TH69150B - กรรมวิธีการตรวจและคัดกรองเอนไซม์ต่าง ๆ อย่างรวดเร็ว - Google Patents

Abstract

------31/07/2561------(OCR) หน้า 1 ของจำนวน 1 หน้าบทสรุปการประดิษฐ์การประดิษฐ์นี้ได้มุ่งเน้นการพัฒนากรรมวิธีการตรวจและคัดกรองเอนไซม์ต่างๆ อย่างรวดเร็วโดยได้ปรับปรุงวิธีการคัดกรองหาเอนไซม์จากแบคทีเรียที่ผลิตเอนไซม์แล้วเก็บละสมไว้ในเซลล์ ซึ่งโดยปกติเอนไซม์ที่ถูกผลิตและสะสมในเซลล์จะใช้เวลาค่อนข้างนานกว่าเอนไซม์จะถูกปล่อยออกมานอกเซลล์โดยเกิดการรั่วของเอนไซม์ผ่านผนังเซลล์ของแบคทีเรีย ดังนั้น จึงได้มีการทดลองหาวิธีการที่ทำให้ผนังเซลล์แบคทีเรียมีรูรั่วและปลดปล่อยเอนไซม์ออกมาโดยที่ไม่มีผลต่อการเจริญเติบโตของเซลล์โดยวิธีการที่เรียกว่าเทคนิคการเททับ ซึ่งจะผสมสารต่างๆ ที่มีผลต่อการรั่วของผนังเซลล์แบคทีเรียทำให้แบคทีเรียเกิดการปลดปล่อยเอนไซม์ออกมาได้มากขึ้นและรวดเร็วขึ้นทำให้สามารถตรวจสอบกิจกรรมของเอนไซม์ได้ด้วยระดับความไวในการตรวจวัดที่สูงขึ้นและใช้เวลาน้อยลง การประดิษฐ์นี้ได้ใช้สารเคมีที่มีราคาถูกกว่าในการทำให้เกิดรูรั่วบนผนังเซลล์แทนการใช้สารเดิมร่วมกับเทคนิคการเททับด้วยวุ้นบนแบคทีเรียที่เพาะเลี้ยงบนอาหารแข็ง โดยมีการทดสอบความสามารถของสารเคมีในการทำให้เกิดการรั่วของผนังเซลล์ เพื่อการประยุกต์ใช้ในการตรวจวัดกิจกรรมของเอนไซม์โนกลุ่มย่อย'โพลีแซคคา'ไรด์ ไลเปส และโปรติเอสของแบคทีเรีย ------------ การประดิษฐ์นี้ได้มุ่งเน้นการพัฒนากรรมวิธีการตรวจและคัดกรองเอนไซม์ต่างๆ อย่างรวดเร็วโดยได้ปรับปรุง วิธีการคัดกรองหาเอนไซม์จากแบคทีเรียที่ผลิตเอนไซม์แล้วเก็บสะสมไว้ในเซลล์ ซึ่งโดยปกติเอนไซม์ที่ถูกผลิตและสะสม ในเซลล์จะใช้เวลาค่อนข้างนานกว่าเอนไซม์จะถูกปล่อยออกมานอกเซลล์โดยเกิดการรั่วของเอนไซม์ผ่านผนังเซลล์ของ แบคทีเรีย ดังนั้นจึงได้มีการทดลองหาวิธีการที่ทำให้ผนังเซลล์แบคทีเรียมีรูรั่วและปลดปล่อยเอนไซม์ออกมาโดยที่ไม่มี ผลต่อการเจริญเติบโตของเซลล์โดยวิธีการที่เรียกว่าเทคนิคการเททับ ซึ่งจะผสมสารต่างๆ ที่มีผลต่อการรั่วของผนัง เซลล์เบคทีเรียทำให้เบคทีเรียเกิดการปลดปล่อยเอนไซม์ออกมาได้มากขึ้นและรวดเร็วขึ้นทำให้สามารถตรวจสอบ กิจกรรมของเอนไซม์ได้ด้วยระดับความไวในการตรวจวัดที่สูงขึ้นและใช้เวลาน้อยลง การประดิษฐ์นี้ได้ใช้สารเคมีที่มี ราคาถูกกว่าในการทำให้เกิดรูรั่วบนผนังเซลล์แทนการใช้สารเดิมร่วมกับเทคนิคการเททับด้วยวุ้นบนเบคทีเรียที่ เพาะเลี้ยงบนอาหารแข็ง โดยมีการทดสอบความสามารถของสารเคมีในการทำให้เกิดการรั่วของผนังเซลล์ เพื่อการ ประยุกต์ใช้ในการตรวจวัดกิจกรรมของเอนไซม์ในกลุ่มย่อยโพลีแซคคาไรด์ ไลเปส และโปรตินเอสของแบคทีเรีย

