TW201208668A - Compounds for the treatment of cancer and its application - Google Patents

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201208668 六、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 本發明係關於一種治療癌症細胞及癌症幹細胞的方法，透過L〇pac 資料庫篩選具有抑制癌幹細胞球狀體株分化、生長潛力之化合物，以期達 到治療癌症效果的目的。 【先前技術】 近十年來因為幹細胞研究的蓬勃發展，開始有人推動癌症幹細胞的假 說’是因為（1)組織中的幹細胞或前期細胞在自我更新（sdf_renewal)時發生 錯誤而產生的異常細胞；同時此類的細胞具有幹細胞的特性，包括自我更 新及分化造成腫瘤產生。根據臨床的疾病的推論的實際案例，1945年8月 美國在日本廣島和長崎投下的原子彈造成大量人員傷亡，包含許多正值發 月期的少女’但在20至30年的追蹤後發現，這些女性幾乎都有乳癌發生， 而在這些癌症細胞中可以發現突變的存在都是由於放射線所引起的，因此 推測由於這些女性在遭受放射線暴露時是正值發育期，而此時的乳腺中具 有相當多的幹細胞存在，因此造成這些幹細胞發生突變，引起了乳癌的發 生。進一步的證據指出幹細胞在癌症的發展中可能扮演重要的角色的原因 是因為正常的幹細胞與癌症細胞間具有許多相似的特質，其中包含了〇)自 我更新的能力；（2)具有分化的能力；（3)活化端粒酶的表現；（4)可以活化抗 細胞凋亡的路徑；（5)增加膜運輸的能力及(6)具有移動與轉移的能力。其中， 研究者便㈣幹細胞在自我更新過程巾的失調可能是造成腫瘤形成的早期 主要原因之一。目前已知有許多路徑可以調控幹細胞的自我更新，包含了 Wnt' Notch和Hedgehog路徑。研究指出，這些途徑在腫瘤形成過程中亦 扮演重要的角色，如：在早期的結腸癌中會發現伽路徑的缺失及在皮膚 的基底細Μ巾有HedgehGg^職失，NQteh基目在彳丨龍瘤生長而最 201208668 終導致結腸癌過程中所扮演的角色。細胞訊號傳導確保著前述平衡機制， 而Notch基因與Wnt基因正是細胞訊號傳導的關鍵因子，確保著腸道的正 常發展與組織。這兩種基因隨腸道組織中的幹細胞增殖與分化而作用。 基因處於Wnt減料路徑社游端’其變異鱗被指為引發結腸癌之肇 因。APC這種腫瘤抑制基因的兩個對偶之一若產生突變，就會導致家族性 大腸痣、肉症（FAP)»此症主要特徵在於患者結腸中會出現數百甚至數千個 腺瘤性痣肉。百分之一的結腸癌便由此症轉變而來。另外，在胰臟癌、胃 癌、刖列腺癌及乳癌中亦發現有Hedgehog路經的缺失。而在急性τ細胞 φ 白血病、子宮頸癌及乳癌中亦有發現Notch路徑缺失。在近幾年的研究指 出，在各種癌症中所找出的癌症幹細胞中有共同表現的標誌蛋白，包括 CD44+ ^ a 6 integrin+ ^ β 1 integrin+ > CD133+ (Prominin)^ ALDH+ 〇 印巢癌死亡率卻是婦科癌症中最高的彡卩巢位於骨盆腔内，發生了腫 瘤，若非大到可由腹部觸摸到，並不容易發現。其常有的下腹不適，噁心、 厭食又常與胃腸疾觸錄_，涵在美暇—種常見的婦科癌症， 發生率與死亡率在北美或是©賴家—直轉穩定的數量與比例同時南 馱、西歐與制發病率正逐年的增加(Bray，L〇〇s et al 2〇〇5;知喊s㈣技 φ a1·2008)。同時在冶療印巢癌非常不容易的主要因素’在於印巢癌復發機率 非常向’以及容易轉移，往往再復發時’診斷都已經是癌化後期階段，因 此需要更多的醫療資源去治癒，但仍維持非常高的死亡率(Jemal，細㈣过此 2008)。治療㈣癌上主要使⑽統治療方式包含：手鋪除癌變組織；放 射線療法’使實心腫瘤萎縮；化學療法，快速阻殺癌細胞，但是成效有限 (CannistWm)。㈣癌個案死亡率在過去十年居高不下也讓人非常的舒異 (Oriel, Hartenbach et al. 1999; Jemal, Siegel et al. 2008) 〇 A p it 0 數據資料輔助、高死亡率、延誤治療、以及尚無有效的預警機制的情況下， 卵巢癌發生機會、死亡率及普遍性有逐年攀升的趨勢。 201208668 針對大部分所獲知的腫瘤分析的數據得知，卵巢癌的發生、生長與分 化的結果’在每個檢體中呈現出很大的差異，讓科學家思考癌幹細胞的作 用與機轉’是否為造成癌細胞間差異性的主要原因吻凡M〇rris〇n et al 2001)。一般正常的幹細胞是可進行無限自身更新的細胞，並且可以進一步 分化為許多種細胞或是組織形式，胚胎幹細胞與成人幹細胞具有分化為不 同組織之能力，取決於可塑性的差異，相對的大部份的體細胞自行更新的 能力有限’這是由於端粒(telomere)變短之故》實驗證明，將未分化之單一 白血病細胞轉殖至小鼠體内，結果使得受轉殖之小鼠亦罹患白血病。癌幹 細胞是從癌化的組織或是細胞團中取得，目前認為癌幹細胞(cancer stem cells，CSCs)與一般成體幹細胞之分子標誌和細胞型態上相似，經過長期的 研究’造血幹細胞的表面抗原表現應該是同時帶有CD34、CD90、CD133 等表面抗原。利用CD34和CD133表面抗原及腺膘呤運體成員 2(ATP-binding cassette sub-family G member 2 : ABCG2) 〇 來進行確認造血 幹細胞’發現ABCG2的表現與邊緣細胞族群(sidepopulation)密切相關，幹 細胞細胞膜表面會高度表現ABCG2，ABCG2能在不同來源的幹細胞中表 現，並且和幹細胞在分化相關的原始特性及間葉幹細胞在人體可能存在的 位置有極大的相關性。此腺膘呤會將赫斯特染色(Hoechst 33342)由核内排除 在外，因此可透過流式細胞儀(Flow Cytometry)來界定幹細胞，赫斯特染色 (Hoechst 33342)染色定量法可得知DNA之濃度，此染色屬於螢光染色中的 一種，使用在螢光顯微觀察下標示DNA，辨識内含DNA的細胞核及粒腺 體的位置。