TR201807733T4 - Düşük dereceli inflamasyon için tahmin edici işaretçi olarak çözünebilir ürokinaz plazminojen aktivatör reseptörü (suPAR). - Google Patents

Abstract

Bu buluş, düşük dereceli inflamasyon ve metabolik sendrom (MS) ve MS ile ilişkili hastalıkları ve/veya düşük dereceli inflamasyonla ilişkili hastalıklar, örneğin kardiyovasküler hastalık, iskemik kalp hastalığı ve tip 2 diyabet için bir işaretçi ile ilgilidir. Daha belirli bir biçimde, düşük dereceli inflamasyon ve metabolik sendromu ve kanser, kardiyovasküler hastalık, iskemik kal hastalığı ve tip 2 diyabet gibi ilişkili hastalıkların gelişme riskini tanılama ve/veya tahmin etme aracı olarak insan biyolojik sıvıları (balgam, kistik sıvı, assit, serum, plazma, idrar) içerisinde çözünebilir ürokinaz plazminojen aktivatör reseptörünün (suPAR) konsantrasyonunun ölçümü ile ilgilidir.

Description

TARIFNAME DÜSÜK DERECELI INFLAMASYON IÇIN TAHMIN EDICI ISARETÇI OLARAK ÇÖZÜNEBILIR ÜROKINAZ PLAZMINOJEN AKTIVATÖR RESEPTÖRÜ (suPAR) BULUSUN ALANI Bulus, belirgin sekilde sagljkl] bir memeli denekte düsük dereceli inflamasyonun teshis edilmesi için bir metoda yöneliktir. Bulus ayrjca bir memeli denekte düsük dereceli inflamasyonla ilgili bir hastallk. gelistirme riskini tahmin etmek için bir metoda yöneliktir.

BULUSUN ARKA PLANI Metabolik sendrom bir yüksek kan basüncE, artmüs glikoz üretimi ve azalmjs glikoz kullanJmDyla insülin direnci, merkezi (abdominal) obezite, dislipidemi (yani yükselmis trigliseritler ve azalmts yüksek yogunluklu lipoprotein kolesterol) ve artmEs IL-6 ve TN-d üretimi kombinasyonu ile karakterize edilir.

Metabolik sendrom, aterosklerotik hastalEklarEn, örnegin yaygUn ve tesadüfi aterotrombotik kardiyovasküler hastalLk (CVD), koroner kalp hastaltgH (CHD), inme, periferik arteriyel hastaltk, kronik obstrüktif akciger hastallgl ve aynH zamanda tip 2 diyabet gibi hastalEklarEn gelisimi için risk faktörlerinin önemli bir kümesi olarak ortaya çükmüstjr. AsErJ beslenme, fiziksel inaktivite ve yaslanma gibi uyaranlar sitokin hiper-sekresyonu ile sonuçlanabilir ve nihai olarak tamamHnda olmamak üzere baz l hastalarda insülin direnci ve diyabete yol açabilir. Yetiskin Tedavi Paneli III (Adult Treatment Panel III (ATP III)) Rehberleri tarafEndan gelistirilen klinik kriterlere göre, Birlesik Devletler'de yasayan 5 yetiskinden l'ine metabolik sendrom tanEsÜ konuldugu tahmin edilmektedir; bununla birlikte bu bireylerin hepsi bu sendromu gelistirmemektedir. Kardiyovasküler hastalHk ve Tip 2 diyabet, gelismis ülkelerde ölüm ve hastalügjn önde gelen nedenleri arasündadür ve bu kronik hastalüklar dünya genelinde baskün bir saglEk sorunu haline gelmektedir. Metabolik sendromun erken teshisi ve gelecekteki kardiyovasküler olaylar ve diyabetin erken teshisinin tahmini, basarElD profilaktik ve terapötik tedavi sanslnt önemli ölçüde arttlracaktHr.

Düsük dereceli inflamasyon metabolik sendromun tetikleyici bir faktörüdür. Günümüzde, düsük dereceli inflamasyonun varlEgDn] ortaya koymak ve bu suretle de vasküler* risk faktörleri ve yaygDn ve tesadüfi aterotrombotik kardiyovasküler hastalEk (CVD), koroner kalp hastalEgD (CHD), inme, periferik arteriyel hastallk, kronik obstrüktif akciger hastalHgl ve tip 2 diyabet ile iliskilendirilen metabolik sendrom gelistirme riskini tahmin etmek için pro-inflamatuar sitokinler, hipertansif C- reaktif protein (hs-CRP), interlökin 6 (IL-6), tümör nekroz faktörü alfa (TNF-d), serum. amiloid. A (SAA), fibrinojen ve albüminin kan düzeyleri; plazama viskozitesi; eritrosit sedimentasyon hHzl (ESR); ve lökosit sayHml kullanHllr.

Saglüklj bireyler belirgin bir biçimde metabolik sendrom gelistirmesine karsEn, son yjllarda HIV enfeksiyonu olan bireylerin tedavide aynÜ zamanda metabolik sendrom gelistirebildigi saptanmUstJr. l996'dan günümüze batJlL ülkelerde Yüksek Düzeyde Aktif Anti-Retroviral Terapi'nin (HAART) yayan uygulamasH, baskllanmßs HIV RNA ve oldukça yüksek CD4 sayEmlarE olan uzun yasayan HIV-enfekte hastalarjn yaygünlJgDnE arttjrmüstEr. Bununla birlikte, HAART'Dn advers etkileri, özellikle proteaz inhibitörlerinin uygulanmasü, insülin direnci, yag redistribisyonu, dislipidemi ve diger kardiyovasküler hastaltk risk faktörleri gibi HIV enfekte olmayan obez bireylerde gözlenene benzer bir Metabolik Sendrom formuna yol açmaktadEr. DolayEsÜyla, bu dismetabolik fenotip kümesini sergileyen, HAART terapisinde HIV-enfekte hastalarEn morbidite ve mortalitesinde bir artEsJ önlemek için erken tanlsal ve kestirimci araçlar gelistirmeye ihtiyaç bulunmaktaw.r. Bir bireyin immünolojik durumu, örnegin TNF-d ve IL-6 gibi immünolojik isaretçilerin düzeyiyle yansjtjlan metabolik durumunu etkiler. Bu immünolojik isaretçilerin HIV- enfekte hastalarda ve aynü zamanda HIV-negatif deneklerde bir metabolik sendromla ters bir biçimde iliskili oldugu gösterilmistir; bununla birlikte, veriler tutarlE degildir ve daha stabil ve güçlü kestirimci isaretçilere ihtiyaç duyulmaktadEr. Ürokinaz-tipi Plazminojen Aktivatör Reseptörü (uPAR, CD87), ürokinaz (uPA) için selüler reseptördür ve nwnositler, makrofajlar, nötrofiller ve plateletler gibi çogu lökosit tarafündan eksprese edilir. uPAR, monositlerde ve T hücrelerindeki bir aktivasyon antijenidir. uPAR, hücre yüzeyinden bulasabilir ve GPI-çapasEndan yoksun çözünebilir bir reseptör formu (suPAR) olusturur. Bulasma mekanizmasj iyi anlasülmamaktadür fakat bir GPI'ya özgü fosfolipaz D tarafündan katalize edilen GPI-çapasDnEn klevajj vasDtasÜyla meydana gelebilir. uPAR'Ln çözünebilir formlaru (suPAR) hücre kültür süpernatantlarlnda ve tümör assitleri, kistik slvH, serum, plazma ve idrar gibi çesitli biyolojik sEvjlarda tanEmlanmÜstJr. Dolasjmdaki suPAR'En selüler kökeni bilinmemektedir. uPAR eksprese eden hücrelerin tamamj olmasa da çogunlugu in 'vitro olarak kültive edildiginde reseptörün çözünebilir formlarHnt bulastHrmaktadlr. yükselmis preoperatif' konsantrasyonlarjnjn, kolorektal kanser için ameliyatj takiben pnömoni gelisimi ile iliskilendirildigini ifsa etmistir. hastaltklar (örnegin ateroskleroz) gibi çok çesitli hastalkklarln tedavisinde bir ikili uPA-uPAR kompleksine baglanan, fakat uPA-uPAR baglanmasünj inhibe etmeyen bir ligandEn kullanÜmJnD ifsa etmistir.

Ostrowski et al (2004) J. Acquir. Immune Defic. Syndro. 35, and Ostrowski et al (2005) J. Acquir. Immune Defic. Syndr. 39, 23-31, HIV-enfekte hastalarda suPAR seviyelerine iliskin çalEsmalarÜ ifsa etmekte ve seviyenin, bu hastalardaki inflamasyonla iliskili oldugu sonucuna 4varmaktadEr. Hastalar HAART ile tedavi edildigi zaman seviye azalmaktadür.

BULUSUN ÖZETI Bu bulus, istem l'e uygun olarak düsük dereceli inflamasyonu teshis etmek için bir metot saglamaktadür.

Bu bulus aynE zamanda istem Z'ye uygun olarak düsük dereceli inflamasyonla iliskili bir hastalük gelistirme riskini tahmin etmek için bir metot saglamaktadjr.

Bu yöntemlerden ikincisindeki ölçüm ayrjca bahsedilen isaretçinin düzeyindeki bir artHsln, düsük dereceli inflamasyonun derecesini gösterdigi bir referans degeriyle karsülastDrElabilir. Bulusun tüm uygulamalaründa, suPAR düzeyinin in vitro ölçümü için örnegin alEnmasEndan önceki 24 saat içerisinde (daha tercih edilen sekliyle 48 saat ya da bir hafta içerisinde) memeli denek için bir kan transfüzyonu Spesifik bir uygulamada söz konusu denek bir insan denek olabilir. (a) adjmündan elde edilen örnek, (b) adJmE gerçeklestirilmeden önce isleme tabi tutulabilir. Örnegin dondurulabilir ve çözdürülebilir, seyreltilebilir, konsantre edilebilir, stabilize edilebilir, filtrelenebilir ya da koruyucu ile isleme tabi tutulabilir.

Referans degeri, bir popülasyonda (i) çözünebilir ürokinaz plazminojen aktivatör reseptörü (suPAR) ve/veya (ii) suPAR'En D2D3 klevaj ürünleri formunda bir isaretçinin düzeylerinin bir standardeUr. Alternatif olarak, söz konusu referans degeri, düsük dereceli inflamasyon ve/veya metabolik sendromun bilinen bir düzeyiyle bir denekten bir örnekten çözünebilir ürokinaz plazminojen aktivatör reseptörü (suPAR) ve/Veya suPAR'ün D2D3 klevaj ürünleri formunda bir isaretçi düzeyinin ölçülmesi yoluyla elde edilir. Belirli bir uygulamada, söz konusu referans düzeyi, Virogates A/S, Danimarkar firmasl taraflndan satflan suPARnosticTM kiti gibi teknikte bilinen analizler kullanarak her ml için <=3.0 ng'dir. Bahsedilen isaretçinin düsük dereceli inflamasyon ve/veya metabolik sendroma sahip olan bir denekteki düzeyi, bahsedilen referans örnegi ile karsülastDrEldDgEnda en az yaklasDk % 10 artmjstjr. Daha spesifik uygulamalarda, bahsedilen isaretçinin düzeyi en az yaklastk % 25, % 50, % 75 ve/Veya % lOO'ün üzerinde artmtstHr.

Burada aynj zamanda, bir memeli denekte, özellikle de bir insan denekte 1 yDl, 3 yEl, 5 yjl, 1-10 le, 1-5 yEl ya da 5- yEl içerisinde metabolik sendromla iliskili bir hastalük ve/veya düsük dereceli inflamasyonla iliskili hastalük, özellikle de kanser gelistirme riski ve/veya mortalite riskini tahmin etmek için bir metot ifsa edilmekte olup, söz konusu (a) bahsedilen denekten elde edilen bir biyolojik SEVJ içeren bir ya da daha fazla örnekte (i) çözünebilir ürokinaz plazminojen aktivatör reseptörü (suPAR) ve/Veya (ii) suPAR'En D2D3 klevaj ürünleri formunda bir isaretçi düzeyinin in vitro bir ölçümünün gerçeklestirilmesi; ve (b) örnegin 1 yjl, 3 yEl, 5 yjl, 10 yül içerisinde ya da 1-10 yEl, 1-15 yDl, 5-10 yjl arasünda metabolik sendromla iliskili bir hastalük ve/veya düsük dereceli inflamasyonla iliskili hastalLk, kanser gelistirme riski ve/veya mortalite riskini tahmin etmek için bir faktör olarak Ölçüm degerlerinin kullantlmaslnt içermektedir. riskinden çok genel mortalite riskini kastediyoruz.

Yukarüdaki gibi, söz konusu referans degeri, bir popülasyonda (i) çözünebilir ürokinaz plazminojen aktivatör reseptörü (suPARJ ve/veya (ii) suPAR'Hn D2D3 klevaj ürünleri formunda bir isaretçinin düzeylerinin bir standardldHr. Alternatif olarak, söz konusu referans degeri, düsük dereceli inflamasyonla iliskili hastalJgD ve/Veya metabolik sendromla iliskili hastalEgE olmayan bir denekten bir örnekten (i) çözünebilir ürokinaz plazminojen aktivatör reseptörü (suPAR) ve/veya (ii) suPAR'tn D2D3 klevaj ürünleri formunda bir isaretçi düzeyinin ölçülmesi yoluyla elde edilir.

Bahsedilen isaretçinin düzeyi, bahsedilen referans örnegi ile karsülastDrEldDgEnda bahsedilen örnekte yaklaSJk % 10 ve/veya 1 ng/ml kadar ya da yaklasük 1-20 ng/ml arasünda yükseltilir.

Spesifik uygulamalarda, isaretçinin› düzeyi en az yaklasük 2 ng/ml, 20 ng/ml ya da asagEdaki aralEklar içerisinde yükseltilebilir: (1-3 ng/ml, 1-5 ng/ml, 3-5 ng/ml, 5-10 ng/ml, -15 ng/ml, 15-20 ng/ml). Belirli bir uygulamada, suPAR düzeyinin erkeklerde yaklasük 3.0 ng/ml'den fazla (ya da 4, 5 ya da 6 ng/ml) ve kadjnlarda yaklasük 3.5 ng/ml'den fazla (ya da 4.5, 5.5 ya da 6.5) olmaQI halinde bahsedilen hastalHklar ya da genel mortalitenin herhangi birisini yukarjda tanDmlanan periyotlardan herhangi birisi içerisinde gelistirmenin riskinin arttEgÜ tanüsj konulur.

AynE zamanda bir memeli denekte düsük dereceli inflamasyonun tedavisini izlemek için bir metot ifsa edilmekte olup, bu (a) düsük dereceli inflamasyon için tedaviye (örnegin anti- inflamatuar tedavi, kanser) tabi tutulan bir denekten bir örnegin izole edilmesi; (b) (i) Çözünebilir ürokinaz plazminojen aktivatör reseptörü (suPAR), (ii) ve/Veya suPAR'Hn D2D3 klevaj ürünleri formunda bir isaretçinin düzeyinin ölçülmesini içermekte olup, içerisinde (b) adjmünda kullanElan bahsedilen isaretçideki bir azalma tedavinin ilerlemesinin bir göstergesidir.

Belirli bir uygulamada, bahsedilen isaretçinin düzeyi, bahsedilen tedavinin seyri sUrasUnda bahsedilen referans örnegi ile karsHlastHrlldHglnda bahsedilen örnekteki en az yaklaskk % 10 ve/Veya 1 ng/ml düzeyinde ve tercih edilen sekliyle yaklasük 1.3-3 ng/ml düzeyinde azalür. Alternatif olarak, bahsedilen isaretçinin düzeyi en az yaklasjk 6 25, 6 ila yaklasHk % 100 arasinda azaltllabilir.

Yukaeraki metotlara göre, bahsedilen düsük dereceli inflamasyonla iliskili hastalEk kardiyovasküler hastaljk, kronik obstrüktif akciger hastaljgü veya diyabet tip 2, Alzheimer hastaljgü, kronik egzema, bronsiyal astÜm ya da otoimmün hastaljk olabilir. Özellikle, bir inflamasyonla iliskili hastalik kanser (örnegin akciger, meme, lösemi, prostat) olabilir.

Yukarüdaki metotlarün bir uygulamasüna göre, bahsedilen biyolojik 83V] tercih edilen sekliyle kan, kan serumu, kan plazmas] ya da idrardEr.

Yukarüdaki metotlarün bir örnegine göre, bahsedilen denek insan immün yetmezlik virüsü ile enfekte edilen ve Yüksek Düzeyde Aktif Anti-Retroviral Terapi (HAART) alan ya da belirgin bir biçimde saglüklE olan bir denektir. Hastanün HIV- enfekte olmasE halinde, en azündan mortalite riskinin degerlendirilmesi baglamünda tercih edilen sekliyle hastanEn AIDS'i yoktur. `SaglEklE' ifadesiyle, hastaya yasamE tehdit eden bir durum (örnegin kanser, kardiyovasküler hastalUk ya da kronik obstrüktif akciger hastallg ), bir oto-immün hastalkk ya da diyabet tip 2 teshisi konulmadEgEnÜ kastediyoruz.

Bu bulusun çesitli uygulamalarjnda, söz konusu hasta 40 yasjn üzerinde olabilir, örnegin 50 ya da 60 yasEn üzerinde olabilir ve 70 yasLn altUnda, örnegin 60 yasLn veya 50 yasJn altUnda olabilir. Hasta beyaz lrka mensup olabilir.

Yukaeraki metotlarHn bir uygulamaslna göre, bahsedilen bir ya da daha fazla örnek bahsedilen denekten bir ya da daha fazla zaman noktasjnda elde edilir. Istege baglj olarak, bahsedilen bir ya da daha fazla ölçüm, tedavinin seyrinin ve/veya etkisinin profilaktik efikasitesini degerlendirmek için karsHlastHrtltr.

Yukaeraki metotlara göre, bahsedilen. in vitro ölçüm. tercih edilen sekliyle bir ELISA testidir. suPAR düzeyleri için uygun ifsa edilmektedir.

Yukaeraki metotlara. göre, b) adlmHnda. denekten elde edilen asagHdaki ilave ölçümlerden bir ya da daha fazlasl asagüdakilerden olusan gruptan seçilmistir: düsük dereceli inflamasyonu teshis etmek için yas, cinsiyet, etnisite, sigara kullanEmE, sigara kullanmama, sistolik/dialostik kan basEncD, kolesterol, trigliseritler ve bel çevresi ölçümü kullanElabilir.

Söz konusu metot ayrlca bir glikoz tolerans testi gerçeklestirilmesi, TNF-alfa, IL-6 degerlendirme, lökosit sayEmÜ, hsCRP, aç karna plazma (Kan-) glikoz, kan basEncD, kolesterol, C-reaktif protein ve/veya trigliserit düzeylerinin ölçümünün gerçeklestirilmesini içerebilir.

Bu patent açEklamasD ayrlca bir düsük dereceli inflamasyon ve/Veya metabolik sendromun tedavisi için netotlara ve kompozisyonlara yöneliktir. Spesifik olarak, ihtiyaç duyan bir denege, bahsedilen düsük dereceli inflamasyon ve/veya metabolik sendromu tedavi etmek için suPAR. düzeyini yeterli sekilde azaltan bir madde miktarEnDn uygulanmasEnD içeren bir metot saglanmaktadUr. Tercih edilen sekliyle, söz konusu plazma düzeyi 6 ng/ml'nin altlnda, daha tercih edilen sekliyle , 4 ya da 3 ng/ml'nin altDnda düsürülür. Uygulanan madde bir anti-suPAR antikoru (örnegin bir monoklonal ya da poliklonal antikor) olabilir. Söz konusu madde alternatif olarak bir suPAR analogu ya da D2D3 izoformlaandan bir ya da daha fazla&' gibi uPA ya da bir suPAR klevaj ürününü baglayabilen bir türev olabilir. Söz konusu kompozisyon, düsük dereceli inflamasyonun ve/veya metabolik sendromun tedavisi ya da önlenmesinde kullanjm için, bir memeli denekte suPAR'En düzeyini azaltan bir madde içeren bir farmasötik kompozisyon olabilir.

Ilgili bir bakts açlsHnda, düsük dereceli inflamasyon ve/veya metabolik sendromun tedavisi veya önlenmesi için terapötik bir kompozisyon hazErlamak için bir maddenin kullanjmj saglanmakta olup, içerisinde bahsedilen madde bir memeli denekte suPAR'In düzeyini azaltDr.

Spesifik bir bakHs açlslnda, bir veri isleme sisteminde uygulanlrken, veri isleme sisteminin düsük düzeyli inflamasyonla iliskili hastalük, bir metabolik sendromla iliskili hastaljk, kanser ve/Veya mortalitenin örnegin 1, 3, içerisinde gerçeklesme riski ve/veya risk degisimini hesaplamasün] saglamak için konfigüre edilen bilgisayar mantHgkna sahip olan bir bilgisayar taraandan okunabilir ortam saglanmakta olup: (a) bir memeli denekten elde edilen bir ya da daha fazla ölçümün aljnmasj için mantEgÜ içermektedir, söz konusu en az bir ölçüm, bahsedilen denekten elde edilen bir ya da daha fazla örnekte (i) çözünebilir ürokinaz plazminojen aktivatör reseptörü (suPAR) ve/Veya (ii) suPAR'Hn D2D3 klevaj ürünleri formunda bir isaretçinin düzeyinin in vitro ölçümüdür; (b) (a) adEmjndaki bahsedilen ölçümlerden bir ya da daha fazlasEnEn analizi için mantEgÜ içermektedir; ve (c) (b) adlmünda bahsedilen ölçümlerin analizine dayalü olarak ytl içerisinde bahsedilen düsük dereceli inflamasyonla iliskili hastaljk ve/Veya bahsedilen metabolik sendromla iliskili hastaljk (örnegin kardiyovasküler hastalük, kronik obstrüktif akciger hastalük ve diyabet tip 2), kanser (örnegin meme kanseri ya da akciger kanseri) ve/veya mortalite riskinin ve/veya riskteki degisimin hesaplanmasH için mantlgl içermektedir.

Belirli bir bakjs açjsünda, (a) adDmJndaki mantEk, bir insan denekten elde edilen iki ya da daha fazla ölçümün alEnmasE için mantEgÜ içermektedir, söz konusu en az bir ölçüm, bahsedilen denekten elde edilen bir ya da daha fazla örnekte (i) çözünebilir ürokinaz plazminojen aktivatör reseptörü (suPAR) ve/veya (ii) suPAR'Im D2D3 klevaj ürünleri formunda bir isaretçinin düzeyinin in vitro ölçümüdür. Veri isleme sisteminin diyabet gelistirme riskini hesaplamak için kullanElmasE halinde, söz konusu mantük ayrDca bir memeli denekte elde edilen kan glikoz düzeylerinin ölçümlerini alabilir; veri isleme sisteminin kardiyovasküler hastalkk riskini hesaplamak için kullanElmasE halinde, söz konusu mantük ayrEca kan basüncj, HDL-kolesterol, LDL-kolesterol, total kolesterol, hsCRP ve/Veya trigliseritlerin ölçümlerini alabilir; veri isleme sisteminin örnegin 1 yjl, 3 yjl, 5 yDl, yül içerisinde, 1-10 yül arasEnda ya da 5-10 yEl arasünda bir memeli denekte mortalite riskini hesaplamak için kullanElmasE halinde, söz konusu mantEk ayrEca beyin natriüretik peptid konsantrasyonlarünjn ölçümlerini alabilir.

Bahsedilen bilgisayar tarafEndan okunabilir ortamda veri isleme sistemi ayrjca düsük dereceli inflamasyon ile iliskili hastalEgEn ve/veya netabolik sendrom ile iliskili hastalDgEn tedavisinin bahsedilen risk degisimini izlemek için kullanElabilir.

Bu bulus ayrüca mevcut bulusun bilgisayar tarafEndan okunabilir ortamEnE içeren bir bilgisayar programü ürününü kapsamaktadEr. Bir “bilgisayar program ürünü”, bir sabit sürücü ve tasUnabilir bir saklama cihazi ve bir saklama birimi gibi bir ortaml göstermek için kullanHlHr. Bir uygulamada, bir bilgisayar programü ürününde bir yazÜlEm saklanabilir ve tasEnabilir bir saklama cihazj, sabit sürücü ve iletisim arayüzü kullanarak bilgisayara yüklenebilir.

Patent açUklamasU ayrJca örnegin 1 yUl, 3 yLl, 5 yLl, 10 yil içerisinde ya da 1 ve 10 yHl araslnda, 1 ve 5 yHl arasHnda ya da 5 ve 10 yll arasinda bir metabolik sendromla iliskili hastalEk, düsük dereceli inflamasyonla iliskili hastale, kanser ve/veya mortalite gelistirme riski ve/veya riskteki degisimi belirlemek için bir bilgisayara yöneliktir ve: (a) bilgisayar tarafUndan okunabilir verilerle kodlanan, bir veri saklama, materyalini saklamak için konfigüre edilen bir bilgisayar taraflndan okunabilir veri saklama ortaml içermektedir, içerisinde bahsedilen veriler bir memeli denekten bir ya da daha fazla örnekten elde edilen bir ya da daha fazla ölçümü içermektedir, içerisindeki en az bir ölçüm, (i) çözünebilir ürokinaz plazminojen aktivatör reseptörü (suPARJ ve/veya (ii) suPAR'lm D2D3 klevaj ürünleri formunda bir isaretçinin düzeyinin in vitro ölçümüdür; (b) bahsedilen bilgisayar taraflndan okunabilir' verileri10 islemek için içerisinde talimatlara sahip olan bir saklama ortamü; (C) bahsedilen bilgisayar-makine tarafEndan okunabilir verileri risk ölçümü ve tedavi ilerleme degerleri seklinde islemek için bahsedilen saklama ortamüyla ve bahsedilen bilgisayar tarafjndan okunabilir veri saklama ortamüyla birlestirilen, bahsedilen talimatlara yanjt veren bir merkezi islem birimi; ve (d) bahsedilen riski ve/veya risk degerlerindeki degisimin çkktHsLnl' almak için (c) adtmlnda bahsedilen merkezi islem birimine birlestirilen bir çEkÜs aygEtE içermektedir.

Belirli bir baküs açjsünda, bilgisayarEn (a) adEmJndaki bilgisayar tarafEndan okunabilir veri saklama ortamÜ bir insan denekten elde edilen iki ya da daha fazla ölçümü içeren verileri içermekte olup, içerisindeki en az bir ölçüm, bahsedilen denekten elde edilen bir ya da daha fazla örnekte (i) çözünebilir ürokinaz plazminojen aktivatör reseptörü (suPAR) ve/veya (ii) suPAR'Ün D2D3 klevaj ürünleri formunda bir isaretçinin düzeyinin in vitro ölçümüdür. BilgisayarEn diyabet gelistirme riskini hesaplamak için kullanJlmasJ halinde, veriler ayrHca memeli bir denekten kan glikoz düzeylerinin ölçümlerini içerebilir; bilgisayarln kardiyovasküler hastaljgün riskini hesaplamak için kullanElmasE halinde, veriler ayrüca kan basjncj, HDL- kolesterol, LDL-kolesterol, total kolesterol ve/veya trigliseritlerin ölçümlerini içerebilir; bilgisayarin bir memeli denekte örnegin 1 yHl, 3 yHl, 5 le, 10 yll içerisinde 1-10 ydl, 1-5 yHl ya da 5-10 yHl araslnda mortalite riskini hesaplamak için kullanjlmasj halinde, veriler ayrüca beyin natriüretik peptid konsantrasyonlarDnEn ölçümlerini içerebilir.

Spesifik bir bakis açlsHnda, örnegin 1 yil, 3 yil, 5 yil, 10 ytl içerisinde ya da 1-10 yHl arasHnda, 1-5 yHl arasHnda ya da -10 yEl arasDnda bir memeli denekte bir metabolik sendromla iliskili hastaljk, düsük dereceli inflamasyonla iliskili hastalEk (örnegin kanser) ve/Veya mortalite riski ve/Veya riskteki degisimi belirlemek için bir hesaplama sistemine erisim saglamak için bir istemci bilgisayar saglanmakta olup, (a) bir memeli denekten elde edilen bir ya da daha fazla ölçümün alEnmasE için girdi aygjtü içermektedir, söz konusu en az bir ölçüm, bahsedilen denekten elde edilen bir ya da daha fazla örnekte (i) çözünebilir ürokinaz plazminojen aktivatör reseptörü (suPAR) ve/Veya suPAR'En D2D3 klevaj ürünleri formunda bir isaretçinin düzeyinin in vitro ölçümüdür; (b) alEnan bir ya da daha fazla ölçümün, (a) adEmIndaki bahsedilen bir ya da daha fazla ölçümü analiz etmek ve bir risk degeri hesaplamak için konfigüre edilen bir sunucu bilgisayara gönderilmesi için bir iletisim arayüzü; ve (c) sunucu› bilgisayardan, hesaplanan. bir risk, degerini almak için bir iletisim ara yüzü içermektedir.

