TW200930365A

TW200930365A - Inhibitors of Akt activity

Info

Publication number: TW200930365A
Application number: TW097101509A
Authority: TW
Inventors: Mark E Layton; Kevin J Rodzinak; Philip E Sanderson
Original assignee: Merck & Co Inc
Priority date: 2006-12-06
Filing date: 2008-01-15
Publication date: 2009-07-16
Also published as: EP2120951A1; US20100022573A1; WO2008070134A1; EP2120951A4; CA2670767A1; AU2007327992A1; JP2010512312A

Description

200930365 九、發明說明：【發明所屬之技術領域】本發明係關於經取代萘咬化合物’其係絲胺酸/蘇胺酸激酶，Akt (亦稱作PKB ;下文稱作"Akt”）之一種或多種同型體之活性的抑制劑。本發明亦係關於包含此等化合物之醫藥組合物及在癌症治療中使用本發明化合物之方法。【先前技術】細胞凋亡（程序性細胞死亡）在胚胎發育及諸如退變性神 ® 經元疾病、心血管疾病及癌症等各種疾病之發病機理中起重要作用。最近工作已經識別出各種參與程序性細胞死亡之調控或執行的促細胞凋亡基因產物及抗細胞凋亡基因產物。諸如Bcl2或Bc1-Xl等抗細胞凋亡基因之表現可抑制由各種刺激造成的細胞凋亡性細胞死亡。另一方面，諸如 Bax或Bad等促細胞凋亡基因之表現可導致程序性細胞死亡 (Adams等人，*SWe«ce，281:1322-1326 (1998))。程序性細胞死亡之執行可由半胱天冬酶-1相關蛋白雖介導，包括半 ® 胱天冬酶-3、半胱天冬酶-7、半胱天冬酶-8及半胱天冬酶-9 等（Thornberry 等人iSc/ewce，281:1312-1316 (1998))。磷脂醯肌醇3'-0H激酶（PI3K)/Akt途徑對於調控細胞存活/細胞死亡而言十分重要（Kulik等人，Mo/. Ce//. _βζ·ο/. 17:1595-1606 (1997); Franke 等人，Ce//，88:435-437 (1997); Kauffmann-Zeh等人，iVaiKM 385:544-548 (1997) Hemmings Scz.ewce，275:628-630 (1997); Dudek 等人， Sconce，275:661-665 (1997))。諸如血小板源生長因子 128379.doc 200930365 (PDGF)、神經生長因子（NGF)及胰島素樣生長因子-1 (IGF-1)等存活因子在各種條件下可藉由引發PI3K活性來促進細胞存活（Kulik等人1997，Hemmings 1997)。活化 PI3K可產生磷脂醯肌醇（3,4,5)-三磷酸酯（Ptdlns(3,4,5)-P3)，而該Ptdlns(3,4,5)-P3又可與含有普列克底物蛋白同源（PH)-結構域之絲胺酸/蘇胺酸激酶Akt結合及促進該絲胺酸/蘇胺酸激酶Akt活化（Franke等人，Ce//，81:727-736 (1995); Hemmings Science, 277:534 (1997); Downward, ® Cwrr. CW/ 仏〇/· 10:262-267 (1998)，Alessi 等人，五M50 J. 15: 6541-6551 (1996))。PI3K或顯性失活 Akt誘變體之特異性抑制劑可廢除此等生長因子或細胞因子之促進存活的活性。先前已揭示PI3K之抑制劑（LY294002或渥曼青黴素（wortmannin))可阻斷Akt藉由上游激酶活化。另外，在其中細胞通常會經受細胞凋亡性細胞死亡之條件下，導入組成型活性PI3K或Akt誘變體可促進細胞存活 (Kulik等人 1997, Dudek等人 1997)。已識別出第二信使調控絲胺酸/蘇胺酸蛋白激酶之Akt子族的3個成員且將其分別稱為Aktl/ΡΚΒα、Akt2/PKBP及 Akt3/PKBy (下文稱作"Aktl"、"Akt2"及"Akt3”）。該等同型體係同源的，尤其在編碼催化結構域之區域中。Akt可藉由因響應PI3K信號傳導而出現的磷酸化事件來活化。PI3K 可磷酸化膜肌醇磷脂，產生第二信使磷脂醯-肌醇3,4,5·三磷酸酯及磷脂醢肌醇3,4-雙磷酸酯，該等第二信使顯示可與Akt之PH結構域結合。當前Akt活化模型提出藉由3'-磷 128379.doc 200930365 酸化磷酸肌醇將酵素募集至膜，在膜中藉由上游激酶磷酸化 Akt之調控位點（B.A. Hemmings，Science 275:628-630 (1997); B.A. Hemmings, Science 276:534 (1997); J.

Downward，279:673-674 (1998)) °

Aktl磷酸化出現於兩個調控位點（即，存於催化結構域活化環中之Thr3G8及鄰近羧基端之Ser473)上（D. R. Alessi等 kEMBO J. 15:6541-6551 (1996)及 R. Meier 等人 J. 5ζ·ο/. C/zew. 272:30491-30497 (1997))。等效調控磷酸化位點出現於Akt2及Akt3令。已經選殖出可在活化環位點磷酸化 Akt之上游激酶且其稱為3'-磷酸肌醇依賴性蛋白激酶1 (PDK1)。PDK1不僅可磷酸化Akt，而且亦可磷酸化p70核糖體S6激酶、p90RSK、血清和糖皮質激素調控之激酶 (SGK)及蛋白激酶C。尚未識別出磷酸化鄰近羧基端之Akt 調控位點的上游激酶，但最近報導暗示了整合素鏈接之激酶（ILK-1)、絲胺酸/蘇胺酸蛋白激酶或自體磷酸化之作用。人類腫瘤之Akt水平分析顯示Akt2在諸多卵巢癌（J. Q. Cheng 等人 Proc?. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 89:9267-9271(1992))及胰腺癌（J. Q. Cheng 等人/Voc. #如/· Ιαί/. *Scz·. m 93:3636-3641 (1996))中過度表現。類似地，已經發現Akt3在乳癌及前列腺癌細胞系中過度表現（Nakatani 等人，J.价〇/· C/ie/w· 274:21528-21532 (1999)。腫瘤抑制因子PTEN(即一種可特異性地去除Ptdlns (3,4,5)-P3之3’磷酸酯的蛋白及脂質磷酸酶）係一種 128379.doc 200930365 PI3K/Akt途徑之負調節物（Li 等人 275:1943-1947 (1997)，Stambolic 等人 Ce// 95:29-39 (1998)，Sun 等人， Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 96:6199-6204 (1999))° PTEN 之種系誘變可造成諸如考登病（Cowden disease)等人類癌症症候群（Liaw等人iVaiwre Geweiz’cs 16:64-67 (1997))。在大多數人類腫瘤中缺失PTEN，且沒有功能性PTEN之腫瘤細胞系顯示高水平之活化Akt (Li等人，見上文，Guldberg 等人 Cancer 57:3660-3663 (1997)，Risinger 等人 ❹ Cancer 57:4736-4738 (1997)) 〇此等觀測表明：PI3K/Akt途徑在腫瘤發生中於調控細胞存活或細胞死亡方面起重要作用。可藉由使用諸如LY294002及渥曼青黴素等抑制劑抑制 PI3K來達成Akt活化及活性之抑制。然而，PI3K抑制不僅能夠無差別地影響所有三種Akt同功酶而且亦能夠無差別地影響依賴於Pdtlns(3,4,5)-P3之其他含有PH結構域之信號傳導分子，例如，酪胺酸激酶之Tec家族。進而言之，已〇經揭示可藉由獨立於PI3K之生長信號來活化Akt。或者，可藉由阻斷上游激酶PDK1之活性來抑制Akt活性。尚未揭示特異性PDK1抑制劑。而且，PDK1抑制可造成多種其活性依賴於PDK1之蛋白激酶（例如，非典型PKC 同型體、SGK及S6激酶）受到抑制（Williams等人，C«rr· 5ζ·ο/. 10:439-448 (2000)。本發明之目標係提供作為Akt抑制劑之新穎化合物。本發明之另一目標係提供包含該等作為Akt抑制劑之新 128379.doc 200930365 穎化合物的醫藥組合物。本發明之另一目知^係·^供一種用於治療癌症之方法，其包括投與此等Akt活性抑制劑。【發明内容】本發明提供可抑制Akt活性之經取代萘啶化合物。特定言之，所揭示化合物可選擇性地抑制一種或兩種Akt同型體。本發明亦提供包含此等抑制性化合物之組合物及藉由對需要癌症治療之患者投與該化合物來抑制Akt活性之方 ® 法。【實施方式】本發明之化合物可用於抑制絲胺酸/蘇胺酸激酶Akt之活性。在本發明之第一實施例中，藉由式A閣明Ah活性之抑制劑：

其中：

、I、J、K、L·及Μ獨立地選自：C^N ’其中E、F、G、U、T I、J、K、L及Μ各自視情況經Ri取代； a係0或1 ’ 或1 ; m係0、1或2 ; P獨立地為〇、1、2、 128379.doc 200930365 3、4 或 5，環X係視情況經1個至5個R3取代之3-7員環烧基或4-7員雜環基；環Y係視情況經1個至4個R4取代之4-7員環烧基或5-7員雜環基；環Z係選自：（C3_C8)環烷基、芳基、雜芳基及雜環基； R1獨立地選自：Η、氧代基、（C = 0)a〇b(Cl_Cl。）烷基、 (c=o)aob-芳基、（c=o)aob(c2-c10)烯基、（c=o)aob(c2-c10) © 炔基、C02H、鹵素、OH、CMCVCe)全氟烷基、 (C=0)aNR7R8 、 CN 、（C=0)a0b(C3-C8)環烷基、 SCOUNVr8、SH、SCCOdCVCw)烷基及（c=o)aob-雜環基，該烷基、芳基、烯基、炔基、環烷基及雜環基視情況經一個或多個選自R6之取代基取代； R2獨立地選自：氧代基、（CsCOaOJCVCw)烷基、 (c=o)aob-芳基、（C=〇)a〇b(C2-C10)烯基、（c=o)aob(c2-c10) 炔基、C02H、齒素、OH、OJCrCe)全氟烷基、〇 (C=0)aNR7R8、CN、（C=0)a0b(C3-C8)環烷基、SH、 S(0)mNR7R8、MOhdCVC,。）烷基及（C=〇)a〇b-雜環基，該烧基、芳基、稀基、炔基、環烧基及雜環基視情況經一個或多個選自R6之取代基取代； R3獨立地選自：氧代基、（C=0)a0b(Ci-C1())烷基、 (c=o)aob-芳基、（C=〇)a〇b(C2-C10)烯基、（C=〇)a〇b(C2-C10) 炔基、C02H、齒素、OH、（MCrCd全氟烷基、 (C=0)aNR7R8、CN、（C=0)a0b(C3-C8)環烷基、SH、 128379.doc 200930365 S(0)mNR7R8、S(0)m_(Ci_CiQ)烷基及（c=〇)a〇b 雜環基，該烧基、芳基、烯基、炔基、環烷基及雜環基視情況經一個或多個選自R6之取代基取代； R獨立地選自：氧代基、（c=〇)a〇b(Ci_c丨❶）烷基、 (c=0)a〇b-芳基、（C=o)aob(c2_c10)烯基、（〇0)a〇b (c2_ c10)炔基、C02H、鹵素、OH、ObCCVCd全氟烷基、 (C=0)aNR7R8、CN、（C=0)a0b(C3-C8)環烷基、SH、 S(0)mNR7R8、烷基及（C=0)a0b-雜環基，該烧基、芳基、烯基、炔基、環烷基及雜環基視情況經一個或多個選自R6之取代基取代； R 係.（C = 0)a〇bCi-Ci〇院基、（C=0)aOb芳基、C2-C10稀基、c2-c10炔基、（c = 0)a0b雜環基、C02H、鹵素、CN、 OH、ObCVCfi 全氟烷基、0a(C=0)bNR7R8、氧代基、 CHO、（N=0)R7R8、S(0)mNR7R8、SH、SiOUJCVCw)烷基或（C=0)aObC3-C8環烷基，該烷基、芳基、烯基、炔基、雜環基及環烷基視情況經一個或多個選自R6a之取代基取代； R6a係選自：（C=0)a〇b(C!-Ci。）烧基、〇a(C]-C3)全 I 烧基、（C〇-C6)伸烧基-S(0)mRa、SH、氧代基、〇H、鹵素、 CN、（C2-C1Q)烯基、（C2-C1G)炔基、（C3-C6)環烷基、（c〇-C6)伸烧基-芳基、（C〇-C6)伸烧基-雜環基、（C〇-C6)伸烧基_ N(Rb)2、C(0)Ra、（CVC6)伸烷基-C02Ra、C(0)H及（C〇-C6) 伸烷基-C02H，該烷基、烯基、炔基、環烷基、芳基及雜環基視情況經至多3個選自Rb、OH、（C,-C6)烷氧基、鹵 128379.doc •12· 200930365 素、C02H、CN、Oa(C=〇)b(Ci-C6)烷基、氧代基及N(Rb)2 之取代基取代； ❹ Ο R7及R8獨立地選自：H、（CsOhOJcvC丨〇)烷基、 (C=0)a0b(C3-C8)環烷基、（C=〇)aOb-芳基、（c=〇)a〇b-雜環基、（C2-Ch))烯基、（C2-C1G)炔基、SH、S02Ra 及 (C=0)aNRb2，該烷基、環烷基、芳基、雜環基、烯基及炔基視情況經一個或多個選自R6a之取代基取代，或者尺7及 R8可與其所連接氮一起形成在每一環中具有3-7個成員且除該氮外視情況含有一個或兩個選自N、〇及S之額外雜原子的單環或二環雜環，該單環或二環雜環視情況經一個或多個選自R6a2取代基取代； R係（Ci-CJ烧基、（C3-C6)環烧基、芳基、或雜環基；且

Rb獨立地為：Η、（Cl-C6)烷基、芳基、雜環基、（C3_C6) 環炫基、（CsC^aCMCVCe)院基、或 S(〇)mRa ; 或其醫藥上可接受之鹽或立體異構體。在本發明之第二實施例中，藉由式A闡明Akt活性抑制劑，其中：

係選自 128379.doc 200930365

且所有其他取代基及變數係如在第一實施例中所定義；或其醫藥上可接受之鹽或立體異構體。在本發明之第三實施例中，藉由式B闡明Akt活性抑制劑： 128379.doc -14- 200930365 中其

Η2 Ρ係0、1或2 ,2 ❹ R獨立地選自：（Cl-c6)院基、(Ci_C6)院氧基、c〇2H 鹵素、OH及NH2 ; 所有其他取代基及變數係如在第二實施例中所定義；或其醫藥上可接受之鹽或立體異構體。在第四實施例中，藉由式(:闡明本發明之抑制劑：

Ο 其中= a係0或1 ; b係0或1 ; m係〇、1或2 ; ρ係〇、i戍2 . R2係選自··（Cl-C6)烷基、（^/^烷氧基、CO#、齒素、OH及 NH2 ; 環X係視情況經丨個至3個！13取代之3·7員環烷基或4_7員雜環基； 128379.doc •15- 200930365 環Υ係視情況經i個至3個R4取代之4_7員環烷基或5_7員雜環基；、還目：Η、氧代基、（C=0)a〇b(Ci_c丨。）烷基、 (c=0)a(v芳基、（C=〇)a〇b(C2-C10)烯基、（c=o)aob(c2-c10) 快基、C〇2H、鹵素、OH、Ob^-CO全氟烷基、 (C=0)aNR7R8 、 (C=0)a〇b(C3-C8)環烷基、 S(〇)mNR7R8、SH、s(〇)m_(Ci_Ci。）烷基及（c=〇)a〇b_ 雜環 ❺ Ο 基’該炫基、芳基、烯基、炔基、環烷基及雜環基視情況經一個或多個選自R6之取代基取代； R3獨立地選自：（Ci-C6)烷基、C〇2H、自素、〇H、（C,- c6)炫氧基、（c2_ClG)烯基； R4獨立地選自：（CVC6)烷基、C02H、_素、〇H、（C,- C6)烷氧基、（c2-C1G)烯基； R6係：（OCOaObCVCw烷基、（c=o)aob芳基、（：2-(：10烯基、c2-c10炔基、（c = 0)a0b雜環基、C02H、鹵素、CN、 OH、ObCrCe 全氟烷基、0a(C=0)bNR7R8、氧代基、 CHO、（N=0)R7R8、SWJ^R8、SH、烷基或（c=o)aobc3-c8環烷基，該烷基、芳基、烯基、炔基、雜環基及環烷基視情況經一個或多個選自R6a之取代基取代； R6a係選自：（CsCOaCMCVC!。）烷基、OJCi-Cs)全氟烷基、（C〇-C6)伸烷基-S(0)mRa、SH、氧代基、OH、齒素、 CN、（C2-C1G)烯基、（C2，C1())炔基、（C3-C6)環烷基、（c〇_ C6)伸烧基-芳基、（C〇-C6)伸炫基雜環基、（Cq-C6)伸燒基_ 128379.doc -16 - 200930365 N(R )2、C(0)Ra、（C〇_C6)伸烷基 _c〇2Ra、训阳及c j 伸烧基-C〇2H ’該烧基、烯基、炔基、環烷基、芳基及雜環基視情況經至多3個選自Rb、〇H、（Ci_C6)烷氧基、齒素、C〇2H、CN、〇a(C=〇)b(Cl-C6)院基、氧代基及N(Rb)2 之取代基取代； R7 及 R8 獨立地選自·· η、（c=〇)a〇b(Ci_Ci<))烷基、 (C-0)a〇b(C3-Cs)環烧基、（〇〇)a〇b_芳基、（c=〇)a〇b 雜環基、（C2-ClG)烯基、（C2-C!。）炔基、SH、S02Ra 及 (C=0)aNRb2 ’該烷基、環烷基、芳基、雜環基、烯基及炔基視情況經一個或多個選自Rh之取代基取代，或者…及 R可與其所連接氮一起形成在每一環中具有3_7個成員且除該氮外視情況含有一個或兩個選自N、〇及S之額外雜原子的單環或二環雜環，該單環或二環雜環視情況經一個或多個選自1163之取代基取代；

Ra係（CVC6)烷基、（CyC6)環烷基、芳基、或雜環基；且〇以獨立地為：Η、（CVC6)烷基、芳基、雜環基、（CVC6) 環烷基、（CsCOaOWCi-CO烷基、或 SCOkRa ; 或其醫藥上可接受之鹽或立體異構體。在第五實施例中，藉由式D闡明本發明之抑制劑： Ο η

128379.doc -17- 200930365 其中： a 係 0 或 1 ; b 係 0 或 1 ; i 或 2 ; p 係〇、1 或 2 ; R2係選自··（CVC6)烷基、（Cl-C6)烷氧基、C02H、鹵素、OH及 NH2 ; R1係選自：Η、氧代基、（C=0)a〇b(Cl_Cl())烷基、 (c=o)aob-芳基、（C=O)a〇b(c2-C10)烯基、（C=O)aOb(C2-C10) 炔基、C02H、鹵素、OH、〇b(Cl_C6)全氟烷基、 (C=0)aNR7R8、CN、（C=0)a0b(C3-C8)環烧基、 © S(〇)mNR7R8、SH、SCOhycVCK)烷基及（C=0)a0b-雜環基’該烷基、芳基、烯基、炔基、環烷基及雜環基視情況經一個或多個選自R6之取代基取代； R 係.（CsC^aObCi-Cio院基、（C=0)a0b芳基、〇2-〇10烯基、C2-C10 炔基、（c=0)a0b雜環基、C02H、幽素、CN、 OH、ObCrC^ 全氟烷基、〇a(C=0)bNR7R8、氧代基、 CHO、（N=0)R7R8、S(0)mNR7R8、SH、SCCOdCVC^。)烷基或（c=o)aobc3-c8環烷基，該烷基、芳基、烯基、炔基、 ❹ 雜環基及環烷基視情況經一個或多個選自R6a之取代基取代； R6a係選自：（CsCOaOdCVCM)烷基、OJCVCs)全氟烷基、（C〇-C6)伸烷基-S(0)mRa、SH、氧代基、OH、齒素、 CN、（C2-C1())烯基、（C2-C10)炔基、（C3-C6)環烷基、（c〇-C6)伸烷基-芳基、（C〇-C6)伸烷基·雜環基、（C〇-C6)伸烷基_ N(Rb)2、C(0)Ra、（C〇-C6)伸烷基-C02Ra、C(0)H及（C〇-C6) 伸烷基-C02H，該烷基、烯基、炔基、環烷基、芳基及雜 128379.doc -18 - 200930365 環基視情況經至多3個選自Rb、〇H、（Ci_C6)烷氧基、產素 c〇2H、CN、oa(c=〇)b(c”c6)烷基、氧代基及N(Rb): 之取代基取代； R及R8獨立地選 :H . (C=O)aOb(C,-C10) (c=〇)a〇b(c3-C8)環烧基、（c=0)a〇b_ 芳基料基、（C2-C1())烯基、（c2_Ci。）炔基、SH、s〇2Ra 及 ❹ 〇 (C==NRV職基、我基、芳基、雜環基、稀基及块基視情況經一個或多個選自R6a之取代基取代 R8可與其料接氮-起形成在每—環巾具有3 :該氣外視情況含有-個或兩個選W之額= 子的单環或二環雜環，該單環或二環雜環視情況經^ 多個選自R6a之取代基取代；個或

Ra係（Μ)院基、（C3_c0)環烧基、芳基

Rb獨立地為：h、（Ci_C6)烧基、芳基裏基，且環烷基、（C=〇)a〇b(Ci_C6)烷基或 s(〇)mRa ; 土（C3-C6) 或其醫藥上可接受之鹽或立體異構體。在第六實施例中，藉由式£闡明本發 β之抑制劑：其中： 128379.doc

• 19· 200930365 a係0或1 ; b係〇或1 ; ^係〇、1或2 ; R1係選自：Η、（C=0)a〇b(Cl_Cl〇)烷基、（C=0)a〇b芳基、〇H、〇b(Ci-C6)全氟烷基、（c=〇)a〇b(C3_C8)環烷基及 (c-o)aob-雜環基，該烷基、芳基、環烷基及雜環基視情況經一個或多個選自R6之取代基取代； R6係：（C=〇)a〇bCl_Cl0烷基、（c=0)a〇b芳基、c2_Cl〇烯基、C2-C10炔基、（c=〇)a〇b雜環基、c〇2h、鹵素、CN、 0H、〇bCi~C6 全氟烷基、0a(C=0)bNR7R8、氧代基、 ® CH0、（N=0)R7R8、S(0)mNR7R8、SH、SCCOn^CVCw)统基或（C = 0)a〇bC3_C8環烷基，該烷基、芳基、烯基、炔基、雜環基及環烷基視情況經一個或多個選自R6a之取代基取代； R6a係選自：（CsCOaOdCVCio)烷基、OJCVCO全氟烷基、（CQ-C6)伸烷基、SH、氧代基、OH、齒素、 CN、（C2-C1())烯基、（c2-C1())炔基、（C3-C6)環烷基、（C〇-C6)伸烷基-芳基、（c〇-c6)伸烷基-雜環基、（c〇-c6)伸烷基· N(Rb)2、C(〇)Ra、（C(rC6)伸烷基-C02Ra、C(0)H及（C〇-C6) 伸烷基-C〇2H，該烷基、烯基、炔基、環烷基、芳基及雜環基視情況經至多3個選自Rb、OH、（<^-(：6)烷氧基、鹵素、C02H、CN、OaCCsOMCi-Cd 烷基、氧代基及 N(Rb)2 之取代基取代；

