TR201815301T4 - Antimikrobiyal peptit ve bunun kullanımları. - Google Patents

Abstract

Buluş antimikrobiyal peptitlerle, peptitleri içeren farmasötik bileşimlerle ve bunların mikrobiyal, bakteriyel, fungal, viral ve parazitik enfeksiyonun tedavisinde veya engellenmesinde kullanımlarıyla ilgilidir.

Description

TARIFNAME ANTIMIKROBIYAL PEPTIT VE BUNUN KULLANIMLARI Bulus, biyokimya ve tip alaniyla ilgilidir. Daha spesifik olarak bulus, antimikrobiyal peptitler alaniyla ve bakteriyel, viral, fungal ve parazitik enfeksiyonlarin etkisiz hale getirilmesiyle ilgilidir.

Antimikrobiyal Peptitler (AMP`ler) doganin tamaminda organizmalarin savunma sisteminin bir ana bilesenidir ve istilaci patojenlerden koruma sunar. Gram-pozitif` ve Gram-negatif bakterilere, mantarlara, parazitlere ve virüslere karsi kuvvetli antimikrobiyal aktivite gösterirler. Büyük oranda mikrobiyal hücre membranlarinin yapisini veya fonksiyonunu bozarak görev yapan AMP”ler ne kadar küçük (çogunlukla yaklasik 15-40 amino asit) olursa, tekli tanimli moleküler yapilari hedeflemezler. Bu nedenle, konvansiyonel antibiyotiklerin aksine, bakterilerin metabolik aktivitesine bakmaksizin etkilidirler. Defensinler ve katelisidin (LL-37) gibi insan AMPileri lökositlerde mevcuttur ve deri ve mukozal yüzeylerdeki çesitli epiteller tarafindan salgilanirlar. Antimikrobiyal aktivitelerine ek olarak, AMP"ler, enflamasyonda, bagisiklik aktivasyonunda ve yara iyilesmesinde önemli efektör moleküllerdir. AMPSIer dizi ve sekonder yapi açisindan oldukça çesitlidir, ancak bazi ortak özellikleri paylasirlar. Çogunlukla katyonik, amfipatiktirler ve mikrop öldürücü etkilerini, bakteriyel membran bütünlügünü bozarak gösterirler. AMPalerin hedef mikroplarin anyonik membran yüzeyleriyle etkilesimi, membran geçirimliligine, hücre lizisine ve ölümüne yol açar. Sitoplazmik membranin birçok AMPlnin ana hedefi oldugu genel olarak kabul edilirken, membranda peptit birikimi artan geçirimlilige ve bariyer fonksiyonunun kaybina neden olur ve bu da Sitoplazmik bilesenlerin sizintisiyla ve hücre ölümüyle sonuçlanir.

Konvansiyonel antibiyotikler bakterileri, hücre duvari üzerindeki bir epitop gibi hedeflere veya bakteriyel protein ve DNA veya RNA sentezindeki hedeflere baglanarak öldürür. Patojenik bakteriler, antibiyotik hedefleri modifiye ederek 02116-P-0001 daha hizli direnç gelistirir, böylece antibiyotikler bu hedeflere artik baglanamaz.

AMP”lerin konvansiyonel antibiyotiklere göre temel bir avantaji, direncin hizlica gelismemesidir. Bunun bir nedeni, konvansiyonel antibiyotikler gibi tekli tanimli moleküler yapilari (epitoplari) hedeflememesi, ancak mikroorganizmalari öldüren hücre membrani üzerinde görev yapmasidir. AMP`ler özellikle, biyofilm-iliskili enfeksiyonlar (BAI) olarak adlandirilan, çogunlukla bakteriler olan ancak mantarlar da olan mikroorganizmalarin yüzeye-ekli hücresel yigintilari olan enfeksiyonlarin etkisiz hale getirilmesinde faydalidir. Biyofilmler, konvansiyonel antibiyotiklere bakteriyel dirence önemli ölçüde katkida bulunur. Biyofilmler insanlardaki, kistik fibroz, kalici tibbi cihazlarin kolonizasyonu ve dis plagi olusumu ve yaralar gibi çesitli patolojik durumlarla iliskilidir. Biyofilmle iliskili enfeksiyonun konvansiyonel antibiyotiklerle etkisiz hale getirilmesi ayrica, proenflamatuar mikrobiyal bilesiklerin salinmasinin uyarilmasi, biyofilmin yetersiz nüfuzu ve gerekli sistemik verilisin sonucu olarak kanda inaktivasyon veya bozulma dahil olmak üzere bir dizi nedenden dolayi yetersizdir. AMP°lerin konvansiyonel bakterilere göre diger avantajlarina öldürmenin hizli baslangici, çevredeki kalinti antibiyotiklerle ilgili mevcut endiseyi azaltan sekilde biyoçözünür olduklari ve eslik eden anti-enIlamatuar aktiviteye sahip olduklari gerçegi dahildir.

Yüzlerce dogal ve sentetik peptitten olusan potansiyel havuz içerisinde, nispeten çok azi klinik denemelere girmistir. Örnekler magainin peptitid, omiganan, OP- 145, noveksatin ve litiksardir. Yalnizca iki AMP, daptomisin ve DPK-060 olarak da bilinen OP-145 için, evre 2°ye kadar klinik denemeler gerçeklestirilmistir. OP-145, endojen insan katelisidin antimikrobiyal peptit LL- 37°den türetilen 24 amino asitli bir peptittir. OP-l45, kronik ortakulak iltihabinin topikal tedavisi için bir endotoksin-nötrlestirici antimikrobiyal peptit olarak gelistirilmistir. Bir anti-mikrobiyal peptit olmasina ek olarak, OP-l45 LPS°yi nötrlestirir. 02116-P-0001 OP-145 dahil olmak üzere halihazirda bilinen AMP°ler halen birkaç kusura sahiptir. Örnegin, P. aerugi'nosa, E. faecali's, Proteus mirabili's, Streptococcus pyogenes ve S. aureus gibi çesitli bakterilerin tamami, katelisidin LL-37 gibi birçok antimikrobiyal peptidi çözen proteazlar salgilar. Böylelikle, proteaza dirençli antimikrobiyal peptitler terapötik bir bakis açisindan avantajlidir. Dahasi, potansiyel litik etkinin yani sira AMP°nin bakteriyel ancak ayrica memeli membranlara karsi diger özellikleri nedeniyle, yeni peptitlerin tasarlanmasindaki zorluklardan biri, enfekte hastanin hücresel membranlarina kiyasla bakteriyel veya fungal hücreler gibi mikroorganizmalara karsi yüksek özgüllüge, yani, yüksek bir terapötik endekse (minimal hemolitik konsantrasyon/minimal antimikrobiyal aktivite; MHC/MEC) sahip AMPslerin gelistirilmesine dayalidir. OP-145 dahil olmak üzere bilinen AMP`lerin bir diger önemli dezavantaji, aktivitesinin plazma konsantrasyonlarinin varligindan güçlü bir sekilde etkilenmesidir. Örnegin, OP- konsantrasyonu) LC99.9 yaklasik 200 uM°dir. Bu, sistemik olarak verilen AMPiler için belirli bir dezavantajdir.

AMP71erin, plazma bilesenlerine özgül olmayan baglanma nedeniyle enzimatik degradasyonu veya peptit mevcut-olmayisi gibi plazma bilesenleri tarafindan plazma benzeri peptit inaktivasyonu varliginda kayda deger ölçüde daha düsük aktivitesinden birçok mekanizma sorumlu olabilir. Plazma bilesenlerine dirençli AMP,ler yalnizca potansiyel sistemik terapötik ajan olduklari için degil, örnegin enfekte yaralarin ve tibbi implantla ilgili enfeksiyon ve enflamasyonun tedavisi için de önemlidir. Özellikle derin doku enfeksiyonlarinda, proteolitik dirençli olmayan AMP°lerin bir inaktivasyonuna yol açabilen sekilde yüksek proteolitik aktivite mevcut olabilir. Kronik yaralardan gelen yara sivisi asiri miktarda proteaza sahiptir ve implante edilen materyaller hizlica konagin sivilarindan gelen plazma bilesenleriyle kaplanir. Hem kronik yaralar hem tibbi implantlar siklikla mikrobiyal biyofilmlerle iliskilidir. Özellikle, biyotilm iliskili enfeksiyonlarin tedavisinde antibiyotikler çogu zaman sistemik olarak verilir ve bu nedenle kanda ve çevredeki dokularda enzimatik olarak çözünmeye yatkindir. Böylelikle, plazma 02116-P-0001 bilesenlerine hassasiyet nedeniyle, OP-l45 dahil olmak üzere birçok AMP*nin uygulanabilirligi, örnegin topikal uygulamalarla sinirli olacaktir. Bu nedenle, özellikle potansiyel sistemik terapötik ajanlar ve/veya örnegin kronik yaralarla ve tibbi implantlarla iliskili biyot'ilm enfeksiyonlarina karsi etkili terapötik ajan olarak, plazma bilesenlerine dirençli alternatif AMP°ler için bariz bir ihtiyaç Mevcut bulusun bir amaci, konvansiyonel antibiyotiklerin kusurlarinin üstesinden gelen ve özellikle plazma bilesenlerine dirençli olduklari için bilinen antimikrobiyal peptitlere göre gelismis özelliklere sahip yeni kuvvetli antimikrobiyal peptitler saglamaktir. Bulusun bir diger amaci, insanlar gibi memelilere verildiginde alerjenik-olmayan, patojenik mikroorganizmalara karsi yüksek özgüllüge sahip ve biyoiilm iliskili enfeksiyonlardaki patojenik mikroorganizmalara karsi yüksek antimikrobiyal aktiviteye sahip antimikrobiyal peptitler saglamaktir. Bulusun peptitleri ve polipeptitleri, hem biyofilmlerdeki mikroorganizmalara hem biyoIilmlerde organize olmamis mikroorganizmalara karsi kuvvetli, genis spektrumlu antimikrobiyal aktivite uygular, hizli antimikrobiyal aktivitelere sahiptir ve terapötik, profilaktik veya tanisal ajanlar olarak kullanilabilir. Bulusun peptitleri ve polipeptitleri, sinirli etkililik süresi ve sinirli uygulanabilirlik sorunlarinin üstesinden gelmek için tasarlanmaktadir çünkü antimikrobiyal aktivitelerini kanda, plazmada ve serumda ve bunlarin bilesenlerinin varliginda muhafaza ederler.

Mevcut bulusun sahipleri, LKKLYKRLVKILKRWWRYLKRPVR dizisine dayali P139-P163 peptitlerinin Gram-pozitif bakterilerin (örnegin Staphylococcus aureus ve Staphylococcus epidermi'dis) ve Gram-negatif bakterilerin (örnegin Pseudomonas aerugi'nosa) yani sira mantarlara (Candida albi'cans ve Aspergillus niger) karsi oldukça etkili oldugunu bulmustur, bakiniz Tablolar 2-4 ve Sekil 1 ve 2. Peptitler böylelikle genis spektrumlu antimikrobiyal aktivite sunar. Tüm peptitler, PBS”te OP-145°inkine benzer olan düsük IC99.9 degerleriyle kanitlandigi üzere çok kuvvetlidir. Önemli bir sekilde, tüm peptitlerin plazma 02116-P-0001 varliginda OP-145”ten daha etkili oldugu bulunmustur. Peptitlerin birçogu plazma varliginda OP-145”ten 16-kata kadar daha yüksek aktiviteyle önemli bir sekilde daha kuvvetli olmustur (Tablolar 2-4). Tablo 2°de ortaya konuldugu üzere, OP- plazma varliginda sahiptir. P140, P141, artis) ve P149 ile P155 sahiptir. karsi etkili oldugu ortaya konulmustur (bakiniz Tablolar 2-4). Ek olarak, P145, P148 ve P159, S. aureus biyofilm olusumunu önleyebilir (bakiniz Sekil 3). Üstelik, P ve lipopolisakkaritleri (LPS) nötrlediklerinden, böylelikle proenflamatuar yaniti indirgediklerinden kanitlanabilir immünomodülatör aktiviteye sahiptir (Tablo 12).

Ayrica, en az 16 amino aside sahip daha kisa P148 varyantlarin PBS içnde P1487inkine benzer bir antimikrobiyal aktiviteye sahip oldugu da bulunmustur (bakiniz Tablo 5). Önemli bir sekilde, plazma varliginda antimikrobiyel aktivite ayrica bu daha kisa varyantlarda da muhafaza edilmektedir. P1485in 14 amino aside sahip daha kisa bir varyanti P148*e kiyasla indirgenmis antimikrobiyel aktiviteye sahiptir, ancak halen plazma varliginda OP-145,ten 5-kat daha kuvvetlidir.

Dolayisila, mevcut bulusa göre bir polipeptit, hem plazma varliginda hem yoklugunda mikro-organizmalara karsi yüksek antimikrobiyal aktiviteye sahiptir ve LPS ve LTA nötrlestirme aktivitesiyle kanitlandigi üzere optimal anti- entlamatuar (mikrobiyal bilesik-nötrlestirme) aktiviteyle biyofilmlerde bulunur veya bulunmaz. 02116-P-0001 Bulusun antimikrobiyal peptitlerinin biyofilm enfeksiyonlari üzerindeki etkisi katlidir: biyofilm olusumun engelleyecek ve var olan biyofilmleri dagitacaktir, salim alanindaki ve çevresindeki bakterileri, mantarlari veya diger mikroplari öldürecektir ve lipoteikoik asit (LTA), peptidoglikan (PG) ve lipopolisakkaritler (LPS) gibi pro-enflamatuar mikrobiyal endotoksinleri nötrlestirerek ve fagositik ve mikrop öldürücü aktivitelerini güçlendirmek için makrofajlari aktive ederek bagisiklik yanitlarini planlayacaktir. Bu bagisiklik kontrolü, implantlari çevreleyen dokunun patojenler için yeni bir nis haline gelmesini engellemek için gereklidir.

Dolayisiyla, mevcut bulus, bir LKKLYKRLVKILKRWWRYLKRPVR amino asit dizisi içeren veya söz konusu amino asit dizisinin bir varyantini içeren bir izole veya rekombinan polipeptit saglamakta olup, söz konusu polipeptit antimikrobiyal, antibakteriyel, antiviral, antifungal ve/veya antiparazitik aktiviteye sahiptir ve %50 plazma varliginda en az bir mikrobiyal türe karsi, ayni kosullar altinda saptandiginda OP- l 45 ` in (asetil- yüksek bir in vitro antimikrobiyal, antibakteriyel, antiviral, antifungal ve/veya antiparazitik aktiviteye sahiptir, söz konusu varyant dizisi en az 14 amino aside sahiptir ve opsiyonel olarak asagidakilere sahiptir: - asagidaki amino asit ikamelerinin 1 ila 8”i: 0 L, V, F, A, 1, W, Y veya Q grubundan seçilen bir veya daha fazla amino asidin söz konusu gruptan seçilen bir baska amino asitle ikamesi; 0 R ve/veya Kinin A veya pozitiI` yüklü bir amino asitle ikamesi; o bir amino asidin karsilik gelen bir D-amino asitle bir veya daha fazla ikamesi; bir amino asidin karsilik gelen bir dogal-olmayan amino asitle bir 02116-P-0001 veya daha fazla ikamesi olup söz konusu karsilik gelen dogal-olmayan amino asit, referans dogal amino asidin bir türevidir ve/veya . söz konusu amino asit dizisinden en az 14 ardisik amino asidin bir geriye- evirtik dizisi olup, burada söz konusu varyant dizisi, opsiyonel olarak yukarida tanimlandigi sekildeki amino asit ikamelerinin birine veya daha fazlasina sahip en az bir KRLVKILKRWWRYL amino asit dizisine sahiptir.

Burada tanimlandigi üzere amino asit dizilerine veya bunlarin varyantlarinda amino asitler tek-harfli sembollerle simgelenir. Bu tek-harfli semboller ve üç- harfli semboller teknikte uzinan kisi tarafindan iyi bilinmektedir ve asagidaki anlamlara sahiptir: A (Ala) alanindir, C (Cys) sisteindir, D (Asp) aspartik asittir, E (Glu) glutamik asittir, F (Phe) fenilalanindir, G (Gly) glisindir, H (His) histidindir, l (Ile) izolösindir, K (Lys) lisindir, L (Leu) lösindir, M (Met) metionindir, N (Asn) asparajindir, P (Pro) prolindir, Q (Gln) glutamindir, R (Arg) arjinindir, S (Ser) serindir, T (Thr) treonindir, V (Val) valindir, W (Trp) triptofandir, Y (Tyr) tirosindir. Burada kullanildigi üzere, “pozitif yüklü bir amino asit”, fizyolojik pI-Ista, yani 7,3-7,47lük bir pHita bir pozitif yüke sahip bir amino asidi ifade etmektedir.

Bulusun bir polipeptidi, antimikrobiyal aktiviteye, tercihen antibakteriyel, antiviral ve/Veya antifungal aktiviteye, daha tercihen antibakteriyel ve/Veya antifungal aktiviteye sahiptir. Ayrica, bulusun bir polipeptidi tercihen hem antimikrobiyal hem anti-enflamatuar aktiviteye sahiptir. Burada kullanildigi sekliyle bir polipeptidin “antimikrobiyal aktivitesi” terimi, en az bir mikrobun, örnegin bir bakterinin, bir virüsün ve/veya bir mantarin büyümesinin veya proliferasyonunun etkisiz hale getirilinesini ifade etmektedir ve büyümenin veya proliferasyonunun önlenmesinin, indirgenmesinin veya engellenmesinin yani sira mikrobun öldürülmesini de içerir. Bir mikrop, mikroskopik olan, yani, çogunluk! çiplak insan gözüyle görülemeyecek kadar küçük olan bir organizmadir.

Mikroplar çok çesitlidirr bakterileri, virüsleri, mantarlari, arkeleri, protozoanlari 02116-P-0001 ve mikroskopik algleri içerir. Benzer sekilde, burada kullanildigi sekliyle bir mantarin ve bir parazitin büyümesinin veya proliferasyonunun etkisiz hale getirilmesini ifade etmektedir ve bunlarin büyümesinin veya proliferasyonunun önlenmesinin, indirgenmesinin veya engellenmesinin yani sira bunlarin öldürülmesini de içerir. Antimikrobiyal aktivite örnegin önleyici konsantrasyon (lC) veya ölümcül konsantrasyon (LC) olarak ifade edilir. Burada kullanildigi sekliyle ICx veya LCx, 2 saatten sonra mikroplarin en az %x7ini öldüren en düsük peptit konsantrasyonunu ifade etmektedir. Örnegin, IC99,9 ve LC99,9 mikroplarin 2%99,9”unu öldüren en düsük peptit konsantrasyonunu ifade etmektedir.

Antimikrobiyal, antibakteriyel, antiviral, antifungal ve antiparazitik aktivite, teknikte bilinen yöntemlerle ölçülebilir.

