KR102427318B1 - 항미생물 펩티드 및 이의 용도 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 항미생물 펩티드, 상기 펩티드를 포함하는 약제학적 조성물 및 미생물, 박테리아, 진균, 바이러스와 기생충 감염을 치료 또는 예방하기 위한 이들의 용도에 관한 것이다.
Description
본 발명은 생화학과 의학 분야에 관한 것이다. 보다 구체적으로 본 발명은 항미생물 펩티드 및 박테리아, 바이러스, 진균과 기생충 감염증을 저지하는 것에 관한 것이다.
항미생물 펩티드(AMP)는 자연계 전체에 걸쳐 생물체의 방어체계의 필수적인 성분으로 침입 병원체로부터 보호해 준다. 이들은 그램 양성과 그램 음성 박테리아, 진균, 기생충과 바이러스에 대해 강력한 항미생물 활성을 보인다. 작은 AMP(보통 약 15-40개의 아미노산)일수록 크게는 미생물 세포막의 구조 또는 기능을 파괴함으로써 작용하고 한정된 분자 구조만을 표적으로 하지 않는다. 따라서 이들은 종래의 항생제와는 대조적으로 박테리아의 대사활성과 관계없이 효과적이다. 디펜신과 카텔리시딘(LL-37)과 같은 인간 AMP는 백혈구 내 존재하고 피부와 점막 표면에서 다양한 상피에 의해 분비된다. AMP는 항미생물 활성 이외에도 염증, 면역활성과 창상 치유에 있어서도 중요한 이펙터 분자이다. AMP는 서열과 2차 구조가 꽤 다양하지만 몇몇 공통적인 특성이 있다. 이들은 통상적으로 양이온성, 양친매성이고 박테리아 막 무결성(membrane integrity)을 손상시켜 살미생물 효과를 발휘한다. 표적 미생물의 음이온성 막 표면과 AMP의 상호작용으로 인해 막 투과화(membrane permeabilization), 세포 용해(cell lysis)와 사멸이 나타난다. 세포질 막은 대부분의 AMP의 주요 표적으로 막 내 펩티드가 축적되면 투과성 증가와 장벽 기능 손실을 초래하여 세포질 성분의 유출과 세포사를 일으킨다는 것이 일반적으로 받아들여지고 있다.
종래의 항생제는 세포벽 상의 에피토프와 같은 표적 또는 박테리아 단백질과 DNA 또는 RNA 합성시 표적에 결합함으로써 박테리아를 사멸시킨다. 병원성 박테리아는 항생제 표적을 변형시켜 더 빠르게 내성을 발생시킴으로써 항생제가 이들 표적에 더 이상 결합할 수 없게 한다. 종래의 항생제에 비해 AMP의 주요 장점은 내성이 쉽게 생기지 않는다는 것이다. 이에 대한 하나의 이유는 종래의 항생제와 같이 한정된 분자구조(에피토프)만을 표적으로 하지 않고 세포막에 작용하여 미생물을 사멸시키기 때문이다. AMP는 주로 박테리아이지만 진균이기도 한 미생물의 표면 부착 세포 응집체인 소위 바이오필름(biofilm) 관련 감염증(BAI)을 저지하는데 특히 유용하다. 바이오필름은 종래 항생제에 대한 박테리아 내성에 상당히 기여한다. 바이오필름은 낭포성 섬유증, 유치 의료 기기의 군체 형성과 치태 형성과 같은 인체 내 다양한 병적 상태 및 창상에 연관되어 있다. 종래의 항생제는 전염증성 미생물 화합물의 방출을 촉진하고, 바이오필름의 침투가 불충분하며, 전신투여가 필요한 결과로서 혈액 내에서 불활성화 또는 분해되는 것을 포함한 많은 이유로 인해 바이오필름 관련 감염을 저지하기에는 더욱 불충분하다. 종래 박테리아에 비해 AMP의 다른 장점은 신속한 사멸 개시 및 이들이 생분해성이어서 환경 내 잔류 항생제에 대한 현재의 우려를 덜어주고 부수적으로는 항염증 활성을 갖는다는 사실을 포함한다.
수백 가지 천연 및 합성 펩티드의 잠재 풀 중에서 상대적으로 적은 수가 임상시험을 진행하였다. 예로는 마가이닌 펩티드, 오미가난, OP-145, 노벡사틴과 라이틱사르가 있다. 뎁토마이신과 DPK-060 2개의 AMP만이 현재 임상 진행 중에 있다. P60.4Ac(Peptides, 2006; 27:649-60)라고도 하는 OP-145의 경우에는 임상시험 2기까지 수행되었다. OP-145는 내인성 인간 카텔리시딘 항미생물 펩티드 LL-37로부터 유도된 24 아미노산 펩티드이다. OP-145는 만성 중이염의 국소 치료를 위한 내독소 중화 항미생물 펩티드로서 개발되었다. OP-145는 항미생물 펩티드일 뿐 아니라 LPS도 중화시킨다.
OP-145를 포함하여 현재 알려진 AMP는 여전히 몇 가지 단점을 갖고 있다. 예를 들면 P. 아에루기노사, E. 파에칼리스, 프로테우스 미라빌리스, 스트렙토코쿠스 피오게네스와 S. 아우레우스와 같은 다양한 박테리아는 모두 카텔리시딘 LL-37과 같은 여러 항미생물 펩티드를 분해하는 프로테아제를 분비한다. 이에 따라 프로테아제 내성의 항미생물 펩티드는 치료 관점에서 유리하다. 더 나아가 박테리아뿐 아니라 포유류 세포막에 대한 AMP의 잠재적인 용해 효과뿐 아니라 다른 특성들로 인해 새로운 펩티드 설계시 해결해야 할 과제 중 하나는 감염 환자의 세포막에 비해 박테리아 또는 진균 세포와 같은 미생물에 대한 높은 특이성, 즉 높은 치료지수(최소 용혈 농도/최소 항미생물 활성; MHC/MEC)를 가진 AMP를 개발하는데 달려있다. OP-145를 포함한 공지의 AMP의 또 다른 중요한 단점은 그의 활성이 혈장 성분의 존재에 의해 크게 영향을 받는다는 것이다. 예를 들면 OP-145의 경우에 PBS에서 LC99.9(박테리아의 ≥99.9%를 사멸시키는 최저 펩티드 농도)가 1.6 μM인 반면에 PBS/혈장(1:1)에서 LC99.9는 약 200 μM이다. 이는 특히 전신투여된 AMP의 경우에 단점이다.
혈장 성분에 대한 비특이적 결합으로 인한 효소 분해 또는 펩티드 비가용성(non-availability)과 같은 혈장 성분에 의한 펩티드 불활성화와 같이 혈장이 존재하는 상태에서 AMP의 활성이 크게 더 낮은 원인에는 여러 메커니즘이 있다. 혈장 성분에 대해 내성이 있는 AMP는 이들이 잠재적인 전신 치료제이기 때문에 중요할 뿐 아니라 예를 들면 감염 창상과 의료 이식물 관련 감염과 염증 치료에도 중요하다. 특히 심부 조직 감염증에서는 높은 단백질 분해 활성이 있을 수 있어 단백질 분해 내성이 없는 AMP의 불활성화가 나타날 수 있다. 만성 창상으로부터 유래되는 창상액에는 과량의 프로테아제가 있고 이식된 재료는 숙주액(hosts fluid)으로부터 유래되는 혈장 성분에 의해 빠르게 덮이게 된다. 만성 창상과 의료 이식물은 모두 대부분의 경우에 미생물 바이오필름과 관련이 있다. 특히 바이오필름 관련 감염증의 치료에 있어서 항생제는 대부분 전신 투여되고 따라서 혈액과 주변 조직에서 효소 분해되기 쉽다. 이에 따라 혈장 성분에 대한 과민성으로 인해 OP-145를 포함한 많은 AMP의 응용성이 예를 들면 국소 적용으로 제한될 것이다. 따라서 특히 잠재적 전신 치료제 및/또는 예를 들면 만성 창상과 의료 이식물과 관련한 바이오필름 감염증에 대한 효과적인 치료제로서 혈장 성분에 내성이 있는 대체 AMP에 대한 확실한 요구가 있다.
본 발명의 목적은 특히 혈장 성분에 내성이 있어 종래 항생제의 단점을 극복하고 공지의 항미생물 펩티드에 비해 특성이 향상된 강력한 신규 항미생물 펩티드를 제공하는 것이다. 본 발명의 또 다른 목적은 사람 등의 포유류에 도입시 비알레르기성이고 병원성 미생물에 대해 특이성이 높으며 바이오필름 관련 감염증에서 병원성 미생물에 대한 항미생물 활성이 특히 높은 항미생물 펩티드를 제공하는 것이다. 본 발명의 펩티드와 폴리펩티드는 바이오필름 내 미생물과 바이오필름 내 조직화되지 않은 미생물 모두에 대해 강력하면서 광범위한 항미생물 활성을 발휘하고 항미생물 활성이 빠르며 치료제, 예방제 또는 진단제로서 사용할 수 있다. 본 발명의 펩티드와 폴리펩티드는 혈액, 혈장과 혈청에서 또한 이들로부터 유래된 성분이 존재하는 상태에서 항미생물 활성을 유지하기 때문에 제한된 효능 지속기간과 제한된 응용성의 문제를 극복하기 위해 고안된 것이다.
본 발명자들은 서열 LKKLYKRLVKILKRWWRYLKRPVR을 기반으로 하는 펩티드 P139-P163가 (약물 내성이 있는) 그램 양성 박테리아(예를 들면 스타필로코쿠스 아우레우스와 스타필로코쿠스 에피데르미디스)와 그램 음성 박테리아(예를 들면 슈도모나스 아에루기노사) 뿐 아니라 진균류(칸디다 알비칸스와 아스페르길루스 니게르)에 대해 매우 유효하다는 것을 발견하였는바, 이에 대해 표 2-4와 11, 도 1과 2를 참조할 것. 이와 같이 상기 펩티드들은 넓은 범위의 항미생물 활성을 발휘한다. 모든 펩티드는 PBS에서 OP-145에 비견할만한 낮은 IC99.9 값에 의해 증명된 바와 같이 효능이 매우 크다. 중요한 점은 모든 펩티드가 혈장이 존재하는 상태에서 OP-145보다 더 효과적이라는 것이 밝혀졌다. 상기 펩티드 대부분은 혈장이 존재하는 상태에서 OP-145보다 16배까지 더 높은 활성과 함께 효능이 훨씬 더 높았다(표 2-4). 표 2에서 입증되어 있는 바와 같이, OP-145는 50% 혈장이 존재하는 상태에서 204.8 μM의 IC99.9를 갖고 있다. P148과 P159는 혈장이 존재하는 상태에서 IC99.9가 12.8 μM이다(16배 증가). P140, P141, P144, P145, P150, P151, P152, P153, P158, P160, P161, P162와 P163은 혈장이 있는 상태에서 IC99.9가 25.6 μM(8배 증가)이다. 혈장이 존재하는 상태에서 P139, P142, P143, P146, P147, P154, P156과 P157의 IC99.9는 51.2 μM(4배 증가)이고 P149와 P155의 IC99.9는 102.4 μM(2배 증가)이다.
P145, P148과 P159는 중간 대수 증식기와 정지기 박테리아 배양물 모두에 대해 유효한 것으로 입증되었다(표 2-4 참조). 또한 P145, P148과 P159는 S. 아우레우스 바이오필름 형성을 저해할 수 있다(도 3 참조). 게다가 P145, P148과 P159는 내독소 리포테이코산(LTA)과 리포다당류(LPS)를 중화하여 전염증성 반응을 감소시키기 때문에 입증할 수 있는 면역 조절 활성을 갖고 있다(표 12).
또한 적어도 16개의 아미노산을 가진 더 짧은 P148 변이체는 PBS에서 P148에 비견할만한 항미생물 활성을 갖는 것으로 밝혀졌다(표 5 참조). 중요한 것은 혈장이 존재하는 상태에서 항미생물 활성도 이 짧은 변이체에서 유지된다는 점이다. 14개의 아미노산을 가진 P148의 더 짧은 변이체는 혈장이 존재하는 상태에서 P148에 비해 항미생물 활성이 감소하지만 OP-145보다 여전히 5배 효능이 더 크다.
그러므로 본 발명에 따른 폴리펩티드는 LPS와 LTA 중화 활성에 의해 증명된 바대로 최적의 항염증(미생물 화합물 중화) 활성과 함께 혈장의 존재 및 부재 상태 모두에서 또한 바이오필름 내 있거나 그렇지 않은 미생물에 대해 높은 항미생물 활성을 갖고 있다.
바이오필름 감염증에 대한 본 발명의 항미생물 펩티드의 효과는 3배인바: 이들은 바이오필름 형성을 예방하고 존재하고 있는 바이오필름을 분산시킬 것이고, 박테리아, 진균 또는 기타 미생물들을 방출 부위와 그 주변에서 사멸시키며, 리포테이코산(LTA), 펩티도글리칸(PG)과 리포다당류(LPS)와 같은 전염증성 미생물 내독소를 중화시키고 대식세포를 활성화하여 이들의 식균 및 살미생물 활성을 증강시킴으로써 면역반응을 조정한다. 이러한 면역 제어는 이식물을 둘러싸고 있는 조직이 병원체를 위한 새로운 적합한 환경이 되는 것을 방지하는데 필요하다.
따라서 본 발명은 아미노산 서열 LKKLYKRLVKILKRWWRYLKRPVR 또는 상기 아미노산 서열의 변이체를 포함하는 분리된 또는 재조합 폴리펩티드로서,
상기 폴리펩티드는 항미생물, 항박테리아, 항바이러스, 항진균 및/또는 항기생충 활성을 갖고, 50% 혈장이 존재하는 상태에서 적어도 하나의 미생물 종에 대한 체외 항미생물, 항박테리아, 항바이러스, 항진균 및/또는 항기생충 활성이 동일 조건에서 측정했을 때 OP-145의 활성보다 적어도 1.3배 더 높으며,
상기 변이체 서열은 적어도 14개의 아미노산을 갖고 경우에 따라:
- 하기 아미노산 치환체 중 하나 이상:
· L, V, F, A, I, W, Y 또는 Q로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 아미노산을 상기 군으로부터 선택되는 또 다른 아미노산으로 치환한 치환체;
· R 및/또는 K를 A 또는 양전하를 띤 아미노산으로 치환한 치환체;
- 아미노산을 대응 D-아미노산으로 치환한 하나 이상의 치환체;
- 아미노산을 대응 비천연 아미노산으로 치환한 하나 이상의 치환체; 및/또는
- 상기 아미노산 서열로부터 적어도 14개의 연속해 있는 아미노산의 레트로-인버소 서열을 갖는 폴리펩티드를 제공한다.
또한 아미노산 서열 LKKLYKRLVKILKRWWRYLKRPVR 또는 상기 아미노산 서열의 변이체를 포함하는 분리된 또는 재조합 폴리펩티드로서,
상기 폴리펩티드는 항미생물, 항박테리아, 항바이러스, 항진균 및/또는 항기생충 활성을 갖고, 50% 혈장이 존재하는 상태에서 적어도 하나의 미생물 종에 대한 체외 항미생물, 항박테리아, 항바이러스, 항진균 및/또는 항기생충 활성이 동일 조건에서 측정했을 때 OP-145의 활성보다 적어도 1.3배 더 높으며,
상기 변이체 서열은 적어도 14개의 아미노산을 갖고 경우에 따라:
- 하기 아미노산 치환체 중 하나 이상:
· L, V, F, A, I, W, Y 또는 Q로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 아미노산을 상기 군으로부터 선택되는 또 다른 아미노산으로 치환한 치환체;
· R 및/또는 K를 양전하를 띤 아미노산으로 치환한 치환체;
- 아미노산을 대응 D-아미노산으로 치환한 하나 이상의 치환체;
- 아미노산을 대응 비천연 아미노산으로 치환한 하나 이상의 치환체; 및/또는
- 상기 아미노산 서열로부터 적어도 14개의 연속해 있는 아미노산의 레트로-인버소 서열을 갖는 폴리펩티드가 제공된다.
본 명세서에 정의된 아미노산 서열 또는 이의 변이체에서 아미노산은 한 글자의 기호로 표시된다. 이들 한 글자 기호와 세 글자의 기호는 당업자에게 잘 알려져 있으며 다음과 같은 의미를 갖는다: A(Ala)는 알라닌, C(Cys)는 시스테인, D(Asp)는 아스파르트산, E(Glu)는 글루탐산, F(Phe)는 페닐알라닌, G(Gly)는 글리신, H(His)는 히스티딘, I(Ile)는 이소류신, K(Lys)는 라이신, L(Leu)은 류신, M(Met)이 메티오닌, N(Asn)은 아스파라긴, P(Pro)는 프롤린, Q(Gln)는 글루타민, R(Arg)은 아르기닌, S(Ser)는 세린, T(Thr)는 트레오닌, V(Val)는 발린, W(Trp)는 트립토판, Y(Tyr)는 티로신이다. 본 명세서에서 사용되는 "양전하를 띠는 아미노산"은 생리학적 pH, 즉 pH 7.3-7.4에서 양전하를 가진 아미노산을 지칭한다.
본 발명의 폴리펩티드는 항미생물 활성, 바람직하게는 항박테리아, 항바이러스 및/또는 항진균 활성, 보다 바람직하게는 항박테리아 및/또는 항진균 활성을 갖는다. 또한 본 발명의 폴리펩티드는 바람직하게는 항미생물 활성과 항염증 활성을 모두 갖고 있다. 본 명세서에서 사용되는 용어 폴리펩티드의 "항미생물 활성"은 적어도 하나의 미생물, 예를 들면 박테리아, 바이러스 및/또는 진균의 성장 또는 증식을 저지하는 것을 지칭하는 것으로, 미생물의 성장 또는 증식의 저해, 감소 또는 예방뿐 아니라 사멸을 포함한다. 미생물은 미시적인, 즉 통상적으로 너무 작아 인간의 육안으로는 볼 수 없는 생물체이다. 미생물은 매우 다양하고 박테리아, 바이러스, 진균, 고세균, 원생동물과 미세조류를 포함한다. 유사하게 본 명세서에서 사용되는 용어 "항박테리아 활성", "항바이러스 활성", "항진균 활성"과 "항기생충 활성"은 일반적으로 각각, 박테리아, 바이러스, 진균과 기생충의 성장 또는 증식을 저지하는 것을 의미하고 이들의 성장 또는 증식의 저해, 감소 또는 예방뿐 아니라 사멸을 포함한다. 항미생물 활성은 예를 들면 저해 농도(IC) 또는 치사 농도(LC)로서 표현된다. 본 명세서에서 사용되는 ICx 또는 LCx는 2시간 후 미생물의 적어도 x%를 사멸시키는 최저 펩티드 농도를 의미한다. 예를 들면 IC99.9와 LC99.9는 미생물의 ≥99.9%를 사멸시키는 최저 펩티드 농도를 의미한다. 항미생물, 항박테리아, 항바이러스, 항진균과 항기생충 활성은 본 기술분야에 알려진 방법에 의해 측정할 수 있다.
이러한 방법들 중 하나는 본 출원의 실시예에 상세히 기재되어 있고 항미생물 활성을 측정하기 위한 체외 분석법을 포함한다. 상기 방법에서 미생물, 예를 들면 박테리아 또는 진균을 예를 들면 1-2시간 동안 서로 다른 농도의 본 발명에 따른 폴리펩티드와 함께 배양하고 이후 미생물-폴리펩티드 혼합물을 적합한 배양 배지 내 또는 상에서 배양하여 생존 및/또는 사멸 미생물의 수를 동일한 방법으로 더 처리한 폴리펩티드와 함께 배양하지 않은 미생물의 시료와 비교하여 정한다.
바이러스 플라크 분석법을 이용하여 본 발명의 폴리펩티드의 항바이러스 활성을 평가할 수 있다. 요컨대 바이러스 종균을 허용 세포 단층의 감염 전에 폴리펩티드에 노출시킨다. 표준 간격 후에 세포 추출물에서 바이러스 역가를 이들 추출물의 다중 희석을 이용하여 새로운 세포 단층을 감염시키고 세포 단층에 대한 이들의 효과를 정량화하여 측정한다.
항기생충 활성 평가를 위해 본 발명의 폴리펩티드와 기생충을 표준 시간 간격 동안 배양한다. 이후, 기생충의 대사활성을 예를 들면 MTT 분석법에 의해 직접분석하거나 기생충을 포유류 세포로 옮기고 배양 후 이들 세포 내 기생충 증식을 현미경법에 의해 평가한다.
본 명세서에서 사용되는 용어 폴리펩티드의 "항염증 활성"은 미생물, 예를 들면 박테리아, 바이러스, 진균 및/또는 기생충에 의해 감염된 피험체에서 염증 반응의 저해, 감소 또는 예방을 의미한다. 본 발명의 폴리펩티드의 항염증 활성은 리포테이코산(LTA), 펩티도글리칸(PG) 및/또는 리포다당류(LPS)와 같은 전염증성 미생물 화합물의 방출을 저해, 감소 또는 예방함으로써 달성된다. 항염증 활성은 본 기술분야에 알려져 있는 방법에 의해 측정할 수 있다. 이러한 방법의 예로는 본 출원의 실시예에 기재되어 있는 LPS 중화 분석법과 LTA 중화 분석법이 있다. 이러한 방법에서는 본 발명의 폴리펩티드를 500 ng/ml LPS 또는 2 mg/ml LTA와 같은 일정 농도의 LPS 또는 LTA와 혼합하고 30분 동안 배양한다. 이후, 이들 혼합물을 희석한 새로운 인간 전혈에 첨가한 지 20시간 후에 혈액 시료 내 시토킨(예를 들면 LTA의 경우에는 1L-8이고 LPS의 경우에는 1L-12p40)의 농도를 ELISA에 의해 측정한다.
본 발명의 폴리펩티드는 혈액 혈장이라고도 하는 혈장, 바람직하게는 인간 혈장에 내성이 있다. 본 명세서에서 사용되는 "혈장" 또는 "혈액 혈장"은 본 기술분야에서 사용되는 통상적인 의미를 갖는다. 상기 용어는 적혈구와 백혈구와 혈소판이 제거된 혈액의 유체분을 의미하는 것으로 이 유체분은 단백질, 호르몬 및 전해질과 같은 기타 유기 화합물과 무기 화합물을 포함한다. 본 명세서에서 사용되는 "혈장에 대한 내성"은 50% 혈장, 바람직하게는 인간 혈장이 존재하는 상태에서 적어도 하나의 미생물 종에 대한 체외 항미생물, 항박테리아, 항바이러스, 항진균 및/또는 항기생충 활성, 즉 동일 조건에서 측정했을 때 OP-145의 활성보다 적어도 1.3배 더 높은 활성을 갖는 것으로서 정의된다. 바람직하게는, 상기 적어도 하나의 미생물 종에 대한 활성은 OP-145의 활성보다 적어도 1.5배 더 높고, OP-145의 활성보다 더 바람직하게는 적어도 2배, 더 바람직하게는 적어도 4배, 더 바람직하게는 적어도 5배 더 높다. 특히 바람직한 폴리펩티드는 50% 혈장이 존재하는 상태에서 OP-145의 항미생물 활성보다 적어도 하나의 미생물 종에 대해 적어도 16배 더 높은 항미생물 활성을 갖고 있다.
"50% 혈장이 존재하는 상태에서"는 폴리펩티드 또는 OP-145를 최종 농도 50%의 혈장, 바람직하게는 인간 혈장이 첨가된 PBS와 같은 액체에서 미생물과 함께 배양할 때 항미생물 활성을 측정하는 것을 의미한다. "동일 조건"은 본 발명의 폴리펩티드의 항미생물, 항박테리아, 항바이러스, 항진균 및/또는 항기생충 활성을 측정하는 조건이 OP-145의 항미생물, 항박테리아, 항바이러스, 항진균 및/또는 항기생충 활성을 측정하는 조건과 동일함을 의미한다. 이러한 조건은 폴리펩티드와 미생물을 배양하는 완충액, 미생물 종의 정체, 미생물의 농도, 배양시간과 온도 및 사용 혈장의 공급원을 포함하지만 이들에 한정되는 것은 아니다.
