TW200907061A - Induction of tolerogenic phenotype in mature dendritic cells - Google Patents

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200907061 九、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 本發明係關於調節樹突狀細胞功能之方法。詳士之本 發明係關於ϋ而才受性樹突狀細胞之方法及可由該等方法 衍生之用途。本發明適用於（例如）治療及/或預防人類之病 理學免疫反應，諸如與自體免疫疾病、移植排斥反應、牛 皮癬、發炎性腸道疾病、過敏症及其類似疾病相關之免疫 反應。本發明另外係關於可自本文中所定義之方法獲得之 藥劑及醫藥組合物。 & 【先前技術】 +能夠抑制τ細胞介導之反應的新藥之發現可有利於治療 右干種免疫介導疾病’包括急性器官排斥反應、移植物抗 伤主病、自體免疫疾病及慢性炎症。 骨髓及器官移植分別為目前用於諸多造血 來源之惡性及非惡性病症及大多數基本器官(肝臟非:: 及肺)之終末期衰竭(end phase fanure)的治療方法。然 而<，由供給者免疫系統所介導之針對接受者之排斥反應 (稱為移植物抗宿主疾病（GvHD))仍為骨髓移植中發病之主 要原因。類㈣，由接受者所介導之同種異體矛多植排斥反 j為器官移植之後移植物長期存活之主要障礙。免疫抑制 藥物可成功治療GvHD與器官移植排斥反應。然而，該等 方法而要長期治療且非特異性地抑制整個免疫系統，使患 父增加之感染及癌症風險。此外，該等非特異性療法 對長期移植物存活之有利影響極為有限（丨）。 Ϊ 31343.doc 200907061 類似地’引起自體免疫疾病中 门瓊組織之破壞的對自身 抗原之免疫反應之治療目前係基於調節炎症及非特異性免 疫抑制/該，方法由於免疫抑制之副作用(包括感染及癌 症）及藥物停用之後疾病復發高 〇凤險而通常不能長期有 效0 在反性發炎疾病及過敏， ；Τ出現對病原性及非病原性 抗原之免疫反應改變。此可能係由效應子與調節性免疫反 f' 應之間的失衡所致。習知消炎或免疫抑制療法通常不足以 修復該平衡。此外，該蓉;庵法夕M y > 為寺縻忐之效盃在藥物停用之後並不 持久。 對於非特異性免疫抑制之一替代性策略係基於特異性免 疫财受性之誘導，其最終目標為下調病原性免疫反應而使 宿主防禦機制保持原樣。中樞耐受性在胸腺打細胞個體 發育期間出現，且由自身反應性τ細胞之株系刪除所介 導，而周邊τ細胞耐受性在整個生命期間均可用且其經設 計以控制對自身抗原及無害外來抗原（諸如食品抗原）之反 應。周邊耐受性通常所涉及之常規過程為：株系刪除、株 系滅活（失能）、細胞激素依賴性免疫偏差（cyt〇kine_ dependent immune-deviation)及抑制。同種異體移植排斥 反應、自身免疫性及炎症中免疫反應之主要介體為T細胞 及B細胞。兩者均不僅需要經由τ細胞受體及b細胞受體進 行彳5 ϊ虎傳輸且需要經由協同刺激路徑（例如Cd28或CD80_ 86及CD40/CD40L)進行信號傳輸。如若干臨床前移植模型 中所證實，T細胞活化期間對該兩種信號之干擾可誘導活 131343.doc 200907061 體外及活體内CD4+ τ細胞之失能（2_6)。包括非促有絲分裂 抗 CD3 mAb、抗 CD4 mAwCampath_1H(^CD叫之前景良 好之藥物正以移植患者加以測試。一實例為非促有絲分裂 抗CD3 mAb，其已用於腎臟移植試驗而無副作用（7，8)。 此外，使用抗CD3 mAb之單一療程改變1型糖尿病（9, ι〇) 及牛皮癬性關節炎（11)中自體免疫過程之進程。最近已證 實，除耗盡效應（12)之外，Campath_1H誘導τ調節細胞（Tr 細胞）之擴增，該等τ調節細胞最終抑制hu_PBL_scm小鼠 之致命性GvHD(13)。 已展示阻斷T細胞協同刺激標靶CD28及cm 54誘導鼠臨 床前模型之抗原特異性耐受性狀態（4)。抗CD1 54 mAb預防 非人類靈長類動物之急性腎同種異體移植排斥反應（14)且 促進長期同種異體移植接受（1 5 ’ 16)。儘管臨床前結果呈 陽性，但由於血栓栓塞併發症之原因仍中止測試作為自體 免疫疾病及移植中免疫調節劑之抗CD1 54 mAb之臨床試驗 (17)。已開發出替代性抗CD154 mAb，且已證實較短療程 之西羅莫司（sirolimus)及與抗CD154 mAb相關之單一供給 者特異性輸血延長靈長類動物中同種異體移植物存活且誘 導耐受性（18，19)。 除上述之外’使用免疫調節細胞激素（諸如IL_1〇及tgF_ β)亦可誘導T細胞失能狀態。IL-10在控制發炎過程、抑制 丁細胞反應及保持免疫耐受性中發揮重要作用（評論於（2〇) 中）。IL-10抑制Τ細胞產生IFN-γ及IL-2(21)，其具有抑制活 性抗原呈現細胞（APC)、嗜中性白血球、嗜伊紅血球及肥 131343.doc 200907061 大細胞所產生之前發炎性細胞激素（諸如TNF-α、IL-l、 6)及趨化因子（諸如L_8及ΜΙρΐα)產生之消炎效應。此外， IL-10下調APC上II類MHC、協同刺激分子及黏著分子之表 現（22-24) ’且調節其刺激能力（25)。重要地’化_1〇對於適 應性1型T調節（Trl)細胞之分化至關重要（26)。Trl細胞之 特徵在於獨特的細胞激素分泌概況。TCR活化之後，其分 泌向含量之IL-10，大量IL_5及TGF_j3，低含量之Ι]ρΝ·γ及 IL-2，但不分泌IL_4(26)。Ag_特異性鼠Tri細胞可在活體 外藉由在高劑量IL_1〇存在下反覆TCR刺激產生（26)。此 外，將IL-10(及小鼠之TGF_p(27))添加至混合淋巴細胞反 應（MLR)培養物（28)中使得丁細胞失能。重要地，最初已藉 由限制稀釋法自1L_10-失能CD4+ T細胞中分離到來自健康 個體之同種異體反應性Trl細胞純系（26)。 成功移植HLA-錯配同種異體幹細胞之重度組合性免疫 缺陷（sCID)患者之研究首次提出人類τη細胞與保持活體 内周邊耐x性有關。在無免疫抑制療法的情況下，該等患 :未出現GvHD。有趣的是’在該等患者之血漿中偵測到 门3量之IL-1 〇，且可在活體外分離到對於宿主抗原 ”有特異&且產生〶含量il_iq之大量供給者衍生τ細胞 (29)。在臨床前骨趙移植模型中，由宿主A%在及 TGF-β存在τ離體失能之供給者cd4+ 了細胞之轉移使得η 類MHC錯配接受者中〜肋顯著減少（27，％)。 ，樹突狀細胞(DC)為高度專一性Apc，其典型地引發感染 後Ag特異性免疫反應（3 〇。該過程包括通常由與微生物 131343.doc 200907061 感染相關之藥劑誘導之DC的末端成熟化。現已瞭解DC可 能不僅具免疫原性且具耐受性。在穩定狀態下DC表現未 成熟表型且可經由Ag-特異性效應子T細胞之刪除及/或Tr 細胞之分化來誘導耐受性（32-36)。反覆以同種異體未成熟 DC刺激原態臍血CD4+ T細胞使得產生IL-10之Tr細胞分化 (37) ’該等Tr細胞經由細胞接觸依賴性機制抑制τ細胞反 應。吾人最近報導以同種異體未成熟DC刺激之周邊血液 原態CD4+ T細胞對於成熟DC再活化曰漸變得具有低反應 性，且以未成熟DC刺激三輪之後，該等τ細胞極度無能且 獲得調節功能。該等τ細胞在表型及功能上類似於Trl細 胞’因為其分泌尚含罝之IL-10及TGF-β，經由iL-i〇依賴 性及T G F - β依賴性機制抑制τ細胞反應，且其誘導可由抗 IL10R mAb阻斷（38)。 未成熟DC與耐受性DC專一性亞群均可促進丁^細胞之分 化。DC之成熟化及功能可在不同層面上進行調節（39)。已 展示藥理與生物藥劑均能夠誘導耐受性Dc(4〇) ^免疫調節 性細胞激素（諸如單獨IL_10(41，42)，或與Τ(}ρ_β組合（43)) 以及前發炎性細胞激素（諸如IFN_a(44，45)及TNF_a(46)) 可促進耐受性DC之分化且誘導具有抑制活性之無能丁細 胞0 CD45在丁細胞活化中發揮至關重要之作用。藉由選擇性 拼接產生胞外域大小不同但具有相同細胞質叩咖域之七 種不同CD45同功異型物（is〇f_s)。儘管多種CD45同功異 型物可同時由個別淋巴細胞表現，但較高及較低分子量 131343.doc -10· 200907061 (MW)之同功異型物有差別地分布於具有不同功能及細胞 激素產生概況之CD4+ T細胞亞群中（47，48)。CD45同功異 型物之表現經高度調節且為動態的。T細胞活化與較高 MW同功異型物減少及所伴隨之較低MW同功異型物之上 調相關聯。不同T細胞亞群中CD45同功異型物之經調節表 現突出其生物學重要性。CD45之PTPase活性調節免疫細 胞中之多個路徑，包括經由TCR、整合素及細胞激素受體 之信號轉導（49，50)。CDM對TCR信號傳輸之功能通常為 刺激性的，但其在細胞激素信號傳輸中可具有抑制效應 (49)。 靶向小鼠CD45之RB同功異型物之抗體可誘導鼠腎、胰 島及心臟同種異體移植物中之長期移植及供給者特異性耐 受性（51)(52)。抗CD45RB mAb使得CD45同功異型物表現 由高MW快速轉變為低MW，其並非與CD4+ T細胞耗盡關 聯，而增加CD4+ T細胞上之CTLA-4表現（53)。已證實 CTLA-4之上調對於抗CD45RB介導之耐受性而言為必要的 (54) 。抗CD45RB mAb不僅誘導CD4+CD25-效應子T細胞失 能，且誘導保持耐受性所需之CD4+CD25 + Tr細胞失能 (55) 。最近已研究新穎胸腺移植物在抗CD45RB mAb之耐 受性誘導中之作用，且其結果為有爭議的。在胰島移植 中，儘管在切除胸腺之小鼠中以抗CD45RB治療顯著減少 早期排斥反應，但其並未改變長期耐受性效應（5 5)。相反 地，在心臟移植中，切除胸腺完全阻礙了抗CD45RB介導 之耐受性。有趣的是，抗CD45RB mAb經由自胸腺重新產 131343.doc 200907061 生抗原特異性CD4+ T細胞來誘導耐受性（56)。 在WO 02/072832(該專利之全部内容係以引用的方式併 入本文中且讀者特別參考該專利）中。已展示CD45RO/RB 結合分子以劑量依賴性方式抑制初級同種異體免疫反應’ 如由活體外MLR所測定。進一步證實CD45RO/RB結合分 子直接作用於效應子T細胞且調節其功能。 鑒於上述内容，此項技術中需要建立有利於抑制潛在病 理免疫反應之其他方法及藥劑。本發明設法藉由以一定方 ( 式調節免疫細胞功能以控制免疫系統之自然調節機制來解 決該問題。 【發明内容】 在一態樣中，本發明提供調節樹突狀細胞（DC)功能之方 法，該方法包含將樹突狀細胞暴露於CD45RO/RB結合分 子。 在第二態樣中，本發明提供調節樹突狀細胞（DC)功能之 方法，該方法包含將樹突狀細胞暴露於結合分子’其中該 、f 結合分子序列中包含高變區CDR1、CDR2及CDR3 ’該 CDR1 具有胺基酸序列 Asn-Tyr-Ile-Ile-His(NYIIH) ’ 該 CDR2 具有胺基酸序列丁)^_1^6-八511-?1：0-丁>^-八511-1^3-〇1丫-Thr-Lys-Tyr-Asn-Glu-Lys-Phe-Lys-Gly(YFNPYNHGTKYNE KFKG)，且該 CDR3 具有胺基酸序列 Ser-Gly-Pro-Tyr-Ala-Trp-Phe-Asp-Thr(SGPYAWFDT);或其中該分子為其直接 等效物。 在一較佳實施例中，該結合分子包含： 131343.doc 200907061 a) 第一域，其序列中包含高變區CDRl、CDR2及CDR3， 該 CDR1 具有胺基酸序列 Asn-Tyr-Ile-Ile-His(NYIIH)，該 CDR2具有胺基酸序列丁7卜卩116-八311-?1'0-丁>^-八311-出5-〇1丫-Thr-Lys-Tyr-Asn-Glu-Lys-Phe-Lys-Gly(YFNPYNHGTKYNE KFKG)，且該 CDR3 具有胺基酸序列 Ser-Gly-Pro-Tyr-Ala-Trp-Phe-Asp-Thr(SGPYAWFDT);及 b) 第二域，其序列中包含高變區CDRl'、CDR2’及 CDR3’，CDR1'具有胺基酸序列 Arg-Ala-Ser-Gln-Asn-Ile-Gly-Thr-Ser-Ile-Gln(RASQNIGTSIQ)，CDR2’具有胺基酸 序歹|]861'-86卜861'-0111-86卜116-861'(888£818)，且。0113，具有 胺基酸序列 Gln-Gln-Ser-Asn-Thr-Trp-Pro-Phe-Thr(QQSNT WPFT);或其直接等效物。 較佳該結合分子為嵌合、人類化或完全人類單株抗體。 因此在一實施例中，結合分子為人類化單株抗體。在另 一實施例中，結合分子為完全人類單株抗體。 適用於本發明之結合分子之實例包括（但不限於）： (a) 包含SEQ ID ΝΟ:1之多肽及/或SEQ ID NO:2之多肽的 結合分子； (b) 包含SEQ ID NO:3之多肽及/或SEQ ID NO:4之多肽的 結合分子； (c) 包含 SEQ ID NO:9 或 SEQ ID NO:10 之多肽及 / 或 SEQ ID N0:7或SEQ ID NO:8之多肽的人類化抗體結合分 子；及

(d) 包含 SEQ ID NO:31 或 SEQ ID NO:32之多肽及 /或 SEQ 131343.doc -13- 200907061 ID NO:7或SEQ ID NO:8之多肽的人類化抗體結合分 子。 在一實施例中，調節DC功能之方法係在活體外執行。 在該等情況下，DC可由生物樣品（亦即離體）獲得，或在活 體外產生’例如經由獲得單核細胞群且誘導該等單核細胞 進行活體外分化為DC。在後一情況下，單核細胞之來源 可為生物樣品。

在一實施例中’調節DC功能之方法包含獲得未成熟DC 之來源且在如本文中所定義之結合分子存在下誘導未成熟 DC成熟化。 調節DC功能之方法適用於誘導dc之耐受性表型。在一 實施例中’調節DC功能之方法另外包含將DC活體外暴露 於T細胞（例如同種異體τ細胞）群以誘導該等τ細胞之耐受 性表型的步驟。該等耐受性T細胞在本文中亦稱為Tr細 胞。 調節DC功能之方法亦適用於製造（例如）供治療及/或預 防與自體免疫疾病、移植排斥反應、牛皮癖、發炎性腸道 疾病及過敏症相關之疾病用的藥劑/醫藥組合物。在一較 佳實施例中’本發明之方法、用途及藥劑/醫藥組合物適 用於治療人類之牛皮癬及/或移植排斥反應（諸如人類之同 種異體移植’例如胰島移植）。 因此’在另一態樣中，本發明提供一種治療及/或預防 與自體免疫疾病、移植排斥反應、牛皮癖、發炎性腸道疾 病及過敏症相關之疾病的方法，其包含向需要該治療及/ 131343.doc -14· 200907061 或該預防之人類個體投與有效量之已藉由暴露於如本文中 所疋義之結合分子而加以調節之D c。 在另態樣中，本發明提供一種治療及/或預防與自體 免疫疾病、移植排斥反應、牛皮癖、#炎性腸道疾病及過 敏症相關之疾病的方法，其包含： (a) 由人類供給者獲得單核細胞群； (b) 誘導該等單核細胞活體外分化以產生Dc來源； (勾將該等DC暴露於如本文中所定義之結合分子以使該 等DC具耐受性；及 (d)向需要該治療及/或該預防之人類接受者投與有效量 之該等耐受性DC。 在本發明之另一悲樣中，提供一種治療及/或預防與自 體免疫疾病、移植排斥反應、牛皮癬、發炎性腸道疾病及 過敏症相關之疾病的方法，其包含： (a) 由人類供給者獲得DC群； (b) 將該等DC暴露於如本文中所定義之結合分子以使該 等DC具耐受性；及 (c) 向需要該治療及/或該預防之人類接受者投與有效量 之该等耐受性DC。 在—實施财，上述態樣中之供給者及接受者為同一個 體。在一替代性實施例中，供給者及接受者為不同個體， 因此對於該接受者而言，該等DC為同種異體的。 本發明之另-態樣提供一種治療及/或預防與自體免疫 疾病、移植排斥反應、牛皮m性腸道疾病及過敏症 I31343.doc -15· 200907061 相關之疾病的方法，其包含： ⑷由第類供給者獲得單核細胞群； (b) 誘導該等單核細胞活體外八 膊兮笙显+从 刀匕以產生DC來源； (c) 將5亥4 DC暴蕗於如下文所 之結合*子以使該等DC具耐受# ^求項1至10中任一項 類供給者獲得之τ細 (d) 將該等耐受性dc暴露於由第二 胞群以使該等T細胞具耐受性；及 (e) 向需要該治療及/或該預 之該等耐受性DC及/或該等耐接受者投與有效量 在另一態樣中，本發明提供_ 種，口療及/或預防與自體 免疫疾病、移植排斥反應、牛 u, r , 癬、土火性腸道疾病及過 敏症相關之疾病的方法，其包含： (a)由第一人類供給者獲得樹突狀細胞群； ⑻將該等樹突狀細胞暴露於如下文所列之請求们錢 中任一項之結合分子以使該等樹突狀細胞具耐受性· ⑷將該等耐受性樹突狀細胞暴露於由第二人類供給者獲 得之T細胞群以使該等T細胞具耐受性；及 ⑷向需要該治療及/或該預防之人類接受者投與有效量 之该等耐受性樹突狀細胞及/或該等耐受性τ細胞。 在一實施例中，第-供給者及/或第二供給者與接受者 為同個體。S -供給者與第二供給者可為同—個體，或 者，第一供給者與第二供給者可為不同個體，因此來自第 i、者之DC與來自第二供給者之τ細胞相對於彼此為同 種異體的。在-實施例中’第一供給者與接受者為同一個 I31343.doc 16 200907061 體且第二供給者為不同個體。該實施例尤其適用於治療 GvHD，其中第二供給者提供移植入接受者/第一供給者之 移植組織。 杈佳地，在上述方法中，Dc在暴露於CD45R〇/RB結合 分子之前為未成热DC，且隨後將該DC在結合分子存在下 誘導以進行成熟化。 在本發明之另一態樣中’提供由暴露於如本文所述之 CD45RO/RB結合分子獲得之經調節DC群及/或由將τ細胞 暴鉻於忒4财文性dc獲得之耐受性τ細胞（亦即Tr細胞）群 之用途，其係用於治療及/或預防與自體免疫疾病、移植 排斥反應、牛皮癖、發炎性腸道疾病及過敏症相關之疾 病。 在另一態樣中’本發明提供由暴露於如本文所述之 CD45RO/RB結合分子獲得之經調節DC群及/或由將τ細胞 暴露於該等耐文性DC獲得之耐受性τ細胞（亦即Tr細胞）群 之用途，其係用於製造供治療及/或預防與自體免疫疾 病、移植排斥反應、牛皮癬、發炎性腸道疾病及過敏症相 關之疾病用的藥劑。 由暴露於如本文中所定義之CD45RO/RB結合分子獲得之 财受性DC及/或由將T細胞暴露於該等耐受性dc獲得之耐 受性T細胞（亦即Tr細胞）適用作藥劑及醫藥組合物。在一實 把例中，3亥等藥劑/醫藥組合物可另外包含如本文中所定 義之CD45RO/RB結合分子。 【實施方式】 131343.doc •17- 200907061 本發明係基於以下認識：與CD45之RO及RB同功異型物 結合之分子能夠誘導樹突狀細胞之耐受性表型。吾人已發 現包含與CD45RO及CD45RB結合之多肽序列之結合分子 (在下文中亦稱為”CD45RO/RB結合分子"）可誘導用於抑制 初級T細胞反應及誘導T細胞耐受性之耐受性樹突狀細胞。 本文中證實抗CD45RO/RB單株抗體不阻礙單核細胞衍生之 樹突狀細胞之成熟化及活化，而能夠上調成熟DC上PD-L2 及CD45RB之表現。藉由將原態周邊血液CD4+ T細胞反覆 暴露於同種異體DC，吾人已證實抗CD45RO/RB單株抗體 調節DC功能以使DC誘導周邊血液CD4+ T細胞分化為表型 上及功能上類似於Tr 1細胞之Tr細胞群。與Trl細胞相似， 該等Tr細胞產生IL-10及TGF-β且經由IL-10依賴性及τ〇ρ_β 依賴性機制抑制T細胞反應。此外，吾人已證實經由pDL_ 2進行信號傳輸為抗CD45RO/RB調節之DC所誘導之Tr分化 的基礎。總之，已證實CD45RO/RB結合分子經由至少數種 作用方式充當免疫調節劑，該等作用方式包括删除效應子 T細胞及經由調節樹突狀細胞誘導Tr細胞。 ”CD45RO/RB結合分子”意謂任何能夠與cD45抗原之 CD45RB及CD45RO同功異型物特異性結合（單獨或與其他 分子聯合）之分子。結合反應可由標準方法（定性檢定）展 示’包括例如各種結合檢定’諸如直接或間接免疫營光= 連同螢光顯微法或細胞螢光測定（FACS)分析，臨胳々 姆恥免疫吸 附檢定（ELISA)或放射免疫檢定，其中可呈斑 凡碭分子與表 現特定CD45同功異型物之細胞之結合。此外， ，该分子之 I3I343.doc -18- 200907061 結合可引起表現該等同功異型物之細胞功能改變，例如可 測定初級或二級混合淋巴細胞反應（MLR)之抑制，諸如一 種測定在CD45RO/RB結合分子存在及不存在下初級或二級 MLR之抑制及測定初級MLR抑制之差異的活體外檢定或生 物檢定。該檢定之一個實例如下： 將人類周邊血液單核細胞（PBMC)或人類CD3 +或CD4 +細 胞與經照射之同種異體PBMC或T細胞耗盡之經照射（5000 拉德（rad))之PBMC在96孔培養板之各孔中在本文所定義之 CD45RO/RB結合分子存在下或在諸如小鼠免疫球蛋白之 對照分子存在下混合。將細胞混合物在37°c下在5% c〇2中 培養4或5日，且藉由在培養之最後16_2〇小時以3H_胸苦脈 衝刺激該等細胞來測定增殖。與對照分子存在下之細胞增 殖相比較來计异初級]VILR之抑制百分比。亦可評估二級 M L R抑制。 或者，活體外功能調節效應亦可藉由量測（例如）在mlr 中之細胞活化之後，或在以特異性抗原（諸如破傷風類毒 素）或其他抗原，或多株刺激劑（諸如植物性金球凝集素 (PHA))或抗CD3及抗CD2 8抗體或佛波醇（ph〇rb〇i)酯及+ 離子載體刺激之後，PBMC或T細胞或CD4+ τ細胞增殖， 細胞激素產生，細胞表面分子表現之變化來測定。^類似 於對於MLR所述之方式進行培養，其中例外為使用可溶性 抗原或多株刺激劑(諸如上述之彼等者)替代同種異體細胞 作^刺激劑。τ細胞增殖較佳如上所述藉由3H_胸苦併入進 行量測。細胞激素產生係藉由夾心EUSA量測，其中將細 131343.doc 200907061 胞激素捕獲抗體塗佈在9 6孔盤之表面上，添加培養物上清 液且在室溫下培育1 hr，且隨後添加對於特定細胞激素具 有特異性之偵測抗體，在添加與酶（諸如辣根過氧化物酶） 結合之二次抗體（second-step antibody)之後繼而添加相應 受質，且在板讀取器中量測吸光度。細胞表面分子之變化 係在將靶細胞以對於特定細胞表面分子具有特異性之抗體 染色之後藉由直接或間接免疫螢光法量測。可將抗體直接 以螢光染料標記，或可使用經螢光標記之對於第一抗體具 有特異性之二次抗體，且使用細胞螢光測定儀對該等細胞 進行分析。 本發明中所用之結合分子對於CD45RO與CD45RB均具有 結合特異性（”CD45 RB/R0結合分子”）。 較佳地，結合分子以<20 nM之解離常數（Kd)，較佳以 <15 nM或<10 nM之Kd，或較佳<5 nM之Kd與CD45RO同功 異型物結合。較佳地，結合分子以<50 nM之Kd ’較佳以 <15 nM或<10 nM之Kd，更佳<5 nM之Kd與CD45RB同功異 型物結合。 在另一較佳實施例中，本發明中所用之結合分子結合以 下CD45同功異型物： 1) 包括CD45分子之A及B抗原決定基但不包括C抗原決定 基之同功異型物；及/或 2) 包括CD45分子之B抗原決定基但不包括A及C抗原決定 基之同功異型物；及/或 3) 不包括CD45分子之A、B或C抗原決定基中之任一者的 131343.doc -20- 200907061 同功異型物。 在另一較佳實施例中，結合分子不結合以下CD45同功 異型物： υ包括CD45分子之所有A、B及C抗原決定基之同功異型 物；及/或 2)包括CD45分子之B與C抗原決定基但不包括A抗原決定 基之同功異型物。 在另一較佳實施例中，結合分子： 1) 識別記憶及活體内同種異體活化T細胞；且/或 2) 與其在人類T細胞上之標把結合，諸如PEER細胞；其 中該結合較佳以<15 nM之Kd，更佳以<10 nM之Kd，最佳 以<5 nM之Kd進行；且/或 3) 抑制活體外同種異體反應性τ細胞功能，較佳以約小 於100 nM ’較佳小於5〇 nM或30 nM之IC50值，更佳以約 10或5 nM之IC50值’最佳以約〇·5 nM或甚至0.1 nM之IC50 值進行；且/或 4) 經由細胞凋亡誘導人類τ淋巴細胞之細胞死亡；且/或 5) 誘導活體外同種異體抗原特異性τ細胞耐受性；且/或 6) 當投與有效量時預防藉由注射人類Pbmc誘導之SCID 小鼠致命性異種移植物抗宿主疾病（GvHD);且/或 7) 與T淋巴細胞、單核細胞、幹細胞、自然殺手細胞及/ 或粒細胞結合，而不與血小板或B淋巴細胞結合；且/或 8) 支持具有特徵性T調節細胞（Treg)表型之τ細胞分化； 且/或 131343.doc 200907061 9)誘導能夠抑制原態τ細胞活化之τ調節細胞；且/或 1 〇)抑制介導人類同種異體移植皮膚排斥反應之發炎過 程’尤其抑制介導移植有人類皮膚及移植有單核脾細胞之 SCID小鼠活體内人類同種異體移植皮膚排斥反應之發炎過 程；且/或 H)延長hu-PBL-NOD/SCID小鼠模型中人類胰島同種異 體移植物之存活。 在另一較佳實施例中，本發明中所用之結合分子與如由 (\

