TH19482Y - กรรมวิธีการผลิตสารประกอบอะโรมาติก โพลีคีไทด์ (Aromatic Polyketide) ที่ออกฤทธิ์ยับยั้งเชื้อก่อโรคมาลาเรีย จากเชื้อรา Orbiocrella - Google Patents

Abstract

------27/11/2563------(OCR) การประดิษฐ์นี้เกี่ยวกับกรรมวิธีการผลิตสารประกอบอะโรมาติก โพลีคีไทด์ (AromaticPolyketide) สูตร (I) และ (II) ชนิดใหม่ ที่ประกอบด้วยขั้นตอนการปลูกถ่ายเส้นใยเชื้อราหรือสปอร์ของเชื้อรา Orbiocrella มายังสารอาหารเลี้ยงหัวเชื้อ, การบ่มเชื้อราดังกล่าวในสภาวะที่มีอากาศ, การหมักบ่มเชื้อราดังกล่าว และการแยกสารประกอบอะโรมาติก โพลีคีไทด์ สูตร (I) และ (II) จากเชื้อราดังกล่าว โดยสารประกอบจากการประดิษฐ์นี้ออกฤทธิ์ยับยั้งเชื้อก่อโรคมาลาเรีย (Plasmodium falciparum K1) โดยมีค่า IC50 5.7 และ 5.6 ไมโครโมลาร์ ตามลำดับ ดังนั้นสารประกอบอะโรมาติก โพลีคีไทด์ สูตร (I) และ (II)หรือองค์ประกอบทางเภสัชกรรมของสารประกอบนี้มีศักยภาพในการพัฒนาเป็นยารักษาโรคมาลาเรีย (สูตรเคมี) ------------ หน้าที่ 1 ของจำนวน 1 หน้า บทสรุปการประดิษฐ์ การประดิษฐ์นี้เกี่ยวกับกรรมวิธีการผลิตสารประกอบอะโรมาติก โพลีคีไทด์ (Aromatic Polyketide) สูตร (I) และ (II) ชนิดใหม่ ที่ประกอบด้วยขั้นตอนการปลูกถ่ายเส้นใยเชื้อราหรือสปอร์ของเชื้อ รา Orbiocrella มายังสารอาหารเลี้ยงหัวเชื้อ, การบ่มเชื้อราดังกล่าวในสภาวะที่มีอากาศ, การหมักบ่มเชื้อ ราดังกล่าว และการแยกสารประกอบอะโรมาติก โพลีคีไทด์ สูตร (I) และ (II) จากเชื้อราดังกล่าว โดย สารประกอบจากการประดิษฐ์นี้ออกฤทธิ์ยับยั้งเชื้อถ่อโรคมาลาเรีย (Plasmodium falciparum K1) โดยมี ค่า IC50 5.7 และ 5.6 ไมโครโมลาร์ ตามลำดับ ดังนั้นสารประกอบอะโรมาติก โพลีคีไทด์ สูตร (I) และ (II) หรือองค์ประกอบทางเภสัชกรรมของสารประกอบนี้มีศักยภาพในการพัฒนาเป็นยารักษาโรคมาลาเรีย (สูตรเคมี)

Claims (10)

