TW200823196A

TW200823196A - New use

Info

Publication number: TW200823196A
Application number: TW096139911A
Authority: TW
Inventors: Alf Claesson
Original assignee: Astrazeneca Ab
Priority date: 2006-11-01
Filing date: 2007-10-24
Publication date: 2008-06-01
Also published as: AU2007314657A1; EP2091540A1; US20080108633A1; EP2091540A4; JP2010508345A; CN101534830A; CA2668321A1; KR20090077063A; RU2009112013A; WO2008054291A1; MX2009004561A; BRPI0718003A2

Description

200823196 九、發明說明：【發明所屬之技術領域】本發明係關於一種已發現具有止痛活性且因此適用於治療或預防人類或動物體内疼痛病狀的吼唑基衍生物及其醫藥學上可接受之鹽的新用途，例如，用於製造供治療或預防諸如人之溫血動物體内疼痛用之藥物。【先前技術】目前用於疼痛病狀之治療方案使用利用極有限範圍之藥理學機制之化合物。一類化合物類鴉片刺激内源性腦内啡糸統，該類化合物之一實例為嗎嗓驗（m〇rphine)。類牙鳥片類化合物具有數個限制其用途之缺點，例如催吐及便秘效應及對呼吸容量之負面影響。其用途亦因其成癮傾向而受到限制。第二個主要類別之止痛藥COX-1型或COX-2型非類固醇消炎止痛藥亦具有諸如不能充分有效治療嚴重疼痛病狀及長期使用cox-ι抑制劑引起黏膜潰瘍之傾向。其他目前使用之藥物之止痛效應的機制表徵不充分及/或具有有限的治療潛能。受體酪胺酸激酶（Receptor tyrosin kinase，RTK)為蛋白質激酶之一子族，其在細胞信號傳導（ceU signalHng)中發揮關鍵作用且牵涉於多種癌症相關過程，包括細胞增生、存活、新血管生成及轉移。目前，已鑑別多達1〇〇種不同 RTK ’包括原肌凝蛋白相關激酶（tr〇p〇rny0sin_reiated kinase，Trk) 〇

Trk為由一組稱為神經營養素（neurotr〇phin，NT)之可溶 125611.doc 200823196 性生長因子活化之高親和力受體。Trk受體家族具有3個成員：TrkA、TrkB及TrkC。在NT中，存在⑴神經生長因子 (nerve growth factor，NGF)，其活化 TrkA ; (ii)腦源性生長因子（brain-derived growth factor，BDNF)及 NT-4/5，其活化TrkB ;及（iii)NT3，其活化TirkC。各Trk受體含有一細胞外域（配位體結合）、一跨膜區及一細胞内域（包括激酶域）。結合配位體後，激酶催化自體磷酸化且觸發下游信號轉導途徑。

Trk在神經元組織發育期間廣泛表現於神經元組織中，其中Trk對維持且使該等細胞存活而言很關鍵。然而，Trk/ 神經營養素軸（或途徑）之胚後期作用仍在討論中。存在展示Trk在神經系統發育及功能中發揮重要作用之報導 (Patapoutian, A.等人，Current Opinion in Neurobiology^ 2001，11，272-280) 〇在過去的十年裏，已有許多科學報告公開提出Trk信號傳導與疼痛誘發之相關性。NGF之含量在發炎後增加且 NGF造成基本及刺激誘發之痛覺過敏（例如，Safieh-Garabedianof等人，〇/ 1995, 115，1265)。發炎後，由mRNA含量增加可知，背根神經節 (dorsal root ganglion)中之 BDNF 含量亦增加（Cho 等人， 1997，749，358)。疼痛中涉及 TrkA/TrkB 及其配位體NGF/BDNF之強有力證據來自利用針對NGF之抗體或Trk受體與清除NGF或BDNF之免疫球蛋白之融合蛋白的研究。數個該等研究已在已誘發炎症之動物體内顯示止 125611.doc 200823196 痛效應（例如，Lewin 等人，European Journal of 1994，6，1903 ; McMahon 等人，TVaiwre Mediche 1995, 1，774)。雖然研究並不涉及Trk受體激酶本身，但其指示抑制NGF或BDNF受體偶合之酪胺酸激酶亦可產生止痛效應。最近文獻亦指出，用NGF活化TrkA會引起某些對經歷炎症之神經末梢增加電信號之過程很重要之離子通道下游向上調節，因此會誘發疼痛（例如，VR-1，Winston等人， Pain 2001，89， 181 ; sodium channels，Choi 等人，

