TW201210517A - Predigested nutritional formula - Google Patents

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201210517 六、發明說明： 相關申請的交叉引用 本申請要求於2010年8月8曰提交的美國臨時申請號 61/371,608、以及於2011年3月31日提交的美國臨時申請號 61/470,094的優先權，出於所有的目的將該等文件的每— 個藉由引用以其全文結合在此。 【發明所屬之技術領域】 本發明針對一預消化的營養配製品。本發明還針對用於 製備一預消化的營養配製品之方法，該方法包括將多種消 化酶和包括碳水化合物類、脂類、蛋白類和水的混合物的 一液體營養組合物進行混合以形成預消化的營養配製品。 【先前技術】 在醫學領域内’用於患者的藥物的適當配料關係重大。 對於特別是嬰兒、較小的兒童、以及老年患者，有時還連 同成年人群，藥物的給予和配料方法通常提出實質的問 題。因為已經在本領域内熟知，藥物係以多種形式（例如 液體、固體、以及固體與液體的組合）提供並且以多種方 式（例如口服、藉由注射、經過皮膚）遞送給患者。 在胰腺外分泌功能不全（EPI)的情況下，其中FDA估計超 過200,000名美國人患有此病，患者因為缺乏由他們的胰 腺合成的消化酶而不能適當地消化食物。消化酶的這種缺 失導致失調(例如消化不良和營養素的吸收障礙），這導致 了與此關聯的導致營養不良和其他由此引起的不希望的生 理病症。對於遭受囊性纖維病（CF)以及其他使胰臟的外分 158012.doc 201210517 泌功能遭受損害的病症（例如胰腺癌、胰臟切除術、以及 胰腺炎）的那些患者而言，該等失調係普遍的。如果不治 療，這種營養不良可以是威脅生命的，特別是在嬰兒的情 況下’並且CF患者和該等失調導致兒童的生長受損、使免 疫應答遭受損害、並且縮短預期壽命。 可以給予消化酶（例如胰脂肪酶和其他胰的酶產品（pEp)) 以至少部分治療EPI ^消化酶添加物的給予使患者更有效 地消化他們的食物。 包含消化酶的膠囊（例如胰脂肪酶（Zenpep®、Cre〇n<8和 Pancreaze®)已經被開發用於口服給藥。然而，如果患者不 能吞咽該等膠囊，每一膠囊可以被打開並且該等成分被撒 在夕里g物上，通常是軟的、酸性食物（例如商業可得的 蘋果醬）並且用勺口服給予患者。可替代地，該等藥物可 以被口服給予嬰兒和兒童，使用注射裝置，該注射裝置包 含了懸浮在一介質中的成分，該介質由此順從給藥.。 還認識到，對於一些患者（包括患有Ερι的兒科和成人患 者）’需要藉由胃造口術飼管和更小的内腔腸道飼管（例如 鼻胃的和空腸的飼管）進行腸道餵養。因此對於該等不能 口服消化酶的患者而言’對於消化酶（例如胰脂肪酶）的給 予存在明確的需求。此外，在消化酶以微粒形式存在並且 被加入到用於給予的營養配製品中時，問題包括如何確保 消化酶對營養素配製品中的對其敏感的組分有效地發揮酶 活性以及如何消除潛在阻塞以進行藉由微粒的腸道餵養。 用於治療EPI的膜脂肪酶主要是以下三個種類的酶的— 158012.doc 201210517 組合：脂肪酶、蛋白酶以及澱粉酶，與它們的多種不同的 輔助因數和辅酶一起。該等酶係在胰中自然產生的，並且 在脂肪、蛋白質和碳水化合物的消化中是重要的。姨脂肪 酶係典型地從豬的騰腺製備的’雖然也可以使用其他來 源，例如在U.S. 6,051，220、U.S. 2004/0057944、2001/ 0046493、以及W02006044529中描述的那些，出於所有的 目的將該等文件的每一個藉由引用以其全文結合在此。該 等酶催化脂肪水解為甘油和脂肪酸，催化澱粉水解為糊精 和糖，並且催化蛋白質水解為胺基酸和衍生的物質。 在接近中性和微鹼性的條件下，胰的酶顯示出最佳活 性。在胃的條件下，胰的酶可能失活，伴有因而發生的在 生物活性方面的缺失。因此，在它們運輸通過胃並且進入 十二指腸期間，外源給予的酶一般被保護免受胃失活並且 保持70整。因此，希望包被胰的酶。胰脂肪酶對胃的失活 最敏感並且是在吸收障礙的治療中的關鍵酶。典型地監控 脂肪酶活性以確定-包含脂肪酶的酶組合物的歡性。出 於所有的目的將公佈給〇nenzif的美國專利7,658,918的全 部内容藉由引用以其全文清楚地結合在此，並且描述了穩 定的消化酶組合物並且說明了某些口服給予的微粒藥物被 設計為通過患者的胃並且此後在腸内釋放。應該盡可能地 準確地將ϋ當劑量的這種微粒藥物給予患纟，特㈤是嬰兒 和兒童。 鑒於上述内容，存在對用於製備一預消化的營養配製品 的實際的、廉價的、簡單的和有效的方法的需要；更具體 158012.doc 201210517 也/y及已經被有效消化並且將能夠腸内給予而沒有任何、 或有限㈣腸飼管阻塞的易感性的#養配製品。 【發明内容】 本發月針對製備一預消化的營養配製品之方法，該方法 包括將'肖化酶和—液體營養組合物進行混合從而使該液體 營養組合物被腸内料會從此受益的患者之前實現了預消 ，本發月還針對一預消化的營養配製品。應當理解，上 述叙說月和以下詳細說明兩者在本發明中是示例性的’ 而不是限制性的。 、發明針對㈣製H肖化㈣養配製品的方法μ 铷：匕t將多種消化酶或它們的—酶溶液與包括碳水化。 …員人月日m蛋白類和水的混合物的—液體營養組合物; 仃混s以形成預消化的營養配製品。 :本發明的-實施方式中’在混合之前係添加多種消、 們的酶溶液到該液體營養組合物的步驟。 二 的另—實施方式中，合之前係添加多㈣ 化酶到該液體營養組合物的步驟。 夕心 在本發明的另—實施方式中， 消化酶的溶液到該液體營養組合物^驟_添加含多卷 酶=:另一實施方式中’該等消化酶係處於胰脂肋 在本發明的另一實施方式t 包被的胰脂肪酶珠粒的形式。 在本發明的另一實施方式t 該等消化酶係處於腸溶衣 該等消化酶係處於腸溶衣 I580l2.doc 201210517 包被的胰脂肪酶珠粒的形式 來實施的。 並且該混合係藉由機械混合 在本發明的另一實施方式中，該混合係藉由以下方式來 f施的’將騰脂肪酶珠粒和液體營養組合物進行機械混合 直至該混合物被均勻化。 勺ΪΓΓ的另一實施方式中，該等消化酶係處於腸溶衣 L被的胰㈣㈣粒_式，並且㈣浮在藥學上 的弱鹼性溶液中以形成它們的酶溶液。 又 可以從包含多種消化酶的任何合適的口服劑型開始製備 本發月的預4化的營養配製品^合適的劑型的非限制性 例包括片齊!、膠囊、或小藥囊。在一具體的實施方式中， 該劑型係膠囊。每-劑型包含藥物的消化酶珠粒。對於本 發明，該等消化酶珠粒係任何種類的微粒，此類微粒可以 ，受機械混合或與一藥學上可接受的弱驗性溶液進行混合 從而釋放包含在其中的活性酶。術語「珠粒」包括粒料' 片Μ、球體、逑你片劑、微片劑、微顆粒、微球、微膠 囊、微丸、連同具有高達約5 mm的直徑的顆粒；該珠粒可 以是任何合適的顆粒大小或形狀。例如，該等珠粒可以是 具有顆粒大小範圍為約5〇_5,〇〇〇 μιη的一「微丸」的形 式或者可以是具有在約2-5 mm的範圍内的一額定（例如 平句值）粒裣的「迷你片劑」的形式。這種微粒可以是具 J於約2 mm(例如約1 _2 mm)的額定（例如平均值）粒徑的 微片劑」。具有為i. i 5 _的最小中值粒徑的「迷你微 球」或具有2.63 mm的最高中值顆粒的「微片劑」也適合 158012.doc 201210517 本方法。該等顆粒可以是具有小於約800 μηι、優選小於 500 μηι、優選是約400 μηι至約600 μιη或者是約25〇 ^^至 約500 μηι的一平均顆粒大小的「微膠囊」的形式。該等珠 粒還可以是具有不小於400 μπι的一體積直徑d(v 〇丨）（定義 為10%的體積分佈低於這一值並且90%高於這—值的直徑） 和不大於900 μηι的一體積直徑d(v，〇.9)(定義為9〇%的體積 分佈低於這一值並且10%高於這一值的直徑）的「微丸」。 該比表面積的範圍可以是在8.7 cm2/g至19.8 cm2/g之間。 適合製備該預消化的營養配製品的所有消化酶珠粒、更 具體是胰脂肪酶酶類珠粒可以被一腸溶衣包被。 短語「腸溶聚合物」係指保護該等消化酶不與胃内容物 接觸的一聚合物’例如在酸性pH條件下穩定的一聚合物， 但是在更高pH條件下可以迅速分解或溶解，或者是水化或 腐触的速度足夠慢的一聚合物，以確保當它在胃中時胃内 容物與該等消化酶的接觸較少，與胃腸道的剩餘物完全不 同。該腸溶聚合物係腸溶衣的一組分，該腸溶衣可以進一 步包括增塑劑和另外的賦形劑。腸溶聚合物的非限制性實 例包括本領域已知的那些，例如修飾的或未修飾的天然聚 合物，例如乙酸鄰苯二曱酸纖維素、羥丙基曱基纖維素鄰 苯二曱酸酯、醋酸羥丙基甲基纖維素琥珀酸酯、以及蟲 膠，或者是合成的聚合物，例如丙烯酸聚合物或共聚物、 甲基丙烯酸聚合物和共聚物、甲基丙烯酸甲酯共聚物、以 及甲基丙稀酸/甲基丙稀酸曱酯共聚物。該腸溶衣將包括 騰脂肪酶緩釋珠粒的内芯膠囊化。該包衣起到保護藥物不 158012.doc 201210517 與胃的酸性環境接觸的作用並且基本防止了在它到達小腸 之前的藥物釋放。該包衣穩定化的消化酶顆粒可以接下來 破配製為膠囊。一具體劑型的穩定化的消化酶顆粒係用腸 溶衣包被的胰脂肪酶珠粒填充的—膠囊。 在此使用的術語「消化酶」表示在消化道中的一酶，它 分解多種食物成分這樣它們可以被生物體攝取或吸收。消 化酶的非限制性實例包括胰脂肪酶（也稱為胰酶）、脂肪 酶、辅脂肪酶、胰蛋白酶、糜蛋白酶、糜蛋白酶B、彈性 蛋白酶、羧肽酶A、羧肽酶B、甘油酯水解酶、磷脂酶、 留醇S旨水解酶、彈性酶、激狀原酶、核糖核_、去氧核 糖，酸酶、α-澱粉酶、木瓜蛋白酶、糜木瓜酶、麩質酶： 鳳4蛋白％、無心果蛋白酶、β_殿粉酶、纖維素酶、卜半 乳糖苷酶、乳糖酶、蔗糖酶、異麥芽糖酶、以及它們的混 合物。 a如在此使用的術語「胰的酶」係指在姨分泌物中存在的 :類型中的任何一種，例如澱粉酶、脂肪酶、蛋白酶、或 匕們的混合物’或者具有酶活性的胰源性的任何提取物， 例如姨酶。 術浯「胰脂肪酶」或「胰脂肪酶」《「胰酶」表示若干 類型的酶的-混合物’包括澱粉酶、脂肪酶、以及蛋白 酶。騰脂肪酶係商業可得的，例如來自N〇rdmark Arzneimutel GmbH^ Scientific Protein Laboratories LLC 〇 =語m w催化水解成甘油和簡單脂肪 文％。適合本發明的脂肪酶的實例包括，但並不局限 158012.doc 201210517 於動物脂肪酶（例如豬脂肪酶）、細菌脂肪酶（例如假單胞 菌脂肪酶和/或伯克霍爾氏菌脂肪酶）、真菌脂肪酶、植物 月曰肪酶、重組脂肪酶（例如藉由合適的宿主細胞（選自培養 的細菌、酵母、真菌、植物、昆蟲或哺乳動物宿主細胞中 的任何一種）經重組DNA技術生產的重組脂肪酶，或者是 包括與一天然發生的序列同源或基本相同的胺基酸序列的 重組脂肪酶，由與一天然發生的編碼脂肪酶的核酸同源或 基本相同的核酸編碼的脂肪酶、等）、合成脂肪酶、化學 u飾的脂肪酶、以及它們的混合物。術語「脂類」廣泛地 c括天然發生的分子，包括脂肪、蠟、留醇、脂溶性維生 素（例如維生素A、D、E和K)、甘油單酯、甘油二醋、甘 油三酯、磷脂，等。 術語「澱粉酶」係指分解澱粉的糖苷水解酶酶類，例如 心澱粉酶、β_澱粉酶、γ-澱粉酶、酸性α_糖苷酶、唾液殿 粉酶（例如唾液素）、等。適合用於本發明的澱粉酶包括， 但並不局限於：動物澱粉酶、細菌澱粉酶、真菌澱粉酶 (例如麯黴澱粉酶（例如米麯黴澱粉酶））、植物澱粉酶、重 組澱粉酶（例如藉由合適的宿主細胞（選自培養的細菌、酵 母、真菌、植物、昆蟲或哺乳動物宿主細胞中的任何一 種）經重組DNA技術生產的重組澱粉酶，或者是包括與一 天然發生的序列同源或基本相同的胺基酸序列的重組澱粉 酶，由與一天然發生的編碼澱粉酶的核酸同源或基本相同 的核酸編碼的澱粉酶、等）、化學修飾的澱粉酶、以及它 們的混合物e 158012.doc -10- 201210517 術δ吾「蛋白酶」—in. Θ 4t -U- Βθ a? 4又疋指打開蛋白質的胺基酸之間的肽 :的_如蛋白水解酶、肽酶、或蛋白質水解酶)。蛋 ^一般藉由它們的催化類型雲別，例如門冬氛酸肽酶、 „ 金屬肽酶、絲氰酸肽酶、蘇氨酸肽 輕、驗性或半驗性蛋白酶、未知催化機制的中性和肽酶。 適合用於本發日㈣非限制性實例包括絲氨酸蛋白酶、蘇氨 酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、門冬氨酸蛋白酶（例如遽原 蟲胃蛋白酶)、金屬蛋白酶和谷氨酸蛋白酶。此外，適合 用於本發明的蛋白酶包括，但並不局限於：動物蛋白酶、 細菌蛋白酶、真菌蛋白酶(例如蜂蜜麯黴蛋白酶)、植物蛋 ㈣' 蛋㈣（例如藉由合適的宿主細胞（選自培養的 、-田菌酵母、真菌、植物、昆蟲或哺乳動物宿主細胞中的 任何一種）經重組DNA技術生產的重組蛋白酶，或者是包 括與一天然發生的序列同源或基本相同的胺基酸序列的重 ”且蛋白8#由與天然發生的編碼蛋白酶的核酸同源或基 本相同的核酸編碼的蛋白酶、等）、化學修飾的蛋白酶、 以及它們的混合物。 本發明的胰脂肪酶類可以包括一或多種脂肪酶（即一種 脂肪酶、或兩種或更多脂肪酶）、一或多種澱粉酶（即一種 澱粉酶、或兩種或更多澱粉酶）、一或多種蛋白酶（即一種 蛋白酶、或兩種或更多蛋白酶）、連同按不同組合和比率 的該等酶的混合物。 在對本發明有用的該等組合物中的脂肪酶活性可以是從 約650至約45,000 IU(USP法）、從約675至約825 IU、從約 158012.doc -11 · 201210517 2,500至約 28,000 IU(USP法）、從約 2,700至約 3,300 IU、從 約4,500至約5,500 IU、從約9,000至約11，〇〇〇 ιυ、從約 13,500至約 16,500 IU、以及從約 18,〇〇〇至約 22,000 IU、從 約22,500至約27,500 IU、從約36,000至約44,000 IU以及它 們之間的所有範圍和子範圍。該等組合物中的澱粉酶活性 可以疋從約1，600至約6,575 IU(USP)從約6,000至約225,000 ιυ、例如從約6,400至約26 300 m、從約1〇 7〇〇至約43 8〇〇 IU、從約 21，500 至約 87,500 ILr、從約 321〇〇 至約 1313〇〇 IU 從約 42,900 至約 175,000 ιυ、從約 53,600 至約 218,700 IU以及它們之間的所有範圍和子範圍。該等組合物中的蛋 白酶活性可以是從約1，250至約3,850 IU(USP)、從約5,000 至約13〇,00〇 m、例如從約5,000至約15,400 IU、從約 8,400 至約 25,700 IU、從約 16,800 至約 51,30.0 IU、從約 25,000至約77 〇〇〇 11;、從約33 5〇〇至約1〇2 8〇〇⑴、從約 41’800至約128,3〇〇 m以及它們之間的所有範圍和子範 圍。該脂肪酶活性的範圍可以是從約675至約825 IU，該 澱粕酶活性係從約i，6〇〇至約6,575 11;，以及該蛋白酶活性 係從1’250至約3,850 IU(USP)。該脂肪酶活性的範圍可以 疋k力2,700至約3,3〇〇 ιυ，該澱粉酶活性係從約6,4〇〇至約 26,300 IU ’以及該蛋白酶活性係從5,000至約15,400 IU(USP) °或者該脂肪酶活性的範圍可以是從約4,500至約 5’5〇〇 IU’該澱粉酶活性係從約10,700至約43,800 IU，以 及5亥蛋白酶活性係從8,400至約25,700 IU(USP)。或者該脂 肪酶活性的範圍可以是從約9,000至約11，〇〇〇 IU，該澱粉 1580 ] 2.doc 201210517 酶活性係從約21，500至約87,500 IU，以及該蛋白酶活性係 從16,800至約51，300 IU(USP)。或者該脂肪酶活性以是從 約13,500至約16,500 IU，該澱粉酶活性係從約32,100至約 131，3 00 111，以及該蛋白酶活性係從25,000至約77,000 iu(usp)。該脂肪酶活性的範圍可以是從約18 000至約 22,000 IU’該澱粉酶活性係從約42,900至約175,000 IU， 以及該蛋白酶活性係從33,500至約102,600 IU(USP)。該脂 肪酶活性的範圍可以是從約22,000至約27,5〇〇 ιυ，該澱粉 酶活性係從約53,600至約218,700 IU，以及該蛋白酶活性 係從約41，800至約128,300 IU (USP)。該脂肪酶活性的範圍 還可以是從約5,000 PhEur脂肪酶單位至約3〇〇〇〇 phEur脂 肪酶單位，它可以是約5,〇〇〇、或者約1〇 〇〇〇、或者約 15,000或者約20,000或者約3〇 〇〇〇或者約4〇 〇〇〇 phE町脂肪 酶單位。 在本發明的一個實施例中，包含上述一部分之澱粉酶活 性之單一劑量亦可由本方法分析。 在某些實施方式中，在組合物中澱粉酶/脂肪酶活性的 比率的範圍可以是從約1至約10，例如從約2.38至約 8.75(根據USP進行酶測定仍在另一實施方式中，蛋白 酶/脂肪酶的比率的範圍可以是從約i至約8，例如從約 至約5.13(根gUSP進行酶測定）。仍在其他實施方式中， 澱粉酶/脂肪酶活性的比率係約i、約2、約3、約4、約5、 、’’勺6、約7、約8、約9、或者約1 〇。 APtalls Pharma上市的至少一些那些腸溶衣包被的胰脂 158012.doc -13- 201210517 肪酶類珠粒藥物可以用於本發明。例如，別⑽ 上市的緩釋膠囊用於在患者t治療騰腺外分泌功能不全 (EPI)，匕在命名EUR_1〇〇8下並且註冊了商標^^叩叩⑧。每 用於口服給予的Zenpep®膠囊包含腸溶衣包被的珠粒（對 於750、3,0〇0、5,000 1；81>單位的脂肪酶為18_19_，對 於1〇’〇〇〇、15,〇00、20’_和40，_卿單位的脂肪酶為 2.2-2.5 mm。

