TH101607A - กระบวนการสำหรับการเตรียมกรด L-อะมิโนโดยใช้สายพันธุ์ของวงศ์ Enterobacteriaceae - Google Patents

Abstract

DC60 (01/02/49) การประดิษฐ์เกี่ยวข้องกับกระบวนการสำหรับการเตรียมกรด L-อะมิโนโดยการหมักจุลินทรีย์ รีคอมบิแนนท์ของวงศ์ Enterobacteriaceae ซึ่งแสดงลักษณะโดยที่ a) จุลินทรีย์ซึ่งผลิตกรด L-อะมิโนที่ต้องการ ซึ่ง yaaU ORF หรือลำดับนิวคลีโอไทด์หรือ แอลลีลซึ่งประมวลรหัสผลิตภัณฑ์จีน ได้ถูกเสริมขึ้น โดยเฉพาะได้ถูกแสดงออกในระดับสูง ได้ถูก เลี้ยงในตัวกลางภายใต้ภาวะซึ่งกรด L-อะมิโนที่ต้องการได้ถูกทำให้อุดมในตัวกลางหรือในเซลล์ และ b) กรด L-อะมิโนที่ต้องการได้ถูกแยก โดยทางเลือก โดยมีส่วนประกอบของอาหารเหลวการ หมัก และ/หรือ มวลชีวภาพ ซึ่งยังคงเหลืออยู่ในทั้งหมดของมันหรือเป็นส่วนๆ (มากกว่าหรือเท่ากับ0 ถึง 100%)ใน ผลิตภัณฑ์ที่แยกหรือซึ่งได้ถูกเอาออกไปอย่างสมบูรณ์ แก้ไขบทสรุปการประดิษฐ์ 20/10/2558 การประดิษฐ์เกี่ยวข้องกับกระบวนการสำหรับการเตรียมกรด L-อะมิโนโดยการหมักจุลินทรีย์ รีคอมบิแนนท์ของวงศ์ Enterobacteriaceae ซึ่งมีลักษณะเฉพาะตรงที่ว่า a) จุลินทรีย์ซึ่งผลิตกรด L-อะมิโนที่ต้องการ ซึ่ง yaaU ORF หรือลำดับนิวคลีโอไทด์หรือ แอลลีลซึ่งประมวลรหัสผลิตภัณฑ์จีน ได้ถูกเสริมขึ้น โดยเฉพาะได้ถูกแสดงออกในระดับสูงเกิน ได้ ถูกเลี้ยงในตัวกลางภายใต้ภาวะซึ่งกรด L-อะมิโนที่ต้องการได้ถูกทำให้อุดมในตัวกลางหรือในเซลล์ และ b) กรด L-อะมิโนที่ต้องการได้ถูกแยก โดยทางเลือก โดยมีส่วนประกอบของอาหารเหลวการ หมัก และ/หรือ มวลชีวภาพ ซึ่งยังคงเหลืออยู่ในทั้งหมดของมันหรือเป็นส่วนๆ (จาก ?0 ถึง 100%) ในผลิตภัณฑ์ที่แยกหรือซึ่งได้ถูกเอาออกไปอย่างสมบูรณ์ ------------------------------------------------------------ การประดิษฐ์เกี่ยวข้องกับกระบวนการสำหรับการเตรียมกรด L-อะมิโนโดยการหมักจุลินทรีย์ รีคอมบิแนนท์ของวงศ์ Enterrobacteriaceae ซึ่งแสดงลักษณะโดยที่ จุลินทรีย์ซึ่งผลิตกรด L-อะมิโนที่ต้องการ ซึ่ง yaaU ORF หรือลำดับนิวคลีโอไทด์หรือแอลลีล ซึ่งประมวลรหัสผลิตภัณฑ์จีน ได้ถูกเสริมขึ้น โดยเฉพาะได้ถูกแสดงออกในระดับสูง ได้ถูกเลี้ยงในตัว กลางภายใต้ภาวะซึ่งกรด L-อะมิโนที่ต้องการได้ถูกทำให้อุดมในตัวกลางหรือในเซลล์ และ กรด L-อะมิโนที่ต้องการได้ถูกแยก โดยทางเลือก โดยมีส่วนประกอบของอาหารเหลวการ หมัก และ/หรือ มวลชีวภาพ ซึ่งยังคงเหลืออยู่ในทั้งหมดของมันหรือเป็นส่วนๆ (มากกว่าหรือเท่ากับ0 ถึง 100%) ใน ผลิตภัณฑ์ที่แยกหรือซึ่งได้ถูกเอาออกไปอย่างสมบูรณ์

