TR201808393T4 - İmmünostimülatör oligodeoksinükleotitler. - Google Patents

İmmünostimülatör oligodeoksinükleotitler. Download PDF

Info

Publication number
TR201808393T4
TR201808393T4 TR2018/08393T TR201808393T TR201808393T4 TR 201808393 T4 TR201808393 T4 TR 201808393T4 TR 2018/08393 T TR2018/08393 T TR 2018/08393T TR 201808393 T TR201808393 T TR 201808393T TR 201808393 T4 TR201808393 T4 TR 201808393T4
Authority
TR
Turkey
Prior art keywords
virus
dna
oligodeoxynucleotide
vaccine according
chicken
Prior art date
Application number
TR2018/08393T
Other languages
English (en)
Inventor
Christina Schrier Carla
Simon Ilg Thomas
Original Assignee
Intervet Int Bv
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Intervet Int Bv filed Critical Intervet Int Bv
Publication of TR201808393T4 publication Critical patent/TR201808393T4/tr

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/117—Nucleic acids having immunomodulatory properties, e.g. containing CpG-motifs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P33/00—Antiparasitic agents
    • A61P33/02—Antiprotozoals, e.g. for leishmaniasis, trichomoniasis, toxoplasmosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55561—CpG containing adjuvants; Oligonucleotide containing adjuvants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/10—Type of nucleic acid
    • C12N2310/17—Immunomodulatory nucleic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/31—Chemical structure of the backbone
    • C12N2310/311—Phosphotriesters
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/31—Chemical structure of the backbone
    • C12N2310/315—Phosphorothioates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/34—Spatial arrangement of the modifications
    • C12N2310/341—Gapmers, i.e. of the type ===---===
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/34—Spatial arrangement of the modifications
    • C12N2310/343—Spatial arrangement of the modifications having patterns, e.g. ==--==--==--
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/34—Spatial arrangement of the modifications
    • C12N2310/345—Spatial arrangement of the modifications having at least two different backbone modifications
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/35—Nature of the modification
    • C12N2310/351—Conjugate
    • C12N2310/3513—Protein; Peptide

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

Mevcut buluş, immünostimülatör oligodeoksinükleotitler, bu tür oligodeoksinükleotitleri içeren vektörler ve aşılar, bunların ilaç olarak kullanımı, bunların, bulaşıcı hastalıkların önlenmesi veya bunlarla savaşılmasındaki kullanımları ve bu tür oligodeoksinükleotitlerin tespit edilmesine yönelik yöntemler ile ilgilidir.