Aptalis Pharma的製劑取代了丟失的酶，改進了消化和 吸收，並且符合美國藥典的標準。該等Zenpep€)膠囊包含 腸溶衣包被的胰脂肪酶類，該等酶類包括羥丙基甲基纖維 素並且具有約6%或更少（優選約2%或更少）的一含水量。 該產品的滅活成分包括交聯羧曱基纖維素鈉、氫化蓖麻 油膠態一氧化石夕、微晶纖維素、硬脂酸鎂、經丙曱纖維 素鄰苯二曱酸酯、滑石、以及檸檬酸三乙酯。Aptalis Pharma製劑的每一劑量提供給患者和醫師恒定量的主要胰 的酶：脂肪酶、蛋白酶、以及澱粉酶，這係由於它們高度 穩定的配製品。膠囊可以被打開並且該成分分散以各自滴 定該劑量。該等特徵允許健康護理專業人員製定好的協調 治療方案以達到具有改進的配料精密度的最佳症狀控制。 在本發明的一具體實施方式中，胰脂肪酶酶類被引入到 一營養腸飼配製品中。這一程序包括以足以覆蓋該等葉片 的所有部分的量傾注一部分液體營養組合物（包括一種碳 水化合物類、脂類、蛋白類、微量營養素、微量元素、纖 維、和水）到一摻混機中的步驟。隨後添加該劑量的消化 158012.doc 14 201210517 酶珠粒的總量到該摻混機中，並且在合適的條件下混合這 一混合物直到得到一勻漿。接下來用剩餘部分的液體營養 組合物調整所得酶-營養配製品的最終體積。使用例如一 台標準家用摻混機進行這一混合。由於國内摻混機中葉片 大小、形狀和轉速的可變性，為達到珠粒的完全崩解而沒 有酶活性損失的最佳混合條件需要在室溫條件下、在 12,500與18,000 rpm之間的混合速度下連續混合12分鐘。 在該等條件下，所得勻漿並不包含可見大小的完整片劑或 碎片。將混合期間產生的配製品發泡使它隨時間溶解。 可替代地，藉由在藥學上可接受的弱鹼性溶液中懸浮它 們，腸溶衣包被的胰脂肪酶酶類珠粒可以被崩解以確保該 等活性酶的有效性，該溶液接下來被添加到該液體營養組 合物中，該組合物包括碳水化合物類、脂類、蛋白類和水 的一此合物，並且最終混合該生成的混合物以形成胰脂肪 酶預消化的營養配製品。在本方法中，在與該液體營養組 合物混合之前，在鹼性溶液中珠粒的混合持續約2〇分鐘至 約120分鐘。該混合物優選保持約2〇分鐘至約“分鐘並且 可以在傾注它到該營養配置品中之前進行攪拌。這一混合 物可以在低於室溫的條件下保存，包括低於（例如在 4°C)的溫度。 忒弱鹼性溶液包括一鹼性物質、胺基酸或它們的混合 物。該鹼性物質可以選自下組，肖組由以下各項組成：鹼 金屬和鹼土金屬氫氧化物、碳酸鹽、重碳酸鹽、硫酸鹽、 麟酸鹽和氧化物’三领『基）·胺基曱⑥（THAM)以及它們 158012.doc 201210517 的混合物。所述鹼性物質可以選自鈉、鉀、鈣或鎂的碳酸 鹽、重碳酸鹽、硫酸鹽、磷酸鹽和它們的混合物。在一些 實施方式中’該鹼性物質選自下組，該組由以下各項組 成：碳酸氫鈉、磷酸二氫鈉'磷酸氫二鈉、磷酸三鈉、碳 酸鎂、碳酸鈣、和氧化鎂、以及它們的混合物。在一具體 的實施方式中，該鹼性物質係碳酸氫鈉。當使用碳酸氫鈉 時’那麼濃度範圍係從約0 65%至約13%重量/體積，例如 約8.4%重量/體積。在其他實施方式中，該碳酸氫鈉濃度 係約 0_65%、約 0.70%、約 〇 75%、約 〇 8〇%、約 〇 85%、約 0.90/〇、約 〇,95%、約 ι·〇〇/0、約！ 5%、約 2 〇%、約 2 5〇/〇、 、.·勺 3.0/。、約 3.5%、約 4.0%、約 4.5%、約 5_0%、約 5.5%、 約 6.0/〇、、約 6.5%、約 7.0〇/〇、約 7.5%、約 8.0%、約 8·4〇/〇、 約 8.5%、約 9·0%、約 10.0%、約 1〇 5%、約 u 〇%、約 U.5%、約12.0%、約12.5%、或約13〇%重量/體積，包括 在它們之間的所有範圍和子範圍。藉由將合適的量的㈣ 物質溶解到合適的體積的水介質中製備該弱驗性溶液。該 溶液的pH值係從約7·5至約85，例如從約8ι至約8 2。 在短時段内製備在該藥學上可接受的弱驗性溶液令的腸 溶衣包被的騰脂肪酶珠粒的混合物，&且要求具有腸溶衣 包被的胰脂肪酶酶類的有效崩解的弱驗性溶液的體積係^ 約5mL至約25mL(例如約5、約12、約15、約η、約μ 約22:或者約25叫’這取決於要添加的脂肪酶USP單 :-混合物具有遠高於從胰脂肪酶粉末開始製 應混合物的脂肪酶穩定性。 158012.doc 201210517 在本發明中可以使用不同的液體營養組合物；它們如在 此所述製備並且包括含量從總卡路里的約28%至約90%的 碳水化合物、含量從約1 %至約55%的脂肪、含量從約4% 至約3 2°/。的蛋白質、對於維生素和礦物質而言是湊足1 〇〇0/〇 的RD A的微量營養素《還可能使用商品化的液體營養組合 物’例如但並不局限於：來自Abbott Laboratories的 PediaSure® 或 Ensure® 或 pulmocare®、或來自 Fresenius Kab的Fresubin®或者其他類似產品。 丞对臨冰症 胰脂肪酶類應當被配料為液體營養組合物 狀、脂肪痢的程度和飲食的脂肪含量，該劑量可以被調整 以適應各個患者。當在給予以前與液體營養組合物混合 時，從約2,000至約4,〇〇〇脂肪酶單位每克脂肪的劑量被推 薦為起始劑量。該劑型具有胰脂肪酶類，在它們係或者以 與弱驗性溶液-起的混合物的形式存在時，例如膠囊可以 如健康護理提供者規定的那樣被打開並且成分可以按單一 的或者多種劑量被添加到該液體營養組合物中。 一使用本發明的方法，胰脂肪酶預消化的營養配製品具有 肪酶活性，該脂肪酶活性被計算為添加到該液體營養 =中的脂肪酶活性單位的百分比；它高於約

