TW200810762A

TW200810762A - Use of DNA and ARA in the preparation of a composition for the prevention or treatment of anemia

Info

Publication number: TW200810762A
Application number: TW096106501A
Authority: TW
Inventors: Francisco J Rosales; Joshua C Anthony; J Thomas Brenna; Andrea Tseng Hsieh; Deborah A Schade
Original assignee: Bristol Myers Squibb Co; Cornell Pesearch Foundation Inc
Priority date: 2006-02-28
Filing date: 2007-02-26
Publication date: 2008-03-01
Also published as: WO2007100435A3; WO2007100435A2; US20070203235A1

Description

200810762 (1) 九、發明說明【發明所屬之技術領域】本發明基本上係關於一種防止或治療貧血之方法。【先前技術】人類血液含有三種類型的細胞-紅血球、白血球及血小板-所有這些細胞都環繞著身體循環。紅血球（RBC )含有血紅素（Hb )(—種紅色、富含鐵質的蛋白質），其會從肺攜載氧氣運送給身體所有的肌肉及器官，氧氣在此等地方發生反應以提供身體正常活動所需的能量。當紅血球的數量或所含血紅素的份量低於正常値時，身體只能得到較少氧氣且產生的能量不足以滿足身體正常運作之需求。此種狀況一般被稱爲貧血。目前已鑑定出近乎100種不同類型的貧血，各有不同的病因。貧血的原因包含紅血球產量不足、紅血球受到破壞（溶血性貧血），或失血。貧血通常與鐵質缺乏有關，不過貧血的其他原因還包括維生素B12缺乏、葉酸缺乏、遺傳性疾病、腎臟病或肝病。貧血的症狀包括呼吸短促、心悸、心雜音、精神不振及疲倦。若不加以治療，貧血可能會造成更嚴重的問題。當紅血球數量減少時，心臟會更努力地工作以拱出更多血液好把更多氧氣送到全身。如果心臟過度工作，會導致心跳快速（心搏過速），及/或習知的左心室肥大（LVH )( 心臟肌肉增厚，可能會導致心臟衰竭）之嚴重病況。 -5- (2) (2)200810762 除了成人以外，在美國有多達20%兒童及在開發中國家有多達80%兒童在18歲以前某些時段有貧血現象。