Description

Tarifname ayrica bir ilaç olarak kullanima yönelik bir immünostimülatör metillenmemis oligodeoksinükleotit açiklamaktadir.
Mevcut bulus kümes hayvanlarinda bulasici hastaligi engellemekte veya bununla savasmakta kullanima yönelik bir immünostimülatör metillenmemis oligodeoksinükleotit içeren asilarla ilgilidir.
Bu zamana kadar bütün tespit sistemleri hücrelerin raportör gen ile geçici transfeksiyonunu kullanmistir. Bu geçici sistemler CpG ODN'Ierin etkinliginin güvenilir yan yana bir karsilastirmasina olanak saglamamaktadir. Yukarida belirtildigi gibi mevcut sistemler üzerindeki önemli bir gelisme raportör genini tasiyan plazmidin hücrelere dahil olmasi ve stabil korunmadir. Stabil plazmidin çesitli hücre bölünme döngülerinden sonra hücrede mevcut kaldigi anlamina gelmektedir.
Siklikla bir plazmide iliskin stabil koruma hücrelerin bir direnç geninin plazmid üzerinde bulundugu antibiyotikler gibi bir veya daha fazla seçici ajanin basinci altinda büyütülmesi vasitasiyla elde edilmektedir. Plazmid kaybi daha sonra plazmidi kaybeden hücrenin ölmesine neden olmaktadir. Geriye kalan yasayabilir hücreler halen plazmidi barindirmaktadir.
Stabil korumanin baska bir yolu lineer hale getirilmis plazmidlerle transfeksiyondur. Bu plazmidler genel olarak hücrenin genomuyla entegre hale gelmekte ve dolayisiyla stabil olarak korunmaktadir. Dolayisiyla mevcut bulusun yine baska bir düzenlemesi bir TLR21-reseptörü ve bir NF-KB raportör genini kodlayan bir plazmid içeren bir hücre ile ilgili olup, burada plazmid hücre içinde stabil olarak korunmaktadir. Bu hücreler CpG moleküllerinin taranmasinda, daha spesifik olarak bulusa göre CpG moleküllerinin taranmasinda kullanim için çok uygundur. Örnekler hücrede stabil olarak korunabilen bir raportör genini kodlayan bir plazmidi içeren bu tür bir hücrenin nasil elde edilecegine dair yeterli birçok kilavuz vermektedir.
Ayrica yukarida bahsedildigi gibi sekrete edilmis alkalin fosfata (SEAO) dayali tespit sistemlerinin kullanilan tespit sistemi için çok uygun oldugu gösterilmistir.
Dolayisiyla tercihen raportör gen sekrete edilmis alkalin fosfati kodlayan bir gendir.
Temel olarak yukarida açiklandigi gibi bir NF-KB raportör genini, tercihen SEAP genini tasiyan bir plazmidin dahil edilmesine ve tercihen stabil korunmasina olanak saglayan bir TLR21'i tasiyan ve eksprese eden herhangi bir hücre veya hücre hatti TLR-21'e özgü CpG ODN'Ieri test etmek için uygundur.
TLR-21'e özgü CpG ODN'nin test edilmesi için uygun bu tür bir hücre hattina iliskin tercih edilen bir örnek tavuk hücre hatti HD11`dir.
Dolayisiyla tercihen tespit sisteminde kullanima yönelik bir hücre hatti bir raportör geni kodlayan bir stabil plazmid içeren bir HD11 hücre hattidir.
HD11 hücre hatti gibi tavuk hücre hatlari tavuk-TLR'sine iliskin bir tam panel göstermektedir. Bu belirli kosullarda belirli bir arka plan aktivitesi olusturabilmektedir.
Dolayisiyla kümes hayvani olmayan memeli hücre hatlari gibi hücre hatlari daha çok tercih edilmektedir. Bu tür bir memeli hücre hattina iliskin bir örnek TLR21'in klonlanmis oldugu bir HEK293 hücresidir. Bu tür bir hücre hatti TLR21 aktive edici sinyaller için daha spesifik olarak seçicidir.
Dolayisiyla daha çok tercihen tespit sisteminde kullanima yönelik bir hücre hatti stabil olarak korunmus bir raportör geni ve TLR21'in klonlanmis oldugu HEK293'ü içeren Tarifname ayrica immünostimülatör oligodeoksinükleotitleri tespit etmeye yönelik bir yöntem açiklamakta olup, burada bu yöntem a) bir oligodeoksinükleotitin bulusa göre bir hücreyle temas ettirilmesini, b) raportör genin ürün seviyesinin tespit edilmesini içermektedir.
Bu yöntemin tercih edilen bir formunda raportör genin ürünü SEAP'tir.
Bu yöntemin daha da tercih edilen bir formu immünostimülatör oligodeoksinükleotitlerin tespitine yönelik bir yöntemle ilgili olup, burada hücre tavuk hücre hatti HD11`in bir hücresi veya tavuk TLR21'inin klonlanmis oldugu bir HEK293 hücre hattinin bir hücresidir. Örnekler Tavuk TLR21'in gen klonlamasi ve heterolog ekspresyonu Tavuk TLR arastirmalarinda son dönem ilerlemeleri TLR21iin kus türlerinde memeli TLR9'un fonksiyonel homologu oldugunu önermektedir (Keestra 2008, Brownlie et al., 2009).
