TW201427671A - 招集及定位幹細胞之組合物及方法 - Google Patents

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Abstract

本文闡述使用經改質胎盤組織以達成內源及外源治療效應之組合物及方法。在施加至受傷或患病器官或身體部分時，該經改質胎盤組織引發幹細胞招集及/或定位直接至或接近該施加位點。本文亦闡述新穎真空乾燥器件及其用途。

Description

招集及定位幹細胞之組合物及方法 相關申請案交叉參考
本申請案係於2013年3月15日申請之美國專利申請案第13/815,873號之部分連續案，其主張於2012年10月12日申請之美國臨時申請案第61/713,352號之優先權。兩個申請案之內容皆係全文以引用方式併入。
本發明部分係關於招集及/或定位幹細胞之組合物。在一個實施例中，將幹細胞招集至患病或受傷器官及/或身體部分之位點以使得該幹細胞於該位點定位延長時間段。幹細胞招集及/或定位係藉由使用足量經改質胎盤組織來達成。亦提供達成幹細胞招集及定位之方法。在相關態樣中，本發明係關於新穎真空脫水器件及其使用。
迄今為止，經改質胎盤組織已用於治療患病或受傷器官。然而，該使用受到可用組織量及器官大小的限制。作為一般規則，已使用引發期望結果之最小量之經改質胎盤組織。舉例而言，使用胎盤組織作為器官之間之屏障層以防止黏著形成。例如，參見美國專利申請公開案第2010/0104539號。在該等案例中，經改質胎盤組織成功提供外源治療效應。
人們充分理解，在治療方案不僅包括外源治療效應且亦包括內 源治療效應時，達成更成功之治療結果。亦即，能協同偶合外源治療劑與其身體自身之自愈能力之患者將達成更佳結果。一種內源癒合機制係將幹細胞招集及/或定位至受傷或患病器官位點。然而，該活體內招集及/或定位極難達成。
本發明部分基於以下發現：在患者之患病或受傷身體部分附近施加足量經改質胎盤組織令人驚訝地引發將幹細胞招集及/或定位至患病或受傷身體部分之位點。此一發現不僅提供由經改質胎盤組織提供之外源治療效應，且亦提供由經招集及/或定位之幹細胞提供之內源治療效應。
因此，在本發明一態樣中提供包含足量經改質胎盤組織以在直接施加至受傷或患病身體部分或其附近時引發活體內幹細胞招集及/或定位之組合物。
在本發明另一態樣中，提供包含足量經改質胎盤組織以在直接施加至受傷或患病身體部分或其附近時引發有效量之幹細胞招集因子以促進活體內幹細胞招集及/或定位之組合物。
在另一態樣中，提供在包含幹細胞之生物來源內引發幹細胞招集及/或定位之方法，該方法包含使該生物來源與足量經改質胎盤組織在該經改質胎盤組織附近引起幹細胞招集及/或定位之條件下接觸。在一個實施例中，所招集幹細胞係造血幹細胞(HSC)。在另一個實施例中，所招集幹細胞係間質幹細胞(MSC)。在一個較佳實施例中，生物來源係動物，例如包括人類之哺乳動物。在另一個較佳實施例中，生物來源係離體來源，例如出生後回收之臍帶血。
在相關態樣中，提供用於使胎盤組織脫水之創新真空脫水器件，其具有改良之性質，例如對胎盤組織損傷極小，改良浮雕(embossment)品質，顯著縮短乾燥時間，及降低與產生脫水胎盤組織 相關之成本。脫水器件包含界定乾燥室且界定流入及流出孔口之乾燥外殼；及在該乾燥室內部，置於真空台頂部上之多孔乾燥板。在另一態樣中，本發明係關於藉由在真空脫水器件中使胎盤組織脫水來使胎盤組織進一步改質。
併入本說明書且構成本說明書之一部分之附圖圖解說明下文所述之若干個態樣。
圖1顯示實例3中所述幹細胞遷移分析之細胞培養插件(culture insert)之示意圖。
圖2顯示在不同量之EpiFix®存在下培養之人類間質幹細胞(MSC)中細胞遷移百分比之長條圖。細節闡述於實例3中。
圖3A顯示在植入後3、7、14及28天時，正常皮膚、假植入體、無細胞真皮基質及EpiFix®中生存/Lin-小鼠造血幹細胞之百分比之長條圖。所顯示值係平均值+/-標準偏差，n=4個樣本。**指示在經由單因子ANOVA比較EpiFix®或對照ADM與正常皮膚及假植入體時，p<0.05。††指示在經由雙尾t測試比較EpiFix®與對照ADM時，p<0.05。圖3B顯示在植入後3、7、14及28天時，正常皮膚、假植入體、無細胞真皮基質及EpiFix®中生存/Lin-小鼠間質細胞之百分比之長條圖。所顯示值係平均值+/-標準偏差，n=4個樣本。**指示在經由單因子ANOVA比較EpiFix®或對照ADM與正常皮膚及假植入體時，p<0.05。細節闡述於實例4中。
圖4A顯示使用CD45及Sca-1之流式細胞術及螢光檢測檢測之細胞之代表性FACS點圖。圖4B顯示經對細胞體進行染色之DAPI及造血幹細胞標記CD34染色之真皮組織之照片。細節闡述於實例5中。
圖5顯示脫水器件之概念圖，其中真空源提供吸力以在經循環且過濾之熱空氣循環期間壓緊胎盤組織及乾燥板。
圖6顯示附接至脫水室之真空台。
圖7顯示聚碳酸酯-聚矽氧複合板，其係由完全由聚矽氧包圍之¼英吋厚之聚碳酸酯插件組成。
在揭示並闡述本發明之前，應理解，下文闡述之態樣並不限於特定組合物、合成方法或用途，此乃因該等內容可變。亦應理解，本文所用術語僅用於闡述具體態樣之目的，且不欲加以限制。
本發明部分基於以下發現：在治療患病或受傷身體部分時使用足量經改質胎盤組織不僅提供外源治療方案，且令人驚訝地亦促進將幹細胞招集及/或定位至欲治療身體部分之內源反應。
I. 定義
