TH19728Y - วิธีการเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อปาล์มน้ำมัน - Google Patents

Abstract

------06/11/2563------(OCR) การประดิษฐ์นี้เกี่ยวข้องกับวิธีการเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อปาล์มนํ้ามันในระบบไอบริดโดยใช้สูตรอาหารเหลวพื้นฐานชนิดเอ็น6 ดัดแปลง (modified N6) ร่วมกับ อะดีนีนซัลเฟต (adenine sulphate)พูเทรสซีน (putrescine) และเคซีน ไฮโดรไลเซท (Casein hydrolysate) ในการซักนำให้เกิดแคลลัส ซึ่งแคลลัสที่ได้จากวิธีการตามการประดิษฐ์นี้มีศักยภาพสูงมากกว่าวิธีการปกติที่เป็นการชักนำให้เกิดโซมาติกเอมบริโอในอาหารแข็ง อีกทั้งยังเพิ่มประสิทธิภาพในการพัฒนาให้เป็นต้นโดยการเพาะเลี้ยงในอาหารแข็งสูตรพื้นฐานเอ็มเอส (MS) ดัดแปลง ที่มีพูเทรสซีน (putrescine) และไม่มีฮอร์โมน ส่งผลให้การเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อปาล์มนํ้ามันมีการพัฒนาเป็นต้นอ่อนได้ในระยะเวลาอันรวดเร็ว คือประมาณ 2-2.5ปี ซึ่งแตกต่างอย่างเห็นได้ชัดจากวิธีการปกติซึ่งใช้ระยะเวลาอย่างน้อย 3-4ปี นอกจากนั้นวิธีการเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อปาล์มนํ้ามันในระบบอาหารเหลวตามการประดิษฐ์นี้ ยังส่งให้ต้นอ่อนที่ได้มีการแปรปรวนทางพันธุกรรมตํ่าลงมากอย่างเห็นได้ชัด ------------ หน้า 1 ของจำนวน 1 หน้า บทสรุปการประดิษฐ์ การประดิษฐ์นี้เกี่ยวข้องกับวิธีการเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อปาล์มน้ำมันในระบบไอบริดโดยใช้สูตร อาหารเหลวพื้นฐานชนิดเอ็น6 ดัดแปลง (modified N6) ร่วมกับ อะดีนีนซัลเฟต (adenine sulphate) พูเทรสซีน (putrescine) และเคซีน ไฮโดรไลเซท (Casein hydrolysate) ในการชักนำให้เกิดแคลลัส ซึ่ง แคลลัสที่ได้จากวิธีการตามการประดิษฐ์นี้มีศักยภาพสูงมากกว่าวิธีการปกติที่เป็นการชักนำให้เกิด โซมาติกเอมบริโอในอาหารแข็งอีกทั้งยังเพิ่มประสิทธิภาพในการพัฒนาให้เป็นด้นโดยการเพาะเลี้ยงใน อาหารแข็งสูตรพื้นฐานเอ็มเอส (MS) ดัดแปลง ที่มีพูเทรสซีน (putrescine) และไม่มีฮอร์โมน ส่งผลให้ การเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อปาล์มนํ้ามันมีการพัฒนาเป็นต้นอ่อนได้ในระยะเวลาอันรวดเร็ว คือประมาณ 2-2.5 ปี ซึ่งแตกต่างอย่างเห็นได้ซัดจากวิธีการปกติซึ่งใช้ระยะเวลาอย่างน้อย 3-4 ปี นอกจากนั้นวิธีการ เพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อปาล์มนํ้ามันในระบบอาหารเหลวตามการประดิษฐ์นี้ ยังส่งให้ต้นอ่อนที่ได้มีการ แปรปรวนทางพันธุกรรมตํ่าลงมากอย่างเห็นได้ชัด

Claims (5)