OP-145는 서열 JIGKEFKRIVERIKRFLRELVRPLRB을 가지며 이때 J는 아세틸이고 B는 아미드이다. 당업자라면 OP-145의 항미생물 활성을 다른 펩티드의 활성과 비교할 수 있기 위해서 아래에 더욱 상세하게 기재되어 있는 통상적으로 사용되고 있는 고상 합성법 또는 재조합 기술을 이용하여 OP-145를 잘 합성할 수 있다. 또한 아세틸화와 아미드화는 본 기술분야에서 사용되고 있는 통상적인 기술이므로 당업자라면 OP-145의 펩티드 사슬의 N-말단을 아세틸화하고 C-말단을 아미드화할 수 있다.
본 명세서에 상세히 설명되어 있는 바와 같이, 상기 체외 항미생물, 항박테리아, 항바이러스, 항진균 및/또는 항기생충 활성은 바람직하게는 IC99.9 또는 IC 50으로서 표현된다. 본 명세서에서 사용되는 "IC99.9"와 "IC50"은 각각 소정 기간, 예를 들면 2시간 내 미생물의 적어도 99.9% 또는 50%를 사멸시키는 최저 펩티드 농도를 의미한다. 바람직하게는 본 발명의 폴리펩티드는 50% 혈장이 존재하는 상태에서 적어도 하나의 미생물 종에 대한 IC99.9는 동일 조건에서 측정했을 때 OP-145의 IC99.9의 최대 75% 이하이다. 50% 혈장이 존재하는 상태에서 적어도 하나의 미생물 종에 대한 본 발명에 따른 폴리펩티드의 체외 IC99.9는 바람직하게는 동일 조건에서 측정했을 때 OP-145의 IC99.9의 최대 70% 이하, 더 바람직하게는 최대 60% 이하, 더 바람직하게는 최대 50% 이하, 더 바람직하게는 최대 40% 이하, 더 바람직하게는 최대 30% 이하, 더 바람직하게는 최대 20% 이하, 가장 바람직하게는 최대 10% 이하이다. 특히 바람직한 폴리펩티드는 50% 혈장이 존재하는 상태에서 적어도 하나의 미생물 종에 대해 동일 조건에서 측정했을 때 OP-145의 IC99.9의 최대 10% 이하인 체외 IC99.9를 갖는다.
본 발명의 폴리펩티드는 바람직하게는 50% 혈장이 존재하는 상태에서 적어도 하나의 미생물 종에 대해 37℃에서 2시간 후 최대 150 μM 이하의 체외 IC99.9를 갖는다. 상기 IC99.9는 바람직하게는 본 명세서에서 실시예에 기재되어 있는 항미생물 활성 측정 방법에 따라 측정한다. 바이오필름과 관련이 없는 미생물의 항미생물 활성을 측정하기 위해 실시예에 기재되어 있는 상기 방법은 최종 농도 50%의 인간 혈장이 첨가된 PBS 내 폴리펩티드의 용액 50 마이크로리터와 PBS ml당 5×106 CFU를 가진 박테리아 현탁액 20 마이크로리터를 웰에서 혼합하는 것을 포함한다. 이 혼합물을 진탕 조건하 37℃에서 2시간 동안 배양한 후, 시료를 사용하여 박테리아의 수를 평가한다. 박테리아의 99.9%가 사멸시키는 최저 펩티드 농도를 저해 농도(IC)99.9라 한다. 박테리아 수는 수동 CFU 계수법에 의해 측정할 수 있다. 항미생물 활성을 측정하기 위해서 예를 들면 1×106 CFU/ml 박테리아를 사용하고 항진균 활성을 측정하기 위해서는 예를 들면 1×105 세포/ml를 사용한다.
항바이오필름 활성을 측정하기 위해서 실시예에 기재되어 있는 상기 방법은 4℃에서 20% 혈장과 함께 밤새 배양에 의해 혈장으로 코팅한 96-웰 폴리펩티드 플레이트 내 바이오필름-조정된 BM2에서 1×108 CFU/ml의 S. 아우레우스 JAR060131과 함께 37℃에서 24시간 동안 폴리펩티드를 배양한 후 IC50을 측정하고, PBS로 4회 세척에 의해 부유 박테리아를 제거하고, 크리스탈 바이올렛으로 바이오필름을 염색하는 것을 포함한다. 에탄올로 가용화한 후 590 nm에서 광학 밀도를 바이오필름 매스(mass)의 척도로서 측정한다.
본 발명의 폴리펩티드는 50% 혈장이 존재하는 상태에서 최대 100 μM 이하, 더 바람직하게는 최대 80 μM 이하, 더 바람직하게는 최대 51.2 μM 이하, 더 바람직하게는 최대 30 μM 이하의 체외 IC99.9를 갖는다. 본 발명의 바람직한 폴리펩티드는 본 명세서에 정의되어 있는 IC99.9가 최대 25.6 μM 이하이다. 50% 혈장이 존재하는 상태에서 적어도 하나의 미생물 종에 대해 최대 12.8 μM 이하의 IC99.9를 가진 폴리펩티드가 특히 바람직하다.
상기 적어도 하나의 미생물 종은 예를 들면 S. 아우레우스, S. 에피데르미디스, P. 아에루기노사와 같은 박테리아종, C. 알비칸스와 A. 니게르와 같은 진균종, 플라스모디움 팔시파룸과 톡소플라즈마 곤디아이와 같은 기생충종 또는 간염 A 바이러스, 간염 C 바이러스, 인플루엔자 A 바이러스와 같은 바이러스종 등이다. 바람직하게는 본 발명의 폴리펩티드는 50% 혈장이 존재하는 상태에서 적어도 하나의 박테리아 또는 진균종, 바람직하게는 S. 아우레우스, S. 에피데르미디스, P. 아에루기노사, C. 알비칸스와 A. 니게르에 대해 최대 105 μM의 체외 IC99.9를 갖고, 가장 바람직하게는 본 발명의 폴리펩티드는 50% 혈장이 존재하는 상태에서 적어도 S. 아우레우스, 가장 바람직하게는 Campoccia 등(Int J Artif Organs. 2008 Sep;31(9):841-7)에 기재되어 있는 S. 아우레우스 JAR에 대해 최대 105 μM의 체외 IC99.9를 갖는다. 본 발명의 바람직한 폴리펩티드는 본 명세서에서 정의하고 있는 있는 IC99.9가 최대 25.6 μM 이하, 더 바람직하게는 최대 12.8 μM 이하이다.
바람직한 변이체 서열은 아미노산을 A로 치환한 최대 하나의 치환체를 갖는다. 이것은 임의의 아미노산, 예를 들면 아미노산 1 내지 24번 위치 중 어느 하나에 있는 아미노산일 수 있다. 표 6-8에 입증되어 있는 바와 같이, 하나의 아미노산이 알라닌에 의해 치환되어 있는 폴리펩티드는 항미생물 활성 중 적어도 일부를 유지하는 반면에 일부 알라닌-치환된 폴리펩티드의 경우에는 활성이 증가하기도 한다.
또한 아미노산 서열 LKKLYKRLVKILKRWWRYLKRPVR 또는 상기 아미노산 서열의 변이체를 포함하는 분리된 또는 재조합 폴리펩티드로서,
상기 폴리펩티드는 항미생물, 항박테리아, 항바이러스, 항진균 및/또는 항기생충 활성을 갖고, 50% 혈장이 존재하는 상태에서 체외 항미생물, 항박테리아, 항바이러스, 항진균 및/또는 항기생충 활성이 동일 조건에서 측정했을 때 OP-145의 활성보다 적어도 1.3배 더 높으며,
상기 변이체는 적어도 14개의 아미노산을 갖고 경우에 따라:
- 하기 아미노산 치환체 중 하나 이상:
· K를 양전하를 띤 아미노산, 바람직하게는 R, 호모라이신, 호모아르기닌, 오르니틴, 디아미노부티르산과 디아미노프로피온산으로 치환한 치환체;
· R을 양전하를 띤 아미노산, 바람직하게는 K, 호모라이신, 호모아르기닌, 오르니틴, 디아미노부티르산과 아미노프로피온산으로 치환한 치환체;
· L을 V, I 또는 W로 치환한 치환체;
· Y를 W 또는 Q로 치환한 치환체;
· V를 F 또는 A로 치환한 치환체;
· I를 L로 치환한 치환체;
· W를 F, Y, L 또는 I로 치환한 치환체;
- 아미노산을 대응 D-아미노산으로 치환한 하나 이상의 치환체;
- 아미노산을 대응 비천연 아미노산으로 치환한 하나 이상의 치환체; 및/또는
- 상기 아미노산 서열로부터 적어도 14개의 연속해 있는 아미노산의 레트로-인버소 서열을 갖는 폴리펩티드가 제공된다.
또한 아미노산 서열 LKKLYKRLVKILKRWWRYLKRPVR 또는 상기 아미노산 서열의 변이체를 포함하는 분리된 또는 재조합 폴리펩티드로서,
상기 폴리펩티드는 항미생물, 항박테리아, 항바이러스, 항진균 및/또는 항기생충 활성을 갖고, 50% 혈장이 존재하는 상태에서 체외 항미생물, 항박테리아, 항바이러스, 항진균 및/또는 항기생충 활성이 동일 조건에서 측정했을 때 OP-145의 활성보다 적어도 1.3배 더 높으며,
상기 변이체는 적어도 14개의 아미노산을 갖고 경우에 따라:
- 하기 아미노산 치환체 중 하나 이상:
· K를 A 또는 양전하를 띤 아미노산, 바람직하게는 A, R, 호모라이신, 호모아르기닌, 오르니틴, 디아미노부티르산과 디아미노프로피온산으로 치환한 치환체;
· R을 A 또는 양전하를 띤 아미노산, 바람직하게는 A, K, 호모라이신, 호모아르기닌, 오르니틴, 디아미노부티르산과 아미노프로피온산으로 치환한 치환체;
· L을 A, V, I 또는 W로 치환한 치환체;
· Y를 A, W 또는 Q로 치환한 치환체;
· V를 F 또는 A로 치환한 치환체;
· I를 A 또는 L로 치환한 치환체;
· W를 A, F, Y, L 또는 I로 치환한 치환체;
- 아미노산을 대응 D-아미노산으로 치환한 하나 이상의 치환체;
- 아미노산을 대응 비천연 아미노산으로 치환한 하나 이상의 치환체; 및/또는
- 상기 아미노산 서열로부터 적어도 14개의 연속해 있는 아미노산의 레트로-인버소 서열을 갖는 폴리펩티드가 제공된다.
이러한 바람직한 변이체 서열은 바람직하게는 아미노산을 A로 치환한 최대 하나의 치환체를 추가로 갖는다. 이것은 임의의 아미노산일 수 있는바, 아미노산 1 내지 24번 위치 중 어느 하나에 있는 아미노산은 A에 의해 치환될 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 아미노산 서열 LKKLYKRLVKILKRWWRYLKRPVR의 변이체는 적어도 14개 아미노산의 길이를 갖고 바람직하게는 하기 아미노산 치환체 중 하나 이상을 갖는다:
- K를 양전하를 띤 아미노산, 바람직하게는 R, 호모라이신, 호모아르기닌, 오르니틴, 디아미노부티르산과 디아미노프로피온산, 보다 바람직하게는 R로 치환한 치환체;
- R을 양전하를 띤 아미노산, 바람직하게는 K, 호모라이신, 호모아르기닌, 오르니틴, 디아미노부티르산과 아미노프로피온산, 보다 바람직하게는 K로 치환한 치환체;
- L을 V, I 또는 W로 치환한 치환체;
- Y를 W 또는 Q로 치환한 치환체;
- V를 F 또는 A로 치환한 치환체;
- I를 L로 치환한 치환체;
- W를 F, Y, L 또는 I로 치환한 치환체;
- 하나 이상의 아미노산을 대응 D-아미노산으로 치환한 치환체;
- 하나 이상의 아미노산을 대응 비천연 아미노산으로 치환한 치환체. 바람직하게는 상기 변이체 서열은 상기 치환체 중 14개 이하, 더 바람직하게는 상기 치환체 중 9개 이하, 8개 이하, 7개 이하, 6개 이하, 5개 이하, 4개 이하, 3개 이하, 2개 이하 또는 1개와 같이 상기 치환체 중 10개 이하를 갖는다.
바람직하게는 상기 변이체 서열은 경우에 따라 하기 아미노산 치환체 중 하나 이상을 갖는다:
- 아미노산 2번 위치에 있는 K를 R로 치환한 치환체
- 아미노산 3번 위치에 있는 K를 R로 치환한 치환체
- 아미노산 4번 위치에 있는 L을 V로 치환한 치환체
- 아미노산 5번 위치에 있는 Y를 W로 치환한 치환체
- 아미노산 8번 위치에 있는 L을 V로 치환한 치환체
- 아미노산 9번 위치에 있는 V를 F 또는 A로 치환한 치환체
- 아미노산 10번 위치에 있는 K를 R로 치환한 치환체
- 아미노산 11번 위치에 있는 I를 L로 치환한 치환체
- 아미노산 12번 위치에 있는 L을 I 또는 W로 치환한 치환체
- 아미노산 15번 위치에 있는 W을 F, Y, L 또는 I로 치환한 치환체
- 아미노산 16번 위치에 있는 W을 F, Y, L 또는 I로 치환한 치환체
- 아미노산 18번 위치에 있는 Y를 Q로 치환한 치환체
- 아미노산 20번 위치에 있는 K를 R로 치환한 치환체
- 아미노산 21번 위치에 있는 R을 K로 치환한 치환체
- 하나 이상의 아미노산을 대응 D-아미노산으로 치환한 치환체.
여기에서 아미노산 위치의 번호는 다음과 같이 부여된다: L1K2K3L4Y5K6R7L8V9K10I11L12K13R14W15W16R17Y18L19K20R21P22V23R24. 상기 변이체는 바람직하게는 경우에 따라 아미노산을 A로 치환한 하나 이상, 더 바람직하게는 최대 하나의 치환체를 더 갖는다. 이것은 임의의 아미노산일 수 있는바, 아미노산 1 내지 24번 위치 중 어느 하나에 있는 아미노산은 A에 의해 치환될 수 있다.
바람직하게는, 본 명세서에 정의되어 있는 변이체 서열은 상기 아미노산 치환체 중 15개 이하, 보다 바람직하게는 상기 치환체 중 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개와 같이 10개 이하를 갖는다. 또한 본 명세서에 정의되어 있는 변이체 서열은 바람직하게는 아미노산 서열 KRLVKILKRWWRYL, 즉 아미노산 6 내지 19번을 포함하고 경우에 따라 상기 아미노산 치환체 중 하나 이상을 갖는다. 따라서 아미노산 서열 LKKLYKRLVKILKRWWRYLKRPVR을 포함하거나 상기 아미노산 서열의 변이체를 포함하는 분리된 또는 재조합 폴리펩티드로서,
상기 폴리펩티드는 항미생물, 항박테리아, 항바이러스, 항진균 및/또는 항기생충 활성을 갖고, 50% 혈장이 존재하는 상태에서 적어도 하나의 미생물 종에 대한 체외 항미생물, 항박테리아, 항바이러스, 항진균 및/또는 항기생충 활성이 동일 조건에서 측정했을 때 OP-145의 활성보다 적어도 1.3배 더 높으며,
상기 변이체 서열은 적어도 아미노산 서열 KRLVKILKRWWRYL을 갖고 경우에 따라:
- 하기 아미노산 치환체 중 10개 이하:
· L, V, F, A, I, W, Y 또는 Q로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 아미노산을 상기 군으로부터 선택되는 또 다른 아미노산으로 치환한 치환체;
· R 및/또는 K를 A 또는 양전하를 띤 아미노산으로 치환한 치환체;
- 아미노산을 대응 D-아미노산으로 치환한 하나 이상의 치환체;
- 아미노산을 대응 비천연 아미노산으로 치환한 하나 이상의 치환체; 및/또는
- 상기 아미노산 서열로부터 적어도 14개의 연속해 있는 아미노산의 레트로-인버소 서열을 갖는 폴리펩티드가 제공된다.
상기 아미노산 치환체 중 적어도 하나를 가진 변이체 서열이 더욱 바람직하다.
본 발명에 따른 바람직한 폴리펩티드는 표 1에 나타낸 펩티드 P139, P140, P141, P142, P143, P144, P145, P146, P147, P148, P149, P150, P151, P152, P153, P154, P155, P156, P157, P158, P159, P160, P161, P162 또는 P163의 아미노산 서열을 포함하는데, 이들 펩티드가 펩티드 OP-145에 비해 PBS에서 높은 항미생물 활성을 갖고 혈장이 존재하는 상태에서 증가된 항미생물 활성을 갖기 때문이다. 바람직하게는 상기 폴리펩티드는 표 1에 나타낸 펩티드 P139, P140, P141, P142, P145, P146, P147, P148, P150, P151, P152, P153, P154, P156, P157, P158, P159, P160, P161, P162 또는 P163의 아미노산 서열을 포함하는데, 이들 펩티드가 OP-145에 비해 혈장이 존재하는 상태에서 적어도 4배 증가된 활성을 갖기 때문이다. 보다 바람직하게는 상기 폴리펩티드는 표 1에 나타낸 펩티드 P140, P141, P145, P148, P150, P151, P152, P153, P158, P159, P160, P161, P162 또는 P163의 아미노산 서열을 포함하는데, 이들 펩티드가 OP-145에 비해 혈장이 존재하는 상태에서 적어도 8배 증가된 활성을 갖기 때문이다.
본 발명의 특히 바람직한 폴리펩티드는 펩티드 P145의 아미노산 서열인 아미노산 서열 LKRLYKRLAKLIKRLYRYLKKPVR 또는 상기 아미노산 서열의 변이체를 포함하되, 상기 변이체 서열은 적어도 14개의 아미노산을 갖고 경우에 따라 아미노산을 대응 D-아미노산 및/또는 대응 비천연 아미노산으로 치환한 하나 이상의 치환체를 갖고/또는 경우에 따라 상기 아미노산 서열로부터 적어도 14개의 연속해 있는 아미노산의 레트로-인버소 서열을 가지며, 더 바람직하게는 상기 폴리펩티드는 아미노산 서열 LKRLYKRLAKLIKRLYRYLKKPVR의 적어도 아미노산 14-19번을 포함하고, 가장 바람직하게는 상기 폴리펩티드는 아미노산 서열 LKRLYKRLAKLIKRLYRYLKKPVR을 포함한다. 이러한 폴리펩티드는 혈청의 존재 및 부재 상태 모두에서 펩티드 P145가 강력한 광범위한 항미생물 활성과 항염증성을 갖기 때문에 특히 바람직하다.
본 발명의 또 다른 특히 바람직한 폴리펩티드는 펩티드 P148의 아미노산 서열인 아미노산 서열 LKRVWKRVFKLLKRYWRQLKKPVR 또는 상기 아미노산 서열의 변이체를 포함하되, 상기 변이체 서열은 적어도 14개의 아미노산을 갖고 경우에 따라 아미노산을 대응 D-아미노산 및/또는 대응 비천연 아미노산으로 치환한 하나 이상의 치환체를 갖고/또는 경우에 따라 상기 아미노산 서열로부터 적어도 14개의 연속해 있는 아미노산의 레트로-인버소 서열을 가지며, 더 바람직하게는 상기 폴리펩티드는 아미노산 서열 LKRVWKRVFKLLKRYWRQLKKPVR의 적어도 아미노산 14-19번을 포함하고, 가장 바람직하게는 상기 폴리펩티드는 아미노산 서열 LKRVWKRVFKLLKRYWRQLKKPVR, RVWKRVFKLLKRYWRQLKKPVR, LKRVWKRVFKLLKRYWRQLKKP, RVWKRVFKLLKRYWRQLKK, WKRVFKLLKRYWRQLKKPVR, LKRVWKRVFKLLKRYWRQLK, VWKRVFKLLKRYWRQLKK, WKRVFKLLKRYWRQLK, KRVFKLLKRYWRQL을 포함한다. 이들은 펩티드 P148, P325, P326, P327, P328, P329, P330, P331과 P332의 아미노산 서열이다. 이러한 폴리펩티드는 혈청의 존재 및 부재 상태 모두에서 펩티드 P148이 강력한 광범위한 항미생물 활성과 항염증성을 갖고 펩티드 P325, P326, P327, P328, P329, P330, P331과 P332는 펩티드 P148의 활성을 보유하였기 때문에 특히 바람직하다.
본 발명의 또 다른 특히 바람직한 폴리펩티드는 펩티드 P159의 아미노산 서열인 아미노산 서열 LKRLYKRVFRLLKRYYRQLRRPVR 또는 상기 아미노산 서열의 변이체를 포함하되, 상기 변이체 서열은 적어도 14개의 아미노산을 갖고 경우에 따라 아미노산을 대응 D-아미노산 및/또는 대응 비천연 아미노산으로 치환한 하나 이상의 치환체를 갖고/또는 경우에 따라 상기 아미노산 서열로부터 적어도 14개의 연속해 있는 아미노산의 레트로-인버소 서열을 가지며, 더 바람직하게는 상기 폴리펩티드는 아미노산 서열 LKRLYKRVFRLLKRYYRQLRRPVR의 적어도 아미노산 14-19번을 포함하고, 가장 바람직하게는 상기 폴리펩티드는 아미노산 서열 LKRLYKRVFRLLKRYYRQLRRPVR을 포함한다. 이러한 폴리펩티드는 혈청의 존재 및 부재 상태 모두에서 펩티드 P159가 강력한 광범위한 항미생물 활성과 항염증성을 갖고 있기 때문에 특히 바람직하다.
본 발명에 따른 또 다른 바람직한 폴리펩티드는 표 6, 7과 8에 나타낸 펩티드 P246, P247, P248, P249, P250, P251, P252, P253, P254, P255, P256, P257, P258, P259, P260, P261, P262, P263, P264, P265, P266, P267, P268, P269, P270, P271, P272, P273, P274, P275, P276, P277, P278, P279, P280, P281, P282, P283, P284, P285, P286, P287, P288, P289, P290, P291, P292, P293, P294, P295, P296, P297, P298, P299, P300, P301, P302, P303, P304, P305, P306, P307, P308, P309, P310, P311, P312, P313, P314, P315, P316 또는 P317의 아미노산 서열을 포함하는데, 이들 펩티드가 펩티드 OP-145에 비해 PBS에서 높은 항미생물 활성을 갖고 혈장이 존재하는 상태에서 증가된 항미생물 활성을 갖기 때문이다. 이러한 아미노산 서열을 가진 폴리펩티드는 하나의 아미노산이 A로 치환되어 있는 P145, P148 또는 P159의 변이체이다. 본 발명의 특히 바람직한 폴리펩티드는 7번 위치의 R이 A로 치환되어 있는 P148의 변이체인 펩티드 P276의 아미노산 서열을 갖는다.
본 발명에 따른 바람직한 폴리펩티드는 표 1, 2, 5, 6, 7, 8, 9 및/또는 10으로부터 선택되는 폴리펩티드의 아미노산 서열을 갖는다. 본 발명에 따른 폴리펩티드는 보다 바람직하게는 50% 혈장에서 치사 농도(LC) 99.9가 최대 102.4 μM 이하인, 표 2 또는 5-10으로부터 선택되는 아미노산 서열 LKKLYKRLVKILKRWWRYLKRPVR 또는 상기 아미노산 서열의 변이체를 포함한다. 일 구현예에 있어서, 50% 혈장에서 LC 99.9가 최대 51.2 μM 이하인, 표 2 또는 5-10으로부터 선택되는 폴리펩티드, 더 바람직하게는 최대 51.2 μM 이하인 폴리펩티드가 제공된다.