在本說明書及下文申請專利範圍中，將提及多個應定義為具有以下含義之術語：必須注意，除非上下文明確說明其他含義，否則說明書及隨附申請專利範圍中所用之單數形式「一(a、an)」及「該」包括複數含義。
「可選的」或「視情況」意指隨後闡述之事件或情況可能發生或可能不發生，且該闡述包括事件或情況發生之情形及不發生之情形。舉例而言，片語「視情況清潔步驟」意指可能或可能不實施清潔步驟。
本文所用術語「個體」或「患者」係指任何脊椎生物，包括(但不限於)不如動物個體，例如人類、農場動物、家養寵物及諸如此類。
本文所用術語「羊膜」包括中間組織層完整或已實質上移除之羊膜。
本文所用術語「身體部分」係指個體之身體之任一部分，包括 組織及器官，亦及一般不稱為器官之身體部分，前提係該等身體部分適合用幹細胞治療。實例性身體部分包括(但不限於)骨、軟骨、腱、韌帶、視網膜、周圍神經、周圍神經鞘、小腸、大腸、胃、骨骼肌、心臟、肝、肺及腎。
本文所用術語「患病的」係指描述為處於疾病狀態或懷疑處於疾病狀態之器官及/或身體部分，其中該疾病適合用幹細胞治療。
本文所用術語「受傷的」具有業內普通含義，且包括對器官及/或身體部分之任何及所有類型之損傷，其中該損傷適合用幹細胞治療。
術語「經改質胎盤組織」係指胎盤組織之任何及所有組份，包括已藉由對組織進行清潔、消毒及/或切片改質之完整胎盤組織，以及胎盤組織之分離組份，例如羊膜、絨毛膜、中間層、臍帶及諸如此類。經改質組織可維持細胞層，例如上皮層及/或成纖維細胞層。經改質胎盤組織可包括進一步改質，例如層壓一或多個胎盤組織層、胎盤組織之微粉化、小分子、蛋白質(例如生長因子、抗體)、核酸(例如適配體)、聚合物或其他物質之化學吸附或物理吸附。
術語「足量」係指經改質胎盤組織之足以隨時間在活體內或活體外在經改質胎盤組織附近或在該經改質胎盤組織上引起幹細胞招集之量。經改質胎盤組織之「足量」將隨多種因素而變，例如(但不限於)所用胎盤組織之類型及/或數量、意欲治療之器官及/或身體部分之類型及/或大小、欲治療器官及/或身體部分之疾病或損傷之嚴重度及投與途徑。熟習此項技術者可基於本文提供之揭示內容來確定「足量」。
術語「幹細胞招集因子」係指能招集幹細胞並使其朝向因子之來源遷移之任何及所有該等因子。幹細胞招集因子之非限制性實例可為一或多種CC趨化素、CXC趨化素、C趨化素或CX3C趨化素。
術語「幹細胞招集及/或定位」係指幹細胞向施加有經改質胎盤組織之身體部分之直接或間接趨化作用。在本申請案之上下文中，術語「招集」係指藉由施加本發明所涵蓋之經改質胎盤組織誘導之幹細胞遷移至受傷或患病器官或身體部分。
招集可係直接招集，其中自胎盤組織釋放經改質胎盤組織中之幹細胞招集因子(例如趨化素，其誘導細胞趨化作用)且其誘導幹細胞向施加有經改質胎盤組織之身體部分遷移。在一態樣中，招集可係間接招集，其中自胎盤組織釋放經改質胎盤組織中之幹細胞招集因子，其誘導鄰近細胞釋放因子(例如趨化素)，該等因子繼而誘導幹細胞向施加有經改質胎盤組織之身體部分遷移。此外，幹細胞招集可體現直接因子及間接因子二者。
術語「定位」意指所招集幹細胞在施加有經改質組織之受傷或患病器官或身體部分處保留延長時間段。定位係藉由經改質胎盤組織及/或其他有助於定位之試劑(例如增加黏度之試劑及觸變劑)之存在來達成，如下文各個實施例中所詳述。
可定位或招集之幹細胞可係患者中已存在之內源幹細胞。或者，幹細胞可來自外源來源且毗鄰患者之患病或受傷位點投與。在任一情形中，經改質胎盤組織用於保留已在其附近之彼等幹細胞，從而定位彼等幹細胞，同時招集距其更遠之幹細胞遷移至患病或受傷位點。
本文所用術語「在......附近」意指毗鄰身體部分或在該身體部分上。舉例而言，經改質胎盤組織在心臟附近意指胎盤組織可在心臟上，或在心臟1-2cm內，但仍足夠接近以發揮幹細胞招集效應。一般而言，「在......附近」意指經改質胎盤組織經置放足夠接近以將幹細胞招集至患病或受傷器官及/或身體部分。此一距離一般係由熟習此項技術者來確定，但較佳在器官或身體部分之約5cm內，在約4cm 內，在約3cm內，在約2cm內或在約1cm內。
術語「外源」係指非天然物質，包括同種異體移植物組織(例如經改質胎盤組織)及幹細胞.在本發明上下文中，外源治療效應係指經改質胎盤組織在施加至受傷或患病器官或身體部分時產生之治療效應，例如在器官或身體部分之間起物理屏障作用以防止黏著形成。
術語「內源」係指來自個體之自體生物物質。在本發明上下文中，內源治療效應係在所治療個體之身體對治療產生自體反應時達成。舉例而言，在所治療個體之身體產生自體反應時，在施加有經改質胎盤組織之位點招集及/或定位幹細胞。
術語「生物來源」係指含有可被招集之幹細胞群之器官或組織，例如骨髓。生物來源可係活體內或活體外來源。
II. 胎盤組織之改質
在一個實施例中，胎盤組織可如美國專利第61/683,698號中所述經改質，包括清潔、分離羊膜及絨毛膜、移除或維持上皮細胞層、去污染及脫水。脫水可使用如美國專利第61/683,700號中所述之乾燥裝置來完成。該兩個申請案皆係全文以引用方式併入本文中。出於本發明之目的，該方法之每一態樣產生單獨或組合使用之經改質胎盤組織。然而，經改質胎盤組織較佳至少包括清潔及去污染步驟。因此，經改質胎盤組織較佳包含已清潔且去污染之胎盤組織，且亦包括已經歷分離羊膜及絨毛膜、移除上皮細胞層及脫水中之一或多者之胎盤組織。
在一些實施例中，經改質胎盤組織選自羊膜、絨毛膜或羊膜及絨毛膜二者。在一個實施例中，經改質胎盤組織包括臍帶，且在另一個實施例中，其不包括臍帶。