Bu yöntemlerin biri bu basvurunun Örneklerinde ayrintili olarak açiklanmaktadir ve antimikrobiyal aktivitenin belirlenmesi için bir in vitro tayin içerir. Bu yöntemde mikroplar, Örnegin bakteriler veya mantarlar, örnegin 1-2 saat süreyle, bulusa göre bir polipeptidin farkli konsantrasyonlariyla inkübe edilir, daha sonra mikrop-polipeptit karisimi, ayni sekilde daha da islenmis polipeptitle inkübe edilmemis olan mikroplarin bir numunesine kiyasla sagkalan ve/veya öldürülen mikroplarin sayisinin belirlenmesi için uygun bir kültür vasati içinde veya üzerinde inkübe edilir.

Bulusun bir polipeptidinin antiviral aktivitesinin tayin edilinesi için virüs plaka tayinleri kullanilabilir. Kisaca, bir virüs inokülümü, permisif bir hücre tek katmaninin enfeksiyonu öncesinde polipeptide maruz birakilir. Standart bir araliktan sonra, hücresel ekstraktlardaki Virüs titresi, taze hücre tek katmanlarinin enfekte edilmesiyle ve hücre tek katmani üzerindeki etkilerinin ölçülmesiyle bu ekstraktlarin birden fazla seyreltisi kullanilarak belirlenir. 02116-P-0001 Antiparazitik aktivitenin tayin edilmesi için, bulusun bir polipeptidi ve bir parazit standart bir zaman araligi süresince inkübe edilir. Daha sonra, parazitlerin metabolik aktivitesi, örnegin bir MTT tayiniyle dogrudan analiz edilebilir veya parazitler memeli hücrelerine aktarilir ve inkübasyondan sonra bu hücrelerdeki parazit çogalmasi mikroskopiyle tayin edilir.

Burada kullanildigi sekliyle bir polipeptidin “anti-enflamatuar aktivitesi”, mikroplarla, örnegin bakterilerle, virüslerle, mantarlarla ve/veya parazitlerle enfekte olmus bir süjede bir enflamatuar yanitin önlenmesinis indirgenmesini veya engellenmesini ifade etmektedir. Bulusun polipeptitlerinin anti-enflamatuar aktivitesi, lipoteikoik asit (LTA), peptidoglikan (PG) ve/veya lipopolisakkaritler (LPS) gibi pro-enflamatuar mikrobiyal bilesiklerin salininasinin önlenmesiyle, indirgeninesiyle veya engellenmesiyle elde edilir. Anti-enflamatuar aktivite teknikte bilinen yöntemlerle ölçülebilir. Bu yöntemlerin örnekleri, bu basvurunun Örneklerinde tarif edildigi üzere bir LPS nötrlestirme tayini ve bir LTA nötrlestirme tayinidir. Bu yöntemde, bulusun bir polipeptidi LPS veya LTA”nin sabit bir konsantrasyonuyla, mesela 500 ng/ml LPS veya 2 mg/ml LTA ile karistirilir ve 30 dakika süreyle inkübe edilir. Daha sonra, bu karisimlar seyreltilmis taze insan tam kanina eklenir ve 20 saat sonra kan numunesindeki sitokinlerin seviyesi (örnegin LTA için 1L-8 ve LPS için lL-l2p40) ELISA ile Bulusun polipeptitleri, kan plazmasi olarak da ifade edilen plazmaya, tercihen insan plazmasina dirençlidir. Burada kullanildigi sekliyle “plazma” veya “insan plazmasi” teknikte kullanilan yaygin anlama sahiptir. Kanin, kirmizi ve ak kan hücrelerinin ve plateletlerinin çikarildigi, proteinleri, hormonlari ve diger organik bilesikleri ve elektroliktler gibi inorganik bilesikleri içeren sivi kismini ifade etmektedir. Burada kullanildigi sekliyle “plazmaya direnç”, %50 plazma, tercihen insan plazmasi varliginda en az bir mikrobiyal türe karsi, ayni kosullar altinda belirlendiginde OP-145iin aktivitesinden en az 1.,3-kat daha yüksek bir in vitro antimikrobiyal, antibakteriyel, antiviral, antifungal ve/veya antiparazitik 02116-P-0001 aktiviteye sahip olmak olarak tanimlanir. Tercihen en 2 bir bikrobiyal türe karsi söz konusu aktivite, OP-145”in aktivitesinden en az 1,5-kat daha yüksektir, daha tercihen OP-l45°in aktivitesinden en az 2-kat, daha tercihen en az 4-kat, daha tercihen en az 5-kat daha yüksektir. Özellikle tercih edilen polipeptitler en az bir mikrobiyal türe karsi, %50 plazina varliginda OP-1453in antimikrobiyal aktivitesinden en az l6-kat daha yüksek bir antimikrobiyal aktiviteye sahiptir. 145 PBS gibi sivi içinde plazma, tercihen insan plazmasi eklenmesiyle, %SOalik bir nihai konsantrasyonda mikroplarla inkübe edildiginde ölçüldügü anlamina gelmektedir. “Ayni tepkime kosullari” ifadesi, bulusun bir polipeptidinin antimikrobiyal, antibakteriyel, antiviral, antifungal ve/veya antiparazitik aktivitesinin ölçüldügü kosullarin, OP-l45°in antimikrobiyal, antibakteriyel, antiviral, antifungal ve/veya antiparazitik aktivitesinin ölçüldügü kosullarla ayni oldugu anlamina gelmektedir. Bu tip kosullara, bunlarla sinirli kalmamak kaydiyla, polipeptit ve mikroplarin inkübe edildigi tampon, mikrobiyal türün kimligi, mikroplarin konsantrasyonu, inkübasyon süresi ve sicakligi ve kullanilan plazma kaynagi dahildir.

OP-l45, JIGKEFKRIVERIKRFLRELVRPLRB dizisine sahip olup, burada J asetildir ve B amiddir. Teknikte uzman bir kisi, OP-1453in antimikrobiyal aktivitesinin diger peptitlerinkiyle yaygin olarak kullanilan kati-evre sentez yöntemlerini veya burada asagida daha ayrintili olarak tarif edilen rekombinan teknikleri kullanarak karsilastirilmasi amaciyla OP-145”i sentezleyebilir. Ayrica, asetilasyon ve amidasyon teknikte kullanilan yaygin tekniklerdir, teknikte uzman kisi bu nedenle, OP-145°in peptit zincirinin N-ucunun asetilasyonunu ve C- Burada ayrintili olarak açiklandigi üzere, in vitro antimikrobiyal, antibakteriyel, antiviral, antifungal ve/veya antiparazitik aktivite tercihen lC99,9 veya IC50 olarak ifade edilir. Burada kullanildigi sekliyle “IC99,9” ve “IC50”, belirli bir 02116-P-0001 periyot, örnegin 2 saat içinde mikroplarin, sirasiyla en az %99,9,unu veya bulusun peptitleri, %50 plazma varliginda en az bir mikrobiyal türe karsi, ayni kosullar altinda belirlendiginde OP-l45°in lC99,9”unun en çok %75alik bir in vitro IC99,9°a sahiptir. Bulusa göre bir polipeptidin %50 plazma varliginda en az bir mikrobiyal türe karsi in vitro IC99,9°u ayni kosullar altinda belirlendiginde en çok %50”si. daha tercihen en çok %40`i, daha tercihen en çok %30`u, daha tercihen en çok %20,si, en tercihen en çok %103udur. Özellikle tercih edilen polipeptitler %50 plazma varliginda en az bir mikrobiyal türe karsi, ayni kosullar sahiptir.

Bulusun polipeptitleri tercihen %50 plazma varliginda en az bir mikrobiyal türe karsi 2 saatten sonra 37°C`de en çok 150 uM bir in vitro IC99,9,a sahiptir. söz konusu IC99,9 tercihen, burada Örneklerde tarif edildigi sekilde antimikrobiyal aktivitesinin belirlenmesi için bir yönteme göre belirlenir. Biyofilmle iliskili olmayan mikroplarin antimikrobiyal aktivitesinin belirlenmesi için Örneklerde tarif edilen söz konusu yöntem, PBS içnde %50”lik bir nihai konsantrasyonda insan plazmasinin eklenmesiyle bir polipeptidin 50 mikroL'sinin ve bakteriyel süspansiyonun 20 mikroLisinin bir solüsyonunun, bir kuyucukta mL basina 5x106 CFU PBS ile karistirilmasini içerir. Bu karisimin 2 saat süreyle 37°C”de çalkalama kosullari altinda inkübasyonundan sonra, bakteriyel sayimlarin tayin edilmesi için bir numune kullanilir. bakterilerin %99,9“unun öldürüldügü en düsük peptit konsantrasyonu, önleici konsantrasyon (IC)99,9 olarak adlandirilir.

Bakteriyel sayimlar manüel CFU sayimiyla belirlenebilir. Antibakteriyel aktivitenin belirlenmesi için örnegin lxlOÖCFU/ml bakteri kullanilir, antifungal aktivitenin belirlenmesi için örnegin 1X105 hücre/ml kullanilir.

Anti-biyofilm aktivitesinin belirlenmesi için, Örneklerde tarif edilen söz konusu yöntem, polipeptidin 24 saat süreyle 37°Cade 1x108 CPU/ml S. aureus 02116-P-0001 JAR060131 ile, %20 plazmayla 4°C”de gece boyu inkübasyonla plazmayla kaplanan 96-kuyucuklu polipropilen plakalarda biyoIilmi-ayarlanmis BM23de inkübasyonundan sonra 1C505nin belirlenmesini, planktonik bakterilerin PBS ile dört yikanarak yok edilmesini ve biyotilmlerin kristal mor ile boyanmasini içerir.

Etanolle çözündürmeden sonra, 590 nm°de optik yogunluk, biyofilm kütlesinin bir ölçümü olarak belirlenir.

Bulusun polipeptitleri tercihen %50 plazma varliginda en çok 100 uMide, daha tercihen en çok 80 uM°de°de, daha tercihen en çok 51,2 uMsde, daha tercihen en çok 30 uM°de bir in vitro IC99,9*a sahiptir. Bulusun tercih edilen polipeptitleri burada tanimlandigi üzere en çok 25,6 uM°debir IC99,93a sahiptir. Özellikle tercih edilen polipeptitler %50 plazma varliginda en az bir mikrobiyal türe karsi en çok 12,8 uM,de bir in vitro lC99,9°a sahiptir.

Söz konusu en az bir mikrobiyal tür örnegin, S. aureus, S. epidermi'dis, P.

Aerugi'nosa gibi bir bakteriyel tür, C. albi'cans ve A. niger gibi bir mantar türü, Plasmodiumfalci'parum ve T oxoplasma gondii' gibi bir parazitik tür veya hepatit A virüsü, hepatit C virüsü, Influenza A virüsü vb gibi bir virüs türüdür. Tercihen, bulusun bir polipeptidi %50 plazma varliginda en az bir bakteriyel veya mantar türüne karsi, tercihen S. aureus, S. epidermi'di's, P. aerugi'nosa, C. albi'cans ve/veya A. niger”e karsi en çok 105 uMsde bir in vitro IC99,9°a sahiptir, en tercihen bulusun bir polipeptidi %50 plazma varliginda en azindan S. aureus°a, en tercihen Cainpoccia et al. (Int J Artif Organs. 2008 Sep;3l(9):84l-7)*de tarif edilen S. aureussa karsien çok 105 uMsde bir in vitro IC99,9”a sahiptir. Bulusun tercih edilen polipeptitleri burada tanimlandigi sekilde S. aureus°a karsi en çok ,6 uM, daha tercihen en çok 12,8 uM bir IC99,9,a sahiptir.

Tercih edilen bir varyant dizisi, bir amino asidin A ile en az bir ikamesine sahiptir.

Bu herhangi bir amino asit, örnegin 1 ila 24 konumlarinin herhangi birinde bir amino asit olabilir. Tablolar 6-87de ortaya kondugu üzere, bir amino asidin alaninle ikame edildigi polipeptitler antimikrobiyal aktivitelerinin en azindan bir 02116-P-0001 kismini muhafaza ederken, bazi alanin-ikameli polipeptitlerin aktivitesi daha da Burada ayrica, bir LKKLYKRLVKILKRWWRYLKRPVR amino asit dizisi veya söz konusu amino asit dizisinin bir varyantini içeren bir izole veya rekombinan polipeptit açiklanmakta olup, söz konusu polipeptit antimikrobiyal, antibakteriyel, antiviral, antifungal ve/veya antiparazitik aktiviteye sahiptir ve ayni kosullar altinda belirlendiginde OP-145iin aktivitesindne en az 1,3-kat daha yüksek bir in vitro antimikrobiyal, antibakteriyel, antiviral, antifungal ve/veya antiparazitik aktiviteye sahiptir, söz konusu varyant en az 14 amino aside sahiptir ve opsiyonel olarak asagidakilere sahiptir: 0 asagidaki amino asit ikamelerinin biri veya daha fazlasi: o K°nin bir pozitif yüklü amino asitle, tercihen R, homolizin, homoarjinin, omitin, diaminobütirik asit ve diaminopropionik asitle ikamesi; o R°nin bir pozitif yüklü amino asitle, tercihen K, homolizin, homoar'inin, ornitin, diaminobütirik asit ve diamino ro ionik asitle ikamesi; o L”nin V, 1 veya W ile ikainesi; o Y°nin W veya Q ile ikamesi; o V”nin F veya A ile ikamesi; o I“nin L ile ikamesi; o W"nin F, Y, L veya 1 ile ikamesi - bir amino asidin karsilik gelen bir D-amino asitle bir veya daha fazla ikamesi; . bir amino asidin karsilik gelen bir dogal-olmayan amino asitle bir veya daha fazla ikamesi ve/veya 02116-P-0001 - en az 14 ardisik amino asidin söz konusu amino asit dizisinden bir geri- eVirtik dizisi.

Burada ayrica, bir LKKLYKRLVKILKRWWRYLKRPVR amino asit dizisini veya söz konusu amino asit dizisinin bir varyantini içeren bir izole veya rekombinan polipeptit açiklanmakta olup, söz konusu polipeptit antimikrobiyal, antibakteriyel, antiviral, antifungal ve/veya antiparazitik aktiviteye sahiptir ve ayni kosullar altinda belirlendiginde OP-145°in aktivitesindne en az 1,3-kat daha yüksek bir in vitro antimikrobiyal, antibakteriyel, antiviral, antifungal ve/Veya antiparazitik aktiviteye sahiptir, söz konusu varyant en az 14 amino aside sahiptir ve opsiyonel olarak asagidakilere sahiptir: 0 asagidaki amino asit ikamelerinin biri veya daha fazlasi: o K°nin A veya bir pozitif yüklü amino asitle, tercihen A, R, homolizin, homoarjinin, ornitin, diaminobütirik asit ve diaminopropionik asitle ikamesi; o R°nin A veya bir pozitif yüklü amino asitle, tercihen A, K, honiolizin, homoarjinin, omitin, diaminobütirik asit ve diaminopropionik asitle ikamesi; o L”nin A, V, 1 veya W ile ikamesi; o Y°nin A, W veya Q ile ikamesi; o V”nin F veya A ile ikamesi; o I“nin A veya L ile ikamesi; o W"nin A, F, Y, L veya 1 ile ikamesi - bir amino asidin karsilik gelen bir D-amino asitle bir veya daha fazla ikamesi; . bir amino asidin karsilik gelen bir dogal-olmayan amino asitle bir veya daha fazla ikamesi ve/veya 02116-P-0001 - en az 14 ardisik amino asidin söz konusu amino asit dizisinden bir geri- eVirtik dizisi.

Bu tip varyant dizisi ayrica tercihen bir amino asidin A ile en çok bir ikamesine sahiptir. Bu herhangi bir amino asitler yapilabilir, böylelikle 1 ila 24 amino asit konumlarinin herhangi birindeki bir amino asit A ile ikame edilebilir.

Burada kullanildigi sekliyle LKKLYKRLVKILKRWWRYLKRPVR amino asit dizisinin bir varyanti en az 14 amino asitlik bir uzunluga ve tercihen asagidaki amino asit ikamelerinin birine veya daha fazlasina sahiptir: 0 K,nin bir pozitif yüklü amino asitle, tercihen R, homolizin, homoarjinin, ornitin, diaminobütirik asit ve diaminopropionik asitle, daha tercihen R ile ikamesi; . R`nin bir pozitif yüklü amino asitle, tercihen K, homolizin, homoarjinin, ornitin, diaminobütirik asit ve diaminopropionik asitle, daha tercihen K ile ikamesi; i L°nin V, I veya W ile ikamesi; o Y”nin W veya Q ile ikamesi; - V7nin F veya A ile ikamesi; - I`nin L ile ikamesi; - Winin F, Y, L veya 1 ile ikamesi . bir veya daha fazla amino asidin karsilik gelen D-amino asitle ikamesi . bir veya daha fazla asidin karsilik gelen bir dogal-olmayan amino asitle ikamesi. Tercihen, söz konusu varyant dizisi 14`e kadar söz konusu ikameye, daha tercihen 10”a kadar söz konusu ikameye, mesela 9°a kadar, veya 1°e kadar söz konusu ikameye sahiptir.

Tercihen, söz konusu varyant dizisi opsiyonel olarak asagidaki amino asit ikamelerinin birine veya daha fazlasina sahiptir: 02116-P-0001 - K”nin 2 ainino asit konumunda R ile ikamesi . K”nin 3 amino asit konumunda R ile ikamesi . Unin 4 amino asit konumunda V ile ikamesi . Y”nin 5 amino asit konumunda W ile ikamesi . L°nin 8 amino asit konumunda V ile ikamesi . V°nin 9 amino asit konumunda F veya A ile ikamesi i Klnin 10 amino asit konumunda R ile ikamesi . l°nin 11 amino asit konumunda L ile ikamesi o Lsnin 12 amino asit konumunda I veya W ile ikamesi . W”nin 15 amino asit konumunda F, Y, L veya 1 ile ikamesi - W°nin 16 amino asit konumunda F, Y, L veya 1 ile ikamesi . Y,nin 18 amino asit konumunda Q ile ikamesi . K'nin 20 amino asit konumunda R ile ikamesi o R,nin 21 amino asit konumunda K ile ikamesi . bir veya daha fazla amino asidin karsilik gelen bir D-amino asitle ikamesi Burada, amino asit konumlarinin numaralandirilmasi asagidaki gibidir: Söz konusu varyant ayrica tercihen opsiyonel olarak bir amino asidin A ile bir veya daha fazla, daha tercihen en çok bir ikamesine sahiptir. Bu, herhangi bir amino asitle yapilabilir, böylelikle 1 ila 24 arasindaki amino asir konumlarinin herhangi birindeki bir amino asit A ile ikame edilebilir.