상술한 바와 같이 아미노산을 또 다른 아미노산으로 치환한 치환체와 다르게 또는 추가로, 본 명세서에 정의되어 있는 아미노산 서열 LKKLYKRLVKILKRWWRYLKRPVR의 변이체는 위에서 나타낸 아미노산 치환체 중 하나 이상의 뒤에 L-아미노산을 대응 D-아미노산으로 또는 상기 아미노산 서열에 존재하는 L-아미노산에 대응하는 D-아미노산으로 치환한 하나 이상의 치환체를 함유할 수 있다. 본 명세서에서 알라닌의 경우에 A와 같이 한 글자의 대문자 기호로 나타낸 아미노산은 천연 단백질에서 통상적으로 발견되는 L-아미노산이다. 본 명세서에서 사용되는 "대응 D-아미노산"은 L-아미노산의 D-아미노산 대응물로서 정의된다. 예를 들면 알라닌(A)의 대응 D-아미노산은 D-알라닌(a), 아르기닌(R)의 대응 D-아미노산은 D-아르기닌(r), 아스파라긴(N)의 대응 D-아미노산은 D-아스파라긴(n) 등등이다. 본 명세서에 정의되어 있는 변이체 서열의 모든 L-아미노산은 이들의 대응 D-아미노산에 의해 치환될 수 있다. 따라서 본 발명에 따르면 아미노산 서열 LKKLYKRLVKILKRWWRYLKRPVR 또는 상기 아미노산 서열의 변이체를 포함하는 폴리펩티드로서, 상기 폴리펩티드가 항미생물, 항박테리아, 항바이러스, 항진균, 항기생충 및/또는 항염증 활성을 갖고 상기 변이체 서열이 적어도 14개의 아미노산을 갖고 경우에 따라:
- 하기 아미노산 치환체 중 하나 이상:
· L, V, F, A, I, W, Y 또는 Q로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 아미노산을 상기 군으로부터 선택되는 또 다른 아미노산으로 또는 아미노산 L, V, F, A, I, W, Y 또는 Q의 대응 D-아미노산으로 치환한 치환체;
· R을 양전하를 띤 아미노산, 바람직하게는 K, 호모라이신, 호모아르기닌, 오르니틴, 디아미노부티르산과 디아미노프로피온산으로 또는 K 또는 R의 대응 D-아미노산으로 치환한 치환체;
· K를 양전하를 띤 아미노산, 바람직하게는 R, 호모라이신, 호모아르기닌, 오르니틴, 디아미노부티르산과 디아미노프로피온산으로 또는 R 또는 K의 대응 D-아미노산으로 치환한 치환체;
- 아미노산을 대응 D-아미노산으로 치환한 하나 이상의 치환체를 갖는 폴리펩티드가 제공된다. 이러한 변이체 서열은 K와 R로부터 선택되는 하나 이상의 아미노산, 바람직하게는 최대 하나 이하의 아미노산을 A 또는 대응 D-아미노산으로 치환한 치환체를 추가로 가질 수 있다. 바람직하게는 상기 변이체 서열은 경우에 따라 하기 아미노산 치환체 중 하나 이상을 갖는다:
· K를 R 또는 R의 대응 D-아미노산으로 치환한 치환체;
· R을 K 또는 K의 대응 D-아미노산으로 치환한 치환체;
· L을 V, I 또는 W 또는 아미노산 V, I 또는 W의 대응 D-아미노산으로 치환한 치환체;
· Y를 W 또는 Q 또는 아미노산 W 또는 Q의 대응 D-아미노산으로 치환한 치환체;
· V를 F 또는 A 또는 아미노산 F 또는 A의 대응 D-아미노산으로 치환한 치환체;
· I를 L 또는 L의 대응 D-아미노산으로 치환한 치환체;
· W를 F, Y, L 또는 I 또는 아미노산 F, Y, L 또는 I의 대응 D-아미노산으로 치환한 치환체;
- 아미노산을 대응 D-아미노산으로 치환한 하나 이상의 치환체.
더 바람직하게는, 상기 변이체 서열은 경우에 따라 하기 아미노산 치환체 중 하나 이상을 갖는다:
- 아미노산 2번 위치에 있는 K를 R 또는 R의 대응 D-아미노산으로 치환한 치환체;
- 아미노산 3번 위치에 있는 K를 R 또는 R의 대응 D-아미노산으로 치환한 치환체;
- 아미노산 4번 위치에 있는 L을 V 또는 V의 대응 D-아미노산으로 치환한 치환체;
- 아미노산 5번 위치에 있는 Y를 W 또는 W의 대응 D-아미노산으로 치환한 치환체;
- 아미노산 8번 위치에 있는 L을 V 또는 V의 대응 D-아미노산으로 치환한 치환체;
- 아미노산 9번 위치에 있는 V를 F 또는 A 또는 아미노산 F 또는 A의 대응 D-아미노산으로 치환한 치환체;
- 아미노산 10번 위치에 있는 K를 R 또는 R의 대응 D-아미노산으로 치환한 치환체;
- 아미노산 11번 위치에 있는 I를 L 또는 L의 대응 D-아미노산으로 치환한 치환체;
- 아미노산 12번 위치에 있는 L을 I 또는 W 또는 아미노산 I 또는 W의 대응 D-아미노산으로 치환한 치환체;
- 아미노산 15번 위치에 있는 W을 F, Y, L 또는 I 또는 아미노산 F, Y, L 또는 I의 대응 D-아미노산으로 치환한 치환체;
- 아미노산 16번 위치에 있는 W을 F, Y, L 또는 I 또는 아미노산 F, Y, L 또는 I의 대응 D-아미노산으로 치환한 치환체;
- 아미노산 18번 위치에 있는 Y를 Q 또는 Q의 대응 D-아미노산으로 치환한 치환체;
- 아미노산 20번 위치에 있는 K를 R 또는 R의 대응 D-아미노산으로 치환한 치환체;
- 아미노산 21번 위치에 있는 R을 K 또는 K의 대응 D-아미노산으로 치환한 치환체;
- 아미노산을 대응 D-아미노산으로 치환한 치환체.
본 명세서에 정의되어 있는 아미노산 서열 LKKLYKRLVKILKRWWRYLKRPVR의 변이체는 L-아미노산을 대응 D-아미노산으로 치환한 24개 이하의 치환체를 함유할 수 있다. 따라서 상기 변이체 서열은 전체가 D-아미노산으로 이루어질 수 있다. 예를 들면 상기 변이체 서열은 L-아미노산을 대응 D-아미노산으로 치환한 24, 23, 22, 21, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 또는 1개의 치환체를 함유할 수 있다. 바람직하게는 L-아미노산을 대응 D-아미노산으로 치환한 하나 이상의 치환체를 가진 상기 변이체 서열은 표 1에 나타낸 펩티드 P139, P140, P141, P142, P143, P144, P145, P146, P147, P148, P149, P150, P151, P152, P153, P154, P155, P156, P157, P158, P159, P160, P161, P162 또는 P163의 아미노산 서열의 적어도 14개의 아미노산을 포함한다. 보다 바람직하게는 경우에 따라 L-아미노산을 대응 D-아미노산으로 치환한 하나 이상의 치환체를 포함하는 본 발명의 폴리펩티드는 펩티드 P1454, P148 또는 P159의 아미노산 서열을 포함한다. 일 구현예에 있어서, 본 명세서에 정의되어 있는 변이체 서열은 아미노산을 대응 D-아미노산으로 치환한 하나의 치환체를 함유한다. 상기 아미노산 서열에서 D-아미노산의 위치는 의미가 없다. 또 다른 구현예에 있어서, 상기 변이체 서열은 모든 L-아미노산을 대응 D-아미노산으로 치환한 치환체를 함유한다. 본 명세서에 정의되어 있는 변이체 서열은 아미노산 서열 LKKLYKRLVKILKRWWRYLKRPVR 또는 펩티드 P139-163 중 하나, 바람직하게는 P145, P148 또는 P159의 아미노산 서열의 적어도 14개의 연속해 있는 아미노산의 레트로-인버소 펩티드일 수도 있다. 바람직하게는 상기 변이체 서열은 상기 아미노산 서열, 바람직하게는 P139-163 중 하나, 더 바람직하게는 P145, P148 또는 P159의 아미노산 서열의 전장(full length)의 레트로-인버소 펩티드이다. 레트로-인버소 펩티드는 기준 아미노산 서열의 역순으로 D-아미노산으로 이루어진 펩티드이다. 예를 들면 본 발명의 바람직한 변이체 서열은 P145, P148 또는 P159의 아미노산 서열의, 즉 각각 서열 rvpkklyrylrkilkalrkylrkl, rvpkklqrwyrkllkfvrkwvrkl 또는 rvprrlqryyrkllrfvrkylrkl을 갖거나 또는 상기 서열들 중 하나의 적어도 14개의 아미노산의 레트로-인버소 펩티드이다.
본 명세서에 정의되어 있는 아미노산 서열 LKKLYKRLVKILKRWWRYLKRPVR의 변이체는 아미노산을 비천연 아미노산으로 치환하거나 또는 위에서 나타낸 아미노산 치환체 중 하나 이상의 뒤에 상기 아미노산 서열에 존재하는 아미노산을 비천연 아미노산으로 치환한 5개 이하의 치환체를 포함할 수 있다. 본 명세서에서 사용되는 "비천연 아미노산"은 자연계 출현 여부에 관계없이 비유전적으로 코딩된 아미노산을 지칭한다. 본 명세서에 정의되어 있는 아미노산 서열의 변이체에 존재할 수 있는 비천연 아미노산은: β-아미노산; p-아실-L-페닐알라닌; N-아세틸라이신; O-4-알릴-L-티로신; 2-아미노아디프산; 3-아미노아디프산; 베타-알라닌; 4-tert-부틸 수소 2-아지도숙시네이트; 베타-아미노프로피온산; 2-아미노부티르산; 4-아미노부티르산; 2,4,-디아미노부티르산; 6-아미노카프로산; 2-아미노헵탄산; 2-아미노이소부티르산; 3-아미노이소부티르산; 2-아미노피멜산; p-아미노페닐알라닌; 2,3-디아미노부티르산; 2,3-디아미노프로피온산; 2,2'-di아미노피멜산; p-아미노-L-페닐알라닌; p-아지도-L-페닐알라닌; D-알릴글리신; p-벤조일-L-페닐알라닌; 3-벤조티에닐 알라닌 p-브로모페닐알라닌; t-부틸알라닌; t-부틸글리신; 4-클로로페닐알라닌; 시클로헥실알라닌; 시스테산; D-시트룰린; 티오-L-시트룰린; 데스모신; 엡실론-아미노헥산산; N-에틸글리신; N-에틸아스파라긴; 2-플루오로페닐알라닌; 3-플루오로페닐알라닌; 4-플루오로페닐알라닌; 호모아르기닌; 호모시스테인; 호모세린; 히드록시라이신; 알로-히드록시라이신; 3-(3-메틸-4-니트로벤질)-L-히스티딘 메틸 에스테르; 이소데스모신; 알로-이소류신; 이소프로필-L-페닐알라닌; 3-메틸-페닐알라닌; N-메틸글리신; N-메틸이소류신; 6-N-메틸라이신; O-메틸-L-티로신; N-메틸발린; 메티오닌 술폭시드; 2-나프틸알라닌; L-3-(2-나프틸)알라닌; 이소세린; 3-페닐세린; 노르발린; 노르류신; 5,5,5-트리플루오로-DL-류신; 오르니틴; 3-클로로-티로신; N-5-카르바모일오르니틴; 페니실라민; 페닐글리신; 피페리딘산; 피리딜알라닌; 1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-3-카르복실산; 베타-2-티에닐알라닌; γ-카르복시-DL-글루탐산; 4-플루오로-DL-글루탐산; D-티록신; 알로-트레오닌; 5-히드록시-트립토판; 5-메톡시-트립토판; 5-플루오로-트립토판; 3-플루오로-발린을 포함한다.
바람직하게는 상기 서열의 천연 아미노산은 대응 비천연 아미노산에 의해 치환된다. 본 명세서에서 사용되는 "대응 비천연 아미노산"은 기준 천연 아미노산의 유도체인 비천연 아미노산을 지칭한다. 예를 들면 천연 아미노산은 대응 β-아미노산에 의해 치환된다. β-아미노산은 천연 아미노산에서와 같이 α 탄소 대신 β 탄소에 결합되어 있는 아미노기를 갖고 있다. 예를 들면 α-알라닌이 β-알라닌 등에 의해 치환되어 있다. 천연 아미노산을 상기 천연 아미노산의 유도체인 비천연 아미노산으로 치환한 치환체의 다른 예들은 다음과 같다. 알라닌은 예를 들면 베타-알라닌, t-부틸알라닌, 2-나프틸알라닌; L-3-(2-나프틸)알라닌, 2-아미노이소부티르산에 의해 치환된다. 아르기닌은 예를 들면 호모아르기닌, 오르니틴, N5-카르바모일오르니틴, 3-아미노-프로피온산에 의해 치환된다. 아스파라긴은 예를 들면 N-에틸아스파라긴에 의해 치환된다. 아스파르트산은 예를 들면 4-tert-부틸 수소 2-아지도숙시네이트에 의해 치환된다. 시스테인은 예를 들면 시스테산, 호모시스테인에 의해 치환된다. 글루탐산은 예를 들면 γ-카르복시-DL-글루탐산; 4-플루오로-DL-글루탐산에 의해 치환된다. 글루타민은 예를 들면 D-시트룰린, 티오-L-시트룰린에 의해 치환된다. 글리신은 예를 들면 N-메틸글리신, t-부틸글리신, N-메틸글리신, D-알릴글리신에 의해 치환된다. 히스티딘은 예를 들면 3-(3-메틸-4-니트로벤질)-L-히스티딘 메틸 에스테르에 의해 치환된다. 이소류신은 예를 들면 이소데스모신, N-메틸이소류신, 알로-이소류신에 의해 치환된다. 류신은 예를 들면 노르류신, 데스모신, 5,5,5-트리플루오로-류신에 의해 치환된다. 라이신은 예를 들면 6-N-메틸라이신, 2-아미노헵탄산, N-아세틸라이신, 히드록시라이신, 알로-히드록시라이신에 의해 치환된다. 메티오닌은 예를 들면 메티오닌 술폭시드에 의해 치환된다. 페닐알라닌은 p-아미노-L-페닐알라닌, 3-벤조티에닐 알라닌, p-브로모페닐알라닌, p-아실-L-페닐알라닌, 2-플루오로페닐알라닌, 3-플루오로페닐알라닌, 4-플루오로페닐알라닌에 의해 치환된다. 프롤린은 예를 들면 3-히드록시프롤린, 4-히드록시프롤린, 1-아세틸-4-히드록시-L-프롤린에 의해 치환된다. 세린은 예를 들면 호모세린, 이소세린, 3-페닐세린에 의해 치환된다. 트레오닌은 예를 들면 D-티록신, 알로-트레오닌에 의해 치환된다. 트립토판은 예를 들면 5-히드록시-트립토판, 5-메톡시-트립토판, 5-플루오로-트립토판에 의해 치환된다. 티로신은 예를 들면 O-메틸-L-티로신, O-4-알릴-L-티로신, 3-클로로-티로신에 의해 치환된다. 발린은 예를 들면 노르발린, N-메틸발린, 3-플루오로-발린에 의해 치환된다.
그러므로 본 발명에 따르면 아미노산 서열 LKKLYKRLVKILKRWWRYLKRPVR 또는 상기 아미노산 서열의 변이체를 포함하는 폴리펩티드로서, 상기 폴리펩티드가 항미생물, 항박테리아, 항바이러스, 항진균, 항기생충 및/또는 항염증 활성을 갖고,
상기 변이체 서열이 적어도 14개의 아미노산을 갖고 경우에 따라:
- 하기 아미노산 치환체 중 하나 이상:
· L, V, F, A, I, W, Y 또는 Q의 군으로부터 선택되는 하나 이상의 아미노산을 상기 군으로부터 선택되는 또 다른 아미노산으로 또는 아미노산 L, V, F, A, I, W, Y 또는 Q의 대응 비천연 아미노산으로 치환한 치환체;
· R을 K 또는 K의 대응 비천연 아미노산으로 치환한 치환체;
· K를 R 또는 K의 대응 비천연 아미노산으로 치환한 치환체;
- 아미노산을 대응 D-아미노산으로 치환한 하나 이상의 치환체. 이러한 변이체 서열은 K와 R로부터 선택되는 하나 이상의 아미노산, 바람직하게는 최대 하나 이하의 아미노산을 대응 비천연 아미노산으로 치환한 치환체를 추가로 가질 수 있다. 바람직하게는, 상기 변이체 서열은 경우에 따라 하기 아미노산 치환체 중 하나 이상을 갖는다:
· K를 R 또는 R의 대응 비천연 아미노산으로 치환한 치환체;
· R을 K 또는 K의 대응 비천연 아미노산으로 치환한 치환체;
· L을 V, I 또는 W 또는 아미노산 V, I 또는 W의 대응 비천연 아미노산으로 치환한 치환체;
· Y를 W 또는 Q 또는 아미노산 W 또는 Q의 대응 비천연 아미노산으로 치환한 치환체;
· V를 F 또는 A 또는 아미노산 F 또는 A의 대응 비천연 아미노산으로 치환한 치환체;
· I를 L 또는 L의 대응 비천연 아미노산으로 치환한 치환체;
· W를 F, Y, L 또는 I 또는 아미노산 F, Y, L 또는 I의 대응 비천연 아미노산으로 치환한 치환체;
- 아미노산을 대응 비천연 아미노산으로 치환한 하나 이상의 치환체.
더 바람직하게는, 상기 변이체 서열은 경우에 따라 하기 아미노산 치환체 중 하나 이상을 갖는다:
- 아미노산 2번 위치에 있는 K를 R 또는 R의 대응 비천연 아미노산으로 치환한 치환체;
- 아미노산 3번 위치에 있는 K를 R 또는 R의 대응 비천연 아미노산으로 치환한 치환체;
- 아미노산 4번 위치에 있는 L을 V 또는 V의 대응 비천연 아미노산으로 치환한 치환체;
- 아미노산 5번 위치에 있는 Y를 W 또는 W의 대응 비천연 아미노산으로 치환한 치환체;
- 아미노산 8번 위치에 있는 L을 V 또는 V의 대응 비천연 아미노산으로 치환한 치환체;
- 아미노산 9번 위치에 있는 V를 F 또는 A 또는 아미노산 F 또는 A의 대응 비천연 아미노산으로 치환한 치환체;
- 아미노산 10번 위치에 있는 K를 R 또는 R의 대응 비천연 아미노산으로 치환한 치환체;
- 아미노산 11번 위치에 있는 I를 L 또는 L의 대응 비천연 아미노산으로 치환한 치환체;
- 아미노산 12번 위치에 있는 L을 I 또는 W 또는 아미노산 I 또는 W의 대응 비천연 아미노산으로 치환한 치환체;
- 아미노산 15번 위치에 있는 W을 F, Y, L 또는 I 또는 아미노산 F, Y, L 또는 I의 대응 비천연 아미노산으로 치환한 치환체;
- 아미노산 16번 위치에 있는 W을 F, Y, L 또는 I 또는 아미노산 F, Y, L 또는 I의 대응 비천연 아미노산으로 치환한 치환체;
- 아미노산 18번 위치에 있는 Y를 Q 또는 Q의 대응 비천연 아미노산으로 치환한 치환체;
- 아미노산 20번 위치에 있는 K를 R 또는 R의 대응 비천연 아미노산으로 치환한 치환체;
- 아미노산 21번 위치에 있는 R을 K 또는 K의 대응 비천연 아미노산으로 치환한 치환체;
- 아미노산을 대응 D-아미노산으로 치환한 치환체.
본 발명에 따른 폴리펩티드는 본 명세서에서 정의되어 있는 아미노산 서열 LKKLYKRLVKILKRWWRYLKRPVR 또는 이 서열의 변이체로 이루어질 수 있다. 본 명세서에서 사용되는 "폴리펩티드"는 다수 개의 아미노산을 포함하는 펩티드, 폴리펩티드와 펩티드 모방체(peptidomimetic)를 지칭한다. 용어 "폴리펩티드"와 "펩티드"는 호환하여 사용된다. 항미생물 활성을 가진 것으로 입증된 본 발명에 따른 가장 작은 폴리펩티드는 14개의 아미노산의 길이를 갖고 있다. 그러나 상기 아미노산 서열 또는 이의 변이체는 더 큰 폴리펩티드, 즉 하나 이상의 추가 아미노산에 의해 N-말단 및/또는 C-말단이 연장된 폴리펩티드의 일부일 수 있다. 본 발명의 폴리펩티드의 아미노산 서열 또는 이의 변이체는 바람직하게는 N- 및/또는 C-말단 연장기를 포함함으로써 N-말단 및/또는 C-말단이 변형될 수 있다. 이와 달리, 상기 아미노산 서열 또는 이의 변이체는 N- 및/또는 C-말단이 연장된다. 따라서 본 발명에 따른 폴리펩티드는 적어도 14개의 아미노산을 포함하고 1000개 이하의 아미노산을 포함할 수 있다. 그러나 제조비용을 가급적 낮게 유지하기 위해서는 더 작은 폴리펩티드가 바람직하다. 바람직하게는 본 발명에 따른 폴리펩티드의 길이는 14-200개 아미노산, 더 바람직하게는 14-100개 아미노산, 더 바람직하게는 14-50개 아미노산이다. 예를 들면 본 발명에 따른 폴리펩티드는 14 내지 24개의 아미노산, 즉 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 또는 24개의 아미노산을 포함한다.
바람직하게는 상기 폴리펩티드는 16-200개, 16-100개 또는 16-50개의 아미노산과 같은 적어도 16개의 아미노산을 포함한다. 상기 폴리펩티드는 바람직하게는 14-24개의 아미노산을 갖는다. 14-24개의 아미노산을 가진 이러한 폴리펩티드는 아세틸-, 헥사노일-, 데카노일-, 미리스토일-, NH-(CH2-CH2-O)11-CO-와 프로피오닐 잔기로 이루어진 군으로부터 선택되는 N-말단 변형체 및/또는 아미드-, NH-(CH2-CH2-O)11-CO-아미드-와 하나 또는 2개의 아미노-헥사노일기로 이루어진 군으로부터 선택되는 C-말단 변형체와 같은 N-말단 및/또는 C-말단 변형체를 추가로 가질 수 있다. 일 구현예에 있어서, 본 발명의 폴리펩티드는 바람직하게는 표 1에 나타낸 P145, P148 또는 P159의 아미노산 서열 또는 이의 적어도 14개의 아미노산으로 이루어져 있고 경우에 따라 N-말단 및/또는 C-말단 변형체를 가지며 바람직하게는 N- 및/또는 C-말단 연장기를 포함하는, 본 명세서에 정의되어 있는 아미노산 서열 LKKLYKRLVKILKRWWRYLKRPVR 또는 이의 변이체로 이루어진다.
