TW200487B - - Google Patents

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20048^ Λ 6 _Π6_ 五、發明説明（1 )

發明背I 發明節籌 本發明係有SI命名為L L - E 1 9 0 2 0 ε及L L - E 1 9 0 2 0 ε T之 新穎抗生素，其製備及回收與純化之方法。 先前持运銳明 - 美國專利苐4,705,688號，抗生素誕誌41 (10), 1511-1514 (1988)及抗生素雜誌 42(10), 1489-1493 ( 1 989 )中揭示抗生素LL-E 1 9020 α及LL-E 1 9020 3。抗生 素LL-E19020 α於C-21a上接有一個三糖，而C-23上接有 苯基醋酸酯基團，其结構如下： γ (請先間讀背而之注意事項祚碣窍木頁

抗生素LL-E19020 /3於C-21a上接有一個三糖，而在 C-24上接有苯基醏酸酯基團，其结構如下： 經濟部屮央標準Αβ工消"合作社印製

81.6.10,000張（1!) 本紙張尺度边用中國Η家標毕（CNS)IM規tM210x297公) 200487 五、發明説明（2 ) 色層分析雜誌48 4, 38 1 - 390 ( 1 989 )揭示—種以逆相 HPLC純化法纯化抗生索LL-E19020 α之方法。美國專利第 4,704,276 及 4,968,493 號中亦揭示抗生索 LL-E19020 cx 及LL-E109020 /9可用於增加產肉動物之生長速率及治療 呼吸道疾病、雞癟及壊死性腸炎。 一 抗生素雜誌4 1 (1 0 ) , 1 2 9 3 - 1 2 9 9 ( 1 9 8 8 );抗生素雜誌 41(10), 1300-1315 (19δδ);抗生索雜誌 39(10), 1361-1367 (1986);抗生素雜誌 42(1)， 94-101 U989); 抗菌劑及化學療法雜誌，33(3>, 322-325 (1989);及 1987年十月4-7日舉行之第27屆抗菌劑化學療法内科會議 之計劃及摘要苐995號，第270頁中報告一族相翮之化合物 ，苯基法徽繁（phenelfamycins)。 發明槪專 現已發現命名為LL-E19020 ε及LL-E19020 ε:之新穎， 抗生素。新穎抗生素LL-E1Q020 ε之结構如下： (請先閲誚背而之注意事項再填寫本頁) 裝· 訂' 線. 經濟部屮央橾準局ex工消价合作社印¾.

