改及變化。另外,除非另有明確陳述或在上下文中矛盾,上文所論及之組份之任何組合內的所有可能變化皆包括於本發明中。儘管藉由示例性實施例描述及展示本發明,但是熟習此項技術者將較好地理解,在不脫離由下文申請專利範圍所界定之本發明之精神及範疇的情況下,在形式及細節中可存在各種改變。
實例1:胜肽之合成
根據固相胜肽合成之習知方法合成序列編號1之胜肽。更特定而言,藉由使用ASP48S(Peptron,Inc.,Daejeon ROK)經由Fmoc固相胜肽合成(solid phase peptide synthesis;SPPS)自C末端耦接各種胺基酸來合成胜肽。使用具有第一胺基酸在C末端處附接於樹脂的彼等胜肽,如下所示:NH2-Lys(Boc)-2-氯基-三苯甲基樹脂
NH2-Ala-2-氯基-三苯甲基樹脂
NH2-Arg(Pbf)-2-氯基-三苯甲基樹脂
在N末端處藉由Fmoc保護待合成胜肽之所有胺基
酸,及藉由可溶解於酸的Trt、Boc、t-Bu(t-butylester;第三丁酯)、Pbf(2,2,4,6,7-五甲基二氫-苯并呋喃-5-磺醯基)保護胺基酸殘基。實例包括以下:Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Gln(Trt)-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH、Fmoc-Met-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-Ahx-OH、Trt-巰基乙酸。
將HBTU[2-(1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基銨六氟磷酸鹽]/HOBt[N-羥基苯并三唑]/NMM[4-甲基嗎啉]用作偶合劑。使用20% DMF中的呱啶移除Fmoc。為了自殘基移除保護或為了自樹脂分離合成胜肽,使用分解混合液[TFA(trifluoroacetic acid:三氟乙酸)/TIS(triisopropylsilane;三異丙基矽烷)/EDT(ethanedithiol;乙二硫醇)/H2O=92.5/2.5/2.5/2.5]。
藉由使用固相支架及重複以下製程來執行胜肽合成:從胺基酸保護開始,各種胺基酸之單獨反應,用溶劑洗滌及脫保護。藉由使用組合至起始胺基酸之固相支架及胺基酸保護,使相應胺基酸單獨反應,用溶劑洗滌及脫保護及重複該等製程來合成各個胜肽。在自樹脂釋放後,所合成胜肽藉由HPLC純化、藉由質譜分析法確認,及凍乾,且藉由MS針對合成驗證,及隨後凍乾。
所製備胜肽之純度經高效能液相層析發現為95%或
更高。
基於具有序列編號1的PEP 1之合成製程描述特定胜肽合成製程,如下所示。
1)耦合將用NH2-Lys(Boc)-2-氯基-三苯甲基樹脂保護的胺基酸(8當量)及DMF中所融化的偶合劑HBTU(8當量)/HOBt(8當量)/NMM(16當量)混合在一起,並在室溫(RT)下培育2小時。在培育後,反應混合物經歷DMF、MeOH及DMF之相繼洗滌。
2)Fmoc脫保護20% DMF中的呱啶經添加及在RT下培育5分鐘,2次,隨後用DMF、MeOH及DMF相繼洗滌。
3)藉由重複上文所論及之反應1)及2)製作胜肽之基本構架NH2-E(OtBu)-A-R(Pbf)-P-A-L-L-T(tBu)-S(tBu)-R(Pbf)L-R(Pbf)-F-I-P-K(Boc)-2-氯基-三苯甲基樹脂。
4)分解:將分解混合液添加至完全合成胜肽,由此自樹脂分離所合成胜肽。