Ra係（CVQ)烷基、（C3-C6)環烷基、芳基或雜環基；且 Rb獨立地為：Η、（CVQ)烷基、芳基、雜環基、（c3-C6) 環烷基、（CsOhOJCVCe)烷基或 S(0)mRa; 128379.doc •20· 200930365 或其醫藥上可接受之鹽或立體異構體。本發明之具體化合物包括：曱基·則〜基）_9.笨基[124]三嗓并[34_ 2-[4-(9-、Hr]本基卜5、’8_ 二氧雜螺[3.4]辛·2·胺（1_12); 一氧雜螺η 2 4]一 4并[^心力·1，6-萘咬-8-基）苯基]-5,8· 一軋雜螺[3.4]辛 _2_ 胺（1·13); 2-[4-(3 -甲基_9_茉篡 _ ❹ 〇基]_5冬二氧雜辛’]二唾并[3,4^，6·萘咬冬基）笨礼雑螺[3_4]辛-2-胺（1_14); 2_[4_(3-乙基-9-苯基[1,2,4]三唑并「34^1/;# 基⑽二氧雜螺[3.4]辛㈣^娜1，6·终8女苯 2-[4-(3-異丙基_9_策其 — 苯基]-5,8_二氧雜土辛’]二嗅并[3’4_刀-1，6·萘咬I基）乳雜螺[3.4]辛_2-胺（1_16); 本基Μ，8-二氧雜螺_辛.2_胺（1_17); 基） 2-[4-(9-笨基 _3_ 嘧咭,1 Γ1。 (1-19); )本基>5’8-二氧雜螺叫辛_2_胺 2 {4吖9·本基·3_n，3n4_|)p 苯基M，k氧卿… 叫2•胺基从二氧雜螺叫辛_2_1);^ n，2,4J三峻祁蔡咬_3-.21)土）本基]-9-笨基 2仰^川）~9·卿娜柳，⑷，w.8_ 128379.doc -21- 200930365 基]苯基卜5,8-二氧雜螺[3.4]辛-2,(1_22); 3_{8_[4_(2_胺基从二氧雜螺[Μ辛_2_幻苯基]冬苯基 [1，2,4]二峻开[3,4’，6_ 萘心 6_{8_[4_(2_胺基从二氧雜螺[3养2_幻苯基]冬苯基 [1,2,4]三唑并[3,4-幻_16笑心， J ，_蔡咬-3-基}吡啶-2-曱酸曱酯（1- 24); 2-[4-(9-苯基-3-"比咬 _2_^n 〇基[1，2,4]三唑并[3,4-f]-l，6-萘啶·8· Ο 〇基）苯基]_5,8·:氧雜螺[3 .2胺⑴即 2-{4'C3'(1H'〇?，咬-8·基]苯基M，8_二敦雜螺[34]辛_2胺（1_26); 2·[Μ3·異抓3_基^苯基[丨从三蝴3，W，6-萘咬_ 8-基）本基]·Μ_二氧雜螺[3 4]辛_2胺（1_27); 2?-苯基噪_2-基[叫三唾并[3,… 基）本基]-5,8-_氧雜螺[3 4]辛_2胺⑴叫· WW胺基姑：氧㈣[3.4]辛·2基] 2-[4-(9-本基-3-<» 比咬 _3 其 ri 1 基[1，2,4]三唆并[3,4-f]-l，6-萘啶 _8_ 基）本基]·5,8·二氧雜螺[3.4]辛j.胺（ι·3〇); 2-[4-(3·環丁基_9-苯基『】9 一苯基]_5,8·二氧雜螺[3.4]辛:2::=)3 ==基甲基A苯基[1，2, 啶-8-基]本基}_5,8_二帝基一氧雜螺叫:2:= 128379.doc -22- 200930365 2-[4♦環 mm 笨基[124]4和咬-8-基）苯基]-5,8-二氧雜螺[3 4]辛_2娜，5 2*(9_苯基·3·六氫〜2_基[1，2,4]三唾并[3 6蔡咬冬基）苯基]-5,8·二氧雜螺[3 4]辛_2_胺（1 ’ 5 2-{4·[3-(4-甲基-1,3-噻唑 _5•基） — )-本基[1，2,4]三唑并[3 4 f]-l，6-萘啶-8-基]苯基卜5,8_二氧，孔雜螵[3.4]辛-2-胺（1-36); 2-[4-(9-本基-3-'»比咬-4-基[12 41-山、’ Ο ❹ 以，2’4]二唑开[3,4_f]_16 萘啶基）苯基]-5,8-二氧雜螺[3.4]辛_2胺（ι_37); 2-{4-[9·苯基作氫暮基）[124]三州3崎 M-萘咬·8·基]苯基卜5,8.二氧雜螺[34]辛_2胺（1_38); 2-{4-[3-(1-苄基-1Η-吲哚 _3_基）丞）本基[1，2,4]三唑并[3 4_ f]-l，6-萘啶-8-基]苯基卜5 8_二氧，乳雜螺[3.4]辛-2-胺（1-39); 叩仰-胺基-5,8_:氧雜螺[3 4]辛_2基）苯基]冬笨基 [1’2,4]二唑并[3,4’，6_萘啶_3基卜2甲基丙_ l 40)； 2_μ♦第三·丁基冬苯基[^ 4]三岭[3，崎16蔡咬ι 基）苯基]-5,8-二氧雜螺[3 4]辛·2胺（1_41); 8 [4 (2胺基5,8-一氧雜螺[34]辛_2•基）苯基]备乙基_9·苯基[1，2’4]三唾并[3,4-刀-1，6·萘咬-3-胺（2_2);及 iV {8 [4 (2胺基_5,8-二氧雜螺ρ 4]辛_2_基）苯基]_9苯基 [1，2,4]—唾并[3,4_/]_1，6_萘咬_3_基卜^^二甲基丙m 二胺（2-3); 或其醫藥上可接受之鹽或立體異構體。本發明之化合物係： 128379.doc -23- 200930365 2 {4-[3-(1·甲基-u咪唾_4_基）9·苯基[i 2 4]三嗅并[3，心萘咬-8-基]苯基卜5 8二氧雜螺[3 4]辛·2胺⑴12广或其醫藥上可接受之鹽。本發明之化合物係： Μ4·(2_胺基-5,8·二氧雜螺[3.4]辛-2·基）苯基]善乙基_9.苯基[1，2,4]三唑并萘啶·3_胺（2_2); 或其醫藥上可接受之鹽。本發明之化合物係： © #'_{8_[4_(2-胺基_5,8-二氧雜螺[3.4]辛-2-基）苯基]-9-苯基 [1’2,4]二唑并[3,4·/]-1，6_ 萘啶 _3_基卜二甲基丙烷·ls3_ 二胺（2-3); 或其醫藥上可接受之鹽。本發明之化合物係： 2-[4-(9-苯基-3-嘧啶_2-基[1，2,4]三唑并[3,4-/]-1,6-萘啶-8- 基）苯基]-5,8-二氧雜螺[3.4]辛-2-胺（1-18); Λ 或其醫藥上可接受之鹽。本發明之化合物可具有不對稱中心、對掌性軸及對掌性平面（如闡述於以下中者：EL. Eliel與S.H. Wilen之 Stereochemistry of Carbon Compounds * John Wiley &

Sons，New York，1994年，第 1119-1190頁），且作為外消旋異構體、外消旋混合物、及作為個別非對映異構體連同其所有可能異構體及混合物（包括光學異構體）存在，所有該等立體異構體均涵蓋於本發明内。此外，本文所揭示化合物可作為互變異構體存在且兩種 128379.doc -24- 200930365 互變異構形式意欲涵蓋於本發明之範圍内，即使僅繪示種互變異構體結構。舉例而言，下列屬於本發明之範圍

〇四唾係以1Η/2Η1變異構體之混合物#纟。四峻部分之互變異構體形式亦屬於本發明之範圍。當任一變數（例如，R2等）在任一要素一 ν 久Μ上

則其母次出現之定義與所有其他出現處之定義無關。取代基與變數之組合僅在該組合產生穩定化合物時二，許自取代基緣製於環系統中之線代表所示鍵可與任 :取代環原子連接。若該環系統為二環，則其意欲指該、該-環部>之任一環上之任一適宜碳原子連接。人=解’―個或多個邦i)原子可由—名熟習該項技術化學辑^本發明化合物中代替—個或多個碳原以提供且可藉由該項技術中已知技術自易於購得之起始相2 成的化合物。當與相似C-元素及Si元素鍵結間排右&與石夕在其共價半徑方面之不同導致在鍵距及空方面有差異。該等差異導致切化合物在與含碳化 128379.doc -25· 200930365

合物相比時於大小及形狀方面有些微變化。一名熟習該項技術人員應瞭解：大小及形狀差異可導致效能、溶解性、缺乏脫靶活性、組裝性質等的些微或顯著改變。（Diass，L 〇·等人 Organometallics (2006) 5:1 188-1 198; Showell，G.A· 專人 Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters (2006) 16:2555-2558) ° 應瞭解，一名熟習該項技術人員可選擇本發明化合物上之取代基及取代模式，以提供化學穩定且可藉由該項技術中已知技術及彼等下文所述方法自易於購得之起始材料容易地合成的化合物。倘若取代基自身經一個以上的基團取代’則應理解此多個基團可位於相同碳上或不同碳上，只要可產生穩定結構。短語"視情況經一個或多個取代基取代"應視為等效於短語”視情況經至少一個取代基取代"且在此等清形中，較佳實施例應具有〇至4個取代基且更佳實施例應具有0至3個取代基。本文所用"烷基"意欲包括具有指定碳原子數之具支鏈及直鏈飽和脂肪族烴基團二者。舉例而言，將"Ci_Ci〇烷基” 中之CkCb定義為包括在直線型或具支鏈排列中具有ι、 2、3、4、5、6、7、8、9或1〇個碳之基團。舉例而言， "CrCu烷基”具體包括甲基、乙基、正-丙基、異-丙基、正-丁基、第二-丁基、異-丁基、戊基、己基、庚基、辛基、壬基、癸基等。術語”環烷基，，意指具有指定碳原子數之單環飽和脂肪族烴基團《舉例而言，"環烷基"包括環丙基、甲基-環丙基、 128379.doc -26· 200930365 2,2-二甲基-環丁基、2-乙基·環戊基、環己基等。 "烷氧基"代表任一藉助氧橋連接之具有指定碳原子數之環狀或非環狀烷基基團。因此，"烷氧基，，涵蓋以上炫基及環烷基之定義。倘若未指定碳原子數，則術語”烯基"係指包含2個至ι〇個碳原子及至少一個碳碳雙鍵之直鏈、具支鏈或環狀非芳族烴基團。較佳存在一個碳碳雙鍵，且可存在至多四個非芳族碳碳雙鍵。因此，"（Q-cw烯基，，意指具有2個至1〇個碳原子之烯基基團。烯基基團包括乙烯基、丙烯基、丁烯基、2-甲基丁烯基及環己烯基。該烯基基團之直鏈、具支鏈或環狀部分可包含雙鍵且若表明為經取代烯基基團則可經取代。術語"炔基"係指包含2個至1〇個碳原子及至少一個碳碳三鍵之直鏈、具支鏈或環狀烴基團。可存在至多三個碳碳二鍵。因此，"（C2-C1())炔基"意指具有2個至1〇個碳原子之〇炔基基團。炔基基團包括乙炔基、丙炔基、丁炔基、3甲基丁炔基等。該炔基基團之直鏈、具直鏈或環狀部分可包含二鍵且若表明為經取代炔基基團，則可經取代。在某些情形中，取代基可定義為具有一定碳原子範圍 (包括〇)/例如，（Cg_C6)伸烷基_芳基。倘若芳基欲視為苯基，則該定義應包括苯基自身及·CH2Ph、_CH2CH2ph、 CH(CH3)CH2CH(CH3)Ph 等。本文所用芳基"意指任何在每一環中具有至多7個原子之穩定單環或二環碳環，其中至少一個環為芳族環。此等 128379.doc -27· 200930365 芳基元素之實例包括笨基、萘基、四氯蔡基、二氮節基及聯苯基。應瞭解，在其中該芳基取代基係二環且一個環係非芳族環之情況下’經由該芳族環連接。、本文所用術語雜芳基表示在每一環中具有至多7個原子之穩定單環或二環，其中至少一個環係芳族且包含丨個至4 個選自由〇、N及S組成之群之雜原子。該定義範圍内之雜芳基基團包括（但不限於）：吖啶基、咔唑基、啐啉基、喹喔啉基、吡唑基，基、苯并三唑基，基 '嘆吩基、苯并嘆吩基、苯并吱喃基、啥淋基、異喧琳基、嚼嗅基、異喔唾基、，嗓基"比嗪基、d荅唤基、π比咬基、嘴咬基、吡咯基、四氫喹啉基。如同下文所定義雜環一般， ’’雜芳基"亦應理解為包括任一含氮雜芳基之队氧化物衍生物。應瞭解，在其中該雜芳基取代基係二環且一個環係非芳族或不含雜原子之情況下，則分別經由該芳族環或經由該含雜原子之環連接^取代基Q之此等雜芳基部分包括但〇不限於：2_苯并咪唑基、2-喹啉基、3-喹啉基' 4_喹啉基、1-異喹啉基、3-異喹啉基及4_異喹啉基。本文所用術語"雜環"或"雜環基"意指包含i個至4個選自由Ο、N及S纽成之群之雜原子的3_至1〇員芳族或非芳族雜環，且包括二環基團。因此，"雜環基"包括上述雜芳基以及其二氫及四氫類似物。"雜環基"之其他實例包括（但不限於）下列：苯并咪唑基、苯并咪唑酮基、苯并呋喃基、苯并呋咕基、笨并吼唑基、苯并三唑基、苯并噻吩基、苯并噁唑基、咔唑基、噚啉基、畤啉基、呋喃基、咪唑基、二 128379.doc -28· 200930365 氫吲哚基、吲哚基、吲哚拉嗪基（indolazinyl)、吲唑基、異苯并呋喃基、異吲哚基、異喹啉基、異噻唑基、異噁岐基、萘吡啶基、噁二唑基、噁°坐基、噁唑啉、異噁唾啉、氧雜環丁基、°比喃基、11比嗪基、°比唑基、嗒嗪基、吡啶并 0比咬基、塔嗓基、吡啶基、嘴啶基、11比洛基、啥唑琳基、喧琳基、啥喔琳基、四氫°比喃基、四峻基、四峻并"比淀基、嗟二嗤基、嗟嗅基、嘆吩基、三α坐基、氣雜環丁基、 1,4-二噁烷基、六氫氮呼基、哌嗪基、六氫吡啶基、吡啶-2-_基、°比略唆基、嗎琳基、硫嗎琳基、二氫苯并味嗤基、二氫苯并呋喃基、二氫苯并噻吩基、二氫苯并噁唑基、二氫β夫味基、二氫味吐基、二氫,β朵基、二氫異。惡嗤基、二氫異噻唑基、二氫噁二唑基、二氫噁唑基、二氫吡嗪基、二氫吡唑基、二氫吡啶基、二氫嘧啶基、二氫吡咯基、二氫喹琳基、二氫四唑基、二氫噻二唑基、二氫噻唑基、二氫噻吩基、二氫三唑基、二氫氮雜環丁基、亞甲基二氧基苯甲醯基、四氫呋喃基及四氫噻吩基、及其Ν氧化物。可經由碳原子或經由雜原子連接雜環基取代基。如彼等熟習該項技術者所瞭解，本文所用"函代•，或"鹵素"意欲包括氣（C1)、氟（F)、溴（ΒΓ)及蛾（I)。在式Β之實施例中，藉由下式所閣明部分

包括下列結構： 128379.doc -29- 200930365

Ν'〆N

N

R1 在式B之另一實施例中，藉由下G〜e '

k 所閹明部名 Μ

係：

J=^K

在一實施例中’環z係選自：笨基及雜環基在另一實施例中’環z係選自：

在又一實施例中，環Z係苯基。 1.. 在一實施例中，\ /係選自. 128379.doc • 30- 200930365

應理解環x及γ亦可經進一步取代。在一實施例中，Ρ係0、1、2或3。在另一實施例中’ ρ係〇、1或2。在另一實施例中，Ρ係1。在式Α或Β之實施例中，Ri係選自：氧代基、 (CtOhOdCi-Cio)烷基、（c=〇)a〇b-芳基、（c=o)aob(c2-c10) 稀基、（C = 〇)a〇b(C2-C10)块基、C02H、鹵素、OH、〇b(Ci-c6)全氟烷基、（C=0)aNR7R8、CN、（C=0)a〇b(C3-C8)環烷基、S(0)2NR7R8、SH、SCCOHCrC^。）烷基及（C=0)a0b·雜環基’該烷基、芳基、烯基、炔基、環烷基及雜環基視情況經R6a取代。 128379.doc •31 · 200930365 在式A或B之另一實施例中，r1係選自：氧代基、 (CsCOaOJCVCw)烷基、C02H、鹵素、〇H、CN、（CVC6) 烷氧基、S(0)2NR7R8、SH、8(0)2-((^-(^0)炫基、 CKOOKCi-Ce)烷基及N(Rb)2 ’該烷基視情況經R6a取代。在式A或B之另一實施例中，R1係選自：氧代基、NH2、 OH、SH、OJC^-Ce)烷基，該烷基視情況經R6a取代。在式A或B之另一實施例中，R2係選自：氧代基、 (CsOhOJCrCu)烷基、C02H、鹵素、OH、CN、（CrCd 烷氧基、CKCsOKCVCe)烷基、（C2-C1())烯基及 N(Rb)2，該烷基視情況經Rb、OH、（CVC6)烷氧基、自素、C02H、 CN、0(0=0)((^-(^)烷基、氧代基及N(Rb)2取代。在式A或B之另一實施例中，R3係選自：（CVCuO烷基、 C02H、画素、OH、（q-Cd烷氧基、（C2-C1())烯基。在式A或B之另一實施例中，R4係選自：（CVCkO烷基、 C02H、鹵素、OH、（CVC6)烷氧基、（C2-C10)烯基。在一實施例中，Rb獨立地選自Η及（C〗-C6)烷基。在一式C之實施例中’ R2係選自：Η、（Ci-CJ烷基、 C02H、i素、OH及NH2 ;環X係4-7員雜環基；環γ係環丁基；R1係選自：Η、（CVC6)烷基、（C3-C6)環烷基、雜環基、ΝΗ((^-(^)炫基，該烧基及雜環基視情況經（Ci_c6)烧基及N(Rb)2取代’其中該Rb獨立地選自：η及（c^-C^)燒基。在式C之實施例中’ R係選自：只及齒素；環X係3_7員雜環基；環Y係環丁基；R1係選自：Η、（(VC6)院基、（c3_ 128379.doc •32- 200930365 C6)環烷基、雜環基、烷基’該烷基及雜環基視情況經（CVC6)烷基及N(Rb)2取代，其中該Rb獨立地選自： Η及（CVC6)烷基。在一式D之實施例中，R2係選自：Η、（CVC6)烷基、 C02H、鹵素、〇Η及NH2 ; R1係選自：Η、（(VC6)烷基、 (C3_C6)環烷基、雜環基、烷基，該烷基及雜環基視情況經（CrCJ烷基及N(Rb)2取代，其中該Rb獨立地選自：Η及（CVC6)烷基。在一式C之實施例中，ρ係1 ; R2係選自：Η及鹵素；R1 係選自：Η、（C〗-C6)烷基、（C3-C6)環烷基、雜環基、 Nl^CVCd烷基，該烷基及雜環基視情況經（CVQ)烷基及 N(Rb)2取代，其中該Rb獨立地選自：η及（(VC6)烷基。在式D之實施例中，ρ係〇且Ri係選自：〇Η、 (OOhObA-Cu)院基、（〇〇)a〇b-芳基、（C=O)aOb(C2-C10) 烯基、（C=0)a0b (c2-c10)炔基、c〇2H、鹵素、OH、OJCr C6)全氟烷基、（C=0)aNR7R8、CN、（C=0)a0b(C3-C8)環烷基、S(0)2NR7R8、SH、SCOKCVC,。）烷基及（c=o)aob雜環基，該燒基、芳基、烯基、炔基、環烷基及雜環基視情況經R6a取代。在式D之實施例中，ρ係〇且Ri係選自：〇H、 (CsCOaOdCi-C!。）燒基、（C = 〇)a〇b_芳基、（C = 〇)a〇b(C2_Ci〇) 烯基、（C=0)a〇b (C2-C10)炔基、c〇2H、鹵素、OH、CMC!-c6)全氟烷基、（C=0)aNR7R8、CN、（C = 0)a0b(C3-C8)環烷基、S(0)2NR7R8、SH、SCCOHCrC^。）烧基及（c=o)aob·雜 128379.doc •33· 200930365 環基，該烷基、芳基、烯基、炔基、環烷基及雜環基視情況經(CrC1())烷基、OH、（C^OXOJCrCu))烷基、-CH(〇H)CH3、 -CH2-苯基及-C(CH3)2OH 取代。在式E之實施例中，R1係選自：OH、（CeCOaOjCrCW 烷基、（c=o)aob_ 芳基、（c=o)aob(c2-c10)烯基、

〇 (C=O)aOb(C2-C10)炔基、C02H、鹵素、〇H、OdCi-Cd全氟烷基、（00)aNR7R8、CN、（C=0)a0b(C3-C8)環烷基、 S(0)2NR7R8、SH、SCCOHCVCw)烷基及（c=o)a〇b_雜環基，該烷基、芳基、烯基、炔基、環烷基及雜環基視情況經（CrC〗。)烷基、〇H、（CsOXOJCVC,。)烷基、_CH(〇H)CH3、 -CH2-苯基及 _c(CH3)2〇H取代。本發明包括式A化合物之游離形式以及其醫藥上可接受之鹽和立體異構體。本文所例示某些經分離特定化合物係胺化合物之質子化鹽。術語，，游離形式"係指該等胺化合物呈非鹽形式。所涵蓋醫藥上可接受之鹽不僅包括對本文所闌述特定化合物所例示經分離鹽，而且亦包括所有式A化合物游離形式之典型醫藥上可接受之鹽。所闞述特定鹽化合物之游離形式可使用該項技術習知之技術加以分離。舉例而言，該游離形式可藉由用適线性稀水溶液（例如，

NaOH、碳酸鉀、氨及碳酸氫納之稀水溶液）處理該鹽加以再生。該等游離形式與其對應鹽形式在某些物理性質（例如’在極性溶劑中之溶解性）上可能有區別，但對於本發 2目的而言該等酸式及驗式鹽另外在醫藥上等效於應游離形式。 128379.doc •34- 200930365 本發明化合物之醫藥上可接受之鹽可自包含驗性或酸性部分之本發明化合物藉由習知化學方法合成。通常，該等鹼性化合物之鹽可藉由離子交換層析或藉由在適宜溶劑或各種溶劑組合中使該游離驗與化學計量量或與過量形成期望鹽之無機酸或有機酸反應來製備。同樣，該等酸性化合物之鹽可藉由與適宜無機鹼或有機驗 ❹

因此，本發明化合物之醫藥上可接受:來鹽开包成括本發明化合物之習知無毒性鹽，如藉錢性本發明化合物與無機酸或有機酸反應所形成者。舉例而言，f知無毒性鹽包括彼等衍生自諸如氫氣酸、氫漠酸、硫酸、胺基續酸、碟酸、确酸及諸如此類等無機酸者以及自諸如乙酸、丙酸、號拍酸、經基乙酸、硬脂酸、乳酸、蘋果酸、酒石酸、棒樣酸、抗壞血酸、巴莫酸、馬來酸、羥基馬來酸、苯乙酸、麩胺酸、苯甲酸、水楊酸、對胺苯續酸、2_乙醯氧基笨甲酸、富馬酸、甲苯續酸、甲貌續酸、乙统二續酸、草酸、輕乙績酸、三氟乙酸（TFA)及諸如此類等有機酸製備的鹽。當本發明化合物為酸性時，適宜，，醫藥上可接受之鹽,，係指自醫藥上可接受之無毒鹼（包括無機鹼及有機鹼在内）製備的鹽。源自無機鹼之鹽包括鋁鹽、銨鹽、鈣鹽、銅鹽、鐵鹽、亞鐵鹽、@鹽、錢鹽'猛鹽、二價猛鹽、卸鹽、納鹽、鋅鹽及諸如此類。尤佳者係銨鹽、鈣鹽、鎂鹽、鉀鹽以及鈉鹽。衍生自醫藥上可接受之有機無毒鹼的鹽包括— 級胺、一級胺及二級胺、經取代胺（包括天然經取代胺）、 128379.doc -35- 200930365 環胺以及鹼性離子交換樹脂之鹽，例如，接μ 例如，精胺酸、甜菜鹼、咖啡因、膽鹼、Ν,Ν1-二苄基乙二胺、- 取一匕胺、2-二乙基胺基己醇、2-二甲基胺基乙醇、乙醇胺、_ Χ ° —肢、乙基嗎啉、Ν·乙基六氫吡啶、還原葡糖胺、葡萄糖胺、組胺酸、哈胺（hydrabamine)、異丙基胺、離脍醏雕胺醱、甲基還原葡糖胺、嗎啉、哌嗪、六氫吡啶、聚胺樹脂、普魯卡因 (procaine)、嘌呤、可可鹼、三乙胺、= 一 ^ — τ妝、二丙胺、胺丁三醇等的鹽。 ❹ 上述醫藥上可接丈之鹽及其他典型醫藥上可接受之鹽的製備係由Berg等人更全面地闡述於"pharmaceuticai (J. Scz·.，1977:66:1-19)中。亦應注意：由於在生理條件下本發明化合物之去質子化酸性部分（例如，羧基基團）可為陰離子，且該電子電荷隨後可在内部被經質子化或經烷基化鹼性部分（例如，四級氮原子）之陽離子電荷平衡掉，故該等化合物可潛在地為内鹽或兩性離子。〇用途本發明之化合物係Akt活性抑制劑且因此可用於治療癌症’具體而言，係與Akt活性異常及Akt下游細胞靶標相關之癌症。此等癌症包括但不限於卵巢癌、胰腺癌、乳癌及前列腺癌以及其中腫瘤抑制因子PTEN發生誘變之癌症（包括膠質細胞瘤）（Cheng等人，*SW. (1992) 89:9267-9271; Cheng等人，/Voc. Jcac/. *SW. (1996) 93:3636-3641; Bellacosa 等人，«/. Cawce/- (1995) 128379.doc -36 - 200930365 64.280-285，Nakatani 等人 ’*/· 5/o/· C/zew. (1999) 274. 21528-21532; Graff, Expert. Opin. Ther. Targets (2002) 6(1):103-113 ;及 Yamada和 Araki，《/· Ce// (2001) 114:2375-2382; Mischel及 Cloughesy，Brah Ραί/ζο/· (2003) 13(1):52-61) 〇本文所提供化合物、組合物及方法尤其被視為可用於治療癌症。可藉由本發明之化合物、組合物及方法治療的癌

