TW201442705A

TW201442705A - 包含蘿蔔硫素之組成物或包含一種蘿蔔硫素前驅物及一種植物固醇或植物固烷醇之組成物

Info

Publication number: TW201442705A
Application number: TW103109974A
Authority: TW
Inventors: Brian Cornblatt; Chia-Ping Charles Hsu; Anton Bzhelyansky; Robert Henderson
Original assignee: Nutramax Lab Inc
Priority date: 2013-03-15
Filing date: 2014-03-17
Publication date: 2014-11-16
Also published as: CA2904865A1; WO2014168736A9; AU2014251259A1; EP2968990A1; JP2016514701A; US20160030530A1; WO2014168736A1; EP2968990A4

Abstract

本發明係關於一種蘿蔔硫素前驅物、一種能夠將該蘿蔔硫素前驅物轉化成蘿蔔硫素之酵素、一種酵素增強劑，以及一種植物固醇及/或植物固烷醇或其酯類之組合。本發明亦與一種蘿蔔硫素或其衍生物與一種植物固醇及/或植物固烷醇或其酯類之組合有關。本發明亦與一種青花菜萃取物或粉末與一種植物固醇及/或植物固烷醇或其酯類之組合有關。本發明提供與該些組合有關之組成物及方法。

Description

包含蘿蔔硫素之組成物或包含一種蘿蔔硫素前驅物及一種植物固醇或植物固烷醇之組成物

本申請案主張2013年3月15日提出之美國臨時專利申請案第61/794,417號之優先權，該臨時專利申請案全部內容茲以此參照方式納入本說明書。

本發明係關於一種蘿蔔硫素前驅物、一種能夠將該蘿蔔硫素前驅物轉化成蘿蔔硫素之酵素、一種酵素增強劑(enzyme potentiator)，以及一種植物固醇及/或植物固烷醇或其酯類之組合。本發明亦與一種蘿蔔硫素或其衍生物與一種植物固醇及/或植物固烷醇或其酯類之組合有關。本發明亦與一種青花菜萃取物或粉末與一種植物固醇及/或植物固烷醇或其酯類之組合有關。本發明提供與該些組合有關之組成物及方法。

結締組織是連接關節中軟骨、骨骼、滑膜、韌帶、半月板及肌腱之結構構架組織(structural framework)。結締組織之組分係由居留細胞(resident cells)生成然後分泌，以形成結締組織之細胞外基質(extracellular matrix,ECM)特徵。ECM除作為結構構架組織外，也在細胞之通訊及功能中起到關鍵作用。在關節軟骨中，軟骨細胞在第二型膠原蛋白ECM構架組織內部排列成一獨特模式。骨骼形成之成骨細胞及骨細胞，還有骨骼再吸收之破骨細胞，皆在礦化的第一型膠原蛋白ECM中進行組織。滑膜中的少數類纖維母細胞(fibroblast-like cells)及類巨噬細胞(macrophage-like cells)也是由ECM保持在適當的位置。同樣地，肌腱細胞及韌帶細胞係在ECM內部裝配在一起。結締組織ECM之合成及分解係受調節分子之網絡所控制，這些調節分子也是由居留組織細胞所產生。該網絡包括生長因子，以及被稱為促發炎介質(pro-inflammatory mediators)之各種分子。它們包括細胞因子、趨化因子、前列腺素及一氧化氮。這些分子顯示出許多生物活性。它們可以誘導細胞增殖或細胞死亡。這些物質還可以誘導ECM生成之合成代謝路徑，或誘導可將ECM分解之分解代謝酵素。在生理條件下，細胞之存活或死亡，結締組織ECM之生成或分解係受到嚴格控制以維持平衡之體內穩態(homeostasis)。調節分子之生成及功能受到許多因素調節，包括機械力、諸如溫度及pH值等物理因子、化學物、微生物及其產物。在一定條件下，這些因素可引發過多及不適時之調節分子生成，而導致不可彌補的組織損傷、功能喪失及死亡。

組織經由發炎反應對機械性、物理性、化學性之損傷及感染起反應。發炎過程已知會導向康復、治愈、對感染之防禦，而且發炎過程通常是保命的。人及動物的發炎反應由兩個階段構成。初期階段之特徵為促發炎介質(例如前列腺素及白三烯)之局部合成(local synthesis)。這些促發炎介質係由花生四烯酸(arachidonic acid)通過環氧酵素 (cyclooxygenases)及脂氧酵素(lipoxygenases)之作用而衍生。這些促發炎介質增加局部血流量及提高內皮細胞之通透性，以允許白血球加入及積累。後續生成的其他促發炎介質包括細胞因子(IL-1 β、TNF-α)、趨化因子(IL-8)，以及一氧化氮。在第二階段，即消退階段，於初期階段期間所產生之前列腺素活化了酵素路徑，沿著該路徑，花生四烯酸轉化為具有抗發炎特性之化學介質。已有報告表示，前列腺素E₂(PGE₂)可活化15-脂氧酵素之表現，15-脂氧酵素係從花生四烯酸產生抗發炎之脂氧素(lipoxins)。因此，發炎之消退係受到促發炎反應驅動。研究已揭露，發炎過程的起始、進展及終止係受到嚴格控制。長時間、超常的發炎已被認為與許多疾病有關聯，這些疾病包括骨關節炎(OA)、類風濕性關節炎(RA)、阿茲海默症、心血管疾病，甚至癌症。

在關節組織中，軟骨細胞、滑膜細胞、成骨細胞、破骨細胞、韌帶細胞、及肌腱細胞會生成各種促發炎介質。其中一種是前列腺素E2(PGE2)，其已知會經由誘導其他介質生成而發揮調節作用，這些介質包括細胞因子、一氧化氮，以及分解結締組織之基質金屬蛋白酵素(matrix metalloproteinase,MMP)。由於PGE2具有誘導MMP之能力，因而有助於軟骨ECM之分解。此外，PGE2會促進骨吸收及骨贅形成。PGE2會敏化(sensitize)周邊神經末梢上的傷害感受器，從而促成發炎性疼痛的發展。PGE2之水平係由可誘導性第二型環氧酵素(cyclooxygenase-2,COX-2)加以局部調節，COX-2是軟骨細胞中的一種一氧化氮合成酵素，其可抑制軟骨及蛋白多醣(proteoglycan)之分解。在諸如骨關節炎之病理條件下，COX-2表現之上調與PGE2生成量之增加係相伴發生。

其他組織在發炎過程中的作用也已充分確立。現已承認的是，滑膜發炎在骨關節炎之軟骨分解中發揮了關鍵作用，特別是在疾病早期。滑膜炎之特徵為，滑膜中居留之類巨噬細胞及類纖維細母胞之活化，導致過量促發炎介質之生成，這些促發炎介質包括TNF-α、IL-1 β及PGE2。最近的證據認為，在骨關節炎最早期，滑膜巨噬細胞為細胞因子之主要來源，而且，在骨關節炎整個病程中，滑膜巨噬細胞是軟骨損傷的重要促成者。細胞因子也誘導了PGE2及活性MMP的生成。現在普遍接受的是，這些介質控制了ECM破壞與修復間之平衡，這使得這些分子成為治療性干預的優先標靶。關節中的其他組織，例如軟骨下骨，也會生成可調節關節健康的促發炎介質。

除了諸如細胞因子及前列腺素等促發炎介質外在骨關節炎中觀察到的關節退化也涉及活性氧物質(reactive oxygen species,ROS)。由諸如一氧化氮及過氧化氫等ROS所誘導之氧化壓力(oxidative stress)已顯示出會造成軟骨細胞凋亡及軟骨ECM分解。此外，已有報告表示ROS會活化信號轉導(signal transduction)路徑，而此等路徑會導致包含細胞因子及前列腺素在內之促發炎介質之生成量增加。體外研究已表明，生成ROS所涉路徑與促發炎介質兩者間之關聯。這些研究所支持的概念為，能夠同時抑制氧化壓力及發炎路徑之作用劑(agent)對發炎之調節將特別有用。

COX-2及PGE2在骨關節炎病理生理學中的核心作用，從特定之COX-2抑制劑及非特定之各種不同非類固醇消炎藥物(NSAID)在該病症治療中之廣泛使用可見一斑。然而，長期給予服用這些藥物有不良副作用，包括胃腸病變及破壞軟骨蛋白多醣之代謝。在人及動物模型中的研究已表明，COX抑制劑的使用，會受損骨骼之癒合及修復。因此，需要有管理發炎之替代療法，這些方法不以使用NSAID為主來抑制PGE2及其他促發炎介質之生成。

天然物的使用在人類及寵物間越來越廣泛。許多天然物可作為有用之化學保護劑，而且，許多天然物對於心血管健康及/或關節健康，尤其是發炎的管理，十分有用。已有某些天然物與膳食補充品、營養品及醫療用食品結合。

為預防或減少影響人類及家養動物之許多疾病發生，透過使用天然物以提供化學保護(chemoprotection)正逐漸成為一種安全、有效、價廉、容易取得且實用的方式。目前已知，可在分子等級對細胞造成損害的致癌物，經常以無毒前驅物的形式被攝取及吸入。這些無毒前驅物之後在體內會轉化成致癌物質。化學保護劑，例如可活化去毒酵素或其輔助因子的天然物質，可抵消致癌物之作用及允許致癌物之清除。這些天然物質亦可增強其他現有的自然防禦機制，例如免疫系統。

某些天然物具有抗氧化活性。在老化、神經退化性疾病之進程，以及諸如局部缺血之生理創傷中，氧化壓力(oxidative stress)扮演了重要角色。抗氧化劑可減少或抑制重要維生生物分子的氧化，亦可能在治療、預防，或減少癌症、冠狀動脈心臟病、中風及神經退化性疾病的發生等方面發揮其作用。阿茲海默症、失智症及中風，為氧化壓力相關疾病之例子。

蘿蔔硫素(sulforaphane)是被認為具化學保護及抗氧化特性的天然物之一實例。蘿蔔硫素是一種有機硫化合物，又稱 1-isothiocyanato-4-methylsulfinylbutane。蘿蔔硫素前驅物，即蘿蔔苷(glucoraphanin)，可從十字花科蔬菜中獲得，例如，青花菜、抱子甘藍及甘藍。但要獲得產生化學保護所需的水平，必須食用非常大量的蔬菜。蘿蔔苷係由稱作芥子酵素(myrosinase)的一種硫代葡萄糖苷酵素(thioglucosidase enzyme)轉化成蘿蔔硫素，該轉化發生於各種外因性來源(例如十字花科蔬菜)及內因性之腸道菌相中。然而，不是所有動物都能在攝取蘿蔔苷後將其轉化成蘿蔔硫素，原因很可能是微生物相及整體健康的變化。此外，在諸如胃等酸性環境中，蘿蔔苷可能被轉化成惰性代謝物。活性代謝物蘿蔔硫素能夠誘導核轉錄因子nuclear erythroid-2-related factor(Nrf2),Nrf2會轉而上調第二階段去毒酵素(Phase II detoxification enzymes)及細胞保護酵素(cytoprotective enzymes)之生成，例如麩胺基硫轉移酵素(glutathione S-transferases)、氧化還原酵素NAD(P)H：quinine oxidoreductase(NQO1)，以及第一型血基質氧化酵素(heme-oxygenase-1,HO-1)。蘿蔔硫素已被認為可誘導這些酵素產生而不會顯著改變細胞色素P-450酵素的合成。第二階段酵素的上調被認為在各種生物活性中均發揮了作用，包括保護腦部不受細胞毒性影響、保護肝臟不受脂肪蓄積之毒性作用影響，以及其他各種組織之去毒。