從上述结構可知，抗生素LL-E 1 9020 £與先前已知之抗 生素LL-E19020 α及LL-E19020 θ不同之g在於 本紙法尺度边用中國困家榀準（CNS)甲4規格（210x297公;《：) 81. 6. 10,000¾ (H) 200487 Λ β Π 6 五、發明説明（3) LL-E19020 ε無接於C-21a之三糖，且缺少接於C-23或 C-24之苯基醋酸酯i圈。此外，其C-23被堪原成伸甲基。 LL-E19020 ε之物化特性如下： 1. 分子量：643 (相應於[M + NaP FABMS = M/Z 666 ) 2. 分子式：CseHssNOe 3. 比旋光度：[a ] y = + 24。（ 1 · 53 MeOH) 4. 紫外線吸收光譜如圖I所示。 紫外線吸收[ΜβΟΗ]λ»·χ(ε): 232 nB (52,000); 290 na (38,000)。 5. 紅外線吸收光譜如圖II所示。 紅外線吸收[ΚΒΓ]νη·χ: 3384, 2973, 2935, 1690, 1639, 16 19, 1548. 145 1 , 1 385 , 12 9 8, 1 15 1 , 10 0 7 c m ~ 1 ° 6. 質子1H NMR[CDC13]:光譜（300 MHz)如國111 所示。 7. 碳1313C HMR [CDC 1 3]:光譜如匾IV所示，有意義之峰 值如下（TMS中之δ值）： (請先閲-^背而之注意事項巩填寫本頁) 裝. 訂- 經濟部屮央榀準而β工消汾合作杜印Μ 176 .1 , 170 .5 , 146 .1 , 140 -4 , 136 .7 , 134 .4 , 132 .1 , 130 .2 , 129 .1 , 128 .8 , 128 .6 , 128 .5 , 128 .2 . 127 .4, 126 .1 , 120 .5 , 98 . 43 , 89 . 20 , 83 . 18 , 77 . 71 , 76 . 69 , 74 . 70 . 72 . 05 , 56 . 06 , 49 . 06 , 41 . 43 . 39 . 84 , 39 . 21 , 39 . 12 , 37 . 42 , 22 . 42 , 13 · 48, 13 . 12 , 11. 87 , 10 . 75 , 10 · 05 ° 8. 高懕液態層析法（HPLC ): 使用醋酸溶液中之乙腈梯度，其滞留時間為12.6分鐘 本紙張尺度边用中S困家標準（CNS) f<l規格（210X297公放) 經濟部中央榀準而β工消赀合作社印Μ 2〇〇挪 Λ (5 _Π_6_五、發明説明（4 )0 9 . 高壓液態層析法（HPLC ): 使在用醋酸溶液中之二噚烷梯度，滯留時間為11,4分 鐘。 、 新穎抗生素LL-E19020 ει之结構與LL-E19020 ε相询 ,但係其C-21差相異構物。LL-E19020 ει之物化特性如 下： 1.分子量：643 ( Μ-熱哦霧（therm〇spray)=Μ/Ζ 643 ) 2 .分子式：C3eH53HOe 3. 紫外埭吸收光譜如圖V所示。 紫外線吸收[MeOH]!/-·〆 232 nin ; 290 ηιη 。 4. 紅外埭吸收光譜如圖VI所示。 紅外線吸收 UBr]v 3400, 2973, 1690, 1640, 1 61 8 , 1 248, 1 1 78, 1 1 49, 1 083 , 1 007 ca~1 ° 5. 質子1H NMR [CDC 1 3]:光譜（300 MHz)如圈 W 所示。 6. 碳1313C NMR [CDC 1 3]光譜如圖VD1所示，有意義之峰值 如下（TMS中之δ值）： (請先閲^背而之注意事項洱填寫本頁) 裝. 訂_ 線. 176 .1 , 170 .5 . 146 .0 , 140 .4 , 136 .6 , 134 .4 . 132 .1 , 130 .1 , 129 .1 . 128 .8 , 128 .5 , 128 .5 , 128 .5 , 127 .4, 126 .0 . 120 .6 , 98 . 44 . 89 . 23 . 83 . 20 , 77 . 71 , 77 . 20 , 74 . 69 , 72. 03 . 56 . 04. 49 . 07 , 41 . 43 , 39 . 86 , 39 . 22 , 39 . 11, 37 . 41 , 22 . 42 , 13 . 45 , 13. 14 , 11. 88 , 10 . 76 , 10 . 0 6° 7. 高壓液態層析法（HPLC): -6 * 本紙张尺度边用中®國家標準（CNS) 規格（210X297公;¢) 81. 6, 10,000張（Π) Λ 6 Η (3 20048? 五、發明説明（5) (請先閲4iFi背而之注意事項孙填寫本頁) 使用醋酸溶液中之乙腈梯度/滯留時間為9.9分鐘。 9. 高懕液態層析法（HPLC): 使在用醋酸溶液中之二鸣烷梯度，滯留時間為9.4分 鐘。 該新穎抗生素LL-E19020 ε及LL-E19020 ε :係在控制 條件下培養利裹鍵徽菌坦沙尼爾斯亞種"NiUL 180 36時，伴 阐LL-E19020 ot及LL-E 19020 Θ之生成而產生。將該新穎 抗生索 LL-E19020 e 及 LL-E19020 £1與1^119020 α 及 LL-E19020 分離，接著Μ高颳液態層析法（HPLC)纯化。 丽式ffi沭 圖I所示係LL-E19020 ε之紫外線吸收光譜。 画I所示係LL-E19020 e之紅外線吸收光譜。 圖HI所示係LL-E19020 ε之筲子核磁共振光譜。 ) 圖IV所示係L L - Ε 1 9 0 2 0 ε之C - 1 3核磁共振光譜。 圖V所示係LL-E19020 ει之紫外線吸收光譜。 圖VI所示係LL-E19020 e ^之紅外線吸收光譜。 圖W所示係LL-E19020 ει之質子核磁共振光譜。 圖VI所示係L L - Ε 1 9 0 2 0 ε :之C - 1 3核磁共振光譜。 經濟部屮央從準而A工消伢合作社印奴 於住旦W實确例說明 抗生素LL-E19020 ε及LL-E19020 ει係於含有可同_化 碳源及氮源之水性營養培養基中需養發酵利嘉鐽嫌菌坦沙 尼爾斯HRRL 1S036菌株而製得。該微生物係保存於狃約珍 珠河市美國氰胺公司Β槩研究部門之培養品種收集處，编 -7 - 本紙張尺度逍用中SH家榀準（CNS)T4規格（210X297公；¢) 81. 6 .〗0,000張（H) 200487