Belirli bir bakjs açEsÜnda, istemci bilgisayarEn (a) adjmündaki giris aygEtÜ, bir insan denekten elde edilen iki ya da daha fazla ölçümü almakta olup, içerisindeki en az bir ölçüm, bahsedilen denekten elde edilen bir ya da daha fazla örnekte (i) çözünebilir ürokinaz plazminojen aktivatör reseptörü (suPAR) ve/veya (ii) suPAR'Hn D2D3 klevaj ürünleri formunda bir isaretçinin düzeyinin in vitro ölçümüdür. Istemci bilgisayarün diyabet gelistirme riskini hesaplamak için kullanElmasE halinde, giris aythE (a) ayrjca bir memeli denekten kan glikoz düzeylerinin ölçümlerini alabilir; istemci bilgisayarHn kardiyovasküler hastallk gelistirme riskini hesaplamak için kullanHlmasH halinde, giris aygtUl (a) ayrkca kan basEncE, HDL-kolesterol, LDL-kolesterol, total kolesterol ve/veya trigliseritlerin ölçümlerini alabilir; istemci bilgisayarün bir memeli denekte örnegin 1 yEl, 3 yEl, 5 yÜl, yil içerisinde 1-1O yHl, 1-5 yil ya da 5-10 yHl araslnda kanser (örnegin meme kanseri ya da akciger kanseri) gelistirme riskini; mortalite riskini hesaplamak için kullanilmasj halinde, giris aygEtü (a) ayrjca NT-proBNP'nin ölçümlerini10 Yine baska bir bakjs açüsjnda, örnegin 1 yEl, 3 yDl, 5 yll, 10 yEl içerisinde ya da 1-10 yül arasünda, 1-5 yül arasünda ya da -10 yll arasHnda bir memeli denekte bir metabolik sendromla iliskili hastaljk, düsük dereceli inflamasyonla iliskili hastalEk (örnegin kanser) gelistirme ve/veya mortalite riskini belirlemek için bilgisayara dayalü bir metot saglanmakta olup, söz konusu metot: (a) bahsedilen denekten elde edilen bir ya da daha fazla örnekte, bilgisayar kontrolü altinda (i) çözünebilir ürokinaz plazminojen aktivatör reseptörü (suPAR) ve/Veya (ii) suPAR'En D2D3 klevaj ürünleri formunda bir isaretçi düzeyinin in vitro bir ölçümünün alEnmasE; (b) bilgisayar kontrolü altEnda (a) adDmEnda alünan bahsedilen in vitro ölçümün analiz edilmesi; (c) (b) adlmHnda elde edilen analiz edilmis ölçümler kullanarak bir memelide 5 yEl, 10 yEl içerisinde ya da 5-10 yEl arasjnda bilgisayar kontrolü altJnda bir metabolik sendromla iliskili hastalEk, düsük dereceli inflamasyonla iliskili hastaldk (örnegin kanser) gelistirme ve/Veya mortalite riski degerinin hesaplanmaslnH içermektedir. ÇIZIMLERIN KISA AÇIKLAMASI Sekil 1, lipodistrofisi olan (LIPO) ve lipodistrofisi olmayan (NONLIPO) HAART terapisi alan HIV enfekte hastalarda aç karnüna serum suPAR konsantrasyonunu gösteren kutu grafikleri göstermektedir. Kutu grafikleri 10., 25., 50. (medyan), 75. ve 90. persantil degerlerini göstermektedir. Her degiskenin uç durumlart ylldHz isaretiyle gösterilmektedir.

Sekil 2, suPAR ve glikoz metabolizmasj ve insülin duyarlElEgÜnJn ölçümleri arasündaki iliskiyi göstermektedir.

Sekil 2A, suPAR ve insülinle uyarElmDs oksidatif olmayan glikoz metabolizmasl (NOGM) araslndaki iliskiyi göstermektedir. 0, lipodistrofik HIV-enfekte hastalar; A, lipodistrofik olmayan HIV-enfekte hastalar. Lineer korelasyon çizgisi, korelasyon katsayüsj ve anlamlJle düzeyi10 gösterilmektedir. Sekil 2B, ya lipodistrofi sergileyen (LIPO, n=18) [0]; ya da lipodistrofisi olmayan (NONLIPO, n=18) [A], HAART (Yüksek Düzeyde aktif antiretroviral terapi) alan HIV- enfekte hastalarda HOMA-IR'e (homeostazi model degerlendirme insulin direnci indeksi; Matthews et al. 1985) karsjlük plazma suPAR düzeyi arasündaki iliskileri göstermektedir. Ayrüca, HAART almamEs HIV-enfekte hastalarün bir grubu HAART (NAIVE, n=7) [o] analize dahil edilmistir. Analizdeki tüm hastalarE kapsayan lineer regresyon hatlarE sunulmaktadEr. LIPO ve NONLIPO (n:36) p-suPAR vs. HOMA-IR r:0.58, p<0.00l (yas düzeltilmis r=0.49, p=0.003). Tüm (n=43) p-suPAR vs. HOMA-IR , HAART terapisinde HIV-enfekte hastalarda standart bir oral glikoz (75 gram) yüklemesinden sonra 2 saat plazma glikoza karsUlLk suPAR arasUndaki iliskileri göstermektedir. o, lipodistrofik. HIV-enfekte hastalar; A, lipodistrofik olmayan HIV-enfekte hastalar. Lineer korelasyon çizgisi, korelasyon katsayEsE ve anlamljlük düzeyi gösterilmektedir. Sekil 2D, HAART terapisinde HIV-enfekte hastalarda bir oral glikoz tolerans testi sUrasUnda elde edilen bir insülin duyarlJlUgL birlesik ölçümüne (ISI birlesik) karsllHk suPAR arasindaki iliskileri göstermektedir. O, lipodistrofik HIV-enfekte hastalar; A, lipodistrofik olmayan HIV-enfekte hastalar.

Lineer korelasyon çizgisi, korelasyon katsayjsü ve anlamlDlEk düzeyi gösterilmektedir.

Sekil 3, 24 HIV-enfekte hastanUn bir alt örneginde idrar kreatinin için düzeltilen gece boyunca aç karnHna idrar suPAR'a karsHllk aç karnHna plazma suPAR arasHndaki lineer iliskiyi göstermektedir. Korelasyonun gücü R2 olarak verilmektedir.

Sekil 4, suprese HIVRNA'SE olan HAART terapisi alan n=5 HIV enfekte hastadan ortalamanin yüzdesi (% 100) olarak 20 dakikalik aralHklarla suPAR'ln sirkadyan konsantrasyonlarlnk göstermektedir. Üst grafik, ayrj günlük profilleri göstermektedir. Alt grafik, aynE hastalarjn +/-SD (standart10 sapma) degerini göstermektedir.

Sekil 5, toplam hayatta kalmayla suPAR düzeylerinin iliskisini göstermektedir. Sekil 5A, suPAR, yas ve cinsiyet arasündaki iliskileri göstermektedir. Çizgili kutu grafik, kadHnlara ve noktalar erkeklere karsjlük gelmektedir. Sekil 5B, suPAR dörtlülerine göre sag kalümü göstermektedir. Ince çizgi düsük suPAR'E göstermektedir (N=, orta önce çizgi N=, orta çizgi, en yüksek suPAR degeri olan 650 bireyi göstermektedir (> 4. 915). Gruplar arasEndaki fark anlamljdür (Log Rank, p<0. 001).

Sekil 6, suPAR düzeylerinin sigara içme ve egzersiz ile iliskisini göstermektedir. Sekil 6A, sigara içme durumuna göre erkekler arasUnda suPAR düzeylerini göstermektedir. Yatay çizgileri olan kutular sigara içenleri, beyaz kutular ara sira içenleri ve dikey çizgileri olan kutular sigara içmeyenleri göstermektedir. Ortalama suPAR düzeyleri, ara sEra içenlerle (3,64 (sd 0.86), N=56) karsjlastjrüldjgünda erkek içiciler arasUnda önemli ölçüde daha yüksek (4.57 (sd1.45) ng/ml, N=580) olmustur, P<0.001, tüm yas gruplarH için Mann-Whitney U testi. Erkek içici olmayanlar araslnda suPAR düzeyi ortalama 3.72 (std 1.22), N=674) olmustur, bu deger içicilerden önemli ölçüde düsüktür (Mann-Whitney p<0.001) fakat ara sEra içenlerle karsElastJrJldJgJnda farklü degildir (p=0.8). Siyah çizgi medyan suPAR'_J ve medyanLn % 25'i kadar üzerinde ve alttnda olan kutularll göstermektedir. Sekil 6B, sigara içme durumuna ve yasa göre kadlnlar arasHnda suPAR düzeylerini göstermektedir. Yatay çizgileri olan kutular sigara içenleri, beyaz kutular ara sjra içenleri ve dikey çizgileri olan kutular sigara içmeyenleri göstermektedir. Kadin içiciler (N=5ll), ara slran içen kimseler (N=50) ve içmeyen kimselerle (N:731) karsHlastHrlldHglnda önemli ölçüde daha yüksek suPAR düzeylerine sahip olmustur, p<0.001. Ara sEra içen kimseler ve içmeyen kimseler arasEnda herhangi bir fark yoktur. Siyah10 çizgi medyan suPAR'J ve medyanEn 6 25'i kadar üzerinde ve altEnda olan kutularE göstermektedir. Sekil 6C, farklü yas gruplarjnda suPAR ve egzersiz arasjndaki iliskiyi göstermektedir. Yas grubu 1, düzenli olarak egzersiz yapmayan (N=539) bireylerden, yas grubu 2, az ila orta düzeyde egzersiz yapan (yürüyüs yapan vs.) bireylerden (N=l454), yas grubu 3, düzenli olarak egzersiz yapan (örnegin jogging) bireylerden (N=546) ve yas grubu 4, profesyonel sporculardan (N=l7) olusmustur.

Sekil 7, rekabetçi bir risk modeli olarak bir CVD gelistirme riskini göstermektedir. Her çizgi bir suPAR çeyregini göstermektedir ve ilk çeyrek en düsük suPAR'dür.

Sekil 8, giriste medyan suPAR'a göre bir diyabet risk analizini göstermektedir. Üst sürekli çizgi (yüksek riskli), medyan üzeri suPAR'L olan bireyleri göstermektedir, diger yandan alt çizgi (noktal l çizgi), medyanHn altHnda suPAR't Sekil 9, bir denekte metabolik sendromun çesitli bilesenleri ve suPAR düzeylerinin iliskisini göstermektedir, söz konusu bilesenler sunlardan bir ya da daha fazlasLdJr: ArtmUs bel çevresi: Erkekler - 40 inç (102 cm)'ye esit ya da daha fazla ve Kadlnlar - 35 inç (88 cm)'ye esit ya da daha fazla; Yükselmis trigliseritler: 150 mg/dL'ye esit ya da daha fazla; Azalmüs HDL (“iyi”) kolesterol: Erkekler - 40 mg/dL'den az, KadEnlar - 50 mg/dL'den az; Yükselmis kan basjncE: 130/85 mm Hg'ye esit ya da daha az; Yükselmis aç karna glikoz: lOO mg/dL'ye esit ya da daha fazla.

Sekil 10, bir denekte metabolik sendromun çesitli bilesenleri ve suPAR düzeylerinin cinsiyete göre iliskisini göstermektedir (sekil 9'daki gibi).

Sekil 11, takip çalEsmasE sürasEnda bir IHD gelisme riskini göstermektedir. Kalln çizgi, medyan m üzerinde suPAR'l olan bireyleri göstermektedir (4.03 ng/ml). Ince çizgi, medyanHn altEnda suPAR'j olan bireyleri göstermektedir. Fark istatistiksel olarak anlamlE olmustur (p<0.001, log-rank10 Sekil 12, çok degiskenli analizlerde CBD gelisimi için anlamlE degiskenlerin ROC analizini göstermektedir.

Sekil 13, kanser teshisine kadar geçen zaman m_ Kaplan Meier analizini göstermektedir. Ince üst Çizgi en düsük suPAR kuartilini göstermektedir, alttaki (medyan ince çizgi) ikinci en düsük suPAR kuartilini göstermektedir, orta kalEn Çizgi ikinci en yüksek suPAR kuartilini göstermektedir ve en kaljn (alt çizgi) en yüksek suPAR kuartilini göstermektedir.

P<0.001, log rank testi.

Sekil 14, zamanla kanser gelistirme riskinin Kaplan Meier analizini göstermektedir. Ince üst çizgi en düsük suPAR kuartilini göstermektedir, alttaki (medyan ince çizgi) ikinci en düsük suPAR kuartilini göstermektedir, orta kalEn çizgi ikinci en yüksek suPAR kuartilini göstermektedir ve en kalJn (alt çizgi) en yüksek suPAR kuartilini göstermektedir.

Sekil 15, zamanla meme kanseri gelistirme riskinin Kaplan Meier analizini göstermektedir. Ince üst çizgi en düsük 1. suPAR kuartilini göstermektedir, alttaki (medyan ince çizgi) ikinci en düsük suPAR. kuartilini göstermektedir, orta kalUn çizgi ikinci en yüksek 3. suPAR kuartilini göstermektedir ve en kalkn (alt çizgi) en yüksek 54. uPAR kuartilini göstermektedir.

Sekil 16, zamanla akciger kanseri gelistirme riskinin Kaplan Meier analizini göstermektedir. Ince üst çizgi l. suPAR kuartilini göstermektedir (en düsük), alttaki (medyan ince çizgi) ikinci suPAR kuartilini göstermektedir (ikinci en düsük), orta kal m. çizgi 3. suPAR. kuartilini göstermektedir (ikinci yüksek) ve en kalin (alt çizgi) 4. suPAR kuartilini göstermektedir (en yüksek).

Sekil 17, zamanla lösemi gelistirme riskinin Kaplan Meier analizini göstermektedir. Alt sürekli çizgi (yüksek riskli), medyan üzeri suPAR'l olan bireyleri göstermektedir, diger yandan üst çizgi (noktalj çizgi), medyanün altünda suPAR'E olan bireyleri göstermektedir.10 Sekil 18, zamanla meme ya da akciger kanseri hariç kanser gelistirme riskinin Kaplan Meier analizini göstermektedir. Alt sürekli çizgi (yüksek riskli), medyan üzeri suPAR'E olan bireyleri göstermektedir, diger yandan üst çizgi (noktall çizgi), medyanün altjnda suPAR'D olan bireyleri göstermektedir.

Sekil 19 (Örnek 13), tam uzunluklu suPAR, DJbD3(LQW), ve kemotaktik aktif suPAR fragmanü, de(m_m7)'nin, spesifik olarak D1 (antikorlar R3 ve R5) ya da D3 (VG-l antikoru) tanüyan antikorlar kullanarak immün-afinite kromatografisi ile saflastjrüldJgDnE göstermektedir. TAG Copenhagen, amino asit sekanslarD SRSRY ve ATVYSRSRY'yi sentezlemistir. Bir mikrotitre plakasü saflastjrülmjs DJbD3him7) (30 ng/ml), saflastJrDlmjs D, karksHml (58 ng/ml) ile kaplanmlstHr. Kuyucuklar üç kopya halinde kaplanmEs ve antikorlarla inkübe edilmistir. Bu antikorlar, substrat eklenerek gelistirilen ve EhSO4 uygulamasü yoluyla durdurulan bir yaban turbu peroksidaz konjuge keçi-anti-fare antikorla saptanmlstHr. Bir ELISA okuyucu, 450 nm dalga boyunda absorbansH ölçmüstür.

Sekil 20. Saflastürjlmüs tam 'uzunluklu suPAR, DJbD3(k2n) ve saflastJrDlmjs kimotripsin tarafEndan yarülmüs suPAR fragmanE, Ddh(8&2n), mevcut patent açjklamasjnün her iki antikoru kullanarak immüno-blotting analizine tabi tutulmustur. VG-l antikoru, tam uzunluklu suPAR, DJbD3hrm7) ve yarHlmls formu, D2D3(%-2n) tanHmJstlr. Bununla birlikte, VG-2 antikorun, western blot prosedürü için uygulanamadjgü gösterilmistir. 2, 4 ve 6 seridine DJbDghip7) yüklenmistir, diger yandan l, 3 ve seridine D2D3(%_m7) yüklenmistir. Serit 1 ve 2, bir Dl spesifik antikoru ile inkübe edilmistir, serit 3 ve 4, bir D3 spesifik antikorla inkübe edilmistir ve serit 5, 6 ve 7, VG-l ile inkübe edilmistir.

Sekil 21: SaflastErülmEs suPAR. (4.6 mg/ml) 4 yad (a 24 saat10 boyunca 1 ve 300 ng/ml konsantrasyonlarda kimotripsin ile parçalanmDs ya da dogrudan parçalama olmadan (serit 4) analiz edilmis, SDS-PAGE ile boyut olarak ayrüstErDlmEs ve western blotting vasltaslyla bir PVDF membranda blotting islemine tabi tutulmustur. 4 saat boyunca 40 ng/ml kimotripsin ile parçalandDgEnda, tam. uzunluklu suPAR'Dn yalnüz az bir kEsmE parçalanmDstJr (serit l). 24 saat boyunca 40 ng/ml kullanEldDgEnda, suPAR ancak küsmen parçalanmEstDr (serit 2). 24 saat boyunca 100 ng/ml kullanüldjgünda, tamamen parçalanmüs tam. uzunluklu suPAR. elde edilmistir (serit 3). Bir protein merdiveni olarak MagicMark kullanElmEstDr (Serit 5).

Sekil 22. Afinite kromatografiyi takiben D2D3(88-277) (serit l), D1D2D3 (serit 2), bir albümin örnegi (serit 3) ve SeeBlue (serit 4) gümüs boyamasE.

Sekil 23. Yukari yönlü regüle edilmis sitokinlerin grafikleri. Örneklerdeki nispi konsantrasyon (her örnegin ortalamask, sahte örneklerin ortalamasjna bölünmüstür), 100 ng/ml DlD2D3(k m7) ya da D2D3(%_m7) ile stimüle edilmistir.

BULUSUN DETAYLI AÇIKLAMASI Burada kullanLlan terminoloji yalnUz belirli uygulamalarJ tantmlama amaclnt tasHmaktadlr ve mevcut bulusun kapsaml yalnHz ekteki istemlerle kHsHtlanacaglndan ktsHtlayldl olarak yorumlanmayacaktEr.

Bir deger aralügj saglanan durumlarda, ilgili her degerin, baglam açük bir biçimde aksini göstermedigi sürece belirtilen aralUk içerisinde her türlü baska belirtilen ya da ilgili deger ve arallgHn üst ve alt sHntrl arasinda alt $`nlrln biriminin onda birine kadar bulusun kapsamt içerisinde oldugu anlasülmaktadEr. Bu daha küçük araljklarjn üst ve alt limitleri bagEmsDz olarak bu aralEga dahil edilebilir ve bu küçük araljklara dahil edildigi ya da hiç birisinin dahil edilmedigi her aralik da bu bulusun kapsamJl içerisindedir.

Belirtilen arallgln limitlerden biri ya da her ikisini dahil ettigi durumlarda, bu dahil edilen limitlerden her ikisini dEslayan aralEklar da bu bulusun kapsamü içerisindedir.10 Aksi sekilde tanEmlanmadEgE sürece, burada kullanülan tüm teknik ve bilimsel terimler, bu bulusun ait oldugu teknikte sEradan uzmanljga sahip olan bir kimse tarafjndan genel olarak anlasHlan anlama sahiptir. Burada tarif edilenlere benzer ya da esdeger olan her türlü metot ve Hateryal, mevcut bulusun uygulamasü ya da testlerinde kullanElabilmesine karsjn, simdi tercih edilen metotlar ve materyaller tarif edilmektedir.

Burada ve ekteki istemlerde kullanjlan sekliyle, “bir” ve "bu” gibi tekil formlar, baglam açEk bir biçimde aksini göstermedikçe çogul göndergeleri kapsamaktadHr.

Bu bulus, düsük dereceli inflamasyonu olan bireylerin ve metabolik bozukluklarü olan bireylerin serum, plazma ve idraründa yükselmis çözünebilir uPAR (suPAR) düzeyleri bulundugu gibi beklenmedik bir gözleme dayanmaktadEr. suPAR'Jn düzeyinin, Vücut kütle indeksinden (BMI) bagUmst olarak degistigi gösterilmektedir ve dolaytsHyla mevcut isaretçilere göre düsük dereceli inflamasyon. ve metabolik sendromun daha kullanEslD bir isaretçisini saglamaktadür. Bunun yanj sjra, bir bireyden elde edilen bir biyolojik sEvEda ölçülen suPAR düzeylerinin, örnegin 1 yUl, 3 yLl, 5 yLl, 10 yUl içerisinde ya da 1-5 yHl, 5-10 yHl, 1-10 yil arasHnda düsük› dereceli inflamasyon ve metabolik bozukluklardan kaynaklanabilen kardiyovasküler hastalük, kronik obstrüktif akciger hastalDgE, diyabet tip 2 've kanser gelisimi (örnegin akciger kanseri, lösemi, prostat ve meme kanseri) gibi hastalEklarEn gelisim riski ve/Veya mortalite riski için güçlü bir kestirimci isaretçi oldugu gösterilmektedir.

Burada tanümlanan sekliyle, “düsük dereceli inflamasyon” ifadesi tamamE gözlenebilir inflamasyonun yoklugunda (1) bir ya da daha fazla pro-inflamatuar sitokin (örnegin IL-6, TNF alfa, IFN gama), serum amiloid A (SAA), orosomukoid, fibrinojen, gamaglobülinin yükselmis düzeyleri; ve/Veya artmls plazma Viskozitesi, eritrosit sedimentasyon hHzL (ESR) ve/Veya lökosit sayEmE; ve/veya (3) bir referans degerle karsülastDrEldDgEnda serum albüminin azalan düzeyleri (bkz.10 ve/veya (4) örnegin hipertansif C-reaktif protein (hs-CRP) tarafündan ölçülen sekliyle artmEs akut faz tepkisi (örnegin normal düzeyin l.5-3.5 kaUl bir hs-CRP düzeyi, tercih edilen sekliyle yaklasjk iki katE) ile karakterize edilir. Belirli bir uygulamada, düsük dereceli inflamasyon, gözlenebilir inflamasyonun yoklugunda bahsedilen isaretçilerden bir` ya da daha fazlasEnDn yükselmesi ile karakterize edilir. Özellikle, düsük dereceli inflamasyon asagEda tarif edilen partikülle güçlendirilmis immünoturbidimetri testi (Roche Diagnostics) kullanarak ölçülen sekliyle l mg/l'den yüksek (özellikle 3 mg/l'den fazla) bir hs-CRP düzeyi olarak karakterize edilebilir.

Burada tanjmlanan sekliyle, “metabolik sendrom” bir yüksek kan basanL, artmUs glikoz üretimi ve azalmUs glikoz kullanLmJyla insülin direnci, merkezi (abdominal) obezite, dislipidemi, yani yükselmis trigliseritler, LDL kolesterol ve total kolesterol ve azalmjs yüksek yogunluklu lipoprotein kolesterol, yukarjda belirtildigi gibi “düsük dereceli inflamasyon” kombinasyonu ile karakterize edilir. Küçük degisikliklerle Ulusal Kolesterol Egitim Programi (NCEP) Yetiskin Egitim Paneli III (ATP III) ile saglanan, metabolik sendromun teshisi için genis bir biçimde kabul edilen kriterler asagüdaki gibidir: Artmüs bel çevresi: Erkekler - 40 inç (102 cm)'ye esit ya da daha fazla ve KadJnlar - 35 inç (88 cm)'ye esit ya da daha Yükselmis trigliseritler: 150 mg/dL'ye esit ya da daha fazla; Azalmüs HDL (“iyi”) kolestrol: Erkekler - 40 mg/dL'den az, KadEnlar - 50 mg/dL'den az; Yükselmis kan basjncü: 130/85 mm Hg'ye esit ya da daha fazla; Yükselmis aç karna glikoz: 100 mg/dL'ye esit ya da daha fazla; Buna göre, bulusun belirli bir uygulamasHnda, denegin listelenen 5 bilesenden 3 ya da daha fazlasünj sergilemesi halinde metabolik sendromlu teshisi konulur. Daha belirli bir10 uygulamada, metabolik sendrom, Uluslararasj Diyabet Federasyonunun tanümlna göre asagüdakilerden en az ikisi ile birlikte merkezi obezite (erkek/kadünlarda > 94/80 cm bel) olarak tanlmlanlr: yükselmis serum trigliseritler > 1.7 mmol/l (150 mg/dl), azalmjs serum yüksek yogunluklu lipoprotein kolesterol (< 1.03 mmol/l (40 mg/dl), yükselmis plazma glikoz (»5.6 mmol/l (100 mg/dl) ya da yükselmis BP (sistolik BP > 130 mm Hg ya da diyalositik BP > 85 mm Hg). suPAR düzeyinin azaltülmasü, suPAR üretim hEanJn azaltjlmasj ya da üretilen suPAR'tn stabilitesinin azaltllmas h örnegin bunun bir anti-suPAR antikoru vasütasEyla vücuttan temizlenmesi yoluyla elde edilebilir. 1. suPAR ve/veya bunun bir isaretçi olarak kullanEm için klevaj ürünleri: Protein suPAR (NCBI Erisim no. AAK31795 ve reseptörün membrana baglE uPAR'Dn GPl-çapasünEn klevaj: yoluyla saljnan Ürokinaz-tipi Plazminojen Aktivatör Reseptörünün (uPAR) çözünebilir klsmEdJr. suPAR, tam 'uzunluklu suPAR (277 amino asit (1-277) ve ürokinaz klevajU ya da insan tripsin benzeri proteaz taraflndan üretilen suPAR fragmanlari D1 (1-83) ve D2D3 (88-277), yine ürokinaz klevajü ya da insan tripsin benzeri proteaz tarafEndan üretilen Dl (1-89) ve D203 (90- 277), plasmin klevajE tarafEndan üretilen Dl (1-91) ve D2D3 (92-277)'den olusan bir glikosile protein ailesidir. Mono ya da poli-klonal antikorlarla immünosaptama yoluyla bir biyolojik g Vlda bunlar m_ varllgli ve miktarim | izlemek için protein suPAR'da ve bunun klevaj ürünlerinde bulunan kesintisiz ve kesintili epitoplar kullanjlabilir. DolaylsEyla, bir biyolojik sDvEda hem suPAR'D hem de bunun klevaj ürünlerini saptamak için suPAR'da ve bunun klevaj ürünlerinde (Örnegin D2D3) yaygtn erisilebilir epitoplara yöneltilen antikorlar kullanjlabilir.

Bir isaretçi olarak suPAR kullanDmE, immün cevabEn örnegin10 TNF-d ve IL-6 gibi diger isaretçilerinden daha stabil olma avantajjna sahiptir. Örnegin, saglüklE bireylerdeki suPAR düzeylerinin gün boyunca stabil oldugu bilinmektedir (Sier CF, HAART terapisi alan HIV enfekte hastalarda suPAR'Dn plazma konsantrasyonundaki sirkadyen degisiklilerin çok sünErlE oldugu gösterilmektedir (Örnek 1). Dolayjsüyla, bir denekten elde edilen bir biyolojik sEvEya dayalE suPAR ölçümleri, denegin aç karnEna olup olmadEgJndan bagEmsEz olarak ve büyük ölçüde örnekleme için zaman sedülünden bagHmslz olarak geçerli olacaktjr. Bu, önemli sirkadyen dalgalanmalar sergileyen TNF-g ve IL-6 gibi alternatif isaretçiler için geçerli degildir.

Biyolojik sDVEnÜn saklanan örneklerinde suPAR. moleküllerinin esnek bir örnekleme sedülü ve stabilitesi, bunun klinik ortamda› bir isaretçi olarak kullanLmU için büyük bir avantajdtr. 2. suPAR ya da bunun klevaj ürünlerinin bir isaretçi olarak saptanmasü için uygun biyolojik örnekler suPAR ya da bunun klevaj ürünleri (örnegin D2D3), buradaki örneklerde gösterildigi gibi bir insan denek ya da hasta gibi bir memeli denekten elde edilen bir biyolojik slvHda suPAR ya da bunun klevaj ürünlerinin düzeyinin ölçülmesi yoluyla tanEsal, prognostik ve kestirimci amaçlarla bir isaretçi olarak kullanülabilir. suPAR ve bunun klevaj ürünleri bir memeli denekten, özellikle de bir insan denekten elde edilen tüm biyolojik vaLlarda, örnegin serebrospinal vaU, plazma, serum, kan, idrar, semen, tükürük ve balgamda bulunur.

Biyolojik örnegin idrar oldugu durumlarda, söz konusu ölçümler bir denekten idrar suPAR/kreatinin degerine dayalü olabilir çünkü bu degerin ayn] denekten elde edilen bir serum (plazma) örneginde suPAR'Jn konsantrasyonu ile son derece iliskili oldugu bilinmektedir. Benzer sekilde, HAART terapisinde bir HIV hastaslnHn idrar suPAR/kreatinin degerleri, aynk denekten elde edilen serum (plazma) örneklerinde suPAR'En konsantrasyonuyla oldukça iliskilidir (Örnek 1). DolayDsEyla,10 idrardaki ölçülen düzeyin protein içerigi için normallestirildigi (örnegin kreatinin kullanarak) durumlarda bir denekte (örnegin HAART terapisinde bir HIV hastasjnda) suPAR ya da bunun klevaj ürünlerinin ölçümü için idrar örnekleri de kullanElabilir. Bu normallestirilmis degerler, mevcut bulusun tanEsal, veya kestirimci amaçlarü için bir isaretçi olarak kullanjlabilir. 3. suPAR ve bunun klevaj ürünlerinin belirlenmesi ve miktarEnEn saptanmasü Bir demekten elde edilen bir biyolojik sHvt içerisinde suPAR ve/veya bunun klevaj ürünlerinin düzeyini ölçmek için dogru metotlar, bu metotlar nispeten ucuz oldugun ve klinik ortamda gerçeklestirmesi kolay oldugundan özellikle uygun olan örnegin Enzime BaglE ImmünoSorbent Testi (ELISA) gibi immün saptama metotlarLMJ kapsamaktadUr. ELISA'lar, beni küçük Inan de büyük saytda örnegi analiz etmek için ve suPAR'a özgü antikorlarla kaplanan hücrelerle bir ELISA plaka formatjnü kapsayacak sekilde adapte edilebilir ya da ELISA testinin tüm bilesenlerini dahil eden bir ölçüm formatEna adapte edilebilir. Ilave olarak, suPAR düzeyleri western blot, Luminex, MALDI-TOF, HPLC ve otomatiklestirilmis immün analizör platformlan , örnegin Bayer Centaur, Abbott Architect, Abbott AxSym, Roche COBAS ve Axis Shield Afinion gibi yaklasümlarla ölçülebilir. 4. A) HAART tedavisinde HIV-enfekte hastalarda ve B) belirgin bir biçimde saglelU deneklerde düsük dereceli inflamasyonun ve metabolik sendromun teshisi için bir isaretçi olarak suPAR Yukaera tarif edildigi gibi düsük dereceli inflamasyon, gözlenebilir inflamasyon sergilemeyen, yine de akut enfeksiyonlarda görülenden çok uzak bir düzeyde immün aktivasyonu saptanabilir olan belirgin bir biçimde sagljklE bir denekteki bir sub-klinik durumdur. Mevcut duyarhl testler kullanarak ölçülen hsCRP (C-reaktif protein), su anda bir denekte düsük dereceli inflamasyon için bir isaretçi olarak kullanElEr.10 Bir denekte düsük dereceli inflamasyonun teshisi için isaretçiler belirli öneme sahiptir, çünkü bu sub-klinik durum tip-2 diyabet ve CVD gibi düsük dereceli inflamasyonla iliskili hastallklarln sonradan gelisimi ile iliskili görülmektedir. Bir popülasyonda düsük dereceli inflamasyonun teshisi, düsük dereceli inflamasyonla iliskili hastalüklarün gelisme riski daha fazla izlenmesi gereken üyeleri tanEmlayacaktEr.