如約90%或約95%。在女奶达— J , 在大約為室溫的條件下，在約360分鐘 的儲存時間後，用添加到哕 刀筵 的體營養組合物的脂肪酶單位 刀比表不的平均脂肪酶活性為高於約95%。 要實驗部分可以看出，本發明提供了若干重 * .·‘·。本發明提供了適合從珠粒狀藥物開始製備腸配 I580I2.doc 17 201210517 製品的一簡單而迅速的方法；在添加到該液體營養組合物 後保持了脂肪酶活性；所得預消化營養配製品並不包含顆 粒（例如它們的完整片劑或碎片）；在該液體膳食中該脂肪 每保持穩定超過六小時並且有效地達到脂解。 該預消化的營養配製品適合用於嬰兒患者、老年患者、 以及其他患有EPI的患者，它允許藥物被小心地給予並且 具有小心可控的配料。 本發明也提供用於試劑盒，該試劑盒將包含在一合適 的密封容器中的該液體營養組合物（碳水化合物、脂類、 蛋白質的水性混合物）和以腸溶衣包被的胰脂肪酶類組合 物形式存在的該酶劑型組合在一起（例如膠囊1〇〇) ^該試劑 •m·可以進步包括藥學上可接受的弱驗性溶液或用於製備 藥學上可接受的弱鹼性溶液的鹼性物質。 包含該劑型（例如某一數量的膠囊）的玻璃瓶係合適的。 可替代地本發明的該等組合物或劑型可以被包裝為在 氣泡包裝」中的單位劑型。為了改進該等組合物或劑型 的穩定性’它們應當儲存在_密封的、防潮的包裝中。合 適的防潮包裝的非限制性實例包括：玻璃罐、結合了濕二 障礙樹脂或塗層的塑膠罐、表面塗薄層鋁的塑膠(例如聚 醋薄膜)包裝、以及類似包裝。短語「防潮」係指具有小 於約0.5 mg水每立方釐米（咖3)的容器體積每年的透水性的 包裝。儲存該等組合物或劑型的該等容器（例如觀子）可以 用任何合適的封閉物封閉，牲g丨β w 閉特別疋在儲存期間最小化渴氣 的進入的封閉物。包含哕算 ’ ^ a 〇哀4將與液體營養組合 158012.doc 201210517 的劑型的包裝還可以包含护 匕各乾紐劑（即吸收水、盥 吸附水的物質），這能夠減 4反應或 密封在包裝内的氣氛中「、'主…爲μ 川如此夠從 π除」濕軋的一乾燥劑膠囊（例 如分子師、粘土、矽膠、 、 ,. /性厌、以及它們的混合物）。 此外，作為常例，當白賠 } 包裝口服藥物單位劑量以添加一「 子」的纖維素材料（例如棉y — J如棉化）到該容器的頂部從而在 頂部填充該空的空間，由拙爭 ° 田此最小化§亥内容物的運動。 這兩種試劑盒組分（液，典莫丨。 1及體營養組合物、具有腸溶衣包被 的騰脂肪酶珠粒的备丨φ丨^ 不了 my型和任意的鹼性物質）可以在一個單 一的包裝中包裝在一起。 這-試劑盒可精存在任何合適的包裝中，該包裝確保 該產品的穩定性。該包裝應當最小化在運輸和/或儲存期 間濕氣的進人。例如’ M包裝可以是具有螺旋的或壓入配 合的封閉物（press-fit cl〇sure)的一玻璃的或塑膠的罐子。 本發明還包括向兒科或成人患者體内給予用本發明的方 法獲得的預消化的營養配製品的一方法，包括以下步驟： a)將該預消化的營養配製品轉移到一配藥袋中；並且匕) 通過一腸内管將該預消化的營養配製品從該袋分配到患者 體内。在它的分配前’該預消化的營養配製品可以被輕輕 地授動。本方法允許從腸溶衣包被的騰脂肪酶類開始簡單 而精確地臨時製備該預消化的營養配製品。 【實施方式】 所有實驗，實驗2.2和4.11例外，使用腸溶衣包被的胰脂 肪酶珠粒（騰脂肪酶迷你片劑（MT)或微片劑（MCT)之一）進 158012.doc -19· 201210517 行’它們係一由腸溶聚合物羥丙甲纖維素鄰苯二甲酸酯 (HP55)包被的胰脂肪酶原料與賦形劑（例如，交聯羧甲基 纖維素鈉、氫化蓖麻油、膠態二氧化矽、微晶纖維素以及 硬脂酸鎂）的共混物；該等MT和MCT包含在具有低於6。/〇含 水量的HPMC膠囊中；它們已經在Zenpep®的名稱下上市。 熟練的技術人員將認識到，可替代的腸溶聚合物和賦形劑 可以被用在腸溶衣包被的胰脂肪酶珠粒中。 在以下實驗中所用的液體營養組合物（或液體膳食）具有 的蛋白質含量：6.25 g/100 mL ’脂肪含量：4.92 g/100 mL· ’ 碳水化合物含量：20.2 g/100 mL，1.5 cal/ml(Ensure Plus®，Abbott，200 mL·的瓶子，調味劑：草莓）。根據患 者的特殊需要可以使用替代的配製品》 1)按照在胰脂肪酶USP專題著作中所描述的脂肪酶測定 的概略步驟進行了脂解活性的測定，此步驟基於在所用的 基質（撖欖油）中滴定（藉由氫離子濃度穩定法（pH_stat method))由酯化的脂肪酸水解形成的游離脂肪酸。此步驟 基於以下的原理：脂肪酶催化甘油三酸酯的水解，這導致 游離脂肪酸（FFA)的形成。形成的FFA的滴定按照時間提供 了脂肪酶的酶活性測定’這可以用單位表示：1 U= 1 μιη〇ι 每分鐘形成的FFA。藉由維持一穩定的ρΗ值此反應發生， 藉由一提供了當pH值相對於一固定值（氫離子濃度穩定法） 變化時添加氫氧化鈉（滴定劑）的實驗系統來維持一穩定的 pH值。添加的滴定劑的量按照時間與藉由脂肪酶作用於甘 油三酸酯而形成的FFA的量相對應。假如在具有一適合的 •20. 158012.doc 201210517 基質量和在酶穩定的實驗條件下進行，可以得到一按照時 間的FFA形成過程的線性動力學。曲線的斜率{添加的滴定 劑=f(時間，分鐘）}給出了脂肪酶的酶活性。 2) 按，’、、在胰知肪轉USP專題著作中所描述的概略步驟進 行了蛋白分解活性的測定。 3) 按照在胰脂肪酶USP專題著作中所描述的概略步驟進 4亍了引起氣为解的活性（amilolytic activity)的測定。 實驗1.在液體膳食中胰脂肪酶微片劑機械的崩解 實驗1.1. 將包含液體膳食的瓶子（蛋白質：6.25 g/l〇〇 mL，脂 肪：4.92 g/l〇〇 mL，碳水化合物：2〇 2 g/1〇() m]L，Ensure Plus® ’ Abbott:)搖動並且然後打開並且將2〇〇 mL的内含物 倒入Sterilmixer 12 Lab均化器中，此均化器配備有一5〇〇_ mL的塑膠谷器和多個不錄鋼不對稱的葉片，混合速度範 圍：12,500_18,000 rpm(PBI)。添加一定量的胰脂肪酶 MCT(Zenpep®，61脂肪酶USP單位/mg)相當於40,000脂肪 酶USP單位（大約6〇〇 mg產物《4〇個微片劑，八個Zenpep® 5000膠囊）大約40,00脂肪酶USP單位每克脂肪包含在液體 膽食内’並且關閉摻混機’在混合速度下啟動此裝置：該 摻混機的位置9=1 6,500 rpm對於1分鐘。 在混合後用下面的方法檢查微片劑的崩解： a)用一圓錐形的橡膠密封製品在一吸濾瓶中藉由一過渡 坩堝（一 30-mL的過濾坩堝，燒結玻璃圓盤孔隙率〇)過濾該 摻混機的一半内含物來評估液體膳食的均質性和完整的微 158012.doc -21- 201210517 片劑的不存在。檢查該過濾圓盤：既沒有檢測到完整的片 劑也沒有檢測到可見大小的片段，因此認為產物已被崩 解；此外當與未處理的液體膳食比較時濾液係同質的。 b)將摻混機中未過濾内含物的剩餘部分轉移進入一 200_ mL的燒杯中，此燒杯係被蓋住的並且勻漿在室溫下保留 30 min ’然後用視覺檢查底部並且發現已經是均勻的。結 果總結在表1中。 實驗1.2. 重複實驗1.1的全部程序，使用一更低的混合速率 ^ 5’5Q〇 rpm對應於該裝置的位置7)進行1分鐘以及2分鐘並 且用與貫驗1相同的方式檢查微片劑的崩解，結果報告在 表1中。 表1 混合時間 現合後勻漿 的溫度 混合後液體膳食 +MCT的形態 過遽前勻黎的 形態 過濾器上的殘 餘物 在室溫下儲 存30 min後 未過濾的勻 漿的形態 4° p, ^ 〇 ..沄 Ϊ ^ %： 畦 c ε 1 ---- 没有明顯的 增加 帶有一些泡沫的均 勻液體；在形態以 及香味上與未處理 液體膳食沒有變化 (圖2、 沒有完整的片劑 也沒有可觀察到 的可見大小的 片段 沒有完整的片 劑也沒有可見 大小的片段 (圖3) 在燒杯底部 帶有很少砂 狀片段的均 勻液體 啭1 瘐c ir • · ir Μ Ίί 瘐 c ε 1 沒有明顯的 增加 帶有一些泡沫的均 勻液體；在形態以 及香味上與未處理 液體膳食沒有變化 (圖4、 沒有完整的片劑 也沒有可觀察到 的可見大小的片 段 沒有完整的片 劑也沒有可見 大小的片段 (圖5) ---- 在燒杯底部 帶有很少砂 狀片段的均 勻液體 --— 158012.doc -22- 201210517 沒有明顯的 帶有一些泡沫的均 沒有完整的片劑 增加 勻液體；在形態以 也沒有可觀察到 1 及香味上與未處理 的可見大小的 <N 液體膽·食沒有變化 片段 (圖6) 沒有完整的片 劑也沒有可見 大小的片段 (圖7) 在燒杯底部 帶有报少砂 狀片段的均 勻液體 一使用旋轉摻混機分鐘的混合週期係在—液體膳食 中同質地分散存在於微片劑中的胰酶的一有效方法。體= 實驗表明在該液體腾食中的微片劑的—完全崩解藉由在 15,000 rpm(國内的摻混機可獲得的速度）下混合〖分鐘完成 的。 實驗2.用騰脂肪酶珠粒（酶_營養配製品/胰脂肪酶殊粒）製備 的酶-營養配製品中的以及液體營養組合物和騰脂肪酶粉 末（液體營養組合物/胰脂肪酶粉末）的混合物中的脂肪酶穩 定性和釋放的測定 將一定量的相當於4〇,0〇〇脂肪酶usp單位（8個e φ 5000膠囊）的微片劑添加到2〇〇爪匕的液體的餐中來β到大 約4000脂肪酶USP單位/g脂肪，並且在15,5〇〇合速 度下混合1分鐘’如實驗1.1和1.2所描述的。在室溫下儲存 超過360分鐘的酶-營養配製品/胰脂肪酶珠粒内測定脂肪酶 製備了第二個樣品’在該樣品中將胰脂肪酶粉末(88脂 肪酶USP皁位/mg ;包含在胰脂肪酶微片劑十的相同的胰 脂肪酶批次，Zenpep®)以相同的劑量添加到液體營養组人 物中並且用手搖動1分鐘^ 了檢測由於混合步 胰脂肪酶微片劑中的脂肪酶活性的任何損失，進行了與粉 158012.doc -23- 201210517 末的對比實驗。 實驗2 · 1.酶-營養配製品/騰脂肪酶中的脂肪酶活性 搖動含有液體膳食的瓶子，打開並且將200 inL的内含物 倒入Sterilmixer 12 Lab摻混機中，此摻混機配備有一 5〇〇· mL的塑膠容器和多個不銹鋼不對稱的葉片。將一定量的 相當於40,000脂肪酶USP單位（在該液體膳食中含有大約 4,000脂肪酶USP單位每克脂肪）的微片劑添加到該摻混機 中’關閉該摻混機並且在以下混合速度下操作該裝置j分 鐘：該摻混機的位置7對應15，500 rpm。藉由目視檢查確認 該微片劑的完全崩解。混合之後立刻將勻漿的一個3_mL等 分部分轉移進入一個50-mL容量瓶中並且用冷的淨化水稀 釋到體積’暫時地搖動該溶液（理論上脂肪酶濃度係12 USP單位/ml)。這係T0樣品。遵循脂肪酶測定胰脂肪酶 USP專題著作立刻滴定i mL T0樣品以測定脂肪酶活性。測 定了引入到該液體膽食的相對於理論總脂肪酶活性的脂肪 酶活性百分比。 關閉此容器並且在室溫沒有攪拌下靜置該勻漿；在取每 份等分部分之前暫時地搖動該勻漿。在1〇、2〇、3〇、4〇、 60、120、240、360分鐘後重複同樣的步驟，藉由在每一 時間點取新鮮的3-mL儲存在室溫下的勻漿的等分部分並且 遵循T 0樣品所描述的稀釋和分析。 整個實驗在兩個不同的日子（複製丨和2)重複兩次並且結 果呈現在表2中，同樣參見圖8。 ° 表2酶·營養配製品/胰脂肪酶珠粒中隨著時間的脂肪酶活性 158012.doc •24- 201210517 在 15,500 rpm 下 1-min 混合後的儲 存時間(min) _ 複製1 複J 故2 平均脂肪 酶活性值 作為理論 上總的％ 總的脂肪酶 活性 (USP單位） 脂肪酶活性值 作為理論上總 的.％1 總的脂肪酶 活性 (USP單位） 脂肪酶活性 值作為理論 上總的％2 初始的 44513 111.3% 42564 106.3% 108 8% 30 43159 107.9% 41503 103.6% 105.8% 60 44187 110.5% 42841 107.0% 108 7% 120 44563 111.4% 42887 107.1% 109 3% 240 46268 115.7% 44018 109.9% 112.8% 360 46394 116.0% 44479 111.0% 113.5% 1)添加到200 mL液體膳食的微片劑的量（655.54 mg)x批 量脂肪_測定（61 USP單位/mg)=39988 USP單位；2)添加 到200 mL液體膳食的微片劑的量（656 53 mg)x批量脂肪酶 測定（61 USP單位/mg)=4〇〇48 USP單位 貫驗2.2.液體營養組合物/騰脂肪酶粉束中的脂肪酶活性 搖動含有液體膳食的瓶子’打開並且將2〇〇 mL的内含物 倒入500-mL的塑膠容器（用於摻混機的相同的類型）。添加 一定量的相當於40,000脂肪酶USP單位（在該液體膳食中含 有大約4,0〇〇脂肪酶usp單位每克脂肪）的胰脂肪酶粉末（包 含在用於貫驗2.1的MCT中的相同批次的原料）並且關閉該 容器並且用手很好地搖動1分鐘。將一個3_mL的液體營養 組合物/騰脂肪酶粉末等分部分轉移進入一個5〇_mL容量瓶 中並且用冷的淨化水稀釋到體積；暫時地搖動該溶液（理 淪上脂肪酶滚度=12 USP單位/mL)以使其均勻化。這係το 樣品。遵循脂肪酶測定胰脂肪酶usp專題著作立刻滴定i mL TO樣品以測定脂肪酶活性。測定了引入到該液體腾食 158012.doc •25· 201210517 的相對於理論總脂肪酶活性的脂肪酶活性百分比。 在 10、20、30、40、60、120、240、以及 360分鐘後重 複同樣的程序’藉由在每一時間點取新鮮的3_mL儲存在室 溫下的液體營養組合物/騰脂肪酶粉末等分部分並且遵循 如T 0樣品所描述的稀釋和分析。 整個實驗在兩個不同的日子（複製1和2)重複兩次並且結 果呈現在表3中，並參見圖8。 表3液體營養組合物/胰脂肪酶粉末中隨著時間的脂肪酶 活性 儲存時間 (min) 藉由1-min搖 動混合後 複製 複製2 ------ 平均脂肪酶 活性值作為 理論上總的 % 總的脂肪酶 活性 (USP單位） 脂肪酶活性 值作為理論 上總的 總的脂肪酶 活性 (USP單位） 脂肪酶活性 值作為理論 上總的°/〇2 初始的 40538 102.3%一- 36024 90.8% 96.6% 30 42568 107.4%^- 39823 100.4% 103.9% 60 43869 110.¾^— 40999 103.4% 107.0% 120 43791 110.5^1-— 41125 103.7% 107.1% 240 45014 113.6^-— 42280 106.6% 110.1% 360 44363 42154 106.3% 109.1% 1)添加到200 mL液體膳食的胰脂肪酶粉末的量（450·32 mg)x批量脂肪酶測定（88脂肪酶USP單位/mg)=39628 USP 單位；2)添加到200 rtiL浪體腊食的騰脂肪酶粉末的量 (450.63 mg)x批量脂肪酶測定（88脂肪酶USP單位/mg)= 39655 USP單位 158012.doc -26- 201210517 從以上實驗可以明確在酶_營養組合物/胰脂肪酶體中 脂肪酶活性總是在理論值’例如作為微片劑添加到液體腾 食的脂肪酶單位數。這證明在混合步驟之後酶立刻釋放完 全並且在液體膳食中脂肪酶保持穩定至少六個小時。此 外，該等結果支援在混合步財沒㈣降解發生，並且來 自崩解的微片劑的酶釋放完全。 實驗3.藉由膜脂肪酶聽(藉由混合崩解的)預消化液體腾 食配製品中的脂肪酶活性的效力 在液體營養組合物與MCT混合之後得到的對預消化餐的 脂肪酶活性效力藉由測量包含在液體膳食配製品内的酯化 的脂肪酸（TAG=甘油三酉旨；DAG=甘油單g旨；MA<3=甘油單 酯）到游離脂肪酸（FFA)的脂解動力學進行測定。實驗遵循 如下的一般線路： a)液體膳食配製品中的脂肪酶的量係28〇〇 usp。^脂 肪’根據每天最大的劑量。 b) 使用了具有如以上所描述組合物的液體腾食配製品， 在初始時進行pH的測定以及作為一時間的函數（在25它一 個50-mL的裝備有一 PH電極的恒溫容器中進行的實驗）。 c) 使用與實驗1和2相同批次的胰脂肪酶微片劑。 d) 脂解產物的動力學曲線的確定，超過8個小時，時間 點選擇在0(在添加微片劑之前）、5、1〇、15、3〇、6()、 120、180、240、300、360、42〇、以及48〇 分鐘：藉由 TLC-FID分析方法進行了 TAG、DAG、MAG和ffa的脂類 抽提和分析。 158012.doc •27- 201210517 e)在所選定的用於脂解的相同時間週期的脂肪酶穩定性 特徵圖線的確定’藉由使用如胰脂肪酶USP專題著作中所 描述的測定方法在相同時間點測定胰脂酶活性。 實驗3.1動力學脂解反應 搖動含有液體膳食的瓶子並且將2〇〇 mL的内含物倒入摻 混機（韋林氏商用實驗室摻混機8〇1〇E(Waring conimercial laboratory blender 8010E)型號 38BL40)。添加一定量的相 當於28,000脂肪酶USP單位的胰脂肪酶微片劑（61脂肪酶 USP單位/mg)=大約2,800脂肪酶USP單位每克包含在該液 體腾食中的脂肪。在Ι-min混合後（混合速度：18〇〇〇 rpm) 藉由目視檢查確認該微片劑的完整分散。將5 〇 mL的該混 合液轉移進入在一個50-mL的裝備有一 pH電極的恒溫容器 中°脂解反應在沒有攪拌的條件下在25。〇保持480分鐘； 在每一採樣時間點測量反應的pH和溫度。在添加微片劑之 前（時間0樣本）’「照原樣」測定了存在於該液體膳食的脂 類（總的脂抽取和TLC-FID分析）的初始量。 實驗3.2.取樣和脂抽取 在本實驗的每一時間點（5、1〇、15、30、60、120、 180、240、3 00、360、420、480分鐘）抽取 1 mL·反應混合 物以定量地回收脂解產物。在每一取樣之前，用機械攪拌 器將反應混合物暫時地均勻化。抽取過程按照F〇ich，s步驟 進行。 實驗3.3.脂解產物的定量分析 藉由用於分析檢測的薄層色譜分析法與一火焰離子化檢 158012.doc •28· 201210517 測器結合進行了 TAG、DAG、MAG和FFA的定量分析。為 了校準使用了對每一脂解產物的標準化合物（三油酸甘油 醋對TAG，1，2-二油酸甘油醋對DAG ; 1 -單油酸甘油@旨對 MAG ;油酸對FFA)。藉由使用相應的校準曲線，藉由計算 在提取的有機層中一合適内標物的回收率評估了整體的提 取產率。進行了所有的分析一式兩份。 實驗3.4.解水平計算 根據水解，一分子的TAG可以最多釋放3分子的FFA »水 解（或者脂解）水平通常被定義為從膳食甘油三酸酯（TAG0) .中釋放的醯基鏈百分比： L%=1 OOxFFA/3xTAG〇 脂肪的完全吸收僅需要膳食TAG轉化成MAG，這對應兩 分子的FFA從一TAG分子的釋放，即一個66.6%的脂解水 平對應著以上的定義。在此，使用了 一在酶水解過程中直 接反映脂肪吸收量的脂解水平的定義。脂解水平在這裡被 表示為總的膳食TAG醯基鏈轉變成「在腸内能吸收的」醯 基鏈的百分比，例如FF A和MAG。它藉由以下的方程定 義，在這個方程中TAG、DAG、MAG和FFA係在水解過程 中在一給定時間回收的殘留甘油三酸酯和脂解產物的毫莫 耳數量： L%=100x(FFA+MAG)/3xTAG〇=100x(FFA+MAG)/3TAG+

