TW201441617A - 用於測試口臭的方法 - Google Patents

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Abstract

本發明係關於測試口臭之方法，特別是咖啡之口臭。本文係描述測試口腔保健組成物降低口臭之效力的方法，該方法包括下列步驟：a)以口腔保健組成物清潔至少一部分的口腔；b)測試來自清潔過的口腔之呼氣樣本，以提供代表一定量之至少一種呼氣中所偵測到的口臭組份之試驗結果；c)將口腔暴露於包括或能形成至少一種口臭組份之口臭物質中；及d)測試來自此口腔之呼氣樣本，以提供代表一定量之至少一種呼氣中所偵測到的口臭組份之試驗結果。

Description

用於測試口臭的方法
本發明係關於測試口臭之方法，特別是咖啡之口臭。
喝咖啡遍及全世界，常能提升飲用者的能量。相對於不飲用咖啡者，飲用咖啡亦與數種健康利益相關聯，例如降低第II型糖尿病、帕金森氏症、失智症、特定癌症、心律不整和中風發生之機率。然而，由飲用咖啡所產生的產物「咖啡口氣」為不希望的。特別是一整天飲用數杯咖發者特別不為所欲。
已知有特別調配用以抵消洋蔥或大蒜臭味之口腔保健組成物，例如潔牙劑、牙膏、口腔清洗劑或漱口水。已知有大量的潛在活性成份或混合物就此目的併入口腔保健組成物中。然而，對於供有效地打擊洋蔥和大蒜口臭之更有效的口腔保健組成物和活性成份，仍有需求。對於進一步研發以開發此等口腔保健組成物相對地有需求。
當口腔保健組成物係以洋蔥或大蒜之口臭為目標而特別調配時，對於潛在的活性組份和組份組合物，以及組份的量有非常廣泛的選擇。再者，使用者常會疑惑藉由氣味遮蔽(以另一種味道壓到臭味)或藉由消除或將臭味化合物轉換成較不臭的化合物是否能達到降低臭味，而後者為解決臭味之較佳方法。
再者，可能的媒劑和提供其他技術效應之效力，例如抗齲保護、抗牙菌斑效力及抗微生物效力的其他活性組份之選擇，甚為廣泛。
以任何的確定程度預測任何特定調配的口腔保健組成物能如何有效的對抗咖啡口臭，為不可能的。因此，各調配物必須就對抗咖啡口臭之效力個別地測試。
此試驗費時、費工且昂貴。再者，可用作研究和發展過程期間可靠工具之一致和穩健的定量結果，難以達成。
對於可有效地及可靠地測試口腔保健組成物，用以測定任何特別調配物可如何有效的對抗口臭，例如咖啡口臭之測試方法，有其需求。
對於比已知的測試較不費時、較不費工且較不昂貴的測試方法，亦有需求。
再者，對於可容易地達到一致和穩健的定量結果，其可在研究和發展具有所欲效用之口腔保健組成物的過程期間用作為可靠工具之方法，有其需求。
本發明係藉由提供測試和選擇口腔保健組成物減少口臭之效用的方法，解決本項技術之上述需求，此方法係包括至少一或多個下列步驟：以口腔保健組成物清潔至少一部分的口腔並測試清潔過的口腔，提供至少一種呼氣中所偵測到的口臭組份之基線量；將口腔暴露於含至少一種口臭組份之口臭物質中；及由口腔得到呼氣樣本，用以偵測呼氣中該至少一種口臭組份的量，其代表此口腔保健組成物之預防效用； 視需要，將至少一種以口腔保健組成物清潔後呼氣中所偵測到的口臭組份之量與以不同口腔保健組成物清潔之量相比較，並選擇較低量的口腔保健組成物用於提供對抗至少一種口腔中口臭成份之預防效用的方法；以此口腔保健組成物清潔至少一部分的口腔；由口腔得到呼氣樣本用以偵測呼氣中至少一種口臭組份之量，其代表此口腔保健組成物減少口臭之效用；視需要，將至少一種以口腔保健組成物清潔後呼氣中所偵測到的口臭組份之量與以不同口腔保健組成物清潔之量相比較，並選擇較低量的口腔保健組成物用於降低口腔中至少一中口臭組份之方法。
如全文所用，範圍係用於速記供描述在此範圍內的各個和每個值。在此範圍內的任何值皆可選作此範圍的最終值。
由詳細說明和實例，本發明進一步的實施例將變得顯而易見。
本發明之說明
因此，本發明係提供測試和選擇口腔保健組成物減少口臭之效用的方法，此方法包括下列步驟：a1.以口腔保健組成物清潔至少一部分的口腔並測試清潔過的口腔，提供至少一種呼氣中所偵測到的口臭組份之基線量；b1.將口腔暴露於含至少一種口臭組份之口臭物質中；c1.由口腔得到呼氣樣本，用以偵測呼氣中該至少一種口臭組份的量，其代表此口腔保健組成物之預防效用；及d1.將至少一種以口腔保健組成物清潔後呼氣中所偵測到的口臭組份之量與以不同口腔保健組成物清潔之量相比較，並選擇較低量的口腔保健組成物用於提供對抗至少一種口腔中口臭組份之預防效用的方法； 本發明另一方面係提供測試和選擇口腔保健組成物減少口臭之效用的方法，其中該方法係包括下列步驟：e1.將口腔暴露於含至少一種口臭組份之口臭物質中；f1.以此口腔保健組成物清潔至少一部分的口腔；g1.由口腔得到呼氣樣本，用以偵測呼氣中至少一種口臭組份之量，其代表此口腔保健組成物減少口臭之效用；及h1.將至少一種步驟e1中以口腔保健組成物清潔後呼氣中所偵測到的口臭組份之量與以不同口腔保健組成物清潔之量相比較，並選擇較低量的口腔保健組成物用於降低口腔中至少一種口臭組份之方法。