Molecular and Cellular Biology 2001， 21， 2695 ; ASIC， Mamet 等人，Journal of Biological Chemistry 2003， 278, 48907)。亦已暗示NGF為引起牛皮癣及搔癢（pruritis)(發癢（itch)) 之因素，從而表明TrkA抑制劑可用於該等適應症 Journal of Dermatology 2QQ6, 落Ί6、0 現已令人驚詞1地發現某些°比π坐基衍生物因充當TrkA及 TrkB之抑制劑而具有有效的止痛活性。已有少數報告提出對TrkA及TrkB具有高度選擇性之選擇性Trk酿胺酸激酶抑制劑。Cephalon描述作為Trk抑制劑之 CEP-751、CEP-701 (George，Ό·專又 ’ Cancer Research， 1999， 59， 2395-2401)及其他吲哚咔唑類似物 (W00114380)。已知當與CEP-701/751相關之生物鹼K252a 注射至患有胰腺炎之大鼠體内時，可抑止機械過敏 (Winston等人，2003，4，329)。 125611.doc 200823196 專利申請案JP 2003-23 1687中揭示在4、5位與伸環烧基縮合之吼嗤化合物充當神經營養素受體抑制劑且可用作止痛藥。GlaxoSmithKline揭示某些作為TrkA抑制劑且適用於治療疼痛及癌症之羥基吲哚化合物（WO 0220479、WO 0220513)。

Vertex Pharmaceuticals之專利申請案 WO 0250065 及 WO 0262789中揭示π比嗤化合物為GSK3、Aurora等之抑制劑且適用於治療癌症。AstraZeneca PLC報導作為IGF-1受體激酶抑制劑之吡唑化合物（WO0348133)。【發明内容】本發明係關於選自下列各物之化合物之用途： (S)-5·演- (5 -氣 σ比唆-2-基）乙基-異丙氧基-1//-吡唑-3-基）嘧啶-2,4-二胺； 5-氯-TV2-[(lS)-l-(5-氟吡啶_2·基）乙基]-#-(5-異丙氧基吡唑-3-基）嘧啶-2,4-二胺； (S)-5-溴二氟吡啶-2-基）乙基異丙氧基-σ坐-3-基）喂唆-2,4-二胺； (S)-5-氯-7V2-(l-(3,5-二氟吡啶-2-基）乙基）-#_(5·異丙氧基-IF-吡唑-3-基）嘧啶-2,4-二胺； 5-氟 _ΑΓ2_[(18)-1-(5-氟吡啶 _2_基）乙基]-#-(5-異丙氧基吡唑-3-基）嘧啶-2,4-二胺； (S)-7\^(l-(3,5-二氟吡啶-2-基）乙基）-5-氟-#兴5·異丙氧基-1丑-吡唑-3-基）嘧啶-2,4·二胺； (S)-5-溴環丙基-1仏吡唑-3-基比唆-2-125611.doc 200823196 基）乙基）嘧啶-2,4-二胺； (S)-5-氯-#欠（5·環丙基_ 1孖-吡唑-3-基氟吡啶-2-基）乙基）嘧啶·2,4-二胺； (S)-5-氯-Λ^·(5-環丙基-1丑-吡唑 _3_基>#2-(1_(3,5_ 二氟吡唆-2-基）乙基）嘧淀-2,4-二胺；及氟。比啶|基）乙基甲基]仏吼嗤-3-基）喷咬-2,4-二胺，

