TR2022020291A2 - Kondrosi̇t i̇çeren gamma i̇rradi̇ye havuzlanmiş pihti taşiyici i̇skele - Google Patents

Abstract

Buluş, başlıca diz, ayak bileği ve kalça olmak üzere tüm eklemlerdeki kıkırdak hasarına yönelik açık ya da kapalı eklem cerrahileri, artroskopik spor cerrahisi ameliyatları, kıkırdak kaybı ile giden rinoplasti ameliyatları olmak üzere kıkırdak tamiri gerektiren her durumda kullanıma yönelik kondroplastik olarak adlandırılan kondrosit içeren gamma irradiye havuzlanmış pıhtı taşıyıcı iskele ve elde edilme yöntemi ile ilgilidir.

Description

TARIFNAME KONDROSIT IÇEREN GAMMA IRRADIYE HAVUZLANMIS PIHTI TASIYICI ISKELE Teknik Alan Bulus, baslica diz, ayak bilegi ve kalça olmak üzere tüm eklemlerdeki kikirdak hasarina yönelik açik ya da kapali eklem cerrahileri, artroskopik spor cerrahisi ameliyatlari, kikirdak kaybi ile giden rinoplasti ameliyatlari olmak üzere kikirdak tamiri gerektiren her durumda kullanima yönelik kondroplastik olarak adlandirilan kondrosit içeren gamma irradiye havuzlanmis pihti tasiyici iskele ve elde edilme yöntemi ile ilgilidir. Teknigin Bilinen Durumu Kondrosit naklini içeren cerrahilerdeki mevcut teknikte kullanilan uygulamalarin basinda; mozaikplasti/osteokondral otogreft; osteokondral allogreft trasplantasyonu, ACI (otolog kondrosit implantasyonu); MACI (matrisle iliskili kondrosit implantasyonu); sentetik, dogal ya da hibrit iskeleler gelmektedir. Mozaikplasti/Osteokondral Otogreft: Hastanin daha az yük tasiyan saglikli kikirdak bölgesinden tek ya da çok sayida, ayarlanabilen çap ve derinlikte silindir seklinde kemik içerikli eklem kikirdagi parçalari çikarilir. Hasarli kikirdak bölgesine ayni çap ve derinlikte silindir delikler açildiktan sonra saglam bölgeden hazirlanan osteokondral silindirik tikaçlar defektli alana impakte edilir. Fakat uygulamada metottaki eksiklikler ve teknik problemlerle karsilasilmaktadir. Öncelikle hasarli kikirdak alani büyük oldugunda donör saha morbiditesi artar ve bu teknigin 3-4 cm2 üzerindeki lezyonlarda kullanimini kisitlar. Greft impaksiyonu sonrasi iyilesme döneminde tespit gücü giderek azalir ve ilgili uzuva yük verilmesi uzun süre ertelenir. Hasarli kikirdak alanini taklit edecek sekilde ayni çapta ve ayni yüzey seklinde kikirdak transferi yapmak teknik olarak zordur. Anatomik olarak kikirdak yüzeyi keskin açilanmasi olan talus omuz Iezyonlari gibi kikirdak defektlerinde kullanimlari sinirlidir. Artroskopik uygulanmasi teknik olarak mümkün olsa da zor ve zahmetlidir. Osteokondral Allogreft Trasplantasyonu: Bu yöntemde taze ve/veya donmus kikirdak yüzeyli allogreftten hastanin kikirdak hasarina uygun boyutta greft hazirlanir ve defekt olan bölgeye impakte edilerek ya da greftin büyüklügüne göre vidalarla tespit edilir. Bu uygulamada da eksiklikler ve teknik problemler ile karsilasilmaktadir. Taze allogreft temini Iimitlidir ve kisa süre içerisinde kullanilmalidir. Donmus allogreftlerde ise saklama süresi uzun olsa da kondrosit canliligi ciddi oranda düsüktür. Donör doku oldukça maliyetlidir. Canli allogreft dokusu potansiyel olarak enfeksiyon riski tasir. ACI (Otolog kondrosit implantasyonu): Bu