Claims (22)

------03/09/2561------(OCR) หน้า 4 ของจำนวน 5 หน้า t จีน ahpF ซึ่งประมวลรหัสหน่วยย่อยใหญ่ของแอลคิลไฮโดรเพอร์ออกไซด์รีด'คเทส u) จีน cysK ซึ่งประมวลรหัสซิสเตอีนชินเธส A v) จีน cysB ซึ่งประมวลรหัสตัวควบคุมของเรกูลอน cys w) จีน cysJ ซึ่งประมวลรหัส NADPH ซัลไฟด์รีตัคเทสฟลาโวโปรตีน x) จีน cysl ซึ่งประมวลรหัส NADPH ซัลไฟด์รีดัคเทสฮีโมโปรตีน y) จีน cysH ซึ่งประมวลรหัสอะดีนิลิลซัลเฟตรีดัคเทส z) จีน rseA ซึ่งประมวลรหัสเมมเบรนโปรตีนซึ่งมีแอคติวิตีต้านซิกมาE (al) จีน rseC ซึ่งประมวลรหัสตัวควบคุมทั้งหมด (global regulator) ของแฟณตอร้ซิกมาE (๖1) จีน sucA ซึ่งประมวลรหัสหน่วยย่อยตีคาร์บอกซิเลสของ 2-คีโตกลูตาเรตดีไฮโดรจีเนส (cl) จีน sucB ซึ่งประมวลรหัสหน่วยย่อยไดไฮโดรไลโพอิลทรานสซัคซิเนส E2 ของ 2-คีโตกลูตาเรตตีไฮโดรจีเนส (dl) จีน sucC ซึ่งประมวลรหัสหน่วยย่อย (3 ของซัคซินิล-CoA ซินธีเทส (el) จีน sucD ซึ่งประมวลรหัสหน่วยย่อย a ของซัคซินิล-CoA ซินธีเทส (fl) จีน aceE ซึ่งประมวลรหัสส่วนประกอบ E1 ของส่วนเชิงช้อนไพรูเวตตีไฮโดรจีเนส (gl) จีน aceF ซึ่งประมวลรหัสส่วนประกอบ E2 ของส่วนเชิงช้อนไพรูเวตดีไฮโดรจีเนส และ (hi) จีน rseB ซึ่งประมวลรหัสตัวควบคุมแอคติ'วิตีแ'ฟกเตอร์,ซิกมาE (แ) ผลิตภัณฑ์จีนของกรอบการอ่านเปิด (ORF) yodA ของ Escherichia coli โดยเพิ่มเติม ไต้ถูกแสดงออกในระดับสูงเกินในเวลาเดียวกัน 17. กระบวนการตามที่ขอถือสิทธิในข้อถือสิทธิที่ 15 ถึง 16 ข้อหนึ่งข้อใด ซึ่งมี ลักษณะเฉพาะตรงที่ว่า การใช้ไต้ทำด้วยจุลินทรีย์ซึ่งวิถีทางเมแทบอลิซึมที่ลดการสร้างกรด L-อะมิโน ดังกล่าวไต้ถูกทำให้อ่อนฤทธิลงอย่างน้อยบางส่วน 18. กระบวนการตามที่ขอถือสิทธิในข้อถือสิทธิที่ 17 ซึ่งมีลักษณะเฉพาะตรงที่ว่า เพื่อ วัตถุประสงค์ของการเตรียม L-ธรีโอนีน, จุลินทรีย์,ของวงศ์Enterobacteriaceae ไต้ถูกหมักซึ่งจีนหนึ่ง หรือมากกว่าที่คัดเลือกจากกลุ่ม: a) จีน tdh ซึ่งประมวลรหัสธรีโอนีนดีไฮโดรจีเนส b) จีน mdh ซึ่งประมวลรหัสมาเลตดีไฮโดรจีเนส c) ผลิตภัณฑ์จีนของกรอบการอ่านเปิด (ORE) yjfA ของ Escherichia coli d) ผลิตภัณฑ์จีนของกรอบการอ่านเปิด (ORF) ytfp ของ Escherichia coli ------------