或其醫藥學上可接受之鹽，其係用於製造供治療或預防疼痛用之藥物。【實施方式】如以上所提及之本發明之化合物可根據w〇 2〇〇6/⑵⑴ 中所述之方法製備。本發明之化合物之合適的醫藥學上可接受之鹽為(例如) 具有足夠鹼性之本發明之化合物的酸加成鹽，例如，盥 (例如）無機或有機酸（例如鹽酸、氫漠酸、硫酸、磷酸、^ 氟乙酸、擰檬酸或順丁烯二酸）形成之酸加成鹽。另外丁具有足夠酸性之本發明之化合物的合適的醫藥學上可接A 之鹽為鹼金屬鹽，例如鈉鹽或鉀鹽；鹼土金屬帛，例如二鹽或鎂鹽；銨鹽，或與提供生理學上可接受之陽機鹼形成的鹽，例如與^#、_ ^ w 、-曱胺、三甲胺、哌啶、嗎啉或參-(2·羥基乙基）胺形成之鹽。 “、中，本發明之化合物、 x 之另一悲樣切尤其選自實例中任一者之化人从^ 合適的醫藥學上可接受之鹽 °之豳·# m , ^為興選自以下各物之酸形成之 | ·本甲酉文、2-(笨甲醯胺基 ’ 上，孓乙烷二磺酸、反 125611.doc 200823196 丁烯二酸、順丁烯二酸、扁桃酸、萘-1，5-二磺酸、磷酸、丁二酸、硫酸或Η— -10·烯酸。在一態樣中，該鹽為磷酸鹽。在另一實施例中，該鹽為硫酸鹽。在另一態樣中，該鹽為反丁烯二酸鹽。在另一實施例中，該鹽為順丁烯二酸 . 鹽。酸加成鹽之其他實例包括乙酸鹽、己二酸鹽、抗壞血酸鹽、苯曱酸鹽、苯磺酸鹽、碳酸氫鹽、硫酸氫鹽、丁酸鹽、樟腦酸鹽、樟腦磺酸鹽、膽鹼、檸檬酸鹽、環己基胺 • 基苯磺酸鹽、二伸乙基二胺、乙烷磺酸鹽、反丁烯二酸鹽、麩胺酸鹽、羥乙酸鹽、半硫酸鹽、2-羥基乙基磺酸鹽、庚酸鹽、己酸鹽、鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、羥基順丁烯二酸鹽、乳酸鹽、蘋果酸鹽、順丁烯二酸鹽、甲烷磺酸鹽、葡曱胺、2-萘磺酸鹽、硝酸鹽、乙二酸鹽、雙羥萘酸鹽、過硫酸鹽、苯乙酸鹽、磷酸鹽、二磷酸鹽、苦味酸鹽、特戊酸鹽、丙酸鹽、奎尼酸鹽（quinate)、水揚酸 ^ 鹽、硬脂酸鹽、丁二酸鹽、胺基苯磺酸鹽、對胺基苯磺酸

W 鹽（sulfanilate)、硫酸鹽、酒石酸鹽、甲苯磺酸鹽（對甲苯磺酸鹽）、三氟乙酸鹽及十一烷酸鹽。，鹼鹽之實例包括銨鹽；鹼金屬鹽，諸如鈉鹽、鋰鹽及鉀 . 鹽；鹼土金屬鹽，諸如鋁鹽、鈣鹽及鎂鹽；與有機鹼形成之鹽，諸如二環己胺鹽、N-甲基-D-還原葡糖胺；及與諸如精胺酸、離胺酸、鳥胺酸等之胺基酸形成之鹽。亦可用試劑使鹼性含氮基團季銨化，該等試劑諸如：低碳烷基鹵化物，諸如曱基i、乙基_、丙基鹵及丁基鹵；硫酸二烷 125611.doc -10- 200823196 酉旨，如硫酸二甲醋、硫酸二乙酯、硫酸二丁輯、硫酸二戊醋；長鏈齒化物，諸如癸基幽、月桂基鹵、肉豆慈基函及硬脂基鹵；芳烷基鹵化物’如苄基溴及其他生理學上可接受之鹽，而其他鹽亦適用，諸如適 . 