A) Dismetabolik özelliklerin bir kümesini sergileyen HAART terapisinde HIV-enfekte hastalar, tedavisi eslestirilmis, lipodistrofik HIV-enfekte hastalarla karsElastErEldEgEnda suPAR'En yükselmis düzeylerine sahiptir (Örnek l). Bu HIV hasta gruplaründa suPAR'En düzeyleri lökosit, lenfosit ve monosit sayilarEyla pozitif bir biçimde iliskilendirilmistir, bunlaan hepsi bir hastanUn immün aktivasyonu ve inflamatuar durumu için belirli öneme sahip kan hücreleridir. Bu veriler ve suPAR ve TNF-d arasEnda gözlenen güçlü pozitif iliski, suPAR'E HIV-enfekte hastalarda düsük dereceli inflamasyonun yeni ve güçlü bir tanEsal isaretçisi olarak tanjmlar.

Bu HIV hasta gruplarindaki suPAR düzeyleri, suPAR'J bu hastalarda metabolik sendromun bir isaretçisi olarak tantmlayan aynk zamanda yag dagllel, insülin duyarlJlHgI ve lipidemi ile güçlü bir biçimde iliskilendirilmistir. suPAR'Dn bir isaretçi olarak kullanÜmJnJn, aynE zamanda TNF-g ve IL-6 alternatif isaretçilerinden daha güçlü bir netabolik sendrom kestirimi sagladLgL gösterilmektedir.

B) Beyaz kan hücresi (yani lökosit) sayHm`h genel nüfusta immün aktivasyon ve düsük dereceli inflamasyon için bir isaretçidir. MonicalO grubunu içeren genel insan nüfusunda, suPAR düzeyi ve beyaz kan hücresi saylmj oldukça konsantre olmustur ve yas ve cinsiyetten bagümsEz oldugu gösterilmistir (Örnek 4, Tablo 9; Örnek 5). Bu veriler, suPAR'l, belirgin bir biçimde sagllkll bireyler içeren genel nüfusta düsük dereceli inflamasyonun yeni bir isaretçisi olarak belirler. Bunun yanE sEra, suPAR, bir denekte düsük dereceli inflamasyonun10 ilerlemesinin evrelenmesi amacjyla degerli bir isaretçi saglar. suPAR'Dn Tip 2 Diyabet ve CVD gibi hastalEklar için bir isaretçi oldugu gösterildiginden, suPAR düsük dereceli inflamasyonla iliskili hastalwklar.m, baslama riskini izlemek için bir isaretçi olarak uygulama alanüna sahiptir. Kanser, suPAR'En faydalü bir isaretçi oldugu baska bir düsük dereceli inflamasyonla iliskili hastalüktEr. Bu, lökositlerin (beyaz kan hücresi sayEmE) kanser gelisimi ile baglantül] inflamasyonün oturmus bir isaretçisi oldugu gözlemiyle tutarltdtr.

Metabolik sendrom, asagjdaki 5 bilesen tarafindan tanEmlanEr: bel çevresi, aç karna glikoz düzeyi, düsük HDL-kolesterol, yüksek plazma trigliserit, artmüs dialostik ve/Veya sistolik kan basüncj; 2004 glikoz modifikasyonuyla NCEP ATPIII 2001 2752).

MonicalO grubunu içeren genel insan nüfusunda, suPAR düzeyleri bir bireyde saptanan metabolik sendromun bilesen sayjsüyla pozitif bir biçimde iliskilendirilmistir (Örnek 6). Bu, test edilen nüfusta hem erkek hem de kadJnlar için geçerlidir ve iliski, denegin yasHndan baglmsHz olmustur. Bu veriler, suPARWI, belirgin bir biçimde sagllkMI bireyler içeren genel nüfusta metabolik sendromun yeni bir isaretçisi olarak 4. Diyabet tip 2 gelistiren belirgin bir biçimde saglüklj bir denek için riski tahmin etmek için bir isaretçi olarak suPAR. suPAR'tn diyabet gelistirme riskinin baglmylz bir tahmincisi oldugu gösterilmektedir (Örnek 5). Hem tek degiskenli hem de çok degiskenli analizlerde, yüksek suPAR, yas (yaslD), cinsiyet (erkek) ve metabolik sendroma sahip olunmasD diyabet gelistirmenin yüksek riski ile önemli ölçüde iliskilendirilmistir. Yas, cinsiyet ve metabolik sendromdan bagtmstz olarak, suPAR'daki bir 1 ng/mL'lik artls, diyabet gelistirmede % 28 artan bir riskle iliskilendirilmistir.

Diyabet gelistirme riskini tahmin etmek için bir isaretçi10 olarak suPAR kullanEmE, risk tasEyan bireylerin yeterince erken bir zaman noktasünda ektinin profilaktik seyrini baslatarak kendi saglEk durumlarün] iyilestirmesine olanak verecektir. suPAR'En aynE zamanda artan bir aç karnjna glikozla önemli ölçüde iliskili oldugu da gösterilmistir (Tablo 9). Örnek 5, suPAR'En tip 2 diyabeti güçlü bir biçimde tahmin ettigini ortaya koymaktadjr. Bu gözlemlerden, suPAR'Jn en muhtemel sekliyle güçlü bir insülin direnç isaretçisi oldugu çtkarttlmaktadHr ve bu da metabolik sendrom ve tip 2 diyabetes mellitusun altünda yatan nedendir. Örnegin bozulmus glikoz toleransE formunda prediyabet, tip 2 diyabette önce geldiginden ve metabolik sendroma sahip olan bireylerde sahip olmayanlardan daha yaygün oldugundan, suPAR'Ln genel nüfusta hem güçlü bir isaretçi hem de güçlü bir prediyabet ve bozulmus glikoz toleransl tahmincisi olmasl çok muhtemeldir. Insülin direncinin güçlü bir isaretçisi olan suPAR'E desteklemek için, bu belirli iliski insülin duyarlElEgÜnJn standart ölçümü kullanarak stabil bir HAART rejiminde HIV-enfekte bireylerde ortaya konulmustur (Örnek 1, Sekil 2A). .Ayrica, insülin duyarlHllglnHn, yani HOMA-IR'nin daha, basit bir Ölçüsü suPAR› ile iliskilendirilmistir (Sekil 2B). Bunun yanE süra, stabil bir HAART rejiminde HIV-enfekte bireylerde bir oral glikoz tolerans testi sErasJnda plazma suPAR düzeyi ve 2 saat plazma glikoz arasEnda gözlenen iliski (Sekil 2C), suPAR'Jn, bozulmus glikoz toleransJnUn güçlü bir isaretçisi oldugunu dogrulamaktadtr.

. Kardiyovasküler Hastah k (CVD) ve Iskemik Kalp HastalHgI (IHD) gelistiren belirgin bir biçimde sagljklü denekler için riski tahmin etmek için bir isaretçi olarak suPAR. suPAR'En, CVD gelisiminin klasik tahmincileri ile iliskili olmayan ya da zayif bir biçimde iliskilendirilen belirgin bir biçimde sagllkll bireylerde bir CVD olayt gelistirme riskinin güçlü ve bagEmsDz bir isaretçisi oldugu gösterilmektedir (Örnek 4). Yas, cinsiyet, sigara içme durumu ve metabolik10 sendromdan bagümsjz olarak, suPAR'daki bir 1 ng/mL'lik artEs, bir CVD gelistirmede % 15.4 artan bir riskle iliskilendirilmistir. suPAR düzeyi, önceden bir Akur Miyokart Enfarktüsü tecrübe etmemis bireylerde bir OHD gelistirme riskinin önemli bir tahmincisidir (Örnek 7). suPAR, diger klasik IHD isaretçilerinden baglmsüz olarak OHD riskini tahmin etmistir.

Yasa göre ayarlanan bir analizde, suPAR'daki bir 1 ng/ml'lik artEs, % 21'lik bir IHD riski artEsD ile iliskilendirilmistir.

Hem CVC hem de OHD gelistirme riskinin tahmini için bir isaretçi olarak suPAR, risk tasEyan bir bireye aynD zamanda bunlarEn riskinin azaltülmasü ile ilgili olarak yeterince erken olan bir zaman noktasünda, etkinin profilaktik seyrini baslatma sansEnD verir. 6. Kanser gelistiren belirgin bir biçimde sagliklu bir denek için riski tahmin etmek için bir isaretçi olarak suPAR. suPAR'En, belirgin bir biçimde saglüklj bireylerde kanser gelisiminin güçlü ve bagJmSEz bir risk isaretçisi oldugu gösterilmektedir (Örnek 10). Cinsiyet ve yastan bagümsjz olarak, suPAR'daki 1 ng'lik bir artJs, genel kanser gelistirme riskinde 1.34 risk artls orani ile iliskilendirilmektedir.

Meme kanseri, lösemi, prostat kanseri ve akciger kanseri alt gruplarjnda önemli iliskiler saptanmEstür.

Kanser gelistirme riskinin tahmini için bir isaretçi olarak suPAR, risk tasEyan bir bireye aynj zamanda bunlarEn riskinin azaltUlmasU ile ilgili olarak yeterince erken olan bir zaman noktasknda, etkinin profilaktik seyrini baslatma sansl verir.

Risk müdahalesinin etkisi suPAR düzeyleri kullanarak izlenebilir. Etkili bir müdahale, suPAR düzeyini azaltacaktür. 7. Yasani tarzî] müdahalesinin efikasitesi ve sagkaljmün bir tahmincisi olarak suPAR Belirgin bir biçimde saglikli bireylerde suPAR düzeylerinin, diger isaretçilerden bagtmsHz olarak mortalite ile güçlü bir biçimde iliskilendirildigi ortaya konulmaktadEr (Örnek 3). Çok degiskenli analizde, suPAR, yastan sonra ikinci en güçlü10 Belirgin bir biçimde saglüklj bir bireyin yasam stilinin, bunlarEn suPAR düzeylerini önemli ölçüde etkiledigi gösterilmektedir. Sigara içme allskanllgl durumunda, sigara içen kimseler suPAR düzeylerini ve kendi hayatta kalma beklentilerini önemli ölçüde etkilemektedir. Benzer sekilde, egzersiz allskanlEgÜ bir bireyde suPAR düzeyleri üzerinde önemli bir etkiye sahiptir, burada egzersiz düzeyi düsük suPAR düzeyleri ile iliskilendirilir. Bir memeli denekten, özellikle de bir insan denekten elde edilen biyolojik bir slvlda düzenli suPAR ölçümlerinin, mevcut yasam stiline ve etkinin profilaktik seyri sErasJnda gerçeklestirilen yasam tarzj degisikliklerinin etkinligine dayalj olarak kendi yasam beklentisine göre hekimin denegini yönlendirmesine imkan tanLyacaktUr, örnegin bir hekim tarafUndan fiziksel bir program önerilebilir. Benzer sekilde, düzenli suPAR ölçümleri hekimin medikasyonun efikasitesini izlemesine; reçete edilen medikasyonü almada hastanEn uyumunu izlemesine ve IHD, CVD ve Tip 2 Diyabet gibi Metabolik Sendromla iliskili hastalEklarE önlemek ya da tedavi etmek için tedavinin seyrinin efikasitesini izlemesine imkan verecektir. 8. Metabolik Sendrom. ve/veya Düsük Dereceli Inflamasyonun Tedavisinin ilerlemesini izlemek için bir isaretçi olarak suPAR düzeyleri aynü zamanda metabolik sendromun ve/veya düsük dereceli inflamatuar hastalJgUn tedavisini izlemek için kullantlabilir. Bir suPAR ölçümü, tedavi baslamadan önce yaptlabilir. Tedavi straslnda, farklH zaman noktalarlnda suPAR ölçümleri yapilabilir. En az yaklasDk % lO ve/veya l ng/ml'lik bir azalma, bir tedavi protokolünün etkinliginin göstergesi olacaktjr. suPAR düzeyleri aynE zamanda tedaviden sonraki çesitli zaman noktalarlnda da ölçülebilir. 9. Metabolik Sendrom› ve/veya Düsük Dereceli Inflamasyonun Tedavisi Bir memeli denekte suPAR'jn düzeyini azaltan maddeler,10 metabolik sendromu ve/Veya düsük dereceli inflamasyonu tedavi etmek için kullanElabilir. Belirli bir bakEs açüsjnda, söz konusu madde bir anti suPAR monoklonal ya da poliklonal antikor olabilir. Bu antikorlar teknikte bilinen metotlar kullanarak elde edilebilir. Çesitli konaklar kullanülabilir ve bunlarla sjnürlj olmamak kaydüyla keçiler, tavsanlar, ratlar, fareler, insanlar` ve baskalarEnE kapsamaktadür. Bu konaklar, suPAR ya da inmünojenik özellikleri olan ndnimum 5-10 amino asit uzunluguna sahip olan peptid fragmanlar] ile enjeksiyon yoluyla astlanabilir (bkz. örn. WO 90/12091). Immünolojik cevabü arttürmak için Çesitli adjuvanlar kullanjlabilir. Bu adjuvanlar bunlarla kjsütlj olmamak kaydjyla Freund, mineral jeller, örnegin alüminyum hidroksit ve yüzey aktif maddeler, örnegin lisolesitin, Pluronik polioller, polianyonlar, peptidler, yag emülsiyonlarL anahtar deligi deniz salyangozu hemosiyanin ve dinitrofenolü kapsamaktadlr. Insanlarda BCG (bacilli Calmette-Guerin) ve Corynebacterium parvum özellikle tercih edilir. Bahsedilen antikoru elde etmek için asagjdaki adjmlar kullanülabilir: (a) uPAR ya da bunun immünojenik bir kLsmUnLn istege baglL olarak bir tasJyUcL proteine konjuge edilmesi; (b) bahsedilen polipeptidle bir konak hayvanln ya da bir adjuvanla (a) adtmHndaki polipeptid-taslyHci proteinin asjlanmasü ve (c) bahsedilen asElanmEs konak hayvandan antikor elde edilmesi. Tercih edilen sekliyle, kullanjlan her türlü antikor yalniz bunlarEn fragmanlarEna degil D2D3 fragmanü gibi tam uzunluklu suPAR'a baglanLr.

Bahsedilen reseptör ya da reseptör peptidlere monoklonal antikorlar, kültürde sürekli hücre hatlaül taraflndan antikor moleküllerinin üretimini saglayan her türlü teknik kullanarak hazErlanabilir. Bunlarla kEsEtlE olmamak kaydüyla hibridom teknigi, insan B-hücre hibridom teknigi ve EBV-hibridom teknigini kapsamaktadlr. Bkz. örn. Kohler, et al., 1975, Spesifik olarak, söz konusu metot asagEdaki adEmlarE içerir: (a) bir immünolojik reseptör peptidle bir hayvanjn asjlanmasü; (b) hayvandan antikor üreten hücrelerin izole edilmesi; (c) monoklonal antikor üreten hibridom hücreler olusturmak için kültürde immortalize edilmis hücrelerle antikor üreten hücrelerin kaynastjrjlmasj; (d) hibridom hücrelerin kültive edilmesi; ve (e) bahsedilen polipeptide baglanan kültürden monoklonal antikorlarEn izole edilmesi.

Antijenik spesifite degisken alanlar vasEtasDyla verilir ve tamamll bir ya da daha fazla degisken alan içeren antikor fragmanlarünjn bakteriyel ekspresyonunu kapsayan deneylerden bilindigi gibi, sabit alanlardan bagJmsEzdEr. Bu moleküller Fab benzeri molekülleri (Better et al (1988) Science 240, tek zincir Fv (ScFv) nwleküllerini (burada VH ve VL partner alanlarl bir esnek oligopeptidi vasßtaslyla baglanßr) (Bird et Acad. Sci. USA 85, 5879) ve izole V alanlarjnj içeren tek alan antikorlarünj (dAb'ler) kapsamaktadür (Ward et al (1989) Nature 341, 544). Bunlaan spesifik baglanma alanlarUnJ koruyan antikor fragmanlarHnln sentezinde rol oynayan tekniklerin genel bir incelemesi Winter & Milstein (1991) Nature 349, 293-299'da bulunacaktür. “SCFV molekülleri" ifadesi, içerisinde VH ve VL partner alanlarEnEn esnek bir oligopeptid vasütasEyla baglandDgE moleküller anlamina gelmektedir. Bu moleküler mevcut bulusta kullanUlabilir.

Istenen spesifiteye sahip olan antikorlarl tankmlamak için taramak için çesitli immüno analizler kullanHlabilir.

Yerlesmis spesifiteleri olan poliklonal ya da monoklonal antikorlar kullanarak rekabetçi baglanma ya da immünoradyometrik analizler için sayjsü protokol teknikte iyi bilinmektedir. Bu immüno analizler tipik olarak polipeptid(ler) ve bunun spesifik antikoru araslnda kompleks formasyonunun ölçümünü kapsamaktadür.

SuPAR düzeylerini azaltan ajanlar elde etmek için10 kullanElabilen diger maddeler, bunlarla sEnErlE olmamak kaydüyla bir D2D3 klevaj ürününü ve/veya baska bir suPAR fragmanJnD kapsamaktadür. Söz konusu. madde aynE zamanda bir suPAR analogu ya da uPA'yH baglayabilen bir türevi kapsayabilir fakat bunlarla sDnErlD degildir. Spesifik bir bakEs açüsînda, bu maddeler bunlarla szEtlD olmamak kaydjyla 1) bir ornatma, delesyon, bir kesme ve/Veya bir ekleme içeren bir amino asit sekansEna sahip olan uPAR, 2) farklj glikosilasyon dereceleri gibi kimyasal olarak modifiye edilmis uPAR ve 3) suPAR sekanslnHn parçasHnln içeren sentetik peptidleri kapsamaktadür. suPAR. analoglarü ya da fragmanlarj insan suPAR, uPAR ve/veya suPAR/uPAR fragmanlarjnü tanüyan antikorlar olusturmak için yeterince büyüktür. Bu analoglar insan suPAR'En en benzer bölgesiyle genel olarak en az % 60, sekans özdesligine sahip olacaktHr. Maddelerin farmasötik kompozisyonlar seklinde formülasyonlarj teknikte iyi bilinmekte ve ayrjca Gennaro (ed.), 2000, Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20th ed., Lippincott, Williams & Wilkins (2000); ve Ansel et al., 1999, Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, 7th ed., Lippincott Williams & Wilkins Publishers gibi yaydnlarda tarif edilmektedir.

Böyle bir kompozisyon farmasötik olarak kabul edilen bir tasEyÜc] içerisinde tipik olarak agErleça yaklasük % 0.1 ila 90 (Örnegin yaklasUk % 1 ila 20 ya da yaklasUk % 1 ila 10) bulus polipeptidi ya da antikoru içerir. Çesitli sHVl ve toz formülasyonlar, tedavi edilecek olan memelinin akcigerlerine inhalasyon için geleneksel metotlar yoluyla hazErlanabilir.

Kompozisyonlarün enjekte edilebilir formülasyonlarü nebati yaglar, dimetilasetamid, dimetilformamid, etil laktat, etil karbonat, izopropil miristat, etanol, polioller (gliserol, propilen glikol, SjVÜ polietilen glikol ve benzerlerini) içerebilir. Intravenöz enjeksiyonlar için, bilesiklerin suda10 çözünebilir versiyonlarü damlatma metoduyla uygulanabilir, bu suretle antifungal ajan ve fizyolojik olarak kabul edilebilir bir eksipiyan içeren farmasötik bir formülasyon infüze edilir.

Fizyolojik, olarak kabul edilebilir eksipiyanlar örnegin % 5 dekstroz, % 0.9 salin, Ringer solüsyonu ya da baska uygun eksipiyanlar içerebilir. Intramüsküler preparasyonlar, örnegin bilesiklerin uygun bir çözünebilir tuz formunun steril bir formülasyonu, enjeksiyon amaçlü su, % 0.9 salin ya da % 5 glikoz solüsyonu gibi farmasötik bir eksipiyan içerisinde çözündürülebilir ve uygulanabilir. Bilesigin uygun bir çözünmeyen formu sulu bir baz ya da farmasötik olarak kabul edilebilir bir yag baz, örnegin uzun zincir yag asidinin bir esteri (örnegin etil oleat) içerisinde bir süspansiyon olarak hazErlanabilir ve uygulanabilir. Her farmasötik formülasyonda terapötik ajanJn› optimal oranL, formülasyonun kendisine göre ve spesifik patolojilerde istenen terapötik etkiye ve iliskili terapötik rejimlere göre degisiklik gösterir.

Kompozisyonlarü hastaya uygulamak için tEp tekniginde sjradan uzmanlEga sahip olan kimselerce bilinen geleneksel metotlar kullanLlabilir. Bunlarla sLnLrlL olmamak kaydUyla standart metotlar kullanarak subkütanöz, intrapulmoner, transmukozal, intraperitoneal, intrauterin, sublingual, intratekal ya da intramüsküler rotalarü kapsamaktadür. Ek olarak, farmasötik formülasyonlar hastaya l-, 3- ya da 6- aylük depo enjekte edilebilir ya da biyolojik olarak parçalanabilir Hateryaller ve metotlar gibi enjekte edilebilir depo uygulama rotalarL vasttaslyla uygulanabilir.

Uygulama rotastndan baglmslm olarak, mevcut bulusun maddesi tipik olarak yaklasük 0.01 mg ila hastanEn Vücut agErlEgEna göre yaklasik 30 mg/kg'lük bir günlük dozajda uygulanür (örnegin 1 mg/kg ila 5 mg/kg). Farmasötik formülasyon, istenmesi halinde toplam istenen günlük dozu elde etmek için günlük çoklu dozlarda uygulanabilir.

Farmasötik formülasyonlarj hastaya uygulamak için tüp tekniginde sjradan uzmanlüga sahip olan kimselerce bilinen10 geleneksel metotlar kullanElabilir. Farmasötik kompozisyonlar tek basDna ya da baska terapötik ajanlarla ya da müdahalelerle kombinasyon halinde uygulanabilir. Spesifik olarak, kompozisyonlar ayrlca mevcut tarifnamenin çok saylda ajantnl içerebilir. . 10 yEl içerisinde Metabolik Sendromla iliskili hastalEklarE, düsük dereceli inflamasyonla iliskili hastalEklarE, kanser ve/Veya mortaliteyi tahmin etmek için suPAR esale araçlar.

Birisi suPAR olan faktörlerin bir kombinasyonu, lO ydl içerisinde CVD (örnegin IHD ve AMI), Diyabet tip 2, kanser ve/Veya mortalite gelistirme riskini tahmincileridir. Örnegin, kademeli geriye dogru mantEksal regresyon, genis bir insan popülasyonunun sonucunu belirlemede en yüksek istatistiksel anlama sahip olan bu etmenleri ve bu hastalelarJn› herhangi birisini gelistirme risklerini tantmlar. Tahmin etmenleri ya da kriterlerinin kombinasyonu, Örnek 8 ve 9'da izah edildigi gibi bir denegin kendi saglük risklerini tahmin etmek için bir algoritma formunda uygulanabilen bir model içerir. Diger algoritmalar, hastalLklaan mortalite riski ya da gelisimini hesaplamak için uygulanabilir. Örnegin, alternatif bir uygulamada, bir risk analiz algoritmaâl suPAR ve yas, ya da suPAR, yas ve cinsiyet ya da suPAR, yas ve sigara kullanmayj kapsayabilir. Bu faktörleri algoritmanün giris degerleri olarak kullanarak, farklE hastalüklar için sonraki 5 yjl, 10 yLl ya da 5yLl-lO le boyunca çUkLs skoru farklU risk oranlarJ olabilir. Böylelikle her hastaltk› örnegin asagtdakiler gibi spesifik bir risk oranl elde edebilir: Diyabet tip 2 Risk % 22 CVD Risk % 19 Kanser Risk % 36 Mortalite Risk % 33 Bir kimsenin spesifik riskini daha iyi tahmin etmek için, örnegin asagüdaki parametreler ölçülebilir ve baska bir risk hesaplamasünda giris degeri olarak kullanElabilir: Diyabet tip 2 için Aç karna kan glikoz CVD için Kan bas_nc_, HDL-kolesterol, LDL-kolesterol, total kolesterol, triqliseritler Kanser için Sigara kullanma, yas Mortalite için NT-proBNP konsantrasyonlarî Beyin tipi natriüretikr peptidin N-terminal fragmanü. Kanser gelistirme riskini tanllama baglamlnda, bu bulus kalHtsal meme kanseri olan bir aileye mensup olan ve/Veya kanserle iliskili BRCAl ve BRCAZ mutasyonlarE gibi bir genetik isaretçiye sahip oldugu gösterilmis kadEnlarla ilgili olarak özellikle faydalj olabilir.

Belirlenen tahmin faktör ölçümlerini girmek için bir bilgisayar taraandan okunabilen bir ortam m› ve bir yll, üç yEl, bes yjl, on yjl ya da içerisinde ya da 1-5 yjl, 1-10 yDl, bes yEl-on yDl arasjnda bir Metabolik Sendromla iliskili hastalEklarEn ve/veya düsük derece inflamasyonla iliskili hastalEklarEn, örnegin CVD (örnegin IHD ve AMI), Diyabet tip 2 gelistirme riski ve kanser gelistirme ve/veya mortalite gelistirme riskinin hesaplanmasl için araçlarHn üretiminde Tahmin faktörlerinin tarif edilen kombinasyonu kullanElabilir.

Belirli bir hasta için bir tahmine varmak için, hekim hastadan elde edilen örnegin biyolojik süvj gibi bir örnekte suPAR'Dn ölçümü gibi çesitli ölçümler gerçeklestirir ve memeli bir denekten, özellikle de bir insan denekten elde edilen bir biyolojik sijda suPAR ve/Veya bunun D2D3 klevaj ürünleri olan bir proteinin düzeyi ya da nispi miktarEnE ve bahsedilen memeli denekten, özellikle de bir insan denekten elde edilen bir ya da daha fazla tahmin faktörü parametresini içeren test bilgisini almak için belirlenen degerleri bir bilgisayar mantHgtna girer, bilgisayar mantHgl bahsedilen biyolojik stvtda bahsedilen proteinin düzeyi ya da nispi miktar | ve bahsedilen bir ya da daha fazla parametrenin analizini gerçeklestirir, söz konusu bilgisayar mantügj girilen belirli degerleri analiz eder ve bir yEl, üç yjl, bes yjl, on yIl içerisinde ya da bir-bes yÜl, bir-on yÜl, bes yül- on yEl arasHnda bir Metabolik Sendromla iliskili hastallk, düsük dereceli inflamasyonla iliskili hastalEk gelistirme, kanser gelistirme ve/veya mortalite gelistirme riskini hesaplar.

Bahsedilen bilgisayar tarafEndan okunabilir ortamj içeren bir bilgisayar, hekimin bir memeli denekte, özellikle de bir insan denekte CVD (örnegin IHD ve AMI) ve/veya Diyabet tip 2 gelistirme riskini tahmin etmesine; ve aynE zamanda Metabolik sendromla iliskili hastalEklarE, örnegin CVD'yi (örnegin IHD ve AMI), Diyabet tip 2 gibi hastaljklarj önlemek ya da tedavi etmek için tedavinin seyri sürasjnda medikasyonun efikasitesini ve reçete edilen medikasyonu almada hastantn uyumunu izlemesine imkan verecektir.

Bahsedilen bilgisayar tarafEndan okunabilir ortamj içeren bir bilgisayarün kullanÜmJ aynE zamanda hekimin bir memelide, özellikle de bir insan denekte bir yjl, üç yEl, bes yEl, lO yLl ya da bir-bes yUl, bir-on le, bes-on yLl içerisinde kanser ve/Veya mortalite gelistirme riskini tahmin etmesine imkan tanDyabilir.

