SU950394A1

SU950394A1 - Method of producing ubiquinone

Info

Publication number: SU950394A1
Application number: SU803212982A
Authority: SU
Inventors: Георгий Викторович Донченко; Леонид Менделеевич Эпштейн; Валерий Николаевич Акулин; Ирина Леонидовна Полищук; Игорь Федорович Мишунин; Владимир Аронович Богуславский
Original assignee: Институт биохимии им.А.В.Палладина; Тихоокеанский научно-исследовательский институт рыбного хозяйства и океанографии
Priority date: 1980-12-05
Filing date: 1980-12-05
Publication date: 1982-08-15

Description

(5) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ УБИХИНОНА(5) METHOD OF OBTAINING Ubihinone

Изобретение относитс к медицинской промьпиленности и касаетс технологии получени биологически активных веществ из сырь животного происхождени .The invention relates to the medical industry and relates to the technology of obtaining biologically active substances from raw materials of animal origin.

Известен способ получени убихинона из сердца лошади, включающий измельчение ткани, гидролиз ее в кип щем растворе метанола, содержащем щблочь и антиоксидант, экстракцию диэтилоловым эфиром, дальнейшую обработку полученного экстракта дл отделени сопутствующих линидов, хроматографическую очистку на колонке с окисью алюмини и последующее выделение и кристаллизацию целевого продукта 1A method of obtaining ubiquinone from the horse's heart is known, including grinding the tissue, hydrolyzing it in a boiling methanol solution containing crushed stone and antioxidant, extracting with diethyl ether, further processing the resulting extract to separate the accompanying lines, chromatographic purification on a column with aluminum oxide and subsequent separation and crystallization target product 1

Однако известный способ не обеспечивает достаточно высокого выхода целевого продукта (95 мг убихинона из 1 кг сырь ), а сырьева база t дл его получени вл етс ограниченной .However, the known method does not provide a sufficiently high yield of the target product (95 mg of ubiquinone from 1 kg of raw material), and the raw material base t for its production is limited.

Цель изобретени - повышение выхода целевого продукта и расширение сырьевой базы.The purpose of the invention is to increase the yield of the target product and the expansion of the resource base.

Поставленна цель достигаетс тем, что согласно способу получени убихинона из сырь животного происхсвкдени , включающему измельчение исходного сырь , его гидролиз раствором щелочи в метаноле в присутствии антиоксиданта, экстракцио органичес10 ким растворителем, обработку полученного экстракта дл отделени сопутствующих липидов, последующую хроматографическую очистку, выделение и кристаллизацию целевого про15 дукта, в качестве исходного сырь используют непищевые и малоценные виды морепродуктов и отходы переработки пищевых видов, гидролиз раствором щелочи в метаноле провод т с The goal is achieved in that according to the method of obtaining ubiquinone from animal raw materials, including grinding the raw material, hydrolyzing it with a solution of alkali in methanol in the presence of an antioxidant, extracting organic solvent, processing the resulting extract to separate the accompanying lipids, subsequent chromatographic purification, separation and crystallization non-food and low-value types of seafood and food processing waste ide, alkali hydrolysis in methanolic solution is carried out with

20 одновременной экстракцией трихлорэтиленом , полученный экстракт упаривают , обрабатывают его смесью метанол - вода при соотношении растворителей 4:1, затем охлажденной cfJieсью ацетон - метанол при соотношении растворителей 1:1, а хроматографическую очистку осуществл ют на кремнийсодержащем сорбенте с последующей последовательной элюцией гексаном и бензолом.20 by simultaneous extraction with trichlorethylene, the extract obtained is evaporated, treated with methanol-water at a 4: 1 solvent ratio, then acetone-methanol cooled with cfJie at a 1: 1 solvent ratio, and chromatographic purification is performed on a silicon-containing sorbent, followed by sequential elution with hexane and benzene .