Martin，P.L.等人，The Anemias，Principles and Practices of Pediatrics，1657 (第二版，Lippincott 1994)。新生兒貧血爲一種新生兒出生後紅血球質量或Hb濃度減少的生理病況。臨床的徵兆及症狀包括進食不良、呼吸困難、心搏過速、呼吸窘迫、活力降低，以及蒼白，因爲嬰兒正奮力補償氧化不足的現象。 “嬰兒生理性貧血”則爲一種特殊的出生後狀況，其爲新生兒在嬰兒期早期並未顯示出任何其他異常的情況下所經歷極低Hb量的情況。目前尙未充分了解引起Hb量降低的原因，不過一般認爲係由於嬰兒要適應出生引發的多種氧氣運輸及傳送的複雜改變，而導致造血活性降低、紅血球量減少及紅血球壽命變短所造成的。出生時具有廣泛不同血紅素値的嬰兒在活性紅血球製造作用自然發生之前，血紅素値都會降到差不多同樣低的程度。雖然並非是造成貧血唯一的理由，不過引起嬰兒及兒童貧血的常見原因爲鐵質缺乏。在出生時，多數足月嬰兒每公斤體重含有75 mg元素鐵，主要係含在Hb ( 75%)中，不過還包括儲存（1 5 % )及組織蛋白之鐵質（1 0% )。 Am· Acad. on Pediatr” Comm. on Nutrition, Iron Fortification of Infant Formulas, Pediatr. 1 04: 1 1 9- 1 23 ( 1 999 )。典型地，在出生後最初的4個月期間，過多的嬰兒紅血球會被破壞掉且嬰兒可留住這些鐵質。這些鐵質以 -6 - 200810762 (3) 及攝食得到的鐵質會被用來支持嬰兒生長時紅血球質量擴增的需求。據估計足月嬰兒欲滿足此生長需求且同時維持適當的鐵質儲存量時’其鐵質需求量爲每日約1 nig/kg。因爲新生的足月嬰兒係在懷孕的7到9個月期間合成超過· 80%的鐵質，所以早產兒必需在出生後第一年內合成更多鐵質以追及他們的足月同輩。所以，出生時體重在 15 00到2500 g之早產兒的鐵質攝取量需求爲每天2 mg/kg ® ，且出生時體重低於1500g之早產兒則爲每天4 mg/kg。基於此等高度的鐵質需求，所以極重要地出生後的膳食鐵質來源必需被嬰兒良好地吸收。雖然母乳中鐵質的濃度很低（約0.3 mg/L )，不過母乳內所含的鐵質較牛乳或豆奶所含鐵質更容易被嬰兒吸收。舉例來說，母乳中有 5 0%到70%的鐵質被吸收到嬰兒體內，相對地以牛乳爲主的嬰兒配方食品中一般只有低於1 2 %的鐵質被吸收。以大豆爲主的嬰兒配方食品之鐵質吸收率比牛乳爲主的嬰兒配 ® 方食品更低且範圍低於1 %至7%。母乳中鐵質的高生體利用率爲專家建議嬰兒應以母乳餵養到至少一歲的一項重要因素。雖然餵食母乳有這麼多好處，不過並非所有的母親都有意願或有能力餵食母乳。近來，在美國多數的嬰兒在超過三個月大時便不再餵食母乳。因爲嬰兒配方食品中的鐵質來源不像母乳的鐵質來源那麼容易吸收，所以嬰兒配方食品必需含有高於母乳鐵質含量之鐵以便給送等量之生體可利用鐵質給嬰兒。如此導致鐵質-強化之嬰兒配方食品 -7- 200810762 (4) 的發展。於美國，鐵質-強化之嬰兒配方食品中鐵質的濃度範圍爲10 mg/L到12 mg/L。於歐洲，嬰兒配方食品則含有4 m g / L到7 m g / L的鐵。不幸地，基於擔憂過量鐵質會造成嬰兒消化道窘迫，所以消費者常避免鐵質-強化的嬰兒配方食品。消費者同時亦擔心高鐵含量會干擾免疫系統。所以，許多消費者仍使用低·鐵質含量之嬰兒配方食品，而置其嬰兒於貧血之鲁風險下。由於貧血經常伴有鐵質缺乏的現象，因此補充鐵質便爲治療此等病況常用的處方。然而，人體每天僅能排出定量的過量鐵質。如果個體攝取超過人體能排出的過量鐵質時，身體會把過量鐵質儲存在肝臟、心臟、胰臟及其他器官的細胞中。此種狀況爲血色素沉著病。若未加以治療，血色素沉著病會導致糖尿病、關節疼痛、心律異常、心臟衰竭、肝硬化或肝臟衰竭。所以，提供一種不涉及鐵質補充來治療或防止貧血的方法會很有益處。因爲有多種類型的貧血與鐵質吸收無關 ’於此等情況下補充鐵質既無效且可能會有危險，所以提供一種組成物，其不在飮食中補充鐵質而能防止或治療多種類型的貧血，會很有益處。此外，提供一種含有此等組成物之嬰兒配方食品或兒童營養品以防止或治療嬰兒及兒童之多種形式的貧血也很有益。【發明內容】 -8 - (5) (5)200810762 簡要地’本發明係關於一種防止或治療個體貧血之新穎方法’該方法包含投予治療有效量之DHA及ARA給該個體。本發明亦關於一種增加個體之紅血球細胞數之新穎方法’該方法包含投予治療有效量之DHA及ARA給該個體。本發明還有關一種增加個體之血紅素濃度之新穎方法 ’該方法包含投予治療有效量之DHA及ARA給該個體。本發明還有關一種提高個體之血容比的方法，該方法包含投予治療有效量之DHA及ARA給該個體。再者，本發明亦係關於一種促進嬰兒加快紅血球生成之新穎方法，該方法包含投予治療有效量之DHA及ARA給該嬰兒。此外’本發明還關於一種增加個體吸收鐵質能力之新穎方法 ’該方法包含投予治療有效量之DHA及ARA給該個體。在本發明所發現之眾多優點當中，包括了提供一種無需投予過量鐵質就能防止或治療多種形式貧血之方法。【實施方式】現在將詳細參考本發明之具體例，其一或多個實施例顯示如下。各實施例係用來解釋本發明，而非限制本發明。事實上對熟悉此技術者而言極明顯地，可在不逾越本發明之範疇或悖離本發明之精神的情況下對本發明進行不同的修改及變更。舉例來說，於一具體例某部份顯示或說明之特性可用於另一具體例而產生再一具體例。所以，本發明意圖將此等修改及變更涵括於後附申請專利範圍及其均等物之範圍內。本發明之其他目標、特性 -9- 200810762 (6) 及態樣係揭示在如下詳細說明中或基於如下詳細說明即顯明可知。熟悉此技術之人士應瞭解此等討論僅爲示範性具體例之描述，且並非意圖用以限制本發明之較廣態樣。在此使用時，術語“治療”意指能緩解、改善或治癒疾病、失調、疾病或病況之症狀。術語“防止”意指透過某些動作來終止或阻撓疾病、失調、疾病或病況之症狀。術語“治療有效量”係指足以改善或矯治該疾病、失調、該疾病或病況之症狀的份量。本發明標的之“個體”包括任何人類或動物個體。該個體較佳地爲需要防止或治療貧血之個體。該個體一般爲哺乳動物。當術語“哺乳動物”在此使用時，係指任何被歸類爲哺乳動物之動物，包括人類、家畜及畜養之動物，以及動物園之動物、運動用動物或寵物，如犬、馬、貓、牛等〇術語“嬰兒”係指小於約1歲之出生後人類。在此使用時，術語“貧血”可定義成紅血球數目或紅血球所含血紅素量低於年齡-特定及性別-特定之可接受限制的任何病況。在此使用時，術語“嬰兒配方食品”意指可作爲母乳替代品且能滿足嬰兒營養需求之組成物。在美國，嬰兒配方食品之內容物係由聯邦法規21 C.F.R·第100、106及107 款來規範。此等規定界定了多種主營養素、維生素類、礦物質類及其它成份含量以力求達到母乳所激發之營養效果 -10- (7) (7)200810762 及其它特性。