蘿蔔硫素及其前驅物蘿蔔苷已受到廣泛研究。Shapiro等人(Nutrition and Cancer,(2006),Vol.55(1),pp.53-62)討論了一項第一階段臨床試驗，該試驗係測定青花菜芽之硫代葡萄糖苷(glucosinolates)及異硫氰酸酯(isothiocyanates)之安全性、耐受性及代謝。Shapiro等人討論以含有硫代葡萄糖苷(例如蘿蔔苷)或異硫氰酸酯(例如蘿蔔硫素)之青花菜芽萃取物，對健康人類對象所進行的一項有安慰劑控制組、雙盲、隨機之臨床試驗。該試驗發現，給對象服用這些物質並不會導致系統的、有臨床顯著性之不良反應。

植物固醇及植物固烷醇為多種化合物所構成之群組，這些化合物通常存在於植物中。植物固醇及植物固烷醇在結構上類似於膽固醇，但其側鏈結構與膽固醇相異。植物固醇及植物固烷醇兩者之組成通常為，一類固醇骨架(steroid skeleton)帶有附接至A環之C-3原子之一羥基，以及附接至D環之C-17原子之一脂族側鏈。植物固醇具有一雙鍵，其通常介於類固醇部分(moiety)之C-5與C-6原子之間。在植物固烷醇中，該雙鍵為飽和鍵。

植物固醇及植物固烷醇已知具有益於健康之效果。舉例而言，植物固醇及植物固烷醇已被認為對於降低血清膽固醇之水平有效，尤其是總膽固醇及LDL膽固醇之水平。儘管降低膽固醇效果相關作用之機制仍無法完全明白，但植物固醇及植物固烷醇被認為對於減少從消化道吸收膽固醇是有效的。

再者，植物固醇及植物固烷醇已知具有益於免疫調節之特性。Bouic等人(“Plant Sterols and Sterolins：A Review of Their Immune-Modulating Properties,”Alternative Medicine Review,1999,Vol.4(3),pp.170-177)討論了一項研究，該研究係評估β-植固醇(beta-sitosterol,BSS)及其配糖體(beta-sitosterol glycoside,BSSG)之保護效果。詳細而言，該研究顯示BSS與BSSG之混合物表現出抗發炎、抗發熱及免疫調節之活性，這可能是透過該混合物具有之標定特定T輔助淋巴細胞(T_H1及T_H2 細胞)之活性，以協助該些細胞之功能正常化，從而改進T淋巴細胞及自然殺手細胞之活性。BSS及BSSG亦被認為對過度活化之抗體反應具有減弱效果(dampening effect)，並可使DHEA與皮質醇之比率正常化，以及降低介白素-6(IL-6)血清水平。Gabay等人(“Stigmasterol：a phytosterol with potential anti-osteoarthritic properties,”Osteoarthritis and Cartilage,2010,Vol.18,pp.106-116)討論了一項研究，該研究係探討豆固醇(stigmasterol)對軟骨細胞所生成之發炎介質及金屬蛋白酵素之效果。該研究顯示，在骨關節炎誘發之軟骨退化中，豆固醇會透過至少部分抵消IL-1 β所誘導之NF-κ B路徑，而抑制此等退化通常涉及之若干種促發炎介質及基質分解介質，例如MMP-3、MMP-13、ADAMTS-4，以及PGE₂。

目前已有超過200種之植物固醇及相關化合物被識別出來。植物固醇及植物固烷醇之示例包括，但不限於：植固醇(3β-stigmast-5-en-3-ol,CAS編號83-46-5)、植固烷醇(3β,5α-stigmastan-3-ol,CAS編號83-45-4)、菜油固醇(3β-ergost-5-en-3-ol,CAS編號474-62-4)、菜油固烷醇(3β,5α-ergostan-3-ol,CAS編號474-60-2)、豆固醇(3β-stigmasta-5,22,-dien-3-ol,CAS編號83-48-7)，以及菜籽脂醇(3β-ergosta-5,22,-dien-3-ol,CAS編號474-67-9)。

用於商業產品中時，植物固醇通常分離自植物油，例如大豆油、油菜籽(芥花籽)油、紅花籽油、棉籽油、葵花油或玉米油，或分離自「妥爾油(tall oil)」，其為木漿製作之副產品。接著，植物固醇通常會經過氫化以獲得植物固烷醇。自由的植物固醇及植物固烷醇通常為高熔點粉末，其不溶於水，在油中相對可溶，且可溶於醇類。植物固醇及植物固烷醇皆可以諸如植物油來源之脂肪酸加以酯化，所產生之酯類為液態或半液態物質。植物固醇酯及植物固烷醇酯一般被認為具有可與食用油脂相較之化學及物理特性，因此，補充含植物固醇酯及植物固烷醇酯之各種加工食品是可行的。植物固醇、植物固烷醇、其酯類，以及製作該些酯類之方法，係說明於美國專利第5,892,068號；美國專利第7,771,771號；美國專利申請案公開2003/0104035號；美國專利第8,338,564號，以及Cantrill等人之文章(Phytosterols,Phytostanols and their Esters(CTA)2008)，前揭各參考資料之全部內容茲以此參照方式納入本說明書。

其他成分亦被認為具有對關節健康及發炎有益之某些效果。葡萄糖胺為一種胺基糖(aminosugar)之實例，其係在身體內由葡萄糖自然形成。當其係以外因方式(exogenously)供應時，葡萄糖胺會刺激結締組織細胞合成，增加正常細胞外基質(extracellular matrix)之量。在軟骨及其他結締組織中，葡萄糖胺也是葡萄胺聚醣(glycosaminoglycans,GAGs)的結構單元，因此，供應額外之葡萄糖胺，可為身體供給額外原料供結締組織中基質合成之用。胺基糖類可為天然的、合成的，或以半合成方式獲得。葡萄糖胺之鹽類包含，但不限於，葡萄糖胺鹽酸鹽(glucosamine hydrochloride)及葡萄糖胺硫酸鹽(glucosamine sulfate)、葡萄糖胺磷酸鹽(glucosamine phosphate)。甘露胺糖(Mannosamine)及N-乙醯葡萄糖胺(N-acetylglucosamine)為胺基糖類之其他示例。胺基糖類可經由，舉例而言，酯化作用、硫酸鹽化作用、乙酰化作用及甲基化作用，進行化學改質。

軟骨素(chondroitin)為葡萄胺聚醣(GAG)之一實例。軟骨素硫酸鹽(Chondroitin sulfate)是關節軟骨中最豐富的葡萄胺聚醣，軟骨素硫酸鹽亦存在於體內許多其他結締組織中。此外，軟骨素硫酸鹽可競相抑制在不正常、過度發炎狀況下分解結締組織之分解酵素。軟骨素硫酸鹽為一種聚合物，其由葡萄醣醛酸(glucuronic acid)及硫酸鹽化軟骨胺(sulfated galactosamine)之重複單元組成[Lester M.Morrison,M.D.and O.Arne Schjeide,Ph.D.,Coronary Heart Disease and the Mucopolysaccharides(Glycosaminoglycans)12(1974)；Philip C.Champe and Richard A.Harvey,Lippincott's Illustrated Reviews：Biochemistry,148-50(2^nd ed.1994)]。

鱷梨/大豆之不皂化物(ASU)已被用於治療骨關節炎及其他形式之關節炎[Thiers,M.H.,“Unsaponifiable constituents of avocado and soya oils.Treatment of certain forms of arthralgia,”J.Med.Lyon 53(222)：195-8(February 1972)(該文章為法文)]，還有軟組織之發炎症狀[Trevoux,R.,“Unsaponifiable fractions of the avocado and soybean in gynecology,”J.Bynecol.Obstet.Biol.Reprod.6(1)：99-105(January 1977)(article in French)；Lamaud,M.E.,et al.,“Biochemical modifications of connective tissue induced by the non-saponifiables of avocado and soy-bean oils administered percutaneously in the‘hairless’rat,”Pathol.Biol.26(5)：269-74(May-June 1978)(該文章為法文)]。此一化合物之作用機制為刺激轉型生長因子(TGF)beta 1、TGF beta 2，以及第一型胞漿素原活化抑制劑(plasminogen activator inhibitor 1,PAI-1)之軟骨細胞表現。經由增加PAI-1,ASU會阻斷導致金屬蛋白酵素活化之串聯(cascade)[Boumediene K.,et al.,“Avocado/soya unsaponifiables enhance the expression of transforming growth factor beta 1 and beta 2 in cultured articular chondrocytes,”Arthritis Rheum.42(1)：148-56(January 1999)]。ASU混合物也被認為可減少由軟骨細胞自發生成之基質溶解素(stromelysins)、IL-6、IL-8及PGE2。此外，ASU可降低IL-1之影響，從而減少軟骨細胞及滑膜細胞生成膠原蛋白酵素。[Henrotin,Y.E.,et al.,“Effects of three avocado/soybean unsaponifiable mixtures on metalloproteinases,cytokines and prostaglandin E2 production by human articular chondrocytes,”Clin.Rheumatol.17(1)：31-9(1998)]。

齒葉乳香(Boswellia serrata，一種傳統阿育吠陀藥物)之樹膠脂含有兩種乳香酸：11-酮基-β-乳香酸(11-keto-β-boswellic acid,KBA)及乙醯基-11-酮基-b-乳香酸(acetyl-11-keto-b-boswellic acid,AKBA)。Abdel-Tawab等人之報告中提到，b-乳香酸可抑制發炎相關酵素第一型微粒體前列腺素E合成酵素(microsomal prostaglandin E synthase-1)及絲胺酸組織蛋白酵素細胞自溶酵素G(serine protease cathepsin G)，從而顯示這些乳香酸具有抗發炎特性，十分適合作為關節健康營養品之成分[Clin Pharmacokinet 2011；50(6)：349-369]。

綠茶含有多種兒茶素之混合物，包含表兒茶素(epicatechin,EC)、表沒食子兒茶素(epigallocatechin,EGC)、表兒茶素沒食子酸酯(epicatechin gallate,ECG),以及表沒食子酸沒食子酸酯(epigallocatechin gallate,EGCG)。這些兒茶素具有效力很大的抗氧化活性，可作為細胞受損所涉自由基(ROS及RNS)之清除劑。這些兒茶素亦可經由將催化ROS(1)生成之金屬加以螯合而起作用。此一抗氧化活性可阻撓造成骨關節炎之作用劑(例如纖維網狀蛋白片段(fibronectin fragments,Fn-f)及細胞因子)之破壞性影響。抗氧化劑可阻斷Fn-f之影響，這些影響包括細胞因子IL-1及TNF-a(2,3)兩者之表現及活性增加。此外，最近研究已顯示，綠茶多酚可顯著減少小鼠身上因膠原蛋白而誘導之關節炎之發生率，此被認為與TNF-a及COX-2(後者為受TNF-a調節之一種酵素，其可催化PGE2(4)之生成)之表現降低有關聯。其他研究也已顯示，綠茶之EGCG可抑制受IL-1誘導之一氧化氮合成酵素之表現及一氧化氮之生成，並可抑制核轉錄因子-kB(nuclear factor-kB)之活化，此種活化為起始細胞因子影響(5)之一關鍵步驟。此外，綠茶之兒茶素近來已顯示出可有效抑制聚蛋白多糖酶(aggrecanase)之活性，此等活性已知涉及軟骨蛋白多醣(6)破壞之早期階段。綠茶之成分具有透過多重機制改善骨關節炎原因及症狀之潛力。綠茶可以一種萃取物之方式或被標準化處理成多酚或兒茶素而給予服用。