5)將預先冷卻之二乙醚添加至所獲得之混合物中,及隨後使用離心以沉澱所聚集之胜肽。
6)在藉由製備型HPLC純化後,藉由LC/MS確認分子量及經凍乾以粉末形式產生。
測試實例1、2及實例2:組合給藥
從胰臟癌患者(n=40)(測試實例2及實例2)及年齡
/性別匹配正常健康對照者(n=24)收集20-30ml之靜脈血。年齡與性別匹配健康對照者由英國Royal Surrey County Hospital的外科小手術診所募集。無受試者具有自體免疫性疾病病史或近期類固醇療法且無對照供體具有癌症之先前病史。向所有受試者提供由當地人力調查委員會批準的書面知情同意書。用組合吉西他濱及卡西他濱化學療法(GemCap)治療所有患者。將所有40位患者分成隊組2(測試實例2)及隊組3(實例2)之2個群組。用組合吉西他濱及卡西他濱治療隊組2(測試實例2),及同時用pep1胜肽及GM-CSF作為佐劑添加至組合吉西他濱及卡西他濱治療隊組3(實例2)。
-測試實例1(對照群組):24位正常健康對照者,施用組合吉西他濱-卡西他濱(GemCap)治療
-測試實例2(隊組2):19位胰臟癌患者,施用組合吉西他濱-卡西他濱(GemCap)治療
-實例2(隊組3):21位胰臟癌患者,施用組合吉西他濱-卡西他濱(GemCap)+pep1-GM-CSF治療
每週靜脈內給予1000mg/m2吉西他濱,每4週內給予三次並接著休息一週,以及按1660mg/m2/日(每次830mg/m2,每日兩次)口服施用卡西他濱3週,休息1週。發明人分析在最初兩個週期GemCap治療期間隊組2中所治療的19位患者之MDSC軌跡。發明人分析隊組3中接受與GemCap組合的pep1之21位患者之MDSC軌跡。主要pep1療程由以下組成:在第1週期間,於第1天、第3天、第5天,接著每週為間隔的第2週、第3週及第4週,隨後為第6週及隨
後為第10週皮內給藥0.56mg pep1。在相同部位處施用各pep1前的10-15分鐘,將GM-CSF用作佐劑,皮內給予75mg之劑量。
在施用GemCap前及施用GemCap後採集週邊血液樣本。對於單獨接受吉西他濱及卡西他濱的患者(隊組2),在治療7週後,在第六次吉西他濱輸液前抽取血液。為了與免疫監測時間點一致,在接受伴有pep 1的吉西他濱及卡西他濱之患者(隊組3)中,在治療10週後,第七次吉西他濱輸液1週後,即將進行第八次吉西他濱輸液前,抽取血液。
在隊組3中,在第14週對3位患者抽取血液及在第18週對2位患者抽取血液,此與輸送pep1一致。將血液引入肝素鋰試管(BD Biosciences,歐洲)或CPT試管中,以便裝運至英國Liverpool Cancer Trials Unit的生物標記儲存庫,計數PBMC,在-80℃冷凍,及在液態N2中儲存,用於後續分批分析。
細胞之免疫表現型分析
取得週邊血液單核細胞,並用杜貝卡氏A(Oxoid,UK)0.15M磷酸鹽緩衝鹽水洗滌。將細胞等分用於MDSC分析。使用LIVE/DEAD Cell Stain Kit(Invitrogen,英國)區分活細胞及死細胞。在用結合緩衝液(BD Biosciences,歐洲)洗滌後,使用以下抗人類單株抗體以便流式細胞計數:抗HLA-DR-APC-Cy7、抗Lin1(CD3,14,16,19,20,56)-FITC及抗CD11b-PECy7(BD Biosciences,歐洲)。在免疫染色後,用結合緩衝液洗滌細胞及使用具有MACSQuantify軟體的
MACSQuant流式細胞儀(Miltenyi Biotec)分析細胞。
延遲型過敏性(Delayed-type hypersensitivity;DTH)皮膚測試