Tercihen, burada tanimlandigi sekilde bir varyant dizisi söz konusu amino asit ikamelerinin 15”ine kadarina, daha tercihen söz konusu amino asit ikamelerinin °una sahiptir. Ayrica, burada tanimlandigi sekilde bir varyant dizisi tercihen, en az bir KRLVKILKRWWRYL amino asit dizisi, yani 6 ila 19 arasinda amino asit içerir, opsiyonel olarak söz konusu amino asit ikamelerinin birine veya daha fazlasina sahiptir. Bu nedenle burada, bir LKKLYKRLVKILKRWWRYLKRPVR 02116-P-0001 amino asit dizisi içeren veya söz konusu amino asit dizisinin bir varyantini içeren bir izole veya rekombinan polipeptit saglanmaktadir, söz konusu polipeptit antimikrobiyal, antibakteriyel, antiviral, antifungal ve/Veya antiparazitik aktiviteye sahiptir ve ayni kosullar altinda belirlendiginde OP-145'in aktivitesindne en az 1,3-kat daha yüksek bir in vitro antimikrobiyal, antibakteriyel, antiviral, antifungal ve/veya antiparazitik aktiviteye sahiptir, söz konusu varyant dizisi, opsiyonel olarak asagidakilere sahip en az bir KRLVKILKRWWRYL amino asit dizisine sahiptir: asagidaki amino asit ikamelerinin 1 ila 8,i: 0 L, V, F, A, 1, W, Y veya Q grubundan seçilen bir veya daha fazla amino asidin söz konusu gruptan seçilen bir baska amino asitle ikamesi; 0 R ve/Veya K°nin A veya pozitif yüklü bir amino asitle ikamesi; i bir amino asidin karsilik gelen bir D-amino asitle bir veya daha fazla ikamesi; o bir amino asidin karsilik gelen bir dogal-olmayan amino asitle bir veya daha fazla ikamesi; - en az 14 ardisik amino asidin söz konusu amino asit dizisinden bir geri- evirtik dizisi.

Söz konusu ainino asit ikamelerinin en az birine sahip bir varyant dizisi ayrica tercih edilir.

Bulusa göre tercih edilen bir polipeptit, Tablo 17de gösterildigi üzere P139, P140, bir amino asit dizisini içerir çünkü bu peptitler OP-145 peptidine kiyasla PBS°te yüksek antimikrobiyal aktiviteye sahiptir ve plazma varliginda yüksek artan 02116-P-0001 antimikrobiyal aktiviteye sahiptir. Tercihen, söz konusu polipeptit, Tablo 1°de peptitlerinin bir amino asit dizisini içerir çünkü bu peptitler plazma varliginda OP- 145,e kiyasla en az 4-kat artan aktiviteye sahiptir. Daha tercihen, söz konusu dizisini içerir çünkü bu peptitler plazma varliginda OP-1455e kiyasla en az 8-kat artan aktiviteye sahiptir.

Bulusun özellikle tercih edilen bir polipeptidi, P145 peptidinin amino asit dizisi veya söz konusu amino asit dizisinin bir varyanti olan LKRLYKRLAKLIKRLYRYLKKPVR ainino asit dizisini içermekte olup, söz konusu varyant dizisi en az 14 amino aside sahiptir ve opsiyonel olarak bir amino asidin karsilik gelen bir D-amino asitle ve/veya karsilik gelen bir dogal-olmayan amino asitle bir veya daha fazla ikamesine sahiptir ve/veya opsiyonel olarak en az 14 ardisik amino asidin söz konusu amino asit dizisinden bir geri-evirtik dizisine sahiptir, daha tercihen söz konusu polipeptit LKRLYKRLAKLIKRLYRYLKKPVR amino asit dizisinin en az 14-19 ainino asitlerini içerir, en tercihen söz konusu polipeptit LKRLYKRLAKLIKRLYRYLKKPVR amino asit dizisini içerir. Bu tip polipeptit özellikle tercih edilir çünkü P145 peptidi serumun hem varliginda hem yoklugunda kuvvetli, genis spektrumlu antimikrobiyal aktiviteye ve anti- enflamatuar özelliklere sahiptir.

Bulusun bir baska özellikle tercih edilen polipeptidi, P148 peptidinin amino asit dizisi olan LKRVWKRVFKLLKRYWRQLKKPVR amino asit dizisini veya Söz konusu amino asit dizisinin bir varyantini içermekte olup, söz konusu varyant dizisi en az 14 amino aside sahiptir ve opsiyonel olarak bir amino asidin karsilik gelen bir D-amino asitle ve/veya karsilik gelen bir dogal-olmayan ainino asitle bir veya daha fazla ikamesine sahiptir ve/veya opsiyonel olrak en az 14 ardisik amino 02116-P-0001 asidin söz konusu amino asit dizisinden bir geri-evirtik dizisine sahiptir, daha tercihen söz konusu polipeptit LKRVWKRVFKLLKRYWRQLKKPVR amino asit dizisinin en az 14-19 amino asit dizisini içerir, en tercihen söz konusu polipeptit LKRVWKRVFKLLKRYWRQLKKPVR, WKRVFKLLKRYWRQLK, KRVFKLLKRYWRQL amino asit dizisini içerir. amino asit dizisidir. Bu tip polipeptit özellikle tercih edilir çünkü Pl48 peptidi serumun hem varliginda hem yoklugunda kuvvetli, genis spektrumlu antimikrobiyal aktiviteye ve anti-enflamatuar özelliklere sahiptir ve P325, P326, muhaza etmistir.

Bulusun bir baska özellikle tercih edilen polipeptidi, P159 peptidinin amino asit dizisi olan LKRLYKRVFRLLKRYYRQLRRPVR amino asit dizisini veya söz konusu amino asit dizisinin bir varyantini içermekte olup, söz konusu varyant dizisi en az 14 amino aside sahiptir ve opsiyonel olarak bir amino asidin karsilik gelen bir D-amino asitle ve/veya karsilik gelen bir dogal-olmayan amino asitle bir veya daha fazla ikamesine sahiptir ve/veya opsiyonel olrak en az 14 ardisik amino asidin söz konusu amino asit dizisinden bir geri-evirtik dizisine sahiptir, daha tercihen söz konusu polipeptit LKRLYKRVFRLLKRYYRQLRRPVR amino asit dizisinin en az 14-19 amino asit dizisini içerir, en tercihen söz konusu polipeptit özellikle tercih edilir çünkü P159 peptidi serumun hem varliginda hem yoklugun kuvvetli, genis spektrumlu antimikrobiyal aktiviteye ve anti-enflamatuar özelliklere sahiptir.

Bulusa göre bir diger tercih edilen polipeptit, Tablolar 6, 7 ve Side gösterildigi 02116-P-0001 dizisini içerir çünkü bu peptitler PBS°te yüksek antiinikrobiyal aktiviteye ve plazma varliginda OP-145°e kiyasla artan antimikrobiyal aktiviteye sahiptir. Bu tip amino asit dizisine sahip polipeptitler, bir amino asidin A ile ikame edildigi P145, P148 veya P159 polipeptitlerinin varyantlaridir. Bulusun özellikle tercih edilen bir polipeptidi, 7 konumundaki R`nin A ile ikame edildigi P148°in bir varyanti olan P276 peptidinin amino asit dizisine sahiptir.

Bulusa göre tercih edilen bir polipeptit, Tablo 1, 2, 5, 6, 7, 8, 9 ve/veya 10°dan seçilen bir polipeptidin bir amino asit dizisine sahiptir. Bulusa göre bir polipeptit bir ölümcül konsantrasyona (LC) 99,9”a sahip LKKLYKRLVKILKRWWRYLKRPVR amino asit dizisini veya bunun bir varyantini içerir. Bir uygulamada, tablolar 2 veya 5-10”dan seçilen, %50 plazmada en çok 51,2 uM, daha tercihen en çok 51,2 uM bir LC 99,9”a sahip bir polipeptit saglanmaktadir.

Yukarida tarif edildigi üzere bir amino asidin bir baska amino asitle ikamelerine alternatif veya ek olarak, burada tanimlandigi üzere LKKLYKRLVKILKRWWRYLKRPVR amino asit dizisinin bir varyanti bir L- amino asidin karsilik gelen D-amino asidiyle veya yukarida gösterilen amino asit ikamelerinin birinden veya daha fazlasindan sonra söz konusu amino asit dizisinde mevcut olan bir L-amino asidine karsilik gelen D-amino asilde bir veya daha fazla ikamesini ihtiva edebilir. Burada alanin için A gibi bir büyük tek-harfli sembolle gösterilen amino asitler, dogal olusumlu proteinlerde yaygin olarak bulunan L-amino asitlerdir. Burada kullanildigi sekliyle “karsilik gelen D-amino asit”, bir L-amino asidin D-amino asit karsiligi olarak tanimlanir. Ornegin, 02116-P-0001 alaninin (A) karsilik gelen D-amino asidi D-alanindir (a), arjininin (R) karsilik gelen D-amino asidi D-arjinindir (r), asparajinin (N) karsilik gelen D-aniino asidi D-asparajindir (n) Vb. Burada tanimlandigi sekilde bir varyant dizisinin tüm L- amino asitleri karsilik gelen D-amino asitleriyle ikame edilebilir. Dolayisiyla, burada bir LKKLYKRLVKILKRWWRYLKRPVR amino asidini veya söz konusu amino asit dizisinin bir varyantini içeren bir polipeptit açiklanmakta olup, söz konusu polipeptit antimikrobiyal, antibakteriyel, antiviral, antifungal, antiparazitik ve/veya anti-enflamatuar aktiviteye sahiptir, söz konusu varyant dizisi en az 14 amino asite sahiptir ve opsiyonel olarak asagidakilere sahiptir: . asagidaki amino asit ikainelerinin biri veya daha fazlasi: 0 L, V, F, A, 1, W, Y veya Q grubundan seçilen bir veya daha fazla amino asidin söz konusu gruptan seçilen bir baska amino asitle veya L, V, F, A, I, W, Y veya Q amino asidinin karsilik gelen bir D-amino asidiyle ikamesi; o R7nin pozitif yüklü bir amino asitle, tercihen, K, homolizin, homoarjinin, omitin, diaminobütirik asit ve diaminopropionik asitle veya K veya R°nin karsilik gelen D-amino asidiyle ikamesi; o K°nin pozitif yüklü bir amino asitle, tercihen, R, homolizin, homoarjinin, ornitin, diaminobütirik asit ve diaminopropionik asitle veya R veya K'nin karsilik gelen D-amino asidiyle ikamesi; o bir amino asidin karsilik gelen bir D-amino asitle bir veya daha fazla ikamesi. Bu tip varyant dizisi ayrica A ile veya karsilik gelen bir D-amino asitle ikameli K ve R”den seçilen bir veya daha fazla amino asidin, tercihen en çok bir amino asidin ikamesine sahiptir. Tercihen, söz konusu varyant dizisi opsiyonel olarak asagidaki amino asit ikamelerinin birine veya daha fazlasina sahiptir: 02116-P-0001 o K“nin R veya R“nin karsilik gelen D-amino asidiyle ikamesi; o R`nin K veya K9nin karsilik gelen D-amino asidiyle ikamesi; o L”nin V, 1 veya W veya V, 1 veya W amino asidinin karsilik gelen bir D-amino asidiyle ikamesi; o Yanin W veya Q veya W veya Q amino asidinin karsilik gelen bir D-amino asidiyle ikamesi; o Vinin F veya A veya F veya A amino asidinin karsilik gelen bir D- amino asidiyle ikamesi; o Isnin L veya L amino asidinin karsilik gelen D-amino asidiyle ikamesi; o W°nin F, Y, L veya I veya L, F, Y, L veya 1 amino asidinin karsilik gelen bir D-amino asidiyle ikamesi; bir amino asidin karsilik gelen bir D-amino asitle bir veya daha fazla ikamesi.

Daha tercihen, söz konusu varyant dizisi opsiyonel olarak asagidaki amino asit ikamelerinin birine veya daha fazlasina sahiptir K7nin 2 amino asit konuinunda R veya R”nin karsilik gelen D-amino asidiyle ikamesi; Kinin 3 amino asit konumunda R veya R”nin karsilik gelen D-amino asidiyle ikamesi; L`nin 4 amino asit konumunda V veya V*nin karsilik gelen D-amino asidiyle ikamesi; Y°nin 5 amino asit konumunda W veya W°nin karsilik gelen D-amino asidiyle ikamesi; L°nin 8 amino asit konumunda V veya V“nin karsilik gelen D-amino asidiyle ikamesi; V°nin 9 amino asit konumunda F veya A veya F veya Ainin karsilik gelen bir D-amino asidiyle ikamesi; 02116-P-0001 - K”nin 10 amino asit konumunda R veya R“nin karsilik gelen D-amino asidiyle ikamesi; . l°nin ll amino asit konumunda L veya L”nin karsilik gelen D-amino asidiyle ikamesi; . L°nin 12 amino asit konumunda 1 veya W veya 1 veya W`nin karsilik gelen bir D-amino asidiyle ikamesi; i W°nin 15 amino asit konumunda F, Y, L veya 1 veya F, Y, L veya l°nin karsilik gelen bir D-amino asidiyle ikamesi; o W°nin 16 amino asit konumunda F, Y, L veya 1 veya F, Y, L veya I*nin karsilik gelen bir D-amino asidiyle ikamesi; - Y”nin 18 amino asit konumunda Q veya Q9nun karsilik gelen D-amino asidiyle ikamesi; . K'nin 20 amino asit konumunda R veya R°nin karsilik gelen D-amino asidiyle ikamesi; . R`nin 21 amino asit konumunda K veya K°nin karsilik gelen D-amino asidiyle ikamesi; i bir amino asidin karsilik gelen bir D-amino asitle ikamesi.

Burada tanimlandigi üzere LKKLYKRLVKILKRWWRYLKRPVR amino asit dizisinin bir varyanti, bir L-amino asidinin kendisinin karsilikgelen D-amino asidiyle 24,e kadar ikamesini ihtiva edebilir. Dolayisiyla, varyant dizisi tamamen D-amino asitlerinden olusabilir. Örnegin, varyant dizisi, bir L-amino asidinin bir L-amino asidin kendisinin karsilik gelen D-amino asidiyle bir veya daha fazla ikamesine sahip söz konusu varyant dizisi, Tablo 1°de gösterildigi üzere P139, peptitlerinin bir amino asit dizisinin en az 14 amino asidini içerir. Daha tercihen, bulusun opsiyonel olarak bir L-amino asidinin kendisinin karsilik gelen D-amino asidiyle bir veya daha fazla ikamesini içeren bir polipeptidi, P1454, Pl48 veya 02116-P-0001 P159 peptidinin bir amino asit dizisini içerir. Bir yönde, burada tanimlandigi sekilde bir varyant dizisi, bir amino asidin kendisinin karsilik D-amino asidiyle bir ikamesini ihtiva eder. D-amino asidinin amino asit dizisindeki konumu ilgisizdir.

Bir baska yönde, varyant dizisi tüm L-amino asitlerin kendilerinin karsilik gelen D-amino asidiyle ikamesini ihgtiva eder. Burada tanimlandigi sekilde bir varyant dizisi ayrica, LKKLYKRLVKILKRWWRYLKRPVR amino asit dizisinin veya dizisinin en az 14 ardisik amino asidinin geri-evirtik peptidi olabilir. Tercihen, söz konusu varyant dizisi, söz konusu amino asit dizisinin, tercihen, P139-163 peptitlerinin birinin, tercihen P145, P148 veya P159°un amino asit dizisinin tam uzunlugunun bir geri-evirtik peptididir. Bir geri-evitik peptit, bir referans amino asit dizisinin evirtik dizisindeki D-amino asitlerden olusan bir peptittir. Örnegin, bulusun tercih edilen bir varyant dizisi, P145, P148 veya P159”un amino asit dizisinin geri-evirtik peptididir, yani, sirasiyla, rvpkklyrylrkilkalrkylrkl, rvpkklqrwyrkllkfvrkwvrkl veya rvprrlqryyrkllrfvrkylrkl dizilerine veya söz konusu dizilerin birinden en az 14 amino aside sahiptir.

Burada tanimlandigi sekilde LKKLYKRLVKILKRWWRYLKRPVR amino asit dizisinin bir varyanti, bir ainino asidin bir dogal-olmayan amino asitle veya yukarida gösterilen amino asit ikamelerinin birinden veya daha fazlasindan sonra söz konusu amino asit dizisinde mevcut olan bir amino asidin dogal-olmayan bir amino asitle Sie kadar ikamesini içerebilir. Burada kullanildigi sekliyle “dogal- olmayan amino asitler", dogada görünüp görünmedikleriyle ilgisiz olarak, genetik-olmayan sekilde kodlanmis amino asitleri ifade etmektedir. Burada tanimlandigi sekilde bir amino asit dizisinin bir varyantinda mevcut olabilen dogal-olmayan amino asitlere sunlar dahildir: ß-amino asitleri; p-asil-L- fenilalanin; N-asetil lisin; O-4-allil-L-tirosin; 2-amin0adipik asit; 3-aminoadipik asit; beta-alanin; 4-tert-bütil hidrojen 2-azidosüksinat; beta-aminopropionik asit; 2-aminobütirik asit; 4-amin0bütirik asit; 2, 4,-diamin0 bütirik asit; 6- aminokaproik asit; 2-aminoheptanoik asit; 2-amin0is0bütirik asit; 3- aminoisobütirik asit; 2-amin0pimelik asit; p-aminofenilalanin; 2, 3-diaminobütirik 02116-P-0001 asit; 2, 3-diamino propionik asit; 2, 2'-diamin0pimelik asit; p-amino-L-fenilalanin; p-azido-L-fenilalanin; D-allilglisin; p-benzoil-L-fenilalanin; 3-benzotienil alanin p-bromofenilalanin; t-bütilalanin; t-bütilglisin; 4-klorofenila1anin; sikloheksilalanin; sisteik asit; D-sitrulin; tiyo-L-sitrulin; desmosin; epsilon-amino heksanoik asit; N-etilglisin; N-etilasparajin; 2-Ilor0fenilalanin; 3-florofenilalanin; 4-florofenila1anin; homoarjinin; homosistein; homoserin; hidroksilisin; allo- hidroksilisin; 3-(3-metil-4-nitrobenzil)-L-histidin metil ester; izodesmosin; allo- izolösin; izopropil-L-fenilalanin; 3-metil-fenilalanin; N-metilglisin; N- metilizolösin; 6-N-metillisin; O-metil-L-tirosin; N-metilvalin; metionin sülfoksit; 2-naftilalanin; L-3-(2-naftil)alanin; izoserin; 3-fenilserin; norvalin; norlösin; fenilglisin; piperidinik asit; piridilalanin; l, 2, 3, 4-tetrahidr0-izokuinolin-3- karboksiliks asit; beta-Z-tienilalanin; y-karboksi-DL-glutamik asit; 4-flor0-DL- glutamik asit; D-tiroksin; allo-treonin; 5-hidroksi-tript0fan; 5-metoksi-triptofan; -Ilor0-tript0fan; 3-Iloro-valin.