症包括但不限於：心臟癌：肉瘤（也管肉瘤、纖維肉瘤、橫紋肌肉瘤、脂肪肉瘤）、黏液瘤、橫紋肌瘤、纖維瘤、脂肪瘤及畸胎瘤；肺癌：非小細胞肺癌、支氣管癌瘤（鱗胞癌瘤、未分化之小細胞癌瘤、未分化之大細胞癌瘤、腺癌）、肺泡（細支氣管）癌瘤、支氣管腺癌瘤、肉瘤、淋巴瘤、軟骨錯構瘤、間皮瘤；胃膦癌：食道癌（鱗狀細胞癌瘤、腺癌、平滑肌肉瘤、淋巴瘤）、胃癌(癌瘤、淋巴瘤、平滑肌肉瘤）、胰腺癌（管腺癌、胰島素瘤、胰高血糠素瘤、雷、、泌素瘤、類癌瘤、胰腺瘤）、小腸癌（腺癌、淋巴、类員、成瑪、卡波西氏（Karposi)肉瘤、平滑肌瘤、血管、神經纖維瘤、纖維瘤）、大腸癌（腺癌、管狀腺瘤、絨丰α + 七狀腺瘤、錯構瘤、平滑肌瘤）、結腸癌、結戚直腸癌及古_ 腸癌；生殖泌尿道癌：腎癌（腺癌、威爾斯氏 (Wilm)腫痼镯L腎母細胞瘤]、淋巴瘤、白血病）、膀胱及尿遂癌（鱗狀細妝广、、粑癌瘤、移行細胞癌瘤、腺癌）、前列腺癌（膝癌、肉瘤彳、t 1 _ 睪丸癌（精原細胞瘤、畸胎瘤、胚胎性癌、请胎癌、織Μ .贵 ^ 癌、肉瘤、間質細胞癌瘤、纖維瘤、纖維藤 128379.doc -37- 200930365 瘤、腺瘤樣瘤、脂肪瘤）；肝癌：肝瘤（肝細胞癌）、膽管細胞癌、肝胚細胞瘤、血管肉瘤、肝細胞性腺瘤、血管瘤；骨癌：骨原性肉瘤（骨肉瘤）、纖維肉瘤、惡性纖維組織細胞瘤、軟骨肉瘤、尤因氏（Ewing)肉瘤、惡性淋巴瘤（網狀細胞肉瘤）、多發性骨髓瘤、惡性巨細胞瘤脊索瘤、骨軟骨瘤（骨軟骨性外生骨疣）、良性軟骨瘤、軟骨母細胞瘤、軟骨黏液樣纖維瘤、骨樣骨瘤及巨細胞瘤；神經系統癌症：顱骨癌（骨瘤、血管瘤、肉芽瘤、黃瘤、變形性骨炎）、腦膜癌（腦脊髓膜瘤、腦膜肉瘤、神經膠質瘤病）、腦癌（星形細胞瘤、趙母細胞瘤、神經膠質瘤、室管膜瘤、生殖細胞瘤[松果體瘤]、多形性膠質母細胞瘤、少突神經膠質瘤、神經鞘瘤、成視網膜細胞瘤、先天性腫瘤）、脊髓神經纖維瘤、腦脊髓膜瘤、神經膠質瘤、肉瘤）；埽科癌症：子宮癌（子宮内膜癌）、宮頸癌（子宮頸癌、腫瘤前期子宮頸發育異常）、卵巢癌（卵巢癌瘤[漿液性囊腺癌、黏液性囊腺癌、未分類之癌瘤]、粒層泡膜細胞瘤、塞托利_雷丁氏（Sertoli-Leydig)細胞瘤、無性細胞瘤、惡性畸胎瘤）、外陰癌（鱗狀細胞癌瘤、上皮内癌、腺癌、纖維肉瘤、黑素瘤）、陰道癌（透明細胞癌瘤、鱗狀細胞癌瘤、葡萄狀肉瘤（胚胎性橫紋肌肉瘤）、輸卵管（癌瘤）；血液系統癌症：血癌（骨髓性白血病[急性及慢性]、急性淋巴細胞性白血病、慢性淋巴細胞性白血病、骨髓組織增殖性疾病、多發性骨趙瘤、脊趙發育不良症候群）、何傑金氏（Hodgkin)疾病、非何傑金氏淋巴瘤[惡性淋巴瘤];皮膚癌：惡性黑素 128379.doc -38- 200930365 瘤、基底細胞癌、鱗狀細胞癌、卡波西氏肉瘤、痣（發育異常處）、脂肪瘤、血管瘤、皮膚纖維瘤、瘢痕瘤、牛皮癖；及腎上腺癌：神經母細胞瘤。因此，本文所用術語 "癌性細胞"包括受上述鑑別病況之任一種影響的細胞。可藉由本發明之化合物、組合物及方法治療的癌症包括但不限於：乳癌、前列腺癌、結腸癌、結腸直腸癌、肺癌、非小細胞肺癌、腦癌、睾丸癌、胃癌、胰腺癌、皮廣癌、小腸癌、大腸癌、喉癌、頭及頸癌、口癌、骨癌、肝癌、膀胱癌、腎癌、甲狀腺癌及血癌。可藉由本發明之化合物、組合物及方法治療的癌症包括.乳癌、前列腺癌、結腸癌、卵巢癌、結腸直腸癌、肺癌及非小細胞肺癌。可藉由本發明之化合物、組合物及方法治療的癌症包括：乳癌、結腸癌（結腸直腸癌）及肺癌（非小細胞肺癌）。可藉由本發明之化合物、組合物及方法治療的癌症包括：淋巴瘤及白血病。

Akt信號傳導可調控血管生成之多個關鍵步驟。Shiojima 及 Walsh，Cz>c*.及以.（2002) 90:1243-1250。在文獻中已知可利用jk管生成抑制劑來治療癌症，參見（例如）j. Rak等人 55:4575-4580，1995 及 Dredge 等人，五«.价〇/· JTzer· (2002) 2(8):953-966。在許多癌症及組織類別中已經顯示血管生成於癌症中之作用：乳癌 (G. Gasparini^ A.L. Harris, J. Clin. Oncol., 1995, 13:765- 782; Μ. Toi等人’柳乂 1994，85:1045- 128379.doc ·39· 200930365 1049);膀胱癌瘤（A_J. Dickinson等人，办·义〜】994 74:762-766);結腸癌瘤（L.M. Ellis等人，1996 120(5):871-878);及口腔腫瘤（J.K. Williams等人，j 心％，1994, 168:373-380)。其他癌症包括進行性腫瘤、發狀細胞白血病、黑素瘤、進行性頭及頸癌、轉移性腎細胞癌、非何傑金氏（Non-Hodgkin，s)淋巴瘤、轉移性乳癌、乳腺癌、進行性黑素瘤、胰腺癌、胃癌、膠質細胞瘤、肺癌、卵巢癌、非小細胞肺癌、前列腺癌、小細胞肺癌、腎細胞癌瘤、各種實體瘤、多發性骨髓瘤、轉移性前列腺癌、惡性膠質瘤、腎癌、淋巴瘤、頑固性轉移性疾病、頑固！·生多發性骨髓瘤、宮頸癌、卡波西氏肉瘤、復發性退行性神經膠質瘤、及轉移性結腸癌（Dredge等人，办户州办汍扔0/_ 77^. (2002) 2(8):953_966)。因此，在本申請案中所揭示Akt抑制劑亦可用於治療此等血管生成相關之癌症。 Q 〔經歷新血管形成之腫瘤顯示轉移可能性增加。實際上，血管生成對於腫瘤生長及轉移而言十分重要。（sp. CUnningham，等人㈣，61: 3206_3211 (…1)) Θ此’本中請案所揭示Akt抑制劑亦可用於防止或減少腔瘤細胞轉移。本發月之範圍進—步涵蓋—種治療或預防其中涉及血管生成之疾病的方法，續古、土投/ 對需要此治療之哺乳動物並中二療有效量之本發明化合物。眼睛新生血管性疾病係 P分最終組織損傷可歸因於眼管異常滲入之病 128379.doc 200930365 Ο 〇症的實例（參見WO 00/30651，2000年6月2日公開）。該不期望滲入可能由局部缺血性視網膜病變引起，例如，該局部缺血性視網膜病變係由糖尿病性視網膜病變、早產兒視網膜病變、視網膜靜脈閉塞等或藉由諸如在年齡相關性黃斑變性中所觀測得脈絡膜新血管生成等退化性疾病產生的。因此，藉由投與本發明化合物來抑制血管生長可防止血管滲入且可預防或治療其中涉及血管生成之疾病，例如，眼晴疾病，如視網膜血管生成、糖尿病性視網膜病變、年齡相關性黃斑變性及諸如此類。本發明之範圍進一步涵蓋一種治療或預防其中涉及血管生成之非惡性疾病的方法，該非惡性疾病包括但不限於眼睛疾病（例如，視網膜血管生成、糖尿病性視網膜病變及年齡相關性黃斑變性）、動脈粥樣硬化、關節炎、乾癬、肥胖症及阿兹海默氏症（Alzheimer,s disease)(Dredge等人 ’ ~⑺ 〇_.扪〇/· r〜r· (2002) 2(8):953 966)。在另一實施例中，提供一種治療或預防其中涉及血管生成之疾病的方法，該疾病包括：眼睛疾病（例如，視網膜血管生成、糖尿病性視網臈病變及年齡相關性粥樣硬化、關節炎及乾癬。本發明之範圍進-步涵蓋一種治療諸如再狹窄症、炎症、自身免疫疾病及過敏症/哮喘等過度增殖性病症之方本發明之範圍進一步涵蓋本發明化合物塗覆支架之用途及因此本發明化合物於經塗覆支架上之用it，其用於治療 128379.doc -41 - 200930365 及/或預防再狹窄症（W〇 03/032809)。本發明之範圍進一步涵蓋本發明化合物之用途，其用於治療及/或預防骨關節炎（WO 03/035048)。本發月之範圍進一步涵蓋一種治療高姨島素灰症之方法。本發明之化合物亦可用於製備可用於治療上述疾病（尤其是癌症）之藥物。在本發明之實施例中，本發明化合物係一種選擇性抑制劑，其抑制效能依賴於PH結構域。在此實施例中，該化合物對缺少PH結構域之截短型Akt蛋白呈現活體外抑制活性降低或無活體外抑制活性。在另一實施例中，本發明化合物係選自由Akt 1之選擇性抑制劑、Akt2之選擇性抑制劑及Akt 1和Akt2二者之選擇性抑制劑組成之群。在另一實施例中，本發明化合物選自由Akt 1之選擇性抑 ◎ 制劑、Akt2之選擇性抑制劑、Akt3之選擇性抑制劑及該3 種Akt同型體中兩種之選擇性抑制劑組成之群。在另一實施例中’本發明化合物係所有3種Akt同型體之選擇性抑制劑’但不為經修飾以刪除PH結構域、絞鏈區或刪除PH結構域及絞鍵區二者之此等Akt同型體中1種、2種或所有之抑制劑。本發明進一步係關於一種抑制Akt活性之方法，其包括對需要其之哺乳動物投與醫藥上有效量之本發明化合物。根據標準醫藥實務，本發明之化合物可單獨或與醫藥上 I28379.doc -42- 200930365 包:::)或稀::組合_組合物形式投與，… 等化合物可經口或非經腸投與途徑。肌内腹膜腔内、皮下、直腸及局部投包含活性成份之醫藥組合物可呈適於經 ❹ Ο :如’㈣卜片劑、菱形鍵、水性或油性懸浮液=散如劑或顆粒、乳劑、硬或軟膠囊、或糖漿絲劑。欲經口用之、’且σ物可依照業内已知任—用於製造醫藥組合物之方法來製備JL該等組合物可包含—種或多種選自由甜味橋味齊丨著色劑及防腐劑組成之群的試劑以提供醫藥上美觀且適口之製劑。錠劑包含活性成份與適於製造錠劑且在醫藥上可接受之無毒賦形劑的混合物。舉例而言’此等賦形劑可為（例如）：惰性稀釋劑，例如，碳酸鈣、碳酸鈉、乳糖、磷酸鈣或磷酸鈉；造粒及崩解劑，例如，微晶纖維素、交聯羧曱基纖維素鈉、玉米澱粉或藻酸；黏結劑，例如，澱粉、明膠、聚乙烯吡咯啶酮或阿拉伯膠；及潤滑劑，例如，硬脂酸鎂、硬脂酸或滑石粉。該等錠劑可無包膜或其可藉由已知技術包膜以掩蔽該藥物之令人不愉快之味道或延遲在胃腸道中之崩解及吸收’並藉此提供長時間持續作用。舉例而言，可使用水溶性遮味材料（例如’ m丙基甲基纖維素或羥丙基纖維素）或延時材料（例如’乙基纖維素、乙酸丁酸纖維素）。用於經口使用之調配物亦可作為硬明膠膠囊存在，其中該活性成份與惰性固體稀釋劑（例如’碳酸鈣、磷酸鈣或 128379.doc -43- 200930365 高嶺土）混合. 水溶性載劑(例如:為軟明膠膠囊，其中該活性成份與液體石壤或概視油醇)或油性媒介(例如，花的==液包含與適用於製備水性懸浮液之職形劑混合 ’、此等賦形劑為懸浮劑，例如，羧甲美 4 + 納、甲基纖料mw基纖維素吡咯吩… 基'纖維素、藻酸納、聚乙烯 Ο 〇為諸如自、頁蓍膠及阿拉伯樹膠等；分散劑或潤濕劑可以 (:丨如P磷月9等天然磷脂、或環氧烷與脂肪酸之縮合產物 (:如人聚氡乙歸硬脂酸醋)、或環氧乙燒與長鏈脂肪族醇、〇產物（例如，聚十七伸乙氧基鯨蠟醇）、或環氧乙烧與衍生自脂肪酸與己糖醇之部分醋的縮合產物（例如，聚氧乙稀山梨糖醇單油酸醋)、或環氧乙院與衍生自脂肪酸與己糖醇酐之部分酯的縮合產物(例如，》乙烯山梨醇酐單油酸_)。料水性懸浮液亦可包含—種或多種防腐劑 γ例如，對羥基苯甲酸乙酯或對羥基苯甲酸正丙酯）、一種或多種著色劑、—種或多種橋味劑，及—種或多種甜味劑 (例如，蔗糖、糖精或阿斯巴甜（aspartame))。可藉由將該活性成份懸浮於諸如花生油、撖欖油、芝麻油或椰子油等植物油中或懸浮於諸如液體石蠟等礦物油中來調配油性懸浮液。該等油性懸浮液可包含增稠劑，例如，蜂蠟、硬石蠟或鯨蠟醇。可加入諸如彼等上文所述者等甜味劑及矯味劑以提供適口口服製劑。此等組合物可藉由加入諸如丁基化羥基苯甲醚或α -生育酚等抗氧化劑來保存。 128379.doc •44- 200930365 適於藉由加人水製備水性懸浮液之可分散粉末及顆粒可包含活性成份與分散或潤濕劑、懸浮劑及-種或多種防腐劑之混合物。適宜分散或潤濕劑及懸浮劑藉由彼等已於上中提及者來例不。亦可存在其他賦形劑例如甜味二：味劑以及著色劑。此等組合物可藉由添加諸血酸等抗氧化劑來保存。 :發明之醫藥組合物亦可呈水包油乳劑形式。油相可為植物油（例如，撖欖油或花生油）或礦物油（例如蠕）或該等之混合物。適宜乳化劑可為天然鱗腊（例如，大丑印鱗脂）及衍生自脂肪酸與己糖醇肝之醋或部分醋（例如，山梨醇單油酸酸輯）及該等部分醋與環氧乙炫之縮人產物（例如，聚氧乙稀山梨醇酐單油酸醋）。該等乳劑亦可包含甜味劑、矯味劑、防腐劑及抗氧化劑。糖漿及酿劑可使用甜味劑（例如，甘油、丙二醇、山梨糖醇或蔗糖）加以調配。該等調配物亦可含有緩和劑、防 ◎ 腐劑、矯味及著色劑及抗氧化劑。該等醫藥組合物可為無菌可注射水性溶液形式。可採用的可接受媒劑及溶劑包括水、林格氏（Ringer,s)溶液及氯化納溶液。該無菌可注射製劑亦可為其中該活性成份溶於油相中之無菌可注射水包油微乳液。舉例而言’可首先將該活性成份溶於大豆油及卵碟脂之混合物中。然後將該油性溶液導入水與甘油混合物中並處理以形成微乳液。該等可注射溶液或微乳液可藉由局部濃注導入患者之血 128379.doc •45· 200930365 流中。或者，可有利地以維持本發明化合物之恆定循環濃度之方式投與該溶液或微乳液。為維持此怪定濃度，可使用持續靜脈内遞送裝置。此裝置之實例為DeUec CADD_ PLUS™ 5400型靜脈内幫浦。該等醫藥組合物可為用於肌内及皮下投與之無菌可注射水性或油質懸浮液形式。此懸浮液可根據已知技術使用彼等已於上文提及之適宜分散或潤濕劑及懸浮劑來調配。無 «可/主射製劑亦可為存於無毒非經腸可接受之 ❹财的無菌可注射溶液或懸浮液，例如，存於M•丁 = 心奋液此外，習慣上採用無菌不揮發油作為溶劑或懸浮介質。任一溫和不揮發油（包括合成甘油單酯或甘油二 a曰）均可用於此目的。此外，在可注射製劑中可使用諸如油酸等脂肪酸。對於該藥物之直腸投與而言，式Α化合物亦可以栓劑形弋投與該等組合物可藉由將該藥物與適宜無刺激賦形劑 ◎ 混合來製備，該賦形劑在常溫下為固體但在直腸溫度下為液體且因而在直腸中融化以釋放該藥物。適宜材料包括可可脂、甘油明膠、氫化植物油、各分子量之聚乙二醇與聚乙二醇之脂肪酸酯的混合物。對於局部使用而言，可使用含式A化合物之乳霜、軟膏、凝膠、溶液或懸浮液等。（對於本申請案而言，局部應用可包括口洗劑及含漱液。）本發明化合物可以鼻内形式藉由局部使用適宜鼻内媒劑及遞送裝置來投與，或使用彼等熟習該項技術者熟知之經 128379.doc • 46 - 200930365 皮皮膚貼片形式藉由經皮途徑投與。當然，對於以經皮遞送系統形式投藥而言，整個劑量方案投與之劑量應為連續而非間歇的。本發明之組合物亦可作為栓劑遞送，該栓劑採用諸如可可油、甘油明膠、氫化植物油、各種分子量之 1乙一醇與聚乙二醇之脂肪酸酯的混合物等基質。當本發明之組合物投與人類受試者時，曰劑量經常由處方醫師確定’該劑量通常視各患者之年齡、重量及反應以及患者症狀之嚴重程度而有所變化。可根據各種因素選擇使用本發明化合物之劑量方案，該專因素包括.患者之體型、物種、年齡、重量、性別及所治療癌症之類型；欲治療癌症之嚴重程度（即，階段）；投與途徑；患者之腎及肝功能；及所用具體化合物或其鹽。一般醫師或獸醫可容易地確定及處方治療疾病（例如，預防、完全或部分限制或阻止疾病發展）所需藥物之有效量。舉例而言，本發明化合物可以至多1〇,〇〇〇毫克之總日劑量投與。本發明化合物可每日一次（QD)投與，或分成若干曰劑量（例如，每日兩次（BID)及每日三次（TID))投與。本發明化合物可以至多1〇,〇〇〇毫克（例如，2,00〇毫克、 3,000毫克、4,000毫克、6,000毫克、8,000毫克或1〇,〇〇〇毫克）之總日劑量投與，其可以一個日劑量投與或可如上所述分成若干日劑量。舉例而言’本發明化合物可以至多1 〇〇〇毫克之總日劑量投與。本發明化合物可每日一次（QD)投與，或分成若干日劑量（例如’每日兩次（BID)及每曰三次（TID))投與《本發 128379.doc -47· 200930365 明化合物可以至多1，000毫克（例如，2〇〇毫克、3〇〇毫克、 400毫克、600毫克、8〇〇毫克或1〇〇〇毫克）之總日劑量投與，其可以一個日劑量投與或可如上所述分成若干曰劑量。此外，可以連續（即，每天）或間歇方式投與。本文所用術語”間歇"或"間歇地"意指以有規律或無規律間隔停止及開始。舉例而言，本發明化合物之間歇投藥可為每週投與 1天至6天，或其可意指按週期投與（例如，每天投與持續2 至8個連續週，然後是至多丨週之無投與停藥期）或其可意指隔日投與。此外，根據上述任一日程表，本發明化合物可連續投與數週，隨後是停藥期。舉例而言，根據上述任一日程表，本發明化合物可投與2至8週，隨後是1週停藥期，或以1〇〇至500毫克之日劑量每日投與兩次，一週投與3至5天。在另一具體實施例中，本發明化合物可每天投與三次達2個連續週’然後停藥1週。本發明化合物之任一或多個特定劑量及劑量曰程表亦可用於任一種或多種用於該組合治療之治療劑（在下文中稱作"第二治療劑·’）。而且，該第二治療劑之特定劑量及劑量日程表可進一步- 改變，且應根據所用特定第二治療劑來確定最佳劑量、劑量曰程表及投與途徑。當然，本發明化合物之投與途徑與該第二治療劑之投與途徑無關。在一實施例中，本發明化合物之投與係經口投 128379.doc -48- 200930365 與。在另一實施例中，本發明化合物之投與係靜脈内投與。因此，根據該等實施例，本發明化合物可經口或靜脈内投與，且該第二治療劑可經口服、非經腸、腹膜腔内、靜脈内、動脈内、經皮、經舌下、肌内、直腸、經口腔、鼻内、脂質體、經由吸入、陰道、眼内、藉由導管或血管内支架局部遞送、皮下、脂肪内、關節内、鞘内、或以緩釋劑量形式投與。此外本發明化合物與第二治療劑可藉由相同的投與模式投與，即，兩種藥劑均（例如）經口、經由IV投與。然而，藉由一種投與模式（例如，口服）投與本發明化合物且藉由另一投與模式（例如，IV或任何其他上文所闞述之投與模式）投與該第二治療劑亦在本發明之範圍内。第一治療方案（本發明化合物之投與）可在第二治療方案 (即，第二治療藥劑）之前、在用該第二治療劑治療之後、在用該第二治療劑進行治療的同時實施，或本發明化合物 ◎ 與該第二治療藥劑組合投與。舉例而言，可確定本發明化合物之總治療期。該第二治療劑可在用本發明化合物開始 /口療之刖或在用本發明化合物治療之後投與。另外，抗癌治療可在投與本發明化合物期間投與但不必在本發明化合物之整個治療期間出現。本發明化合物亦可與治療劑、化學治療劑或抗癌劑組合使用。本發明所揭示化合物與治療劑、化學治療劑及抗癌劑之組合屬於本發明之範圍。該等藥劑之實例可在ν τ. Devita^S. UeUman^ ^ Cancer Principles and Practice 128379.doc -49· 200930365 〇/〇⑽—（第6版，2001年2月15日），u沖w仙嶋 ^WUkins PuMishers中發現。普通技術人員應能夠根據該等樂物之具體特性及所涉及癌症辨別出可使用哪種藥劑組合。此等藥劑包括下列：雖激素受體調節劑、雄激素受體調節劑、類視色素受體調節劑、細胞毒性/細胞生長抑制劑、抗增殖劑、異戊二烯基_蛋白轉移酶抑制劑、hmg_ C〇A還原酶抑制劑及其他血管生成抑制劑、聊蛋白酶抑制劑、逆轉錄酶抑制劑、細胞增殖及存活信號傳導之抑制劑、雙膦酸鹽類、芳香酶抑制劑、siRNA治療劑、丫_分泌酶抑制劑、干擾受體酪胺酸激酶（RTK)之藥劑及干擾細胞週期檢查點之藥劑。本發明化合物在與輻射療法共同施用時尤其有用。雌激素受體調節劑"係指干擾或抑制雌激素與受體結合 (與作用機制無關）之化合物。雌激素受體調節劑之實例包括但不限於他莫昔芬（tamoxifen)、雷洛昔芬（ral〇xifene)、〇艾多昔芬（id〇xifene)、LY353381、LY1 17081、托瑞米芬 (toremifene)、氟維司群（fuivestrant)、4_[7_(2,2-二曱基 _ι· 氧代基丙氧基-4-曱基-2·[4-[2-(1-六氫》比啶基）乙氧基]苯基]-2/iM-苯并吡喃_3_基]_苯基_22·二甲基丙酸酯、44,_二經基二苯基酮-2,4-二硝基苯基-腙及SH646。 "雄激素受體調節劑，，係指干擾或抑制雄激素與受體結合 (與作用機制無關）之化合物。雄激素受體調節劑之實例包括非那雄胺（finasteride)及其他5α-還原酶抑制劑、尼魯米特（nilutamide)、氟他胺（fiutamide)、比卡魯胺（bicalutamide)、 128379.doc •50- 200930365 利阿唑（liarozole)及乙酸阿比拄 rj 匕将龍（abiraterone acetate)。 "類視色素受體調節劑”#彳I I i + 4 Λ J货、&干擾或抑制類視色素與受體結合（與作用機制無關）之化人 ;化0物。此等類視色素受體調節劑之實例包括貝沙羅汀（bexarnte 、 ^ * N U3exarotene)、維八酸扣⑷⑽⑻、 U-順式-視黃酸、9-順式·視黃酸、&二免甲基鳥胺酸、 ILX23-7553、反式4(4,.經基笨基）視黃酿胺、及林叛基苯基視黃酿胺。

Ο "細胞毒性/細胞生長抑制劑”係指主要藉由直接干擾該細胞之機能或者抑制或干擾細胞有絲分裂而導致細胞死亡或抑制細胞增殖的化合物，其包括烷基化劑、腫瘤壞死因子、嵌入劑、低氧可活化化合物、微管抑制劑/微管穩定劑、有絲分裂驅動蛋白之抑制劑、組蛋白脫乙醯酶抑制劑、有絲分裂進程中所涉及激酶之抑制劑、生長因子及細胞因子信號轉導途徑中所涉及激酶之抑制劑、抗代謝物、生物反應調節劑、激素/抗激素類治療劑、造血生長因子、單株抗體靶向治療劑、拓撲異構酶抑制劑、蛋白酶體抑制劑、泛素連接酶抑制劑及aurora激酶抑制齊j。細胞毒性/細胞生長抑制劑之實例包括但不限於塞特那 (sertenef)、惡病質素（cachectin)、異環碟酿胺 (ifosfamide)、他索那明（tasonermin)、氣尼達明 (lonidamine)、卡始、六甲嘯胺（altretamine)、潑尼莫司、、丁 (prednimustine)、二溴衛矛醇（di 漠 dulcitol)、雷莫司、γ (ranimustine)、福莫司’汀(fotemustine)、奈達 g (nedaplatin)、奥沙利翻（oxaliplatin)、替莫β坐胺、庚麵 128379.doc 51 200930365 (heptaplatin)、雌莫司汀（estramustine)、托西英丙舒凡 (improsulfan tosilate)、曲填胺（trofosfamide)、尼莫司 >'丁 (nimustine)、二漠螺氯敍（dibrospidium chloride)、嗓喷替派（pumitepa)、樂始（lobaplatin)、沙始（satraplatin)、普飛諾黴素（profiromycin)、順鈾（cisplatin)、伊羅夫文 (irofulven)、右異環填醯胺（dexifosfamide)、順式-胺二氣 (2-曱基比咬）始、节基鳥嗓呤、麥確酿胺（glufosfamide)、 GPX100、四氣化（反，反，反）-雙-μ·(己烷-1，6-二胺）-μ·[二胺-鉑（II)]雙[二胺（氯）鉑（II)]、二阿裏西叮基精胺（diarizidinyl spermine)、三氧化二砷、1-(11-十二烧基胺基-10-經基十一烷基）-3,7-二甲基黃嘌呤、佐柔比星（zorubicin)、伊達比星（idarubicin)、柔紅黴素（daunorubicin)、比生群 (bisantrene)、米托蒽 S昆（mitoxantrone)、0比柔比星 (pirarubicin) 、°比萘非特（pinafide)、伐蘆比星 (valrubicin)、氨柔比星（amrubicin)、抗贅瘤物、3·-去胺基-3’-嗎啉基-13-脫氧-10-羥基洋紅黴素、脂質體蒽環黴素 (annamycin)、加蘭柔比星（galarubicin)、依利奈法德 (elinaHcie)、MEN10755、4-去甲氧基-3-去胺基-3-氮丙啶基-4-曱基磺醯基-柔紅黴素（參見WO 00/50032)、Raf激酶抑制劑（例如，Bay43-9006)及mTOR抑制劑（例如，Wyeth's CCI-779) 〇低氧可活化化合物之實例係替拉紮明（tirapazamine)。蛋白體抑制劑之實例包括但不限於乳胞素及MLN-341 (Velcade)。 128379.doc -52- 200930365 微管抑制劑/微管-穩定劑之實例包括紫杉醇、硫酸長春地辛（vindesine sulfate)、3’，4'-二脫氫-4，-脫氧-8，-去甲長春驗、多西紫杉醇（docetaxol)、根黴素（rhizoxin)、多拉司他汀（dolastatin)、羥乙磺酸米伏布林（miv〇buiin isethionate)、奥裏斯他汀（auristatin)、西馬多丁 (cemadotin) 、1^1^09881 、BMS184476 、長春氟寧 (vinflunine)、克利特非辛（crypt〇phycin)、2,3,4,5,6-五 I _ N-(3-氟-4-甲氧基苯基）苯磺醯胺、脫水長春花鹼 ® (anhydrovinblastine)、#,#-二甲基-L·纈胺醯基-L-纈胺醯基-Ν-曱基-L-纈胺醯基-L-脯胺酿基-L-脯胺酸·第三·丁· 胺、TDX258、埃坡黴素（epothilone)(參見，例如，美國專利第 6,284,781 號及第 6,288,237 號）及 BMS188797。在一實施例中，微管抑制劑/微管-穩定劑不包括埃坡黴素。拓撲異構酶抑制劑之某些實例係拓撲替康、 hycaptamine、伊立替康、魯比替康（rubitecan)、6-乙氧基丙醢基- 3'，4'-0-外-亞苄基-教酒菌素（chartreusin)、9 -曱氧基-iV，#-二甲基-5-硝基吡唑并[3,4,5-kl]吖啶-2-(6/〇丙胺、 1-胺基-9-乙基-5-氟-2,3-二氫-9-羥基-4-甲基-1丑,12孖-苯并 [de]吡喃并[3’，4’:b，7]-吲嗪並[1,2b]喹啉-1〇，13(9/ί，15/〇二酮、勒托替康（lurtotecan)、7-[2-(#-異丙基胺基）乙基]-(20S)喜樹驗、BNP1350、BNPI1100、BN80915、 BN80942、磷酸依託泊苦（etoposide phosphate)、替尼泊苦 (teniposide)、索布佐生（sobuzoxane)、2’-二甲基胺基-2，-脫氧-依託泊苷、GL331、沁[2-(二曱基胺基）乙基]-9-羥基- 128379.doc -53 - 200930365 5,6-二甲基-6//-0比咬并[4,3-1)]叶''1坐-1-甲酿胺、&8111&。14116、 (5&，5&3,8&&，91))-9-[2-[#-[2-(二曱基胺基）乙基]-#-甲基胺基]乙基]-5-[4-羥基-3,5-二甲氧基苯基]-5,5江，6,8,8社,9-六氫呋喃并（3’,4’:6,7)萘并（2,3-d)-l，3-二氧雜環戊二烯-6-酮、 2,3-(亞曱基二氧基）-5-曱基-7-羥基-8-甲氧基苯并[c]-菲啶銪、6,9-雙[(2-胺基乙基）胺基]苯并[g]異喹啉-5,10-二酮、 5-(3-胺基丙基胺基）-7,10-二羥基-2-(2-羥基乙基胺基甲基）-6/f-吡唑并[4,5，l-de]吖啶-6-酮、#-[1-[2(二乙基胺基）乙基胺基]-7-甲氧基_9-氧代基-9H-噻噸-4-基甲基]甲醯胺、#-(2-(二曱基胺基）乙基）吖啶-4-甲醯胺、6-[[2-(二甲基胺基）乙基]胺基]-3·羥基-7//-茚并[2，l-c]喹啉-7·酮、及地美司鈉 (dimesna)