TLR21 qen klonlamasinin taslagi Gen bankasi veri tabani dizisi NM_OO1030558'e bagli olarak bir primer çifti tavuk TLR21 geninin polimeraz zincir reaksiyonu (PCR) amplifikasyonuna yönelik sentezlenmistir: Ga-TLR21-for1 GAAGCTTACCATGATGGAGACAGCGGAGAAGGC Ga-TLR21-rev1 GGCGGCCGCTACATCTGTTTGTCTCCTTCCCTG Primerler kodonlari (koyu renk) baslatmak ve bitirmek için bitisik kisitlama klonlama alanlari (alti çizili) ve bir Kozak dizisi (italik) saglamak üzere tasarlanmistir. RT-PCR bir sablon olarak tavuk dalak toplam RNA'si ve bu primerler kullanilarak gerçeklestirilmistir. Beklenen büyüklükte (~ 3000 bp) bir PCR ürünü pCR2.1-T0po'ya klonlandi ve 5 plazmid klon (Pl, P2, P12, P13, P14) dizilimi yapilmistir.
Kullanildigi sekilde, tavuk TLR21'ine iliskin DNA dizisi. ›- -i'-[ I l i li v Sie'i 51.1 -i.
HEK293-pNiny2-Zeo'nun (klonal transfeksiyonu hücre hatti) pcDNA3.1(+)-Neo-chiTLR21 11'. 1 Insan embriyonik böbrek (HEK) hücreleri 293 viral transformasyon araciligiyla 1970'Ierde olusturulmustur (Graham et al., 1977) ve simdi ATCC gibi hücre hatti havuzlari araciligiyla arastirma toplulugu için bulunmaktadir. pNifty2 birçok immünostimülatör etkiye iliskin bir ayirici özellik olan, NFKB transkripsiyon faktör aktivasyonunun, digerlerinin arasindan toII-benzeri reseptör aktivasyonlarinin tespitine olanak saglayan bir plazmiddir. pNiny2'de NFKB üzerindeki kendi transkripsiyonuna/çevrimine bagli raportör gen sekrete edilmis alkalin fosfatazdir (SEAP). Detaylar bu plazmidi satan sirketin veri föyünde açiklanmaktadir: lnvivogen. pNifty2 araciligiyla transformasyon/transfeksiyon olaylari büyüme ortamina zeokin eklenmesi vasitasiyla hem bakteri hem de memeli hücrelerinde seçilmektedir.
HEK293 hücreleri standart yöntemler (Iipofeksiyon) araciligiyla pNiny2 ile transfekte edilmistir, stabil bir hücre hatti seçilmistir, NF-kB/SEAP ekseninin islevselligi insan tümör nekroz faktörü a'nin (Sigma) stimülasyonu vasitasiyla olusturulmustur. Stimüle edilmis hücrelerin kültür süpernatantindaki sekrete edilmis SEAP bir alkalin tampon (50 mM NaHCOa, pH9.6, 2 mM MgClz) içinde kromojenik substrat p-nitrofenilfosfat kullanan bir mikrotitre plaka kolorimetrik analiz vasitasiyla belirlenmistir. Renk gelisimi (A = 405 nm) bir mikrotitre plaka okuyucu vasitasiyla gözlemlenmistir. Bu okuma ayrica klonal hatlarin gürültü oranlarina karsi yüksek sinyal ile seçilmesi (kisitli dilüsyon yöntemi vasitasiyla) için kullanilmistir. Bu seçilen klonlarin biri (dublaj klon 11) daha sonra tavuk TLR21 ile baska çalismalara yönelik kullanilmistir. pcDNA3.1(+)-neo Invitrogen'den satin alinan standart bir memeli ekspresyon vektörüdür. TavukTLR21 geninin bu vektöre alt klonlanmasi PCR vasitasiyla dahi edilen bitisik Hind III (baslangiç kodonu) ve Not I (bitis kodonu) alanlari araciligiyla yapilmistir. (Bakiniz, sekil 1).
Bu plazmid daha sonra klonal HEK293-pNifty2-zeo hattina transfekte edilmistir ve rekombinant hücreler hem zeokinin hem de G418'in büyüme ortami içine eklenmesi vasitasiyla seçilmistir. Meydana gelen poliklonal rekombinant hücre hattinin islevselligi kültürün ODN-X4 ve ODN-HEK1-PTO ile stimülasyonu ve SEAP tespiti vasitasiyla degerlendirilmistir. Daha üstün klonal hücre hatlari daha sonra kisitli dilüsyon yönteminin ardindan stimülasyon ve SEAP tespiti vasitasiyla tanimlanmistir.
SEAP memeli sistemlerindeki bir raportör enzimdir (Yang et al., 1997). SEAP insan embriyonik alkalin fosfatazin sekrete edilmis bir formudur. Esas avantajlari tespitin hassasiyetini ve saglamligini saglayan yüksek stabilite ve son derece yüksek spesifik aktivitedir. SEAP tespiti için çesitli substratlar açiklanmistir ancak reaksiyon ürünü p- ekonomik ve saglam pNPP seçilmistir. Test düzeneklerimizde kinetik analizler gerçeklestirmekteyiz çünkü bunlar daha genis bir dinamik niceliklendirme araligi saglamaktadir.
HEK-Neo-chiTLR21 (Pvu I ile lineer hale getirilmistir) ve bir poliklonal hücre hatti ortamin 350 tig/ml zeokin ile ve ODN-HEK1 (PTO) ile stimüle edilmesi vasitasiyla bir islevsellik testi gerçeklestirilmistir. Sekrete edilmis alkalin fosfataz (SEAP) parental HEK293-pNiny2- Zeo hücre hatti vasitasiyla degil de seçilen hücreler vasitasiyla üretilmistir. Tekli hücre klonlama gerçeklestirilmistir ve münferit klonlar ODN-X4'e (PDE) (GGGGGGTTCGTTTTCGTTTTCGTTGGGGG) ve ODN-HEK1 'e (PTO) (TCGTCGTTTTGTCGTTTGTCGTT) karsi yanit vermelerine yönelik analiz edilmistir. 46 zeo/G418-çift-dirençli klonal hücre hattindan sadece 3`ü ODN stimülisine karsi yanit verirken 3 - 4 baska hücre hatti daha zayif sinyaller göstermistir. Dolayisiyla seçilen klonlarin %85'i bu islevsel degildir.
Bütün diger çalismalar için ODN-X4 (PDE) ve ODN-HEKTe (PTO) stimülasyonuna karsi yanit üzerine uzak ara en yüksek SEAP okuma sinyali ile üretilen klonal hücre hatti 38 kullanilmistir.