1. จุลินทรีย์รีคอมบิแนนท์ของวงศ์ Enterobacteriaceae ซึ่งมี yaaU ORF ที่เสริมขึ้นหรือแสดง ออกในระดับสูง ซึ่งประมวลรหัสพอลิเพพไ ทด์ที่ได้ถูกอธิบายประกอบเป็นตัวขนส่งน้ำตาลที่ สันนิษฐาน และซึ่งผลิตกรด L-อะมิโน ในลักษณะที่ปรับปรุงให้ดีขึ้น

2. จุลินทรีย์ตามที่ขอถือสิทธิในข้อถือสิทธิที่ 1 ซึ่งพอลินิวคลีโอไทด์ซึ่งประม วลรหัสพอลิ เพพไทด์ที่ลำดับกรดอะมิโนของมันเหมือนกันอย่างน้อย 90% กับลำดับกรดอะมิโนที่คัดเลือกจากกลุ่ม SEQ ID NO. 4, SEQ ID NO. 6 และ SEQ ID NO. 8 ได้ถูกเสริมขึ้น

3. จุลินทรีย์ตามที่ขอถือสิทธิในข้อถือสิทธิที่ 2 ซึ่งแสดงลักษณะโดยที่มันมีพอลินิวคลีโอ ไทด์ที่แสดงออกในระดับสูงหรือที่เสริมขึ้นซึ่งสอดคล้องกั บ yaaU ORF และซึ่งได้ถูกคัดเลือกจาก กลุ่ม : a) พอลินิวคลีโอไทด์ซึ่งมีลำดับนิวคลีโอไทด์จาก SEQ ID NO. 3, SEQ ID NO. 5 หรือ SEQ ID NO. 7 b) พอลินิวคลีโอไทด์ซึ่งมีลำดับนิวคลีโอไทด์ที่สอดคล้องกับ SEQ ID NO. 3, SEQ ID NO. 5 หรือ SEQ ID NO. 7 ภายในข้อจำกัดของดีเจเนอเรซีขอ งรหัสพันธุกรรม c) ลำดับพอลินิวคลีโอไทด์ซึ่งมีลำดับที่ไฮบริไดซ์กับลำดับซึ่งเป็น คู่สมกับลำดับ SEQ ID NO. 3, SEQ ID NO. 5 หรือ SEQ ID NO. 7 ภายใต้ภาว ะเข้มงวด d) พอลินิวคลีโอไทด์ซึ่งมีลำดับนิวคลีโอไทด์ SEQ ID NO. 3, SEQ ID NO. 5 หรือ SEQ ID NO.7 ซึ่งมีผลจากการกลายพันธุ์ชนิดเซนซ์ที่เป็นกลางทางหน้าที่

4. จุลินทรีย์ตามที่ขอถือสิทธิในข้อถือสิทธิที่ 2 ซึ่งแสดงลักษณะโดยที่พอลิเพพไทด์มีลำดับ กรดอะมิโนซึ่งเหมือนกันอย่างน้อย 95% กับลำดับหนึ่งที่คัดเลือกจากกลุ่ม SEQ ID NO. 4, SEQ ID NO. 6 และ SEQ ID NO. 8

5. จุลินทรีย์ตามที่ขอถือสิทธิในข้อถือสิทธิที่ 2 ซึ่งแสดงลักษณะโดยที่พอลิเพพไทด์มีลำดับ กรดอะมิโนซึ่งเหมือนกัน 100% กับลำดับจาก SEQ ID NO. 4, SEQ ID NO. 6 หรือ SEQ ID NO. 8