Tercihen, söz konusu dizinin bir dogal amino asidi, karsilik gelen bir dogal- olmayan amino asitle ikamelidir. Burada kullanildigi sekliyle, bir “karsilik gelen dogal-olmayan amino asit”, referans dogal amino asidin bir türevi olan bir dogal- olmayan amino asidi ifade etmektedir. Örnegin, bir dogal amino asit karsilik gelen ß-amino asitle ikame edilir. ß-amino asitleri amino gruplarini, dogal amino asitlerde oldugu gibi (1 karbon yerine [3 karbona baglamistir. Örnegin, (i-alanin ß- alanin ile ikame edilir vb. Bir dogal amino asidin söz konusu amino asidin bir türevi olan bir dogal-amino asitle ikamesinin diger örnekleri sunlardir. Alanin örnegin beta-alanin, t-bütilalanin, 2-naftillalanin; L-3-(2-naftil)alanin, 2- aminoisobütirik asitle ikame edilir. Arjinin örnegin homoarjinin, ornitin, N5- karbamoilomitin, 3-amino-pr0pi0nik asitle ikame edilir. Asparajin örnegin N- etilasparajin ile ikame edilir. Aspartik asit örnegin 4-tert-bütil hidrojen 2- azidosüksinat ile ikame edilir. Sistein örnegin sisteik asitle, homosisteinle ikame edilir. Glutamik asit örnegin y-karboksi-DL-glutamik asit; 4-flor0-DL-glutamik asitle ikame edilir. Glutamin örnegin D-sitmlin, tiyo-L-sitrulin ile ikame edilir. 02116-P-0001 Glisin Örnegin N-metilglisin, t-bütilglisin, N-metilglisin, D-allilglisin ile ikame edilir.Histidin örnegin 3-(3-rnetil-4-nitr0benzi1)-L-histidin metil ester ile ikame edilir. Izolösin örnegin isodesmosin, N-metilizolösin, allo-izolösin ile ikame edilir. Lösin örnegin norlösin, desmosin, 5,5,5-trif10r0-lösin ile ikame edilir. Lisin örnegin 6-N-metillisin, 2-amin0heptanoik asit, N-asetil lisin, hidroksilisin, allo- hidroksilisin ile ikame edilir. Metionin örnegin metionin sülfoksit ile ikame edilir.

Fenilalanin örnegin p-amino-L-fenilalanin, 3-benz0tienil alanin p- bromofenilalanin, p-asil-L-fenilalanin, 2-flor0fenilalanin, 3- florofenilalanin, 4- florofenilalanin ile ikame edilir. Prolin örnegin 3-hidroksiprolin, 4-hidr0ksiprolin, 1-asetil-4-hidr0ksi-L-prolin ile ikame edilir. Serin Örnegin homoserin, izoserin, 3- fenilserin ile ikame edilir. Treonin örnegin D-tiroksin, allo-treonin ile ikame edilir. Triptofan örnegin 5-hidr0ksi-triptofan, 5-metoksi-triptofan, 5-floro- triptofan ile ikame edilir. Tirosin örnegin O-metil-L-tirosin, O-4-allil-L-tirosin, 3- kloro-tirosin ile ikame edilir. Valin örnegin norvalin, N-metilvalin, 3-flor0-valin ile ikame edilir.

Dolayisiyla, burada LKKLYKRLVKILKRWWRYLKRPVR amino asit dizisini veya söz konusu amino asit dizisinin bir varyantini içeren bir polipeptit açiklanmakta olup, söz konusu polipeptit antimikrobiyal, antibakteriyel, antiviral, antiûingal, antiparazitik ve/Veya anti-enflamatuar aktiviteye sahiptir, söz konusu varyant dizisi en az 14 amino aside sahiptir ve opsiyonel olarak asagidakilere sahiptir: . asagidaki amino asiti ikamelerinin biri veya daha fazlasi: 0 L, V, F, A, 1, W, Y veya Q grubundan seçilen bir veya daha fazla amino asidin söz konusu gruptan seçilen bir baska amino asitle veya L, V, F, A, I, W, Y veya Q amino asidinin karsilik gelen bir dogal-olmayan amino asidiyle ikamesi; o R°nin K veya K”nin karsilik gelen bir dogal-olmayan amino asitle ikamesi; 02116-P-0001 K”nin R veya K”nin karsilik gelen bir dogal-olmayan amino asitle ikamesi; o bir amino asidin karsilik gelen bir D-amino asitle bir veya daha fazla ikamesi. Bu tip varyant dizisi ayrica, karsilik gelen bir dogal-olmayan amino asit A ile ikameli K ve R`den seçilen bir veya daha fazla amino tercihen en çok bir amino asidin ikamesini de içerebilir. Tercihen, söz konusu varyant dizisi opsiyonel olarak, asagidaki amino asit ikamelerinin birine veya daha fazlasina sahiptir: K”nin R veya R”nin karsilik gelen bir dogal-olmayan amino asidiyle ikamesi; R°nin K veya K”nin karsilik gelen bir dogal-olmayan amino asidiyle ikamesi; L°nin V, 1 veya W veya V, I veya W°nin karsilik gelen bir dogal- olmayan amino asidiyle ikainesi; Yinin W veya Q veya W veya Q°nun karsilik gelen bir dogal- olmayan amino asidiyle ikamesi; V”nin F veya A veya F veya A”nin karsilik gelen bir dogal- olmayan amino asidiyle ikamesi; ikamesi; Winin F, Y, L veya 1 veya F, Y, L veya l”nin karsilik gelen bir dogal-olmayan amino asidiyle ikamesi; o bir amino asidin karsilik gelen bir dogal-olmayan amino asitle bir veya daha fazla ikamesi.

Daha tercihen, söz konusu varyant dizisi opsiyonel olarak asagidaki amino asit ikamelerinin birine veya daha fazlasina sahiptir 02116-P-0001 K”nin 2 amino asit konumunda R veya R7nin karsilik gelen dogal-olmayan amino asidiyle ikamesi; K”nin 3 amino asit konumunda R veya R°nin karsilik gelen dogal-olmayan amino asidiyle ikamesi; L°nin 4 ainino asit konumunda V veya V`nin karsilik gelen dogal-olmayan amino asidiyle ikamesi; Y,nin 5 amino asit konumunda W veya W°nin karsilik gelen dogal- olmayan amino asidiyle ikamesi; Lsnin 8 amino asit konumunda V veya V”nin karsilik gelen dogal-olmayan amino asidiyle ikamesi; V”nin 9 ainino asit konumunda F veya A veya F veya Asnin karsilik gelen bir dogal-olmayan amino asidiyle ikamesi; K'nin 10 amino asit konumunda R veya R`nin karsilik gelen dogal- olmayan amino asidiyle ikamesi; amino asidiyle ikamesi; L”nin 12 amino asit konumunda 1 veya W veya 1 veya W'nin karsilik gelen bir dogal-olmayan amino asidiyle ikamesi; W°nin 15 amino asit konumunda F, Y, L veya 1 veya F, Y, L veya Isnin karsilik gelen bir dogal-olmayan amino asidiyle ikamesi; Wsnin 16 amino asit konumunda F, Y, L veya I veya F, Y, L veya Pnin karsilik gelen bir dogal-olmayan amino asidiyle ikamesi; Y°nin 18 amino asit konumunda Q veya Qsnun karsilik gelen dogal- olmayan amino asidiyle ikamesi; Kanin 20 amino asit konumunda R veya R3nin karsilik gelen dogal- olmayan amino asidiyle ikamesi; Ranin 21 amino asit konumunda K veya K°nin karsilik gelen dogal- olmayan amino asidiyle ikamesi; bir amino asidin karsilik gelen bir D-amino asitle ikamesi. 02116-P-0001 Bir polipeptit, burada tanimlandigi sekilde LKKLYKRLVKILKRWWRYLKRPVR amino asit dizisinden veya bu dizinin bir varyantindan olusabilir. Burada kullanildigi sekliyle, bir “polipeptit”, birden fazla amino asit içeren peptitleri, polipeptitleri ve peptidomimetikleri ifade etmektedir. antimikrobiyal aktiviteye sahip oldugu ortaya konan en küçük polipeptit 14 amino asit uzunluguna sahiptir. Ancak, amino asit dizisi veya bunun varyanti daha büyük bir polipeptidin, yani N-ucunda ve/veya C-ucunda bir veya daha fazla ilave amino asitle uzatilmis bir polipeptidin parçasi olabilir. Bulusun bir polipeptidinin amino asit dizisi veya bunun varyanti N-ucunda ve/veya C-ucunda, tercihen bir N- ve/Veya C-ucu uzatma grubu içererek modifiye edilmis olabilir. Alternatif olarak, söz konusu amino asit dizisi veya bunun bir varyanti N- ve/veya C-ucunda uzatilmis olabilir. Bu nedenle bulusa göre bir polipeptit en az 14 amino asit içerir ve 1000”e kadar amino asit içerebilir. Ancak, üretim maliyetlerini inümkün oldugunca düsük tutinak amaciyla daha küçük polipeptitler tercih edilir. Tercihen, daha tercihen 14-50 amino asit uzunlugundadir. Örnegin, bulusa göre bir amino asit içerir. Tercihen, söz konusu polipeptit en az 16 amino asit, mesela 16- amino aside sahiptir. 14-24 amino aside sahip bu tip polipeptit ayrica, bir aseti1-, heksanoil-, dekanoil-, myristoi1-, NH-(CH2-CH2-O)ii-CO- ve propionil- kalintisindan olusan gruptan seçilen bir N-ucu modifikasyonu gibi ve/veya amid-, NH-(CHz-CH2-0)1i-CO-amid- ve bir veya iki amino-heksanoil grubundan olusan gruptan seçilen bir C-ucu modifikasyonu gibi bir N-ucu ve/veya C-ucu modifikasyonuna sahip olabilir. Bir uygulamada, bulusun bir polipeptidi, burada tanimlandigi sekilde, tercihen Tablo 1”de gösterildigi üzere P145, P148 veya P159°un amino asit dizisinden veya en az bunlarin en az 14 amino asidinden olusan, opsiyonel olarak bir N-ucu ve/veya C-ucu modifikasyona sahip, tercihen bir N- ve/Veya C-ucu uzatma grubu içeren 02116-P-0001 LKKLYKRLVKILKRWWRYLKRPVR amino asit dizisinden veya bunun bir varyantindan olusur.

Burada kullanildigi sekliyle, “peptidomimetik”, peptidik-olmayan yapisal ögeler ihtiva eden, bulusun bir polipeptidinin antimikrobiyal. antibakteriyel, antiviral, antifungal, antiparazitik ve/veya anti-enflamatuar özelliklerini taklit eden bir bilesigi ifade etmektedir. Dolayisiyla, bulusun bir polipeptidi peptidik-olmayan yapisal ögeler içerebilir. Bu tip peptidik-olmayan yapisal ögeler, bulusun bir polipeptidinin amino asit dizisinde, söz konusu dizinin bir veya daha fazla amino asidinin modifikasyonunun ikamesinin bir sonucu olarak mevcut olabilir.

Alternatif olarak, bulusun bir polipeptidi, burada tanimlandigi sekilde LKKLYKRLVKILKRWWRYLKRPVR amino asit dizisinin disinda veya bunun bir varyantinda, yani opsiyonel N- ve/veya C-ucu uzatma gruplarinda peptidik- olmayan yapisal ögeler içerebilir. Bir peptidomimetikteki bir peptidik-olmayan yapisal öge tipik olarak, bir veya daha fazla var olan amino asidin bir modifikasyonudur. Tercih edilen peptidoinimetikler, örnegin burada yukarida tarif edilen sekilde dogal olmayan amino asitler, konformer kisitlar, polipeptidin siklizasyonu, izosterik replasman veya diger modifikasyonlar kullanilarak bulusun polipeptitlerinin yapisal modifikasyonuyla elde edilir. Bulusa göre bir polipeptidin amino asit dizisi böylelikle opsiyonel olarak bir veya daha fazla modifikasyon içerir. Bu tip polipeptit, posttranslasyonel islem gibi dogal islemlerle veya kimyasal modifikasyon teknikleriyle modifiye edilebilir. Modifikasyonlar söz konusu polipeptitte, polipeptit omurgasi, amino asit yan-zincirleri dahil olmak üzere herhangi bir konumda ve N- veya C-ucunda sokulabilir. Bir tekli polipeptit birden fazla tipte modifikasyon veya bir tek tipte birçok modifikasyon ihtiva edebilir. Modifikasyonlara asetilasyon, amidasyon, asilasyon, fosforilasyon, inetilasyon, demetilasuon, ADP-ribosilasyon, disülfit bag olusum, ubikutin ekleme, gama-karboksilasyon, glikosilasyon, hidroksilasyon, iyodinasyon, oksidasyon, pegilasyon ve sülfasyon dahildir. Ek olarak, bulusa göre bir polipeptit, biyotin, floresein veya flavin gibi bir etiketle, bir lipitle veya lipit 02116-P-0001 türeviyle, bir seker grubuyla donatilabilir. Bulusa göre bir polipeptit ayrica bir hedefleme bölütüyle de donatilabilir.

Tercih edilen bir uygulamada, bulusa göre bir polipeptit N-ucunda ve/Veya C- ucunda modifiyedir. Bulusun bir polipeptidi böylelikle tercihen bir N- ve/veya C- ucu uzatma grubu içerir. Bulusun bir polipeptidinde kullanilabilen N- ve C-ucu uzatma gruplari teknikte iyi bilinmektedir. Bir N-ucu modifikasyonun tercih edilen örnekleri bir asetil-, bir heksanoil-, bir dekanoil-, bir miristoil-, bir NH- (CH2-CH2-O)ii-CO- ve bir propionil-kalintisidir. Bir C-ucu modifikasyonun tercih edilen örnekleri bir amid-, bir NH-(CHz-CH2-0)1 i-CO-amid- ve bir veya iki amino-heksanoil grubudur. Ancak, diger N- veya C-ucu uzatma gruplari ayrica, teknikte uzman bir kisi tarafindan bilinen aktif bilesikler saglayacaktir. Bir uygulamada, söz konusu polipeptit bir N-ucu asetil, heksanoil-, dekan0i1-, miristoil-, NH-(CH2-CH2-O)ii-CO- veya propionil-kalintisi ve bir C-ucu amid, NH-(CHz-CH2-0)1i-CO-amid- ve bir veya iki amino-heksanoil grubu içerir. Bir uygulamada, bulusa göre bir polipeptit saglanmakta olup burada N-ucu asetillenir ve C-ucu amidlenir. Böylelikle burada, bir LKKLYKRLVKILKRWWRYLKRPVR amino asit dizisini veya söz konusu amino asit dizisinin bir varyantini içeren bir izole veya rekombinan polipeptit açiklanmakta olup, söz konusu polipeptit antimikrobiyal, antibakteriyel, antiviral, antifungal, antiparazitik ve/veya anti-enflamatuar aktiviteye sahiptir, söz konusu varyant dizisi en az 14 amino aside sahiptir ve opsiyonel olarak asagidaki amino asit ikamelerinin birine veya daha fazlasina, tercihen 10'una kadarina sahiptir: 0 Kanin 2 amino asit konumunda R ile ikamesi; o K°nin 3 amino asit konumunda R ile ikamesi; . L”nin 4 amino asit konumunda V ile ikamesi; - Y”nin 5 amino asit konumunda W ile ikamesi; o L”nin 8 amino asit konumunda V ile ikamesi; - V°nin 9 amino asit konumunda F veya A ile ikamesi; . K°nin 10 amino asit konumunda R ile ikamesi; 02116-P-0001 - I”nin 11 ainino asit konumunda L ile ikamesi; . L”nin 12 amino asit konumunda 1 veya W ile ikamesi; . Winin 15 amino asit konumunda F, Y, L veya 1 ile ikamesi; o W"nin 16 amino asit konumunda F, Y, L veya 1 ile ikamesi; . Yanin 18 amino asit konumunda Q ile ikamesi; . K°nin 20 amino asit konumunda R ile ikamesi; i R°nin 21 amino asit konumunda K ile ikames ve/veya . bir veya daha fazla amino asidin karsilik gelen bir D-amino asitle ikamesi burada söz konusu amino asit dizisi veya bunun söz konusu varyanti, tercihen bir N-ucu asetil-, heksanoil-, dekanoil-, miristoil-, NH-(CHz-CHz- O)i i-CO- veya propionil-kalintisi ve bir C-ucu amid-, NH-(CH2-CH2-O)i i- CO-amid- ve bir veya iki amino-heksanoil grubu içeren bir N- ve/Veya C- ucu uzatma grubu içerir. Teknikte uzman bir kisi tarafindan diger N- veya C-ucu uatma gruplarinin ayrica aktif bilesikler de saglayacagi anlasilacaktir. Burada, amino asitlerin numaralandirilmasi asagidaki Söz konusu polipeptit tercihen, Tablo 1”de gösterildigi üzere P145, P148 veya P159”un bir amino asit dizisini veya bunlarin en az 14 amino asidini içerir. Söz konusu polipeptit ayrica tercihen 14-24 amino aside sahiptir.

Tercih edilen bir uygulamada, bulusa göre bir polipeptit bir hidrofob bölüt içerir.

Hidrofob gruplarin katyonik (poli)peptitlere eklenmesi, mikrobiyal endotoksini nötrlestirme ve mikrobiyal membranlarla etkilesme yetilerini gelistirir ve böylelikle mikroplari. örnegin patoj enleri ortadan kaldirma yetilerini iyilestirir.

Burada yukarida tarif edildigi üzere, bulusa göre bir polipeptit, teknikte bilinen kimyasal modifikasyon teknikleriyle modifiye edilebilir. Bulusa göre polipeptitlerin modifikasyonlari polipeptidin sentezi esnasinda veya sonunda 02116-P-0001 eklenebilir. Örnegin, polipeptit kati-evre sentez teknigi kullanilarak sentezlendiginde, N-ucu asetilasyon, halen reçineye bagli olan amino asit dizisinin asetik asitle tepkimeye sokulmasinin sonunda gerçeklestirilebilir. Bir baska örnek olarak, C-ucu amidasyonu örnegin, kati-evre peptit sentezinde, piyasada bulunan Tentagel SAM (ex Rapp, Tübingen, Almanya) gibi özel bir rçeine türü kullanilarak gerçeklestirilir. Bu reçineler, yarilma esnasinda amildenmis (poli)peptitlerin salindigi bir kimyasal tutacak içerir. Polipeptitlerin modifiye edilmesinin bu ve diger yöntemleri teknikte uzaman herhangi bir kisi tarafindan bilinmektedir.