根據本發明，本案發明者已發現一種防止或治療個體貧血之新穎方法，其包含把治療有效量之二十二碳六烯酸 (DHA )及二十碳四烯酸（ARA )投予給個體。事實上，本發明已顯示DHA及ARA的投予能增加12%到1 5%之紅血球、血紅素、及血容比，因此能防止及/或緩解貧血。 DHA及ARA爲長鏈聚不飽和脂肪酸（LCPUFA)，其顯示出能有益於嬰兒的健康及成長。更明確地，DHA及 ARA顯示出能支持嬰兒腦、眼睛及神經的發育及維護。 Birch，E.等人，A Randomized Controlled Trial of Long-Chain Polyunsaturated Fatty Acid Supplementation of Formula in Term Infants after Weaning at 6 Weeks of Age， Am. [ Clin. Nutr. 75:5 70-5 8 0 ( 2002 ) 。Clandinin，M 等人，Formulas with Docosahexaenoic Acid ( DHA ) and Arachidonic Acid ( ARA ) Promote Better Growth and Development Scores in Very-Low-Birth-Weight Infants ( V LB W)，Pediatr. Res. 5 1 : 1 8 7 A -1 8 8 A ( 2 0 0 2 )。餵食母乳之嬰兒一般係經由母乳得到DHA及ARA。然而，以嬰兒配方食品韻養的嬰兒則必需把DHA及ARA加到飲食內。雖然已知DHA及ARA有益於嬰兒腦、眼睛及神經的發育，不過以往並不知道DHA及ARA對貧血有任何功效。本發明所發現之DHA及ARA對貧血的正面效用係令人訝異且無法預知的。於本發明某些具體例中，該個體爲需要防止及/或治 -11 - 200810762 (8) 療貧血的主體。該個體可爲處於發生貧血風險之人類主體。該個體可能是由於基因性易染病體質、生活方式、飲食、遺傳性疾病、維生素或礦物質缺乏、疾病或失調等而有此風險。舉例來說，患有特定腎臟病或肝病的個體即爲具有發生貧血風險的個體。於本發明特定具體例中，該需要防止及/或治療貧血之個體爲嬰兒。於一特定具體例中，該需要防止及/或治 ^ 療貧血之個體爲早產嬰兒。同樣可作爲另一實例地，因爲有80 %以上的鐵質係在懷孕第7到9個月間累積的，而早產兒鐵質累積的時間被迫縮短，因此很容易有貧血的風險〇於本發明中，DHA及ARA的投藥形式並不重要，只要能把治療有效量投予給個體即可。於某些具體例中，該 DHA及ARA係透過錠劑、片劑、囊劑、膜衣錠、粒狀膠囊、膠囊、油滴或囊袋投予給個體。於另一具體例中，該 ® DHA及ARA係添加到食品或飮料中食用。於本發明某些具體例中，該DHA及ARA係補充到嬰兒或兒童飮食中以防止或治療貧血。於此具體例中，可把 DH A及ARA添加到嬰兒配方食品或兒童營養品中，然後餵食給嬰兒或兒童。於一具體例中，用於本發明之嬰兒配方食品具有完整的營養且含有適當類型及份量的脂質、醣類、蛋白質、維生素及礦物質。該脂質及脂肪量一般係在約3到約7 g / 1 0 0仟卡間不等。該蛋白質量一般係在約1到約5 g / 1 〇〇 -12- 200810762 (9) 仟卡間不等。該醣類量一般係在約8到約1 2 g/1 00仟卡間不等。蛋白質源可爲任何此技術所用的蛋白質，如無脂牛奶、乳清蛋白質、酪蛋白、大豆蛋白質、水解蛋白質、胺基酸等。醣類源可爲任何此技術所用的醣類，如乳糖、葡萄糖、玉米糖漿固體、麥芽糊精、蔗糖、澱粉、米漿固體等。脂質源可爲任何此技術所用的脂質，如植物油如棕櫚油、菜籽油、玉米油、大豆油、棕櫚液油、椰子油、中等鏈長三甘油酯油、高油酸葵花油、高油酸紅花子油等。方便地，可採用市售的嬰兒配方食品。如，可於 Enfalac、Enfamil®、Enfamil⑧ 早產兒配方食品、 Enfamil® 含鐵配方、Lactofree® 、 Nutramigen® 、 Pregestimil⑧，及 ProSobee⑧（來自 Mead Johnson & Company,艾凡士惟（E vansvi 11 e )，印地安納州，美國）補充適當量的DHA及ARA且用以實施本發明之方法。此外，Enfamil⑧LIPIL® (其含有有效量DHA及ARA )爲市售產品且可用於本發明。本發明方法需要投予DHA及ARA的組合。於此具體例中，該ARA : DHA的重量比爲約1 : 3到約9 : 1。於本發明一具體例中，該比例爲約1 : 2到約4 : 1。於再一具體例中，該比例爲約2 : 3到約2 : 1。於一特定具體例中，該比例爲約2 : 1。於本發明一特定具體例中，該比率爲約 1 : 1 . 5。於本發明特定具體例中，該DHA量爲脂肪酸量的約 0.3 2°/。到0.96%之間。於本發明另一具體例中，該AR A量 -13· 200810762 (10) 爲脂肪酸量的約0.0%到約0.64%之間。因此，於本發明特定具體例中，單獨使用DHA即可治療或防止個體貧血。於本發明具體例中，該DHA的有效量一般爲每天每公斤體重約3 mg到每天每公斤體重約150 mg。於本發明一具體例中，該份量爲每天每公斤體重約6 mg到每天每公斤體重約100 mg。於另一具體例中，該份量爲每天每公斤體重約15 mg到每天每公斤體重約60 mg。 ^ 使用時，本發明具體例中ARA之有效量一般爲每天每公斤體重約5 mg到每天每公斤體重約150 mg。於本發明一具體例中，該份量爲每天每公斤體重約1 0 mg到每天每公斤體重約120 mg不等。於另一具體例中，該份量爲每天每公斤體重約15 mg到每天每公斤體重約90 mg不等。於再一具體例中，該份量爲每天每公斤體重約20 mg到每天每公斤體重約60 mg不等。本發明嬰兒配方食品中DHA量一般爲約2 mg/100仟 ® 卡（kcal )到約100 mg/100仟卡不等。於另一具體例中，該DHA量爲約5 mg/100仟卡到約75 mg/100仟卡。於再 —具體例中，該 DHA量係約 15 mg/100仟卡到約 60 mg/100仟卡不等。使用時，本發明嬰兒配方食品中ARA量一般爲約4 mg/100仟卡（kcal )到約 100 mg/100仟卡不等。於另一具體例中，該ARA量爲約10 mg/100仟卡到約67 mg/100 仟卡。於再一具體例中，該A R A量係約2 0 m g / 1 0 0仟卡到約50 mg/100仟卡不等。於一特定具體例中，該ARA量係 -14- 200810762 (11) 約30 mg/100仟卡到約40 mg/100仟卡不等。用於本發明、已補充含有DHA及ARA之油類的嬰兒配方食品可採用此技術習知的標準技藝製備。舉例來說，可用等量的DHA及ARA替代常用於嬰兒配方食品之油類 (如高油酸葵花油）。該ARA及DHA源可爲此技術任何習知的來源如魚油、單細胞油、蛋黃脂質、腦脂質等。該DHA及ARA可爲天然形式，惟其餘LCPUFA源必需不會對嬰兒產生任何實質的不良影響。另一選擇地，可採用精煉形式的DHA及 ARA。