Sekiller 2-5 çesitli zeo/G418-çift-dirençli klonal hücre hattinin SEAP aktivitesine iliskin bir özet vermektedir.
' [G]x { T C G T C G}n T C G [G]z 3 motifine bagli bu homopolimer serisinde 3'-dG turu test edilen bütün ODN'ler için bir G'ye kisaltilmistir. (mmgmxßN-ymk{TCGTcGhTCGKmîmmwamwmmw, burada x=7, z=0 ve n=2'dir: G7 {T C G T C G }2 T C G CMmgmXßN-Ymk{TCGTCGhTCGKüymmwamamdwx burada x=7, z=0 ve n=3'dir: G7 { T 0 G T c G }3 T 0 G X2wl5GGGGGGGTCGTCGTCGTCGTCG X23N45 GGGGGGGTCGTCGTCGTCGTCGTCGTCGTCGTCGTCGTCGTCGTCGTCGTCG X23N47 GGGGGGGTCGTCGTCGTCGTCGTCGTCGTCGTCGTCGTCGTCGTCGTCGTCGTC X23N49 GGGGGGGTCGTCGTCGTCGTCGTCGTCGTCGTCGTCGTCGTCGTCGTCGTCGTC X23N21 GGGGGGGTCGTCGTCGTCGTCGTCGTCGTCGTCGTCGTCGTCGTCGTCGTCGTC X23N23 GGGGGGGTCGTCGTCGTCGTCGTCGTCGTCGTCGTCGTCGTCGTCGTCGTCGTC X23N-25 GGGGGGGTCGTCGTCGTCGTCGTCGTCGTCGTCGTCGTCGTCGTCGTCGTCGTC X23N27 tavukTLR21lindeki raportör enzim SEAP'in 405 nm'de abzorbe edilen bir renkli ürün miktarini indüklemedeki etkisini göstermektedir.
Sasirtici sekilde Sekil 6'dan eger n = 3 ise immüno-stimülatör etkinin beklenmedik sekilde yüksek oldugu çikartilabilmektedir. Bu etki Sekil 9'da beklenmedik sekilde düsük bir E050 degeri seklinde açikça niceliklendirilmektedir.
Bunun ötesinde Sekiller 6-8'den n=3'ten n=13'e bir artisin aktivitede ayrica bir artis da (= ECSOlde bir azalma) verdigi çikartilabilmektedir. Bu artis n 5 degerine eristiginde daha da hizli bir düsüs göstermektedir.
Sekil 9'dan görülebildigi üzere n=10 ve üstünde bir degerde ECso degeri 100 pM'in biraz altinda bir düzlüge erisirken halihazirda n=4'lük bir degerde ECso'nin 200 pM'nin sadece biraz üstünde oldugu görülebilmektedir.
' [G]x { T C G T C G}nT C G [G]: 3' motifine bagli bu homopolimer dizilerinde n = 4 iken 3'-G'Ierin sayisi modifiye edilmistir.
Asagidaki yapilar test edilmistir: (=X23, standart 1) X4-pent 5'-GGGGGGTTCGTI i ICGI I I ICGI I I ICGI I I ICGTTGGGGG-S' (= standart 2) Sekil 10, raportör hücreler HEK293-pNifty2-tavukTLR21'indeki raportör enzim SEAP'in 405 nmyde abzorbe edilen bir renkli ürün miktarini indüklemede 3'-G'lerin sayisinin degistirilmesinin etkisini göstermektedir.
Bu CpG motiflerine yönelik asagidaki EC50 gibidir: X4-pent (standart kontrol) 340 pM Buradan EC50 ile iliskili olarak z=4 veya 4'ten az olmasi kosuluyla 3'-G'lerin sayisinin özellikle ilgili olmadigi çikartilabilmektedir.
Sekillerin açiklamasi: Sekil 1: pcDNA3.1(+)-chiTLR21'in plazmid haritasi Sekiller 2-5: çesitli zeo/G418-çift-dirençli klonal hücre hattinin SEAP aktivitesine iliskin tavukTLR21'indeki raportör enzim SEAP'in 405 nm'de abzorbe edilen bir renkli ürün miktarini indüklemedeki etkisini göstermektedir. göstermektedir. 3451'In E050 degerlerini göstermektedir.
Literatür Referanslari Babiuk L.A., Gomis S., Hecker R., 2003. Molecular approaches to disease control.
Poult. Sci. 82, 870-875.
Brownlie, R., Zhu J., Allan B., Mutwiri G.K., Babiuk L.A., Potter A., Griebel P., 2009.
Chicken TLR21 acts as a functional homologue to mammalian TLR9 in the recognition Carrington A.C., Secombes C.J., 2006. A review of CpGs and their relevance to aquaculture. Vet. Immunol. Immunopathol. 112, 87-101.
Daubenberger C.A., 2007. TLR9 agonists as adjuvants for prophylactic and therapeutic vaccines. Curr. Opin. Mol. Ther. 9, 45-52.
Dom A., Kippenberger S., 2008. Clinical application of CpG-, n0n-CpG-, and antisense oligodeoxynucleotides as immunomodulators. Curr. Opin. Mol. Ther. 10, 10-20.
Fonseca D.E., Kline J.N., 2009.Use of CpG oligodeoxynucleotides in treatment of asthma and allergic disease. Adv. Drug Deliv. Rev. 61, 256-262.
Graham, F.L., Smiley, J., Russell, W.C., Naim, R., 1977. Characteristics of a human cell line transformed by DNA from human adenovirus type 5. J. Gen. ViroI. 36, 59-74.
Griebel P.J., Brownlie R., Manuja A., Nichani A., Mookherjee N., Popowych Y., Mutwiri G., Hecker R., Babiuk L.A., 2005. Bovine toII-Iike receptor 9: a comparative analysis of molecular structure, function and expression. Vet. Immunol. lmmunopathol. 108, 11-16.
Hemmi H., Takeuchi O., Kawai T., Kaisho T., Sato S., Sanjo H., Matsumoto M., Hoshino K., Wagner H., Takeda K., Akira S., 2000. A Toll-Iike receptor recognizes bacterial DNA. Nature 408, 740-745.
Keestra AM., 2008. Molecular dissection of the Chicken TOII-Iike receptor repertoire.
PhD thesis (Proefschrift), University of Utrecht, The Netherlands Kline J.N., 2007. Immunotherapy of asthma using CpG oligodeoxynucleotides.
Kline J.N., Krieg AM., 2008. ToII-Iike receptor 9 activation with CpG oligodeoxynucleotides for asthma therapy. Drug News Perspect. 21, 434-439.
