Claims (22)
------03/09/2561------(OCR) หน้า 4 ของจำนวน 5 หน้า t จีน ahpF ซึ่งประมวลรหัสหน่วยย่อยใหญ่ของแอลคิลไฮโดรเพอร์ออกไซด์รีด'คเทส u) จีน cysK ซึ่งประมวลรหัสซิสเตอีนชินเธส A v) จีน cysB ซึ่งประมวลรหัสตัวควบคุมของเรกูลอน cys w) จีน cysJ ซึ่งประมวลรหัส NADPH ซัลไฟด์รีตัคเทสฟลาโวโปรตีน x) จีน cysl ซึ่งประมวลรหัส NADPH ซัลไฟด์รีดัคเทสฮีโมโปรตีน y) จีน cysH ซึ่งประมวลรหัสอะดีนิลิลซัลเฟตรีดัคเทส z) จีน rseA ซึ่งประมวลรหัสเมมเบรนโปรตีนซึ่งมีแอคติวิตีต้านซิกมาE (al) จีน rseC ซึ่งประมวลรหัสตัวควบคุมทั้งหมด (global regulator) ของแฟณตอร้ซิกมาE (๖1) จีน sucA ซึ่งประมวลรหัสหน่วยย่อยตีคาร์บอกซิเลสของ 2-คีโตกลูตาเรตดีไฮโดรจีเนส (cl) จีน sucB ซึ่งประมวลรหัสหน่วยย่อยไดไฮโดรไลโพอิลทรานสซัคซิเนส E2 ของ 2-คีโตกลูตาเรตตีไฮโดรจีเนส (dl) จีน sucC ซึ่งประมวลรหัสหน่วยย่อย (3 ของซัคซินิล-CoA ซินธีเทส (el) จีน sucD ซึ่งประมวลรหัสหน่วยย่อย a ของซัคซินิล-CoA ซินธีเทส (fl) จีน aceE ซึ่งประมวลรหัสส่วนประกอบ E1 ของส่วนเชิงช้อนไพรูเวตตีไฮโดรจีเนส (gl) จีน aceF ซึ่งประมวลรหัสส่วนประกอบ E2 ของส่วนเชิงช้อนไพรูเวตดีไฮโดรจีเนส และ (hi) จีน rseB ซึ่งประมวลรหัสตัวควบคุมแอคติ'วิตีแ'ฟกเตอร์,ซิกมาE (แ) ผลิตภัณฑ์จีนของกรอบการอ่านเปิด (ORF) yodA ของ Escherichia coli โดยเพิ่มเติม ไต้ถูกแสดงออกในระดับสูงเกินในเวลาเดียวกัน 17. กระบวนการตามที่ขอถือสิทธิในข้อถือสิทธิที่ 15 ถึง 16 ข้อหนึ่งข้อใด ซึ่งมี ลักษณะเฉพาะตรงที่ว่า การใช้ไต้ทำด้วยจุลินทรีย์ซึ่งวิถีทางเมแทบอลิซึมที่ลดการสร้างกรด L-อะมิโน ดังกล่าวไต้ถูกทำให้อ่อนฤทธิลงอย่างน้อยบางส่วน 18. กระบวนการตามที่ขอถือสิทธิในข้อถือสิทธิที่ 17 ซึ่งมีลักษณะเฉพาะตรงที่ว่า เพื่อ วัตถุประสงค์ของการเตรียม L-ธรีโอนีน, จุลินทรีย์,ของวงศ์Enterobacteriaceae ไต้ถูกหมักซึ่งจีนหนึ่ง หรือมากกว่าที่คัดเลือกจากกลุ่ม: a) จีน tdh ซึ่งประมวลรหัสธรีโอนีนดีไฮโดรจีเนส b) จีน mdh ซึ่งประมวลรหัสมาเลตดีไฮโดรจีเนส c) ผลิตภัณฑ์จีนของกรอบการอ่านเปิด (ORE) yjfA ของ Escherichia coli d) ผลิตภัณฑ์จีนของกรอบการอ่านเปิด (ORF) ytfp ของ Escherichia coli ------------------03/09/2018------(OCR) Page 4 of 5 pages t Gene ahpF which encodes the macrosubunit of alkylhydroperoxide reductase u) Gene cysK which encodes cysteine synthase A v) Gene cysB which encodes the regulator of regulon cys w) Gene cysJ which encodes NADPH sulfide reductase flavoprotein x) Gene cysl which encodes NADPH sulfide reductase hemoprotein y) Gene cysH which encodes adenylyl sulfate reductase