Böyle bir bilgisayar, örnegin bir yEl, bes yül, on yül içerisinde ya da 1-5 yEl arasEnda, l-lO yEl arasünda ya da 5- yLl arasUnda bir metabolik sendromla iliskili hastalUk, düsük dereceli inflamasyonla iliskili hastallk, kanser ve/veya mortalite riski ve/veya riskteki degisimi belirlemek için bir risk hesaplama sistemine erisim saglamak için örnegin bir doktorun ameliyathanesindeki bir istemci bilgisayar olup, söz konusu istemci bilgisayar: (a) bilgisayar taraandan okunabilir 'verilerle kodlanan bir veri saklama, materyalini saklamak için konfigüre edilen bir bilgisayar taraflndan okunabilir veri saklama ortaml içermektedir, içerisinde bahsedilen veriler bir memeli denekten bir ya da daha fazla örnekten elde edilen bir ya da daha fazla ölçümü içermektedir, içerisindeki en az bir ölçüm, (i) çözünebilir ürokinaz plazminojen aktivatör reseptörü (suPARJ ve/veya (ii) suPAR'lm D2D3 klevaj ürünleri formunda bir isaretçinin düzeyinin in vitro ölçümüdür; (b) bahsedilen bilgisayar tarafündan okunabilir verileri10 islemek için içerisinde talimatlara sahip olan bir saklama ortamü; (C) bahsedilen bilgisayar-makine tarafündan okunabilir verileri risk ölçümü ve tedavi ilerleme degerleri seklinde islemek için bahsedilen saklama ortamüyla ve bahsedilen bilgisayar tarafjndan okunabilir veri saklama ortamüyla birlestirilen, bahsedilen talimatlara yanjt veren bir merkezi islem birimi; ve (d) bahsedilen riski ve/veya risk degerlerindeki degisimin çkktHsLnl' almak için (c) adtmlnda bahsedilen merkezi islem birimine birlestirilen bir çEkÜs aygEtE içermektedir.

Alternatif olarak, istemci bilgisayar sunlarü içermektedir: bir memeli denekten elde edilen bir ya da daha fazla ölçümün aljnmas] için girdi aygjt] içermektedir, söz konusu en az bir ölçüm, bahsedilen denekten elde edilen bir ya da daha fazla örnekte (i) çözünebilir ürokinaz plazminojen aktivatör reseptörü (suPAR) ve/veya (ii) suPAR'Dn D2D3 klevaj ürünleri formunda bir isaretçinin düzeyinin in vitro ölçümüdür; alJnan bir ya da daha fazla ölçümün, (a) adEmDndaki bahsedilen bir ya da daha fazla ölçümü analiz etmek ve bir risk degeri hesaplamak için konfigüre edilen bir sunucu bilgisayara gönderilmesi için bir iletisim arayüzü; ve sunucu bilgisayardan hesaplanan bir risk degerini almak için bir ÇEkEs aygEtD, verileri çükartmak için uygun her türlü aygüt ya da devre sistemini içerebiliru Bu çJkUs angtUnLn örnekleri verileri kullam`dl taraandan okunabilir sekilde sunmak için örnegin. bir ekran, yazHC | ve/Veya benzerleri gibi aygHtlart içermektedir. Alternatif veya ilave olarak, çükjs ayth] verileri bir ya da daha fazla baska aygjta, örnegin bilgisayarlara iletmek için bir iletisim arayüzü içerebilir. Örnegin, iletisim› arayüzü› bir seri port, bir~ USB port, bir paralel port, bir kHsa mesafeli kablosuz iletisim› arayüzü, örnegin bir kEzDlötesi (örnegin IrDa) port, bir Bluetooth alJCD-vericisi ya da benzerlerini içerebilir. Arayüz devre10 sistemlerinin diger örnekleri bir ag kartj, bir DSL modem, bir ag geçici bilgisayarE, hücreli telekomünikasyonlar için bir kablosuz iletisim devresi ya da benzerlerini kapsamaktadEr. Çtkts aygttlarlntn yine baska örnekleri bilgisayar taraflndan okunabilir bir ortama, örnegin bir disk sürücüye, bir hasza kartD arayüzüne ve/Veya benzerlerine verileri yadermak için aygEtlar ya da devre sistemi içermektedir. Örnegin, bilgisayar tarafjndan okunabilir verileri islemek için veri isleme sistemi, iletisim› arayüzüne erisime sahip olan bir sunucu bilgisayar` ya da baska veri isleme sistemi içerebilir. Bazj uygulamalarda, burada tarif edilen risk hesaplama sisteminin fonksiyonelligi çok sayEda bilgisayar arasünda, örnegin bir bilgisayar agJ, örnegin yerel bir alan agj, genis bir alan agü, internet ya da benzerleri vasDtasEyla baglanan bilgisayarlar arasJnda dagUtJlabilir.

Giris aygHtl verileri almak için uygun her türlü ayglt ya da devre sistemini, örnegin bir kullanücj arayüzü, örnegin bir klavye, bir grafik kullanücj arayüzü, bir isaret aygEtJ ve/Veya benzerlerini içerebilir. Giris aygEtlarÜnJn diger örnekleri burada tarif edildigi gibi iletisim arayüzlerini ve bir saklama ortamtndan verileri okumak için cihazlaml ya da devre sistemini, örnegin bir disk sürücü, bir haflza kartl okuyucu ve/veya benzerlerini içermektedir. ÖRNEKLER Örnek 1: suPAR, HIV enfekte hastalarda düsük dereceli inflamasyon ve metabolik sendromun (dismetabolizma) bir isaretçisidir.

HAART terapisi alan HIV enfekte bireylerin son zamanlarda dismetabolizma gelistirdigi saptanmüstjr, dismetabolizma enfekte olmamjs bireylerde görülene benzer olan fakat daha kEsa bir zaman çerçevesi içerisinde görülen bir metabolik sendrom formudur. HIV hastalaml üzerindeki asagldaki çallsma, suPAR'tn metabolik sendrom için bir isaretçi olarak faydastm ortaya koymaktadjr ve bu isaretçinin bu hasta grubunda metabolik sendrom için IL-6 ve TNF-d isaretçilerinden daha10 güçlü bir kestirim gücüne sahip oldugunu göstermektedir.

Hasta gruplarj. HAART terapisinde 36 HIV-enfekte erkek hastadan olusan bir grubun gece boyunca aç karna suPAR degerleri tahmin edilmistir (Andersen et al., 2003, Metabolism bir isaretçisi olan lipodistrofili (LIPO) 18 hasta ve bir klinik arastErma ve bir anketle ortaya konulan sekliyle herhangi bir metabolik sendrom belirtisi olmayan (NONLIPO) 18 hastadan olusmaktadEr, bunlarün her ikisi Andersen et al., hastalar incelemeden en az 12 ay önce HAART almEs, sabit bir agjrlükta olmus ve üç aylük inceleme boyunca herhangi bir akut enfeksiyon vakasE yasamamüstjr. NONLIPO (Siyah AfrikalE) dEsEnda tüm katjljmcjlar beyaz Erka mensuptur. Denekler yazEl] bilgilendirilmis onani vermis ve protokol Danimarka, Kopenhag Etik. Komitesi taraandan onaylanm.ß ve Helsinki Deklarasyonu ll'ye uygun olarak gerçeklestirilmistir.

Protokol: Glikoz izleme teknigi ve dolaylj kalorimetri içeren hiperinsülinemik (40 mU mr2 dak"H öglisemik ( klemplerden elde edilen veriler, Haugaard et al. 2005, Eur J. ve 18 NONLIPO hastadan insülin duyarlHllgl (Rd) ve oksidatif olmayan glikoz bosaltjm hDzEnDn (NOGM) tahminlerini saglamEstDr. HAART terapisinde bes enfekte erkek hastada, gece boyunca aç kaldjktan sonra sabah 08:00'da baslayarak 24 saat boyunca 20 dakikalik periyotlarla (6 Hd/saat) sürekli olarak venöz kan allnarak sirkadyan plazma suPAR düzeyi belirlenmistir. Örnekler' bir kateterden (sol antekubital ven içerisinde yerlestirilmis) korunmamüs test tüplerine alünmjs ve 25°C'de 1 saat boyunca thtElasmaslna izin verilmis ve bundan sonra 4°C'de santrifüj uygulanmEstEr. Serum sonraki analizler için -80°C'de saklanmlstlr. Bu 5 hastaya 09:00, saatlerinde atjstjrmaljk verilmistir. 22:30 yatEs zamanEndan önce uyumalarüna izin verilmemistir. Hastane alanj içerisinde10 dolanmalarüna izin verilmis, fakat egzersiz yasaklanmEstEr.

Stabil HAART terapisinde HIV-enfekte hastalarda plazma suPAR'En idrar suPAR ile iliskili olup olmadEgjnJ test etmek için, HIV` negatif bireylerde önceden ortaya konuldugu üzere 24'ünden olusan bir alt örnekten gece boyunca aç karna idrar allnmüstEr. Idrarün dilüsyonda suPAR üzerindeki farklüljklarjnün etkisi, önceden tarif edildigi gibi kreatinin miktarE ile iliskilendirilmistir (Sier et al., 1999, Lab suPAR ölçümü: suPAR düzeyleri ELISA testi ile asagüdaki gibi belirlenmistir: Nunc maxisorp ELISA plakalarE (Nunc, Roskilde, Denmark) gece boyunca 4°C'de monoklonal anti rat anti-suPAR antikoru (VG-l, ViroGates A/S, Copenhagen, Denmark, 3 mg/ml, 100 ml/kuyucuk) ile kaplanmtstkr. Plakalar PBS tampon +- % 1 BSA ve % 0.1 TweenZO ile oda sücakljgünda 1 saat bloke edilmis ve 0.1 Tween20 içeren PBS tamponla 3 kez yJkanmjstJr. 1. 5 mg/ml fare-anti suPAR-HRP etiketli antikor (VG-Z-HRP, ViroGates) ve 15 ml plazma (ya da idrar) örnegi içeren 85 ml dilüsyon tamponu (100 mm fosfat, 97. 5 mm NaCl, 10 g L*l bovin serum albümin (BSA, Fraction V, Boehringer Mannheim, Penzberg, Germany), 50 U nürl heparin sodyum tuzu (Sigma Chemical Co., St. Louis, MO), % 0. l (h/h) Tween-20, pH '7. 4) iki kopya halinde ELISA plakaya eklenmistir. 37°C'de 1 saat inkübasyondan sonra, plakalar 10 kez PBS tampon + % 0.1 Tween20 ile W kanmts ve 100 ml/kuyucuk HRP substrat eklenmistir (Substrate reagent pack, R&D Systems Minneapolis, Minnesota). Renk reaksiyonu 50 Hd/kuyucuk lM IhSO4 kullanarak dakika sonra durdurulmus 450 nm dalga boyunca ölçülmüstür.

Test için varyasyon % 9.6 ve testler arasj varyasyon % 12.4 olmustur. Aç karnHna plazma suPAR, HAART terapisindeki 36 HIV- enfekte hastanHn hepsinde ölçülmüstür.

Diger Testler: Plazma glikoz, insülin, C-peptid, serbest yag asitleri, kolesteroller, immünolojik ve hematolojik10 parametreleri içeren trigliserit ölçümü tarif edildigi sekilde gerçeklestirilmistir (Andersen et al., 2003, Metabolism 52: E1072-E1080). Vucut kompozisyonu çift enerjili x-ray absorpsiyometre (DEXA) tarama (XR- 36; Norland Medical System, Fort Atkinson, WI) vasütasEyla tahmin edilmis ve bölgesel yag dagElDm] önceden tarif edildigi gibi belirlenmistir (Andersen Hesaplamalar: Total glikoz bosaltma hHzl (Rd), etiketli glikoz infüzatlarü için adapte edilen Steele kararlj olmayan hal esitlikleri kullanarak hesaplanmüstjr (Hother-Nielsen et al., ZOO-ml/kg olarak ve havuz fraksiyonu 0.65 olarak alEnmEstDr.

Glikoz oksidasyon hJzU (GOX) dogrulanmJs esitliklerden NOGM, Rd ve GOX arasündaki fark olarak hesaplanmEstEr.

Istatistiksel analiz: Veriler ortalama ± SEM ve medyan olarak ve dagElÜmlar çarpjk oldugunda çeyrekler açEklEgE olarak sunulmaktadLr. LIPO ve NONLIPO arasJnda verilerin dagUlLanJ karsHlastHrmak için varyans analizi (ANOVA) gerçeklestirilmistir. NONLIPO yask ile karsHlastHrlldHglnda LIPO yasD bir miktar yüksek oldugundan, kismi korelasyonlarjn hesaplanmasE yoluyla ayarlanmüstEr. Veri dagDlEmDnJn çarpük olmasü durumunda, veriler ANOVA uygulanmadan önce log dönüstürme islemine tabi tutulmustur. Degiskenler arasJndaki iliskileri hesaplamak için uygun oldugunda Pearson korelasyon katsaytst (r) ve Spearman korelasyon katsaylst (p) uygulanmEstEr. Dismetabolik parametreler için açDklayEcE bir degisken olarak suPAR'Jn gücünü test etmek için lineer bir kademeli çoklu regresyon modeli kullanDlmJstJr. Hesaplamalar SPSS programi ile gerçeklestirilmistir (SPSS ver. 12. O; SPSS degerleri istatistiksel olarak anlamli olarak tanEmlanmjstDr.

P degerinin 0.05'ten büyük ya da esit olmasj fakat 0.2'den10 Sonuçlar: A. inflamasyon ve ve Tablo 2). bununla birlikte yas iliskilidir: suPAR yasla önemli bir arasündaki karsElastErmalar yas suPAR düzeyleri, metabolik Medyan hastanEn tamamünda ölçülebilir olmustur pozitif sendromla korelasyon küçük olmasE halinde bir egilim kaydedilmistir. için. düzeltilmistir karsülastDrEldDgEnda LIPO'da 2 kat yükselmistir HIV hastalarEnda düsük dereceli medyan plazma suPAR düzeyi 2.52 ng/ml olacak sekilde 36 sergilediginden çalEsma. gruplarE ve korelasyon analizleri için ayarlamadan sonra fark azalmJstÜr (Sekil 1, Tablo 1).

Tablo 1” ÇalEsma gruplarEnda antropometri, lipidemi, insülin duyarlLlLgU ve immünoloji Total yag kütlesi (kg) 16 (1) 13 (2) 0.13 Total yagst doku kütlesi61 (2) 54 (2) fP-glikoz (mmol/L) 4.9 (0.1) 4.8 (0.1) ns Hemoglobin (mmol/L) 8.8 (0.2) 8.6 (0.2) ns HIV-enfeksiyon süresi (ay) 99 (14) 72 (11) ns PI terapi süresi (ay) 32 (4) 25 (4) 0.16 biçimde CDC sînîflandîrma: numara6/6/6 4/5/9 ns Ortalama (SBM) ya da Hßdyan (çeyrekler aç3k13g3); P<0.05; M P<0.0l; C, P<0.00l, yas (yil) için ayarlamadan sonra; #, P=0.06 yas için ayarlamadan sonra; Kol yagü (%), (kol yag kütlesi + gövde yag kütlesi)/ gövde yag kütlesi; Rd, glikoz izleme teknigi kullanarak bir hiperinsülinemik öglisemik klemp taraandan tahmin edilen sekliyle glikoz bosaltlmHdlr, Rd minus GOX (glikoz oksidasyon hDzE) oksidatif olmayan metabolizma hüzEdÜr (NOGM). fP, aç karnüna plazma; CDC sEnEflandDrmasD: HastalEk Kontrol ve Önleme (CDC) merkezinin sLnLflandUrma sistemine göre A, B ve C klinik evreleri seklinde kategorize edilmistir, burada C, ifadesi AIDS tanlsHnl göstermektedir.

LIPO hastalarE ortalamada NONLIPO hastalarjndan bir miktar daha yasljdjr ve artmEs bir yag dEsj Vücut kütlesine baglanabilen bir miktar daha yüksek BMI degerine sahiptir, diger yandan toplam yag kütlesi çaltsma gruplarH arastnda önemli ölçüde farklth k göstermemistir (Tablo 1). Kol yaglnln oranü, LIPO hastalarjnda lipodistrofi ile tutarlE sekilde NONLIPO ile karsjlastjrüldjgünda LIPO hastalarjnda önemli ölçüde azalmjstjr. Bunlarjn aç karnjna glikozu normal olmasEna karsün, LIPO hastalarjnda çesitli dismetabolik özellikler belirgin olmustur. LIPO hastalarH, NONLIPO ile karsHlastHrtldHgtnda hem oksidatif hem oksidatif olmayan yolda düsük insülin stimüle glikoz kullanEmÜ sergilemistir. Aç karnDna insülin, HDL düsE kolesterol, total lökosit, lenfosit ve monosit sayümlarü LIPO hastalarEnda artmjstür. Plazma TNF-d ve plazma IL-6 LIPO hastalaründa yükselmistir, bununla birlikte farklar istatistiksel olarak anlamll olmamtstHr. HIV enfeksiyonunun süresi, HAART süresi ve CD4 hücre saylsl çalEsma gruplarü arasünda önemli ölçüde farklülEk göstermemistir. HIV-RNA, her iki çalEsma grubunda tamamen suprese edilmistir (Tablo 1). Hastaljk Kontrol ve Önleme (CDC) merkezinin sJnJflandDrma sistemine göre A, B ve C klinik evreleri seklinde kategorize edilen hastalar (burada C, ifadesi AIDS tanDsEnE göstermektedir), LIPO ve NONLIPO hastalar arasEnda önemli farklElelar ortaya koymamEstEr Tüm LIPO ve NONLIPO hastalarü HAART'Dn parçasE olarak nükleosit revers transkriptaz inhibitörleri (NRTI) ile tedavi edilmistir; bunlar sürasüyla: lamivudin (% 83, % 83), zidovudin (% 39, % 50), stavudin (% 56, % 39), ve didanosin (% 6, % ll). LIPO ve NONLIPO hastalarünün % 89'u taraflndan HIV-1 proteaz inhibitörleri (PI'ler) kullanllmHstlr, yani strasHyla indinavir (% 44, % 22), ritonavir (% 22, % 39), nelfinavir (% 22, % 22) ve sakuinavir (% l7, % 11).

Tek degiskenli korelasyon analizi, asagüdaki parametrelerle iliskilendirilen suPAR'Dn dismetabolizma ile iliskili oldugunu ortaya çLkarmLstLr: l) suPAR, tüm hastalarda yastan baglmsHz olarak yag daglleH, insülin duyarllegE ve lipidemi ölçümleriyle son derece anlamlE sekilde iliskilendirilmistir (n=36, sekil 2 've Tablo 2) suPAR, temel bir inflamasyon aracLszla suPAR'J baglayan TNF-d ile güçlü ve pozitif bir biçimde iliskilendirilmistir. suPAR'kn sastrtlct bir biçimde yag dagllel, insülin duyarlElEgü ve total kolesterol bakDmEndan TNF-d'ya göre daha güçlü bir tahminci oldugu saptanmEstEr (Tablo 2 ve Tablo 3). 3) suPAR, hastanIn immün aktivasyonu ve inflamatuvar durumu için öneme sahip olan kan hücreleriyle iliskiyi saptayan lökositler, lenfositler' ve monositlerle pozitif' bir biçimde iliskilendirilmistir (Tablo 4).

Tablo 2. Yag dagElEmÜ, insülin duyarlülEgD, lipidemi ve immünoloji parametreleri ve suPAR arasEnda lineer korelasyon katsayElarÜ n = 36 suPAR r-degeri P Kol yag_ (%) -O.48 Vücut kütle indeksi 0.19 ns Toplam yap kütlesi (% BW) 0.11 ns Rdmaw -O.58 <0.001a NOGMklemp 0.66 <0.00l b GOXkiemp 0.03 ns fP-Insülin 0.58 <0.001 b fP-glikoz .0.11 ns Non-HDL kolesterol 0.51 <0.005 a Trigliserit 0.22 0.19 CD4 0.06 ns HIV-enfeksiyon süresi 0.20 ns NRTI terapi süresi 0.07 ns PI terapi süresi 0.14 ns Nadir CD4 .0.20 ns HIV-RNA doruk -0.24 0.17 Tablo 1'de kîsaltmalar verilmektedir; 5, P<0.05; b, P<0.01 yas (yjl) için ayarlamadan sonra; suPAR, trigliserit, TNF-d, IL-6 ve HIV-RNA doruk degeri, bu parametrelerin normal bir dagElDmJnD elde etmek için log dönüstürme islemine tabi tutulmustur Tablo 3. Yag dagTlFmH, insülin duyarlHlFgH, lipidemi ve immünoloji parametrelerine karsrlrk TNF-d ve IL-6 arasînda lineer korelasyon katsayülarE n=36 TNF-d r-degeri P IL-6 P r-degeri Rdkiemp -0.25 0.15 -O.l3 ns NOGMKMmp -O.17 ns -O.33 <0.05 Total 0.44 <0.0l a 0.14 ns kolesterol Kolesterol Tablo 1'de krsaltmalar verilmektedir; 3, P<0.05; C, P<0.00l yas (yîl) için ayarlamadan sonra; TNF-d, IL-6, trigliserit ve CD4'teki nispi artîs, bu parametrelerin normal bir dag-l_m_n_ elde etmek için log dönüstürme islemine tabi tutulmustur Tablo 4. Immün ve inflamatuar cevabjn aktivatörleri olan suPAR ve kan hücreleri arasEnda tek degiskenli korelasyonlar (Spearman p) n=36 P suPAR ve asagFdakiler arasFndaki korelasyonlar: Lökositler 0.48** Nötrofiller 0.18 Lenfositler 0.51** Monositler 0.34* suPAR'En dismetabolizmanün temel parametrelerinin saglani bir isaretçisi oldugunu ortaya koymak için çoklu regresyon analizleri yapjlmjstEr. Oksidatif olmayan glikoz metabolizmasj, suPAR, yas, TNF-d, IL-6, aç karnüna trigliserit ve HDL düsü kolesterolün dahil edildigi bir modelde suPAR ile güçlü bir biçimde iliskili olarak kalmlstlr (R?:O.43, P<0.00l).

HDL djsj kolesterolün varyasyonunun çogunlugu, yine yas, TNF-d ve IL-6'nEn açEklayEcÜ degiskenler olarak dahil edildigi bir modelde aç karnüna trigliserit ve suPAR tarafündan açlklanabilmistir (R2=0.69, P<0.000l). Bunun yanj sEra, suPAR, suPAR, yas, TNF-d ve IL-6'yJ kapsayan bir modelde anlamlJ bir Rd isaretçisi olarak kalmHsttr (R2=O.33, P<0.00l).

Sekil 3, aç karnüna plazma suPAR. ve idrar suPAR'Jn, stabil HAART terapisinde HIV-enfekte hastalarda son derece iliskili oldugunu göstermektedir. Idrar suPAR'En plazma suPAR'En saglam bir tahmini oldugu gösterildiginden, suPAR'Dn düzeyi bu bireylerden idrar ve aynU zamanda plazma örneklerinde gerçeklestirilebilir. Idrar kreatinin için düzeltilen idrar suPAR'En, önceden sagljklj bireylerde plazma suPAR ile pozitif ve güçlü bir biçimde iliskilendirildigi ve idrar suPAR'da günlük degisimlerin küçük oldugu gösterilmistir (Sier et al.

Mevcut veriler, stabil HAART terapisinde HIV enfekte hastalarda suPAR'ln plazma konsantrasyonundaki sirkadyen degisimlerin szEtlD oldugunu göstermektedir (Sekil 4).

Sonuç: Bu veriler, dismetabolik özelliklerin bir kümesini sergileyen HAART terapisinde HIV enfekte hastalarün, eslenmis lipodistrofik olmayan HIV enfekte hastalarla karsülastDrEldDgEnda nispeten yüksek suPAR'E olanlar oldugunu göstermektedir. suPAR düzeylerinin slraslyla beyaz kan hücreleri sayüsj, TNF-d, yag dagElDmj, insülin duyarlÜlEgD ve lipidemi ile güçlü bir biçimde iliskilendirilmesi, suPAR'Dn bu hastalarda immün olusum ve metabolizma arasünda önemli bir baglant] oldugunu vurgulamaktadEr. Mevcut veriler, suPAR'Jn bu hasta grubunda TNF-d ve IL-6'dan daha güçlü bir metabolik sendrom isaretçisi oldugunu göstermektedir.

Mevcut örnekte gözlenen suPAR ve TNF-d arasEndaki güçlü pozitif korelasyon, suPAR'Ün stabil HAART rejiminde HIV- enfekte hastalarda düsük dereceli inflamatuvar durumun yeni bir isaretçisi oldugunu ve bu nedenle bu durum için tanLsal bir araç oldugunu göstermektedir. Bunun yanH stra, mevcut çaltsmada, suPAR'tn kendileri düsük dereceli inflamasyonun isaretçileri ve efektörleri olan lökositler, lenfositler ve monositlerle pozitif bir biçimde iliskilendirildigi gözlenmistir. Bu kan hücrelerinin hücre yüzeyinde uPAR'Dn yogunlugu yüksektir ve plazma suPAR'Jn çogunlugunun, mevcut verilerle tutarh' olacak sekilde bu hücrelerden kaynaklandtgl düsünülmektedir. Önceki epidemiyoloji çalEsmalarÜ total lökosit sayümj ve lenfosit sayÜmJnDn, insülin direnciyle ters bir biçimde iliskilendirildigini ve diyabet tip 2 gelistirme riskindeki bir artHsla baglanUlll oldugunu göstermistir. Immün sistemin kronik aktivasyonunun, tip 2 diyabetin patojenezinde bir rol oynayabildigi ileri sürülmektedir. Mevcut LIPO/NONLIPO HIV çalEsmasEndaki veriler, suPAR'En hem düsük dereceli10 inflamasyon hem de metabolik sendromun yeni bir isaretçisi oldugunu göstermekte ve düsük dereceli inflamasyonun metabolik sendromun ve dolayüsüyla da HIV hastalarEnda tip 2 diyabet ve kardiyovasküler hastalHklar gibi metabolik sendromla iliskilendirilen hastaljklarjn gelisiminde itici bir faktör oldugu sonucunu desteklemektedir. Örnek 2. suPAR, saglüklE bireylerde tahmin degeri tasEr suPAR düzeylerinin toplam yasam beklentisinin bir tahmincisi oldugu gösterilmektedir. arasünda, Danimarka Glostrup Üniversite Hastanesi yakjnünda yasayan popülasyondan rastgele olarak seçilen 30, 40, 50 ya da 60 yaslarEnda 4807 birey, popülasyon arastjrmasjna katElmak birey yeniden davet edilmis ve 2656'sL gelmis ve sonraki arastHrmalara katHlmts ve kan vermistir. 1993/94 ylllarlndan 2605 plazma örnegi bu çalüsma için uygun olmustur. suPAR ölçümü: suPAR, Örnek 1'de tarif edildigi gibi suPARnosticTM kit (ViroGates, Copenhagen, Denmark) kullanarak ölçülmüstür. KJsaca, söz konusu kit yakalama monoklonal antikorla önceden kaplanan bir ELISA plaka içermektedir.

Protokole göre, örnek dilüsyon tamponuna bir HRP etiketli saptama monoklonal antikor eklenmistir. Daha sonra 25 ml plazma örnegi 225 ml dilüsyon tamponu ile karüstjrülmjs ve 100 ml numune (çift kopya halinde) ELISA plakanjn kuyucuklarjna alJnmUs ve bir saat boyunca inkübe edilmistir. ELISA, plaka daha sonra ylkanmls ve sonra 20 dakika boyunca 50 ml substrat eklenmis ve reaksiyon 50 ml 0.5M HZSO4 ile durdurulmustur.

Plakalar 450 nM'de ölçülmüstür. Kitin test içi varyasyonu 6 ölçülmüstür. Kit standart egrisi, suPAR düzeylerinin 0.6 ila 22.0 ng/ml araslnda ölçmek için dogrulanmtstHr. Üç örnek dogrulana arallgHn altHnda (2) ya da üzerinde (1) suPAR düzeyi vermis ve sonuçlardan çEkartElmEstür.

Istatistiksel analiz: SagkalEm, tek degiskenli ve çok10 degiskenli Cox regresyonu ve Kaplan-Meier analizi kullanarak analiz edilmistir. Gruplar arasündaki farklar Mann-Whitney testi kullanarak analiz edilmistir. Analiz için istatistiksel yaztllhi SPSS, versiyon 13 kullanllmtstlky < 0.05'lik bir p degerinin anlamlE oldugu düsünülmüstür.

Sonuçlar: Toplam sagkalÜm3n bir tahmincisi olarak suPAR düzeyleri: 2602 bireyde medyan suPAR 4.03 ng/ml plazma olmustur (aralEk 1.3 - 19.9). Supar düzeyleri yasla birlikte artmüs ve erkeklerle karsHlastHrLldHglnda (N: 1310, medyan suPAR 3. 84, aralHk 1. 3 - 17. 8) kadEnlar arasEnda daha yüksek olmustur (N=1292, Toplani sagkalEnn > 10 yEllEk takip çalüsmasü sjrasünda, 391 birey ölmüs ve l3'ü takip çaljsmasjnda izlenememistir. Cox regresyon analizi kullanarak, yüksek suPAR, takip çalismasJ skrasHnda artmls mortalite riski ile önemli ölçüde iliskilendirilmistir (N=2602, her ng suPAR artESE için 1. 31) sagkaltmla iliskilendirilmistir.

Tek degiskenli ve çok degiskenli analiz: Sagkallmla iliskilendirilen diger isaretçiler yas (her yas için RH = (erkeklerle karsHlastHrmalll olarak, kadHnlar için RH=0. 613, güven aralHgl % 95: 0. 50-0. 75) olmustur. Tek degiskenli analizde anlamlj olan tüm isaretçiler çok degiskenli analize dahil edildiginde, suPAR anlamlü ve baglmsüz bir mortalite tahmincisi olarak kalmüstEr (Tablo 5, her ng suPAR artjsj için Tablo 5: Yasa göre ayarlanan çok degiskenli analiz Esitlikteki degiskenler Wald Sig. Exp(B) için % 95.0 güven Kaplan-Meier analizi: suPAR'Hn sagkallm. üzerindeki etkisini görsellestirmek için, suPAR degerleri esit olarak boyutlandDrElmDs 3 gruba ayrDlmjstjr; bir düsük suPAR grubu (N=, bir orta suPAR grubu aralük 4.57 - 19.,4). Kaplan-Meiera analizi, 3 grup arasjnda sagkaltmda önemli farkltlHklar ve artan suPAR düzeyleriyle artan mortalite ortaya koymustur (p<0. 001). Benzer sekilde, bu durum 4 gruba ayrüldEgünda da geçerli olmustur (Sekil 5).