2DAG+MAG+FFA 根據這個定義，100%脂解對應著一個TAG分子轉化成一 個MAG和兩個FFA分子。這個脂解水平的定義沒有考慮可 158012.doc -29- 201210517 能的MAG水解，後面的過程對於脂肪吸收不是必要的。 分析的結果報導在以下的表4-7中以及圖10-12中。 表4胰脂肪酶MCT的液體膳食脂解動力學，實驗3-測定1 取樣間隔(min) 莫耳濃度(mM) TAG FFA DAG MAG 0 35.56 0.00 0.00 0.00 5 31.40 6.74 7.90 2.69 10 22.20 8.10 8.50 2.79 15 23.05 12.90 12.56 5.93 30 23.86 16.64 20.22 10.31 60 17.19 17.90 19.42 13.29 120 13.96 23.50 20.02 11.83 180 14.84 22.40 22.53 15.97 240 13.76 22.15 22.66 14.99 300 16.17 18.39 20.64 13.79 360 17.44 29.01 21.08 13.84 420 11.61 35.61 19.99 12.57 480 10.61 29.94 19.31 11.39 表5胰脂肪酶MCT的液體膳食脂解動力學，實驗3-測定2 取樣間隔(min) 莫耳濃度(mM) TAG FFA DAG MAG 0 36.30 0.00 0.00 0.00 5 32.09 8.53 7.53 3.65 10 26.82 8.75 9.56 3.58 15 24.03 14.40 12.25 6.41 30 20.20 21.25 16.91 8.07 60 15.86 20.64 17.04 14.10 120 15.63 14.90 20.95 13.60 180 13.82 25.31 19.06 15.04 240 13.90 20.14 24.03 16.66 300 17.61 26.20 20.52 15.37 158012.doc -30- 201210517 360 16.78 25.64 21.21 13.27 420 11.90 32.95 20.02 11.91 480 10.98 28.76 19.07 11.09 表6胰脂肪酶微片劑的液體膳食脂解動力學，實驗3-平均值 取樣間隔(min) 莫耳濃度(mM) TAG FFA DAG MAG 0 35.93 0.00 0.00 0.00 5 31.75 7.64 7.72 3.17 10 24.51 8.43 9.03 3.19 15 23.54 13.65 12.41 6.17 30 22.03 18.95 18.57 9.19 60 16.53 19.27 18.23 13.70 120 14.80 19.20 20.49 12.72 180 14.33 23.86 20.80 15.51 240 13.83 21.15 23.35 15.83 300 16.89 22.30 20.58 14.58 360 17.11 27.33 21.15 13.56 420 11.76 34.28 20.01 12.24 480 10.80 29.35 19.19 11.24 表7根據下面的計算的脂解水平1和2: 脂解水平1計算（FFA%) L%=(100xFFA)/(3xTAG〇)=(100xFFA)/(3xTAG+2xDAG+ MAG+FFA) 脂解水平2計算（FFA%=MAG%)。 L%=(10〇xFFA+MAG)/(3xTAG〇)=(100xFFA+MAG)/(3xTA G+2xDAG+MAG+FFA)。 脂解水平

樣品ID 脂解水平 j(FFA°/〇) 脂解水平 2CFFA+MAG%) IS-回收 (%)__ 時間(min)

脂肪酸的 總量mM 158012.doc -31- 201210517 樣品1測定1 0.0% 0.0% 98% 0 107 樣品1測定1 5.6% 7.9% 90% 5 119 樣品1測定1 8.6% 11.5% 94% 10 95 樣品1測定1 11.4% 16.7% 86% 15 113 樣品1測定1 12.0% 19.4% 94% 30 139 樣品1測定1 14.7% 25.6% 94% 60 122 樣品1測定1 20.0% 30.1% 98% 120 117 樣品1測定1 17.5% 30.0% 86% 180 128 樣品1測定1 17.9% 30.0% 98% 240 124 樣品1測定1 15.1% 26.4% 108% 300 122 樣品1測定1 21.1% 31.2% 91% 360 137 樣品1測定1 29.0% 39.2% 102% 420 123 樣品1測定1 26.8% 37.0% 98% 480 112 平均值 120 SD 12 CV(%) 10% 樣品ID 脂解水平 l(FFA°/〇) 脂解水平 2(FFA+MAG°/〇) IS-回收 (%) 時間(min) 脂肪酸的 總量mM 樣品1測定2 0.0% 0.0% 100% 0 109 樣品1測定2 6.9% 9.9% 90% 5 124 樣品1測定2 7.8% 11.0% 82% 10 112 樣品1測定2 12.3% 17.7% 89% 15 117 樣品1測定2 17.2% 23.7% 104% 30 124 樣品1測定2 17.7% 29.8% 96% 60 116 樣品1測定2 12.7% 24.3% 101% 120 117 樣品1測定2 21.1% 33.6% 108% 180 120 樣品1測定2 15.9% 29.1% 108% 240 127 樣品1測定2 19.3% 30.7% 102% 300 135 樣品1測定2 19.5% 29.5% 99% 360 132 樣品1測定2 27.3% 37.2% 107% 420 121 樣品1測定2 25.9% 35.9% 113% 480 111 平均值 120 SD 8 CV(°/〇) 7% 158012.doc -32- 201210517 表8根據表7中顯示的計算平均脂解水平1和2;其值用曲線 圖被報導在圖12中 平均脂解水平 時間 脂解水平1(FFA%) (min) 測定1 測定2 平均值 SD 0 0.0% 0.0% 0.0% 0% 5 5.6% 6.9% 6% 1% 10 8.6% 7.8% 8% 1% 15 11.4% 12.3% 12% 1% 30 12.0% 17.2% 15% 4% 60 14.7% 17.7% 16% 2% 120 20.0% 12.7% 16% 5% 180 17.5% 21.1% 19% 3% 240 17.9% 15.9% 17% 1% 300 15.1% 19.3% 17% 3% 360 21.1% 19.5% 20% 1% 420 29.0% 27.3% 28% 1% 480 26.8% 25.9% 26% 1% 時間 (min) 脂解水平2(FFA+MAG%) SD 測定1 測定2 平均值 0 0.0% 0.0% 0% 0% 5 7.9% 9.9% 9% 1% 10 11.5% 11.0% 11% 0% 15 16.7% 17.7% 17% 1% 30 19.4% 23.7% 22% 3% 60 25.6% 29.8% 28% 3% 120 30.1% 24.3% 27% 4% 180 30.0% 33.6% 32% 3% 240 30.0% 29.1% 30% 1% 300 26.4% 30.7% 29% 3% 158012.doc •33- 201210517 360 31.2% 29.5% 30% 1% 420 39.2% 37.2% 38% 1% 480 37.0% 35.9% 36% 1% 從以上的資料可以明確，觀測了一值得注意的在液體膳 食中用姨脂肪酶微片劑（混合後崩解的）預消化的TAG水平 的減小（作為脂肪酶脂解活性的結果）。在第一個小時tag 的濃度跌落到初始值的大約45%，然後在本實驗的剩餘部 分中繼續降低到—更小的程度，在8小時後達到大約7〇% 減少。此外，關於脂解該等結果表明在本發明的過程中得 到的液體營養組合物具有一個醯基鏈的百分比，該醯基鏈 從甘油三酸醋中釋放，在1小時後大約16%以及8小時後大 約28。/。；甘油三酸酯醯基鏈轉化成游離脂肪酸醯基鏈和轉 化成甘油單醋醯基鏈的百分比在1小時後大約係28%以及8 小時後大約36%。 實驗4.在碳酸氫鈉溶液中胰脂肪酶珠粒（微片劑和迷你片 劑）的崩解 碳酸氫鈉溶液的製備。 溶液A)按重量/體積計13%的碳酸氫鈉溶液：在容量瓶中 將13.0 g碳酸氫鈉加入到1〇〇 mL水中並且搖動；該鹽沒有 完全溶解（飽和溶液）。 溶液B)按重量/體積計8.4%的碳酸氫鈉溶液：在容量瓶 中將8‘4 g碳酸氫鈉加入到1〇〇 mL水中並且搖動直至溶解。 溶液C)按重量/體積計0 65%的碳酸氫鈉溶液：在容量瓶 中將0.65 g碳酸氫鈉加入到1〇〇 mL水中並且搖動直至溶 解0 158012.doc •34· 201210517 實驗4·在室溫下在5 mL 8_4%碳酸氫鈉溶液中具有5,〇〇〇脂 肪酶USP單位/膠囊（zenpep®微片劑5,000脂肪酶USP U/cps) 的腸溶衣包被的腹脂肪酶微片劑的單劑量單位的崩解時間 在15 mL燒杯中將一膠囊的内含物加入到5 mL 8.4%的破 酸氫納中，無需攪拌。該樣品被儲存在室溫下實驗台條件 下’無需攪拌。在定期的時間間隔進行目測觀察，記錄下 該等浸泡的微片劑的外觀，直至觀察到該產物崩解（即， / 該產物的任何一殘餘物係不具有明顯的硬核的軟塊）.在 ; 上述條件下在儲存20分鐘之後該等微片劑出現崩解。在約 55分鐘之後任何保留的殘餘物被完全溶解。圖13至18係在 無攪拌下在8.4%重碳酸鹽溶液中浸泡〇分鐘、1〇分鐘、2〇 分鐘、35分鐘、45分鐘、以及55分鐘之後該等迷你片劑的 照片。 貫驗4.2.在室溫下在5 mL 8.4%碳酸氫納溶液中儲存2〇分鐘 之後具有5,000脂肪酶USP單位/膠囊（Zenpep®微片劑5,000 脂肪酶USP U/cps)的胰脂肪酶微片劑的單劑量單位的崩解 在溫和地攪拌該產物的保留的殘餘物之後在室温下在5 mL 8.4%碜酸氫鈉溶液中儲存20分鐘之後對一劑量單位的 崩解的效果進行評估：僅觀察到少量碎片《圖19至21係在 . 無擾拌下在8.4%重碳酸鹽溶液中浸泡〇分鐘、1 〇分鐘、2〇 分鐘之後該等微片劑的照片。圖22係在20分鐘浸泡結束.時 在溫和攪拌之後保留的殘餘物。 實驗4.3.在室溫下在5 mL 8.4%碳酸氫鈉溶液中儲存2〇分鐘 之後處於等效於5,000脂肪酶USP單位的量的騰脂肪酶迷你 158012.doc -35- 201210517 片劑的崩解

使用等效於5,000脂肪酶USP U的胰脂肪酶迷你片劑重複 實驗4.2，在這種情況下，在8.4%碳酸氫鈉溶液中浸泡2〇 分鐘之後攪拌的樣品中觀察到更多的碎片Q 圖23至25係在無攪拌下在8.4%重碳酸鹽溶液中浸泡〇分 鐘、10分鐘、以及20分鐘之後迷你片劑的照片。圖26係在 20分鐘浸泡結束時在溫和的攪拌之後保留的殘餘物的照 片。 實驗4.4.在室溫下在5 mL 8.4%碳酸氫納溶液中儲存3〇分鐘 之後處於等效於5,000脂肪酶USP U的量的胰脂肪酶迷你片 劑的崩解 在這個實驗中，在無攪拌下碳酸氫鈉溶液中的該等迷你 片劑具有更長的停留時間（30分鐘）；在終點處在溫和攪拌 之後該等保留的軟塊完全消失（圖27-28)。 實驗4.5.被加入具有5,000脂肪酶usp單位/膠囊（Zenpep(g)微 片劑5,000脂肪酶USP U/cps)[*崩解期=〇-240分鐘]胰脂肪酶 微片劑的8.4%碳酸氫鈉溶液的pH測量 「當則」並且在加入單劑量單位的内含物5、1 〇、】5、 20、30、80、120、180、以及240分鐘之後對室溫下5 mL 8.4%奴酸氫鈉溶液的pH進行測量。未觀察到pHw制的改 變；表9顯示所得到的pH值。 表9·被加入一劑量單位的胰脂肪酶微片劑（5,〇〇〇脂肪酶 USP單位/cps)的碳酸氫鈉溶液的{)11值 時間(分鐘）| pH ~~Γ --— 158012.doc -36 - 201210517 0 8.223 「當前」的重碳酸鹽溶液 5 8.286 被加入一劑量單位的胰脂肪酶微片劑(5,000脂肪酶USP U/cps)的重碳酸鹽溶液 10 8.292 厂 15 8.298 厂 20 8.307 厂 30 8.315 厂 80 8.352 厂 120 8.378 厂 180 8.404 厂 240 8.410 厂 實驗4.6.在室溫下在5 mL 13%碳酸氫鈉溶液中具有5,000脂 肪酶USP U/膠囊（Zenpep®微片劑5,000脂肪酶USP U/cps)的 胰脂肪酶微片劑的單劑量單位的崩解 在無授拌下在15 mL燒杯中將一膠囊的内含物加入到5 mL 1 3%的碳酸氫鈉中。該樣品被儲存在室溫下實驗台條 件下，無需攪拌。在定期的時間間隔進行目測觀察，記錄 下該等浸泡的微片劑的外觀，直至觀察到該產物崩解。在 上述條件下在儲存20分鐘之後該等微片劑完全溶解。圖29 至31係在無攪拌下在13%重碳酸鹽溶液中浸泡0分鐘、10 分鐘、以及20分鐘之後該等微片劑的照片。 實驗4.7.在室溫下在5 mL 0.65%碳酸氫鈉溶液中具有5,000 脂肪酶USP U/膠囊（Zenpep®微片劑5,000脂肪酶USP U/cps) 的胰脂肪酶微片劑的單劑量單位的崩解 在無攪拌下在15 mL燒杯中將一膠囊的内含物加入到5 mL 0.65%的碳酸氫鈉中。該樣品被儲存在室溫下實驗台條 件下，無需攪拌。在定期的時間間隔進行目測觀察，記錄 158012.doc -37- 201210517 下該等浸泡的微片劑的外觀’直至觀察到該產物崩解。在 上述條件下在20分鐘之後，所有該等微片劑沒有完全崩解 (仍然可以看到小的硬核）。35分鐘之後，僅觀察到少量的 軟塊。圖32至33係在無攪拌下在0.65%重碳酸鹽溶液中浸 泡0分鐘以及3 5分鐘之後該等微片劑的照片。 實驗4.8.在室溫下在5 mL 8.4%碳酸氫鈉溶液中具有5,〇〇〇 脂肪酶USP U/膠囊（Zenpep®微片劑5,〇〇〇脂肪酶USp U/Cps)(5,000脂肪酶USP u/膠囊=4〇〇〇〇脂肪酶usp⑺的胰 脂肪酶微片劑的8個單位的收集的樣品的崩解 在無攪拌下在30 mL燒杯中將具有5,〇〇〇脂肪酶USP U/cps(相應於40,000脂肪酶USP單位）的八個膠囊的内含物 加入到5 mL 8.4%的碳酸氫鈉中。該樣品被儲存在室溫下 實驗台條件下，無需攪拌，在定期的時間間隔進行目測觀 察，記錄下該等浸泡的微片劑的外觀，直至觀察到該產物 崩解。在上述條件下在20分鐘之後，所有該等微片劑沒有 元全朋解（仍然可以看到小的硬核）β約4〇·45分鐘之後，僅 觀察到軟塊。圖34至36係在無攪拌下在8.4%重碳酸鹽溶液 中浸泡0分鐘、20分鐘、以及45分鐘之後該等微片劑的照 實驗4.9.在4°C下在5 mL 8.4%碳酸氫鈉溶液中具有5,〇〇〇脂 肪酶USP U/膠囊（zenpep®微片劑5,〇〇〇脂肪酶usp U/cps)(5,000脂肪酶USP U/膠囊=40,000脂肪酶USP仍的胰 脂肪酶微片劑的八個單位的收集的樣品的崩解 在無攪拌下在30 mL燒杯中將相應于約4〇,〇〇0脂肪酶usp 158012.doc -38 - 201210517 單位的八個膠囊的内含物加入到5 mL 84%的碳酸氫鈉 中。該樣品被儲存在4t:下，無需授摔。在定期的時間間 隔進打目測觀察，記錄下該等浸泡的微片劑的外觀，直至 觀察到該產物崩解。在上述條件下2〇分鐘之後，大多數微 片劑仍然是完整的；約45分鐘之後，僅觀察到不多的軟 塊。圖37至38係在無攪拌下在4。。了在8.4%重碳酸鹽溶液 中浸泡0分鐘以及45分鐘之後該等微片劑的照片。 實驗4.10.8.4%碳酸氫納溶液的體積對具有5，_脂肪酶usp U/膠囊（Zenpep®微片劑5,〇〇〇脂肪酶usp u/cps)(5,〇〇〇脂肪 酶USP U/膠囊=4〇,〇〇〇脂肪酶usp u)的胰脂肪酶微片劑的8 個單位的收集的樣品的崩解時間的影響 在室溫下在無攪拌下在懸浮於5、10、15、20、以及25 mL介質中的微片劑上對8 4%碳酸氫鈉溶液的體積對胰脂 肪酶微片劑（40,000脂肪酶usp單位）的崩解時間的影響進 行°平估。在定期的時間間隔進行目測觀察，記錄下該等浸 泡的微片劑的外觀。藉由以下各項觀察到隨著碳酸氫鈉溶 液的體積逐漸增加，微片劑崩解時間逐漸減少：隨著體積 從5 mL增加到10 mL，崩解時間減少了約1〇分鐘（35分鐘對 刀鐘）5亥1 5 mL樣品顯示在20分鐘之後大多數微片劑仍 然係元整的，而在2〇 mL和25 mL樣品中在20分鐘之後僅觀 'T、j軟塊（在5 mL 8.4%重碳酸鹽溶液中崩解5，〇〇〇 U的單獨 的劑量單位需要相同的時間）。「當前」和該等微片劑的2〇 刀鐘朋解期之後25 mL碳酸氫鈉溶液的？11對應地是8 ιΐ6和 7·979。圖39至41係在無攪拌下在室溫下在逐漸增加體積 158012.doc -39- 201210517 (51111^、15111[、以及25 111[)的8.4%重碳酸鹽溶液中浸泡2〇 分鐘之後s亥專微片劑的照片。 貫驗4.11.在室溫下在25 mL 8.4%碳酸氫納溶液中相應於 40,000脂肪酶USP單位（Creon®緩釋膠囊，24,000脂肪酶 USP U/cps，市售產品，失效期0272012)的胰脂肪酶球粒 的收集的樣品的崩解時間 在無攪拌下在50 mL燒杯中將相應于約40,000脂肪酶USP 單位的一些膠囊的内含物加入到25 mL 8.4%的碳酸氫納 中。該樣品被儲存在室溫下’無需授拌。在定期的時間間 隔進行目測觀察’記錄下該等浸泡的微片劑的外觀，直至 觀察到該產物崩解。在上述條件下20分鐘之後，所有的顆 粒仍然是完整的’與時間〇相比較在外觀上沒有任何顯著 改變；在短暫攪拌之後，形成了該等粒料的團塊。6〇分鐘 之後具有硬核的穩定量的粒料仍然存在，它們在另一短暫 攪拌步驟之後沒有崩解。在進一步的對照中，在9〇分鐘時 仍然觀察到少量的粒料，在120分鐘之後發生完全崩解。 圖42至45顯示了在室溫下在8.4%重碳酸鹽溶液中浸泡〇分 鐘、20分鐘、90分鐘、以及12〇分鐘之後腸溶衣包被的球 體（Creon®)的照片。 實驗5.在8.4%碳酸氫鈉溶液中胰脂肪酶活性的確定 在5,000脂肪酶USP單位的單劑量單位上亦或在4〇,〇〇〇脂 肪酶usp單位的更高的劑量上對儲存在室溫和4t：下的溶 於碳酸氫鈉溶液中的胰脂肪酶微片劑中包含的三種主要酶 的活性進行評估。使用上述方法確定活性。 158012.doc •40· 201210517 實驗5.1.在室溫相對4°C [*在室溫下崩解期=20分鐘]下溶於 *5 1^8.4%碳酸氫鈉溶液中的具有5,〇〇〇脂肪酶1；8?1；/膠 囊（Zenpep®微片劑5,000脂肪酶USP U/cps)的胰脂肪酶微片 劑的單劑量單位的脂肪酶活性 無減攪拌在15 mL燒杯中將一膠囊的内含物加入到5 mL 8.4%的碳酸氫鈉中。該樣品被儲存在室溫下實驗台條件 下，無需攪拌。製備了兩個獨立的樣品（丨八和丨B)。在2〇分 鐘之後，將胰脂肪酶/重碳酸鹽樣品攪拌並且將12〇 μ1等分 部分稀釋到10 mL水中並且按照胰脂肪酶usp專題著作中 所述的脂肪酶測定法使用丨mL該溶液對脂肪酶活性進行確 .定（時間〇)。在to採樣之後立即將樣品1A儲存在室溫下，而 將樣品1B保存在4°C下。在t0之後15分鐘、3〇分鐘、45分 鐘、60分鐘、90分鐘、15〇分鐘、以及24〇分鐘從樣品丨八和 ⑺這兩個樣品中進-步抽取12G μ1等分部分，稀釋並且立 即測定脂肪酶活性。該胰脂肪酶/碳酸氫鈉混合物中的脂 肪酶的活性被表達為從同—運行中批量脂肪酶測^實驗值 中計算的總脂肪酶活性的％。將來自兩個運行的結果匯總 於表l〇a(室溫下的活性）、㈣_下的活性）以及表 10c(平均數據）中。 表存儲在至溫下的8 4%碳酸氫納溶液中s，〇_的胰脂 肪酶微片劑的脂肪酶活性 運行1 Ί Ί- "―__ 運行2 泣基於理緣的1在⑴時船助」 敏/¾奶酶^ 1於埋論的^ 存儲時間 I 初^(to)1 158012.doc •41- 201210517