甲基硫醯基甲烷(Methylsulfonylmethane,MSM)，亦稱DMSO₂、二甲基碸及二甲碸，為一種有機硫化合物。MSM被認為可提供硫，這些硫有被蛋白質利用而形成雙硫鍵(disulfide bonds)之潛在性。GAG透過這些雙硫鍵用硫交聯在一起。這些雙硫鍵可降低GAG鏈之構造靈活性(conformational flexibility)，從而使軟骨結實及富有彈性。

玻尿酸(HA)為一種高分子量多醣(polysaccharide)，分佈在所有身體組織及體液中，也是關節軟骨之細胞外基質之一種組成分。在滑液之關節機構中，HA之黏彈特性(viscoelastic properties)發揮了不可或缺的功能。當HA與聚集蛋白聚糖(aggrecan)結合，會有帶負電荷之大型聚集體形成而吸引水分子，以幫助緩衝關節。外源性HA具有抗發炎、合成代謝、鎮痛及軟骨保護之效果[Sports Health.Mar 2013；5(2)：153-159]。

硫辛酸(LA)，亦稱為1,2-二硫戊環-3-戊酸(1,2 dithiolane-3-pentanoic acid)、1,2-二硫戊環-3-纈草酸(1,2-dithiolane-3-valeric acid)或6,8-硫辛酸(6,8-thioctic acid)，是一種有效、天然存在之低分子量抗氧化劑。硫辛酸在線粒體中由辛酸經酵素催化合成。硫辛酸是線粒體脫羧反應之關鍵輔助因子，並且對於生成足够之ATP不可或缺。硫辛酸以鏡像異構物(enantiomeric)形式存在：R-硫辛酸(R-LA)及S-硫辛酸(S-LA)。在生物系統中，僅R-LA會共軛連接至醯胺鍵之賴氨酸殘基。氧化(LA)及還原(DHLA)形式代表有效的氧化還原對(redox couple)。LA的生物效應包括清除活性氧物質、再生諸如麩胺基硫及維生素E等內源性抗氧化劑、螯合金屬離子，以及修復巨分子中的氧化損傷。LA及DHLA都能夠清除活性氧物質(ROS)及活性氮物質(RNS)，並具有防止蛋白質羰基形成之能力。LA及DHLA能再生其他內源性抗氧化劑，例如維生素C、維生素E及麩胺基硫，從而保護細胞對抗氧化壓力。最近的證據認為，LA不僅可作為真正的氧化物清除劑，還可用作細胞壓力反應路徑之活化劑。硫辛酸之衍生物在本發明所屬技術領域中已有說明。硫辛酸之某些衍生物可提供更佳之生物活性、更佳之藥物動力特性(例如較長半衰期)、更佳之生物利用率，以及較低之藥物交互作用。硫辛酸之衍生物在以下出版物中已有說明，茲將其以此參照方式納入本說明書：Gruzman等人：Synthesis and characterization of new and potent alpha-lipoic acid derivatives.Bioorganic & Medicinal Chemistry,2004,12：1183-1190；Melagraki等人：Synthesis and evaluation of the antioxidant and anti-inflammatory activity of novel coumarin-3-aminoamides and their alpha-lipoic acid adducts.European Journal of Medicinal Chemistry,2009,44：3020-3026；Gurkan等人：Syntheses of novel indole lipoic acid derivatives and their antioxidant effects on lipid peroxidation.Archiv der Pharmazie,2005,338：67-73；Ortial等人：Fluorinated amphiphilic amino acid derivatives as antioxidant carriers：a new class of protective agents.J Med Chem 2006；12-2820；以及Koufaki等人：Sign and synthesis of antioxidant alpha-lipoic acid hybrids.Methods Mol Biol,2010,594：297-309。

硼是一種非金屬元素，可在自然環境中發現。補充硼已顯示可緩和關節炎之疼痛及不適。流行病學研究已揭露，相較於非患者，關節炎患者股骨頭部、骨骼及滑液中硼濃度較低之分析證據；在世界上硼攝取量通常為每日1.0mg或更低之區域，關節炎之估計發生率範圍從20至70%，但在硼攝取量通常為每日3至10mg之區域，關節炎之估計發生率範圍則從0至10%[Environ Health Perspect.1994 Nov；102 Suppl 7：83-5]。

第二型膠原蛋白(collagen type II)亦具有幫助維持合成代謝(anabolism)與分解代謝(catabolism)間正常平衡之有益效果。詳細而言，結締組織疾病可能是自體免疫過程(autoimmune processes)所引起，在自體免疫過程中，免疫系統會將個體本身之結締組織視同「外來入侵者」般加以攻擊及分解代謝。口服第二型膠原蛋白可使免疫系統減敏，以防止進一步之攻擊並使個體之免疫反應正常化。如此，可減少結締組織之分解代謝過程，並使合成代謝達到最大程度。攝取第二型膠原蛋白，可為腸胃道相關淋巴組織(GALT，亦稱派亞氏淋巴叢)中之免疫細胞帶來膠原蛋白分子。膠原蛋白分子與GALT內特定細胞間之交互作用，會活化被稱為T抑制細胞(T suppressor cells)之流動免疫細胞(mobile immune cells)。這些細胞會轉而調節對抗個體本身之第二型膠原蛋白(在結締組織中)之破壞性免疫反應。

白藜蘆醇(resveratrol)是一種芪類化合物(stilbenoid)，普遍存在於葡萄中，以及處於壓力下及受細菌或真菌感染之日本蓼(Japanese Knotweed)根部。小鼠及大鼠之實驗顯示，白藜蘆醇在延長端粒(telomere)、增強端粒酵素活性、降低血糖、抑制血小板凝集、經由提高一氧化氮生成促進血管舒張等方面有發揮其作用，並具有抗發炎之特性。

沒食子酸(gallic acid)是一種三羥苯甲酸(trihydroxybenzoic acid)，自然存在於沒食子、漆樹、金縷梅、茶葉及櫟樹皮中。研究顯示，沒食子酸具有抗氧化、促細胞凋亡及抗發炎之特性。

ω-3脂肪酸是必需脂肪酸，包括ALA、DHA及EPA，其並非由身體自然生成，因此需要在膳食中攝取，通常是經由攝食魚類而攝取。研究證明，ω-3脂肪酸可有效幫助降低三酸甘油酯及血壓。其他研究也已顯示，ω-3脂肪酸在脈管系統及關節中具有抗發炎之效果。

磷蝦油(Krill oil)富含ω-3脂肪酸之二十碳五烯酸(EPA)及二十二碳六烯酸(DHA)，以及抗氧化之蝦紅素(astaxanthin)。磷蝦油已顯示出具抗氧化特性，可降低膽固醇及C-反應蛋白質(C-Reactive Protein)，後者為一種發炎指標，與心臟疾病風險增高有關聯。研究亦揭示出抗發炎效果，以及可降低類風濕及骨關節炎相關疼痛及僵硬。

S-腺苷甲硫胺酸(SAMe)是一種重要內源性化合物，存在於整個身體，並在諸如轉硫化反應(transsulfation)等許多生物反應中發揮作用。在結締組織之許多結構元件(包含蛋白質及蛋白多醣)之合成中，SAMe是重要的反應劑。因此，SAMe具有增強其他合成代謝劑作用之重要合成代謝效果。由於其抗氧化作用，SAMe亦具有抗發炎之效果。SAMe在原發性CNS之功能為，在合成各種不同關鍵化合物之反應中供給甲基，這些化合物包括神經傳導物及磷脂。舉例而言，SAMe會促進磷脂醯乙醇胺(phosphatidylethanolamine)轉化為卵磷脂，而卵磷脂會形成細胞質膜之內部脂質層(lipid layer)之部分。這樣，SAMe便增加了細胞膜流動性(membrane fluidity)，並強化受體/配體結合之有效性[Champe and Harvey,Biochemistry,1994；Stramentinoli,G.,“Pharmacologic Aspects of S-Adenosylmethionine,”American J.Med.,83(5A)：35(1987)；Baldessarini,F.,“Neuropharmacology of S-Adenosyl Methionine,”American J.Med.,83(5A)：95(1987)；Carney,M.,“Neuropharmacology of S-Adenosyl Methionine,”Clin.Neuropharmacol.,9(3)：235(1986)；Janicak,P.,“S-Adenosylmethionine in Depression,”Alabama J.Med.Sci.25(3)：306(1988)]。這些功能亦與其他甲基供給體(methyl donors)有關，像是甜菜碱(三甲基甘胺酸)(betaine(trimethylglycine))、5-甲基四葉酸(5-methyltetrahydrofolate)、葉酸，以及二甲基甘胺酸(dimethylglycine)。[Champe and Harvey,Biochemistry,1994]。

水飛薊素及其有效成分具有若干作用機制，包括刺激核仁聚合酵素A(nucleolar polymerase A)。該刺激會轉而提高核糖體活性，帶來細胞蛋白質合成之增加，以及肝癌細胞修復率之提升。Conti,M.,et al.,Protective activity of Silipide on liver damage in rodents,Japan J.Pharmacol.,60,1992,pp.315-21。其他保護機制則涉及肝癌細胞膜分子結構之改變(此等改變會減少毒素結合到及進入細胞)及抗氧化之效果。Parish,R.& Doering,P.,Treatment of Amanita mushroom poisoning：a review,Vet.Hum. Toxocol.,28(4)1986,pp.318-22。

維生素K2，又稱甲萘醌類(menaquinone)，其可以甲萘醌-4(MK-4)、甲萘醌-5(MK-5)、甲萘醌-6(MK-6)、甲萘醌-7(MK-7)、甲萘醌-8(MK-8)、甲萘醌-9(MK-9)、甲萘醌-10(MK-10)、甲萘醌11(MK-11)，以及葉醌(phylloquinone)之形態提供。葉醌可以取自諸如綠色葉菜等植物來源，葉醌在血漿中的半衰期很短，但可由內皮細胞、睪丸及胰臟轉化成甲萘醌-4(MK-4)。葉醌可由腸道細菌合成，亦可存在於乳酪中。

歐洲專利申請案2 213 280號揭露了包含硫代葡萄糖苷(例如蘿蔔苷)及芥子酵素之配方，其中該配方係封入膠囊或以膜衣包覆。

本說明書所引用之一切參考資料，其全部內容茲以此參照方式納入本說明書。

本發明提供一種組成物，該組成物包含：(i)一種蘿蔔硫素前驅物，較佳者為蘿蔔苷；(ii)一種能夠將該蘿蔔硫素前驅物轉化成蘿蔔硫素之酵素，較佳者為一種葡萄糖苷酵素，更佳者為一種硫代葡萄糖苷酵素，尤佳者為芥子酵素；(iii)一種酵素增強劑，較佳者為抗壞血酸；以及(iv)一種植物固醇及/或植物固烷醇或其酯類。本發明亦提供一種組成物，該組成物包含：(i)蘿蔔硫素或其衍生物，以及(ii)一種植物固醇及/或植物固烷醇或其酯類。本發明亦提供一種組成物，該組成物包含：(i)一種青花菜萃取物或粉末，以及(ii)一種植物固醇及/或植物固烷醇或其酯類。

本發明亦提供包括給予服用本申請案所述一種或多種組合物之方法。本發明提供一種針對一對象之結締組織、肝、前列腺、腦部、脊椎、肺、腎、大腸、乳房、食道、胰臟或卵巢相關疾病或狀況或受損加以治療、預防、減少發生、減輕相關症狀，以及/或減少二次復發之方法，該方法包括給予有前揭需要之對象服用本發明該些組成物當中一者。本發明更提供針對發炎加以治療、預防、減低其量或程度、減輕相關症狀之方法。本發明亦提供一種針對一對象體內之基質金屬蛋白酵素(例如基質金屬蛋白酵素第13型，MMP-13)，降低其水平或下調或減少其基因表現之方法，該方法包括給予該對象服用本發明該些組成物當中一者。本發明亦提供一種針對一對象之MMP-13及/或PGE₂之升高或異常水平相關狀況或失調加以治療、預防、減少發生、減輕相關症狀，以及/或減少二次復發之方法，該方法包括給予該對象服用本發明該些組成物當中一者。