------06/11/2563------(OCR) 1. วิธีการเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อปาล์มนํ้ามัน มีขั้นตอนดังนื้ ก) การเลี้ยงเอมบริโอเจนิกแคลลัสในอาหารเหลวด้วยอาหารเลี้ยงเชื้อสูตรเอ็น6 ดัดแปลง-1 ภายใต้สภาวะที่มีการเขย่าที่ 120-180 rpm อุณหภูมิ 25องศาc ในที่มืด เป็นเวลา 2 เดือน โดยมีการเปลี่ยนย้ายแคลลัสลงอาหารใหม่เป็นระยะทุกๆ 2 สัปดาห์ ข) การนำเอมบริโอเจนิกแคลสัสที่พัฒนาใหม่ออกจากแคลสัสเดิม ที่ได้จากข้อ ก) มาเลี้ยงใน อาหารแข็งด้วยสูตรเอ็น6 ดัดแปลง-2 จนกระทั่งพัฒนาเป็นยอด โดยเลี้ยงเป็นนาน 6-12 เดือน2. วิธีการเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อปาล์มนํ้ามัน ตามข้อถือสิทธิที่ 1 ที่ซึ่ง อาจเพิ่มเติมด้วยขั้นตอนการนำโซ มาติกเอมบริโอที่เริ่มพัฒนายอด ที่ได้จากข้อ ข) มาเลี้ยงในอาหารเลี้ยงเชื้อสูตรเอ็มเอส ดัดแปลง-1 โดยเลี้ยงนาน 6-12 เดือน3. วิธีการเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อปาล์มนํ้ามัน ตามข้อถือสิทธิที่ 1 ที่ซึ่ง อาหารเลี้ยงเชื้อเหลวสูตรเอ็น6 ดัดแปลง-1 ประกอบด้วย แอมโมเนียมซัลเฟต ((NH4)2SO4) 213.5 มิลลิกรัมต่อลิตร โพแทสเซียมไนเตรท (kno3) 3134 มิลลิกรัมต่อลิตร โพแทสเซียมไดไฮโดรเจนฟอสเฟต (kh2po4) 540 มิลลิกรัมต่อลิตร แมกนีเซียมซัลเฟตเฮปตะไฮเดรท (MgSO4.7H2O) 185 มิลลิกรัมต่อลิตร แคลเซียมคลอไรด์ไดไฮเดรท (CaCl2.2H2O) 166 มิลลิกรัมต่อลิตร โพแทสเซียมไอโอไดน์ (KI) 0.8 มิลลิกรัมต่อลิตร กรดบอริค (H3BO3) 6.2 มิลลิกรัมต่อลิตร แมงกานีสซัลเฟตเตตระไฮเดรท (MnSO4.4H2O) 20 มิลลิกรัมต่อลิตร ซิงค์ซัลเฟตเฮปตะไฮเดรท (ZnSO4.7H2O) 8.6 มิลลิกรัมต่อลิตร โคบอลต์คลอไรด์ออกตะไรเดรท (CoCl2.6H2O) 0.05 มิลลิกรัมต่อลิตร คอปเปอร์ซัลเฟตเฮปตะไรเดรท (CuSO4.7H2O) 0.05 มิลลิกรัมต่อลิตร โซเดียมโมลิบเดตไดไฮเดรท (Na2MoO4.2H2O) 0.25 มิลลิกรัมต่อลิตร เฟอร์รัสซัลเฟตเฮปตะไฮเดรท (FeSO4.7H2O) 27.8 มิลลิกรัมต่อลิตร ไดโซเดียมเอทธิลีนไดเอมีนเตตระอะซิติกแอซิด (Na2EDTA) 37.2 มิลลิกรัมต่อลิตร ไมโอ-อิโนซิทอล 100 มิลลิกรัมต่อลิตร กรดนิโคตินิก 2.5 มิลลิกรัมต่อลิตร ไพริดอกซิน ไฮโดรคลอไรด์ 2.5 มิลลิกรัมต่อลิตร ไทอะมิน ไฮโดรคลอไรด์ 2.5 มิลลิกรัมต่อลิตร ซูโครส 30 มิลลิกรัมต่อลิตร อะดีนีนซัลเฟต 20-60 มิลลิกรัมต่อลิตร พูเทรสซีน 80-120 มิลลิกรัมต่อลิตร เคซีนไฮโดรไลเซท 300-800 มิลลิกรัมต่อลิตร4. วิธีการเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อปาล์มนํ้ามัน ตามข้อถือสิทธิที่ 1 ที่ซึ่ง อาหารเลี้ยงเชื้อแข็งสูตรเอ็น6ดัดแปลง-2 ประกอบด้วย แอมโมเนียมซัลเฟต ((NH4)2SO4) 213.5 มิลลิกรัมต่อลิตร โพแทสเซียมไนเตรท (KNO3) 3134 มิลลิกรัมต่อลิตร โพแทสเซียมไดไฮโดรเจนฟอสเฟต (KH2PO4) 540 มิลลิกรัมต่อลิตร แมกนีเซียมซัลเฟตเฮปตะไฮเดรท (MgSO4.7H2O) 185 มิลลิกรัมต่อลิตร แคลเซียมคลอไรด์ไดไฮเดรท (CaCl2.2H2O) 166 มิลลิกรัมต่อลิตร โพแทสเซียมไอโอไดน์ (KI) 0.8 มิลลิกรัมต่อลิตร กรดบอริค (H3BO3) 6.2 มิลลิกรัมต่อลิตร แมงกานีสซัลเฟตเตตระไฮเดรท (MnSO4.4H2O) 20 มิลลิกรัมต่อลิตร ซิงค์ซัลเฟตเฮปตะไฮเดรท (ZnSO4.7H2O) 8.6 มิลลิกรัมต่อลิตร โคบอลต์คลอไรด์ออกตะไฮเดรท (CoCl2.6H2O) 0.05 มิลลิกรัมต่อลิตร คอปเปอร์ซัลเฟตเฮปตะไฮเดรท (CuSO4.7H2O) 0.05 มิลลิกรัมต่อลิตร โซเดียมโมลิบเดตไดไฮเดรท (Na2MoO4.2H2O) 0.25 มิลลิกรัมต่อลิตร เฟอร์รัสซัลเฟตเฮปตะไฮเดรท (FeSO4.7H2O) 27.8 มิลลิกรัมต่อลิตร ไดโซเดียมเอทธิลีนไดเอมีนเตตระอะซีติกแอซิด (Na2EDTA) 37.2 มิลลิกรัมต่อลิตร ไมโอ-อิโนซิทอล 100 มิลลิกรัมต่อลิตร กรดนิโคตินิก 2.5 มิลลิกรัมต่อลิตร ไพริดอกซิน ไฮโดรคลอไรด์ 2.5 มิลลิกรัมต่อลิตร ไทอะมิน ไฮโดรคลอไรด์ 2.5 มิลลิกรัมต่อลิตร ซูโครส 30 มิลลิกรัมต่อลิตร อะดีนีนซัลเฟต 20-60 มิลลิกรัมต่อลิตร พูเทรสซีน 120-160 มิลลิกรัมต่อลิตร เคซีนไฮโดรไลเซท 300-800 มิลลิกรัมต่อลิตร ไฟตาเจล 2.5 มิลลิกรัมต่อลิตร5. วิธีการเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อปาล์มนํ้ามัน ตามข้อถือสิทธิที่ 1 ที่ซึ่ง อาหารเลี้ยงเชื้อสูตรเอ็มเอส ดัดแปลง-1 ประกอบด้วย แอมโมเนียมซัลเฟต ((NH4)2SO4) 1900 มิลลิกรัมต่อลิตร โพแทสเซียมไนเตรท (kno3) 1650 มิลลิกรัมต่อลิตร โพแทสเซียมไดไฮโดรเจนฟอสเฟต (KH2PO4) 170 มิลลิกรัมต่อลิตร แมกนีเซียมซัลเฟตเฮปตะไฮเดรท (MgSO4.7H2O) 370 มิลลิกรัมต่อลิตร แคลเซียมคลอไรด์ไดไฮเดรท (CaCl2.2H2O) 440 มิลลิกรัมต่อลิตร โพแทสเซียมไอโอไดน์ (KI) 0.83 มิลลิกรัมต่อลิตร กรดบอริค (H3BO3) 6.2 มิลลิกรัมต่อลิตร แมงกานีสซัลเฟตเตตระไฮเดรท (MnSO4.4H2O) 22.3 มิลลิกรัมต่อลิตร ซิงค์ซัลเฟตเฮปตะไฮเดรท (ZnSO4.7H2O) 8.6 มิลลิกรัมต่อลิตร โคบอลต์คลอไรด์ออกตะไฮเดรท (CoCl2.6H2O) 0.025 มิลลิกรัมต่อลิตร คอปเปอร์ซัลเฟตเฮปตะไฮเดรท (CuSO4.7H2O) 0.025 มิลลิกรัมต่อลิตร โซเดียมโมลิบเดตไดไฮเดรท (Na2MoO4.2H2O) 0.25 มิลลิกรัมต่อลิตร เฟอร์รัสซัลเฟตเฮปตะไฮเดรท (FeSO4.7H2O) 27.8 มิลลิกรัมต่อลิตร ไดโซเดียมเอทธิลีนไดเอมีนเตตระอะซิติกแอซิด (Na2EDTA) 37.2 มิลลิกรัมต่อลิตร ไกลซีน 2.0 มิลลิกรัมต่อลิตร กรดนิโคตินิก 0.5 มิลลิกรัมต่อลิตร ไพริดอกซิน ไฮโดรคลอไรด์ 0.5 มิลลิกรัมต่อลิตร ไทอะมิน ไฮโดรคลอไรด์ 0.1 มิลลิกรัมต่อลิตร ซูโครส 30 มิลลิกรัมต่อลิตร พูเทรสซีน (Putrescine) 80-120 มิลลิกรัมต่อลิตร ไฟตาเจล 2.5 มิลลิกรัมต่อลิตร ------------ แก้ไข 08/11/2561 ข้อถือสิทธิไม่มี ---------------------------------------------------------------------------------------------------- หน้า 1 ของจำนวน 3 หน้า ข้อถือสิทธิ

1. วิธีการเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อปาล์มน้ำมัน มีขั้นตอนดังนี้ ก) การเลี้ยงแคลสัสในอาหารเหลวด้วยอาหารเลี้ยงเชื้อสูตรเอ็น6 ดัดแปลง-1 ภายใต้สภาวะ ที่มีการเขย่าที่ 120-180 rpm อุณหภูมิ 25(สัญลักษณ์)C ในที่มีด เป็นเวลา 2 เดือน โดยมีการ เปลี่ยนย้ายแคลลัสลงอาหารใหม่เป็นระยะทุกๆ 2 สัปดาห์ ข) การนำเอมบริโอเจนิกแคลลัสที่พัฒนาใหม่ออกจากแคลลัสเดิม ที่ได้จากข้อ ก) มาเลี้ยงใน อาหารแข็งด้วยสูตรเอ็น6 ดัดแปลง-2 จนกระทั่งพัฒนาเป็นยอด โดยเลี้ยงเป็นนาน 6-12 เดือน

2. วิธีการเพาะเลี้ยง ตามข้อถือสิทธิที่ 1 ที่ซึ่ง อาจเพิ่มเติมด้วยขั้นตอนการนำโซมาติกเอมบริโอที่เริ่ม พัฒนายอด ที่ได้จากข้อ ข) มาเลี้ยงในอาหารเลี้ยงเชื้อสูตรเอ็มเอส ดัดแปลง-1 โดยเลี้ยงนาน 6-12 เดือน

3. วิธีการเพาะเลี้ยง ตามข้อถือสิทธิที่ 1 ที่ซึ่ง อาหารเลี้ยงเชื้อสูตรเอ็น6 ดัดแปลง-1 ประกอบด้วย (NH4)2SO4 213.5 มิลลิกรัมต่อลิตร KNO3 3134 มิลลิกรัมต่อลิตร KH2PO4 540 มิลลิกรัมต่อลิตร MgSO4.7H2O 185 มิลลิกรัมต่อลิตร CaCl2.2H2O 166 มิลลิกรัมต่อลิตร Kl 0.8 มิลลิกรัมต่อลิตร H3BO3 6.2 มิลลิกรัมต่อลิตร MnSO4.4H2O 20 มิลลิกรัมต่อลิตร ZnSO4.7H2O 8.6 มิลลิกรัมต่อลิตร CoCl2.6H2O 0.05 มิลลิกรัมต่อลิตร CuSO4.7H2O 0.05 มิลลิกรัมต่อลิตร Na2MoO4.2H2O 0.25 มิลลิกรัมต่อลิตร FeSO4.7H2O 27.8 มิลลิกรัมต่อลิตร Na2EDTA 37.2 มิลลิกรัมต่อลิตร ไมโอ-ริโนซิทอล 100 มิลลิกรัมต่อลิตร หน้า 2 ของจำนวน 3 หน้า กรดนิโคติบิก 2.5 มิลลิกรัมต่อลิตร ไพริดอกซิน ไฮโดรคลอไรด์ 2.5 มิลลิกรัมต่อลิตร ไทอะมิน ไฮโดรคลอไรด์ 2.5 มิลลิกรัมต่อลิตร ซูโครส 30 มิลลิกรัมต่อลิตร อะดีนีนซัลเฟต 20-60 มิลลิกรัมต่อลิตร พูเทรสซีน 80-120 มิลลิกรัมต่อลิตร เคซีนไฮโดรไลเซท 300-800 มิลลิกรัมต่อลิตร