觀察與比對DNA染色的數據之後，可以從一般細胞之中分離具 有幹細胞潛力的細胞。而細胞之間並不會彼此造成癌化的現象，但是具有 致癌性(Tumorigenic)的細胞則會造成周圍細胞癌化的發生。癌幹細胞有別於 癌細胞與人體一般的幹細胞’亦具有分化、增生及自我更新的能力。癌幹 細胞的發現與概念在I960年時就被提出，指出癌幹細胞在實驗室培養的環 境中，具有可不斷的分化與增生的能力，同時在體内形成腫瘤。之後的研 201208668 究之中’已經成功從急性髓球性白血病(acutemyeloidleukemia)中分析出具 有幹細胞特徵的癌幹細胞。更進一步在2003年，科學家從乳癌腫瘤之中成 功分離出具有幹細胞特性的癌幹細胞。自此之後，越來越多具有癌幹細胞 特性的邊緣細胞族群(side population)，如：腦瘤、黑色素瘤、肺癌、前列腺 癌、胰臟癌、頭頸癌、結腸癌、肝癌以及晚期的卵巢癌。癌幹細胞造成化 療與放射線治療失效的主要因素之一。因此了解癌幹細胞轉移與機轉將會 影響癌症診療的判斷與治療。 在組織或是細胞中的癌幹細胞數量是非常稀少的，同時又缺乏一般癌 • 症所周知的型態’因此界定癌幹細胞的功能特性是重要且不易。透過赫斯 特染色(Hoechst) ’成為幹細胞探針去辨識幹細胞膜上的通透孔，如腺膘呤 運體(ATP-binding cassette)、多藥抗藥性因子(Multidrug resistance ; MDR1)、 乳癌細胞抵抗蛋白 l(Breast Cancer Resistance Proteinl，BCRP1)、ATPbinding cassette、sub-family G、member 2 (ABCG2)，這些因子已被證實表現於幹細 胞上。Bcrpl/ABCG的表現更突顯出具有癌幹細胞特性的關鍵。赫斯特 (Hoechst)染色技術去辨識邊緣細胞族群中具有癌幹細胞活性在本發明具有 代表性意義。 利用選擇性無篩選標示基因(marker-free)研究法來探討球狀細胞團的分 化方式，可以幫助我們更進一步了解尚未分化具有多種能力的神經球幹細 胞(neurosphere stem cells)分化的方式與路徑，一般而言這樣的球狀幹細胞團 含有4-20%的幹細胞處在”靜止狀態”的未分化階段，但是卻具有高分化的特 性。類似的研究表現在從乳房組織及人類癌症組織分離出，具有幹細胞特 性的非沾黏性球狀體。這些具有分化能力的癌幹細胞團，利用習知特定分 子標誌：ABCG2、CD117、CD133呈現陽性反應，來辨識出癌幹細胞的數 量與表現。 在卵巢癌研究的領域之中，利用卵巢癌病人身上所抽取的腹水所挑選 出的次選殖(subclone)球狀體幹細胞的實驗，亦可利用OCT4、胚胎幹細胞 201208668 調控蛋白(NAN〇G)、C则基因特徵及蛋白質表現來偵測癌幹細胞的表 現’OCT4為哺乳祕絲早姆育重要轉賴子之_，只會表現在具有八 化能力的全餘财’ & OCT4會倾細齡化的難。在部分雜細^ 中’可以找到CD133基因標記的癌症幹細胞，以及〇CT4與胚胎幹細胞調 控蛋白(NANOG)，可藉此峨癌症病患癌症或魏是娜來觸存活期。 與在哺乳嶋物邊緣細_群染色排除轉癌幹細 細胞團的形樹，· 丨17 _功分_==: 这樣的技術更有觀培養更有效的_治賴物。結合染色獅技術與以 及球狀體形成模式分析可增加彡卩巢癌初始細胞分離^藉由高通量藥物筛 Throughput Drug S_ing)柯找崎對㈣齡始細胞、或 其他癌症初始細胞(癌幹細胞)最具療效的藥物。 據悉’癌幹細胞活動為癌細胞增生與擴散的主要因素，傳統治療癌細 胞係糊臨床摘除、化學_、放射線毒殺方式，以期達到減少癌細胞數 量’但若無法抑制癌幹細胞活性，則癌症擴散與增生的復發機率非常高。 傳統上治療癌症習用方法仍有諸多缺失，且轉移復發率高，實非—良善之 設計’而亟待加以改良，找尋更直接的治療方式，以期制及早預防、及 早治療之效。 本案發明人鑑於上述習用治療癌症方法各項缺點，乃亟思加以改良創 新’尋見各種可m療癌幹細胞與藥物3&方，並經多年苦錄錯潛心研究 後，終於成功研發完成本件用於治療癌症的化合物及其應用。 【發明内容】 本發明之目的即在於提供一種已發現之化合物做為抑制癌幹細胞之藥 物’藉以影響癌幹細胞之分化與增生。其抑制癌幹細胞作用與機轉係分別 藉由投入化合物吼咯烷二硫代氨基甲酸銨（Amm〇nium 201208668 pyrrolidinedithiocarbamate)、（E)3-((4+ 丁苯基）硫醢）_2-丙烯腈（Bay 11-7085)、（2’Ζ，3Έ)-6-溴靛玉紅-3，_ 肟 ^z yE^Bromoindirubin-S， •oxime (BIO)、丫-4-二烴基-2-(6-烴基-1-庚烯基)_4_環戊烷巴豆酸λ内酯(Brefeldin A)、布他拉莫((+)-Butaclamol)、凱西黴素(Calcimycin)、μ[雙(4_氣苯基）曱 基]-3-[2-(2,4-雙氣苯基)-2-(2,4-雙氣苯氧基）乙基]氫咪唑鹽類 (Calmidazolium chloride)、亂化白屈菜赤域(chelerythrine chloride)、4,5,6,7-四演苯并咪》坐(CK2 Inhibitor 2)、N2-(順-2-胺基環己基)-N6-(3-氣苯基)-9-乙基 -9H-嗓吟-2,6-一胺鹽酸鹽(CGP-74514A hydrochloride)、7-三氟甲基-4-(4-甲 基-1-底肼基)吡咯-[l，2-a]喹喔啉蘋果酸鹽(CGS-12066Ameleate)、地喹氯銨 (Dequalinium dichloride)、二氩烏本皆(Dihydroouabain)、蛾化二苯破鹽 (Diphenyleneiodonium chloride)、二鹽酸吐根域(Emetine dihydrochloride hydrate)、Ν-[4·曱氧基-3-(4-甲基小哌嗪基)苯基]_2、甲基-4，-(5-甲基-1，2,4- 口 咢二唑)-1，1'-二苯基-4-羧基酿胺水合鹽酸鹽(GR 127935 hydrochloride)、 3,4-一氫-2,2-二甲基-211-耕[1，2七]"比味-5,6-二酮(^3-1^^11〇116)、对克螺 (Niclosamide)、尼非得品（Nifedipine)、6-亞硝基-1，2-苯並吡喃酮 (6-Nitroso-l，2-benzopyrone)、棕櫚醯-DL-肉鹼鹽（Palmitoyl-DL-Camitine chloride)、小白菊内酯（Parthenolide)、4-(4-氟苯基)-2-(4-硝基苯)-5-(4-吡 0定）-1Η- °米。