圖1為一圖表，其呈現在38℃無抗壞血酸情況下蘿蔔苷之轉化，如示例4所述。

圖2為一圖表，其呈現蘿蔔苷在38℃下大約10分鐘內之轉化作為抗壞血酸濃度之函數，如示例4所述。

圖3為一圖表，其呈現在38°C及1mM抗壞血酸情況下，於30分鐘內轉化成之蘿蔔硫素，如示例4所述。

圖4為一圖表，其呈現蘿蔔苷在模擬腸液中轉化成蘿蔔硫素，如示例5所述。

圖5為呈現示例6所述實驗結果之圖表。

圖6為呈現示例7所述實驗結果之圖表。

本發明係關於一種蘿蔔硫素前驅物、一種能夠將該蘿蔔硫素前驅物轉化成蘿蔔硫素之酵素、一種酵素增強劑，以及一種植物固醇及/或植物固烷醇或其酯類之組合。本發明亦與蘿蔔硫素或其衍生物與一種植物固醇及/或植物固烷醇或其酯類之組合有關。本發明亦與下列各者之組合有關：一種青花菜萃取物或粉末，以及一種植物固醇及/或植物固烷醇或其酯類或上列者之混合物。本發明亦與使用一種植物固醇及/或植物固烷醇或其酯類，並搭配由下列一者或多者所混合之物有關：蘿蔔硫素前驅物、蘿蔔硫素或其衍生物，及青花菜萃取物。本發明提供與該些組合有關之組成物。

本發明提供包含給予服用該些組合物之方法在一些實施例中，可針對一對象之結締組織、肝、前列腺、腦、脊椎、肺、腎、大腸、乳房、食道、胰臟或卵巢相關之疾病或狀況或受損，給予該對象服用該組合物，以治療、預防、降低該疾病或狀況或受損之發生、減少其相關症狀，及/或降低二次復發。該組合物可給予服用，以針對一對象之發炎加以治療、預防、降低其發生或程度、減少其相關症狀。該組合物可給予服用，以降低一對象之基質金屬蛋白酵素(例如MMP-13及/或PGE₂)之水平，或下調或減少其基因表現。該組合物亦可給予服用，以針對一對象之MMP-13及/或PGE₂之升高或異常水平相關狀況或失調加以治療、預防、減少發生、減輕相關症狀，以及/或減少二次復發。該組合物亦可給予服用以誘導麩胺基硫之水平，其能夠有效地最小化或減少體內有害自由基之存在、抑制或降低iNOS/NO系統之有害影響，以及減少促發炎基因之表現。

蘿蔔硫素亦稱1-isothiocyanato-4-methylsulfinylbutane。蘿蔔硫素之衍生物包含但不限於蘿蔔硫素之次硫酸硫代氨基甲酸鹽類似物(sulfoxythiocarbamate analogues)、6-methylsulfinylhexyl isothiocyanate(6-HITC)，以及包含蘿蔔硫素結構，但在異硫氰基(isothiocyanato group)及亞碸基(sulfoxide group)間有不同側鏈及/或不同間距基長度之化合物。蘿蔔硫素衍生物之範例包含以下參考資料所述者，各該參考資料之全部內容茲以此參照方式納入本說明書：Hu等人發表於Eur J Med Chem,2013,64：529-539之文章；Ahn等人發表於Proc Natl Acad Sci USA,2010,107(21)：9590-9595之文章；Morimistu等人發表於J.Biol.Chem.2002,277：3456-3463之文章；以及Baird等人發表於Arch Toxicol,2011,85(4)：241-272之文章。

在一些實施例中，該組成物包含蘿蔔硫素或其衍生物，較佳者為蘿蔔硫素，其份量為大約1μg至大約10g，較佳者為大約3μg至大約5g，較佳者為大約5μg至大約1000mg，較佳者為大約7μg至大約750mg，更佳者為大約10μg至大約500mg，尤佳者為大約100μg至大約100mg。在一些實施例中，適於人類使用之組成物包含大約1mg至大約20mg。

在一些實施例中，本發明之方法包含給予一對象服用蘿蔔硫素或其衍生物，較佳者為蘿蔔硫素，其用量為大約1μg至大約10g，較佳者為大約3μg至大約5g，較佳者為大約5μg至大約1000mg，較佳者為大約7μg至大約750mg，更佳者為大約10μg至大約500mg，尤佳者為大約100μg至大約100mg。在對象為人類之一些實施例中，該方法包含給予對象服用大約1mg至大約20mg。在一些實施例中，本發明之方法包含給予一對象服用蘿蔔硫素或其衍生物，較佳者為蘿蔔硫素，其用量為大約0.01μg/kg至大約0.2g/kg，較佳者為大約0.05μg/kg至大約0.07g/kg，更佳者為大約0.07μg/kg至大約15mg/kg，更佳者為大約0.1μg/kg至大約11mg/kg，尤佳者為大約0.2μg/kg至大約7mg/kg。在對象為人類之一些較佳實施例中，該方法包含給予對象服用大約2μg/kg至大約2mg/kg之用量，或者大約0.01mg/kg至大約1mg/kg之用量，或者大約0.1mg/kg至大約0.4mg/kg之用量。上述該些用量可指每劑服用之量或每日總劑量。每日總劑量係指在24小時內給予一對象服用之一種化合物或成分之總量。

在一些實施例中，該方法包含給予服用一種蘿蔔硫素或其衍生物當中不只一者。在一些實施例中，該些組成物包含一種蘿蔔硫素或其衍生物當中不只一者。舉例而言，該些方法或組成物可同時包含蘿蔔硫素及蔔硫素衍之一種或多種蘿生物，或同時包含兩種或更多種衍生物。在一些實施例中，當該方法或組成物包含一種蘿蔔硫素或其衍生物當中不只一者時，上文所述之量可指每種蘿蔔硫素或每一種蘿蔔硫素衍生物各別之量，或指不只一種之蘿蔔硫素或蘿蔔硫素衍生物之總量。

在本說明書中，「蘿蔔硫素前驅物」一詞係指可用於生產蘿蔔硫素之任何化合物、物質或原料。在較佳實施例中，該蘿蔔硫素前驅物包含可被轉化或代謝成蘿蔔硫素之一種化合物，較佳者為由一種酵素轉化或代謝成蘿蔔硫素。在一些較佳實施例中，該蘿蔔硫素前驅物包含蘿蔔苷。蘿蔔苷是一種硫代葡萄糖苷，亦稱4-methylsulfinylbutyl glucosinolate及1-S-[(1E)-5-(methylsulfinyl)-N-(sulfonatooxy) pentanimidoyl]-1-thio-β-D-glucopyranose。

在一些實施例中，該組成物包含該蘿蔔硫素前驅物，較佳者為蘿蔔苷，其份量為大約1μg至大約10g，較佳者為大約250μg至大約5g，更佳者為大約500μg至大約2000mg，甚佳者為大約1mg至大約750mg，再甚佳者為大約1.5mg至大約250mg，更甚佳者為大約2mg至大約100mg，尤佳者為大約3mg至大約75mg。在一些實施例中，適於人類使用之組成物包含大約3.5mg至大約50mg之該蘿蔔硫素前驅物，較佳者為蘿蔔苷。

在一些實施例中，該方法包含給予一對象服用該蘿蔔硫素前驅物，較佳者為蘿蔔苷，其份量為大約1μg至大約10g，較佳者為大約250μg至大約5g，更佳者為大約500μg至大約2000mg，甚佳者為大約1mg至大約750mg，再甚佳者為大約1.5mg至大約250mg，更甚佳者為大約2mg至大約100mg，尤佳者為大約3mg至大約75mg。在對象為人類之一些實施例中，該方法包含給予對象服用大約3.5mg至大約50mg。在一些實施例中，該方法包含給予一對象服用一份量之蘿蔔硫素前驅物，其用量為大約1μg/kg至大約1000mg/kg，較佳者為大約5μg/kg至大約500mg/kg，更佳者為大約7.5μg/kg至大約100mg/kg，甚佳者為大約10μg/kg至大約25mg/kg，尤佳者為大約25μg/kg至大約10mg/kg。在對象為人類之一些實施例中，該方法包含以大約50μg/kg至大約800μg/kg之用量給予服用。上述該些用量可指每劑服用之量或指每日總劑量。

在一些實施例中，該方法包含給予服用不只一種蘿蔔硫素前驅物。在一些實施例中，該組成物包含不只一種蘿蔔硫素前驅物。在一些實施例中，當該方法或組成物包含不只一種蘿蔔硫素前驅物時，上述該些用量可指每一種蘿蔔硫素前驅物之量，或指該些蘿蔔硫素前驅物之總量。

該蘿蔔硫素前驅物可被轉化或代謝成蘿蔔硫素。在一些實施例中，該蘿蔔硫素前驅物係由一種酵素轉化成蘿蔔硫素。在一些實施例中，能夠將該蘿蔔硫素前驅物轉化成蘿蔔硫素之該酵素包含一種葡萄糖苷酵素(glucosidase enzyme)，較佳者為一種硫代葡萄糖苷酵素(thioglucosidase enzyme)，更佳者為芥子酵素。芥子酵素亦稱硫代葡萄糖苷醣類水解酵素(thioglucoside glucohydrolase)。

在一些實施例中，該組成物包含該酵素之量為大約1pg至大約1ug，較佳者為大約50pg至大約500ng，尤佳者為大約1ng至大約150ng。在一些實施例中，適於人類使用之組成物包含之該酵素為大約5ng至大約75ng。

在一些實施例中，該方法包含以大約1pg至大約1μg，較佳者為大約50pg至大約500ng，尤佳者為大約1ng至大約150ng之量給予服用該酵素，較佳者為芥子酵素。在對象為人類之一些實施例中，該方法包含給予服用大約5ng至大約75ng之該酵素。在一些實施例中，該方法包含給予一對象服用該酵素，其用量為大約0.02pg/kg至大約0.02ug/kg，較佳者為大約0.7pg/kg至大約7ng/kg，尤佳者為大約0.02ng/kg至大約2ng/kg。在對象為人類之一些較佳實施例中，該方法包含以大約0.1ng/kg至大約1ng/kg之量給予服用。上述該些用量可指每劑服用之量或每日總劑量。

在一些實施例中，該方法包含給予服用不只一種能夠將該蘿蔔硫素前驅物轉化成蘿蔔硫素之酵素。在一些實施例中，該組成物包含不只一種能夠將該蘿蔔硫素前驅物轉化成蘿蔔硫素之酵素。在一些實施例中，當該些方法或組成物包含不只一種酵素時，上述該些用量可指每一種酵素之量，或指該些酵素之總量。