本發明另一方面係提供測試和選擇口腔保健組成物減少口臭之效用的方法，其中該方法係包括下列步驟：a2.以口腔保健組成物清潔至少一部分的口腔並測試清潔過的口腔，提供至少一種呼氣中所偵測到的口臭組份之基線量；b2.將口腔暴露於含至少一種口臭組份之口臭物質中；c2.由口腔得到呼氣樣本，用以偵測呼氣中該至少一種口臭組份的量，其係代表此口腔保健組成物之預防效用；d2.視需要，將至少一種以口腔保健組成物清潔後呼氣中所偵測到的口臭組份之量與以不同口腔保健組成物清潔之量相比較，並選擇較低量的口腔保健組成物用於提供對抗至少一種口腔中口臭組份之預防效用的方法；e2.以步驟a2之口腔保健組成物清潔至少一部分的口腔；f2.由口腔得到呼氣樣本，用以偵測呼氣中至少一種口臭組份之量，其代表此口腔保健組成物減少口臭之效用；及 g2.視需要，將至少一種在步驟e2中以口腔保健組成物清潔後呼氣中所偵測到的口臭組份之量與以不同口腔保健組成物清潔之量相比較，並選擇較低量的口腔保健組成物用於降低口腔中至少一種口臭組份之方法。
本發明另一方面係提供測試和選擇口腔保健組成物減少口臭之效用的方法，其中該方法係包括下列步驟：a2.以口腔保健組成物清潔至少一部分的口腔並測試清潔過的口腔，提供至少一種呼氣中所偵測到的口臭組份之基線量；b2.將口腔暴露於含至少一種口臭組份之口臭物質中；c2.由口腔得到呼氣樣本，用以偵測呼氣中該至少一種口臭組份的量，其係代表此口腔保健組成物之預防效用；d2.將至少一種以口腔保健組成物清潔後呼氣中所偵測到的口臭組份之量與以不同口腔保健組成物清潔之量相比較，並選擇較低量的口腔保健組成物用於提供對抗至少一種口腔中口臭組份之預防效用的方法；e2.以步驟a2之口腔保健組成物清潔至少一部分的口腔；f2.由口腔得到呼氣樣本，用以偵測呼氣中至少一種口臭組份之量，其代表此口腔保健組成物減少口臭之效用；及g2.將至少一種於步驟e2中以口腔保健組成物清潔後呼氣中所偵測到的口臭組份之量與以不同口腔保健組成物清潔之量相比較，並選擇較低量的口腔保健組成物用於降低口腔中至少一種口臭組份之方法。
視需要，此口臭物質係來自咖啡。
視需要，本發明之口腔保健組成物為潔牙劑、漱口水、口腔清洗劑、牙膏、凝膠、牙乳膏、口香糖或可攜帶劑量物件，例如(不限於)菱錠劑、薄荷、微珠、圓片、棒棒糖、經調配以小的可攜式氣霧器(噴霧瓶) 供口腔應用之液體、經調配以小的可攜式滴液產生瓶供口腔應用之液體，或軟式柔韌錠劑(膠姆糖(chewie))。
在某些實施例中，各清潔步驟係包括以牙膏或潔牙凝膠之口腔保健組成物刷洗牙齒。
在某些替代的實施例中，各清潔步驟係包括以漱口水或口腔清洗劑之口腔保健組成物沖洗口腔。
視需要，臭味組份為一雜環化合物之口臭物質。在一實施例中，此雜環化合物為呋喃或吡咯。
視需要，所測試的臭味組份為至少一種由3-甲基-呋喃、2,5-二甲基-呋喃、2-呋喃-甲醇、2-呋喃甲醇乙酸酯、2-甲基硫基-甲基呋喃、1-戊基-吡咯及2,2’-甲基雙呋喃組成之群中選出之口臭組份。
進一步視需要，各測試步驟係偵測至少三種由3-甲基-呋喃、2,5-二甲基-呋喃、2-呋喃-甲醇、2-呋喃甲醇乙酸酯、2-甲基硫基-甲基呋喃、1-戊基-吡咯及2,2’-甲基雙呋喃組成之群中選出之口臭組份。
又進一步視需要，各測試步驟係偵測由3-甲基-呋喃、2,5-二甲基-呋喃、2-呋喃-甲醇、2-呋喃甲醇乙酸酯、2-甲基硫基-甲基呋喃、1-戊基-吡咯及2,2’-甲基雙呋喃組成之群中選出之所有口臭組份。
在本發明一實施例中，口腔保健組成物可包括一或多種羰基化合物，例如醛類和酮類，包封呋喃或吡咯化合物之化合物、焦磷酸四鈉、風味劑及其組合物。
視需要，各取得步驟係包括下列亞步驟：i.在固相微萃取(SPME)纖維上收集至少一種口臭組份；ii.使用層析將所收集的至少一種口臭組份分離；及 iii.使用質譜測定此分離的至少一種口臭組份，提供代表各別的呼氣樣本中此至少一種口臭組份量之定量。
視需要，此層析為氣相層析(GC)及/或此質譜(MS)為三重四極質譜。
視需要，步驟b1或b2係分別在步驟a1或a2之後進行10至30分鐘，步驟c1或c2係分別在步驟a1或a2之後進行15至45分鐘，及步驟e1或e2係分別在步驟a1或a2之後進行30至60分鐘。
在本發明一實施例中，步驟d1或d2中所選的口腔保健組成物係與步驟a1或a2中所選的最初口腔保健組成物不同。
在本發明一實施例中，步驟g1或g2中所選的口腔保健組成物係與步驟a1或a2中所選的最初口腔保健組成物不同。
因此，本發明較佳的實施例係提供一測試方法，其係使用相關儀器，有效地測量人類口中咖啡臭味成份並篩選具有減少咖啡臭味功能之有效用的口腔保健組成物。
本發明較佳的實施例亦提供以一活體外固相微萃取(SPME)技術，使用層析，特別是氣相層析及質譜，特別是三重四極質譜，測量口中，特別是口腔頂端空間咖啡臭味之分析方法。