z) Gene rseA which encodes membrane protein with anti-sigma E activity (al) Gene rseC which encodes the global regulator of phosphate sigma E (61) Gene sucA which encodes the carboxylase subunit of 2-ketoglutarate dehydrogenase (cl) gene sucB, which encoding the dihydrolipoyl transsucciase E2 subunit of 2-ketoglutarate dehydrogenase (dl); gene sucC, which encoding the (3) subunit of succinyl-CoA synthesizer (el); gene sucD, which encoding the a subunit of succinyl-CoA synthesizer (fl); gene aceE, which encoding the E1 subunit of the pyruvate dehydrogenase (gl); gene aceF, which encoding the E2 subunit of the pyruvate dehydrogenase (hi); and gene rseB, which encoding the control activity factor, sigmaE (a). The product of the open reading frame (ORF) yodA of Escherichia coli was also expressed at high levels simultaneously. 17. 18. The process described in claim 17, which is characterized that, for the purpose of preparing L-threonine, microorganisms of the family Enterobacteriaceae are fermented with one or more selected genes from the following groups: a) gene tdh encoding threonine dehydrogenase; b) gene mdh encoding malate dehydrogenase; c) gene product of the open reading frame (ORE) yjfA of Escherichia coli; d) gene product of the open reading frame (ORF) ytfp of Escherichia coli.
1. จุลินทรีย์รีคอมบิแนนท์ของวงศ์ Enterobacteriaceae ซึ่งมี yaaU ORF ที่เสริมขึ้นหรือแสดง ออกในระดับสูง ซึ่งประมวลรหัสพอลิเพพไ ทด์ที่ได้ถูกอธิบายประกอบเป็นตัวขนส่งน้ำตาลที่ สันนิษฐาน และซึ่งผลิตกรด L-อะมิโน ในลักษณะที่ปรับปรุงให้ดีขึ้น1. Recombinant microorganisms of the family Enterobacteriaceae, exhibiting enhanced or highly expressed yaaU ORF, process polypeptide codes described as hypothetical sugar transporters, and produce L-amino acids in an improved manner.
2. จุลินทรีย์ตามที่ขอถือสิทธิในข้อถือสิทธิที่ 1 ซึ่งพอลินิวคลีโอไทด์ซึ่งประม วลรหัสพอลิ เพพไทด์ที่ลำดับกรดอะมิโนของมันเหมือนกันอย่างน้อย 90% กับลำดับกรดอะมิโนที่คัดเลือกจากกลุ่ม SEQ ID NO. 4, SEQ ID NO. 6 และ SEQ ID NO. 8 ได้ถูกเสริมขึ้น2. A microorganism as claimed in claim 1, whose polynucleotide encoding is a polypeptide whose amino acid sequence is at least 90% identical to the amino acid sequences selected from groups SEQ ID NO. 4, SEQ ID NO. 6, and SEQ ID NO. 8, has been added.