Tercih edilen bir uygulamada, bulusa göre bir polipeptit bir hücreye nüfuz eden peptit içerir. Bu tip hücreye nüfuz eden peptit, bulusun bir antimikrobiyal peptidine baglandiginda, polipeptidin hücre membranlari boyunca etkili translokasyonunu kolaylastiran bir peptit dizisidir. Teknikte bilinen herhangi bir hücreye nüfuz eden peptit, bulusun bir polipeptidinde kullanilabilir. Hücreye nüfuz eden peptitlerin örneklerine, bunlarla sinirli kalmamak kaydiyla, poliarjinin, TAT, HIV-Tat, R9-TAT, Pep-l, Pep-7, penetratin, transportan, Antp, Rev, FHV kaplama proteini, buforin II, MAP, K-FGF, Ku70, SynBl, HN-l, TPlO, pVEC, BGSC ve BGTC dahildir.

Bulusun bir polipeptidi tercihen, dogada bu sekilde olusmayan bir polipeptittir.

Yani, bulusun bir polipeptidi tercihen bir dogal olusumlu-olmayan polipeptittir.

Burada kullanildigi sekliyle “Dogal olusumlu-olmayan” ifadesi, polipeptidin dogada 0 sekilde bulunmadi, tercihen, polipeptidin amino asit dizisinin dogada bulunmadigi anlamina gelmektedir.

Ayrica, bulusun bir polipeptidinin, bulusun alti polipeptidine kadarini içeren, amino asidini içeren bir multimeri saglanmaktadir. Söz konusu multimer, ayni amino asit dizisine sahip altiya kadar polipeptit monomeri veya iki veya daha fazla polipeptit monomerinin farkli bir amino asit dizisine sahip oldugu altiya 02116-P-0001 kadar polipeptit monomeri içerebilir. Tercih edilen bir uygulamada, bulusa göre bie multimer, ayni amino asit dizisine sahip bulusa göre altiya kadar polipeptit Bulusa göre polipeptitlerin tuzlari da saglanmaktadir. Bu tip tuzlara, bunlarla sinirli kalmamak kaydiyla, asit ilaveli tuzlar ve baz ilaveli tuzlar dahildir. Burada kullanildigi sekliyle, bir polipeptidin “farmakolojik olarak kabul edilen tuzu”` polipeptidin arzu edilen antimikrobiyal, antibakteriyel, antifungal, antiviral, antiparazitik ve/veya anti-enflamatuar aktivitesini muhafaza eden ve insanlara veya hayvanlara verilis için uygun olan bir tuzu ifade etmektedir. Polipeptitlerin tuzlarinin hazirlanma yöntemleri teknikte bilinmektedir ve genel olarak polipeptidin farmakolojik olarak kabul edilen bir asit veya bazla, örnegin ürünün serbest asit veya serbest baz formlarinin, uygun asit veya bazin bir veya daha fazla muadiliyle tuzun çözünmez oldugu bir çözücü veya vasatta veya daha sonra in vacuo veya dondurarak-kurutmayla yok edilen su gibi bir çözücüde tepkimeye sokulmasiyla veya var olan bir tuzun katyonlarinin uygun bir iyon degisimi reçinesi üzerinde bir baska katyonla degistirilmesiyle karistirilmasini içerir.

Farmakolojik olarak kabul edilen tuzlarin ve bazlarin örneklerine, polipeptitlerin serbest amino gruplariyla amonyum tuzlari olusturan formik asit, asetik asit, propionik asit, laktik asit, glikolik asit, oksalik asit, pirüvik asit, süksinik asit, maleik asit, malonik asit, trifloroasetik asit, sinamik asit, sülfürik asit, hidroklorik asit, hidrobromik asit, nitrik asit, perklorik asit, fosforik asit ve tiyosiyanik asit gibi organik ve inorganik asitler ve etilamin, metilamin, dimetilamin, trietilamin, izopropilamin, diizopropilamin ve diger mono-, di- ve trialkilaminler ve arilaminler gibi polipeptitlerin serbest karboksilik gruplariyla karboksilat tuzlari olusturan bazlar dahildir.

Bulusa göre polipeptitler çesitli yöntemlerle hazirlanabilir. Örnegin, bir polipeptit yaygin olarak kullanilan kati-evre sentez yöntemleriyle, örnegin teknikte iyi bilinen alfa-amino gruplarinin t-BOC veya FMOC korumasini içeren yöntemlerle sentezlenebilir. Burada, amino asitler, amino asitlerin büyümekte olan bir 02116-P-0001 zincirine sirali olarak eklenir. Bu tip yöntemler örnegin Merritield (1963), J. Am. özellikle, büyük-ölçekli üretimde yaklasik 70 amino aside kadar bir uzunluga sahip polipeptitler gibi polipeptitlerin veya nispeten kisa polipeptitlerin sentezi için uygundur.

Alternatif olarak, bulusun bir polipeptidi, teknikte iyi bilinen, polipeptidi kodlayan bir nükleotid dizisinin konak hücrelerde eksprese edildigi rekombinan teknikler kullanilarak hazirlanabilir. Bulus böylelikle, bulusa göre bir polipeptidin hazirlanmasi için asagidakileri içeren bir yöntem saglamaktadir: . bulusa göre bir polipeptidi kodlayan bir nükleik asit dizisi içeren bir nükleik asit molekülünün saglanmasi; . bir konak hücrenin söz konusu nükleik asit molekülüyle dönüstürülmesi; . söz konusu konak hücrenin, söz konusu polipeptidin ekspresyonuna olanak saglayan kosullar altinda kültürlenmesi; i söz konusu polipeptidin söz konusu hücrelerden hasat edilmesi; . opsiyonel olarak söz konusu polipeptidin N-ucunda veya C-ucunda, örnegn bir N- ve/veya C-ucu uzatma grubu eklenmesiyle modifiye edilmesi.

Bulus ayrica, bulusa göre bir polipeptidi kodlayan bir nükleik asit içeren, burada bulusa göre bir nükleik asit molekülü olarak da ifade edilen bir nükleik asit molekülü saglamaktadir. Burada kullanildigi sekliyle, bulusun bir nükleik asit molekülü veya nükleik asit dizisi nükleotidlerin bir zincirini, tercihen DNA ve/veya RNA içerir.

Ayrica, bulusa göre bir nükleik asit dizisi molekülü içeren bir vektör de saglanmaktadir. Burada kullanildigi sekliyle “vektör” terimi, bir konak hücrenin içine bir heterolog nükleik asit dizisi ekleyebilen, bir plazmid, bakteriyofaj veya 02116-P-0001 hayvan virüsü gibi bir nükleük asit molekülünü ifade etmektedir. Bulusa göre bir vektör, bulusun, bir konak hücrede heterolog nükleik asit dizisi tarafindan kodlanan bir polipeptidinin ekspresyonuna veya üretimine olanak saglar. Bulusa göre kullanilan bir vektör örnegin, örneklerine, bunlarla sinirli kalmamak kaydiyla, (Modifiye Vaksinia virüsü Ankara, MVA dahil olmak üzere) vaksinia virüsü, Newcastle Hastaligi virüsü (NDV), adenovirüs veya retrovirüs dahil olan bir hayvan virüsünden türetilir. Bulusa göre bir vektör tercihen, seçilen konak hücrelerde bulusa göre bir polipeptidin transkripsiyonunun baslatilmasi için uygun olan bir promotör içeren bir ekspresyon kaseti içerir. Ökaryotik konak hücrelerde bulusa göre polipeptitlerin ekspresyonu için uygun promotörlerin örneklerine, bunlarla sinirli kalinainak kaydiyla, memeli konaklar için beta-aktin promotörü, iinmünoglobülin promotörü, SS RNA promotörü veya sitomegalovirüs (CMV), Rous sarkoma Virüsü (RSV) ve Simian Virüsü 40 (SV40) promotörleri gibi virüs türevi promotörler dahildir.

Bulus tarafindan ayrica, bulusa göre bir nükleik asit molekülü ve/veya bir vektör içeren bir rekombinan konak hücre saglanmaktadir. Bir konak hücre, bulusa göre bir vektör gibi bir nükleik asit molekülü tarafindan dönüstürülmüs olan veya dönüstürülebilen bir hücredir. “Dönüstürme" bir yabanci nükleik asidin bir alici hücrenin içine eklenmesini ifade etmektedir. Bir konak hücrenin dönüstürülmesi, bir rekombinan proteinin söz konusu hücre tarafindan geçici ekspresyonuyla sonuçlanabilir, yani rekombinan protein yalnizca tanimli bir süre için eksprese edilir. Alternatif olarak, bir alici hücrenin dönüstürülmesi stabil ekspresyonla sonuçlanabilir, yani nükleik asit hücrenin genomunun içine eklenir ve böylelikle hücrelerin sonraki nesillerine geçirilir. Ek olarak, bir rekombinan proteinin indüklenebilir ekspresyonu elde edilebilir. Indüklenebilir bir ekspresyon sistemi, bulusun bir polipeptidini kodlayan bir nükleik asit dizisinin ekspresyonuna olanak saglayan bir molekülün varligini veya yoklugunu gerektirir. Indüklenebilir ekspresyon sisteminin örneklerine, bunlarla sinirli kalmamak kaydiyla, Tet-On ve Tet-Off ekspresyon sistemleri, örnegin bir ekdizon indüklenebilir gen ekspresyon sistemi, bir arabinoz-indüklenebilir gen ekspresyon sistemi ve indüklenebilir bir 02116-P-0001 metalotiyonein promotörü içeren bir pMT/BiP vektörü (Invitrogen) kullanan bir Drosophila indüklenebilir ekspresyon sistemi gibi hormon indüklenebilir sistemi dahildir. Bulusa göre bir polipeptidin hazirlanmasi için bir yöntemde kullanilan bir konak hücre örnegin bir Gram-pozitif prokaryot, bir Gram-negatif prokaryot veya bir ökaryottur. Tercihen, söz konusu konak hücre, bir bitki hücresi, bir maya hücresi, bir memeli hücresi veya bir böcek hücresi gibi bir ökaryotik hücre, en tercihen bir böcek hücresi veya bir memeli hücresidir. Uygun konak hücrelerin örneklerine misir hücreleri, pirinç hücreleri, su mercimegi hücreleri, (BY-2 veya NT-l hücreleri gibi) tütün hücreleri ve patates hücreleri gibi bitki hücreleri dahildir. Maya hücrelerinin örnekleri Saccharomyces ve Pichi'a”d1r. Böcek hücrelerinin örnekleri, Tn5, SF-9 ve SF-21 hücreleri gibi Spodoptera fmgiperda hücreleri ve Drosophila Schneider 2 (SZ) hücreleri gibi Drosophila hücreleridir.

Bulusa göre bir polipeptidin eksprese edilmesi için uygun olan memeli hücrelerinin örneklerine, bunlarla sinirli kalmamak kaydiyla, Afrika Yesil Maymun böbrek (Vero) hücreleri, (BHK-21 gibi) bebek hemstir böbrek hücreleri, Insan retina hücreleri (örnegin PerC6 hücreleri), (HEK293 hücreleri) gibi insan embriyonik böbrek hücreleri, Madin Darby Kanin böbrek (MDCK) hücreleri, Tavuk embriyo fibroblastlari (CEF), Tavuk embriyo böbrek hücreleri (CEK hücreleri), blastodemi-türevi embriyonik kök hücreleri (örnegin EB14), (3T3 hücreleri gibi) fare embriyonik fibroblastlari, Çin hemstiri yumurtalik (CHO) hücreleri ve bu hücre tiplerinin türevleri dahildir.

Bulusa göre bir yöntem tercihen ayrica, bulusa göre polipeptitlerin hasat edilmesinin, saflastirilmasinin ve/veya izole edilmesinin bir adimini içerir. Elde edilen bulusa göre polipeptitler tercihen insan terapisinde, opsiyonel olarak ilave saflastirma, izolasyon veya isleme adimlarindan, örnegin jel elektroforez veya kromatografi yöntemleri kullanilarak saflastirmadan sonra kullanilir.

Bulusa göre bir polipeptit, hem terapötik hem terapötik olmayan uygulamalarda avantajli biçimde kullanilabilen bir takim aktivite sergiler. Özellikle, bulusa göre polipeptitler, bakteriyel enfeksiyonlar, mantar enfeksiyonlari, viral enfeksiyonlar 02116-P-0001 gibi çesitli mikrobiyal enfeksiyonlarin etkisiz hale getirilmesinde ve parazitik enfeksiyonlarin etkisiz hale getirilmesinde faydalidir. Böylelikle, bulusa göre bir polipeptit veya bunun farmakolojik olarak kabul edilen bir tuzunu ve en az bir adet farmakolojik olarak kabul edilen tasiyici, seyreltici ve/veya eksipiyan içerens farmasötik bilesimler saglanmaktadir. Ayrica, bulusa göre bir nükleik asit molekülü veya vektör ve en az bir adet farmakolojik olarak kabul edilen tasiyici, seyreltici ve/veya eksipiyan içeren farmasötik bilesimler de saglanmaktadir.

Bulus ayrica, bir ilaç olarak kullanim için bulusa göre bir polipeptit saglamaktadir. Ayrica, bir ilaç olarak kullanim için bulusa göre bir polipeptit kodlayan bir nükleik asit dizisi içeren bir nükleik asit molekülü saglanmaktadir.

Söz konusu ilaç bir terapötik veya bir profilaktik ajan olabilir.

Bir yönde, spesifikasyon, bir bakteriyel, fungal, viral ve/veya parazitik enfeksiyondan muzdarip veya muzdarip olma riskinde olan bir süjenin tedavisi için, söz konusu süjeye bulusa göre bir polipeptidin, bulusa göre bir farmasötik bilesimin veya bulusa göre bir nükleik asit molekülünün terapötik olarak etkili bir miktarinin verilmesini içeren bir yöntemi açiklamaktadir. Ayrica, bir mikropla enfekte olan bir süjenin tedavisi için veya bir mikrobiyal enfeksiyonun profîlaksisi için bir ilacin hazirlanmasi için bir yöntem de açiklanmaktadir. Tercih edilen bir yönde, söz konusu mikrop bir bakteri, bir mantar, bir virüs veya bir parazittir.

Ayrica, bir mikrobiyal, bakteriyel, fungal, viral ve/veya parazitik enfeksiyonun veya bir mikrobiyal, bakteriyel, fungal, viral ve/veya parazitik enfeksiyondan kaynaklanan bir durumun engellenmesinde veya tedavisinde bulusa göre kullanim için bir polipeptit ve/veya nükleik asit molekülü saglanmaktadir.

Burada kullanildigi sekliyle, bir “süje” bir insan veya bir hayvandir. Süjelere, bunlarla sinirli kalmamak kaydiyla, insanlar, domuzlar, gelincikler, foklar, tavsanlar, kediler, köpekler, inekler ve atlar gibi memeliler ve tavuklar, ördekler, kazlar ve hindiler gibi kuslar dahildir. Bulusun tercih edilen bir uygulamasinda bir süje bir memelidir. Özellikle tercih edilen bir uygulamada süje bir insandir. 02116-P-0001 Bulus ayrica, bir mikrobun, örnegin bir bakterinin, bir virüsün, bir mantarin veya bir parazitin büyümesinin önlenmesi için, söz konusu mikrobun veya parazitin bulusa göre bir polipeptit veya farmasötik bilesimle temas ettirilmesini içeren bir yöntein de saglamaktadir. Söz konusu temas, i'n vivo veya in vitro gerçeklestirilebilir.

Bulusa göre polipeptitler ve farmasötik bilesimler, çesitli viral, bakteriyel ve fungal enfeksiyonlar gibi çesitli mikrobiyal enfeksiyonlarin tedavisinde etkilidir. Örnegin, polipeptitler ve farmasötik bilesimler, Gram-negatif ve Gram-pozitif bakterilerin tedavisinde etkilidir. Insanlarda veya hayvanlarda, bulusun polipeptitleriyle ve bilesimleriyle tedavi edilebilen enfeksiyonlara neden olabilen patojenik bakterilerin örneklerine, bunlarla sinirli kalinamak kaydiyla, Listeria, Eschericihia, klamidya, riketsial bakteriler, mikobakteriler, stafilokok, streptokok, pnömonokok, meningokok, Klebsiella, psödomona, Legionella, difteri, Salmonella, basil, Vibrio kolera, tetanos, Klostridyum, Bacillus, Yersinia ve Leptospira bakterileri dahildir.

Insanlarda veya hayvanlarda, bulusun polipeptitleriyle ve bilesimleriyle tedavi edilebilen enfeksiyonlara neden olabilen patojenik virüslerin örneklerine, bunlarla sinirli kalmamak kaydiyla, A, B veya C hepatit, herpes Virüsü (örnegin VZV, HSV-I, HAV-6, HSV-ll, CMV, EpsteinBarr-virüsü), adenovirus, influenza virüsü, Ilavivirüsler, ekovirüs, rinovirüs, coxsackie Virüsü, koronavirüs, solunum sinsisyal virüsü, HTLV virüsü, dengue virüsü, papillomavirüs, polio virüsü, kuduz Virüsü ve insan bagisiklik yetmezligi virüsü (HIV virüsü; örnegin, tip I ve II) dahildir.

Insanlarda veya hayvanlarda, bulusun polipeptitleriyle ve bilesimleriyle tedavi edilebilen enfeksiyonlara neden olabilen patojenik mantarlarin örneklerine, bunlarla sinirli kalmamak kaydiyla, Kandida (örnegin, albikanlar, krusei, glabrata, tropicalis), Aspergillus (örnegin, fumigatus, niger), Cryptococcus neoformans, Histoplasma capsulatum, Genus Mucorales, Blastomyces dermatitidi's, Paracocci'di'oides brasili'ensis ve Coccidioi'des immitis dahildir. 02116-P-0001 Insanlarda veya hayvanlarda, bulusun polipeptitleriyle ve bilesimleriyle tedavi edilebilen enfeksiyonlara neden olabilen patojenik parazitlerin örneklerine, bunlarla sinirli 'kalmamak kaydiyla, Entamoeba histolyti'ca,Plasmodium (örnegin falciparum, vivax), Entamoeba. Giardia, Balanti'di'um call', Acanthamoeba, Cryptosporidium sp., Pneumocysti's carini'i', Babesia microti, Trypanosoma (örnegin brucei, cmzi), Leishmania (örnegin donovani) ve T oxoplasma gondi'i' dahildir.

Tercih edilen bir uygulamda, bulusun polipeptitleri ve farmasötik bilesimleri, metisiline-dirençli Staphylococcus aureus (MRSA) ve (dirençli-olmayan) S. aureuS, Staphylococcus epidermz'dz's, Gram-negatif bakteri Pseudomonas aerugi'nosa ve mantar türleri Candida albi'cans ve Aspergillus nigersin neden oldugu enfeksiyonlarin tedavisinde etkilidir.