本發明方法之較佳的實施例可有效地指出人類口中高達七種咖啡臭味成份之濃度量並用於篩選具有減少咖啡惡臭功能之有效用的口腔保健產品。
本發明方法之較佳的實施例可提供能區分對照的口腔保健組成物，例如牙膏及試驗口腔保健組成物，例如牙膏，特別調配供預防和移除口腔中咖啡臭味之活體外方法。
在某些實施例中，本發明係提供測試口腔保健組成物減少咖啡臭味之效用的方法。在測試方法中，口臭係由臭味物質所產生，例如選自至少一種咖啡。雖然可使用原始或天然的物質，但典型地，口臭物質係包括一經測量劑量之口臭物質，其典型地係為方便和可再生的形式，例如粉末或萃取物。
本發明係特別應用於測試減少咖啡臭味之效用。然而，本發明亦可用於試驗其他口臭物質或組份。
在一方面，此方法可提供顯現口腔保健組成物預防性減少來自口臭物質之口臭的能力。
於清潔過的口腔上先進行一清新度試驗，其中係測試呼氣樣本中存在經清潔口中頂部空間之預定口臭組份。然後將口腔暴露於一劑量的口臭物質，及測試另一呼氣樣本中存在具氣味口中頂部空間之預定口臭組份。
二種呼氣樣本之比較顯示口腔保健組成物預防性防止口頂空間免於後續來自較早咖啡暴露所具有的臭味。
第一次清潔口腔頂部空間
在第一步驟中，此方法係以欲測試的口腔保健組成物清潔至少一部份的口腔。清潔步驟典型地係包括以牙膏或潔牙凝膠之口腔保健組成物刷洗牙齒。另一種選擇，此清潔步驟可包括以漱口水或口腔清洗劑之口腔保健組成物沖洗口腔。此清潔步驟較佳地係具有預定的時間，且例如可花費30秒至2分鐘，典型地約1分鐘。
清潔過的口腔頂部空間之取樣
此取樣和各種驗證口部清潔之偵測技術中所描述的過程一般亦用於本發明中其他取樣和偵測步驟。
測試清潔過的口腔之呼氣樣本以決定至少一種呼氣中所偵測的口臭組份之基線量，其應為零或低量的臭味組份。
在此實施例中，此測試步驟係於固相微萃取(SPME)纖維上收集至少一種口臭組份。在此測試方法中係將一SPME纖維束2放入自願的人類受試者之口中。纖維束2係以聚合物質之隔離管4防止與口部直接接觸。纖維束2典型地係包括具有Carboxen®/聚二甲基矽氧烷(CAR/PDMS)作為基質活性基團之75微米塗層的熔融矽氧纖維，一適合的纖維束2，具有一黑色平板收集器，可得自美國賓州貝爾豐特市的Supelco公司。然而，亦可使用其他市售SPME纖維束。自願的人類受試者係經由鼻子吸氣並經由嘴巴呼氣至套管4和纖維束2。
然後，將纖維束2所收集的口臭組份使用層析，典型地氣相層析分離。
例如，在一實施例中，係使用美國加州帕洛阿爾托市之Agilent Technologies公司所販售商品名GC7890A之氣相層析(GC)。然而，亦可使用其他市售的氣相層析設備。
在一實施例中，在此氣相層析中烘箱的溫度係保持在35℃達1分鐘，及然後以15℃/min速率將溫度升至160℃並在該處另再保持2.667分鐘。總計運作時間可能為12分鐘。可使用氦氣作為載體氣體且流速可為1mL/min。注射器溫度可設定在250℃。可使用SLBTM-5ms GC管柱(30m x 0.25mm x 0.25μm膜厚度，可得自賓州貝爾豐特市的Sigma-Aldrich公司)來分離纖維束2中所收集的口臭組份。
待纖維束2中所收集的口臭組份分離後，使用質譜測定一定量分離的口臭組份，以提供代表一定量之至少一種呼氣樣本中口臭組份之定量。
典型地，質譜儀係包括一得自美國加州帕洛阿爾托市Agilent Technologies公司之7000MS三重四極質譜儀。然而，亦可使用其他市售質譜儀。
質譜儀上典型的參數設定係如下。非離子化之溶劑保留時間可從0至0.5分鐘。質譜偵測可在0.5分鐘時啟動。
質譜儀係於各別的採集時間對各偵測的組份記錄多數個計數。本發明之方法僅可用於偵測單一組份。然而，在一較佳的實施例中，係偵測多數個組份，且在各採集時間之計數係代表存在的各別組份之量。
在某些實施例中，其中該方法係用於偵測咖啡臭味，所偵測的該至少一種口臭組份係選自至少一種3-甲基-呋喃、2,5-二甲基-呋喃、2-呋喃-甲醇、2-呋喃甲醇乙酸酯、2-甲基硫基-甲基呋喃、1-戊基-吡咯、2,2’-甲基雙呋喃。在一實施例中，係個別偵測此七種口臭組份中的其中三種，且在另外的實施例中，係個別偵測七種口臭組份。
當使用7000MS三重四極質譜儀偵測這些特定的口臭組份且典型的參數設定係如上設定時，則採集時間係如下：從0.5至2.8分鐘，2-甲基-呋喃可在82.8之分子離子和53.0之子離子偵測到且碰撞能量為20eV。從2.8至4.5分鐘。2,5-二甲基呋喃可在96.2 m/z之分子離子和81.0 m/z之子離子偵測到且碰撞能量為10eV。從4.5至5.5分鐘，2-呋喃甲醇可在98.2 m/z之分子離子和42.1 m/z之子離子偵測到且碰撞能量為10eV。從6.0至6.23分鐘，2-呋喃甲醇乙酸酯可在140.2 m/z之分子離子和98.2 m/z之子離子偵測到且碰撞能量為10eV。從 6.23至6.70分鐘，2-甲基硫基甲基呋喃可在128.2 m/z之分子離子和80.9 m/z之子離子偵測到且碰撞能量為10eV。從6.7至7.1分鐘，1-戊基-吡咯可在137.2 m/z之分子離子和80.9 m/z之子離子偵測到且碰撞能量為10eV。從7.1至12.0分鐘，2,2’-甲基-雙呋喃可在148.2 m/z之分子離子和91.2 m/z之子離子偵測到且碰撞能量為10eV。記錄各組份之總數用以表示已偵測到該組份的量。可加入二或所有的參數之計數以提供代表來自個別組份之組合物的口臭之整體參數。