在與接種疫苗部位對側的下腹部處皮內施用pep1(100μg)。在給藥48小時後,要求患者記錄DTH反應大小,並報告給臨床醫師。將陽性DTH反應定義為平均直徑5mm之紅斑及硬結。
活體外增殖檢定
在具有10%彙集人類血清(Innovative Research,美國)及20μg/ml pep1胜肽的X-VIVO 15(Lonza,英國)中以2×106細胞/孔於48孔盤(Thermo Fisher Scientific,美國)中種下經解凍之PBMC。在3天培養後,向培養基添加10單位/ml IL-2(Peprotech,英國)。在第11天,獲得pep1富集細胞及在圓底96孔盤中以1×105細胞/孔(50μl)裝入該等細胞。對於刺激前細胞,添加照射(45 Gy)自體PBMC(1×105細胞/孔,50μl)以充當抗原呈現細胞(antigen-presenting cells;APCs)。藉由添加100μl對照培養基、pep1(20μg/ml)或者陽性對照PHA(5μg/ml)來測試pep1特異性增殖。在進一步培育2天后,在計數前添加1μCi/孔之3H-胸苷經歷16小時。將對pep1的陽性增殖反應定義為1.8以上刺激指數(stimulation index;SI)並在四個複製中的每分鐘計數具有顯著差異。
細胞素分析
遵循製造商說明書,使用BioRad BioPlex Instrument,使用BioRad BioPlex 27 Pro Cytokine,Chemokine
and Growth Factor Assay(BioRad Laboratories,美國)檢定與PBMC同時收集的患者血清之細胞素水平。
腫瘤負荷評估
由對MDSC結果不知情的放射學者使用RECIST v1.1標準量測CT影像上的可評估病灶來執行腫瘤負荷化學療法前及化學療法後之獨立評估。使用腫瘤病灶之長軸量測及病理淋巴結之短軸量測之總和以毫米量測腫瘤負荷。
統計分析
使用具有Welch校正的不成對t測試比較胰臟癌患者與對照者中的Lin-DR-CD11b+細胞之中位數水平。用Spearman等級測試分析基線MDSC與細胞素之間的關聯性,及當在中位數MDSC水平處對分時,使用非參數Mann-Whitney測試辨識細胞素中的顯著差異。使用成對Wilcoxon測試比較化學療法前及化學療法後的細胞素水平。自治療後MDSC之值中減去治療前MDSC之值以給出MDSC之絕對變化,及藉由絕對變化除以治療前之值計算百分比變化。該等資料具有高度偏斜分佈,故在對數標度上圖形表示,但使用無母數法在原始標度上實施所有分析。使用Wilcoxon標記等級測試測試各個治療群組內的變化。就治療前值、治療後值、絕對變化及百分比變化而言,使用Wilcoxon雙樣本測試比較隊組2及隊組3。就絕對變化及百分比變化而言,使用Wilcoxon雙樣本測試比較具有疾病控制(PR、SD)與病況惡化(progressive disease;PD)的患者。對於趨勢連續性的敏感度分析包括:(1)僅包括SD患者之再分析以移除腫瘤大小改
變的影響,及(2)僅包括10週治療後時序的隊組3中患者之再分析。
結果
1.促炎性細胞素與MDSC之水平間的關係
如第1圖所示,在胰臟癌患者中,促炎性細胞素之水平與Lin-DR-CD11b+細胞之基線水平無關。
分析用吉西他濱及卡西他濱化學療法治療的40位晚期胰臟癌患者之冷凍保存的PBMC。其中21位患者接受使用端粒酶疫苗pep1的伴隨療法。該等患者的基線治療前值包括於治療前中位數之計算及促炎性細胞素之基線水平與MDSC水平之關聯內。在分析吉西他濱及卡西他濱對Lin-DR-CD11b+細胞之效果中,僅分析單獨接受吉西他濱及卡西他濱的19位患者中的接續樣本。此表現型係基於Kotsakis及同僚之研究用來標記MDSC。