본 명세서에서 사용되는 "펩티드 모방체"는 비펩티드 구조 요소를 함유하는 화합물로서, 본 발명의 폴리펩티드의 항미생물, 항박테리아, 항바이러스, 항진균, 항기생충 및/또는 항염증 특성을 모방하고 있는 화합물을 지칭한다. 그러므로 본 발명의 폴리펩티드는 비펩티드 구조 요소를 포함할 수 있다. 본 발명의 폴리펩티드의 아미노산 서열에는 이러한 비펩티드 구조 요소가 상기 서열의 하나 이상의 아미노산의 변형체를 치환한 결과로서 존재할 수 있다. 이와 달리, 본 발명의 폴리펩티드는 본 명세서에 정의되어 있는 아미노산 서열 LKKLYKRLVKILKRWWRYLKRPVR 밖에 또는 이의 변이체 안에, 즉 경우에 따른 N- 및/또는 C-말단 연장기에 비펩티드 구조 요소를 포함할 수 있다. 펩티드 모방체 내 비펩티드 구조 요소는 전형적으로 하나 이상의 존재하고 있는 아미노산의 변형체이다. 바람직한 펩티드 모방체는 예를 들면 위에서 본 명세서에서 위에 정의한 바와 같은 비천연 아미노산을 사용하는 본 발명의 폴리펩티드의 구조 변형, 형태 구속(conformational restraint), 상기 폴리펩티드의 고리화, 등비체적 대체(isosteric replacement) 또는 그 외 변형에 의해 얻어진다. 이에 따라 본 발명에 따른 폴리펩티드의 아미노산 서열은 경우에 따라 하나 이상의 변형체를 포함한다. 이러한 폴리펩티드는 번역후 프로세싱과 같은 자연적인 과정 또는 화학적 변형 기술에 의해 변형될 수 있다. 변형체는 폴리펩티드 주쇄, 아미노산 측쇄를 포함한 상기 폴리펩티드 내 임의의 위치와 N- 또는 C-말단에서 삽입될 수 있다. 단일 폴리펩티드는 여러 유형의 변형체 또는 단일 유형의 여러 변형체를 함유할 수 있다. 변형은 아세틸화, 아미드화, 아실화, 인산화, 메틸화, 탈메틸화, ADP-리보실화, 이황화 결합 형성, 유비퀴틴화, 감마-카르복실화, 글리코실화, 히드록실화, 요오드화, 산화, 페길화(pegylation)와 술폰화를 포함한다. 또한 본 발명에 따른 폴리펩티드에는 비오틴, 플루오레세인 또는 플라빈, 지질 또는 지질 유도체, 당기(sugar group)와 같은 표지가 제공될 수 있다. 본 발명에 따른 폴리펩티드에는 표적 부분이 더 제공될 수 있다.
바람직한 일 구현예에 있어서, 본 발명에 따른 폴리펩티드는 N-말단 및/또는 C-말단이 변형된다. 이에 따라 본 발명의 폴리펩티드는 바람직하게는 N- 및/또는 C-말단 연장기를 포함한다. 본 발명의 폴리펩티드에서 사용할 수 있는 N- 및 C-말단 연장기는 본 기술분야에 잘 알려져 있다. N-말단 변형의 바람직한 예는 아세틸-, 헥사노일-, 데카노일-, 미리스토일-, NH-(CH2-CH2-O)11-CO-와 프로피오닐 잔기이다. C-말단 변형의 바람직한 예는 아미드-, NH-(CH2-CH2-O)11-CO-아미드-와 하나 또는 2개의 아미노-헥사노일기이다. 그러나 다른 N- 또는 C-말단 연장기들 또한 당업자에게 알려져 있는 활성 화합물을 수득하게 할 수 있다. 일 구현예에 있어서, 상기 폴리펩티드는 N-말단 아세틸-, 헥사노일-, 데카노일-, 미리스토일-, NH-(CH2-CH2-O)11-CO- 또는 프로피오닐-잔기 및 C-말단 아미드-, NH-(CH2-CH2-O)11-CO-아미드-와 하나 또는 2개의 아미노-헥사노일기를 포함한다. 일 구현예에 있어서, N-말단이 아세틸화되고 C-말단이 아미드화되어 있는 본 발명에 따른 폴리펩티드가 제공된다.
이에 따라 본 발명은 아미노산 서열 LKKLYKRLVKILKRWWRYLKRPVR 또는 상기 아미노산 서열의 변이체를 포함하는 분리된 또는 재조합 폴리펩티드로서, 상기 폴리펩티드가 항미생물, 항박테리아, 항바이러스, 항진균, 항기생충 및/또는 항염증 활성을 갖고 상기 변이체 서열이 적어도 14개의 아미노산을 갖고 경우에 따라 하기 아미노산 치환체 중 하나 이상, 바람직하게는 10개 이하를 가지며:
- 아미노산 2번 위치에 있는 K를 R로 치환한 치환체;
- 아미노산 3번 위치에 있는 K를 R로 치환한 치환체;
- 아미노산 4번 위치에 있는 L을 V로 치환한 치환체;
- 아미노산 5번 위치에 있는 Y를 W로 치환한 치환체;
- 아미노산 8번 위치에 있는 L을 V로 치환한 치환체;
- 아미노산 9번 위치에 있는 V를 F 또는 A로 치환한 치환체;
- 아미노산 10번 위치에 있는 K를 R로 치환한 치환체;
- 아미노산 11번 위치에 있는 I를 L로 치환한 치환체;
- 아미노산 12번 위치에 있는 L을 I 또는 W로 치환한 치환체;
- 아미노산 15번 위치에 있는 W을 F, Y, L 또는 I로 치환한 치환체;
- 아미노산 16번 위치에 있는 W을 F, Y, L 또는 I로 치환한 치환체;
- 아미노산 18번 위치에 있는 Y를 Q로 치환한 치환체;
- 아미노산 20번 위치에 있는 K를 R로 치환한 치환체;
- 아미노산 21번 위치에 있는 R을 K로 치환한 치환체; 및/또는
- 하나 이상의 아미노산을 대응 D-아미노산으로 치환한 치환체,
상기 아미노산 서열 또는 이의 상기 변이체가 N- 및/또는 C-말단 연장기를 포함하고, 바람직하게는 N-말단 아세틸-, 헥사노일-, 데카노일-, 미리스토일-, NH-(CH2-CH2-O)11-CO- 또는 프로피오닐-잔기와 C-말단 아미드-, NH-(CH2-CH2-O)11-CO-아미드-와 하나 또는 2개의 아미노-헥사노일기를 포함하는 폴리펩티드를 제공한다. 다른 N- 또는 C-말단 연장기들 또한 활성 화합물을 수득하게 할 것이라는 것은 당업자에게 명백할 것이다. 본 명세서에서 아미노산의 번호는 다음과 같이 부여된다: L1K2K3L4Y5K6R7L8V9K10I11L12K13R14W15W16R17Y18L19K20R21P22V23R24. 상기 폴리펩티드는 바람직하게는 표 1에 나타낸 P145, P148 또는 P159 또는 그의 적어도 14개의 아미노산을 포함한다. 상기 폴리펩티드는 바람직하게는 14-24개의 아미노산을 갖는다.
바람직한 일 구현예에 있어서, 본 발명에 따른 폴리펩티드는 소수성 부분을 포함한다. 양이온성 (폴리)펩티드에 소수성기를 첨가하면 미생물 내독소를 중화시키고 미생물막과 상호작용하는 상기 (폴리)펩티드의 능력을 향상시켜 미생물, 예를 들면 병원체를 제거하는 상기 (폴리)펩티드의 능력을 향상시킨다.
본 명세서에서 위에 기재한 바와 같이, 본 발명에 따른 폴리펩티드는 본 기술분야에 알려져 있는 화학적 변형 기술에 의해 변형될 수 있다. 본 발명에 따른 폴리펩티드의 변형은 폴리펩티드의 합성 도중 또는 종료 시점에 도입될 수 있다. 예를 들면 상기 폴리펩티드를 고상 합성 기술을 이용하여 합성할 때 N-말단 아세틸화를 종료 시점에 수지에 여전히 결합되어 있는 아미노산 서열을 아세트산과 반응시켜 수행할 수 있다. 또 다른 예로서 C-말단 아미드화를 예를 들면 상업적으로 이용 가능한 Tentagel SAM(ex Rapp, 튀빙겐, 독일)과 같은 고상 펩티드 합성에서 특수한 종류의 수지를 이용하여 수행한다. 이들 수지는 절단(cleavage) 중에 아미드화된 (폴리)펩티드가 방출되는 화학적 조절자(chemical handle)를 포함한다. 이들과 그 외 폴리펩티드 변형 방법은 모든 당업자에게 알려져 있다.
바람직한 일 구현예에 있어서, 본 발명에 따른 폴리펩티드는 세포 투과 펩티드를 포함한다. 이러한 세포 투과 펩티드는 본 발명의 항미생물 펩티드에 연결시 세포막을 통과하여 폴리펩티드의 효율적인 전위를 용이하게 하는 펩티드 서열이다. 본 기술분야에 알려져 있는 모든 세포 투과 펩티드를 본 발명의 폴리펩티드에서 사용할 수 있다. 세포 투과 펩티드의 예는 폴리아르기닌, TAT, HIV-Tat, R9-TAT, Pep-1, Pep-7, 페네트라틴, 트랜스포탄, Antp, Rev, FHV 코팅 단백질, 부포린 II, MAP, K-FGF, Ku70, SynBl, HN-1, TP10, pVEC, BGSC와 BGTC를 포함하지만 이들에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 폴리펩티드는 바람직하게는 자연계에서 발생하지 않는 폴리펩티드로서, 즉 본 발명의 폴리펩티드는 바람직하게는 비자연 발생적 폴리펩티드이다. 본 명세서에서 사용되는 "비자연 발생적"은 상기 폴리펩티드가 상기 형태로 자연계에서 발견되지 않는, 바람직하게는 상기 폴리펩티드의 아미노산 서열이 자연계에서 발견되지 않는다는 것을 의미한다.
본 명세서에 정의되어 있는 아미노산 서열 LKKLYKRLVKILKRWWRYLKRPVR 또는 이의 변이체를 포함하는 6개 이하의 폴리펩티드를 포함하는, 바람직하게는 P145, P148 또는 P159의 아미노산 서열 또는 이의 적어도 14개의 아미노산을 포함하는 본 발명의 폴리펩티드의 다량체(multimer)가 또한 제공된다. 상기 다량체는 동일한 아미노산 서열을 가진 6개 이하의 폴리펩티드 단량체 또는 2개 이상의 폴리펩티드 단량체가 서로 다른 아미노산 서열을 가진 6개 이하의 폴리펩티드 단량체를 포함할 수 있다. 바람직한 일 구현예에 있어서, 본 발명에 따른 다량체는 동일한 아미노산 서열을 가진 본 발명에 따른 6개 이하의 폴리펩티드를 포함한다.
본 발명에 따른 폴리펩티드의 염이 또한 제공된다. 이러한 염은 산부가염과 염기부가염을 포함하지만 이들에 한정되는 것은 아니다. 본 명세서에서 사용되는 폴리펩티드의 "약제학적으로 허용되는 염"은 폴리펩티드의 원하는 항미생물, 항박테리아, 항진균, 항바이러스, 항기생충 및/또는 항염증 활성을 유지하고 인간 또는 동물에 투여하기에 적합한 염을 지칭한다. 폴리펩티드의 염을 제조하기 위한 방법은 당업계에 공지되어 있고 일반적으로 예를 들면 생성물의 유리산 또는 유리 염기 형태를 염을 용해하지 않는 용매 또는 매질 또는 추후 진공에서 또는 동결건조에 의해 제거되는 물과 같은 용매에서 적절한 산 또는 염기 1 당량 이상과 반응시키거나 존재하고 있는 염의 양이온을 적합한 이온 교환 수지상의 또 다른 양이온에 대해 교환함으로써 폴리펩티드를 약제학적으로 허용되는 산 또는 염과 혼합하는 것을 포함한다. 약제학적으로 허용되는 산과 염기의 예는 폴리펩티드의 유리 아미노기와 암모늄염을 형성하는 포름산, 아세트산, 프로피온산, 락트산, 글리콜산, 옥살산, 피루브산, 숙신산, 말레산, 말론산, 트리플루오로아세트산, 신남산, 황산, 염산, 브롬산, 질산, 과염소산, 인산과 티오시안산과 같은 무기산과 유기산 및 폴리펩티드의 유리 카르복실산과 카르복실레이트염을 형성하는 에틸아민, 메틸아민, 디메틸아민, 트리에틸아민, 이소프로필아민, 디이소프로필아민과 그 외 모노-, 디- 및 트리알킬아민과 아릴아민과 같은 염기를 포함한다.
본 발명에 따른 폴리펩티드는 다양한 방법에 의해 제조할 수 있다. 예를 들면 통상적으로 사용되는 고상 합성법, 예를 들면 당업계에 잘 알려져 있는 알파-아미노기의 t-BOC 또는 FMOC 보호를 포함하는 방법에 의해 폴리펩티드를 합성할 수 있다. 이때 아미노산은 성장하는 아미노산의 사슬에 순차적으로 부가된다. 이러한 방법들은 예를 들면 Merrifield(1963), J. Am. Chem. Soc. 85: 2149-2156; 및 Atherton 등., "Solid Phase Peptide Synthesis," IRL Press, London (1989)에 기재되어 있다. 고상 합성법은 약 70개 이하의 아미노산의 길이를 가진 폴리펩티드와 같이 상대적으로 짧은 길이의 폴리펩티드를 대규모 제조로 합성하기에 특히 적합하다.
이와 달리, 본 발명의 폴리펩티드는 폴리펩티드를 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 숙주 세포에서 발현시키는 당업계에 잘 알려져 있는 재조합 기술을 이용하여 제조할 수 있다. 이에 따라 본 발명은:
- 본 발명에 따른 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열을 포함하는 핵산 분자를 제공하고;
- 상기 핵산 분자로 숙주 세포를 형질전환시키고;
- 상기 폴리펩티드의 발현이 가능한 조건에서 상기 숙주 세포를 배양하고;
- 상기 세포로부터 상기 폴리펩티드를 회수하고;
- 경우에 따라 예를 들면 N- 및/또는 C-말단 연장기를 첨가하여 상기 폴리펩티드의 N-말단 또는 C-말단을 변형시키는 것을 포함하는 본 발명에 따른 폴리펩티드를 제조하기 위한 방법을 제공한다.
본 발명은 또한 본 발명에 따른 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열을 포함하는 핵산 분자를 제공하며, 본 명세서에서는 본 발명에 따른 핵산 분자라고도 한다. 본 명세서에서 사용되는 본 발명의 핵산 분자 또는 핵산 서열은 뉴클레오티드, 바람직하게는 DNA 및/또는 RNA의 사슬을 포함한다.
또한 본 발명에 따른 핵산 서열 분자를 포함하는 벡터가 제공된다. 본 명세서에서 사용하고 있는 용어 "벡터"는 숙주 세포에 이종 핵산 서열을 도입할 수 있는 플라스미드, 박테리오파아지 또는 동물 바이러스와 같은 핵산 분자를 의미한다. 본 발명에 따른 벡터는 숙주 세포에서 이종 핵산 서열에 의해 코딩되는 본 발명의 폴리펩티드의 발현 또는 생산을 가능하게 한다. 본 발명에 따라 사용되는 벡터는 예를 들면 동물 바이러스로부터 유래되며, 그 예로는 우두 바이러스(변형 우두 바이러스 앙카라(MVA)와 같은 약독화된 유도체 포함), 뉴캐슬병 바이러스(NDV), 아데노바이러스 또는 레트로바이러스를 포함하지만 이들에 한정되지 않는다. 본 발명에 따른 벡터는 바람직하게는 선택된 숙주 세포에서 본 발명에 따른 폴리펩티드의 전사 개시에 적합한 프로모터를 포함하는 발현 카세트를 포함한다. 진핵 숙주 세포에서 본 발명에 따른 폴리펩티드를 발현시키기에 적합한 프로모터의 예는 베타-액틴 프로모터, 면역글로빈 프로모터, 5S RNA 프로모터 또는 포유류 숙주에 대한 시토메갈로바이러스(CMV), 라우스 육종 바이러스(RSV)과 유인원 바이러스 40(SV40) 프로모터와 같은 바이러스 유래 프로모터를 포함하지만 이들에 한정되는 것은 아니다.
본 발명에 의하면, 본 발명에 따른 핵산 분자 및/또는 벡터를 포함하는 재조합 숙주 세포가 또한 제공된다. 숙주 세포는 본 발명에 따른 벡터와 같은 핵산 분자에 의해 형질전환된 세포 또는 형질전환할 수 있는 세포이다. "형질전환"은 수용 세포에 외래 핵산이 도입되는 것을 의미한다. 숙주 세포의 형질전환으로 인해 상기 세포에 의한 재조합 단백질의 일시적인 발현이 나타날 수 있는데, 이는 재조합 단백질이 한정된 기간 동안만 발현되는 것을 의미한다. 이와 달리, 수용 세포의 형질전환으로 인해 안정된 발현이 나타날 수 있는데, 이는 상기 세포의 게놈에 핵산이 도입되어 세포의 다음 세대로 옮겨가는 것을 의미한다. 추가로 재조합 단백질의 유도성 발현이 달성될 수 있다. 유도성 발현계는 본 발명의 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열의 발현을 가능하게 하는 분자의 존재 또는 부재를 필요로 한다. 유도성 발현계의 예는 Tet-On과 Tet-Off 발현계, 예를 들면 엑디손 유도성 유전자 발현계와 같은 호르몬 유도성 유전자 발현계, 아라비노오스 유도성 유전자 발현계와 유도성 메탈로티오네인 프로모터를 포함하는 pMT/BiP 벡터(Invitrogen)를 사용하는 초파리 유도성 발현계를 포함하지만 이들에 한정되는 것은 아니다. 본 발명에 따른 폴리펩티드를 제조하기 위한 방법에서 사용되는 숙주 세포는 예를 들면 그램 양성 원핵생물, 그램 음성 원핵생물 또는 진핵생물이다. 바람직하게는 상기 숙주 세포는 식물 세포, 효모 세포, 포유류 세포 또는 곤충 세포와 같은 진핵 세포, 가장 바람직하게는 곤충 세포 또는 포유류 세포이다. 적합한 숙주 세포의 예는 옥수수 세포, 벼 세포, 개구리밥 세포, 담배 세포(BY-2 또는 NT-1 세포와 같은)와 감자 세포를 포함한다. 효모 세포의 예는 사카로마이세스와 피치아이다. 곤충 세포의 예는 Tn5, SF-9와 SF-21 세포와 같은 스포돕테라 프루기페르다 세포와 드로소필라 슈나이더 2(S2) 세포와 같은 초파리 세포이다. 본 발명에 따른 폴리펩티드를 발현하기에 적합한 포유류 세포의 예는 아프리카 푸른 원숭이 신장(Vero) 세포, 어린 햄스터 신장(BHK-21와 같은) 세포, 인간 망막 세포(예를 들면 PerC6 세포), 인간 배아 신장 세포(HEK293 세포와 같은s), Mardin-Darby 개 신장(MDCK) 세포, 닭 배아 섬유아세포(CEF), 닭 배아 신장 세포(CEK 세포), 배반엽 유래 배아 간세포(예를 들면 마우스 배아 섬유아세포(3T3 세포와 같은), 중국 햄스터 난소(CHO) 세포와 이들 세포 유형의 유도체를 포함하지만 이들에 한정되는 것은 아니다.
본 발명에 따른 방법은 바람직하게는 본 발명에 따른 폴리펩티드를 회수, 정제 및/또는 분리하는 단계를 더 포함한다. 본 발명에 따라 얻어진 폴리펩티드는 바람직하게는 경우에 따라 추가 정제, 분리 또는 가공 단계, 예를 들면 겔 전기영동 또는 크로마토그래피법을 이용하여 정제한 후에 인간 치료에 사용된다.
본 발명에 따른 폴리펩티드는 치료와 비치료 분야 모두에서 유리하게 사용될 수 있는 많은 활성을 나타낸다. 특히 본 발명에 따른 폴리펩티드는 박테리아 감염증, 진균 감염증, 바이러스 감염증과 같은 다양한 미생물 감염증의 저지와 기생충 감염증을 저지하는데 유용하다. 이에 따라 본 발명에 따른 폴리펩티드 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염과 적어도 하나의 약제학적으로 허용되는 담체, 희석제 및/또는 부형제를 포함하는 약제학적 조성물이 제공된다. 또한 본 발명에 따른 핵산 분자 또는 벡터와 적어도 하나의 약제학적으로 허용되는 담체, 희석제 및/또는 부형제를 포함하는 약제학적 조성물이 제공된다.
본 발명은 또한 약제로서 사용하기 위한 본 발명에 따른 폴리펩티드를 제공한다. 또한 약제로서 사용하기 위한 본 발명에 따른 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열을 포함하는 핵산 분자가 제공된다. 상기 약제는 치료제 또는 예방제일 수 있다.
일 구현예에 있어서, 본 발명은 박테리아, 진균, 바이러스 및/또는 기생충 감염증을 겪고 있거나 겪을 위험이 있는 피험체를 치료하기 위한 방법으로서, 상기 피험체에 본 발명에 따른 폴리펩티드, 본 발명에 따른 약제학적 조성물 또는 본 발명에 따른 핵산 분자의 치료 유효량을 투여하는 것을 포함하는 방법을 제공한다. 또한 미생물에 의해 감염된 피험체를 치료하거나 미생물 감염증을 예방하기 위한 약제를 제조하기 위한 방법이 제공된다. 바람직한 일 구현예에 있어서, 상기 미생물은 박테리아, 진균, 바이러스 또는 기생충이다. 또한 미생물, 박테리아, 진균, 바이러스 및/또는 기생충 감염증 또는 미생물, 박테리아, 진균, 바이러스 및/또는 기생충 감염증에 기인한 증상의 예방 또는 치료에 사용하기 위한 본 발명에 따른 폴리펩티드 및/또는 핵산 분자가 제공된다.
본 명세서에서 사용되는 "피험체"는 인간 또는 동물이다. 피험체는 인간, 돼지, 흰담비, 바다표범, 토끼, 고양이, 개, 소와 말과 같은 포유류 및 닭, 오리, 거위와 칠면조와 같은 조류를 포함하지만 이들에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 바람직한 구현예에 있어서, 피험체는 포유류이다. 특히 바람직한 구현예에 있어서, 상기 피험체는 인간이다.
본 발명은 또한 예를 들면 박테리아, 바이러스, 진균 또는 기생충과 같은 미생물의 성장을 저해하기 위한 방법으로서, 상기 미생물 또는 기생충을 본 발명에 따른 폴리펩티드 또는 약제학적 조성물과 접촉시키는 것을 포함하는 방법을 제공한다. 상기 접촉은 체내와 체외에서 실시할 수 있다.
본 발명에 따른 폴리펩티드와 약제학적 조성물은 다양한 바이러스, 박테리아와 진균 감염증과 같은 여러 가지 미생물 감염증을 치료하는데 효과적이다. 예를 들면 상기 폴리펩티드와 약제학적 조성물은 그램 음성과 그램 양성 박테리아를 치료하는데 효과적이다. 본 발명의 폴리펩티드와 조성물로 치료할 수 있는 인간 또는 동물에서 감염증을 일으킬 수 있는 병원성 박테리아의 예는 리스테리아, 에스케리치아, 클라마이디아, 리케치알 박테리아, 마이코박테리아, 스타필로코치, 스트렙토치, 뉴모노코치, 메닝고코치, 클렙시엘라, 슈도모나스, 레지오넬라, 디프테리아, 살모넬라, 바실리, 비브리오 콜레라에, 테타누스, 클로스트리디움, 바실루스, 예르시니아와 렙토스피라 박테리아를 포함하지만 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 폴리펩티드와 조성물로 치료할 수 있는 인간 또는 동물에서 감염증을 일으킬 수 있는 병원성 바이러스의 예는 A, B 또는 C형 간염, 헤르페스 바이러스(예를 들면, VZV, HSV-I, HAV-6, HSV-II, CMV, 엡스테인바르-바이러스), 아데노바이러스, 인플루엔자 바이러스, 플라비바이러스, 에코바이러스, 리노바이러스, 콕사키 바이러스, 코로나바이러스, 호흡기 세포융합 바이러스(RSV), 로타바이러스, 모르빌리바이러스, 루벨라 바이러스, 파보바이러스, 우두 바이러스, HTLV 바이러스, 뎅기열 바이러스, 유두종 바이러스, 폴리오 바이러스, 광견병 바이러스와 인간 면역결핍 바이러스(HIV 바이러스; 예를 들면 I과 II형)를 포함하지만 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 폴리펩티드와 조성물로 치료할 수 있는 인간 또는 동물에서 감염증을 일으킬 수 있는 병원성 진균류의 예는 칸디다(예를 들면 알비칸스, 크루세이, 글라브라타, 트로피칼리스), 아스페르길루스(예를 들면 푸미가투스, 니게르), 크립토코쿠스 네오포르만스, 히스토플라즈마 캅술라툼, 무코랄레스속, 블라스토마이세스 더마티티디스, 파라코치디오이데스 브라질리엔시스와 코치디오이데스 이미티스를 포함하지만 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 폴리펩티드와 조성물로 치료할 수 있는 인간 또는 동물에서 감염증을 일으킬 수 있는 병원성 기생충의 예는 엔타모에바 히스톨라이티카, 플라스모디움(예를 들면 팔시파룸, 비박스), 엔타모에바, 기아르디아, 발란티디움 콜라이, 아칸타모에바, 크립토스포리디움종, 뉴모사이스티스 카리니아이, 바베시아 미크로티, 트리파노소마(예를 들면 브루세이, 크루지), 레슈마니아(예를 들면 도노바니)와 톡소플라즈마 곤디아이를 포함하지만 이에 한정되는 것은 아니다.