或純化產物。，該等鹽可由習知方法形成，諸如藉由使游離驗形式之產物與-或多種適當酸之等效物在鹽不可溶之溶劑或介質中 Φ 《在可在真空下或藉由冷束乾燥或在合適的離子交換樹脂上使現存鹽之陰離子交換成另一種陰離子而移除之諸如水之溶劑中反應。亦應瞭解，本發明之某些化合物可以溶劑合物以及非溶劑合物形式（諸如，水合物形式）存在。應瞭解本發明涵蓋所有該等溶劑合物形式。用法預期具有激酶抑制活性之如以上所提及之化合物或其醫籲㈣上可接受之鹽適用於治療或預防疼痛病狀，且因此咸信，其適用於治療人類或動物體之方法。本發明亦係關於包3該等化合物之醫藥組合物之用途，且係關於其在製造在諸如人之溫血動物體内產生止痛效應之藥物中之用途。本發明包括冑等化合物<醫藥學上可接受之鹽或前藥之用途。根據本發明使用之化合物之性質應適用於醫療法，尤其用=治療及/或預防不同起因及病因之疼痛，包括急性以及慢性疼痛狀態。實例為由化學、機械、輕射、熱、感染 125611.doc -11 - 200823196 或發炎性組織外傷或癌症所引起之疼痛。其他實例為外傷後疼痛；頭痛及偏頭痛；多種關節炎性及發炎性病狀，諸如骨關節炎及類風濕性關節炎；與慢性發炎、骨骼疾病及諸如癌症之細胞增生（實體腫瘤及白血病）相關之肌筋膜疼痛及下腰疼痛。同時，可使用如以上所提及之化合物或其醫藥學上可接受之鹽治療或預防中樞或周邊起因之神經性病狀。該等疼痛病狀之實例為三又神經痛、帶狀疱疹後神經痛 (postherpetic neuralgia，PHN)、疼痛性糖尿病性單/多發性神經病變及與神經損傷、脊髓損傷、中樞性中風後、多發性硬化症、牛皮癣、搔癢及帕金森氏病（parkins disease)相關之疼痛。其他疼痛可具有内臟起因，諸如由潰瘍、痛經、子宮内膜異位、IBS、消化不良等引起之疼痛，且亦可用如以上所提及之化合物或其醫藥學上可接受之鹽治療或預防。本發明之一實施例係關於如以上所提及之化合物或其醫藥學上可接受之鹽在製造供治療或預防疼痛用之藥物;^ 用途。本發明之另一實施例係關於如以上所提及之化合物或其醫藥學上可接受之鹽在製造供治療或預防發炎性疼痛或神經病變性疼痛用之藥物中的用途。在另—實施例中，發炎性疼痛為慢性發炎性疼痛。在本發明之另一實施例中，用途為治療性的。在本發明之又-實施例中’用途為預防性的。 125611.doc 12 200823196 =本發月之實施例中，該疼痛係選自由化學、機械、輻射、熱、感染或發炎性組織外傷所引起之疼痛。在本發明之另_實施射，該疼痛為外傷後疼痛或由頭 :偏貝痛引起之疼痛’·選自由骨關節炎及類風濕性關節火引起之疼痛之關節炎性及發炎性病肖大；與慢性發炎、骨骼疾病或諸如癌症之細胞增生(實體腫瘤或白血病)相關之肌筋膜疼痛及下腰疼痛。