與對照者(測試實例)(p<0.0001)相比較,胰臟癌患者(n=40)中的Lin-DR-CD11b+細胞顯著增加。患者中的Lin-DR-CD11b+細胞之中位數基線(表示為%之活PBMC)為1.85(間距0.62-8.45);24個對照者中的對應值為中位數0.82(間距0.16-2.2)。
對於具有完全細胞素資料的33位胰臟癌患者中的促炎性細胞素之基線水平與基線MDSC之間不存在關聯性(Spearman係數:IL-6=0.153,IL-1β=0.22,VEGF=-0.0389,TNFα=0.0587,MCP-1=-0.226)。當MDSC水平在中位數處對分時,具有高MDSC的患者與具有低MDSC的彼等患者相
比較,該等細胞素之基線水平不存在顯著差異(第1圖)。
2.僅施用GemCap之測試實例2(隊組2)之結果
由於測試實例2(隊組2)之GemCap療法,吉西他濱及卡西他濱療法未一致地減少Lin-DR-CD11b+細胞數目,對疾病控制之貢獻及癌症相關炎症之程度。更特定而言,如下所示。
在單獨接受化學療法的患者(測試實例2,隊組2)中,吉西他濱及卡西他濱療法導致19位患者中的8位之Lin-DR-CD11b+細胞下降。在病況惡化(PD)的7位患者中,5位患者之Lin-DR-CD11b+細胞水平上升及2位患者下降(間距-60至+662%)。在穩定疾病(stable disease;SD)的10位患者中,6位患者之Lin-DR-CD11b+細胞水平增加及4位患者下降(間距-68至+604%)。對pep1疫苗實現部分反應的兩類患者在Lin-DR-CD11b+百分比上皆下降。發明人已獲得精確腫瘤量測,及在具有穩定疾病的10位患者中的8位中,最長直徑之總和不存在顯著增加或減少。在Lin-DR-CD11b+百分比變化之相對貢獻作為腫瘤大小的任何顯著變化之直接結果將為最小的該等患者中,5位患者之Lin-DR-CD11b+百分比上升及3位患者下降。該等資料表明,在吉西他濱及卡西他濱化學療法本身後繼發的Lin-DR-CD11b+百分比不存在一致的減小。Lin-DR-CD11b+百分比變化具有追蹤腫瘤反應之趨勢。此很好地論證了在具有基線Lin-DR-CD11b+比中位數更大之患者中,MDSC下降的群組將最有可能具有最大免疫學益處(表3)。
在該等患者中,6位患者之Lin-DR-CD11b+百分比增加。該等患者中的3位具有行進性疾病作為對療法的最佳反應,及3位具有0%腫瘤體積變化。在Lin-DR-CD11b+百分比下降的3位患者中,1位患者獲得部分反應及另一位患者腫瘤體積減小11%。在該等患者中的僅3位中,在吉西他濱及卡西他濱療法後,Lin-DR-CD11b+百分比比基線中位數更小。當組合隊組2及隊組3時,MDSC中的絕對變化與反應(p=0.02)相關,其中在研究中具有PD的9位患者之水平平均增加(中位數=0.47)及具有疾病控制的31位患者之水平降低(中位數=-0.49)。
發明人接下來分析,追蹤癌症相關炎症程度之變化的MDSC水平之變化是否用作治療期間IL-6及其他炎性細胞素中的替代變化。表4中展示結果。