有絲分裂驅動蛋白（且具體而言，係人類有絲分裂驅動蛋白KSP)之抑制劑的實例闡述於公開案WO 03/039460、 WO 03/050064 ' WO 03/050122 ' WO 03/049527 ' WO 03/049679 、WO 03/049678 、 WO 04/039774 、WO 03/079973 、WO 03/099211 ' WO 03/105855 、WO 03/106417 、WO 04/037171 、 WO 04/058148 、WO 04/058700 、WO 04/126699 、 WO 05/018638 、WO 05/019206 、WO 05/019205 、 WO 05/018547 、WO 05/017190 、US2005/0176776 中。在一實施例中，有絲分裂驅動蛋白之抑制劑包括但不限於KSP之抑制劑、MKLP1 之抑制劑、CENP-E之抑制劑、MCAK之抑制劑及Rab6-KIFL之抑制劑。 128379.doc • 54- 200930365 ••組蛋白脫乙醯酶抑制劑"之實例包括但不限於SAHA、 TSA、oxamflatin、PXD101、MG98 及 scriptaid。另外提及的其他組蛋白脫乙醯酶抑制劑可發現於下列原稿中： Miller， T.A.等人，·/. MW. Chem. 46(24):5097-5116 (2003)。 "有絲分裂進程中所涉及激酶之抑制劑"包括但不限於 aurora激酶之抑制劑、Polo樣激酶（PLK)之抑制劑（具體而言，係PLK-1之抑制劑）、bub-1之抑制劑及bub-Rl之抑制劑。"aurora激酶抑制劑"之實例係VX-680。 "抗增殖劑"包括反義RNA及DNA募核苷酸類，例如， G3139、ODN698、RVASKRAS、GEM231、及 INX3001 ; 及抗代謝物，例如，依諾他濱（enocitabine)、卡莫氟 (carmofur)、替加氟（tegafur)、喷司他丁（pentostatin)、去氧 II 尿普（doxifluridine)、三甲曲沙（trimetrexate)、氟達拉濱（fludarabine)、卡培他濱（capecitabine)、加洛他濱 (galocitabine)、阿糖胞普十八烧基填酸納（cytarabine ocfosfate)、（fosteabine sodium hydrate)、雷替曲塞 (raltitrexed)、（paltitrexid)、乙嘲替氟（emitefur)、嘆吐0夫林（tiazofurin)、地西他濱（decitabine)、諾拉曲塞（nolatrexed)、培美曲塞（pemetrexed)、奈拉濱（nelzarabine)、2'-脫氧-2·-亞曱基胞苷、2·-氟亞曱基-2’-脫氧胞苷、^[5-(2,3-二氫-苯并呋喃基）磺醯基]-7VM3,4-二氣苯基）脲、#6-[4-脫氧-4-[#2-[2(E)，4(E)-十四碳二烯醯基]甘胺醯基胺基]-L-丙三氧基-B-L-甘露-七》比味糖基]腺嗓吟、aplidine、海勒素 128379.doc -55- 200930365 (ecteinascidin)、曲沙他濱（troxacitabine)、4-[2-胺基-4-氧代基-4,6,7,8 -四氮-3//-癌咬并[5,4-1)][1，4]0塞 °秦-6-基- (tS)-乙基]-2,5-噻吩基-L-麩胺酸、胺基蝶呤、5-氟尿嘧啶、阿拉諾新（alanosine)、11-乙醯基-8-(胺甲酿氧基甲基）-4-曱醯基-6-甲氧基-14·氧雜基-1，11-二氮雜四環并（7.4.1.0.0)-十四碳-2,4,6-三稀-9-基乙酸酯、苦馬豆素（8评&丨11801^116)、洛美曲索（lometrexol)、右雷佐生（dexrazoxane)、甲硫胺酸酶、2'-氰基-2’-脫氧-iV4-棕櫚醯基呋喃阿糖基胞嘧〇咬及3-胺基吡啶-2-曱醛縮胺基硫脲及曲司佐單抗 (trastuzumab)。單株抗體靶向治療劑之實例包括彼等具有與癌細胞特異性或靶細胞特異性單株抗體連接之細胞毒性因子或放射性同位素的治療劑。實例包括百克沙（Bexxar)。 "HMG-CoA還原酶抑制劑”係指3-羥基-3-甲基戊二醯基-CoA還原酶之抑制劑。可使用的HMG-CoA還原酶抑制劑之實例包括但不限於洛伐他汀（l〇vastatin)(MEVACOR® ;參〇見美國專利第4,231,938號、第4,294,926號及第4,319,039 號）、辛伐他汀（simvastatin)(ZOCOR® ;參見美國專利第 4,444,784號、第4,820,850號及第4,916,239號）、普伐他汀 (pravastatin)(PRAVACHOL® ;參見美國專利第 4,346,227 號、第 4,537,859號、第 4,410,629號、第 5,030,447號及第 5，180,589號）、氟伐他汀（fluvastatin)(LESCOL® ;參見美國專利第 5,354,772號、第 4,911，165號、第 4,929,437 號、第 5，189，164 號、第 5,1 18,853 號、第 5,290,946 號及第 128379.doc -56 - 200930365 5,356,896號）、阿托伐他汀（atorvastatin)(LIPITOR®;參見美國專利第5,273,995號、第4,681,893號、第5,489,691號及第5,342,952號）及西立伐他汀（〇61^&81&“11)(亦稱作瑞伐他汀（rivastatin)及BAYCHOL® ;參見美國專利第5,177,080 號）。可用於本發明方法之此等及其他HMG-CoA還原酶抑制劑之結構式闡述於 M. Yalpani, "Cholesterol Lowering Drugs”，C/zemisiry & 少，第 85-89 頁（1996年 2 月 5 曰）之第87頁及美國專利第4,782,084號及第4,885,314號中。本〇文所用術語HMG-CoA還原酶抑制劑包括具有HMG-CoA還原酶抑制活性之化合物的所有醫藥上可接受之内酯及開環酸形式（即，其中内酯環打開以形成游離酸）以及鹽和酯形式，且因此此等鹽、酯、開環酸及内酯形式之使用屬於本發明之範圍。 "異戊二烯基-蛋白轉移酶抑制劑"係指一種可抑制任一種或任一組合的異戊二烯基-蛋白轉移酶酵素之化合物，包括法呢基-蛋白轉移酶（FPTase)、I型尨牛兒基尨牛兒基-蛋白轉移酶（GGPTase-I)、及II型尨牛兒基尨牛兒基-蛋白轉移酶（GGPTase-II，亦稱為RabGGPTase)。異戊二烯基-蛋白轉移酶抑制劑之實例可發現於下列公開案及專利中：WO 96/30343、WO 97/18813、WO 97/21701、WO 97/23478、WO 97/38665、WO 98/28980、 WO 98/29119、WO 95/32987、美國專利第 5,420,245 號、美國專利第5,523,430號、美國專利第5,532,359號、美國專利第5,510,510號、美國專利第5,589,485號、美國專利第 128379.doc •57- 200930365 5,602,098號、歐洲專利公開案0 618 221、歐洲專利公開案 0 675 112、歐洲專利公開案0 604 181、歐洲專利公開案 0 696 593、WO 94/19357、WO 95/08542、W0 95/11917、 WO 95/12612、WO 95/12572、W0 95/10514、美國專利第 5,661，152 號、WO 95/10515 、WO 95/10516 、W0 95/24612、WO 95/34535、WO 95/25086、WO 96/05529、 WO 96/06138、WO 96/06193、WO 96/16443、WO 96/21701 > WO 96/21456 ' WO 96/22278 ' W0 96/24611 ' 〇 WO 96/24612、WO 96/05168、WO 96/05169、W0 96/00736、美國專利第 5,571,792 號、WO 96/17861、WO 96/33159、WO 96/34850、WO 96/34851、W0 96/30017、 WO 96/30018、WO 96/30362、WO 96/30363、WO 96/31111、WO 96/31477 ' WO 96/31478、W0 96/31501、 WO 97/00252、WO 97/03047、WO 97/03050、WO 97/04785、WO 97/02920、WO 97/17070、W0 97/23478、 WO 97/26246、WO 97/30053、WO 97/44350、WO 98/02436、及美國專利第5,532,359號。對於異戊二烯基-蛋白轉移酶抑制劑對血管生成作用之實例，可參見五wropeaw X 〇/ Cawcer，第 35 卷，No· 9，第 1394-1401 頁 (1999)。 ”血管生成抑制劑"係指可抑制新穎血管形成（與作用機制無關）之化合物。血管生成抑制劑之實例包括但不限於諸如酪胺酸激酶受體 Flt-1 (VEGFR1)及 Flk-l/KDR (VEGFR2) 之抑制劑等酪胺酸激酶抑制劑、表皮源、纖維母細胞源或 128379.doc -58 - 200930365 血小板源生長因子之抑制劑、MMP (基質金屬蛋白酶）抑制劑、整合素阻斷劑、干擾素-α、介白素-12、多硫酸戊聚糖酯（pentosan polysulfate)、環氧合酶抑制劑，包括非類固醇抗炎劑（NSAID)(如阿司匹林（aspirin)及布洛芬 (ibuprofen))以及選擇性環氧合酶-2抑制劑（如塞利西蔔 (celecoxib)及羅非考昔（rofecoxil^KPAMS，第 89 卷，第 7384 頁（1992); ·/#(：/，第 69 卷，第 475 頁（1982); Jrd ，第 108卷，第 573 頁（1990); ，第 238 〇卷，第 68 頁（1994); ，第 372 卷，第 83 頁 (1995); C7/«, Ori/iop.第 313 卷，第 76 頁（1995); J. Mo/. Endocrinol.，第 Ί6卷，第 1071 (1996); Jpn. J. Pharmacol. ’ 第 75卷，第 105 頁（1997); Ca加π ’ 第 57卷，第 1625 頁 (1997); Ce//，第 93 卷，第 705 頁（1998); /W/. ·/. Mo/. MeA，第 2卷，第 715 頁（1998); ·/·价〇/. CTzew.，第 274卷，第9116頁（1999))、類固醇抗炎劑（例如，皮質類固醇、鹽皮質激素、地塞米松（dexamethasone)、潑尼松〇

(prednisone)、潑尼松龍（prednisolone)、甲潑尼龍、倍他米松（betamethasone))、甲醯胺三0坐、康布瑞塔卡汀八-4(combretastatinA-4)、角鯊胺、6-0 -氣乙酿基-幾基）-煙麯黴醇（fumagillol)、沙立度胺（thalidomide)、血管抑制素、肌鈣蛋白-1、血管緊張素II拮抗劑（參見Fernandez等人，, C/z>z. Me 汰 105:141-145 (1985))及 VEGF之抗體（參見 iVaiwre Sioiec/zwo/ogY，第 17 卷，第 963-968 頁（1999 年 10 月）；Kim 等人，3W，841-844 (1993) ; WO 128379.doc -59- 200930365 00/44777，·及 W〇〇〇/61186)。可調咸或抑制血管生成且亦可與本發明化合物組合使用 U 療劑包括可調節或抑制凝固及纖維蛋白溶解系統之藥幻（參見 C7m, CTzew. Ζβ.从“ 38:679_692 (2〇〇〇))。可或抑制凝固及纖維蛋白溶解途徑之此等藥劑的實例包不限於肝素（參見㈣8〇:1〇23(1998))、低刀子量肝素及羧肽酶U抑制劑（亦稱作活性凝血酶可活化纖維蛋白溶解抑制因子[TAFIa]之抑制劑）（參見〜細’ 101.329-3 54 (2001))。丁纽&抑制劑已闡述於美國專利第60/3 10,927號（2001年8月8日提出申請）及第6〇/349,925 號（2002年1月18曰提出申請）中。干擾細胞週期檢查點之藥劑”係指可抑制轉導細胞週期 k查點彳5號之蛋白激酶，藉此致使癌細胞對DNA損害劑敏感的化合物。此等藥劑包括ATR、ATM、CHK11及CHK12 激酶之抑制劑及CDK和CDC激酶抑制劑且其具體實例為ΤΟ 羥基星形孢菌素 '夫拉平度（flav〇pirid〇l) 、 cyc2〇2 (Cyclacel)及 BMS-387032。 ”干擾受體酪胺酸激酶（RTK)之藥劑"係指可抑制rtk及因此腫瘤生成和腫瘤發展所涉及機制的化合物。此等藥劑包括c-KU、Eph' PDGF、Flt3 及c_MeR抑制劑。其他= 劑包括RTK之抑制劑，如由Bume_Jensen及…在 41 1:355-365, 2001 中所述。 ”細胞增殖及存活信號傳導途徑之抑制劑”係指可抑❸ 胞表面受體下游信號轉導通路之化合物。此等藥劑包括: 128379.doc -60· 200930365 胺酸/蘇胺酸激酶之抑制劑（包括但不限於Akt之抑制劑，例如，闡述於 WO 02/083064、WO 02/083139、WO 02/083140、US 2004-0116432、WO 02/083138、US 2004-

0102360 、 WO 03/086404 ' WO 03/086279 、 WO 03/086394 、 WO 03/084473 、WO 03/086403 、 WO 2004/041162 、WO 2004/096131、WO 2004/096129 ' WO 2004/096135 、WO 2004/096130、WO 2005/100356 、 WO 2005/100344 、US 2005/029941 ' US 2005/44294 、 US 〇 2005/43361、60/734188、60/652737、60/670469 中者）、 Raf激酶之抑制劑（例如，BAY-43-9006)、MEK之抑制劑 (例如，CI-1040及PD-098059)、mTOR之抑制劑（例如， WyethCCI-779)及 PI3K之抑制劑（例如，LY294002)。如上文所述，與NSAID之組合係與作為強效COX-2抑制劑之NS AID的用途有關。對於本說明書而言，倘若NSAID 對COX-2抑制具有ΙμΜ或更小之IC5G(如藉由細胞或微粒體分析量測得），則該NSAID係強效的。〇 W 本發明亦涵蓋與作為選擇性COX-2抑制劑之NSAID的組合。對於本說明書而言，將作為COX-2之選擇性抑制劑的 NSAID定義為彼等與對COX-1抑制特異性相比對COX-2具有至少100倍抑制特異性的物質，該抑制特異性藉由細胞或微粒體分析所評定COX-2之IC5〇與COX-1之IC5Q的比例量測。此等化合物包括但不限於彼等揭示於下列專利中者：美國專利5,474,995、美國專利5,861，419、美國專利 6,001，843、美國專利 6,020,343、美國專利 5,409,944、美 128379.doc -61 - 200930365 國專利5,436,265、美國專利5,536,752、美國專利 5,550，142、美國專利 5,604,260、美國專利 5,698,584、美國專利 5,710，140、WO 94/15932、美國專利 5,344,991、美國專利5，134，142、美國專利5,38〇,738、美國專利 5,393,790、美國專利5,466,823、美國專利5,633,272及美國專利5,932,598 ’所有該等案件均以引用方式併入本文中。尤其可用於本發明治療方法之COX-2的抑制劑係：3 -苯基-4-(4-(曱基磺醯基）苯基）-2-(5//)-呋喃酮；及 5-氣-3-(4-甲基續醯基）苯基_2-(2-甲基-5-°比咬基）〇比咬；或其醫藥上可接受之鹽。作為COX-2特異性抑制劑闡述且因此可用於本發明之化合物包括但不限於下列：帕瑞考昔（parec〇xib)、 BEXTRA®及CELEBREX®或其醫藥上可接受之鹽。血管生成抑制劑之其他實例包括但不限於血管内皮抑素、ukrain、豹娃酶（ranpirnase)、IM862、5·甲氧基·4-[2-甲基-3-(3-甲基-2-丁烯基）環氧乙烷基]-i_氧雜螺[2,5]辛_6_ 基（氣乙醯基）胺基甲酸酯、乙醯基地那林 (acetyldinanaline)、5·胺基-卜叮％% 二氣 _4_(4-氣苯甲醯基）苯基]曱基]-1丑-1，2,3-三唑-4-甲醯胺、CM101、角驚胺、康布瑞塔卡汀（combretastatin)、RPI4610、NX3 1838、硫酸化甘露戊糖磷酸鹽、7,7-(羰基-雙[亞胺基-ΛΓ-甲基-4,2-吡咯基羰基亞胺基[iV·曱基-4,2-»比洛]-羰基亞胺基]_雙_(ι,3-萘二磺酸酯）、及3-[(2,4-二甲基吡咯-5-基）亞甲基]_2_吲哚酮 128379.doc •62· 200930365 (SU5416)。如上文所用，”整合素阻斷劑”係指可選擇性地拮抗、抑制或對抗生理配體與ανβ3整合素結合之化合物，可選擇性地拮抗、抑制或對抗生理配體與ανβ5整合素結合之化合物’可拮抗、抑制或對抗生理配體與ανβ3整合素及ανβ5 整合素二者結合之化合物，及可拮抗、抑制或對抗在毛細血官内皮細胞上表現之特殊整合素之活性的化合物。該術語亦指 ανβ6、ανβ8、αΐβΐ、α2β1、α5β1、α6β1 及 α6β4整合素之拮抗劑。該術語亦指ανβ3、ανβ5、ανβ6、ανβ8、 αΐβΐ、α2β1、β5α1、α6β1及α6β4整合素之任一組合的拮抗劑。胳胺酸激酶抑制劑之某些具體實例包括Ν-(三氟甲基苯基）-5-甲基異噁唑-4-甲醯胺、3-[(2,4-二甲基吡咯-5-基）亞甲基）吲哚-2-酮、17-(烯丙基胺基）-17-去甲氧基格爾德黴素、4-(3-氣-4-氟苯基胺基）-7-甲氧基_6·[3-(4_嗎啉基）丙氧基]喧唾啉、#-(3-乙炔基苯基）-6,7-雙（2-曱氧基乙氧基）-4-喧唾啉胺、BIBX1382、2,3,9，10，11，12-六氫-10-(羥基甲基）-10-羥基-9-甲基-9,12-環氧基-1//·二吲哚并[1，2,3-fg:3’，2'，l’-kl] 比咯并[3,4-i][l，6]苯并二氮雜環辛-1-酮、 SH268、染料木黃酮（genistein)、STI571、CEP2563、4-(3-氣苯基胺基）-5,6-二甲基-7/f-吡咯并[2,3-d]嘧啶甲烷磺酸酯、4-(3-溴-4-羥基苯基）胺基-6,7-二甲氧基喹唑啉、4-(4，-羥基苯基）胺基-6,7-二甲氧基喹唑啉、SU6668、 STI571A、ΛΓ-4-氣苯基-4-(4-吡啶基甲基）_1_呔嗪胺、及 128379.doc • 63 - 200930365 EMD121974。

本發明方法亦涵蓋與除抗癌化合物外之化合物的組合。舉例而言，本發明所主張化合物與PPAR-γ (即，PPAR-gamma)激動劑及PPAR-δ (即，PPAR-delta)激動劑之組合可用於治療某些惡性腫瘤。PPAR-γ及PPAR-δ係經核過氧化物酶體增殖子活化之受體γ及δ。PPAR-γ在内皮細胞上之表現及其在血管生成中之參與已經報道於文獻中（參見·/· Cardiovasc. Pharmacol. (1998) 31:909-913; J. Biol. Chem. (1999) 274:91 16-9121; Invest. Ophthalmol Vis. Sci. (2000) 41:2309-2317)。最近，已經證實PPAR-γ激動劑在活體内可抑制VEGF之血管生成反應；曲格列酮（troglitazone)及羅格列_ (rosiglitazone)馬來酸鹽二者在小鼠中均可抑制視網膜新血管形成的發展。（Jrc/i. Op/zi/iawo/. 2001; 1 19:709-717)。PPAR-γ激動劑及PPAR- γ/α激動劑之實例包括但不限於噻唑啶二酮類（例如，DRF2725、CS-011、曲格列酮、羅格列嗣、及0比格列_ (pioglitazone))、非諾貝特 (fenofibrate) > 吉非貝齊（gemfibrozil)、氣貝丁酯 (clofibrate) > GW2570 ' SB219994 ' AR-H039242 ' JTT-501、MCC-555、GW2331、GW409544、NN2344、 KRP297、NP0110、DRF4158、NN622、GI262570、 PNU182716、DRF552926、2-[(5,7-二丙基-3-三氣甲基-1，2-苯并異噁唑-6-基）氧基]-2-曱基丙酸（揭示於USSN 09/782,856 中）、及2(i?)-7-(3-(2-氣-4-(4-氟苯氧基）苯氧基）丙氧基）-2-乙基苯并二氫《比喃-2-甲酸（揭示於USSN 128379.doc •64· 200930365 60/235,708及 60/244,697 中）°

本發明之另一實施例係本發明所揭示化合物與用於癌症治療之基因療法之組合的用途。關於治療癌症之基因策略，參見Hall 等人 / 丑 wm Gewei (1997) 61:785-789)及 Kufe 等人（Cawcer ，第 5 版，第 876-889 頁，BC

Decker, Hamilton 2000)。基因治療可用於遞送任一腫瘤抑制基因。此等基因之實例包括但不限於可藉由重組病毒介導之基因轉移遞送的p53(例如，參見美國專利第6,069，134 〇號）、uPA/uPAR拮抗劑（"Adenovirus-Mediated Delivery of a uPA/uPAR Antagonist Suppresses Angiogenesis-Dependent Tumor Growth and Dissemination in Mice,''Gene TTzerapy，August (1998) 5(8):1 105-13)及干擾素 (2000) 164:217-222)。本發明之化合物亦可與固有多重藥物抗性（MDR)之抑制劑組合投與，特定言之，MDR與轉運蛋白之高水平表現有關。此等MDR抑制劑包括p-糖蛋白（P-gp)之抑制劑，例 ^^如，LY335979、XR9576、OC144-093、R101922、VX853 及 PSC833 (伐司朴達（valspodar))。本發明之化合物可結合鎮吐劑單獨或與放射治療一起使用以治療噁心或嘔吐，包括可由本發明化合物使用引起的急性、延遲、後期及期待性嘔吐。為了預防或治療嘔吐，本發明之化合物可結合其他鎮吐劑使用，該等鎮吐劑尤其為神經激肽-1受體拮抗劑、5HT3受體拮抗劑（例如，昂丹司璦（ondansetron)、格拉司瓊（granisetron)、托烧司壤 128379.doc -65- 200930365 (tr〇piSetron)、及紮托司瓊（zatisetron))、GAB AB 受體激動劑（例如’巴氣芬（bacl〇fen))、皮質類固醇（例如，