Sonuç: Belirgin bir biçimde sagljklü bireylerde suPAR düzeylerinin, diger isaretçilerden bagEmsDz olarak mortalite ile güçlü bir biçimde iliskilendirildigi ortaya konulmaktadtr. Çok degiskenli analizde elde edilen Wald degerine göre (Tablo ), suPAR, yastan sonra ikinci en güçlü mortalite isaretçisi olmustur. Dolayjsüyla, belirli bir yas, cinsiyet ve sigara içme durumu için, suPAR mortalite riskini önemli ölçüde tahmin etmektedir. Örnek 3. Müdahalenin efikasitesi için bir isaretçi olarak Bu örnek, suPAR düzeyleri ve dolaylsüyla bir bireyin tahmin edilen hastalük riski üzerinde yasam tarzEna müdahalenin etkisini ortaya koymaktadür.

Popülasyon grubu: Yukarüda Örnek 2'de tanÜmlandDgE gibi MONICA grubu.

Metotlar: suPAR, Örnek 2'de tarif edildigi gibi ölçülmüstür.

Istatistikler: Gruplar arasündaki karsElastErma, Mann-Whitney testi kullanarak yapElmDstJr. Sagkalüm, Cox regresyon analiz kullanarak analiz edilmistir.

Sonuçlar: suPAR, bir bireyin sigara içme allskanlügj ve hem sigara içenler hem de içmeyenlerde sagkaljm ile önemli ölçüde degil ve 106'sE ara slra içicidir. Sigara içenler, sigara içmeyenler` ve ara sEra içenlerle karsjlastjrjldjgjnda önemli ölçüde daha yüksek suPAR düzeylerine sahip olmustur (her ikisi p>0.001). Sigara içmeyenler ve ara süra içenler arasEnda suPAR düzeylerinde farklEle bulunmamEstDr (p=O. 7).

Erkekler arasHnda sigara içme ve suPAR düzeyleri: Erkek sigara içiciler, tüm yas gruplarE için sigara içmeyenlerle karsülastDrEldDgEnda daha yüksek suPAR düzeylerine sahip olmustur (p<0.001, Sekil 6A). Erkek sigara içiciler arasEnda (N=580), 133'ü takip çaljsmasj sErasÜnda ölmüstür. suPAR, sagkalLmla önemli ölçüde iliskili olmustur (Cox regresyonu RH: içicilerden (N=674), 100'ü takip çalüsmasü sürasEnda ölmüstür. suPAR, sagkaljmla önemli ölçüde iliskili olmustur (RH: 1. 73, içerken 6'sL takip çalUsmasU sUrasLnda ölmüstür. RH: 2.16, % 95 güven araltgH: O. 88 - 5. 30).

Kadtnlar arasHnda sigara içme ve suPAR düzeyleri: KadHn sigara içiciler, tüm yas gruplarE için sigara içmeyenlerle karsülastDrEldDgEnda daha yüksek suPAR düzeylerine sahip olmustur (p<0.00l, Sekil 6B). Kadün içiciler (N=511), ara sEra içen kadUnlardan önemli ölçüde daha yüksek bir suPAR'a sahip olmustur (N: 56) (p<0.001), Mann-Whitney. Kadln sigara içenler arasHnda ortalama suPAR (std 1.38), ara slra içen kadßnlarla (ortalama 3.99 ng/ml) karsElastErEldEgEnda 5.11 olmustur.

Ara süra içenler (N=50) ve hiç içmeyenler (N=731) arasjnda suPAR düzeyinde herhangi bir fark gözlenmemistir, Mann-Whitney p=O.79. Kadlm içicilerin suPAR degeri daha yüksek olmustur (ortalama 5.11 ng/ml, std 1.38), bu deger içmeyenlerde daha içiciler için Cox regresyonu, suPAR'jn sagkalEmla önemli10 ölçüde iliskili oldugunu göstermistir. 511 kadündan 72'si takip çalEsmasE sErasDnda ölmüstür. Yüksek suPAR düzeyi, azalan sagkaljmla iliskilendirilmistir, RH=1.26, % 95 güven aralHgt, 1.10 - 1.45.

Sigara kullanmayandan 731 kadEndan 73'ü takip çaljsmasj sErasÜnda ölmüstür. Yüksek suPAR düzeyi, azalan sagkalümla iliskilendirilmistir, RH=1.21, % 95 güven aralÜgJ, 1.11 - 1.31. Ara sEra içeren 50 kadEndan 5'i takip çaljsmas] Egzersiz ve suPAR: MONICA grubundaki tüm. bireylere egzersiz aljskanlEklarE sorulmustur. Bireyler dört gruba ayrülmjstür; Grup 1, düzenli olarak egzersiz yapmadEgDnJ bildiren bireylerden olusmustur (N=539), grup 2, az ila orta düzeyde egzersiz yapan (yürüyüs yapan vs.) bireylerden olusmustur (N=1454), grup 3, düzenli olarak egzersiz yapan (örnegin jogging) bireylerden olusmustur (N:546) ve grup 4, profesyonel sporculardan olusmustur (N=17). Egzersiz yasa bagjmlj oldugundan, Sekil 6C, yasa göre farklj egzersiz gruplarj arasünda suPAR düzeylerini göstermektedir. 71 yasjndaki bireyler hariç olmak üzere tüm yas gruplaanda, egzersiz yapmayan bireylerle karsHlastHrtldHgtnda düzenli olarak egzersiz yapan bireyler için önemli ölçüde düsük suPAR düzeyleri gözlenmistir (tüm analizler için p<0.004). Yas ve cinsiyet için ayarlanan korelasyon analizi, egzersiz ve suPAR arasünda önemli bir negatif korelasyon ortaya koymustur Sonuç: suPAR'ln, yasam tarzHndaki bir degisiklikle degisen bir isaretçi oldugu gösterilmistir, yani sigara içmeyen ya da sigara içmeyi bjrakmjs bireyler, sigara içmeye devam eden bireylerden önemli ölçüde daha düsük suPAR düzeylerine sahiptir. suPAR, immün aktivasyonu tetikleyen çesitli hastallklart tarafindan yükseltilir ve burada yüksek bir suPAR düzeyinin yüksek mortalitenin tahmini oldugu gösterilmektedir. suPAR'En aynj zamanda egzersiz ve fiziksel zindelikle iliskilendirilen dinamik bir yasam tarz] degisikligi10 isaretçisi oldugu gösterilmektedir. Yüksek suPAR düzeyine sahip olan bireyler egzersizle kendi suPAR düzeylerini azaltabilir ve bu da yasam beklentilerini uzatür ve bu durum 71 yas altH tüm bireyler için önemli olan bir gözlemdir. Örnek 4: suPAR, kardiyovasküler hastaljgjn (CVD) gelisimi için bir risk isaretçisidir CVD, dünyada en yaygün hastalük nedenidir. Örnegin, Isveç'te, bulasüc] olmayan durumlar tüm ölümlerin % 83'ünü meydana getirir; toplani ölümün % 41'i kardiyovasküler* hastalEklardan (CVD), % 26'âl kanserden ve yaklaSlk % 7'si dls nedenlerden (kasütlj ve kasütsEz yaralanmalardan) kaynaklanjr.

Popülasyon grubu: Örnek 2'de tanjmlanan MonicalO grubu.

Metotlar: Örnek 2'deki suPAR ölçümü.

Istatistikler: Ölüme kadar geçen süre için Kaplan Meier tahmincisinin bir eksigi gösterilmektedir. Kümülatif görülüs skklHgL (bir olay yasama olaslllgl) CVD için gösterilmektedir.

CVD'nin kümülatif görülüs süklEgÜ, ölümden kaynaklanan ve diger nedenlerden kaynaklanan üç rekabetçi neden olarak CVD ile bir rekabetçi risk modelinde tahmin edilmektedir. Tüm analizler, suPAR'Ln dagUlJmUnLn çeyreklerine göre tabakalJ olarak örneklenmektedir. Orijinal 2602 hastada çeyrek katoflar 4.910 ng/ml'dir (% 75). CVD olayDna iliskin takip çalüsmasü 31 Aralük 2001'e kadar analizler için mevcut olmustur.

Sonuçlar: Kan örnekleme anLnda, 208 birey zaten bir CVD yasamUstLr ve CVD gelistirme risk analizinden çHkartllmHstlr. Kan örneklemeden önce bir CVD yasayanlar, kan örnekleme an1ndan bir CVD yasamamEs olanlarla karsülastürEldügEnda daha yüksek suPAR düzeylerine sahip olmustur (Mann-Whitney, p<0.001).

Takip çalüsmasü slrasünda, 318 hasta bir CVD olayE gelistirmis, bunlardan 70'i bir akut miyokardiyal enfarktüs olmustur. suPAR› çeyreklerine göre bir CVD gelistirme riski, Sekil 7'deki rekabetçi risk modeli olarak gösterilmektedir. suPAR, CVD'nin bagDmsEz bir risk tahmincisidir: Çok degiskenli10 analizlerde, veriler toplam 2394 birey için analiz için mevcuttur* ve bunlardan 316'sÜ bir CVD olayE gelistirmistir.

Yas, cinsiyet, sigara içme durumu ve bel çevresi bilindiginde sürekli suPAR degerleri kullanllarak, suPAR CVD'nin önemli bir risk tahmincisi olarak kalmjstür (Tablo 6).

Tablo 6: Esitlikte CVD Degiskenleri gelistirme riskinin çok degiskenli analizleri Wald Sig. Exp(B) Exp(B) için % 95.0 m'iven ara 1_l gl LDL-kolesterol, tek degiskenli Cox analizlerinde bir CVD olayDnEn gelisme riski ile önemli ölçüde iliskilendirilmistir, bununla birlikte çok degiskenli analizlerde önemli bir CVD Tablo 7: LDL kolesterolü (mmol/l) içeren çok degiskenli analizler Q:) 0 .. rn'ivpn Metabolik sendroni aynj zamanda bagümsjz olarak CVD gelisimi ile iliskilendirilmistir. Modele metabolik sendrom dahil edildiginde, suPAR halen son derece önemli ve bagEmsDz bir baska CVD olay tahmincisi olarak. kalmEstÜr (Tablo 8'de çok degiskenli analizler).

Tablo 8. 2004 glikoz modifikasyonuyla NCEP ATPIII 2001 tanEmÜna göre tanEmlanan, metabolik sendromu içeren çok degiskenli analizler.

Wald Sig. Exp(B) Exp(B) için % 95.0 nüvpn araljüj sendrom Cinsiyet ve yasH kontrol eden kHsmi bir korelasyon analizinde, suPAR, vücut trigliseritler korelasyon sergilemistir ya da hiç sergilememistir gibi bilinen indeksi CVD risk risk isaretçileri arasjndaki küsmi korelasyon.

LDL-kolesterol isaretçileriyle suPAR ve cinsiyet ve yas için ayarlanan bilinen CVD Kontrol DnFîi Q'Lv'on'lnri CINSIYET VE YAS SuPAR (ng/ml) Korelasyon 1.000 AnlamlJle (2 uçlu) .

Düzenli sigara Korelasyon -.383 içme (evet ya da Anlamlîlîk (2 uçlu) .OOO df 2550 Beyaz kan Korelasyon .355 hünvnlavi Anlamllllk (2 uçlu) .000 df 2550 LDL-kolesterol Korelasyon -.003 Anlamljljk (2 uçlu) .896 df 2550 Trigliserit Korelasyon .097 AnlamlJle (2 uçlu) .OOO df 2550 Bel çevresi Korelasyon .027 Anlamljljk (2 uçlu) .172 df 2550 Sistolik kan Korelasyon .042 AnlamlJle (2 uçlu) .032 df 2550 Aç karnjna glikoz Korelasyon .081 Anlamlîlîk (2 uçlu) .000 df 2550 Sonuç. suPAR'Ün, belirgin bir biçimde saglEklE bireylerde bir CVD olayDnEn gelisiminin sasErtEcE bir biçimde güçlü ve bagEmsEz bir risk isaretçisi oldugu gösterilmektedir. Yas, cinsiyet, sigara içme durumu ve metabolik sendromdan bagHmst olarak, suPAR'daki bir 1 ng/mL'lik artjs, takip çaljsmasj sErasÜnda bir CVD gelistirmede % 15.4 artan bir riskle iliskilendirilmistir (% 95 güven aralEgD: 8.4 ila 22.8,P<0.001). SasürtEcD bir biçimde, suPAR CVD gelistirmenin klasik tahminçilerir ile iliskilendirilmemektedir` ya da zayüf bir biçimde iliskilendirilmektedir* ve bu duruni suPAR'ln CVD için bir risk isaretçisi olarak güçlü ve bagEmsDz rolünü güçlendirmektedir. Örnek 5: Plazma suPAR düzeyi, düsük dereceli inflamasyonun tanEsD ve Diyabet tip 2 gelisiminin bagümsEz bir tahmincisidir.

Diyabet gelistiren bireylerin saylsll (tip 2 (diyabet) son on yElle dönemlerde artmüstjr. AsDrE kilolu bireylerde daha yüksek bir diyabet prevalansE bulunmaktadür. Bununla birlikte, tüm asErÜ kilolu bireyler diyabet gelistirmemektedir.

DolayUsJyla, Vücut kitle indeksinden bagLmst olarak bir bireyin diyabet gelistirme riskini tahmin etmek için isaretçilere ihtiyaç bulunmaktadlr.

Popülasyon grubu: Örnek 2'de tanjmlanan MonicalO grubu.

Metotlar: Örnek 2'deki gibi suPAR belirleme; Metabolik sendrom, 2004 leD glikoz modifikasyonuyla NCEP ATPIII 2001'e göre tanUmlanmJstLr. Temel seviyede, 425 birey (% 16.3) metabolik sendrom yasamtstlr.

Sonuçlar: MonikalO grubunun kan örnekleme zamanlnda, 34 bireyin ICD-8 ve -10 kodlarjna göre diyabetli oldugu teshis edilmistir. Bu bireyler, dahil etme zamanünda diyabeti olmayan kimselerle karsülastürjldügjnda önemli ölçüde daha yüksek suPAR düzeylerine sahip olmustur (Mann-Whitney, p<0.00l).

Takip döneminde, önceden diyabet 1 ya da II teshisi konulmamls 2568 bireyden 65'i diyabet gelistirmeye devam etmistir.

Medyan suPAR'a dayalD olarak orijinal grup (2602 birey) 210 gruba ayrEldDgEnda, medyanün üzerinde suPAR düzeylerine sahip olan önemli ölçüde daha fazla birey, diyabet gelistirmeye devam etmistir (log rank testi, p<0.001, ters Kaplan Meier çizimi, Sekil 8).

Diyabet riskinin çok degiskenli analizi: Sigara içme, diyabet gelistirme riski ile iliskilendirilmemistir. Tek degiskenli analizde, yüksek suPAR, yas (yaslj), cinsiyet (erkek) ve yüksek bir Vücut kitle indeksine sahip olunmasü diyabet gelistirmenin yüksek riski ile önemli ölçüde iliskilendirilmistir. Çok degiskenli analizde (Tablo 10), bu son faktörlerin hepsi diyabet gelistirme riski ile önemli ölçüde iliskili kalmüstEr.

Tablo 10. Diyabet gelisiminin tek degiskenli önemli tahmincilerinin çok degiskenli analizi Esitlikteki degiskenler Wald Sig. Exp(B) Exp(B) için % 95.0 güven aralJgJ Diyabetes mellitus gelisiminin tahmincisi olarak lökosit saylmH - suPAR'Hn gücü: Genel popülasyonda immün aktivasyon ve düsük dereceli inflamasyon için bir isaretçi olarak kabul edilen beyaz kan hücrelerinin (WBC), yani lökositlerin sayEsÜnJn, diyabetes mellitusun gelisimini önemli ölçüde tahmin ettigi gösterilmistir (Vozarova B et al., 2002, saylMl, hem tek degiskenli analizde (r=0. 34, P<0. 0001) hem de cinsiyet. ve yas için düzeltmeden sonra (kEsmi korelasyon r=0.35, P<0.0001) suPAR ile güçlü bir pozitif korelasyon ortaya koymustur. DolayDsEyla, suPAR, genel nüfus içerisinde immün aktivasyonu ve düsük dereceli inflamasyon için bir isaretçi olarak farzedilebilir. suPAR'ln Tablo 10'daki beyaz10 kan hücresi saylmü ile degistirilmesiyle, beyaz kan hücreleri her litre için her 109 beyaz kan hücresi için yas, cinsiyet ve metabolik sendromdan bagümsEz diyabetes mellitus gelistirme riskinde % 13 düzeyinde bir artHsla iliskilendirilmistir (% 95 güven aralEgE: % 0 ila % 26, P<0.05). Bununla birlikte, hem suPAR hem de beyaz kan hücresi degerleri aljndügjnda beyaz kan hücresi önemli olmamjstür (P=O.), diger yandan suPAR yükselmis bir diyabet gelistirme riski ile güçlü bir biçimde iliskili kalmüstjr (plazma suPAR'da her 1 ng/mL artüs için % 27, % 95 güven arallgl: % 13 ila % 43, P<0.0001). Dolaylslyla, suPAR, beyaz kan hücresine göre daha güçlü bir diyabet tahmincisidir.

Hüküm. Bu veriler, suPAR'Dn diyabet gelistirme riskinin bagEmsEz bir tahmin edicisi oldugunu göstermektedir. Yas, cinsiyet ve netabolik sendrom bilindiginde, suPAR'daki bir 1 ng/ml'lik artLs, diyabet gelistirmede % 28 artan, bir riskle iliskilendirilmistir (% 95 güven araltgl: % 15-43). Ek olarak, bu veriler, suPAR'En yas ve cinsiyetten bagjmsEz olarak beyaz kan hücresi sayEmE ile güçlü bir biçimde iliskili oldugunun kanEtÜn] saglamakta. ve böylelikle de genel nüfus içerisinde suPAR'L immün aktivasyonun ve düsük dereceli inflamasyonun bir isaretçisi olarak saptamaktadHr. 6.9 mM'nin üzerinde bir temel seviye kan sekeri düzeyine sahip olan ya da insülin kullanan bireyler dEsEnda, diyabet gelistirmeyle ilgili olarak suPAR'En önemli degismemistir. Örnek 6: suPAR, metabolik sendromun bir isaretçisidir Popülasyon grubu: Örnek 2'de tanLmlandJgU gibi MONICA 10 Metotlar: Örnek 2'deki gibi suPAR belirleme. Metabolik sendrom, 2004 yDlE glikoz modifikasyonuyla NCEP ATPIII 2001 tanEmÜna göre tanEmlanmDstJr (Grundy SM et al., 2005, da 1-5 bilesenine sahip olan seklinde tanlmlanan 2602 bireyin metabolik Slana. dagHl mii Tablo ll'de gösterilmektedir. 5 bilesen sunlardEr: Artmjs bel çevresi: Erkekler - 40 inç (102 cm)'ye esit ya da daha fazla ve KadEnlar - 35 inç (88 cm)'ye10 esit ya da daha fazla; Yükselmis trigliseritler: 150 mg/dL'ye esit ya da daha fazla; Azalmjs HDL (“iyi”) kolesterol: Erkekler - 40 mg/dL'den az, Kadinlar - 50 mg/dL'den az; Yükselmis kan bastncl: 130/85 nm1 Hg'ye esit. ya da. daha az; Yükselmis aç karna glikoz: 100 mg/dL'ye esit ya da daha fazla (önemis modifikasyonlarla birlikte Yetiskin Tedavi Paneli (NCEP) Adult Treatment Panel III (ATP III) tarafündan saglanan tanEma dayalj olarak).

Tablo 11: 2602 birey arasEnda metabolik sendrom ve suPAR degerlerinin daglltmH Metabolik sendrom bilesenlerinin Frekans Yüzde Ortalama suPAR aa.. la I lwpi/Mî \ O 748 29.2 3.97 4 136 4.6 4.65 39 0.4 4.80 Toplam 2602 100.0 Sonuçlar: suPAR düzeyleri, bir bireyde metabolik sendrom bilesenlerinin sayEsE arttjkça artar. Herhangi bir metabolik sendrom bileseni olmayan bireyler (O), bir ya da daha fazla bileseni olan bireylerle karsilastlrildlgßnda önemli ölçüde daha düsük suPAR düzeylerine sahip olmustur (Tablo 11 ve Sekil 9), p<0.001, Mann Whitney u testi. Bu, hem erkeler hem de kadEnlarEn için geçerli bir durum olmustur (Sekil 10). Tek degiskenli Pearson korelasyonunda, suPAR (log dönüsümü yapLlmLs), metabolik bilesenlerin artan sastLyla pozitif olarak iliskilendirilmistir (rzO. 17, P korelasyon yas ve cinsiyet için düzeltmeden sonra oldukça anlamlE kalmjstür (küsmi korelasyon r=0.13, P<0.0001).

Hüküm: suPAR, yal ve cinsiyetten bagÜmsEz olarak güçlü bir metabolik sendrom isaretçisidir. suPAR'En aynj zamanda artan bir aç karnHna glikozla önemli ölçüde iliskili oldugu da gösterilmistir (Tablo 9). Örnek 5'te, suPAR'Wn tip 2 diyabeti güçlü bir biçimde tahmin ettigini ortaya konulmustur. Bu gözlemlerden, suPAR'Ün güçlü bir insülin direnç isaretçisi oldugu çükartülmaktadjr ve bu da metabolik sendrom ve tip 2 diyabetes mellitusun altünda yatan nedendir. Örnek 7. Bir CVD bileseni olarak Iskemik Kalp Hastalügjnjn bir isaretçisi olarak suPAR suPAR'kn, bir CVD bileseni olarak slanlandlrllan Iskemik Kalp HastalEgEnDn (IHD) gelecekteki gelisiminin tahminci isaretçisi oldugu gösterilmektedir.

Popülasyon grubu: Örnek 2'de tanEmlandJgD gibi MONICA 10 Metotlar: Örnek 2'deki gibi suPAR belirleme.

Sonuçlar: Önceden IHD'si olmayan 2534 bireyden, 115'i takip çalEsmasE sürasEnda IHD gelistirilmistir. Çok degiskenli cox regresyon analizi, metabolik sendromun varljgünda ve cinsiyet, yas, sigara içme durumundan bagümsjz olarak 1 ng/ml suPAR artEsDnJn % 16.7 oranJnda artan bir IHD gelistirme riski ile iliskilendirildigini göstermistir (güven aralJgU 95: % 4.8 ila diyabet gelistirilmistir. Bu 9 birey analizden çEkartEldDgEnda, suPAR halen önemli ölçüde ve bagjmsüz olarak regresyon analizi: Yasa göre ayarlanan bir Cox regresyon analizinde, suPAR'daki bir 1 ng/ml'lik artHs, % 21'lik bir IHD riski artEsD ile iliskilendirilmistir (RH=1.21, % 95 güven aralDgE: 1. 09-1. 35) ve metabolik sendroni % 61'lik yüksek erkeklerle karsJlastJrUldJgUn kadJnlarda risk % 61 azalmUstJr (RH=0.39, güven araltgl % 95, O.25-O.60), sigara içenlerle karsHlastHrlldHglnda sigara içmeyenlerde risk % 33 azalmHstJr (her 10 mM artEs için) % 3.5 risk artEsJ olmustur (RH=1.035, güven aralügj % 95: 1.02-1.05).

Kaplan-Meier analizi: Kaplan-Meier analizi gerçeklestirmek için, bireyle, çallsmaya dahil olan 2602 bireyin medyan suPAR degerine dayalj olarak 2 gruba ayrjlmjstEr (4.03 ng) (Sekil 11).10 Hüküm: Bu sonuçlar, suPAR düzeyinin önceden bir AMI yasamayan bireylerde bir CVD bileseni olarak IHD gelistirme riskinin önemli bir tahmincisi oldugunu göstermektedir. suPAR, diger klasik IHD isaretçilerinden bagkmskz olarak OHD riskini tahmin etmistir. Örnek 8. CVD ya da Diabetes mellitus tip II gelistirme riskinin tahmini için algoritma Birisi suPAR olan faktörlerin bir kombinasyonu, CVD ya da Tip genis sayida insan denegin sonucunu ve bu hastallklar m_ her birini gelistirme riskini tahmin etmede en yüksek istatistiksel anlama sahip olan faktörleri tanEmlamak için kademeli geriye dogru mantüksal regresyondan yararlanjlmjstEr.

Tahmin etmenleri ya da kriterlerinin kombinasyonu, her bir denegin saglUk risklerini tahmin etmek için bir algoritma formunda uygulanabilen bir model saglamaktadHr.

Kademeli, geriye dogru regresyon analizi Asagüdaki tek degiskenli parametreler, gelecekte bir CVD gelisimi ile önemli ölçüde iliskilendirilmistir: suPAR (RH (RH=Risk oranL) ng artUs için 1.23 (% 95 güven aralLgU: 1. 18- alkol kullanjmü (her sise artjsü için RH 1.03 (% 95 güven aralUgL: 1.08-1.34)), kUrmJzU kan hücresi sayLmU (RH = 1.05 (% 95 güven arallgH: l.02-l.08)), metabolik sendrom varlHgl (RH güven aralEgE: 1.001-1.004)), Trigliseritler (her mmol/l artEs kan baslncH (Her si (Si baslnç birimi) artHsl için RH 1.04 (% 95 güven aralDgE: 1.03-1.06)), Sistolik kan basDncE (Her si (Si basEnç birimi) artEsE için RH 1.036 (% 95 güven araljgüz10 aralÜgE: 1.07-1.10)), Aç karnüna glikoz düzeyi (RH = 1.02 (% Çok degiskenli analiz: Tüm tek degiskenli önemli veriler daha sonra çok degiskenli bir analize girilmistir. Çok degiskenli analiz Tablo 12'de gösterilmektedir. Tablo 12'deki önemli faktörler daha sonra yeni birçok degiskenli analize girilmistir (Tablo 13). Farkll parametrelerin kan örneklemeden sonraki 8 yjl içerisinde CVD vakasjnü tahmin etme yetenegi, Sekil 12'de gösterildigi gibi aljcü islem karakteristik egrileri (ROC) kullanarak analiz edilmistir.

Egri altj alana (AUC) göre, yas, bunu takiben suPAR, gelecekte CVD gelistirmenin en iyi tahmincileri olmustur (Tablo 14). Çok degiskenli analizde önemli olan tüm parametrelerden elde edilen bilginin birlestirilmesi, gelecekte CVD gelistirmenin tahmin dogrulugunu iyilestirecektir. En yüksek AUC'u veren parametrelerin lineer kombinasyonunun tanjmlanmasj, Fisher Z transformasyonuna dayalU olarak Xiong et al., 2004, Med.

Decision Making; 24: 659-69 yaylnHndaki metot kullanarak gerçeklestirilebilir. Bu sekilde, kombine AUC'u arttlrmak için mevcut modelde algoritmaya ilave veriler ve aynD zamanda henüz kesfedilmemis parametreler eklenebilir ya da dahil edilebilir.

Bunun yanü sjra, mevcut olmamasE halinde modelden veriler çLkartLlabilir. Örnegin, aç karnLna glikoz verilerinin bulunmamasll halinde, model mevcut verilerle kullanHlabilir.

Modelin sonucu, % olarak risk olabilen ya da hesaplanan bir yas olarak bir risk çjktjsjdür (daha sonra hastanEn yasü ile karsülastDrElabilir). Riskin normalden daha yuksek olmasj halinde, hesaplanan yas bireyin yasündan daha yüksek olacaktir: Tablo 12: Tek degiskenli analizde CVD gelistirme riski ile önemli ölçüde iliskilendirilen parametrelerdeki her 1 birimlik degisim için çok degiskenli analiz.

Maid Sig. Exp(B) Exp(B) için % 95 güven aralîgî düzeyi Tablo 13. Tablo 12'den CVD ile önemli ölçüde iliskilendirilen parametrelerin çok degiskenli analiz.

Wald df Sig. Exp(B) Exp(B) için % 95 qüven ara1_g_ Tablo 14. Sekil 12'ye karsElÜk gelen veriler için egri altE Egri alt] alan Test Sonuç Alan Std. Asimptotik Asimptotik 95% Güven Degiskeni Hata(a) Siq.(b) aralrgr Alt sLnLr Üst sinir basîncî Örnek 9: CVD, Diyabet tip 2 ve/veya kanserin gelisimi ve/Veya mortalite riskinin bilgisayar destekle degerlendirmesi Bir hastanün, suPAR'En bir parametre oldugu belirli bir zaman aralDgE içerisinde mortalite ve/Veya CVD, kanser ya da tip 2 diyabet gelistirme riskinin degerlendirmesi için istatistiksel bir algoritmanln gelistirilmesi asagHda açlklanmaktadlr.

Hesaplama, bir Microsoft Excel elektronik çizelgesi gibi standart bir bilgisayar programEnda gerçeklestirilebilir.