Λ 6 V, C 五、發明説明（6 ) 碼為LL-E19020 。該新穎抗生素之活培養物已寄存於伊利 諾州61604皮爾利市美國展粟部北區研艽中心之専利培養 物收集實驗室中，且已列為永久培養物。該寄存中心將該 S株命名為NRRL 18036。 培養物LL-E19020產生短螺旋狀孢子鍵，為1〇至5〇髑！ 子長，有時孢子鏈較長。該等孢子鐽有_接合之傾向，而在 ISP培養基，如燕麥片及無機鹽-澱粉上形成乾缲黑色團 塊。以電子顯微鏡檢視，該孢子具有光滑表面。該菌株含 有二胺基庚二酸之L-異構物，從而分類為鍵黴菌属。 在碳水化合物利用之ISP試驗中，LL-E1 9020可依靠阿 拉伯糖，果糖，肌酵，甘海糖酵，萤三糖，鼠李糖，蔗糖 及木糖而生長，而不利用纖维素。 下文表I係LL-E 19020與生理與外形與其最相近之利嘉 踺嫌素ISP 5 461,在高登生理系列（Gordon Physiological series )中反應之比較。 因為LL-E19020與ISP 5461有五處不同之特徴（黃喋呤 水解，草酸鹽去羧基作用，使赤癣醇，鼠李糖及/3-甲基 -D-木糖苷形成酸），故被命名為利嘉鐽徽菌之亞種。 (請先閲沐背而之注意事項再填寫木頁) 線. 經濟部+央檁準/-JKC工消合作社印製 8 本紙张尺度逍用中8«家樣準(〇耵）〒4規格(210父297公度） 81. 6. 10,000¾ (11) 20048?

Λ 6 η G 經濟部屮央標準局β工消赀合作杜印¾. 、發明説明（7) I.I.-RR1 90?075 羌 T 利«辅徽菌TSP夕莴替試酴反 m 反應 U.-K190?0 Τ ς 上」.4 6 降解/轉化 - 酪蛋白 + + 黃嘌呤 - + 次黃嘌呤 + + 酪胺酸 + + 腺喋呤 + + 畜牛 澱粉酶 + + 白明膠梅 + + 磷酸酯酶 + + 硝酸鹽堪原酶 - - 尿素_ + + 七葉甘酶 + + 牛再於 5!«氯化钠 + + 水楊酸鹽 - - 溶菌酶原汁 微量 微量 利用 醋酸鹽 + + 苯甲酸鹽 + + 檸揼酸鹽 + + (請先閲請背而之注意事項再磺寫木頁) 裝· 線. 本紙張尺度边用中09國家炫準（CNS) T4規格（210X297公¢) 81. 6 , 10,000張（II) 200487

Λ 6 15 C 五、發明説明（8 ) 表 (鐮） LL-EE19020及利嘉鐽徽M TSP之窵铎試除反摩 反應 TSP S4R1 經濟部屮央桴準灼A工消伢合作社印^ 乳酸鹽 蘋果酸鹽 黏酸鹽 草酸鹽 丙酸鹽 丙酮酸鹽 琥珀酸盥 酒石酸鹽 牛苒溫摩lot：42¾50¾ g牛稱 核糖酵 阿拉伯糖 纖維二糖 糊精 半乳糖酵 赤癣糖酵 果糖 半乳糖 -1 0 - 本紙诋尺度逍用中困困家樣毕（CNS)IM規格（210X297公放） 8U. 10,000 張⑻ (請先閲-背而之注意事項再場寫本頁) 裝· 訂_ 線- 200487

Λ fi Η G 五、發明説明（9 ) 丟 T (缠） l.l._F.R19020及利惠嫌黴菌TSP之离替試除反腱 反應 葡萄糖 甘油 肌酵 乳糖 麥芽糖 甘兹糖醇 甘兹糖 蜜二糖 α -甲基-D-葡萄糖苷 蜜三耱 鼠李糖 水揚苷 山梨糖酵 Μ糖 海藻糖 木耱 召-甲基-D-木糖苷

