TH12410C3

TH12410C3 - เซลล์ยีสต์ลูกผสม Pichia stipitis สำหรับการผลิตเอทานอลโดยตรงจากชีวมวล ประเภทเซลลูโลส และเฮมิเซลลูโลส และการใช้เซลล์ยีสต์ลูกผสมดังกล่าว

Info

Publication number: TH12410C3
Application number: TH1503000027U
Authority: TH
Inventors: รุ่งสว่าง นายนิรันดร์; ภูสีน้ำ นายเอกชัย; ธนพงศ์พิพัฒน์ นางสาวสุทิพา
Original assignee: นางสาวอรุณศรี ศรีธนะอิทธิพล; นางทิพวรรณ รัตนกิจ
Filing date: 2015-01-13
Publication date: 2017-02-10

Abstract

แก้ไข บทสรุปการประดิษฐ์ วันที่ 03/06/2559 การประดิษฐ์นี้มีจุดมุ่งหมายในการปรับปรุงพันธุกรรมของยีนต์ Pichia stipitis เพื่อให้ได้เซลล์ ยีนต์ลูกผสม P.stipitis สำหรับการผลิตเอทานอลโดยตรงจากชีวมวลประเภทเซลลูโลส และเฮมิ เซลลูโสซึ่งเป็นการหมักเอทานอลแบบขั้นตอนเดียว โดยยีสต์ลูกผสมดังกล่าวถูกปรับปรุงพันธุกรรมให้มี ประสิทธิภาพในการหลังเอนไซม์เอ็นโดกลูคาเนส (endoglucanase) และ ไซแลนเสส (xylanase ) ออก สู่นอกเซลล์แบบร่วมกัน (co -expression) เพื่อการย่อยสลายชีวมวลประเภทเซลลูโลส และเฮมิ เซลลูโลส และยีสต์ P.stipitis จะเปลี่ยนน้ำตาลที่ได้จากการย่อยชีวมวลดังกล่าวให้เป็นเอทานอลได้ อย่างมีประสิทธิภาพด้วยกระบวนการที่ไม่ซับซ้อน จึงเป็นการลดต้นทุนในกระบวนการผลิตเทนานอล โดยตรงจากสารประเภทชีวมวล ในเชิงของการใช้วัตถุดิบประเภทชีวมวลที่มีราคาถูกได้อย่างเต็ม ประสิทธิภาพ และลดปริมาณเอนไซม์ที่จำเป็นต้องเติมลงไปในการย่อยสลายชีวมวลได้เป็นอย่างมาก ------------------------------------------------------------------------------------------------------------ คำขอใหม่ปรับปรุง 2/08/2559 การประดิษฐ์นี้มีจุดมุ่งหมายในการปรับปรุงพันธุกรรมของยีนต์ P.stipitis เพื่อให้ได้เซลล์ยีนต์ ลูกผสม P.stipitis สำหรับการผลิตเอทานอลโดยตรงจากชีวมวลประเภทเซลลูโลส และเฮมิ เซลลูโสซึ่งเป็นการหมักเอทานอลแบบขั้นตอนเดียว โดยยีสต์ลูกผสมดังกล่าวถูกปรับปรุงพันธุกรรมให้มี ประสิทธิภาพในการหลังเอนไซม์เอ็นโดกลูคาเนส (endoglucanase) และ ไซแลนเสส (xylanase ) ออก สู่นอกเซลล์แบบร่วมกัน (co -expression) เพื่อการย่อยสลายชีวมวลประเภทเซลลูโลส และเฮมิ เซลลูโลส และยีสต์ P.stipitis จะเปลี่ยนน้ำตาลที่ได้จากการย่อยชีวมวลดังกล่าวให้เป็นเอทานอลได้ อย่างมีประสิทธิภาพด้วยกระบวนการที่ไม่ซับซ้อน จึงเป็นการลดต้นทุนในกระบวนการผลิตเทนานอล โดยตรงจากสารประเภทชีวมวล ในเชิงของการใช้วัตถุดิบประเภทชีวมวลที่มีราคาถูกได้อย่างเต็ม ประสิทธิภาพ และลดปริมาณเอนไซม์ที่จำเป็นต้องเติมลงไปในการย่อยสลายชีวมวลได้เป็นอย่างมาก

