SU960593A1 - Штамм рнотовастеRIUм маNDарамеNSIS М-58,1651,используемый в качестве тестобъекта дл определени амилосубтилина - Google Patents

Description

Изобретение относится к микробиологии ,

Предлагаемый штамм новый, в научно-технической и патентной литературе не описан. ₅

Целью изобретения является получение штамма Photobacteriurn mandapamensis Μ~5δ, 1651, используемого в качестве тест-объекта для определения амилосубтилина. ₁₀

Штамм Photobacteriurn mandapamensls М-58, 1651, выделен во Всесоюзном научно-исследовательском институте приборостроения Главного Управления микробиологической промышлен- ,₅ ности при Совете Министров СССР и хранится в коллекции культур микроорганизмов Всесоюзного научно-исследовательского института антибиотиков. 20

Микроморфологические признаки. Бесспоровые палочки 1,0-2,5x0,41,0 мкм, с закругленными концами, одиночные и соединенные в пару. Кап-.

сул нет. Подвижны. При неблагоприятных условиях для роста наблюдаются плеоморфные формы. Грамотрицатель ны.

Макроморфологические признаки. Колонии на рыбо-пептонном агаре (РПА) круглые-с ровным краем, беловатые, гладкие и блестящие, старые колонии слегка буреют. Полупрозрачные, слегка выпуклые, с приподнятым центром, мелкозернистые, вязкие. Рост по штриху на РПА беловатый, гладкий, блестящий, на рыбо-пептонном бульоне (РПБ) - однородная муть с небольшим рыхлым осадком на дне.

Физиологические признаки. Растет при концентрации хлористого натрия от 0,5 до 6,0%,оптимальный рост при 3-5% хлористого натрия. Метаболизм как аэробный, так и ферментативный. Сбраживает до кислот с образованием газа глюкозу, фруктозу, галактозу, без образования газа - глицерин, Не сбраживает арабинозу, ксилозу,

960593 4 сахарозу, мальтозу, лактозу и ман- ¹ нит. Образует нитриты из нитратов. На пептонной среде образует аммиак. Индол не образует. Крахмал не гидролизует. Желатину разжижает.Реакция Фогес-Проскауэра положительна. Факультативный анаэроб.

Растет при.37°, не растет при 5° и 42°. Оптимум роста 25-32^С. Оптимум люминесценции около 3θ С. Рост при pH 6,0-9,0. Люминесцирует в фазе экспоненциального роста и в течение стационарной фазы 1-3 дня.

Штамм Photobacterium mandapamensis М-58 хорошо растет и люминесцирует на РПА (состав в г/л: камбала 50,0, пептон 5,0, NaCI 30,0, вода водопроводная 1,0 л, агар 20,0?. Способ приготовления: камбалу без костей и кожи размельчают и-замачивают в воде на 2 ч, затем кибятят в течение 1 ч и профильтровывают через вату.

В вытяжку добавляют пептон и хло'· ристый натрий, доводят pH до 7,3, разливают по колбам и добавляют агар. Стерилизуют при 1 ати 20 мин, мясопептонном агаре с 3% хлористого натрия, пептонно-глицериновом агаре (состав в г/л: пептон 5,0, глицерин 20 ,Ό, NaC 1 30,0, агар 1%, вода водопроводная 1,0 л, pH 7,2).

Оптимальные температуры инкубации 25-32°С. Время-инкубации 18-24 ч, при высеве из-под вазелинового масла может увеличиваться до 36-48 ч.

.При использовании штамма в качестве тест -организма на амилосубтилин необходимо получить его в интенсивно светящейся форме, для чего лиофилизированную в желатино-сахарозной средё (состав в г/л: сахароза 100,0, желатин 15,0, вода дистиллированная 1 ,0 л, стерилизация 2 дня по 0 ,5 атм, 30· мин), культуру высевают в жидкую рыбо-пептонную среду или мясо-пептонный бульон с 3% хлористого натрия и после 18-48 ч инкубации делают пересев на твердые агаризованные среды того же состава или при хранении культуры под вазелиновым маслом делают высев непосредственно на вышеуказанные твердые: среды.

Инкубацию на твердых средах ведут при 30°С в течение 18 ч, после чего штамм проверяют в темноте на интенсивность свечения, а затем культу'ру смывают с поверхности агара и тщательно суспендируют в минимальной среде (состав в г/л: NaC1 30,0, 5 NaHjPO^ 5,3, К^НР0₄ 2,1, (ΝΗ^ΗΡΟ^ ¹ 0,5, MgS0₄ 0,1, глицерин 3 мл,вода дистиллированная 1,0 ,л, pH 7,2/.

П р и м ё р. В химически чистую посуду производят смыв пыли, содер10 жащей амилосубтилин, с поверхности или.фильтра минимальной средой.

Пробу тщательно перемешивают до возможно полного растворения амило!субтилина и порциями по 4 мл пере15 носят в химически чистые пробирки.

При большом загрязнении и значитель- „ ном количестве пыли следует сделать ^f разведения пробы. Все определения проводят в тройной повторности с со20 блюдеМием стерильности.