Klinman DM., 2004. Immunotherapeutic uses of CpG oligodeoxynucleotides. Nat. Rev.
Klinman DM, Currie D., Gursel I., Verthelyi D., 2004. Use of CpG oligodeoxynucleotides as immune adjuvants. Immunol. Rev. 199, 201 -216.
Klinman DM., 2006. Adjuvant activity of CpG oligodeoxynucleotides. Int. Rev.
Klinman DM., Klaschik S., Sato T., Tross D., 2009. CpG oligodeoxynucleotides as adjuvants for vaccines targeting infectious diseases. Adv. Drug Deliv. Rev. 61, 248- Kindrachuk J., Potter J., Wilson H.L., Griebel P., Babiuk L.A., Napper S., 2008.
Activation and regulation of toII-Iike receptor 9: CpGs and beyond. Mini Rev. Med.
Krieg AM., Yi A,K., Matson S,, Waldschmidt T,J., Bishop G.A., Teasdale R., Koretzky G.A., Klinman DM., 1995. CpG motifs iri bacterial DNA trigger direct B-cell activation.
Nature 374, 546-549.
Krieg AM., 2002. CpG motifs in bacterial DNA and their immune effects. Annu. Rev.
Krieg AM., 2003. CpG motifs: the active ingredient in bacterial extracts? Nat. Med. 9, 831-835.
Krieg AM., 2006. Therapeutic potential of TolI-Iike receptor 9 activation. Nat. Rev. Drug Discov. 5, 471 -484.
Krieg A.M., 2007a. Anti-infective applications of toII-Iike receptor 9 agonists. Proc. Am.
Krieg A.M., 2007b. Development of TLR9 agonists for cancer therapy. J. Clin. Invest.
Linghua Zhang et al., 2007. Vaccination with Newcatle disease vaccine and CpG oligodeoxynucleotides induces specific immunity and protection against Newcastle disease virus in SPF Chicken. Vet. Immun. And Immunopath. 115, 216-222.
Medzhitov R., 2001. CpG DNA: security code for host defense. Nat. Immunol. 2, 15-16.
Mutwiri G., van Drunen LitteI-van den Hurk S., Babiuk L.A., 2009. Approaches to enhancing immune responses stimulated by CpG oligodeoxynucleotides. Adv. Drug Deliv. Rev. 61, 226-232.
Mutwiri G., Pontarollo R., Babiuk S., Griebel P., van Drunen Littel-van den Hurk S., Mena A., Tsang C., Alcon V., Nichani A., loannou X., Gomis S., Townsend H., Hecker R., Potter A., Babiuk L.A., 2003. Biological activity of immunostimulatory CpG DNA motifs in domestic animals. Vet. Immunol. lmmunopathol. 91, 89-103.
Singh M., O'Hagan D.T., 2003. Recent advances in veterinary vaccine adjuvants. Int. J.
Parasitol. 33, 469-478.
Vollmer J., 2005. Progress in drug development of immunostimulatory CpG oligodeoxynucleotide ligands for TLR9. Expert Opin. Biol. Ther. 5, 673-682.
Vollmer J., Krieg AM., 2009. Immunotherapeutic applications of CpG oligodeoxynucleotide TLR9 agonists. Adv. Drug Deliv. Rev. 61, 195-204.
Wagner H., 2009. The immunogenicity of CpG-antigen conjugates. Adv. Drug. Deliv.
Weiner G.J., 2009. CpG oligodeoxynucleotide-based therapy of Iymphoid malignancies. Adv. Drug Deliv. Rev. 61, 263-267.
Werling D., Jungi T.W., 2003. TOLL-like receptors Iinking innate and adaptive immune response. Vet. Immunol. lmmunopathol. 91, 1-12.
Wilson H.L., Dar A., Napper S.K., Marianela Lopez A., Babiuk L.A., Mutwiri GK., 2006.
Wilson K.D., de Jong SD., Tam Y.K., 2009. Lipid-based delivery of CpG oligodeoxynucleotides enhances immunotherapeutic efficacy. Adv. Drug Deliv. Rev. 61, 233-242.
Yang, T.T., Sinai, P., Kitts, P.A., Kain, SR., 1997. Quantification of gene expression DIZI LISTESI <110> Intervet International BV <120> Immünostimülatör oligodeoksinükleotitler <160> 19 <170> Patentln versiyonu 3.5 <210> 1 < 211› 33 < 212› DNA < 213> sentetik DNA <400> 1 <210> 2 < 211› 33 < 212› DNA < 213› sentetik DNA <400> 2 <210> 3 < 211› 2935 < 212› DNA < 213› sentetik DNA <400> 3 99thCtgâg <210> 4 < 211> 22 < 212› DNA < 213> sentetik DNA <400> 4 <210> 5 < 211› 28 < 212› DNA < 213> sentetik DNA <400> 5 <210> 6 < 211› 34 < 212› DNA < 213› sentetik DNA <400> 6 <210> 7 < 211› 40 < 212› DNA < 213› sentetik DNA <400> 7 <210> 8 < 211> 46 < 212> DNA < 213> sentetik DNA <400> 8 <210> 9 < 211› 52 < 212› DNA < 213> sentetik DNA <400> 9 <210> 10 < 211› 58 < 212› DNA < 213› sentetik DNA <400> 10 <210> 11 < 211› 64 < 212› DNA < 213> sentetik DNA <400> 11 <210> 12 < 211› 70 < 212› DNA < 213› sentetik DNA <400> 12 <210> 13 < 211› 76 < 212› DNA < 213› sentetik DNA <400> 13 <210> 14 < 211› 82 < 212› DNA < 213› sentetik DNA <400> 14 <210> 15 < 211› 88 < 212› DNA < 213› sentetik DNA <400> 15 <210> 16 < 211› 28 < 212› DNA < 213› sentetik DNA <400> 16 <210> 17 < 211› 41 < 212› DNA < 213› sentetik DNA <400> 17 <210> 18 < 211› 36 < 212› DNA < 213› sentetik DNA <400> 18 <210> 19 < 211› 32 < 212› DNA < 213> sentetik DNA <400> 19