3. จุลินทรีย์ตามที่ขอถือสิทธิในข้อถือสิทธิที่ 2 ซึ่งแสดงลักษณะโดยที่มันมีพอลินิวคลีโอ ไทด์ที่แสดงออกในระดับสูงหรือที่เสริมขึ้นซึ่งสอดคล้องกั บ yaaU ORF และซึ่งได้ถูกคัดเลือกจาก กลุ่ม : a) พอลินิวคลีโอไทด์ซึ่งมีลำดับนิวคลีโอไทด์จาก SEQ ID NO. 3, SEQ ID NO. 5 หรือ SEQ ID NO. 7 b) พอลินิวคลีโอไทด์ซึ่งมีลำดับนิวคลีโอไทด์ที่สอดคล้องกับ SEQ ID NO. 3, SEQ ID NO. 5 หรือ SEQ ID NO. 7 ภายในข้อจำกัดของดีเจเนอเรซีขอ งรหัสพันธุกรรม c) ลำดับพอลินิวคลีโอไทด์ซึ่งมีลำดับที่ไฮบริไดซ์กับลำดับซึ่งเป็น คู่สมกับลำดับ SEQ ID NO. 3, SEQ ID NO. 5 หรือ SEQ ID NO. 7 ภายใต้ภาว ะเข้มงวด d) พอลินิวคลีโอไทด์ซึ่งมีลำดับนิวคลีโอไทด์ SEQ ID NO. 3, SEQ ID NO. 5 หรือ SEQ ID NO.7 ซึ่งมีผลจากการกลายพันธุ์ชนิดเซนซ์ที่เป็นกลางทางหน้าที่3. Microorganisms as proposed in claim 2, characterized by having highly expressed or enhanced polynucleotide sequences corresponding to the yaaU ORF, and which have been selected from the following groups: a) polynucleotides with nucleotide sequences from SEQ ID NO. 3, SEQ ID NO. 5, or SEQ ID NO. 7; b) polynucleotides with nucleotide sequences corresponding to SEQ ID NO. 3, SEQ ID NO. 5, or SEQ ID NO. 7 within the genetic constraints of the genetic code; c) polynucleotide sequences that are hybridized with sequences which are... Matched to SEQ ID NO. 3, SEQ ID NO. 5, or SEQ ID NO. 7 under strict conditions. d) Polynucleotides containing SEQ ID NO. 3, SEQ ID NO. 5, or SEQ ID NO. 7 nucleotide sequences resulting from a functionally neutral sense mutation.
4. จุลินทรีย์ตามที่ขอถือสิทธิในข้อถือสิทธิที่ 2 ซึ่งแสดงลักษณะโดยที่พอลิเพพไทด์มีลำดับ กรดอะมิโนซึ่งเหมือนกันอย่างน้อย 95% กับลำดับหนึ่งที่คัดเลือกจากกลุ่ม SEQ ID NO. 4, SEQ ID NO. 6 และ SEQ ID NO. 84. The microorganism as claimed in claim 2, characterized by a polypeptide sequence with at least 95% identical amino acid sequence to the first sequence selected from SEQ ID NO. 4, SEQ ID NO. 6, and SEQ ID NO. 8.
5. จุลินทรีย์ตามที่ขอถือสิทธิในข้อถือสิทธิที่ 2 ซึ่งแสดงลักษณะโดยที่พอลิเพพไทด์มีลำดับ กรดอะมิโนซึ่งเหมือนกัน 100% กับลำดับจาก SEQ ID NO. 4, SEQ ID NO. 6 หรือ SEQ ID NO. 85. The microorganism as claimed in claim 2, characterized by a polypeptide sequence with 100% identical amino acid sequence to that from SEQ ID NO. 4, SEQ ID NO. 6, or SEQ ID NO. 8.
6. จุลินทรีย์ตามที่ขอถือสิทธิในข้อถือสิทธิที่ 1 ถึง 5 ข้อใดข้อหนึ่ง ซึ่งแสดงลักษ ณะโดยที่มัน ได้ถูกผลิตขึ้นโดยทรานสฟอร์เมชัน, ทรานสดัคชัน หรือคอนจูเกชัน หรือก ารรวมกันของวิธีเหล่านี้ โดยใช้เวกเตอร์ซึ่งมี yaaU ORF, แอลลีลขอ ง ORF นี้ หรือส่วนของมัน และ/หรือ โปรโมเตอร์6. Any microorganism as claimed under claims 1 through 5, characterized by its production by transformation, transduction, or conjugation, or a combination of these methods, using a vector containing yaaU ORF, an allele of this ORF or a part of it, and/or a promoter.
7. จุลินทรีย์ตามที่ขอถือสิทธิในข้อถือสิทธิที่ 1 ถึง 6 ข้อใดข้อหนึ่ง ซึ่งจำนวนชุด ของ yaaU ORF หรือแอลลีล ได้ถูกทำให้เพิ่มขึ้นอย่างน้อย 17. Microorganisms as claimed under claims 1 through 6, in which the number of yaaU ORF or allele sets has been increased by at least 1.
8. จุลินทรีย์ตามที่ขอถือสิทธิในข้อถือสิทธิที่ 7 ซึ่งแสดงลักษณะโดยที่การเพิ่มขึ้นของจำนวน ชุดของ yaaU ORF โดยอย่างน้อย 1 ได้ถูกทำสำเร็จได้โดยการแทรกรวม ORF หรือแอลลีลเข้าสู่ โครโมโซมของจุลินทรีย์8. A microorganism as proposed in claim 7, characterized by the achievement of an increase in the number of yaaU ORF sets by at least 1 through the insertion of an ORF or allele into the microorganism's chromosome.