6. จุลินทรีย์ตามที่ขอถือสิทธิในข้อถือสิทธิที่ 1 ถึง 5 ข้อใดข้อหนึ่ง ซึ่งแสดงลักษ ณะโดยที่มัน ได้ถูกผลิตขึ้นโดยทรานสฟอร์เมชัน, ทรานสดัคชัน หรือคอนจูเกชัน หรือก ารรวมกันของวิธีเหล่านี้ โดยใช้เวกเตอร์ซึ่งมี yaaU ORF, แอลลีลขอ ง ORF นี้ หรือส่วนของมัน และ/หรือ โปรโมเตอร์

7. จุลินทรีย์ตามที่ขอถือสิทธิในข้อถือสิทธิที่ 1 ถึง 6 ข้อใดข้อหนึ่ง ซึ่งจำนวนชุด ของ yaaU ORF หรือแอลลีล ได้ถูกทำให้เพิ่มขึ้นอย่างน้อย 1

8. จุลินทรีย์ตามที่ขอถือสิทธิในข้อถือสิทธิที่ 7 ซึ่งแสดงลักษณะโดยที่การเพิ่มขึ้นของจำนวน ชุดของ yaaU ORF โดยอย่างน้อย 1 ได้ถูกทำสำเร็จได้โดยการแทรกรวม ORF หรือแอลลีลเข้าสู่ โครโมโซมของจุลินทรีย์

9. จุลินทรีย์ตามที่ขอถือสิทธิในข้อถือสิทธิที่ 7 ซึ่งแสดงลักษณะโดยที่การเพิ่มขึ้นของจำนวน ชุดของ yaaU ORF โดยอย่างน้อย 1 ได้ถูกทำสำเร็จได้โดยวิธีของเวกเตอร์ที่ถ่ายแบบได้นอก โครโมโซม

10. จุลินทรีย์ตามที่ขอถือสิทธิในข้อถือสิทธิที่ 1 หรือ 2 ซึ่งแสดงลักษณะโดยที่เพื่อให้บรรลุ การเสริม a) โปรโมเตอร์และส่วนควบคุม หรือตำแหน่งจับเกาะของไรโบโซมอยู่ข้างหน้าก่อน yaaU ORF ได้ถูกทำให้กลายพันธุ์ หรือ b) แคสเสตการแสดงออกหรือโปรโมเตอร์ได้ถูกแทรกรวมอยู่ข้างหน้าก่อน yaaU ORF

11. จุลินทรีย์ตามที่ขอถือสิทธิในข้อถือสิทธิที่ 1 หรือ 2 ซึ่งแสดงลักษณะโดยที่ yaaU ORF อยู่ภายใต้การควบคุมของโปรโมเตอร์ซึ่งเสริมการแสดงออกของจีน

12. จุลินทรีย์ตามที่ขอถือสิทธิในข้อถือสิทธิที่ 1 ถึง 11 ซึ่งแสดงลักษณะโดยที่การเสริมของ yaaU ORF เพิ่มความเข้มข้นหรือแอคติวิตีของผลิตภัณฑ์จีน yaaU (โปรตีน) โดยอย่างน้อย 10% โดย อาศัยเกณฑ์แอคติวิตีหรือความเข้มข้นของผลิตภัณฑ์จีนในสายพันธุ์หรือจุลินทรีย์ดั้งเดิมซึ่งไม่ได้เป็น ชนิดรีคอมบิเเนนท์สำหรับ yaaU ORF

13. จุลินทรีย์ตามที่ขอถือสิทธิในข้อถือสิทธิที่ 1 ถึง 12 ข้อใดข้อหนึ่ง ซึ่งแสดงลักษณะโดยที่ จีนอื่นๆ ของวิถีเมแทบอลิซึมสำหรับชีวสังเคราะห์กรด L-อะมิโนที่ต้องการได้มีอยู่ในรูปที่เสริมขึ้น โดยเฉพาะที่แสดงออกในระดับสูง