本發明所用之LCPUFA可含或不含EPA。於特定具體例中，本發明所用LCPUFA含有極少或根本不含二十碳五烯酸（EPA )。舉例來說，於特定具體例中，在此所用之嬰兒配方食品含有低於約20 mg/1 00仟卡EPA。於另一具體例中，在此所用之嬰兒配方食品嬰兒配方食品含有低於約10 mg/100仟卡EPA。於再一具體例中，在此所用之嬰兒配方食品嬰兒配方食品含有低於約5 mg/1 00仟卡EPA 。於一特定具體例中，在此所用之嬰兒配方食品基本上不含 EPA 〇如美國專利第5,374,657號、第5,550，156號及第 5，397,591號之揭示般，DHA及ARA源可爲單細胞油類，該等專利案全部倂此以爲參考。於本發明一具體例中，從嬰兒出生開始到嬰兒一歲左右的飮食內皆補充有DH A及 ARA。於本發明之另一具體 -15- 200810762 (12) 例中，從嬰兒出生開始到嬰兒兩歲左右的飲食內 DHA及ARA。於另一具體例中，個體終身飮食有DHA及ARA。本發明於臨床上可用於健康個有某種形式貧血之個體。於本發明，DHA及ARA的補充可有效治療種類型的貧血，包括但不限於：溶血性貧血、小溶血性貧血、脾臟機能亢進、丙酮酸激酶缺乏、成異常貧血、球狀紅血球症、鐵粒幼紅血球性貧免疫溶血性貧血、鐮狀細胞貧血、地中海貧血、磷酸去氫酶（G6PD ) _缺乏貧血、肝病、腎臟病血、再生不能性貧血，或多種維生素或營養素-如維生素812、：82、：66、（：、八、0、£或^：、鐵、鋅、銅、鈣或蛋白質。如同在實施例中所看到的，本發明之優點 RBC合成、強化胎兒紅血球壽命、提高飲食鐵質之合倂作用，及從而降低個體的鐵質需求。於特定具體例中，本發明提供一種增加個體目的方法，該方法包含投予治療有效量之DHA I 該個體。於另一具體例中，本發明提供一種增加紅素濃度之方法，該方法包含投予治療有效量之 ARA給該個體。於再一具體例中，本發明提供一體之血容比的方法，該方法包含投予治療有效i 及ARA給該個體。於一特定具體例中，本發明促進嬰兒加快紅血球生成之方法，該方法包含投皆補充有內皆補充體以及患或防止多血管病之紅血球生血、自體葡萄糖-6-、惡性貧缺乏症，質、葉酸包括促進倂入RBC 紅血球數乏ARA給個體之血 DHA及種提局個歐之 DHA 提供一種予治療有 -16- 200810762 (13) 效量之DHA及ARA給該嬰兒。此外，本發明還提供一種增加個體吸收鐵質能力之方法，該方法包含投予治療有效量之DHA及ARA給該嬰兒。於任一此等具體例中’該個體可爲任何人類或動物主體。於某些具體例中，該個體爲需要防止及/或治療貧血之主體。該個體可爲具有貧血風險之人類主體。該個體可能是由於基因性易染病體質、生活方式、飮食、遺傳性疾病、維生素或礦物質缺乏、疾病或失調等而有此風險。於本發明特定具體例中，該需要防止及/或治療貧血的個體爲嬰兒。於一特定具體例中，該需要防止及/或治療貧血的個體爲早產兒。本發明亦關於DHA及ARA於製備供防止或治療貧血之藥劑上之用途。於此具體例中，該DHA及ARA可用來製備用於人類或動物任一個體防止或治療貧血之藥劑。舉例來說，該藥劑可用於家畜、畜養動物、動物園之動物、運動用動物或寵物，如狗、馬、貓、牛等。於某些具體例中，該個體爲需要防止及/或治療貧血之個體。如下實施例係在說明本發明不同的具體例。熟悉此技術之人士在考量於此揭示之本發明說明書內容或具體施行之後，即明顯可知包含於在此所述之申請專利範圍內之其他具體例。本案申請人認爲本說明書及實施例應僅視爲舉例用，且本發明之範疇及精神應由實施例後方之申請專利範圍來界定。除非另有說明，否則於此等實施例中之所有百分率都是以重量爲基礎來提供。 -17- (14) 200810762 實施例的一般步驟用以實施本發明及測量結果所用的材料及一般步驟係述於下文：動物測試