------27/11/2563------(OCR) 1. กรรมวิธีการผลิตสารประกอบอะโรมาติก โพลีคีไทด์ (Aromatic Polyketide) สูตร (I) และ (II) ที่ออก ฤทธิ์ยับยั้งเชื้อก่อโรคมาลาเรีย (Plasmodium falciparum K1) จากเชื้อรา Orbiocrella ที่ ประกอบด้วยขั้นตอนดังนี้ ก. การเลี้ยงเชื้อรา Orbiocrella ก.1. การปลูกถ่ายเส้นใยเชื้อราหรือสปอร์ของเชื้อรา Orbiocrella มายังสารอาหารเลี้ยง หัวเชื้อ, ก.2. การบ่มเชื้อราดังกล่าวในสภาวะที่มีอากาศ, ก.3. การหมักบ่มเชื้อราดังกล่าว; และ ข. การแยกสารประกอบอะโรมาติก โพลีคีไทด์ (Aromatic Polyketide) สูตร (I) และ (II) จาก เชื้อราดังกล่าว ที่ประกอบด้วยขั้นตอน ข.1. การสกัดสารประกอบอะโรมาติก โพลีคีไทด์ (Aromatic Polyketide) สูตร (I) และ (II) โดยการกรองอาหารเลี้ยงเชื้อ จากนั้นนำส่วนอาหารเลี้ยงเชื้อ (ของเหลว) มาสกัด ด้วยตัวทำละลายอินทรีย์ ที่เลือกได้จากกลุ่มที่ประกอบด้วย เอทธิล อะซิเตท (ethyl acetate), เมธานอล (methanol), เอธานอล (ethanol), ไดคลอโรมีเธน (dichloromethane), อะซิโทน (acetone), หรือส่วนผสมของสารดังกล่าว โดยตัว ทำละลายอินทรีย์ ที่เหมาะสม คือ เอทธิล อะซิเตท (ethyl acetate) จะได้สารสกัด หยาบที่มีสารประกอบอะโรมาติก โพลีคีไทด์ (Aromatic Polyketide) สูตร (I) และ (II) ข.2. การแยกสารประกอบอะโรมาติก โพลีคีไทด์ (Aromatic Polyketide) สูตร (I) และ (II) ออกจากสารสกัดหยาบดังกล่าว โดยทำให้บริสุทธิ์โดยวิธีโครมาโตรกราฟี มาตรฐาน โดยใช้ตัวดูดซับ (adsorbant); โดยหากใช้ซิลิกาเจลชนิดนอร์มาลเฟส (normal phase) เป็นตัวดูดซับ ตัวชะล้างที่เหมาะสม คือ ส่วนผสมของไดคลอโร มีเทนและเมทธานอล; และหากใช้ซิลิกาเจลชนิดรีเวอร์สเฟส (reverse phase: C18) เป็นตัวดูดซับ ตัวชะล้างที่เหมาะสม คือ ส่วนผสมของอะซิโตรไนไตรล์และนํ้า; จะได้ สารประกอบอะโรมาติก โพลีคีไทด์ (Aromatic Polyketide) สูตร (I) และ (II) (สูตรเคมี)2. กรรมวิธีการผลิตสารประกอบอะโรมาติก โพลีคีไทด์ (Aromatic Polyketide) สูตร (I) และ (II) ที่ออก ฤทธิ์ยับยั้งเชื้อก่อโรคมาลาเรีย จากเชื้อรา Orbiocrella ตามข้อถือสิทธิ 1 ที่ซึ่ง เชื้อรา Orbiocrella ดังกล่าว ที่เหมาะสมคือ เชื้อราสายพันธุ์ Orbiocrella petchii BCC 513773. กรรมวิธีการผลิตสารประกอบอะโรมาติก โพลีคีไทด์ (Aromatic Polyketide) สูตร (I) และ (II) ที่ออก ฤทธิ์ยับยั้งเชื้อก่อโรคมาลาเรีย จากเชื้อรา Orbiocreiia ตามข้อถือสิทธิ 1 ที่ซึ่ง สารอาหารเลี้ยงหัวเชื้อ ดังกล่าว คือ อาหารเหลวโปเตโต้เดกซ์โตรส (potato dextrose broth)4. กรรมวิธีการผลิตสารประกอบอะโรมาติก โพลีคีไทด์ (Aromatic Polyketide) สูตร (I) และ (II) ที่ออก ฤทธิ์ยับยั้งเชื้อก่อโรคมาลาเรีย จากเชื้อรา Orbiocreiia ตามข้อถือสิทธิ 1 ที่ซึ่ง ขั้นตอนการบ่มเชื้อรา ดังกล่าวในสภาวะที่มีอากาศดังกล่าว ทำโดยการเขย่าเชื้อราที่ได้ปลูกถ่ายแล้ว ด้วยความเร็ว 