Aversa等人，Cellular Immunology 158，3 14-328(1994)所 述之單株抗體”A6”結合相同抗原決定基。該參考文獻之全 部内容係以引用的方式併入本文中且讀者特別參考該參考 文獻。 由於上述結合特性及生物學活性，本發明中所用之結合 分子尤其適用於治療及/或預防之藥品。此外，該等結合 分子尤其適用於離體調節DC功能以使DC展現耐受性表 型。預計該等耐受性DC將適用於治療及/或預防。結合分 I 、 子及/或經調節D C尤其適用之疾病包括自體免疫疾病、移 植排斥反應、皮炎、牛皮癖、發炎性腸道疾病及/或過敏 症’其將在下文中進一步闡明。 包含SEQ ID ΝΟ:1之多肽及SEQ ID NO:2之多肽之分子 為 CD45RO/RB結合分子。sEQ ID ΝΟ:1 之 CD45RO/RB結合 分子中之高變區CDR1，、CDR2,及CDR3,如下：CDR1，具有 胺基酸序列 Arg-Ala-Ser-Gln-Asn-Ile-Gly-Thr-Ser-Ile_ Gln(RASQNIGTSIQ)(SEQ ID NO:19)，CDR21 具有胺基酸序 131343.doc ·22· 200907061 列 Ser-Ser-Ser-Glu-Ser-Ile-Ser(SSSESIS)(SEQ ID NO:20)， 且 CDR3'具有胺基酸序列 Gln-Gln-Ser-Asn-Thr-Trp-Pro-Phe-Thr(QQSNTWPFT)(SEQ ID NO:21)。 亦發現SEQ ID NO:2之CD45RO/RB結合分子中之高變區 CDR1、CDR2及CDR3，CDR1具有胺基酸序列八311-丁7卜116-Ile-His(NYIIH)(SEQ ID NO:22)，CDR2具有胺基酸序列

Tyr-Phe-Asn-Pro-Tyr-Asn-His-Gly-Thr-Lys-Tyr-Asn-Glu-Lys-Phe-Lys-Gly(YFNPYNHGTKYNEKFKG)(SEQ ID NO:23)， 且 CDR3 具有胺基酸序列 Ser-Gly-Pro-Tyr-Ala-Trp-Phe-Asp-Thr(SGPYAWFDT)(SEQ ID NO:24)。 CDR為3個特異性互補判定區（亦稱為高變區），其基本上 決定抗原結合特徵。該等CDR為可變區之部分，例如分別 為SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO:2之部分，其中該等CDR與構 架區（FR)(例如恆定區）交替。在嵌合抗體中，SEQ ID ΝΟ:1為輕鏈之部分，例如為SEQ ID NO:3之部分，且SEQ ID NO:2為重鏈之部分，例如為SEQ ID NO:4之部分。重鏈 之CDR以及相關輕鏈之CDR基本上構成本發明所用分子之 抗原結合位點。應瞭解輕鏈可變區對結合力能學所作之貢 獻小於相關重鏈可變區所作之貢獻，且經分離之重鏈可變 區獨自具有抗原結合活性。該等分子通常稱為單域抗體。 在本發明之一實施例中，所用結合分子包含至少一個抗 原結合位點，例如CD45RO/RB結合分子，其序列中包含高 變區CDR1、CDR2及CDR3，該CDR1具有胺基酸序列Asn-Tyr-Ile-Ile-His(NYIIH)(SEQ ID NO:22)，該 CDR2具有胺基 131343.doc -23- 200907061 酸序列丁丫卜卩]16-八811-?1*〇-丁5^-八311-出5-〇1丫-丁11卜1^3-丁)^-八811-Glu-Lys-Phe-Lys-Gly(YFNPYNHGTKYNEKFKG)(SEQ ID NO:23)，且該 CDR3 具有胺基酸序列 Ser-Gly-Pro-Tyr-Ala-Trp-Phe-Asp-Thr(SGPYAWFDT)(SEQ ID NO:24)。在另一 實施例中，結合分子為結構如上定義之結合分子之直接等 效物。 在另一態樣中，本發明使用包含至少一個抗原結合位點 之分子，例如CD45RO/RB結合分子，其包含： a) 第一域，其序列中包含高變區CDR1、CDR2及CDR3， 該 CDR1 具有胺基酸序列 Asn-Tyr-Ile-Ile-His(NYIIH)(SEQ ID NO:22)，該 CDR2具有胺基酸序列7^1>-?116-八511-?1>〇-丁>^-Asn-His-Gly-Thr-Lys-Tyr-Asn-Glu-Lys-Phe-Lys-Gly(YFNP YNHGTKYNEKFKG)(SEQ ID NO:23)，且該CDR3具有胺基 酸序列 Ser-Gly-Pro-Tyr-Ala-Trp-Phe-Asp-Thr(SGPYAWFDT) (SEQ ID NO:24);及 b) 第二域，其序列中包含高變區CDR1'、CDR^及 CDR3’，CDR1，具有胺基酸序歹J Arg-Ala-Ser_Gln-Asn-Ile-Gly-Thr-Ser-Ile-Gln(RASQNIGTSIQ)(SEQ ID N0:19), CDR2’ 具有胺基酸序列 Ser-Ser-Ser-Glu-Ser-Ile-Ser(SSSESIS)(SEQ ID NO:20)，且 CDR3,具有胺基酸序列 Gln-Gln-Ser-Asn-Thr-Trp-Pro-Phe-Thr(QQSNTWPFT)(SEQ ID NO:21)。在一替代性實施例中，本發明使用為上文剛 描述之結合分子之直接等效物的結合分子。 在一較佳實施例中，序列中包含高變區CDR1、CDR2及 131343.doc •24· 200907061 CDR3之第一域為免疫球蛋白重鏈，且序列中包含高變區 CDR1'、CDR21及CDR3’之第二域為免疫球蛋白輕鏈。 在另一態樣中，本發明使用一種分子（例如CD45RO/RB 結合分子），其包含SEQ ID ΝΟ:1之多肽及/或SEQ ID NO:2 之多肽，較佳在一域中包含SEQ ID ΝΟ:1之多肽，且在另 一域中包含SEQ ID NO:2之多肽，例如嵌合單株抗體。在 另一態樣中，本發明使用一種分子（例如CD45RO/RB結合 分子），其包含SEQ ID NO:3之多肽及/或SEQ ID NO:4之多 肽，較佳在一域中包含SEQ ID NO:3之多肽，且在另一域 中包含SEQ ID NO:4之多肽，例如嵌合單株抗體。 當抗原結合位點包含第一域與第二域，或分別SEQ ID ΝΟ:1 或 SEQ ID NO:3 之多肽與分別 SEQ ID NO:2 或 SEQ ID NO:4之多肽時，其可位於同一多肽上，或較佳各域可位於 不同鏈上，例如第一域為重鏈（例如免疫球蛋白重鏈）或其 片段之部分，且第二域為輕鏈（例如免疫球蛋白輕鏈）或其 片段之部分。 由上文所給描述可見，在較佳實施例中，本發明所用之 CD45RO/RB結合分子為單株抗體（mAb)，其中結合活性主 要係由如上所述之CDR區決定，例如與大體上源於人類之 不具有結合特異性之其他分子（諸如構架區，例如恒定區） 相聯合的該等CDR區。在一較佳實施例中’ CD45RO/RB結 合分子為IgGl同型之單株抗體。 本發明可使用一種CD45RO/RB結合分子，其為如由 Aversa等人，Cellular Immunology 158，314-328(1994)所 131343.doc -25- 200907061 述之單株抗體，，A6”，該文獻中描述从特徵之段落係以引用 的方式併入。 在另一態樣中，本發明使用—種(：1)4511〇爪8結合分子， 根據本發明其為嵌合、人類化或完全人類單株抗體。 CD45RO/RB結合分子之實例包括例如來源於由b細胞或 w虫&瘤產生之抗體及/或其任何片段（例如F(ab，）2及片 段）之嵌合或人類化抗體，以及單鏈或單域抗體。單鏈抗 體由通常由10至30個胺基酸，較佳15至25個胺基酸組成之 肽連接子共價結合的抗體重鏈可變域及輕鏈可變域組成。 因此，該結構不包含重鏈及輕鏈之恆定部分且咸信小肽間 隔子之抗原性應比整個恆定部分低。嵌合抗體意謂重鏈及 輕鏈或兩者之恆定區源於人類而重鏈與輕鏈之可變域均源 於非人類（例如鼠）之抗體。人類化抗體意謂高變區（CDR) 源於非人類（例如鼠）而所有或大體上所有其他部分（例如恆 定區及可變區之高度保守部分）源於人類的抗體。然而人 類化抗體可在鄰接於高變區之可變區部分中保留少許鼠序 列胺基酸。 高變區（亦即CDR)可與源於人類之各種構架區（例如輕鏈 及重鏈之恆定部分）相聯合。合適構架區（例如）描述於 "Sequences of proteins of immunological interest”， Kabat ’ E.A.等人，US department of health and human services > Public health service ^ National Institute of health中。較佳地，人類重鏈之恆定部分為IgG1型，包括 亞型，較佳地，人類輕鏈之恆定部分可為κ*λ型，更佳為 I31343.doc -26- 200907061 K型。較佳地，該重鏈包含不超過一個糖基化位點，最佳 該糖基化位點為Ν-糖基化位點，且最佳該一個糖基化位點 位於重鏈之怪定部分。最佳可變區中不存在糖基化位點， 較佳構架區中無糖基化位點。 重鏈之較佳恆定部分為SEQ ID ΝΟ:4之多肽（不具有上文 指定之CDR11、CDR21及CDR3’序列部分），且輕鏈之較佳 恆定部分為SEQ ID NO:3之多肽（不具有上文指定之 CDR1、CDR2及CDR3序列部分）。 在一實施例中，使用一種人類化抗體，其包含胺基酸 SEQ ID NO:7或胺基酸SEQ ID NO:8之包含如上所定義之 CDR11、CDR2'及 CDR3’的輕鏈可變區，及 /或 SEQ:ID NO:9 或SEQ:ID NO:10之包含如上所定義之CDR1、CDR2及 CDR3的重鏈可變區。 在另一實施例中，使用另一種人類化抗體，其包含胺基 酸SEQ ID NO:7或胺基酸SEQ ID NO:8之包含如上所定義 之CDR11、CDR2'及CDR3’之輕鏈可變區，及/或SEQ:ID NO:31或SEQ:ID NO:32之包含如上所定義之CDR1、CDR2 及CDR3之重鏈可變區。 在另一實施例中，本發明使用一種人類化抗體，其包含 SEQ ID NO:9 或 SEQ ID NO:10 之多肽及 SEQ ID NO:7 或 SEQ ID NO:8之多肽。在另一實施例中，本發明使用一種人類 化抗體，其包含SEQ ID NO:31或SEQ ID NO:32之多肽及 SEQ ID NO:7 或 SEQ ID NO:8之多肽。 在其他實施例中，本發明使用一種人類化抗體，其包含 131343.doc -27- 200907061 -SEQ ID N〇:9之多肽及SEQ ID NO:7之多肽（諸如 VHE/humV2)， -SEQ ID NO:9之多肽及SEQ ID NO:8之多肽（諸如 VHE/humVl)， -SEQ ID NO:10之多肽及SEQ ID NO:7之多肽（諸如 VHQ/humV2) > -SEQ ID NO:10之多肽及SEQ ID NO:8之多肽（諸如 VHQ/humVl)， -SEQ ID NO:31之多肽及SEQ ID NO:7之多肽（諸如 VHEN73D/humV2)， -SEQ ID NO:31之多肽及SEQ ID NO:8之多肽（諸如 VHEN73D/humVl)， -SEQ ID NO:32之多肽及SEQ ID NO:7之多肽（諸如 VHQN73D/humV2)，或 -SEQ ID NO:32之多肽及SEQ ID NO:8之多肽（諸如 VHQN73D/humVl)。 提及本發明所用之例如本文中所指定序列（例如 CDR1(SEQ ID NO:22) 、 CDR2(SEQ ID NO:23)、 CDR3(SEQ ID NO:24) 、 CDR1'(SEQ ID NO:19)、 CDR2’（SEQ ID NO:20)、CDR3’（SEQ ID NO:21)，或 SEQ ID NO:l、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、 SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO: 10、SEQ ID NO:3 1 或 SEQ ID NO:32)之多肽包括該（多） 肽（序列）之直接等效物；例如包括該多肽之官能衍生物。 131343.doc -28- 200907061 «亥g此衍生物可包括指定序列之共價修飾，且/或該官能 衍生物可包括指定序列之胺基酸序列變異體。 所除非另有說明，否則本文中”多肽，，包括任何肽或蛋白 質，其包含由肽鍵彼此連接之胺基酸，具有起始於n末端 且、止於c末知之胺基酸序列。較佳地，本發明中所使用 之多肽為單株抗體。更佳地，多肽為拔合（V-移植）單株抗 體或人類化（CDR-移植）單株抗體。人類化（(：]：)11_移植）單株 抗體可能包括或可能不包括引入接受者抗體之構架㈣序 列中之其他突變。較佳地，人類化或嵌合抗體包含不超過 一個糖基化位點。最佳該一個糖基化位點為义糖基化位 點最佳可變區中不存在糖基化位點，且甚至更佳重鏈可 變區中不存在糖基化位點，最佳構架區（FR)中不存在糖基 化位點。 如本文中所使用之多肽之官能衍生物包括具有與本發明 中所用之多肽相同之定性生物活性（亦即具有與cd45r〇及 CD45RB結合之能力）的分子。官能衍生物包括本發明所用 之多肽的片段及肽類似物。片段包含多肽(例如指定序列 之多肽)序列内的區域。術語”衍生物”係用於定義本發明中 所用之夕肽（例如指定序列之多肽）的胺基酸序列變異體及 八仏G飾物本發明所用之多肽（例如指定序列之多肽）的 官能衍生物較佳與結構如上定義之多肽（例如指定序列之 多幻的胺基酸序列具有至少約65%，更佳至少約㈣，甚 至更佳至少約85% ’最佳至少約95%之總體序列同源性， 且大體上保留與CD45R〇及CD45RB結合之能力。 I3I343.doc -29· 200907061

較佳地，官能衍生物至少具有以下各物之結合親和力： 包含SEQ ID ΝΟ:1之多肽及/或SEQ ID NO:2之多肽的結合 分子、包含SEQ ID NO:9或SEQ ID NO:10之多肽及/或SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:8之多肽的人類化抗體；或包含SEQ ID NO:31 或 SEQ ID NO:32之多肽及 /或 SEQ ID NO:7 或 SEQ ID NO:8之多肽的人類化抗體。 術語”共價修飾物”包括如本文中所定義之多肽（例如指定 序列之多肽）的修飾物；或其含有有機蛋白質或非蛋白質 衍生試劑之片段、與異源多肽序列之融合物及轉譯後修飾 物。經共價修飾之多肽（例如指定序列之多肽）仍具有與 CD45RO及CD45RB藉由交聯結合之能力。共價修飾通常藉 由使靶向胺基酸殘基與能夠與所選側鏈或末端殘基反應之 有機衍生試劑反應或藉由控制在所選重組宿主細胞中發揮 功能之轉譯後修飾機制來引入。某些轉譯後修飾為重組宿 主細胞對所表現多肽之作用的結果。麵醯胺醯基及天冬醯 胺醯基殘基通常轉譯後脫醯胺化為相應麵胺醯基及天冬胺 醯基殘基。或者，在適度酸性條件下使該等殘基脫胺化。 其他轉譯後修飾包括脯胺酸及離胺酸之羥基化，絲胺醯 基、路胺酸或蘇胺醯基殘基之羥基磷酸化，離胺酸、精胺 酸及組胺酸側鏈胺基之甲基化，參見（例如）T. E.

Creighton ’ Proteins : Structure and Molecular Properties， W. H. Freeman & Co.，San Francisco，第 79_86 頁（1983)。 共價修飾物（例如）包括包含如本文中所定義之多肽（例如指 定序列之多肽）的融合蛋白及其胺基酸序列變異體，諸如 131343.doc -30- 200907061 免疫黏附素，及與異源信號序列之N末端融合物。 對於天然多肽及其官能衍生物之”同源性”在本文中定義 為在序列比對及引入空位（若必要）以達成最大同源性百分 比之後且不將任何保守性取代視為序列一致性之部分，備 選序列中與相應天然多肽殘基相同之胺基酸殘基之百分 比。不應將N末端及C末端延伸及插入視為降低—致性或 同源性。比對之方法及電腦程式為吾人所熟知。 "胺基酸''係指（例如）所有天然存在之L-α-胺基醆，且包 括D-胺基酸。胺基酸係由熟知單字母或三字母標示僻別。 術語"胺基酸序列變異體”係指胺基酸序列與如本文中所 定義之多肽（例如指定序列之多肽）相比具有一些差別的分 子。如本文中所定義之多肽（例如指定序列之多肽）的胺基 酸序列變異體仍具有與CD45RO及CD45RB結合之能力。 取代變異體為如本文中所定義之多肽（例如指定序列之 多肽）中移除至少一個胺基酸殘基且在其同—位置處之位 點中插入不同胺基酸之彼等變異體。該等取代可為單一取 代，其中分子中僅一個胺基酸經取代，或其可為多重取 代，其中同一分子中兩個或兩個以上胺基酸經取代。插入 變異體為如本文中所定義之多肽（例如指定序列之多肽）中 緊鄰特定位置之胺基酸插入一或多個胺基酸之變異體。緊 鄰胺基酸意謂與該胺基酸之α_羧基或心胺基官能基連接’。、 缺失變異體為本發明之多肽（例如指定序列之多肽）中一或 多個胺基酸得以移除之變異體。通常，缺失變異體在分子 之特疋區域中缺失一或兩個胺基酸。 *31343.doc 200907061 本文中亦描述以下聚核苷酸序列： -編碼CDR1之胺基酸序列的GGCCAGTCAGAACATT GGCACAAGCATACAGTG(SEQ ID NO:25)； -編碼CDR2之胺基酸序列的TTCTTCTGAGTCTATCTC TGG(SEQ ID NO:26)； -編碼CDR3之胺基酸序列的ACAAAGTAATACCTGGCC ATTCACGTT(SEQ ID NO:27)；

-編碼CDR1'之胺基酸序列的TTATATTATCCACTG(SEQ ί ID NO:28)； -編碼CDR2’之胺基酸序列的TTTTAATCCTTACAATCAT GGTACTAAGTACAATGAGAAGTTCAAAGGCAG(SEQ ID NO:29)； -編碼CDR3·之胺基酸序列的AGGACCCTATGCCTGG TTTGACACCTG(SEQ ID NO:30)； -編碼SEQ ID NO: 1之多肽（亦即本發明所用之mAb之輕 鏈可變區）的SEQ ID NO:5 ; -編碼SEQ ID N〇:2之多肽（亦即本發明所用之mAb之重 鏈可變區）的SEQ ID NO:6 ; -編碼SEQ ID NO:9之多肽（亦即包括CDR1、CDR2及 CDR3之重鏈可變區）的SEQ ID ΝΟ:11 ; -編碼8£〇10 1^0:10之多肽（亦即包括€0111、00112及 CDR3之重鏈可變區）的SEQ ID NO:12 ; -編碼SEQ ID NO:7之多肽（亦即包括CDR1'、CDR2'及 CDR3·之輕鏈可變區）的SEQ ID NO:13 ; 131343.doc -32- 200907061 -編碼SEQ ID NO:8之多肽（亦即包括CDRl'、CDR21及 CDR3'之輕鏈可變區）的SEQ ID NO:14 ; -編碼SEQ ID NO:8之多肽（亦即包括CDRl’、CDR21及 CDR3’之輕鏈可變區）的SEQ ID NO:33 ; -編碼SEQ ID NO :31之多肽（亦即包括CDRl、CDR2及 CDR3之重鏈可變區）的SEQ ID NO:34 ;及 -編碼SEQ ID NO:32之多肽（亦即包括CDRl、CDR2及 CDR3之重鏈可變區）的SEQ ID NO:35。 包含編碼CD45RO/RB結合分子（例如編碼如本文中所定 義之CDRl、CDR2及CDR3之胺基酸序列及/或編碼如本文 中所定義之CDRl1、CDR2’及CDR3’之胺基酸序列）之聚核 苷酸的聚核苷酸可用作產生本發明所使用之結合分子之源 材料。該等聚核苷酸包括上列及下列聚核苷酸，如下： 包含SEQ ID NO:5之聚核苷酸及/或（較佳及）SEQ ID NO:6之聚核苷酸的聚核苷酸； 包含編碼SEQ ID NO: 7或SEQ ID NO: 8之多肽及/或（較佳 及）SEQ ID NO:9或SEQ ID NO: 10之多肽的聚核苷酸的聚核 苷酸；例如包含編碼以下多肽之聚核苷酸的聚核苷酸： -SEQIDNO:7之多肽及SEQIDNO:9之多肽， SEQIDNO:7之多肽及SEQIDNO:10之多肽， -SEQIDNO:8之多肽及SEQIDNO:9之多肽，或 -SEQIDNO:8之多肽及SEQIDNO:10之多肽； 包含SEQ ID ΝΟ:11或SEQ ID NO:12之聚核苷酸及/或（較 佳及）SEQ ID NO:13之聚核苷酸或SEQ ID NO:14之聚核苷 131343.doc -33 - 200907061 酸的聚核苷酸，較佳包含以下聚核苷酸之聚核苷酸： -SEQ ID ΝΟ:11之聚核苷酸及SEQ ID ΝΟ:13之聚核苷 酸， -SEQ ID ΝΟ:11之聚核苷酸及SEQ ID ΝΟ:14之聚核苷 酸， -SEQ ID ΝΟ:12之聚核苷酸及SEQ ID ΝΟ:13之聚核苷 酸，或 -SEQ ID ΝΟ:12之聚核苷酸及SEQ ID ΝΟ:14之聚核苷 酸； 包含編碼SEQ ID ΝΟ:31或SEQ ID ΝΟ:3 2之多肽及/或（較 佳及）SEQ ID ΝΟ:7或SEQ ID ΝΟ:8之多肽的聚核苷酸的聚 核苷酸；例如包含編碼以下多肽之聚核苷酸的聚核苷酸： -SEQIDNO:31之多肽及SEQIDNO:7之多肽， -SEQIDNO:31之多肽及SEQIDNO:8之多肽， -SEQIDNO:32之多肽及SEQIDNO:7之多肽，或 -SEQIDNO:32之多肽及SEQIDNO:8之多肽；及 包含SEQ ID NO:34或SEQ ID NO:35之聚核苷酸及/或較 佳及SEQIDNO:33;SEQIDNO:14或13之聚核苷酸的聚 核苷酸： -SEQIDNO:34 之多肽及 SEQIDNO:33之多肽， -SEQIDNO:34 之多肽及 SEQIDNO:14 之多肽， -SEQIDNO:34 之多肽及 SEQIDNO:13 之多肽， -SEQIDNO:35 之多肽及 SEQIDNO:33之多肽， -SEQIDNO:35之多肽及SEQIDNO:14之多肽，或 131343.doc 34· 200907061 -SEQ ID NO:35之多肽及 SEQ ID NO: 13之多肽。 除非另有說明，否則本文中”聚核苷酸”包括任何聚核糖 核苷酸或聚脫氧核糖核苷酸，其可為未經修飾之RNA或 DNA，或經修飾之RNA或DNA，包括（但不限於）單股及雙 股RNA，及單股區與雙股區之混合物的RNA。 CD45RO/RB結合分子，例如嵌合、人類化或完全人類抗 體，可由重組DNA技術產生。因此，可構築一或多個編碼 CD45RO/RB之DNA分子，將其置於適當控制序歹|J下且藉 由適當載體轉移（例如藉由轉染）至適合宿主（生物體）中表 現。 該等聚核苷酸可編碼例如CD45RO/RB結合分子之單一重 鍵及/或輕鍵。 CD45RO/RB結合分子可藉由習知方法以及本文所提供之 資訊例如高變區或可變區之胺基酸序列及編碼該等區域之 聚核苷酸序列之知識獲得。構築可變域基因之方法（例如） 描述於EP 239 400中且可簡單總結如下：可選殖編碼具有 任何特異性之m A b之可變區的基因。測定編碼構架區及南 變區之DNA片段且移除編碼高變區之DNA片段。根據本文 中所指定之CDR及CDR1序列藉由DNA合成來製備雙股合成 CDR盒。該等盒具有黏性末端以使其可在源於人類之所需 構架之連接處接合。亦可根據（例如）類似於習知方法製備 編碼單鏈抗體之聚核苷酸。可便利地將編碼本發明中所用 之多肽之聚核苷酸轉移至適當表現載體中。 可根據習知方法使用適當細胞株（諸如CHO細胞株，例 131343.doc -35- 200907061 如DG44及其他DHFR-CHO細胞、Sp/2或NS/0細胞株）。表 現載體，例如包含啟動子及編碼重鏈及輕鏈恆定部分之基 因的表現載體（例如）為已知且可市售。已知或可根據習知 方法找到適當宿主（包括細胞培養物或轉殖基因動物）。 合適表現載體包括編碼如本文中所定義之CD4 5 RO/RB結