4. วิธีการเพาะเลี้ยง ตามข้อถือสิทธิที่ 1 ที่ซึ่ง อาหารเลี้ยงเชื้อสูตรเอ็น6 ดัดแปลง-2 ประกอบด้วย (NH4)2SO4 213.5 มิลลิกรัมต่อลิตร KNO3 3134 มิลลิกรัมต่อลิตร KH2PO4 540 มิลลิกรัมต่อลิตร MgSO4.7H2O 185 มิลลิกรัมต่อลิตร CaCl2.2H2O 166 มิลลิกรัมต่อลิตร Kl 0.8 มิลลิกรัมต่อลิตร H3BO3 6.2 มิลลิกรัมต่อลิตร MnSO4.4H2O 20 มิลลิกรัมต่อลิตร ZnSO4.7H2O 8.6 มิลลิกรัมต่อลิตร CoCl2.6H2O 0.05 มิลลิกรัมต่อลิตร CuSO4.7H2O 0.05 มิลลิกรัมต่อลิตร Na2MoO4.2H2O 0.25 มิลลิกรัมต่อลิตร FeSO4.7H2O 27.8 มิลลิกรัมต่อลิตร Na2EDTA 37.2 มิลลิกรัมต่อลิตร ไมโอ-อิโนซิทอล 100 มิลลิกรัมต่อลิตร กรดนิโคตินิก 2.5 มิลลิกรัมต่อลิตร ไพริดอกซิน ไฮโดรคลอไรด์ 2.5 มิลลิกรัมต่อลิตร ไทอะมิน ไฮโดรคลอไรด์ 2.5 มิลลิกรัมต่อลิตร ซูโครส 30 มิลลิกรัมต่อลิตร หน้า 3 ของจำนวน 3 หน้า อะดีนีนซัลเฟต 20-60 มิลลิกรัมต่อลิตร พูเทรสซีน 120-160 มิลลิกรัมต่อลิตร เคชินไฮโดรไลเซท 300-800 มิลลิกรัมต่อลิตร ไฟตาเจล 2.5 มิลลิกรัมต่อลิตร

5. วิธีการเพาะเลี้ยง ตามข้อถือสิทธิที่ 1 ที่ซึ่ง สูตรเอ็มเอส ดัดแปลง-1 ประกอบด้วย (NH4)2SO4 1900 มิลลิกรัมต่อลิตร KNO3 1650 มิลลิกรัมต่อลิตร KH2PO4 170 มิลลิกรัมต่อลิตร MgSO4.7H2O 370 มิลลิกรัมต่อลิตร CaCl2.2H2O 440 มิลลิกรัมต่อลิตร Kl 0.83 มิลลิกรัมต่อลิตร H3BO3 6.2 มิลลิกรัมต่อลิตร MnSO4.4H2O 22.3 มิลลิกรัมต่อลิตร ZnSO4.7H2O 8.6 มิลลิกรัมต่อลิตร CoCl2.6H2O 0.025 มิลลิกรัมต่อลิตร CuSO4.7H2O 0.025 มิลลิกรัมต่อลิตร Na2MoO4.2H2O 0.25 มิลลิกรัมต่อลิตร FeSO4.7H2O 27.8 มิลลิกรัมต่อลิตร Na2EDTA 37.2 มิลลิกรัมต่อลิตร ไกลซีน 2.0 มิลลิกรัมต่อลิตร กรดนิโคตินิก 0.5 มิลลิกรัมต่อลิตร ไพริดอกซิน ไฮโดรคลอไรด์ 0.5 มิลลิกรัมต่อลิตร ไทอะมิน ไฮโดรคลอไรด์ 0.1 มิลลิกรัมต่อลิตร ซูโครส 30 มิลลิกรัมต่อลิตร พูเทรสซีน (Putrescine) 80-120 มิลลิกรัมต่อลิตร ไฟตาเจล 2.5 มิลลิกรัมต่อลิตร