在某些實施例中，測試步驟進一步係包括將代表各別呼氣樣本中至少二種或全部偵測的口臭組份之量的計數加總之子-步驟，以提供呼氣樣本之單一的定量總計數值。此單一的定量總計數值係代表清潔過的口腔頂部空間中與口臭物質有關的口臭。
將口臭物質導入口中
之後，將口腔暴露於包括或能形成至少一種口臭組份之口臭物質。典型地，係在最初清潔口腔開始後，進行口臭物質暴露10至30分鐘，更典型地約20分鐘。
為了校準一段時間後人類口中氣味濃度之變化，繼續將稀咖啡溶液用於頂部空間方法發展及以SPME-GC-MRM-MS法驗證。咖啡濃度為從2至16mg/mL之37℃水溶液，從該範圍可有效地覆蓋人類口中咖啡氣味強度。
三重複後，來自2mg/mL至16mg/mL之咖啡濃度的咖啡臭味物質之曲線下平均總面積係如下：
咖啡氣味可藉由以3mL的咖啡臭味溶液沖洗1分鐘來導入口腔。
含口臭物質之口腔頂部空間的第一次取樣
測試來自經口臭物質處理的口腔之呼氣樣本，提供代表一定量之至少一種呼氣中所偵測到的口臭組份之試驗結果。視需要，此樣本係於最初的清潔步驟開始後15至45分鐘之期間所採集。
如上述對清潔過的口腔頂部空間之樣本進行測試係，亦即使用SPME纖維束2，及然後如上述進行相同的氣相層析和質譜過程。此含口臭物質之口腔頂部空間的取樣係提供各偵測組份在各別採集時間的多數個計數。
又，本發明之方法僅可用於偵測單一組份。然而，在其他的實施例中，係偵測多數個組份，各自具有個別的採集時間，且在各採集時間之計數係代表存在的各別組份之量。在某些實施例中，測試步驟係將代表各別呼氣樣本中至少二種或全部偵測的口臭組份之量的計數加總，以提供呼氣樣本之單一的定量總計數值。此單一的定量總計數值係代表含口臭物質之口腔頂部空間中與口臭物質有關的口臭。
測試結果可與基線結果相比較，以提供口腔保健組成物預防性減少口臭物質所產生的口臭之能力的指標。
第二次清潔口腔頂部空間
在另一方面，此方法進一步係提供口腔保健組成物清新口腔及減少因先前暴露於口臭物質所產生的口臭之能力指標。
之後，為了測定口腔保健組成物之清新能力，此方法係以測試的口腔保健組成物再次清潔至少一部分有氣味的口腔。
此清潔步驟典型地係包括以牙膏或潔牙凝膠之口腔保健組成物刷洗牙齒。另一種選擇，此清潔步驟可包括以漱口水或口腔清洗劑之口腔保健組成物沖洗口腔。此清潔步驟較佳地係具有預定的時間，且例如可花費30秒至2分鐘，典型地約1分鐘。典型地，係在使用纖維束2從經口臭物質處理的口腔之第二次呼氣樣本採樣後0至5分鐘內進行清潔。
清潔過含口臭物質之口腔頂部空間的第二次取樣
在另一測試步驟中，係測試來自經口臭物質處理過的第二呼氣樣本及隨後清潔過的口腔，以提供代表第二量之至少一種呼氣中所偵測到的口臭組份之第二次試驗結果。視需要，第二樣本係於最初的清潔步驟開始後30至60分鐘之期間所採集，局部地40分鐘。
如上述對清潔過的口腔頂部空間之樣本進行測試。使用另外的SPME纖維束2，及然後如上述進行相同的氣相層析和質譜過程。此取樣係提供各偵測組份在各別採集時間的多數個計數。又，本發明之方法僅可用於偵測單一組份。然而，在較佳的實施例中，係偵測多數個組份，各自具有個別的採集時間，且在各採集時間之計數係代表存在的各別組份之量。在某些實施例中，測試步驟係將代表各別呼氣樣本中至少二種或全部偵測的口臭組份之量的計數加總，以提供呼氣樣本之單一的定量總計數值。此單一的定量總計數值係代表含口臭物質及隨後清潔過的口腔頂部空間中與口臭物質有關的口臭。
第二測試結果可與第一測試結果相比較，以提供口腔保健組成物清新口腔及減少因暴露於口臭物質所產生的口臭之能力的指標。
上述之測試方法可用於比較不同口腔保健組成物於減少口臭，特別是洋蔥及/或大蒜臭味之性能。例如，調配供減少口臭之第一口腔保健組成物可用作為測試樣本，而第二口腔保健組成物可用作為對照樣本。
來自GC-MC讀數之層析圖中的波峰可轉變成個別的臭味組份之計數，其可藉由其個別的採集時間來辨識。因此計數數據係提供各別臭味組份之偵測量的數值。
本發明亦提供用於測試口腔保健組成物減少口臭效力之組成物，其係包括至少一種由下列組成之群中選出的化合物：3-甲基-呋喃、2,5-二甲基-呋喃、2-呋喃-甲醇、2-呋喃甲醇乙酸酯、2-甲基硫基-甲基呋喃、1-戊基-吡咯、2,2’-甲基雙呋喃。