14. จุลินทรีย์ตามที่ขอถือสิทธิในข้อถือสิทธิที่ 13 ซึ่งแสดงลักษณะโดยที่จุลินทรีย์ได้ถูก คัดเลือกจากสกุล Escherichia, Erwinia, Providencia และ Serratia

15. จุลินทรีย์ตามที่ขอถือสิทธิในข้อถือสิทธิที่ 1 ถึง 14 ข้อใดข้อหนึ่ง ซึ่งแสดงลักษณะโดยที่ มันผลิต L-ธรีโอนีน

16. กระบวนการสำหรับการเตรียมกรด L-อะมิโน โดยการหมักจุลินทรีย์รีคอมบิแนนท์ของ วงศ์ Enterobacteriaceae ซึ่งแสดงลักษณะโดยที่ a) จุลินทรีย์ซึ่งผลิตกรด L-อะมิโนที่ต้องการ ซึ่ง yaaU ORF หรือลำดับนิวคลีโอไทด์หรือ แอลลีลซึ่งประมวลรหัสผลิตภัณฑ์จีนของมัน ได้ถูกเสริมขึ้น โดยเฉพาะได้ถูกแสดงออกในระดับสูง ได้ถูกเลี้ยงในตัวกลางภายใต้ภาวะซึ่งกรด L-อะมิโนที่ต้องการได้ถูกทำให้อุดมในตัวกลางหรือใน เซลล์ และ b) กรด L-อะมิโนที่ต้องการได้ถูกแยก โดยมีส่วนประกอบของอาหารเหลวการหมัก และ/ หรือ มวลชีวภาพ ซึ่งยังคงเหลืออยู่ เป็นทั้งหมดของมันหรือเป้นส่วนๆ (มากว่าหรือเท่ากับ 0 ถึง 100%) ในผลิตภัณฑ์ที่ แยกหรือซึ่งได้ถูกเอาออกไปอย่างสมบูรณ์

17. กระบวนการตามที่ขอถือสิทธิในข้อถือสิทธิที่ 16 ซึ่งแสดงลักษณะโดยที่ได้ใช้จุลินทรีย์ ตามที่ขอถือสิทธิในข้อถือสิทธิที่ 1 ถึง 15 ข้อใดข้อหนึ่ง