Claims (8)

ข้อถือสิทธฺ์ (ทั้งหมด) ซึ่งจะไม่ปรากฏบนหน้าประกาศโฆษณา :------31/07/2561------(OCR) หน้า 1 ของจำนวน 2 หน้าข้อถือสิทธิ 1. กรรมวิธีการตรวจและคัดกรองเอนไซม์อย่างรวดเร็ว ที่มีขั้นตอนดังนี้1.1 การเตรียมอาหารเลี้ยงเชื้อแบบแข็งที่ผสมสับสเตรทของเอนไซม์ที่ต้องการตรวจและคัดกรอง1.2 การเลี้ยงเซลล์แบคทีเรียที่ผลิตเอนไซม์ที่ต้องการตรวจและคัดกรองบนอาหารแข็ง1.3 การเททับโคโลนิของแบคทีเรียที่ผลิตเอนไซม์ที่ต้องการตรวจและคัดกรองด้วยวุ้นที่ผสมสารเคมีที่มีฤทธึ๋ทำให้เซลล์แบคทีเรียรั่วได้ ซึ่งสารเคมีที่มิฤทธึ๋คังกล่าว เลือกได้จาก สาร EDTA, สารแอมพิซิสิน, สารโซเดียมโดเดกซิลซัลเฟต, สารซาโคซีน หรือ สารไทรทอนเอ็กล์-!00 อย่างหนึ่งหรือหลายอย่างรวมกัน1.4 การตรวจสอบกิจกรรมของเอนไซม์ที่มีลักษณะพิเศษคือ การทำให้เกิดรูรั่วบนผนังเซลล์เพื่อปลดปล่อยเอนไซม์ออกมาร่วมกับเทคนิคการเททับโคโลนีของแบคทีเรียที่ผลิตเอนไซม์เพื่อคัดกรองเอนไซม์บนอาหารแข็ง โดยสามารถตรวจสอบกิจกรรมการทำงาบของเอนไซม์ได้ซัดเจนและรวดเร็วชื้น 2. กรรมวิธีการตรวจและคัดกรองเอนไซม์อย่างรวดเร็ว ตามข้อถือสิทธิที่ 1 ที่ซึ่ง อาหารเลี้ยงเชื้อแบบแข็งที่ผสมสับสเตรทดังกล่าว มีลักษณะพิเศษคือ ประกอบด้วย 0.05% ของสับสเตรทสำหรับคัดกรองแบคทีเรียที่ผลิตเอนไซม์สารไตรบิวไทรีน 1% สารกัมแอราบิค 0.1% หรือ นมพร่องมันเนย 2% 3. กรรมวิธีการตรวจและคัดกรองเอนไซม์อย่างรวดเร็ว ตามข้อถือสิทธิที่ 1 ที่ซึ่ง การเลี้ยงเซลล์แบคทีเรียที่ผลิตเอนไซม์ที่ต้องการตรวจและคัดกรองบนอาหารแข็ง มีลักษณะพิเศษคือ เลี้ยงเซลล์ที่อุณหภูมิที่เหมาะสมเป็นเวลา 16 - 48ชั่วโมงจากนั้นนำเซลล์ดังกล่าวมาลดปริมาณให้มีเซลล์ 5 - 20 โคโลนิต่อเพลท แล้วนำมาเทแผ่บนอาหารแข็งที่มีสับสเตรทดังกล่าว และเลี้ยงเซลล์ดังกล่าวที่อุณหภูมิที่เหมาะสม จนกระทั้งโตเป็นโคโลนิ 4. กรรมวิธีการตรวจและคัดกรองเอนไซม์อย่างรวดเร็ว ตามข้อถือลิทธีที่ 1 ที่ซึ่ง การเททับโคโลนิของแบคทีเรียที่ผลิตเอนไซม์ มิลักษณะพิเศษคือ เททับโคโลนิของแบคทีเรียดังกล่าวด้วยวุ้น 0.7% ที่ผสมสารเคมีที่มีฤทธี้\'ทำ\'ให้เซลล์แบคทีเรียรั่วได้ ที่ซึ่งเลือกได้จาก สาร EDTA