9. จุลินทรีย์ตามที่ขอถือสิทธิในข้อถือสิทธิที่ 7 ซึ่งแสดงลักษณะโดยที่การเพิ่มขึ้นของจำนวน ชุดของ yaaU ORF โดยอย่างน้อย 1 ได้ถูกทำสำเร็จได้โดยวิธีของเวกเตอร์ที่ถ่ายแบบได้นอก โครโมโซม9. The microorganism as claimed in claim 7, characterized by the attainment of an increase of at least 1 in the number of yaaU ORF sets by means of an extrachromosomal transmissible vector.
10. จุลินทรีย์ตามที่ขอถือสิทธิในข้อถือสิทธิที่ 1 หรือ 2 ซึ่งแสดงลักษณะโดยที่เพื่อให้บรรลุ การเสริม a) โปรโมเตอร์และส่วนควบคุม หรือตำแหน่งจับเกาะของไรโบโซมอยู่ข้างหน้าก่อน yaaU ORF ได้ถูกทำให้กลายพันธุ์ หรือ b) แคสเสตการแสดงออกหรือโปรโมเตอร์ได้ถูกแทรกรวมอยู่ข้างหน้าก่อน yaaU ORF10. The microorganism as claimed in claim 1 or 2, which exhibits the following characteristics to achieve enhancement: a) the promoter and regulator or ribosome attachment site are preceding the yaaU ORF; or b) the expression cassette or promoter is inserted preceding the yaaU ORF.
11. จุลินทรีย์ตามที่ขอถือสิทธิในข้อถือสิทธิที่ 1 หรือ 2 ซึ่งแสดงลักษณะโดยที่ yaaU ORF อยู่ภายใต้การควบคุมของโปรโมเตอร์ซึ่งเสริมการแสดงออกของจีน11. Microorganisms as proposed in claim 1 or 2, characterized by yaaU ORF being under the control of a promoter that enhances gene expression.
12. จุลินทรีย์ตามที่ขอถือสิทธิในข้อถือสิทธิที่ 1 ถึง 11 ซึ่งแสดงลักษณะโดยที่การเสริมของ yaaU ORF เพิ่มความเข้มข้นหรือแอคติวิตีของผลิตภัณฑ์จีน yaaU (โปรตีน) โดยอย่างน้อย 10% โดย อาศัยเกณฑ์แอคติวิตีหรือความเข้มข้นของผลิตภัณฑ์จีนในสายพันธุ์หรือจุลินทรีย์ดั้งเดิมซึ่งไม่ได้เป็น ชนิดรีคอมบิเเนนท์สำหรับ yaaU ORF12. Microorganisms as claimed in claims 1 through 11, characterized by the supplementation of yaaU ORF increasing the concentration or activity of the yaaU (protein) product by at least 10% based on the activity or concentration of the product in the original strain or microorganism which is not recombinant for yaaU ORF.
13. จุลินทรีย์ตามที่ขอถือสิทธิในข้อถือสิทธิที่ 1 ถึง 12 ข้อใดข้อหนึ่ง ซึ่งแสดงลักษณะโดยที่ จีนอื่นๆ ของวิถีเมแทบอลิซึมสำหรับชีวสังเคราะห์กรด L-อะมิโนที่ต้องการได้มีอยู่ในรูปที่เสริมขึ้น โดยเฉพาะที่แสดงออกในระดับสูง13. Any microorganism as claimed in claims 1 through 12, characterized by the presence of other genes of the metabolic pathway for the desired L-amino acid biosynthesis in an enhanced form, particularly expressed at a high level.
14. จุลินทรีย์ตามที่ขอถือสิทธิในข้อถือสิทธิที่ 13 ซึ่งแสดงลักษณะโดยที่จุลินทรีย์ได้ถูก คัดเลือกจากสกุล Escherichia, Erwinia, Providencia และ Serratia14. Microorganisms as claimed in claim 13, characterized by being selected from the genera Escherichia, Erwinia, Providencia, and Serratia.