發明人假設,在具有腫瘤體積穩定性但MDSC百分比上升的患者中,存在持續腫瘤相關炎症,該炎症繼續推動MDSC生產。在吉西他濱及卡西他濱治療期間19位隊組2患者中的7位之IL-6水平上升;該等患者中的4位病況惡化。其他3位患者具有穩定疾病且在該等3位患者中,MDSC百分比增加。表3展示在具有穩定疾病的19位患者中的10位之化學療法期間相對於炎性細胞素之變化的MDSC百分比變化。在MDSC百分比下降的四位患者中,所有4位患者之IL-6下降,且在該等患者之一個中(患者8號),7週化學療法後IL-6水平自152.72pg/ml降至8.66pg/ml與MDSC百分比自2.54%降至1.59%關聯。在MDSC百分比增加之具有穩定疾病的六位患者中,3位患者之基線MDSC水平低於中位數及在化學療法後保持如此。在中位數以上基線MDSC水平於治療後繼續上升的兩位患者中,IL-6(患者1號及3號)存在顯著增加。患者3號之VEGF水平亦自37.59pg/ml增加至70.69pg/ml,該患者為病況未惡化但展示出此增加的唯一患者。
3.比較測試實例2(隊組2)與實例2(隊組3)之 間MDSC數目之變化
第2圖及表5所示結果為用GemCap治療19位胰臟患者的(隊組2)及用GemCap+pep1-GM-CSF治療21位胰臟患者的實例2(隊組3)。
發明人分析單獨接受GemCap的患者(隊組2)與和接受GemCap與具有低劑量GM-CSF作為佐劑的pep1接種疫苗的患者(隊組3)中的MDSC之變化軌跡,及比較該兩者。表5展示隊組2與隊組3之治療前及治療後的MDSC值之匯總統計,及在第1圖中在對數標度上圖形繪製該等值。隊組3的治療前MDSC值比隊組2更高(p=0.08)。在隊組3中,MDSC自此較高水平顯著減少(絕對變化與百分比變化分別為p=0.007及p=0.006),而在隊組2中不存在顯著變化(絕對變化與百分比變化分別為p=0.60及p=0.62)。此給出
治療後並未顯著不同的隊組2及隊組3的值(p>0.99)。就MDSC變化而言,隊組2與隊組3之間的此差異行為在統計上具有顯著邊界(絕對變化與百分比變化分別為p=0.04及p=0.06)。展示隊組2與隊組3之間所觀察之差異趨勢的敏感度分析對於SD子群組及10週子群組的治療後評估保持一致。
發明人分析了在接受伴隨吉西他濱及卡西他濱及pep1的21位隊組3患者中對pep1免疫反應之發展(對pep1的陽性增殖檢定及/或陽性DTH之發展)。此隊中的九位患者發展出免疫反應。在該等9位患者中的8位中,化學免疫療法期間的MDSC百分比下降。9位中的6位具有比患者中位數更大的基線LinDR-CD11b+百分比,及在所有該等患者中,MDSC水平下降(補充表1)。在抽取血液用於增殖反應之分析時,所有免疫反應者具有放射性疾病控制(PR或SD),此時間與該等患者中的接續的MDSC檢定之時序一致。
用pep1單獨處理之效果實例
藉由使用自新鮮間皮瘤組織採集的顆粒狀及單核細胞MDSC進行顯微鏡間皮瘤抑制檢定。當針對間皮瘤治療時,此檢定亦使用培美曲塞(pemetrexed),誘發活化腫瘤細胞中的STAT3之衰老相關分泌表現型。經由此舉,此檢定已辨識出pep 1自腫瘤細胞釋放細胞素、分化骨髓細胞及抑制MDSC活化之效果。
1.測試實例3-4及實例3-4:用pep1單獨處理樹突狀細胞(dendritic cell;DC)成熟之效果
藉由使用健康供體的PBMC之附著單核細胞執行
DC成熟實驗。進行5天培養。條件如下。
測試實例3:MoDCs+GM-CSF/IL4
實例3:MoDCs+GM-CSF/IL4+pep1
測試實例4:MoDCs+GM-CSF/IL4+培美曲塞
實例4:MoDCs+GM-CSF/IL4+pep1/培美曲塞
*MoDCs:單核細胞衍生樹突狀細胞
用LPS(脂多糖;Lipopolysaccharides)處理所有樣本1夜或不處理。測試所培養樣本如下。