1)在崩解所需要的停留時間2〇分鐘之後；2):被加入到5 mL碳酸氫鈉中的胰脂肪酶微片劑的量：72m 批量脂 肪酶測定實驗值（71.5脂肪酶USP單位/mg)=5丨87 usp單 位；3广被加入到5 mL碳酸氫鈉中的胰脂肪酶微片劑的 量：59.34 mgx批量脂肪酶測定實驗值（75脂肪酶usp單位/ mg)=4451 USP 單位 表10b·存儲在4°C下的8.4%碳酸氫鈉溶液中5 〇〇〇ϋ的胰脂 肪酶微片劑的脂肪酶活性 存儲時間 (分鐘） 運行1 --------- 運行2 總脂肪酶活 性(USPU) 基於理論的總 脂肪酶2的脂 肪酶活性％ 在to時脂 肪酶活性 % 總脂肪酶活 性(USP u) 基於理論的總脂 肪酶3的脂肪酶 活性％ 在to時脂 肪酶活性 0Z 初始值(to)1 4265 92.3 100.0 4653 96.0 /0 1 ΛΑ η 15 4006 86.7 93.9 4395 90 7 iUu.U QA A 30 3748 81.1 87.9 4201 86 7 -7Η·.Η ΟΛ Ί 45 3554 76.9 83.3 3942 81.3 yyj.j QA 7 60 3360 72.7 78.8 3878 80.0 Οτ·. / 0*3 1 90 3296 71.3 77.3 3425 70.7 Ο.). J 150 2973 64.3 69.7 3167 65.3 / J.0 68.1 158012.doc •42· 201210517 240 | 2714 58.7 63.6 2908 60.0 62.5 1)在崩解所需要的停留時間20分鐘之後；2):被加入到5 mL碳酸氫鈉中的胰脂肪酶微片劑的量：64.62 mgx批量脂 肪酶測定實驗值（71.5脂肪酶USP單位/mg)=4620 USP單 位，3):被加入到5 mL碳酸氫鈉中的胰脂肪酶微片劑的 量.64.63 mgX批量脂肪酶測定實驗值（75脂肪酶usp單位/ mg)=4847 USP單位。 表10c.存儲在室溫M°C下的8.4。/〇碳酸氫鈉溶液中5,000脂肪 酶USP單位的胰脂肪酶微片劑的脂肪酶活性（運行丨和2的平 均值） 存儲時間 存儲在: 1：溫下 存储在4°C下 (分鐘） 基於理論的總脂肪 酶的脂肪酶活性％ 在t〇時脂肪酶 活性％ 基於理論的總脂肪 酶的脂肪酶活性％ 在to時脂肪酶 活性％ 初始值(to)1 96.9 ΐοο.η 94 2 100 Π 15 73.8 76.1 88 7 -.......... 〇4 9 30 57.3 59.2 83 9 QQ 1 45 51.8 _ 53.4 79 1 · J. ' 、^^ «4 0 60 41.6 42.9 76 4 fil 1 90 30.8 zzsri： 71.0 Oi.i ---〜 75.4 150 25.4 26.λ 64 8 〜^ AQ Q 240 17.7 __1^2 __ 59.4 63.1 1)在崩解所需要的停留時間20分鐘之後。 存儲在4 C的混合物與存儲在室溫下的混合物相比較顯 示更高的脂肪酶穩定性（在4小時之後約6〇%對約2〇%的殘 餘脂肪酶活性”特別地，對於存儲在室溫下的樣品在第 一個小時中觀察到脂肪酶活性幾乎垂直地下降（留下小於 50%的初始脂肪酶活性）。 158012.doc .43· 201210517 實驗5·2.溶於*5 mL 8.4%碳酸氫鈉溶液中具有5,000脂肪酶 USP U/膠囊（Zenpep® 微片劑 5,000 脂肪酶 USP U/cps)(5,000 脂肪酶USP U/膠囊=40,000脂肪酶USP U)的胰脂肪酶微片 劑的八個單位的收集的樣品的脂肪酶活性[*在室溫下崩解 期=20分鐘] 在無攪拌下在15 mL燒杯中將八個膠囊的内含物加入到5 mL 8.4%的碳酸氫鈉中。該樣品被儲存在室溫下實驗台條 件下，無需攪拌。製備了兩個獨立的樣品（2A和2B)。在20 分鐘之後，將胰脂肪酶/重碳酸鹽混合物攪拌並且將150 μΐ 等分部分稀釋到10 mL水中並且按照胰脂肪酶USP專題著 作的脂肪酶測定法在1 mL該溶液上對脂肪酶活性進行確定 (時間0)。在t0採樣之後立即將樣品2A存儲在室溫下，而將 樣品2B保存在4°C下。在t0之後15分鐘、30分鐘、45分 鐘、60分鐘、120分鐘、以及240分鐘從樣品2A和2B這兩 個樣品中進一步抽取1 50 μΐ等分部分，稀釋並且立即測 定脂肪酶活性。該胰脂肪酶/碳酸氫鈉混合物中的脂肪酶 的活性被表達為從同一運行中批量脂肪酶測定實驗值中計 算的總脂肪酶活性的％。該等結果被匯總於表11中。 表11.存儲在室溫/4°c下的8.4%碳酸氫鈉溶液中40,000脂肪 酶USP單位的胰脂肪酶微片劑的脂肪酶活性 存儲時間 (分鐘） 存儲在室溫下 存儲在4°C下 總脂肪酶活性 (USP U) 基於理論的總脂 肪酶2的脂肪酶 活性％ 總脂肪酶活性 (USP U) 基於理論的總脂 肪酶3的脂肪酶 活性％ 初始值(to)1 23422 57.3 23366 58.7 158012.doc -44- 201210517 15 35405 86.7 36642 92.0 30 33226 81.3 36642 92.0 45 27779 68.0 37174 93.3 60 23966 58.7 36642 92.0 120 16885 41.3 33987 85.3 240 9804 24.0 29739 74.7 1):在崩解所需要的停留時間20分鐘之後；2):被加入到5 mL碳酸氫鈉中的胰脂肪酶微片劑的量：544.69 mgX批量脂 肪酶測定實驗值（75脂肪酶USP單位/mg)=40852 USP單位； 3):被加入到5 mL碳酸氫鈉中的胰脂肪酶微片劑的量： 531.05 mgx批量脂肪酶測定實驗值（75脂肪酶USP單位/ mg)=39829 USP單位 在t0觀察到的初始的低的值可以被解釋為在20分鐘崩解 期内微片劑的總量的不完全溶解。在兩個測試的存儲條件 下，與在一個單獨的劑量單位上完成的前面的實驗相比較 所測量的殘留的脂肪酶活性是更高的。 實驗5.3.在室溫相對4°C下溶於*5 mL 8.4%碳酸氫鈉溶液中 的具有5,000脂肪酶USP U/膠囊（Zenpep®微片劑5,000脂肪 酶USP U/cps)的胰脂肪酶微片劑的單劑量單位的脂肪酶活