metotta ilk operasyonda hastanin daha az yük tasiyan saglikli kikirdak bölgesinden kikirdak doku örnekleri alinir. Üretim tesisi laboratuvarinda kondrosit üretimi gerçeklestirilir. Ikinci bir operasyonla kikirdak hasari bölgesi hazirlandiktan sonra hasar alani üzerine dikilen periostal bir yama altina kondrositIer enjekte edilir. Bu yöntemin eksiklikleri ve teknik problemleri de mevcuttur. Örnegin hasarli kikirdak alani çevresinde saglam kikirdak sinirlara ihtiyaç vardir. Açik cerrahi gerekmektedir. Iki kez cerrahi islem yapilmasi gerekmektedir. Kikirdak maturasyonu olusana kadar uzun süre eklem yük vermekten korunmaIidir. MACI (Matrisle iliskili kondrosit implantasyonu): Bu metotta kikirdak hasari olan hastadan hekim önce saglikli bölgeden biyopsi almakta, bu biyopsileri üretim tesisine transfer etmekte, üretim tesisinde kondrosit üretimi tamamlandiktan sonra kollajen iskele (scaffold) membranlar üzerine ekim yapilmakta ve hekime uygulamak üzere yollanmaktadir. Hekim ise ikinci cerrahi operasyon ile hasarli bölgeye ulasmakta hasarli bölgeyi temizledikten sonra membrani hasarli bölgenin enine boyuna ve çevresine göre keserek sekil vermekte ve hasarli bölgeye yerlestirerek ameliyati tamamlamaktadir. Bu modelde kullanilan tasiyici iskele hayvan (domuz, sigir, fare, deniz canlilari) kaynakli ksenojenik kollajen membranlardir. Söz konusu tasiyici membran olarak kullanilan bu iskelelerin 4 temel dezavantaji vardir. Öncelikle bu membranlar pahali ve yurt disi bagimliligi olan ürünlerdir. Bu membranlar ksenojenik olmalari nedeniyle yabanci doku reaksiyon riskine sahiptir. Kollajen iskelelerin ya da membranlarin kondrojenik etkileri kisitlidir. Iki kez cerrahi islem yapilmasi gerekmektedir ve nihai islemin artroskopik uygulamasi mümkün olsa da teknik olarak zorlayicidir. Bu membranlara ancak 2 boyutlu sekil verilebilmektedir (Hasarli bölgenin en ve boyutuna göre sekil verilir. 3. boyut daima membranin kalinligi ile sabittir). Sentetik, Dogal ya da Hibrit Iskeleler: Bu yöntemde 3 boyutlu olarak istenen doku sekline üretilebilen iskeleler mevcuttur. Ksenojenik kollajen, hyaluronik asit, chitosan gibi organik materyaller ya da polietilen glikol, polikaprolakton, poliglikolik asit gibi sentetik materyaller ya da bunlarin hibrit varyasyonlaridir. Örnegin EP185856281 Avrupa patentinde ilk katmani kolajen, ikinci katmani kolajen ve HAidan meydana gelen doku iskelesi tanimlanmistir. Yine TR2010/11221 nolu ulusal patentte kikirdak ve/veya osteokondral kemik dokusu hasarlarinin tedavisinde kullanilan biyobozunur, biyouyumlu, en az üç katman içermekte, vertikal olarak olusturulmus en az bir kanal içeren gözenekli yapida bir doku iskelesi açiklanmistir. Fakat bu tip iskeIeIerde kondrosit bulunmamaktadir. Kondrojenik özellikleri kisitIidir. Bu organik materyaller hizlica hidrolize olmaktadir ve mekanik stabiliteleri düsüktür. Ksenojenik yabanci doku reaksiyonu riskleri vardir. Sentetik materyallerin bozunum süreleri degisken olabilmekte, iskelede kiriIganIik qusturabiImektedir. Sentetik iskeIeIer istenen biyolojik çevreyi olusturmamakta, bozunum sirasinda toksik materyal açiga çikarabilmekte ve lokal doku reaksiyonuna, inflamatuvar yanitlara yol açabilmektedirler. 