合分子（例如序列 SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:37、 SEQ ID NO.38、SEQ ID NO:39、SEQ ID NO:4〇 或 SEQ ID NO:41之CD45RO/RB結合分子）之聚核苷酸。 如上所述，本發明所用之CD45RO/RB結合分子經由調節 DC表型發揮免疫抑制及耐受性作用。CD45RO/RB結合分 子所展現之該等原先未認識到之特性使其適用於對同種異 體抗原、自身抗原、過敏原及菌群抗原進行活體内及離體 耐受性誘導。舉例而言，CD45RO/RB結合分子可適用於離 體誘導耐受性DC，該等DC可在暴露於結合分子之後引入 需要其之宿主中來治療及預防以下疾病，例如（包括）自體 免疫疾病，諸如（但不限於）類風濕性關節炎、牛皮癖性關 節炎、自體免疫甲狀腺炎、格雷氏症（Graves disease)、工 型及II型糖尿病、多發性硬化症、克羅恩氏症（Cr〇hn，s disease，CD)、潰瘍性結腸炎（uc)、全身性紅斑性狼瘡 症、謝格連氏症候群（Sjogren syndrome)、硬皮病、自體免 疫胃炎、絲球體腎炎；移植排斥反應，諸如（但不限於）器 官及組織同種異體移植及異種移植排斥反應，例如用於治 療（例如）心臟、肺、組合心肺、肝臟、腎臟、胰腺、皮膚 13l343.doc -36- 200907061 或角膜移植之接受者，移植物抗宿主疾病（gvhd)，諸如 骨髓移植之後’及/或騰島細胞移植排斥反應；及/或牛皮 癬；皮炎，諸如異位性及接觸性皮炎（包括過敏性接觸性 皮炎）’發炎性腸道疾病；及/或過敏症，包括過敏性哮 喘。在較佳實施例中，本發明之方法及組合物與治療及/ 或預防牛皮癬及移植排斥反應（例如改善人類接受者對所 移植之諸如胰島細胞之同種異體細胞的排斥）有關。 預計藉由暴露於如本文中所定義iCD45RO/Rtg合分子 來調節之DC將為（例如）用於治療及/或預防自體免疫疾 病丄移植排斥反應’例如胰島細胞移植排斥反應或移植物 抗宿主疾病（GVHD);牛皮癬；皮炎；發炎性腸道疾病及/ 或過敏症之有用藥物/藥劑。 如本文中所使用之沉及’或心細胞之，，有效量”為足 生有利或所需結果之量，該等結果包括臨床結果，諸 接或間接減少由自體免疫疾病、移植排 皮炎、發炎性腸道疾病及/或過敏症產生之一或= :患以上疾病者之生活品質，降低治療該 : 舄之其他荦物之南丨旦说、病所 、… 強另—藥物之效應，延緩疾病夕 進程及/或延長患者存活。 嚷疾病之 有效$可以一或多次投藥來 藥物、化合物或醫藥組合棒達可成不與其他 他藥劑聯合可能達成或二有:lvj:若與—或多種其 為以有效量給予。4成所而結果，則可將單—藥劑視 f3l343.doc -37- 200907061 根據本發月調節之Dc及/或由將T細胞暴露於經調節 產生之T r可作為唯一活性成份投與或連同免疫調節療法中 之其他藥物或(例如)用於治療或預防與自體免疫疾病、移 植排斥反應、牛皮癬、纟炎、發炎性腸道疾病及/或過敏 症相關之疾病的其他消炎劑一起投與。舉例而言，DC&Z 或Tr 了與以下藥劑組合使用：約調神經填酸酶抑制劑，例 如裱孢黴素（Cycl〇sporine)A、環孢黴素 G、FK 5〇6、ΑΒΤ_ 281 ASM 981 , mTOR抑制劑，例如雷帕黴素 (rapamycm)、40-0-(2-羥基）乙基 _ 雷帕黴素、CCI779、 ABT578、AP23573、AP23464、AP23675、AP23841、 TAFA-93、百利姆思（bi〇iimus)_7或百利姆思_9 ;皮質類固 醇；環磷醯胺；硫唑嘌呤；甲胺喋呤；S丨p受體促效劑， 例如FTY 720或其類似物；來氟米或其類 似物；咪。坐立賓（mizoribine);黴酚酸；黴酚酸嗎啉乙酯； 15_去氧史帕脈林（15-deoxyspergualine)或其類似物；免疫 抑制單株抗體，例如白血球受體之單株抗體，該等白血球 党體例如 MHC、CD2、CDS、CD4、CD1 la/CD18、CD7 ' CD25、CD27、B7、CD40、CD45、CD58、CD137、 ICOS、CD150(SLAM)、0X40、4-1BB 或其配體，例如 CD 1 54 ;或其他免疫調節化合物，例如具有CTLA4或其突 變體之胞外域之至少一部分的重組結合分子，例如與非 CTLA4蛋白序列連接之CTLA4或其突變體之至少胞外部 分’例如CTLA41g(例如指定為ATCC 68629)或其突變體， 例如LEA29Y，或其他黏著分子抑制劑，例如mAb，或低 131343.doc -38 - 200907061 劑抑㈣’包括LFM_，選擇素拮抗劑及Μ 投^藉2括㈣㈣㈣時时緩輸注之㈣f知途徑 ^投樂可為（例如）靜脈内、腹膜内、& 收踢門、肌肉内、腔内、 次卜、局部或經皮投藥。 一砗Μ、，Λ /、仅梁思明一起或在大體上同 ，Β 相同媒劑或獨立媒劑投與組份。 較佳地，各組份係以固定組合形式投與。 /. V,.... 本發明之藥劑及醫藥組合物包 j匕祜至少一種醫藥學上可 接受之载劑或稀釋劑。 劑，如音本田文^使用之術語,,W藥學上可接受之載劑或稀釋 固;：一或多種適合於向哺乳動物(包括人類)投與之相容 =或液體填充劑、稀釋劑或囊封物質。術語”載劑”表示 咬=與之組合以有利於應用的天然或合成之有機成份 或無機成份。 ”醫藥學上可接受”意謂不會干擾活性成份之生物活性之 :效性的無毒物質。該等製劑通常可含有醫藥學上可接受 浪度之鹽、緩衝劑、防腐劑、相容 A 補充免疫增效 蜊，諸如佐劑及細胞激素及視情 4，兄其他治療劑，諸如化療 劑。 ’、 當於藥品中使用時，該等鹽應為醫 商樂予上可接受的，但 可便利地將非醫藥學上可接受之_ 又心鹽用於製備其醫藥學上可 接受之鹽。 醫藥組合物可含有合適緩衝劑，句 匕括.乙酸鹽；檸檬酸 鹽；硼酸鹽；及磷酸鹽。 131343.doc •39- 200907061 醫藥組合物亦可視情況含有合適防腐劑，諸如：氣化苯 曱烴銨·’氯丁醇；對羥基苯甲酸酯及硫柳汞。 向個體投與之DC及/或Tr細胞之劑量可根據不同參數， 尤其根據所用投藥模式及個體狀態選擇。其他因素包括所 需療程。倘若在所施用之初始劑量下個體之反應不足，則 可在患者耐受性允許之程度上採用較高劑量（或藉由不 同、較局部化傳遞途徑投與之有效較高劑量）。 广 本發明之醫藥組合物/藥劑可包含其他（例如，活性）成 伤，例如其他免疫調節抗體，諸如（但不限於）如本文中所 定義之CD45RO/RB結合分子’抗IC〇s，抗CD154，抗 CD134L或重組蛋白，諸如（但不限於）rCTLA_4(cDm)、 rOX40(CDl34);或消炎劑或免疫調節化合物，諸如（但不 限於）環孢菌素A、FTY 720、RAD、雷帕黴素、FK5〇6、 15 -去氧史帕胍林、類固醇；如上所述。 人本發月之組合物可以自由組合投與或可調配成固定組 L =絕對劑量將視多種因素而變化，該等因素例如個體、 技樂途、所需持續時間、活性劑之釋放速率及待治療病 狀之性質及嚴重程度。 如上所述欲根據本發明之方法及用途治療之疾病包括 (仁不限於)自體免疫疾病，包括類風濕性關節炎、牛皮癖 性關=炎、自體免疫甲狀腺炎、格雷氏症、！型及π型糖尿 病夕發性硬化症、克羅恩氏症（CD)、潰癌性結腸炎 (UC)、全身性紅斑性狼瘡症、謝格連氏症候群、硬皮病、 自體免疫胃炎及絲球體腎炎；移植排斥反應，包括（但不 131343.doc •40· 200907061 如用於治療(例： 移植排斥反應，例 腺 '皮膚:臟、肺、組合心肺、肝臟、腎臟、騰 (_)=:植之接受者，移植物抗宿主疾病 )“骨髓移植之後’及/或胰島細胞移植排斥反 … 纟炎’諸如異位性及接觸性皮炎(包括 性接觸性皮炎h發炎性腸道疾病；及/或過敏症，包 敏性哮喘。 實例 猎由參考以下實例將能夠更充分理解本發明。該等實例 僅係出於說明之目的且不應視為限制本發明之範疇。 本文中稱為ChA6 mAb之抗體為嵌合抗體，其包含SEQ ID NO:3之輕鏈及SEQ ID NO:4之重鏈。 統汁上顯著差異之所有分析均使用學生配對？測試（the students paired ? test)執行。户值小於〇 〇5視為顯著的。所 有培養物均重複執行三份且誤差範圍表示SD。 f例I.嵌合A6抗體（chA6)之產生。 藉由將藉由RT-PCR選殖之mAb A6(58)可變區與人類γ-1 重鏈及人類κ輕鏈恆定區連接產生ChA6。轉染至sp2/〇細胞 中且使用G4 1 8及甲胺喋呤選擇純系之後，將抗體藉由親和 層析經山羊抗人類IgG純化繼而經尺寸排阻層析純化。使 用 dCTYCL凡五7OX(Sterogene，2705-01)移除内毒素。最 終内毒素含量低於每毫克蛋白質30皮克。 實例2 : DC分允。 經 Ficoll-Hypaque 梯度（Nycomed Amersham)離心自健康 13I343.doc -41 - 200907061 供給者分離卩61^(：。將€014+單核細胞在37°(：下在補充有 10% FCS(Biowhittaker)、100 U/ml 青黴素 / 鏈黴素（BristoL· Myers Squibb)及 50 μΜ 2-巯基乙醇（BioRad)之 RPMI 1640(Biowhittaker)(DC培養基）中培育1小時之後，將其分 離為黏附部分。充分洗滌之後，藉由將黏附單核細胞在 DC培養基中之 10 ng/ml rhIL-4(R&D SYSTEMS)及 100 ng/ml rhGM-CSF(Immunotools)中培養而使其分化為 DC。5 曰之後，使DC不受刺激或將其轉移至含有經照射（1〇,〇〇〇 拉德）表現人類CD40L之3T3纖維母細胞之孔中誘導成熟 化。DC成熟化期間，將細胞在抗CD45RO/RB(chA6) mAb( 1 0 pg/ml)存在或不存在下培養。2曰之後，將未成 熟、成熟及成熟/chA6 DC收集、照射（6000拉德）’且用於 刺激T細胞，且在各輪刺激之前進行冷凍及解凍。藉由流 式細胞計數分析常規檢驗DC之純度及成熟化狀態以確定 CDla、CD14、CD83及HLA-DR之表現。通常培養物含有 >90% CDla+CD14_細胞。在一些實驗中，亦對未成熟、成 熟及chA6調節（成熟/chA6)DC之協同刺激分子CD40、 CD80及 CD86、ICOS-配體、ILT-4(Gregorio Aversa友情贊 助）、ILT-3(Immunotech)、PDL-1、PDL-2(eBioscience)、 ICAM-1、LFA-1、CD45RO 及 CD45RB(BD bioscience)及 SLAM(Gregorio Aversa友情贊助）之表現量進行測試。 實例3 : Γ鈿應之，趣/6 ^藉由使用CD4+ T細胞分離套組 (Miltenyi Biotech)根據製造商之說明進行陰性選擇自 PBMC純化CD4+ T細胞。將所得CD4+ T細胞之一部分低溫 I3I343.doc -42- 200907061 保存以備後用’且使用抗CD45RO偶合磁珠及LD陰性選擇 管柱（Miltenyi Biotech)使其餘部分耗盡Cd45R〇+細胞。所 得細胞通常大於90% CD4+CD45ROXD45RA+。 實例4 : Γ細虑分允。將1 X 1〇5個DC與1 X 1〇6個同種異 體CD4 + CD45RO T細胞在2 ml補充有5°/。混合AB人類血清 (Biowhittaker)及 1〇〇 U/ml 青黴素 / 鏈黴素（Brist〇1_Myers Squibb)之 X-vivo 15 培養基（Biowhittaker)中一起培養。6或 7日之後，添加rhIL-2(20 U/ml)(Chiron)且使細胞再擴增7_8 曰。開始培養之後第1 4日，將T細胞收集，洗滌，且以來 自與原代培養所用相同之同種異體供給者之未成熟、成熟 或成熟/chA6 DC再刺激。3曰之後，添加rhIL-2。二次刺 激之後，將T細胞收集’洗滌且測試其增殖及抑制能力。 在一些實驗中，在各輪刺激開始時添加中和抗pDL2 (MIH18 ’ 10 pg/ml，eBioscience)mAb且每次細胞均分裂。 反覆以未成熟DC刺激之T細胞稱為T(imm)，反覆以成熟 DC刺激之T細胞稱為T(mat)且反覆以成熟/chA6 DC刺激之 T細胞稱為T(chA6 mat)。 fT細胞之增殖及抑制。 為測試T(imm)、T(mat)或T(chA6 mat)細胞抑制增殖及/ 或細胞激素產生之能力，將自體CD4+ T細胞解束且以同種 異體成熟DC(10:1，T:DC)或單核細胞（CD3-耗盡之PBMC， 6000拉德照射）（1:1，丁：單核細胞）刺激。將原態（：〇4+丁細 胞在96孔圓底板中最終體積為200 μΐ之完全培養基中單獨 或在T(imm)、T(mat)或T(chA6 mat)細胞（1:1之比率）存在下 131343.doc -43- 200907061 刺激。在一些培養物中添加抗IL-10R(30 pg/ml，3F9)及/或 抗 TGF-P(5 0 pg/ml，1D11，R&D SYSTEMS)mAb。指定時 間之後，將各孔以每孔1 pCi 3H-胸苷脈衝刺激16小時或收 集上清液用於分析IFN-γ產生。 實例 6 : £17*^4。 使用成熟同種異體DC以10:1(T:DC)之比率刺激T(imm)、 T(mat)或 T(chA6 mat)。24 小時（對於 IL-2 及 IL-4)、48 小時 (對於IL-10及IFN-γ)及72小時（對於TGF-β)之後收集上清 液。為評估未成熟、成熟及成熟/chA6 DC所產生之細胞激 素之量，將DC單獨培養。48小時之後獲得上清液。藉由 捕獲型ELIS A根據製造商之說明（BD Biosciences)測定比-2、IL-4、IL-10、IL-12、IL-6、TNF-α 及 IFN-γ 之含量。藉 由捕獲型ELISA根據製造商之說明（R&D systems)測定酸化 上清液中之TGF-β之含量。偵測限度如下：IL-2 : 20 pg/ml ； IL-4 ： 20 pg/ml ； IL-10 ： 20 pg/ml ； IL-12 ： 30 pg/ml，IL-6 · 30 pg/ml，TNF-α : 20 pg/ml，IFN-γ : 60 pg/ml ; TGF-β : 60 pg/ml。 實例Ί ·. chA6 mAb調節之成熟DC之表型 在chA6 mAb存在下所產生之成熟DC包含混合細胞群， 其通常包含成熟DC及類似於未成熟DC之細胞。為判定 chA6處理是否調節成熟DC之分化及成熟狀態，執行細胞 表型分析。在IL-4及GM-CSF存在下自CD14+單核細胞分化 DC 5曰，且隨後使其不受刺激或藉由與表現CD40L之鼠纖 維母細胞在可溶chA6 mAb存在或不存在下共培養48小時 131343.doc -44 - 200907061 活化。正如所料，未成熟、成熟及成熟/chA6 DC之培養物 通常均 >90% CDla+CDl4·(圖 1)。 未成熟之DC呈CD83陰性且HLA-DR較低。在DC活化期 間添加chA6 mAb並未改變CD83及HLA-DR之表現，在成 熟DC上該等表現得以上調（圖1) ^成熟/chA6及成熟DC表 現相當量之協同刺激分子CD40、CD80及CD86。 f例S ·. chA6 mAb改變成熟DC上PDL-2及CD45RB之表 現。

吾人隨後判定先前與耐受性DC關聯之分子是否由成熟/ chA6 DC表現。成熟/chA6 DC與成熟DC上之ILT3及ILT4 之表現類似，且正如所料，與未成熟DC相比該等表現較 低（圖2八）。。11八6成熟0(：上1丁1^3之]^?1為12,8士6.4，而成 熟DC上為13.6±6.4(n = 5 ，p=ns)且未成熟DC上為 18.4±9.2(n=5 ’ p=ns)。成熟 /chA6 DC 上 ILT4 之 MFI 為 14.7±4.9，而成熟 DC上為 12.4士4.1(n=8，p=ns)且未成熟 DC上為22·1±7.4(η=5，ρ = 0·05)。與成熟及未成熟DC相 比，成熟/chA6 DC上之ICOS-L之表現略微增加：成熟 /chA6 DC 上 ICOS-L 之 MFI 為 40.1 土 23.2，而成熟 DC 上為 20±11.5(n = 4，p = ns)，且未成熟DC 上為 31·4±18.1(η=4， p=ns)。成熟/chA6 DC及成熟DC表現類似量之SLAM，其 中成熟/chA6 DC上之MFI為21.5±3.9，而成熟DC上為 18.9士10.9(11 = 4，卩=118)，其與未成熟〇〇(8.9±5.1，11=4， p = 0.05)相比顯著較高。未觀察到成熟/chA6 DC與成熟DC 之間黏著分子ICAM-1及LFA-1之表現有差異：成熟/chA6 DC I31343.doc -45- 200907061 上ICAM-1之MFI為471·5±192.5 ’而成熟DC上為 472.1 土 192.7(n=5，p=ns)，其與未成熟DC(136.8±55.9，η =5，ρ=0.02)相比顯著較高。成熟/chA6 DC上LFA-1之MFI 為 50.3 士25.2，而成熟DC 上為 53_3士26.6(n=5 ’ p=ns) ’ 且其 與未成熟DC(43.7±2 1.9，n=5，p=n.s.)相比略微增加。成 熟/chA6與成熟DC中PDL-1之表現相當，且與未成熟DC相 比顯著較高，如先前報導（59)。成熟/chA6 DC上PDL-1之 MFI 為 43.8±16.6，而成熟 DC 上為 47.9士 1 8.1(n = 8，p=ns)， ί 且未成熟DC上為25.9±9(n=8 ’ pSO.OOl)。成熟/chA6與成熟 DC上之DC-SIGN表現相當，但與未成熟DC相比略高。成 熟/chA6、成熟及未成熟DC上之DC-SIGN之MFI分別為 34.4土9.6、3 4.3±7.8及25.2士5.8。相比之下，成熟/chA6 DC 上PDL-2之表現顯著較高（圖2)。成熟/chA6 DC上PDL-2之 MFI 為 25·8士8.6 ，而成熟 DC 上為 16·8±5.6(η=10 ， ρ=0.009)，而未成熟 DC 為 19·7土6.6(η=10，p=ns)。吾人亦 證實在chA6 mAb存在下成熟DC上CD45RB之表現較高。成 熟/chA6 DC上CD45RB之MFI為22.6±9.2，而成熟DC上為 1〇·7±4.4(η=6，p=0.05)，且未成熟 DC 為 24·8± 10· 1 (n= 6， ρ=0·04)。相比之下，與成熟及未成熟DC相比，成熟/chA6 DC上之CD45RO/RB同功異型物之表現顯著較低。成熟/ chA6 DC 上之 CD45RO/RB 之 MFI 為 34.1±7.8，而成熟DC 上 為 41.9±9.6(η=20 ，p-0.01)，且未成熟 DC 上為 60.6±13.9(n=20，p=〇.〇2)。CD45RO/RB 同功異型物之下調 並非歸因於chA6 mAb之存在，因為成熟/chA6 DC經二次 131343.doc -46- 200907061 抗體之染色類似於經同型對照物之染色（數據未展示）。三 種DC亞群中CD45RO同功異型物之表現相當。未成熟、成 熟及成熟/chA6 DC上之CD45RO之MFI分別為27.3±10.3、 20.5±7.8及20.4±7.7。 f办\9 ·· ChA6 mAb處理不改變成熟DC之細胞激素產生概 況。 吾人隨後測定DC之細胞激素分泌概況。將未成熟、成 熟及成熟/chA6 DC在培養7日之後洗滌且再於板中培養兩 曰。與成熟DC相比成熟/chA6 DC分泌類似量之il-6、IL-12、IL-10及TNF-α(圖3)。該等結果一起表明在DC成熟化 期間添加chA6並不改變所得成熟DC之細胞激素產生。該 等結果並不排除吾人未分析之其他細胞激素之表現及分泌 可由chA6 mAb調節之可能性。 實例10 ·· chA6 mAb誘導耐受性DC。 吾人隨後研究成熟/chA6 DC在活體外產生Tr細胞上是否 與未成熟DC同樣有效。使用標準化方案（38)將 CD4 + CD45RO-T細胞反覆以10:1比率之同種異體成熟/chA6 DC刺激（3輪刺激），且隨後測試其響應於成熟DC增殖之能 力。令人驚訝地，3輪刺激之後’以同種異體成熟/chA6 DC預致敏之T細胞對於以完全成熟DC再活化具有低反應性 (圖4A)。與以成熟DC刺激之T細胞相比，觀察到Ag誘導之 增殖平均減少57士23%(η=17，ρ=0·009)。正如所料，與反 覆以成熟DC預致敏之Τ細胞相比’以同種異體未成熟 DC預致敏之T細胞對於以同種異體成熟DC再活化具有 131343.doc -47- 200907061 低反應性’增殖平均減少75±17%(n=23，ρ = 0·0009)。響應 於多株性活化獲得類似結果（圖4Β)，其中以成熟/chA6 DC 活化三輪之後’增殖平均減少62.6± 16.5 %(n=3)，且以未成 熟DC活化之後增殖平均減少78·7±2〇%(η=3)。該低反應性 可藉由添加抗CD28 mAb及外源IL-2來挽救（圖4Β)。 反覆以成熟/chA6 DC活體外刺激周邊血液 CD4 + CD45RO- T細胞產生極度低反應性之τ細胞，此發現 表明該等細胞可能亦具有獲得性抑制能力。因此吾人測試 以成熟/chA6 DC產生之T細胞抑制原態自體CD4+ T細胞在 以同種異體成熟DC激發之後之反應的能力。以成熟dc單 獨或在T(chA6 mat)或T(mat)細胞（1:1比率）存在下刺激原態 CD4 T細胞’且在開始培養之後第2 ' 3或4日對增殖進行 s平估。作為對照’將以成熟DC預致敏之原態CD4+ T細胞 與T(imm)細胞共培養。以成熟DC刺激之原態CD4+ T細胞 展示初級反應之動力學，增殖在培養4日之後達到峰值（圖 5)。正如所料’以成熟DC產生之T(mat)細胞當以同一供給 者之D C再激發時展示二級反應之動力學，增殖在第2曰達 到峰值。T(chA6 mat)細胞在整個時程中保持低反應性。 向初級MLR中添加T(mat)細胞使得在第2日增殖增加。重 要地，添加T(chA6 mat)或T(imm)細胞均抑制原態cd4+ T 細胞響應於成熟DC之增殖。與T(chA6 mat)細胞及T(imm) 細胞一起培養之後第4日評估時分別觀察到原態cD4+ τ細 胞增殖平均減少76±23%及87±10%(η=13)。該等結果一起 表明在chA6 mAb存在下DC之活化引起耐受性DC之產生， 131343.doc -48- 200907061 該等耐受性DC活體外誘導Tr細胞。 章mil chA6調節之DC所產生之T細胞在表型上及功能 上等效於Tr 1細胞。 吾人隨後檢驗藉由以成熟/chA6 DC反覆刺激所誘導之Tr 細胞是否類似於產生IL-1 0之Trl細胞。吾人首先測定 T(chA6mat)細胞以成熟DC活化之後的細胞激素產生概 況，且吾人將其細胞激素產生概況與T(imm)或T(mat)細胞 進行對比。如表1中所示，T(mat)細胞產生所測試之所有 細胞激素。相比之下，T(chA6 mat)細胞產生IL-1 0、IFN-γ 及TGF-β，且不能產生顯著量之IL-2或IL-4。類似於 T(imm)細胞，與T(mat)細胞相比，T(chA6 mat)細胞產生略 低量之IL-10，且TGF-β之含量無顯著差異。T(chA6 mat) 細胞產生IFN-γ，但至少比T(mat)細胞所分泌之IFN-γ少1 0 倍。因此，T(chA6 mat)細胞展示類似於Trl細胞的細胞激 素生產概況。 T(min) T (mat) T(chA6 mat) P IL-2, pg/ml <20 1500±500 <20 0.02 IL-4, pg/ml <20 130±60 <20 ns IL-10, pg/ml 430±65 800±170 600±120 0.05 IFN-γ, ng/ml 1.3±0.5 6.5±2.7 0.8 士 0.2 0.05 IFN-β, pg/ml 410±200 400±200 350±160 ns 表1 : Timm、Tmat及TchA6maT細胞之細胞激素生產概 況。 以未成熟、成熟及chA6/成熟DC進行3輪刺激結束時， 將T細胞株以mDC活化，且培養24 h(對於IL-2)、48 h(對於 131343.doc -49- 200907061 IL-10、IFN-γ及TGF-β)之後收集上清液。藉由ELISA測定 指定細胞激素之含量。給出八次獨立實驗中所偵測之平均 值士 SEM量。 吾人隨後研究T(chA6 mat)細胞對增殖之抑制是否經由 產生IL-10及/或TGF-β介導。吾人使用同種異體單核細胞 執行抑制實驗來誘導原態T細胞增殖。在該等條件下，添 加中和抗IL-1 0R及抗TGF-PmAb完全逆轉T(chA6 mat)細胞 所介導之增殖抑制（圖6)。該等數據一起表明藉由以成熟/ chA6 DC反覆刺激產生之Tr細胞在表型上及功能上等效於 T r 1細胞。 f例12 ·. chA6成熟DC誘導之Trl細胞分化需要PDL-2/PD-1相互作用。 吾人展示在所測試之财受性標記物中，以chA6 mAb處 理之成熟DC上之PDL-2顯著上調。已知PDL-2為一種抑制 受體，其由DC選擇性表現（59)。因此吾人研究PDL-2/PD-1 相互作用是否為成熟/chA6 DC所誘導之Trl細胞產生所 需。在中和抗PDL-2或對照IgG mAb存在或不存在下反覆 以成熟/chA6 DC刺激CD4 + CD45RO-T細胞。如8A中所示， 在中和抗PDL-2 mAb存在下，T細胞分化完全逆轉成熟/ chA6 DC所誘導之低反應性狀態。此外，PDL-2阻斷亦阻 礙具有抑制活性之Tr細胞之誘導（圖8B)。 參考文獻 1. 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義大利商聖拉斐爾狄蒙特泰伯基金會 <120>成熟樹突狀細胞之耐受性表型之誘導 <130> 50623-EP-EPA <140> EP 07109672.1 <141> 2007-06-05 <】5007109672.1 <151>2007-06-05 <160> 41 <170> Patentln version 3.3 <210> 1 <211> 107 <212> PRT <213>人工序列 <220> <221> Source <222> 1..107 <223>/註解=“人工序列之描述：嵌合輕鏈之 胺基酸序列之部分” <400> 1