Claims (1)

  1. ISTEMLER Kümes hayvanlarinda bulasici bir hastaligi engellemeye veya bununla savasmaya yönelik asi olup. özelligi; söz konusu asinin (a) asagidaki genel formüle sahip olan bir immünostimülatör metillenmemis oligodeoksinükleotitin bir immünostimülatör miktarini 5'[G]x{TCGTCG}nTCG[G]z3' x = 3-20; 2 = 0-10; n = 2-100; veya bunlarin farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzunu ve/veya oligodeoksinükleotiti içeren bir vektörü, (b) bir antijen bileseninin immünojenik bir miktarini veya bir antijen bilesenini kodlayan genetik bilgiyi, burada söz konusu antijen bileseni kendi dogal susu formunda kümes hayvanlarina karsi patojenik olan bir virüs veya mikro-organizmadir veya bunlardan türetilir, ve (c) farmasötik olarak kabul edilebilir bir tasiyiciyi içermesi ile karakterize edilmesidir. Istem 1'e göre bir asi olup, özelligi; x = 3-10; n = 3-18 olmasi ile karakterize edilmesidir. Istem 1 veya 2'ye göre bir asi olup, özelligi; 5' [G])( ve 3' [G]z nükleotitlerin bir fosforotiyoat baglanmasina sahip olmasi ve diger nükleotitlerin bir fosfodiester baglanmasina sahip olmasidir. Istemler 1-3'ten herhangi birine göre bir asi olup, özelligi; söz konusu oligodeoksinükleotitin bir tasiyiciya veya haptene baglanmasidir. Önceki istemlerden herhangi birine göre asi olup, özelligi; söz konusu virüsün veya mikro-organizmanin Bulasici Bronsit virüsünden, Newcastle Hastaligi virüsünden, Bulasici Bursal Hastaligindan (Gumboro), Tavuk Anemi ajanindan, Kuslara ait Reovirüsten, Mycoplasma gal/isepticum, Hindi Rhinotracheitis virüsten, Haemophilus paragalli'narum (Coryza), Tavuk Poksvirüsten, Kuslara ait Encephalomyelitis virüsten, Egg Drop sendromu virüsü, Bulasici Laryngotracheitis virüsünden, Hindi Herpes Virüsünden, Eimeria türlerinden, Ornithobacterium rhinotracheale, Pasteure/Ia multocida, Mycoplasma synoviae, Salmone//a türleri ve Escheri'chi'a coli'den olusan gruptan seçilmesi ile karakterize edilmesidir.
TR2018/08393T 2011-05-26 2012-05-25 İmmünostimülatör oligodeoksinükleotitler. TR201808393T4 (tr)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201161490387P 2011-05-26 2011-05-26
EP11167605 2011-05-26