經改質胎盤組織亦可形成多個層，其可分開乾燥並層壓在一起或一起乾燥以形成多層壓層。在一個實施例中，層壓兩個或更多個羊 膜層。在另一個實施例中，層壓兩個或更多個絨毛膜層。在另一實施例中，層壓羊膜層及絨毛膜層。視情況，在層壓之前，使羊膜層進一步改質以實質上移除上皮層。較佳地，成纖維細胞層在移除上皮層後保持實質上完整。
經改質胎盤組織亦可微粉化為多種大小的顆粒。微粉化胎盤組織可夾在多層壓層之一或多層之間，或可位於壓層頂部上。亦可將微粉化胎盤組織添加至經改質胎盤組織單層。例如，參見美國臨時申請案第61/543,995號，其係全文以引用方式併入本文中。
可進一步處理經改質胎盤組織以獲得生物因子之水性溶液萃取物。此一萃取物之製備及使用闡述於美國專利申請案第13/744,331號中，其係全文以引用方式併入本文中。
在某些實施例中，本文所述經改質胎盤組織係使用創新脫水器件脫水，該創新脫水器件藉由包括功能性乾燥板與自整合真空源接觸來改良如美國專利申請案第13/744,332號(全文以引用方式併入本文)中所述之乾燥裝置。更特定而言，脫水器件包含：(i)界定乾燥室且界定流入及流出孔口之乾燥外殼；及(ii)在該乾燥室內部，多孔乾燥板置於真空台頂部上。多孔乾燥板具有接收欲脫水胎盤組織之第一表面；及與該第一表面相對之第二表面，該第二表面與真空台直接或間接接觸。在此一組態中，脫水器件在脫水過程期間容許真空吸力將置於乾燥板表面上之胎盤組織固持就位。
在某些實施例中，乾燥板係由容許剛好足以將胎盤組織黏著至表面之材料製成，使得胎盤組織在乾燥過程期間保持穩定拉伸，以防止胎盤組織移動及/或收縮。另一方面，黏著性過強的材料會使得難以自表面移除脫水胎盤組織，由此對脫水胎盤組織造成不期望之撕裂或其他損傷。較佳地，用於乾燥板之材料具有疏水表面及期望彈性。在一個實施例中，用於乾燥板之材料係聚矽氧或聚碳酸酯。較佳地， 乾燥板包含完全由聚矽氧包圍以提供期望勁度及疏水性質之聚碳酸酯插件。更佳地，乾燥板之厚度為至少英吋、至少¼英吋、至少英吋、至少½英吋、至少英吋、至少¾英吋、至少英吋或至少1英吋以提供期望勁度，由此在真空乾燥期間防止撓曲/彎曲。
乾燥板可經進一步改良以具有其他期望特徵。舉例而言，乾燥板含有壓痕、突出或二者以在組織移植物上產生浮雕。乾燥板具有凸起浮雕或凹下浮雕以使得在乾燥過程期間將浮雕強加至胎盤組織上。實例性浮雕包括(但不限於)字母、字符、設計、標誌、圖像、圖案等。較佳地，在胎盤組織上強加之浮雕容許最終用戶藉由肉眼藉助(例如)在自一側而非另一側可視化時表現不同之不對稱特徵容易地區分脫水胎盤組織之一側與另一側。
在一些實施例中，乾燥板可為半透明或不透明。較佳地，乾燥板可具有與胎盤組織之自然顏色顯著不同且使得易於目測檢查置於該板上之胎盤組織之顏色，例如薄荷綠或醫用藍色。在一些實施例中，乾燥板具有平滑表面。在其他實施例中，乾燥板具有紋理化表面。熟習此項技術者將能改變與胎盤組織接觸之乾燥板表面之紋理，以獲得具有期望紋理之脫水胎盤組織。
乾燥板係多孔板，其具有散佈在乾燥板整個區域之孔洞或穿孔以容許施加真空壓力。在將胎盤組織置於乾燥板表面上之後，施加真空吸力以將胎盤組織壓至該板之乾燥表面上。真空之壓力經調節以使得將浮雕清晰地強加至胎盤組織上，同時防止胎盤組織及板彎曲、撓曲及/或收縮。
可改變孔洞之數目及大小以達成期望結果。在一些實施例中，孔洞可按期望圖案排列。較佳地，孔洞均勻散佈在板之整個表面上，以使得所有孔洞皆由胎盤組織覆蓋以提供均勻且一致的真空壓力。孔洞之圖案可具有或可不具有對稱設計。較佳地，孔洞按正方形對稱圖 案排列。
在一個實施例中，在約100cm2、約150cm2、約200cm2、約250cm2、約300cm2、約350cm2、約400cm2、約450cm2或約500cm2面積上有約50個、約100個、約150個、約200個、約250個、約300個孔洞。在另一個實施例中，孔洞之大小可介於0.1mm至10mm直徑範圍內，例如，小於0.1mm、小於0.5mm、小於1mm、小於2mm、小於3mm、小於4mm、小於5mm、小於6mm、小於7mm、小於8mm、小於9mm或小於10mm。較佳地，孔洞之大小介於4mm與8mm直徑之間。乾燥板上之孔洞可具有或可不具有相同大小。
真空源向置於乾燥室內之真空台供應減壓。然後，真空台且相關地乾燥板及胎盤組織經受來自真空源之可變且可控量之減壓以對胎盤組織施加機械力，由此將胎盤組織固持就位。熟習此項技術者可熟練地調節真空壓力以使得向胎盤組織施加最小壓力，以避免對組織造成損傷；但真空壓力足以防止胎盤組織在乾燥過程期間移動及/或收縮且將清晰浮雕強加至胎盤組織。
當在過高真空壓力下實施脫水時，產生具有不均勻表面之組織移植物，例如「氣泡」形成；當在過低真空壓力下實施脫水時，胎盤組織在該過程期間不夠穩定，且組織因此可收縮、起皺及/或具有模糊浮雕。
因此，熟習此項技術者應理解，脫水器件受差壓梯度控制，該差壓梯度係自經過室充氣部之循環氣流之輕微正壓力與來自藉由乾燥夾具之內通道施加至移植物之真空之輕微負壓力之間之差異產生。此梯度可根據下式來計算且經處理以有助於組織並經由此真空乾燥裝置之設計特徵加快乾燥。此係藉由控制至少四個參數來完成，即接觸板表面上之孔洞之數目、孔洞之大小或直徑、真空壓力及乾燥板之總表面積。
熟習此項技術者可熟練地選擇適宜真空台。多種市售真空台適用於本發明之目的。舉例而言，可使用購自Werner Machine公司之Werner Machine真空台。或者，真空台可得自Systematic Automations。