바람직한 구현예에 있어서, 본 발명의 폴리펩티드와 약제학적 조성물은 메티실린에 내성이 있는 스타필로코쿠스 아우레우스(MRSA)와 (내성이 없는) S. 아우레우스, 스타필로코쿠스 에피데르미디스, 그램 음성 박테리아인 슈도모나스 아에루기노사와 진균종인 칸디다 알비칸스와 아스페르길루스 니게르에 의해 유발되는 감염증을 치료하는데 유효하다.
상기 폴리펩티드를 함유한 조성물은 예방 및/또는 치료 처치를 위해 투여할 수 있다. 치료용으로 폴리펩티드 또는 조성물은 이미 질환이 있는 피험체, 바람직하게는 인간에 감염증의 증후 또는 감염증과 그의 합병증에 기인한 증상을 저지하기에 충분한 양으로 투여된다. 예방용으로 폴리펩티드 또는 조성물은 미생물 또는 기생충 감염증에 걸릴 위험이 있는 피험체, 예를 들면 인간 또는 동물에 감염을 예방하거나 적어도 감염증의 진행을 저해하기에 충분한 양으로 투여된다. 상기 폴리펩티드는 본 발명에 따른 약제학적 조성물에 증상 또는 질환, 특히 미생물 또는 기생충 감염증과 관련된 증후를 치료하기에 충분한 양인 치료량으로 존재한다. 본 발명에 따른 폴리펩티드 또는 이들 중 적어도 2개의 조합의 전형적인 투여량은 폴리펩티드의 크기에 따라 체중 1 kg 당 폴리펩티드 0.01 내지 10 mg이다.
본 발명의 폴리펩티드와 약제학적 조성물은 광범위한 용도에 적합하다. 예를 들면 이들은 국소 용도, 예를 들면 피부 감염증, 창상 감염증과 요로 감염증의 치료 또는 예방에 사용될 수 있다. 본 명세서에서 상세히 전술한 바와 같이 본 발명의 폴리펩티드는 바이오필름 형성을 예방하고 존재하고 있는 바이오필름을 분산시킬 수 있고, 바이오필름 형성 위치 및 그 주변에서 박테리아, 진균 또는 기타 미생물들을 사멸시키고, 전염증성 미생물 내독소를 중화시킴으로써 면역반응을 조절한다. 박테리아 바이오필름은 피부 창상 치유를 지연시키고 감염된 피부 창상, 피부 감염증 또는 요로 감염증을 치유 또는 치료시 종래 항생제의 국소 항박테리아 효율을 감소시킬 수 있다. 따라서 본 발명은 피부 감염증, 창상 감염증 및/또는 요로 감염증의 치료 또는 예방에 사용하기 위한 본 발명에 따른 폴리펩티드, 약제학적 조성물 및/또는 핵산 분자를 제공한다. 또한 창상 치유에 사용하기 위한 본 발명에 따른 폴리펩티드, 약제학적 조성물 및/또는 핵산 분자가 제공된다. 또한 피부 감염, 창상 감염, 요로 감염의 치료 또는 예방 및/또는 창상 치유를 위한 약제학적 조성물의 제조에서 본 발명에 따른 폴리펩티드, 약제학적 조성물 및/또는 핵산분자의 용도가 제공된다. 본 발명은 또한 피부 감염, 창상 감염 및/또는 요로 감염에 걸린 피험체를 치료하기 위한 방법으로서, 상기 피험체에 본 발명에 따른 폴리펩티드, 본 발명에 따른 약제학적 조성물 또는 본 발명에 따른 핵산 분자의 치료 유효량을 투여하는 것을 포함하는 방법을 제공한다.
본 발명의 폴리펩티드는 미생물, 예를 들면 박테리아, 바이러스, 진균, 기생충 감염에 취약한 물질을 위한 보존제로서 더욱 유리하게 사용할 수 있다. 이러한 물질은 본 발명의 폴리펩티드로 함침 또는 코팅하거나 본 발명의 폴리펩티드에 의해 덮여질 수 있다. 본 명세서에서 상세하게 전술한 바와 같이, 본 발명의 폴리펩티드는 혈액, 혈장과 혈청 내 및 혈장 성분과 같은 성분이 존재하는 상태에서 항미생물 활성을 유지한다. 따라서 본 발명의 폴리펩티드와 약제학적 조성물은 특히 전신 용도 및 이식물과 의료 기기와 관련된 감염의 치료 및/또는 예방에 적합하다. 본 명세서에서 사용되는 용어 "의료 기기"는 인체 또는 동물체에서 사용할 수 있는 임의 유형의 기기를 의미하는 것으로 의료 기구, 의료 도구, 고관절과 무릎관절을 포함한 인공 관절과 치과 보철물 같은 보철물, 유방 보형물, 심박 조율기, 심장 판막, 스텐트, 카테터, 이어 튜브(ear tube), 부목, 의료 기기용 나사와 같은 이식형 기기 및 창상 또는 조직 드레싱을 포함하지만 이들에 한정되는 것은 아니다. 이식물과 의료 기기는 대개 실시예에서 입증되어 있는 바와 같이 본 발명의 폴리펩티드에 의해 성공적으로 저지되는 미생물 감염, 특히 바이오필름 감염증과 관련이 있는 경우가 많다. 또한 이식물과 의료 기기는 이식 후 일반적으로 빠르게 숙주액의 혈장 성분에 의해 덮여진다. 본 발명의 폴리펩티드는 실시예에서 입증되어 있는 바와 같이 혈장 성분이 존재하는 상태에서 항미생물 활성을 발휘하기 때문에 이식물 및/또는 의료 기기의 미생물 감염은 본 발명에 따른 폴리펩티드에 의해 효과적으로 치료 및/또는 예방된다. 따라서 이식물 및/또는 의료 기기용 보존제로서 본 발명의 폴리펩티드의 용도가 제공된다. 또한 이식물 및/또는 의료 기기의 미생물 감염, 바람직하게는 박테리아 감염의 예방 및/또는 치료에 사용하기 위한 본 발명의 폴리펩티드가 제공된다.
본 발명의 폴리펩티드는 방출 제어(controlled release) 및/또는 표적지향 전달 담체에 혼입되는 것이 유리하다. 본 명세서에서 사용되는 용어 "방출 제어"는 시간에 의존하는 방식으로 본 발명의 폴리펩티드가 방출되는 것을 의미한다. 일 구현예에 있어서, 방출 제어는 느린 방출을 의미한다. 본 명세서에서 사용되는 용어 "표적지향 전달"은 부위지향 방식으로 본 발명의 폴리펩티드가 방출되는 것을 의미한다. 방출 제어 수송체를 사용하면 예를 들면 주사에 의한 본 발명의 폴리펩티드의 빈번한 투여를 피할 수 있다는 장점이 있다. 표적지향 전달 수송체를 사용하면 본 발명의 폴리펩티드가 염증 부위 또는 감염 부위와 같은 피험체의 신체 내 대상 부위에 효과적으로 전달 및/또는 상기 대상 부위에서 유지되는 장점이 있다. 바람직하게는 본 발명의 폴리펩티드는 박테리아, 진균, 바이러스와 기생충을 포함한 미생물에 의해 감염되는 부위를 표적으로 한다. 방출제어 및/또는 표적지향 전달 담체는 본 기술분야에 잘 알려져 있다. 방출제어 및/또는 표적지향 전달 수송체의 비제한적 예로는 나노입자, 마이크로입자, 나노캡슐, 마이크로캡슐, 리포솜, 미소 구체, 하이드로겔, 폴리머, 지질 복합체, 혈청 알부민, 항체, 시클로덱스트린과 덱스트란이 있다. 방출제어는 예를 들면 이러한 담체의 표면 내부 또는 상부에 본 발명의 폴리펩티드를 혼입함으로써 제공된다. 상기 담체는 본 발명의 폴리펩티드를 포획하고 수성, 산성 또는 염기성 환경 또는 체액과 같이 적합한 환경에서 서서히 분해 또는 용해하는 입자를 형성함으로써 폴리펩티드를 방출하는 물질이다. 표적지향 전달은 예를 들면 담체의 표면상에 표적지향기를 제공함으로써 달성된다. 표적지향기를 포함하는 이러한 담체의 예로는 항체-관능화 담체, 부위-특이적 리간드를 가진 담체와 표면 양전하 또는 음전화를 가진 담체가 있다. 방출제어 및/또는 표적지향 전달을 위해 바람직한 입자로는 경우에 따라 표적지향기가 제공되어 있는 나노입자, 즉 직경이 약 1 내지 500 nm 범위, 바람직하게는 직경이 약 200 nm 이하인 입자와 리포솜이 있다. 따라서 본 발명은 본 발명의 폴리펩티드를 포함하는 방출제어 담체 및 이러한 방출제어 담체를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다. 또한 본 발명의 폴리펩티드를 포함하는 표적지향 전달 담체 및 이러한 표적지향 전달 담체를 포함하는 약제학적 조성물이 제공된다. 이러한 담체는 바람직하게는 나노입자, 마이크로입자, 나노캡슐, 마이크로캡슐, 리포솜, 미소 구체, 하이드로겔, 폴리머, 지질 복합체, 혈청 알부민, 항체, 시클로덱스트린과 덱스트란으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
바람직한 표적지향 전달 및/또는 방출제어 담체는 생분해성 물질이다. 본 명세서에서 사용되는 "생분해성"은 생리학적 조건에서 분해되는 분자를 의미한다. 이것은 가수분해에 의해 분해 가능한 분자와 효소분해가 필요한 분자를 포함한다. 적합한 생분해성 물질로는 PLA(폴리락트산), PGA(폴리글리콜산), 폴리카프로락톤(PCA), 폴리에틸렌 옥사이드(PEO), 폴리디옥사논(PDS), 폴리카프로락톤(PCL), 폴리프로필렌 푸마레이트와 같은 생분해성 폴리머와 천연 생분해성 물질, 락티드, 글리콜리드와 카프로락톤과 같은 락톤으로부터 유도되는 폴리머, 트리메틸렌 카르보네이트와 테트라메틸렌 카르보네이트, 디옥사논, 에틸렌 글리콜, 폴리에스테르 아미드(PEA) 에틸렌 옥사이드, 에스테르아미드, γ-히드록시발레레이트, β-히드록시프로피오네이트, α-히드록시산, 히드록시부테레이트, 히드록시 알카노에이트, 폴리이미드 카르보네이트, 폴리우레탄, 폴리무수물과 이들의 조합과 같은 카보네이트, 히알루론산, 키토산과 셀룰로오스와 같은 다당류 및 젤라틴과 콜라겐과 같은 단백질을 포함하지만 이에 한정되는 것은 아니다.
또한 바람직하게는 본 발명의 폴리펩티드를 포함하는 이식물 및/또는 의료 기기용 코팅이 제공된다. 일 구현예에 있어서, 이러한 코팅은 본 발명의 폴리펩티드의 방출제어를 위해 제공된다. 이러한 의료 기기용 방출제어 코팅은 바람직하게는 생분해성 물질을 포함하여 코팅 물질의 분해에 의해 본 발명의 폴리펩티드가 방출된다. 따라서 본 발명의 폴리펩티드를 포함하는 방출제어 코팅이 또한 제공된다. 또한 본 발명의 폴리펩티드를 포함하는 이러한 코팅과 생분해성 물질을 포함하는 의료 기기가 제공된다. 또한 본 발명의 폴리펩티드를 포함하는 이러한 코팅과 생분해성 물질을 포함하는 이식물이 제공된다. 본 발명에 따른 생분해성 코팅은 위에 정의되어 있는 생분해성 물질을 포함한다. 특히 이러한 생분해성 코팅은 PLA(폴리락트산), PGA(폴리글리콜산), 폴리카프로락톤(PCA), 폴리에틸렌 옥사이드(PEO), 폴리디옥사논(PDS), 폴리카프로락톤(PCL), 폴리프로필렌 푸마레이트, 락티드, 글리콜리드와 카프로락톤과 같은 락톤으로부터 유도되는 폴리머, 트리메틸렌 카르보네이트와 테트라메틸렌 카르보네이트, 디옥사논, 에틸렌 글리콜, 폴리에스테르 아미드(PEA) 에틸렌 옥사이드, 에스테르아미드, γ-히드록시발레레이트, β-히드록시프로피오네이트, α-히드록시산, 히드록시부테레이트, 히드록시 알카노에이트, 폴리이미드 카르보네이트, 폴리우레탄, 폴리무수물과 이들의 조합과 같은 카보네이트, 히알루론산, 키토산과 셀룰로오스와 같은 다당류 및 젤라틴과 콜라겐과 같은 단백질로 이루어진 군으로부터 선택되는 물질을 포함한다. 또한 이식물 및/또는 의료 기기의 미생물 감염, 바람직하게는 박테리아 감염을 예방 및/또는 치료하는 방법으로서, 상기 이식물 및/또는 의료 기기에 본 발명의 폴리펩티드를 포함하는 코팅을 제공하고 상기 이식물 또는 의료 기기를 피험체에 이식하는 것을 포함하는 방법이 제공된다.
상기 폴리펩티드와 약제학적 조성물은 또한 이들이 리포테이코산, 펩티도글리칸과 리포다당류와 같은 전염증성 미생물 내독소를 중화시켜 호중구, 대식세포/단핵구와 림프구의 유입 및 감염 피험체에 의한 전염증성 미생물 화합물의 방출을 저해, 감소 또는 예방하기 때문에 항염증제로서 유용하다. 따라서 전염증성 화합물의 방출을 저해하기 위한 방법으로서, 전염증성 화합물을 방출할 수 있는 세포를 본 발명에 따른 폴리펩티드와 접촉시키는 것을 포함하는 방법이 또한 제공된다. 상기 접촉은 체내와 체외에서 수행될 수 있다. 또한 항염증제로서 사용하기 위한 본 발명에 따른 폴리펩티드가 제공된다.
본 발명에 따른 폴리펩티드는 강력한 항미생물제이지만 이들은 항생제, 항바이러스제와 항진균제와 같은 종래의 항감염제 또는 기타 항미생물 펩티드와 같은 공지의 항미생물제, 항체 및 예를 들면 증감제, 나노입자와 같은 공지된 화학물질과 조합할 수 있다. 이러한 조합은 항미생물 활성 증가로 나타나거나 활성 범위를 넓게 할 수 있다. 본 발명의 폴리펩티드는 예를 들면 박테리아 감염증을 치료하기 위해서 페니실린, 세팔로스포린, 마크로리드, 플루오로퀴놀론, 술폰아미드, 테트라사이클린 및/또는 아미노글리코시드와 조합될 수 있다. 바이러스 감염증 치료를 위해 폴리펩티드는 아시클로버, 간시클로비르, 지도부딘(AZT) 또는 디다노신과 같은 항바이러스 뉴클레오시드 유사체 또는 오셀타미비르, 페라미비르 또는 자나미비르와 같은 뉴라미다아제(neuramidase) 저해제와 조합될 수 있다. 진균 감염증 치료를 위해서 본 발명의 폴리펩티드와 조성물은 폴리엔 항진균제, 이미다졸, 트리아졸, 알릴아민, 에키노칸딘, 시클로피록스, 플루사이토신 및/또는 그리세오풀빈과 조합될 수 있다. 따라서 본 발명은 본 발명에 따른 폴리펩티드 및 항생제 또는 항미생물 펩티드와 같은, 바람직하게는 페니실린, 세팔로스포린, 카르바페넴과 무피로신으로 이루어진 군으로부터 선택되는 추가 항미생물제를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다.
본 발명에 따른 약제학적 조성물은 적어도 하나의 약제학적으로 허용되는 담체, 희석제 또는 부형제를 포함한다. 적합한 담체의 예는 예를 들면 키홀 림펫 헤모시아닌(kyhole limpet haemocyanin, KLH), 혈청 알부민(예를 들면 BSA 또는 RSA)과 난백 알부민을 포함한다. 바람직한 일 구현예에 있어서, 상기 적합한 담체는 용액, 예를 들면 염수이다. 정제, 캡슐제 등에 혼입될 수 있는 부형제의 예는 다음과 같다: 트라가칸트 검, 아카시아, 옥수수 전분 또는 젤라틴과 같은 결합제; 미세결정 셀룰로오스와 같은 부형제; 옥수수 전분, 호화전분, 알긴산 등과 같은 붕해제; 스테아린산 마그네슘과 같은 활제; 수크로오스, 락토오스 또는 사카린과 같은 감미제; 페퍼민트, 윈터그린(wintergreen) 또는 체리 오일과 같은 향미제이다. 투여 단위 형태가 캡슐일 때에는 상기 유형의 물질 이외에도 지방유와 같은 액체 담체를 함유할 수 있다. 다양한 다른 물질들이 코팅으로서 또는 그렇지 않고 투여 단위의 물리적 형태를 변형하기 위해서 존재할 수 있다. 예를 들어 정제는 셀락, 당 또는 이들 2개로 코팅될 수 있다. 시럽 또는 엘릭시르는 상기 활성 화합물, 감미제로서 수크로오스, 보존제로서 메틸 파라벤과 프로필 파라벤, 염료 및 체리 또는 오렌지 향과 같은 향미제를 함유할 수 있다. 본 발명에 따른 약제학적 조성물은 바람직하게는 인체용으로 적합하다.
본 명세서에 기재되어 있는 약제학적 조성물은 서로 다른 다양한 방법으로 투여될 수 있다. 예로서 본 발명에 따른 폴리펩티드를 포함하고 약제학적으로 허용되는 담체를 함유하는 약제학적 조성물을 경구, 비강내, 직장, 국소, 복강내, 정맥내, 근육내, 피하(subcutaneous), 피하(subdermal), 경피, 척수강내와 두개내 방법을 통해 투여하는 것을 포함한다. 경구 투여를 위해서 상기 활성 성분은 캡슐제, 정제와 산제와 같은 고체 투여형태 또는 엘릭시르, 시럽과 현탁액과 같은 액체 투여형태로 투여될 수 있다.
주사용 멸균 조성물은 종래의 약제학적 실시에 따라 본 발명의 폴리펩티드를 물 또는 참깨유, 코코넛유, 면실유 등과 같은 천연 식물유와 같은 주사용 매질 또는 에틸 올레에이트 등과 같은 합성 지방 매질에 용해 또는 현탁시켜 제형화할 수 있다. 완충제, 보존제, 산화방지제 등이 혼입될 수도 있다.
국소 투여용 조성물은 종래의 약제학적 실시에 따라 제형화될 수도 있다. 본 명세서에서 사용되는 "국소 투여"는 피부 또는 점막과 같은 신체 표면에 도포하여 미생물 또는 기생충 감염증에 기인하는 증상을 국소 치료하는 것을 의미한다. 국소 투여에 적합한 제형의 예는 크림, 겔, 연고, 로션, 포말, 현탁액, 분무액, 에어로졸, 분말 에어로졸을 포함하지만 이에 한정되는 것은 아니다. 국소 약제는 피부 도포형(epicutaneous)으로 이는 피부에 직접 도포되는 것을 의미한다. 국소 약제는 예를 들면 기도의 점막 상피 도포용 흡입제이거나 결막에 도포되는 점안액 또는 귀에 넣는 점이액(ear drop)과 같이 피부 이외의 조직의 표면에 도포될 수도 있다. 국소 투여용으로 제형화되는 상기 약제학적 조성물은 바람직하게는 유화제, 희석제, 보습제, 보존제, pH 조정제 및/또는 물과 같은 국소 도포용에 적합한 적어도 하나의 약제학적 부형제를 포함한다.
본 발명에 따른 폴리펩티드는 또한 진단용으로 적합하다. 상기 폴리펩티드는 예를 들면 혈액, 혈장, 점액, 창상 삼출액과 소변과 같은 생리학적 시료에 존재하는 예를 들면 LPS, LTA와 PG를 포함한 박테리아 독소와 같은 미생물 독소를 검출함으로써 미생물 감염 검출용으로 사용할 수 있다. 또한 상기 폴리펩티드는 이러한 시료 내 미생물 독소의 양을 측정하기 위해 사용할 수 있다. 따라서 진단제로서 사용하기 위한 본 발명에 따른 폴리펩티드 핵산 분자가 제공된다. 또한 혈액, 혈장, 점액, 창상 삼출액과 소변 시료와 같은 생리학적 시료에서 미생물 독소, 바람직하게는 박테리아 또는 진균 독소를 검출하기 위한 본 발명에 따른 폴리펩티드의 용도가 제공된다. 상술한 바와 같이, 본 발명에 따른 폴리펩티드는 비오틴, 플루오레세인 표지, 근적외선 염료 또는 방사성 동위원소와 같은 적절한 모이어티와 결합할 수 있다. 이렇게 표지된 폴리펩티드는 미생물 감염 부위로 이동하기 때문에 박테리아 감염증과 같은 미생물 감염증을 검출하기 위한 방법에서 사용할 수 있다. 상기 폴리펩티드에 부착된 사용 표지에 적합한 검출기를 사용하면 감염 부위를 검출할 수 있다. 따라서 본 발명에 의하면 박테리아 감염증과 같은 미생물 감염증을 검출하기 위한 방법이 또한 제공된다. 상기 방법은 전형적으로 미생물체에 의해 감염되거나 감염이 의심되는 피험체에 표지된 폴리펩티드를 투여하는 것을 포함한다. 상기 표지된 폴리펩티드는 감염성 생물체와 상호작용할 수 있기 때문에 감염 부위에 축적된다. 생리학적 시료 내 미생물 독소를 검출하기 위해 상기 방법은 미생물체에 의해 감염되거나 감염이 의심되는 피험체의 생리학적 시료에 표지된 폴리펩티드를 투여하는 것을 포함한다. 상기 폴리펩티드에 부착되어 있는 표지에 감응하는 다양한 검출기를 사용하여 감염 부위 또는 시료 내 폴리펩티드의 축적을 검출할 수 있다.
본 발명에 따른 폴리펩티드의 또 다른 유용한 용도는 식료품의 보존이다. 따라서 식품 보존제로서 본 발명에 따른 폴리펩티드의 용도가 또한 제공된다. 일반적으로 병원성 또는 부패 미생물은 식품을 60 내지 100℃의 다양한 온도로 처리하는 열처리에 의해 파괴된다. 이러한 처리는 바람직하지 않은 관능 효과와 같은 식료품에 대해 바람직하지 않은 효과를 가질 수 있다. 식료품에서 보존제로서 본 발명에 따른 폴리펩티드를 사용하면 식료품의 저장수명의 연장 및/또는 안전성 증대로 나타날 수 있다.