Polipeptitleri ihtiva eden bilesimler profilaktik ve/veya terapötik tedaviler için verilebilir. Terapötik uygulamalarda, polipeptitler veya bilesimler, halihazirda bir hastaliktan muzdarip bir süjeye, tercihen bir insana, enfeksiyonun veya enfeksiyondan kaynaklanan durumun semptomlarinin ve komplikasyonlarinin etkisiz hale getirilmesi için yeterli bir miktarda verilir. Profilaktik uygulamalarda, polipeptitler veya bilesimler, bir mikrobiyal veya parazitk enfeksiyona yakalanma riskinde olan bir süjeye, örnegin bir insana veya hayvana, enfeksiyonu engellemek veya en azindan bir enfeksiyonun gelismesini önlemek için yeterli bir miktarda verilir. Polipeptit tipik olarak bulusa göre farmasötik bir bilesimde, bir durumun veya hastaligin, özellikle bir mikrobiyal veya parazitik enfekisyonla iliskili semptomlarin iyilestirilmesi için yeterli bir miktari olan terapötik bir miktarda mevcuttur. Bulusa göre bir polipeptidin verilisinin tipik dozlari veya en az iki dozun kombinasyonlari, polipeptidin boyutuna bagli olarak vücut agirliginin kilogrami basina 0,01 ila 10 mg arasindadir.

Bulusun polipeptitleri ve farmasötik bilesimleri, çok çesitli uygulamalar için uygundur. Örnegin, topikal uygulama, örnegin deri enfeksiyonlarinin, yara 02116-P-0001 enfeksiyonlarinin ve idrar yolu enfeksiyonlarinin tedavisinde veya engellenmesinde kullanilabilirler. Burada önceden ayrintili olarak açiklandigi üzere, bulusun polipeptitleri biyofilm olusumunu engelleyebilir ve var olan biyoiilmleri dagitir, biyot'ilm olusumu alanindaki ve çevresindeki bakterileri, mantarlari veya diger mikroplari öldürür ve pro-enflamatuar mikrobiyal endotoksinleri nötrlestirerek bagisiklik yanitlarini modüle eder. Bakteriyel mikrofilmler kütanöz yara iyilesmesini geciktirebilir ve enfekte deri yaralarinin, deri enfeksiyonklarinin veya idrar yolu enfeksiyonlarinin iyilestirilmesinde veya tedavisinde konvansiyonel antibiyotiklarin topikal antibakteriyel etkililigini indirgeyebilir. Bulus bu nedenle, deri enfeksiyonunun, yara enfeksiyonunun ve/Veya idrar yolu enfeksiyonunun tedavisinde veya engellenmesinde kullanim için bulusa göre bir polipeptit, farmasötik bilesim ve/veya nükleik asit molekülü saglar. Ayrica, yara iyilesmesinde kullaniin için bulusa göre bir polipeptit, farmasötik bilesim ve/veya nükleik asit molekülü de saglanmaktadir. Ayrica, deri enfeksiyonunun, yara enfeksiyonunun, idrar yolu enfeksiyonunun tedavisi veya engellenmesi için ve/veya yara iyilesmesi için bulusa göre bir polipeptidin, farmasötik bilesimin ve/veya nükleik asit molekülünün kullanimi da saglanmaktadir. Bulus ayrica, deri enfeksiyonundan, yara enfeksiyonundan ve/veya idrar yolu enfekisyonundan muzdarip bir süjenin tedavisi için, söz konusu süjeye, bulusa göre bir polipeptidin, bulusa göre bir farmasötik bilesimin veya bulusa göre bir nükleik asit molekülünün terapötik olarak etkili bir miktarinin verilisini içeren bir yöntein de saglamaktadir.

Bulusun polipeptitleri ayrica, mikrobiyal, örnegin bakteriyel, viral, fungal, parazitik enfeksiyonla duyarli materyaller için bir koruyucu olarak da avantajli sekilde kullanilabilir. Bu tip materyal bulusun bir polipeptidiyle doyurulabilir veya kaplanabilir veya sarilabilir. Burada önceden ayrintili olarak açiklandigi üzere,` bulusun polipeptitleri kanda, plazmada ve serumda ve plazma bilesenleri gibi bilesenlerin varliginda antimikrobiyal aktiviteyi muhafaza eder. Bu nedenle bulusun polipeptitleri ve farmasötik bilesimleri özellikle sistemik uygulama için ve implantlar ve tibbi cihazlarla iliskili enfeksiyonun tedavisi ve/veya 02116-P-0001 engellenmesi için faydalidir. Burada kullanildigi sekliyle ``tibbi cihaz” terimi, insan veya hayvan gövdesinde kullanilabilen herhangi bir tipteki cvihazi ifade etmektedir ve bunlara. bunlarla sinirli kalmamak kaydiyla, tibi aletler, tibbi araçlar, kalçalar ve dizler dahil olmak üzere suni eklemler ve dis protezleri gtibi protezler, gögüs implanltlari, kalp pilleri, kalp valflari, stentler, kateterler, kulak tüpleri, ateller, tibbi cihazlar için vialar ve yara veya doku sargilari gibi implante edilebilir cihazlar dahildir. lmplantlar ve tibbi cihazlar siklikla, Ömeklerde ortaya kondugu üzere mevcut bulusun polipeptitleri tarafindan basarili bir sekilde etkisiz hale getirilen mikrobiyal enfeksiyonla, özellikle biyofilm enfeksiyonlariyla iliskilidir. Ayrica, implantlar ve tibbi cihazlar genellikle hizli bir sekilde, implantasyondan sonra konak sivilardan gelen plazma bilesenleri tarafindan sarilir. Bulusun polipeptitleri Ömeklerde ortaya kondugu üzere plazina bilesenlerinin varliginda antimikrobiyal aktivite sagladigi için, implantlarin ve/veya tibbi cihazlarin mikrobiyal enfekisyonu bulusa göre bir polipeptit tarafindan etkili bir sekilde tedavi edilir ve/veya engellenir. Bu nedenle, bulusa göre bir polipeptidin, bir implant ve/veya tibbi cihaz için bir koruyucu olarak kullanimi saglanmaktadir. Ayrica, bir implantin ve/veya tibbi cihazin mikrobiyal enfeksiyonunun, tercihen bakteriyel enfeksiyonunun engellenmesinde ve/veya tedavisinde kullanim için bulusun bir polipeptidi de saglanmaktadir.

Bulusun bir polipeptidi avantajli sekilde kontrollü bir salima ve/veya hedeflenen aktarim tasiyicisina katilir. Burada kullanildigi sekliyle, “kontrollü salim” terimi, bulusun polipeptidinin zamana bagli bir biçiinde salinmasini ifade etmektedir. Bir uygulamada, kontrollü salim yavas salimi ifade etmektedir. Burada kullanildigi sekliyle, “hedeflenen aktarim” terimi, bulusun polipeptidinin alana-yönelik bir biçimde salinmasini ifade etmektedir. Kontrollü bir salim aracinin kullanimi, bulusun polipeptidinin enjeksiyonuyla oldugu sekilde sik verilisin önlenebilmesi avantajina sahiptir. Bir hedeflenen aktarim aracinin kullanimi, bulusun polipeptidinin bir süjenin gövdesindeki, bir entlamasyon alani veya bir enfeksiyon alani gibi bir ilgi konusu alana etkili bir sekilde aktarilmasi ve/veya bu alanda muhafaza edilmesi avantajina sahiptir. Tercihen, bulusun bir polipeptidi, 02116-P-0001 bakteriler, mantarla, Virüsler ve parazitler dahil olmak üzere mikroorganizmalar tarafindan enfekte olan bir alana hedeflenir. Kontrollü salim ve/veya hedeflenen aktarim tasiyicilari teknikte iyi bilinmektedir. Kontrollü sa'lim ve/veya hedeflenen aktarim araçlarinin sinirlayici olmayan örnekleri nanopartiküller, mikropartiküller, nanokapsüller, mikrokapsüller, lipozomlar, mikroküreler, hidrojeller, polimerler, lipit kompleksleri, serum albümini, antikorlar, siklodekstrinler ve dekstranlardir.

Kontrollü salim örnegin, bulusun bir polipeptidinin bu tip tasiyicinin içine veya üzerine katilmasiyla saglanir. Tasiyicilar, bulusun bir polipeptidini yakalayan partikülleri olusturan ve aköz, asitli veya bazik ortam veya vücut sivilari gibi uygun bir ortamda yavasça parçalanan veya çözünen ve böylelikle polipeptidi salan materyallerden yapilir. Hedeflenen aktarim örnegin, yüzeyinde hedefleyici gruplara sahip bir tasiyici saglayarak elde edilir. Hedefleyici gruplar içeren bu tip tasiyici Örnekleri antikor-is]evsellestirilmis tasiyicilar, alana-özgü bir liganda sahip tasiyicilar ve bir pozitif veya negatif yüzey yüküne sahip tasiyicilardir.

Kontrollü salim ve/veya hedeflenen aktarim için tercih edilen partiküller, opsiyonel olarak hedefleyici gruplarla donatilan nanopartiküller. yani çap olarak yaklasik 1 ila 500 nm arasinda, tercihen 200 nm”ye kadar olan partiküller ve lipozomlardir. Bu nedenle bulus, bulusun bir polipeptidini ve bu tip kontrollü salim tasiyicisi içeren farmasötik bilesimleri içeren bir kontrollü salim tasiyicisi saglarnaktadir. Ayrica, bulusun bir polipeptidini ve bu tip hedeflenen aktarim tasiyicisini içeren bir farmasötik bilesim içeren bir hedeflenen aktarim tasiyicisi da saglanmaktadir. Söz konusu tasiyici tercihen, nanopartiküllerden, mikropartiküllerden, nanokapsüllerden, mikrokapsüllerden, lipozomlardan, mikrokürelerden, hidrojellerden, polimerlerden, lipit komplekslerinden, serum albümininden, antikorlardan, siklodekstrinlerden ve dekstranlardan olusan gruptan seçilir.

Tercih edilen hedeflenen aktarim ve/veya kontrollü salim tasiyicilari biyoçözünür materyalden yapilir. Burada kullanildigi sekliyle “biyoçözünür”, fizyolojik kosullar altinda çözünen molekülleri ifade etmektedir. Bunlara, hidrolitik olarak çözünebilen moleküller ve enzimatik çözünme gerektiren moleküller dahildir. 02116-P-0001 Uygun biyoçözünür materyallere, bunlarla sinirli kalmamak kaydiyla, PLA (poli laktik asit), PGA (poli glikolik asit), polikaprolakton (PCA), polietilen oksit (PEO), polidioksanon (PDS), polikaprolakton (PCL), polipropilen fümarat, laktid, glikolid ve kaprolakton gibi laktonlar türetilen polimerler, trimetilen karbonat ve tetrametilen karbonat gibi karbonatlar, dioksanonlar, etilen glikol, polyester amid (PEA) etilen oksit, esteramidler, y-hidroksivalerat, ß-hidroksipropionat, d-hidroksi asit, hidroksibuteratlar, hidroksi alkanoatlar, poliimid karbonatlar, poliüretanlar. polianhidritler ve bunlarin kombinasyonlari, hiyalüronik asit, kitosan ve selüloz gibi polisakkaritler ve jelatin ve kolajen gibi proteinler gibi biyoçözünür polimerler ve dogal biyoçözünür materyaller dahildir.

Ayrica, tercihen implantlar ve/veya tibbi cihazlar için, bulusun bir polipeptidini içeren bir kaplama da saglanmaktadir. Bir uygulamada, bu tip kaplama, bulusun polipeptidinin kontrollü salimini saglar. Tibbi cihazlar için bu tip kontrollü salim kaplamasi tercihen biyoçözünür bir materyal içerir, böylece bulusun polipeptidinin salimi, kaplama materyalinin çözünmesiyle elde edilir. Bu nedenle ayrica, bulusun bir polipeptidini içeren bir kontrollü salim kaplamasi da saglanmaktadir. Ayrica, bulusun bir polipeptidini ve bir biyoçözünür materyal içeren bu tip kaplamayi içeren bir tibbi cihaz saglanmaktadir. Bulusa göre bir biyoçözünür kaplama, yukarida tanimlanan sekilde bir biyoçözünür materyal içerir. Özellikle, bu tip biyoçözünür kaplama, asagidakilerden olusan gruptan seçilir; PLA (poli laktik asit), PGA (poli glikolik asit), polikaprolakton (PCA), polietilen oksit (PEO), polidioksanon (PDS), polikaprolakton (PCL), polipropilen famarat, laktid, glikolid ve kaprolakton gibi laktonlar türetilen polimerler, trimetilen karbonat ve tetrametilen karbonat gibi karbonatlar, dioksanonlar, etilen glikol, polyester amid (PEA) etilen oksit, esteramidler, y-hidroksivalerat, [3- hidroksipropionat, (it-hidroksi asit, hidroksibuteratlar, hidroksi alkanoatlar, poliimid karbonatlar, poliüretanlar, polianhidritler ve bunlarin kombinasyonlari, hiyalüronik asit, kitosan ve selüloz gibi polisakkaritler ve jelatin ve kolajen gibi proteinler. Ayrica, bir implantin ve/veya tibbi cihazin mikrobiyal enfeksiyonunun, tercihen bakteriyel enfeksiyonunun engellenmesi ve/veya tedavisi için, söz 02116-P-0001 konusu implantin ve/veya tibbi cihazin bulusun bir polipeptidini içeren bir kaplamayla saglanmasini ve söz konusu implant veya tibbi cihazin bir süjeye implante edilmesini içeren bir yöntem saglanmaktadir.

Polipeptitler ve farmasötik bilesimler ayrica, lipoteikoik asit, peptidoglikan ve lipopolisakkaritler gibi pro-enflamatuar mikrobiyal endotoksinleri nötrlestirdikleri ve böylelikle nötrofillerin, makrofajlarin/monositlerin ve lenfositlerin akisini ve enfekte süje tarafindan pro-enflamatuar mikrobiyal bilesiklerin salimini önledikleri, indirgedikleri veya engelledikleri için anti-enIlamatuar ajanlar olarak da faydalidir. Ayrica bu nedenle burada, pro-enflamatuar bilesiklerin saliminin önlenmesi için, pro-enflamatuar bilesikleri salabilen bir hücrenin bulusa göre bir polipeptitle temas ettirilmesini içeren bir yöntem de açiklanmaktadir. Söz konusu temas i'n vi'vo ve in vitro gerçeklestirilebilir. Ayrica burada, bir anti-enflamatuar ajan olarak bulusa göre bie polipeptit de açiklanmaktadir.

Her ne kadar bulusa göre polipeptitler kuvvetli antimikrobiyal ajanlar olsa da, antibiyotikler, antiviraller ve antifungaller veya diger antimikrobiyal peptitler gibi konvansiyonel anti-enfektifler gibi bilinen antimikrobiyal ajanlarla, antikorlarla ve kimyasallarla Örnegin duyarlastiricilarla, nanopartiküllerle birlestirilebilir. Bu tip bir kombinasyon artan bir antimikrobiyal aktiviteyle sonuçlanabilir veya aktivite spektrumunu genisletebilir. Bulusun polipeptitleri örnegin, bakteriyel enfeksiyonlarin tedavisi için penisilinlerle, sefalosporinlerle, makrolidlerle, florokuinolonlarla, sülfonamidlerle, tetrasilinlerle ve/veya aminoglikosidlerle birlestirilebilir. Viral enfeksiyonlarin tedavisi için, polipeptitler asiklovir, gansiklovir, zidovudin (AZT) veya didanosin gibi antiviral nükleosit analoglariyla veya oseltamivir, peramivir veya zanamivir gibi nöramidaz inhibitörleriyle birlestirilebilir. Mantar enfeksiyonlarinin tedavisi için bulusun polipeptitleri ve bilesimleri, polien antifungallerle, imidazollerle, triazollerle, alilaminlerle, ekinokandinlerle, siklopiroksla, flusitosinle ve/veya griseofulvinl birlestirilebilir.

Bulus bu nedenle, bulusa göre bir polipeptit ve tercihen penisilinlerden, sefalosporinlerden, karbapenemlerden ve mupirosinden olusan gmptan seçilen bir 02116-P-0001 antibiyotik veya bir antimikrobiyal peptit gibi ilave bir antimikrobiyal ajan içeren bir farmasötik bilesim saglamaktadir.

Bulusa göre farmasötik bilesimler en az bir adet farmakolojik olarak kabul edilen tasiyici, seyreltici veya eksipiyan içerir. Uygun tasiyicilarin örnekleri örnegin laporoskopik limpet hemosiyanin (KLH), serum albümini (örnegin BSA veya RSA) ve ovalbümin içerir. Tercih edilen bir uygulamada söz konusu uygun tasiyici bir solüsyon, örnegin salindir. Tabletlere, kapsüllere ve benzerlerine katilabilen eksipiyanlarin örnekleri sunlardir: gam tragakant, akasya, misir nisastasi veya jelatin gibi bir baglayici; mikrokristalin selüloz gibi bir eksipiyan; misir nisastasi, Önceden jelatinize edilmis nisasta, aljinik asit ve benzerleri gibi bir parçalayici ajan; magnezyum stearat gibi bir yaglayici; sükroz, laktoz veya sakarin gibi bir tatlandirici; nane, kekik üzümü yagi veya visne gibi bir aroma verici ajan.

Dozaj ünite formu bir kapsül oldugunda, yukaridaki tipteki inateryallere ek olarak, sabit yag gibi bir sivi tasiyici ihtiva edebilir. Kaplainalar olarak veya baska sekillerde dozaj ünitesinin fiziksel formunu modifiye etmek için çesitli diger materyaller mevcut olabilir. Örnegin, tabletler selakla, sekerle veya her ikisiyle de kaplanabilir. Bir surup veya eliksir aktif bilesik, bir tatlandirici olarak sükroz, koruyucular olarak metil ve propil parabenler, bir boya ve visne veya portakal aromasi gibi bir aroma verici ajan ihtiva edebilir. Bulusa göre bir farmasötik bilesim tercihen insan kullanimi için uygundur.

Burada tarif edilen farmasötik bilesiinler, çok çesitli farkli yollarla verilebilir. Örneklere, bulusa göre bir polipeptit içeren ve farmakolojik olarak kabul edilen bir tasiyici ihtiva eden bir farmasötik bilesimin oral, intranazal, rektal, topikal, intraperitoneal, intravenöz, intramusküler, subkütan, subdermal, transdermal, intratekal ve intrakraniyal yöntemler vasitasiyla verilisi dahildir. Oral verilis için, etken madde kapsüller, tabletler ve tozlar gibi kati dozaj fonnlarinda veya eliksisler, suruplar ve süspansiyonlar gibi sivi dozaj formlarinda verilebilir. 02116-P-0001 Enjeksiyon için steril bilesimler konvansiyonel uygulamaya göre, bulusun polipeptidinin su veya susam yagi, hindistan cevizi yagi, fistik yagi, kolza tohumu yagi vb gibi dogal olusumlu bir bitkisel yag veya etil oleat veya benzerleri gibi bir sentetik yag araci gibi enjeksiyon için bir araç içinde çözündürülmesiyle veya süspanse edilmesiyle formüle edilebilir. Tamponlar, koruyucular, antioksidanlar ve benzerleri de katilabilir.