本發明亦提供一種青花菜萃取物及/或青花菜粉末之使用，包含但不限於青花菜種子及青花菜芽之萃取物及粉末。本發明提供給予服用青花菜萃取物及/或青花菜粉末之方法，以及包含青花菜萃取物及/或青花菜粉末之組成物。在一些實施例中，該青花菜萃取物或粉末係經過標準化處理，使之包含大約1%至大約75% w/w，更佳者為大約2.5%至大約50% w/w，甚佳者為大約5%至大約25% w/w，尤佳者為大約10%至大約20% w/w之一種蘿蔔硫素前驅物，較佳者為蘿蔔苷。青花菜萃取物及青花菜粉末之範例包含但不限於美國專利5,411,986號；5,725,895號；5,968,505號；5,968,567號；6,177,122號；6,242,018號；6,521,818號；7,303,770號及8,124,135號所述者，各該專利之全部內容茲以此參照方式納入本說明書。青花菜粉末可經由將青花菜，較佳者為青花菜芽，舉例而言，風乾、冷凍乾燥、滾筒乾燥、噴霧乾燥、加熱乾燥及/或部分真空乾燥而獲得。在一些實施例中，該些組成物及方法包含使用大約1μg至大約10g，更佳者為大約250μg至大約5g，甚佳者為大約500μg至大約1g，較佳者為大約600μg至大約500mg，更佳者為大約750μg至大約400mg，尤佳者為大約1mg至大約300mg之該青花菜萃取物。在一些實施例中，該青花菜萃取物或粉末係存在於一組成物中，或係以足夠提供上述該些份量之一種蘿蔔硫素前驅物或蘿蔔硫素之量，而給予一對象服用。在一些實施例中，該組成物可更包含一種酵素增強劑，較佳者為抗壞血酸。在一些實施例中，該方法可更包含給予服用一種酵素增強劑，較佳者為抗壞血酸。

蘿蔔硫素或其衍生物、該蘿蔔硫素前驅物，及/或能夠將該蘿蔔硫素前驅物轉化成蘿蔔硫素之該酵素，可取自任何來源，包含但不限於十字花科(亦稱蕓薹科)之一種或多種植物。十字花科植物之範例包含但不限於以下所列者：青花菜、抱子甘藍、花椰菜、甘藍、辣根、歐洲防風、蘿蔔、山葵、水田芥及白芥菜。在一些較佳實施例中，蘿蔔硫素前驅物，較佳者為蘿蔔苷，以及該酵素，較佳者為芥子酵素，係取自青花菜、青花菜芽或青花菜種子。該蘿蔔硫素前驅物及該酵素可取自相同來源或不同來源。在一些實施例中，該蘿蔔硫素前驅物及該酵素可皆取自該些植物之一種萃取物或粉末，較佳者為青花菜種子或青花菜芽之一種萃取物或粉末。

本發明提供一種酵素增強劑之使用。酵素增強劑可用於加強能夠將該蘿蔔硫素前驅物轉化成蘿蔔硫素之該酵素之活性。在一些實施例中，該酵素增強劑包含一種酵素輔助因子，較佳者為抗壞血酸。抗壞血酸，亦稱抗壞血酸鹽或維生素C，可增強芥子酵素之活性。在一些實施例中，當沒有諸如抗壞血酸之酵素增強劑存在時，轉化成蘿蔔硫素之反應可能會太慢，以致無法在最大吸收(peak absorption)所需之位置發生。該酵素增強劑可取自一天然來源或以合成方式生產。

在一些實施例中，該些組成物可包含大約1mg至大約500mg，較佳者為大約1mg至大約250mg，尤佳者為大約1mg至大約125mg之該酵素增強劑。在一些較佳實施例中，適於人類使用者組成物包含大約1mg至大約50mg之該酵素增強劑。

在一些實施例中，本發明之方法包含以大約1mg至大約500 mg，較佳者為大約1mg至大約250mg，尤佳者為大約1mg至大約125mg之量，給予服用一種酵素增強劑，較佳者為抗壞血酸。在對象為人類之一些較佳實施例中，該方法包含給予服用大約1mg至大約50mg。在一些實施例中，本發明之方法包含以大約0.01mg/kg至大約3mg/kg，尤佳者為大約0.02mg/kg至大約2mg/kg之量，給予服用該酵素增強劑，較佳者為抗壞血酸。在對象為人類之一些較佳實施例中，該方法包含以大約0.02mg/kg至0.7mg/kg之量給予服用該酵素增強劑。上述該些用量可指每劑服用之量或每日總劑量。

在一些實施例中，該方法包含給予服用不只一種酵素增強劑。在一些實施例中，該組成物包含不只一種酵素增強劑。在一些實施例中，當該方法或組成物包含不只一種酵素增強劑時，上述該些用量可指每一種酵素增強劑之量，或指該些酵素增強劑之總量。

本發明更包括使用一種植物固醇或其酯類，及/或一種植物固烷醇或其酯類，及/或上列者之混合物。「植物固醇」一詞包含，但不限於，4-去甲基固醇(4-desmethyl sterols)、4-單甲基固醇(4-monomethyl sterols)及4,4-二甲基固醇(4,4-dimethyl sterols(三萜醇(triterpene alcohols))，及上列者之混合物。4-去甲基固醇之示例包含，但不限於，植固醇、菜油固醇、豆固醇、菜籽脂醇、22-脫氫菜籽脂醇(22-dehydrobrassicasterol)，以及5-燕麥固醇(5-avenasterol)。4,4-二甲基固醇之示例包含，但不限於，環木菠蘿烯醇(cycloartenol)、24-亞甲基環木菠蘿烷醇(24-methylenecycloartanol)，以及環糠固醇(cyclobranol)。「植物固烷醇」一詞包含植物固醇之飽和形式，包括但不限於植固烷醇、菜油固烷醇及此二者之24-差向異構物，以及環木菠蘿烷醇、24-亞甲基環木菠蘿烷醇及環糠固醇之飽和形式，以及上列者之混合物。「植物固醇酯」及「植物固烷醇酯」二詞係指以酸類(例如脂肪酸)酯化之植物固醇及植物固烷醇。脂肪酸之示例包含不飽和及飽和脂肪酸，其包括，但不限於，肉豆蔻烯酸(myristoleic acid)、棕櫚油酸(palmitoleic acid)、薩芬酸(sapienic acid)、油酸(oleic acid)、反油酸(elaidic acid)、異油酸(vaccenic acid)、亞油酸(linoleic acid)、反式亞油酸(linoelaidic acid)、α-亞麻酸(alpha-linolenic acid)、花生四烯酸、二十碳五烯酸、芥子酸(erucic acid)、二十二碳六烯酸、辛酸(caprylic acid)、癸酸(capric acid)、月桂酸(lauric acid)、肉豆蔻酸(myristic acid)、棕櫚酸(palmitic acid)、硬脂酸(stearic acid)、花生脂酸(arachidic acid)、蘿酸(behenic acid)、掬焦油酸(lignoceric acid)，以及蟲蠟酸(cerotic acid)。在一些實施例中，可與植物固醇及植物固烷醇酯化之酸類包含，但不限於，棕櫚酸、棕櫚油酸、油酸、亞油酸，以及硬脂酸。在一些實施例中，本發明與一種植物固醇或其酯類之使用，或一種植物固烷醇及其酯類之使用有關。在一些實施例中，本發明與超過一種植物固醇(或其酯類)之使用，或超過一種植物固烷醇(或其酯類)之使用有關。在一些實施例中，本發明係關於植物固醇及/或植物固醇酯之一混合物之使用，或植物固烷醇及植物固烷醇酯之一混合物之使用，或植物固醇及植物固烷醇及/或其酯類之一混合物之使用。在一些實施例中，本發明提供植固醇、菜油固醇及/或豆固醇，或上列者之混合物之使用。在一些實施例中，本發明提供一混合物之使用，該混合物包含植固醇、菜油固醇、豆固醇、菜油固烷醇、植固烷醇，以及菜籽脂醇。

植物固醇、植物固烷醇，或其酯類，可以任何形式提供，例如萃取物或粉末形式。在一些實施例中，該萃取物或粉末所包含之植物固醇、植物固烷醇，或其酯類可分離或萃取自植物油，例如大豆油、油菜籽(芥花籽)油、紅花籽油、棉籽油、葵花油或玉米油，或分離或萃取自妥爾油或妥爾油樹脂，如美國專利第8,338,564號所說明者。萃取物或粉末之示例包含但不限於Phytosterol Complex(由Total Nutrition銷售)、Phytosterol Complex(由Source Naturals銷售)、Heart Choice Plant Sterols(由Vitamin Shoppe銷售)，以及Phytosterol Complex(由Puritan’s Pride銷售)。在一些實施例中，萃取物或粉末包含植固醇、菜油固醇及/或豆固醇。在一些實施例中，該萃取物或粉末經標準化處理以含有大約5%至大約99%，或者大約15%至大約95%，或者大約30%至大約90%，或者大約40%至大約80%之植物固醇、植物固烷醇，或其酯類。前揭百分比量可指單一之植物固醇、植物固烷醇，或其酯類之量，或指植物固醇、植物固烷醇，及其酯類之總量。本發明之含植物固醇及/或植物固烷醇粉末，可應用本發明所屬技術領域中任何方法而獲得，此等方法包括但不限於風乾、冷凍乾燥、滾筒乾燥、噴霧乾燥、加熱乾燥及/或部分真空乾燥。

在一些實施例中，本發明之組成物及方法包括使用大約1mg至大約1000mg之植物固醇、植物固烷醇，或其酯類。在一些實施例中，本發明之組成物及方法包括使用大約5mg至大約750mg，或者大約10mg至大約500mg，或者大約15mg至大約400mg，或者大約20mg至大約300mg，或者大約25mg至大約250mg，或者大約25mg至大約200mg之植物固醇、植物固烷醇，或其酯類。前揭之量可指單一之植物固醇、植物固烷醇，或其酯類之量，或指植物固醇、植物固烷醇，及其酯類之總量。前揭之量亦可指包含一種植物固醇、一種植物固烷醇，或其酯類之一混合物、萃取物或粉末之量。在一些實施例中，本發明之組成物及方法包括使用大約25mg至大約200mg之植固醇、菜油固醇及/或豆固醇。

在一些實施例中，本發明之方法包括給予服用植物固醇、植物固烷醇，或其酯類，其用量為大約0.01mg/kg至大約15mg/kg，或者大約0.05mg/kg至大約10mg/kg，或者大約0.1mg/kg至大約8mg/kg，或者大約0.2mg/kg至大約6mg/kg，或者大約0.35mg/kg至大約5mg/kg，或者大約0.3mg/kg至大約3mg/kg。前揭之量可指單一之植物固醇、植物固烷醇，或其酯類之量，或指植物固醇、植物固烷醇，及其酯類之總量。前揭之量亦可指包含一種植物固醇、一種植物固烷醇，或其酯類之一混合物、萃取物或粉末之量。上述用量可指每劑服用量或每日總劑量。

本發明之方法可更包含給予服用一種或多種額外成分。本發明之組成物可更包含一種或多種額外成分。本發明亦提供使用這些額外成分當中一者或多者之方法及組成物，該些額外成分係在植物固醇、植物固烷醇，或其酯類之外添加使用，或代替植物固醇、植物固烷醇，或其酯類而使用。該些額外成分之使用可具有協同效應。該些額外成分可包含有效藥劑成分、營養補充劑及營養萃取物。額外成分之範例包含，但不限於，檞皮素或其衍生物、諸如葡萄糖胺之一種胺基糖、諸如軟骨素之一種葡萄胺聚醣(glycosaminoglycan)、鱷梨/大豆之不皂化物、諸如維生素K2之維生素、咖啡果實、鎂、熊果酸、原花青素、兒茶素、α-及β-葡聚醣、S-腺苷甲硫胺酸(SAMe)、甜菜素、硫辛酸、沒食子酸、白藜蘆醇、玻尿酸、甲基硫醯基甲烷(MSM)，以及第二型膠原蛋白。這些額外成分可存在於蔓越橘(Vaccinium macrocarpon)之萃取物(原花青素、檞皮素，以及熊果酸)、薑黃(Curcuma longa)、香菇(Lentinus edodes)等藥用蕈菇之萃取物、舞菇(Grifola frondosa)之萃取物、奶薊之萃取物或粉末、靈芝(Ganoderma lucidum)之萃取物、綠茶萃取物，以及蛋殼膜。