坐（PD 169316)、1，10--水二氮雜菲（l，10-Phenanthroline monohydrate)、4-苯基-3-氧化吱咱羧腈(4-Phenyl-3-fiiroxancarbonitrile)、鹽酸 呱唑嗪(Prazosin hydrochloride)、前吡喀紫質六二鈉(Protoporphyrin IX disodium)、奎納克林二鹽酸鹽（Quinacrine dihydrochloride)、烏本苷 (Quabain)、維它命 A 酸對-烴基苯胺(Retinoic acid p-hydroxyanilide)、呂宋揪 夾粉素(Rottlerin)、血根域(Sanguinarine chloride)、二硫化四乙基硫碳醯胺 (Tetraethylthium disulfide)及 3-[1 -(3H-咪唑-4-yl)-meth(Z)-炔基]-5-曱氧基 -1，3-二氫-2吲哚(SU 9516)進行試驗，藉以抑制癌幹細胞的分化與增生。其 可作為單一試劑或與其他抗癌治療法組合。 201208668 尤其，上述化合物藥物會誘發癌幹細胞的凋亡；且經由赫斯特(Hoechst 33342)染色法、流式細胞儀檢測(Flow Cytometry)、生長分化區域分析 analysis)、分化動力學分析(pr〇iiferati〇n dynamics)、影像分析對比 (image-based screen assay)、細胞生長抑殺試驗(MTS assay)、臨床動物實驗 (preclinical animal study)等方法，發現當癌幹細胞株力0入上述化合物，會導 致癌幹細胞凋亡。 本發明之目的即在於使用上述之化合物在藥學上可接受之鹽類、溶劑 合物或在藥學上具有藥學功能之衍生物，以抑制其癌細胞及其癌幹細胞， 其癌症的種類係指下列中之一種：子宮頸癌、乳癌、結腸癌、胰臟癌、胃 癌、前列腺癌、急性T細胞白血病、血癌、肝癌、内膜癌、肺癌、大腸癌、 黑色素細胞瘤或惡性肉瘤。 本發明之抑制癌症生長之醫藥組合物中，可加入藥學上可接受之賦形 劑中的稀釋劑、填充劑、結合劑、崩解劑、潤滑劑等作為臨床醫學上可使 用於治療癌症之劑型。 【實施方式】 實施例一 一、試驗材料 試驗材料包含一系列完整具有癌幹細胞特性的母系癌幹細胞株 (parental CP70)及癌幹細胞邊緣細胞族群(side population CP70sps cells)，細 胞株經過特定生物因子標定證實其具有高度分化的幹細胞特性e而本實驗 所使用的界面活性劑Triton Χ-114為一含有長碳鍵的分子，經過Triton Χ-114 前處理後之細胞’使用抗體如antibody against human OCT4、NANOG、 NESTIN、ABCG2、或ALDH-1等蛋白質標示，透過赫斯特(Hoechst 33342) 螢光染色(fluorescence-conjugated secondary antibody)及流式細胞儀檢測 (flow cytometry)篩選出具有幹細胞特性的幹細胞(如圖一 A及圖二A所 201208668 示）。最後使用蛋白質CD34、CD44或CD133 ’染色確認幹細胞膜蛋白特徵 (如圖二B所示）。 二、確定致癌細胞CP70sps之幹細胞分化特性

取癌幹細胞邊緣細胞族群(side population CP70sps cells)繼代第〇期(p〇) 之細胞，將癌幹細胞利用腹膜内(intraperitoneally)注射至免疫不全模式鼠 NOD/SCID體内。經過70曰的體内所取得的腫瘤細胞為繼代第一期⑻)。(如 圖一 C及D所示)為比較不同分化能力之癌幹細胞在體内所產生之不同分化 情形’使用不同之CP70、CP70spsP0及CP70spsPl細胞株，再進行腹膜注 射至免疫不全模式鼠NOD/SCID體内，觀察並紀錄免疫不全模式鼠不同時 期的變化’當免疫不全模式鼠腹部產生硬塊時，給予犧牲解剖觀察免疫不 全模式鼠體内腹水及腫瘤型態，觀察其腫瘤大小、重量、形態，予以記錄。 三、活性生物藥物試劑篩選 準備CP70sps細胞株103於96孔盤各培養井中，經過24小時穩定培養 後，使用LOPAC公司之資料庫中各形式活性藥物，投以3〇μΜ於各培養井 内，觀察二日，再利用冷光細胞活性檢測試劑盒進行細胞活性檢測癌幹細 胞之結構。 四、偵測具抑制癌幹細胞分化能力之各形式活性藥物 從LOPAC公司挑選出61種具有抑制癌幹細胞(CP7〇sps)分化、生長潛 力之化合物（見表一）。於96孔盤培養井中各栽植5〇〇〇單位癌幹細胞 (CP70sps)，靜置24hr，再投以挑選出的61種具抑制癌幹細胞(CP7〇sps)化 合物，以低濃度3μΜ投藥於各培養井之中，進而觀察與測試癌幹細胞 (CP70sps)生長受到抑制結果。使用非放射線活性檢測試劑盒經過細胞生長 抑殺試驗(MTS assay)測定癌幹細胞(CP7〇sps)存活率。發現三種化合物耐克 11 201208668 螺(Niclosamide)、呂宋揪夾粉素(Rottlerin)及布他拉莫（(吟触油⑽ hydrochloride)具有顯著的抑制效果。 表一、LOPAC公司之資料庫中各形式活性藥物 _Class

Cytotoxic agent

Biochemistry__43

Adenosine_ 53

Adrenoceptor Ϊ02 1 2 Hormone 31 1 Cholinergic 77 1 Somatostain 2 1 Neurotransmitter 423 14 Intracellular Calcium 7 3 Ion pump and ion channel 72 7 Multi-Drug Resistance 12 2 Nitric Oxide 36 3 Phosphorylation 92 g Tachykinin 5 1 1258 61