Asp lie Leu Leu Thr Gin Ser Pro Ala He Leu Ser Val Ser Pro Gly 15 10 15

Glu Arg Val Ser Phe Ser Cys Arg Ala Ser Gin Asn lie Gly Thr Ser 20 25 30 lie Gin Trp Tyr Gin Gin Arg Thr Asn Gly Ser Pro Arg Leu Leu lie 35 40 45

Arg Ser Ser Ser Glu Ser lie Ser Gly lie Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser G)y Thr Asp Phe Thr Leu Ser lie Asn Ser Val Glu Ser 65 70 75 80

Glu Asp lie Ala Asp Tyr Tyr Cys Gin Gin Ser Asn Thr Trp Pro Phe 85 90 95

Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys 100 105 <210> 2 <211> 118 <212> PRT <213>人工序列 <220> <221> Source <222> 1..118 <223>/註解=“人工序列之描述：嵌合重鏈之 胺基酸序列之部分” <400> 2

Glu Val Gin Leu Gin Gin Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 15 10 15 131343-序列表.doc 200907061

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Pro Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gin Leu Lys Ser Gly 115 120 125

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 -2- 131343·序列表.doc 200907061

Lys Val Gin Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gin Ser Gly Asn Ser Gin 145 150 155 160

Glu Ser Val Thr Glu Gin Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190

Ala Cys Glu Val Thr His Gin Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205

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Glu Val Gin Leu Gin Gin Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 15 10 15

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Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser 180 185 190

Ser Leu Gly Thr Gin Thr Tyr lie Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser 195 200 205

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Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro 260 265 270

Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala 275 280 285

Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val 290 295 300

Ser Val Leu Thr Val Leu His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr 305 310 315 320

Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro lie Glu Lys Thr 325 330 335

He Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu 340 345 350

Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr Cys 355 360 365

Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp Glu Ser 370 375 380

Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp 385 390 395 400

Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser 405 410 415

Arg Trp Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala 420 425 430

Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 5 <211> 321 <212> DNA <213>人工序列 <220> 4- 131343-序列表.doc 200907061 <221> Source <222> 1..321 <223>/註解=“人工序列之描述：編碼SEQIDNO:l之 多肽的核苷酸序列” <400> 5 gacattctgc tgacccagtc tccagccatc ctgtctgtga gtccaggaga aagagtcagt 60 ttctcctgca gggccagtca gaacattggc acaagcatac agtggtatca acaaagaaca 120 aatggttctc caaggcttct cataaggtct tcttctgagt ctatctctgg gatcccttcc 180 aggtttagtg gcagtggatc agggacagat tttactctta gcatcaacag tgtggagtct 240 gaagatattg cagattatta ctgtcaacaa agtaatacct ggccattcac gttcggctcg 300 gggaccaagc ttgaaatcaa a 321 <210> 6 <211> 354 <212> DNA <213>人工序列 <220> <221> Source <222> 1..354 <223>/註解=“人工序列之描述：編碼SEQIDNO:2之 多肽的核苷酸序列” <400> 6 gaggtgcagc tgcagcagtc aggacctgaa ctggtaaagc ctggggcttc aglgaagatg 60 tcctgcaagg cctctggata cacattcact aattatatta tccactgggt gaagcaggag 120 cctggtcagg gccttgaatg gattggatat tttaatcctt acaatcatgg tactaagtac 180 aatgagaagt tcaaaggcag ggccacacta actgcagaca aatcclccaa cacagcctac 240 atggacctca gcagcctgac ctctgaggac tctgcgatct actactgtgc aagatcagga 300 ccctatgcct ggtttgacac ctggggccaa gggaccacgg tcaccgtctc ctca 354 <210> 7 <211> 107 <212> PRT <213>人工序列 <220> <221> Source <222> 1..107 <223>·/註解='·人工序列之描述：稱為humX^humX^^VLm)之人類化 輕鏈之胺基酸序列之部分” <400> 7

Asp He Leu Leu Thr Gin Ser iVo Ala Thr Leu Ser Leu Ser F*ro Gly 15 10 15

Glu Arg Ala Thr Phe Ser Cys Arg Ala Ser Gin Asn lie Gly Thr Ser 20 25 30 lie Gin Trp Tyr Gin Gin Lys Thr Asn Gly Ala Pro Arg Leu Leu He 35 40 45

Arg Ser Ser Ser Glu Ser He Ser Gly lie Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Glu Pro 131343-序列表.doc 200907061 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gin Gin Ser Asn Thr Trp Pro Phe 85 90 95

Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys 100 105 <210> 8 <211> 107 <212> PRT <213>人工序列 <220> <221> Source <222> 1..107 <223>/註解=”人工序列之描述：稱為humVl(humVl=VLh)之人類化輕 鏈之胺基酸序列之部分'· <400> 8

Asp He Leu Leu Thr Gin Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gin Asn lie Gly Thr Ser 20 25 30 lie Gin Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Arg Leu Leu lie 35 40 45

Arg Ser Ser Ser Glu Ser lie Ser Gly lie Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Glu Pro 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gin Gin Ser Asn Thr Trp Pro Phe 85 90 95

Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys 100 105 <210> 9 <211> 118 <212> PRT <213>人工序列 <220> <221> Source <222> 1..118 <223>註解人工序列之描述：稱為VHE之人類化重鏈之胺基酸序列 之部分” <400> 9

Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 15 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 lie lie His Trp Val Lys Gin Glu Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp He 35 40 45 -6- 131343-序列表.doc 200907061

Gly Tyr Phe Asn Pro Tyr Asn His Gly Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60

Lys Gly Arg Ala Thr Leu Thr Ala Asn Lys Ser lie Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Ser Gly Pro Tyr Ala Trp Phe Asp Thr Trp Gly Gin Gly Thr 100 105 110

Thr Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 10 <211> 118 <212> PRT <213>人工序列 <220> <221> Source <222> 1..118 <223>註解=="人工序列之描述：稱為VHQ之人類化 重鏈之胺基酸序列之部分" <400> 10

Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 lie lie His Trp Val Lys Gin Glu Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp lie 35 40 45

Gly Tyr Phe Asn Pro Tyr Asn His Gly Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60

Lys Gly Arg Ala Thr Leu Thr Ala Asn Lys Ser He Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Ser Gly Pro Tyr Ala Trp Phe Asp Thr Trp Gly Gin Gly Thr 100 105 110