在一些實施例中，將乾燥板加熱至高至足以加速乾燥過程但未過高而損傷胎盤組織之溫度。或者，將通過乾燥室之充氣部之空氣加熱至介於20℃與45℃之間之恆定溫度。較佳將空氣或板或二者之溫度恆定保持在45℃以減少乾燥室中之水分含量，以加速乾燥過程。過濾經加熱空氣且使其在整個乾燥室中循環以自室內部之胎盤組織及氣氛移除水分。在其他實施例中，藉由將乾燥劑串聯置於氣流入口線及出口線中之一者或兩者中(仍在室外)自氣流移除水分。使經加熱空氣經過乾燥劑再循環進一步降低成本並加速乾燥過程。較佳地，經加熱氣流相對於胎盤組織表面成45°角。
在其他態樣中，可將多個胎盤組織移植物置於乾燥板上以在脫水器件中同時乾燥一個以上胎盤組織移植物。儘管脫水器件可用於使本文所述組織移植物脫水，但其可用於使除了胎盤組織以外之物體脫水。
III 經改質胎盤組織之使用
本申請案之發明者驚訝地發現，使用本發明所涵蓋之經改質胎盤組織達成兩倍治療效應：將經改質胎盤組織施加至個體之受傷或患病器官或身體部分不僅產生外源治療效應，且亦藉由將幹細胞招集及/或定位至施加位點提供內源治療效應。
其意外地發現，在將經改質胎盤組織施加至受傷或患病器官或身體部分之後，幹細胞遷移至受傷或患病位點以使得幹細胞在該位點 以高於正常生理條件下之幹細胞濃度之濃度積累。此幹細胞招集係由施加至該位點之經改質胎盤組織直接誘導，其在施加後釋放諸如趨化素等幹細胞招集因子。或者，幹細胞招集係由施加至該位點之經改質胎盤組織間接誘導-施加經改質胎盤組織對鄰近細胞具有誘導效應，其繼而釋放幹細胞招集因子以將幹細胞吸引至受傷或患病位點。在較佳實施例中，幹細胞招集係由經改質胎盤組織產生之直接效應與間接效應之組合誘導。
在一些態樣中，可向本技術之經改質胎盤組織(包括微粉化胎盤組織或經改質胎盤組織之萃取物或水性溶液)添加一或多種增強幹細胞趨化作用及/或招集之幹細胞招集因子。或者，可向壓層組織移植物之層添加幹細胞招集因子。因此，例如，可向經改質胎盤組織添加細胞因子、趨化素、生長因子、細胞外基質組份及其他生物活性材料以增強天然幹細胞招集。幹細胞招集因子之特定非限制性實例可包括以下中之一或多者：CC趨化素、CXC趨化素、C趨化素或CX3C趨化素。其他幹細胞招集因子可進一步包括生長因子，例如cc-成纖維細胞生長因子(αFGF或αFGF-1)、β-成纖維細胞生長因子(βFGF-1或βFGF-2)、血小板衍生生長因子(PDGF)、血管內皮生長因子(VEGF-A、B、C、D或E)、血管生成素-1及-2、類胰島素生長因子(IGF-1)、骨型態發生蛋白(BMP-2及-7)、轉變生長因子-α及-β(TGF-α及TGF-β)、表皮生長因子(EGF)、結締組織生長因子(CTGF)、肝細胞生長因子(HGF)、人類生長激素(HGH)、角質細胞生長因子(KGF)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白血病抑制因子(LIF)、神經生長因子(NGF)、基質細胞衍生因子1(SDF-1α)、顆粒球巨噬細胞集落刺激因子(GM-CSF)及業內已知之其他因子。
在將幹細胞招集至受傷或患病器官或身體部分後，藉由將幹細胞於位點定位延長時間段來增強治療效應。幹細胞定位係藉由經改質 胎盤組織之存在來達成，其經延長時間段持續釋放幹細胞招集因子。因此，熟習此項技術者可熟練地進一步改質胎盤組織以納入不同釋放階段之幹細胞招集因子。例如，微粉化胎盤組織係與經改質胎盤組織組合使用以達成幹細胞招集因子之立即釋放、延遲釋放及延長釋放。在另一個實施例中，將經改質胎盤組織之萃取物或水性溶液與其他形式之經改質胎盤組織組合，以使得萃取物或溶液可藉由快速開始釋放幹細胞招集因子來引發幹細胞之立即招集；同時其他形式之經改質胎盤組織可延遲釋放幹細胞招集因子以使得將幹細胞招集至位點及/或於該位點定位延長時間段，由此增強治療效應。
可將其他藥劑與經改質胎盤組織一起共投與至受傷或患病器官或身體部分以有助於招集至位點之幹細胞之定位。例如，可將經改質胎盤組織與藥劑共投與以提高在局部位點之黏度。任何適於醫藥用途之增稠劑(包括膠凝劑、觸變劑、相變劑等)皆在本發明範圍內。在與經改質胎盤組織共遞送時，該等藥劑在活體內形成黏稠或凝膠狀生物可蝕性或生物可降解團塊，其限制自遞送位點向外轉運且容許幹細胞招集因子經一段時間自所形成團塊擴散。
生物相容性觸變劑選自(僅舉例而言)透明質酸、膠原、凝血酶凝膠、纖維蛋白凝膠及纖維蛋白膠。在另一個實施例中，相變劑係凝膠形成劑，例如Pluronic®(例如，氧乙烯與氧丙烯之共聚物)。較佳地，用作膠凝劑、觸變劑或相變劑之任何聚合物皆具有生物可蝕性。在另一實施例中，器官或身體部分選自由以下組成之群：皮膚、黏膜、牙齦、骨、軟骨、腱、視網膜、周圍神經、周圍神經鞘、小腸、大腸、胃、骨骼肌、心臟、肝、肺及腎。
在其他實施例中，觸變組合物或相變組合物係在遞送至個體之前形成。該等組合物包含經改質胎盤組織及增稠劑。觸變組合物係如下組合物：在不存在剪切時，該組合物具有高黏度(其不移動)，且在 剪切存在下，該組合物之黏度顯著降低以可在剪切下遞送。觸變組合物之實例係牙膏。相變組合物係水性組合物，其基於諸如以下等適宜觸發事件經歷自液體至凝膠或固體團塊之變化：溫度升高、光活化、電磁刺激、添加相變輔因子(例如，藻酸鹽加鈣)。該等組合物為業內所熟知。該等組合物較佳可在注射下遞送但視需要亦可局部遞送。若組合物之黏度不允許習用注射，則可使用高壓注射器且其為業內所熟知。該等高壓注射器之非限制性實例包括美國專利第6,503,244號(全文以引用方式併入本文中)中所闡述之彼等及諸如此類。