I 性[*在室溫下在40分鐘崩解期之後] 與實驗2.1相比較在這個實驗中崩解期的時間加倍了。 該等結果被匯總於表12中。 表12·被存儲在室溫/4°C下的5 mL 8.4%碳酸氫鈉溶液中 5,000脂肪酶USP單位的胰脂肪酶微片劑的脂肪酶活性（在 室溫下在40分鐘崩解期之後） 158012.doc -45- 201210517 存儲時間 (分鐘） 存儲在室溫下 存儲在4°C下 總脂肪酶活性 (USPU) 基於理論的總脂 肪酶2的脂肪酶 活性％ 總脂肪酶活性 (USP U) 基於理論的總脂 肪酶3的脂肪酶 活性％ 初始值(to)1 3962 87.6 4156 81.0 15分鐘 3016 66.7 4156 81.0 30分鐘 3844 85.0 3687 71.9 45分鐘 1952 43.1 3553 69.3 60分鐘 1597 35.3 3285 64.1 120分鐘 1065 23.5 2950 57.5 240分鐘 651 14.4 2615 51.0 1):在崩解所需要的停留時間40分鐘之後；2):胰脂肪酶 微片劑的量.(5 9.14 mg) X批量脂肪酶測定實驗值（76.5脂肪 酶USP單位/mg)=4524 USP單位；3):胰脂肪酶微片劑的量 (67.04 mg)x批量脂肪酶測定實驗值（76·5脂肪酶USP單位/ mg)=5129 USP單位 由於重碳酸鹽介質中額外的停留時間，當崩解時間延長 時脂肪酶穩定性稍微地變差。 實驗5.4.溶於*5 mL 8.4%碳酸氫鈉溶液中具有5,000脂肪酶 USP U/膠囊（Zenpep®微片劑 5,000脂肪酶 USP U/cps) (5,000 脂肪酶USP U/膠囊=40,000脂肪酶USP U)的胰脂肪酶微片 劑的八個單位的收集的樣品的脂肪酶活性[*在室溫下在40 分鐘崩解期之後] 這個實驗遵循實驗2.2的相同的步驟，除了崩解期的時 間之外，該崩解期的時間被加倍以確保更大量的微片劑完 全崩解。該等結果被匯總於表13中。 表13.被存儲在室溫/4°C下的5 mL 8.4%碳酸氫鈉溶液中 158012.doc -46- 201210517 40,000脂肪酶USP單位的胰脂肪酶微片劑的脂肪酶活性（在 40分鐘崩解期之後） 存儲時間(分鐘） 存儲在室溫下 存儲在4°C下 總脂肪酶活性 (USPU) 基於理論的總脂 肪酶2的脂肪酶 活性％ 總脂肪酶活性 (USPU) 基於理論的總脂 肪酶3的脂肪酶 活性％ 初始值(to)1 31276 82.9 29855 78.9 15分鐘 32269 85.5 32343 85.5 30分鐘 28297 75.0 33339 88.2 45分鐘 22836 60.5 32841 86.8 60分鐘 19361 51.3 31348 82.9 120分鐘 15390 40.8 30851 81.6 240分鐘 8936 23.7 27865 73.7 1):在崩解所需要的停留時間40分鐘之後；2):胰脂肪酶 微片劑的量（496.44 mg)x批量脂肪酶測定實驗值（76脂肪酶 USP單位/mg)=37729 USP單位；3):胰脂肪酶微片劑的量 (497.5 9 mg)x批量脂肪酶測定實驗值（76脂肪酶USP單位/ mg)=37817 USP單位 如在前面測試中已經觀察到的，在被存儲在4°C下的樣 品懸浮液中觀察到令人滿意的脂肪酶穩定性（在四小時存 儲之後約74%的剩餘活性）。對於收集的樣品的40,000脂肪 酶USP單位而言，藉由將崩解時間從20分鐘增加到40分鐘 未觀察到脂肪酶穩定性的顯著變化，因為在該20分鐘期内 該等微片劑的一部分係未完全崩解的。 實驗5.5.溶於*5 mL 8.4%碳酸氫鈉溶液中具有5,000脂肪酶 USP U/膠囊（Zenpep®微片劑 5,000脂肪酶 USP U/cps) (5,000 脂肪酶USP U/膠囊=40,000脂肪酶USP U)的胰脂肪酶微片 158012.doc -47- 201210517 J的\個單位的收集的樣品的脂肪酶活性[*在室溫下在4〇 分鐘崩解期之後] 。在無授掉下在15 mL燒杯中將相應于約4〇,〇〇〇脂肪酶USp 單位的八個膠囊的内含物加入到5 mL 8.4%的碳酸氫鈉 中。該樣品被儲存在室溫下實驗台條件下，無需攪拌。製 備了兩個獨立的樣品（2 A和2Bp在4〇分鐘之後將該胰脂 肪酶/重妷酸鹽混合物攪拌，並且將14〇 y等分部分稀釋到 1〇〇 mL冷的pH 7 5的緩衝劑中。使用冷的7 5緩衝劑將丄 的3亥溶液進一步稀釋到20 mL·。根據胰脂肪酶USP專題 著作中所述的概略步驟來確定蛋白酶活性（時間〇)。在取得 t0等分部分之後立即將樣品2A存儲在室溫下，而將樣品2b 保存在41下。在t〇之後30分鐘、60分鐘、120分鐘、240 刀在里從樣品2A和2B這兩個樣品中進一步抽取丨4〇 μι等分部 刀，並且立即測定蛋白酶活性。該騰脂肪酶/碳酸氫鈉混 合物中的蛋白酶的活性被表達為從批量蛋白酶測定中計算 的總蛋白酶活性的％(177 USP U/mg)。該等結果被匯總於 表14中。 表14·被存儲在室溫/4。〇下的5 mL 8.4%碳酸氫納溶液中 40,000脂肪酶USP單位的胰脂肪酶微片劑的蛋白梅活性（在 40分鐘崩解期之後） 存儲時間(分鐘） 存儲在室溫下 存儲在4°C下 158012.doc • 48· 201210517 總脂肪酶活性 (USPU) 基於理論的總脂 肪酶2的脂肪酶活 性％ 總脂肪酶活性 (USPU) 基於理論的總脂 肪酶3的脂肪酶活 性％ 初始值(to)1 72115 81.4 74141 81.9 30分鐘 67107 75.7 77209 85.3 60分鐘 78626 88.7 78232 86.4 120分鐘 71114 80.2 91526 101.1 240分鐘 77624 87.6 98685 109.0 1):在崩解所需要的停留時間40分鐘之後；2):胰脂肪酶 微片劑的量（500.8 mg)x批量蛋白酶測定（177蛋白酶USP單 位/mg)=88642 USP單位；3):胰脂肪酶微片劑的量（511.32 mg)x批量蛋白酶測定（177脂肪酶USP單位/mg)=90504 USP 單位 在這兩種存儲條件下，在四個小時期間蛋白酶展示令人 滿意的穩定性，其中對於存儲在室溫下的樣品溶液剩餘活 性在75.7%至88.7%之間，並且對於存儲在4°C下的樣品溶 液剩餘活性在81.9%至109%之間。 實驗5.6·溶於*5 mL 8.4%碳酸氫鈉溶液中具有5,000脂肪酶 118卩11/膠囊（26叩6?@微片劑5,000脂肪酶1；8?1；气？3)(5,000 脂肪酶USP U/膠囊=40,000脂肪酶USP U)的胰脂肪酶微片 劑的八個單位的收集的樣品的澱粉酶活性[*在室溫下在40 分鐘崩解期之後] 在無攪拌下在15 mL燒杯中將相應于約40,000脂肪酶USP 單位的八個膠囊的内含物加入到5 mL 8.4%的碳酸氫鈉 中。該樣品被儲存在室溫下實驗台條件下，無需攪拌。製 備了兩個獨立的樣品（2A和2B)。在40分鐘之後，將該胰脂 158012.doc •49- 201210517 肪酶/重碳酸鹽混合物攪拌，並且將270 μΐ等分部分稀釋到 5 mL冷的pH 6.8的澱粉酶緩衝劑中。使用冷的pH 6.8澱粉 酶緩衝劑將1 mL的該溶液進一步稀釋到20 mL。根據胰脂 肪酶USP專題著作中所述的概略步驟來確定澱粉酶活性（時 間0)。在取得t0等分部分之後立即將樣品2A存儲在室溫 下，而將樣品2B保存在4°C下。在t0之後60分鐘以及120分 鐘從樣品2A和2B這兩個樣品中進一步抽取270 μΐ等分部 分，並且立即測定澱粉酶活性。該胰脂肪酶/碳酸氫鈉混 合物中的澱粉酶的穩定性被表達為從批量澱粉酶測定中計 算的總蛋白酶活性的％(238 USP U/mg)。該等結果被匯總 於表15中。 表15.被存儲在室溫/4°C下的 5 mL 8.4%碳酸氫鈉溶液中 40,000脂肪酶USP單位的膜脂肪酶微片劑的澱粉酶穩定性 (在40分鐘崩解期之後） 存儲時間(分鐘） 存儲在室溫下 存儲在4°C下 總澱粉酶活性 (USPU) 基於理論的總澱 粉酶2的澱粉酶活 性％ 總澱粉酶活性 (USP U) 基於理論的總澱 粉酶3的澱粉酶活 性％ 初始值(t〇y 111071 89.1 99843 79.8 60分鐘 80684 64.7 94063 75.2 120分鐘 58679 47.1 99318 79.4 1):在崩解所需要的停留時間40分鐘之後；2):胰脂肪酶 微片劑的量（523.92 mg)x批量澱粉酶測定（23 8澱粉酶USP單 位/mg) = 124693 USP單位；3):胰脂肪酶微片劑的量 (525.49 mg)x批量澱粉酶測定（238脂肪酶USP單位/ 158012.doc -50- 201210517 mg)=125067 USP單位。 與存儲在室溫下的樣品溶液相比較存儲在4°C下的樣品 溶液中的澱粉酶活性得以改善（在整個測試時間期間在理 論酶活性的75%至80%之間）。 實驗5.7.在室溫相對4°C下溶於*5 mL 13%碳酸氫鈉飽和溶 液中的具有5,000脂肪酶USP U/膠囊（Zenpep®微片劑5,000 脂肪酶USP U/cps)的胰脂肪酶微片劑的單劑量單位的脂肪 酶活性[*在室溫下在20分鐘崩解期之後] 這個實驗遵循實驗2.1中所述的相同步驟，唯一的差別 係所使用的碳酸氫鈉溶液的濃度（13°/。）。該胰脂肪酶/碳酸 氫鈉混合物中的脂肪酶的穩定性被表達為從同一運行中批 量脂肪酶測定實驗值中計算的總脂肪酶活性的％。該等結 果被匯總於表16中。 表16.被存儲在室溫/4°C下的5 mL 13%碳酸氫鈉飽和溶液 中約5,000 USP單位的胰脂肪酶微片劑的脂肪酶穩定性（在 20分鐘崩解期之後） 存儲時間 (分鐘） 存儲在室溫下 存儲在4°C下 總脂肪酶活性 (USPU) 基於理論的總脂 肪酶2的脂肪酶 活性％ 總脂肪酶活性 (USPU) 基於理論的總脂 肪酶3的脂肪酶 活性％ 初始值(to)1 4343 101.3 4629 98.7 15分鐘 3429 80.0 4566 97.3 30分鐘 2743 64.0 4379 93.3 45分鐘 2229 52.0 4003 85.3 60分鐘 1829 42.7 3753 80.0 120分鐘 1200 28.0 3190 68.0 240分鐘 800 18.7 2690 57.3 158012.doc -51- 201210517 1):在崩解所需要的停留時間：20分鐘之後；2):胰脂肪 酶微片劑的量（57.15 mg)x批量脂肪酶測定實驗值（75脂肪 酶USP單位/mg)=4286 USP單位；3):胰脂肪酶微片劑的量 (62.5 5 mg)x批量脂肪酶測定實驗值（75脂肪酶USP單位/ mg)=4691 USP 單位 在這兩個存儲條件下所觀察到的脂肪酶穩定性圖譜與使 用8.4%碳酸氫鈉溶液所得到的那些幾乎是完全重疊的，表 明鹼性物質濃度增加對該酶的穩定性沒有影響。 實驗5.8.溶於*5 mL 8.4%碳酸氫鈉溶液中具有5,000脂肪酶 USP U/膠囊（Zenpep® 微片劑 5,000 脂肪酶 USP U/cps)(5,000 脂肪酶USP U/膠囊=40,000脂肪酶USP U)的胰脂肪酶微片 劑的八個單位的收集的樣品的脂肪酶活性[*在4°C下在45 分鐘崩解期之後] 這個實驗遵循實驗2.2中所述的相同步驟，唯一的差別 係該崩解期係在4°C完成的持續了 45分鐘。該胰脂肪酶/碳 酸氫鈉混合物中的脂肪酶的穩定性被表達為從同一運行中 批量脂肪酶測定實驗值中計算的總脂肪酶活性的％。該等 結果被匯總於表17中。 表17.被存儲在4°C下的5 mL 8.4%碳酸氫鈉溶液中40,00011 的胰脂肪酶微片劑的脂肪酶活性（在4°C下在45分鐘崩解期 之後） 存儲時間(分鐘） 存儲> M°C下 總脂肪酶活性 (USP U) 基於理論的總脂肪 酶2的脂肪酶活性％ 158012.doc -52- 201210517 初始值(to)1 33092 84.2 15分鐘 37229 94.7 30分鐘 33610 85.5 45分鐘 36195 92.1 60分鐘 34127 86.8 120分鐘 32575 82.9 240分鐘 28439 72.4 1):在崩解所需要的停留時間20分鐘之後；2):胰脂肪酶 微片劑的量（517.07 mg)x批量脂肪酶測定實驗值（76脂肪酶 USP 單位/mg)=39297 USP 單位。 .所觀察到的脂肪酶穩定性圖譜與在室溫下使用40分鐘崩 解期所得到的圖譜等效：對於所收集樣品的40,000脂肪酶 USP單位在室溫下40分鐘崩解期對該酶的穩定性沒有影 響。 實驗5.9.溶於*25 mL 8.4%碳酸氩鈉溶液中具有5,000脂肪 酶1^?11/膠囊（26叩6?@微片劑5,000脂肪酶1；8?11/。？3) (5,000脂肪酶USP U/膠囊=40,000脂肪酶USP U)的胰脂肪酶 微片劑的八個單位的收集的樣品的脂肪酶活性[*在室溫下 在20分鐘崩解期之後]