ที่ความเข้มข้น 10 ถึง 50 มิลลิโมลารี, สารแอมพิซีลินที่ความเข้มข้น 25ถืง 50 มิลลิโมลารี, สารโซเดียมโดเดกซิลซัลเฟต (SDS) ที่ความเข้มข้นร้อยละ 0.1 ถึง 1.0, สารซาโคซีนที่ความเข้มข้นร้อยละ 0.1 ถึง 0.5, หรือสารไทรทอนเอ็กล์-!00 ที่ความเข้มข้นร้อยละ 0.05 ถึง 0.1 5. กรรมวิธีการตรวจและคัดกรองเอนไซม์อย่างรวดเร็ว ตามข้อถือสิทธิที่ 1 หรือ 4 ข้อใดข้อหนึ่ง ที่ซึ่ง การเททับ\'โค\'โลนิของแบคทีเรียที่ผลิตเอนไซม์ มีลักษณะพิเคษคือ เททับโคโลนิของแบคทีเรียดังกล่าวด้วยวุ้น 0.7% ที่ผสมสารเคมีที่มีฤทธี้ทำให้เซลล์แบคทีเรียรั่วได้มากกว่าหนึ่งชนิด ที่เลือกได้จาก (5.1) สารแอมพิซิสินและสาร EDTA (5.2) สารแรมพิซิลินและสาร SDS (5.3) สารแอมพิซิสินและสารไทรทอนเอ็กล์-!00 (5.4) สารแอมพิซิสินและสารซาโคซีน (5.5)สาร SDS และสารซาโคซีน (5.6) สาร SDS และสารไทรทอนเอ็กล์-พ0 (5.7) สารซาโคซีนและสารไทรทอนเอ็กล์-!00หรือ (5.8) สาร SDS, สารซาโคซีนและสารไทรทอนเอ็กล์-!00 6. กรรมวิธีการตรวจและคัดกรองเอนไซม์อย่างรวดเร็ว ตามข้อถือสิทธิที่ 1, 4 หรือ 5 ข้อใดข้อหนึ่ง ที่ซึ่ง การเททับโคโลนิของแบคทีเรียที่ผลิตเอนไซม์ มีลักษณะพิเศษคือ เททับโคโลนิของแบคทีเรียดังกล่าวด้วยวุ้น 0.7% ที่ผสมลับสเตรทไม่ละลายนํ้าลงบนโคโลนิที่เจริญอยู่บนเพลท แล้วเลี้ยงเชื้อที่ต้องการตรวจที่ 37 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 1 ชั่วโมง 7. กรรมวิธีการตรวจและคัดกรองเอนไซม์อย่างรวดเร็ว ตามข้อถือสิทธิที่ 1, 4, 5 หรือ 6 ข้อใดข้อหนึ่ง ที่ซึ่ง การเททับโคโลนิของแบคทีเรียที่ผลิตเอนไซม์ มิลักษณะพิเศษคือ เททับโคโลนิของแบคทีเรียดังกล่าวด้วยวุ้น 0.7% ในสารละลายบัฟเฟอร์ที่ค่า pH 3 ถึง 10 เพื่อใซ้คัดกรองหาเอนไซม์ที่ทำงานได้ดีในสภาวะที่เป็นกรดด่างรุนแรงหน้า 2 ของจำนวน 2 หน้า 8. กรรมวิธีการตรวจและคัดกรองเอนไซม์อย่างรวดเร็ว ตามข้อถือสิทธิที่ 1, 4, 5, 6 หรือ 7 ข้อใดข้อหนึ่ง ที่ซึ่ง การเททับ โคโลนีของแบคทีเรียที่ผลิตเอนไซม์ มีลักษณะพิเศษคือ เททับโคโลนีของแบคทีเรียดังกล่าวด้วยวุ้น 0.7% ที่ผสม ลับสเตรทมากกว่าหนึ่งชนิดเพื่อตรวจกิจกรรมของเอนไซม์มากกว่า 1 ชนิดในเวลาเดียวกัน ------------