Параллельно методом разведения готовят ряд контрольных пробирок с минимальной средой, содержащей амилосубтилин в убывающих концентраци25 ях от 0,2 до 0,0125 мг/мл для построения стандартной кривой.

На чертеже показана калибровочная кривая зависимости интенсивности свечения тест-организма М-58 _м от концентрации амилосубтилина в пробе.

ί Во все опытные и контрольные пробирки одновременно вносят по одной капле суспензии клеток мутанта Photobacterium mandapamensis М-58, тща³⁵ тельно перемешивают и ставят на инкубацию на 18 ч при 30°С.

После окончания инкубации опытные и контрольные пробирки извле⁴⁰ кают из термостата, тщательно перемешивают и регистрируют их свечение визуально или на приборе - люМ4ноиетре. Сопоставляя интенсивность свечения опытных проб с пробами ря⁴⁵ да контрольных пробирок, определяют концентрацию амилосубтилина в опытных пробах.

Claims (1)

1. сахарозу мальтозу, лактозу и маннит . Образует нитриты из нитратов. На пептонной среде образует аммиак. Индол не образует. Крахмал не гид ролизует. Желатину разжижает.Реакци  Фогес-Проскауэра положительна. Факультативный анаэроб. Растет при.37, не растет при 5 и . Оптимум роста 25-32 С. Оптимум люминесценции около 30 С. Рост при рН 6,0-9,0. Люминесцирует в фаз экспонещиального роста и в течение стационарной фазы 1-3 дн . Штамм Photobacterium mandapamensfs М-58 хорошо растет и люмииесци рует на РПА (состав в г/л: камбала 50,0, пептон 5,0, NaCl 30,0, вода водопроводна  1,0 л, агар 20,OJt Способ приготовлени : камбалу без костей и кожи размельчают и-замачивают в воде на 2 ч, затем кип т т в течение 1 ч и профильтровывают чере вату. В ВЫТЯЖКУ добавл ют пептон и хло ристый натрий, довод т рН до 7,3, разливают по колбам и добавл ют ага Стерилизуют при 1 ати 20 мин, м сопептонном агаре с 3 хлористо -о нат ри  , пептонно-глицериновом агаре (состав в г/л: пептон 5,0, глицерин 20 ,0, NaC 1 30,0, агар 2%, вода водопроводна  1,0 л, рН 7,2). Оптимальные температуры инкубаци 25-32С. Врем , инкубации 18-24 ч, при высеве из-под вазелинового масла может увеличиватьс  до 36-48 ч. При использовании штамма в качестве тест -организма на амилосубтилин необходимо получить его в интен сивно свет щейс  форме, дл  чего лиофилизированную в желатино-сахаро ной среде (состав в г/л: сахароза 100,0, желатин 15,0, вода дистиллированна  1 ,0 л, стерилизаци  2 дн  по 0,5 атм, 30 мин), культуру высевают в жидкую рыбо-пептонную среду или м со-пептонный бульон с 3% хлористого натри  и после 18-48 ч инку бации делают пересев на твердые агаризованные среды того же состава или при хранении культуры под вазелиновым маслом делают высев непосредственно на вышеуказанные тверды среды. Инкубацию на твердых средах ведут при в течение 18 ч, после чего штамм провер ют в темноте на интен34 сивность свечени , а затем культуру смывают с поверхности агара и тщательно суспендируют в минимальной среде (состав в г/л: NaC1 30,0, . 5,3, 2,1,(NH4)iiHP04 0,5, ,1, глицерин 3 мл/вода дистиллированна  1,0,л, рН 7,2/. П р и м е р. В химически чистую посуду производ т смыв пыли, содержащей амилосубтилин, с поверхности или.фильтра минимальной средой. Пробу тщательно перемешивают до возможно полного растворени  амило субтилина и порци ми по 4 мл перенос т в химически чистые пробирки. При большом загр знении и значитель- „ ном количестве пыли следует сделать разведени  пробы. Все определени  провод т в тройной повторности с соблюдением стерильности. Параллельно методом разведени  готов т р д контрольных пробирок с минимальной средой, содержащей амилосубтилин в убывающих концентраци х от 0,2 до мг/мл дл  построени  стандартной кривой. На чертеже показана калибровочна  кривай зависимости интенсивности свечени  тест-организма М-58 от концентрации амилосубтилина в пробе. Во все опытные и контрольные пробирки одновременно внос т по одной капле суспензии клеток мутанта Photobacterium raandapamensis М-58, тщательно перемешивают и став т на инкубацию на 18 ч при . После окончани  инкубации опытные и контрольные пробирки извлекают из термостата, тщательно перемешивают и регистрируют их свечение визуально или на приборе - лю/ 1нометре . Сопоставл   интенсивность свечени  опытных проб с пробами р да контрольных пробирок, .определ ют концентрацию акмлосубтилина в опытных пробах. Формула изобретени  Photobacterium mandapamensis М-58, 1651. (коллекци  культур микроорганизмов ВНИИА), используемый в качестве тест-объекта дл  определени  амилосубтилина.