식품 내 병원성 미생물은 피험체의 감염증 또는 중독을 일으킬 수 있고 캄파일로박터 제주니, 살모넬라 타이피, 살모넬라 파라타이피와 비-타이피 살모넬라종, 스타필로코쿠스 아우레우스, 에스케리치아 콜라이, 리스테리아 모노사이토게네스, 쉬겔라 및 클로스트리디움 보툴리눔과 같은 박테리아, 로타바이러스와 노워크 바이러스와 같은 바이러스, 타에니아 솔리움, 타에니아 사기나타와 트리키넬라 스피랄리스와 같은 기생충 및 곰팡이를 포함한다. 식품 부패는 식료품의 외형, 균일성, 향 및/또는 냄새의 변화를 말하는 것으로, 락토바실루스, 류코노스톡, 슈도모나스, 미크로코쿠스, 플라보박테리움, 세라티아, 엔테로박터와 스트렙토코쿠스와 같은 박테리아, 아스페르길루스, 푸사리움과 클라도스포리움과 같은 진균류 및 효모류에 의해 유발될 수 있다.
이하, 비제한적인 실시예에서 본 발명을 더욱 상세하게 설명하기로 한다.
도 1: 5 μM의 칸시다스 또는 0.8-6.4 μM의 제시된 펩티드의 존재하 PBS에서 배양한 A. 니케르의 성장 곡선. 수치는 0시간의 광학 밀도 대비 600 nm에서의 광학 밀도로서 나타내었다. 16시간 배양 후 PBS 내 진균 성장의 광학 현미경 사진. 대표적인 광학 현미경 사진은 3회 촬영함.
도 2: 25% 혈장에서 PBS, 칸시다스, OP-145 또는 제시된 펩티드와 함께 16시간 배양 후 A. 니게르 성장의 광학 현미경 사진. 대표적인 광학 현미경 사진은 3회 촬영함.
도 3: 서로 다른 농도(단위 μM)에서 S. 아우레우스 JAR060131에 의한 바이오필름 형성의 저해. 미처리 시료(0) 대비 3개의 독립적인 실험의 평균 바이오필름 매스(%)±표준편차로서 결과를 나타내었다. A, 미코팅 웰에서 바이오필름 형성. B, 혈장-코팅된 웰에서 바이오필름 형성.
도 1: 5 μM의 칸시다스 또는 0.8-6.4 μM의 제시된 펩티드의 존재하 PBS에서 배양한 A. 니케르의 성장 곡선. 수치는 0시간의 광학 밀도 대비 600 nm에서의 광학 밀도로서 나타내었다. 16시간 배양 후 PBS 내 진균 성장의 광학 현미경 사진. 대표적인 광학 현미경 사진은 3회 촬영함.
도 2: 25% 혈장에서 PBS, 칸시다스, OP-145 또는 제시된 펩티드와 함께 16시간 배양 후 A. 니게르 성장의 광학 현미경 사진. 대표적인 광학 현미경 사진은 3회 촬영함.
도 3: 서로 다른 농도(단위 μM)에서 S. 아우레우스 JAR060131에 의한 바이오필름 형성의 저해. 미처리 시료(0) 대비 3개의 독립적인 실험의 평균 바이오필름 매스(%)±표준편차로서 결과를 나타내었다. A, 미코팅 웰에서 바이오필름 형성. B, 혈장-코팅된 웰에서 바이오필름 형성.
실시예
재료 및 방법
항미생물
펩티드의 합성
미리 로딩한(preloaded) Tentagel 수지, 인시츄(in situ) 활성화를 위한 PyBop/NMM과 Fmoc 제거를 위한 NMP 중 20% 피페리딘을 사용하여 통상적인 Fmoc-화학에 의해 합성 펩티드를 제조하였다[Hiemstra HS et al. Proc Natl Acad Sci USA, 94, 10313-10318 (1997)]. 6배 아실화 화학종으로 60분 동안 커플링을 실시하였다. 최종 Fmoc 제거 후, C(트리에틸실란) 또는 W(에탄티올)이 펩티드 서열 내 존재하였을 때 추가 포착제(scavenger)를 함유한 TFA/H2O 19/1(v/v)로 펩티드를 절단하였다. 에테르/펜탄 1/1(v/v) 침전 및 원심분리에 의한 생성물 분리에 의해 펩티드를 분리하였다. 약 40℃에서 공기로 냉각한 후, 펩티드를 아세트산/물 1/10(v/v)에 용해시키고 동결건조하였다. UPLC-MS(Acquity, Waters)를 사용하여 펩티드의 순도를 확인하고 예상 분자량을 나타내는 Maldi-Tof 질량 분광분석법을 이용하여 무결성(integrity)을 확인하였다.
약어:
Fmoc: 9H-플루오레닐메틸옥시카르보닐
NMM: N-메틸모르폴린
PyBOP: 벤조트리아졸-1-일-옥시-트리스-피롤리디노-포스포늄 헥사플루오로포스페이트
TFA: 트리플루오로 아세트산
박테리아 균주
메티실린에 내성이 있는 스타필로코쿠스 아우레우스(MRSA), LUH14616의 임상 분리주를 네덜란드 마스트리히트 소재 마스트리히트 대학교 의료 센터의 S. Croes 박사로부터 선의로 제공받았다(Croes S BMC Microbiol. 2009;9:229. doi: 10.1186/1471-2180-9-22 참고).
S. 아우레우스 JAR는 Campoccia 등(Int J Artif Organs. 2008 Sep;31(9):841-7)에 기재되어 있다.
스타필로코쿠스 에피데르미디스 RP62a는 Infect. Immun.2008; 75: 1129-1136에 기재되어 있다.
슈도모나스 아에루기노사 PAO1는 Nucl. Acids Res 2011; 39, Suppl. 1: D596-D60에 기재되어 있다.
박테리아를 사용하기 전까지 80℃에서 보관하였다. 중간 대수 증식기 박테리아의 종균을 혈액 한천 플레이트로부터 분리한 박테리아 군체를 Tryptic Soy Broth(TSB) 배지(Becton Dickinson, 르 뽕 드 끌레, 프랑스)에서 2.5시간 동안 배양하여 준비한 다음, 필요 농도로 희석하였다. 정지기의 S. 아우레우스 JAR060131은 18-20시간 배양물로부터 얻었다.
항박테리아 활성 측정
펩티드를 S. 아우레우스 JAR060131, 메티실린 내성 S. 아우레우스(MRSA) LUH14616, 스타필로코쿠스 에피데르미디스 RP62a와 슈도모나스 아에루기노사 PAO1의 중간 대수 증식기 배양물 1×106 CFU/ml와 함께 최종 농도 50%의 응혈된(pooled) 인간 혈장(Sanquin, 암스테르담, 네덜란드)이 무첨가 또는 첨가된 PBS에서 배양하였다. 항미생물 활성은 99.9% 치사 농도(LC99.9), 즉 진탕 조건하 37℃에서 2시간 배양 후 박테리아의 ≥99.9%를 사멸시키는 최저 펩티드 농도로서 나타내었다.
정지기 박테리아에 대한 펩티드의 항미생물 활성을 평가하기 위해서 펩티드를 18-20시간 배양물로부터 얻은 1×106 CFU/ml의 정지상 S. 아우레우스 JAR060131과 함께 상술한 조건에서 배양하였다.
항진균 활성 측정
펩티드를 칸디다 알비칸스 YO1의 중간 대수 증식기 배양물 1×105 세포/ml와 함께 최종 농도 50%의 응혈된 인간 혈장이 무첨가 또는 첨가된 상태에서 배양하였다. 항미생물 활성은 99% 치사 농도(LC99), 즉 진탕 조건하 37℃에서 2시간 배양 후 박테리아의 ≥99%를 사멸시키는 최저 펩티드 농도로서 나타내었다.
진균 성장에 대한 펩티드의 효과를 아스페르길루스 니게르를 이용하여 평가하였다. 펩티드를 7.5×104 포자/ml의 A. 니게르 PagsAlux와 함께 최종 농도 50%의 응혈된 인간 혈장이 무첨가 또는 첨가된 PBS에서 배양하였다. 양성 대조군으로서 포자를 항진균 카스포펀진(칸시다스)로 처리하였다. 경시에 따라 흡광도를 측정하고 16시간 째에 진균 성장을 광학현미경법을 이용하여 영상화하였다.
항바이오필름 활성 측정
펩티드를 Antimicrob Agents Chemother 2012; 56: 2696-2704에 기재되어 있는 바대로 96-웰 폴리프로필렌 플레이트 내 바이오필름-조정된 BM2에서 1×108 CFU/ml의 S. 아우레우스 JAR060131과 함께 배양하였다. 37℃에서 24시간 배양 후, 부유 박테리아를 PBS로 4회 세척하여 제거하고 바이오필름을 크리스탈 바이올렛으로 염색하였다. 에탄올로 가용화한 후 590 nm에서 광학밀도를 바이오필름 매스의 척도로서 측정하였다. 항바이오필름 활성은 50% 저해 농도(IC50), 즉 바이오필름 매스의 감소율 ≥50%를 나타내는 최저 펩티드 농도로서 표시하였다.
혈장이 존재하는 상태에서 펩티드의 항바이오필름 활성을 평가하기 위해서 96-웰 폴리펩티드 플레이트를 20% 혈장과 함께 4℃에서 밤새 배양하여 혈장으로 코팅하였다. 웰을 멸균수로 1회 세척하고 상술한 바와 같이 S. 아우레우스와 펩티드로 접종하였다.
면역조절 활성:
LPS
및
LTA
중화
펩티드를 37℃에서 30분 동안 500 ng/ml LPS(E. 콜라이 O54) 또는 2 mg/ml LTA(S. 아우레우스, 내독소 없음) 또는 1×109 CFU/ml의 UV-사멸 S. 아우레우스 JAR060131와 함께 전배양하였다. 희석한 인간 전혈을 펩티드-LPS/LTA/S. 아우레우스 혼합물로 20시간 동안 37℃에서 자극하였다. 상청액 중 IL12p40과 IL8 농도를 ELISA를 이용하여 측정하였다. LPS와 LTA 중화 활성은 50% 또는 90% 저해 농도(IC50과 IC90), 즉 LPS/LTA/S. 아우레우스 유도 IL12p40 또는 IL8 생산 감소율 ≥50 또는 ≥90%이 나타나는 최저 펩티드 농도로서 표시하하였다.
결과
OP-145로부터
유도된
25개 펩티드의 동정
항미생물이고 OP-145에 비해 혈장 성분에 덜 취약한 새로운 펩티드를 컴퓨터 예측을 기반으로 동정하였다.
OP-145는 양친매성 나선 구조를 취하는 것으로 예측된다. 이러한 구조에서 상기 펩티드는 헬릭스의 일측에 전하를 띤 작용기와 다른 한 측에는 소수성 작용기를 함유하는 α-헬릭스로 폴딩되어 있다. 아미노산 치환체를 가진 펩티드를 적용한 종전의 연구로부터 본 발명자들은 말단이 헬릭스의 소수성 측에 이어져 있는 전하를 띤 작용기를 도입하거나 또는 말단이 헬릭스의 전하를 띤 측에 이어져 있는 소수성 작용기를 도입하면 항미생물 활성이 약화된 화합물이 얻어진다는 것을 알게 되었다.
이에, 본 발명자들은 새로 고안한 펩티드가 양친매성 헬릭스로 폴딩될 것으로 예측되어야 한다고 결정하였다. OP-145의 서열을 토대로 본 발명자들은 아미노산 치환에 대해 아래의 기본구조(motif)를 고안하였다. 본 발명자들은 OP-145와의 구조 유사성을 최소화하고 항미생물 활성에 영향을 주는 혈장 성분에 대한 결합이 최소화되는 가능성을 최대화하면서 OP-145와는 중대하게 구별되는 펩티드를 얻게 되는 치환에 대해 주목하였다.
컴퓨터 예측을 통해 아래의 기본구조가 양친매성 헬릭스를 가진 펩티드를 얻게 할 것이라는 것이 밝혀졌다.
기본구조를 바탕으로 아래의 25개 펩티드를 선택하였다(J = 아세틸, B = 아미드).
표 1. 펩티드 P139-163의 서열. J = 아세틸, B = 아미드
이들 펩티드의 항박테리아 활성에 대해서는 혈장의 부재 및 존재 상태에서 시험하였다(표 2).
얻어진 결과를 토대로 P145, P148과 P159는 OP-145에 비해 크게 개선된 펩티드로서 선택되었다.
표 2. OP-145로부터 유도된 펩티드의 항미생물 활성. 1항미생물 활성은 IC99.9(μM), 즉 2시간 내 박테리아 종균(약 1×106 CFU/ml S. 아우레우스 JAR) 중 99.9%를 사멸시킨 최저 펩티드 농도로서 표시되어 있다.
서로 다른 박테리아에 대한 P145, P148과 P159의 항미생물 활성
PBS에서 P145, P148과 P159는 중간 대수 증식기 배양물 내 모든 박테리아종에 대해 OP-145와 유사한 항미생물 활성을 가졌다(표 3). 50% 혈장이 존재하는 상태에서, P145, P148과 P159는 OP-145에 비해 S. 아우레우스 JAR060131(11-16배), MRSA LUH14616(21-26배), S. 에피데르미디스 RP62a(43배)와 P. 아에루기노사 PAO1(>11-21배)에 대한 살미생물 활성이 더 높았다.
표 3. 중간 대수 증식기 배양물 내 PBS와 50% 혈장에서 OP145, P145, P148과 P159의 항미생물 활성. 결과는 IC99.9, 즉 박테리아의 ≥99.9% 박테리아 사멸이 나타나는 최저 펩티드 농도(단위 μM)로서 표시되어 있다. 결과는 적어도 2개의 독립적인 실험의 중간값이다.
| LC99.9( μM ) | |||||||||||
| S. 아우레우스 JAR060131 | MRSA LUH14616 | S. 에피데르미디스 RP62a | P. 아에루기노사 PAO1 | ||||||||
| PBS | 50% 혈장 | PBS | 50% 혈장 | PBS | 50% 혈장 | PBS | 50% 혈장 | ||||
| OP-145 | 1.6 | 204.8 | 1.6 | 204.8 | 0.8 | 204.8 | 3.2 | >204.8 | |||
| P145 | 1.6 | 19.2 | 1.6 | 9.6 | 0.8 | 3.2 | 1.6 | 25.6 | |||
| P148 | 1.6 | 19.2 | 1.6 | 8.0 | 0.8 | 3.2 | 1.6 | 12.8 | |||
| P159 | 2.4 | 12.8 | 2.4 | 9.6 | 1.6 | 3.2 | 1.6 | 12.8 | |||
OP145, P145, P148과 P159는 대수 증식기 박테리아에 비해 정지기의 S. 아우레우스 JAR060131에 대해서 유사한 항미생물 활성을 보였다(표 4). 이에 따라 50% 혈장이 존재하는 상태에서 P145, P148과 P159는 OP-145보다 S. 아우레우스 JAR060131에 대해 더 높은 살미생물 활성을 보였다.
표 4. PBS와 50% 혈청에서 S. 아우레우스 JAR060131의 정치 현탁액에 대한 OP145, P145, P148과 P159의 항미생물 활성. 결과는 3개의 독립적인 실험의 평균값이다.
| LC99.9 ( μM ) | ||
| PBS | 50% 혈장 | |
| OP-145 | 1.6 | >204.8 |
| P145 | 1.6 | 25.6 |
| P148 | 1.6 | 12.8 |
| P159 | 2.4 | 25.6 |
P148의 길이
변이체의
항미생물
활성
P148의 C-말단과 N-말단에서 4개의 아미노산의 결실은 S. 아우레우스 JAR060131에 대한 항미생물 활성에 대해 효과가 없다(표 5). C-말단과 N-말단에서 5개의 아미노산 결실은 P148에 비해 항미생물 활성을 감소시키지만 OP-145에 비해 활성은 여전히 5배 증가한다.
표 5. PBS와 50% 혈장에서 P148의 길이 변이체의 항미생물 활성. 결과는 IC99.9, 즉 ≥99.9% S. 아우레우스의 사멸이 나타나는 최저 펩티드 농도(단위 μM)로서 표시되어 있다. 결과는 2개의 독립적인 실험의 평균값이다. J = 아세틸, B = 아미드
| LC99.9( μM ) | |||
| 펩티드 | 서열 | PBS | 50% 혈장 |
| P148 | J L K R V W K R V F K L L K R Y W R Q L K K P V R B | 1.6 | 12.8 |
| P325 | J R V W K R V F K L L K R Y W R Q L K K P V R B | 1.6 | 9.6 |
| P326 | J L K R V W K R V F K L L K R Y W R Q L K K P B | 1.6 | 12.8 |
| P327 | J R V W K R V F K L L K R Y W R Q L K K P B | 1.6 | 8.0 |
| P328 | J W K R V F K L L K R Y W R Q L K K P V R B | 1.6 | 12.8 |
| P329 | J L K R V W K R V F K L L K R Y W R Q L K B | 0.8 | 9.6 |
| P330 | J V W K R V F K L L K R Y W R Q L K K B | 1.6 | 9.6 |
| P331 | J W K R V F K L L K R Y W R Q L K B | 1.6 | 9.6 |
| P332 | J K R V F K L L K R Y W R Q L B | 4.8 | 38.4 |
다중 알라닌 치환체를 가진 P145, P148과 P159의
항미생물
활성
P145, P148과 P159의 하나의 아미노산과 P148의 2개의 아미노산을 알라닌으로 치환한 치환체는 S. 아우레우스 JAR060131에 대한 항미생물 활성에 대해 효과가 없다(표 6-9).
표 6. 서로 다른 위치에서 알라닌이 치환된 P145의 PBS와 50% 혈장 중 항미생물 활성. 2개의 독립적인 실험의 결과. J = 아세틸, B = 아미드
표 7. 서로 다른 위치에서 알라닌이 치환된 P148의 PBS와 50% 혈장 중 항미생물 활성. 2개의 독립적인 실험의 결과. J = 아세틸, B = 아미드
표 8. 서로 다른 위치에서 알라닌이 치환된 P159의 PBS와 50% 혈장 중 항미생물 활성. 2개의 독립적인 실험의 결과. J = 아세틸, B = 아미드
표 9. 다수 개의 알라닌이 치환된 P148의 PBS와 50% 혈장 중 항미생물 활성. 결과는 2개의 독립적인 실험의 평균값이다. J = 아세틸, B = 아미드
| LC99.9 ( μM ) | |||
| 펩티드 | 서열 | PBS | 50% 혈장 |
| P148 | J L K R V W K R V F K L L K R Y W R Q L K K P V R B | 1.2 | 19.2 |
| P318 | J A K R V W K A V F K L L K R Y W R Q L K K P V R B | 1.2 | 19.2 |
| P319 | J L K R A W K A V F K L L K R Y W R Q L K K P V R B | 1.2 | 19.2 |
| P320 | J L K R V A K A V F K L L K R Y W R Q L K K P V R B | 1.2 | 19.2 |
| P321 | J L K R V W K A A F K L L K R Y W R Q L K K P V R B | 1.2 | 19.2 |
| P322 | J L K R V W K A V A K L L K R Y W R Q L K K P V R B | 1.2 | 19.2 |
| P323 | J L K R V W K A V F K A L K R Y W R Q L K K P V R B | 1.2 | 19.2 |
| P324 | J L K R V W K A V F K L A K R Y W R Q L K K P V R B | 1.2 | 19.2 |
양전하를 띤 아미노산 치환체를 가진 P148의
항미생물
활성
라이신 또는 아르기닌이 양전하를 띤 아미노산에 의해 대체된 P148 변이체는 PBS와 50% 혈장이 존재하는 상태 모두에서 S. 아우레우스에 대한 항미생물 활성을 유지하고 있다(표 10).
표 10. PBS와 50% 혈장에서 양전하를 띤 아미노산 치환체를 가진 P148의 항미생물 활성. J = 아세틸, O = 오르니틴; X = 디아미노부티르산(DABA); U = 디아미노프로피온산(DAPA), B = 아미드
P145, P148과 P159의 항진균 활성
OP145는 51.2 μM에서 PBS 중 C. 알비칸스 YO1에 대해 항진균 활성을 보이지 않았다(표 11). P145, P148과 P159는 12.8 μM(P159의 경우) 내지 38.4 μM(P148의 경우) 범위의 농도에서 C. 알비칸스의 99%를 사멸시켰다. 50% 혈장에서 항진균 활성은 P145, P148과 P159의 경우에 204.8 μM이었다. 이 농도에서 OP145의 경우에는 항진균 활성이 관찰되지 않았다.
표 11. PBS와 50% 혈장에서 OP-145, P145, P148과 P159의 항진균 활성. 결과는 2개의 독립적인 실험의 평균값이다.
| LC99 ( μM ) | ||
| PBS | 50% 혈장 | |
| OP-145 | >51.2 | >204.8 |
| P145 | 25.6 | 204.8 |
| P148 | 38.4 | 204.8 |
| P159 | 12.8 | 204.8 |
OP145는 3.2 μM의 농도에서 A. 니게르의 성장을 >99.9%만큼 저해하였다(도 1). P145는 OP-145와 유사한 항진균 활성을 보인 반면에 P148은 4배 더 높은 항진균 활성을 가져 0.8 μM에서 이미 진균 성장을 저해하였다. P159는 OP-145에 비해 2배 더 낮은 항진균 활성을 가졌다. 혈장이 광학 밀도값에 영향을 주었기 때문에 혈장이 존재하는 상태에서 상기 펩티드의 항진균 활성을 광학 현미경 사진만을 토대로 해서 평가하였다. 25% 혈장이 존재하는 상태에서 진균 성장은 204.8 μM의 OP-145에 의해 저해되었다(도 2). P145, P148과 P159는 102.4 μM에서 성장을 저해하였다.
P145, P148과 P159의 항바이오필름 활성
OP145는 3.2 μM에서 바이오필름 형성 저해율 ≥50%를 보였다(도 3A). P145에 대한 IC50 값은 6.4 μM이었고 P148과 P159에 대해서는 12.8 μM이었다. 최대 바이오필름 저해율은 약 75%이었다. 중요한 것은 바이오필름-조정된 BM2 배지에서 이들 펩티드가 51.2 μM까지 항미생물 활성을 보이지 않았다는 점이다. 혈장 코팅된 웰에서, 3.2 μM의 OP145와 P159는 바이오필름 형성을 50% 저해한 반면에 P145와 P148의 경우에는 바이오필름 형성을 50% 저해하기 위해서는 2배 더 높은 농도가 필요하였다(도 3B). 혈청이 존재하는 상태에서 최대 바이오필름 저해율은 61%(P148의 경우) 내지 82%(P159의 경우) 범위에 있었다.
면역조절 활성: P145, P148과 P159에 의한 LPS와 LTA 중화
OP145의 IC50과 IC90은 각각 0.15 nM와 1.25 nM이었다. P148은 0.03 nM에서 그리고 P159는 0.05 nM에서 이미 LPS-유도 IL12p40 생산의 >50%를 저해하였다. 0.25 nM의 P148과 P159 및 0.75 nM의 P145에 의해 LPS-유도 IL12p40의 90% 저해율에 도달하였다(표 11). LTA를 중화하는 상기 펩티드의 능력은 혈구에 의한 LTA-유도 IL8 생산 저해율을 측정함으로써 평가하였다. 최종 농도 0.781 μM에서 OP145는 5 ㎍/ml LTA에 의해 유도된 IL-8 생산의 >50%를 저해하였다(표 11). P145, P148과 P159는 4배 증가된 LTA-중화 능력을 가졌다. 또한 UV에 의해 사멸된 S. 아우레우스 JAR060131의 박테리아와 함께 펩티드를 전배양하였다. 0.195 μM의 OP145와 함께 배양하였더니 S. 아우레우스 JAR에 의해 유도되는 IL-8 생산 감소율이 >50%로 나타났다(표 12). P159는 OP-145와 유사한 중화 활성을 가진 반면에 S. 아우레우스-유도 IL8 생산을 >50% 저해하기 위해서는 8배 더 높은 농도의 P145와 P148이 필요하였다(표 12).