15. จุลินทรีย์ตามที่ขอถือสิทธิในข้อถือสิทธิที่ 1 ถึง 14 ข้อใดข้อหนึ่ง ซึ่งแสดงลักษณะโดยที่ มันผลิต L-ธรีโอนีน15. A microorganism as claimed under claims 1 through 14, characterized by the production of L-threonine.
16. กระบวนการสำหรับการเตรียมกรด L-อะมิโน โดยการหมักจุลินทรีย์รีคอมบิแนนท์ของ วงศ์ Enterobacteriaceae ซึ่งแสดงลักษณะโดยที่ a) จุลินทรีย์ซึ่งผลิตกรด L-อะมิโนที่ต้องการ ซึ่ง yaaU ORF หรือลำดับนิวคลีโอไทด์หรือ แอลลีลซึ่งประมวลรหัสผลิตภัณฑ์จีนของมัน ได้ถูกเสริมขึ้น โดยเฉพาะได้ถูกแสดงออกในระดับสูง ได้ถูกเลี้ยงในตัวกลางภายใต้ภาวะซึ่งกรด L-อะมิโนที่ต้องการได้ถูกทำให้อุดมในตัวกลางหรือใน เซลล์ และ b) กรด L-อะมิโนที่ต้องการได้ถูกแยก โดยมีส่วนประกอบของอาหารเหลวการหมัก และ/ หรือ มวลชีวภาพ ซึ่งยังคงเหลืออยู่ เป็นทั้งหมดของมันหรือเป้นส่วนๆ (มากว่าหรือเท่ากับ 0 ถึง 100%) ในผลิตภัณฑ์ที่ แยกหรือซึ่งได้ถูกเอาออกไปอย่างสมบูรณ์16. A process for the preparation of L-amino acids by fermentation of recombinant microorganisms of the family Enterobacteriaceae, characterized by: a) microorganisms producing the desired L-amino acid, whose yaaU ORF or nucleotide sequence or allele encoding its Chinese product has been enriched, or who are particularly highly expressed, are cultured in a medium under conditions in which the desired L-amino acid is enriched in the medium or in cells; and b) the desired L-amino acid is isolated with components of the fermentation liquid medium and/or biomass remaining as whole or in fractions (greater than or equal to 0 to 100%) in the isolated product or which are completely removed.
17. กระบวนการตามที่ขอถือสิทธิในข้อถือสิทธิที่ 16 ซึ่งแสดงลักษณะโดยที่ได้ใช้จุลินทรีย์ ตามที่ขอถือสิทธิในข้อถือสิทธิที่ 1 ถึง 15 ข้อใดข้อหนึ่ง17. The process as claimed in claim 16, characterized by the use of microorganisms as claimed in claims 1 through 15.
18. กระบวนการตามที่ขอถือสิทธิในข้อถือสิทธิที่ 16 หรือ 17 ซึ่งแสดงลักษณะโดยที่เพื่อวัตถุ ประสงค์ของการเตรียม L-ธรีโอนีน จุลินทรีย์ของวงศ์ Enterobacteriaceae ได้ถูกหมักซึ่งจีนหนึ่งหรือ มากกว่าที่คัดเลือกจากกลุ่ม 18.1 อย่างน้อยจีนหนึ่งของโอเปอรอน thrABC ซึ่งประมวลรหัสแอสปาร์เตตไคเนส, ฮอมอเซรีนดีไฮโดรจีเนส, ฮอมอเซรีนไคเนส และธรีโอนีนซินเธส 18.2 จีน pyc ของ Corynebacterium glutamicum ซึ่งประมวลรหัสไพรูเวตคาร์บอกซิเลส 18.3 จีน pps ซึ่งประมวลรหัสฟอสฟออีนอลไพรูเวตซิมเธส 18.4 จีน ppc ซึ่งประมวลรหัสฟอสฟออีนอลไพรูเวตคาร์บอกซิเลส 18.5 จีน pntA และ pntB ซึ่งประมวลรหัสหน่วยย่อยไพริดีนทรานสไฮโดรจีเนส 18.6 จีน rhtB ซึ่งประมวลรหัสโปรตีนที่เป็นสื่อกลางความต้านทานต่อฮอมอโซรีน 18.7 จีน rhtC ซึ่งประมวลรหัสโปรตีนที่เป็นสื่อกลางความต้านทานต่อธรีโอนีน 18.8 จีน thrE ของ Corynebacterium glutamicum ซึ่งประมวลรหัสโปรตีนตัวพาส่งออก