Decadron (地塞米松）、Kenai〇g、Arist〇cort、Nasalide、

Preferid、Benecorten)或其他（例如，揭示於美國專利第 2,789’118 號、第 2,990,401 號、第 3,048,581 號、第 3，126,375 號、第 3,929,768 號、第 3,996,359 號、第 3,928,326號及第3,749,712號中者）、抗多巴胺劑，例如，吩嗔嗓類（例如’丙氣拉唤（prochlorperazine)、氟奮乃靜 (fluphenazine)、硫利噠嗪（thioridazine)及美索達嗪 (mesoridazine))、曱氧氯普胺（metoclopramide)或屈大麻酚 (dronabinol)。在另一實施例中，揭示選自神經激肽_ 1受體拮抗劑、5HT3受體拮抗劑及皮質類固醇之鎮吐劑的輔助治療以治療或預防可由本發明化合物投藥引起的嘔吐。結合本發明化合物使用的神經激肽-1受體拮抗劑全面地闡述於（例如）美國專利第5，162,339號、第5,232,929號、第 5,242,930 號、第 5,373,003 號、第 5,387,595 號、第 5,459,270 號、第 5,494,926 號、第 5,496,833 號、第 5,637,699號、第5,719,147號；歐洲專利公開案第EP 〇 360 390號、第 0 394 989號、第 0 428 434號、第 0 429 366號、第 0 430 771號、第 0 436 334號、第 0 443 132號、第〇 482 539號、第 0 498 069號、第 0 499 313號、第 0 512 901 號、第 0 512 902號、第 0 514 273號、第〇 514 274號、第〇 514 275號、第 0 514 276號、第 0 5 15 681號、第 0 517 589號、第 0 520 555號、第 0 522 808號、第〇 528 495號、第〇 532 128379.doc -66- 200930365 456號、第 0 533 280號、第 0 536 817號、第 0 545 478號、第 0 558 156號、第 0 577 394號、第 0 585 913號、第〇 590 152號、第 0 599 538號、第 0 610 793號、第 0 634 402號、第 0 686 629號、第 0 693 489號、第 0 694 535號、第〇 699 655號、第 0 699 674號、第 0 707 006號、第 0 708 101 號、第 0 709 375號、第 0 709 376號、第 0 714 891號、第〇 723 959號、第0 733 632號及第0 776 893號；PCT國際專利公開案第 WO 90/05525號、第 90/05729號、第 91/09844號、 ❹ 第 91/18899 號、第 92/01688 號、第 92/06079 號、第 92/12151號、第 92/15585 號、第 92/17449號、第 92/20661 號、第 92/20676 號、第 92/21677 號、第 92/22569 號、第 93/00330號、第 93/00331號、第 93/01159號、第 93/01165 號、第93/01169號、第 93/01170號、第 93/06099號、第 93/09116號、第 93/10073號、第 93/14084號、第 93/14113 號、第93/18023號、第93/19064號、第93/21155號、第 93/21181號、第 93/23380號、第 93/24465 號、第 94/00440 ® 號、第 94/01402 號、第 94/02461 號、第 94/02595 號、第 94/03429號、第 94/03445號、第 94/04494號、第 94/04496 號、第 94/05625 號、第 94/07843 號、第 94/08997 號、第 94/10165號、第 94/10167號、第 94/10168號、第 94/10170 號、第94/11368號、第 94/13639號、第 94/13663號、第 94/14767號、第 94/15903號、第 94/19320號、第 94/19323 號、第94/20500號、第94/26735號、第94/26740號、第 94/29309號、第 95/02595號、第 95/04040號、第 95/04042 128379.doc -67· 200930365 號、第95/06645號、第 95/07886號、第 95/07908號、第 95/08549號、第 95/11880號、第 95/14017號、第 95/15311 號、第95/16679號、第 95/17382號、第 95/18124號、第 95/18129號、第 95/19344號、第 95/20575號、第 95/21819 號、第95/22525號、第 95/23798號、第 95/26338號、第 95/28418 號、第 95/30674號、第 95/30687號、第 95/33744 號、第96/05181號、第 96/05193號、第 96/05203號、第 96/06094 號、第 96/07649號、第 96/10562 號、第 96/16939 〇號、第 96/18643 號、第 96/20197 號、第 96/21661 號、第 96/29304 號、第 96/29317號、第 96/29326號、第 96/29328 號、第 96/31214 號、第 96/32385 號、第 96/37489 號、第 97/01553 號、第 97/01554號、第 97/03066號、第 97/08144 號、第97/14671號、第 97/17362號、第 97/18206號、第 97/19084號、第97/19942號及第97/21702號；及英國專利公開案第2 266 529號、第2 268 931號、第2 269 170號、第 2 269 590號、第 2 271 774號、第 2 292 144號、第 2 293 ^ 168號、第2 293 169號及第2 302 689號中。此等化合物之製備全面地闡述於上述專利案及公開案中，該等案件均以引用方式併入本文中。在一實施例中，可結合本發明化合物使用的神經激肽-1 受體拮抗劑係選自：2-(R)-(l-(R)-(3,5-雙（三氟曱基）苯基）乙氧基）-3-(S)-(4-氟苯基）-4-(3-(5-氧代基-1H,4H-1，2,4-三唑基）甲基）嗎啉或其醫藥上可接受之鹽，其闡述於美國專利第5,719,147號中。 128379.doc -68 - 200930365 本發明之化合物亦可與用於治療貧血之藥劑一起投與。此貧血治療劑為（例如）連續紅血球生成受體活化劑（例如，阿法依伯汀）。本發明之化合物亦可與用於嗜中性白血球減少症治療之藥劑一起投與。此嗜中性白血球減少症治療劑係（例如）可調節嗜中性粒細胞生成及功能之造血生長因子，例如，人類粒細胞集落刺激因子（G-CSF)。G-CSF之實例包括非格司亭。〇本發明之化合物亦可與諸如左旋咪唾（levamisole)、異丙肌苦（isoprinosine)及日達仙（Zadaxin)等免疫增強藥一起投與。本發明之化合物亦可與P450抑制劑組合以用於治療或預防癌症，該等P450抑制劑包括：異生物質（xenobiotics)、奎尼丁（quinidine)、酿胺（tyramine)、酮康嗤（ketoconazole)、睾 _ (testosterone)、奎寧（quinine)、曱0比丙酮 (methyrapone)、咖 _ 因、苯乙肼（phenelzine)、多柔比星〇 (doxorubicin)、醋竹桃黴素（troleandomycin)、環苯紮林 (cyclobenzaprine)、紅黴素(erythromycin)、可卡因 (cocaine)、0夫拉茶驗（furafyline)、西目米替丁（cimetidine)、右美沙芬（dextromethorphan)、利托那韋（ritonavir)、茚地那韋（indinavir)、氨普那韋（amprenavir)、地爾硫卓 (diltiazem)、特非那定（terfenadine)、維拉帕来 (verapamil)、考的松（cortisol)、伊曲康嗅（itraconazole)、米貝拉地爾（mibefradil)、萘法嗤酮（nefazodone)及奈非那 128379.doc -69- 200930365 韋（nelfinavir)。本發明化合物亦可與Pgp及/或BCRP抑制劑組合用於治療或預防癌症，該等Pgp及/或BCRP抑制劑包括：環孢素 A、PSC833、GF120918、克列莫佛（cremophor)EL、煙麯黴毒素（fumitremorgin)C、Kol32、Kol34、易瑞沙 (Iressa)、曱確酸伊馬替尼（matnib mesylate)、ΕΚΙ-785、 C11033、新生黴素（novobiocin)、已烯雌紛（diethylstilbestrol)、他莫昔芬（tamoxifen)、利血平（reserpine)、VX-710、膜蛋〇白酶抑制素（tryprostatin)A、類黃_ 、利托那韋 (ritonavir)、沙奎那韋（saquinavir)、奈非那韋 (nelfinavir)、奥美拉0坐（omeprazole)、奎尼丁（quinidine)、維拉帕米、特非那定（terfenadine)、明康°坐 (ketoeonazole)、硝’苯地平（nifidepine)、FK506、胺埃酮 (amiodarone)、XR9576、茚地那韋、氨普那韋、考的松、睾酮、LY335979、OC144-093、紅黴素、長春新鹼、地高辛（digoxin)及他林洛爾（talinolol)。〇本發明之化合物亦可與雙膦酸鹽類（應理解為包括雙膦酸鹽類、二膦酸鹽類、雙膦酸類及二膦酸類）組合以用於治療或預防癌症，包括骨癌。雙膦酸鹽類之實例包括但不限於：依替膦酸鹽（Didronel)、帕米膦酸鹽 (pamidronate)(Aredia)、阿倫膦酸鹽（alendronate) (Fosamax)、利塞膦酸鹽（risedronate)(Actonel)、嗅來膦酸鹽（zoledronate)(Zometa)、伊班膦酸鹽（ibandronate) (Boniva)、英卡膦酸（incadronate)或斯孟膦酸鹽 128379.doc -70- 200930365 (cimadronate)、氯膦酸鹽（clodronate)、EB-1053、米諾膦酸鹽（minodronate)、奈力鱗酸鹽（neridronate)、0比膦酸鹽 (piridronate)及替魯膦酸鹽（tiludronate)，包括任一及所有其醫藥上可接受之鹽、衍生物、水合物及混合物。本發明之化合物亦可與芳香酶抑制劑組合以用於治療或預防乳癌。芳香酶抑制劑之實例包括但不限：阿那曲唑 (anastrozole)、來曲坐（letrozole)及依西美坦 (exemestane) ° 本發明之化合物亦可與siRNA治療劑組合以用於治療或預防癌症。本發明之化合物亦可與γ-分泌酶抑制劑及/或NOTCH信號傳導之抑制劑組合投與。此等抑制劑包括闡述於下列中之化合物：WO 01/90084、WO 02/30912、WO 01/70677、 WO 03/013506、WO 02/36555、WO 03/093252、WO 03/093264、WO 03/093251、WO 03/093253、WO 2004/039800、WO 2004/039370、WO 2005/030731、WO 2005/014553、USSN 10/957,251 > WO 2004/08991 1 > WO 02/081435 ' WO 02/081433、WO 03/018543、WO 2004/031 137、WO 2004/031 139 ' WO 2004/031138 ' WO 2004/101538、WO 2004/101539 及 WO 02/47671 (包括 LY-450139) » 如在下列公開案中所揭示Akt之抑制劑（且包括本發明之化合物）：WO 02/083064、WO 02/083139、WO 02/083140 ' US 2004-0116432 ' WO 02/083138、US 2004- 128379.doc -71- 200930365

0102360 ' WO 03/086404 、WO 03/086279 、WO 03/086394、WO 03/084473、WO 03/086403、WO 2004/041162、WO 2004/096131、WO 2004/096129、WO 2004/096135、WO 2004/096130、WO 2005/100356 ' WO 2005/100344、US 2005/029941、US 2005/44294、US 2005/43361、60/734188、60/652737、60/670469亦可與鉀鹽、鎂鹽、β_阻斷劑（例如，阿替洛爾）及内皮素-a (ETa)拮抗劑組合使用以達成維持心血管體内平衡之目標。 © 如在下列公開案中所揭示Akt之抑制劑（且包括本發明之

化合物）：WO 02/083064 ' WO 02/083139 、 WO 02/083140 、 US 2004-01 16432、WO 02/083 138、US 2004- 0102360 、 WO 03/086404 ' WO 03/086279 、 WO 03/086394 、 WO 03/084473 、 WO 03/086403 、 WO 2004/041162 、WO 2004/096131 、WO 2004/096129 、WO 2004/096135 、WO 2004/096130 、WO 2005/100356 、WO 2005/100344 、US 2005/029941 、US 2005/44294 、US 2005/43361、60/734188、60/652737、60/670469亦可與胰島素、胰島素促泌素、PPAR-γ激動劑、二甲雙胍 (metformin)、諸如奥曲肽（octreotide)等生長抑素受體激動劑、DPP4抑制劑、磺醯脲及α-葡糖苷酶抑制劑組合使用以達成維持葡萄糖體内平衡之目標。本發明之化合物亦可與PARP抑制劑組合用於治療或預防癌症。本發明化合物亦可與下列治療劑組合以用於治療癌症： 128379.doc -72- 200930365 阿巴瑞克（Plenaxis depot®);阿地白介素（Prokine®);阿地白介素（Proleukin®);阿來祖馬（Alemtuzumabb) (Campath®);阿曲諾英（alitretinoin)(Panretin®);別嗓吟醇（allopurinol)(Zyloprim®);六甲嘴胺（altretamine) (Hexalen®);胺鱗汀（amifostine)(Ethyol®);阿那曲峻 (anastrozole)(Arimidex®);三氧化二珅（Trisenox®);天冬醯胺酶（Elspar®);阿紮胞普（azacitidine)(Vidaza®);貝法古自馬（bevacuzimab)(Avastin®);貝沙羅汀（bexarotene)膠 © 囊（Targretin®);貝沙羅汀凝膠（Targretin®);博來黴素 (bleomycin)(Blenoxane®);波替單抗（bortezomib) (Velcade®);靜脈内使用的白消安（busulfan)(Busulfex®); 口服白消安（Myleran®);卡普睾酮（calusterone) (Methosarb®);卡培他濱（capecitabine)(Xeloda®);卡銘 (carboplatin)(Paraplatin®);卡莫司汀（carmustine) (BCNU®，BiCNU®);卡莫司汀（Gliadel®);卡莫司汀與聚苯丙生20植入物（Gliadel Wafer®); 塞利西蔔 (celecoxib)(Celebrex®);西土西單抗（cetuximab) (Erbitux®);苯丁酸氮芥（chlorambucil)(Leukeran®);順始 (Platinol®);克拉屈濱（cladribine)(Leustatin® ， 2-

CdA®);氣苯吩嘹（clofarabine)(Clolar®);環碟酿胺 (Cytoxan®，Neosar®);環麟醯胺（Cytoxan Injection®); 環鱗醢胺（Cytoxan Tablet®);阿糖胞普（Cytosar-U®);阿糖胞苷脂質體（DepoCyt®);達卡巴0秦（dacarbazine)(DTIC-Dome®);更生黴素（dactinomycin)、放線菌素D(actinomycin D) 128379.doc -73 - 200930365 (Cosmegen®);達貝泊汀 α (Darbepoetin alfa)(Aranesp®); 柔紅黴素（daunorubicin)脂質體（DanuoXome®);柔紅黴素、道諾黴素（daunomycin)(daunorubicin®);柔紅黴素，道諾黴素（Cerubidine®);地尼白介素2(Denileukin diftitox)(Ontak®);右雷佐生（dexrazoxane)(Zinecard®); Ο

多西他赛（docetaxel)(taxotere®);多柔比星（Adriamycin PFS®);多柔比星（Adriamycin®，Rubex®);多柔比星 (Adriamycin PFS Injection®);多柔比星脂質體（Doxil®); 丙酸甲雄烧酮（dromostanolone®); 丙酸甲雄烧嗣 (masterone injection®);愛立特氏（Elliott’s)B 溶液（Elliott’s B Solution®);表柔比星（epirubicin)(Ellence®);阿法依伯汀（Epoetin alfa)(epogen®);埃羅替尼（erlotinib) (Tarceva®);雌莫司汀（estramustine)(Emcyt®);鱗酸依託泊苦（etoposide phosphate)(Etopophos®);依託泊普 (etoposide)，VP-16(Vepesid®);依西美坦（exemestane) (Aromasin®);非格司亭（Filgrastim)(Neupogen®);氟尿普 (intraarterial)(FUDR®);氟達拉濱（fludarabine) (Fludara®);氟尿嘴唆，5-FU(Adrucil®);氟維司群 (fulvestrant)(Faslodex®);吉非替尼（gefitinib)(Iressa®); 吉西他濱（gemcitabine)(Gemzar®);吉姆單抗奥佐米星 (gemtuzumab ozogamicin)(Mylotarg®);乙酸戈舍瑞林 (goserelin acetate)(Zoladex Implant®);乙酸戈舍瑞林 (Zoladex®);乙酸組胺瑞林（histrelin acetate)(Histrelin implant®); 羥基脲（Hydrea®);替坦異貝莫單抗 128379.doc -74- 200930365 (Ibritumomab Tiuxetan)(Zevalin®);伊達比星（idarubicin) (Idamycin®);異環磷醯胺（IFEX®);甲磺酸伊馬替尼 (imatinib mesylate)(Gleevec®);干擾素 a 2a(Roferon A®);干擾素 a-2b(Intron A®);伊立替康（irinotecan) (Camptosar®);勒納度胺（lenalidomide)(Revlimid®);來曲唾（letrozole)(Femara®);甲醢四氫葉酸（leucovorin) (Wellcovorin®，leucovorin®);乙酸亮丙瑞林（Eligard®); 左旋四味峻（levamisole)(Ergamisol®);羅氮芬〇 (lomustine) ， CCNU(CeeBU®);雙氣乙基甲胺 (meclorethamine)，氮芥（Mustargen®);乙酸甲地孕明 (Megace®);美法余（melphalan)，L-PAM(Alkeran®);疏基嗓吟，6-MP(Purinethol®);美司納（mesna)(Mesnex®);美司納（Mesnex tabs®);胺曱蝶吟（Methotrexate®);甲氧沙林（methoxsalen)(Uvadex®);絲裂黴素C(Mutamycin®);米托坦（mitotane)(Lysodren®);米托蒽酿（mitoxantrone) (Novantrone®)；苯丙酸諸龍（nandrolone phenpropionate) (Durabolin-50®)；耐拉濱（nelarabine)(Arranon®);諾非單抗（Nofetumomab)(Verluma®);奥普瑞白介素（Oprelvekin) (Neumega®);奥沙利銘（〇xaliplatin)(Eloxatin®);紫杉醇 (Paxene®);紫杉醇（taxol®);紫杉醇蛋白質結合顆粒 (Abraxane®);帕利非明（palifermin)(Kepivance®);帕米膦酸二鈉（pamidronate)(Aredia®);培加酶（pegademase) (Adagen(Pegademase Bovine)®);培加帕酶（pegaspargase) (Oncaspar®);培非拉斯替（Pegnigrastim)(Neulasta®);培 128379.doc •75- 200930365 美曲塞二納（pemetrexed disodium)(Alimta®);喷托他丁 (pentostatin)(Nipent®) ; 0辰泊漠烧(pipobroman)

(Vercyte®); 普卡黴素（plicamycin)，米拉黴素 (mithramycin)(Mithracin®) ; 口卜吩姆納（porfimer sodium)(Photofrin®); 丙卡巴肼（procarbazine) (Matulane®);奎納克林（quinacrine)(Atabrine®);拉布立酶（Rasburicase)(Elitek®);利妥昔單抗（Rituximab) (Rituxan®);沙格莫丁（sargramostim)(Leukine®);沙格莫丁（sargramostim)(Prokine®);索拉非尼（sorafenib) (Nexavar®);鏈脲黴素（streptozocin)(Zanosar®);馬來酸蘇尼替尼（sunitinib maleate)(Sutent®);滑石粉 (Sclerosol®);他莫昔芬（Nolvadex®);替莫嗅胺 (temozolomide)(Temodar®);替尼泊普（teniposide)，VM-26(Vumon®);睾内酿（Teslac®);硫鳥嗓吟，6-TG(Thioguanine®);嗟替派（thiotepa)(Thioplex®);拓撲替康（Hycamtin®);托瑞米芬（toremifene)(Fareston®);托西莫單抗（Tositumomab)(Bexxar®);托西莫單抗/1-131托西莫單抗（Bexxar®);曲司佐單抗（Trastuzumab)(Herceptin®); 維甲酸（tretinoin)，ATRA(Vesanoid®);尿嘴咬氣芥（Uracil Mustard Capsules®);伐藍比星（valrubicin)(Valstar®);長春驗（Velban®);長春新驗（vincristine)(Oncovin®);長春瑞濱 _(Navelbine®) ; 0坐來膦酸鹽（zoledronate)(Zometa®)及福瑞斯達（v〇rinostat)(Zolinza®)。因此，本發明之範圍涵蓋本發明所主張化合物與選自下 128379.doc •76- 200930365 列之第二化合物之組合的用途：雌激素受體調節劑、雄激素受體調節劑'類視色素受體調節劑、細胞毒性/細胞生長抑制劑、抗增殖劑、異戊二烯基_蛋白轉移酶抑制劑、 HMG-CoA還原酶抑制劑、ΗΙγ蛋白酶抑制劑、逆轉錄酶抑制劑、血管生成抑制劑、PPAR-γ激動劑、PPAR_S激動劑、固有多耐藥性抑制劑、止吐劑、用於治療貧血之藥劑、用於治療嗜中性白血球減少症之藥劑、增強免疫之藥物、細胞增殖及存活信號傳導之抑制劑、雙膦酸鹽、芳香酶抑制劑、siRNA治療劑、γ-分泌酶抑制劑、干擾受體酪胺酸激酶（RTK)之藥劑、干擾細胞週期檢查點之藥劑及任一上文所列舉治療劑。與本發明化合物相關之術語"投與，，及其變體（例如，"投與化合物）思指將該化合物或該化合物之前藥引入需要治療動物之系統中。當本發明化合物或其前藥與一種或多種其他活性劑（例如，細胞毒性劑等）組合提供時，"投與"及其變體各自應理解為包括同時及相繼引入該化合物或其前藥與其他藥齊1丨。本文所用術語"組合物"意欲涵蓋包含規定量之規定成份的產品以及任一可自規定量之規定成份的組合直接或間接產生的產品。本文所用術語，，治療有效量"意指活性化合物或醫藥劑在組織、系統、動物或人類中產生生物或醫學反應之量，其係由研究者、獸醫師、醫師或其他臨床醫師來尋求。術語"治療癌症"或"癌症之治療"係指對受癌症病況折磨 128379.doc • 77· 200930365 之哺乳動物實施的投筚，曰後4t 係如藉由殺死癌細胞緩解癌症病況之效果以及導致抑制轉庶&& , 邶制該癌細胞之生長及/或轉移的效在實施例巾；^用作第二化合物之血管生成抑制劑係選自：赂胺酸激酶抑制劑、表皮源生長因子之抑制劑、成纖維細胞源生長因子之抑制劑、血小板源生長因子之抑制劑、MMP(基質金屬蛋白酶）抑制劑、整合素阻斷劑、干擾素—α、介白素_12、戊聚糖多硫酸酯、環氧合酶抑制劑、〇甲醯胺三唑、康布瑞塔卡汀（⑶mbretastatin)A_4、角鯊胺、6-0-氣乙醯基·羰基_煙麯黴醇、沙立度胺 (thalidomide)、血管抑制素、肌鈣蛋白、或 VEGF之抗體。在一實施例中，該雌激素受體調節劑係他莫昔芬（tamoxifen)或雷洛昔芬（raloxifene)。申請專利範圍之範圍亦包括一種治療癌症之方法，該方法包括將治療有效量之本發明化合物與輻射療法組合及/ 或與選自以下列之第二化合物組合施與：雌激素受體調節 ❹ 劑、雄激素受體調節劑、類視色素受體調節劑、細胞毒性/細胞生長抑制劑、抗增殖劑、異戊二烯基蛋白轉移酶抑制劑、HMG-CoA還原酶抑制劑、HIV蛋白酶抑制劑、逆轉錄酶抑制劑、血管生成抑制劑、PPAR-γ激動劑、ppAR_ 5激動劑、固有多耐藥性抑制劑、止吐劑、用於治療貧灰之藥劑、用於治療嗜中性白血球減少症之藥劑、増強免疫之藥物、細胞增殖及存活信號傳導之抑制劑、雙膦酸鹽、芳香酶抑制劑、siRNA治療劑、γ-分泌酶抑制劑、干擾受 128379.doc -78- 200930365 體酪胺酸激酶（RTK)之藥及任一上文所列舉治療劑劑、干擾細胞週期檢查點之藥劑而且，本發明又法包括將治療有效抗組合投與。本發明進一步涵包括將治療有效量與0 —實施例係一種治療癌症之方法，該方量之本發明化合物與紫杉醇或曲司佐單蓋一種治療或預防癌症之方法，該方法之本發明化合物與COX-2抑制劑組合投 Ο

本發明亦包括—錄用於>α療或預防癌症之醫藥組合物， :.冑有效量之本發明化合物及選自下列之第二化合镅：激素受體調節劑、雄激素受體調節劑、類視色素受 …劑、細胞毒性/細胞生長抑制劑、抗增殖劑、異戊 -晞基蛋白轉移酶抑制劑、hmg_CqA還原酶抑制劑、卿蛋白酶抑制劑、祕絲逆轉錄酶抑制劑、血管生成抑制劑、 PPAR-y^^^j ^ PPAR Λ 免^ 士ι _激動劑、細胞增殖及存活信號傳導之抑制劑、雙膦酸睡、吸鹽芳香酶抑制劑、siRNA治療劑、 γ-分泌酶抑制劑、干擾受體絡胺酸激酶（rtk)之藥劑、干擾細胞週期檢查點之藥劑及任—上文所列舉治療劑。本文引證的所有專利、公 △開案及正在申請的專利申請案均以引用方式併入本文中。、在闡述化學品及在下列眚你丨士 ^ m

歹J實例中所用縮寫係：AEB 胺基乙基苯磺醯氟）；BSA (牛 I十血，月白蛋白）；BuLi (正丁基鋰）；c:dci3(氯仿_d); CuI 岙亞銅），CuS〇4 (硫酸銅）； DCE (— 氣乙燒）；DCM ( ** 患田 ρ»、 (―氣甲烷DEAD (偶氮二甲酸 I28379.doc •79- 200930365 二乙酯）；DMA (二甲基乙醯胺）；DMF (N，N-二甲基甲醯胺）；DMSO (二甲亞砜）；DPPA (二苯基磷醯基疊氮化物）；DTT (二硫蘇糖醇）；EDC (N-乙基-N，-(3-二甲基胺基丙基）碳化二亞胺）；EDTA (乙二胺四乙酸）；EGTA (乙二醇四乙酸）；EtOAc (乙酸乙酯）；EtOH (乙醇）；HOAc (乙酸）；HPLC (高效液相層析）；HRMS (高解析度質譜）； LCMS (液相層析-質譜儀）；LHMDS (雙（三甲基甲矽烷基）醯胺鋰）；LRMS (低解析度質譜）；MeOH (甲醇）；MP-B(CN)H3 (大孔氰基硼氫化物）；NaHC03 (碳酸氫鈉）； Na2S04 (硫酸鈉）；Na(〇Ac)3BH (三乙醯基硼氫化鈉）； NH4OAc (乙酸銨）；NBS (N-溴琥珀醯胺）；NMR (核磁共振）；PBS (磷酸緩衝鹽溶液）；pcr (聚合酶鏈反應）； Pd(dppf) ([1，1’_ 雙（二苯基膦基）二茂鐵]鈀）；pd(ph3)4 (肆-三笨基膦鈀（0)) ; P0C13 (磷醯氣）；ps-DIEA (聚苯乙烯二異丙基乙基胺）；PS-PPhs (聚苯乙烯-三苯基膦）；TB AF (四丁基氟化銨）；THF (四氫呋喃）；TF a (三氟乙酸）； TMSCHzN2 (三甲基矽烷基重氮曱烷）及^ (乙醯基）；B〇c (第三-丁氧基羰基）；Bu (丁基）；Cal (計算值）；Calc'd (計算得）；DIEA (二異丙基乙基胺）；DMAP (4-二甲基胺基吡啶）；EDC (N-乙基-N'-(3-二曱基胺基丙基）碳化二亞胺）； Eq (當量）；Et (乙基）；HOBT (經基苯并三唾）；ιρΑ (異丙醇）；LC/MS (液相層析-質譜儀）；Me (曱基）；MeCN (乙腈）；NMP (N-甲基"比咯啶酮）；Pr (丙基）；pyr (吼啶）；Sat (飽和）及Tosic (對-甲苯續酸）。 128379.doc •80· 200930365 除在文獻中得知或在試驗程序中所例示的其他標準操作以外，本發明化合物亦可藉由使用下列反應示意圖中所示反應來製備。因此，下文說明性反應示意圖並不受限於出於闡述目的而列示的化合物或使用的任何具體取代基。該專反應示意圖中所示取代基編號並非必須與申請專利範圍中所用者相關’且通常為簡便起見，當在上文式A之定義中允許有若干取代基時，展示連接至該化合物之單一取代基。反應示意圖之網要反應示意圖I及II提供用於製備本發明化合物之有用的詳情。所需中間體在某些情況下有市售或可按照文獻程序加以製備。如在反應示意圖I中所示，首先藉助諸如LHMDS等鹼用 3-氣-2-氣甲基-1-丙烯烷基化苯基乙酸衍生物以獲得^。隨後用（例如）臭氧以氧化方式裂解該烯烴以獲得酮1-2，使該酮與諸如乙二醇等二醇反應以獲得1-3。在鹼性條件下進行環化並實施水解，隨後獲得環烷基化合物1-4。在產生醯疊氮後，進行重排且用合適的醇封閉所得異氱酸酯，獲得胺基甲酸酯1-5。氰酸化（在此情況下，藉由鈀催化），產生腈1-6。對1-6實施去質子化，繼而與親核性苄基格氏試劑（Grignard reagent)反應並實施水解，獲得酮1-7。在鹼性條件下，縮合1-7與醛1-8，獲得氣萘啶。用肼置換氣，獲得醯肼1-1 〇 ^在進行醯化後，於鹼性條件下原位實施環化，產生三唑并萘啶1-11並對胺進行去保護（在此情況 128379.doc 81 200930365 下，用TFA)，產生1_12。其中R1係胺基烷基基團之本發明化合物可按照反應示意圖II中所概述程序來製備。使醯阱1-10與碳化二亞胺反應以產生脲，於鹼性條件下原位環化該脲以獲得烷基胺基三唑II-1。隨後實施去保護，獲得II-2。