18. กระบวนการตามที่ขอถือสิทธิในข้อถือสิทธิที่ 16 หรือ 17 ซึ่งแสดงลักษณะโดยที่เพื่อวัตถุ ประสงค์ของการเตรียม L-ธรีโอนีน จุลินทรีย์ของวงศ์ Enterobacteriaceae ได้ถูกหมักซึ่งจีนหนึ่งหรือ มากกว่าที่คัดเลือกจากกลุ่ม 18.1 อย่างน้อยจีนหนึ่งของโอเปอรอน thrABC ซึ่งประมวลรหัสแอสปาร์เตตไคเนส, ฮอมอเซรีนดีไฮโดรจีเนส, ฮอมอเซรีนไคเนส และธรีโอนีนซินเธส 18.2 จีน pyc ของ Corynebacterium glutamicum ซึ่งประมวลรหัสไพรูเวตคาร์บอกซิเลส 18.3 จีน pps ซึ่งประมวลรหัสฟอสฟออีนอลไพรูเวตซิมเธส 18.4 จีน ppc ซึ่งประมวลรหัสฟอสฟออีนอลไพรูเวตคาร์บอกซิเลส 18.5 จีน pntA และ pntB ซึ่งประมวลรหัสหน่วยย่อยไพริดีนทรานสไฮโดรจีเนส 18.6 จีน rhtB ซึ่งประมวลรหัสโปรตีนที่เป็นสื่อกลางความต้านทานต่อฮอมอโซรีน 18.7 จีน rhtC ซึ่งประมวลรหัสโปรตีนที่เป็นสื่อกลางความต้านทานต่อธรีโอนีน 18.8 จีน thrE ของ Corynebacterium glutamicum ซึ่งประมวลรหัสโปรตีนตัวพาส่งออก ธรีโอนีน 18.9 จีน gdhA ซึ่งประมวลรหัสกลูตาเมตดีไฮโดรจีเนส 18.10 จีน pgm ซึ่งประมวลรหัสฟอสฟอกลูโคมิวเทส 18.11 จีน fba ซึ่งประมวลรหัสฟรุคโทสไบฟอสเฟตแอลโดเลส 18.12 จีน ptsH ซึ่งประมวลรหัสฟอสฟอฮิสติดีนโปรตีนเฮกโซสฟอสฟอทรานสเฟอเรส 18.13 จีน ptsI ซึ่งประมวลรหัสเอนไซม์ I ของระบบฟอสฟอทรานสเฟอเรส 18.14 จีน crr ซึ่งประมวลรหัสส่วนประกอบ IIA ที่จำเพาะกับกลูโคส 18.15 จีน ptsG ซึ่งประมวลรหัสส่วนประกอบ IIBC ที่จำเพาะกับกลูโคส 18.16 จีน Irp ซึ่งประมวลรหัสตัวควบคุมของเรกูลอนลูซีน 18.17 จีน fadR ซึ่งประมวลผลรหัสตัวควบคุมของเรกูลอน fad 18.18 จีน icIR ซึ่งประมวลรหัสตัวควบคุมของเซนทรัลอินเตอร์มีเดียรีเมแทบอลิซึม (central intermediary metabolism) 18.19 จีน ahpC ซึ่งประมวลรหัสหน่วยย่อยเล็กของแอลคิลไฮโดรเพอร์ออกไซด์รีดัคเทส 18.20 จีน ahpF ซึ่งประมวลรหัสหน่วยย่อยใหญ่ของแอลคิลไฮโดรเพอร์ออกไซด์รีดัคเทส 18.21 จีน cysK ซึ่งประมวลรหัสซิสเตอีนซินเธส A 18.22 จีน cysB ซึ่งประมวลรหัสตัวควบคุมของเรกูลอน cys 18.23 จีน cysJ ซึ่งประมวลรหัส NADPH ซัลไฟต์รีดัคเทสฟลาโวโปรตีน 18.24 จีน cysI ซึ่งประมวลรหัส NADPH ซัลไฟต์รีดัคเทสฮีโมโปรตีน 18.25 จีน cysH ซึ่งประมวลรหัสอะดีนิลิลซัลเฟตรีดัคเทส 18.26 จีน rseA ซึ่งประมวลรหัสเมมเบรนโปรตีนซึ่งมีแอคติวิตีต้านซิกมาE 18.27 จีน rseC ซึ่งประมวลรหัสตัวควบคุมทั้งหมดของแฟกเตอร์ซิกมาE 18.28 จีน sucA ซึ่งประมวลรหัสหน่วยย่อยดีคาร์บอกซิเลสของ 2-คีโตกลูตาเรตดี ไฮโดรจีเนส 18.29 จีน sucB ซึ่งประมวลรหัสหน่วยย่อยไดไฮโดรไลโพอิลทรานสซัคซิเนส E2 ของ 2-คีโตกลูตาเรตดีไฮโดรจีเนส 18.30 จีน sucC ซึ่งประมวลรหัสหน่วยย่อย เบตา ของซัคซินิล-CoA ซินธีเทส 18.31 จีน sucD ซึ่งประมวลรหัสหน่วยย่อย อัลฟา ของซัคซินิล-CoA ซินธีเทส 18.32 จีน aceE ซึ่งประมวลรหัสส่วนประกอบ E1 ของส่วนเชิงซ้อนไพรูเวตดีไฮโดรจีเนส 18.33 จีน aceF ซึ่งประมวลรหัสส่วนประกอบ E2 ของส่วนเชิงซ้อนไพรูเวตดีไฮโดรจีเนส และ 18.34 จีน rseB ซึ่งประมวลรหัสตัวควบคุมแอคติวิตีแฟกเตอร์ซิกมาE 18.35 ผลิตภัณฑ์จีนของกรอบการอ่านเปิด (ORF) yodA ของ Eschericchia coil ได้ถูกเสริมโดยเพิ่มเติม โดยเฉพาะได้ถูกแสดงออกในระดับสูงในเวลาเดียวกัน

