SU1391090A1 - Штамм бактерий VIвRIо сноLеRае 042 серовара, используемый в качестве индикаторной культуры дл вы влени умеренного фага 042/1 серовара и его вирулентных мутантов - Google Patents

Description

Б В

20

25

Изобретение относитс  к медицинской микробиологии и может быть ис- . Шользовано при диагностике НАГ-инфек- 1)1ий.5

Цель изобретени  - изыскание штамма , способного вы вл ть умеренный фаг нового серотипа OA2/I и обеспе- Ч|Ивать в качестве штамма-ментора раз- | ножение вирулентных мутантов этого 10 фага.

Штамм V.cholerae выделен из объектов окружающей среды и депонирован П|од номером КМ-13(С-170).

; Штамм КМ-13(С-170) характеризуетс  15 следующими свойствами.

Культурально-морфологические при- эмаки.

j Подвижные, слегка изогнутые палоч:- к 1,6-2,9 мкм в длину и 0,2-0,6 мкм в1 ширину, с одним пол рно расположе- ньтм жгутиком, спор и капсул не образуют , грамотрицательны.

На твердых питательных средах

(агар Мартена, агар Хоттингера,-щелочной м со-пептонный агар рН 7,6± iO,2) обрадует круглые, полупрозрачные , 3-4 мм в-диаметре колонии с р|овным краем, слегка уплотненным ь(ентром через 18 ч выращивани  при .

На жидких питательных средах (бу- Льон Мартена, бульон Хоттингера, 1|%-на  пептрнна  вода (рН 7,8+0,2)) о|бразует равномерную муть и нежную п{ленку на поверхности через 6 ч вы- р|ащивани  при .

Физиолого-биохимические свойства. Тест на оксидазу положителен, р азлагает до кис;лоты без газа манно- зу, сахарозу, глюкозу, маннит, не ферментирует арабинозу, инозит, лак- Тозу, на среде Хью-Лейфсона фермен- пирует и окисл ет глюкозу, образует декарбоксилазу лизина, не образует дигидролазу аргинина, ферментирует К1рахмал и желатин, не растет при кон- , и|ентрации 7-10% хлорида натри . Серологические свойства. Не агглютинируетс  холерными диаг-м Йостичёскими сыворотками 0,RO, Инаба, Огава, агглютинируетс  моноварной в|ибрионной сывороткой 042 серовара, Hie агглютинируетс  монов рными виб- {1{ионными сыворотками других (02-041, 043-056) О сероваров.

Способен вы вл ть и обеспечивать репродукцию умеренного ф га 042/1 серотипа и его вирулентных мутантов.

30

35

40

45

55

Умеренные и вирулентные фаги 04271 серотипа формируют на газоне штамма С-170 негативные колонии типичной морфологии.

Колонии умеренного фага 042/1 серотипа имеют круглую форму 5±1 мм в диаметре, с плотным центром и узкой зоной неполного лизиса по периферии . Негативные колонии вирулентИых мутантов отличаютс  от исходного умеренного варианта прозрачным центром .

По электронно-микроскопической структуре фаги 042/1 серотипа относ тс  к II морфологической группе А.С. Тихоненко.Они имеют маленькую головку 300±32 А в диаметре и лишены отростка. Одиночный цикл вирулентного мутанта 781/781 в/С-170 фага 042/1 серотипа характеризуетс  минимальным латентным периодом 31±1 мин и средним урожаем 20+3 частиц на одну инфицированную клетку. Вирулентные мутанты фага 042/1 обладают практически ценным свойством - специфически лизировать 86-90% штаммов энтеро- патогенных вибрионов V.cholerae .042 серовара, что может быть использовано при лабораторной диагностике НАГ-ии- фекций.

i

Размножаетс  штамм С-170 в бульо- ,

не и на агаре Мартена (рН 7,6+0,2), хран т его в лиофилизированном сос-- то нии.

Спектр действи  фага показан в таблице.

Использование штамма иллюстрируетс  следзгющим примером.

Пример. Индикаторные свойства штамма С-170 в отношении умеренных фагов 042/Г серотипа и его вирулентных мутантов вы вл ют в следующем опыте методом Грациа и капли.

Фильтрат суточной бульонной культуры щтамма (КМ-14) Vibrio chole- rae 042 серовара или другого штамма того же серовара, исследуемого на лизогению, в количестве 1,0 мл смешивают с 0,2 мл бульонной трехчасо-г вого роста культурой штамма С-170 и 5,0 мл 0,7%-ного агара Мартена (пред- варительно расплавленного и охлажденного до 45 с) и вьщивают на пластинку 2%-ного агара Мартена в,чатке Петри . После застывани  нанесенного сло  чашку переаертьгаают и культивируют при 37 С 18-20 ч (метод Грациа).

Бульонную культуру трехчасового роста штамма С-170 внос т в количестве 0,5 WI в 5,0 мл 0,7%-ного агара Мартена, тщательно перемешивают и выливают на поверхность пластинки 2%-ного агара Мартена в чашке Петри. На-застывшую поверхность нанос т каплю исследуемого фильтрата. При наличии небольшого количества корпускул фага в фильтрате он обнаруживаетс  -методом Грациа в виде изолированных негативных колоний на газоне штамма С-170. При высокой концентрации фага в фильтрате его обнаруживают методом капли в виде сливного литического п тна на газоне штамма С-170 на мест нанесени  фильтрата.

Дп  получени  вирулентного фага с первой чашки отбирают прозрачную колонию, уколом платиновой иглы фаз из нее перенос т в 0,1 мл бульона Мартена и концентрируют на твердой среде по методу Адамса с применением в качестве штамма-ментора V.chole- гае 042 С-170. Полученный концентрат

фага размножают в жидкой среде на штамме С-170. К 100,0 мл бульона Мар- тана добавл ют трехчасовую бульонную культуру штамма в количестве 2 мл (540 микробных тел в S мл) к концентрат фага из расчета множественности инфекции 15:1. Посев культивируют при З7 с в течение 2,5+0,2 ч до просветлени  микробной взвеси, после чего стерилизуют фильтрацией через фарфоровые бактериальные фильтры марки Ф-5, контролируют на стерильность и примен ют по назначению.

Концентраци  частиц препарата вирулентного мутанта фага 042/ серо- типа 781/781 в/170, размноженного в указанных услови х, равна частиц на I мл.

Claims (1)

1. Формула изобретени 

   Штамм бактерий Vibrio cholerae 042 серовара KM-13(C-S70), используемый качестве индикаторной культуры л  вы влени  умеренного фага 0,42/1 еровара и его вирулентных мутантов.

   Спмтр. дМет т спвцнфичкоегь ФАГВ ) С-170

   -

   56