3 boyutlu yazicilar ile istenen defekte göre sekillendirilebilse de cerrahi öncesi ön hazirlik ve modelleme gerektirmektedir. Cerrahi sirasinda, hasarli alana göre tekrar sekillendirilebilmeleri ve artroskopik uygulamalari sinirIidir. Rinoplasti uygulamalarinda ise kondrosit tasiyici bir iskele mevcut olmayip; cerrah genellikle hastanin diger bölgelerinden aldigi kikirdak dokularini hasarli bölgeye yerlestirir. Bu islem saglikli bölgede (genellikle kostalar) hasar olustururken; implante edilen kikirdaklar doku beslenme sorunu nedeniyle kisa sürede parçalanarak, istenilen etkiyi qusturmazIar. Rinoplastide üretilmis kondrositlerin iIgiIi bölgeye enjeksiyonu ise tasiyici bir iskele olmamasi nedeniyle dagilmakta ve o bölgede kalmamaktadir. Sonuç olarak, yukarida anlatilan olumsuzluklardan dolayi ve mevcut çözümlerin konu hakkindaki yetersizligi nedeniyle ilgili teknik alanda bir gelistirme yapilmasi gerekli kilinmistir. Bulusun Amaci Bulus, mevcut durumlardan esinlenerek qusturqup yukarida belirtilen olumsuzluklari çözmeyi amaçlamaktadir. Bulusun öncelikli amaci baslica diz, ayak bilegi ve kalça olmak üzere tüm eklemlerdeki kikirdak hasarina yönelik açik ya da kapali eklem cerrahiIeri, artroskopik spor cerrahisi ameliyatlari, kikirdak kaybi ile giden rinopIasti ameliyatlari olmak üzere kikirdak tamiri gerektiren her durumda kullanima yönelik kondroplastik olarak adlandirilan, gamma irradiye havuzlanmis kriyopresipitat, Kondrosit, kalsiyum, traneksamik asit karisimindan mamul pihti tasiyici iskele ve üretim yöntemini ortaya koymaktir. Bulusun bir amaci, kolay ulasilabilir ve ucuz bir iskele ürünü ortaya koymaktir. Bulus konusu ürünün ana hammadde kaynagi kan bankasindan temin edilen dondurulmus plazma oldugu için (kriyopresipitat) hammadde ulasimi kolay ve ucuzdur. Bu ham madde kolaylikla Kizilayldan elde edilebilecek kriyopresipitatlarin havuzlanmasini takiben 25 kGylde gama isinlama ile steril hale getirilmesi sonucu olusturulan plazma pihtilasma proteinleridir. Dolayisiyla ksenojenik degildir. Bulusun bir amaci, macun yapisinda olmasi sayesinde Artroskopik uygulamasi ve 3 boyutlu sekillendirmesi kolay ve pratik bir ürün ortaya koymaktir. Hekim bu macunu kolaylikla artroskopi kanüllerinden temizlenmis hasarli bölgeye ulastirilabilir ve yerinde sekillendirebilir. Bulusun bir amaci, her tür sekil verilebildigi ve ürün istenilen boyutlara üretilebildigi için kikirdak tamiri gerektiren tüm cerrahilerde hasarli alan boyutlarindan bagimsiz olarak kullanilabilir bir iskele ürünü ortaya koymaktir. Bulusun bir amaci, Rinoplastide rekonstrüksiyonda kullanilabilir bir iskele ürünü ortaya koymaktir. Rinoplastide ise hekim cerrahi esnasinda burnu düzeltmek için çikardigi kikirdaklari ileride kullanmak üzere laboratuvara üretim için yollamasi halinde cerrahi sonrasi gelebilecek rekonstrüksiyon ameliyatlarinda kullanilmak üzere bu kondrositleri söz konusu olan pihti matrikse ürettirip; kondrosit tasiyan bu iskeleyi cerrahi esnasinda istedigi sekli vererek rekonstrüksiyonu saglayabilir. Yukarida anlatilan amaçlari