Mevcut örnekte, söz konusu algoritma Örnek 2 ve 10'da açjklandEgD gibi MONICOlO grubundaki denekler için belirlenen ortak. degiskenlerin veri kümesine dayalHdJk' ve CVD, kanser, diyabet ve ölüme kadar geçen süreden olusan dört farklF son nokta için ayrE olarak uygulanmjstjr. Bu algoritma, Sagkaljm Analizi'nin istatistik alanEnda gelistirilen bir istatistik modeli olan Orantüsal Risk Modeli üzerine insa edilir. Temel Seviye Risk Fonksiyonu bir güç fonksiyonu olacak sekilde seçilir` ve Weibull dagHtllmlß olay zamanlarlm | verir. Temel alînan zaman ölçegi yastFr ve olay zamanlarî soldan kesiktir ve sagdan sansürlüdür.

Söz konusu algoritma, bir bireyin karakteristiklerinin bir fonksiyonu (burada bundan sonra “ortak degiskenler” olarak adlandErElacaktÜr) olarak belirli bir zaman içerisinde CVD, kanser ya da diyabet edinme ya da ölme riskinin ayrt tahminlerini olusturur. Bu risk tahminleri, modelden elde edilen ortak degiskenlerin tahmini etkileri asagEdaki ifadeye girilerek elde edilir: P = ]. -exp(-(exp(a*log(age+t))-exp(a*1og(age)))*exp(z*beta- burada a, b ve beta ifadeleri, En Büyük Olabilirlik Kestirimi kullanElarak sjrasEyla verilerin modele uydurulmasEndan elde edilen ortak degiskenlerin etkisi ve sekil ve ölçek parametrelerinin tahminleridir. ya da ölme riskinin tahmin edilebildigi bir bireyden (muhtemelen fiktif) ortak degiskenleri içermektedir. P ifadesi, bireyin t yEl içerisinde CVD, kanser ya da diyabet edinme ya da ölme olasElEgJdJr, “yas”, bireyin mevcut yasjdür ve 2 ifadesi olasHltgll hesaplamak için modele dahil edilen diger tüm ortak degiskenleri içeren bir vektördür.

Bu risk tahminleri modele hangi ortak degiskenlerin dahil edildigine, son noktaya ve a, b ve betanEn tahminlerine dayanmaktadEr. Her risk degerlendirmesi için çekirdek ortak CVD'ye kadar geçen süre: Yas, cinsiyet, suPAR, sigara içici/ ara sjra sigara içici ya da kullanmayan, sistemik/diyalositik kan basjncü, bel çevresi, HDL-kolesterol, LDL-kolesterol; Kansere kadar geçen süre: Yas, cinsiyet, sigara içici/ ara sLra sigara içici ya da kullanmayan, suPAR; Diyabete kadar geçen süre: Yas, cinsiyet, aç karna glikoz, Ölüme kadar geçen süre: Yas, cinsiyet, sigara içici/ ara sjra sigara içici ya da kullanmayan, suPAR, sistemik/diyalostik kan basEncE, bel çevresi.

Bunun yanU sUra, yukarUda gösterilen ortak degiskenlere ilave olarak, söz konusu model hastaldk riski ile iliskilendirilen Örnegin total kolesterol, trigliserit, hs-CRP, NTproBNP, BMI, fiziksel aktivite, alkol alÜmE ve genetik polimorfizmler gibi baska ortak degiskenlerin eklenmesine imkan tanjr. Ortak degiskenler arasündaki etkilesimler de modele dahil edilebilir.

AsagHda, her son nokta için bir olmak üzere dört örnek verilmektedir. Daha az ortak degiskene sahip olan algoritmalar z'ler ve beta'lar ihmal edilerek modele daha kolay dahil10 edilir ve etkilesimler daha fazla 2 ve beta katülarak dahil edilir. Tüm örneklerde, dikkate alEnan birey 58 yasjnda bir erkektir ve suPAR ölçümü 3.0 ng/ml'dir. Degerlendirilen risk, yll içerisinde bir olay yasama riskidir. Her parametre için çalEsma aralEgÜ 6 95 güven aralügj ile verilir ve bu aralEk, tahminden standart hatanün iki katEnEn çJkartJldZg] ve tahmine standart hatanEn iki katEnJn eklendigi aralEktDr ([tah.- 2*s.e.;tah.+2*s.e.]). Örneklerde, her seferinde bir tahmin saglayan (parantez içerisinde) bir standart hata (s.e.) gösterilmektedir.

CVD'ye kadar geçen süre: Tahminler asagüdaki gibidir: betal (hiç sigara içmeyenlere karsjlük ara sEra içenler), beta4 = 0.66 (0.12) (hiç sigara içmeyenlere karsJlUk düzenli içenler), betaS : 0.007 (0.005) (sistolik kan basßnclnda bir mm Hg'llk artEs), beta6 = 0.029 (0.009) (diyalostik kan basüncEndaki bir mm Hg'lük artjs), beta7 = 0.009 (0.006) (bel çevresinde bir cm artEs), beta8 = ve beta. Sekil parametresinin logaritmasl log(a)=l.75 (0.08)'dir ve ölçek parametresinin logaritmasH log(b)=5.34 (0.17)'dir.

Formüle göre, erkegin 160/120 kan basjncüna, 100 cm bel çevresine, 0.14'lük bir HDL ölçümüne ve 0.4'lük bir LDL ölçümüne sahip olan sigara içmeyen bir erkek olmasü durumunda, yLl içerisinde CVD geçirme riski P=% 45.3'tür. 48 yaSLnda olmasi halinde riski % 23.4 olacakü r. 5 yHl içerisinde CVD yasama riski P=% 21.8'dir. Bir kadtnlm. ilgili riski 10 yHl içerisinde % 33.8'dir. Bir erkegin 2.0 ng/ml'lik bir suPAR ölçümüne sahip olmasl halinde, 10 yil içerisinde CVD geçirme olasÜlEgE % 41.1 olacaktür ve 4.0 ng/ml olmasj halinde % 49.8 olacaktir. Erkegin düzenli olarak sigara içmeye baslamasl halinde, 10 yHl içerisinde CVD olma riski % 68.8 olacaktHr.

Erkegin kan basjncEnj 120/80'e indirmesi halinde, 10 yül içerisinde CVD olma riski % 13.4 olacaktür. Bel çevresini 5 cm10 azaltabilmesi halinde, riski 6 43.9'a düsecektir. HDL ölçümünü 0.15'e yükseltebilmesi halinde, % 45.5'lik bir risk elde edecektir ve LDL ölçümünü 0.3'e düsürebilmesi halinde, % 43.7'lik bir risk elde edecektir.

Kansere kadar geçen süre: Tahminler asagüdaki gibidir: betal (sigara içmeyenlere karsjlük ara süra sigar içenler) ve beta4 = 0.62 (0.19) (sigara içmeyenlere karsülEk düzenli sigara içenler). Sekil parametresinin logaritmasl log(a):4.83 (0.07)'dir ve ölçek parametresinin logaritmasl log(b)=1.73 Formüle göre, erkegin sigara içicisi olmamasü halinde, 10 yEl içerisinde kanser olma riski P=% 4.2'dir. 48 yasjnda. olmasE halinde riski 6 1.9 olacaktir. 5 yLl içerisinde kanser yasama riski P:% 1.7'dir. Bir kadHnln ilgili riski 10 ytl içerisinde 3.9'dur. Bir erkegin 2.0 ng/ml'lik bir suPAR ölçümüne sahip olmasü halinde, 10 yjl içerisinde kanser geçirme olasJlDgE % 3.3 olacaktür ve 4.0 ng/ml olmasE halinde % 5.3 olacaktir.

Erkegin düzenli olarak sigara içmeye baslamasU halinde, 10 yLl içerisinde kanser olma riski % 7.6 olacaktlr.

Diyabete kadar geçen süre: Tahminler asagidaki gibidir: betal (0.03) (aç karna glikozda bir birim artEs). Sekil parametresinin logaritmasL log(a)=5.81 (0.32)'dir ve ölçek parametresinin logaritmasH log(b)=1.45 (0.20)'dir.

Formüle göre, erkegin aç karna glikoz düzeyinin 5 olmas halinde, 10 yDl içerisinde diyabet yasama riski P=% 2.3'tür. 48 yaslnda olmasE halinde riski % 1.3 olacaktjr. 5 yül içerisinde diyabet yasama riski P=% 1.0'dEr. Bir kadünEn ilgili riski 10 yHl içerisinde % 1.0'dlr. Bir erkegin 2.0 ng/ml'lik bir suPAR ölçümüne sahip olmasl halinde, 10 yHl içerisinde diyabet. geçirme olasüljgü 6 1.8 olacaktEr` ve 4.0 ng/ml olmasD halinde 6 2.8 olacaktEr. Erkegin aç karnEna10 glikoz düzeyini 4'e düsürebilmesi halinde, diyabet yasam riski Ölüme kadar geçen süre. Tahminler asagjdaki gibidir: betal (hiç sigara içmeyenlere karsjlük ara sEra içenler), beta4 = 0.72 (0.11) (hiç sigara içmeyenlere karsjlük düzenli içenler), beta5 = 0.001 (0.004) (sistolik kan basjncjnda bir mm Hg'ljk artEs), beta6 = 0.021 (0.007) (diyalostik kan basüncEndaki bir mm Hg'lHk artls), beta7 : 0.002 (0.005) (bel çevresinde bir cm artEs). Sekil parametresinin logaritmasj log(a)=2.01 (0.06)'dEr ve ölçek parametresinin logaritmasj log(b)=4.89 Formüle göre, erkegin 160/120 kan basEncEna. ve 100 cm bel çevresine sahip olan sigara içmeyen bir erkek olmasL durumunda, 10 yll içerisinde ölme riski P:% 16.9'dur. 48 yasEnda olmas: halinde riski % 5.9 olacaktjr. 5 yjl içerisinde ölme riski P=% 6.7'dir. Bir kadÜnJn ilgili riski 10 yEl içerisinde % 10.7'dir. Bir erkegin 2.0 ng/ml'lik bir suPAR ölçümüne sahip olmasU halinde, 10 yUl içerisinde ölme olasHltg' % 14.1 olacaktHr ve 4.0 ng/ml olmasl halinde % 20.1 olacaktir. Erkegin düzenli olarak sigara içmeye baslamasl halinde, 10 yül içerisinde ölme riski % 31.5 olacaktEr.

Erkegin kan basJnCEnJ 120/80'e indirmesi halinde, 10 yül içerisinde ölme riski % 7.7 olacaktEr. Bel çevresini 5 cm azaltabilmesi halinde, riski % 16.7'ye düsecektir. Örnek 10. suPAR düzeyleri, gelecekte kanser gelistirmenin bir risk isaretçisidir ÇalEsmanEn amacü. Önceki çalüsmalar, suPAR. düzeylerinin belirli kanser hastalaründa prognozun tahmini oldugunu göstermistir. Bununla birlikte, suPAR düzeylerinin kanseri olmayan belirgin bir biçimde sagllkll bireylerde gelecekte kanser gelistirmenin tahmini olup olmadlgl hiç arastürjlmamjstür. DolayEsEyla suPAR'En kanser gelisimini tahmin edip etmedigini arastErdEk.10 Denekler ve metotlar: Glostrup Üniversite Hastanesi yakEnDnda yasayan popülasyondan birey, popülasyon arastErmasEna katDlmak üzere davet davet edilmis ve 2656'sE gelmis ve sonraki arastDrmalara katElmEs ve kan vermistir. 1993 Haziran ve 1995 Araljk aralDgEndan elde edilen 2605 plazma örnegi bu çalEsma için uygun olmustur. 2605 katlllmcl kendi kendine uygulana bir anketi doldurmustur. Kendi bildirdikleri fiziksel aktiviteye dayalü olarak, katÜlJmcÜlar 3 gruba ayrülmjstür: Fiziksel aktivitesi olmayan denekler (% 20), hafif fiziksel aktivitesi olan denekler (günlük yürüyüs, bisiklete binme ya da günde yarLm saatten az spor aktivitesi (% 55) ve günde yarUm saatten fazla egzersiz yapan denekler (% 21). % 4'ü egzersizle ilgili anketi doldurmamjstür. 1091 katülümcj düzenli sigara içicisidir (% 42), 106'sE (% 4) ara sDra sigara içtigini bildirmistir ve 1405'i sigara kullanücjsü degildir. Alkol alJmU, katLlmeLlarJn Danimarka SaglUk BakanlUgLnUn önerdiginden daha fazla ya da daha az içmesine göre iki grubu ayrtlmkstHr (erkekler için hafta 21 alkol birimi (l birim = 12 g alkol) ve kadEnlar için 14 alkol birimi). Kanser bilgisi, Danimarka Ulusal Sagljk KayEtlarEndan elde edilmistir. Vücut kütle indeksi (BMI), agjrlük bölü boyun karesi olarak hesaplanmUstJr. Metabolik sendrom, UluslararasL Diyabet Federasyonunun tanHmlna göre asagHdakilerden en az ikisi ile birlikte merkezi obezite (erkek/kadHnlarda > 94/80 cm bel) olarak tanDmlanmüstEr: yükselmis serum trigliseritler > 1.7 mmol/l (150 mg/dl), azalmEs serum yüksek yogunluklu lipoprotein kolesterol (< 1.03 mmol/l (40 mg/dl), yükselmis plazma glikoz (>5.6 mmol/l (100 mg/dl) ya da yükselmis BP (sistolik BP > 130 mm Hg ya da diyalositik BP > 85 mm Hg).

Egzersiz: Kendi bildirdikleri fiziksel aktiviteye dayalj olarak, denekler dört gruba ayrülmEstEr: l) Fiziksel10 aktivitesi olmayan denekler, 2) hafif fiziksel aktivitesi olan denekler (günlük yürüyüs, 83k 83k bisiklete binme ya da günde yarEm saatten az spor aktivitesi, 3) günde yarüm saatten fazla spor aktivitesine katllan denekler, ve 4) profesyonel Yüksek duyarlEle CRP belirlemeleri (hsCRP): Plazma konsantrasyonlarE, 0.1-20 mg/l aralügünda ve 0.03 mg/l'lik en düsük saptama limitiyle partikülü arttürllmüs immünotürbidimetri testi (Roche/Hitachi; Roche Diagnostics, Basel, Switzerland) kullanarak belirlenmistir. hsCRP, 2510 Örnekte Ölçülmüstür ve medyan hsCRP 1.81 olmustur (aralEk 0.12 - 98.45 mg/ml). suPAR ölçümleri: suPAR, suPARnosticTM kit (ViroGates, Copenhagen, Denmark) kullanarak. ölçülmüstür. Söz konusu kit, HIV-1 enfekte bireylerde hastalLk. progresyonunu ölçmek için gelistirilmistir. Kisaca, bu kit, yakalayan monoklonal antikorla Önceden kaplanan plakalarla ve örnek dilüsyon tamponuna eklenen bir HRP etiketli saptama monoklonal antikoru ile birlikte gelir. Daha sonra 25 ml plazma örnegi 225 ml dilüsyon tamponu ile karLstUrLlUr ve önceden kaplanan plakaya çift kopya halinde 100 ml numune eklenir ve bir saat boyunca inkübe edilmistir. YHkamadan sonra 20 dakika boyunca. 50 ml substrat eklenmis ve reaksiyon 50 ml 0.5 H2804 ile durdurulmustur. Plakalar 630 nM referansla 450 nM dalga boyunda ölçülmüstür. Her çalEsma günü için 8 plaka (312 örnek) ölçülmüstür. Örnekler bir numarayla etiketlenmis ve teknisyen, hasta örneginin kimligini bilmemektedir. Test içi varyasyon 6 ölçülmüstür. Kit standart egrisi, suPAR. düzeylerini 0.6 ila 22.0 ng/ml arasinda ölçmek için dogrulanmEstDr. Üç örnek testin dogrulanan aralEgEn altEnda (2) ya da üzerinde (1) suPAR düzeyi vermis ve analizden çHkartHlmlstHr. Kanser verileri, bireylerin suPAR. düzeylerine iliskin herhangi bir bilgi olmadan bir istatistikçi tarafEndan Ulusal SaglEk KayEtlarEndan elde edilmistir. Kanser, UluslararasE HastalEk10 SEnEflandDrma (ICD) 8 ve 10 kodlarj kullanarak teshis edilmistir. ICD kodunun C500: C509 olmasj halinde, meme kanseri teshisi konulmustur. C340:C349 olmasj halinde akciger kanseri teshisi konulmustur. Takip çalHsmasll Q rasHnda, 28'i kolorektal kanser gelistirmis, 5'i neoplazmalar gelistirmis, 37'si akciger kanseri gelistirmis, 4'ü melanom, 23'ü meme kanseri, biri serviks, 3'ü endometriyum, altjs] yumurtalEk, lZ'si prostat, 9'u mesane, 9'u lösemi gelistirmistir. MONICA çalEsmasE lokal etik komitesi tarafündan onaylanmüstjr.

Istatistikler: suPAR kuartilleri üzerinde Kaplan Meier sagkalEm analizi gerçeklestirilmis ve log rank testi kullanarak kuartiller arasündaki fark test edilmistir. Risk oranlarJnD ve suPAR'dan bagEmsÜzlJgD belirlemek için Cox regresyon analizi kullanjlmüstEr. < 0.05 olan bir p degerinin anlamlL oldugu düsünülmüstür.

Sonuçlar: 66 birey kan örneklemesinden önce bir kanser teshisine sahip olmus ve analizden çükartülmjstjr. Takip çalEsmasE sErasÜnda 136'sü kanser gelistirmistir.

Kanser teshisi zamanünda Kaplan Meier analizi. Kohort, suPAR düzeylerine dayalJ olarak esit olarak boyutlandUrLlmUs 4 gruba ayrtlmtstHr; düsük suPAR grubu (N=650, suPAR arallgl 1.34 - orta yüksek suPAR grubu (N=651, aralEk 4.0 - 4.9) ve yüksek suPAR grubu (N=650, araljk 4.9 - 19.9). Bir kanser teshisi olan bireyler analizden sansürlenmistir ve kanser teshisi sLrasUnda bir Kaplan Meier analizi Sekil l4'te gösterilmektedir (log rank p<0. 001).

Kanser` teshisi slrasHnda yasa göre ayarlanmlß Cox regresyon analizi: suPAR'En kanserin bagümsjz bir tahmincisi olup olmadÜgInD ele almak için, çok degiskenli analiz gerçeklestirilmistir. Yas ve cinsiyete göre ayarlanan bir Cox regresyon analizinde, 1 ng'llk bir suPAR artisi (suPAR 1.3 ve 19.9 ng/ml araslnda degismektedir), 1.34'lük bir artmls kanser gelistirme risk oranD (HR) ile iliskilendirilmistir (% 95 ve sistolik kan basüncj (sürasjyla P = 0.5 ve 0.3), metabolik sendrom (p= 0.3), diyabet (p = 0.9), egzersiz (p = 0.02), sigara içme (p< 0.001), hemoglobin. (p: 0.9), LDL. kolesterol (p: , total kolesterol (p : 0.06) trigliseritler (p= 0.5), aç karnEna glikoz düzeyi (p = kanser riskinin çesitli olasÜ tahmincileri için tek degiskenli (Yasa göre ayarlanmEs) Cox analizi gerçeklestirilmistir. Yasa göre ayarlanan cox regresyon çok degiskenli analizinde, önemli olan ya da yasa göre ayarlanmls tek degiskenli analizde bir egilim uygulanan tahminciler dahil edilmistir. suPAR, BMI, egzersiz, total kolesterol ve sigara içmenin dahil edilmesiyle, yalnüz suPAR ve sigara içme kanser gelisimini tahmin etmistir (Tablo 15). Meme kanseri (altgrup analizi).

Takip çalUsmasU sUrasLnda 22 kadLn meme kanseri gelistirmistir. Tek degiskenli analizde, 1 ng/ml suPAR artlsH, 1.37'lik bir RH ile iliskilendirilmistir (% 95 güven aralEgD: gelistirmek için bu artmüs riski degistirmemistir (yasa göre içme, egzersiz ya da lipidler, gelecekte meme kanseri gelistirme riski ile önemli ölçüde iliskilendirilmemistir.

Yalnüz kadEnlar meme kanseri gelistirmistir. suPAR kuartilleri üzerine Kaplan Meier analizi (2602 bireye dayanmaktadür ve temel seviyede herhangi bir kanser formu olan bireyler dLslanmJstUr), en düsük suPAR'a sahip olan bireylerin (Sekil 'te ince çizgi), en yüksek suPAR. kuartilindeki bireylerle karsHlastHrlldHglnda (Sekil 15'te en kalln çizgi) meme kanseri gelistirme riskinin önemli ölçüde düsük oldugunu göstermistir. suPAR0123 Toplam N Vaka say-s_ Sansürlü N Yüzde Genel Karsülastürmalar - TABLO 16 Ki-kara df Sig.

Log Rank (Mantel-Cox) 5.389 1 0.020 Akciger` kanseri: Takip çaljsmasj sürasEnda 36 birey akciger kanseri gelistirmistir. Yasa göre ayarlanmls çok degiskenli cox regresyon analizinde, suPAR (RH=1.49, güven aralTgH % 95: 1. 32-1. 69, her ng/ml artjs için), cinsiyet (erkekler 3.1'lik yükselmis bir riske sahiptir (güven aralEgÜ % 95: 1.45 - 6.56) ve sigara içme (düzenli içiciler 5.16'13k yükselmis bir riske sahiptir (% 95 güven aralJgD: 2.21 - 12.04) akciger kanseri gelistirme riskiyle önemli ölçüde iliskilendirilmistir. Wald degerine bakjldügjnda (Tablo 17), suPAR, gelecekte akciger kanseri gelisimini açEklamak için en iyi degisken olmustur. suPAR kuartilleri üzerinde Kaplan Meier analizi (2602 bireye dayanmaktadEr ve temel seviyede herhangi bir kanser formu olan bireyler djslanmEstDr), en düsük suPAR'a sahip olan bireylerin (Sekil 16'da ince çizgi), medyan düsük suPAR'Hn (ikinci en ince çizgi), medyan yüksek suPAR'In (ikinci en kalün çizgi) ve en yüksek suPAR'a (en kalEn çizgi) sahip olan bireylerin, en yüksek suPAR kuartilindeki bireylerle karsülastürEldÜgEnda akciger kanseri gelistirme riski önemli ölçüde farklü oldugunu göstermistir (p<0.001, log rank testi).

TABLO 17 - Vaka Isleme Özeti suPAR0123 Toplam EIVaka say]sî]Sansür1ü N Yüzde TABLO 18 - Genel Karsllastlrmalar Ki-kare df Sig.

Log Rank (Mantel-Cox) 25.167 1 .000 Lösemi: Takip çaljsmasj sürasünda 9 birey lösemi gelistirmistir. Tek degiskenli analizde, suPAR (RH = 1.45, % 95 güven aralDgE: her ng artEs için 1. 15 - 1. 82) lösemi gelistirme riskiyle önemli ölçüde iliskilendirilmistir. Yas (erkekler için RH 0.28, % 95 güven araljgüz 0.6 - 1.2) ya da gelistirme riski ile önemli ölçüde iliskilendirilmistir. Az sayEda vakadan dolayü (lösemi gelistirmis 9), temel seviyede kanseri olanlar hariç olmak üzere 2602 bireyde Hßdyan suPAR kullanElarak Kaplan Meier Çizimi gerçeklestirilmistir (bkz.

Tablo 19 - Lösemi suPAR0123 Toplam N Vaka sastJ Sansürlü N Yüzde Tablo 20 - Genel KarsElastErmalar Ki-kare df Sig.

Log Rank (Mantel-Cox) 8.882 1 ,003 Prostat Kanseri: Takip çaljsmasj sürasEnda. 10 birey' prostat kanseri gelistirmistir. 1.31'1ik bir suPAR, her ng suPAR/ml artHs | için RH degeriyle gelisimi tahmin etme egiliminde olmustur 95 güven aralEgÜ: - 1.75). kuartilindeki vakalarEn sayjsü asagüda gösterilmistir Tablo 21 Prostat Kanseri Sansürlü TartHsma: Bu sonuçlar, suPAR'Jn, kan örneklemesi straslnda kanseri olmayan bireylerde gelecekte kanser gelistirme riskinin son derece önemli ve bagDmsEz bir tahmincisi oldugunu göstermektedir. Wald degerine göre, suPAR genel kanser gelisiminin en güçlü tahmincisi olmustur (bkz. Tablo 22). Alt grup analizi, yas, cinsiyet ve sigara kullanÜmE gibi diger tahmincilerden bagjmsüz olarak, temel seviyede yüksek suPAR düzeylerinin akciger, meme kanseri ve lösemi gelisim riskini önemli ölçüde arttjrdjgjnü göstermis ve prostat kanseri ile ilgili bir egilim gözlenmistir. Minör kanser formlarü (meme ve akciger kanseri dHslndaki formlar) ile ilgili olarak, suPAR, akciger' kanseri dESÜ // meme kanseri dEsj kanser gelisimiyle önemli ölçüde iliskilendirilmistir. Minör kanser formlarj kolorektal kanser, neoplazmalar, melanom, serviks, endometriyum, yumurtalük, prostat ve mesane kanserlerini kapsamLstUr.

Tablo 22 - Tüm Kanserler Wald Sig. Exp(B)EXp(B) için % 95.0 Güven ara jg] Tablo 23. Genel kanser gelisimi üzerinde yasa göre ayarlanmls cox regresyon çok degiskenli analizi (N=136) Wald Sig. Exp(B) Exp(B) için % 95.0 karsilik içmeyenler) Yukarüda kaydedildigi gibi, genel kanser teshisine kadar geçen sürenin Kaplan Meier analizi Sekil 14'te gösterilmektedir.

Ince üst çizgi en düsük suPAR kuartilini göstermektedir, alttaki (medyan ince çizgi) ikinci en düsük suPAR kuartilini göstermektedir, orta kalEn çizgi ikinci en yüksek suPAR kuartilini göstermektedir* ve en kal m_ (alt çizgi) en yüksek suPAR kuartilini göstermektedir. P<0.001, log rank testi.

Akciger kanseri dDsE / meme kanseri düsE kanser gelisim riski ve suPAR. Akciger ve meme kanseri kapsam djsjnda bEraledEgDnda, 66 birey baska kanser formlarE gelistirmistir.

Medyan suPAR, düzeylerine göre, medyan üzerinde suPAR'J olan kimseler takip çallsmaSI slrasHnda önemli ölçüde daha yüksek bir akciger kanseri dESE / meme kanseri düs: kanser gelistirme sansüna sahip olmustur (Sekil 18). Örnek 11. Belirgin bir biçimde saglük bireylerde kardiyovasküler hastalEk ve mortalitenin tahmincisi olarak suPAR'Ln kullanUmJnU iliskin diger çalLsmalar Materyaller ve metotlar Glostrup Üniversite Hastanesi yakEnDnda yasayan popülasyondan birey, popülasyon arastlrmaslna katHlmak üzere davet davet edilmis ve 2656'sE gelmis ve sonraki arastDrmalara katElmEs ve kan vermistir. 1993 Haziran ve 1995 Araljk aralÜgEndan elde edilen 2605 plazma örnegi bu çalEsma için uygun olmustur. 2605 katLlJmcL kendi kendine uygulana bir anketi doldurmustur.

Kendi bildirdikleri fiziksel aktiviteye dayalH olarak, katElÜmcElar 4 gruba ayrElmEstDr: Fiziksel aktivitesi olmayan denekler (% 20), hafif fiziksel aktivitesi olan denekler (günlük yürüyüs, bisiklete binme ya da günde yarEm saatten az spor aktivitesir (% 55), günde yarim saatten fazla egzersiz yapan denekler (% 21) ve profesyonel atletler (N: 17). % 4'ü egzersizle ilgili anketi doldurmamjstür. 1091 katjlümcj düzenli sigara içicisidir (% 42), 106's3 (% 4) ara sDra sigara10 içtigini bildirmistir ve 1405'i sigara kullanücjsü degildir.

Istatistiksel modellere girildiginde, ara sEra sigara içen kimseler sigara içmeyenlerle gruplanmüstEr. Alkol alümE, kattlectlarln Danimarka Sagllk BakanllgtnHn önerdiginden daha fazla ya da daha az içmesine göre iki grubu ayrjlmjstür (erkekler için haftada 21 alkol birimi (1 birim = 12 g alkol) ve kadjnlar için 14 alkol birimi). CVD bilgisi, 2001 arallk Danimarka Ulusal Saglük KayEtlarEndan elde edilmistir ve veriler önceden dogrulanmEstür. Istatistiksel analiz için CV ölümü, ölümcül olmayan miyokardiyal enfarktüs ve ölümcül olmayan inmenin birlesik bir CVD son noktasj kullanjlmjstür çünkü bu son noktalarEn önceki olus sükljklarj temel seviyede kaydedilmistir. Medyan CVD takip çaljsmas] 7.6 yDl sürmüstür.

Takip çalEsmasE sürasünda, 316'SE CVD gelistirmistir, bunlardan 291'i ölümcül degildir. 316 bireyden 118'si bir IHD gelistirmistir, bunlardan 70'ine AMI teshisi konulmustur. , Nüfus Dairesi Sisteminden mortaliteye iliskin bilgiler elde edilmistir. Takip çalüsmasü sürasünda, 388 birey ölmüs ve 13'ü takip çalLsmasLnda izlenememistir. Vücut kütle indeksi (BMI), aglrlHk bölü boyun karesi (kg/m2) olarak hesaplanmlstlr.

Kan basHnd` 5 dakika oturarak dinlendikten sonra bir chaM tansiyon aleti kullanarak ölçülmüs ve iki ölçümün ortalamasE rapor edilmistir.