DC成熟標記物;活體外DC之T細胞刺激功能;及在CD3/CD28T細胞增殖之抑制能力。
亦分析精胺酸酶、Inos、Ros、Stat3及Stat6。
2.測試實例5-6及實例5-6:具有或不具有腫瘤衍生因子的pep1之效果及DC之成熟
將間皮瘤細胞裝入25個燒瓶中,及用如下樣本以40%-50%匯流處理該等細胞。
測試實例5:間皮瘤細胞株(Mesothelioma cell line;MCL)
實例5:間皮瘤細胞株+pep1(MCLG)
測試實例6:間皮瘤細胞株+培美曲塞(MCLP)
實例6:間皮瘤細胞株+pep1/培美曲塞(MCLGP)
在處理中,在處理24小時後,清除已使用的培養基及由新培養基替換。在36小時後,收集及儲存培養上清液。隨後,使用未用pep1處理的測試實例及用pep1作為培養基處理的實例,進行5天培養。
對照者:MoDCs+GMCSF/IL4
測試實例7:MoDCs+GMCSF/IL4+MLC
實例7:MoDCs+GMCSF/IL4+MCLG
測試實例8:MoDCs+GMCSF/IL4+MLCP
實例8:MoDCs+GMCSF/IL4+MLCGP
用LPS(脂多糖)處理所有樣本1夜或不處理。測試所培養樣本如下。
DC成熟標記物;活體外DC之T細胞刺激功能;及在CD3/CD28處T細胞增殖之抑制能力。
亦分析精胺酸酶、Inos、Ros、Stat3及Stat6。
3.活化之pep1對於抑制MDSC之效果
用pep1(亦+培美曲塞)處理來自患者的純化MDSC一夜,及在洗滌後用於MLR(混合淋巴細胞反應;Mixed lymphocyte reaction)以便抑制檢定。另一方面,在MLR期間進行處理及添加至T細胞處理作為對照者。
<110> 韓商.凱爾傑姆維克斯有限公司 金商在
<120> 用於抑制骨髓衍生抑制細胞之組成物
<130> OF14P079/TW
<160> 2
<170> PatentIn版本3.2
<210> 1
<211> 16
<212> PRT
<213> 智人
<400> 1
<210> 2
<211> 1132
<212> PRT
<213> 智人
<400> 2
Claims (31)
- 一種抑制骨髓衍生抑制細胞(MDSC)之組成物,該組成物包含:包含序列編號1的一胺基酸序列的一胜肽、具有與該胺基酸序列80%或以上之序列同源性的一胜肽或上述的一片段的一胜肽,該組成物以一有效量之該胜肽抑制MDSC。
- 如請求項1所述之抑制MDSC的組成物,其中該組成物用於向需要抑制MDSC的一受試者施用。
- 如請求項1所述之抑制MDSC的組成物,其中該等骨髓衍生抑制細胞於具有一腫瘤的該受試者體內。
- 如請求項3所述之抑制MDSC的組成物,其中該腫瘤選自由腎細胞癌(RCC)、大腸直腸癌(CRC)、胃癌(GC)、黑色素瘤、肺癌、血癌、前列腺癌、腺癌及胰臟癌所組成之群組。
- 如請求項1所述之抑制MDSC的組成物,其中該組成物與抗癌藥物組合而向受試者施用。
- 如請求項5所述之抑制MDSC的組成物,其中該抗癌藥物是一化學療法藥物,及其中該化學療法藥物是脫氧核苷類似物及氟基嘧啶中的一或更多者。
- 如請求項6所述之抑制MDSC的組成物,其中該氟基嘧啶是5-氟脲嘧啶或卡西他濱。
- 如請求項5所述之抑制MDSC的組成物,其中該組成物與一佐劑向受試者施用。
- 如請求項8所述之抑制MDSC的組成物,其中該佐劑是細胞素佐劑。
- 如請求項9所述之抑制MDSC的組成物,其中該細胞素佐劑是顆粒性細胞-巨噬細胞群落刺激因子(GM-CSF)。
- 如請求項1至9中任一項所述之抑制MDSC的組成物,其中該MDSC具有Lin-DR-CD11b+表現型。