動物處理係在位於德州聖安東尼市（San Antonio )之西南生物醫學硏究所（Southwest Foundation for Biomedical Research，SFBR)進行且所用步驟已獲 SFBR 硏究用動物照顧及應用委員會核准。1 4隻妊娠約1 82天之懷孕狒狒同時分娩。狒狒新生兒的特性槪述於表1。表1狒狒新生兒特性動物數目（η) 14 性別 10F，4M 分娩時懷孕日數（d) 182±6 出生體重（g) 860±151 Π週時體重（g) 1519±281 增重（g) 658±190.4 在出生後24小時內把新生兒轉到育嬰室且隨機分配到三個飮食組內。動物被指定採用一種如下配方食品：對照組（C組），未補充DHA及ARA ;補充0.32% DHA及 0.64% ARA ( L 組）及補充〇·96% DHA 及 0.64% ARA ( L3 組）。C組及L組爲市售的人類嬰兒配方食品（分別爲 Enfamil®& Enfamil® LipilTM)，且所有飮食皆提供 I·8 200810762 (15) mg/100 卡鐵質。配方食品係由 Mead-Johnson Nutritionals (艾凡士惟，IN )提供。動物係養育在隔離的新生兒保育器內，等到2週大以後再移到進出管制之育嬰室內個別的不銹鋼籠中。房間溫度係維持在76°F到82°F間，12小時光/暗循環。新生兒生長情形係採用體重測量來評估，每週記錄2 或3次。每隻動物每週還測量頭圍及頭頂到臀部的長度。 ^ 血液係在7 : 00到8 : 30間於無麻醉的情況下在禁食動物的大腿作靜脈穿刺而取得。血液學測量係在第2、4、 8、10及12週齡時以乙烯二胺四醋酸（EDTA )鉀微量採血管收集之全血進行分析。測量及數據分析評估的參數包括白血球（WBC )計數、RBC計數、Hb 濃度、血容比、血球平均容積（MCV )、血球平均血紅素 ® ( MCH )、紅血球平均血紅素濃度（MCHC )，及紅血球分佈軸圖（RDW )。紅血球指數MCV、MCH、MCHC及 RDW爲基於RBC、血紅素及血容比等彼此間的關係而算出的計算値。測量値係使用Coulter MAXM自動載入裝置 (Beckman Coulter, Inc., Fullerton, CA )測量。數據係以平均値±SD表示。血液數據係採用隨機係數迴歸模式評估以測定LCPUFA補充的效果。會測定各個個體各種血液參數的斜率及截距。飲食處理爲固定效應且隨機效應則包括個體、年齢、及年齡/飲食交互作用。迴歸 -19- 200810762 (16) 分析係採用出生後年齢-2週（最初的採樣時間點）來計算截距。使用變異數分析，以基線C組爲共變量來比較各飮食組間的斜率。亦使用迴歸模式評估人體計測數據以檢驗飲食相對時間的系統性影響。系統性分析係使用適用視窗 9· 1 版之 S AS ( S AS Institute，Cary, NC )進行，表示之顯著性 p<〇.〇5。 _ 實施例1 本實施例係在說明補充DHA及ARA來治療或防止狒狒新生兒貧血之結果。使用動物體重、頭圍及頭頂到臀部長度來評估生長情形。統計分析顯示各飲食組間並沒有顯著差異（Ρ>〇· 37 ) 。人體計測資料顯示新生兒生長及生理發展都正常。於第2週到第1 2週得到的血液學數據（平均値±SD ) 係示於表2-5。