反應示意圖I

Zn(CN)2 Pdfit-Ru^PU

二氧雜環己烷

128379.doc -82- 200930365

反應示意圖II

實例所提供實例及示意圖意欲幫助進一步理解本發明。所用具體材料、物質及條件均意欲進一步闡述本發明而非限制 ◎ 本發明之合理範圍。不意圖1

Zn(CN)2 Pd[(t-Bu)3PJ2 二氧雜環己烷l〇〇t

128379.doc • 83 · 200930365

1-11

2-(4-溴苯基）-4-(氯甲基）戊-4-烯酸乙酯（1-1) 於-78°C下，向（4-溴苯基）乙酸乙酯（143 g，588 mmol)存於THF (800 mL)之溶液中加入LHMDS (1·13 eq，存於THF 中）。在30分鐘後，於-78 °C下，將該反應混合物經由套管添加至3-氣-2-氣甲基-1-丙稀（147 g, 1180 mmol)存於THF (500 mL)之溶液中。經1 5小時將該反應物自-78°C緩慢升溫至rt。將該反應混合物倒入碳酸氫納中，用EtOAc萃取，經硫酸鈉乾燥、過濾並濃縮。藉由管柱層析用1-20% EtOAc/己烷溶離來純化粗製殘留物。合併各合適的部分並在真空中去除溶劑以獲得澄清油狀4-(1//-1，2,4-三唑-3-基）六氫吡啶-1-甲酸苄基酯（1-1)。MS (M+H+): 332.5。 2-(4·溴苯基）_5_氯·4_氧代基戊酸乙酯（1_2) 於-78°C下’向2-(4-溴苯基）-4-(氣甲基）戊-4-烯酸乙酯 (1-1) (7.3 g，25 mmol)存於曱醇（40 mL)及 DCM (40 mL)之溶液中通入〇3直至該反應物變為淡藍色（6小時）。將該反應物再攪拌1小時’此時向該反應混合物中通入N2直至該溶液變為無色。向該反應物種加入過量甲基硫醚（3.75 g， 60.3 mmol)並使該混合物自-7yc升溫至rt。將該反應混合物倒入飽和碳酸氫鈉中，用DCM萃取，經硫酸鈉乾燥，過濾、並濃縮。藉由管柱層析用丨_20〇/〇 EtOAc/己烷溶離來純化 128379.doc -84 - 200930365 粗製殘留物。合併各合適的部分並在真空中去除溶劑以獲得固體狀2-(4-溴苯基）-5-氣-4-氧代基戊酸乙酯（1_2)。Ms (M+H+): 153.2。 2-(4-溴苯基）-3-[2_(氣甲基）-1,3-二氧環戊-2-基]丙酸乙酯（1-3) 向2-(4->臭苯基）-5-氣-4-氧代基戊酸乙醋（i_2) (35 g，105 mmol)及乙二醇（19.5 g，315 mmol)存於甲苯（3〇〇 mL)之溶液中加入對·甲苯續酸（1〇〇 mg)並藉助dean stark分水器將該反應物加熱至回流達6小時。濃縮反應混合物並藉由管柱層析用0-50% EtOAc/己烧溶離來純化。合併各合適的部分、濃縮並自EtOAc及己烷再結晶所得固體以獲得白色固體狀2-(4-溴苯基）-3-[2-(氣甲基）-1，3-二氧環戊-2-基]丙酸乙酯（1-3) MS (M+H+): 378。 2-(4-溴苯基）-5,8·二氧雜螺[3.4]辛烷-2-羧酸（1-4) 向冷卻至-78°C之2-(4·溴苯基）-3-[2-(氣甲基）·1，3-二氧環戊-2-基]丙酸乙酯（l_3) (27 g，71.5 mmol)存於 DMF (200 mL)之溶液中加入NaH (8.58 g, 214 mmol)並使該反應物自 -78°C緩慢地升溫至rt。當到達rt時，添加1 n NaOH (100 mL)並將該反應混合物授拌過夜。將該粗反應混合物倒入飽和碳酸氫鈉中並用氣仿洗滌。用HC1酸化水性層，用氣仿萃取，經硫酸鈉乾燥，過濾並濃縮。藉由管柱層析用j _ 50% EtOAc/己烷溶離來純化粗製殘留物。合併各合適的部分並自EtOAc/己烷再結晶以獲得白色固體狀2_(4_溴苯基）_ 5,8-二氧雜螺[3.4]辛垸_2-羧酸（1-4)。厘8(]^+11+):314。 128379.doc •85· 200930365 【2-(4-漢苯基）_s冬二氧雜螺【3 4】辛_2基】胺基甲酸第三_ 丁基酯（1-5) 向2·(4_漠苯基）_5,8-二氧雜螺[3.4]辛烷-2-羧酸（1-4) (4〇·7 g，13〇 mmol)存於第三丁醇（23i mL，3 之溶液中加入DPPA n s e 1，Λ (5.8 g，130 mmol)並在Ν2下將該反應物加熱至100C，過夜。將該反應混合物倒入飽和碳酸氫鈉中’用EtOAc萃取，經硫酸納乾燥，過濾並漠縮。藉由管

柱層析用7-50% EtOAc/己垸溶離來純化粗製殘留物。合併各合適的部分並在真空中去除溶劑以獲得[2_(4_溴苯基）_ 5,8-二氧雜螺[3.4]辛·2·基]胺基甲酸第三·丁基醋（卜5)。ms (M+H+): 385。 [2-(4-氱基苯基）-5,8-二氧雜螺【3.4】辛_2_基】胺基甲酸第三-丁基酯（1-6) 向[2-(4_溴苯基）-5,8_二氧雜螺[3 4]辛_2基]胺基甲酸第三-丁基醋（1-5) (21.3 g，55.5 mmol)存於二氧雜環己烧（1〇〇 mL)及DMF (100 mL)之溶液中加入氰化鋅（6 52 555 mmol)及雙（三第三-丁基膦）把（0) (2.84 g，5 55刪叫並在 A下將該反應物加熱至120。(： ’ H、時。將該反應混合物冷卻至rt、過濾並濃縮。藉由管柱層析用Et〇Ac/己烷溶離來純化粗製殘留物。合併各合適的部分並在真空中2 除溶劑以獲得[2-(4-氰基苯基）-5,8_二氧雜螺[3 4]辛1基] 胺基甲酸第三-丁基酯（1-6)。MS (M+H+). 331。二氧雜螺[3.4]辛_2_基}胺 {2-[4-(苯基乙醢基）苯基】-5,8-基甲酸第三-丁基酯（I-7) 128379.doc -86- 200930365 於-78C下，向[2-(4-氰基苯基）_5,8-二氧雜螺[3.4]辛-2-基]私基甲酸第二-丁基醋（1-6) (15.0 g，45.4 mmol)存於THF (150 mL)之溶液令加入異丙基氣化鎂（22 7 mL, 45 4 mm〇1， 2 Μ，存於THF中）。在1小時後，加入苄基氣化鎂（68 mL， 135 mmol, 2 Μ，存於THF中）並使該反應物經5小時緩慢升溫至rt。將該反應混合物倒入飽和氯化錢中，用Et〇Ac萃取，經硫酸鈉乾燥’過濾並濃縮。藉由管柱層析用 EtOAc/己烧溶離來純化粗製殘留物。合併各合適的部分並在真空中去除溶劑以獲得{2-[4-(苯基乙醢基）苯基]_5,8_二氧雜螺[3.4]辛-2-基}胺基甲酸第三-丁基酯（L?)。ms (M+H+): 424。 {2-[4-(5-氯-3-苯基-1，6-萘咬-2-基）苯基卜5,8-二氧雜琢【3·4】辛_2_基}胺基甲酸第三·丁基酯（1_9) 向{2-[4-(苯基乙醯基）苯基]_5,8_二氧雜螺[3 4]辛_2_基} 胺基甲酸第二-丁基g旨（1-7) (8.8 g，20.8 mmol)存於DMF (100 mL)之溶液中加入碳酸鉀（14.4 g，1〇4 (5.33 g，20.8 mmol)並將該反應混合物加熱至8〇。〇，過夜。將該反應混合物倒入飽和碳酸氫納中、用Et〇Ac萃取、經硫酸鈉乾燥、過濾並濃縮。藉由管柱層析用H0% EtOAc/己烷溶離來純化粗製殘留物^合併各合適的部分並在真空中去除溶劑以獲得{2-[4-(5-氣-3-苯基-丨，6-萘啶_2_ 基）苯基]-5,8-二氧雜螺[3·4]辛-2-基}胺基甲酸第三_丁基醋 (1-9) 〇 MS (M+H+): 545 〇 {2-[4-(5_肼基-3-苯基-1，6-萘咬-2-基）笨基]_5,8-二氣雜螺 128379.doc • 87- 200930365 [3.4] 辛-2-基}胺基甲酸第三_丁基酯（11〇) 向{2-[4-(5-氯-3-苯基-1，6·萘啶_2_基）苯基;1-5,8-二氧雜螺 [3.4] 辛-2-基}胺基甲酸第三_丁基酯（1_9)(5§92111111〇1)存於二氧雜環己烷（100 mL)之溶液中加入肼（30 g，92 mmol) 並將該反應混合物加熱至100°c，1小時。將該反應混合物倒入飽和礙酸氫鈉中、用氣仿萃取、經硫酸鈉乾燥、過濾並濃縮以獲得黃色固體狀{2·[4_(5-肼基-3-苯基-1,6-萘啶-2-基）苯基]-5,8-二氧雜螺[3.4]辛-2-基}胺基甲酸第三-丁基酯（1-10)。MS (Μ+Η+): 540。 (2-{4-[3-(1-甲基-1/7-咪唑·4_ 基）_9_ 苯基[1，2,4]三唑并 [3,4-/卜1,6-萘啶-8-基]苯基}-5,8-二氧雜螺[3.4】辛-2-基）胺基甲酸第三-丁基酯（1-11) 向1-甲基-1Η-咪唑-4-甲酸（7.0 g，56 mmol)存於DMA (200 mL)之溶液中加入 EDC (11 g，56 mmol)及 HOBt (8.5 g， 56 mmol)並將該反應混合物在60°C下加熱1小時。隨後加入{2-[4-(5-胖基-3-苯基-1，6-萘咬-2-基）苯基]-5,8-二氧雜螺 [3.4] 辛-2-基}胺基曱酸第三-丁基酯（ι·ι〇) (30 g，56 mmol；) 並將該反應物在60°C下再攪拌2小時，此時加入乙酸（17 g， 280 mmol)並將該反應物在80°C下攪拌過夜。使該反應混合物冷卻至rt、用1 N NaOH淬滅、倒入飽和碳酸氫鈉中，用氣仿萃取、經硫酸鈉乾燥、過濾並濃縮^藉由管柱層析用存於DCM中之10%甲醇溶離來純化粗製殘留物β濃縮各合適的部分並自甲醇再結晶所得固體以獲得白色固體狀（2_ {4-[3·(1-甲基-1丑-〇米〇坐-4-基）-9-苯基[1，2,4]三嗤并[34-/]- 128379.doc -88- 200930365 1，6-萘咬-8-基]苯基}-5,8-二氧雜螺[3 4]辛_2基）胺基曱酸第三·丁基酯（1-11)。MS (M+H+): 630。 2-{4·[3-(1-甲基-1丑-味嗅基）苯基【12 4]三唑并 [3,4-/卜1,6-萘啶-8-基】苯基}-5,8-二氧雜螺[3 4】辛_2_胺（1· 12) 於rt、Ν2下，經2小時向（2-{4-[3-(1-甲基味吐_4_基）· 9-苯基[1，2,4]三唑并[3,4-/]-1，6-萘啶基]苯基}_5,8-二氧雜螺[3.4]辛-2-基）胺基曱酸第三-丁基酯（lu)存於dcm (50 mL)之溶液中加入TFA (50 mL)。該反應物用1 ν NaOH (65 0 mL)淬滅、倒入飽和碳酸氫納中、用氣仿萃取、經硫酸納乾燥、過濾並濃縮。自甲醇再結晶該粗製殘留物以獲得白色固體狀2-{4-[3-(1-甲基-1"-咪嗤-4-基）-9-苯基[ι，2,4] 三唑并[3,4-/]-1，6-萘啶-8-基]苯基}-5,8-二氧雜螺[3.4]辛_2_ 胺（1-12)。HRMS (M+H+):計算值=530.2299，觀測值 = 530.2315; !H NMR (CDC13) δ 9.45-9.4 (m, 1H), 9.05 (s, 1H), 7.85 (s, 1H), 7.60 (s, 1H), 7.48-7.45 (m, 2H), 7.44. 7.40 (m, 1H) 7.38-7.3 (m, 7H), 4.03-3.98 (m, 2H), 3.9-3.88 (m, 2H), 3.85 (s, 3H), 2.90-2.85 (m, 2H), 2.55-2.48 (m, 2H)，1.88 (s, 2H)。 128379.doc -89- 200930365 以與實例1-12相似之方式製備下列化合物：化合物結構計算得 HRMS m/z (M+H)+ 觀測得 HRMS m/z (M+H)+ 1-13 Γλ〇 00^ 449.3523 449.3515 1-14 OOC^2 ^ir^o 464.2081 464.2081 1-15 477.6 478 1-16 491.6 492 128379.doc 90- 200930365

化合物結構計算得 HRMS m/z (M+H)+ 觀測得 HRMS m/z (M+H)+ 1-17 489.6 490 1-18 527.6 528 1-19 eg。 568.2204 567.2207 1-20 ΓΛ 534.2495 534.2500 1-21 〇0〇 nrV° H0^^u 465.1822 465.1833 128379.doc •91- 200930365

化合物結構計算得 HRMS m/z (M+H)+ 觀測得 HRMS m/z (M+H)+ 1-22 516.2387 516.2405 1-23 eg。 542.2182 542.2187 1-24 s。 CH3 0 585.2234 585.2245 1-25 eg。 Ch?0? 527.2177 527.2190 1-26 ego 565.2347 565.235 128379.doc •92- 200930365

化合物結構計算得 HRMS m/z (M+H)+ 觀測得 HRMS m/z (M+H)+ 1-27 〇0〇 517.2238 517.2245 1-28 527.2180 527.2190 1-29 ogo :h9°^T 510.1921 510.1935 1-30 eg。 527.2180 527.2190 1-31 504.2382 504.2394 128379.doc -93- 200930365

化合物結構計算得 HRMS m/z (M+H)+ 觀測得 HRMS m/z (M+H)+ 1-32 eg。 rYNr^ 504.2381 504.2394 1-33 〇0〇 rrNr° 490.2616 490.2602 1-34 〇C〇 516.1483 516.1499 1-35 ogo fY^m2 533.1744 533.1754 1-36 ogo fY^^2 ch3 ^Y°O 547.1894 547.1911 128379.doc -94- 200930365

化合物結構計算得 HRMS m/z (M+H)+ 觀測得 HRMS m/z (M+H)+ 1-37 527.2180 527.2190 1-38 eg。 534.2495 534.2500 1-39 ό^: 655.7757 655.7754 1-40 eg。 (^Y^nh2 rYNr^ ch3 522.2483 522.2500 1-41 〇g〇 506.2535 506.2551 128379.doc -95- 200930365 示意圖2

(2-{4-[3-(乙基胺基）-9-苯基丨1，2,4】三唑并[3,4-/卜1,6-萘啶-8-基]苯基}-5,8-二氧雜螺【3.4】辛-2-基）胺基甲酸第三-丁基酯（2-1) Ο 向微波瓶中加入{2-[4-(5-肼基-3-苯基·1，6-萘啶-2-基）苯基]-5,8-二氧雜螺[3.4]辛-2-基}胺基甲酸第三丁基酯（u❶) (1.8 g，3.3 mmol)、EDC (0.64 g, 3.3 mmol)及 DMF (1〇 mL)。在微波輻照下’於8〇°C下將該反應混合物加熱5分鐘 (高吸收）。加入乙酸（0_5 mL)並在微波輻照下，於8〇°C下將該反應混合物加熱5分鐘（高吸收藉由反相管柱層析 (Sunfire C18)用5%至95%乙腈/(〇.1% TFA/水）梯度溶離來純化所得殘留物。藉由懸浮於乙酸乙酯中來游離鹼化各合〇適的部分’依次用飽和碳酸氫鈉溶液、水、鹽水洗滌，經硫酸納乾燥’過濾並在真空中濃縮以獲得白色固體狀（2_ {4-[3-(乙基胺基）-9-苯基[1，2,4]三唑并[3,4-/]-1,6·萘啶-8- 基]苯基}-5,8-二氧雜螺[3·4]辛_2_基）胺基甲酸第三-丁基酯 (2-1)。MS (Μ+Η)+: 593。 8-[4-(2-胺基-5,8-二氧雜螺[3.4]辛_2•基）苯基】_Ν•乙基_9_ 苯基[1，2,4】三唑并丨3,4-f】-l，6-萘咬_3_胺（2-2) 在室溫下’向2-1 (2.0 g，3.3 mmol)中加入TFA (10 mL)。在0.5小時後，在真空中濃縮該反應混合物並藉由反 128379.doc 96· 200930365 相管柱層析（Sunfire C18)用5%至95%乙腈/(0.1% TFA/水）梯度溶離來純化。藉由懸浮於乙酸乙酯中來游離鹼化各合適的部分’依次用飽和碳酸氫鈉溶液、水、鹽水洗滌，經硫睃鈉乾燥、過濾、濃縮並自甲醇再結晶以獲得白色固體狀8-[4-(2-胺基·5,8-二氧雜螺[3.4]辛_2_基）苯基]乙基-9-苯基[1，2,4]三哇并[3,4-/1-1,6-萘啶 _3_ 胺（2-2)。HRMS (M+H)+:觀測值=492.5723，計算值=492 5698。化合物2-3

ΓΛ

iV1·{8-[4-(2-胺基-5,8-二氧雜螺[3.4]辛_2_基）苯基】-9-苯基[1，2,4]三峻并[3,4-/]-1，6·萘咬-3-基卜二甲基丙燒_ 1,3-二胺（2-3) Ο 以與實例2_2相似的方式製備化合物2_3 ; HRMS 觀測值=550.2925，計算值=550.2964。不意圈3

128379.doc -97. 200930365

{2-[4-(9-苯基-3-嘧啶-2-基【1，2,4】三唑并[3,4_/卜1，6·萘啶-8-基）苯基]-5,8_二氧雜螺[3.4】辛-2-基}胺基甲酸第三·丁基酯（3-1) 向嘧咬-2-甲酸（10.46 g，46.8 mmol)存於DMA (200 mL) 之溶液中加入EDC (8.98 g，46.8 mmol)及 HOBt (7·17 g， 46_8 mmol)並將該反應混合物在60°C下攪拌1小時。隨後加入{2-[4-(5-肼基-3-苯基-1，6-萘啶-2-基）苯基]-5,8-二氧雜螺 [3.4]辛-2-基}胺基曱酸第三-丁基酯（1_10)(25 27 8，46.8 mmol)並將該反應物在60°C下再攪拌2小時，此時加入乙酸 (20.8 g，460 mmol)並將該反應物在8〇充下攪拌過夜。使該反應混合物冷卻至rt，用1 N NaOH淬滅，倒入飽和碳酸氫鈉中，用氯仿萃取，經硫酸鈉乾燥、過濾並濃縮。藉由管柱層析用存於DCM中之1 〇〇/。甲醇溶離來純化粗製殘留物。濃縮各合適的部分並自甲醇再結晶所得固體以獲得白色固體狀{2-[4-(9-苯基-3-喷啶_2.基[12,4]三唑并[3,4_/]_16蔡咬-8-基）苯基]-5,8-二氧雜螺[34]辛_2_基}胺基甲酸第三丁基酯（3-1)。MS (M+H+): 628。 2-[4-(9-苯基-3K2-基[^ 4]三峡并[3 4介16_茶唆_ 8-基）苯基]-5,8-二氧雜螺[3 4】辛_2胺（ι ΐ8) 在rt下，於N2中經2小時向{2_[4_(9_苯基_3_鳴咬_2_基 128379.doc •98· 200930365 [1，2,4]三唑并[3,4-/]-1，6-萘啶-8-基）苯基]-5,8-二氧雜螺 [3.4] 辛_2_基}胺基甲酸第三-丁基酯（3-1) (5.0 g，7.97 mmol)存於DCM (50 mL)之溶液中加入TFA (50 mL)。用1 N NaOH (650 mL)淬滅該反應物，倒入飽和碳酸氫鈉中，用氣仿萃取、經硫酸鈉乾燥、過濾並濃縮。自曱醇再結晶該粗製殘留物以獲得白色固體狀2-[4-(9-苯基-3-嘧啶-2-基 [1，2,4]三唑并[3,4-/]-1，6-萘啶-8-基）苯基]-5,8-二氧雜螺 [3.4] 辛-2-胺（1-18)。NMR (CDC13) δ 9.73-9.68 (m，1H)， 9.18 (s, 1H), 9.05-9.00 (m, 2H), 7.60-7.58 (m, 1H), 7.50- 7.45 (m, 2H), 7.44-7.40(m, 1H) 7.38-7.3 (m, 7H), 4.05-3.98 (m, 2H), 3.92-3.85 (m, 2H), 2.94-2.85 (m, 2H), 2.55-2.50 (m，2H)。實例1 人類Akt同型體及ΔΡΗ-Aktl之選殖按照下列製備pS2neo介體（在2001年4月3曰作為ATCC PTA-3253儲存於ATCC中）：用Bglll切割pRmHA3介體（按照在 Nucl. Acid Res.l6:1043-1061 (1988)中所述製備）並分離 2734 bp片段。puChsneo 介體（按照在五 «/. 4:167-171

(1985)中所述製備）亦用Bgin切割並分離4〇29 bp帶。將此兩個分離片段連接在一起以產生稱為pS2neo-l之介體。該質粒含有位於金屬硫蛋白啓動子與醇脫氫酶p〇ly A添加位點之間的多位點接頭。其亦具有受熱休克啓動子驅動之 ne〇抗性基因。用Psp5II及BsiWI切割pS2ne〇-l介體。合成兩種互補寡核苷酸且隨後對其進行退火（CTGCGGCCGC 128379.doc •99· 200930365 (SEQ.ID.NO.: 1)及 GTACGCGGCCGCAG (SEQ.ID.NO.: 2))。將切下pS2neo-l及經退火募核苷酸連接在一起以產生第二介體pS2neo。在此轉化中添加了 Notl位點以幫助在轉染至S2細胞中之前進行線性化。藉由PCR (Clontech)自人類脾臟cDNA (Clontech)開始擴增人類Aktl基因，使用5·引物： 5'CGCGAATTCAGATCTACCATGAGCGACGTGGCTATTGT G 3’（SEQ.ID.N0.: 3)及 3,引物： ❹ 5，CGCTCTAGAGGATCCTCAGGCCGTGCTGCTGGC3' (SEQ.ID.N0.: 4)。該5'引物包含EcoRI及Bglll位點。出於選殖目的，該3’引物包含Xbal及BamHI位點。所得PCR產物作為EcoRI/Xba I片段亞選殖至pGEM3Z (Promega)中。出於表現/純化目的，對全長Aktl基因之5'末端添加中間T 標籤，使用PCR引物： 5'GTACGATGCTGAACGATATCTTCG 3' (SEQ.ID.NO.: 5)。所得PCR產物包含5' ΚρηΙ位點及3' BamHI位點，該等〇位點用於亞選殖具有含有昆蟲細胞表現介體pS2neo之生物素標籤的框内片段。對於Aktl之普列克底物蛋白同源結構域（PH)缺失（Aaa ΑΗΡ ，其涉及一部分 Aktl 絞鏈區缺失）版本之表現而言，使用全長Aktl基因在作為模板之pS2neo介體中實施PCR缺失誘變。以2步實施該PCR，使用重疊内部引物 (5'GAATACATGCCGATGGAAAGCGACGGGGCTGAAGAG ATGGAGGTG 3· (SEQ.ID.NO·: 6)及 128379.doc -100- 200930365 5'CCCCTCCATCTCTTCAGCCCCGTCGCTTTCCATCGGCA TGTATTC 3’（SEQ.ID.NO.: 7))，該等内部弓丨物包含該缺失區及5'和3’侧接引物，該等側接引物包含ΚρηΙ位點及5'端上之中間Τ標籤。用ΚρηΙ及Smal消化最終PCR產物並連接至pS2neo全長AktlKpnl/Smal切割介體中，用該缺失版本有效地置換該選殖體之5'端。藉由成人大腦cDNA (Clontech)之PCR來擴增人類Akt3基因，使用胺基末端oligo引物： ❹ 5' GAATTCAGATCTACCATGAGCGATGTTACCATTGTG 3' (SEQ.ID.NO.: 8);及羧基末端oligo引物： 5' TCTAGATCTTATTCTCGTCCACTTGCAGAG 3'(SEQ.ID.N0.: 9) °