五、耐克螺(Niclosamide)對癌幹細胞(CP70sps)的抑制模式 於96孔盤培養井中各栽植5000單位癌幹細胞(CP70sps)，於不同培養 井中投以不同濃度之化合物对克螺(Niclosamide)，從2.25μΜ至18μΜ，同 一藥劑量給予2組重覆觀察’觀察3天，經過細胞生長抑殺試驗(MTS assay) 測定癌幹細胞(CP7〇sps)存活率。同時進行臨床測試，將兩組各五隻小鼠注 射lxlO4單位的CP70sps於小鼠體内，其中一組給予每天每公斤1〇mg的化 合物耐克螺(Niclosamide)投藥，進行1至47天。實驗進行後第36天，兩組 之小鼠每三天紀錄其體重之變化至第48天，犧牲小鼠觀察小鼠體内腹腔腫 瘤發生結點。 六、耐克螺(Niclosamide)對卵巢癌幹細胞株(OVCA)抑制模式 12 201208668 . 於96孔盤培養井中各栽植遞單位印巢癌幹細胞株(OVCA)，投以化 合物对克螺(Nidosamide^作為實驗組，未投藥之印巢癌幹細胞株 (OVCA)為控做，過三天的觀察，將實驗與__過_生長抑殺 試驗(MTS assay)觀察作比較。模擬體内臨床觀察，將兩組各五隻小鼠注射i xlO4單位㈣癌幹細絲(OVCA)，由五位人_驗體分離出㈣巢癌幹 細胞株(pdOVCICs)，其中-組之小鼠給予每天每公斤1〇叫的化合物对克 螺(Niclosamide)投藥，進行i至π天。實驗進行後第％天，兩組之小鼠每 二天紀錄其體重之變化至第48天’犧牲小峨察小鼠體__瘤發生結 • 點。 實施例二、癌細胞MCF7分化成腫瘤球狀體與耐克螺(Nk丨〇samide)抑制性 試驗材料包含一系列完整具有癌幹細胞特性的母源癌幹細胞株(MCF7 sp)與癌細胞球狀體株(MCF7SPS)，細胞株經過特定生物因子標定證實其具 有高度分化的幹細胞特性。母源癌幹細胞株(MCF7 sp)在體外經過6天的培 養後’癌幹細胞會聚集群落之後分化形成癌幹細胞球狀體株(MCF7 SPS)結 構。利用赫斯特染色(H〇echst33342)染色排除法，找出在癌幹細胞株(MCF7 鲁 SP)上腺膘呤運體成員 2(ATP-binding cassette sub-family G member 2 : ABCG2)分子有過度表現的現象。進一步可以觀察到，癌細胞株(MCF7 Sp) 上ABCG2抑制者GF120918，有顯著下降(如圖一 b所示）β 比較母源癌幹細胞株(MCF7 sp)、癌細胞球狀體株(MCF7 SPS)與癌細胞 株(MCF7) ’將癌幹細胞利用腹膜内(ίη^ρβΓ^〇ηβ3ιΐγ)注射至免疫不全模式鼠 NOD/SCID體内。觀察並紀錄免疫不全模式鼠不同時期的變化，當免疫不 全模式鼠腹部產生硬塊時’給予犧牲解剖觀察免疫不全模式鼠體内腹水及 腫瘤型態，觀察其腫瘤大小、重量、形態，予以記錄。 為比較投抗癌藥物紫杉醇(Paclitaxol)，對於母源癌幹細胞株(MCF7 sp)、癌細胞球狀體株(MCF7 SPS)、人類乳腺上皮細胞癌(mda-MB 231)及 13 201208668 人類乳腺上皮細胞癌球狀體(MDA-MB231 SPS)毒殺情形，可以發現抗癌藥 物紫杉醇(Paclitaxol)可以對癌細胞株(MCF7)產生有效的抑制作用，但對於 母源癌幹細胞株(MCF7sp)並沒有明顯的抑制。再進一步利用流式細胞儀檢 測(flow cytometry)，癌幹細胞球狀體株(MCF7 SPS)顯示出具有豐富CD44 與CD24表面抗原的表現。顯示癌幹細胞球狀體株(MCF7 sps)具有癌幹細 胞特性。利用流式細胞儀檢測(flow cytometry)亦標示出癌幹細胞球狀體株 (MCF7 SPS)具有幹細胞特徵的表面抗原蛋白，包括0ct4、Nan〇g及abcg〗。 於癌幹細胞球狀體株(MCF7 SPS)投以濃度2.1mg/cc DKK，30μΜ GSI與 30μΜ cyclopamide等訊息抑制劑，3天後觀察Wnt，NOTCH及shh抑制的 發生。經過染色觀察發現癌幹細胞球狀體株(MCF7 SPS)會受到Wnt， NOTCH及shh的影響，產生形態的改變。另外在投以Ν〇Τ(Ή纟卩冑彳#|30μΜ GSI後，發現癌幹細胞會聚集，進而造成腫瘤球狀體的形成。從以上的實驗 過程中，我們得知癌幹細胞球狀體株(MCF7 SPS)是含有可分化之癌幹細胞。 從LOPAC公司挑選具有抑制癌幹細胞球狀體株(MCF7 SPS)分化、生長 潛力之化合物1258項，進行抑制癌分化的實驗。經過筛選之後發現，以3〇 種化合物’包含吡咯烷二硫代氨基曱酸銨（Ammonium pyrrolidinedithiocarbamate)、（E)3-((4-t- 丁苯基）硫醯）-2-丙烯腈 ((E)3-((4-t-Butylphenyl) sulfonyl)-2-propenenitrile)(Bay 11-7085) > (2,Ζ,3Έ)-6-漠散玉紅-3’-將((2%3卫)-6七丨1>〇〇1〇丨11(1丨1111^11-3’-(^1116)(810)、丫-4-二烴基-2-(6-烴基-1-庚烯基）-4-環戊烷巴豆酸 λ-内酯 (Y-4-Dihydroxy-2-(6-hydroxy-l-heptenyl)-4-cyclopentanecrotonic acid λ-lactone) (Brefeldin A)、布他拉莫((+)-Butaclamol)、飢西黴素(Calcimycin)、 1-[雙(4-氣苯基）曱基]-3-[2-(2,4-雙氣苯基)-2-(2,4-雙氯苯氧基）乙基]-1氫 -咪唑鹽類(1-[此(4-(：111〇1>〇卩1^1^1)11^1^1]-3-[2-(2,4-此111〇«^1161^1)-2-(2,4-dichlorobenzyloxy)ethyl]-1 H-imidazolium chloride) (Calmidazolium chloride)、氣化白屈菜赤域(Chelerythrine chloride)、4,5,6,7-四漠苯并°米。坐 14 201208668 (CK2 Inhibitor 2)、N2-(順-2-胺基環己基)->^-(3-氣苯基)-9-乙基-9H·嘌呤 -2,6-二胺鹽酸鹽（>12-((^-2_^\111丨11〇〇>^1〇116\)4)-]^-(3-(：111〇1*〇卩1^1171)-9-ethyl-9H-purine-2,6-diamine hydrochloride)(CGP-74514A hydrochloride) ' 7-三氟甲基-4-(4-甲基-1--哌肼基）吡咯-[l，2-a]喹喔啉蘋果酸鹽