yerine getirmek üzere bulus, kikirdak tamiri gerektiren her durumda kullanima yönelik kondroplastik olarak adlandirilan Kondrosit pihti tasiyici iskele olup en temel halinde kriyopresipitat veya plazma ürününe ek olarak kondrosit içermektedir. Tercih edilen yapilanmalar ayrica kalsiyum ve/veya traneksamik asit içermektedir. Bulus konusu kondroplastik üretim yöntemi en temel halinde asagidaki islem adimlarini içermektedir: (i) Kan bankasindan temin edilen taze donmus plazmalardan kriyopresipitatlarin hazirlanmasi; (ii) Hazirlanan kriyopresipitatlarin bir araya getirilerek havuzlanmasi; (iii) Havuzlanan kriyopresipitatlarin gama isinlama ile sterilize edilmesi; (iv) Sterilize kriyopresipitat havuzuna kondrosit, kalsiyum, traneksamik asit karistirilarak inkübe edilmesi ile kondroplastik olusumunun saglanmasi, (v) Olusan kondroplastigin solüsyonla yikanmasi, (vi) Kondroplastik ürünün paketlenerek operasyon alanina transfer edilmesi. Bulusun yapisal ve karakteristik özellikleri ve tüm avantajlari asagida verilen sekiller ve bu sekillere atifIar yapilmak suretiyle yazilan detayli açiklama sayesinde daha net olarak anlasilacaktir ve bu nedenle degerlendirmenin de bu sekiller ve detayli açiklama göz önüne alinarak yapilmasi gerekmektedir. Bulusun Anlasilmasina Yardimci Olacak Sekiller Sekil 1, bulusa konu olan kondroplastik üretim süreçlerinin sematik gösterimidir. a: Kriyopresipitat havuzu; b: (-20 C) saklama; c: Gamma irradiasyon; d: kondrosit; e: havuzlanmis kriyopresipitat, Kondrosit, kalsiyum, traneksamik asit karisimi; f: inkübasyon; g: Kondroplastik olusumu; h: macun iskele; j: kondroplastik; k: sekillendirme; l: hasarIi bölge impIantasyonu. Bulusun Detayli Açiklamasi Bu detayli açiklamada, bulusa konu olan kondroplastik ve tercih edilen yapilanmalari, sadece konunun daha iyi anlasilmasina yönelik olarak açiklanmaktadir. Bulus kikirdak tamiri gerektiren her durumda kuIIanima yönelik kondroplastik olarak adlandirilan Kondrosit pihti tasiyici iskele olup en temel halinde gamma irradiye havuzlanmis kriyopresipitat, Kondrosit, kalsiyum, traneksamik asit karisimi içermektedir. Bulus konusu kondroplastik üretim yöntemi en temel halinde asagidaki islem adimlarini içermektedir: (i) Kan bankasindan temin edilen taze donmus plazmalardan kriyopresipitatlarin hazirlanmasi; (ii) Hazirlanan kriyopresipitatlarin bir araya getirilerek havuzlanmasi; (iii) Havuzlanan kriyopresipitatlarin gama isinlama ile sterilize edilmesi; (iv) Sterilize kriyopresipitat havuzuna kondrosit, kalsiyum, traneksamik asit karistirilarak inkübe edilmesi ile kondroplastik olusumunun saglanmasi, (v) Olusan kondroplastigin solüsyonla yikanmasi, (vi) Kondroplastik ürünün paketlenerek operasyon alanina transfer edilmesi. Bulus kapsaminda (i) islem adiminda; -18 "Cide taze donmus plazmalar 1-6 "Cide eritilerek hizli santrifüjle süpernatantin ayrilmasi ile kriyopresipitatlar elde edilir. Bu ürünler -20 "Cide 1 yil saklanabilir. FVIII, FXIII, fibrinojen ve fibronektin içerir. Bir ünite konsantrasyonda von-Willebrand faktör, 50- 60 mg fibronektin ve taze donmus plazmadaki konsantrasyonun bir buçuk-dört kati kadar faktör