Topikal verilis için bilesimler de konvansiyonel farmasötik uygulamaya göre hazirlanabilir. Burada kullanildigi sekliyle “topikal verilis”, mikrobiyal veya parazitik enfeksiyonlardan kaynaklanan durumlarin lokal olarak tedavi edilmesi için deri veya mukuz membranlar gibi bir vücut yüzeyine uygulamayi ifade etmektedir. Topikal verilis için uygun forrnülasyonlarin örneklerine, bunlarla sinirli kalmamak kaydiyla, bir krem, jel, merhem, losyon, köpük, süspansiyon, sprey, aerosol, toz aerosol dahildir. Topikal ilaçlar epikütanöz olabilir, yani dogrudan deriye uygulanirlar. Topikal ilaçlar ayrica, örnegin solunum yolunun mukoza] epitelyumuna uygulama için solunum yoluyla olabilir veya derinin disindaki dokularin yüzeylerine uygulanabilir, mesela konjunktivaya uygulanan göz damlalari veya kulaga yerlestirilen kulak damlalari olabilir. Topikal verilis için formüle edilen söz konusu farmasötik bilesim tercihen, bir emulgan, bir seyreltici, bir hümektan, bir koruyucu, bir pH ayarlayici ve/veya su gibi, topikal uygulama için uygun en az bir farmasötik eksipiyan içerir.

Bulusa göre bir polipeptit ayrica, tanisal kullanim için de özellikle uygundur.

Polipeptitler mikrobiyal enfeksiyonun saptanmasi için, örnegin mikrobiyal toksinlerin, örnegin LPS, LTA ve PG dahil olmak üzere kan, plazma, mukus, yara eksüdasi ve idrar gibi fizyolojik numunede mevcut bakteriyel toksinlerin saptanmasiyla saptanmasi için kullanilabilir. Ayrica, polipeptitler, bu numunelerde mikrobiyal toksinlerin miktarinin belirlenmesi için de kullanilabilir.

Bu nedenle. bir tanisal ajan olarak kullanim için bulusa göre bir polipeptit nükleik asit molekülü saglanmaktadir. Ayrica, kan, plazma, mukus, yara eksüdasi ve idrar numunesi gibi fizyolojik bir numunede bir mikrobiyal toksinin, tercihen bir 02116-P-0001 bakteriyel veya fungal toksinin saptanmasi için bulusa göre bir polipeptidin kullanimi da saglanmaktadir. Yukarida tarif edildigi üzere, bulusa göre bir polipeptit bir biyotin, bir floresin etiketi, bir yakin kizilötesi boya veya bir radyoaktif` izotp gibi uygun bir bölütle eslenebilir. Bu tip etiketlenmis polipeptitler, bakteriyel enfeksiyonlar gibi mikrobiyal enfeksiyonlarin saptanmasi için bir yöntemde kullanilabilir çünkü bir mikrobiyal enfeksiyon alanina göç ederler. Polipeptide ekli kullanilan etiket için uygun bir detektör kullanilarak, enfeksiyon alanlarinin saptanmasi mümkündür. Bakteriyel enfeksiyonlar gibi mikrobiyal enfeksiyoknlari saptanmasi için yöntemler bu nedenle bulus tarafindan saglanmaktadir. Yöntem tipik olarak etiketlenmis bir polipeptidin bir mikrobiyal organizmayla enfekte olmus veya enfekte oldugundan süphelenilen bir süjeye verilisini içerir. Etiketlenmis polipeptit enfeksiyöz organizmayla etkilesebildigi için, enfeksiyon alaninda birikir. Bir fizyolojik numunede mikrobiyal toksinlerin saptanmasi için, yöntem etiketlenmis bir polipeptidin, bir mikrobiyal organizmayla enfekte olmus veya enfekte oldugundan süphelenilen bir süjeye verilisini içerir. Polipeptide ekli etikete duyarli çesitli detektörler kullanilarak polipeptidin enfeksiyon alaninda veya bir numunede birikmesini saptamak mümkündür.

Bulusa göre polipeptitlerin bir baska faydali uygulamasi, gida ürünlerinin korunmasidir. Bu nedenle ayrica, bulusa göre bir polipeptidin bir gida koruyucusu olarak kullanimi da saglanmaktadir. Genel olarak, patojenik veya bozuk mikroorganizma, gidalarin 60 ila 100°C arasinda degisen sicakliklara maruz birakilarak isisal olarak islenmesiyle yok edilir. Bu islem gida ürünü üzerinde, istenmeyen organoleptik etkiler gibi istenmeyen etkilere sahip olabilir. Bulusa göre bir polipeptidin gida ürünlerinde bir koruyucu olarak kullanimi, uzamis raf ömrüyle ve/veya gida ürününün arttirilmis güvenligiyle sonuçlanabilir.

Gidalardaki patojenik mikroorganizmalar süjelerin enfeksiyonlarina veya zehirlenmesine neden olabilir ve Campylobacter jejuni, Salmonella zfyphi, Salmonella paratyphi' ve non-typhi Salmonella türleri, Staphylococcus aureus, 02116-P-0001 Escheri'chi'a call', Listeria monocyrogenes, Shigella ve Clostridz'um Botuli'num, Rotavirüsler ve Norwalk virüsü gibi virüsler, Taenia solium, T aeni'a sagi'nata ve Trichi'nella spirali's gibi parazitler ve kütler içerir. Gida bozulmasi, gida ürünleirnin görünümünün, kivaminin, lezzetinin ve/Veya kokusunun degismesini ifade etmektedir ve Lactobacillus, Leuconostoc, Pseudomonas, Micrococcus, Flavobaeterium, Serratia, Enterobacter ve Streptococcus gibi bakgteriler, Aspergillus, Fusarium ve Cladosporium gibi mantarlar ve mayalar buna neden olabilir.

Bulus asagidaki sinirlayici-olmayan örneklerde daha ayrintili olarak açiklanacaktir.

Sekillerin kisa açiklamasi w: 5 uM Cancidas veya 0,8-6,4 uM gösterilen peptitler varliginda PBS°te kültürlenen bir A. nigefin büyüme egtileri. Degerler, 0 saatte optik yogunluga göre 600 nm`de optik yogunluk olarak ifade edilmektedir. 16 saatlik inkübasyondan sonra PBS içinde fungal büyümenin isik mikrogratlari. Üç kopya olarak temsilci isik mikrograflari.

Sekil 2: PES, Cancidas, OP-145 veya gösterilen peptitlerle 16 saatlik inkübasyondan sonra %25 plazmada A. niger büyümesinin isik mikrograflari. Üç kopya olarak temsilci isik mikrograflari.

SM: Farkli konsantrasyonlarda (uM) olarak biyofilm olusumunun S. aureus JAR060131 tarafindan önlenmesi. Sonuçlar, muamele edilmemis numuneye (0) göre biyofilm kütlesinin ± üç bagimsiz deneyin standart sapmalarinin ortalama yüzdesi olarak ifade edilmektedir. A, kaplanmamis kuyucuklai'da biyot'ilm olusumu. B, plazma-kapli kuyucuklarda biyofilm 02116-P-0001 Örnekler Gereç ve yöntemler Antimikrobival peptitlerin sentezi Sentetik peptitler, in situ aktivasyon için ön yüklemeli Tentagel reçineleri olan PyBop/NMM ve Fmoc yok edilmesi için NMPide %20 piperidin kullanilarak normal Fmoc-kimyasiyla hazirlandi [Hiemstra HS et al. Proc Natl Acad Sci USA, gerçeklestirildi. Nihai Fmoc yok edilisinden sonra, peptitler, C (trietilsilan) veya W (etanetiyol) peptit dizisinde mevcut oldugunda ilave tutucular ihtiva eden TFA/H2O 19/1 (v/V) ile yarildi. Peptitler eter/pentan l/l (v/v) çökeltilmesiyle ve ürünün santrifüjlemeyle izolasyonuyla izole edildi. Yaklasik 40°C9de havayla- kurutmadan sonra, peptitler asetik asit/su 1/10 (v/v) içinde çözündürüldü ve liyofilize edildi. Peptitler UPLC-MS (Acquity, Waters) kullanilarak saflik açisindan ve beklenen moleküler kütleleri gösteren Maldi-Tof kütle spektrometri (Microflex, Bruker) kullanilarak bütünlük açisindan kontrol edildi.

Kisaltmalar: Fmoc: 9H-f10renilmetiloksikarbonil NMM: N-metilmorfolin PyBOP: Benzotriazol- 1-yl-oksi-tris-pirolidino-fosfonyum heksaIlorofosfat TFA: tritloro asetik asit Bakteriyel suslar Metisilin-dirençli Staphylococcus aureus (MRSA)°nin klinik izolati olan LUH14616, Dr. S. Croes, Maastricht Üniversitesi Tip Merkezi, Maastricht, 02116-P-0001 S. aureus JAR, Campoccia et al. (Int .I Artif Organs. 2008 Sep;3l(9):84l-7)”de tarif edilmektedir. edilmektedir.

D60°ta tarif edilmektedir.

Bakteriler kullanima kadar -80°C,de depolandi. Orta kayit evre bakterilerinin inokülümleri, kan agar plakalarindan izole bakteriyel kolonilerin 2,5 saat süreyle Triptik Soya Suyu (TSB) vasatinda (Becton Dickinson, Le Pont de Clax, Fransa) inkübe edilmesiyle hazirlandi ve daha sonra ihtiyaç duyulan konsantrasyona Antibakteriyel aktivitenin belirlenmesi Peptitler PBS içinde S. aureus JAR LUH14616, Staphylococcus epidermi'di's RP62a ve Pseudomonas aeruginosa konsantrasyonda havuzlanmis insan plazinasi (Sanquin, Amsterdam, Hollanda) eklenerek veya eklenmeden inkübe edildi. Antimikrobiyal aktivite %99,9 ölümcül konsantrasyon (LC99,9), yani, 37°C3de çalkalama kosullari altinda 2 saatlik inkübasyondan sonra bakterilerin 2%99,9,unu öldüren en düsük peptit konsantrasyonu olarak ifade edilmektedir.

Peptitlerin hareketsiz evre bakterilerine yönelik antimikrobiyal aktivitesinin tayin edilmesi için, peptitler yukarida tarif edilen kosullar altinda 18-20 saatlik 02116-P-0001 ile inkübe edildi.

Antifungal aktivitenin belirlenmesi Peptitler Candida albicans Y-01`in bir orta-logaritmik kültürünün 1X105 hücre/ml`siyle, %50°lik bir nihai konsantrasyonda havuzlanmis insan plazmasi eklenerek veya eklenmeden inkübe edildi. Antimikrobiyal aktivite %99,9 ölümcül konsantrasyon (LC99,9), yani, 37°C3de çalkalama kosullari altinda 2 saatlik inkübasyondan sonra hücrelerin 2%99,9"unun öldürüldügü en düsük peptit konsantrasyonu olarak ifade edilmektedir.

Peptitlerin fungal büyüme üzerindeki etkisi, Aspergi'llus niger kullanilarak tayin edildi. Peptitler PBS içinde A. niger PagsA-lux”ün 7,5)(104 spor/mFSiyle, %25”lik bir konsantrasyonda havuzlanmis insan plazmasi eklenerek veya eklenmeden inkübe edildi. Pozitif kontrol olarak, sporlara antifungal caspofungin (Cancidas) ile muamele edildi. Emilim süreç içerisinde ve 16nc1 saatte ölçüldü, fungal büyüme isik mikroskopisi kullanilarak görsellestirildi.

Anti-bivofilm aktivitesinin belirlenmesi sekilde, 96-kuyucuklu polipropilen plakalarda biyofilmi-ayarlanmis BM2 içinde inkübasyondan sonra, planktonik bakteriler PBS ile dört yikamayla yok edildi ve biyofilmler kristal mor ile boyandi. Etanolle çözünürlestirmeden sonra, 590 nm°de optik yogunluk, biyofilm kütlesinin bir ölçümü olarak belirlendi. Anti-biyof'ilm aktivitesi %50 önleyici konsantrasyon (ICSO), yani, biyofilm kütlesinin 2%50 indirgenmesiyle sonuçlanan en düsük peptit konsantrasyonu olarak ifade edilmektedir. 02116-P-0001 Peptitlerin plazma varliginda anti-biyofilm aktivitesinin tayin edilmesi için, 96- kuyucuklu polipropilen plakalar 4°C°de %20 plazmayla gece boyunca inkübasyon yapilarak plazmayla kaplandi. Kuyular bir kez steril suyla yikandi ve yukarida tarif edildigi sekilde S. aureus ve peptitlerle asilandi.

Immünomodülatör aktivite: LPS ve LTA nötrlestirme Peptitler veya 2 mg/ml LTA (S. aureus, endotoksinsiz) veya 1x]09 CPU/ml UV ile öldürülmüs S. aureus JAR060131 ile dakika süreyle 37°C'de ön-inkübe edildi. Seyreltilmis tam insan kani 20 saat süreyle 37°C°de peptit-LPS/LTA/S. aureus karisimlariyla uyarildi. Süzüntülerdeki nötrlestirme aktivitesi %50 veya %90 önleyici konsantrasyon (IC50 ve IC90), indirgenmesiyle sonuçlanan en düsük peptit konsantrasyonu olarak ifade edilmektedir.

Sonuçlar OP-145,ten türetilen 25 peptidin tanimlanmasi Antimikrobiyal olan ve OP-145'e kiyasla plazma bilesenlerine daha az duyarli olan yeni peptitler, bilgisayar öngörüsüyle tanimlandi.

OP-145”in bir amfipatik sarmal yapiyi benimsedigi öngörülmektedir. Bu tip bir yapida, peptit, sarmalin bir tarafinda yüklü gruplar ve diger tarafta hidrofob gruplar ihtiva eden bir a-sarmalinda katlanir. Amino asit ikamelerine sahip peptitlerin uygulandigi önceki çalismalardan, sarmalin hidrofob tarafinda sonuçlanan yüklü gruplarin eklenmesinin veya sarmalin yüklü tarafinda sonuçlanan hidrofob gruplarin eklenmesinin, azalmis antibakteriyel aktiviteye sahip bilesiklerle sonuçlandigini bilmekteyiz. 02116-P-0001 Böylelikle, yeni tasarlanan peptitlerin, amfipatik bir sarmalda katlandigi öngörülmelidir. OP-145”in dizisine dayali olarak, amino asit ikamesi için asagidaki motifi tasarladik. OP-l45”e yapi benzerligini minimize ederek ve anti- mikrobiyal aktiviteyi etkileyen plazma bilesenlerine baglanmanin miminize edilme sansini maksimize ederek, OP-145°ten önemli sekilde ayri peptitler Bilgisayar öngörüsü, asagidaki motifin amfipatik bir sarmala sahip peptitler Asagidaki 25 peptit, motife esasen seçildi (J = asetil, B = amid). 02116-P-0001 asetil, 8 Tablo 1. P139-163 peptltlerin dizisi. J W K R V F R I W K R I F R Y L K R P V R B W K R L V R I I K R I Y R Q L K R P V R B P139 J L K K L P14O J L R R L P141 J L R R L Y K R V F R L L K R W W R Y L K R P V R B P142 J L R R L P143 J L R R L Y K R V V K L W K R L F R Q L R R P V R B P144 J L K K L Y K R V A K I W K R W I R Y L K K P V R B P146 J L K K L Y K R L F K I L K R I L R Y L R K P V R B P147 J L K K L W K R L A R L L K R F I R Q L R R P V R B P148 J L K R V W K R V F K L L K R Y W R Q L K K P V R B P149 J L K K V Y K R L A R L L K R Y I R Y L R R P V R B P15O J L K K V W K R V A R L I K R W F R Y L R R P V R B P151 J L K K L Y K R L F K L W K R L Y R Y L K K P V R B P152 J L R R V Y K R L A R L 1 K R Y L R Q L K K P V R B P153 J L R K L W K R V V K 1 W K R Y L R Q L R R P V R B P154 J L R K L W K R L A K I I K R L Y R Y L R R P V R B P155 J L K K V Y K R V A R L I K R L F R Y L K R P V R B P156 J L R R L P157 J L K K V W K R V F R I L K R F L R Y L K R P V R B P158 J L R R V Y K R L F R L W K R I I R Q L R R P V R B P159 J L K R L Y K R V F R L L K R Y Y R Q L R R P V R B P160 J L K K L W K R L A R L W K R 1 1 R Q L K K P V R B P161 J L R R V W K R V A R I I K R L Y R Y L K R P V R B P162 J L K R L W K R L F K I L K R Y Y R Y L R R P V R B P163 J L R R L W K R V F K I I K R L F R Q L K K P V R B Bu peptitler, plazma yoklugunda ve varliginda antibakteriyel aktiviteleri açisindan test edildi (Tablo 2). deger sekilde gelismis peptitler olarak seçildi.

Tablo 2. OP-l45”ten türetilen peptitlerin antimikrobiyal aktiviteleri. lAn'timikrobiyal aktivite lC99,9 (uM), yani, 2 saat içerisinde (yaklasik 1x106 CPU/ml S. aureus JAR olan) bakteriyel inokülümlerin %99,9°unu öldüren en düsük peptit konsantrasyonu olarak ifade edilmektedir. 02116-P-0001 Peptit Antimikrobiyal aktivitel IC99,9 (pM) PES %50 plazma 02116-P-0001 Peptit Antimikrobiyal aktivite1 IC99,9 (uM) PBS %50 plazma P145, P148 ve P159*un farkli bakterilere karsi antimikrobival aktivitesi PBS içinde, P145, P148 ve P159 orta-logaritmik kültürdeki tüm bakteriyel türlere karsi OP-l45 ile benzer bir antimikrobiyal aktiviteye sahip oldu (Tablo 3). %50 için (, S. epidermi'di's RP62a için (43-kat) ve P. aerugi'nosa PAOl için (>11-21-kat) daha yüksek bakteri öldürücü aktivite gösterdi. logaritmik kültürlerdeki antimikrobiyal aktivitesi. Sonuçlar LC99,9, yani, bakterilerin :%999 öldürülmesiyle sonuçlanan (uM olarak) en düsük peptit konsantrasyonu olarak ifade edilmektedir. Sonuçlar, en az iki bagimsiz deneyin medyan degerleridir. 02116-P-0001 LC99,9 (pM) aureusJAR060131 P1451,6 19,2 P1481,6 19,2 P159 2,4 12,8 1,6 204,8 1,6 9,6 1,6 8,0 2,4 9,6 epidermi'disRPöZa 0,8 204,8 0,8 3,2 0,8 3,2 1,6 3,2 aeruginosaPAOl 3,2 >204,8 1,6 25,6 1,6 12,8 1,6 12,8 S. aureus ve P159, logaritmik bakterilere kiyasla JAR060131`e karsi benzer antimikrobiyal aktivite gösterdi (Tablo 4). Böylelikle, süspansiyonuna karsi antimikrobiyal aktivitesi. Sonuçlar üç bagimsiz deneyin ortalama degerleridir.