Пример 1. В качестве сырь используют рыбную мелочь (несортовую скумбрию). Рыбную мелочь целиком перерабатывают на м сорубке. Навеску 5 кг рыбного фарша помещают в реактор на 20 л, приливают k л трихлорэтилена, 3,5 л раствора КОН в метаноле (вес/объем), со держащего 50 г пирогаллола, и содержимое непрерывно перемешивают мешалкой 45 мин при 25 С „ После отстаивани нижний слой трихлорэтилена сливают, в отстойник на 30 л и провод т дважды повторную экстракцию 4,0 л трихлорэтилена при непрерывном перемешивании содержимого реактора 30 мин. Собранные вместе экстракты (11,2 л) промывают при плавном перемешивании 4 л воды, а затем дважды провод т нейтрализацию 2,5 л 2,5 -ного раствора НС в воде. После тщательного отделени водного раствора провод т вакуумную отгонку растворител до 1/10 первоначального объема - 1200 мл. Концентрированный липидный экстракт однократно промывают 500 мл метанолводного раствора (:1) дл удалени поверхностно-активных веществ, а затем полностью удал ют растворитель на вакуумном испарителе. Получают г суммарных липидов и раствор ют их в трехкратном объеме (30 мл) метанол-ацетонового раствора (1:1) при +(5С и оставл ют на ночь при -15°С. Полученный осадок отфильтровывают и промывают двум ббъемами охлажденного до (-15) (-20)С метанол-ацетонового раствора (300 мл), выпаривают под вакуумом и получают 100 г сопутствующих липидов. Экстракт, содержащий убихинон , упаривают под вакуумом и полУчаютна этом этапе 40,7 г липидного остатка, содержащего убихинон . Нанос т указанный липидный остаток в минимальном объеме гексана на колонку с кремниевой водной кислотой предварительно отмытой перегнанным метанолом и активированной при в течение 5 ч.Example 1. As raw materials used fish trifle (unbort mackerel). The fish fines are processed entirely on a m slicer. A portion of 5 kg of minced fish is placed in a 20 l reactor, k l of trichlorethylene, 3.5 l of KOH solution in methanol (w / v) containing 50 g of pyrogallol are added, and the contents are continuously stirred with a stirrer for 45 minutes at 25 ° C. the lower layer of trichlorethylene is drained into a 30 liter sump and repeated extraction is carried out twice with 4.0 l of trichlorethylene with continuous stirring of the contents of the reactor for 30 minutes. The extracts collected together (11.2 liters) are washed with smooth stirring with 4 liters of water, and then neutralization is carried out twice with 2.5 liters of 2.5% solution of HC in water. After careful separation of the aqueous solution, the solvent was vacuum distilled to 1/10 of the original volume — 1200 ml. The concentrated lipid extract is washed once with 500 ml of a methanol-water solution (: 1) to remove the surfactants, and then the solvent is completely removed on a vacuum evaporator. G total lipids are obtained and dissolved in a threefold volume (30 ml) of a methanol-acetone solution (1: 1) at + (5 ° C and left overnight at -15 ° C. The resulting precipitate is filtered off and washed with two volumes of cooled to (- 15) (-20) C methanol-acetone solution (300 ml), evaporated under vacuum and 100 g of concomitant lipids are obtained.The extract containing ubiquinone is evaporated under vacuum and 40.7 g of lipid residue containing ubiquinone is obtained at this stage. the specified lipid residue in a minimum volume of hexane per column with silicon acid aqueous pre-scoured with methanol and distilled under activated for 5 hours.

; ;

Сорбент берут в 10-кратном по весу к липиду количестве ( г кремниевой водной кислоты Si02.n ). Соотношение диаметра столба колон5 ки к его высоте 1: 4-1:5. Элюирование провод т дес тикратным объемом (объем/вес) гексана, а затем бензола . Собирают фракции по 250-500 мл элюатов. Убихинон выходит с первойThe sorbent is taken in a 10-fold weight-on lipid amount (g of silicic aqueous acid Si02.n). The ratio of the diameter of the column of the column to its height is 1: 4-1: 5. Elution was carried out in a ten-fold volume (volume / weight) of hexane, and then benzene. Collect fractions of 250-500 ml of eluates. Ubiquinone comes from the first