表2.補充LCPUFA之足月狒狒新生兒第2週時之臨床血液參考數據（範圍，平均値土SD) 飲食 c組 L組 L3組 WBC(xl03) 4.6-9.6 6.73±0.91 6.67±0.31 7.30±2.52 RBC (xlO6) 4.4-6.04 5.0310.47 5·76±0·36 5.8410.03 血紅素(g/dl) 12·7-16·7 14.1010.94 16·00±0·66 16·33±0·47 血容比(％) 37.2-52.0 42.58+3.69 49.87±2.44 50.53+0.23 MCV (fl) 80.1-89.4 84.8013.80 86·53±1·29 86·53±0·85 MCH (pg) 26.2-28.8 28.05+1.25 27.77±0·55 28·00±0·78 MCHC (g/dl) 31.4-34.1 33.13+0.79 32.0710.21 32.37+0.87 RDW (%) 11.7-14.0 12.33+0.61 13·17±0·21 13.50±0.44 -20- (17) 200810762 表3.補充LCPUFA之足月狒狒新生兒第4週時之臨床血液參考數據（範圍，平均値±80)

飲食 C組 L組 L3組 WBC (xlO3) 6.1-13.4 9.83±2.68 8.70±2.15 8.5310.84 RBC (xlO6) 4.64-5.8 4.94±0.09 5.24±0.04 5.38±0.38 血紅素(g/dl) 12·1-15·2 13.08±0.66 13·73±0·69 14.38±0.74 血容比(％) 36.9-45.9 40.03±2.10 42.70±2.83 45.05±2.75 MCV (fl) 76.4-86.1 81.08±3.27 81.53±1.15 83.8511.73 MCH(pg) 25.1-27.7 26.53±0.96 26.2310.80 26.83±1.03 MCHC (g/dl) 31.3-33.1 32.70±0.22 32.15±0.64 31.95±0.70 RDW (%) 10.8-13.3 11.45±0.47 12.43±0.26 13.05±0.31 表4.補充LCPUFA ；參考數據（範圍之足月狒狒新生兒第8週時之臨床血液，平均値± S D) 飲食 C組 L組 L3組 WBC (xlO3) 4.4-11.4 8.卯 ±2.84 7.98±1.68 9.16±1.35 RBC (xlO6) 4.76-5.89 4.97±0.13 5.1010.39 5.54±0.27 血紅素(g/dl) 11.8-14.8 12.28±0.29 12.63±0.40 13.90±0.55 血容比(％)36·2·47·2 37.96±1.19 39.43±1.62 44.12±1.85 MCV (fl) 73.6-82.1 76.50±1.80 77.53±2.79 79.64±1.76 MCH (pg) 23.3-26.0 24.76±0.42 24.8311.08 25.08±0.53 MCHC (g/dl) 31.2-33.1 32.32+0.57 32.05i0.33 31.52±0.38 RDW (%) 10.9-12.8 11.42±0.45 12.03±0.68 12·14±0·49 -21 - (18) 200810762 表5.補充LCPUFA之足月狒狒新生兒第12週時之臨床血液參考數據（範圍，平均値±SD) 飲食 c組 L組 L3組 WBC (xlO3) 1.2-7.9 4.44±2.01 6.2311.54 5.24±1.36 RBC (xlO6) 4.36-5.46 4.8010.23 4.95±0.50 4.85±0.24 血紅素(g/dl) 10.9-12.8 11.74±0.64 12.1310.76 12.28±0.64 血容比(％)33.8-40.0 36.28+1.16 37.43±2.86 38·06±1·80 MCV (fl) 72.1-81.4 75.68±1.86 75.65±2.44 78.40±1·87 MCH (pg) 23.5-26.0 24.46±0.71 24.53土 0.89 25.30±0.51 MCHC (g/dl) 31-33.1 32.3210.83 32.40±0.52 32.26±0.30 RDW (%) 11-12.7 11·70±0·51 11.68±0.30 12.10±0.53

從多種測量値可以看出補充作用造成的顯著差異（第

1-4圖）〇LCPUFA能升高RBC、血容比、血紅素及RDW 的數據且最高値見於L3組，其次爲L及C飲食組。在第 12週時RBC及血紅素値分別爲5·5±0·5χ106及15.34±1.26 g/dl 到 4·9±0.3χ106 及 12.0 4±0.6 7 g/dl 之範圍。最初血液測量値顯示從出生開始餵食飮食性LCPUFA之顯著性影響