200 ถึง 220 รอบต่อนาที (rpm) ที่อุณหภูมิ 20 ถึง 30 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 2 ถึง 15 วัน5. กรรมวิธีการผลิตสารประกอบอะโรมาติก โพลีคีไทด์ (Aromatic Polyketide) สูตร (I) และ (II) ที่ออก ฤทธิ์ยับยั้งเชื้อก่อโรคมาลาเรีย จากเชื้อรา Orbiocreiia ตามข้อถือสิทธิ 1 ที่ซึ่ง ขั้นตอนการหมักบ่มเชื้อ ราดังกล่าว ทำโดยถ่ายหัวเชื้อไปยังอาหารเลี้ยงเชื้อที่เหมาะสมในการสร้างสารทุติยภูมิ การหมักบ่มเชื้อ ทำได้ทั้งสภาวะที่ตั้งทิ้งไว้นิ่งๆ หรือเขย่า 10 ถึง 80 วันที่อุณหภูมิ 20 ถึง 30 องศาเซลเซียส6. กรรมวิธีการผลิตสารประกอบอะโรมาติก โพลีคีไทด์ (Aromatic Polyketide) สูตร (I) และ (II) ที่ออก ฤทธิ์ยับยั้งเชื้อก่อโรคมาลาเรีย จากเชื้อรา Orbiocreiia ตามข้อถือสิทธิ 5 ที่ซึ่ง การหมักบ่มเชื้อราใน สภาวะเขย่าดังกล่าว มีอุณหภูมิที่เหมาะสมอยู่ที่ 25 ถึง 28 องศาเซลเซียส7. กรรมวิธีการผลิตสารประกอบอะโรมาติก โพลีคีไทด์ (Aromatic Polyketide) สูตร (I) และ (II) ที่ออก ฤทธิ์ยับยั้งเชื้อก่อโรคจากแบคทีเรีย จากเชื้อรา Orbiocreiia ตามข้อถือสิทธิ 1 ที่ซึ่ง ขั้นตอนการทำให้ บริสุทธิ์โดยวิธีโครมาโตรกราฟีดังกล่าว ยังประกอบเพิ่มเติมด้วย — ขั้นตอนการแยกด้วยเพรพาเรทีฟ เอชพีแอลซี (preparative HPLC) โดยคอลัมน์ชนิดที่เหมาะสม คือ ซันไฟร์ เพรพ ซี18 โอบีดี (SunFire Prep C18 OBD) ขนาด 19 x 250 มิลลิเมตร ขนาดซิลิ กาเจล 10 ไมโครเมตร โดยตัวชะล้างที่ใช้ เลือกได้จากกลุ่มที่ประกอบด้วย อะซีโตไนไตรล์ (acetonitrile), เมธานอล (methanol), นํ้า, หรือส่วนผสมของสารดังกล่าว โดยตัวชะล้างที่ เหมาะสม คือ ส่วนผสมของอะซิโตรไนไตรล์และนํ้า — ขั้นตอนการแยกสารทำให้บริสุทธิ์มากขึ้นด้วยวิธีเจลฟิลเตรชันโครมาโตกราฟี (gel filtration chromatography) โดยใช้ตัวดูดซับเซฟาเด็กซ์8. กรรมวิธีการผลิตสารประกอบอะโรมาติก โพลีคีไทด์ (Aromatic Polyketide) สูตร (I) และ (II) ที่ออก ฤทธิ์ยับยั้งเชื้อก่อโรคมาลาเรีย จากเชื้อรา Orbiocreiia ตามข้อถือสิทธิ 7 ที่ซึ่ง ขั้นตอนการแยกสารทำ ให้บริสุทธิ์มากขึ้นด้วยวิธีเจลฟิลเตรชันโครมาโตกราฟี โดยใช้ตัวดูดซับเซฟาเด็กซ์ดังกล่าว ใช้ตัวดูดซับ เซฟาเด็กซ์ คือ เซฟาเด็กซ์ Trade mark แอลเอช-20 (Sephadex Trade mark LH-20) และใช้ตัวชะล้าง ที่เลือกได้จากกลุ่มที่ ประกอบด้วย สารเมธานอล (methanol), ไดคลอโรมีเธน (dichloromethane), หรือส่วนผสมของสาร ดังกล่าว9. องค์ประกอบทางเภสัชกรรม ที่ประกอบด้วยสารประกอบอะโรมาติก โพลีคีไทด์ สูตร (I), สารประกอบอะโรมาติก โพลีคีไทด์ สูตร (II), เกลือของสารประกอบอะโรมาติก โพลีคีไทด์ สูตร (I), เกลือของสารประกอบสารประกอบอะโรมาติก โพลีคีไทด์ สูตร (II), หรือส่วนผสมของสารดังกล่าว ร่วมกับสารประกอบที่ยอมรับได้ทางเภสัขกรรม อย่างน้อยหนึ่งชนิด ------------ หน้าที่ 1 ของจำนวน 2 หน้า ข้อถือสิทธิ