- 一種抑制MDSC的套組,該套組包含如請求項1至10中任一項所述之組成物及一說明書。
- 如請求項12所述之抑制MDSC的套組,其中該套組進一步包含一抗癌藥物。
- 如請求項13所述之抑制MDSC的套組,其中該抗癌藥物是一化學療法藥物,及其中該化學療法藥物是脫氧核苷類似物及氟基嘧啶中的一或更多者。
- 如請求項14所述之抑制MDSC的套組,其中該脫氧核苷類似物是吉西他濱,及其中該氟基嘧啶是5-氟脲嘧啶或卡西他濱。
- 如請求項12所述之抑制MDSC的套組,其中該套組進一步包含一佐劑。
- 如請求項16所述之抑制MDSC的套組,其中該佐劑為細胞素佐劑。
- 如請求項17所述之抑制MDSC的套組,其中該佐劑是顆粒性細胞-巨噬細胞群落刺激因子(GM-CSF)。
- 如請求項12所述之抑制MDSC的套組,其中該說明書包含資訊,該資訊包括與該抗癌藥物及該佐劑組合的抑制MDSC的該組成物之一給藥法。
- 如請求項12所述之抑制MDSC的套組,其中該套組藉由抑制MDSC來預防、緩解或治療與MDSC相關的疾病或症狀。
- 如請求項12所述之抑制MDSC的套組,其中該套組藉由抑制MDSC用以預防、緩解或治療癌症。
- 如請求項21所述之抑制MDSC的套組,其中該癌症選自由腎細胞癌(RCC)、大腸直腸癌(CRC)、胃癌(GC)、黑色素瘤、肺癌、血癌、前列腺癌、腺癌及胰臟癌所組成之群組。
- 一種抑制骨髓衍生抑制細胞(MDSC)之方法,該方法包含以下步驟:施用包含序列編號1的一胺基酸序列的一胜肽、具有與該胺基酸序列80%或以上之序列同源性的一胜肽或上述的一片段的一胜肽,其中該胜肽具有抑制MDSC的有效量。
- 一種抑制MDSC之組成物,該組成物包含:包含序列編號1的一胺基酸序列的一胜肽、具有與該胺基酸序列80%或以上之序列同源性的一胜肽或上述的一片段的一胜肽;以及一佐劑。
- 一種抗癌之組成物,該組成物包含:包含序列編號1的一胺基酸序列的一胜肽、具有與該胺基酸序列80%或以上之序列同源性的一胜肽或係上述的一片段的一胜肽;一抗癌藥物;以及一佐劑。
- 一種癌症疫苗之組成物,該組成物包含:包含序列編號1的一胺基酸序列的一胜肽、具有與該胺基酸序列80%或以上之序列同源性的一胜肽或係上述的一片段的一胜肽;一抗癌藥物;以及一佐劑。
- 如請求項24至26中任一項所述之組成物,其中該抗癌藥物是一化學療法藥物,其中該化學療法藥物是脫氧核苷類似物及氟基嘧啶中的一或更多者,以及其中該佐劑是一細胞素佐劑。
- 如請求項27所述之組成物,其中該胜肽包含序列編號1之胺基酸序列,其中該脫氧核苷類似物是吉西他濱,其中該氟基嘧啶是5-氟脲嘧啶或卡西他濱,以及其中該佐劑是GM-CSF。
- 一種抗癌之套組,該套組包含一組成物,該組成物包含:包含序列編號1的一胺基酸序列的一胜肽、具有與該胺基酸序列80%或以上之序列同源性的一胜肽或係上述的一片段的一胜肽;一抗癌藥物;以及一說明書。
- 一種預防、緩解或治療癌症之方法,該方法包含以下步驟:向需要預防、緩解或治療癌症的一受試者施用與一抗癌藥物及/或一佐劑組合的一有效量之胜肽,該胜肽包含序列編號1的一胺基酸序列的一胜肽、具有與該胺基酸序列80%或以上之序列同源性的一胜肽或係上述的一片段的一胜肽。
- 一種胜肽之用途,該胜肽用於製造抑制骨髓衍生抑制細胞(MDSC)之一組成物的,該組成物包含:包含序列編號1的 一胺基酸序列的一胜肽、具有與該胺基酸序列80%或以上之序列同源性的一胜肽或係上述的一片段的一胜肽。
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