因此，多種使得必須將經改質胎盤組織施加至受傷或患病器官或身體部分之療法除了外源治療效應以外，亦藉助幹細胞之招集及/或定位產生內源治療效應。該等療法例示於下文中且不欲限制本發明。其他實例性療法闡述於美國專利申請案第13/815,873號及第61/713,352號中，其係以引用方式明確併入本文中。
A.傷口癒合
舉例而言，經改質胎盤組織已用於多個傷口癒合應用中。羊膜含有促進傷口癒合及再上皮化之生長因子，例如EGF、bFGF及PDGF。本發明係基於以下發現：在以足量使用時，該經改質胎盤組織亦直接或間接在施加位點附近誘導幹細胞招集。在一態樣中，施加本文所述經改質胎盤組織(其中皮膚之上皮層破裂)可有效地將生長因子直接遞送至受傷位點以促進癒合以及幹細胞招集。羊膜由於IV型、V型及VII型膠原之存在而係獨特ECM，該存在使得羊膜能結合水並膨脹。應理解，經改質胎盤組織之傷口癒合態樣具有外源治療效應，而自經改質胎盤組織直接及/或間接引起之幹細胞招集具有內源治療效應。
類似地，胎盤組織之中間組織層主要係由糖蛋白及蛋白多糖組成，此亦使得中間組織層能結合水。因此，經改質胎盤組織在施加至 患病或受傷器官或身體部分時幫助將水保持在該位點，從而有助於癒合。舉例而言，在親水環境中有助於癒合級聯內之細胞遷移(包括幹細胞招集)。中間層亦係由I型、III型及IV型膠原組成。I型膠原藉由提供用於細胞附接及大分子固著之主要生物機械支架來向皮膚提供機械強度。III型膠原提供彈性。
傷口每日向醫師呈現自身之類型各不相同。急性傷口係由手術幹預、創傷及燒傷造成。慢性傷口係與其他方面健康之個體之癒合相比延遲閉合之傷口。困擾患者之慢性傷口類型之實例包括糖尿病性足潰瘍、靜脈性下肢潰瘍、壓力性潰瘍、動脈性潰瘍及經感染手術傷口。
在治療創傷性傷口時，醫師之目標係在容許患者保持傷口區域之自然功能且使瘢痕及感染極小的同時癒合傷口。若傷口感染，可導致喪失肢體或生命。大多數情況下，醫師使該等患者癒合且無意外事件。然而，處理慢性傷口之醫師主要關注儘可能快地使傷口閉合，以使可能導致喪失肢體或生命的感染的風險降至最低。慢性傷口係患有共病之患者之傷口，該等共病使癒合級聯變複雜或延遲該級聯。在一態樣中，本文所述經改質胎盤組織可起遞送必需傷口癒合因子、細胞外基質蛋白、發炎介質之組織再生模板作用，以及引發至該位點之幹細胞招集及/或定位，以幫助減輕發炎、促進癒合並減少瘢痕組織形成。在此態樣中，本文所述經改質胎盤組織(包括微粉化胎盤組織)係用於治療適合負壓力技術之傷口，包括燒傷及潰瘍，例如慢性潰瘍、糖尿病性潰瘍、褥瘡及諸如此類。在另一態樣中，經改質胎盤組織係結合習用治療(包括(但不限於)負壓力療法)使用，且亦可與包括生物相容性材料(例如膠原、透明質酸、明膠或其組合)之基質或支架組合使用。
B.防止瘢痕形成
在另一態樣中，本文所述經改質胎盤組織可用於防止手術切口導致之瘢痕形成。倘若手術程序產生大切口，則經改質胎盤組織非常有用。具體而言，經改質胎盤組織可用於解決或減輕在手術後於脊柱及周圍區域發生之併發症。在一態樣中，經改質胎盤組織可用於防止或減少在脊柱上或脊柱附近之瘢痕形成並密封硬膜撕裂。手術後在脊柱處或在脊柱附近之瘢痕形成可令人極度虛弱，且可能需要後續手術來解決如上文所討論之症狀。術語「抗黏著」在業內亦用於指在脊柱處或在脊柱附近預防瘢痕組織。作為外源療法，經改質胎盤組織可用做保護屏障以防止脊柱硬膜因周圍手術位點而受到手術後創傷。舉例而言，組合物可防止諸如脊椎骨等新切割骨之銳邊對脊柱硬膜造成損傷。在其他態樣中，經改質胎盤組織可用於腰椎前方椎體間融合、腰椎後方椎體間融合、經腰椎椎體間融合、頸椎前路椎間盤切除融合、顯微椎間盤切除、脊柱硬膜修復，且作為硬膜密封劑用於防止CSF洩漏。在每一態樣中，將經改質胎盤組織施加至位點藉由自身體其他部分向該位點招集及/或定位幹細胞來誘導自體反應，由此增強治療效應。
C.骨科應用
在其他態樣中，本文所述經改質胎盤組織可用於骨科應用(即，運動醫學)。運動醫學包括修復及重建在活躍個體及運動員之關節中或關節周圍因創傷或反覆運動引起之慢性病況造成之各種軟組織損傷。舉例而言，運動醫學包括治療與肩、肘、足、踝、手及腕相關(但不限於此)之多種不同損傷。在一態樣中，經改質胎盤組織可用於減輕發炎(例如，網球肘、腕隧道症等)。在其他態樣中，可將經改質胎盤組織施加至關節表面以提供醫學益處。舉例而言，經改質胎盤組織可幫助減輕關節表面之發炎或腫脹。在其他態樣中，經改質胎盤組織可幫助修復軟骨細胞及/或其再生長。在其他態樣中，本文所述經 改質胎盤組織可用於其他骨科應用中，例如幫助修復骨膜；幫助修復破裂/受損的滑液囊；在骨修復期間幫助固定填隙材料；或用於涉及個體骨端之應用(例如，用於小骨固定之抗黏著屏障，其中使用金屬電鍍或硬體之抗黏著屏障，或幫助修復破裂/受損的滑液囊)。在每一情形中，幹細胞招集及/或定位之額外益處向患病及/或受傷器官及/或身體部分提供進一步程度之內源療法。
D.其他療法