1.1. -K 1 9Q2Q TSP 54R1 (請先閲請背而之注意事項再填寫本頁) 裝- 訂_ 經濟部屮央標準局β工消f合作社印製 -11- 各紙尺度逸用中aa家標準（CN5)«f4規格（210X25)7公龙） 81. 6. 10.000¾ (H) 經濟部屮央標準^工消"合作社印製 20048? Λ (5 ___Η6__ 五、發明説明f〇) 懕了解，上述特徴僅係說明之用，為製備該新穎抗菌劑 ，本發明並不限於該特定微生物，或不限於完全苻合上述 特徽之微生物。事實上，吾人驥想可包括使用經各種方法 所生成之該微生物突變株，突爱之方法如曝荛於X-輻射， 紫外線輻射，Ν’-甲基-Ν’-硝基-N-亞硝基脹，放線菌唼菌 體等。 一 利嘉鍵嫌菌坦沙尼爾斯亞種NRRL 18 0 36之培養可在多種 液態培養基上進行。可用於製備LL-E19020 e及 LL-E 1 9020 ει之培養基含有一種可同化之碳源，諸如糊 精，蔗糖，麥芽糖，甘油等；一種可同化之氮源，諸如蛋 白質，蛋白質水解產物，多胜肽，胺基酸及玉米糖漿等； 及無機陰離子及陽離子，諸如鉀，納，銨，鈣，硫酸_， 碳酸鹽，磷酸鹽，氛化物等。微董原素，諸如鉬及铜 等係圼培養基中其他成份之雜質方式而添加。發酵榴中之 通氣作用係將無菌空氣強迫通過或通至發酵培養基之表面. 。係使用機械攪拌翼進行發酵榷之進一步攪拌作用。若裔 要，可加入消泡劑，諸如矽酮油。 萃取發酵原汁Μ回收抗生素LL-E19020 ε及LL-E19020 e 1 ° 窗俐一 培埔物之脚備 依據下列配方製備用於使原始接種物生長之棵準培養···基 右旋糖 1.0¾ -12 - (請先閲請背而之注意事項洱塡寫本頁) 本紙張尺度边用中a S家榀準（CNS)甲4規格（210x297公;《：) 81. 6. 10,000張（11) 200487

五、發明説明（11) 糊精 2.0¾ 酵母萃取物 0.5% N Z Amine A - 0.5% 碳酸鈣 0.1¾ 加水至 100.0¾ 注意事項：NZ Amine A為酪蛋白之胰'液消化物，係狃約 偉市Scheffield Chemical公司之註冊商標。 該培養基經滅菌後，取其100毫升（在500毫升燒瓶中 )接種利嘉鏈烫菌坦沙尼爾斯亞種NRRL 18036。然後將該 培養基置入旋轉式振盪器上，在281C下培養48小時，其係 原始接棰物。隨後，K該原始接種物接種在瓶中之10公升 相同滅菌培養基，但另加入0.3XV / V矽酮消泡劑。該培養 物生長48小時後成為第二接種物。而後，以該第二接種物 接種在發酵器中之300公升相同滅菌培養基中。 啻例二 發睹 製備配方如下之發酵物 (請先閲讀背而之注意事項洱堝寫本頁) 裝. 訂· 線. 經濟部+央榀準而只工消价合作社印31 糊 精 7 . 0¾ 右 旋 糖 0 · .5¾ 大 豆 粉 1 .5¾ 玉 米 漿 0 . .5¾ 碳 酸 鈣 0 ' .5¾ 矽 酮 消泡劑 0 . 3% 加 水 至 100 .0¾ -13- 本紙尺度边用中a Η家標準（CNS)甲4規怙（2丨0x297公龙） 81. 6 . 10,000張.（II) ^〇〇4δ'? Λ f) η 6 經濟部屮央桴準灼CX工消#合作社印¾. 五、發明説明（12) 此培養物經滅菌後，以10公升實例一之第二接種物接種 ，终體積為300公升。於30C下進行發酵，無菌空氣流速 為每分鐘每公升糖化膠0.67公升空氣，並使用200 rPm攪 拌92至93小時，此時收集糖化膠。 _ 窖例三 . LL-F.T9Q2Q κ H II.-F：1 fl Q 2 Q ε ,之分 g 及妹 貫例二進行兩次發酵作用所得糖化膠缌體積達503公升 ，以6公升甲苯稀釋之。以濃鹽酸調整pH至4.5 。攪拌中 加入250公升甲酵。持續攪拌兩小時，並連續監控pH值。 將50磅矽藻土加至混合物中，接著攪拌15分鑪。K壓濾槻 過濾混合物，並M75公升水沖洗壓濾機。所收集之埋體積 為697公升。用100公升去離子水Ml至2公升/分鐘之 速率冲洗樹脂，再用1 20公升1 ·. 1 1 N氫氧化納/甲酵以1 至2公升/分種之速率沖洗，接著用100公升去離子水以 1至2公升/分鐘之速率冲洗，接著用120公升1N硫酸以 1至2公升/分鐘之逑率冲洗，接著用100公升去離子水 Ml至2公升/分鐘之速率冲洗而製備45公升HP - 20管柱 。撿査溶析物之pH值，可能有需要用額外之去離子水冲洗 K調整p Η至6至7之間。再用1 〇 〇公升甲酵以1-至2公升 /分鐘之速率冲洗管柱.接著用100公升去離子水沖洗。 再用108公升丙酮及12公升水姐成之溶液以1至2公升一 / 分鐘之速率進一步冲洗管柱，繼之用100公升丙酮以1至 2公升/分鐘之速率沖洗·最後用公升去離子水以1 至2公升/分鐘之速率沖洗。自壓濾楗所得之6 9 7公升液 -14 - 本紙張尺度逍用中BIS家楳準（CNS)T 4規格（210X29〖公tf) 81. 6. 10,000張⑻ (請先閱請背而之注意事項洱填寫本頁) 装- 線- 2004B7 Λ fi Β (; 經濟部屮央捣準而CX工消伢合作社印製 五、發明説明（l·3) 體K1公升/分鐘之速率加至備妥之HP - 20管柱中。再用 120公升去離子水K1公升/分鐘之速率冲洗管柱，接著 用6 4公升去離子水及1 6公升丙_姐成之溶液Μ 1公升/分 鐘之速率沖洗。收集四個20公升之溶析部份.命名為F1-F4。再用48公升去離子水及32公升丙酮姐成之溶液Μ0. 5 至1公升/分鐘之速率沖洗管柱，得四個2 0公升之溶析部 份，收集之，標示為F5-F8。再用32公升去離子水及48公 升丙酮姐成之溶液以0.5至1公升/分鐘之速率沖洗管柱 ,得四個20公升之收集部份，命名為F9-F12 。再用-16公 升水及64公升丙酮姐成之溶液Μ 0.5至1公升/分鐘之速 率冲洗管柱，得四個20公升之收集部份，命名為F13-F16。再用丙酮Κ0.5至1公升/分鐘之速率冲洗管柱， 得四個20公升收集部份，命名為F17 - F20。濃縮收集部份 16,冷凍乾燥之，得36.8克之物質，以50-52Χ二嗶烷之 U醋酸溶液溶析之，而於Cia逆相管（5.0 X 25公分）中 ,Μ高壓液態層析法純化。收集到13個部份。蒸發第5部 份，得121毫克1^-〖1902〇6。用30%乙腈之13!醣酸溶液 溶析部份2 ,在C18逆相管（5.0 X 25公分）中，Μ高壓 液態層析法進一步純化，得19.5毫克1^41902〇£1。 分枳桦窝1Β液裤匾枳法（HPLC) 以兩種不同之分析性高壓液態層析法分析LL-E19020 ε 及^^成份。與LL-E19020 α及召相較，其滯留時間顯示 於下表： 滯留時間（分鐘 ） -15 - (請先間讀背而之注意事項洱填寫本頁) 裝· 訂_ 本紙尺度逍用中國囷家«準（CNS)IM規格（210X297公放） 81. 6. 10,000¾ (II) 20048?