在一些實施例中，植物固醇、植物固烷醇，或其酯類，與蘿蔔硫素或其衍生物之比為大約1：50至大約1500：1，或者大約1：25至大約1000：1，或者大約1：10至大約750：1，或者大約1：5至大約500：1，或者大約1：2至大約250：1，或者大約2：1至大約100：1，或者大約2：1至大約50：1，或者大約2.5：1至大約25：1，或者大約3：1至大約15：1，或者大約3：1至大約10：1，或者大約3：1至大約8：1。在一些實施例中，植物固醇、植物固烷醇，或其酯類，與蘿蔔硫素前驅物之比為大約1：50至大約1000：1，或者大約1：25至大約750：1，或者大約1：10至大約500：1，或者大約1：5至大約250：1，或者大約1：2至大約150：1，或者大約2：1至大約100：1，或者大約2.5：1至大約75：1，或者大約3：1至大約50：1，或者大約4：1至大約25：1，或者大約4：1至大約10：1，或者大約4：1至大約7：1。這些比率可與一種植物固醇或其酯類、一種植物固烷醇或其酯類之量有關，或與植物固醇或其酯類及植物固烷醇或其酯類之總量有關。

在一些實施例中，該組成物包含一種單位劑量形式，其包含但不限於適合口服、直腸給藥、靜脈給藥、皮下給藥、肌內給藥、經皮給藥、經黏膜給藥及局部給藥之醫藥劑量形式。在一些較佳實施例中，該組成物包含一種可口服劑型或一種直腸給藥劑型。可口服劑型之範例包含但不限於藥錠、膠囊、可分散於飲料中之粉末、一種液體，例如溶液、懸浮液或乳劑、一種軟膏/咀嚼膠囊、一種咀嚼棒，或本發明所屬技術領域中已知之其他合適劑型。在較佳實施例中，該組成物包含一種藥錠、膠囊或柔軟之咀嚼點心。該些可口服劑型可製備成快速釋放、持續釋放或延遲釋放。

在一些實施例中，用於提供至少該蘿蔔硫素前驅物、該酵素及該酵素增強劑之劑型，係能夠在消化道中具有pH值至少為4之一區域，較佳者為具有pH值至少為5之一區域釋放者，例如小腸，較佳者為十二指腸。在一些實施例中，用於提供至少該蘿蔔硫素或蘿蔔硫素衍生物，及/或該青花菜萃取物或粉末之劑型，係能夠在消化道中具有pH值至少為4之一區域，較佳者為具有pH值至少為5之一區域釋放者，例如小腸，較佳者為十二指腸。在一些實施例中，該植物固醇及/或植物固烷醇或其酯類(或上列者之混合物)，及/或任何選擇性額外成分被釋放之區域，亦是在消化道中具有pH值至少為4之一區域，較佳者具有pH值至少為5之一區域，例如小腸，較佳者為十二指腸。前文所述之小腸包含十二指腸、空腸及迴腸。

在一些實施例中，每一種成分(亦即蘿蔔硫素前驅物、酵素、酵素增強劑、蘿蔔硫素或其衍生物、青花菜萃取物或粉末、植物固醇及/或植物固烷醇或其酯類(或上列者之混合物)，以及/或者額外成分)係同時釋放或相伴釋放(亦即在一短時間內彼此伴隨釋放)。這種方式優於被製備成在消化道中具有pH值低於4之一區域(例如胃)釋放之含蘿蔔苷之組成物。因在此種低pH值環境下，其酸性環境會將蘿蔔硫素前驅物改而轉化成生理上非活性之其他最終產物，例如蘿蔔硫腈(sulforaphane nitrile)及環硫腈(epithionitrile)。

在一些實施例中，該些組成物可包括含有胃腸保護配方之可口服組成物，該些胃腸保護配方包括腸溶膜衣劑型或可耐受消化道中pH值低於4之一區域(例如胃)之降解之任何劑型。舉例而言，該可口服組成物可包括含腸溶膜衣之一藥錠或膠囊。該腸溶膜衣所包括之材料可包含但不限於乙醯醋酸纖維素(cellulose acetate phthalate)、鄰苯二甲酸羥丙基甲基纖維素(hydroxypropyl methylcellulose phthalate)、聚乙烯醋酸纖維素(polyvinyl acetate phthalate)、甲基丙烯酸共聚物(methacrylic acid copolymer)、甲基丙烯酸：丙烯酸酯共聚物(methacrylic acid：acrylic ester copolymer)、羥丙基甲基纖維素琥珀酸醋酸鹽(hydroxypropyl methylcellulose acetate succinate)、羥丙基甲基纖維素偏苯三甲酸酯(hydroxypropyl methylcellulose trimellitate)、蟲膠(shellac)、乙酸偏苯三甲酸酯纖維素(cellulose acetate trimellitate)、羧甲基乙基纖維素(carboxymethylethylcellulose)，及由前述者混合之物。該腸溶膜衣可包含本發明所屬技術領域中已知之任何合適之腸溶性聚合物。在一些實施例中，該組成物中該些成分之一種或多種可嵌入腸溶性聚合物之一基質。在一些實施例中，該些可口服組成物包含會在胃酸中緩慢溶解並移動至小腸之一種耐酸膠囊，例如CAPSUGEL®所銷售之DRCAPS^TM耐酸膠囊，或其他任何耐酸膠囊。

在最佳形式下，該可口服組成物係被一膜衣所圍住，該膜衣只會在周圍介質之pH值至少為4，更佳者為pH值至少為5，時才會溶解。作為一替代方案，可採用以時間而非pH值來控制釋放之一種膜衣，其釋放速率被調整至只有在消化道之pH值上升到至少為4，更佳者為上升到至少為5，該些成分才會被釋放。因此，一種按時間釋放(緩釋)之配方可用於防止該蘿蔔硫素前驅物、能夠將該蘿蔔硫素前驅物轉化成蘿蔔硫素之該酵素及該酵素增強劑，或是防止該蘿蔔硫素，在胃部釋放。該(些)膜衣層可以標準包覆技術應用於可口服組成物。該些腸溶膜衣之材料可溶解或分散於有機溶劑或水溶劑中。使該腸溶膜衣開始溶解之pH值，可經由具選定之側鏈基及/或側鏈基比率之一種聚合物或多種聚合物之組合加以控制。舉例而言，該聚合物膜之溶解特性可經由調整游離羧基與酯基之比而加以改變。腸溶膜衣層亦含有醫藥上可接受之塑化劑，例如檸檬酸三乙酯(triethyl citrate)、鄰苯二甲酸二丁酯(dibutyl phthalate)、三醋汀(triacetin)、聚乙二醇(polyethylene glycols)、聚山梨醇酯(polysorbates)或其他塑化劑。添加物亦可包含在內，例如分散劑、著色劑、抗黏著劑及抗發泡劑。

該些組成物可含有一種或多種非有效藥劑成分(通常亦稱「賦形劑」)。非有效成分，舉例而言，係用於溶解化、懸浮、稠化、稀釋、乳化、安定、保存、保護、著色、調味及形成該些有效成分，使其成為可適用及有效之一種製劑，該製劑是安全、方便並在其他方面可以使用的。該些賦形劑最好為醫藥上可接受之賦形劑。醫藥上可接受之賦形劑類別之範例包含潤滑劑、緩衝劑、安定劑、發泡劑、色素、著色劑、調味劑、充填劑、增積劑、香料、釋出修飾劑(release modifiers)、佐劑、塑化劑、流加速劑(flow accelerators)、離型劑、多元醇、造粒劑(granulating agents)、稀釋劑、黏合劑、緩衝劑、吸收劑、滑動劑、黏著劑、抗黏劑、酸化劑、軟化劑、樹脂、緩和劑、溶劑、表面活性劑、乳化劑、彈性體，及由前述者混合之物。

在一些實施例中，(i)一種蘿蔔硫素前驅物，較佳者為蘿蔔苷、(ii)一種能夠將該蘿蔔硫素前驅物轉化成蘿蔔硫素之酵素，較佳者為一種葡萄糖苷酵素，更佳者為一種硫代葡萄糖苷酵素，尤佳者為芥子酵素、(iii)一種酵素增強劑，較佳者為一種酵素輔助因子，更佳者為抗壞血酸，以及(iv)植物固醇及/或植物固烷醇或其酯類(或上列者之混合物)之組合，表現出協同作用。在一些實施例中，蘿蔔硫素(或其衍生物)及一種植物固醇、一種植物固烷醇，或其酯類(或上列者之混合物)之組合表現出協同作用。協同作用係指兩種或更多種成分之組合所提供之效果，大於該些作用物單獨使用時所產生效果之總和。在較佳實施例中，該協同作用大於累加作用。在一些實施例中，一種蘿蔔硫素前驅物、一種能夠將該蘿蔔硫素前驅物轉化成蘿蔔硫素之酵素、一種酵素增強劑，以及一種植物固醇、一種植物固烷醇，或其酯類(或上列者之混合物)之組合，相較於下列情況而有統計上顯著之較大效果：(i)僅有各單獨成分，(ii)僅有該蘿蔔硫素前驅物及該酵素之組合；及/或(iii)僅有該蘿蔔硫素前驅物、該酵素及該酵素增強劑之組合。

在較佳實施例中，相較於僅有該蘿蔔硫素前驅物之情況，及相較於僅有該植物固醇、植物固烷醇，或其酯類(或上列者之混合物)之情況，該蘿蔔硫素前驅物、該酵素、該酵素增強劑，以及一種植物固醇、一種植物固烷醇，或其酯類(或上列者之混合物)之組合因具有統計顯著性及/或大於累加之效應而證明其協同作用。在一些實施例中，相較於僅有蘿蔔苷、芥子酵素、抗壞血酸之組合，以及相較於僅有該植物固醇、植物固烷醇，或其酯類(或上列者之混合物)之情況，蘿蔔苷、芥子酵素、抗壞血酸，以及植物固醇、植物固烷醇，或其酯類(或上列者之混合物)之組合具有協同作用。在一些實施例中，相較於僅有蘿蔔苷、芥子酵素、抗壞血酸之組合，以及相較於僅有單一種植物固醇、植物固烷醇，或其酯類之情況，蘿蔔苷、芥子酵素、抗壞血酸，以及一種或多種植物固醇、植物固烷醇，或其酯類之一混合物之組合具有協同作用。

在較佳實施例中，相較於僅有蘿蔔硫素(或其衍生物)之情況，及相較於僅有該植物固醇、植物固烷醇，或其酯類(或上列者之混合物)之情況，蘿蔔硫素(或其衍生物)與一種植物固醇、一種植物固烷醇，或其酯類(或上列者之混合物)之組合因具有統計顯著性及/或大於累加之效應而證明其協同作用。在一些實施例中，相較於蘿蔔硫素(或其衍生物)之組合，以及相較於僅有單一種植物固醇、植物固烷醇，或其酯類(或上列者之混合物)之情況，蘿蔔硫素(或其衍生物)與一種或多種植物固醇、植物固烷醇，或其酯類之一混合物之組合具有協同作用。

在一些實施例中，青花菜萃取物或粉末與一種植物固醇、一種植物固烷醇，或其酯類(或上列者之混合物)之組合，較下列情況具有統計顯著性及/或大於累加之效應：(i)僅有青花菜萃取物或粉末，及/或(ii)僅有一種植物固醇、植物固烷醇，或其酯類(或上列者之混合物)。在一些實施例中，相較於僅有青花菜萃取物或粉末之情況，及相較於僅有一種植物固醇、植物固烷醇，或其酯類(或上列者之混合物)之情況，青花菜萃取物或粉末與植物固醇及/或植物固烷醇，或其酯類(或上列者之混合物)之組合具有協同作用。在一些實施例中，相較於僅有青花菜萃取物或粉末之情況，及相較於單一種植物固醇、植物固烷醇，或其酯類之情況，青花菜萃取物或粉末與一種或多種植物固醇、植物固烷醇，或其酯類之一混合物之組合具有協同作用。