XIII içerir. (ii) islem adiminda havuzlanmis kriyopresipitatlar üründen ürüne içerik farkliliklarinin/degiskenliklerinin önüne geçmektedir. (iii) islem adiminda 25 kGylde gama isinlama ile yapilan sterilizasyon Prion hastaligi dahil tüm viral ve non-viral enfeksiyöz ajanlara yönelik bulastan bagimsiz ve güvenli ürün hazirlanmasini saglamaktadir. (iv) islem adimi kondroplastik temel üretim sürecidir. Karisimin içinde bulunan kriyohavuz pihtilasma faktörlerini saglarken içine ilave edilen kalsiyum ve kondrosit pihtilasmanin tetigini çekecektir. Buradaki kondrositler, saglam dokudan elde edilen kondrositlerin hücre kültüründe otolog serum ile çogaltilmasi sonucu elde edilmistir. Kalsiyum bu asamada reaksiyonun baslamasi için gerekli oldugu gibi reaksiyonun baslamasi için ihtiyaç duyulan doku (tissue) faktörleri kondrositler tarafindan saglanmis olacaktir. Ortama konan traneksamik asit ise olusan kondroplastigin erimeden uzun süre stabil kalmasini saglamak için ilave edilir. Uygulamada agirlikça tercihen 0/086,Ilk Kriyopresipitat havuzuna %8.6 Kalsiyum, %0.4 Traneksamik asit ve mide yaklasik 7x106 hücre içeren %5*lik kondrosit süspansiyonu olacak sekilde karisim olusturulur ve 37 CCide 20 dakika inkübasyona tabi tutulur. (v) nolu islem adiminda olusan kondroplastik PBS solüsyonu ile tercihen 3 kez yikanmaktadir. Bu süreç fazla kalsiyum ve traneksamik asidin ortamdan uzaklastirilmasi için gereklidir. PBS Fosfat tamponlu salin olup, biyolojik arastirmalarda yaygin olarak kullanilan bir tampon solüsyondur. Disodyum hidrojen fosfat, sodyum klorür ve bazi formülasyonlarda potasyum klorür ve potasyum dihidrojen fosfat içeren su bazli bir tuz çözeltisidir. Tampon, sabit bir pH'in korunmasina yardimci olur. (vi) nolu islem adiminda yikanan kondroplastik ürününün operasyon alanina transferi esnasinda ürünün canliliginin ve kalitesinin korunmasi için glikoz free ringer laktat içinde paketlenmesi tercih edilmektedir. Paketlenen ürün 4-8 C derecede operasyon alanina 24 saat içinde transfer edilmelidir. Bulus kapsaminda ortaya konan yöntemde, tasiyici iskele olarak kullanilan ve bulusçularin plastik adini verdigi pihti tasiyici iskelenin hammaddesi insan plazmasidir. Bu hammadde kolaylikla kan bankalarindan elde edilebilecek kriyopresipitatlarin havuzlanmasini takiben 25 kGylde gama isinlama ile steril hale getirilmesi sonucu olusturulan plazma pihtilasma proteinleridir. Dolayisiyla ksenojenik degildir. Ana kaynagi Kan bankasi plazmasi oldugu için (kriyopresipitat) hammadde ulasimi kolay ve ucuzdur. Kondrosit üretimini takiben insan kaynakli kriyopresipitat iskele kondrositlerle karistirilip, içine kalsiyum ve traneksamik asit ilavesi sonrasi 20 dk içinde pihtilasarak bir macun haline dönüsür. Bu macun iskele içerisinde kondrosit canliligini korurken ayni zamanda sekil verilebilen bir özelliktedir. Bu özellik ona 2 avantaj kazandirir: - Hekim bu macunu kolaylikla artroskopi kanüllerinden temizlenmis hasarli bölgeye ulastirilabilir. Artroskopik uygulamasi kolay ve pratiktir. - Artroskopi ile hasarli bölgeye ulasildiktan sonra hasarli bölgenin içerisinde manipüle edilerek sekil almasi