Thr Val Thr Val Ser Ser 115

<210> 11 <211> 354 <212> DNA <213>人工序列 <220> <221> Source <222> 1..354 <223>/註解=“人工序列之描述：編碼胺基酸序列 SEQ ID NO: 9之核苷酸序列” -7- 131343-序列表.doc 200907061 <400> 11 gaggtgcagc tggtggagtc aggagccgaa gtgaaaaagc ctggggcttc agtgaaggtg 60 tcctgcaagg cctctggata cacattcact aattatatta tccactgggt gaagcaggag 120 cctggtcagg gccttgaatg gattggalat tttaatcctt acaatcatgg tactaagtac 180 aatgagaagt tcaaaggcag ggccacacta actgcaaaca aatccatcag cacagcctac 240 atggagctca gcagcctgcg ctctgaggac actgcggtct actactgtgc aagatcagga 300 ccctatgcct ggtttgacac ctggggccaa gggaccacgg tcaccgtctc ctca 354 <210> 12 <211〉 354 <212> DNA <213>人工序列 <220> <221> Source <222> 1..354 <223>/註解=“人工序列之描述：編碼胺基酸序列 SEQ ID NO: 10之核苷酸序列” <400> 12 caggtgcagc tggtggagtc aggagccgaa gtgaaaaagc ctggggcttc agtgaaggtg 60 tcctgcaagg cctctggata cacattcact aattatatta tccactgggt gaagcaggag 120 cctggtcagg gccttgaatg gattggatat tttaatcctt acaatcatgg tactaagtac 180 aatgagaagt tcaaaggcag ggccacacta actgcaaaca aatccatcag cacagcctac 240 atggagctca gcagcctgcg ctctgaggac actgcggtct actactgtgc aagatcagga 300 ccctatgcct ggtttgacac ctggggccaa gggaccacgg tcaccgtctc ctca 354 <210> 13 <211> 321 <212> DNA <213>人工序列 <220> <221> Source <222〉1..32] <223>/註解=“人工序列之描述：編碼胺基酸序列 SEQ ID NO: 7之核苷酸序列” <400> 13 gacattctgc tgacccagtc tccagccacc ctgtctctga gtccaggaga aagagccact 60 ttctcctgca gggccagtca gaacattggc acaagcatac agtggtatca acaaaaaaca 120 aatggtgctc caaggcttct cataaggtct tcttctgagt ctatctctgg gatcccttcc 180 aggtttagtg gcagtggatc agggacagat tttactctta ccatcagcag tctggagcct 240 gaagattttg cagtgtatta ctgtcaacaa agtaatacct ggccattcac gttcggccag 300 gggaccaagc tggagatcaa a 321 <210> 14 <211> 321 <212> DNA <2丨3>人工序列 <220> <221> Source <222> 1..321 131343-序列表.doc 200907061 <223>/註解=“人工序列之描述：編碼胺基酸序列 SEQIDNO:8之核苷酸序列” <400> 14 gacattctgc tgacccagtc tccagccacc ctgtctctga gtccaggaga aagagccact 60 ctctcctgca gggccagtca gaacattggc acaagcatac agtggtatca acaaaaacca 120 ggtcaggctc caaggcttct cataaggtct tcttctgagt ctatctctgg gatcccttx:c 180 aggtttagtg gcagtggatc agggacagat tttactctta ccatcagcag tctggagcct 240 gaagattttg cagtgiatla ctgtcaacaa agtaatacct ggccattcac gttcggccag 300 gggaccaagc tggagatcaa a 321 <210> 15 <211〉 8687 <212> DNA <213>人工序列 <220> <221> Source <222> L.8687 f <223>/註解人工序列之描述：表現載體HCMV-G1 HuA6-VHQ之核! ' 苷酸序列（包含SEQ ID NO:12(VHQ)3921-4274之人類化重鏈表 現載體的完整DNA序列;Γ <400> 15 agctttttgc aaaagcctag gcctccaaaa aagcctcctc actacttctg gaatagctca 60 gaggccgagg cggcctcggc ctctgcataa ataaaaaaaa ttagtcagcc atggggcgga 120 gaatgggcgg aactgggcgg agttaggggc gggatgggcg gagtlagggg cgggactatg 180 gttgctgact aattgagatg catgctttgc atacttctgc ctgctgggga gcctggttgc 240 tgactaattg agatgcatgc tttgcatact tctgcctgct ggggagcctg gggactttcc 300 acaccctaac tgacacacat tccacagctg cctcgcgcgt ttcggtgatg acggtgaaaa 360 cctctgacac atgcagctcc cggagacggt cacagctlgt ctgtaagcgg atgccgggag 420 cagacaagcc cgtcagggcg cgtcagcggg tgttggcggg tgtcggggcg cagccatgac 480 ccagtcacgt agcgatagcg gagtgtatac tggcttaact atgcggcatc agagcagatt 540 gtactgagag tgcaccatat gcggtgtgaa ataccgcaca gatgcgtaag gagaaaatac 600 cgcatcaggc gctcticcgc ttcctcgctc actgactcgc tgcgctcggt cgttcggctg 660 \ · cggcgagcgg tatcagctca ctcaaaggcg gtaatacggl tatccacaga atcaggggat 720 aacgcaggaa agaacatgtg agcaaaaggc cagcaaaagg ccaggaaccg taaaaaggcc 780 gcgttgctgg cgtttttcca taggctccgc ccccctgacg agcatcacaa aaatcgacgc 840 tcaagtcaga ggtggcgaaa cccgacagga ctataaagat accaggcgtt tccccctgga 900 agctccctcg tgcgctctcc tgttccgacc ctgccgctta ccggatacct gtccgccttt 960 ctcccttcgg gaagcgtggc gctttctcat agctcacgct gtaggtatct cagttcggtg 1020 taggtcgttc gctccaagct gggctgtgtg cacgaacccc ccgttcagcc cgaccgctgc 1080 gccttatccg gtaactatcg tcttgagtcc aacccggtaa gacacgactt atcgccactg 1140 gcagcagcca ctggtaacag gattagcaga gcgaggtatg taggcggtgc tacagagttc 1200 ttgaagtggt ggcctaacta cggctacact agaaggacag tatttggtat ctgcgctctg 1260 ctgaagccag ttaccttcgg aaaaagagtt ggtagctctt gatccggcaa acaaaccacc 1320 9- 131343-序列表.doc 200907061 gctggtagcg gtggtttttt tgtttgcaag cagcagatta cgcgcagaaa aaaaggatct 1380 caagaagatc ctttgatctt ttctacgggg tctgacgctc agtggaacga aaactcacgt 1440 taagggattt tggtcatgag attatcaaaa aggatcttca cctagatcct tttaaattaa 1500 aaatgaagtt tlaaatcaat ctaaagtata tatgagtaaa cttgglctga cagttaccaa 1560 tgcttaatca gtgaggcacc tatctcagcg atctgtctat ttcgttcatc catagttgcc 1620 tgactccccg tcgtgtagat aactacgata cgggagggct taccatctgg ccccagtgct 1680 gcaatgatac cgcgagaccc acgctcaccg gctccagatt tatcagcaat aaaccagcca 1740 gccggaaggg ccgagcgcag aagtggtcct gcaactttat ccgcctccat ccagtctatt 1800 aattgttgcc gggaagctag aglaagtagt tcgccagtta atagmgcg caacgttgtt 1860 gccaiigctg caggcatcgt ggtgtcacgc tcgtcgtttg gtatggcttc attcagctcc 1920 ggttcccaac gatcaaggcg agtlacatga tcccccatgt tgtgcaaaaa agcggttagc 1980 tccttcggtc ctccgatcgt tgtcagaagt aagttggccg cagtgttatc actcatggtt 2040 atggcagcac tgcataattc tcttactgtc atgccatccg taagatgctt ttctgtgact 2100 ggtgagtact caaccaagtc attctgagaa tagtgtatgc ggcgaccgag ttgctcttgc 2160 ccggcgtcaa cacgggataa taccgcgcca catagcagaa ctttaaaagt gctcatcatt 2220 ggaaaacgtt ctlcggggcg aaaactctca aggatcttac cgctgttgag atccagttcg 2280 atgtaaccca ctcgtgcacc caactgatct tcagcatctt ttactttcac cagcgtttct 2340 gg£tgagcaa aaacaggaag gcaaaatgcc gcaaaaaagg gaataagggc gacacggaaa 2400 tgttgaatac tcalactctt cctttttcaa tattattgaa gcatttatca gggttattgt 2460 ctcatgagcg gatacatatt tgaatgtatt tagaaaaata aacaaatagg ggttccgcgc 2520 acatttcccc gaaaagtgcc acctgac£tc taagaaacca ttattatcat gacattaacc 2580 tataaaaata ggcgtatcac gaggcccttt cgtcttcaag aattcagctt ggctgcagtg 2640 aataataaaa tgtgtgtttg tccgaaatac gcgttttgag atuctgtcg ccgactaaat 2700 tcatgtcgcg cgatagtggt gtttatcgcc gatagagatg gcgatattgg aaaaatcgat 2760 atttgaaaat atggcatatt gaaaatgtcg ccgatgtgag tttctgtgta actgatatcg 2820 ccatttttcc aaaagtgait tttgggcata cgcgatatct ggcgatagcg cttatatcgt 2880 ttacggggga tggcgataga cgactttggt gacttgggcg attctgtgtg tcgcaaatat 2940 cgcagtttcg atataggtga cagacgatat gaggctatat cgccgataga ggcgacatca 3000 agctggcaca tggccaatgc atatcgatct atacattgaa tcaatattgg ccattagcca 3060 tattattcat tggttatata gcataaatca aiattggcta ttggccattg catacgttgt 3120 atccatatca taatatgtac atttatattg gctcatgtcc aacattaccg ccatgttgac 3180 attgattatt gactagttat taatagtaat caatiacggg gtcattagtt catagcccat 3240 atatggagtt ccgcgttaca taacttacgg taaatggccc gcctggctga ccgcccaacg 3300 acccccgccc attgacgtca alaatgacgt atgttcccat aglaacgcca atagggactt 3360 tccattgacg tcaatgggtg gagtatttac ggtaaactgc ccacttggca gtacatcaag 3420 tgtatcatat gccaagtacg ccccctattg acgtcaatga cggtaaatgg cccgcctggc 3480 attatgccca gtacatgacc ttatgggact ttcctacttg gcagtacatc tacgtattag 3540 tcatcgctat taccatggtg atgcggtttt ggcagtacat caatgggcgt ggatagcggt 3600 ttgactcacg gggatttcca agtctccacc ccattgacgt caatgggagt ttgttttggc 3660 •10- 131343-序列表_(1〇。 200907061 accaaaatca acgggacttt ccaaaatgtc gtaacaactc cgccccattg acgcaaatgg 3720 gcggtaggcg tgtacggtgg gaggtctata taagcagagc tcgtttagtg aaccgtcaga 3780 tcgcctggag acgccatcca cgctgttttg acctccatag aagacaccgg gaccgatcca 3840 gcctccgcaa gcttgccgcc accatggact ggacctggag ggtgttctgc ctgctggccg 3900 tggcccccgg cgcccacagc caggtgcagc tggtggagtc aggagccgaa gtgaaaaa^c 3960 ctggggcttc agtgaaggtg tcctgcaagg ccictggata cacattcact aattatatta 4020 tccactgggt gaagcaggag cctggtcagg gccttgaatg gattggatat tttaatcctt 4080 acaatcatgg tactaagtac aatgagaagt tcaaaggcag ggccacacta adgcaaaca 4140 aatccatcag cacagcctac atggagctca gcagcctgcg ctctgaggac actgcggtct 4200 actactgtgc aagatcagga ccctatgcct ggtttgacac ctggggccaa gggaccacgg 4260 tcaccgtctc ctcaggtgag ttctagaagg atcccaagct agctttctgg ggcaggccag 4320 gcctgacctt ggctttgggg cagggagggg gctaaggtga ggcaggtggc gccagccagg 4380 tgcacaccca atgcccatga gcccagacac tggacgctga acctcgcgga cagttaagaa 4440 cccaggggcc tctgcgccct gggcccagct ctgtcccaca ccgcggtcac atggcaccac 45CX) ctctcttgca gcctccacca agggcccatc ggtcttcccc ctggcaccct cctccaagag 4560 cacctctggg ggcacagcgg ccctgggctg cctgglcaag gactacttcc ccgaaccggt 4620 gacggtgtcg tggaactcag gcgccctgac cagcggcgtg cacaccttcc cggctgtcct 4680 acagtcctca ggactctact ccctcagcag cgtggtgacc gtgccctcca gcagcttggg 4740 cacccagacc tacatctgca acgtgaatca caagcccagc aacaccaagg tggacaagaa 4800 agttggtgag aggccagcac agggagggag ggtglctgct ggaagccagg ctcagcgctc 4860 ctgcctggac gcatcccggc latgcagccc cagtccaggg cagcaaggca ggccccgtct 4920 gcctcttcac ccggaggcct ctgcccgccc caclcatgct cagggagagg gtcttctggc 4980 tttttcccca ggctctgggc aggcacaggc taggtgcccc laacccaggc cctgcacaca 5040 aaggggcagg tgctgggctc agacctgcca agagccatat ccgggaggac cctgcccctg 5100 acctaagccc accccaaagg ccaaactctc cactccctca gctcggacac cttctctcct 5160 cccagattcc agtaactccc aatcttctct ctgcagagcc caaatcttgt gacaaaactc 5220 acacatgccc accgtgccca ggtaagccag cccaggcctc gccctccagc tcaaggcggg 5280 acagglgccc tagagtagcc tgcatccagg gacaggcccc agccgggtgc tgacacgtcc 5340 acctccatct cttcctcagc acctgaactc ctggggggac cgtcagtctt cctcttcccc 5400 ccaaaaccca aggacaccct catgatctcc cggacccctg aggtcacatg cgtggtggtg 5460 gacgtgagcc acgaagaccc tgaggtcaag ttcaactggt acgtggacgg cgtggaggtg 5520 cataatgcca agacaaagcc gcgggaggag cagtacaaca gcacgtaccg tgtggtx:agc 5580 gtcctcaccg tcctgcacca ggactggctg aatggcaagg agiacaagtg caaggtctcc 5640 aacaaagccc tcccagcccc catcgagaaa accatctcca aagccaaagg tgggacccgt 5700 ggggtgcgag ggccacatgg acagaggccg gctcggccca ccctctgccc tgagagtgac 5760 cgctgtacca acctctgtcc clacagggca gccccgagaa ccacaggtgt acaccctgcc 5820 cccatcccgg gatgagctga ccaagaacca ggtcagcctg acctgcctgg tcaaaggctt 5880 ctatcccagc gacatcgccg tggagtggga gagcaatggg cagccggaga acaactacaa 5940 -11 - 131343-序列表.doc 200907061 gaccacgcct cccgtgctgg actccgacgg ctccttcttc ctctacagca agctcaccgt 6000 ggacaagagc aggtggcagc aggggaacgt cttctcatgc tccgtgatgc atgaggctct 6060 gcacaaccac tacacgcaga agagcctctc cctgtctccg ggtaaatgag tgcgacggcc 6120 ggcaagcccc cgctccccgg gctctcgcgg tcgcacgagg atgcttggca cgtaccccct 6180 gtacatactt cccgggcgcc cagcatggaa ataaagcacc cagcgctgcc ctgggcccct 6240 gcgagactgt gatggttctt tccacgggtc aggccgagtc tgaggcctga gtggcatgag 6300 atctgatatc atcgatgaat tcgagctrgg tacccgggga tcgatccaga catgataaga 6360 tacattgatg agtttggaca aaccacaact agaatgcagt gaaaaaaatg cttlatttgt 6420 gaaatttgtg atgctattgc tttatttgta accattataa gctgcaataa acaagttaac 6480 aacaacaatt gcattcattt tatgtttcag gttcaggggg aggtgtggga ggtttttlaa 6540 agcaagtaaa acctctacaa atgtggtatg gctgattatg atctctagtc aaggcactat 6600 acatcaaata ttccttatta acccctttac aaattaaaaa gctaaaggta cacaattttt 6660 gagcatagtt attaatagca gacactctat gcctgtgtgg agtaagaaaa aacagtatgt 6720 latgattata actgttatgc ctacttataa aggttacaga alatttttcc ataattllct 6780 tgtatagcag tgcagctttt tcctttgtgg tgtaaatagc aaagcaagca agagttctat 6840 tactaaacac agcatgactc aaaaaactta gcaattctga aggaaagtcc ttggggtctt 6900 ctacctttct cttctttttt ggaggagtag aatgttgaga gtcagcagta gcctcatcat 6960 cactagatgg catttcttct gagcaaaaca ggttttcctc attaaaggca ttccaccact 7020 gctcccattc atcagttcca taggttggaa tctaaaatac acaaacaatt agaatcagta 7080 gtttaacaca tiatacactt aaaaatttta tatttacctt agagctltaa atcictgtag 7140 gtagtttgtc caattatgtc acaccacaga agtaaggttc cttcacaaag atccgggacc 7200 aaagcggcca tcgtgcctcc ccactcctgc agttcggggg catggatgcg cggatagccg 7260 ctgctggttt cctggatgcc gacggatttg cactgccggt agaactccgc gaggtcgicc 7320 agcctcaggc agcagctgaa ccaactcgcg aggggatcga gcccggggtg ggcgaagaac 7380 tccagcatga gatccccgcg ctggaggatc atccagccgg cgtcccggaa aacgattccg 7440 aagcccaacc tttcatagaa ggcggcggtg gaatcgaaat ctcgtgatgg caggttgggc 7500 gtcgcttggt cggtcatttc gaaccccaga gtcccgctca gaagaactcg tcaagaaggc 7560 gatagaaggc gatgcgctgc gaatcgggag cggcgatacc gtaaagcacg aggaagcggt 7620 cagcccattc gccgccaagc tcttcagcaa tatcacgggt agccaacgct atgtcctgat 7680 agcggtccgc cacacccagc cggccacagt cgatgaatcc agaaaagcgg ccattttcca 7740 ccatgatatt cggcaagcag gcatcgccat gggtcacgac gagatcctcg ccgtcgggca 7800 tgcgcgcctt gagcctggcg aacagttcgg ctggcgcgag cccctgatgc Icttcgtcca 7860 gatcatcctg atcgacaaga ccggcttcca tccgagtacg tgctcgclcg atgcgatgtt 7920 tcgcttggtg gtcgaatggg caggtagccg gatcaagcgt atgcagccgc cgcattgcat 7980 cagccatgat ggatactttc tcggcaggag caagglgaga tgacaggaga tcx:tgccccg 8040 gcacttcgcc caatagcagc cagtcccttc ccgcttcagt gacaacgtcg agcacagctg 8100 cgcaaggaac gcccgtcgtg gccagccacg atagccgcgc tgcctcgtcc tgcagttcat 8160 tcagggcacc ggacaggtcg gtcttgacaa aaagaaccgg gcgcccctgc gctgacagcc 8220 ggaacacggc ggcatcagag cagccgattg tctgttgtgc ccagtcatag ccgaatagcc 8280 12· Π1343-序列表.doc 200907061 tctccaccca agcggccgga gaacctgcgt gcaatccatc ttgttcaatc atgcgaaacg 8340 atcctcatcc tgtctcttga tcagatcttg atcccctgcg ccatcagatc cttggcggca 8400 agaaagccat ccagtttact ttgcagggct tcccaacctt accagagggc gccccagctg 8460 gcaattccgg ttcgcttgct gtccalaaaa ccgcccagtx: tagctatcgc catgtaagcc 8520 cactgcaagc tacctgcttt ctctttgcgc ttgcgttttc ccttgtccag atagcccagt 8580 agctgacatt catccg£gg: cagcaccgtt tctgcggact ggctttctac gtgttccgct 8640 tcctttagca gcccttgcgc cctgagtgct tgcggcagcg tgaagct 8687 <210> 16 <21l> 8687 <212> DNA <213>人工序列 <220> <221> Source <222> 1..8687 <223>/註解="人工序列之描述：表現載體HCMV-G1 HuA6-VHE之核 苷酸序列（包含SEQ ID NO:ll(VHE)392卜4274之人類化重鏈表 現載體的完整DNA序列)" <400> 16 agctuttgc aa 抑 gcctag gcctccaaaa aagcctcctc actacttctg gaatagctca 60 gaggccgagg cggcctcggc ctctgcataa ataaaaaaaa tlagtcagcc atggggcgga 120 gaatgggcgg aactgggcgg agttaggggc gggatgggcg gagttagggg cgggactatg 180 gttgctgact aattgagatg catgctttgc atacttctgc ctgctgggga gcctggltgc 240 tgactaattg agatgcatgc tttgcalact tctgcctgct ggggagcctg gggactttcc 300 acaccctaac tgacacacat tccacagctg cctcgcgcgt ttcggtgatg acggtgaaaa 360 cctctgacac atgcagctcc cggagacggt cacagcttgt ctgtaagcgg atgccgggag 420 cagacaagcc cgtcagggcg cgtcagcggg tgttggcggg tgtcggggcg cagccatgac 480 ccagtcacgt agcgatagcg gagtgtatac tggcttaact atgcggcatc agagcagatt 540 gtactgagag tgcaccatat gcggtgtgaa ataccgcaca gatgcgtaag gagaaaatac 600 cgcatcaggc gctcttccgc ttcctcgctc actgactcgc tgcgctcggt cgttcggctg 660 cggcgagcgg tatcagctca ctcaaaggcg gtaatacggt tatccacaga atcaggggat 720 aacgcaggaa agaacatgtg agcaaaaggc cagcaaaagg ccaggaaccg laaaaaggcc 780 gcgttgctgg cgtttttcca taggctccgc ccccctgacg agcatcacaa aaatcgacgc 840 tcaagtcaga ggtggcgaaa cccgacagga ctataaagat accaggcgtt tccccctgga 900 agctccctcg tgcgctcicc tgttccgacc ctgccgctta ccggatacct gtccgccttt 960 ctcccttcgg gaagcgtggc gctttctcat agctcacgct gtaggtatct cagtlcggtg 1020 taggtcgttc gctccaagct gggctgtgtg cacgaacccc ccgttcagcc cgaccgctgc 1080 gccttatccg gtaactatcg tcttgagtcc aacccggtaa gacacgactt atcgccactg 1140 gcagcagcca ctggiaacag gattagcaga gcgaggtatg taggcggtgc tacagagttc 12CX) ttgaagtggt ggcctaacta cggctacact agaaggacag tatttggtat ctgcgctctg 1260 ctgaagccag ttaccttcgg aaaaagagtt ggtagctctt gatccggcaa acaaaccacc 1320 gctggtagcg gtggtttttt tgtttgcaag cagcagatta cgcgcagaaa aaaaggatct 1380 -13· 131343-序列表.doc 200907061 caagaagatc ctttgatctt ttctacgggg tctgacgctc agtggaacga aaactcacgt 1440 taagggattt tggtcatgag attatcaaaa aggatctlca cctagatcct tttaaattaa 1500 aaatgaagtt ttaaatcaat ctaaagtata tatgagtaaa cttggtctga cagttaccaa 1560 tgcttaatca gtgaggcacc tatctcagcg atctgtctat ttcgticatc catagttgcc 1620 tgactccccg tcgtgiagat aactacgata cgggagggct taccatctgg ccccagtgct 1680 gcaatgaiac cgcgagaccc acgctcaccg gctccagatt tatcagcaat aaaccagcca 1740 gccggaaggg ccgagcgcag aagtggtcct gcaacttiat ccgcx:tccat ccagtctatt 1800 aattgttgcc gggaagctag agtaagtagt tcgccagtta atagtttgcg caacgttgtt 1860 gccattgctg caggcatcgt ggtgtcacgc icgtcgtttg gtatggcttc atlcagctcc 1920 ggttcccaac gatcaaggcg agttacatga tcccccatgt tgtgcaaaaa agcggttagc 1980 tccttcggtc ctccgatcgt tgtcagaagt aagttggccg cagtgttatc actcatggtt 2040 atggcagcac tgcalaattc tcttactgtc atgccatccg taagatgctt ttctglgact 2100 ggtgagtact caaccaagtc attctgagaa tagtgtatgc ggcgaccgag ttgctcttgc 2160 ccggcgtcaa cacgggataa taccgcgcca catagcagaa ctttaaaagt gctcatcatl 2220 ggaaaacgtt cttcggggcg aaaactctca aggatcttac cgctgttgag atccagttcg 2280 atglaaccca ctcgtgcacc caactgatct tcagcatctt ttactttcac cagcgtttct 2340 gggtgagcaa aaacaggaag gcaaaatgcc gcaaaaaagg gaataagggc gacacggaaa 2400 tgttgaatac tcatactctt cctttttcaa tattattgaa gcatttatca gggttattgt 2460 ctcatgagcg gatacatatt tgaatgtatt tagaaaaata aacaaatagg ggttccgcgc 2520 acatttcccc gaaaagtgcc acctgacgtc taagaaacca ttattatcat gacattaacc 2580 tataaaaata ggcgtatcac gaggcccttt cgtcttcaag aattcagctt ggctgcagtg 2640 aataataaaa tgtgtgtttg tccgaaalac gcgttttgag atttctgtcg ccgactaaat 2700 tcatgtcgcg cgalagtggt gttiatcgcc gatagagatg gcgalattgg aaaaatcgat 2760 atttgaaaat atggcalatt gaaaatgtcg ccgatgtgag tttctgtgta actgatatcg 2820 ccatttttcc aaaagtgatt tttgggcata cgcgatatct ggcgatagcg cttatatcgt 2880 ttacggggga tggcgataga cgactttggt gacttgggcg attctgtgtg tcgcaaatat 2940 cgcagtttcg atataggtga cagacgatat gaggctatat cgccgataga ggcgacatra 3000 agctggcaca tggccaatgc atatcgatct atacattgaa tcaatattgg ccattagcca 3060 tattattcat tggttatata gcataaatca atattggcta ttggccattg catacgttgt 3120 atccatatca taatatgtac atttatattg gctcatgtcc aacattaccg ccatgttgac 3180 attgattatt gactagttat taatagtaat caattacggg gtcattagtt catagcccat 3240 atatggagtt ccgcgttaca taacttacgg taaatggccc gcctggctga ccgcccaacg 3300 acccccgccc attgacgtca ataatgacgt atgttcccat agtaacgcca atagggactt 3360 tccattgacg tcaatgggtg gagtatttac ggtaaactgc ccacttggca gtacatcaag 3420 tgtatcatat gccaagtacg ccccctattg acgtcaatga cggtaaatgg cccgcctggc 3480 attatgccca gtacatgacc ttatgggact ttcctacttg gcagtacatc tacgtattag 3540 tcatcgctat taccatggtg atgcggtttt ggcagtacat caatgggcgt ggatagcggt 3600 ttgactcacg gggatttcca agtctccacc ccattgacgt caatgggagt ttgttttggc 3660 accaaaatca acgggacttt ccaaaatgtc gtaacaactc cgccccattg acgcaaatgg 3720 -14- 131343-序列表.doc 200907061 / gcggtaggcg tgtacggtgg gaggtctata taagcagagc tcgtttagtg aaccgtcaga 3780 tcgcctggag acgcx:atcca cgctgttttg acctccatag aagacaccgg gaccgatcca 3840 gcctccgcaa gcttgccgcc accatggact ggacctggag ggtgttctgc ctgctggccg 3900 tggcccccgg cgcccacagc gaggtgcagc tggtggagtc aggagccgaa gtgaaaaagc 3960 ctggggcttc agtgaaggtg tcctgcaagg cctctggata cacattcact aattatatta 4020 tccactgggt gaagcaggag cctggtcagg gccngaatg gattggatat tttaatcctt 4080 acaatcatgg tactaagtac aatgagaagt tcaaaggcag ggccacacta actgcaaaca 4140 aatccatcag cacagcctac atggagctca gcagcctgcg ctctgaggac actgcggtct 4200 actactgtgc aagatcagga ccctatgcct ggtttgacac ctggggccaa gggaccacgg 4260 tcaccgtctc ctcaggtgag ttctagaagg atcccaagct agctttctgg ggcaggccag 4320 gcctgacctt ggctttgggg cagggagggg gctaaggtga ggcaggtggc gccagccagg 4380 tgcacaccca atgcccatga gcccagacac tggacgctga acctcgcgga cagttaagaa 4440 cccaggggcc tctgcgccct gggcccagct ctgtcccaca ccgcggtcac atggcaccac 4500 cictcttgca gcctccacca agggcccatc ggtcttcccc ctggcaccct cctccaagag 4560 cacctctggg ggcacagcgg ccctgggctg cctggtcaag gactacttcc ccgaaccggt 4620 gacggtgtcg tggaactcag gcgccctgac cagcggcgtg cacaccttcc cggctgtcct 4680 acagtcctca ggactctact ccctcagcag cgtggtgacc gtgccctcca gcagcttggg 4740 cacccagacc tacatctgca acgtgaatca caagcccagc aacaccaagg tggacaagaa 4800 agUggtgag aggccagcac agggagggag ggtgtctgct ggaagccagg ctcagcgctc 4860 ctgcctggac gcatcccggc tatgcagccc cagtccaggg cagcaaggca ggccccgtct 4920 gcctcttcac ccggaggcct ctgcccgccc cactcatgct cagggagagg gtcttctggc 4980 tttticccca ggctctgggc aggcacaggc taggtgcccc taacccaggc cctgcacaca 5040 aaggggcagg tgctgggctc agacctgcca agagccatat ccgggaggac cctgcccctg 5100 acciaagccc accccaaagg ccaaactctc cactccctca gctcggacac cttctctcct 5160 cccagattcc aglaactccc aatcttctct ctgcagagcc caaatcttgt gacaaaactc 5220 acacatgccc accgtgccca ggtaagccag cccaggcctc gccctccagc tcaaggcggg 5280 acaggtgccc tagagtagcc tgcatccagg gacaggcccc agccgggtgc tgacacgtcc 5340 acctccatct cttcctcagc acctgaactc ctggggggac cgtcagtctt cctcttcccc 5400 ccaaaaccca aggacaccct catgatctcc cggacccctg aggtcacatg cgtggtggtg 5460 gacgtgagcc acgaagaccc tgaggtcaag ttcaactggt acgtggacgg cgtggaggtg 5520 cataaigcca agacaaagcc gcgggaggag cagtacaaca gcacglaccg tgtggtcagc 5580 gtcctcaccg tcctgcacca ggactggctg aatggcaagg agtacaagtg caaggtctcc 5640 aacaaagccc tcccagcccc catcgagaaa accatctcca aagccaaagg tgggacccgt 5700 ggggtgcgag ggccacatgg acagaggccg gctcggccca ccctctgccc tgagagtgac 5760 cgctgtacca acctctgtcc ctacagggca gccccgagaa ccacaggtgt acaccctgcc 5820 cccatcccgg gatgagctga ccaagaacca ggtcagcctg acctgcctgg tcaaaggctt 5880 ctatcccagc gacatcgccg tggagtggga gagcaatggg cagccggaga acaactacaa 5940 gaccacgcct cccgtgctgg actccgacgg ctccttxrttc ctctacagca agctcaccgt 6000 -15- 131343-序列表,doc 200907061 ggacaagagc aggtggcagc aggggaacgt cttctcatgc tccgtgatgc atgaggctct 6060 gcacaaccac tacacgcaga agagcctctc cctgtctccg ggtaaatgag tgcgacggcc 6120 ggcaagcccc cgctccccgg gctctcgcgg tcgcacgagg atgcttggca cgtaccccct 6180 gtacatactt cccgggcgcc cagcatggaa ataaagcacc cagcgctgcc ctgggcccct 6240 gcgagactgt gatggttctt tccacgggtc aggccgagtc tgaggcctga gtggcatgag 6300 atctgatatc atcgatgaat tcgagctcgg tacccgggga tcgatccaga catgataaga 6360 tacatlgatg agtttggaca aaccacaact agaatgcagt gaaaaaaatg ctttatttgt 6420 gaaatttgtg atgclattgc tttatttgta accattataa gctgcaataa acaagttaac 6480 aacaacaatt gcattcattt tatgtttcag gttcaggggg aggtgtggga ggttttttaa 6540 agcaagtaaa acctctacaa atgtggtatg gctgattatg atctctagtc aaggcactat 6600 acatcaaata ttccttatta acccctttac aaattaaaaa gctaaaggta cacaattttt 6660 gagcatagtt attaatagca gacactctat gcctgtgtgg agtaagaaaa aacagtatgt 6720 tatgattata actgttatgc clacttataa aggttacaga atatttttcc ataattttct 6780 tgtatagcag tgcagctttt tcctttgtgg tgtaaatagc aaagcaagca agagttclat 6840 tactaaacac agcatgactc aaaaaactta gcaattctga aggaaagtcc ttggggtctt 6900 ciacctttct cttctttttt ggaggagtag aatgttgaga glcagcagta gcctcatcat 6960 cactagatgg catttcttct gagcaaaaca ggttttcctc attaaaggca ttccaccact 7020 gctcccattc atcagttcca taggttggaa tctaaaatac acaaacaatt agaatcagta 7080 gtttaacaca ttatacactt aaaaatttta tatttacctt agagctttaa atctctgtag 7140 giagtttgtc caattatgtc acaccacaga agtaaggttc cttcacaaag atccgggacc 7200 aaagcggcca tcgtgcctcc ccactcctgc agttcggggg catggatgcg cggatagccg 7260 ctgctggttt cctggatgcc gacggatttg cactgccggt agaactccgc gaggtcgtcc 7320 agcctcaggc agcagctgaa ccaactcgcg aggggatcga gcccggggtg ggcgaagaac 7380 tccagcatga gatccccgcg ctggaggatc atccagccgg cgtcccggaa aacgattccg 7440 aagcccaacc tttcatagaa ggcggcggtg gaatcgaaat ctcgtgatgg caggttgggc 7500 gtcgcttggt cggtcattlc gaaccccaga gtcccgctca gaagaactcg tcaagaaggc 7560 gatagaaggc gatgcgctgc gaatcgggag cggcgatacc gtaaagcacg aggaagcggt 7620 cagcccattc gccgccaagc tcttcagcaa tatcacgggt agccaacgct atgtcctgat 7680 agcggtccgc cacacccagc cggccacagt cgatgaatcc agaaaagcgg ccattttcca 7740 ccatgatatt cggcaagcag gcatcgccat gggtcacgac gagatcctcg ccgtcgggca 7800 tgcgcgcctt gagcctggcg aacagttcgg ctggcgcgag cccctgatgc tcttcgtcca 7860 gatcatcctg atcgacaaga ccggcttcca tccgagtacg tgctcgctcg atgcgatgtt 7920 tcgcttggtg gtcgaatg£g caggtagccg gatcaagcgt atgcagccgc cgcattgcat 7980 cagccatgat ggatactttc tcggcaggag caaggtgaga tgacaggaga tcctgccccg 8040 gcacttcgcc caatagcagc cagtcccttc ccgcttcagt gacaacgtcg agcacagctg 8100 cgcaaggaac gcccgtcgtg gccagccacg atagccgcgc tgcctcgtcc tgcagttcat 8160 tcagggcacc ggacaggtcg gtcttgacaa aaagaaccgg gcgcccctgc gctgacagcc 8220 ggaacacggc ggcatcagag cagccgattg tctgttgtgc ccagtcatag ccgaatagcc 8280 tctccaccca agcggccgga gaacctgcgt gcaatccatc ttgttcaatc atgcgaaacg 8340 -】6- 13】343-序列表.doc 200907061 atcctcatcc tgtctcttga tcagatcttg atcccctgcg ccatcagatc cttggcggca 8400 agaaagccat ccagtttact ttgcagggct tcccaacctt accagagggc gccccagctg 8460 gcaattccgg ttcgcttgct gtccataaaa ccgcccagtc tagctatcgc catgtaagcc 8520 cactgcaagc tacctgcttt ctctttgcgc ttgcgttttc ccttgtccag atagcccagt 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cagatgcgta aggagaaaat 600 accgcatcag gcgctcttcc gcttcctcgc tcactgactc gctgcgctcg gtcgttcggc 660 tgcggcgagc ggtatcagct cactcaaagg cggtaatacg gttatccaca gaatcagggg 720 ataacgcagg aaagaacatg tgagcaaaag gccagcaaaa ggccaggaac cgtaaaaagg 780 , ccgcgttgct ggcgtttttc cataggctcc gcccccctga cgagcatcac aaaaatcgac 840 i ' 、 gctcaaglca gaggtggcga aacccgacag gactataaag alaccaggcg tttccccctg 900 gaagctccct cgtgcgctct cctgttccga ccctgccgct taccggatac ctgtccgcct 960 ttctcccttc gggaagcgtg gcgctttctc atagctcacg ctgtaggtat ctcagttcgg 1020 tgtaggtcgt tcgctccaag ctgggctgtg tgcacgaacc ccccgttcag cccgaccgct 1080 gcgccttatc cggtaactat cgtcttgagt ccaacccggt aagacacgac ttatcgccac 1140 tggcagcagc cactggtaac aggattagca gagcgaggta tgtaggcggt gctacagagt 1200 tcttgaagtg gtggcctaac tacggctaca ctagaaggac agtatttggl atctgcgctc 1260 tgctgaagcc agttaccttc ggaaaaagag ttgglagctc ttgatccggc aaacaaacca 1320 ccgctggtag cggtggtttt tttgtttgca agcagcagat tacgcgcaga aaaaaaggat 1380 ctcaagaaga tcctttgatc ttttctacgg ggtctgacgc tcagtggaac gaaaactcac 1440 -17- 131343-序列表.doc 200907061 gttaagggat tttggtcatg agattatcaa aaaggatctt cacctagatc cttttaaan 1500 aaaaatgaag ttttaaatca atctaaagta latatgagta aacttggtct gacagttacc 1560 aatgcttaat cagtgaggca cctatctcag cgatctgtct atttcgttca tccatagttg 1620 cctgactccc cgtcgtgtag ataactacga tacgggaggg cttaccatct ggccccagtg 1680 ctgcaatgat accgcgagac ccacgctcac cggctccaga tttatcagca ataaaccagc 1740 cagccggaag ggccgagcgc agaagtggtc ctgcaacttt atccgcctcc atccagtcta 1800 ttaattgttg ccgggaagct agagtaagta gttcgccagt taatagtttg cgcaacgttg 1860 ttgccattgc tgcaggcatc gtggtgtcac gctcgtcgtt tggtatggct tcattcagct 1920 ccggttccca acgatcaagg cgagttacat gatcccccat gttgtgcaaa aaagcggtta 1980 gctccttcgg tcctccgatc gttgtcagaa glaagttggc cgcagtgtta tcactcatgg 2040 ttatggcagc actgcataat tctcttactg tcatgccatc cgtaagatgc ttttctgtga 2100 ctggtgagta ctcaaccaag tcattctgag aatagtgtat gcggcgaccg agttgctctt 2160 gcccggcgtc aacacgggat aataccgcgc cacatagcag aactttaaaa glgctcatca 2220 ttggaaaacg ttcttcgggg 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tagcataaat caatattggc tattggccat tgcatacgtt 3120 gtatccatat cataatatgl acatttatat tggctcatgt ccaacattac cgccatgttg 3180 acattgatta ttgactagtt attaatagta atcaattacg gggtcattag ttcatagccc 3240 atatatggag ttccgcgtta cataacttac ggtaaatggc ccgcctggct gaccgcccaa 3300 cgacccccgc ccattgacgt caataatgac gtatgttccc atagtaacgc caatagggac 3360 tttccattga cgtcaatggg tggagtattt acggtaaact gcccacttgg cagtacatca 3420 agtgtatcat atgccaagta cgccccctat tgacgtcaat gacggtaaat ggcccgcctg 3480 gcattatgcc cagtacatga ccttatggga ctttcctact tggcagtaca tctacgtatt 3540 agtcatcgct attaccatgg tgatgcggtt ttggcagtac atcaatgggc gtggatagcg 3600 gtttgactca cggggatttc caagtctcca ccccattgac gtcaatggga gtttgttttg 3660 gcaccaaaat caacgggact ttccaaaatg tcgtaacaac tccgccccat tgacgcaaat 3720 gggcggtagg cgtgtacggt gggaggicta tataagcaga gctcgtttag tgaaccgtca 3780 -18- 131343-序列表 _doc 200907061 gatcgcctgg agacgccatc cacgctgttt tgacctccat agaagacacc gggaccgatc 3840 cagcctccgc aagcttgata tcgaattcct gcagcccggg ggatccgccc gcttgccgcc 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ttataaggga ctaaatatgt agtcatccta 5220 aggcgcataa ccatttataa aaatcatcct tcattctatt ttaccctatc atcctctgca 5280 agacagtcct ccctcaaacc cacaagcctt ctgtcctcac agtcccctgg gccatggtag 5340 gagagacttg cttccttgtt ttcccctcct cagcaagccc tcatagtcct tttlaagggt 5400 -23- 131343-序列表.doc 200907061 gacaggtctt acagtcatat atcctttgat tcaattccct gagaatcaac caaagcaaat 5460 ttttcaaaag aagaaacctg clataaagag aatcattcat tgcaacatga tataaaataa 5520 caacacaata aaagcaatta aataaacaaa caatagggaa atgttlaagt tcatcatggt 5580 acttagactt aatggaatgt catgccttat ttacattttt aaacaggtac tgagggactc 5640 ctgictgcca agggccgtat tgagtacttt ccacaacx:ta atttaatcca cactatactg 5700 tgagatlaaa aacattcatt aaaatgttgc aaaggttcta taaagctgag agacaaatat 5760 attctataac tcagcaatcc cacttctaga tgactgagtg tccccaccca ccaaaaaact 5820 atgcaagaat gttcaaagca gctttattla caaaagccaa aaattggaaa tagcccgatt 5880 gtccaacaat agaatgagtt attaaactgt ggtatgttta tacattagaa tacccaatga 5940 ggagaattaa caagctacaa ctatacctac tcacacagat gaatctcata aaaataatgt 6000 tacalaagag aaactcaatg caaaagatat gttctgtatg ttttcatcca tacaaagttc 6060 aaaaccaggt aaaaataaag ttagaaattt ggatggaaat tactcttagc tgggggtggg 6120 cgagttagtg cctgggagaa gacaagaagg ggcttctggg gtcttggtaa tgttctgttc 6180 ctcgtgtggg gttgtgcagt tatgatctgt gcactgttct gtatacacat tatgcttcaa 6240 aataacttca cataaagaac atcttalacc cagttaatag atagaagagg aataagtaat 6300 aggtcaagac cacgcagctg gtaagtgggg gggcctggga tcaaatagct acctgcctaa 6360 tcctgccctc ttgagccctg aatgagtctg ccttccaggg ctcaaggtgc tcaacaaaac 6420 aacaggcctg ctattttcct ggcatctgtg ccctgtttgg ctagctagga gcacacatac 6480 atagaaatta aatgaaacag accttcagca aggggacaga ggacagaatt aaccttgccc 6540 agacactgga aacccetgta tgaacactca catgtttggg aagggggaag ggcacatgta 6600 aatgaggact cttcctcatt ctatggggca ctctggccct gcccctctca gctactcatc 6660 catccaacac acctttctaa gtacctctct ctgcctacac tctgaagggg acaggagta 6720 actaacacag catcccttcc ctcaaatgac tgacaatccc tttgtcctgc tttgtttttc 6780 tttccagtca giactgggaa agtggggaag gacagtcatg gagaaactac ataaggaagc 6840 accagccct tctgcctctt gagaatgttg atgagtatca aatctttcaa actttggagg 6900 tttgagtagg ggtgagactc agtaatgtcc cttccaatga catgaacttg ctcactcatc 6960 cctgggggcc aaattgaaca atcaaaggca ggcataatcc agctatgaat tctaggatcg 7020 atccagacat gataagalac attgatgagt ttggacaaac cacaactaga atgcagtgaa 7080 aaaaatgctt tatttgtgaa atttgtgatg ctattgcttt atttgtaacc atlataagct 7140 gcaataaaca agttaacaac aacaattgca ttcattttat gtttcaggtt cagggggagg 7200 tgtgggaggt tttttaaagc aagtaaaacc tctacaaatg tggtatggct gattatgatc 7260 tctagtcaag gcactataca tcaaatattc ctlattaacc cctttacaaa ttaaaaagct 7320 aaaggtacac aatttttgag calagttatt aatagcagac actctatgcc tgtgtggagt 7380 aagaaaaaac agtatgttat gattataact gttatgccta cttataaagg ttacagaata 7440 tttttccata atttlcttgt atagcagtgc agctttttcc tttgtggtgt aaatagcaaa 7500 gcaagcaaga gttctattac taaacacagc atgactcaaa aaacttagca attctgaagg 7560 aaagtccttg gggtcttcta cctttctctt cttttttgga ggagtagaat gttgagagtc 7620 agcagtagcc tcatcatcac tagatggcat ttcttctgag caaaacaggt tticctcatt 7680 aaaggcattc caccactgct cccattcatc agttccatag gttggaatct aaaatacaca 7740 • 24· 131343-序列表.doc 200907061 aacaattaga atcagtagtt taacacatta tacacttaaa aattttatat ttaccttaga 7800 gctttaaatc tctgtaggta gtttgtccaa ttatgtcaca ccacagaagt aaggttcctt 7860 cacaaagatc cgggaccaaa gcggccatcg tgcctcccca ctcctgcagt tcgggggcat 7920 ggatgcgcgg atagccgctg ctggtttcct ggatgccgac ggatttgcac tgccggtaga 7980 actccgcgag gtcgtccagc ctcaggcagc agctgaacca actcgcgagg ggatcgagcc 8040 cggggtgggc gaagaactcc agcatgagat ccccgcgctg gaggatcatc cagccggcgt 8100 cccggaaaac gattccgaag cccaaccttt catagaaggc ggcggtggaa tcgaaatctc 8160 gtgatggcag gttgggcgtc gcttggtcgg tcatttcgaa ccccagaglc ccgctcagaa 8220 gaactcgtca agaaggcgat agaaggcgat gcgctgcgaa tcgggagcgg cgataccgta 8280 aagcacgagg aagcggtcag cccattcgcc gccaagctct tcagcaatat cacgggtagc 8340 caacgctatg tcctgatagc ggtccgccac acccagccgg ccacagtcga tgaatccaga 8400 aaagcggcca ttttccacca tgalaltcgg caagcaggca tcgccatggg tcacgacgag 8460 atcctcgccg tcgggcatgc gcgccttgag cctggcgaac agttcggctg gcgcgagccc 8520 ctgatgctct tcgtccagat catcctgalc gacaagaccg gcttccatcc gagtacgtgc 8580 tcgctcgatg cgatgtttcg cttggtggtc gaatgggcag gtagccggat caagcgtatg 8640 cagccgccgc attgcatcag ccatgatgga tactttctcg gcaggagcaa ggtgagatga 8700 caggagatcc tgccccggca cttcgcccaa tagcagccag tcccttcccg cttcagtgac 8760 aacgtcgagc acagctgcgc aaggaacgcc cgtcgtggcc agccacgaia gccgcgctgc 8820 ctcgtcctgc agttcattca gggcaccgga caggtcggtc ttgacaaaaa gaaccgggcg 8880 cccctgcgct gacagccgga acacggcggc atcagagcag ccgattglct gttgtgccca 8940 gtcatagccg aatagcctct ccacccaagc ggccggagaa cctgcgtgca atccatcttg 9000 ttcaatcatg cgaaacgatc ctcatcctgt ctcttgatca gatcttgatc ccctgcgcca 9060 tcagatcctt ggcggcaaga aagccatcca gtttactttg cagggcttcc caaccttacc 9120 agagggcgcc ccagctggca atlccggttc gcttgctgtc cataaaaccg cccagtclag 9180 ctatcgccat gtaagcccac tgcaagctac ctgctttctc tttgcgcttg cgttttccct 9240 tgtccagata gcccagtagc tgacattcat ccggggtcag caccgtttct gcggactggc 9300 tttctacgtg ttccgcttcc tttagcagcc cttgcgccct gagtgcttgc ggcagcgtga 9360 ag 9362 <210> 19 <211> 11 <212> PRT <213>人工序列 <220> <221> Source <222〉1..11 <223>/註解=“人工序列之描述：SEQIDNO:l之CD45RO/RB結合分子中 之高變區CDR1引子” <400> 19