Λ fi Γ> C 五、發明説明（14) 經濟部+央桴準/ί.;Α工消赀合作社印5i 成 份 系统h 系 统 Β LL -E19020 α 22.7 23 . 5 LL -E19020 β 27.6 26.7 LL -E19020 ε 12.6 1 1.4 LL -E19020 ε 1 9.9 9.4 - A HPLC系统： 具 有 護 管之 A 1 It e c h adsorb 0 S p h e r e HS 5 u Cl β管柱（ 4 . 6 X 250 毫 米 ) * 以乙腈 之 1%醋 酸溶 液 梯度 溶 析。起始 姐 份 為 40 % 乙 腈 t 線 性地於 25分 鐘 内增 加 至70 1 % ，保持70 % 五 分 鐘。 流 速 為 1 . 0毫升 / 分 鐮 〇 · B HPLC系统： 具 有 m 管之 A 1 It e c h adsorb 0 S p h e r e HS 5 u Cl 8管柱（ 4 . 6 X 250 牽 米 ) » 以二啤 焼 之 U醋酸 溶 液梯 度 溶析。起 始 姐 份 為55 % 二 晖 院 ,線性 地 於 25分鐘 内 增加 至 7 0¾.並 保 持 70 %五 分 鐘 ο 流 速為1 . 0 毫 升 /分 鐘 苜 例 四 LL- E19020 e 及 LL- R 1 90?0 ε 1 夕沃鵲外抗菌活性 K 標 準瓊脂稀 釋 培 養 法， 針 對 多 種 革蘭氏 陽 性 菌 及陰 性 菌， 測 定 LL-E19020 e 及LL ,-E 1 9020 e 1 之 活 體 外 抗菌 活 性° 將 含有55ί羊 血 及 以 兩倍 增 加 m 度 之 LL-E19020 ε及 LL-E19020 e ι 牟 爾 - 希頓 瓊 脂 ( M u e 1 1 e r - Hi n t .ο η a g a Γ )倒. 人培養皿中 。以史提爾複製器將瓌脂表面接種1 至5 X 10Λ 個菌落形 成 單 位 之钿 菌 0 記 錄 經18小 時 培 養 後可 抑 制一 種 菌株生長 之 抗 生 素最 低 m 度 * 為該菌 株 之 最 低抑 制 濃度。 -16 - 本紙51c尺度边用中as家楳準（CNS)T4規格（2丨0x297公处） 81. β. 10,00051 (II) (請先閲請背而之注意事項再塡寫本頁) 裝· 訂 線. 200487 Λ 6 η 6 五、發明説明（15) 璁胞級釋倍希·»备低抑制澹麻方法 1. 在牟爾-希頓原汁中製備範園介於2560至0. 15»克/ 毫升之連績兩倍藥物稀釋液及溶液對照姐。 2. 將2奄升槩物稀釋液（i〇X )加至加有含5.6¾去纖维 蛋白羊血之18毫升牟爾-#頓瓊脂之滅菌螺旋蓋瓶*P 。在含有5S：羊血之瓊脂中，藥物之最终濃度為256至 〇. 015微克/奄升。 3. 將每一测試微生物之一些分難菌落筚種在5毫升胰蛋 白》大豆原汁或腦心臓灌注原汁中。在351C下振邇培 養物五小時。 4. 在牟爾-希顇原汁中稀釋每一培養物1 :50倍（ ΙΟ^·7 ),使用史提爾複製器塗在瑱脂板上。對照姐 瓊脂板懕最後接種，以確保活性有機物在鍪儷搡作中 存活。靜置經接種之瓊脂板，直至接種斑被完全吸收 Ο 5. 轉化瓊脂板，在35C下於二氧化碳中培養18小時。 6. 記錄出現完全抑制作用時之抗菌劑最低澹度為最低抑 制濃度（MIC )。细小、幾乎不可見之霧狀或單一菌 落不記。 (請先閲1?背而之注意事項$塥寫本頁) 裝- 線· 經濟部中央楛準/!-Jcx工消作合作社印5i -17 - 本紙張尺度逍用中8 Η家楳平（CNS) «ΡΊ規格（210X297公没) 200487 Λ G Π 6 五、發明説明（1令 其结果如下： 經濟部屮央榀準而β工消作合作杜印3i I.I.-K1 9020 e及I.I.-R19020 e , 之活轉夕卜杭莆沃株 暑飪柚制灌麽（微克/豪并 ） 有櫧艏 l.l. -R19020 ε # ε e ε l 1 .金黃葡萄球菌MEMC 87-69 >128 . - - 2 .金黃葡萄球菌ROSE (MP) >128 8 16 3 .金黄葡萄球菌I V E S 6-542 >128 - - 4.金黃葡萄球菌IVES 5-160 >128 4 8 5 .金黃葡萄球菌IVES 5-396 >128 4 δ 6.金黃葡萄球菌VGH ； 84-47 >128 8 8 7.金黃葡萄球菌CMC ' 83-131 >128 16 32 8 .金黃葡萄球菌SMITH (MP) >128 4 4 9 .金黃®萄球菌ATCC 25923 >128 8 32 1〇l金黃葡萄球菌ATCC 2921 3 >128 16 16 11·溶血葡萄球菌AVAH 88-1 >128 32 32 溶血葡萄球菌AVAH 88-3 >128 16 16 iaK匍萄球菌 82-86 >128 - - W.表皮葡萄球菌 IVES 455 >128 4 8 15·表皮葡萄球菌 ATCC 12228 >128 - - 1& 腸球菌 spp. ARUM 87-41 >128 32 64 17.臈球菌 s p p . C Η Β Μ 88-60 >128 64 64 la 腸球菌 spp. WRVA 88-33 >128 64 128 19·腸球菌 spp. UCI 85-30 >128 32 64 一 18 ** 本紙张尺度边用中IS囤家楳iMCNS) 規格（210X297公:¢) (請先閲沭背而之注意事項巩填寫本頁) 裝. 