1. กรรมวิธีการตรวจและคัดกรองเอนไซม์อย่างรวดเร็ว ที่ขั้นตอนดังนี้ 1.1 การเตรียมอาหารเลี้ยงเชื้อแบบแข็งที่ผสมสับสเตรทของเอนไซม์ที่ต้องการตรวจและคัดกรอง 1.2 การเลี้ยงเซลล์แบคทีเรียที่ผลิตเอนไซม์ที่ต้องการตรวจและคัดกรองบนอาหารแข็ง 1.3 การเททับโคโลนีของแบคทีเรียที่ผลิตเอนไซม์ที่ต้องการตรวจและคัดกรองด้วยวุ้นที่ผสมสารเคมีที่มีฤทธิ์ทำให้ เซลล์แบคทีเรียรั่วได้ และ 1.4 การตรวจสอบกิจกรรมของเอนไซม์ ที่มีลักษณะพิเศษคือ การทำให้เกิดรูรั่วบนผนังเซลล์เพื่อปลดปล่อยเอนไซม์ออกมา ร่วมกับเทคนิคการเททับโคโลนี ของแบคที่เรียที่ผลิตเอนไซม์ เพื่อคัดกรองเอนไซม์บนอาหารแข็ง โดยสามารถตรวจสอบกิจกรรมการทำงานของ เอนไซม์ได้ชัดเจนและรวดเร็วขึ้น

2. กรรมวิธีการตรวจและคัดกรองเอนไซม์อย่างรวดเร็ว ตามข้อถือสิทธิที่ 1 ที่ซึ่ง อาหารเลี้ยงเชื้อแบบแข็งที่ผสม สับสเตรทดังกล่าว มีลักษณะพิเศษคือประกอบด้วย 0.05% ของสับสเตรทสำหรับคัดกรองแบคทีเรียที่ผลิตเอนไซม์ สารไตรบิวไทริน 1% สารกัมแอราบิค 0.1% หรือ นมพร่องมันเนย 2%

3. กรรมวิธีการตรวจและคัดกรองเอนไซม์อย่างรวดเร็ว ตามข้อถือสิทธิที่ 1 ที่ซึ่ง การเลี้ยงเซลล์แบคทีเรียที่ผลิต เอนไซม์ที่ต้องการตรวจและคัดกรองบนอาหารแข็ง มีลักษณะพิเศษคือ เลี้ยงเซลล์ที่อุณหภูมิที่เหมาะสมเป็นเวลา ประมาณ 16-48 ชั่วโมงจากนั้นนำเซลล์ดังกล่าวมาลดปริมาณให้มีเซลล์ประมาณ 5-20 โคโลนีต่อเพลท แล้วนำมา เทแผ่บนอาหารแข็งที่มีสับสเตรทดังกล่าว และเลี้ยงเซลล์ดังกล่าวที่อุณหภูมิที่เหมาะสม จนกระทั้งโตเป็นโคโลนี