1. กรรมวิธีการผลิตสารประกอบอะโรมาติก โพลีคีไทด์ (Aromatic Polyketide) สูตร (I) และ (II) ที่ออก ฤทธิ์ยับยั้งเชื้อก่อโรคมาลาเรีย (Plasmodium falciparum K1) จากเชื้อรา Orbioerella ที่ ประกอบด้วยขั้นตอนดังนี้ ก. การเลี้ยงเชื้อรา Orbiocrella ก.1. การปลูกถ่ายเส้นใยเชื้อราหรือสปอร์ของเชื้อรา Orbiocrella มายังสารอาหารเลี้ยง หัวเชื้อ, ก.2. การบ่มเชื้อราดังกล่าวในสภาวะที่มีอากาศ, ก.3. การหมักบ่มเชื้อราดังกล่าว; และ ข. การแยกสารประกอบอะโรมาติก โพลีคีไทด์ (Aromatic Polyketide) สูตร (I) และ (II) จาก เชื้อราดังกล่าว ที่ประกอบด้วยขั้นตอน ข.1. การสกัดสารประกอบอะโรมาติก โพลีคีไทด์ (Aromatic Polyketide) สูตร (I) และ (II) โดยการกรองอาหารเลี้ยงเชื้อ จากนั้นนำส่วนอาหารเลี้ยงเชื้อ (ของเหลว) มาสกัด ด้วยตัวทำละลายอินทรีย์ ที่เลือกได้จากกลุ่มที่ประกอบด้วย เอทธิล อะซิเตท (ethyl acetate), เมธานอล (methanol), เอธานอล (ethanol), ไดคลอโรมีเธน (dichloromethane), อะซิโทน (acetone), หรือส่วนผสมของสารดังกล่าว โดยตัว ทำละลายอินทรีย์ ที่เหมาะสม คือ เอทธิล อะซิเตท (ethyl acetate) จะได้สารสกัด หยาบที่มีสารประกอบอะโรมาติก โพลีคีไทด์ (Aromatic Polyketide) สูตร (I) และ (II) ข.2. การแยกสารประกอบอะโรมาติก โพลีคีไทด์ (Aromatic Polyketide) สูตร (I) และ (II) ออกจากสารสกัดหยาบดังกล่าว โดยทำให้บริสุทธิ์โดยวิธีโครมาโตรกราฟี มาตรฐาน โดยใช้ตัวดูดซับ (adsorbant); โดยหากใช้ซิลิกาเจลชนิดนอร์มาลเฟส (normal phase) เป็นตัวดูดซับ ตัวชะล้างที่เหมาะสม คือ ส่วนผสมของไดคลอโร มีเทนและเมทธานอล; และหากใช้ซิลิกาเจลซนิดรีเวอร์สเฟส (reverse phase: C18) เป็นตัวดูดซับ ตัวชะล้างที่เหมาะสม คือ ส่วนผสมของอะซิโตรไนไตรล์และน้ำ; จะได้ สารประกอบอะโรมาติก โพลีคีไทด์ (Aromatic Polyketide) สูตร (I) และ (II) (สูตรเคมี)