Egzersiz: Kendi bildirdikleri fiziksel aktiviteye dayalj olarak, denekler dört gruba ayrUlmLstLr: 1) Fiziksel aktivitesi olmayan denekler, 2) hafif fiziksel aktivitesi olan denekler (günlük yürüyüs, sßk sik bisiklete binme ya da günde yarEm saatten az spor aktivitesi, 3) günde yarüm saatten fazla spor aktivitesine katElan denekler, ve 4) profesyonel atletler. Bu çalEsma, lokal etik komitesi tarafEndan onaylanmis ve deneklere bilgilendirilmis onam verilmistir. suPAR ölçümleri: suPAR, suPARnosticTM kit (ViroGates, Copenhagen, Denmark) kullanarak ölçülmüstür. Söz konusu kit, HIV-1 enfekte bireylerde hastalEk progresyonunu ölçmek için10 gelistirilmistir. Klsaca, bu kit, yakalayan monoklonal antikorla önceden kaplanan plakalarla ve örnek dilüsyon tamponuna eklenen bir HRP etiketli saptama monoklonal antikoru ile birlikte gelir. Daha sonra 25 ml plazma örnegi 225 ml dilüsyon tamponu ile karEstÜrElDr ve önceden kaplanan plakaya çift kopya halinde 100 ml numune eklenir ve bir saat boyunca inkübe edilmistir. Yükamadan sonra 20 dakika boyunca 50 ml substrat eklenmis ve reaksiyon 50 ml 0.5M H2804 ile durdurulmustur. Plakalar 630 nM referansla 450 nM dalga boyunda ölçülmüstür. Örnekler bir numarayla etiketlenmis ve teknisyen, hasta örneginin kimligini bilmemektedir. Test içi varyasyon % 2.75 ve testler arasE varyasyon % 9.17 olmustur. 2605 örnek ölçülmüstür. Kit standart egrisi, suPAR düzeylerini 0.6 ila 22.0 ng/ml arasEnda ölçmek için dogrulanmEstDr. Üç örnek testin dogrulanan aralJgUn altLnda (2) ya da üzerinde (1) suPAR düzeyi vermis ve analizden d`karttlmlstHr. suPAR düzeyleri ve plazma Örnekleme tarihi arasjnda herhangi bir korelasyon bulunmamüstjr (örnekler Haziran 1993 ve Aralük 1994 arasünda elde edilmistir) ve bu durum, örnek dondurma süresinin suPAR'Un plazma düzeyi üzerinde etkisi olmadLgUnJ göstermektedir (rho = 0.001, p = 0.96).

Istatistikler: suPAR'Hn prognostik. önemli, iki farkl | sonuç için arastürElmDstIr. Bunlar, 1993-94 yüllaründa kan örneginden l) CVD teshisine ve 2) ölüme kadar geçen zaman olmustur. Kuartillerine göre dört grupta suPAR degerleri katmanlastUktan sonra, ölüme kadar geçen süre için bir Kaplan- Meier çizimi çizilmistir. CVD'ye kadar geçen süre için, rekabetçi riskler olarak CVD ve Ölüm ile rekabetçi bir risk analizi gerçeklestirilmis ve CVD'ye kadar geçen sürenin tahmini çizilmistir. Etki büyüklügünün miktarlnün belirlenmesi için risk oranlarEnE veren analiz için Cox orantjsal risk modeli kullanHlmlstHr. Ilk olarak, suPAR'ln etkisi yas ve cinsiyet gibi farkl l modellerde tahmin edilmistir. Sonuçlar üzerinde suPAR'Ün etkilerinin karjsmjs olup olmadEgDnj arastürmak için, yasam tarzü, lipidler ve kardiyovasküler10 degiskenlerden olusan üç grup ayrü ve ortak olarak dahil edilmis ve bu modellerde suPAR'Dn etkisi tahmin edilmistir.

Analizde, asagüdaki degiskenler sürekli olarak girilmistir: yas, suPAR, total kolesterol, HDL kolesterol, trigliseritler, sistolik kan basEncD, dialostik kan basjncj, vücut kütle endeksi ve bel çevresi. Asagjdaki degiskenler kategorik olarak girilmistir: cinsiyet, sigara içme (def), egzersiz (def) ve alkol (def). Ikincisi, yas ve cinsiyet için ayarlanmEs risk oranlarj diger tüm degiskenler için hesaplanür. Çoklu regresyon analizleri kullanilarak, nispi riskler yas ve cinsiyet için ayarlanmjs ve yasam tarz: ölçümleri (günlük egzersiz, alkol tüketimi ve sigara içme durumu), lipidler (total kolesterol, HDL kolesterol ve trigliseritler) ve metabolik risk faktörleri (diyalostik ve sistolik kan basEncD, BMI, bel) için standartlastLrUlmLs regresyon oranJ hesaplanmHstlr.

Sonuçlar: 2602 bireyde suPAR miktarü saptanmüstjr. Medyan suPAR 4.03 ng/ml plazma olmustur (aralük 1.3 - 19.9). suPAR düzeyleri yasla birlikte artmEs ve erkeklerle karsUlastUrLldUgLnda (N= l3l0, medyan suPAR 3. 84, aralUk l. 3 - 17. 8) kadlnlar* arasHnda daha yüksek olmustur` (N = 1292, medyan suPAR 4. 26, aralHk l. 9 - 19. 9), p<0.0l. suPAR, klasik kardiyovasküler isaretçilerden bagümsüz CVD'yi tahmin etmektedir: Kan örnekleme sjrasEnda, 209 birey kardiyovasküler bir olaydan muzdarip olmus ve CVD analizinden çLkartLlmUstJr. Takip çalLsmasL erasUnda, 316'sL kardiyovasküler bir olay gelistirmistir. Yas ve cinsiyete göre ayarlanan Cox regresyon analizinde, suPAR'daki bir 1 ng/ml'lik artEs, % l9'luk bir kardiyovasküler olay gelistirme riski artEsÜ ile iliskilendirilmistir (% 95 güven araljgj: % 12 - ). suPAR'Jn bagjmsjz bir CVD isaretçisi olup olmadEgÜnJ belirlemek için, klasik kardiyovasküler isaretçilerin suPAR'Hn risk oram` (HR) üzerindeki etkisi belirlenmistir (bkz. Tablo Tablo 24. Diger risk faktörleri için ayarlanan her ng suPAR10 artEsÜ için nispi risk CVD Mortalite HR ((% 95 HR (% 95 güven güven araligi) SuPAR N=2379 N=2602 Yasam tarzr N=2324 N= Lipidler N=2378 N= CVD risk faktörleri N=2379 N=2602 haqlnhl RMT hel) Hepsi N=2323 N=2536 Tablo 24'te gösterildigi gibi, kardiyovasküler risk isaretçileri dahil edildiginde suPAR üzerindeki etki büyük ölçüde degismeden kalmHstHr ve suPAR'Hn CVD'nin bagkmglz bir tahmincisi oldugu sonucuna varülabilir. suPAR ve klasik risk isaretçilerinin gelecekte CVD gelistirme riski üzerindeki kestirimci degerlerini dogrudan karsülastürmak için, bir standart sapma (SD) degisimi kullanklmHstlr. Tablo 25'te gösterildigi gibi, suPAR, gelecekteki bir CVD olayln m_ degerlendirmesi için ikinci en iyi tahminci (diyalostik kan basjncündan sonra) olmustur.

Tablo 25. CVD ve mortalite gelistirme riski için bir 1 SD degisiminin risk oranlarü.

CVD HR (% 95 güvenTotal mortalite suPAR düzeyleri uzun yasam tahmincisidir erkek) ölmüs ve 13'ü takip çalüsmasüna katjlmamjstjr. Kohort suPAR degerlerine dayalj olarak kuartillere bölündügünde, tüm kuartiller arasHnda sagkallmda önemli bir fark gözlenmistir.

Cox regresyon analizinde, 1 ng/ml daha yüksek bir suPAR, takip çalEsmasE sjrasünda 6 24 artmjs mortalite riski ile önemli ölçüde iliskilendirilmistir (% 95 güven aralJgD: % 19 - 29). Çok degiskenli analizde (Tablo 24), kmi risk baska nwrtalite risk faktörleri eklenmesiyle büyük ölçüde degistirilmemistir. Ölçülen ve kaydedilen diger degiskenlerle dogrudan karsDlastDrmada, suPAR'daki bir 1 SD degisim, en güçlü mortalite isaretçisi olmustur. suPAR'En etkisinin erken veya geç yasam evresinin hangisinde en belirgin oldugunu belirgin oldugunu belirlemek. için, dört yas grubu için bir alt grup analizi gerçeklestirilmistir. 45 yasindakiler arasLnda mortalitenin Risk Oranl (RH) 1.47 (% 95 güven arallgl: her 1 ng/ml suPAR artEsÜ için 1.30 - 1.67), 51 yasEndakiler için 1.36 ( suPAR düzeyleri yasam tarzl ile iliskilendirilmektedir kullanmayan ya da ara süra kullanan (1511'den 106'53) bireyler olmustur. Hem erkek hem de kadjnlarda, günlük sigara kullanEmE önemli ölçüde yükselmis suPAR düzeyleri ile iliskilendirilmistir. Sigara içmeyen erkeklerin (N-730) ortalama suPAR düzeyi 3.72 ng/ml olmustur (SD 1.20), bu deger sigara içen erkeklerden önemli ölçüde daha düsük olmustur (N: sekilde, sigara kullanmayan kadjnlarjn (N=781) ortalama suPAR degeri olmustur, p<0.001. 1511 sigara içmeyen arasinda, 614'ü önceden düzenli sigara içicisi oldugunu bildirmistir. Önceden sigara içenler, sigara içmeye devani eden bireylerle karsülastDrEldDgEnda önemli ölçüde daha düsük suPAR10 düzeylerine sahip olmustur (4.8 ng/ml'ye karsDle 4.0, p<0.00l). CVD riski, hem sigara içmeyenler (yas ve cinsiyete göre ayarlanmEs, her ng/ml artjs için RH: 1.11 (% 95 güven güven aralEgD: 1.10 - 1.31) arasjnda önemli olmustur. Total mortalite ile ilgili olarak, her ng suPAR artjsj için sigara içmeyen bireyler arasjnda HR 1.17 (% 95 güven aralDgE: 1.10 - 1.25) ve düzenli içiciler arasEnda 1.31 (% 95 güven aralJgD: 1.21 - 1.42) olmustur.

Aynt zamanda, uPAR düzeylerinin egzersizden etkilenip etkilenmedigi de belirlenmistir. Mann Whitney testi kullanarak, günlük 30 dakikadan fazla egzersiz yapan bireylerin, egzersiz yapmadJgJnD bildiren bireylerden önemli ölçüde daha düsük suPAR düzeylerine sahip oldugu saptanmüstjr arasHnda önemli olmustur.

Sonuçlar, suPAR'In plazma düzeyinin kardiyovasküler hastalügj tahmin ettigini göstermektedir. Her ng/ml suPAR. artjsj için risk artÜsE, klasik CVD isaretçileri eklenerek azaltElmamEstDr ve bu durum suPAR'Jn yeni ve bagLmsUz bir CVD isaretçisi oldugunu göstermektedir. Örnek 12: SaglHktan hastallga birlesik bir analiz Materyaller ve Metotlar Yukarüda tarif edildigi gibi MONICA 10 kohort. suPAR'En saglüklE bireylerde bir hastaljk (CVD, T2DM, kanser ya da ölüm) gelistirme riskini tahmin etme yetenegini belirlemek için, önceden temel seviyede CVD, TZDM ya da kanser teshisi konan 220 bireyi kapsam dlsHnda blraktlk. Kalan 2382 bireyde, yas ve cinsiyete göre ayarlanmEs Cox regresyon analizinde, suPAR'daki 1 çeyrek artüs, CVD, TZD, kanser ya da ölümden olusan birlesik son nokta gelistirmede % 59'lük bir risk artis ile iliskilendirilmistir (% 95 güven arallgl: % 47-72, Tablo 26). Diger isaretçiler> için ayarlamadan sonra, suPAR, % 41'lik bir risk oranjyla hastalDgEn önemli bir tahmincisi olarak kalmjstür (% % gwmn mmig; % 2wsn (nmkizm. En10 yüksek suPAR kuartili içerisindeki bireyler, en yüksek hastalEk gelistirme riskine sahip olan bireyler olmustur (P<0. 001).

AsagHdaki Tablo 26, her degiskenin çeyrekler arasll aralHgt için risk oranünj göstermektedir (gruplanmjs degiskenler olarak girilen sigara içme, egzersiz ve alkol dEsjnda).

Kuartiller arasü aralEklar Tablo 1'de gösterilmektedir.

Arastürjlan hastalEk öyküsü olan bireyler analizden çEkartElmDstJr. Tüm risk oranlarü cinsiyet ve yas için ayarlanmtsttr.

Degisken Gruplar/birim CVD Diyabet. Kanser Mortalite Birlesik Sigara içme Yok 1 1 1 1 1 Egzersiz analiz l 1 1 Profesyoneller (0.06-2.20) edilmemis * Alkol Tavsiyenin 1 1 l 1 1 al m alt` 'nda *Düsük son noktalardan dolay' analiz edilmemis Örnek 13. Bir bireyden alîndan bir örnekte suPAR'In miktarjnün saptanmasü için antikorlar Bir bireyden alündan biyolojik bir örnekte suPAR ve suPAR fragmanlarHnJn ölçümü için bir metot, asagldaki karakteristiklere sahip olan antikorlardan (VG-l ve VG-Z) yararlanmaktadHr: i Tam uzunluklu suPAR'E tanEyabilir ve baglayabilir i Kimotripsin ile klevaj yoluyla elde edilen DN%(8&2W) suPAR fragmanJnD tanDyabilir ve baglayabilir i Kimotripsin ile suPAR'ln klevajl vasltaSJyla sergilenen kemotaktik amino asit sekansl SRSRY'yi tanlmaz ya da baglamaz i Dl ve IhD3 arasFnda baglayHcT bölgesinde 84 ila 92 amino asitleri arasünda konumlandürjlan amino asit sekans ATVYSRSRY'yi tanEmaz ya da baglamaz.

VG-l ve VG-2 antikor spesifitesinin tarifi ELISA testinde kullanllan antikorlarHn spesifitesi, suPARnostic® (ticari olarak Virogates A/S, Danimarka firmasEndan elde edilebilir) yani VG-l (kaplama antikoru( ve VG-2 (saptama antikoru) sekil 19 ve 20'de gösterilmektedir.

Rat (VG-l) ve farede (VG-2) tam uzunluklu insan suPAR'a karsE gelistirilen bu monoklonal antikorlar tam. uzunluklu suPAR, D1D2D3h,p7)'yi spesifik olarak tanlmaktadHr., Bu antikorlar aynE zamanda kimotripsinle klevaj yoluyla elde edilen suPAR fragmanj, Dýh(8&2n)'yi de spesifik olarak tanümaktadEr.

Antikorlar, kimotripsin ile klevajdan sonra amino terminal ucunda sergilenen D2D3(%_Zn)'nin kemotaktik aktif kalüntElarJ 88 ila 92'ye karsDlEk gelen sentezlenmis amino asit sekansE SRSRY'yi tanHmamaktad1r (sekil 19). AntikorlarHn hiçbiri, uPA ile klevaj yoluyla elde edilebilen amino-terminal kalDntElarj 84 ila 92'ye karsDlEk gelen sentezlenmis amino asit sekans ATVYSRSRY'yi tanjmaz. Bununla birlikte, tavsanlarEn tam uzunluklu suPAR ile asDlanmasü yoluyla elde edilen bir poliklonal antikor karlsHml, - düsük yogunluklar vermesine karsün - peptid sekansü ATVYSRSRY'yi tanüyabilmistir. Bunun yanE sjra, SRSRY peptid sekansE ile asElanan tavsanlardan elde edilen bir poliklonal antikor hem SRSRY hem de ATVYSRSRY sekanslarDnE tanEmEstEr.

Sonuç olarak, antikorlarün (VG-l ve VG-Z), kimotripsin ile klevaj yoluyla elde edilen tam uzunluklu suPAR' l ve suPAR fragman: Dýh(g&2w)'yi hem tanDdEgE hem de bagladEgE gösterilmistir. Bununla birlikte, söz konusu antikorlar, uPA ile klevaj yoluyla elde edilebilen kemotaktik aktif sekans SRSRY ya da amino terminal ucu AVTYSRSRY'yi tanEmaz ya da baglamaz.

VG-l ve VG-2 tipi antikorlar, bu metotlarln hepsinde kullanHm için uygundur. Örnek 14: suPAR bir inflamasyon indükleyicidir Yükselmis suPAR düzeylerinin, bir pro-inflamatuar durumun tanLsU oldugu ve hastalLk riskini tahmin ettigi gösterilmektedir. suPAR'ln pro-inflamatuar kosusu indüklemesi halinde, örnegin anti-suPAR antikorlar uygulanmasl yoluyla suPAR'En uzaklastErjlmasj, bireyin inflamasyonunu azaltacaktür.

Mevcut örnegin amacj, suPAR'Jn sub-klinik pro-inflamatuar durumu indükleyip indüklemedigini ya da bir pro-inflamatuar durumu yansJth yanswtmadlgHm arastHrmaktlr. Mevcut örnekte, saflastlrHlmWs tam uzunluklu suPAR (D1D2D3(h2w) ve aym zamanda suPAR'Dn D2D3 fragmanü (D2D3(%-m)), taze alinan insan kanEna eklenmis ve stimülasyondan sonra farle zaman noktalarEnda ilgili 10 sitokin ölçülmüstür.

Materyaller ve Metotlar Deney aklsHnln bir genel taslagl asaglda gösterilmektedir suPAR DlD2D3(y2w)'nin CHO-hücre hattü üretimi Afinite kromatografisi vasütasEyla hücre kültür ortamEndan DlD2D3(ygw) saflastErma kimotripsin parçalamasj SJrasDyla D3 ve Dl baglanma antikorlarj kullanarak ilave afinite kromatografisi Safllgß test etmek için SBS-PAGE, Western Blot ve gümüs boyama yoluyla analiz Dl D2D3 ve D2D3(8&2w)'nin tam kana tabi tutulmasE Luminex mültipleks ile sitokin profilinin analizi Sonuçlar suPAR D1D2D3(b2n)'nin CHO-hücre hattE üretimi CHO hücre hattE, rekombinan insan tam uzunluklu uPAR geni ile stabil bir biçimde transfekte edilmistir. CHO, yalan stabil transfekte hücrelerin popülasyon hakim olmasHml saglayan seçici bir ajan olarak 100 nM metotreksat (MTX, Sigma-Aldrich Cat. No. A6770), 50 Ünite/ml penisilin ve 50 mg/ml streptamisin (Sigma, Cat No. P4333) ile takviye edilen bir nemlendirilmis % 5 C02 inkübatör içerisinde 37°C'de GlutaMAXTM PES ile % 90 Dulbecco's Modified Eagle Ortamda gelistirilmistir.

Afinite kromatografisi vasEtasjyla hücre kültür ortamEndan D1D2D3(y2w) saflastErma Bir VG-l anti-suPAR kolon (ViroGates, Denmark), rekombinan insan suPAR içeren CHO hücre hattH ortaml 1.5 ml/dakikallk bir volumetrik pompa htzlnda uygulanmadan önce 20 ml PBS ile dengelenmistir. Örnek uygulamadan sonra, baglanmamüs proteinleri ve ortam bilesenlerini, özellikle de bovin serum10 büyüme takviyesi içerisindeki en bol protein olan albümini uzaklastErmak için kolon 20 ml PBS ile yEkanmEstEr, pH 7.4.

Son olarak, immünoafiniteyle VG-l'e baglanan suPAR, kovalent olmayan baglarl klrmak ve yalnHz suPAR fragmanlarHnl elüte etmek için 0.1 M sitrat tamponla elüte edilmistir, ph . Elüatlar 2.5 ml hacim içerisinde toplanmjs ve tampon, önceden tarif edildigi gibi PD-lO kolonlar kullanarak 0.1 M PBS, pH 7.4, ile degistirilmis ve sonraki analize kadar -20 °C'de tutulmustur.

D2D3(%_ü7) ve Dl(1%7) olacak sekilde of D1D2D3(b2w)'nin kimotripsin parçalamasj Tam uzunluklu suPAR'dan D2D3(88-277) olusturmak için, elüatlar kimotiprin ile isleme tabi tutulmustur (amino asit 87 ve 8 8arasünda yarjlan, kimotripsin sekanslama sEnJfü, Roche suPAR konsantrasyonunda 5 mL suPAR elüatl, % 0.05'lik CHAPS ve son suPAR konsantrasyonu verecek sekilde % 0.1 CHAPS ve 0.1 M Tris. HCl'den, pH 8.1, olusan 3.5 mL parçalama tamponu ile karLstLrLlmLstUr. Solüsyonun örnekleri, 250 ml hacimli eppendorf tüplere allnmts ve 1 ila 300 ng/mL kimotripsin arasHnda istenen son konsantrasyonu verecek sekilde kimotripsin eklenmistir. 500 ml'lik bir son hacim elde etmek için PBS eklenmistir. 37°C'de 4 ya da 24 saatlik inkübasyondan sonra, enzimatik reaksiyon ilgili örnegin -20°C'de dondurulmasL yoluyla sonlandUrLlmUstJr. Sonuçta olusan ürünler SBS-PAGE ile ayrHstlrHlmls ve daha sonra western blotting yoluyla PVDF membrana transfer edilmistir (sekil 21).

SErasüyla D3 ve Dl baglanma antikorlarü kullanarak ilave afinite kromatografisi, saf D1D2D3 olusturulmasj VG-l kolon vasütasüyla primer afinite saflastürma isleminden sonra, elüat bir PBS tamponla (pH 7.4) degistirilmis ve saf bir D1D2D3 elüatl verecek sekilde her türlü Ddh'ü uzaklastErmak için bir Dl antikor kolona uygulanmüstjr. Bu tampon PBS ile degistirilmis (pH 7.4) ve konsantrasyon10 suPARnostic ELISA kiti kullanarak belirlenmistir.

Saf D2D3 suPAR fragmanj olusturma D2D32'ten olusan bir elüat hazjrlarken, prosedür ilave adEmlar gerektirmistir. suPAR'Hn primer saflastHrma isleminden ve PES ile bir tampon degisiminden önce, Dl, D2D3 fragmanlar: ve muhtemelen halen bir' miktar D1D2D3 verecek sekilde yukarjda tarif edildigi gibi kimotripsin ile enzimatik parçalama uygulanmEstEr. Kalan suPAR fragmanlarjndan D2D3'ü saflastErmak için, anti-Dl antikor kolonu negatif seçim için kullantlmHst m, bu suretle D2D3 ve kimotripsini içeren aka toplanmjstür. Bu, VG-l kolon vasütasEyla bir kez daha tekrar edilmistir. Son olarak, elüat PBS ile tampon degisimine tabi tutulmus (pH 7.4) ve konsantrasyon belirlenmistir. Elde edilen D1D2D3 ve D2D3 fragmanlarünjn safljgj, gümüs boyama (sekil 22) kullanarak, görsellestirilmis ve western blotting (sekil 20) kullanarak suPAR molekülleri olarak dogrulugu slnanmls ve dogru, saf bilesiklerin hazjrlandEgÜnj göstermistir.

Kana suPAR eklenmesini etkilerini karsülastjrmak ve normallestirmek için, önceden örnegi içeren suPAR yüklemesi olmadan sitrat elüsyon tamponu eklenerek sahte örnek (negatif kontrol) hazirlanmts ve daha sonra suPAR örneklerinin tamponunu taklit etmek için elüat (suPAR'slz) PBS ile degistirilmistir. Elüsyonun antikor içerisinde içsel olarak ya da antikor* ve sefaroz kürecikler arasünda herhangi bir bag kopmasEna yol açmasü ve suPAR. elüatlarü kirletmesi halinde, sahte örnekler suPAR elüatlarla aynU arka planL içerecektir.

D1D2D3 ve D2D3(8&2n)'nin tam kana tabi tutulmasl Kan vericisi olarak 27 yasHnda saglHkll bir kadtn kullanElmDstjr ve analizlerde kan örneklemeden 2 saat önce besin almamjstjr. Kan, deney için kullanjlmak üzere ven ponksiyonu yoluyla yedi steril lO ml'lik lityum-heparin kaplE tüplere (Venoject Li-Heparin tüpler, Terumo Cat. No. VT- lOOSHL) ve Clinical Biochemical Department, Unit 339, Hvidovre Hospital'da kan veri analizi için gönderilmek üzere 4 Hd'Lik iki EDTA tüpe alJnmEstEr. Bir Bayer Advia® 120 Hematoloji10 Analizörü kullanarak enzim baglE optik sitometri (DsEk saçElDm] kullanarak) yoluyla ilgili kan hücrelerinin konsantrasyonu ve floresans etiketli antikorlarla aküs sitometrisi vasttaslyla. CD4 ve CD8 T hücreler* arasßnda fark belirlenmistir (Hastalük Kontrol Merkezi, CD45+ lenfositler üzerine toplama için 4 renkli metodu önermistir). 1., 2. ve 3.

Deneyde nötrofil konsantrasyonu sürasüyla 4.0, 4.3 ve 3.1 * 109 monositler 0.3, 0.5 ve 0.4 * 109 hücre/L ve lenfositler (belirtilmemis) 1.5, 1.7 ve 1.9 * 109 hücre/L olmustur. Bazofil konsantrasyonu tüm deneylerde 0.01 * 109 hücre/L olmustur.

Lökositlerin toplam konsantrasyonu 5.5, 6.6 ila 5.8 * 109 hücre/L arasjnda degismistir.

Luminex multipleks ile sitokin profilinin analizi Plazma eritilmis, buz üzerinde saklanmLs ve Starstation yazHllMi kullanHlarak Luminex®MAP sistem (Luminex Corporation) üzerinde sitokin 10- plex AB Bead Kit, hu (BioSourcem, Invitrogen, Cat. No. LHCOOOl) ya da 10- plex Sitokin UltraSensitiveTM AB Bead Kit, hu (BioSourcem, izlenerek analiz edilmistir. Analiz içi varyasyonun. % 20'yi asmasH halinde örnek yeniden ölçülmüstür. Analizin analiz için varyasyonuna dayalE olarak, isaretçilerdeki bir artEs, söz konusu analizin kontrolü (sahte) % 50'den fazla asmasü halinde biyolojik olarak önemli olarak düsünülmüstür.

Sonuçlar Üç baglmsHz deney gerçeklestirilmistir ve burada tam kan Örnekleri 5 dakika, 3 saat, 6 saat ya da 24 saatte 100 ng/ml D1D2D3(k2w), D2D3(8&2w) ile ya da sahte elüat ile stimüle edilmistir. Her deneyden elde edilen örnekler çift kopya halinde ölçülmüstür.

GM-CSF, IL-Z, IL-4 ve 1L-5, D1D2D3 taraandan ya da D2D3 taraandan önemli ölçüde indüklenmemistir. GM-CSE' ve IL-S'e istinaden, elde edilen sonuçlar miktar ölçümünün alt sEnjrInDn altEnda olmustur.10 Tablo 27, Üç bagEmsDz deneyden elde edilen temsili sonuçlar] göstermektedir.

Tablo 27: Tam kan örneklerinin sitokin konsantrasyonlarj (pg/ml) 5 dakika, 3 saat, 6 saat ya da 24 saatte 100 ng/ml D1D2D3 (k2W)i D2D3 (gßzw) ile ya da sahte elüatla stimüle edilmistir.

GM-CSF Analiz sonuçlarl 3 6 saat 24 saat dakika_saaf 2133 (nn 71'!) 132133 (in 71'!) dak 3 saatö saat24 saat dak 3 saat 6 saat 24 saat Bunun aksine pro-inflamatuar sitokinler, INF-gama, IL-l beta, regüle edilmistir, diger yandan TNF-alfa yukarE yönlü regülasyonu görülmesine karsHn D2D3 daha az etkiye sahip olmustur (sekil 23).

Hükümler Bu örnek, tam uzunluklu suPAR'Jn belirli sitokinler ve aynj zamanda kemokin IL-8'in bir indükleyici oldugunu göstermistir.

AsagHda Tablo 28'de görülebildigi gibi, IL-l beta, IL-6, IL-8 ve TNF-alfa ile ilgili olarak erken evrede indükleme (stimülasyondan sonra 6 haftaya kadar) gözlenmistir, diger yandan arastErÜlan diger 6 sitokinin önemli yukarE yönlü regülasyonu gözlenmemistir. Erken yukarE yönlü. regüle edilen sitokinlerin hepsi pro-inflamatuar isaretçilerdir. Bir pro- inflamatuar isaretçi eklendiginde stkllkla görüldügü gibi, indüklenen etki, aynü zamanda D1D2D3 ile 24 saat stimülasyonunda oldugu gibi IL-lO'un geç indüklenmesi ile etkisizlestirilir.

Bu sonuçlara dayalü olarak, tam uzunluklu suPAR'Jn inflamatuar yolarUn aktif bir indükleyici oldugu sonucuna varmaktayUz.

Tablo 28. Ölçülen sitokinler ve kemokin (IL-8), kaynak ve hedef hücreler ve sitokinlerin hedef hücreler üzerinde sematik incelemesi. anti- erken geç erken geç GM- Hedef hücrelerinHiçbiri Etki Etki Etki yok Etki yok CSF apoptozunu, yok yok granülositik ve makrofaj soylar seklinde farklHlasma ve proliferasyonu, genis bir aralHkta hücrenin fonksiyonel ve II MHC regüle ekspresyonunu edilmis yukarH yönlü regüle eder.

MakrofajlarH, NK ve T hücreleri aktive eder. Ig sHanH, aktive B hücreleri hücre sitokinlerin faz tepkiyeyok yok yönlü yönlü si indüklenmesi. IL- katîlîr ve regüle regüle 2 ile Tinflamasyon, edilmis edilmis hücrelerinin sok ve ölüme aktivasyonunu aracîlîk birlikte stimüleedecek eder. NKsekilde hücreleri aktivesinerji eder. B hücreolusturur matürasyonu ve proliferasyonu.