在本發明另外的實施例中，用於測試口腔保健組成物減少口臭效力之組成物係包括至少三種由下列組成之群中選出的化合物：3-甲基-呋喃、2,5-二甲基-呋喃、2-呋喃-甲醇、2-呋喃甲醇乙酸酯、2-甲基硫基-甲基呋喃、1-戊基-吡咯、2,2’-甲基雙呋喃。
在本發明另外的實施例中，用於測試口腔保健組成物減少口臭效力之組成物係包括3-甲基-呋喃、2,5-二甲基-呋喃、2-呋喃-甲醇、2-呋喃甲醇乙酸酯、2-甲基硫基-甲基呋喃、1-戊基-吡咯、2,2’-甲基雙呋喃。
在本發明另外的實施例中，用於測試口腔保健組成物減少上述口臭效力的組成物不具有另外的成份。
本發明亦提供藉由任何上述方法所偵測之口腔保健組成物，其中該口腔保健組成物為潔牙劑、漱口水、牙膏、凝膠、牙乳膏、口香糖 或可攜帶劑量物件，例如(不限於)菱錠劑、薄荷、微珠、圓片、棒棒糖、經調配以小的可攜式氣霧器(噴霧瓶)供口腔施用之液體、經調配以小的可攜式滴液產生瓶供口腔施用之液體，或軟式柔韌錠劑，其可減少至少一種由下列組成之群中選出的化合物：3-甲基-呋喃、2,5-二甲基-呋喃、2-呋喃-甲醇、2-呋喃甲醇乙酸酯、2-甲基硫基-甲基呋喃、1-戊基-吡咯及2,2’-甲基雙呋喃並包括一或多種羰基化合物，一包封呋喃或吡咯化合物之化合物、焦磷酸四鈉、風味劑及其組合物。
在偵測的口腔保健組成物之另外的實施例中，此口腔保健組成物係減少至少三種由下列組成之群中選出的化合物之口臭：3-甲基-呋喃、2,5-二甲基-呋喃、2-呋喃-甲醇、2-呋喃甲醇乙酸酯、2-甲基硫基-甲基呋喃、1-戊基-吡咯及2,2’-甲基雙呋喃。
在偵測的口腔保健組成物之另外的實施例中，此口腔保健組成物係減少來自3-甲基-呋喃、2,5-二甲基-呋喃、2-呋喃-甲醇、2-呋喃甲醇乙酸酯、2-甲基硫基-甲基呋喃、1-戊基-吡咯及2,2’-甲基雙呋喃之組合物的口臭。
本發明亦以下列非限定實例加以說明。
實例 實例1
本發明之活體外測試方法係用於研究牙膏組成物減少咖啡口臭之性能。
使用本發明方法測試一牙膏，用以測定(a)在施用咖啡臭味物質(以下稱為刺激物)之前藉由刷洗預防性防止口腔頂部空間咖啡臭味，及(b)在以刺激物漱口後藉由刷洗移除口腔頂部空間咖啡臭味之能力。
步驟1-第一次清潔口腔頂部空間
以各別的牙膏刷洗自願受試者之牙齒1分鐘。
步驟2-清潔過的口腔頂部空間之取樣
自願受試者經由其口部呼氣至SPME(固相微萃取)纖維束1分鐘，以便於測試來自清潔過的口腔之第一呼氣樣本及將所需的口臭組份收集在SPME纖維上。纖維束係藉由聚合物質之隔離管防止與口部直接觸。纖維束係包括具有Carboxen®/聚二甲基矽氧烷(CAR/PDMS)作為基質活性基團之75微米塗層的熔融矽氧纖維，該纖維束，具有一黑色平的收集器且係得自美國賓州貝爾豐特市的Supelco公司。自願的人類受試者係經由鼻子吸氣並經由嘴巴呼氣至套管和纖維束。
將收集在纖維束中的口臭組份使用氣相層析分離。此氣相層析係使用美國加州帕洛阿爾托市之Agilent Technologies公司所販售商品名GC7890A之氣相層析(GC)。在此氣相層析中烘箱的溫度係保持在35℃達1分鐘，及然後以15℃/min速率將溫度升至160℃並在該處另再保持2.667分鐘。總計運作時間為12分鐘。使用氦氣作為載體氣體且流速為1mL/min。注射器溫度可設定在250℃。可使用SLBTM-5ms GC管柱(30m x 0.25mm x 0.25μm膜厚度，可得自賓州貝爾豐特市的Sigma-Aldrich公司)來分離纖維束中所收集的口臭組份。
待纖維束中所收集的口臭組份分離後，使用質譜測定一定量分離的口臭組份，以提供代表一定量之至少一種呼氣樣本中口臭組份之定量。
質譜儀係包括一得自美國加州帕洛阿爾托市Agilent Technologies公司之7000MS三重四極質譜儀。非離子化之溶劑保留時間係從0至0.5分鐘。質譜偵測係在0.5分鐘時啟動。
質譜儀係於各別的採集時間對各偵測的組份記錄多數個計數。本發明之方法僅可用於偵測單一組份。然而，在一較佳的實施例中，係偵測多數個組份，且在各採集時間之計數係代表存在的各別組份之量。偵測七種口臭組份，其具有各自的採集時間，且各採集時間的計數係代表存在的各別組份之量。
在此實施例中，就偵測洋蔥臭味，所偵測的口臭組份為3-甲基-呋喃、2,5-二甲基-呋喃、2-呋喃-甲醇、2-呋喃甲醇乙酸酯、2-甲基硫基-甲基呋喃、1-戊基-吡咯、2,2’-甲基雙呋喃。
當使用7000MS三重四極質譜儀偵測這些特定的口臭組份及參數設定係如上設定時，採集時間係如下。