2. กรรมวิธีการผลิตสารประกอบอะโรมาติก โพลีคีไทด์ (Aromatic Polyketide) สูตร (I) และ (II) ที่ออก ฤทธิ์ยับยั้งเชื้อก่อโรคมาลาเรีย จากเชื้อรา Orbiocrella ตามข้อถือสิทธิ 1 ที่ซึ่ง เชื้อรา Orbiocrella ดังกล่าว ที่เหมาะสมคือ เชื้อราสายพันธุ์ Orbiocrella petchii BCC 51377 หน้า 2 ของจำนวน 2 หน้า

3. กรรมวิธีการผลิตสารประกอบอะโรมาติก โพลีคีไทด์ (Aromatic Polyketide) สูตร (I) และ (II) ที่ออก ฤทธิ์ยับยั้งเชื้อก่อโรคมาลาเรีย จากเชื้อรา Orbiocrella ตามข้อถือสิทธิ 1 ที่ซึ่ง สารอาหารเลี้ยงหัวเชื้อ ดังกล่าว คือ อาหารเหลวโปเตโต้เดกซ์โตรส (potato dextrose broth)

4. กรรมวิธีการผลิตสารประกอบอะโรมาติก โพลีคีไทด์ (Aromatic Polyketide) สูตร (I) และ (II) ที่ออก ฤทธิ์ยับยั้งเชื้อก่อโรคมาลาเรีย จากเชื้อรา Orbiocrella ตามข้อถือสิทธิ 1 ที่ซึ่ง ขั้นตอนการบ่มเชื้อรา ดังกล่าวในสภาวะที่มีอากาศดังกล่าว ทำโดยการเขย่าเชื้อราที่ได้ปลูกถ่ายแล้ว ด้วยความเร็ว 200 ถึง 220 รอบต่อนาที (rpm) ที่อุณหภูมิ 20 ถึง 30 องศาเซลเซียส เบ็เนเวลา 2 ถึง 15 วัน

5. กรรมวิธีการผลิตสารประกอบอะโรมาติก โพลีคีไทด์ (Aromatic Polyketide) สูตร (I) และ (II) ที่ออก ฤทธิ์ยับยั้งเชื้อก่อโรคมาลาเรีย จากเชื้อรา Orbiocrella ตามข้อถือสิทธิ 1 ที่ซึ่ง ขั้นตอนการหมักบ่มเชื้อ ราดังกล่าว ทำโดยถ่ายหัวเชื้อไปยังอาหารเลี้ยงเชื้อที่เหมาะสมในการสร้างสารทุติยภูมิ การหมักบ่มเชื้อ ทำได้ทั้งสภาวะที่ตั้งทิ้งไว้นิ่งๆ หรือเขย่า 10 ถึง 80 วันที่อุณหภูมิ 20 ถึง 30 องศาเซลเซียส

6. กรรมวิธีการผลิตสารประกอบอะโรมาติก โพลีคีไทด์ (Aromatic Polyketide) สูตร (I) และ (II) ที่ออก ฤทธิ์ยับยั้งเชื้อก่อโรคมาลาเรีย จากเชื้อรา OrbiocreUo ตามข้อถือสิทธิ 5 ที่ซึ่ง การหมักบ่มเชื้อราใน สภาวะเขย่าดังกล่าว มีอุณหภูมิที่เหมาะสมอยู่ที่ 25 ถึง 28 องศาเซลเซียส