Claims

ข้อถือสิทธฺ์ (ทั้งหมด) ซึ่งจะไม่ปรากฏบนหน้าประกาศโฆษณา :แก้ไข วันที่ 03/06/2559 1. เซลล์ยีสต์ลูกผสม pichia stipitis สำหรับการผลิตเอทานอลโตยตรงจากชีวมวลประเภทเซลลูโลส และเฮมิเซลลูโลส ที่ซึ่งเชลล์ยีสต์ลูกผสมดังกล่าวถูกดัดแปลงพันธุกรรมให้มีการแสดงออกแบบ ร่วมกัน (co-expression) ของยีนที่ประมวลรหัสเป็นเอนไซม์เอ็นโดกลูคาเนส (endoglucanase และไชแลนเนส (xylanase) ที่คัดแยกได้จาก Aspergillus และมีลำดับเบสที่ดัดแปลงให้เหมาะสม กับการประมวลรหัสใน P. stipites แล้วดังรูปที่ 1 และรูปที่ 2 ตามลำดับ 2. เซลล์ยีสต์ลูกผสม P. stipitis ตามข้อถือสิทธิ 1 ที่ซึ่งการแสดงออกแบบร่วมกันของยีนดังกล่าวใช้ องค์ประกอบของโปรโมเตอร์ชนิดที่ไม่ต้องอาศัยการเหนี่ยวนำ (constitutive promoter) 3. เซลล์ยีนลูกผสม P. stipitis ตามข้อถือสิทธิ 2 ที่ซึ่งโปรโมเตอร์ชนิดที่ไม่ต้องอาศัยการเหนี่ยวนำ เลือกได้จากโปรโมเตอร์ของะยีน TKL (transketolase) หรือโปรโมเตอร์ของยีน TEF1 (transcription elongation factor 1) อย่างใดอย่างหนึ่ง 4. เซลล์ยีสต์ลูกผสม P. stipitis ตามข้อถือสิทธิ 3 ที่ซึ่งโปรโมเตอร์ชนิดที่ไม่ต้องอาศัยการเหนี่ยวนำที่ดี คือ โปรโมเตอร์ของยีน TEF1 5. เซลล์ยีนต์ลูกผสม P. stipitis ตามข้อถือสิทธิ 1-4 ข้อใดข้อหนึ่ง ที่ซึ่ง P. stipitis ที่ดี คือ P. stipitis สายพันธุ์ BCC15191 ---------------------------------------------------------------------------------------------------------- คำขอใหม่ปรับปรุง 2/08/2559

1. เซลล์ยีสต์ลูกผสม pichia stipitis สำหรับการผลิตเอทานอลโตยตรงจากชีวมวลประเภทเลลูโล่ และเฮมิเซลลูโลล ที่ซึ่งเชลล์ยีสต์ลูกผสมดังกล่าวถูกดัดแปลงพันธุวรรมให้มีวางแสดงออกแบบ ร่วมกัน (GO-expression) ของจีนที่ประมวลรหัสเป็นเอนไซม์เอ็นโดกลูคาเนส (endogLucanase และไชแลนเนส (xyLanase)

2. เซลล์ยีสต์ลูกผลม p. stipitis ตามข้อถือสิทธิ 1 ที่ซึ่งยีนที่ประมวลรหัสเป็นเอนไชม์เอ็นโดกลูคาเนล คั ด แ ย กได้ จ า ก จี นั ส Aspergillus,Neosartorya, pseudogymnooscus, penicllium ห รื อ Totoromyces อย่างใดอย่างหนึ่ง

3. เชลล์ยีสต์ลูกผสม p. stipitis ตามข้อถือสิทธิ 1 ที่ซึ่งยืนที่ประมวลรหัสเป็นเอนไซม์ไชแลนเนสคัดแยก ไต้จากจีนัส Aspergillus, Neurospora, colletotrichum, pseudogymnooscus, punctularia, pestolotiopsis หรือ penicllium อย่างใดอย่างหนึ่ง