Fibroblast proliferasyonu.

Adezyon moleküllerinin endotelyal hücreler üzerinde ekspresyonunu arttürür. Akut hücreler, yok yok monositler ve makrofajlarHn aktivasyon, matürasyon ve proliferasyonu.

Aktive T hücreler, büyük granüler lenfositler ve monositlerin sitolitik proliferasyonu veEndotoksin yok yok farklülasmasü. indüklü TNF sentezinin üretimini aktivasyonu. azaltjr Monositlerin aktivasyonu. MHC SHan II'nin makrofaj yukarJ regülasyonu. Thz aktivasyonu, yok yok farklülasmasü, proliferasyonu ve kemotaksis.

Bazofil aktivasyonu. B hücrelerinin proliferasyonu ve plazma hücreleri faz tepkiye yok yok yönlü yönlü seklinde katîlîr ve regüle regüle farklHlasmasH veinflamasyon, edilmis edilmis proliferasyonu. sok ve ölüme Plazma aracîlîk hücrelerinin edecek antikor üretimi.sekilde T hücrelerininsinerji sitotoksik Tolusturur. hücreler seklindeAnti-z TNF farklHlasmasH. üretimini Karacigerden akutinhibe eder. faz teoki vanLt makrofajlar içinInflamasyonda yok yok yönlü yönlü kemotaktik salJnacak regüle regüle olan ilk edilmis edilmis sitokinlerden makrofajlar vefonksiyonlarî yok yönlü yönlü mast hücreleriril bask lar regüle regüle taraandan pro- ve pro- edilmis edilmis inflamatuar inflamatuar sitokinlerin sitokinlerin üretimini inhibeüretimini eder. Tregüle eder hücrelerinin IL-2 üretimini inhibe hücrelerinin antijen özgü aktivasyonu ve sitokinlerin üretimini inhibe eder. B hücreleri için gelisme ve farklülasma.

TNF-d Gram-negatif Pro-z AkutEtki Sînîr Yukarî Yukarî bakterilere vefaz tepkiyeyok çizgisi yönlü yönlü diger bulasîc_1kat7l7r ve nde regüle regüle ajanlara konakinflamasyon, yukarî edilmis edilmis cevaana aracîlîksok ve ölüme yönlü eder. Tümöraracîlîk regüle hücrelerinin edecek edilmis ölümü. sekilde MakrofajlarHn Sinerji sitokin olusturur. ekspresyonu ve CAM. Adezyon moleküllerinin KJsaltmalar: DC: Dendritik hücreler; NK: Dogal katil Patent açDklamasEnEn baküs açülarEna iliskin özet 1. Bir memeli denekte, özellikle de bir insan denekte düsük dereceli inflamasyonu ve/veya metabolik sendromu teshis etmek için bir metot olup, söz konusu metot: (a) bahsedilen denekten elde edilen bir biyolojik SIVD içeren bir ya da daha fazla örnekte çözünebilir ürokinaz plazminojen aktivatör reseptörü (suPAR) formunda bir isaretçi düzeyinin in vitro bir ölçümünün gerçeklestirilmesi; ve (b) elde edilen, bir ya da daha fazla, ölçüni degerinin düsük dereceli inflamasyon ile iliskili bir hastalHk ve/Veya metabolik sendromun teshisinde bir faktör olarak kullanElmasEnE içermektedir. 2. Bir memeli denekte, özellikle de bir insan denekte on yEl içerisinde netabolik sendromla iliskili bir hastalük ve/veya düsük dereceli inflamasyonla iliskili bir hastalLk ve/veya kanser gelistirme riskini ve/veya mortalite riskini tahmin etmeye yönelik bir metot olup, söz konusu metot: (a) bahsedilen denekten elde edilen bir biyolojik sJvD içeren bir ya da daha fazla örnekte (i) çözünebilir ürokinaz plazminojen aktivatör reseptörü (suPAR) ve/veya (ii) suPAR'Ln D2D3 klevaj ürünleri formunda bir isaretçi düzeyinin in vitro bir ölçümünün gerçeklestirilmesi; ve (b) elde edilen ölçüm degerlerinin, on yEl içerisinde metabolik sendromla iliskili bir hastalEk ve/veya düsük dereceli inflamasyonla iliskili bir hastalEk ve/veya kanser gelistirme riskini ve/veya mortalite riskini tahmin etmek için bir faktör olarak kullanHlmasHnl içermektedir. 3. 2. maddedeki bakHs açlsHna göre metabolik sendromla iliskili bir hastaljk ve/Veya düsük dereceli inflamasyonla iliskili bir hastalEk gelistirme riskinin tahmin edildigi bir metot olup, burada söz konusu hastalEk kardiyovasküler hastallk, kronik obstrüktif akciger hastallgH, egzema, obezite, otoimmün hastallk, kanser ve diyabet tip Z'den olusan gruptan seçilir. 4. 1 ya da 2. Maddelerdeki baküs açüsüna göre bir metot olup, burada söz konusu biyolojik SEVÜ kan, kan serumu, kan plazmasE ya da idrardjr. . 1. maddedeki bakHs açlslna göre bir metot olup, burada sözü edilen denek insan immünyetmezlik virüsü ile enfekte olan ve Son Derece Aktif Anti-Retroviral Tedavi alan bir denektir. 6. Madde 1 ya da Z'ye göre bir metot olup, burada söz konusu denek belirgin sekilde sagljklüdjr. 7. Madde 1 ya da Z'ye göre metot olup, burada biyolojik bir stw` içeren bahsedilen örneklerden birden fazlaâ bahsedilen denekten birden fazla zaman noktasünda elde edilir. 8. Madde 7'e göre bir metot olup, ayrEca etki ve/veya tedavinin profilaktik seyrinin efikasitesini degerlendirmek için bir ya da daha fazla zaman noktasünda tahmin edilen riskin karsLlastLrLlmasLnU içermektedir. 9. Madde 7'ye göre bir metot olup, burada etkinin sözü edilen profilaktik seyri fiziksel egzersizi içermektedir. lO. Madde 1 ya da Z'ye göre bir metot olup, burada sözü edilen in vitro ölçüm bir ELISA testidir. ll. Madde 1 ya da Z'ye göre bir metot olup, b) addmdnda aerca bahsedilen bir ya da daha fazla ölçüm degerinin klinik sonucu tahmin etmek için bir referans degeri ile karsHlastHrtlmastm lZ. Madde l'e göre bir metot olup, burada b) adDmEnda, düsük dereceli inflamasyonu teshis etmek için ilave olarak yas, cinsiyet, etnisite, sigara içme/ içmeme durumu ve bel çevresi ölçümü kullantlHr. 13. Bir memeli denekte düsük dereceli inflamasyon ve/veya metabolik sendrom seviyesini saptamak için bir metot olup, söz konusu metot: (a) bir denekten bir örnek izole edilmesi; (b) bahsedilen (a) örneginde (i) çözünebilir ürokinaz plazminojen aktivatör reseptörü (suPAR) ve/veya (ii) suPAR'tn DZD3 klevaj ürünleri formunda bir isaretçi düzeyinin ölçülmesi; (0) (b) adEmEnda elde edilen ölçümün bir referans degeriyle karsülastDrElmasEnE içerir; içerisinde bahsedilen örnekte bahsedilen isaretçi düzeyindeki bir artls, artan düsük dereceli inflamasyon ve/veya metabolik sendrom varljgDnE göstermektedir. 14. Madde 13'e göre metot olup, burada söz konusu referans degeri, bir popülasyonda (i) çözünebilir ürokinaz plazminojen aktivatör reseptörü (suPAR) ve/veya (ii) suPAR'En D2D3 klevaj ürünleri formunda bir isaretçinin düzeylerinin bir standardldHr.

. Madde 13'e göre metot olup, burada söz konusu referans degeri, düsük dereceli inflamasyon ve/veya metabolik sendromu olmayan bir denekten bir örnekten (i) çözünebilir ürokinaz plazminojen aktivatör reseptörü (suPAR) ve/Veya (ii) suPAR'En D2D3 klevaj ürünleri formunda bir isaretçi düzeyinin ölçülmesi yoluyla elde edilir. 16. Madde 13'e göre metot olup, burada bahsedilen isaretçi düzeyi, bahsedilen referans örnegi ile karsElastErEldEgEnda en 17. Madde 13'e göre bir metot olup, burada sözü edilen metot ayrlca bir glikoz tolerans testi gerçeklestirilmesi ve/veya TNF-alfa, IL-6, lökosit sayJmH, aç karna plazma glikozu, ya da aç karna kan glikozu, kan basjncE, kolesterol, C-reaktif protein ve/veya trigliserit düzeylerinin testinin gerçeklestirilmesini içerir. 18. Bir memeli denekte on yLl içerisinde metabolik sendromla iliskili bir hastah k, düsük dereceli inflamasyonla iliskili bir hastalHk ve/Veya kanser gelistirme riskini ve/Veya mortalite riskini tahmin etmeye yönelik bir netot olup, söz konusu metot: (a) bir denekten bir örnek izole edilmesi; (b) (i) çözünebilir ürokinaz plazminojen aktivatör reseptörü (suPARJ ve/veya (ii) suPAR'Hn D2D3 klevaj ürünleri formunda bir isaretçi düzeyinin ölçülmesi; (0) (b) adEmEnda elde edilen ölçümün bir referans degeriyle karsülastDrElmasEnE içerir, burada bahsedilen isaretçi düzeyindeki bir artjs, on yEl içerisinde artan düsük dereceli inflamasyon ve/veya metabolik sendrom, kanser ve/Veya mortalite riskini göstermektedir l9. Madde 18'e göre metot olup, burada bahsedilen isaretçi düzeyi, bahsedilen referans örnegi ile karsjlastjrüldjgünda bahsedilen örnekte en az yaklasEk % 10 ve/veya 1 ng/ml yükselmistir.

. Madde 18'e göre metot olup, burada söz konusu hastalHk diyabettir. 21. Madde ZO'ye göre metot olup, burada (b) adDmE ayrüca glikoz seviyelerinin ölçülmesini içerir. 22. Madde 18'e göre metot olup, burada. söz konusu hastalük kardiyovasküler hastaletUr. 23. Madde 22'ye göre metot olup, burada (b) adel ayrlca kan basEncE, HDL-kolesterol, LDL-kolesterol, total kolesterol ve/veya trigliseritlerin ölçülmesini içerir. 24. Madde 18'e göre metot olup, burada söz konusu hastalük kanserdir.

. Madde 24'e göre metot olup, burada söz konusu kanser meme kanseri, lösemi, prostat kanseri ya da akciger kanseridir. 26. Madde 25'e göre metot olup, burada (b) adDmE ayrEca yas ve sigara içme durumunun belirlenmesini içerir. 27. Madde 18'e göre metot olup, burada on yjl içerisindeki yüksek mortalite riski ölçülür. 28. Madde 27'ye göre metot olup, burada (b) adel ayrlca beyin natriüretik peptit konsantrasyonlarHnln ölçülmesini içerir. 29. Bir memeli denekte düsük dereceli inflamasyon ve/Veya metabolik sendromun tedavisini izlemek için bir metot olup, söz konusu metot: (a) düsük dereceli inflamasyon ve/veya metabolik sendrom tedavisine tabi tutulan bir denekten bir örnegin izole edilmesi; (b) (i) çözünebilir` ürokinaz plazminojen aktivatör* reseptörü (suPAR) ve/veya (ii) suPAR'Ün D2D3 klevaj ürünleri formunda bir isaretçi düzeyinin ölçülmesini içerir; burada (b) adeWnda kullanllan bahsedilen isaretçi seviyesindeki bir azalma tedavinin ilerlemesinin bir göstergesidir.

. Madde 29'a göre bir metot olup, burada bahsedilen isaretçi seviyesi, en az yaklasjk % 10 ve/veya 1 ng/ml kadar azaltjlür. 31. Bir memeli denekte düsük dereceli inflamasyonu ve/veya metabolik sendromu tedavi etmek için bir metot olup, söz konusu metot, bahsedilen düsük dereceli inflamasyonu ve/veya metabolik sendromu tedavi etmek için etkili olan suPAR seviyesini azaltan bir madde miktarjnün ihtiyaç duyan bir denege uygulanmasjnü içerir. 32. Madde 31'e göre metot olup, burada bahsedilen madde bir anti-suPAR antikorudur. 33. Madde 32'ye göre metot olup, burada bahsedilen anti-suPAR antikoru bir monoklonal ya da poliklonal antikordur. 34. Madde 31'e göre metot olup, burada bahsedilen madde uPA baglayabilen bir suPAR analogu ya da türevidir.

. Madde 31'e göre metot olup, burada› bahsedile madde bir D2D3 klevaj ürünüdür. 36. Düsük dereceli inflamasyonun ve/veya netabolik sendromun tedavisi ya da önlenmesinde kullanEm için bir farmasötik kompozisyon olup, bir memeli denekte suPAR'En seviyesini azaltan bir madde içerir. 37. Düsük dereceli inflamasyon ve/veya metabolik sendromun tedavisi veya önlenmesi için terapötik bir kompozisyon hazErlamak için bir maddenin kullanjmü olup, burada bahsedilen madde bir memeli denekte suPAR'En seviyesini azaltDr. 38. Bir veri isleme sisteminde uygulanErken, veri isleme sisteminin düsük düzeyli inflamasyonla iliskili hastalük, bir metabolik sendromla iliskili hastalEk, kanser ve/veya mortalitenin lO yHl içerisinde gerçeklesme riski ve/Veya risk degisimini hesaplamasjnü saglamak için konfigüre edilen bilgisayar mantEgEna sahip olan bir bilgisayar tarafEndan okunabilir ortam olup: (a) bir memeli denekten elde edilen bir ya da daha fazla ölçümün alünmasü için mantEk, içerir, söz konusu en az bir ölçüm, bahsedilen denekten elde edilen bir ya da daha fazla örnekte (i) çözünebilir ürokinaz plazminojen aktivatör reseptörü (suPAR) ve/veya (ii) suPAR'Dn D2D3 klevaj ürünleri formunda bir isaretçinin seviyesinin bir in vitro ölçümüdür; (b) (a) adEmDndaki bahsedilen ölçümlerden bir ya da daha fazlasLnLn analizi için mantLgU içerir; ve (c) sözü edilen ölçümlerin (b) adelndaki analize baglH olarak on yül içerisinde bahsedilen düsük dereceli inflamasyonla iliskili hastalük, sözü edilen metabolik sendromla iliskili hastalEk, sözü edilen kanser ve/veya sözü edilen mortalite riski ve/veya riskteki degisimin hesaplanmasU için mantUgJ 39. Madde 38'deki bilgisayar taraflndan okunabilir ortam olup, burada (a) adDmJndaki mantük, bir insan denekten elde edilen iki ya da daha fazla ölçümü alDr, burada en az bir ölçüm, bahsedilen denekten elde edilen bir ya da daha fazla örnekte (i) çözünebilir ürokinaz plazminojen aktivatör reseptörü (suPARJ ve/veya (ii) suPAR'lm D2D3 klevaj ürünleri formunda bir isaretçinin seviyesinin in vitro ölçümüdür. 40. Madde 38'deki bilgisayar tarafEndan okunabilir ortam olup, burada söz konusu veri isleme sistemi, diyabet gelistirme riskini hesaplamak için kullanüljr. 41. Madde 40'taki bilgisayar tarafindan okunabilir ortam olup, burada söz konusu mantlk ayrlca bahsedilen memeli denekten kan glikoz seviyelerinin ölçümlerini alür. 42. Madde 38'deki bilgisayar tarafEndan okunabilir ortam olup, burada söz konusu veri isleme sistemi, kardiyovasküler hastalEk gelistirme riskini hesaplamak için kullanüljr. 43. Madde 42'deki bilgisayar taraflndan okunabilir ortam olup, burada söz konusu mantEk ayrDca kan basüncj, HDL-kolesterol, LDL-kolesterol, total kolesterol ve/veya trigliserit ölçümlerini alDr. 44. Madde 38'deki bilgisayar tarafEndan okunabilir ortam olup, burada söz konusu veri isleme sistemi, kanser gelistirme riskini hesaplamak için kullanHllr. 45. Madde 44'e göre bilgisayar taraflndan okunabilir ortam olup, burada söz konusu kanser meme kanseri, lösemi, prostat kanseri ya da akciger kanseridir. 46. Madde 38'deki bilgisayar tarafEndan okunabilir ortam olup, burada söz konusu veri isleme sistemi bir memeli denekte 1 içerisinde mortalite riskini hesaplamak için kullanElEr. 47. Madde 46'daki bilgisayar tarafEndan okunabilir ortam olup, burada söz konusu mantük ayrjca beyin natriüretik peptit konsantrasyonlaanLn ölçümlerini alUr. 48. Bir bilgisayar program. ürünü olup, madde 38'deki bilgisayar taraflndan okunabilir ortaml içerir. 49. Bir` metabolik sendromla iliskili hastalük 've/veya düsük dereceli inflamasyonla iliskili hastalEk gelistirme riskini ve/veya risk degisimini belirlemek için bir bilgisayar olup (a) bilgisayar taraandan okunabilir verilerle kodlanan bir veri saklama, materyalini saklamak için konfigüre edilen bir bilgisayar taraandan. okunabilir* veri saklama. ortamJl içerir, burada bahsedilen veriler bir memeli denekten bir ya da daha fazla örnekten elde edilen ölçümleri içerir, burada en az bir ölçüm, (i) çözünebilir ürokinaz plazminojen aktivatör reseptörü (suPAR) ve/veya (ii) suPAR'Hn D2D3 klevaj ürünleri formunda bir isaretçi seviyesinin in vitro ölçümüdür; (b) bahsedilen bilgisayar tarafindan okunabilir verileri islemek için içerisinde talimatlara sahip olan bir saklama ortamü; (c) bahsedilen bilgisayar-makine taraflndan okunabilir verileri risk ölçümü ve tedavi ilerleme degerleri seklinde islemek için bahsedilen saklama ortamüyla ve bahsedilen bilgisayar tarafjndan okunabilir veri saklama ortamüyla birlestirilen, bahsedilen talimatlara yanjt veren bir merkezi islem birimi; ve (d) bahsedilen riski ve/veya risk degerlerindeki degisimin çEktDsEnE almak için (c) adEmEnda bahsedilen merkezi islem birimine birlestirilen bir çEkÜs aygEtE içerir. 50. Madde 49'daki bilgisayar olup, burada (a) adEmJndaki bilgisayar tarafEndan okunabilir veri saklama ortamü bir insan denekten elde edilen iki ya da daha fazla ölçümü içeren verileri içerir, burada en az bir ölçüm, bahsedilen denekten elde edilen bir ya da daha fazla örnekte (i) çözünebilir ürokinaz plazminojen aktivatör reseptörü (suPAR) ve/veya (ii) suPAR'En D2D3 klevaj ürünleri formunda bir isaretçi seviyesinin bir in vitro ölçümüdür. 51. Madde 49'daki bilgisayar olup, burada söz konusu bilgisayar, diyabet gelistirme riskini hesaplamak için kullanElEr. 52. Madde 49'daki bilgisayar olup, burada söz konusu bilgisayar diyabet gelistirme riskini hesaplamak için kullanLlLr ve bilgisayar depolama ortamUndaki veriler aerca bahsedilen memeli denekten kan glikoz seviyelerinin ölçümlerini içerir. 53. Madde 49'daki bilgisayar olup, burada söz konusu bilgisayar, kardiyovasküler hastalük gelistirme riskini hesaplamak için kullanjlür. 54. Madde 49'daki bilgisayar olup, burada söz konusu bilgisayar kardiyovasküler hastalEk gelistirme riskini hesaplamak için kullanElDr ve bilgisayar saklama ortamlndaki veriler ayrkca kan baslnck, HDL-kolesterol, LDL-kolesterol, total kolesterol, C-reaktif protein ve trigliseritlerin ölçümlerini içerir. 55. Madde 49'daki bilgisayar olup, burada söz konusu bilgisayar kanser (örnegin meme kanseri, lösemi, prostat kanseri ya da akciger kanseri) gelistirme riskini hesaplamak için kullanllkr. 56. Madde 49'daki bilgisayar olup, burada söz konusu bilgisayar bir memeli denekte l yEl, 3 yEl, 5 yEl, lO yDl, l yEl-lO yjl, 1-5 yEl, 5-10 yül içerisinde mortalite riskini hesaplamak için kullanjlür. 57. Madde 49'daki bilgisayar olup, burada söz konusu bilgisayar bir memeli denekte 10 yHl içerisinde mortalite riskini hesaplamak için kullanjlür ve bilgisayar tarafEndan okunabilir ortamdaki veriler ayrEca beyin natriüretik peptit konsantrasyonlarEnEn ölçümlerini içerir. 58. Bir Inetabolik sendromla iliskili hastalUk. ve/veya düsük dereceli inflamasyonla iliskili hastallk gelistirme riskini ve/veya risk degisimini belirlemek için bir risk hesaplama sistemine erisim saglayan bir istemci bilgisayar olup, söz konusu istemci bilgisayar: (a) bir memeli denekten elde edilen bir ya da daha fazla ölçümün alUnmasU için bir girdi aygLtU içerir, burada en az bir ölçüm, bahsedilen denekten elde edilen bir ya da daha fazla. örnekte (i) çözünebilir* ürokinaz plazminojen aktivatör reseptörü (suPAR) ve/veya (ii) suPAR'Dn D2D3 klevaj ürünleri formunda bir isaretçi seviyesinin in vitro ölçümüdür; (b) alEnan bir ya da daha fazla ölçümün, (a) adDmEndaki bahsedilen bir` ya da daha fazlar ölçümü› analiz etmekr ve bir risk degeri hesaplamak için konfigüre edilen bir sunucu bilgisayara gönderilmesi için bir iletisim arayüzü; ve (0) sunucu bilgisayardan hesaplanan bir risk degerini almak için bir iletisim ara yüzü içerir. 59. Madde 58'deki bilgisayar olup, burada (a) adÜmEndaki girdi aygtül, bir insan demekten elde edilen iki ya da daha fazla ölçümü aljr, burada en az bir ölçüm, bahsedilen demekten elde edilen bir ya da daha fazla örnekte (i) çözünebilir ürokinaz plazminojen aktivatör reseptöru (suPAR) ve/veya (ii) suPAR'En D2D3 klevaj ürünleri formunda bir isaretçi seviyesinin in vitro ölçümüdür. 60. Madde 60'taki bilgisayar olup, burada söz konusu bilgisayar, diyabet gelistirme riskini hesaplamak için kullanElEr. 61. Madde 59'daki bilgisayar olup, burada söz konusu bilgisayar diyabet gelistirme riskini hesaplamak için kullanLlLr ve burada söz konusu girdi aygUtL ayrUca bahsedilen memeli denekten kan glikoz seviyelerinin ölçümlerini alHr. 62. Madde 59'daki bilgisayar olup, burada söz konusu bilgisayar, kardiyovasküler hastalük gelistirme riskini hesaplamak için kullanjlür. 63. Madde 59'daki bilgisayar olup, burada söz konusu bilgisayar kardiyovasküler hastaltk gelistirme riskini hesaplamak için kullanWlHr ve burada (a) adlmlndaki girdi aygEtü ayrEca kan basüncj, HDL-kolesterol, LDL-kolesterol, total kolesterol, ve/veya trigliseritlerin ölçümlerini aljr. 64. Madde 59'daki bilgisayar olup, burada söz konusu bilgisayar kanser (örnegin meme kanseri, prostat kanseri, lösemi ya da akciger kanseri) gelistirme riskini hesaplamak için kullanlltr. 65. Madde 59'daki bilgisayar olup, burada söz konusu bilgisayar kanser (örnegin meme kanseri, prostat kanseri, lösemi ya da akciger kanseri) gelistirme riskini hesaplamak için kullanllHr ve burada sözü edilen girdi aygHtl ayrica sigara içme ve yasla ilgili verileri alHr. 66. Madde 49'daki bilgisayar olup, burada söz konusu bilgisayar* bir memeli denekte l-lO yEl içerisinde mortalite riskini hesaplamak için kullanüljr. 67. Madde 60'taki bilgisayar olup, burada söz konusu bilgisayar bir memeli denekte 1-10 yEl içerisinde mortalite riskini hesaplamak için kullanJlJr ve girdi aygjtü (a) ayrüca beyin natriüretik peptit konsantrasyonlarjnün ölçümlerini 68. Bir memeli denekte metabolik sendromla iliskili bir hastaltk, düsük dereceli inflamasyonla iliskili hastalkk (örnegin kanser) gelistirme riski ve/veya mortalite riskini belirlemek için bilgisayar tabanlE bir metot olup, (a) bahsedilen denekten elde edilen bir ya da daha fazla örnekte, bilgisayar kontrolü altEnda (i) çözünebilir ürokinaz plazminojen aktivatör reseptörü (suPAR) ve/veya (ii) suPAR'Ln D2D3 klevaj ürünleri formunda bir isaretçi seviyesinin in vitro bir Ölçümünün aljnmasj; (b) bilgisayar kontrolü altünda (a) adjmjnda alünan bahsedilen in vitro ölçümün analiz edilmesi; (c) (b) adLmUnda elde edilen analiz edilmis ölçümler kullanllarak bir memelide 1 ytl, 3 yll, 5 ytl, 10 ytl içerisinde ya da 1-5 yHl, 1-10 yHl ya da 5-10 yil araslnda bilgisayar kontrolü altünda bir nßtabolik sendromla iliskili hastalEk, düsük dereceli inflamasyonla iliskili hastalEk (örnegin kanser) gelistirme ve/veya mortalite riski degerinin hesaplanmasLnL içerir. 68. SaglHkll bir bireyin kardiyovasküler hastallk, kronik obstrüktif akciger hastallgIh egzema, obezite, otoimmün hastalEk, kanser, metabolik sendrom ya da diyabet tip 2 gelistirme riskini azaltmak için bir metot olup: (a) bireyde suPAR seviyesinin belirlenmesi; ve (b) hasta için bahsedilen suPAR. seviyesinin l sJglnda kismen uygun tedaviye karar verilmesi adtmlarlnH içerir. 69. Saglel] bir bireyin kardiyovasküler hastaljk, kronik obstrüktif akciger hastaljgj, egzema, obezite, otoimmün hastalEk, kanser, metabolik sendrom ya da tip 2 diyabet gelistirme riskini azaltmak için bir metot olup, bireyin plazmasjnda suPAR seviyesinin azaltülmasü adÜmEnE içerir. 70. Madde 70'e göre bir metot olup, burada söz konusu plazma seviyesi 6 ng/ml'nin altüna düsürülür.

Claims (9)

ISTEMLER

1. Belirgin derecede saglik bir memeli denekte, örnegin bir insan denekte düsükr dereceli inflamasyonu teshis etmek için bir metot olup, özelligi: (a) bahsedilen denekten elde edilen bir biyolojik sivi içeren bir ya da daha fazla örnekte çözünebilir üroki naz pl azmi nojen aktivatör reseptörü (suPAR) ve/veya (ii) suPAR'in D2D3 klevaj ürünleri formunda bir isaretçi seviyesinin in vitro bir ölçümünun gerçeklestirilmesi, ve (b) elde edilen bir ya da daha fazla. ölçüni degerinin düsük dereceli inflamasyon teshisinde bir faktör olarak kullanilmasini içermesidir.

2. Bir memeli denekte, örnegin bir insan denekte düsük dereceli inflamasyonla iliskili bir hastalik gelisme riskini tahmin etmek için bir metot olup, özelligi: (a) bahsedilen denekten elde edilen bir biyolojik sivi içeren bir ya da daha fazla örnekte (i) çözünebilir üroki naz plazminojen aktivatör reseptörü (suPAR) ve/veya (ii) suPAR'in D2D3 klevaj ürünleri formunda bir isaretçi seviyesinin in vitro bir ölçümünün gerçeklestirilmesi; ve (b) elde edilen öcüm degerinin, düsük dereceli inflamasyonla iliskili bir hastalik gelistirme riskini tahmin etmek için bir faktör olarak kullanilmasini içermesidir.

3. Istem 1 ya da Z'ye göre bir metot olup, özelligi; burada söz konusu biyolojik sivinin kan serumu, kan plazmasi ya da idrar olmasidir.

4. Istem 1 ya da Z'ye göre bir metot olup, özelligi; burada biyolojik bir sivi içeren söz konusu örneklerden birden fazlasinin bahsedilen denekten birden fazla zaman noktasinda elde edilmis olmasidir.

5. Istem 4'e göre bir metot olup, özelligi; ayrica etki ve/veya tedavinin profilaktik seyrinin efikasitesim degerlendirmek için bir ya da daha fazla zaman noktasinda isaretçi seviyesinin karsilastirilmasini içermesidir.

6. Istem 5'e göre bir metot olup, özelligi; burada etkinin sözü edilen profilaktik seyrinin fiziksel egzersiü içermesidir.

7. Istem 5 ya da 6'ya göre bir metot olup, özelligi; burada sözü edilen isaretçi seviyesindeki en az % 10 veya 1 ng/ml'lik bir azalmanin efikasiteyi göstermesidir.

8. Onceki istemlerin herhangi birine göre bir metot olup, özelligi; burada sözü edilen in vitro ölçümün bir ELISA testi olmasidir.

9. Onceki istemlerin herhangi birine göre bir metot olup, özelligi; burada sözü edilen metodun ayrica bir glikoz tolerans testi gerçeklestirilmesi ve/Veya TNF-alfa, IL-6, lökosit sayimi, aç karna plazma glikozu, ya da aç karna kan glikozu, kan basinci, kolesterol, C-reaktif protein ve/veya trigliserit seviyelerinin testinin gerçeklestirilmesini içermesidir.