欠在：發明之又一實施例中，該疼痛具有中樞或周邊起因，其係選自由三又神經痛、帶狀疱錢神經痛（phn)、疼痛性糖尿病性單/多發性神經病引起之疼痛及與神” 傷、脊髓損傷、中樞性中風後、多發性硬化症或帕金森氏病相關之疼痛。在本發明之一實施例中，該疼痛具有内臟起因，其係選自由潰癌、痛經、子宮内膜異位、IBS及消化不良引起之疼痛。本發明之另一實施例係關於治療或預防罹患或存在罹患 \痛（丨又欧）發义性疼痛或神經病變性疼痛及以上所提及之任何疼痛之風險之患者體内該等疾病的方法，該方法包含向患者投與治療有效量之如以上所提及之化合物或其醫藥學上可接受之鹽。另 κ施例係關於用於治療或預防疼痛、慢性發炎性疼痛或神經病變性疼痛及以上所提及之任何疼痛之藥劑，該藥劑包含作為活性成分之如以上所提及之化合物或其醫藥學上可接受之鹽。 1256Il.doc -13- 200823196 剤里將視投藥途徑、疾病嚴重性、患者之年齡及體重、患者之疾病及當確定最適於特定患者之個別方案及劑量含量時主治醫師通常考慮之其他因素而定。用於疼痛療法中之根據本發明使用之化合物之有效量為足以在症狀上減輕溫血動物、尤其人類體内之痛覺，減緩痛覺進展或降低罹患疼痛之患者經歷更嚴重疼痛之危險的量° 劑量通常應在每天1 mg至1〇〇〇 mg活性物質範圍内。本發明之另一實施例係關於以上所提及之用途，其中如以上所提及之化合物之每日劑量係在約〇 1 mg至約1〇〇〇 mg範圍内。本發明之另一實施例係關於以上所提及之用途，其中如以上所&及之化合物之每日劑量係在約1 mg至約750 mg範圍内。本發明之一實施例係關於以上所提及之用途，其中如以上所提及之化合物之每日劑量係在約1 mg至約5 0 0 mg範圍内。字組’’每日劑量”係經定義以便吡唑基化合物可以諸如錠劑或膠囊之單位劑量形式每日給予一次，或者吡唑基化合物可每日給予兩次。每日劑量可在以下所提及之劑量範圍内變化，且視患者對治療之個別反應而定。本文所使用之字組”治療性治療"意謂一旦疼痛開始使患者遭受痛苦，即藉由投與如以上所提及之發明之化合物或其醫藥學上可接受之鹽來治療疼痛以減輕痛覺。此意謂使 125611.doc • 14· 200823196 用該等化合物提供針對完全或部分發展之疼痛病狀之療法，該疼痛病狀諸如由化學、機械、輻射、熱、感染或發炎性組織外傷或癌症引起之疼痛。本文所使用之字組”預防性治療，，意謂可向人員提供本發明之U比唑基衍生物來防止疼痛頻繁發作及降低發作之嚴重性或持續時間。此外，其可在已開始產生完整症狀或僅輕微症狀之疼痛發作之前投與。醫藥組合物