О половиной порции бензола. Упаренные фракции объедин ют, удал ют растворитель в вакууме и получают суммарный препарат убихинона г. После повторной хроматографической очи15 стки и двухкратной кристаллизации из абсолютного этанола получают 17,90мг убихинонаi в том числе 6,8 мг кристаллического вещества, или на 1 кг навески ткани 3,58 мл убихинона, вAbout half a serving of benzene. The evaporated fractions are combined, the solvent is removed in vacuo and the total preparation of ubiquinone is obtained. After repeated chromatographic purification and two-fold crystallization from absolute ethanol, 17.90 mg of ubiquinone is obtained, including 6.8 mg of crystalline substance, or per 1 kg of tissue 3 , 58 ml of ubiquinone,

20 том числе 1,36 мг кристаллического вещества (38% от общего выделенного убихинона).20 including 1.36 mg of crystalline substance (38% of the total isolated ubiquinone).

Пример2„ В качестве сырь 25 используют печень сельдевой акулы. Навеску 25 кг измельченной печени акулы помещают в реактор на 100 л, приливают 20 л трихлорэтилена, 17,5 16%-ного раствора КОН в ме , таноле, содержащего 250 г пирогаллола . Провод т аналогично примеру 1 одновременно гидролиз и экстракцию материала, обработку экстракта соответствующими количествами воды, 2,5%-ного раствора НС в воде, упаривание до 1/10 (5,0 л) первоначального объема (5б л), промывание 2,5л метанолводным раствором (4:0, удаление растворител на вакуумном испарителе . Получают 950 г суммарных липидов , отдел ют 352 г сопутствующих липидов и 590 г липидного остатка нанос т в гексане на колонку с 3 кг кремниевой водной кислоты., Элюируют последовательно 30 л гексана и 20 г бензола. Получают 35, г суммарного препарата убихинона. После повторной хроматографической очистки и двухразовой кристаллизации из абсолютного этанола получают 1б5,2 мг убихинона, в том числе 51 мг кристаллического вещества, или на 1 кг навески печени 6,6 мг убихинона, в том числе 2,04 мг кристаллического вещества (30,9% от общего выделен5 ного убихинона).Example 2 „Herring shark liver is used as raw material 25. A weighed 25 kg of crushed shark liver is placed in a 100-liter reactor, 20 l of trichlorethylene, 17.5 of a 16% KOH solution in I, of thanol, containing 250 g of pyrogallol are added. Carried out analogously to example 1 at the same time hydrolysis and extraction of the material, treatment of the extract with appropriate amounts of water, 2.5% aqueous solution of HC in water, evaporation to 1/10 (5.0 l) of the initial volume (5b l), washing 2.5 l methanolic solution (4: 0, removal of the solvent on a vacuum evaporator. 950 g of total lipids are obtained, 352 g of concomitant lipids are separated and 590 g of lipid residue is applied in hexane per column with 3 kg of silicic aqueous acid., 30 l of hexane are eluted successively and 20 g of benzene. Receive 35, g of the total preparations After repeated chromatographic purification and twice crystallization from absolute ethanol, 1–5.2 mg of ubiquinone is obtained, including 51 mg of a crystalline substance, or 6.6 mg of ubiquinone, including 2.04 mg of a crystalline substance, per kg of liver ( 30.9% of the total isolated 5 ubiquinone).

Эффективность извлечени убихи- нона по предлагаемому способу в данThe efficiency of extraction of ubiquinone according to the proposed method is given in

Claims

Claim

A method of obtaining ubiquinone from sy. rye of animal origin, including grinding of the feedstock, its hydrolysis with a solution of alkali in methanol in the presence of an antioxidant, extraction with an organic solvent, processing the obtained extract to separate the accompanying lipids, subsequent chromatographic purification, isolation and crystallization of the target product, distinguished by that, in order to increase the yield of the target product and expand the raw material base, non-food and low-value types of seafood and processing waste evyh species of alkali hydrolysis solution in methanol is carried out with simultaneous extraction trichloro! ethylene, the obtained extract is evaporated, it is treated with a methanol-water mixture at a solvent ratio of 4: 1, then with a cooled acetone-methanol mixture at a solvent ratio of 1: 1, and chromatographic purification is carried out using a silicon-containing sorbent followed by subsequent elution with hexane and benzene.