。迴歸方程式顯示出截距値有一致的變化趨勢，L3組及L 組相較於未補充的C組有較高的最初値。於2週齡時，L3組之RBC、血紅素及血容比測量値

最高(5.8±0.03xl06 ， 16.3土0.5 g/dl、 5 0.5 ± 0.2 0/〇 )，而 C 組低了近乎 15°/〇且分別爲 5.0± 0.5x1 06、14.1 ±0.9 g/dl、 42·6±3·7%。DHA及ARA的補充亦會影響血液參數遞減率。紅血球測量値的縱向改變顯著地與未補充的對照組不同且L3組顯示出隨著時間有最顯著的縮減，其次爲L組。所有動物於第1 2週最底點時達到類似値且彼此間RBC、血紅素、血容比及RDW値不再有顯著差異。諸紅血球指 -22- (19) (19)200810762 數MCV及MCH的明顯型式指出L3飮食組有較高値，接著爲L組及C組，有著一致但不顯著的變化趨勢。諸飮食組間MCHC測量値並沒有統計上的差異。結果討論已得到年齡對應之狒狒血液之MCV、MCH及MCHC 等數據特性參考範圍且其類似於目前數據。Havill，L.M. 寺人，Hematology and Blood Biochemistry in Infant Baboons ( Papio Hamadryas )，J. Med. Primatol 32 : 13 1- 1 3 8 ( 2 0 0 3 )。在出生後第一個月期間紅血球測量値降低現象與其他已公開之正常狒狒數據一致。狒狒血液學發生變化係與文獻指出之健康足月嬰兒有同樣的變化趨勢。出生後，人類嬰兒在約2個月大時達到RBC、血紅素及血容比之生理性底點。狒狒的血紅素濃度於3個月大時降低到 12.04:1:0.67 g/dl且最後會在4個月齢時達到最低點。除了物種差異性以外，血液計數値改變將因採集部位不同而有所不同且此等差異可能會因爲採樣部位-人類爲腳後跟穿刺相對於狒狒以靜脈穿刺-不同而被放大。在出生第1天時紅血球指數變動很快速，所以並沒有狒狒脊索或基線血液資訊。我們假設在分娩時動物有常態分佈的測量値且在出生後24小時內即開始餵食實驗性嬰兒配方食品。於2週齡時取得最初血液樣本且發現有補充該營養及無補充該營養之新生兒間血液指數間有顯著差異 -23- (20) (20)200810762 飮食性LCPUFA對血液參數的影響係藉由比較L及 L3組相對於無補充該營養之C組的結果來評估。有補充 DHA及 ARA之動物在出生後第一週維持著顯著較高的 RBC、Hb及血容比値且接著以類似C組的降低速率來減少。此等紅血球參數的迴歸斜率很明顯地一致，L及L 3 組迴歸斜率較陡峭而相反地未補充營養組之斜率較和緩。能發現到DHA濃度較高能明顯改善諸紅血球指標。雖然新生兒血液測量値最後會落到差不多低的數値，不過此等結果顯示：在“嬰兒期生理性貧血”期間，補充LCPUFAs 對狒狒提供有效的保護機制。較高的RBC及血紅素値會促進身體組織的氧化，雖然此等影響在1 2週齢後不再顯著，仍然顯示出飲食性DHA及ARA對出生後紅血球再生作用令人訝異的益處。 RDW爲紅血球大小變異的計算値且迴歸分析偵測出補充該營養的嬰兒相較於對照組有顯著差異。雖然攝取飲食性LCPUFAs之動物的細胞大小變異稍微高出些，不過此等數値係在正常範圍內且RDW値於診斷上的角色也還無法確定。較高的血容比及RBCs値指出全血內紅血球的數目確實增加了且可能是由於新細胞的製造增加了。網狀紅血球（RBC前體）的體積較成熟的紅血球大。如果RBC 是由於細胞的製造增加而增加。那麼新釋出的網狀紅血球將會影響RDW的測量値。然而，血液抹片未經分析，故無法得到有關網狀紅血球的資訊。已知飮食性LCPUFAs會改變動物及人類新生兒之 -24- (21) (21)200810762 RBC及組織脂肪酸特性。紅血球細胞膜之脂質組成佔約 50重量％，主要爲磷脂質的形式。補充該營養之動物有較高紅血球參數的一種可能的解釋爲RBC存活率提高了。成熟紅血球的正常壽命爲約120天且在胎兒時期最後一個月產生之RBCs壽命則爲45到70天。足月嬰兒的紅血球則能存活約60-80天，而早產兒的紅血球壽命則明顯較短。膜結構改變被認爲是造成胎兒RBC存活率較低的原因。正常的新生兒紅血球比起成年人的紅血球來說較不具撓性且較能抵抗胞溶作用，但是對於氧化劑引起的損害較敏感。LCPUFA合倂到紅血球細胞的細胞膜中可能會增加撓性及血管完整性而較能忍受血液循環的壓迫而促進細胞存活。可能是由於血紅素同時發生多種改變造成補充該營養之新生兒的紅血球指數有可見到的改善現象。懷孕期間，胎兒血紅素即開始轉變成成人血紅素且此轉變會一直延續到出生後六個月。調節血紅素-氧氣親和力及紅血球細胞 2,3-二磷甘油酯（DPG )濃度之相關變化則是從出生時開始。胎兒紅血球對氧氣具有較高親和力且對2,3-DPG (其爲一種蛋白質，能與去氧血紅素結合而促進氧氣釋出到身體組織）則有較低親和力。當嬰兒成熟時，胎兒血紅素會減少，紅血球與2,3-DPG的交互作用增加且血紅素-氧氣解離曲線會發生對應的向右偏移現象。肝臟對於醣類及脂質代謝以及鐵質體內恆定極爲重要。補充LCPUFA已顯示能增加狒狒新生兒肝臟DHA濃度 -25- 200810762 (22) 。出生前後期間額外的改變可能會影響營養素的吸收或運輸以及造血系統的成熟。胎兒血液的製造係從肝臟開始，在懷孕最後3個月期間逐漸移轉到骨髓且延續到出生後一週。紅血球生成素（EPO，一種負責延長RBC細胞存活及刺激紅血球系（erythroid )細胞增生之必要生長因子）的製造亦發生在胎兒肝臟。在出生後第1個月內EP0的製造會轉移到腎臟的腎小管周圍細胞。對初生的羊隻而言，該轉移作用係在出生後約40天完成。成人的腎臟會反應缺氧狀態來製造EP0且對於氧氣的變動更敏感。出生時，氧氣張力驟然增加引發數種改變，其包括造血作用、網狀紅血球計數、骨髓紅血球系細胞元件及EP0抑制作用減少。 EP0的製造會持續減少4-6週，直到約10-12週齢時達到成人的濃度爲止。新生兒體內EP0減少較快，且在出生後第1個月期間人類嬰兒血漿內的EP0量最低。羊水及人類母乳內皆含有EP0。已於消化道、內皮細胞、脾臟、肝臟、腎臟、肺、脊索及腦確認出EP0受體且指出EP0還有非-造血之其他角色。肝臟儲存過量鐵質且製造運鐵蛋白（一種與所有循環性血漿鐵質結合之蛋白質）。鐵質體內恆定爲一種複雜且嚴密調節的過程，係由小腸的吸收層次來控制。並沒有鐵質分泌的機制存在且累積儲存是很危險的，因爲會有氧自由基形成。最近發現到的激素，鐵質調節激素（hepcidin )，已指出肝臟對腸之鐵質吸收有調節作用。鐵質調節激 -26- 200810762 (23)