從0.5至2.8分鐘，2-甲基-呋喃可在82.8之分子離子和53.0之子離子偵測到且碰撞能量為20eV。從2.8至4.5分鐘。2,5-二甲基呋喃可在96.2 m/z之分子離子和81.0 m/z之子離子偵測到且碰撞能量為10eV。從4.5至5.5分鐘，2-呋喃甲醇可在98.2 m/z之分子離子和42.1 m/z之子離子偵測到且碰撞能量為10eV。從6.0至6.23分鐘，2-呋喃甲醇乙酸酯可在140.2 m/z之分子離子和98.2 m/z之子離子偵測到且碰撞能量為10eV。從6.23至6.70分鐘，2-甲基硫基甲基呋喃可在128.2 m/z之分子離子和80.9 m/z之子離子偵測到且碰撞能量為10eV。從6.7至7.1分鐘，1-戊基-吡咯可在137.2 m/z之分子離子和80.9 m/z之子離子偵測到且碰撞能量為10eV。從7.1至12.0分鐘，2,2’-甲基-雙呋喃可在148.2 m/z之分子離子和91.2 m/z之子離子 偵測到且碰撞能量為10eV。記錄各組份之總數以表示已偵測到該組份的量。
步驟3-將口臭物質導入口中
之後，將自願受試者的口腔暴露於一經計算劑量之咖啡臭味物質中。口臭物質之暴露係在最初清潔口腔開始後進行約15至20分鐘。
製備從2mg/mL至16mg/mL之咖啡濃度，以製備經計算劑量之咖啡臭味物質。咖啡氣味係藉由以3mL的咖啡臭味溶液漱口1分鐘來導入口腔。
步驟4-具臭味之口腔頂部空間的第一次取樣
在另一測試步驟中係測試來自經口臭物質處理的口腔之第一呼氣樣本，以提供代表第一量之至少一種呼氣中所偵測到的口臭組份之第一試驗結果。第一樣本係於最初的清潔步驟開始後20分鐘之期間所採集。
如上述對清潔過的口腔頂部空間之樣本進行測試。使用另一SPME纖維束2，及然後如上述進行相同的氣相層析和質譜程序。此取樣係提供各偵測組份在各別採集時間的多數個計數。再次，將本發明之方法，如前面取樣，用於偵測七種口臭組份。
步驟5-第二次清潔口腔頂部空間
進行另外的測試以提供此口腔保健組成物清新口腔及減少因先前暴露於口臭物質所產生的口臭之能力指標。
使用測試的口腔保健組成物再次清潔口腔。此再次清潔步驟係包括以牙膏刷洗牙齒約1分鐘的時間。此清潔係在從經口臭物質處理的口腔之第一次呼氣樣本採樣後0至5分鐘的期間進行。
步驟6-有臭味然後清潔過的口部之第二次取樣
在另一測試步驟中，類似第一次樣本測試，測試來自經口臭物質處理過及隨後清潔過的口腔之第二呼氣樣本，以提供代表第二量之七種呼氣中所偵測到的口臭組份之第二次試驗結果。視需要，第二樣本係於最初的清潔步驟開始後40分鐘的期間所採集。
如上述對前面樣本進行測試。使用另外的SPME纖維束，及然後如上述進行相同的氣相層析和質譜程序。此取樣係提供各偵測組份在各別採集時間的多數個計數。再次，將本發明之方法用於偵測如前面樣本中之七種口臭組份。
步驟7-第一和第二次取樣之結果比較
將第一次和第二次取樣之層析圖數據，就各七種偵測的口臭組份，藉由比較第一次和第二次取樣之數值的量進行分析。
就各七種偵測的口臭組份，比較第一次和第二次之數值，用以測定此測試的口腔保健組成物在口腔頂部空間內預防性防止洋蔥臭味之能力。
就各七種偵測的口臭組份，比較第一次和第二次之數值，用以測定此測試的口腔保健組成物移除已存在口腔頂部空間內洋蔥臭味之能力。
藉由比較一種口腔保健組物對另一種口腔保健組成物之結果，使用健全和可重複的的測試可將各口腔保健組物對抗口臭之效力量化。對於一較有效的組成物與效用較低的組成物相比較時，移除臭味之效力可以數值下降百分比表示。
當然，可使用其他數據分析技術來分析計算數據以提供測試的口腔保健組物之(絕對或比較性)效力指標。
就各第一和第二次取樣，係將代表各別呼氣樣本中全部七種所偵測的口臭組份之量的計數加總，以提供呼氣樣本之單一的定量總計數值。此單一的定量總計數值係代表含各別取樣中與口臭物質有關的口臭。
再次，藉由將一口腔保健組物之單一的定量總計數值與另一口腔保健組物相比較，使用健全和可重複的測試可將各口腔保健組物對抗口臭之效力量化。
實例2
本發明之活體外測試方法係用於研究不同的牙膏組成物減少咖啡口臭之性能。
使用本發明方法之一實施例於自願者中測量一對照牙膏和一含咖啡臭味劑之測試牙膏，用以測定其各別的(a)在施用刺激物之前藉由刷洗預防性防止口腔頂部空間咖啡臭味，及(b)在以刺激物漱口後藉由刷洗移除口腔頂部空間咖啡臭味之能力。使用如上述實例1之相同的步驟順序。在各順序中，對照牙膏和測試牙膏係獨立地進行測試。
使用相同的咖啡臭味物質。全部七種口臭組份係各以三個樣本來測定。化合物1為3-甲基呋喃，化合物2為2,5-二甲基-呋喃，化合物3為2-呋喃-甲醇，化合物4為2-呋喃甲醇乙酸酯，化合物5為2-甲基硫基-甲基呋喃，化合物6為1-戊基-吡咯及化合物7為2,2’-甲基雙呋喃。
分析第一次之計數數據的臭味預防測試結果(20分鐘後)係如表1-2所示。
表1-3之符號：
A(臭味化合物編號-(1)3-甲基-呋喃，(2)2,5-二甲基-呋喃，(3)2-呋喃-甲醇，(4)2-呋喃甲醇乙酸酯，(5)2-甲基硫基-甲基呋喃，(6)1-戊基-吡咯，(7)2,2’-甲基雙呋喃。
對照牙膏-含焦磷酸四鈉(TSPP)和風味劑
B(對照牙膏-來自三重四極MS偵測器之臭味計數)
C(對照牙膏+含羰基化合物之1%組成物-來自三重四極MS偵測器之臭味計數).