(7-Trifluoromethyl-4-(4-methyl-1 -piperazinyl)pyrrolo-[l ,2-a]quinoxaline maleate salt)(CGS-12066Ameleate)、地嗤氯敍(Dequalinium dichloride)、二氬 烏本苦(Dihydroouabain)、蛾化二苯破鹽(Diphenyleneiodonium chloride)、二 鹽酸吐根域(Emetine dihydrochloride hydrate)、N-[4-甲氧基-3-(4-曱基-I-。底。秦 基)苯基]-2、甲基-4'-(5-甲基-1,2,4-口咢二唑)_1，1、二苯基-4-羧基醯胺水合鹽 酸鹽（N-[4- Methoxy-3-(4- methyl-1- piperazinyl) phenyl]-2'-methyl-4二(5- methyl-1，2,4-oxadiazol-3-yl)-1，1 ’-biphenyl-4-carboxamide hydrochloride hydrate)(GR 127935 hydrochloride)、3,4-二氩-2,2-二甲基-2H-耕[1,2-B]0比喃 -5,6-二 酮（3,4-Dihydro-2,2- Dimethyl-2H- Naphtho[l,2-B] Pyran-5,6-Dione)(beta-Lapachone)、耐克螺（Niclosamide)、尼非得品 (Nifedipine)、ό-亞石肖基-1，2-苯並〇比°南酮(6-Nitroso-l，2-benzopyrone)、棕櫊酿 -DL-肉驗鹽(Palmitoyl-DL-Camitine chloride)、小白菊内 S旨(Parthenolide)、 4-(4-氟苯基）-2-(4-硝基苯）-5-(4- °比啶）-1Η-咪唑 (4-(4-Fluorophenyl)-2-(4-nitrophenyl)-5-(4-pyridyl)-lH-imidazole)(PD 169316) ' 1,10-一水二氮雜菲(1，10-Phenanthroline monohydrate)、4-苯基-3-氧化 °夫咱叛腈（4-Phenyl-3-fiiroxancarbonitrile)、鹽酸狐 β坐嗪（Prazosin hydrochloride)、前°比嗔紫質六二納(Protoporphyrin IX disodium)、奎納克林 二鹽酸鹽(Quinacrine dihydrochloride)、烏本苷(Quabain)、維它命 A 酸對-烴 基苯胺(Retinoic acid p-hydroxyanilide)、呂宋揪夾粉素(Rottlerin)、血根域 (Sanguinarine chloride)、二硫化四乙基硫碳醯胺(Tetraethylthium disulfide)及 3-[1-(3Η-咪唑-4-yl)_meth(Z)-炔基]-5_ 曱氧基-1，3-二氫-2 吲哚 (3-[l-(3H-Imidazol-4-yl)-meth-(Z)-ylidene]-5-methoxy-l,3-dihydro-indol-2-one 15 201208668 )(SU9516)加入乳癌細胞及卵巢癌細胞中結果如表二及表三所示，其中化合 物耐克螺(Niclosamide)可以抑制癌幹細胞球狀體株(MCF7 SPS)的形成以及 減少母源癌幹細胞株(MCF7 sp)片段的產生，可有效抑制球狀體增生與分 化。觀察與比較癌幹細胞球狀體株(MCF7 SPS)，體外培養2天後，分別投 以3μΜ及30μΜ化合物财克螺(Niclosamide)靜置48小時，結果發現化合物 对克螺(Niclosamide)可有效抑制球狀體增生與分化。利用軟體image pro plus 軟體分析其形態與數量。進一步在母源癌幹細胞株(MCF7sp)及人類乳腺上 皮細胞癌(MDA-MB 231)投以3μΜ化合物财克螺(Niclosamide) ’發現皆有明 顯抑制的現象。 表二、抑制乳癌細胞之化合物 化合物名稱 癌細胞存活率(％) 4-Phenyl-3-furoxancarbonitrile 1.1 Prazosin hydrochloride 1.1 Niclosamide 1.4 6-Nitroso-1,2-benzopyrone 1.5 beta-Lapachone 1.67 Ouabain 1.8 Protoporphyrin IX disodium 1.8 BIO 2.4 GR 127935 hydrochloride 2.8 Quinacrine dihydrochloride 3.8 Calmidazolium chloride 3.9 Bay 11-7085 4 一 Ammonium pyrrolidinedithiocarbamate 4.4 Mitoxantrone 5.2 Brefeldin A from Penicillium brefeldianum 6.6 1,10-Phenanthroline monohydrate 7 Emetine dihydrochloride hydrate 7.3 Parthenolide 7.3 (S)-(+)-Camptothecin 8.2 CK2 Inhibitor 2 8.3 PD 169316 8.8 Nifedipine 8.8 Dihydroouabain 9.1 Palmitoyl-DL-Camitine chloride 9.7 Chelerythrine chloride 9.9 CGP-74514A hydrochloride 10 201208668