線· 200 A G I? 6 經濟部屮央標準而β工消价合作社印虹 五、發明説明（I7) 2α 腸 球. 菌 S ΡΡ ' .VGH ; 84. -69 >128 32 64 21 腸 球 菌 S Ρ Ρ • CMC 83 -120 >128 32 128 22 化 膿 性 鍵 菌 AMCH 88 -84 4 .12 .5 2a 化 膿 性 鍵 球: 菌 AMCH 88- -86 8 .25 .5 24 化 牖 性 鍵 球 菌 C203 (ΜΡ) - 1 2 25. 肺 炎 鐽 球 菌 CHBM 88 -70 8 - - 一 2a 肺 炎 鍵 球 菌 CHBM 88 -75 4 - - 27. 肺 炎 鍵 球 菌 TEX 85- 2 16 .5 2 2a 孢 桿 菌 DAVIES >128 64 128 2a 肺 炎 克 雷 伯 氏菌NEMC87 -271 >128 >128 >128 30. 大 腸 桿 菌 ATCC 25922 >128 >128 >128 3L 大 腸 桿 菌 ATCC 35218 >128 >128 >128 32 大 腸 桿 菌 D -21 >128 - - 3a 大 腸 桿 菌 D -22 >128 - - 34. 飼 綠 假 單 胞 菌12- 4- 4 (ΜΡ) - >128 >128 從 上 述 之 活 體外數 據 可 知 » LL -Ε19020 ε 及 LL -Ε19020 e 1 為 抗 菌 劑 〇 抗 生 素 LL-E19020 ε 及 LL -Ε19020 ε 1之 實 用 性在 於 其 抗 菌 活 性 0 例 如，該 抗 菌 劑 可 用 於抑 制 佃菌 慼 染 ,做 為 局 部 抗 菌 劑 及 做 為實驗 室 之 一 般 消 毒劑 〇 除其 抗 菌 活性 以 外 * » 該 等 化 合 物 可做為 禽 類 抗 球 蟲 劑及 生 長促 進 劑 與驅 腸 蟲 m ί 〇 用 於 治 療 丨上 .本發 明 化 合 物 可 以習 用 之蕖 學 姐 合物 型 式 投 :予 •而 1用 於 ，所 裔之用 途 上 〇 該 姐 合物 可 經調 製 成 適於 Ρ 服 -19 本紙5fc尺度边用中國國家4ί準（CNS)甲4規怙（2丨0X297公犮） (請先閱請背而之注意事項"碼寫本頁) 裝. 線_ Λ G Η 6 200487 五、發明説明（l 8 ) ，非烴腸道姶蕖或局部給藥。活性成份可與非毒性蕖學上 可接受載劑混合，該載劑之型式可依投藥之劑型，即口服 ，非經臈道給藥或局部用蕖而定。若該化合物係用於上述 之用途，其可與一種Μ上之蕖學上可接受載劑混合，例如 溶劑，稀釋劑等，而Μ如錠劑，除囊劑，可分敗粉劑，或 含有約0.05至5«懸浮劑之懸浮液劑，或含有約1〇至50¾糖 之糖漿劑，及含有約2 0至5 0 %乙酵之酏_之型式口服給藥 ，或K滅菌注射溶液或含有在等張介霣中約〇 . 〇 5至5 S!懸浮 劑之懋浮液之型式非经腸道給藥。該等酱蕖製劑可含有約 0.05至90%之活性成份，通常係介於約5-60重量％，及載 劑。 經由任何局部給藥途徑，應每日投與0.2-100.0奄克/ 公斤體重之有效量化合物1至5次，包括但不限於口眼給 藥，非烴^道給藥（包括皮下注射，靜脈注射，肌肉注射. ，胸腔内注射，灌注法），噴S吸入法.直腸給蕖。該給 槩係Μ含有習用非毒性槩學上可接受載劑，佐劑及載體之 劑型投予。應了解，對於任何特定之病患，特定之劑最及 用蕖之頻率係依多種因素而定，包括所使用特定化合物之 活性，新陳代謝穩定性及該化合物之作用期，年龄，體重 ，健康狀況，性別，歆食，給藥型式及時間，排泄速率， 藥物併用狀況，特定病症之嚴重性及接受治療個體。一 該活性化合物可口眼，及經靜脈，肌肉或皮下注射。依 活性成份之性質及所箱之特定給藥型式堪擇適合之固態載 Η,包括教粉，乳糖，磷酸二鈣.微晶纖維素，蔗糖及高 -20 - 本紙5fc尺度遴用中國國家楳準（CNS) Τ4規格（210x297公:¢) ..............< 乂 ....裝.....叮----線----(.( (請先閲^背而之注意事項巩蜞寫木頁) 經濟部屮央標準·而R工消伢合作社印¾. 200487 經濟部屮央標準而只工消费合作社印奴 五、發明説明（19) 嶺土，及液態載體，包括滅菌水，聚乙二酵，非離子性界 面活性劑及食用油，諸如玉米油，花生油及芝麻油。可含 有習用於製備藥學姐合物之佐劑，番料，著色劑，防腐劑 及抗氧化劑，例如維他命Ε,抗壊血酸，ΒΗΤ及ΒΗΑ ° 就製備及投藥方便之観點，較佳之藥學姐合物為固態姐 合物，特別是錠劑及硬膠囊及液體填充膠囊。較佳係口服 投予化合物。 活性化合物亦可非經腸道給槩或腹腔内注射。該等活性 化合物之游離鐮或藥理上可接受鹽之溶液或懸浮液，可在 水中適當地與界面活性劑混合而製得，諸如羥丙基纖維素 。亦可製備在甘油，液態聚乙二酵及其混合物中之分散劑 。於一般之儲存及使用狀況下，該等製劑含有一種防腐劑 Μ防止微生物之生長。 用於注射用之製鬭型態包括滅菌水溶液或分敗液，及供 使用時製成滅菌注射溶液或分散液之滅菌粉末。無論如何 ，製劑之型態須經滅菌，且須充液至易於注射之程度。在 製備及儲存條件下，其必須®定而可防止諸如细菌及徽菌 之微生物污染。載劑可為含水，乙酵，多酵（如甘油，丙 二酵及液態聚乙二醇），其適當混合物及植物油之溶劑或 分敗介霣。 21 - 本紙尺度边用中a Β家橒準（CNS) Τ4規格（210x297公犮) (請先閲-背而之注意事項巩蜞寫本頁)