LC99,9 (uM) >204,8 02116-P-0001 Pl48'in uzunluk varvantlarinin antimikrobival aktivitesi P148°in C- ve N-uçlarinda 4 amino asidin silintisi, S. aureus JAR06013l”e karsi antimikrobiyal aktivite üzerinde hiç etkiye sahip olmadi (Tablo 5). C- ve N- uçlarinda 5 amino asidin silintisi P148°e kiyasla antimikrobiyal aktiviteyi indirger ancak aktivite halen OP- 145”e kiyasla 5-kat artmistir.

Tablo 5. P148iin uzunluk varyantlarinin PBS ve %50 plazma içinde antimikrobiyal aktivitesi. Sonuçlar LC99,9, yani, S. aureusaun 2%99,9 öldürülmesiyle sonuçlanan (uM olarak) en düsük peptit konsantrasyonu olarak ifade edilmektedir. Sonuçlar iki bagimsiz deneyin ortalama degerleridir. J = asetil, Peptit Dizi JLKRVWKRVFKLLKRYWRQLKK JRVWKRVFKLLKRYWRQLKKPV JLKRVWKRVFKLLKRYWRQLKK JRVWKRVFKLLKRYWRQLKKPB JWKRVFKLLKRYWRQLKKPVRB JLKRVWKRVFKLLKRYWRQLKB JVWKRVFKLLKRYWRQLKKB JWKRVFKLLKRYWRQLKB JKRVFKLLKRYWRQLB LC99,9 (uM) 02116-P-0001 P145, P148 ve P159,un birden fazla alanin ikamesivle antimikrobival aktivitesi ikamesi, S. aureus JAR060131,e karsi antimikrobiyal aktivite üzerinde hiçbir etkiye sahip degildir (Tablolar 6-9). 02116-P-0001 Tablo 6. P'i45'in. PES VE %50 plezmada farkli Konumlarcla bir alanin Kamesiyle antjmikrcibiyal adivitesi. Iki bagimsiz ::e 13"`m sonuç ari. .J = asetil, 3 = amid 24'-- 1755-04 1255 05 1255 07 175310 2235-11 1255 20 115&)1 1255-22 ”5521 1155 2:! 1255-25 375925 ”55,27 1255-28 iiKRiviRiAkiitü .kRRIV'iRLAKL 'i-'iLV .LKALT'ÃRLAKL›I.-1LV iKRiAxaiAKi xâiv Lxnivxaiisiiquiv LKRIVmaLvki=n=Lf iKniviuiAin iaiv LKRlVLJLAKLAEFLV lKRlYKHlAKî «niv LtniVKHLAxizn4Av itKRiYKHLâKL ua ilKR: KRLANL na JLKRL KRLAKL MH KRLAKLIKH 12'.- Tablo 7 P148'in. PBS v, %50 plazmada farkli konumlarda bir alanin ikamesiyle antimikrobiyal akîivitesi Iki bagimsiz deneyin sonuçlari. = asetilv 8 = amid. 175510 1255 33 1755-94 1255!. 1255 &3 2155-4' 1155-43 2255 4'3 .255 50 2255 S? .IKRK'Ã-RGVV 17Ã^\'\$'Â.Q'i ; yi; i '.'Nv I H' ' 4, R 'i".\'›: il L' › 1 R w.' v: kit'xîß`iii H '1 V.' 51 9 V' '1-' 51 `1 '1. 517%: P 1Wî› 7' V'Ii'î' F 1 7.- u 1!) I) 1:50:50:) m .sospvlazmn _'58_ 5? plazma IKPu'R* 15 ."itv l& '-3` nun: ;ie sýirz k 0; llii npvki *in %1: 4 , @gr , :Su nisan iis 512 M izs XPh'R'r 15 ; si: :c 12: (Pvkh ii, in ;6 125 lKKPvP.? _Lâ . :56 .16 AKKFVRL Lrs . 08 zan ons 201.: 01 is __ 929.? i-; m 12'» iîa PiRr. p .'55 ci:: M: iiiçne lp gs:: :34 PVREi _ ;L _ :SÇ _.6_ LIG P'vRi' :e 255 ar; si-i PVP.:` :li 25-. :-3 bi) FRP; :o *ili 173 7 15: PR'II:: 11: J'iS LC› 13':- PK'RE lli :'.iu 115 9351- ]m Sl) I?" LC999 `IM' 02116-P-0001 Tablo 8. P159'un. PBS ve %50 plazmada farkli konumlarda bir alanin ikamesiyle antimikrobiyai aktivitesi. Iki bagimsiz deneyin sonuçlari.

J = asetil, 8 = amid. Lcsas (um) .

Peptid Ca"$ma* Dizi ms 50% .plazma Pas 50% plazma Tablo 9. P148”in. PBS ve %50 plazmada birden fazla alanin ikamesiyle antimikrobiyai aktivitesi.

Sonuçlar iki bagimsiz deneyin ortalama degerleridir. J = asetil. B = amid.

LC99.9(11M) Peptid PBS 50°..

DIZI plazma 02116-P-0001 Pl48 varvantlarinin pozitif vüklü amino asit ikamelerivle antimikrobival aktivitesi Lizin veya arjininin pozitif yüklü bir amino asitle degistirildigi Pl48 varyantlari. hem PBS°te hem %50 plazma varliginda S. aureus°a karsi antimikrobiyal aktiviteyi muhafaza eder (Tablo 10).

Tablo 10. P148'in, PBS ve %50 plazmada pozitif yüklü amino asit ikameleriyle antimikrobiyal aktivitesi. J = asetil, O = ornitin; X = diaminobütirik asit (DABA): U = diaminopropionik asit (DAPA), B = amid.

LC99.9 lEMl Peptid DIZI PES 50% plazma P148 LKRl/'E'JKRVFKLLKRY QLKKF'IR' 0.8 12.8 P365 '.<`3R`~/WKR`JFI-Ç_'_KRE Q_l'-'.KP'/P 0.8 12.8 PBGG '_ Ki`.r'\fi*.'KR"J Fl-I. _ _ KR& Q _l-(KP'JR 0.8 12.8 P367 LKRVih"R"/FKLLKRY' 'QLKKP'IR. 0.8 12,8 P369 ._ K R“iih'K RVFÖ L _ KRY "ELK K PVR 0.8 12.8 P370 7 KRVW KRVFKl _iÂFRY QLK KPIIR 0.8 25.6 P371 _KRVWKRVFKL_KQ`~ ;`g_l\'KP'/R 0.8 25.6 P373 :KRV WKRVFI-ÄL L KR" `j ,CHP R 0_8 25.6 P374 ;KR'IWKRVFKL_KR 'QLKîêP` 0.8 25.6 P375 :KRVWKRVFKLIKR QLKKP'IÜ. 0,8 12,8 P377 L.I«î`R'JirlKR`J}-K~_KR ';gnl\IKP'/R. 0.8 12.8 P381 LKR'Iii'JKR'IFF L L KRY -g KKF'IR 0.8 25.6 P382 :KRVWBRVFKLLXRY QLKKP'IR. 0_8 25.6 P383 LKRVWKRVFKL _KEY 'QLKKP'JR- 0.8 25.6 P38S ;KRVWKRVFKL_KRY QLNKP'IR': 0.8 12.8 P386 LKRVWKR'JFKL_KR` "ELKXP'JR' 0.8 25.6 P387 LKRVWKRVFKLLKR QLKKP'IX 1.6 25.6 P389 :ÜPVWKR'IFKLLKR QIKKP'IR': 0.8 12.8 PSSD I.K:`Ji'.'KR'JE-EL_KR QLI'IIKP'JR` 1.6 12.8 P391 LKR'IL'CIRVFKLLKR QLKKP'IRÄ. 0.8 25.6 P392 LKR"-/"wlx"7FK'__E\R ;ILKKP'JRI 0.8 12.8 P393 LKRV'»'JKR"/Fi"`L KR QLKKP'IRI 0.8 25.6 P394 ,KRVV'BRVFKLLUR iQLE-(KP/R 0.8 25.6 P397 LKRVWKRVFKLLKRY' QLUKP'IR: (18 25.6 P398 ;KR'IV-'KRVFKL;KRYWRQLKIGPVR 1.6 25.6 P399 ;KP'f'i'KRVFKL_KRYWRQLKKPVÜ 3.2 51.2 02116-P-0001 P145, P148 ve P159”un antifungal aktivitesi OP-145, PBS içinde 51,2 uM,de C. albi'cans Y-Ol ”e karsi 'hiç antifungal aktivite (P148 için) arasinda degisen konsantrasyonlarda C. albicans`larin %99°unu oldu. Bu konsantrasyonda, OP-l45 için hiç antifungal aktivite gözlemlenmedi. aktivitesi. Sonuçlar iki bagimsiz deneyin ortalama degerleridir.

LC99 (iiM) PES %50 plazma OP-l45 A. niger büyümesini, 3,2 uM konsantrasyonlarda >%99,9 önledi (Sekil 1). P145, OP-l45 ile benzer antifungal aktivite gösterirken, P148, fungal büyümeyi halihazirda 0,8 uM°de önlerken 4-kat daha yüksek antifungal aktiviteye sahip oldu. P159 OP-145°e kiyasla 2-kat daha düsük bir antifungal aktiviteye sahip oldu. Plazma optik yogunluk degerlerini etkiledikçe, peptitlerin plazma varliginda antifungal aktivitesi, yalnizca isik mikrogratlarina dayali olarak tayin edildi. %25 plazma varliginda, fungal büyüme OP-145”in 204,8 uM ile önlendi 02116-P-0001 P145, P148 ve P159”un anti-bivofilm aktivitesi biyofilm önlenmesi yaklasik %75`ti. Dikkate deger olarak, biyofilmi-ayarlanmis BM2 vasatinda, bu peptitler 51,2 uM”ye kadar antimikrobiyal aktivite göstermedi.

Plazma-kapli kuyucuklarda, OP-145 ve P159°un 3,2 uM`si biyofilm olusumunu ve P148 için iki-kat daha yüksek bir konsantrasyon gerekti (Sekil 3B). Plazma arasinda degisti.

Immünomodülatör aktivite: P145, P148 ve P159 ile LPS ve LTA nötralizasyonu önledi. LPS-indüklü IL-12p4031n önlenmesinin yüzde doksanina, P148 ila LTA”yi nötrlestirme yetisi, LTA-indüklü IL-8 üretiminin kan hücreleri tarafindan önlenmesinin ölçülmesiyle tayin edildi. 0,781 uM”lik bir nihai konsantrasyonda, P159, 4-kat artmis bir LTA-nötrlestirme yetisine sahip oldu. Peptitler ayrica, S. aureus JAR06013liin UV-öldürülmüs bakterileriyle ön-inkübe edildi. OP-145”in 0,195 uM”siyle inkübasyon, S. aureus JAR tarafindanindüklenen IL-8 üretiminin nötrlestirme aktivitesine sahipken, S. aureus-tetikli IL-8 üretiminin >%50 oraninda önlenmesi için P145 ve P148°in 8-kat daha yüksek bir konsantrasyonu gerekti (Tablo 12). 02116-P-0001 aktivitesi. LPS nötrlestirmesi için, deney iki donörden alinan kan kullanilarak gerçeklestirildi. LTA ve S. aureus nötrlestirmesi için, deney bir donörden alman kan kullanilarak gerçeklestirildi.

Peptit LPS nötrlestirmesi (nM olarak IC90) P145 0,75 P148 0,25 P159 0,25 LTA nötrlestirmesi (nM olarak IC90) 0,781 0,195 0,195 0,195 S. aureus nötrlestirmesi (nM olarak IC90) 0,195 1,563 1,563 0,195 02116-P-0001 RzLâGSWm 9.1 0" 0944:& 0 8 pw! 1.6;1M . Cmcicias 3 4 ;5 g mezun Süre (saat) 4 ü S 10121(16 Süre (saat) 02116-P-0001 0.10* 0.35" 0.8 “M 4 6 3 *O '%2 '%4 'te 0» ;JM Süre (saat) 0.8 ;m 1.::: pm 3 214%', Süre (saat) Sekil 1, devami 02116-P-0001 /14 ;74 02116-P-0001 02116-P-0001 9193515 1 02116-P-0001 P145 9148 Or-i-ucöoi ::iç-'05:60:' civ-edco'oi P148 P159

Claims (5)

1. ISTEMLER Bir LKKLYKRLVKILKRWWRYLKRPVR amino asit dizisi içeren veya söz konusu amino asit dizisinin bir varyantini içeren bir izole veya rekombinan polipeptit olup, söz konusu polipeptit antimikrobiyal, antibakteriyel, antiviral, antifungal ve/veya antiparazitik aktiviteye sahiptir ve %50 plazma varliginda en az bir mikrobiyal türe karsi, ayni kosullar altinda saptandiginda OP-145`in (asetil- yüksek bir in vitro antimikrobiyal, antibakteriyel, antiviral, antifungal ve/veya antiparazitik aktiviteye sahiptir, söz konusu varyant dizisi en az 14 amino aside sahiptir ve opsiyonel olarak asagidakilere sahiptir: - asagidaki amino asit ikamelerinin 1 ila 8°iz ~ L, V, F, A, I, W, Y veya Q grubundan seçilen bir veya daha fazla amino asidin söz konusu gruptan seçilen bir baska amino asitle ikamesi; - bir amino asidin karsilik gelen bir D-amino asitle bir veya daha fazla ikamesi; - bir amino asidin karsilik gelen bir dogal-olmayan amino asitle bir veya daha fazla ikamesi olup söz konusu karsilik gelen dogal-olmayan amino asit, referans dogal amino asidin bir türevidir; ve/veya - söz konusu amino asit dizisinden en az 14 ardisik amino asidin bir geriye- evirtik dizisidir, özelligi söz konusu varyant dizisinin, opsiyonel olarak yukarida tanimlandigi sekildeki amino asit ikamelerinin birine veya daha fazlasina sahip en az bir KRLVKILKRWWRYL amino asit dizisine sahip olmasidir.
2. 2. Isteni 1”e göre polipeptit olup, özelligi bir amino asidin karsilik gelen bir dogal-olmayan amino asitle söz konusu bir veya daha fazla ikamesi asagidakilerden olusan gruptan seçilmesidir: o bir amino asidin karsilik gelen 6 amino asitle ikamesi; o R°nin homoarjinin, ornitin, N5-karbam0ilornitin veya 3-amin0-pr0pi0nik asitle ikamesi; o I`nin izodesmosin, N-metilizolösin veya allo-izolösin ile ikamesi; o L”nin norlösin, desmosin veya 5,5,5-triH0r0-lösin ile ikamesi; o K`nin 6-N-metillisin, 2-amin0heptan0ik asit, N-asetil lisin, hidroksilisin veya allo-hidroksilisin ile ikamesi; o P°nin 3-hidroksiprolin, 4-hidroksiprolin veya 1-aseti1-4-hidroksi-L-prolin ile ikamesi; o W`nin 5-hidr0ksi-tript0fan, S-metoksi-triptofan veya S-florotriptofan ile ikamesi; o Y°nin O-metil-L-tirosin, O-4-alil-L-tirosin veya 3-k10r0-tirosin ile ikamesi; ve o V7nin norvalin, N-metilvalin veya 3-flor0-valin ile ikamesi.
3. 3. Istem 1 veya ?ye göre polipeptit olup, özelligi söz konusu polipeptidin opsiyonel olarak N-ucu ve/veya C-ucu olarak modifiye olmasidir, tercihen bir N-ucu asetil-, heksanoil-, dekanoil-, miristoil-, NH-(CHz-CHz-O)ii-CO- veya propionil-kalintisi içerir ve/veya bir C-ucu amid-, NH-(CHz-CHz-O)ii-CO- amid- veya bir veya iki amino-heksanoil grup içerir.
4. 4. Istemler 1-3°ten herhangi birine göre bir polipeptit kodlayan bir nükleik asit dizisi içeren bir nükleik asit molekülüdür.
5. 5. Istem 4”e göre nükleik asit molekülü içeren bir vektördür. Istem 4°e göre nükleik asit molekülü ve/veya istem Sie göre vektör içeren bir rekombinan konak hücredir. lstemler 1-3,ten herhangi birine göre polipeptit veya bunun farmakolojik olarak kabul edilen bir tuzunu, istem 4,e göre nükleik asit molekülü ve/veya istem Sie göre vektör ve en az bir adet farmakolojik olarak kabul edilen tasiyici, seyreltici ve/veya eksipiyan içeren farmasötik bir bilesimdir. Istem 73ye göre farmasötik bilesim olup, özelligi ayrica penisilinlerden, sefalosporinlerden, mupirosinlerden ve karbapenemlerden olusan gruptan seçilen tercihen ilave bir antimikrobiyal ajan içerir. istem 7 veya 8*e göre farmasötik bilesim olup, özelligi söz konusu polipeptidi içeren bir kontrollü salim ve/veya hedeflenmis aktarim tasiyicisi içermesidir, böylece söz konusu tasiyici tercihen nanopartiküllerden, mikropartiküllerden, nanokapsüllerden, mikrokapsüllerden, lipozomlardan, mikrokürelerden, hidrojellerden, polimerlerden, lipit komplekslerinden, serum albümininden, antikorlardan, siklodekstrinlerden ve dekstrandan olusan gruptan seçilir. Bir tibbi cihaz için istemler l-3”ten herhangi birine göre bir polipeptit içeren kaplamadir. lstemler 1-3°ten herhangi birine göre polipeptit ve/veya istem 4°e göre nükleik asit molekülü olan bir terapötik, profilaktik veya tanisal ajan olarak kullanim içindir. Bir mikrobiyal, bakteriyel, fungal, viral ve/veya parazitik enfeksiyonun tedavisinde ve/veya bakteriyel, fungal, viral ve/veya parazitik enfeksiyondan kaynaklanan bir durumun tedavisinde istem llle göre kullanima yönelik polipeptit ve/veya nükleik asit molekülüdür. 13. Istem 11 veya 12”ye göre biyofilm iliskili enfeksiyonun tedavisinde ve/veya engellenmesinde kullanima yönelik polipeptit ve/veya nükleik asit molekülüdür. 14. Istemler l-3`ten herhangi birine göre bir polipeptidin hazirlanmasi için bir yöntem olup, özelligi asagidakileri içermesidir: - istemler 1-33ten herhangi birine göre bir polipeptit kodlayan bir nükleik asit dizisi içeren bir nükleik asit molekülünün saglanmasi; - bir konak hücrenin söz konusu nükleik asit molekülüyle dönüstürülmesi; - söz konusu konak hücrenin, söz konusu polipeptitle ekspresyonuna olanak saglayan kosullar altinda kültürlenmesi; - söz konusu polipeptidin söz konusu hücrelerden hasat edilmesi; - opsiyonel olarak söz konusu polipeptidin N-ucu veya C-ucu olarak modifiye edilmesi.