Publications (1)

Publication Number Publication Date
TR201808393T4 true TR201808393T4 (tr) 2018-07-23

Family

ID=47216636

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TR2018/08393T TR201808393T4 (tr) 2011-05-26 2012-05-25 İmmünostimülatör oligodeoksinükleotitler.

Country Status (12)

Country Link
US (1) US9315814B2 (tr)
EP (1) EP2714908B1 (tr)
JP (1) JP5872685B2 (tr)
CN (2) CN103547675A (tr)
BR (1) BR112013029966A2 (tr)
CA (1) CA2834440A1 (tr)
MX (1) MX2013013801A (tr)
PL (1) PL2714908T3 (tr)
RU (1) RU2584588C2 (tr)
TR (1) TR201808393T4 (tr)
WO (1) WO2012160184A1 (tr)
ZA (1) ZA201308477B (tr)

Families Citing this family (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2471926A3 (en) 2010-12-30 2012-07-11 Intervet International BV Immunostimulatory oligodeoxynucleotides
TR201808393T4 (tr) * 2011-05-26 2018-07-23 Intervet Int Bv İmmünostimülatör oligodeoksinükleotitler.
AR091569A1 (es) * 2012-06-28 2015-02-11 Intervet Int Bv Receptores de tipo toll
US20160136197A1 (en) 2013-06-14 2016-05-19 Intervet International B.V. Pharmaceutical Compositions Comprising a GPG Oligodeoxynucleotide and Cyclic Di-GMP
AR097029A1 (es) * 2013-07-26 2016-02-17 Intervet Int Bv Aceleración de la respuesta inmune inducida por virus vectorial en aves, composición, uso, método para la vacunación y método para acelerar la respuesta inmune
HUE063529T2 (hu) 2014-10-03 2024-01-28 Intervet Int Bv Szélesspektrumú vakcina madár reovírus ellen
US12239702B2 (en) 2017-12-04 2025-03-04 Intervet Inc. Vaccination with replicon particles and oil adjuvant
MX2020006246A (es) * 2017-12-15 2020-09-03 Bayer Animal Health Gmbh Oligonucleotidos inmunoestimulantes.
US11291715B2 (en) 2017-12-20 2022-04-05 Intervet Inc. Diluent for cell-associated alphaherpesvirus vaccine
CN110404065B (zh) * 2018-04-27 2023-06-16 洛阳赛威生物科技有限公司 一种猪用佐剂组合物及其制备方法
BR112021012167A2 (pt) 2018-12-20 2021-08-31 Intervet International B.V. Regime de vacinação inicial-reforço
CN110747292A (zh) * 2019-11-28 2020-02-04 青岛易邦生物工程有限公司 一种禽传染性支气管炎qx型病毒野毒与疫苗毒的鉴别方法
JP2023506919A (ja) 2019-12-20 2023-02-20 インターベット インターナショナル ベー． フェー． 多価ｈｖｔベクターワクチン
EP4267179A1 (en) 2020-12-24 2023-11-01 Intervet International B.V. Multivalent hvt vector vaccine
JP2025515050A (ja) 2022-05-05 2025-05-13 インターベット インターナショナル ベー． フェー． 新規多価ｈｖｔベクターワクチン