D(臭味化合物之下降%-B與C之比較)
上示數據係顯示本發明之SPME-GC/MS方法得以快速測定含羰基化合物之牙膏提供較低的個別臭味化合物之計數及與無羰基化合物的相同牙膏相比較且能僅以一個測試樣本提供七種臭味化合物之數據。此項提供測試牙膏對抗口臭之減少臭味組份之預防效力和能力之量化指標。
藉由以本發明之SPME-GC/MS方法偵測全部主要的臭味組份，其確定臭味的降低係來自臭味組份之實際的減少而不是遮蔽之結果，亦即羰基化合物之存在比含TSPP和風味劑的比較牙膏更能增進臭味移除。
目前所申請的方法提供了一種用於選擇提供處理臭味之預防性效用的適當潔牙劑，以及選擇供降低臭味組份之適當潔牙劑的方法。
藉由可快速地得到臭味處理之相關數據，不僅可改善所開發的臭味組成物，且可選擇此等組成物而非其他效用較低的組成物並藉由併入降低臭味之不同或另外的試劑幫助裁量個人需求之組成物(例如化合物(6)僅在表2中減少(表2-40.3%)，而表1和表3則看見化合物(6)增加)。
當已說明和描述本發明之特定的實施例時，熟習本項技術者應明瞭，在不悖離如所附的申請專利範圍定義之本發明範圍下，可做各種變化和修改。

Claims (23)

  1. 一種用於測試和選擇口腔保健組成物減少口臭之效用的方法，其中該方法係包括下列步驟：a1.以一口腔保健組成物清潔至少一部分的口腔並測試清潔過的口腔，提供至少一種呼氣中所偵測到的口臭組份之基線量；b1.將口腔暴露於含至少一種口臭組份之口臭物質中；c1.由口腔得到呼氣樣本，用以偵測呼氣中該至少一種口臭組份的量，其代表此口腔保健組成物之預防效用；及d1.將至少一種以口腔保健組成物清潔後呼氣中所偵測到的口臭組份之量與以不同口腔保健組成物清潔之量相比較，並選擇較低量的口腔保健組成物用於提供對抗至少一種口腔中口臭組份之預防效用的方法。
  2. 一種測試和選擇口腔保健組成物減少口臭之效用的方法，其中該方法係包括下列步驟：e1.將口腔暴露於含至少一種口臭組份之口臭物質中；f1.以口腔保健組成物清潔至少一部分的口腔；g1.由口腔得到呼氣樣本，用以偵測呼氣中至少一種口臭組份之量，其代表該口腔保健組成物減少口臭之效用；及h1.將至少一種步驟e1中以口腔保健組成物清潔後呼氣中所偵測到的口臭組份之量與以不同口腔保健組成物清潔之量相比較，並選擇較低量的口腔保健組成物用於降低口腔中至少一種口臭組份之方法。
  3. 一種測試和選擇口腔保健組成物減少口臭之效用的方法，該方法係包括一或多個下列步驟： a2.以一口腔保健組成物清潔至少一部分的口腔並測試清潔過的口腔，提供至少一種呼氣中所偵測到的口臭組份之基線量；b2.將口腔暴露於含至少一種口臭組份之口臭物質中；c2.由口腔得到呼氣樣本，用以偵測呼氣中該至少一種口臭組份的量，其係代表此口腔保健組成物之預防效用；d2.視需要，將至少一種以口腔保健組成物清潔後呼氣中所偵測到的口臭組份之量與以不同口腔保健組成物清潔之量相比較，並選擇較低量的口腔保健組成物用於提供對抗至少一種口腔中口臭組份之預防效用的方法；e2.以步驟a2之口腔保健組成物清潔至少一部分的口腔；f2.由口腔得到呼氣樣本，用以偵測呼氣中至少一種口臭組份之量，其代表此口腔保健組成物減少口臭之效用；及g2.視需要，將至少一種在步驟e2中以口腔保健組成物清潔後呼氣中所偵測到的口臭組份之量與以不同口腔保健組成物清潔之量相比較，並選擇較低量的口腔保健組成物用於降低口腔中至少一種口臭組份之方法。
  4. 如前述申請專利範圍中任一項之方法，其中該口臭物質係來自咖啡。
  5. 如前述申請專利範圍中任一項之方法，其中該清潔步驟係包括：(i)以牙膏或潔牙凝膠之口腔保健組成物刷洗牙齒及/或(ii)以漱口水或口腔清洗劑之口腔保健組成物沖洗口腔。
  6. 如前述申請專利範圍中任一項之方法，其中該臭味組份為呋喃或吡咯化合物。
  7. 如前述申請專利範圍中任一項之方法，其中該臭味組份為至少一種由下列組成之群中選出的口臭組份：3-甲基-呋喃、2,5-二甲基-呋喃、2-呋喃 -甲醇、2-呋喃甲醇乙酸酯、2-甲基硫基-甲基呋喃、1-戊基-吡咯及2,2’-甲基雙呋喃。
  8. 如前述申請專利範圍中任一項之方法，其中該臭味組份為至少三種由下列組成之群中選出的口臭組份：3-甲基-呋喃、2,5-二甲基-呋喃、2-呋喃-甲醇、2-呋喃甲醇乙酸酯、2-甲基硫基-甲基呋喃、1-戊基-吡咯及2,2’-甲基雙呋喃。
  9. 如前述申請專利範圍中任一項之方法，其中該口臭組份為3-甲基-呋喃、2,5-二甲基-呋喃、2-呋喃-甲醇、2-呋喃甲醇乙酸酯、2-甲基硫基-甲基呋喃、1-戊基-吡咯及2,2’-甲基雙呋喃之組合物。