素會抑制鐵質吸收，於鐵質缺乏及造血旺盛期間其製造量會減少。鐵質狀態被認爲涉及EPO的傳訊表現，我們基於脂肪酸與EPO間的交互作用及鐵質可利用性對於補充 LCPUFA之動物體內之早期血液分化提出一種解釋。飲食性DHA及ARA有助於促進EPO從肝臟運輸到腎臟，而適度地提高EPO的量。骨髓、消化道及身體其他部位的EPO 受體感知到循環EPO，從而刺激紅血球製造及腸黏膜成熟〇鐵質吸收變得更有效率且可供造血，此反應藉由紅血球細胞膜及肝臟多種同步變化來完成。鐵質缺乏之紅血球會異常地堅硬且未補充該營養之C組可能會從紅血球分解產物中得到所需鐵質。雖然所有狒狒新生兒係攝取含有同樣份量鐵質之配方食品，不過其吸收主要視消化道成熟度而定。EPO可能會與其他生長因子產生交互作用而促始絨毛腺窩細胞成熟。在發育中的大鼠新生兒腸道中，EPO會增加小腸長度及絨毛表面積。人類硏究已發現餵食補充DHA及ARA之配方食品的嬰兒壞死性腸炎（N E C )較不嚴重且在檢查出生體重極低之嬰兒的追溯硏究中指出當投予重組EPO時會有較低的NEC發生率。在早產兒隨機實驗中以重組EP0 及鐵質治療之早產兒較單獨以EPO治療之嬰兒有較高血容比及網狀紅血球細胞計數以及較少輸血次數。在出生後成長的第一週期間，補充ARA及增加DHA 量對於血液學測量値造成無法預期但一致的變化型式。補 -27- 200810762 (24) 充該營養之動物的紅血球指數改良現象對於早期發育提供生理性優點及加快的造血作用。此等發現捕捉到動態變化期的特殊變化，其爲以往嬰兒補充營養硏究於有限採樣情況下不曾指出的現象。檢測補充LCPUFA及人類嬰兒之認知性功能的類似硏究亦指出其對最初發育有益處，不過在較大年齡時則無影響。此等型式被認爲係“反應某些發育上的梯狀階段，其中於一認知領域中早期的發育優勢可提 9 供其他較高層級領域之優勢。”Colombo，J.等人，Maternal DHA and the Development of Attention in Infancy and Toddlerhood, Child Dev. 57: 1 254- 1 267 ( 2004 )。血液指數提供新生兒快速發育過程的些許資訊且一般相信加快造血作用有凌駕造血作用的持久影響。本發明已評估飲食性LCPUFA對足月狒狒新生兒血液學特性之個體發生學影響。血液學數據類似於已建立之狒狒嬰兒參考範圍且與人類新生兒發育期間記錄到較高成熟 ® 度一致。在出生後第一週期間，補充份量 0.32% DHA/0.64% ARA 及 0.96% DHA/0.64% ARA 之個體較未補充該等營養之對照組分別增加12%及15%之RBC、血紅素及血容比値。補充LCPUFA之嬰兒配方食品能加快造血作用及促進消化道成熟而防止新生兒貧血伴隨之紅血球測量値快速滑落的現象。於此專利說明書所引用之所有參考資料，包括但不限於所有文章、公告、專利、專利申請案、演講、教科書、報告、手稿、小冊、書籍、網貼、雜誌、期刊等，全部倂 -28- 200810762 (25) 入本專利說明書中以爲參考。在此對此等參考資料的討論僅係槪述作者的論點且並非同意任一參考資料爲先前技術。本案申請人保留挑戰引用資料之正確性及恰當性之權利〇雖然本發明之較佳具體例已使用特定術語、裝置及方法來說明，不過此等說明僅係用於展示性目的。所用之字句係描述性字句而非限制性字句。應瞭解地，熟悉此技術之人士可在不悖離本發明之精神或逾越本發明之範疇下進行多種變化及改變，本發明之範疇係以如下所述之申請專利範圍來界定。此外應瞭解地，該等不同具體例之態樣可全部或部份地彼此互換。舉例來說，雖然本發明係例示市售的無菌液體營養補充品之製法，不過還意圖包含其他應用。故而，後附申請專利範圍之精神及範疇不應受限於其內所含較佳版本之說明而已。【圖式簡單說明】爲了促使對本發明有更徹底的暸解，請搭配後附圖式參照以上的說明。第1圖爲顯示補充DHA及ARA對RBC計數之影響的圖；第2圖爲顯示補充DHA及ARA對Hb計數之影響的圖；第3圖爲顯示補充DHA及ARA對血容比之影響的圖 • 29 - 200810762 (26) 第4圖爲顯示補充DHA及ARA對RBC分佈軸圖之影響的圖；.

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Claims

(1) (1)200810762 十、申請專利範圍 1. 一種DHA及ARA之用途，其係用於製造供防止或治療個體貧血之組成物。 2. 如申請專利範圍第1項之用途，其中該貧血係選自下列所組成之群：溶血性貧血、小血管病之溶血性貧血、脾臟機能亢進、丙酮酸激酶缺乏引起之貧血、紅血球生成異常貧血、球狀紅血球症、鐵粒幼紅血球性貧血、自體免疫溶血性貧血、鐮狀細胞貧血、地中海貧血、葡萄糖-6 _ 磷酸去氫酶（G6PD )-缺乏貧血、惡性貧血、再生不能性貧血、肝病或腎臟病引起之貧血，以及各種維生素或營養素-缺乏，如維生素B12、B2、B6、C、A、D、E或K、鐵質、葉酸、鋅、銅、鈣或蛋白質缺乏所引起之貧血。 3. 如申請專利範圍第1項之用途，其中該DHA的用量係每天每公斤體重約3 mg至每天每公斤體重約150 mg 之間。 4. 如申請專利範圍第1項之用途，其中該DH A的用量係每天每公斤體重約15 mg至每天每公斤體重約60 mg 之間。 5. 如申請專利範圍第1項之用途，其中該ARA的用量係每天每公斤體重約5 mg至每天每公斤體重約150 mg 之間。 6. 如申請專利範圍第1項之用途，其中該ARA的用量係每天每公斤體重約20 mg至每天每公斤體重約60 mg 之間。 -31 - 200810762 (2) 7. 如申請專利範圍第1項之用途，其中該 ARA : DHA之重量比爲約1 : 3至約9 : 1。 8. 如申請專利範圍第1項之用途，其中該 AR A : DHA之重量比爲約1 : 1 .5。 9. 如申請專利範圍第1項之用途，其中該個體爲嬰兒。 10. 如申請專利範圍第9項之用途，其中該組成物爲 # 嬰兒配方。

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