在無攪拌下在50 mL燒杯中將相應于約40,000脂肪酶USP 單位的八個膠囊的内含物加入到25 mL 8.4%的碳酸氫鈉 中。該樣品被儲存在室溫下實驗台條件下。製備了兩個獨 立的樣品（2A和2B)。在20分鐘之後，將胰脂肪酶/重碳酸 鹽混合物攪拌並且用水將150 μΐ等分部分稀釋到20 mL， 並且將該等混合物攪拌，並且將1 50-μ1等分部分稀釋到20 mL水中並且按照胰脂肪酶USP專題著作中概略步驟在1 mL 158012.doc -53- 201210517 該溶液上對脂肪酶活性進行確定（時間〇)。在得到to等分部 分之後立即將樣品2A存儲在室溫下，而將樣品2B保存在 4°C下。在t0之後15分鐘、30分鐘、45分鐘、60分鐘、120 分鐘、以及240分鐘從溶液2A和2B兩者中進一步抽取150 μΐ等分部分，並且立即測定脂肪酶活性。該胰脂肪酶/碳酸 氩鈉混合物中的脂肪酶的穩定性被表達為從同一運行中批 量脂肪酶測定實驗值中計算的總脂肪酶活性的％。該等結 果被匯總於表1 8中。 表18.被存儲在室溫/4°C下的25 mL 8.4%碳酸氫鈉溶液中約 40,000脂肪酶USP單位的胰脂肪酶微片劑的脂肪酶活性（在 20分鐘崩解期之後） 158012.doc 54- 201210517 存儲時間 (分鐘） 存儲在 --... 室溫下 '~~~— 存儲在4°Γ τ 總脂肪酶活性 (USPU) 基於理論的總脂 肪酶2的脂肪酶 活性％ 總脂肪酶活性 (USPU) 基於理論的總脂 肪酶3的脂肪酶 、，本从〇/- 初始值(to)1 36335 99.3 35688 ✓ΰ Ti /0 15分鐘 35850 98.0 29390 yu.i 7/1 30分鐘 28099 76.8 37262 r\ 45分鐘 25192 68.9 35163 y4.u 00 7 60分鐘 22285 60.9 34638 oo. / 〇7 A 120分鐘 17925 49.0 33064 O / .^r A 240分鐘 15018 41.1 30964 78.1 1):在崩解所需要的停留時間20分鐘之後；2):胰脂肪酶 φά片劑的里（484·46 mg) X批量脂肪酶測定實驗值（7 5 · 5脂肪 酶USP單位/mg)=36577 USP單位；3):胰脂肪酶微片劑的 量（524.82 mg)x批量脂肪酶測定實驗值（75 5脂肪酶USP單 位/mg)=39624 USP 單位。 在相同的存儲條件下對於在5 mL重碳酸鹽介質中崩解的 相同的量的微片劑而言被存儲在4°C下的25 mL樣品溶液的 脂肪酶穩定性展示相同的觀察到的圖譜，而與處於較低體 積的相應的樣品相比較，被存儲在室溫下的25 mL樣品溶 液顯示提高的穩定性（四小時之後，約40%剩餘的酶活性相 對約23%剩餘的酶活性）》 實驗5.10.溶於25 mL 8.4%碳酸氫鈉溶液中的胰脂肪酶粉末 (4〇,000脂肪酶USP單位）的脂肪酶穩定性 在50 mL燒杯中將相應于約40,000脂肪酶USP單位的一定 量的胰脂肪酶粉末加入到25 mL 8.4%的碳酸氫鈉中並且短 暫地攪拌（2分鐘）從而得到均勻的混合物。製備了兩個獨立 158012.doc -55- 201210517 的樣品（2A和2B)。將15〇 μ1等分部分稀釋到2〇 mL水中並 且使用胰脂肪酶usp專題著作的概略步驟在i mL該溶液上 對脂肪酶活性進行確定（時間〇)。在得到⑺等分部分之後立 即將樣品2A存儲在室溫下，而將樣品2B保存在4。〇下。在 t〇之後15分鐘、45分鐘、6〇分鐘、12〇分鐘、以及24〇分鐘 從樣品2A和2B兩者中進一步抽取15〇卜丨等分部分並且立 即測定脂肪酶活性。該胰脂肪酶粉末/碳酸氫鈉混合物中 的脂肪酶的穩定性被表達為從同—運行中批量脂肪酶測定 實驗值中計算的總脂肪酶活性的％(119 usp 。該等 結果被匯總於表1 9中。 表认被存儲在室溫Mt：下的25mL8.4%碳酸氣納溶液中的 胰脂肪酶粉末（約40,〇〇〇脂肪酶usp單位）的脂肪酶活性 存儲時間 (分鐘） 存儲在 室溫下 存儲 總脂肪酶活性 (USPU) 基於理論的總脂 肪酶1的脂肪酶 活性％ 總脂肪酶活性 (USPU) 基於理論的總脂 肪酶2的脂肪酶 活杨％ 初始值(to) 39747 97.5 38978 QC Λ 15分鐘 29811 _73.1 35874 87 4 30分鐘 26041 63.9 33459 01 < 45分鐘 22958 56.3 31390 Ol 60分鐘~ 19531 47.9 ' 31390 / 0·) 7A ^ 120分鐘 15419 -— _ 37.8 30700 74 q 240分鐘 10622 26.1 25526 62.2 1).胰脂肪酶粉末的量（342.65 mg)X批量脂肪酶測定實驗 值（119脂肪酶USP單位/mg)=4〇775 USP單位；2):胰脂肪 酶粉末的量（344.94 11^)><批量脂肪酶測定實驗值（119脂肪 酶USP單位/mg)=41〇48 USP單位 158012.doc -56· 201210517 與對於腸溶衣包被的胰脂肪酶微片劑所觀察的相比較， 騰脂肪酶粉末的脂肪酶穩定性圖譜（用於其他實驗中的胰 脂肪酶微片劑中所包含的相同批號）係顯著地更低的（在這 兩個存儲條件下在240分鐘終點時14%-16%更小的剩餘的 曰肪扭活丨生）。在25 mL· 8_4%碳酸氫納溶液中崩解的微片 劑的脂肪酶穩定性圖譜與胰脂肪酶粉末的比較被顯示於圖 46中。 實驗6.添加有胰脂肪酶珠粒/重碳酸鹽溶液的液體營養組合 物中脂肪酶活性的確定（在弱鹼性溶液中珠粒崩解） 貫驗6.1.溶於*5 mL 8.4%碳酸氫鈉溶液中具有5,〇〇〇脂肪酶 USP U/膠囊（Zenpep®微片劑 5,000脂肪酶 USP U/cps)(5,000 脂肪酶USP U/膠囊=4〇,〇〇〇脂肪酶usp U)的胰脂肪酶微片 劑的八個單位的收集的樣品的液體營養組合物中的脂肪酶 活性[*在室溫下崩解期=20分鐘] 在無授拌下在30 mL燒杯中將相應于約40,〇〇〇脂肪酶USP 單位的八個膠囊的内含物加入到5 mL 8.4%的碳酸氫鈉 中。在20分鐘之後，將胰脂肪酶/重碳酸鹽混合物攪拌並 且倒入包含2000 mL液體營養組合物（參見上述組合物）的 瓶子中；（「當前」該液體營養組合物的pH=6.423 ;該液 體營養組合物+包含溶解的微片劑的5 mL 8.4%碳酸氫納溶 液的pH=6.724);將該容器關閉並且短暫地搖動。將得到 的混合物的3 mL等分部分倒入50 mL容量瓶中並且用冷水 稀釋到體積；將溶液短暫地搖動（理論的脂肪酶濃度=12 USP單位/ml)。這係το樣品。按照用於確定脂肪酶活性的 1580I2.doc •57- 201210517 胰脂肪酶USP專題著作的脂肪酶測定法來對1 mL TO樣品進 行立即地測定。在得到各等分部分之前在無攪拌下將容器 關閉並且存儲在室溫下，將混合物進行短暫地搖動。藉由 在任何時間點處取樣3 mL等分部分的存儲在室溫下的混合 物，並且遵循對於T0樣品所描述的稀釋和分析，在1 5分 鐘、30分鐘、60分鐘、120分鐘、240分鐘、以及360分鐘 之後重複該步驟。添加有胰脂肪酶/碳酸氫鈉混合物的液 體營養組合物（200 ml)中的脂肪酶的穩定性被表達為從實 驗2.卜2.4、2.7-2.9中得到的批量脂肪酶測定平均值計算的 總脂肪酶活性的％(75.1脂肪酶USP U/mg)。該等結果被匯 總於表20中。 表20.在室溫下添加有包含溶解的胰脂肪酶的5 mL 8.4%重 碳酸鹽溶液的200 mL液體營養組合物中脂肪酶活性 存儲在室溫下 存儲時間(分鐘） 總脂肪酶活性 (USPU)2 基於理論的總脂肪 酶的脂肪酶活性％ 初始值(to)1 35888 91.9 15 34327 87.9 30 35367 90.5 60 36928 94.5 120 37968 97.2 240 38488 98.5 360 38488 98.5 1):在崩解所需要的停留時間20分鐘之後；2):被加入到5 mL碳酸氫鈉中的胰脂肪酶微片劑的量：520.1 1 mgx批量脂 肪酶測定（75.1脂肪酶USP單位/mg) = 39060 USP單位。 158012.doc -58- 201210517 在所考慮的時間範圍内脂肪酶活性保持穩定；在第一時 間點（t0-30分鐘）内所觀察到的稍微降低可以被解釋為在2〇 分鐘崩解期内微片劑的總量的不完全溶解；然而在液體膳 食時在第一小時之後所有該等剩餘的殘餘物可能完全溶 解。一旦將胰脂肪酶/重碳酸鹽混合物倒入測試的液體營 養組合物中沒有觀察到脂肪酶降解：在製備之後脂肪酶保 持穩定持續至少6小時。 實驗6.2.溶於*5 mL 8.4%碳酸氫鈉溶液中的胰脂肪酶微片 劑（約40,000脂肪酶USP單位）的液體營養組合物中脂肪酶 穩定性[*在4°C下在45分鐘崩解期之後] 在無檟：拌下在30 mL燒杯中將相應于約4〇, 〇〇〇脂肪酶USP 單位的八個膠囊的内含物加入到5 mL 8.4°/。的碳酸氫鈉 中’並且存儲在4°C下。45分鐘之後，將胰脂肪酶/重碳酸 鹽混合物攪拌並且倒入液體營養組合物的瓶中；將容器關 閉並且短暫地搖動《將3 mL等分部分的得到的混合物倒入 50 mL容量瓶中並且用冷水稀釋到體積；將溶液短暫地搖 動。這係T0樣品。使用胰脂肪酶USP專題著作中的概略步 驟來對1 mL T0樣品進行立即測定以確定脂肪酶活性。在 得到各等分部分之前在無攪拌下將容器關閉並且存儲在室 溫下，將混合物進行短暫地搖動。藉由在任何時間點處取 樣3 mL等分部分的存儲在室溫下的混合物，並且遵循對於 T0樣品所描述的稀釋和分析，在丨5分鐘、3〇分鐘、6〇分 鐘、120分鐘、以及240分鐘之後重複同一步驟。添加有胰 脂肪酶/碳酸氫鈉溶液的測試液體營養組合物中的脂肪酶 158012.doc -59- 201210517 的穩定性被表達為從前面實驗2.1-2.4、2.7-2.9中得到的批 量脂肪酶測定平均值計算的總脂肪酶活性的％(75 · 1脂肪酶 USP U/mg)。該等結果被匯總於表21中。 表21.添加有包含溶解的40,000脂肪酶USP單位胰脂肪酶微 片劑的5 mL 8.4%重碳酸鹽溶液的室溫的200 mL的液體營 養組合物中脂肪酶活性（在4°C 45分鐘崩解期） 存儲時間(分鐘） 存儲在室溫下 總脂肪酶活性 (USP U)2 基於理論的總脂肪 酶的脂肪酶活性％ 初始值(to)1 34042 93.2 15分鐘 34529 94.5 30分鐘 35988 98.5 60分鐘 37447 102.5 120分鐘 37933 103.9 240分鐘 38906 106.5 1):微片劑的崩解所要求的碳酸氫鈉溶液中45分鐘停留時 間之後；2):胰脂肪酶微片劑的量（486.32 mg)x批量脂肪 酶測定（75.1脂肪酶USP單位/mg)=36,523 USP單位 經過四個小時在測試的液體營養組合物中脂肪酶活性保 持穩定。在這個實驗中觀察到酶活性逐步增加，這可能是 由於該液體膳食的組分所誘導的酶構象變化（與增加的活 性相關）。除了測量到的更高的脂肪酶活性之外，這個實 驗的穩定性圖譜類似於前面的一圖譜（添加有在更短的崩 解時間之後溶於5 mL 8.4%重碳酸鹽溶液中的相同量的微 片劑的液體培養組成）。 實驗6.3.溶於*5 mL 8.4%碳酸氫鈉溶液中具有5,000脂肪酶 158012.doc -60- 201210517 USP U/膠囊（Zenpep®微片劑 5,000脂肪酶 USP U/cps)(5,000 脂肪酶1^?1；/膠囊=40,000脂肪酶1；3?1；)的胰脂肪酶微片 劑的八個單位的收集的樣品的液體營養組合物中的蛋白酶 活性[*在4°C下崩解期=45分鐘] 在無攪拌下在30 mL燒杯中將相應于約40,000脂肪酶USP 單位的八個膠囊的内含物加入到5 mL 8.4%的碳酸氫鈉 中，並且存儲在4°C下。45分鐘之後，將胰脂肪酶/重碳酸 鹽混合物攪拌並且倒入液體營養組合物的瓶中；將容器關 閉並且短暫地搖動。將2.8 mL等分部分的得到的混合物倒 入20 mL容量瓶中並且用冷的pH 7.5缓衝劑稀釋到體積； 用冷的pH 7.5緩衝劑將1 mL該溶液進一步稀釋到50 mL。 使用胰脂肪酶USP專題著作的概略步驟來確定蛋白酶活性 (時間0)。在得到各等分部分之前在無攪拌下將容器關閉並 且存儲在室溫下，將混合物進行短暫地搖動。藉由在任何 時間點處取樣2.8 mL等分部分的存儲在室溫下的混合物， 並且遵循對於T0樣品所描述的稀釋和分析，在30分鐘、60 分鐘、120分鐘、以及240分鐘之後重複同一步驟。添加有 胰脂肪酶/碳酸氫鈉混合物的測試的液體膳食中蛋白酶的 穩定性被表達為從批量蛋白酶測定中計算的總蛋白酶活性 的％(177 USP U/mg)。該等結果被匯總於表22中。 表22.添加有包含溶解的約40,000脂肪酶USP單位的胰脂肪 酶微片劑的5 mL 8.4%重碳酸鹽溶液的室溫的200 mL的液 體膳食中蛋白酶活性（在4°C下45分鐘崩解期） 存儲時間(分鐘） 存儲在室溫下 158012.doc •61 - 201210517 總蛋白酶活性 (USP U)2 基於理論的總蛋白 酶的蛋白酶活性％ 初始值(to)1 69018 74.6 30分鐘 89409 96.6 60分鐘 89409 96.6 120分鐘 94638 102.3 240分鐘 96729 104.5 1):在微片劑的崩解所要求的碳酸氫鈉溶液中45分鐘停留 時間之後；2):胰脂肪酶微片劑的量（522.86 mg)x批量蛋 白酶測定（177蛋白酶USP單位/mg)=92,546 USP單位。 對於整個四個小時而言，蛋白剩餘活性係非常近似於 (或稍微大於）理論的總酶含量的100%的。 實驗6.4.溶於*5 mL 8.4%碳酸氫鈉溶液中具有5,000脂肪酶 USP U/膠囊（Zenpep® 微片劑 5,000脂肪酶 USP U/cps)(5,000 脂肪酶USP U/膠囊=40,000脂肪酶USP U)的胰脂肪酶微片 劑的八個單位的收集的樣品的液體營養膳食中的澱粉酶活 性[*在4°C下在45分鐘崩解期之後] 在無攪拌下在30 mL燒杯中將相應于40,000脂肪酶USP單 位的八個膠囊的内含物加入到5 mL 8.4%的碳酸氫鈉中， 並且存儲在4°C下。45分鐘之後，將胰脂肪酶/重碳酸鹽混 合物攪拌並且倒入液體膳食的瓶中；將容器關閉並且短暫 地搖動。將2.2 mL等分部分的得到的混合物倒入20 mL容 量瓶中並且用冷的pH 6.8澱粉酶缓衝劑稀釋到體積；並且 進行搖動。使用胰脂肪酶USP專題著作的概略步驟來確定 澱粉酶活性（時間0)。在得到各等分部分之前在無攪拌下將 容器關閉並且存儲在室溫下，將混合物進行短暫地搖動。 158012.doc -62- 201210517 藉由在任何時間點處取樣2·2 mL等分部分的存儲在室溫下 的混合物，並且遵循對於了0樣品所描述的稀釋和分析，在 60分鐘和U0分鐘之後重複同—步驟。添加有騰脂肪酶/碳 酸氫納混合物的測試腾食中澱粉酶的穩定性被表達為從批 里灰粉轉測疋中計箅的總殿粉酶活性的％(238 USP U/mg)。該等結果被匯總於表23中。 表Μ·添加有包含溶解的約40，000脂肪酶usp單位的腹脂肪 酶微片劑的s mL 8·4%重碳酸鹽溶液的室溫的2〇〇 mL的液 體營養膳食中澱粉酶活性（在4°c下45分鐘崩解期） 存儲時間(分鐘） — 存儲在室溫下 總澱粉酶活性 (USP U)2 基於理論的總殿粉 酶的澱粉酶活,H：〇/n _^值⑽1 109006 ------ 87.8 ---60分鐘 100661 _------ 81.1 __分鐘 93359 75.2 1------ 1):微片劑的崩解所要求的碳酸氫鈉溶液中45分鐘停留時 間之後；2) ··胰脂肪酶微片劑的量（521 56 111§)><批量殿粉 酶測定（238澱粉酶USP單位/mg)=124，131 USP單位。 在測試的液體膳食中在整個兩小時内澱粉酶活性顯示逐 步降低（從理論的總酶含量的88%至75%)，因此與碳酸氣 鈉溶液中的情況相比較該降低係較不顯著的。 實驗6.5.在液體樣品膳食加上溶於*25 mL 8.4%碳酸氣鈉溶 液中具有5,000脂肪酶USP U/膠囊（Zenpep®微片劑5,〇〇〇脂 肪酶USP U/cps)(5,000脂肪酶USP U/膠囊=4〇,000脂肪酶 USP U)的膜脂肪酶微片劑的八個單位的收集的樣品中的脂 158012.doc -63- 201210517 肪酶穩定性[*在室溫下在20分鐘崩解期之後] 在無授拌下在適合的燒杯中將相應于4〇,〇〇〇脂肪酶USp 單位的八個膠囊的内含物加入到25 mL 8 4%的碳酸氫鈉 中。20分鐘之後，將胰脂肪酶/重碳酸鹽混合物攪拌並且 倒入液體膳食的瓶中；將容器關閉並且短暫地搖動。將 3 · 5 mL等分部分的得到的混合物倒入5 〇 m]L容量瓶中並且 用冷水稀釋到體積；將溶液短暫地搖動。這係τ〇樣品。使 用胰脂肪酶usp專題著作的概略步驟來對工mL 1〇樣品進行 立即測定以確定脂肪酶活性。在得到各等分部分之前在無 攪拌下將容器關閉並且存儲在室溫下’將混合物進行短暫 地搖動。藉由在任何時間點處取樣3 5 mL等分部分的存儲 在室溫下的混合物，並且遵循對於τ〇樣品所描述的稀釋和 分析，在15分鐘、30分鐘、60分鐘、12〇分鐘、24〇分鐘、 以及360分鐘之後重複同一步驟，添加有胰脂肪酶/碳酸氫 鈉混合物的測試的液體營養組合物中的脂肪酶的穩定性被 表達為從實驗2.1-2.4、2.7-2.9中得到的批量脂肪酶測定平 均值計异的總脂肪酶活性的％(75丨脂肪酶USp u/mg)。該 等結果被匯總於表2 4中。 表24.添加有包含溶解的約4〇,〇〇0脂肪酶usp單位的胰脂肪 酶微片劑的25 mL 8.4%重碳酸鹽溶液的室溫的2〇〇 mL的 液艎營養組合物中脂肪酶活性（20分鐘崩解期） 158012.doc ~ 64 - 201210517 存儲時間(分鐘） 存儲在室溫下 總脂肪酶活性 (USPU)2 基於理論的總脂肪 酶的脂肪酶活性％ 初始值(t〇y 32732 85.2 15分鐘 33244 86.6 30分鐘 34266 89.2 60分鐘 34778 90.5 120分鐘 36824 95.9 240分鐘 37335 97.2 360分鐘 37847 98.5 1)在微片劑的崩解所要求的碳酸氫鈉溶液中20分鐘停留時 間之後；2):胰脂肪酶微片劑的量（511.44 mg)x批量脂肪 酶測定（75_1脂肪酶USP單位/mg)=38,409 USP單位。 除了 to之外，該脂肪酶穩定性圖譜與在添加有溶於較小 體積（5 mL)的8.4%碳酸氫鈉溶液中的產物的同一液體膳食 中得到的幾乎完全重疊，表明重碳酸鹽介質的體積增加對 該酶的穩定性沒有影響。 儘管參考某些具體實施方式和實例在上面進行了說明和 描述，然而本發明不旨在限於該等所示的細節上。而係在 申請專利範圍的範圍以及等效的範圍内並且在不偏離本發 明的精神下可以進行詳細地多種修改。所特別想要的是例 如在本文件中廣泛引證的所有範圍將落在該更寬範圍内的 所有更窄的範圍包括在它們的範圍内。 【圖式簡單說明】 當與如下附圖結合閱讀時，本發明將從如下詳細說明被 最佳理解： 158012.doc -65- 201210517

圖1.在混合前的液體膳食+胰脂肪酶MCT 圖2.在以16,500 rpm的速度混合1分鐘後，液體膳食+胰 脂肪酶MCT 圖3.在過濾液體膳食+胰脂肪酶MCT勻漿（以16,500 rpm 的速度混合1分鐘）後，在玻璃過濾坩堝上的殘餘物

圖4.在以15,500 rpm的速度混合1分鐘後，液體腊食+月夷 脂肪酶MCT 圖5.在過滤液體膳食（Ensure Plus®)+肤脂肪酶MCT勻漿 (以15,500 rpm的速度混合1分鐘）後，在玻璃過濾坩禍上的 殘餘物