在其他態樣中，經改質胎盤組織可用於減少與牙齦炎、牙周炎、黏膜炎及植入體周圍炎相關之發炎；治療牙周骨內缺損以再生新骨、組織/器官修復及再生、牙周韌帶及齒堊質；使牙科植入體周圍損失之骨再生；在骨塑形後增加臨床附連之量；治療牙齦萎縮；經由手術重建或藉由直接注射乳突以增加大小和厚度來使牙間乳突再生；在齒槽垂直及水平骨增大中施加至屏障膜或生物相容性網狀物頂部上；在初次縫合後施加於手術位點上以幫助癒合；在牙齦萎縮治療中在置放軟組織移植物之前、期間或之後施加至自體移植物、異種移植物、異質移植物(alloplast)、屍體同種異體移植物或胎盤同種異體移植物軟組織移植物上；增加臨床附連之量；在牙齒及牙科植入體周圍之牙齦增大；擴大角質化組織區域；在引導骨再生中增厚覆蓋牙齦組織；在置放之前、期間或之後與異質移植物、異種移植物及/或屍體骨移植物混合用於治療骨內缺損以使新骨、牙周韌帶及齒堊質再生；在引導骨再生中使植入體周圍損失之骨再生；位點保存；開窗法及骨裂缺損；初次及二次齒槽骨脊增大；竇增高；及牙齦瓣膜穿孔。在涉及牙本質及牙髓組織之應用中，減少牙髓組織發炎，治療牙髓病灶，牙髓再生，及在牙髓療法中在填塞之前注射至空心牙髓腔中。在涉及口腔黏膜組織之應用中，減少口腔病灶之發炎，治療口腔病灶，及在置放軟組織移植物之前、期間或之後施加至自體移植物、異種移植 物、異質移植物、屍體同種異體移植物或胎盤同種異體移植物軟組織移植物上，以替代在疾病或創傷性損傷期間損失之較大量黏膜組織。
在上述每一應用中，將經改質胎盤組織以足以吸引幹細胞並促進內源癒合之量直接施加至患病及/或受傷身體部分、施加至其近端或其內部。在各個態樣中，為將幹細胞吸引至受損身體部分，在幹細胞遷移至目標身體部分之前需要足量胎盤組織。舉例而言，如實例3中所述，以濃度依賴性方式因應EpiFix®發生幹細胞遷移。發現1.5mm直徑之EpiFix®經改質胎盤組織圓盤在活體外不會導致顯著幹細胞遷移。然而，4mm直徑之EpiFix®經改質胎盤組織圓盤及12×13mm正方形EpiFix®斑塊顯示與對照細胞相比在統計學上顯著增加幹細胞之遷移。一平方公分之EpiFix®重4mg。令人驚訝地，即使活體外幹細胞遷移亦需要最小質量之經改質胎盤組織以誘導遷移，即大於1.5mm EpiFix®經改質胎盤組織圓盤之質量。換言之，足量經改質胎盤組織之存在與足夠濃度之幹細胞招集因子相關聯以使得達成幹細胞招集及/或定位。
另外，實例4闡述在小鼠中活體內植入5×5mm正方形EpiFix®經改質胎盤組織斑塊，導致在植入後約2週時開始統計學上顯著增加幹細胞招集。就此而言，預期使用較大量之EpiFix®經改質胎盤組織將進一步增強幹細胞招集，即在縮短時間範圍內達成幹細胞招集及/或在給定時間段中招集該數目之幹細胞。在各個實施例中，與未接受經改質胎盤組織之個體相比，幹細胞招集至少增強5%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、90%、100%或更多。無論如何，至少在此實例中，數據顯示需要大於最小量之EpiFix®經改質胎盤組織以實現幹細胞招集及/或定位。
此外，亦預期微粉化經改質胎盤組織可在具體身體部分中提高幹細胞招集速率。在該等態樣中，將微粉化經改質胎盤組織增加至經 改質胎盤組織，即單層經改質胎盤組織或在多層胎盤組織壓層之間。
實例
闡述以下實例以向熟習此項技術者提供如何製備及評估本文所述及所主張化合物、組合物及方法之完整揭示內容及說明，且該等實例僅意欲具有實例性且不欲限制發明者所認為其發明之範圍。已經努力確保數值(例如量、溫度等)之準確性，但應計及一些誤差及偏差。除非另有說明，否則份數係重量份數，溫度以℃表示或為環境溫度，且壓力為大氣壓力或接近大氣壓力。反應條件有多種變化及組合(例如，組份濃度、期望溶劑、溶劑混合物、溫度、壓力及可用於優化自所述製程獲得之產物純度及產率之其他反應範圍及條件。優化該等製程條件僅需要適當常規實驗。
實例1-微粉化胎盤組織之製備
此處用於產生微粉化顆粒之羊膜/絨毛膜組織移植物係藉由US 2008/0046095中所述之方法來產生，其係全文以引用方式併入。將組織移植物(4cm×3cm)及兩個9.5mm鋼磨球置於50mL小瓶中且隨後將小瓶密封。將小瓶置於冷凍組具(Cryo-block)中，且將冷凍組具置於凍存架(Cryo-rack)中。將凍存架置入液氮保存杜瓦(Dewar)瓶中。使組織樣品經受氣相冷卻不超過30-60分鐘。自杜瓦瓶移除凍存架，且自凍存架移除冷凍組具。將冷凍組具置入研磨器(SPEX Sample Prep GenoGrinder 2010)中且以1,500rpm研磨20分鐘。在經過20分鐘後，檢查組織以確保微粉化。若需要，將組織放回杜瓦瓶中再保持30-60分鐘，且移至研磨器再研磨20分鐘以確保充分微粉化。在組織經充分微粉化後，使用一系列美國標準ASTM篩對其進行分選。將篩按以下順序置放：355μm、300μm、250μm、150μm及125μm。將微粉化材料自50mL小瓶轉移至355μm篩。個別搖動每一篩以充分分離微粉化顆粒。在使用篩將微粉化顆粒有效分離後，在單獨小瓶中收 集粒徑為355μm、300μm、250μm、150μm及125μm之微粉化顆粒。
實例2-具有微粉化胎盤組織之組織移植物之製備
可對本文所述化合物、組合物及方法進行各種修改及改變。考慮本文所揭示化合物、組合物及方法之說明書及實踐後可瞭解本文所述化合物、組合物及方法之其他態樣。意欲將說明書及實例視為實例性。
適宜交聯劑及程序之詳細說明提供於以代理人案號102741-0250申請且標題為PLACENTAL TISSUE GRAFTS MODIFIED WITH A CROSS-LINKING AGENT AND METHODS OF MAKING AND USING THE SAME之同時提交申請之美國專利申請案第61/683,697號中，該申請案係全文以引用方式併入本文中。
增強胎盤組織移植物之詳細說明提供於以代理人案號102741-0350申請且標題為REINFORCED PLACENTAL TISSUE GRAFTS AND METHODS OF MAKING AND USING THE SAME之同時提交申請之美國專利申請案第61/683,699號中，該申請案係全文以引用方式併入本文中。