saglanir. Hasarin boyut ve derinligine göre sekil aldikça yeni ürün eklenerek defekt anatomik olarak doldurulabilir. Yani artroskopik uygulamaya uygun oldugu gibi 3 boyutlu sekillendirmesi de son derece basittir. Rinoplastide ise hekim cerrahi esnasinda burnu düzeltmek için çikardigi kikirdaklari ileride kullanmak üzere laboratuvara üretim için yollamasi halinde cerrahi sonrasi gelebilecek rekonstrüksiyon ameliyatlarinda kullanilmak üzere bu kondrositleri söz konusu olan pihti matrikse ürettirip; kondrosit tasiyan bu iskeleyi cerrahi esnasinda istedigi sekli vererek rekonstrüksiyonu saglayabilir. Bu metodun avantaji: - Ilk burun cerrahisi esnasinda çikartilan kikirdaklar kullanildigi için yeni bir kikirdak dokusu alani cerrahisine ihtiyaç yoktur. - Üretilmis kondroplastik vasitasiyla kondrosit içeren iskele hasarli bölgeye yerlestirildiginde ekstra beslenme ihtiyaci göstermeden gerekli kondrosit implantasyonu gerçeklestirilmis olacaktir. Ayrica bu ürüne her tür sekil verilebildigi ve ürün istenilen boyutlara üretilebildigi için kikirdak tamiri gerektiren tüm cerrahilerde hasarli alan boyutlarindan bagimsiz olarak kullanilabilir. TR TR TR

Claims (1)

1.ISTEMLER . Kikirdak tamiri gerektiren her durumda kullanima yönelik pihti tasiyici iskele olup, özelligi; kriyopresipitat veya plazma ürününe ek olarak kondrosit içermesidir. Istem 1,e uygun pihti tasiyici iskele olup, özelligi; ayrica kalsiyum ve/veya traneksamik asit içermesidir. Kikirdak tamiri gerektiren her durumda kullanima yönelik pihti tasiyici iskele Kan bankasindan temin edilen taze donmus plazmalardan kriyopresipitatlarin hazirlanmasi; Hazirlanan kriyopresipitatlarin biraraya getirilerek havuzlanmasi; Havuzlanan kriyopresipitatlarin gama isinlama ile sterilize edilmesi; Sterilize kriyopresipitat havuzuna kondrosit, kalsiyum, traneksamik asit karistirilarak inkübe edilmesi ile kondroplastik olusumunun saglanmasi, Islem adimlarini içermesidir. Istem 3*e uygun bir üretim yöntemi olup, özelligi; ayrica Olusan kondroplastigin solüsyonla yikanmasi, Kondroplastik ürünün paketlenerek operasyon alanina transfer edilmesi Islem adimlarini içermesidir. Istem 3*e uygun bir üretim yöntemi olup, özelligi; (i) islem adiminda; taze donmus plazmalarin 1-6 “Cide eritilerek hizli santrifüjle süpernatanin ayrilmasi kriyopresipitatlarin ile elde edilmesidir. Istem 3*e uygun bir üretim yöntemi olup, özelligi; (iii) islem adiminda 25 kGylde gama isinlama ile yapilanmasidir. Istem 3*e uygun bir üretim yöntemi olup, özelligi; (iv) islem adiminda 0/086,Ilk Kriyopresipitat havuzuna mllde yaklasik 7x106 hücre içeren %5*lik kondrosit süspansiyonu ile beraber %8.6 Kalsiyum ve %0.4 Traneksamik asit olacak sekilde karisim olusturulmasi ve 37 “Cide 20 dakika inkübe edilmesidir. . Istem 4,e uygun bir üretim yöntemi olup, özelligi; (v) nolu islem adiminda olusan kondroplastik PBS solüsyonu ile tercihen 3 kez yikanmasidir. Istem 4,e uygun bir üretim yöntemi olup, özelligi; (vi)nolu islem adiminda yikanan kondroplastik ürününün glikoz free ringer laktat içinde paketlenmesi ve 4-8 C derecede operasyon alanina 24 saat içinde transfer edilmesidir. TR TR TR