표 12. OP145, P145, P148과 P159의 LPS, LTA와 S. 아우레우스 중화 활성. 2명의 기증자의 혈액을 사용하여 LPS 중화에 대한 실험을 실시하였다. LTA와 S. 아우레우스 중화에 대해서는 1명의 기증자의 혈액을 사용하여 실험하였다.
| 펩티드 |
LPS
중화
(IC90, nM) |
LTA
중화
(IC50, μM ) |
S.
아우레우스
중화
(IC50, μM ) |
| OP-145 | 1.25 | 0.781 | 0.195 |
| P145 | 0.75 | 0.195 | 1.563 |
| P148 | 0.25 | 0.195 | 1.563 |
| P159 | 0.25 | 0.195 | 0.195 |
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Leu Lys Lys Leu Tyr Lys Arg Leu Val Lys Ile Leu Lys Arg Trp Trp
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Arg Tyr Leu Lys Arg Pro Val Arg
20
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<221> MOD_RES
<222> (24)
<223> AMIDATION
<400> 2
Ile Gly Lys Glu Phe Lys Arg Ile Val Glu Arg Ile Lys Arg Phe Leu
1 5 10 15
Arg Glu Leu Val Arg Pro Leu Arg
20
<210> 3
<211> 14
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> variant antimicrobial peptide
<400> 3
Lys Arg Leu Val Lys Ile Leu Lys Arg Trp Trp Arg Tyr Leu
1 5 10
<210> 4
<211> 24
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> antimicrobial peptide P148
<400> 4
Leu Lys Arg Val Trp Lys Arg Val Phe Lys Leu Leu Lys Arg Tyr Trp
1 5 10 15
Arg Gln Leu Lys Lys Pro Val Arg
20
<210> 5
<211> 24
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> antimicrobial peptide P145
<400> 5
Leu Lys Arg Leu Tyr Lys Arg Leu Ala Lys Leu Ile Lys Arg Leu Tyr
1 5 10 15
Arg Tyr Leu Lys Lys Pro Val Arg
20
<210> 6
<211> 22
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> variant antimicrobial peptide P148
<400> 6
Arg Val Trp Lys Arg Val Phe Lys Leu Leu Lys Arg Tyr Trp Arg Gln
1 5 10 15
Leu Lys Lys Pro Val Arg
20
<210> 7
<211> 22
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> variant antimicrobial peptide P148
<400> 7
Leu Lys Arg Val Trp Lys Arg Val Phe Lys Leu Leu Lys Arg Tyr Trp
1 5 10 15
Arg Gln Leu Lys Lys Pro
20
<210> 8
<211> 19
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> variant antimicrobial peptide P148
<400> 8
Arg Val Trp Lys Arg Val Phe Lys Leu Leu Lys Arg Tyr Trp Arg Gln
1 5 10 15
Leu Lys Lys
<210> 9
<211> 20
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> variant antimicrobial peptide P148
<400> 9
Trp Lys Arg Val Phe Lys Leu Leu Lys Arg Tyr Trp Arg Gln Leu Lys
1 5 10 15
Lys Pro Val Arg
20
<210> 10
<211> 20
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> variant antimicrobial peptide P148
<400> 10
Leu Lys Arg Val Trp Lys Arg Val Phe Lys Leu Leu Lys Arg Tyr Trp
1 5 10 15
Arg Gln Leu Lys
20
<210> 11
<211> 18
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> variant antimicrobial peptide P148
<400> 11
Val Trp Lys Arg Val Phe Lys Leu Leu Lys Arg Tyr Trp Arg Gln Leu
1 5 10 15
Lys Lys
<210> 12
<211> 16
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> variant antimicrobial peptide P148
<400> 12
Trp Lys Arg Val Phe Lys Leu Leu Lys Arg Tyr Trp Arg Gln Leu Lys
1 5 10 15
<210> 13
<211> 14
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> variant antimicrobial peptide P148
<400> 13
Lys Arg Val Phe Lys Leu Leu Lys Arg Tyr Trp Arg Gln Leu
1 5 10
<210> 14
<211> 24
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> antimicrobial peptide P159
<400> 14
Leu Lys Arg Leu Tyr Lys Arg Val Phe Arg Leu Leu Lys Arg Tyr Tyr
1 5 10 15
Arg Gln Leu Arg Arg Pro Val Arg
20
<210> 15
<211> 24
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> retro-inverse P145
<400> 15
Arg Val Pro Lys Lys Leu Tyr Arg Tyr Leu Arg Lys Ile Leu Lys Ala
1 5 10 15
Leu Arg Lys Tyr Leu Arg Lys Leu
20
<210> 16
<211> 24
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> retro-inverse P148
<400> 16
Arg Val Pro Lys Lys Leu Gln Arg Trp Tyr Arg Lys Leu Leu Lys Phe
1 5 10 15
Val Arg Lys Trp Val Arg Lys Leu
20
<210> 17
<211> 24
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> retro-inverse P159
<400> 17
Arg Val Pro Arg Arg Leu Gln Arg Tyr Tyr Arg Lys Leu Leu Arg Phe
1 5 10 15
Val Arg Lys Tyr Leu Arg Lys Leu
20
<210> 18
<211> 24
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> consensus sequence
<220>
<221> VARIANT
<222> (2)
<223> May be R
<220>
<221> VARIANT
<222> (3)
<223> May be R
<220>
<221> VARIANT
<222> (4)
<223> May be V
<220>
<221> VARIANT
<222> (5)
<223> May be W
<220>
<221> VARIANT
<222> (8)
<223> May be V
<220>
<221> VARIANT
<222> (9)
<223> May be F or A
<220>
<221> VARIANT
<222> (10)
<223> May be R
<220>
<221> VARIANT
<222> (11)
<223> May be L
<220>
<221> VARIANT
<222> (12)
<223> May be I or W
<220>
<221> VARIANT
<222> (15)
<223> May be F, Y, L or I
<220>
<221> VARIANT
<222> (16)
<223> May be F, Y, L or I
<220>
<221> VARIANT
<222> (18)
<223> May be Q
<220>
<221> VARIANT
<222> (20)
<223> May be R
<220>
<221> VARIANT
<222> (21)
<223> May be K
<400> 18
Leu Lys Lys Leu Tyr Lys Arg Leu Val Lys Ile Leu Lys Arg Trp Trp
1 5 10 15
Arg Tyr Leu Lys Arg Pro Val Arg
20
<210> 19
<211> 24
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> antimicrobial peptide P139
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)
<223> ACETYLATION
<220>
<221> MOD_RES
<222> (24)
<223> AMIDATION
<400> 19
Leu Lys Lys Leu Trp Lys Arg Val Phe Arg Ile Trp Lys Arg Ile Phe
1 5 10 15
Arg Tyr Leu Lys Arg Pro Val Arg
20
<210> 20
<211> 24
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> antimicrobial peptide P140
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)
<223> ACETYLATION
<220>
<221> MOD_RES
<222> (24)
<223> AMIDATION
<400> 20
Leu Arg Arg Leu Trp Lys Arg Leu Val Arg Ile Ile Lys Arg Ile Tyr
1 5 10 15
Arg Gln Leu Lys Arg Pro Val Arg
20
<210> 21
<211> 24
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> antimicrobial peptide P141
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)
<223> ACETYLATION
<220>
<221> MOD_RES
<222> (24)
<223> AMIDATION
<400> 21
Leu Arg Arg Leu Tyr Lys Arg Val Phe Arg Leu Leu Lys Arg Trp Trp
1 5 10 15
Arg Tyr Leu Lys Arg Pro Val Arg
20
<210> 22
<211> 24
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> antimicrobial peptide P142
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)
<223> ACETYLATION
<220>
<221> MOD_RES
<222> (24)
<223> AMIDATION
<400> 22
Leu Arg Arg Leu Trp Lys Arg Leu Val Lys Ile Leu Lys Arg Trp Phe
1 5 10 15
Arg Tyr Leu Arg Arg Pro Val Arg
20
<210> 23
<211> 24
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> P143
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)
<223> ACETYLATION
<220>
<221> MOD_RES
<222> (24)
<223> AMIDATION
<400> 23
Leu Arg Arg Leu Tyr Lys Arg Val Val Lys Leu Trp Lys Arg Leu Phe
1 5 10 15
Arg Gln Leu Arg Arg Pro Val Arg
20
<210> 24
<211> 24
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> P144
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)
<223> ACETYLATION
<220>
<221> MOD_RES
<222> (24)
<223> AMIDATION
<400> 24
Leu Lys Lys Leu Tyr Lys Arg Val Ala Lys Ile Trp Lys Arg Trp Ile
1 5 10 15
Arg Tyr Leu Lys Lys Pro Val Arg
20
<210> 25
<211> 24
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> P146
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)
<223> ACETYLATION
<220>
<221> MOD_RES
<222> (24)
<223> AMIDATION
<400> 25
Leu Lys Lys Leu Tyr Lys Arg Leu Phe Lys Ile Leu Lys Arg Ile Leu
1 5 10 15
Arg Tyr Leu Arg Lys Pro Val Arg
20
<210> 26
<211> 24
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> P147
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)
<223> ACETYLATION
<220>
<221> MOD_RES
<222> (24)
<223> AMIDATION
<400> 26
Leu Lys Lys Leu Trp Lys Arg Leu Ala Arg Leu Leu Lys Arg Phe Ile
1 5 10 15
Arg Gln Leu Arg Arg Pro Val Arg
20
<210> 27
<211> 24
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> P149
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)
<223> ACETYLATION
<220>
<221> MOD_RES
<222> (24)
<223> AMIDATION
<400> 27
Leu Lys Lys Val Tyr Lys Arg Leu Ala Arg Leu Leu Lys Arg Tyr Ile
1 5 10 15
Arg Tyr Leu Arg Arg Pro Val Arg
20
<210> 28
<211> 24
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> p150
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)
<223> ACETYLATION
<220>
<221> MOD_RES
<222> (24)
<223> AMIDATION
<400> 28
Leu Lys Lys Val Trp Lys Arg Val Ala Arg Leu Ile Lys Arg Trp Phe
1 5 10 15
Arg Tyr Leu Arg Arg Pro Val Arg
20
<210> 29
<211> 24
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> P151
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)
<223> ACETYLATION
<220>
<221> MOD_RES
<222> (24)
<223> AMIDATION
<400> 29
Leu Lys Lys Leu Tyr Lys Arg Leu Phe Lys Leu Trp Lys Arg Leu Tyr
1 5 10 15
Arg Tyr Leu Lys Lys Pro Val Arg
20
<210> 30
<211> 24
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> P152
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)
<223> ACETYLATION
<220>
<221> MOD_RES
<222> (24)
<223> AMIDATION
<400> 30
Leu Arg Arg Val Tyr Lys Arg Leu Ala Arg Leu Ile Lys Arg Tyr Leu
1 5 10 15
Arg Gln Leu Lys Lys Pro Val Arg
20
<210> 31
<211> 24
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> P153
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)
<223> ACETYLATION
<220>
<221> MOD_RES
<222> (24)
<223> AMIDATION
<400> 31
Leu Arg Lys Leu Trp Lys Arg Val Val Lys Ile Trp Lys Arg Tyr Leu
1 5 10 15
Arg Gln Leu Arg Arg Pro Val Arg
20
<210> 32
<211> 24
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> P154
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)
<223> ACETYLATION
<220>
<221> MOD_RES
<222> (24)
<223> AMIDATION
<400> 32
Leu Arg Lys Leu Trp Lys Arg Leu Ala Lys Ile Ile Lys Arg Leu Tyr
1 5 10 15
Arg Tyr Leu Arg Arg Pro Val Arg
20
<210> 33
<211> 24
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> P145
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)
<223> ACETYLATION
<220>
<221> MOD_RES
<222> (24)
<223> AMIDATION
<400> 33
Leu Lys Lys Val Tyr Lys Arg Val Ala Arg Leu Ile Lys Arg Leu Phe
1 5 10 15
Arg Tyr Leu Lys Arg Pro Val Arg
20
<210> 34
<211> 24
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> P-156
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)
<223> ACETYLATION
<220>
<221> MOD_RES
<222> (24)
<223> AMIDATION
<400> 34
Leu Arg Arg Leu Trp Lys Arg Leu Val Lys Leu Trp Lys Arg Phe Phe
1 5 10 15
Arg Tyr Leu Lys Lys Pro Val Arg
20
<210> 35
<211> 24
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> P157
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)
<223> ACETYLATION
<220>
<221> MOD_RES
<222> (24)
<223> AMIDATION
<400> 35
Leu Lys Lys Val Trp Lys Arg Val Phe Arg Ile Leu Lys Arg Phe Leu
1 5 10 15
Arg Tyr Leu Lys Arg Pro Val Arg
20
<210> 36
<211> 24
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> P158
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)
<223> ACETYLATION
<220>
<221> MOD_RES
<222> (24)
<223> AMIDATION
<400> 36
Leu Arg Arg Val Tyr Lys Arg Leu Phe Arg Leu Trp Lys Arg Ile Ile
1 5 10 15
Arg Gln Leu Arg Arg Pro Val Arg
20
<210> 37
<211> 24
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> P160
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)
<223> ACETYLATION
<220>
<221> MOD_RES
<222> (24)
<223> AMIDATION
<400> 37
Leu Lys Lys Leu Trp Lys Arg Leu Ala Arg Leu Trp Lys Arg Ile Ile
1 5 10 15
Arg Gln Leu Lys Lys Pro Val Arg
20
<210> 38
<211> 24
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> P161
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)
<223> ACETYLATION
<220>
<221> MOD_RES
<222> (24)
<223> AMIDATION
<400> 38
Leu Arg Arg Val Trp Lys Arg Val Ala Arg Ile Ile Lys Arg Leu Tyr
1 5 10 15
Arg Tyr Leu Lys Arg Pro Val Arg
20
<210> 39
<211> 24
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> P162
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)
<223> ACETYLATION
<220>
<221> MOD_RES
<222> (24)
<223> AMIDATION
<400> 39
Leu Lys Arg Leu Trp Lys Arg Leu Phe Lys Ile Leu Lys Arg Tyr Tyr
1 5 10 15
Arg Tyr Leu Arg Arg Pro Val Arg
20
<210> 40
<211> 24
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> P163
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)
<223> ACETYLATION
<220>
<221> MOD_RES
<222> (24)
<223> AMIDATION
<400> 40
Leu Arg Arg Leu Trp Lys Arg Val Phe Lys Ile Ile Lys Arg Leu Phe
1 5 10 15
Arg Gln Leu Lys Lys Pro Val Arg
20
<210> 41
<211> 22
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> P325
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)
<223> ACETYLATION
<220>
<221> MOD_RES
<222> (22)
<223> AMIDATION
<400> 41
Arg Val Trp Lys Arg Val Phe Lys Leu Leu Lys Arg Tyr Trp Arg Gln
1 5 10 15
Leu Lys Lys Pro Val Arg
20
<210> 42
<211> 22
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> P326
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)
<223> ACETYLATION
<220>
<221> MOD_RES
<222> (22)
<223> AMIDATION
<400> 42
Leu Lys Arg Val Trp Lys Arg Val Phe Lys Leu Leu Lys Arg Tyr Trp
1 5 10 15
Arg Gln Leu Lys Lys Pro
20
<210> 43
<211> 20
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> P327
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)
<223> ACETYLATION
<220>
<221> MOD_RES
<222> (20)
<223> AMIDATION
<400> 43
Arg Val Trp Lys Arg Val Phe Lys Leu Leu Lys Arg Tyr Trp Arg Gln
1 5 10 15
Leu Lys Lys Pro
20
<210> 44
<211> 20
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> P328
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)
<223> ACETYLATION
<220>
<221> MOD_RES
<222> (20)
<223> AMIDATION
<400> 44
Trp Lys Arg Val Phe Lys Leu Leu Lys Arg Tyr Trp Arg Gln Leu Lys
1 5 10 15
Lys Pro Val Arg
20
<210> 45
<211> 20
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> P329
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)
<223> ACETYLATION
<220>
<221> MOD_RES
<222> (20)
<223> AMIDATION
<400> 45
Leu Lys Arg Val Trp Lys Arg Val Phe Lys Leu Leu Lys Arg Tyr Trp
1 5 10 15
Arg Gln Leu Lys
20
<210> 46
<211> 18
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> P330
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)
<223> ACETYLATION
<220>
<221> MOD_RES
<222> (18)
<223> AMIDATION
<400> 46
Val Trp Lys Arg Val Phe Lys Leu Leu Lys Arg Tyr Trp Arg Gln Leu
1 5 10 15
Lys Lys
<210> 47
<211> 16
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> P331
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)
<223> ACETYLATION
<220>
<221> MOD_RES
<222> (16)
<223> AMIDATION
<400> 47
Trp Lys Arg Val Phe Lys Leu Leu Lys Arg Tyr Trp Arg Gln Leu Lys
1 5 10 15
<210> 48
<211> 14
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> P332
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)
<223> ACETYLATION
<220>
<221> MOD_RES
<222> (14)
<223> AMIDATION
<400> 48
Lys Arg Val Phe Lys Leu Leu Lys Arg Tyr Trp Arg Gln Leu
1 5 10
<210> 49
<211> 24
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> P145
<400> 49
Leu Lys Arg Leu Tyr Lys Arg Leu Ala Lys Leu Ile Lys Arg Leu Tyr
1 5 10 15
Arg Tyr Leu Lys Lys Pro Val Arg
20
<210> 50
<211> 24
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> P246
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)
<223> ACETYLATION
<220>
<221> MOD_RES
<222> (24)
<223> AMIDATION
<400> 50
Ala Lys Arg Leu Tyr Lys Arg Leu Ala Lys Leu Ile Lys Arg Leu Tyr
1 5 10 15
Arg Tyr Leu Lys Lys Pro Val Arg
20
<210> 51
<211> 24
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> P247
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)
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<220>
<221> MOD_RES
<222> (24)
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Leu Ala Arg Leu Tyr Lys Arg Leu Ala Lys Leu Ile Lys Arg Leu Tyr
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> P248
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)
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<220>
<221> MOD_RES
<222> (24)
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Leu Lys Ala Leu Tyr Lys Arg Leu Ala Lys Leu Ile Lys Arg Leu Tyr
1 5 10 15
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<221> MOD_RES
<222> (24)
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<221> MOD_RES
<222> (24)
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<221> MOD_RES
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<221> MOD_RES
<222> (24)
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<221> MOD_RES
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<221> MOD_RES
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<221> MOD_RES
<222> (24)
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<221> MOD_RES
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<221> MOD_RES
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<221> MOD_RES
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<220>
<221> MOD_RES
<222> (24)
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<220>
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<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)
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<220>
<221> MOD_RES
<222> (24)
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<221> MOD_RES
<222> (1)
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<220>
<221> MOD_RES
<222> (24)
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<220>
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<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)
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<220>
<221> MOD_RES
<222> (24)
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<220>
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<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)
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<220>
<221> MOD_RES
<222> (24)
<223> AMIDATION
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<220>
<223> P277
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)
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<220>
<221> MOD_RES
<222> (24)
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<213> Artificial Sequence
<220>
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<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)
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<220>
<221> MOD_RES
<222> (24)
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> P279
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)
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<220>
<221> MOD_RES
<222> (24)
<223> AMIDATION
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<220>
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<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)
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<220>
<221> MOD_RES
<222> (24)
<223> AMIDATION
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> P281
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)
<223> ACETYLATION
<220>
<221> MOD_RES
<222> (24)
<223> AMIDATION
<400> 86
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Arg Gln Leu Lys Lys Pro Val Arg
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<210> 87
<211> 24
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> P282
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)
<223> ACETYLATION
<220>
<221> MOD_RES
<222> (24)
<223> AMIDATION
<400> 87
Leu Lys Arg Val Trp Lys Arg Val Phe Lys Leu Leu Ala Arg Tyr Trp
1 5 10 15
Arg Gln Leu Lys Lys Pro Val Arg
20
<210> 88
<211> 24
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> P283
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)
<223> ACETYLATION
<220>
<221> MOD_RES
<222> (24)
<223> AMIDATION
<400> 88
Leu Lys Arg Val Trp Lys Arg Val Phe Lys Leu Leu Lys Ala Tyr Trp
1 5 10 15
Arg Gln Leu Lys Lys Pro Val Arg
20
<210> 89
<211> 24
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> P284
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)
<223> ACETYLATION
<220>
<221> MOD_RES
<222> (24)
<223> AMIDATION
<400> 89
Leu Lys Arg Val Trp Lys Arg Val Phe Lys Leu Leu Lys Arg Ala Trp
1 5 10 15
Arg Gln Leu Lys Lys Pro Val Arg
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<211> 24
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> P285
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)
<223> ACETYLATION
<220>
<221> MOD_RES
<222> (24)
<223> AMIDATION
<400> 90
Leu Lys Arg Val Trp Lys Arg Val Phe Lys Leu Leu Lys Arg Tyr Ala
1 5 10 15
Arg Gln Leu Lys Lys Pro Val Arg
20
<210> 91
<211> 24
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> P286
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)
<223> ACETYLATION
<220>
<221> MOD_RES
<222> (24)
<223> AMIDATION
<400> 91
Leu Lys Arg Val Trp Lys Arg Val Phe Lys Leu Leu Lys Arg Tyr Trp
1 5 10 15
Ala Gln Leu Lys Lys Pro Val Arg
20
<210> 92
<211> 24
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> P287
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)
<223> ACETYLATION
<220>
<221> MOD_RES
<222> (24)
<223> AMIDATION
<400> 92
Leu Lys Arg Val Trp Lys Arg Val Phe Lys Leu Leu Lys Arg Tyr Trp
1 5 10 15
Arg Ala Leu Lys Lys Pro Val Arg
20
<210> 93
<211> 24
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> P288