製備及使用微粉化胎盤組織及其萃取物之詳細說明提供於以代理人案號102741-0400申請且標題為MICRONIZED PLACENTAL TISSUE COMPOSITIONS AND METHODS OF MAKING AND USING THE SAME之同時提交申請之美國專利申請案第61/683,700號中，該申請案係全文以引用方式併入本文中。
實例3-在EpiFix ® 存在下之細胞遷移
在EpiFix®樣品存在下在細胞培養物中評估人類間質幹細胞(人類MSC)，以確定EpiFix®是否會誘導人類MSC遷移。EpiFix®係具有完整上皮層之羊膜及絨毛膜層。
材料及方法
在24孔細胞培養插件中實施標準遷移分析，在該插件底部具有8μm孔濾膜(參見圖1；BD Biosciences)。在實驗開始前24小時，在無血清培養基中培養人類MSC(一個供體，傳代3次)，且將300μL PBS中之5μg/mL纖連蛋白置入每一細胞培養插件中，以確保纖連蛋白吸附至細胞培養插件表面過夜。
在實驗當天，將700μL無血清培養基加載至板之底部孔中，隨後添加大小不同之無菌EpiFix®部分(低：1.5mm直徑圓盤；中：4mm直徑圓盤；高：12×13mm正方形，修剪為3-4mm正方形件；n=6個所測試EpiFix®組織供體)(圖2)。一平方公分之EpiFix®重4mg。無血清培養基及具有10%胎牛血清之培養基(n=6)分別用作陰性及陽性對照。然後將人類MSC(40,000個細胞，300μL)加載至細胞培養插件中且培養24小時。然後，用PBS沖洗細胞培養插件兩側，且用棉頭敷藥棒移除上部分插件中之未遷移細胞。將具有濾膜之插件下側上之細胞在10%福馬林(formalin)中固定20分鐘，然後用蘇木素(hematoxylin)沖洗並染色5min。在膜下表面上用倒置顯微鏡(Nikon TE2000；SPOT軟體4.6)計數穿過膜遷移之細胞數。
將每一樣品孔之數據對10% FBS陽性對照正規化且表示為每100×視野顯微照片中所計數遷移細胞之平均值±標準偏差。使用Box-Cox轉變實施統計學比較以正規化數據變異，之後用圖凱誠實顯著性差異事後測試(Tukey’s honestly significant difference post-hoc test)實施單因子變異數分析(ANOVA)。
結果
含有最小EpiFix®樣品之低組(1.5mm直徑之圓盤)與無血清陰性對照無顯著不同(參見圖2中之長條圖)。中組(4mm直徑之圓盤)及高組(12×13mm正方形，修剪為3-4mm正方形件)在統計學上高於無血 清對照(相對於對照約60%及75%遷移；參見圖2)，表明EpiFix®刺激細胞遷移。高組與中組無顯著不同。結果表明，EpiFix®產物含有一或多種吸引人類間質幹細胞之因子。
實例4-接受EpiFix ® 植入體之小鼠中之幹細胞招集
實施研究以確定所植入EpiFix®在正常小鼠中是否引起招集幹細胞/前驅細胞，主要係小鼠造血幹細胞(HSC)及小鼠間質幹細胞(小鼠MSC)。
材料及方法
使用來自六個供體之EpiFix®產物植入正常小鼠中。以手術方式將5×5mm正方形EpiFix®置於4個月齡FVB/NJ小鼠皮下(體重介於約23.50g與約30g之間)。每個時間點將每個樣品植入四隻小鼠中。時間點為3、7、14及28天。陰性對照係正常皮膚及假手術小鼠(有手術切口但無植入體)。使用去細胞真皮基質(無細胞真皮基質；ADM)作為比較植入體(I型膠原，無細胞因子)。採集植入體及覆蓋皮膚以供螢光活化細胞分選(FACS)。
採集植入體及覆蓋皮膚，切成1mm2切片，且在37℃下在0.15%分散酶/0.075%膠原酶溶液中培育1小時。在離心後，如下文所述用譜系抗體混合劑對樣品進行染色。添加CD31抗體，之後添加Alexa Fluor 647抗大鼠二級抗體。最後培育藻紅素-Cy7偶聯抗CD45抗體。如下文所述製備並分析樣品。
將樣品與譜系陰性(lin-)抗體混合劑(Ter119/CD4/CD8a/Gr-1/CD45R/CD11b)一起培育，之後與藻紅素-Cy5抗大鼠二級抗體一起培育。對於間質幹細胞分析，添加針對CD45(藻紅素-Cy7)及Sca-1(螢光異硫氰酸鹽)之偶聯抗體。對於造血幹細胞分析，添加針對CD45(藻紅素-Cy7)、c-Kit(藻紅素)及Sca-1(螢光異硫氰酸鹽)之偶聯抗體。將樣品與抗體一起培育30分鐘，且隨後藉由添加5體積之含有2mM乙 二胺四乙酸之磷酸鹽緩衝鹽水中之2%胎牛血清進行洗滌。將細胞離心且然後在4℃下在碘化丙碇中再懸浮1分鐘。使用LSR流式細胞儀分析樣品。使用CellQuest軟體，針對lin-/Sca-1+/CD45-門控樣品以界定間質幹細胞，且針對lin-/Sca-1+/c-Kit+/CD45+門控以界定造血幹細胞。
結果
在EpiFix®植入後，與陰性對照相比，小鼠HSC在第7、14及28天顯著增加(參見圖3A)。與ADM相比，在EpiFix®樣品中，小鼠HSC在第28天保持顯著增加。
在EpiFix®植入後，與陰性對照相比，小鼠MSC在第7天顯著增加(參見圖3B)。與陰性對照相比，小鼠MSC之平均百分比在所有時間點皆增加。
因此，上述數據顯示，在正常小鼠中在活體內，EpiFix®植入體有效招集HSC及MSC二者。數據亦顯示，EpiFix®導致較無細胞真皮基質(ADM)更長期之HSC招集，從而證實了EpiFix®之細胞因子介導效應之假設。