Family Cites Families (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6207646B1 (en) * 1994-07-15 2001-03-27 University Of Iowa Research Foundation Immunostimulatory nucleic acid molecules
AU2001231245A1 (en) * 2000-01-31 2001-08-07 The Regents Of The University Of California Immunomodulatory polynucleotides in treatment of an infection by an intracellular pathogen
US7585847B2 (en) 2000-02-03 2009-09-08 Coley Pharmaceutical Group, Inc. Immunostimulatory nucleic acids for the treatment of asthma and allergy
CN1309418C (zh) * 2000-06-08 2007-04-11 英特塞尔生物医药研究发展股份公司 免疫刺激性寡脱氧核苷酸
EP2196217A1 (en) 2001-09-14 2010-06-16 Cytos Biotechnology AG Packaging of immunostimulatory substances into virus-like particles: method of preparation and use
EP1551221A4 (en) * 2002-07-03 2007-08-01 Coley Pharm Group Inc NUCLEIC ACID COMPOSITIONS FOR STIMULATING IMMUNE RESPONSES
CN100546998C (zh) * 2002-12-23 2009-10-07 戴纳伐克斯技术股份有限公司 免疫刺激序列寡核苷酸和使用方法
CN1810970B (zh) * 2005-01-27 2011-05-18 长春华普生物技术有限公司 含CpG的单链脱氧核苷酸与其疫苗组合物及其应用
WO2007020017A1 (en) * 2005-08-12 2007-02-22 Bionostra, S.L. Composition for bird immunization administered by aerosol
DE102006031483B4 (de) * 2006-07-07 2009-12-24 Fraunhofer-Gesellschaft zur Förderung der angewandten Forschung e.V. Zellulärer Pyrogentest
US20090123467A1 (en) * 2007-07-31 2009-05-14 The Johns Hopkins University Polypeptide-Nucleic Acid Conjugate for Immunoprophylaxis or Immunotherapy for Neoplastic or Infectious Disorders
TWI351288B (en) * 2008-07-04 2011-11-01 Univ Nat Pingtung Sci & Tech Cpg dna adjuvant in avian vaccines
CA2734643A1 (en) * 2008-08-18 2010-02-25 The Kitasato Institute Avian influenza virus antigen, and booster immunization method for avian influenza vaccine in combination with mucosal adjuvant which is effective through oral administration
KR101634058B1 (ko) 2008-12-09 2016-06-27 화이자 백신스 엘엘씨 ＩｇＥ ＣＨ３ 펩티드 백신
EP2471926A3 (en) 2010-12-30 2012-07-11 Intervet International BV Immunostimulatory oligodeoxynucleotides
TR201808393T4 (tr) * 2011-05-26 2018-07-23 Intervet Int Bv İmmünostimülatör oligodeoksinükleotitler.

Also Published As

Publication number Publication date
US20140193457A1 (en) 2014-07-10
US9315814B2 (en) 2016-04-19
JP2014516534A (ja) 2014-07-17
BR112013029966A2 (pt) 2017-01-31
EP2714908A1 (en) 2014-04-09
RU2013156673A (ru) 2015-07-10
CN103547675A (zh) 2014-01-29
PL2714908T3 (pl) 2018-07-31
JP5872685B2 (ja) 2016-03-01
RU2584588C2 (ru) 2016-05-20
EP2714908B1 (en) 2018-04-18
CN107513533A (zh) 2017-12-26
CA2834440A1 (en) 2012-11-29
MX2013013801A (es) 2013-12-16
ZA201308477B (en) 2014-08-27
WO2012160184A1 (en) 2012-11-29

Similar Documents

Publication Publication Date Title
TR201808393T4 (tr) İmmünostimülatör oligodeoksinükleotitler.
RU2587633C2 (ru) Иммуностимулирующие олигодезоксинуклеотиды
US9364531B2 (en) Immunostimulatory oligodeoxynucleotides
EP2867249B1 (en) Toll-like receptors and immunostimulatory oligonucleotides
MX2011005231A (es) Vacuna recombinante de vector viral inactivado.
JP2019517526A (ja) 伝染性気管支炎に対するワクチン
AU2023356965A1 (en) Poultry vaccines and methods of protecting poultry