ธรีโอนีน 18.9 จีน gdhA ซึ่งประมวลรหัสกลูตาเมตดีไฮโดรจีเนส 18.10 จีน pgm ซึ่งประมวลรหัสฟอสฟอกลูโคมิวเทส 18.11 จีน fba ซึ่งประมวลรหัสฟรุคโทสไบฟอสเฟตแอลโดเลส 18.12 จีน ptsH ซึ่งประมวลรหัสฟอสฟอฮิสติดีนโปรตีนเฮกโซสฟอสฟอทรานสเฟอเรส 18.13 จีน ptsI ซึ่งประมวลรหัสเอนไซม์ I ของระบบฟอสฟอทรานสเฟอเรส 18.14 จีน crr ซึ่งประมวลรหัสส่วนประกอบ IIA ที่จำเพาะกับกลูโคส 18.15 จีน ptsG ซึ่งประมวลรหัสส่วนประกอบ IIBC ที่จำเพาะกับกลูโคส 18.16 จีน Irp ซึ่งประมวลรหัสตัวควบคุมของเรกูลอนลูซีน 18.17 จีน fadR ซึ่งประมวลผลรหัสตัวควบคุมของเรกูลอน fad 18.18 จีน icIR ซึ่งประมวลรหัสตัวควบคุมของเซนทรัลอินเตอร์มีเดียรีเมแทบอลิซึม (central intermediary metabolism) 18.19 จีน ahpC ซึ่งประมวลรหัสหน่วยย่อยเล็กของแอลคิลไฮโดรเพอร์ออกไซด์รีดัคเทส 18.20 จีน ahpF ซึ่งประมวลรหัสหน่วยย่อยใหญ่ของแอลคิลไฮโดรเพอร์ออกไซด์รีดัคเทส 18.21 จีน cysK ซึ่งประมวลรหัสซิสเตอีนซินเธส A 18.22 จีน cysB ซึ่งประมวลรหัสตัวควบคุมของเรกูลอน cys 18.23 จีน cysJ ซึ่งประมวลรหัส NADPH ซัลไฟต์รีดัคเทสฟลาโวโปรตีน 18.24 จีน cysI ซึ่งประมวลรหัส NADPH ซัลไฟต์รีดัคเทสฮีโมโปรตีน 18.25 จีน cysH ซึ่งประมวลรหัสอะดีนิลิลซัลเฟตรีดัคเทส 18.26 จีน rseA ซึ่งประมวลรหัสเมมเบรนโปรตีนซึ่งมีแอคติวิตีต้านซิกมาE 18.27 จีน rseC ซึ่งประมวลรหัสตัวควบคุมทั้งหมดของแฟกเตอร์ซิกมาE 18.28 จีน sucA ซึ่งประมวลรหัสหน่วยย่อยดีคาร์บอกซิเลสของ 2-คีโตกลูตาเรตดี ไฮโดรจีเนส 18.29 จีน sucB ซึ่งประมวลรหัสหน่วยย่อยไดไฮโดรไลโพอิลทรานสซัคซิเนส E2 ของ 2-คีโตกลูตาเรตดีไฮโดรจีเนส 18.30 จีน sucC ซึ่งประมวลรหัสหน่วยย่อย เบตา ของซัคซินิล-CoA ซินธีเทส 18.31 จีน sucD ซึ่งประมวลรหัสหน่วยย่อย อัลฟา ของซัคซินิล-CoA ซินธีเทส 18.32 จีน aceE ซึ่งประมวลรหัสส่วนประกอบ E1 ของส่วนเชิงซ้อนไพรูเวตดีไฮโดรจีเนส 18.33 จีน aceF ซึ่งประมวลรหัสส่วนประกอบ E2 ของส่วนเชิงซ้อนไพรูเวตดีไฮโดรจีเนส และ 18.34 จีน rseB ซึ่งประมวลรหัสตัวควบคุมแอคติวิตีแฟกเตอร์ซิกมาE 18.35 ผลิตภัณฑ์จีนของกรอบการอ่านเปิด (ORF) yodA ของ Eschericchia coil ได้ถูกเสริมโดยเพิ่มเติม โดยเฉพาะได้ถูกแสดงออกในระดับสูงในเวลาเดียวกัน18. The process described in claims 16 or 17, which is characterized by the fact that for the purpose of preparing L-threonine, microorganisms of the family Enterobacteriaceae were fermented in which one or more genes selected from group 18.1, at least one gene of the thrABC operon which encoding aspartate kinase, homoserine dehydrogenase, homoserine kinase, 18.2 The pyc gene of Corynebacterium glutamicum encodes pyruvate carboxylase. 18.3 The pps gene encodes phosphoenol pyruvate sympathase. 18.4 The ppc gene encodes phosphoenol pyruvate carboxylase. 18.5 The pntA and pntB genes encode the pyridine transhydrogenase subunit. 18.6 The rhtB gene encodes a protein mediated for homozoline resistance. 