實例5-接受EpiFix ® 植入體之小鼠中之幹細胞表徵
使用流式細胞術及免疫組織化學實施研究以表徵招集至小鼠中EpiFix®植入位點之幹細胞。
材料及方法
經由16只4個月齡FVB/NJ小鼠背部上之皮膚切口將呈5×5mm正方形斑塊之經Purion®處理之無菌EpiFix®植入皮下。在另外16只小鼠中製備相同皮膚切口以起對照處理(假)作用。對於與膠原支架比較，將5×5mm正方形斑塊之去細胞人類真皮(無細胞真皮基質；ADM)植入16只小鼠背部上之皮下。使用未手術小鼠作為用於分析之「正常」背部皮膚來源。
在植入後3、7、14及28天移除手術位點以供分析幹細胞。在每一時間點使用4只動物/組。使用兩種不同方法鑑別幹細胞：螢光活化細胞分選(FACS)及免疫組織化學(IHC)。對於FACS分析，自羊膜及相關再生組織分離所有細胞。用針對特定幹細胞標記之抗體對細胞進行螢光標記。用流式細胞儀確定每一細胞類型之身份及數目。
對於免疫組織化學分析，將膜及相關再生組織固定，切片用於載玻片，且用針對幹細胞之特定抗體染色。對於免疫組織化學使用兩種抗體：抗CD34，其特異性檢測造血前驅細胞(HPC)並與真皮前驅細胞、內皮細胞、樹突細胞反應；及抗CD31，其檢測內皮細胞。顯微檢驗經染色組織切片並量測特定幹細胞類型之存在及數目。對於實驗性分析，計數每一細胞類型之相對數目。將結果計算為每一細胞類型之百分比(經免疫染色細胞之數目/細胞總數)。對於細胞招集，免疫組織化學分析兩個面積：植入體周圍組織及植入體自身。
結果
FACS分析之代表性數據顯示於圖4A中。左圖顯示樣品中之細胞總數。中圖顯示CD45陽性細胞數(在紅色方框中)。右圖顯示Sca-1陽性細胞數(在紅色方框中)。CD45及Sca-1係造血幹細胞之特異性標記。
圖4B顯示實例性免疫組織化學影像。左下角之灰色長條代表50μm。用DAPI(藍色--對所有細胞進行染色)及抗CD34(紅色)對切片進行染色。顯示在實驗小鼠中植入組織之位置以供參照。
在第14及28天，與陰性對照相比，在EpiFix®植入體周圍組織中造血前驅細胞(HPC)含量顯著升高。在第14及28天，與膠原支架ADM對照相比，在EpiFix®植入體周圍組織中造血前驅細胞顯著增加。
前驅細胞被招集至EpiFix®植入體中。在EpiFix®植入體中，植入體內造血前驅細胞在第14天達到峰值，且在第28天保持升高。在第14 及28天，與對照ADM相比，在EpiFix®植入體中平均植入體內造血前驅細胞增加。前驅細胞被招集至ADM對照植入體中。
EpiFix®植入體之血管化自第14天至第28天穩定增加。在第28天在EpiFix®植入體中之新血管形成量顯著大於ADM對照。
該等數據確認，EpiFix®含有一或多種將造血幹細胞及間質幹細胞二者招集至受傷位點之因子。在EpiFix®膜及相關再生組織中較在假膠原支架、或更重要地對照膠原支架中發現更多該等幹細胞。 EpiFix®較對照去細胞膠原支架顯著更有效地招集前驅細胞以拓殖植入體位點。前驅細胞在EpiFix®膜中多於在對照膠原支架中。
EpiFix®亦在相關再生組織及EpiFix®膜自身中誘導新血管形成。EpiFix®膜中之血管化顯著高於在膠原支架對照中。
實例6-可變真空壓力及乾燥板孔徑之測試
此研究證實操作真空壓力及乾燥板孔徑以達成期望組織美觀。
測試改變真空壓力及板孔徑以確定在脫水期間壓緊羊膜組織所需每板面積之最小壓力量。使用最小壓力將提高系統效率並減小所乾燥胎盤組織移植物上之「氣泡」大小。在一系列四個實驗中，施加至乾燥組織之真空壓力自16英吋水逐漸降低至5英吋水，直至組織不再固持並保持平坦，而係因脫水而收縮及起皺。對於每一實驗，使用相同複合板且將溫度恆定保持在45℃。在該系列測試之中途改變孔徑，自6mm直徑變為4mm。下表詳述所記錄量測值及所得每板面積壓力之計算。亦插入二元「是/否」輸出以界定組織固持臨限值。
自真空固持強度實驗獲得之數據顯示，在脫水過程期間，任何低於5.89Pa之壓力皆不足以將胎盤組織穩定在乾燥板上。可藉由此實驗確立每一參數之臨限值。
在通篇本申請案中，參照各個出版物。該等出版物之揭示內容係全文以引用方式併入本申請案中，以更全面地闡述本文所述之化合物、組合物及方法。
可對本文所述化合物、組合物及方法進行各種修改及改變。考慮本文所揭示化合物、組合物及方法之說明書及實踐後可瞭解本文所述化合物、組合物及方法之其他態樣。意欲將說明書及實例視為實例性。

Claims (6)

  1. 一種組合物，其包含引發有效量幹細胞招集因子之經改質胎盤組織，其中該胎盤組織係以足量存在，使得在活體內置於身體部分附近時，該胎盤組織促進幹細胞招集至該身體部分。
  2. 如請求項1之組合物，其中該身體部分選自由以下組成之群：骨、軟骨、腱、視網膜、周圍神經、周圍神經鞘、小腸、大腸、胃、骨骼肌、心臟、肝、肺及腎。
  3. 如請求項1或2之組合物，其中由生物材料招集之該等幹細胞係多潛能幹細胞。
  4. 如請求項1或2之組合物，其中該胎盤組織具有足以將幹細胞招集至欲治療身體部分之質量。
  5. 如請求項1或2之組合物，其中該身體部分患病或受傷。
  6. 一種真空脫水器件，其包含：(i)界定乾燥室且界定流入及流出孔口之乾燥外殼；及(ii)在該乾燥室內部，多孔乾燥板置於真空台頂部上，其中該乾燥板具有接收欲脫水物體之第一表面及與該第一表面相對且附接至該真空台之第二表面。
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