19. กระบวนการตามที่ขอถือสิทธิในข้อถือสิทธิที่ 16 ถึง 18 ข้อใดข้อหนึ่ง ซึ่งแสดงลักษณะ โดยที่การใช้ได้ทำด้วยจุลินทรีย์ซึ่งวิถีทางเมแทบอลิซึมที่ลดการสร้างกรด L-อะมิโนที่ต้องการได้ถูก ทำให้อ่อนฤทธิ์ลงอย่างน้อยบางส่วน

20. กระบวนการตามที่ขอถือสิทธิในข้อถือสิทธิที่ 19 ซึ่งแสดงลักษณะโดยที่เพื่อวัตถุ ประสงค์ของการเตรียม L-ธรีโอนีน จุลินทรีย์ของวงศ์ Enterobacteriaceae ได้ถูกหมักซึ่งจีนหนึ่งหรือ มากกว่าที่คัดเลือกจากกลุ่ม: 20.1 จีน tdh ซึ่งประมวลรหัสธรีโอนีนดีไฮโดรจีเนส 20.2 จีน mdh ซึ่งประมวลรหัสมาเลตดีไฮโดรจีเนส 20.3 ผลิตภัณฑ์จีนของกรอบการอ่านเปิด (ORF) yjfA ของ Escherichia coli 20.4 ผลิตภัณฑ์จีนของกรอบการอ่านเปิด (ORF) ytfP ของ Escherichia coli 20.5 จีน pckA ซึ่งประมวลรหัสฟอสฟออีนอลไพรูเวตคาร์บอกซีไคเนส 20.6 จีน poxB ซึ่งประมวลรหัสไพรูเวตออกซิเดส 20.7 จีน dgsA ซึ่งประมวลรหัสตัวควบคุม DgsA ของระบบฟอสฟอทรานสเฟอเรส 20.8 จีน fruR ซึ่งประมวลรหัสตัวกดฟรุคโทส 20.9 จีน rpoS ซึ่งประมวลรหัสแฟกเตอร์ซิกมา38 และ 20.10 จีน aspA ซึ่งประมวลรหัสแอสปาร์เตตแอมโมเนียมไลเอส ได้ถูกทำให้อ่อนฤทธิ์ลงโดยเพิ่มเติม โดยเฉพาะได้ถูกกำจัด หรือการแสดงออกของมันได้ถูก ทำให้ลดลงเวลาเดียวกัน

21. กระบวนการตามที่ขอถือสิทธิในข้อถือสิทธิที่ 16 ถึง 20 ข้อใดข้อหนึ่ง ซึ่งแสดงลักษณะ โดยที่กรด L-อะมิโนที่คัดเลือกจากกลุ่ม L-แอสปาราจีน, L-เซรีน, L-กลูตาเมต, L-ไกลซีน, L-อะลานีน, L-ซีสเตอีน, L-เวลีน, L-เมไธโอนีน, L-โปรลีน, L-ไอโซลูซีน, L-ลูซีน, L-ไทโรซีน, L-เฟนิลอะลานีน, L-ฮิสติดีน, L-ไลซีน, L-ทริปโตเฟน, L-อาร์จินีน และ L-ฮอมอเซรีน ได้ถูกเตรียม ขึ้น

22. กระบวนการตามที่ขอถือสิทธิในข้อถือสิทธิที่ 21 ซึ่งแสดงลักษณะโดยที่กรด L-อะมิโน ที่คัดเลือกจากกลุ่ม L-ไอโซลูซีน, L-เวลีน, L-เมไธโอนีน, L-ฮอมอเซรีน, L-ทริปโตเฟน และ L-ไลซีน ได้ถูกเตรียมขึ้น