4. เชลล์ยีลต์ลูกผสม p. stipitis ตามข้อถือสิทธิ 2 ที่ซึ่งยืนที่ประมวลรหัสเป็นเอนไซม์เอ็นโดกลูคาเนสที คัดแยกได้จาก Aspergillus ดังกล่าวมีลำดับเบสที่ดัดแปลงให้เหมาะสมวับการประมวลรหัสใน p. stipitis แล้วดังรูปที่ 1

5. เซลล์ยีสต์ลูกผสม p. stipitis ตามข้อถือลิทธิ 3 ที่ซึ่งยีนที่ประมวลรหัลเป็นเอนไซม์ไซแลนเนส จาก Asperfltus ดังกล่าวมีลำตับเบสที่ตัตแปลงให้เหมาะสมกับการประมวลรหัสใน p. stipitis แล้วดัง รูปที 2

6. เซลล์ยีสต์ลูกผสม p. stipitis ตามข้อถือสิทธิ 1 ที่ซึ่งการแสดงออกแบบร่วมกันของยีนดังกล่าวใช้ องค์ประกอบของโปรโมเตอร์ขนิดที่ไมต้องอาศัยการเหนียวนำ (constitutive promoter)

7. เซลล์ยีสต์ลูกผลม p. st1ขp/t1s ตามข้อถือสิทธิ 6 ที่ซึ่งโปรโมเตอร์ฯนิตที่ไม่ต้องอาศัยการเหนี่ยวนา เลื อ กได้ จ า กโป รโม เต อ ร์ข อ ง ยี น TKL (transketolase) ห รื อโ ป ร โ ม เ ต อ ร์ ข อ ง ยี น TEFI (transcription elongation factor 1) อย่างใดอย่างหนึ่ง

8. เชลล์ยีสต์ลูกผสม p. stipitis ตามข้อถือสิทธิ 7 ที่ซึ่งโปรโมเตอร์ชนิดที่ไม่ต้องอาศัยการเหนี่ยวนำ คือ โปรโมเตอร์ของยีน TEFI

9. เซลล์ยีสต์ลูกผลม p. stipitis ตามข้อถือสิทธิ 1-8 ข้อใดข้อหนึ่ง ที่ชึ่ง p. stipitis ที่ดี คือ p. stipitis สายพันธุ์ BCC15191 1 0.กระบวนการผลิตเอทานอลโดยตรงจากชีวมวลประเภทเชลลูโลสและเฮมิเชลลูโลส ด้วยการใช้เซลล์ ยีลต์ลูกผสม p. stipitis ตามข้อถือลิทธิ 1-9 ข้อใดข้อหนึ่ง ร่วมในกระบวนการ ที่ซึ่งกระบวนการ ดังกล่าวประกอบด้วยขั้นตอนดังนี้ 10.1 เพาะเลี้ยงเซลล์ยีสต์ลูกผสม p. stipitis ตามข้อถือสิทธิ 1-9 ข้อใดข้อหนึ่ง ในอาหารเลี้ยงเชื้อ เหลว YPD ที่อุณหภูมิ 50 องศาเซลเขียส อัตราการเขย่า 250 รอบต่อนาที เป็นเวลาประมาณ 18 ชั่วโมง เพื่อเตรียมเป็นกล้าเชื้อ 1 1 10.2 ถ่ายกล้าเชื้อเชลล์ยีสต์ลูกผสม p. stipitis ตามข้อถือสิทธิ 1-9 ข้อใดข้อหนึ่ง ที่เตรียมได้จากข้อ 10.1 ลงในอาหารเลี้ยงเชื้อเหลว BM ที่มีสารประเภทชีวมวลเป็นแหล่งคาร์บอน บ่มที่อุณหภูมิ 30 องศาเซลเซียส อัตราการเขย่า 100 รอบต่อนาที เป็นเวลา 72 ชั่วโมง แล้วทำการวัด ปริมาณเอทานอลที่ผลิตขึ้น