在一些實施例中，本發明之方法及組成物更包括使用齒葉乳香(Boswellia serrata)萃取物或存在於齒葉乳香萃取物之任何成分，此等成分包括但不限於乳香酸及五環三萜酸(pentacyclic triterpene acids)。此等成分之示例包括，但不限於，α-乳香酸、β-乳香酸、3-乙酰基α-乳香酸、3-乙酰基β-乳香酸、11-酮基-β-乳香酸(KBA)，以及乙醯基-11-酮基-β-乳香酸(AKBA)。在一些實施例中，將齒葉乳香萃取物及/或齒葉乳香萃取物之成分添加至本發明之組合，較僅使用該組合可具有協同作用。

本發明提供使用之方法，其包含給予有需求之一對象服用之方法。在一些實施例中，該方法包含給予服用一種蘿蔔硫素前驅物、一種能夠將該蘿蔔硫素前驅物轉化成蘿蔔硫素之酵素、一種酵素增強劑，以及一種植物固醇、植物固烷醇，或其酯類(或上列者之混合物)之組合。在一些實施例中，該方法包含給予服用一種蘿蔔硫素或其衍生物與一種植物固醇、植物固烷醇，或其酯類(或上列者之混合物)之組合。在一些實施例中，該方法包含給予服用一種青花菜萃取物或粉末與一種植物固醇、植物固烷醇，或其酯類(或上列者之混合物)之組合。

在一些實施例中，本發明之方法係關於針對一對象之結締組織、肝、生殖泌尿系統(包括前列腺、乳房及卵巢)、腦、肺、腎、大腸、食道、胰臟或造血系統相關之疾病或狀況，加以治療、預防、降低該疾病或狀況之發生、減少其相關症狀，及/或降低二次復發，該方法包括給予該對象服用本發明之組合。該些方法可對減少或減緩組織及器官，例如結締組織、肝、生殖泌尿系統(包括前列腺、乳房及卵巢)、腦、肺、腎、大腸、食道，以及胰臟，之受損有幫助。在一些實施例中，本發明之方法係關於針對有需要之一對象，增加其體內麩胺基硫之水平。該方法亦可幫助促發炎介質(例如MMP-13及PGE₂)異常水平或高水平相關疾病或狀況之治療、預防、相關症狀減少，及/或二次復發降低。此等疾病或狀況之示例包括但不限於，骨關節炎、類風溼性關節炎、非酒精性脂肪肝疾病(NAFLD)、癌症(例如肝癌、肺癌、前列腺癌、大腸癌、乳癌、腦癌、卵巢癌、食道癌、胰臟癌、鼻咽癌、骨肉瘤)、白血病、囊性纖維變性、人類後天免疫不全病毒(HIV)、麩胺基硫合成酵素缺乏(glutathione synthetase deficiency)、阿茲海默氏症、帕金森氏症、亨丁頓舞蹈症、肌萎縮性側索硬化(ALS)、Friedreich共濟失調、多發性硬化、纖維肌痛(fibromyalgia)、慢性疲勞、自閉症、糖尿病、肝毒性，以及環境因素造成之毒性。

在一些實施例中，本發明之方法係關於為生物標記提供有益之影響，以及針對這些生物標記之異常水平相關症狀加以治療、預防、減少發生及減輕。此等生物標記之示例包含但不限於NADPH依賴酵素(NADPH-dependent enzymes)、硫氧化還原蛋白(thioredoxin,TXN)、硫氧化還原蛋白還原酵素(thioredoxin reductase-1,Txnrd-1)、麩胺酸-半胱胺酸接合酵素次單位(glutamate-cysteine ligase subunit,GCLC)、亞硫酸基轉移酵素1A1(sulfotransferase 1A1,SULT1A1)、第一型血基質氧化酵素(heme oxygenase-1,HMOX1)、麩胺基硫過氧化酶-3(glutathione peroxidase-3,GPx-3)、麩胺基硫轉移酵素theta2(glutathione S-transferse theta 2,GSTT2)、微粒體麩胺基硫轉移酵素1(microsomal glutathione S-transferase 1,MGST1)、醛氧化酵素(aldehyde oxidase,AOX1)、醛酮還原酵素1B8(aldo-keto reductase 1B8,Akr1b8)、含黃素之單氧酵素2(flavin-containing monooxygenase 2,FMO2)、Fc受體區域受體III(Fc receptor region receptor III,Fcgr3)、類胰蛋白酵素beta 1(tryptase beta 1,TPSB1)、肥大細胞蛋白分解酵素-6(mast cell protease-6,Mcpt6)、神經細胞表面蛋白-1-alpha(neurexin-1-alpha,NRXN-1)、小眼症相關轉錄因子(microphthalmia-associated transcription factor,MITF)、第二型碘化甲狀腺素脫碘酵素(type II iodothyronine deiodinase,DIO2)、血管生成素-14(angiopoietin-14,Angpt14)、細胞膜表面抗原分化群36(cluster of differentiation,CD36)，以及Ntel。與這些生物標記之高水平或異常水平相關之疾病或狀況包含但不限於癌症、肺及中樞神經系統之結核、多發性硬化、局部性迴腸炎、動脈粥樣硬化、骨關節炎、氣喘、中風、肺氣腫、糖尿病性腎病變、胎盤之慢性組織細胞絨毛炎、高血壓、腹主動脈瘤、發炎性腸道疾病、慢性鼻竇炎、冠狀動脈疾病及腎臟疾病。

在一些實施例中，該方法包含給予有需求之一對象服用蘿蔔硫素及一種植物固醇及/或植物固烷醇或其酯類(或上列者之混合物)之一組合。在一些實施例中，該方法包含給予有需求之一對象服用青花菜萃取物或粉末與一種植物固醇及/或植物固烷醇或其酯類(或上列者之混合物)之一組合。在一些較佳實施例中，該方法包含給予該對象服用蘿蔔苷、芥子酵素、抗壞血酸，以及一種植物固醇及/或植物固烷醇或其酯類(或上列者之混合物)之一組合。在較佳實施例中，該些組合在本發明之該些方法中表現出協同作用。

在較佳實施例中，該些組合之一種或多種成分(例如，該蘿蔔硫素前驅物、能夠將該蘿蔔硫素前驅物轉化成蘿蔔硫素之該酵素、該酵素增強劑、該植物固醇及/或植物固烷醇或其酯類(或上列者之混合物)；或該蘿蔔硫素或其衍生物及該植物固醇及/或植物固烷醇或其酯類(或上列者之混合物)；或該青花菜萃取物或粉末及該植物固醇及/或植物固烷醇或其酯類(或上列者之混合物))係以單一組成物或單一劑型之方式一起服用，或者係分開服用，較佳者為在該些成分之治療性質互相重疊之一段時間內服用。在一些實施例中，該些組合之該些成分可以兩個或更多個可口服組成物或劑型之方式服用。舉例而言，在一些實施例中，該蘿蔔硫素前驅物、能夠將該蘿蔔硫素前驅物轉化成蘿蔔硫素之該酵素，以及該酵素增強劑係以單一可口服劑型之方式服用，而該植物固醇及/或植物固烷醇或其酯類(或上列者之混合物)則以分開或額外之一個或多個可口服劑型之方式服用。在較佳實施例中，該組合之該些成分係以單一劑型之方式服用。

在一些實施例中，該組合之服用頻率可為每日一次至十次，較佳者為每日一次至五次，更佳者為每日一次至三次，尤佳者為每日一次。

本申請案所揭露之劑量泛指適用於人類(大約68公斤)之劑量。劑量之計算，可由熟習本發明所屬技術領域者在評估體重、表面積、代謝率及物種差異後加以判定。

在本說明書中，「對象」一詞係指任何動物，包含哺乳類及鳥類。哺乳動物包含但不限於人類、狗、貓、馬、牛、駱駝、象、獅、虎、熊、海豹，及兔。在較佳實施例中，該些對象包含非食用類之哺乳動物，例如人類、貓及狗。

示例

示例1

以下為一示範性配方：含蘿蔔苷之青花菜萃取物(大約12% w/w)：50mg至5g

含芥子酵素之冷凍乾燥青花菜芽粉末：25mg至500mg

抗壞血酸，5mg至500mg

妥爾油(Tall oil)植物固醇及植物固烷醇，25mg至50mg

示例2

一種疏水性交互作用層析(hydrophobic interaction chromatographic,HILIC)法已研究出來，該方法包含以下條件：層析管柱：沃特斯公司(Waters Corp.)之BEH(ethylene bridged hybrid)醯胺，粒徑1.7-μm；內徑2.1mm x 100mm

流動相溶液：20% 10mM之醋酸銨，pH 5.0；80%之乙腈；分離方式：等位(isocratic)

管柱溫度：70℃

流率：0.7mL/分鐘

上述條件允許分離五種典型之十字花科硫代葡萄糖苷，包含蘿蔔硫素前驅物、蘿蔔苷。

示例3

蘿蔔苷消耗量作為抗壞血酸濃度之函數。

在有可變濃度之抗壞血酸(範圍從0至600μmoles/Liter)環境下，以取自青花菜芽之固定濃度之芥子酵素，將含有約12%(w/w)蘿蔔苷之大約250mg青花菜種子萃取物加以水解。使該些反應混合物保持在 38℃之恆溫項60分鐘，並每15分鐘取出等份之實驗試樣(aliquots)，以層析方式測定蘿蔔苷(GR)之濃度。蘿蔔苷之消耗速率被解釋為蘿蔔苷轉化成蘿蔔硫素之速率。將蘿蔔苷含量減少作為抗壞血酸濃度增加之函數以圖表呈現時產生了一系列之線性圖；該些線性回歸線之斜率反映了蘿蔔苷之消耗速率，其單位為μmoles/minute。明顯的是，在濃度600μmoles/Liter之抗壞血酸環境下，其反應速率較缺少抗壞血酸之調節作用時之反應速率增加到13倍。

示例4

蘿蔔苷等莫耳轉化成蘿蔔硫素。

茲進行由兩部分組成之一項實驗，以進一步闡明抗壞血酸在調節芥子酵素活性中的作用。所有溶液均以20mM TBS緩衝液(Tris-buffered saline)製備，pH值為7.5，該pH值之前已被指出最適於芥子酵素之活性；每一取樣管內裝有精確稱重之冷凍乾燥青花菜粉末100mg作為芥子酵素之來源。該實驗在38℃下進行2小時，每隔30分鐘移除等分之試樣，且蘿蔔苷及蘿蔔硫素之含量皆以HPLC法測定。一種強酸性之反應停止液被用於即刻抑制被移除等份試樣中芥子酵素之進一步活性。一控制樣本不含抗壞血酸，且未以輔助因子協助酵素轉換之進行。

第一部分。在濃度固定為1mmol/Liter之抗壞血酸環境下，加入青花菜種子萃取物(含大約12% w/w之蘿蔔苷)，份量從250mg增加至500mg。

第二部分。將青花菜種子萃取物之量固定在250mg，使抗壞血酸之濃度從0.4mmol/Liter改變至3.8mmol/Liter。下表將蘿蔔苷(GR)及蘿蔔硫素以μmole為單位表示。明顯的是，在幾乎全部的反應混合物中，蘿蔔苷轉化成蘿蔔硫素在前30分鐘內便告完成。然而，控制樣本在沒有抗壞血酸(AA)之刺激作用下所發生之酵素轉換經仔細檢驗後顯示，蘿蔔苷等莫耳轉化成蘿蔔硫素，亦即所消耗之蘿蔔苷之量，相當於所產生之蘿蔔硫素之量。