此等引物包含用於選殖目的之5’ EcoRI/Bglll位點及Y

Xbal/Bglll位點。將所得PCR產物選殖至pGEM4Z (?1*〇1116§&)之£〇〇111和父5&1位點中。出於表現/純化目的，對全長Akt3之5'端添加中間T標籤，使用PCR引物：

_ 5'GGTACCATGGAATACATGCCGATGGAAAGCGATGTTA 〇 CCATTGTGAAG3'(SEQ.ID.NO.: 10)。所得 PCR 產物涵蓋 5' ΚρηΙ位點，該位點允許用含有昆蟲細胞表現介體pS2neo之生物素標籤於框内選殖。藉由PCR自人類胸腺cDNA (Clontech)擴增人類Akt2基因，使用胺基末端oligo引物： 5' AAGCTTAGATCTACCATGAATGAGGTGTCTGTC 3' (SEQ.ID.NO.: 11);及羧基末端 oligo引物： 5'GAATTCGGATCCTCACTCGCGGATGCTGGC 3' 128379.doc •101· 200930365 (SEQ.ID.NO.: 12)。此等引物包含用於選殖目的之5’ Hindlll/Bglll位點及3'EcoRI/BamHI位點。將所得PCR產物亞選殖至pGem3Z(Promega)之Hindlll/EcoRI位點中。出於表現/純化目的，對全長Akt2之5'末端添加中間T標籤，使用PCR引物： 5'GGTACCATGGAATACATGCCGATGGAAAATGAGGTGT CTGTCATCAAAG 3' (SEQ_ID.NO.: 13)。按照上文所述將所得PCR產物亞選殖至pS2neo介體中。

〇實例2 人類Akt同型艟及ΔΡΗ-Aktl之表現純化在pS2neo表現介體中含有選殖Aktl、Akt2、Akt3及 △PH-Aktl基因之DNA並藉由磷酸鈣方法使用該DNA轉染果蠅S2細胞（ATCC)。選擇抗生素（G418, 500 pg/ml)抗性細胞池。將細胞擴大至1.0 L體積（〜7.〇xl 06/ml)，添加生物素及CuS04以使最終濃度分別達50 μΜ及50 mM。使細胞在27 °C下生長72 h並藉由離心收穫之。在-70°C下冷凍細胞糊直到需要時》實例3 人類Akt同型體及ΔΡΗ-Aktl之純化藉由用50 ml存於緩衝液A (50 mM Tris pH 7.4，1 mM EDTA, 1 mM EGTA，0_2 mM AEBSF, 10 pg/ml苯曱脒，各自為5 pg/ml之亮抑蛋白酶肽（leupeptin)、抑肽酶及胃蛋白酶抑制素，10%甘油及1 mM DTT)中之1% CHAPS進行超聲波處理來裂解在實例2中所述1公升S2細胞之細胞糊。使 128379.doc • 102- 200930365 用負載有9 mg/ml抗-中間T單株抗體之Protein G Sepharose 快速流動（Pharmacia)管柱且用存於含有25%甘油之緩衝液 A中之75 μΜ EYMPME (SEQ.ID.N0.: 14)肽溶離來純化可溶性部分。彙集含有Akt/PKB之部分並藉由SDS-PAGE評定蛋白純度。使用標準Bradford協議定量純化蛋白。用液氮迅速冷凍純化蛋白並於-70°C下儲存之。

自S2細胞純化之Akt普列克底物蛋白同源結構域缺失及 Akt需要活化。在含有 10 nM PDK1 (Upstate Biotechnology 公司）、脂質媒劑（10 μΜ磷脂醯肌醇-3,4,5-三磷酸酯-Metreya公司，100 μΜ磷脂醯膽鹼及100 μΜ磷脂醯絲胺酸-Avanti Polar lipids 公司）及活化緩衝液（50 mM Tris pH 7.4, 1.0 mM DTT，0.1 mM EGTA，1.0 μΜ微囊藻素-LR，0·1 mM ATP, 10 mM MgCh，333 pg/ml BSA及 0.1 mM EDTA)之反應中活化Akt及Akt普列克底物蛋白同源結構域缺失（Alessi 等人，Cwrrewi βζο/ogj 7:261-269)。將該反應物於 22°C 下培育4小時。在液氮中迅速冷凍各等份。實例4

Akt激酶分析利用GSK-源生物素化肽基質分析活化Akt同型體及普列克底物蛋白同源結構域缺失構建體。藉由均相時間分辨螢光（HTRF)使用對磷酸肽具有特異性之鑭系螯合物（Lance)-偶聯之單株抗體以及鏈黴抗生物素鏈接之別藻藍蛋白（SA-APC)螢光團（其可與該肽之生物素部分結合）測定肽磷酸化之程度。當該Lance及APC靠近（即’與相同磷酸肽分子結 128379.doc -103- 200930365 合）時，自Lance至APC發生非放射性能量轉移，繼而在665 nm下自APC發光。該分析所需材料： A·活化Akt同功酶或普列克底物蛋白同源結構域缺失構建體。 B. Akt 肽基質：GSK3oc (S21)肽 #3928 生物素-GGRARTS SFAEPG (SEQ.ID.NO.: 15) ， Macromolecular

Resources ° ❹ C. Lance標記之抗-磷酸化GSK3oc單株抗體（Cell Signaling Technology，選殖體 # 27) ° D· SA-APC (Prozyme目錄編號PJ25S 批號 896067)。 E. Microfluor®B U形底微量滴定板（Dynex Technologies，目錄編號7205)。 F. Discovery® HTRF微量板分析儀，Packard Instrument公司0 G. 100 X蛋白酶抑制劑混合劑（PIC) : 1 mg/ml苯甲脒，0.5 ❹ mg/ml胃蛋白酶抑制素，0.5 mg/ml亮抑蛋白酶肽，0.5 mg/ml抑肽酶。 Η. 10X分析緩衝液：500 mM HEPES，pH 7.5，1% PEG, 1 mM EDTA, 1 mM EGTA, 1% BSA，20 mM θ-甘油磷酸酯。 I. 淬滅緩衝液：50 mM HEPES pH 7.3，16.6 mM EDTA， 0.1% BSA，0.1% Triton X-100，0.17 nM Lance標記之單株抗體選殖體 # 27, 0.0067 mg/ml SA-APC。

J. ATP/MgCl2工作溶液：IX分析緩衝液，1 mM DTT，IX 128379.doc 200930365 PIC，125 mM KCl，5%甘油，25 mM MgCl2, 375 TM ATP » K. 酵素工作溶液：lx分析緩衝液，i mM DTT，IX PIC， 5%甘油’活性Akt。選擇最終酵素濃度以便該分析在線性反應範圍内。 L. 肽工作溶液：IX分析緩衝液，1 mM DTT, IX PIC，5% 甘油，2 TM GSK3生物素化肽# 3928。藉由向96-孔微量滴定板之適當孔中添加16 Tl ATP/MgCh工作溶液來對反應物進行組合。繼1〇 T1肽工作溶液之後添加抑制劑或媒劑（1.0 T1)。藉由添加13 T1酵素工作溶液並混合來開始該反應。使該反應進行50 min且隨後藉由添加60 Tl HTRF淬滅緩衝液來終止該反應。將該等終止反應物在室溫下培育至少30 min且隨後在Disco very儀器上讀取。用於鍵撤抗生物素迅速孔板分析之程序：步驟1 : 向 20 μΐ 2X基質溶液（20 μΜ GSK3肽，300 μΜ ATP，20 mM MgCl2, 20 pCi/ml [γ33Ρ] ATP，IX分析緩衝液，5%甘油，1 mM DTT，IX PIC，0.1% BSA及 100 mM KC1)中添加該測試化合物存於100% DMSO中之溶液（1 μΐ)。藉由添加 19 μΐ 2Χ酵素溶液（6.4 ηΜ活性Akt/PKB，IX分析緩衝液， 5%甘油，1 mM DTT，IX PIC及0.1% BSA)來開始磷酸化反應。隨後在室溫下將該等反應物培育45分鐘。步驟2 : 藉由添加170 μΐ 125 mM EDTA來終止該反應。將200 μΐ 128379.doc -105· 200930365 終止反應物轉移至鏈黴抗生物素Flashplate® PLUS (NEN Life Sciences，目錄編號SMP103)。使用孔板振盪器將該孔板在室溫下培育210分鐘。抽取每個孔之内容物並以200 μΐ TBS每孔將該等孔沖洗2次。隨後以200 μΐ TBS每孔將該等孔洗滌3次，5分鐘，在洗滌步驟期間用平臺式振盪器在室溫下培育該等孔板。用密封膠帶覆蓋該等孔板並使用具有用於計數存於 Flashplate 中[33Ρ]之合適配置的 Packard TopCount計數。用於鏈擻抗生物素過濾板分析之程序：步驟1 : 實施上文如在鏈黴抗生物素迅速孔板分析之步驟1中所述酶促反應》步驟2 : 藉由添加20 μΐ 7.5 Μ氫氣酸胍來終止該反應。將50 μΐ終止反應物轉移至鏈黴抗生物素過濾板（SAM2™ Biotin Capture Plate，Promega，目錄編號V7542)並用過滤器將該反應物培育1-2分鐘，隨後施加真空。隨後使用真空歧管以如下方式洗滌該孔板：1)4x200 μι/ 孔之2 M NaCl ; 2) 6x200 μΐ/孔之2 M NaCl及 1% Η3Ρ04 ; 3) 2x200 μΐ/孔之 diH20 ;及 4) 2x100 μΐ/孔之 95%乙醇。隨後對該等膜進行徽底地空氣乾燥，然後添加閃爍體。用白色背襯膠帶封閉該孔板之底部’添加30 μΐ/孔之 Microscint 20 (Packard Instruments ’ 目錄編號6013621) 〇用透明密封膠帶封閉該孔板之頂部，且隨後使用具有用於 128379.doc -106- 200930365 計數存於液體閃爍體中[33P]之合適配置的Packard TopCount計數。用於磷酸織維素過濾板分析之程序：步驟1 : 按照在鏈黴抗生物素迅速孔板分析（上文）之步驟1中所述利用 KKGGRARTSSFAEPG (SEQ.ID.NO.: 16)作為基質代替生物素-GGRARTSSFAEPG實施該等酶促反應。步驟2 : © 藉由添加20 μΐ 0.75% H3P04來終止該反應。將50 μΐ終止反應物轉移至過濾板（UNIFILTER™，Whatman Ρ81強陽離子交換體，White Polystyrene 96孔板 ’ Polyfiltronics，目錄編號7700-3312)中並藉助過濾器將該反應物培育1-2分鐘，隨後施加真空。隨後使用真空歧管以如下防止洗滌該孔板：1) 9x200 μΐ/ 孔0.75% Η3Ρ〇4 ;及2) 2x200 μΐ/孔diH20。用白色背襯膠帶封閉該孔板之底部，隨後添加30 μΐ/孔之Microscint 20。用〇透明密封膠帶封閉該孔板之頂部，且使用具有用於計數 [33P]及液體閃燦體之合適配置的Packard TopCount計數。 PKA分析：各個PKA分析係由下列組份構成： A. 5X PKA 分析缓衝液（200 mM Tris pH 7.5，100 mM MgCl2, 5mM β-酼基乙醇，0.5 mM EDTA) B. 50 μΜ在水中稀釋之Kemptide (Sigma)的原液 C. 藉由將1.0 μΐ 33P-ATP [10 mCi/ml]稀釋成 200 T1 未經標 128379.doc -107- 200930365 記ATP之50 μΜ原液製備得33Ρ-ΑΤΡ D. 10 μΐ在0.5 mg/ml BSA中稀釋之PKA催化亞單位（UBI目錄編號14-114)的70 nM原液 E. PKA/Kemptide工作溶液：等體積的5X PKA分析緩衝液，Kemptide溶液及PKA催化亞單位。在96深-孔分析孔板中來對反應物進行組合。向10 T1 33P-ATP溶液中添加抑制劑或媒劑（10 T1)。藉由向每個孔中添加30 T1 PKA/Kemptide工作溶液來開始該反應。混合該等反應物並將其在室溫下培育20 min。藉由添加50 T1 100 mM EDTA及100 mM焦磷酸鈉並混合來終止該等反應。用p81磷酸纖維素96孔過濾板（MiUipore)收集酵素反應產物（磷酸化Kemptide)。為了準備該孔板，用75 mM磷酸填充p81過濾板之每個孔。藉由對該孔板底部施加真空經由過濾器排空該等孔。向每個孔中添加磷酸（75 mM，1 70 μΐ)。向含有磷酸之過遽板的對應孔中添加30 μΐ來自每一終止ΡΚΑ反應之等份試樣。在施加真空後藉助過濾器捕集肽並用75 mM磷酸將過濾器洗滌5次。在最後洗滌後，對過濾器實施空氣乾燥。向每個孔中添加閃燦液（30 μΐ)並在 TopCount (Packard)上對該過濾、器進行言十數。 PKC分析：各PKC分析係由下列組份構成： A. 10X PKC共活化緩衝液：2.5 mM EGTA, 4 mM CaCl2 B. 5X PKC活化緩衝液：1.6 mg/ml磷脂醯絲胺酸，0.16 128379.doc -108 - 200930365 mg/ml二酿甘油，100 mM Tris pH 7.5，50 mM MgCh，5 mM β-Μ基乙醇 C. 藉由將 1.0 μΐ 33P-ATP [10 mCi/ml]稀釋成 100 μΐ未經標記ATP之100 μΜ原液製備得33Ρ-ΑΤΡ D. 在水中稀釋之髓鞘鹼性蛋白（350 pg/ml, UBI) E. 稀釋成0·5 mg/ml BSA 之 PKC (50 ng/ml, UBI 目錄編號 14-115) F. PKC/髓鞘鹼性蛋白工作溶液：藉由混合各自為5體積之 PKC共活化緩衝液及髓鞘鹼性蛋白與各自為10體積之PKC 活化緩衝液及PKC製備得。在96深-孔試驗板中對該等分析物進行組合。向5.0 μΐ 33Ρ-ΑΤΡ中添加抑制劑或媒劑（10 Τ1)。藉由添加PKC/髓鞘鹼性蛋白工作溶液並混合來開始反應。將反應物在30°C下培育20 min。藉由添加50 ΤΙ 100 mM EDTA及100 mM焦磷酸鈉並混合來終止反應。用PVDF膜將磷酸化髓鞘鹼性蛋白收集於96孔過濾板中並藉由閃爍計數來定量。在上述分析中測試於示意圖及表中所述本發明之化合物且發現該等化合物對Aktl、Akt2及Akt3中的一種或多種具有 $50 μΜ之 IC50。實例5 基於細胞之分析以測定Akt/PKB抑制在平皿中以100 mM平鋪細胞（例如，具有活化Akt/PKB 之LnCaP或PTEN(-")腫瘤細胞系）。當該等細胞為約70%至 80%鋪滿時，對該等細胞再喂送5 ml新鮮培養基並向溶液 128379.doc -109- 200930365 中添加測試化合物。對照包含未經處理細胞、經媒劑處理之細胞及經濃度分別為20 μΜ或200 nM之LY294002 (Sigma)或渥曼青黴素（Sigma)處理之細胞。將該等細胞培育2、4或6 hr並去除培養基，用PBS洗滌細胞、刮除並轉移至離心試管中。使該等細胞沈澱並再次用PBS洗滌之。最後，將該細胞沈澱重新懸浮於溶胞緩衝液（20 mM Tris pH 8, 140 mM NaCl，2 mM EDTA，1% Triton，1 mM焦磷酸納，10 mM β-甘油填酸醋，10 mM NaF, 0.5 mm NaV〇4, 1 μΜ微囊藻素及1 x蛋白酶抑制劑混合劑）中，置於冰上1 5分鐘並輕柔地使之形成漩渦以裂解該等細胞。於4°C下，在 Beckman臺式超速離心機中以100,000xg將該裂解物旋轉20 min。藉由標準Bradford協議（BioRad)定量該上清液蛋白並在-70°C下儲存直至需要。按照下列自澄清裂解物免疫沈澱（IP)蛋白：對於 Aktl/ΡΚΒα而言，將裂解物與 Santa Cruz sc-7126 (D-17)在 NETN (100 mM NaCl, 20 mM Tris pH 8.0, 1 mM EDTA, 0.5% NP-40)中混合並添加蛋白A/G瓊脂糖（Santa Cruz sc-2003) 。對於 Akt2/PKBP而言，將裂解物與抗 -Akt2瓊脂糖 (Upstate Biotechnology #16-174)在 NETN 中混合且對於 Akt3/PKBy而言，將裂解物與抗-Akt3瓊脂糖（Upstate Biotechnology #16-175)在 NETN 中混合。將 IP 在 4°C 下培育過夜、洗滌並藉由SDS-PAGE分離之。使用西方點潰分析來分析總Akt、pThr308 Aktl、 pSer473 Aktl及Akt2和Akt3上之對應磷酸化位點及Akt之下 128379.doc -110- 200930365 游目標，使用特異性抗體（Cell Signaling Technology):抗-總Akt (目錄編號9272)、抗-磷酸化Akt絲胺酸473 (目錄編號9271)及抗-磷酸化Akt蘇胺酸308 (目錄編號9275)。在使用於PBS + 0.5%脫脂幹乳（NFDM)中稀釋之適當一級抗體在4°C下培育過夜後，在室溫下用存於PBS + 0.5% NFDM 中之Horseradish過氧化物酶（HRP)標記之二級抗體培育1小時。用 ECL試劑（Amersham/Pharmacia Biotech RPN2134)檢測蛋白。

❹ 實例6 神經生長因子刺激之Akt活化以1 X 106個細胞每孔板（100 mM)平鋪MCF7細胞（作為 PTEN+/+之人類乳癌細胞系）。當該等細胞為70%至80%鋪滿時，對該等細胞再喂送5 ml不含血清之培養基並培育過夜。次日早上，添加化合物並將該等細胞培育1-2 hr ’此後添加神經生長因子（以引發Akt活化）30分鐘並按照上文所述分析該等細胞。實例7 腫瘤生長抑制可藉由此項技術中熟知若干協議證實癌細胞生長抑制劑之活體内功效。在第0天，將呈現PI3K途徑（例如，LnCaP、PC3、 C33a、OVCAR-3、MDA-MB-468、A2780或諸如此類）失調之人類腫瘤細胞系經皮下注入6-1 0週齡雌性裸（對於前列腺腫瘤異種移植物[LnCaP及PC3]，亦可使用雄性小鼠[10-14 128379.doc -111 - 200930365 週大])鼠（Harlan)之左側腹中。將該等小鼠隨機分成媒劑治療組化口物/台療組或組合治療組。在第i天，開始每日皮下才又藥並在試驗期間維持。或者，可藉由連續輸液幫浦投與該抑制劑測試化合物。以〇 2 ml之總體積遞送化合物、化合物組合或媒劑。當經媒劑治療之動物呈現直徑為 O.5-1.0 cm之損傷時（通常在注射該等細胞後4週至5 5週），切除腫瘤並稱重。計算每種細胞系之每個治療組之腫瘤的平均重量。 ❹ 實例8 點溃多重分析此程序闡述用於檢測存於96孔格式板之相同孔中多重磷酸化蛋白的三明治免疫分析。在96-孔板中培育細胞裂解物’在該等96-孔板上於相同孔内以在空間上獨立之斑點形式佈置不同的捕捉抗體《添加磷酸化特異性兔子多株抗體並藉由經電化學發光標籤標記之抗兔子抗體檢測該複合物。 ❹ 96-孔LNCaP板+/-化合物：以Beckman J6 1200 rpm將抽吸物培養基旋轉10 min。添加 50 μΐ/孔：TBS (Pierce #28376-20 mM Tris pH 7.5，150 mM NaCl)+l% Triton X-100+蛋白酶及碟酸酶抑制劑。以塑性纏繞物纏繞，置於-70°C冷凍機中直至完全冷凍。用 3%阻斷劑A存於IX Tris Wash Buffer中之溶液（150 μΐ/孔）阻斷 Multiplex Plates (Meso Scale Discovery, Gaithersburg， MD)。用孔板密封器覆蓋’用Micromix振盪器於RT下培育 128379.doc -112- 200930365 2 h (最少）。用IX RCM 51 (TTBS)洗滌。將解凍細胞裂解物孔板置於冰上，向經封阻孔板中添加40 μΐ裂解物/孔。用孔板密封器覆蓋，用Micromix振盈器於4 °C 0/Ν下；^ 育，用IX RCM 51洗滌。在存於IX Tris Wash Buffer(抗碟酸化AKT (T308)，抗麟酸化Tuberin (T1462)，單獨或二者之組合）中之1%阻斷劑A中稀釋二級抗體。添加25 μΐ/孔，用孔板密封器覆蓋並用Micromix振盪器於RT下培育3 h。用IX RCM 51洗滌。在存於IX Tris Wash Buffer中之1%阻 © 斷劑A中稀釋Ru-GAR。添加25 μΐ/孔，用孔板密封器覆蓋並用Micromix振盪器於RT下培育1 h。用IX RCM 51洗滌。用水稀釋4X讀取緩衝液T至IX，添加200 μΐ稀釋讀取緩衝液/孔。用Sector 6000顯像議讀數。蛋白酶及磷酸酶抑制劑：微囊藻素-LR, Calbiochem # 475815至1 μΜ最終濃度（原液 = 500 μΜ)

Calbiochem # 524624, 100X Set I Calbiochem # 524625, 100X Set II Calbiochem # 539134, 100X Set III 抗磷酸化AKT (T308):

Cell Signaling Technologies # 9275 抗磷酸化 Tuberin (T1462):

Covance親和純化（兔子 MS 2731/2732)

Ru-GAR=釕睃化山羊抗兔子 128379.doc -113 - 200930365 10X Tris Wash Buffer，阻斷劑A及4X讀取緩衝液Τ 10X RCM 51 (10X TTBS, RCM 51) 1X=20 mM Tris pH 7.5, 140 mM NaCl, 0.1% Tween-20 實例9 基於細胞之（活體内）分析此程序闡述用於Akt絲胺酸/蘇胺酸激酶之基於細胞之（活體内）活性分析。活化内源性Akt能夠磷酸化經生物素化之特異性Akt基質（GSK3P)肽。藉由均相時間分辨螢光 (HTRF)使用對磷酸肽具有特異性之銪穴狀化合物[Eu(K)]-偶聯之抗體以及鏈黴抗生物素鏈接之XL665螢光團（其可與該肽之生物素部分結合）實施測定。當該[Eu(K)]及XL665 靠近（即，與相同磷酸肽分子結合）時，自Eu(K)至XL665發生非放射性能量轉移，繼而在665 nm下自XL665發光。該分析可用於檢測多重不同物種之所有3種Akt同功酶 (Aktl、Akt2及Akt3)之抑制劑，倘若各物種存在特異性抗體。材料及試劑 A. 細胞培養微量滴定平底96孔板，Corning Costar，目錄編號3598。 B. 經反應結合蛋白A塗覆之96-孔板，Pierce，目錄編號 15130 。 C. 經反應結合蛋白G塗覆之96-孔板，Pierce，目錄編號 15131 。 D. Micromix 5振盈器。 128379.doc -114- 200930365 E. Microfluor®B U形底微量滴定板，Dynex Technologies，目錄編號7205。 F. 96孔板洗蘇器，Bio-Tek Instruments，目錄編號EL 404。 G. Discovery® HTRF微量板分析儀，Packard Instrument公司0 緩衝溶液 A. IP激酶細胞裂解緩衝液：IX TBS; 0.2% Tween 20; IX蛋白酶抑制劑混合劑III (原液係100X，Calbiochem， © 539134) ; IX磷酸酶抑制劑混合劑I (原液係100X，

Calbiochem，524624);及IX填酸酶抑制劑混合劑II (原液係 100X，Calbiochem，524625) 〇 B. 10X分析緩衝液：500 mM Hepes pH 7.5; 1% PEG; 1 mM EDTA; 1 mM EGTA ;及 20 mM β -甘油鱗酸醋。 C. IP激酶分析緩衝液：IX分析緩衝液；50 mM KC1; 150 μΜ ATP; 10 mM MgCl2; 5%甘油；1 mM DTT ; 1錠劑蛋白酶抑制劑混合劑每50 ml分析緩衝液；及0.1% BSA。〇 D. GSK3P基質溶液：IP激酶分析緩衝液；及500 nM生物素化。呂聊肽° E. Lance緩衝液：50 mM Hepes pH 7.5; 0.1% BSA ;及 0.1% Triton Χ-100 〇 F. Lance終止緩衝液：Lance緩衝液；及33.3 mM EDTA。 G. Lance 檢測緩衝液：Lance 緩衝液；13.3 pg/ml SA-APC ;及 0.665 nM EuK Ab a磷酸（Ser-21) GSK3B。多步驟免疫沈澱Akt激酶分析 128379.doc -115 - 200930365 第1天 A. 播種C33a細胞步驟：在96孔微量滴定板中平鋪60,〇〇〇個C33a細胞/孔。 B. 將細胞於37°C下培育過夜。第2天 D·化合物添加步驟：向上述96孔板中添加存於新鮮培養基（α-ΜΕΜ/10% FBS，室溫）中之化合物並在組織培養培育箱中培育5 hr。〇 E.細胞裂解步驟：抽取培養基並添加100 μΐ IP激酶細胞裂解緩衝液。 F. 於-7(TC下冷凍96孔微量滴定板（注意：此步驟可進行至少1小時或整夜）。第3天 G. 塗覆蛋白A/G 96孔板步驟：向下列孔中添加存於1〇〇 Μ PBS中之適當濃度的α-Akt抗體（Aktl、Akt2或Akt3): a-Akt 1 (20 ng/孔Λ00 μΐ) Β2 »»»Β10/列B-G/Aktl孔板