Arg Ala Ser Gin Asn He Gly Thr Ser He Gin 1 5 10 <210> 20 -25- 131343-序列表.doc 200907061

<211> 7 <212〉PRT <2]3>人工序列 <220> <221> Source <222> 1..7 <223>/註解=“人工序列之描述：SEQIDNO:l之CD45RO/RB結合分子中 之高變區CDR2引子” <400> 20

Ser Ser Ser Glu Ser lie Ser <210> 21 <211> 9 <212> PRT <2Π>人工序列 <220> <221> Source <222> 1..9 <223>/註解=“人工序列之描述：SEQIDNO:l之CD45RO/RB結合分子中 f 之高變區CDR3引子” <400> 21

Gin ΰΐπ Scr Asn Thr TYp Pro Phc 丁hr I 5 <210> 22 <211> 5 <212> PRT <213>人工序列 <220> <221> Source <222> 1..5 <223>/註解=“人工序列之描述：SEQIDNO:2之CD45RO/RB結合分子中 之高變區CDR1” <400> 22

Asn Tyr He lie His <210> 23 <211> 17 <212> PRT <213>人工序列 <220〉 <221> Source <222> 1..17 <223>/註解=“人工序列之描述：SEQIDNO:2之CD45RO/RB結合分子中 之高變區CDR2” <400> 23

Lys Tyr Asn Glu Lys Phe Lys

Tyr Phe Asn Pro Tyr Asn His Gly Thr 1 5 10

Gly <210> 24 •26- 131343-序列表.doc 200907061 <211> 9

<212> PRT <2丨3>人工序列 <220> <221> Source <222> 1..9 <223>/t^解=‘‘人工序列之描述：SEQIDN〇:22CD45R〇/RB結合分子中 之岗變區CDH3” <400> 24

SerGlyProTyrAlaTtpPheAspThr <210> 25 <211> 33 <212> DNA <213>人工序列 <220〉 <221> Source <222> 1..33 f

<223>註解=人工序列之描述：編碼CDR1之胺基酸序列之聚核苷酸序列，， <400> 25 ggccagtcag aacattggca caagcataca gtg 33 <210> 26 <211> 21 <212> DNA <213>人工序列 <220> <221> Source <222> 1..21 <223>註解=‘‘人工序列之描述：編碼〇〇112之胺基酸序列之聚核苷酸序列” <400> 26 tlcttctgag tctaictctg g 〇. <210> 27 <211> 27 <212> DNA <213>人工序列 <220> <221> Source <222> L27 “ <223>註解=“人工序列之描述：編碼(：1)113之胺基酸序列之聚核苷酸序列，， <400> 27 acaaagtaat acctggccat tcacgti 27 <210> 28 <211> 15 <212> DNA <213>人工序列 <220> <221> Source <222> 1..15 ( <223>註解=“人工序列之描述：編碼CDR〗引子之胺基酸序列之聚核皆酸序列” <400> 28 ttatattatc cactg <210> 29 131343·序列表,d〇c • 27· 200907061 <211> 51 <212> DNA <213>人工序列 <220> <221> Source <222> 1..51 <223>註耜=“人工序列之描述：編碼CDR2引子之胺基酸序列之聚核苷酸序列” <400> 29 ttttaatcct tacaatcatg gtactaagta caatgagaag ttcaaaggca g 51 <210> 30 <211> 27 <212> DNA <213>人工序列 <220> <221> Source <222〉1,.27 <223>註解=‘‘人工序列之描述：編碼CDR3引子之胺基酸序列之聚核苷酸序列” <400> 30 aggaccctat gcctggtttg acacctg 27 ί <210> 31 <211> 118 <212> PRT <2〇>人工序列 <220> <221> Source <222> 1..I18 <223>註解= "人工序列之描述：稱為VHE-N73D之人類化重鏈之胺基鲅序到之杳/ <400> 31

Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr lie He His Trp Val I^s Gin Glu ProGiy Gin Gly Leu Glu Trp lie

G^Tyr Phe Asng。Tyr Asn H| Gly 鼠 ys Tyr Asn Glu Lys Phe

LysGlyArgAlami.umAlaAspLysSerI.eSerThrA.aTyr

Met Glu Leu Ser Ser Uu Arg Ser G,u Asp π, Ala Va. Tyr Tyr Cys

Ala Arg Ser Gly Pro Tyr Ala Trp Phe Asp Thr Trp Gly Gin Gly Thr 100 105 110

Thr Val Thr Val Ser Ser 115

<210> 32 <211> 118 <212> PRT 28- 131343-序列表doc 200907061 <213>人工序歹ij <220> <221〉Source <222> 1.,118 <223>註解人工序列之描述：稱為VHQ-N73D之人類化重鏈之胺基醆序列之部分,, <400> 32

Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 15 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr lie Trp Val Lys Gin Glu Pro G]y Gin Gly Leu Glu Trp lie

Gly Tyr Phe Asn Pro Tyr Asn His Gly Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe f

Lys Gly Arg Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser lie Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Ser Gly Pro Tyr Ala Trp Phe Asp Thr Trp Gly Gin Gly Thr 100 105 110