18.7 The rhtC gene encodes a protein mediated for threonine resistance. 18.8 The thrE gene of Corynebacterium glutamicum encodes a threonine export carrier protein. 18.9 The gdhA gene encodes glutamate dehydrogenase. 18.10 The pgm gene encodes phosphoglucomutase. 18.11 Gene fba, which encoding fructose bisphosphate aldolase; 18.12 Gene ptsH, which encoding phosphohistidine protein hexose phosphotransferase; 18.13 Gene ptsI, which encoding enzyme I of the phosphotransferase system; 18.14 Gene crr, which encoding glucose-specific component IIA; 18.15 Gene ptsG, which encoding glucose-specific component IIBC; 18.16 Gene Irp, which encoding the regulator of leucine regulation; 18.17 Gene fadR, which encoding the regulator of fad regulation; 18.18 Gene icIR, which encoding the regulator of central intermediary metabolism; 18.19 Gene ahpC, which encoding the small subunit of alkyl hydroperoxide reductase; 18.20 Gene ahpF. 18.21 Gene cysK encodes the major subunit of alkyl hydroperoxide reductase. 18.22 Gene cysB encodes the regulator of regulon cys. 18.23 Gene cysJ encodes the NADPH sulfite reductase flavoprotein. 18.24 Gene cysI encodes the NADPH sulfite reductase hemoprotein. 18.25 Gene cysH encodes adenylyl sulfate reductase. 18.26 Gene rseA encodes the membrane protein with anti-sigma E activity. 18.27 Gene rseC encodes all regulators of factor sigma E. 18.28 Gene sucA encodes the decarboxylase subunit of... 2-ketoglutarate dehydrogenase 18.29 Gene sucB, which encodes the dihydrolipoyl transsuccinate subunit E2 of 2-ketoglutarate dehydrogenase; 18.30 Gene sucC, which encodes the beta subunit of succinyl-CoA synthesizer; 18.31 Gene sucD, which encodes the alpha subunit of succinyl-CoA synthesizer; 18.32 Gene aceE, which encodes the component E1 of the pyruvate dehydrogenase complex; 18.33 Gene aceF, which encodes the component E2 of the pyruvate dehydrogenase complex; and 18.34 Gene rseB, which encodes the activity factor sigmaE regulator. 18.35 Gene product of the open read frame (ORF) yodA of the Eschericchia coil. This was further enhanced and, in particular, expressed at a high level simultaneously.
19. กระบวนการตามที่ขอถือสิทธิในข้อถือสิทธิที่ 16 ถึง 18 ข้อใดข้อหนึ่ง ซึ่งแสดงลักษณะ โดยที่การใช้ได้ทำด้วยจุลินทรีย์ซึ่งวิถีทางเมแทบอลิซึมที่ลดการสร้างกรด L-อะมิโนที่ต้องการได้ถูก ทำให้อ่อนฤทธิ์ลงอย่างน้อยบางส่วน19. The process as claimed in any one of claims 16 through 18, which is characterized by the use of microorganisms in which the metabolic pathways that reduce the production of the required L-amino acids have been attenuated, or at least partially.