Tetraethylthiuram disulfide 10.18 SU 9516 10.7 Retinoic acid p-hydroxyanilide 13 CGS-12066A maleate 16.3 根據實驗的結果發現，耐克螺(Niclosamide)對於癌幹細胞球狀體株 (MCF7 SPS)具有明顯的抑制效果。根據前述，利用分化動力學分析 (proliferation dynamics)觀察耐克螺(Niclosamide)表現在癌幹細胞球狀體株 (MCF7 SPS)反應上，可得證當耐克螺(Niclosamide)濃度越高，或是置留時 間越長，對於癌幹細胞球狀體株(MCF7 SPS)毒殺、抑制效果亦隨之提升。 φ 时克螺(Niclosamide)對於乳癌幹細胞球狀體(MDA-MB231 SPS)與乳癌 細胞(MDA-MB231)的抑制反應中，發現对克螺(Niclosamide)對於乳癌幹細 胞球狀體(MDA-MB231 SPS)有顯著的抑制產生。同時隨著耐克螺 (Niclosamide)投以乳癌幹細胞球狀體(MDA-MB231 SPS)的實驗中得知，乳 癌幹細胞球狀體(MDA-MB231 SPS)存活率與耐克螺(Niclosamide)置放產生 顯著的負相關。 此外，分別比較癌幹細胞球狀體株(MCF7 SPS)在投以耐克螺 (Niclosamide)實驗中，觀察與乳癌密切相關之結合蛋白(CyclinDl)、與子宮 φ 頸癌密切相關之結合蛋白(Hes-Ι)及與胰腺癌密切相關之結合蛋白(PTCH)都 有明顯被抑制的效果。經過流式細胞儀檢測(flow cytometry)，OCT4在施以 5μΜ咐克螺(Niclosamide)於癌幹細胞球狀體株(MCF7 SPS)上的表現中發 現，投以耐克螺(Niclosamide)之癌幹細胞球狀體株(MCF7 SPS) OCT4濃度 較高。投以5μΜ耐克螺(Niclosamide)之免疫不全模式鼠NOD/SCID上癌幹 細胞球狀體株(MCF7 SPS)上的表現，可以觀察到投以耐克螺(Niclosamide) 之小鼠其體内腫瘤的大小與重量皆比未投藥之小鼠小且輕。 實施例三、卵巢癌細胞株分化成腫瘤球狀體與耐克螺(Niclosamide)抑制性 17 201208668 試驗材料包含一系列完整卵巢癌症細胞(〇VCA)與卵巢癌症邊緣族群 細胞(OVCsp)，利用赫斯特染色(H〇echst33342)染色排除法，細胞株經過特 定生物因子標疋證實其具有高度分化的幹細胞特性β印巢癌症邊緣族群細 胞(OVCsp)在體外經過6天的培養後，癌幹細胞會聚集成群落，卵巢癌症球 狀型態細胞(OVCsps)結構，印巢癌症球狀型態細胞(0VCsps)中具有腫瘤發 生特性的癌幹細胞稱為卵巢癌幹細胞(OVCICs)。從LOPAC公司筛選出 1200種以上具有抑制卵巢癌症細胞(0VCA)及卵巢癌症球狀型態細胞 (OVCsps)分化、生長潛力之化合物’利用細胞生長抑殺試驗(MTS咖町)與 腺苷三磷酸活性檢測(ATP-based assay)比較細胞存活率，如表三所示為篩選 過之化合物對於卵巢癌的抑制效果。 表三、抑制卵巢癌細胞之化合物 化合物名稱 癌細胞存活率(％) Sanguinarine chloride 20.37 Ouabain 26.69 Diphenyleneiodonium chloride 31.37__ Protoporphyrin IX disodium 34.75 Niclosamide 34.86 Rottlerin 38.89 (S)-(+)-Camptothecin 39.11 Brefeldin A from Penicillium brefeldianum 41.18 Calcimycin Γ 42.70 (+)-Butaclamol hydrochloride 42.81 Dihydroouabain 45.97 Emetine dihydrochloride hydrate 49.13 Dequalinium dichloride 54.68 Vinblastine sulfate salt 64.6 從LOPAC公司挑選出60種具有抑制癌幹細胞分化、生長潛力之化合 物’分別投以低濃度3μΜ化合物以檢視卵巢癌症細胞(〇vCA)及印巢癌症 球狀型態細胞(OVCsps)細胞毒殺性。最後發現三種最具毒殺癌細胞能力的 化合物：布他拉莫((+)-Butaclamol hydrochloride)、耐克螺(Niclosamide)及呂 201208668 宋揪夾粉素(Rottlerin)。耐克螺(Niclosamide)與呂宋揪夾粉素(Rottierin)對印 巢癌幹細胞(OVCICs)最具毒殺能力。布他拉莫((+)_Butaclamol hydrochloride) 則是同時對卵巢癌症細胞(OVCA)及卵巢癌症球狀型態細胞(〇vCsps)具有 細胞毒殺能力。在臨床動物印巢癌實驗中，财克螺(Niclosamide)表現出亦可 成功抑制癌幹細胞。 利用流式細胞儀檢測(flow cytometry)標示，使用抗體如antibody against human OCT4、NANOG、NESTIN等蛋白質標誌。OCT4為哺乳動物胚胎早 期發育重要轉錄因子之一，只會表現在具有分化能力的全能細胞中，其中 Oct-4與Nanog參與胚胎幹細胞(embryonic stem cells，ES cells)分化重要調 控因子，Nestin是胚胎時期表現之中間絲蛋白質，主要出現於移行及進行細 胞分裂中的細胞’包括神經幹細胞、星形膠細胞，以及未成熟的肌細胞。 Nestin常用以標定不同時期的分化細胞，以及發育階段的細胞。實驗結果得 知，比較癌幹細胞邊緣細胞族群(side population CP70sps cells)與癌幹細胞株 (CP70sp) ’ 癌幹細胞邊緣細胞族群(side population CP70sps cells) Nanog、 Nestin有顯著的表現。 以及利用幹細胞探針去辨識幹細胞膜上的通透孔，以表示該細胞具有 幹細胞特徵，包括ABCG2及ALDH-1，進一步探討癌幹細胞株(CP70sp)彼此 間黏貼形成球狀體過程。結果顯示1 ABCG2表現在邊界細胞群(side population CP70sps cells)比癌細胞株(CP70)高出許多。乙醛脫氫酶活性 (ALDH1)分離出新的乳癌幹細胞，這類細胞，具有癌幹細胞的特性，ALDH1 能夠決定一個腫瘤的侵略性的強度。在不同特徵的癌細胞，包含：卵巢癌 細胞株(SKOV3)、卵巢上皮癌細胞株(TOV21G)、卵巢癌細胞株(CP70)及卵 巢癌邊界細胞群(side population CP70sps cells)，對於乙搭脫氫酶活性 (ALDH1)的比較，可以發現在投以抑制劑二乙氨基苯甲酸 (Diethylaminobenzaldehyde，DEAB)，則乙醛脫氫酶活性(ALDH1)表現被抑 201208668 制(如圖三所示）。