為使用本發明之化合物或其醫藥學上可接受之鹽治療性治療（包括預防性治療）包括人類之哺乳動物，通常根據標準醫藥實踐將其調配為醫藥組合物。本發明之一實施例係關於包含如以上所提及之本發明之化合物或其醫藥學上可接受之鹽以及醫藥學上可接受之佐劑、稀釋劑及/或载劑的醫藥組合物在製造供治療或預防疼痛、慢性發炎性疼痛或神經病變性疼痛用之藥物途。本發明之化合物可經口、非經腸、經頻、陰道、直腸、吸入、吹入、舌下、肌肉内、皮下、局部、經鼻、腹膜内、胸内、靜脈内、硬膜外、勒内1室内及藉由注射至關節中來投與。就由本發明之化合物製備醫藥組合物而言，醫藥學上可，惰性載劑可為固體或液體。固體形式製劑包括散劑、錠劑、可分散顆粒劑、膠囊、扁囊劑及检劑。固體載劑可為一或多種亦可充當稀釋劑、調味劑、增溶 125611.doc .15- 200823196 劑、潤滑劑、縣：全如 &斤Μ、黏合劑或錠劑崩解劑之物質；直亦可為封裝材料。、、人在散片！中’載劑為細粉狀固體，其與細粉狀活性組分混口在錠4中，活性組分係與具有必要黏合性質之載劑以合適比例混合且以所需形狀及大小麼實。 ^就製：栓劑組合物而言，首先將諸如脂肪酸甘油酯與可口物之低熔點蠟熔融且藉由（例如）攪拌將活性成 #刀政於其中。隨後，將熔融均相混合物傾人適當大小之模具中且使其冷卻並固化。、口適的載劑/稀釋劑包括碳酸鎮、硬脂酸鎮、滑石、乳糖、果膠、糊精、殿粉、黃笑膠、甲基纖維素、瘦甲土纖維素鈉、低熔點蠟、可可油及其類似物。 ^體开ί式組合物包括溶液、懸浮液及乳液。作為適於非 :腸技狀液體製劑之實例，可提及活性化合物之無菌水酿丙—_溶液。液體組合物亦可以溶液形式調配於聚魅溶液中。經σ投藥之水溶液可藉由將活性組分溶解於水中且按需要添加合適稠劑來製備。穩定劑及增 έ 且八二使用之水性懸浮液可藉由將細粉狀活性 :刀連同諸如Μ合成樹膠、樹脂、甲基纖維素纖維素鈉之黏性材料及醫筚甲土一起分散於水中來製倩5物領域所知之其他懸浮劑 =組合物可為單位劑型。以該形式，將組合性組分之單位劑量。單位劑型可為封裝製劑，續封裝含有離散量之製劑，例如封裝錠劑、膠 Ζ 1256Il.doc -16- 200823196 安瓿中之散劑。單位劑型亦可為膠囊、扁囊劑或錠劑本身，或其可為適當數目之任何該等封裝形式。組合除本發明之化合物外，本發明之醫藥組合物亦可含有一或多種具有治療一或多種本文所提及之疾病病狀價值之醫藥劑或可與該或該等醫藥劑共同投與（同時或相繼）。本文所定義之疼痛治療可以單一療法形式應用或除根據本發明使用之化合物外，還涉及投與其他止痛或佐劑療法。該療法可（例如）包括以同時、單獨或相繼使用形式組合之一或多種以下種類之減輕疼痛之成分： a) 類鴉片止痛藥，例如嗎啡鹼、凱托米酮 (ketobemidone)或芬太尼（fentanyl) b) NSAID或COX-1或COX-2類止痛藥，例如布洛芬 (ibuprofene)、萘普生（naproxene)、塞來考昔 (selecoxib)或乙醯基水揚酸（acetylsalicylic acid)及其含提供氧化氮基團之類似物 c) 止痛佐劑，諸如阿米替林（amitriptyline)、丙味嗓 (imipramine)、度洛西汀（duloxetine)或美西律 (mexiletine) d) NMDA括抗劑，例如開他敏（ketamine)、美金剛 (memantine)或右旋美托芬（dextrometorfan) e) 鈉通道阻斷劑，例如利多卡因（lidocaine)或美西律 f) 抗痙攣藥，例如痛痙寧（carbamazepine)、托吼酯 (topiramate)或拉莫三唤（lamotrigine) 125611.doc •17- 200823196 g) 抗痙攣/止痛胺基酸，諸如加巴噴丁 &吐邛entin)或普瑞巴林（pregabalin) h) 大麻鹼 i) 針對NGF或TNF-α之抗體。生物測試活體内實驗在如 Tonussi 及 Ferreira(Paz>2 1992，48，421-427)所述之大鼠角叉菜膠測試中，當根據本發明使用之化合物經全身性投藥給予小鼠或大鼠時，其尤其減輕疼痛。因此，可推斷化合物可用作減輕多種起因之疼痛之治療劑。角又菜膠誘發之單發性關節炎直接向大鼠膝關節單次注射角叉菜膠產生在3至4小時時出現峰值且持續1至2天且對大部分抗疼痛藥物治療敏感之症狀（Tonussi及 Ferreira，1992, 48, 421-427)。實驗程序在異氟烧麻醉下，將50 jiL角叉菜膠（7·5 mg/mL)自背側注射至左腔跗（踝）關節中。該注射引起誘發後4 8 h之間惡化至隶大程度之局部發炎，此後，其逐漸消退，且動物呈現施加於且保護四肢之重量之減輕。測試程序··爪印設定爪印走道由在一短端具有入口點及在另一端具有出口之 100x10 cm之路徑組成，且訓練大鼠走出快速的連續通道。走道具有玻璃地面，其中光經由光纖投影於一個長邊 125611.doc 18 200823196 緣中。以此方式投影光實質上在玻璃地面内實現完全内反射。僅在目標觸摸玻璃處，諸如大鼠爪之位置，接觸點處光才散射且產生光照印跡（illuminated print)，其由置放於走道下之廣角照相機記錄（Betts, Duckworth，五Med. 1978，7，223-228)。光照之光強（範圍0-255)係視相對於地面之接觸程度而定且隨外加壓力而增加（Clarke， ά 1995，58，415-419)。爪印設定為由 Hamers，