Claims (1)

1. 經濟邶中央搮準扃印來

   六、 申請專利範® 1 —種抗生素LL-E19020 e ，其 (a) 结搆如下

   (b) (C) (d) (e) (f) (g) (h) 2 分子置：643 (相應於[M + Na]+ FABMS = M/Z 666 ), 比旋光度：[ot]2eD = + 24。（ 1.53 MeOH), 特激性紫外線吸收光譜如圃I所示， 特戡性紅外線吸收光譜如醒E所示， 特徴性霣子核磁共振光譜如圈Μ所示， 特戡性碳-13核磁共振光繒如圈IV所示， 使用醋酸溶液中之乙腈梯度，其特撖性HPLC滯留時間 為12.6分鐘，且 (i) 使在用醸酸溶液中之二啤烷梯度，其特徴性HPLC滯留 時間為11.4分鐘。 —種製備根據申謫専利範圈第1項之抗生素LL-E19 020 e之 方法，其包括在含有可同化碳海，氮源及無機鹽之液態培 養基中，使利熹鏈《菌坦沙尼爾斯亞種（Stc.£.£.l.Qay-c.^s. lvdinus ssp. t.an^nnius )NRRL 18036或其突變株進·ΓΓ 箱氣發酵，至該培養基產生寅質抗生素活性，而後回收抗 生索 LL-E19020 ε。 (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) 甲 4(210X297 公尨） A7 B7 C7 D7 20048? 六、申請專利範® a —種製備根據申謫専利範圈第1項之抗生素LL-E19020 e 之方法，其包括使含有可同化碳源，氮涯及無機鹽且經利 嘉鐽撇菌坦沙尼爾斯亞種NRRL 18036或其突變株接種之液 態培餐基進行需氧發酵，在25至32¾之溫度下維持該發酵 物約80-200小時，收集糖化膠並萃取該抗生素。 4 —種對抗鏈球菌（streptococcus)之抗生素藥姐合物， 其含有抗菌量之根據申請専利範圔第1項之抗生素 LL-E19020 e 及藥學上可接受載劑。 5·—種抗生素LL-E19020e α，其 结構如下 (請先聞讀背面之注意本項再填寫本頁) •装·

   •打· (b) 分子量：643 ( Μ·热噴霧ms = M/Z ), (〇 特微性紫外線吸收光譜如圔V所示， (d) 特戡性紅外線吸收光繒如圃VI所示， (e) 特微性質子核磁共振光繒如圖VI所示， (f) 特徴性碳-13核磁共振光.譜如圈VIB所示， <g) 使用醋酸溶硖中之乙腩梯度，其特徴性HPLC滞留時間 為9.9分鏡，且 (h) 使在用酺酸溶液中之二嗶烷梯度，其特微性HPLC滯留 -2 - 甲 4(210X297 公廣） .線. 經濟部中央揉準局印製 A7 B7 C7 D7 7. 8. 200481 六'申請專利範面 時間為9.4分鐘。 —棰製備根據申誚専利範園第5項之抗生索LL-E19020 e : 之方法，其包括在含有可同化碳源，氮源及無機鹽之液態 培養基中使利嘉鍵緻菌坦沙尼爾斯亞種NRRL 18036或其突 變株進行箱氧發酵，至該培養基產生寅質抗生素活性，而 後回收抗生素LL-E19020 ε :。 一種製備根據申請専利範圃第5項之抗生素LL-El 9 020.e : 之方法，其包括使含有可同化碳源，氮源及無機鹽且經利 嘉鍵撤菌坦沙尼爾斯亞種NRRL 18036或其突變株接種之液 態培養基進行需氧發酵，在25至32¾之溫度下維持該發酵 物約80-200小時，收集糖化膠並萃取該抗生素。 一種對抗鐽球菌之抗生素《蕖姐合物，其含有抗菌悬之根 據申請專利範圍第5項之抗生素LL-E19020 ε a及藥學上可 接受之載劑。 (請先聞讀背面之注意事項再填鸾本页) •打. .綵· 經濟部中央搮準局印製 3 甲 4(210X 297公濩）