比較癌幹細胞株(CP70sp)彼此間黏貼形成球狀體過程。癌幹細胞特性的 母系癌幹細胞株(parental CP70)及癌幹細胞邊緣細胞族群(side population CP70sps cells)，使用抗體ABCG2蛋白質標示，透過流式細胞儀檢測(flow cytometry)篩選出具有幹細胞特性的幹細胞。最後使用蛋白質CD34、CD44 或CD133 ’染色確認幹細胞膜蛋白特徵。利用流式細胞儀檢測(flow cytometry)標示，蛋白質CD34、CD44或CD133的表現，在癌幹細胞邊緣 細胞族群(side population CP70sps cells)表現量皆比乳癌細胞株(CP70)高。 親源細胞株A2780s由母系癌幹細胞株(parental CP70)及癌幹細胞邊緣 細胞族群(side population CP70sps cells)分化而得。使用抗癌藥物順鉑 (Cisplatin)在親源細胞株A2780S上，比較從LOPAC公司挑選出60種具有 抑制癌幹細胞分化、生長潛力之化合物，觀察到母系癌幹細胞株(parental CP70)及癌幹細胞邊緣細胞族群(side population CP70sps cells)成功被抑制。 同時隨著投藥時間的延長，癌細胞的存活率呈現顯著的下降(如圖四A、B、 C及D所示）。 母系癌幹細胞株(parental CP70)及癌幹細胞邊緣細胞族群(side population CP70sps cells)腹腔注射入免疫不全模式鼠NOD/SCID上，誘發腫 瘤發生(如圖五A及B所示）。投以三種最具毒殺癌細胞能力的化合物：耐 克螺(Niclosamide)、呂宋揪夾粉素(Rottlerin)及布他拉莫((+)-Butaclamol hydrochloride)，投藥在母系癌幹細胞株(parental CP70)及邊界細胞群(side population CP70sps cells)，發現三種化合物对克螺(Niclosamide)、呂宋揪夾 粉素(Rottlerin)及布他拉莫((+)-Butaclamol hydrochloride)對邊界細胞群(side population CP70sps cells)有顯著的抑制效果。布他拉莫(⑴-Butaclamol hydrochloride)對乳癌細胞株(CP70)亦有毒殺作用(如圖六所示）。 投以5μΜ财克螺(Niclosamide)之施打邊界細胞群(side population 20 201208668 CP70sps cells)免疫不全模式鼠N〇D/saD上，比較印巢腫瘤差異上的表現， 可以觀察到投以耐克螺(Niclosamide)之小鼠其體内腫瘤的大小與重量皆比 未投藥之小鼠小且輕(如圖七A及B所示）。 從人類卵巢癌病患體中取得卵巢癌幹細胞(〇VCICs)，在體外施以耐克 螺(Niclosamide)進行毒殺觀察。同時亦可得證耐克螺可以成功 抑制卵巢腫瘤的分生與增長(如圖八所示）。 從人類卵巢癌病患體中取得卵巢癌幹細胞(OVCICs)，在體外施以布他 拉莫((+>Butaclamol hydrochloride)進行毒殺觀察。同時亦可得證布他拉莫 φ ((+)-Butaclam〇l hydrochloride)可以成功抑制卵巢腫瘤的分生與增長(如圖九 201208668 【圖式簡單說明】 圖一 A係利用Hoechst 33342顯示四種不同之癌症細胞株，圖一 b投 以ABCG2抑制子至癌幹細胞株，發現施以ABCG2抑制子之後細胞數有明 顯下降。圖一 C為癌幹細胞株大小之分析，圖一 D將癌幹細胞殖於培養皿 中培養，形成球狀結構。 圖二A係利用蛋白質標記分析癌幹細胞是否具有Nanog，〇ct4及 Nestin表現，經過流式細胞儀分析。圖二B進一步區分癌幹細胞(CP70)及 癌幹細胞團(CP70 SPS)細胞表面具有(CD34, CD44, CD133)表現差異。 圖三係針對不同之癌幹細胞進行ALDH-1表現分析。 圖四A係癌幹細胞不同時期細胞活性存活測試。圖四b係投以抗癌藥 物Cisp丨atin(CDDP)，觀察癌幹細胞(CP70)及癌幹細胞團(CP70 SPS)數量上差 異。圖四C係為投以抗癌藥物Cisplatin(CDDP)，不同時期癌幹細胞(CP70) 存活率。 圖五A係轉殖癌幹細胞(CP70 sps)入大鼠體内誘發癌腫瘤之發生。圖五 B係轉殖癌幹細胞(CP70)入大鼠體内誘發癌腫瘤之發生情形。 圖六係對於癌幹細胞(CP70)及癌幹細胞團(CP70 SPS)投以化合物耐克 螺（Niclosamide)、呂宋揪夾粉素(Rottlerin)、布他拉莫((+)-Butaclamol)觀察 癌幹細胞抑制與細胞存活率。 圖七A係將已誘發印巢癌之大鼠，投以化合物耐克螺〇sjici〇samide)觀 察’有處理之卵巢癌大鼠其腫瘤有明顯變化》圖七B將卵巢取下觀察，投 以化合物耐克螺(Niclosamide)之罹癌大鼠其卵巢癌細胞數被抑制。 圖八將化合物财克螺(Niclosamide)在體外共同培養於人類卵巢癌之培 養基中，卵巢癌細胞數受到抑制。 圖九將化合物布他拉莫((+)-Butaclamol)在體外共同培養於人類卵巢癌 之培養基中，卵巢癌細胞數受到抑制。 22 201208668 【主要元件符號說明】 無