Lankhorst, van Laar, Veldhuis, Gispen(/. Neurotrauma 2001，18，187-201)介紹之貓行走（Cat Walk)之修改版，且具有求取數個與大鼠步態模式及承受重量相關之參數之電腦化步態偵測算法。在誘發單發性關節炎之前一及兩天，訓練動物穿過走道兩次。接著，在測試當天在注射角叉菜膠之前即刻及注射後3及5小時（對應於經口投與測試化合物後2及4小時）時進行記錄。使用下列參數進行分析：

間’記錄各像素之光強之最大值。

每爪印之中間值。之中間值。各爪之承受重量中間值以佔所有四個爪

125611.doc -19· 200823196 資料分析將值表示為平均值士SEM。使用用於比較處理組之間投藥後各時間點所獲得之資料之單因素ANOVA接著Newman-

KeUlS分析結果。有效性水準設定為p<〇.〇5(SigmaStat@ 2.03) 〇結果爪印設定以單發性關節炎誘發前之各爪承受重量，計算其佔所有爪之承文重1中間值總和的百分率，以爪印算法結果表 7、後爪刀別介於21.8 士 1.6%及24.6 士 1.1%(平均值土 SEM)範圍内。由角叉菜膠誘發單發性關節炎後3及5小時，在不同測4日守間，後爪重量分布為3〇 2土3 2%及34 9士2 平均值 SEM)’ 及 22.1 土 4.6% 及 39.0 土 2.1%(平均值土 SEM)，將其與主射角又菜勝之前之後爪重量分布之值_〇·2±ι.8 及-2·6土 1·〇(平均值±SEM)相比較。圖j展示爪印設定分析法中，5-氯K[(ls)小(5_就0比啶_2基）乙基]異丙氧基-1好-吨唑_3_基）嘧啶_2,4•二胺對因角又菜膠誘發單發性關卽炎之大鼠兩條後腿之間的承受重量的分布的效應。各爪之承受重量中間值以佔所有四個爪之承受重量中間值總和的百分率表示。其顯示兩個後爪之間承受重量之百分率不同。由角叉菜膠誘發關節炎後lh，經口投與5_ 氟吼唆冬基）乙基]，(5_異丙氧基w坐j 基），咬-2,4-二胺（n=8隻/組）。借助於用於所有成對多重比較法之單向細VA，接著進行Newman_Keiii法之統計分 125611.doc -20- 200823196 析。將用5-氯氟吨啶-2-基）乙基異丙氧基-1/Γ-11比嗅-3-基）哺唆-2,4-二胺處理之不同劑量組與媒劑處理之對照組進行統計學比較。顯著水準（*)設定為 p<0_05 0 與媒劑組相比，5-氯-iV2-[(lS)-l_(5-氟吡啶-2-基）乙基]-#夂（5·異丙氧基-1孖-吡唑-3-基）嘧啶-2,4-二胺之所有三個劑量 30 μηιοΐ/kg、60 μιηοΐ/kg及 120 μπιοΐ/kg在經口投與 2 小時與4小時時均顯著降低後爪重量分布。在所測試之投藥間隔中，未觀察到明顯的劑量依賴性。因此，劑量30 μπιοΐ/kg使後爪之間的承受重量之差異自媒劑組之角又菜膠處理後3小時時之30.2士3.2%減小至9.2±4.0%，而劑量 120 μπιοΐ/kg使承受重量之差異減小至14·9±4·4%(平均值土SEM)。結論結果證明TrkA拮抗劑5·氣-#_[( 1 S)-1 -(5-氟吡啶-2-基）乙基]- (5 -異丙氧基-1 σ比β坐-3·基）癌咬-2,4-二胺之所有劑量（30 μηιοΐ/kg、60 μπιοΐ/kg及 120 μπιοΐ/kg，經口）對經關節内踝注射角叉菜膠誘發之發炎性疼痛均產生顯著效應。使用爪印電腦化步態偵測算法量測角叉菜膠誘發之承受重量之減小。

Trk Α檢定格式使用擴增發光親近檢定（Amplified Luminescent Proximity Assay)(Alphascreen)技術（1^1^]1£111^1>，549 Albany Street，Boston, MA)量測Trk A激酶活性使一般多肽 125611.doc -21- 200823196 受質中合成酪胺酸殘基磷酸化之能力。為量測Trk A激酶活性’使經HIS標記之人類Trk A激酶 (1^八之胺基酸442-796，8\¥丨83彳1：〇1—級寄存編號？04629) 之細胞内域表現於SF9細胞中且使用標準鎳管柱層析法純化。在室溫下將激酶與經生物素標記之受質及三磷腺苷 (ATP)—起培育20分鐘後，藉由添加30 mM乙二胺四乙酸 (EDTA)使激酶反應中止。在384孔微量滴定盤中進行反應且在室溫下培育隔夜後使用EnVision Multilabel板讀取儀藉由添加經抗生蛋白鏈菌素塗佈之供體微珠及經磷酸酪胺酸特異性抗體塗佈之受體微珠偵測反應產物。肽受質 PolyEY-生物素(PGT-bio·) ATPKm 70 μΜ 檢定條件 0.838 ng/ml Trk A、9mM HEPES、45 pg/ml BSA、10 mM MnCl2、5 nMPGT-bio、0.01% Triton® X-100、70μΜ ATP 培育 20分鐘，室溫終止/偵測條件 6·3 mM HEPES、30 mM EDTA、525jg/ml BSA、40 mM Naa、0.007%Triton®X-100、12ng/ml供體微珠、12ng/ml 受體微珠偵測培育隔夜，室溫螢光計設定激發=680 nM，發射=570 nM，激發時間=180 ms，總量測時間=5 50ms 雖然如以上所提及之本發明之化合物之藥理學性質隨結構改變而變化，但可證明如以上所提及之本發明化合物所具有之活性通常在IC5G濃度（實現50%抑制之濃度）或（〇·〇1 μΜ至1 〇 μV[)範圍内之劑量下。 125611.doc -22- 200823196 當在上述活體外檢定中測試時，在下列IC 5 G下量測下列實例之Trk抑制活性。化合物 Ι€5〇(μΜ) (8)-5->臭-^\/^-(5-孩丙基-17/-11比17坐-3-基)-7\/^-(1-(5-亂11比咬-2-基）乙基)嘧啶-2,4-二胺 0.005 (S)-5-溴-#-(5-環丙基-li/j 比唑-S-基)-#-(1-(5-氟说啶-2-基）乙基)嘧啶-2,4-二胺 0.008 (S)-5-氟-#-(5-環丙基比唑-3-基)氟吼啶-2-基）乙基)嘧啶-2,4·二胺 0.010 【圖式簡單說明】圖1為不同劑量下之後爪重量分布。 125611.doc -23-