  10. 如前述申請專利範圍中任一項之方法，其中該口腔保健組成物係含有一或多種由下列組成之群中選出的化合物：羰基化合物、包封硫化合物之化合物、焦磷酸四鈉、風味劑及其組合物。
  11. 如前述申請專利範圍中任一項之方法，其中各取得步驟係包括下列亞步驟：i.在固相微萃取(SPME)纖維上收集至少一種口臭組份；ii.使用層析將所收集的至少一種口臭組份分離；及iii.使用質譜測定此分離的至少一種口臭組份之量，以提供代表各別的呼氣樣本中該至少一種口臭組份量之量。
  12. 如前述申請專利範圍中任一項之方法，其中該層析為氣相層析(GC)及/或該質譜(MS)為三重四極質譜。
  13. 如前述申請專利範圍中任一項之方法，其中步驟b1或b2係分別在步驟a1或a2之後進行10至30分鐘，步驟c1或c2係分別在步驟a1或a2之後進行15至45分鐘，及步驟e1或e2係分別在步驟a1或a2之後，進行30至60分鐘。
  14. 如申請專利範圍第3項之方法，其中該方法係包括下列步驟：a2.以一口腔保健組成物清潔至少一部分的口腔並測試清潔過的口腔，提供至少一種呼氣中所偵測到的口臭組份之基線量；b2.將口腔暴露於含至少一種口臭組份之口臭物質中；c2.由口腔得到呼氣樣本，用以偵測呼氣中該至少一種口臭組份的量，其係代表此口腔保健組成物之預防效用；d2.將至少一種以口腔保健組成物清潔後呼氣中所偵測到的口臭組份之量與以不同口腔保健組成物清潔之量相比較，並選擇較低量的口腔保健組成物用於提供對抗至少一種口腔中口臭組份之預防效用的方法；e2.以步驟a2之口腔保健組成物清潔至少一部分的口腔；f2.由口腔得到呼氣樣本，用以偵測呼氣中至少一種口臭組份之量，其代表該口腔保健組成物減少口臭之效用；及g2.將至少一種於步驟e2中以口腔保健組成物清潔後呼氣中所偵測到的口臭組份之量與以不同口腔保健組成物清潔之量相比較，並選擇較低量的口腔保健組成物用於降低口腔中至少一種口臭組份之方法。
  15. 如前述申請專利範圍中任一項之方法，其中步驟d1或d2中所選的口腔保健組成物係與步驟a1或a2中所選的最初口腔保健組成物不同。
  16. 如前述申請專利範圍中任一項之方法，其中步驟g1或g2中所選的口腔保健組成物係與步驟a1或a2中所選的最初口腔保健組成物不同。
  17. 一種用於測試口腔保健組成物降低口臭之效用的組成物，係包括至少一種由下列組成之群中選出的化合物：3-甲基-呋喃、2,5-二甲基-呋喃、2-呋喃-甲醇、2-呋喃甲醇乙酸酯、2-甲基硫基-甲基呋喃、1-戊基-吡咯及2,2’-甲基雙呋喃。
  18. 如申請專利範圍第17項之組成物，其係包括至少三種由下列組成之群中選出的化合物：3-甲基-呋喃、2,5-二甲基-呋喃、2-呋喃-甲醇、2-呋喃甲醇乙酸酯、2-甲基硫基-甲基呋喃、1-戊基-吡咯及2,2’-甲基雙呋喃。
  19. 如申請專利範圍第18項之組成物，其係包括3-甲基-呋喃、2,5-二甲基-呋喃、2-呋喃-甲醇、2-呋喃甲醇乙酸酯、2-甲基硫基-甲基呋喃、1-戊基-吡咯及2,2’-甲基雙呋喃之組合物。
  20. 如申請專利範圍第17-19項中任一項之組成物，其中並無另外的成份。
  21. 一種藉由如申請專利範圍第1-16項中任一項之方法所偵測之口腔保健組成物，其中該口腔保健組成物為一潔牙劑、漱口水、口腔清洗劑、牙膏、凝膠、牙乳膏、口香糖或可攜帶劑量物件，例如(不限於)菱錠劑、薄荷、微珠、圓片、棒棒糖、經調配以小的可攜式氣霧器(噴霧瓶)供口腔應用之液體、經調配以小的可攜式滴液產生瓶供口腔應用之液體，或軟式柔韌錠劑，其係用於減少至少一種由下列組成之群中選出的化合物之口臭：3-甲基-呋喃、2,5-二甲基-呋喃、2-呋喃-甲醇、2-呋喃甲醇乙酸酯、2-甲基硫基-甲基呋喃、1-戊基-吡咯及2,2’-甲基雙呋喃，並包括一或多種羰基化合物、包封呋喃或吡咯化合物之化合物、焦磷酸四鈉、風味劑及其組合物。
  22. 如申請專利範圍第21項之口腔保健組成物，其中該口腔保健組成物係降低至少三種由下列組成之群中選出的化合物之口臭：3-甲基-呋喃、2,5-二甲基-呋喃、2-呋喃-甲醇、2-呋喃甲醇乙酸酯、2-甲基硫基-甲基呋喃、1-戊基-吡咯及2,2’-甲基雙呋喃。
  23. 如申請專利範圍第22項之口腔保健組成物，其該口腔保健組成物係降低來自3-甲基-呋喃、2,5-二甲基-呋喃、2-呋喃-甲醇、2-呋喃甲醇乙酸酯、2-甲基硫基-甲基呋喃、1-戊基-吡咯及2,2’-甲基雙呋喃之組合物的口臭。
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