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)
<223> ACETYLATION
<220>
<221> MOD_RES
<222> (24)
<223> AMIDATION
<400> 93
Leu Lys Arg Val Trp Lys Arg Val Phe Lys Leu Leu Lys Arg Tyr Trp
1 5 10 15
Arg Gln Ala Lys Lys Pro Val Arg
20
<210> 94
<211> 24
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> P289
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)
<223> ACETYLATION
<220>
<221> MOD_RES
<222> (24)
<223> AMIDATION
<400> 94
Leu Lys Arg Val Trp Lys Arg Val Phe Lys Leu Leu Lys Arg Tyr Trp
1 5 10 15
Arg Gln Leu Ala Lys Pro Val Arg
20
<210> 95
<211> 24
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<213> Artificial Sequence
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Leu Lys Arg Leu Tyr Lys Arg Val Phe Arg Leu Leu Lys Arg Tyr Tyr
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Arg Gln Leu Ala Arg Pro Val Arg
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<221> MOD_RES
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<221> MOD_RES
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<211> 24
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<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)
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<220>
<221> MOD_RES
<222> (24)
<223> AMIDATION
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<220>
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<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)
<223> ACETYLATION
<220>
<221> MOD_RES
<222> (24)
<223> AMIDATION
<400> 125
Ala Lys Arg Val Trp Lys Ala Val Phe Lys Leu Leu Lys Arg Tyr Trp
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<211> 24
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> P319
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)
<223> ACETYLATION
<220>
<221> MOD_RES
<222> (24)
<223> AMIDATION
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<220>
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<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)
<223> ACETYLATION
<220>
<221> MOD_RES
<222> (24)
<223> AMIDATION
<400> 127
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Arg Gln Leu Lys Lys Pro Val Arg
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<211> 24
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> P321
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)
<223> ACETYLATION
<220>
<221> MOD_RES
<222> (24)
<223> AMIDATION
<400> 128
Leu Lys Arg Val Trp Lys Ala Ala Phe Lys Leu Leu Lys Arg Tyr Trp
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Arg Gln Leu Lys Lys Pro Val Arg
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<211> 24
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> P322
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)
<223> ACETYLATION
<220>
<221> MOD_RES
<222> (24)
<223> AMIDATION
<400> 129
Leu Lys Arg Val Trp Lys Ala Val Ala Lys Leu Leu Lys Arg Tyr Trp
1 5 10 15
Arg Gln Leu Lys Lys Pro Val Arg
20
<210> 130
<211> 24
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> P323
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)
<223> ACETYLATION
<220>
<221> MOD_RES
<222> (24)
<223> AMIDATION
<400> 130
Leu Lys Arg Val Trp Lys Ala Val Phe Lys Ala Leu Lys Arg Tyr Trp
1 5 10 15
Arg Gln Leu Lys Lys Pro Val Arg
20
<210> 131
<211> 24
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> P324
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)
<223> ACETYLATION
<220>
<221> MOD_RES
<222> (24)
<223> AMIDATION
<400> 131
Leu Lys Arg Val Trp Lys Ala Val Phe Lys Leu Ala Lys Arg Tyr Trp
1 5 10 15
Arg Gln Leu Lys Lys Pro Val Arg
20
<210> 132
<211> 24
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> P148
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)
<223> ACETYLATION
<220>
<221> MOD_RES
<222> (24)
<223> AMIDATION
<400> 132
Leu Lys Arg Val Trp Lys Arg Val Phe Lys Leu Leu Lys Arg Tyr Trp
1 5 10 15
Arg Gln Leu Lys Lys Pro Val Arg
20
<210> 133
<211> 24
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> P365
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)
<223> ACETYLATION
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)
<223> Orn
<220>
<221> MOD_RES
<222> (24)
<223> AMIDATION
<400> 133
Leu Lys Arg Val Trp Lys Arg Val Phe Lys Leu Leu Lys Arg Tyr Trp
1 5 10 15
Arg Gln Leu Lys Lys Pro Val Arg
20
<210> 134
<211> 24
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> P366
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)
<223> ACETYLATION
<220>
<221> MOD_RES
<222> (3)
<223> Orn
<220>
<221> MOD_RES
<222> (24)
<223> AMIDATION
<400> 134
Leu Lys Arg Val Trp Lys Arg Val Phe Lys Leu Leu Lys Arg Tyr Trp
1 5 10 15
Arg Gln Leu Lys Lys Pro Val Arg
20
<210> 135
<211> 24
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> P367
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)
<223> ACETYLATION
<220>
<221> MOD_RES
<222> (6)
<223> Orn
<220>
<221> MOD_RES
<222> (24)
<223> AMIDATION
<400> 135
Leu Lys Arg Val Trp Lys Arg Val Phe Lys Leu Leu Lys Arg Tyr Trp
1 5 10 15
Arg Gln Leu Lys Lys Pro Val Arg
20
<210> 136
<211> 24
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> P368
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)
<223> ACETYLATION
<220>
<221> MOD_RES
<222> (7)
<223> Orn
<220>
<221> MOD_RES
<222> (24)
<223> AMIDATION
<400> 136
Leu Lys Arg Val Trp Lys Arg Val Phe Lys Leu Leu Lys Arg Tyr Trp
1 5 10 15
Arg Gln Leu Lys Lys Pro Val Arg
20
<210> 137
<211> 24
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> P369
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)
<223> ACETYLATION
<220>
<221> MOD_RES
<222> (10)
<223> Orn
<220>
<221> MOD_RES
<222> (24)
<223> AMIDATION
<400> 137
Leu Lys Arg Val Trp Lys Arg Val Phe Lys Leu Leu Lys Arg Tyr Trp
1 5 10 15
Arg Gln Leu Lys Lys Pro Val Arg
20
<210> 138
<211> 24
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> P370
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)
<223> ACETYLATION
<220>
<221> MOD_RES
<222> (13)
<223> Orn
<220>
<221> MOD_RES
<222> (24)
<223> AMIDATION
<400> 138
Leu Lys Arg Val Trp Lys Arg Val Phe Lys Leu Leu Lys Arg Tyr Trp
1 5 10 15
Arg Gln Leu Lys Lys Pro Val Arg
20
<210> 139
<211> 24
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> P371
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)
<223> ACETYLATION
<220>
<221> MOD_RES
<222> (14)
<223> Orn
<220>
<221> MOD_RES
<222> (24)
<223> AMIDATION
<400> 139
Leu Lys Arg Val Trp Lys Arg Val Phe Lys Leu Leu Lys Arg Tyr Trp
1 5 10 15
Arg Gln Leu Lys Lys Pro Val Arg
20
<210> 140
<211> 24
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> P372
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)
<223> ACETYLATION
<220>
<221> MOD_RES
<222> (17)
<223> Orn
<220>
<221> MOD_RES
<222> (24)
<223> AMIDATION
<400> 140
Leu Lys Arg Val Trp Lys Arg Val Phe Lys Leu Leu Lys Arg Tyr Trp
1 5 10 15
Arg Gln Leu Lys Lys Pro Val Arg
20
<210> 141
<211> 24
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> P373
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)
<223> ACETYLATION
<220>
<221> MOD_RES
<222> (20)
<223> Orn
<220>
<221> MOD_RES
<222> (24)
<223> AMIDATION
<400> 141
Leu Lys Arg Val Trp Lys Arg Val Phe Lys Leu Leu Lys Arg Tyr Trp
1 5 10 15
Arg Gln Leu Lys Lys Pro Val Arg
20
<210> 142
<211> 24
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> P374
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)
<223> ACETYLATION
<220>
<221> MOD_RES
<222> (21)
<223> Orn
<220>
<221> MOD_RES
<222> (24)
<223> AMIDATION
<400> 142
Leu Lys Arg Val Trp Lys Arg Val Phe Lys Leu Leu Lys Arg Tyr Trp
1 5 10 15
Arg Gln Leu Lys Lys Pro Val Arg
20
<210> 143
<211> 24
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> P375
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)
<223> ACETYLATION
<220>
<221> MOD_RES
<222> (24)
<223> Orn
<220>
<221> MOD_RES
<222> (24)
<223> AMIDATION
<400> 143
Leu Lys Arg Val Trp Lys Arg Val Phe Lys Leu Leu Lys Arg Tyr Trp
1 5 10 15
Arg Gln Leu Lys Lys Pro Val Arg
20
<210> 144
<211> 24
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> P377
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)
<223> ACETYLATION
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)
<223> Dbu
<220>
<221> MOD_RES
<222> (24)
<223> AMIDATION
<400> 144
Leu Xaa Arg Val Trp Lys Arg Val Phe Lys Leu Leu Lys Arg Tyr Trp
1 5 10 15
Arg Gln Leu Lys Lys Pro Val Arg
20
<210> 145
<211> 24
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> P378
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)
<223> ACETYLATION
<220>
<221> MOD_RES
<222> (3)
<223> Dbu
<220>
<221> MOD_RES
<222> (24)
<223> AMIDATION
<400> 145
Leu Lys Xaa Val Trp Lys Arg Val Phe Lys Leu Leu Lys Arg Tyr Trp
1 5 10 15
Arg Gln Leu Lys Lys Pro Val Arg
20
<210> 146
<211> 24
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> P379
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)
<223> ACETYLATION
<220>
<221> MOD_RES
<222> (6)
<223> Dbu
<220>
<221> MOD_RES
<222> (24)
<400> 146
Leu Lys Arg Val Trp Xaa Arg Val Phe Lys Leu Leu Lys Arg Tyr Trp
1 5 10 15
Arg Gln Leu Lys Lys Pro Val Arg
20
<210> 147
<211> 24
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> P380
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)
<223> ACETYLATION
<220>
<221> MOD_RES
<222> (7)
<223> Dbu
<220>
<221> MOD_RES
<222> (24)
<223> AMIDATION
<400> 147
Leu Lys Arg Val Trp Lys Xaa Val Phe Lys Leu Leu Lys Arg Tyr Trp
1 5 10 15
Arg Gln Leu Lys Lys Pro Val Arg
20
<210> 148
<211> 24
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> P381
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)
<223> ACETYLATION
<220>
<221> MOD_RES
<222> (10)
<223> Dbu
<220>
<221> MOD_RES
<222> (24)
<223> AMIDATION
<400> 148
Leu Lys Arg Val Trp Lys Arg Val Phe Xaa Leu Leu Lys Arg Tyr Trp
1 5 10 15
Arg Gln Leu Lys Lys Pro Val Arg
20
<210> 149
<211> 24
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> P382
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)
<223> ACETYLATION
<220>
<221> MOD_RES
<222> (13)
<223> Dbu
<220>
<221> MOD_RES
<222> (24)
<223> AMIDATION
<400> 149
Leu Lys Arg Val Trp Lys Arg Val Phe Lys Leu Leu Xaa Arg Tyr Trp
1 5 10 15
Arg Gln Leu Lys Lys Pro Val Arg
20
<210> 150
<211> 24
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> P383
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)
<223> ACETYLATION
<220>
<221> MOD_RES
<222> (14)
<223> Dbu
<220>
<221> MOD_RES
<222> (24)
<223> AMIDATION
<400> 150
Leu Lys Arg Val Trp Lys Arg Val Phe Lys Leu Leu Lys Xaa Tyr Trp
1 5 10 15
Arg Gln Leu Lys Lys Pro Val Arg
20
<210> 151
<211> 24
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> P384
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)
<223> ACETYLATION
<220>
<221> MOD_RES
<222> (17)
<223> Dbu
<220>
<221> MOD_RES
<222> (24)
<223> AMIDATION
<400> 151
Leu Lys Arg Val Trp Lys Arg Val Phe Lys Leu Leu Lys Arg Tyr Trp
1 5 10 15
Xaa Gln Leu Lys Lys Pro Val Arg
20
<210> 152
<211> 24
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> P385
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)
<223> ACETYLATION
<220>
<221> MOD_RES
<222> (20)
<223> Dbu
<220>
<221> MOD_RES
<222> (24)
<223> AMIDATION
<400> 152
Leu Lys Arg Val Trp Lys Arg Val Phe Lys Leu Leu Lys Arg Tyr Trp
1 5 10 15
Arg Gln Leu Xaa Lys Pro Val Arg
20
<210> 153
<211> 24
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> P386
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)
<223> ACETYLATION
<220>
<221> MOD_RES
<222> (21)
<223> Dbu
<220>
<221> MOD_RES
<222> (24)
<223> AMIDATION
<400> 153
Leu Lys Arg Val Trp Lys Arg Val Phe Lys Leu Leu Lys Arg Tyr Trp
1 5 10 15
Arg Gln Leu Lys Xaa Pro Val Arg
20
<210> 154
<211> 24
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> P387
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)
<223> ACETYLATION
<220>
<221> MOD_RES
<222> (24)
<223> Dbu
<220>
<221> MOD_RES
<222> (24)
<223> AMIDATION
<400> 154
Leu Lys Arg Val Trp Lys Arg Val Phe Lys Leu Leu Lys Arg Tyr Trp
1 5 10 15
Arg Gln Leu Lys Lys Pro Val Xaa
20
<210> 155
<211> 24
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> P389
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)
<223> ACETYLATION
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)
<223> Dpr
<220>
<221> MOD_RES
<222> (24)
<223> AMIDATION
<400> 155
Leu Lys Arg Val Trp Lys Arg Val Phe Lys Leu Leu Lys Arg Tyr Trp
1 5 10 15
Arg Gln Leu Lys Lys Pro Val Arg
20
<210> 156
<211> 24
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> P390
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)
<223> ACETYLATION
<220>
<221> MOD_RES
<222> (3)
<223> Dpr
<220>
<221> MOD_RES
<222> (24)
<223> AMIDATION
<400> 156
Leu Lys Arg Val Trp Lys Arg Val Phe Lys Leu Leu Lys Arg Tyr Trp
1 5 10 15
Arg Gln Leu Lys Lys Pro Val Arg
20
<210> 157
<211> 24
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> P391
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)
<223> ACETYLATION
<220>
<221> MOD_RES
<222> (6)
<223> Dpr
<220>
<221> MOD_RES
<222> (24)
<223> AMIDATION
<400> 157
Leu Lys Arg Val Trp Lys Arg Val Phe Lys Leu Leu Lys Arg Tyr Trp
1 5 10 15
Arg Gln Leu Lys Lys Pro Val Arg
20
<210> 158
<211> 24
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> P392
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)
<223> ACETYLATION
<220>
<221> MOD_RES
<222> (7)
<223> Dpr
<220>
<221> MOD_RES
<222> (24)
<223> AMIDATION
<400> 158
Leu Lys Arg Val Trp Lys Arg Val Phe Lys Leu Leu Lys Arg Tyr Trp
1 5 10 15
Arg Gln Leu Lys Lys Pro Val Arg
20
<210> 159
<211> 24
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> P393
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)
<223> ACETYLATION
<220>
<221> MOD_RES
<222> (10)
<223> Dpr
<220>
<221> MOD_RES
<222> (24)
<223> AMIDATION
<400> 159
Leu Lys Arg Val Trp Lys Arg Val Phe Lys Leu Leu Lys Arg Tyr Trp
1 5 10 15
Arg Gln Leu Lys Lys Pro Val Arg
20
<210> 160
<211> 24
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> P394
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)
<223> ACETYLATION
<220>
<221> MOD_RES
<222> (13)
<223> Dpr
<220>
<221> MOD_RES
<222> (24)
<223> AMIDATION
<400> 160
Leu Lys Arg Val Trp Lys Arg Val Phe Lys Leu Leu Lys Arg Tyr Trp
1 5 10 15
Arg Gln Leu Lys Lys Pro Val Arg
20
<210> 161
<211> 24
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> P395
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)
<223> ACETYLATION
<220>
<221> MOD_RES
<222> (14)
<223> Dpr
<220>
<221> MOD_RES
<222> (24)
<223> AMIDATION
<400> 161
Leu Lys Arg Val Trp Lys Arg Val Phe Lys Leu Leu Lys Arg Tyr Trp
1 5 10 15
Arg Gln Leu Lys Lys Pro Val Arg
20
<210> 162
<211> 24
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> P396
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)
<223> ACETYLATION
<220>
<221> MOD_RES
<222> (17)
<223> Dpr
<220>
<221> MOD_RES
<222> (24)
<223> AMIDATION
<400> 162
Leu Lys Arg Val Trp Lys Arg Val Phe Lys Leu Leu Lys Arg Tyr Trp
1 5 10 15
Arg Gln Leu Lys Lys Pro Val Arg
20
<210> 163
<211> 24
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> P397
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)
<223> ACETYLATION
<220>
<221> MOD_RES
<222> (20)
<223> Dpr
<220>
<221> MOD_RES
<222> (24)
<223> AMIDATION
<400> 163
Leu Lys Arg Val Trp Lys Arg Val Phe Lys Leu Leu Lys Arg Tyr Trp
1 5 10 15
Arg Gln Leu Lys Lys Pro Val Arg
20
<210> 164
<211> 24
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> P398
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)
<223> ACETYLATION
<220>
<221> MOD_RES
<222> (21)
<223> Dpr
<220>
<221> MOD_RES
<222> (24)
<223> AMIDATION
<400> 164
Leu Lys Arg Val Trp Lys Arg Val Phe Lys Leu Leu Lys Arg Tyr Trp
1 5 10 15
Arg Gln Leu Lys Lys Pro Val Arg
20
<210> 165
<211> 24
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> P399
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)
<223> ACETYLATION
<220>
<221> MOD_RES
<222> (24)
<223> Dpr
<220>
<221> MOD_RES
<222> (24)
<223> AMIDATION
<400> 165
Leu Lys Arg Val Trp Lys Arg Val Phe Lys Leu Leu Lys Arg Tyr Trp
1 5 10 15
Arg Gln Leu Lys Lys Pro Val Arg
20
Claims (23)
- 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열을 포함하거나 또는 상기 아미노산 서열의 변이체를 포함하는 분리된 또는 재조합 폴리펩티드로서,
상기 폴리펩티드가 항미생물, 항박테리아, 항바이러스, 항진균 또는 항기생충 활성을 갖고, 50% 혈장이 존재하는 상태에서 적어도 하나의 미생물 종에 대한 체외 항미생물, 항박테리아, 항바이러스, 항진균 또는 항기생충 활성이 동일 조건에서 측정했을 때 OP-145의 활성보다 적어도 1.3배 더 높으며,
상기 변이체 서열이 적어도 14개의 아미노산을 갖고,
상기 변이체 서열이 적어도 서열번호 3으로 표시되는 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드. - 제1항에 있어서,
상기 폴리펩티드가 항미생물, 항박테리아, 항바이러스, 항진균 또는 항기생충 활성을 갖고, 50% 혈장이 존재하는 상태에서 적어도 하나의 미생물 종에 대한 체외 항미생물, 항박테리아, 항바이러스, 항진균 또는 항기생충 활성이 동일 조건에서 측정했을 때 OP-145의 활성보다 적어도 1.3배 더 높으며,
상기 변이체 서열이,
- 하기 아미노산 치환체 중 1 내지 8개:
· L, V, F, A, I, W, Y 또는 Q로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 아미노산을 상기 군으로부터 선택되는 또 다른 아미노산으로 치환한 치환체;
· R 및/또는 K를 A 또는 양전하를 띤 아미노산으로 치환한 치환체;
- 아미노산을 대응 D-아미노산으로 치환한 하나 이상의 치환체;
- 아미노산을 기준 천연 아미노산의 유도체인 대응되는 비천연 아미노산으로 치환한 하나 이상의 치환체; 및/또는
- 상기 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열로부터 적어도 14개의 연속해 있는 아미노산의 레트로-인버소 서열을 갖는 폴리펩티드. - 제2항에 있어서, 상기 아미노산을 대응 비천연 아미노산으로 치환한 하나 이상의 치환체가
ｏ 아미노산을 대응 β 아미노산으로 치환한 치환체;
ｏ R을 호모아르기닌, 오르니틴, N5-카르바모일오르니틴 또는 3-아미노-프로피온산으로 치환한 치환체;
ｏ I를 이소데스모신, N-메틸이소류신 또는 알로-이소류신으로 치환한 치환체;
ｏ L을 노르류신, 데스모신 또는 5,5,5-트리플루오로-류신으로 치환한 치환체;
ｏ K를 6-N-메틸라이신, 2-아미노헵탄산, N-아세틸라이신, 히드록시라이신 또는 알로-히드록시라이신으로 치환한 치환체;
ｏ P를 3-히드록시프롤린, 4-히드록시프롤린 또는 1-아세틸-4-히드록시-L-프롤린으로 치환한 치환체;
ｏ W를 5-히드록시-트립토판, 5-메톡시-트립토판 또는 5-플루오로-트립토판으로 치환한 치환체;
ｏ Y를 O-메틸-L-티로신, O-4-알릴-L-티로신 또는 3-클로로-티로신으로 치환한 치환체; 및
ｏ V를 노르발린, N-메틸발린 또는 3-플루오로-발린으로 치환한 치환체로 이루어진 군으로부터 선택되는 폴리펩티드. - 제1항에 있어서, 상기 폴리펩티드는 N-말단 또는 C-말단이 변형되는 폴리펩티드.
- 제4항에 있어서, 상기 폴리펩티드는 N-말단 아세틸-, 헥사노일-, 데카노일-, 미리스토일-, NH-(CH2-CH2-O)11-CO- 또는 프로피오닐 잔기를 포함하거나, 또는 C-말단 아미드-, NH-(CH2-CH2-O)11-CO-아미드- 또는 하나 또는 2개의 아미노-헥사노일기를 포함하는 폴리펩티드.
- 제1항에 있어서, 상기 폴리펩티드는 N-말단 및 C-말단이 변형되는 폴리펩티드.
- 제6항에 있어서, 상기 폴리펩티드는 N-말단 아세틸-, 헥사노일-, 데카노일-, 미리스토일-, NH-(CH2-CH2-O)11-CO- 또는 프로피오닐 잔기를 포함하고, C-말단 아미드-, NH-(CH2-CH2-O)11-CO-아미드- 또는 하나 또는 2개의 아미노-헥사노일기를 포함하는 폴리펩티드.
- 제2항에 있어서, 상기 폴리펩티드는 N-말단 또는 C-말단이 변형되는 폴리펩티드.
- 제8항에 있어서, 상기 폴리펩티드는 N-말단 아세틸-, 헥사노일-, 데카노일-, 미리스토일-, NH-(CH2-CH2-O)11-CO- 또는 프로피오닐 잔기를 포함하거나, 또는 C-말단 아미드-, NH-(CH2-CH2-O)11-CO-아미드- 또는 하나 또는 2개의 아미노-헥사노일기를 포함하는 폴리펩티드.
- 제2항에 있어서, 상기 폴리펩티드는 N-말단 및 C-말단이 변형되는 폴리펩티드.
- 제10항에 있어서, 상기 폴리펩티드는 N-말단 아세틸-, 헥사노일-, 데카노일-, 미리스토일-, NH-(CH2-CH2-O)11-CO- 또는 프로피오닐 잔기를 포함하고, C-말단 아미드-, NH-(CH2-CH2-O)11-CO-아미드- 또는 하나 또는 2개의 아미노-헥사노일기를 포함하는 폴리펩티드.
- 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 따른 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열을 포함하는 핵산 분자.
- 제12항에 따른 핵산 분자를 포함하는 벡터.
- 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 따른 폴리펩티드 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 따른 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열을 포함하는 핵산 분자, 및/또는 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 따른 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열을 포함하는 핵산 분자를 포함하는 벡터; 및
적어도 하나의 약제학적으로 허용되는 담체, 희석제 및/또는 부형제;를 포함하는 미생물, 박테리아, 진균, 바이러스 및/또는 기생충 감염증의 치료용, 또는 박테리아, 진균, 바이러스 및/또는 기생충 감염증에 기인한 증상의 치료용 약제학적 조성물. - 제14항에 있어서, 추가 항미생물제를 더 포함하는 약제학적 조성물.
- 제15항에 있어서, 상기 추가 항미생물제는 페니실린, 세팔로스포린, 무피로신과 카르바페넴으로 이루어진 군으로부터 선택되는 약제학적 조성물.
- 제14항에 있어서, 상기 폴리펩티드를 포함하고 방출제어 및/또는 표적지향 전달 담체를 포함하는 약제학적 조성물.
- 제17항에 있어서, 상기 담체는 나노입자, 마이크로입자, 나노캡슐, 마이크로캡슐, 리포솜, 미소 구체, 하이드로겔, 폴리머, 지질 복합체, 혈청 알부민, 항체, 시클로덱스트린과 덱스트란으로 이루어진 군으로부터 선택되는 약제학적 조성물.
- 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 따른 폴리펩티드를 포함하는 의료 기기용 코팅.
- 치료제, 예방제 또는 진단제로서 사용하기 위한 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 따른 폴리펩티드.
- 제20항에 있어서, 미생물, 박테리아, 진균, 바이러스 및/또는 기생충 감염증의 치료용, 및/또는 박테리아, 진균, 바이러스 및/또는 기생충 감염증에 기인한 증상의 치료용 폴리펩티드.
- 제20항에 있어서, 바이오필름 관련 감염의 예방 및/또는 치료용 폴리펩티드.
- 박테리아, 진균, 바이러스 및/또는 기생충 감염증을 겪고 있는 인간을 제외한 동물 피험체를 치료하기 위한 방법으로서, 상기 피험체에
- 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 따른 폴리펩티드,
- 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 따른 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열을 포함하는 핵산 분자,
- 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 따른 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열을 포함하는 핵산 분자를 포함하는 벡터, 또는
- 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 따른 폴리펩티드 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 따른 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열을 포함하는 핵산 분자, 및/또는 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 따른 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열을 포함하는 핵산 분자를 포함하는 벡터; 및 적어도 하나의 약제학적으로 허용되는 담체, 희석제 및/또는 부형제;를 포함하는 미생물, 박테리아, 진균, 바이러스 및/또는 기생충 감염증의 치료용, 또는 박테리아, 진균, 바이러스 및/또는 기생충 감염증에 기인한 증상의 치료용 약제학적 조성물
의 치료 유효량을 투여하는 것을 포함하는 방법
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