ThrVal5ThrValSe:Ser <210> 33 <211> 321 <212> DNA <213>人工序列 <220> <221> Source <222> 1..321 <223>/k解=“人工序列之描述：編碼胺基酸序列SEQIDNO:8之核苷酸序列” έ <400> 33 gacattagc tgacccagtc tccagccacc ctgtctctga gtccaggaga aagagccact 60 ctctcctgca gggccagtca gaacattggc acaagcalac agtgglatca acaaaaacca 120 ggtcaggctc caaggettet cataaggtct tcttctgagl ctatctctgg gatcccttcc 180 aggttiagtg gcagtggatc agggacagat tttactctta ccatcagcag tctggagcct 240 gaagattttg cagtgtatta ctgtcaacaa agtaatacct ggccattcac gttcggccag 300 gggaccaagc ttgaaatcaa a 321 <210> 34 <211> 354 <212> DNA <213>人工序列 <220> <221> Source <222> 1..354 <223>/註解=‘‘人工序列之描述：編碼胺基酸序列SEqIDN〇:312核苦酸序列” -29- 131343-序列表.doc 200907061 <400> 34 gaggtgcagc tggtggagtc aggagccgaa gtgaaaaagc ctggggcttc agtgaaggtg 60 tcctgcaagg cctctggata cacattcact aattatatta tccactgggt gaagcaggag 120 cctggtcagg gccttgaatg gattggatat tttaatcctt acaatcatgg tactaagtac 180 aatgagaagt tcaaaggcag ggccacacta actgcagaca aatccatcag cacagcctac 240 atggagctca gcagcctgcg cictgaggac actgcggtct actactgtgc aagatcagga 300 ccctatgcct ggtttgacac ctggggccaa gggaccacgg tcaccgtctc ctca 354 <210> 35 <211> 354 <212> DNA <213>人工序列 <220〉 <221> Source <222> 1..354 <223>/註解=“人工序列之描述：編碼胺基酸序列SEQIDNO:32之核苷酸序列 <400> 35 caggtgcagc tggtggagtc aggagccgaa gtgaaaaagc ctggggcttc agtgaaggtg 60 tcctgcaagg cctctggata cacattcact aattatatta tccactgggt gaagcaggag 120 cctggtcagg gccttgaatg gattggatat tttaatcctt acaatcatgg tactaagtac 180 aatgagaagt tcaaaggcag ggccacacta actgcagaca aatccatcag cacagcctac 240 atggagctca gcagcctgcg cictgaggac actgcggtct actactgtgc aagatcagga 300 ccctatgcct ggtttgacac ctggggccaa gggaccacgg tcaccgtctc ctca 354 <210> 36 <211> 8096 <212> DNA <213>人工序列 <220> <221> Source <222> 1..8096 <223>/註解=“人工序列之描述：表現載體LCVLlSp20之核苷酸序列 <400> 36 clagagtcct agagaggtct ggtggagcct gcaaaagtcc agctttcaaa ggaacacaga 60 agtatgtgta tggaatatia gaagatgttg cttttactct taagttggtt cctaggaaaa 120 atagttaaat actgtgactt taaaatgtga gagggttttc aagtactcat ttttttaaat 180 gtccaaaatt tttgtcaatc aatttgaggt cttgtttgtg tagaactgac attacttaaa 240 gtttaaccga ggaatgggag tgaggctctc tcatacccta ttcagaactg acttttaaca 300 ataataaatt aagtttaaaa tatttttaaa tgaattgagc aatgttgagt tggagtcaag 360 atggccgatc agaaccagaa cacctgcagc agctggcagg aagcaggtca tgtggcaagg 420 ctatttgggg aagggaaaat aaaaccacta ggiaaacttg tagctgtggt ttgaagaagl 480 ggttttgaaa cactctgtcc agccccacca aaccgaaagt ccaggctgag caaaacacca 540 cctgggtaat ttgcatttct aaaataagtt gaggattcag ccgaaactgg agaggtcctc 600 ttttaactta ttgagttcaa cctttiaatt ttagcttgag tagttctagt ttccccaaac 660 ttaagtttat cgacttctaa aatgtattta gaactcattt tcaaaattag gttatgtaag 720 aaattgaagg actttagtgt ctttaatttc taatatattt agaaaacttc ttaaaattac 780 30· 131343-序列表.doc 200907061 tctattattc tlccctctga ttattggtct ccattcaatt cttttccaal acccgaagca 840 tttacagtga ctttgttcat gatctttttt agUgtttgt tttgccttac lattaagact 900 ttgacattct ggtcaaaacg gcttcacaaa tctttttcaa gaccactttc tgagtattca 960 ttttaggaga aatacttttt ttttaaatga atgcaattat ctaggacctg caggcatgct 1020 gttttctgtc tgtccctaac atgccctgtg attatccgca aacaacacac ccaagggcag 1080 aactttgtta cttaaacacc atcctgtttg cttctttcct caggaactgt ggctgcacca 1140 tctgtcttca tcitcccgcc atctgatgag cagttgaaat ctggaactgc ctctgttgtg 1200 tgcctgctga ataacttcia tcccagagag gccaaagtac agtggaaggt ggalaacgcc 1260 ctccaatcgg gtaactccca ggagagtgtc acagagcagg acagcaagga cagcacctac 1320 agcctcagca gcaccctgac gctgagcaaa gcagactacg agaaacacaa agtctacgcc 1380 tgcgaagtca cccatcaggg cctgagctcg cccgtcacaa agagcncaa caggggagag 1440 tgttagaggg agaagtgccc ccacctgctc ctcagttcca gcctgaccxc ctcccatcct 1500 ttggcctctg accctttttc cacaggggac ctacccctat tgcggtcctc cagctcatct 1560 ttcacctcac ccccctcctc ctccttggct ttaattatgc taatgttgga ggagaatgaa 1620 taaataaagt gaatctttgc acctgtggtt tctctctttc ctcatttaat aattattatc 1680 tgttgtttta ccaactactc aatttctctt ataagggact aaatatgtag tcatcctaag 1740 gcgggatatc gagatctgaa gctgatccag acatgataag atacattgat gagtttggac 1800 aaaccacaac tagaatgcag tgaaaaaaat gctttatttg tgaaatttgl gatgctattg 1860 ctttatttgt aaccatlata agctgcaata aacaagttaa caacaacaat tgcattcatt 1920 ttatgtttca ggttcagggg gaggtgtggg aggtttttla aagcaagtaa aacctctaca 1980 aatgtggtat ggctgattat gatctciagt caaggcacta tacatcaaat attccttatt 2040 aaccccttta caaattaaaa agctaaaggt acacaatttt tgagcatagt tattaatagc 2100 agacactcta tgcctgtgtg gagtaagaaa aaacagiatg ttatgattat aactgttatg 2160 cctacttata aaggttacag aaiatttttc cataattttc ttglatagca gtgcagcttt 2220 ttcctttgtg gtgtaaatag caaagcaagc aagagttcta ttactaaaca cagcatgact 2280 caaaaaactt agcaattctg aaggaaagtc cttggggtct tciaccttic tcttcttttt 2340 tggaggagta gaatgttgag agtcagcagt agcctcatca tcactagatg gcatttcttc 2400 tgagcaaaac aggttttcct cattaaaggc attccaccac tgctcccatt catcagttcc 2460 ataggttgga atctaaaata cacaaacaat tagaatcagt agtttaacac attatacact 2520 taaaaatttt atatttacct tagagcttta aatctctgta ggtagtttgt ccaattatgt 2580 cacaccacag aagtaaggtt ccttcacaaa gatccggacc aaagcggcca tcgtgcctcc 2640 ccactcctgc agttcggggg catggatgcg cggaiagccg ctgctggttt cctggatgcc 2700 gacggatttg cactgccggt agaactccgc gaggtcgtcc agcctcaggc agcagctgaa 2760 ccaactcgcg aggggatcga gcatccccca tggtcttata aaaatgcata gctttaggag 2820 gggagcagag aacttgaaag catcttcctg ttagtctttc ttctcgtaga cttcaaactt 2880 atacttgatg cctttttcct cctggacctc agagaggacg cctgggtait ctgggagaag 2940 tttatatttc cccaaatcaa tttctgggaa aaacgtgtca ctttcaaatt cctgcatgat 3000 ccttgtcaca aagagtctga ggtggcctgg ttgattcatg gcttcctggt aaacagaact 3060 -31 - 131343-序列表.doc 200907061 gcctccgact atccaaacca tgtctacttt acttgccaat tccggltgtt caataagtct 3120 taaggcatca tccaaacttt tggcaagaaa atgagctcct cgtggtggtt ctttgagttc 3180 tctactgaga actatattaa ttctgtcctt taaaggtcga ttcttctcag gaatggagaa 3240 ccaggttttc ctacccataa icaccagatt ctgtttacct tccactgaag aggttgtggt 3300 cattctttgg aagtacttga actcgttcct gagcggaggc cagggtcggt ctccgttctt 3360 gccaatcccc atattttggg acacggcgac gatgcagttc aatggtcgaa ccatgatggc 3420 agcggggata aaatcctacc agccttcacg ctaggattgc cgtcaagttt gggggtaccg 3480 agctcgaatt agctttttgc aaaagcctag gcctccaaaa aagcctcctc actacttctg 3540 gaatagctca gagggccgag gcggcctcgg cctctgcata aataaaaaaa attagtcagc 3600 catggggcgg agaatgggcg gaactgggcg gagttagggg cgggatgggc ggagttaggg 3660 gcgggactat ggttgctgac taattgagat gcatgctttg catacttctg cctgctgggg 3720 agcctgggga ctttccacac ctggttgctg actaattgag atgcatgctt tgcatacttc 3780 tgcctgctgg ggagcctggg gacttlccac accctaactg acacacattc cacagctgcc 3840 tcgcgcgttt cggtgatgac ggtgaaaacc tctgacacat gcagctcccg gagacggtca 3900 cagcttgtct gtaagcggat gccgggagca gacaagcccg tcagggcgcg tcagcgggtg 3960 Uggcgggtg tcggggcgca gccatgaccc agtcacglag cgatagcgga gtglatactg 4020 gcttaactat gcggcatcag agcagattgt actgagagtg caccatatgc ggccgcatat 4080 gcg£tgtgaa ataccgcaca gatgcgtaag gagaaaatac cgcatcaggc gctcttccgc 4140 ttcctcgctc actgactcgc tgcgctcggl cgttcggctg cggcgagcgg tatcagctca 4200 ctcaaaggcg gtaatacggt tatccacaga atcaggggat aacgcaggaa agaacatgtg 4260 agcaaaaggc cagcaaaagg ccaggaaccg taaaaaggcc gcgtlgctgg cgtttttcca 4320 taggctccgc ccccctgacg agcatcacaa aaatcgacgc tcaagtcaga ggtggcgaaa 4380 cccgacagga ctataaagat accaggcgtt tccccctgga agctccctcg tgcgctctcc 4440 tgttccgacc ctgccgctta ccggalacct gtccgccttt ctcccttcgg gaagcgtggc 4500 gctttctcat agctcacgct glaggtatct cagttcggtg taggtcgttc gctccaagct 4560 gggctgtgtg cacgaacccc ccgttcagcc cgaccgctgc gccttatccg gtaactatcg 4620 tcttgaglcc aacccggtaa gacacgactt atcgccactg gcagcagcca ctggtaacag 4680 gattagcaga gcgaggtatg taggcggtgc tacagagttc ttgaagtggt ggcctaacta 4740 cggciacact agaaggacag latttggtat ctgcgctctg ctgaagccag ttaccttcgg 4800 aaaaagagtt ggtagctctt gatccggcaa acaaaccacc gctggtagcg gtggtttttt 4860 tgtttgcaag cagcagatta cgcgcagaaa aaaaggatct caagaagatc ctttgatctt 4920 ttctacgggg tctgacgctc agtggaacga aaactcacgt taagggattt tggtcatgag 4980 atlatcaaaa aggatcttca cctagatcct tttaaattaa aaatgaagtt ttaaatcaat 5040 ctaaagtata tatgagtaaa cttggtctga cagttaccaa tgctlaatca gtgaggcacc 5100 tatctcagcg atctgtctat ttcgttcatc catagttgcc tgactccccg tcgtgtagat 5160 aactacgata cgggagggct taccatctgg ccccagtgct gcaatgatac cgcgagaccc 5220 acgctcaccg gctccagatt tatcagcaat aaaccagcca gccggaaggg ccgagcgcag 5280 aagtggtcct gcaactttat ccgcctccat ccagtctatt aattgttgcc gggaagctag 5340 agtaagtagt tcgccagtta atagtttgcg caacgttgtt gccattgctg caggcatcgt 5400 •32- 131343-序列表.doc 200907061 ggtgtcacgc tcgtcgtttg gtatggcttc attcagctcc ggttcccaac gatcaaggcg 5460 agnacatga tcccccatgt tgtgcaaaaa agcggttagc tccttcggtc ctccgatcgt 5520 tgtcagaagt aagttggccg cagtgttatc actcatggu atggcagcac tgcataattc 5580 tcttactgtc atgccatccg taagatgctt ttctgigact ggtgagtact caaccaagtc 5640 attctgagaa tagtgtatgc ggcgaccgag ttgctcttgc ccggcgtcaa cacgggalaa 5700 taccgcgcca catagcagaa ctttaaaagt gctcatcatt ggaaaacgtt cttcggggcg 5760 aaaactctca aggatctlac cgctgttgag atccagttcg atgtaaccca ctcgtgcacc 5820 caactgatct tcagcatctt ttactttcac cagcgtttct gggtgagcaa aaacaggaag 5880 gcaaaatgcc gcaaaaaagg gaataagggc gacacggaaa tgttgaatac tcalactctt 5940 cctttttcaa tatlattgaa gcatttatca gggttattgt ctcatgagcg gatacatatt 6000 tgaatgiatt tagaaaaata aacaaatagg ggttccgcgc 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agagttggtg agaggccagc 1200 acagggaggg agggtgtctg ctggaagcca ggctcagcgc tcctgcctgg acgcatcccg 1260 gctatgcagt cccagtccag ggcagcaagg caggccccgt ctgcctctic acccggaggc 1320 ctctgcccgc cxx:actcatg ctcagggaga gggtcttctg gctttttccc caggctctgg 1380 gcaggcacag gctaggtgcc cctaacccag gccctgcaca caaaggggca ggtgctgggc 1440 tcagacctgc caagagccat atccgggagg accctgcccc tgacctaagc ccaccccaaa 1500 -34- 131343-序列表.doc 200907061 ggccaaactc tccactccct cagctcggac accttctctc ctcccagatt ccagtaactc 1560 ccaatcttct ctctgcagag cccaaatctt gtgacaaaac tcacacatgc ccaccgtgcc 1620 caggtaagcc agcccaggcc tcgccctcca gctcaaggcg ggacaggtgc cctagagtag 1680 cctgcatcca gggacaggcc ccagccgggt gctgacacgt ccacctccat ctcttcctca 1740 gcacctgaac tcctgggggg accgtcagtc ttcctcttcc ccccaaaacc caaggacacc 1800 ctcatgatct cccggacccc tgaggtcaca tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgaagac 1860 cctgaggtca agttcaactg gtacgtggac ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag 1920 ccgcgggagg agcagtacaa cagcacgtac cgtgtggtca gcgtcctcac cgtcctgcac 1980 caggactggc 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gctgggccac gagaagccct aggagcccct ggggacagac acacagcccc 2880 tgcctctgla ggagactgtc ctgtcctgtg agcgccctgt cctccgaccc cgatgcccac 2940 tcgggggcat gcctagtcca tgcgcgtagg gacaggccct ccctcaccca tctaccccca 3000 cggcactaac ccctggcagc cctgcccagc ctcgcacccg catggggaca caaccgactc 3060 cggggacatg cactctcggg ccctgtggag ggactggtgc agatgcccac acacacactc 3120 agcccagacc cgttcaacaa accccgcact gaggttggtc gagcgggagt gcggccagag 3180 cctgcctcgg ccgtcaggga ggactcccgg gctcactcga aggaggtgcc accatttcag 3240 ctttggtagc ttttcttctt cttttaaatt ttctaaagct cattaattgt ctttgatgtt 3300 tcttttgtga tgacaataaa atatcctttt taagtcttgt acttcgtgat gggagccgcc 3360 ttcctgtgtc cacgcgcctc ctgcccccgg tgggaagcac ggtcaggagg aggctggtcc 3420 agctgcacct cgggggctcc ctgcactcgc cccccgcctc ctgcagccac acgcattgcc 3480 cgagcgaccc tccctggccc ctgtcactac atggacccct ggggcttctc ctcttttcta 3540 catggatgca gtttctcctc ctgctgggca cggtgctgcc tgccctggtc actctgcggg 3600 ggacagggcc tccagggaaa gctgggtcga ggctgggagc tggctcaggc tggccaggca 3660 gagccacagg 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acataatgag tggtcaciaa tgggccactg ttacactgtt atatgtataa ggctcaagaa 10380 tgagcactga ggctgtaagg tgtatgggtg aggacatcag gatgtaaacc cagctcaggt 10440 agaggactca gaggacagce cagtcagcat gaactaaiaa acatcagata agataaggca 10500 caagctcagc tatatagggt aagggatctt tgtaaatctg attgtgcatc cagtctagtt 10560 caatgtgact taggaagccc agtcatatgc aaatctagag aagactttag agtagaaatc 10620 tgaggctcac ctcacatacc agcaagcgag tgaccagtta gtcttaaggc accacttctt 10680 agacatcatg gcttgggtgt ggaccttgcc attcctgaig gcagctgccc aaagtaagac 10740 -38- 131343-序列表.doc 200907061 atcagaaaaa agagttccaa ggggaattga agcagttcca tgaatactca ccttcctgtg 10S00 ttcttttcac aggtgtccag gcagaggtgc agctggtgga gtcaggagcc gaagtgaaaa 10860 agcctggggc ttcagtgaag gtgtcctgca aggcctctgg atacacattc actaattata 10920 ttatccactg ggtgaagcag gagcctggtc agggccttga atggatigga tattttaatc 10980 cttacaatca tggtactaag tacaatgaga agttcaaagg cagggccaca ctaactgcag 11040 acaaatccat cagcacagcc tacatggagc tcagcagcct gcgctctgag gacactgcgg 11100 tctactactg tgcaagatca ggaccctatg cctggtttga cacctggggc caagggacca 11160 cggtcaccgt ctcctcaggt aagaatggcc actctagggc ctttgttttc tgctgctgcc 11220 tgtgggattt catgagcatt gcaaagttgt cctcgggaca tgttccgagg ggacctgggc 11280 ggactggcca ggaggggacg ggcactgggg tgccttgagg atctgggagc ctctgtggat 11340 tttccgatgc ctttggaaaa tgggaagag gttgggtgcg tctgagacag taactcagcc 11400 tgggggcttg gtgaagatcg ccgcacagca gcgagtccgt gaaatatctt atttagactt 11460 gtgaggtgcg ctgtgtgtca atttacatct taaatccttt atlggctgga aagagaattg 11520 ttggagtggg tgaatccagc caggagggac gcggggggat cca 11563 ( <210〉 38 <211> 11563 <212> DNA <2I3>人工序列 <220> <221> Source <222> 1..11563 <223>/註解=“人工序列之描述：表現載體HCVHQN73DSp20之核苷酸序列” <400> 38 ctagagaggt ctggtggagc ctgcaaaagt ccagctttca aaggaacaca gaagtatgtg 60 tatggaatat tagaagatgt tgcttttact cttaagttgg ttcctaggaa aaatagttaa 120 atactgtgac tttaaaatgt gagagggttt tcaagtactc atttttttaa atgtccaaaa 180 tttttgtcaa tcaatttgag gtcttgtUg tglagaactg acattactta aagutaacc 240 gaggaatggg agtgaggctc tctcataccc tattcagaac tgacttttaa caataataaa 300 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aggataaagt cactacatct gagcacagag caggacatct 10320 •43· 131343-序列表.doc 200907061 acataatgag tggtcactaa tgggccactg ttacactgtt atatgtataa ggctcaagaa 10380 tgagcactga ggctgtaagg tgtatgggtg aggacatcag gatgtaaacc cagctcaggt 10440 agaggactca gaggacagca cagtcagcat gaactaataa acatcagata agataaggca 10500 caagctcagc tatatagggt aagggatctt tgtaaatctg attgtgcatc cagtctagtt 10560 caatgtgact taggaagccc agtcatatgc aaatctagag aagactttag agtagaaatc 10620 tgaggctcac clcacatacc agcaagcgag tgaccagtta gtcttaaggc accacttctl 10680 agacatcatg gcttgggtgt ggaccttgcc attcctgatg gcagctgccc aaagtaagac 10740 atcagaaaaa agagttccaa ggggaattga agcagttcca tgaatactca ccttcctgtg 10800 ttcttttcac aggtgtccag gcacaggtgc agctggtgga gtcaggagcc gaagtgaaaa 10860 agcctggggc ttcagtgaag gtgtcctgca aggcclctgg atacacattc actaattata 10920 ttatccactg ggtgaagcag £agcctggtc agggccttga atggattgga tattttaatc 10980 cttacaatca tggiactaag tacaatgaga agttcaaagg cagggccaca ctaactgcag 11040 acaaalccat cagcacagcc tacatggagc tcagcagcct gcgctctgag gacactgcgg 11100 tctaclactg tgcaagatca ggaccctatg cctggtttga cacctggggc caagggacca 11160 cggtcaccgt ctcctcaggt aagaatggcc actctagggc ctttgttttc tgctgctgcc 11220 tgtgggattt catgagcatt gcaaagttgt cctcgggaca tgttccgagg ggacctgggc 11280 ggactggcca ggaggggacg ggcactgggg tgccttgagg atctgggagc ctctgtggat 11340 tttccgatgc ctttggaaaa tgggactgag gttgggtgcg tctgagacag taactcagcc 11400 tgggggcrtg gtgaagatcg ccgcacagca gcgagtccgt gaaatalctt atttagactt 11460 gtgaggtgcg ctgtgtgtca atttacatct taaatccttt attggctgga aagagaattg 11520 ttggagtggg tgaatccagc caggagggac gcggggggat cca 11563 <210> 39 <211> 8096 <212> DNA <213>人工序列 <220> <221> Source <222> 1..8096 <223>/註解=“人工序列之描述：表現載體LCVL2Sp20之核苷酸序列” <400> 39 ctagagtcct agagaggtct ggtggagcct gcaaaagtcc agctttcaaa ggaacacaga 60 agtatgtgta tggaatatta gaagatgttg cttttactct taagttggtt cctaggaaaa 120 atagttaaat actgtgactt laaaatgtga gagggttttc aagtactcat ttttttaaat 180 gtccaaaatt tttgtcaatc aatttgaggt cttgtttgtg tagaactgac attacttaaa 240 gtttaaccga ggaatgggag tgaggctctc tcatacccta ttcagaactg acttttaaca 300 ataataaatt aagttlaaaa latttttaaa tgaattgagc aatgttgagt tggagtcaag 360 atggccgatc agaaccagaa cacctgcagc agctggcagg aagcaggtca tgtggcaagg 420 ctatttgggg aagggaaaat aaaaccacia ggtaaacttg tagctglggt ttgaagaagt 480 ggttttgaaa cactctgtcc agccccacca aaccgaaagt ccaggctgag caaaacacca 540 cctgggtaat ttgcatttct aaaataagtt gaggattcag ccgaaactgg agaggtcctc 600 ttttaactta ttgagttcaa cctttlaatt ttagcttgag tagttctagt ttccccaaac 660 ttaagtttat cgacttctaa aatgtattta gaactcattt tcaaaattag gtlatglaag 720 -44 - 131343·序列表.doc 200907061 aaattgaagg actttagtgt ctttaatttc taatatattt agaaaacttc ttaaaattac 780 tctattattc ttccctctga tlattggtct ccattcaatt cttttccaat acccgaagca 840 ttlacagtga ctttgttcat gatctttttt agttgtttgt tttgccttac tattaagact 900 ttgacattct ggtcaaaacg gcttcacaaa tctttttcaa gaccactttc tgagtattca 960 ttttaggaga aatacttttt ttttaaatga atgcaattat ctaggacctg caggcatgct 1020 gttuctgtc tgtccctaac atgccctgtg attatccgca aacaacacac ccaagggcag 1080 aactttgtta cttaaacacc atcctgtttg cttctttcct caggaactgt ggctgcacca 1 i40 tctgtcttca tcttcccgcc atctgatgag cagttgaaat ctggaactgc ctctgttgtg 1200 tgcctgctga ataacttcia tcccagagag gccaaagtac agtggaaggt ggataacgcc 1260 ctccaatcgg gtaactccca ggagagtgtc acagagcagg acagcaagga cagcacctac 1320 agcctcagca gcaccctgac gctgagcaaa gcagactacg agaaacacaa agtctacgcc 1380 tgcgaagtca cccatcaggg cctgagctcg cccgtcacaa agagcttcaa caggggagag 1440 tgttagaggg agaagtgccc ccacctgctc ctcagticca gcctgacccc ctcccatcct 1500 ttggcctctg accctttttc cacaggggac ctacccctat tgcggtcctc cagctcatct 1560 ttcacctcac ccccctcctc ctccttggct ttaatiatgc taatgttgga ggagaatgaa 1620 taaataaagl gaatctttgc acctgtggtt tctctctttc ctcatttaat aattattatc 1680 tgttgtttta ccaactactc aatttctctt ataagggact aaatatgtag tcatcctaag 1740 gcgggatatc gagatctgaa gctgatccag acatgataag atacattgat gagtttggac 1800 aaaccacaac tagaatgcag tgaaaaaaat gcttiatttg tgaaatttgt gatgctattg 1860 ctttatttgt aaccattata agctgcaata aacaagttaa caacaacaat tgcattcatt 1920 ttatgtttca ggttcagggg gaggtgtggg aggtttttta aagcaagtaa aacctctaca 1980 aatgtggtat ggctgattat gatctctagt caaggcacta tacatcaaat attccttatt 2040 aaccccttta caaattaaaa agctaaaggt acacaatttt tgagcatagt tattaatagc 2100 agacactcta tgcctgtgtg gaglaagaaa aaacagtatg ttatgatlat aactgttatg 2160 cctacttata aaggttacag aatatttttc cataattttc ttgtatagca gtgcagcttt 2220 ttcctttgtg gtgtaaatag caaagcaagc aagagttcta ttactaaaca cagcatgact 2280 caaaaaactt agcaattctg aaggaaagtc cttggggtct tctacctttc tcttcttttt 2340 tggaggagta gaatgttgag agtcagcagt agcctcatca tcactagatg gcatttcttc 2400 tgagcaaaac aggttttcct cattaaaggc attccaccac tgctcccatt catcagttcc 2460 ataggttgga atctaaaata cacaaacaat tagaatcagt agtttaacac attatacact 2520 taaaaatttt atattiacct tagagcttta aatctctgta ggtagtttgt ccaattatgt 2580 cacaccacag aagtaaggtt ccttcacaaa gatccggacc aaagcggcca Icgtgcctcc 2640 ccactcctgc agttcggggg catggatgcg cggalagccg ctgctggttt cctggatgcc 2700 gacggatttg cactgccggt agaactccgc gaggtcgtcc agcctcaggc agcagctgaa 2760 ccaactcgcg aggggatcga gcatccccca tggtcttata aaaatgcata gctttaggag 2820 gggagcagag aacttgaaag catcttcctg ttagtctttc ttctcgtaga cttcaaactt 2880 atacttgatg cctttttcct cctggacctc agagaggacg cctgggtatt ctgggagaag 2940 tttaiatttc cccaaatcaa tttctgggaa aaacglgtca ctttcaaatt cctgcatgat 3000 -45- 131343-序列表.doc 200907061 ccttgtcaca aagagtctga ggtggcctgg ttgattcatg gcttcctggt aaacagaact 3060 gcctccgact atccaaacca tgtctacttt acttgccaat tccggttgtt caataagtct 3120 taaggcatca tccaaactit tggcaagaaa atgagctcct cgtggtggtt ctttgagttc 3180 tctactgaga actatattaa ttctgtcctt taaaggtcga ttctictcag gaatggagaa 3240 ccaggttttc ctacccataa tcaccagatt ctgtttacct tccactgaag aggttgtggt 3300 cattctttgg aagiacttga actcgttcct gagcggaggc cagggtcggt ctccgttcu 3360 gccaatcccc atattttggg acacggcgac gatgcagttc aatggtcgaa ccatgatggc 3420 agcggggata aaatcctacc agccticacg ctaggattgc cgtcaagttt gggggtaccg 3480 agctcgaatt agcttlttgc aaaagcctag gcctccaaaa aagcclcctc actacttctg 3540 gaatagctca gagggccgag gcggcctcgg cctctgcata aataaaaaaa attagtcagc 3600 catggggcgg agaatgggcg gaactgggcg gagttagggg cgggatgggc ggaguaggg 3660 gcgggactat ggttgctgac taattgagat gcatgctttg catacttctg cctgctgggg 3720 agcctgggga ctttccacac ctggttgctg actaattgag atgcatgctt tgcatacttc 3780 tgcctgctgg ggagcctggg gactttccac accctaactg acacacattc cacagctgcc 3840 tcgcgcgttt cggtgatgac ggtgaaaacc tctgacacat gcagctcccg gagacggtca 3900 cagcttgtct glaagcggat gccgggagca gacaagcccg tcagggcgcg tcagcgggtg 3960 ttggcgggtg tcggggcgca gccatgaccc agtcacgtag cgatagcgga gtgtatactg 4020 gcttaactat gcggcatcag agcagattgt actgagagtg cacx:atatgc ggccgcaiat 4080 gcggtgtgaa ataccgcaca gatgcgtaag gagaaaatac cgcatcaggc gctcttccgc 4140 ttcctcgctc actgactcgc tgcgctcggt cgttcggctg cggcgagcgg tatcagctca 4200 ctcaaaggcg gtaatacggt tatccacaga atcaggggat aacgcaggaa agaacatgtg 4260 agcaaaaggc cagcaaaagg ccaggaaccg taaaaaggcc gcgttgctgg cgtttttcca 4320 taggctccgc ccccctgacg agcatcacaa aaatcgacgc tcaaglcaga ggtggcgaaa 4380 cccgacagga ctataaagat accaggcgtt tccccctgga agctccclcg tgcgctctcc 4440 tgttccgacc ctgccgctta ccggatacct giccgccttt ctcccttcgg gaagcgtggc 4500 gctttctcat agctcacgct gtaggiatct cagttcgglg taggtcgttc gctccaagct 4560 gggctgtgtg cacgaacccc ccgttcagcc cgaccgctgc gccttatccg gtaactatcg 4620 tcttgagtcc aacccggiaa gacacgactt atcgccactg gcagcagcca ctggtaacag 4680 gattagcaga gcgaggtatg taggcggtgc tacagagttc ttgaagtggt ggcctaacta 4740 cggctacact agaaggacag tatttggtat ctgcgctctg ctgaagccag ttaccttcgg 4800 aaaaagagtt ggtagctctt gatccggcaa acaaaccacc gctggtagcg gtggtttttt 4860 tgtttgcaag cagcagatta cgcgcagaaa aaaaggatct caagaagatc ctttgatctt 4920 ttctacgggg tctgacgctc agtggaacga aaactcacgt taagggattt tggtcatgag 4980 attatcaaaa aggatcttca cctagatcct tttaaattaa aaatgaagtt ttaaatcaat 5040 ctaaagtata tatgagtaaa cttggtctga cagttaccaa tgctlaatca gtgaggcacc 5100 tatctcagcg atctgtctat ttcgttcatc catagttgcc tgactccccg tcgtgtagat 5160 aactacgala cgggagggct taccatctgg ccccagtgct gcaatgatac cgcgagaccc 5220 acgctcaccg gctccagatt tatcagcaat aaaccagcca gccggaaggg ccgagcgcag 5280 aagtggtcct gcaactttat ccgcctccat ccagtctatt aattgttgcc gggaagctag 5340 -46- 131343·序列表.doc 200907061 agtaagtagt tcgccagtta atagtttgcg caacgttgtt gccattgctg caggcatcgt 5400 ggigtcacgc tcgtcgtttg gtatggcttc attcagctcc ggttcccaac gatcaaggcg 5460 agttacatga tcccccatgt tgtgcaaaaa agcggttagc tccttcggtc ctccgatcgt 5520 tgtcagaagt aagttggccg cagtgttatc actcatggtt atggcagcac tgcataattc 5580 tcttactgtc atgccatccg taagatgctt ttctgtgact ggtgagtact caaccaagtc 5640 attctgagaa lagtgtatgc ggcgaccgag ttgctcttgc ccggcgtcaa cacgggataa 5700 taccgcgcca catagcagaa ctttaaaagt gctcatcatt ggaaaacgtt cttcggggcg 5760 aaaactctca aggatcttac cgctgttgag atccagttcg atgtaaccca ctcgtgcacc 5820 caactgatct tcagcatctt ttactUcac cagcgtttct gggtgagcaa aaacaggaag 5880 gcaaaatgcc gcaaaaaagg gaalaagggc gacacggaaa tgttgaatac tcatactctt 5940 ccmttcaa tatlattgaa gcattlatca gggttattgt ctcatgagcg gatacatatt 6000 tgaatgtatt tagaaaaala aacaaatagg ggttccgcgc acatttcccc gaaaagtgcc 6060 acctgacgtc taagaaacca tlattatcat gacattaacc tataaaaata ggcgtatcac 6120 gaggcccttt cgtcttcaag aattcagctg ctcgaggaag agctcaaacc catgctactc 6180 tctggcttga tggaagcaac gctttcatag ctgagctgtc amaataata aagagatttt 6240 tttatlaata ttgaaaagat gggttattta tgtaagactc tgtcttcatt ttaaaaacca 6300 caccttccag tagtattctg ttactgttct ggcaatcact gtgatcaaga agctacacgg 6360 tgagttgtgc ttctcagtcc taagggatac atctacaaga ggctcccata ctcgaagctc 6420 aggaaacatt gtagaaaagg aggcaaaaga ctgacagagc cagaggacca agaaatttgt 6480 t£tgaggttg tgtctcctac taacaalata agcaatatct ataaattgtt gatatcatgg 6540 ctactaaaat gtgagttgaa cgaggaggac acaaatgaac atgacaatca gaatgaggcc 6600 tctcacctgc aaaaaacact alagagaagc agataaagct gtcagcagaa gaggcgcacc 6660 tccttataga agaagcctac caggtttgat atatcagcct tgaaaaccia catagtattt 6720 acattatatc gagtctatga gacatattta gtaatgcata tgtatgtgtg tgtgtgcatg 6780 tatgtgtgta aatacatatg ttcatagaaa aatgtgtaaa aagagatcat gaatttaaga 6840 gagaactggg acaatttttt tcagggagtt gtaatcagga aagttaaggg aaaaatgttg 6900 laattaaaat tcaggctcag aaacaaacaa aggaaaagaa aaaaaaacaa caacaacaac 6960 aaaaaaacaa aacaaaggag aagctgtatg gccacaatag catctacagc taactgtgaa 7020 aggataatgg aacaagttat gtactgccta gagcaglatg atgcctaaat catctcgaca 7080 tggaggaaaa tagaacaaag acactctaca tagactatga tagaaatcaa aataaggtgt 7140 aagacataga acattagttt tgtttgttgl tcaaagagac tcacattccc acaaaaaaat 7200 ctgtgggatt ttacaggtct gcaataagct gctgacctga tgatttctgc agctgtgcct 7260 accctttgct gatttgcatg tacccaaagc atagcttact gacatgagga tttcttcata 7320 gtcaggtcac accctttgct ggaglcagaa tcacactgat cacacacagt catgagtgtg 7380 ctcactcagg tcctggcgtt gctgctgctg tggcttacag gtaatgaaga cagcactaga 7440 attttattga gcttcctgta cactgtgctg cttgtctctg tgaaaattct cttgtgaatt 7500 aatcatgtgg ggatctgttt tcaatttttc aattgtaggt acgcgttgtg acattctgct 7560 gacccagtct ccagccaccc tgtctctgag tccaggagaa agagccactt tctcctgcag 7620 -47- 131343-序列表.doc 200907061 ggccagtcag aacattggca caagcataca gtggtatcaa caaaaaacaa atggtgctcc 7680 aaggcttctc ataaggtctt cttctgagtc tatctctggg atcccttcca ggtttagtgg 7740 cagtggatca gggacagatt ttactctlac catcagcagt ctggagcctg aagattttgc 7800 agtgtattac tgtcaacaaa gtaatacctg gccattcacg ttcggccagg ggaccaagct 7860 tgaaatcaaa cgtaagtaga atccaaagtc tctttctlcc gttgtctatg tctgtggctt 7920 ctatgtctaa aaatgatgta taaaatctta ctctgaaacc agattctggc actctccaag 7980 gcaaagatac agagtaactc cgtaagcaaa gctgggaata ggctagacat gttcictgga 8040 gaatgaatgc cagtgtaata attaacacaa gtgatagttt cagaaatgct clagtt 8096 <210> 40 <211> 11563 <212> DNA <213>人工序列 <220> <221> Source <222> L11563 <223>/註解=“人工序列之描述：表現載體HCVHESp20之核苷酸序列” / <400> 40 ctagagaggt ctggtggagc ctgcaaaagt ccagctttca aaggaacaca gaagtatgtg 60 tatggaatat tagaagatgt tgcttttact cttaagttgg ttcctaggaa aaatagttaa 120 atactgtgac tttaaaatgt gagagggttt tcaagtactc atttttttaa atgtccaaaa 180 tttttgtcaa tcaatttgag gtcttgtttg tgtagaactg acattactta aagtttaacc 240 gaggaatggg agtgaggctc tctcataccc tattcagaac tgacttttaa caataataaa 300 ttaagtttaa aatattttta aatgaattga gcaatgttga gttggagtca agatggccga 360 tcagaaccag aacacctgca gcagctggca ggaagcaggt catgtggcaa ggctatttgg 420 ggaagggaaa ataaaaccac taggtaaact tgtagctgtg gtttgaagaa gtggttttga 480 aacactctgt ccagccccac caaaccgaaa gtccaggctg agcaaaacac cacctgggta 540 atttgcattt ctaaaataag ttgaggattc agccgaaact ggagaggtcc tcttttaact 600 tattgagttc aaccttttaa tttlagcttg agtagttcta gtttccxcaa actlaagttt 660 atcgacttct aaaatgtatt taagctttct ggggcaggcc aggcctgacc ttggctttgg 720 ggcagggagg gggctaaggt gaggcaggtg gcgccagcca ggtgcacacc caatgcccat 780 ξ gagcccagac actggacgct gaacctcgcg gacagttaag aacccagggg cctctgcgcc 840 ctgggcccag ctctgtccca caccgcggtc acatggcacc acctctcrtg cagcctccac 900 caagggccca tcggtcttcc ccctggcacc ctcctccaag agcacctctg ggggcacagc 960 ggccctgggc tgcctggtca aggactactt ccccgaaccg gtgacggtgt cgtggaactc 1020 aggcgccctg accagcggcg tgcacacctt cccggctgtc ctacagtcct caggactcta 1080 ctccctcagc agcgtggtgii ccgtgccctc cagcagcttg ggcacccaga cctacatctg 1140 caacgtgaat cacaagccca gcaacaccaa ggtggacaag agagttggtg agaggccagc 1200 acagggaggg agggtgtctg ctggaagcca ggctcagcgc tcctgcctgg acgcatcccg 1260 gctatgcagt cccagtccag ggcagcaagg caggccccgt ctgcctcttc acccggaggc 1320 ctctgcccgc cccaclcatg ctcagggaga gggtcttctg gctttttccc caggctctgg 1380 gcaggcacag gclaggtgcc cctaacccag gccctgcaca caaaggggca ggtgctgggc 1440 tcagacctgc caagagccat atccgggagg accctgcccc tgacctaagc ccaccccaaa 1500 -48- 131343-序列表.doc 200907061 ggccaaactc tccactccct cagctcggac accttctctc ctcccagatt ccagtaactc 1560 ccaatcttct ctctgcagag cccaaatctt gtgacaaaac tcacacatgc ccaccgtgcc 1620 caggtaagcc agcccaggcc tcgccctcca gctcaaggcg ggacaggtgc cctagagtag 1680 cctgcatcca gggacaggcc ccagccgggt gctgacacgt ccacctccat ctcttcctca 1740 gcacctgaac tcctgggggg accgtcagtc ttcclcttcc ccccaaaacc caaggacacc 1800 ctcatgatct cccggacccc tgaggtcaca tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgaagac 1860 cctgaggtca agttcaactg gtacgtggac ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag 1920 ccgcgggagg agcagtacaa cagcacgtac cgtgtggtca gcgtcctcac cgtcctgcac 1980 caggactggc tgaatggcaa ggagtacaag tgcaaggtct ccaacaaagc cctcccagcc 2040 cccatcgaga 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cctcccagcc 2040 cccatcgaga aaaccatctc caaagccaaa ggtgggaccc gtggggtgcg agggccacat 2100 ggacagaggc cggctcggcc caccctx:tgc cctgagagtg accgctgtac caacctctgt 2160 ccctacaggg cagccccgag aaccacaggt gtacaccctg cccccatccc gggaggagat 2220 gaccaagaac caggtcagcc tgacctgcct ggtcaaaggc tlctatccca gcgacatcgc 2280 cgtggagtgg gagagcaatg ggcagccgga gaacaactac aagaccacgc ctcccgtgct 2340 ggactccgac ggctccttct tcctciatag caagctcacc gtggacaaga gcaggtggca 2400 gcaggggaac gtcttctcat gctccgtgat gcatgaggct ctgcacaacc actacacgca 2460 gaagagcctc tccctgtccc cgggtaaatg agtgcgacgg ccggcaagcc cccgctcccc 2520 gggctctcgc ggtcgcacga ggatgcttgg cacgtacccc gtctacalac ttcccaggca 2580 cccagcatgg aaataaagca cccaccactg ccctgggccc ctgcgagact gtgatggttc 2640 tttccacggg tcaggccgag tctgaggcct gagtggcatg agggaggcag agcgggtccc 2700 actgtcccca cactggccca ggctgtgcag gtgtgcctgg gccgcctagg gtggggctca 2760 gccaggggct gccctcggca gggtggggga tttgccagcg tggccctccc tccagcagca 2820 gctgccctgg gctgggccac gagaagccct aggagcccx：! ggggacagac 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cagaaccaac catggtccga agcgagaggt gggtgtcaga 3720 tccagacatg ataagataca ttgatgagtt tggacaaacc acaactagaa tgcagtgaaa 3780 aaaatgcttt atttgtgaaa tttgtgatgc tattgcttta tttgtaacca ttataagctg 3840 caataaacaa gtlaacaaca acaattgcat tcattttatg tttcaggttc agggggaggt 3900 gtgggaggtt ttttaaagca agtaaaacct ctacaaatgt ggtatggctg attatgatct 3960 ctagtcaagg cactatacat caaatattcc ttattaaccc ctttacaaat laaaaagcta 4020 aaggiacaca atttttgagc atagttatta atagcagaca ctctatgcct gtgtggagta 4080 agaaaaaaca gtatgttatg attataactg ttatgcctac ttataaaggt tacagaatat 4140 tlttccataa ttttcttgta tagcagtgca gctttttcct ttgtggtgta aatagcaaag 4200 caagcaagag ttctattact aaacacagca tgactcaaaa aacttagcaa ttctgaagga 4260 aagtccttgg ggtctlctac ctttctcttc tttmggag gagtagaatg ttgagagtra 4320 gcagtagcct catcatcact agatggcatt tcttctgagc aaaacaggtt ttcctcatta 4380 aaggcattcc accactgctc ccattcatca gttccatagg tlggaatcta aaatacacaa 4440 acaattagaa tcagtagttt aacacattat acacttaaaa attttatatt taccttagag 4500 ctttaaatct ctgtaggtag tttgtccaat tatgtcacac cacagaagta aggttccttc 4560 acaaagatcc ggaccaaagc ggccatcgtg cctccccact cctgcagttc gggggcatgg 4620 atgcgcggat agccgctgct ggtttcctgg atgccgacgg atttgcactg ccggtagaac 4680 tccgcgaggt cgtccagcct caggcagcag ctgaaccaac tcgcgagggg atcgagcccg 4740 gggtgggcga agaactccag catgagatcc ccgcgctgga ggatcatcca gccggcgtcc 4800 cggaaaacga ttccgaagcc caacctttca lagaaggcgg cggtggaatc gaaatctcgt 4860 gatggcaggt tgggcgtcgc ttggtcggtc attlcgaacc ccagagtccc gctcagaaga 4920 actcgtcaag aaggcgatag aaggcgatgc gctgcgaatc gggagcggcg ataccgtaaa 4980 gcacgaggaa gcggtcagcc cattcgccgc caagctcttc agcaatatca cgggtagcca 5040 acgctatgtc ctgatagcgg tccgccacac ccagccggcc acagtcgatg aatccagaaa 5100 agcggccatt ttccaccatg atancggca agcaggcatc gccatgggtc acgacgagat 5160 cctcgccgtc gggcatgcgc gccttgagcc tggcgaacag ttcggctggc gcgagcccct 5220 gatgctcttc gtccagatca tcctgatcga caagaccggc ttccatccga gtacgtgctc 5280 gctcgatgcg atgtttcgct tggtggtcga atgggcaggt agccggatca agcgtatgca 5340 gccgccgcat tgcatcagcc atgatggata ctttctcggc aggagcaagg tgagatgaca 5400 ggagatcctg ccccggcact tcgcccaata gcagccagtc ccttcccgct tcagtgacaa 5460 cgtcgagcac agctgcgcaa ggaacgcccg tcgtggccag cx;acgatagc cgcgctgcct 5520 cgtcctgcag ttcattcagg gcaccggaca ggtcggtctt gacaaaaaga accgggcgcc 5580 cctgcgctga cagccggaac acggcggcat cagagcagcc gattgtctgt tgtgcccagt 5640 catagccgaa tagcctctcc acccaagcgg ccggagaacc tgcgtgcaat ccatctlgtt 5700 -55- 131343-序列表.doc 200907061 caatcatgcg aaacgatca catcctgtct cttgatcaga tcttgatccc ctgcgccatc 5760 agatccttgg cggcaagaaa gccatccagt ttactttgca gggcttccca accttaccag 5820 agggcgcccc agctggcaat tccggttcgc ttgctgtcca taaaaccgcc cagtctagct 5880 atcgccatgt aagcccactg caagctacct gctttctctt tgcgcttgcg mtcccttg 5940 tccagatagc ccagtagctg acattcatcc ggggtcagca ccgtttctgc ggactggctt 6000 tctacgtgtt ccgcttcctt tagcagccct tgcgccctga gtgcttgcgg cagcgtgaag 6060 ctttttgcaa aagcctaggc ctccaaaaaa gcctcctcac tacttctgga atagctcaga 6120 ggccgaggcg gcctcggcct ctgcalaaat aaaaaaaatt agtcagccat ggggcggaga 6180 atgggcggaa ctgggcggag ttaggggcgg gatgggcgga gttaggggcg ggactatggt 6240 tgctgactaa ttgagatgca tgctttgcat acttctgcct gctggggagc ctggggactt 6300 tccacacctg gttgctgact aattgagatg catgctttgc atacttctgc ctgctgggga 6360 gcctggggac tticcacacc ctaactgaca cacattccac agctgcctcg cgcgtttcgg 6420 tgatgacggt gaaaacctct gacacatgca gctcccggag acggtcacag cttgtctgla 6480 agcggatgcc gggagcagac aagcccgtca gggcgcgtca gcgggtgttg gcgggtglcg 6540 gggcgcagcc atgacccagt cacgtagcga tagcggagtg tatactggct taaclatgcg 66(X) gcatcagagc agattgtact gagagtgcac catatgcggt gtgaaatacc gcacagatgc 6660 gtaaggagaa aataccgcat caggcgctct tccgcttcct cgctcactga ctcgctgcgc 6720 tcggtcgttc ggctgcggcg agcggtatca gctcactcaa aggcggtaat acggttatcc 6780 acagaatcag gggataacgc aggaaagaac atgtgagcaa aaggccagca aaaggccagg 6840 aaccgtaaaa aggccgcgtt gctggcgttl ttccataggc tccgcccccc tgacgagcat 6900 cacaaaaatc gacgctcaag tcagaggtgg cgaaacccga caggactata aagataccag 6960 gcgtttcccc ctggaagctc cctcgtgcgc tcicctgttc cgaccctgcc gcttaccgga 7020 tacctgtccg cctttctccc ttcgggaagc gtggcgcttt ctcatagctc acgctgtagg 7080 latctcagtt cggtgtaggt cgtlcgctcc aagctgggct gtgtgcacga accccccgtt 7140 cagcccgacc gctgcgcctt atccggtaac tatcgtcttg agtccaaccc ggtaagacac 7200 gacttatcgc cactggcagc agccactggt aacaggatta gcagagcgag gtatgtaggc 7260 ggtgctacag agttcttgaa gtggtggcct aactacggct acactagaag gacagtattt 7320 ggtatctgcg ctctgctgaa gccagttacc ttcggaaaaa gagttggtag ctcttgatcc 7380 ggcaaacaaa ccaccgctgg tagcggtggt ttttttgttt gcaagcagca gattacgcgc 7440 agaaaaaaag gatctcaaga agatcctttg atcttttcta cggggtctga cgctcagtgg 7500 aacgaaaact cacgttaagg gattttggtc atgagattat caaaaaggat cttcacctag 7560 atccttttaa attaaaaatg aagttttaaa tcaatctaaa gtatatatga gtaaacttgg 7620 tctgacagtt accaatgctl aatcagtgag gcacctatct cagcgatctg tctatttcgt 7680 tcatccatag ttgcctgact ccccgtcgtg tagataacta cgatacggga gggcttacca 7740 tctggcccca gtgctgcaat gataccgcga gacccacgct caccggctcc agatttatca 7800 gcaaiaaacc agccagccgg aagggccgag cgcagaagtg gtcctgcaac tttatccgcc 7860 tccatccagt ctattaatlg ttgccgggaa gctagagtaa gtagttcgcc agttaatagt 7920 ttgcgcaacg ttgttgccat tgctgcaggc atcgtggtgt cacgctcgtc gtttggtatg 7980 gcttcattca gctccggttc ccaacgatca aggcgagtta catgatcccc catgttgtgc 8040 -56- 131343-序列表.doc 200907061 aaaaaagcgg ttagctcctt cggtcctccg atcgttgtca gaaglaagtt ggccgcagtg 8100 ttatcactca tggttatggc agcactgcat aattctctta ctgtcatgcc atccgtaaga 8160 tgcttttctg tgactggtga gtactcaacx aagtcattct gagaatagtg tatgcggcga 8220 ccgagngct cttgcccggc gtcaacacgg gataataccg cgccacaug cagaacttia 8280 aaagtgctca tcattggaaa acgttcttcg gggcgaaaac tctcaaggat cttaccgctg 8340 ttgagatcca gttcgatgta acccactcgt gcacccaact galcttcagc atcttttact 8400 ttcaccagcg tttctgggtg agcaaaaaca ggaaggcaaa atgccgcaaa aaagggaata 8460 agggcgacac ggaaatgttg aatactcata ctcttccttt ttcaatatta ttgaagcatt 8520 tatcagggtt attgtctcat gagcggalac alatttgaat gtatttagaa aaataaacaa 8580 ataggggttc cgcgcacatt tccccgaaaa gtgccacctg acgtctaaga aaccattatt 8640 atcatgacat taacctaiaa aaataggcgt atcacgaggc cctttcgtct tcaagaauc 8700 gagctcggta cccatcagcc aaaaagcatg cctgccacac aacatcaatt tctggaaaac 8760 gctacactta attattlcta gtagaacagc tctttggttt gccaaaaaga atcacctata 8820 gtggcatcta agcacaaaaa ggagaaaaaa atcacaaaga aatgattgag aggcataata 8880 aaaattatca aaaaattatg agttttacga tttcatcttt ttccaagttg aaatcatagg 8940 gtggctttaa cacagtgaca aggaatgtgc atgctgccat tatggtgctc tgcctaaaat 9000 ggttggagcc ttgtcatgct acagagaaac tgtcatacag cagggggtgc caaatttcca 9060 tattttttta tatcattgag caggtgcaca gaagaccaga aagcactttc tatcaggctg 9120 gccttcctct tcctttccag tatgaagcaa aaactgccaa tgaaactagc aattgttaaa 9180 ttcctttttc aaacagtatt tgtgctatca gaacatagtg cattcaaaag tctagcctga 9240 gagaacaacc cagttttatt cattcctcct actacctctc tcattcccac tgtttgtgtt 9300 ctccctccca ttttaattgt ctalctagtc caaactaagc acacgatcca gtccacatta 9360 aacaacatgt ttlcacttta agtcaaatac aagacacctt taalatcagc ccttgttcat 9420 aatcgtgctt ctagtgactt aatglacatg tcacactgta ctgttgggtt ttgtgtctca 9480 tcatgaacaa tgltgtgaag gtattaagtg gagagtaagc agaattagat tcctctaatg 9540 atgcacaccc acactaagag cagaaataat attaaaaata gaaaaaaaag ttttacatga 9600 gatttcaaat acccaggtat gagctgcagt ttcttcaagt taaagcalcg aggttgtcag 9660 ttacactatt acaggaaaca tatgcagagt ttttatttta gtalattagt tttcacatat 9720 gtggaatlac tattaaacta ttctttcttt tcaaatgctt accattgtaa atgagtttgt 9780 gactttgtgt aggtgagtgc acatgactct ggatgcctaa gaggactgaa gaagttggag 9840 ttataggtag ttttattcta cttgactgtt cagtgctaaa aalacaactg aggtccttta 9900 aactgctgtt catgaacttc ttaattgata tatctcatga gatctctaaa ctatttttat 9960 tatgacacgt ttcaccattt tcactgtaac gatttttatg ttttatatta atgtaactat 10020 atgacacttc ccaaaatccc catattcaca attgaactgt ttcaaagttt taccttgact 10080 tatgggaaat gaaaacccac attttataat tttaaaatga aatgtttatt ttatatltct 10140 gcaaatttca caa£gaaaga ttagtcactg gtgtgtgaga gcagaggagc ataagagttc 10200 aggaatagaa tccattatga ttctggaggc aaggaagaac tgatgccaag gtttcagtat 10260 aagagcagta tccactggaa aggataaagt cactacatct gagcacagag caggacatct 10320 -57- 131343·序列表.doc 200907061 acataatgag tggtcactaa t£ggccactg ttacactgtt atatgtataa ggctcaagaa 10380 tgagcactga ggctgtaagg tgtatgggtg aggacatcag gatgtaaacc cagctcaggt 10440 agaggactca gaggacagca cagtcagcat gaactaataa acatcagaia agataaggca 10500 caagctcagc tatalagggt aagggatctt tgtaaatctg attgtgcatc cagtctagtt 10560 caatgtgact taggaagccc agtcatatgc aaatctagag aagactttag agtagaaatc 10620 tgaggctcac ctcacalacc agcaagcgag tgaccagtta gtcttaaggc accacttctl 10680 agacatcatg gcttgggtgt ggaccttgcc attcctgatg gcagctgccc aaagtaagac 10740 atcagaaaaa agagttccaa ggggaattga agcagttcca tgaatactca ccttcctgtg 10800 ttcttttcac aggtgtccag gcacaggtgc agctggtg£a gtcaggagcc gaagtgaaaa 10860 agcctggggc ttcagtgaag gtgtcctgca aggcctctgg atacacattc actaattata 10920 ttatccactg ggtgaagcag gagcctggtc agggccttga atggattgga tattttaatc 10980 cttacaatca tggtactaag tacaatgaga agttcaaagg cagggccaca ctaactgcaa 11040 acaaatccat cagcacagcc tacatggagc tcagcagcct gcgctctgag gacactgcgg 11100 tctactactg tgcaagatca ggaccctatg cctggtttga cacctggggc caagggacca 11160 cggtcaccgt ctcctcaggt aagaatggcc actctagggc ctttgttttc tgctgctgcc 11220 tgtgggattt catgagcatt gcaaagttgt cctcgggaca tgttccgagg ggacctgggc 11280 ggactggcca ggaggggacg ggcactgggg tgccttgagg atctgggagc ctctgtggat 11340 tttccgatgc ctttggaaaa tgggactgag gttgggtgcg tctgagacag taactcagcc 11400 igggggcttg gtgaagatcg ccgcacagca gcgagtccgt gaaatatctt atttagactt 11460 gtgaggtgcg ctgtgtgtca atttacatct taaatccttt attggctg£a aagagaattg 11520 ttggagtggg tgaatccagc caggagggac gcggggggat cca 11563 58- 131343-序列表.doc