7. กรรมวิธีการผลิตสารประกอบอะโรมาติก โพลีคีไทด์ (Aromatic Polyketide) สูตร (I) และ (II) ที่ออก ฤทธิ์ยับยั้งเชื้อก่อโรคจากแบคทีเรีย จากเชื้อรา OrbiocreUo ตามข้อถือสิทธิ 1 ที่ซึ่ง ขั้นตอนการทำให้ บริสุทธิ์โดยวิธีโครมาโตรกราฟีดังกล่าว ยังประกอบเพิ่มเติมด้วย — ขั้นตอนการแยกด้วยเพรพาเรทีฟ เอซพีแอลซี (preparative HPLC) โดยคอลัมน์ชนิดที่เหมาะสม คือ ซันไฟร์ เพรพ ซี18 โอบีดี (SunFire Prep C18 OBD) ขนาด 19 X 250 มิลลิเมตร ขนาดซิลิ กาเจล 10ไมโครเมตร โดยตัวชะล้างที่ใช้ เลือกได้จากกลุ่มที่ประกอบด้วย อะซีโตไนไตรล์ (acetonitrile), เมธานอล (methanol), น้ำ, หรือส่วนผสมของสารดังกล่าว โดยตัวชะล้างที่ เหมาะสม คือ ส่วนผสมของอะซิโตรไนไตรล์และน้ำ — ขั้นตอนการแยกสารทำให้บริสุทธิ์มากขึ้นด้วยวิธีเจลฟีลเตรซ้นโครมาโตกราฟี (gel filtration chromatography) โดยใช้ตัวดูดซับเซฟาเด็กซ์

8. กรรมวิธีการผลิตสารประกอบอะโรมาติก โพลีคีไทด์ (Aromatic Polyketide) สูตร (I) และ (II) ที่ออก ฤทธิ์ยับยั้งเชื้อก่อโรคมาลาเรีย จากเชื้อรา OrbiocreUo ตามข้อถือสิทธิ 7 ที่ซึ่ง ขั้นตอนการแยกสารทำ ให้บริสุทธิ์มากขึ้นด้วยวิธีเจลฟีลเตรซ้นโครมาโตกราฟี โดยใช้ตัวดูดซับเซฟาเด็กซ์ดังกล่าว ใช้ตัวดูดซับ เซฟาเด็กซ์ คือ เซฟาเด็กซ์?แอลเอซ-20 (Sephadex?LH-20) และใช้ตัวชะล้าง ที่เลือกได้จากกลุ่มที่ ประกอบด้วย สารเมธานอล (methanol), ไดคลอโรมีเธน (dichloromethane), หรือส่วนผสมของสาร ดังกล่าว

9. องค์ประกอบทางเภสัชกรรม ที่ประกอบด้วยสารประกอบอะโรมาติก โพลีคีไทด์ สูตร (I), สารประกอบอะโรมาติก โพลีคีไทด์ สูตร (II), เกลือของสารประกอบอะโรมาติก โพลีคีไทด์ สูตร (I), เกลือของสารประกอบสารประกอบอะโรมาติก โพลีคีไทด์ สูตร (II), หรือส่วนผสมของสารดังกล่าว ร่วมกับสารประกอบที่ยอมรับได้ทางเภสัชกรรม อย่างน้อยหนึ่งชนิด

10. กรรมวิธีการยับยั้งเชื้อก่อโรคมาลาเรีย (Plasmodium falciparum K1) ในสิ่งมีชีวิต ที่ซึ่ง กรรมวิธี ดังกล่าว ประกอบด้วย ขั้นตอนการจัดการให้องค์ประกอบทางเภสัชกรรม ตามข้อถือสิทธิ 9 เข้าสู่ ร่างกายสิ่งมีชีวิตนั้นๆ