Claims

200823196 十、申請專利範園： 1. 一種化合物之用途’該等化合物係選自： (S)-5-溴-#2-(1-(5-氟吼啶·2_基）乙基異丙氧基吡唑-3-基）癌啶_2,4_二胺； 5-氯-#2-[(lS)小（5_氛11比啶-2-基）乙基異丙氧基-1开-吡唑_3_基）嘧啶*2,4-二胺； (S)-5-溴二氤响啶-2-基）乙基異丙氧基-1丑-吡唑-3-基）嘧啶_2,4-二胺； (S)-5·氣_妒-(1-(3,5·二氟吼啶-2-基）乙基異丙氧基-1丑-吡唑-3-基）嘧啶_2,4-二胺； 5-氟-AT2-[(lS)-l-(5_氟响啶-2_基）乙基異丙氧基-1/f-吡唑-3-基）嘧啶_2,4-二胺； (8)-7ν2-(1-(3,5-二氟 0比 σ定 _2·基）乙基）_5_ 氟-#((5-異丙氧基-liii-n比嗤-3-基）嘴唆-2,4-二胺； (8)_5-溴-#-(5-環丙基-1丑-吡唑-3-基）-#2_(1_(5_氟吡啶-2-基）乙基）喷π定-2,4 -二胺； (8)-5-氯-7\^-(5-環丙基-1丑^比唾_3_基）_#2_(1_(5_氟口比唆_2-基）乙基）嘧啶-2,4·二胺； (δ)-5ϋ_(5_環丙基卜（3,5_ 二氟吡咬基）乙基）嘧啶-2,4-二胺；及氣# -[(1S)-1_(5 -氟1^比咬-2-基）乙基]曱基q丑比坐3基）嘴咬_2,4-二胺，或其醫藥學上可接受之鹽，其係用於製造供治療或預防疼痛用之藥物。 2. 如請求们之用途，其中該疼痛係選自慢性發炎性疼痛 125611.doc 200823196 或神經病變性疼痛。 3. —種包含如請求項丨之化合物以及醫藥學上可接受之佐劑、稀釋劑及/或载劑之醫藥組合物之用途，其係=於製造供治療或預防疼痛、慢性發炎性疼痛或神經病變性疼痛用之藥物。 4·如明求項1至3中任一項之用途，其中該醫藥學上可接受之鹽為硫酸鹽或順丁烯二酸鹽。 5·如请求項1至3中任一項之用途，其中該用途為治療性用途。 6·如請求項1至3中任一項之用途，其中該用途為預防性用途。 7. 如凊求項1至3中任一項之用途，其中該疼痛係由化學、機械、輪射、熱、感染或發炎性組織外傷所引起。 8. 如請求項1至3中任一項之用途，其中該疼痛為外傷後疼痛或由頭痛及偏頭痛引起之疼痛；選自由骨關節炎及類風濕性關節炎引起之疼痛之關節炎性及發炎性病狀；與慢性炎症、骨骼疾病或癌症相關之肌筋膜疼痛及下腰疼痛。 9. 如請求項1至3中任一項之用途，其中該疼痛具有中樞或周邊起因，其係選自由三叉神經痛、帶狀疱疹後神經痛、疼痛性糖尿病性單/多發性神經病變引起之疼痛及與神經損傷、脊髓損傷、中樞性中風後、多發性硬化症或帕金森氏病（parkinson’s disease)相關之疼痛。 10·如請求項1至3中任一項之用途，其中該疼痛具有内臟起 125611.doc 200823196 、IBS及消因，其係選自由潰瘍、痛經、子宮内膜異位化不良引起之疼痛。 11·如請，項1至3中任一項之用途，其中如請求項^之化合物之每日劑量係在約0.1 mg至約1000 mg‘圍内。 12·如明求項10之用途，其中如請求項1之化合物之每曰劑置係在約1 mg至約750 mg範圍内。

:求項12之用途，其中如請求項工之化合物之每日劑里係在約1 mg至約500 mg範圍内。

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