Claims (1)

1. 200907061 十、申請專利範圍： 1. 一種調節樹突狀細胞（DC)功能之方法，該方法包含將樹 突狀細胞暴露於CD45RO/RB結合分子。 2. —種調節樹突狀細胞（DC)功能之方法，該方法包含將樹 突狀細胞暴露於結合分子，其中該結合分子序列中包含 高變區CDR1、CDR2及CDR3，該CDR1具有胺基酸序列 Asn-Tyr-Ile-Ile-His(NYIIH)，該 CDR2 具有胺基酸序列 Tyr-Phe-Asn-Pro-Tyr-Asn-His-Gly-Thr-Lys-Tyr-Asn-Glu-Lys-Phe-Lys-Gly(YFNPYNHGTKYNEKFKG)，該 CDR3 具 有胺基酸序列 Ser-Gly-Pro-Tyr-Ala-Trp-Phe-Asp-Thr(SGPYAWFDT);或其中該分子為其直接等效物。 3. 如請求項1或請求項2之方法，其中該結合分子包含： a) 第一域，其序列中包含高變區CDR1、CDR2及 CDR3，該 CDR1 具有胺基酸序歹ij Asn-Tyr-Ile-Ile-His(NYIIH)，該CDR2具有胺基酸序列丁7卜卩116-八311-Pro-Tyr-Asn-His-Gly-Thr-Lys-Tyr-Asn-Glu-Lys-Phe-Lys-Gly(YFN PYNHGTKYNEKFKG)，該 CDR3具有胺 基酸序列 Ser-Gly-Pro-Tyr-Ala-Trp-Phe-Asp-Thr(SGPY AWFDT);及 b) 第二域，其序列中包含高變區CDR1'、CDR2'及 CDR3’，CDR1'具有胺基酸序列 Arg-Ala-Ser-Gln-Asn-Ile- Gly-Thr-Ser-Ile-Gln(RASQNIGTSIQ)，CDR2,具 有胺基酸序列 Ser-Ser-Ser-Glu-Ser-Ile-Ser(SSSESIS)， CDR31 具有胺基酸序列 Gln-Gln-Ser-Asn-Thr-Trp-Pro- 13l343.doc 200907061 Phe-Thr(QQSNTWPFT);或 其直接等效物。 4，如請求項1至3中任一項之方法，其中該結 ^ , x 乃子為嵌合 或人類化分子。 5.如請求項1至4中任一項之方法，其中該結合八 刀于為嵌合 或人類化單株抗體’例如IgG 1同型之欲合岑 人類化單株 抗體。 (6·如請求項1至5中任一項之方法，其中該結合分子包含 SEQ ID N〇:l之多肽及/或SEQ ID NO:2之多肽。 7.如請求項1至6中任一項之方法，其中該結合分子包含 SEQ ID N0:3之多肽及/或SEQ ID NO:4之多肽。 8·如請求項1至7中任一項之方法，其中該結合分子為包含 SEQ ID NO:9 或 SEQ ID NO:10 之多肽及 / 或 SEQ ID N〇:7 或SEQ ID NO:8之多肽的人類化抗體。 9.如請求項1至8中任一項之方法，其中該结合分子為包含 SEQ ID NO:31 或 SEQ ID ΝΟ··32之多肽或 SEQ ID NO:7 或 \ SEQ ID NO:8之多肽的人類化抗體。 1 〇.如請求項1至9中任一項之方法，其中該結合分子為包含 以下之人類化抗體： (a) SEQ ID NO:9之多肽及 SEQ ID NO:7之多狀； (b) SEQ ID NO:9之多肽及SEQ ID NO:8之多狀； (c) SEQ ID NO: l〇之多肽及 SEQ ID NO:7之多狀； (d) SEQIDNO:10之多肽及SEQIDNO:8之多狀’ (e) SEQIDNO:31之多肽及SEQIDNO:7么^多狀’ 131343.doc 200907061 (f) SEQ Π) NO:31之多肽&SEq ID n〇:8之多肽； (8)8丘<5 1〇1^0:32之多肽及8£(^1〇1^0:7之多肽；或 (h) SEQ ID NO:32之多肽及SEq ID n〇:8i 多肽。 11.如請求項1至1 〇中任—項之方法，其中該方法係在活體 外執行。 12·如4求項丨至丨丨中任一項之方法，其係用於誘導該等樹 突狀細胞展現耐受性表型。 1 3 .如請求項i至丨2中任一項之方法其包含 (a) 獲彳于未成熟樹突狀細胞之來源；及 (b) 在該結合分子存在下誘導該等未成熟樹枝狀細胞成 熟。 14. 士叫求項丨至13中任一項之方法，其中該等樹突狀細胞 係來源於生物樣品。 1 5.如=求項i至14中任一項之方法，其中該等樹突狀細胞 係藉由誘導單核細胞來源（例如來自生物樣品）活體外分 化而獲得。 如明求項1至1 5中任一項之方法，其另外包含以下步 驟.使該等樹突狀細胞活體外暴露於丁細胞群以誘導該 等丁細胞之耐受性表型。 月^項1 6之方法，其中該等Τ細胞對於該等樹突狀細 匕而0為同種異體的（allogeneic)。 I ::治療及/或預防與自體免疫疾病、移植排斥反應、牛 包含：發炎性腸道疾病及過敏症相關之疾病的方法，其 匕3向需要該治療及/或該預防之個體投與有效量之藉由 131343.doc 200907061 如請求項1至17中任一項之方法獲得之樹突狀細胞及/或 猎由如請求項16或請求項17之方法獲得之τ細胞。 19. 一種治療及/或預防與自體免疫疾病、移植排斥反應、牛 皮癬、發炎性腸道疾病及過敏症相關之疾病的方法，其 包含： (a) 由供給者獲得單核細胞群； (b) 誘‘該等單核細胞活體外分化以產生樹突狀細胞來 源； (C)將該等樹突狀細胞暴露於如請求項1至1 〇中任一項之 結合分子以使該等樹突狀細胞具耐受性；及 (d)向需要該治療及/或該預防之接受者投與有效量之該 等耐受性樹突狀細胞。 20. 種冶療及/或預防與自體免疫疾病、移植排斥反應、牛 皮癬發炎性腸道疾病及過敏症相關之疾病的方法，其 包含： (a)由供給者獲得樹突狀細胞群； ⑻將該㈣突狀細胞暴露於如請求項m中任一項之 、’'a S刀子以使s亥等樹突狀細胞具耐受性；及 (c) 向需要該治療及/或該預防之接受者投與有效量之該 等耐受性樹突狀細胞。 21. -種治療及/或預防與自體免疫疾病、移植排斥反應、牛 皮癬、發炎性腸道疾病及過敏症相關之疾病的方法，其 包含： (a)由第一供給者獲得單核細胞群； 131343.doc 200907061 ()誘導。亥等早核細胞活體外分化以產生樹突狀細胞 源； ()將4等树犬狀細胞暴露於如請求項1至附任一項之 &刀子以使該等樹突狀細胞具耐受性； ⑷將該等耐受性樹突狀細胞暴露於由第二供給者獲得 之τ細胞群以使該等τ細胞具耐受性；及 ⑷向需要該治療及/或該預防之接受者投與有效量之該 等耐受性樹突狀細胞及/或該等耐受性τ細胞。 22.種化療及/或預防與自體免疫疾病、移植排斥反應、牛 皮癬發炎性腸道疾病及過敏症相關之疾病的方法，其 包含： (a)由第一供給者獲得樹突狀細胞群； ()將°亥荨树犬狀細胞暴露於如請求項1至10中任一項之 結合分子以使該等樹突狀細胞具耐受性； (C)將該等耐受性樹突狀細胞暴露於由第二供給者獲得 之T細胞群以使該等τ細胞具耐受性；及 (d)向需要該治療及/或該預防之接受者投與有效量之該 等耐受性樹突狀細胞及/或該等耐受性T細胞。 23. 如請求項19或請求項20之方法，其中該供給者及該接受 者為同一個體。 24. 如請求項19或請求項20之方法，其中該供給者及該接受 者為不同個體’視情況其中該方法係用於治療及/或預防 移植排斥反應且該等樹突狀細胞係由該移植供給者獲 得。 131343.doc 200907061 Μ·如請求項21或請求項22之方法，其中該第—供給者及該 第二供給者與該接受者為同一個體。 26. 如=求項21或請求項22之方法，其中該第二供給者對於 X第供、、’α者及/或該接受者而言為同種里體的。 27. 如請求項19至26中任—項之方法，其中該等樹突狀細胞 在暴露於該結合分子之前為未成熟樹突狀細胞，且其中 該等樹突狀細胞隨後在該結合分子存在下誘導以 熟化。 取 2 8. —種由如請求項1至丨7中任一 “ 貞之方法獲得之樹突狀細 胞群及/或由如請求項16或請求項17之方法獲得之耐受性 Τ細胞群之用途，其係用於治療及/或預防與自體免疫疾 病、移楂排斥反應、牛皮癬、發炎性 相關之疾病。 “道疾病及過敏症 29. 一種由如請求項1 2至17中任—項之方法獲得之樹突^ 胞群及/或由如請求項16或請求項17 j /¾•獲传之耐香性 τ細胞群之用途，其係用於製造治 臀及/或預防與自 疫疾病、移植排斥反應、牛皮癣、 敏症相關之疾病的藥劑。 疾病及過 爪如請求項!至17中任一項之方法，其係 受性樹突狀細胞及/或耐受性T細胞之藥劑。、灰艳包含耐 3 !. —種由如請求項i至丨7中任—項之方法> 一 耐受性T細胞群，其係用作藥劑 種醫藥組合物，其包含由如請求項 突狀細胞群及/或由如請求項16或請求項之耐文性樹 财受性T細胞群，兑总田从L ' 之方去獲得之 32. 1 至1 7中任一項之 2 I31343.doc 200907061 =得之耐受性樹突狀細胞群及/或由如請求項μ或請 33·如請求項32 = 1耐受性T細胞群 中任 項之結合分子 合物’其另 外 包含 如請求項i 至10 131343.doc