20. กระบวนการตามที่ขอถือสิทธิในข้อถือสิทธิที่ 19 ซึ่งแสดงลักษณะโดยที่เพื่อวัตถุ ประสงค์ของการเตรียม L-ธรีโอนีน จุลินทรีย์ของวงศ์ Enterobacteriaceae ได้ถูกหมักซึ่งจีนหนึ่งหรือ มากกว่าที่คัดเลือกจากกลุ่ม: 20.1 จีน tdh ซึ่งประมวลรหัสธรีโอนีนดีไฮโดรจีเนส 20.2 จีน mdh ซึ่งประมวลรหัสมาเลตดีไฮโดรจีเนส 20.3 ผลิตภัณฑ์จีนของกรอบการอ่านเปิด (ORF) yjfA ของ Escherichia coli 20.4 ผลิตภัณฑ์จีนของกรอบการอ่านเปิด (ORF) ytfP ของ Escherichia coli 20.5 จีน pckA ซึ่งประมวลรหัสฟอสฟออีนอลไพรูเวตคาร์บอกซีไคเนส 20.6 จีน poxB ซึ่งประมวลรหัสไพรูเวตออกซิเดส 20.7 จีน dgsA ซึ่งประมวลรหัสตัวควบคุม DgsA ของระบบฟอสฟอทรานสเฟอเรส 20.8 จีน fruR ซึ่งประมวลรหัสตัวกดฟรุคโทส 20.9 จีน rpoS ซึ่งประมวลรหัสแฟกเตอร์ซิกมา38 และ 20.10 จีน aspA ซึ่งประมวลรหัสแอสปาร์เตตแอมโมเนียมไลเอส ได้ถูกทำให้อ่อนฤทธิ์ลงโดยเพิ่มเติม โดยเฉพาะได้ถูกกำจัด หรือการแสดงออกของมันได้ถูก ทำให้ลดลงเวลาเดียวกัน20. The process described in claim 19, which is characterized by the fermentation of L-threonine by microorganisms of the Enterobacteriaceae family, is described by one or more Chinese microorganisms. More than 20% of the selected groups were identified: 20.1 gene tdh, which encoding threonine dehydrogenase; 20.2 gene mdh, which encoding malate dehydrogenase; 20.3 gene product of the open reading frame (ORF) yjfA of Escherichia coli; 20.4 gene product of the open reading frame (ORF) ytfP of Escherichia coli; 20.5 gene pckA, which encoding phosphoenol pyruvate carboxykinase; 20.6 gene poxB, which encoding pyruvate oxidase; 20.7 gene dgsA, which encoding the regulator DgsA of the phosphotransferase system; 20.8 gene fruR, which encoding the fructose suppressor; 20.9 gene rpoS, which encoding factor sigma 38; and 20.10 gene aspA, which encoding aspartate ammonium lyase. It has been weakened by additional means, specifically by being eliminated, or its expression has been reduced at the same time.
21. กระบวนการตามที่ขอถือสิทธิในข้อถือสิทธิที่ 16 ถึง 20 ข้อใดข้อหนึ่ง ซึ่งแสดงลักษณะ โดยที่กรด L-อะมิโนที่คัดเลือกจากกลุ่ม L-แอสปาราจีน, L-เซรีน, L-กลูตาเมต, L-ไกลซีน, L-อะลานีน, L-ซีสเตอีน, L-เวลีน, L-เมไธโอนีน, L-โปรลีน, L-ไอโซลูซีน, L-ลูซีน, L-ไทโรซีน, L-เฟนิลอะลานีน, L-ฮิสติดีน, L-ไลซีน, L-ทริปโตเฟน, L-อาร์จินีน และ L-ฮอมอเซรีน ได้ถูกเตรียม ขึ้น21. The process described in any one of the claims 16 through 20, which is characterized by the preparation of selected L-amino acids from the groups L-asparagine, L-serine, L-glutamate, L-glycine, L-alanine, L-cysteine, L-valine, L-methionine, L-proline, L-isoleucine, L-leucine, L-tyrosine, L-phenylalanine, L-histidine, L-lysine, L-tryptophan, L-arginine, and L-homoserine, is performed.
22. กระบวนการตามที่ขอถือสิทธิในข้อถือสิทธิที่ 21 ซึ่งแสดงลักษณะโดยที่กรด L-อะมิโน ที่คัดเลือกจากกลุ่ม L-ไอโซลูซีน, L-เวลีน, L-เมไธโอนีน, L-ฮอมอเซรีน, L-ทริปโตเฟน และ L-ไลซีน ได้ถูกเตรียมขึ้น22. The process described in claim 21, characterized by the preparation of selected L-amino acids from the groups L-isoleucine, L-valine, L-methionine, L-homoserine, L-tryptophan, and L-lysine.