Q a-Akt 2 (50 ng/孔/100 μΐ) B2 »»»B10/列B-G/Akt2孔板兔子-IgG (150 ng/孔/100 μΐ): Bll-Gll在每一孔板上(Aktl及Akt2) Η·使用Micromix 5 (形式20 ;姿態2)在冷室（+4°C )中培育4 小時（注意：狀態視Micromix 5機器而定）。 I. 抽出a-Akt抗體溶液並向每孔中添加1〇〇 piPBS。 J. Akt免疫沈澱步驟：向1〇〇 μΐ步驟（I)之PBS中添加5 μΐ解凍細胞裂解物（對於Aktl孔板）及10 μΐ解凍細胞裂解物（對於Akt2孔板）。注意：解凍細胞裂解物位於冰上。藉由在 128379.doc -116- 200930365 轉移至抗體孔板中之前來回吸移10X來混合解凍裂解物。用冰保存該等細胞裂解物孔板。在將細胞裂解物轉移至抗體孔板之後，於-70°c下冷藏該細胞裂解物。 K. 使用Micromix 5 (形式20 ;姿態3)在冷室（+4°C )中培育整夜。第4天 L. 免疫沈澱孔板洗滌步驟：藉助TTBS (RCM 51，1X=2個循環）使用96-孔板洗滌器洗滌96孔板IX。用TTBS填充各孔並培育10分鐘。用TTBS洗滌96孔板2X。（注意：在使用前預先準備好孔板洗滌器：1.檢查緩衝液儲蓄器，確保其滿載且2.排空廢物容器。 M_手動孔板洗滌步驟：添加180 μΐ IP激酶分析緩衝液。 N.開始Akt酵素反應：抽取上清液。添加60 μΐ GSK3p基質溶液。 Ο.使用Micromix 5振盪器在RT下培育2.5小時。注意：應調整培育時間以便管柱1 〇/管柱11之比例不會> 1 〇。 P. 混合30 μΐ Lance檢測緩衝液與30 μΐ Lance終止緩衝液 (60 μΐ總量/孔）並添加至黑色Microfluor U形底96孔板中。 Q. 終止Akt酵素反應：將40 μΐ來自步驟（Ο)之蛋白A/G96 孔板之Akt酶促反應混合物轉移至步驟（Ρ)之黑色 Microfluor U形底96孔板中。 U.使用Micromix 5振盪器（形式20，姿態3)在室溫下培育 1-2 hr，隨後藉助Discovery HTRF微量板分析儀使用Akt程序讀取。 128379.doc •117- 200930365 ip激酶細胞裂解緩衝液 100 μΐ每孔 8 ml (1個孔板） 45 ml (6個孔板） 1XTBS 7744 μΐ ΝΑ Tween 20 20 μΐ ΝΑ 1X蛋白酶抑制劑混合劑III 80 μΐ ΝΑ IX碟酸酶抑制劑混合劑I 80 μΐ 450 μΐ IX磷酸酶抑制劑混合劑II 80 μΐ 450 μΐ 微囊藻素LR(500X) 90 μΐ IP激酶分析緩衝液

100 μΐ每孔 8 ml (1個孔板） 50 ml (3個孔板） ιοχ分析緩衝液 800 μΐ 5 ml 1 MKC1 400 μΐ 2.5 ml 250 mM ATP 4.8 μΐ 30 μΐ 1 M MgCl2 80 μΐ 500 μΐ 甘油 400 μΐ 2.5 ml 1 MDTT 8 μΐ 50 μΐ 蛋白酶抑制劑混合劑 1片錠劑/50 ml 1 10%BSA 80 μΐ 500 μΐ didH2〇 6227.2 μΐ 38.9 ml GSK3B基質溶液

60 μΐ每孔 5 ml (1個孔板） 7 ml IP激酶分析緩衝液 1 mM GSK3B 肽 5 ml 2.5 μΐ 3.5 μΐ

Lance終止緩衝液 30 μΐ每孔 128379.doc 118- 200930365 3 ml Cl個孔板） 5 ml 5 ml IX Lance緩衝液 EDTA 0.5 Μ 2800.2 μΐ 199.8 μΐ

Lance檢測緩衝液 30 μΐ每孔 3 ml (1個孔板） 5 ml SA-APC (1 mg/ml，存於ddH2〇中，以1/75.2在Lance緩衝液中稀釋） 40 μΐ 66.7 μΐ EuK Ab a-磷酸化(Ser 21)GSK3fl (680 nM，以1/1133在Lance緩衝液中稀釋） 2.7 μΐ 4.5 μΐ

128379.doc 119-

Claims

200930365 十、申請專利範圍： 1. 一種式A之化合物：

其中：丑、？、〇、11、1、1、1^、]^及1^獨立地選自：0或：^，其中£、1?、〇、11、1、1、《：、1^及河各自視情況經111取代；丑係0或1 ; b係0或1 ; m係0、1或2 ; p獨立地為〇、1、 2、3、4或 5 ; 環X係視情況經1個至5個R3取代之3-7員環院基或4-7員雜環基；環Y係視情況經1個至4個R4取代之4-7員環烧基或5-7員雜環基；環Z係選自：（C：3-C8)環院基、芳基、雜芳基及雜環基； R1獨立地選自：Η、氧代基、（0 = 0)^((^-(^0)烷基、 (C=0)aOb-芳基、（C=0)aOb(C2-C1())稀基、（c=〇)a〇b (c2- Cio)炔基、C02H、自素、OH、OJCrCe)全氟烷基、 (C = 0)aNR7R8 ' CN 、（C = 0)a0b(C3-C8)環烷基、 S(〇)mNR7R8、SH、SCC^m-CCi-Ci。）烧基及（c=〇)a〇b_雜環 128379.doc 200930365 基，該燒基、笔# ^ ^ _ 方基、烯基、炔基、環烷基及雜環基視情況經一個或多個選自R6之取代基取代； R2獨立地選自：氧代基、（㈣)aC)b(Ci_Ci。）院基、 ()a〇b 芳基、（C=〇)a〇b(C2-C10)烯基、（c=〇)a〇b (c2. C,0)快基、C〇2H、_ 素、〇H、〇b(Ci C6)全氣烧基、 (C=())aNTV、CN、（C=0)a0b(C3-C8)環烧基、SH、 S(0)mNRR、s(〇)m(c 丨·。丨。)烷基及(c = 〇)a〇b 雜環基，該烷基、芳基、烯基、炔基、環烷基及雜環基視情況經一個或多個選自R6之取代基取代； R獨立地選自：氧代基、（c=〇)a〇b(Ci_CW烷基、 (c=0)a〇b_芳基、（C=〇)a〇b(C2-C10)烯基、（c=〇)a〇b (c2_ C10)炔基、c〇2H、函素、OH、〇b(Ci C6)全氟烷基、 (C=〇)aNR7R8、CN、（C=0)a0b(c3-c8)環烷基、SH、 S(0)mNR7R8、s(〇)m_(Ci_CiG)烷基及（c=；〇)a〇b•雜環基，該烷基、芳基、烯基、炔基、環烷基及雜環基視情況經一個或多個選自R6之取代基取代； R4獨立地選自：氧代基、（C=0)a〇b(Ci_CiG)烷基、 (C=0)a〇b-芳基、（c=〇)a〇b(C2-C1())稀基、（c=〇)a〇b (c2_ c10)炔基、C〇2H、齒素、OH、Ob(Cl_C6)全氟烷基、 (C=0)aNR R8、cn、（C=〇)a〇b(C3-C8)環院基、SH、 S(0)mNR7R8、烷基及（c=〇)a〇b 雜環基，該烷基、芳基、烯基、炔基、環烷基及雜環基視情況經一個或多個選自R6之取代基取代； R6係·（C=〇)a〇bCl_Cio炫基、（C=〇)a〇b芳基、c2_Ci〇稀 128379.doc 200930365 基、C2-C10炔基、（c=0)a0b雜環基、C02H、鹵素、CN、 OH、ObCrCe 全氟烷基、0a(C=0)bNR7R8、氧代基、 CH〇、（N=〇)R7r8、S⑼mNR7R8、SH、SCOVCCj-C!。)烷基或（C = 〇)a〇bc3-C8環烷基，該烷基、芳基、烯基、炔基、雜環基及環烷基視情況經一個或多個選自R0a之取代基取代； R6a係選自：（CsCOaOdCVCH))烷基、OJCVCs)全氟烷基、（c0-c6)伸烷基_s(0)mRa、SH、氧代基、OH、鹵素、CN' (C2-C1())稀基、（C2-C1())炔基、（C3-C6)環貌基、 (C〇-C6)伸烷基·芳基、（C(rc6)伸烷基_雜環基、（C(rC6)伸烧基-N(Rb)2、c(〇)Ra、（c〇-C6)伸烷基-C02Ra、C(0)H及 (Co-Ce)伸烷基_C〇2h，該烷基、烯基、炔基、環烷基、芳基及雜環基視情況經至多3個選自、〇H、（C!-C6)院氧基、鹵素、C02H、CN、OJCsOMCVCd烷基、氧代基及N(Rb)2之取代基取代； R7及R8獨立地選自：Η、（oohObt^-C,。）烷基、 (c=o)aob(c3-c8)環烧基、（c=0)a〇b_芳基、（c=〇)a〇b 雜環基、（c2-c1())烯基、（C2_Ciq)炔基、SH、s〇2Ra& (C=0)aNRb2，該烷基、環烷基、芳基、雜環基、烯基及炔基視情況經一個或多個選自Rea之取代基取代，或者R7 及R8可與其所連接氮—起形成在每-環中具有3_7個成員且除該氮外視情況含有—個或兩個選自N、〇及s之額外雜原子的單環或二環雜環，該單環或三環雜環視情況經一個或多個選自R6a之取代基取代； 128379.doc 200930365 Ra係（CVC6)烷基、（C3-C6)環烷基、芳基或雜環基；且 1^獨立地為：Η、（CVCd烷基、芳基、雜環基、（C3 c6)環烷基、（CsCOaCMCVCO 烷基或 S(0)mRa; 或其醫藥上可接受之鹽或立體異構體。 2. 一種式A之化合物，其中：

且所有其他取代基及變數係如請求項1中所定義； 128379.doc 200930365 或其醫藥上可接受之鹽或立體異構體。 3. —種式B之化合物：

其中： ❹ P係〇、1或2 ; R2獨立地選自：（Ci-C6)炫基、（Ci_C6)烧氧基、 C02H、鹵素、OH及 NH2 ; 所有其他取代基及變數係如請求項2中所定義；或其醫藥上可接受之鹽或立體異構體。 4. 一種式C之化合物：

其中： a係0或1 ; b係0或1 ; m係0、1或2 ; p係〇、; R2係選自：（Cl-c6)烷基、（Cl_c6)烷氧基、c〇2H、函素、OH及 NH2 ; 環X係視情況經i個至3個R3取代之3_7員環烧基或4·7員 128379.doc 200930365 雜環基；環Y係視情況經1個至3個R4取代之4-7員環烷基或5_7員雜環基； R1係選自：Η、氡代基、（〇0)a0b(Cl_ClG)烷基、 (C = 〇)a〇b_^基、（C = 〇)a〇b(C2-Ci〇)稀基、（C = 〇)a〇b(C2-C10)炔基、C02h、鹵素、OH、Ob(CVC6)全氟烷基、 (C=0)aNR7R 、CN、（C=0)a〇b(C3-C8)環烷基、 S(0)mNR7R8、SH、烷基及（C = 〇)a〇b-雜環基，該炫基、芳基、稀基、炔基、環烧基及雜環基視情況經一個或多個選自R6之取代基取代； R3獨立地選自：（Cl-C6)烷基、C02H、鹵素、〇H、 (C 1 - C 6 )炫·氧基、（C 2 - C 1 〇 )稀基； R4獨立地選自：（Cl-C6)烷基、C02H、齒素、〇H、 (CVC6)烷氧基、（C2-C1G)烯基； R6係：（C=0)a〇bCl_Cl〇烷基、（〇〇)a〇b芳基、C2_Ci〇稀基、C2-C10快基、（C = 〇)a〇b雜環基、C02H、齒素、CN、 OH、ObCrCs 全氟烷基、〇a(c=〇)bNR7R8、氧代基、 CHO、（N=0)R7R8、呂⑼眞汍8、SH、SCOVA-Cio)烷基或（C=0)aObC3-C8環烷基，該烷基、芳基、烯基、炔基、雜環基及環烷基視情況經一個或多個選自R6a之取代基取代； R6a係選自：（CeCOaOJCVC^o)烷基、OaA-CJ全氟烷基、（C〇-C6)伸烷基-S(0)mRa、SH、氧代基、OH、鹵素、CN、（C2-C1G)烯基、（C2-C1G)炔基、（C3-C6)環烷基、 128379.doc 200930365 (C〇-C6)伸烷基-芳基、（C〇-C6)伸烷基-雜環基、（c0-c6)伸烷基-N(Rb)2、C(0)Ra、（C(rC6)伸烷基-C02Ra、C(〇)H及 (c〇-c6)伸烷基-C02H，該烷基、烯基、炔基、環烷基、芳基及雜環基視情況經至多3個選自Rb、OH、（C^Cd烷氧基、鹵素、C02H、CN、OJCsOMCVCe)烷基、氧代基及N(Rb)2之取代基取代； R7及R8獨立地選自：Η、（CsOhOJCi-Ci。）烷基、 (c=o)aob(c3-c8)環烷基、（c=o)aob-芳基、（c=o)aob_雜環基、（C2-C1G)稀基、（C2-C1Q)炔基、SH、S02Ra& (C=0)aNRb2，該烷基、環烷基、芳基、雜環基、烯基及炔基視情況經一個或多個選自R6a之取代基取代，或者R7 及R8可與其所連接氮一起形成在每一環中具有3-7個成員且除該氮外視情況含有一個或兩個選自N、〇及S之額外雜原子的單環或二環雜環’該單環或二環雜環視情況經一個或多個選自R6a之取代基取代，· RYMCrC6)烷基、（CVC6)環烷基、芳基或雜環基；且 R獨立地為：Η、（C^-Ce)烧基、芳基、雜環基、（c3_ C6)環烷基、（C=〇)a〇b(Cl_C6)烷基或 S(〇)mRa; 或其醫藥上可接受之鹽或立體異構體。 5· 一種式D之化合物： 128379.doc 200930365

其中： a係0或1 ; b係0或1 ; m係〇、1或2 ; p係0、1或2 ; R2係選自：（CVCd烷基、（CVCe)烷氧基、C02H、鹵 ▲ 素、OH及 NH2 ; Ο R1係選自：Η、氧代基、烷基、 (C=0)a0b-芳基、（C=0)a0b(C2-C1())烯基、（C=0)a0b(C2-C10)炔基、C02H、鹵素、OH、Ob(Ci-C6)全氟烷基、 (C=0)aNR7R8 、CN 、（C=0)a0b(C3-C8)環烷基、 S(0)mNR7R8、SH、SCCOmJCi-CM)烷基及（C=0)a0b-雜環基，該烷基、芳基、烯基、炔基、環烷基及雜環基視情況經一個或多個選自R6之取代基取代； Q R6係：（C^OhObCVCw烷基、（C=0)a0b芳基、（：2-(：10烯基、C2-C10炔基、（c = 0)a0b雜環基、C02H、鹵素、CN、 OH、ObCVG 全氟烷基、〇a(c=〇)bNR7R8、氧代基、 CHO、（N=0)R7R8、s(0)mNR7R8、SH、S^m-CCVC,。)烷基或（C=0)a0bC3-C8環烷基，該烷基、芳基、烯基、炔基、雜環基及環烧基視情況經一個或多個選自R6a之取代基取代； R6a係選自：（CsCOaCMCVCw)烷基、OJCVCJ全氟烷 128379.doc 200930365 基、（C0-C6)伸烷基-S(〇)mRa、SH、氧代基、〇H、鹵素、CN、（C2-C〗。）埽基、（c2-Cu))块基、（c3-C6)環烧基、 (C〇-C6)伸烷基-芳基、（cG-C6)伸烷基-雜環基、（Cq_c6)伸烷基-N(Rb)2、C(0)Ra、（c〇-C6)伸烷基 _c〇2Ra、C(0)H及 (C〇-C6)伸烷基-C〇2H，該烷基、烯基、炔基、環炫基、芳基及雜環基視情況經至多3個選自Rb、〇H、烧氧基、_ 素、C02H、CN、Oa(C=0)b(Cl-C6)烷基、氧代基及N(Rb)2之取代基取代； R7及R8獨立地選自：Η、（C=〇)a〇b(Cl_Ci。）烷基、 (C-〇)a〇b(C3-C8)環烧基、（c = 0)a0b·芳基、（C = 〇)a〇b-雜環基、（C2-C10)稀基、（C2-C1。）块基、SH、S〇2Ra 及 (C=0)aNRb2，該烧基、環烧基、芳基、雜環基、烯基及缺基視情況經一個或多個選自R6a之取代基取代，或者R7 及R可與其所連接氮一起形成在每一環中具有3 — 7個成員且除該氮外視情況含有一個或兩個選自N、〇及8之額外雜原子的單環或二環雜環，該單環或二環雜環視情況經一個或多個選自R6a2取代基取代； R係（CVC6)烷基、（CVC6)環烷基、芳基或雜環基；且 …獨立地為：Η、（C!-C6)烷基、芳基、雜環基、（C3· C6)環烷基、（C = 〇)a〇b(C!-C6)烷基或 S(〇)mRa; 或其醫藥上可接受之鹽或立體異構體。 6. 一種式E之化合物： 128379.doc 200930365 ί~\

其中： a係0或1 ; b係0或1 ; m係〇、1或2 ; R1係選自：Η、（C = O)a〇b(Ci-C10)烷基、（〇0)a0b 芳基、OH、Ojcvcd全氟烷基、（C=0)a0b(C3-C8)環烷基及（C=0)aOb·雜環基，該烷基、芳基、環烷基及雜環基視情況經一個或多個選自R6之取代基取代； R6係：（OOhObCVC!。烷基、（c=o)aob芳基、（：2-(：10烯基、c2-c10炔基、（c = 0)a0b雜環基、C02H、鹵素、CN、 OH、〇bCVC6 全氟烷基、0a(C=0)bNR7R8、氧代基、 CHO、（N=〇)R7R8、s(0)mNR7R8、SH、SCOVA-C,。)烷基或（C=〇)a〇bc3-C8環烷基，該烷基、芳基、烯基、炔基、雜環基及環烷基視情況經一個或多個選自R6a之取代基取代； R6a係選自：（CWhCMCVCn))烷基、oa(c〗-c3)全氟烷基、（C〇-C6)伸烷基-S(0)mRa、SH、氧代基、OH、鹵素、CN、（c2-C1())烯基、（C2-C1())炔基、（C3-C6)環炫基、 (c〇-C6)伸烷基-芳基、（C〇-C6)伸烷基-雜環基、（C〇-C6)伸烷基-N(Rb)2、C(〇)Ra、（C()_C6)伸烷基 _C〇2Ra、C(〇)H及 (C0-C6)伸烷基_c〇2h，該烷基、烯基、炔基、環烷基、 128379.doc •10- 200930365 芳基及雜環基視情況經至多3個選自Rb、〇H、（Cl_C6)燒氧基、齒素、C02H、CN、〇a(C=0)b(Ci_C6)烷基 '氡代基及N(Rb)2之取代基取代； RaSCCVC6)烧基、（C3-C6)環烷基、芳基或雜環基；且 …獨立地為：Η、（CVC6)烷基、芳基、雜環基、匸6)環燒基、（0 = 0)3(^((^-(^6)燒基或 S(〇)mRa; 或其醫藥上可接受之鹽或立體異構體。一種化合物，其係選自：

2-Η-[3-(1·甲基尊咪唑_4_基）9笨基[124]三唑并 [3’4-yM，6K8基]苯基}58二氧雜螺⑽辛·2胺； 5 8备（苯基[124]二唾并D，4^1·1，6-萘唆·8_基）苯基]_ 5,8-—氧雜螺[3.4]辛-2-胺； =(3-甲基1苯基Π，2,4]三料[3,4咖，一 L *，知，-rj 二基）笨基]-5,8-二氧雜螺[3 4]辛_2胺； :基Γ5乙广笨基…^ )基]_5,8二氧雜螺[3.4]辛-2_胺； 2 [4·(3-異丙基_9笨基）苯基]-5 8 1雜并[认外1，6-萘啶冬 ”，8_一氧雜螺[34]辛_2_胺； △l4、（3-環丙基_9_苯基）苯基]-5 8 - 盞 μ ，，]二唑并[3,4·/]-1，6-萘啶-8- w苯基一!Τ[3·4]〜咬-8南苯基⑴Γ都，2,4]三唾并⑽咖，6-蔡 2· 唑并[3,4-f]_16苯岭，—唑并[1，5·3]嘧啶-2-基[1，2,4]三，基）苯基]·5,8-二氧雜螺[3.4]辛-2- 128379.doc 200930365 胺； 2·(4-[9-苯基小(1，3_嘆唾| 基）π，2,4]三嗤并[3，4_f]_ 1，6-萘啶_8_基]苯基卜5冬二氧雜螺[3 4]辛_2胺； 8 [4 (2-胺基-5,8-一氧雜螺[3 4]辛_2_基）苯基]冬苯基 [1’2,4]二峻并[3,4-f]-l，6-萘咬_3_醇； 2-{4-[3-(2-呋喃基）-9-苯基 π 9 41 _ ^ 不丞 U，2,4]二唑并[3,4-f]-l，6-萘啶-8-基]苯基}-5,8·二氧雜螺[3 4]辛_2胺； 3|[4-(2-胺基-5,8_二氧雜螺[3 4]辛_2基）苯基]冬苯基U，2’4]三唾并[以斗以-萘以旬苯盼； Μ8·[4·(2·胺基_5,8_二氧雜螺[3.4]辛-2_基)苯基]-9_笨基[1，2,4]三唑并[3,4-f]-i，6·苯咹 1 w J ，奈啶-3-基}吡啶-2-甲酸甲酯； 2 -[4-(9 -苯基-3 -β比咬-2 -基!·〗·?“- I U’2,4]三唑并[3 4_f]_16-萘啶-8-基）苯基]-5,8-二氧雜螺[3 4]辛_2_胺. 2-{4·[3-(1Η- 0弓 |咕-5 -基）, J y 本基[1,2,4]三唑并[3,4-f]_ Μ-萘咬冬基]苯基}-5,8_二氧雜螺[3 ^辛_2·胺； 2-[4-(3-異°惡唆-3-基-9-苯基「1<：) 不丞 U，2,4]三唑并[3,4-f]-l，6_ 萘啶-8-基）苯基]-5,8-二氡雜螺[3 4]辛胺 2-[4-(9-苯基-3-° 比嗓-2-基丨 I) ，j 丞11，2,4]二唑并[34-£]_1，6_萘啶-8-基）苯基]-5,8-二氧雜螺[3 4]辛^_胺· 1- {8-[4-(2-胺基-5,8-二氧雜螺|^^|1* &雜螺[3.4]辛_2-基）苯基]-9-笨基[1，2,4]三唑并[3,4-f]-l，6·萃啶常呢'3-基}乙醇； 2- [4-(9-苯基-3-吼咬-3-基门9/11- 吞 Π，2,4]三唑并[3,4-f]-16_ 萘啶-8-基）苯基]-5,8-二氧雜螺[3 4]辛_2胺 128379.doc •12· 200930365 2仰·環丁基.9_苯基Π，2,4]Μ并[3,崎Μ•萃咬· 8-基）苯基]-5,8-二氧雜螺[34]辛_2•胺； 2爷[3_(環丙基甲基）·9·笨基[1，2,4]三唾并[3 6_ 萘啶-8-基]苯基}·5,8-二氧雜螺[3 4]辛·2_胺，· ， =4-(9_苯基·^丙基Π，2,4]μ并[3,崎16•蔡咬I 基）本基]-5,8-二氧雜螺[3.4]辛_2-胺· 2-[4·(3·環戊，烯]-基_9_苯基[124]三唾并[料 1，6-萘咬-8-基）苯基]-5,8-二氧雜螺[3 4]辛·2_胺. 苯基_3_六氫…都，… ，-萘咬·8·基）苯基]-5,8_二氧雜螺[3 4]辛·2胺；。2:{广[3*甲基_1，3心_5'基”·苯基"，2,4]三嗤并 ’ -]_1，6-萘啶-8-基]苯基}_5,8·二氧雜螺[3 4]辛韻； MM9-笨基_3“比咬_4_基[12,4]三唾并[3 6萃啶基）苯基]_5,8_二氧雜螺[34]辛_2_胺；， …、 2·{4-[9_苯基_3_(四^比嗓·4基狀μ]三。坐并 ’ ^，6·_·8·基]苯基}_5,8_:氧_[34]辛％ [3； '[3_(1；^^ ’ · ]，6_秦咬各基]苯基}·5,8·二氧雜螺[3.4]辛1胺； ΗΗ4#-胺基·5,8<氧雜螺[34]辛_2基戊基]9苯基[1，2,4]三吐并[W]·1，6^基k曱基丙_2-醇；冰(3·第三_丁基_9_笨基啶基）苯基]_5,8_二氧雜螺[3 4]辛_2胺； H4-(2_胺基_5,8_二氧雜螺[3·4]辛|基）苯基]善乙基_ 9_苯基[1，2,4]三唑并萘啶_3胺；及 128379.doc -13- 200930365 #’-{8-[4·(2-胺基 _5,8-二氧基[山]三唾并[3,4办16 ^螺Μ辛I基）苯基]-9·苯 13·二胺；，萘啶-3_基}-况沁二甲基丙烷- 8. 參 9· 10. ❹ 11. 12. 13. 或其醫藥上可接受之鹽或立體異構體。一種化合物，其係： 2-{4-[3-(1_ 甲基· 咪 [3 4-/1 τ ^ ^ 4_基）_9-苯基[1，2,4]三唑并 ’刀，蔡咬―8-基]苯基}巧，8-二氧雜或其醫藥上可接受之鹽。 ⑥雜螺[3.4]辛-2-胺，一種化合物，其係： 8-[4-(2_胺基 _5 二 9笼某no 雜螺[3.4]辛-2-基）苯基]I乙基- 9_本基Π，2,4]三唾并[3,4·刀·16_蔡咬_3胺；或其醫藥上可接受之鹽。一種化合物，其係：妒-{8-[4-(2-胺基，5,8_ 二氧 9 41 _ 乳雜螺[3.4]辛-2-基）苯基]-9-苯基[，2,4]二唑并[3,4-/]-1，6_ 举咬 _3 二胺；奈啶3-基}-心二甲基丙院_ 或其醫藥上可接受之鹽。一種化合物，其係： 2 [4-(9-求基 -哺咬 _2_ 基 ^-8-¾ 基[1，2,4]二唑并[3,4-/1-1，6-萘啶基）本基]·5,8-二氧雜螺[3.4]辛_2•胺；或其醫藥上可接受之鹽。物，其包含醫藥載劑及分散於其中之治療有重之如請求項1之化合物。種如4求項i之化合物之用途， •V、25〜兩夫用於製備用於治療或預防而要此治療之哺乳動物癌症的藥物。 128379.doc -14- 200930365 七、指定代表圖： (一) 本案指定代表圖為：（無） (二) 本代表圖之元件符號簡單說明：八、本案若有化學式時，請揭示最能顯示發明特徵的化學式：

❹ 128379.doc