4. กรรมวิธีการตรวจและคัดกรองเอนไซม์อย่างรวดเร็ว ตามข้อถือสิทธิที่ 1 ที่ซึ่ง การเททับโคโลนีของแบคทีเรียที่ผลิต เอนไซม์ มีลักษณะพิเศษคือ เททับโคโลนีของแบคทีเรียดังกล่าวด้วยวุ้น 0.7% ที่ผสมสารเคมีที่มีฤทธิ์ทำให้เซลล์ แบคทีเรียรั่วได้ ที่ซึ่งเลือกได้จาก สาร EDTA ที่ความเข้มข้นประมาณ 10 ถึง 50 มิลลิโมลาร์ สารแอมพิซิลินที่ความ เข้มข้นประมาณ 25 ถึง 50 มิลลิโมลาร์ สารโซเดียมโดเดกซิลซัลเฟต (SDS) ที่ความเข้มข้นประมาณร้อยละ 0.1 ถึง 1.0 สารซาโคซีนที่ความเข้มข้นประมาณร้อยละ 0.1 ถึง 0.5 สารหรือไทรทอนเอ็กส์ -100 ที่ความเข้มข้น ประมาณร้อยละ 0.05 ถึง 0.1

5. กรรมวิธีการตรวจและคัดกรองเอนไซม์อย่างรวดเร็ว ตามข้อถือสิทธิที่ 1 หรือ 4 ข้อใดข้อหนึ่ง ที่ซึ่ง การเททับโคโลนี ของแบคทีเรียที่ผลิตเอนไซม์ มีลักษณะพิเศษคือ เททับโคโลนีของแบคทีเรียดังกล่าวด้วยวุ้น 0.7% ที่ผสมสารเคมีที่ มีฤทธิ์ทำให้เซลล์แบคทีเรียรั่วได้มากกว่าหนึ่งชนิด ที่เลือกได้จาก (5.1) สารแอมพิซิลินและสาร EDTA (5.2) สาร แอมพิซิลินและสาร SDS (5.3) สารแอมพิซิลินและสารไทรทอนเอ็กส์-100 (5.7) สารซาโคซีนและสารไทรทอน เอ็กส์-100 หรือ (5.8) สาร SDS, สารซาโคซีนและสารไทรทอนเอ็กส์-100

6. กรรมวิธีการตรวจและคัดกรองเอนไซม์อย่างรวดเร็ว ตามข้อถือสิทธิที่ 1, 4 หรือ 5 ข้อใดข้อหนึ่ง ที่ซึ่ง การเททับ โคโลนีของแบคทีเรียที่ผลิตเอนไซม์ มีลักษณะพิเศษคือ เททับโคโลนีของแบคทีเรียดังกล่าวด้วยวุ้น 0.7% ที่ผสม สับสเตรทไม่ละลายน้ำลงบนโคโลนีที่เจริญอยู่บนเพลท แล้วเลี้ยงเชื้อที่ต้องการตรวจที่ 37 องศาเซลเซียส เป็นเวลา ประมาณ 1 ชั่วโมง

7. กรรมวิธีการตรวจและคัดกรองเอนไซม์อย่างรวดเร็ว ตามข้อถือสิทธิที่ 1, 4, 5 หรือ 6 ข้อใดข้อหนึ่ง ที่ซึ่ง การเททับ โคโลนีของแบคทีเรียที่ผลิตเอนไซม์ มีลักษณะพิเศษคือ เททับโคโลนีของแบคทีเรียดังกล่าวด้วยวุ้น 0.7% ใน สารละลายบัฟเฟอร์ที่ค่า pH3 ถึง 10 เพื่อใช้คัดกรองหาเอนไซม์ที่ทำงานได้ดีในสภาวะที่เป็นกรดด่างรุนแรง

8. กรรมวิธีการตรวจและคัดกรองเอนไซม์อย่างรวดเร็ว ตามข้อถือสิทธิที่ 1, 4 , 5, 6 หรือ 7 ข้อใดข้อหนึ่ง ที่ซึ่ง การเท ทับโคโลนีของแบคทีเรียที่ผลิตเอนไซม์ มีลักษณะพิเศษคือ เททับโคโลนีของแบคทีเรียดังกล่าวด้วยวุ้น 0.7% ที่ผสม สับสเตรทมากกว่าหนึ่งชนิดเพื่อตรวจกิจกรรมของเอนไซม์มากกว่า 1 ชนิดในเวลาเดียวกัน