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Claims (1)

1. 201208668 七、申請專利範圍： 1. 一種用於治療癌症的醫藥組合物，其包含(a)選自於下列群組中至少一種 化〇物’ η比嘻院二硫代氨基曱酸錄（八^皿⑽丨⑽ pyrrolidinedithiocarbamate)、（E)3-((4-t- 丁苯基）硫醯）-2-丙烯腈（Bay 11 7085)、（2 Z，3 E)-6-漠散玉紅-3’-脖(2’Z，3，E)-6-Bromoindirubin-3，-oxime (ΒΙΟ)、γ-4-二烴基-2-(6-烴基-1-庚烯基)_4_環戊烷巴豆酸χ_内酯(Brefeldin A)、布他拉莫((+)_Butaclamol)、凱西黴素(Caicimycin)、丨_[雙(4_氣苯基） 甲基]-3-[2-(2,4-雙氣苯基)-2-(2,4-雙氣苯氧基）乙基]-1氫-味唑鹽類 (Calmidazolium chloride)、氣化白屈菜赤域(chelerythrine chloride)、 4,5,6,7-四溴苯并咪唑(CK2 Inhibitor 2)、N2-(順-2-胺基環己基)-1^-(3-氣苯 基)-9-乙基-9H-嘌呤·2,6-二胺鹽酸鹽(CGP-74514Ahydrochloride)、7-三氟 甲基·4-(4-曱基-1- -0底肼基)吡咯_[l，2-a]喹喔啉蘋果酸鹽(CGS-12066A meleate)、地啥氣敍（Dequalinium dichloride)、二氫烏本苦 (Dihydroouabain)、蛾化二苯峨鹽(Diphenyleneiodonium chloride)、二鹽酸 吐根域(Emetine dihydrochloride hydrate)、N-[4-甲氧基-3-(4-甲基-1-«·底嗪基) 苯基]-2'-曱基-4'-(5-甲基-1，2,4-口咢二唑)-1，1，-二苯基-4-羧基醯胺水合 鹽酸鹽(GR 127935 hydrochloride)、3,4-二氩^2,2-二甲基-2H-耕[1，2-B]0比喃 -5,6-二酮(beta-Lapachone)、对克螺(Niclosamide)、尼非得品(Nifedipine)、 6-亞硝基-1，2-苯並》比喃酮(6-Nitroso-1，2-benzopyrone)、標棚醯-DL-肉驗鹽 (?31〇1紅〇丫1~01^^111出116〇111〇14(16)、小白菊内西旨（？〇111^11〇1丨£16)、4-(4-說苯 基)-2-(4-硝基苯)-5-(4->» 比啶)-1Η-咪唑(PD 169316)、1，1〇-— 水二氮雜菲 (1,10-Phenanthroline monohydrate)、4-苯基-3-氧化。夫咱羧腈 24 201208668 (4-Phenyl-3-foroxancarbonitrile)、鹽酸呱唑嗪(ρΓ&ζ〇4η hydrochloride)、前 吡喀紫質六二鈉(Protoporphyrin IX disodium)、奎納克林二鹽酸鹽 (Quinacrine dihydrochloride)、烏本苷(Quabain)、維它命 A 酸對-烴基苯胺 (Retinoic acid p-hydroxyanilide)、呂宋揪夾粉素(Rott〖erin)、血根域 (Sanguinarine chloride)、一硫化四乙基硫碳酿胺(Tetraethylthium disulfide) 及 3-[1-(3Η-咪唑-4-yl)-meth(Z)_炔基]-5-曱氧基-1,3-二氫-2 吲《朵(SU 9516) (b) —藥學上可接受之載體或賦形劑至該醫藥組合物。 # 2.如申請專利範圍第1項所述之一種用於治療癌症的醫藥組合物，其包含 該化合物在藥學上可接受之鹽類、溶劑合物或在藥學上具有藥學功能之 衍生物。 3. 如申請專利範圍第1項所述之一種用於治療癌症的醫藥組合物，其中上 述之癌症係選自下列族群中之一者或其任一組合：子宮頸癌、乳癌、卵 巢癌、結腸癌、胰臟癌、胃癌、前列腺癌、急性τ細胞白血病、血癌、 肝癌、内膜癌、肺癌、大腸癌、黑色素細胞瘤、惡性肉瘤或其他惡性腫 瘤。 4. 如申明專利範圍第1項所述之一種用於治療癌症的醫藥組合物，其中該 賦形劑包含稀釋劑、填充劑、結合劑、崩解劑、潤滑劑。 5. -種用於治療癌症的醫藥組合物’其包含⑻耐克螺_〇随㈣及其該 化0物在藥學上可接受之鹽類、溶劑合物或在藥學上具有藥學功能之衍 生物(b)~~藥學上可接受之健或賦糊至該s藥組合物。 6. 如申轉利範圍第6項所述之醫藥組合物，其中所述之癌症係選自下列 族群中之一者或其任一組合：子宮頸癌、乳癌、印巢癌、結腸癌、姨臟 癌、胃癌、前列腺癌、急性T細胞白血病、血癌、肝癌、内膜癌、肺癌、 25 201208668 大腸癌'黑色素細胞瘤、惡性肉瘤或其他惡性腫瘤。 申青專利範圍第6項所述之醫藥組合物，其中該賦形劑包含稀釋劑、 填充劑、結合劑、崩解劑、潤滑劑。 & -種麟治療癌症的醫藥組合物，其包含⑷呂宋揪夾粉摊。赫)及其 槪合物在縣上可接受之贿、溶麵絲學上具錢學功能之 何生物(b)藥學上可接受之载體或賦形劑至該醫藥組合物。 申月專利細第1G項所述之醫藥組合物，其中所述之癌症顧自下列 、·者或其任组合.子呂頸癌、乳癌、即巢癌、結腸癌、姨臟 癌、胃癌、前列腺癌、急性T細胞白血病、血癌、肝癌、内膜癌、肺癌、 大腸癌、黑色素細胞瘤、惡性肉瘤或其他惡性腫瘤。 申奢專利域第1〇項所述之醫藥組合物，其中該賦形劑包含稀釋劑、 填充劑、結合劑、崩解劑、潤滑劑。 種驗治療輪的„組合物，其包含(a)布錄__Butadam〇i)及 其該化合物在藥學上可接受之鹽類、溶劑合物或在藥學上具有藥學功能 之Μ物(b)-藥學上可接受之賴錢糊至該㈣組合物。 如申4專利|&圍第M項所述之醫藥組合物，，其中所述之癌症係選自下 j、群:之者或其任一組合：子宮頸癌、乳癌、印巢癌、結腸癌、肤 *; °月癌前列腺癌、急性τ細胞白血病、血癌、肝癌、内膜癌、肺 癌大腸癌、黑色素細胞瘤、惡性肉瘤或其他惡性腫瘤。 13·如申明專利範圍第14項所述之醫藥組合物，其中該賦形劑可為稀釋劑、 填充劑、結合劑、崩解劑、潤滑劑等。 26