圖6·在以15,500 rpm的速度混合2分鐘後，液體膳食+胰 脂肪酶MCT 圖7·在過濾液體膳食（Ensure Plus®)+胰脂肪酶MCT勻漿 (以15,500 rpm的速度混合2分鐘）後，在玻璃過濾坩堝上的 殘餘物 圖8.在液體膳食中脂肪酶釋放和穩定性的圖示 圖9.在脂解期間的pH和溫度動力學 圖10.在實驗3中每一脂解產物的濃度曲線 圖11·在實驗3中的TAG動力學 圖12·關於胰脂肪酶MCT的脂解係水平1(L1)和水平（L2) 圖13.在室溫條件下-時間〇，在5 mL 8.4%碳酸氫鈉溶液 中的胰脂肪酶微片（約5,000脂肪酶UPS單位） 圖14.在室溫條件下-時間1〇分鐘，在5 mL 8,4%碳酸氫鈉 溶液中的胰脂肪酶微片（約5,000脂肪酶UPS單位） 158012.doc -66- 201210517 圖15.在室溫條件下-時間20分鐘，在5 mL 8.4%碳酸氫鈉 溶液中的胰脂肪酶微片（約5,000脂肪酶UPS單位） 圖16.在室溫條件下-時間35分鐘，在5 mL 8.4%碳酸氫鈉 溶液中的胰脂肪酶微片（約5,000脂肪酶UPS單位） 圖17.在室溫條件下-時間45分鐘，在5 mL 8.4%碳酸氫鈉 溶液令的胰脂肪酶微片（約5,000脂肪酶UPS單位） 圖18.在室溫條件下-時間55分鐘，在5 mL 8.4%碳酸氫鈉 溶液中的胰脂肪酶微片（約5,000脂肪酶UPS單位） 圖19.在室溫條件下-時間0，在5 mL 8.4%碳酸氫鈉溶液 中的胰脂肪酶微片（約5,000脂肪酶UPS單位） 圖20_在室溫條件下-時間1〇分鐘，在5 mL 8.4%碳酸氫鈉 溶液中的胰脂肪酶微片（約5,000脂肪酶UPS單位） 圖21.在室溫條件下-時間20分鐘，在5 mL 8.4%碳酸氫鈉 溶液中的胰脂肪酶微片（約5,000脂肪酶UPS單位） 圖22.在20分鐘浸泡時間後，在室溫條件下-溶液攪拌， 在5 mL 8.4%碳酸氫鈉溶液中的胰脂肪酶微片（約5,〇〇〇脂肪 酶UPS單位） 圖23.在室溫條件下-時間〇，在5 mL 8.4%碳酸氫納溶液 中的胰脂肪酶微片（約5,000脂肪酶UPS單位） 圖24.在室溫條件下-時間1〇分鐘，在5 mL 8.4%碳酸氫鈉 溶液中的胰脂肪酶微片（約5,000脂肪酶UPS單位） 圖25.在室溫條件下-時間20分鐘，在5 mL 8.4%碳酸氫鈉 溶液中的胰脂肪酶微片（約5,000脂肪酶UPS單位） 圖26.在20分鐘浸泡時間後，在室溫條件下_溶液攪拌， 158012.doc •67· 201210517 在5 mL 8.4%碳酸氫鈉溶液中的胰脂肪酶微片（約5,〇〇〇脂肪 酶UPS單位） 圖27.在室溫條件下-時間30分鐘，在5 mL 8.4%碳酸氫鈉 溶液中的胰脂肪酶微片（約5,000脂肪酶UPS單位） 圖28.在30分鐘浸泡時間後，在室溫條件下-溶液攪拌， 在5 mL 8.40/〇碳酸氫鈉溶液中的胰脂肪酶微片（約5,〇〇〇脂肪 酶UPS單位） 圖29.在室溫條件下-時間〇，在5 mL 13%碳酸氫鈉溶液 中的胰脂肪酶微片（約5,000脂肪酶UPS單位） 圖30.在室溫條件下-時間1〇分鐘，在5 mL 13%碳酸氫鈉 溶液中的胰脂肪酶微片（約5,000脂肪酶UPS單位） 圖31.在室溫條件下-時間20分鐘，在5 mL 13%碳酸氫鈉 溶液中的胰脂肪酶微片（約5,000脂肪酶UPS單位） 圖32.在室溫條件下-時間〇，在5 mL 0.65%碳酸氫鈉溶液 中的胰脂肪酶微片（約5，000脂肪酶UPS單位） 圖33.在室溫條件下-時間35分鐘，在5 mL 0.65%碳酸氫 鈉溶液中的胰脂肪酶微片（約5,000脂肪酶UPS單位） 圖34.在室溫條件下-時間〇，在5 mL 8.4%碳酸氫鈉溶液 中的胰脂肪酶微片（約40,000脂肪酶UPS單位） 圖35·在室溫條件下-時間20分鐘，在5 mL 8.4%碳酸氫鈉 溶液中的胰脂肪酶微片（約40,000脂肪酶UPS單位） 圖36·在室溫條件下·時間45分鐘，在5 mL 8.4%碳酸氫鈉 溶液中胰脂肪酶微片（約40,000脂肪酶UPS單位） 圖3 7·在4°C -時間〇，在5 mL 8.4%碳酸氫鈉溶液中的胰脂 1580I2.doc •68- 201210517 肪酶微片（約40,000脂肪酶UPS單位） 圖38·在4°c-時間45分鐘，在5 mL 8.4%碳酸氫鈉溶液中 的胰脂肪酶微片（約40,000脂肪酶UPS單位） 圖39.在室溫條件下-時間20分鐘，在5 mL 8.4%碳酸氫鈉 溶液中的胰脂肪酶微片（約40,000脂肪酶UPS單位） 圖40.在室溫條件下-時間20分鐘，在15 mL 8·4%碳酸氫 鈉溶液中的胰脂肪酶微片（約40,000脂肪酶UPS單位） 圖41·在室溫條件下-時間20分鐘，在25 mL 8.4%碳酸氫 鈉溶液中的胰脂肪酶微片（約40,000脂肪酶UPS單位） 圖42.在室溫條件下-時間0，在25 mL 8.4°/。碳酸氫鈉溶液 中的胰脂肪酶球粒（約4〇,000脂肪酶UPS單位） 圖43.在室溫條件下時間20分鐘，在25 mL 8.4%碳酸氧 鈉溶液中的胰脂肪酶球粒（約40,000脂肪酶UPS單位） 圖44·在室溫條件下-時間90分鐘，在25 mL 8.4%碳酸氫 鈉溶液中的胰脂肪酶球粒（約40,000脂肪酶UPS單位） 圖45.在室溫條件下-時間120分鐘，在25 mL 8.4%碳酸氫 鈉溶液中的胰脂肪酶球粒（約40,000脂肪酶UPS單位） 圖46.在儲存在室溫條件下/4°C的25 mL 8.4%碳酸氫鈉溶 液中，剩餘脂肪酶活性為40,000脂肪酶UPS單位，胰脂肪 酶微片與胰脂肪酶粉末對比 158012.doc -69-

Claims (1)

1. 201210517 七、申請專利範圍： 一種用於製備㈣化的營養配製品之方法，包括將多種 消化酶或它們的酶溶液與包括碳水化合物類、脂 白類和水的混合物的-液體營養組合物進行混合從而形 成該預消化的營養配製品。 2.如申請專利範圍第1項 所述之方法，其中將該等消化酶 或匕們的酶溶液加入到兮该挪放总4人 八糾这液體營養組合物中係先於該混 合的。 3. 如申請專利範圍第2項所 加入到該液體營養組合物 4. 述之方法，其中將該等消化酶 中係先於該混合的。 5. 如申請專利範圍第2項所述之方法，其令將該等消化酶 的溶液加人到該液體營養組合物中係先於該混合的。 如申請專利範圍第卜2、3或4項所述之方法，其中該等 消化酶係處於胰脂肪酶珠粒的形式。 6. 7. 8. 9. 如申請專利範圍篦Ί1 . s ^ x _ 弟 2、3或4項所述之方法，其中該等 ’肖化酶係處於腸溶衣包被的姨脂肪酶珠粒的形式。 如申明專利辄圍第卜2、3或4項所述之方法，其中該等 消化酶係處於腸溶衣包被的胰脂肪酶珠粒的形式並且該 混合係藉由機械混合來實施的。 申:專利範圍第1、2、3或4項所述之方法，其中該混 係藉由以下方式來實施的，將胰脂肪酶珠粒和液體營 養組合物進行機械混合直至該混合物被均勻化。 ，申喷專利範圍第丨、2、3或4項所述之方法，它們的酶 '液係藉由將腸溶衣包被的膜脂肪酶珠粒懸浮在一藥學 158012.doc 201210517 上可接受的弱鹼性溶液中而製備的。 之方 rpm 實現 爪如申請專利範圍第卜2、3 ”…。、7或8項所述 法，其中混合係纟約室溫下在約125〇〇與約18咖 之間的混合速度下持續約1分鐘至約2分鐘而連續地 的。 11.如申請專利範 λ , ”六1r將從該混 。付到的混合物隨後結合該液體營養組合物的另一部 分0 ’其中該混合係在約 ’其中該混合係在具 其中有待混合的混合 12. 如申請專利範圍第1 〇項所述之方法 15,000與約16,500 rpm之間實現的。 13. 如申請專利範圍第10項所述之方法 有混合葉片的混舍裝置中實現的， 物係處於足以覆蓋該等葉片的量。 其中’該弱驗性溶 14.如申請專利範圍第9項所述之方法 液中膜月曰肪S#珠粒的混合物在它姑^ λ , 你匕被加入到該液體營養組 合物中之前被保持約20分鐘至約ι2〇分鐘。 之方法’其中該藥學上 種鹼性物質、一種胺基 15 ·如申請專利範圍第9或14項所述 可接受的弱驗性溶液包括至少— 酸、或它們的一混合物。 16. 如申請專利範圍第15項所述之方法，其中㈣性物質係 選自下組，該組由以下各項組成：驗金屬和驗土金屬氫 氧化物、碳酸鹽、重碳酸鹽、硫酸鹽、磷酸鹽、氧化物 以及三-(經甲基）-胺基甲烧（ΤΗΑΜ)以及它們的混合物。 17. 如f請專利範圍第16項所述之方法，其中⑽性物質係 158012.doc 201210517 選自下組，該組由以下久馆， r谷項組成··碳酸氫鈉、磷酸二氫 鈉、磷酸氫二鈉、磷酸=钠 由 文一納、碳酸鎂、碳酸鈣、和氧化 鎂、以及它們的混合物。 =申請專利範圍第17項所述之方法，其中該驗性物質係 奴酸風鈉’並且該碳酸氫納濃度範圍按重量/體積計是從 約0.65%至約13%。 19. 如申請專利範圍第9、14、15、16、口或^項所述之方 法，其中該藥學上可接受的弱鹼性溶液的？11範圍從約 7.5至約 8.5。 20. 如申請專利範圍第9、14、15、16、17、以或^項所述 之方法，其中，該弱鹼性溶液中胰脂肪酶珠粒的混合物 在它被加入到該液體營養組合物中之前被保持在室溫以 下。 21. 根據申s青專利範圍第5、6、7、8、9、10、11、12、 U、14、15、16、17、18、19以及20項所述之方法，其 中該等胰脂肪酶珠粒係處於等價於大致約2,〇〇〇與約 4,〇〇〇脂肪酶USP單位/g該液體營養組合物的脂肪之間的 一個量。 22. 如申請專利範圍第1-21項所述之方法，其中該液體營養 組合物的熱量成分共包括約28%至90%的碳水化合物、 約1%至55%的脂肪、以及約4%至32%的蛋白質。 23·如申請專利範圍第1至22項所述之方法，其中所使用的 該等酶係處於以下形式的：粒料、片劑、球體、迷你片 劑、微片劑、微顆粒、微球、微膠囊或微丸。 158012.doc 201210517 24.如申請專利範圍第1至16項所述之方法，其中該等酶具 有總計約3,000、約4,200、，約5 〇〇〇、約6 〇〇〇、約 ι〇，_、約 1〇,5〇〇、約 15,000、約 16 8〇〇、約 2〇 〇〇〇、約 21’000、約24 〇〇〇、約25 〇〇〇 Usp脂肪酶單位或它們的 倍數或約5,000或約30,000 PhEur脂肪酶單位或它們的 倍數。 25. 如申請專利範圍第1至24項所述之方法，其中加入-治 療有效量的多種酶。 26. 一種可以藉*巾請專利範圍第1至25項中任何—項所述 之方法得到的㈣化的營養配製品，其中料酶具有高 於約85%的脂肪酶活性，該脂肪酶活性作為被加入到該 液體營養組合物中的脂肪酶活性單位的百分比。 27. 如中請專利範㈣26項所述之㈣化的營養配製品，其 中该專酶具有高於約9〇%的脂肪酶活性，該脂肪酶活性 作為被加入到該液體營養組合物中的腊肪酶活性單位的 百分比。 28. t申請專利範圍第％項所述之㈣化的營養配製品，立 ::等酶具有高於約95%的腊肪酶活性，該脂肪酶活性 作為被加人到該液體營養組合物中的脂肪酶活性單位的 29.如申請專利範圍第26項 . 述之預消化的營養配製品，其 _菖在約室溫下在儲# 8丨Μ π 1 古一 #時間約3㈣鐘之後，該等酶具 有兩於約95°/。的平均脂肽始 ^ 1曰肪％活性’該平均脂肪酶活性作 為被加入到該液體營養έ八 瞀、·且δ物中的脂肪酶活性單位的百 15S012.doc 201210517 分比。 3〇.如申請專利範圍第26項所述之預消化的營養配製品，其 中當在室溫下在儲料間鳩分鐘之後，該等酶且有約 1嶋的平均脂㈣活性，該平均脂㈣活性作為被加入 到該液體營養組合物中的脂肪酶活性單位的百分比。 31 •如申請專利範圍第26至3〇項所述之預消化的營養配製 品，其中該等脂類包括甘油三酯，並且在約W、時之後 所述甘油二酯的量係初始值的約45%。 32. 如申請專利範圍第26至3〇項所述之預消化的營養配製 品，其中該等脂類包括甘油三酯，並且在約8小時之後 所述甘油三酯的量係初始值的約3〇0/〇。 33. 如中請專㈣圍第26至3()項中任何—項所述之騰脂肪酶 預消化的營養配製品，其中該等脂類包括甘油三酯，其 中在約1小時之後從該等甘油三酯中釋放的醯基鏈的百 分比係約16%。 34. 如申請專利範圍第3〖或33項所述之預消化的營養配製 品，其中該等脂類包括甘油三酯’並且在約1小時之後 被轉化成游離脂肪酸醯基鏈並且被轉化成甘油單酿酿基 鏈的甘油三酯醯基鏈的百分比係約28%。 35. 如申請專利範圍第26至3〇項所述之預消化的營養配製 品’其中該等脂類包括甘油三酯，並且其中在約8小時 之後從該等甘油三酯中釋放的醯基鏈的百分比係約 280/〇。 36. 如申請專利範圍第32或35項所述之預消化的營養配製 158012.doc 201210517 品，其中該等脂類包括甘油三醋’並且在約8小時之後 被轉化成游離脂肪酸酿基鏈並且被轉化成甘油單醋酿基 鏈的甘油三酯醯基鏈的百分比係約3 6 %。 土 37. -種向對其有需要的患者體内施用一預消化的營養配製 品之方法，包括以下步驟： a.將如中請專利範圍26至361^壬何_項所述之預消化的 營養配製品轉移到一配藥袋中； U過-腸内管、帶刻度的胃造口術管、鼻胃管或空腸 管將該胰脂肪酶預消化的營養配製品從該袋分配到該 患者體内。 38. 如申請專利範圍第37項所述之方法，其中將該預消化的 營養配製品在它分配之前輕輕地攪動。 39. —種向兒科或成人患者體内施用一預消化的營養配製品 之方法，包括以下步驟： a.將包括碳水化合物類、脂類、蛋白類和水的混合物的 液體營養組合物的一部分倒入一摻混機中； b，將姨知肪酶珠粒的劑量的總量加入該捧混機中並且關 閉該換混機； c. 在約室溫下將得到的混合物在約15,〇〇〇與約丨6,5〇〇 rpm之間的混合速度下連續地混合約1至2分鐘； d. 將步驟c)中得到的共混物與該液體營養組合物的一 第二部分相結合從而達到該全部預消化的營養配製品 的最終體積； e. 將步驟d)的預消化的營養配製品轉移到一配藥袋 158012.doc 201210517 中； f. 在開始餵養之前將該袋輕輕地搖動； g. 通過一腸内管啟動链養。 40.胰脂肪酶珠粒用於製備預消化的營養配製品以用於兒科 或成人患者的腸道餵養之用途。 41· 一種用於製備預消化的營養配製品以用於腸道餵養之試 劑盒，包括： a.—液體營養組合物，包括碳水化合物類、脂翻 , '蛋白 類和水的一混合物； b ·姨脂肪酶珠粒。 42. 如申請專利範圍第41項所述之試劑盒，進一步 3 L括一藥 學上可接受的弱鹼性溶液。 ’、 43. 如申睛專利範圍第41項所述之試劑盒，進一步3 制L括用來 聚備一樂學上可接受的弱鹼性溶液的鹼性物質。 158012.doc