該實驗之第二部分評定濃度漸增之抗壞血酸對芥子酵素活性之調節作用。可觀察到的是，在芥子酵素之促進下，蘿蔔苷轉化成蘿蔔硫素一開始明顯呈線性，直到抗壞血酸濃度達2mmol/L，之後便顯著趨於平穩。

最後，在該實驗第一部分之30分鐘後，檢驗蘿蔔硫素之產出，其顯示在濃度1mmol/Liter之抗壞血酸環境下，100mg冷凍乾燥青花菜芽粉末中所含固定份量之芥子酵素，能夠以可預測之線性方式產生至少200μmole之蘿蔔硫素。圖1、2、3及4呈現了本實驗之結果。

示例5

蘿蔔苷在模擬腸液之環境下轉化成蘿蔔硫素。

本實例之實驗使用模擬腸液(SIF)粉末，其係一種商業供應之濃縮物，在組成、pH值及離子強度方面十分接近人類之腸內容物。該實驗使用美國藥典(USP)溶離試驗儀2(Dissolution Apparatus 2(槳形))，有500mL之模擬腸液分配至該試驗儀之六個溶解容器，並以150mg之冷凍乾燥青花菜芽粉末作為芥子酵素之來源。在容器1~4中，抗壞血酸之濃度從0.25mmol/Liter至1.00mmol/Liter不等；在容器5中，除濃度1mmol/Liter之抗壞血酸外，還懸浮有3.125g之胰酵素8X USP；在容器6中，除濃度1mmol/Liter之抗壞血酸及3.125g之胰酵素8X USP外，還加有雙倍份量之冷凍乾燥青花菜芽粉末(300mg)。在該些容器溫度達到38℃後，將富含蘿蔔苷(12%,w/w)之250mg青花菜種子萃取物加入每一容器，並將以此得到之懸浮液以75RPM之轉速攪動2小時。每隔15分鐘取出等份試樣並測定其蘿蔔硫素含量。圖4呈現蘿蔔硫素較大產出與抗壞血酸較高濃度間之直接相關，尤其是在該實驗之前期階段。

示例6

茲進行以下試驗以判定多種植物固醇之組合，對MMP-13基因表現水平之效果。MMP-13為分解第二型膠原蛋白之一種主要膠原蛋白酵素，其經常作為骨關節炎等發炎疾病進程之一標記使用。MMP-13同時受壓力及發炎信號所調節。MMP-13表現之下調對關節健康有益。

在此試驗中，馬軟骨細胞係以：(1)0.5μM蘿蔔硫素(SFN)、(2)8.3μg/mL之植物固醇與植物固烷醇之一混合物，或(3)0.5μM蘿蔔硫素(SFN)與8.3μg/mL之植物固醇與植物固烷醇之一混合物之組合，擇一處理24小時。在預處理後，將該些軟骨細胞以介白素-1 β(IL-1 β)活化24小時，以誘導MMP-13之基因表現，MMP-13會將負責分解細胞外基質或細胞支撐系統之一種蛋白質加以編碼。MMP-13之水平係以定量RT-PCR法測定，並以倍數表現(fold expression)呈現之。

試驗結果顯示，相較於分別使用之情況，蘿蔔硫素與MMP-13之組合具有協同作用。事實上，試驗結果顯示，僅使用植物固醇與植物固烷醇之混合物造成了基因表現之增加。然而，蘿蔔硫素與該些植物固醇及植物固烷醇之組合則協同降低了MMP-13之基因表現。

示例7

茲進行以下試驗以判定多種植物固醇與多種植物固烷醇之組合，對前列腺素E₂(PGE₂)生成之水平之效果。PGE₂為一種疼痛及促發炎介質，經常存在於發炎組織中。PGE₂被認為是經由直接刺激感受傷害之初級感覺神經元(亦稱傷害感受器)，以及間接刺激疼痛相關胜肽P物質(substance P,SP)及抑鈣素基因系胜肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)之釋放，而造成疼痛。

在該試驗中，RAW小鼠巨噬細胞係以：(1)0.5μM蘿蔔硫素(SFN)、(2)8.3μg/mL之植物固醇與植物固烷醇之一混合物，或(3)0.5μM蘿蔔硫素(SFN)與8.3μg/mL之植物固醇與植物固烷醇之一混合物之組合，擇一處理24小時。然後，將該些細胞以脂多醣(LPS)活化，以誘導發炎及PGE₂之生成。PGE₂之生成係以酵素免疫吸附分析法(ELISA)測定。試驗結果顯示，相較於分別使用之情況，蘿蔔硫素與植物固醇及植物固烷醇之組合產生了協同效果。該組合造成了PGE₂生成之減少。

Claims

一種可口服組成物，該可口服組成物包含：一種蘿蔔硫素前驅物；一種能夠將該蘿蔔硫素前驅物轉化成蘿蔔硫素之酵素；一種酵素增強劑；以及一種植物固醇及/或植物固烷醇或其酯類。
如申請專利範圍第1項之可口服組成物，其中該蘿蔔硫素前驅物包含蘿蔔苷。
如申請專利範圍第1項之可口服組成物，其中能夠將該蘿蔔硫素前驅物轉化成蘿蔔硫素之該酵素包含芥子酵素。
如申請專利範圍第1項之可口服組成物，其中該酵素增強劑包含抗壞血酸。
如申請專利範圍第1項之可口服組成物，其中該組成物包含一種腸溶膜衣劑型。
如申請專利範圍第1項之可口服組成物，其中該組成物更包括自下列所構成群組中選定之一種或多種額外成分：檞皮素、一種胺基糖、一種葡萄胺聚醣、鱷梨/大豆之不皂化物、一種維生素、咖啡果實、鎂、熊果酸、一種原花青素、一種兒茶素、一種α-或β-葡聚醣、薑黃素、S-腺苷甲硫胺酸(SAMe)、甜菜素、硫辛酸、沒食子酸、白藜蘆醇、玻尿酸、硼、甲基硫醯基甲烷(MSM)、乙醯基酮-β-乳香酸(AKBA)，以及第二型膠原蛋白。
如申請專利範圍第1項之可口服組成物，其包含蘿蔔苷、芥子酵素、抗壞血酸，以及含有一種或多種植如申請專利範圍第1項之可口服組成物，其中該組成物包含青花菜萃取物或粉末。物固醇及/或植物固烷醇之一混合物。
如申請專利範圍第1項之可口服組成物，其中該組成物包含青花菜萃取物或粉末。
一種針對與結締組織有關聯之一狀況或失調加以治療、預防、減少發生、減輕相關症狀，以及減少二次復發之方法，該方法包括給予有前揭需求之一對象服用一種蘿蔔硫素前驅物；一種能夠將該蘿蔔硫素前驅物轉換成蘿蔔硫素之酵素；一種酵素增強劑；以及一種植物固醇及/或植物固烷醇或其酯類。
一種用於降低一對象體內前列腺素E₂(PGE₂)或基質金屬蛋白酵素第13型(MMP-13)之水平或基因表現之方法，該方法包含給予有前揭需要之該對象服用一種蘿蔔硫素前驅物；一種能夠將該蘿蔔硫素前驅物轉換成蘿蔔硫素之酵素；一種酵素增強劑；以及一種植物固醇及/或植物固烷醇或其酯類。
如申請專利範圍第9或10項之方法，其中該蘿蔔硫素前驅物包含蘿蔔苷。
如申請專利範圍第9或10項之方法，其中能夠將該蘿蔔硫素前驅物轉化成蘿蔔硫素之該酵素包含芥子酵素。
如申請專利範圍第9或10項之方法，其中該酵素增強劑包含抗壞血酸。
如申請專利範圍第9或10項之方法，該方法包含給予服用蘿蔔苷、芥子酵素、抗壞血酸，以及含有一種或多種植物固醇及/或植物固烷醇之一混合物。
如申請專利範圍第9或10項之方法，該方法包含給予服用一種腸溶膜衣劑型。
一種可口服組成物，該可口服組成物包含一種青花菜萃取物或粉末以及一種植物固醇及/或植物固烷醇或其酯類。
如申請專利範圍第16項之可口服組成物，其中該青花菜萃取物或粉末包含大約1至大約75% w/w之蘿蔔苷。
如申請專利範圍第16項之可口服組成物，其中該青花菜萃取物或粉末包含芥子酵素。
如申請專利範圍第16項之可口服組成物，其更包含一種酵素增強劑。
如申請專利範圍第16項之可口服組成物，其中該酵素增強劑包含抗壞血酸。
如申請專利範圍第16項之可口服組成物，其中該組成物包含一種腸溶膜衣劑型。
如申請專利範圍第16項之可口服組成物，其包括一種青花菜萃取物或粉末，以及含有一種或多種植物固醇及/或植物固烷醇之一混合物。
如申請專利範圍第16項之可口服組成物，其更包含自下列所構成群組中選定之一種或多種額外成分：檞皮素、一種胺基糖、一種葡萄胺聚醣、鱷梨/大豆之不皂化物、一種維生素、咖啡果實、鎂、熊果酸、一種原花青素、一種兒茶素、一種α-或β-葡聚醣、薑黃素、S-腺苷甲硫胺酸(SAMe)、甜菜素、硫辛酸、沒食子酸、白藜蘆醇、玻尿酸、硼、甲基硫醯基甲烷(MSM)、乙醯基酮-β-乳香酸(AKBA)，以及第二型膠原蛋白。
一種針對與結締組織有關聯之一狀況或失調加以治療、預防、減少發生、減輕相關症狀，以及減少二次復發之方法，該方法包括給予有前揭需要之一對象服用青花菜萃取物或粉末以及一種植物固醇及/或植物固烷醇或其酯類。
一種用於降低一對象體內前列腺素E₂(PGE₂)或基質金屬蛋白酵素第13型(MMP-13)之水平或基因表現之方法，該方法包含給予有前揭需要之該對象服用青花菜萃取物或粉末以及一種植物固醇及/或植物固烷醇或其酯類。
一種可口服組成物，該可口服組成物包含蘿蔔硫素或其衍生物，以及一種植物固醇及/或植物固烷醇或其酯類。
如申請專利範圍第26項之可口服組成物，其中該組成物包含一種腸溶膜衣劑型。
如申請專利範圍第26項之可口服組成物，其包含蘿蔔硫素或其衍生物，以及含有一種或多種植物固醇及/或植物固烷醇之一混合物。
如申請專利範圍第26項之可口服組成物，其更包含自下列所構成群組中選定之一種或多種額外成分：檞皮素、一種胺基糖、一種葡萄胺聚醣、鱷梨/大豆之不皂化物、一種維生素、咖啡果實、鎂、熊果酸、一種原花青素、一種兒茶素、一種α-或β-葡聚醣、薑黃素、S-腺苷甲硫胺酸(SAMe)、甜菜素、硫辛酸、沒食子酸、白藜蘆醇、玻尿酸、硼、甲基硫醯基甲烷(MSM)、乙醯基酮-β-乳香酸(AKBA)，以及第二型膠原蛋白。
一種針對與結締組織有關聯之一狀況或失調加以治療、預防、減少發生、減輕相關症狀，以及減少二次復發之方法，該方法包括給予有前揭需要之一對象服用蘿蔔硫素或其衍生物，以及一種植物固醇及/或植物固烷醇或其酯類。
一種用於降低一對象體內前列腺素E₂(PGE₂)或基質金屬蛋白酵素第13型(MMP-13)之水平或基因表現之方法，該方法包含給予有前揭需要之該對象服用蘿蔔硫素或其衍生物，以及一種植物固醇及/或植物固烷醇或其酯類。